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WO2006073145A1 - 抗アレルギー効果を有する乳酸菌の製造法 - Google Patents

抗アレルギー効果を有する乳酸菌の製造法 Download PDF

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WO2006073145A1
WO2006073145A1 PCT/JP2006/300004 JP2006300004W WO2006073145A1 WO 2006073145 A1 WO2006073145 A1 WO 2006073145A1 JP 2006300004 W JP2006300004 W JP 2006300004W WO 2006073145 A1 WO2006073145 A1 WO 2006073145A1
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WO
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lactic acid
lactobacillus
acid bacteria
medium
acid bacterium
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Ceased
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PCT/JP2006/300004
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English (en)
French (fr)
Inventor
Shigeru Fujiwara
Daisuke Sawada
Akira Yoshikawa
Jun Mizutani
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Asahi Soft Drinks Co Ltd
Original Assignee
Calpis Co Ltd
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Publication date
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    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor

Definitions

  • the present invention relates to a method for producing a lactic acid bacterium having an excellent antiallergic effect by increasing the amount of cytodynamic in production in a living body by ingestion, an antiallergic agent comprising this lactic acid bacterium as an active ingredient, and It relates to food and drink.
  • Lactic acid bacteria are known to have the effect of improving the balance of intestinal flora to reduce intestinal spoilage products and stool properties, as well as improving the immune activity of living organisms. It is used as an active ingredient of allergic agents (see, for example, JP-A-2004-26729 (Patent Document 1)). In general, it is said that in order to obtain the physiological effects as described above by lactic acid bacteria, it is necessary to ingest a relatively large amount of bacterial cells.
  • nutrients such as yeast extract and beef extract are used.
  • the MRS medium is for research use, there has been a problem in using it for lactic acid bacteria cultivated with this medium. For this reason, it has been desired to develop a medium that can only have ingredients that are recognized as foods and food additives.
  • Peptone a protein hydrolyzate (partially hydrolyzed protein that does not precipitate with ammonium sulfate, a secondary protein derivative used as a component of a microbial medium, V) as one of the nutrient sources of the medium
  • a protein hydrolyzate partially hydrolyzed protein that does not precipitate with ammonium sulfate, a secondary protein derivative used as a component of a microbial medium, V
  • the medium composition was selected based on the growth characteristics of lactic acid bacteria, which has never been studied before. is there.
  • Patent Document 1 JP 2004-26729 A
  • the present invention includes a method for producing a highly effective lactic acid bacterium having an anti-allergic effect by selecting a medium composition that can be used for food and drink, and a lactic acid bacterium obtained by the method as an active ingredient.
  • Another object of the present invention is to provide an antiallergic agent and a food or drink product containing this lactic acid bacterium as an active ingredient and having an antiallergic effect.
  • lactic acid bacteria are cultured using a medium containing 0.01 mass% or more, preferably 0.01 to 10 mass% of a casein hydrolyzate.
  • a method for producing lactic acid bacteria having an antiallergic effect is provided.
  • lactic acid bacteria having a high antiallergic effect can be obtained by culturing lactic acid bacteria using a medium supplemented with casein hydrolyzate. Furthermore, a larger amount of lactic acid bacteria can be obtained by using a medium to which a nitrogen source originating from animal meat or seafood meat is added in addition to the casein hydrolyzate.
  • the medium contains 0.01 to 10% by mass of a casein hydrolyzate.
  • a lactic acid bacterium having a higher antiallergic effect can be obtained.
  • a medium containing 0.01 to 10% by mass of a kiln source derived from livestock meat or seafood meat may be used.
  • nitrogen sources originating from ushi, tuna, bonito and the like are used.
  • the lactic acid bacterium is Lactobacillus acidophilus, Or Lactobacillus fermentum, Lactobacillus casei, Lactobacillus paracasei, and Lactobacillus gasseri.
  • Lactobacillus acidophilus L-92 strain patent biological deposit center deposit number FERM BP-4911, deposit date March 4, 1994
  • lactic acid bacteria are collected from the culture and dried. According to this, lactic acid bacteria having a high antiallergic effect can be obtained, and safety when used as a raw material for foods and pharmaceuticals can be further increased. Therefore, an antiallergic agent containing the lactic acid bacterium obtained by the above method as an active ingredient can be obtained, and a food and drink with high antiallergic effect can be obtained using this lactic acid bacterium.
  • more lactic acid bacteria having a high antiallergic effect can be obtained by culturing lactic acid bacteria using a medium to which a casein hydrolyzate is added.
  • the present invention provides a method for producing a lactic acid bacterium having an antiallergic effect, wherein the lactic acid bacterium is cultured using a medium containing a casein hydrolyzate.
  • the present invention also provides a method for producing lactic acid bacteria having an IL-12 production promoting effect, characterized by culturing lactic acid bacteria using a medium containing a casein hydrolyzate.
  • the casein hydrolyzate is a pancreatin hydrolysate.
  • the hydrolyzate is peptone.
  • the medium contains 0.01 to 10% by mass of casein carro hydrolyzate.
  • the lactic acid bacterium is a lactic acid bacterium belonging to the genus Lactobacillus.
  • lactic acid bacteria belonging to the genus Lactobacillus are Lactobacillus acidophilus ⁇ Lactobacillus fermentum, Lactobacillus fermentum, Lactobacillus casei, Lactobacillus casei, Lactobacillus casei, Lactobacillus casei, Lactobacillus paracasei), or Lactobacillus gasseri.
  • Ratatobacillus acidophilus is Lactobacillus acidophilus L-92 strain (FERM BP-4981).
  • the strength of the cultured culture is collected from lactic acid bacteria and dried.
  • the medium is derived from casein hydrolyzate and livestock meat or seafood. And a nitrogen source.
  • the present invention also provides an antiallergic agent and an IL-12 production promoter containing lactic acid bacteria obtained by the method of the present invention as active ingredients.
  • the present invention also provides a food or drink product having an antiallergic effect, which contains the lactic acid bacteria obtained by the method of the present invention as an active ingredient.
  • the method for producing lactic acid bacteria having an antiallergic effect of the present invention can also be used as a method for producing an antiallergic agent, and the culture of lactic acid bacteria obtained by this method is used as an antiallergic agent. You can also be used as a method for producing an antiallergic agent, and the culture of lactic acid bacteria obtained by this method is used as an antiallergic agent. You can also be used as a method for producing an antiallergic agent, and the culture of lactic acid bacteria obtained by this method is used as an antiallergic agent. You can also
  • a lactic acid bacterium having a high IL-12 production promoting effect can be produced.
  • the method for producing a lactic acid bacterium having an antiallergic effect of the present invention can also be used as a method for producing an IL-12 production promoter containing the lactic acid bacterium as an effective component.
  • the antiallergic agent of the present invention is It can also be used as an IL-12 production promoter containing lactic acid bacteria as an active ingredient. It is widely known that IL-12 has the action of suppressing IgE production and allergy.
  • an excellent anti-allergy can be obtained by culturing lactic acid bacteria using a medium to which a casein hydrolyzate and, if necessary, a nitrogen source originating from animal meat or seafood meat are added. Lactic acid bacteria having an effect can be obtained.
  • the medium can be prepared at a very low cost and can efficiently promote the growth of lactic acid bacteria, the culture cost of the lactic acid bacteria can be reduced. Further, by containing the lactic acid bacteria thus obtained as an active ingredient, it is possible to provide an antiallergic agent and a food and drink that are highly safe and have an excellent antiallergic effect.
  • FIG. 1 shows the amount of IL-12 produced by the production of lactic acid bacteria cultured using the media (1) to (7) of Example 1.
  • Casein hydrolyzate is generally known as casein peptone, milk peptide, etc., and is derived from casein. Contains a lot of nitrogen compounds such as tides and amino acids. Casein hydrolyzate is generally used as a raw material for food and a medium component, and commercially available products can be used.
  • nitrogen sources derived from livestock meat or seafood used for the purpose of promoting the growth of bacterial cells include concentrated aquatic juice obtained in the production of canned aquatic animals and processed fishery products. It contains nitrogen compounds such as proteins, peptides, amino acids and inorganic components eluted from animal meat and seafood, and is inexpensive.
  • Nitrogen sources derived from livestock meat or seafood meat may be prepared from commercially available meat or seafood meat extract as it is, or by enzymatic degradation or acid hydrolysis. .
  • As livestock meat it is preferable to use sushi and seafood as tuna and bonito.
  • the casein hydrolyzate can be used without particular limitation as long as it is a sanitary and safe raw material that can be used in the production of food and drink.
  • the trade name "BACTO CASI TONE” the trade name “BACTOTRYPTONE” (all manufactured by Difco)
  • trade name “Paticase Bepton” manufactured by Kyokuto Pharmaceutical
  • trade name “casein peptone plus” manufactured by Organotechnie
  • the nitrogen source derived from livestock meat or seafood used for the purpose of promoting the growth of bacterial cells is not particularly limited as long as it is a sanitary and safe raw material that can be used in food production.
  • trade name “BACTO BEEF EXTRACT” (Difco)
  • trade name “Bacterio-N-KS (B)” (manufactured by Marunouchi)
  • trade name “Cultivator T” (made by Yaizu Suisan), etc.
  • casein hydrolyzate it is preferable to use a medium containing 0.01 mass% or more of casein hydrolyzate, preferably 0.01 to 10 mass% of casein hydrolyzate. If the amount is too small, good growth of lactic acid bacteria cannot be expected, and a large amount of lactic acid bacteria having a sufficient antiallergic effect, that is, IL-12 induction ability cannot be obtained.
  • a medium containing 0.01 to 10% by mass of a nitrogen source originating from livestock meat or seafood meat, more preferably 0.01 to 1% by mass of a nitrogen source originating from livestock meat or seafood meat is used.
  • V the growth of the cells having an antiallergic effect is improved.
  • lactose glucose, sucrose, dextris
  • Saccharide sources such as glucose, organic or inorganic salts, livestock meat, seafood meat, nitrogen sources originating from proteins other than casein (including hydrolysates thereof) and the like may also be added.
  • yeast extract, other peptones, meat extract and the like may be added.
  • the medium used in the present invention can be prepared according to a conventional method using the above-described components. For example, a predetermined amount of livestock meat or seafood meat is produced in water (preferably distilled water or ion exchange water). The nitrogen source and casein hydrolyzate to be added are added, and the other components are further added as necessary to dissolve uniformly. Then, the pH is adjusted to 6.5 to 7.0 and a known method (e.g., autoclave) ).
  • water preferably distilled water or ion exchange water
  • the nitrogen source and casein hydrolyzate to be added are added, and the other components are further added as necessary to dissolve uniformly. Then, the pH is adjusted to 6.5 to 7.0 and a known method (e.g., autoclave) ).
  • lactic acid bacteria may be cultured according to a conventional method using the medium prepared as described above.
  • the lactic acid bacteria are cultured in a preculture solution (or an agar medium) in the medium. Lactic acid bacteria colonies) are inoculated and cultured under aerobic, microaerobic or anaerobic conditions at 30-45 ° C for 12-72 hours. During culture, the pH of the medium is lowered by lactic acid bacteria metabolites (such as lactic acid).
  • the pH of the medium is appropriately measured, and an alkaline aqueous solution (hydroxysodium hydroxide, potassium hydroxide, potassium hydroxide) Cultivation can also be carried out while maintaining the pH of the medium at 6.5 to 7.5 (more preferably pH 6.8 to 7.2) by adding (aqueous solution such as calcium or ammonia).
  • aqueous solution such as calcium or ammonia
  • culturing while maintaining the pH of the medium in the vicinity of neutrality can improve the growth of lactic acid bacteria and improve the yield of bacterial cells.
  • Examples of lactic acid bacteria used in the culture method of the present invention include Lactobacillus delbrueckii bulgaricus, Lattobacillus delbrueckii bulgaricus, Lactobacillu delbrueckii lactis, Lactobacillus delbrueckii lactis (Lactobacillus delbrueckii lactis) Lactobacillus helveticus), Ratatobatinoles. Lactobacillus aci dophilus, Lactobacillus crispatus, Lactobacillus crispatus, Lactobacillus amylovorus, Lactobacillus cinopat. Lactobacillus.
  • Lactobacillus johnsonii Lactobacillus johnsonii
  • Lactobacillus casei Lactobacillus paracasei, Lactobacillus paracasei.
  • Lactobacillus z eae la Lactobacillus plantarum, Lactobacillus rnamnosus, Lactobacillus brevis, Lactobacillus kefir, Lactobacillus kefir, Lactobacillus.
  • Lactobacillus reuteri Bifidobacterium, longum, Bifidobacterium.lacti s, Bifidobacterium.lacti s, Bifidobacterium.cate-yuratam .catenulatum) and the like are preferred, but Lactobacillus acidophilus L-0062 strain (FERM BP-4980), L-92 strain (FERM BP-4911), which has stronger and anti-allergic effects, Particularly preferred is Lactobacillus fermentum CP34 strain (FERM BP-8383).
  • lactic acid bacterial cells after culturing of lactic acid bacteria, it is preferable to collect lactic acid bacterial cells from the obtained culture by, for example, filtration, centrifugation, and the like, and to dry these bacterial cells.
  • the anti-allergic effect can be maintained even when the dead cells are sterilized by heat sterilization before drying.
  • the dried cells are preferably powdered and commercialized as raw materials for beverages and foods.
  • the antiallergic agent of the present invention contains the lactic acid bacterium as an active ingredient.
  • Such an antiallergic agent may be added to the lactic acid bacteria, if necessary, by adding excipients, sweeteners, acidulants, vitamins, minerals, pigments, fragrances, thickening polysaccharides, etc. It can be prepared as tablets, capsules, pastes, jellies, and various solid foods or liquid beverages.
  • the antiallergic agent of the present invention has an immunostimulatory effect and is used as an immunostimulator.
  • the effective intake is 1 mg to 10 g per day for adults in terms of lactic acid bacteria, and more preferably 10 to 200 mg.
  • the antiallergic agent of the present invention can be ingested by adding to, for example, beverages, jellies, candies, gums, retort foods, and instant foods.
  • Fish extract (trade name: Erlich meat extract, manufactured by Kyokuto Pharmaceutical Co., Ltd.) 10 g, yeast extract (trade name: Mist P2G, manufactured by Asahi Food and Health Care) 5 g, glucose 20 g, decaglycerin monooleate (trade name: polyglycerin ester poem) J-0381V, manufactured by Riken Vitamin) lg, sodium acetate crystals (conforming to food additive standards) 5 g, magnesium sulfate crystals (conforming to food additive standards) O.lg and dipotassium hydrogen phosphate (conforming to food additive standards) 2 g
  • 10 g of casein peptone (trade name: casein peptone plus, manufactured by Organotechnie) was prepared, and purified water was added to make up to 1 L. After adjusting the pH to 6.8 with sodium hydroxide, 121 ° Medium 1) was prepared by autoclaving with C for 20 minutes.
  • Soybean peptone (Product name: Soybean peptone A2, Organotechnie) 10g
  • Soybean peptone (trade name: soybean peptone A3, manufactured by Organotechnie) 10g
  • Soybean peptone (trade name: Soybean peptone AX, manufactured by Organotechnie) 10g,
  • Plant peptone (trade name: Plant peptone El, manufactured by Organotechnie) 10g
  • Casein peptone (trade name: Tryptone Nl, manufactured by Organotechnie) 10 g.
  • Lactobacillus acidophila (Lactobacillus acidophilus) L-92 strain (FERM BP-4981) each was inoculated with 3.5% preculture and cultured at 35 ° C for 18 hours.
  • the culture solution was centrifuged to collect the bacterial cells, washed with sterilized water three times, and then freeze-dried with a freeze-drying device (FDU-830 manufactured by Tokyo Rika Kikai Co., Ltd.) to obtain a lactic acid bacteria powder. .
  • the entire amount of lactic acid bacteria powder was collected and weighed.
  • the obtained lactic acid bacteria powder was suspended in sterilized water and then sterilized at 100 ° C. for 10 minutes to obtain a lactic acid bacteria suspension.
  • the antiallergic effect was measured by the following method using IL-12 inducing ability as an index.
  • a 6-week-old BALB / c mouse (female) was intraperitoneally injected with an OVA solution (containing an equal volume of Alum) at a concentration of g / 0.1 mL for 10 days. The mouse was then removed by cervical dislocation. Slaughtered and the spleen removed. Spleen cells were suspended in RPMI1640 medium (containing 10% FBS and 25 mM HEPES), and passed through a 70 m cell strainer (manufactured by FALCON) to become single cells. RP MI1640 medium (containing 10% FBS and 25 mM HEPES) was added to this cell suspension to adjust the number of viable cells to 5 ⁇ 10 6 / ml to obtain a spleen cell suspension. The number of viable cells was measured by adding trypan blue staining solution to the cell suspension, mixing, and counting the number of viable cells using an erythrocyte counter.
  • FBS Fetal Bovine Serum
  • FBS that had been stored frozen was put into a 56 ° C water bath for 30 minutes to be inactivated, and then stored in a sterilized container and stored frozen.
  • RPMI 1640 medium “-Susii” (2) (trade name, manufactured by Nissui Pharmaceutical) Dissolve 10.2 g in 1 L of distilled water and steam sterilize at 21 ° C for 20 minutes, 10% NaHCO, 0.3 g of L-glutamine, Penicillin 100,000 units, strike
  • the culture supernatant was used as a mouse IL-12p70 measurement kit (trade name “OptEIA Mouse I
  • the medium 1) using casein peptone plus had a very high ability to induce IL-12 production, and the medium using other peptones had a low ability to induce IL-12 production. It was confirmed that the medium 1) using casein peptone brass has the same or higher ability to induce IL-12 production than the case of using the commercially available MRS medium.
  • Casein peptone (trade name: casein peptone plus, manufactured by Organotechnie) lkg, yeast E Kiss (trade name: East peptone standard type F, manufactured by Organotechnie) 0. 5 kg, ⁇ sugar 2.25kg, decaglycerol mono O rain acid ester (product Name: Sunsoft Q-17S, Taiyo Gakugaku Co., Ltd.) 0.1kg, Sodium acetate crystals (conforming to food additive standards) 0.5kg, Dipotassium hydrogen phosphate (conforming to food additive standards) 0.5kg, Magnesium sulfate crystals (food) Additive standard compliant) 0.1kg, fish meat extract (Brand name: Bacterio-N-KS (B), manufactured by Maruha) 1kg each, purified water is added to make up to 100L, and dissolved in about 50% The pH was adjusted to pH 6.8 with sodium chloride (conforming to food additive standards), sterilized at 121 ° C. for 20 minutes according to a conventional method, and
  • the culture solution was treated with a centrifuge SC-1 type (manufactured by Westphalia) to separate it into an insoluble solid and a liquid phase. Dilute the resulting insoluble solids with purified water to the same volume as the medium volume. Thereafter, the cells were washed in the same manner using a centrifugal separator SC-1 (manufactured by Westphalia), and separated into an insoluble solid and a liquid phase.
  • the insoluble solid content obtained is diluted with purified water to the same volume as the medium volume, sterilized by heating at 100 ° C for 10 minutes, cooled to below 60 ° C, and then centrifuged with SC- Treatment with type 1 (manufactured by Westphalia) separated into an insoluble solid and a liquid phase to obtain a dispersion of washed, sterilized and concentrated cells.
  • the bacterial cell dispersion was poured into a freeze-drying vat to a thickness of 1 cm, housed in a freezer maintained at -38 ° C, and frozen until the product temperature was -35 ° C or lower.
  • the frozen bacterial cell dispersion is immediately stored in a freeze dryer TFD-50LF2 (manufactured by Toyo Giken Co., Ltd.) with an initial heating temperature set to 40 ° C, and the resulting dried product is dried according to a conventional method. Dried until the weight loss was 3% or less.
  • the obtained dried product was pulverized with an M-4 type Nara type free pulverizer (manufactured by Nara Machinery) and sieved with a 22-mesh screen to obtain a cell powder of uniform particle size.
  • Casein peptone (trade name: casein peptone plus, manufactured by Organotechnie) lkg, yeast E Kiss (trade name: East peptone standard type F, manufactured by Organotechnie) 0. 5 kg, ⁇ sugar 2.25kg, decaglycerol mono O rain acid ester (product Name: Sunsoft Q-17S, Taiyo 0.1kg, sodium acetate crystals (conforming to food additive standards) 0.5kg, dipotassium hydrogen phosphate (conforming to food additive standards) 0.5kg, magnesium sulfate crystals (conforming to food additive standards) 0.1kg, fish extract ( (Product name: Bacterio-N-KS (B), manufactured by Maruha) 1 kg each, add purified water to make up to 100 L, adjust to pH 6.8 with sodium hydroxide dissolved in about 50% After sterilization at 121 ° C for 20 minutes according to a conventional method, the medium was prepared by cooling to 35 ° C, which is the culture temperature.
  • Bacterio-N-KS Bacterio-N
  • SC-1 centrifuge SC-1
  • the cells were washed by Furthermore, the obtained insoluble solid content is diluted with purified water to the same volume as the medium volume, sterilized by heating at 105 ° C for 3 minutes, cooled to below 60 ° C, and then centrifuged with SC- Treatment with type 1 (manufactured by Westphalia) separated into an insoluble solid and a liquid phase to obtain a dispersion of washed, sterilized and concentrated cells.
  • the bacterial cell dispersion was poured into a freeze-drying vat to a thickness of 1 cm, housed in a freezer maintained at -38 ° C, and frozen to a product temperature of 35 ° C or lower.
  • the frozen bacterial cell dispersion is immediately stored in a freeze dryer TFD-50LF2 (manufactured by Toyo Giken Co., Ltd.) with an initial heating temperature set at 40 ° C. Dried until The obtained dried product was pulverized with an M-4 type Nara type free pulverizer (manufactured by Nara Machinery Co., Ltd.) and sieved with a 22 mesh screen to obtain a cell powder having a uniform particle size.
  • the obtained sterilized lactic acid bacteria beverage can be used for hay fever and year-round by taking 1 bottle per day.
  • the same amount of lactic acid bacteria as that contained in fermented milk subjected to clinical trials for allergic rhinitis can be consumed.
  • an inexpensive beverage having an antiallergic effect that can be easily ingested and is inexpensive can be produced.

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Abstract

　乳酸菌を、カゼイン加水分解物を含有せしめた培地を用いて培養することを特徴とする抗アレルギー効果を有する乳酸菌の製造法が開示される。本発明はまた、本発明の方法を用いて培養した乳酸菌を有効成分として含む抗アレルギー剤、ならびに本発明の方法を用いて培養した乳酸菌を有効成分として含む抗アレルギー効果を有する飲食品を提供する。

Description

明 細 書
抗アレルギー効果を有する乳酸菌の製造法
技術分野
[0001] 本発明は、経口摂取することにより、生体におけるサイト力インの産生量を高め、優 れた抗アレルギー効果を有する乳酸菌の製造法、この乳酸菌を有効成分とする抗ァ レルギ一剤及び飲食品に関する。
背景技術
[0002] 乳酸菌は、腸内フローラのバランスを改善して腸内腐敗産物の低減や糞便性状を 改善する効果のほか、生体の免疫活性を向上させる効果を有することが知られてお り、抗アレルギー剤の有効成分等として利用されている（例えば、特開 2004-26729号 公報 (特許文献 1)参照)。一般に、乳酸菌による前記のような生理効果を得るために は、菌体を比較的大量に摂取する必要があると言われて 、る。
[0003] 一方、乳酸菌の培養には、市販の研究用 MRS培地等を用いることが知られて 、る
1S 乳酸菌の生育を良好にするための添加物として、酵母エキス、牛肉エキス等の栄 養分が用いられている。
[0004] 乳酸菌の栄養要求を満たす培地を用いれば、乳酸菌が通常通り増殖することは容 易に考えられるが、乳酸菌を工業的に大量に培養しょうとした場合に、前記のような 乳酸菌の栄養要求を満たす培地を用いても、必ずしも抗アレルギー活性を有する菌 体力 安価に大量に得られる訳ではないという問題があった。
[0005] また、 MRS培地は研究用であるため、この培地により培養された乳酸菌^食品 等に用いるには問題があった。その為、食品及び食品添加物として認められる成分 のみ力もなる培地の開発が望まれていた。
[0006] また、培地の栄養源の一つとして、タンパク質加水分解物であるペプトン (硫酸アン モニゥムで沈殿しない、部分加水分解されたタンパク質。微生物培地の成分として用 V、られる二次タンパク質誘導体)等の成分を用いられることが知られて!/ヽるが、ぺプト ンの種類が乳酸菌の抗アレルギー効果と関係があることについては何ら知られてい なかった。特に、乳酸菌の菌数自体が増加するにも関わらず、十分な抗アレルギー 活性が得られな 、場合があると 、うことにつ！/、ては、全く知られて！/、なかった。
[0007] このように、乳酸菌の抗アレルギー効果と培地組成との関係については、これまで に研究されたことがなぐ乳酸菌の増殖特性だけに着眼して培地組成が選択されて いたのが現状である。
特許文献 1：特開 2004-26729号公報
発明の開示
発明が解決しょうとする課題
[0008] そこで、本発明は、飲食品に利用できる培地組成を選択することにより、抗アレルギ 一効果の高 ヽ乳酸菌を製造する方法、及び該方法によって得られた乳酸菌を有効 性成分として含有せしめた抗アレルギー剤及びこの乳酸菌を有効成分として含有せ しめて抗アレルギー効果を有する飲食品を提供することを目的とする。
課題を解決するための手段
[0009] 本発明者は、前記目的を達成するために鋭意研究した結果、カゼイン加水分解物
(カゼインペプトン)を添加した培地を用いることにより、抗アレルギー効果の高い乳 酸菌が、得られることを見出し、本発明を完成するに至った。
[0010] 本発明の 1つの観点においては、乳酸菌を、カゼイン加水分解物を 0.01質量％以 上、好ましくは 0.01〜10質量％含有せしめた培地を用いて培養することを特徴とする
、抗アレルギー効果を有する乳酸菌の製造法が提供される。
[0011] 本発明によれば、カゼイン加水分解物を添加した培地を用いて乳酸菌を培養する ことにより、抗アレルギー効果の高い乳酸菌を得ることができる。更に、カゼイン加水 分解物に加えて、畜肉又は魚介肉を起源とする窒素源を添加した培地を用いる事に より、より大量の乳酸菌を得ることができる。
[0012] また、前記培地は、カゼイン加水分解物を 0.01〜10質量％含有せしめることが好ま しい。これによつて、抗アレルギー効果がより高い乳酸菌を得ることができる。更に、 菌体の増殖を促進する目的で、畜肉又は魚介肉を起源とする窯素源を 0.01〜10質 量％含有する培地を用いてもよい。畜肉又は魚介肉の窒素源としては、ゥシ、マグロ 、カツォ等を起源とする窒素源が用いられる。
[0013] 更にまた、前記乳酸菌がラクトバチルス.ァシドフィラス (Lactobacillus acidophilus), 又はラクトバチルス.フアーメンタム（Lactobacillus fermentum)、ラタトバチルス.カゼィ (Lactobacillus casei)、ラクトノくチノレスノ ラ力 ITィ (Lactobacillus paracasei)、ラクトノ チルス ガッセリ (Lactobacillus gasseri)であることが好ましい。特に、ラクトバチルス. ァシドフィルス L-92株（特許生物寄託センター寄託番号 FERM BP— 4981、寄託 日 1994年 3月 4日）であることが好ましい。カロえて、前記培養物から乳酸菌の菌体を 採取し、乾燥することが好ましい。これによれば、抗アレルギー効果の高い乳酸菌を 得ることができると共に、食品、医薬品の原料として用いる場合の安全性をより高める ことができる。従って、前記の方法で得られた乳酸菌を有効成分として含有せしめる 抗アレルギー剤を得ることができ、またこの乳酸菌を用いて抗アレルギー効果の高!ヽ 飲食品を得ることができる。
[0014] 本発明によれば、カゼイン加水分解物を添加した培地を用いて乳酸菌を培養する ことにより、抗アレルギー効果の高い乳酸菌をより多く得ることができる。
[0015] 本発明は、乳酸菌をカゼイン加水分解物を含有せしめた培地を用いて培養するこ とを特徴とする抗アレルギー効果を有する乳酸菌の製造法を提供する。本発明はま た、乳酸菌をカゼイン加水分解物を含有せしめた培地を用いて培養することを特徴と する IL-12産生促進効果を有する乳酸菌の製造法を提供する。
[0016] 好ましい態様においては、カゼイン加水分解物はパンクレアチン加水分解物である 。また好ましくは、加水分解物はペプトンである。また好ましくは、培地は、カゼインカロ 水分解物を 0.01〜10質量％含有する。
[0017] 別の態様においては、乳酸菌はラクトバチルス属に属する乳酸菌である。好ましく は、ラクトバチルス属に属する乳酸菌は、ラクトバチルス.ァシドフィラス（Lactobacillus acidophilus)^ラクトノくチノレス.フアーメンタム (Lactobacillus fermentum)、ラクトノ チ ノレス.力 ITィ (Lactobacillus casei)、ラクトノくチノレスノヽラカセィ (Lactobacillus paracasei ),又はラクトバチルス.ガッセリ (Lactobacillus gasseri)である。より好ましくは、ラタトバ チルス.ァシドフィラスは、ラクトバチルス.ァシドフィラス L-92株（FERM BP-4981)であ る。
[0018] 別の態様においては、培養を行った培養物力も乳酸菌の菌体を採取し乾燥する。
[0019] また別の態様においては、培地は、カゼイン加水分解物と畜肉又は魚介肉を起源 とする窒素源とを含有する。
[0020] 本発明はまた、本発明の方法で得られた乳酸菌を有効成分として含有せしめた抗 アレルギー剤ならびに IL-12産生促進剤を提供する。
[0021] 本発明はまた、本発明の方法で得られた乳酸菌を有効成分として含有せしめた抗 アレルギー効果を有する飲食品を提供する。
[0022] なお、本発明の抗アレルギー効果を有する乳酸菌の製造法は、同時に、抗アレル ギー剤の製造法としても使用でき、本方法により得られた乳酸菌の培養物を抗アレル ギー剤として使用することもできる。
[0023] 本発明の方法にしたがえば、 IL-12産生促進効果の高い乳酸菌を製造することが できる。本発明の抗アレルギー効果を有する乳酸菌の製造法は、本乳酸菌を有効成 分として含有せしめた IL-12産生促進剤の製造法としても使用でき、さらに、本発明の 抗アレルギー剤は、同時に、乳酸菌を有効成分として含有せしめた IL-12産生促進 剤として使用することもできる。 IL-12が IgE産生を抑制し、アレルギーを抑制する作用 を有することは広く知られて 、る。
発明の効果
[0024] 本発明によれば、カゼイン加水分解物、及び、更に必要に応じ畜肉又は魚介肉を 起源とする窒素源を添加した培地を用いて乳酸菌を培養することにより、優れた抗ァ レルギ一効果を有する乳酸菌を得ることができる。また、該培地は、非常に安価に調 製でき、かつ効率的に乳酸菌の増殖を促進することができるので、乳酸菌の培養コス トを低くすることができる。更にこうして得られた乳酸菌を有効成分として含有せしめる ことにより、安全性が高ぐ優れた抗アレルギー効果を有する抗アレルギー剤及び飲 食品を提供することができる。
図面の簡単な説明
[0025] [図 1]実施例 1の培地（1)から（7)を用いて培養した乳酸菌力 生産される IL-12の生 産量を示す。
発明を実施するための最良の形態
[0026] まず、本発明の乳酸菌の培養に用いる培地について説明する。カゼイン加水分解 物は、一般にカゼインペプトン、乳ペプチド等として知られ、カゼインに由来するぺプ チド、アミノ酸等の窒素化合物を多く含む。カゼイン加水分解物は、食品原料、培地 成分として一般に用いられており、市販のものを用いることができる。
[0027] また、菌体の増殖を促進する目的で用いる、畜肉又は魚介肉を起源とする窒素源 の例としては、水畜産缶詰、水畜産加工品製造の際に得られる煮汁を濃縮したもの であり、獣肉、魚介肉から溶出するタンパク質、ペプチド、アミノ酸等の窒素化合物及 び無機成分を含み、安価である。畜肉又は魚介肉を起源とする窒素源は、市販のも のを用いてもよぐ畜肉又は魚介肉のエキスをそのまま濃縮しても、また酵素分解又 は酸加水分解して調製してもよい。畜肉としては、ゥシ、魚介肉としては、マグロ、カツ ォを用いることが好ましい。
[0028] 前記カゼイン加水分解物としては、飲食品の製造に使用可能な衛生性'安全性を 有する原料であれば特に制限なく用いることができ、例えば、商品名「BACTO CASI TONE」、商品名「BACTOTRYPTONE」（いずれも Difco製)、商品名「パティケースべ プトン」（極東製薬製)、商品名「カゼインペプトンプラス」（Organotechnie製)等を用い ることがでさる。
[0029] また、菌体の増殖を促進する目的で用いる、畜肉又は魚介肉を起源とする窒素源 としては、食品製造に使用可能な衛生性'安全性を有する原料であれば特に制限な く用いることができ、例えば、商品名「BACTO BEEF EXTRACT」（Difco製)、商品名 「Bacterio- N- KS(B)」（マルノヽ製）、商品名「カルチベータ T」（焼津水産製)等を用いる ことができる。
[0030] 本発明においては、カゼイン加水分解物を 0.01質量％以上、好ましくは、カゼイン 加水分解物を 0.01〜10質量％含有せしめた培地を用いることが好ましぐカゼインカロ 水分解物の含有量が少な過ぎると、乳酸菌の良好な生育が期待できず、また、十分 な抗アレルギー効果、即ち、 IL-12誘導能を有する乳酸菌を大量に得ることができな い。
[0031] 更に好ましくは、畜肉又は魚介肉を起源とする窒素源を 0.01〜10質量％、より好ま しくは畜肉又は魚介肉を起源とする窒素源を 0.01〜1質量％含有せしめた培地を用 V、ることにより、抗アレルギー効果を有する菌体の増殖が良好となる。
[0032] また、前記基本的成分の他に、必要に応じて、乳糖、グルコース、蔗糖、デキストリ ン等の糖源、有機又は無機塩類、畜肉、魚介肉、カゼイン以外の蛋白を起源とする 窒素源 (その加水分解物も含む)等を添加してもよい。前記成分の中でも、糖源を 1 〜10 質量％、有機又は無機塩類を 0.5〜2質量％添加することが好ましい。なお必 要に応じて、酵母エキス、その他のペプトン類、肉エキス等も添加してもよい。
[0033] 本発明で用いられる培地は、前記各成分を用いて常法に従って調製することがで き、例えば、水 (好ましくは蒸留水又はイオン交換水）に所定量の畜肉又は魚介肉を 起源とする窒素源及びカゼイン加水分解物を添加し、必要に応じて前記の他の成分 を更に加えて均一に溶解した後、 pHを 6.5〜7.0に調整して公知の方法 (例えばォー トクレーブ等）により滅菌すればよい。
[0034] 本発明の方法においては、前記のようにして調製した培地を用いて常法に従って 乳酸菌の培養を行なえばよぐ例えば、前記培地に、乳酸菌の前培養液 (又は寒天 培地で培養した乳酸菌のコロニー)を接種し、好気性、微好気性又は嫌気性の条件 下で、 30〜45°C、 12〜72時間培養すればよい。なお、培養中に、乳酸菌の代謝産物 (例えば乳酸等）により培地の pHが低下するため、適宜培地の pHを測定し、アルカリ 水溶液 (水酸ィ匕ナトリウム、水酸ィ匕カリウム、水酸ィ匕カルシウム、アンモニア等の水溶 液）を添カ卩して、培地の pHを 6.5〜7.5(より好ましくは pH6.8〜7.2)に保持しながら培養 を行なうこともできる。このように培地の pHを中性付近に保持して培養を行なうことに より、乳酸菌の生育を良好にすることができ、菌体収量を向上させることができる場合 もめる。
[0035] 本発明の培養方法において用いられる乳酸菌としては、例えば、ラクトバチルス.デ ルブリュッキイ ブルガリカス（Lactobacillus delbrueckii bulgaricus)、ラタトバチルス. デルブリュッキイ ラクテイス（Lactobacillu delbrueckii lactis)、ラクトバチルス.ヘルべ ティカス（Lactobacillus helveticus)、ラタトバチノレス.ァシドフィラス（Lactobacillus aci dophilus)、ラクトバチルス.クリスパタス（Lactobacillus crispatus)、ラクトバチルス.アミ ロボフス (Lactobacillus amylovorus 、フクトノ、チノレス.刀リナフム (Lactobacillus galnn arum)、ラクトノくチノレス.ガッセリ (Lactobacillus gasseri)、ラクトノくチノレス.ジョンソ - (Lac tobacillus johnsonii)、ラクトノくチノレス.カセィ (Lactobacillus casei)、ラクトノくチノレスノ ラカセィ (Lactobacillus paracasei)、ラクトノくチノレス. ITァェ（Lactobacillus zeae)、ラ タトバチルス.プランタラム（Lactobacillus plantarum)、ラクトバチルス.ラムノーサス（La ctobacillus rnamnosus)、フクトノくチノレス.ブレヒス (Lactobacillus brevis)、フクトノ テ ルス.ケフィール（Lactobacillus kefir)、ラタトバチルス.フアーメンタム（Lactobacillus f ermentum)、ラクトバチルス.ロイテリ（Lactobacillus reuteri)、ビフイドバタテリゥム.ロン ガム（Bifidobacterium, longum)、ビフイドバタテリゥム.ラクテイス（Bifidobacterium.lacti s)、ビフイドバタテリゥム.カテ-ユラ一タム（Bifidobacterium.catenulatum)等が好ましく 挙げられるが、より強 、抗アレルギー効果を有するラクトバチルス.ァシドフィラス (Lact obacillus acidophilus) L- 0062株（FERM BP- 4980)、 L- 92株（FERM BP- 4981)、ラ タトバチルス.フアーメンタム（Lactobacillus fermentum) CP34株 (FERM BP- 8383)等 が特に好ましい。
[0036] 本発明においては、乳酸菌の培養終了後、得られた培養物から乳酸菌の菌体を例 えばろ過、遠心分離等の方法によって採取し、この菌体を乾燥することが好ましい。 これによつて、飲料'食品や医薬品の原料として、より安定性の高い乳酸菌を提供す ることができる。し力も乾燥前に加熱殺菌により死菌体としても、抗アレルギー効果を 保持することができる。なお、乾燥した菌体は、粉末化して飲料'食品や医薬品の原 料として製品化することが好ま 、。
[0037] 本発明の抗アレルギー剤は、前記乳酸菌を有効成分として含有せしめたものであ る。このような抗アレルギー剤は、 前記乳酸菌に、必要により、賦形剤、甘味料、酸 味料、ビタミン類、ミネラル類、色素、香料、増粘多糖類等を添加し、粉末、穎粒、錠 剤、カプセル剤、ペースト状、ゼリー状、及び各種の固形食品、又は液状の飲料とし て調製することができる。
[0038] 本発明の抗アレルギー剤は、免疫賦活効果を有し、免疫賦活剤として用いられる。
その有効摂取量は、前記乳酸菌体換算で成人 1日当り lmg〜10gであり、より好ましく は 10〜200mgである。
[0039] また、本発明の抗アレルギー剤は、例えば、飲料、ゼリー、キャンディー、ガム、レト ルト食品、インスタント食品等に添加して摂取することもできる。この場合、前記乳酸 菌を 1日当たり l〜l,000mg、より好ましくは 10〜500mg採取できるように前記各食品中 に添加することが好ましい。 [0040] 本明細書において明示的に引用される全ての特許および参考文献の内容は全て 本明細書の一部としてここに引用する。また，本出願が有する優先権主張の基礎とな る出願である日本特許出願 2005— 24204号の明細書および図面に記載の内容は 全て本明細書の一部としてここに引用する。
[0041] 以下に実施例により本発明をより詳細に説明する。
実施例 1
[0042] カゼインペプトンプラスを用いた培地の調製
魚肉エキス (商品名：エルリッヒ肉エキス、極東製薬工業製） 10g、酵母エキス (商品 名：ミースト P2G、アサヒフードアンドへルスケア製） 5g、グルコース 20g、デカグリセリ ンモノォレイン酸エステル（商品名：ポリグリセリンエステル ポエム J-0381V、理研ビ タミン製） lg、酢酸ナトリウム結晶 (食品添加物規格準拠) 5g、硫酸マグネシウム結晶（ 食品添加物規格準拠) O.lg及びリン酸水素二カリウム (食品添加物規格準拠) 2gに対 し、カゼインペプトン（商品名：カゼインペプトンプラス、 Organotechnie製） 10gをカロえ、 精製水をカ卩えて 1Lにメスアップし、水酸ィ匕ナトリウムで pH6.8に調整した後、 121°Cで 2 0分間オードクレープ滅菌して培地 1)を調製した。
[0043] [比較例 1]
対照として、前記培地成分のうちカゼインペプトンプラス（商品名、 Organotechnie製 ) 10gに代えて、次のペプトンをそれぞれ加え、前記実施例 1と同様の処理を行い、培 地 (2ト (7)を調製した。
培地 (2)小麦ペプトン（商品名：小麦ペプトン El、 Organotechnie製） 10g、
培地 (3)大豆ペプトン（商品名：大豆ペプトン A2、 Organotechnie製） 10g、
培地 (4)大豆ペプトン（商品名：大豆ペプトン A3、 Organotechnie製） 10g、
培地 (5)大豆ペプトン（商品名：大豆ペプトン AX、 Organotechnie製） 10g、
培地 (6)植物ペプトン（商品名：植物ペプトン El、 Organotechnie製） 10g、
培地 )カゼインペプトン（商品名：トリプトン Nl、 Organotechnie製） 10g。
[0044] [試験例 1]
1.乳酸菌の調製
前記実施例 1及び比較例 1にて調製した培地 1)〜7)に、ラクトバチルス.ァシドフイラ ス (Lactobacillus acidophilus) L- 92株（FERM BP- 4981)の前培養液をそれぞれ 3.5 %接種し、 35°Cで 18時間培養を行なった。
[0045] 培養終了後、培養液を遠心して菌体を回収して滅菌水で 3回洗浄した後、凍結乾 燥装置 (東京理化器機製 FDU-830)で凍結乾燥して乳酸菌粉末を得た。乳酸菌粉 末を全量回収し、重量を測定した。得られた乳酸菌粉末を滅菌水に懸濁後、 100°C、 10分殺菌処理を行い、乳酸菌懸濁液を得た。以下の方法により IL-12誘導能を指標 として抗アレルギー効果の測定を行った。
[0046] 2. IL-12誘導能の測定
(1) 脾臓細胞の調整
6週齢の BALB/cマウス (雌)の腹腔内に、 g/0.1mL濃度の OVA溶液（等量の Alu mを含む）をマウスに注射して 10日間飼育した後、頸椎脱臼によりマウスを屠殺し、脾 臓を摘出した。脾臓細胞を RPMI1640培地（10%FBS、 25mM HEPES含有）に懸濁し 、 70 mセルストレーナ一（FALCON製）に通し単細胞化した。この細胞懸濁液に RP MI1640培地（10%FBS、 25mM HEPES含有）を加えて生細胞数が 5 X 106/mlとなるよ うに調整して脾臓細胞懸濁液を得た。なお、生細胞数の測定方法は、細胞懸濁液に トリパンブルー染色液を加えて混合し、赤血球計算盤にて生細胞数を数えることで行 つた o
[0047] 試薬
1 ) FBS(Fetal Bovine Serum)
冷凍保存してある FBSを 56°Cウォーターバスに 30分間入れ非働化して、滅菌容器に 入れて冷凍保存した。
2) PBS
NaCl 80g、Na HPO · 12Η Ο 29g、 KC1 2g、 KH PO 2gを蒸留水に溶解して 1Lとし
2 4 2 2 4
、オートクレーブで滅菌した。
3) RPMI 1640 Medium
RPMI 1640培地「-ッスィ」（2) (商品名、 日水製薬製） 10.2gを蒸留水 1Lに溶解して 1 21°C、 20分蒸気滅菌し、 10%NaHCO、 L-グルタミン 0.3g、ペニシリン 10万単位、スト
3
レプトマイシン 0. lg (GIBCO製）を無菌的に加えた。 [0048] (2) 脾臓細胞と乳酸菌粉末の共培養 (IL-12の誘導）
96穴平底プレート (FALCON製）に、前記脾臓細胞懸濁液を 200 L/穴、乳酸菌粉 末懸濁液を 0.01〜1 μ g/穴、 OVAを 20 μ g/穴ずつ入れ、 37°C、 5%COで 24時間培
2
し 7こ。
[0049] (3) 抗アレルギー活性指標 IL-12測定
IL- 12の測定は、培養上清をマウス IL- 12p70測定キット（商品名「OptEIA Mouse I
L- 12 (p70) Set」、 BD Phar Mingen製）及び 96穴ィムノアツセィ用プレート（NUNC製） を用いて行った。その結果を図 1に示す。
[0050] (4) 結果
図 1から、カゼインペプトンプラスを用いた培地 1)が非常に IL-12産生誘導能が高く 、他のペプトンを用いた培地では IL-12産生誘導能が低かった。カゼインペプトンブラ スを用いた培地 1)は市販の MRS培地を用いた場合と比較して、同等又はそれ以上 の IL-12産生誘導能を有することが確認された。
実施例 2
[0051] タブレットの製造
カゼインペプトン（商品名：カゼインペプトンプラス、 Organotechnie製） lkg、酵母ェ キス（商品名：イーストペプトン スタンダード タイプ F、 Organotechnie製） 0.5kg、蔗 糖 2.25kg、デカグリセリンモノォレイン酸エステル (商品名：サンソフト Q-17S、太陽ィ匕 学製) 0.1kg、酢酸ナトリウム結晶（食品添加物規格準拠) 0.5kg、リン酸水素二カリウム (食品添加物規格準拠) 0.5kg、硫酸マグネシウム結晶（食品添加物規格準拠) 0.1kg 、魚肉エキス（商品名： Bacterio- N- KS(B)、マルハ製） 1kgをそれぞれ加え、精製水を 加えて 100Lにメスアップし、 50%程度に溶解した水酸ィ匕ナトリウム (食品添加物規格 準拠)で PH6.8に調整して、 121°C、 20分間常法に従って滅菌した後、培養温度である 35°Cまで冷却して培地を調製した。
[0052] 同培地を用いて 35°Cで培養したスターターを無菌的に 1〜5%接種し、 15分間攪拌 の後に攪拌翼を停止し、 pHが 4.2以下になるまで (18時間程度)培養した。培養終了 後、培養液を遠心分離機 SC-1型 (ウェストファリア製)を用いて処理し、不溶性固形 分と液相に分離した。得られた不溶性固形分を培地の容量と等倍まで精製水で稀釈 した後、同様に遠心分離機 SC-1型 (ウェストファリア製)を用いて処理し、不溶性固形 分と液相に分離することによって、菌体を洗浄した。更に得られた不溶性固形分を精 製水で培地の容量と等倍まで稀釈して、 100°C、 10分間加熱して殺菌し、 60°C以下ま で冷却した後に、遠心分離機 SC-1型 (ウェストファリア製)を用いて処理し、不溶性固 形分と液相に分離することにより、洗浄され、殺菌され、濃縮された菌体の分散液を 得た。
[0053] 菌体の分散液を凍結乾燥用バットに lcm厚に流し込み、 -38°Cに保持された冷凍庫 に収容して、品温が- 35°C以下となるまで冷凍した。凍結された菌体の分散液を、初 期加熱温度を 40°Cに設定した凍結乾燥機 TFD-50LF2 (東洋技研製）に速やかに収 容し、常法に従い、得られた乾燥物の乾燥減量が 3%以下になるまで乾燥した。得ら れた乾燥物を M-4型奈良式自由粉砕機 (奈良機械製)で粉砕し、 22メッシュのスクリ 一ンで篩別し、粒度の揃った菌体末を得た。
[0054] 得られた菌体末 3.2kgに対し、パーテック SI150 (昭和興産製) 55kg,粉末還元パラチ ノース PNP (三井物産製) 20kg、精製乾燥殺菌タピオ力 (松谷ィ匕学製） 10kg、ダルコ一 ス（JAS規格準拠） 9.8kg、 DKエステル F- 20W (三栄源エフ ·エフ ·アイ製） 2kgを UV- 1 型 Vプレンダー（内田工業所製)で、常法に従って 5分間混合し、菌体末を含有せし めた打錠用粉末を得た。打錠用粉末をペガサス 1024HUK-AWC型打錠機 (菊水製 作所製)を使用し、 9mm φ標準 R型臼杵を用いて、常法に従って、 1粒当り 350mgのタ ブレットに整形した。
[0055] 得られたタブレットを 1日当り 2粒摂取する事により、花粉症及び通年性アレルギー 性鼻炎の方を対象とした臨床試験に供した発酵乳に含まれるものと同量の乳酸菌を 摂取できる。本発明により、継続して摂取することが容易で、かつ安価な抗アレルギ 一剤を製造することができる。
実施例 3
[0056] 飲料の製造
カゼインペプトン（商品名：カゼインペプトンプラス、 Organotechnie製） lkg、酵母ェ キス（商品名：イーストペプトン スタンダード タイプ F、 Organotechnie製） 0.5kg、蔗 糖 2.25kg、デカグリセリンモノォレイン酸エステル (商品名：サンソフト Q-17S、太陽ィ匕 学製) 0.1kg、酢酸ナトリウム結晶（食品添加物規格準拠) 0.5kg、リン酸水素二カリウム (食品添加物規格準拠) 0.5kg、硫酸マグネシウム結晶（食品添加物規格準拠) 0.1kg 、魚肉エキス（商品名： Bacterio- N- KS(B)、マルハ製） 1kgをそれぞれ加え、精製水を 加えて 100Lにメスアップし、 50%程度に溶解した水酸ィ匕ナトリウムで pH6.8に調整して 、 121°C、 20分間常法に従って滅菌した後、培養温度である 35°Cまで冷却して培地を 調整した。
[0057] 同培地を用いて 35°Cで培養したスターターを無菌的に 1〜5%接種し、 15分間攪拌 の後に攪拌翼を停止し、 OD600が 5.0に達するまで (18時間程度)培養した。培養終了 後、培養液を遠心分離機 SC-1型 (ウェストファリア製)を用いて処理し、不溶性固形 分と液相に分離した。得られた不溶性固形分を培地の容量と等倍まで精製水で稀釈 した後、同様に遠心分離機 SC-1型 (ウェストファリア製)を用いて処理し、不溶性固形 分と液相に分離することによって、菌体を洗浄した。更に得られた不溶性固形分を精 製水で培地の容量と等倍まで稀釈して、 105°C、 3分間加熱して殺菌し、 60°C以下ま で冷却した後に、遠心分離機 SC-1型 (ウェストファリア製)を用いて処理し、不溶性固 形分と液相に分離することにより、洗浄され、殺菌され、濃縮された菌体の分散液を 得た。
[0058] 菌体の分散液を凍結乾燥用バットに lcm厚に流し込み、 -38°Cに保持された冷凍庫 に収容して、品温カ 35°C以下まで冷凍とした。凍結された菌体の分散液を初期加 熱温度を 40°Cに設定した凍結乾燥機 TFD-50LF2 (東洋技研製）に速やか収容し、常 法に従い、得られた乾燥物の乾燥減量力 以下になるまで乾燥した。得られた乾 燥物を M-4型奈良式自由粉砕機 (奈良機械製)で粉砕し、 22メッシュのスクリーンで 篩別し、粒度の揃った菌体末を得た。
[0059] 常法に従って調製した SNF3%程度の乳製品乳酸菌飲料 Itに対し、 0.2kgの菌体末 を添加し、 H-50型可変式高圧均質化機 (三和機械製)を使用し、 15MPaで均質ィ匕し た原液を常法に従い、飲料製造用のプレートヒーターを用いて 96°C30秒殺菌した後 に、 85°Cで 100ml壜に充填し、常法に従って PPキャップの卷締めを行い、転倒して蓋 部を殺菌し、殺菌乳酸菌飲料とした。
[0060] 得られた殺菌乳酸菌飲料は、一日当り 1本を摂取することにより、花粉症及び通年 性アレルギー性鼻炎の方を対象とした臨床試験に供した発酵乳に含まれるものと同 量の乳酸菌を摂取できる。本発明により、継続して摂取することが容易で、かつ安価 な抗アレルギー効果を有する飲料を製造することができる。

Claims

請求の範囲
[I] 乳酸菌を、カゼイン加水分解物を含有せしめた培地を用いて培養することを特徴と する抗アレルギー効果を有する乳酸菌の製造法。
[2] 乳酸菌を、カゼイン加水分解物を含有せしめた培地を用いて培養することを特徴と する IL-12産生促進効果を有する乳酸菌の製造法。
[3] 前記カゼイン加水分解物がパンクレアチン加水分解物である、請求項 1または 2に記 載の製造法。
[4] 前記加水分解物がペプトンである、請求項 1― 3の 、ずれかに記載の製造法。
[5] 前記培地は、カゼイン加水分解物を 0.01〜10質量％含有せしめたものである、請求 項 1〜4のいずれかに記載の製造法。
[6] 前記乳酸菌がラクトバチルス属に属する乳酸菌である、請求項 1〜5のいずれかに記 載の製造法。
[7] 前記ラクトバチルス属に属する乳酸菌力 ラクトバチルス.ァシドフィラス（Lactobacillus acidophilus)^ラクトノくチノレス.フアーメンタム (Lactobacillus fermentum)、ラクトノ チ ノレス.力 ITィ (Lactobacillus casei)、ラクトノくチノレスノヽラカセィ (Lactobacillus paracasei ),又はラクトバチルス.ガッセリ (Lactobacillus gasseri)である、請求項 6に記載の製造 法。
[8] 前記ラクトバチルス.ァシドフィラス力 ラクトバチルス.ァシドフィラス L-92株（FERM B
P-4981)である、請求項 7に記載の製造法。
[9] 前記培養を行った培養物から乳酸菌の菌体を採取し乾燥する、請求項 1〜8のいず れかに記載の製造法。
[10] 前記培地は、カゼイン加水分解物と畜肉又は魚介肉を起源とする窒素源とを含有す る、請求項 1〜9のいずれかに記載の製造法。
[I I] 請求項 1〜10のいずれかに記載の方法で得られた乳酸菌を有効成分として含有せ しめた抗アレルギー剤。
[12] 請求項 1〜10のいずれかに記載の方法で得られた乳酸菌を有効成分として含有せ しめた抗アレルギー効果を有する飲食品。
[13] 請求項 1〜10のいずれかに記載の方法で得られた乳酸菌を有効成分として含有せ しめた IL-12産生促進剤。
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