WO2007148739A1

WO2007148739A1 - 植物由来の細胞賦活化剤、抗老化剤及び細胞外マトリックス産生促進剤

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Publication number: WO2007148739A1
Application number: PCT/JP2007/062457
Authority: WO
Inventors: Yoshihisa Kasukabe; Michiko Suzuki; Atsushi Sogabe
Original assignee: Toyobo Co Ltd
Current assignee: Toyobo Co Ltd
Priority date: 2006-06-22
Filing date: 2007-06-20
Publication date: 2007-12-27
Anticipated expiration: 2008-12-22
Also published as: JPWO2007148739A1

Abstract

　本発明は、細胞に対して賦活化、抗老化、細胞外マトリックス産生促進効果に優れ、長期にわたる使用に十分に耐えうる細胞賦活化剤又は抗老化剤を提供する。具体的には、本発明は、ポリアミンを有効成分として含む植物抽出物を含有することを特徴とする細胞賦活化剤、抗老化剤、細胞外マトリックス産生促進剤さらにそれらを有効成分とする化粧品・医薬部外品（皮膚外用剤、浴用剤、育毛剤等）、飲食品、医薬品に利用するための方法を提供する。

Description

明細書

植物由来の細胞賦活化剤、抗老化剤及び細胞外マトリックス産生促進剤技術分野

[0001] 本発明は、各種細胞の賦活化作用又は抗老化作用を高める物質及びその利用方法に関する。

[0002] また、本発明は、各種細胞の細胞外マトリックス産生を促進する物質及びその利用方法に関する。

背景技術

[0003] 個体老化やこれに伴って発生する各種の疾患などは、分裂するすべての細胞の老ィ匕 (分裂速度の低下、細胞機能の低下）と深く関わっている。例えば皮膚の真皮及び表皮は、表皮細胞、繊維芽細胞、及びこれら細胞外の皮膚構造を支持するエラスチン、コラーゲン、ヒアルロン酸等の細胞外マトリックスによって構成されている。特にコラーゲンやヒアルロン酸の合成や分解を制御しているのは主として繊維芽細胞である (非特許文献 1)。

[0004] 若い皮膚においては、これらの皮膚組織の相互作用が恒常性を保つことによって水分保持、柔軟性、弾力性が確保され、肌は外観的にも張りと艷があり、みずみずしい状態に維持される。ところ力加齢や紫外線、乾燥、ストレスなどによって特に細胞外マトリックスや繊維芽細胞の機能低下が引き起こされ、その結果、皮膚の柔軟性、保湿機能は低下し、肌は張りゃ艷を失い、荒れ、しわ、くすみなどの老化症状が発生する。加齢とともに繊維芽細胞の機能は衰えコラーゲンやヒアルロン酸の代謝回転速度は低下することも知られている (非特許文献 2)。

[0005] 細胞レベルで老化防止や抑制を目的に賦活化剤、抗老化剤、細胞外マトリックス産生促進剤の探索が行われている。例えば動物系由来の細胞賦活化剤としては、結合組織加水分解物 (特許文献 1)、胸腺 *脾臓由来水溶性蛋白（特許文献 2)、牛胎盤エキス (特許文献 3)などが知られてレ、る。植物系由来の細胞賦活化剤としては、ゴマ、サンャク、トウガラシ、トウキ、ドクダミ、バタモンドウ（特許文献 4)、アーモンド、セィヨウタンポポ、セィヨウニヮトコ、センキユウ、センブリ、ソゥハクヒ、トウニン、ニンジン、ホップ、ムクゲ、ョクイニン (特許文献 5)、ショウガ科ゥコン属（特許文献 6)、ハナヤスリ科ハナヤスリ属（特許文献 7)の抽出物などが知られている。コラーゲンを産生促進する作用を有する物質としては、甘草葉抽出物 (特許文献 8)、ハス胚芽抽出物 (特許文献 9)、加水分解バレイショタンパク（特許文献 10)、柿の葉抽出物又はサンザシの果実抽出物（特許文献 11)、米糠溶媒抽出物（特許文献 12)、アヤメ科クロッカス属サフラン抽出物（特許文献 13)、ゥリ科植物の種子抽出物（特許文献 14)などが知られている。これらの一部は賦活化剤、抗老化剤、コラーゲン産生促進剤又はヒアルロン酸産生促進剤として医薬部外品や化粧品に利用されているが、非常に個人差が大きく、作用効果が十分とは言えず、満足すべき作用効果を発揮する細胞賦活化剤、抗老化剤、さらにはコラーゲン産生促進剤やヒアルロン酸産生促進剤を含む細胞外マトリックス産生促進剤は得られていな力、つた。

ポリアミンは、第 1級アミノ基を 2つ以上もつ脂肪族炭化水素の総称で生体内に普遍的に存在する天然物であり、 20種類以上のポリアミンが見出されている。代表的なポリアミンとしてはプトレシン、スペルミジン、スペルミンがある。ポリアミンの主な生理作用としては (1)核酸との相互作用による核酸の安定化と構造変化 (2)種々の核酸合成系への促進作用 (3)タンパク質合成系の活性化 (4)細胞膜の安定化や物質の膜透過性の強化 (5)活性酸素の消去 (6)細胞増殖の促進が知られているが、特に皮膚の細胞 (繊維芽細胞）における賦活化作用、抗老化作用、細胞外マトリックスの産生促進作用やコラーゲン又はヒアルロン酸の産生促進作用については全く知られていなかつに。

特許文献 1 :特開昭 62— 84024号公報

特許文献 2 :特開昭 63— 188697号公報

特許文献 3：特開平 03— 141299号公報

特許文献 4 :特開平 10— 45615号公報

特許文献 5：特開平 10— 36279号公報

特許文献 6 :特開 2004— 75632号公報

特許文献 7 :特開 2005— 89375号公報

特許文献 8：特開 2000— 191498号公報特許文献 9 :特開 2002— 29980号公報

特許文献 10 :特開 2005— 263689号公報

特許文献 11 :特開 2006— 160629号公報

特許文献 12 :特開 2005— 272433号公報

特許文献 13 :特開 2005— 206510号公報

特許文献 14 :特開 2006— 273815号公報

非特許文献 1 : FRAGRANCE JOURNAL, 12, 51-55, 2004

非特許文献 2： FRAGRANCE JOURNAL, 26(1), 45-50， 1998

発明の開示

発明が解決しょうとする課題

[0007] 哺乳類、特にヒトに対して賦活化ゃ抗老化を付与することは極めて重要な課題であり、動物系、植物系由来の賦活物質ゃ抗老化剤は各種見つかっているが、実際には産業上利用可能な程度に十分かつ安定した効果は得られておらず、新規な細胞賦活化剤ゃ抗老化剤が探索されているのが現状である。従って、本発明の目的は、植物由来で細胞に対して賦活化又は抗老化効果に優れ、長期にわたる使用に十分に耐えうる安全性を備えた細胞賦活化剤又は抗老化剤を提供し、これらを有効成分とした化粧品 ·医薬部外品 (皮膚外用剤、浴用剤、育毛剤等）、飲食品、医薬品に利用するための方法を提供することである。

[0008] また、本発明の目的は、細胞に対して細胞外マトリックス産生促進効果に優れ、長期にわたる使用に十分に耐えうる安全性を備え細胞外マトリックス産生促進剤を提供し、これらを有効成分とした化粧品 ·医薬部外品 (皮膚外用剤、浴用剤、育毛剤等)、飲食品、医薬品に利用するための方法を提供することである。

課題を解決するための手段

[0009] 本発明者らは上記の目的を達成すべく鋭意努力した結果、ポリアミン及びポリアミンを有効成分とする植物抽出物が皮膚における細胞（特に繊維芽細胞）の賦活化、抗老化、細胞の細胞外マトリックス産生促進に有効であることを見出し、本発明を完成するに至った。すなわち、本発明は以下のような構成からなる。

項 1. 植物由来ポリアミン含有抽出物を有効成分とすることを特徴とする抗老化剤。項 2. 植物由来ポリアミン含有抽出物を有効成分とすることを特徴とする細胞賦活化剤。

項 3. 植物由来ポリアミン含有抽出物が、大豆種子、大豆胚芽、大豆胚、大豆芽、小麦種子、小麦胚芽、小麦胚、小麦芽、豆乳及びオカラよりなる群から選ばれた少なくとも 1種であることを特徴とする項 1に記載の抗老化剤。

項 4. 植物抽出物に含有されるポリアミンが、第一級アミノ基を 2つ以上有する脂肪族炭化水素からなる群より選ばれた少なくとも 1種以上の化合物であることを特徴とする項 1に記載の抗老化剤。

項 5. 植物抽出物に含有されるポリアミン力 1， 3—ジァミノプロパン、プトレシン、力ダベリン、カルジン、スペルミジン、ホモスペルミジン、ァミノプロピルカダベリン、テルミン、スペルミン、テノレモスぺノレミン、カナバルミン、ァミノペンチルノルスペルミジン、

N， N—ビス（ァミノプロピル）カダベリン、ホモスペルミン、力ルドペンタミン、ホモ力ノレドペンタミン、力ルドへキサミン及びホモ力ルドへキサミンよりなる群から選ばれた少なくとも 1種の化合物であることを特徴とする項 1に記載の抗老化剤。

項 6. ポリアミンが、プトレシン、スペルミジン及びスペルミンからなる群から選ばれた少なくとも 1種の化合物であることを特徴とする項 1に記載の抗老化剤。

項 7. ポリアミンもしくは植物由来ポリアミン含有抽出物を有効成分とする細胞外マトリックス産生促進剤。

項 8. ポリアミンもしくは植物由来ポリアミン含有抽出物を有効成分とするコラーゲン産生促進剤。

項 9. ポリアミンもしくは植物由来ポリアミン含有抽出物を有効成分とするヒアルロン酸産生促進剤。

項 10. 項 1、 3〜6のいずれかに記載の抗老化剤、項 2に記載の細胞賦活化剤、項 7に記載の細胞外マトリックス産生促進剤、項 8に記載のコラーゲン産生促進剤または項 9に記載のヒアルロン酸産生促進剤を有効成分として含有することを特徴とする化粧品類。

項 11. 植物由来ポリアミン含有抽出物を動物の皮膚に接触させる工程を含むことを特徴とする皮膚の抗老化方法もしくは細胞賦活化方法。項 12. 植物由来ポリアミン含有抽出物が、大豆種子、大豆胚芽、大豆胚、大豆芽、小麦種子、小麦胚芽、小麦胚、小麦芽、豆乳及びオカラよりなる群から選ばれた少なくとも 1種以上から得ることを特徴とする項 11に記載の抗老化方法もしくは細胞賦活化方法。

項 13. ポリアミンもしくは植物由来ポリアミン含有抽出物を動物の皮膚に接触させる工程を含むことを特徴とする皮膚の細胞外マトリックス産生促進方法。

項 14. 細胞外マトリックス産生促進が、コラーゲン産生促進を含む、項 13に記載の方法。

項 15. 細胞外マトリックス産生促進力ヒアルロン酸産生促進を含む、項 13に記載の方法。

項 16. ポリアミンが、第一級アミノ基を 2つ以上有する脂肪族炭化水素からなる群より選ばれた少なくとも 1種以上の化合物であることを特徴とする項 13に記載の方法。項 17. 植物由来ポリアミン含有抽出物が、大豆種子、大豆胚芽、大豆胚、大豆芽、小麦種子、小麦胚芽、小麦胚、小麦芽、豆乳及びオカラよりなる群から選ばれた少なくとも 1種以上から得ることを特徴とする項 13に記載の方法。

項 18· ポリアミンが、 1, 3—ジァミノプロパン、プトレシン、カダベリン、カノレジン、スペルミジン、ホモスペルミジン、ァミノプロピルカダベリン、テルミン、スペルミン、テルモスペルミン、カナバルミン、ァミノペンチルノルスペルミジン、 N, N—ビス（ァミノプロピノレ）カダベリン、ホモスペルミン、力ルドペンタミン、ホモ力ルドペンタミン、カノレドへキサミン及びホモ力ルドへキサミンよりなる群から選ばれた少なくとも 1種以上の化合物であることを特徴とする項 13に記載のコラーゲン産生促進方法。

項 19. ポリアミンが、プトレシン、スペルミジン及びスペルミンからなる群力、ら選ばれた少なくとも 1種以上の化合物であることを特徴とする項 13に記載の方法。

項 20. (1)植物及び Z又は植物抽出物を酸性条件下に処す工程と、（2)液体画分を分離する工程とを含むことを特徴とするポリアミン含有植物抽出物の調製方法。項 21. 鉱酸及び Z又は有機酸を含む酸溶液を添加し酸性条件下に処すことを特徴とする項 20に記載のポリアミン含有植物抽出物の調製方法。

項 22. pHが 2以下になるように鉱酸及び/又は有機酸を含む酸溶液を添加し酸性条件下に処すことを特徴とする項 20に記載のポリアミン含有植物抽出物の調製方法。

項 23. 鉱酸及び/又は有機酸が、塩酸、硫酸、硝酸、酢酸、リン酸、トリクロ口酢酸、過塩素酸、クェン酸、乳酸、プロピオン酸、酪酸、蓚酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、リンゴ酸、酒石酸、安息香酸、スルホサリチル酸及びギ酸よりなる群から選ばれた少なくとも 1種以上の酸であることを特徴とする項 21又は 22に記載のポリアミン含有植物抽出物の調製方法。

項 24. 酸性条件下になるように添加する酸溶液が、塩酸及び Z又は過塩素酸及び /又は硫酸であることを特徴とする項 20〜23のいずれかに記載のポリアミン含有植物抽出物の調製方法。

項 25. 植物及び Z又は植物抽出物を酸性条件下に処すと同時又は後に、ポリフエノール吸着剤を添カ卩し、液体画分を分離することを特徴とする項 20〜24のいずれかに記載のポリアミン含有植物抽出物の調製方法。

項 26. 植物及び/又は植物抽出物が、大豆種子、大豆胚芽、大豆胚、小麦種子、小麦胚芽、小麦胚、豆乳及びオカラよりなる群から選ばれた少なくとも 1種以上であることを特徴とする項 20〜25のいずれかに記載のポリアミン含有植物抽出物の調製方法。

項 27. 液体画分を分離する工程が、遠心分離及び/又は濾過分離であることを特徴とする項 20〜26のいずれかに記載のポリアミン含有植物抽出物の調製方法。項 28. 項 20〜27のいずれかに記載の調製方法によって回収されたポリアミン含有植物抽出物を、さらにイオン交換法、ゲル濾過法、膜分画法及び電気透析法よりなる群から選ばれた少なくとも 1種以上の処理により精製することを特徴とするポリアミン含有植物抽出物の調製方法。

項 29. 項 20〜28のいずれかに記載の調製方法によって回収されたポリアミン含有植物抽出物を含有する抗老化剤または細胞賦活化剤。

項 30. 項 20〜28のいずれかに記載の調製方法によって回収されたポリアミン含有植物抽出物を含有する細胞外マトリックス産生促進剤。

項 31. 項 20〜28のいずれかに記載の調製方法によって回収されたポリアミン含有植物抽出物を含有するコラーゲン産生促進剤。

項 32. 項 20〜28のいずれかに記載の調製方法によって回収されたポリアミン含有植物抽出物を含有するヒアルロン酸産生促進剤。

発明の効果

[0010] 本発明により、安全性に優れた賦活化作用、抗老化作用、細胞外マトリックス産生促進作用が期待でき、ポリアミン或いはポリアミンを含む植物抽出物を有効成分とした化粧品 ·医薬部外品 (皮膚外用剤、浴用剤、育毛剤等)、飲食品、医薬品を提供すること力 Sできる。

図面の簡単な説明

[0011] [図 1]ダイズ種子から調製した植物抽出物 (左）と精製植物抽出物 (右）の純度確認 [図 2]ダイズ胚芽から調製した植物抽出物の純度確認

[図 3]コムギ胚芽から調製した植物抽出物の純度確認

[図 4]豆乳から調製した植物抽出物の純度確認

[図 5]ヒト皮膚繊維芽細胞を用いたダイズ胚芽抽出物による賦活化 *抗老化活性

[図 6]ヒト皮膚繊維芽細胞を用いたコムギ胚芽抽出物による賦活化 *抗老化活性

[図 7]ヒト毛乳頭細胞を用いたダイズ胚芽抽出物による賦活化 *抗老化活性

[図 8]ヒト毛乳頭細胞を用いたコムギ胚芽抽出物による賦活化 *抗老化活性

[図 9]ダイズ胚芽抽出物とコムギ胚芽抽出物によるコラーゲン産生促進活性

[図 10]ダイズ胚芽抽出物とコムギ胚芽抽出物によるコラーゲン産生促進活性（3日間培養）

[図 11]ダイズ胚芽抽出物とコムギ胚芽抽出物によるコラーゲン産生促進活性（6日間培養）

[図 12]ダイズ胚芽抽出物とコムギ胚芽抽出物によるヒアルロン酸産生促進活性（3日間培養）

[図 13]ダイズ胚芽抽出物とコムギ胚芽抽出物によるコラーゲン産生促進活性（3日間培養）

[図 14]ダイズ胚芽抽出物とコムギ胚芽抽出物によるコラーゲン産生促進活性（6日間培養） [図 15]ダイズ胚芽抽出物とコムギ胚芽抽出物によるコラーゲン産生促進活性（3日間培養）

[図 16]ダイズ胚芽抽出物とコムギ胚芽抽出物によるコラーゲン産生促進活性（6日間培養）

[図 17]ヒト皮膚繊維芽細胞を用いたポリアミンによる賦活化 *抗老化活性

[図 18]ヒト毛乳頭細胞を用いたポリアミンによる賦活化 *抗老化活性

[図 19]ポリアミンよるコラーゲン産生促進活性（2日間培養）

[図 20]ポリアミンよるヒアルロン酸産生促進活性（1日間培養）

[図 21]ポリアミンよるヒアルロン酸産生促進活性（3日間培養）

[図 22]ポリアミンよるヒアルロン酸産生促進活性（6日間培養）

[図 23]ヒト皮膚繊維芽細胞を用いたポリアミンによる賦活化 *抗老化活性

[図 24]ポリアミンよるコラーゲン産生促進活性（3日間培養）

[図 25]ポリアミンよるコラーゲン産生促進活性 (6日間培養）

発明を実施するための最良の形態

[0012] 本発明において「賦活化」及び「抗老化」とは、動物の細胞機能や細胞活性を活発、増大又は維持させることで細胞機能や細胞活性の低下を小さくすることである。「賦活化」により「抗老化」が実現できる。例えば皮膚細胞においては、加齢や光老化による基底膜の構造変化の蓄積に伴う皮膚細胞の機能低下を小さくすることで、皮膚のしわ、たるみ、硬化等を防止、改善して弾力のある若々しい健康な肌の状態を維持することなどを指している。毛乳頭又は毛母細胞においては、加齢、ストレス、ホルモンバランスによる毛乳又は毛母細胞の機能低下を小さくすることで、へアサイクノレを維持して脱毛を抑えることなどを指してレ、る。

[0013] 本発明において「ポリアミン」とは、第 1級アミノ基を 2つ以上もつ脂肪族炭化水素の総称で生体内に普遍的に存在する天然物であり、 20種類以上のポリアミンが見出されている。例えば、 1 , 3—ジァミノプロパン、プトレシン、カダベリン、カルジン、スペルミジン、ホモスペルミジン、ァミノプロピルカダベリン、テルミン、スペルミン、テルモスぺノレミン、カナバルミン、ァミノペンチルノルスペルミジン、 N, N—ビス（ァミノプロピル )カダベリン、ホモスペルミン、力ルドペンタミン、ホモ力ルドペンタミン、力ルドへキサミン、ホモ力ルドへキサミンなどが挙げられる。代表的なポリアミンとしてはプトレシン、スぺノレミジン、スぺノレミンがある。

[0014] 本発明において「植物抽出物」とは、植物及び/又は植物加工物を抽出して得られる物である。

[0015] 本発明において「植物由来ポリアミン含有抽出物」とは、植物及び Z又は植物加工物から得られる（天然)ポリアミンを含む植物抽出物である。本発明においては、「植物由来ポリアミン含有抽出物」を「ポリアミンを含む植物抽出物及び z又はポリアミンを有効成分として含む植物抽出物」と称することもある。植物由来ポリアミン含有抽出物に含有されるポリアミン濃度は、 M (モル/リットル）では、通常は 0. 00001〜5M 、好ましく fま 0. 00005〜3M、より好ましく fま 0. 0001〜2Mである。又は、重量⁰ /₀では、通常 fま 0. 0001〜95^ο/_ο、好ましく fま 0. 001〜75^ο/_ο、より好ましく fま 0. 01〜50^ο/ο である。

[0016] 「植物由来ポリアミン含有抽出物」は、ポリアミン濃度を高めるための精製を行なつていない低純度品と、イオン交換樹脂で精製してポリアミン濃度を大幅に高めた高純度品のいずれを使用してもよい。低純度品のダイズ 'コムギ胚芽抽出物粉末のポリアミン濃度は 0.：!〜 0. 2%程度であるが、イオン交換樹脂で精製した高純度品の精製ダイズ.コムギ胚芽抽出物の粉末のポリアミン濃度は 30〜50%まで高めることができる。抽出物が水溶液の場合には上記濃度の 1/10〜1/100になる。

[0017] 本発明で言うところの「プトレシン」は代表的なポリアミンの一つで生物体内に普遍的に存在する一般的な天然物であり、第一級アミノ基を 2つもつ脂肪族炭化水素化合物である。「カダベリン」は代表的なポリアミンの一つで生物体内に普遍的に存在する一般的な天然物であり、第一級アミノ基を 2つもつ脂肪族炭化水素化合物である。「スペルミジン」は代表的なポリアミンの一つで生物体内に普遍的に存在する一般的な天然物であり、第一級アミノ基を 3つもつ脂肪族炭化水素化合物である。「スぺノレミン」は代表的なポリアミンの一つで生物体内に普遍的に存在する一般的な天然物であり、第一級アミノ基を 4つもつ脂肪族炭化水素化合物である。

[0018] ポリアミンは魚類の白子（特許第 3518778号）、動物の精子、乳素材（特開 2001-866 3号）、酵母 (特開 2000-245493号)等から得ることができる。化学合成 (特開平 7-2779 17号）、酵素反応や微生物代謝による化学的合成 (代謝， Vol.9, No.11， 1010-1017， 1972)、市販品等から得ることもできる。

[0019] 本発明で言うところの「動物に接触させる」とは、ヒト、家畜などに対してポリアミンをあらゆる剤型 (アンプル状、カプセル状、粉末状、顆粒状、丸剤、錠剤状、固形状、液状、ゲル状、気泡状、乳液状、クリーム状、軟膏状、シート状、ムース状など)で外部塗布、外部処理、経口投与等で与えることである。例えばポリアミンを化粧品、医薬部外品、飲食品 (ペットフードを含む）、医薬品、飼料などに配合して動物に接触させること力 Sできる。動物としては、ヒト、ゥシ、ゥマ、ブタ、ラット、マウス、ゥサギ、ィヌ、ネコなどの哺乳類が好ましく例示され、特にヒトが好ましい。

[0020] 「細胞外マトリックス産生促進」とは、細胞外の皮膚構造を支持するコラーゲン、ヒアルロン酸等の細胞外マトリックスの産生を促進することである。このように細胞外マトリックス産生促進する物質を「細胞外マトリックス産生促進剤」と称している。細胞外マトリックス産生促進により、「抗老化」が実現される。「細胞外マトリックス産生促進剤」には、「コラーゲン産生促進剤」や「ヒアルロン酸産生促進剤」が含まれる。特に「コラーゲン産生促進剤」とは、「細胞外マトリックス産生促進剤」のなかでも、コラーゲンの産生を促進する物質のことをいう。「ヒアルロン酸産生促進剤」とは、「細胞外マトリックス産生促進剤」のなかでも、ヒアルロン酸の産生を促進する物質のことをいう。

[0021] ポリアミンを含む植物抽出物及び/又はポリアミンを有効成分として含む植物抽出物を得る植物としては、特に限定されるものではないが、例えば双子葉植物、単子葉植物、草本性植物、木本性植物、ゥリ科植物、ナス科植物、イネ科植物、アブラナ科植物、マメ科植物、ァオイ科植物、キク科植物、ァカザ科植物、マメ科の植物、該植物抽出物、該植物エキスなどが挙げられる。例えば、サッマイモ、トマト、キュゥリ、力ボチヤ、メロン、スイカ、タノくコ、シロイヌナズナ、ピーマン、ナス、マメ、サトイモ、ホウレンソゥ、ニンジン、イチゴ、ジャガイモ、イネ、トウモロコシ、アルファルファ、コムギ、ォォムギ、ダイズ、ナタネ、ソルガム、ユーカリ、ポプラ、ケナフ、杜仲、サトウキビ、シュガ一ビート、キヤッサバ、サゴヤシ、ァカザ、ユリ、ラン、カーネーション、バラ、キク、ペチュユア、トレユア、キンギヨソゥ、シクラメン、カスミソゥ、ゼラニゥム、ヒマヮリ、シバ、ヮタ、エノキダケ、ホンシメジ、マツタケ、シィタケ、キノコ類、チョウセンニンジン、ァガリクス、ゥコン、ォタネニンジン、柑橘類、緑茶、紅茶、ウーロン茶、バナナ、キウイ、納豆、豆乳、ダイズエキス、コムギエキス、胚芽エキス、胚エキス、果汁、オカラ、コメ胚芽、コムギ胚芽、ォォムギ胚芽、ダイズ胚芽、トウモロコシ胚芽、マイ口胚芽、ヒマヮリ胚芽などが挙げられる。

[0022] 好ましくは、単子葉植物や双子葉植物がよぐさらに好ましくはイネ科植物やマメ科植物がよい。特に好ましい植物又はその加工品として、トウモロコシ、キノコ類、ダイス、、コムギ、納豆、豆乳、オカラ、コムギ胚芽、ダイズ胚芽、トウモロコシ胚芽、ダイズェキス、コムギエキス、胚芽エキス、胚エキスが挙げられる。

[0023] ポリアミンを含む植物抽出物及び Z又はポリアミンを有効成分として含む植物抽出物を得る植物組織としては、特に限定はされない。好ましくは、種子形態、生育過程にあるものである。生育過程にある植物は全体、あるいは部分的な組織から得ることができる。得ることができる部位としては、特に限定されないが全樹、花、蕾、子房、果実、葉、子葉、茎、芽、根、種子、乾燥種子、胚、胚芽、根などである。好ましくは、果実、葉、茎、芽、種子、乾燥種子、胚芽、胚であり、特に好ましくは、種子、乾燥種子、胚芽、胚などである。

[0024] ポリアミンを含む植物抽出物及び/又はポリアミンを有効成分として含む植物抽出物を得る植物としては植物加工物であってもよレ、。その加工方法は、植物を水、有機溶媒、水と有機溶媒の混合物などを用いて、低温、室温、加温条件下での含浸法、蒸留法、圧搾法、超音波法、超臨界流体法、亜臨界流体法などで抽出物を回収する。さらに植物や植物から回収した抽出物を発酵させるなどの加工処理した加工物なども含まれる。例えば植物エキス、豆乳、オカラ、小麦粉、発酵エキス、納豆などが挙げられる。

[0025] ポリアミンを含む植物抽出物及び Z又はポリアミンを有効成分として含む植物抽出物を得る方法としては、植物及び/又は植物加工物に、酸性条件下になるように酸溶液を添加することにある。酸性条件下は、 pHが 6以下の条件をいう。抽出時に、 p Hを酸性条件下にすることにより、植物組織から効率的かつ安定的なポリアミン組成物回収の効果が得られる。この効果は、 pH力 S6以下であれば一様に得られるが、好ましくは pHが 4以下であり、特に好ましくは pHが 2以下などである。下限については、使用する酸溶液の原液の pHで構わないので、特に制限されないが、好ましくは、 p H0〜2である。

[0026] 酸性条件下（酸水溶液）で植物抽出物を得ることで、エタノールやメタノールのような有機溶媒で回収した植物抽出物に比べてポリアミン量の回収率が高ぐ特に水に溶けにくい化合型ポリアミンは酸性条件によって水に可溶化でき、有機溶媒では抽出効率が低い遊離型ポリアミンの含量も向上する。ポリアミンは酸性条件下では優れた安定性を示し、植物抽出物中に含まれるポリアミンやその他の有効成分の安定性が向上する。さらに酸性条件下（酸水溶液）で植物抽出物を得ることで、ポリアミン以外の天然有効成分が同時に回収される。例えば、天然有効成分としては単糖、オリゴ糖等の糖類、ペプチド、蛋白質等が挙げられる。ポリアミンとポリアミン以外の天然有効成分を同時に含むことで賦活化、細胞外マトリックス産生促進効果がより増強される。加えて回収した植物抽出物は水溶液であるため有機溶媒に比べて安全性の面でも高レ、メリットが期待される。

[0027] 酸性条件下になるように添加する酸溶液としては、塩酸、硫酸、リン酸などの鉱酸、酢酸、プロピオン酸、酪酸、蓚酸、マロン酸、コハク酸、フマノレ酸、マレイン酸、リンゴ酸、乳酸、酒石酸、クェン酸、安息香酸などの有機酸および酸性水が挙げられるが、 0. 01N〜6Nの塩酸、硫酸、硝酸、酢酸、リン酸、トリクロ口酢酸、スルホサリチル酸、ギ酸、クェン酸、乳酸や 0. 1〜： 10%の過塩素酸などの無機酸や有機酸などである。好ましくは、 0. 0625〜： INの塩酸、 0. 25〜5%の過塩素酸、 0. 1〜： INの硫酸などである。

[0028] 抽出工程において、ポリフエノール吸着剤を添加してもよレ、。ポリフエノール吸着剤の添カ卩により、ポリアミンを含む植物抽出物及び Z又はポリアミンを有効成分とする植物抽出物の回収を容易ならしめることができる。ポリフエノール吸着剤は、ポリフエノール類を吸着出来る物質であれば、特に限定はされないが、 PVPP (ポリビュルポリピロリドン）、 PVP (ポリビュルピロリドン）、 PEG (ポリエチレングリコール）等が好ましく使用される。特に好ましくは、 PVPP (ポリビニノレポリピロリドン）である。これらのポリフエノール吸着剤は市販の物質を使用してもよい。たとえば、ポリクラール (登録商標）、 P OLYCLAR (登録商標）（アイエスピー社製）、 Divergan (登録商標）（BASF社製）、 Dowex (登録商標） 1、 PVP— 40等を使用しても良い。植物及び/又は植物加ェ物に酸溶液を添加した後にポリフエノール吸着剤を添加することで、ポリアミンを含む植物抽出物及び/又はポリアミンを有効成分として含む植物抽出物の回収量、収率、純度が高まることが期待できる。また、ポリフエノール吸着剤を添加することで、細胞、皮膚細胞に対する賦活化、抗老化、細胞外マトリックス産生、コラーゲン産生、ヒアルロン産生効果に対してネガティブに作用するポリフエノール類等の植物抽出物中への混入を抑えることができる。

[0029] ポリフエノール吸着剤の添カ卩量は、好ましくは 0.：!〜 30% (w/v)、より好ましくは 0 . 5〜20% (wZv)、さらに好ましくは、 1〜： 10% (w/v)である。

[0030] 植物及び/又は植物加工物に、酸性条件下になるように酸溶液を添加又は酸性条件下になるように酸溶液を添加した後にポリフエノール吸着剤を添加した後に破砕、粉砕、混合をおこなうことでポリアミンを含む植物抽出物及び/又はポリアミンを有効成分として含む植物抽出物の回収量を高めることができる。特に植物組織の場合は細胞壁を有することから細胞壁に損傷を与えることが望ましい。植物加工物や植物エキスの場合には、細胞壁を含まないことから特に細胞壁に損傷を与えるような破砕や粉砕を行う必要はなレ、。破砕や粉砕を行う方法としては、例えば、ミキサー、プレンダー、ホモジナイザー、乳鉢、超音波破碎機などを利用することができる。

[0031] 植物及び/又は植物加工物に含まれてレ、たポリアミンを酸溶液中（液体画分）に十分に抽出した後に遠心分離や濾過分離によって液体画分を残查ゃ沈殿と分離する。回収された液体画分にはポリアミンが多く含まれており「ポリアミンを含む植物抽出物及び/又はポリアミンを有効成分として含む植物抽出物」が得られる。

[0032] 必要に応じてポリアミン含有植物抽出物は、イオン交換法、膜分画法、ゲル濾過法、電気透析法で脱塩処理や精製処理を行っても良ぐこれらの方法を少なくとも 1つ以上実施することで、ポリアミンに関してより高純度な植物抽出物を得ることができる。例えば、イオン交換法としては、植物抽出液をイオン交換樹脂を充填したカラムに通し、有効成分であるポリアミンとアミノ酸、ペプチド、蛋白質、糖類等の夾雑物とを分離する。使用するイオン交換樹脂としては、イオン交換基がスルホン酸基、スルホプ口ピル基、リン酸基、カルボキシルメチル基、アミノエチル基、ジェチルァミノ基、 4級アミノエチル基、 4級アンモニゥム基等であればよぐ陽イオン交換樹脂でも陰イオン交換樹脂でもいずれも使用することができる。陽イオン交換樹脂を使用した場合には、有効成分であるポリアミンは陽イオン交換樹脂に吸着されるので、非吸着物質を十分に分離した後、硫酸、塩酸等の酸性溶液や塩化ナトリウム等の塩溶液で有効成分を溶出する。陰イオン交換樹脂を使用した場合には、有効成分であるポリアミンは陰イオン交換樹脂に吸着されないので、有効成分を含む非吸着画分を回収する。例えば、膜分画法としては、セルロース系、酢酸セルロース系、ポリスルホン系、ポリアミド系、ポリアクリル二トリル系、ポリ四フッ化工チレン系、ポリエステル系、ポリプロピレン系等で分画分子量が 1000〜： 100000の範囲の限外濾過（UF)膜を使用して植物抽出物の UFを行い、有効成分であるポリアミンを含む透過液を回収する。また、食塩阻止率 30〜80%のナノフィルトレーシヨン（NF)膜を使用して有効成分溶液の N Fを行い、脱塩する。例えば、ゲル濾過法は、植物抽出物を中和し、ゲル濾過担体を充填したカラムに通して分子量分画により有効成分であるポリアミンを回収する。使用するゲル濾過担体は、デキストラン系、アクリルアミド系、ァガロース系、セルロース系、ポリビニル系、ガラス系、ポリスチレン系などで分画分子量が 100〜100000の範囲である。例えば、電気透析法は、陽イオン交換膜と陰イオン交換膜とによって仕切られた各膜間に植物抽出物と食塩水とを交互に供給して電気透析を行う。電気透析の条件は、初期電流密度が 0. 5〜： 15A/dm²、電圧が 0. 1〜： 1. 5V/槽などが挙げられる。

ポリアミン、ポリアミンを含む植物抽出物及び/又はポリアミンを有効成分として含む植物抽出物はそのまま細胞賦活化剤、抗老化剤、細胞外マトリックス産生促進剤、コラーゲン産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤として利用しても良いが、化粧品 · 医薬部外品 (皮膚外用剤、浴用剤、育毛剤等）、食品、医薬品に配合して利用することが好ましい。ポリアミンを配合する濃度（M :モル Zリットル）は、吸収程度、作用程度、製品形態、使用頻度などによって決められ、特に限定されるものではないが、培養細胞における細胞培養液中のポリアミン濃度は、通常は 0. 00001〜： 100mM、好ましく ίま 0. 00005〜75mM、より好ましく fま 0. 0001〜50mMである。一方、直接ヒトの皮膚に塗布する皮膚外用剤、例えば液剤又はクリーム、乳液、ローション、化粧水、軟膏などの化粧品又は医薬品形態の場合、通常は 0. 01〜： 10000 /i M、好ましく ίま 0. 05〜： 1000 μ Μ、より好ましく ίま 0. 1〜： 100 μ Μ、特に:!〜 10 μ Μである。経口剤などの固形剤の場合には、 1回当たりの投与量は、通常は 0. 01〜： 10000 μ Μ 、好ましく fま 0. 05〜： 1000 μ Μ、より好ましく fま 0. 1〜： 100 μ Μ、特 ίこ：!〜 ΙΟ μ Μである。

[0034] 本発明の「植物由来ポリアミン含有抽出物」は、天然植物由来であるために化学合成品に比べて安全性が高い植物由来の場合には、植物からポリアミン含有抽出物を調製すれば良くて簡便性に優れている。さらに植物由来の場合には、ポリアミン含有抽出物中には少なくともプトレシン、スペルミジン、スペルミンの 3種類は含まれており、それぞれについて個々に調製する必要はない。植物由来の場合には、栽培または市販されてレ、る植物原料を用いれば良く、特に小麦や大豆の種子は植物原料の中でも安価に販売されており、大量に原料確保することもできポリアミン含有抽出物の生産コストは化学合成品に比べて安価である。化粧品におレ、ても天然物特に植物由来が望まれている。また、植物由来の抽出物中にはポリアミン以外の天然成分が含まれており、その成分がポリアミンによる効果をより高める可能性がある。力 0えて、ポリアミン以外の天然成分 (例えば単糖、オリゴ糖等の糖類、ペプチド、タンパク質等）が有効成分として作用（賦活化 '抗老化'コラーゲン産生促進、ヒアルロン酸産生促進)することとが期待される。したがって、本発明の植物由来ポリアミン含有抽出物を有効成分とすることを特徴とする細胞賦活化剤又は抗老化剤の有用性は非常に高い。

[0035] 本発明の植物由来のポリアミン含有抽出物は抽出物中にはポリアミン以外の天然成分が含まれることで、ポリアミンに比べてポリアミン特有の臭気が軽減し、安定性も高まることで、食品用途、化粧品用途、医薬部外品用途、医薬品用途に利用しても品質を損なうことがない。

[0036] 本発明の細胞賦活化剤、抗老化剤、細胞外マトリックス産生促進剤、コラーゲン産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤は、ポリアミンの必須成分に加え必要に応じて本発明の効果を損なわない範囲内で、化粧品類、医薬部外品類、飲食品類、医薬品類などに使用される成分や添加剤を併用して配合することができる。

[0037] 例えば、油脂類としては、アポガド油、アルモンド油、ウイキヨゥ油、エゴマ油、オリーブ油、オレンジ油、オレンジラファー油、ゴマ油、カカオ脂、力ミツレ油、力ロット油、キユーカンバー油、牛脂、牛脂脂肪酸、ククイナッツ油、サフラワー油、大豆油、ツバキ油、トウモロコシ油、ナタネ油、パーシック油、ヒマシ油、綿実油、落花生油、タートル油，ミンク油、卵黄油、カカオ脂、パーム油、パーム核油、モクロウ、ヤシ油、牛脂、豚脂、硬化油、硬化ヒマシ油などが挙げられる。

[0038] ロウ類としては、ミツロウ、カルナバロウ、鯨ロウ、ラノリン、液状ラノリン、還元ラノリン、硬質ラノリン、カンデリラロウ、モンタンロウ、セラックロウなどが挙げられる。

[0039] 鉱物油としては、流動パラフィン、ワセリン、パラフィン、ォゾケライド、セレシン、マイクロクリスタンワックス、ポリエチレン末、スクワレン、スクヮラン、プリスタンなどが挙げられる。

[0040] 脂肪酸類としては、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、ベヘン酸、ォレイン酸、 12-ヒドロキシステアリン酸、ゥンデシレン酸、トール油、ラノリン脂肪酸などの天然脂肪酸、イソノナン酸、カプロン酸、 2—ェチルブタン酸、イソペンタン酸、 2—メチルペンタン酸、 2—ェチルへキサン酸、イソペンタン酸などの合成脂肪酸が挙げられる。

[0041] アルコール類としては、エタノール、イソピロパノール、ラウリルアルコール、セタノーノレ、ステアリルアルコール、ォレイルアルコール、ラノリンアルコール、コレステロ一ノレ、フィトステロールなどの天然アルコール、 2—へキシルデカノール、イソステアリルァノレコール、 2—オタチルドデカノールなどの合成アルコール、酸化エチレン、エチレングリコール、ジエチレングリコール、トリエチレングリコール、エチレングリコールモノエチルエーテル、エチレングリコールモノブチルエーテル、ジエチレングリコールモノメチノレエーテノレ、ジエチレングリコーノレモノェチノレエーテノレ、ポリエチレングリコーノレ、酸化プロピレン、プロピレングリコール、ポリプロピレングリコール、 1， 3—ブチレングリコーノレ、グリセリン、ノチノレアノレコーノレ、ペンタエリトリトーノレ、ソノレビトーノレ、マンニトーノレ、ブドウ糖、ショ糖などの多価アルコール類などが挙げられる。

[0042] エステル類としては、ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、ステアリン酸ブチル、ラウリン酸へキシル、ミリスチン酸ミリスチル、ォレイン酸ォレイル、ォレイン酸デシル、ミリスチン酸オタチルドデシル、ジメチルオクタン酸へキシルデシル、乳酸セチル、乳酸ミリスチノレ、フタル酸ジェチル、フタル酸ジブチル、酢酸ラノリン、モノステアリン酸エチレングリコール、モノステアリン酸プロピレングリコール、ジォレイン酸プロピレングリコールなどが挙げられる。

[0043] 金属セッケンとしては、ステアリン酸アルミニウム、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸亜鉛、ステアリン酸カルシウム、パルミチン酸亜鉛、ミリスチン酸マグネシウム、ラゥリン酸亜鉛、ゥンデシレン酸亜鉛などが挙げられる。

[0044] ガム質及び水溶性高分子化合物としては、アラビアゴム、ベンゾインゴム、ダンマノレゴム、グアヤタ脂、アイルランド苔、カラャゴム、トラガントゴム、キヤロブゴム、クインシード、寒天、カゼイン、デキストリン、ゼラチン、ぺクチン、デンプン、カラギーナン、力ルボキシアルキルキチン、キトサン、ヒドロキシアルキルキチン、低分子キトサン、キトサン塩、硫酸化キチン、リン酸化キチン、アルギン酸及びその塩、ヒアルロン酸及びその塩、コンドロイチン硫酸、へパリン、ェチルセルロース、メチルセルロース、カルボキシメチノレセノレロース、カノレボキシェチノレセノレロース、カノレボキシェチノレセノレロースナトリウム、ヒドロキシェチノレセノレロース、ヒドロキシプロピノレセノレロース、ニトロセノレ口ース、結晶セルロース、ポリビニルアルコール、ポリビニルメチルエーテル、ポリビエルピロリドン、ポリビュルメタアタリレート、ポリアクリル酸塩、ポリエチレンオキサイドやポリプロピレンオキサイド等のポリアルキレンオキサイド又はその架橋重合物、カルボキシビュルポリマー、ポリエチレンィミンなどが挙げられる。

[0045] 界面活性剤としては、ァニオン界面活性剤（カルボン酸塩，スルホン酸塩，硫酸ェステル塩，リン酸エステル塩）、カチオン界面活性剤（ァミン塩，四級アンモニゥム塩）、両性界面活性剤 (カルボン酸型両性界面活性剤，硫酸エステル型両性界面活性剤，スルホン酸型両性界面活性剤，リン酸エステル型両性界面活性剤）、非イオン界面活性剤（エーテル型非イオン界面活性剤，エーテルエステル型非イオン界面活性剤，エステル型非イオン界面活性剤，ブロックポリマー型非イオン界面活性剤，含窒素型非イオン界面活性剤）、その他の界面活性剤 (天然界面活性剤，タンパク質カロ水分解物の誘導体，高分子界面活性剤，チタン'ケィ素を含む界面活性剤，フッ化炭素系界面活性剤などが挙げられる。

[0046] ビタミン類としては、ビタミン A群ではレチノール、レチナール（ビタミン A1)、デヒドロレチナール（ビタミン A2)、カロチン、リコピン（プロビタミン A)、ビタミン B群では、チアミン塩酸塩、チアミン硫酸塩（ビタミン B1)、リボフラビン（ビタミン B2)、ピリドキシン（ビタミン B6)、シァノコバラミン（ビタミン B12)、葉酸類、ニコチン酸類、パントテン酸類、ピオチン類、コリン、イノシトール類、ビタミン C群では、ァスコルビン酸及びその誘導体、ビタミン D群では、ェルゴカルシフエロール（ビタミン D2)、コレカルシフエロール（ビタミン D3)、ジヒドロタキステロール、ビタミン E群では、トコフエロール及びその誘導体、ュビキノン類、ビタミン K群では、フイトナジオン（ビタミン K1)、メナキノン（ビタミン K2)、メナジオン（ビタミン K3)、メナジオール（ビタミン K4)などが挙げられる。

[0047] アミノ酸としては、パリン、ロイシン、イソロイシン、トレオニン、メチォニン、フエニルァラニン、トリプトファン、リジン、グリシン、ァラニン、ァスパラギン、グノレタミン、セリン、システィン、シスチン、チロシン、プロリン、ヒドロキシプロリン、ァスパラギン酸、グノレタミン酸、ヒドロキシリジン、アルギニン、オル二チン、ヒスチジンなどや、それらの硫酸塩、リン酸塩、硝酸塩、クェン酸塩、あるいはピロリドンカルボン酸の如きアミノ酸誘導体などが挙げられる。

[0048] 美白剤としては、ァスコルビン酸又はその誘導体、ィォゥ、胎盤加水分解物、ェラグ酸又はその誘導体、コウジ酸又はその誘導体、ダルコサミン又はその誘導体、アルブチン又はその誘導体、ヒドロキシケィヒ酸又はその誘導体、グノレタチオン、アルニカェキス、才ゥゴンエキス、ソゥハクヒエキス、サイコエキス、ボウフゥエキス、マンネンタケ菌糸体培養物又はその抽出物、シナノキエキス、モモ葉エキス、エイジッエキス、クジンエキス、ジュエキス、トウキエキス、ョクイニンエキス、カキ葉エキス、ダイォゥエキス、ボタンピエキス、ハマメリスエキス、マロニエエキス、オトギリソゥエキス、油溶†生カンゾゥエキスなどが挙げられる。

[0049] 保湿剤としては、ヒアノレロン酸、ポリグノレタミン酸、セリン、グリシン、スレオニン、ァラニン、コラーゲン、加水分解コラーゲン、ヒドロネクチン、フイブロネクチン、ケラチン、エラスチン、ローヤルゼリー、コンドロイチン硫酸へパリン、グリセ口リン脂質、グリセ口糖脂質、スフインゴリン脂質、スフインゴ糖脂質、リノール酸又はそのエステル類、エイコサペンタエン酸又はそのエステル類、ぺクチン、ビフィズス菌発酵物、乳酸発酵物、酵母抽出物、レイシ菌糸体培養物又はその抽出物、小麦胚芽油、アポガド油、米胚芽油、ホホバ油、ダイズリン脂質、 γ —オリザノール、ビロウドアオイエキス、ョクイ二ンエキス、ジォゥエキス、タイソゥエキス、力イソゥエキス、キダチアロエエキス、ゴボウエキス、マンネンロウエキス、アル二力エキス、小麦フスマなどが挙げられる。

[0050] 育毛剤としては、ペンタデカン酸グリセリド、コレウスエキス、ゲンチアナエキス、マツカサエキス、ローヤルゼリーエキス、クマザサエキス、 t-フラバノン、 6-ベンジルァミノプリン、センブリエキス、塩化カルプロニゥム、ミノキシジノレ、フィナステリド、アデノシン、ニコチン酸アミド、桑の根エキス、ジォゥエキス、 5_アミノレブリン酸などが挙げられる

[0051] 動物或いは植物、生薬の抽出物やエキスとしては、ァセンャク（阿仙薬）、ァシタバ、ァセロラ、ァノレテア、ァノレニ力、アボカド、アマチヤ（甘茶）、アロエ、アロエベラ、イラクサ、イチヨウ (銀杏葉，銀杏）、ウイキヨゥ（茴香）、ゥコン (鬱金）、ウスパサイシン (細辛）、ウメ（烏梅）、ゥラジ口ガシ、ゥワウルシ、ノイバラ（営実）、ヒキォコシ (延命草）、ォウギ (黄耆）、コガネバナ (ォゥゴン）、ャマザクラ (桜皮）、キハダ (黄柏）、ォゥレン (黄連）、ォタネニンジン (人参）、オトギリソゥ（弟切草）、ォドリコソゥ、オランダガラシ、ォレンジ、イトヒメハギ (遠志）、ゥッボダサ（夏枯草）、ツルドクダミ（何首烏）、ェンジュ（槐花）、ョモギ (ガイ葉）、ガジュッ (莪朮）、クズ (葛根）、カノコソゥ（吉草根）、力ミツレ、キカラスゥリ（瓜呂根）、力ワラョモギ（茵チン蒿）、カンゾゥ（甘草）、フキタンポポ (款冬花，款冬葉）、キイチゴ、キウイ果実、キキヨウ (桔梗)、キク (菊花)、キササゲ (梓実）、ミカン属植物果実 (枳実)、タチバナ (橘皮)、キユウリ、ウドまたはシシウド (羌活，独活) 、アンズ (杏仁）、クコ（地骨皮，枸杞子，枸杞葉）、クララ（苦参）、タスノキ、クマザサ、グレープフルーツ果実、二ッケィ (桂皮）、ケィガイ (ケィガイ）、ェビスダサ (決明子）、マルバアサガオ又はアサガオ (ケン牛子）、ベニバナ（紅花）、ゴバイシ (五倍子）、コンフリー、コパイバ、クチナシ（山梔子）、ゲンチアナ、ホオノキ (厚朴）、ヒナタイノコズチ（牛膝）、ゴシュュ（呉茱萸）、ゴボウ、チョウセンゴミシ (五味子）、米、米ぬか、コムギ、ミシマサイコ（柴胡）、サフラン、サボンソゥ、サンザシ（山ザ子）、サンショウ（山椒）、サルビア、サンシチニンジン（三七人参）、シィタケ (椎茸）、ジォゥ（地黄）、シクンシ (使君子)、ムラサキ (紫根)、シソ (紫蘇葉，紫蘇子)、カキ (柿蒂)、シャクャク (芍薬)、ォォバコ（車前子，車前草)、ショウガ (生姜)、ショウブ (菖蒲）、トウネズミモチ (女貞子）、シモッケソゥ、シラカバ、スイカズラ（金銀花，忍冬）、セィヨウキヅタ、セィヨウノコギリソゥ、セィヨウニヮトコ、ァズキ（赤小豆）、ニヮトコ（接骨木）、ゼニァオイ、センキュゥ (川キユウ）、センプリ（当薬)、クヮ (桑白皮，桑葉）、ナツメ (大棗)、ダイズ、タラノキ、チクセッニンジン (竹節人参）、ハナスゲ (知母）、ヮレモコゥ（地楡）、ドクダミ（十薬）、フユムシナツクサタケ（冬虫夏草）、トウガラシ、ホオズキ (登呂根）、タチジヤコゥソゥ、リヨクチャ (緑茶）、コウチヤ (紅茶）、チヨウジ (丁子）、ゥンシユウミカン (陳皮）、ツバキ、ッボクサ、トウガラシ (番椒）、トウキ（当帰）、トウキンセン力、ダイダイ (橙皮）、ヮレモコゥ（地楡）、トウモロコシ (南蛮毛）、トチュウ（杜仲，杜仲葉）、トマト、ナンテン (南天実）、ニンニク (大サン)、ォォムギ (麦芽）、ハクセン（白蘚皮）、ジャノヒゲ (麦門冬）、パセリ、バタタ、ハツ力（薄荷）、ハマメリス、バラ、ビヮ葉 (枇杷葉）、マツホド（茯リヨウ）、ブドウまたはその葉、へチマ、ボダイジュ、ボタン（牡丹皮）、ホップ、マイカイ（マイ瑰花）、松葉、マロニエ、マンネンロウ、ムクロジ、メリッサ、メリロート、ボケ（木瓜）、モャシ、モモ (桃仁，桃葉）、ヒォウギ (射干）、ビンロウジュ (檳ロウ子）、メハジキ (益母草）、ャグルマギク、ユキノシタ（虎耳草）、ャマモモ（楊梅皮）、ヤシャブシ (矢車）、ノ、トムギ（ョクイニン）、モウコョモギ、ャマョモギ、ラベンダー、リンゴ果実、マンネンタケ（霊芝）、レモン果実、レンギヨゥ（連翹）、レンゲソゥ、ゲンノショウコ（老鸛草）、ハシリドコ口（ロート根）、鶏トサ力、牛'人の胎盤抽出物、豚'牛の胃、十二指腸、或いは腸の抽出物若しくはその分解物、水溶性コラーゲン、水溶性コラーゲン誘導体、コラーゲン加水分解物、エラスチン、エラスチン加水分解物、水溶性エラスチン誘導体、シルク蛋白、シノレク蛋白分解物、牛血球蛋白分解物などが挙げられる。

[0052] 微生物培養代謝物としては、酵母エキス、亜鉛含有酵母エキス、ゲルマニウム含有酵母エキス、セレン含有酵母エキス、マグネシウム含有酵母エキス、米醱酵エキス、ユーグレナ抽出物、脱脂粉乳の乳酸発酵物などが挙げられる。

[0053] a—ヒドロキシ酸としては、グリコール酸、クェン酸、リンゴ酸、酒石酸、乳酸などが挙げられる。

[0054] 無機顔料としては、無水ケィ酸、ケィ酸マグネシウム、タルク、カオリン、ベントナイト、マイ力、雲母チタン、ォキシ塩化ビスマス、酸化ジルコニウム、酸化マグネシウム、酸化亜鉛、酸化チタン、炭酸カルシウム、炭酸マグネシウム、黄酸化鉄、ベンガラ、黒酸化鉄、グンジヨウ、酸化クロム、水酸化クロム、カーボンブラック、カラミンなどが挙げられる。

[0055] 紫外線吸収剤としては、 p—ァミノ安息香酸誘導体、サルチル酸誘導体、アントラニル酸誘導体、クマリン誘導体、アミノ酸系化合物、ベンゾトリアゾール誘導体、テトラゾール誘導体、イミダゾリン誘導体、ピリミジン誘導体、ジォキサン誘導体、カンファー誘導体、フラン誘導体、ピロン誘導体、核酸誘導体、アラントイン誘導体、ニコチン酸誘導体、ビタミン B6誘導体、ォキシベンゾン、ベンゾフエノン、グアイァズレン、シコニン，バイカリン、ノイカレイン、ベルべリンなどが挙げられる。

[0056] 収斂剤としては、乳酸、酒石酸、コハク酸、クェン酸、アラントイン、塩化亜鉛、硫酸亜鉛、酸化亜鉛、カラミン、 p _フエノールスルホン酸亜鉛、硫酸アルミニウムカリウム、レソルシン、塩化第二鉄、タンニン酸などが挙げられる。

[0057] 抗酸化剤としては、ァスコルビン酸及びその塩、ステアリン酸エステル、トコフェロール及びそのエステル誘導体、ノルジヒドログァセレテン酸、ブチルヒドロキシトルエン（ BHT)、ブチルヒドロキシァ二ソール（BHA)、パラヒドロキシァニソール、没食子酸プ口ピル、セサモール、セサモリン、ゴシポールなどが挙げられる。

[0058] 抗炎症剤としては、ィクタモール、インドメタシン、カオリン、サリチル酸、サリチル酸ナトリウム、サリチル酸メチル、ァセチルサリチル酸、塩酸ジフェンヒドラミン、 d又は dl —カンフル、ヒドロコルチゾン、グアイァズレン、カマズレン、マレイン酸クロルフエニラミン、グリチルリチン酸及びその塩、グリチルレチン酸及びその塩などが挙げられる。

[0059] 殺菌 ·消毒薬としては、アタリノール、ィォゥ、塩化ベンザルコニゥム、塩化べンゼト二ゥム、塩化メチルロザ二リン、クレゾール、ダルコン酸カルシウム、ダルコン酸クロルへキシジン、スノレファミン、マーキュロクロム、ラタトフエリン又はその加水分解物などが挙げられる。

[0060] 頭髪用剤としては、二硫化セレン、臭化アルキルイソキノリニゥム液、ジンクピリチォン、ビフエナミン、チアントーノレ、カスタリチンキ、ショウキヨウチンキ、トウガラシチンキ、塩酸キニーネ、強アンモニア水、臭素酸カリウム、臭素酸ナトリウム、チォグリコール酸などが挙げられる。

[0061] 香料としては、ジヤコゥ、シベット、カストリウム、アンバーグリスなどの天然動物性香料、ァニス精油、アンゲリカ精油、イラン精油、ィリス精油、ウイキヨゥ精油、オレンジ精油、カナンガ精油、力ラウエ一精油、カルダモン精油、グアヤタウッド精油、クミン精油、黒文字精油、ケィ皮精油、シンナモン精油、ゲラニゥム精油、コパイババルサム精油、コリアンデル精油、シソ精油、シダーウッド精油、シトロネラ精油、ジャスミン精油、ジンジャーグラス精油、杉精油、スペアミント精油、西洋ハツ力精油、大茴香精油、チュべローズ精油、丁字精油、橙花精油、冬緑精油、トルーバルサム精油、バチユリ一精油、バラ精油、パルマローザ精油、檜精油、ヒバ精油、白檀精油、プチダレン精油、べィ精油、べチバ精油、ベルガモット精油、ペルーバルサム精油、ボアドローズ精油、芳樟精油、マンダリン精油、ユーカリ精油、ライム精油、ラベンダー精油、リナロェ精油、レモングラス精油、レモン精油、ローズマリー精油、和種ハツ力精油などの植物性香料、その他合成香料などが挙げられる。

[0062] 色素 ·着色剤としては、赤キャベツ色素、赤米色素、ァカネ色素、アナトー色素、ィカスミ色素、ゥコン色素、ェンジュ色素、ォキアミ色素、柿色素、カラメル、金、銀、クチナシ色素、コーン色素、タマネギ色素、タマリンド色素、スピルリナ色素、ソバ全草色素、チェリー色素、海苔色素、ハイビスカス色素、ブドゥ果汁色素、マリーゴールド色素、紫ィモ色素、紫ャマイモ色素、ラック色素、ルチンなどが挙げられる。

[0063] 甘味料としては、砂糖、甘茶、果糖、ァラビノース、ガラクトース、キシロース、マンノース、麦芽糖、蜂蜜、ブドウ糖、ミラクリン、モネリンなどが挙げられる。

[0064] 栄養強化剤としては、貝殻焼成カルシウム、シァノコラバミン、酵母、小麦胚芽、大豆胚芽、卵黄粉末、へミセルロース、ヘム鉄などが挙げられる。

[0065] その他、ホルモン類、金属イオン封鎖剤、 pH調整剤、キレート剤、防腐'防バイ剤、清涼剤、安定化剤、乳化剤、動 ·植物性蛋白質及びその分解物、動 ·植物性多糖類及びその分解物、動'植物性糖蛋白質及びその分解物、血流促進剤、消炎剤'抗ァレルギ一剤、細胞賦活剤、角質溶解剤、創傷治療剤、増泡剤、増粘剤、口腔用剤、消臭 '脱臭剤、苦味料、調味料、酵素などが挙げられる。

[0066] 本発明の剤型は任意であり、アンプル状、カプセル状、粉末状、顆粒状、丸剤、錠剤状、固形状、液状、ゲル状、気泡状、乳液状、クリーム状、軟膏状、シート状、ムース状などの医薬部外品類、皮膚'頭髪用化粧品類及び浴用剤、飲食品類、医薬品類に配合して用いることができる。

[0067] 具体的には化粧品類、医薬部外品類としては、例えば内用'外用薬用製剤、化粧水、乳液、クリーム、軟膏、ローション、オイル、パックなどの基礎化粧料、洗顔料や皮膚洗浄料、シャンプー、リンス、ヘアートリートメント、ヘアクリーム、ポマード、ヘアスプレー、整髪料、パーマ剤、ヘアートニック、染毛料、育毛'養毛料などの頭髪化粧料、ファンデーション、白粉、おしろレ、、口紅、頰紅、アイシャドウ、アイライナー、マスカラ、眉墨、まつ毛などのメークアップィ匕粧料、美爪料などの仕上げ用化粧料、香水類、浴用剤、その他、歯磨き類、口中清涼剤 ·含嗽剤、液臭 ·防臭防止剤、衛生用品、衛生綿類、ウエットティッシュなどが挙げられる。

[0068] 飲食品類としては、例えば清涼飲料、炭酸飲料、栄養飲料、果実飲料、乳酸飲料等の飲料、アイスクリーム、アイスシャーベット、力、き氷等の冷菓、そば、うどん、はるさめ、ぎょうざの皮、しゅうまいの皮、中華麵、即席麵等の麵類、飴、キャンディー、ガム、チョコレート、錠菓、スナック菓子、ビスケット、ゼリー、ジャム、クリーム、焼き菓子、パン等の菓子類、力二、サケ、アサリ、マグロ、イワシ、ェビ、カツォ、サバ、クジラ、力キ、サンマ、イカ、ァカガイ、ホタテ、ァヮビ、ゥニ、イクラ、トコブシ等の水産物、かまぼこ、ハム、ソーセージ等の水産 ·畜産カ卩ェ食品、粉乳、加工乳、発酵乳等の乳製品、サラダ油、てんぷら油、マーガリン、マヨネーズ、ショートニング、ホイップクリーム、ドレッシング等の油脂及び油脂加工食品、ソース、たれ等の調味料、カレー、シチュー、親子丼、お粥、雑炊、中華丼、かつ丼、天丼、うな丼、ハヤシライス、おでん、マーボドーフ、牛丼、ミートソース、玉子スープ、オムライス、餃子、シユーマイ、ハンバーグ、ミートボール等のレトルトバウチ食品、種々の形態の健康'栄養補助食品、保健機能食品、錠剤、カプセル剤、ドリンク斉 lj、トローチなどが挙げられる。

[0069] 本発明の細胞賦活化剤、抗老化剤、細胞外マトリックス産生促進剤、コラーゲン産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤はヒトに対して好適に適用されるものであるが、それぞれの作用効果が期待できる限り、ヒト以外の動物に対して適用することもできる

実施例

[0070] 以下に実施例を示して本発明をより具体的に説明するが、これらは単なる例示であつて、本発明の範囲を何ら限定するものではない。

(ポリアミン分析方法）

動物、植物、微生物、前記抽出物及び加工物、ポリアミンを含む植物抽出物を有効成分として含有することを特徴とする細胞賦活化剤、ポリアミンを有効成分として含む植物抽出物もしくはポリアミン自体を含むことを特徴とする抗老化剤、ポリアミンを有効成分として含む植物抽出物もしくはポリアミン自体を含むことを特徴とする細胞外マトリックス産生促進剤、ポリアミンを含む植物抽出物もしくはポリアミン自体を有効成分とすることを特徴とする化粧品類、ポリアミンを含む植物抽出物もしくはポリアミン自体を有効成分とすることを特徴とする医薬部外品類、ポリアミンを含む植物抽出物もしくはポリアミン自体を有効成分とすることを特徴とする飲食品類、ポリアミンを含む植物抽出液物もしくはポリアミン自体を有効成分とすることを特徴とする医薬品類などに含まれるポリアミン含量を以下の方法で調べることができる。植物中のポリアミンは遊離型ポリアミン、化合型ポリアミン、結合型ポリアミンがあり抽出方法は異なるがいずれも解析することができる（Plant Cell Physiol., 43(2), 196-206, 2002， J. Nutr. Bioche m.， 4, 66-70， 1993, Biosci. Biotech. Biochem" 61(9), 1582-1584, 1997)。具体例として植物種子の遊離型ポリアミンの分析方法について詳細に示す。約 0. 1〜： 1. Og のダイズ種子に希釈内部標準液（1 , 6—hexanediamine、又は 1 , 7 - diaminohe ptane、内部標準量 = 7. 5又 12nmol)と 5%過塩素酸水溶液 (試料生体重 1. Og当たり 5〜20mL)を加え、ポリトロンミキサーを用いて室温下で十分に磨碎抽出する。磨砕液を、 4°C · 35, 000 X gで 20分間遠心分離して上清液を採取し本液を遊離型ポリアミン溶液とする。スクリューキャップ付きのマイクロチューブに 100〜400 μしの遊離型ポリアミン溶液 (植物抽出物，精製植物抽出物）、 200 z Lの飽和炭酸ナトリウム水溶液、 200 μ Lのダンシルク口ライド Ζアセトン溶液（lOmgZmL)を加えて軽く混和する。チューブの栓をしつ力と閉めたのちアルミ箔で覆レ、、 60°Cのウォーターバスで 1時間加温してダンシル化を行う。チューブを放冷した後、プロリン水溶液（10 Omg/mL)を 200 μ L加えて混和する。アルミ箔で覆ってウォーターバスで 30分間再加温する。放冷後、窒素ガスを吹き付けてアセトンを除いた後に、 600 z Lのトノレエンを加えて激しく混和する。チューブを静置して 2相に分かれた後に、上層のトルェン層を 300 /i Lマイクロチューブに分取する。分取したトルエンに窒素ガスを吹き付けてトルエンを完全除去する。チューブに 200 /i Lのメタノールを加えてダンシル化遊離型ポリアミンを溶解させる。プトレシン、スペルミジン、スペルミンの遊離型ポリアミン量の定量は蛍光検出器 (励起波長： 365nm ·発光波長： 510nm)を接続した高速液体クロマトグラフィーを用いて内部標準法で分析する。 HPLCカラムは z Bondapak C 18 (Waters社製： 027324、 3. 9 X 300mm、粒子径 10 μ m)を使用する。試料中のポリアミン含量は標準液と試料の HPLCチャートから、それぞれ各ポリアミンと内部標準のピーク面積を求めて算出する。

[0072] (実施例 1A)ダイズ種子からのポリアミンを含む植物抽出物及び/又はポリアミンを有効成分として含む植物抽出物の調製

[0073] 100gのダイズ種子（品種'フクユタカ'）に希釈内部標準液（1 , 7-diaminohepta ne、内部標準量 = 1200nmol)と 480mLの 5%過塩素酸水溶液を加えて室温下で一晩放置した。その後、ポリフエノール吸着剤であるポリクラール VT (ISP社製）を 16 g添加し、プレンダーミキサーでダイズ種子を十分に破砕後、室温下で 30分間放置して酸性条件下で抽出した。破砕物を 2°C · 22, 000 X gで 20分間遠心分離して液体画分を採取し、 30%の水酸化ナトリウム溶液で中和して本液を植物抽出物 (ダイズ種子抽出物）とした。植物抽出物中にはポリアミンとしてプトレシンが 8. 2mg、スペルミジンが 12· 4mg、スペルミンが 6. lmg含まれており、合計で 26· 7mgであった。さらに回収した植物抽出物を陽イオン交換樹脂（AG 50W-X4, 200-400mesh, H +型，バィォラッド社製）で充填したカラムに通し、ポリアミンを樹脂に吸着させた。 0. 7N Na Cl/0. 1Mリン酸ナトリウム溶液（ρΗ8· 0)、水、 1N塩酸を順次流してカラムを洗浄した。不純物を除去した後に、 6Ν塩酸でポリアミンを溶出して 30%の水酸化ナトリウムで中和して本液を精製植物抽出物 (精製ダイズ種子抽出物）とした。精製植物抽出物中にはポリアミンとしてプトレシンが 6. 4mg、スペルミジンが 10. 4mg、スペルミンが 5. lmg含まれており、合計で 21. 9mgであった。植物抽出物と精製植物抽出物の HPLC分析のチャート図を図 1に示した。プトレシン（検出時間： 10.173分 · 10.17 5分）、カダベリン（検出時間： 10.903分 · 10.890分）、スペルミジン（検出時間： 16.050 分 · 16.137分）、スペルミン（検出時間： 20.100分 ' 20.225分）のシャープな単一ピークがいずれの抽出物においても検出され、ポリアミンが主成分であることが確認された。ポリアミン純度を HPLC分析のピーク面積から算出したところ、植物抽出物は 80〜 86%、精製植物抽出物は 88〜93%であった。ポリアミンが主成分である理由は、ポリフエノール吸着剤を添カ卩し、酸条件下で抽出することで種子タンパク質などの不純物を変性及び吸着除去していることが大きく影響している。植物抽出物（ダイズ種子抽出物）と精製植物抽出物 (精製ダイズ種子抽出物）は電気透析装置 (ァシライザ一, ァストム社製）により脱塩を行い、凍結乾燥により濃縮して種々の評価に用いた。

[0074] lOOgのダイズ種子（品種'フクユタカ'）に希釈内部標準液（1 , 7-diaminohepta ne、内部標準量 = 1200nmol)と 500mLの IN塩酸溶液を加えて低温 (4°C)下で一晚放置した。その後、ポリフエノール吸着剤であるポリクラール VT (ISP社製）を 16g 添加し、プレンダーミキサーでダイズ種子を十分に破砕後、低温 (4°C)下で 30分間放置して酸性条件下で抽出した。破砕物を 2°C ' 22, 000 X gで 20分間遠心分離して液体画分を採取し、 30%の水酸化ナトリウム溶液で中和して本液を植物抽出物（ダイズ種子抽出物）とした。植物抽出物中にはポリアミンとしてプトレシンが 4. lmg、スペルミジンが 9. lmg、スぺノレミンが 2. 9mg含まれており、合計で 16. lmgであつた。回収した植物抽出物 (ダイズ種子抽出物）を電気透析装置 (ァシライザ一，ァストム社製）により脱塩を行い、凍結乾燥により濃縮して種々の評価に用いた。

[0075] 以上の結果から、ダイズ種子から工業的又は実用的に利用できるポリアミンを含む植物抽出物及び/又はポリアミンを有効成分として含む植物抽出物を得ることができた。特に、植物から 1N塩酸でポリアミンを含む植物抽出物及び/又はポリアミンを有効成分として含む植物抽出物が回収できることが確認できたことから、安全性に優れたポリアミンを含む植物抽出物及び Z又はポリアミンを有効成分として含む植物抽出物を提供することができる。塩酸でポリアミンを含む植物抽出物及び Z又はポリアミンを有効成分として含む植物抽出物を回収し、 30%の水酸化ナトリウムで中和すれば、ごく一般的なイオンによる中和反応となり、ポリアミンの抽出に一般的に用いられるトリクロロ酢酸に比べて安全性が高いと考えられる。

[0076] (実施例 2A)ダイズ芽からのポリアミンを含む植物抽出物及び/又はポリアミンを有効成分として含む植物抽出物の調製 [0077] ダイズ種子（品種'フクユタカ'）を吸水させて、光条件下又は暗黒条件下、 26°Cで 2日間培養して発芽させた。光条件下又は暗黒条件下で培養した発芽ダイズの芽部分をそれぞれ約 50gサンプリングした。 50gのダイズ芽に希釈内部標準液（1， 7-di aminoheptane、内部標準量 = 600nmol)、 250mLの 5%過塩素酸水溶液、ポリフェノール吸着剤であるポリクラール VT (ISP社製）を 8g添カ卩し、ホモジナイザーでダイズ芽を十分に破砕した。次に室温下で 30分間放置して酸性条件下で抽出した。破砕物を 2°C ' 22, 000 X gで 20分間遠心分離して液体画分を採取し、 30%の水酸化ナトリウム溶液で中和して本液を植物抽出物（ダイズ芽抽出物）とした。光条件下で発芽させたダイズ芽力植物抽出物中にはポリアミンとしてプトレシンとカダベリンが 26 . 2mg、スぺノレミジン力 Si . 8mg、スぺノレミン力 0. 2mg含まれており、合計で 28. 2m gであった。暗黒条件下で発芽させたダイズ芽から植物抽出物中にはポリアミンとしてプトレシンとカダベリンが 17. lmg、スペルミジンが 1. 6mg、スぺノレミン力 2mg含まれており、合計で 18. 9mgであった。回収した植物抽出物（ダイズ芽抽出物）を電気透析装置 (ァシライザ一，ァストム社製）により脱塩を行い、凍結乾燥により濃縮して種々の平価に用いた。

[0078] 以上の結果から、ダイズの芽には特にプトレシンとカダベリンが多く含まれていることが明らかとなった。ポリアミンの中でもプトレシンゃカダベリンを特に有効成分として利用する際には、ダイズの芽を抽出材料として利用することが望ましい。ダイズ芽から工業的又は実用的に利用できるポリアミンを含む植物抽出物及び/又はポリアミンを有効成分として含む植物抽出物を得ることができた。

[0079] (実施例 3A)ダイズ胚芽 (ダイズ胚)からのポリアミンを含む植物抽出物及び/又はポリアミンを有効成分として含む植物抽出物の調製

[0080] 100gのダイズ胚芽（フォーユー社製）に希釈内部標準液（1 , 7-diaminoheptan e、内部標準量 = 1200nmol)、 500mLの 5%過塩素酸水溶液を加えて室温下で 1 時間放置した。その後、ポリフエノール吸着剤であるポリクラール VT (ISP社製）を 16 g添加し、プレンダーミキサーでダイズ胚芽を十分に破砕後、室温下で 30分間放置して酸性条件下で抽出した。破砕物を 2°C · 22, 000 X gで 20分間遠心分離して液体画分を採取し、 30%の水酸化ナトリウム溶液で中和して本液を植物抽出物 (ダイズ胚芽抽出物）とした。植物抽出物中にはポリアミンとしてプトレシンが 23. 5mg、スペルミジンが 24· Omg、スペルミンが 9· 6mg含まれており、合計で 57· lmgであった。さらに回収した植物抽出物を陽イオン交換樹脂（AG 50W-X4, 200-400mesh, H +型，バィォラッド社製）で充填したカラムに通し、ポリアミンを樹脂に吸着させた。 0. 7N Na Cl/0. 1Mリン酸ナトリウム溶液 (pH8. 0)、水、 1N塩酸を順次流してカラムを洗浄した。不純物を除去した後に、 6N塩酸でポリアミンを溶出して 30%の水酸化ナトリウムで中和して本液を精製植物抽出物 (精製ダイズ胚芽抽出物）とした。精製植物抽出物中にはポリアミンとしてプトレシンが 20. 4mg、スペルミジンが 22. 3mg、スペルミンが 7. 7mg含まれており、合計で 50. 4mgであった。植物抽出物（ダイズ胚芽抽出物）と精製植物抽出物 (精製ダイズ胚芽抽出物）は電気透析装置 (ァシライザ一，ァストム社製）により脱塩を行レ、、凍結乾燥により濃縮して種々の評価に用いた。

1kgのダイズ胚芽（フォーユー社製）に希釈内部標準液（1， 7-diaminoheptane 、内部標準量 = 10 /i mol)、 5Lの IN塩酸溶液を加えて室温下で 1時間放置した。その後、ポリフエノール吸着剤であるポリクラール VT (ISP社製）を 80g添加し、ホモジナイザーでダイズ胚芽を十分に破砕後、室温下で 1時間放置して酸性条件下で抽出した。破砕物を 2°C ' 22, 000 X gで 30分間遠心分離して液体画分を採取し、 30 %の水酸化ナトリウム溶液で中和して本液を植物抽出物 (ダイズ胚芽抽出物）とした。植物抽出物中にはポリアミンとしてプトレシンが 235. lmg、スペルミジン力 41. 8m g、スぺノレミン力 0. lmg含まれており、合計で 557. Omgであった。植物抽出物の HPLC分析のチャート図を図 2に示した。プトレシン（検出時間： 10.925分）、スペルミジン（検出時間： 15.898分）、スペルミン（検出時間： 20.025分）のシャープな単一ピークが検出された。 13.002分の単一ピークは希釈内部標準液（1， 7-diaminoheptan e)である。各ポリアミンのシャープな単一ピークが植物抽出物で検出され、ポリアミンが主成分であることが確認された。植物抽出物が高純度である理由は、胚芽 (胚)部分のみを用いることで種子タンパク質等の混入が低いことと、ポリフエノール吸着剤を添加し、酸条件下で抽出することで種子タンパク質などの不純物を変性及び吸着除去していることが大きく影響している。植物抽出物 (ダイズ胚芽抽出物）は電気透析装置（ァシライザ一，ァストム社製）により脱塩を行レ、、凍結乾燥により濃縮して種々の評価に用いた。

[0082] 以上の結果から、ダイズ胚芽 (ダイズ胚）力極めて高含量なポリアミンを含む植物抽出物及び/又はポリアミンを有効成分として含む植物抽出物が得ることが明らかとなった。特にダイズ胚芽から、これ程の量のポリアミンが回収された報告は全くなぐダイズ胚芽中にポリアミン含量が著しく高いことについても始めての知見であった。これまでにポリアミン又はポリアミン組成物を植物から抽出して工業的に利用する場合、植物中に含まれるポリアミン含量が極めて低ぐさらに抽出効率が低いことが大きな問題であつたが、 1kgのダイズ胚芽（ダイズ芽）から約 0. 5gのポリアミン又はポリアミン組成物が回収できたことから、生産コストの面でも大きな改善がなされた。植物から 1 N塩酸でポリアミンを含む植物抽出物及び/又はポリアミンを有効成分として含む植物抽出物が回収できることが確認できたことから、安全性に優れたポリアミンを含む植物抽出物及び/又はポリアミンを有効成分として含む植物抽出物を提供することができる。

[0083] (実施例 4A)

I.コムギ胚芽（コムギ胚）力のポリアミンを含む植物抽出物及び/又はポリアミンを有効成分として含む植物抽出物の調製

[0084] lOOgのコムギ胚芽 (培焼'ローストタイプ，日清フアルマ社製）に希釈内部標準液（ 1 , 7-diaminoheptane,内部標準量 = 1200nmol)、 500mLの 5%過塩素酸水溶液を加えて室温下で 1時間放置した。その後、ポリフエノール吸着剤であるポリクラール VT (ISP社製）を 16g添加し、ブレンダ一ミキサーでダイズ胚芽を十分に破砕後、室温下で 30分間放置して酸性条件下で抽出した。破砕物を 2°C ' 22, OOO X gで 2 0分間遠心分離して液体画分を採取し、 30%の水酸化ナトリウム溶液で中和して本液を植物抽出物（コムギ胚芽抽出物）とした。植物抽出物中にはポリアミンとしてブトレシンが 6. 4mg、スペルミジンが 23. 9mg、スペルミンが 14. 3mg含まれており、合計で 44. 6mgであった。さらに回収した植物抽出物を陽イオン交換樹脂 (AG 50W-X 4， 200-400mesh, H +型，バイオラッド社製）で充填したカラムに通し、ポリアミンを樹脂に吸着させた。 0. 7N NaCl/0. 1Mリン酸ナトリウム溶液（pH8. 0)、水、 1N塩酸を順次流してカラムを洗浄した。不純物を除去した後に、 6N塩酸でポリアミンを溶出して 30%の水酸化ナトリウムで中和して本液を精製植物抽出物 (精製コムギ胚芽抽出物）とした。精製植物抽出物中にはポリアミンとしてプトレシンが 5. 7mg、スペルミジンが 21 · 5mg、スぺノレミン力 2. 9mg含まれており、合計で 40· lmgであった。植物抽出物（コムギ胚芽抽出物）と精製植物抽出物 (精製コムギ胚芽抽出物）は電気透析装置（ァシライザ一，ァストム社製）により脱塩を行レ、、凍結乾燥により濃縮して種々の評価に用いた。

[0085] 1kgのコムギ胚芽 (培焼'ローストタイプ，日清フアルマ社製）に希釈内部標準液（1 , 7-diaminoheptane,内部標準量 = 10 μ mol)、 5Lの IN塩酸溶液を加えて室温下で 1時間放置した。その後、ポリフエノール吸着剤であるポリクラール VT (ISP社製）を 80g添加し、ホモジナイザーでコムギ胚芽を十分に破砕後、室温下で 1時間放置して酸性条件下で抽出した。破砕物を 2°C ' 22, 000 X gで 30分間遠心分離して液体画分を採取し、 30%の水酸化ナトリウム溶液で中和して本液を植物抽出物（コムギ胚芽抽出物）とした。植物抽出物中にはポリアミンとしてプトレシンが 75. lmg、スぺノレミジン力 294. Omg、スぺノレミン力 S119. 4mg含まれており、合計で 488. 5mgであった。植物抽出物の HPLC分析のチャート図を図 3に示した。プトレシン (検出時間 : 10.110分）、スペルミジン（検出時間： 15.892分）、スペルミン（検出時間： 20.019分）のシャープな単一ピークがそれぞれ検出された。 12.994分の単一ピークは希釈内部標準液（1 , 7— diaminoheptane)である。各ポリアミンのシャープな単一ピークが植物抽出物で検出され、ポリアミンが主成分であることが確認された。植物抽出物が高純度である理由は、胚芽 (胚)部分を用いることで種子タンパク質等の混入が低いことと、ポリフエノール吸着剤を添加し、酸条件下で抽出することでタンパク質などの不純物を変性又は吸着除去していることが大きく影響している。植物抽出物（コムギ胚芽抽出物）は電気透析装置 (ァシライザ一，ァストム社製）により脱塩を行い、凍結乾燥により濃縮して種々の評価に用いた。

[0086] 以上の結果から、コムギ胚芽（コムギ胚)から工業的又は実用的に利用できるポリアミンを含む植物抽出物及び/又はポリアミンを有効成分として含む植物抽出物を得ること力 Sできた。コムギ胚芽中にはポリアミン以外にも有効な成分が多く含まれていること力ら、回収した植物抽出物中には主成分であるポリアミン以外にも有効成分が含まれている可能性がある。ポリアミン以外の有効成分の効果と作用がポリアミンの効果と作用に混合されることによって、より優れた効果と作用がさらに期待できる。植物力 1N塩酸でポリアミンを含む植物抽出物及び/又はポリアミンを有効成分として含む植物抽出物が回収できることが確認できたことから、安全性に優れたポリアミンを含む植物抽出物及び/又はポリアミンを有効成分として含む植物抽出物を提供することができる。

[0087] II.工業化グレードの原料とポリフヱノール吸着剤、 1N以下の塩酸で抽出した実験例

[0088] 各 lkgのダイズ胚芽（大豆胚芽'粉タイプ，フォーユー社製）に各 6Lの 0. 1N、 0. 5 N、 INの塩酸溶液を加えた。さらに、ポリフエノール吸着剤であるダイパガン F (BAS F社製）を各 80g添加し、スリーワンモーターで室温下にて 2時間攪拌して酸性条件下で抽出した。攪拌物を 4°C、 12, 000 X gで 30分間遠心分離して液体画分を採取し、 30。/oの水酸化ナトリウム溶液で中和した後に 4°C、 12, 000 X gで 30分間遠心分離して液体画分を採取し、本液を植物抽出物 (ダイズ胚芽抽出物）とした。 0. 1Nの塩酸による植物抽出物中にはポリアミンとしてプトレシンが 217. 9mg、スペルミジン力 S163. 5mg、スペルミンが 34· 7mg含まれており、合計で 416· lmgであった。 0. 5Nの塩酸による植物抽出物中にはポリアミンとしてプトレシンが 226. 5mg、スペルミジン力 S170. Omg、スぺノレミン力 36. 5mg含まれており、合計で 433. Omgであった。 1Nの塩酸による植物抽出物中にはポリアミンとしてプトレシンが 232. 4mg、スペルミジン力 S174. 4mg、スぺノレミン力 39. 96mg含まれており、合計で 446. 76mgであつた。植物抽出物 (ダイズ胚芽抽出物）は電気透析装置 (ァシライザ一，ァストム社製）により脱塩を行い、凍結乾燥により濃縮して種々の評価に用いた。

[0089] 以上の結果から、 0. 1N、 0. 5N、 INの塩酸濃度でもポリアミンを含む植物抽出物及び/又はポリアミンを有効成分として含む植物抽出物が回収できることが確認でき、安全性や取り扱い上の面でも優れた調製方法が見出された。

[0090] III.工業化グレードの原料とポリフヱノール吸着剤、 1N以下の硫酸で抽出した実験例

[0091] 各 lkgのダイズ胚芽（大豆胚芽'粉タイプ，フォーユー社製）に各 6Lの 0. 1N、 0. 5

N、 INの硫酸溶液を加えた。さらに、ポリフエノール吸着剤であるダイパガン F (BAS F社製）を各 80g添加し、スリーワンモーターで室温下にて 2時間攪拌して酸性条件下で抽出した。攪拌物を 4°C · 12, 000 X gで 30分間遠心分離して液体画分を採取し、 30%の水酸化ナトリウム溶液で中和した後に 4°C ' 12, 000 X gで 30分間遠心分離して液体画分を採取し、本液を植物抽出物 (ダイズ胚芽抽出物）とした。 0. 1Nの硫酸による植物抽出物中にはポリアミンとしてプトレシンが 220. 8mg、スペルミジン力 7mg、スぺノレミン力 35. lmg含まれており、合計で 421. 6mgであった。 0. 5Nの硫酸による植物抽出物中にはポリアミンとしてプトレシンが 223. 7mg、スペルミジンが 167. 9mg、スぺノレミン力 S35. 5mg含まれており、合計で 427. lmgであった。 1Nの硫酸による植物抽出物中にはポリアミンとしてプトレシンが 229. 4mg、スペルミジンが 172. 2mg、スぺノレミン力 S36. 5mg含まれており、合計で 438. lmgであった。植物抽出物 (ダイズ胚芽抽出物）は電気透析装置 (ァシライザ一，ァストム社製）により脱塩を行い、凍結乾燥により濃縮して種々の評価に用いた。

[0092] 以上の結果から、 0. 1N、 0. 5N、 INの硫酸濃度でもポリアミンを含む植物抽出物及び/又はポリアミンを有効成分として含む植物抽出物が回収できることが確認でき、安全性や取り扱い上の面でも優れた調製方法が見出された。

[0093] IV.工業化グレードの原料とポリフエノール吸着剤、 1N以下の塩酸で抽出した実験例

[0094] 各 lkgのコムギ胚芽（特脱脂小麦胚芽'微粉末タイプ ' 20kg入り，日清フアルマ社製 )に各 4Lの 0. 1N、 0. 5N、 INの塩酸溶液を加えた。さらに、ポリフエノール吸着剤であるダイパガン F (BASF社製）を各 80g添力 0し、スリーワンモーターで室温下にて 2時間攪拌して酸性条件下で抽出した。攪拌物を 4°C · 12, 000 X gで 30分間遠心分離して液体画分を採取し、 30%の水酸化ナトリウム溶液で中和した後に 4°C ' 12， 000 X gで 30分間遠心分離して液体画分を採取し、本液を植物抽出物（コムギ胚芽抽出物）とした。 0. 1Nの塩酸による植物抽出物中にはポリアミンとしてプトレシンが 4 8. 4mg、スぺノレミジン力 S201. 6mg、スぺノレミン力 46mg含まれており、合計で 296m gであった。 0. 5Nの塩酸による植物抽出物中にはポリアミンとしてプトレシン力 S48. 4 m_g、スぺノレミジン力 S183. 6mg、スぺノレミン力 S50. 8mg含まれており、合計で 282. 8 mgであった。 1Nの塩酸による植物抽出物中にはポリアミンとしてプトレシンが 51. 2 _mg、スぺノレミジン力 S204. 4mg、スぺノレミン力 56. 6mg含まれており、合計で 312. 2 mgであった。植物抽出物（コムギ胚芽抽出物）は電気透析装置（ァシライザ一，ァストム社製）により脱塩を行い、凍結乾燥により濃縮して種々の評価に用いた。

[0095] 以上の結果から、 0. 1N、 0. 5N、 INの塩酸濃度でもポリアミンを含む植物抽出物及び/又はポリアミンを有効成分として含む植物抽出物が回収できることが確認でき、安全性や取り扱い上の面でも優れた調製方法が見出された。

[0096] V.工業化グレードの原料とポリフエノール吸着剤、 1N以下の硫酸で抽出した実験例

[0097] 各 lkgのコムギ胚芽（特脱脂小麦胚芽.微粉末タイプ.20kg入り，日清フアルマ社製 )に各 4Lの 0. 1N、 0. 5N、 INの硫酸溶液を加えた。さらに、ポリフエノール吸着剤であるダイパガン F (BASF社製）を各 80g添カロし、スリーワンモーターで室温下にて 2時間攪拌して酸性条件下で抽出した。攪拌物を 4°C ' 12, 000 X gで 30分間遠心分離して液体画分を採取し、 30%の水酸化ナトリウム溶液で中和した後に 4°C ' 12， 000 X gで 30分間遠心分離して液体画分を採取し、本液を植物抽出物（コムギ胚芽抽出物）とした。 0. 1Nの硫酸による植物抽出物中にはポリアミンとしてプトレシンが 5 Omg、スぺノレミジン力 195. 6mg、スぺノレミン力 46. 4mg含まれており、合計で 292m gであった。 0. 5Nの硫酸による植物抽出物中にはポリアミンとしてプトレシンが 50m g、スぺノレミジン力 201. 6mg、スぺノレミン力 S56. 6mg含まれており、合計で 308. 2m gであった。 INの硫酸による植物抽出物中にはポリアミンとしてプトレシンが 52. 8m g、スぺノレミジン力 197. 2mg、スぺノレミン力 S58. 4mg含まれており、合計で 308. 4m gであった。植物抽出物（コムギ胚芽抽出物）は電気透析装置（ァシライザ一，ァストム社製）により脱塩を行い、凍結乾燥により濃縮して種々の評価に用いた。

[0098] 以上の結果から、 0. 1N、 0. 5N、 INの硫酸濃度でもポリアミンを含む植物抽出物及び/又はポリアミンを有効成分として含む植物抽出物が回収できることが確認でき、安全性や取り扱い上の面でも優れた調製方法が見出された。

[0099] (実施例 5A)豆乳からのポリアミンを含む植物抽出物及び Z又はポリアミンを有効成分として含む植物抽出物の調製

[0100] lOOmLの豆乳（品種'フクユタカ'）に希釈内部標準液（1， 7_diaminoheptane、内部標準量 = 1200nmol)、 lOOmLの 5%過塩素酸水溶液を加えた。その後、ミキサ一で十分に混合後、室温下で 30分間放置して酸性条件下で抽出した。混合物を 4°C - 27, 700 X gで 20分間遠心分離して液体画分を採取し、 30%の水酸化ナトリウム溶液で中和して本液を植物抽出物（豆乳抽出物）とした。植物抽出物中にはポリアミンとしてプトレシンが 0. 7mg、スペルミジンが 1. 9mg、スぺノレミン力 SO. 7mg含まれており、合計で 3. 3mgであった。回収した植物抽出物（豆乳抽出物）を電気透析装置（ァシライザ一，ァストム社製）により脱塩を行レ、、凍結乾燥により濃縮して種々の評価に用いた。

[0101] lOOmLの豆乳（品種'フクユタカ'）に希釈内部標準液（1， 7_diaminoheptane、内部標準量 = 960nmol)、 10%過塩素酸水溶液を 2. 5mL (終濃度 0. 25%)、 5m L (終濃度 0. 5%)、 10mL (終濃度 1 %)、 20mL (終濃度 2%)、 40mL (終濃度 4%) それぞれ加えた。その後、ミキサーで十分に混合後、室温下で 30分間放置して酸性条件下で抽出した。混合物を 2°C · 27, 700 X gで 20分間遠心分離して液体画分を採取し、 30%の水酸化ナトリウム溶液で中和して本液を植物抽出物（豆乳抽出物）とした。 0. 25%の過塩素酸濃度では液体画分が白色を呈した。過塩素酸濃度が低いことで、 pH低下によるダイズタンパク質の変性が不十分になり液体画分に混入したと考えられる。 0. 5%と 1%の過塩素酸濃度でも僅かに白色を呈した。ポリアミンの回収量は 0. 25%の過塩素酸濃度の植物抽出物ではポリアミン以外のピークが見られ他の成分の混入が見られた、他の過塩素酸濃度に比べてポリアミン回収量が低下した。一方、 0. 5%以上の過塩素酸濃度の植物抽出物では、回収量は同じレベルでポリァミンとしてプトレシンが 1. 8mg、スぺノレミジン力 S2. 8mg、スペルミン力 . Omg含まれており、合計で 5. 6mgであった。回収した植物抽出物（豆乳抽出物）を電気透析装置（ァシライザ一，ァストム社製）により脱塩を行レ、、凍結乾燥により濃縮して種々の評価に用いた。 0. 5%の過塩素酸濃度でもポリアミンを含む植物抽出物及び Z又はポリアミンを有効成分として含む植物抽出物が回収できることが確認でき、安全性の面でも優れた調製方法が見出された。

[0102] lOOmLの豆乳（品種'フクユタカ'）に希釈内部標準液（1， 7_diaminoheptane、内部標準量 = 800nmol)をカロえ、 6N塩酸を用レ、て終濃度力 S。. 0625N, 0. 125N 、 0. 25N、 0. 5N、 INになるように添加した。その後、ミキサーで十分に混合後、室温下で 30分間放置して酸性条件下で抽出した。混合物を 2°C ' 27, 700 X gで 20分間遠心分離して液体画分を採取し、 30%の水酸化ナトリウムで中和して本液を植物抽出物（豆乳抽出物）とした。 0. 0625N、 0. 125N、 0. 25N、 0. 5Nの塩酸濃度では液体画分が少し白色を呈した。塩酸濃度が低いことで、 pH低下によるダイズタンパク質の変性が不十分になり液体画分に混入したと考えられる。ポリアミンの回収量は全ての塩酸濃度でほぼ同じレベルでポリアミンとしてプトレシンが 1. lmg、スペルミジンが 2. 3mg、スぺノレミン力 6mg含まれており、合計で 4. Omgであった。回収した植物抽出物（豆乳抽出物）を電気透析装置 (ァシライザ一，ァストム社製）により脱塩を行い、凍結乾燥により濃縮して種々の評価に用いた。 1N以下の塩酸でもポリアミンを含む植物抽出物及び Z又はポリアミンを有効成分として含む植物抽出物が回収できることが確認でき、安全性の面でも優れた調製方法が見出された。 1Nの塩酸で回収した植物抽出物の HPLC分析のチャート図を図 4に示した。プトレシン (検出時間： 10.124分）、スペルミジン（検出時間： 15.929分）、スペルミン（検出時間： 20.0 40分）のシャープな単一ピークがそれぞれ検出された。各ポリアミンのシャープな単一ピークが植物抽出物で検出され、ポリアミンが主成分であることが確認された。植物抽出物が高純度である理由は、酸条件下で抽出することで豆乳中に混入している種子タンパク質のほとんどが変性し、遠心分離によって沈殿除去されたためである。以上の結果から、豆乳から工業的又は実用的に利用できるポリアミンを含む植物抽出物及び/又はポリアミンを有効成分として含む植物抽出物を得ることができた。豆乳からポリアミンを含む植物抽出物及び/又はポリアミンを有効成分として含む植物抽出物を回収する場合には、破砕や粉砕処理が不要であり、調製行程が少なくメリツトが大きい。豆乳中にはポリアミン以外にも有効な成分が多く含まれていることから、回収した植物抽出物中には主成分であるポリアミン以外にも有効成分が含まれている可能性がある。ポリアミン以外の有効成分の効果と作用がポリアミンの効果と作用に混合されることによって、より優れた効果と作用がさらに期待できる。特に、過塩素酸や塩酸の濃度を下げることで、植物抽出物中のダイズタンパク質の混入量が高めることが確認されたので、用途に応じて過塩素酸や塩酸の濃度を低くして調製すればよレ、。豆乳はごく一般的に飲食されていることから豆乳から調製したポリアミンを含む植物抽出物及び/又はポリアミンを有効成分として含む植物抽出物の安全性は極めて高い。

[0104] (実施例 6A)オカラからのポリアミンを含む植物抽出物及び/又はポリアミンを有効成分として含む植物抽出物の調製

[0105] 1kgのオカラに希釈内部標準液（1， 7-diaminoheptane,内部標準量 = 10 x m ol)、 5Lの 5%過塩素酸水溶液をカ卩えて室温下で 1時間放置した。その後、ホモジナィザ一でオカラを十分に破砕後、室温下で 1時間放置して酸性条件下で抽出した。破砕物を 2°C ' 22, 000 X gで 30分間遠心分離して液体画分を採取し、 30%の水酸化ナトリウム溶液で中和して本液を植物抽出物（オカラ抽出物）とした。植物抽出物中にはポリアミンとしてプトレシンが 5. 4mg、スペルミジンが 17. 8mg、スペルミンが 6. 5mg含まれており、合計で 29. 7mgであった。植物抽出物 (オカラ抽出物）は電気透析装置（ァシライザ一，ァストム社製）により脱塩を行レ、、凍結乾燥により濃縮して種々の評価に用いた。

[0106] 以上の結果から、オカラから工業的又は実用的に利用できるポリアミンを含む植物抽出物及び/又はポリアミンを有効成分として含む植物抽出物を得ることができた。オカラは豆乳採取後の残查であり、ポリアミンがほとんど含まれていないと考えられていたが、豆乳よりは少ないがポリアミンが多く含まれていることが確認された。オカラは豆乳採取後の残查であることから、ダイズタンパク質等の含量が低ぐ植物抽出物中のポリアミン純度は高ぐ陽イオン交換樹脂での精製が不要であることも明らかとなつた。オカラはそのほとんどが廃棄されていることから、オカラを生産材料としてポリアミンを含む植物抽出物及び/又はポリアミンを有効成分として含む植物抽出物を回収すれば、産業上大きなメリットが期待される。

[0107] (実施例 7A)ダイズ胚芽由来のポリアミンを含む植物抽出物及び Z又はポリアミンを有効成分として含む植物抽出物による正常ヒト皮膚繊維芽細胞を用いた評価

[0108] ダイズ胚芽由来のポリアミンを含む植物抽出物及び Z又はポリアミンを有効成分として含む植物抽出物は実施例 3 Aに記載されている植物抽出物（ダイズ胚芽抽出物 )と精製植物抽出物 (精製ダイズ胚芽抽出物）を用いた。評価は以下の手順で行った。正常ヒト皮膚線維芽細胞を 1ゥエル当たり 2. 0 X 10⁴個となるように 48穴マイクロプレートに播種した。播種培地には、ダルベッコ改変イーグル培地（DMEM)に 10% のゥシ胎児血清を添加したものを用いた。 37°C、二酸化炭素濃度 5vol%中にて 24 時間培養後、任意のポリアミン濃度の試料を添加した試験培地に交換し、さらに 48 時間培養した。次いで 3 _ (4, 5—ジメチル一 2 _チアゾリル)一 2， 5—ジフエ二ルテトラゾリウムブロミド (MTT)を 100 μ g/mL含有する培地に交換して 3時間培養し、テトラゾリゥム環の開環により生じるフオルマザンを 2 _プロパノールにて抽出し、マイク口プレートリーダーにて 550nmの吸光度を測定した。同時に濁度として 650nmにおける吸光度を測定し、両測定値の差により細胞賦活作用を評価した。評価結果を、コントロール (水添加）における細胞賦活作用を 100とした相対値にて図 5に示す。

[0109] 図 5より明らかなように、ダイズ胚芽抽出物、精製ダイズ胚芽抽出物を添加した培地では、いずれにおいても正常ヒト皮膚線維芽細胞に対して高い細胞賦活 *抗老化効果を有していることが認められた。濃度はポリアミン濃度で示した。特に、ダイズ胚芽由出物で ίま 0. 67 μ Μ、 6. 7 /i M、 13. 4 μ M (プトレシン濃度 9· 2 μ Μ,スぺノレミジン濃度 3· 8 μ Μ,スペルミン濃度 0· 4 μ Μ)、 33. 5 /i Μのポリアミン濃度、精製ダイズ胚芽抽出物では 7· 4 μ Μ、 14. 8 μ Μ (プトレシン濃度 8. 2 μ Μ, スペルミジン濃度 5· 8 /i M,スぺノレミン濃度 0· 8 μ Μ)、 37. 0 /i Μのポリアミン濃度 ίこおレヽてブランク (水）と比較して、いずれも 20%以上の有意な細胞賦活 '抗老化作用が認められた。以上のことから、これらのポリアミンを含む植物抽出物及び/又はポリアミンを有効成分として含む植物抽出物は、優れた細胞賦活作用を有することが明らかとなり、これらを肌に適用することにより、加齢に伴う繊維芽細胞の衰えが軽減されることでコラ一ゲンやヒアルロン酸の代謝回転速度の低下が小さくなり、極めて優れた老化防止効果を発揮し、加齢、紫外線曝露等により生じる皮膚のしわ、たるみ等を効果的に改善すること力 Sできる。

[0110] (実施例 8Α)コムギ胚芽由来のポリアミンを含む植物抽出物及び Ζ又はポリアミンを有効成分として含む植物抽出物による正常ヒト皮膚繊維芽細胞を用いた評価

[oiii] コムギ胚芽由来のポリアミンを含む植物抽出物及び Ζ又はポリアミンを有効成分として含む植物抽出物は実施例 4Αに記載されている植物抽出物（コムギ胚芽抽出物 )と精製植物抽出物 (精製コムギ胚芽抽出物）を用いた。評価は以下の手順で行った。正常ヒト皮膚線維芽細胞を 1ゥエル当たり 2. 0 X 10⁴個となるように 48穴マイクロプレートに播種した。播種培地には、ダルベッコ改変イーグル培地（DMEM)に 10% のゥシ胎児血清を添加したものを用いた。 37°C、二酸化炭素濃度 5vol%中にて 24 時間培養後、任意のポリアミン濃度の試料を添加した試験培地に交換し、さらに 48 時間培養した。次いで 3_(4, 5—ジメチル一 2_チアゾリル)一 2， 5—ジフエ二ルテトラゾリウムブロミド (MTT)を 100 μ g/mL含有する培地に交換して 3時間培養し、テトラゾリゥム環の開環により生じるフオルマザンを 2_プロパノールにて抽出し、マイク口プレートリーダーにて 550nmの吸光度を測定した。同時に濁度として 650nmにおける吸光度を測定し、両測定値の差により細胞賦活作用を評価した。評価結果を、コントロール (水添加）における細胞賦活作用を 100とした相対値にて図 6に示す。

[0112] 図 6より明らかなように、コムギ胚芽抽出物、精製コムギ胚芽抽出物を添加した培地では、いずれにおいても正常ヒト皮膚線維芽細胞に対して高い細胞賦活 *抗老化効果を有していることが認められた。濃度はポリアミン濃度で示した。特に、コムギ胚芽由出物で ίま 0. 33 μ Μ、 3. 3 /i M (プトレシン濃度 0. 7 /i M,スぺノレミジン濃度 2. 3 μ Μ,スぺノレミン濃度 0· 3 /i Μ)、 6· 6 μ Μ、 16· 5 /i Μのポリアミン濃度、精製コムギ胚芽抽出物では 4· 1 μ Μ、 8· 2 /i Μ、 20. 5 μ Μ (プトレシン濃度 3· 5 μ Μ,スぺノレミジン濃度 14· 5 /i M,スペルミン濃度 2· 5 /i M)のポリアミン濃度においてブランク (水）と比較して、いずれも 20%以上の有意な細胞賦活 '抗老化作用が認められた。以上のことから、これらのポリアミンを含む植物抽出物及び/又はポリアミンを有効成分として含む植物抽出物は、優れた細胞賦活作用を有することが明らかとなり、これらを肌に適用することにより、加齢に伴う繊維芽細胞の衰えが軽減されることでコラ一ゲンやヒアルロン酸の代謝回転速度の低下が小さくなり、極めて優れた老化防止効果を発揮し、加齢、紫外線曝露等により生じる皮膚のしわ、たるみ等を効果的に改善すること力 Sできる。

[0113] (実施例 9 A)ダイズ胚芽由来のポリアミンを含む植物抽出物及び Z又はポリアミンを有効成分として含む植物抽出物によるヒト毛乳頭細胞を用いた評価

[0114] · ヒト毛乳頭細胞の培養方法

ヒト頭髪毛乳頭細胞（THPC -001)トータルキット（HDPCトータルキット： THPCK — 001、製造元：セルアプリケイシヨンズインク USA、輸入販売元:東洋紡績株式会社)を用いて、常法によりヒト毛乳頭細胞を培養した。解凍した細胞を懸濁するための PCGM培地を 10mL、 15mL遠心チューブに分注し、氷冷しておく。即ち、凍結したヒト頭髪毛乳頭細胞（THPC— 001)の入ったバイアル瓶を 37°Cの恒温槽で急速に融解する。このバイアル瓶に PCGM培地を ImL程度徐々に滴下し DMSOを希釈後、全量を PCGM培地が入った遠心チューブに移し懸濁させる。浮遊細胞を冷却低遠心機で 4°C、 lOOOrpm, 5分間遠心する。沈殿した細胞を吸わないように注意しながら上清を吸引し、 lmLPCGM培地に再懸濁させる。この全量を、コラーゲン液でコートした T— 75フラスコに植え込み、加湿下で、二酸化炭素濃度 5vol%、 37°Cに保たれたインキュベーターに入れ静置培養を行う。 1日後、培地の交換を行う。以後、 1日おきに培地の交換を行い継代培養する。尚、 PCGM培地成分は、 1%FBSを含有する PCGM基礎培地 250mLに牛下垂体抽出液（BPE) 100倍希釈液を 2. 5mL、牛胎児血清（FCS) 100倍希釈液を 2. 5mL、インシュリン 'トランスフェリン 'トリョードサイロニン溶液（ΓΓΤ) 200倍希釈液を 1 · 25mL、サイロプロテイン溶液（Cyp) 200 倍希釈液を 1. 25mL添カ卩したものを用いた。

· 毛乳頭細胞賦活作用の評価

ダイズ胚芽由来のポリアミンを含む植物抽出物及び/又はポリアミンを有効成分として含む植物抽出物は実施例 3 Aに記載されている植物抽出物（ダイズ胚芽抽出物 )と精製植物抽出物 (精製ダイズ胚芽抽出物）を用いた。評価は、以下の手順で行つた。ヒト毛乳頭細胞を 1ゥエル当たり 2· 0 X 10⁴個となるように 48穴マイクロプレートに播種した。播種培地には、ダルベッコ改変イーグル培地（DMEM)に 10%のゥシ胎児血清を添加したものを用いた。 24時間培養後、任意のポリアミン濃度の試料を添加した試験培地に交換し、さらに 48時間培養した。次いで 3_(4,5—ジメチル— 2_ チアゾリル )_ 2，5—ジフエニルテトラゾリゥムブロミド（MTT)を 100 μ g/mL含有する培地に交換して 3時間培養し、テトラゾリゥム環の開環により生じるフオルマザンを 2 —プロパノールにて抽出し、マイクロプレートリーダーにて 550nmの吸光度を測定した。同時に濁度として 650nmにおける吸光度を測定し、両測定値の差により細胞賦活作用を評価した。評価結果を、試料無添加のブランクにおける細胞賦活作用を 10 0とした相対値にて図 7に示す。

[0116] 図 7より明らかなように、ダイズ胚芽抽出物、精製ダイズ胚芽抽出物を添加した培地では、ヒト毛乳頭細胞に対して高い細胞賦活 ·抗老化効果を有していることが認められた。濃度はポリアミン濃度で示した。特に、ダイズ胚芽抽出物では 6. 7 _M M、 13. 4 μ Μ (プ卜レシン濃度 9. 2 μ Μ,スぺノレミジン濃度 3. 8 μ Μ,スぺノレミン濃度 0. 4 μ Μ)、 33. 5 μ Μのポリアミン濃度、精製ダイズ胚芽抽出物では 7. 4 μ Μ、 14. 8 μ Μ (プ卜レシン濃度 8. 2 μ Μ,スぺノレミジン濃度 5. 8 μ Μ,スぺノレミン濃度 0. 8 μ Μ)、 3 7. Ο μ Μのポリアミン濃度においてブランク（水）と比較して、いずれも 20%以上の有意な細胞賦活 '抗老化作用が認められた。以上のことから、これらのポリアミンを含む植物抽出物及び/又はポリアミンを有効成分として含む植物抽出物は、優れた細胞賦活作用を有することが明らかとなり、これらを肌に適用することにより、極めて優れた老化防止効果を発揮し、加齢、紫外線曝露等により生じる皮膚のしわ、たるみ等を効果的に改善することができる。さらに、ヒト毛乳頭細胞のおいて優れた細胞賦活作用が確認されたことから、加齢、ストレス、ホルモンバランス、紫外線暴露により生じる毛髪形成阻害等をポリアミンは効果的に改善することができる。

[0117] (実施例 10A)コムギ胚芽由来のポリアミンを含む植物抽出物及び/又はポリアミンを有効成分として含む植物抽出物によるヒト毛乳頭細胞を用いた評価

[0118] · ヒト毛乳頭細胞の培養方法

ヒト頭髪毛乳頭細胞（THPC - 001)トータノレキット（HDPCトータルキット： THPCK — 001、製造元：セルアプリケイシヨンズインク USA、輸入販売元:東洋紡績株式会社)を用いて、常法によりヒト毛乳頭細胞を培養した。解凍した細胞を懸濁するための PCGM培地を 10mL、 15mL遠心チューブに分注し、氷冷しておく。即ち、凍結したヒト頭髪毛乳頭細胞（THPC— 001)の入ったバイアル瓶を 37°Cの恒温槽で急速に融解する。このバイアル瓶に PCGM培地を ImL程度徐々に滴下し DMSOを希釈後、全量を PCGM培地が入った遠心チューブに移し懸濁させる。浮遊細胞を冷却低遠心機で 4°C、 lOOOrpm, 5分間遠心する。沈殿した細胞を吸わないように注意しながら上清を吸引し、 lmLPCGM培地に再懸濁させる。この全量を、コラーゲン液でコートした T— 75フラスコに植え込み、加湿下で、二酸化炭素濃度 5vol%、 37°Cに保たれたインキュベーターに入れ静置培養を行う。 1日後、培地の交換を行う。以後、 1日おきに培地の交換を行い継代培養する。尚、 PCGM培地成分は、 1 %FBSを含有する PCGM基礎培地 250mLに牛下垂体抽出液（BPE) 100倍希釈液を 2. 5mL、牛胎児血清 (FCS) 100倍希釈液を 2. 5mL、インシュリン 'トランスフェリン 'トリョードサイロニン溶液（ΓΓΤ) 200倍希釈液を 1. 25mL、サイロプロテイン溶液（Cyp) 200 倍希釈液を 1. 25mL添加したものを用いた。

[0119] · 毛乳頭細胞賦活作用の評価

コムギ胚芽由来のポリアミンを含む植物抽出物及び Z又はポリアミンを有効成分として含む植物抽出物は実施例 4Aに記載されている植物抽出物（コムギ胚芽抽出物 )と精製植物抽出物 (精製コムギ胚芽抽出物）を用いた。評価は、以下の手順で行つた。ヒト毛乳頭細胞を 1ゥエル当たり 2. 0 X 10⁴個となるように 48穴マイクロプレートに播種した。播種培地には、ダルベッコ改変イーグル培地（DMEM)に 10%のゥシ胎児血清を添加したものを用いた。 24時間培養後、任意のポリアミン濃度の試料を添加した試験培地に交換し、さらに 48時間培養した。次いで 3— (4, 5—ジメチルー 2— チアゾリル )ー 2, 5—ジフエニルテトラゾリゥムブロミド（MTT)を 100 μ g/mL含有する培地に交換して 3時間培養し、テトラゾリゥム環の開環により生じるフオルマザンを 2 —プロパノールにて抽出し、マイクロプレートリーダーにて 550nmの吸光度を測定した。同時に濁度として 650nmにおける吸光度を測定し、両測定値の差により細胞賦活作用を評価した。評価結果を、試料無添加のブランクにおける細胞賦活作用を 10 0とした相対値にて図 8に示す。

[0120] 図 8より明らかなように、コムギ胚芽抽出物、精製コムギ胚芽抽出物を添加した培地では、ヒト毛乳頭細胞に対して高い細胞賦活 *抗老化効果を有していることが認められた。濃度はポリアミン濃度で示した。特に、コムギ胚芽抽出物では 6. 6 z M、 16. 5 μ Μ (プ卜レシン濃度 3. 5 μ Μ,スぺノレミジン濃度 1 1. 5 μ Μ,スぺノレミン濃度 1. 5 μ Μ)のポリアミン濃度、精製ダイズ胚芽抽出物では 4. 1 μ Μ、 8. 2 μ Μ、 20. 5 μ Μ ( プ卜レシン濃度 3. 5 μ Μ, スぺノレミジン濃度 14. 5 μ Μ,スぺノレミン濃度 2. 5 μ Μ)のポリアミン濃度においてブランク（水）と比較して、いずれも 20%以上の有意な細胞賦活 '抗老化作用が認められた。以上のことから、これらのポリアミンを含む植物抽出物及び/又はポリアミンを有効成分として含む植物抽出物は、優れた細胞賦活作用を有することが明らかとなり、これらを肌に適用することにより、極めて優れた老化防止効果を発揮し、加齢、紫外線曝露等により生じる皮膚のしわ、たるみ等を効果的に改善すること力 Sできる。さらに、ヒト毛乳頭細胞のおいて優れた細胞賦活作用が確認されたことから、加齢、ストレス、ホルモンバランス、紫外線暴露により生じる毛髪形成阻害等をポリアミンは効果的に改善することができる。

[0121] (実施例 1 1A)ダイズ胚芽由来とコムギ胚芽由来のポリアミンを含む植物抽出物及び /又はポリアミンを有効成分として含む植物抽出物によるコラーゲン産生能の評価

[0122] ダイズ胚芽由来のポリアミンを含む植物抽出物及び Z又はポリアミンを有効成分として含む植物抽出物は実施例 3 Aに記載されている植物抽出物（ダイズ胚芽抽出物 )を用いた。コムギ胚芽由来のポリアミンを含む植物抽出物及び Z又はポリアミンを有効成分として含む植物抽出物は実施例 4Aに記載されている植物抽出物（コムギ胚芽抽出物）を用いた。評価は、以下の手順で行った。正常ヒト皮膚線維芽細胞を 1ゥェノレ当たり 1. O X 10⁵個となるように 48穴マイクロプレートに播種した。播種培地には、ダルベッコ改変イーグル培地（DMEM)に 1 %のゥシ胎児血清を添加したものを用いた。 37°C、二酸化炭素濃度 5vol%中にて 24時間培養後、 PBS (—）で 2回洗浄した後、任意の濃度の試料を添加した無血清培地に交換し、さらに 50時間同条件にて培養した。培養上清から、ヒト線維芽細胞が産生する I型プロコラーゲン C末端べプチ K (Procollagen typel carboxyterminal propeptide : PIP)を、 Procollagen type Iし- pep tide (PIP) EIA Kit(TaKaRa)で測定した。コラーゲン産生促進率は、標準品を上記 EL ISAキットにて測定し、その結果から検量線を作成、その検量線から試料添加時のコラーゲン産生量及び試料無添加時のコラーゲン産生量を求め、試料無添加時のコラ一ゲン産生量を 100%として算出し、評価を行った。

[0123] 図 9より明らかなように、ダイズ胚芽抽出物または小麦胚芽抽出物を添加した培地では、ヒト皮膚のコラーゲン産生活性 (コラーゲン産生促進作用）が有意に高まることが認められた。濃度はポリアミン濃度で示した。特に、ダイズ胚芽抽出物では 6. 7 μ Μのポリアミン濃度、コムギ胚芽抽出物では 3. 3 μ Μのポリアミン濃度においてブランク（7 )と比較して、いずれも 20%以上の有意なコラーゲン産生促進作用が認められた。ポリアミンを含む植物抽出物及び/又はポリアミンを有効成分として含む植物抽出物を肌に適用することにより、加齢に伴う繊維芽細胞の衰えが軽減されることでコラーゲンやヒアルロン酸の代謝回転速度の低下が小さくなり、極めて優れた老化防止効果を発揮し、加齢、紫外線曝露等により生じる皮膚のしわ、たるみ等を効果的に改善することができる。

[0124] (実施例 12A)ダイズ胚芽由来とコムギ胚芽由来のポリアミンを含む植物抽出物及び /又はポリアミンを有効成分として含む植物抽出物によるコラーゲン産生能の評価

[0125] ダイズ胚芽由来のポリアミンを含む植物抽出物及び Z又はポリアミンを有効成分として含む植物抽出物は実施例 3 Aに記載されている植物抽出物（ダイズ胚芽抽出物 )を用いた。コムギ胚芽由来のポリアミンを含む植物抽出物及び Z又はポリアミンを有効成分として含む植物抽出物は実施例 4Aに記載されている植物抽出物（コムギ胚芽抽出物）を用いた。ポリアミンとの比較としてプトレシン、スペルミジン、スペルミンをそれぞれ単独で用いた。評価は、以下の手順で行った。正常ヒト皮膚線維芽細胞を 1ゥエル当たり 1. O X 10⁵個となるように 48穴マイクロプレートに播種した。播種培地には、ダルベッコ改変イーグル培地（DMEM)に 1 %のゥシ胎児血清を添加したものを用いた。 37°C、二酸化炭素濃度 5vol%中にて 24時間培養後、 PBS (—）で 2回洗浄した後、任意の濃度の試料を添加した無血清培地に交換し、さらに 3日間、 6日間同条件にて培養した。培養上清から、ヒト線維芽細胞が産生する I型プロコラーゲン C 末 5¾へゾチト (Procollagen typel carboxytermmal propeptide： PIP)を、 Procollagen t ype I C-peptide (PIP) EIA Kit (TaKaRa)で測定した。コラーゲン産生促進率は、標準品を上記 ELISAキットにて測定し、その結果から検量線を作成、その検量線から試料添加時のコラーゲン産生量及び試料無添加時のコラーゲン産生量を求め、試料無添カ卩時のコラーゲン産生量を 100%として算出し、評価を行った。

[0126] 図 10、図 1 1より明らかなように、ダイズ胚芽抽出物または小麦胚芽抽出物を添加した培地では、ヒト皮膚のコラーゲン産生活性 (コラーゲン産生促進作用）が有意に顕著に高まることが認められた。濃度はポリアミン濃度で示した。ダイズ胚芽抽出物では 6. 7 μ Μ、 13. 4 μ Μ、 33. 5 μ Μのポリアミン濃度、コムギ胚芽抽出物では 3. 3 μ Μ、 6. 6 μ Μ、 16. 5 μ Μのポリアミン濃度においてブランク（水）や各種ポリアミンと比較して、いずれも顕著なコラーゲン産生促進作用が認められた。ポリアミンを含む植物抽出物及び/又はポリアミンを有効成分として含む植物抽出物は各種ポリアミンに比べて明らかに優れた細胞外マトリックスやコラーゲンの産生作用を有することが確認された。ポリアミンを含む植物抽出物及び Z又はポリアミンを有効成分として含む植物抽出物肌に適用することにより、加齢に伴う繊維芽細胞の衰えが軽減し、コラ一ゲンの産生を促進してコラーゲン量を維持することができる。その結果、加齢、紫外線曝露等により生じる皮膚のしわ、たるみ等を効果的に改善することができる。

[0127] (実施例 13A)ダイズ胚芽由来とコムギ胚芽由来のポリアミンを含む植物抽出物及び /又はポリアミンを有効成分として含む植物抽出物によるヒアルロン酸産生能の評価

[0128] ダイズ胚芽由来の植物抽出物は実施例 3Aに記載されている植物抽出物（ダイズ胚芽抽出物）を用いた。コムギ胚芽由来の植物抽出物は実施例 4Aに記載されている植物抽出物（コムギ胚芽抽出物）を用いた。ポリアミンとの比較としてプトレシン、スペルミジン、スペルミンをそれぞれ単独で用いた。評価は、以下の手順で行った。正常ヒト皮膚線維芽細胞を 1ゥエル当たり 1. O X 10⁵個となるように 48穴マイクロプレートに播種した。播種培地には、ダルベッコ改変イーグル培地（DMEM)に 1%のゥシ胎児血清を添加したものを用いた。 37°C、二酸化炭素濃度 5vol%中にて 24時間培養後、 PBS (—）で 2回洗浄した後、任意のポリアミン濃度の試料を添加した無血清培地に交換し、さらに 3日間同条件にて培養した。培養上清中のヒアルロン酸を測定した。尚プレート上の細胞を 0.5% Triton-X100を含む細胞溶解液で溶解し回収後にタンパク質量を測定し (Bio Rad,プロテインアツセィキット）、細胞数の指標とした。ヒアルロン酸の測定は、正常ヒト皮膚線維芽細胞が産生するヒアルロン酸を、ヒアルロン酸プレート「中外」（富士レビォ社）を用いて Hyaluronic acid binding protein (HABP) を用いたサンドイッチ法により測定した。ポリアミンや植物抽出物を添カ卩していない試料（コントロール）のヒアルロン酸量を 100とした場合の、ポリアミン、植物抽出物添カロ試料のヒアルロン酸量を産生率とした。

[0129] 図 12より明らかなように、各ポリアミン、ダイズ胚芽抽出物又はコムギ胚芽抽出物を添加した培地では、ヒト皮膚のヒアルロン酸産生率が有意に高まることが認められた。各濃度はポリアミン濃度で示した。培養 3日間では、ダイズ胚芽抽出物は 6. 7 μ M、 13. 4 /i M、 33. 5 /i Mのポリアミン濃度、コムギ胚芽抽出物は 3. 3 μ M、 6. 6 /i M、 16. 5 /i Mのポリアミン濃度においてコントロールや各種ポリアミンと比較して、いずれも高いヒアルロン酸産生促進作用が認められた。ポリアミンを含む植物抽出物及び /又はポリアミンを有効成分として含む植物抽出物は、ポリアミン以外の有効成分を含むことでポリアミンに比べて明らかに優れた細胞外マトリックスやヒアルロン酸の産生作用を有することが確認された。ポリアミンを含む植物抽出物及び/又はポリアミンを有効成分として含む植物抽出物を肌に適用することにより、加齢に伴う繊維芽細胞の衰えが軽減し、ヒアルロン酸の産生を促進してヒアルロン酸量を維持することができる。その結果、加齢、紫外線曝露等により生じる皮膚のしわ、たるみ等を効果的に改善することができる。

[0130] (実施例 14A)美容液の製造

以下に示す組成の美容液を常法により製造した。コントロールとして、胚芽抽出物を含まない美容液も常法により製造した。

(組成）

4. 0

ジプロピレンダリコール 6. 0

ポリエチレングリコール 1500 5. 0

POE (20)ォレイルアルコールエーテル 0. 5

ショ糖脂肪酸エステル 0. 2

メチノレセノレロース 0. 2

精製ダイズ胚芽抽出物（ポリアミン濃度 ₇· 4mM) 1. 0

精製水全体で 100となる量

[0131] (実施例 15A)乳液の製造

以下に示す組成の乳液を常法により製造した。コントロールとして、胚芽抽出物を含まない乳液も常法により製造した。

(組成）（重量％)

グリセリノレエーテノレ 1. 5

ショ糖脂肪酸エステル 1. 5 酸ソルビタン 1. 0

スクヮラン 7· 5

ジプロピレングリコール 5. 0

精製ダイズ胚芽抽出物 (ポリアミン濃度 7. 4mM) 1. 0

精製水全体で 100となる量

[0132] (実施例 16 A)クリームの製造

以下に示す組成のクリームを常法により製造した。コントロールとして、胚芽抽出物を含まないクリームも常法により製造した。

(組成） (重量％)

プロピレングリコーノレ 6. 0

フタル酸ジブチル

ステアリン酸 d 5. 0

〇

モノステアリン酸グリセリン 5. 0 〇〇

〇

モノステアリン酸ソルビタン

モノステアリン酸ポリエチレンソルビタン

ェデト酸ナトリウム

精製ダイズ胚芽抽出物 (ポリアミン濃度 7. 4mM)

精製水全体で 100となる量

(実施例 17A)官能評価

実施例 14A〜16Aを用いて官能評価を行った。なお、胚芽抽出物を含まない比較例も同時に評価した。官能評価は、シヮ等の老化症状の気になる 40〜60歳のパネル 20人を 1群として実施例及び比較例をそれぞれ 1日 2回， 3力月間連続使用してもらい、 3力月後の肌状態についてアンケート調查をして行った。

[0134] [表 1A] 実施例比較例

(植物抽出物あり） (植物抽出物なし）

1 4A 1 5A 1 6A 1 4A 1 5A 1 6A 上昇 13 1 1 11 0 1 1 皮膚やや上昇 4 6 5 3 2 2 弾力性変化なし 3 3 4 15 16 15 低下 0 0 0 2 1 2 改善 15 14 13 1 0 1 やや改善 3 4 4 2 3 2 シヮ改善

変化なし 2 2 3 15 15 16 悪化 0 0 0 2 2 1

[0135] 官能評価の結果として、各項目における評価者の数を表 1Aに示した。胚芽抽出物を含まない比較例より実施例の方が、 8割以上のパネルが皮膚の弾力性が回復し、シヮの軽減が認められたと回答しており、顕著な皮膚の老化症状の回復効果があることが示された。

[0136] (実施例 18A)美容液の製造

(組成）（重量％)

ソノレビット 4. 0

ジプロピレングリコール 6. 0

ポリエチレングリコーノレ 1500 5. 0

POE (20)ォレイルアルコールエーテル 0. 5

ショ糖脂肪酸エステル 0. 2

メチルセルロース 0. 2

精製コムギ胚芽抽出物（ポリアミン濃度 10. 25mM) 1. 0

精製水全体で 100となる量

(実施例 19A)乳液の製造以下に示す組成の乳液を常法により製造した。コントロールとして、胚芽抽出物を含まない乳液も常法により製造した。

(組成）（重量％)

グリセリノレエーテノレ 1. 5

ショ糖脂肪酸エステル 1. 5

モノステアリン酸ソルビタン 1. 0

7. 5

Jコール 5. 0

精製コムギ胚芽抽出物（ポリアミン濃度 10. 25mM) 1. 0

精製水全体で 100となる量

[0138] (実施例 20A)クリームの製造

(組成）（重量％)

プロピレングリコーノレ 6. 0

フタル酸ジブチル 19. 0

5. 0

菌 5. 0

菌 12. 0

モノステアリン酸ポリエチレンソルビタン 38. 0

ェデト酸ナトリウム 0· 03

精製コムギ胚芽抽出物（ポリアミン濃度 10. 25mM) 1. 0

精製水全体で 100となる量

[0139] (実施例 21A)官能評価

実施例 18A〜20Aを用いて官能評価を行った。なお、胚芽抽出物を含まない比較例も同時に評価した。官能評価は、シヮ等の老化症状の気になる 40〜60歳のパネル 20人を 1群として実施例及び比較例をそれぞれ 1日 2回， 3力月間連続使用してもらい、 3力月後の肌状態についてアンケート調查をして行った。 [0140] [表 2A]

[0141] 官能評価の結果として、各項目における評価者の数を表 2Aに示した。胚芽抽出物を含まない比較例より実施例の方が、 8割以上のパネルが皮膚の弾力性が回復し、シヮの軽減が認められたと回答しており、顕著な皮膚の老化症状の回復効果があることが示された。

[0142] (実施例 22A)ダイズ胚芽由来とコムギ胚芽由来のポリアミンを含む植物抽出物及び /又はポリアミンを有効成分として含む植物抽出物によるコラーゲン産生能の評価

[0143] ダイズ胚芽由来のポリアミンを含む植物抽出物及び/又はポリアミンを有効成分として含む植物抽出物は実施例 3Aに記載されている植物抽出物（ダイズ胚芽抽出物 )を用いた。コムギ胚芽由来のポリアミンを含む植物抽出物及び/又はポリアミンを有効成分として含む植物抽出物は実施例 4Aに記載されている植物抽出物（コムギ胚芽抽出物）を用いた。ポリアミンとの比較としてプトレシン、スペルミジン、スペルミンをそれぞれ単独で用いた。さらに市販品である大豆エキスを比較対照として用いた。評価は、以下の手順で行った。正常ヒト皮膚線維芽細胞を 1ゥヱル当たり 1. O X 10⁴個となるように 48穴マイクロプレートに播種した。播種培地には、ダルベッコ改変ィーグル培地（DMEM)に 1。 /。のゥシ胎児血清を添カ卩したものを用いた。 37°C、二酸化炭素濃度 5vol%中にて 24時間培養後、 PBS (—）で 2回洗浄した後、任意の濃度の試料を添加した無血清培地に交換し、さらに 3日間、 6日間同条件にて培養した。培養上清から、ヒト線維芽細胞が産生する I型プロコラーゲン C末端ペプチド（Procollagen type丄 carboxytermmal propeptide： PIP) ¾τ Procollagen type I し- peptide (PIP) EIA Kit (TaKaRa)で測定した。コラーゲン産生促進率は、標準品を上記 ELISAキットにて測定し、その結果から検量線を作成、その検量線力試料添カ卩時のコラーゲン産生量及び試料無添加時のコラーゲン産生量を求め、試料無添加時のコラーゲン産生量を 100%として算出し、評価を行った。

[0144] 図 13、図 14より明らかなように、大豆胚芽抽出物または小麦胚芽抽出物を添加した培地では、ヒト皮膚のコラーゲン産生活性 (コラーゲン産生促進作用）が有意に高まることが認められた。濃度はポリアミン濃度で示した。ダイズ胚芽抽出物では 12 μ Μ、 24 μ Μのポリアミン濃度、コムギ胚芽抽出物では 6. 3 μ Μ、 12. 6 μ Μのポリアミン濃度においてブランク (水）や各種ポリアミンと比較して、いずれも顕著なコラーゲン産生促進作用が認められた。市販の大豆エキスは、エタノールなどの有機溶媒で抽出したエキスであり、ポリアミンがほとんど含まれていないことから、コラーゲン産生活性はダイズ胚芽抽出物に比べて極めて低くなつた。大豆エキスでコラーゲン産生活性が低かった理由としては、プトレシン、スペルミジン、スペルミンを有効成分として含まず、加えて酸性条件下ではなくエタノール等の有機溶媒で抽出したためにポリアミン以外の有効な成分が含まれていないためであると考えている。ポリアミンを含む植物抽出物及び/又はポリアミンを有効成分として含む植物抽出物は各種ポリアミンに比べて明らかに優れた細胞外マトリックスやコラーゲンの産生作用を有することが確認された。ポリアミンを含む植物抽出物及び/又はポリアミンを有効成分として含む植物抽出物肌に適用することにより、加齢に伴う繊維芽細胞の衰えが軽減し、コラーゲンの産生を促進してコラーゲン量を維持することができる。その結果、加齢、紫外線曝露等により生じる皮膚のしわ、たるみ等を効果的に改善することができる。

[0145] (実施例 23Α)ダイズ胚芽由来とコムギ胚芽由来のポリアミンを含む植物抽出物及び

/又はポリアミンを有効成分として含む植物抽出物によるコラーゲン産生能の評価

[0146] ダイズ胚芽由来のポリアミンを含む植物抽出物及び Ζ又はポリアミンを有効成分として含む植物抽出物は実施例 3 Αに記載されている植物抽出物（ダイズ胚芽抽出物

)を用いた。コムギ胚芽由来のポリアミンを含む植物抽出物及び Z又はポリアミンを有効成分として含む植物抽出物は実施例 4Aに記載されている植物抽出物（コムギ胚芽抽出物）を用いた。ポリアミンとの比較としてプトレシン、スペルミジン、スペルミンをそれぞれ単独で用いた。評価は、以下の手順で行った。正常ヒト皮膚線維芽細胞を 1ゥエル当たり 1. 0 X 10⁵個となるように 48穴マイクロプレートに播種した。播種培地には、ダルベッコ改変イーグル培地（DMEM)に 1 %のゥシ胎児血清を添加したものを用いた。 37°C、二酸化炭素濃度 5vol%中にて 24時間培養後、 PBS (—）で 2回洗浄した後、任意の濃度の試料を添加した無血清培地に交換し、さらに 3日間、 6日間同条件にて培養した。培養上清から、ヒト線維芽細胞が産生する I型プロコラーゲン C 末) i耑ヘスチト' Procollagen typel carooxytermmal propeptide： PIP) 、 Procollagen t ype I C-p印 tide (PIP) EIA Kit (TaKaRa)で測定した。尚プレート上の細胞を 0.5% Tri ton_X100を含む細胞溶解液で溶解し回収後にタンパク質量を測定し (Bio Rad,プロティンアツセィキット）、細胞数の指標とした。コラーゲン産生促進率は、標準品を上記 ELISAキットにて測定し、その結果から検量線を作成、その検量線からタンパク質 (細胞数）当たりの試料添加時のコラーゲン産生量及び試料無添加時のコラーゲン産生量を求め、試料無添カ卩時のコラーゲン産生量を 100%として算出し、評価を行つに。

図 15、図 16より明らかなように、大豆胚芽抽出物または小麦胚芽抽出物を添加した培地では、ヒト皮膚のコラーゲン産生活性 (コラーゲン産生促進作用）が有意に高まることが認められた。濃度はポリアミン濃度で示した。特に培養 6日間では、全ての胚芽抽出物においてブランク（水）、各ポリアミンと比較して、いずれも有意に高いコラ一ゲン産生促進作用が認められた。ポリアミンの生理作用として細胞増殖作用が知られている力 S、タンパク質量を指標とした細胞当たりで各種ポリアミンによりコラーゲン産生促進作用が示されたことから、プトレシン、スペルミジン、スペルミンの各ポリアミンを含んだ大豆胚芽抽出物や小麦胚芽抽出物には細胞増殖 (細胞数増加）を伴わないコラーゲン産生促進（細胞外マトリックス産生促進）作用を有することが本結果から始めて見出された。言い換えれば、プトレシン、スぺノレミジン、スペルミンの各ポリアミンを含んだ大豆胚芽抽出物や小麦胚芽抽出物は 1細胞当たりのコラーゲン産生量を顕著に高める作用を有することが明らかとなった。以上のことから、これらの各ポリアミンを含んだ大豆胚芽抽出物や小麦胚芽抽出物を肌に適用することにより、加齢に伴う繊維芽細胞の衰えが軽減し、コラーゲンの産生を促進してコラーゲン量を維持すること力 Sできる。その結果、加齢、紫外線曝露等により生じる皮膚のしわ、たるみ、くすみ等を効果的に改善することができる。

[0148] (実施例 24A)大豆胚芽由来と小麦胚芽由来の植物抽出物の成分分析

[0149] ダイズ胚芽由来の抽出物は実施例 3Aに記載されている植物抽出物（ダイズ胚芽抽出物）を用いた。コムギ胚芽由来の抽出物は実施例 4Aに記載されている植物抽出物 (コムギ胚芽抽出物)を用いた。成分として、エネルギー、水分、蛋白質、脂質、灰分、炭水化物、ナトリウム、糖類を分析した。分析は、（株)マシス食品安全分析センターで実施した。成分の分析結果を表 3Aに示した。サンプルは水溶液のため水分が約 85%含まれており、残りの約 15%の固形成分は、炭水化物（約 11〜： 12%)、タンパク質 (約 3。/。）、灰分 (0. 6〜0. 8。/。）、脂質 (約 0. 1%)であった。固形成分の内、炭水化物がほとんどを占めており、炭水化物の約 70%が糖類であった。残りの 30 %は核酸、食物繊維等と思われる。糖類の内訳は、大豆胚芽抽出物は単糖のグノレコースとフルクトース（60%)、二糖のマルトース（3%)、三糖のラフイノース、マルトトリオース（36% 小麦胚芽抽出物はグルコースとフルクトース（59%)、ラタトース、スクロース（18%)、ラフイノース、マルトトリオース（7· 4%)、残りが四糖以上のオリゴ糖であった。以上の結果から、特に大豆胚芽抽出物、小麦胚芽抽出物の成分の多くを占めている糖類（特に単糖'オリゴ糖とその組み合わせ）が賦活化、抗老化、細胞外マトリックス産生促進、コラーゲン産生促進、ヒアルロン酸産生促進、美肌効果に対する有効成分の一つであると考えている。大豆胚芽抽出物、小麦胚芽抽出物に共通して単糖、オリゴ糖等の有効成分が多く含まれるのは、大豆や小麦の種子や胚芽を塩酸等の酸性条件下で抽出処理したことが大きなポイントであると考えている。また、抽出の際にポリフヱノール吸着剤を添加することで、賦活化、抗老化、細胞外マトリックス産生促進、コラーゲン産生促進、ヒアルロン産生促進に対してネガティブに作用するポリフヱノール類等の植物抽出物中への混入を抑えることができと考えている。しかしながら、これにより本発明が何ら限定されるものではない。

[0150] [表 3A] 大豆胚芽抽出小麦胚芽抽出

分析項目単位分析方法

物物

エネルギー 58 62 kcal/100g 計算法水分 84.9 83.9 g/100g 常圧加熱乾燥法タンパク質

3.1 3.3 g/100g ケルダール法

※丄

脂質 0.1 Tr g/100g ソックスレー抽出法灰分 0.8 0.6 g/lOOg 直接灰化法炭水化物

11.2 12.2 g/lOOg 計算法

イオンクロマトグラナ卜リウム 76 74 mg/100g

フ法全糖 7.8(100) 8.5(100) g/lOOg フエノール硫酸法グルコース 1.61(20.6) 1.5(17.6) g/lOOg HPLC法フルクトース 2.96(37.9) 3.48(40.9) g/lOOg HPLC法マルトース 0.21(2.7) 検出されず g/lOOg HPLC法ラク卜ース検出されず 0.35(4.1) g/lOOg HPLC法スクロース検出されず 1.18(13.9) g/lOOg HPLC法ラフイノース

マルトトリオ一 2.81(36.0) 0.63(7.4) g/lOOg HPLC法ス

四糖以上極微量 1.61(<18.9) g/lOOg HPLC法

※ タンパク質換算計数 =6.25 、炭水化物 - (水分 +タンパク質 +脂質 + Tr (トレース）：含まれているが最小記載量に達していない

(実施例 1B)正常ヒト皮膚繊維芽細胞を用いた評価

評価は、以下の手順で行った。正常ヒト皮膚線維芽細胞を 1ゥエル当たり 2. OX10 ⁴個となるように 48穴マイクロプレートに播種した。播種培地には、ダルベッコ改変ィ一ダル培地（DMEM)に 10%のゥシ胎児血清を添加したものを用いた。 37°C、二酸化炭素濃度 5vol%中にて 24時間培養後、任意の濃度のポリアミン群試料を添加した試験培地に交換し、さらに 48時間培養した。次いで 3— (4， 5—ジメチルー 2—チァゾリル)一 2, 5—ジフエニルテトラゾリゥムブロミド（MTT)を 100 μ g/mL含有する培地に交換して 3時間培養し、テトラゾリゥム環の開環により生じるフオルマザンを 2— プロパノールにて抽出し、マイクロプレートリーダーにて 550nmの吸光度を測定した。同時に濁度として 650nmにおける吸光度を測定し、両測定値の差により細胞賦活作用を評価した。評価結果を、コントロール (水添加）における細胞賦活作用を 100とした相対値にて図 17に示す。

[0152] 図 17より明らかなように、スぺノレミン、スペルミジン、プトレシンを添加した培地では、いずれにおいても正常ヒト皮膚線維芽細胞に対して高い細胞賦活 ·抗老化効果を有してレヽること力認ヽめられた。特に、 0. 0001mM、 0. OOlmM, 0. OlmM, 0. lm Mのプトレシン、 0. 0001mM、 0. OOlmM, 0. OlmMのスぺノレミジン、 0. OOlmM 、 0. OlmMのスペルミンを添加した場合には、ブランク（水）と比較して、いずれも 20 %以上の有意な細胞賦活 '抗老化作用が認められた。以上のことから、これらのポリアミンは、優れた細胞賦活作用を有することが明らかとなり、これらを肌に適用することにより、極めて優れた老化防止効果を発揮し、加齢、紫外線曝露等により生じる皮膚のしわ、たるみ等を効果的に改善することができる。

[0153] (実施例 2B)ヒト毛乳頭細胞を用いた評価

[0154] · ヒト毛乳頭細胞の培養方法

ヒト頭髪毛乳頭細胞（THPC -001)トータノレキット（HDPCトータルキット： THPCK — 001、製造元：セルアプリケイシヨンズインク USA、輸入販売元:東洋紡績株式会社)を用いて、常法によりヒト毛乳頭細胞を培養した。解凍した細胞を懸濁するための PCGM培地を 10mL、 15mL遠心チューブに分注し、氷冷しておく。即ち、凍結したヒト頭髪毛乳頭細胞（THPC— 001)の入ったバイアル瓶を 37°Cの恒温槽で急速に融解する。このバイアル瓶に PCGM培地を lmL程度徐々に滴下し DMSOを希釈後、全量を PCGM培地が入った遠心チューブに移し懸濁させる。浮遊細胞を冷却低遠心機で 4°C、 lOOOrpm, 5分間遠心する。沈殿した細胞を吸わないように注意しながら上清を吸引し、 lmLPCGM培地に再懸濁させる。この全量を、コラーゲン液でコートした T— 75フラスコに植え込み、加湿下で、二酸化炭素濃度 5vol%、 37°Cに保たれたインキュベーターに入れ静置培養を行う。 1日後、培地の交換を行う。以後、 1日おきに培地の交換を行い継代培養をする。尚、 PCGM培地成分は、 1 %FBSを含有する PCGM基礎培地 250mLに牛下垂体抽出液（BPE) 100倍希釈液を 2. 5mL、牛胎児血清 (FCS) 100倍希釈液を 2. 5mL、インシュリン 'トランスフェリン 'トリョードサイロニン溶液（ΓΓΤ) 200倍希釈液を 1. 25mL、サイロプロテイン溶液（Cyp) 200 倍希釈液を 1. 25mL添加したものを用いた。 [0155] · 毛乳頭細胞賦活作用の評価

評価は、以下の手順で行った。ヒト毛乳頭細胞を 1ゥエル当たり 2. 0 X 10⁴個となるように 48穴マイクロプレートに播種した。播種培地には、ダルベッコ改変イーグル培地（DMEM)に 1重量％のゥシ胎児血清を添カ卩したものを用いた。 24時間培養後、任意の濃度のポリアミン群試料を添加した試験培地に交換し、さらに 48時間培養した。次いで 3_(4,5—ジメチル一 2_チアゾリル)一 2，5—ジフエニルテトラゾリゥムブ口ミド (MTT)を ΙΟΟ μ gZmL含有する培地に交換して 3時間培養し、テトラゾリゥム環の開環により生じるフオルマザンを 2_プロパノールにて抽出し、マイクロプレートリーダ一にて 550nmの吸光度を測定した。同時に濁度として 650nmにおける吸光度を測定し、両測定値の差により細胞賦活作用を評価した。評価結果を、試料無添加のブランクにおける細胞賦活作用を 100とした相対値にて図 18に示す。

[0156] 図 18より明らかなように、スペルミジン、プトレシン、スペルミンを添加した培地では、ヒト毛乳頭細胞に対して高い細胞賦活 *抗老化効果を有していることが認められた。特に、 0. 001mM、 0. 01mM、 0. ImMのプ卜レシン、 0. 01mM、 0. ImMのスぺノレミジンを添加した場合には、ブランク（水）と比較して、いずれも 20%以上の有意な細胞賦活 '抗老化作用が認められた。以上のことから、これらのポリアミンは、優れた細胞賦活作用を有することが明らかとなり、これらを肌に適用することにより、極めて優れた老化防止効果を発揮し、加齢、紫外線曝露等により生じる皮膚のしわ、たるみ等を効果的に改善することができる。さらに、ヒト毛乳頭細胞のおいて優れた細胞賦活作用が確認されたことから、加齢、ストレス、ホルモンバランス、紫外線暴露により生じる毛髪形成阻害等をポリアミンは効果的に改善することができる。

[0157] (実施例 3B)ポリアミンによるコラーゲン産生能の評価

評価は、以下の手順で行った。正常ヒト皮膚線維芽細胞を 1ゥヱル当たり 1. 0 X 10 5個となるように 48穴マイクロプレートに播種した。播種培地には、ダルベッコ改変ィーグノレ培地（DMEM)に 1 %のゥシ胎児血清を添カ卩したものを用いた。 37°C、二酸化炭素濃度 5vol%中にて 24時間培養後、 PBS (—）で 2回洗浄した後、任意の濃度のポリアミン群試料を添加した無血清培地に交換し、さらに 2日間同条件にて培養した。培養上清から、ヒト線維芽細胞が産生する I型プロコラーゲン C末端ペプチド (Pro collagen ty e I carboxyterminal propeptide : PIP)を、 Procollagen type I C-peptide (P IP) EIA Kit (TaKaRa)で測定した。コラーゲン産生促進率は、標準品を上記 ELISA キットにて測定し、その結果から検量線を作成、その検量線力試料添加時のコラーゲン産生量及び試料無添加時のコラーゲン産生量を求め、試料無添加時のコラーゲン産生量を 100%として算出し、評価を行った。

[0158] 図 19より明らかなように、プトレシン、スペルミジン、スペルミンを添加した培地では、ヒト皮膚のコラーゲン産生活性 (コラーゲン産生促進作用）が有意に高まることが認められた。濃度はポリアミン濃度で示した。全てのポリアミン濃度区においてブランク（水）と比較して、いずれも 20%以上の有意なコラーゲン産生促進作用が認められた。ポリアミンを肌に適用することにより、加齢に伴う繊維芽細胞の衰えが軽減し、コラーゲンの産生を促進してコラーゲン量を維持することができる。その結果、加齢、紫外線曝露等により生じる皮膚のしわ、たるみ等を効果的に改善することができる。

[0159] (実施例 4B)ポリアミンによるヒアルロン酸産生能の評価

[0160] ポリアミンはプトレシン、スぺノレミジン、スペルミンをそれぞれ単独で用いた。評価は、以下の手順で行った。正常ヒト皮膚線維芽細胞を 1ゥエル当たり 1. 0 X 10⁵個となるように 48穴マイクロプレートに播種した。播種培地には、ダルベッコ改変イーグル培地（DMEM)に 1 %のゥシ胎児血清を添加したものを用いた。 37°C、二酸化炭素濃度 5vol%中にて 24時間培養後、 PBS (—）で 2回洗浄した後、任意のポリアミン濃度の試料を添加した無血清培地に交換し、さらに 1日間、 3日間、 6日間同条件にて培養した。培養上清中のヒアルロン酸を測定した。尚プレート上の細胞を 0.5% Triton-X 100を含む細胞溶解液で溶解し回収後にタンパク質量を測定し (Bio Rad,プロテインアツセィキット）、細胞数の指標とした。ヒアルロン酸の測定は、正常ヒト皮膚線維芽細胞が産生するヒアルロン酸を、ヒアルロン酸プレート「中外」（富士レビォ社）を用いて Hyaluronic acid binding protein (HABP)を用いたサンドイッチ法により測定した。ポリアミンを添加してレ、なレ、試料（コントロール）のヒアルロン酸量を 100とした場合の、各ポリアミンのヒアルロン酸量を産生率とした。

[0161] 図 20、図 21、図 22より明らかなように、各ポリアミンを添加した培地では、ヒト皮膚のヒアルロン酸産生率が有意に高まることが認められた。全てのポリアミン濃度区においてコントロールと比較して、いずれも有意なヒアルロン酸産生促進作用が認められた。ポリアミンを肌に適用することにより、加齢に伴う繊維芽細胞の衰えが軽減し、ヒアルロン酸の産生を促進してヒアルロン酸量を維持することができる。その結果、加齢、紫外線曝露等により生じる皮膚のしわ、たるみ等を効果的に改善することができる。

(実施例 5B)美容液の製造

以下に示す組成の美容液を常法により製造した。コントロールとして、ポリアミンを含まない美容液も常法により製造した。

(組成） (重量％)

ソノレビット 4. 0

ジプロピレンダリコール 6. 0

〇

ポリエチレングリコーノレ 1500 5. 〇 0

POE (20)ォレイルアルコールエーテノレ 0. 5

ショ糖脂肪酸エステル 0. 2

メチノレセノレロース 0. 2

スペルミジン

精製水全体で 100となる量

(実施例 6B)乳液の製造

以下に示す組成の乳液を常法により製造した。コントロールとして、ポリアミンを含まない乳液も常法により製造した。

(組成）（重量％)

グリセリノレエーテノレ 1. 5

ショ糖脂肪酸エステル 1. 5

'"ソ酸ソノレビタン 1. 0

7. 5

—ノレ 5. 0

0. 01

全体で 100となる量 (実施例 7B)クリームの製造

以下に示す組成のクリームを常法により製造した。コントロールとして、ポリアミンを含まないクリームも常法により製造した。

(組成） (重量％)

プロピレングリコーノレ 6. 0

フタル酸ジブチル 19. 0

ステアリン酸 5. 0

モノステアリン酸グリセリン 5. 0

モノステアリン酸ソルビタン 12. 0

モノステアリン酸ポリエチレンソルビタン 38. 0

ェデト酸ナトリウム 0. 03

スペルミジン 0. 01

精製水全体で 100となる量

(実施例 8B)官能評価

実施例 5B〜7Bを用いて官能評価を行った。なお、ポリアミンを含まない比較例も同時に評価した。官能評価は、シヮ等の老化症状の気になる 40〜60歳のパネル 2 0人を 1群として実施例及び比較例をそれぞれ 1日 2回， 3力月間連続使用してもらい、 3力月後の肌状態についてアンケート調査をして行った。

[0166] [表 IB]

〇

[0167] 官能評価の結果として、各項目における評価者の数を表 1Bに示した。ポリアミンを含まない比較例より実施例の方力 9割以上のパネルが皮膚の弾力性が回復し、シヮの軽減が認められたと回答しており、顕著な皮膚の老化症状の回復効果があることが示された。さらに、スペルミジン配合濃度が 0. 1重量⁰ /₀においても、皮膚の老化症状の回復効果など同様な結果を得た。

[0168] (実施例 9B)美容液の製造

(組成） (重量％)

ソノレビット 4. 0

ジプロピレングリコール 6. 0

ポリエチレングリコール 1500 5. 0

POE (20)ォレイルアルコールエーテル 0. 5

ショ糖脂肪酸エステル 0. 2

メチノレセノレロース 0. 2

プトレシン精製水全体で 100となる量

[0169] (実施例 10B)乳液の製造

(組成）

グリセリノレエーテノレ 1. 5

ショ糖脂肪酸エステル 1. 5

モノステアリン酸ソルビタン 1. 0

7. 5

—ノレ 5. 0

0. 05

精製水全体で 100となる量

[0170] (実施例 11B)クリームの製造

(組成） (重量％)

プロピレングリコール 6. 0

フタル酸： 19. 0

5. 0

12. 0

モノステアリン酸ポリエチレンソルビタン 38. 0

ェデト酸ナトリウム 0. 03

0. 05

精製水全体で 100となる量

(実施例 12B)官能評価

実施例 9B〜： 11Bを用いて官能評価を行った。なお、ポリアミンを含まない比較例も同時に評価した。官能評価は、シヮ等の老化症状の気になる 40〜60歳のパネル 2 0人を 1群として実施例及び比較例をそれぞれ 1日 2回， 3力月間連続使用してもらい、 3力月後の肌状態についてアンケート調査をして行った。

2B]

[0173] 官能評価の結果として、各項目における評価者の数を表 2Bに示した。ポリアミンを含まない比較例より実施例の方力 9割以上のパネルが皮膚の弾力性が回復し、シヮの軽減が認められたと回答しており、顕著な皮膚の老化症状の回復効果があることが示された。さらに、プトレシン配合濃度が 0. 5重量％においても、皮膚の老化症状の回復効果など同様な結果を得た。

[0174] (実施例 13B)美容液の製造

以下に示す組成の美容液を常法により製造した。コントローノレとして、ポリアミンを含まない美容液も常法により製造した。

(組成） (重量％)

ソノレビット 4. 0

ジプロピレングリコール 6. 0

ポリエチレングリコーノレ 1500 5. 0

POE (20)ォレイルアルコールエーテル 0. 5

ショ糖脂肪酸エステル 0. 2 0. 2

0. 01

精製水全体で 100となる量

[0175] (実施例 14B)乳液の製造

(組成）

グリセリノレエーテノレ 1. 5

ショ糖脂肪酸エステル 1. 5

モノステアリン酸ソルビタン 1. 0

7. 5

5. 0

0. 01

精製水全体で 100となる量

[0176] (実施例 15B)クリームの製造

(組成）（重量％)

プロピレングリコーノレ 6. 0

フタル酸ジブチル 19. 0

酸 5. 0

モノステアリン酸グリセリン 5. 0

モノステアリン酸ソルビタン 12. 0

モノステアリン酸ポリエチレンソルビタン 38. 0

ェデト酸ナトリウム 0. 03

0. 01

精製水全体で 100となる量

(実施例 16B)官能評価実施例 13B〜15Bを用いて官能評価を行った。なお、ポリアミンを含まない比較例も同時に評価した。官能評価は、シヮ等の老化症状の気になる 40〜60歳のパネル 20人を 1群として実施例及び比較例をそれぞれ 1日 2回， 3力月間連続使用してもらレ、、 3力月後の肌状態についてアンケート調查をして行った。

[表 3B]

[0179] 官能評価の結果として、各項目における評価者の数を表 3Bに示した。ポリアミンを含まない比較例より実施例の方力 9割以上のパネルが皮膚の弾力性が回復し、シヮの軽減が認められたと回答しており、顕著な皮膚の老化症状の回復効果があることが示された。さらに、スペルミン配合濃度が 0. 1重量％においても、皮膚の老化症状の回復効果など同様な結果を得た。

[0180] (実施例 17B)正常ヒト皮膚繊維芽細胞を用いた評価

評価は、以下の手順で行った。

[0181] 正常ヒト皮膚線維芽細胞を 1ゥエル当たり 2. 0 X 10⁴個となるように 48穴マイクロプレートに播種した。播種培地には、ダルベッコ改変イーグル培地（DMEM)に 10% のゥシ胎児血清を添カ卩したものを用いた。 37°C、二酸化炭素濃度 5vol%中にて 24 時間培養後、 10 _μ g/mlマイトマイシン C (抗生物質 'ナカライテスタ社製)を含む D MEMで 2時間培養した。マイトマイシン Cは DNAの複製を阻害する作用があることから、当該処置にて細胞増殖は抑制される。その後、 PBSにて洗浄した後に、任意の濃度のポリアミン群試料を添加した試験培地に交換し、さらに 48時間培養した。次レヽで WST— 8 l^— —metnoxy—A—nitrophenyD—j— —nitrophenyD—S—^'A—disulfophen yl)-2H-tetrazolium,monosodium salt 'ナカライテスタ社製〕を 100 μ g/mL含有する培地に交換して 3時間培養し、テトラゾリゥム環の開環により生じるフオルマザンを 2_ プロパノールにて抽出し、マイクロプレートリーダーにて 450nmの吸光度を測定した。同時に濁度として 600nmにおける吸光度を測定し、両測定値の差により細胞賦活作用を評価した。評価結果を、コントロール (水添加）における細胞賦活作用を 100とした相対値にて図 23に示す。

[0182] 図 23より明らかなように、マイトマイシン Cで細胞増殖を抑制したにも関わらずプトレシン、スペルミジン、スペルミンを添加した培地では、いずれにおいても正常ヒト皮膚線維芽細胞に対して有意に細胞賦活化 '抗老化活性を有していることが認められた。ポリアミンの生理作用として細胞増殖作用が知られている力細胞増殖停止作用を有するマイトマイシン Cにより細胞増殖を抑えたにも関わらず各種ポリアミンを添加することにより細胞賦活化活性が示されたことから、各種ポリアミンには細胞増殖 (細胞数増加）や細胞再生を伴わなレ、細胞賦活化 ·細胞活性化 ·抗老化作用を有することが本結果から初めて見出された。以上のことから、これらのポリアミンは、優れた細胞賦活化 (細胞活性化)作用を有することが明らかとなり、これらを肌に適用することにより、極めて優れた老化防止効果を発揮し、加齢、紫外線曝露等により生じる皮膚のしわ、たるみ等を効果的に改善することができる。

[0183] (実施例 18B)ポリアミンによるコラーゲン産生能の評価

評価は、以下の手順で行った。

[0184] 正常ヒト皮膚線維芽細胞を 1ゥヱル当たり 1. 0 X 10⁵個となるように 48穴マイクロプレートに播種した。播種培地には、ダルベッコ改変イーグル培地（DMEM)に 1%のゥシ胎児血清を添加したものを用いた。 37°C、二酸化炭素濃度 5νο1。/₀中にて 24時間培養後、 PBS (—）で 2回洗浄した後、任意の濃度のポリアミン群試料を添加した無血清培地に交換し、さらに 3日間、 6日間同条件にて培養した。培養上清から、ヒト線維芽細胞が産生する I型プロコラーゲン C末端ペプチド（Procollagen typel carboxy terminal propeptide： PIP)を、 Procollagen type I C-peptide (PIP) EIA Kit (TaKaRa) で測定した。尚プレート上の細胞を 0.5% Triton-X100を含む細胞溶解液で溶解し回収後にタンパク質量を測定し (Bio Rad,プロテインアツセィキット）、細胞数の指標とした。コラーゲン産生促進率は、標準品を上記 ELISAキットにて測定し、その結果から検量線を作成、その検量線からタンパク質 (細胞数）当たりの試料添加時のコラーゲン産生量及び試料無添加時のコラーゲン産生量を求め、試料無添加時のコラーゲン産生量を 100%として算出し、評価を行った。

[0185] 図 24、図 25より明らかなように、プトレシン、スペルミジン、スペルミンを添加した培地では、ヒト皮膚のコラーゲン産生率が細胞当たりで有意に高まることが認められた。濃度はポリアミン濃度で示した。全てのポリアミン濃度区においてブランク（水）と比較して、いずれも有意なコラーゲン産生促進作用が認められた。ポリアミンの生理作用として細胞増殖作用が知られているが、タンパク質量を指標とした細胞当たりで各種ポリアミンによりコラーゲン産生促進作用が示されたことから、各種ポリアミンには細胞増殖 (細胞数増加）を伴わなレ、コラーゲン産生促進 (細胞外マトリックス産生促進)作用を有することが本結果から始めて見出された。言い換えれば、各種ポリアミンは 1細胞当たりのコラーゲン産生量を高める作用を有することが明らかとなった。以上のことから、これらのポリアミンを肌に適用することにより、加齢に伴う繊維芽細胞の衰えが軽減し、コラーゲンの産生を促進してコラーゲン量を維持することができる。その結果、加齢、紫外線曝露等により生じる皮膚のしわ、たるみ等を効果的に改善することができる。

[0186] (実施例 19B)美容液の製造

(組成）（重量％)

ソノレビット 4. 0

ジプロピレングリコール 6. 0

ポリエチレングリコーノレ 1500 5. 0

POE (20)ォレイルアルコールエーテル 0. 5 ショ糖脂肪酸エステル 0. 2

rース 0· 2

0. 01

0. 005

精製水全体で 100となる量

[0187] (実施例 20Β)乳液の製造

(組成）（重量％)

グリセリノレエーテノレ 1. 5

ショ糖脂肪酸エステル 1. 5

酸ソルビタン 1. 0

7. 5

ジプロピレンダリコール 5. 0

0. 01

0. 005

精製水全体で 100となる量

[0188] (実施例 21B)クリームの製造

(組成）（重量％)

プロピレングリコーノレ 6. 0

フタル酸ジブチル 19. 0

ステアリン酸 5. 0

モノステアリン酸グリセリン 5. 0

'Π、ノ酸ソノレビ、タン 12. 0 モノステアリン酸ポリェチレンソルビタン 38. 0

ェデト酸ナトリウム 0. 03

スペルミジン 0. 01

プトレシン 0. 01

スペルミン 0. 005

精製水全体で 100となる量

(実施例 22B)官能評価

実施例 19B〜21Bを用いて官能評価を行った。なお、ポリアミンを含まない比較例も同時に評価した。官能評価は、シヮ等の老化症状の気になる 40〜60歳のパネル 20人を 1群として実施例及び比較例をそれぞれ 1日 2回， 3力月間連続使用してもらレ、、 3力月後の肌状態についてアンケート調查をして行った。

4B]

官能評価の結果として、各項目における評価者の数を表 4Bに示した。ポリアミンを含まない比較例より各ポリアミンを混合配合した実施例の方力 9割以上のパネルが皮膚の弾力性が回復し、シヮの軽減が認められたと回答しており、顕著な皮膚の老化症状の回復効果があることが示された。さらに、各ポリアミンを単独で配合した場合よりも各ポリアミンを混合して配合した場合の方力皮膚の老化症状の回復などに優れた効果があることが初めて確認された。

[0192] (実施例 23B)美容液の製造

(組成）

4. 0

Jコール 6. 0

ポリエチレングリコーノレ 1500 5. 0

POE (20)ォレイルアルコールエーテル 0. 5

ショ糖脂肪酸エステル 0. 2

—ス 0. 2

ダイズ胚芽抽出物（ポリアミン濃度 3. 4mM) . 0

精製水全体で 100となる量

[0193] (実施例 24B)乳液の製造

(組成）（重量％)

グリセリ/レエーテ/レ 1. 5

ショ糖脂肪酸エステル 1. 5

酸ソルビタン 1. 0

7. 5

コーノレ 5. 0

ダイズ胚芽抽出物（ポリアミン濃度 3. 4mM) 1. 0

精製水全体で 100となる量

[0194] (実施例 25B)クリームの製造

(組成）プロピレングリコーノレ 6. 0

フタル酸ジブチル 19· 0

ステアリン酸 5. 0

モノステアリン酸グリセリン 5. 0

モノステアリン酸ソルビタン 12. 0

モノステアリン酸ポリエチレンソルビタン 38. 0

ェデト酸ナトリウム 0. 03

ダイズ胚芽抽出物（ポリアミン濃度³. 4mM) 1. 0

精製水全体で 100となる量

(実施例 26B)官能評価

実施例 23B〜25Bを用いて官能評価を行った。なお、胚芽抽出物を含まない比較例も同時に評価した。官能評価は、シヮ等の老化症状の気になる 40〜60歳のパネル 20人を 1群として実施例及び比較例をそれぞれ 1日 2回， 3力月間連続使用してもらい、 3力月後の肌状態についてアンケート調査をして行った。

[表 5B]

官能評価の結果として、各項目における評価者の数を表 5Bに示した。胚芽抽出物を含まない比較例より実施例の方が、 9割以上のパネルが皮膚の弾力性が回復し、シヮの軽減が認められたと回答しており、顕著な皮膚の老化症状の回復効果があることが示された。

[0198] (実施例 27B)美容液の製造

(組成）

4. 0

Jコール 6. 0

ポリエチレングリコーノレ 1500 5. 0

POE (20)ォレイルアルコールエーテル 0. 5

ショ糖脂肪酸エステル 0. 2

—ス 0. 2

コムギ胚芽抽出物（ポリアミン濃度 1. 7mM) 1. 0

精製水全体で 100となる量

[0199] (実施例 28B)乳液の製造

(組成）（重量％)

グリセリ/レエーテ/レ 1. 5

ショ糖脂肪酸エステル 1. 5

酸ソルビタン 1. 0

7. 5

コーノレ 5. 0

コムギ胚芽抽出物（ポリアミン濃度 1. 7mM) 1. 0

精製水全体で 100となる量

[0200] (実施例²⁹ B)クリームの製造

(組成）プロピレングリコー/レ 6. 0

フタル酸ジブチノレ 19· 0

ステアリン酸 5. 0

モノステアリン酸グリセリン 5. 0

モノステアリン酸ソルビタン 12. 0

モノステアリン酸ポリエチレンソルビタン 38. 0

ェデト酸ナトリウム 0. 03

コムギ胚芽抽出物（ポリアミン濃度 1. 7mM) 1. 0

精製水全体で 100となる量

(実施例 30B)官能評価

実施例 27B〜29Bを用いて官能評価を行った。なお、胚芽抽出物を含まない比較例も同時に評価した。官能評価は、シヮ等の老化症状の気になる 40〜60歳のパネル 20人を 1群として実施例及び比較例をそれぞれ 1日 2回， 3力月間連続使用してもらい、 3力月後の肌状態についてアンケート調査をして行った。

[表 6B]

官能評価の結果として、各項目における評価者の数を表 6Cに示した。胚芽抽出物を含まない比較例より実施例の方が、 9割以上のパネルが皮膚の弾力性が回復し、シヮの軽減が認められたと回答しており、顕著な皮膚の老化症状の回復効果があることが示された。

産業上の利用可能性

本発明により、植物由来の安全性に優れた賦活化作用、抗老化作用、さらに安全性に優れた細胞外マトリックス産生促進作用が期待でき、ポリアミンを有効成分とした化粧品 ·医薬部外品 (皮膚外用剤、浴用剤、育毛剤等）、飲食品、医薬品を提供することできることからも、産業界に大きく寄与することが期待される。

Claims

請求の範囲

[I] 植物由来ポリアミン含有抽出物を有効成分とすることを特徴とする抗老化剤。

[2] 植物由来ポリアミン含有抽出物を有効成分とすることを特徴とする細胞賦活化剤。

[3] 植物由来ポリアミン含有抽出物が、大豆種子、大豆胚芽、大豆胚、大豆芽、小麦種子、小麦胚芽、小麦胚、小麦芽、豆乳及びオカラよりなる群から選ばれた少なくとも 1 種であることを特徴とする請求項 1に記載の抗老化剤。

[4] 植物抽出物に含有されるポリアミンが、第一級アミノ基を 2つ以上有する脂肪族炭化水素からなる群より選ばれた少なくとも 1種以上の化合物であることを特徴とする請求項 1に記載の抗老化剤。

[5] 植物抽出物に含有されるポリアミン力 1 , 3—ジァミノプロパン、プトレシン、カダべリン、カルジン、スペルミジン、ホモスペルミジン、ァミノプロピルカダベリン、テルミン、スペルミン、テノレモスぺノレミン、カナバルミン、ァミノペンチルノルスペルミジン、 N, N —ビス（ァミノプロピノレ）カダベリン、ホモスペルミン、力ルドペンタミン、ホモ力ルドペンタミン、力ルドへキサミン及びホモ力ルドへキサミンよりなる群から選ばれた少なくとも 1 種の化合物であることを特徴とする請求項 1に記載の抗老化剤。

[6] ポリアミンが、プトレシン、スペルミジン及びスペルミンからなる群力選ばれた少なくとも 1種の化合物であることを特徴とする請求項 1に記載の抗老化剤。

[7] ポリアミンもしくは植物由来ポリアミン含有抽出物を有効成分とする細胞外マトリックス産生促進剤。

[8] ポリアミンもしくは植物由来ポリアミン含有抽出物を有効成分とするコラーゲン産生促進剤。

[9] ポリアミンもしくは植物由来ポリアミン含有抽出物を有効成分とするヒアルロン酸産生促進剤。

[10] 請求項 1、 3〜6のいずれかに記載の抗老化剤、請求項 2に記載の細胞賦活化剤、請求項 7に記載の細胞外マトリックス産生促進剤、請求項 8に記載のコラーゲン産生促進剤または請求項 9に記載のヒアルロン酸産生促進剤を有効成分として含有することを特徴とする化粧品類。

[II] 植物由来ポリアミン含有抽出物を動物の皮膚に接触させる工程を含むことを特徴とする皮膚の抗老化方法もしくは細胞賦活化方法。

[12] 植物由来ポリアミン含有抽出物が、大豆種子、大豆胚芽、大豆胚、大豆芽、小麦種子、小麦胚芽、小麦胚、小麦芽、豆乳及びオカラよりなる群から選ばれた少なくとも 1 種以上から得ることを特徴とする請求項 11に記載の抗老化方法もしくは細胞賦活化方法。

[13] ポリアミンもしくは植物由来ポリアミン含有抽出物を動物の皮膚に接触させる工程を含むことを特徴とする皮膚の細胞外マトリックス産生促進方法。

[14] 細胞外マトリックス産生促進が、コラーゲン産生促進を含む、請求項 13に記載の方法。

[15] 細胞外マトリックス産生促進力ヒアルロン酸産生促進を含む、請求項 13に記載の方法。

[16] ポリアミンが、第一級アミノ基を 2つ以上有する脂肪族炭化水素からなる群より選ばれた少なくとも 1種以上の化合物であることを特徴とする請求項 13に記載の方法。

[17] 植物由来ポリアミン含有抽出物が、大豆種子、大豆胚芽、大豆胚、大豆芽、小麦種子、小麦胚芽、小麦胚、小麦芽、豆乳及びオカラよりなる群から選ばれた少なくとも 1 種以上から得ることを特徴とする請求項 13に記載の方法。

[18] ポリアミンが、 1, 3—ジァミノプロパン、プトレシン、カダベリン、カルジン、スペルミジン、ホモスペルミジン、ァミノプロピルカダベリン、テノレミン、スペルミン、テルモスペルミン、カナバルミン、ァミノペンチルノルスペルミジン、 N, N—ビス（ァミノプロピル）力ダベリン、ホモスペルミン、力ルドペンタミン、ホモ力ルドペンタミン、力ルドへキサミン及びホモ力ルドへキサミンよりなる群から選ばれた少なくとも 1種以上の化合物であることを特徴とする請求項 13に記載のコラーゲン産生促進方法。

[19] ポリアミンが、プトレシン、スペルミジン及びスペルミンからなる群力選ばれた少なくとも 1種以上の化合物であることを特徴とする請求項 13に記載の方法。

[20] (1)植物及び/又は植物抽出物を酸性条件下に処す工程と、（2)液体画分を分離する工程とを含むことを特徴とするポリアミン含有植物抽出物の調製方法。

[21] 鉱酸及び/又は有機酸を含む酸溶液を添加し酸性条件下に処すことを特徴とする請求項 20に記載のポリアミン含有植物抽出物の調製方法。

[22] pHが 2以下になるように鉱酸及び/又は有機酸を含む酸溶液を添加し酸性条件下に処すことを特徴とする請求項 20に記載のポリアミン含有植物抽出物の調製方法

[23] 鉱酸及び/又は有機酸が、塩酸、硫酸、硝酸、酢酸、リン酸、トリクロ口酢酸、過塩素酸、クェン酸、乳酸、プロピオン酸、酪酸、蓚酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、リンゴ酸、酒石酸、安息香酸、スルホサリチル酸及びギ酸よりなる群から選ばれた少なくとも 1種以上の酸であることを特徴とする請求項 21又は 22に記載のポリァミン含有植物抽出物の調製方法。

[24] 酸性条件下になるように添加する酸溶液が、塩酸及び/又は過塩素酸及び Z又は硫酸であることを特徴とする請求項 20〜23のいずれかに記載のポリアミン含有植物抽出物の調製方法。

[25] 植物及び/又は植物抽出物を酸性条件下に処すと同時又は後に、ポリフエノール吸着剤を添加し、液体画分を分離することを特徴とする請求項 20〜24のいずれかに記載のポリアミン含有植物抽出物の調製方法。

[26] 植物及び/又は植物抽出物が、大豆種子、大豆胚芽、大豆胚、小麦種子、小麦胚芽、小麦胚、豆乳及びオカラよりなる群から選ばれた少なくとも 1種以上であることを特徴とする請求項 20〜25のいずれかに記載のポリアミン含有植物抽出物の調製方法。

[27] 液体画分を分離する工程が、遠心分離及び/又は濾過分離であることを特徴とする請求項 20〜26のいずれかに記載のポリアミン含有植物抽出物の調製方法。

[28] 請求項 20〜27のいずれかに記載の調製方法によって回収されたポリアミン含有植物抽出物を、さらにイオン交換法、ゲル濾過法、膜分画法及び電気透析法よりなる群力選ばれた少なくとも 1種以上の処理により精製することを特徴とするポリアミン含有植物抽出物の調製方法。

[29] 請求項 20〜28のいずれかに記載の調製方法によって回収されたポリアミン含有植物抽出物を含有する抗老化剤または細胞賦活化剤。

[30] 請求項 20〜28のいずれかに記載の調製方法によって回収されたポリアミン含有植物抽出物を含有する細胞外マトリックス産生促進剤。請求項 20〜28のいずれかに記載の調製方法によって回収されたポリアミン含有植物抽出物を含有するコラーゲン産生促進剤。

請求項 20〜28のいずれかに記載の調製方法によって回収されたポリアミン含有植物抽出物を含有するヒアルロン酸産生促進剤。