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WO2002049668A1 - Verwendung von kompatiblen soluten als adjuvantien für impfstoffe - Google Patents

Verwendung von kompatiblen soluten als adjuvantien für impfstoffe Download PDF

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WO2002049668A1
WO2002049668A1 PCT/DE2001/004836 DE0104836W WO0249668A1 WO 2002049668 A1 WO2002049668 A1 WO 2002049668A1 DE 0104836 W DE0104836 W DE 0104836W WO 0249668 A1 WO0249668 A1 WO 0249668A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
vaccine
vaccines
compatible solutes
compatible
oil
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
PCT/DE2001/004836
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Georg Melmer
Thomas Schwarz
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Bitop Gesellschaft fur Biotechnische Optimierung mbH
Original Assignee
Bitop Gesellschaft fur Biotechnische Optimierung mbH
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from DE10065986A external-priority patent/DE10065986A1/de
Priority claimed from DE10064401A external-priority patent/DE10064401A1/de
Application filed by Bitop Gesellschaft fur Biotechnische Optimierung mbH filed Critical Bitop Gesellschaft fur Biotechnische Optimierung mbH
Priority to AU2002229491A priority Critical patent/AU2002229491A1/en
Priority to DE10195473T priority patent/DE10195473D2/de
Publication of WO2002049668A1 publication Critical patent/WO2002049668A1/de
Anticipated expiration legal-status Critical
Ceased legal-status Critical Current

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Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants

Definitions

  • the invention relates to pharmaceutical formulations containing proteins, peptides, polypeptides and / or nucleic acids. It also affects vaccines, adjuvants and stabilizers for pharmaceutical formulations. Furthermore, the invention relates to the use of compatible solutes as stabilizers for pharmaceutical formulations and as adjuvants.
  • Vaccines traditionally consist of living, weakened pathogens, completely inactivated organisms or inactivated proteins. Although these forms have proven successful in the past, there have been significant disadvantages for serious illnesses:
  • Completely inactivated vaccines can have pathogenic components that can lead to undesirable side effects.
  • pathogens such as hepatitis B, C, papillomavirus
  • Some pathogens are very difficult or impossible to keep in culture.
  • adjuvants are generally added to the vaccines, which are intended to increase the immune response in other ways.
  • adjuvants are known.
  • Factors that influence the choice of adjuvants for vaccines are the cost and the complicability of the preparation, the effects and / or side effects in use and the acceptance as a component in medicinal products.
  • a group of particulate adjuvants are mineral compounds. From this group, only aluminum compounds, for example aluminum hydroxide, are approved and have been used for a long time and very widely.
  • the advantages of aluminum hydroxide are its few side effects and the inexpensive, simple availability.
  • a depot function with delayed release of the antigen, a possible stabilizing effect on the antigen conformation and the simulation of the humoral immune response were identified as mechanisms of action for aluminum hydroxide.
  • Aluminum hydroxide as a relatively weak adjuvant are that it is not equally effective for all antigens and the cellular immune response is not affected because Langerhans cells are not reached. Furthermore, aluminum hydroxide can only be used in conjunction with relatively strong antigens. Aluminum hydroxide is also suspected to be involved in the formation of allergies and also neurological diseases such as Alzheimer's disease.
  • Another group of particulate adjuvants are hydrophobic and surface-active substances. These include mineral oils which are used to produce emulsions of various types (e.g. water-in-oil, oil-in-water, water-in-oil-in-water). These types of emulsion have different immunomodulatory effects, stabilizing effects on the antigen presentation on effector cells and depot effects when the antigen is released in the body. Such adjuvants cannot be used in humans, but only in animals.
  • Immunological adjuvants were originally defined as substances that, when combined with certain specific antigens, produce more immunity than the antigen itself. However, despite intensive research, only one adjuvant is approved by the American Food & Drug Administration (FDA). These are aluminum-based mineral salts (generic alum). Although alum was previously considered to be very safe, there is a strong need to remove alum as an adjuvant. Aluminum is suspected to be involved in Alzheimer's disease and possibly also other diseases. But above all, alum is only a very weak adjuvant. There is also great concern because alum can trigger an (IgE) response that is associated with some allergenic reactions in humans.
  • IgE an
  • adjuvants are often empirical in nature, so there is no clarity about the mode of action. It is still difficult to make predictions about suitable adjuvants.
  • Vaccines / vaccines within the scope of the invention mean both vaccines / vaccines for active as well as for passive immunization. However, the invention preferably relates to vaccines / vaccines for active immunization.
  • Extremophilic microorganisms synthesize certain small molecules to protect against extreme living conditions. These connections are called Compatible Solutes. These compatible solutes from extremophilic microorganisms include di-sugar alcohols from C3 to C6 sugars (especially di-myo-inositol phosphate (DIP), cyclic 2,3-diphosphoglycerate (cDPG) and 1,1-di-glycerol phosphate (DGP)), ß-mannosylglycerate (Firoin), ß-mannosylglyceramide (Firoin-A), ectoin, hydroxyectoin and / or di-mannosyl-di-inositol phosphate (DMIP) and / or derivatives, e.g. B. acids, salts or esters of these compounds.
  • DIP di-myo-inositol phosphate
  • cDPG cyclic 2,3-diphosphoglycerate
  • Vaccines that serve to protect the resistance situation must have a high stability almost more than other pharmaceuticals. Transport and distribution of the goods to the end user are particularly problematic. The consumer also expects that the purchased product does not spoil immediately after purchase, but can be kept in stock for a few days or weeks, depending on the product. Conventionally, labile vaccines or pharmaceuticals are therefore preserved with stabilizing agents or by lyophylization, which are mostly used in the form of chemical monosubstances or their combinations. The aspect of bioavailability and the optimal biological half-life is often taken into account in addition to galenics by certain formulations.
  • stabilizers for vaccines are important factors which influence the selection of stabilizers for vaccines.
  • Other important factors which influence the selection of stabilizers for vaccines are the cost and the complicability of the preparation, the effects and / or side effects in use and the acceptance as a component in medicinal products.
  • a large number of additives for stabilizing pharmaceutical products are known from the prior art. These include e.g. B. Additives based on flavorings, alcohols, organic acids, aldehydes, phenolic substances and essential oils. Some of the known stabilizers significantly improve durability. However, they are rejected by many consumers because their effects on the health of the consumer are not known and harmful effects, especially if they are repeated over a long period of time, cannot be excluded. However, most of the stabilizers used so far have side effects, and these substances also do not meet the requirements placed on the safety of stabilizers, such as stability with regard to the stabilizing effect, minimal toxicity without interaction with the antigen, further degradability in the organism and the lack of one own immunogenic effect.
  • the proteins can also become cloudy or adsorbed on the walls of the vessels, which considerably deteriorate the quality of these products.
  • they can be lyophilized and / or stored at a low temperature, preferably (4 ° C; -2 to - 8 ° C; -20 ° C; -80 ° C).
  • a low temperature preferably (4 ° C; -2 to - 8 ° C; -20 ° C; -80 ° C.
  • the above instabilities can increase during the lyophilization, freezing, solubilization and thawing process.
  • the aforementioned problems also relate to pharmaceutical formulations based on proteins, peptides, polypeptides and / or nucleic acids.
  • the present invention relates to an adjuvant or an adjuvant combination for vaccines comprising at least one substance from the group of compatible solutes.
  • the group of compatible solutes named in the invention comprises various low-molecular substances from extremophilic microorganisms, namely ectoin, hydroxyectoin, di-myo-inositol phosphate (DIP), cyclic 2,3-diphosphoglycerate (cDPG), 1,1-di-glycerol phosphate ( DGP), ß-mannosylglycerate (Firoin), ß-mannosylglyceramide (Firoin-A) and / or di-mannosyl-di-inositol phosphate (DMIP) and / or a derivative, e.g.
  • the invention further comprises crude extracts of compatible solutes from microorganisms and mixtures of compatible solutes.
  • the invention further relates to the production of combination preparations from compatible solutes with adjuvant effect and vaccines or vaccines, including the associated intermediate stages, or constructs, production processes and uses.
  • the present invention relates to an adjuvant or an adjuvant combination for vaccines comprising at least one substance from the group of
  • Solute includes various low molecular weight substances from extremophiles
  • Microorganisms namely ectoin, hydroxyectoin, di-myo-inositol phosphate
  • DIP cyclic 2,3-diphosphoglycerate
  • cDPG cyclic 2,3-diphosphoglycerate
  • DGP 1,1-di-glycerol phosphate
  • ß-mannosylglycerate Firoin
  • ß-mannosylglyceramide Firoin-A
  • DMIP Di-mannosyl-di-inositol phosphate
  • B an acid, salt or ester of these compounds.
  • the invention further relates to the
  • the adjuvant combination according to the invention is in the form of an emulsion.
  • Emulsions suitable according to the invention are, for example, water-in-oil, oil-in-water or water-in-oil-in-water emulsions.
  • An adjuvant for vaccines in the form of an oil-in-water emulsion is preferred according to the invention.
  • Another object of the present invention is a method for producing an adjuvant for vaccines, comprising a combination of vaccine and Compatible Solut.
  • the preparation takes place according to the invention in such a way that the antigens are prepared, purified and stored in a stable manner in the presence of the compatible solute (s).
  • This method offers the advantage that production and storage advantages can be combined with the advantage of the adjuvant effect of compatible solutes.
  • Another object of the present invention are vaccines containing an adjuvant according to the invention.
  • the vaccines can optionally contain other pharmaceutically acceptable excipients, carriers and / or solvents.
  • the vaccines according to the invention are produced in a manner known per se.
  • the vaccines according to the invention are notable for the fact that the immune response is substantially greater with the same amount of antigen. This makes it possible, with the same immune response, to reduce the amount of antigen without impairing the vaccination protection achieved. This leads to a much cheaper vaccination.
  • the invention relates to combination preparations from compatible solutes and vaccines.
  • Combination preparations with compatible solutes conventional adjuvants (aluminum hydroxide, recombinant proteins, protein subunits, synthetic proteins, plasmid DNA and hydrophobic and surface-active substances such as mineral oil) and vaccines are particularly preferred.
  • Raw extracts of compatible solutes from microorganisms are particularly suitable as adjuvants.
  • adsorbate vaccines are used as vaccines.
  • the present invention relates to the field of vaccines / vaccines and the use of compatible solutes from extremophilic microorganisms for the production and / or the stable storage and transportation of vaccines / vaccines.
  • the present invention relates to a pharmaceutical composition or a vaccine which comprises the mixture of a vaccine and one or more compounds from the group of compatible solutes from extremophilic microorganisms.
  • the group of compatible solutes named in the invention comprises various low-molecular substances from extremophilic microorganisms, namely ectoin, hydroxyectoin, di-myo-inositol phosphate (DIP), cyclic 2,3-diphosphoglycerate (cDPG), 1,1-di-glycerol phosphate ( DGP), ß-mannosylglycerate (Firoin), ß-mannosylglyceramide (Firoin-A) and / or di-mannosyl-di-inositol phosphate (DMIP) and / or a derivative, e.g.
  • the invention further relates to the production of combination preparations from compatible solutes and vaccines or vaccines and / or other chemical or biological substances or structures for immunization, including the associated intermediate stages, or constructs, production processes and uses.
  • These compounds are added to vaccines to increase the stability during manufacture, transport, storage and / or in use.
  • the present invention relates to the field of vaccines and the use of compatible solutes from extremophilic microorganisms for the production and / or stable storage and / or transport of vaccines and vaccines.
  • the present invention thus relates to a method of using compatible solutes to improve the shelf life and / or stabilize vaccines and vaccines.
  • the present invention relates to a pharmaceutical composition or a vaccine which comprises the mixture of a vaccine and one or more compounds from the group of compatible solutes from extremophilic microorganisms.
  • the group of compatible solutes named in the invention comprises various low-molecular substances from extremophilic microorganisms, namely ectoin, hydroxyectoin, di-myo-inositol phosphate (DIP), cyclic 2,3-diphosphoglycerate (cDPG), 1,1-di-glycerol phosphate ( DGP), ß-mannosylglycerate (Firoin), ß-mannosylglyceramide (Firoin-A) and / or di-mannosyl-di-inositol phosphate (DMIP) and / or a derivative, e.g. B. an acid, salt or ester of these compounds.
  • DIP di-myo-inositol phosphate
  • cDPG
  • the invention further relates to the production of combination preparations from compatible solutes and vaccines or vaccines, or other chemical or biological substances or structures for immunization, including the associated intermediates, or constructs, production processes and uses. These compounds are added to vaccines to increase the stability during manufacture, transport, storage and / or in use.
  • the present invention had for its object to provide a vaccine formulation that the stability of vaccines z. B. on the basis of antigens in the form of peptides or proteins.
  • the vaccine according to the invention is not subject to any restrictions.
  • the antigens can be naturally occurring immunogenic proteins, e.g. B. act from viral or bacterial pathogens originating proteins or fragments or cellular degradation products in the form of peptides; or tumor antigens or fragments thereof.
  • the antigen is a tumor antigen or a natural or synthetic peptide derived therefrom, in this case the vaccines are present as tumor vaccines.
  • the present invention relates to the use of compatible solutes from extremophilic microorganisms, namely ectoin, hydroxyectoin, di-myo-inositol phosphate (DIP), cyclic 2,3-diphosphoglycerate (cDPG), 1,1-di-glycerol phosphate (DGP), ß -Mannosylglycerate (Firoin), ß-Mannosylglyceramid (Firoin-A) and / or Di-mannosyl-di-inositol phosphate (DMIP) and / or a derivative, e.g. B.
  • DIP di-myo-inositol phosphate
  • cDPG cyclic 2,3-diphosphoglycerate
  • DGP 1,1-di-glycerol phosphate
  • ß -Mannosylglycerate Firoin
  • ß-Mannosylglyceramid
  • the present invention relates to a pharmaceutical composition or a vaccine which comprises the mixture of a vaccine and one or more compounds from the group of compatible solutes.
  • the group of compatible solutes named in the invention comprises various low-molecular substances from extremophilic microorganisms, namely ectoin, hydroxyectoin, di-myo-inositol phosphate (DIP), cyclic 2,3-iphosphoglycerate (cDPG), 1,1-di-glycerol phosphate ( DGP), ß-mannosylglycerate (Firoin), ß-mannosylglyceramide (Firoin-A) and / or di-mannosyl-di-inositol phosphate (DMIP) and / or a derivative, e.g. B. an acid, salt or ester of these compounds.
  • the invention further relates to the production of combination preparations from compatible solutes and vaccines or vaccines, including the associated intermediate stages, or constructs, production processes and uses.
  • such biological liquids can also be synthetically composed solutions from an artificial or natural liquid matrix (e.g. serum or phosphate-buffered NaCl solution) known to the person skilled in the art and added biological substances, which in turn can be produced by genetic engineering.
  • an artificial or natural liquid matrix e.g. serum or phosphate-buffered NaCl solution
  • the amount of active antigen in the vaccine according to the invention can vary over a wide range.
  • the amount of peptide may vary. a. depending on the type of processing or the respective formulation.
  • the amount of peptide to be administered can be approximately 0.1 ⁇ g to approximately 5000 ⁇ g per vaccination dose, generally 1.0 ⁇ g to approximately 1000 ⁇ g, in particular approximately 10 ⁇ g to approximately 500 ⁇ g.
  • compatible solutes to pharmaceutical formulations, in particular vaccines, vaccines and / or other chemical or biological substances, liquids or structures also serves to stabilize them against stress conditions.
  • vaccines / vaccines and / or combination preparations in isolated components of organisms are stabilized against stress conditions.
  • the vaccines / vaccines are preferably protein and / or peptide-based Are vaccine.
  • the vaccines can also contain synthetic, recombinant or highly purified antigens.
  • the stress conditions are in particular elevated temperature, lyophilization, freezing, solubilization and / or thawing processes.
  • Stabilization against stress conditions is preferably carried out during manufacture, transport, storage and / or in use.
  • the stabilization against stress conditions is a long-term stabilization.
  • the use of the compatible solutes for a tumor vaccine, in particular based on one or more tumor-associated or tumor-specific antigens, is particularly preferred.
  • the invention further relates to vaccines, adjuvants and stabilizers for pharmaceutical formulations. Furthermore, the invention relates to the use of compatible solutes as stabilizers for pharmaceutical formulations and as adjuvants.
  • the adjuvant according to the invention is e.g. B. suitable for vaccines for pigs.
  • the adjuvant according to the invention is preferred for a vaccine against parvovirus infection in pigs.
  • the optimal concentration of the compatible solute in the vaccine preparation is between 0.05 M and 0.5 M. A concentration of 0.1 M is particularly preferred.
  • the stabilizer according to the invention is e.g. B. suitable for vaccines in humans.
  • the stabilizer according to the invention is preferred for a vaccine against polio (infantile paralysis) in humans, which is caused by picomaviruses of the genus enteroviruses.
  • the Compatible Solute is used alone or together with the known stabilizers such as magnesium chloride or sorbitol.
  • the optimal concentration of the compatible solute in the vaccine preparation is between 0.01 M and 1 M or better between 0.05 M and 0.5 M. A concentration of 0.1 M is particularly preferred.
  • the following formulation A or formulation B is used:
  • Standard stabilization solution 1 polysaccharides and other components
  • 10% w / v
  • hydroxyectoin and formulations containing hydroxyectoin have a positive impact on vaccine titers of protein vaccines after storage at refrigerator temperature.
  • the use of hydroxyectoin alone has advantages over formulation B since the addition of multicomponent stabilizing solution is no longer necessary.

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Abstract

Die Erfindung betrifft eine Proteine, Peptide, Polypeptide und/oder Nukleinsäuren enthaltende pharmazeutische Formulierung, die eine oder mehrere Verbindungen aus der Gruppe der Kompatiblen Solute enthält.

Description

VERWENDUNG VON KOMPATIBLEN SOLUTEN ALS ADJUVANTIEN FÜR IMPFSTOFFE
Die Erfindung betrifft Proteine, Peptide, Polypeptide und/oder Nukleinsäuren enthaltende pharmazeutische Formulierungen. Sie betrifft weiterhin Impfstoffe, Adjuvantien und Stabilisatoren für pharmazeutische Formulierungen. Darüber hinaus betrifft die Erfindung die Verwendung von Kompatiblen Soluten als Stabilisatoren für pharmazeutische Formulierungen und als Adjuvantien.
Vakzine bestehen traditionell aus lebenden, abgeschwächten Pathogenen, komplett inaktivierten Organismen oder inaktivierten Proteinen. Obwohl diese Formen sich in der Vergangenheit als erfolgreich erwiesen haben, haben sich doch entscheidende Nachteile für schwerwiegende Krankheiten herausgestellt:
So können bestimmte abgeschwächte lebende Viren in immunsupprimierten Individuen dennoch zu den entsprechenden Krankheitsbildern führen
Bei komplett inaktivierten Vakzinen können pathogene Komponenten vorliegen, die zu unerwünschten Nebeneffekten führen können.
Einige Pathogene (wie Hepatitis B, C, Papillomaviren) sind sehr schwierig oder überhaupt nicht in Kultur zu halten.
Bei der Anwendung von Impfstoffen wird in der Praxis oft eine nicht zufriedenstellende Wirksamkeit beobachtet, die sich beispielsweise in ungenügend hoher Antikörperausbildung und klinischer Manifestation trotz Impfung äußert. Ursache hierfür kann eine geringe Immunität der Antigene sein. Möglichkeiten diese zu erhöhen wären z. B. eine höhere Antigenkonzentration je Impfdosis. Dies scheitert jedoch häufig daran, daß bei der Virusvermehrung in Ziellinie oft nur eine begrenzte Viruskonzentration erreichbar ist. Ein Ausweg wäre hierbei, die Vermehrung in primären Zellkulturen, wobei oft höhere Viruskonzentrationen erzielt werden können. Diese Möglichkeit ist jedoch in vielen Fällen wegen gesetzlicher Bestimmungen nicht anwendbar.
Daher werden den Impfstoffen im allgemeinen Adjuvantien zugesetzt, welche die Immunantwort auf andere Weise erhöhen sollen. Derartige Adjuvantien sind bekannt.
Faktoren, welche die Auswahl von Adjuvantien für Impfstoffe beeinflussen, sind die Kosten und die Komplizierbarkeit der Herstellung, die Wirkungen und/oder Nebenwirkungen bei der Anwendung sowie die Akzeptanz als Bestandteil in Arzneimitteln.
Eine Gruppe der partikulären Adjuvantien sind Mineralverbindungen. Aus dieser Gruppe sind nur Aluminiumverbindungen, beispielsweise Aluminiumhydroxid, zugelassen und seit langem und sehr verbreitet angewandt. Vorteile des Aluminiumhydroxids sind seine geringen Nebenwirkungen und die kostengünstige, einfache Verfügbarkeit. Als Wirkmechanismen für Aluminiumhydroxid wurden eine Depotfunktion mit verzögerter Freisetzung des Antigens, eine eventuelle stabilisierende Wirkung auf die Antigenkonformation und die Simulation der humoralen Immunantwort festgestellt.
Nachteile des Aluminiumhydroxids als relativ schwaches Adjuvans bestehen darin, daß es nicht für alle Antigene gleich effektiv ist und die zelluläre Immunreaktion nicht beeinflußt wird, da die Langerhansschen Zellen nicht erreicht werden. Weiterhin ist Aluminiumhydroxid nur in Verbindung mit relativ starken Antigenen anwendbar. Aluminiumhydroxid steht auch im Verdacht an der Ausbildung von Allergien und auch neurologischen Erkrankungen wie Alzheimer Krankheit beteiligt zu sein. Eine andere Gruppe von partikulären Adjuvantien sind hydrophobe und oberflächenaktive Substanzen. Zu diesen gehören u. a. Mineralöle, die zur Herstellung von Emulsionen verschiedener Typen (z. B. Wasser-in-ÖI, Öl-in-Wasser, Wasser-in-öl-in-Wasser) verwendet werden. Diese Emulsionstypen haben in unterschiedlichem Maße immunomodulatorische Auswirkung, stabilisierende Auswirkung auf die Antigenpräsentation an Effektorzellen und Depotwirkung bei der Freisetzung des Antigens im Körper. Derartige Adjuvantien können aber nicht beim Menschen, sondern ausschließlich beim Tier angewendet werden.
In den letzten 10 Jahren wurden verschiedene neue Ansätze für die Vakzin-Entwicklung durchgeführt, die erhebliche Vorteile haben dürften. Diese neuen Ansätze verwenden rekombinante Proteine oder Proteinuntereinheiten, synthetische Peptide oder Plasmid-DNA. Obwohl diese Verfahren erhebliche Vorteile wie z. B. reduzierte Toxizität aufweisen sind sie oft wenig immunogen. Dies gilt besonders für Vakzine, die auf rekombinanten Proteinen oder Peptiden basieren. Es besteht daher ein großer Bedarf an neuen immunologischen Adjuvantien, die sich wirkungsvoll und kompatibel mit neuen Vakzinen kombinieren lassen.
Immunologische Adjuvantien wurden ursprünglich als Substanzen definiert, die in Kombination mit bestimmten spezifischen Antigenen mehr Immunität produzieren als das Antigen selbst. Allerdings ist trotz intensiver Forschung nur ein einziges Adjuvans durch die amerikanische Food & Drug Administration (FDA) zugelassen. Es handelt sich hier um aluminium-basierende Mineralsalze (Generika Alum). Obwohl Alum bislang als sehr sicher galt, gibt es einen starken Bedarf Alum als Adjuvans abzulösen. So steht Aluminium im Verdacht an der Alzheimer Krankheit und evtl. auch anderen Erkrankungen beteiligt zu sein. Vor allem aber ist Alum aber nur ein sehr schwaches Adjuvans. Große Bedenken bestehen auch, da Alum eine (IgE)-Antwort auslösen kann, die mit einigen allergenen Reaktionen beim Menschen assoziiert werden.
Von großer Bedeutung für die Adjuvansentwicklung ist die Sicherheit. Obwohl eine ganze Reihe von Adjuvantien in fortgeschrittenen klinischen Versuchen waren und eine hohe Wirkung zeigten, erwiesen sie sich als zu toxisch für eine Routineanwendung. Neben der Sicherheit sind für die Anwendung eines neuen Adjuvans auch die Biostabilität, die Verabreichung, die Kosten, die Bioverteilung und die Universalität wichtig.
Die Anwendung von Adjuvantien hat oft empirischen Charakter, so daß keine Klarheit über die Wirkungsweise besteht. Vorhersagen über geeignete Adjuvantien lassen sich noch schlecht treffen.
Als Impfstoffe/Vakzine im Bereich der Erfindung werden sowohl Impfstoffe/Vakzine zur aktiven als auch zur passiven Immunisierung verstanden. Die Erfindung bezieht sich jedoch vorzugsweise auf Impfstoffe/Vakzine zur aktiven Immunisierung.
Kompatible Solute
Extremophile Mikroorganismen synthetisieren bestimmte niedermolekulare Verbindungen zum Schutz vor den extremen Lebensbedingungen. Diese Verbindungen bezeichnet man als Kompatible Solute. Zu diesen Kompatiblen Soluten aus extremophilen Mikroorganismen zählen Di-Zuckeralkohole von C3 bis C6 Zuckern (insbesondere Di-myo-inositolphosphat (DIP), cyclisches 2,3 Diphosphoglycerat (cDPG) und 1,1-Di-Glycerin-Phosphat (DGP)), ß-Mannosylglycerat (Firoin), ß-Mannosylglyceramid (Firoin-A), Ectoin, Hydroxyectoin und/oder Di-mannosyl-di-inositolphosphat (DMIP) und/oder Derivate, z. B. Säuren, Salze oder Ester dieser Verbindungen.
Traditionelle Vakzine sind zumeist abgetötete oder geschwächte Krankheitserreger. Diese Vakzine sind in der Regel relativ stabil und können problemlos in die Anwendung gebracht werden. Im Gegensatz zu den traditionellen Impfstoffen enthalten die meisten der modernen Vakzine synthetische, rekombinante oder hochgereinigte Antigene in Form von Proteinen oder Peptiden. Diese Vakzine gelten in ihrer gezielten Impfwirkung als sicherer, weisen jedoch im allgemeinen den Nachteil geringerer Stabilität und Immunogenität auf. Um diesen Nachteil zu kompensieren, werden den Vakzinen Additive beigegeben, um die Stabilität und optional auch die spezifische Immunantwort auf Antigene zu verstärken und zu verlängern.
Vakzine die zum Schutz der Resistenzsituation dienen, müssen fast mehr noch als andere Pharmazeutika eine hohe Stabilität haben. Problematisch sind besonders der Transport und die Distribution der Ware bis zum Endverbraucher. Der Verbraucher erwartet darüber hinaus, daß das erworbene Produkt auch nach dem Kauf nicht sofort verdirbt, sondern, je nach Produkt, einige Tage oder Wochen auf Vorrat gehalten werden kann. Herkömmlicherweise werden daher labile Impfstoffe bzw. Pharmazeutika mit Stabilisierungsmitteln oder durch Lyophylisation haltbar gemacht, die meist in Form von chemischen Monosubstanzen oder deren Kombinationen eingesetzt werden. Dem Aspekt der Bioverfügbarkeit und der optimalen biologischen Halbwertzeit wird oft neben der Galenik auch durch bestimmte Formulierungen Rechnung getragen.
Traditionelle Vakzine sind zumeist abgetötete oder geschwächte Krankheitserreger. Diese Vakzine sind in der Regel relativ stabil und können problemlos in die Anwendung gebracht werden. Im Gegensatz zu den traditionellen Impfstoffen zielen die meisten der modernen Vakzine auf die Verwendung von synthetischen, rekombinanten und hochgereinigten Antigenen in Form von Proteinen oder Peptiden ab. Diese Vakzine gelten in ihrer gezielten Impfwirkung als sicherer, weisen jedoch im allgemeinen den Nachteil geringerer Stabilität und Immunogenität auf.
Die Grundvoraussetzung für die Verwendung eines Stabilisators ist die Sicherheit. Weitere wichtige Faktoren, welche die Auswahl von Stabilisatoren für Impfstoffe beeinflussen, sind die Kosten und die Komplizierbarkeit der Herstellung, die Wirkungen und/oder Nebenwirkungen bei der Anwendung sowie die Akzeptanz als Bestandteil in Arzneimitteln.
Aus dem Stand der Technik ist eine Vielzahl von Additiven zur Stabilisierung von pharmazeutischen Produkten bekannt. Hierzu zählen z. B. Additive auf der Basis von Aromastoffen, Alkoholen, organischen Säuren, Aldehyden, phenolischen Stoffen und ätherischen Ölen. Einige der bekannten Stabilisatoren verbessern die Haltbarkeit wesentlich. Sie werden jedoch von vielen Verbrauchern abgelehnt, da ihre Auswirkungen auf die Gesundheit des Verbrauchers nicht bekannt sind, bzw. schädliche Einflüsse, insbesondere bei wiederholter Aufnahme über einen langen Zeitraum, nicht ausgeschlossen werden können. Die meisten der bisher verwendeten Stabilisatoren weisen jedoch Nebeneffekte auf, auch erfüllen diese Substanzen nicht die Anforderungen, die an die Sicherheit von Stabilisatoren gestellt werden, wie Stabilität im Hinblick auf Stabilisationswirkung, minimale Toxizität ohne Wechselwirkung mit dem Antigen, femer Abbaufähigkeit im Organismus sowie Fehlen einer eigenen immunogenen Wirkung.
Werden labile proteinbasierende Vakzine gelagert, so kann es ebenfalls zu Eintrübungen oder Adsorption der Proteine an Gefäßwandungen kommen, welche die Qualität dieser Produkte erheblich verschlechtern. Um die Haltbarkeit labiler Komponenten wie beispielsweise Antigene und Vakzine zu gewährleisten, können diese lyophilisiert und/oder bei niedriger Temperatur, bevorzugterweise (4°C; -2 bis - 8°C; -20°C; -80°C) gelagert werden. Die oben genannten Instabilitäten können sich jedoch während des Lyophylisations-, Einfrier-, Solubilisierungs- und Auftauvorgangs verstärken.
Von großer Bedeutung für die Stabilisatorentwicklung ist die Sicherheit. Obwohl eine ganze Reihe von Adjuvantien in fortgeschrittenen klinischen Versuchen waren und eine hohe Wirkung zeigten, erwiesen sie sich als zu toxisch für eine Routineanwendung. Neben der Sicherheit sind für die Anwendung eines neuen Stabilisators auch die Biostabilität, die Verabreichung, die Kosten, die Bioverteilung und die Universalität wichtig.
Die vorgenannten Probleme betreffen darüber hinaus auch pharmazeutische Formulierungen auf Basis von Proteinen, Peptiden, Polypeptiden und/oder Nukleinsäuren.
Es besteht somit ein Bedarf an neuartigen pharmazeutischen Formulierungen der eingangs genannten Art. Diese Aufgabe wird gelöst durch pharmazeutische Formulierungen gemäß Anspruch 1. Bevorzugte Ausführungsformen der Erfindung sind Gegenstand der abhängigen Ansprüche.
Die vorliegende Erfindung betrifft ein Adjuvans oder eine Adjuvans-Kombination für Impfstoffe umfassend mindestens eine Substanz der Gruppe der Kompatiblen Solute. Die Gruppe der in der Erfindung benannten Kompatiblen Solute umfaßt verschiedene niedermolekulare Substanzen aus extremophilen Mikroorganismen, namentlich Ectoin, Hydroxyectoin, Di-myo-inositolphosphat (DIP), cyclisches 2,3 Diphosphoglycerat (cDPG), 1, 1-Di-Glycerin-Phosphat (DGP), ß-Mannosylglycerat (Firoin), ß-Mannosylglyceramid (Firoin-A) und/oder Di-mannosyl-di-inositolphosphat (DMIP) und/oder ein Derivat, z. B. eine Säure, ein Salz oder Ester dieser Verbindungen. Die Erfindung umfaßt weiterhin Rohextrakte Kompatibler Solute aus Mikroorganismen und Gemische Kompatibler Solute. Die Erfindung betrifft ferner die Herstellung von Kombinationspräparaten aus Kompatiblen Soluten mit adjuvantivem Effekt und Impfstoffen bzw. Vakzinen, einschließlich der damit in Zusammenhang stehenden Zwischenstufen, bzw. Konstrukte, Herstellungsverfahren und Verwendungen.
Die vorliegende Erfindung betrifft ein Adjuvans oder eine Adjuvans-Kombination für Impfstoffe umfassend mindestens eine Substanz der Gruppe der
Kompatiblen Solute. Die Gruppe der in der Erfindung benannten Kompatiblen
Solute umfaßt verschiedene niedermolekulare Substanzen aus extremophilen
Mikroorganismen, namentlich Ectoin, Hydroxyectoin, Di-myo-inositolphosphat
(DIP), cyclisches 2,3 Diphosphoglycerat (cDPG), 1,1-Di-Glycerin-Phosphat (DGP), ß-Mannosylglycerat (Firoin), ß-Mannosylglyceramid (Firoin-A) und/oder
Di-mannosyl-di-inositolphosphat (DMIP) und/oder ein Derivat, z. B. eine Säure, ein Salz oder Ester dieser Verbindungen. Die Erfindung betrifft ferner die
Herstellung von Kombinationspräparaten aus Kompatiblen Soluten mit adjuvantivem Effekt und Impfstoffen bzw. Vakzinen, einschließlich der damit in Zusammenhang stehenden Zwischenstufen, bzw. Konstrukte,
Herstellungsverfahren und Verwendungen. Überraschender Weise wurde gefunden, daß die o.g. Verbindungen aus der Gruppe der Kompatiblen Solute als Einzelsubstanzen und/oder in Kombination miteinander und/oder in Kombination mit konventionellen Adjuvantien (z. B. Aluminiumhydroxid, Mineralöl) die Immunantwort in synergistischer Weise steigern. Durch die Verwendung Kompatibler Solute konnte selbst beim Einsatz einer vergleichbar geringen Antigenmenge eine hohe Wirksamkeit erzielt werden.
Dies hat den Vorteil, daß für eine Impfung weniger Antigenmenge verwendet werden kann, wodurch sich die Kosten pro Impfdosis erheblich verringern lassen.
Vorteilhaft ist es, wenn die erfindungsgemäße Adjuvans-Kombination in Form einer Emulsion vorliegt. Erfindungsgemäß geeignete Emulsionen sind beispielsweise Wasser-in-öl-, öl-in-Wasser- oder Wasser-in-ÖI-in-Wasser- Emulsionen. Erfindungsgemäß bevorzugt ist ein Adjuvans für Impfstoffe in Form einer öl-in-Wasser-Emulsion.
Ein weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist ein Verfahren zur Herstellung eines Adjuvans für Impfstoffe, umfassend eine Kombination von Impfstoff und Kompatiblen Solut.
Die Herstellung erfolgt erfindungsgemäß in der Art, daß man die Antigene in Gegenwart des/der Kompatiblen Solute herstellt, aufreinigt und stabil lagert. Dieses Verfahren bietet den Vorteil, daß Produktions- und Lagerungsvorteile mit dem Vorteil des adjuvantiven Effektes Kompatibler Solute kombiniert werden können.
Ein weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind Impfstoffe enthaltend ein erfindungsgemäßes Adjuvans. Die Impfstoffe können gegebenenfalls weitere pharmazeutisch verträgliche Hilfsstoffe, Trägerstoffe und/oder Lösemittel enthalten. Die Herstellung der erfindungsgemäßen Impfstoffe erfolgt in an sich bekannter Weise. Die erfindungsgemäßen Impfstoffe zeichnen sich dadurch aus, daß die Immunantwort bei gleicher Antigenmenge wesentlich größer ist. Damit wird es möglich, bei gleicher Immunantwort, die Antigenmenge zu verringern, ohne den erzielten Impfschutz zu beeinträchtigen. Dies führt zu einer wesentlich kostengünstigeren Impfung.
Gemäß einer bevorzugten Ausführungsform betrifft die Erfindung Kombinationspräparate aus Kompatiblen Soluten und Impfstoffen. Besonders bevorzugt sind Kombinationspräparate mit Kompatiblen Soluten, konventionellen Adjuvantien (Aluminiumhydroxid, rekombinante Proteine, Proteinuntereinheiten, synthetische Proteine, Plasmid-DNA sowie hydrophobe und oberflächenaktive Substanzen wie z. B. Mineralöl) und Impfstoffen handelt. Rohextrakte Kompatibler Solute aus Mikroorganismen eignen sich besonders gut als Adjuvantien. Gemäß einer weiteren bevorzugten Ausführungsform werden als Impfstoffe Adsorbat-Impfstoffe eingesetzt.
Die vorliegende Erfindung bezieht sich auf das Gebiet der Impfstoffe/Vakzine und der Anwendung Kompatibler Solute aus extremophilen Mikroorganismen zur Herstellung und/oder der stabilen Lagerung sowie dem Transport von Impfstoffen/Vakzinen.
Die vorliegende Erfindung betrifft eine pharmazeutische Zusammensetzung bzw. eine Vakzine, die die Mischung eines Impfstoffs und einer oder mehrerer Verbindungen der Gruppe der Kompatiblen Solute aus extremophilen Mikroorganismen umfaßt. Die Gruppe der in der Erfindung benannten Kompatiblen Solute umfaßt verschiedene niedermolekulare Substanzen aus extremophilen Mikroorganismen, namentlich Ectoin, Hydroxyectoin, Di-myo-inositolphosphat (DIP), cyclisches 2,3 Diphosphoglycerat (cDPG), 1,1-Di-Glycerin-Phosphat (DGP), ß-Mannosylglycerat (Firoin), ß-Mannosylglyceramid (Firoin-A) und/oder Di-mannosyl-di-inositolphosphat (DMIP) und/oder ein Derivat, z. B. eine Säure, ein Salz oder Ester dieser Verbindungen. Die Erfindung betrifft ferner die Herstellung von Kombinationspräparaten aus Kompatiblen Soluten und Impfstoffen bzw. Vakzinen und/oder anderen chemischen oder biologischen Substanzen oder Strukturen zur Immunisierung, einschließlich der damit in Zusammenhang stehenden Zwischenstufen, bzw. Konstrukte, Herstellungsverfahren und Verwendungen.
Diese Verbindungen werden Vakzinen zur Erhöhung der Stabilität während der Herstellung, des Transports, der Lagerung und/oder in der Anwendung beigegeben.
Die vorliegende Erfindung bezieht sich auf das Gebiet der Vakzine und die Anwendung Kompatibler Solute aus extremophilen Mikroorganismen zur Herstellung und/oder stabilen Lagerung und/oder Transport von Vakzinen und Impfstoffen. Die vorliegende Erfindung betrifft somit ein Verfahren die Verwendung von Kompatiblen Soluten zur Haltbarkeitsverbesserung und/oder Stabilisierung von Impfstoffen und Vakzinen.
Die vorliegende Erfindung betrifft eine pharmazeutische Zusammensetzung bzw. eine Vakzine, die die Mischung eines Impfstoffs und einem oder mehreren Verbindungen der Gruppe der Kompatiblen Solute aus extremophilen Mikroorganismen umfaßt. Die Gruppe der in der Erfindung benannten Kompatiblen Solute umfaßt verschiedene niedermolekulare Substanzen aus extremophilen Mikroorganismen, namentlich Ectoin, Hydroxyectoin, Di-myo-inositolphosphat (DIP), cyclisches 2,3 Diphosphoglycerat (cDPG), 1 ,1-Di-Glycerin-Phosphat (DGP), ß-Mannosylglycerat (Firoin), ß-Mannosylglyceramid (Firoin-A) und/oder Di-mannosyl-di-inositolphosphat (DMIP) und/oder ein Derivat, z. B. eine Säure, ein Salz oder Ester dieser Verbindungen.
Die Erfindung betrifft ferner die Herstellung von Kombinationspräparaten aus Kompatiblen Soluten und Impfstoffen bzw. Vakzinen, oder anderen chemischen oder biologischen Substanzen oder Strukturen zur Immunisierung einschließlich der damit in Zusammenhang stehenden Zwischenstufen, bzw. Konstrukte, Herstellungsverfahren und Verwendungen. Diese Verbindungen werden Vakzinen zur Erhöhung der Stabilität während der Herstellung, des Transports, der Lagerung und/oder in der Anwendung beigegeben.
Der vorliegenden Erfindung lag die Aufgabe zugrunde, eine Vakzineformulierung bereit zustellen, die die Stabilität von Vakzinen z. B. auf der Grundlage von Antigenen in Form von Peptiden oder Proteinen verstärkt. Bezüglich der Peptid bzw. Proteinantigene unterliegt die erfindungsgemäße Vakzine keinerlei Beschränkungen. Bei den Antigenen kann es sich um natürlich vorkommende immunogene Proteine, z. B. von viralen oder bakteriellen Erregern stammende Proteine bzw. Fragmente oder zelluläre Abbauprodukte in Form von Peptiden handeln; oder um Tumorantigene bzw. Fragmente davon. In einer bevorzugten Ausführungsform ist das Antigen ein Tumorantigen bzw. ein davon abgeleitetes natürliches oder synthetisches Peptid, in diesem Fall liegen die Vakzine als Tumorvakzine vor.
Überraschenderweise konnte durch Zusatz von Kompatiblen Soluten zu Vakzinpräparaten eine Stabilisierung der Vakzine gegenüber vielfältigen Streßbedingungen wie Lyophylisation, Einfrieren, Auftauen, Resuspendieren, erhöhte Temperatur usw. gezeigt werden, ohne daß sich die Substanzen selber als instabil, toxisch, wechselwirkend mit dem Antigen, nicht-abbaufähig im Organismus oder immunogen erwiesen hätten. Überraschenderweise wurden bei der Verwendung der Kompatiblen Solute keine Nebenwirkungen festgestellt. Auch nach Lyophilisation mit Kompatiblen Soluten versetzter Impfstofflösungen erhält man nach Auflösen ein klares Produkt.
Die vorliegende Erfindung betrifft die Verwendung von Kompatiblen Soluten aus extremophilen Mikroorganismen, namentlich Ectoin, Hydroxyectoin, Di-myo-inositolphosphat (DIP), cyclisches 2,3 Diphosphoglycerat (cDPG), 1 ,1-Di-Glycerin-Phosphat (DGP), ß-Mannosylglycerat (Firoin), ß-Mannosylglyceramid (Firoin-A) und/oder Di-mannosyl-di-inositolphosphat (DMIP) und/oder ein Derivat, z. B. eine Säure, ein Salz oder Ester dieser Verbindungen zur Langzeitstabilisierung von biologischen Flüssigkeiten, insbesondere auch solchen, die durch Lyophilisation und anschließende Rekonstitution erhalten werden. Die vorliegende Erfindung betrifft eine pharmazeutische Zusammensetzung bzw. eine Vakzine, die die Mischung eines Impfstoffs und einem oder mehreren Verbindungen der Gruppe der Kompatiblen Solute umfaßt. Die Gruppe der in der Erfindung benannten Kompatiblen Solute umfaßt verschiedene niedermolekulare Substanzen aus extremophilen Mikroorganismen, namentlich Ectoin, Hydroxyectoin, Di-myo-inositolphosphat (DIP), cyclisches 2,3 iphosphoglycerat (cDPG), 1 ,1-Di-Glycerin-Phosphat (DGP), ß-Mannosylglycerat (Firoin), ß-Mannosylglyceramid (Firoin-A) und/oder Di-mannosyl-di-inositolphosphat (DMIP) und/oder ein Derivat, z. B. eine Säure, ein Salz oder Ester dieser Verbindungen. Die Erfindung betrifft ferner die Herstellung von Kombinationspräparaten aus Kompatiblen Soluten und Impfstoffen bzw. Vakzinen, einschließlich der damit in Zusammenhang stehenden Zwischenstufen, bzw. Konstrukte, Herstellungsverfahren und Verwendungen.
Im Sinn der Erfindung können solche biologischen Flüssigkeiten auch synthetisch zusammengesetzte Lösungen aus eine dem Fachmann in sich bekannten artifiziellen oder auch natürlichen Flüssigkeitsmatrix (z. B. Serum oder phosphatgepufferter NaCI-Lösung) und zugesetzten biologischen Substanzen, die ihrerseits gentechnisch hergestellt sein können, sein.
Die Menge an wirksamem Antigen in der erfindungsgemäßen Vakzine kann über eine breiten Bereich variieren. Die Menge an Peptid hängt u. a. von der Verarbeitungsart oder der jeweiligen Formulierung ab. Die zu verabreichende Menge an Peptid kann ca. 0.1 μg bis ca. 5000 μg pro Vakzinierungsdosis betragen, im allgemeinen 1.0 μg bis ca. 1000 μg, insbesondere ca. 10 μg bis ca. 500 μg.
Die Zugabe von Kompatiblen Soluten zu pharmazeutischen Formulierungen, insbesondere Impfstoffen Vakzinen und/oder anderen chemischen oder biologischen Substanzen, Flüssigkeiten oder Strukturen dient auch der Stabilisierung gegenüber Streßbedingungen. Dabei werden beispielsweise Impfstoffe/Vakzine und/oder Kombinationspräparate in isolierten Bestandteilen von Organismen gegenüber Streßbedingungen stabilisiert. Die Impfstoffe/Vakzine sind dabei vorzugsweise protein- und/oder peptidbasierende Vakzine sind. Auch können die ImpfstoffeΛ/akzine synthetische, rekombinante oder hochgereinigte Antigene enthalten. Die Streßbedingungen sind dabei insbesondere erhöhte Temperatur, Lyophylisations-, Einfrier-, Solubilisierungs- und/oder Auftauvorgänge. Durch die Zugabe der Kompatiblen Solute kann somit die spezifische Immunantwort auf Antigene verstärkt und/oder verlängert werden. Die Stabilisierung gegenüber Streßbedingungen erfolgt vorzugsweise während der Herstellung, des Transports, der Lagerung und/oder in der Anwendung. Insbesondere handelt es sich bei der Stabilisierung gegenüber Streßbedingungen um eine Langzeitstabilisierung. Besonders bevorzugt ist der Einsatz der Kompatiblen Solute für ein Tumorvakzin, insbesondere auf Basis eines oder mehrer tumorassoziierter oder tumor-spezifischer Antigene, handelt.
Die Erfindung betrifft weiterhin Impfstoffe, Adjuvantien und Stabilisatoren für pharmazeutische Formulierungen. Darüber hinaus betrifft die Erfindung die Verwendung von Kompatiblen Soluten als Stabilisatoren für pharmazeutische Formulierungen und als Adjuvantien.
Die Erfindung soll nachfolgend anhand eines Ausführungsbeispiels exemplarisch erläutert werden.
Beispiel 1
Das erfindungsgemäße Adjuvans ist z. B. für Impfstoffe für Schweine geeignet. Bevorzugt ist das erfindungsgemäße Adjuvans für einen Impfstoff gegen Parvovirusinfektion beim Schwein. Die optimale Konzentration des Kompatiblen Soluts in der Impfstoffpräparation liegt zwischen 0,05 M und 0,5 M. Besonders bevorzugt ist eine Konzentration von 0,1 M.
Beispiel 2
Der erfindungsgemäße Stabilisator ist z. B. für Impfstoffe beim Menschen geeignet. Bevorzugt ist der erfindungsgemäße Stabilisator für einen Impfstoff gegen Polio (infantile paralyse) beim Menschen, die durch Picomaviren des Genus Enteroviren verursacht wird. Das Kompatible Solute wird alleine oder zusammen mit den bekannten Stabilisatoren wie Magnesiumchlorid oder Sorbitol verwendet. Die optimale Konzentration des Kompatiblen Soluts in der Impfstoffpräparation liegt zwischen 0,01 M und 1 M oder besser zwischen 0,05 M und 0,5 M. Besonders bevorzugt ist eine Konzentration von 0,1 M.
Beispiel 3
Ein Protein-Impfstoff (rekombinantes Protein A; interner Nomenklatur) ist nicht stabil lagerbar bei T = 0 °C. Er muß daher - falls keine Stabilisatoren gefunden werden - bei T = -70 °C gelagert werden. Dies ist aber aufgrund logistischer Rahmenbedingungen nicht möglich. Es muß daher eine Möglichkeit gefunden werden, den Protein-Impfstoff bei Kühlschranktemperatur (T = 5 °C) stabil über längere Zeiträume zu lagern. Hierbei müssen bestimmte Stabilisatoren hinzu gegeben werden. Folgende Formulierung A bzw. Formulierung B wird angesetzt:
Formulierung A:
Standardstabilisierungslösung 1 (Polysaccharide und weitere Komponenten) 10 % (w/v) Hydroxyectoin
Formulierung B:
Standardstabilisierungslösung 2 10 % (w/v) Hydroxyectoin
Als Kontrollen werden denaturiertes rekombinantes Protein A und bei -70 °C ohne Additive gelagertes Protein eingesetzt. Die Aktivität des Impfstoffs wird über Antigenbindungstests (relative Einheit; Scala 0 - 10) bestimmt. Es werden verschiedene - in der Aminosäuresequenz leicht variierende - Strukturen des rekombinanten Proteins A (Typ AA - AB - AC) getestet. Ergebnis:
Figure imgf000016_0001
Es wird beobachtet, daß Hydroxyectoin und hydroxyectoinhaltige Formulierungen einen positiven Einfluß auf Impfstofftiter von Protein-Impfstoffen nach Lagerung bei Kühlschranktemperatur haben. Gegenüber der Formulierung B hat die alleinige Verwendung von Hydroxyectoin Vorteile, da die Zugabe von Mehrkomponenten-Stabilisationslösung nicht mehr notwendig ist.
Bei Ectoin und Firoin handelt es sich um eingetragene Marken.
- Ansprüche

Claims

Patentansprüche
1. Proteine, Peptide, Polypeptide und/oder Nukleinsäuren enthaltende pharmazeutische Formulierung, dadurch gekennzeichnet, daß sie eine oder mehrere Verbindungen aus der Gruppe der Kompatiblen Solute enthält.
2. Formulierung gemäß Anspruch 1 , dadurch gekennzeichnet daß sie als kompatible Solute eine oder mehrere der folgenden Verbindungen enthält: Ectoin, Hydroxyectoin, Di-Zuckeralkoholphosphate von C3 bis C6 Zuckeralkoholen, ?-Mannosylglycerat (Firoin), iff-Mannosylglyceramid (Firoin-A), Di-mannosyl-di-inositolphosphat (DMIP) und/oder oder physiologisch verträgliche Derivate davon.
3. Formulierung gemäß Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß die Di-Zuckeralkohole Di-myo-inositolphosphat (DIP), cyclisches 2,3 Diphosphoglycerat (cDPG), 1,1-Di-Glycerin-phosphat (DGP) sind.
4. Formulierung gemäß Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, daß das oder die Kompatiblen Solute darin in einer Konzentration von 0,05 bis 0,5 M und vorzugsweise 0,1 M vorliegen.
5. Impfstoff zur aktiven oder passiven Immunisierung gemäß einem der vorstehenden Ansprüche.
6. Impfstoff gemäß Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, daß das oder die darin enthaltenen Antigene synthetische, rekombinante und/oder hochgereinigte Antigene sind.
7. Impfstoff, gemäß Anspruch 5 oder 6, dadurch gekennzeichnet, das oder die Antigene eines oder verschiedene Proteine, Peptide oder Nukleinsäuren oder eine Mischung davon sind.
8. Impfstoff gemäß einem der Ansprüche 5 bis 7, dadurch gekennzeichnet, daß eine Vakzinierungsdosis einen Antigengehalt von 0,1 μg bis 5 mg, vorzugsweise 1,0 μg bis 1,0 mg und besonders bevorzugt 10 μg bis 0,5 mg aufweist.
9. Impfstoff gemäß einem der vorstehenden Ansprüche 5 bis 8, dadurch gekennzeichnet, daß er weiterhin eine oder mehrere der folgenden Adjuvantien enthält: Aluminiumhydroxid, rekombinante Proteine, Proteinuntereinheiten, synthetische Proteine, Nukleinsäuren, insbesondere Plasmid-DANN, sowie hydrophobe und/oder oberflächenaktive Substanzen wie z. B. Mineralöl.
10. Tumorimpfstoff gemäß einem der vorstehenden Ansprüche 5 bis 9, vorzugsweise enthaltend ein oder mehrere tumorassoziierte und/oder tumorspezifische Antigene.
11. Adsorbat-I mpfstoff gemäß einem der vorstehenden Ansprüche 5 bis 10.
12. Adjuvans, dadurch gekennzeichnet, daß es eines oder mehrere der Kompatiblen Solute gemäß einem der Ansprüche 1 bis 4 enthält.
13. Adjuvans gemäß Anspruch 12, dadurch gekennzeichnet, daß mindestens eines der Kompatiblen Solute als Rohextrakt aus Mikroorganismen vorliegt.
14. Adjuvans gemäß einem der Ansprüche 12 oder 13, dadurch gekennzeichnet, daß es als Wasser-in-öl-, Wasser-in-ÖI-in-Wasser- und bevorzugt als öl-in-Wasser-Emulsion vorliegt.
15. Verwendung einer oder mehrerer der Kompatiblen Solute gemäß einem der Ansprüche 1 bis 4 als Stabilisator für pharmazeutische Formulierungen, vorzugsweise für Impfstoffe.
16. Verwendung gemäß Anspruch 15 bei der Herstellung, dem Transport, der Lagerung und/oder der Anwendung der Formulierungen.
17. Verwendung gemäß einem der Ansprüche 15 oder 16, dadurch gekennzeichnet, daß die Formulierung ein Impfstoff gemäß einem der Ansprüche 5 bis 11 ist.
18. Verwendung gemäß einem der Ansprüche 15 bis 17, dadurch gekennzeichnet, dass der Impfstoff in Gegenwart der/des Kompatiblen Solute/s hergestellt, aufgereinigt und/oder gelagert wird.
19. Verwendung einer oder mehrerer der Kompatiblen Solute gemäß einem der Ansprüche 1 bis 4 als Adjuvans zur kombinierten Verabreichung mit einem Impfstoff, insbesondere zur Verabreichung als Impfstoff-Adjuvans Kombinationspräparat oder zur isolierten Verabreichung.
20. Stabilisator für pharmazeutische Formulierungen enthaltend eines oder mehrere der Kompatiblen Solute gemäß einem der Ansprüche 1 bis 4.
21. Stabilisator gemäß Anspruch 20, dadurch gekennzeichnet, daß die Kompatiblen Solute als Wasser-in-ÖI-, Wasser-in-ÖI-in-Wasser- und vorzugsweise als Öl-in-Wasser-Emulsion vorliegen.
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