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WO2006048926A1 - マイクロアレイの密封装置 - Google Patents

マイクロアレイの密封装置 Download PDF

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WO2006048926A1
WO2006048926A1 PCT/JP2004/016274 JP2004016274W WO2006048926A1 WO 2006048926 A1 WO2006048926 A1 WO 2006048926A1 JP 2004016274 W JP2004016274 W JP 2004016274W WO 2006048926 A1 WO2006048926 A1 WO 2006048926A1
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WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
reaction
substrate
sealing device
roller
concave structure
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
PCT/JP2004/016274
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Sachio Nomura
Masatoshi Kondo
Toru Egashira
Yoko Kimura
Nobuko Ito
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
BML Inc
Original Assignee
BML Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by BML Inc filed Critical BML Inc
Priority to PCT/JP2004/016274 priority Critical patent/WO2006048926A1/ja
Priority to JP2006542196A priority patent/JPWO2006048926A1/ja
Publication of WO2006048926A1 publication Critical patent/WO2006048926A1/ja
Anticipated expiration legal-status Critical
Ceased legal-status Critical Current

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    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L3/00—Containers or dishes for laboratory use, e.g. laboratory glassware; Droppers
    • B01L3/50—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes
    • B01L3/508—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes rigid containers not provided for above
    • B01L3/5085—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes rigid containers not provided for above for multiple samples, e.g. microtitration plates
    • B01L3/50853—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes rigid containers not provided for above for multiple samples, e.g. microtitration plates with covers or lids
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L2200/00—Solutions for specific problems relating to chemical or physical laboratory apparatus
    • B01L2200/06—Fluid handling related problems
    • B01L2200/0642—Filling fluids into wells by specific techniques
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
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    • B01L2300/00—Additional constructional details
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    • B01L2300/041—Connecting closures to device or container
    • B01L2300/044—Connecting closures to device or container pierceable, e.g. films, membranes
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L2300/00—Additional constructional details
    • B01L2300/08—Geometry, shape and general structure
    • B01L2300/0809—Geometry, shape and general structure rectangular shaped
    • B01L2300/0819—Microarrays; Biochips
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L2300/00—Additional constructional details
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    • B01L2300/0809—Geometry, shape and general structure rectangular shaped
    • B01L2300/0829—Multi-well plates; Microtitration plates
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N35/00—Automatic analysis not limited to methods or materials provided for in any single one of groups G01N1/00 - G01N33/00; Handling materials therefor
    • G01N35/00029—Automatic analysis not limited to methods or materials provided for in any single one of groups G01N1/00 - G01N33/00; Handling materials therefor provided with flat sample substrates, e.g. slides
    • G01N2035/00099—Characterised by type of test elements
    • G01N2035/00158—Elements containing microarrays, i.e. "biochip"

Definitions

  • the present invention relates to a microarray, and more particularly to a sealing device for a substrate capable of intensively performing a liquid phase reaction.
  • detection substrate capable of intensively performing a liquid phase reaction, particularly a biochemical liquid phase reaction, and has filed a patent application for this ("detection substrate”: WO 03/0 31972).
  • the detection substrate is a "detection substrate having a large number of wells on the surface of the substrate", and the biochemical liquid phase reaction is intensively performed in each of the many wells provided. It can be carried out.
  • the target is prepared by charging the detection target and the substrate for the liquid phase reaction into each well, and then dispensing the reaction solution for the reaction to the substrate of the liquid phase reaction. Preparation of liquid phase reaction can be mentioned.
  • the substrate is incubated to advance the liquid phase reactions in the individual wells. By detecting these reactions, the necessary biochemical information can also be detected.
  • the present invention should be solved by sealing the reaction side surface with a thin film such as a film as part of preparation for a detection substrate capable of performing biochemical liquid phase reactions intensively. It is to provide an automated means in case.
  • the present inventor has the following (1) and (3), and a sealing device for a substrate capable of collectively performing a liquid phase reaction (1)
  • the present invention has been completed by finding that the above-mentioned problems can be solved by providing this sealing device).
  • a recess capable of mounting a substrate capable of performing a liquid phase reaction in a state where the reaction side surface is substantially exposed.
  • Substrate storage part with structure hereinafter also referred to as “storage part”: equivalent to “lower cassette” described later
  • sliding roller A roller slidable along the reaction side surface of the substrate placed in the storage section (hereinafter also referred to as “sliding roller”)
  • a thin film (hereinafter also referred to as “sealing thin film”) disposed between the roller and the reaction side surface by sliding the roller along the reaction side surface of the substrate.
  • a delivery mechanism (hereinafter also referred to as “delivery mechanism”, which can be sent out while keeping the state in close contact with the reaction side surface, and seals the thin film on the reaction side surface; And a mechanism for operating the ⁇ sliding roller '' according to the method of use described later)
  • This sealing device is basically a state in which the "reaction substrate” prepared for the final liquid phase reaction is substantially exposed in the concave structure of the "housing part” on the reaction side surface. And slide the ⁇ sliding roller '' along the reaction side surface of the ⁇ reaction substrate '' to bring the final reaction liquid near the moving direction side of the ⁇ sliding roller ''. While dripping, the “sealing thin film” disposed between the “sliding roller” and the reaction side surface is sent out while keeping in close contact with the reaction side surface (by the above delivery mechanism), ⁇ Seal film '' on the reaction side It can be used by sealing on the surface (hereinafter, this usage method is referred to as “this usage method.
  • the "housing part” force is detachable from the main body of the sealing device, and the "housing part”
  • the concave structure is sealed in a state where the “reaction substrate” is stored in the concave structure. It is preferable to provide a mechanism capable of
  • the “reception substrate” “housing part” is separated from the sealing device body, and the “housing part”
  • the “reaction substrate” is sealed in a state of being accommodated in the concave structure by attaching a pair of lid members, and the sealed “reservoir” is subjected to a reaction treatment (incubation).
  • a liquid phase reaction on the “reaction substrate” can be performed (hereinafter, this method of use is also referred to as “method of use 2”).
  • the “housing portion” of the present sealing device has the following characteristics (a) to (c) when the device body force is also removable. It can also be grasped as a “reaction substrate” storage tool (hereinafter also referred to as “the present storage device”).
  • the reaction substrate in which the sealing thin film is sealed to the reaction side surface with the sealing device is separated from the device without removing the sealing device force. Install the lid member and apply it to the incubator etc.
  • the phase reaction can proceed. This is not only advantageous in terms of work efficiency, but also prevents the “reaction thin film” from being peeled off when the reaction substrate before the liquid phase reaction is removed from the “housing”, and is also suitable. The yield at which liquid phase reaction conditions are provided can be improved.
  • reaction substrate means a “detection substrate having a number of wells on the surface of the substrate” and means a detection instrument having a surface capable of performing a liquid phase reaction. is there.
  • This detection instrument mainly means a microarray-like substrate, and the shape is mainly a substrate-like force. The shape is not necessarily limited to this shape.
  • FIG. 1 is a drawing showing an embodiment of a "reaction substrate".
  • the reaction substrate 10 can be manufactured by providing a large number (at least two or more) of wells 12 on the surface (only one side) 110 of the original substrate 11.
  • the volume of the wel 12 should be freely selected according to the volume of the liquid phase necessary for the detection of the liquid phase reaction performed in these wels, and is not particularly limited. That is, the well 12 needs to have a volume that is appropriately larger than the volume of the liquid phase necessary for detecting the liquid phase reaction. Specifically, the volume is preferably about 100-6800% with respect to the required volume of the liquid phase.
  • the reaction substrate 10 is preferably a substrate for performing the detection of the liquid phase reaction in each of the wells 12 and is preferably smaller than the necessary volume force ⁇ 1 unit of the liquid phase.
  • the volume of each of the wels 12 is preferably 1 ⁇ 1 or less, and more preferably about 0.01 1 or less.
  • the preferred minimum volume of the well 12 should be specified according to the measurement sensitivity of the liquid phase reaction and the technique of installing the well 12.
  • the existence density of the wells 12 per unit area of the reaction substrate 10 in the reaction substrate 10 should be defined according to the size of each well 12, the technology for providing the well 12, and the detection technique for the liquid phase reaction. Although not particularly limited, in general, it is preferably about 1400,000 pieces Zcm 2 . When the reaction performed on the detection substrate is an invader 1 'assembly method described later, it is particularly preferably about 1 10000 Zcm 2 .
  • the amount of DNA to be detected is small or the number of single nucleotide polymorphisms (SNPs) to be detected is small, for example, the number of individuals to be detected in hundreds, SNP to be detected object is, when performing in a manner that is classified as being a case like] a few mm, very preferably less than 1 one 400 ZCM 2, "high throughput for" [ When carried out in such a manner that the number of single nucleotide polymorphisms (SNPs) to be detected is large (for example, tens of thousands or more), it is extremely preferably about 400-10000 Zcm 2 .
  • the reaction force performed on the detection substrate is a low-density microarray method (for example, about several hundred genes whose expression level is to be examined), or a liquid-phase reaction other than the low-density Invader 'Atsui method (immune reaction, radio I Takeno assay I method, the homogeneous mediation Si method) (liquid phase reaction of each, when the type of the detection target is a few cases, etc.), particularly preferred, 1 one 400 Zcm less than 2 It is.
  • the reaction performed on the detection substrate is performed using a high-density microarray method (for example, about several thousand to several tens of thousands of genes whose expression level is examined), or a liquid other than the above-described high-density Invader Atsey method.
  • a high-density microarray method for example, about several thousand to several tens of thousands of genes whose expression level is examined
  • a liquid other than the above-described high-density Invader Atsey method In the case of phase reaction (in the case of each liquid phase reaction, etc.), particularly preferably 400 to 40,000 Zcm 2 , very preferably 400 to 10,000 Zcm 2 .
  • the shape of the well 12 is not particularly limited, and examples thereof include a hemispherical shape, a cylindrical shape having a hemispherical bottom, a cylindrical shape, a mortar shape, a conical shape, a pyramid shape, and a prism shape. Further, it is preferable that the size of the opening of the well 12 is maintained so that the liquid phase can be easily injected. Specifically, about 0.01 to 0.5 mm (diameter) is preferable.
  • the material of the reaction substrate 10 is not particularly limited as long as it has rigidity enough to withstand practical use.
  • the liquid phase reaction detection means is a detection means using fluorescence.
  • the substrate itself does not have autofluorescence! /
  • a material is suitable for preventing the generation of background during measurement. Therefore, the material of the reaction substrate 10 in such a case includes glass, ceramics, metal, plastic, and the like.
  • thermoplastic resin as a plastic, first, as a polymer whose main chain is almost composed of carbon, an olefin polymer such as a propylene polymer (polypropylene, etc.), 4-methylpentene 1 polymer, etc .; Cycloolefin-based polymers of norbornene-based polymers (ethylene norbornene copolymer, etc.); methyl metatalylate-based polymers, isobornyl Acrylic polymers such as copolymers of metatalylate, dicyclopentamethacrylic copolymers; amorphous styrenic polymers, syndiotactic styrenic polymers, para-tert-butylene styrenic polymers, alphamethylstyrene-methyl methacrylate copolymers
  • Styrene polymers such as ABS resin; cyclohexyl malate polymer, dimethyl itaconate polymer, hardened salt vinyl resin, fluorine polymer (vinylidene fluoride polymer, tetrafluoroethylene polymer, etc.)
  • Other vinyl polymers can be mentioned.
  • thermoplastic resins polyacetal resins, polycarbonates, polyester resins, aromatic polyesters, polyamides, polyurethanes, polyurethane-polyethers, polyolefins are used as polymers containing heteroatoms in the main chain skeleton.
  • thermosetting resins include unsaturated polyesters, epoxy resins (especially alicyclic epoxy resins), three-dimensional curable polyurethanes, unsaturated acrylic resins (epoxy acrylate resins). ), Melamine resin, three-dimensional styrene resin, three-dimensional silicone resin, aryl resin (diaryl phthalate resin, diethylene glycol diallyl carbonate resin, etc.), and the like.
  • silicone treatment is often suitable for preventing adsorption of materials, reagents, and the like used for detection on the reaction substrate 10 on the substrate surface.
  • the silicone treatment can be performed according to a conventional method. For example, by applying a sol-gel method, etc., colloidal silica and other silicone raw materials are hydrolyzed, and a curing catalyst, a solvent, a leveling agent, and an ultraviolet absorber as necessary are added.
  • the silicone coating material to be formed can be performed by a conventional method, for example, preferably by a dip method or a vapor deposition method, or by a spray method, a roll coating method, a flow coating method, a spin coating method or the like.
  • the reaction substrate 10 is colored to prevent self-fluorescence when, for example, fluorescence is used for detection, and Sarako protects against adverse effects of fluorescence emission between adjacent wells. It is possible. For such coloring, saturation, hue, brightness, etc. can be selected as required. However, in this case, it is generally preferable that the color is black. In this case, the substrate material can be colored by mixing a black pigment such as carbon.
  • the specific size and shape of the reaction substrate 10 can be freely specified, and are not particularly limited. However, the actual usage is that the reaction substrate 10 is designed based on a standard widely used as a microarray. Is preferred. In other words, various microarray analyzers, analysis software, and related dispensers are designed to meet the standards, and the reaction substrate 10 is also designed to have a size and shape that match these standards. Is preferred. Specifically, a plate-like shape in the vicinity of “length 26 mm ⁇ width 76 mm ⁇ thickness lmm”, which is the size of a slide glass usually used in Japan, is suitable.
  • the reaction substrate 10 is used in accordance with the microarray shape and size standards in the V, region (for example, the United States (1 inch x 3 inches wide), Europe, etc.). It is preferable to design 10 shapes and sizes. Alternatively, it is desirable that the size is suitable for dispensing and detection equipment. Microarray scanners that can analyze even with a microtiter plate size have been sold, and that size is acceptable.
  • the method for producing the reaction substrate 10 is not particularly limited, but it is usually produced by a method of providing a well directly on a single substrate.
  • a large number of wells 12 were formed on the surface by a micro-wel formation method, such as an embossing method using a die with fine irregularities, a die-cutting method, or a processing with a fine drill.
  • the substrate 10 can be manufactured.
  • the embossing method and the die-cutting method are suitable when the material of the reaction substrate 10 is plastic.
  • reaction substrate 10 can be manufactured.
  • the detection target that can be detected by performing a liquid phase reaction (mainly a biochemical liquid phase reaction) performed on the “reaction substrate” is not particularly limited.
  • Nucleic acids to be analyzed (DNA and Z or RNA, which may be double-stranded or single-stranded, and may have a specific three-dimensional structure such as a hairpin structure)
  • Peptides, antibodies, bacteria, viruses, various clinical samples blood samples, urine samples, lymph fluid samples, synovial fluid samples, saliva samples, etc.
  • various clinical samples blood samples, urine samples, lymph fluid samples, synovial fluid samples, saliva samples, etc.
  • the detection target is preferably contained in a dispensing solution (hereinafter also referred to as a first dispensing solution) in which the first dispensing is usually performed.
  • a dispensing solution hereinafter also referred to as a first dispensing solution
  • the first dispensing solution includes a stabilizer and a treating agent according to the type of detection target.
  • the immobilizing agent and the like can be contained in the solution as necessary.
  • the content of the detection target in the first dispensing solution should be selected according to the type, purpose, etc. of the detection target, and is not limited at all. At least it is necessary that the amount of signal that can be detected by contact with the reactant is more than that which can be detected and less than the amount that noise is observed.
  • the final reaction liquid dropped in the vicinity of the moving direction side of the “sliding roller” can be appropriately selected according to the type of detection target to be used and the liquid phase reaction to be selected.
  • the liquid phase reaction performed in the present invention is not particularly limited.
  • a catalytic reaction of a protein such as an enzyme reaction, an antigen-antibody reaction, an interaction between proteins, and a specific affinity between substances.
  • -Tee including hybridization between nucleotide chains
  • the liquid phase reaction can be detected by utilizing means currently used in the microarray technology. Specifically, for example, fluorescence at each well can be detected by using a highly sensitive fluorescence scanner on the substrate after the liquid phase reaction obtained by the selected detection method. In addition, detection by radioisotope, detection by EIA method, homogenous detection such as AlphaScreen TM [manufactured by PerkinElmer (USA)] can be performed.
  • one of the most preferred embodiments of the liquid phase reaction to be carried out is the so-called Invader _ Atssey method [Third Wave Technologies (USA)].
  • FIG. 2 is a schematic diagram showing an overview of this invader.
  • the first nucleotide chain 22 is first hybridized to the cage nucleotide chain (wild type gene) 21.
  • the first nucleotide chain 22 is a base complementary to the mutation detection base [in this figure, the wild type is T (thymine)] in the cage nucleotide chain 21 [in this figure, A (adenine)].
  • T thymine
  • A adenine
  • the second nucleotide chain 23 is further hybridized with respect to the partial double strand of the cage nucleotide chain 21 and the first nucleotide chain 22.
  • the second nucleotide chain 23 has a “complementary portion” 231 complementary to the saddle-shaped nucleotide chain 21 on the 3 ′ side, and a detection element is provided continuously therewith.
  • the “detection part” 232 that is non-complementary to the type nucleotide chain is a complex nucleotide chain on the 5 ′ side, and the 5 ′ base of the “complementary part” 231 is the base to be detected for mutation.
  • the base (A) is complementary to (T).
  • the mutation detection target base portion (T) of the cage nucleotide chain 21 is replaced with the “complement of the third terminal base of the first nucleotide chain 22 and the second nucleotide chain”.
  • a partial three-base overlap structure with the 5′-most base (A) of the “partial” 231 will be formed.
  • nuclease 24 having an activity of specifically cleaving this partial three-base overlap structure on its 3 'side is allowed to act, so that the second nucleotide strand 23 cleaved by this nuclease
  • the detection portion 232 ′ the 3 ′ end is a complementary base (A) to the base (T) to be detected for mutation
  • the nucleotide sequence 21 is a wild type. Can be detected.
  • the fluorescent dye 251 is near the 5 'end and the fluorescence quencher is near the 3' side.
  • the wild type can be detected by allowing a hairpin type probe (nucleotide chain) 25 labeled with 252 to coexist with the hybrid system.
  • the single-stranded part on the 3 side of the hairpin probe 25 is used for detection of the second nucleotide chain 23. It is designed to be complementary to part 232, and the 5'-side base adjacent to the 5'-most base of this single-stranded part is the mutation detection target base (T). .
  • T mutation detection target base
  • nuclease 24 acts again to cleave between fluorescent dye 251 and fluorescent quenching substance 252 in hairpin probe 25 to release fluorescent dye 251 and to quench fluorescence by fluorescent quenching substance 252. And the original fluorescence can be detected. By detecting this fluorescence, it is possible to detect that the cocoon-type nucleotide chain 21 is a wild-type gene in which no mutation is observed in the mutation detection target base.
  • the target nucleotide for mutation detection of the cocoon-type nucleotide chain 21 is an SNP base that is, for example, G (guanine) rather than a wild-type base (T), and this is detected positively.
  • the complementary bases in the first nucleotide chain 22 and the second nucleotide chain 23 are C (cytosine) complementary to G from the above A, and the sequence of the detection portion 232 and the 25 sequences corresponding thereto.
  • the fluorescent dye 251 and the fluorescence quenching substance 252 in the hairpin type probe 25 are used as a fluorescent dye that emits fluorescence different from the above system and a fluorescence quenching substance corresponding thereto.
  • SNPs in the nucleotide chain 21 can be detected by fluorescence of different fluorescent dyes.
  • nucleotide 21 having a wild type base and a mutant base when mixed (hetero type), it may be detected positively as a mixed fluorescence of the above two types of fluorescence. Is possible.
  • the force exemplified for the detection system using the hairpin type probe in addition to this, for example, the detection portion 232 is directly subjected to fluorescent labeling or isotope labeling for direct detection. It is also possible to detect SNPs etc. by detecting the part. Furthermore, here, an example is shown in which positive detection is performed whether or not SNPs are present, but in either case, it is possible to perform negative detection in which no label such as fluorescence is detected. It is.
  • the Invader Atsey method described above is partially applied as the reaction proceeds.
  • a nuclease that specifically cleaves the base overlap structure cuts out the ⁇ detection moiety '' of the second nucleotide chain (when using a hairpin probe, the labeled fluorescent substance is combined with a fluorescence quencher.
  • This is a very sensitive liquid phase reaction in which the labels used in the Invader's Atsy method are sensitized because it works continuously (even at the separation stage), and in the case of performing a micro liquid phase reaction as in the present invention. Is a very suitable liquid phase reaction.
  • this method is very useful as a method that can efficiently detect SNPs that are the key to customized medicine. By applying the present invention to this method, it is simple and efficient. In particular, it is possible to detect SNPs, which is very significant for industry.
  • the above-described chain-type nucleotide chain 21 is a detection target to be contained in the first dispensing solution, and other invader methods described above are used.
  • the first dispensing solution is dispensed into the microwells of the detection instrument and then dried to detect the detection target on the inner wall of the detection instrument having a plurality of wells.
  • An object is attached, and the final reaction solution containing a reaction material for the detection object is brought into contact with the inner wall of the detection tool to which the detection object is attached, and a signal generated by this contact is detected.
  • the detection object can be evaluated.
  • the second dispensing force seal the detection operation is rushed, and if the force is not performed correctly, the contents will leak from the respective wells onto the surface of the detection instrument, Mixing them may adversely affect the evaluation of the detection object.
  • This working process is made more efficient by the present method of use 1 and 2 using the hermetically sealed device, and the yield of reaction under favorable conditions is improved.
  • the temperature-responsive substance is not particularly limited, but without additives such as salts, it is about 10-90 ° C, preferably about 40-70 ° C.
  • a substance that causes a phase change is preferable. Specifically, gelatin, agar, DPPC (DPPC) (
  • Dipalmitoyl phosphatidylcholine), poly (N-isopropylacrylamide), poly ( ⁇ -capula rataton) and the like can be mentioned, and gelatin is particularly preferable.
  • polyhydric alcohols in general, for example, polysaccharides such as dextran, starch syrup components such as maltose and trehalose, and further powers such as polyethylene glycol, xylitol, etc. Is preferred.
  • the temperature-responsive substance and the slowly-dissolving substance both of them, the holding substance!
  • Either one or both of them are selected, and usually the first It can be used by being contained in a dispensing solution.
  • the content of the retention substance in the first dispensing solution needs to be at least an amount that can sufficiently retain the detection target in a dry state, a moisturized state, or a swollen state.
  • the retained substance hydrates or swells, but if the amount of retained substance is not sufficient at that time, the detection target is completely retained in the retained substance. It will be a little free.
  • the liberated detection object is not preferable because it can be immediately mixed into adjacent wells when the wells communicate with each other via the reaction solution.
  • the temperature-responsive substance is gelatin, it is preferably contained in the range of 0.05-2 mass% with respect to the first dispensing solution. If it is less than 0.05% with respect to the solution, the detection target is not completely retained in the gelatin as the temperature responsive substance as described above, but is eluted in the reaction solution, and other substances are passed through the reaction solution. Detection objects in the well may come into contact with each other and the detection sensitivity may decrease. If the amount exceeds 2% by mass, the first dispensing solution itself will become excessively viscous, which may hinder dispensing. There is a tendency to occur.
  • the first dispensing solution is preferably prepared by adding and dissolving the detection target substance in an aqueous solution of the retentate in a liquefied (solated) state.
  • Other preparation methods are not limited to the method.
  • the first dispensing solution can be prepared immediately before dispensing the detection substrate to the well, and can be prepared in advance several days and several hours before dispensing.
  • the storage period as the first dispensing solution is preferably selected according to the stability of the detection target. Also, at least during dispensing, the first dispensing solution needs to be liquid. Furthermore, after adding the detection object, it is not preferable to set the temperature at which the detection object is decomposed or altered.
  • the detection method is such that the liquid first dispensing solution can be used for each well of the detection instrument described above.
  • a microdispensing machine such as an ink jet type microdispensing machine
  • the first dispensing solution in the well is dried (preferably when the retention substance is a slowly dissolving substance or when the retention substance is not used) or is cooled (at room temperature).
  • Reaction which contains a reactive substance for the detection target in the first dispensing solution after adhering to the well of the detection instrument (e.g., when the holding substance is a temperature-responsive substance).
  • the solution is brought into contact with the inner wall of the well where the first dispensing solution has been attached, and the temperature rises or falls.
  • the poly (N-isopropylacrylamide) described above solidifies as the temperature rises, It has a liquid nature. Therefore, when this is used as a temperature response substance, the temperature of the dispensing solution is lowered to the liquid temperature during the first dispensing, and the reaction temperature is increased to the solidification temperature after the dispensing. It is preferable to lower the temperature of the well to the liquid temperature at the time of detection by bringing the solution into contact with the solution.] By detecting the signal generated by releasing the detection target by dissolving it by leaving it, etc. An object can be evaluated.
  • FIG. 1 is a drawing showing an embodiment of a reaction substrate which is an object of the present sealing device.
  • FIG. 2 This is a schematic diagram of the overview of the Invaders Atssey method.
  • FIG. 3 is an overall perspective view of an embodiment of the sealing device.
  • FIG. 4 is a perspective view of a roller support of the sealing device.
  • FIG. 5 is a longitudinal sectional view of a roller support of the sealing device.
  • FIG. 6 is an explanatory view of a longitudinal section schematically illustrating a sealing process of a sealing film to a reaction substrate using the sealing device.
  • FIG. 7 is an overall perspective view schematically showing a sealing process of a sealing film to a reaction substrate using the sealing device.
  • FIG. 8 is an exploded perspective view of a storage portion of the sealing device.
  • FIG. 9 is a drawing illustrating an aspect of a storage unit capable of changing the horizontal angle.
  • FIG. 10 A drawing showing the manner in which the cassette is tightened with a set screw when the storage unit is also separated from the sealing device force.
  • FIG. 11 is a longitudinal sectional view schematically showing how the sealing device is used.
  • FIG. 3 is an overall perspective view of an embodiment 30 of the sealing device.
  • the sealing device 30 is configured as described below.
  • the pedestal 31 that supports the main body of the sealing device 30 has a pedestal plate 311 and four legs 312A-D (312D not shown) that support the pedestal plate 311 provided at the four corners of the pedestal plate 311! / Each of these four legs 312A-D is provided with a height adjustment mechanism that can adjust the height by, for example, the fitting length by screwing into the base plate 311. Is preferred.
  • a housing 32 and an electric motor 33 are placed on the pedestal plate 311.
  • the housing 32 includes one T-shaped bottom plate 321, two side plates 322A-B (322B not shown) fixed to the bottom plate 321 in a state where both T-shaped arm forces stand up, and the side
  • the top plate 323 is placed and fixed on the upper end of the plates 322A-B, and the plate-like body 324 is placed and fixed on the bottom plate 321.
  • a rail support 331 is placed and fixed on the plate-like body 324, and a rail fitting groove is provided along the length direction of the upper surface of the rail support 331.
  • a long plate-shaped guide rail 332 is fitted and fixed to the upper surface of the rail support 331 by fitting a convex portion 3321 provided in the length direction of the bottom surface of the rail 332 into the rail support 331.
  • a projecting member 333 is provided on one side surface of the rail support 331. This will be described later This is a stopper mechanism that prevents the feeding member 3411 from striking against the protruding member 333 when the slide stage 341 tries to move on the guide rail 332 beyond the limit.
  • a slide stage 341 is guided and supported on the guide rail 332 by a guide rail 332 via a bowl-shaped feeding member 3411 fixed to the bottom thereof.
  • the slide stage 341 can be moved along the rail 332 when the feeding member 3411 slides on the guide rail 332.
  • a recess 3412 into which the lower cassette 351 constituting the cassette 35 can be fitted is provided on the upper surface of the slide stage 341.
  • the lower cassette 351 is provided with a concave structure in which the reaction substrate 36 can be placed with the reaction side surface substantially exposed. Further, it is preferable that the lower cassette 351 is detachable from the recess 3412.
  • the roller support 37 is literally a member for supporting the sliding roller 39 in the sealing device 30.
  • the details of the roller support 37 are described in FIG. 4 (perspective view) and FIG. 5 (FIG. 4: longitudinal section in I).
  • the roller support 37 has a shape composed of a basic portion 371 and two saddle-shaped protrusions (372 mm).
  • the shaft 38 passes through the basic portion 371 in one direction as viewed in the direction of the arrow, and both ends thereof are rotatably supported by the side plates 322 ⁇ .
  • the roller support 37 is rotatable around a shaft rod 38.
  • the roller pressure adjustment dial 373 (which is the axis of the roller support 37) can be adjusted by moving the screw through the top plate 323.
  • the roller pressure adjusting stopper 375 (provided at a position biased in the direction of the arrow 2 in the direction of the arrow from the shaft rod 38 of the roller support 37). Is provided)
  • the roller pressure adjusting dial 373 is a male screw with a head 3731.
  • the elastic body support is provided at the tip thereof.
  • a bracket 3732 can be provided.
  • a washer 3734 is attached to the upper surface opening of the through-hole 3733 provided in the roller support 37 for screwing the roller pressure adjusting dial 373, and the washer 3734 and On the inner surface of the through-hole 3733, a female screw that can be screwed with the male screw of the roller pressure adjusting dial 373 is provided.
  • a cylindrical coil panel 374 suitable as an elastic body is sandwiched between upper surfaces of the elastic body receiving bracket 3732 and the roller support body 37, thereby giving a downward elastic force to the single support body 37. That is, a pressing force generated by screwing the roller pressure adjusting dial 373 through the cylindrical coil panel 374 is applied to the sliding roller 39, and as a result, an elastic and uniform pressure is applied to the reaction substrate 36. be able to.
  • the roller pressure adjusting stopper 375 is a male screw with a head 3751.
  • a washer 3753 is attached to the upper surface of the through hole 3752 provided in the roller support 37 for screwing the roller pressure adjusting stopper 375, and the inner surface of the washer 3753 and the Z or through hole 3752 is attached to the upper surface of the through hole 3752.
  • the roller pressure adjustment stopper 375 is provided with a female screw that can be screwed in with a male screw.
  • a screw contact member 376 is attached to the roller support 37 at a position where it comes into contact when the roller pressure adjusting stopper 375 is screwed.
  • the tip of the screw should be positioned at the desired height of the upper surface force of the roller support 37 at a position of the roller support 37 that is biased to the arrow 2 side of the shaft 38.
  • the two ends of the roller support 37 projecting part (372A.B) are supported by the sliding roller 39 on the side of the arrow 1 side, and round nuts with holes (391 ⁇ ⁇ ⁇ : ⁇ (Not shown) and is attached at the protrusions 372 mm.
  • the roller body 392 of the sliding roller 39 is in contact with the reaction-side surface 361 of the reaction substrate 36 placed in the concave structure of the lower cassette 351, and can slide on the surface 361 by its own rotational movement. It has become.
  • the rotational movement of the sliding roller 39 is supplied from the electric motor 33 connected directly or indirectly to the round nut 391B, and can rotate the sliding roller 39 in the forward direction or the reverse direction.
  • the roller speed of the sliding roller 39 is preferably variable. That is, in order to make it difficult to generate bubbles, it is preferable to slide the sliding roller 39 slowly. However, if it is too slow, the sealing efficiency is deteriorated, and the concave structure is dried in advance. There is a tendency that the substances that have been dissolved dissolve and move to the adjacent recesses and become easily contaminated. Therefore, it is preferable that the motor 33 has a function capable of adjusting the rotation speed, and thereby the sliding speed of the sliding roller 39 can be adjusted.
  • the round nut 391A is provided with a stopper for the rotational motion.
  • a small female screw 394 (FIG. 4) penetrating the round nut 391A is provided, and the corresponding male screw 393 can be used as a stopper for the rotational motion. That is, by screwing the male screw 393, the tip of the male screw 393 applies a frictional force to the protruding portion 372A, and prevents the sliding roller from being inadvertently rotated when the sealing device 30 is stationary. (When the sealing device 30 is activated, the male screw 393 is loosened).
  • the rod-shaped body 377 has an arrow on the slanting upper part and rear side in the vicinity of the sliding roller 39 (based on the two directions of arrows) at the projecting portion (372 ⁇ ⁇ ⁇ ) of the two force points of the single support 37. Visible in one direction.
  • one end of a plate panel 41 which is an elastic body, is fixed to the top plate 323, and a gripping tool 411 is provided at the other end.
  • one end of the wire panel 42 is fixed to the top plate 323, and a gripping tool 421 is provided at the other end.
  • One end of the seal paper 412 (the seal film 4121 and the release paper 4122 are bonded) is clamped and fixed by the gripping tool 411 of the board panel 41, and the seal film 4121 and the release paper 4122
  • the sealing film 4121 is fixed by the pinching force between the sliding roller 39 and the reaction substrate 36, and the release paper 4 122 passes through the lower side of the rod-shaped body 377 and is fixed by the gripping tool 421.
  • the release film 4122 does not sag toward the reaction substrate 36 due to the tension between the one end and the other end, and the sealing film 4121 is in close contact with the reaction substrate 36 with appropriate tension, and the state is maintained. I'm leaning.
  • FIG. 6 ( ⁇ ) — ( ⁇ ) (longitudinal sectional view) and FIG. 7 (overall perspective view) show a seal against the reaction substrate 36 using the sealing device 30.
  • the sliding roller 39 is slid by rotating along the reaction side surface 361 of the reaction substrate 36 by the power of the electric motor 33, so that the unit 39
  • the sealing film 4121 disposed between the reaction side surface 361 and the reaction side surface 361 is sent out while keeping in close contact with the reaction side surface 361, and the sealing film 4121 is sealed to the reaction side surface 361. It is possible to wear.
  • the final reaction liquid 431 is sealed while being dropped near the moving direction side of the sliding roller 39.
  • the dropping of the final reaction solution can be performed manually using a dropper or the like, but it is also preferable to use an automatic dropping mechanism. For example, as shown in FIG.
  • the final reaction liquid 431 is charged into a container 43 equipped with a cylinder / piston mechanism, and the piston 432 portion of the container moves into the cylinder according to the forward movement of the feeding member 3411.
  • the portion 433 to be pushed in the final reaction liquid in the cylinder 433 is synchronized with the forward movement of the feeding member 3411, that is, the sliding of the sliding roller 39 with respect to the reaction substrate 36.
  • 431 can automatically drop the final reaction solution onto a desired position on the reaction substrate 36 via the tube 434.
  • a groove 3513 (FIG. 7) is preferably provided around the reaction substrate 36 placed in a concave structure 3511 (FIG. 8) provided in the lower cassette 351 described later.
  • the incubated reaction substrate 36 ′ can be easily taken out from the lower cassette 351 by hooking the incubated reaction substrate 36 ′ from the groove 3513 with an instrument such as a spatula.
  • a desired sliding motion on the reaction substrate 36 can be performed by the rotation of the roller 39 by transmitting the power of the electric motor 33 to the sliding roller 39. It is not limited to. For example, by transmitting the power of the electric motor 33 to the slide stage 341 and sliding the slide stage on the guide rail 332, the sliding roller 39 slides on the reaction substrate 36 in synchronization with this movement, The same function as the sealing device 30 can be exhibited. Further, the power of the electric motor can be transmitted to both the sliding roller 39 and the slide stage 341, and both can be moved in the same manner as described above, so that the same function as the sealing device 30 can be exhibited.
  • the upper cassette 352 constituting the cassette 35 which is preferably detachable is the lower cassette described above.
  • the cassette 351 When the cassette 351 is separated from the main sealing device 30, it can be attached as a lid member to the lower cassette 351.
  • the upper and lower cassettes are attached by screwing through the assembly holes 3521A-D. It is preferable to fix.
  • a cushioning material such as a urethane pad is interposed between the upper cassette 352 and the lower cassette 351. It is conceivable that the buffer material is bent and the force pressing the reaction substrate 36 is weakened. In order to prevent this, it is preferable that the upper cassette 352 can be always pressed against the lower cassette 351 with a certain force by the coin-like panel.
  • FIG. 8 is an exploded perspective view of the “housing portion” of the main sealing device 30 and the usage mode of the housing portion as the “main housing tool”.
  • the storage portion of the main sealing device 30 is composed of the slide stage 341, and preferably the lower cassette 351, which forms a cassette 35 in a string with the upper cassette 352.
  • the lower cassette 351 can be fitted and placed in a detachable state in a recess 3412 provided on the upper surface of the slide stage 341.
  • the recess 3412 has a cross-sectional shape that allows the lower cassette 351 to be fitted and placed at different plane angles so that the place where the lower cassette 351 is fitted and placed can be changed. Yes.
  • the bottom of the recess 3412 is provided with four force-rotating stage rotation slots 3 413A-D, and each slot has a fixing screw 3414A-D force at its tip that is the feed member.
  • the heads of the fixing screws which are screwed and fixed at 3411 and have a diameter larger than the hole width of the rotation slots 3413A and D, are hooked on the rotation slots. .
  • the fixing screw 341 4A-D slides on the rotating long hole 3413A-D according to the force, and these are moved at the desired position. It is possible to fix the selected horizontal angle of the slide stage 341 on the guide rail 332 by tightening the fixing screws.
  • the lower cassette 351 is provided with a concave structure 3511 having a shape capable of fitting and mounting the reaction substrate 36 in a state where the reaction side surface is substantially exposed.
  • Upper cassette 352 In the upper cassette 352, an assembly screw hole 3512A-D is provided at a position overlapping with the fixing screw hole 3521A-D in the upper cassette 352.
  • FIG. 9 is a drawing showing an example of a stage that can change the horizontal angle.
  • the sealing mode can be varied by controlling the horizontal angle of the reaction substrate 36.
  • the cross-sectional shape of the concave portion 3412 of the slide stage 341 can be fitted and mounted on the lower cassette 351 at different plane angles without using the rotating long holes 3413A and 1D.
  • the lower cassette 351 can be placed at the desired horizontal angle [Fig. 9 (A) (B)].
  • the plane angle of the reaction substrate 36 can be controlled by rotating the slide stage 341 itself to a desired plane angle and fixing it by the function of the stage rotation slot 3413A-D described above. There is [Figure 9 (C)].
  • the horizontal angle of the reaction substrate 36 in the sealing device 30 can be controlled more freely by combining the above-described FIGS. 9 (A)-(C). That is, for example, the means shown in FIGS. 9 (1) and 1 (2) can be used as rough horizontal angle adjusting means, and the means (3) can be used as a horizontal angle fine adjusting means.
  • the above reaction substrate 36 can be obtained by attaching the upper cassette 352 to the lower cassette 351. It is preferable to seal the concave structure 3511 in a state where 'is stored in the concave structure 3511.
  • a cushioning material 354 such as a urethane pad between the reaction substrate 36 ′ and the upper cassette 352 reduces the mounting pressure on the reaction substrate 36 ′ and increases the reliability of storage. It is suitable for planning.
  • the fixing screw hole 3521A-D provided in the upper cassette 352 and the lower force It is preferable to tighten set screw holes 3511A-D with set screws 353A-D. Also in this case, by using the set screw 353A-D as a screw using a panel mechanism, it is possible to prevent the pressure applied to the reaction substrate 36 'from becoming excessively large by tightening the screw.
  • the set screw 353 is capable of tightening the cassette 35 in the manner shown in FIG. 10, for example.
  • the set screw 353 is composed of a head 31 3531 and a shaft ⁇ 3532 force.
  • a screw part 3532A is provided near the tip of the shaft ⁇ 3532 and can be screwed into the female screw provided in the assembly screw hole 3511. It is.
  • the cylindrical portion 3532B has a smaller diameter than the inner diameters of the fixing screw hole 3521 and the assembly screw hole 3511.
  • a panel receiver 3533 is arranged below the head 3531.
  • the lower cassette 351, reaction substrate 36, sealing film 4121, cushioning material 353, and upper cassette 352 are stacked in the same manner as described above, and the coil diameter is set on the shaft 3532 of the set screw 353 than the fixing screw hole.
  • the screw part 3532A is screwed in the screw hole for assembly,
  • the buffering force of the compression coil panel 354 prevents the pressure applied to the reaction substrate 36 ′ from becoming excessively large.
  • FIG. 11 is a longitudinal sectional view schematically showing how the sealing device 30 is used.
  • the reaction substrate 36 is fitted and placed in the concave structure 3511 provided in the lower cassette 351.
  • the depth of the groove structure 3511 is slightly shallower (about 0.1-0. 5 mm) than the thickness of the reaction substrate 36.
  • the reaction-side surface 361 of the reaction substrate 36 is slightly exposed in the lower cassette 351.
  • the lower cassette 351 is provided with the groove 3513, and further, a gradient (35111) from the outside toward the inside is provided in the vicinity of the bottom surface of the side surface of the concave structure 3511.
  • FIG. 11 (B) shows the sealing film 4121 in the same manner as in FIG.
  • the present invention provides an automated means for sealing the reaction side surface with a thin film such as a film as part of preparation for a detection substrate capable of performing biochemical liquid phase reactions intensively. Is done.

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Description

マイクロアレイの密封装置
技術分野
[0001] 本発明は、マイクロアレイ、特に、液相反応を集約的に行うことが可能な基板に対 する密封装置に関する発明である。
背景技術
[0002] 出願人は、液相反応、特に生化学的な液相反応を集約的に行うことが可能な検出 基板の開発を行い、これについての特許出願を行った（「検出用基板」： WO 03/0 31972)。
[0003] 当該検出用基板は、「基板表面に、多数のゥエルが設けられている検出用基板」で あり、多数設けられた個々のゥエル中で、生化学的な液相反応を集約的に行うことが できる。この集約的な液相反応を行おうとする場合、その液相反応の種類に応じた下 準備を行う必要がある。典型的には、個々のゥエル中に検出対象物と液相反応の基 質を仕込み、次いで、液相反応の基質に対して反応を行う反応液を分注すること〖こ より、目的とする液相反応の下準備を行うことが挙げられる。この下準備完了後に、基 板をインキュベートして個々のゥエルにおける液相反応を進行させ、これらの反応を 検出することにより、当該基板力も必要な生化学的な情報を検出することができる。
[0004] 上記の液相反応の下準備の一環として、基板表面をフィルム等の薄膜で密封する ことが、個々のゥエル内に仕込まれた液体同士の接触をすることによる測定誤差の発 生の防止や、個々のゥエルにおいて均一なインキュベート環境を実現する上で必須 である場合が認められる。
[0005] このような密封は、現状では手技によりなされている。しかしながら、大量の検体を 処理する場合、手技では、その効率性が問題となる。また、手技者の技量によっては 、密封が十分に行われず、コンタミネーシヨン等がおこり、液相反応が予定通り行わ れることに対する歩留まりが低下することも考えられる。さらに、この密封を手技で行 おうとすると、一人が薄膜をつまみ上げてローラーを動かしながら、もう一人が液を適 量ずつローラーの動きに合わせて流し込む必要があり、結局 2人の人員が必要となる 。また、反応液の分注は、インクジェット型微量分注機等を応用することにより自動化 が進んで!/、ることを考慮すると、この密封にっ 、ても自動化を図ることが好ま 、と考 えられる。
発明の開示
[0006] よって、本発明が解決すべきは、生化学的な液相反応を集約的に行うことが可能な 検出基板における下準備の一環として、その反応側表面をフィルム等の薄膜で密封 する場合の自動化手段を提供することにある。
[0007] 本発明者は、この課題について検討を行った結果、下記（1)一（3)を備えることを 特徴とする、液相反応を集約的に行うことが可能な基板に対する密封装置 (以下、本 密封装置ともいう）を提供することにより、上記の課題を解決し得ることを見出し、本発 明を完成した。
(1)液相反応を集約的に行うことが可能な基板 (以下、「反応基板」ともいう）を、そ の反応側の表面を実質的に露出させた状態で載置可能な形状の凹構造が設けられ た、基板の収納部（以下、「収納部」ともいう：後述する「下カセット」に相当）
(2)当該収納部に載置した前記基板の反応側の表面に沿って摺動可能なローラ 一（以下、「摺動ローラー」ともいう）
(3)当該ローラーを、前記基板の反応側の表面に沿って摺動させることにより、当 該ローラーと当該反応側の表面の間に配置した薄膜 (以下、「密封用薄膜」ともいう） を、当該反応側の表面に密着させた状態を保ちながら送り出して、当該薄膜を当該 反応側の表面に封着することが可能な送り出し機構 (以下、「送り出し機構」とも 、う： 「収納部」と「摺動ローラー」を、後述する本使用方法に従って作動させるための機構 )
[0008] 本密封装置は、基本的には、最終液相反応の準備を行った「反応基板」を、「収納 部」の凹構造に、その反応側の表面を実質的に露出させた状態で上に向けて載置し 、「摺動ローラー」を、「反応基板」の反応側の表面に沿って摺動させることにより、最 終反応液を「摺動ローラー」の移動方向側近傍に滴下しながら、「摺動ローラー」と当 該反応側の表面の間に配置した「密封用薄膜」を、当該反応側の表面に密着させた 状態を保って送り出して (上記送り出し機構による）、「密封用薄膜」を当該反応側の 表面に封着することにより使用することができる（以下、この使用方法を「本使用方法
1」ともいう）。
[0009] 本密封装置において本使用方法を行うことにより、「反応基板」に対する「密封用薄 膜」の封着を効率的に、かつ、確実に行うことが可能となり、好適な液相反応条件が 提供される歩留まりを、一般的な手技密封に比べ向上させることが可能となる。
[0010] また、「収納部」力 本密封装置本体から着脱可能であり、かつ、「収納部」において
、組となる蓋部材を、本密封装置本体力 分離された「収納部」に装着させることによ り、「反応基板」が凹構造に収納された状態で、上記凹構造を封止することができる 機構が設けられて ヽることが好適である。
[0011] すなわち、上記の本使用方法 1における「密封用薄膜」の「反応基板」における密封 の後に、「反応基板」の「収納部」を前記密封装置本体から分離し、当該「収納部」に おいて、組となる蓋部材を装着させることにより、前記「反応基板」を、凹構造に収納 された状態で封止し、当該封止済みの「収納部」を反応処理 (インキュベート）するこ とにより、前記「反応基板」における液相反応を行うことができる（以下、この使用方法 を「本使用方法 2」ともいう）。
[0012] このように、本密封装置の「収納部」は、当該装置本体力も着脱可能な場合には、こ の「収納部」自体を、下記 (a)—（c)の特徴を有する、「反応基板」の収納具 (以下、「 本収納具」とも 、う）としても把握され得る。
(a)「反応基板」を、その反応側の表面を実質的に露出させた状態で載置可能な形 状の凹構造が設けられている
(b)本密封装置本体から着脱可能であり、当該装置本体に装着させた状態では、 前記「収納部」としての機能を有する
(c)本密封装置本体から分離した状態にお!、て、組となる蓋部材を装着させること により、「反応基板」が収納された状態で、上記凹構造を封止することができる機構が 設けられている
[0013] 本使用方法 2を行うことで、本密封装置で、密封用薄膜を反応側表面に封着させた 反応用基板を、本密封装置力 取り外すことなぐそのまま当該装置から分離させた 状態で蓋部材を装着させて、これをインキュベータ一等にかけることで、所望する液 相反応を進行させることができる。このことは、作業の効率上有利であるだけではなく 、液相反応前の反応基板を「収納部」から取り外す際の「反応用薄膜」の剥がれゃブ レ等を防止し、さらに、好適な液相反応条件が提供される歩留まりを向上させることが できる。
[0014] 以下、本発明を実施する上での前提となる事項について説明する。
[0015] 反^某板
「反応基板」は、「基板表面に、多数のゥエルが設けられている検出用基板」、であ り、液相反応を行うことが可能なゥエルを表面に有する検出用器具を意味するもので ある。この検出用器具は、主としてマイクロアレイ様基板を意味するものであり、形状 は主に基板状である力 必ずしもこの形状に限定されるものではない。
[0016] 第 1図は、「反応基板」の一態様を表した図面である。反応基板 10は、原基板 11の 表面 (片面のみ） 110上に、ゥエル 12を、多数 (少なくとも 2個以上)設けることにより 製造され得る。
[0017] ゥエル 12の容積は、これらのゥエルにおいて行う、液相反応の検出に必要な液相 のボリュームに応じて自由に選択されるべきものであり、特に限定されるべきものでは ない。すなわち、ゥエル 12は、液相反応の検出に必要な液相のボリュームよりも、適 度に大きな容積であることが必要である。具体的には、この必要な液相のボリューム に対して、 100— 6800%程度の容積であることが好適である。
[0018] 反応基板 10は、本来、必要な液相のボリューム力 μ 1単位より小さ!/、ことが好適な 、液相反応の検出を、各々のゥエル 12において行うための基板であるから、ゥエル 1 2の、各々の容積は、好適には 1 μ 1以下、さらに好適には、 0. 01 1以下程度であ る。このゥエル 12の容積の好適な最低値は、液相反応の測定感度と、ゥエル 12を設 ける技術に応じて規定されるべきものである。
[0019] また、反応基板 10における、ゥエル 12の、基板単位面積当りの存在密度は、各々 のゥエル 12の大きさ、ゥエル 12を設ける技術、液相反応の検出技術に応じて規定さ れるべきものであり、特に限定されるべきものではないが、概ね、好適には、 1一 400 00個 Zcm2程度である。検出用基板において行われる反応が、後述するインべーダ 一'アツセィ法である場合、特に好適には、 1一 10000個 Zcm2程度である。また、ィ ンベーダー.アツセィ法を、「低処理向け」〔検出対象となる DNAの量が少ない場合 や、検出目的となる一塩基多型 (SNP)の数が少ない場合、例えば、検出対象となる 個人数が数百人で、検出目的となる SNPが、数個程度である場合等〕として分類さ れる態様で行う場合、極めて好適には、 1一 400個 Zcm2未満であり、「高処理向け」〔 検出目的となる一塩基多型 (SNP)の数が多 、 (例えば、数万個以上)場合〕として分 類される態様で行う場合、極めて好適には、 400— 10000個 Zcm2程度である。また 、検出用基板において行われる反応力 低密度のマイクロアレイ法 (例えば、発現量 を調べるべき遺伝子が数百個程度）、または、低密度のインベーダー 'アツセィ法以 外の液相反応 (免疫反応、ラジオィムノアッセィ法、ホモジーニアスアツセィ法等）（各 々の液相反応において、検出対象の種類が数個の場合等)である場合、特に好適に は、 1一 400個 Zcm2未満である。さらに、検出用基板において行われる反応が、高 密度のマイクロアレイ法 (例えば、発現量を調べる遺伝子が数千一数万個程度）、ま たは、高密度の上記のインベーダー ·アツセィ法以外の液相反応 (各々の液相反応 において、検出対象の種類が数千一数万個の場合等)である場合、特に好適には、 400— 40000個 Zcm2、極めて好適には、 400— 10000個 Zcm2である。
[0020] また、ゥエル 12の形状は、特に限定されず、例えば、半球面状、底が半球面状の 円筒状、円筒状、すり鉢状、円錐状、角錐状、角柱状等が挙げられる。また、ゥエル 1 2の開口部の大きさは、液相を容易に注入可能な大きさが保たれていることが好適で ある。具体的には、 0. 01-0. 5mm程度（直径）が好適である。
[0021] 反応基板 10の素材は、実用に耐えられる程度の剛性を有していれば特に限定さ れないが、特に、液相反応の検出手段が、蛍光を用いる検出手段である場合には、 基板自体が自家蛍光を有さな!/、素材であることが、計測時のバックグラウンドの発生 を防御する上で好適である。よって、このような場合の反応基板 10の素材は、ガラス 、セラミックス、金属、プラスチック等が挙げられる。
[0022] プラスチックとしては、熱可塑性榭脂の例を挙げると、まず、主鎖が殆ど炭素からな るポリマーとして、プロピレン系ポリマー（ポリプロピレン等）、 4ーメチルペンテン 1系ポ リマー等のォレフィン系ポリマー；ノルボルネン系ポリマー（エチレンノルボルネンコポ リマー等）のシクロォレフィン系ポリマー；メチルメタタリレート系ポリマー、イソボル-ル メタタリレートのコポリマー、ジシクロペンタ-ルメタクリル系コポリマー等のアクリル系 ポリマー；非結晶のスチレン系ポリマー、シンジオタクチックスチレン系ポリマー、パラ t ーブチノレスチレン系ポリマー、アルファメチルスチレンーメチルメタクリレートコポリマー
、 ABS榭脂等のスチレン系ポリマー；シクロへキシルマレート系ポリマー、ジメチルイ タコネート系ポリマー、硬化塩ィ匕ビニル榭脂、フッ素系ポリマー（ビ-リデンフルォライ ド系ポリマー、テトラフルォロエチレン系ポリマー等）のその他のビニル系ポリマー等 を挙げることができる。
[0023] また、熱可塑性榭脂のうち、主鎖の骨格にヘテロ原子を含むポリマーとして、ポリア セタール榭脂、ポリカーボネート、ポリスノレフォン、芳香族ポリエステル、ポリアミド、ポ リウレタン、ポリフエ-レンエーテル、ポリフエ-レンスルフイド、ポリイミド榭脂、トリァセ リルセルロース等が挙げられる。
[0024] さらに、熱硬化性榭脂の例としては、不飽和ポリエステル、エポキシ榭脂（特に、脂 環族エポキシ榭脂）、三次元硬化型ポリウレタン、不飽和アクリル榭脂（エポキシアタリ レート榭脂を含む)、メラミン榭脂、三次元化スチレン榭脂、三次元化シリコーン榭脂 、ァリル樹脂（ジァリルフタレート榭脂、ジエチレングリコールジァリルカーボネート榭 脂等)等が挙げられる。
[0025] また、必要に応じて、ガラスやプラスチック製の反応基板 10において、シリコーン処 理、脂肪酸処理等の表面処理を、常法に従い行うことができる。特に、シリコーン処 理は、反応基板 10における、検出に用いる材料、試薬等の基板表面への吸着を防 御するために好適である場合が多 、。
[0026] シリコーン処理は、常法に従い行うことができる。例えば、ゾル 'ゲル法等を応用す ることにより、コロイダルシリカ、その他のシリコーン原料を加水分解し、硬化触媒、溶 剤、レべリング剤、必要に応じて紫外線吸収剤等を添加して調製されるシリコーンコ ート材を、常法、例えば、好適には、ディップ法や蒸着法、その他、スプレー法、ロー ルコート法、フローコート法、スピンコート法等により行うことができる。
[0027] また、反応基板 10に、着色を施して、例えば、検出に蛍光を用いる場合の自家蛍 光を防御すること、さら〖こは、隣接したゥエル同士の蛍光発光による悪影響を防御す ることが可能である。かかる着色は、必要に応じて、彩度、色相、明度等を選択可能 であるが、概ね、黒色であることが好ましぐこの場合、炭素等の黒色顔料を基板材 料に混合して着色を行うことができる。
[0028] 反応基板 10の具体的な大きさと形状は、自由に規格可能であり、特に限定されな いが、マイクロアレイとして汎用されている規格に基づいた設計であることが、現実の 使用態様として好適である。すなわち、各種のマイクロアレイ解析機器、解析ソフトや 関連する分注機等が、カゝかる規格に合わせて設計されており、反応基板 10も、この ような規格に合致させた大きさと形状に設計することが好適である。具体的には、日 本国で、通常用いられているスライドガラスのサイズである、「縦 26mm X横 76mm X 厚さ lmm」近傍の板状形状とすることが好適である。これと同様に、反応基板 10を用 V、る地域〔例えば、米国（縦 1インチ X横 3インチ程度)やヨーロッパ等〕のマイクロアレ ィの形状と大きさの規格に対応させて、反応基板 10の形状と大きさの設計を行うこと が好適である。もしくは分注、検出用機器に適合した大きさであることが望ましい。マ イクロタイタ一プレートサイズでも解析可能なマイクロアレイスキャナーが販売されてき ており、そのサイズでもかまわない。
[0029] 反応基板 10の製造方法は、特に限定されないが、通常、単一の基板上に、直接、 ゥエルを設ける方法により製造される。
[0030] この製造方法では、例えば、ゥエル 12に対応する多数の貫通口を設けた、塩ィ匕ビ
-ル等の素材の薄膜をマスクとして、加工前の基板の表面上に貼り、その上から、サ ンドブラスト法 (微細粒子を高速で基板表面に衝突させることによって、基板表面にゥ エルを形成する方法)、微細な凹凸を設けた型を用いる型押し法や型抜き法、微細 なドリルによる加工等の、微細ゥエル形成法により、表面上に、多数のゥエル 12が設 けられた、反応基板 10を製造することができる。
[0031] また、型押し法や型抜き法は、反応基板 10の素材がプラスチックである場合に好適 である。
[0032] このようにして、反応基板 10を製造することができる。
[0033] 検出対象物
「反応基板」上において行われる、液相反応（主に、生化学的液相反応）を行うこと により検出され得る検出対象物は、特に限定されない、具体的には、例えば、遺伝子 解析を行う対象となる核酸 (DNAおよび Zまたは RNA、 2本鎖であっても 1本鎖であ つても良い。また、ヘアピン構造等の特定の立体構造を有していてもよい）、ポリぺプ チド、抗体、細菌、ウィルス、各種の臨床検体 (血液検体、尿検体、リンパ液検体、滑 液検体、唾液検体等)等、特に限定されない。
[0034] 検出対象物は、通常、第 1の分注を行う、分注溶液 (以下、第 1の分注溶液ともいう） 中に含有させることが好適である
また、第 1の分注溶液には、水、 2-プロパノール (後述する DPPCの溶媒として好適 である）、イソプロピルアルコール等の溶媒の他に、検出対象物の種類に応じた安定 剤、処理剤、固定化剤等を、必要に応じて、当該溶液中に含有させることができる。
[0035] また、第 1の分注溶液における検出対象物の含有量は、検出対象物の種類、目的 等に応じて選択されるべきもので、全く限定されるものではない。少なくとも、反応物 質との接触により、検出可能な程度のシグナルを発生可能な程度より多ぐかつ、ノィ ズが認められるほどの量より少ないことが必要である。
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本発明において、「摺動ローラー」の移動方向側近傍に滴下する最終反応液は、 用いる検出対象物の種類と、選択する液相反応に応じて適宜選択することができる。
[0037] 本発明にお 、て行われる液相反応は、特に限定されず、例えば、酵素反応のよう な蛋白質の触媒反応、抗原抗体反応、蛋白質間の相互作用、物質間の特異的なァ フィ-ティー（ヌクレオチド鎖同士のハイブリダィゼーシヨンを含む）等が挙げられる。
[0038] 液相反応の検出は、現在、マイクロアレイ技術で用いている手段を利用することに より行うことができる。具体的には、例えば、選択される検出方法により得られた液相 反応後の基板を、高感度な蛍光スキャナーを用いることにより、各ゥエルにおける蛍 光を検出することができる。また、ラジオアイソトープによる検出、 EIA法による検出、 AlphaScreen™ [PerkinElmer社 (米国）製〕のようなホモジーニアスな検出等も行うこと ができる。
[0039] 本発明にお 、て行われる液相反応の最も好適な態様の一つとして、 、わゆる、イン ベーダ^ _·アツセィ法 [Third Wave Technologies社（米国）〕が挙げられる。
[0040] 第 2図は、このインべーダ一.アツセィ法のあらましを略図化した図面である。 [0041] 第 2図において、铸型ヌクレオチド鎖（野生型遺伝子） 21に対して、まず、第 1のヌク レオチド鎖 22をハイブリダィズさせる。
[0042] 第 1のヌクレオチド鎖 22は、铸型ヌクレオチド鎖 21における、変異検出対象塩基〔 本図では、野生型が T (チミン)〕に相補的な塩基〔本図では、 A (アデニン)〕が 3 '末 端に位置する、铸型ヌクレオチド鎖 21に対して相補的なヌクレオチド鎖である（なお、 この例では、第 1のヌクレオチド鎖 22の 3，末端の塩基は、変異検出対象塩基に対し て相補的ではないが、その塩基が、変異検出対象塩基と第 2のヌクレオチド鎖の会 合反応に干渉することにより、部分的三塩基重複構造が形成され得る)。
[0043] 次いで、この铸型ヌクレオチド鎖 21と第 1のヌクレオチド鎖 22との部分的 2本鎖に対 して、さらに、第 2のヌクレオチド鎖 23をノヽイブリダィズさせる。
[0044] 第 2のヌクレオチド鎖 23は、铸型ヌクレオチド鎖 21に対して相補的な「相補的部分」 231が、 3'側にあり、これと連続して、検出要素が設けられた、铸型ヌクレオチド鎖に 対して非相補的な「検出用部分」 232が、 5'側にある、複合的ヌクレオチド鎖であり、 「相補的部分」 231の最も 5'側の塩基は、変異検出対象塩基 (T)に対して相補的な 塩基 (A)となっている。
[0045] この第 2のハイブリダィズ反応によって、铸型ヌクレオチド鎖 21の変異検出対象塩 基部分 (T)は、第 1のヌクレオチド鎖 22の 3，末端塩基と、第 2のヌクレオチド鎖の「相 補的部分」 231の最も 5 '側の塩基 (A)との、部分的三塩基重複構造が形成されるこ ととなる。
[0046] 次いで、この部分的三塩基重複構造を、その 3'側で特異的に切断する活性を有 するヌクレアーゼ 24を作用させて、このヌクレアーゼにより切断された、第 2のヌクレオ チド鎖 23の検出用部分 232'〔3'末端が、変異検出対象塩基 (T)に対して相補的塩 基 (A)となっている〕を検出することにより、铸型ヌクレオチド鎖 21が、野生型であるこ とを検出することがでさる。
[0047] 本図においては、 5'末端近傍に蛍光色素 251とその 3'側の近傍に蛍光消光物質
(タエンチヤー） 252を標識した、ヘアピン型プローブ (ヌクレオチド鎖） 25を、上記の ハイブリダィズ系と共存させることにより、上記の野生型の検出が可能である。
[0048] ヘアピン型プローブ 25の 3，側の一本鎖部分は、第 2のヌクレオチド鎖 23の検出用 部分 232に対して相補的に設計されており、かつ、かかる一本鎖部分の最も 5 '側の 塩基に隣合うさらに 5'側の一塩基は、変異検出対象塩基 (T)となっている。そして、 検出用部分 232'力 ヘアピン型プローブ 25の一本鎖部分とハイブリダィズすると、 検出用部分 232'の 3'末端の塩基 (A)が、ヘアピン型プローブ 25の二本鎖部分の 先端において、再び、部分的三塩基重複構造を形成する。これに対し、再度、ヌクレ ァーゼ 24が作用して、ヘアピン型プローブ 25における、蛍光色素 251と蛍光消光物 質 252の間が切断され、蛍光色素 251が遊離し、蛍光消光物質 252による蛍光消光 作用から開放されて、本来の蛍光が検出可能な状態となる。この蛍光を検出すること により、铸型ヌクレオチド鎖 21が、変異検出対象塩基において変異が認められない 野生型遺伝子であることを検出することができる。
[0049] これに対して、铸型ヌクレオチド鎖 21の変異検出対象塩基が、野生型の塩基 (T) ではなぐ例えば、 G (グァニン)である SNP塩基であり、これをポジティブに検出する 場合には、第 1のヌクレオチド鎖 22と第 2のヌクレオチド鎖 23における、相補的塩基 を、上記の Aから、 Gに相補的な C (シトシン）として、検出用部分 232の配列とそれに 対する 25の配列を別配列のセットにし、さらに、ヘアピン型プローブ 25における蛍光 色素 251と蛍光消光物質 252を、上記の系とは異なる蛍光を発色する蛍光色素と、 これに対する蛍光消光物質とすることにより、铸型ヌクレオチド鎖 21における SNPsを 、異なる蛍光色素の蛍光によって検出することが可能である。
[0050] また、铸型ヌクレオチド 21が、野生型塩基と変異型塩基を有するものが、混在する 場合 (ヘテロ型）は、上記の 2種類の蛍光の混合型蛍光として、ポジティブに検出する ことも可能である。
[0051] なお、ここには、ヘアピン型プローブを用いた検出システムを例示した力 これ以外 にも、例えば、検出用部分 232に、直接、蛍光標識やアイソトープ標識を行って、直 接、検出用部分を検出することにより、 SNPs等を検出することも可能である。さらに、 ここでは、 SNPsを有する場合も、そうでない場合も、ポジティブに検出する例を示し たが、いずれかの場合においては、蛍光等の標識が検出されない、ネガティブな検 出を行うことも可能である。
[0052] 上述したインベーダー ·アツセィ法は、技術的には、反応の進行に伴い、部分的三 塩基重複構造を特異的に切断するヌクレアーゼが、第 2のヌクレオチド鎖の「検出用 部分」を切り出す段階にぉ 、て (ヘアピン型プローブを用いる場合には、標識された 蛍光物質を蛍光消光物質と切り離す段階においても）、連続的に働くため、蛍光等 の、インベーダー 'アツセィ法において用いる標識が増感される、極めて鋭敏な液相 反応であり、本発明のような微量液相反応を行う場合においては、非常に好適な液 相反応である。また、この方法は、オーダーメード医療の鍵となる SNPsを効率良く検 出可能な方法として、非常に有用であり、このアツセィ法に、本発明を適用することに より、平易かつ効率的 ·網羅的に、 SNPsを検出することが可能となり、産業上におけ る意義は、非常に大きい。
[0053] 本使用方法において、インベーダー法を検出手段として用いる場合には、上記の 鎖型ヌクレオチド鎖 21が、第 1の分注溶液に含有させる検出対象物であり、上述した インベーダー法の他の検出要素を含有する溶液力 最終反応液として選択される。
[0054] 上述したように、第 1の分注溶液を、検出器具の微小ゥエルに分注後、乾燥させて 、検出対象物を、複数のゥエルを有する検出用器具のゥエルの内壁に、検出対象物 を付着させ、この検出対象物に対する反応物質を含有する最終反応液を、前記の検 出対象物を付着させた検出用器具のゥエルの内壁に接触させ、この接触により発生 するシグナルを検出して、検出対象物の評価を行うことができる。し力しながら、この 場合、第 2の分注力 シール、検出作業を急いで、し力も、正確に行わないと、各々 のゥエルから、内容成分が検出器具の表面上に漏れだして、これらが混ざり合って、 検出対象物の評価に悪影響を及ぼすことも考えられる。この作業工程が、本密封装 置を用いた本使用方法 1一 2により、効率化され、好適な条件で反応が行われる歩留 まりが向上する。
[0055] ただし、本発明を適用する場合にお!、ても、下記の温度応答性物質と徐溶解性物 質を用いる方法を行うことが有利である。すなわち、温度応答性物質、および Zまた は、徐溶解性物質を、検出対象物とゥエルの内壁において共存させることにより、最 終反応液の滴下後、検出対象物がゥエル内に止まる時間を、十分に確保することが 可會 になる。
[0056] 驢 溶解件驢 温度応答性物質は、特に限定されないが、塩類等の添加剤なしに、 10— 90°C程 度、好適には、 40— 70°C程度の温度領域で、固体 (ゲル)から液体への相変化をも たらす物質であることが好適である。具体的には、ゼラチン、寒天、 DPPC (
Dipalmitoyl phosphatidylcholine)、ポリ（N-イソプロピルアクリルアミド）、ポリ（ ε -カプ 口ラタトン)等を挙げることができるが、特に、ゼラチンが好適である。
[0057] また、徐溶解性物質としては、多価アルコール全般、例えば、デキストランなどの多 糖や、マルトース、トレハロースなどの水飴成分、さらには、ポリエチレングリコール、 キシリトール等があげられる力 特に、トレハロースが好適である。
[0058] 温度応答性物質と徐溶解性物質 (これらを併せて、保持物質とも!ヽぅ）は、それぞれ 、または、共に、 1種または 2種以上を選択して、通常は、第 1の分注溶液中に含有さ せて用いることができる。
[0059] 保持物質の、第 1の分注溶液における含有量は、乾燥状態、保湿状態若しくは膨 潤状態で、検出対象物を十分保持できる量以上を必要とする。すなわち、乾燥後、 最終反応液の滴下を行った後、保持物質は、保湿または膨潤するが、その際に保持 物質の量が十分でないと、検出対象物が、保持物質の中に完全に保持されず遊離 すること〖こなる。遊離した検出対象物は、ゥエル間が反応液を介して通じている場合 には、直ちに隣接ゥエルに混入し得るため、好ましくない。ゥエル内が最終反応液で 満たされても、検出対象物が十分保持される量の保持物質が存在すれば、隣接する ゥエルへの混合が防がれ、最終反応液の滴下後に薄膜を封着することによって隔離 されたゥエル内では、その後の加温または冷却による温度応答性物質の相変化によ る検出対象物質の遊離、または、徐溶解性物質の、室温での緩徐な徐溶解性物質 の溶解により、他のゥエルに影響を受けない、単独ゥエル特異的な反応が生じる。
[0060] 例えば、温度応答性物質がゼラチンであれば、第 1の分注溶液に対して 0. 05— 2 質量％の範囲で含有させることが好適である。当該溶液に対して 0. 05%未満である と、上述のように検出対象物が温度応答物質としてのゼラチン内に保持されきらず、 反応溶液中に溶出して、反応溶液を介して、他のゥエル内の検出対象物同士が接 触して、検出感度が低下するおそれがあり、 2質量％を超えると、第 1の分注溶液自 体が、過度に粘調となり、分注に支障が生ずる傾向がある。 [0061] 第 1の分注溶液は、通常、液状化 (ゾル化）している状態の、保持物質の水溶液に 検出対象物を添加して溶解させて調製することが好適であるが、この方式に限定さ れるわけではなぐ他の調製方法でもよい。また、第 1の分注溶液は、検出基板のゥ エルへの分注直前に調製することも可能であり、分注の数日一数時間前に、予め調 製することも可能である。この第 1の分注溶液としての保存期間は、検出対象物の安 定性等に応じて選択することが好適である。また、少なくとも分注時には、第 1の分注 溶液は液状であることが必要である。さらに、検出対象物を添加後は、検出対象物が 分解又は変質を起こす温度とすることは好適ではない。
[0062] 枪出方法
検出方法は、液状の第 1の分注溶液を、上述した検出用器具のゥエル毎に、用手 法も可能である力 好適には微量分注機 (インクジェット型の微量分注機等）を用い て注入し、ゥエル中の第 1の分注溶液を、乾燥処理 (保持物質が徐溶解性物質の場 合、若しくは、保持物質を用いない場合に好適である)または冷却処理 (室温放置を 含む:保持物質が温度応答性物質の場合に好適である)等により、検出用器具のゥ エルに付着させた後、この第 1の分注溶液中の検出対象物に対する反応物質を含 有する反応溶液を、前記の第 1の分注溶液の付着処理を行つたゥエルの内壁に接 触させ、温度上昇または下降 [上述したポリ（N-イソプロピルアクリルアミド）は、温度 上昇により固化し、温度下降により液ィ匕する性質がある。よって、これを温度応答物 質として用いる場合には、第 1の分注時には液ィ匕温度まで分注溶液の温度を下げて 、当該分注後に固化温度までゥエルの温度を上昇させつつ、反応溶液を接触させ、 検出時に液ィ匕温度までゥエルの温度を下降させることが好適である]、放置等により 溶解させることで検出対象物を遊離させ、発生するシグナルを検出することにより、検 出対象物の評価を行うことができる。
図面の簡単な説明
[0063] [図 1]本密封装置の対象である反応基板の一態様を表した図面である。
[図 2]インべーダ一 ·アツセィ法のあらましを略図化した図面である。
[図 3]本密封装置の一実施例の全体斜視図である。
[図 4]本密封装置のローラー支持体の斜視図である。 [図 5]本密封装置のローラー支持体の縦断面図である。
[図 6]本密封装置を用いた反応基板に対するシール用フィルムの密封工程を図式ィ匕 した縦断面解説図である。
[図 7]本密封装置を用いた反応基板に対するシール用フィルムの密封工程を図式ィ匕 した全体斜視図である。
[図 8]本密封装置の収納部についての分解斜視図である。
[図 9]水平角度変更可能な収納部の態様について例示した図面である。
[図 10]収納部を本密封装置力も分離する場合の、止めネジによるカセットの締め込 みの態様にっ 、て示した図面である。
[図 11]本密封装置の使用態様について模式ィ匕した縦断面図である。
発明を実施するための最良の形態
[0064] 以下、図面を用いて本発明について説明する。
[0065] 第 3図は、本密封装置の一実施例 30の全体斜視図である。本密封装置 30は、下 記のごとくに構成されている。
[0066] 本密封装置 30の本体を支える台座 31は、台座板 311と、それを支える 4本の脚部 312A— D (312Dは図示せず）が当該台座板 311の四隅に設けられて!/、る。これら の 4本の脚部 312A— Dには、例えば、台座板 311へのねじ込みによる嵌め合い長さ により、高さを調整することができる高さ調整機構が、それぞれに設けられていること が好適である。台座板 311の上には、ハウジング 32と電動モーター 33が載置されて いる。ハウジング 32は、 1枚の T字型底板 321、当該底板 321の T字の両腕力も起立 した状態で固定されている 2枚の側板 322A— B (322Bは図示せず）、及び、当該側 板 322A— Bの上端に載置固定されている天板 323で構成されており、底板 321の 上には、板状体 324が載置固定されている。
[0067] 板状体 324の上には、レール支持体 331が載置固定されており、当該レール支持 体 331の上面の長さ方向に沿ってレール嵌合用溝が設けられている。レール支持体 331の上面には、長板状の案内用レール 332が、当該レール 332の底面の長さ方向 に設けられている凸部 3321が嵌り込むことによって、嵌合固定されている。また、レ ール支持体 331の一側面には、突出部材 333が設けられている。これは、後述する スライドステージ 341が案内用レール 332上を、限度を超えて移動しょうとする場合 に、送り用部材 3411が当該突出部材 333に対して当たることにより防止するストッパ 一機構である。
[0068] 案内用レール 332には、スライドステージ 341が、その底部に固定された、鉤型の 送り用部材 3411を介して、案内用レール 332により案内支持されている。そして、ス ライドステージ 341は、送り用部材 3411部分が案内用レール 332上を摺動すること により、当該レール 332に沿って移動させることが可能である。
[0069] スライドステージ 341の上面には、カセット 35を構成する下カセット 351を嵌合可能 な凹部 3412が設けられている。下カセット 351には、反応基板 36を、その反応側の 表面を実質的に露出させた状態で載置可能な形状の凹構造が設けられている。また 、下カセット 351は、前記凹部 3412から着脱可能であることが好適である。
[0070] ローラー支持体 37は、文字通り、摺動ローラー 39を、本密封装置 30において支持 するための部材である。ローラー支持体 37の詳細については、第 4図 (斜視図）と第 5図（第 4図： I における縦断面図）において記載されている。ローラー支持体 37は 、その基本部分 371と、鉤型の 2力所の突出部（372Α·Β)からなる形状をしている。 軸棒 38は、基本部分 371内を矢視 1方向に貫通しており、その両端が上記側板 322 Α— Βにおいて回転自在に支持されている。ローラー支持体 37は、軸棒 38を中心と して回転可能となっている。この回転可能なローラー支持体 37の動きを制御するた めに、天板 323を貫通して、ネジの動きによって上下動を調整可能な、ローラー圧力 調整用ダイヤル 373 (ローラー支持体 37のうち軸棒 38よりも摺動ローラー 39側に偏 つた位置に設けられている）とローラー圧力調整用ストッパー 375 (ローラー支持体 3 7のうち軸棒 38よりも矢視 2方向側に偏った位置に設けられている）が設けられている
[0071] ローラー圧力調整用ダイヤル 373は、頭部 3731付きの雄ネジである力 ローラー 支持体に対して与える力を弾力的かつ均等にするために、好適には、その先端に弾 性体受け金具 3732が設けることができる。
[0072] ローラー圧力調整用ダイヤル 373をネジ込むための、ローラー支持体 37において 設けられた貫通口 3733の上面口には座金 3734が装着されており、座金 3734及び /又は貫通口 3733の内面には、ローラー圧力調整用ダイヤル 373の雄ネジによる ネジ込みが可能な雌ネジが設けられて 、る。弾性体として好適な円筒コイルパネ 37 4は、前記弾性体受け金具 3732とローラー支持体 37の上面に挟まれることにより、口 一ラー支持体 37に対して下向きの弾性力を与えている。すなわち、ローラー圧力調 整用ダイヤル 373のネジ込みにより生ずる円筒コイルパネ 374を介した押圧力が摺 動用ローラー 39にかかり、その結果、反応基板 36に対して、弾力的、かつ、均等な 圧力をかけることができる。
[0073] 一方、ローラー圧力調整用ストッパー 375は、頭部 3751付きの雄ネジである。ロー ラー圧力調整用ストッパー 375をネジ込むための、ローラー支持体 37において設け られた貫通口 3752の上面口には座金 3753が装着されており、座金 3753及び Z又 は貫通口 3752の内面には、ローラー圧力調整用ストッパー 375の雄ネジによるネジ 込みが可能な雌ネジが設けられている。また、ローラー支持体 37において、ローラー 圧力調整用ストッパー 375をネジ込んだ場合に当接する位置には、ネジ当接部材 37 6が装着されている。ローラー圧力調整用ストッパー 375において、ローラー支持体 3 7のうち、軸棒 38よりも矢視 2側に偏った位置で、ローラー支持体 37の上面力も所望 の高さにネジの先端を位置させることにより、この先端部分よりも上にローラー支持体 37の前方側が動くことを抑止することが可能であり、前記のローラー圧力調整用ダイ ャル 373による押し込み圧力が過度に反応基板 36にかかることを防止することがで きる。
[0074] ローラー支持体 37の 2力所の突出部（372A.B)において、矢視 1側に支持されて いる摺動ローラー 39の両端は、穴付きの丸ナット（391Α·Β : Βは図示せず)で、突出 部 372Α·Βにおいて取り付けられている。摺動ローラー 39のローラー本体 392は、 下カセット 351の凹構造に載置された反応基板 36の反応側の表面 361に接しており 、自らの回転運動により当該表面 361上を摺動可能な状態となっている。摺動ローラ 一 39の回転運動は、上記丸ナット 391Bに、直接又は間接に連結された電動モータ 一 33から供給され、順方向又は逆方向に摺動ローラー 39を回転させることが可能で ある。
[0075] 滴下する最終反応液の粘度等の特性により、凹構造への入りやすさ、気泡の生成 度合い等が変わるため、摺動ローラー 39のローラースピードは可変であることが好適 である。すなわち、気泡を生成し難くするためには、ゆっくりと摺動ローラー 39を摺動 させることが好適であるが、ゆっくり過ぎると封着の効率が悪くなることと、凹構造内に 予め乾固させておいた物質が溶解して、隣接凹部へと移動してコンタミネーシヨンし やすくなる傾向が生ずることになる。よって、回転速度を調整することが可能な機能を 当該モーター 33が備えており、これにより摺動ローラー 39の摺動スピードを調整する ことが可能であることが好適である。
[0076] 丸ナット 391Aには、前記回転運動のストッパーを設けることが好適である。具体的 には、例えば、丸ナット 391Aを貫通する小さな雌ネジ 394 (第 4図）を設け、これに対 応する雄ネジ 393を、前記回転運動のストッパーとすることができる。すなわち、雄ネ ジ 393をネジ込むことにより、雄ネジ 393の先端が突出部 372Aに対して摩擦力を与 え、本密封装置 30の静置時における摺動ローラーの不用意な回転運動を防止する ことが可能である（本密封装置 30の起動時には、当該雄ネジ 393を緩める）。また、口 一ラー支持体 37の 2力所の突出部（372Α·Β)において、摺動ローラー 39の近傍斜 め上後方 (矢視 2方向を基準とする）に、棒状体 377が、矢視 1方向に貫装されてい る。
[0077] また、天板 323には、弾性体である板パネ 41の一端が固定され、他端には把持具 411が設けられている。さらに、天板 323には、線パネ 42の一端が固定され、他端に は把持具 421が設けられて!/、る。板パネ 41の把持具 411によりシール紙 412 (シー ル用フィルム 4121と剥離紙 4122は接着している）の一端は鋏み固定され、シール 用フィルム 4121と剥離紙 4122力剥がされた他端のうち、シール用フィルム 4121は 摺動ローラー 39と反応基板 36との間の挟み込み力により定着され、かつ、剥離紙 4 122は、棒状体 377の下側を通って、把持具 421により挟み固定されることにより、当 該一端と他端間の張力により、剥離紙 4122が反応基板 36側にたるみ込むことなぐ シール用フィルム 4121が反応基板 36に適度の張力を伴って密着して 、る状態が保 たれている。
[0078] 第 3図に関連して、第 6図 (Α)— (Β) (縦断面解説図）と第 7図 (全体斜視図）は、本 密封装置 30を用いた反応基板 36に対するシール用フィルム 4121の密封工程を図 式ィ匕したものである。
[0079] 本密封装置 30においては、電動モーター 33の動力により、摺動ローラー 39を、反 応基板 36の反応側表面 361に沿って回転させることで摺動させることにより、当該口 一ラー 39と当該反応側の表面 361の間に配置したシール用フィルム 4121を、当該 反応側の表面 361に密着させた状態を保ちながら送り出して、当該シール用フィル ム 4121を当該反応側の表面 361に封着することが可能である。この場合、最終反応 液 431を、当該摺動ローラー 39の移動方向側近傍に滴下しながら、封着を行うこと が原則である。この最終反応液の滴下は、スポイト等を用いて手技で行うことも可能 であるが、自動滴下機構を用いることも好適である。例えば、第 3図に示すように、シ リンダー ·ピストン機構を備えた容器 43に最終反応液 431を仕込んで、当該容器のピ ストン 432部分が送り用部材 3411の前方への移動に応じてシリンダー部分 433が押 し込まれるようにすることにより、送り用部材 3411の前方への移動、すなわち、摺動ロ 一ラー 39の反応基板 36に対する摺動に同期させて、シリンダー 433内の最終反応 液 431が、チューブ 434を介して反応基板 36における所望の位置に当該最終反応 液を自動的に滴下することもできる。なお、後述する下カセット 351に設けられる凹構 造 3511 (第 8図）には、その中に載置した反応基板 36の周囲に溝部 3513 (第 7図） が設けられているのが好適であり、当該溝部 3513に余剰の最終反応液を逃がすこと が可能である。また、当該溝部 3513から、インキュベート後の反応基板 36'をヘラ等 の器具で引っかけて、下カセット 351から容易に取り出すことが可能である。
[0080] 本実施例では、電動モーター 33の動力を摺動ローラー 39に伝達することによる当 該ローラー 39の回転により、所望する反応基板 36上における摺動運動を行うことが できるが、必ずしもこれに限定されるものではない。例えば、電動モーター 33の動力 を、スライドステージ 341に伝達し、スライドステージを案内用レール 332において摺 動させることにより、この動きに同期して摺動ローラー 39も反応基板 36上を摺動し、 本密封装置 30と同様の機能を発揮させることができる。また、電動モーターの動力を 、摺動ローラー 39とスライドステージ 341の双方に伝達し、双方を上記と同様に動か すことにより、本密封装置 30と同様の機能を発揮させることも可能である。
[0081] また、好適には着脱可能であるカセット 35を構成する上カセット 352は、前述した下 カセット 351を、本密封装置 30から分離した場合に、当該下カセット 351に対する蓋 部材として装着させることが可能であり、例えば、組み付け用穴 3521A— Dを介した ネジ止めにより、当該上下カセットを装着固定することが好ましい。この場合、当該ネ ジ止め手段として、コイル状パネを装着した雄ネジを用いることが、過度の締め付け を防止する上で好適である。また、後述するように、上カセット 352と下カセット 351の 間にウレタンパッド等の緩衝材を介在させることが好適である力 例えば、前述したィ ンベーダ一.アツセィ法を用いる場合の加熱工程によって、この緩衝材がたわんで反 応基板 36を押しつける力が弱まる場合が考えられる。それを防止するために、前記 コィノレ状パネによる一定の力で、常時、上カセット 352を下カセット 351に向けて押し つけることが可能となり好適である。
[0082] 第 8図は、本密封装置 30の「収納部」、さらには、当該収納部の「本収納具」として の使用態様についての分解斜視図である。第 8図に示したごとぐ本密封装置 30の 収納部は、前記のスライドステージ 341と、好適には上カセット 352と糸且になってカセ ット 35を形成する、下カセット 351により構成されている。下カセット 351は、スライドス テージ 341の上面に設けられた凹部 3412に、着脱可能な状態で嵌合載置すること ができる。この例では、凹部 3412は、下カセット 351を嵌合載置させる場所を変更す ることができるように、異なる平面角度で下カセット 351を嵌合載置することができる横 断面形状となっている。また、凹部 3412の底部には、 4力所のステージ回転用長穴 3 413A— Dが設けられており、各々の長穴には、固定用ネジ 3414A— D力 その先 端部が送り用部材 3411においてネジ込まれて固定されており、回転用長穴 3413A 一 Dの穴幅よりも大きな直径を有する前記の固定用ネジの頭部は、これらの回転用 長穴の上に引っ掛かつている。そして、スライドステージ 341に対して水平方向の力 をかけることにより、その力に応じて、回転用長穴 3413A— D上を、固定用ネジ 341 4A— Dがスライド移動し、所望の位置でこれらの固定用ネジを締め込むことで、案内 用レール 332上におけるスライドステージ 341の選択した水平角度を固定することが 可能である。
[0083] 下カセット 351には、反応基板 36を、その反応側の表面を実質的に露出させた状 態で嵌合載置可能な形状の凹構造 3511が設けられており、さら〖こ、上カセット 352 を装着配置した場合に、当該上カセット 352における固定用ネジ穴 3521A— Dと重 なり合う位置に、組み付け用のネジ穴 3512A— Dが設けられている。
[0084] 第 9図は、水平角度変更可能なステージの態様について例示した図面である。本 密封用装置 30において、反応基板 36の水平角度をコントロールすることにより、封 着の態様を多様ィ匕することができる。この場合、上述したように、回転用長穴 3413A 一 Dを用いずに、スライドステージ 341の凹部 3412の横断面形状を、異なる平面角 度で下カセット 351を嵌合載置することができる形状とした上で、下カセット 351を所 望する水平角度に載置することができる [第 9図 (A) (B) ]。また、上述したステージ 回転用長穴 3413A— Dの機能により、スライドステージ 341自体を、所望の平面角 度まで回転させて固定することにより、反応基板 36の平面角度をコントロールするこ とが可能である [第 9図（C) ]。さらに、上記の第 9図 (A)—（C)を組み合わせることに よって、より自在に、本密封装置 30における反応基板 36の水平角度をコントロール することが可能である。すなわち、例えば、第 9図（1)一（2)の手段を、大ざっぱな水 平角度調整手段として、同（3)の手段を、水平角度の微調整手段とすることも可能で ある。
[0085] 第 8図（2)に示すように、スライドステージ 341の凹部 3412に嵌合載置した、下力 セット 351の凹構造 3511において、反応基板 36の反応側表面 361を上に向けた状 態で嵌合載置し、その上に、本密封装置 30により、シール用フィルム 4121を、最終 反応液を反応側表面に上層しつつ封着する。このシール用フィルム 4121で密封さ れた反応基板 36'をインキュベートする際には、下カセット 351の凹構造 3511から、 当該反応基板 36'を取り外して、これをインキュベータ一等でインキュベートすることも 可能である。しかしながら、作業効率と当該反応基板 36'の引き剥がしの際の取り扱 いによる封着の剥がれ等のリスクを考慮すると、下カセット 351に、上カセット 352を装 着させることにより、上記反応基板 36'が凹構造 3511に収納された状態で、当該凹 構造 3511を封止することが好適である。この封止の際、反応基板 36'と上カセット 35 2の間に、ウレタンパッド等の緩衝材 354を介在させることが、反応基板 36'にかかる 装着圧力を緩和して、保存の確実性を図る上で好適である。また、当該装着状態を 固定ィ匕するために、上カセット 352において設けた固定用ネジ穴 3521A— Dと下力 セットの組み付け用ネジ穴 3511A— Dを、止めネジ 353A— Dによる締め込みを行う ことが好適である。この際も、止めネジ 353A— Dを、パネ機構を用いたネジとするこ とにより、このネジの締め込みにより、反応基板 36'にかかる圧力が過度に大きくなる ことを防止することができる。
[0086] 止めネジ 353は、例えば、第 10図に示すような態様で、カセット 35を締め込むこと 力 Sできる。止めネジ 353は、頭咅 3531と軸咅 3532力ら構成されており、軸咅 3532 の先端近傍にネジ部 3532Aが設けられており、組み付け用ネジ穴 3511に設けられ た雌ネジと螺合可能である。また、円筒部 3532Bは、固定用ネジ穴 3521と組み付け 用ネジ穴 3511の内径よりも小径である。頭部 3531の下側には、パネ受け 3533が 配置されている。下カセット 351、反応基板 36、シール用フィルム 4121、緩衝材 353 及び上カセット 352を、上述した要領で積層 '装着し、止めネジ 353の軸部 3532に、 そのコイル径が固定用ネジ穴よりも大きぐパネ受け 3533の径よりも小さい圧縮コィ ルバネ 354を通して、上カセット 352の固定用ネジ穴 3521A— Dに向けてネジ込み を行うことにより、ネジ部 3532Aが組み付け用ネジ穴においてネジ止めされ、かつ、 圧縮コイルパネ 354の緩衝力により、反応基板 36'にかかる圧力が過度に大きくなる ことが防止されている。
[0087] 第 11図は、本密封装置 30の使用態様について模式化した縦断面図である。第 11 図 (A)において、下カセット 351に設けられた凹構造 3511に反応基板 36を嵌合載 置されている。溝構造 3511の深さは、反応基板 36の厚さよりも若干（0. 1-0. 5mm 程度）浅ぐ反応基板 36の反応側の表面 361は、下カセット 351において当該若干 分露出している。また、上述した通り、下カセット 351には、溝部 3513が設けてあり、 さらに、凹構造 3511の側面の底面近傍は、外側から内側に向けての勾配（35111) が設けられている。第 11図（B)は、前記第 10図の要領で、シール用フィルム 4121を 、最終反応液を反応側表面 361に上層しつつ密封し、その上カゝら緩衝材 353を積層 し、さらにその上力も上カセット 352を装着させて、前述した止めネジ 353でのねじ込 み固定を行った状態を示している。この状態で、カセット 35を本密封装置力も分離し 、これをインキュベータ一等による反応処理を行う。第 11図（C)に示すように、インキ ュペート終了後は、上カセット 352と緩衝材 353を取り外し、反応基板 36'において 認められるシグナルを捕捉することにより、所望する生化学的な液相反応の検出を行 うことができる。なお、インキュベート終了後に、カッター 355で余分なシール用フィル ム 4121を切除することができる。この場合、上記の勾配 35111〖こカッター 355の刃 をスムーズに入れて、この切除作業を容易に行うことができる。
産業上の利用可能性
本発明により、生化学的な液相反応を集約的に行うことが可能な検出基板におけ る下準備の一環として、その反応側表面をフィルム等の薄膜で密封する場合の自動 化手段が提供される。

Claims

請求の範囲
[1] 下記（1)一 (3)を備えることを特徴とする、液相反応魏約的に行うことが可能な基 板に対する密封装置。
(1)液相反応 ^^約的に行うことが可能な基板を、その反応側の表面を実質的に 露出させた状態で載置可能な形状の凹構造が設けられた、基板の収納部
(2)当該収納部に載置した前記基板の反応側の表面に沿って摺動可能なローラ
(3)当該ローラーを、前記基板の反応側の表面に沿って摺動させることにより、当 該ローラーと当該反応側の表面の間に配置した薄膜を、当該反応側の表面に密着さ せた状態を保ちながら送り出して、当該薄膜を当該反応側の表面に封着することが 可能な送り出し機構
[2] 前記ローラーと前記基板の反応側の表面の間に薄膜が配置される前に、当該薄膜 力も剥離紙を引き剥がすことができる、引き剥がし機構が設けられていることを特徴と する、請求項 1記載の密封装置。
[3] 前記引き剥がし機構が、張力によって剥離紙を引き剥がすことができる機構であるこ とを特徴とする、請求項 2記載の密封装置。
[4] 前記ローラーの摺動スピードを調整するための機構が設けられていることを特徴とす る、請求項 1一 3のいずれかに記載の密封装置。
[5] 前記基板の反応側の表面を前記ローラーが摺動する方向を調整することができる機 構が設けられて 、ることを特徴とする、請求項 1一 4の 、ずれかに記載の密封装置。
[6] 前記ローラーに対する前記収納部の相対位置の移動に同期して、滴下口が移動し、 液体を、当該滴下口を介してローラーの移動方向側近傍に滴下することが可能な滴 下機構が設けられていることを特徴とする、請求項 1一 5のいずれかに記載の密封装 置。
[7] 前記収納部の凹構造の側壁部分が、当該凹構造において前記基板を載置した際に 、当該基板の周隨こ 1力所以上の隙間部分が形成される形状となっていることを特徴 とする、請求項 1一 6のいずれかに記載の密封装置。
[8] 前記収納部が、密封装置本体から着脱可能であり、かつ、当該収納部にお!、て、組 となる蓋部材を、当該密封装置本体から分離された当該収納部に装着させることによ り、前記基板が凹構造に収納された状態で、上記凹構造を封止することができる機構 が設けられていることを特徵とする、請求項 1〜7のいずれかに記載の密封装置。 前記凹構造の封止を、前記基板と前記蓋部材との間に緩衝材を介在させて行うことが できる、請求項 8記載の密封装置。
下記（a)〜（c)の特徴を有する、液相反応を集約的に行うことが可能な基板の収 納具。
(a)前記基板を、その反応側の表面を実質的に露出させた状態で載置可能な形状 の凹構造が設けられている
(b)前記密封装置本体から着脱可能であり、当該装置本体に装着させた状態では、 前記収納部としての機能を有する
(c)前記密封装置本体から分離した状態において、組となる蓋部材を装着させること により、前記基板が収納された状態で、上記凹構造を封止することができる機構が設け られている
前記凹構造の側壁部分が、当該凹構造において前記基板を載置した際に、当該基 板の周囲に 1力所以上の隙間部分が形成される形状となっていることを特徴とする、請 求項 10記載の収納具。
前記凹構造の封止を、前記基板と前記蓋部材との間に緩衝材を介在させて行うことが できる、請求項 1 1記載の収納具。
最終液相反応の準備を行った前記基板を、前記基板の収納部の凹構造に、その反 応側の表面を実質的に露出させた状態で上に向けて载置し、
前記ローラーを、前記基板の反応側の表面に沿って摺動させることにより、最終反応 液を当該ローラーの移動方向側近傍に滴下しながら、当該ローラーと当該反応側の表 面の間に配置した薄膜を、当該反応側の表面に密着させた状態を保って送り出して、 当該薄膜を当該反応側の表面に封着することを特徴とする、請求項 1記載の密封装 置の使用方法。
最終反応液の滴下が、前記滴下機構により行われることを特徴とする、請求項 6記載 の密封装置の使用方法。
最終液相反応の準備を行った前記基板を、前記基板の収納部の凹構造に、その反 応側の表面を実質的に露出させた状態で上に向けて載置し、
前記ローラーを、前記基板の反応側の表面に沿って摺動させることにより、最終反 応液を当該ローラーの移動方向側近傍に滴下しながら、当該ローラーと当該反応側 の表面の間に配置した薄膜を、当該反応側の表面に密着させた状態を保って送り出 して、当該薄膜を当該反応側の表面に封着した後、前記基板の収納部を前記密封 装置本体から分離し、
当該収納部において、組となる蓋部材を装着させることにより、前記基板を、凹構造 に収納された状態で封止し、当該封止済みの収納部を反応処理することにより、前 記基板における液相反応を行うことを特徴とする、請求項 8記載の密封装置の使用 方法。
[16] 液相反応力インベーダー 'アツセィ法による反応である、請求項 13— 15のいずれか に記載の密封装置の使用方法。
[17] 液相反応の検出が、前記基板反応側の表面のゥエルの内壁に、検出対象物を付着 させ、この検出対象物に対する反応物質を含有する最終反応液を、前記ゥエルの内 壁に接触させ、この接触により発生するシグナルを検出して、検出対象物の評価を 行うことにより行われる、請求項 13— 16のいずれかに記載の密封装置の使用方法。
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2007331817A (ja) * 2006-06-16 2007-12-27 Showa Seiki Kk マイクロプレート用シーラー
JP2009115620A (ja) * 2007-11-06 2009-05-28 Furukawa Co Ltd 分注シール装置およびウェル開口部のシール方法
CN111172008A (zh) * 2018-11-09 2020-05-19 开启基因股份有限公司 自动化核酸萃取的方法及装置

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH1111405A (ja) * 1997-05-29 1999-01-19 Beckman Coulter Inc 容器を密封する装置及び方法
JP2000335509A (ja) * 1999-05-31 2000-12-05 Micronics Kk マイクロプレートの密封方法およびマイクロプレートの自動密封装置
WO2002025289A1 (en) * 2000-09-18 2002-03-28 I-Card Corporation Micro well array and method of sealing liquid using the micro well array
WO2003031972A1 (en) * 2001-10-05 2003-04-17 Bml, Inc. Sensing board

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH1111405A (ja) * 1997-05-29 1999-01-19 Beckman Coulter Inc 容器を密封する装置及び方法
JP2000335509A (ja) * 1999-05-31 2000-12-05 Micronics Kk マイクロプレートの密封方法およびマイクロプレートの自動密封装置
WO2002025289A1 (en) * 2000-09-18 2002-03-28 I-Card Corporation Micro well array and method of sealing liquid using the micro well array
WO2003031972A1 (en) * 2001-10-05 2003-04-17 Bml, Inc. Sensing board

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2007331817A (ja) * 2006-06-16 2007-12-27 Showa Seiki Kk マイクロプレート用シーラー
JP2009115620A (ja) * 2007-11-06 2009-05-28 Furukawa Co Ltd 分注シール装置およびウェル開口部のシール方法
CN111172008A (zh) * 2018-11-09 2020-05-19 开启基因股份有限公司 自动化核酸萃取的方法及装置
CN111172008B (zh) * 2018-11-09 2021-09-28 开启基因股份有限公司 自动化核酸萃取的方法及装置

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