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WO2007036559A1 - Mikroskopsystem für fcs-messungen - Google Patents

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WO2007036559A1
WO2007036559A1 PCT/EP2006/066861 EP2006066861W WO2007036559A1 WO 2007036559 A1 WO2007036559 A1 WO 2007036559A1 EP 2006066861 W EP2006066861 W EP 2006066861W WO 2007036559 A1 WO2007036559 A1 WO 2007036559A1
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light
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microscope according
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Werner Knebel
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Leica Microsystems CMS GmbH
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    • G02B—OPTICAL ELEMENTS, SYSTEMS OR APPARATUS
    • G02B21/00—Microscopes
    • G02B21/0004—Microscopes specially adapted for specific applications
    • G02B21/002—Scanning microscopes
    • G02B21/0024—Confocal scanning microscopes (CSOMs) or confocal "macroscopes"; Accessories which are not restricted to use with CSOMs, e.g. sample holders
    • G02B21/0052—Optical details of the image generation
    • G02B21/0076—Optical details of the image generation arrangements using fluorescence or luminescence
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
    • G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
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    • G02B21/0064—Optical details of the image generation multi-spectral or wavelength-selective arrangements, e.g. wavelength fan-out, chromatic profiling

Definitions

  • the invention relates to a microscope system for FCS measurements.
  • the invention relates to a microscope system for performing FCS measurements with at least one light source emitting illuminating light and with a plurality of optical elements directing the illuminating light to a sample volume.
  • European patent EP 0 941 470 discloses a fluorescence correlation spectroscopy module for a microscope.
  • the FCS module can be connected to a microscope of any type. Fluorescence correlation spectroscopy makes it possible to study molecular dynamic processes. For this purpose, the particles in solution are doped with dyes capable of fluorescence, and then these dyes are excited by light of a certain wavelength. The excitation light coming from a laser is coupled into the module via a flange connection for an optical waveguide. In the FCS module known from the prior art, it is difficult to match the FCS detection volume with the sample area that is to be examined.
  • the invention has for its object to provide a microscope system with which the alignment can be done on the sample volume to be examined in a reliable manner.
  • the objective object is achieved by a microscope system comprising the features of claim 1.
  • FCS measurements are provided with a target light source for marking an FCS volume.
  • the light of the target light source is also directed to the sample volume via the plurality of optical elements.
  • the Wavelength of the first light source differs from the wavelength of the target light source.
  • a combining element which combines the illumination light of the first light source with the light of the target light source to form a common beam path.
  • the light of the target light source has a larger wavelength than the illumination light of the first light source.
  • the light of the target light source has a wavelength which is in the range of red light.
  • the light of the target light source may have a wavelength that is in the range of IR light.
  • IR light a camera is provided which registers the IR light and converts it to an image visible to the user.
  • the aiming light source is provided with correction optics to compensate for the color errors due to the different wavelengths from the first light source and the target light source.
  • the at least first light source and / or the target light source is a laser.
  • the microscope is provided with an optical fiber into which the illumination light of the at least first light source and the light of the target light source can be coupled in order to achieve the colinearity of the illumination light and the light of the target light source.
  • the union element can be a beam splitter. It is also conceivable that the unifying element is an AOTF, an AOBS or an AOM.
  • Fig. 1 is a schematic representation of a first embodiment of the invention.
  • FIG. 1 schematically describes a microscope system 1 for performing FCS measurements.
  • the microscope system 1 is at least a first Provided light source 3, which emits illumination light, which is directed to a sample volume 5 and a sample.
  • a target light source 7 for marking the FCS volume 5 is provided.
  • the aiming light source 7 emits light 6, which is also directed to the FCS volume.
  • the wavelength of the illumination light 2 of the first light source 3 differs from the wavelength of the light 6 of the aiming light source 7.
  • the light 2 from the illumination light source 3 and the light 6 from the aiming light source 7 are merged by a combining element 9 to a common collinear beam path.
  • the joining element 9 can be designed as a beam splitter.
  • the joining element 9 is an AOTF, an AOBS, or AOM.
  • a correction optics 10 is provided between the target light source 7 and the combining element 9, to compensate for the color errors due to the different wavelengths of the light 2 of the first light source 3 and the light 6 of the target light source 7.
  • the light 2 of the first light source 3 and the light 6 of the target light source 7 are directed onto the sample volume 5 or the sample via a plurality of optical elements 12 and a microscope optical system 14.
  • the sample volume 5 or the sample is provided at least on an XY table 16, thereby changing the sample volume with respect to the position of the illumination light.
  • the sample volume 5 is excited to fluoresce due to the illumination by the light of the first light source 3, so that the sample volume 5 emits detection light 15, which is also directed to the detector 18 via the microscope optics 14 and the optical elements.
  • the light 6 of the target light source 7 has a larger wavelength than the illumination light 2 of the first light source 3.
  • the light 2 of the target light source 3 has a wavelength which is in the range of red light.
  • the location of the light 6 of the target light source 7 on the sample volume 5 can thus be observed directly and visually by a user 24. If the light 6 of the target light source 7 is in the wavelength range of IR light, a camera 22 is provided which generates an image for the user 24, so that it can recognize the location of the illumination light 25 in the sample volume 5.
  • FIG. 2 shows a further embodiment of the microscope system 1.
  • the unifying element 9 is followed by an optical fiber 30, in which the Illumination light 2 of the at least first light source 3 and the light 6 of the target light source are coupled.
  • an optical fiber 30 By coupling the illumination light 2 of the light 6 of the target light source 7 into the optical fiber 30, the colinearity of the illumination light is achieved. This ensures that the light 6 of the target light source 7 and the illumination light 2 of the at least first light source 3 impinge on a common point of incidence 25 in the sample volume 5 or in the sample.
  • the optical fiber 30 may be provided with a coupling-in optical system 31 and a coupling-out optical system 32.

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Abstract

Es ist ein Mikroskopsystem (1) zur Durchführung von FCS-Messungen mit mindestens einer ersten Lichtquelle (3), die Beleuchtungslicht (2) aussendet, offenbart. Ferner ist eine Ziellichtquelle (7) zum Markieren eines FCS-Volumens im Probenvolumen (5) vorgesehen. Das Licht der Ziellichtquelle (7) und das Licht der ersten Lichtquelle (3) werden auf einen gemeinsamen Ort im Probenvolumen (5) gerichtet. Die Wellenlänge der ersten Lichtquelle (3) unterscheidet sich von der Wellenlänge der Ziellichtquelle (7).

Description

Mikroskopsystem für FCS-Messunqen
Die Erfindung betrifft ein Mikroskopsystem für FCS-Messungen. Im Besonderen betrifft die Erfindung ein Mikroskopsystem zur Durchführung von FCS-Messungen mit mindestens einer Lichtquelle, die Beleuchtungslicht aussendet, und mit mehreren optischen Elementen, die das Beleuchtungslicht auf ein Probenvolumen richten.
Das europäische Patent EP 0 941 470 offenbart ein Fluoreszenzkorrela- tionons-Spektroskopiemodul für ein Mikroskop. Das FCS-Modul kann extra mit einem Mikroskop beliebiger Bauart verbunden werden. Mit der Fluoreszenz- korrelationons-Spektroskopie ist das Studium zur Untersuchung molekularer dynamischer Vorgänge möglich. Hierzu werden die in Lösung befindlichen Partikel mit zu Fluoreszenz fähigen Farbstoffen dotiert, und diese Farbstoffe dann über Licht bestimmter Wellenlänge angeregt. Das von einem Laser kommende Anregungslicht wird in das Modul über eine Flanschverbindung für einen Lichtwellenleiter eingekoppelt. Bei dem aus dem Stand der Technik bekannten FCS-Modul ist es schwierig, das FCS-Detektionsvolumen mit dem Probenbereich zur Deckung zu bringen, der untersucht werden soll.
Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, ein Mikroskopsystem zu schaffen, mit dem auf zuverlässige Weise die Ausrichtung auf das zu untersuchende Probenvolumen erfolgen kann.
Die objektive Aufgabe wird durch ein Mikroskopsystem gelöst, das die Merkmale des Anspruchs 1 umfasst.
Es ist besonders vorteilhaft, wenn das Mikroskopsystem zur Durchführung von
FCS-Messungen mit einer Ziellichtquelle zum Markieren eines FCS-Volumens versehen ist. Dabei wird das Licht der Ziellichtquelle ebenfalls über die mehreren optischen Elemente auf das Probenvolumen gerichtet. Die Wellenlänge der ersten Lichtquelle unterscheidet sich von der Wellenlänge der Ziellichtquelle.
Ein Vereinigungselement ist vorgesehen, das das Beleuchtungslicht der ersten Lichtquelle mit dem Licht der Ziellichtquelle zu einem gemeinsamen Strahlengang vereinigt. Das Licht der Ziellichtquelle besitzt eine größere Wellenlänge als das Beleuchtungslicht der ersten Lichtquelle.
Besonders vorteilhaft ist es, wenn das Licht der Ziellichtquelle eine Wellenlänge aufweist, die im Bereich von rotem Licht liegt. Ebenso kann das Licht der Ziellichtquelle eine Wellenlänge aufweisen, die im Bereich von IR-Licht liegt. Bei IR-Licht ist eine Kamera vorgesehen, die das IR-Licht registriert und in ein für den Benutzer sichtbares Bild wandelt. Ferner ist die Ziellichtquelle mit einer Korrekturoptik versehen, um die Farbfehler aufgrund der unterschiedlichen Wellenlängen von der ersten Lichtquelle und der Ziellichtquelle auszugleichen. Die mindestens erste Lichtquelle und/oder die Ziellichtquelle ist ein Laser.
In einer weiteren Ausführungsform ist das Mikroskop mit einer Lichtleitfaser versehen, in die das Beleuchtungslicht der mindestens ersten Lichtquelle und das Licht der Ziellichtquelle einkoppelbar ist, um die Kolinearität des Beleuchtungslichts und des Lichts der Ziellichtquelle zu erzielen. Das Vereinigungs- element kann dabei ein Strahlteiler sein. Ebenso ist es denkbar, dass das Vereinigungselement ein AOTF, ein AOBS oder ein AOM ist.
Weitere vorteilhafte Ausgestaltungen der Erfindung können den Unteransprüchen entnommen werden.
In der Zeichnung ist der Erfindungsgegenstand schematisch dargestellt, und wird anhand der Figuren nachfolgend beschrieben. Dabei zeigen:
Fig. 1 eine schematische Darstellung einer ersten Ausführungsform der Erfindung; und
Fig. 2 eine schematische Darstellung einer zweiten Ausführungsform der Erfindung. Figur 1 beschreibt schematisch ein Mikroskopsystem 1 zur Durchführung von FCS-Messungen. Das Mikroskopsystem 1 ist mit mindestens einer ersten Lichtquelle 3 versehen, die Beleuchtungslicht aussendet, das auf ein Probenvolumen 5 bzw. eine Probe gerichtet wird. Ferner ist eine Ziellichtquelle 7 zum Markieren des FCS-Volumens 5 vorgesehen. Die Ziellichtquelle 7 sendet Licht 6 aus, das ebenfalls auf das FCS-Volumen gerichtet wird. Die Wellenlänge des Beleuchtungslichts 2 der ersten Lichtquelle 3 unterscheidet sich von der Wellenlänge des Lichts 6 der Ziellichtquelle 7. Das Licht 2 von der Beleuchtungslichtquelle 3 und das Licht 6 von der Ziellichtquelle 7 werden durch ein Vereinigungselement 9 zu einem gemeinsamen, kolinearen Strahlengang zusammengeführt. Das Vereinigungselement 9 kann dabei als Strahlteiler ausgebildet sein. Ebenso ist es denkbar, dass das Vereinigungselement 9 ein AOTF, ein AOBS, oder AOM ist. Zwischen der Ziellichtquelle 7 und dem Vereinigungselement 9 ist eine Korrekturoptik 10 vorgesehen, um die Farbfehler aufgrund der unterschiedlichen Wellenlängen des Lichts 2 der ersten Lichtquelle 3 und des Lichts 6 der Ziellichtquelle 7 auszugleichen. Das Licht 2 der ersten Lichtquelle 3 und das Licht 6 der Ziellichtquelle 7 wird über mehrere optische Elemente 12 und eine Mikroskopoptik 14 auf das Probenvolumen 5 bzw. die Probe gerichtet. Das Probenvolumen 5 bzw. die Probe ist zumindest auf einem XY-Tisch 16 vorgesehen, um dadurch das Probenvolumen hinsichtlich der Position des Beleuchtungslichts zu verändern. Das Proben- volumen 5 wird aufgrund der Beleuchtung durch das Licht der ersten Lichtquelle 3 zur Fluoreszenz angeregt, so dass das Probenvolumen 5 Detektionslicht 15 aussendet, das ebenfalls über die Mikroskopoptik 14 und die optischen Elemente auf den Detektor 18 gerichtet wird. Das Licht 6 der Ziellichtquelle 7 besitzt eine größere Wellenlänge als das Beleuchtungslicht 2 der ersten Licht-quelle 3. In einer ersten Ausführungsform besitzt das Licht 2 der Ziellichtquelle 3 eine Wellenlänge, die im Bereich von rotem Licht liegt. Den Ort des Lichts 6 der Ziellichtquelle 7 auf dem Probenvolumen 5 kann ein Benutzer 24 somit direkt und visuell beobachten. Falls das Licht 6 der Ziellichtquelle 7 im Wellen-Iängenbereich von IR-Licht liegt, ist eine Kamera 22 vorgesehen, die für den Benutzer 24 ein Bild erzeugt, damit dieser den Ort des Beleuchtungslichts 25 im Probenvolumen 5 erkennen kann.
Figur 2 zeigt eine weitere Ausführungsform des Mikroskopsystems 1 . Dem Vereinigungselement 9 ist eine Lichtleitfaser 30 nachgeordnet, in die das Beleuchtungslicht 2 der mindestens ersten Lichtquelle 3 und das Licht 6 der Ziellichtquelle eingekoppelt werden. Durch das Einkoppeln des Beleuchtungslichts 2 des Lichts 6 der Ziellichtquelle 7 in die Lichtleitfaser 30 erzielt man die Kolinearität des Beleuchtungslichts. Somit ist gewährleistet, dass das Licht 6 der Ziellichtquelle 7 und das Beleuchtungslicht 2 der mindestens ersten Lichtquelle 3 auf einen gemeinsamen Auftreffort 25 im Probenvolumen 5 oder in der Probe auftreffen. Die Lichtleitfaser 30 kann mit einer Einkoppeloptik 31 und einer Auskoppeloptik 32 versehen sein.

Claims

Patentansprüche
1 . Mikroskopsystem (1 ) zur Durchführung von FCS-Messungen mit mindestens einer ersten Lichtquelle (3), die Beleuchtungslicht (2) aussendet und mehreren optischen Elementen (12, 15), die das Beleuchtungslicht (2) auf ein Probenvolumen (5) richten, dadurch gekennzeichnet, dass eine Ziellichtquelle (7) zum Markieren eines FCS-Volumens im Probenvolumen (5) vorgesehen ist, deren Licht (6) ebenfalls über die mehreren optischen Elemente (12, 15) auf das Probenvolumen (5) gerichtet ist, und wobei sich die Wellenlänge der ersten Lichtquelle (3) von der Wellenlänge der Ziellichtquelle (7) unterscheidet.
2. Mikroskop nach Anspruch 1 , dadurch gekennzeichnet, dass ein Vereinigungselement (9) vorgesehen ist, das das Beleuchtungslicht (2) der ersten Lichtquelle (3) mit dem Licht (6) der Ziellichtquelle (7) zu einem gemeinsamen Strahlengang vereinigt.
3. Mikroskop nach Anspruch 1 , dadurch gekennzeichnet, dass das Licht (6) der Ziellichtquelle (7) eine größere Wellenlänge besitzt, als das Beleuchtungslicht (2) der ersten Lichtquelle (3).
4. Mikroskop nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, dass das Licht (6) der Ziellichtquelle (7) eine Wellenlänge aufweist, die im Bereich von rotem Licht liegt.
5. Mikroskop nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, dass das Licht (6) der Ziellichtquelle (7) eine Wellenlänge aufweist, die im Bereich von IR- Licht liegt, und dass eine Kamera (22) vorgesehen ist, die das IR-Licht registriert und in ein für den Benutzer (24) sichtbares Bild wandelt.
6. Mikroskop nach einem der Ansprüche 1 bis 5, dadurch gekennzeichnet, dass die Ziellichtquelle (7) mit einer Korrekturoptik (10) versehen ist, um die Farbfehler aufgrund der unterschiedlichen Wellenlängen von der ersten Lichtquelle (3) und der Ziellichtquelle (7) auszugleichen.
7. Mikroskop nach einem der Ansprüche 1 bis 6, dadurch gekennzeichnet, dass die mindestens erste Lichtquelle (3) und/oder die Ziellichtquelle (7) ein Laser ist.
8. Mikroskop nach einem der Ansprüche 1 bis 7, dadurch gekennzeichnet, dass eine Lichtleitfaser (30) vorgesehen ist, in die das Beleuchtungslicht (2) der mindestens ersten Lichtquelle (3) und das Licht (6) der Ziellichtquelle (7) einkoppelbar ist, um eine Kolinearität des Beleuchtungslichts (2) und des Lichts (6) der Ziellichtquelle (7) zu erzielen.
9. Mikroskop nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, dass das Vereinigungselement (9) ein Strahlteiler ist.
10. Mikroskop nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, dass das Vereinigungselement (9) ein AOTF, ein AOBS, oder ein AOM ist.
PCT/EP2006/066861 2005-09-29 2006-09-28 Mikroskopsystem für fcs-messungen Ceased WO2007036559A1 (de)

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