WO2006064075A1 - Derivados de isoquinolina como inhibidores de calpaina - Google Patents
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Definitions
- Field of technique The present invention is framed in the field of enzyme inhibitors with therapeutic activity, more specifically calpain inhibitors.
- Calpains, or neutral proteases activated by Ca 2+ are a family of cysteine proteases (“cysteine proteases”) with a very active metabolic role. Although their natural substrate is not clearly determined, these enzymes catalyze the hydrolysis of a variety of proteins involved in signal transduction, cytoskeleton reconstruction, cell cycle regulation and apoptosis (Adv. Pharmacol. 1996, 37 , 117).
- the calpain family comprises various tissue-specific isoforms and two ubiquitous isoenzymes: ⁇ -calpain (or calpain I) and wi-calpain (or calpain II), which require micromolar and millimolar amounts, respectively, of Ca 2 + for activation in vitro.
- each isoform is composed of a large subunit ( ⁇ 80 kDa), which has a protease domain with cysteine of the papain type, and a small subunit ( ⁇ 30 kDa), which is common to each isoenzyme.
- the C-terminal ends of each subunit have domains capable of binding Ca 2+ (calmodulin type domain) (FEBS Lett. 2001, 501, 111).
- calpains which can occur by increasing the intracellular concentration of Ca 2+ , is implicated in numerous diseases, such as cerebral and cardiac ischemia, cerebral stroke, Alzheimer's, Parkinson's, Hungtinton, muscular dystrophy, cataracts, demyelinating diseases (such as multiple sclerosis) and other degenerative diseases (Pathophysiology 1999, 6, 91; Brain Res. Rev. 2003, 42, 169).
- calpain inhibitors are as neuroprotective agents.
- various strategies have been used so far. Agents acting on the membrane depolarization and the entry of Ca 2+ into cells, or that prevent the production of free radicals (antioxidants), or that are antagonistic to the action of neurotransmitters (J. Clinical Neurosa. 2002, 9, A).
- Calpain overactivation requires a continuous increase in intracellular concentrations of Ca 2+ , and this enzyme is dormant in resting cells [ie, with "normal” Ca 2+ levels]. Therefore, calpain inhibition is presented as an appropriate treatment in neurodegenerative diseases. Based on its characteristics, it is foreseeable that the inhibition of calpain has fewer side effects in human therapeutics than the blocking of metabolic processes prior to its activation in the pathological processes, such as the antagonism of the NMDA receptor of glutamate and aspartate, due to that calpain is not activated under "normal” physiological conditions since the action of excitatory amino acids is essential for the normal functioning of the nervous system.
- potent and selective calpain inhibitors are very useful as working tools to study the mechanism of action of this protease, as well as its role in certain physiological processes.
- inhibitors are peptides or peptidomimetics with few amino acids (between 2 and 6) hydrophobic and some electrophilic functionality, among which ⁇ -ketophosphonates, ⁇ -ketophosphinates, ⁇ -ketophosphine oxides, ⁇ - ketoesters, ⁇ -keto acids, ⁇ -ketoamides, trifluoromethyl ketones, aldehydes, methylsulfonium salts, epoxides, etc.
- these compounds act on the papain-like domain of calpain, which results in a relatively low selectivity, so they are also often inhibitors of other proteases with cysteine (e.g., papain) and even proteases with serine (serine). proteas is).
- cysteine e.g., papain
- serine serine
- proteas is
- the present invention relates to partially reduced isoquinoline derivative compounds with activity as calpain inhibitors.
- a compound of the present invention is an ester or an amide derived from acids (3-5 r ec-butyl-l-oxo-2,3-dihydro-l-isoquinolin-4-ylidene) -acetic acid and (3-sec -butyl- 1-thioxo-2,3-dihydro-l-isoquinolin-4-ylidene) -acetic acid, including compounds whose substituent in position 4- of the isoquinoline fragment are amino acid-related structures, including fragments of aminocarbonyl compounds, which bind to the isoquinoline fragment by a carbonylmethyliden group. Description.
- the present invention relates to a compound characterized in that it has a partially reduced isoquinoline structure with substitution of a sec-butyl group in position 3, and of formula I or ⁇ ,
- - group X is oxygen (O) or sulfur (S), interchangeably,
- - group R 1 is independently selected among the groups
- R 4 is selected from an alkyl, aryl group, an amino acid derivative and a peptide derivative
- - NR 5 R 6 in which R 5 and R 6 are independently selected from an alkyl, aryl group, an amino acid derivative, a peptide derivative, and R 5 and R 6 groups that form a cyclic system, - OH,
- R 7 represents an aryl or alkyl group
- R 2 and R 3 are the same or different, and are independently selected from the groups O (oxygen), NH, or NR 8 , where R 8 represents an alkyl or aryl group,
- - Z is selected among the groups - alkyl between 2 and 8 carbon atoms, - aryl,
- Especially preferred compounds are:
- the essential reaction in the preparation of compounds of types I and E is an acylation reaction between an acid or acid derivative, such as electrophile, and an amine or alcohol, as nucleophile.
- the synthetic strategy of the compounds of formula I or II depends on the structure of the groups R 1 , R 2 , and R 3 , as well as whether these groups are the same or different.
- a special type of compounds of type I and II, object of the present invention are of type V, in which there are related amino acid, peptide, and compound chains, linked to the isoquinoline fragment through an acetylmethylidene group. These compounds are prepared by customary transformations in organic synthesis and which are known to those skilled in the art, using suitable amino acid, peptide derivatives, and related compounds.
- the alcohols, amines, amino acids, peptides, and derivatives thereof used in the synthesis of the compounds of formula I or ⁇ are commercial or are prepared by usual methods in organic synthesis.
- biocatalytic methods have been applied using the enzyme acylase as a biocatalyst (Tetrahedron: Asymmetry 1998, P, 1951-1965).
- calpain inhibitors There are several calpain isoforms, which are very similar structurally and, as far as is known, share the same mechanism of action. The two most abundant are the micro-calpain (or calpain I) and the mili- calpain (or calpain-II), which differ in in vitro tests, in the concentration of Ca 2+ necessary for its activation. Since the two isoforms of the enzyme are very similar, it has been found in many examples in the literature that calpain inhibitors are of both isoenzymes (Adv. Synth. Catal. 2002, 344, 855).
- calpain we refer to the two isoforms (or isoenzymes) that are included in the definition of calpain. Therefore, another object of the present invention is the use of a compound of formula I or ⁇ as a calpain inhibitor
- the inhibitory capacity of calpain has been quantified by the value of IC 50 , which is defined as the concentration of inhibitor that halves the catalytic activity of an enzyme. The lower the IC 50 value, the more potent the inhibitor. Results of inhibition of calpain I (the most relevant from a physiological point of view) of some compounds of the present invention are indicated in the table
- calpain II also called milli-calpain
- Ca 2+ concentration would cause cell death before the milli-calpain could be activated.
- inhibition assays have been performed for calpain I, but are extrapolated for calpain II.
- a further object of the present invention is the use of a compound of formula I or ⁇ for the treatment or prevention of degenerative diseases as well as to prepare a medicine for the preventive or therapeutic treatment of a degenerative disease, and especially when the degenerative disease is selected from cerebral ischemia, ischemia heart, stroke, Alzheimer's, Parkinson's, Hungtinton, muscular dystrophy, cataracts and demyelinating diseases, and especially if the demyelinating disease is multiple sclerosis (Pathophysiology 1999, 6, 91; Brain Res. Rev. 2003, 42, 169).
- Figure 1 shows results of the study of the derivatives of P-sec-butyl-l-oxo-2,3-dihydro-lH-isoquinolin-4-ylidene-acetic acid (3-5 r ec-butyl-l -thioxo-2,3-dihydro-lH-isoquinolin-4-ylidene) -acetic, objects of the present invention and their biological activity as calpain I inhibitors.
- examples are the experimental procedures, spectroscopic and analytical data of some isoquinoline derivatives of formulas I or ⁇ , as well as tests of their biological activity.
- Example 24 Synthesis of (S, S ⁇ ⁇ ) - 2-amino-iV- ⁇ 2 '- [2- (3-sec-butyl-l-oxo-2,3-dihydro-lphi-isoquinoline-4-ylide) -acetylamino] -biphenyl-2-yl ⁇ -3-phenyl-propionamide (23).
- Example 28 Synthesis of (S, S, S, S, S, S, S, S, Z) -2- (2- ⁇ 2- [2- (3-sec-b ⁇ ⁇ t ⁇ -l-oxo-2 , 3-dilute-lH- isoquinolin-4-ylidene) -acetylamino] -3-methyl-pentanoylamino ⁇ -3-methyl-pentanoylamino) -3-methyl-pentanoate (26).
- Enzyme activity test Calpain inhibition.
- IC 50 is defined as the concentration of inhibitor that halves the catalytic activity of an enzyme. The lower the IC 50 value, the more potent the inhibitor. Results of inhibition of calpain I (the most relevant from a physiological point of view) of some compounds of the present invention are indicated in Table 1 and in Figure 1.
- the lyophilized substrate is component A of the Molecular Probes EnzChek ® green fluorescence protease assay kit (reference # E-6638; component B, called 2OX digestion buffer, contains 13mL of 200 mM Tris-HCl, pH 7.8 , and 2 mM sodium azide
- the commercial calpain I used has a concentration of 1 mg in 1 mL of aqueous solution (the solution is 20 mM imidazole-HCl, pH 6'8, 1 mM EDTA, 1 mM
- calpain solution 200 ⁇ g of the lyophilized substrate (component A of the Molecular Probes kit) was dissolved in 200 ⁇ L of phosphate buffered saline. This solution was transferred to a graduated flask and diluted with the digestion solution to a total volume of 40 mL. Preparation of the calpain solution (calpain solution).
- the inhibitor was dissolved in DMSO. Each inhibitor was tested at 7 different concentrations between 10 nM and 200 ⁇ M.
- - EDTA Ethylenediaminetetraacetic acid.
- - EGTA Ethylene- ⁇ 5 r - (oxyethylene nitrile) tetraacetic acid.
- Tris (hydroxmethyl) aminomethane Tris (hydroxmethyl) aminomethane.
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Abstract
La presente invención se refiere a compuestos derivados de isoquinolina parcialmente reducida con sustitución de un grupo sec-butilo en posición 3 con actividad como inhibidores de calpaina. Un compuesto de la presente invención es un éster o amida derivada del ácido (3-5rec-butil-l-oxo-2,3-dihidro-lH-isoquinolin-4-iliden)-acético y de ácido (3-5rec-butil-l-tioxo-2,3-dihidro-lH-isoquinolin-4-iliden)-acético. Los compuestos de fórmula I o II tienen aplicación en el tratamiento preventivo o terapéutico de una enfermedad degenerativa.
Description
TITULO
DERIVADOS DE ISOQUINOLINA COMO INHIBIDORES DE CALPAINA
Campo de la técnica. La presente invención se enmarca en el campo de los inhibidores de enzimas con actividad terapéutica, más específicamente de los inhibidores de calpaina.
Antecedentes.
Las calpainas, o proteasas neutras activadas por Ca2+ (CANP, E.C. 3.4.22.17), son una familia de proteasas con cisteína ("cysteine proteases") con un papel metabólico muy activo. Aunque su sustrato natural no está claramente determinado, estas enzimas catalizan la hidrólisis de una variedad de proteínas implicadas en la transducción de señales, en la reconstrucción del citoesqueleto, en la regulación del ciclo celular y en la apóptosis (Adv. Pharmacol. 1996, 37, 117). En mamíferos, la familia de calpainas comprende diversas isoformas específicas de tejido y dos isoenzimas ubicuas: la μ- calpaina (o calpaina I) y la wi-calpaina (o calpaina II), que requieren cantidades micromolares y milimolares, respectivamente, de Ca2+ para su activación in vitro.
Estudios estructurales por difracción de rayos X han mostrado que cada isoforma está compuesta por una subunidad grande (~ 80 kDa), que presenta un dominio de proteasa con cisteina del tipo de la papaina, y una subunidad pequeña (~ 30 kDa), que es común a cada isoenzima. Los extremos C-terminales de cada subunidad tienen dominios capaces de unirse a Ca2+ (dominio tipo calmodulina) (FEBS Lett. 2001, 501, 111).
La sobreactivación de las calpainas, lo que puede ocurrir al aumentar la concentración intracelular de Ca2+, está implicada en numerosas enfermedades, tales como las isquemias cerebral y cardiaca, ictus cerebral, Alzheimer, Parkinson, Hungtinton, distrofia muscular, cataratas, enfermedades desmielinizantes (como la esclerosis múltiple) y otras enfermedades degenerativas (Pathophysiology 1999, 6, 91; Brain Res. Rev. 2003, 42, 169).
La principal aplicación de inhibidores de calpaina es como agentes neuroprotectores. En el área terapéutica relacionada con la neuroprotección se han empleado hasta ahora diversas estrategias. Se han usado agentes que actúan sobre la
despolarización de membrana y la entrada de Ca2+ en las células, o que evitan la producción de radicales libres (antioxidantes), o que son antagonistas de la acción de neurotransmisores (J. Clinical Neurosa. 2002, 9, A). Recientemente se ha prestado mucha atención a los fármacos capaces de bloquear los receptores NMDA para el glutamato; sin embargo, el bloqueo de receptores ionotrópicos de aminoácidos excitatorios puede no ser un método ideal para impedir la acción excitotóxica, ya que estos fármacos tienen efectos secundarios psicotomiméticos (Pharmacol. Ther. 1999, 81, 163; Neurobiol. Disease 2003, 12, 82). Una alternativa interesante para conseguir neuroprotección es el bloqueo de fenómenos celulares "post-receptor" que están silenciados fisiológicamente; es decir, la búsqueda de bloqueantes selectivos de cascadas catabólicas inducidas por los agentes excitotóxicos. Es previsible que estos fármacos potenciales de acción intracelular, al actuar sobre rutas metabólicas que se activan durante la neurodegeneración, podrían permitir una acción neuroprotectora más eficaz y selectiva.
La sobreactivación de calpaina requiere un aumento continuado de las concentraciones intracelulares de Ca2+, y esta enzima está latente en las células en reposo [es decir, con niveles de Ca2+ "normales"]. Por ello, la inhibición de calpaina se presenta como un tratamiento adecuado en enfermedades neurodegenerativas. En base a sus características, es previsible que la inhibición de calpaina tenga menos efectos secundarios en terapéutica humana que el bloqueo de procesos metabólicos previos a su activación en los procesos patológicos, como es el caso del antagonismo del receptor NMDA de glutamato y aspartato, debido a que la calpaina no se activa en condiciones fisiológicas "normales" y a que la acción de aminoácidos excitatorios es imprescindible para el funcionamiento normal del sistema nervioso.
Además, los inhibidores potentes y selectivos de calpaina son muy útiles como herramientas de trabajo para estudiar el mecanismo de acción de esta proteasa, así como su papel en ciertos procesos fisiológicos.
Por otra parte, derivados de isoquinolina diferentemente sustituidos se han usado como farmacóforos en compuestos con diversas actividades biológicas (US-5576435; Eur. J. Pharmacology. 2004, 501, 111). Por otro lado, los aminoácidos y los compuestos
relacionados, tales como, los compuestos aminocarbonílicos, poseen diversas propiedades biológicas (J. Med Chem. 2002, 45, 4762; Bioorg. Med. Chem. Lett. 2000, 10, 1497).
Se han descrito inhibidores reversibles e irreversibles de calpaina {Trenas Mol.
Medicine 2001, 7, 355; US-6103720; WO-9641638; US-5541290; ES-200301125; ES- 200401104; Bioorg. Med. Chem. Lett. 2004, 14, 2753; Chemistry & Biodiversity 2004, 1, 442). Los rasgos estructurales más frecuentes de estos inhibidores es que son péptídos o peptidomiméticos con pocos aminoácidos (entre 2 y 6) hidrófobos y alguna funcionalidad electrófila, entre las que cabe mencionar α-cetofosfonatos, α- cetofosfinatos, óxidos de α-cetofosfinas, α-cetoésteres, α-cetoácidos, α-cetoamidas, trifluorometilcetonas, aldehidos, sales de metilsulfonio, epóxidos, etc. Aparentemente, estos compuestos actúan sobre el dominio tipo papaina de la calpaina, lo que se traduce en una selectividad relativamente baja, por lo que frecuentemente también son inhibidores de otras proteasas con cisteina (por ejemplo, papaina) e incluso de proteasas con serina (serine proteas es). Además, el hecho de que estos compuestos sean derivados peptídicos hace que, en algunos casos, posean algunas propiedades farmacológicas no deseadas, tales como transporte ineficaz a través de membranas celulares o la degradación por peptidasa. En parte debido a estos inconvenientes, aun no se ha encontrado un inhibidor de calpaina con utilidad terapéutica.
Recientemente, nuestro grupo ha preparado una variedad de inhibidores de calpaina que se caracterizan por ser derivados de isoquinolina (Adv. Synth. Catal. 2002, 344, 855) Sin embargo, para que estos derivados de isoquinolina sean activos como inhibidores de calpaina es necesaria la presencia de una cadena peptídica (ejemplos ilustrativos son los compuestos 1 y 2, a los que genéricamente denominamos híbridos péptido-heterociclo), y la actividad biológica es altamente dependiente de la longitud del fragmento peptídico, como queda de manifiesto en los valores de IC50 de los compuestos 1 y 2. Sin embargo, nuestros primeros resultados indicaban que los derivados sencillos de isoquinolina, en los que no hay cadena peptídica, no son inhibidores de calpaina, como se ilustra para el compuesto 3.
IC50 = 45 nM IC5o = 1OO μM inactivo
La extensión de la investigación en derivados de isoquinolina como inhibidores de calpaina nos ha permitido descubir que cuando el sustituyente en posición 3- del anillo de isoquinolina es un grupo sec-butilo, la actividad inhibitoria de calpaina aumenta de manera espectacular, y la presencia de cadenas peptídicas no es absolutamente necesaria para lograr tal actividad biológica. El hecho de que no sea necesaria la presencia de cadenas peptídicas en este tipo de compuestos incrementa notablemente su potencial utilidad terapéutica como inhibidores enzimáticos: es de esperar que estos derivados de isoquinolina sin cadena peptídica sean más estables metabólicamente y su transporte celular sea más eficaz que los híbridos péptido- heterociclo.
Breve descripción de la invención La presente invención se refiere a compuestos derivados de isoquinolina parcialmente reducida con actividad como inhibidores de calpaina. Un compuesto de la presente invención es un éster o una amida derivada de los ácidos (3-5rec-butil-l-oxo-2,3-dihidro- lH-isoquinolin-4-iliden)-acético y (3 -sec-butil- 1 -tioxo-2,3-dihidro- lH-isoquinolin-4- iliden)-acetico, incluyendo compuestos cuyo sustituyente en posición 4- del fragmento de isoquinolina son estructuras relacionadas con los aminoácidos, incluyendo fragmentos de compuestos aminocarbonílicos, los cuales se unen al fragmento de isoquinolina por un grupo carbonilmetiliden.
Descripción.
La presente invención se refiere a un compuesto caracterizado porque tiene estructura de isoquinolina parcialmente reducida con sustitución de un grupo sec-butilo en posición 3, y de fórmula I o π,
en la que:
- el grupo X es oxígeno (O) o azufre (S), indistintamente,
- el asterisco (*) representa un centro estereogénico, de configuración (R) ó (S), indistintamente,
- el grupo R1 está independiemente seleccionado entre los grupos
- NH2,
- NHR4 en el que R4 está seleccionado entre un grupo alquilo, arilo, un derivado de aminoácido y un derivado de péptido, - NR 5R6 en el que R5 y R6 están independientemente seleccionados entre un grupo alquilo, arilo, un derivado de aminoácido, un derivado de péptido, y grupos R5 y R6 que forman un sistema cíclico, - OH,
- OR7 en el que R7 representa un grupo arilo o alquilo, - los grupos R2 y R3 son iguales o distintos, y están independientemente seleccionados entre los grupos O (oxígeno), NH, ó NR8, dónde R8 representa un grupo alquilo o arilo,
- Z está seleccionado entre los grupos
- alquilo entre 2 y 8 átomos de carbono, - arilo,
- arilalquilo,
- cadena oxialquílica conteniendo independientemente entre 1 y 3 átomos de oxígeno y entre 2 y 10 átomos de carbono,
- fragmento derivado de aminoácido o péptido.
Son compuestos especialmente preferidos:
- (5',5',Z)-(3-5rec-butil-l-oxo-2,3-dihydro-lH-isoquinolin-4-iliden)-acetato de metilo (7),
- ácido (S, S,Z)-(3 -sec-butil- 1 -oxo-2,3 -dihydro- lH-isoquinolin-4-iliden)-acetico
(8),
- (5',5',Z)-(3-5rec-butil-l-oxo-2,3-dihidro-lH-isoquinolin-4-iliden)-acetato de iso- propilo (9), - (5',5',Z)-(3-5rec-butil-l-oxo-2,3-dihidro-lH-isoquinolin-4-iliden)-acetato de 1- butilo (10),
- (S,S,Z)-(3-sec-butx\- 1 -oxo-2,3-dihidro- lH-isoquinolin-4-iliden)-acetato de bencilo (11), - (5',5',5',5',Z,Z,Z)-(3-5'ec-butil-l-oxo-2,3-dihidro-lH-isoquinolin-4-iliden)-acetato de 4-[2-(3-5rec-butil-l-oxo-2,3-dihidro-lH-isoquinolin-4-iliden)-acetoxi]-but-2- enilo (12),
- (5',5',5',5',Z,Z)-(3-5rec-butil-l-oxo-2,3-dihidro-lH-isoquinolin-4-iliden)-acetato de 4-[2-(3-5rec-butil-l-oxo-2,3-dihidro-lH-isoquinolin-4-iliden)-acetoxi]-but-2-inilo
(13), - (5',5',5',5',Z,Z)-(3-5'ec-butil-l-oxo-2,3-dihidro-lH-isoquinolin-4-iliden)-acetato de
4-[2-(3-5rec-butil-l-oxo-2,3-dihidro-lH-isoquinolin-4-iliden)-acetoximetil]- benzilo (14),
- (5',5',Z)-iV-bencil-2-(3-5rec-butil-l-oxo-2,3-dihidro-lH-isoquinolin-4-iliden)- acetamida (15), - (5',5',Z)-iV-(3-acetil-fenil)-2-(3-5'ec-butil-l-oxo-2,3-dihidro-lH-isoquinolin-4- yiiden)-acetamide (16),
- (5',5',Z)-iV-(2'-amino-biphenil-2-il)-2-(3-5'ec-butil-l-oxo-2,3-dihidro-lH- isoquinolin-4-iliden)-acetamida (17),
- (5,5',5',5',Z,Z)-2,2'-¿w-[(3-íec-butil-l-oxo-2,3-dihidro-lH-isoquinolin-4-iliden)- acetilamino]bifenilo (18),
- (5',5',5',Z)-(l-{2'-[2-(3->yec-butil-l-oxo-2,3-dihidro-lH-isoquinolin-4-iliden)- acetilamino]-bifenil-2-ilcarbamoil}-2-metil-propil)-carbamato de 9H-fluoren-9- ilmetilo (19),
- (5',5',5',Z)-(l-{2'-[2-(3-5'ec-butil-l-oxo-2,3-dihidro-7H-isoquinolin-4-iliden)- acetilamino] -bifenil-2-ilcarbamoil} -2-fenil-etil)-carbamato de 9H-fluoren-9- ilmetilo (20),
- (5',5',5',5',Z)-(l-{2'-[2-(3-íec-butil-l-oxo-2,3-dihidro-lH-isoquinolin-4-iliden)- acetilamino] -bifenil-2-ilcarbamoil} -2-metil-butil)-carbamato de 9H-fluoren-9- ilmetilo (21),
- (5',5',5',Z)-2-amino-iV-{2'-[2-(3-5'ec-butil-l-oxo-2,3-dihidro-lH-isoquinolin-4- iliden)-acetilamino] -bifenil-2-il} -3 -metil-butiramida (22),
- (5',5',5',Z)-2-amino-iV-{2'-[2-(3-sec-butyl-l-oxo-2,3-dihidro-lH-isoquinolin-4- iliden)-acetilamino] -bifenil-2-il} -3 -fenil-propionamide (23),
- (5',5',5',5',Z)-2-amino-iV-{2'-[2-(3-sec-butil-l-oxo-2,3-dihidro-lH-isoquinolin-4- ilidene)-acetilamino]-bifenil-2-il}-3-metil-pentanamida (24),
- (S,S,S,S,S,S,Z)-2-{2-[2-(3-sec-buú\Λ-oxo-2β-dMdroΛHAsoqumo\inAA\iden)- acetilamino]-3-metil-pentanoilamino}-3-metil-pentanoato de metilo (25), - (S,S,S,S,S,S,S,S,Z)-2-(2-{2-[2-(3-secA)uú\Λ-oxo-2,3-dMdroΛHΛsoqumo\in-4- iliden)-acetilamino]-3-metil-pentanoilamino}-3-metil-pentanoilamino)-3-metil- pentanoato de metilo (26),
- (5',5',5',5',Z)-2-{2-[2-(3-sec-butil-l-oxo-2,3-dihidro-lH-isoquinolin-4-iliden)- acetilamino]-3-metil-butirilamino}-3-fenil-propionato de metilo (27), - (£í,£',.Z)-(3-5rec-butil- 1 -tioxo-2,3 -dihidro- lH-isoquinolin-4-iliden)-acetato de metilo (28),
- ácido (S, S,Z)-(3 -sec-butil- 1 -tioxo-2,3 -dihidro- lH-isoquinolin-4-iliden)-acétic
(29), y - (5',5',5',5',5',5',Z)-2-{2-[2-(3-sec-butil-l-tioxo-2,3-dihidro-lH-isoquinolin-4- iliden)-acetilamino]-3-metil-pentanoilamino}-3-metil-pentanoato de metilo (30), y cualquiera de sus isómeros.
Los siguientes intermedios sintéticos son también compuestos especialmente preferidos de la presente invención:
- (5,£)-3-metil-2-(2-yodobenzoilamino)-pentanoato de metilo (4),
- (5í,5)-iV-[(l-hidroximetil-2-metil)-butil]-2-yodo-benzamida (5), y
- (S,SJZ)- 5-metil-4-(2-yodobenzoilamino)- 2-heptenoato de metilo (6), y cualquiera de sus isómeros.
La síntesis de los compuestos de fórmula general I y II de la presente invención se ha llevado a cabo por métodos habituales en síntesis orgánica los cuales son conocidos por los expertos en la técnica, ( Chemical Approaches to the Synthesis of
Peptides and Proteins, CRC Press, Boca Ratón, 1997; Comprehensive Organic
Synthesis, Pergamon Press, 1991, Synlett 2000, 509; Adv. Synth. Catal. 2001, 343, 360;
Topics Current Chemistry 1999, 204, 127; BuIl. Soc. Chim. BeIg. 1978, 87, 229). Como ejemplo ilustrativo, aunque no limitante, los compuestos descritos en esta patente se han preparado a partir del isómero correspondiente del ácido (3-5rec-butil-l-oxo-2,3- dihydro-lH-isoquinolin-4-iliden)-acetico (III) o del isómero correspondiente del ácido
(3-5rec-butil-l-tioxo-2,3-dihydro-lH-isoquinolin-4-iliden)-acetico ( IV). La síntesis de los compuestos IH y IV se indica a continuación usando como intermedios los compuestos, que también son objeto de la presente invención
- cualquier isómero de (3-5rec-butil-l-oxo-2,3-dihydro-lH-isoquinolin-4-iliden)- acetato de metilo (A),
- cualquier isómero de 5-metil-4-(2-yodobenzoilamino)-2-heptenoato de metilo
(B), - cualquier isómero de N-[(í -hidroximetil-2-metil)-butil]-2-yodo-benzamida (C), y
- cualquier isómero de 3-metil-2-(2-yodobenzoilamino)-pentanoato de metilo (D).
reactivo de lawesson tolueno
Debido a que la funcionalidad principal presente en los compuestos I y II (como indicado por los sustituyentes R1, R2, y R3) es la amida o éster, la reacción esencial en la preparación de los compuestos de los tipos Iy E es una reacción de acilación entre un ácido o derivado de ácido, como electrófilo, y una amina o alcohol, como nucleófilo. La estrategia sintética de los compuestos de fórmula I o II depende de la estructura de los grupos R1, R2, y R3, así como de si estos grupos son iguales o diferentes. Un tipo especial de compuestos de tipo I y II, objeto de la presente invención, son del tipo V, en los que existen cadenas de aminoácido, péptido, y compuesto relacionados, unidas al fragmento de isoquinolina a través de un grupo acetilmetiliden. Estos compuestos se preparan por transformaciones habituales en síntesis orgánica y que son conocidas por los expertos en la técnica, usando los derivados adecuados de aminoácido, péptido, y compuestos relacionados.
Cuando en la síntesis de los compuestos I ó π se han usado péptidos como nucleófilos o electrófilos, su síntesis se ha realizado por métodos habituales en química de aminoácidos y péptidos. Se han usado los grupos terc-butoxicarbonil (Boc), benciloxicarbonil (Cbz) y fluorenilmetoxicarbonil (Fmoc) como protección de los grupos amino; los grupos carboxilo se han protegido como esteres alifáticos (metílico, etílico o bencílico). La reacción de acoplamiento para la síntesis de estos péptidos usados como nucleófilos se ha realizado usando metodologías habituales: o por activación del grupo carbonilo como cloruro de ácido, o por formación de esteres activos (por ejemplo de pentafluorofenilo), o a través del anhídrido mixto, o por la activación "in situ" del grupo carbonilo (por tratamiento del ácido con una combinación de carbodiimida y 1 -hidroxibenzotriazol o métodos relacionados) (Chemical Approaches to the Synthesis ofPeptides and Proteins, CRC Press, Boca Ratón, 1997).
Una característica esencial de los compuestos de la presente invención es que son inhibidores de calpaina. Existen diversas isoformas de calpaina, las cuales son muy parecidas estructuralmente y, por lo que es conocido, comparten el mismo mecanismo de acción. Las dos más abundantes son la micro-calpaina (o calpaina I) y la mili- calpaina (o calpaina-II), las cuales se diferencian en ensayos in vitro, en la concentración de Ca2+ necesaria para su activación. Como las dos isoformas de la enzima son muy similares, se ha encontrado en muchos ejemplos de la bibliografía que los inhibidores de calpaina lo son de ambas isoenzimas (Adv. Synth. Catal. 2002, 344, 855). De esta forma, en la presente invención cuando mencionemos a la calpaina, hacemos referencia a las dos isoformas (o isoenzimas) que están incluidas en la definición de calpaina. Por lo tanto, otro objeto de la presente invención es el uso de un compuesto de fórmula I ó π como inhibidor de calpaina
La capacidad de inhibición de calpaina se ha cuantificado por el valor de IC50, que se define como la concentración de inhibidor que reduce a la mitad la actividad catalítica de una enzima. Cuanto más bajo sea el valor de IC50, más potente es el inhibidor. Resultados de inhibición de calpaina I (la más relevante desde un punto de vista fisiológico) de algunos compuestos de la presente invención se indican en la tabla
1 y en la figura 1. Dado que la calpaina II, también denominada mili-calpaina, necesita más cantidad de Ca2+ para la activación, posiblemente no tenga un papel fisiológico tan relevante; pues dicha concentración de Ca2+ causaría la muerte celular antes de que se pudiera activar la mili-calpaina. Por esta razón, los ensayos de inhibición se han realizado para calpaina I, pero son extrapolables para calpaina II.
Tabla 1. Resultados representativos de inhibición de calpaina de compuestos objetos de esta invención.
Algunas de los compuestos representados en la figura 1 son inhibidores muy potentes de calpaina y pueden ser útiles en el diseño de compuestos con aplicaciones terapéuticas. Debido a que se ha encontrado que la sobreactivación de la calpaina está implicada en numerosas enfermedades degenerativas, un objeto adicional de la presente invención es el uso de un compuesto de fórmula I ó π para el tratamiento o prevención de enfermedades degenerativas así como para preparar un medicamento para el tratamiento preventivo o terapéutico de una enfermedad degenerativa, y en especial cuando la enfermedad degenerativa está seleccionada entre isquemia cerebral, isquemia
cardíaca, ictus cerebral, Alzheimer, Parkinson, Hungtinton, distrofia muscular, cataratas y enfermedades desmielinizantes, y en especial si la enfermedad desmielinizante es la esclerosis múltiple (Pathophysiology 1999, 6, 91; Brain Res. Rev. 2003, 42, 169).
Breve descripción de la figura.
La figura 1 muestra resultados del estudio de los derivados del ácido P-sec-butil-l-oxo- 2,3-dihydro-lH-isoquinolin-4-iliden)-acético del ácido (3-5rec-butil-l-tioxo-2,3-dihydro- lH-isoquinolin-4-iliden)-acético, objetos de la presente invención y su actividad biológica como inhibidores de calpaína I.
Ejemplos.
Como ejemplos ilustrativos, aunque no limitantes, se indican los procedimientos experimentales, datos espectroscópicos y analíticos de algunos derivados de isoquinolina de fórmulas I o π, así como ensayos de la actividad biológica de los mismos.
Ejemplo 1.
Síntesis de (5,5)-3-mctil-2-(2-yodobcnzoilamino)-pcntanoato de metilo (4).
13C-RMN (50 MHz, CDCl3) δ: 171 '9 (CO2Me); 168'7 (CONH); 141 '7 (C(I ')); 139'9 (C(3')); 131*2 (C(4')); 128'3, 128'0 (C(5')5 C(6')); 92'2 (C(2')); 56'7 (C(2)); 52'1 (CO2Me); 38'0 (C(3)); 25'2 (C(4)); 15'6 (Me-C(3)); 11'6 (C(5)) ppm. EM-ES (ES+) m/e: 376 ([M+ H]+), 398 ([M+ Na]+), 773 ([2M+ H]+). AE: Calculado para C14Hi8INO3: C 44'82, H 4'84, N 3'73. Encontrado: C 45' 12, H 5'10, N 4'00.
Ejemplo 2. Síntesis de (S^-iV-[(l-hidroximetil-2-metil)-butyl]-2-yodo-benzamida (5).
A una disolución de 4 (8'44 g, 22'5 mmol) en THF (50 mL) a -10 °C se añadió LiBH4 (1'47 g, 67'5 mmol). Seguidamente se añadió lentamente MeOH (5 mL), la mezcla se agitó a -10 °C durante 10 minutos y a continuación se dejó alcanzar la temperatura ambiente. Posteriormente se añadió H2O, se eliminó el THF a vacío y la fase acuosa se extrajo con AcOEt (3 x 50 mL). Las fases orgánicas se lavaron con salmuera y se secaron sobre MgSO4. Una vez eliminado a vacío el disolvente se obtuvo el producto crudo, el cual se purificó por cromatografía en columna usando como eluyente hexano/AcOEt (1:1 a 1:9) y luego AcOEt, obteniéndose 5 (6'6 g, 85% rto). Sólido blanco.
P.f.: 125-126 °C.
[o]D = - 27' 8 (c = 1 '0, CHCl3).
IR (KBr) v: 3410, 3295, 1628, 1544, 1076 cm"1.
1H-RMN (400 MHz, CDCl3, mezcla de confórmeros M y m, 4:1) δ: 7'81 (m, 0'7 H, H- C(3'), M); 7'72 (m, 0'3 H, H-C(3'), m); 7'50-7'31 (m, 2 H, H-C(5'), H-C(6'), M+m);
7'10-7'04 (m, 1 H, H-C(4'), M+m); 6'42 (d, J= 8'1, 0'2 H, NH, m); 6'06 (d ancho, J= 8'1, 0'8 H, NH, M); 3'99-3'85 (m, 1 H, H-C(2), M+m); 3'85-3'72 (m, 2 H, H-C(I), M+m); 2'88 (í ancho, J= 5'4, 0'2 H, OH, m); 2'62 (í ancho, J= 5'4, 0'8 H, OH, M); 1 '80-1 '50 (m, 2 H, H-C(4), M+m); 1 '28-1 '14 (m, 1 H, H-C(3), M+m); 0'97 (d, J= 6'8, 3 H, Me-C(3)); 0'92 (f, J= 7*5, 3 H, H-C(5)) ppm.
13C-RMN (50 MHz, CDCl3) δ: 170'0 (CONH); 142'4 (C(I ')); 139'7 (C(3'))í 131*1 (C(4')); 128*5, 128*1 (C(5')5 C(6')); 92'3 (C(2')); 36'2 (C(I)); 56'4 (C(2)); 35'5 (C(3)); 25'6 (C(4)); 15'6 (Me-C(3)); 11*3 (C(5)) ppm. EM (ES+) m/e: 348 ([M+ H]+), 370 ([M+ Na]+), 717 ([2M+ Na]+). AE: Calculado para C13Hi8INO2: C 44'97, H 5*23, N 4'03.
Encontrado: C 45 ' 11 , H 5 '26, N 4' 18.
Ejemplo 3.
Síntesis de (5,5,£)-5-mctil-4-(2-yodobcnzoilamino)-2-hcptcnoato de metilo (6).
A una disolución comercial de cloruro de oxalilo 2M en CH2Cl2 anhidro (10' 33 mL,
20 '8 mmol) diluida con el mismo disolvente (12 mL) a -78 °C se añadió gota a gota una disolución de DMSO anhidro (2'9 mL, 41'0 mmol) en CH2Cl2 anhidro (30 mL). La mezcla se agitó durante 30 minutos a -78 °C tras los cuales se añadió una disolución del alcohol 5 (4'44 g, 12'8 mmol) en CH2Cl2 anhidro (25 mL) gota a gota vía cánula. La mezcla se agitó durante 1 hora a -78 °C y a continuación se añadió Et3N (10'26 mL, 74'0 mmol) gota a gota. Después de aproximadamnte 1 hora de agitación a -78 °C, cuando la oxidación del aldehido fue completa (ccf), se añadió Ph3P=CHCO2Me (6'0 g, 19'0 mmol) dejando que la reacción alcanzase lentamente temperatura ambiente durante toda la noche. Por último, se eliminó el disolvente a vacío obteniéndose un producto bruto que se purificó por cromatografía en columna usando como eluyente hexano/AcOEt (4:1 a 1:1) proporcionando de este modo el isómero E del N- benzoilamino éster insaturado 6 (4'1 g, 80% rto). Sólido blanco. P.f.: 124-125 °C. [o]D = + 1 '7 (C = 1 '0, CHCl3).
IR (KBr) v: 3347, 3275, 2958, 1721, 1640, 1531 cnϊ1.
1H-RMN (300 MHz, CDCl3) δ: 7'85 (d, J= TS, 1 H, H-C(3')); 7'37 (m, 2 H, H-C(5'), H-C(6')); 7'10 (m, 1 H, H-C(4')); 6'92 (dd, J = 15*8, 5'9, 1 H, H-C(3)); 6'05 (dd, J= 15*8, 1*7, 1 H, H-C(2)); 5'93 (d ancho, J= 8*8, 1 H, NH); 4'79 (m, 1 H, H-C(4)); 3'72 (s, 3 H, CO2Me); 1*79 (m, 1 H, H-C(5)); 1*54 (m, 1 H, Ha-C(6)); 1*22 (m, 1 H, Hb- C(6)); 0'97 (m, 6 H, Me-C(S), H-C(7)) ppm.
13C-RMN (50 MHz, CDCl3) δ: 168*7 (CONH); 166'5 (CO2Me); 145*9 (C(3)); 142*0 (C(I ')); 139'9 (C(3')); 131*2 (C(4')); 128*3, 128*2 (C(5')5 C(6')); 122*0 (C(2)); 92*1 (C(2')); 54'8 (C(4)); 51 '7 (CO2Me); 38'7 (C(5)); 25'4 (C(6)); 15*4 (Me-C(S)), 11 '6 (C(7)) ppm.
EM (ES+) m/e: 402 ([M+ H]+), 424 ([M+ Na]+), 803 ([2M+ H]+), 825 ([2M+ Na]+). AE: Calculado para C16H20INO3: C 47'89, H 5*02, N 3*49. Encontrado: C 48*11, H 5*13, N 3'61.
Ejemplo 4.
Síntesis de (5,5,Z)-(3-sec-butil-l-oxo-2,3-dihidro-l//-isoquinolin-4-ilidcn)-acctato de metilo (7).
7
Una mezcla del éster 6 (4' 17 g, 10'4 mmol), Pd(OAc)2 (80 mg, 0'035 mmol), Ph3P (288 mg, l'O8 mmol) y Et3N (3 '2 mL, 20'6 mmol) en CH3CN anhidro (250 mL) se refluyó durante 3 días bajo argón con agitación vigorosa. A continuación la mezcla se dejó alcanzar la temperatura ambiente y tras posterior adición de H2O (250 mL), se extrajo con CHCl3 (3 x 50 mL). Las fases orgánicas se lavaron con salmuera y se secaron sobre MgSO4. Una vez eliminado a vacío el disolvente se obtuvo el producto bruto, que se purificó por cromatografía en columna usando como eluyente hexano/AcOEt (4:1 a 2:3) para dar el compuesto 7 (2'4 g, 85% rto). Sólido amorfo blanco. [o]D = - 365'8 (c = 0'5, CHCl3). IR (KBr) v: 3434, 1715, 1669, 1568, 1195, 1167, 774 cm "!.
1H-RMN (500 MHz, CDCl3) δ: 8*13 (m, 1 H; H-C(8')); 7'57 (m, 3 H, H-C(5'), H- C(6'), H-C(7')); 6'60 (d ancho, J= 3*4, 1 H, NH); 6'34 (s, 1 H, H-C(2)); 5'45 (m, 1 H, H-C(3')); 3'77 (s, 3 H, CO2Me); 1*61 (m, 1 H, H-C(I ")); 1*45 (m, 1 H, Ha-C(2")); 1*15 (m, 1 H, Hb-C(2")); 0'87 (d, J = 6'8, 3 H, Me-C(I ")); 0'81 (f, J = 7*6, 3 H, H- C((3")) ppm.
13C-RMN (50 MHz, CDCl3) δ: 165*4 (CONH); 164'0 (CO2Me); 150*7 (C(4')); 135*3 (C(4a')); 132*7, 130'5 (C(5') o C(6') o C(7')); 128*4 (C(8a')í 127*9 (C(8'))í 123*8 (C(5') o C(6') o C(7')); H6'4 (C(2)); 55'8 (C(3')); 51*5 (CO2Me); 41*5 C(I ")); 24'4 (C(2")); 15*1 (Me-C(I ')); 11 '0 (C(3 ") ppm. EM (ES+) m/e: 274 ([M+ H]+), 296 ([M+ Na]+), 547 ([2M+ H]+), 569 ([2M + Na]+). AE: Calculado para C16Hi9NO3: C 70*31, H 7*01, N 5*12. Encontrado: C 70*15, H 7*02, N 5*04.
Ejemplo 5. Síntesis del ácido (5,5,Z)-(3-sec-butil-l-oxo-2,3-dihydro-l//-isoquinolin-4-ilidcn)- acetico (8).
A una disolución de 7 (273 mg, l'O mmol) en una mezcla 1:1 de THF-H2O (10 mL) a temperatura ambiente se añadió una solución de LiOH (83 '9 mg, 2'0 mmol) en H2O (2 mL). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante toda la noche, y a continuación se acidificó con HCl 5% hasta pH = 2. Se eliminó el THF a vacío y la fase acuosa se extrajo con AcOEt (3 x 50 mL). Las fases orgánicas se lavaron con salmuera y se secaron sobre MgSO4. Una vez eliminado a vacío el disolvente se obtuvo el producto bruto, que se purificó por recristalización de AcOEt/hexano para dar el ácido 8 (140 mg, 54% rto) como un sólido blanco.
P.f.: 215-216 °C (con reblandecimiento previo).
[o]D = - 333'8 (c = 0*49, DMF).
IR(KBr)v: 3435,2966, 1674, 1306cm"1.
1H-RMN (300 MHz, DMSO-^6) δ: 12'64 (s ancho, 1 H, CO2H); 8'60 (d, J = 4'9, 1 H, NH); 7'91 (dd, J= 7'3, 1'5, 1 H, H-C(8')); 7'75 (dd, J= 7'9, 1'3, 1 H, H-C(5')); 7'64- 7'53 (m, 2 H, H-C(6'), H-C(7')); 6'36 (s, 1 H, H-C(2)); 5'24 (dd, J= Tl, 4'9, 1 H, H- C(3')); 1'47 (m, 1 H, Ha-C(2")); 1'45 (m, 1 H, H-C(I")); 1*16 (m, 1 H, Hb-C(2")); 0'74 (m, 6 H, Me-C(I"), H-C(3")) ppm.
13C-RMN (50 MHz, DMSO-^6) δ: 166'7 (CONH); 162'5 (CO2H); 149'1 (C(4')); 135'1 (C(4a')); 132'6, 130'3 (C(6')5 C(7')); 128'7 (C(8a')); 127'0 (C(8')); 124'4 (C(5')); 117'6 (C(2)); 53'9 (C(3')); 41'2 (C(I ")); 24'3 (C(2")); 15'0, 10'9 (Me-C(I "), C(3")) ppm. EM (ES+) m/e: 260 ([M+ H]+), 282 ([M+ Na]+), 519 ([2M+ H]+), 541 ([2M+ Na]+). AE: Calculado para C15Hi7NO3: C 69'48, H 6'61, N 5'40. Encontrado: C 69'25, H 7'00, N 5'41.
Ejemplo 6. Reacción del ácido 8 con alcoholes y dioles (Procedimiento General I). Síntesis de esteres del ácido 8.
A una suspensión del ácido 8 (100 mg, 0'38 mmol) en CH2Cl2 anhidro (2 '5 mL) a 0 0C se la añadió gota a gota SOCl2 (0'28 mL, 3 '8 mmol), la mezcla se agitó hasta temperatura ambiente y a continuación se calentó a reflujo durante aproximadamente 1 h. Seguidamente se eliminó el disolvente a presión reducida obteniéndose un aceite que se disolvió en CH2Cl2 anhidro (2 '5 mL), al que se añadió bajo argón el alcohol correspondiente (0'76 mmol para los monoalcoholes y 0'15 mmol para los dioles) disuelto en CH2Cl2 anhidro (2 '5 mL). La mezcla se agitó a temperatura ambiente bajo argón durante 1 hora. A continuación se diluyó la reacción con CH2Cl2 (50 mL) y se extrajo con una disolución acuosa saturada de NaHCO3 (3 x 50 mL). La fase orgánica se lavó con salmuera y se secó sobre MgSO4. Una vez eliminado a vacío el disolvente se obtuvo el producto crudo, que se purificó por cromatografía en columna usando como eluyente hexano/AcOEt (4:1 a 1:1). Los rendimientos indicados a continuación se refieren al conjunto de las dos etapas (formación del cloruro de ácido y síntesis de los esteres).
Ejemplo 7.
Síntesis de (S,S,Z)-(3-sec-butil-l-oxo-2,3-dihidro-l/r-isoquinolin-4-iliden)-acetato de /so-propilo (9).
Siguiendo el Procedimiento General I, se obtuvo el compuesto 9 como un aceite incoloro (81 mg, 71% rto).
9
[o]D = - 341 '8 (c = 0'25, CHCl3).
IR(KBr)v: 3429,2968,2876, 1708, 1672, 1372, 1181, 1107,775cm"1.
1H-RMN (400 MHz, CDCl3) δ: 8'09 (m, 1 H; H-C(8')); 7'55 (m, 3 H, H-C(5'), H- C(6'), H-C(7')); 6'97 (s ancho, 1 H, NH); 6'28 (s, 1 H, H-C(2)); 5'44 (dd, J= 4'5, 2'4,
1 H, H-C(3')); 5'07 (sep, J= 6'2 1 H, CHMe2); 1'58 (m, 1 Η, H-C(I ")); 1'43 (m, 1 H,
Ha-C(2")); 1'28 (d, J= 6'2, 3 H, CO2CHMe2); 1'26 (d, J= 6'2, 3 H, CO2CHMe2); 1*15
(m, 1 H, Hb-C(2")); 0'86 (d, J= 6'8, 3 H, Me-C(I ")); 0'78 (t, J= TA, 3 H, H-C((3")) ppm. 13C-RMN (50 MHz, CDCl3) δ: 165'0 (CONH); 164'0 (CO2CHMe2); 149'8 (C(4'));
135'5 (C(4a')); 132'6, 130'4 (C(5') ó C(6') ó C(7')); 128'4 (C(8a')); 127'9 (C(8'));
123'8 (C(5') ó C(6') ó C(7')); H7'5 (C(2)); 67'8 (CO2CHMe2); 55'8 (C(3')); 41'5
(C(I ")); 24'4 (C(2")); 21'9 (CO2CHMe2); 15'1 (Me-C(I ')); 11*0 (C(3")) ppm.
EM (ES+) m/e: 302 ([M + H]+), 324 ([M + Na]+), 603 ([2M + H]+), 625 ([2M + H + Na]+).
Ejemplo 8.
Síntesis de (S,S,Z)-(3-sec-butil-l-oxo-2,3-diliidro-l/r-isoquinolin-4-iliden)-acetato de 1 -butilo (10). Siguiendo el Procedimiento General I, se obtuvo el compuesto 10 como un aceite un sólido blanco (82 mg, 69% rto).
P.f.: 110-112 °C. [o]D = - 316'6 (c = 0'5, CHCl3).
IR (KBr) v 3467, 3311, 2927, 1707, 1667, 1599, 1186, 770 cnϊ1. 1H-RMN (300 MHz, CDCl3) δ: 8'14 (m, 1 H; H-C(8')); 7'59 (m, 3 H, H-C(5'), H- C(6'), H-C(7')); 6'48 (s ancho, 1 H, NH); 6'35 (s, 1 H, H-C(2)); 5'46 (dd, J= 6'8, 3'4, 1 H, H-C(3')); 4'18 (t, J = 6'7, 2 H, CO2CH2CH2CH2CH3); 1'73-1'59 (m, 3 H, H- C(I "), CO2CH2CH2CH2CH3); 1'5O-1'42 (m, 3 H, Ha-C(2"), CO2CH2CH2CH2CH3); 1*18 (m, 1 H, Hb-C(2")); 0'96 (f, J = 7'4, CO2CH2CH2CH2CH5); 0'88 (d, J= 6'8, 3 Η, Me-C(I")); 0'82 (f, J= 7'3, 3 Η, Η-C((3")) ppm.
13C-RMN (50 MHz, CDCl3) δ: 165'6 (CONH); 164'7 (CO2CH2CH2CH2CH3); 150'2 (C(4')); 135*5 (C(4a'))í 132*8, 130'5 (C(5') ó C(6') ó C(7')); 128*1 (C(8a'))í 126*9 (C(8')); 123*9 (C(5') ó C(6') ó C(7')); 117*0 (C(2)); 64'4 (CO2CH2CH2CH2CH3); 55'9 (C(3')); 41*5 (C(I ")); 39'6 (CO2CH2CH2CH2CH3); 24'4 (C(2")); 19*2 (CO2CH2CH2CH2CH3); 15*1 (Me-C(I ')); 13*7 (CO2CH2CH2CH2CH3); 11*0 (C(3")) ppm. EM (ES+) m/e: 316 ([M+ H]+), 338 ([M+ Na]+), 631 ([2M+ H]+), 653 ([2M+ Na]+).
Ejemplo 9. Síntesis de (S^-»,Z>-(3-sec-butil-l-oxo-2,3-dihidro-l/r-isoquinolin-4-iliden)-acetato de bencilo (11). Siguiendo el Procedimiento General I, se obtuvo el compuesto 11 como un sólido blanco (69 mg, 50% rto).
[o]D = - 178'5 (c = 0'005, CHCl3).
IR (KBr) v: 3435, 2927, 1710, 1669, 1159, 1028, 767, 695 cnϊ1.
1H-RMN (300 MHz, CDCl3) δ: 8'14 (m, 1 H; H-C(8')); 7'56 (m, 3 H, H-C(5'), H-
C(6'), H-C(7')); 7'39 (m, 5 H, CO2CH2PA); 6'86 (d ancho, J= 4'3, 1 H, NH); 6'40 (s, 1
H, H-C(2)); 5'46 (dd, J= Tl, 4'3, 1 H, H-C(3')); 5'22 (s, 2 H, CO2CH2Ph); 1'61 (m, 1
Η, H-C(I ")); 1'44 (m, 1 H, Ha-C(2")); 1'14 (m, 1 H, Hb-C(2")); 0'87 (d, J= 6'8, 3 H,
Me-C(I")); 0'81 (t, J= 7'3, 3 H, H-C((3")) ppm.
13C-RMN (50 MHz, CDCl3) δ: 165'2 (CONH); 163'8 (CO2CH2Ph); 150'9 (C(4'));
135'6 (C(4a')); 135'4 (C(Ph)); 132'7, 130'6 (C(5') o C(6') o C(7')); 128'6, 128'5,
128'4, 128'3, 128'1 (7 C, C(8'), C(8a'), C(Ph)); 123'9 (C(5') o C(6') o C(7')); H6'5
(C(2)); 66'3 (CO2CH2Ph); 55'9 (C(3')); 41'5 (C(I ")); 24'4 (C(2")); 15'1 (Me-C(I ')); l l'l (C(3")) ppm.
EM (ES+) m/e: 350 ([M+ H]+), 372 ([M+ Na]+), 699 ([2M + H]+), 721 ([2M+ Na]+).
Ejemplo 10.
Síntesis de (SΛ^Λ^^^)-(3-sec-butíl-l-oxo-2,3-díhidro-l^-isoquínolin-4-iUden)- acetato de 4- [2-(3-sec-butil-l-oxo-2,3-dihidro-l/7-isoquinolin-4-iliden)-acetoxi] -but-
2-enilo (12).
Siguiendo el Procedimiento General I, se obtuvo el compuesto 12 como un sólido blanco (35 mg, 41% rto).
P.f.: 79-81 °C.
[o]D = - 404'2 (c = 0'12, CHCl3).
IR(KBr)v: 3429,2964,2927, 1714, 1671, 1273, 1157,773 cm"1.
1H-RMN (300 MHz, CDCl3) δ: 8'14 (m, 2 H; H-C(8')); 7'56 (m, 6 H, H-C(5'), H-
C(6'), H-C(7')); 6'67 (d ancho, J = 4'6, 2 H, NH); 6'34 (s, 2 H, H-C(2)); 5'84 (t, J=
4'1, 2 H, CH=CH); 5'46 (dd, J = Tl, 4'6, 2 Η, Η-C(3')); 4'81 (t, J = 4'1, 4 H,
CO2CH2CH=CHCH2CO2); 1'59 (m, 2 Η, H-C(I ")); 1'44 (m, 2 H, Ha-C(2")); 1'16 (m, 2 H, Hb-C(2")); 0'87 (d, J= 6'8, 6 H, Me-C(I ")); 0'80 (t, J= TA, 6 H, H-C((3")) ppm. 13C-RMN (50 MHz, CDCl3) δ: 165'1 (CONH); 163'8 (CO2CH2CH=CHCH2CO2); 151 '2 (C(4')); 135'3 (C(4a')); 132'8, 130'7 (C(5') o C(6') o C(7')); 128'4, 128'2, 128'1 (C(8')5 C(8a'), C(CH=CH)); 123'8 (C(5') o C(6') o C(7')); 116'2 (C(2)); 59'9 (CO2CH2CH=CHCH2CO2); 55'9 (C(3')); 41'5 (C(I ")); 24'5 (C(2")); 15'1 (Me-C(I ')); l l'0 (C(3")) ppm.
EM (ES +) m/e: 571 ([M + H]+), 593 ([M + Na]+), 1141 ([2M + H]+), 1163 ([2M + Na]+).
Ejemplo 11.
Síntesis de (S,S,S,S,Z,Z)-(3-sec-butil-l-oxo-2,3-dihidro-l/r-isoquinolin-4-iliden)- acetato de 4- [2-(3-sec-butil-l -oxo-2,3-dihidro-l//-isoquinolin-4-ilidcn)-acctoxi] -but-
2-inilo (13).
Siguiendo el Procedimiento General I, se obtuvo el compuesto 13 como un sólido blanco (44 mg, 52% rto).
P.f.: 85-87 °C.
[o]D = - 447'2 (c = O' 14, CHCl3).
IR(KBr)v: 3434,2963,2927, 1718, 1669, 1378, 1273, 1152,771 cm"1.
1H-RMN (300 MHz, CDCl3) δ: 8'12 (m, 2 H; H-C(8')); 7'55 (m, 6 H, H-C(5'), H-
C(6'), H-C(7')); 6'67 (d ancho, J= 4'5, 2 H, NH); 6'35 (s, 2 H, H-C(2)); 5'41 (dd, J=
7'3, 4'5, 2 H, H-C(3')); 4'82 (s, 4 H, CO2CH2C≡CCH2CO2); 1'59 (m, 2 Η, H-C(I "));
1'42 (m, 2 H, Ha-C(2")); 1*15 (m, 2 H, Hb-C(2")); 0'85 (d, J= 6'8, 6 H, Me-C(I "));
0'77 (t, J= 7'3, 6 H, H-C((3")) ppm.
13C-RMN (75 MHz, CDCl3) δ: 164'5 (CONH); 163 '7 (CO2CH2C≡CCH2CO2); 152'1
(C(4')); 135'1 (C(4a')); 132'8, 130'9 (C(5') o C(6') o C(7')); 128'4 (C(8a')); 128'1
(C(8')); 123'9 (C(5') o C(6') o C(7')); 115'6 (C(2)); 80'8 (CO2CH2C=CCH2CO2); 56'1
(C(3')); 52'1 (CO2CH2C^CH2CO2); 41'6 (C(I")); 24'4 (C(2")); 15'1 (Me-C(I')); ll'l(C(3"))ppm.
EM(ES+) m/e: 569 ([M+ H]+), 591 ([M+ Na]+), 1137 ([2M+ H]+), 1159 ([2M +
Na]+).
Ejemplo12.
Síntesis de (5,5,5,5,Z,Z)-(3-sec-butil-l-oxo-2,3-dihidro-l//-isoquinolin-4-ilidcn)- acetato de 4- [2-(3-sec-butil-l -oxo-2,3-dihidro-l/7-isoquinolin-4-ilidcn)- acetoximetil]-benzílo (14). Siguiendo el Procedimiento General I, se obtuvo el compuesto 14 como un sólido blanco (25 mg, 27% rto).
P.f.: 213-215 °C.
[o]D = - 391 '0 (C = 0'22, CH2Cl2). IR (KBr) v: 3422, 2927, 1712, 1671, 1379, 1275, 1158, 775 cm"1.
1H-RMN (300 MHz, CDCl3) δ: 8'14 (m, 2 H; H-C(8')); 7'57 (m, 6 H, H-C(5'), H- C(6'), H-C(7')); 7'43 (s, 4 H, CO2CH2PACH2CO2); 6'40 (s, 2 H, H-C(2)); 6'25 (d ancho, J = AH, 2 H, NH); 5'45 (dd, J = Tl, AH, 2 H, H-C(3')); 5'23 (s, 2 H, CO2CH2PhCH2CO2); 5'22 (s, 2 H, CO2CH2PhCH2CO2); 1'61 (m, 2 Η, H-C(I ")); 1'44 (m, 2 H, Ha-C(2")); 1'17 (m, 2 H, Hb-C(2")); 0'87 (d, J= 6'8, 6 H, Me-C(I")); 0'81 (t, J= 7'3, 6 H, H-C((3")) ppm.
13C-RMN (75 MHz, CDCl3) δ: 165'1 (CONH); 163'9 (CO2CH2PhCH2CO2); 151*3 (C(4')); 135'9 (C(Ph)); 135'3 (C(4a')); 132'7, 130'6 (C(5') o C(6') o C(7')); 128'5 (6 C, C(8a'), C(Ph)); 128'0 (C(8')); 123'8 (C(5') o C(6') o C(7')); 116'3 (C(2)); 65'8 (CO2CH2PhCH2CO2); 55'9 (C(3')); 41'5 (C(I ")); 24'4 (C(2")); 15'1 (Me-C(I ')); 11*0 (C(3")) ppm.
EM (ES+) m/e: 621 ([M+ H]+), 623 ([M+ Na]+), 1241 ([2M+ H]+), 1264 ([2M + H + Na]+).
Ejemplo 13.
Reacción del ácido 8 con aminas y diaminas (Procedimiento General II). Síntesis de amidas del ácido 8.
A una suspensión del ácido 8 (100 mg, 0'38 mmol) en CH2CI2 anhidro (2 '5 mL) a 0 0C se la añadió gota a gota SOCl2 (0'28 mL, 3 '8 mmol), la mezcla se agitó hasta temperatura ambiente y a continuación se calentó a reflujo durante aproximadamente 1 h. Seguidamente se eliminó el disolvente a presión reducida obteniéndose un aceite oscuro que se disolvió en CH2CI2 anhidro (2'5 mL), al que se añadió bajo argón la amina correspondiente (0'57 mmol de mono-amina ó 0'17 mmol de di-amina) disuelta en CH2Cl2 anhidro (2'5 mL). Seguidamente se añadió Et3N (0'I mL, 0'76 mmol) y se dejó agitando a temperatura ambiente durante toda la noche. A continuación se diluyó la reacción con CH2Cl2 (50 mL) y se extrajo secuencialmente con una disolución acuosa de HCl 5% (3 x 50 mL) y disolución acuosa saturada de NaHCO3 (3 x 50 mL). La fase orgánica se lavó con salmuera y se secó sobre MgSO4. Una vez eliminado a vacío el disolvente se obtuvo el producto bruto, que se purificó por cromatografía en columna usando como eluyente hexano/AcOEt (7:3 a 1:1).
Ejemplo 14.
Síntesis de (S^-»yZ)-iV-bencil-2-(3-sec-butil-l-oxo-2,3-diliidro-l/r-isoquinolin-4- iliden)-acetamida (15).
Siguiendo el Procedimiento General II, se obtuvo el compuesto 15 como un sólido blanco (119 mg, 90% rto).
P.f.: 90-94 °C. [o]D = - 315'1 (c = 0'25, CH3OH).
IR (KBr) v: 3435, 2963, 2927, 1651, 1523, 1450 cm 1.
1H-RMN (300 MHz, CDCl3) δ: 8'10 (m, 1 H; H-C(8')); 7'49 (m, 3 H, H-C(5'), H-
C(6'), H-C(7')); 7'32 (m, 5 H, CONHCH2PA); 6'20 (d ancho, J= 4'5, 1 H, NH); 6' 17
(s, 1 H, H-C(2)); 6'02 (m, 1 H, CONHCH2Ph); 5'65 (dd, J = 7*3, 4*5, 2 H, H-C(3')); 4'53 (m, 2 H, CONHCH2Ph); 1'63 (m, 1 Η, H-C(I ")); 1'45 (m, 1 H, Ha-C(2")); 1'19 (m, 1 H, Hb-C(2")); 0'89 (d, J = 6*8, 3 H, Me-C(I ")); 0'81 (f, J= 7'3, 3 H, H-C((3")) ppm. 13C-RMN (75 MHz, CDCl3) δ: 164'7 (CONHCH2Ph); 163 '9 (CONH); 147' 1 (C(4a')); 137'9 (C(4')); 135*9 (C(Ph)); 132'7, 129'9 (C(5') o C(6') o C(7')); 128'8, 128'4, 127'9, 127'7 (7 C, C(8'), C(8a'), C(Ph)); 123'5 (C(5') o C(6') o C(7')); 119'2 (C(2)); 55'6 (C(3'))5 43'7 (CONHCH2Ph); 41'3 (C(I ")); 24'6 (C(2")); 15'2 (Me-C(I ')); 11*1 (C(3")) ppm. EM (ES+) m/e: 349 ([M+ H]+), 371 ([M+ Na]+), 697 ([2M+ H]+), 719 ([2M+ Na]+).
Ejemplo 15.
Síntesis de (SΛ^)-Λr-(3-acetil-fenU)-2-(3-sec-butü-l-oxo-2,3-dihidro-l/T- isoquínolin-4-yiiden)-acetamide (16). Siguiendo el Procedimiento General II, se obtuvo el compuesto 16 como un sólido blanco (112 mg, 79% rto).
16
P.f.: 147-151 °C.
[o]D = - 333 '5 (c = 0'26, CH3OH). IR (KBr) v: 3413, 3435, 2964, 2927, 1673, 1656, 1549, 1484, 1167, 688 cm"1.
1H-RMN (500 MHz, 50 0C, CDCl3) δ: 8'33 (s ancho, 1 H, CONHAr); 8'10 (m, 2 Η; Η- C(8'), H-Ar); 7'98 (d, J= 7*3, 1 H, H-Ar); 7'66 (d, J= TS, 1 H, H-Ar); 7'46 (m, 4 H, H-C(5'), H-C(6'), H-C(7'), H-Ar); 6'51 (s ancho, 1 H, NH); 6'35 (s, 1 H, H-C(2)); 5'60 (dd, J= 7*3, 4*8, 1 H, H-C(3')); 2'57 (s, 3 H, ArCOCH5); 1'63 (m, 1 Η, H-C(I ")); 1*47 (m, 1 H, Ha-C(2")); 1*15 (m, 1 H, Hb-C(2")); 0'90 (d, J= 6'8, 3 H, Me-C(I")); 0'80 (í, J= 7'3, 3 H, H-C((3")) ppm.
13C-RMN (75 MHz, CDCl3) δ: 198'3 (ArCOCH3); 164'5, 163*3 (CONH); 148'2 (C(4a')); 138*8 (C(4')); 135*9, 132*8, 130*2, 128*2, 127*8 (C(Ph), C(5') o C(6') o C(T), C(8')); 129*3 (C(8a'))í 124*4, 123*9 (C(2), C(Ph)); 55'6 (C(3'))í 41*3 (C(I ")); 29'7 (ArCOCH3); 24'7 (C(2")); 15*2 (Me-C(I ')); 11*2 (C(3")) ppm. EM (ES+) m/e: 377 ([M+ H]+), 399 ([M+ Na]+), 753 ([2M+ H]+), 775 ([2M+ Na]+).
Ejemplo 16.
Síntesis de (SΛ^)-N-(2'-amino-biphenU-2-U)-2-(3-sec-butil-l-oxo-2,3-dihidro-lfi- isoquínolin-4-ilíden)-acetamida (17).
Siguiendo el Procedimiento General II, se obtuvo el compuesto 17 como un sólido blanco (121 mg, 75% rto).
17
[o]D = - 312*6 (C = 0*33, CH3OH).
IR (KBr) v: 3436, 1661, 1515, 1439, 1299, 1161, 749 cm"1.
1H-RMN (300 MHz, 30 0C, CDCl3, mezcla de conformeros M y m, 1:1) δ: 8'24 (m, 2 H, H-Ar, M+m); 8'08 (m, 2 H; H-C(8'), M+m); 8'00 (s ancho, 1 H, CONHAr, M); 7'95 (s ancho, 1 Η, CONHAr, m); 7'54-7'39 (m, 8 Η, Η-C(5'), H-C(6'), H-C(7'), H-Ar, M+m); T29-T22 (m, 6 H, H-Ar, M+m); 7'19-7'09 (m, 2 H, H-Ar, M+m); 6'92-6'82 (m, 4 H, H-Ar, M+m); 6'38 (s ancho, 1 H, NH, M); 6'38 (s ancho, 1 H, NH, m); 6'10 (s, 1 H, H-C(2), M); 6'06 (s, 1 H, H-C(2), m); 5'59 (m, 1 H, H-C(3'), M); 5'33 (m, 1 H, H-C(3'),m); 3'97 (s, 2 H, ArNH2, M+m); 1'59 (m, 1 Η, H-C(I "), M+m); 1*41 (m, 1 H, Ha-C(2"), M+m); 1*13 (m, 1 H, Hb-C(2"), M+m); 0'85 (d, J = 4*2, 3 H, Me-C(I "), M); 0'83 (d, J= 4*2, 3 H, Me-C(I "), m); 0'77 (í, J= 7*3, 3 H, H-C((3")) ppm. 1H-RMN (300 MHz, DMSO-^6) δ: 9'32 (s ancho, 1 H, CONHAr); 8'48 (d ancho, J= 4*6, 1 Η, NH); 7'87 (m, 1 H, H-C(8')); 7'70 (m, 1 H, H-C(5')); 7'58 (m, 3 H, H-C(6'), H-C(7'), H-C(2)); 7'37 (m, 1 H, H-Ar); 7'25 (m, 2 H, H-Ar); 7'06 (m, 1 H, H-Ar); 6'92 (m, 1 H, H-Ar); 6'78 (m, 1 H, H-Ar); 6'64 (m, 1 H, H-Ar); 6'56 (m, 1 H, H-Ar); 5 '43
(m, 1 H, H-C(3')); 4'63 (s, 2 H, ArNH2); 1'35 (m, 2 Η, Ηa-C(2"), H-C(I ")); 1*21 (m, 1
H, Hb-C(2")); 0'73 (m, 6 H, Me-C(I "), H-C(3")) ppm.
13C-RMN (50 MHz, CDCl3, mezcla de conformeros M y m, 1:1) δ: 163'9, 163'8, 163'2
(CONH, M+m); 147'5, 147'1, 150'9 137*8, 135*9, 132*7, 130'0, 128*8, 128*0, 127*9,
127*8 (19 C, (C(4'), C(4a'), C(5'), C(6'), C(T), C(8'), C(8a'), C(Ph), M+m); 125*2,
125*1 (C(Ar), M+m); 123*8, 123*7 (C(5') o C(6') o C(T), M+m); 122*5, 122*3 (C(Ar),
M+m); 120*3, 120*1, 119*7, 119*4 (C(2), C(Ar), M+m); 115*9 (C(Ar)); 55*9, 55'6
(C(3'), M+m); 41*4 (C(I ")); 24'6 (C(2")); 15*2 (Me-C(I ')); 11*2 (C(3")) ppm.
EM (ES+) m/e: 426 ([M + H]+), 753 ([2M + H]+), 851 ([2M + H]+), 874 ([2M + H +
Na]+).
Ejemplo 17.
Síntesis de (S^S'Λ'S')^^)-2,2'-é/s-[(3-sec-butü-l-oxo-2,3-dihidro-lfi-isoquinolin-4- ilíden)-acetilamino]bifenilo (18).
Siguiendo el Procedimiento General II, se obtuvo el compuesto 18 como un sólido blanco (154 mg, 61% rto).
P.f.: 177-180 °C.
[o]D = - 395*0 (c = 0*25, CH3OH).
IR (KBr) v: 3435, 2963, 1656, 1521, 1302, 1161, 753 cm"1.
1H-RMN (500 MHz, CDCl3, mezcla de confórmeros M y m, 1:1) δ: 8' 10 (m, 2 H,
CONH-Bif,, M+m); 8'06 (m, 1 Η; Η-C(8'), M); 8'01 (m, 1 H; H-C(8'), m); 7*52-7*16
(m, 14 H; H-C(5'), H-C(6'), H-C(7'), H-Bif, M+m); 6'61 (d ancho, 1 H, NH-L-Biq,
M); 6'36 (d, J = 4*4, 1 H, NH-L-Biq, m); 6'07 (s, 1 H, H-C(2), M); 6'02 (s, 1 H, H-
C(2), m); 5'55 (m, 1 H, H-C(3'), M); 5'37 (m, 1 H, H-C(3'), m); 1 '61-1 '52 (m, 1 H, H-
C(I "), M+m); 1*38 (m, 1 H, Ha-C(2"), M+m); 1*12 (m, 1 H, Hb-C(2"), M+m); 0'86-
0'71 (m, 12 H, Me-C(I "), H-C(3"), M+m) ppm. [El acrónimo Biq se usa para el radical acilo derivado de la isoquinolina y el acrónimo Bif para el derivado del bifenilo].
EM (ES+) m/e: 667 ([M+ H]+), 689 ([M+ Na]+), 1356 ([2M+ H + Na]+).
Ejemplo 18.
Reacción de la amina 17 con derivados de aminoácidos (Procedimiento General
III). Síntesis de híbridos péptido-heterociclo-bifenilo
A una suspensión del iV-Fmoc-aminoácido correspondiente (0'31 mmol) en CH2CI2 anhidro (2'0 mL) a 0 0C se la añadió gota a gota SOCl2 (0'23 mL, 3'1 mmol), la mezcla se agitó hasta temperatura ambiente y a continuación se calentó a reflujo durante aproximadamnte 1 h. Seguidamente se eliminó el disolvente a presión reducida obteniéndose un sólido blanco que se disolvió en CH2CI2 anhidro (2'0 mL), al que se añadió bajo argón la amina 17 (200 mg, 0'47 mmol) disuelta en CH2CI2 anhidro (2'0 mL). Seguidamente se añadió Et3N (80 μL, 0'62 mmol) y se dejó agitando a temperatura ambiente durante toda la noche. A continuación se diluyó la reacción con CH2CI2 (50 mL) y se extrajo secuencialmente con una disolución acuosa de NaHCO3 (3 x 50 mL) y disolución acuosa saturada de HCl 5% (3 x 50 mL). La fase orgánica se lavó con salmuera y se secó sobre MgSO4. Una vez eliminado a vacío el disolvente se obtuvo el producto crudo, que se purificó por cromatografía en columna usando como eluyente hexano/AcOEt (3:2 a 1:1).
17
Ejemplo 19.
Síntesis de (S,SΛ^)-(l-{2'-[2-(3-sec-butü-l-oxo-2,3-dihidro-lfi-isoquinolin-4- iliden)-acetilamino] -bifenil-2-ilcarbamoil}-2-metil-propil)-carbamato de 9H- fluoren-9-ilmetilo (19).
Siguiendo el Procedimiento General III, el compuesto 19 se obtuvo como un sólido blanco (172 mg, 73% rto).
19
P.f.: 133-135 °C.
[o]D = - 188'0 (c = 0'25, CH2Cl2).
IR (KBr): v: 3408, 2963, 1663, 1519, 1450, 1299, 1232, 758, 739 cm"1. 1H-RMN (300 MHz, 323 K, CDCl3, mezcla de confórmeros M y m, 1:1) δ: 8'14-7'93 (m, 2 H, H-Ar, M+m); T15-T10 (m, 1 H; H-Ar, M+m); 7'57-7'12 (m, 19 H, H-Ar, CONH-Bif-CONH, M+m); 6' 18 (d, J = 4'4, 0'5 H, NH-L-Biq, M); 6' 12 (d, J = 4'4, 0'5 H, NH-L-Biq, m); 6'03 (s, 0'5 H, H-C(2), M); 5'98 (s, 0'5 H, H-C(2), m); 5'45 (m, 0'5 H, H-C(3'), M); 5'36 (m, 0'5 H, H-C(3'), m); 5'04 (s ancho, 1 H, NH-Fmoc, M+m); 4'42-4'26 (m, 2 Η, CH2-FmOC, M+m); 4'17-4'09 (m, 1 Η, CHn-L-VaI, M+m); 3'87 (m, O'5 Η, CH-Fmoc, M); 3'81 (m, O'5 Η, CH-Fmoc, m); 1'96 (m, 1 Η, CHp-L- VaI, M+m); 1'54 (m, 1 Η, H-C(I "), M+m); l'4O (m, 1 H, Ha-C(2"), M+m); 1'1O (m, 1 H, Hb-C(2"), M+m); 0'89-0'73 (m, 12 H, Me-C(I "), H-C(3"), Me2 de L-VaI, M+m) ppm. 1H-RMN (300 MHz, 353 K, DMSO-^6) δ: 8'93 (s ancho, 1 H, CONHBif); 8'75 (s ancho, 1 Η, CONHBif); 8'14-6'94 (m, 22 Η, Η-C(5'), H-C(6'), H-C(7'), H-C(8'), H- Ar); 6'43 (s, 1 H, H-C(2)); 5 '34 (m, 1 H, H-C(3')); 4'32-4'15 (m, 3 H, CH2-FmOC, CH- Fmoc); 3'84 (m, 1 Η, CHn-L-VaI); 1*91 (m, 1 Η, CHp-L-VaI); 1*38 (m, 2 Η, Ηa-C(2"), H-C(I ")); 1*09 (m, 1 H, Hb-C(2")); 0'86-0'66 (m, 12 H, Me-C(I"), H-C(3"), Me2 de L-VaI) ppm.
EM (ES+) m/e: 747 ([M+ H]+), 770 ([M+ Na]+), 1515 ([2M+ H + Na]+).
Ejemplo 20.
Síntesis de (S,SΛ^)-(l-{2'-[2-(3-sec-butü-l-oxo-2,3-dihidro-ifi-isoquinolin-4- ilíden)-acetílamino]-bífeníl-2-ilcarbamoil}-2-fenil-etíl)-carbamato de 9//-fluoren-9- ilmetilo (20).
Siguiendo el Procedimiento General III, el compuesto 20 se obtuvo como un sólido blanco (109 mg, 45% rto).
P.f.: 108-110 °C.
[o]D = - 181'0 (c = 0'23, CH2Cl2).
IR (KBr): v: 3409, 2956, 1659, 1519, 1450, 1247, 1161, 1046, 758, 739 cnϊ1.
1H-RMN (300 MHz, 313 K, CDCl3, mezcla de confórmeros M y m, 1'5:1) δ: 8'14-
7'99 (m, 2 H, H-Ar, M+m); 7'88-7'65 (m, 3 H; H-Ar, M+m); 7'48-7'Ol (m, 20 H, H-
Ar, M+m); 6'72 (d, J= 4'4, 0'6 H, NH-L-Biq, M); 6'52 (d, J= 4'4, 0'4 H, NH-L-Biq, m); 6'05 (S, 0'6 H, H-C(2), M); 5'98 (s, 0'4 H, H-C(2), m); 5'46 (m, 0'4 H, H-C(3'), m); 5'37 (m, 0'4 H, H-C(3'), M); 5'27 (s ancho, 0'6 H, NH-Fmoc, M); 5'02 (d ancho,
0'4 Η, NH-Fmoc, m); 4'38-4'06 (m, 4 Η, CH2-FmOC, CH-Fmoc, CHα-L-Phe, M+m);
3'21 (m, 1 Η, CHp-L-Phe, M); 2'84 (m, 1 Η, CHp-L-Phe, m); 1'61 (m, 1 Η, H-C(I "),
M+m); 1'41 (m, 1 H, Ha-C(2"), M+m); 1'13 (m, 1 H, Hb-C(2"), M+m); 0'80 (d, 2 H, J
= 6'8, Me-C(I"), M); 0'80 (d, 0'5 H, J= 6'8, Me-C(I "), m); 0'74 (t, 3 H, , J= 7'8, H-
C(3"), M+m) ppm.
EM (ES+) m/e: 795 ([M+ H]+), 818 ([M+ Na]+), 1612 ([2M + Na]+).
Ejemplo 21.
Síntesis de (SΛ'S'Λ^)-(l-{2'-[2-(3-sec-butil-l-oxo-2,3-dihidro-lfi-isoquinolin-4- ilíden)-acetílamino] -bifenil-2-ilcarbamoil}-2-metil-butil)-carbamato de 9//-fluoren-
9-ilmetilo (21).
Siguiendo el Procedimiento General III, el compuesto 21 se obtuvo como un sólido blanco (101 mg, 58% rto).
21
P.f.: l 16-120 °C.
[o]D = - 155'l (C = 0.12, CHCl3).
IR (KBr) v: 3406, 3282, 2963, 2920, 1662, 1516, 1450, 1233, 757, 740 cnϊ1.
1H-RMN (300 MHz, 318 K, CDCl3, mezcla de confórmeros M y m, 1:1) δ: 8'12-7'Ol (m, 22 H, H-Ar, CONH-Bif-CONH, M+m); 6'33 (s ancho, 0'5 H, NH-L-Biq, M); 6'27
(s ancho, 0'5 H, NH-L-Biq, m); 6'05 (s, 0'5 H, H-C(2), M); 5'99 (s, 0'5 H, H-C(2), m);
5'47 (m, 0'5 H, H-C(3'), M); 5'34 (m, 0'5 H, H-C(3'), m); 5'23 (s ancho, 1 H, NH-
Fmoc, M+m); 4'44-3'88 (m, 4 Η, CH2-FmOC, CH-Fmoc, CHn-L-IIe, M+m); 1'86 (m,
0'5 Η, CHp-L-IIe, M); 1'72 (m, 0'5 Η, CHp-L-IIe, m); 1'59 (m, 1 Η, H-C(I "), M+m); l'4O (m, 1 H, Ha-C(2"), CH2a-L-Ile, M+m ); 1*14 (m, 1 H, Hb-C(2"), CH2b-L-Ile,
M+m); 0'88-0'70 (m, 12 H, Me-C(I "), H-C(3"), [CH-CH5] de L-IIe, [CH2-CH5] de L-
He, M+m) ppm.
EM (ES+) m/e: 761 ([M + H]+), 783 ([M + Na]+), 1522 ([2M + H]+), 1545 ([2M+
Na]+).
Ejmplo 22.
Desprotección del grupo iV-Fmoc (Procedimiento General IV)
A una solución del correspondiente compuesto JV-Fmoc protegido (0'09 mmol) en 0'3 mL de DMF anhidra a 0 0C y bajo argón se la añadió piperidina (70 μL). A continuación la mezcla se dejó alcanzar temperatura ambiente durante 2 h. Una vez eliminado el disolvente a vacío se obtuvo el producto crudo, que se purificó por cromatografía en columna usando como eluyente hexano/AcOEt (1:1 a l :9).
Ejemplo 23.
Síntesis de (S,SΛ^)-2-amino-iV-{2'-[2-(3-sec-butü-l-oxo-2,3-dihidro-lfi- isoquinolin-4-iliden)-acetilamino] -bifenil-2-il} -3-metil-butiramida (22). Siguiendo el Procedimiento General FV, se obtuvo el compuesto 22 como un sólido blanco (12 mg, 24% rto).
P.f.: 110-113 °C.
[o]D = - 35'9 (c = 0'07, CHCl3).
IR (KBr) v: 3434, 2956, 1660, 1521, 14369, 1165, 753 cm"1. 1H-RMN (500 MHz, 313 K, CDCl3, mezcla de confórmeros M y m, 1:1) δ: 9'31 (s ancho, 0'5 H, CONH-Bif-CONH, M); 9'28 (s ancho, 0'5 H, CONH-Bif-CONH, m);
8'38 (s ancho, 0'5 H, CONH-Bif-CONH, M); 8'28 (s ancho, 0'5 H, CONH-Bif-CONH, m); 8'09 (m, 1 H; H-C(8'), M); 8'19 (m, 1 H; H-C(8'), m); 7'45 (m, 6 H, H-Ar, H-Bif,
M+m); 7'23 (m, 5 H, H-Ar, H-Bif, M+m); 6'25 (d, J= 4'5, 0'5 H, NH-L-Biq, M); 6'18 (d, J = 4'5, 0'5 H, NH-L-Biq, m); 6'03 (s, 0'5 H, H-C(2), M); 5'99 (s, 0'5 H, H-C(2), m); 5'52 (m, 1 H, H-C(3'), M+m); 3'47 (m, 1 H, NH2, M); 3'29 (m, 1 H, NH2, m); 3'23
(d, J= VA, 0'5 H, CHn-L- Val, M); 3'15 (d, J= 3 '4, 0'5 Η, CHn-L-VaI, m); 2'24 (m, 1
Η, CHp-L-VaI, M+m); 1*61 (m, 1 Η, H-C(I "), M+m); 1*52 (m, 1 H, Ha-C(2"), M+m);
1*18 (m, 1 H, Hb-C(2"), M+m); 0'91-0'63 (m, 12 H, Me-C(I "), H-C(3"), Me2 de L- Val, M+m) ppm.
EM (ES +) m/e: 525 ([M + H]+), 547 ([M + Na]+), 1049 ([2M + H]+), 1072 ([2M+
Na]+).
Ejemplo 24. Síntesis de (S,SΛ^)-2-amino-iV-{2'-[2-(3-sec-butyl-l-oxo-2,3-dihidro-lfi- isoquínolin-4-ilíden)-acetílamino]-bífeníl-2-íl}-3-fenil-propionamide (23).
Siguiendo el Procedimiento General FV, se obtuvo el compuesto 23 como un sólido blanco (32 mg, 61% rto).
P.f.: 107-110 °C.
[o]D = - 231 '0 (c = 0'06, CH2Cl2).
IR(KBr)v: 3435, 1658, 1519, 1436, 1161,753 cm1.
1H-RMN (500 MHz, CDCl3, mezcla de confórmeros M y m, 2'5:1) δ: 9'36 (s ancho,
0'7 H, CONH-Bif-CONH, M); 9'32 (s ancho, 0'3 H, CONH-Bif-CONH, m); 8'40-8'05
(m, 3 H, H-C(8'), CONH-Bif-CONH, M+m); 7'53-7'44 (m, 6 H, H-Ar, H-Bif, M+m);
7'43-7'13 (m, 5 H, H-Ar, H-Bif, M+m); 6'49 (m, 1 H, NH-L-Biq, M+m); 6'07 (s, 0'7
H, H-C(2), M); 6'06 (s, 0'3 H, H-C(2), m); 5'51 (m, 1 H, H-C(3'), M+m); 3'55 (m, 1
H, CHα-L-Phe, M+m); 3' 18 (m, 1 Η, CHp-L-Phe, M); 2'49 (m, 1 Η, CHp-L-Phe, m);
1*59 (m, 1 Η, H-C(I "), M+m); l'50 (m, 1 H, Ha-C(2"), M+m); 1*16 (m, 1 H, Hb-
C(2"), M+m); 0'90-0'70 (m, 6 H, Me-C(I "), H-C(3"), M+m) ppm.
Ejemplo 25.
Síntesis de (SΛ'S'Λ^)-2-amino-iV-{2'-[2-(3-sec-butil-l-oxo-2,3-dihidro-lfi- isoquínolin-4-ilidene)-acetílamino] -bifcnil-2-il} -3-metíl-pentanamida (24). Siguiendo el Procedimiento General IV, se obtuvo el compuesto 24 como un sólido blanco (34 mg, 71% rto).
24
P.f.: 93-96 °C.
[o]D = - 215'6 (c = 0'09, MeOH).
IR(KBr): v: 3413,2962,2920, 1666, 1580, 1521, 1436, 1302, 1164,755cm"1.
1H-RMN (400 MHz, CDCl3, mezcla de confórmeros M y m, 1:1) δ: 9'41 (s ancho, 0'5 H, CONH-Bif-CONH, M); 9'38 (s ancho, 0'5 H, CONH-Bif-CONH, m); 8'32 (s ancho, 0'5 H, CONH-Bif-CONH, M); 8'22 (s ancho, 0'5 H, CONH-Bif-CONH, m); 8*13 (m, 0'5 H, H-C(8'), M); 8'03 (m, 0'5 H, H-C(8'), m); 7'46-7'35 (m, 6 H, H-Ar, H- Bif, M+m); 7'24-7'09 (m, 5 H, H-Ar, H-Bif, M+m); 6'77 (d, J= 4'4, 0'5 H, NH-L-Biq, M+m); 6'70 (d, J= 4'4, 0'5 H, NH-L-Biq, M+m); 6'04 (s, 0'5 H, H-C(2), M); 6'02 (s, 0'5 H, H-C(2), m); 5'48 (m, 1 H, H-C(3'), M+m); 3'26 (d, J= 3'4, 0'5 H, CHn-L-IIe, M); 3*17 (d, J= 3*4, 0'5 Η, CHn-L-IIe, m); 1'96 (m, 1 Η, CHp-L-IIe, M); 1*88 (m, 1 Η, CHp-L-IIe, m); 1*58 (m, 1 Η, H-C(I "), M+m); 1*52 (m, 1 H, Ha-C(2"), M+m); 1*14 (m, 1 H, Hb-C(2"), M+m); 0'89-0'74 (m, 12 H, Me-C(I "), H-C(3"), [CH-CH5] de L- He, [CH2-CH5] de L-IIe, M+m) ppm.
Ejemplo 26.
Síntesis de híbridos pέptido-isoquinolina (Procedimiento General V). A una disolución del ácido 8 (150 mg, 0'58 mmol) en DMF anhidro, se añaden secuencialmente el péptido correspondiente (como trifluoroacetato) (0'70 mmol), 1- hidroxibenzotriazol (ΗOBT, 92 mg, 0'70 mmol), l-(3-dimetilaminopropil)-3- etilcarbodiimida (EDC, 134'4 mg, 0'70 mmol) y 4-(dimetilamino)piridina (DMAP, 7 mg, 0'058 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante una noche. Posteriormente, el disolvente orgánico se eliminó a vacío y el producto crudo se purificó por cromatografía en columna para dar el híbrido péptido-isoquinolina correspondiente.
Ejemplo 27.
Síntesis de (SΛ'SΛ'S')'S;^)-2-{2-[2-(3-sec-butil-l-oxo-2,3-diliidro-lfi-isoquinolin-4- iliden)-acetilamino]-3-metil-pentanoilamino}-3-metil-pentanoato de metilo (25).
Siguiendo el Procedimiento General V a partir del péptido CF3CO2 " +H-L-Ile-L-Ile- OCH3, y tras purificación por cromatografía (mezclas de hexano-EtOAc 4:1 a 3:2), se obtuvo el compuesto 25 como un sólido blanco (232 mg, 80% rto).
25 IR (KBr) v: 3436, 2965, 1743, 1652, 1544 cm"1.
1H-RMN (300 MHz, CDCl3) δ: 8'26 (d, J = 5'1, 1 H, NH-L-Iiq); 7'96 (m, 1 H, H- C(8')); 7'38-7'21 (m, 5 H, H-C(5'), H-C(6'), H-C(7'), NH-L-IIe[I], NH-L-Ile[2]); 6'09 (j. 1 H, H olefinico); 5'57 (dd, J = Tl, 5'1, 1 H, H-C(3')); 4'68 (m, 1 H, CHn-L- Ile[2]); 4'43 (dd, J= 7'6, 5'1, 1 H, CHn-L-IIe[I]); 3'72 (s, 3 H, CO2Me); 1'93-1'79 (m, 3 H, [Me-CH-Et] de L-Iiq, CHp-L-IIe[I], CHP-L-Ile[2]); 1 '66-1 '08 (m, 6 H, [Me-CH- CH2CH3] de L-Iiq, CH2- L-IIe[I], CH2-L-Ile[2]); l'04-0'74 (m, 18 H, [Me-CH-CH2CH3] de L-Iiq, [Me-CH-CH2CH5] de L-Iiq, [CH-CH5] de L -He[I], [CH-CH5] de L -Ile[2], [CH2-CH5] de L-IIe[I], [CH2-CH5] de L-Ile[2]) ppm. 13C-RMN (50 MHz, CDCl3) δ: 172'0, 171 '9 (CO2Me, CONΗ-L-Ile[2]); 164'8, 164'5 (=CH-CONH, CONH-L-Iiq); 147'5 (C(4'))5 136'0 (C(4a')); 132'4, 129'5, 123'6 (C(5'), C(6'), C(7')); 128'3 (C(8a')); 127'5 (C(8')); H9'2 (CH olefinico); 57'3 (CHn-L-IIe [2]); 56'9 (CHn-L-IIe[I]); 54'9 (C(3')); 51'9 (CO2Me); 41'3, 38'3, 37'1 ([Me-CH-Et] de L- Iiq, CHp-L-IIe[I], CHP-L-Ile[2]); 25'1, 24'9 (3 C, [Me-CH-CH2CH3] de L-Iiq, CH2-L- He[I], CH2-L-Ile[2]); 15'4, 15'3, 15'0, 11 '4, 11 '2 (6 C, [Me-CH-CH2CH3] de L-Iiq, [Me-CH-CH2CH3] de L-Iiq, [CH-CH3] de L-IIe[I], [CH-CH3] de L-Ile[2], [CH2-CH3] de L-IIe[I], [CH2-CH3] de L-Ile[2]) ppm. ES (MS+) m/e: 500 ([M+ H]+), 522 ([M+ Na]+), 999 ([2M+ H]+), 1021 ([2M+ Na]+).
Ejemplo 28. Síntesis de (S,S,S,S,S,S,S,S,Z)-2-(2-{2-[2-(3-sec-b\ιtΑ-l-oxo-2,3-dilúdro-lH- isoquinolin-4-iliden)-acetilamino]-3-metil-pentanoilamino}-3-metil- pentanoilamino)-3-metil-pentanoato de metilo (26).
Siguiendo el Procedimiento General V a partir del péptido CF3CO2 " +H-L-Ile-L-Ile-L- He-OCH3, y tras purificación por cromatografía (mezclas de hexano-EtOAc 1 :4 a 1 :9), se obtuvo el compuesto 26 como un sólido blanco (234 mg, 66% rto).
[o]D = - 100'9 (c = 0'33, MeOH).
IR(KBr)v: 3302,2965, 1739, 1650, 1529, 1207cm1.
1H-RMN(300MHz,(D6)DMSO)δ: 8'49(d,J=4'5, 1 H,NH-L-Biq);8'25(d,J=8'5,
1 H,NH-L-Ile[3]); 8'14 (d,J=7'3, 1 H, NH-L-IIe[I]); 7'99 (d,J= 8'7, 1 H, NH-L- Ile[2]); 7'88 (dd, J = TZ, 0'8, 1 H, H-C(8')); 7'66-7'58 (m, 2 H, H-C(5'), H-C(6')); 7'50 (td, J= 7'6, 0'9, 1 H, H-C(7')); 6'70 (s, 1 H, H olefínico); 5'47 (dd, J= 7'3, 4'5, 1 H, H-C(3')); 4'35 (f, J= 8'5, 1 H, CHα-L-Ile[3]); 4'24 (f, J= 8'7, 1 H, CHα-L-Ile[2]); 4'17 (f, J= 7'3, 1 H, CHn-L-IIe[I]); 3'58 (s, 3 H, CO2Me); 1 '84-1*62 (m, 3 H, CHp-L- He[I], CHP-L-Ile[2], CHP-L-Ile[3]); l'52-0'91 (m, 9 H, [Me-CH-Et] de L-Biq, [Me-CΗ- CH2CH3] de L-Biq, CH2-L-IIe[I], CH2-L-Ile[2], CH2-L-Ile[3]); 0'90-0'68 (m, 24 H, [Me-CH-CH2CH3] de L-Biq, [Me-CH-CH2CH5] de L-Biq, [CH-CH5] de L-IIe[I], [CH- CH5] de L-Ile[2], [CH-CH5] de L-Ile[3], [CH2-CH5] de L-IIe[I], [CH2-CH5] de L-Ile[2], [CH2-CH5] de L-Ile[3]) ppm. 13C-RMN (50 MHz, (D6)DMSO) δ: 171 '7, 171 '2, 170'7 (CONH-L-IIe[I], CONH-L- Ile[2], =CH-CONH); 164'6, 162'6 (CONH-L-Biq, CO2Me); 144'0 (C(4')); 136'0 (C(4a')); 132'4 (C(5') o C(6')); 129'5 (C(7')); 128'6 (C(8a'); 126'9 (C(8')); 123'7 (C(5') o C(6')); 120'3 (CH olefiníco); 56'5, 56'4, 56'2 (CHn-L-IIe[I], CHa-L-Ile[2], CHa-L-Ile[3]); 54'6 (C(3')); 51*5 (CO2Me); 41*3 ([Me-CH-Et] de L-Biq); 36*8, 36'5, 35'9 (CHp-L-IIe[I], CHP-L-Ile[2], CHP-L-Ile[3]); 24*6, 24'2 (4 C, [Me-CH-CH2CH3] de L-Biq, CH2-L-IIe[I], CH2-L-Ile[2], CH2-L-Ile[3]); 15*3, 15*2, 15'0, 14*9, 11*0, 10'9, 10'8 (8 C, [Me-CH-CH2CH3] de L-Biq, [Me-CH-CH2CH3] de L-Biq, [CH-CH3] de L- He[I], [CH-CH3] de L-Ile[2], [CH-CH3] de L-Ile[3], [CH2-CH3] de L-IIe[I], [CH2-CH3] de L-Ile[2], [CH2-CH3] de L-Ile[3]) ppm.
ES (ES+) m/e: 613 ([M+ H]+), 635 ([M+ Na]+), 1226 ([2M + H]+), 1247 ([2M+ Na]+).
Ejemplo 29.
Síntesis de (SΛ'S'Λ^)-2-{2-[2-(3-sec-butil-l-oxo-2,3-dihidro-lfi-isoquinolin-4- ilidcn)-acctilamino]-3-mctil-butirilamino}-3-fcnil-propionato de metilo (27). Siguiendo el Procedimiento General V a partir del péptido CF3CO2 " +H-L-Val-L-Phe- OCH3, y tras purificación por cromatografía (mezclas de hexano-EtOAc 3:2 a 2:3), se obtuvo el compuesto 27 como un sólido blanco (217 mg, 72% rto).
27 P.f.: 174-176 °C.
[o]D = - 129'0 (c = 0'5, CHCl3).
IR (KBr) v: 3436, 2964, 1743, 1655, 1538 cm"1.
1H-RMN (400 MHz, CDCl3) δ: 8'24 (d, J = 4'6, 1 H, NH-L-Biq); 7'96 (dd, J = 7'6,
1.4, 1 H, H-C(8')); 7'37-7'03 (m, 10 H, H-C(5'), H-C(6'), H-C(7'), NH-L-IIe, NH-L- Phe, aromático de L-Phe); 6'06 (s, 1 H, H olefínico); 5'57 (dd, J = 7'3, 4'9, 1 H, H- C(3')); 4'74 (dd, J = 14'0, 6'3, 1 H, CHα-L-Phe); 4'48 (dd, J = 9'1, 6'6, CHn-L-VaI); 3'66 (s, 3 H, CO2Me); 2'91 (dd, J= 14'0, 6'3, 2 H, CHP-L-Phe); 2'11 (m, 1 H, CHp-L- VaI); 1 '57-1 '48 (m, 2 H, [Me-CH-CH2CH3] de L-Biq); 1' 17-1 '09 (m, 1 H, [Me-CH- CH2CH3] de L-Biq); 1'0O (d, J= 6'7, 3 H, Me2 de L-VaI); 0'96 (d, J= 6'7, 3 H, Me2 de L-VaI); 0'85 (d, J= 6'7, 3 H, [Me-CH-CH2CH3] de L-Biq); 0'80 (t, J= 7'3, 3 H, [Me- CH-CH2CH5] de L-Biq) ppm.
13C-RMN (50 MHz, CDCl3) δ: 172'0, 171*5 (CONΗ-L-Val, CO2Me); 164'9, 164'6 (=CΗ-CONΗ, CONH-L-Biq); 147'2 (C(4')); 135'9, 135'7, 132'5, 129'6, 129'2, 128'5, 128'3, 127'4, 127'0, 123'6 (12 C, C(4a'), C(5'), C(6'), C(7'), C(8a'), C(8'), C aromático de L-Phe); 119'1 (CH olefínico); 58'3 (CHα-L-Phe); 55'0 (C(3')); 53'3 (CHa-L- Val); 52' 1 (CO2Me); 41 '3 ([Me-CH-CH2CH3] de L-Biq), 37'5 (CHP-L-Phe), 31'6 (CHp-L-VaI); 24'7 ([Me-CH-CH2CH3] de L-Biq); 19'2, 18'2 (Me2 de L-VaI); 15'1 ([Me-CH-CH2CH3] de L-Biq); 11 '3 ([Me-CH-CH2CH3] de L-Biq) ppm.
ES (ES+) m/e: 520 ([M+ H]+), 542 ([M+ Na]+), 1039 ([2M + H]+), 1061 ([2M+ Na]+).
Ejemplo 30.
Síntesis de (5,5,Z)-(3-sec-butil-l-tioxo-2,3-dihidro-l//-isoquinolin-4-ilidcn)-acctato de metilo (28).
A una disolución de la isoquinolinona 7 (273 mg, l'O mmol) en tolueno anhidro (9'0 mL) se añadió el reactivo de Lawesson ([2,4-bis(4-metoxifenil)-l,3-ditia-2,4- difosfetano-2,4-disulfuro]) (445 mg, l'l mmol) y la mezcla se refluyó durante aproximadamente 1 h. A continuación la mezcla se dejó alcanzar temperatura ambiente y se eliminó el disolvente a vacío obteniendo un producto crudo, que se purificó por cromatografía en columna usando como eluyente hexano/AcOEt (19:1 a 7:3), dando 263 mg (91% rto) de 27, como un sólido amarillo. P.f.: 50-53 °C. [o]D = - 754'2 (c = 0'5, CHCl3).
IR(KBr) v: 3436, 3432, 3170, 2665, 1713, 1637, 1368, 1215, 1195, 1172, 1013, 772 cm"1.
1H-RMN (300 MHz, CDCl3) δ: 8'91 (s ancho, 1 H, NH); 8'58 (dd, J= TS, Yl, 1 H, H-
C(8')); 7'55-7'43 (m, 3 H, H-C(5'), H-C(6'), H-C(7')); 6'31 (s, 1 H, H-C(2)); 5'48 (dd, J= 7'8, 5'1, 1 H, H-C(3')); 3'75 (s, 3 H, CO2Me); 1'66 (m, 1 H, H-C(I")); 1'49 (m, 1 H, Ha-C(2")); 1'19 (m, 1 H, Hb-C(2")); 0'86-0'79 (m, 6 H, Me-C(I"), H-C((3")) ppm. 13C-RMN (50 MHz, CDCl3) δ: 191*4 (CSNH); 165'8 (CO2Me); 149'6 (C(4')); 133'1 (C(4a')); 132'3, 131*0 (C(5') o C(6') o C(7')); 130'8 (C(8a')); 130'5 (C(8')); 123'7 (C(5') o C(6') o C(7')); H7'l (C(2)); 57'7 (C(3')); 51*7 (CO2Me); 40'8 C(I ")); 24'9 (C(2")); 14*9, 10'9 (Me-C(I '), (C(3")) ppm.
EM (ES+) m/e: 290 ([M+ H]+), 312 ([M+ Na]+), 601 ([2M + Na]+).
Ejemplo 31.
Síntesis del ácido (S,S,Z)-(3-sec-butil-l-tioxo-2,3-diliidro-l/r-isoquinolin-4-iliden)- acétic (29).
1H-RMN (300 MHz, DMSO-^6) δ: 12'77 (s ancho, 1 H, CO2H); 11 '03 (d, J= 4'9, 1 H, NH); 8'39 (dd, J = 7'6, l'l, 1 H, H-C(8')); 7'72-7'53 (m, 3 H, H-C(5'), H-C(6'), H- C(7')); 6'39 (s, 1 H, H-C(2)); 5'33 (dd, J= 8'2, 4'9, 1 H, H-C(3')); 1'56-1'46 (m, 1 H, Ha-C(2")); 1 '44-1 '38 (m, 1 H, H-C(I ")); 1' 19-1 '06 (m, 1 H, Hb-C(2")); 0'78 (t, J= 7'5, 3 H, Me-C(I ")); 0'81 (d, J= 6'9, 3 H, H-C((3")) ppm.
13C-RMN (50 MHz, DMSO-^6) δ: 189'3 (CSNH); 166'6 (CO2H); 147'8 (C(4')); 133'1 (C(4a')); 131*1 (2 C, C(5') o C(6') o C(7')); 130'6 (C(8a')); 13O'l (C(8')); 124'4 (C(5') o C(6') o C(7')); H8'8 (C(2)); 55'7 (C(3')); 40'9 (C(I ")); 24'8 (C(2")); 14'9 (Me- C(l ')); 10'9 (C(3")) ppm. EM (ES+) m/e: 276 ([M+ H]+), 298 ([M+ Na]+), 573 ([2M + Na]+).
Ejemplo 32.
Síntesis de (SΛ'S'Λ'S')'S;^)-2-{2-[2-(3-sec-butil-l-tioxo-2,3-dihidro-lfi-isoquinolin-4- iliden)-acetilamino]-3-metil-pentanoilamino}-3-metil-pentanoato de metilo (30).
El compuesto se obtuvo siguiendo el Procedimiento General V a partir del ácido 29 y el péptido CF3CO2 " +H-L-Ile-L-Ile-OCH3. Se purificó por cromatografía usando mezclas de hexano/EtOAc (4:1 a 3:2) para dar 30 como un aceite (257 mg, 86% rto).
[o]D = - 366'0 (c = 0'25, CHCl3).
IR (KBr) v: 3435, 2964, 1739, 1631, 1525, 1212 cm 1.
1H-RMN (300 MHz, (D6)DMSO) δ: 10'96 (d, J= 4'9, 1 H, NH-L-Biq); 8'38-8'28 (m, 3
H, NH-L-IIe[I], NH-L-Ile[2], H-C(8')); 7'65-7'48 (m, 3 H, H-C(5'), H-C(6'), H-C(7')); 6'72 (s, 1 H, H olefínico); 5'61-5'56 (m, 1 H, H-C(3')); 4'39 (t, J = 8'1, 1 H, CHn-L- Ile[2]); 4'16 (t, J= Tl, 1 H, CHn-L-IIe[I]); 3'59 (s, 3 H, CO2Me); 1 '86-1 '68 (m, 2 H, CHp-L-IIe[I], CHP-L-Ile[2]); l'54-0'98 (m, 7 H, [Me-CH-Et] de L-Biq, [Me-CΗ- CH2CH3] de L-Biq, CH2-L-IIe[I], CH2-L-Ile[2]); 0'86-0'65 (m, 18 H, [Me-CH-CH2CH3] de L-Biq, [Me-CH-CH2CH5] de L-Biq, [CH-CH5] de L -He[I], [CH-CH5] de L -Ile[2], [CH2-CH5] de L-IIe[I], [CH2-CH5] de L-Ile[2]).
13C-RMN (50 MHz, (D6)DMSO) δ: 189'2 (CSNΗ); 171 '7, 171 '3 (CO2Me, CONΗ-L- Ile[2]); 164'5 (=CΗ-CONΗ); 142'9 (C(4')); 132'8, 130'9, 123'8 (C(5')5 C(6'), C(7')); 131*4 (C(8')); 130'6 (C(8a'))í 129'4 (C(4a'))í 121*5 (olefinic CH); 56'5 (CHn-L-IIe [2]); 56'1 (CHn-L-IIe[I]); 55'0 (C(3')); 51*5 (CO2Me); 40*3, 36*8, 35'9 ([Me-CH-Et] de L- Biq, CHp-L-IIe[I], CHp-L-IIe [2]); 24*9, 24*7, 24'2 ([Me-CH-CH2CH3] de L-Biq, CH2-L- He[I], CH2-L-Ile[2]); 15*3, 15*1, 14*7, 11*1, 10*8 (6 C, [Me-CH-CH2CH3] de L-Biq, [Me-CH-CH2CH3] de L-Biq, [CH-CH3] de L-IIe[I], [CH-CH3] de L-Ile[2], [CH2-CH3] de L-IIe[I], [CH2-CH3] de L-Ile[2]). MS (ES+) m/e: 516 ([M + H]+), 583 ([M + Na]+), 1031 ([2M + H]+), 1053 ([2M + Na]+).
Ejemplo 33.
Ensayo de actividad enzimática: Inhibición de calpaina.
La capacidad de inhibición de calpaina se ha cuantificado por el valor de IC50, que se define como la concentración de inhibidor que reduce a la mitad la actividad catalítica de una enzima. Cuanto más bajo sea el valor de IC50, más potente es el inhibidor. Resultados de inhibición de calpaina I (la más relevante desde un punto de vista fisiológico) de algunos compuestos de la presente invención se indican en la tabla 1 y en la figura 1.
Tabla 1. Resultados representativos de inhibición de calpaina de compuestos objetos de esta invención.
Los experimentos se realizaron espectrofluorimétricamente usando un espectrofluorímtro Spectrqβuor Tecan Corp 93382, excitando a 485 nM y midiendo a 530 nM. Caseina marcada con BODIPY-FL® {Molecular Probes) se usó como sustrato y calpaina I de eritrocito porcino (Calbiochem, Cat No 208712) se usó como enzima. El sustrato liofilizado es el componente A del kit de ensayo de proteasas EnzChek® green fluorescence de Molecular Probes (referencia # E-6638; el componente B, llamado tampón de digestión 2OX, contiene 13mL de 200 mM Tris-HCl, pH 7'8, y 2 mM azida sódica. La calpaina I comercial usada tiene una concentración de 1 mg en 1 mL de
disolución acuosa (la disolución es 20 mM imidazol-HCl, pH 6' 8, 1 mM EDTA, 1 mM
EGTA, 5 mM β-mercaptoetanol, conteniendo 30% de glicerina).
Preparación de la disolución tampόn de digestión (disolución de digestión).
2 '5 mL del tampón dedigestión 2OX (componente B del kit de Molecular Probes) se diluyó con agua hasta un volumen total de 50 mL.
Preparación de la disolución del sustrato (disolución de caseína).
200 μg del sustrato liofilizado (componente A del kit de Molecular Probes) se disolvió en 200 μL de tampón fosfato salino. Esta disolución se trasvasó a un matraz graduado y se diluyó con la disolución de digestión hasta un volumen total de 40 mL. Preparación de la disolución de calpaina (disolución de calpaina).
20 μL de la disolución comercial de calpaina se diluyeron con disolución de digestión hasta un volumen total de 200 μL.
Preparación de disolución de inhibidor (disolución de inhibidor).
El inhibidor se disolvió en DMSO. Cada inhibidor se ensayó a 7 concentraciones distintas entre 10 nM y 200 μM.
Experimentos de actividad enzimάtica.
Todos los datos se obtuvieron midiendo la variación de fluorescencia con el tiempo. El uso de un dispositivo multi-celdilla y pipetas Eppendorf mulú -canal permitió medir la variación de fluorescencia de hasta 64 experimentos simultáneamnte. De esta manera, el experimento control y los experimentos con las distintas concentraciones de inhibidor se llevaron a cabo en la misma tanda de medidas. Todos los experimentos se realizaron 2 veces.
Experimento control.
El experimento control se llevó a cabo mezclando 180 μL de disolución de caseína y 5 μL de disolución de calpaina. La reacción fue iniciada por la adición de 10 μL de disolución 50 μL de CaCl2 en agua, y la fluorescencia se midió desde el momento de la adición de Ca2+ (tiempo = 0) y durante 250-300 segundos (midiendo durante 20 ciclos cinéticos). La variación de fluorescencia (ΔF) se representó frente al tiempo (t). Para probar el efecto del DMSO sobre la actividad enzimática, se realizaron experimentos control adicionales añadiendo DMSO (en las cantidades usadas en los experimentos con los inhibidores), obteniéndose el mismo resultado que en el experimento control.
Actividad enzimάtica en presencia de inhibidores.
180 μL de disolución de caseína, 5 μL de disolución de calpaina y 5 μL de disolución de inhibidor (de concentración variable) se mezclaron. La reacción fue iniciada por la adición de 10 μL de disolución 50 μM de CaCl2 en agua, y la fluorescencia se midió desde el momento de la adición de Ca2+ (tiempo = 0) y durante 250-300 segundos (midiendo durante 20 ciclos cinéticos). La variación de fluorescencia (ΔF) se representó frente al tiempo, y un valor de ΔF/t se obtuvo de cada experimento. Determinación de la IC50.
Para cada inhibidor, el valor de ΔF/t se representó frente a la concentración (c) de inhicidor, desde c = 0 hasta c = 200 μM. Los data se ajustan a una línea recta, y de la ecuación se determina el valor de IC50 (como la concentración de inhibidor que hace que la enzima tenga la mitad de actividad).
Abreviaturas.
A continuación se indica el significado de las abreviaturas usadas.
- AcOEt: Acetato de etilo.
- AE: Análisis elemental. - CANP: Proteasa neutra activada por calcio.
- ccf : Cromatografía en capa fina.
- DMF: iV,iV-Dimetilformamida.
- DMSO: Dimetilsulfóxido.
- EDTA: Ácido etilendiaminotetraacético. - EGTA: Ácido etilen-¿¿5r-(oxietilennitrilo)tetraacético.
- EM: Espectro de masas.
- ES: Electro-spray.
- IR: Infrarrojo.
- NMDA: JV-metikD-aspartato. - P.f.: Punto de fusión.
- THF: Tetrahidrofurano.
- Tris: Tris(hidroxmetil)aminometano.
- 1H-RMN: Resonancia magnética nuclear de protón.
- 13C-RMN: Resonancia magnética nuclear de carbono-13.
Claims
1. Un compuesto caracterizado porque tiene estructura de isoquinolina parcialmente reducida con sustitución de un grupo sec-butilo en posición 3, y de fórmula I o π,
en la que:
- el grupo X es oxígeno (O) o azufre (S), indistintamente,
- el asterisco (*) representa un centro estereogénico, de configuración (R) ó (S), indistintamente,
- el grupo R1 está independiemente seleccionado entre los grupos - NH2,
- NHR4 en el que R4 está seleccionado entre un grupo alquilo, arilo, un derivado de aminoácido y un derivado de péptido,
- NR 5R6 en el que R5 y R6 están independientemente seleccionados entre un grupo alquilo, arilo, un derivado de aminoácido, un derivado de péptido, y grupos R5 y R6 que forman un sistema cíclico,
- OH,
- OR7 en el que R7 representa un grupo arilo o alquilo,
- los grupos R2 y R3 son iguales o distintos, y están independientemente seleccionados entre los grupos O (oxígeno), NH, ó NR8, dónde R8 representa un grupo alquilo o arilo,
- Z está seleccionado entre los grupos
- alquilo entre 2 y 8 átomos de carbono, - arilo, - arilalquilo,
- cadena oxialquílica conteniendo independientemente entre 1 y 3 átomos de oxígeno y entre 2 y 10 átomos de carbono,
- fragmento derivado de aminoácido o péptido.
2. Un compuesto según la reivindicación 1 caracterizado porque está seleccionado entre:
- (5',5',Z)-(3-5rec-butil-l-oxo-2,3-dihydro-lH-isoquinolin-4-iliden)-acetato de metilo (7), - ácido (S, S,Z)-(3 -sec-butil- 1 -oxo-2,3 -dihydro- lH-isoquinolin-4-iliden)-acetico
(8),
- (5',5',Z)-(3-5rec-butil-l-oxo-2,3-dihidro-lH-isoquinolin-4-iliden)-acetato de iso- propilo (9),
- (5',5',Z)-(3-5rec-butil-l-oxo-2,3-dihidro-lH-isoquinolin-4-iliden)-acetato de 1- butilo (10),
- (S,S,Z)-(3-sec-butx\- 1 -oxo-2,3-dihidro- lH-isoquinolin-4-iliden)-acetato de bencilo (11),
- (5',5',5',5',Z,Z,Z)-(3-5'ec-butil-l-oxo-2,3-dihidro-lH-isoquinolin-4-iliden)-acetato de 4-[2-(3-5rec-butil-l-oxo-2,3-dihidro-lH-isoquinolin-4-iliden)-acetoxi]-but-2- enilo (12),
- (5',5',5',5',Z,Z)-(3-5rec-butil-l-oxo-2,3-dihidro-lH-isoquinolin-4-iliden)-acetato de 4-[2-(3-5rec-butil-l-oxo-2,3-dihidro-lH-isoquinolin-4-iliden)-acetoxi]-but-2-inilo
(13),
- (5',5',5',5',Z,Z)-(3-5rec-butil-l-oxo-2,3-dihidro-lH-isoquinolin-4-iliden)-acetato de 4-[2-(3-5rec-butil-l-oxo-2,3-dihidro-lH-isoquinolin-4-iliden)-acetoximetil]- benzilo (14),
- (5',5',Z)-iV-bencil-2-(3-5rec-butil-l-oxo-2,3-dihidro-lH-isoquinolin-4-iliden)- acetamida (15), - (5',5',Z)-iV-(3-acetil-fenil)-2-(3-5'ec-butil-l-oxo-2,3-dihidro-lH-isoquinolin-4- yiiden)-acetamide (16),
- (5',5',Z)-iV-(2'-amino-biphenil-2-il)-2-(3-5'ec-butil-l-oxo-2,3-dihidro-lH- isoquinolin-4-iliden)-acetamida (17), - (5,5',5',5',Z,Z)-2,2'-¿w-[(3-íec-butil-l-oxo-2,3-dihidro-lH-isoquinolin-4-iliden)- acetilamino]bifenilo (18),
- (5',5',5',Z)-(l-{2'-[2-(3->yec-butil-l-oxo-2,3-dihidro-lH-isoquinolin-4-iliden)- acetilamino]-bifenil-2-ilcarbamoil}-2-metil-propil)-carbamato de 9H-fluoren-9- ilmetilo (19),
- (5',5',5',Z)-(l-{2'-[2-(3-5'ec-butil-l-oxo-2,3-dihidro-7H-isoquinolin-4-iliden)- acetilamino] -bifenil-2-ilcarbamoil} -2-fenil-etil)-carbamato de 9H-fluoren-9- ilmetilo (20),
- (5',5',5',5',Z)-(l-{2'-[2-(3-íec-butil-l-oxo-2,3-dihidro-lH-isoquinolin-4-iliden)- acetilamino] -bifenil-2-ilcarbamoil} -2-metil-butil)-carbamato de 9H-fluoren-9- ilmetilo (21),
- (5',5',5',Z)-2-amino-iV-{2'-[2-(3-5'ec-butil-l-oxo-2,3-dihidro-lH-isoquinolin-4- iliden)-acetilamino] -bifenil-2-il} -3 -metil-butiramida (22),
- (5',5',5',Z)-2-amino-iV-{2'-[2-(3-sec-butyl-l-oxo-2,3-dihidro-lH-isoquinolin-4- iliden)-acetilamino] -bifenil-2-il} -3 -fenil-propionamide (23),
- (5',5',5',5',Z)-2-amino-iV-{2'-[2-(3-sec-butil-l-oxo-2,3-dihidro-lH-isoquinolin-4- ilidene)-acetilamino]-bifenil-2-il}-3-metil-pentanamida (24),
- (S,S,S,S,S,S,Z)-2-{2-[2-(3-sec-buú\Λ-oxo-2β-dMdroΛHAsoqumo\inAA\iden)- acetilamino]-3-metil-pentanoilamino}-3-metil-pentanoato de metilo (25), - (S,S,S,S,S,S,S,S,Z)-2-(2-{2-[2-(3-secA)uú\Λ-oxo-2,3-dMdroΛHΛsoqumo\in-4- iliden)-acetilamino]-3-metil-pentanoilamino}-3-metil-pentanoilamino)-3-metil- pentanoato de metilo (26),
- (5',5',5',5',Z)-2-{2-[2-(3-sec-Butil-l-oxo-2,3-dihidro-lH-isoquinolin-4-iliden)- acetilamino]-3-metil-butirilamino}-3-fenil-propionato de metilo (27), - (£í,£',.Z)-(3-5rec-butil- 1 -tioxo-2,3 -dihidro- lH-isoquinolin-4-iliden)-acetato de metilo (28),
- ácido (S, S,Z)-(3 -sec-butil- 1 -tioxo-2,3 -dihidro- lH-isoquinolin-4-iliden)-acétic
(29), y - (5',5',5',5',5',5',Z)-2-{2-[2-(3-5'ec-butil-l-tioxo-2,3-dihidro-lH-isoquinolin-4- iliden)-acetilamino]-3-metil-pentanoilamino}-3-metil-pentanoato de metilo (30), y cualquiera de sus isómeros. 3. Un procedimiento de síntesis de los compuestos de fórmula I o π, definido en la reivindicación 1, caracterizado porque un compuesto intermedio, que es cualquier isómero del ácido (3-5rec-butil-l-oxo-2,
3-dihydro-lH-isoquinolin-4-iliden)-acetico, se transforma en amida o ester.
4. Un procedimiento de síntesis de los compuestos de fórmula I o π, , definido en la reivindicación 1, caracterizado porque un compuesto intermedio, que es cualquier isómero de (3-5rec-butil-l-oxo-2,3-dihydro-lH-isoquinolin-4-iliden)-acetato de metilo, se transforma por hidrólisis.
5. Un procedimiento de síntesis de los compuestos de fórmula I o π, definido en la reivindicación 1, caracterizado porque un compuesto intermedio, que es cualquier isómero de 5-metil-4-(2-yodobenzoilamino)-2-heptenoato de metilo, se transforma en un derivado de isoquinolina.
6. Un compuesto que es cualquier isómero de 5-metil-4-(2-yodobenzoilamino)-2- heptenoato de metilo.
7. Un procedimiento de síntesis de los compuestos de fórmula I o π, definido en la reivindicación 1, caracterizado porque un compuesto intermedio, que es cualquier isómero de iV-[(l-hidroximetil-2-metil)-butil]-2-yodo-benzamida, se transforma en un éster α,β-insaturado.
8. Un compuesto que es cualquier isómero de JV-[(l-hidroximetil-2-metil)-butil]-2- yodo-benzamida.
9. Un procedimiento de síntesis de los compuestos de fórmula I o π, definido en la reivindicación 1, caracterizado porque un compuesto intermedio, que es cualquier isómero de 3-metil-2-(2-yodobenzoilamino)-pentanoato de metilo, se reduce a alcohol.
10. Un compuesto que es cualquier isómero de 3-metil-2-(2-yodobenzoilamino)- pentanoato de metilo.
11. Uso de un compuesto, definido en la reivindicación 1, caracterizado porque tiene estructura de isoquinolina parcialmente reducida con sustitución de un grupo sec-butilo en posición 3, y de fórmula I o π,
en la que:
- el grupo X es oxígeno (O) o azufre (S), indistintamente,
- el asterisco (*) representa un centro estereogénico, de configuración (R) ó (S), indistintamente,
- el grupo R1 está independiemente seleccionado entre los grupos - NH2,
- NHR4 en el que R4 está seleccionado entre un grupo alquilo, arilo, un derivado de aminoácido y un derivado de péptido,
- NR 5R6 en el que R5 y R6 están independientemente seleccionados entre un grupo alquilo, arilo, un derivado de aminoácido, un derivado de péptido, y grupos R5 y R6 que forman un sistema cíclico,
- OH,
- OR7 en el que R7 representa un grupo arilo o alquilo,
- los grupos R2 y R3 son iguales o distintos, y están independientemente seleccionados entre los grupos O (oxígeno), NH, ó NR8, dónde R8 representa un grupo alquilo o arilo,
- Z está seleccionado entre los grupos
- alquilo entre 2 y 8 átomos de carbono, - arilo, - arilalquilo,
- cadena oxialquílica conteniendo independientemente entre 1 y 3 átomos de oxígeno y entre 2 y 10 átomos de carbono,
- fragmento derivado de aminoácido o péptido, como inhibidor de calpaina.
12. Uso de un compuesto, según la reivindicación 11, caracterizado porque es de fórmula I ó II y seleccionado entre
- (5',5',Z)-(3-5rec-butil-l-oxo-2,3-dihydro-lH-isoquinolin-4-iliden)-acetato de metilo (7),
- (S,S,Z)-(3-sec-butx\- 1 -oxo-2,3-dihidro- lH-isoquinolin-4-iliden)-acetato de bencilo (11),
- (5',5',5',5',Z,Z,Z)-(3-5rec-butil-l-oxo-2,3-dihidro-lH-isoquinolin-4-iliden)-acetato de 4-[2-(3-5rec-butil-l-oxo-2,3-dihidro-lH-isoquinolin-4-iliden)-acetoxi]-but-2- enilo (12),
- (5',5',5',5',Z,Z)-(3-5rec-butil-l-oxo-2,3-dihidro-lH-isoquinolin-4-iliden)-acetato de 4-[2-(3-5rec-butil-l-oxo-2,3-dihidro-lH-isoquinolin-4-iliden)-acetoxi]-but-2-inilo
(13),
- (5',5',5',5',Z,Z)-(3-5rec-butil-l-oxo-2,3-dihidro-lH-isoquinolin-4-iliden)-acetato de 4-[2-(3-5rec-butil-l-oxo-2,3-dihidro-lH-isoquinolin-4-iliden)-acetoximetil]- benzilo (14),
- (5',5',Z)-iV-bencil-2-(3-5rec-butil-l-oxo-2,3-dihidro-lH-isoquinolin-4-iliden)- acetamida (15), - (5',5',Z)-iV-(3-acetil-fenil)-2-(3-5'ec-butil-l-oxo-2,3-dihidro-lH-isoquinolin-4- yiiden)-acetamide (16),
- (5',5',Z)-iV-(2'-amino-biphenil-2-il)-2-(3-5'ec-butil-l-oxo-2,3-dihidro-lH- isoquinolin-4-iliden)-acetamida (17),
- (S,S,S, S,Z,Z)-2,2 ' -bis- [(3 -sec-butil- 1 -oxo-2,3 -dihidro- lH-isoquinolin-4-iliden)- acetilamino]bifenilo (18), - (5',5',5',Z)-(l-{2'-[2-(3-5'ec-butil-l-oxo-2,3-dihidro-lH-isoquinolin-4-iliden)- acetilamino]-bifenil-2-ilcarbamoil}-2-metil-propil)-carbamato de 9H-fluoren-9- ilmetilo (19), - (5',5',5',Z)-(l-{2'-[2-(3-5'ec-butil-l-oxo-2,3-dihidro-7H-isoquinolin-4-iliden)- acetilamino] -bifenil-2-ilcarbamoil} -2-fenil-etil)-carbamato de 9H-fluoren-9- ilmetilo (20),
- (S, S,S, S,Z)-{ 1 - {21- [2-(3-.sec-butil- 1 -oxo-2,3 -dihidro- lH-isoquinolin-4-iliden)- acetilamino]-bifenil-2-ilcarbamoil}-2-metil-butil)-carbamato de 9H-fluoren-9- ilmetilo (21),
- (5',5',5',Z)-2-amino-iV-{2'-[2-(3-5'ec-butil-l-oxo-2,3-dihidro-lH-isoquinolin-4- iliden)-acetilamino] -bifenil-2-il} -3 -metil-butiramida (22), - (5',5',5',Z)-2-amino-iV-{2'-[2-(3-sec-butyl-l-oxo-2,3-dihidro-lH-isoquinolin-4- iliden)-acetilamino] -bifenil-2-il} -3 -fenil-propionamide (23),
- (5',5',5',5',Z)-2-amino-iV-{2'-[2-(3-sec-butil-l-oxo-2,3-dihidro-lH-isoquinolin-4- ilidene)-acetilamino]-bifenil-2-il}-3-metil-pentanamida (24),
- (S, S,S, S,S, S,Z)-2- {2- [2-(3 -sec-butil- 1 -oxo-2,3 -dihidro- lH-isoquinolin-4-iliden)- acetilamino]-3-metil-pentanoilamino}-3-metil-pentanoato de metilo (25), - (S,S,S,S,S,S,S,S,Z)-2-(2-{2-[2-(3-secA)uú\Λ-oxo-2,3-dMdroΛHAsoqumo\in-4- iliden)-acetilamino]-3-metil-pentanoilamino}-3-metil-pentanoilamino)-3-metil- pentanoato de metilo (26),
- (5',5',5',5',Z)-2-{2-[2-(3-sec-Butil-l-oxo-2,3-dihidro-lH-isoquinolin-4-iliden)- acetilamino]-3-metil-butirilamino}-3-fenil-propionato de metilo (27), y
- (£í,£',.Z)-(3-5rec-butil- 1 -tioxo-2,3 -dihidro- lH-isoquinolin-4-iliden)-acetato de metilo (28), como inhibidor de calpaína.
13. Uso de un compuesto inhibidor de calpaína de fórmula I o π, definido en las reivindicaciones 11 y 12, para preparar un medicamento para el tratamiento preventivo o terapéutico de una enfermedad degenerativa.
14. Uso de un compuesto inhibidor de calpaína de fórmula I o II según la reivindicación 13 en el que la enfermedad degenerativa está seleccionada entre isquemia cerebral, isquemia cardiaca, ictus cerebral, Alzheimer, Parkinson, Ηungtinton, distrofia muscular, cataratas y enfermedades desmielinizantes.
15. Uso de un compuesto inhibidor de calpaína de fórmula I o π según la reivindicación 14 en el que la enfermedad degenerativa desmielinizante es la esclerosis múltiple.
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