WO2005011407A1

WO2005011407A1 - 抗腫瘍性組成物

Info

Publication number: WO2005011407A1
Application number: PCT/JP2004/011290
Authority: WO
Inventors: Takashi Kawai; Mayu Hashimoto; Kazuko Awazu; Shigetoshi Mizutani; Takeshi Sakai; Ikunoshin Kato
Original assignee: Takara Bio Inc
Current assignee: Takara Bio Inc
Priority date: 2003-07-31
Filing date: 2004-07-30
Publication date: 2005-02-10
Anticipated expiration: 2006-01-31
Also published as: JP2007166903A

Abstract

ブナシメジ子実体の熱水抽出物中の、可溶性であって排除分子量10万の限外ろ過膜を通過しない画分からなる抗腫瘍性組成物;ナシメジ子実体の熱水抽出物中の、可溶性であって排除分子量10万の限外ろ過膜を通過しない画分からなる組成物を、さらに陰イオン交換樹脂に供した後、溶出させて得られ得る抗腫瘍性組成物;前記抗腫瘍性組成物を含有する食品又は飲料;(1)ブナシメジ子実体を1～5時間熱水処理して得られる熱水抽出物より、不溶物を除去する工程、及び(2)工程(1)で得られた可溶性画分を排除分子量10万の限外ろ過に供する工程を包含することを特徴とする抗腫瘍性組成物の製造方法;ならびに(1)ブナシメジ子実体を1～5時間熱水処理して得られる熱水抽出物より、不溶物を除去する工程、(2)工程(1)で得られた可溶性画分を排除分子量10万の限外ろ過に供する工程、及び(3)工程(2)で得られた組成物を陰イオン交換樹脂に供した後、溶出させる工程を包含することを特徴とする抗腫瘍性組成物の製造方法。

Description

抗腫瘍性組成物技術分野

本発明はブナシメジ子実体を熱水処理し、不溶物を除去し、さらに排除分子量

1 0万の限外ろ過を行うことにより得られ得る組成物、又は当該組成物を陰ィォン交換樹脂に供した後溶出させて得明られ得る組成物からなる抗腫瘍性組成物、及び該抗腫瘍性組成物を含む食品又は飲料に関するものである。

書

背景技術

シィタケ、マイタケ、エノキタケ等の種々の食用担子菌が抗腫瘍性を有することは広く知られており、これらの子実体又は菌糸体よりこれまでに様々な抗腫瘍性組成物が調製されてきた。また、食用担子菌の一つであるブナシメジが抗腫瘍性を有することも明らかにされてきており、例えば、タンパク質含量 3〜2 0重量％、糖含量 2 0〜 5 0重量％を有する子実体熱水抽出物、及びその精製多糖体が（例えば、特開平 5— 3 0 6 2 3 3号公報）、さらには水又は親水性溶媒に懸濁後、加熱処理により得られる分子量 6， 0 0 0〜6 0， 0 0 0の生理活性物質 E E M— Sが抗腫瘍性を有することが明らかにされている（例えば、国際公開第 0 1 / 5 1 0 7 0号パンフレツト）。発明の開示

各種食用担子菌の子実体が抗腫瘍性を有することは明らかとなつているが、効果を得るためには一定量を日常的に食すことが必要である。しかしながら、食用担子菌といえども味に癖があり、料理に工夫をしても日常的に一定量食すことは難しい。一方、ある種の担子菌から得られる抗腫瘍性、免疫賦活活性等を有する有効成分を配合した健康食品が広く市場に流通しているが、原料の担子菌が希少のため、生産される健康食品も非常に高価なものとならざるを得ない。

本発明の課題は安価な食用担子菌が有する抗腫瘍性を損なわずに、しかも効率の良い方法で抽出 ·濃縮して得られた、経口摂取によりその効果を発揮し得る新規な抗腫瘍性組成物、及び該組成物を含有する食品又は飲料を提供するものである。

本発明者らは上記課題を解決するため、鋭意研究した結果、ブナシメジ子実体の熱水抽出物に対し所定の処理を施すことにより、ブナシメジの子実体から、従来知られている抗腫瘍性成分とは異なる、経口摂取によりその効果を発揮し得る新規な抗腫瘍性組成物が得られることを見出し、本発明を完成した。

すなわち本発明を概説すれば、本発明の第 1の発明は、ブナシメジ子実体の熱水抽出物中の、可溶性であって排除分子量 1 0万の限外ろ過膜を通過しない画分からなる抗腫瘍性組成物に関する。本発明の第 1の発明において、当該組成物としては、糖含量が 4 5〜6 0重量％、脂質含量が 2 0〜4 5重量％、タンパク質含量が 1〜 1 5重量％である抗腫瘍性組成物が例示される。

本発明の第 2の発明は、ブナシメジ子実体の熱水抽出物中の、可溶性であって排除分子量 1 0万の限外ろ過膜を通過しない画分からなる組成物を、さらに陰ィオン交換樹脂に供した後、溶出させて得られ得る抗腫瘍性組成物に関する。本発明の第 2の発明において、当該組成物としては、糖含量が 5 0〜6 0重量％、脂質含量が 2 0〜4 0重量％、タンパク質含量が 5〜 2 0重量％である抗腫瘍性組成物が例示される。

本発明の第 3の発明は、本発明の第 1又は第 2の発明の組成物を含有する食品又は飲料に関する。

本発明の第 4の発明は、（1 ) ブナシメジ子実体を 1〜 5時間熱水処理して得られる熱水抽出物より、不溶物を除去する工程、及び（2 ) 工程（1 ) で得られた可溶性画分を排除分子量 10万の限外ろ過に供する工程を包含することを特徴とする抗腫瘍性組成物の製造方法に関する。本発明の第 4の発明において、抗腫瘍性組成物としては糖含量が 45〜60重量％、脂質含量が 20〜45重量％、タンパク質含量が 1〜15重量％でぁる組成物が例示される。

本発明の第 5の発明は、（1) ブナシメジ子実体を 1〜 5時間熱水処理して得られる熱水抽出物より、不溶物を除去する工程、（2) 工程（1) で得られた可溶性画分を排除分子量 10万の限外ろ過に供する工程、及び（3) 工程（2) で得られた組成物を陰イオン交換樹脂に供した後、溶出させる工程を包含することを特徴とする抗腫瘍性組成物の製造方法に関する。本発明の第 5の発明において、抗腫瘍性組成物としては、糖含量が 50〜60重量％、脂質含量が 20〜40 重量％、タンパク質含量が 5〜 20重量％の組成物が例示される。

本発明において、ブナシメジとしては、いずれも独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センター（〒305- 8566 日本国茨城県つくば市東 1丁目 1 番地 1中央第 6) に寄託されている、 Lyo phy l l um u 1 ma r i urn

M- 8171 (FERM BP— 1415) (寄託日： 1986年 8月 23日）、又は Lyo phy l l um u lma r i um K- 0259 (FERM P - 1 2981) (寄託日： 1992年 6月 2日）が例示される。また、本発明の第 1、第 2 の発明において、処理温度が 80〜100°C、処理時間が 1〜 5時間の熱水処理が例示される。

本発明により、以上の通りの、安価な食用担子菌が有する抗腫瘍性を有しており、経口摂取によりその効果を発揮し得る抗腫瘍性組成物、及び該組成物を含有する食品又は飲料を得ることができる。発明を実施するための最良の形態

本発明の抗腫瘍性組成物はブナシメジ子実体に由来するものであるが、かかる組成物は、これまでにブナシメジより得られた抗腫瘍性の組成物と比較して、組成物中の構成成分が全く異なるものであり、特に脂質を通常 2 0重量％以上含有するという点で新規な組成物である。従来、ブナシメジの抗腫瘍性は、熱水抽出物中の分子量 6 0 0 0〜 6 0 0 0 0の画分により発揮されるものと思われていたところ、本発明者らは、意外にもブナシメジ子実体の熱水抽出物中の可溶性であつて排除分子量 1 0万の限外ろ過膜を通過しない画分こそ抗腫瘍性の発揮にとつて重要であることを初めて明らかにした。かかる知見は従来の知見からは全く予想外のことである。従って、本発明の組成物によれば、従来のブナシメジ由来の抗腫瘍性の組成物に比べ、より効果的な抗腫瘍効果の発現が期待できる。また、その原料であるブナシメジは安価であり、その処理工程も簡易であることから、本発明の組成物は従来のものと比べてより安価に製造することができ、従って、より汎用性に富む健康素材であるといえる。

本発明の第 1の発明である抗腫瘍性組成物は、ブナシメジ子実体の熱水抽出物中の可溶性であって排除分子量 1 0万の限外ろ過膜を通過しない画分からなる組成物であって、具体的には、ブナシメジ子実体を熱水処理して得られる熱水抽出物より、不溶物及び分子量 1 0万以下画分を除去して得られ得る組成物である。かかる組成物の製造方法については後述するが、該組成物による良好な抗腫瘍性の発現を促す観点から、該組成物の糖含量としては、好ましくは 4 5 ~ 6 0重量 %、脂質含量としては、好ましくは 2 0〜4 5重量％、タンパク質含量としては、好ましくは 1〜 1 5重量％である。また、該組成物のゥロン酸含量としては、特に限定はないが、好ましくは 0 . 0 1〜1 0重量％、より好ましくは 0 . 1〜 5重量％である。なお、本明細書における糖含量、脂質含量、タンパク質含量、及びゥ口ン酸含量は後述の実施例 8に記載の方法により測定することができる。また、本発明の第 2の発明である抗腫瘍性組成物は、本発明の第 1の発明の組成物を、さらに陰イオン交換樹脂に供した後、溶出させて得られ得る組成物である。かかる組成物は、本発明の第 1の発明である組成物中の抗腫瘍性成分が濃縮されたものである。前記と同様の観点から、該組成物の糖含量としては、好ましくは 50~60重量％、脂質含量としては、好ましくは 20〜40重量％、タンパク質含量としては、好ましくは 5〜20重量％である。また、ゥロン酸含量としては、特に限定はないが、好ましくは 0. 01〜10重量％、より好ましくは 0. ：!〜 5重量％である。

本発明の第 1及び第 2の発明である組成物（以下、本発明の組成物という場合がある）が有する抗腫瘍性とは、具体的には、少なくとも、該組成物が個体の免疫を賦活すること、または直接腫瘍に作用すること等により、結果的に腫瘍の増殖を抑制することをいう。かかる抗腫瘍性は、後述の参考例 2に記載の方法に従つて評価することができる。本発明の組成物による抗腫瘍性は、個体が該組成物を経口摂取することにより個体内で発揮され得る。個体とは生体であれば特に限定されるものではないが、主としてヒトを含む哺乳動物をいう。

本発明において原料として使用されるブナシメジは自然界においては秋期に種々の広葉樹の枯れ木に叢生あるいは離生しており、他のきのこと比較して形や歯切れのよい肉質のため、極めて美味なきのことして採食されてきた。また、近年ではォガクズに米糠やその他の栄養源を配合した培養基を用いて、ビン又は箱で栽培を行う菌床人工栽培法が確立され、季節に関係なく一年を通じて安定してきのこを収穫できるようになつている。

本発明に使用されるブナシメジは天然のものでも人工栽培品でもよいが、一年を通じて簡易かつ安価に入手可能であることから人工栽培品が好ましく、より好適には L y o p h y 1 1 um u 1 ma r i urn M- 8171 (FERM B P— 141 5) 、又は L y o p h y 1 1 um u 1 ma r i um K- 0259 (FERM P— 12981) が例示される。これらの菌株は、商品名「やまびこほんしめじ」もしくは「スーパーやまびこしめじ」として大量に市場に流通している。

子実体は生のもの（生鮮子実体）でも加熱乾燥、天日乾燥、凍結乾燥等で乾燥された子実体乾燥物でもよい。また子実体は株のままでも粉砕した後に熱水処理を行ってもよい。熱水処理とは、子実体をそのまま、もしくは上記記載のように処理したものに水を加え、一定時間加熱を行うことをいう。熱水とは、いわゆる加熱された水をいい、その温度は特に限定されるものではないが、水温は好適には後述の処理温度と同様の温度範囲である。熱水処理に用いる水としては、蒸留水、精製水、イオン交換水、水道水等を使用することができる。子実体として生鮮子実体を使用する場合は生鮮子実体 1重量部に対して好適には 1〜 1 0重量部、より好適には 1〜 5重量部の水を使用でき、また子実体乾燥物を使用する場合は乾燥物 1重量部に対して好適には 5〜 5 0重量部、より好適には 1 0〜2 5重量部の水を使用することができる。処理の条件には特に限定はないが、処理温度は好ましくは 8 0〜 1 0 0 °C、より好ましくは 9 0 ~ 1 0 0 °Cで、処理時間は好ましくは 1〜 5時間、得られる組成物の抗腫瘍性の発現を向上させる観点から、より好ましくは 2〜4時間の範囲で処理を行うのがよい。抽出処理は、静置して行っても、攪拌下に行ってもよい。以上の熱水処理によりブナシメジ子実体由来の熱水抽出物を得る。

上記で得られた熱水抽出物からの不溶物の除去は通常の方法で行えばよく、例えばろ過又は遠心分離により不溶物を除去することができる。ここで、不溶物とは、ろ過の場合、市販のろ紙（例えば、アドバンテック社製 N o . 2フィルター ) によりろ別される抽出物中の不溶性の成分を、遠心分離の場合、少なくとも 5 0 0 0 X gの遠心力により沈降し得る抽出物中の不溶性の成分をいう。そのようにして得られた可溶物、すなわち、熱水抽出物中の可溶性画分を次いで排除分子量 1 0万の限外ろ過に供することにより本発明の第 1の発明である抗腫瘍性組成物を得ることができる。すなわち、本発明の第 1の発明の組成物は、抗腫瘍性を有する分子量 1 0万を超える成分を主成分とする新規な組成物である。なお、本発明の組成物における分子量 1 0万とは限外ろ過に使用する限外ろ過膜の排除分子量により決まる分子量をいうが、前記可溶性画分を排除分子量 1 0万の限外ろ過に供した場合と同様な分子量範囲の画分を分取可能な、分子量 1 0万以下の画分の排除手段であれば、排除分子量 1 0万の限外ろ過の代わりに当該手段を任意に使用することができる。また、本発明の組成物において分子量 1 0万は前記の通り定義されるため、当該分子量の値は、本発明の組成物の構成成分の実際の分子量を示すものではない。例えば分子量が 1 0 0 0以下の物質であっても分子量 1 0万を超える高分子成分に吸着した状態で存在している場合、上記の限外ろ過により分子量 1 0万を超える画分に入ってくることがある。そのような分子量 1 0万以下の物質は不純物であるが、本発明の組成物は、そのような不純物を含む場合を排除するものではない。

一方、本発明の第 2の発明である抗腫瘍性組成物は、本発明の第 1の発明である上記組成物を、さらに陰イオン交換樹脂に供した後、溶出させて得られる。かかる処理は、第 1の発明である組成物を精製することを意図したものである。本発明の第 2の発明である組成物では本発明の第 1の発明である組成物に比べて抗腫瘍性成分が濃縮されており、より高い抗腫癟性の発現が期待できる。

陰イオン交換樹脂としては D E A E—セルロース、 T E A E—セルロース、 E C T E O L A—セルロース、 P A B—セルロース等を用いることができ、好ましくは D E A E—セル口ファイン（チッツ株式会社製）を用いることができる。上記第 1の発明である抗腫瘍性組成物を適切な開始緩衝液、例えば水、リン酸緩衝液等で平衡化した陰イオン交換樹脂を充填したカラムにかけ、前記緩衝液で非吸着画分を洗い出した後、緩衝液の塩濃度を上げて、好ましくは 4 0 O mM以上の N a C 1濃度で溶出させることにより、本発明の第 2の発明である抗腫瘍性組成物を得ることができる。

上記操作により得られた本発明の組成物はいずれも液性の組成物として得られるが、その後に、適宜、乾燥を行って乾燥物としてもよい。また、さらに当該乾燥物を粉末、錠剤等の任意の形態に加工してもよい。例えば、錠剤形態を有する本発明の組成物は、そのまま食品として使用することも可能である。さらに、本発明の組成物はそのまま食品素材として用いてもよく、他の食品素材、例えば増粘剤、甘味料、有機酸、栄養剤、香料、着色料等を組み合わせて食品素材、飲料素材として用いてもよい。

以上により、本発明の組成物が得られるが、本発明の組成物としては、良好な抗腫瘍性を発揮し得る観点から、処理温度が 8 0〜1 0 0で、処理時間が 1〜5 時間で熱水処理して得られたものである組成物が好適である。

一方、同様の観点より、本発明の第 1の発明である組成物の製造方法としては、 ( 1 ) ブナシメジ子実体を 1〜5時間熱水処理して得られる熱水抽出物より、不溶物を除去する工程、及び（2 ) 工程（1 ) で得られた可溶性画分を排除分子量 1 0万の限外ろ過に供する工程を包含する方法が、本発明の第 2の発明である組成物の製造方法としては、（1 ) ブナシメジ子実体を 1〜 5時間熱水処理して得られる熱水抽出物より、不溶物を除去する工程、（2 ) 工程（1 ) で得られた可溶性画分を排除分子量 1 0万の限外ろ過に供する工程、及び（3 ) 工程（2 ) で得られた組成物を陰イオン交換樹脂に供した後、溶出させる工程を包含する方法が好適である。

本発明の食品又は飲料は、本発明の組成物を含有してなる、担子菌子実体の抗腫瘍作用を有する食品又は飲料であり、本発明の食品又は飲料を摂取、喫食することにより抗腫瘍性が発揮され生体の恒常性が維持されることにおいて特に有用である。

本発明の食品又は飲料は、特に限定するものではないが、例えば、穀物加工品 (例、小麦粉加工品、デンプン類加工品、プレミックス加工品、麵類、マカロニ類、パン類、あん類、そば類、麩、ビーフン、はるさめ、包装餅等）、油脂加工品（例、可塑性油脂、てんぷら油、サラダ油、マヨネーズ類、ドレッシング等）、大豆加工品（例、豆腐類、味噌、納豆等）、食肉加工品（例、ハム、ベーコン、プレスハム、ソーセージ等）、水産製品（例、冷凍すりみ、かまぼこ、ちくわ、はんぺん、さつま揚げ、つみれ、すじ、魚肉ハム、ソーセージ、かつお節、魚卵加工品、水産缶詰、つくだ煮等）、乳製品（例、原料乳、クリーム、ョーダルト、バタ一、チーズ、練乳、粉乳、アイスクリーム等）、野菜 ·果実加工品（例、ペースト類、ジャム類、漬物類、果実飲料、野菜飲料、ミックス飲料等）、菓子類（例、チョコレート、ビスケット類、菓子パン類、ケーキ、餅菓子、米菓類等）、アルコール類（例、日本酒、中国酒、ワイン、ウイスキー、焼酎、ゥォッ力、ブランデー、ジン、ラム酒、ビール、清涼アルコール飲料、果実酒、リキュ —ル等）、嗜好飲料（例、緑茶、紅茶、ウーロン茶、コーヒー、清涼飲料、乳酸飲料等）、調味料（例、しょうゆ、ソース、酢、みりん等）、缶詰 ·瓶詰 ·袋詰食品（例、牛飯、釜飯、赤飯、カレー、その他の各種調理済食品等）、半乾燥または濃縮食品（例、レバ一ペースト、その他のスプレツド、そば · うどんの汁、濃縮スープ類等）、乾燥食品（例、即席麵類、即席カレー、インスタントコ一ヒ一、粉末ジュース、粉末スープ、即席味噌汁、調理済食品、調理済飲料、調理済スープ等）、冷凍食品（例、すき焼き、茶碗蒸し、うなぎかば焼き、ハンバーグステーキ、シユウマイ、餃子、各種スティック、フルーツカクテル等）、固形食品、液体食品（例、スープ等）、香辛料類等の農産 ·林産加工品、畜産加工品、水産加工品等が挙げられる。

本発明の食品又は飲料は、その原料に本発明の組成物を用いて、公知の食品又は飲料の製造方法に従って製造することができる。該食品又は飲料中の本発明の組成物の含有量としては特に限定はないが、乾燥重量換算で、好ましくは 1〜1 0 0重量％、より好ましくは 1 0〜9 0重量％である。

本発明の組成物を、マウスに対し体重 1 k g当り 1 g Z日で経口投与しても毒性は認められない。実施例

以下、本発明を実施例をもって詳細に説明するが本発明はこれらの実施例に何ら限定されるものではない。参考例 1 熱水可溶画分と不溶画分の調製

器内温を 60°Cに設定した熱風乾燥器を用いて、ブナシメジ Lyo p hy l 1 urn u 1 ma r i urn M— 8171 (FERM B P - 1415) の生鮮子実体を乾燥後、粉碎することにより子実体粉末を得た。該子実体粉末 500 gに 10 Lの純水を加えて 95°C、 3時間熱水処理を行った。熱水抽出物を室温まで冷却させた後、遠心分離（6500 G、 30分、室温）を行い、熱水可溶画分と熱水不溶画分を得た。得られた熱水可溶画分はエバポレー夕一にて濃縮後、熱水不溶画分はそのまま凍結乾燥を行うことにより、熱水可溶画分凍結乾燥物 210 g、熱水不溶画分凍結乾燥物 247 gを得た。これらの凍結乾燥物は下記実施例に用いる前に粉砕機を用いて粉末状にした。参考例 2 熱水可溶画分と不溶画分の腫瘍増殖抑制活性

I CRマウス（日本エスエルシー社）は、 5週齢の雌を購入し 6週齢で使用した。 S a r c oma— 180 (以下 S— 180 ) 腫瘍細胞は、 I CRマウスの腹腔に移植して腹水をつくり、 7日毎に別のマウスに移植して継代した。継代して 7日目の腹水を採取し、リン酸緩衝液を用いて、懸濁と遠心分離による洗浄を繰り返した後、同緩衝液に懸濁して細胞数を計測後、 1 X 10⁸個/ mLとなるように調整した。この 0. lmLを I CRマウスの右側腹部皮下に移植し、 7曰後に形成された固形腫瘍の大きさを測定した。腫瘍の大きさの平均が各群で均等になるように、また 1群 10匹となるようにマウスを 4群に群分けした。そのうちの 2群に対してそれぞれ、参考例 1で調製した 2種の凍結乾燥粉末を、別の 1群には参考例 1で調製した子実体粉末をサンプルとして通常の粉末飼料 C E— 2に混ぜてマウスに与えた。投与量は子実体粉末に換算して、粉末試料 CE— 2に対して重量比で 10 %混ぜて与えた場合と同等になるようにした。コント口一ル群には CE— 2のみをサンプルとして与えた。腫瘍の大きさは、 S— 180移植後 5週目に測定した。その結果を表 1に示す。なお、腫瘍の大きさは長径と短径を

0 測定し、以下の計算式：腫瘍体積（mm³ ) = (長径） X (短径） ² /2 にしたがって体積を算出して比較した。また、腫瘍増殖抑制活性は、以下の計算式：腫瘍増殖抑制活性（％)= { (コントロール群の腫瘍体積一各サンプル投与群の腫瘍体積） /コントロール群の腫瘍体積 } X 100 にしたがって算出した。

表 1

投与したサンプル腫瘍体積腫瘍増殖抑制活性

(平均土標準誤差） (%)

CE- 2 (コントロール） 3212±370

子実体粉未 2416±604 24. 8

熱水不溶画分 2891±703 10. 0

熱水可溶面分 1447±511 55. 0 以上のようにブナシメジの子実体粉末を熱水処理した場合、可溶画分に S— 1 80腫瘍の増殖を抑制する作用が認められた。また、その抑制作用はもとの子実体粉末よりも強いものであった。実施例 1 熱水処理時間の検討

熱水処理時間を 1、 2、 3又は 5時間に変更した以外は参考例 1と同様の方法で調製することにより、 4種の熱水可溶画分の凍結乾燥粉末を得た。 250 gの子実体粉末よりそれぞれの熱水可溶画分の凍結乾燥粉末を約 1 1 O g得た。参考例 2と同じ条件で、 S— 180腫瘍を I CRマウスに移植し、 7日目に腫瘍の大きさの平均が各群間で均等になるように群分けして用いた。上記各画分の凍結乾燥粉末をサンプルとして通常の粉末飼料 CE— 2に混ぜてマウスに与えた。投与量は子実体粉末に換算して、粉末試料 CE— 2に対して重量比で 10%混ぜて与えた場合と同等になるように用いた。コント口一ル群には CE— 2のみをサンプルとして与えた。腫瘍の大きさは、 S— 180移植後 5週目に測定した。また、腫瘍の大きさと腫瘍増殖抑制活性は、参考例 2と同様に算出した。その結果を表 2に示す。表 2

投与したサンプル腫瘍体積腫瘍增前抑制活性

(平均 ±標準誤差〉 (%)

CE— 2 (コント口ール） 4230+917

1時間熱水処理後の可溶面分 3132±673 26. 0

2時間熱水処理後の可溶画分 2744±820 35. 1

3時間熱水処理後の可溶画分 2240土 348 47. 0

5時間熱水処理後の可溶画分 3216+744 24, 0 すべてのブナシメジの熱水可溶画分に S— 180固形腫瘍に対する強い増殖抑制作用がみられ、中でも処理時間が 2時間と 3時間のものにおいて S— 180固形腫瘍に対するより強い増殖抑制作用がみられた。実施例 2 子実体粉末由来の分子量 10万超画分の調製

器内温を 60°Cに設定した熱風乾燥器を用いて、ブナシメジ Lyo phy l 1 um u 1 ma r i urn M—8171 (FERM BP— 1415) の生鮮子実体を乾燥後、粉砕することにより子実体粉末を得た。該子実体粉末 500 gに 10 Lの純水を加えて 95°C、 3時間熱水処理を行った。熱水抽出物を室温まで冷却させた後、遠心分離（6500 G、 30分、室温）を行い、熱水可溶画分を得た。熱水可溶画分は排除分子量 10万のホロファイバー（アミコン社製）を装着した限外ろ過器により濃縮後、凍結乾燥し、粉碎器により粉碎することにより、分子量 10万超画分の凍結乾燥粉末約 20 gを得た。実施例 3 子実体粉末由来の分子量 10万超画分の腫瘍増殖抑制活性

参考例 2と同じ条件で、 S— 180腫瘍を I CRマウスに移植し、 7日目に腫瘍の大きさの平均が各群間で均等になるように 2群に群分けして用いた。そのうちの 1群に、実施例 2で調製した凍結乾燥粉末をサンプルとして通常の粉末飼料 CE— 2に混ぜてマウスに与えた。投与量は子実体粉末に換算して、粉末試料 C E— 2に対して重量比で 10 %混ぜて与えた場合と同等になるようにした。コントロ一ル群には CE— 2のみをサンプルとして与えた。腫瘍の大きさは、 S— 1 80移植後 5週目に測定した。また、腫瘍の大きさと腫瘍増殖抑制活性は、参考例 2と同様に算出した。その結果を表 3に示す。

表 3

投与したサンプル腫疡体積腫瘍増殖抑制活性

(平均土標準誤差〉 (%)

C E - 2 (コント口一ル） 5 1 3 1 ± 1 83 3

分子量 1 0万超面分 1 84 6土 5 90 6 4. 0 表 3に示すように、ブナシメジ熱水抽出物から得られた分子量 10万超画分において S— 180固形腫瘍の増殖を抑制する作用がみられた。実施例 4 生鮮子実体由来の分子量 10万超画分の調製

ブナシメジ Lyo phy l l um u lma r i um M— 817 1 (FER M BP— 1415) の生鮮子実体 2. 3 k gをホモジナイズしてペースト状にし、純水を加えて全量を 4. 6 Lとしたのち、 95 、 3時間熱水処理を行った。熱水抽出物を室温まで冷却させた後、遠心分離（6500 G、 30分、室温）を行い、熱水可溶画分 3 Lを得た。熱水不溶画分には再度純水を加えて全量を 3 Lとしたのち、 95° (：、 30分熱水処理し、熱水抽出物を室温まで冷却させた後、遠心分離（6500 G、 30分、室温）を行うことにより熱水可溶画分 1. 6 Lを得た。両熱水可溶画分を混合したのち、排除分子量 10万のホロファイバー (アミコン社製）を装着した限外ろ過器により濃縮後、凍結乾燥し、粉砕器により粉碎することにより、分子量 10万超画分の凍結乾燥粉末約 2. 4 gを得た。またブナシメジ L y 0 p h y 1 1 urn u 1 ma r i urn K一 0259 (FE RM P— 12981) の生鮮子実体 2. 5 k gから上記と同様の操作を行い、分子量 10万超画分の凍結乾燥粉末約 1. 8 gを得た。実施例 5 生鮮子実体由来の分子量 10万超画分の腫瘍増殖抑制活性

参考例 2と同じ条件で、 S— 180腫瘍を I CRマウスに移植し、 7日目に腫瘍の大きさの平均が各群間で均等になるように 3群に群分けして用いた。そのうちの 2群にそれぞれ、実施例 4で調製した 2種の凍結乾燥粉末をサンプルとして通常の粉末飼料 CE— 2に混ぜてマウスに与えた。投与量は子実体粉末に換算して、粉末試料 CE— 2に対して重量比で 10 %混ぜて与えた場合と同等になるように用いた。コントロール群には CE— 2のみをサンプルとして与えた。腫瘍の大きさは、 S— 180移植後 5週目に測定した。また、腫瘍の大きさと腫瘍抑制活性は、参考例 2と同様に算出した。その結果を表 4に示す。表 4

サンプル投与群腫疡体積腫疡抑制活性

(平均土標準誤差） (%)

CE- 2 (コント口一ル） 2139±343

L y o h y l l u m u 1 m a r 1 u m 1289±242 39. 7

M-8171生鮮子実体由来分子量 1 0万超画分

L y o p h y l l u m u 1 m a r i u m 1207±397 43. 6

K-0259生鮮子実体由来分子: ¾ 1 0万超画分表 4に示すように、ブナシメジの生鮮子実体を熱水処理して得られた分子 0万超画分投与群において S— 180固形腫瘍増殖の抑制がみられた。実施例 6 ィォン交換樹脂分画物の調製器内温を 60°Cに設定した熱風乾燥器を用いて、ブナシメジ Lyophy l 1 urn u 1 ma r i um M— 8171 (FERM BP— 1415) の生鮮子実体を乾燥後、粉碎することにより子実体粉末を得た。該子実体粉末 500 に 10 Lの純水を加えて 95°C、 3時間熱水処理を行った。熱水抽出物を室温まで冷却させた後、遠心分離（6500 G、 30分、室温）を行い、熱水可溶画分 8 . 7 L (pH6. 2) を得た。該熱水可溶画分を排除分子量 10万のホロフアイバー（アミコン社製）を装着した限外ろ過器により濃縮することにより、分子量 10万超画分21^ (pH6. 4) を得た。該分子量 10万超画分に 60 OmLのエタノールを加え、かく拌し、不溶物を遠心分離（15000 G、 30分、室温 ) により取り除いた後、 8 X40 cmのカラムに 1 OmMの NaC 1を含む 10 mM リン酸ナトリウムバッファー（ρΗ7. 0) で平衡化した DEAE—セル口ファイン Α— 800 (チッソ株式会社製）を充填したクロマトグラフィーにかけ、同平衡化バッファーで洗浄した。次に、同平衡化バッファーの NaC 1濃度を 40 OmM又は 100 OmMとしたリン酸ナトリウムバッファー（ρΗ7. 0 ) で溶出し、それぞれを分取した。得られた 40 OmM N a C 1溶出画分及び 100 OmM NaC 1溶出画分は、排除分子量 1万のホロファイバー（アミコン社製）を装着した限外ろ過器により濃縮後、凍結乾燥し、粉砕器により粉砕することにより、 40 OmM NaC 1溶出画分の凍結乾燥粉末を 3. 9 g、 10 0 OmM Na C 1溶出画分の凍結乾燥粉末を 0. 9 g得た。実施例 7 イオン交換樹脂分画物の腫瘍増殖抑制活性

参考例 2と同じ条件で、 S— 180腫瘍を I CRマウスに移植し、 7日目に腫瘍の大きさの平均が各群間で均等になるように 3群に群分けした。そのうちの 2 群にそれぞれ、実施例 6で調製した 2種の凍結乾燥粉末をサンプルとして通常の粉末飼料 CE— 2に混ぜてマウスに与えた。投与量は子実体粉末に換算して、粉末試料 C E— 2に対して重量比で 10 %混ぜて与えた場合と同等になるようにし表 6

分画物名糖含量蛋白質含量脂質含量ゥロン酸含量

(%) (%) (%) (%)

L y o p h y l l um u 1 m a r i u m 51 10 33 0. 6

M- 8 1 71子実体粉末由来分子量 10万

超面分

y o p h y l l um u 1 m a r i u m 54 3. 5 30 0. 8

M— 8 171生鮮子実体由来分子量 10万

超画分

L y o p h y l l um u l ma r i um 48 3 35 3. 2

K- 0259生鮮子実体由来分子量 10万

超画分

40 OmM N a C 1 溶出画分 55 16 30 2. 2

産業上の利用可能性

本発明により、安価な食用担子菌が有する抗腫瘍性を有し、経口摂取によりその効果を発揮し得る抗腫瘍性組成物、及び該組成物を含有する食品又は飲料を得ることができる。よって、本発明は特に医薬や健康食品分野において特に有用である。

7 た。コントロール群には CE— 2のみをサンプルとして与えた。腫瘍の大きさは S— 180移植後 5週目に測定した。また、腫瘍の大きさと腫瘍増殖抑制活性は、参考例 2と同様に算出した。その結果を表 5に Ιτ ^ 5

投与したサンプル腫疡体積腫癍增殖抑制活性

(平均士標 Φ誤差） (%)

C E - 2 (コントロール） 3358± 101 5

400 mM N a C 1溶出画分 1066± 312 68. 3

1 000 mM N a C 1？容出画分 3051 ± 1034 9. 1 その結果、表 5に示すように 400mM NaC 1溶出画分に腫瘍増殖抑制活性が認められた。実施例 8 各画分の組成

上記実施例 2 4及び 6で得られた各分子量 10万超画分及び 40 OmM N aC l溶出画分について、糖含量、ゥロン酸含量、脂質含量及び蛋白質含量をそれぞれフエノール硫酸法〔アナリティカルケミストリー（An a 1 y t i c a 1 Ch em i s t r y) 、第 28巻、第 350頁（1956) 〕、カルバゾール硫酸法〔アナリティカルバイオケミストリー（An a 1 y t i c a 1 B i o c h em i s t r y) 、第 4巻、第 330頁（1962) 〕、クロ口ホルム一メタノール混液抽出法〔ジャーナルォブバイオロジカルケミストリー ( J ou r n a l o f B i o l o g i c a l Ch emi s t r y) 、第 22 6巻、第 497頁（1957) 〕、及び蛋白質測定キット（C o oma s s i e

P r o t e i n As s ay Re a g e n t K i t P i e r c e社) を用いて測定した。その結果を表 6に示す。

16

Claims

請求の範囲

1. ブナシメジ子実体の熱水抽出物中の、可溶性であって排除分子量 10万の限外ろ過膜を通過しない画分からなる抗腫瘍性組成物。

2. 糖含量が 45〜60重量％、脂質含量が 20〜45重量％、タンパク質含量が 1〜 15重量％である請求項 1記載の抗腫瘍性組成物。

3. ブナシメジ子実体の熱水抽出物中の、可溶性であって排除分子量 10万の限外ろ過膜を通過しない画分からなる組成物を、さらに陰イオン交換樹脂に供した後、溶出させて得られ得る抗腫瘍性組成物。

4. 糖含量が 50〜60重量％、脂質含量が 20〜40重量％、タンパク質含量が 5〜 20重量％である請求項 3記載の抗腫瘍性組成物。

5. ブナシメジが L y o p h y 1 1 um u 1 ma r i um M— 8171 ( FERM B P— 1415) 、又は Ly o p hy 1 1 um u 1 m a r i um K一 0259 (FERM P— 12981 ) である請求項 1〜 4いずれか 1項に記載の抗腫瘍性組成物。

6. 熱水抽出物が処理温度 80〜 100 ° (：、処理時間 1〜 5時間で熱水処理して得られたものである請求項 1〜 5のいずれ力、 1項に記載の抗腫瘍性組成物。

7. 請求項 1〜 6のいずれか 1項に記載の抗腫瘍性組成物を含有する食品又は飲料。

8. (1) ブナシメジ子実体を 1〜5時間熱水処理して得られる熱水抽出物より、不溶物を除去する工程、及び（2) 工程（1) で得られた可溶性画分を排除分子量 10万の限外ろ過に供する工程を包含することを特徴とする抗腫瘍性組成物の製造方法。

9. 抗腫瘍性組成物が、糖含量が 45〜 60重量％、脂質含量が 20〜 45重量％、タンパク質含量が 1〜15重量％である組成物である請求項 8記載の抗腫瘍性組成物の製造方法。

10. (1) ブナシメジ子実体を 1〜5時間熱水処理して得られる熱水抽出物より、不溶物を除去する工程、（2) 工程（1) で得られた可溶性画分を排除分子量 10万の限外ろ過に供する工程、及び（3) 工程（2) で得られた組成物を陰イオン交換樹脂に供した後、溶出させる工程を包含することを特徴とする抗腫瘍性組成物の製造方法。

1 1. 抗腫瘍性組成物が、糖含量が 50〜 60重量％、脂質含量が 20〜 40 重量％、タンパク質含量が 5〜20重量％である組成物である請求項 10記載の抗腫瘍性組成物の製造方法。

12. ブナシメジが L y o p h y 1 1 um u 1 m a r i u m M— 8171 (F E RM B P— 1415) 、又は L y o p h y 1 1 um u 1 m a r i um

K一 0259 (FERM P— 12981) である請求項 8〜11いずれか 1 項に記載の抗腫瘍性組成物の製造方法。