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WO2005042031A2 - Oligoribonukleotide zur behandlung von unerwünschter pigmentierung der haut und der haare durch rna-interferenz - Google Patents

Oligoribonukleotide zur behandlung von unerwünschter pigmentierung der haut und der haare durch rna-interferenz Download PDF

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WO2005042031A2
WO2005042031A2 PCT/EP2004/012422 EP2004012422W WO2005042031A2 WO 2005042031 A2 WO2005042031 A2 WO 2005042031A2 EP 2004012422 W EP2004012422 W EP 2004012422W WO 2005042031 A2 WO2005042031 A2 WO 2005042031A2
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
skin
hair
oligoribonucleotide
pigmentation
oligoribonucleotides
Prior art date
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Ceased
Application number
PCT/EP2004/012422
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English (en)
French (fr)
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WO2005042031A3 (de
Inventor
Rainer Wolber
Christoph Smuda
Thomas Blatt
Claudia Mundt
Werner Berens
Stefan Gallinat
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Beiersdorf AG
Original Assignee
Beiersdorf AG
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
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Publication date
Application filed by Beiersdorf AG filed Critical Beiersdorf AG
Priority to EP04797559A priority Critical patent/EP1682187A2/de
Publication of WO2005042031A2 publication Critical patent/WO2005042031A2/de
Publication of WO2005042031A3 publication Critical patent/WO2005042031A3/de
Anticipated expiration legal-status Critical
Ceased legal-status Critical Current

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    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/60—Sugars; Derivatives thereof
    • A61K8/606—Nucleosides; Nucleotides; Nucleic acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
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    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
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    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/50—Physical structure
    • C12N2310/53—Physical structure partially self-complementary or closed

Definitions

  • the invention relates to oligoribonucleotides which induce the breakdown of mRNA of enzymes and structures involved in the pigmentation process of the skin and which are particularly suitable for the treatment and prophylaxis of undesired pigmentation of the skin (skin tanning), as occurs, for example, as a result of UV radiation.
  • skin tanning skin tanning
  • the present invention relates to unwanted hair pigmentation.
  • the present invention relates to cosmetic and dermatological preparations for the prophylaxis and treatment of undesirable pigmentation, for example local hyper- and deficient pigmentations (liver spots, freckles, age spots, melasma, post-inflammatory hyperpigmentation), but also purely for cosmetic lightening of larger, individual skin types adequately pigmented skin areas.
  • undesirable pigmentation for example local hyper- and deficient pigmentations (liver spots, freckles, age spots, melasma, post-inflammatory hyperpigmentation), but also purely for cosmetic lightening of larger, individual skin types adequately pigmented skin areas.
  • Melanocytes are responsible for the pigmentation of the skin, which can be found in the bottom layer of the epidermis, the stratum basale, next to the basal cells as - depending on the skin type either isolated or more or less frequently occurring - pigment-forming cells.
  • melanocytes contain melanosomes, in which the melanin is formed. When stimulated by UV radiation, among other things, melanin is increasingly formed. This is ultimately transported via the living layers of the epidermis (keratinocytes) into the horny layer (corneocytes) and causes a more or less pronounced brown to brown-black skin color.
  • DHICA and DHI Melanin are formed as the final stage of an oxidative process, in which tyrosine with the help of the enzyme tyrosinase via several intermediate stages to the brown to brown-black eumelanins (DHICA and DHI Melanin) or with the participation of sulfur-containing compounds to reddish pheomelanin.
  • DHICA and DHI melanin are produced via the common intermediate stages dopaquinone and dopachrome. The latter is implemented, partly with the participation of further enzymes, either in indole-5,6-quinone carboxylic acid or in indole-5,6-quinone, from which the two eumelanins mentioned arise.
  • phaeomelanin occurs among other things via the intermediates dopaquinone and cysteinyldopa.
  • the expression of the melanin-synthesizing enzymes is controlled by a specific transcription factor (microphthalmia-associated transcription factor, MITF).
  • MITF microphthalmia-associated transcription factor
  • p-protein appears to play an important role here, although the exact function is still unclear.
  • the transfer of the melanosomes, their whereabouts in the epidermis and their breakdown and breakdown of the melanin is also of crucial importance in the pigmentation of the skin. It could be shown that the PAR-2 receptor is important for the transport of the melanosomes from the melanocytes into the keratinocytes (M. Seiberg et al., 2000, J. Cell. Sei., 113: 3093-101).
  • the size and shape of the melanosomes also influence their light-scattering properties and thus the color appearance of the skin. In black Africans, for example, large spheroidal, individually present melanosomes are found, whereas in Caucasians, one finds smaller melanosomes that occur in groups.
  • Problems with hyperpigmentation of the skin have a variety of causes or are side effects of many biological processes, e.g. UV radiation (e.g. freckles, ephelides), genetic disposition, incorrect pigmentation of the skin during wound healing or scarring (post-inflammatory hyperpigmentation) or skin aging (e.g. lentigines senile).
  • Skin peeling methods (chemical and mechanical "peelings") are also used, but these often result in inflammatory reactions and, because of the post-inflammatory hyperpigmentation that occurs afterwards, can even lead to more pigmentation instead of reduced pigmentation.
  • cosmetics also include hair care an extremely intensively researched area.
  • the structure of all these hairs is roughly similar: the central hair mark (from epithelial cells with eosinophilic granules of the trichohyaline substance), surrounded by the hair cortex (from horny cells; contains pigments) and the cuticle (cuticle pili; coreless epidermal layer) and of layers of the epithelial and connective tissue sheath.
  • the hair is divided into the hair shaft protruding from the skin and the oblique hair root reaching into the subcutis, the layers of which correspond approximately to those of the epidermis.
  • the thickened lower end of the root, the hair bulb sits on a vascular connective tissue cone, the hair papilla, protruding into it (both as a hair floor).
  • Melanin is responsible for the personal hair color. Melanin is formed in the melanocytes, cells that occur in the hair bulb in association with the keratinocytes of the hair market. As characteristic cell organelles, melanocytes contain melanosomes, in which the melanin is formed. This is transferred via the long dendrites of the melanocytes into the keratinocytes of the precortical matrix and creates the more or less pronounced blonde to brown-black hair color. The processes of melanin synthesis and the distribution of melanin in the hair are carried out analogously to the processes described above.
  • Eumelanin is the black-brown pigment. It is mainly about the depth of color of the hair. In brown and black hair it occurs in clearly recognizable granules.
  • Phaeomelanin is the red pigment. It is responsible for light blonde, blonde and red hair. The structure of this melanin is much finer and smaller. The different hair colors result from the different proportions of the melanin types: • Blond hair contains little eumelanin and a lot of phaeomelanin. • Dark hair contains a lot of eumelanin and little phaeomelanin. • Red hair also has little eumelanin and a lot of phaeomelanin. • All shades of hair in between result from different mixing ratios of the two melanin types. The pigment formation process can only proceed if sufficient tyrosinase is available. This enzyme is produced less frequently with age. This gradually leads to gray hair. The reason: with little tyrosinase too less and less tyrosine formed. The production of melanin also decreases. The missing melanin is replaced by the storage of air bubbles. The hair appears gray.
  • This process is usually insidious. It begins at the temples and then extends to the entire hair on the head. Then it hits the beard and eyebrows. Finally, all of the body's hair is gray.
  • gray hair is called canities.
  • Premature graying from the age of 20, is also called Canities praecox.
  • Symptoms of canities, or symptomatic graying of the hair can have various causes. These include: • Pernicious anemia (vitamin B deficiency anemia), • Severe endocrinological disorders, e.g. B. in thyroid diseases. • acute, febrile illnesses, • drug side effects, • cosmetics, • metals.
  • the cosmetic industry uses lead acetate in some countries, which is toxic and is therefore prohibited in the European Cosmetics Regulation.
  • This lead acetate is preferably applied to the hair as a solution and remains there for a long time without being washed off.
  • keratin fibers e.g. B. hair, wool or furs
  • Coupler and developer components are also referred to as oxidation dye precursors.
  • Special representatives are, for example, p-phenylenediamine, p-toluenediamine, 2,4,5,6-tetraaminopyrimidine, p-aminophenol, N, N-bis (2-hydroxyethyl) -p-phenylenediamine, 2- (2,5-diaminophenyl ) -ethanol, 2- (2,5-diaminophenoxy) -ethanol, 1-phenyl-3-carboxyamido-4-amino-pyrazolon-5, 4-amino-3-methylphenol, 2-aminomethyl-4-aminophenol, 2- Hydroxy-methyl-4-aminophenol, 2-hydroxy-4,5,6-triaminopyrimidine, 2,4-dihydroxy-5,6-diaminopyrimidine and 2,5,6-triamino-4-hydroxypyrimidine.
  • M-Phenylenediamine derivatives, naphthols, resorcinol and resorcinol derivatives, pyrazolones and m-aminophenols are generally used as coupler components.
  • Particularly suitable coupler substances are ⁇ -naphthol, 1,5-, 2,7- and 1,7-dihydroxynaphthalene, 5-amino-2-methylphenol, m-aminophenol, resorcinol, resorcinol monomethyl ether, m-phenylenediamine, 2 , 4-diaminophenoxyethanol, 1-phenyl-3-methyl-pyrazolon-5, 2,4-di-chloro-3-aminophenol, 1, 3-bis (2,4-diaminophenoxy) propane, 2-chlororesorcinol, 4 -Chloror- sorcinol, 2-chloro-6-methyl-3-aminophenol, 2-methylresorcinol and 5-methylresorcinol.
  • oxidation dyes intensive dyeings can be achieved with good fastness properties, but the development of the color is generally done under the influence of oxidizing agents such. B. H 2 O 2 , which in some cases can result in damage to the fiber. Furthermore, some oxidation dye precursors or certain mixtures of Oxidation dye precursors sometimes have a sensitizing effect on people with sensitive skin. Direct dyes are applied under gentler conditions, but their disadvantage is that the dyeings often have inadequate fastness properties.
  • the object of the present invention is to reduce the independent melanin production of the hair, but without coloring agents and in particular oxidizing agents such. B. H 2 O 2 to be instructed. In addition, the agents must have no or only a very low sensitization potential.
  • dsRNA double-stranded RNA fragments
  • RNAi RNA interference
  • the dsRNA causes the specific degradation of the homologous mRNA in the cell in an unexplained manner and thus prevents protein production.
  • WO01 / 29058 discloses the identification of genes which are involved in RNAi and their use for modulating RNAi activity.
  • the reduction in gene expression in cells by dsRNA is known from WO01 / 68836.
  • the dsRNA contains a nucleotide sequence which, under the physiological conditions of the cell, hybridizes with the nucleotide sequence of at least part of the gene to be inhibited.
  • the dsRNA is preferably 400 to 800 nucleotides in length.
  • WO01 / 75164 discloses the use of dsRNA with a length of 21 to 23 nucleotides for the specific inactivation of gene functions in mammalian cells by RNAi.
  • EP 1 214 945 A2 discloses the use of dsRNA with a length of 15 to 49 base pairs for inhibiting the expression of a given target gene in mammalian cells.
  • the dsRNA can be modified to increase its stability and should allow the treatment of cancer, viral diseases and Alzheimer's disease.
  • WO02 / 053773 relates to an in vitro method for determining skin stress and skin aging in humans and animals, test kits and biochips suitable for carrying out the method, and a test method for demonstrating the effectiveness of cosmetic or pharmaceutical active substances against skin stress and skin aging.
  • WO 01/58918 A2 describes the use of oligonucleotides against tyrosinase and TRP-1 for lightening the skin.
  • Oligoribonucleotides which are suitable for the prophylaxis and treatment of undesirable pigmentation of the skin and hair, have not previously been described.
  • the object of the present invention is to provide compositions which enable an effective treatment of and prophylaxis against undesirable pigmentation of the skin and hair, in particular against irregular pigmentation of the skin (“uneven skin tone, age spots, melasma etc.), without the disadvantages of the prior art to show the technology.
  • RNA molecules RNA molecules
  • gene shutdown gene silencing
  • RNAi RNA interference
  • the invention thus relates to oligoribonucleotides which can induce the breakdown of the mRNA of structures involved in the pigmentation of skin or hair.
  • the mRNA whose degradation is to be effected is shown below also called target mRNA. Accordingly, we understand target gene as the gene and in particular the coding region of the gene, the expression of which is wholly or partly suppressed.
  • target sequence refers to both the target gene and the target mRNA.
  • the degradation of the mRNA by structures involved in pigmentation of the skin and hair by RNAi is sequence-specific, ie an oligoribonucleotide generally only inhibits the expression of the corresponding target gene.
  • the coding regions (cDNA) of the respective genes are preferred, including the 5 'and 3' UTR regions.
  • the regions of the coding regions which are 50 to 100 nucleotides downstream of the start codon are particularly preferred.
  • oligoribonucleotides according to the invention are preferably double-stranded RNA molecules (dsRNAs) which are homologous to the sequence of the target gene, or a section thereof, i.e. match the target gene with respect to sense and antisense strand.
  • dsRNAs double-stranded RNA molecules
  • dsRNA Homology is also present according to the invention if the dsRNA is not completely identical to the target sequence.
  • the invention also relates to longer nucleotide fragments, such as dsRNAs that correspond in length to the respective target mRNAs or cDNAs. These can e.g. can be converted into fragments of 21 to 23 nucleotides in length by soluble Drosophila embryo extract (cf. WO01 / 75164). Long-chain dsRNA is also broken down into short pieces intracellularly. However, the direct use of long-chain dsRNA is generally not preferred since it can cause non-specific inhibition of translation in mammalian cells.
  • the structure involved in the actual melanin synthesis is the enzyme tyrosinase, TRP1, TRP2 or the p-protein.
  • tyrosinase the enzyme for melanin formation.
  • TRP1, TRP2 and, in particular, p-protein have a rather supportive function in melanin formation only the inhibition of the existing pacemaker enzyme tyrosinase by more or less specific inhibitors (kojic acid etc.)
  • the siRNA approach is highly selective.
  • the enzymes involved in melanin synthesis are the following oxidases / tautomerases tyrosinase p14679 (EC 1.14.18.1)
  • TRP-2 P40126 (EC 5.3.3.12)
  • Tyrosinase (Tyr, Tyro) is the pacemaker enzyme for melanin synthesis.
  • the enzymes TRP-1 (tyrosinase related peptide 1, Tyrpl, Tyr1) and TRP-2 (tyrosinase related peptide 2, Dct, Tyr2) control to what extent the brown DHICA or, exclusively under the influence of tyrosinase, the black DHI melanin is formed becomes.
  • the numbers given are the access numbers (Accession Numbers) of the Swiss-PROT database of the EMBL-EBI (European Bioinformatics Institute Heidelberg). It is also preferred if the structure involved in the expression of the melanin synthesis is the transcriptin factor MITF.
  • MITF pacemaker enzyme
  • tyrosinase which does not run without the transcription factor MITF
  • MITF since it controls the expression of tyrosinase, among other things.
  • MITF - strictly speaking MITF-M- is a very exclusive transcription factor that only controls genes in the skin that are relevant for pigmentation.
  • This in turn has the advantages that a) the melanin formation is nipped in the bud very early, b) no side effects occur, since there is no interference with other metabolic pathways, such as is the case with the inhibition of "general transcription factors” such as p53, NFkB or AP1 that are also partly involved in the regulation of pigmentation.
  • the structures that continue to influence melanogenesis which are still very preferred, include the MITF transcription factor and, in particular, the melanocyte-specific M isoforms (MITF-M) and especially the p-protein ( OCA2):
  • MITF (ID O75030)
  • MITF-M1 (ID O75030-9)
  • the structures which influence the pigmentation processes in the skin and which are preferred are those structures which are involved in the transport of the melanosomes into the epidermis.
  • This also includes the peptidases trypsin and trypsin-like enzymes and various serine proteases (including mast cell tryptase beta III (ID Q96RZ7; MMCP-7-like tryptase (ID Q996RZ7)).
  • the access numbers (Accession Numbers) of the Swiss-PROT database of the EMBL-EBI (European Bioinformatics Institute Heidelberg) are given here. It is therefore particularly preferred if the structure involved in the transfer of the melanosomes is proteinase activated receptor 2 (PAR-2).
  • PAR-2 proteinase activated receptor 2
  • no melanin is transported further and, as a result, melanin synthesis comes to a standstill.
  • the inhibition of the proteases inhibits their important functions in the skin, which leads to side effects.
  • the pharmaceutical or cosmetic compositions according to the invention preferably contain 0.00001 to 10% by weight, particularly preferably 0.0003 to 3% by weight and very particularly preferably 0.01 to 1.0 of the oligoribonucleotide (s) according to the invention, based on the total weight the composition.
  • the above quantity relates to the mass of the oligoribonucleotides integrated in the vector, the mass of the vector itself is not taken into account.
  • compositions which contain only those oligoribonucleotides which inhibit the expression of one or more of the above-mentioned genes, ie the genes of structures involved in skin pigmentation and, if appropriate, the proteinase PKR, and in particular of the preferred genes mentioned.
  • the compositions according to the invention can contain one or preferably more oligoribonucleotides. These can be oligoribonucleotides that inhibit the expression of several different structures involved in skin pigmentation. However, mixtures of oligoribonucleotides can also be used which have different sequence regions of the same gene or the same mRNA of a structure involved in skin pigmentation as the target.
  • compositions which contain 1 to 5 and in particular 1 to 3 different oligoribonucleotides are preferred. Mixtures of oligoribonucleotides which, besides the structures mentioned in the skin pigmentation and possibly the proteinase PKR, non-specifically inhibit or induce the activity of a large number of other skin proteins are undesirable since practically no control of side effects is possible. Skin proteins are understood to mean those proteins which are expressed in the skin. Compositions which contain one or more oligoribonucleotides which inhibit the expression of the tyrosinase or the transcription factor MITF are very particularly preferred. The splice variants MITF-M1 and MITF-M2 should be mentioned in particular.
  • compositions which each contain at least one oligoribonucleotide which is directed against PAR-2 are also particularly preferred.
  • compositions which each contain at least one oligoribonucleotide which is directed against TRP1 and / or TRP-2.
  • those compositions are furthermore particularly preferred which contain oligoribonucleotides which are able to inhibit the expression of serine proteinases, such as pancreatic and neutrophil elastases and macrophage elastase, which belong to the group of elastases.
  • serine proteinases are involved, among other things, in phagocytotic processes, in the defense against microorganisms, the degradation of elastin, collagens, proteoglycans, fibrinogen and fibrin and in the digestion of damaged tissue, but can also lead to an activation of PAR-2 (Bolognesi, M ., K. Djinovic-Carugo, et al. (1994) "Molecular bases for human leucocyte elastase inhibition.” Monaldi Arch Chest DJs 49 (2): 144-9).
  • those oligoribonucleotides are preferred which express the expression of the particular Inhibit target gene compared to untreated cells by at least 25%, preferably by at least 50%, particularly preferably by at least 80% and very particularly preferably by at least 85% If necessary, the expression of the target gene in the cells is first measured to measure the inhibition Tumor cells are preferably used to determine the effectiveness of the oligoribonucleotides according to the invention, in the same way suitable primary cultures can be used.
  • the oligoribonucleotides are introduced into the cells and then, if necessary after induction of the expression of the target gene, the expression rate of the target gene in these cells is measured and compared with that found in cells that have not been transfected with the respective oligoribonucleotide. It is also preferred if the oligoribonucleotide in front of the target sequence differs in a maximum of 0 to 2 base pairs, particularly preferably 0 to 1, based on a length of 20 base pairs, and very particularly preferably has no deviations from the target sequence, ie there are a maximum of 0 to 2 and in particular exchanged a maximum of 0 to 1 base pairs for other base pairs. This has the advantage of being particularly effective because it increases with the degree of agreement with the target sequence.
  • the oligoribonucleotide is homologous to a section of the gene of the structure involved in the pigmentation of skin and / or hair, the sense strand of which is on the 5 'side by two adenosine residues and on the 3' side by two thymidine residues or by one Thymidine and a cytosine residue is flanked. This flanking leads to a particular effectiveness, without an explanation being known. It is particularly preferred if the oligoribonucleotide carries two deoxythymidine residues at the 3 'end.
  • RNA duplexes according to the invention can have smooth (blunt ends) or projecting (sticky ends) ends.
  • Double-stranded oligoribonucleotides have been found to be particularly effective which have an overhang of 1 to 6, preferably 1 or 2, nucleotides at the 3 'end of each strand.
  • the protruding nucleotides are preferably 2'-deoxynucleotides, particularly preferably 2'-deoxythymidine residues. By using the 2'-deoxynucleotides, the costs of RNA synthesis can be reduced and the resistance of the RNA to the nuclease degradation can be increased.
  • the protruding nucleotides need not necessarily be the nucleotides homologous to the target sequence and are therefore not taken into account in the deviations from the target sequence defined above.
  • Oligoribonucleotides which have been shown to be particularly effective are those which are homologous to such a section of the target gene and in particular the corresponding double-stranded cDNA, the sense strand of which is on the 5 'side by two adenosine residues (A) and on the 3' side by two thymidine residues (T) or a thymidine and a cytidine residue (C) is limited.
  • the section delimited by AA and TT or AA and TC preferably has a length of 19 to 21, in particular 19 nucleotides and accordingly has the general form AA (N 19 _ 2 i) TT or AA (N 19-21 ) TC, where N stands for a nucleotide.
  • Oligoribonucleotides which are complementary to a section of the target gene or the corresponding double-stranded cDNA which has the general form AA (N 19 ) to AA (N 21 ) are further preferred. Oligoribonucleotides which are homologous to the N 9-21 fragment of the regions mentioned are particularly preferred.
  • the particularly preferred oligoribonucleotides thus have a length of 19 to 21 base pairs, the individual strands forming these oligoribonucleotides preferably having two additional 2'-deoxynucleotides, in particular two 2'-deoxythymidine residues, on the 3 'side, so that the dsRNA 19 to 21 base pairs and comprises two protruding 2'-deoxynucleotides per strand.
  • the target gene does not contain an area of the form AA (N 19-21 ), areas of the form NA (N 19 _2i) or any fragment of the form N 19-2 ⁇ are searched for. N 19 .
  • fragments delimited, for example, by AA and TT are preferred, in principle, however, all dsRNA fragments which are homologous to the target sequence are suitable according to the invention.
  • the oligoribonucleotides according to the invention could advantageously also be integrated into expression vectors, in particular those which bring about an expression of the oligoribonucleotides in mammalian cells.
  • a stable inhibition of the expression of the target gene can be achieved even with an intracellular degradation of the oligoribonucleotides, since oligoribonucleotides are constantly supplied by the vector-assisted synthesis.
  • One or more copies of a dsRNA can be integrated into a vector, but also one or more copies of two or more different dsRNAs. Suitable vector systems are described, for example, by Brummelkamp et al., Loc. Cit.
  • mammalian expression vectors in particular those which have a polymerase III H1 RNA promoter and 5 to 9 so-called loops which are formed from a dsRNA according to the invention and a sequence of the same length which is reversely complementary to the dsRNA according to the invention and serves as a spacer and contain a sequence signal of 5 successive thymidine residues.
  • the Vectors thus contain 5 to 9 copies of the respective dsRNA molecule.
  • These can be dsRNAs that are specific for 1 target gene or dsRNAs that are specific for several different target genes.
  • the oligoribonucleotides according to the invention can be in the form of the unmodified oligoribonucleotides. However, they are preferably oligoribonucleotides which are chemically modified at the level of the sugar residues, the nucleobases, the phosphate groups and / or the skeleton located between them, in order, for example, to increase the stability of the oligoribonucleotides in cosmetic or dermatological preparations and / or in the skin , e.g.
  • oligoribonucleotides wherein one or more phosphate groups are replaced by phosphothioate, methylphosphonate and / or phosphoramidate groups, such as N3 '- P5' - phosphoramidate, are exchanged. Oligoribonucleotides in which phosphate groups are replaced by phosphothioate groups are particularly preferred.
  • One or more of the phosphate groups of the oligoribonucleotide can be modified. In the case of a partial modification, terminal groups are preferably modified, but oligoribonucleotides in which all the phosphate groups have been modified are particularly preferred. This applies mutatis mutandis to the modifications described below.
  • Preferred sugar modifications include the replacement of one or more ribose residues of the oligoribonucleotide with morpholine rings (morpholine oligoribonucleotides) or with amino acids (peptide oligoribonucleotides). All of the ribose residues of the oligoribonucleotide are preferably replaced by amino acid residues and in particular morpholine residues.
  • Morpholine oligoribonucleotides in which the morpholine residues are particularly preferred are particularly preferred
  • Sulphonyl or preferably phosphoryl groups are connected to one another, as can be seen in formula 1 or 2:
  • B represents a modified or unmodified purine or pyrimidine base, preferably adenine, cytosine, guanine, or uracil,
  • X represents O or S, preferably O,
  • Y represents O or NJ-CH 3 , preferably O,
  • Z stands for alkyl, O-alkyl, S-alkyl, NH 2 , NH (alkyl), NH (O-alkyl), N (alkyl) 2 , N (alkyl) (O-alkyl), preferably N (alkyl) 2 , where alkyl is linear or branched alkyl groups having 1 to 6, preferably 1 to 3 and particularly preferably 1 or 2 carbon atoms.
  • Formulas 1 and 2 each represent only a section of an oligoribonucleotide chain.
  • Morpholine oligoribonucleotides in which the morpholine residues are connected to one another via phosphoryl groups are very particularly preferred, as shown in Formula 2, in which X is O, Y is O and Z is N (CH 3 ) 2 .
  • the ribose residues can be modified by amino residues, such as NH 2 , fluorine, alkyl or O-alkyl residues, such as OCH 3 , 2'-modified oligoribonucleotides being particularly preferred.
  • amino residues such as NH 2 , fluorine, alkyl or O-alkyl residues, such as OCH 3
  • 2'-modified oligoribonucleotides being particularly preferred.
  • Exemplary modifications are 2 '-Fluoro-, 2' alkyl, 2'-0-alkyl-, 2 '-O- methoxyethyl modifications, 5' palmitate derivatives and 2 '-O-methylribonucleotides.
  • the modification of the nucleotides of dsRNA counteracts activation of the protein kinase PKR in the cell, which is dependent on double-stranded RNA. This avoids unspecific inhibition of translation.
  • substitution of at least one 2'-hydroxyl group of the nucleotides of the dsRNA by a 2'-amino or a 2'-methyl group is particularly suitable for this purpose.
  • at least one nucleotide in at least one strand of the dsRNA can be replaced by a so-called "locked nucleotide" which contains a chemically modified sugar ring.
  • a preferred modification of the sugar ring is a 2'-O, 4'-C-methylene bridge.
  • dsRNA containing several "locked nucleotides" is preferred.
  • alkyl here preferably represents linear, branched or cyclic alkyl groups having 1 to 30, preferably 1 to 20, particularly preferably 1 to 10 and very particularly preferably 1 to 6 carbon atoms.
  • Branched and Cyclic radicals naturally have at least 3 carbon atoms, cyclic radicals having at least 5 and in particular at least 6 carbon atoms being preferred.
  • the oligoribonucleotides contain one or more alpha-nucleosides. This makes the siRNA more stable and therefore more effective.
  • Suitable base modifications are described, for example, in US Pat. No. 6,187,578 and WO 99/53101, to which reference is hereby expressly made.
  • a modification of one or more pyrimidines in position 5 with I, Br, Cl, NH 3 and N 3 has proven to be advantageous.
  • the synthesis of modified and unmodified oligoribonucleotides and other suitable modification options are described in the literature.
  • the production of modified and unmodified oligoribonucleotides is now also offered as a service by numerous companies, for example by Dharmacon, 1376 Miners Dhve # 101, Lafayette, CO 80026, USA, Xeragon Inc., Genset Oligos and Ambion.
  • the production of oligoribonucleotides is also described in US Pat. No. 5,986,084.
  • the invention also encompasses a pharmaceutical or cosmetic composition containing one or more of the described oligoribonucleotides or a physiologically tolerable salt thereof and a corresponding composition for topical use.
  • composition contains several oligoribonucleotides that inhibit the expression of several different structures involved in the pigmentation of skin and / or hair.
  • such a composition contains several oligoribonucleotides which contain different sequence regions of one and the same gene, one of the actual melanin synthesis (melanosome structures; Tyrosianse, TRP-1, TRP-2, p-protein) and / or the expression of these melanosome structures (MITF) and / or the structure involved in the transfer of the melanosomes (into the keratinocytes) (PAR-2).
  • the oligoribonucleotides and compositions are suitable for the treatment and prophylaxis of undesirable pigmentation of the skin and hair, in particular the symptoms described above. They are suitable for cosmetic and therapeutic Treatment of unwanted pigmentation caused by endogenous and exogenous factors, especially UV radiation.
  • compositions according to the invention can prevent incorrect pigmentations and permanently remove existing (incorrect) pigmentations and without the risk of side effects.
  • the method described in WO02 / 053773 can be used to determine the effectiveness of the oligoribonucleotides according to the invention.
  • the oligoribonucleotides according to the invention are particularly suitable for the prevention and treatment of unwanted pigmentation of the skin, such as occurs in the form of chronically sun-damaged skin (age spots, "uneven skin tone"), but also in the case of freckles and melasma.
  • they are suitable Oligoribonucleotides according to the invention for the prevention and treatment of sun exposure-related skin tanning and also for lightening the pigmentation of the hair.
  • the oligoribonucleotides according to the invention are also suitable for lightening pigmentation which is appropriate to the skin type. Because of their prophylactic effect, the oligoribonucleotides and compositions according to the invention are also outstandingly suitable for skin care ,
  • compositions can preferably be in the form of a solution, cream, ointment, lotion, hydrodispersion, lipodispersion, emulsion, Pickering emulsion, a gel, a solid stick or as an aerosol.
  • Compositions for topical use are preferred according to the invention.
  • the compositions can be in any galenic form commonly used for topical application, e.g.
  • compositions according to the invention are suitable for cosmetic and therapeutic, ie in particular dermatological, use.
  • the invention further comprises the use of an oligoribonucleotide or a physiologically compatible salt thereof or a preparation described for skin care or cosmetic or therapeutic treatment of undesired pigmentation of skin or hair and for the production of a cosmetic or therapeutic composition for topical application and for skin care or treatment of unwanted pigmentation of the skin or hair as well as for the treatment of changes or damage with regard to pigmentation on the skin or hair caused by UV radiation in the skin, dryness, roughness and flaccidity of the skin, wrinkling, the reduced regreasing by sebum glands , and an increased susceptibility to mechanical stress (cracking), for the treatment of photodermatosis, the symptoms of senile xerosis, photoaging and a breakdown of the connective tissue of the skin, which with undesirable pigmenti skin or hair.
  • the oligoribonucleotides can also be used in encapsulated form, for example encapsulated in liposomes. They can also be stabilized by adding cyclodextrins.
  • Cyclodextrins are also known as cycloamyloses and cycloglucans.
  • the cyclodextrins are cyclic oligosaccharides consisting of ⁇ -1, 4 linked glucose units.
  • six to eight glucose building blocks (-, ß- or ⁇ -cyclodextrin) are linked together.
  • Cyclodextrins are obtained when Bacillus macerans acts on starch. They have a hydrophobic interior and a hydrophilic exterior. According to the invention, both the cyclodextrins themselves, in particular ⁇ -cyclodextrin, ⁇ -cyclodextrin and ⁇ -cyclodextrin, and derivatives thereof are suitable.
  • the cyclodextrin (s) are preferably used in cosmetic and dermatological compositions in a concentration of 0.0005 to 20.0% by weight, in particular 0.01 to 10% by weight and particularly preferably in a concentration of 0.1 to 5.0% by weight.
  • the cyclodextrin species which are particularly preferred according to the invention are ⁇ -cyclodextrin and hydroxypropyl- ⁇ -cyclodextrin.
  • Polar cyclodextrins are also particularly preferred according to the invention.
  • Liposomes can be prepared in a manner known per se using natural phospholipids, e.g. Produce phosphatidylcholine from eggs, soybeans, etc., or synthetic phospholipids (cf. G. Betageri (editor), "Liposome Drug Delivery Systems", Lancaster Techonomic Publishing Company 1993; Gregoriadis (editor), “Liposome Technology", CRC Press). Preferred methods and materials for the production of liposomes are described in WO 99/24018.
  • Double-stranded oligoribonucleotides can also be modified to counter dissociation into the single strands, for example by one or more covalent, coordinative or ionic bonds. However, oligoribonucleotides without such modifications are preferred.
  • the nucleotides in the RNA molecules can furthermore also comprise “non-standard” nucleotides, such as, for example, non-naturally occurring nucleotides or deoxyribonucleotides. It has surprisingly been found that the oligoribonucleotides, after the compositions have been applied to the skin, inhibit the expression of the genes which are responsible for the pigmentation of the skin, and thus prevent the formation and distribution of the skin's own pigment melanin without side effects and in this way enable effective treatment and prophylaxis of undesired pigmentation of the skin without showing the disadvantages of the prior art.
  • compositions according to the invention can additionally contain one or more oligoribonucleotides which inhibit the expression of the protein kinase PKR and thus counteract non-specific inhibition of translation.
  • compositions according to the invention are also suitable for the treatment of UV rays, e.g. the ultraviolet part of the sun's radiation, caused skin damage.
  • UVB rays (290 to 320 nm) cause, for example, erythema, sunburn or even more or less severe burns.
  • UVA rays (320 nm to 400 nm) can cause irritation to light-sensitive skin and lead to damage to the elastic and collagen fibers of the connective tissue, which causes the skin to age prematurely. They are also the cause of numerous phototoxic and photoallergic reactions.
  • the oligoribonucleotides according to the invention are also suitable for the treatment of e.g.
  • UV rays and functional disorders in the epidermis and dermis of the skin such as for example visible vascular dilatations such as telangiectasias and cuperosis, skin sagging and the formation of wrinkles, local hyper-, hypo- and incorrect pigmentations, such as e.g. B. age spots, and increased susceptibility to mechanical stress, such as Cracked skin.
  • compositions according to the invention are the treatment and prevention of age and / or UV-induced collagen degeneration and the breakdown of elastin and glycosaminoglycans; of degenerative manifestations of the skin, such as loss of elasticity and loss of the epidermal and dermal cell layers, the components of the connective tissue, the reticles and capillary vessels) and / or the skin appendages; from environmental, for example caused by ultraviolet radiation, smoking, smog, reactive oxygen species, free radicals and the like, negative changes in the skin and the appendages of the skin; deficient, sensitive or hypoactive skin conditions or deficient, sensitive or hypoactive conditions of skin appendages; the reduction in skin thickness; from sagging and / or skin fatigue; changes in transepidermal water loss and normal skin moisture; change in the energy metabolism of healthy skin; deviations from normal cell-cell communication in the skin, which can manifest itself, for example, through the formation of wrinkles; changes in normal fibroblast and keratinocyte proliferation; of changes in normal
  • Cosmetic skin care is primarily understood to mean that the natural function of the skin acts as a barrier against environmental influences (e.g. dirt, chemicals, microorganisms) and against the loss of the body's own substances (e.g. water, natural fats, electrolytes) is strengthened or restored. If this function is disturbed, there may be an increased absorption of toxic or allergenic substances or an infestation of microorganisms and, as a result, toxic or allergic skin reactions.
  • the aim of skin care is also to compensate for the loss of fat and water in the skin caused by daily washing. This is especially important when the natural regeneration ability is insufficient.
  • skin care products are intended to protect against environmental influences, especially sun and wind.
  • compositions according to the invention therefore preferably contain those components which are suitable for the purposes mentioned.
  • Such substances are known per se to the person skilled in the art.
  • one or more antisense oligoribonucleotides can be incorporated into conventional cosmetic and dermatological preparations, which can be in various forms.
  • the compositions according to the invention for cosmetic use are in the form of an emulsion, for example in the form of a cream, a lotion or a cosmetic milk.
  • these contain further components such as fats, oils, waxes and / or other fat bodies, as well as water and one or more emulsifiers, as are usually used for such a type of formulation.
  • Emulsions usually contain a lipid or oil phase, an aqueous phase and preferably also one or more emulsifiers.
  • Compositions which also contain one or more hydrocolloids are particularly preferred.
  • the compositions according to the invention preferably contain 0.001 to 35% by weight, particularly preferably 2 to 15% by weight of emulsifier, 0.001 to 45% by weight, particularly preferably 10 to 25% by weight of lipid and 10 to 95% by weight, particularly preferably 60 to 90% by weight of water.
  • the lipid phase of the cosmetic or dermatological emulsions according to the invention can advantageously be selected from the following group of substances: (1) mineral oils, mineral waxes; (2) oils such as triglycerides of capric or caprylic acid, as well as natural oils such as e.g. Castor oil; (3) fats, waxes and other natural and synthetic fat bodies, preferably esters of fatty acids with low C alcohols, e.g.
  • silicone oils such as dimethylpolysiloxanes, diethylpolysiloxanes, diphenylpolysiloxanes and mixed forms thereof.
  • the term “low C number” here means preferably 1 to 5, particularly preferably 1 to 3 and very particularly preferably 3 carbon atoms.
  • the oil phase of the emulsions of the present invention is advantageously selected from the group of the esters from saturated and / or unsaturated, branched and / or unbranched alkane carboxylic acids with a chain length of 3 to 30 carbon atoms and saturated and / or unsaturated, branched and / or unbranched alcohols a chain length of 3 to 30 carbon atoms, from the group of esters of aromatic carboxylic acids and saturated and / or unsaturated, branched and / or unbranched alcohols, of a chain length of 3 to 30 carbon atoms.
  • ester oils can then advantageously be selected from the group of isopropyl myristate, isopropyl palmitate, isopropyl stearate, isopropyl oleate, n-butyl stearate, n-hexyl laurate, n-decyl oleate, isooctyl stearate, isononyl stearate, isononylisononanoate, 2-ethylhexyluryl stylate, 2-ethylhexyl palatate 2-octyldodecyl palmitate, oleyl oleate, olerlerucate, erucyl oleate, erucylerucate as well as synthetic, semisynthetic and natural mixtures of such esters, for example Jojoba oil.
  • oil phase can advantageously be selected from the group of branched and unbranched hydrocarbons and waxes, the silicone oils, the dialkyl ethers, the
  • the saturated or unsaturated, branched or unbranched alcohols and also the fatty acid triglycerides, especially the triglycerol esters of saturated and / or unbranched saturated, branched and / or unbranched alkane carboxylic acids with a chain length of 8 to 24, in particular 12-18 carbon atoms.
  • the fatty acid triglycerides can, for example, advantageously be selected from the group of synthetic, semisynthetic and natural oils, for example olive oil, sunflower oil, soybean oil, peanut oil, rapeseed oil, almond oil, palm oil, coconut oil, palm kernel oil and the like.
  • oil phase is advantageously selected from the group 2-ethylhexyl isostearate, octyldodecanol, isotridecylisononanoate, isoeicosane, 2-ethylhexyl cocoate, C 12-15 alkyl benzoate, caprylic capric acid triglyceride, dicaprylyl ether.
  • Particularly advantageous are mixtures of C 12- i 5 alkyl benzoate and 2-ethylhexyl isostearate, mixtures of C ⁇ 2-15 alkyl benzoate and isotridecyl isononanoate and mixtures of C 12- 5 alkyl benzoate, 2-ethylhexyl isostearate and isotridecyl isononanoate.
  • hydrocarbons paraffin oil, squalane and squalene can be used advantageously for the purposes of the present invention.
  • the oil phase can advantageously also have a content of cyclic or linear silicone oils or consist entirely of such oils, although it is preferred to use an additional content of other oil phase components in addition to the silicone oil or the silicone oils.
  • Such silicones or silicone oils can be present as monomers, which are generally characterized by structural elements, as follows:
  • the silicon atoms can be substituted with the same or different alkyl radicals and / or aryl radicals, which are generally represented here by the radicals R 1 - R (to say that the number of different radicals is not necessarily limited to up to 4), m can be used here Accept values from 2 - 200,000. Unless otherwise stated, aryl is preferably phenyl herein.
  • n can be Accept values from 3/2 to 20. Broken values for n take into account that there may be odd numbers of siloxyl groups in the cycle.
  • Cyclomethicone e.g. decamethylcyclopentasiloxane
  • silicone oils can also be used advantageously for the purposes of the present invention, for example undecamethylcyclotrisiloxane, polydimethylsiloxane, poly (methylphenylsiloxane), cetyldimethicone, behenoxydimethicone.
  • silicone oils of a similar constitution to the compounds described above, the organic side chains of which are derivatized, for example polyethoxylated and / or polypropoxylated.
  • silicone oils include, for example, polysiloxane-polyalkyl-polyether copolymers such as the cetyl-dimethicone copolyol, the (cetyl-dimethicone copolyol (and) polyglyceryl-4-isostearate (and) hexyl laurate).
  • Mixtures of cyclomethicone and isotridecyl isononanoate, of cyclomethicone and 2-ethylhexyl isostearate are also particularly advantageous.
  • the aqueous phase of the preparations according to the invention optionally advantageously contains alcohols, diols or polyols of low C number, and also their ethers, preferably ethanol, isopropanol, propylene glycol, glycerol, ethylene glycol, ethylene glycol monoethyl or monobutyl ether, propylene glycol monomethyl, monoethyl or monobutyl ether, diethylene glycol monomethyl - or monoethyl ether and analog products, furthermore alcohols with a low C number, for example Ethanol, isopropanol, 1, 2-propanediol, glycerol and in particular one or more thickeners, which one or more can advantageously be selected from the group consisting of silicon dioxide and aluminum silicates.
  • alcohols, diols or polyols of low C number and also their ethers, preferably ethanol, isopropanol, propylene glycol, glycerol, ethylene
  • Preparations according to the invention in the form of emulsions preferably contain one or more emulsifiers.
  • emulsifiers can advantageously be selected from the group of nonionic, anionic, cationic or amphoteric emulsifiers.
  • nonionic emulsifiers are (1) partial fatty acid esters and fatty acid esters of polyhydric alcohols and their ethoxylated derivatives (e.g. glyceryl monostearates, sorbitan stearates, glyceryl stearyl citrates, sucrose stearates); (2) ethoxylated fatty alcohols and fatty acids; (3) ethoxylated fatty amines, fatty acid amides, fatty acid alkanolamides; (4) alkylphenol polyglycol ether (e.g. Triton X).
  • polyhydric alcohols and their ethoxylated derivatives e.g. glyceryl monostearates, sorbitan stearates, glyceryl stearyl citrates, sucrose stearates
  • ethoxylated fatty alcohols and fatty acids e.g. glyceryl monostearates, sorbitan
  • the anionic emulsifiers include soaps (e.g. sodium stearate); Fatty alcohol sulfates; Mono-, di- and trialkylphosphonic acid esters and their ethoxylates.
  • the cationic emulsifiers include quaternary ammonium compounds with a long-chain aliphatic radical, for example distearyldimonium chloride.
  • the amphoteric emulsifiers include alkylamininoalkane carboxylic acids, betaines, sulfobetaines, imidazoline derivatives.
  • O / W emulsifiers can, for example, advantageously be selected from the group of the polyethoxylated or polypropoxylated or polyethoxylated and polypropoxylated products, for example the fatty alcohol ethoxylates, the ethoxylated wool wax alcohols, the polyethylene glycol ethers of the general formula RO - (- CH 2 -CH 2 -O- ) n -R ', the fatty acid ethoxylates of the general formula R-COO - (- CH 2 -CH 2 -O-) n -H, the etherified fatty acid ethoxylates of the general formula R-COO - (- CH 2 -CH 2 -O) n -R ', the esterified fatty acid ethoxylates of the general formula R-COO - (- CH 2 -CH 2 -O-) n -C (O) -R', the polyethylene glycol glycerol
  • Polyoxyethylene sorbitol fatty acid esters the alkyl ether sulfates of the general formula RO - (- CH 2 -CH 2 -O-) n -SO 3 -H, the fatty alcohol propoxylates of the general formula RO - (- CH 2 - CH (CH 3 ) -O-) n - H, the polypropylene glycol ether of the general formula RO - (- CH 2 - CH (CH 3 ) -O-) n -R ', the propoxylated wool wax alcohols, the etherified fatty acid propoxylates, R-C00 - (- CH 2 -CH (CH 3 ) -O-) n -R ', the esterified
  • Fatty acid propoxylates of the general formula R-COO - (- CH 2 -CH (CH 3 ) -O-) n -C (O) -R ' the fatty acid propoxylates of the general formula R-COO - (- CH 2 -CH (CH 3 ) -O-) n -H, the polypropylene glycol glycerol fatty acid ester, the propoxylated sorbitan esters, the cholesterol propoxylates, the propoxylated triglycerides, the alkyl ether carboxylic acids of the general formula RO - (- CH 2 -CH (CH 3 ) 0-) n -CH 2 -COOH, the alkyl ether sulfates or the acids on which these sulfates are based, of the general formula RO - (- CH 2 -CH (CH 3 ) - O-) n -SO 3 -H, the fatty alcohol ethoxylates / propoxy
  • the variables n and m each independently represent an integer from 1 to 40, preferably 5 to 30.
  • the polyethoxylated or polypropoxylated or polyethoxylated and polypropoxylated O / W emulsifiers selected from the group are particularly advantageous of the substances with HLB values of 11-18, very particularly advantageously with HLB values of 14.5-15.5, provided the O / W emulsifiers are saturated radicals R and R '. If the O / W emulsifiers have unsaturated radicals R and / or R ', or if isoalkyl derivatives are present, the preferred HLB value of such emulsifiers can also be lower or higher.
  • fatty alcohol ethoxylates from the group of the ethoxylated stearyl alcohols, cetyl alcohols, cetylstearyl alcohols (cetearyl alcohols).
  • cetyl alcohols cetylstearyl alcohols
  • cetearyl alcohols cetearyl alcohols
  • the sodium laureth-11 carboxylate can advantageously be used as the ethoxylated alkyl ether carboxylic acid or its salt.
  • Sodium laureth 1-4 sulfate can advantageously be used as alkyl ether sulfate.
  • Polyethylene glycol (30) cholesteryl ether can advantageously be used as the ethoxylated cholesterol derivative.
  • Polyethylene glycol (25) soyasterol has also proven itself.
  • polyethylene glycol glycerol fatty acid esters from the group polyethylene glycol (20) glyceryl laurate, polyethylene glycol (21) glyceryl laurate, polyethylene glycol (22) glyceryl laurate, polyethylene glycol (23) glyceryl laurate, polyethylene glycol (6) glyceryl caprat caprinat, polyethylene glycol (20) glyceryl oleate, polyethylene glycol
  • sorbitan esters from the group consisting of polyethylene glycol (20) sorbitan monolaurate, polyethylene glycol (20) sorbitan monostearate, polyethylene glycol (20) sorbitan monoisostearate, polyethylene glycol (20) sorbitan monopalmitate, polyethylene glycol (20) sorbitan monooleate.
  • W / O emulsifiers that can be used are: fatty alcohols with 8 to 30 carbon atoms, monoglycerol esters of saturated and / or unsaturated, branched and / or unbranched alkane carboxylic acids with a chain length of 8 to 24, in particular 12 to 18 carbon atoms, and diglycerol esters saturated and / or unsaturated, branched and / or unbranched alkane carboxylic acids with a chain length of 8 to 24, in particular 12 - 18 carbon atoms, monoglycerol ethers of saturated and / or unsaturated, branched and / or unbranched alcohols with a chain length of 8 to 24, in particular 12 - 18 C atoms, diglycerol ethers of saturated and / or unsaturated, branched and / or unbranched alcohols with a chain length of 8 to 24, in particular 12-18 C atoms, propylene glycol esters of saturated and / or unsaturated, branched and
  • W / O emulsifiers are glyceryl monostearate, glyceryl monoisostearate, glyceryl monomyristate, glyceryl monooleate,
  • Sorbitan monoisooleate sucrose distearate, cetyl alcohol, stearyl alcohol,
  • Preparations according to the invention in the form of emulsions preferably also contain one or more hydrocolloids. These hydrocolloids can are advantageously chosen from the group of gums, polysaccharides, cellulose derivatives, layered silicates, polyacrylates and / or other polymers. Preparations according to the invention which are present as hydrogels contain one or more hydrocolloids. These hydrocolloids can advantageously be selected from the aforementioned group.
  • Gums include plant or tree sap that harden in the air and form resins or extracts from aquatic plants. Gum arabic, locust bean gum, tragacanth, karaya, guar gum, pectin, gellan gum, carrageenan, agar, algine, chondrus, xanthan gum can advantageously be selected from this group for the purposes of the present invention.
  • derivatized gums such as e.g. Hydroxypropyl guar (Jaguar® HP 8).
  • polysaccharides and derivatives are e.g. Hyaluronic acid, chitin and chitosan, chondroitin sulfates, starch and starch derivatives.
  • cellulose derivatives are e.g. Methyl cellulose, carboxymethyl cellulose, hydroxyethyl cellulose, hydroxypropyl methyl cellulose.
  • Layered silicates contain naturally occurring and synthetic clays such as Montmorillonite, bentonite, hectorite, laponite,
  • Magnesium aluminum silicates such as Veegum®. These can be used as such or in a modified form such as e.g. Stearylalkonium hektorite.
  • silica gels can also advantageously be used.
  • the polyacrylates include e.g. Carbopol types from Goodrich (Carbopol 980, 981, 1382, 5984, 2984, EDT 2001 or Pemulen TR2).
  • polymers e.g. Polyacrylamides (Seppigel 305), polyvinyl alcohols, PVP, PVP / VA copolymers, polyglycols.
  • the oligoribonucleotides used according to the invention are inserted into aqueous systems or surfactant preparations for cleaning the skin and hair.
  • the cosmetic preparations according to the invention preferably also contain auxiliaries such as are usually present in such Preparations are used, for example preservatives, bactericides, deodorizing substances, antiperspirants, insect repellents, vitamins, anti-foaming agents, dyes, pigments with a coloring effect, thickeners, softening substances, moisturizing and / or moisturizing substances (moisturizers), or other conventional Components of a cosmetic formulation such as polyols, polymers, foam stabilizers, electrolytes, organic solvents or silicone derivatives, antioxidants and in particular UV absorbers.
  • auxiliaries such as are usually present in such Preparations are used, for example preservatives, bactericides, deodorizing substances, antiperspirants, insect repellents, vitamins, anti-foaming agents, dyes, pigments with a coloring effect
  • Moisturizers are substances or mixtures of substances that give cosmetic or dermatological preparations the property of reducing the release of moisture from the horny layer (also known as trans-epidermal water loss (TEWL)) and / or hydrating the skin after application or distribution on the skin surface To influence the horny layer positively.
  • Advantageous moisturizers for the purposes of the present invention are, for example, glycerol, lactic acid, pyrrolidone carboxylic acid and urea.
  • polymeric moisturizers from the group of water-soluble and / or water-swellable and / or water-gellable polysaccharides.
  • glycerin is preferably used in an amount of 0.05-30% by weight, particularly preferably 1-10%.
  • the cosmetic compositions can advantageously also contain one or more of the following natural active ingredients or a derivative thereof: alpha-lipoic acid, phytoene, D-biotin, coenzyme Q10, alpha glucosylrutin, camitin, camosin, natural and / or synthetic isoflavonoids, creatine, hop or hop-malt extract, taurine.
  • active ingredients that positively influence aging skin which reduce the formation of wrinkles or existing wrinkles, such as bioquinones and especially ubiquinone Q10, soy, creatinine, creatine, liponamide, or promote the restructuring of connective tissue, such as isoflavone, in the Formulations according to the invention can be used very well.
  • formulations are particularly suitable for combination with active ingredients to support skin functions in dry skin, in particular dry skin such as serinol and osmolytes, for example taurine.
  • active ingredients for the relief or positive influencing of irritative skin conditions, be it advantageous for sensitive skin in general or for skin irritated by noxious substances (UV light, chemicals).
  • Active substances such as sericosides, various extracts of liquorice, licochalcone, in particular licochalcone A, silymarin, silyphos, dexpanthenol, inhibitors of prostaglandin metabolism (especially cyclooxygenase) and leukotriene metabolism (especially 5-lipoxygenase, but also 5-lipoxygen) are to be mentioned here Inhibitor Proteins, FLAP).
  • licochalcone in particular licochalcone A, silymarin, silyphos, dexpanthenol
  • inhibitors of prostaglandin metabolism especially cyclooxygenase
  • leukotriene metabolism especially 5-lipoxygenase, but also 5-lipoxygen
  • FLAP Inhibitor Proteins
  • compositions according to the invention contain one or more UV absorbers.
  • Preferred UV absorbers are those which absorb in the range of UVB and / or UVA rays.
  • UVB radiation which are derivatives of 3-benzylidene camphor, 4-aminobenzoic acid, cinnamic acid, salicylic acid, benzophenone and also 2-phenylbenzimidazole. Filters with an absorption maximum in the range of 308 nm are preferred, since this is where the maximum erythema effectiveness of sunlight lies.
  • UV-A filter substances for the purposes of the present invention are dibenzoylmethane derivatives, in particular 4- (tert-butyl) -4'-methoxydibenzoylmethane (CAS-Nr. 70356-09-1), marketed by Givaudan under the trade name Parsol ® 1789 and is sold by Merck under the trade name Eusolex® 9020.
  • dibenzoylmethane derivatives in particular 4- (tert-butyl) -4'-methoxydibenzoylmethane (CAS-Nr. 70356-09-1), marketed by Givaudan under the trade name Parsol ® 1789 and is sold by Merck under the trade name Eusolex® 9020.
  • the preparations according to the invention advantageously contain substances that absorb UV radiation in the UV-A and / or UV-B range, the total amount of filter substances, for. B. 0.1% by weight to 30% by weight, preferably 0.5 to 20% by weight, in particular 1.0 to 15.0% by weight, based on the total weight of the preparations, for cosmetic purposes
  • the hair or the Protect skin from the entire range of ultraviolet radiation can also serve as sunscreens for the hair or skin.
  • UV-A filter substances are phenylene-1,4-bis (2-benzimidazyl) -3,3'-5,5'-tetrasulfonic acid
  • salts especially the corresponding sodium, potassium or triethanolammonium salts, in particular the phenylene-1,4-bis (2-benzimidazyl) -3,3'- 5,5'-tetrasulfonic acid bis-sodium salt
  • 1,4-di (2-oxo-10-sulfo-3-bornylidenemethyl) benzene and its salts especially the corresponding 10-sulfato compounds, especially the corresponding sodium, potassium or triethanolammonium salt
  • benzene-1,4-di (2-oxo-3-bomylidenemethyl-10-sulfonic acid) is also called benzene-1,4-di (2-oxo-3-bomylidenemethyl-10-sulfonic acid) and is characterized by the following structure:
  • Advantageous UV filter substances in the sense of the present invention are also so-called broadband filters, ie filter substances that absorb both UV-A and UV-B radiation.
  • Advantageous broadband filters or UV-B filter substances are, for example, bis-resorcinyltriazine derivatives with the following structure:
  • R 1 , R 2 and R 3 are independently selected from the group of branched and unbranched alkyl groups having 1 to 10 carbon atoms or represent a single hydrogen atom.
  • Particularly preferred are the 2,4-bis - ⁇ [4- (2-ethylhexyloxy) -2-hydroxy] phenyl ⁇ -6- (4-methoxyphenyl) -1,3,5-triazine (INCI: Aniso triazine ), which is available under the trade name Tinosorb® S from CIBA-Chemicals GmbH, and the 4,4 ', 4 "- (1,3,5-triazine-2,4,6-triyltriimino) -tris-benzoic acid- tris (2-ethylhexyl ester), synonymous: 2,4,6-tris [anilino- (p-carbo-2'-ethyl-1'-hexyloxy)] - 1,3,5-triazine (INCI: oct
  • UV filter substances which the structural motif
  • UV filter substances for the purposes of the present invention, for example the s-triazine derivatives described in European patent application EP 570 838 A1, the chemical structure of which is given by the generic formula
  • R represents a branched or unbranched CC 18 alkyl radical, a C 5 -C 12 cycloalkyl radical, optionally substituted with one or more C r C 4 alkyl groups,
  • X represents an oxygen atom or an NH group,
  • Ri is a branched or unbranched C 1 -C 18 alkyl radical, a C 5 -C 12 cycloalkyl radical, optionally substituted with one or more CC 4 alkyl groups, or a hydrogen atom, an alkali metal atom, an ammonium group or a group of the formula means in which
  • A represents a branched or unbranched CC 18 alkyl radical, a C 5 -C 2 cycloalkyl or aryl radical, optionally substituted by one or more C 1 -C 4 alkyl groups,
  • R 3 represents a hydrogen atom or a methyl group
  • n represents a number from 1 to 10
  • a branched or unbranched C 1 -C 8 -alkyl radical a C 5 -C 12 cycloalkyl radical, optionally substituted by one or more CC 4 - represents alkyl groups when X represents the NH group
  • a branched or unbranched CC 18 alkyl radical a C 5 -C 12 cycloalkyl radical, optionally substituted with one or more C 1 -C 4 alkyl groups, or a hydrogen atom, an alkali metal atom, an ammonium group or a group of the formula
  • A represents a branched or unbranched CrC 18 alkyl radical, a C 5 -C 2 cycloalkyl or aryl radical, optionally substituted by one or more CC 4 alkyl groups,
  • R 3 represents a hydrogen atom or a methyl group
  • n represents a number from 1 to 10 when X represents an oxygen atom.
  • a particularly advantageous UV filter substance in the sense of the present invention is also an asymmetrically substituted s-triazine, the chemical structure of which is represented by the formula
  • dioctylbutylamidotnazon (INCI: dioctylbutamidotriazone) and is available under the trade name UVASORB HEB from Sigma 3V.
  • EP 775 698 also describes bis-resorcinyltriazine derivatives which are to be used advantageously and whose chemical structure is represented by the generic formula
  • R 1 , R 2 and Ai represent a wide variety of organic radicals.
  • R 1 , R 2 and Ai represent a wide variety of organic radicals.
  • R 1 , R 2 and Ai represent a wide variety of organic radicals.
  • An advantageous broadband filter for the purposes of the present invention is 2,2'-methylene-bis- (6- (2H-benzotriazol-2-yl) -4- (1,1,3,3-tetramethylbutyl) phenol) [INCI : Bisoctyltriazoi], which is characterized by the chemical structural formula
  • Tinosorb® M is identified and is available under the trade name Tinosorb® M from CIBA Chemical GmbH.
  • Another advantageous broadband filter for the purposes of the present invention is 2- (2H-benzotriazol-2-yl) -4-methyl-6- [2-methyl-3- [1,3,3,3-tetramethyl-1 - [( trimethylsilyl) oxy] disiloxanyl] propyl] phenol (CAS No .: 155633-54-8) with the INCI name Drometrizole Trisiloxane, which is characterized by the chemical structural formula
  • the UV-B filters can be oil-soluble or water-soluble.
  • Advantageous oil-soluble UV-B filter substances are e.g. E.g .: 3-benzylidene camphor derivatives, preferably 3- (4-methylbenzylidene) camphor, 3-benzylidene camphor; 4-aminobenzoic acid derivatives, preferably 4- (dimethylamino) benzoic acid (2-ethylhexyl) ester, 4-
  • Advantageous water-soluble UV-B filter substances are e.g. B. salts of 2-phenylbenzimidazole-5-sulfonic acid, such as its sodium, potassium or triethanolammonium salt, and the sulfonic acid itself; Sulfonic acid derivatives of 3-benzylidene camphor, such as. B. 4- (2-oxo-3-bornylidene methyl) benzenesulfonic acid, 2-methyl-5- (2-oxo-3-bomylidene methyl) sulfonic acid and salts thereof.
  • a further light protection filter substance to be used advantageously according to the invention is ethylhexyl-2-cyano-3,3-diphenylacrylate (octocrylene), which is available from BASF under the name Uvinul ® N 539 and is distinguished by the following structure:
  • Benzoxazole derivatives such as, in particular, 2,4-bis- [5-1 (dimethylpropyl) benzoxazol-2-yl- (4-phenyl) -imino] -6- (2-ethylhexyl) -imino-1 are also particularly advantageous according to the invention , 3,5-triazine with the CAS No. 288254-16-0, which is available, for example, under the trade name Uvasorb® K2A, and hydroxybenzophenones such as, in particular, the 2- (4'-diethylamino-2'-hydoxybenzoyl) benzoic acid hexyl ester or also Aminobenzophenone, which is available under the Uvinul A Plus.
  • compositions according to the invention can furthermore contain antioxidants to protect the cosmetic preparation itself or to protect the constituents of the cosmetic preparation from harmful oxidation processes.
  • the antioxidants are advantageously selected from the group consisting of amino acids (eg glycine, histidine, tyrosine, tryptophan) and their derivatives, imidazoles (eg urocanic acid) and their derivatives, peptides such as D, L-carnosine, D-carnosine, L- Carnosine and its derivatives (e.g. anserine), carotenoids, carotenes (e.g. ⁇ -carotene, ß-carotene, lycopene) and their derivatives, retinol, aurothioglucose, propylthiouracil and other thiols (e.g.
  • amino acids eg glycine, histidine, tyrosine, tryptophan
  • imidazoles eg urocanic acid
  • peptides such as D, L-carnosine, D-carnosine, L- Carnosine and its derivatives (e.g. an
  • buthionine sulfoximines in very low tolerable doses (e.g. pmol to ⁇ mol / kg), also (metal) chelators (e.g. ⁇ -hydroxy fatty acids, palmitic acid, phytic acid, lactoferrin), ⁇ -hydroxy acids (e.g.
  • citric acid lactic acid, malic acid
  • Humic acid bile acid, bile extracts, bilirubin, biliverdin, EDTA, EGTA and their derivatives
  • unsaturated fatty acids and their derivatives eg ⁇ -linolenic acid, linoleic acid, oleic acid
  • folic acid and their derivatives alanine diacetic acid, flavonoi de, polyphenols, catechins, vitamin C and derivatives (e.g. ascorbyl palmitate, Mg ascorbyl phosphate, ascorbyl acetate), tocopherols and derivatives (e.g.
  • vitamin E acetate vitamin E acetate
  • zinc and its derivatives e.g. ZnO, ZnSO 4
  • selenium and its derivatives e.g. seleni
  • the amount of the antioxidants (one or more compounds) in the preparations is preferably 0.001 to 30% by weight, particularly preferably 0.05 to 20% by weight, in particular 1 to 10% by weight, based on the total weight of the preparation .
  • Cosmetic and therapeutic preparations according to the invention advantageously also contain inorganic pigments based on metal oxides and / or other metal compounds which are sparingly soluble or insoluble in water, in particular the oxides of titanium (TiO 2 ), zinc (ZnO), iron (eg Fe 2 O 3 ), zirconium (ZrO 2 ), silicon (SiO 2 ), manganese (eg MnO), aluminum (Al 2 O 3 ), cerium (eg Ce 2 O 3 ), mixed oxides of the corresponding metals and mixtures of such oxides. It is particularly preferably pigments based on TiO 2 .
  • the inorganic pigments are in hydrophobic form, ie that they are are treated to be water-repellent on the surface.
  • This surface treatment can consist in that the pigments are provided with a thin hydrophobic layer by methods known per se.
  • One such method consists, for example, in that the hydrophobic surface layer according to a direction
  • n and m are stoichiometric parameters to be used at will, R and R 'are the desired organic residues.
  • hydrophobized pigments shown in analogy to DE-OS 33 14 742 are advantageous.
  • Advantageous TiO 2 pigments are available, for example, under the trade names MT 100 T from TAYCA, M 160 from Kemira and T 805 from Degussa.
  • Preparations according to the invention can also contain anionic, nonionic and / or amphoteric surfactants, especially if crystalline or microcrystalline solids, for example inorganic micropigments, are to be incorporated into the preparations according to the invention.
  • Surfactants are amphiphilic substances that can dissolve organic, non-polar substances in water.
  • the hydrophilic parts of a surfactant molecule are mostly polar functional groups, for example -COO " , -OSO 3 2" , -SO 3 " , while the hydrophobic parts generally represent non-polar hydrocarbon residues.
  • Surfactants are generally classified according to Art and charge of the hydrophilic part of the molecule, and four groups can be distinguished here, namely anionic surfactants, cationic surfactants, amphoteric surfactants and nonionic surfactants
  • Anionic surfactants generally have carboxylate, sulfate or sulfonate groups as functional groups. In an aqueous solution they form negatively charged organic ions in an acidic or neutral environment. Cationic surfactants are characterized almost exclusively by the presence of a quaternary ammonium group. In aqueous solution they form positively charged organic in an acidic or neutral environment Ions. Amphoteric surfactants contain both anionic and cationic groups and accordingly behave like anionic or cationic surfactants in aqueous solution depending on the pH. They have a positive charge in a strongly acidic environment and a negative charge in an alkaline environment. In the neutral pH range, however, they are zwitterionic, as the following example should illustrate:
  • Non-ionic surfactants do not form ions in an aqueous medium.
  • Acylamino acids such as (1) acylglutamates, for example sodium acylglutamate, di-TEA-palmitoylaspartate and sodium caprylic / capric glutamate; (2) acyl peptides, for example palmitoyl-hydrolyzed milk protein, sodium cocoyl-hydrolyzed soy protein and sodium / potassium cocoyl-hydrolyzed collagen; (3) sarcosinates, for example myristoyl sarcosin, TEA-lauroyl sarcosinate, sodium lauroyl sarcosinate and sodium cocoyl sarcosinate; (4) taurates, e.g. sodium lauroyl taurate and sodium methyl cocoyl taurate; (5) acyl lactylates such as lauroyl lactylate and caproyl lactylate; (6) alaninates;
  • acylglutamates for example sodium acylglutamate, di-TEA-
  • Carboxylic acids and derivatives such as lauric acid, aluminum stearate, magnesium alkanolate and zinc undecylenate; Ester carboxylic acids, e.g. calcium stearoyl lactylate, laureth-6 citrate and sodium PEG-4 lauramide carboxylate; ether Carboxylic acids, for example sodium laureth-13 carboxylate and sodium PEG-6 cocamide carboxylate;
  • Carboxylic acids, ester carboxylic acids and ether carboxylic acids preferably contain 1 to 50 and in particular 2 to 30 carbon atoms.
  • Phosphoric acid esters and salts such as, for example, DEA-oleth-10-phosphate and dilureth-4-phosphate;
  • Sulfonic acids and salts such as (1) acyl isethionates, for example sodium / ammonium cocoyl isethionate; (2) alkylarylsulfonates; (3) alkyl sulfonates, e.g.
  • Sulfuric acid esters such as (1) alkyl ether sulfate, for example sodium, ammonium,
  • Cationic surfactants to be used advantageously are alkylamines, alkylimidazoles, ethoxylated amines and quaternary surfactants and esterquats.
  • Quaternary surfactants contain at least one N atom that is covalently linked to 4 alkyl or aryl groups. Regardless of the pH value, this leads to a positive charge.
  • Alkyl betaine, alkyl amidopropyl betaine and alkyl amidopropyl hydroxysulfain are advantageous.
  • the cationic surfactants used according to the invention can furthermore preferably be selected from the group of the quaternary ammonium compounds, in particular benzyltrialkylammonium chlorides or bromides, such as, for example, benzyldimethylstearylammonium chloride, furthermore alkyltrialkylammonium salts, for example cetyltrimethylammonium chloride or bromide, alkyldimethylchloride bromide or alkyldimethylchloride bromide or alkyldimethylchloride bromide or alkyldimethylchloride bromide, Alkylamidethyltrimethylammonium ether sulfates, alkylpyridinium salts, for example lauryl or cetylpyrimidinium chloride, imidazoline derivatives and compounds with a cationic character such as amine oxides, for example alkyldimethylamine oxides or alkylaminoethyldimethylamine oxides
  • Amphoteric surfactants to be used advantageously are (1) acyl / dialkylethylene diamine, for example sodium acylamphoacetate, disodium acylamphodipropionate, disodium alkyl amphodiacetate, sodium acylamphohydroxypropyl sulfonate, disodium acylamphodiacetate and sodium acylamphopropionate; (2) N-alkyl amino acids, for example aminopropyl alkyl glutamide, alkyl aminopropionic acid, sodium alkyl imidodipropionate and
  • Nonionic surfactants to be used advantageously are (1) alcohols; (2) alkanolamides such as Cocamide MEA DEA / MIPA; (3) amine oxides such as cocoamidopropylamine oxide; (4) esters formed by esterification of carboxylic acids with ethylene oxide, glycerin, sorbitan or other alcohols; (5) ethers, for example ethoxylated / propoxylated alcohols, ethoxylated / propoxylated esters, ethoxylated / propoxylated glycerol esters, ethoxylated / propoxylated cholesterols, ethoxylated / propoxylated triglyceride esters, ethoxylated propoxylated lanolin, ethoxylated / propoxylated polysiloxanes, propoxylated POE ethers and alkyl decoylglyglycosyl glycosyl
  • the surface-active substance can be present in the preparations according to the invention in a concentration between 1 and 95% by weight, based on the total weight of the preparations.
  • Preparations for medical use do not differ in their composition from the cosmetic products and can also contain the substances mentioned above. They differ from them primarily in that they have to go through a special approval process.
  • phase inversion temperature emulsions (PIT emulsions) of the composition likewise given were prepared.
  • the oligoribonucleotide used was dsRNA, which was obtained by hybridizing the sequences SEQ ID NOs 37 and 38.
  • the dsRNA has two protruding dT residues at each 3 '.
  • the dsRNA is specific for the cDNA of tyrosinase and inhibits the expression of the gene of this enzyme by RNA interference. It is therefore called anti-Tyrosian dsRNA.
  • anti-Tyrosian dsRNA The other abbreviations used in the examples are to be understood accordingly.
  • a PIT emulsion was prepared using dsRNA, which was obtained by hybridizing the sequences SEQ NOs 44 and 45.
  • the quantities of anti-tyrosinase dsRNA relate to the total amount of dsRNA, which is composed in equal parts of the respective sequences mentioned (SEQ IDs).
  • creams of the composition were prepared.
  • a cream was prepared using anti-tyrosinase dsRNA, which was obtained by hybridizing the sequences SEQ NOs 43 and 45.
  • the amount of anti-tyrosinase dsRNA, anti-PAR-2 dsRNA, anti-MITF-dsRNA and anti-P-protein dsRNA relate to the total amount of dsRNA, which is equal parts from the respective sequences mentioned (SEQ IDs) to form the individual target genes.
  • Example 3 Preparation of water-in-oil emulsions
  • water-in-oil emulsions of the composition likewise given were prepared.
  • the oligoribonucleotide used was dsRNA, which was obtained by hybridizing the sense RNA and antisense RNA strand to SEQ ID NO 40.
  • SEQ ID NO 40 is a section of the tyrosinase cDNA. The two strands of the dsRNA each had two 2'-deoxythymidine residues at the 3 'position.
  • Table 3 W / O emulsions
  • Example 4 Preparation of hydrodispersions By mixing the components listed in the table, hydrodispersions of the composition likewise given were prepared.
  • the oligoribonucleotide used was dsRNA, which was obtained by hybridizing the sense RNA and antisense RNA strand to cDNA of the PAR-2.
  • SEQ ID NOs 115 and 117 is a section of the PAR-2 cDNA.
  • the two strands of the dsRNA each had two 2'-deoxythymidine residues at the 3 'position.
  • the quantities of anti-PAR-2 dsRNA relate to the total amount of dsRNA, which is composed in equal parts of the respective sequences mentioned (SEQ IDs).
  • Example 5 Preparation of a gel cream By mixing the components specified in the table, a gel cream of the composition likewise given was prepared. The pH of the gel cream was then adjusted to 6.0.
  • a gel cream was prepared using dsRNA, which was obtained by hybridizing the sequences SEQ NOs 38 and 39.
  • the amount of anti-tyrosinase dsRNA is based on the total amount dsRNA, which is composed in equal parts of the respective sequences mentioned (SEQ IDs).
  • Example 6 Preparation of a cream based on a water-in-oil emulsion. By mixing the components given in the table, a cream of the composition likewise given was prepared on the basis of a water-in-oil dispersion. Table 6: W / O cream
  • Example 7 Preparation of a cream based on a water-in-oil-in-water emulsion
  • a cream of the composition likewise specified was prepared on the basis of a water-in-oil-in-water dispersion.
  • the oligoribonucleotide used was dsRNA, which was obtained by hybridizing the sense RNA and antisense RNA strand to SEQ ID NO 38. The two strands of the dsRNA each had two 2'-deoxythymidine residues at the 3 'position.
  • FIG. 1 shows the single-stranded cDNA of tyrosinase related protein-1 (TRP-1), in which all fragments of the form AA-N 19 -TT and AA-N 19 -TC are optically highlighted.
  • TRP-1 tyrosinase related protein-1
  • FIG. 2 These fragments (targeted region) are shown in FIG. 2 together with the corresponding homologous (senseRNA) and complementary (antisenseRNA) RNA single strands.
  • Single-stranded RNAs are shown which are modified on the 3 ′ side by two deoxythymidine residues (dt).
  • the hybridization of two complementary single-stranded RNAs results in dsRNA with protruding 3 'ends, which are each formed by two 21-deoxythymidine residues.
  • the representation shown here is exemplary for SEQ ID NO 1 and SEQ ID NO 22, with the respective sense RNA being shown with 1a and 22a and the respective antisense RNA with 1b and 22b.
  • the respective dsRNA from SEQ ID NO 1 or SEQ ID NO 22 is formed from 1a and 1b or 22a and 22b.
  • the formation of the dsRNA of the other sequences is carried out analogously.
  • the gene of tyrosinase related protein-1 is one of the preferred target genes for the oligoribonucleotides according to the invention. Accordingly, oligoribonucleotides which are homologous to the double-stranded sequence derived from the sequence shown in FIG. 1, sections thereof and in particular to the double-stranded sequences derived from the sections highlighted in FIG. 1 are particularly preferred according to the invention.
  • the double-stranded sequence derived from the sequence shown in FIG. 1 is understood to mean the sequence which is formed from the sequence shown in FIG. 1 and the strand complementary thereto. The other information is to be understood accordingly.
  • Tyrosinase is one of the most preferred genes.
  • a preferred sequence region ie a sequence region with a length of 19 nucleotides, which is flanked by AA and TT or TC, is emphasized; the representation is analogous to Fig. 1.
  • Oligoribonucleotides belonging to the double-stranded sequence derived from the sequence shown in FIG. 3, sections thereof and in particular to that double-stranded sequences which are derived from the region highlighted in FIG. 3 are also preferred according to the invention.
  • the single-stranded cDNA of the tyrosinase-like protein 2 can be seen in FIG.
  • a preferred sequence range i.e. a sequence region with a length of 19 nucleotides, which is flanked by AA and TT or TC, is highlighted; the representation is analogous to Fig. 1.
  • Oligoribonucleotides which are homologous to the double-stranded sequence derived from the sequence shown in FIG. 4, sections thereof and in particular to the double-stranded sequence derived from the region highlighted in FIG. 4 are likewise preferred according to the invention.
  • the respective dsRNA is formed analogously to FIG. 2.
  • the single-stranded cDNA of the MITF can be seen in FIG. Again, a preferred sequence range, i.e. a sequence region with a length of 19 nucleotides, which is flanked by AA and TT or TC, is highlighted; the representation is analogous to Fig. 1. Oligoribonucleotides which are homologous to the double-stranded sequence derived from the sequence shown in FIG. 5, sections thereof and in particular to the double-stranded sequence derived from the region highlighted in FIG. 5 are likewise preferred according to the invention. The respective dsRNA is formed analogously to FIG. 2.
  • the single-stranded cDNA of the P protein can be seen in FIG. Again, a preferred sequence range, i.e. a sequence region with a length of 19 nucleotides, which is flanked by AA and TT or TC, is highlighted; the representation is analogous to Fig. 1. Oligoribonucleotides which are homologous to the double-stranded sequence derived from the sequence shown in FIG. 6, sections thereof and in particular to the double-stranded sequence derived from the region highlighted in FIG. 6 are likewise preferred according to the invention. The respective dsRNA is formed analogously to FIG. 2.
  • the single-stranded cDNA of the PAR-2 can be seen in FIG.
  • a preferred sequence region ie a sequence region with a length of 19 nucleotides, which is flanked by AA and TT or TC, is emphasized; the representation is analogous to Fig. 1.
  • Oligoribonucleotides leading to the double-stranded sequence derived from the sequence shown in FIG. 7, sections thereof and in particular to the double-stranded sequence coming from the region highlighted in FIG. 7 are homologous, are also preferred according to the invention.
  • the respective dsRNA is formed analogously to FIG. 2.

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Abstract

Doppelsträngiges Oligoribonukleotid oder ein physiologisch verträgliches Salz davon, das in der Lage ist, den Abbau von mRNA von einem oder mehreren an der Pigmentierung der Haut und/oder der Haare beteiligten Strukturen zu induzieren.

Description

Oligoribonukleotide zur Behandlung von unerwünschter Piqmentierunq der Haut und der Haare durch RNA-Interferenz
Die Erfindung betrifft Oligoribonukleotide, die den Abbau von mRNA von am Pigmentierungsprozess der Haut beteiligten Enzymen und Strukturen induzieren und die sich insbesondere zur Behandlung und Prophylaxe unerwünschter Pigmentierung der Haut (Hautbräunung) eignen, wie sie beispielsweise infolge von UV-Bestrahlung auftritt. In gleicherweise betrifft die vorliegende Erfindung unerwünschte Pigmentierung der Haare.
In einer bevorzugten Ausführungsform betrifft die vorliegende Erfindung kosmetische und dermatologische Zubereitungen zur Prophylaxe und Behandlung unerwünschter Pigmentierung, beispielsweise lokaler Hyper- und Fehlpigmentierungen (Leberflecken, Sommersprossen, Altersflecken, Melasma, postinflammatorische Hyperpigmentierung), aber auch rein die kosmetischen Aufhellung größerer, dem individuellen Hauttyp an sich durchaus angemessen pigmentierter Hautflächen.
Für die Pigmentierung der Haut verantwortlich sind die Melanozyten, welche in der untersten Schicht der Epidermis, dem Stratum basale, neben den Basalzellen als - je nach Hauttyp entweder vereinzelt oder aber mehr oder weniger gehäuft auftretende - pigmentbildende Zellen vorzufinden sind. Melanozyten enthalten als charakteristische Zellorganellen Melanosomen, in denen das Melanin gebildet wird. Unter anderem bei Anregung durch UV-Strahlung wird verstärkt Melanin gebildet. Dieses wird über die lebenden Schichten der Epidermis (Keratinozyten) letztlich in die Hornschicht (Corneozyten) transportiert und ruft eine mehr oder weniger ausgeprägte bräunliche bis braun-schwarze Hautfarbe hervor. Melanin wird als Endstufe eines oxidativen Prozesses gebildet, in welchem Tyrosin unter Mitwirkung der Enzyms Tyrosinase über mehrere Zwischenstufen zu den braun bis braun-schwarzen Eumelaninen (DHICA- und DHI- Melanin) bzw. unter Beteiligung von schwefelhaltigen Verbindungen zum rötlichen Phäomelanin umgewandelt wird. DHICA- und DHI-Melanin entstehen über die gemeinsamen Zwischenstufen Dopachinon und Dopachrom. Letzteres wird, teilweise unter Beteiligung weiterer Enzyme, entweder in lndol-5,6-Chinon-Carbonsäure oder in lndol-5,6-Chinon umgesetzt, woraus die beiden genannten Eumelanine entstehen. Die Entstehung von Phäomelanin läuft unter anderem über die Zwischenprodukte Dopachinon und Cysteinyldopa. Gesteuert wird die Expression der Melanin-synthetisierenden Enzyme durch einen spezifischen Transkriptionsfaktor (microphthalmia- associated transcription factor, MITF). Neben den beschriebenen enzymatischen Prozessen der Melanin- Synthese sind in den Melanosomen noch weitere Proteine für die Melanogenese von Bedeutung. Eine wichtige Rolle scheint hier dem sogenannten p-Protein zuzukommen, wobei die exakte Funktion noch unklar ist.
Neben dem zuvor beschriebenen Prozess der Melanin-Synthese in den Melanozyten, ist bei der Pigmentierung der Haut auch der Transfer der Melanosomen, deren Verbleib in der Epidermis sowie deren Abbau und der Abbau des Melanins von entscheidender Bedeutung. Es konnte gezeigt werden dass für den Transport der Melanosomen aus den Melanozyten in die Keratinozyten der PAR-2-Rezeptor bedeutsam ist (M. Seiberg et al., 2000, J. Cell. Sei., 113:3093-101). Ferner haben Größe und Form der Melanosomen Einfluss auf ihre lichtstreuenden Eigenschaften und somit das farbliche Erscheinungsbild der Haut. So findet man bei Schwarzafrikanern verstärkt große spheroidale, einzeln vorliegende Melanosomen, während man bei Kaukasiem eher kleinere, in Gruppen vorkommende Melanosomen vorfindet.
Grundsätzlich kann man bei der Pigmentierung der Haut also Strukturen unterscheiden, die • am eigentlichen Melanin-Synthseprozess in den Melanosomen (Tyrosianse, TRP- 1 , TRP-2, p-Protein) • am Transfer / an der Verteilung der Melanosomen an die benachbarten Zellen, insbesondere Keratinozyten (PAR-2) sowie • an der Expression der o.g. Strukturen (insbesondere über den Transkriptionsfaktor MITF) beteiligt sind. Probleme mit Hyperpigmentierung der Haut haben vielfältige Ursachen bzw. sind Begleiterscheinungen vieler biologischer Vorgänge, z.B. UV-Strahlung (z.B. Sommersprossen, Ephelides), genetische Disposition, Fehlpigmentierung der Haut bei der Wundheilung bzw. -vernarbung (postinflammatorische Hyperpigmentierung) oder der Hautalterung (z.B. Lentigines seniles).
Es sind Wirkstoffe und Zubereitungen bekannt, welche der Hautpigmentierung entgegenwirken. Im praktischen Gebrauch sind im wesentlichen Präparate auf der Grundlage von Hydrochinon, welche aber einesteils erst nach mehrwöchiger Anwendung ihre Wirkung zeigen, deren übertrieben lange Anwendung andererseits aus toxikologischen Gründen bedenklich ist. Von Albert Kligman et al. wurde eine sogenannte Triformula entwickelt, die eine Kombination aus 0.1% Tretinoin, 5.0% Hydroquinone, 0.1% Dexamethasone darstellt (A. Kligman, 1975, Arch. Dermatol., 111 :40-48). Allerdings ist auch diese Formulierung wegen möglicher irreversibler Veränderungen im Pigmentierungssystem der Haut sehr umstritten. Auch ist die Verwendung von Quecksilberverbindungen gebräuchlich, was ebenfalls toxikologisch höchst bedenklich ist. Ferner finden hautschälende Methoden (chemische und mechanische „Peelings") Anwendung, die jedoch häufig entzündliche Reaktionen nach sich ziehen und aufgrund danach eintretender postinflammatorischer Hyperpigmentierungen sogar zu stärkerer statt verminderter Pigmentierung führen können. In der Kosmetik ist neben der Hautgesundheit und der Hautpflege auch die Haarpflege ein äußerst intensiv erforschter Bereich.
Haar ist das aus Hörn bestehende, fadenförmige, fast universelle (an Handflächen, Fußsohlen, Streckseiten der Zehen-, Fingerendglieder fehlende) Hautanhangsgebilde; unterschieden als Langhaar (die Kopf-, Bart-, Achsel-, Schamhaare = Capilli, Barba, Hirci bzw. Pubes; beim Mann auch Brusthaar), Kurz-, Borstenhaar (Supercilia, Cilia, Vibrissae, Tragi) und Wollhaar (Lanugo, Velushaar). Der Aufbau all dieser Haare ist im groben und ganzen ähnlich: zentral das Haarmark (aus Epithelzellen mit eosinophilen Homsubstanzkörnchen = Trichohyalin-Granula), umgeben von der Haarrinde (aus verhornten Zellen; enthält Pigmente) und dem Haaroberhäutchen (Cuticula pili; kernlose Epidermisschicht) sowie von Schichten der epithelialen und bindegewebigen Haarscheide. Das Haar gliedert sich in den aus der Haut ragenden Haarschaft und die in die Unterhaut reichende, schräge Haarwurzel, deren Schichten etwa denen der Oberhaut entsprechen. Das verdickte untere Wurzelende, die Haarzwiebel, sitzt einem in sie hineinragenden, gefäßhaltigen Bindegewebszapfen, der Haarpapille, auf (beide als Haarboden). Die Zwiebel ist in der Anfangs- ( = Anagen-) phase, der sich zyklisch wiederholenden Haarbildung zwiebelartig geschichtet infolge ständiger Neubildung von Zellen durch ihre papillennahe Schicht (Matrix), später dann geschlossen, kolbig, ganz verhornt (Kolbenhaar) und wird schließlich, in der End- ( = Telogen-) phase, durch ein neues Haar - ausgehend von einer sich neu bildenden Haarpapille - in Richtung Follikelöffnung verdrängt.
Verantwortlich für die persönliche Haarfarbe ist das Melanin. Gebildet wird das Melanin in den Melanozyten, Zellen, die in der Haarzwiebel assoziiert mit den Keratinozyten des Haarmarks vorkommen. Melanozyten enthalten als charakteristische Zellorganellen Melanosomen, in denen das Melanin gebildet wird. Dieses wird über die langen Dendriten der Melanozyten in die Keratinozyten der präkortikalen Matrix transferiert und ruft die mehr oder weniger ausgeprägte blonde bis braun-schwarze Haarfarbe hervor. Die Prozesse der Melanin-Synthese und der Verteilung der Melanins in die Haare erfolgen analog zu den zuvor beschriebenen Prozessen.
Das Eumelanin ist das Schwarz-Braun-Pigment. Es entscheidend hauptsächlich über die Farbtiefe des Haares. In braunem und schwarzem Haar kommt es in deutlich erkennbaren Körnchen vor.
Das Phaeomelanin ist das Rot-Pigment. Es ist verantwortlich für hellblonde, blonde und rote Haare. Dieses Melanin ist von seiner Struktur her sehr viel feiner und kleiner. Aus den verschiedenen Anteilen der Melanintypen entstehen die verschiedenen Haarfarben: • Blondes Haar enthält wenig Eumelanin und viel Phaeomelanin. • Dunkles Haar enthält viel Eumelanin und wenig Phaeomelanin. • Rotes Haar hat ebenfalls wenig Eumelanin und sehr viel Phaeomelanin. • Alle dazwischenliegenden Haarschattierungen entstehen aus unterschiedlichen Mischungsverhältnissen der beiden Melanintypen. Ablaufen kann der Pigmentbildungsprozeß nur, wenn genügend Tyrosinase zur Verfügung steht. Dieses Enzym wird mit zunehmendem Alter seltener gebildet. Das führt dann nach und nach zu grauen Haaren. Der Grund: mit wenig Tyrosinase wird auch immer weniger Tyrosin gebildet. So nimmt auch die Produktion von Melanin ab. Das fehlende Melanin wird durch die Einlagerung von Luftbläschen ersetzt. Die Haare erscheinen grau.
Dieser Prozess ist in der Regel schleichend. Er beginnt an den Schläfen und weitet sich dann auf die gesamte Kopfbehaarung aus. Danach erwischt es den Bart und die Augenbrauen. Zuletzt sind schließlich alle Haare des Körpers grau.
Medizinisch werden graue Haare als Canities bezeichnet. Es gibt verschiedene Möglichkeiten des Ergrauens. Vorzeitiges Ergrauen, ab dem 20 Lebensjahr, nennt sich auch Canities praecox. Die Canities symptomatica, oder symptomatisches Ergrauen der Haare, kann verschiedene Ursachen haben. Dazu gehören: • Perniziöse Anämie (Vitamin-B-Mangelanämie), • schwere endokrinologische Störungen, z. B. bei Schilddrüsenerkrankungen. • akute, fieberhafte Erkrankungen, • Arzneimittelnebenwirkungen, • Kosmetika, • Metalle.
Die Färbung von Haaren, insbesondere von lebenden menschlichen Haaren, mit Hilfe natürlicher Farbstoffe, wie dies seit dem Altertum insbesondere für den Farbstoff Henna bekannt ist, und die seit Jahren zugunsten synthetischer Farbstoffe in den Hintergrund gedrängt wurden, bildet seit einigen Jahren den Gegenstand eines neuen Interesses. Nachteilig ist der durch Henna entstehende rote Farbton.
Mit zunehmendem Lebensalter nimmt die Melaninproduktion ab, die die Haarfarbe bewirkt: die Haare werden grau bzw. weiß. Es ist ein kosmetischer Wunsch bei einigen Verbrauchern, diesen Prozess umzukehren bzw. langsamer ablaufen zu lassen. Hierzu verwendet die kosmetische Industrie in einigen Ländern Bleiacetat, das giftig ist und daher in der europäischen Kosmetikverordnung verboten ist. Dieses Bleiacetat wird vorzugsweise als Lösung auf die Haare aufgebracht und verbleibt dort längere Zeit, ohne abgewaschen zu werden. Für das Färben von keratinhaltigen Fasern, z. B. Haaren, Wolle oder Pelzen, kommen im allgemeinen entweder direktziehende Farbstoffe oder Oxidationsfarbstoffe, die durch oxidative Kupplung einer oder mehrerer Entwicklerkomponenten untereinander oder mit einer oder mehreren Kupplerkomponenten entstehen, zur Anwendung. Kuppler- und Entwicklerkomponenten werden auch als Oxidationsfarbstoffvorprodukte bezeichnet.
Als Entwicklerkomponenten werden üblicherweise primäre aromatische Amine mit einer weiteren, in para- oder ortho-Position befindlichen freien oder substituierten Hydroxy- oder Aminogruppe, Diaminopyridinderivate, heterocyclische Hydrazone, 4-Aminopyrazolon- derivate sowie 2,4,5,6-Tetraaminopyrimidin und dessen Derivate eingesetzt.
Spezielle Vertreter sind beispielsweise p-Phenylendiamin, p-Toluylendiamin, 2,4,5,6- Tetraaminopyrimidin, p-Aminophenol, N,N-Bis-(2-hydroxyethyl)-p-phenylendiamin, 2-(2,5- Diaminophenyl)-ethanol, 2-(2,5-Diaminophenoxy)-ethanol, 1- PhenyI-3-carboxyamido-4- amino-pyrazolon-5, 4-Amino-3-methylphenol, 2-Aminomethyl-4-aminophenol, 2-Hydroxy- methyl-4-aminophenol, 2-Hydroxy-4,5,6-triaminopyrimidin, 2,4-Dihydroxy-5,6-diaminopyri- midin und 2,5,6-Triamino-4-hydroxypyrimidin.
Als Kupplerkomponenten werden in der Regel m-Phenylendiaminderivate, Naphthole, Resorcin und Resorcinderivate, Pyrazolone und m-Aminophenole verwendet. Als Kuppler- Substanzen eignen sich insbesondere α-Naphthol, 1,5-, 2,7- und 1,7-Dihydroxynaphthalin, 5-Amino-2-methylphenol, m-Aminophenol, Resorcin, Resorcin-monomethylether, m- Phenylendiamin, 2,4-diaminophenoxyethanol, 1- Phenyl-3-methyl-pyrazolon-5, 2,4-Di- chlor-3-aminophenol, 1 ,3-Bis-(2,4-diaminophenoxy)-propan, 2-Chlorresorcin, 4-Chlorre- sorcin, 2-Chlor-6-methyl-3-aminophenol, 2-Methylresorcin und 5-Methylresorcin. Bezüglich weiterer üblicher Farbstoffkomponenten wird ausdrücklich auf die Reihe "Dermatology", herausgeben von Ch. Culnan, H. Maibach, Verlag Marcel Dekker Inc., New York, Basel, 1986, Bd. 7, Ch. Zviak, The Science of Hair Care, Kap. 7, Seiten 248- 250 (Direktziehende Farbstoffe), und Kap. 8, Seiten 264-267 (Oxidationsfarbstoffe), sowie das "Europäische Inventar der Kosmetikrohstoffe", 1996, herausgegeben von der Europäischen Kommission, erhältlich in Diskettenform vom Bundesverband der deutschen Industrie- und Handelsunternehmen für Arzneimittel, Reformwaren und Körperpflegemittel e.V., Mannheim, Bezug genommen.
Mit Oxidationsfarbstoffen lassen sich zwar intensive Färbungen mit guten Echtheitseigenschaften erzielen, die Entwicklung der Farbe geschieht jedoch im allgemeinen unter dem Einfluss von Oxidationsmitteln wie z. B. H2O2, was in einigen Fällen Schädigungen der Faser zur Folge haben kann. Des weiteren können einige Oxidationsfarbstoffvorprodukte bzw. bestimmte Mischungen von Oxidationsfarbstoffvorprodukten bisweilen bei Personen mit empfindlicher Haut sensibilisierend wirken. Direktziehende Farbstoffe werden unter schonenderen Bedingungen appliziert, ihr Nachteil liegt jedoch darin, dass die Färbungen häufig nur über unzureichende Echtheitseigenschaften verfügen. Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist es die selbständige Melaninproduktion der Haare zu vermindern, ohne jedoch auf Färbungsmitteln und insbesondere Oxidationsmittel wie z. B. H2O2 angewiesen zu sein. Darüber hinaus dürfen die Mittel kein oder lediglich ein sehr geringes Sensibilisierungspotential aufweisen.
Fire et al., Trends Genet. 15 (1999) 358-363 haben gezeigt, daß sich die Genexpression posttranskriptional durch die Anwesenheit doppelsträngiger RNA-Fragmente (dsRNA), die homolog zur Sequenz der mRNA des untersuchten Gens ist, inhibieren läßt, und diesen Vorgang als RNA-Interferenz (RNAi) bezeichnet. Die dsRNA bewirkt auf noch ungeklärte Weise den spezifischen Abbau der homologen mRNA in der Zelle und verhindert so die Proteinproduktion. Die WO01/29058 offenbart die Identifikation von Genen, die an der RNAi beteiligt sind, sowie deren Verwendung zur Modulation des RNAi-Aktivität.
Elbashir et al., Nature 411 (2001) 494-498, beschreiben die spezifische Inhibierung der Expression von endogenen und heterologen Genen in verschiedenen Säugerzellen durch kurze, interferierende RNAs (short interfering RNAs, siRNAs). Es wurden doppelsträngige RNA-Fragmente mit einer Länge von 21 Nukleotiden eingesetzt.
Aus der WO01/68836 ist die Verminderung der Genexpression in Zellen durch dsRNA bekannt. Die dsRNA enthält eine Nukleotidsequenz, die unter den physiologischen Bedingungen der Zelle mit der Nukleotidsequenz zumindest eines Teils des zu inhibierenden Gens hybridisiert. Die dsRNA weist vorzugsweise eine Länge von 400 bis 800 Nukleotiden auf.
Die WO01/75164 offenbart die Verwendung von dsRNA mit einer Länge von 21 bis 23 Nukleotiden zur spezifischen Inaktivierung von Genfunktionen in Säugerzellen durch RNAi.
Brummelkamp et al., Science 296 (2002) 550-553, beschreiben ein Vektorsystem, das die Synthese von siRNAs in Säugerzellen auslösen und so die Genexpression eines Zielgens inhibieren soll. Die EP 1 214 945 A2 offenbart die Verwendung von dsRNA mit einer Länge von 15 bis 49 Basenpaaren zur Hemmung der Expression eines vorgegebenen Zielgens in Säugerzellen. Die dsRNA kann zur Erhöhung ihrer Stabilität modifiziert sein und soll die Behandlung von Krebs, viralen Erkrankungen und Morbus Alzheimer erlauben. Die WO02/053773 betrifft ein in vitro Verfahren zur Bestimmung des Hautstreß und der Hautalterung bei Menschen und Tieren, zur Durchführung des Verfahrens geeignete Test-Kits und Biochips sowie ein Testverfahren zum Nachweis der Wirksamkeit von kosmetischen oder pharmazeutischen Wirkstoffen gegen Hautstreß und Hautalterung.
Die WO 01/58918 A2 beschreibt die Verwendung von Oligonukleotiden gegen Tyrosinase und TRP-1 zur Aufhellung der Haut.
Oligoribonukleotide, die sich zur Prophylaxe und Behandlung von unerwünschter Pigmentierung von Haut und Haaren eignen, wurde bisher nicht beschrieben.
Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist die Bereitstellung von Zusammensetzungen, die eine wirksame Behandlung von und Prophylaxe vor unerwünschter Pigmentierung von Haut und Haaren, insbesondere gegen unregelmäßier Pigmentierung der Haut („uneven skin tone, Alterflecken, Melasma etc.) ermöglichen, ohne die Nachteile des Standes der Technik zu zeigen.
Nachfolgend werden die an der Pigmentierung von Haut und Haaren beteiligten Enzyme und Proteine auch zusammenfassend „an der Pigmentierung (von Haut und Harren) beteiligten Strukturen" genannt.
Es hat sich für den Fachmann nicht vorhersehbar herausgestellt, dass ein doppelsträngiges Oligoribonukleotid oder ein physiologisch verträgliches Salz davon, das in der Lage ist, den Abbau von mRNA von einem oder mehreren an der Pigmentierung der Haut und/oder der Haare beteiligten Strukturen zu induzieren, den Mängeln des Standes der Technik abhilft.
Bei den erfindungsgemäßen Oligoribonukleotiden handelt es sich um RNA-Moleküle (RNAs), die die Expression dieser Enzyme ganz oder teilweise unterdrücken (Genabschaltung, Genesilencing), was vermutlich auf den Abbau der mRNA von einem der oben genannten Enzyme zurückzuführen ist. Dieser Vorgang wird als RNA- Interferenz (RNAi) bezeichnet. Die Erfindung betrifft somit Oligoribonukleotide, die den Abbau der mRNA von an der Pigmentierung von Haut bzw. Haaren beteiligten Strukturen induzieren können. Die mRNA, deren Abbau bewirkt werden soll, wird im Folgenden auch Ziel-mRNA genannt. Entsprechend wir unter Zielgen das Gen und insbesondere der codierende Bereich des Gens verstanden, dessen Expression ganz oder teilweise unterdrückt wird. Wenn nicht anders angegeben bezieht sich der Begriff Zielsequenz sowohl auf das Zielgen als auch auf die Ziel-mRNA. Der Abbau der mRNA von an der Pigmentierung der Haut und der Haare beteiligten Strukturen durch RNAi verläuft sequenzspezifisch, d.h. ein Oligoribonukleotid inhibiert in der Regel nur die Expression des korrespondierenden Zielgens.
Als Zielsequenz für die erfindungsgemäßen Oligoribonukleotide sind die codierenden Bereiche (cDNA) der jeweiligen Gene bevorzugt, einschließlich der 5'- und 3'-UTR- Bereiche. Besonders bevozugt sind die Regionen der codierenden Bereiche, die 50 bis 100 Nukleotide stromabwärts des Startcodons liegen.
Die erfindungsgemäßen Oligoribonukleotide stellen vorzugsweise doppelsträngige RNA- Moleküle (dsRNAs) dar, die zur Sequenz des Zielgens, bzw. einem Abschnitt davon, homolog sind, d.h. hinsichtlich Sense- und Antisense-Strang mit dem Zielgen übereinstimmen.
Homologie ist erfindungsgemäß auch dann gegeben, wenn die dsRNA nicht vollständig mit der Zielsequenz identisch ist. Gegenstand der Erfindung sind jedoch auch längere Nukleotidfragmente, wie z.B. dsRNAs, die in Ihrer Länge den jeweiligen Ziel-mRNAs bzw. cDNAs entsprechen. Diese können z.B. durch löslichen Drosophila Embryo Extrakt in Fragmente einer Länge von 21 bis 23 Nukleotiden überführt werden (vgl. WO01/75164). Langkettige dsRNA wird zudem intrazellulär zu kurzen Stücken abgebaut. Allerdings ist die direkte Verwendung langkettiger dsRNA im allgemeinen nicht bevorzugt, da diese in Säugerzellen eine unspezifische Inhibition der Translation bewirken kann.
Durch dieses sehr selektiven Vorgehen kommt es zu keiner Überlagerung mit anderen physiologischen Prozessen in der Haut. Es gibt ganz klare Zielproteine, deren Bildung hochselektiv verhindert wird. Einzige Aufgabe dieser Proteine ist die Pigmentierung (Melanin-Synthese) und somit die Färbung in Haut und Haaren. Andere physioligische Funktionen sind nicht bekannt. Es handelt sich somit um a) ein biologisches Ziel, dass keine Überlappung mit anderen biologischen Prozessen in der Haut hat, b) um eine Technik, die hochselektiv nur Pigmentierungsprozesse ausschaltet. Dies bedingt vor allem eine extrem niedrige Nebenwirkungsrate - diese ist theoretisch gleich Null - eine ungewöhnlich hohe Effizienz und eine ausgezeichnete Wirksamkeit. Die unerwünschten Nebenwirkungen von klassischen Hautaufhellern (Hydrochinon, Quecksilbersalze etc.) treten nicht auf.
Es wurde weiter gefunden, daß es bevorzugt ist, wenn die an der Pigmentierung der Haut und/oder der Haare beteiligten Strukturen an (I) der eigentlichen Melanin-Synthese (Melanosomenstrukturen) und/oder an der (II) Expression dieser Melanosomen- Strukturen und/oder am (III) Transfer der Melanosomen (in die Keratinozyten) beteiligt sind. Dies hat den Vorteil einer besonders effektiven Wirkung. Die Pigmentierung von Haut und Haaren kann grob in die drei Prozesse l-lll unterteilt werden. Je mehr man einzelne Schritte inhibiert umso besser ist das Gesamtergebnis, da sich die Einzeleffekte multiplizieren.
Demnach ist es bevorzugt, wenn die an der eigentlichen Melanin-Synthese beteiligten Struktur das Enzym Tyrosinase, TRP1 , TRP2 oder das p-Protein ist. Dadurch wird die Melanin-Bildung sozusagen „im Keim erstickt", da die Tyrosinase das Schrittmacherenzym der Melanin-Bildung ist. TRP1 , TRP2 sowie insbesondere p-Protein haben in diesem Kontext eher unterstützende Funktion bei der Melanin-Bildung. Stand der Technik ist dagegen nur die Inhibition des bereits vorhandenen Schrittmacherenzyms Tyrosinase durch mehr oder weniger spezifische Inhibitoren (Kojisäure etc. ). Im Gegensatz hierzu ist der siRNA-Angang hochselektiv.
Die an der Melaninsynthese beteiligten Enzyme sind folgende Oxidasen / Tautomerasen Tyrosinase p14679 (EC 1.14.18.1 )
TRP-1 p17643 (EC 1.14.18.-)
TRP-2 P40126 (EC 5.3.3.12)
Bei der Tyrosinase (Tyr, Tyro) handelt es sich um das Schrittmacherenzym der Melanin- Synthese. Die Enzyme TRP-1 (tyrosinase related peptide 1 , Tyrpl , Tyr1) und TRP-2 (tyrosinase related peptide 2, Dct, Tyr2) steuern, inwieweit vermehrt das braune DHICA oder, ausschließlich unter Einfluss von Tyrosinase, das schwarze DHI-Melanin gebildet wird. Bei den angegebenen Zahlen handelt es sich um die Zugangsnummern (Accession Numbers) der Swiss-PROT Datenbank des EMBL-EBI (European Bioinformatics Institute Heidelberg). Ebenfalls bevorzugt ist es, wenn die an der Expression der an der Melaninsynthese beteiligten Struktur der Transkriptinsfaktor MITF ist. Dies bewirkt eine Inhibierung der Expression des Schrittmacher-Enzyms Tyrosinase, die ohne den Transkriptionsfaktor MITF nicht abläuft, da er u.a. die Expression der Tyrosinase steuert. Zudem handelt es sich bei MITF -genaugenommen MITF-M- um einen sehr exklusiven Transkriptionsfaktor, der nur pigmentierungsrelevante Gene in der Haut steuert. Dies hat wiederum die Vorteile, dass a) die Melaninbildung ganz früh im Keim erstickt wird, b) keine Nebenwirkungen auftreten, da es zu keiner Interferenz mit anderen Stoffwechselwegen kommt, wie sie bei der Inhibierung „allgemeiner Transkriptionsfaktoren" wie z.B. p53, NFkB oder AP1 aufträte, die teilweise auch an der Regulation der Pigmentierung beteiligt sind. Zu den weiterhin sehr bevorzugten Strukturen, die die Melanogenese beeinflussen, gehören demnach der Transkriptionsfaktor MITF sowie insbesondere die melanozytenspezifischen M-Isoformen (MITF-M) und ganz besonders das p-Protein (OCA2):
MITF (ID O75030) MITF-M1 (ID O75030-9)
MITF-M2 (ID O75030-10) und insbesondere
P-Protein (ID Q04671 ).
Angegeben sind hier die Zugangsnummern (Accession Numbers) der Swiss-PROT Datenbank des EMBL-EBI (European Bioinformatics Institute Heidelberg).
Ferner gehören zu den weiterhin bevorzugten Strukturen, die die Pigmentierungsvorgänge in der Haut beieinflussen, diejenigen Strukturen, die am Transport der Melanosomen in die Epidermis beteilgt sind. Hierzu gehören auch die Peptidasen Trypsin und trypsinähnliche Enzyme und verschiedene Serin-Proteasen (u.a. Mast cell tryptase beta III (ID Q96RZ7; MMCP-7-like tryptase (ID Q996RZ7)). Als wichtige Struktur ist hierbei insbesondere zu nennen:
PAR-2 human (ID P55085)
Angegeben ist hier die Zugangsnummern (Accession Numbers) der Swiss-PROT Datenbank des EMBL-EBI (European Bioinformatics Institute Heidelberg). Daher ist es besonders bevorzugt, wenn die am Transfer der Melanosomen beteiligte Struktur der Proteinase Activated Receptor 2 (PAR-2) ist. Beim Stand der Technik, bei dem durch Inhibition von Hautproteasen über klassische Proteaseinhibitoren PAR-2 deaktiviert wird, wird kein Melanin weitertransportiert und in der Folge kommt die Melanin-Synthese zum Erliegen. Gleichzeitig wird durch die Inhibition der Proteasen deren wichtige Funktionen in der Haut unterbunden, wodurch es zu Nebenwirkungen kommt. Dagegen kommt es durch hochselektives Ausschalten von PAR-2, das erst gar nicht gebildet wird, zu keiner Beeinflussung der Proteasen (Desquamation etc.), die ihre physiologischen Funktionen weiter ausüben. Trotzdem ist der Melanintransport unterdrückt, da kein oder weniger PAR-2 vorhanden ist. Dadurch kommt es zu einer Hautaufhellung ohne Nebenwirkung.
Die erfindungsgemäßen pharmazeutischen oder kosmetischen Zusammensetzungen enthalten vorzugsweise 0,00001 bis 10 Gew.-%, besonders bevorzugt 0,0003 bis 3 Gew.-% und ganz besonders bevorzugt 0,01 bis 1,0 des oder der erfindungsgemäßen Oligoribonukleotide, bezogen auf das Gesamtgewicht der Zusammensetzung. Bei der Verwendung von Oligorbinonukleotiden, die in Vektoren integriert sind, bezieht sich die obige Mengenangabe auf die Masse der in den Vektor integrierten Oligoribonukleotide, die Masse des Vektors selbst wird nicht berücksichtigt.
Erfindungsgemäß sind solche Zusammensetzungen bevorzugt, die ausschließlich solche Oligoribonukleotide enthalten, die die Expression eines oder mehrerer der oben genannten Gene, d.h. der Gene von an der Hautpigmentierung beteiligten Strukturen und ggf. der Proteinase PKR, und insbesondere der genannten bevorzugten Gene inhibieren. Die erfindungsgemäßen Zusammensetzungen können ein oder vorzugsweise mehrere Oligoribonukleotide enthalten. Hierbei kann es sich um Oligoribonukleotide handeln, die die Expression mehrerer unterschiedlicher an der Hautpigmentierung beteiligten Strukturen inhibieren. Es können aber auch Gemische von Oligoribonukleotiden eingesetzt werden, die verschiedene Sequenzbereiche ein und desselben Gens oder derselben mRNA einer an der Hautpigmentierung beteiligten Struktur zum Ziel haben. Bevorzugt sind Zusammensetzungen, die 1 bis 5 und insbesondere 1 bis 3 verschiedene Oligoribonukleotide enthalten. Mischungen von Oligoribonukleotiden, die neben den genannten an der Hautpigmentierung beteiligten Strukturen und ggf. der Proteinase PKR unspezifisch die Aktivität einer Vielzahl von anderen Hautproteinen inhibieren oder induzieren sind unerwünscht, da praktisch keine Kontrolle von Nebenwirkungen möglich ist. Unter Hautproteinen werden solche Proteine verstanden, die in der Haut exprimiert werden. Ganz besonders bevorzugt sind Zusammensetzungen, die ein oder mehrere Oligoribonukleotide enthalten, die die Expression der Tyrosinase bzw. der Transkriptionsfaktors MITF inhibieren. Hierbei sind insbesondere die Splicevarianten MITF-M1 und MITF-M2 zu nennen.
Besonders bevorzugt sind weiterhin Zusammensetzungen, die jeweils mindestens ein Oligoribonukleotid enthalten, das gegen PAR-2 gerichtet ist.
Ferner sind besonders bevorzugt Zusammensetzungen, die jeweils mindestens ein Oligoribonukleotid enthalten, das gegen TRP1 und / oder TRP-2 gerichtet ist. Erfindungsgemäß sind weiterhin solche Zusammensetzungen besonders bevorzugt, die Oligoribonukleotide enthalten, die in der Lage sind, die Expression von Serin- Proteinasen, wie pankreatischer und neutrophiler Elastasen und Makrophagen-Elastase, zu inhibieren, die zur Gruppe der Elastasen zählen.
Diese Serin-Proteinasen sind u.a. beteiligt an phagozytotischen Prozessen, an der Abwehr von Mikroorganismen, der Degradierung von Elastin, Kollagenen, Proteoglykanen, Fibrinogen und Fibrin und am Verdau beschädigter Gewebe, können aber auch zu einer Aktivierung des PAR-2 führen (Bolognesi, M., K. Djinovic-Carugo, et al. (1994). „Molecular bases for human leucocyte elastase inhibition." Monaldi Arch Chest DJs 49(2): 144-9). Erfindungsgemäß sind solche Oligoribonukleotide bevorzugt, die die Expression des jeweiligen Zielgens im Vergleich zu unbehandelten Zellen um mindestens 25 %, vorzugsweise um mindestens 50 %, besonders bevorzugt um mindestens 80 % und ganz besonders bevorzugt um mindestens 85 % inhibieren. Falls erforderlich, wird zur Messung der Inhibierung die Expression des Zielgens in den Zellen zunächst auf geeignete Weise induziert. Zur Bestimmung der Wirksamkeit der erfindungsgemäßen Oligoribonukleotide werden vorzugsweise tumorale Zellen verwendet. In gleicher Weise können geeignete Primärkulturen verwendet werden. Die Oligoribonukleotide werden in die Zellen eingegracht und anschließend, ggf. nach Induktion der Expression des Zielgens, die Expressionsrate des Zielgen in diesen Zellen gemessen und mit derjenigen verglichen, die in Zellen gefunden wird, die nicht mit dem jeweiligen Oligoribonukleotid transfiziert wurden. Ebenfalls bevorzugt ist es, wenn das Oligoribonukleotid vor der Zielsequenz bezogen auf eine Länge von 20 Basenpaaren in maximal 0 bis 2 Basenpaaren, besonders bevorzugt 0 bis 1 abweicht und ganz besonders bevorzugt keine Abweichungen von der Zielsequenz aufweist, d.h. es sind maximal 0 bis 2 und insbesondere maximal 0 bis 1 Basenpaare gegen andere Basenpaare ausgetauscht. Dies hat den Vorteil einer besonderen Wirksamkeit, weil diese mit dem Grad der Übereinstimmung mit der Zielsequenz ansteigt.
Ebenfalls bevorzugt ist es, wenn das eine Länge von 15 bis 49 Basenpaaren, vorzugsweise 17 bis 30, besonders bevorzugt eine Länge von 19 bis 25 Basenpaaren, ganz besonders bevorzugt von 19 bis 23 Basenpaaren, ganz außergewöhnlich bevorzugt 19 Basenpaare aufweist.
Ebenfalls bevorzugt ist es, wenn das Oligoribonukleotid homolog zu einem Abschnitt des Gens des an der Pigmentierung von Haut und/oder Haar beteiligten Struktur ist, dessen sense-Strang 5'-seitig durch zwei Adenosinreste und 3'-seitig durch zwei Thymidinreste oder durch einen Thymidin- und einen Cytosinrest flankiert wird. Diese Flankierung führt zu einer besonderen Wirksamkeit, ohne dass dafür eine Erklärung bekannt wäre. Besonders bevorzugt ist es dabei, wenn das Oligoribonukleotid am 3'-Ende zwei Desoxythymidinreste trägt.
Die erfindungsgemäßen RNA-Duplexe können glatte (blunt ends) oder überstehende (sticky ends) Enden aufweisen. Als besonders wirksam haben sich doppelsträngige Oligoribonukleotide erwiesen, die am 3'-Ende von jedem Strang einen Überhang von 1 bis 6, vorzugsweise 1 oder 2 Nukleotiden aufweisen. Bei den überstehenden Nukleotiden handelt es sich vorzugsweise um 2'-Desoxynukleotide, besonders bevorzugt 2'-Desoxy- thymidinreste. Durch die Verwendung der 2'-Desoxynukleotide lassen sich die Kosten der RNA-Synthese reduzieren und die Widerstandsfähigkeit der RNA gegenüber dem Nukleaseabbau erhöhen. Die überstehenden Nukleotide müssen nicht zwangsläufig die zur Zielsequenz homologen Nukleotide sein und bleiben daher bei den oben definierten Abweichungen von der Zielsequenz unberücksichtig. Bevorzugt sind allerdings Oligoribonukleotide mit kurzen Überständen, insbesondere von 2 Nukleotiden, bei denen die überstehenden Nukleotide des antisense-Strangs der dsRNA zur Zielsequenz komplementär sind. Als besonders wirksam haben sich Oligoribonukleotide erwiesen, die zu einem solchen Abschnitt des Zielgens und insbesondere der entsprechenden doppelsträngigen cDNA homolog sind, dessen sense-Strang 5'-seitig durch zwei Adenosinreste (A) und 3'-seitig durch zwei Thymidinreste (T) oder einen Thymidin- und einen Cytidinrest (C) begrenzt wird. Der durch AA und TT bzw. AA und TC begrenzte Abschnitt weist vorzugsweise eine Länge von 19 bis 21 , insbesondere 19 Nukleotiden auf und hat demnach die allgemeine Form AA(N19_2i)TT oder AA(N19-21)TC, wobei N für ein Nukleotid steht. Weiter bevorzugt sind Oligoribonukleotide, die zu einem Abschnitt des Zielgens bzw. der entsprechenden doppelsträngigen cDNA komplementär sind, der die allgemeine Form AA(N19) bis AA(N21) hat. Hierbei sind Oligoribonukleotide, die zu dem N 9-21-Fragment der genannte Bereiche homolog sind, besonders bevorzugt. Die besonders bevorzugten Oligoribonukleotide weisen somit eine Länge von 19 bis 21 Basenpaaren auf, wobei die diese Oligoribonukleotide bildenden Einzelstränge 3'-seitig vorzugsweise jeweils zwei zusätzliche 2'-Desoxynukleotide, insbesondere zwei 2'-Desoxythymidinreste aufweisen, so daß die dsRNA 19 bis 21 Basenpaare und pro Strang zwei überstehende 2'- Desoxynukleotide umfaßt.
Sollte das Zielgen keinen Bereich der Form AA(N19-21) enhalten, wird nach Bereichen der Form NA(N19_2i) oder einem beliebigen Fragment der Form N19-2ι gesucht. N19. ι- Fragmente, die z.B. von AA und TT begrenzt werden, sind zwar bevorzugt, grundsätzlich sind erfindungsgemäß jedoch alle dsRNA-Fragmente geeignet, die zu der Zielsequenz homolog sind. Die erfindungsgemäßen Oligoribonukleotide könnten vorteilhaft auch in Expressionsvektoren integriert werden, insbesondere solchen, die eine Expression der Oligoribonukleotide in Säugerzellen bewirken. Auf diese Weise läßt sich selbst bei einem intrazellulären Abbau der Oligoribonukleotide eine stabile Inhibierung der Expression des Zielgens erreichen, da durch die vektorgestützte Synthese ständig Oligoribonukleotide nachgeliefert werden. In einen Vektor können eine oder mehrere Kopien einer dsRNA integriert werden, aber auch jeweils eine oder mehrere Kopien von zwei oder mehr unterschiedlichen dsRNAs. Geeignete Vektorsysteme werden z.B. von Brummelkamp et al., a.a.O. beschrieben. Bevorzugt sind Säuger-Expressionsvektoren, insbesondere solche, die einen Polymerase III H1-RNA-Promotor und 5 bis 9 sogenannte Loops, die aus einer erfindungsgernäßen dsRNA und einer gleichlangen Sequenz, die zur der erfind ungsgernäßen dsRNA revers komplementär ist und als Spacer dient, gebildet werden, und ein Terrninationssignal von 5 aufeinanderfolgenden Thymidinresten enthalten. Die Vektoren enthalten somit 5 bis 9 Kopien des jeweiligen dsRNA-Moleküls. Hierbei kann es sich dsRNAs handeln, die für 1 Zielgen spezifisch sind, oder um dsRNAs, die für mehrere unterschiedliche Zielgene spezifisch sind.
Die erfindungsgemäßen Oligoribonukleotide können in Form der unmodifizierten Oligoribonukleotide vorliegen. Vorzugsweise handelt es sich jedoch um Oligoribonukleotide, die auf der Ebene der Zuckerreste, der Nukleobasen, der Phosphatgruppen und/oder des dazwischen befindlichen Skeletts chemisch modifiziert sein, um beispielsweise die Stabilität der Oligoribonukleotide in kosmetischen oder dermatologischen Zubereitungen und/oder in der Haut zu erhöhen, z.B. gegenüber einem nukleolytischem Abbau, um die Penetration der Oligoribonukleotide in die Haut und die Zelle zu verbessern, um die Wirksamkeit der Oligoribonukleotide günstig zu beeinflussen und/oder die Affinität zu den zu hybridisierenden Sequenzabschnitten zu verbessern.
Bevorzugt sind Oligoribonukleotide, bei denen eine oder mehrere Phosphatgruppen durch Phosphothioat-, Methylphosphonat- und/oder Phosphoramidatgruppen, wie z.B. N3'- P5'- Phosphoramidatgruppen, ausgetauscht sind. Besonders bevorzugt sind Oligoribonukleotide bei denen Phosphatgruppen durch Phosphothioatgruppen ausgetauscht sind. Es können eine oder mehrere der Phosphatgruppen des Oligoribonukleotids modifiziert sein. Bei einer teilweisen Modifikation werden vorzugsweise endständige Gruppen modifiziert, Oligoribonukleotide bei denen alle Phosphatgruppen modifiziert sind, sind jedoch besonders bevorzugt. Dies gilt sinngemäß auch für die im folgenden beschriebenen Modifikationen.
Bevorzugte Zuckermodifikationen umfassen den Austausch einer oder mehrerer Ribosereste des Oligoribonukleotids durch Morpholinringe (Morpholin-Oligoribonukleotide) oder durch Aminosäuren (Peptid-Oligoribonukleotide). Vorzugsweise sind sämtliche Ribosereste des Oligoribonukleotids gegen Aminosäurereste und insbesondere Morpholinreste ausgetauscht.
Besonders bevorzugt sind Morpholin-Oligoribonukleotide bei denen die Morpholinreste über
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Sulfonyl- oder vorzugsweise Phosphorylgruppen miteinander verbunden sind, wie in Formel 1 oder 2 zu sehen ist:
B steht für eine modifizierte oder nicht modifizierte Purin- oder Pyrimidinbase, vorzugsweise für Adenin, Cytosin, Guanin, oder Uracil,
X steht für O oder S, vorzugsweise O,
Y steht für O oder NJ-CH3, vorzugsweise O,
Z steht für Alkyl, O-Alkyl, S-Alkyl, NH2, NH(Alkyl), NH(O-Alkyl), N(Alkyl)2, N(Alkyl)(O-Alkyl), vorzugsweise N(Alkyl)2, wobei Alkyl für lineare oder verzweigte Alkylgruppen mit 1 bis 6 vorzugsweise 1 bis 3 und besonders bevorzugt 1 oder 2 Kohlenstoffatomen steht.
Die Formeln 1 und 2 stellen jeweils nur einen Ausschnitt aus einer Oligoribonukleotidkette dar.
Ganz besonders bevorzugt sind Morpholin-Oligoribonukleotide bei denen die Morpholinreste über Phosphorylgruppen miteinander verbunden sind, wie in Formel 2 gezeigt ist, bei denen X für O, Y für O und Z für N(CH3)2 steht.
Weiterhin können die Ribosereste durch Amino-, wie NH2, Fluor, Alkyl oder O-Alkylreste, wie OCH3, modifiziert werden, wobei 2'-modifizierte Oligoribonukleotide besonders bevorzugt sind. Beispielhafte Modifikationen sind 2'-Fluoro-, 2'-Alkyl-, 2'-0-Alkyl-, 2'-O- Methoxyethyl-Modifikationen, 5'-Palmitat-Derivate und 2'-O-Methylribonukleotide. Die Modifizierung der Nukleotide von dsRNA wirkt in der Zelle einer Aktivierung der Proteinkinase PKR entgegen, die von doppelsträngiger RNA abhängig ist. Hierdurch wird eine unspezifische Inhibition der Translation vermieden. Zu diesem Zweck eignet sich insbesondere die Substitution mindestens einer 2'-Hydroxylgruppe der Nukleotide der dsRNA durch eine 2'-Amino- oder eine 2'-Methylgruppe. Weiterhin kann mindestens ein Nukleotid in mindestens einem Strang der dsRNA durch ein sogenanntes "locked nucleotide" ersetzt sein, das einen chemisch modifizierten Zuckerring enthält. Eine bevorzugte Modifikation des Zuckerrings ist eine 2'-O, 4'-C-Methylenbrücke. dsRNA, die mehrere "locked nucleotides" enthält, ist bevorzugt.
Wenn nicht anders angegeben, steht Alkyl hierin vorzugsweise für lineare, verzweigte oder cyclische Alkylgruppen mit 1 bis 30, vorzugsweise 1 bis 20, besonders bevorzugt 1 bis 10 und ganz besonders bevorzugt 1 bis 6 Kohlenstoffatomen. Verzweigte und cyclische Reste weisen naturgemäß mindestens 3 Kohlenstoffatome auf, wobei cyclische Reste mit mindestens 5 und insbesondere mindestens 6 Kohlenstoffatomen bevorzugt sind.
Ebenfalls bevorzugt ist es, wenn die Oligoribonukleotide ein oder mehrere alpha- Nukleoside enthalten. Dadurch wird die siRNA stabiler und somit wirksamer.
Geeignete Basenmodifikationen werden z.B. in der US 6,187 578 und der WO 99/53101 beschrieben, auf die hiermit ausdrücklich Bezug genommen wird. Als vorteilhaft hat sich eine Modifikation eines oder mehrerer Pyrimidine in Position 5 mit I, Br, Cl, NH3 und N3 erwiesen. Die Synthese modifizierter und nicht modifizierter Oligoribonukleotide sowie weitere geeignete Modifikationsmöglichkeiten sind in der Literatur beschrieben. Zudem wird die Herstellung modifizierter und nichtmodifizierter Oligoribonukleotide inzwischen auch von zahlreichen Firmen als Dienstleitung angeboten, beispielsweise von den Firmen Dharmacon, 1376 Miners Dhve#101, Lafayette, CO 80026, USA, Xeragon Inc., Genset Oligos und Ambion. Die Herstellung von Oligoribonukleotiden wird darüber hinaus auch in der US 5,986,084 beschrieben.
Die Erfindung umfasst auch eine pharmazeutische oder kosmetische Zusammensetzung enthaltend ein oder mehrere der beschriebenen Oligoribonukleotide oder ein physiologisch verträgliches Salz davon und eine entsprechende Zusammensetzung zur topischen Anwendung.
Bevorzugt ist es, wenn eine solche Zusammensetzung mehrere Oligoribonukleotide enthält, die die Expression mehrerer unterschiedlicher an der Pigmentierung von Haut und/oder Haaren beteiligten Strukturen inhibieren.
Ebenfalls bevorzugt ist es, wenn eine solche Zusammensetzung mehrere Oligoribo- nukleotide enthält, die verschiedene Sequenzbereiche ein und desselben Gens einer an der eigentlichen Melanin-Synthese (Melanosomenstrukturen; Tyrosianse, TRP-1 , TRP-2, p-Protein) und/oder an der Expression dieser Melanosomen-Strukturen (MITF)und/oder am Transfer der Melanosomen (in die Keratinozyten) beteiligten Struktur (PAR-2) zum Ziel haben. Die Oligoribonukleotide und Zusammensetzungen eignen sich zur Behandlung und Prophylaxe unerwünschter Pigmentierung von Haut und Haaren, insbesondere der oben beschriebenen Symptome. Sie eignen sich zur kosmetischen und therapeutischen Behandlung von unerwünschter Pigmentierung, die durch endogene und exogene Faktoren, insbesondere UV-Strahlung hervorgerufen werden. Die erfindungsgemäßen Zusammensetzungen können Fehlpigmentierungen vorbeugen und vorhandene (Fehl-) Pigmentierungen dauerhaft und ohne das Risiko von Nebenwirkungen beheben. Zur Bestimmung der Wirksamkeit der erfindungsgemäßen Oligoribonukleotide kann beispielsweise das in der WO02/053773 beschriebene Verfahren verwendet werden.
Die erfindungsgemäßen Oligoribonukleotide eignen sich besonders zur Vorbeugung und Behandlung von unerwünschter Pigmentierung der Haut, wie sie in Form von chronisch sonnengeschädigter Haut (Altersflecken, „uneven skin tone"), aber auch bei Sommersprossen und Melasma auftritt. In einer ebenso bevorzugten Form eignen sich die erfindungsgemäßen Oligoribonukleotide zur Vorbeugung und Behandlung von sonnenexpositionsbedingter Hautbräunung sowie auch zur Aufhellung der Pigmentierung der Haare. Ebenso eignet sich die erfindungsgemäßen Oligoribonukleotide zur Aufhellung einer an sich dem Hauttyp angemessener Pigmentierung. Auf Grund ihrer prophylaktischen Wirkung eignen sich die erfindungsgemäßen Oligoribonukleotide und Zusammensetzungen auch hervorragend zur Hautpflege.
Solche Zusammensetzungen können bevorzugt in Form einer Lösung, Creme, Salbe, Lotion, Hydrodispersion, Lipodispersion, Emulsion, Pickering-Emulsion, eines Gel, eines festen Stifts oder als Aerosol vorliegen. Erfindungsgemäß sind Zusammensetzungen zur topischen Anwendung bevorzugt. Die Zusammensetzungen können in allen galenische Formen vorliegen, die gewöhnlicherweise für eine topische Applikation eingesetzt werden, z.B. als Lösung, Creme, Salbe, Lotion, Shampoo, das heißt Emulsion vom Typ Wasser-in-ÖI (W/O) oder vom Typ Öl-in-Wasser (O/W), multiple Emulsion, beispielsweise vom Typ Was- ser-in-ÖI-in-Wasser (W/O W), oder Öl-in-Wasser-in-ÖI (O W/O), Hydrodispersion oder Lipodispersion, Pickering-Emulsion, Gel, fester Stift oder Aerosol.
Die kosmetische oder medizinische Behandlung der genannten Indikationen erfolgt in der Regel durch ein- oder mehrmaligen Auftrag der erfindungsgemäßen Zusammensetzungen auf die Haut, vorzugsweise auf die betroffenen Hautstellen. Der erfindungsgemäßen Zusammensetzungen eignen sich zur kosmetischen und therapeutischen, d.h. insbesondere dermatologischen Anwendung. Die Erfindung umfasst weiterhin die Verwendung eines Oligoribonukleotids oder eines physiologisch verträglichen Salzes davon oder einer beschriebenen Zubereitung zur Hautpflege oder kosmetischen oder therapeutischen Behandlung von unerwünschter Pigmentierung von Haut bzw. Haaren sowie zur Herstellung einer kosmetischen oder therapeutischen Zusammensetzung zur topischen Applikation und zur Hautpflege oder Behandlung von unerwünschter Pigmentierung der Haut bzw. der Haare sowie zur Behandlung von Veränderungen oder Schäden hinsichtlich der Pigmentierung an Haut bzw. Haaren, die durch UV-Strahlung in der Haut hervorgerufen werden, Trockenheit, Rauhigkeit und Schlaffheit der Haut, Faltenbildung, der verminderten Rückfettung durch Talgdrüsen, und einer vergrößerten Anfälligkeit gegenüber mechanischem Streß (Rissigkeit), zur Behandlung von Photodermatosen, den Symptomen der senilen Xerosis, des Photoagings und einem Abbau des Bindegewebes der Haut, die mit unerwünschter Pigmentierung von Haut bzw Haaren verbunden sind.
Das Weglassen eines einzelnen Bestandteile beeinträchtigt die einzigartigen Eigenschaften der Gesamtzusammensetzung. Daher sind alle angegebenen Bestandteile der erfindungsgemäßen Zubereitungen zwangsläufig erforderlich, um die Erfindung auszuführen.
Zur Erhöhung der Stabilität und/oder der Penetration können die Oligoribonukleotide auch in verkapselter Form verwendet werden, beispielsweise verkapselt in Liposomen. Außerdem können sie durch die Zugabe von Cyclodextrinen stabilisiert werden.
Cyclodextrine werden auch als Cycloamylosen und Cycloglucane bezeichnet. Es handelt sich bei den Cyclodextrinen um zyklische Oligosaccharide bestehend aus α-1 ,4 verknüpften Glucosebausteinen. In der Regel sind sechs bis acht Glucosebausteine ( -, ß-, bzw. γ-Cyclodextrin) miteinander verbunden. Cyclodextrine werden bei Einwirkung von Bacillus macerans auf Stärke erhalten. Sie besitzen einen hydrophoben Innenraum und eine hydrophile Außenseite. Erfindungsgemäß sind sowohl die Cyclodextrine selbst, insbesondere α-Cyclodextrin, ß-Cyclodextrin und γ-Cyclodextrin, als auch Derivate davon geeignet.
Erfindungsgemäß werden das oder die Cyclodextrine in kosmetischen und dermatologischen Zusammensetzungen vorzugsweise in einer Konzentration von 0.0005 bis 20.0 Gew.-%, insbesondere 0,01 bis 10 Gew.- % und besonders bevorzugt in einer Konzentration von 0.1 bis 5.0 Gew.-% eingesetzt. Es ist erfindungsgemäß vorteilhaft native, polar- und/oder unpolar- substituierte Cyclodextrine einzusetzen. Hierzu gehören vorzugsweise aber nicht ausschließlich Methyl-, insbesondere random-Methyl-ß-Cyclodextrin, Ethyl- sowie Hydroxypropyl-Cyclodextrine, beispielsweise Hydroxypropyl-ß-Cyclodextrin und Hydroxypropyl-ß-Cyclodextrin. Die erfindungsgemäß besonders bevorzugten Cyclodextrinspezies sind γ-Cyclodextrin und Hydroxypropyl-ß-Cylcodextrin. Erfindungsgemäß ebenso besonders bevorzugt sind polare Cyclodextrine.
Liposomen lassen sich auf an sich bekannte Weise unter Verwendung natürlicher Phospholipide, wie z.B. Phosphatidylcholin aus Eiern, Sojabohnen etc., oder synthetischer Phospholipide herstellen (vgl. G. Betageri (Herausgeber), „Liposome Drug Delivery Systems", Lancaster Techonomic Publishing Company 1993; Gregoriadis (Herausgeber), „Liposome Technology", CRC Press). Bevorzugte Verfahren und Materialien zur Herstellung von Liposomen werden in der WO 99/24018 beschrieben.
Doppelsträngige Oligoribonukleotide können zudem modifiziert werden, um einer Dissoziation in die Einzelstränge entgegenzuwirken, beispielsweise durch eine oder mehrere kovalente, koordinative oder ionische Bindungen. Oligoribonukleotide ohne derartige Modifikationen sind jedoch bevorzugt.
Die Nukleotide in den RNA Molekülen können weiterhin auch „non-standard" Nukleotide , wie z.B. nicht natürlich vorkommende Nukleotide oder Desoxyribonukleotide umfassen. Es hat sich überraschenderweise herausgestellt, daß die Oligoribonukleotide nach dem Aufbringen der Zusammensetzungen auf die Haut die Expression der Gene inhibieren, die für die Pigmentierung der Haut verantwortlich sind, und so die Bildung und Verteilung des hauteigenen Pigments Melanin nebenwirkungsfrei verhindern und auf diese Weise eine wirksame Behandlung und Prophylaxe von unerwünschter Pigmentierung der Haut ermöglichen, ohne die Nachteile des Standes der Technik zu zeigen. Es wird angenommen, daß diese Wirkung darauf zurückzuführen ist, daß die erfindungsgemäßen Oligoribonukleotide von den Zellen der Haut aufgenommen werden und intrazellulär den Abbau der mRNAs der genannten Gene durch RNAi induzieren, wobei Einzelheiten des Mechanismus dieser Reaktionskaskade noch nicht bekannt sind. Die Oligoribonukleotide eignen sich daher besonders zur Initiierung des Abbaus von mRNA von an der Pigmentierung der Haut beteiligten Strukturen und zur Inhibierung derartiger Strukturen in der Haut und insbesondere in Hautzellen. Die erfindungsgemäßen Zusammensetzungen können zusätzlich ein oder mehrere Oligoribonukleotide enthalten, die die Expression der Proteinkinase PKR inhibiert und so einer unspezifischen Inhibition der Translation entgegenwirken.
Weiter eignen sich die erfindungsgemäßen Zusammensetzungen zur Behandlung der durch UV-Strahlen, z.B. den ultravioletten Teil der Sonnenstrahlung, hervorgerufenen Hautschäden. UVB-Strahlen (290 bis 320 nm) verursachen beispielsweise Erytheme, Sonnenbrand oder sogar mehr oder weniger starke Verbrennungen. UVA-Strahlen (320 nm bis 400 nm) können Irritationen bei lichtempfindlicher Haut hervorrufen und führen zu einer Schädigung der elastischen und kollagenen Fasern des Bindegewebes, was die Haut vorzeitig altern läßt. Zudem sind sie Ursache zahlreicher phototoxischer und photoallergischer Reaktionen. Die erfindungsgemäßen Oligoribonukleotide eignen sich auch zur Behandlung von z.B. durch UV-Strahlen hervorgerufenen Strukturschäden und Funktionsstörungen in der Epidermis und Dermis der Haut, wie beispielsweise von sichtbaren Gefäßerweiterungen, wie Teleangiektasien und Cuperosis, Hautschlaffheit und Ausbildung von Falten, lokalen Hyper-, Hypo- und Fehlpigmentierungen, wie z. B. Altersflecken, und vergrößerter Anfälligkeit gegenüber mechanischem Streß, wie z.B. Rissigkeit der Haut.
Weitere Anwendungsgebiete für die erfindungsgemäßen Zusammensetzungen sind die Behandlung und Verhinderung der Alters- und/oder UV-induzierten Kollagendegeneration sowie dem Abbau von Elastin und Glykosaminoglykanen; von degenerative Erscheinungen der Haut, wie Elastizitätsverlust sowie Schwund der epidermalen und dermalen Zellschichten, der Bestandteile des Bindegewebes, der Retezapfen und Kapillargefäße) und/oder der Hautanhanggebilde; von umweltbedingten, z.B. durch ultraviolette Strahlung, Rauchen, Smog, reaktive Sauerstoffspezies, freie Radikale und dergleichen verursachte, negativen Veränderungen der Haut und der Hautanhanggebilde; von defizitären, sensitiven oder hypoaktiven Hautzuständen oder defizitären, sensitiven oder hypoaktiven Zustände von Hautanhanggebilden; der Verringerung der Hautdicke; von Hauterschlaffung und/oder Hautermüdung; von Veränderungen des transepidermalen Wasserverlustes und des normalen Feuchtigkeitsgehaltes der Haut; von Veränderung des Energiestoffwechsels der gesunden Haut; von Abweichungen von der normalen Zell-Zell-Kommunikation in der Haut, die sich z.B. durch Faltenbildung äußern kann; von Veränderungen der normalen Fibroblasten- und Keratinozyten proliferation; von Veränderungen der normalen Fibroblasten- und Keratinozytendifferenzierung; von polymorpher Lichtdermatose, Vitiligo; von Wundheilungsstörungen; von Störungen der normalen Kollagen-, Hyaluronsäure-, Elastin- und Glykosaminoglykan-Homeostase; der gesteigerten Aktivierung proteolytischer Enzyme in der Haut, wie z. B. von Metalloproteinasen. Unter kosmetischer Hautpflege ist in erster Linie zu verstehen, daß die natürliche Funktion der Haut als Barriere gegen Umwelteinflüsse (z. B. Schmutz, Chemikalien, Mikroorganismen) und gegen den Verlust von körpereigenen Stoffen (z. B. Wasser, natürliche Fette, Elektrolyte) gestärkt oder wiederhergestellt wird. Wird diese Funktion gestört, kann es zu verstärkter Resorption toxischer oder allergener Stoffe oder zum Befall von Mikroorganismen und als Folge zu toxischen oder allergischen Hautreaktionen kommen. Ziel der Hautpflege ist es ferner, den durch tägliches Waschen verursachten Fett- und Wasserverlust der Haut auszugleichen. Dies ist gerade dann wichtig, wenn das natürliche Regenerationsvermögen nicht ausreicht. Außerdem sollen Hautpflegeprodukte vor Umwelteinflüssen, insbesondere vor Sonne und Wind, schützen. Zur kosmetischen Anwendung enthalten die erfindungsgemäßen Zusammensetzungen daher vorzugsweise solche Komponenten, die für die genannten Zwecke geeignet sind. Solche Substanzen sind dem Fachmann an sich bekannt. Beispielsweise können ein oder mehrere Antisense Oligoribonukleotide in übliche kosmetische und dermatologische Zubereitungen eingearbeitet werden, welche in verschiedenen Formen vorliegen können. Gemäß einer besonders bevorzugten Ausführungsform liegen die erfindungsgemäßen Zusammensetzungen zur kosmetischen Anwendung als Emulsion vor, z.B. in Form einer Creme, einer Lotion, einer kosmetischen Milch. Diese enthalten neben den genannten Oligoribonukleotiden weitere Komponenten wie z.B. Fette, Öle, Wachse und/oder andere Fettkörper, sowie Wasser und einen oder mehrere Emulgatoren, wie sie üblicherweise für einen solchen Typ der Formulierung verwendet werden.
Emulsionen enthalten in der Regel eine Lipid- oder Ölphase eine wäßrige Phase und vorzugsweise auch einen oder mehrere Emulgatoren. Besonders bevorzugt sind Zusammensetzungen, die darüber hinaus auch ein oder mehrere Hydrocolloide enthalten. Die erfindungsgemäßen Zusammensetzungen enthalten vorzugsweise 0,001 bis 35 Gew.-%, besonders bevorzugt 2 bis 15 Gew.-% Emulgator, 0,001 bis 45 Gew.-%, besonders bevorzugt 10 bis 25 Gew.-% Lipid und 10 bis 95 Gew.-%, besonders bevorzugt 60 bis 90 Gew.-% Wasser.
Die Lipidphase der erfindungsgemäßen kosmetischen oder dermatologischen Emulsionen kann vorteilhaft gewählt werden aus folgender Substanzgruppe: (1) Mineralöle, Mineralwachse; (2) Öle, wie Triglyceride der Caprin- oder der Caprylsäure, ferner natürliche Öle wie z.B. Rizinusöl; (3) Fette, Wachse und andere natürliche und synthetische Fettkörper, vorzugsweise Ester von Fettsäuren mit Alkoholen niedriger C- Zahl, z.B. mit Isopropanol, Propylenglykol oder Glycerin, oder Ester von Fettalkoholen mit Alkansäuren niedriger C-Zahl oder mit Fettsäuren; (4) Alkylbenzoate; (5) Silikonöle wie Dimethylpolysiloxane, Diethylpolysiloxane, Diphenylpoly-siloxane sowie Mischformen daraus.
Wenn nicht anders angegeben werden hierin unter niedriger C-Zahl vorzugsweise 1 bis 5, besonders bevorzugt 1 bis 3 und ganz besonders bevorzugt 3 Kohlenstoffatome verstanden.
Die Ölphase der Emulsionen der vorliegenden Erfindung wird vorteilhaft gewählt aus der Gruppe der Ester aus gesättigten und/oder ungesättigten, verzweigten und/oder unverzweigten Alkancarbonsäuren einer Kettenlänge von 3 bis 30 C-Atomen und gesättigten und/oder ungesättigten, verzweigten und/oder unverzweigten Alkoholen einer Ket- tenlänge von 3 bis 30 C-Atomen, aus der Gruppe der Ester aus aromatischen Carbonsäuren und gesättigten und/oder ungesättigten, verzweigten und/oder unverzweigten Alkoholen einer Kettenlänge von 3 bis 30 C-Atomen. Solche Esteröle können dann vorteilhaft gewählt werden aus der Gruppe Isopropylmyristat, Isopropylpalmitat, Isopropylstearat, Isopropyloleat, n-Butylstearat, n-Hexyllaurat, n-Decyloleat, Isooctylstearat, Isononylstearat, Isononylisononanoat, 2-Ethylhexylpalmitat, 2-Ethylhexyl- laurat, 2-Hexyldecylstearat, 2-Octyldodecylpalmitat, Oleyloleat, Oleylerucat, Erucyloleat, Erucylerucat sowie synthetische, halbsynthetische und natürliche Gemische solcher Ester, z.B. Jojobaöl.
Ferner kann die Ölphase vorteilhaft gewählt werden aus der Gruppe der verzweigten und unverzweigten Kohlenwasserstoffe und -wachse, der Silkonöle, der Dialkylether, der
Gruppe der gesättigten oder ungesättigten, verzweigten oder unverzweigten Alkohole, sowie der Fettsäuretriglyceride, namentlich der Triglycerinester gesättigter und/oder un- gesättigter, verzweigter und/oder unverzweigter Alkancarbonsäuren einer Kettenlänge von 8 bis 24, insbesondere 12 - 18 C-Atomen. Die Fettsäuretriglyceride können beispielsweise vorteilhaft gewählt werden aus der Gruppe der synthetischen, halbsynthetischen und natürlichen Öle, z.B. Olivenöl, Sonnenblumenöl, Sojaöl, Erdnußöl, Rapsöl, Mandelöl, Palmöl, Kokosöl, Palmkemöl und dergleichen mehr.
Auch beliebige Abmischungen solcher Öl- und Wachskomponenten sind vorteilhaft im Sinne der vorliegenden Erfindung einzusetzen. Es kann auch gegebenenfalls vorteilhaft sein, Wachse, beispielsweise Cetylpalmitat, als alleinige Lipidkomponente der Ölphase einzusetzen. Vorteilhaft wird die Ölphase gewählt aus der Gruppe 2-Ethylhexylisostearat, Octyldodecanol, Isotridecylisononanoat, Isoeicosan, 2-Ethylhexylcocoat, C12-15-Alkylben- zoat, Capryl-Caprinsäure-triglycerid, Dicaprylylether.
Besonders vorteilhaft sind Mischungen aus C12-i5-Alkylbenzoat und 2-Ethylhexylisostea- rat, Mischungen aus Cι2-15-Alkylbenzoat und Isotridecylisononanoat sowie Mischungen aus C12- 5-Alkylbenzoat, 2-Ethylhexylisostearat und Isotridecylisononanoat.
Von den Kohlenwasserstoffen sind Paraffinöl, Squalan und Squalen vorteilhaft im Sinne der vorliegenden Erfindung zu verwenden.
Vorteilhaft kann die Ölphase ferner einen Gehalt an cyclischen oder linearen Silikonölen aufweisen oder vollständig aus solchen Ölen bestehen, wobei allerdings bevorzugt wird, außer dem Silikonöl oder den Silikonölen einen zusätzlichen Gehalt an anderen Ölphasenkomponenten zu verwenden. Solche Silicone oder Silikonöle können als Monomere vorliegen, welche in der Regel durch Strukturelemente charakterisiert sind, wie folgt:
Figure imgf000026_0001
Als erfindungsgemäß vorteilhaft einzusetzenden linearen Silicone mit mehreren Siloxyleinheiten werden im allgemeinen durch Strukturelemente charakterisiert wie folgt:
Figure imgf000027_0001
wobei die Siliciumatome mit gleichen oder unterschiedlichen Alkylresten und/oder Arylresten substituiert werden können, welche hier verallgemeinernd durch die Reste R-i - R dargestellt sind (will sagen, daß die Anzahl der unterschiedlichen Reste nicht notwendig auf bis zu 4 beschränkt ist), m kann dabei Werte von 2 - 200.000 annehmen. Aryl steht hierin, wenn nicht anders angegeben, vorzugsweise für Phenyl.
Erfindungsgemäß vorteilhaft einzusetzende cyclische Silicone werden im allgemeinen durch Strukturelemente charakterisiert, wie folgt
Figure imgf000027_0002
wobei die Siliciumatome mit gleichen oder unterschiedlichen Alkylresten und/oder Arylresten substituiert werden können, welche hier verallgemeinernd durch die Reste R - R dargestellt sind (will sagen, daß die Anzahl der unterschiedlichen Reste nicht notwendig auf bis zu 4 beschränkt ist), n kann dabei Werte von 3/2 bis 20 annehmen. Gebrochene Werte für n berücksichtigen, daß ungeradzahlige Anzahlen von Siloxylgruppen im Cyclus vorhanden sein können.
Vorteilhaft wird Cyclomethicon (z.B. Decamethylcyclopentasiloxan) als erfindungsgemäß zu verwendendes Silikonöl eingesetzt. Aber auch andere Silikonöle sind vorteilhaft im Sinne der vorliegenden Erfindung zu verwenden, beispielsweise Undecamethylcyclotrisiloxan, Polydimethylsiloxan, Poly(methylphenylsiloxan), Cetyldimethicon, Behenoxydimethicon.
Vorteilhaft sind ferner Mischungen aus Cyclomethicon und Isotridecylisononanoat, sowie solche aus Cyclomethicon und 2-Ethylhexylisostearat. Es ist aber auch vorteilhaft, Silikonöle ähnlicher Konstitution wie der vorstehend bezeichneten Verbindungen zu wählen, deren organische Seitenketten derivatisiert, beispielsweise polyethoxyliert und/oder polypropoxyliert sind. Dazu zählen beispielsweise Polysiloxan-polyalkyl-polyether-copolymere wie das Cetyl-Dimethicon-Copolyol, das (Cetyl-Dimethicon-Copolyol (und) Polyglyceryl-4-lsostearat (und) Hexyllaurat).
Besonders vorteilhaft sind ferner Mischungen aus Cyclomethicon und Isotridecylisononanoat, aus Cyclomethicon und 2-EthylhexyIisostearat.
Die wäßrige Phase der erfindungsgemäßen Zubereitungen enthält gegebenenfalls vorteilhaft Alkohole, Diole oder Polyole niedriger C-Zahl, sowie deren Ether, vorzugsweise Ethanol, Isopropanol, Propylenglykol, Glycerin, Ethylenglykol, Ethylenglykolmonoethyl- oder -monobutylether, Propylenglykolmonomethyl, -monoethyl- oder -monobutylether, Diethylenglykolmonomethyl- oder -monoethylether und analoge Produkte, ferner Alkohole niedriger C-Zahl, z.B. Ethanol, Isopropanol, 1 ,2-Propandiol, Glycerin sowie insbesondere ein oder mehrere Verdickungsmittel, welches oder welche vorteilhaft gewählt werden kön- nen aus der Gruppe Siliciumdioxid, Aluminiumsilikate.
Erfindungsgemäße als Emulsionen vorliegenden Zubereitungen enthalten vorzugsweise einen oder mehrere Emulgatoren. Diese Emulgatoren können vorteilhaft gewählt werden aus der Gruppe der nichtionischen, anionischen, kationischen oder amphoteren Emulgatoren.
Unter den nichtionischen Emulgatoren befinden sich (1 ) Partialfettsäureester und Fettsäureester mehrwertiger Alkohole und deren ethoxylierte Derivate (z. B. Glycerylmonostearate, Sorbitanstearate, Glycerylstearylcitrate, Sucrosestearate); (2) ethoxylierte Fettalkohole und Fettsäuren; (3) ethoxilierte Fettamine, Fettsäureamide, Fettsäurealkanolamide; (4) Alkylphenolpolyglycolether (z.B. Triton X).
Unter den anionischen Emulgatoren befinden sich Seifen (z. B. Natriumstearat); Fettalkoholsulfate; Mono-, Di- und Trialkylphosphosäureester und deren Ethoxylate.
Unter den kationischen Emulgatoren befinden sich quaternäre Ammoniumverbindungen mit einem langkettigen aliphatischen Rest z.B. Distearyldimonium Chloride. Unter den amphoteren Emulgatoren befinden sich Alkylamininoalkancarbonsäuren, Betaine, Sulfobetaine, Imidazolinderivate. Weiterhin gibt es natürlich vorkommende Emulgatoren, zu denen Bienenwachs, Wollwachs, Lecithin und Sterole gehören.
O/W-Emulgatoren können beispielsweise vorteilhaft gewählt werden aus der Gruppe der polyethoxylierten bzw. polypropoxylierten bzw. polyethoxylierten und polypropoxylierten Produkte, z.B. der Fettalkoholethoxylate, der ethoxylierten Wollwachsalkohole, der Polyethylenglycolether der allgemeinen Formel R-O-(-CH2-CH2-O-)n-R', der Fettsäureethoxylate der allgemeinen Formel R-COO-(-CH2-CH2-O-)n-H, der veretherten Fettsäureethoxylate der allgemeinen Formel R-COO-(-CH2-CH2-O)n -R', der veresterten Fettsäureethoxylate der allgemeinen Formel R-COO-(-CH2-CH2-O-)n-C(O)-R', der Polyethylenglycolglycerinfettsäureester, der ethoxylierten Sorbitanester, der Cholesterinethoxylate, der ethoxylierten Triglyceride, der Alkylethercarbonsäuren der allgemeinen Formel R-O-(-CH2-CH2-O-)n-CH2-COOH, der
Polyoxyethylensorbitolfettsäureester, der Alkylethersulfate der allgemeinen Formel R-O-(- CH2-CH2-O-)n-SO3-H, der Fettalkoholpropoxylate der allgemeinen Formel R-O-(-CH2- CH(CH3)-O-)n-H, der Polypropylenglycolether der allgemeinen Formel R-O-(-CH2- CH(CH3)-O-)n-R', der propoxylierten Wollwachsalkohole, der veretherten Fettsäurepropoxylate, R-C00-(-CH2-CH(CH3)-O-)n-R', der veresterten
Fettsäurepropoxylate der allgemeinen Formel R-COO-(-CH2-CH(CH3)-O-)n-C(O)-R', der Fettsäurepropoxylate der allgemeinen Formel R-COO-(-CH2-CH(CH3)-O-)n-H, der Polypropylenglycolglycerinfettsäureester, der propoxylierten Sorbitanester, der Cholesterinpropoxylate, der propoxylierten Triglyceride, der Alkylethercarbonsäuren der allgemeinen Formel R-O-(-CH2-CH(CH3)0-)n-CH2-COOH, der Alkylethersulfate bzw. die diesen Sulfaten zugrundeliegenden Säuren der allgemeinen Formel R-O-(-CH2-CH(CH3)- O-)n-SO3-H, der Fettalkoholethoxylate/propoxylate der allgemeinen Formel R-O-Xn-Ym-H, der Polypropylenglycolether der allgemeinen Formel R-O-Xn-Ym-R', der veretherten Fettsäurepropoxylate der allgemeinen Formel R-COO-Xn-Ym-R', der Fettsäureethoxylate/propoxylate der allgemeinen Formel R-COO-Xn-Ym-H.
Die Variablen n und m stehen in allen Fällen unabhängig voneinander jeweils für eine ganze Zahl von 1 bis 40, vorzugsweise 5 bis 30. Erfindungsgemäß besonders vorteilhaft werden die eingesetzten polyethoxylierten bzw. polypropoxylierten bzw. polyethoxylierten und polypropoxylierten O/W-Emulgatoren gewählt aus der Gruppe der Substanzen mit HLB-Werten von 11 - 18, ganz besonders vorteilhaft mit HLB-Werten von 14,5 - 15,5, sofern die O/W-Emulgatoren gesättigte Reste R und R' aufweisen. Weisen die O/W-Emulgatoren ungesättigte Reste R und/oder R' auf, oder liegen Isoalkylderivate vor, so kann der bevorzugte HLB-Wert solcher Emulgatoren auch niedriger oder darüber liegen.
Es ist von Vorteil, die Fettalkoholethoxylate aus der Gruppe der ethoxylierten Stearylalkohole, Cetylalkohole, Cetylstearylalkohole (Cetearylalkohole) zu wählen. Insbesondere bevorzugt sind:
Polyethylenglycol(13)stearylether (Steareth-13), Polyethylenglycol(14)stearylether (Stea- reth-14), Polyethylenglycol(15)stearylether (Steareth-15), Polyethylenglycol(16)stea- rylether (Steareth-16), Polyethylenglycol(17)stearylether (Steareth-17), Polyethylenglycol- (18)stearylether (Steareth-18), Polyethylenglycol(19)steaιylether (Steareth-19), Polyethy- lenglycol(20)stearylether (Steareth-20),
Polyethylenglycol(12)isostearylether (lsosteareth-12), Polyethylenglycol(13)isostearyl- ether (lsosteareth-13), Polyethylenglycol(14)isostearylether (lsosteareth-14), Polyethylen- glycol(15)isostearylether (lsosteareth-15), Polyethylenglycol(16)isostearylether (Iso- steareth-16), Polyethylenglycol(17)isostearylether (lsosteareth-17), Polyethylenglycol- (18)isostearylether (lsosteareth-18), Polyethylenglycol(19)isostearylether (lsosteareth-19- ), Polyethylenglycol(20)isostearylether (lsosteareth-20),
Polyethylenglycol(13)cetylether (Ceteth-13), Polyethylenglycol(14)cetylether (Ceteth-14), Polyethylenglycol(15)cetylether (Ceteth-15), Polyethylenglycol(16)cetylether (Ceteth-16), Polyethylenglycol(17)cetylether (Ceteth-17), Polyethylenglycol(18)cetylether (Ceteth-18), Polyethylenglycol(19)cetylether (Ceteth-19), Polyethylenglycol(20)cetylether (Ceteth-20),
Polyethylenglycol(13)isocetylether (lsoceteth-13), Polyethy lenglycol(14)isocetylether (Iso- ceteth-14), PolyethylengIycol(15)isocetylether (lsoceteth-15), Polyethylenglycol(16)- isocetylether (lsoceteth-16), Polyethylenglycol(17)isocetylether (lsoceteth-17), Polyethy- lenglycol(18)isocetylether (lsoceteth-18), Polyethylenglycol(19)isocetylether (Isoceteth- 19), Polyethylenglycol(20)isocetylether (lsoceteth-20),
Polyethylenglycol(12)oleylether (Oleth-12), Polyethylenglycol(13)oleylether (Oleth-13), Polyethylenglycol(14)oleylether (Oleth-14), Polyethylenglycol(15)oleylether (Oleth-15),
Polyethylenglycol(12)laurylether (Laureth-12), Polyethylenglycol(12)isolaurylether (Isolau- reth-12). Polyethylenglycol(13)cetylstearylether (Ceteareth-13), Polyethylenglycol(14)cetylstearyl- ether (Ceteareth-14), Polyethylenglycol(15)cetylstearylether (Ceteareth-15), Polyethylen- glycol(16)cetylstearylether (Ceteareth-16), Polyethylenglycol(17)cetylstearylether (Ceteareth-17), Polyethylenglycol(18)cetylstearylether (Ceteareth-1 8), Polyethylenglycol- (19)cetylstearylether (Ceteareth-19), Polyethylenglycol(20)cetylstearylether (Ceteareth- 20),
Es ist ferner von Vorteil, die Fettsäureethoxylate aus folgender Gruppe zu wählen:
Polyethylenglycol(20)stearat, Polyethylenglycol(21 )stearat, Polyethylenglycol(22)stearat, Polyethylenglycol(23)stearat, Polyethylenglycol(24)stearat, Polyethylenglycol(25)stearat, Polyethylenglycol(12)isostearat, Polyethylenglycol(13)isostearat, Polyethylenglycol(14)- isostearat, Polyethylenglycol(15)isostearat, Polyethylenglycol(16)isostearat, Polyethylen- glycol(17)isostearat, Polyethylenglycol(18)isostearat, Polyethylenglycol(19)isostearat, Polyethylenglycol(20)isostearat, Polyethylenglycol(21 )isostearat, Polyethylenglycol- (22)isostearat, Polyethylenglycol(23)isostearat, Polyethylenglycol(24)isostearat, Polyethy- lenglycol(25)isostearat,
Polyethylenglycol(12)oleat, Polyethylenglycol(13)oleat, PoIyethylenglycol(14)oleat, Poly- ethylenglycol(15)oleat, PolyethylenglycoI(16)oleat, Polyethylenglycol(17)oleat, Polyethy- lenglycol(18)oleat, Polyethylenglycol(19)oleat, Polyethylenglycol(20)oleat,
Als ethoxylierte Alkylethercarbonsäure bzw. deren Salz kann vorteilhaft das Natriumlau- reth-11 -carboxylat verwendet werden.
Als Alkylethersulfat kann Natrium Laureth 1-4 sulfat vorteilhaft verwendet werden.
Als ethoxyliertes Cholesterinderivat kann vorteilhaft Polyethylenglycol- (30)Cholesterylether verwendet werden. Auch Polyethylenglycol(25)Sojasterol hat sich bewährt.
Als ethoxylierte Triglyceride können vorteilhaft die Polyethylenglycol(60) Evening Primrose Glycerides verwendet werden (Evening Primrose = Nachtkerze)
Weiterhin ist von Vorteil, die Polyethylenglycolglycerinfettsäureester aus der Gruppe Po- lyethylenglycol(20)glyceryllaurat, Polyethylenglycol(21 )glyceryllaurat, Polyethylenglycol- (22)glyceryllaurat, Polyethylenglycol(23)glyceryllaurat, Polyethylenglycol(6)glyceryl- caprat caprinat, Polyethylenglycol(20)glyceryloleat, Polyethylenglycol-
(20)glycerylisostearat, Polyethylenglycol(18)glyceryloleat/cocoat zu wählen.
Es ist ebenfalls günstig, die Sorbitanester aus der Gruppe Polyethylenglycol- (20)sorbitanmonolaurat, Polyethylenglycol(20)sorbitanmonostearat, Polyethylenglycol- (20)sorbitanmonoisostearat, Polyethylenglycol(20)sorbitanmonopalmitat, Polyethylen- glycol(20)sorbitanmonooleat zu wählen.
Als vorteilhafte W/O-Emulgatoren können eingesetzt werden: Fettalkohole mit 8 bis 30 Kohlenstoffatomen, Monoglycerinester gesättigter und/oder ungesättigter, verzweigter und/oder unverzweigter Alkancarbonsäuren einer Kettenlänge von 8 bis 24, insbesonde- re 12 - 18 C-Atomen, Diglycerinester gesättigter und/oder ungesättigter, verzweigter und/oder unverzweigter Alkancarbonsäuren einer Kettenlänge von 8 bis 24, insbesondere 12 - 18 C-Atomen, Monoglycerinether gesättigter und/oder ungesättigter, verzweigter und/oder unverzweigter Alkohole einer Kettenlänge von 8 bis 24, insbesondere 12 - 18 C-Atomen, Diglycerinether gesättigter und/oder ungesättigter, verzweigter und/oder unverzweigter Alkohole einer Kettenlänge von 8 bis 24, insbesondere 12 - 18 C- Atomen, Propylenglycolester gesättigter und/oder ungesättigter, verzweigter und/oder unverzweigter Alkancarbonsäuren einer Kettenlänge von 8 bis 24, insbesondere 12 - 18 C-Atomen sowie Sorbitanester gesättigter und/oder ungesättigter, verzweigter und/oder unverzweigter Alkancarbonsäuren einer Kettenlänge von 8 bis 24, insbesondere 12 - 18 C-Atomen.
Insbesondere vorteilhafte W/O-Emulgatoren sind Glycerylmonostearat, Glycerylmonoisostearat, Glycerylmonomyristat, Glycerylmonooleat,
Diglycerylmonostearat, Diglycerylmonoisostearat, Propylenglycolmonostearat,
Propylenglycolmonoisostearat, Propylenglycolmonocaprylat, Propylenglycolmonolaurat, Sorbitanmonoisostearat, Sorbitanmonolaurat, Sorbitanmonocaprylat,
Sorbitanmonoisooleat, Saccharosedistearat, Cetylalkohol, Stearylalkohol,
Arachidylalkohol, Behenylalkohol, Isobehenylalkohol, Selachylalkohol, Chimylalkohol, Po- lyethylenglycol(2)stearylether (Steareth-2), Glycerylmonolaurat, Glycerylmonocaprinat, Glycerylmonocaprylat. Erfindungsgemäße als Emulsionen vorliegenden Zubereitungen enthalten darüber hinaus vorzugsweise auch ein oder mehrere Hydrocolloide. Diese Hydrocolloide können vorteilhaft gewählt werden aus der Gruppe der Gummen, Polysaccharide, Cellulosederivate, Schichtsilikate, Polyacrylate und/oder anderen Polymeren. Erfindungsgemäße als Hydrogele vorliegenden Zubereitungen enthalten ein oder mehrere Hydrocolloide. Diese Hydrocolloide können vorteilhaft aus der vorgenannten Gruppe gewählt werden.
Zu den Gummen zählt man Pflanzen- oder Baumsäfte, die an der Luft erhärten und Harze bilden oder Extrakte aus Wasserpflanzen. Aus dieser Gruppe können vorteilhaft im Sinne der vorliegenden Erfindung gewählt werden beispielsweise Gummi Arabicum, Johannisbrotmehl, Tragacanth, Karaya, Guar Gummi, Pektin, Gellan Gummi, Carrageen, Agar, Algine, Chondrus, Xanthan Gummi.
Weiterhin vorteilhaft ist die Verwendung von derivatisierten Gummen wie z.B. Hydroxypropyl Guar (Jaguar® HP 8).
Unter den Polysacchariden und -derivaten befinden sich z.B. Hyaluronsäure, Chitin und Chitosan, Chondroitinsulfate, Stärke und Stärkederivate. Unter den Cellulosederivaten befinden sich z.B. Methylcellulose, Carboxymethylcellulose, Hydroxyethylcellulose, Hydroxypropylmethylcellulose.
Unter den Schichtsilikaten befinden sich natürlich vorkommende und synthetische Tonerden wie z.B. Montmorillonit, Bentonit, Hektorit, Laponit,
Magnesiumaluminiumsilikate wie Veegum®. Diese können als solche oder in modifizierter Form verwendet werden wie z.B. Stearylalkonium Hektorite.
Weiterhin können vorteilhaft auch Kieselsäuregele verwendet werden.
Unter den Polyacrylaten befinden sich z.B. Carbopol Typen der Firma Goodrich (Carbopol 980, 981, 1382, 5984, 2984, EDT 2001 oder Pemulen TR2).
Unter den Polymeren befinden sich z.B. Polyacrylamide (Seppigel 305), Polyvinylalkohole, PVP, PVP / VA Copolymere, Polyglycole.
Gemäß einer weiteren bevorzugten Ausführungsform werden die erfindungsgemäß verwendeten Oligoribonukleotide in wäßrige Systeme bzw. Tensidzubereitungen zur Reinigung der Haut und der Haare eingefügt. Die erfindungsgemäßen kosmetischen Zubereitungen enthalten neben den genannten Komponenten vorzugsweise auch Hilfsstoffe, wie sie üblicherweise in solchen Zubereitungen verwendet werden, z.B. Konservierungsmittel, Bakterizide, desodorierend wirkende Substanzen, Antitranspirantien, Insektenrepellentien, Vitamine, Mittel zum Verhindern des Schäumens, Farbstoffe, Pigmente mit färbender Wirkung, Verdickungsmittel, weichmachende Substanzen, anfeuchtende und/oder feuchthaltende Substanzen (Moisturizer), oder andere übliche Bestandteile einer kosmetischen Formulierung wie Polyole, Polymere, Schaumstabilisatoren, Elektrolyte, organische Lösungsmittel oder Silikonderivate, Antioxidantien und insbesondere UV-Absorber.
Als Moisturizer werden Stoffe oder Stoffgemische bezeichnet, welche kosmetischen oder dermatologischen Zubereitungen die Eigenschaft verleihen, nach dem Auftragen bzw. Verteilen auf der Hautoberfläche die Feuchtigkeitsabgabe der Hornschicht (auch trans- epidermal water loss (TEWL) genannt) zu reduzieren und/oder die Hydratation der Hornschicht positiv zu beeinflussen. Vorteilhafte Moisturizer im Sinne der vorliegenden Erfindung sind beispielsweise Glycerin, Milchsäure, Pyrrolidoncarbonsäure und Harnstoff. Ferner ist es insbesondere von Vorteil, polymere Moisturizer aus der Gruppe der wasser- löslichen und/oder in Wasser quellbaren und/oder mit Hilfe von Wasser gelierbaren Poly- saccharide zu verwenden. Insbesondere vorteilhaft sind beispielsweise Hyaluronsäure und/oder ein fucosereiches Polysaccharid, welches in den Chemical Abstracts unter der Registraturnummer 178463-23-5 abgelegt und z. B. unter der Bezeichnung Fuco- gelDlOOO von der Gesellschaft SOLABIA S.A. erhältlich ist. Glycerin wird bei der Verwendung als besonders bevorzugter Moisturizer vorzugsweise in einer Menge von 0,05-30 Gew.%, besonders bevorzugt sind 1-10%, eingesetzt.
Die kosmetischen Zusammensetzungen können vorteilhaft auch einen oder mehrere der folgenden natürlichen Wirkstoffe oder ein Derivat davon enthalten: alpha-Liponsäure, Phytoen, D-Biotin, Coenzym Q10, alpha Glucosylrutin, Camitin, Camosin, natürliche und/oder synthetische Isoflavonoide, Kreatin, Hopfen- bzw. Hopfen-Malz-Extrakt, Taurin. So zeigte sich, dass Wirkstoffe zur positiven Beeinflussung der Altershaut, die die Entstehung von Falten oder auch bestehenden Falten vermindern, wie Biochinone und insbesondere Ubichinon Q10, Soja, Creatinin, Creatin, Liponamid, oder die Restrukturierung des Bindegewebes fördern, wie Isoflavon, in den erfindungsgemäßen Formulierungen sehr gut verwendet werden können. Auch zeigte sich, dass sich die Formulierungen in besonderer Weise zur Kombination mit Wirkstoffen zur Unterstützung der Hautfunktionen bei trockener Haut, insbesondere alterstrockener Haut, wie Serinol und Osmolyte, z.B. Taurin, eignen. In ähnlicher Weise erwies sich die Einarbeitung von Wirkstoffen zur Linderung bzw. positiven Beeinflussung von irritativen Hautzuständen, sei es bei empfindlicher Haut im allgemeinen oder bei durch Noxen gereizter Haut (UV-Licht, Chemikalien), als vorteilhaft. Hier sind Wirkstoffe zu nennen wie Sericoside, verschiedene Extrakte des Süssholzes, Licochalcone, insbesondere das Licochalcone A, Silymarin, Silyphos, Dexpanthenol, Inhibitoren des Prostaglandinstoffwechsels (insbesondere der Cyclooxygenase) und des Leukotrienstoffwechsels (insbesondere der 5-Lipoxygenase, aber auch des 5-Lipoxygenase Inhibitor Proteins, FLAP).Auch erwies sich die Einarbeitung von Modulatoren der Pigmentierung als vorteilhaft. Hier sind Wirkstoffe zu nennen, die die Pigmentierung der Haut vermindern und so zu einer kosmetisch gewünschten Aufhellung der Haut führen und/oder das Auftreten von Altersflecken reduzieren und/oder bestehende Altersflecken aufhellen (Tyrosinsulfat, Dioic acid (8- Hexadecen-1 ,16-dicarbonsäure), Liponsäure und Liponamid, verschiedene Extrakte des Süßholzes, Kojisäure, Hydrochinon, Arbutin, Fruchtsäuren, insbesondere Alpha-Hydroxy- Säuren (AHAs), Bearberry (Uvae ursi), Ursolsäure, Ascorbinsäure, Grüntee-Extrakte). Gemäß einer besonders bevorzugten Ausführungsform enthalten die erfindungsgemäßen Zusammensetzungen einen oder mehrere UV-Absorber. Bevorzugte UV-Absorber sind solche, die im Bereich der UVB- und/oder UVA-Strahlen absorbieren.
Zum Schutz gegen UVB-Strahlung sind zahlreiche Verbindungen bekannt, bei denen es sich um Derivate des 3-Benzylidencamphers, der 4-Aminobenzoesäure, der Zimtsäure, der Salicylsäure, des Benzophenons sowie auch des 2-Phenylbenzimidazols handelt. Bevorzugt sind Filter mit einem Absorptionsmaximum im Bereich von 308 nm, da hier das Maximum der Erythemwirksamkeit des Sonnenlichtes liegt.
Vorteilhafte UV-A-Filtersubstanzen im Sinne der vorliegenden Erfindung sind Dibenzoylmethanderivate, insbesondere das 4-(tert.-Butyl)-4'-methoxydibenzoylmethan (CAS-Nr. 70356-09-1), welches von Givaudan unter der Marke Parsol® 1789 und von Merck unter der Handelsbezeichnung Eusolex® 9020 verkauft wird.
Die Zubereitungen gemäß der Erfindung enthalten vorteilhaft Substanzen, die UV- Strahlung im UV-A- und/oder UV-B-Bereich absorbieren, wobei die Gesamtmenge der Filtersubstanzen z. B. 0,1 Gew.-% bis 30 Gew.-%, vorzugsweise 0,5 bis 20 Gew.-%, insbesondere 1 ,0 bis 15,0 Gew.-% beträgt, bezogen auf das Gesamtgewicht der Zubereitungen, um kosmetische Zubereitungen zur Verfügung zu stellen, die das Haar bzw. die Haut vor dem gesamten Bereich der ultravioletten Strahlung schützen. Sie können auch als Sonnenschutzmittel fürs Haar oder die Haut dienen.
Weitere vorteilhafte UV-A-Filtersubstanzen sind die Phenylen-1 ,4-bis-(2-benzimidazyl)- 3,3'-5,5'-tetrasulfonsäure
Figure imgf000036_0001
und ihre Salze, besonders die entsprechenden Natrium-, Kalium- oder Triethanolammonium-Salze, insbesondere das Phenylen-1 ,4-bis-(2-benzimidazyl)-3,3'- 5,5'-tetrasulfonsäure-bis-natriumsalz
Figure imgf000036_0002
mit der INCI-Bezeichnung Bisimidazylate, welches beispielsweise unter der Handelsbezeichnung Neo Heliopan AP bei Haarmann & Reimer erhältlich ist.
Ferner vorteilhaft sind das 1 ,4-di(2-oxo-10-Sulfo-3-bornylidenmethyl)-Benzol und dessen Salze (besonders die entsprechenden 10-Sulfato-verbindungen, insbesondere das entsprechende Natrium-, Kalium- oder Triethanolammonium-Salz), das auch als Benzol-1 ,4- di(2-oxo-3-bomylidenmethyl-10-sulfonsäure) bezeichnet wird und sich durch die folgende Struktur auszeichnet:
Figure imgf000036_0003
Vorteilhafte UV-Filtersubstanzen im Sinne der vorliegenden Erfindung sind ferner sogenannte Breitbandfilter, d.h. Filtersubstanzen, die sowohl UV-A- als auch UV-B-Strahlung absorbieren.
Vorteilhafte Breitbandfilter oder UV-B-Filtersubstanzen sind beispielsweise Bis- Resorcinyltriazinderivate mit der folgenden Struktur:
Figure imgf000037_0001
wobei R1, R2 und R3 unabhängig voneinander gewählt werden aus der Gruppe der verzweigten und unverzweigten Alkylgruppen mit 1 bis 10 Kohlenstoffatomen bzw. ein einzelnes Wasserstoffatom darstellen. Insbesondere bevorzugt sind das 2,4-Bis-{[4-(2-Ethyl- hexyloxy)-2-hydroxy]-phenyl}-6-(4-methoxyphenyl)-1 ,3,5-triazin (INCI: Aniso Triazin), welches unter der Handelsbezeichnung Tinosorb® S bei der CIBA-Chemikalien GmbH erhältlich ist, und das 4,4',4"-(1 ,3,5-Triazin-2,4,6-triyltriimino)-tris-benzoesäure-tris(2- ethylhexylester), synonym: 2,4,6-Tris-[anilino-(p-carbo-2'-ethyl-1'-hexyloxy)]-1 ,3,5-triazin (INCI: Octyl Triazone), welches von der BASF Aktiengesellschaft unter der Warenbe- Zeichnung UVINUL® T 150 vertrieben wird.
Auch andere UV-Filtersubstanzen, welche das Strukturmotiv
Figure imgf000038_0001
aufweisen, sind vorteilhafte UV-Filtersubstanzen im Sinne der vorliegenden Erfindung, beispielsweise die in der Europäischen Offenlegungsschrift EP 570 838 A1 beschriebenen s-Triazinderivate, deren chemische Struktur durch die generische Formel
Figure imgf000038_0002
wiedergegeben wird, wobei
R einen verzweigten oder unverzweigten C C18-Alkylrest, einen C5-C12-Cycloalkyl- rest, gegebenenfalls substituiert mit einer oder mehreren CrC4- Alkylgruppen, darstellt, X ein Sauerstoffatom oder eine NH-Gruppe darstellt,
Ri einen verzweigten oder unverzweigten Cι-C18-Alkylrest, einen C5-C12-Cycloalkyl- rest, gegebenenfalls substituiert mit einer oder mehreren C C4- Alkylgruppen, oder ein Wasserstoffatom, ein Alkalimetallatom, eine Ammoniumgruppe oder eine Gruppe der Formel
Figure imgf000039_0001
bedeutet, in welcher
A einen verzweigten oder unverzweigten C C18-Alkylrest, einen C5-Cι2-Cyclo- alkyl- oder Arylrest darstellt, gegebenenfalls substituiert mit einer oder mehreren C-|-C4- Alkylgruppen,
R3 ein Wasserstoffatom oder eine Methylgruppe darstellt, n eine Zahl von 1 bis 10 darstellt, einen verzweigten oder unverzweigten C-ι-Cι8-Alkylrest, einen C5-C12-Cycloalkyl- rest, gegebenenfalls substituiert mit einer oder mehreren C C4- Alkylgruppen, darstellt, wenn X die NH-Gruppe darstellt, und einen verzweigten oder unverzweigten C C18-Alkylrest, einen C5-C12-Cycloalkyl- rest, gegebenenfalls substituiert mit einer oder mehreren C-ι-C4- Alkylgruppen, oder ein Wasserstoffatom, ein Alkalimetallatom, eine Ammoniumgruppe oder eine Gruppe der Formel
Figure imgf000039_0002
bedeutet, in welcher
A einen verzweigten oder unverzweigten CrC18-Alkylrest, einen C5-Cι2-Cyclo- alkyl- oder Arylrest darstellt, gegebenenfalls substituiert mit einer oder mehreren C C4- Alkylgruppen,
R3 ein Wasserstoffatom oder eine Methylgruppe darstellt, n eine Zahl von 1 bis 10 darstellt, wenn X ein Sauerstoffatom darstellt. Eine besonders vorteilhafte UV-Filtersubstanz im Sinne der vorliegenden Erfindung ist ferner ein unsymmetrisch substituiertes s-Triazin, dessen chemische Struktur durch die Formel
Figure imgf000040_0001
wiedergegeben wird, welches im Folgenden auch als Dioctylbutylamidotnazon (INCI: Dioctylbutamidotriazone) bezeichnet wird und unter der Handelsbezeichnung UVASORB HEB bei Sigma 3V erhältlich ist.
Auch in der Europäischen Offenlegungsschrift EP 775 698 werden vorteilhaft einzusetzende Bis-Resorcinyltriazinderivate beschrieben, deren chemische Struktur durch die generische Formel
Figure imgf000040_0002
wiedergegeben wird, wobei R1 , R2 und A-i verschiedenste organische Reste repräsentieren. Vorteilhaft im Sinne der vorliegenden Erfindung sind ferner das 2,4-Bis-{[4-(3-sulfonato)- 2-hydroxy-propyloxy)-2-hydroxy]-phenyl}-6-(4-methoxyphenyl)-1 ,3,5-triazin Natriumsalz, das 2,4-Bis-{[4-(3-(2-Propyloxy)-2-hydroxy-propyloxy)-2-hydroxy]-phenyl}-6-(4-methoxy- phenyl)-1 ,3,5-triazin, das 2,4-Bis-{[4-(2-ethyl-hexyloxy)-2-hydroxy]-phenyl}-6-[4-(2-meth- oxyethyl-carboxyl)-phenylamino]-1 ,3,5-triazin, das 2,4-Bis-{[4-(3-(2-propyloxy)-2-hydroxy- propyloxy)-2-hydroxy]-phenyl}-6-[4-(2-ethyl-carboxyl)-phenylamino]-1 ,3,5-triazin, das 2,4- Bis-{[4-(2-ethyl-hexyloxy)-2-hydroxy]-phenyl}-6-(1 -methyl-pyrrol-2-yl)-1 ,3,5-triazin, das 2,4-Bis-{[4-tris(trimethylsiloxy-silylpropyloxy)-2-hydroxy]-phenyl}-6-(4-methoxyphenyl)- 1 ,3,5-triazin, das 2,4-Bis-{[4-(2"-methylpropenyloxy)-2-hydroxy]-phenyl}-6-(4-methoxyphe- nyl)-1 ,3,5-triazin und das 2,4-Bis-{[4-(1',1 ',1',3,,5,,5',5'-Heptamethylsiloxy-2"-methyI-pro- py!oxy)-2-hydroxy]-phenyl-6-(4-methoxyphenyl)-1 ,3,5-triazin.
Ein vorteilhafter Breitbandfilter im Sinne der vorliegenden Erfindung ist das 2,2'-Methylen- bis-(6-(2H-benzotriazol-2-yl)-4-(1 ,1 ,3,3-tetramethylbutyl)-phenol) [INCI: Bisoctyltriazoi], welches durch die chemische Strukturformel
Figure imgf000041_0001
gekennzeichnet ist und unter der Handelsbezeichnung Tinosorb® M bei der CIBA- Chemikalien GmbH erhältlich ist.
Vorteilhafter Breitbandfilter im Sinne der vorliegenden Erfindung ist ferner das 2-(2H- benzotriazol-2-yl)-4-methyl-6-[2-methyl-3-[1,3,3,3-tetramethyl-1-[(trimethylsilyl)oxy]di- siloxanyl]propyl]-phenol (CAS-Nr.: 155633-54-8) mit der INCI-Bezeichnung Drometrizole Trisiloxane, welches durch die chemische Strukturformel
Figure imgf000042_0001
gekennzeichnet ist.
Die UV-B-Filter können öllöslich oder wasserlöslich sein. Vorteilhafte öllösliche UV-B- Filtersubstanzen sind z. B.: 3-Benzylidencampher-Derivate, vorzugsweise 3-(4-Methyl- benzyliden)campher, 3-Benzylidencampher; 4-Aminobenzoesäure-Derivate, vorzugsweise 4-(Dimethylamino)-benzoesäure(2-ethyIhexyl)ester, 4-
(Dimethylamino)benzoesäureamylester; 2,4,6-Trianilino-(p-carbo-2'-ethyl-1'-hexyloxy)- 1 ,3,5-triazin; Ester der Benzalmalonsäure, vorzugsweise 4-Methoxy- benzalmalonsäuredi(2-ethylhexyl)ester; Ester der Zimtsäure, vorzugsweise 4- Methoxyzimtsäure(2-ethylhexyl)ester, 4-Methoxyzimtsäureisopentylester; Derivate des Benzophenons, vorzugsweise 2-Hydroxy-4-methoxybenzophenon, 2-Hydroxy-4-methoxy- 4'-methylbenzophenon, 2,2'-Dihydroxy-4-methoxybenzophenon sowie an Polymere gebundene UV-Filter.
Vorteilhafte wasserlösliche UV-B-Filtersubstanzen sind z. B. Salze der 2- Phenylbenzimidazol-5-suIfonsäure, wie ihr Natrium-, Kalium- oder ihr Triethanolam- monium-Salz, sowie die Sulfonsäure selbst; Sulfonsäure-Derivate des 3- Benzylidencamphers, wie z. B. 4-(2-Oxo-3-bornylidenmethyl)benzolsulfonsäure, 2- Methyl-5-(2-oxo-3-bomylidenmethyl)sulfonsäure und deren Salze.
Eine weiterere erfindungsgemäß vorteilhaft zu verwendende Lichtschutzfiltersubstanz ist das Ethylhexyl-2-cyano-3,3-diphenylacrylat (Octocrylen), welches von BASF unter der Bezeichnung Uvinul® N 539 erhältlich ist und sich durch folgende Struktur auszeichnet:
Figure imgf000043_0001
Es kann auch von erheblichem Vorteil sein, polymergebundene oder polymere UV-Filtersubstanzen in Zubereitungen gemäß der vorliegenden Erfindung zu verwenden, insbe- sondere solche, wie sie in der WO-A-92/20690 beschrieben werden.
Erfindungsgemäß besonders vorteilhaft sind ferner Benzoxazol-Derivate wie insbesondere das 2,4-bis-[5-1 (dimethylpropyl)benzoxazol-2-yl-(4-phenyl)-imino]-6-(2- ethylhexyl)-imino-1,3,5-triazin mit der CAS Nr. 288254-16-0, welches beispielweise unter der Handelsbezeichnung Uvasorb® K2A erhältlich ist, sowie Hydroxybenzophenone wie insbesondere der 2-(4'-Diethylamino-2'-hydoxybenzoyl)-benzoesäurehexylester oder auch Aminobenzophenon, welcher unter dem Uvinul A Plus erhältlich ist.
Ferner kann es gegebenenfalls von Vorteil sein, erfindungsgemäß weitere UV-A- und/oder UV-B-Filter in kosmetische oder dermatologische Zubereitungen einzuarbeiten, beispielsweise bestimmte Salicylsäurederivate wie 4-lsopropylbenzylsalicylat, 2-Ethyl- hexylsalicylat (= Octylsalicylat), Homomenthylsalicylat.
Die Liste der genannten UV-Filter, die im Sinne der vorliegenden Erfindung eingesetzt werden können, soll selbstverständlich nicht limitierend sein.
Weiterhin können die erfindungsgemäßen Zusammensetzungen Antioxidantien zum Schutz der kosmetischen Zubereitung selbst bzw. zum Schutz der Bestandteile der kos- metischen Zubereitungen vor schädlichen Oxidationsprozessen enthalten.
Vorteilhaft werden die Antioxidantien gewählt aus der Gruppe bestehend aus Aminosäuren (z.B. Glycin, Histidin, Tyrosin, Tryptophan) und deren Derivate, Imidazole (z.B. Uroca- ninsäure) und deren Derivate, Peptide wie D,L-Carnosin, D-Carnosin, L-Carnosin und deren Derivate (z.B. Anserin), Carotinoide, Carotine (z.B. α-Carotin, ß-Carotin, Lycopin) und deren Derivate, Retinol, Aurothioglucose, Propylthiouracil und andere Thiole (z.B. Thioredoxin, Glutathion, Cystein, Cystin, Cystamin und deren Glycosyl-, N-Acetyl-, Methyl-, Ethyl-, Propyl-, Amyl-, Butyl- und Lauryl-, Palmitoyl-, Oleyl-, γ-Linoleyl-, Cho- lesteryl- und Glycerylester) sowie deren Salze, Dilaurylthiodipropionat, Distearylthio- dipropionat, Thiodipropionsäure und deren Derivate (Ester, Ether, Peptide, Lipide, Nukleotide, Nukleoside und Salze) sowie Sulfoximinverbindungen (z.B. Buthionin- sulfoximine, Homocysteinsulfoximin, Buthioninsulfone, Penta-, Hexa-, Heptathio- ninsulfoximin) in sehr geringen verträglichen Dosierungen (z.B. pmol bis μmol/kg), ferner (Metall)-Chelatoren (z.B. α-Hydroxyfettsäuren, Palmitinsäure, Phytinsäure, Lactoferrin), α -Hydroxysäuren (z.B. Citronensäure, Milchsäure, Apfelsäure), Huminsäure, Gallensäure, Gallenextrakte, Bilirubin, Biliverdin, EDTA, EGTA und deren Derivate, ungesättigte Fettsäuren und deren Derivate (z.B. γ-Linolensäure, Linolsäure, Ölsäure), Folsäure und deren Derivate, Alanindiessigsäure, Flavonoide, Polyphenole, Catechine, Vitamin C und Derivate (z.B. Ascorbylpalmitat, Mg-Ascorbylphosphat, Ascorbylacetat), Tocopherole und Derivate (z.B. Vitamin-E-acetat), sowie Koniferylbenzoat des Benzoeharzes, Rutinsäure und deren Derivate, Ferulasäure und deren Derivate, Butylhydroxytoluol, Butylhydroxy- anisol, Nordihydroguajakharzsäure, Nordihydroguajaretsäure, Trihydroxybutyrophenon, Harnsäure und deren Derivate, Mannose und deren Derivate, Zink und dessen Derivate (z.B. ZnO, ZnSO4) Selen und dessen Derivate (z.B. Selenmethionin), Stilbene und deren Derivate (z.B. Stilbenoxid, Trans-Stilbenoxid) und die erfindungsgemäß geeigneten Deri- vate (Salze, Ester, Ether, Zucker, Nukleotide, Nukleoside, Peptide und Lipide) dieser genannten Wirkstoffe.
Die Menge der Antioxidantien (eine oder mehrere Verbindungen) in den Zubereitungen beträgt vorzugsweise 0,001 bis 30 Gew.-%, besonders bevorzugt 0,05 - 20 Gew.-%, insbesondere 1 - 10 Gew.-%, bezogen auf das Gesamtgewicht der Zubereitung. Erfindungsgemäße kosmetische und Therapeutische Zubereitungen enthalten vorteilhaft außerdem anorganische Pigmente auf Basis von Metalloxiden und/oder anderen in Wasser schwerlöslichen oder unlöslichen Metallverbindungen, insbesondere der Oxide des Titans (TiO2), Zinks (ZnO), Eisens (z.B. Fe2O3), Zirkoniums (ZrO2), Siliciums (SiO2), Mangans (z.B. MnO), Aluminiums (AI2O3), Cers (z.B. Ce2O3), Mischoxiden der entsprechenden Metalle sowie Abmischungen aus solchen Oxiden. Besonders bevorzugt handelt es sich um Pigmente auf der Basis von Ti02.
Es ist besonders vorteilhaft im Sinne der vorliegenden Erfindung, wenngleich nicht zwingend, wenn die anorganischen Pigmente in hydrophober Form vorliegen, d.h., daß sie oberflächlich wasserabweisend behandelt sind. Diese Oberflächenbehandlung kann darin bestehen, daß die Pigmente nach an sich bekannten Verfahren mit einer dünnen hydrophoben Schicht versehen werden.
Eines solcher Verfahren besteht beispielsweise darin, daß die hydrophobe Oberflächen- schicht nach einer Rektion gemäß
n TiO2 + m (RO)3 Si-R' -> n Ti02 (oberfl.)
erzeugt wird, n und m sind dabei nach Belieben einzusetzende stöchiometrische Para- meter, R und R' die gewünschten organischen Reste. Beispielsweise in Analogie zu DE- OS 33 14 742 dargestellte hydrophobisierte Pigmente sind von Vorteil.
Vorteilhafte TiO2-Pigmente sind beispielsweise unter den Handelsbezeichnungen MT 100 T von der Firma TAYCA, ferner M 160 von der Firma Kemira sowie T 805 von der Firma Degussa erhältlich. Erfindungsgemäße Zubereitungen können, zumal wenn kristalline oder mikrokristalline Festkörper, beispielsweise anorganische Mikropigmente in die erfindungsgemäßen Zubereitungen eingearbeitet werden sollen, auch anionische, nichtionische und/oder amphotere Tenside enthalten. Tenside sind amphiphile Stoffe, die organische, unpolare Substanzen in Wasser lösen können. Bei den hydrophilen Anteilen eines Tensidmoleküls handelt es sich meist um polare funk- tionelle Gruppen, beispielweise -COO", -OSO3 2", -SO3 ", während die hydrophoben Teile in der Regel unpolare Kohlenwasserstoffreste darstellen. Tenside werden im allgemeinen nach Art und Ladung des hydrophilen Molekülteils klassifiziert. Hierbei können vier Gruppen unterschieden werden, nämlich anionische Tenside, kationische Tenside, amphotere Tenside und nichtionische Tenside.
Anionische Tenside weisen als funktionelle Gruppen in der Regel Carboxylat-, Sulfatoder Sulfonatgruppen auf. In wäßriger Lösung bilden sie im sauren oder neutralen Milieu negativ geladene organische Ionen. Kationische Tenside sind beinahe ausschließlich durch das Vorhandensein einer quaternären Ammoniumgruppe gekennzeichnet. In wäßriger Lösung bilden sie im sauren oder neutralen Milieu positiv geladene organische Ionen. Amphotere Tenside enthalten sowohl anionische als auch kationische Gruppen und verhalten sich demnach in wäßriger Lösung je nach pH-Wert wie anionische oder kationische Tenside. Im stark sauren Milieu besitzen sie eine positive und im alkalischen Milieu eine negative Ladung. Im neutralen pH-Bereich hingegen sind sie zwitterionisch, wie das folgende Beispiel verdeutlichen soll:
pH=2 RNH2 +CH2CH2COOH X" (X" = beliebiges Anion, z.B. CI")
pH=7 RNH2 +CH2CH2COO"
pH=12 RNHCH2CH2COO- B+ (B+ = beliebiges Kation, z.B. Na+)
Typisch für nicht-ionische Tenside sind Polyether-Ketten. Nicht-ionische Tenside bilden in wäßrigem Medium keine Ionen.
Vorteilhaft zu verwendende anionische Tenside sind:
Acylaminosäuren (und deren Salze), wie (1 ) Acylglutamate, beispielsweise Natriumacylglutamat, Di-TEA-palmitoylaspartat und Natrium Caprylic/ Capric Glutamat; (2) Acylpeptide, beispielsweise Palmitoyl-hydrolysiertes Milchprotein, Natrium Cocoyl- hydrolysiertes Soja Protein und Natrium-/ Kalium Cocoyl-hydrolysiertes Kollagen; (3) Sarcosinate, beispielsweise Myristoyl Sarcosin, TEA-Iauroyl Sarcosinat, Natriumlauroyl- sarcosinat und Natriumcocoylsarkosinat; (4) Taurate, beispielsweise Natriumlauroyltaurat und Natriummethylcocoyltaurat; (5) Acyllactylate, wie Lauroyllactylat und Caproyllactylat; (6) Alaninate;
Carbonsäuren und Derivate, wie beispielsweise Laurinsäure, Aluminiumstearat, Magnesi- umalkanolat und Zinkundecylenat; Ester-Carbonsäuren, beispielsweise Calciumstearoyllactylat, Laureth-6 Citrat und Natrium PEG-4 Lauramidcarboxylat; Ether- Carbonsäuren, beispielsweise Natriumlaureth-13 Carboxylat und Natrium PEG-6 Cocamide Carboxylat;
Carbonsäuren, Ester-Carbonsäuren und Ether-Carbonsäuren enthalten vorzugsweise 1 bis 50 und insbesondere 2 bis 30 Kohlenstoffatome. Phosphorsäureester und Salze, wie beispielsweise DEA-Oleth-10-Phosphat und Dilau- reth-4 Phosphat;
Sulfonsäuren und Salze, wie (1) Acylisethionate, z.B. Natrium-/ Ammoniumcocoyl- isethionat; (2) Alkylarylsulfonate; (3) Alkylsulfonate, beispielsweise Natriumcocosmonoglyceridsulfat, Natrium C12-1 Olefin-sulfonat, Natriumlaurylsulfoacetat und Magnesium PEG-3 Cocamidsulfat; (4) Sulfosuccinate, beispielsweise Dioctylnatriumsulfosuccinat, Dinatriumlaurethsulfosuccinat, Dinatriumlaurylsulfosuccinat und Dinatriumundecylenamido MEA-Sulfosuccinat;
Schwefelsäureester, wie (1) Alkylethersulfat, beispielsweise Natrium-, Ammonium-,
Magnesium-, MIPA-, TIPA- Laurethsulfat, Natriummyrethsulfat und Natrium C12-13 Parethsulfat; (2) Alkylsulfate, beispielsweise Natrium-, Ammonium- und TEA- Laurylsulfat.
Vorteilhaft zu verwendende kationische Tenside sind Alkylamine, Alkylimidazole, Ethoxylierte Amine und Quaternäre Tenside sowie Esterquats.
Quaternäre Tenside enthalten mindestens ein N-Atom, das mit 4 Alkyl- oder Arylgruppen kovalent verbunden ist. Dies führt, unabhängig vom pH Wert, zu einer positiven Ladung. Vorteilhaft sind, Alkylbetain, Alkylamidopropylbetain und Alkyl-amidopropylhydroxysulfain. Die erfindungsgemäß verwendeten kationischen Tenside können ferner bevorzugt gewählt werden aus der Gruppe der quaternären Ammoniumverbindungen, insbesondere Benzyltrialkylammoniumchloride oder -bromide, wie beispielsweise Benzyldimethylstea- rylammoniumchlorid, ferner Alkyltrialkylammoniumsalze, beispielsweise Cetyltrimethylam- moniumchlorid oder -bromid, Alkyldimethylhydroxyethylammoniumchloride oder -bromide, Dialkyldimethylammoniumchloride oder -bromide, Alkylamidethyltrimethylammonium- ethersulfate, Alkylpyridiniumsalze, beispielsweise Lauryl- oder Cetylpyrimidiniumchlorid, Imidazolinderivate und Verbindungen mit kationischem Charakter wie Aminoxide, beispielsweise Alkyldimethylaminoxide oder Alkylaminoethyldimethylaminoxide. Vorteilhaft sind insbesondere Cetyltrimethylammoniumsalze zu verwenden.
Vorteilhaft zu verwendende amphotere Tenside sind (1)AcyI-/dialkylethylendiamin, beispielsweise Natriumacylamphoacetat, Dinatriumacylamphodipropionat, Dinatriumalkyl- amphodiacetat, Natriumacylamphohydroxypropylsulfonat, Dinatriumacylamphodiacetat und Natriumacylamphopropionat; (2) N-Alkylaminosäuren, beispielsweise Aminopropyl- alkylglutamid, Alkylaminopropionsäure, Natriumalkylimidodipropionat und
Lauroamphocarboxyglycinat. Vorteilhaft zu verwendende nicht-ionische Tenside sind (1) Alkohole; (2) Alkanolamide, wie Cocamide MEA DEA/ MIPA; (3) Aminoxide, wie Cocoamidopropylaminoxid; (4) Ester, die durch Veresterung von Carbonsäuren mit Ethylenoxid, Glycerin, Sorbitan oder anderen Alkoholen entstehen; (5) Ether, beispielsweise ethoxylierte/propoxylierte Alkohole, ethoxylierte/ propoxylierte Ester, ethoxylierte/ propoxylierte Glycerinester, ethoxylierte/ propoxylierte Cholesterine, ethoxylierte/ propoxylierte Triglyceridester, ethoxyliertes propoxyliertes Lanolin, ethoxylierte/ propoxylierte Polysiloxane, propoxylierte POE-Ether und Alkylpolyglycoside wie Laurylglucosid, Decylglycosid und Cocoglycosid; (6) Sucroseester, -ether; (7) Polyglycerinester, Diglycerinester, Monoglycerinester; (8) Methylglucosester, Ester von Hydroxysäuren. Vorteilhaft ist ferner die Verwendung einer Kombination von anionischen und/oder amphoteren Tensiden mit einem oder mehreren nicht-ionischen Tensiden.
Die oberflächenaktive Substanz kann in einer Konzentration zwischen 1 und 95 Gew.-% in den erfindungsgemäßen Zubereitungen vorliegen, bezogen auf das Gesamtgewicht der Zubereitungen. Zubereitungen zur medizinischen Anwendung unterscheiden sich in ihrer Zusammensetzung nicht von den kosmetischen Produkten und können ebenso die oben genannten Stoffe enthalten. Sie unterscheiden sich von diesen in erster Linie dadurch, daß sie ein spezielles Zulassungsverfahren durchlaufen müssen.
Im folgenden wird die Erfindung anhand von Ausführungsbeispielen näher erläutert. In den Beispielen beziehen sich alle Zahlenangaben auf Gew.-%, sofern nichts Anderes angegeben ist.
Es ist bei all diesem im Einzelfalle möglich, daß die vorgenannten Konzentrationsangaben leicht über- oder unterschritten werden und dennoch erfindungsgemäße Zubereitungen erhalten werden. Dies kommt angesichts der breit streuenden Vielfalt an geeigneten Komponenten derartiger Zubereitungen für den Fachmann nicht unerwartet, so daß er weiß, daß bei solchen Über- oder Unterschreitungen der Boden der vorliegenden Erfindung nicht verlassen wird.
Die nachfolgenden Beispiele sollen die vorliegende Erfindung verdeutlichen, ohne sie einzuschränken. Die Zahlenwerte in den Beispielen bedeuten Gewichtsprozente, bezogen auf das Gesamtgewicht der jeweiligen Zubereitungen.
Beispiele Beispiel 1 : Herstellung von PIT Emulsionen Durch Mischen der in der Tabelle angegebenen Komponenten wurden Phasen- Inversions-Temperatur-Emulsionen (PIT-Emulsionen) der ebenfalls angegebenen Zusammensetzung hergestellt. Als Oligoribonukleotid wurde dsRNA verwendet, die durch Hybridisieren der Sequenzen SEQ ID NOs 37 und 38 erhalten wurde. Die dsRNA weist 3'-ständig jeweils zwei überstehende dT-Reste auf. Die dsRNA ist für die cDNA der Tyrosinase spezifisch und inhibiert die Expression des Gens dieses Enzyms durch RNA- Interferenz. Sie wird daher als anti-Tyrosianse dsRNA bezeichnet. Die übrigen in den Beispielen verwendeten Abkürzungen sind entsprechend zu verstehen.
Tabelle 1: PIT - Emulsionen
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Auf analoge Weise wurde eine PIT-Emulsion unter Verwendung von dsRNA hergestellt, die durch Hybridisieren der Sequenzen SEQ NOs 44 und 45 erhalten wurde. Die Mengenabgaben zu anti-Tyrosinase-dsRNA beziehen sich auf die Gesamtmenge an dsRNA, die sich zu gleichen Teilen aus den genannten, jeweiligen Sequenzen (SEQ IDs) zusammensetzt.
Beispiel 2: Herstellung von Cremes auf der Basis von OI-in-Wasser-Emulsionen
Durch Mischen der in der Tabelle angegebenen Komponenten wurden Cremes der ebenfalls angegebenen Zusammensetzung hergestellt.
Tabelle 2: O/W-Cremes
Figure imgf000052_0001
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Tabelle 2: O/W-Cremes (Fortsetzung)
Figure imgf000054_0001
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Auf analoge Weise wurde eine Creme unter Verwendung von antiTyrosinase-dsRNA hergestellt, die durch Hybridisieren der Sequenzen SEQ NOs 43 und 45 erhalten wurde. Die Mengenabgaben zu anti-Tyrosinase-dsRNA, anti-PAR-2-dsRNA, anti-MITF-dsRNA und anti-P-Protein-dsRNA beziehen sich jeweils auf die Gesamtmenge an dsRNA, die sich zu gleichen Teilen aus den genannten, jeweiligen Sequenzen (SEQ IDs) zu den einzelnen Zielgenen zusammensetzt.
Beispiel 3: Hersteilung von Wasser-in-OI-Emulsionen Durch Mischen der in der Tabelle angegebenen Komponenten wurden Wasser-in-ÖI- Emulsionen der ebenfalls angegebenen Zusammensetzung hergestellt. Als Oligoribonukleotid wurde dsRNA verwendet, die durch Hybridisieren des Sense RNA und Antisense RNA Strangs zu SEQ ID NO 40 erhalten wurde. SEQ ID NO 40 ist ein Abschnitt der cDNA der Tyrosinase. Die beide Stränge der dsRNA wiesen 3'-ständig jeweils zwei 2'-Desoxythymidinreste auf. Tabelle 3: W/O-Emulsionen
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Tabelle 3: W/O Emulsionen (Fortsetzung)
Figure imgf000058_0001
Beispiel 4: Herstellung von Hydrodispersionen Durch Mischen der in der Tabelle angegebenen Komponenten wurden Hydrodispersionen der ebenfalls angegebenen Zusammensetzung hergestellt. Als Oligoribonukleotid wurde dsRNA verwendet, die durch Hybridisieren des Sense RNA und Antisense RNA Strangs zu cDNA des PAR-2 erhalten wurde. SEQ ID NOs 115 und 117 ist ein Abschnitt der cDNA des PAR-2. Die beide Stränge der dsRNA wiesen 3'-ständig jeweils zwei 2'-Desoxythymidinreste auf. Die Mengenabgaben zu anti-PAR-2-dsRNA beziehen sich auf die Gesamtmenge an dsRNA, die sich zu gleichen Teilen aus den genannten, jeweiligen Sequenzen (SEQ IDs) zusammensetzt.
Tabelle 4: Hydrodispersionen
Figure imgf000059_0001
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Beispiel 5: Herstellung einer Gelcreme Durch Mischen der in der Tabelle angegebenen Komponenten wurde eine Gelcreme der ebenfalls angegebenen Zusammensetzung hergestellt. Der pH-Wert der Gelcreme wurde anschließend auf 6,0 eingestellt.
Tabelle 5: Gelcreme
Figure imgf000061_0001
Auf analoge Weise wurde eine Gelcreme unter Verwendung von dsRNA hergestellt, die durch Hybridisieren der Sequenzen SEQ NOs 38 und 39 erhalten wurde. Die Mengenabgaben zu anti-Tyrosinase-dsRNA beziehen sich auf die Gesamtmenge an dsRNA, die sich zu gleichen Teilen aus den genannten, jeweiligen Sequenzen (SEQ IDs) zusammensetzt.
Beispiel 6: Herstellung einer Creme auf der Basis einer Wasser-in-ÖI-Emulsion Durch Mischen der in der Tabelle angegebenen Komponenten wurde eine Creme der ebenfalls angegebenen Zusammensetzung auf der Basis einer Wasser-in-Öl-Dispersion hergestellt. Tabelle 6: W/O-Creme
Figure imgf000062_0001
Auf analoge Weise wurde eine Emulsion unter Verwendung von dsRNA hergestellt, die durch Hybridisieren der Sequenzen SEQ NOs 70, 71 und 85 erhalten wurde. Die Mengenabgaben zu anti-MITF-dsRNA beziehen sich auf die Gesamtmenge an dsRNA, die sich zu gleichen Teilen aus den genannten, jeweiligen Sequenzen (SEQ IDs) zusammensetzt. Beispiel 7: Herstellung einer Creme auf der Basis einer Wasser-in-OI-in-Wasser- Emulsion
Durch Mischen der in der Tabelle angegebenen Komponenten wurde eine Creme der ebenfalls angegebenen Zusammensetzung auf der Basis einer Wasser-in-ÖI-in-Wasser- Dispersion hergestellt. Als Oligoribonukleotid wurde dsRNA verwendet, die durch Hybridisieren des Sense RNA und Antisense RNA Strangs zu SEQ ID NO 38 erhalten wurde. Die beide Stränge der dsRNA wiesen 3'-ständig jeweils zwei 2'- Desoxythymidinreste auf.
Tabelle 7: W/O/W-Creme
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Abbildungen:
Die Figur 1 zeigt die einzelsträngige cDNA des Tyrosinase Related Proteins-1 (TRP-1), in der alle Fragmente der Form AA-N19-TT und AA-N19-TC optisch hervorgehoben sind. Die Darstellung erfolgt in zwei Blöcken, die jeweils den identischen cDNA-Sequenzbereich beinhalten. Im ersten Block sind die Fragmente der Form AA-N19-TT hervorgehoben, im zweiten Block die der Form AA-N19-TC.
In Figur 2 sind diese Fragmente (targeted region) exemplarisch zusammen mit den entsprechenden homologen (senseRNA) und komplementären (antisenseRNA) RNA- Einzelsträngen dargestellt. Gezeigt sind einzelsträngige RNAs, die 3'-seitig durch zwei Desoxythymidinreste (dt) modifiziert sind. Die Hybridisierung von zwei komplementären einzelsträngigen RNAs ergibt dsRNA mit überstehenden 3'-Enden, die durch jeweils zwei 21- Desoxythymidinreste gebildet werden. Die hier gezeigte Darstellung ist exemplarisch für die SEQ ID NO 1 und SEQ ID NO 22, wobei mit 1a bzw 22a die jeweilige sense RNA und mit 1b und 22b die jeweilige antisense RNA dargestellt ist. Aus 1a und 1b bzw. 22a und 22b wird die jeweilige dsRNA aus SEQ ID NO 1 bzw SEQ ID NO 22 gebildet. Die Bildung der dsRNA der übrigen Sequenzen erfolgt analog.
Das Gen des Tyrosinase Related Proteins-1 (TRP-1) gehört zu den bevorzugten Zielgenen für die erfindungsgemäßen Oligoribonukleotide. Oligoribonukleotide, die zu der von der in Fig. 1 gezeigten Sequenz abgeleiteten doppelsträngigen Sequenz, Abschnitten davon und insbesondere zu den doppelsträngigen Sequenzen, die von den in Figur 1 hervorgehobenen Abschnitten abgeleitet sind, homolog sind, sind demgemäß erfindungsgemäß besonders bevorzugt. Unter der von der in Fig. 1 gezeigten Sequenz abgeleiteten doppelsträngigen Sequenz wird die Sequenz verstanden, die aus der in Fig. 1 gezeigten Sequenz und dem dazu komplementären Strang gebildet wird. Die anderen Angaben sind entsprechend zu verstehen.
In Figur 3 ist die einzelsträngige cDNA der Tyrosinase zu sehen. Die Tyrosinase gehört zu den besonders bevorzugten Genen. Auch hier ist ein bevorzugter Sequenzbereich, d.h. ein Sequenzbereich mit einer Länge von 19 Nukleotiden, der durch AA und TT bzw. TC flankiert wird, hervorgehoben; die Darstellung erfolgt analog zu Fig.1. Oligoribonukleotide, die zu der von der in Fig. 3 gezeigten Sequenz abgeleiteten doppelsträngigen Sequenz, Abschnitten davon und insbesondere zu der doppelsträngigen Sequenz, die von dem in Figur 3 hervorgehobenen Bereich abgeleitet ist, homolog sind, sind erfindungsgemäß ebenfalls bevorzugt.
In Figur 4 ist die einzelsträngige cDNA des Tyrosinase-ähnlichen Proteins 2 (TRP2) zu sehen. Auch hier ist ein bevorzugter Sequenzbereich, d.h. ein Sequenzbereich mit einer Länge von 19 Nukleotiden, der durch AA und TT bzw. TC flankiert wird, hervorgehoben; die Darstellung erfolgt analog zu Fig.1. Oligoribonukleotide, die zu der von der in Fig. 4 gezeigten Sequenz abgeleiteten doppelsträngigen Sequenz, Abschnitten davon und insbesondere zu der doppelsträngigen Sequenz, die von dem in Figur 4 hervorgehobenen Bereich abgeleitet ist, homolog sind, sind erfindungsgemäß ebenfalls bevorzugt. Die Bildung der jeweiligen dsRNA erfolgt analog zu Fig. 2.
In Figur 5 ist die einzelsträngige cDNA des MITF zu sehen. Auch hier ist ein bevorzugter Sequenzbereich, d.h. ein Sequenzbereich mit einer Länge von 19 Nukleotiden, der durch AA und TT bzw. TC flankiert wird, hervorgehoben; die Darstellung erfolgt analog zu Fig.1. Oligoribonukleotide, die zu der von der in Fig. 5 gezeigten Sequenz abgeleiteten doppelsträngigen Sequenz, Abschnitten davon und insbesondere zu der doppelsträngigen Sequenz, die von dem in Figur 5 hervorgehobenen Bereich abgeleitet ist, homolog sind, sind erfindungsgemäß ebenfalls bevorzugt. Die Bildung der jeweiligen dsRNA erfolgt analog zu Fig. 2.
In Figur 6 ist die einzelsträngige cDNA des P-Proteins zu sehen. Auch hier ist ein bevorzugter Sequenzbereich, d.h. ein Sequenzbereich mit einer Länge von 19 Nukleotiden, der durch AA und TT bzw. TC flankiert wird, hervorgehoben; die Darstellung erfolgt analog zu Fig.1. Oligoribonukleotide, die zu der von der in Fig. 6 gezeigten Sequenz abgeleiteten doppelsträngigen Sequenz, Abschnitten davon und insbesondere zu der doppelsträngigen Sequenz, die von dem in Figur 6 hervorgehobenen Bereich abgeleitet ist, homolog sind, sind erfindungsgemäß ebenfalls bevorzugt. Die Bildung der jeweiligen dsRNA erfolgt analog zu Fig. 2.
In Figur 7 ist die einzelsträngige cDNA des PAR-2 zu sehen. Auch hier ist ein bevorzugter Sequenzbereich, d.h. ein Sequenzbereich mit einer Länge von 19 Nukleotiden, der durch AA und TT bzw. TC flankiert wird, hervorgehoben; die Darstellung erfolgt analog zu Fig.1. Oligoribonukleotide, die zu der von der in Fig. 7 gezeigten Sequenz abgeleiteten doppelsträngigen Sequenz, Abschnitten davon und insbesondere zu der doppelsträngigen Sequenz, die von dem in Figur 7 hervorgehobenen Bereich abgeleitet ist, homolog sind, sind erfindungsgemäß ebenfalls bevorzugt. Die Bildung der jeweiligen dsRNA erfolgt analog zu Fig. 2.

Claims

Patentansprüche
1. Doppelsträngiges Oligoribonukleotid oder ein physiologisch verträgliches Salz davon, das in der Lage ist, den Abbau von mRNA von einem oder mehreren an der Pigmentierung der Haut und/oder der Haare beteiligten Strukturen zu induzieren.
2. Oligoribonukleotid nach Anspruch 1 , dadurch gekennzeichnet, daß die an der Pigmentierung der Haut und/oder der Haare beteiligten Strukturen an (I) der eigentlichen Melanin-Synthese (Melanosomenstrukturen) und/oder an der (II) Expression dieser Melanosomen-Strukturen und/oder am (III) Transfer der Melanosomen (in die Keratinozyten) beteiligt sind.
3. Oligoribonukleotid nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß die an der eigentlichen Melanin-Synthese beteiligten Struktur das Enzym Tyrosinase, TRP1 , TRP2 oder das p-Protein ist.
4. Oligoribonukleotid nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß die an der Expression der an der Melaninsynthese beteiligten Struktur der Transkriptinsfaktor MITF ist.
5. Oligoribonukleotid nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß die am Transfer der Melanosomen beteiligte Struktur der Proteinase Activated Receptor 2 (PAR-2) ist.
6. Oligoribonukleotid nach einem der Ansprüche 1 bis 5, dadurch gekennzeichnet, daß es die Expression des Gen der an der Pigmentierung von Haut und/oder Haar beteiligten Struktur um mindestens 25 % inhibiert.
7. Oligoribonukleotid nach Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, daß es die Expression des Gen der an der Pigmentierung von Haut und/oder Haar beteiligten Struktur um mindestens 50 % inhibiert.
8. Oligoribonukleotid nach einem der Ansprüche 1 bis 7, dadurch gekennzeichnet, daß es vor der Zielsequenz bezogen auf eine Länge von 20 Basenpaaren in maximal 0 bis 2 Basenpaaren abweicht. 9. Oligoribonukleotid nach einem der Ansprüche 1 bis 8, dadurch gekennzeichnet, daß es eine Länge von 15 bis 49 Basenpaaren aufweist.
10. Oligoribonukleotid nach Anspruch 9, dadurch gekennzeichnet, daß eine Länge von 19 bis 25 Basenpaaren aufweist.
11. Oligoribonukleotid nach einem der Ansprüche 1 bis 10, dadurch gekennzeichnet, daß es homolog zu einem Abschnitt des Gens des an der Pigmentierung von Haut und/oder Haar beteiligten Struktur ist, dessen sense-Strang 5'-seitig durch zwei Adenosinreste und 3'-seitig durch zwei Thymidinreste oder durch einen Thymidin- und einen Cytosinrest flankiert wird.
12. Oligoribonukleotid nach einem der Ansprüche 1 bis 11, dadurch gekennzeichnet, daß es am 3'-Ende zwei Desoxythymidinreste trägt. 13. Oligoribonukleotid nach einem der Ansprüche 1 bis 12, dadurch gekennzeichnet, daß es einfach oder mehrfach in einen Expressionsvektor integriert ist.
14. Oligoribonukleotid nach einem der Ansprüche 1 bis 13, dadurch gekennzeichnet, daß eine oder mehrere Phosphatgruppen durch Phosphothioat-, Methylphos- phonat- und/oder Phosphoramidatgruppen ausgetauscht sind. 15. Oligoribonukleotid nach einem der Ansprüche 1 bis 14, dadurch gekennzeichnet, daß ein oder mehrere Ribosereste durch Aminosäurereste oder Morpholinreste ausgetauscht sind.
16. Oligoribonukleotid nach einem der Ansprüche 1 bis 15, dadurch gekennzeichnet, daß ein oder mehrere Ribosereste durch Fluor, Alkyl- oder O-Alkylreste modifiziert sind.
17. Oligoribonukleotid nach einem der Ansprüche 1 bis 16, dadurch gekennzeichnet, daß es ein oder mehrere alpha-Nukleoside enthält.
18. Pharmazeutische oder kosmetische Zusammensetzung enthaltend ein oder mehrere Oligoribonukleotide gemäß einem der Ansprüche 1 bis 17 oder ein physiologisch verträgliches Salz davon.
19. Zusammensetzung nach Anspruch 18 zur topischen Anwendung.
20. Zusammensetzung nach Anspruch 18 oder 19, dadurch gekennzeichnet, daß sie mehrere Oligoribonukleotide enthält, die die Expression mehrerer unterschiedlicher an der Pigmentierung von Haut und/oder Haaren beteiligten Strukturen inhibieren.
21. Zusammensetzung nach Anspruch 18 oder 19, dadurch gekennzeichnet, daß sie mehrere Oligoribonukleotide enthält, die verschiedene Sequenzbereiche ein und desselben Gens einer an der eigentlichen Melanin-Synthese (Melanosomenstrukturen; Tyrosianse, TRP-1 , TRP-2, p-Protein) und/oder an der Expression dieser Melanosomen-Strukturen (MITF)und/oder am Transfer der Melanosomen (in die Keratinozyten) beteiligten Struktur (PAR-2) zum Ziel haben.
22. Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 18 bis 21, dadurch gekennzeichnet, daß sie 0,00001 bis 10 Gew.-% Oligonukleotid enthält.
23. Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 18 bis 22, dadurch gekennzeichnet, daß sie 1 bis 5 unterschiedliche Oligoribonukleotide enthält.
24. Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 18 bis 23, dadurch gekennzeichnet, daß sie ausschließlich solche Oligoribonukleotide enthält, die die Expression eine oder mehrerer an der Pigmentierung von Haut und Harren beteiligten Strukturen inhibieren. 25. Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 18 bis 25, dadurch gekennzeichnet, daß sie in Form einer Lösung, Creme, Salbe, Lotion, Hydrodispersion, Lipodispersion, Emulsion, Pickering-Emulsion, eines Gel, eines festen Stifts oder als Aerosol vorliegt.
26. Verwendung eines Oligoribonukleotids oder eines physiologisch verträglichen Salzes davon oder einer Zubereitung gemäß einem der vorangehenden Ansprüche zur Hautpflege oder kosmetischen oder therapeutischen Behandlung von unerwünschter Pigmentierung von Haut bzw. Haaren.
27. Verwendung eines Oligoribonukleotids oder eines physiologisch verträglichen Salzes davon oder einer Zubereitung gemäß einem der vorangehenden Ansprüche zur Herstellung einer kosmetischen oder therapeutischen Zusammensetzung zur topischen Applikation.
28. Verwendung eines Oligoribonukleotids oder eines physiologisch verträglichen Salzes davon nach Anspruch 1 bis 17 zur Herstellung eines kosmetischen oder therapeutischen Mittels zur Hautpflege oder Behandlung von unerwünschter Pigmentierung der Haut bzw. der Haare.
9. Verwendung nach einem der Ansprüche 27 bis 28 zur Behandlung von Veränderungen oder Schäden hinsichtlich der Pigmentierung an Haut bzw. Haaren, die durch UV-Strahlung in der Haut hervorgerufen werden, Trockenheit, Rauhigkeit und Schlaffheit der Haut, Faltenbildung, der verminderten Rückfettung durch Talgdrüsen, und einer vergrößerten Anfälligkeit gegenüber mechanischem Streß (Rissigkeit), zur Behandlung von Photodermatosen, den Symptomen der senilen Xerosis, des Photoagings und einem Abbau des Bindegewebes der Haut, die mit unerwünschter Pigmentierung von Haut bzw Haaren verbunden sind.
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