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WO2003054224A3 - Procede et dispositif integre permettant de deceler des methylations de la cytosine - Google Patents

Procede et dispositif integre permettant de deceler des methylations de la cytosine Download PDF

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WO2003054224A3
WO2003054224A3 PCT/DE2002/004507 DE0204507W WO03054224A3 WO 2003054224 A3 WO2003054224 A3 WO 2003054224A3 DE 0204507 W DE0204507 W DE 0204507W WO 03054224 A3 WO03054224 A3 WO 03054224A3
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Abstract

La présente invention concerne un procédé permettant de déceler des polymorphismes de l'ADN et une méthylation de la cytosine. Ce procédé consiste a) à extraire l'ADN à analyser d'un prélèvement; b) à traiter par voie chimique et/ou enzymatique l'ADN à analyser si une analyse de la méthylation de la cytosine est à effectuer ; c) à amplifier l'ADN à analyser dans une réaction de polymérase, une amorce étant présente dans la solution et une amorce étant liée à la surface d'une phase solide, au moins une de ces amorces étant constituée de deux domaines, celui situé à l'extrémité 3' étant hybridé à l'ADN à analyser mais celui situé à l'extrémité 5' n'étant pas hybridé ; d) à procéder à une nouvelle amplification de l'ADN amplifié en c), l'amorce de cette deuxième amplification étant hybridée au domaine situé à l'extrémité 5' d'au moins une première amorce ou lui étant identique, ces amorces de la deuxième amplification étant dotées d'une marque décelable ; e) à hybrider les produits d'amplification aux oligonucléotides et/ou aux oligomères PNA qui sont liés à une phase solide et ne fonctionnent pas comme amorces dans l'amplification. L'hybridation permet de tirer des conclusions sur les caractéristiques de séquence ou le modèle de méthylation de l'ADN à analyser.
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