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WO2006080087A1 - 抗ストレス物質のスクリーニング方法及び抗ストレス物質 - Google Patents

抗ストレス物質のスクリーニング方法及び抗ストレス物質 Download PDF

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WO2006080087A1 PCT/JP2005/001358 JP2005001358W WO2006080087A1 WO 2006080087 A1 WO2006080087 A1 WO 2006080087A1 JP 2005001358 W JP2005001358 W JP 2005001358W WO 2006080087 A1 WO2006080087 A1 WO 2006080087A1
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    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
    • G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
    • G01N33/5082—Supracellular entities, e.g. tissue, organisms
    • G01N33/5088—Supracellular entities, e.g. tissue, organisms of vertebrates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/18—Antipsychotics, i.e. neuroleptics; Drugs for mania or schizophrenia

Definitions

  • the present invention relates to an anti-stress substance, particularly a drug for improving chronic stress, and an efficient screening method for a compound that can be the drug.
  • Non-Patent Document 1 raised above, by running on a treadmill, After stress was applied to rats, BE, which is also secreted by the hypothalamic force, was measured, and it was found that the amount of BE increased significantly as the same exercise was repeated over a long period of time, but the plasma corticosterone concentration As a result, it is concluded that there is no relationship between BE and stress.
  • exercise and sports increase BE concentration in the center regardless of the nonspecific reaction by the hypothalamic-pituitary-adrenocortical system, and are related to various metabolic increases during stress and the delay or reduction of stress fatigue. It only makes you guess that you will speak.
  • Patent Document 1 International Publication WO02Z34257
  • Non-Patent Document 1 Shigeru Asahina et al., Physical Fitness 52 (2003), p.159-166
  • Non-Patent Document 2 Fumiko Mimasa et al., Physical Fitness 45 (1996), p.519-526 Disclosure of the invention
  • the method for producing an experimental model animal of the present invention is a method of creating a chronic stress state by administering L-tritophan, and for example, a rat can be used as the experimental model animal.
  • the screening method for an anti-stress substance of the present invention is characterized in that the test substance is administered to an experimental model animal that has been brought into a chronic stress state by administering L-tritophan, and the urinary MHPGZNA ratio excreted thereafter is used as an index. It is a method to check the presence or absence of the improvement.
  • the antistress substance of the present invention is an antistress substance obtained by the screening method of the present invention, and for example, ⁇ -endorphin can be used as an antistress substance.
  • antistress materials capable of coping with stress can be efficiently screened.
  • FIG. 1 is a diagram showing a neurological immune system response to chronic emotional stress and input of tributophan information and a physiological relationship in modification by ⁇ -endorphin.
  • Stress includes pleasant stress (eustress: stress that is beneficial to health) and discomfort.
  • the force that mainly means the stress as the latter is not necessarily limited thereto.
  • the method for producing an experimental model animal in a stress state of the present invention includes the administration of L-tribtophan.
  • the animals that can be modeled are animals that are widely used as experimental animals, such as rats, mice, and rabbits, but are not limited thereto. Moreover, it can also target a human.
  • a method of drinking (taking) which may be either intravenous administration or intraperitoneal administration.
  • administration to the center is also conceivable, but administration to the center is very difficult experimentally, and the intravenous administration and drinking method are more effective for animals than the administration to the center.
  • L-tributophan can be appropriately changed depending on the body weight of the target animal, the target animal, etc. In the case of a force rat, it is sufficient to have 50 mgZ body weight kg or more, and approximately lOOmgZ body weight kg.
  • an experimental animal to which L-tributophan has been administered as described above is used. That is, after creating a chronic stress state by administration of L-tribtophan, a test substance that is an anti-stress substance is administered and the anti-stress effect is measured. The anti-stress effect is measured by comparing the ratio of the total amount of urinary 3-Methoxy-4-hydroxyphenylglycol (MHPG) and noradrenaline (NA) excreted within a certain period of time after administration of L-tritophan. The amount of both may be measured using an appropriate quantitative method such as HPLC.
  • MHPG urinary 3-Methoxy-4-hydroxyphenylglycol
  • NA noradrenaline
  • the urine collected is usually 24 hours after administration, taking into account the metabolism of L-tritophan, etc., but may be changed appropriately depending on the experimental conditions.
  • the effect of the test substance can be determined.
  • the force that can be seen when the MHPGZNA ratio increases when L-tribtophan is administered. In this case, the effect judgment is excluded.
  • the test substance should be administered at a sufficient washout after the previous L-tritophan administration in order to eliminate the effects of L-tryptophan administered previously. A period of about 1 week is preferable.
  • the test substance may be administered at the same time as the administration of L-tritophan or the administration power of L-tritophan, after a while, and preferably at the same time as the administration of L-tryptophan.
  • Any administration method can be used as long as it is in the periphery.
  • intravenous administration or intraperitoneal administration can be used in the same manner as L tributofan administration. In the case of a human dog, etc., it may be taken (taken).
  • a group of 6 rats was chronically stressed by administering L-tritophan. Do not administer ⁇ -endorphin !, both in the case of administration, and in the case of administration! In addition, urinary 3-Methoxy-4-hydroxyphenylglycol (MHP G) and urinary excretion 24 hours after administration of L-tryptophan.
  • MHP G urinary 3-Methoxy-4-hydroxyphenylglycol
  • N noradrenaline
  • test rats were 200-260 g Wistar female rats that were fed with free intake of food and water under a light-dark cycle at room temperature 22 ° C, 7: 00-19: 00 (light hours). Japan SLC) was used.
  • the MHPGZNA ratio in the chronic stress state decreased in 4 out of 6 animals (# 1, 2, 4, 5) compared to the normal state, whereas when the BE was administered, the MHPG ZNA ratio was not administered in the BE Two out of six rats appeared to rise to normal and almost returned to normal (# 4, 5: 33% recovered).
  • Figure 1 shows the neurological immune system response to chronic emotional stress and the input of tributophan information and the physiological relevance of modification by ⁇ -endorphin.
  • Chronic stress caused by repeated stress or sustained stress leads to an increase in the concentration of tributophan in the brain, and the limbic system of the hypothalamus, such as the amygdala, is the center of emotional expression ( It is thought that the circuit leading to the hypothalamus pronucleus) and the activation of BE existing in this area are promoted.
  • Centrally produced BE may be expressed as neurogenic, for example, by increasing the stress threshold in the limbic region to delay the onset of stress, resulting in a reduction in stress.
  • A elevation of noradrenaline
  • AC TH corticotropin
  • test substance for example, BE in the present application
  • the test substance deemed effective by this method synergizes with endogenous BE generated in the center to cause in vivo homeostasis mechanism, particularly neuroimmune system (increased T cell activity).
  • the degree of improvement in the chronic stress state can be determined by using rats that have been brought into a chronic stress state by administration of tributophan and then measuring the ratio of MHPGZNA excreted in urine.
  • an anti-stress agent for relieving chronic stress can be efficiently screened.
  • antistress substances particularly antistress substances against chronic stress

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Abstract

　ストレスに対処可能な抗ストレス物資を効率よくスクリーニングすることを目的として、ラット等の実験動物に、Ｌ−トリプトファンを投与しその後２４時間に排泄された尿総量中のＭＨＰＧ／ＮＡ排泄比を測定する。次いで、被験物質とＬ−トリプトファンを同時投与しその後２４時間に排泄された尿総量中のＭＨＰＧ／ＮＡ比を測定し、両者の変化を見て、被験物質の抗ストレス作用を調べる。この方法で効果ありとされた物質（例えば本願におけるＢＥ）は、中枢で生じた内因性ＢＥとの相乗的作用で生体内ホメオスタシス機構、特に神経−免疫系（Ｔ細胞活性亢進）の調節に作用させるものであり、効果が高い抗ストレス作用剤を迅速かつ確実にスクリーニングできるものと考えられる。

Description

抗ストレス物質のスクリーニング方法及び抗ストレス物質
技術分野
[0001] 本発明は抗ストレス物質、特に慢性的なストレスを改善するための薬剤、及び当該 薬剤となりうる化合物の効率的なスクリーニング方法に関する。
背景技術
[0002] 近年における社会的問題の一つとして、ストレスによる精神的、肉体的影響が挙げ られる。ストレスとは、社会一般には何らかの原因によって生じた状態を意味すること が多いが、厳密な意味においては、この状態を意味するのではなぐ 1976年にセリ ェが提唱した「外界からのあらゆる要求に対する生体の非特異的な反応」を言う。す なわち、生理的ストレス因子（生理的ストレッサー）、例えば、温度や光などの物理的 ストレッサー、有害化学物質や金属イオンなどの化学的ストレッサー、飢餓、炎症、感 染などの複合ストレッサーや、心理的ストレッサー、例えば、家族の病気'死亡、離婚 などの生活上のストレッサー、人間関係などの職業上のストレッサー、戦争や災害な どその他の種々のストレッサーによって引き起こされ、その結果、体内に生じた重要 な生物学的変化 (ストレス)を言うのであって、この生物学的な変化が症候 (一般適応 症候群）となって現れると言われている。そして、本願においては、これらのストレスを 抑制する化合物を抗ストレス物質と称する。
[0003] 近年、いわゆるストレスに対して種々の事柄が明らかにされており、一定レベル以上 の運動負荷によってストレス状態に置かれた生体では、視床下部 下垂体 副腎皮 質系による非特異的反応が惹起され、 ACTHやコルチコステロンなどのストレス抵抗 ホルモンが分泌されると言われている（非特許文献 1参照)。また、運動やスポーツに はいわゆるストレス解消効果が期待されており、実際に身体的ストレス状態や精神的 ストレス状態を鎮静ィ匕させる効果が認められている。そして、このときに血中に増加す る β エンドルフィン（「ΒΕ」と称する）と呼ばれる内因性麻薬様物質が運動のリラクセ ーシヨン効果に影響を与えるとも言われて 、る (非特許文献 2参照)。
[0004] ところが、先に上げた非特許文献 1において、トレッドミル上を走行させることにより ラットにストレスを負荷した後、視床下部力も分泌される BEを測定したところ、長期間 にわたつて同様の運動を繰り返すほど著しく BE量が増加することが見出されたが、 血漿コルチコステロン濃度の上昇が必ずしも伴わないことから、結果的には BEとスト レスとの関係はないと結論づけられている。つまり、運動やスポーツは視床下部 下 垂体-副腎皮質系による非特異的反応と関係なく中枢内における BE濃度を上昇さ せ、ストレス時の各種代謝亢進やストレス性疲労の遅延や軽減と関係して ヽることを 推測させるにすぎない。
[0005] BEなどのォピオイド系物質は脳 血液関門を通過できないことより、中枢性の BEと 末梢系の BEとではその役割が異なって 、ることを否定できな 、。中枢にぉ 、ては、 前記非特許文献 1によれば、長期間の繰り返し運動を中止した後に視床下部の BE が増加することより、情動（例えば倦怠感）の発現に何らかの関係があることが示唆さ れている。一方、末梢において血漿中 BEも増加し、脾臓からグルカゴンを上昇させ て、糖代謝に関係する内分泌系への影響がある点についても示唆されているが（非 特許文献 1参照）、これまでに末梢系における BE投与と免疫系の回復を介在させた ストレス解消との関連は明らかにされていない。
[0006] このようにストレスに関し、生体内 BEの出現との関係については種々の研究が進め られている力 現時点ではストレッサーとストレスとの関係が科学的に解明されている とは言い切れず、このようなストレッサー、特に慢性的なストレスに対する防御物質と して、何が有効なの力推測の域を出ず全く手探りの状況である。
[0007] 一方、本願発明者は、ラットをトレッドミル上で走行させた上で、トリブトファンの脳内 への取り込みと中枢性神経の疲労との関連を調べていたところ、トレッドミル上の走行 がトリブトファンの脳内への取り込みを促進し、トリブトファンが中枢性神経の疲労原 因物質であることを突き止め、この取り込みを抑制する物質（中枢性疲労回復または 予防剤）を探索すベぐトレッドミル上の走行を利用した中枢性神経の疲労回復 (予 防)剤をスクリーニングする方法を考案して 、る（特許文献 1参照)。
特許文献 1：国際公開公報 WO02Z34257
非特許文献 1：朝比奈 茂ら、体力科学 52(2003), p.159- 166
非特許文献 2 :見正 富美子ら、体力科学 45(1996), p.519-526 発明の開示
発明が解決しょうとする課題
[0008] このような状況下において、本願発明者はトレッドミル上の走行が慢性的なストレス をラットに負荷していることに着目し、トリブトファンの投与によっても同様なストレス状 態を作り出せることを発見した。そして、こうして得られたストレス状態のラットを用いて 種々の代謝物質の測定を行ったところ、尿中におけるノルアドレナリン (NA)とその代 謝物質の主要なもののひとつである 3-Methoxy-4-hydroxyphenylglycol (MHPG)の 排泄量比がストレス状態と正常な状態とで異なり、 BEの投与によってこの比が正常 状態に戻ることを見出し、本願発明を完成するに至った。
課題を解決するための手段
[0009] 本発明の実験モデル動物の作製方法は L トリブトファンを投与することにより慢性 ストレス状態を作り出す方法であって、当該実験モデル動物として、例えばラットを用 いることがでさる。
[0010] また、本発明の抗ストレス物質のスクリーニング方法は、 L トリブトファンを投与する ことにより慢性ストレス状態にした実験モデル動物に被験物質を投与し、その後に排 泄される尿中 MHPGZNA比を指標としてその改善の有無を調べる方法である。
[0011] そして、本発明の抗ストレス物質は、上記本発明のスクリーニング方法で得られた抗 ストレス物質であって、例えば β エンドルフィンを抗ストレス物質として利用すること ができる。
発明の効果
[0012] 本発明によれば、ストレスに対処可能な抗ストレス物資を効率よくスクリーニングする ことができる。
図面の簡単な説明
[0013] [図 1]慢性的情動ストレスとトリブトファン情報の入力に対する神経 免疫系応答と β エンドルフィンによる修飾における生理学的な関連を示す図である。
発明を実施するための最良の形態
[0014] ストレスには、快ストレス（eustress:健康にとって有益になるようなストレス）と、不快ス トレス（distress:生体にとって有害となるようなストレス）とがあると言われている力 本 発明においては、主として後者としてのストレスを意味する力 必ずしもそれに限られ るものではない。
[0015] 本発明のストレス状態である実験モデル動物の作製方法は、 L トリブトファンを投 与することをその内容とするものである。モデルにできる動物は、広く一般に実験動 物として用いられる動物、例えばラット、マウス、ゥサギ等であるが、これらに限定され るものではない。また、ヒトを対象とすることもできる。投与の方法も、静脈内投与もしく は腹腔内投与の方法いずれであってもよぐヒトゃ犬等をモデルにする場合にあって は、もちろん飲用（服用）による方法も行い得る。もちろん、中枢への投与も考えられ るが、中枢への投与は実験的にも非常に困難な方法であり、前記静脈内への投与や 飲用による方法は中枢内への投与に比べると動物に対して物理的な負荷等を与え ることなくストレス状態を作り出せる点で非常に有用な方法であると言える。 L—トリブト ファンの投与量は対象動物の体重や対象動物等によって適宜変更できるものである 力 ラットの場合には 50mgZ体重 kg以上、おおよそ lOOmgZ体重 kgもあれば十分 である。
[0016] 本発明の抗ストレス物質のスクリーニング方法においては、上記のようにして L—トリ ブトファンが投与された実験動物が用いられる。すなわち、 L トリブトファンの投与に より慢性ストレス状態を作り出した上で、抗ストレス物質となる被験物質を投与して、抗 ストレス効果を測定すればよい。抗ストレス効果の測定は、 L トリブトファンの投与後 一定時間内に排出される尿中の 3-Methoxy-4-hydroxyphenylglycol (MHPG)とノル アドレナリン (NA)の総量の比を比較することにより行われる。両者の量は、 HPLCな ど適当な定量方法などを用いて測定すればよい。また、集める尿は、 L トリブトファン の代謝等を考慮すれば通常投与後 24時間で十分であるが、実験条件によって適宜 変更しても差し支えない。こうして被験物質の非投与時と投与時における MHPGZ NA比を比較することによって、被験物質の効果を知ることができる。なお、 L トリブト ファンを投与した際に MHPGZNA比が上昇する場合が見られる力 この場合は効 果の判定力 除外される。また、被験物質の投与時期は、先に投与した L トリプトフ アンによる影響を除くため、先の L トリブトファンの投薬の後十分なゥォッシュアゥト時 間、好ましくは 1週間程度の期間を置くのがよい。
[0017] 被験物質の投与は、 L トリブトファンの投与と同時あるいは L トリブトファンの投与 力 しばらく時間が経って力 の投与いずれでもよいが、好ましくは L トリプトファンの 投与と同時である。投与用法も末梢におけるものであればいずれの方法でもよぐ L トリブトファンの投与と同じぐ例えば静脈内投与や腹腔内投与の方法が挙げられる。 また、ヒトゃ犬等の場合には、飲用（服用）することにしても差し支えない。
[0018] このように、 L トリブトファンの投与により作り出された慢性的ストレス状態の動物に 被験物質を投与すれば、極めて簡単に抗ストレス物質、特に慢性的なストレス状態を 改善可能な薬物を見つけ出すことができる。
[0019] 以下、本発明について下記実施例に基づきさらに詳細に説明するが、本発明は下 記の実施例に限定されな ヽのは言うまでもな 、。
実施例 1
[0020] 一群 6匹のラットに L トリブトファンを投与することにより慢性ストレス状態にした。そ して、 β エンドルフィンを投与しな!、場合と投与した場合の双方にお!、て、 L トリプ トフアン投与後 24時間に排泄した尿中の 3-Methoxy-4-hydroxyphenylglycol (MHP G)及びノルアドレナリン（NA)を下記条件による HPLC (Yamamoto et. al.， Brain Research Bulletin 43(1), 1997, P43— 46)によって測定することにより、 —エンドルフ インの抗ストレス効果にっ 、て調べた。
[0021] く MHPG及び ΝΑの測定条件〉
カラム： TSKゲル ODS—80TM (TOSOH JAPAN) C— 18 逆相系 5 /z m, 4. omm X l50mm
温度： 25°C
溶離液：リン酸系バッファー（pH4. 13)
検出器: ECD (0. 7V)
[0022] 被験ラットには、室温 22°C、 7 : 00— 19 : 00 (明時）の明暗サイクル下で、飼料及び 水を自由摂取にして飼育した 200— 260gのウィスター系の雌ラット（日本 SLC)を用 いた。
[0023] 〔実験 1〕 63mgZkg及び 125mgZkg当たりの L トリプトファンをラットに投与して、疲労に 至るまでのランニング時間を測定した。その結果を表 1に示す。この結果、トリプトファ ンを 63mgZkg当たり投与することにより、ランニング時間の減少が見られ、慢性スト レス状態を作り出せることが確認された。
[表 1] 投与量 ランニングタイム (分）
63mg/Kg 対照 92.3 土 1 2.8
投与群 89.8 土 1 0.9 *
1 25mg/Kg 対照 1 29.8 土 1 9.3
投与群 1 03.3 土 20.3 *
Mean±S.D. not significant P<0.05 〔実験 2〕
次に、 BEによる慢性ストレスへの効果を確かめるべく実験を行った。まず実験の 開始前 24時間の排尿を集め、予め正常状態 (対照）における MHPGZNAの比を 測定した。そして 63mgZkg当たりの L トリブトファンを投与することによりラットに慢 性ストレス状態を作り出し、 L-トリブトファン投与後 24時間に排泄された尿を集め、全 排泄尿中の MHPGZNAの比を測定した。次に、 1週間のゥォッシュアウトの経過後 、再び同量の L—トリプトファン及び BE50ngZ匹を同時に投与し、その後 24時間に 排泄された全尿中の MHPGZNAの比を測定した (慢性ストレス状態 + BE)。その 結果を表 2に示す。慢性ストレス状態における MHPGZNA比は、正常状態に比べ て 6匹中 4匹（# 1, 2, 4, 5)が低下するのに対し、 BEを投与した場合には、 MHPG ZNA比が BE非投与時に比べて上昇し、正常状態の比にほぼ戻ったラットが 6匹中 2匹現れた（# 4, 5 : 33%が回復)。
[表 2] β一エンドルフィン処置（50ngノ匹）による慢性ストレス下における
MHPGZNA比の変化 ラッ卜 No. # 1 #2 #3 #4 #5 #6 対 照 22.8 37.7 20.6 32.4 42.4 32.9 慢性ストレス状態 21 .3 27.5 40.7 1 9.7 31 .1 47.9 慢性ストレス状態 + BE 1 9.6 1 7.7 7.9 27.1 45.4 38.8
[0025] 〔実験 3〕
BEの投与量を lOOngZ匹にして、実験 2と同様な実験を行った。その結果を表 3 に示す。この結果、慢性ストレス状態における MHPGZNA比は、正常状態に比べ て 6匹中 4匹（# 2, 3, 5, 6)が低下するのに対し、 BEを投与した場合には (ストレス 状態 + BE)、 MHPGZNA比が |8—ストレス非投与時に比べて上昇し、非投与時に 低下した全てのラットが、 1匹の例外を除いて正常状態にほぼ戻ることができた。なお 、この例外であるラット（ # 5)の正常状態の値が他のラットに比べて大きすぎることか ら、何らかの要因で正常状態における値が高くなつたにすぎず、 BEの投与により正 常状態に戻って 、るものと考えられる。
[表 3] β—エンドルフィン処置（l OOngZ匹）による慢性ストレス下における
MHPGZNA比の変化 ラッ卜 No. # 1 #2 #3 #4 #5 #6 対 照 1 9.2 24.7 36.2 24.9 94.7 32.7 慢性ストレス状態 55.5 1 9.2 1 9.9 30.0 28.1 1 1 .0 慢性ストレス状態 + BE 6.2 34.0 46.1 20.8 31 .7 33.6
[0026] 以上の実験 2、 3から、慢性ストレス状態にすることにより MHPGZNA比の低下が 70%のラット（8匹 Z12匹中）で観察できた。そして、 BE投与量の増加に伴い、 MH PGZNA比が正常状態に戻るラット数が増加し、ストレスの負荷で血中に増加する B E濃度 (約 5ngZml：測定データ示さず)の 2倍量 (個体中)程度を腹腔内に注入す れば、 70%のラット（6匹 Z8匹中）で速やかに MHPGZNA比が対照レベルにまで 復帰している。このように、 BEの投与により交感神経系の活動が回復し、 BEが免疫 系の回復に連動して慢性ストレス状態の改善に寄与していることが裏付けられた。
[0027] 図 1に、慢性的情動ストレスとトリブトファン情報の入力に対する神経 免疫系応答と β エンドルフィンによる修飾における生理学的な関連を示した。繰り返されたストレ スゃ持続的なストレスにより生じた慢性的なストレスは、脳内の広範囲でトリブトファン 濃度の上昇を招き、情動発現の中枢である扁桃核のような大脳辺縁系一視床下部（ 視床下部前核）に至る回路やこの領域に存在する BEの発動を促進すると考えられる 。そして、中枢で産生された BEは神経性、例えば大脳辺縁系領域のストレス閾値を 上げてストレス発現を遅らせ、その結果ストレス感の軽減として発現される可能性もあ る。また、慢性ストレス形成の初期には、下垂体前葉カゝら副腎皮質刺激ホルモン (AC TH)が分泌されることによって、コルチコステロンの上昇や交感神経系の亢進（図中 A:ノルアドレナリンの上昇 = MHPGZNA比の低下）が見られる力 このことは脾臓 産生 T細胞の減少が見られる一方で、下垂体や副腎髄質力 由来した末梢 BEの産 生がその修復に努める可能性があることを示している。やがて、慢性ストレスの回復 期には、交感神経系機能亢進状態が減少（図中 B :ノルアドレナリンの減少 = MHP GZNA比の上昇）し、免疫活性が高まる（B細胞や抗体の上昇)方へ転じるものと推 測される。
[0028] このように、ストレスが引き金 (警告反応期）となって、内分泌 神経 免疫系活性が 動的に作動 (抵抗期）し、ストレス感 (被憊期)などの情動形成を発現するが、同時に 修復機構の作動 (修復期）によってホメォスタシス機構が維持されるものと考えられる 。すなわち、この方法で効果ありとされた被験物質 (例えば本願における BE)は、中 枢で生じた内因性 BEとの相乗的作用で生体内ホメォスタシス機構、特に神経 免疫 系 (T細胞活性亢進)の調節に作用し、被験物質の投与によって慢性的なストレスが 解消されると、それにより低下した MHPGZNA比が上昇することになるのであって、 本発明はこの機構に基づいてなされたものである。
[0029] したがって、トリブトファンの投与により慢性ストレス状態にしたラットを用い、その後 尿中に排泄される MHPGZNA比を測定することによって、慢性ストレス状態の改善 度を知ることができる。その結果、慢性ストレス解消のための抗ストレス作用剤を効率 よくスクリーニングすることができる。 産業上の利用可能性
本発明によると、効率よく抗ストレス物質、特に慢性的なストレスに対する抗ストレス 物質をスクリーニングすることができ、近年、重要視されている各種ストレス症状の改 善に大きく寄与できる。

Claims

請求の範囲
[1] L トリブトファンを投与することにより慢性ストレス状態を作り出す実験モデル動物の 作製方法。
[2] 前記実験モデル動物は、ラットである請求項 1の実験モデル動物の作製方法。
[3] L トリブトファンを投与することにより慢性ストレス状態にした実験モデル動物に被験 物質を投与し、その後に排泄された尿中 MHPGZNA比を指標としてその改善の有 無を測定する抗ストレス物質のスクリーニング方法。
[4] 請求項 3記載のスクリーニング方法で得られた抗ストレス物質。
[5] β エンドルフィンである請求項 4に記載の抗ストレス物質。
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