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WO2007058129A1 - 抗原の測定法およびそれに用いるキット - Google Patents

抗原の測定法およびそれに用いるキット Download PDF

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WO2007058129A1
WO2007058129A1 PCT/JP2006/322486 JP2006322486W WO2007058129A1 WO 2007058129 A1 WO2007058129 A1 WO 2007058129A1 JP 2006322486 W JP2006322486 W JP 2006322486W WO 2007058129 A1 WO2007058129 A1 WO 2007058129A1
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WO
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antigen
antibody
measured
albumin
water
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PCT/JP2006/322486
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French (fr)
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Ryo Kojima
Yoshiro Sato
Katsuhiro Katayama
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Nitto Boseki Co Ltd
Original Assignee
Nitto Boseki Co Ltd
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Publication date
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Priority to JP2007545223A priority patent/JP5239340B2/ja
Priority to KR1020087011402A priority patent/KR101298433B1/ko
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    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G01N33/544—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being organic
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    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals

Definitions

  • the present invention relates to a method for measuring an antigen and a kit used therefor. More specifically, the present invention is a measurement method using a competitive homogeneous immunoagglutination measurement method for antigens in a sample, and is suitable for measurement of antigens such as albumin, which is a protein present in high concentration in a biological sample. The present invention relates to a method for measuring an antigen and a kit used therefor.
  • an immunoturbidimetric method such as latex immunoturbidimetric method is known. Since these methods can measure a large number of samples in a short time, they are widely used in the clinical laboratory industry. However, if to be'll measure proteins present in high concentrations of about 10 _ 3 M in the blood such as albumin in this way, problems Sh Sh occurs. That is, in this case, it is necessary to dilute and use the blood sample collected as a sample, and there is a problem that the operation before the measurement is complicated. In addition, it is necessary to use a large amount of an antibody used as a measurement reagent, which causes a problem that the measurement reagent becomes expensive. Furthermore, there was a problem that the prozone phenomenon occurred and measurement could not be performed immediately in the high concentration range. As a result, the measurement of these proteins by immunoturbidimetry has not been put into practical use in an undiluted system.
  • a competitive homogeneous immunoaggregation assay method is known in connection with the above-described immunoturbidimetric method (Patent Documents 1, 2, and 3).
  • Competitive homogeneous immunoagglutination measurement method is a method in which a sample containing an antigen to be measured, an antibody against the antigen, and fine particles carrying an antigen capable of binding to the antibody are mixed, and the antibody and the sample are mixed.
  • the antigen-antibody reaction is competed between the antigen in the medium and the antigen carried by the fine particles, and the degree of aggregation caused by the antigen-antibody reaction between the antigen carried by the fine particles and the antibody is quantified. It is a method to do.
  • This method has the merit that a low concentration of antigen can be measured by various devices, and many studies have been made from this viewpoint.
  • This method when using this method to measure high-concentration proteins, if you try to create a calibration curve, The measurement blank with a concentration of 0 exceeds the measurement limit, making measurement impossible. As a result, there has been little research on measuring high-concentration proteins using this method, and as a result, there has been no practical use.
  • Patent Document 1 Japanese Patent Application Laid-Open No. 57-206859
  • Patent Document 2 Japanese Patent Publication No. 58-500874
  • Patent Document 3 Japanese Patent Laid-Open No. 2002-296281
  • the problem of the present invention is that a conventional competitive homogeneous immunoagglutination measurement method, which is conventionally used for measuring high concentration antigens, is used in an undiluted system. It is to provide a method for measuring an antigen. It is also possible to provide a measurement kit for use in such a measurement method.
  • the present inventors have used a competitive homogeneous immunoagglutination measurement method that has hardly been studied for the ability to measure a high concentration of protein. Then, it was examined to measure albumin in the sample.
  • a high concentration of albumin is not diluted, that is, an undiluted system is used. It became clear that it was possible to measure accurately.
  • the present invention has been achieved through a long process.
  • the present invention relates to a sample containing an antigen to be measured, an antibody against the antigen, and the same antigen as the antigen or an analog of the antigen that can react with the antibody.
  • the antigens carried by the fine particles are compared with the same antigen or an analog of the antigen by the antigen-antibody reaction to determine the antigen to be measured.
  • Relates to a method for measuring an antigen characterized in that it is an antibody to which a water-soluble polymer is covalently bound.
  • the present invention relates to an antibody against an antigen to be measured and a water-soluble polymer shared
  • the present invention relates to an antigen measurement kit comprising a bound antibody and fine particles carried on the same antigen as the antigen to be measured or an analog of the antigen and capable of antigen-antibody reaction with the antibody.
  • the measurement method of the present invention it is present in a high concentration in a biological sample such as albumin using a small amount of an expensive antibody as a measurement reagent without causing a prozone phenomenon and leaving the sample undiluted.
  • the antigen which is a protein to be immunoassay can be measured.
  • the measurement method of the present invention is based on the principle that, in a competitive immune reaction, only one of the reaction reagent and product is turbid and the other components are dissolved in water. Is described below by way of example.
  • the target to be mixed as a reaction reagent (antigen derived from 0 sample, GO, the same antigen as the antigen or a conjugate of the antigen analog and fine particles, (m) force to use the antibody as a reagent ( All antigens, conjugates and antibodies of 0-GiO can be dissolved in water or can be uniformly dispersed.Then, when these are mixed and allowed to undergo an antigen-antibody reaction, (iv)
  • Two antigen-antibody reaction products are produced by competition between the (iii) antibody conjugate and (v) the (i) antigen and (iii) antibody conjugate.
  • the conjugate of (iv) is insoluble in water and turbid, whereas the conjugate of (V) is soluble in water. Therefore, the more bound compound (iv) is formed, the higher the turbidity of the reaction solution.
  • an antibody to which a water-soluble polymer is covalently bound is used as a reagent antibody. It can be used to suppress the antigen-antibody reaction and reduce the turbidity of the reaction system to a measurable level.
  • the antigen to be measured is preferably a substance present in a biological sample, particularly a protein present in a high concentration in the biological sample.
  • albumin, IgG, IgA, and IgM are preferable, and albumin and IgG are more preferable.
  • albumin is most preferably quantified by immunoassay without diluting a sample because it can be used in the present invention even though it has not been put into practical use in the clinical laboratory industry.
  • the sample is, for example, a liquid sample derived from a living body, and specifically includes plasma, serum, urine, and the like.
  • the antibody used in the present invention is an antibody against the antigen to be measured, and as long as such an antibody, either a polyclonal antibody or a monoclonal antibody can be used.
  • an antigen analog is a substance having a structure similar to an antigen and capable of binding to an antibody through an antigen-antibody reaction.
  • fine particles fine particles usually used for immunoagglutination can be used as they are.
  • the most common fine particles are latex particles. Fine particles with a particle size of 0.01 to 0.5 microns are usually used.
  • the supporting method is a normal supporting method such as a physical adsorption method or a covalent bond method by hydrophobic interaction. Can be used.
  • water-soluble polymer to be covalently bound to the antibody examples include polyethylene glycols, polybulal alcohol, dextran, poly (N-butylpyrrolidone), polyacrylamide, polyacrylmorpholine, polyoxazoline, poly (N— 2- (hydroxypropyl) metatalamide) and the like. Of these, polyethylene glycols and polybutyl alcohol are preferred. Provided that the polymer is water-soluble at room temperature.
  • Polyethylene glycols are polymers having repeating units of —CH 2 CH 2 —.
  • polyethylene glycol homopolymer examples thereof include polyethylene glycol homopolymer, polyoxyethylated polyol, polyoxyethylated glycerin, polyoxyethylated polyol, polyoxyethylated sorbitol, and polyoxyethylated glucose.
  • Polye Tylene glycols are substituted at one end with an alkyl group having 1 to 4 carbon atoms, preferably 1 to 2 carbon atoms! /.
  • polyethylene glycol unsubstituted polyethylene glycol, monomethyl polyethylene glycol or polyoxyethyl glycerin is preferable, and monomethyl polyethylene glycol is particularly preferable.
  • the water-soluble polymer such as polyethylene glycol can be covalently bound to the antibody by a conventional method in which the water-soluble polymer is covalently bound to the peptide or protein.
  • a conventional method in which the water-soluble polymer is covalently bound to the peptide or protein.
  • 4-hydroxy-3-trobenzenesulfonate ester or N-hydroxysuccinimide ester of carboxylic acid (N-hydroxysuccinate) is attached to the end of a water-soluble polymer such as polyethylene glycol via a spacer if desired.
  • Succinimide or ⁇ -trophic carbonate or 2, 4, 5 trichlorophenol conjugated with amino group in antibody reacts to generate amide bond or urethane bond
  • the water-soluble polymer and the antibody can be covalently bonded.
  • the average molecular weight of the polymer is selected, for example, depending on the antibody used, but generally it is preferably about 200 to 10,000, more preferably 300 to 4,000 ⁇ ! /. If the molecular weight is too low, the antigen-antibody reaction may not be sufficiently suppressed. If the molecular weight is too high, the antibody covalently bonded to the water-soluble polymer may be dissolved in water.
  • the present invention as a method of quantifying the degree of aggregation, it is common to measure the turbidity produced by absorbance. However, the aggregate was not observed with the naked eye or aggregated. It can also be done by counting particles.
  • a first reagent in which fine particles carried on the same antigen as the antigen to be measured or an analog of the antigen are uniformly dispersed in a buffer solution such as a phosphate buffer, and a water-soluble polymer are covalently bonded.
  • a second reagent is prepared by dissolving the antibody in a buffer solution such as a phosphate buffer solution.
  • the first reagent and the second reagent to the sample containing the antigen to be measured to cause the antigen-antibody reaction, and determine the resulting agglutination rate, for example, at a wavelength of 800 nm using the 2-point end method Based on a calibration curve prepared in advance using a standard sample whose antigen concentration is already known, The antigen of can be quantified.
  • an antibody against an antigen, to which a water-soluble polymer is covalently bonded, and a fine particle carried on the antigen or an analog of the antigen An antigen quantification kit containing the above can be used.
  • the antibody against the antigen and the antibody to which the water-soluble polymer is covalently bonded, or for the fine particles carried on the antigen or analog of the antigen use the antibody and fine particles described in the quantification method as they are, respectively. Can do.
  • Adsorption of albumin to latex particles was performed as follows.
  • an anti-human albumin serum ⁇ fraction solution (manufactured by International Immunology Corporation, total protein concentration 6.5 g / dL) was used as an antibody.
  • lg PEGylation reagent was added and dissolved in 10 mL of phosphate buffer to prepare a PEGylation solution.
  • these antibody solution and PEGylation solution were mixed at a ratio of 1: 1 and left at room temperature for 1 hour to obtain a PEGylated antibody having a protein concentration of 3.25 gZdL.
  • the first reagent and the second reagent were prepared using latex particles adsorbed with albumin and PEGylated antibody.
  • the first reagent was used as a suspension with a latex concentration of 4% by adding 5 mL of phosphate buffer to 20 mL of human albumin-sensitized latex particle suspension.
  • 10 mL of a PEGylated anti-human albumin serum ⁇ fraction solution with a protein concentration of 3.25 g / dL was added to 15 mL of a phosphate buffer, and used as a solution with a protein concentration of 1.3 gZdL. This solution corresponds to a 20% concentration of the ⁇ fraction.
  • non-PEGylated anti-human albumin serum ⁇ fraction was diluted with a phosphate buffer to a protein concentration of 1.3 gZdL.
  • Comparative Example 1 lOOOmM sodium chloride sodium salt was added to anti-human albumin goat serum ⁇ fraction that had not been PEGylated in order to suppress the immune reaction, and the protein concentration was 1.3 g / dL. A fraction solution was prepared.
  • serum with a known albumin concentration was appropriately diluted with physiological saline and used.
  • composition of each reagent is as follows.
  • Second test composition (needle test)
  • Serum albumin was measured using a Hitachi 7170S type automatic analyzer. The sample was reacted with 270 L of the first reagent and 270 L of the second reagent against 2 L of serum, and between 19 and 30 photometric points at a wavelength of 800 nm (after R2 addition) In 1 minute to 4 minutes later, the change in absorbance was measured by the 2-point end method.
  • Table 1 shows the amount of change in absorbance when serum albumin was measured using the above reagents.
  • the reaction absorbance is suppressed to a measurable level. This is thought to be the result of albumin that tries to bind to the antibody by PEGylation of the antibody was sterically hindered and the absorbance was appropriately controlled.
  • the knowledge that the reaction absorbance can be freely controlled by PEGylating the antibody is the first of the present invention, and was completely unpredictable.
  • Serum albumin was measured using latex particles adsorbed with albumin and PEGylated antibodies.
  • the PEGylated anti-human albumin goat serum ⁇ fraction was prepared in the same manner as in Example 1, 2).
  • a first reagent and a second reagent were prepared in the same manner as in Example 1 using latex particles adsorbed with albumin and PEGylated antibodies.
  • a phosphate buffer As the first reagent, 10 mL of a phosphate buffer was added to 40 mL of a suspension of human albumin-sensitized latex particles and used as a suspension with a latex concentration of 4%.
  • a PEGylated anti-human albumin serum ⁇ fraction solution was added to 30 mL of a phosphate buffer, and used as a solution having a protein concentration of 1.3 gZdL.
  • composition of each reagent is as follows. Sodium dihydrogen phosphate dihydrate 20 mM pH 7. 50
  • Serum albumin concentration was measured using a Hitachi 7170S automatic analyzer, and 2 ⁇ L of serum as a sample was reacted with 270 ⁇ L of the first reagent and 270 ⁇ L of the second reagent. Between -30 photometric points (1 minute after R2 addition, equivalent to 4 minutes later), the change in absorbance was measured by the 2-point end method.
  • the albumin concentration was calculated from a calibration curve created using the multi-check calibration curve creation function of the model, using the serum standardized with protein standard serum CRM470 as the standard solution.
  • the correlation was confirmed using TIA method “N-Atsusei TIA Micro Alb” (Nittobo) as a control reagent.
  • the TIA reagent sample was a 100-fold diluted serum with physiological saline.
  • the measurement was similarly performed using a Hitachi 7170S type automatic analyzer according to the specified parameter. The measured result was multiplied by 100 to obtain the serum albumin value.
  • Table 2 shows the change in absorbance of each standard solution, and Fig. 1 shows the calibration curve.
  • Table 2 Method of the present invention using Hitachi 7 1700 S-type automatic analyzer
  • Serum albumin measurement by the conventional immunization method requires the ability to dilute the specimen to a measurable concentration. For this reason, Accuracy of sample dilution and surface of operability
  • the method of the present invention can be said to be a very useful method.
  • the correlation was confirmed with the TIA method as X and the method according to the present invention as Y.
  • the immunization method is known as the only method that can accurately measure, and the correlation with the ⁇ method, one of the immunization methods, has been confirmed.
  • the method of the present invention can accurately measure serum albumin. It can be said.
  • the measurement method of the present invention uses a high amount of an expensive antibody as a measurement reagent, does not develop a prozone phenomenon, and remains in a biological sample such as albumin at a high concentration without developing the sample.
  • the antigen which is a protein to be immunoassay can be measured.
  • FIG. 1 shows a calibration curve created by the measurement method of the present invention.
  • FIG. 2 shows the results of the correlation between the measurement method of the present invention and the sputum method when serum albumin is measured.

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Abstract

　競合的均一系免疫凝集測定法に用いる抗体として、水溶性ポリマーを共有結合した抗体を用いることにより、高濃度の蛋白質抗原を、希釈することなく、無希釈系で正確に測定できる。

Description

明 細 書
抗原の測定法およびそれに用いるキット
技術分野
[0001] 本発明は、抗原の測定法およびそれに用いるキットに関する。更に詳細には、本発 明は、試料中の抗原の競合的均一系免疫凝集測定法による測定法であって、生体 試料中に高濃度で存在する蛋白質であるアルブミンなどの抗原の測定に適した抗原 の測定法およびそれに用いるキットに関する。
背景技術
[0002] 血液試料に存在する蛋白質を測定する一つの方法として、ラテックス免疫比濁法 等の免疫比濁法が知られている。これらの方法は、多数の試料を短時間で測定でき るので、臨床検査業界で幅広く用いられている。しかし、アルブミンのような血中に 10 _3M程度の高濃度で存在する蛋白質をこのような方法で測定しょうとする場合、いろ いろ問題が発生する。つまり、この場合、試料として採取した血液検体を希釈して使 用する必要があり、測定前の操作が繁雑であるという問題があった。また、測定試薬 として用いる抗体を多量に使用する必要があり、測定試薬が高価になるという問題も あった。さらには、プロゾーン現象が起こりやすぐ高濃度域では測定できないことが あるという問題があった。その結果、免疫比濁法による、これら蛋白質の測定は、無 希釈系では、実用化されていないのが現状である。
[0003] ところで、免疫測定法には、上記の免疫比濁法に関連して、競合的均一系免疫凝 集測定法が知られている (特許文献 1、 2および 3)。競合的均一系免疫凝集測定法 とは、測定すべき抗原を含む試料と、該抗原に対する抗体と、その抗体と結合可能な 抗原を担持してある微細粒子とを混合し、該抗体と、試料中の抗原および微細粒子 が担持した抗原との間で、抗原抗体反応を競合させて、微細粒子が担持した抗原と 抗体との抗原抗体反応による凝集の度合!ヽから、測定すべき抗原を定量する方法で ある。この方法は、種々の工夫により、低濃度の抗原を測定できるというメリットがあり 、その観点からいくつ力研究がなされてきた。し力しながら、この方法を用いて、高濃 度の蛋白質を測定する場合には、検量線を作成しょうとすると、測定対象の蛋白質 濃度が 0の場合の測定ブランクが測定限界を超えてしまうため、測定不可能となる。 その結果、この方法を用いて高濃度の蛋白質を測定することは、ほとんど研究されて おらず、その結果、実用ィ匕もされていないのが現状である。
[0004] 特許文献 1：特開昭 57— 206859号公報
特許文献 2：特表昭 58 - 500874号公報
特許文献 3 :特開 2002— 296281号公報
発明の開示
発明が解決しょうとする課題
[0005] 従って、本発明の課題は、従来、高濃度の抗原を測定することには、ほとんど用い られて ヽなカゝつた競合的均一系免疫凝集測定法を用いて、無希釈系で抗原を測定 する、抗原の測定法を提供することにある。また、そのような測定法に用いる測定用キ ッ卜を提供すること〖こある。
課題を解決するための手段
[0006] そのような状況下、これらの問題を解決するため、本発明者らは、高濃度の蛋白質 を測定する点力もはほとんど検討されていな力つた競合的均一系免疫凝集測定法に より、試料中のアルブミンを測定することを検討した。その結果、驚くべきことに、競合 的均一系免疫凝集測定法に用いる抗体として、水溶性ポリマーを共有結合した抗体 を用いると、高濃度のアルブミンを、試料を希釈することなぐすなわち、無希釈系で 正確に測定できることが判明した。本発明はカゝかる経過により達成されたものである。
[0007] 従って、本発明は、測定すべき抗原を含む試料と、該抗原に対する抗体と、該抗原 と同じ抗原または該抗原の類似物であって該抗体と抗原抗体反応し得る類似物に担 持した微細粒子とを混合して、該抗体と、試料中の抗原および微細粒子が担持した 該抗原と同じ抗原または該抗原の類似物との間で、抗原抗体反応を競合させて、該 抗体と微細粒子が担持した該抗原と同じ抗原または該抗原の類似物との抗原抗体 反応による凝集の度合いから、測定すべき抗原を定量する競合的均一系免疫凝集 測定法にぉ 、て、該抗体は水溶性ポリマーが共有結合した抗体であることを特徴と する、抗原の測定法に関する。
[0008] 更に本発明は、測定すべき抗原に対する抗体であってかつ水溶性ポリマーが共有 結合した抗体と、測定すべき抗原と同じ抗原またはその抗原の類似物であって該抗 体と抗原抗体反応し得る類似物に担持した微細粒子を含む抗原測定用キットに関す る。
発明の効果
[0009] 本発明の測定法により、測定試薬である高価な抗体を少なく用い、プロゾーン現象 を発現することなぐかつ、試料を無希釈のまま、アルブミン等の生体試料中に高濃 度で存在する蛋白質である抗原を免疫測定することができる。
発明を実施するための最良の形態
[0010] 本発明の測定法は、競争免疫反応で、反応試薬および生成物のうちの、 1個のみ が濁りを有し、他の成分が水に溶解するということに基づいており、その原理を、以下 に例示して説明する。
まず、反応試薬として混合する対象として、（0試料由来の抗原、 GO該抗原と同じ 抗原またはその抗原の類似物と微細粒子との結合体、（m)試薬としての抗体を用い る力 これら（0- GiOの抗原、結合体および抗体は、すべて水に可溶あるいは均一分 散可能である。次いで、これらを混合して抗原抗体反応をさせると、（iv) GOの結合体と
(iii)の抗体との結合物、および（v) (i)の抗原と（iii)の抗体との結合物の 2つの抗原 抗体反応物が競合して生成する。 (iv)の結合物は水に不溶性で濁りが生じるのに対 し、（V)の結合物は水に可溶性である。従って、（iv)の結合物が多く形成されればされ るほど、反応液の濁度が増加する。
この競争反応では、 (0の抗原は、 GOの結合体と、限定量の（m)の抗体に対して競 争反応し、それによつて、生じる不溶性の（iv)の結合物の量を減少させると同時に、 反応溶液中の濁度を低下させる。そのため、試料中の抗原が高濃度になればなるほ ど、反応液の濁りが小さくなる。従って、濁りの度合いから試料中の抗原を測定するこ とがでさる。
[ooii] ところで、この競争免疫反応において、 (0の試料中の抗原の濃度が高い場合、 GO の結合体、 (iii)の抗体の濃度を高くしなければならない。この場合、 (iv)の結合物が 多量に形成され濁りが濃すぎて測定不能になりやすい。
本発明においては、試薬の抗体として、水溶性ポリマーが共有結合された抗体を 用いて抗原抗体反応を抑制し、反応系の濁りを、測定できる程度に減少させることが できる。
[0012] 本発明にお ヽて、測定対象の抗原は、生体試料に存在する物質、特に生体試料 に高濃度に存在する蛋白質が好適である。具体的には、アルブミン、 IgG、 IgA、 Ig Mが好適であり、アルブミン、 IgGがさらに好適である。特に、アルブミンは、試料を無 希釈で免疫測定法で定量することは、臨床検査業界では、実用化されていないにも かかわらず、本発明で実施可能な点から最も好適である。本発明において、試料と は、例えば、生体由来の液体試料であり、具体的には、血漿、血清、尿等を例示でき る。
本発明に用いる抗体とは、測定すべき抗原に対する抗体であり、そのような抗体で あればポリクローナル抗体、モノクローナル抗体のいずれをも用いることができる。
[0013] 本発明において、抗原の類似物とは、抗原に類似した構造をもち、かつ、抗体と抗 原抗体反応して結合可能な物質である。
微細粒子とは、免疫凝集反応に通常使用される微細粒子をそのまま使用すること ができる。最も一般的な微細粒子は、ラテックス粒子である。微細粒子は、通常 0. 01 〜0. 5ミクロンのものが使用される。
本発明において、測定対象の抗原と同じ抗原またはその類似物を微細粒子に担持 しておく場合、担持の方法は、疎水性相互作用による物理的吸着法や共有結合法 等の通常の担持する方法を用いることができる。
[0014] 抗体に共有結合させる水溶性ポリマーとしては、例えば、ポリエチレングリコール類 、ポリビュルアルコール、デキストラン、ポリ（N-ビュルピロリドン）、ポリアクリルアミド、 ポリアクロィルモルホリン、ポリオキサゾリン、ポリ（N—2—（ヒドロキシプロピル)メタタリ ルアミド）などが例示できる。なかでも、ポリエチレングリコール類、ポリビュルアルコー ルが好ましい。但し、ポリマーが室温で水溶性であることを条件とする。
ポリエチレングリコール類は、—CH CH O—の繰り返し単位を有するポリマーであ
2 2
れば特に限定されず、ポリエチレングリコール単独重合体、ポリオキシェチル化ポリ オール、ポリオキシェチル化グリセリン、ポリオキシェチル化ポリオール、ポリオキシェ チル化ソルビトールまたはポリオキシェチル化グルコースが例示できる。なお、ポリエ チレングリコール類は、一方の端部が炭素数 1〜4、好ましくは炭素数 1〜2のアルキ ル基で置換されて!、てもよ！/、。
ポリエチレングリコール類としては、非置換ポリエチレングリコール、モノメチルポリエ チレングリコールまたはポリオキシェチルイ匕グリセリンが好ましぐ特に、モノメチルポリ エチレングリコールであることが好ましい。
[0015] ポリエチレングリコール類のような水溶性ポリマーと抗体とを共有結合させるには、 ペプチドまたは蛋白質に水溶性ポリマーを共有結合させる慣用の方法によって行うこ とができる。例えば、ポリエチレングリコール類等の水溶性ポリマーの末端に、所望に よりスぺーサーを介して、カルボン酸の 4 -ヒドロキシ - 3 -トロベンゼンスルホネー トエステルまたは N -ヒドロキシスクシイミドエステル（N -ヒドロキシコハク酸イミド）、ま たは ρ -トロフエ-ルカーボネートまたは 2, 4, 5 トリクロルフエ-ルカーボネートを 結合させたものを、抗体中のアミノ基と反応させ、アミド結合またはウレタン結合を生 成することにより、水溶性ポリマーと抗体とを共有結合させることができる。
ポリマーの平均分子量は例えば、使用される抗体に応じて選択されるが、一般的に は、約 200〜10, 000であること力好ましく、 300〜4, 000であること力 ^より好まし!/、。 分子量が低すぎると抗原抗体反応を抑制することが不十分になることがあり、分子量 が高すぎると、水溶性ポリマーと共有結合した抗体が、水に溶けに《なることもある。
[0016] 本発明においては、凝集の度合いを定量する方法としては、通常、生成する濁りを 吸光度で測定するのが一般的であるが、凝集塊を肉眼で観察したり、凝集をしなか つた粒子を計数することによつても実施することができる。
本発明の測定法を実施するには、例えば、次の具体的な方法が挙げられる。まず、 試薬として、測定すべき抗原と同じ抗原または該抗原の類似物に担持した微細粒子 を、りん酸緩衝液などの緩衝液に均一分散した第一試薬、並びに、水溶性ポリマー が共有結合した抗体を、りん酸緩衝液などの緩衝液に溶解した第二試薬を調製する 。次いで、自動分析装置を用いて、測定すべき抗原を含む試料に、第一試薬および 第二試薬を加えて、抗原抗体反応をさせ、生じる凝集割合を、例えば、波長 800nm にて 2ポイントエンド法により吸光度変化量として測定し、得られた測定値から、予め 抗原濃度既知の標準試料を用いて作成した検量線に基づいて、目的とする試料中 の抗原を定量することができる。
[0017] このような本発明の定量方法を実現するためには、抗原に対する抗体であってか つ水溶性ポリマーが共有結合された抗体と、抗原またはその抗原の類似物に担持し た微細粒子とを含む抗原定量用キットを用いることができる。
抗原に対する抗体であってかつ水溶性ポリマーが共有結合された抗体、抗原また はその抗原の類似物に担持してある微細粒子は、それぞれ、定量方法で説明した抗 体、微細粒子をそのまま用いることができる。
[0018] 以下の実施例によって本発明を具体的に説明するが、これらは本発明の範囲を限 定するものではない。
実施例 1並びに比較例 1
杭体の PEG化の枪討
抗体に PEG (ポリエチレングリコール)を結合させることにより、抗原抗体反応を制御 することを目的として以下の実験を行った。なお、塩化ナトリウム等の免疫反応抑制 剤を、 PEG化されて 、な 、抗体に添加し同様の実験を行って比較をした。
[0019] 1)ヒトアルブミン感作ラテックス粒子の調製
ラテックス粒子へのアルブミンの吸着は以下のように行った。
1%濃度とした粒径 67nmのポリスチレン製ラテックス粒子懸濁液 lOOmLに、ヒト血 清アルブミン (スクリプス社製)をりん酸緩衝液に 10%となるように溶解した溶液 100 mLを混合し、室温にて 2時間攪拌した。そして、 18,000rpmで 3時間遠心分離を行 い、上清を廃棄し沈殿物を回収した。この沈殿物にりん酸緩衝液 lOOmLをカ卩え、沈 殿物を懸濁した後、再び遠心分離を行い、未吸着の剰余ヒト血清アルブミンを取り除 いた。さらに遠心分離後の沈殿物に、りん酸緩衝液 20mLを加え、沈殿物を懸濁し超 音波処理を行い、ラテックス粒子を完全に分散させた。このラテックス濃度 5%のヒトァ ルブミン感作ラテックス粒子懸濁液は、冷蔵にて保存した。
[0020] 2) PEG化抗ヒトアルブミンャギ血清 Ύフラクションの調製
PEG化試薬として、 CH 0 (CH CH 0)nCOCH CH CO— OSu (ただし、 OSuは、 H
3 2 2 2 2
OSu (N—ヒドロキシコハク酸イミド）の Hが除去された残基である）で表される試薬 (N OF社製、商品名： SUNBRIGHT ME-020CS PEG分子量 2000)を用いて行った。抗 体の PEG化は以下のように行った。
まず、抗体として抗ヒトアルブミンャギ血清 γフラクション溶液（International Immuno logy Corporation製、総タンパク濃度 6.5g/dL) 10mLを用いた。それとは別に lgの PEG化試薬をりん酸緩衝液 10mLに添加溶解し PEG化溶液として調製した。続、て 、これら抗体溶液と PEG化溶液を 1： 1で混合し、室温にて 1晚放置し、蛋白濃度 3. 2 5gZdLの PEG化抗体を得た。
[0021] 3)血清アルブミン測定試薬の調製
アルブミンを吸着させたラテックス粒子および PEG化した抗体を用いて、第一試薬 および第二試薬を調製した。
第一試薬は、ヒトアルブミン感作ラテックス粒子懸濁液 20mLに、りん酸緩衝液 5mL を加え、ラテックス濃度 4%の懸濁液として用いた。第二試薬は、蛋白濃度 3. 25g/ dLの PEG化抗ヒトアルブミンャギ血清 γフラクション溶液 10mLに、りん酸緩衝液 15 mLをカ卩え、蛋白濃度 1. 3gZdLの溶液として用いた。この溶液は、当該 γフラクショ ン 20%濃度にあたる。
また、対照試薬として、 PEG化を施していない抗ヒトアルブミンャギ血清 γフラクショ ンをりん酸緩衝液にて、蛋白濃度 1. 3gZdLとなるように希釈して使用した。
さらに、比較例 1として、 PEG化を施していない抗ヒトアルブミンャギ血清 γフラクシ ヨンに、免疫反応を抑止するために塩ィ匕ナトリウムを lOOOmM添加し、蛋白濃度 1. 3 g/dLの γフラクション溶液を調製した。
試料は、アルブミン濃度既知の血清を生理食塩水で適宜希釈して使用した。
[0022] 各試薬の組成は以下の通りである。
りん酸緩衝液糸且
りん酸二水素ナトリウム二水和物 20 mM pH 7. 50
EDTA- 2Na mM
第一試薬組成
りん酸二水素ナトリウム二水和物 20 mM pH 7. 50
EDTA- 2Na mM
ヒトアルブミン感作ラテックス粒子 第二試薬組成
りん酸二水素ナトリウム二水和物 20 mM pH 7. 50
EDTA- 2Na mM
PEG化抗ヒトアルブミンャギ血清
yフラクション .. 3gZdL (蛋白濃度)
[0023] 第二試蓉組成 (針照試蓉)
りん酸二水素ナトリウム二水和物 20 mM pH 7. 50
EDTA- 2Na mM
抗ヒトアルブミンャギ血清
γフラクション (未処理） 1. 3gZdL (蛋白濃度）
二 釦 比 ）
りん酸二水素ナトリウム二水和物 20 mM pH 7. 50
EDTA- 2Na mM
抗ヒトアルブミンャギ血清
γフラクション (未処理） 1. 3gZdL (蛋白濃度）
塩化ナトリウム 1000 mM
[0024] 4)吸光度測定
血清アルブミンの測定は日立 7170S型自動分析装置を用い、試料として血清 2 Lに対し第一試薬 270 レ第二試薬 270 Lを反応させ、波長 800nmにて 19〜3 0測光ポイント間 (R2添加後 1分後から 4分後に相当）において、 2ポイントエンド法に よる吸光度変化量を測定した。
[0025] 5)測定結果
上記試薬を用いて、血清アルブミンを測定した際の吸光度変化量を表 1に示した。
[0026] [表 1] 表 1 ： 曰立 7 1 7 0 S型自動分析装雷での血清アルブミンの吸光度変化量
Figure imgf000011_0001
[0027] 表 1に示したように、 PEG化抗体を使用した場合には、アルブミン濃度が高くなるに したがって、吸光度が減少する。これは、検体中のアルブミンと試薬に添加したラテツ タス粒子に結合したアルブミンの競争反応によるものである。
さらに、本発明法では反応に用いる抗体力 SPEG化されているため、反応吸光度が 測定可能なレベルに抑えられている。これは、抗体を PEG化することにより、抗体に 結合しょうとするアルブミンが、立体障害を受け、吸光度が適切にコントロールされた 結果と考えられる。しかし、抗体を PEG化することにより反応吸光度を自在にコント口 ールしうる知見は、本発明が初めてのものであり、まったく予測されがたいものであつ た。
一方、 PEG化していない抗体を使用した場合には、抗体とアルブミン感作ラテック ス粒子との反応が制御されずに、自動分析装置の吸光度測定限界値を超えてしまい 、全く測定できなくなってしまう。同様に塩ィ匕ナトリウムなどの免疫反応抑制剤を用い た場合にぉ 、ても、測定限界値を超えてしま 、測定できなかった。
[0028] 実施例 2
血清アルブミンの測定
アルブミンを吸着させたラテックス粒子および PEG化した抗体を用いて、血清アル ブミンの測定を行った。
1)ヒトアルブミン感作ラテックス粒子の調製
1%濃度とした粒径 67nmのポリスチレン製ラテックス粒子懸濁液 200mLに、ヒト血 清アルブミンをりん酸緩衝液に 10%となるように溶解した溶液 200mLを混合し、室 温にて 2時間攪拌した。その後の遠心分離操作は、実施例 1と同様に行った。遠心 分離後の沈殿物に、りん酸緩衝液 40mLを加え、沈殿物を懸濁後、超音波処理を行 いラテックス粒子を分散させ、実施例 1と同じぐラテックス濃度 5%のヒトアルブミン感 作ラテックス粒子懸濁液を得た。
[0029] 2) PEG化抗ヒトアルブミンャギ血清 Ύフラクションの調製
PEG化抗ヒトアルブミンャギ血清 γフラクションは、実施例 1の 2)と同様にして調製 した。
3)血清アルブミン測定試薬の調製
アルブミンを吸着させたラテックス粒子および PEG化した抗体を用いて、実施例 1と 同様、第一試薬および第二試薬を調製した。
第一試薬は、ヒトアルブミン感作ラテックス粒子懸濁液 40mLに、りん酸緩衝液 10m Lを加え、ラテックス濃度 4%の懸濁液として用いた。第二試薬は、 PEG化抗ヒトアル ブミンャギ血清 γフラクション溶液 20mLに、りん酸緩衝液 30mLをカ卩え、蛋白濃度 1 . 3gZdLの溶液として用いた。
[0030] 各試薬の組成は以下の通りである。 りん酸二水素ナトリウム二水和物 20 mM pH 7. 50
EDTA- 2Na 1 mM
ヒトアルブミン感作ラテックス粒子 4% (v/v)
第二試薬組成
りん酸二水素ナトリウム二水和物 20 mM pH 7. 50
EDTA- 2Na 1 mM
PEG化抗ヒトアルブミンャギ血清
γフラクション 1. 3gZdL (蛋白濃度）
[0031] 4)吸光度沏 I定
血清アルブミン濃度の測定は日立 7170S型自動分析装置を用い、試料として血清 2 μ Lに対し第一試薬 270 μ L、第二試薬 270 μ Lを反応させ、波長 800nmにて 19 〜30測光ポイント間（R2添加後 1分後力 4分後に相当）において、 2ポイントエンド 法による吸光度変化量を測定した。
アルブミン濃度は、蛋白標準血清 CRM470にて値付けされた血清を標準液とし、 当該機種の多点検量線作成機能を用いて作成された検量線より算出させた。また、 TIA法の「N—アツセィ TIA Micro Alb」（日東紡績）を対照試薬として相関性の確 認を行った。なお、 TIA法試薬の試料は、血清を生理食塩水で 100倍に希釈したも のを使用した。測定は同様に日立 7170S型自動分析装置を使用し、指定パラメータ 一にしたがって行った。測定された結果を 100倍して血清アルブミン値とした。
[0032] 5)測定結果
A)本発明の測定法の検量線
各標準液の吸光度変化量を表 2に、また検量線を図 1に示した。
[0033] [表 2] 表 2 ： 日立 7 1 7 0 S型自動分析装置での本発明法
における各標準液の吸光度変化量
Figure imgf000013_0001
[0034] 表 2および図 1に示したように、ラテックス粒子へのアルブミン吸着量および PEG化 抗体をコントロールすることによって、血清検体を無希釈で測定可能となる。また、本 発明法では、競争反応を利用するため、アルブミン濃度が高くなるにしたがって吸光 度が減少する。このため、免疫反応を利用した測定試薬で問題となるプロゾーン現象 の回避が可能となった。
これまでの免疫法による血清アルブミン測定は、検体を測定可能な濃度まで希釈 する必要がある力 本発明法は無希釈のまま測定に供することができる。このため、 検体希釈の正確性や操作性の面力 本発明法は非常に有益な方法であるといえる
[0035] B)TIA法との相関性
血清アルブミン測定による本発明法と TIA法との相関性の結果を図 2に示した。
TIA法を X、本発明法を Yとして、相関性を確認したところ、 Y=0. 97Χ+0. 05、 相関係数 0. 974 (Ν = 30)と良好な結果が得られた。血清アルブミン測定において 免疫法は唯一正確に測定できる方法として知られており、免疫法の一つである ΤΙΑ 法との相関性が確認されたことは、本発明法が血清アルブミンを正確に測定できると いえる。
産業上の利用可能性
[0036] 本発明の測定法により、測定試薬である高価な抗体を少なく用い、プロゾーン現象 を発現することなぐかつ、試料を無希釈のまま、アルブミン等の生体試料中に高濃 度で存在する蛋白質である抗原を免疫測定することができる。
図面の簡単な説明
[0037] [図 1]本発明の測定法により作成した検量線を示す。
[図 2]血清アルブミンを測定した場合の本発明の測定法と ΤΙΑ法との相関性の結果を 示す。

Claims

請求の範囲
[1] 測定すべき抗原を含む試料と、該抗原に対する抗体と、該抗原と同じ抗原または 該抗原の類似物であって該抗体と抗原抗体反応し得る類似物に担持した微細粒子 とを混合して、該抗体と、試料中の抗原および微細粒子が担持した該抗原と同じ抗 原または該抗原の類似物との間で、抗原抗体反応を競合させて、該抗体と微細粒子 が担持した該抗原と同じ抗原または該抗原の類似物との抗原抗体反応による凝集の 度合 ヽから、測定すべき抗原を定量する競合的均一系免疫凝集測定法にぉ ヽて、 該抗体は水溶性ポリマーが共有結合した抗体であることを特徴とする、抗原の測定 法。
[2] 水溶性ポリマーがポリエチレングリコール類、ポリプロピレングリコール単独重合体 またはポリビニルアルコールである請求項 1の測定法。
[3] 水溶性ポリマーがポリエチレングリコール類である請求項 1の測定法。
[4] 測定すべき抗原が生体試料中に高濃度に存在する蛋白質である請求項 1から 3の いずれかの測定法。
[5] 測定すべき抗原がアルブミンである請求項 4の測定法。
[6] 測定すべき抗原を含む試料を希釈することなく実施する請求項 1から 5のいずれか の測定法。
[7] 測定すべき抗原に対する抗体であってかつ水溶性ポリマーが共有結合した抗体と 、測定すべき抗原と同じ抗原またはその抗原の類似物であって該抗体と抗原抗体反 応し得る類似物に担持した微細粒子を含む、競合的均一系免疫凝集測定法により 抗原を測定するための抗原測定用キット。
[8] 水溶性ポリマーがポリエチレングリコール類、ポリプロピレングリコール単独重合体 またはポリビュルアルコールである請求項 6のキット。
[9] 水溶性ポリマーがポリエチレングリコール類である請求項 7のキット。
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CN2006800429561A CN101310186B (zh) 2005-11-18 2006-11-10 测定抗原的方法和用于其的试剂盒
JP2007545223A JP5239340B2 (ja) 2005-11-18 2006-11-10 抗原の測定法およびそれに用いるキット
KR1020087011402A KR101298433B1 (ko) 2005-11-18 2006-11-10 항원을 측정하는 방법 및 여기에 사용되는 키트
EP06823308A EP1950565B1 (en) 2005-11-18 2006-11-10 Method of assaying antigen
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2009031252A (ja) * 2007-06-29 2009-02-12 Nitto Boseki Co Ltd 物質の測定法およびそれに用いるキット
CN102944672A (zh) * 2012-11-16 2013-02-27 李方和 采用光激发化学发光免疫分析对血清中的待测靶物质进行定性与定量检测的方法
WO2019049395A1 (ja) * 2017-09-08 2019-03-14 アルフレッサファーマ株式会社 分析装置および分析方法

Families Citing this family (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8293487B1 (en) * 2012-01-06 2012-10-23 Jiandi Zhang Zestern, a simple, fast, specific and quantifiable improvement of immunodetection process
CN103293299B (zh) * 2012-02-24 2016-06-08 珀金埃尔默医学诊断产品（上海）有限公司 拓宽双抗体夹心免疫检测浓度范围的方法及其试剂盒
CN102680712A (zh) * 2012-06-18 2012-09-19 王钊 竞争法胶乳颗粒增强免疫比浊bnp检测试剂盒及其制备方法
US10588541B2 (en) 2014-07-15 2020-03-17 General Electric Company Magnetic tracker system and method for use for surgical navigation
US10076267B2 (en) 2014-10-03 2018-09-18 General Electric Company Methods and systems for improved navigation
CN107741493A (zh) * 2017-09-30 2018-02-27 湖南海源医疗科技股份有限公司 一种采用免疫竞争比浊法测定尿微量白蛋白的试剂盒
CN109813908A (zh) * 2018-12-29 2019-05-28 宁波普瑞柏生物技术股份有限公司 消除胱抑素c检测中钩状效应的方法和试剂盒
US20220276232A1 (en) * 2021-02-26 2022-09-01 Canon Kabushiki Kaisha Latex agglutination reaction sensitizer, latex agglutination reagent, and method for measuring target substance in specimen by latex agglutination method using the same
JP2022132100A (ja) * 2021-02-26 2022-09-07 キヤノン株式会社 ラテックス凝集反応増感剤、ラテックス凝集試薬、及びそれを用いたラテックス凝集法による検体中の標的物質の測定方法
CN116148462B (zh) * 2021-11-22 2025-11-18 菲鹏生物股份有限公司 一种捕获法检测抗体的方法和应用
CN120847419B (zh) * 2025-09-22 2025-12-16 北京万泰德瑞诊断技术有限公司 一种可溶性生长刺激表达基因2蛋白测定试剂盒、制备方法及应用

Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS57206859A (en) 1981-03-16 1982-12-18 Intanashiyonaru Inst Obu Seriy Method of examining grain coagulation reaction
JPS58500874A (ja) 1981-06-02 1983-05-26 エレクトロ−ヌ−　クレオニツクス、インコ−ポレ−テツド 免疫沈殿分析
JPS6290538A (ja) * 1985-10-17 1987-04-25 Konishiroku Photo Ind Co Ltd 分析素子
JPH0264459A (ja) * 1988-07-05 1990-03-05 Boehringer Mannheim Gmbh 結合可能の物質を測定する方法及び試薬
JPH09304389A (ja) * 1996-05-15 1997-11-28 Sekisui Chem Co Ltd 免疫測定試薬および免疫測定法
JPH11344492A (ja) * 1998-06-01 1999-12-14 Eiken Chem Co Ltd 免疫学的凝集反応試薬およびこれを用いたプロゾーン現象の抑制方法
JP2001091516A (ja) * 1999-09-24 2001-04-06 Sekisui Chem Co Ltd ヒトα−フェトプロテインの定量法および測定キット
JP2002296281A (ja) 2001-03-07 2002-10-09 F Hoffmann La Roche Ag 改良された均一系イムノアッセイ法
JP2004196777A (ja) * 2002-12-02 2004-07-15 Toray Ind Inc 生理活性物質含有材料およびその製造方法
WO2004060041A2 (en) * 2002-12-30 2004-07-22 Biogen Idec Ma Inc. Kim-1 antagonists and use to modulate immune system

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4732863A (en) * 1984-12-31 1988-03-22 University Of New Mexico PEG-modified antibody with reduced affinity for cell surface Fc receptors
US4868106A (en) * 1985-10-17 1989-09-19 Konishiroku Photo Industry Co., Ltd. Analytical element and method for determining a component in a test sample
US7234937B2 (en) * 1999-11-30 2007-06-26 Orametrix, Inc. Unified workstation for virtual craniofacial diagnosis, treatment planning and therapeutics
US20050129616A1 (en) * 2001-05-25 2005-06-16 Human Genome Sciences, Inc. Antibodies that immunospecifically bind to TRAIL receptors
WO2004013287A2 (en) * 2002-08-02 2004-02-12 Human Genome Sciences, Inc. Antibodies against c3a receptor
US7489786B2 (en) * 2002-12-11 2009-02-10 Ira Marlowe Audio device integration system

Patent Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS57206859A (en) 1981-03-16 1982-12-18 Intanashiyonaru Inst Obu Seriy Method of examining grain coagulation reaction
JPS58500874A (ja) 1981-06-02 1983-05-26 エレクトロ−ヌ−　クレオニツクス、インコ−ポレ−テツド 免疫沈殿分析
JPS6290538A (ja) * 1985-10-17 1987-04-25 Konishiroku Photo Ind Co Ltd 分析素子
JPH0264459A (ja) * 1988-07-05 1990-03-05 Boehringer Mannheim Gmbh 結合可能の物質を測定する方法及び試薬
JPH09304389A (ja) * 1996-05-15 1997-11-28 Sekisui Chem Co Ltd 免疫測定試薬および免疫測定法
JPH11344492A (ja) * 1998-06-01 1999-12-14 Eiken Chem Co Ltd 免疫学的凝集反応試薬およびこれを用いたプロゾーン現象の抑制方法
JP2001091516A (ja) * 1999-09-24 2001-04-06 Sekisui Chem Co Ltd ヒトα−フェトプロテインの定量法および測定キット
JP2002296281A (ja) 2001-03-07 2002-10-09 F Hoffmann La Roche Ag 改良された均一系イムノアッセイ法
JP2004196777A (ja) * 2002-12-02 2004-07-15 Toray Ind Inc 生理活性物質含有材料およびその製造方法
WO2004060041A2 (en) * 2002-12-30 2004-07-22 Biogen Idec Ma Inc. Kim-1 antagonists and use to modulate immune system

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
See also references of EP1950565A4 *
TOMIYAMA H. ET AL.: "Polyethylene Glycol (PEG) Shiyaku o Mochiita Kansetsu Ko Globulin Shiken no Kento", THE JOURNAL OF CLINICAL LABORATORY INSTRUMENTS AND REAGENTS, vol. 21, no. 3, 1998, pages 251 - 257, XP010227588 *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2009031252A (ja) * 2007-06-29 2009-02-12 Nitto Boseki Co Ltd 物質の測定法およびそれに用いるキット
CN102944672A (zh) * 2012-11-16 2013-02-27 李方和 采用光激发化学发光免疫分析对血清中的待测靶物质进行定性与定量检测的方法
CN102944672B (zh) * 2012-11-16 2015-05-20 李方和 采用光激发化学发光免疫分析对血清中的待测靶物质进行定性与定量检测的方法
WO2019049395A1 (ja) * 2017-09-08 2019-03-14 アルフレッサファーマ株式会社 分析装置および分析方法

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