WO2008020085A2

WO2008020085A2 - Use of chloro- and fluoromethyl ketone derivatives in anti-viral therapy

Info

Publication number: WO2008020085A2
Application number: PCT/EP2007/058628
Authority: WO
Inventors: Ulrich Schubert
Original assignee: Virologik GmbH
Current assignee: Virologik GmbH
Priority date: 2006-08-18
Filing date: 2007-08-20
Publication date: 2008-02-21
Anticipated expiration: 2009-02-18
Also published as: DE102006039148A1; WO2008020085A3

Abstract

The invention relates to agents for treating acute and chronic infections involving viruses that are pathogenic in humans and animals and that assemble on the cell membrane and are released from the cell surface by budding. Said viruses include in particular pathogens of infectious diseases such as AIDS, hepatitis, haemorrhagic fever, SARS, smallpox, measles, polio or influenza. The invention relates to agents, which as a result of their structure act inter alia on the protease and/or helicase. Said inhibitors and their chloro- and fluoromethyl ketone derivatives thus influence the replication of viral diseases. The following substance classes and their 10 derivatives belong to said inhibitors: AAPFCMK, Z-VADFMK, IETDFMK, Ac-YVADCMK, VEIDFMK, VPFCMK, LLFCMK, AAFCMK, AAPYCMK and GGLCMK. Said agents destroy the highly organised processes of the interaction between viral and cellular enzymes necessary for viral replication. As a result, the release and production of infectious viral offsprings is reduced or even completely suppressed.

Description

Verwendung von Chloro- und Fluoromethylketon-Derivaten in der anti-viralen Therapie Use of chloro- and fluoromethyl ketone derivatives in anti-viral therapy

Beschreibungdescription

[0001] Die Erfindung betrifft Mittel zur Behandlung von akuten und chronischen Infektionen mit für Mensch und Tier pathogenen Viren, welche an der Zellmembran assemblieren und durch Knospung von der Zelloberfläche freigesetzt werden. Hierzu zählen insbesondere Erreger von Infektionserkrankungen wie AIDS, Hepatitis, hämorrhagisches Fieber, SARS, Pocken, Masern, Polio oder Grippe. Gegenstand der Erfindung sind Mittel, die als Wirkstoffe Inhibitoren der Protease- und/oder Helikaseaktivität enthalten. Hierzu zählen Inhibitoren der zellulären Protease, wie auch Substanzen, welche die Entwindung der DNA durch Einfluss auf die ATP-abhängige Helikase bewirken. Durch diese Mittel werden die hoch organisierten Prozesse der Virus- Replikation und folglich die Assemblierung von Virusstrukturproteinen gestört. Im Ergebnis dessen wird die Freisetzung und die Produktion von infektiösen Nachkommenviren unterbunden. Zum Schutz dieser Mittel werden diese mit Chloro- oder Fluoromethylketon-Gruppen versehen, welches ihre antivirale Wirksamkeit nicht beeinflusst. Diese Mittel besitzen ein breites Wirkspektrum und können daher als neuartige Breitbandvirostatika zur Vorbeugung, beziehungsweise zur Therapie von unterschiedlichen Virusinfektionen eingesetzt werden.The invention relates to agents for the treatment of acute and chronic infections with human and animal pathogenic viruses, which assemble on the cell membrane and are released by budding from the cell surface. These include in particular pathogens of infectious diseases such as AIDS, hepatitis, haemorrhagic fever, SARS, smallpox, measles, polio or influenza. The invention relates to agents containing as active ingredients inhibitors of protease and / or helicase activity. These include inhibitors of cellular protease, as well as substances that cause the unwinding of the DNA by influencing the ATP-dependent helicase. These agents interfere with the highly organized processes of virus replication and, consequently, the assembly of viral structural proteins. As a result, the release and production of infectious progeny viruses is inhibited. To protect these agents they are provided with chloro or fluoromethyl ketone groups, which does not affect their antiviral activity. These agents have a broad spectrum of activity and can therefore be used as novel broad-spectrum antivirals for the prevention or therapy of different viral infections.

1. Charakteristik des bekannten Standes1. Characteristic of the known state

1.1 Prinzipien der Virusassemblierung1.1 Principles of Virus Assembly

[0002] Die sogenannten späten Prozesse einer Virusreplikation beinhalten die Neusynthese von Virusproteinen, wobei in der Regel die Virusstrukturproteine zuerst nach Aktivierung der viralen Genexpression exprimiert werden. Diese Strukturproteine werden sodann in den Prozess der Assemblierung und der Formierung von viralen Unterstrukturen eingehen. Bei umhüllten Viren erfolgt in der Regel dieser Prozess an zellulären Membranen, meist an der Innenseite der Zellmembran. Alternativ besteht aber auch die Möglichkeit, dass Virusproteine zuerst im Zytosol der Zelle oder auch dem Zellkern in Virus-ähnliche Partikel assemblieren und später diese Virionen mit Prozessen der Freisetzung von der Zellmembran mit einer Lipidmembran umhüllt werden. Viren, welche an der Zellmembran assemblieren, werden in der Regel durch aktive Knospung (engl.: budding) von der Zellmembran freigesetzt. Dabei kommt es zur Formierung einer Virus-Knospe (engl: bud), welche aktiv von der Zellmembran ausgestülpt und dann letztendlich durch Abschnürung von der Zelloberfläche in Form eines Nachkommenvirus freigesetzt wird.The so-called late processes of virus replication involve the viral synthesis of viral proteins, with the virus structural proteins usually being expressed first after activation of viral gene expression. These structural proteins will then enter the process of assembly and formation of viral substructures. In the case of enveloped viruses, this process usually takes place on cellular membranes, usually on the inside of the cell membrane. Alternatively, however, it is also possible that virus proteins first assemble into virus-like particles in the cytosol of the cell or also the nucleus and later these virions are enveloped with processes of release from the cell membrane with a lipid membrane. Viruses that assemble on the cell membrane are usually released from the cell membrane by active budding. It comes to the formation of a virus bud (engl: bud), which actively everted from the cell membrane and then ultimately released by pinching off the cell surface in the form of a progeny virus.

1.1.1 Darstellung der Assemblierung, Freisetzung und Reifung von Viren am Beispiel von Humanen Immundefizienzviren (HIV)1.1.1 Representation of the assembly, release and maturation of viruses using the example of human immunodeficiency viruses (HIV)

[0003] Die Prinzipien der späten Prozesse der Virusreplikation sollen am Beispiel von HIV dargestellt werden. Hauptkomponenten der HIV-Strukturproteine werden in Form von drei Polyproteinen translatiert: Gag und Gag-Pol für die inneren Core-Proteine und viralen Enzyme sowie Env für die viralen Hüllproteine. Membran-targeting- Signale in der NH2-terminalen Domäne von Gag sind für den Transport von Gag an die Zellmembran jedoch entscheidend. Im Falle von HIV-I resultiert die vollständige proteolytische Prozessierung des Gag Polyproteins Pr55 in der Formierung des Matrix (MA), des Capsid (CA) sowie des Nucleocapsids (NC) und des COOH-terminalen p6^gag Proteins. HIV- Virionen werden generell als unreife nicht-infektiöse Viruspartikel von der Plasmamembran abgeschnürt; dieser Prozess wird als Virusbudding bezeichnet. Unmittelbar nach oder auch während des Buddings beginnt mit der Aktivierung der viralen Protease (PR) die proteolytische Prozessierung von Gag und Gag-Pol-Polyproteinen. Die proteolytische Reifung der Virionen geht einher mit morphologischen Veränderungen. Charakteristisch dabei ist die Kondensierung des inneren Cores, welche in der Formierung eines für das reife Virus typischen kegelförmigen Core-Zylinders resultiert (zusammengefasst in Kräusslich and Welker, 1996; Swanstrom and Wills, 1997).The principles of the late processes of virus replication will be presented using the example of HIV. Main components of the HIV structural proteins are translated as three polyproteins: Gag and Gag-Pol for the inner core proteins and viral enzymes, and Env for the viral envelope proteins. However, membrane targeting signals in the NH2-terminal domain of Gag are critical for transporting Gag to the cell membrane. In the case of HIV-I, complete proteolytic processing of the Gag polyprotein Pr55 results in formation of the matrix (MA), capsid (CA), nucleocapsid (NC), and COOH-terminal p6 ^gag protein. HIV virions are generally pinched off the plasma membrane as immature non-infectious virus particles; this process is called a virus budget. Immediately after or even during budding, proteolytic processing of gag and gag-pol polyproteins begins with activation of the viral protease (PR). The proteolytic maturation of virions is associated with morphological changes. Characteristic here is the condensation of the inner core, which results in the formation of a tapered core cylinder typical of the mature virus (summarized in Kräusslich and Welker, 1996, Swanstrom and Wills, 1997).

1.2. Einflussnahme auf die Virusreplikation1.2. Influence on virus replication

1.2.1. Chloro- und Fluoromethylketone1.2.1. Chloro- and fluoromethyl ketones

Die dem Inhibitor zugrunde liegende Sequenz wurde durch 2.2 A Kristallstrukturanalyse der humanen Chymase (HC), einer chymotrypsin-ähnlichen Serin-Protease, exprimiert in Mastzellen, bestimmt (Pereira et al. 1999). Hierbei bindet der Peptidyl-CMK-Inhibitor spezifisch und kovalent an die Aminosäuren Serl95 und His57 (Pereira et al. 1999).The sequence underlying the inhibitor was determined by 2.2 A crystal structure analysis of human chymase (HC), a chymotrypsin-like serine protease expressed in mast cells (Pereira et al., 1999). Here, the peptidyl-CMK inhibitor binds specifically and covalently to the amino acids Serl95 and His57 (Pereira et al., 1999).

1.2.2. Helikase- und Protease-Inhibitoren1.2.2. Helicase and protease inhibitors

[0004] Es ist bekannt, dass AAPF_CMK in mit humanem Papilloma- Virus (HPV) infizierten Zellen, in einer noch nicht geklärten Art und Weise, eine Wachstumshemmung der infizierten Zellen zur Folge hat. AAPF_CMK, dessen offensichtliches Target eine Protease im Zellkern scheint, beeinflusst jedoch deren erhöhte Aktivität in virusinfϊzierten Zellen nicht (Drubin et al.It is known that AAPF _CMK in cells infected with human papilloma virus (HPV), in a not yet clarified manner, growth inhibition of the infected cells result. AAPF _CMK , whose obvious target is a protease in the nucleus seems, however, does not affect their increased activity in virus-infected cells (Drubin et al.

2006).2006).

[0005] Weitere Inhibitoren mit Chloromethylketon bzw. Fluoromethylketon-Schutzgruppen zur selektiven Hemmung der Protease oder Caspase sind Z-VAD_FMK, IETDFMK, AC-YVAD_CMK,Further inhibitors with chloromethyl ketone or fluoromethyl ketone protecting groups for the selective inhibition of protease or caspase are Z-VAD _F MK, IETDFMK, AC-YVAD _C MK,

VEIDFMK, VPFCMK, LLFCMK, AAFCMK, AAPYCMK und GGLCMK-VEIDFMK, VPFCMK, LLFCMK, AAFCMK, AAPYCMK and GGLCMK

2. Das Wesen der Erfindung2. The essence of the invention

[0006] Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, Mittel zur Verfügung zu stellen, die zur Behandlung von akuten und chronischen Infektionen mit für Mensch und Tier pathogenen Viren geeignet sind. Diesen Viren ist zu eigen, dass sie in der Zelle, vorzugsweise an der Zellmembran, assemblieren und durch Knospung von der Zelloberfläche freigesetzt werden. Hierzu zählen insbesondere Erreger von Infektionserkrankungen, wie AIDS, Hepatitis, hämorrhagisches Fieber, SARS, Pocken, Masern, Polio, Herpesvirusinfektionen oder Grippe. Gegenstand der Erfindung sind Mittel, die als Wirkstoffe Inhibitoren der Virusreplikation enthalten. Hierzu zählen Inhibitoren von zellulären Helikasen wie auch Proteasen, die mit chemischen Schutzgruppen versehen sind. Durch diese Mittel werden die hoch organisierten Prozesse der Replikation, Assemblierung und der proteolytischen Reifung von Virusstrukturproteinen gestört, in deren Ergebnis die Freisetzung und die Produktion von infektiösen Nachkommenviren unterbunden wird. Diese Mittel besitzen ein breites Wirkspektrum und können daher als neuartige Breitbandvirostatika zur Vorbeugung, beziehungsweise zur Therapie von unterschiedlichen Virusinfektionen eingesetzt werden.The invention has for its object to provide means that are suitable for the treatment of acute and chronic infections with human and animal pathogenic viruses. These viruses are inherent in that they assemble in the cell, preferably on the cell membrane, and are released by budding from the cell surface. These include in particular pathogens of infectious diseases such as AIDS, hepatitis, haemorrhagic fever, SARS, smallpox, measles, polio, herpesvirus infections or influenza. The invention relates to agents containing as active ingredients inhibitors of virus replication. These include inhibitors of cellular helicases as well as proteases that are provided with chemical protecting groups. These agents interfere with the highly organized processes of replication, assembly, and proteolytic maturation of viral structural proteins, thus preventing the release and production of infectious progeny viruses. These agents have a broad spectrum of activity and can therefore be used as novel broad-spectrum antivirals for the prevention or therapy of different viral infections.

[0007] Die Aufgabe der Erfindung wurde unter anderem durch den Einsatz von mit chemischen Schutzgruppen versehenen Inhibitoren der Serin-Proteasen gelöst.The object of the invention was achieved, inter alia, by the use of chemical inhibitors provided with inhibitors of serine proteases.

[0008] Es sind erfmdungsgemäß Mittel zur Behandlung von unterschiedlichen Virus-Infektionen entwickelt worden, die als wirksame Komponenten mit chemischen Schutzgruppen versehene Inhibitoren enthalten, welche einen Einfluss auf Helikasen und SAP-Domänen-Proteine besitzen. Hierzu zählen Substanzen wie zum Beispiel: AAPFCMK, Z-VADFMK, IETDFMK, AC-YVAD CMK, VEIDFMK, VPFCMK, LLFCMK, AAFCMK, AAPYCMK und GGL_CMK-There are erfmdungsgemäß means for the treatment of different viral infections have been developed which contain as active components with chemical protective groups provided inhibitors which have an influence on helicases and SAP domain proteins. These include substances such as: AAPFCMK, Z-VADFMK, IETDFMK, AC-YVAD CMK, VEIDFMK, VPFCMK, LLFCMK, AAFCMK, AAPYCMK and GGL _C MK-

[0009] Das Wesen der Erfindung geht auch aus den Patentansprüchen hervor. [0010] Allen späten Prozessen der Virusreplikation, wie Assemblierung, Knospung, proteolytische Reifung und Virusfreisetzung ist gemeinsam, dass die Virusstrukturproteine in der Regel als Vorläuferproteine in Form von Polyproteinen gebildet werden, die dann durch die Aktivität von Proteasen, welche entweder von der Wirtszelle stammen, meist aber mindestens eine viral kodierte Protease darstellen, in die sogenannten reifen Virusstrukturproteine gespalteten werden. Dieser Prozess wird allgemein als Virusreifung bezeichnet. Die geordneten und fein aufeinander abgestimmten Prozesse der Assemblierung, der Reifung, der Knospung und der Freisetzung sind entscheidende Voraussetzung für die erfolgreiche Bildung von infektiösen Nachkommenviren. Die geringste Störung dieser vielschichtigen Prozesse kann die Infektiosität und/oder die Freisetzung von Nachkommenviren wesentlich stören. Alle diese Prozesse haben eines gemeinsam: Sie beinhalten vielfältige und aufeinander abgestimmte Prozesse.The essence of the invention is also apparent from the claims. Common to all late processes of virus replication, such as assembly, budding, proteolytic maturation and virus release, is that the virus structural proteins are typically formed as precursor proteins in the form of polyproteins, which are then derived by the activity of proteases derived either from the host cell , but usually represent at least one virally encoded protease, are split into the so-called mature viral structure proteins. This process is commonly referred to as virus maturation. The ordered and finely tuned processes of assembly, maturation, budding and release are crucial for the successful generation of infectious progeny viruses. The slightest disruption of these multi-layered processes can significantly disrupt the infectivity and / or the release of progeny viruses. All of these processes have one thing in common: they contain diverse and coordinated processes.

[0011] Alle Methoden, welche die Replikation, das heißt die Vervielfältigung der viralen genetischen Information stören, werden daher auch die Formierung von infektiösen Nachkommenviren verhindern. Dies kann entweder indirekt durch Beeinflussung von Helikasen, welche direkt die Entwindung der genetischen Information regulieren, erfolgen. Direkte Einflüsse auf die Proteinfaltung kann durch Substanzen oder physikalische Einflüssen ausgelöst werden, welche die Proteinkonformation regulieren. Diese sogenannten chemischen Chaperone sind in der Regel niedermolekulare Verbindungen, welche die Menge des strukturgebundenen Wassers an der Oberfläche von Proteinmolekülen regulieren und dadurch die Stabilität der Sekundär strukturen beeinflussen.All methods that interfere with replication, that is, the amplification of the viral genetic information, will therefore also prevent the formation of infectious progeny viruses. This can be done either indirectly by influencing helicases, which directly regulate the unwinding of the genetic information. Direct influences on protein folding can be triggered by substances or physical influences that regulate protein conformation. These so-called chemical chaperones are usually low molecular weight compounds which regulate the amount of structure-bound water on the surface of protein molecules and thereby influence the stability of the secondary structures.

[0012] Anwendungsgebiete sind sowohl die Behandlung als auch die Vorbeugung von viralen Infektionen. Es sind erfindungsgemäß Mittel zur Behandlung von unterschiedlichen Virusinfektionen entwickelt worden, die als wirksame Inhibitoren der Protease- und/oder Helikaseaktivität mit chemischen Schutzgruppen versehen sind. Die erfmdungsgemäßen neuartigen Mittel eignen sich zur Behandlung, Therapie und Hemmung von Infektionen mit unterschiedlichen humanpathogenen oder auch tierpathogenen Viren. Im Vordergrund stehen Erreger von chronischen Infektionserkrankungen, wie zum Beispiel AIDS (HIV-I und HIV-2), von Hepatitis (HCV und HBV), von dem Erreger des "Severe Acute Respiratory Syndrom" (SARS), dem SARS-CoV (Coronavirus); von Pockenviren, von Erregern des viralen hämorrhagisches Fiebers (VHF), wie zum Beispiel den Ebola- Viren als Vertreter der Familie der Filoviridae; von Grippe-Erregern, wie zum Beispiel dem Influenza- A- Virus. [0013] Gemäß einer vorteilhaften Ausgestaltung der Erfindung können in infizierten Zellen verschiedene anti-virale Wirkungen ausgelöst werden. Diese betreffen zum Beispiel die Hemmung der Replikation viraler genetische Informationen durch Beeinflussung der Helikaseaktivität. Gleichzeitig werden durch Inhibierung der Replikaseaktivität die weitere Prozessierung eventueller viraler Vorläuferproteine, also die Reifung von Virusproteinen und folglich die Freisetzung und die Produktion von infektiösen Nachkommenviren gestört. In der Gesamtsumme dieser Wirkung kann eine therapeutische Wirkung durch Blockade der Virusreplikation im Organismus bewirkt werden.Fields of application are both the treatment and the prevention of viral infections. There have been developed according to the invention means for the treatment of different viral infections, which are provided as effective inhibitors of protease and / or helicase activity with chemical protective groups. The novel agents according to the invention are suitable for the treatment, therapy and inhibition of infections with different human pathogenic or animal-pathogenic viruses. In the foreground are pathogens of chronic infectious diseases such as AIDS (HIV-1 and HIV-2), hepatitis (HCV and HBV), the causative agent of the Severe Acute Respiratory Syndrome (SARS), the SARS-CoV (Coronavirus ); poxviruses, viral haemorrhagic fever (VHF) pathogens, such as the Ebola virus as a member of the Filoviridae family; of influenza agents, such as the influenza A virus. According to an advantageous embodiment of the invention, various anti-viral effects can be triggered in infected cells. These concern, for example, the inhibition of the replication of viral genetic information by influencing helicase activity. At the same time, the further processing of any viral precursor proteins, ie the maturation of viral proteins and consequently the release and the production of infectious progeny viruses are disturbed by inhibiting the replicase activity. In the sum total of this effect, a therapeutic effect can be effected by blocking viral replication in the organism.

[0014] Die Aufgaben der Erfindung werden durch den Einsatz von mindestens einem Inhibitor der Helikase- und/oder Proteaseaktivität gelöst, der mit chemischen Schutzgruppen versehen ist. Es sind erfindungsgemäß Mittel zur Behandlung von Virus-Infektionen entwickelt worden, die als eine wirksame Komponente mit chemischen Schutzgruppen versehene Inhibitoren der Transkription und/oder Proteinprozessierung in pharmazeutischen Zubereitungen enthalten.The objects of the invention are achieved by the use of at least one inhibitor of helicase and / or protease activity, which is provided with chemical protecting groups. There have been developed according to the invention agents for the treatment of viral infections containing as an effective component with chemical protecting groups inhibitors of transcription and / or protein processing in pharmaceutical preparations.

[0015] In allen bevorzugten Anwendungen der Erfindung werden diese Inhibitoren und Substanzen von Zellen höherer Eukaryonten aufgenommen und nach Zellaufnahme entweder indirekt die Aktivitäten von Helikasen der Wirtszellen blockieren oder in Form von Proteasehemmern direkt die Prozessierung von Virusproteinen stören.In all preferred applications of the invention, these inhibitors and substances are taken up by cells of higher eukaryotes and after cell uptake either indirectly block the activities of helicases of the host cells or in the form of protease inhibitors directly interfere with the processing of viral proteins.

[0016] Erfindungsgemäß werden als Inhibitoren der Helikase- und/oder Proteaseaktivität Substanzen eingesetzt, die in verschiedenen Formen in vivo oral, intravenös, intramuskulär, subkutan, in verkapselter Form mit oder ohne Zellspezifität-tragende Veränderungen oder anderweitig verabreicht werden und die aufgrund der Anwendung eines bestimmten Applikations- und Dosis-Regimes eine geringe Zytotoxizität und/oder hohe Selektivität für bestimmte Zellen und Organe aufweisen, keine oder unbedeutende Nebenwirkungen auslösen, eine relativ hohe metabolische Halbwertszeit und eine relativ geringe Clearence-Rate im Organismus aufweisen.According to the invention as inhibitors of helicase and / or protease activity substances are used, which are administered in various forms in vivo orally, intravenously, intramuscularly, subcutaneously, in encapsulated form with or without cell specificity-bearing changes or otherwise and due to the application a particular application and dose regimen have low cytotoxicity and / or high selectivity for certain cells and organs, cause no or insignificant side effects, have a relatively high metabolic half-life and a relatively low clearance rate in the organism.

[0017] Als Inhibitoren der Helikase und/oder Proteaseaktivität werden des weiteren Substanzen eingesetzt, die total-synthetisch hergestellt, durch gentherapeutische Verfahren in vivo synthetisiert, durch gentechnische Verfahren in vitro oder in Mikroorganismen hergestellt, und durch chemische Modifikationen vor Degradationsprozessen geschützt werden. Eine Isolierung in natürlicher Form aus Mikroorganismen oder anderen natürlichen Quellen kann ebenso durchgeführt werden.As inhibitors of helicase and / or protease activity further substances are used which are produced totally synthetic, synthesized by gene therapy methods in vivo, prepared by genetic engineering methods in vitro or in microorganisms, and protected by chemical modifications against degradation processes. An isolation in natural form from microorganisms or other natural sources can also be carried out.

[0018] Mit den Inhibitoren der Helikase- und/oder Proteaseaktivität, die mit chemischen Schutzgruppen versehen sind, werden erfindungsgemäß Mittel zur Verfügung gestellt, die überraschenderweise durch die Blockierung der Replikation und Reifung von unterschiedlichen Viren die Produktion von infektiösen Nachkommen- Viren beeinträchtigen und damit die Ausbreitung einer systemischen Infektion im Organismus verhindern sowie weiterhin die Freisetzung von infektiösen Viren aus infizierten Zellen blockieren, die Ausbreitung einer Virus-Infektion im Organismus begrenzen, zur Verhinderung des Krankheitsausbruches und zur Reduzierung der Infektionsausbreitung im Organismus (Reduzierung von "viral load") von symptomlosen Virus-infizierten Personen beitragen, die Etablierung einer systemischen Virus-Infektion unmittelbar nach Kontakt mit infektiösen biologischen Proben, infizierten Personen oder deren näherer Umgebung verhindern, die Virämie sowohl bei einer Neuinfektion als auch bei chronischen Infektionen mit unterdrücken und den Erfolg einer Viruseliminierung durch das eigene Immunsystem und/oder durch bekannte Mittel, welche in Kombination mit den Inhibitoren der Helikase und/oder Proteaseaktivität mit ähnlicher oder anderer Wirkung erhöhen.With the inhibitors of helicase and / or protease activity, which are provided with chemical protective groups, means are provided according to the invention, surprisingly affect the production of infectious progeny viruses by blocking the replication and maturation of different viruses and thus prevent the spread of systemic infection in the organism and further block the release of infectious virus from infected cells, limit the spread of virus infection in the organism, prevent the onset of disease and reduce the spread of infection in the organism (reducing viral load) contribute to the prevention of systemic virus infection immediately after contact with infectious biological samples, infected individuals or their immediate vicinity, the viremia both in a new infection and in ch and suppress the success of virus elimination by the own immune system and / or by known means which in combination with the helicase inhibitors and / or protease activity increase with similar or other action.

[0019] Die mit Schutzgruppen versehenen Inhibitoren der Helikase und/oder Proteaseaktivität können auch in Kombination mit anderen anti- Virus-Medikamenten und sonstigen Therapieschemata eingesetzt werden, z.B. Interferon alpha/beta/gamma und Varianten hiervon (zum Beispiel pegylierte Interferone), Interleukine, Nukelosidanaloga (Lamivudine, Cidovir, Ribavirin und andere), Steroide, Thymidikinase-Hemmern (z.B. Ganzyklovir), Plasma- Austausch, Thymosin alpha 1, Impfstoffe, passive und aktive Vakzinierung, therapeutische und prophylaktische Vakzinierung, Glycyrrhizin, Stammzelltransplantation, Organtransplantationen, Nahrungstherapie, Immunsuppressiva, Cyclo sporine und Derivate hiervon, Amanditin und Derivate, Interleukine und andere Cytokine, nicht Proteasom-selektive Protease-Inhibitoren, Azathioprin, Hämodialyse sowie hoch aktive antiretrovirale Therapie (highly active antiretroviral therapy, "HAART") bei Co -Infektionen von HCV und HIV. Da diese Inhibitoren auch antivirale Wirkung auf HIV ausüben, ist eine Behandlung von HC V/HI V-Ko infektionen, insbesondere in Kombination mit HAART-Therapie, ein Anwendungsschwerpunkt der Erfindung.The protective groups of the inhibitors of helicase and / or protease activity can also be used in combination with other anti-viral drugs and other therapeutic regimens, such as interferon alpha / beta / gamma and variants thereof (for example, pegylated interferons), interleukins, Nukeloside analogues (lamivudine, cidovir, ribavirin and others), steroids, thymidikinase inhibitors (eg, Ganzyklovir), plasma exchange, thymosin alpha 1, vaccines, passive and active vaccination, therapeutic and prophylactic vaccination, glycyrrhizin, stem cell transplantation, organ transplants, nutritional therapy, immunosuppressants , Cyclosporins and derivatives thereof, amanditin and derivatives, interleukins and other cytokines, non-proteasome selective protease inhibitors, azathioprine, hemodialysis and highly active antiretroviral therapy ("HAART") in coinfections of HCV and HIV , Since these inhibitors also exert antiviral activity on HIV, treatment of HC V / HI V co-infections, especially in combination with HAART therapy, an application focus of the invention.

[0020] Die Merkmale der Erfindung gehen aus den Elementen der Ansprüche und aus der Beschreibung hervor, wobei sowohl einzelne Merkmale als auch mehrere in Form von Kombinationen vorteilhafte Ausführungen darstellen, für die mit dieser Schrift Schutz beantragt wird. Die Erfindung liegt auch in einem kombinierten Einsatz von bekannten und neuen Elementen, den Inhibitoren der Helikaseaktivität einerseits sowie der Proteaseaktivität andererseits. Weiterhin können diese neuen Mittel, welche die Transkription und Prozessierung von Virusproteinen beeinflussen, auch in Kombination mit anderen, bereits bekannten antiviralen Chemotherpeutika angewendet werden.The features of the invention will become apparent from the elements of the claims and from the description, wherein both individual features and several represent advantageous embodiments in the form of combinations for which protection is sought with this document. The invention is also in a combined use of known and novel elements, the inhibitors of helicase activity on the one hand and the protease activity on the other. Furthermore, these new agents, which affect the transcription and processing of viral proteins, can also be used in combination with other, already known antiviral chemotherapeutic agents.

[0021] Erfindungsgemäß findet die Hemmung der Helikase- und/oder Proteaseaktivität Verwendung zur Herstellung von Mitteln zur Bekämpfung / Behandlung und Vorbeugung von Erkrankungen sowie von pathologischen Erscheinungen, welche die durch SARS-CoV und verwandten Coronaviren verursacht werden, die durch virale hämorrhagische Fieber (VHF) in Menschen und Tieren, insbesondere in non- humanen Primaten (Affen) und ihre verwandten Tieren ausgelöst werden, wie zum Beispiel Infektionen mit den Vertretern der Filoviren, dem Ebolavirus und Marburgvirus oder die durch Infektionen mit Lassa- Virus oder Krim/Kongo-hämorrhagischem-Fieber- Virus verursacht werden.According to the invention, the inhibition of helicase and / or protease activity is used for the preparation of agents for the control / treatment and prevention of diseases as well as pathological phenomena caused by SARS-CoV and related coronaviruses caused by viral haemorrhagic fever ( VHF) in humans and animals, in particular in non-human primates (monkeys) and their related animals, such as, for example, infections with the representatives of the filoviruses, the Ebola virus and Marburg virus or those caused by infections with Lassa virus or Crimea / Congo haemorrhagic fever virus.

[0022] Für die bevorzugte Anwendung der erfindungsgemäß neuartigen antiviralen Mittel bei der Behandlung von viralen Hepatiden wird festgestellt, dass die erfindungsgemäße Verwendung von mit Schutzgruppen versehenen Inhibitoren der Helikase und/oder Proteaseaktivität in der Hemmung der Transkription, Assemblierung, Reifung und Freisetzung von Nachkommenviren besteht. Die Verwendung zur Hemmung der Vermehrung von Flaviviridae erfolgt nach den Mechanismen a) Blockierung/Reduktion der Assemblierung und Freisetzung von neuen Virionen, b) Blockierung/Reduktion der Infektiosität der freigesetzten Virionen, c) Blockierung/Reduktion der Infektionsausbreitung in kultivierten Zellen.For the preferred application of the novel antiviral agents of the invention in the treatment of viral hepatides, it is noted that the use of helicase-protected inhibitors of the invention and / or protease activity in the inhibition of transcription, assembly, maturation and release of progeny viruses , The use of inhibiting the multiplication of Flaviviridae is by the mechanisms a) blocking / reducing the assembly and release of new virions, b) blocking / reducing the infectivity of the released virions, c) blocking / reducing the spread of infection in cultured cells.

[0023] Dies impliziert, dass die neuartigen Chloro- und Fluoromethylketon-Derivate der o.g. Inhibitoren die Ausbreitung von Nachkommenviren in infizierten Organen unterdrücken. [0024] Eine weitere Verwendung von mit Schutzgruppen versehenen Inhibitoren der Helikase- und/oder Proteaseaktivität ist die Vorbeugung einer Hepatitis- Virusinfektion bei Personen mit hohem Risiko einer Neuinfektion, zum Beispiel bei Ärzten und anderem Risiko-Personal, Drogenabhängigen, Reisenden in hochendemische Gebiete für Hepatitis- Viren, in der Krankenbehandlung oder für Familienangehörige von chronischen Virusträgern.This implies that the novel chloro- and fluoromethyl ketone derivatives of the above inhibitors suppress the propagation of progeny viruses in infected organs. Another use of protected inhibitors of helicase and / or protease activity is the prevention of hepatitis viral infection in individuals at high risk of re-infection, for example, physicians and other risk personnel, drug addicts, travelers in highly endemic areas Hepatitis viruses, in the treatment of patients or for family members of chronic virus carriers.

[0025] Eine wesentliche Anwendung besteht in der Verwendung von Inhibitoren der Helikase- und/oder Proteaseaktivität zur Herstellung von Mitteln bzw. pharmazeutischen Zubereitungen zur Hemmung der Transkription, Freisetzung, Reifung und Replikation von Hepatitisviren sowie zur Herstellung von Arzneimitteln zur Behandlung und Prophylaxe von Hepatitiden.An essential application is the use of inhibitors of helicase and / or protease activity for the preparation of agents or pharmaceutical preparations for inhibiting the transcription, release, maturation and replication of hepatitis viruses and for the production of medicaments for the treatment and prophylaxis of hepatitis ,

[0026] In der Summe dieser neuartigen Mechanismen lässt sich feststellen, dass die verminderte Freisetzung von noch dazu wenigen oder gar nicht infektiösen Viruspartikeln im Netto-Effekt bei gleichzeitigem Zelltod von Virus-produzierenden Karzinomzellen im Falle einer in vivo Anwendung von Helikase- und/oder Proteaseinhibitoren die Menge an infektiösen Virionen in einem mit Hepadnaviren infizierten Organismus verringert. Somit wird insgesamt die Zahl infizierter Produzentenzellen im Leberzellgewebe reduziert. Dies macht die Anwendung von Chloro- und Fluoromethylketon-Derivaten der o.g. Inhibitoren allein oder in Kombination mit bereits in der anti- viralen Therapie von Hepadnaviren verwendeten Therapeutika attraktiv.In sum, these novel mechanisms can be found that the reduced release of even a few or no infectious virus particles in net effect with simultaneous cell death of virus-producing carcinoma cells in the case of in vivo application of helicase and / or Protease inhibitors reduces the amount of infectious virions in a hepadnavirus infected organism. Thus, the number of infected producer cells in liver cell tissue is reduced overall. This makes the use of chloro and fluoromethyl ketone derivatives of the above-mentioned. Inhibitors alone or in combination with already used in the anti-viral therapy of hepadnaviruses therapeutics attractive.

[0027] Gegenstand der Erfindung ist ebenfalls die Verwendung von mit Schutzgruppen versehenen Helikase- und/oder Proteaseinhibitoren für die Bekämpfung / Behandlung von Erkrankungen/pathologischen Erscheinungen, die durch Infektionen mit Retroviren verursacht wurden. Die Erkrankungen/pathologischen Erscheinungen können durch Infektionen mit Leukämieviren, humanen T-Zell-Leukämieviren HTLV-I und HTLV-II oder durch Infektionen mit Lentiviren verursacht werden.The invention also provides the use of protective helicase and / or protease inhibitors for the control / treatment of diseases / pathological phenomena caused by infections with retroviruses. The diseases / pathological phenomena can be caused by infections with leukemia viruses, human T-cell leukemia viruses HTLV-I and HTLV-II or by infections with lentiviruses.

[0028] Ein weiteres Anwendungsgebiet der Erfindung ist die Bekämpfung / Behandlung von AIDS, sowohl in der frühen symptomlosen als auch in der fortgeschrittenen Krankheitsphase, mittels Inhibitoren der Helikase- und/oder Proteaseaktivität. Diese Substanzen können auch in Kombination mit anderen anti-retro viralen Medikamenten eingesetzt werden, z.B. mit Blockern der Reversen Transkriptase. Auch die Kombination mit anti-retroviralen Therapien basierend auf gentherapeutischen Interventionen ist möglich. [0029] Eine weitere Verwendung ergibt sich durch die Kombination mit intrazellulärer Immunisierung, wie z.B. dem Einbringen von anti-HIV- 1 /HI V-2 wirksamen Genen in Stammzellen und/oder in periphere CD4⁺ Lymphozyten.Another field of application of the invention is the control / treatment of AIDS, both in the early asymptomatic and in the advanced disease phase, by means of inhibitors of helicase and / or protease activity. These substances can also be used in combination with other anti-retroviral drugs, eg with reverse transcriptase blockers. The combination with anti-retroviral therapies based on gene therapy interventions is also possible. Another use results from the combination with intracellular immunization, such as the introduction of anti-HIV-1 / HI V-2 effective genes in stem cells and / or in peripheral CD4 ⁺ lymphocytes.

[0030] Eine Verhinderung des Krankheitsausbruches und eine Reduzierung der Infektionsausbreitung im Organismus (Reduzierung von "viral load") von symptomlosen HIV- 1 /HI V-2 seropositiven und HIV-I /HI V-2-infϊzierten Personen ist erfindungsgemäß ebenfalls möglich. Weiterhin können die erfindungsgemäßen Inhibitoren der Helikase- und/oder Proteaseaktivität zur Behandlung / Bekämpfung / Verhinderung von HIV-induzierter Demenz, insbesondere zur Verhinderung der HIV-Infektion von Neuronen, Glia- und Endothelzellen in Kapillaren des Gehirns eingesetzt werden. Eine weitere Verwendung ist die Verhinderung der Etablierung einer systemischen HIV-I /HI V-2-Infektion unmittelbar nach Kontakt mit infektiösem Virus (zum Beispiel bei Nadel-Stich- Verletzungen mit HIV-kontaminiertem Blut oder Blutprodukten).A prevention of disease outbreak and a reduction of the spread of infection in the organism (reduction of "viral load") of asymptomatic HIV-1 / HI V-2 seropositive and HIV-I / HI V-2 infected persons is also possible according to the invention. Furthermore, the inhibitors of helicase and / or protease activity according to the invention can be used for the treatment / control / prevention of HIV-induced dementia, in particular for the prevention of HIV infection of neurons, glia and endothelial cells in capillaries of the brain. Another use is to prevent the establishment of systemic HIV-I / HI V-2 infection immediately after contact with infectious virus (for example, needle-stick injuries with HIV-contaminated blood or blood products).

[0031] Die Prinzip-Lösung der Aufgabe wird am Beispiel von HIV-I und HIV-2 gezeigt. Es wird dargestellt, dass unmittelbar nach Zugabe von verschiedenen Substanzklassen von mit Schutzgruppen versehenen Inhibitoren der Helikase- und/oder Proteaseaktivität im Folgenden die Produktion von infektiösen Viruspartikeln gehemmt wird.The principle solution of the problem is shown by the example of HIV-1 and HIV-2. It is shown that immediately after the addition of different classes of compounds of protected inhibitors of helicase and / or protease activity in the following production of infectious virus particles is inhibited.

[0032] Erfindungsgemäß wird dieses Phänomen in HIV-I infizierten permanenten Kulturen von CD4⁺ humanen T-Zellen transfiziert mit infektiöser proviraler DNA HIV-I beobachtet und hier näher beschrieben. Aufgrund dieser neuartigen Aktivitäten der erfindungsgemäßen Inhibitoren der viralen Transkription und Prozessierung ist davon auszugehen, dass die Applikation von in vivo verträglichen mit Schutzgruppen versehenen Inhibitoren der Helikase- und/oder Proteaseaktivität die Infektionsausbreitung von HIV im Organismus unterdrücken oder vollständig eliminieren kann.According to the invention, this phenomenon is observed in HIV-I infected permanent cultures of CD4 ⁺ human T cells transfected with infectious proviral DNA HIV-I and described in more detail here. Because of these novel activities of the inhibitors of viral transcription and processing according to the invention, it can be assumed that the application of inhibitors of helicase and / or protease activity provided with protective groups in vivo can suppress or completely eliminate the spread of infection of HIV in the organism.

[0033] Erfindungsgemäß wird gezeigt, dass der hemmende Effekt von Inhibitoren der Helikase- und/oder Proteaseaktivität durch Chloro- und/oder Fluoromethylketone auf die HIV-Replikation folgende Mechanismen beinhaltet:According to the invention it is shown that the inhibitory effect of inhibitors of helicase and / or protease activity by chloro- and / or fluoromethyl ketones on the HIV replication includes the following mechanisms:

1. Blockierung/Reduktion der Transkription der viralen genetischen Information;1. blocking / reduction of transcription of viral genetic information;

2. Blockierung/Reduktion der proteolytischen Prozessierung der Gag-Polyproteine; 3. Blockierung/Reduktion von Freisetzung und Budding von neuen Virionen an der Zellmembran;2. blocking / reduction of proteolytic processing of gag polyproteins; 3. blocking / reduction of release and budding of new virions at the cell membrane;

4. Blockierung/Reduktion der Infektiosität von freigesetzten Virionen;4. blockage / reduction of infectivity of released virions;

5. Blockierung/Reduktion der Infektionsausbreitung von HIV-I in Kultur CD4⁺ T-Zellen.5. Blockage / reduction of infection spread of HIV-I in culture CD4 ⁺ T cells.

[0034] Zur Lösung der Aufgabe wurden im Rahmen der Erfindung verschiedene proteinchemische, molekular- viro logische und morphologische Studien an HIV-I durchgeführt. Erfindungsgemäß wird der durch mit Schutzgruppen versehenen Inhibitoren der Helikase- und/oder Proteaseaktivität ausgelöste Defekt in der Prozessierung der viralen Vorläuferproteine mittels biochemischer Methoden dargestellt. Durch den Einfluss von den erfindungsgemäßen Chloro- und/oder Fluoromethylketonen im, mit humanem Immundefizienzvirus (HIV) infizierten, humanen Lymphozyten-System konnte eine dosisabhängige Replikationshemmung gezeigt werden.To solve the problem various protein chemical, molecular viro logical and morphological studies of HIV-I were carried out in the context of the invention. According to the invention, the defect in the processing of the viral precursor proteins triggered by protective groups with inhibitors of the helicase and / or protease activity is represented by means of biochemical methods. The influence of the chloro- and / or fluoromethyl ketones according to the invention in the human lymphocyte system infected with human immunodeficiency virus (HIV) showed a dose-dependent inhibition of replication.

[0035] Erfindungsgemäß wird dargestellt, dass die hemmende Wirkung von Inhibitoren, die mit der Chloro- und/oder Fluoromethylketon-Schutzgruppen versehen wurden, auf die HIV- Replikation, Assemblierung und Freisetzung nicht aber die enzymatische Aktivität der HIV-I PR (Protease ?) trifft. Durch in vitro Prozessierungsstudien an isolierten Gag- und PR-Mo lekülen von HIV-I wird gezeigt, dass verschiedene Substanzklassen von Inhibitoren Helikaseinhibitoren keinerlei Einfluss auf die PR- Aktivität ausüben.According to the invention it is shown that the inhibitory effect of inhibitors provided with the chloro and / or fluoromethyl ketone protecting groups on HIV replication, assembly and release but not the enzymatic activity of HIV-I PR (protease? ) meets. In vitro processing studies on isolated Gag and PR molecules of HIV-I have shown that various classes of inhibitors of helicase inhibitors exert no influence on PR activity.

[0036] Erfindungsgemäß wird der inhibitorische Effekt der erfindungsgemäßen Inhibitoren der Helikase- und/oder Proteaseaktivität auf die Virusreplikation in Kulturen HIV-I -infizierter CD4⁺ T-Zellen demonstriert. Die Zugabe von nanoM-Konzentrationen an verschiedenen Substanzklassen der erfindungsgemäßen Inhibitoren der Helikase- und/oder Proteaseaktivität verhindert die Infektionsausbreitung und bewirkt das Ausbleiben einer produktiven Virusreplikation.According to the invention, the inhibitory effect of the inhibitors of helicase and / or protease activity according to the invention on the virus replication in cultures of HIV-1 -infected CD4 ⁺ T cells is demonstrated. The addition of nanoM concentrations to various classes of the inventive inhibitors of helicase and / or protease activity prevents the spread of infection and causes the lack of productive virus replication.

[0037] Das in der Erfindungsbeschreibung dargestellte Prinzip der Verwendung der erfindungsgemäßen Inhibitoren der Helikase- und/oder Proteaseaktivität zur Blockierung einer HIV-Infektion ist neuartig in Hinsicht auf die Verwendung einer bereits bekannten Substanzklasse (mit chemischen Schutzgruppen versehene Helikase- und/oder Proteasehemmer) für eine neue Aktivität (der Blockierung von Gag-Prozessierung und Freisetzung von Retroviren). [0038] Weiterhin ist neu, dass die Verwendung der erfindungsgemäßen Inhibitoren der Helikase- und/oder Proteaseaktivität zur Blockierung von HIV und anderen Retroviren nicht das Virus selber, sondern Mechanismen beeinflusst, die in allen Wirtszellen des Virus konserviert sind. Im Vergleich zu bisherigen anti-retroviralen Methoden, die essentielle Komponenten des Virus selber treffen, ist die Wahrscheinlichkeit der Entstehung von Resistenzmechanismen bei Applikation von mit Schutzgruppen versehenen Inhibitoren der Helikase um Größenordnung geringer. Die Neuartigkeit dieses Wirkprinzips der erfindungsgemäßen Inhibitoren der Helikase- und/oder Proteaseaktivität zeigt sich auch in der Tatsache, dass diese Inhibitoren ein breites Wirkungsspektrum gegenüber unterschiedlichen Isolaten von HIV-I besitzen. Der inhibitorische Effekt wurde im Rahmen der Erfindung mit gleicher Intensität bei verschiedenen primären als auch Zellkultur-adaptierten T-Zelltrophen und Makrophagen-trophen HIV-Isolaten beobachtet.The principle of the use according to the invention of the inhibitors of helicase and / or protease activity according to the invention for blocking an HIV infection is novel with respect to the use of an already known class of substances (helicase and / or protease inhibitors provided with chemical protective groups). for a new activity (the blocking of gag processing and release of retroviruses). Furthermore, it is novel that the use of the inhibitors of helicase and / or protease activity according to the invention for the blocking of HIV and other retroviruses does not affect the virus itself, but mechanisms that are conserved in all host cells of the virus. Compared to previous anti-retroviral methods, the essential components of the virus itself hit, the likelihood of the emergence of resistance mechanisms in the application of protected helicase inhibitors are orders of magnitude smaller. The novelty of this principle of action of the inhibitors of helicase and / or protease activity according to the invention is also reflected in the fact that these inhibitors have a broad spectrum of activity against different isolates of HIV-1. The inhibitory effect was observed within the scope of the invention with equal intensity in various primary as well as cell culture-adapted T-cell tropes and macrophage-tropic HIV isolates.

[0039] Neuartig ist weiterhin das Prinzip der Wirkung der erfindungsgemäßen Inhibitoren der Helikase- und/oder Proteaseaktivität, die zwar nicht den Viruseintritt, wohl aber die Produktion von infektiösen Viruspartikeln von bereits infizierten Zellen verhindern. Dadurch sollte wesentlich die Menge an infektiösen Virionen (Viruslast) und somit die Infektionsausbreitung in vivo reduziert werden können. Die mittlere Überlebenszeit einer akut HlV-infizierten T-Zelle beträgt wenige Tage. Zudem ist bekannt, dass die Hemmung der Virusfreisetzung und die damit verbundene Akkumulation von zum Teil toxischen HIV-Proteinen (insbesondere den Env- Hüllproteinen) zu einem verstärkten zytopathischen Effekt und dadurch zum schnelleren Absterben der infizierten Zelle führt. Neben der Neuinfektion sollte die Wirkung der erfindungsgemäßen Inhibitoren der Helikase- und/oder Proteaseaktivität auch zu einem schnelleren Absterben von bereits infizierten Zellen führen.Also novel is the principle of the action of the inhibitors of helicase and / or protease activity according to the invention, which does not prevent the virus, but the production of infectious virus particles from already infected cells. This should significantly reduce the amount of infectious virions (viral load) and thus the spread of infection in vivo. The mean survival time of an acute HIV-infected T cell is a few days. In addition, it is known that the inhibition of virus release and the associated accumulation of partially toxic HIV proteins (in particular the Env envelope proteins) leads to an increased cytopathic effect and thereby to faster death of the infected cell. In addition to the new infection, the effect of the inhibitors of helicase and / or protease activity according to the invention should also lead to a faster death of already infected cells.

[0040] In der Summe dieser neuartigen Mechanismen lässt sich feststellen, dass die verminderte Freisetzung von noch dazu wenigen oder gar nicht infektiösen Viruspartikeln im Netto-Effekt bei gleichzeitigem Zelltod der Virus-produzierenden Zellen im Falle einer in vivo Anwendung der erfindungsgemäßen Inhibitoren der Helikase- und/oder Proteaseaktivität die Menge an infektiösen Virionen im peripheren Blut und gleichzeitig die Zahl infizierter Produzentenzellen von HIV im Gesamt-Organismus reduziert. Dies macht die Anwendung der erfindungsgemäßen Inhibitoren der Helikase- und/oder Proteaseaktivität allein oder in Kombination mit bereits in der anti-retroviralen Therapie verwendeten Enzymhemmern attraktiv. [0041] Die Prinzip-Lösung der Aufgabe wird an den Beispielen von HIV- Viren gezeigt. In Kontrollversuchen wurde zunächst dargestellt, dass eine Vorbehandlung der Target-Zellen (CD4⁺ T-Zellen) mit nicht-zytotoxischen Konzentrationen verschiedener Substanzklassen von Inhibitoren der Helikase- und/oder Proteaseaktivität keinen Einfluss auf die Lebensfähigkeit der Wirtszelle ausübt.In the sum of these novel mechanisms, it can be stated that the reduced release of even a few or even non-infectious virus particles has a net effect with simultaneous cell death of the virus-producing cells in the case of in vivo use of the helicase inhibitors according to the invention. and / or protease activity reduces the amount of infectious virions in the peripheral blood and at the same time reduces the number of infected producer cells of HIV in the whole organism. This makes the use of the inhibitors of helicase and / or protease activity according to the invention alone or in combination with enzyme inhibitors already used in anti-retroviral therapy attractive. The principle solution of the problem is shown by the examples of HIV viruses. In control experiments it was first shown that pretreatment of the target cells (CD4 ⁺ T cells) with non-cytotoxic concentrations of different substance classes of inhibitors of helicase and / or protease activity has no influence on the viability of the host cell.

[0042] Die Erfindung soll anhand von Ausführungsbeispielen näher erläutert werden, ohne auf diese Beispiele beschränkt zu sein.The invention will be explained in more detail by means of embodiments, without being limited to these examples.

Ausführungsbeispieleembodiments

Beispiel 1 :Example 1 :

[0043] Die Behandlung von humanen HlV-infϊzierten Zellkulturen mit moderaten Konzentrationen von potentiellen Inhibitoren der Protease reduziert drastisch das Wachstum infizierter Zellen. Hierbei zeigt sich keine unspezifische Zell-Toxizität.The treatment of human HIV-infected cell cultures with moderate concentrations of potential inhibitors of the protease drastically reduces the growth of infected cells. This shows no unspecific cell toxicity.

Die Inhibition der HIV-Replikation im HLT-System zeigt Figur 1 :The inhibition of HIV replication in the HLT system is shown in FIG. 1:

Die humane Tonsille wurde nach der Ektomie in 3-5mm große Blöcke geschnitten und je 9 dieser Blöcke auf Gelschwämme zur weiteren Kultivierung gegeben. Jeder Block wurde mit 10ng HIV für 24h infiziert bei gleichzeitiger Gabe von 50μM AAPFcmk. Es wurde pro Ansatz eine 3fach Bestimmung durchgeführt. Nach 24h wurde das Virus rausgewaschen und die Blöcke für weitere 15 Tage in RPMI-Medium kultiviert. Alle 3 Tage wurden Überstände für die RT- Aktivitätsbestimmung genommen und neues Kulturmedium dazugegeben.The human tonsil was cut into 3-5mm blocks after the ectomy and each 9 of these blocks were placed on gel sponges for further cultivation. Each block was infected with 10ng of HIV for 24h with concomitant administration of 50μM AAPFcmk. A 3-fold determination was carried out per batch. After 24 hours, the virus was washed out and the blocks cultured for a further 15 days in RPMI medium. Supernatants were taken every 3 days for RT activity determination and new culture medium added.

Beispiel 2:Example 2:

[0044] Die Behandlung von Methylprednisolon-behandelten Thymozyten mit Chloromethylketonen verhindert Lamin-Breakdown, Chromatinfragmentation und apoptotisch bedingte morphologische Veränderungen. Beispiel 3 :The treatment of methylprednisolone-treated thymocytes with chloromethyl ketones prevents lamin-breakdown, chromatin fragmentation and apoptotic morphological changes. Example 3:

[0045] Chloromethylketone besitzen ein sehr starkes, Dosis-abhängiges Potential zur Wachstumshemmung ras-transformierter Zellen.Chloromethyl ketones have a very strong, dose-dependent potential for inhibiting the growth of ras-transformed cells.

Beispiel 4:Example 4:

[0046] Erste Experimente weisen auf eine AAPFc_Mκ/Chloromethylketon-bedingten Verminderung der Replikation von HI-Viren im humanen lymphatischen System hin.Initial experiments indicate an AAPFc _M κ / chloromethyl ketone-related reduction in the replication of HI viruses in the human lymphatic system.

Literatur:Literature:

Clawson et al. 1993. An inhibitor of nuclear scaffold protease blocks chemical transformation of fibroblasts. Cell Growth Differ. 4(7):589-94.Clawson et al. 1993. An inhibitor of nuclear scaffold protease blocks a chemical transformation of fibroblasts. Cell Growth Differ. 4 (7): 589-94.

Clawson et al. 1995. Nuclear scaffold-associated protease: in situ nuclear localization and effects of a proteasome inhibitor on growth and morphology of a ras-transformed hepatocyte cell line. Hepatology 22(4 Pt l):1230-5.Clawson et al. 1995. Nuclear scaffold-associated protease: in situ nuclear localization and effects of a proteasome inhibitor on growth and morphology of a ras-transformed hepatocyte cell line. Hepatology 22 (4 Pt l): 1230-5.

Drubin et al. 2006. A Protease Inhibitor Specifically Inhibits Growth of HPV-Infected Keratinocytes. Molecular Therapie 13(6): 1142-8.Drubin et al. 2006. A Protease Inhibitor Specifically Inhibits Growth of HPV-Infected Keratinocytes. Molecular Therapy 13 (6): 1142-8.

Drubin et al. 2004. Spontaneous transformation of an immortalized hepatocyte cell line: potential role of a nuclear protease. Cancer Letters 213: 39-48.Drubin et al. 2004. Spontaneous transformation of an immortalized hepatocyte cell line: potential role of a nuclear protease. Cancer Letters 213: 39-48.

Pereira et al. 1999. The 2.2 A crystal structure of human chymase in complex with succinyl-Ala- Ala-Pro-Phe-chloromethylketone: structural explanation for its dipeptidyl carboxypeptidase specificity. J Mol Biol. 286(1): 163-73.

Pereira et al. 1999. The 2.2 A crystal structure of human chymase in complex with succinyl-Ala-Ala-Pro-Phe-chloromethyl ketones: structural explanation for its dipeptidyl carboxypeptidase specificity. J Mol Biol. 286 (1): 163-73.

Claims

claims

1. A composition for the treatment or prevention of acute and chronic infections with human and animal pathogenic viruses, characterized in that they contain as an effective component at least one provided with chemical protective groups inhibitor of protease and / or helicase activity in a pharmaceutical preparation containing the inhibits the assembly and maturation of virus structural proteins.

2. Composition according to claim 1, characterized in that chloro or fluoromethyl ketone groups are used as chemical protecting groups.

3. Composition according to claim 1 and 2, characterized in that as inhibitors of protease and / or helicase activity inhibitors of cellular protease, as well as substances which cause the unwinding of the DNA by influencing the ATP-dependent helicase or inhibitors of transcription and / or protein processing.

4. Composition according to one of claims 1 to 3, characterized in that as inhibitors provided with chemical protective groups of protease and / or helicase activity one or more of the following substances is used: AAPFCMK, Z-VAD _F MK, IETDFMK, AC YVADCMK , VEIDFMK, VPFCMK, LLFCMK, AAFCMK, AAPYCMK and GGLCMK-

5. Use of protease and / or helicase activity inhibitors provided with chemical protective groups for the production of anti-viral agents and / or pharmaceutical preparations with anti-viral activity, which inhibits the late processes of the replication cycle of viruses, ie the assembly, the release, and the maturation of infectious progeny viruses, and thus the virus budding of viruses, for the treatment of viral diseases.

6. Use of chemical protecting group inhibitors of protease and / or helicase activity, which are the late processes of the replication cycle of viruses by influencing retroviral Gag proteins for the preparation of pharmaceutical preparations for the treatment of viral diseases.

7. Use according to claim 6 or 7 for the treatment of infectious diseases such as AIDS (HIV-1 and HIV-2), hepatitis, haemorrhagic fever, Severe Acute Respiratory Syndrome (SARS), smallpox, measles, polio, Filoviridae, Flaviviridae or influenza ,

8. Use according to any one of claims 5 to 7 as broad spectrum virostats for the prevention or therapy of different viral infections.

9. Use according to any one of claims 5 to 8 for blocking the replication and maturation of different viruses and thus prevent the production of infectious progeny viruses and the spread of systemic infection in the organism and continue

block the release of infectious viruses from infected cells,

- limit the spread of a viral infection in the organism,

- contribute to the prevention of disease outbreak and to the reduction of the spread of infection in the organism (reduction of "viral load") of asymptomatic virus-infected persons,

prevent the establishment of a systemic virus infection immediately after contact with infectious biological samples, infected persons or their closer environment,

suppress the viremia both with a new infection and with chronic infections and increase the success of a virus elimination by the own immune system and / or by known means, which in combination with the inhibitors of the helicase and / or protease activity with similar or other effect increase.

10. Use according to any one of claims 5 to 9 in combination with other anti-viral drugs and other therapeutic regimens such as interferon alpha / beta / gamma and variants thereof (in particular pegylated interferons), interleukins, Nukelosidanaloga (lamivudine, cidovir, ribavirin and others) , Steroids, thymidikinase inhibitors (eg, Ganzyklovir), plasma exchange, thymosin alpha 1, vaccines, passive and active vaccination, therapeutic and prophylactic vaccination, glycyrrhizin, stem cell transplantation, organ transplants, nutritional therapy, immunosuppressants, cyclosporins and derivatives thereof, amanditin and derivatives, Interleukins and other cytokines, not proteasome-selective protease inhibitors, azathioprine, hemodialysis as well Highly active antiretroviral therapy ("HAART") or co-infections of HCV and HIV.

11. Use according to one of claims 5 to 10 according to the mechanisms a) blocking / reduction of the assembly and release of new virions, b) blocking / reduction of the infectivity of the released virions, c) blocking / reduction of the spread of infection in cultured cells.

Use according to any one of claims 5 to 11 for the prevention of hepatitis viral infection in persons at high risk of re-infection, for example, physicians and other risk personnel, drug addicts, travelers in high-grade areas for hepatitis viruses, in the treatment or for Family members of chronic virus carriers.

13. Use according to any one of claims 5 to 12 for the preparation of medicaments for the treatment and prophylaxis of hepatitis.

14. Use according to any one of claims 5 to 13 for reducing the amount of infectious virions in a hepadnavirus-infected organism or for reducing the number of infected producer cells in liver cell tissue both alone and in combination with therapeutic agents already used in the anti-viral therapy of hepadnaviruses ,

15. Use according to any one of claims 5 to 14 for the control / treatment of diseases / pathological phenomena caused by infections with retroviruses, in particular by infections with leukemia viruses, human T-cell leukemia viruses HTLV-I and HTLV-II or by infection with lentiviruses.

Use according to any one of claims 5 to 15 for the control / treatment of AIDS, both in the early asymptomatic and in the advanced disease phase, also in combination with other anti-retroviral drugs such as reverse transcriptase blockers or in combination with anti-retroviral ones Therapies based on gene therapy interventions.

17. Use according to claim 16 in combination with intracellular immunization, such as the introduction of anti-HIV-1 / HI V-2 effective genes in stem cells and / or in peripheral CD4 ⁺ lymphocytes.

18. Use according to any one of claims 5 to 17 for the prevention of disease outbreak and a reduction of the spread of infection in the organism (reduction of "viral load") of asymptomatic HIV-1 / HIV-2 seropositive and HIV-1 / HIV-2 infected persons or for the treatment / control / prevention of HIV-induced dementia, in particular for the prevention of HIV infection of neurons, glial and endothelial cells in capillaries of the brain or for the prevention of the establishment of systemic HIV-I / HI V-2 infection immediately after Contact with infectious virus (for example, in needle-stick injuries with HIV-contaminated blood or blood products).

19. Use according to any one of claims 5 to 18, according to the mechanisms a) blocking / reduction of the transcription of the viral genetic information; b) blocking / reduction of proteolytic processing of the gag polyproteins; c) blocking / reduction of release and budding of new virions at the cell membrane; d) blocking / reducing the infectivity of released virions; e) Blocking / reducing the spread of infection of HIV-1 in culture CD4 ⁺ T cells.