WO2003008396A1

WO2003008396A1 - Optically active oxazine derivative

Info

Publication number: WO2003008396A1
Application number: PCT/JP2002/007171
Authority: WO
Inventors: Shinji Ina; Kenjiro Yamana; Naomi Suzuki; Takeshi Otani; Mayumi Iino; Akane Takahama
Original assignee: Nikken Chemicals Co Ltd
Current assignee: Kowa Co Ltd
Priority date: 2001-07-16
Filing date: 2002-07-15
Publication date: 2003-01-30
Anticipated expiration: 2004-01-16

Description

明細- 光学活性ォキサジン誘導体技術分野

本発明は、ホスホジエステラーゼ（phosphodiesterase, PDE) IV阻害作用を有する新規な化合物及ぴそれを含む医薬組成物に関するものである。背景技術

(土) 一 6— [3 - (2—インダニルォキシ） —4ーメトキシフエニル] - 6- メチルー 3, 4， 5, 6—テトラヒドロ一 2 H— 1, 3—ォキサジン一 2—オン（W O 9 8/0 4 5 3 4号公報参照）は、強いホスホジエステラーゼ（PDE) IV阻害作用を有し、気管支拡張作用及ぴ抗炎症作用を発現することが知られており、 .喘息、皮膚炎などの炎症性疾患、リゥマチ、多発†生硬化症などの自己免疫疾患等に有効と考えられている。発明の開示

(士）一 6— [3— (2—インダニルォキシ）一 4ーメトキシフエニル] — 6— メチノレ一 3， 4, 5, 6—テトラヒドロ一 2 H— 1， 3—ォキサジン _ 2—オンは、ラセミ体（比旋光度 0° ) で 6位に不斉炭素を有し、（+) —体と（一）一体の二種類の異性体の存在が予想はされていたが、 3， 4, 5， 6—テトラヒドロー 2H - 1 , 3一ォキサジン一 2—オン骨格を有する化合物の異性体の分離方法は一般化されておらず、ラセミ体から異性体を分離することは達成し得なかった。特に上記の（士）一6— [3— （2—インダニノレォキシ）一 4—メトキシフエ二ノレ] 一 6— メチルー 3， 4, 5, 6—テトラヒドロー 2 H— 1, 3—ォキサジン一 2—オンは酸性若しくは塩基性を示す官能基を有しておらず、その分離に光学活性な有機塩基や有機酸を利用したジァステレオマー光学分割法などの手法は利用できなかつた。従って、そのホスホジエステラーゼ (PDE) IV阻害作用おょぴ副作用の違いについては知られておらず、検討することもできなかった。

本発明者は、各々の異性体を純粋に取得するために研究を重ねた結果し (±) 一 6 - [ 3 - ( 2—インダニルォキシ）一 4—メトキシフエ二ノレ]一 6—メチノレー 3， 4 , 5 , 6—テトラヒドロー 2 H— 1， 3—ォキサジン _ 2—オンを高速液体クロマトグラフィ一で純粋な各異性体に分離する方法を見出した。そして、得られた各異性体のホスホジエステラーゼ（PDE) IV阻害作用及ぴ抗喘息作用、並びに毒性及ぴ水に対する溶解性を検討し、特定の異性体が医薬として優れた性質を有していることを見出し、本発明を完成するに至った。

すなわち、本発明は、（一）一6— [ 3 - ( 2—インダニルォキシ）一4ーメトキシフエ二ル] — 6—メチル一3， 4， 5 , 6—テトラヒドロ一 2 H— 1 , 3—ォキサジン一 2—オン又はその水和物若しくはその溶媒和物に関する。

また本発明は、（一）一 6— [ 3— （2—インダニルォキシ）一 4ーメトキシフェニル] 一 6—メチル一3， 4 , 5 , 6—テトラヒドロー 2 H— 1， 3—ォキサジンー 2—オン並びにその水和物及ぴその溶媒和物からなる群から選ばれる物質を有効成分として含む医薬に関する。 ' 本発明の化合物はホスホジエステラーゼ（PDE) IV阻害作用を示し、これに基づき、本発明の医薬は、喘息、皮膚炎、慢性閉塞性肺疾患等の炎症性疾患；多発性硬化症；リゥマチ等の自己免疫疾患の治療及ぴ Z又は予防のための医薬として有用である。

また、本発明の化合物はアレルギー性結膜炎に対する改善作用を示し、これに基づき、本発明の医薬は、アレルギー性結膜炎、春季カタル、春季角結膜炎等のァレルギー性眼疾患の治療及び/又は予防のための医薬として有用である。

さらに、本発明の化合物は TN F— _α産生抑制作用を示し、これに基づき、本発明の医薬は、アレルギー、気管支喘息、敗血症、関節炎（関節リウマチ、変形性関節症等）、糖尿病、乾癬、クローン病、潰瘍性大腸炎の治療及び Ζ又は予防のための医薬として有用である。また、本発明の化合物は N K i受容体拮抗作用を示し、これに基づき、本発明の医薬は、痛み；嘔吐；喘息、慢性閉塞性肺疾患、皮膚炎（ァトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、奪麻疹等）、アレルギー性眼疾患、関節炎等の炎症性疾患の治療及び Z 又は予防のための医薬として有用である。

別の観点からは、本発明により、上記の医薬の製造のための（一） - 6 - [ 3— ( 2—インダニルォキシ）一4ーメトキシフエ二ル] 一 6—メチルー 3， 4 , 5 , 6—テトラヒドロー 2 H— 1， 3—ォキサジン一 2—オン並びにその水和物及びその溶媒和物からなる群から選ばれる物質の使用；上記物質を含むホスホジエステラーゼ（PDE) IV阻害剤；上記物質を含むアレルギー性結膜炎に対する改善剤；上記物質を含む T N F— a産生抑制剤；及び上記物質を含む N I^受容体插抗剤が提供される。

また、さらに別の観点からは、

ヒトを含む哺乳類動物においてホスホジエステラーゼ（PDE) IVを阻害する方法であって、（一）一 6— [ 3— （2—インダニノレォキシ）一 4ーメトキシフエニル] 一 6—メチルー 3， 4， 5 , 6—テトラヒドロ一 2 H— 1， 3—ォキサジン一 2— オン並びにその水和物及ぴその溶媒和物からなる群から選ばれる物質の有効量をヒトを含む哺乳類動物に投与する工程を含む方法；

喘息、皮膚炎、若しくは慢性閉塞性肺疾患等の炎症性疾患、多発性硬化症、又はリゥマチ等の自己免疫疾患の治療及び/又は予防方法であって、上記物質の治療及び/又は予防有効量をヒトを含む哺乳類動物に投与する工程を含む方法；

ヒトを含む哺乳類動物においてァレルギ一性結膜炎を改善する方法であって、上記物質の有効量をヒトを含む哺乳類動物に投与する工程を含む方法；

アレルギー性結膜炎、春季カタル、春季角結膜炎等のアレルギー性眼疾患の治療及び _ 又は予防方法であって、上記物質の治療及び Z又は予防有効量をヒトを含む哺乳類動物に投与する工程を含む方法；

ヒトを含む哺乳類動物において T N F— aの産生を抑制する方法であって、上記物質の有効量をヒトを含む哺乳類動物に投与する工程を含む方法；アレルギー、気管支喘息、敗血症、関節炎（関節リウマチ、変形性関節症等）、糖尿病、乾癬、クローン病、又は潰瘍性大腸炎の治療及び Z又は予防方法であって、上記物質の治療及ぴ z又は予防有効量をヒトを含む哺乳類動物に投与する工程を含む方法；

ヒトを含む哺孚 L類動物において ΝΚ^受容体を拮抗阻害する方法であって、上記物質の有効量をヒトを含む哺乳類動物に投与する工程を含む方法；及ぴ

痛み、嘔吐、又は喘息、慢性閉塞性肺疾患、皮膚炎（ァトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、蓴麻疹等）、アレルギー性眼疾患、若しくは関節炎等の炎症性疾患の治療及び/又は予防方法であつて、上記物質の治療及び Z又は予防有効量をヒトを含む哺乳類動物に投与する工程を含む方法

が提供される。発明を実施するための最良の形態

本発明の光学活性的に純粋な化合物は、例えば国際公開 WO 9 8 / 0 4 5 3 4に記載の方法により製造されるラセミ体を高速液体クロマトグラフィー（HPLC) を用いて下記の実施例に記載の如く特定の条件で処理することにより、二種類の光学活性体 [即ち（一）一6— [ 3— ( 2—インダニルォキシ）一4ーメトキシフエ二ル] 一 6—メチルー 3 , 4， 5， 6—テトラヒドロー 2 H— 1 , 3—ォキサジン一 2— オン及び (+) - 6 - [ 3 - ( 2—インダニルォキシ) —4—メトキシフエ二ノレ] 一 6—メチルー 3 , 4， 5 , 6—テトラヒドロー 2 H— 1， 3—ォキサジン一 2— オン] に分割することにより得られる。また、得られた光学活性体を必要に応じて各種溶媒により再結晶を行うことにより、更に高純度の光学活性体を得ることがでさる。

光学活性体の再結晶は、メタノール、エタノール、イソプロパノール、プタノーノレ、アセトン、酢酸ェチノレ、クロロホノレム、 n-へキサン、シクロへキサン等の単一溶媒又は 2種若しくはそれ以上の溶媒を組み合わせた混合溶媒により行うことカできる。上記の方法により得られる光学活性体の（一）一体 [ (一）一 6— [3— （2— インダニルォキシ）一 4ーメトキシフエ-ノレ] 一 6—メチルー 3， 4, 5, 6—テトラヒドロー 2 H— 1,. 3—ォキサジン一 2—オンの略]および（+) —体 [ (+) 一 6— [3— （2—インダニノレォキシ）一4ーメトキシフエニル] 一 6—メチルー

3, 4, 5, 6—テトラヒドロー 2 H— 1 , 3—ォキサジン一 2—オンの略]の PDE IV阻害活性おょぴ抗喘息作用をラセミ体 [ (士）一体] と比較して下記の表 1に示す。表 1は後記の試験例 1及ぴ試験例 2の結果をまとめたものである。表 1

上記表に示した様に、（一）一体はラセミ体の約 2倍の PDE IV阻害作用及ぴ抗喘息作用を有すのに対し、（+) —体はラセミ体の約 1/3の PDE IV阻害作用おょぴ約 1 / 4以下の抗喘息作用しか有さず、薬理活性は相当弱いがラセミ体と同程度の毒性を示す。さらに、（一）一体はラセミ体に比べ水に対する溶解性が著しく高く、各種液剤としての利用の可能性が高くなるとともに、消化管などにおける吸収性も改善される可能性があり好ましい。以上の通り、（一）一体はラセミ体に比べて PDE IV阻害薬および抗喘息薬などの医薬として極めて有用であることが確認された。また、（一）一体がアレルギー性結膜炎に対する改善作用、 TNF— a産生抑制作用、及び NK;^受容体拮抗作用を有することも新たに確認された。ラセミ体が PDE IV阻害薬おょぴ抗喘息薬として有用であることは国際公開 WO 9 8/0 4 5 3 4 号に開示されているが、（一）一体がアレルギー性眼疾患治療薬、 TNF— 産生阻害薬、及び N K i受容体拮抗薬として有用であることは示唆ないし教示されていない。本発明の化合物を有効成分として含む医薬としては、上記の方法により得られる光学活性な化合物並びにその水和物及ぴその溶媒和物からなる群から選ばれる物質を単独で用いてもよいが、又は上記物質を薬学的に許容される担体と混合し、適当な形態の医袓成物として調製することもできる。

全身投与に適する医薬組成物としては、例えば、顆粒剤、散剤、錠剤、丸剤、硬カプセル剤、軟カプセル剤、シロップ剤、乳剤、懸濁剤、又は液剤等の経口投与に適する医薬組成物、あるいは注射剤（静脈内、筋肉内、皮下）、点滴剤、軟膏剤、坐剤、エアゾール剤、吸入剤等の非経口投与に適する医薬組成物を例示することができる。局所投与に適する医薬組成物としては、点眼剤、眼軟膏剤、軟膏剤、坐剤、エアゾール剤、吸入剤等を挙げることができる。

なお、上記の医薬組成物の製造のためには、必要により 1種又は 2種以上の製剤用添加物、例えば、結合剤、潤滑剤、崩壊剤、保存剤、緩衝剤、増粘剤、溶解補助剤、キレート剤、安定化剤、 pH調整剤、等張化剤のような通常用いられる各種製剤用添加剤を用いてもよい。

例えば、経口投与のための医薬組成物は、？し糖、結晶セルロース、ブドウ糖、コーンスターチ、ショ糖、ソルビトール、マン-トール、エリスリトールなどの賦形剤、カルボキシメチルセルロースカルシウム、ヒドロキシプロピルセルロースなどの崩壊剤、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ポリエチレンダリコール、硬化油などの滑沢剤、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピノレメチノレセノレロース、カノレボキシメチノレセノレロース、ポリビニノレアノレコール、ゼラチン、アラビアゴムなどの湿潤剤、その他必要に応じて界面活性剤、矯味剤などを使用して所望の投与剤型に調製することができる。

また、非経口投与のための医薬組成物の製造には、水、エタノール、グリセリン、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、寒天、トラガントガムなどの希釈剤を用いて、必要に応じて溶解補助剤（ポリビュルピロリドン、ポリオキシェチレン硬化ヒマシ油、ポリエチレングリコール、ポリソルべ一ト 80、ポリオキシェチレンモノステアレート等）、保存剤（クロロブタノール、デヒドロ酢酸ナトリゥム、塩化ベンザルコニゥム、塩ィヒセチルピリジ-ゥム、フヱネチルアルコール、パラオキシ安息香酸エステル類、塩化べゼトニゥム等）、緩衝剤（ホウ酸緩衝剤、リン酸塩緩衝剤、炭酸塩緩衝剤、酢酸塩緩衝剤、クェン酸緩衝剤等）、安定化剤（ェデト酸ナトリウム、亜硫酸水素ナトリゥム等）、 pH調整剤（水酸化ナトリウム、水酸ィ匕カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、酢酸、クェン酸、リン酸等）、 '等張化剤（塩化ナトリゥム、塩ィ匕カリゥム、グリセリン、多価アルコール、ソルビトール、マンニトール、グルコース等）、無痛化剤などを使用することができる。

眼軟膏剤の場合には、通常使用されている基剤（眼科用白色ワセリン、プラスチベース、プロぺト等）を使用でき、添加剤としては、流動パラフィンなどが挙げられる。

本発明の医薬の投与量は、全身投与用の製剤として経口投与する場合、通常、成人に対し本発明の化合物の重量と'して 1日あたり 0. 01〜： 1000m gであり、好ましくは 0. 01〜100m gである。投与量は、年齢、病状、症状のほか、同時投与の医薬の有無等により適宜増減することが好ましい。前記 1日投与量を 1日 1回、又は適当間隔をおいて 1日に 2〜 3回に分けて投与してもよいし、数日ごとに間欠投与してもよレヽ。全身投与用の注射剤として用いる場合には、本発明の化合物の重量として、成人に対し 1回量 0. 001〜100m gを連続投与又は間欠投与することが好ましい。本発明の医薬を局所投与する場合の投与量は、吸入剤の場合、通常、成人に対し 1日量 0. 001〜300m gであり、好ましくは 0. 001〜30m gである。点眼剤の場合には、通常0. 01〜3. 0^/ %の濃度で使用され、眼軟膏剤の場合には、通常 0. 01〜 10. 0wZ v %の濃度で使用される。投与量は、年齢、病状、症状のほか、同時投与の医薬の有無等により適宜増減することが好ましい。注射剤の場合、 1日に 1〜数回に分けて投与することができる。点眼剤の場合、通常 1日に 1〜 6回、 1回に 1 〜 2滴を点眼することができ、眼軟膏の場合、通常 1日に 1〜 2回、結膜嚢内に適量を塗布することができる。実施例

以下、本発明を実施例及ひ ¾験例によりさらに具体的に説明するが、本発明の範囲は以下の実施例およぴ試験例に限定されるものではない。

<実施例 1 >

(土）一 6— [3— (2—インダニルォキシ）一4ーメトキシフヱニル] 一 6— メチル一 3， 4, 5， 6—テトラヒドロー 2 H— 1， 3—ォキサジン一 2—オン 70g を変性エタノール 7.0Lに溶解した後、一度に約 3.0 gのサンプル溶液を力ラムに注入し、下記の条件で HPLCを行った。

カラム： CHIRALPAK AS (10cm φ X50cm)

溶媒：変性エタノール

流量： lOOmL/分

第 1ピーク及ぴ第 2ピークそれぞれの分画液を減圧濃縮し、得られた油状の残渣にエタノール及ぴ _n-へキサンを添加後、再ぴ減圧濃縮し、粉末状の光学活性体を得た。以上のような操作を繰り返すことにより（土）一体 70 gより二種類の光学活性体、（一）一体 31.5g、（+) —体 29.6 gを得た。尚、構造については、光学分割前のラセミ体の NMRと比較することにより確認した。 -

(一）一体：保持時間 50〜62分、カラム温度 40。C

[c¾]²⁰ _D 一 68° (c二 1.00， MeOH)

一 NMR (CDC 1₃) δ (p pm)

1.68 (3H, s) 、 2.14 (1H, ddd， J=14.0, 10.6, 5.6 Hz) 、 2.30 (1H, ddd, J=14.0, 3.9， 3.9 Hz) 、 3.06 (1H, ddd, J=10.6, 10.6, 4.8 Hz) 、 3.20 (1H, dd, J=16.7, 3.9 Hz) 、 3.22 (1H, dd, J=16.7， 3.9 Hz) 、 3.25-3.30 (1H, m) 、 3.36 (1H, dd, J=16.7, 6.6 Hz) 、 3.37 (1H, dd, 16.7， 6.6 Hz) 、 3.81 (3H, s) 、 5.21 (1H, dddd, J=6.6, 6.6, 3.9, 3.9Hz) 、 6.13 (1H， broad) 、 6.86 (1H, d, J=8.3Hz) 、 6.90 (1H, dd, J=8.3, 2.2Hz) 、 6.95 (1H， d, J=2.2Hz) 、 7.15-7.19 (2H, m) 、 7.21-7.23 (2H, m) (+) —体：保持時間 ₆₉〜88分、カラム温度 40°C

ί Υ°_Ό +68° (c=1.00, MeOH)

(土）一体の¹ H— NMR (CDC 1₃) δ (p pm)

1.66 (3H, s) 、 2.11 (1H, ddd, J=13.9, 10.3, 5.4Hz) 、 2.27 (1H, ddd, J=13.9, 4.2, 4.2Hz) 、 3.00-3.07 (1H, m) 、 3.20 (1H, dd, J=16.6, 3.7Hz) 、 3.22 (1H, dd, J=16.6, 3.7Hz) 、 3.22-3.29 (1H, m) 、 3.36 (2H, dd, J=16.6, 6.6Hz) 、 3.80 (3H， s) 、 5.21 (1H, dddd, 6.6, 6.6, 3.7, 3.7Hz) 、 6.13 (lH, broad) 、 6.86 (1H, . d, J=8.3Hz) 、 6.90 (1H, dd, J=8.3， 2.2Hz) 、 6.95 (1H, d， J=2.2Hz) 、 7.14-7.18 (2H, m) 、 7.19-7.23 (2H， m)

<実施例 2〉

錠剤の製造

30 gの（一）一 6— [3— (2—インダニルォキシ）一4—メトキシフヱニル] 一 6—メチノレ一 3， 4, 5, 6—テトラヒドロ一 2 H— 1， 3—ォキサジン一 2— オン、乳糖 253 g、トウモロコシデンプン 63 g、低置換ヒドロキシプロピルセルロース 40 g、ステアリン酸カルシウム 4 gを混和し、通常の方法で圧縮して前記化合物 1 Omgを含む錠剤を製造した。

<実施例 3>

カプセル剤の製造

30 gの（一）ー6— [3— (2—インダニルォキシ）一 4ーメトキシフエニル] —6—メチル一3， 4， 5， 6—テトラヒドロー 2H— 1， 3—ォキサジン一 2— オン、乳糖 260 g、トウモロコシデンプン 66 g、ステアリン酸カルシウム 4 g を混和した後、通常の方法でゼラチンカプセルに充填し、前記化合物 1 Omgを含むカプセル剤を製造した。ぐ実施例 4 >

吸入剤の製造

(-) 一 6— [3— （2—インダニルォキシ）一 4ーメトキシフエ二ル'] 一 6— メチルー 3， 4， 5, 6—テトラヒドロ一 2 H— 1， 3—ォキサジン一 2—オンをよく粉砕し、粒子径を 1〜5 /imとしたもの 0. 1 5 gと乳糖（32 5メッシュ、ディー. ェム. ブイ. 社製） 6 O gを混和する。通常の方法でカプセルに充填し、各カプセルが前記化合物 50 gを含むようにする。吸入は粉末吸入容器にカプセルを装填して行う。

<実施例 5 >

点眼剤の製造

滅菌精製水にメチルセルロース 0. 3 g、塩ィヒベンザルコニゥム液を微量、リン酸二水素ナトリウム 2 g、水酸化ナトリウム適量を加え、溶解後、除塵 ·除菌ろ過を行った。この液に無塵 ·無菌の（一）一 6— [3 - (2—インダニルォキシ） —4—メトキシフエ二ル] 一 6—メチルー 3， 4, 5, 6—テトラヒドロー 2 H— 1, 3—ォキサジン一 2—オン 0. 5 gを懸濁させ、滅菌精製水を加えて全量を 1 00 mLとした。得られた懸濁液を洗浄 ·乾燥 ·滅菌した点眼容器に一定容量充填し、ノズル、キャップを施し、点眼剤を製造した。ぐ実施例 6 >

眼軟膏剤の製造

(一）一 6— [3- (2—インダニルォキシ）一 4ーメトキシフヱニル] 一 6— メチルー 3， 4， 5, 6—テトラヒドロー 2H— 1, 3—ォキサジン一 2—オン 0. 5 g、精製ラノリン 1 0. 0 g、眼科用白色ワセリン 80. O g及び流動パラフィン 0. 5 gをとり、眼科軟膏の製法に従って調製し、更に眼科用白色ワセリンを加えて調製することにより眼軟膏剤 1 00 gを製造した。一く試験例 1 >

ホスホジエステラーゼ（PDE) の分離及ぴ PDE阻害活性の測定

化合物の P D E阻害活性およぴ選択性を調べるために I型、 III型、 IV型及ぴ V 型の、 4種類の PDEアイソザィムを準備した [T r e n d s P h a r ma c o 1 . S c i . , 1 2， 1 9— 2 7 (1 9 9 2) ]。 I型 P D Eはシグマ社より購入したものを用いた。また、 III型、 IV型及び V型の PDEアイソザィムはラットょり採取した血小板（III型および V型）又は好中球（IV型）力ら部分精製した。各酵素源を 2 O mMビストリス、 EDTA (エチレンジァミン 4酢酸） 2 mM_N PM S F (フエ-ルメチルスルフォニルフルオラィド) 0. 1 mM、 2—メルカプトェタノール 5 mM、ぺプスタチン 0. 00 lmM、ロイぺプチン 0. 0 1 mMを含む緩衝液 (ρΗ 6. 5) 中でホモジナイズし、 3 0 0 00 XGで 3 0分間遠心して得られた遠心上清をィ才ン交換カラム（Qセファロースフアーストフロー、ファノレマシァ社製）にかけ、 0〜1Μの酢酸ナトリウムで溶離した。部分精製したアイソザィムは各々既知の選択的阻害剤の効果を調べることによって同定した。

被検物質は DMS O (ジメチルスルホキシド）中に溶解し、 5 mMの塩化マグネシゥムを含む 5 OmMトリス塩酸緩衝液中に添加した。この反応液に上記の PDE アイソザィムおよび³ H— c AMP (III型、 IV型 PDEのとき）又は³ H— c GMP ( I型、 V型 PDEのとき）を基質として加え、 3 0°Cで 3 0分間反応させた。反応後 1 00度の沸騰液中に 5分間つけることによって反応を停止した。 PDEによつて生成したヌクレオチドは 5 ' ーヌクレォチダーゼで³ H—アデノシンまたは³ H -グァノシンに分解し、未反応の基質と反応生成物はィォン交換力ラム（ Q A Eセフアデッタス、フアルマシア社製）を通して分離した。溶出した³ H—ヌクレオシドの放射活性を液体シンチレーションカウンターで測定した。各被検物質の阻害活性は I C₅。値 (μΜ) で表し、 IV型に対する阻害活性を表 2に示した。また、各被検物質の I型、 III型、 V型に対する阻害活性は IV型に対する阻害活性の 1 0分の 1以下であった。表 2

<試験例 2 >

抗原誘発気道収縮抑制作用（抗喘息作用）

ハートレイ系雄性モルモットに卵白アルブミン（〇Α) を 3 5mg筋肉内投与して感作し、 4日後に同様に追加感作を行った。初回感作から 2 5〜2 9日後、ペントバルビタール麻酔したモルモットに気管力ニューレを揷入して人工呼吸を施した。 Ko n z e t t— R o e s s 1 e r法により気道抵抗をモニターし、 OA0. 0 5 mg/k g静脈内投与で惹起される気道抵抗の増加を調べた。被検物質は 0. 5 %カルボキシメチルセルロースに懸濁して抗原投与の 4 5分前に十二指腸内投与した。本発明の化合物の効果を ED_5Q値で表し、表 3に示す。表 3

<試験例 3 >

ァレルギ一性結膜炎モデルに対する改善作用

実験にはウィスター系のラット（日本クレア）を使用した。ラットに卵白アルブミン（OA、シグマ社製） 1 0 0 μ _§と 1 0 m g水酸ィ匕アルミニウム（Alum、 PIERCE 社製）を 1 m Lの生理食塩液に懸濁し、腹腔内投与することによつて感作した。ァレルギ一性結膜炎は、感作日から 3週目以降のラットを用い、生理食塩液で 3 Om gZniLの濃度に調製した OAを 10 μ L点眼することによって惹起した。薬物は、 1. 0% (w/v) の濃度で生理食塩液に懸濁し、 OAで結膜炎を惹起する 1 0分前に点眼した（陽性対照薬としてジフェンヒドラミンを 0. 3% (w/v) の濃度で生理食塩液に懸濁し、 OAで結膜炎を惹起する 10分前に点眼した）。薬物の効果は、 OA点眼後から 20分間に観察された、後肢で眼瞼を引つ搔く仕草（Itch - Scratch response：痒みの指標と考えられる）の回数を測定し、下記式より痒みの抑制率を求めた。

コントロール群：予め感作したラットに〇Aで結膜炎を惹起する 10分前に生理食塩水を点眼した。 '

無処置群：感作していないラット.に生理食塩水を点眼した。

§十算 ·Α(：

(被験物質群 -無処置群)

抑制率（％) = 100- X 00

(コントロール群

その結果、（一）一体は例数 5で 71.4%の抑制率を示した。ぐ試験例 4 >

TNF— α産生抑制作用

ラットをペントバルビタール麻酔下にてへパリン処置した試験管に採血を行つた。採血した血液と等量の RPMI— 1640培地を加え、 24we l 1 1 a t eに分注し、溶媒 (DMSO) 、または、溶媒に溶かした被験薬を添加し、 30 分間、 37°C、 5%。〇₂でプレインキュベーションを行った。反応は LP S (リポポリサッカライド）を添カ卩して開始し、 4時間、 37°C、 5%C〇₂でインキュベーションを行い、氷浴にて反応を停止した。反応停止後、 3000 r pm、 4°C、 15分間遠心分離し、上清中の TNF— αを EL I S Α法にて測定した。被験薬の活性は溶媒対照群に対する産生抑制率を求め、 TN F— _α産生を 5 0 %抑制する被験薬濃度を求め評価した。

その結果、（一）一体の IC₅。（ M)は 0. 11であった。

<試験例 5 >

N K^受容体拮抗作用

ヒト型 N K ₁受容体を発現させた CH0細胞を 25mM Tris- HC1、 6mM MnCl₂、 ImM EDTA、 10 i M PMSFを含む pH7. 4の緩衝液中でホモジナイズし、 800 g s 10分間遠心した。上清を lOOOOOg X 1. 0時間遠心し、得られた沈渣を上記緩衝液中に再度懸濁した。タンパク量を測定後、 0. 02mg protein/mLになるように、 20mM HEPES、 1. 0mM MnCl₂、 0. 01%BSAを含む pH7. 4の緩衝液で希釈し、 N K 受容体標本として使用した。

！^！^受容体への親和性は、 [¾] SR140333の bindingの阻害を測定することによつて求めた。前述した N Kェ受容体標本に DMS0中に溶解した被験物質及び [¾] SR140333 (最終濃度 0. 25nM) を加え、 25。Cで 90分間インキュベートした後、グラスフィルターで吸引濾過し、 lmLの 50mM Tris- HC1緩衝液 pH7. 4で 3回洗浄後、フィルター上の放射能活性を液体シンチレーシヨンカウンターで測定した。尚、被験物質は最終濃度で 10 μ Μ添カ卩し、 [¾] SR140333のバインディング阻害活性を測定した。 '

その結果、 (-) 一体はほぼ 100%の抑制率を示した。

<試験例 5 >

モルモット摘出気管支のサブスタンス: Ρ (Ν Κ _Χ ) 収縮に対する抑制作用体重 330〜496gのハートレイ系雄性モルモットを脱血屠殺後に気管を摘出し、鎖状標本を作製した。これを 95% 0₂ + 5% C0₂の混合ガスを通気した 3 Mインドメタシンを含む Krebs- Henseleit液を満たした organ bath中に lgの負荷で懸垂した。標本の収縮反応は FDピックァップ及びひずみ圧力ァンプを介してペンレコーダ一で記録した。標本が安定した後、サプスタンス Pを 10— ⁹〜10— ¾の濃度となるよう低濃度から累積添加して収縮反応を確認した。標本を Krebs-Henseleit液で数回洗浄した後；/ 本発明化合物を添カ卩して 20分間作用させた。その後、サブスタンス Pを累積添加して収縮を惹起した。

その結果、（一）一体はモルモットの摘出気管支におけるサブスタンス P誘発収縮のグラフを用量依存的に右側にシフトさせ、拮抗的な阻害作用を示した。産業上の利用可能性

本発明の化合物はラセミ体に比べて約 2倍のホスホジエステラーゼ（PDE) IV阻害作用及び抗喘息作用を有しており、またラセミ体に比べて水に対する溶解性が著しく高いことから、喘息、慢性閉塞性肺疾患等の炎症性疾患などの治療及び/ Xは予防のための医薬の有効成分として極めて有用である。

Claims

請求の範'囲

1. (一） - 6 - [3— (2—インダニルォキシ) 一 4—メトキシフエニル] 一 6 ーメチルー 3， 4, 5， 6—テトラヒドロー 2H— 1， 3—ォキサジン一 2—オン又はその水和物若しくはその溶媒和物。

2. (一）一 6— [3— (2—インダニルォキシ）一 4ーメトキシフエ二ル] - 6 一メチル一 3, 4, 5, 6—テトラヒドロー 2H— 1， 3—ォキサジン一 2—オン並びにその水和物及びその溶媒和物からなる群から選ばれる物質を有効成分として含む医薬。

3.有効成分である上記の物質と製剤用添加物とを含む医薬組成物の形態の請求の範囲第 2項に記載の医薬。

4.炎症性疾患の治療及び Z又は予防のための請求の範囲第 2項又は第 3項に記載の医薬。

5. 喘息の治療及び又は予防のための請求の範囲第 2項又は第 3項に記載の医

6.慢性閉塞性肺疾患の治療及び Z又は予防のための請求の範囲第 2項又は第 3項に記載の医薬。

7.了レルギ一性眼疾患の治療及び Z又は予防のための請求の範囲第 2項又は第 3 項に記載の医薬。

8. (—）一 6— [3— (2—インダニノレォキシ）一 4—メトキシフヱニル] 一 6 —メチルー 3, 4， 5， 6—テトラヒドロー 2H— 1， 3—ォキサジン一 2—オン並びにその水和物及ぴその溶媒和物からなる群から選ばれる物質を含むホスホジエステラーゼ IV阻害薬。

9. (一）一 6— [3— （2—インダニルォキシ）一 4ーメトキシフヱニル] - 6 ーメチルー 3， 4, 5， 6—テトラヒドロー 2H— 1, 3—ォキサジン一 2—オン並びにその水和物及ぴその溶媒和物からなる群から選ばれる物質を含む TN F— 産生阻害薬。

10. (一) — 6— [3 - (2—インダ-ルォキシ）一 4ーメトキシフエニル] 一 6—メチノレー 3, 4, 5, 6—テトラヒドロ一 2 H— 1, 3—ォキサジン一 2—ォン並びにその水和物及びその溶媒和物からなる群から選ばれる物質を含む；^！^受容体拮抗薬。