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WO2001068698A2 - Non-selective cation channel - Google Patents

Non-selective cation channel Download PDF

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Publication number
WO2001068698A2
WO2001068698A2 PCT/EP2001/002837 EP0102837W WO0168698A2 WO 2001068698 A2 WO2001068698 A2 WO 2001068698A2 EP 0102837 W EP0102837 W EP 0102837W WO 0168698 A2 WO0168698 A2 WO 0168698A2
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
nucleic acid
otrpc4
sequence
polypeptide
host
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
PCT/EP2001/002837
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German (de)
French (fr)
Other versions
WO2001068698A3 (en
Inventor
Guenter Schultz
Timothy Plant
Rainer Strotmann
Christian Harteneck
Karin Nunnenmacher
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Boehringer Ingelheim Pharma GmbH and Co KG
Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals Inc
Original Assignee
Boehringer Ingelheim Pharma GmbH and Co KG
Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Boehringer Ingelheim Pharma GmbH and Co KG, Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals Inc filed Critical Boehringer Ingelheim Pharma GmbH and Co KG
Publication of WO2001068698A2 publication Critical patent/WO2001068698A2/en
Publication of WO2001068698A3 publication Critical patent/WO2001068698A3/en
Anticipated expiration legal-status Critical
Ceased legal-status Critical Current

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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
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    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals

Definitions

  • the present invention relates to nucleic acids which code for the non-selective cation channel OTRPC4 and to polypeptides which are coded by said nucleic acids.
  • the invention further relates to hosts or host cells, said
  • the invention includes • blockers, activators and modulators of said OTRPC4 cation channels and pharmaceutical compositions containing said blockers, activators and modulators.
  • the invention also relates to non-human mammals which contain either OTRPC4 as a transgene, inactivated gene (knock-out) or modified gene (knock-in).
  • RVD regulated volume decrease
  • TRP transient receptor potential
  • This channel is for the C. elegans reactions to solutions with high Responsible for osmolarity and was therefore called OSM-9 (2), but so far nothing is known about the biophysical characteristics of OSM-9, and a corresponding homologous protein has not yet been described for mammals.
  • the family of TRP channels (TRPCs) (3) can be divided into three different subfamilies (4).
  • the largest family is the STRP subfamily (short TRP; named after its short N-terminus), consisting of the classic Drosophila channels TRP and TRPL (transient receptor potential-like) (5) and 7 mammalian homologues from TRP (TRPC1- 7 ) (6-15).
  • the channels of this family are involved in the calcium influx that is triggered by the activation of receptors that have in common that. they activate the phospholipase C.
  • the second subfamily of TRPCs was named OTRPC, after the first representative of this family OSM-9. The channels of this family are activated by chemical and physical stimuli.
  • the OTRPC family includes the vanilloid receptor (VRl) (16, 17), the vanilloid-like receptor (VRL-1, also known as GRC) (18, 19), and a channel whose possible function is that of an epithelial Calcium channel is (ECaC or also known as CaTl) (20, 21).
  • VRl is a non-selective calcium permeable channel that was cloned from rat dorsal ganglion cells (16). This channel is activated by heat and the substance capsaicin, which causes pain.
  • the recently criticized, VRR-related channel, VRL-1 can be activated by heat and could be involved in pain reception (18).
  • IGF-1 insulin-like growth factor-1
  • ECaC ECaC
  • CaTl 21
  • LTRPC long TRP channels, named after its long N-terminus
  • WO 00/32766 discloses human vanilloid receptors and their use.
  • the object of the present invention is to provide a new TRP channel with advantageous properties compared to the channels described above and known from the prior art. Description of the invention
  • RNA and RNA or DNA and DNA each have the same meaning.
  • the invention relates to a nucleic acid, characterized in that it codes for the non-selective cation channel OTRPC4 or for a fragment, a functional variant, an allele variant, a subunit, or variants of the said nucleic acid due to the degenerative code or a nucleic acid which is linked to said nucleic acid can hybridize.
  • the cation channel or OTRPC4 polypeptides according to the invention are described further below.
  • OTRPC4 nucleic acids according to the invention are preferably eukaryotic nucleic acids, particularly preferably human or murine, but also from rats, hamsters, goats, cattle, pigs, sheep, dogs, cats, monkeys and other eukaryotes known to the person skilled in the art.
  • said nucleic acid is a recombinantly produced nucleic acid, e.g. a cDNA.
  • nucleic acids according to the invention are shown as examples.
  • a nucleic acid RNS according to the invention is preferred.
  • a nucleic acid DNA according to the invention is further preferred.
  • a nucleic acid according to the invention is furthermore preferably characterized in that it contains 5 'or 3' or 5 'and 3' untranslated regions.
  • the nucleic acid according to the invention can contain further untranslated regions upstream and / or downstream.
  • Said untranslated region can comprise a regulatory element, such as a transcription initiation unit (promoter) or enhancer.
  • Said promoter can be, for example, a structurally active or inducible or development-controlled promoter.
  • Preferred, without excluding other known promoters are the constitutive promoters of human cytomegalovirus (CMV) and rous sarcoma virus (RSV), as well as simian virus 40 (SV40) and herpes simplex virus (HSV) promoters.
  • CMV cytomegalovirus
  • RSV40 simian virus 40
  • HSV herpes simplex virus
  • Inducible promoters include antibiotic-resistant promoters, heat shock promoters, hormone-inducible "Mouse Mammary Tumor Virus” (MMTV) promoters and the metallothionein promoter.
  • a nucleic acid according to the invention is furthermore preferably characterized in that it codes for a fragment of the non-selective cation channel OTRPC4.
  • a nucleic acid according to the invention is furthermore preferably characterized in that it codes for a functional variant of the non-selective cation channel OTRPC4.
  • a nucleic acid according to the invention is furthermore preferably characterized in that it codes for an allelic variant of the non-selective cation channel OTRPC4.
  • a nucleic acid according to the invention is furthermore preferably characterized in that it codes for variants of the nucleic acid on the basis of the degenerative code.
  • a nucleic acid is furthermore preferably characterized in that it can hybridize to a nucleic acid according to the invention under stringent conditions. Stringent conditions are known to the person skilled in the art and can be found in particular in Sambrook et al. (1989). Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd ed, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York..
  • a nucleic acid according to the invention is furthermore preferably characterized in that
  • said non-selective cation channel OTRPC4 is a mammalian cation channel.
  • a nucleic acid according to the invention is furthermore preferably characterized in that said non-selective cation channel OTRPC4 is murine.
  • a nucleic acid according to the invention is furthermore preferably characterized in that said non-selective cation channel OTRPC4 is human. Also preferred is a nucleic acid which is characterized in that it has the sequence
  • R is understood as A or G
  • M as A or C
  • S as i C or G
  • Y as C or T
  • K as G or T
  • W as A or T.
  • nucleic acid which is characterized in that the sequence CTCTCACCGCCTACTACCAGCCGCTGGAGGGCACAATGGCGGATTCCAGCGAA w GGCCCCCGCGCGGGGCCCGGGGAGGTGGCTGAGCTCCCCGGGGATGAGAGTGG CACCCCAGGTGGGGAGGCTTTTCCTCTCCTCCCTGGCCAATCTGTTTGAGGG GGAGGATGGCTCCCTTTCGCCCTCACCGGCTGATGCCAGTCGCCCTGCTGGCCC AGGCGATCrGGCGACCAAATCTGCGCATGAAGTTCCAGGGCGCCTTCCGCAAGG GGGTGCCCAACCCCATCGATCTGCTGGAGTCCACCCTATATGAGTCCTCGGTGG TGCCTGGGCCCAAGAAAGCACCCATGGACTCACTGTTTGACTACGGCACCTATC GTCACCACTCCAGTGACAACAAGAGGTGGAGGAAGAAGATCATAGAAGCAG CCGCAGAGCCCCAAAGCCTGCCTCAGCCGCCCCATCCTCAAAG
  • Conditions can hybridize, an allelic variant or a functional variant of said sequence or a variant of the nucleic acid comprises due to the degenerative code.
  • the human OTRPC4 cDNA sequence is included with the sequence shown above.
  • nucleic acid which is characterized in 'that the
  • Can hybridize conditions comprises an allelic variant or a functional variant of said sequence or a variant of the nucleic acid based on the degenerative code, wherein R is an A or G, M is an A or C, S is a C or G, Y is a C or T, K can be a G or T and W can be an A or T. According to the invention is shown with the above
  • Sequence comprises the murine OTRPC4 DNA sequence with 5 'and 3' untranslated sequences.
  • R is A or G
  • M is A or C
  • S is C or G
  • Y is C or T
  • K is G or
  • T and W can be an A or T.
  • the sequence shown above is the murine OTRPC4 DNA sequence with 5 'and 3' untranslated sequences.
  • Conditions can hybridize, an allelic variant or a functional variant of said sequence or a variant of the nucleic acid comprises due to the degenerative code.
  • the murine OTRPC4 cDNA sequence is included with the sequence shown above.
  • a recombinant vector is characterized in that it contains a nucleic acid according to the invention, as described above.
  • vectors according to the invention are viral vectors such as e.g. B. Vaccinia, Semliki Forest Virus and Adenovirus.
  • Vectors for use in COS cells have the Simian Virus (SV) 40 “origin of replication” and enable high numbers of copies of the plasmids.
  • Vectors for use in insect cells are, for example, E.
  • coli transfer vectors and contain, for example, the DNA coding for polyhedrin as a promoter
  • a recombinant vector according to the invention is characterized in that it is an expression vector.
  • a host characterized in that it contains a vector according to the invention.
  • a host according to the invention expresses an OTRPC4 polypeptide according to the invention, for example on the cell surface
  • the hosts according to the invention can be transiently or stably transfected with one of the said vectors, such a host is described by way of example in Example 1, Figure 4 of the invention.
  • Eukaryotic host cells according to the invention include fungi, such as. B. Pichia pastoris, Saccharomyces cerevisiae, Schizosaccharomyces, Trichoderma.
  • Another preferred host according to the invention is an insect cell (e.g. from Spodoptera frugiperda Sf-9, with a baculovirus expression system).
  • Cells according to the invention also include oocytes, for example from frogs or toads.
  • Hosts according to the invention can also be plant cells, e.g. by Nicotiana tabacum.
  • the OTRPC4 polypeptides according to the invention are particularly well expressed in mammalian cells and cell lines. Therefore, a preferred host according to the invention is a mammalian cell. Examples of mammalian cells according to the invention are HEK293, HeLa, COS, BHK, CHO cells.
  • a host according to the invention is therefore very particularly preferably an Sf9, HEK293 or HeLa cell.
  • a host according to the invention is preferably a bacteriophage. Baculovirus may be mentioned as an example.
  • Another host according to the invention is a prokaryotic host cell. Examples of prokaryotic host cells according to the invention are Escherichia coli, Bacillus subtilis, Streptomyces or Proteus mirabilis.
  • Another important aspect of the present invention relates to a polypeptide which is encoded by a nucleic acid according to the invention or a fragment, a functional variant, an allele variant, a subunit, a variant based on the degenerative nucleic acid code or a glycosylation variant thereof.
  • OTRPC4 polypeptide or fragment thereof is understood to mean one or more of the polypeptide (s) described here, ie a polypeptide selected from fragments, allelic variants, functional subunits, variants based on the degenerative nucleic acid code, a chemical derivative thereof, a fusion protein with said polypeptide or a glycosylation variant of OTRPC4.
  • OTRPC4 polypeptides according to the invention are preferably eukaryotic polypeptides, particularly preferably human or murine, but also from rats, hamsters, goats, cattle, pigs, sheep, dogs, cats, monkeys and from other eukaryotes known to the person skilled in the art.
  • OTRPC4 in the context of this invention is a new cation channel which, compared to the cation channels known from the prior art, has the advantageous property that it is regulated by changes in the osmolarity of the extracellular medium. It therefore represents a completely new generation of cation channels compared to known from the prior art cation channels, which are responsible, for example, as osmosensors for the regulation of the cell volume.
  • the channel activity is stimulated and inhibited by increasing it.
  • the channel is constitutively active with a physiological osmolarity of approx. 300 mosmol / l.
  • the channel is non-selective in its ion permeability, that is, it is continuous for all cations (Na + , K + , Ca 2+ ) and shows, for example, a certain preference for Ca 2+ ca ->) •
  • polypeptide according to the invention which is a fragment of the non-selective cation channel OTRPC4. This means part of the polypeptide according to the invention.
  • polypeptide according to the invention which is a functional variant of the non-selective cation channel OTRPC4.
  • OTRPC4 can differ from OTRPC4 by substitution, deletion or addition of one or more amino acids, preferably by 1 to 10 amino acids.
  • functional variants are understood to mean further representatives of the OTRPC4 family, which likewise have the above-described advantageous property of regulating channel activity by osmolarity.
  • Another important aspect of the present invention relates to a polypeptide according to the invention, which is an allelic variant of the non-selective cation channel OTRPC4.
  • polypeptide according to the invention which is a subunit of the non-selective cation channel OTRPC4.
  • Ion channels are often composed of subunits, for example the AMPA receptor. Accordingly, the invention also encompasses subunits of the OTRPC4 cation channel.
  • Another important aspect of the present invention relates to a polypeptide according to the invention, which is a variant of the non-selective cation channel OTRPC4 due to the degenerative nucleic acid code.
  • polypeptide according to the invention which is a chemical derivative of the non-selective cation channel OTRPC4.
  • OTRPC4 a chemical derivative of the non-selective cation channel
  • This is understood to mean molecules which are produced from the OTRPC4 polypeptides according to the invention by chemical reactions, for example by iodination, acetylation, binding to an effector molecule or radioisotope or to a toxin.
  • a polypeptide according to the invention which is a fusion protein from the non-selective cation channel OTRPC4 and another protein.
  • a fusion protein can be produced, for example, by recombinant expression of the OTRPC4 nucleic acid according to the invention, which is fused to a further nucleic acid which contains all the coding information “in frarne”.
  • This can be, for example, a marker protein or a reporter protein such as GFP or LacZ.
  • Other fusion partners are known to the person skilled in the art.
  • Another important aspect of the present invention relates to a polypeptide according to the invention, which is a glycosylation variant of the non-selective cation channel OTRPC4.
  • the invention comprises processes for the production of polypeptides according to the invention, characterized in that a host according to the invention is cultivated and said polypeptide is expressed.
  • Said hosts can be transfected, for example, stably or transiently with a vector or an expression vector which contains a nucleic acid coding for an OTRPC4 polypeptide or fragment.
  • the OTRPC4 polypeptide or fragment according to the invention is expressed on the cell surface of the host.
  • Said polypeptide can also be secreted into the medium.
  • the OTRPC4 polypeptides or fragments according to the invention can be used in a method according to the invention, for example in fungi, such as. B.
  • Pichia pastoris Saccharomyces cerevisiae, Schizosaccharomyces, Trichoderma with vectors that lead to surface expression, are prepared.
  • the method according to the invention for producing the OTRPC4 polypeptides or fragments can also be carried out with insect cells, eg. B. as a transient or stable expression system or baculovirus expression system.
  • insect cells eg. B. as a transient or stable expression system or baculovirus expression system.
  • Sf-9 insect cells are infected with, for example, Autographa californica nuclear polyhedrosis virus (AcNPV) or related viruses.
  • AcNPV Autographa californica nuclear polyhedrosis virus
  • the E. coli transfer vectors described above contain, for example, as a promoter the DNA coding for polyhedrin, behind which the DNA coding for the OTRPC4 polypeptide or fragment according to the invention is cloned.
  • Insect cell expression systems for the expression of OTRPC4 polypeptide or fragment are commercially available.
  • a mammalian expression system for example in a host according to the invention, for example the HEK293 cell or the Heia cell, which contains, for example in an expression vector, a nucleic acid according to the invention coding for OTRPC4 or a fragment thereof, can be used to express the OTRPC4 cation channel, the said Host is cultivated under conditions known to those skilled in the art and the OTRPC4 polypeptide or fragment is expressed, for example, on the cell surface.
  • An advantage of mammalian expression systems is that they enable very good glycosylation and folding conditions. Mammalian cells are with transient expression systems, stable expression systems and with viral expression systems such.
  • B. Vaccinia, Semliki Forest virus, adenovirus can be used, which are commercially available.
  • transgenic animals e.g. B. cows, goats, mice are suitable for a method according to the invention.
  • Transgenic plants such as Nicotiana tabacum (tobacco) can also be used in a method according to the invention. These are particularly suitable for the production of OTRPC4 polypeptide or fragment according to the invention.
  • OTRPC4 fragments according to the invention are preferably suitable for OTRPC4 fragments according to the invention, but also for the entire OTRPC4 polypeptide.
  • the OTRPC4 polypeptides according to the invention are either preferably on the surface, for example in the outer shell, i.e. one of the two bacterial cell membranes or the pyptidoglycan layer of the outer shell in Gram-negative bacteria or integrated in the cell membrane in Gram-positive bacteria, or intracellularly, e.g. in inclusion bodies or by periplasmic secretion in Gram-negative bacteria using vectors suitable for this purpose.
  • Another aspect of the present invention relates to an antibody protein, characterized in that it is specific for a polypeptide according to the invention.
  • the antibody protein according to the invention therefore binds to an epitope of OTRPC4 or to an epitope of one of the variants described above.
  • fragment antigen-binding Fab
  • These OTRPC4-specific antibody proteins according to the invention consist of the variable regions of both Chains that are held together by the subsequent constant region. These can arise from conventional antibodies by digestion of proteases, such as with papain, but similar Fab fragments can now also be produced using genetic engineering.
  • an antibody protein according to the invention is an F (ab ') 2 fragment which can be produced by proteolytic cleavage with pepsin.
  • an OTRPC4-specific antibody molecule according to the invention is such an Fv fragment. Because these Fv fragments are the covalent linkage of both chains because the cysteines of the constant chains are missing, the Fv fragments are often stabilized.
  • an antibody protein is referred to as an Fv single chain or "single-chain Fv" (scFv).
  • scFv single chain Fv
  • Prior art examples of such scFv antibody proteins are described in Huston et al. (1988, PNAS 16: 5879-5883). Therefore, in yet another preferred embodiment, an OTRPC4-specific antibody protein according to the invention is an Fv single chain protein (scFv).
  • an antibody protein according to the invention is a diabody specific for an OTRPC4 epitope.
  • Antibody fragment The person skilled in the art understands diabody as a bivalent homodimeric scFv derivative (Hu et al., 1996, PNAS 16: 5879-5883). The shortening of the linker in an scFv molecule to 5-10 amino acids leads to the formation of homodimers in which an inter-chain VH / VL assembly takes place. Diabodies can also be stabilized by incorporating disulfide bridges. Prior art examples of diabody antibody proteins are found in Perisic et al. (1994, Structure 2: 1217-1226).
  • minibody as a bivalent, homodimeric scFv derivative. It consists of a fusion protein which contains the CH3 region of an immunoglobulin, preferably IgG, very particularly preferably IgGl as the dimerization region, which is linked to the scFv via an Hwge region (eg also from IgGl) and an E / ' rcfer region is.
  • the disulfide bridges in the hinge region are mostly formed in higher cells and not in prokaryotes.
  • an antibody protein according to the invention is an OTRPC4-specific minibody antibody fragment.
  • Prior art examples of minibody antibody proteins can be found in ⁇ u et al. (1996, Cancer Res. 56: 3055-61).
  • triabody as: a trivalent homotrimeric scFv derivative (Kortt et al. 1997 Protein Engineering 10: 423-433). ScFv derivatives in which V ⁇ -VL are fused directly without a linker sequence lead to the formation of trimers.
  • a tetravalent miniantibody as a tetravalent homodimeric scFv derivative (Pack et al., 1995 J. Mol. Biol. 246: 28-34). The multimerization is carried out by tetrameric coiled c ⁇ zY domain.
  • An antibody protein according to the invention is particularly preferably completely human.
  • Another aspect of the present invention relates to a method for producing an antibody protein according to the invention, which comprises the following steps: a host selected from a eukaryotic or prokaryotic cell which contains one or more vectors with one or more nucleic acids specific for the antibody protein, is cultured under conditions in which said antibody protein is expressed by said host cell, and said antibody protein is isolated.
  • the antibody proteins of the invention can also be used in a method according to the invention in fungi such as. B. Pichia pastoris, Saccharomyces cerevisiae, Schizosaccharomyces, Trichoderma with vectors which lead to intracellular expression or secretion, getting produced.
  • the method according to the invention for producing the antibody proteins can also be carried out with insect cells, for. B. as a transient or stable expression system or baculovirus expression system, comparable to that described above.
  • Insect cell expression systems for the expression of antibody proteins are commercially available. Insect cell expression systems are particularly suitable for the scFv fragments according to the invention and Fab or F (ab ') 2 fragments and antibody proteins or fragments thereof, which are fused with effector molecules, but also for complete antibody molecules.
  • mammalian expression systems allow very good glycosylation and folding conditions, e.g. transient expression systems, e.g. B. in COS cells or stable expression systems such. B. BHK, CHO, myeloma cells. Mammalian cells are also e.g. B. with viral expression systems such. B. Vaccinia, Semliki Forest virus, adenovirus can be used. Also transgenic animals e.g. B. cows, goats, mice are suitable for a method according to the invention. Transgenic plants such as Nicotiana tabacum (tobacco) can also be used in a method according to the invention.
  • transient expression systems e.g. B. in COS cells or stable expression systems such.
  • Mammalian cells are also e.g. B. with viral expression systems such. B. Vaccinia, Semliki Forest virus, adenovirus can be used.
  • transgenic animals e.
  • the secretion of the antibody protein into the interstitial space can be achieved.
  • Production with prokaryotic expression systems such as Escherichia coli, Bacillus subtilis, Streptomyces or Proteus mirabilis is preferably suitable for antibody fragments according to the invention, such as Fab, F (ab ') 2, scFv fragments, minibodies, diabodies and multimers of said fragments.
  • the antibody proteins according to the invention are either intracellular, e.g. in inclusion bodies or by periplasmic secretion in Gram-negative bacteria using suitable vectors.
  • the invention also encompasses the use of a polypeptide according to the invention for finding blockers, activators or modulators of said polypeptides.
  • Blockers are understood to mean substances which inhibit the ion permeability of the channel by binding to the OTRPC4 cation channel itself, by binding to regulatory subunits or by interaction with the cell membrane or parts thereof.
  • Activators are understood to mean substances which stimulate the ion permeability of the channel by binding to the OTRPC4 cation channel itself, by binding to regulatory subunits or by interaction with the cell membrane or parts thereof.
  • Modulators are understood to mean substances which, by binding to the OTRPC4 cation channel itself, by binding to regulatory subunits or by interaction with the cell membrane or parts thereof, change the ion permeability of the channel, for example change the selectivity of the channel towards calcium and sodium.
  • Blockers, activators or modulators can develop their respective pharmacological properties depending on physical influences, such as pH, temperature and ion concentrations of the intracellular or extracellular mileus, or also depending on the activation state of the channel.
  • the invention furthermore encompasses the use of a host according to the invention for finding blockers, activators or modulators of OTRPC4 channels.
  • Another preferred aspect of the invention is a method for finding blockers, activators or modulators of OTRPC4, characterized in that a host according to the invention is incubated with a test substance.
  • a further, very particularly preferred aspect of the invention is a method according to the invention, characterized in that a membrane flow is measured, said membrane flow is compared with a membrane flow which is measured in said host after incubation with a known control substance or in the absence of the test substance.
  • a membrane flow is measured, said membrane flow is compared with a membrane flow which is measured in said host after incubation with a known control substance or in the absence of the test substance.
  • a method is described by way of example in Example 1, Figure 7 of the invention.
  • Another, very particularly preferred aspect of the invention is a method according to the invention in which said activator is bound to a channel, said host is incubated with a test substance and the displacement of the activator bound to the channel is measured by the test substance.
  • a further, very particularly preferred aspect of the invention is a method according to the invention, in which a host according to the invention is incubated with a test substance, the intracellular amount of a divalent cation is determined and said amount of the divalent cation is compared with the amount of said divalent cation, which in the Incubation of said hosts with a known control or in the absence of the Test substance is measured.
  • a method is described by way of example in Example 1 of the invention.
  • HTS refers in the context of the invention to an experimental method in which a large number of test substances are tested simultaneously, preferably an HTS method is carried out in microtiter plates, partially or completely automated and to electronic devices such as computers for data storage, analysis and interpretation by means of bioinformatics Robots which can handle a large number of microtiter plates at the same time and can carry out several thousand tests per day are preferably used for automation purposes, and a test substance is preferably tuned to a desired activator, blocker or modulator radio tion tested in a line-based system with a cell according to the invention.
  • the term HTS also includes ultra high throughput patterning (UHTS) tests.
  • UHTS ultra high throughput patterning
  • said UHTS methods are performed using 384 or 1536 well microtiter plates, submicroliter and subnanoliter pipettors, improved plate readers, and methods to prevent evaporation.
  • HTS processes are described by way of example in the patents US 5876946 A or US 5902732 A. The average person skilled in the art can adapt the methods described above and in the examples to an HTS or UHTS format without being inventive.
  • a HTS for identifying blockers, activators or modulators of the OTRPC4 channel can be carried out as described in Example 1, but can also be carried out using so-called inducible expression systems, for example a plasmid inducible by tetracycline (Gossen M, Bonin AL, Freundlich S, Bujard H: Inducible gene expression Systems for higher eukaryotic cells. Curr Opin Biotechnol 1994, 5, 516-20) or a system inducible by the ecdysone receptor (Invitrogen). These systems, as well as others, are commercially available.
  • Another important aspect of the present invention is an activator of OTRPC4, which can be found using a method according to the invention.
  • Another important aspect of the present invention is a blocker of OTRPC4, which can be found using a method according to the invention.
  • a modulator of OTRPC4 is a modulator of OTRPC4, which can be found using a method according to the invention.
  • a further preferred embodiment of the invention comprises an anti-sense nucleic acid, characterized in that it can hybridize to a part of a nucleic acid according to the invention under stringent conditions.
  • Anti-sense nucleic acid (English: “anti-sense nucleic acid” or also “anti-sense oligonucleotides”) in the context of this invention is understood to mean DNA or RNA molecules which are complementary to at least part of an inventive, i.e. mRNA coding for an OTRPC4 polypeptide or fragment.
  • a definition of anti-sense nucleic acid can also be found in the prior art (Weintraub HM, 1990 Scientific American, 262, 34-40). In the cell, anti-sense nucleic acid molecules hybridize to the corresponding mRNA and form a double-stranded molecule.
  • the anti-sense nucleic acids according to the invention interfere with the translation of the mRNA coding for OTRPC4 polypeptide or an OTRPC4 fragment, since the cell will not translate said double-stranded mRNA.
  • the central region of the anti-sense nucleic acid in the context of this invention contains at least 14 nucleotides that are complementary to the target RNA.
  • the invention also encompasses peptide nucleic acids, phosphodiester anti-sense nucleic acids and phosphothioate oligonucleotides which are complementary to at least part of an mRNA molecule coding for an OTRPC4 polypeptide or fragment according to the invention.
  • Such substances specific for other target RNA are known from the prior art (Boado RJ et al., 1998 JPharm Sei 87: 1308-1315.).
  • Example 1 In Example 1 (Table 1), five anti-sense sequences are listed as examples and the criteria that led to the selection of these sequences are shown.
  • Another preferred embodiment of the invention comprises an anti-sense nucleic acid according to the invention which is a ribozyme.
  • Ribozyme in the context of this invention is an RNA molecule that is specific to the target RNA, i.e. the invention for a
  • the ribozyme according to the invention preferably has a central sequence which is not complementary to and for the target RNA catalytic activity (catalytic region (a)) and two flanking sequences which are essentially complementary to two adjacent sequences of the target RNA (hybridization region (b)), so the binding of the ribozyme via base pairing and thereby the selective cleavage of the target Allow RNS.
  • a preferred embodiment of the ribozyme according to the invention can be represented by the following general formula: (b) (a) (b)
  • N G, C, A or U
  • R is purine and S is pyrimidine and the central region is No -3 o Sequence (a) can be replaced by a linker that is not a nucleic acid, namely, for example, a hydrocarbon chain (see also Thomson et al., 1993, Nucleic Acids Res 21, 5600-5603.).
  • the ribozymes according to the invention can be, for example, a "hammerhead""hairpin” or "axehead” ribozyme.
  • ribozyme can also be modified within the scope of the invention to obtain increased nuclease resistance, examples of which are the substitution of the 2'-OH groups of the ribose by 2'-H, 2'-O-methyl, 2'-O-allyl, 2'-fluorine or 2'- Amino groups (Paolella et al., 1992, and Pieken et al., 1991) or the modification of phosphodiester bonds, e.g.
  • RNA Ribonucleic acid
  • pharmaceutically acceptable carriers or auxiliaries phosphorothioate or phosphorodithioate
  • Eckstein, 1985, and Beaton et al. In : Eckstein, F. (ed.) Oligon ucleotides and analogues - A practical approach - Oxford, JRL Press (1991), 109-135) or by a methyl group (methylphosphonate; Miller, ibid., 137-154).
  • Further modifications include the conjugation of the RNA with poly-L-lysine, polyalkyl derivatives, cholesterol or PEG.
  • the ribozymes according to the invention preferably contain at least one of the phosphate modifications described above and / or at least one of the ribose modifications described above.
  • Another important aspect of the invention is a pharmaceutical composition which contains a nucleic acid according to the invention and pharmaceutically acceptable carriers or auxiliaries.
  • compositions which contains an anti-sense nucleic acid according to the invention and pharmaceutically acceptable carriers or excipients.
  • compositions which contains a polypeptide according to the invention and pharmaceutically acceptable carriers or excipients.
  • Pharmaceutically acceptable carriers or adjuvants in this invention can be physiologically acceptable compounds that, for example, stabilize or improve the absorption of OTRPC4 activator, blocker or modulator.
  • physiologically acceptable compounds include, for example, carbohydrates such as glucose, sucrose or dextrans, antioxidants such as ascorbic acid or glutathione, chelating agents, low molecular weight compounds or other stabilizers or auxiliaries (see also Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th edition, Mack Publ., Easton.).
  • Those skilled in the art know that the selection of a pharmaceutically acceptable carrier e.g. depends on the administration route of the connection.
  • compositions which contains a vector according to the invention and pharmaceutically acceptable carriers or excipients.
  • Said pharmaceutical composition can also contain a vector according to the invention for gene therapy and can additionally comprise as an adjuvant a colloidal dispersion system or liposomes for targeted application of the pharmaceutical composition.
  • a pharmaceutical composition which contains a host according to the invention and pharmaceutically acceptable carriers or auxiliaries. Also a host or a host cell which has a vector according to the invention contains, can be used in a pharmaceutical composition in the context of this invention, for example for gene therapy.
  • colloidal dispersion system An example of a targeted application system, e.g. for anti-sense oligonucleotides or ribozymes according to the invention is said colloidal dispersion system.
  • Colloidal dispersion systems include macromolecule complexes, nanocapsules, beads, and lipid-based systems including oil-in-water emulsions, micelles, mixed micelles and lipomas, or liposome formulations.
  • the preferred colloidal system of the invention is liposomes. Liposomes are artificial membrane vesicles that are useful as vehicles in vitro and in vivo. These formulations can carry cationic, anionic or neutral charge.
  • RNA, DNA and intact virions can enter the aqueous phase in the Encapsulated internally and transported to the target in a biologically active form (Fraley R et al., 1981, Trends s Biochem Sei 6, 77-80).
  • liposomes In addition to mammalian cells, liposomes have also been used for the targeted transport of nucleotides in plant,
  • the genes should be included with high efficiency without reducing their biological activity; (2) it should be preferential and 0 substantial binding to the target cell compared to non-target cells; (3) the aqueous phase of the vehicle should be with ho efficiency can be transferred into the target cell cytoplasm; and (4) the genetic information should be expressed accurately and efficiently (Mannino RJ et al., 1988, BioTechniques 6, 682-690).
  • composition of the liposomes usually consists of a combination of phospholipids, in particular high-phase transition-temperature phospholipids (English “high-phase transition temperature"), e.g. in combination with steroids, e.g. Cholesterol. Other phospholipids or other lipids can also be used.
  • the physical characteristics of the liposomes depend on the pH, the ion concentration and the presence of divalent cations.
  • the pharmaceutical composition of the present invention can also contain a vector according to the invention as a bare “gene expression vector”.
  • a vector according to the invention is not provided with an adjuvant for targeted application associated (e.g. liposomes, colloidal particles, etc.).
  • an adjuvant for targeted application associated e.g. liposomes, colloidal particles, etc.
  • a fundamental advantage of naked DNA vectors is the lack of an immune response that is caused by the vector itself.
  • the invention also relates to the use of a nucleic acid according to the invention for the manufacture of a medicament for the treatment of a disease selected from the group consisting of diabetes, hyperlipidemia, hyperproteinemia, hypertension, stroke, renal insufficiency, shock and other pathophysiological conditions which are characterized by hyper- and hypoosmolarity ,
  • a disease selected from the group consisting of diabetes, hyperlipidemia, hyperproteinemia, hypertension, stroke, renal insufficiency, shock and other pathophysiological conditions which are characterized by hyper- and hypoosmolarity
  • shock states of different origins such as cardiogenic, metabolic, septic, anaphylactic shock or shock states triggered by burns or polytrauma.
  • shock is understood to be a pathophysiological condition which leads to a generalized, serious reduction in tissue perfusion and consecutive tissue damage.
  • the invention also relates to the use of an anti-sense nucleic acid according to the invention for the manufacture of a medicament for the treatment of a disease selected from the group of diabetes, hyperlipidemia, hyperproteinemia, hypertension, stroke, renal insufficiency and and shock.
  • a disease selected from the group of diabetes, hyperlipidemia, hyperproteinemia, hypertension, stroke, renal insufficiency and and shock.
  • shock states of different origins such as cardiogenic, metabolic, septic, anaphylactic shock or shock states triggered by burns or polytrauma.
  • the invention also relates to the use of a vector according to the invention for the manufacture of a medicament for the treatment of a disease selected from the group of diabetes, hyperlipidemia, hyperproteinemia, hypertension, stroke, renal failure and and shock.
  • the invention also relates to the use of a host according to the invention for the manufacture of a medicament for the treatment of a disease selected from the group of diabetes, hyperlipidemia, hyperproteinemia, hypertension, stroke, renal failure and and shock.
  • shock states of different origins such as cardiogenic, metabolic, septic, anaphylactic shock or shock states triggered by burns or polytrauma.
  • Another essential aspect of the invention is a non-human mammal, characterized in that it contains a nucleic acid (transgene) according to the invention in addition to its genome.
  • transgene a nucleic acid according to the invention in addition to its genome.
  • This is understood to mean a non-human, transgenic mammal which, in addition to its genome, has stably integrated a nucleic acid sequence according to the invention for OTRPC4 or a fragment thereof into part of its body cells (chimera) or into all body cells and expresses the OTRPC4 polypeptide or fragment .
  • the person skilled in the art is aware of transgenic mammals which are transgenic for other sequences (see also Schenkel, L, Spektrum Akad. Verl., 1995).
  • Transgenic mammals according to the invention are, for example, transgenic rodents, such as rats, mice and hamsters, but also goats, cattle, pigs, sheep and other non-human mammals known to the person skilled in the art. Mice are very
  • Another essential aspect of the invention is a non-human mammal, characterized in that a nucleic acid according to the invention is inactivated (gene knock-out) in its genome.
  • a nucleic acid according to the invention is inactivated (gene knock-out) in its genome.
  • This is understood to mean a non-human, so-called knock-out mammal, in whose genome the endogenous nucleic acid sequence corresponding to an inventive nucleic acid sequence coding for OTRPC4 or a fragment thereof is inactivated and in which no or only small amounts of OTRPC4 polypeptide or fragment of which are expressed.
  • Small amounts mean that the expression of OTRPC4 polypeptide or fragment is reduced by at least 50%, preferably more than 50 to 80%, particularly preferably more than 80 to 100% compared to comparable, non-knock-out mammals.
  • the inactivation is often carried out by cloning a reporter sequence, for example the gene for neomycin resistance.
  • Other knock-out mammals in which other sequences are inactivated are known to the person skilled in the art.
  • Knockout mammals according to the invention are, for example, knock-out rodents, such as rats, mice and hamsters, however also goats, cattle, pigs, sheep and other non-human mammals known to those skilled in the art. Mice are very particularly preferred. Methods for producing a knock-out mammal according to the invention are described below. The construction of a recombinant vector for a conditional knock-out is described as an example in Example 1.
  • Another essential aspect of the invention is a non-human mammal, characterized in that a nucleic acid according to the invention is modified (gene knock-in) in its genome.
  • This modification can be carried out by means of homologous recombination of the coding nucleic acid and has the result that, for example, an OTRPC4 polypeptide or fragment thereof is expressed in this mammal with modified properties. This can e.g. by mutation in a small part of the coding nucleic acid.
  • Knock-out mammals according to the invention are, for example, knock-in rodents, such as rats, mice and hamsters, but also goats, cattle, pigs, sheep and other non-human mammals known to the person skilled in the art. Mice are very particularly preferred. Methods for producing a knock-in mammal according to the invention are described below.
  • the non-human transgenic or knock-out or knock-in mammals according to the invention are outstandingly suitable for analyzing the function of the OTRPC4 gene or polypeptide.
  • the mammals according to the invention can each be compared with mammals of the same species or advantageously of the same litter (“littermates”) and the function of the polypeptide according to the invention can thereby be investigated.
  • the invention also includes methods for producing a non-human mammal, characterized in that a ) embryonic stem cells of said non-human mammal are transfected with a vector which contains a nucleic acid according to the invention and a
  • Embryonic stem cells can be obtained by cultivating the inner cell mass of blastocysts and multiplied in tissue culture.
  • the differentiation of the stem cells is prevented by culturing them on fibroblast nutrient cells or by adding leukemia inhibiting factor (LIF) to the culture medium.
  • LIF leukemia inhibiting factor
  • the nucleic acid according to the invention is introduced into ES cells, for example DNA coding for OTRPC4 or a fragment thereof, for example by means of transfection, retrovirus infection or electroporation.
  • ES cells for example DNA coding for OTRPC4 or a fragment thereof, for example by means of transfection, retrovirus infection or electroporation.
  • Such a vector carries, for example, the neomycin gene, which confers resistance to G418.
  • Successfully transfected embryonic stem cells can be identified by adding G418 to the culture medium. Only successfully transfected ES can grow under these conditions.
  • transfected ES are, for example, transferred back into blastocysts and these are transferred into the germ line of a female mammal according to the invention.
  • the mutated cells are integrated into the developing embryo and take part in the development of all tissues.
  • the transgene according to the invention enters the germline.
  • Chimeric animals form which can be characterized, for example, by prior selection of ES cells and recipient blastocysts from animals of different coat colors. Multiple breeding of the chimeric animals gives homozygous animals that express the transgene in each tissue.
  • Another method according to the invention for the production of non-human transgenic mammals comprises the isolation of fertilized egg cells, the microinjection of nucleic acid according to the invention coding for OTRPC4 or a fragment thereof, the implantation of said fertilized egg cells into the germ line of a pseudo-pregnant, female animal, said non-human mammal and the examination of the progeny of said female animal with a male animal of the same type for expression of the transgene.
  • the nucleic acid introduced by microinjection preferably DNA, often integrates at a different location than the comparable endogenous nucleic acid, but is usually expressed in the same way.
  • Said nucleic acid according to the invention can be in the genome in one, but also in numerous, ie 2 to several hundred or thousands of copies be integrated. Details on processes for the production of transgenic, non-human
  • Mammals are known to the person skilled in the art (see also Schenkel, J., Spektrum Akad. Verl., 1995).
  • the invention also includes methods for producing a non-human
  • Mammal characterized in that s d) embryonic stem cells of said non-human mammal with a
  • Transfected vector which contains a nucleic acid that can hybridize to a nucleic acid according to the invention under stringent conditions, and is inactivated by inserting an additional nucleic acid sequence, and a recombination between the genomic DNA of said non-human mammal and the nucleic acid contained in the vector enables e ) Stably transfected stem cells from step d) are isolated and these are transferred into the germ line of a female animal of said non-human mammal. f) the offspring of the said female animal from step e) with a male animal of the same type are animals which are characterized by the nucleic acid
  • Step d) express the encoded polypeptide, analyzed.
  • the endogenous gene which corresponds to or comprises an OTRPC4 nucleic acid sequence according to the invention is inactivated by so-called knock-out
  • said gene is activated and inactivated by homologous recombination.
  • homologous recombination to be methods which make it possible to specifically incorporate nucleic acid, for example DNA, into genes.
  • a criticized copy of the endogenous gene is replaced by a non-functional copy. For example, the inserted copy is interrupted by an inserted copy of one or more antibiotic resistance genes, which leads to inactivation.
  • the sequence for the target gene can be interrupted by the neomycin resistance gene.
  • HSV-tk herpes simplex virus thymidine kinase
  • those cells can be identified in which homologous recombination has taken place.
  • an inactivated copy of a nucleic acid coding for OTRPC4 or a fragment s thereof, cloned into a suitable vector is introduced into embryonic stem cells (as described above) using a suitable method, ie by transfection, retrovirus infection or electroporation.
  • the introduced nucleic acid goes in one part the ES with the corresponding cellular copy of the OTRPC4 gene a homologous recombination and replaces the gene with the introduced nucleic acid according to the invention.
  • those ES in which homologous recombination has taken place can be identified by means of the antibiotic G418 and the antiviral substance ganciclovir.
  • ES, in which homologous recombination has occurred are injected into a blastocyst, which is inserted into the uterus of a female non-human mammal of the same type as the ES.
  • Chimeric animals form which can be characterized, for example, by prior selection of ES cells and recipient blastocysts from animals of different coat colors. Multiple breeding of the chimeric animals gives homozygous animals in which the target gene is completely inactivated in each tissue.
  • the invention also encompasses methods for producing a non-human mammal, characterized in that g) embryonic stem cells of said non-human mammal are transfected with a vector which contains a nucleic acid which can hybridize to a nucleic acid according to the invention under stringent conditions, and is modified by insertion of an additional nucleic acid sequence, and a recombination between the genomic DNA of said non-human mammal and the nucleic acid contained in the vector enables h) stably transfected stem cells from step g) to be isolated and into the germ line a female animal of said non-human Mammals are transferred i) the offspring of the said female animal from step h) with a male animal of the same type are analyzed for animals which express the polypeptide encoded by the nucleic acid from step g).
  • the method for producing knock-out animals is carried out in a manner similar to the method for producing knock-out animals, with the difference that the target gene is not inactivated but modified.
  • OTRPC4-DNA, RNA, protein or channel should in no way be seen as limiting the breadth of the invention, but only serve to illustrate the invention in more detail. Additional OTRPC4 DNA, RNA, proteins or channels are shown in the description.
  • RNA transcript of a length of 3.3 kb was provided everything expressed in the liver, heart, kidney and testis was identified ( Figure 1b).
  • RNA purified from the kidney of a mouse a cDNA s with a length of 3277 bp was cloned using the RACE-PCR method contains an open reading frame of 2616 bp (see sequences according to the invention, supra and claims 19 and 20.)
  • the genomic organization of the murine sequence of OTRPC4 was clarified by sequencing of the intron-exon transitions and is shown by way of example in Figure 2.
  • In situ hybridizations with a Fragments from the coding region of the OTRPC4-DNA 0 showed a high expression of the OTRPC4-RNA in the distal bundle of the kidney, but also plexus choreoid in the brain ventricles ( Figure 3).
  • GFP green fluorescent protein
  • pEGFP-NI fluorescent protein
  • the invention relates to a human OTRPC4 with the amino acid sequence: MADSSEGPRAGPGEVAELPGDESGTPGGEAFPLSSLANLFEGEDGSLSPSPADASRP
  • Expression plasmid containing OTRPC4 was transiently transfected and compared to non-transfected control cells 24-36 hours later.
  • Northern blots for the detection of OTRPC4 RNA in human tissues A commercial Northern blot from Clontech was hybridized with a probe mix based on a partial clone that had been isolated from a human salivary cDNA bank. The probe mix consisted of three fragments, the by restriction of the clone with Stu I. The fragments were 496 bp, 556 bp and 698 bp long and correspond to the three 3 'Stu I fragments of the human DNA of OTRPC4.
  • RNAs from twelve human tissues There were also filters (Clontech) with RNA from cardiovascular tissues, from tissues of the digestive system. and hybridized from tissues of the endocrine system. No clear signal was shown on these Northern blots.
  • HEK293 cells were transiently transfected with expression plasmid containing the OTRPC4-GFP fusion construct and then the concentration of the intracellular calcium concentration ([Ca 2+ ] i) using the FURA-2 Method measured using a monochromatic single cell calcium measuring station ( Figure 4).
  • the basal [Ca 2+ ] j in OTRPC4-expressing cells was significantly increased compared to the control cells (94 + 11 nM; 50 cells measured in three independent experiments versus 41 ⁇ 3 nM; 63 cells measured in three independent experiments).
  • OTRPC4 as a regulator of the osmolarity of the body's own liquids
  • OTRPC4 can regulate the osmolarity of the body's own fluids, which are formed by secretion, such as cerebrospinal fluid, the aqueous humor of the eye (and thus the intraocular pressure), the saliva of the salivary glands, etc.
  • secretion such as cerebrospinal fluid, the aqueous humor of the eye (and thus the intraocular pressure), the saliva of the salivary glands, etc.
  • hypoosmolarity is initiated with a calcium influx counter-regulating processes.
  • the present invention therefore also relates to the use of modulators of OTRPC4 or the biological activity of OTRPC4, in particular inhibitors or activators, for regulating the osmolarity of the body's own liquids, in particular cerebrospinal fluid, aqueous humor in the eye, and / or saliva.
  • the present invention further relates to pharmaceutical compositions which contain modulators, inhibitors and / or activators of OTRPC4, and the use of modulators, inhibitors and / or activators of OTRPC4 for the production of pharmaceutical compositions for prophylactic or therapeutic Regulation of the osmolarity of the body's own fluids, which are formed by secretion, in particular cerebrospinal fluid, aqueous humor in the eye, and / or saliva, for diseases or health conditions where this is necessary.
  • the OTRPC4-mediated change in the intracellular calcium concentration depends on the osmolarity of the extracellular solution
  • the current-voltage curve of the current activated by hypoosmolar solution had the same shape as that of the spontaneous current in cells expressing OTRPC4, but the reversal potential was shifted to a more positive potential (-5.6 + 0.7 mV).
  • Removal of sodium and calcium ions from the extracellular solution resulted in a complete but reversible block of the inward flow and reduced the outward flow components (see Figure 7).
  • the addition of hypotonic extracellular solution triggered a current flow that showed the properties of chloride channels that are activated by volume changes (27).
  • the activation of these strains could be completely inhibited by the addition of the chloride channel blocker NPPB (50 ⁇ M), while the cation streams triggered by hypotonic solution in cells expressing OTRPC4 were not influenced by this blocker.
  • hypotonic solution used to initiate the currents was replaced with hypotonic solutions containing either only sodium or only 20 mM calcium as cations.
  • the above-described eukaryotic expression plamide with the OTRPC4 cDNA additionally also contains a gene which confers resistance to the antibiotic G418 to the cells which are transfected with this plasmid.
  • HEK293 cells were transfected by lipofection as described above and stably expressing cells isolated by selection with G418. In order that the OTRPC4 channel is not constitutively active during the selection period, the HEK293 cells were cultivated in a medium whose osmolarity was set to 320 mosmol / 1.
  • the HEK293 cells stably expressing the OTRPC4 channel were sown in 384 well plates and the increase in the [Ca 2+ ] i triggered by the addition of hypotonic medium was measured in the cells with the aid of a fluorescence imaging plate reader (FLIPR).
  • FLIPR fluorescence imaging plate reader
  • Intron 11 located at base 1965, has a size> 5 kb, so that the DNA for the long arm can be obtained here.
  • Exon 12 with approx. 420 bp was tagged with accompanying LoxP sites for the purpose of conditional knock-out.
  • the OTRPC4 protein expressed in the conditional knock-out mice will be functionally inactive in vivo.
  • the anti-sense sequences listed in Table 1 were selected according to the following rules:
  • GC and AT base pairs are roughly evenly distributed.
  • One of the sequences covers the ATG in order to include, in addition to the induction of an RNAse H, which degrades the target RNA, the inhibition of the translation start as a mechanism.
  • Antisense-Oligo 1 / Base 6-21 (5 ' -UTR) CGT CTG CAC TGC TCA G
  • the selected antisense sequences can also be used as flanking sequences for the construction of ribozymes.
  • Protein sequence against which the antibody is directed corresponds to distal C-terminus 0 of the murine OTRPC4 protein.
  • the peptide sequence is as follows:
  • rabbits were immunized with 1 mg of KLH conjugate of the peptide shown above.
  • the control cells were native HEK293 cells.
  • the fractions from the cytosol and the cholate extract showed no
  • HEK cells examined for the presence of the OTRPC4 protein in the intact cells.
  • the primary antibody was the peptide antibody described above.
  • As a secondary AK used an ant-rabbit AK with a FITC conjugate ( Figure).
  • Cell membrane is integrated as a native protein and the antibody recognizes the OTRPC4 protein and can detect it in Western blot or in the living cell via immunofluorescence.
  • Thastrup O. et al. Thapsigargin, a tumor promoter, discharges intracellular Ca 2+ strores by specific inhibition of the endoplasmic reticulum Ca2 + -ATPase. Proc. Natl. Acad. Be. USA 87: 2466-2470 (1990).
  • Figure 1 Amino acid sequence of the predicted pore-forming structure of OTRPC4 and the tissue distribution of the expression of OTRPC4. s
  • (a) The amino acid sequence of the predicted fifth and sixth transmembrane domains and the neighboring cytosolic domain of OTRPC4 is shown. The transmembrane regions 5 and 6 and the putative pore-forming cytoplasmic domain are designated as such, and the conserved amino acids are deposited
  • Figure 2 Sequences of the cDNA coding for OTRPC4 of the mouse and organization is of the genomic clone of OTRPC4. The translation start, the stop codons, as well as the transitions between exons and introns and the length of the introns are indicated. The amino acid sequence is shown below the DNA sequence, the predicted transmembrane regions and the ankyrin binding site are indicated.
  • a sagittal section (a) and a horizontal section (f) of an entire mouse kidney two enlargements of the sagittal section of the kidney (b, c), a sagittal section (e), a coronary section (f), a horizontal section (g) of an entire mouse -Brain and one
  • Figure 4 Increase in the intracellular calcium concentration in HEK293 cells transfected with a plasmid that expresses the cDNA of OTRPC4.
  • the intracellular calcium concentration was measured using the FURA-2 technique in cells that express OTRPC4 and compared to cells that do not express this channel.
  • 3s cells were initially cultured in isotonic solution containing 100mM mannitol and 1mM CaCl2.
  • the upper horizontal bar indicates the change of the extracellular solution with which the cells were washed to a 200 mM solution. The change in osmolarity was achieved by omitting the mannitol. In the period indicated by the lower horizontal bar, the calcium
  • the traces shown represent the mean values of 17 cells (for the OTRPC4-expressing cells) and 21 cells (for the control cells) in the same experiment.
  • the small figure shows the corresponding measurement traces for individual OTRPC4-expressing cells in the same experiment.
  • Figure 5 Osmolarity-dependent change in intracellular calcium concentration in HEK293 cells that transiently express OTRPC4. The maximum is shown Fluorescence quotients of the calcium-loaded and unloaded FURA-2 dye depending on the osmolarity of the extracellular solution.
  • Figure 6 Decrease in ion flow in OTRPC4-expressing cells in a hyperosmolar extracellular solution.
  • the ion flow was recorded by voltage ramps from -100 to +100 mM in a standard extracellular solution (osmolarity 305 mosmol / 1; 1) and after adding a solution containing mannitol with an osmolarity of 320 mosmol / 1 (2), the small picture shows the time course of the effect triggered by the increase in the osmolarity of the extracellular solution.
  • Figure 7 Increase in ion flow carried by cations triggered by hypotonic extracellular solution in cells that express OTRPC4.
  • A The whole cell ion current of an OTRPC4 expressing cell was measured at -100 and +100 mV. At the time indicated on the horizontal bar, the standard extracellular solution was exchanged for a solution containing 100 mM NaCl and 100 mM mannitol (osmolarity 320 mosmol / 1), then for a solution without mannitol (215 mosmol / 1 ) and then again with a hypoosmolar solution in which sodium and calcium were replaced by NMDG. Finally, the cell was rinsed again with 320 milliosmolar solution.
  • B The ion current is plotted, which was triggered by a single voltage ramp in an OTRPC4-expressing cell at the points in time denoted by numbers in (A).
  • FIG. 8 Western blot of OTRPC4 in subcellular fractions.
  • a western blot with three different fractions from HEK293 cells which had been transfected with the OTRPC4 was hybridized with the antibody.
  • the control cells were native HEK293 cells.
  • the fractions from the cytosol and the cholate extract showed no signal for the OTRPC4 fragment, the cell membrane fraction in the transfected HEK293 cells showed a clear signal for the occurrence of OTRPC4 in the cell membrane.
  • Figure 9 Increase in intracellular calcium concentration in cells expressing OTRPC4.
  • the first substance was added after 1 min, the second after 2 min.
  • the osmolarity of the measurement buffer was 320 mosmol / 1.
  • Figure 10 Increase in ion flow carried by cations triggered by hypotonic extracellular solution in cells of the choroid plexus.
  • the extracellular standard solution was exchanged for a solution which had an osmolarity of 300 mosmol / 1, then for a solution with 230 mosmol / and then again for the starting solution (osmolarity 300 mosmol /1).
  • the cells were stimulated with 20 ⁇ M serotonin in order to check the vitality of the cells and the sensitivity of the method.
  • the ratio-specific to non-specific fluorescence is plotted in a FURA-2 measurement against time.

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Abstract

The present invention relates to nucleic acids which code for the non-selective cation channel OTRPC4 and to polypeptides which are coded by said nucleic acids. The invention also relates to hosts or host cells that express said polypeptide and to methods for finding blocking agents, activators and modulators of said OTRPC4 cation channels. The invention further relates to blocking agents, activators and modulators of said OTRPC4 cation channels and to pharmaceutical compositions containing said blocking agents, activators and modulators. The invention further relates to non-human mammals that contain OTRPC4 as a transgene, inactivated gene (knock-out) or modified gene (knock-in).

Description

Neuer nichtselektiver Kationenkanal New non-selective cation channel

Die vorliegende Erfindung betrifft Nukleinsäuren, die für den nicht-selektiven Kationenkanal OTRPC4 kodieren sowie Polypeptide, die durch besagte Nukleinsäuren kodiert werden. Weiterhin betrifft die Erfindung Wirte bzw. Wirtszellen, die besagtesThe present invention relates to nucleic acids which code for the non-selective cation channel OTRPC4 and to polypeptides which are coded by said nucleic acids. The invention further relates to hosts or host cells, said

5 Polypeptid exprimieren und Verfahren zum Auffinden von Blocker, Aktivatoren sowie Modulatoren besagter OTRPC4-Kationenkanäle. Die Erfindung umfaßt • Blocker, Aktivatoren und Modulatoren besagter OTRPC4-Kationenkänale sowie pharmazeutische Zusammensetzungen enthaltend besagte Blocker, Aktivatoren und Modulatoren. Außerdem betrifft die Erfindung nicht humane Säuger, die entweder OTRPC4 als Transgen, w inaktiviertes Gen (knock-out) oder modifiziertes Gen (knock-in) enthalten.5 Express polypeptide and method for finding blockers, activators and modulators of said OTRPC4 cation channels. The invention includes • blockers, activators and modulators of said OTRPC4 cation channels and pharmaceutical compositions containing said blockers, activators and modulators. The invention also relates to non-human mammals which contain either OTRPC4 as a transgene, inactivated gene (knock-out) or modified gene (knock-in).

Hintergrund der ErfindungBackground of the Invention

Zellen sind je nach physiologischem Zustand des Gewebes, dem sie angehören unterschiedlichen extrazellulären Ionenkonzentrationen und damit unterschiedlichen is Osmolaritäten ausgesetzt. Ein Absinken der extrazellulären Osmolarität führt zu einer intrazellulären Volumenzunahme durch Einstrom extrazellulärer Flüssigkeit. Diese Volumenzunahme bedroht die Homöostase der Zelle, so daß die Evolution ein Mechanismus entwickelte, dessen Aktivierung dazu führt, daß eine Zelle, die osmotisch bedingte Volumenzunahme aktiv gegenregulieren kann. Dieser Mechanismus wird alsDepending on the physiological state of the tissue to which they belong, cells are exposed to different extracellular ion concentrations and thus different isomolarities. A decrease in the extracellular osmolarity leads to an intracellular volume increase due to the inflow of extracellular fluid. This increase in volume threatens the homeostasis of the cell, so that evolution developed a mechanism whose activation leads to a cell being able to actively counter-regulate the osmotic increase in volume. This mechanism is called

20 „regulated volume decrease" (RVD) bezeichnet (zur Übersicht siehe Ref. 1). Der molekulare Mechanismus, der dem RVD zugrunde liegt, ist bisher nicht bekannt, allerdings wurde in verschiedenen Studien ein transienter Anstieg der intrazellulären Kalziumkonzentrationen nachgewiesen, der mit der Volumenregulation einherging und durch Lanthan und Gadolinum hemmbar war. Möglicherweise ist also ein nicht-selektiver20 called "regulated volume decrease" (RVD) (for an overview, see ref. 1). The molecular mechanism on which RVD is based is not yet known, although various studies have demonstrated a transient increase in intracellular calcium concentrations, which Volume regulation and was inhibited by lanthanum and gadolinum, so it may be a non-selective one

2s Kalzium-durchgängiger Kanal an dem RVD beteiligt.2s calcium channel involved in the RVD.

In C. elegans wurde eine cDNA kloniert, die für einen Kanal kodiert, der Verwandschaften zu der TRP („transient receptor potential")-Familie von nicht-selektiven Kationenkanälen aufweist. Dieser Kanal ist für die Reaktionen von C. elegans auf Lösungen mit hoher Osmolarität verantwortlich und wurde deshalb OSM-9 genannt (2). Bisher ist aber noch so nichts zu den biophysikalischen Charakteristika von OSM-9 bekannt, eine entsprechendes homologes Protein wurde bisher auch nicht für Säugetiere beschrieben. Die Familie von TRP-Kanälen (TRPCs) (3) kann in drei unterschiedliche Subfamilien unterteilt werden (4). Die größte Familie bildet die STRP-Subfamilie (short TRP; benannt nach ihrem kurz N-Terminus), bestehend aus den klassischen Drosophila-Kanäle TRP und TRPL (transient receptor potential-like) (5) sowie 7 Säugerhomologen von TRP (TRPC1- 7) (6-15). Die Kanäle dieser Familie sind beteiligt an dem Kalzium-Einstrom, der durch die Aktivierung von Rezeptoren ausgelöst wird, denen gemeinsam ist, daß . sie die Phospholipase C aktivieren. Die zweite Unterfamilie der TRPCs wurde OTRPC benannten, nach dem ersten Vertreter dieser Familie OSM-9. Die Kanäle dieser Familie werden aktiviert durch chemische und physikalische Reize. Zur OTRPC-Familie gehören der Vanilloid-Rezeptor (VRl) (16, 17), der vanilloid-like receptor (VRL-1, auch als GRC bekannt) (18, 19), und ein Kanal, dessen mögliche Funktion, die eines epithelialen Kalzium- Kanals ist (ECaC oder auch als CaTl bekannt) (20, 21). VRl ist ein nicht-selektiver Kalzium-permeabler Kanal, der aus dorsalen Ganglien-Zellen der Ratten kloniert wurde (16). Dieser Kanal wird aktiviert durch Hitze und durch die Substanz Capsaicin, die Schmerz-auslösend wirkt. Der kürzlich Monierte, dem VRl verwandte Kanal, VRL-1, kann durch Hitze aktiviert werden und könnte in der Schmerzrezeption beteiligt sein (18). Allerdings könnte sein weit verbreitete Expression auch ein Hinweis dafür sein, daß dieser Kanal noch andere Funktionen hat, z.B. wurde kürzlich gezeigt, daß dieser Kanal an dem intrazellulären Transport des „insulin-like growth factor-1" (IGF-1) beteiligt ist (19). Andere Mitglieder dieser OTRPC-Familie sind ECaC, der aus Kaninchen-Niere kloniert wurde (20) und CaTl (21), der aus Ratten-Duodenum kloniert wurde; beide Kanäle sind in der Sequenz identisch und sind an der Vitamin D ausgelösten Einströmt von Kalzium in epithelialen Zellen beteiligt (20, 21). Die dritte TRP-Subfamilie wurde LTRPC genannt (long TRP Channels, nach ihrem langen N-terminus benannt) und besteht bislang aus den beiden Mitgliedern Melastatin (22) und TRPC7 (23).In C. elegans, a cDNA was cloned that codes for a channel that is related to the TRP ("transient receptor potential") family of non-selective cation channels. This channel is for the C. elegans reactions to solutions with high Responsible for osmolarity and was therefore called OSM-9 (2), but so far nothing is known about the biophysical characteristics of OSM-9, and a corresponding homologous protein has not yet been described for mammals. The family of TRP channels (TRPCs) (3) can be divided into three different subfamilies (4). The largest family is the STRP subfamily (short TRP; named after its short N-terminus), consisting of the classic Drosophila channels TRP and TRPL (transient receptor potential-like) (5) and 7 mammalian homologues from TRP (TRPC1- 7 ) (6-15). The channels of this family are involved in the calcium influx that is triggered by the activation of receptors that have in common that. they activate the phospholipase C. The second subfamily of TRPCs was named OTRPC, after the first representative of this family OSM-9. The channels of this family are activated by chemical and physical stimuli. The OTRPC family includes the vanilloid receptor (VRl) (16, 17), the vanilloid-like receptor (VRL-1, also known as GRC) (18, 19), and a channel whose possible function is that of an epithelial Calcium channel is (ECaC or also known as CaTl) (20, 21). VRl is a non-selective calcium permeable channel that was cloned from rat dorsal ganglion cells (16). This channel is activated by heat and the substance capsaicin, which causes pain. The recently criticized, VRR-related channel, VRL-1, can be activated by heat and could be involved in pain reception (18). However, its widespread expression could also indicate that this channel has other functions, for example, it has recently been shown that this channel is involved in the intracellular transport of "insulin-like growth factor-1" (IGF-1) ( 19) Other members of this OTRPC family are ECaC, which was cloned from rabbit kidney (20) and CaTl (21), which was cloned from rat duodenum, both channels are identical in sequence and are triggered on vitamin D. Inflows of calcium involved in epithelial cells. (20, 21) The third TRP subfamily was called LTRPC (long TRP channels, named after its long N-terminus) and so far consists of the two members Melastatin (22) and TRPC7 (23) ,

Die WO 00/32766 offenbart humane Vanilloid-Rezeptoren und deren Verwendung.WO 00/32766 discloses human vanilloid receptors and their use.

Die Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist es, einen neuen TRP-Kanal mit vorteilhaften Eigenschaften gegenüber den oben beschriebenen, aus dem Stand der Technik bekannten Kanälen bereit zu stellen. Beschreibung der ErfindungThe object of the present invention is to provide a new TRP channel with advantageous properties compared to the channels described above and known from the prior art. Description of the invention

Die Aufgabe wurde im Rahmen der Ansprüche und Beschreibung der vorliegenden Erfindung gelöst.The object was achieved within the scope of the claims and description of the present invention.

Die Verwendung der Einzahl oder des Plurals in den Ansprüchen oder der Beschreibung soll in keiner Weise limitierend sein und die andere Form ebenfalls mit einschließen. RNA und RNS bzw. DNA und DNS haben jeweils die gleiche Bedeutung.The use of the singular or plural in the claims or the description is not intended to be limiting in any way and also to include the other form. RNA and RNA or DNA and DNA each have the same meaning.

Die Erfindung betrifft eine Nukleinsäure, dadurch gekennzeichnet, daß sie für den nichtselektiven Kationenkanal OTRPC4 oder für ein Fragment, eine funktionelle Variante, eine allele Variante, eine Untereinheit kodiert, oder Varianten der besagten Nukleinsäure aufgrund des degenerativen Kodes oder eine Nukleinsäure, die an besagte Nukleinsäure hybridisieren kann. Der erfindungsgemäße Kationenkanal bzw. OTRPC4 Polypeptide sind weiter unten beschrieben. Erfindungsgemäße OTRPC4 Nukleinsäuren sind bevorzugt eukaryontische Nukleinsäuren, besonders bevorzugt humane oder murine, aber auch aus der Ratte, Hamster, Ziegen, Rinder, Schweine, Schafe, Hund, Katze, Affen sowie weiteren dem Fachmann bekannte Eukaryonten. Beispielsweise ist besagte Nukleinsäure eine rekombinant hergestellte Nukleinsäure, z.B. eine cDNS. In den Abbildungen bzw. in dem Beispiel sind exemplarisch erfindungsgemäße Nukleinsäuren gezeigt. Bevorzugt ist eine erfindungsgemäße Nukleinsäure RNS. Weiterhin bevorzugt ist eine erfindungsgemäße Nukleinsäure DNS.The invention relates to a nucleic acid, characterized in that it codes for the non-selective cation channel OTRPC4 or for a fragment, a functional variant, an allele variant, a subunit, or variants of the said nucleic acid due to the degenerative code or a nucleic acid which is linked to said nucleic acid can hybridize. The cation channel or OTRPC4 polypeptides according to the invention are described further below. OTRPC4 nucleic acids according to the invention are preferably eukaryotic nucleic acids, particularly preferably human or murine, but also from rats, hamsters, goats, cattle, pigs, sheep, dogs, cats, monkeys and other eukaryotes known to the person skilled in the art. For example, said nucleic acid is a recombinantly produced nucleic acid, e.g. a cDNA. In the figures or in the example, nucleic acids according to the invention are shown as examples. A nucleic acid RNS according to the invention is preferred. A nucleic acid DNA according to the invention is further preferred.

Weiterhin bevorzugt ist eine erfindungsgemäße Nukleinsäure dadurch gekennzeichnet, daß sie 5' oder 3' oder 5' und 3' untranslatierte Regionen enthält. Die erfindungsgemäße Nukleinsäure kann stromaufwärts und oder stromabwärts weitere untranslatierte Bereiche enthalten. Besagte untranslatierte Region kann ein regulatorisches Element, wie z.B. einen Transkriptionsinitiationseinheit (Promoter) oder Enhancer umfassen. Besagter Promoter kann beispielsweise ein konstutiv aktiver oder induzierbarer oder Entwicklungsgesteuerter Promoter sein. Bevorzugt, ohne weitere bekannte Promoter auszuschließen, sind die konstitutiven Promoter des humanen Cytomegalovirus (CMV) und Rous Sarkomvirus (RSV), ebenso wie der Simianvirus 40 (SV40) und Herpes simplex Virus (HSV) Promoter. Erfindungsgemäße induzierbare Promoter umfassen Antibiotikum resistente Promoter, Hitzeschockpromoter, Hormon-induzierbare „Mouse Mammary Tumor Virus" (MMTV)- Promoter und den Metallothionein-Promoter. Weiterhin bevorzugt ist eine erfindungsgemäße Nukleinsäure dadurch gekennzeichnet, daß sie für ein Fragment des nicht-selektiven Kationenkanals OTRPC4 kodiert. Weiterhin bevorzugt ist eine erfindungsgemäße Nukleinsäure dadurch gekennzeichnet, daß sie für eine fünktionelle Variante des nicht-selektiven Kationenkanals OTRPC4 kodiert. Weiterhin bevorzugt ist eine erfindungsgemäße Nukleinsäure dadurch gekennzeichnet, daß sie für eine allele Variante des nicht-selektiven Kationenkanals OTRPC4 kodiert. Weiterhin bevorzugt ist eine erfindungsgemäße Nukleinsäure dadurch gekennzeichnet, daß sie für Varianten der Nukleinsäure aufgrund des degenerativen Kodes kodiert. Weiterhin bevorzugt ist eine Nukleinsäure dadurch gekennzeichnet, daß sie an eine i erfindungsgemäße Nukleinsäure unter stringenten Bedingungen hybridisieren kann. Stringente Bedingungen sind dem Fachmann bekannt und finden sich insbesondere in Sambrook et al. (1989). Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York. Weiterhin bevorzugt ist eine erfindungsgemäße Nukleinsäure dadurch gekennzeichnet, daßA nucleic acid according to the invention is furthermore preferably characterized in that it contains 5 'or 3' or 5 'and 3' untranslated regions. The nucleic acid according to the invention can contain further untranslated regions upstream and / or downstream. Said untranslated region can comprise a regulatory element, such as a transcription initiation unit (promoter) or enhancer. Said promoter can be, for example, a structurally active or inducible or development-controlled promoter. Preferred, without excluding other known promoters, are the constitutive promoters of human cytomegalovirus (CMV) and rous sarcoma virus (RSV), as well as simian virus 40 (SV40) and herpes simplex virus (HSV) promoters. Inducible promoters according to the invention include antibiotic-resistant promoters, heat shock promoters, hormone-inducible "Mouse Mammary Tumor Virus" (MMTV) promoters and the metallothionein promoter. A nucleic acid according to the invention is furthermore preferably characterized in that it codes for a fragment of the non-selective cation channel OTRPC4. A nucleic acid according to the invention is furthermore preferably characterized in that it codes for a functional variant of the non-selective cation channel OTRPC4. A nucleic acid according to the invention is furthermore preferably characterized in that it codes for an allelic variant of the non-selective cation channel OTRPC4. A nucleic acid according to the invention is furthermore preferably characterized in that it codes for variants of the nucleic acid on the basis of the degenerative code. A nucleic acid is furthermore preferably characterized in that it can hybridize to a nucleic acid according to the invention under stringent conditions. Stringent conditions are known to the person skilled in the art and can be found in particular in Sambrook et al. (1989). Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd ed, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York.. A nucleic acid according to the invention is furthermore preferably characterized in that

! besagter nicht-selektiver Kationenkanal OTRPC4 ein Säugerkationenkanal ist.! said non-selective cation channel OTRPC4 is a mammalian cation channel.

Weiterhin bevorzugt ist eine erfindungsgemäße Nukleinsäure dadurch gekennzeichnet, daß besagter nicht-selektiver Kationenkanal OTRPC4 murin ist.A nucleic acid according to the invention is furthermore preferably characterized in that said non-selective cation channel OTRPC4 is murine.

Weiterhin bevorzugt ist eine erfindungsgemäße Nukleinsäure dadurch gekennzeichnet, daß besagter nicht-selektiver Kationenkanal OTRPC4 human ist. Weiterhin bevorzugt ist eine Nukleinsäure, die dadurch gekennzeichnet ist, daß sie die SequenzA nucleic acid according to the invention is furthermore preferably characterized in that said non-selective cation channel OTRPC4 is human. Also preferred is a nucleic acid which is characterized in that it has the sequence

CTCTCACCGCCTACTACCAGCCGCTGGAGGGCACAATGGCGGATTCCAGCGAA GGCCCCCGCGCGGGGCCCGGGGAGGTGGCTGAGCTCCCCGGGGATGAGAGTGG CACCCCAG TTGΌGGAGGCTTTTCCTCTCTCCTCCCTGGCCAATCTGTTTGAGGGCTCTCACCGCCTACTACCAGCCGCTGGAGGGCACAATGGCGGATTCCAGCGAA GGCCCCCGCGCGGGGCCCGGGGAGGTGGCTGAGCTCCCCGGGGATGAGAGTGG CACCCCAG TTGΌGGAGGCTTTTCCTCTCTCCGATGGGGTGT

5 GGAGGATGGCTCCCTTTCGCCCTCACCGGCTGATGCCAGTCGCCCTGCTGGCCC AGGCGATGGGCGACCAAATCTGCGCATGAAGTTCCAGGGCGCCTTCCGCAAGG GGGTGCCCAACCCCATCGATCTGCTGGAGTCCACCCTATATGAGTCCTCGGTGG TGCCTGGGCCCAAGAAAGCACCCATGGACTCACTGTTTGACTACGGCACCTATC GTCACCACTCCAGTGACAACAAGAGGTGGAGGAAGAAGATCATAGAGAAGCAG o CCGCAGAGCCCCAAAGCCCCTGCCCCTCAGCCGCCCCCCATCCTCAAAGTCTTC AACCGGCCTATCCTCTTTGACATCGTGTCCCGGGGCTCCACTGCTGACCTGGAC GGGCTGCTCCCATTCTTGCTGACCCACAAGAAACGCCTAACTGATGAGGAGTTT CGAGAGCCATCTACGGGGAAGACCTGCCTGCCCAAGGCCTTGCTGAACCTGAG CAATGGCCGCAACGACACCATCCCTGTGCTGCTGGACATCGCGGAGCGCACCG GCAACATGCGGGAGTTCATTAACTCGCCCTTCCGTGACATCTACTATCGAGGTC AGACAGCCCTGCACATCGCCATTGAGCGTCGCTGCAAACACTACGTGGAACTTC TCGTGGCCCAGGGAGCTGATGTCCAcGCCCAGGCCCGTGGGCGCTTCTTCCAGC CCAAGGATGAGGGGGGCTACTTCTACTTTGGGGAGCTGCCCCTGTCGCTGGCTG CCTGCACCAACCAGCCCCACATTGTCAACTACCTGACGGAGAACCCCCACAAGA AGGCGGACATGCGGCGCCAGGACTCGCGAGGCAACACAGTGCTGCATGCGCTG GTGGCCATTGCTGACAACACCCGTGAGAACACCAAGTTTGTTACCAAGATGTAC w GACCTGCTGCTGCTCAAGTGTGCCCGCCTCTTCCCCGACAGCAACCTGGAGGCC GTGCTCAACAACGACGGCCTCTCGCCCCTCATGATGGCTGCCAAGACGGGCAA GATTGGGATCTTTCAGCACATCATCCGGCGGGAGGTGACGGATGAGGACACAC GGCACCTGTCCCGCAAGTTCAAGGACTGGGCCTATGGGCCAGTGTATTCCTCGC TTTATGACCTCTCCTCCCTGGACACGTGTGGGGAAGAGGCCTCCGTGCTGGAGA is TCCTGGTGTACAACAGCAAGATTGAGAACCGCCACGAGATGCTGGCTGTGGAG CCCATCAATGAACTGCTGCGGGACAAGTGGCGCAAGTTCGGGGCCGTCTCCTTC TACATCAACGTGGTCTCCTACCTGTGTGCCATGGTCATCTTCACTCTCACCGCCT ACTACCAGCCGCTGGAGGGCACACCGCCGTACCCTTACCGCACCACGGTGGAC TACCTGCGGCTGGCTGGCGAGGTCATTACGCTCTTCACTGGGGTCCTGTTCTTC5 GGAGGATGGCTCCCTTTCGCCCTCACCGGCTGATGCCAGTCGCCCTGCTGGCCC AGGCGATGGGCGACCAAATCTGCGCATGAAGTTCCAGGGCGCCTTCCGCAAGG GGGTGCCCAACCCCATCGATCTGCTGGAGTCCACCCTATATGAGTCCTCGGTGG TGCCTGGGCCCAAGAAAGCACCCATGGACTCACTGTTTGACTACGGCACCTATC GTCACCACTCCAGTGACAACAAGAGGTGGAGGAAGAAGATCATAGAGAAGCAG o CCGCAGAGCCCCAAAGCCCCTGCCCCTCAGCCGCCCCCCATCCTCAAAGTCTTC AACCGGCCTATCCTCTTTGACATCGTGTCCCGGGGCTCCACTGCTGACCTGGAC GGGCTGCTCCCATTCTTGCTGACCCACAAGAAACGCCTAACTGATGAGGAGTTT CGAGAGCCATCTACGGGGAAGACCTGCCTGCCCAAGGCCTTGCTGAACCTGAG CAATGGCCGCAACGACACCATCCCTGTGCTGCTGGACATCGCGGAGCGCACCG GCAACATGCGGGAGTTCATTAACTCGCCCTTCCGTGACATCTACTATCGAGGTC AGACAGCCCTGCACATCGCCATTGAGCGTCGCTGCAAACACTACGTGGAACTTC TCGTGGCCCAGGGAGCTGATGTCCAcGCCCAGGCCCGTGGGCGCTTCTTCCAGC CCAAGGATGAGGGGGGCTACTTCTACTTTGGGGAGCTGCCCCTGTCGCTGGCTG CCTGCACCAACCAGCCCCACATTGTCAACTACCTGACGGAGAACCCCCACAAGA AGGCGGACATGCGGCGCCAGGACTCGCGAGGCAACACAGTGCTGCATGCGCTG GTGGCCATTGCTGACAACACCCGTGAGAACACCAAGTTTGTTACCAAGATGTAC w GACCTGCTGCTGCTCAAGTGTGCCCGCCTCTTCCCCGACAGCAACCTGGAGGCC GTGCTCAACAACGACGGCCTCTCGCCCCTCATGATGGCTGCCAAGACGGGCAA GATTGGGATCTTTCAGCACATCATCCGGCGGGAGGTGACGGATGAGGACACAC GGCACCTGTCCCGCAAGTTCAAGGACTGGGCCTATGGGCCAGTGTATTCCTCGC TTTATGACCTCTCCTCCCTGGACACGTGTGGGGAAGAGGCCTCCGTGCTGGAGA is TCCTGGTGTACAACAGCAAGATTGAGAACCGCCACGAGATGCTGGCTGTGGAG CCCATCAATGAACTGCTGCGGGACAAGTGGCGCAAGTTCGGGGCCGTCTCCTTC TACATCAACGTGGTCTCCTACCTGTGTGCCATGGTCATCTTCACTCTCACCGCCT ACTACCAGCCGCTGGAGGGCACACCGCCGTACCCTTACCGCACCACGGTGGAC TACCTGCGGCT GGCTGGCGAGGTCATTACGCTCTTCACTGGGGTCCTGTTCTTC

20 TTCACCAACATCAAAGACTTGTTCATGAAGAAATGCCCTGGAGTGAATTCTCTC TTCATTGATGGCTCCTTCCAGCTGCTCTACTTCATCTACTCTGTCCTGGTGATCG TCTCAGCAGCCCTCTACCTGGCAGGGATCGAGGCCTACCTGGCCGTGATGGTCT TTGCCCTGGTCCTGGGCTGGATGAATGCCCTTTACTTCACCCGTGGGCTGAAGC TGACGGGGACCTATAGCATCATGATCCAGAAGATTCTCTTCAAGGACCTTTTCC20 TTCACCAACATCAAAGACTTGTTCATGAAGAAATGCCCTGGAGTGAATTCTCTC TTCATTGATGGCTCCTTCCAGCTGCTCTACTTCATCTACTCTGTCCTGGTGATCG TCTCAGCAGCCCTCTACCTGGCAGGGATCGAGGCCTACCTGGCCGTGATGGTCT TTGCCCTGGTCCTGGGCTGGATGAATGCCCTTTACTTCACCCGTGGGCTGAAGC TGACGGGGACCTATAGCATCATGATCCAGAAGATTCTCTTCAAGGACCTTTTCC

3s GATTCCTGCTCGTCTACTTGCTCTTCATGATCGGCTACGCTTCAGCCCTGGTCTC CCTCCTGAACCCGTGTGCCAACATGAAGGTGTGCAATGAGGACCAGACCAACT GCACAGTGCCCACTTACCCCTCGTGCCGTGACAGCGAGACCTTCAGCACCTTCC TCCTGGACCTGTTTAAGCTGACCATCGGCATGGGCGACCTGGAGATGCTGAGCA GCACCAAGTACCCCGTGGTCTTCATCATCCTGCTGGTGACCTACATCATCCTCA so CCTTTGTGCTGCTCCTCAACATGCTCATTGCCCTCATGGGCGAGACAGTGGGCC AGGTCTCCAAGGAGAGCAAGCACATCTGGAAGCTGCAGTGGGCCACCACCATC CTGGACATTGAGCGCTCCTTCCCCGTATTCCTGAGGAAGGCCTTCCGCTCTGGG GAGATGGTCACCGTGGGCAAGAGCTCGGACGGCACTCCTGACCGCAGGTGGTG CTTCAGGGTGGATGAGGTGAACTGGTCTCACTGGAACCAGAACTTGGGCATCA TCAACGAGGACCCGGGCAAGAATGAGACCTACCAGTATTATGGCTTCTCGCATA CCGTGGGCCGCCTCCGCAGGGATCGCTGGTCCTCGGTGGTACCCCGCGTGGTG 3 s GATTCCTGCTCGTCTACTTGCTCTTCATGATCGGCTACGCTTCAGCCCTGGTCTC CCTCCTGAACCCGTGTGCCAACATGAAGGTGTGCAATGAGGACCAGACCAACT GCACAGTGCCCACTTACCCCTCGTGCCGTGACAGCGAGACCTTCAGCACCTTCC TCCTGGACCTGTTTAAGCTGACCATCGGCATGGGCGACCTGGAGATGCTGAGCA GCACCAAGTACCCCGTGGTCTTCATCATCCTGCTGGTGACCTACATCATCCTCA so CCTTTGTGCTGCTCCTCAACATGCTCATTGCCCTCATGGGCGAGACAGTGGGCC AGGTCTCCAAGGAGAGCAAGCACATCTGGAAGCTGCAGTGGGCCACCACCATC CTGGACATTGAGCGCTCCTTCCCCGTATTCCTGAGGAAGGCCTTCCGCTCTGGG GAGATGGTCACCGTGGGCAAGAGCTCGGACGGCACTCCTGACCGCAGGTGGTG CTTCAGGGTGGATGAGGTGAACTGGTCTCACTGGAACCAGAACTTGGGCATCATCA TCAACGAGGACCCGGGCAAGAATGAGACCTATACTAGGGGGGCCCC

» GAACTGAACAAGAACTCGAACCCGGACGAGGTGGTGGTGCCTCTGGACAGCAT GGGGAACCCCCGCTGCGATGGCCACCAGCAGGGTTACCCCCGCAAGTGGAGGA CTGAGGACGCCCCGCTCTAGGGACTGCAGCCCAGCCCCAGCTTCTCTGCCCACT CATTTCTAGTCCAGCCGCATTTCAGCAGTGCCTTCTGGGGTGTCCCCCCACACC CTGCTTTGGCCCCAGAGGCGAGGGACCAGTGGAGGTGCCAGGGAGGCCCCAGG o ACCCTGTGGTCCCCTGGCTCTGCCTCCCCACCCTGGGGTGGGGGCTCCCGGCCA CCTGTCTTGCTCCTATGGAGTCACATAAGCCAACGCCAGAGCCCCTCCACCTCA GGCCCCAGCCCCTGCCTCTCCATTATTTATTTGCTCTGCTCTCAGGAAGCGACG TGACCCCTGCCCCAGCTGGAACCTGGCAGAGGCCTTAGGACCCCGTTCCAAGTG CACTGCCCGGCCAAGCCCCAGCCTCAGCCTGCGCCTGAGCTGCATGCGCCACCA TTTTTGGCAGCGTGGCAGCTTTGCAAGGGGCTGGGGCCCTCGGCGTGGGGCCA TGCCTTCTGTGTGTTCTGTAGTGTCTGGGATTTGCCGGTGCTCAATAAATGTTTA TTCATTGACGGTGAAAAAAAAAAAAAAAAAAA oder eine Teilsequenz hiervon, eine Nukleinsäure, die an besagte Sequenz unter stringenten Bedingungen hybridisieren kann, eine allele Variante oder eine fünktionelle Variante von o besagter Sequenz oder eine Variante der Nukleinsäure aufgrund des degenerativen Kodes umfaßt. Erfindungsgemäß ist mit der oben dargestellten Sequenz die humane OTRPC4 DNS Sequenz mit 5' und 3'-untranslatierten Sequenzen umfaßt."GAACTGAACAAGAACTCGAACCCGGACGAGGTGGTGGTGCCTCTGGACAGCAT GGGGAACCCCCGCTGCGATGGCCACCAGCAGGGTTACCCCCGCAAGTGGAGGA CTGAGGACGCCCCGCTCTAGGGACTGCAGCCCAGCCCCAGCTTCTCTGCCCACT CATTTCTAGTCCAGCCGCATTTCAGCAGTGCCTTCTGGGGTGTCCCCCCACACC CTGCTTTGGCCCCAGAGGCGAGGGACCAGTGGAGGTGCCAGGGAGGCCCCAGG o ACCCTGTGGTCCCCTGGCTCTGCCTCCCCACCCTGGGGTGGGGGCTCCCGGCCA CCTGTCTTGCTCCTATGGAGTCACATAAGCCAACGCCAGAGCCCCTCCACCTCA GGCCCCAGCCCCTGCCTCTCCATTATTTATTTGCTCTGCTCTCAGGAAGCGACG TGACCCCTGCCCCAGCTGGAACCTGGCAGAGGCCTTAGGACCCCGTTCCAAGTG CACTGCCCGGCCAAGCCCCAGCCTCAGCCTGCGCCTGAGCTGCATGCGCCACCA TTTTTGGCAGCGTGGCAGCTTTGCAAGGGGCTGGGGCCCTCGGCGTGGGGCCA TGCCTTCTGTGTGTTCTGTAGTGTCTGGGATTTGCCGGTGCTCAATAAATGTTTA TTCATTGACGGTGAAAAAAAAAAAAAAAAAAA or a partial sequence thereof, a nucleic acid capable of hybridizing to said sequence under stringent conditions, an allelic variant or a fünktionelle variant of o said sequence or a variant of the nucleic acid due to of the degenerative code. According to the invention, the sequence shown above includes the human OTRPC4 DNA sequence with 5 'and 3' untranslated sequences.

Die erfindungsgemäßen Nukleinsäuren sind nach der international anerkannten IUPAC Nomenklatur angegeben, d.h. unter R wird ein A oder G, unter M ein A oder C, unter S ein i C oder G, unter Y ein C oder T, unter K ein G oder T und unter W ein A oder T verstanden.The nucleic acids according to the invention are given according to the internationally recognized IUPAC nomenclature, i.e. R is understood as A or G, M as A or C, S as i C or G, Y as C or T, K as G or T and W as A or T.

Weiterhin bevorzugt ist eine Nukleinsäure, die dadurch gekennzeichnet ist, daß sie die Sequenz CTCTCACCGCCTACTACCAGCCGCTGGAGGGCACAATGGCGGATTCCAGCGAA w GGCCCCCGCGCGGGGCCCGGGGAGGTGGCTGAGCTCCCCGGGGATGAGAGTGG CACCCCAGGTGGGGAGGCTTTTCCTCTCTCCTCCCTGGCCAATCTGTTTGAGGG GGAGGATGGCTCCCTTTCGCCCTCACCGGCTGATGCCAGTCGCCCTGCTGGCCC AGGCGATCrGGCGACCAAATCTGCGCATGAAGTTCCAGGGCGCCTTCCGCAAGG GGGTGCCCAACCCCATCGATCTGCTGGAGTCCACCCTATATGAGTCCTCGGTGG TGCCTGGGCCCAAGAAAGCACCCATGGACTCACTGTTTGACTACGGCACCTATC GTCACCACTCCAGTGACAACAAGAGGTGGAGGAAGAAGATCATAGAGAAGCAG CCGCAGAGCCCCAAAGCCCCTGCCCCTCAGCCGCCCCCCATCCTCAAAGTCTTC AACCGGCCTATCCTCTTTGACATCGTGTCCCGGGGCTCCACTGCTGACCTGGAC GGGCTGCTCCCATTCTTGCTGACCCACAAGAAACGCCTAACTGATGAGGAGTTT CGAGAGCCATCTACGGGGAAGACCTGCCTGCCCAAGGCCTTGCTGAACCTGAG CAATGGCCGCAACGACACCATCCCTGTGCTGCTGGACATCGCGGAGCGCACCG GCAACATGCGGGAGTTCATTAACTCGCCCTTCCGTGACATCTACTATCGAGGTC AGACAGCCCTGCACATCGCCATTGAGCGTCGCTGCAAACACTACGTGGAACTTC TCGTGGCCCAGGGAGCTGATGTCCACGCCCAGGCCCGTGGGCGCTTCTTCCAGC CCAAGGATGAGGGGGGCTACTTCTACTTTGGGGAGCTGCCCCTGTCGCTGGCTG CCTGCACCAACCAGCCCCACATTGTCAACTACCTGACGGAGAACCCCCACAAGA AGGCGGACATGCGGCGCCAGGACTCGCGAGGCAACACAGTGCTGCATGCGCTG GTGGCCATTGCTGACAACACCCGTGAGAACACCAAGTTTGTTACCAAGATGTAC GACCTGCTGCTGCTCAAGTGTGCCCGCCTCTTCCCCGACAGCAACCTGGAGGCC GTGCTCAACAACGACGGCCTCTCGCCCCTCATGATGGCTGCCAAGACGGGCAA GATTGGGATCTTTCAGCACATCATCCGGCGGGAGGTGACGGATGAGGACACAC GGCACCTGTCCCGCAAGTTCAAGGACTGGGCCTATGGGCCAGTGTATTCCTCGC TTTATGACCTCTCCTCCCTGGACACGTGTGGGGAAGAGGCCTCCGTGCTGGAGA TCCTGGTGTACAACAGCAAGATTGAGAACCGCCACGAGATGCTGGCTGTGGAG CCCATCAATGAACTGCTGCGGGACAAGTGGCGCAAGTTCGGGGCCGTCTCCTTC TACATCAACGTGGTCTCCTACCTGTGTGCCATGGTCATCTTCACTCTCACCGCCT ACTACCAGCCGCTGGAGGGCACACCGCCGTACCCTTACCGCACCACGGTGGAC TACCTGCGGCTGGCTGGCGAGGTCATTACGCTCTTCACTGGGGTCCTGTTCTTC TTCACCAACATCAAAGACTTGTTCATGAAGAAATGCCCTGGAGTGAATTCTCTC TTCATTGATGGCTCCTTCCAGCTGCTCTACTTCATCTACTCTGTCCTGGTGATCG TCTCAGCAGCCCTCTACCTGGCAGGGATCGAGGCCTACCTGGCCGTGATGGTCT TTGCCCTGGTCCTGGGCTGGATGAATGCCCTTTACTTCACCCGTGGGCTGAAGC TGACGGGGACCTATAGCATCATGATCCAGAAGATTCTCTTCAAGGACCTTTTCC GATTCCTGCTCGTCTACTTGCTCTTCATGATCGGCTACGCTTCAGCCCTGGTCTC CCTCCTGAACCCGTGTGCCAACATGAAGGTGTGCAATGAGGACCAGACCAACT GCACAGTGCCCACTTACCCCTCGTGCCGTGACAGCGAGACCTTCAGCACCTTCC TCCTGGACCTGTTTAAGCTGACCATCGGCATGGGCGACCTGGAGATGCTGAGCA GCACCAAGTACCCCGTGGTCTTCATCATCCTGCTGGTGACCTACATCATCCTCA CCTTTGTGCTGCTCCTCAACATGCTCATTGCCCTCATGGGCGAGACAGTGGGCC AGGTCTCCAAGGAGAGCAAGCACATCTGGAAGCTGCAGTGGGCCACCACCATC CTGGACATTGAGCGCTCCTTCCCCGTATTCCTGAGGAAGGCCTTCCGCTCTGGG GAGATGGTCACCGTGGGCAAGAGCTCGGACGGCACTCCTGACCGCAGGTGGTG CTTCAGGGTGGATGAGGTGAACTGGTCTCACTGGAACCAGAACTTGGGCATCA TCAACGAGGACCCGGGCAAGAATGAGACCTACCAGTATTATGGCTTCTCGCATA CCGTGGGCCGCCTCCGCAGGGATCGCTGGTCCTCGGTGGTACCCCGCGTGGTG GAACTGAACAAGAACTCGAACCCGGACGAGGTGGTGGTGCCTCTGGACAGCAT GGGGAACCCCCGCTGCGATGGCCACCAGCAGGGTTACCCCCGCAAGTGGAGGA CTGAGGACGCCCCGCTCTAGGGACTGCAGCCCAGCCCCAGCTTCTCTGCCCACT CATTTCTAGTCCAGCCGCATTTCAGCAGTGCCTTCTGGGGTGTCCCCCCACACC CTGCTTTGGCCCCAGAGGCGAGGGACCAGTGGAGGTGCCAGGGAGGCCCCAGG ACCCTGTGGTCCCCTGGCTCTGCCTCCCCACCCTGGGGTGGGGGCTCCCGGCCA CCTGTCTTGCTCCTATGGAGTCACATAAGCCAACGCCAGAGCCCCTCCACCTCA GGCCCCAGCCCCTGCCTCTCCATTATTTATTTGCTCTGCTCTCAGGAAGCGACG TGACCCCTGCCCCAGCTGGAACCTGGCAGAGGCCTTAGGACCCCGTTCCAAGTG CACTGCCCGGCCAAGCCCCAGCCTCAGCCTGCGCCTGAGCTGCATGCGCCACCA TTTTTGGCAGCGTGGCAGCTTTGCAAGGGGCTGGGGCCCTCGGCGTGGGGCCA TGCCTTCTGTGTGTTCTGTAGTGTCTGGGATTTGCCGGTGCTCAATAAATGTTTA TTCATTGACGGTGAAAAAAAAAAAAAAAAAAA hat. Die oben dargestellten Sequenz ist erfindungsgemäß die humane OTRPC4 DNS Sequenz mit 5' und 3'-untranslatierten Sequenzen.Further preferred is a nucleic acid which is characterized in that the sequence CTCTCACCGCCTACTACCAGCCGCTGGAGGGCACAATGGCGGATTCCAGCGAA w GGCCCCCGCGCGGGGCCCGGGGAGGTGGCTGAGCTCCCCGGGGATGAGAGTGG CACCCCAGGTGGGGAGGCTTTTCCTCTCTCCTCCCTGGCCAATCTGTTTGAGGG GGAGGATGGCTCCCTTTCGCCCTCACCGGCTGATGCCAGTCGCCCTGCTGGCCC AGGCGATCrGGCGACCAAATCTGCGCATGAAGTTCCAGGGCGCCTTCCGCAAGG GGGTGCCCAACCCCATCGATCTGCTGGAGTCCACCCTATATGAGTCCTCGGTGG TGCCTGGGCCCAAGAAAGCACCCATGGACTCACTGTTTGACTACGGCACCTATC GTCACCACTCCAGTGACAACAAGAGGTGGAGGAAGAAGATCATAGAGAAGCAG CCGCAGAGCCCCAAAGCCCCTGCCCCTCAGCCGCCCCCCATCCTCAAAGTCTTC AACCGGCCTATCCTCTTTGACATCGTGTCCCGGGGCTCCACTGCTGACCTGGAC GGGCTGCTCCCATTCTTGCTGACCCACAAGAAACGCCTAACTGATGAGGAGTTT CGAGAGCCATCTACGGGGAAGACCTGCCTGCCCAAGGCCTTGCTGAACCTGAG CAATGGCCGCAACGACACCATCCCTGTGCTGCTGGACATCGCGGAGCGCACCG GCAACATGCGGGAGTTCATTAACTCGCCCTTCCGTGACATCTACTATCGAGGTC AGACAGCCCTGCACATCGCCATTGAGCGTCGCTGCAAACACTACGTGGAACTTC TCGTGGCCCAGGGAGCTGATGTCCACGCCCAGGCCCGTGGGCGCTTCTTCCAGC CCAAGGATGAGGGGGGCTACTTCTACTTTGGGGAGCTGCCCCTGTCGCTGGCTG CCTGCACCAACCAGCCCCACATTGTCAACTACCTGACGGAGAACCCCCACAAGA AGGCGGACATGCGGCGCCAGGACTCGCGAGGCAACACAGTGCTGCATGCGCTG GTGGCCATTGCTGACAACACCCGTGAGAACACCAAGTTTGTTACCAAGATGTAC GACCTGCTGCTGCTCAAGTGTGCCCGCCTCTTCCCCGACAGCAACCTGGAGGCC GTGCTCAACAACGACGGCCTCTCGCCCCTCATGATGGCTGCCAAGACGGGCAA GATTGGGATCTTTCA GCACATCATCCGGCGGGAGGTGACGGATGAGGACACAC GGCACCTGTCCCGCAAGTTCAAGGACTGGGCCTATGGGCCAGTGTATTCCTCGC TTTATGACCTCTCCTCCCTGGACACGTGTGGGGAAGAGGCCTCCGTGCTGGAGA TCCTGGTGTACAACAGCAAGATTGAGAACCGCCACGAGATGCTGGCTGTGGAG CCCATCAATGAACTGCTGCGGGACAAGTGGCGCAAGTTCGGGGCCGTCTCCTTC TACATCAACGTGGTCTCCTACCTGTGTGCCATGGTCATCTTCACTCTCACCGCCT ACTACCAGCCGCTGGAGGGCACACCGCCGTACCCTTACCGCACCACGGTGGAC TACCTGCGGCTGGCTGGCGAGGTCATTACGCTCTTCACTGGGGTCCTGTTCTTC TTCACCAACATCAAAGACTTGTTCATGAAGAAATGCCCTGGAGTGAATTCTCTC TTCATTGATGGCTCCTTCCAGCTGCTCTACTTCATCTACTCTGTCCTGGTGATCG TCTCAGCAGCCCTCTACCTGGCAGGGATCGAGGCCTACCTGGCCGTGATGGTCT TTGCCCTGGTCCTGGGCTGGATGAATGCCCTTTACTTCACCCGTGGGCTGAAGC TGACGGGGACCTATAGCATCATGATCCAGAAGATTCTCTTCAAGGACCTTTTCC GATTCCTGCTCGTCTACTTGCTCTTCATGATCGGCTACGCTTCAGCCCTGGTCTC CCTCCTGAACCCGTGTGCCAACATGAAGGTGTGCAATGAGGACCAGACCAACT GCACAGTGCCCACTTACCCCTCGTGCCGTGACAGCGAGACCTTCAGCACCTTCC TCCTGGACCTGTTTAAGCTGACCATCGGCATGGGCGACCTGGAGATGCTGAGCA GCACCAAGTACCCCGTGGTCTTCATCATCCTGCTGGTGACCTACATCATCCTCA CCTTTGTGCTGCTCCTCAACATGCTCATTGCCCTCATGGGCGAGACAGTGGGCC AGGTCTCCAAGGAGAGCAAGCACATCTGGAAGCTGCAGTGGGCCACCACCATC CTGGACATTGAGCGCTCCTTCCCCGTATTCCTGAGGAAGGCCTTCCGCTCTGGG GAGATGGTCACCGTGGGCAAGAGCTCGGACGGCACTCCTGACCGCAGGTGGTG CTTCAGGGTGGATGAGGTGAACTGGTCTCACTGGAACCAGAACTTGGGCATCA TCAACGAGGACCCGGGCAAGAATGAGACCTACCAGTATTATGGCTTCTCGCATA CCGTGGGCCGCCTCCGCAGGGATCGCTGGTCCTCGGTGGTACCCCGCGTGGTG GAACTGAACAAGAACTCGAACCCGGACGAGGTGGTGGTGCCTCTGGACAGCAT GGGGAACCCCCGCTGCGATGGCCACCAGCAGGGTTACCCCCGCAAGTGGAGGA CTGAGGACGCCCCGCTCTAGGGACTGCAGCCCAGCCCCAGCTTCTCTGCCCACT CATTTCTAGTCCAGCCGCATTTCAGCAGTGCCTTCTGGGGTGTCCCCCCACACC CTGCTTTGGCCCCAGAGGCGAGGGACCAGTGGAGGTGCCAGGGAGGCCCCAGG ACCCTGTGGTCCCCTGGCTCTGCCTCCCCACCCTGGGGTGGGGGCTCCCGGCCA CCTGTCTTGCTCCTATGGAGTCACATAAGCCAACGCCAGAGCCCCTCCACCTCA GGCCCCAGCCCCTGCCTC TCCATTATTTATTTGCTCTGCTCTCAGGAAGCGACG TGACCCCTGCCCCAGCTGGAACCTGGCAGAGGCCTTAGGACCCCGTTCCAAGTG CACTGCCCGGCCAAGCCCCAGCCTCAGCCTGCGCCTGAGCTGCATGCGCCACCA TTTTTGGCAGCGTGGCAGCTTTGCAAGGGGCTGGGGCCCTCGGCGTGGGGCCA TGCCTTCTGTGTGTTCTGTAGTGTCTGGGATTTGCCGGTGCTCAATAAATGTTTA TTCATTGACGGTGAAAAAAAAAAAAAAAAAAA has. According to the invention, the sequence shown above is the human OTRPC4 DNA sequence with 5 'and 3' untranslated sequences.

Weiterhin bevorzugt ist eine Nukleinsäure, die dadurch gekennzeichnet ist, daß sie die Sequenz ATGGCGGATTCCAGCGAAGGCCCCCGCGCGGGGCCCGGGGAGGTGGCTGAGCT CCCCGGGGATGAGAGTGGCACCCCAGGTGGGGAGGCTTTTCCTCTCTCCTCCCT GGCCAATCTGTTTGAGGGGGAGGATGGCTCCCTTTCGCCCTCACCGGCTGATGC CAGTCGCCCTGCTGGCCCAGGCGATGGGCGACCAAATCTGCGCATGAAGTTCC AGGGCGCCTTCCGCAAGGGGGTGCCCAACCCCATCGATCTGCTGGAGTCCACC CTATATGAGTCCTCGGTGGTGCCTGGGCCCAAGAAAGCACCCATGGACTCACTG TTTGACTACGGCACCTATCGTCACCACTCCAGTGACAACAAGAGGTGGAGGAA GAAGATCATAGAGAAGCAGCCGCAGAGCCCCAAAGCCCCTGCCCCTCAGCCGC CCCCCATCCTCAAAGTCTTCAACCGGCCTATCCTCTTTGACATCGTGTCCCGGG GCTCCACTGCTGACCTGGACGGGCTGCTCCCATTCTTGCTGACCCACAAGAAAC GCCTAACTGATGAGGAGTTTCGAGAGCCATCTACGGGGAAGACCTGCCTGCCC AAGGCCTTGCTGAACCTGAGCAATGGCCGCAACGACACCATCCCTGTGCTGCTG GACATCGCGGAGCGCACCGGCAACATGCGGGAGTTCATTAACTCGCCCTTCCGT GACATCTACTATCGAGGTCAGACAGCCCTGCACATCGCCATTGAGCGTCGCTGC AAACACTACGTGGAACTTCTCGTGGCCCAGGGAGCTGATGTCCAcGCCCAGGCC CGTGGGCGCTTCTTCCAGCCCAAGGATGAGGGGGGCTACTTCTACTTTGGGGA GCTGCCCCTGTCGCTGGCTGCCTGCACCAACCAGCCCCACATTGTCAACTACCT GACGGAGAACCCCCACAAGAAGGCGGACATGCGGCGCCAGGACTCGCGAGGC AACACAGTGCTGCATGCGCTGGTGGCCATTGCTGACAACACCCGTGAGAACAC CAAGTTTGTTACCAAGATGTACGACCTGCTGCTGCTCAAGTGTGCCCGCCTCTT CCCCGACAGCAACCTGGAGGCCGTGCTCAACAACGACGGCCTCTCGCCCCTCAT GATGGCTGCCAAGACGGGCAAGATTGGGATCTTTCAGCACATCATCCGGCGGG AGGTGACGGATGAGGACACACGGCACCTGTCCCGCAAGTTCAAGGACTGGGCC TATGGGCCAGTGTATTCCTCGCTTTATGACCTCTCCTCCCTGGACACGTGTGGG GAAGAGGCCTCCGTGCTGGAGATCCTGGTGTACAACAGCAAGATTGAGAACCG CCACGAGATGCTGGCTGTGGAGCCCATCAATGAACTGCTGCGGGACAAGTGGC GCAAGTTCGGGGCCGTCTCCTTCTACATCAACGTGGTCTCCTACCTGTGTGCCA TGGTCATCTTCACTCTCACCGCCTACTACCAGCCGCTGGAGGGCACACCGCCGT ACCCTTACCGCACCACGGTGGACTACCTGCGGCTGGCTGGCGAGGTCATTACGC TCTTCACTGGGGTCCTGTTCTTCTTCACCAACATCAAAGACTTGTTCATGAAGA AATGCCCTGGAGTGAATTCTCTCTTCATTGATGGCTCCTTCCAGCTGCTCTACTT CATCTACTCTGTCCTGGTGATCGTCTCAGCAGCCCTCTACCTGGCAGGGATCGA GGCCTACCTGGCCGTGATGGTCTTTGCCCTGGTCCTGGGCTGGATGAATGCCCT TTACTTCACCCGTGGGCTGAAGCTGACGGGGACCTATAGCATCATGATCCAGAA GATTCTCTTCAAGGACCTTTTCCGATTCCTGCTCGTCTACTTGCTCTTCATGATC GGCTACGCTTCAGCCCTGGTCTCCCTCCTGAACCCGTGTGCCAACATGAAGGTG TGCAATGAGGACCAGACCAACTGCACAGTGCCCACTTACCCCTCGTGCCGTGACFurther preferred is a nucleic acid which is characterized in that the sequence ATGGCGGATTCCAGCGAAGGCCCCCGCGCGGGGCCCGGGGAGGTGGCTGAGCT CCCCGGGGATGAGAGTGGCACCCCAGGTGGGGAGGCTTTTCCTCTCTCCTCCCT GGCCAATCTGTTTGAGGGGGAGGATGGCTCCCTTTCGCCCTCACCGGCTGATGC CAGTCGCCCTGCTGGCCCAGGCGATGGGCGACCAAATCTGCGCATGAAGTTCC AGGGCGCCTTCCGCAAGGGGGTGCCCAACCCCATCGATCTGCTGGAGTCCACC CTATATGAGTCCTCGGTGGTGCCTGGGCCCAAGAAAGCACCCATGGACTCACTG TTTGACTACGGCACCTATCGTCACCACTCCAGTGACAACAAGAGGTGGAGGAA GAAGATCATAGAGAAGCAGCCGCAGAGCCCCAAAGCCCCTGCCCCTCAGCCGC CCCCCATCCTCAAAGTCTTCAACCGGCCTATCCTCTTTGACATCGTGTCCCGGG GCTCCACTGCTGACCTGGACGGGCTGCTCCCATTCTTGCTGACCCACAAGAAAC GCCTAACTGATGAGGAGTTTCGAGAGCCATCTACGGGGAAGACCTGCCTGCCC AAGGCCTTGCTGAACCTGAGCAATGGCCGCAACGACACCATCCCTGTGCTGCTG GACATCGCGGAGCGCACCGGCAACATGCGGGAGTTCATTAACTCGCCCTTCCGT GACATCTACTATCGAGGTCAGACAGCCCTGCACATCGCCATTGAGCGTCGCTGC AAACACTACGTGGAACTTCTCGTGGCCCAGGGAGCTGATGTCCAcGCCCAGGCC CGTGGGCGCTTCTTCCAGCCCAAGGATGAGGGGGGCTACTTCTACTTTGGGGA GCTGCCCCTGTCGCTGGCTGCCTGCACCAACCAGCCCCACATTGTCAACTACCT GACGGAGAACCCCCACAAGAAGGCGGACATGCGGCGCCAGGACTCGCGAGGC AACACAGTGCTGCATGCGCTGGTGGCCATTGCTGACAACACCCGTGAGAACAC CAAGTTTGTTACCAAGATGTACGACCTGCTGCTGCTCAAGTGTGCCCGCCTCTT CCCCGACAGCAACCTGGAGGCCGTGCTCAACAACGACGGCCTCTCGCCCCTCAT GATGGCTGCCAAGACGGGCAAGATTGGGATCTTTCAGCACATCATCCGGCGGG AGGTGACGGATGAGGACAC ACGGCACCTGTCCCGCAAGTTCAAGGACTGGGCC TATGGGCCAGTGTATTCCTCGCTTTATGACCTCTCCTCCCTGGACACGTGTGGG GAAGAGGCCTCCGTGCTGGAGATCCTGGTGTACAACAGCAAGATTGAGAACCG CCACGAGATGCTGGCTGTGGAGCCCATCAATGAACTGCTGCGGGACAAGTGGC GCAAGTTCGGGGCCGTCTCCTTCTACATCAACGTGGTCTCCTACCTGTGTGCCA TGGTCATCTTCACTCTCACCGCCTACTACCAGCCGCTGGAGGGCACACCGCCGT ACCCTTACCGCACCACGGTGGACTACCTGCGGCTGGCTGGCGAGGTCATTACGC TCTTCACTGGGGTCCTGTTCTTCTTCACCAACATCAAAGACTTGTTCATGAAGA AATGCCCTGGAGTGAATTCTCTCTTCATTGATGGCTCCTTCCAGCTGCTCTACTT CATCTACTCTGTCCTGGTGATCGTCTCAGCAGCCCTCTACCTGGCAGGGATCGA GGCCTACCTGGCCGTGATGGTCTTTGCCCTGGTCCTGGGCTGGATGAATGCCCT TTACTTCACCCGTGGGCTGAAGCTGACGGGGACCTATAGCATCATGATCCAGAA GATTCTCTTCAAGGACCTTTTCCGATTCCTGCTCGTCTACTTGCTCTTCATGATC GGCTACGCTTCAGCCCTGGTCTCCCTCCTGAACCCGTGTGCCAACATGAAGGTG TGCAATGAGGACCAGACCAACTGCACAGTGCCCACTTACCCCTCGTGCCGTGAC

AGCGAGACCTTCAGCACCTTCCTCCTGGACCTGTTTAAGCTGACCATCGGCATGAGCGAGACCTTCAGCACCTTCCTCCTGGACCTGTTTAAGCTGACCATCGGCATG

GGCGACCTGGAGATGCTGAGCAGCACCAAGTACCCCGTGGTCTTCATCATCCTGGGCGACCTGGAGATGCTGAGCAGCACCAAGTACCCCGTGGTCTTCATCATCCTG

CTGGTGACCTACATCATCCTCACCTTTGTGCTGCTCCTCAACATGCTCATTGCCCCTGGTGACCTACATCATCCTCACCTTTGTGCTGCTCCTCAACATGCTCATTGCCC

TCATGGGCGAGACAGTGGGCCAGGTCTCCAAGGAGAGCAAGCACATCTGGAAGTCATGGGCGAGACAGTGGGCCAGGTCTCCAAGGAGAGCAAGCACATCTGGAAG

CTGCAGTGGGCCACCACCATCCTGGACATTGAGCGCTCCTTCCCCGTATTCCTGCTGCAGTGGGCCACCACCATCCTGGACATTGAGCGCTCCTTCCCCGTATTCCTG

AGGAAGGCCTTCCGCTCTGGGGAGATGGTCACCGTGGGCAAGAGCTCGGACGGAGGAAGGCCTTCCGCTCTGGGGAGATGGTCACCGTGGGCAAGAGCTCGGACGG

CACTCCTGACCGCAGGTGGTGCTTCAGGGTGGATGAGGTGAACTGGTCTCACTGCACTCCTGACCGCAGGTGGTGCTTCAGGGTGGATGAGGTGAACTGGTCTCACTG

GAACCAGAACTTGGGCATCATCAACGAGGACCCGGGCAAGAATGAGACCTACCGAACCAGAACTTGGGCATCATCAACGAGGACCCGGGCAAGAATGAGACCTACC

AGTATTATGGCTTCTCGCATACCGTGGGCCGCCTCCGCAGGGATCGCTGGTCCTAGTATTATGGCTTCTCGCATACCGTGGGCCGCCTCCGCAGGGATCGCTGGTCCT

CGGTGGTACCCCGCGTGGTGGAACTGAACAAGAACTCGAACCCGGACGAGGTGCGGTGGTACCCCGCGTGGTGGAACTGAACAAGAACTCGAACCCGGACGAGGTG

GTGGTGCCTCTGGACAGCATGGGGAACCCCCGCTGCGATGGCCACCAGCAGGGGTGGTGCCTCTGGACAGCATGGGGAACCCCCGCTGCGATGGCCACCAGCAGGG

TTACCCCCGCAAGTGGAGGACTGAGGACGCCCCGCTCTAG oder eine Teilsequenz hiervon, eine Nukleinsäure, die an besagte Sequenz unter stringentenTTACCCCCGCAAGTGGAGGACTGAGGACGCCCCGCTCTAG or a partial sequence thereof, a nucleic acid attached to said sequence under stringent

Bedingungen hybridisieren kann, eine allele Variante oder eine fünktionelle Variante von besagter Sequenz oder eine Variante der Nukleinsäure aufgrund des degenerativen Kodes umfaßt. Erfindungsgemäß ist mit der oben dargestellten Sequenz die humane OTRPC4 cDNS Sequenz umfaßt.Conditions can hybridize, an allelic variant or a functional variant of said sequence or a variant of the nucleic acid comprises due to the degenerative code. According to the invention, the human OTRPC4 cDNA sequence is included with the sequence shown above.

Weiterhin bevorzugt ist eine Nukleinsäure, die' dadurch gekennzeichnet ist, daß sie dieFurther preferred is a nucleic acid, which is characterized in 'that the

Sequenzsequence

ATGGCGGATTCCAGCGAAGGCCCCCGCGCGGGGCCCGGGGAGGTGGCTGAGCTATGGCGGATTCCAGCGAAGGCCCCCGCGCGGGGCCCGGGGAGGTGGCTGAGCT

CCCCGGGGATGAGAGTGGCACCCCAGGTGGGGAGGCTTTTCCTCTCTCCTCCCTCCCCGGGGATGAGAGTGGCACCCCAGGTGGGGAGGCTTTTCCTCTCTCCTCCCT

GGCCAATCTGTTTGAGGGGGAGGATGGCTCCCTTTCGCCCTCACCGGCTGATGCGGCCAATCTGTTTGAGGGGGAGGATGGCTCCCTTTCGCCCTCACCGGCTGATGC

CAGTCGCCCTGCTGGCCCAGGCGATGGGCGACCAAATCTGCGCATGAAGTTCCCAGTCGCCCTGCTGGCCCAGGCGATGGGCGACCAAATCTGCGCATGAAGTTCC

AGGGCGCCTTCCGCAAGGGGGTGCCCAACCCCATCGATCTGCTGGAGTCCACCAGGGCGCCTTCCGCAAGGGGGTGCCCAACCCCATCGATCTGCTGGAGTCCACC

CTATATGAGTCCTCGGTGGTGCCTGGGCCCAAGAAAGCACCCATGGACTCACTGCTATATGAGTCCTCGGTGGTGCCTGGGCCCAAGAAAGCACCCATGGACTCACTG

TTTGACTACGGCACCTATCGTCACCACTCCAGTGACAACAAGAGGTGGAGGAATTTGACTACGGCACCTATCGTCACCACTCCAGTGACAACAAGAGGTGGAGGAA

GAAGATCATAGAGAAGCAGCCGCAGAGCCCCAAAGCCCCTGCCCCTCAGCCGCGAAGATCATAGAGAAGCAGCCGCAGAGCCCCAAAGCCCCTGCCCCTCAGCCGC

CCCCCATCCTCAAAGTCTTCAACCGGCCTATCCTCTTTGACATCGTGTCCCGGGCCCCCATCCTCAAAGTCTTCAACCGGCCTATCCTCTTTGACATCGTGTCCCGGG

GCTCCACTGCTGACCTGGACGGGCTGCTCCCATTCTTGCTGACCCACAAGAAACGCTCCACTGCTGACCTGGACGGGCTGCTCCCATTCTTGCTGACCCACAAGAAAC

GCCTAACTGATGAGGAGTTTCGAGAGCCATCTACGGGGAAGACCTGCCTGCCCGCCTAACTGATGAGGAGTTTCGAGAGCCATCTACGGGGAAGACCTGCCTGCCC

AAGGCCTTGCTGAACCTGAGCAATGGCCGCAACGACACCATCCCTGTGCTGCTG GACATCGCGGAGCGCACCGGCAACATGCGGGAGTTCATTAACTCGCCCTTCCGT GACATCTACTATCGAGGTCAGACAGCCCTGCACATCGCCATTGAGCGTCGCTGC AAACACTACGTGGAACTTCTCGTGGCCCAGGGAGCTGATGTCCAcGCCCAGGCC CGTGGGCGCTTCTTCCAGCCCAAGGATGAGGGGGGCTACTTCTACTTTGGGGA GCTGCCCCTGTCGCTGGCTGCCTGCACCAACCAGCCCCACATTGTCAACTACCT GACGGAGAACCCCCACAAGAAGGCGGACATGCGGCGCCAGGACTCGCGAGGC AACACAGTGCTGCATGCGCTGGTGGCCATTGCTGACAACACCCGTGAGAACAC CAAGTTTGTTACCAAGATGTACGACCTGCTGCTGCTCAAGTGTGCCCGCCTCTT CCCCGACAGCAACCTGGAGGCCGTGCTCAACAACGACGGCCTCTCGCCCCTCAT GATGGCTGCCAAGACGGGCAAGATTGGGATCTTTCAGCACATCATCCGGCGGG AGGTGACGGATGAGGACACACGGCACCTGTCCCGCAAGTTCAAGGACTGGGCC TATGGGCCAGTGTATTCCTCGCTTTATGACCTCTCCTCCCTGGACACGTGTGGG GAAGAGGCCTCCGTGCTGGAGATCCTGGTGTACAACAGCAAGATTGAGAACCG CCACGAGATGCTGGCTGTGGAGCCCATCAATGAACTGCTGCGGGACAAGTGGC GCAAGTTCGGGGCCGTCTCCTTCTACATCAACGTGGTCTCCTACCTGTGTGCCA TGGTCATCTTCACTCTCACCGCCTACTACCAGCCGCTGGAGGGCACACCGCCGT ACCCTTACCGCACCACGGTGGACTACCTGCGGCTGGCTGGCGAGGTCATTACGC TCTTCACTGGGGTCCTGTTCTTCTTCACCAACATCAAAGACTTGTTCATGAAGA AATGCCCTGGAGTGAATTCTCTCTTCATTGATGGCTCCTTCCAGCTGCTCTACTT CATCTACTCTGTCCTGGTGATCGTCTCAGCAGCCCTCTACCTGGCAGGGATCGA GGCCTACCTGGCCGTGATGGTCTTTGCCCTGGTCCTGGGCTGGATGAATGCCCT TTACTTCACCCGTGGGCTGAAGCTGACGGGGACCTATAGCATCATGATCCAGAA GATTCTCTTCAAGGACCTTTTCCGATTCCTGCTCGTCTACTTGCTCTTCATGATC GGCTACGCTTCAGCCCTGGTCTCCCTCCTGAACCCGTGTGCCAACATGAAGGTG TGCAATGAGGACCAGACCAACTGCACAGTGCCCACTTACCCCTCGTGCCGTGAC AGCGAGACCTTCAGCACCTTCCTCCTGGACCTGTTTAAGCTGACCATCGGCATG GGCGACCTGGAGATGCTGAGCAGCACCAAGTACCCCGTGGTCTTCATCATCCTG CTGGTGACCTACATCATCCTCACCTTTGTGCTGCTCCTCAACATGCTCATTGCCC TCATGGGCGAGACAGTGGGCCAGGTCTCCAAGGAGAGCAAGCACATCTGGAAG CTGCAGTGGGCCACCACCATCCTGGACATTGAGCGCTCCTTCCCCGTATTCCTG AGGAAGGCCTTCCGCTCTGGGGAGATGGTCACCGTGGGCAAGAGCTCGGACGG CACTCCTGACCGCAGGTGGTGCTTCAGGGTGGATGAGGTGAACTGGTCTCACTG GAACCAGAACTTGGGCATCATCAACGAGGACCCGGGCAAGAATGAGACCTACC AGTATTATGGCTTCTCGCATACCGTGGGCCGCCTCCGCAGGGATCGCTGGTCCT CGGTGGTACCCCGCGTGGTGGAACTGAACAAGAACTCGAACCCGGACGAGGTG GTGGTGCCTCTGGACAGCATGGGGAACCCCCGCTGCGATGGCCACCAGCAGGG TTACCCCCGCAAGTGGAGGACTGAGGACGCCCCGCTCTAG hat. Die oben dargestellten Sequenz ist erfindungsgemäß die humane OTRPC4 cDNSAAGGCCTTGCTGAACCTGAGCAATGGCCGCAACGACACCATCCCTGTGCTGCTG GACATCGCGGAGCGCACCGGCAACATGCGGGAGTTCATTAACTCGCCCTTCCGT GACATCTACTATCGAGGTCAGACAGCCCTGCACATCGCCATTGAGCGTCGCTGC AAACACTACGTGGAACTTCTCGTGGCCCAGGGAGCTGATGTCCAcGCCCAGGCC CGTGGGCGCTTCTTCCAGCCCAAGGATGAGGGGGGCTACTTCTACTTTGGGGA GCTGCCCCTGTCGCTGGCTGCCTGCACCAACCAGCCCCACATTGTCAACTACCT GACGGAGAACCCCCACAAGAAGGCGGACATGCGGCGCCAGGACTCGCGAGGC AACACAGTGCTGCATGCGCTGGTGGCCATTGCTGACAACACCCGTGAGAACAC CAAGTTTGTTACCAAGATGTACGACCTGCTGCTGCTCAAGTGTGCCCGCCTCTT CCCCGACAGCAACCTGGAGGCCGTGCTCAACAACGACGGCCTCTCGCCCCTCAT GATGGCTGCCAAGACGGGCAAGATTGGGATCTTTCAGCACATCATCCGGCGGG AGGTGACGGATGAGGACACACGGCACCTGTCCCGCAAGTTCAAGGACTGGGCC TATGGGCCAGTGTATTCCTCGCTTTATGACCTCTCCTCCCTGGACACGTGTGGG GAAGAGGCCTCCGTGCTGGAGATCCTGGTGTACAACAGCAAGATTGAGAACCG CCACGAGATGCTGGCTGTGGAGCCCATCAATGAACTGCTGCGGGACAAGTGGC GCAAGTTCGGGGCCGTCTCCTTCTACATCAACGTGGTCTCCTACCTGTGTGCCA TGGTCATCTTCACTCTCACCGCCTACTACCAGCCGCTGGAGGGCACACCGCCGT ACCCTTACCGCACCACGGTGGACTACCTGCGGCTGGCTGGCGAGGTCATTACGC TCTTCACTGGGGTCCTGTTCTTCTTCACCAACATCAAAGACTTGTTCATGAAGA AATGCCCTGGAGTGAATT CTCTCTTCATTGATGGCTCCTTCCAGCTGCTCTACTT CATCTACTCTGTCCTGGTGATCGTCTCAGCAGCCCTCTACCTGGCAGGGATCGA GGCCTACCTGGCCGTGATGGTCTTTGCCCTGGTCCTGGGCTGGATGAATGCCCT TTACTTCACCCGTGGGCTGAAGCTGACGGGGACCTATAGCATCATGATCCAGAA GATTCTCTTCAAGGACCTTTTCCGATTCCTGCTCGTCTACTTGCTCTTCATGATC GGCTACGCTTCAGCCCTGGTCTCCCTCCTGAACCCGTGTGCCAACATGAAGGTG TGCAATGAGGACCAGACCAACTGCACAGTGCCCACTTACCCCTCGTGCCGTGAC AGCGAGACCTTCAGCACCTTCCTCCTGGACCTGTTTAAGCTGACCATCGGCATG GGCGACCTGGAGATGCTGAGCAGCACCAAGTACCCCGTGGTCTTCATCATCCTG CTGGTGACCTACATCATCCTCACCTTTGTGCTGCTCCTCAACATGCTCATTGCCC TCATGGGCGAGACAGTGGGCCAGGTCTCCAAGGAGAGCAAGCACATCTGGAAG CTGCAGTGGGCCACCACCATCCTGGACATTGAGCGCTCCTTCCCCGTATTCCTG AGGAAGGCCTTCCGCTCTGGGGAGATGGTCACCGTGGGCAAGAGCTCGGACGG CACTCCTGACCGCAGGTGGTGCTTCAGGGTGGATGAGGTGAACTGGTCTCACTG GAACCAGAACTTGGGCATCATCAACGAGGACCCGGGCAAGAATGAGACCTACC AGTATTATGGCTTCTCGCATACCGTGGGCCGCCTCCGCAGGGATCGCTGGTCCT CGGTGGTACCCCGCGTGGTGGAACTGAACAAGAACTCGAACCCGGACGAGGTG GTGGTGCCTCTGGACAGCATGGGGAACCCCCGCTGCGATGGCCACCAGCAGGG TTACCCCCGCAAGTGGAGGACTGAGGACGCCCCGCTCTAG has. According to the invention, the sequence shown above is the human OTRPC4 cDNA

Sequenz.Sequence.

Weiterhin bevorzugt ist eine Nukleinsäure, die dadurch gekennzeichnet ist, daß sie dieAlso preferred is a nucleic acid which is characterized in that it has the

Sequenz GGCCACGCGTCGACTAGTACGGGGGGGGGGGGGGGGGTGGCRGSRGGAKCAG GACTCGGCCGGAGGGATCAGGAAGCGGCGGCGCTGCGCCCGCGTCCTGAGGCT GAGAAGTACAAACAGATCTGGGTCCAGTATGGCAGATCCTGGTGATGGTCCCC GTGCAGCGCCTGGGGAGGTGGCTGAGCCCCCTGGAGATGAGAGTGGTACCTCT GGTGGGGAGGCCTTCCCCCTCTCTTCCCTGGCCAATCTGTTTGAGGGGGAGGAA GGCTCCTCTTCTCTTTCCCCGGTGGATGCTAGCCGCCCTGCTGGCCCTGGCGAT GGACGTCCAAACCTGCGTATGAAGTTCCAGGGCGCTTTCCGCAAGGGGGTTCCC AACCCCATTGACCTGTTGGAGTCCACCCGGTACGAGTCCTCAGTAGTGCCTGGG CCCAAGAAAGCGCCCATGGATTCCTTGTTCGACTACGGCACTTACCGTCACCAC CCCAGTGACAACAAGAGATGGAGGAGAAAGGTCGTGGAGAAGCAGCCACAGA GCCCCAAAGCTCCTGCACCCCAGCCACCCCCCATCCTCAAAGTCTTCAATCGGC CCATCCTCTTTGACATTGTGTCCCGGGGCTCCACTGCGGACCTAGATGGACTGC TCTCCTTCTTGTTGACCCACAAGAAGCGCCTGACTGATGAGGAGTTCCGGGAGC CGTCCACGGGGAAGACCTGCCTGCCCAAGGCGCTGCTGAACCTAAGCAACGGG CGCAACGACACCATCCCGGTGTTGCTGGACATTGCGGAGCGCACCGGCAACAT GCGTGAATTCATCAACTCGCCCTTCAGAGACATCTACTACCGAGGCCAGACATC CCTGCACATTGCCATCGAACGGCGCTGCAAGCACTACGTGGAGCTGCTGGTGG CCCAGGGAGCCGACGTGCACGCCCAGGCCCGCGGCCGCTTCTTCCAGCCCAAG GATGAGGGAGGCTACTTCTACTTTGGGGAGCTGCCCTTGTCCCTGGCAGCCTGC ACCAACCAGCCGCACATCGTCAACTACCTGACAGAGAACCCTCACAAGAAAGC TGACATGAGGCGACAGGACTCGAGGGGGAACACGGTGCTGCACGCGCTGGTGG CCATCGCCGACAACACCCGAGAGAACACCAAGTTTGTCACCAAGATGTACGAC CTGCTGCTTCTCAAGTGTTCACGCCTCTTCCCCGACAGCAACCTGGAGACAGTT CTCAACAATGATGGCCTTTCGCCTCTCATGATGGCTGCCAAGACAGGCAAGATC GGGGTCTTTCAGCACATCATCCGACGTGAGGTGACAGATGAGGACACCCGGCA TCTGTCTCGCAAGTTCAAGGACTGGGCCTATGGGCCTGTGTATTCTTCTCTCTA CGACCTCTCCTCCCTGGACACATGCGGGGAGGAGGTGTCCGTGCTGGAGATCCT s GGTGTACAACAGCAAGATCGAGAACCGCCATGAGATGCTGGCTGTAGAGCCCA TTAACGAACTGTTGAGAGACAAGTGGCGTAAGTTTGGGGCTGTGTCCTTCTACA TCAACGTGGTCTCCTATCTGTGTGCCATGGTCATCTTCACCCTCACCGCCTACTA TCAGCCACTGGAGGGCACGCCACCCTACCCTTACCGGACCACAGTGGACTACCT GAGGCTGGCTGGCGAGGTCATCACGCTCTTCACAGGAGTCCTGTTCTTCTTTAC o CAGTATCAAAGACTTGTTCACGAAGAAATGCCCTGGAGTGAATTCTCTCTTCGT CGATGGCTCCTTCCAGTTACTCTACTTCATCTACTCTGTGCTGGTGGTTGTCTCT GCGGCGCTCTACCTGGCTGGGATCGAGGCCTACCTGGCTGTGATGGTCTTTGCC CTGGTCCTGGGCTGGATGAATGCGCTGTACTTCACGCGCGGGTTGAAGCTGAC GGGGACCTACAGCATCATGATTCAGAAGATCCTCTTCAAAGACCTCTTCCGCTT s CCTGCTTGTGTACCTGCTCTTCATGATCGGCTATGCCTCAGCCCTGGTCACCCTC CTGAATCCGTGCACCAACATGAAGGTCTGTGACGAGGACCAGAGCAACTGCAC GGTGCCCACGTATCCTGCGTGCCGCGACAGCGAGACCTTCAGCGCCTTCCTCCT GGACCTCTTCAAGCTCACCATCGGCATGGGAGACCTGGAGATGCTGAGCAGCG CCAAGTACCCCGTGGTCTTCATCCTCCTGCTGGTCACCTACATCATCCTCACCTT 0 CGTGCTCCTGTTGAACATGCTTATCGCCCTCATGGGTGAGACCGTGGGCCAGGT GTCCAAGGAGAGCAAGCACATCTGGAAGTTGCAGTGGGCCACCACCATCCTGG ACATCGAGCGTTCCTTCCCTGTGTTCCTGAGGAAGGCCTTCCGCTCCGGAGAGA TGGTGACTGTGGGCAAGAGCTCAGATGGCACTCCGGACCGCAGGTGGTGCTTC AGGGTGGACGAGGTGAACTGGTCTCACTGGAACCAGAACTTGGGCATCATTAA 5 CGAGGACCCTGGCAAGAGTGAAATCTACCAGTACTATGGCTTCTCCCACACCGT GGGGCGCCTTCGTAGGGATCGTTGGTCCTCGGTGGTGCCCCGCGTAGTGGAGC TGAACAAGAACTCAAGCGCAGATGAAGTGGTGGTACCCCTGGATAACCTAGGG AACCCCAACTGTGACGGCCACCAGCAGGGCTACGCTCCCAAGTGGAGGACGGA CGATGCCCCACTGTAGGGGCCGTGCCAGAGCTCGCACAGATAGTCCAGGCTTGSequence GGCCACGCGTCGACTAGTACGGGGGGGGGGGGGGGGGTGGCRGSRGGAKCAG GACTCGGCCGGAGGGATCAGGAAGCGGCGGCGCTGCGCCCGCGTCCTGAGGCT GAGAAGTACAAACAGATCTGGGTCCAGTATGGCAGATCCTGGTGATGGTCCCC GTGCAGCGCCTGGGGAGGTGGCTGAGCCCCCTGGAGATGAGAGTGGTACCTCT GGTGGGGAGGCCTTCCCCCTCTCTTCCCTGGCCAATCTGTTTGAGGGGGAGGAA GGCTCCTCTTCTCTTTCCCCGGTGGATGCTAGCCGCCCTGCTGGCCCTGGCGAT GGACGTCCAAACCTGCGTATGAAGTTCCAGGGCGCTTTCCGCAAGGGGGTTCCC AACCCCATTGACCTGTTGGAGTCCACCCGGTACGAGTCCTCAGTAGTGCCTGGG CCCAAGAAAGCGCCCATGGATTCCTTGTTCGACTACGGCACTTACCGTCACCAC CCCAGTGACAACAAGAGATGGAGGAGAAAGGTCGTGGAGAAGCAGCCACAGA GCCCCAAAGCTCCTGCACCCCAGCCACCCCCCATCCTCAAAGTCTTCAATCGGC CCATCCTCTTTGACATTGTGTCCCGGGGCTCCACTGCGGACCTAGATGGACTGC TCTCCTTCTTGTTGACCCACAAGAAGCGCCTGACTGATGAGGAGTTCCGGGAGC CGTCCACGGGGAAGACCTGCCTGCCCAAGGCGCTGCTGAACCTAAGCAACGGG CGCAACGACACCATCCCGGTGTTGCTGGACATTGCGGAGCGCACCGGCAACAT GCGTGAATTCATCAACTCGCCCTTCAGAGACATCTACTACCGAGGCCAGACATC CCTGCACATTGCCATCGAACGGCGCTGCAAGCACTACGTGGAGCTGCTGGTGG CCCAGGGAGCCGACGTGCACGCCCAGGCCCGCGGCCGCTTCTTCCAGCCCAAG GATGAGGGAGGCT ACTTCTACTTTGGGGAGCTGCCCTTGTCCCTGGCAGCCTGC ACCAACCAGCCGCACATCGTCAACTACCTGACAGAGAACCCTCACAAGAAAGC TGACATGAGGCGACAGGACTCGAGGGGGAACACGGTGCTGCACGCGCTGGTGG CCATCGCCGACAACACCCGAGAGAACACCAAGTTTGTCACCAAGATGTACGAC CTGCTGCTTCTCAAGTGTTCACGCCTCTTCCCCGACAGCAACCTGGAGACAGTT CTCAACAATGATGGCCTTTCGCCTCTCATGATGGCTGCCAAGACAGGCAAGATC GGGGTCTTTCAGCACATCATCCGACGTGAGGTGACAGATGAGGACACCCGGCA TCTGTCTCGCAAGTTCAAGGACTGGGCCTATGGGCCTGTGTATTCTTCTCTCTA CGACCTCTCCTCCCTGGACACATGCGGGGAGGAGGTGTCCGTGCTGGAGATCCT s GGTGTACAACAGCAAGATCGAGAACCGCCATGAGATGCTGGCTGTAGAGCCCA TTAACGAACTGTTGAGAGACAAGTGGCGTAAGTTTGGGGCTGTGTCCTTCTACA TCAACGTGGTCTCCTATCTGTGTGCCATGGTCATCTTCACCCTCACCGCCTACTA TCAGCCACTGGAGGGCACGCCACCCTACCCTTACCGGACCACAGTGGACTACCT GAGGCTGGCTGGCGAGGTCATCACGCTCTTCACAGGAGTCCTGTTCTTCTTTAC o CAGTATCAAAGACTTGTTCACGAAGAAATGCCCTGGAGTGAATTCTCTCTTCGT CGATGGCTCCTTCCAGTTACTCTACTTCATCTACTCTGTGCTGGTGGTTGTCTCT GCGGCGCTCTACCTGGCTGGGATCGAGGCCTACCTGGCTGTGATGGTCTTTGCC CTGGTCCTGGGCTGGATGAATGCGCTGTACTTCACGCGCGGGTTGAAGCTGAC GGGGACCTACAGCATCATGATTCAGAAGATCCTCTTCAAAGACCTCTTCCGCTT s CCTGCTTGTGTACCTGCTCTTCATGATCGGCTATGCCTCAGCCCTGGTCACCCTC CTGAATCCGTGCACCAACATGAAGGTCTGTGACGAGGACCAGAGCAACTGCAC GGTGCCCACGTATCCTGCGTGCCGCGACAGCGAGACCTTCAGCGCCTTCCTCCT GGACCTCTTCAAGCTCACCATCGGCATGGGAGACCTGGAGATGCTGAGCAGCG CCAAGT ACCCCGTGGTCTTCATCCTCCTGCTGGTCACCTACATCATCCTCACCTT 0 CGTGCTCCTGTTGAACATGCTTATCGCCCTCATGGGTGAGACCGTGGGCCAGGT GTCCAAGGAGAGCAAGCACATCTGGAAGTTGCAGTGGGCCACCACCATCCTGG ACATCGAGCGTTCCTTCCCTGTGTTCCTGAGGAAGGCCTTCCGCTCCGGAGAGA TGGTGACTGTGGGCAAGAGCTCAGATGGCACTCCGGACCGCAGGTGGTGCTTC AGGGTGGACGAGGTGAACTGGTCTCACTGGAACCAGAACTTGGGCATCATTAA 5 CGAGGACCCTGGCAAGAGTGAAATCTACCAGTACTATGGCTTCTCCCACACCGT GGGGCGCCTTCGTAGGGATCGTTGGTCCTCGGTGGTGCCCCGCGTAGTGGAGC TGAACAAGAACTCAAGCGCAGATGAAGTGGTGGTACCCCTGGATAACCTAGGG AACCCCAACTGTGACGGCCACCAGCAGGGCTACGCTCCCAAGTGGAGGACGGA CGATGCCCCACTGTAGGGGCCGTGCCAGAGCTCGCACAGATAGTCCAGGCTTG

3β GCCTTCGCTCCCACCTACATTTAGGCATTTGTCCGGTGTCTTCCCACACCCGCAT GGGACCTTGGAGGTGAGGGCCTCTGTGGCGACTCTGTGGAGGCCCCAGGACCC TCTGGTCCCCGCCAAGACTTTTGCCTTCAGCTCTACTCCCCACATGGGGGGGCG GGGCTCCTGGCTACCTGTCTCGCTCGCTCCCATGGAGTCACCTAAGCCAGCACA3β GCCTTCGCTCCCACCTACATTTAGGCATTTGTCCGGTGTCTTCCCACACCCGCAT GGGACCTTGGAGGTGAGGGCCTCTGTGGCGACTCTGTGGAGGCCCCAGGACCC TCTGGTCCCCGCCAAGACTTTTGCCTTCACGGGGGGCCCCGGGACTAG GGGCTCCTGGCTACCTGTCTCGCTCGCTCCCATGGAGTCACCTAAGCCAGCACA

AGGCCCCTCTCCTCGAAAGGCTCAGGCCCCATCCCTCTTGTGTATTATTTATTGCAGGCCCCTCTCCTCGAAAGGCTCAGGCCCCATCCCTCTTGTGTATTATTTATTGC

TCTCCTCAGGAAAATGGGGTGGCAGGAGTCCACCCGCGGCTGGAACCTGGCCATCTCCTCAGGAAAATGGGGTGGCAGGAGTCCACCCGCGGCTGGAACCTGGCCA

GGGCTGAAGCTCATGCAGGGACGCTGCAGCTCCGACCTGCCACAGATCTGACCGGGCTGAAGCTCATGCAGGGACGCTGCAGCTCCGACCTGCCACAGATCTGACC

TGCTGCAG CCTGGCTAGTGTGGGTCTTCTGTACTTTGAAGAGATCGGGGCCGCTGCTGCAG CCTGGCTAGTGTGGGTCTTCTGTACTTTGAAGAGATCGGGGCCGC

TGGTGCTCAATAAATGTTTATTCTCGGTGGAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAATGGTGCTCAATAAATGTTTATTCTCGGTGGAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA

AAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA

AA oder eine Teilsequenz hiervon, eine Nukleinsäure, die an besagte Sequenz unter stringentenAA or a partial sequence thereof, a nucleic acid attached to said sequence under stringent

Bedingungen hybridisieren kann, eine allele Variante oder eine fünktionelle Variante von besagter Sequenz oder eine Variante der Nukleinsäure aufgrund des degenerativen Kodes umfaßt, worin R ein A oder G, M ein A oder C, S ein C oder G, Y ein C oder T, K ein G oder T und W ein A oder T sein kann. Erfindungsgemäß ist mit der oben dargestelltenCan hybridize conditions, comprises an allelic variant or a functional variant of said sequence or a variant of the nucleic acid based on the degenerative code, wherein R is an A or G, M is an A or C, S is a C or G, Y is a C or T, K can be a G or T and W can be an A or T. According to the invention is shown with the above

Sequenz die murine OTRPC4 DNS Sequenz mit 5' und 3'-untranslatierten Sequenzen umfaßt.Sequence comprises the murine OTRPC4 DNA sequence with 5 'and 3' untranslated sequences.

Weiterhin bevorzugt ist eine Nukleinsäure, die dadurch gekennzeichnet ist, daß sie dieAlso preferred is a nucleic acid which is characterized in that it has the

Sequenzsequence

GGCCACGCGTCGACTAGTACGGGGGGGGGGGGGGGGGTGGCRGSRGGAKCAGGGCCACGCGTCGACTAGTACGGGGGGGGGGGGGGGGGTGGCRGSRGGAKCAG

GACTCGGCCGGAGGGATCAGGAAGCGGCGGCGCTGCGCCCGCGTCCTGAGGCTGACTCGGCCGGAGGGATCAGGAAGCGGCGGCGCTGCGCCCGCGTCCTGAGGCT

GAGAAGTACAAACAGATCTGGGTCCAGTATGGCAGATCCTGGTGATGGTCCCCGAGAAGTACAAACAGATCTGGGTCCAGTATGGCAGATCCTGGTGATGGTCCCC

GTGCAGCGCCTGGGGAGGTGGCTGAGCCCCCTGGAGATGAGAGTGGTACCTCTGTGCAGCGCCTGGGGAGGTGGCTGAGCCCCCTGGAGATGAGAGTGGTACCTCT

GGTGGGGAGGCCTTCCCCCTCTCTTCCCTGGCCAATCTGTTTGAGGGGGAGGAAGGTGGGGAGGCCTTCCCCCTCTCTTCCCTGGCCAATCTGTTTGAGGGGGAGGAA

GGCTCCTCTTCTCTTTCCCCGGTGGATGCTAGCCGCCCTGCTGGCCCTGGCGATGGCTCCTCTTCTCTTTCCCCGGTGGATGCTAGCCGCCCTGCTGGCCCTGGCGAT

GGACGTCCAAACCTGCGTATGAAGTTCCAGGGCGCTTTCCGCAAGGGGGTTCCCGGACGTCCAAACCTGCGTATGAAGTTCCAGGGCGCTTTCCGCAAGGGGGTTCCC

AACCCCATTGACCTGTTGGAGTCCACCCGGTACGAGTCCTCAGTAGTGCCTGGGAACCCCATTGACCTGTTGGAGTCCACCCGGTACGAGTCCTCAGTAGTGCCTGGG

CCCAAGAAAGCGCCCATGGATTCCTTGTTCGACTACGGCACTTACCGTCACCACCCCAAGAAAGCGCCCATGGATTCCTTGTTCGACTACGGCACTTACCGTCACCAC

CCCAGTGACAACAAGAGATGGAGGAGAAAGGTCGTGGAGAAGCAGCCACAGACCCAGTGACAACAAGAGATGGAGGAGAAAGGTCGTGGAGAAGCAGCCACAGA

GCCCCAAAGCTCCTGCACCCCAGCCACCCCCCATCCTCAAAGTCTTCAATCGGCGCCCCAAAGCTCCTGCACCCCAGCCACCCCCCATCCTCAAAGTCTTCAATCGGC

CCATCCTCTTTGACATTGTGTCCCGGGGCTCCACTGCGGACCTAGATGGACTGCCCATCCTCTTTGACATTGTGTCCCGGGGCTCCACTGCGGACCTAGATGGACTGC

TCTCCTTCTTGTTGACCCACAAGAAGCGCCTGACTGATGAGGAGTTCCGGGAGCTCTCCTTCTTGTTGACCCACAAGAAGCGCCTGACTGATGAGGAGTTCCGGGAGC

CGTCCACGGGGAAGACCTGCCTGCCCAAGGCGCTGCTGAACCTAAGCAACGGGCGTCCACGGGGAAGACCTGCCTGCCCAAGGCGCTGCTGAACCTAAGCAACGGG

CGCAACGACACCATCCCGGTGTTGCTGGACATTGCGGAGCGCACCGGCAACAT GCGTGAATTCATCAACTCGCCCTTCAGAGACATCTACTACCGAGGCCAGACATC CCTGCACATTGCCATCGAACGGCGCTGCAAGCACTACGTGGAGCTGCTGGTGG CCCAGGGAGCCGACGTGCACGCCCAGGCCCGCGGCCGCTTCTTCCAGCCCAAG GATGAGGGAGGCTACTTCTACTTTGGGGAGCTGCCCTTGTCCCTGGCAGCCTGC ACCAACCAGCCGCACATCGTCAACTACCTGACAGAGAACCCTCACAAGAAAGC TGACATGAGGCGACAGGACTCGAGGGGGAACACGGTGCTGCACGCGCTGGTGG CCATCGCCGACAACACCCGAGAGAACACCAAGTTTGTCACCAAGATGTACGAC CTGCTGCTTCTCAAGTGTTCACGCCTCTTCCCCGACAGCAACCTGGAGACAGTT CTCAACAATGATGGCCTTTCGCCTCTCATGATGGCTGCCAAGACAGGCAAGATC GGGGTCTTTCAGCACATCATCCGACGTGAGGTGACAGATGAGGACACCCGGCA TCTGTCTCGCAAGTTCAAGGACTGGGCCTATGGGCCTGTGTATTCTTCTCTCTA CGACCTCTCCTCCCTGGACACATGCGGGGAGGAGGTGTCCGTGCTGGAGATCCT GGTGTACAACAGCAAGATCGAGAACCGCCATGAGATGCTGGCTGTAGAGCCCA TTAACGAACTGTTGAGAGACAAGTGGCGTAAGTTTGGGGCTGTGTCCTTCTACA TCAACGTGGTCTCCTATCTGTGTGCCATGGTCATCTTCACCCTCACCGCCTACTA TCAGCCACTGGAGGGCACGCCACCCTACCCTTACCGGACCACAGTGGACTACCT GAGGCTGGCTGGCGAGGTCATCACGCTCTTCACAGGAGTCCTGTTCTTCTTTAC CAGTATCAAAGACTTGTTCACGAAGAAATGCCCTGGAGTGAATTCTCTCTTCGT CGATGGCTCCTTCCAGTTACTCTACTTCATCTACTCTGTGCTGGTGGTTGTCTCT GCGGCGCTCTACCTGGCTGGGATCGAGGCCTACCTGGCTGTGATGGTCTTTGCC CTGGTCCTGGGCTGGATGAATGCGCTGTACTTCACGCGCGGGTTGAAGCTGAC GGGGACCTACAGCATCATGATTCAGAAGATCCTCTTCAAAGACCTCTTCCGCTT CCTGCTTGTGTACCTGCTCTTCATGATCGGCTATGCCTCAGCCCTGGTCACCCTC CTGAATCCGTGCACCAACATGAAGGTCTGTGACGAGGACCAGAGCAACTGCAC GGTGCCCACGTATCCTGCGTGCCGCGACAGCGAGACCTTCAGCGCCTTCCTCCT GGACCTCTTCAAGCTCACCATCGGCATGGGAGACCTGGAGATGCTGAGCAGCG CCAAGTACCCCGTGGTCTTCATCCTCCTGCTGGTCACCTACATCATCCTCACCTT CGTGCTCCTGTTGAACATGCTTATCGCCCTCATGGGTGAGACCGTGGGCCAGGT GTCCAAGGAGAGCAAGCACATCTGGAAGTTGCAGTGGGCCACCACCATCCTGG ACATCGAGCGTTCCTTCCCTGTGTTCCTGAGGAAGGCCTTCCGCTCCGGAGAGA TGGTGACTGTGGGCAAGAGCTCAGATGGCACTCCGGACCGCAGGTGGTGCTTC AGGGTGGACGAGGTGAACTGGTCTCACTGGAACCAGAACTTGGGCATCATTAA CGAGGACCCTGGCAAGAGTGAAATCTACCAGTACTATGGCTTCTCCCACACCGTCGCAACGACACCATCCCGGTGTTGCTGGACATTGCGGAGCGCACCGGCAACAT GCGTGAATTCATCAACTCGCCCTTCAGAGACATCTACTACCGAGGCCAGACATC CCTGCACATTGCCATCGAACGGCGCTGCAAGCACTACGTGGAGCTGCTGGTGG CCCAGGGAGCCGACGTGCACGCCCAGGCCCGCGGCCGCTTCTTCCAGCCCAAG GATGAGGGAGGCTACTTCTACTTTGGGGAGCTGCCCTTGTCCCTGGCAGCCTGC ACCAACCAGCCGCACATCGTCAACTACCTGACAGAGAACCCTCACAAGAAAGC TGACATGAGGCGACAGGACTCGAGGGGGAACACGGTGCTGCACGCGCTGGTGG CCATCGCCGACAACACCCGAGAGAACACCAAGTTTGTCACCAAGATGTACGAC CTGCTGCTTCTCAAGTGTTCACGCCTCTTCCCCGACAGCAACCTGGAGACAGTT CTCAACAATGATGGCCTTTCGCCTCTCATGATGGCTGCCAAGACAGGCAAGATC GGGGTCTTTCAGCACATCATCCGACGTGAGGTGACAGATGAGGACACCCGGCA TCTGTCTCGCAAGTTCAAGGACTGGGCCTATGGGCCTGTGTATTCTTCTCTCTA CGACCTCTCCTCCCTGGACACATGCGGGGAGGAGGTGTCCGTGCTGGAGATCCT GGTGTACAACAGCAAGATCGAGAACCGCCATGAGATGCTGGCTGTAGAGCCCA TTAACGAACTGTTGAGAGACAAGTGGCGTAAGTTTGGGGCTGTGTCCTTCTACA TCAACGTGGTCTCCTATCTGTGTGCCATGGTCATCTTCACCCTCACCGCCTACTA TCAGCCACTGGAGGGCACGCCACCCTACCCTTACCGGACCACAGTGGACTACCT GAGGCTGGCTGGCGAGGTCATCACGCTCTTCACAGGAGTCCTGTTCTTCTTTAC CAGTATCAAAGACTTGTTCACGAAGAAATGCCCTGGAGTGAATTCTCTCTTCGT CGATGGCTCCTTCCAG TTACTCTACTTCATCTACTCTGTGCTGGTGGTTGTCTCT GCGGCGCTCTACCTGGCTGGGATCGAGGCCTACCTGGCTGTGATGGTCTTTGCC CTGGTCCTGGGCTGGATGAATGCGCTGTACTTCACGCGCGGGTTGAAGCTGAC GGGGACCTACAGCATCATGATTCAGAAGATCCTCTTCAAAGACCTCTTCCGCTT CCTGCTTGTGTACCTGCTCTTCATGATCGGCTATGCCTCAGCCCTGGTCACCCTC CTGAATCCGTGCACCAACATGAAGGTCTGTGACGAGGACCAGAGCAACTGCAC GGTGCCCACGTATCCTGCGTGCCGCGACAGCGAGACCTTCAGCGCCTTCCTCCT GGACCTCTTCAAGCTCACCATCGGCATGGGAGACCTGGAGATGCTGAGCAGCG CCAAGTACCCCGTGGTCTTCATCCTCCTGCTGGTCACCTACATCATCCTCACCTT CGTGCTCCTGTTGAACATGCTTATCGCCCTCATGGGTGAGACCGTGGGCCAGGT GTCCAAGGAGAGCAAGCACATCTGGAAGTTGCAGTGGGCCACCACCATCCTGG ACATCGAGCGTTCCTTCCCTGTGTTCCTGAGGAAGGCCTTCCGCTCCGGAGAGA TGGTGACTGTGGGCAAGAGCTCAGATGGCACTCCGGACCGCAGGTGGTGCTTC AGGGTGGACGAGGTGAACTGGTCTCACTGGAACCAGAACTTGGGCATCATTAA CGAGGACCCTGGCAAGAGTGAAATCTACCAGTACTATGGCTTCTCCCACACCGT

GGGGCGCCTTCGTAGGGATCGTTGGTCCTCGGTGGTGCCCCGCGTAGTGGAGCGGGGCGCCTTCGTAGGGATCGTTGGTCCTCGGTGGTGCCCCGCGTAGTGGAGC

TGAACAAGAACTCAAGCGCAGATGAAGTGGTGGTACCCCTGGATAACCTAGGGTGAACAAGAACTCAAGCGCAGATGAAGTGGTGGTACCCCTGGATAACCTAGGG

AACCCCAACTGTGACGGCCACCAGCAGGGCTACGCTCCCAAGTGGAGGACGGAAACCCCAACTGTGACGGCCACCAGCAGGGCTACGCTCCCAAGTGGAGGACGGA

CGATGCCCCACTGTAGGGGCCGTGCCAGAGCTCGCACAGATAGTCCAGGCTTGCGATGCCCCACTGTAGGGGCCGTGCCAGAGCTCGCACAGATAGTCCAGGCTTG

GCCTTCGCTCCCACCTACATTTAGGCATTTGTCCGGTGTCTTCCCACACCCGCATGCCTTCGCTCCCACCTACATTTAGGCATTTGTCCGGTGTCTTCCCACACCCGCAT

GGGACCTTGGAGGTGAGGGCCTCTGTGGCGACTCTGTGGAGGCCCCAGGACCCGGGACCTTGGAGGTGAGGGCCTCTGTGGCGACTCTGTGGAGGCCCCAGGACCC

TCTGGTCCCCGCCAAGACTTTTGCCTTCAGCTCTACTCCCCACATGGGGGGGCGTCTGGTCCCCGCCAAGACTTTTGCCTTCAGCTCTACTCCCCACATGGGGGGGCG

GGGCTCCTGGCTACCTGTCTCGCTCGCTCCCATGGAGTCACCTAAGCCAGCACAGGGCTCCTGGCTACCTGTCTCGCTCGCTCCCATGGAGTCACCTAAGCCAGCACA

AGGCCCCTCTCCTCGAAAGGCTCAGGCCCCATCCCTCTTGTGTATTATTTATTGCAGGCCCCTCTCCTCGAAAGGCTCAGGCCCCATCCCTCTTGTGTATTATTTATTGC

TCTCCTCAGGAAAATGGGGTGGCAGGAGTCCACCCGCGGCTGGAACCTGGCCATCTCCTCAGGAAAATGGGGTGGCAGGAGTCCACCCGCGGCTGGAACCTGGCCA

GGGCTGAAGCTCATGCAGGGACGCTGCAGCTCCGACCTGCCACAGATCTGACCGGGCTGAAGCTCATGCAGGGACGCTGCAGCTCCGACCTGCCACAGATCTGACC

TGCTGCAGCCCTGGCTAGTGTGGGTCTTCTGTACTTTGAAGAGATCGGGGCCGCTGCTGCAGCCCTGGCTAGTGTGGGTCTTCTGTACTTTGAAGAGATCGGGGCCGC

TGGTGCTCAATAAATGTTTATTCTCGGTGGAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAATGGTGCTCAATAAATGTTTATTCTCGGTGGAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA

AAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA

AA hat, worin R ein A oder G, M ein A oder C, S ein C oder G, Y ein C oder T, K ein G oderAA in which R is A or G, M is A or C, S is C or G, Y is C or T, K is G or

T und W ein A oder T sein kann. Die oben dargestellten Sequenz ist erfindungsgemäß die murine OTRPC4 DNS Sequenz mit 5' und 3'-untranslatierten Sequenzen.T and W can be an A or T. According to the invention, the sequence shown above is the murine OTRPC4 DNA sequence with 5 'and 3' untranslated sequences.

Weiterhin bevorzugt ist eine Nukleinsäure, die dadurch gekennzeichnet ist, daß sie dieAlso preferred is a nucleic acid which is characterized in that it has the

Sequenzsequence

ATGGCAGATCCTGGTGATGGTCCCCGTGCAGCGCCTGGGGAGGTGGCTGAGCCATGGCAGATCCTGGTGATGGTCCCCGTGCAGCGCCTGGGGAGGTGGCTGAGCC

CCCTGGAGATGAGAGTGGTACCTCTGGTGGGGAGGCCTTCCCCCTCTCTTCCCTCCCTGGAGATGAGAGTGGTACCTCTGGTGGGGAGGCCTTCCCCCTCTCTTCCCT

GGCCAATCTGTTTGAGGGGGAGGAAGGCTCCTCTTCTCTTTCCCCGGTGGATGCGGCCAATCTGTTTGAGGGGGAGGAAGGCTCCTCTTCTCTTTCCCCGGTGGATGC

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CCCATCCTCAAAGTCTTCAATCGGCCCATCCTCTTTGACATTGTGTCCCGGGGCTCCCATCCTCAAAGTCTTCAATCGGCCCATCCTCTTTGACATTGTGTCCCGGGGCT

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GCACTACGTGGAGCTGCTGGTGGCCCAGGGAGCCGACGTGCACGCCCAGGCCCGCACTACGTGGAGCTGCTGGTGGCCCAGGGAGCCGACGTGCACGCCCAGGCCC

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GACAGATGAGGACACCCGGCATCTGTCTCGCAAGTTCAAGGACTGGGCCTATGGACAGATGAGGACACCCGGCATCTGTCTCGCAAGTTCAAGGACTGGGCCTATG

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AGGTGTCCGTGCTGGAGATCCTGGTGTACAACAGCAAGATCGAGAACCGCCATAGGTGTCCGTGCTGGAGATCCTGGTGTACAACAGCAAGATCGAGAACCGCCAT

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GGTGGTGCCCCGCGTAGTGGAGCTGAACAAGAACTCAAGCGCAGATGAAGTGGGGTGGTGCCCCGCGTAGTGGAGCTGAACAAGAACTCAAGCGCAGATGAAGTGG

TGGTACCCCTGGATAACCTAGGGAACCCCAACTGTGACGGCCACCAGCAGGGCTGGTACCCCTGGATAACCTAGGGAACCCCAACTGTGACGGCCACCAGCAGGGC

TACGCTCCCAAGTGGAGGACGGACGATGCCCCACTGTAG oder eine Teilsequenz hiervon, eine Nukleinsäure, die an besagte Sequenz unter stringentenTACGCTCCCAAGTGGAGGACGGACGATGCCCCACTGTAG or a partial sequence thereof, a nucleic acid attached to said sequence under stringent

Bedingungen hybridisieren kann, eine allele Variante oder eine fünktionelle Variante von besagter Sequenz oder eine Variante der Nukleinsäure aufgrund des degenerativen Kodes umfaßt. Erfindungsgemäß ist mit der oben dargestellten Sequenz die murine OTRPC4 cDNS Sequenz umfaßt.Conditions can hybridize, an allelic variant or a functional variant of said sequence or a variant of the nucleic acid comprises due to the degenerative code. According to the invention, the murine OTRPC4 cDNA sequence is included with the sequence shown above.

Weiterhin bevorzugt ist eine Nukleinsäure, die dadurch gekennzeichnet ist, daß sie dieAlso preferred is a nucleic acid which is characterized in that it has the

Sequenzsequence

ATGGCAGATCCTGGTGATGGTCCCCGTGCAGCGCCTGGGGAGGTGGCTGAGCCATGGCAGATCCTGGTGATGGTCCCCGTGCAGCGCCTGGGGAGGTGGCTGAGCC

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TAGCCGCCCTGCTGGCCCTGGCGATGGACGTCCAAACCTGCGTATGAAGTTCCATAGCCGCCCTGCTGGCCCTGGCGATGGACGTCCAAACCTGCGTATGAAGTTCCA

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Die oben dargestellten Sequenz ist erfindungsgemäß die murine OTRPC4 cDNS Sequenz. In einer weiteren bevorzugten Ausführungsform ist ein rekombinanter Vektor dadurch gekennzeichnet, daß er eine erfindungsgemäße Nukleinsäure, wie oben beschrieben, enthält. Beispiele für erfindungsgemäße Vektoren sind virale Vektoren wie z. B. Vaccinia, Semliki- Forest-Virus und Adenovirus. Vektoren zur Verwendung in COS-Zellen besitzen den Simian Virus (SV) 40 „origin of replication" und ermöglichen hohe Kopienzahlen der Plasmide. Vektoren zur Verwendung in Insektenzellen sind beispielsweise E. coli Transfervektoren und enthalten z.B. als Promotor die für Polyhedrin kodierende DNA. In einer weiteren bevorzugten Ausführungsform ist ein erfindungsgemäßer rekombinanter Vektor dadurch gekennzeichnet, daß er ein Expressionsvektor ist. Noch eine bevorzugte Ausführungsform der Erfindung ist ein Wirt, dadurch gekennzeichnet, daß er einen erfindungsgemäßen Vektor enthält. Ein erfindungsgemäßer Wirt exprimiert ein erfindungsgemäßes OTRPC4 Polypeptid beispielsweise an der Zelloberfläche, z.B. in die Plasmamembran integriert. Die erfindungsgemäßen Wirte können transient oder stabil mit einem der besagten Vektoren transfϊziert sein. Ein solcher Wirt ist exemplarisch in Beispiel 1, Abbildung 4 der Erfindung beschrieben.ACGGTGCTGCACGCGCTGGTGGCCATCGCCGACAACACCCGAGAGAACACCAA GTTTGTCACCAAGATGTACGACCTGCTGCTTCTCAAGTGTTCACGCCTCTTCCCC GACAGCAACCTGGAGACAGTTCTCAACAATGATGGCCTTTCGCCTCTCATGATG GCTGCCAAGACAGGCAAGATCGGGGTCTTTCAGCACATCATCCGACGTGAGGT GACAGATGAGGACACCCGGCATCTGTCTCGCAAGTTCAAGGACTGGGCCTATG GGCCTGTGTATTCTTCTCTCTACGACCTCTCCTCCCTGGACACATGCGGGGAGG AGGTGTCCGTGCTGGAGATCCTGGTGTACAACAGCAAGATCGAGAACCGCCAT GAGATGCTGGCTGTAGAGCCCATTAACGAACTGTTGAGAGACAAGTGGCGTAA GTTTGGGGCTGTGTCCTTCTACATCAACGTGGTCTCCTATCTGTGTGCCATGGT CATCTTCACCCTCACCGCCTACTATCAGCCACTGGAGGGCACGCCACCCTACCC TTACCGGACCACAGTGGACTACCTGAGGCTGGCTGGCGAGGTCATCACGCTCTT CACAGGAGTCCTGTTCTTCTTTACCAGTATCAAAGACTTGTTCACGAAGAAATG CCCTGGAGTGAATTCTCTCTTCGTCGATGGCTCCTTCCAGTTACTCTACTTCATC TACTCTGTGCTGGTGGTTGTCTCTGCGGCGCTCTACCTGGCTGGGATCGAGGCC TACCTGGCTGTGATGGTCTTTGCCCTGGTCCTGGGCTGGATGAATGCGCTGTAC TTCACGCGCGGGTTGAAGCTGACGGGGACCTACAGCATCATGATTCAGAAGAT CCTCTTCAAAGACCTCTTCCGCTTCCTGCTTGTGTACCTGCTCTTCATGATCGGC TATGCCTCAGCCCTGGTCACCCTCCTGAATCCGTGCACCAACATGAAGGTCTGT GACGAGGACCAGAGCAACTGCACGGTGCCCACGTATCCTGCGTGCCGCGACAG CGAGACCTTCAGC GCCTTCCTCCTGGACCTCTTCAAGCTCACCATCGGCATGGG AGACCTGGAGATGCTGAGCAGCGCCAAGTACCCCGTGGTCTTCATCCTCCTGCT GGTCACCTACATCATCCTCACCTTCGTGCTCCTGTTGAACATGCTTATCGCCCTC ATGGGTGAGACCGTGGGCCAGGTGTCCAAGGAGAGCAAGCACATCTGGAAGTT GCAGTGGGCCACCACCATCCTGGACATCGAGCGTTCCTTCCCTGTGTTCCTGAG GAAGGCCTTCCGCTCCGGAGAGATGGTGACTGTGGGCAAGAGCTCAGATGGCA CTCCGGACCGCAGGTGGTGCTTCAGGGTGGACGAGGTGAACTGGTCTCACTGG AACCAGAACTTGGGCATCATTAACGAGGACCCTGGCAAGAGTGAAATCTACCA GTACTATGGCTTCTCCCACACCGTGGGGCGCCTTCGTAGGGATCGTTGGTCCTC GGTGGTGCCCCGCGTAGTGGAGCTGAACAAGAACTCAAGCGCAGATGAAGTGG TGGTACCCCTGGATAACCTAGGGAACCCCAACTGTGACGGCCACCAGCAGGGC TACGCTCCCAAGTGGAGGACGGACGATGCCCCACTGTAG has. According to the invention, the sequence shown above is the murine OTRPC4 cDNA sequence. In a further preferred embodiment, a recombinant vector is characterized in that it contains a nucleic acid according to the invention, as described above. Examples of vectors according to the invention are viral vectors such as e.g. B. Vaccinia, Semliki Forest Virus and Adenovirus. Vectors for use in COS cells have the Simian Virus (SV) 40 “origin of replication” and enable high numbers of copies of the plasmids. Vectors for use in insect cells are, for example, E. coli transfer vectors and contain, for example, the DNA coding for polyhedrin as a promoter In a further preferred embodiment, a recombinant vector according to the invention is characterized in that it is an expression vector. Yet another preferred embodiment of the invention is a host, characterized in that it contains a vector according to the invention. A host according to the invention expresses an OTRPC4 polypeptide according to the invention, for example on the cell surface The hosts according to the invention can be transiently or stably transfected with one of the said vectors, such a host is described by way of example in Example 1, Figure 4 of the invention.

Noch eine bevorzugte Ausführungsform der Erfindung ist ein erfindungsgemäßer Wirt, welcher eine eukaryontische Wirtszelle ist. Erfindungsgemäße eukaryontische Wirtszellen umfassen Pilze, wie z. B. Pichia pastoris, Saccharomyces cerevisiae, Schizosaccharomyces, Trichoderma. Ein weiterer bevorzugter erfindungsgemäßer Wirt ist eine Insektenzelle (z.B. aus Spodoptera frugiperda Sf-9, mit einem Baculovirus- Expressionssystem). Erfindungsgemäße Zellen umfassen auch Oozyten, beispielsweise von Fröschen oder Kröten. Erfindungsgemäße Wirte können auch Pflanzenzellen sein, z.B. von Nicotiana tabacum. In Säugerzellen und -zellinien werden die erfindungsgemäßen OTRPC4-Polypeptide besonders gut exprimiert. Daher ist ein bevorzugter erfindungsgemäßer Wirt eine Säugerzelle. Beispiele für erfindungsgemäße Säugerzellen sind HEK293-, HeLa-, COS-, BHK-, CHO-Zellen.Another preferred embodiment of the invention is a host according to the invention, which is a eukaryotic host cell. Eukaryotic host cells according to the invention include fungi, such as. B. Pichia pastoris, Saccharomyces cerevisiae, Schizosaccharomyces, Trichoderma. Another preferred host according to the invention is an insect cell (e.g. from Spodoptera frugiperda Sf-9, with a baculovirus expression system). Cells according to the invention also include oocytes, for example from frogs or toads. Hosts according to the invention can also be plant cells, e.g. by Nicotiana tabacum. The OTRPC4 polypeptides according to the invention are particularly well expressed in mammalian cells and cell lines. Therefore, a preferred host according to the invention is a mammalian cell. Examples of mammalian cells according to the invention are HEK293, HeLa, COS, BHK, CHO cells.

Ganz besonders bevorzugt ist ein erfindungsgemäßer Wirt daher eine Sf9-, HEK293- oder HeLa- Zelle. Bevorzugt ist ein erfindungsgemäßer Wirt ein Bakteriophage. Beispielhaft sei Baculovirus genannt. Ein weiterer erfindungsgemäßer Wirt ist eine prokaryontische Wirtszelle. Beispiele für erfindungsgemäße prokaryontische Wirtszellen sind Escherichia coli, Bacillus subtilis, Streptomyces oder auch Proteus mirabilis. Ein weiterer wichtiger Aspekt der vorliegenden Erfindung bezieht sich auf ein Polypeptid, das durch eine erfindungsgemäße Nukleinsäure kodiert wird oder ein Fragment, eine fünktionelle Variante, eine allele Variante, eine Untereinheit, eine Variante aufgrund des degenerativen Nukleinsäure-Kodes oder eine Glykosilierungsvariante hiervon. Im Rahmen dieser Erfindung wird unter OTRPC4-Polypeptid oder Fragment hiervon eines oder mehrere der hier beschriebenen Polypeptid(e) verstanden, d.h. ein Polypeptid ausgewählt aus Fragmenten, allelen Varianten, fünktionelle Untereinheiten, Varianten aufgrund des degenerativen Nukleinsäure-Kodes, ein chemisches Derivat hiervon, ein Fusionsprotein mit besagtem Polypeptid oder eine Glykosilierungsvariante von OTRPC4. Erfindungsgemäße OTRPC4-Polypeptide sind bevorzugt eukaryontische Polypeptide, besonders bevorzugt humane oder murine, aber auch aus der Ratte, Hamster, Ziegen, Rinder, Schweine, Schafe, Hund, Katze, Affen sowie aus weiteren dem Fachmann bekannte Eukaryonten. OTRPC4 im Rahmen dieser Erfindung ist ein neuer Kationenkanal, der gegenüber den aus dem Stand der Technik bekannten Kationenkanälen die vorteilhafte Eigenschaft aufweist, daß er durch Veränderungen der Osmolarität des extrazellulären Mediums reguliert wird. Er stellt daher eine gegenüber aus dem Stand der Technik bekannten Kationenkanälen einen völlig neue Generation von Kationenkanälen dar, die z.B. als Osmosensoren für die Regulation des Zellvolumens verantwortlich sind. Durch Erniedrigung der Osmolarität wird die Kanalaktivität stimuliert und und durch Erhöhung gehemmt. Z.B. ist der Kanal bei physiologischer Osmolarität von ca. 300 mosmol/l konstitutiv aktiv. Der Kanal ist nichtselektiv in seiner Ionenpermeabilität, d.h. durchgängig für alle Kationen (Na+, K+, Ca2+) und zeigt z.B. eine gewisse Präferenz für Ca2+

Figure imgf000022_0001
ca- >)•A host according to the invention is therefore very particularly preferably an Sf9, HEK293 or HeLa cell. A host according to the invention is preferably a bacteriophage. Baculovirus may be mentioned as an example. Another host according to the invention is a prokaryotic host cell. Examples of prokaryotic host cells according to the invention are Escherichia coli, Bacillus subtilis, Streptomyces or Proteus mirabilis. Another important aspect of the present invention relates to a polypeptide which is encoded by a nucleic acid according to the invention or a fragment, a functional variant, an allele variant, a subunit, a variant based on the degenerative nucleic acid code or a glycosylation variant thereof. In the context of this invention, OTRPC4 polypeptide or fragment thereof is understood to mean one or more of the polypeptide (s) described here, ie a polypeptide selected from fragments, allelic variants, functional subunits, variants based on the degenerative nucleic acid code, a chemical derivative thereof, a fusion protein with said polypeptide or a glycosylation variant of OTRPC4. OTRPC4 polypeptides according to the invention are preferably eukaryotic polypeptides, particularly preferably human or murine, but also from rats, hamsters, goats, cattle, pigs, sheep, dogs, cats, monkeys and from other eukaryotes known to the person skilled in the art. OTRPC4 in the context of this invention is a new cation channel which, compared to the cation channels known from the prior art, has the advantageous property that it is regulated by changes in the osmolarity of the extracellular medium. It therefore represents a completely new generation of cation channels compared to known from the prior art cation channels, which are responsible, for example, as osmosensors for the regulation of the cell volume. By lowering the osmolarity, the channel activity is stimulated and inhibited by increasing it. For example, the channel is constitutively active with a physiological osmolarity of approx. 300 mosmol / l. The channel is non-selective in its ion permeability, that is, it is continuous for all cations (Na + , K + , Ca 2+ ) and shows, for example, a certain preference for Ca 2+
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ca ->) •

Noch ein wichtiger Aspekt der vorliegenden Erfindung bezieht sich auf ein erfindungsgemäßes Polypeptid, welches ein Fragment des nicht-selektiven Kationenkanals OTRPC4 ist. Hierunter wird ein Teil des erfindungsgemäßen Polypeptides verstanden. Noch ein wichtiger Aspekt der vorliegenden Erfindung bezieht sich auf ein erfindungsgemäßes Polypeptid, welches eine fünktionelle Variante des nicht-selektiven Kationenkanals OTRPC4 ist. Hierunter werden Polypeptide verstanden, die weitgehend ähnlich wie OTRPC4 sind und die dieselbe biologische Aktivität wie OTRPC4 aufweisen oder eine inhibitorische Aktivität für OTRPC4 haben. Eine Variante von OTRPC4 kann durch Substitution, Deletion oder Addition einer oder mehrerer Aminosäuren von OTRPC4 sich unterscheiden, bevorzugt durch 1 bis 10 Aminosäuren. Beispielsweise werden unter fünktionelle Varianten weitere Vertreter der OTRPC4-Familie verstanden, die ebenfalls die oben beschriebene vorteilhafte Eigenschaft der Regulierung der Kanalaktivität durch Osmolarität aufweisen.Another important aspect of the present invention relates to a polypeptide according to the invention, which is a fragment of the non-selective cation channel OTRPC4. This means part of the polypeptide according to the invention. Another important aspect of the present invention relates to a polypeptide according to the invention, which is a functional variant of the non-selective cation channel OTRPC4. These are understood to mean polypeptides which are largely similar to OTRPC4 and which have the same biological activity as OTRPC4 or have an inhibitory activity for OTRPC4. A variant of OTRPC4 can differ from OTRPC4 by substitution, deletion or addition of one or more amino acids, preferably by 1 to 10 amino acids. For example, functional variants are understood to mean further representatives of the OTRPC4 family, which likewise have the above-described advantageous property of regulating channel activity by osmolarity.

Noch ein wichtiger Aspekt der vorliegenden Erfindung bezieht sich auf ein erfindungsgemäßes Polypeptid, welches eine allele Variante des nicht-selektiven Kationenkanals OTRPC4 ist.Another important aspect of the present invention relates to a polypeptide according to the invention, which is an allelic variant of the non-selective cation channel OTRPC4.

Noch ein wichtiger Aspekt der vorliegenden Erfindung bezieht sich auf ein erfindungsgemäßes Polypeptid, welches eine Untereinheit des nicht-selektiven Kationenkanals OTRPC4 ist. Oft sind Ionenkanäle aus Untereinheiten zusammengesetzt, beispielsweise der AMPA-Rezeptor. Entsprechend werden von der Erfindung auch Untereinheiten des OTRPC4-Kationenkanals umfaßt.Another important aspect of the present invention relates to a polypeptide according to the invention, which is a subunit of the non-selective cation channel OTRPC4. Ion channels are often composed of subunits, for example the AMPA receptor. Accordingly, the invention also encompasses subunits of the OTRPC4 cation channel.

Noch ein wichtiger Aspekt der vorliegenden Erfindung bezieht sich auf ein erfindungsgemäßes Polypeptid, welches eine Variante des nicht-selektiven Kationenkanals OTRPC4 aufgrund des degenerativen Nukleinsäure-Kodes ist.Another important aspect of the present invention relates to a polypeptide according to the invention, which is a variant of the non-selective cation channel OTRPC4 due to the degenerative nucleic acid code.

Noch ein wichtiger Aspekt der vorliegenden Erfindung bezieht sich auf ein erfindungsgemäßes Polypeptid, welches ein chemisches Derivat des nicht-selektiven Kationenkanals OTRPC4 ist. Hierunter werden Moleküle verstanden, die aus den erfindungsgemäßen OTRPC4 Polypeptiden durch chemische Reaktionen hergestellt werden, beispielsweise durch Iodinierung, Acetylierung, Bindung an ein Effektormolekül oder Radioisotop oder an ein Toxin.Another important aspect of the present invention relates to a polypeptide according to the invention, which is a chemical derivative of the non-selective cation channel OTRPC4. This is understood to mean molecules which are produced from the OTRPC4 polypeptides according to the invention by chemical reactions, for example by iodination, acetylation, binding to an effector molecule or radioisotope or to a toxin.

Noch ein wichtiger Aspekt der vorliegenden Erfindung bezieht sich auf ein erfindungsgemäßes Polypeptid, welches ein Fusionsprotein aus dem nicht-selektiven Kationenkanals OTRPC4 und einem weiteren Protein ist. Ein solches Fusionsprotein kann beispielsweise durch rekombinante Expression der erfindungsgemäßen OTRPC4 Nukleinsäure, die an eine weitere Nukleinsäure fusioniert ist, die sämtliche kodierende Information „in frarne" enthält, hergestellt werden. Dies kann beispielsweise ein Markerprotein oder ein Reporterprotein wie GFP oder LacZ sein. Weitere Fusionspartner sind dem Fachmann bekannt. Noch ein wichtiger Aspekt der vorliegenden Erfindung bezieht sich auf ein erfindungsgemäßes Polypeptid, welches eine Glykosilierungsvariante des nicht-selektiven Kationenkanals OTRPC4 ist. Die Erfindung umfaßt Verfahren zur Herstellung von erfindungsgemäßen Polypeptiden, dadurch gekennzeichnet, daß ein erfindungsgemäßer Wirt kultiviert wird und besagtes Polypeptid exprimiert wird. Besagte Wirte können z.B. stabil oder transient mit einem Vektor oder einem Expressionsvektor, der eine für ein OTRPC4-Polypeptid oder -Fragment kodierende Nukleinsäure enthält, transfiziert werden. Beispielsweise wird das erfindungsgemäße OTRPC4-Polypeptid oder -Fragment an der Zelloberfläche des Wirtes exprimiert. Besagtes Polypeptid kann aber auch in das Medium sezerniert werden. Die erfindungsgemäßen OTRPC4-Polypeptide oder -Fragmente können in einem erfindungsgemäßen Verfahren beispielsweise in Pilzen, wie z. B. Pichia pastoris, Saccharomyces cerevisiae, Schizosaccharomyces, Trichoderma mit Vektoren, die zur Oberflächenexpression führen, hergestellt werden. Auch mit Insektenzellen kann das erfindungsgemäße Verfahren zur Herstellung der OTRPC4-Polypeptides oder -Fragmentes durchgeführt werden, z. B. als transientes oder stabiles Expressionsystem oder Baculovirus-Expressionssystem. Hierbei werden z.B. Sf-9 Insektenzellen mit z.B. Autographa californica nuclear polyhedrosis virus (AcNPV) oder verwandten Viren infiziert. Die oben beschriebenen E. coli Transfervektoren enthalten z.B. als Promotor die für Polyhedrin kodierende DNA, hinter der die für das erfindungsgemäße OTRPC4-Polypeptid oder -Fragment kodierende DNA hineinkloniert wird. Nach Identifikation eines koπekten Transfervektorklones in E. coli wird dieser zusammen mit unvollständiger Baculovirus-DNA in eine Insektenzelle transfiziert und rekombiniert mit der Baculovirus-DNA, um funktionsfähige Baculoviren zu bilden. Mit Hilfe starker Insektenzellpromotoren werden in einem erfindungsgemäßen Verfahren große Mengen des erfindungsgemäßen OTRPC4-Polypeptides oder -Fragmentes gebildet.Another important aspect of the present invention relates to a polypeptide according to the invention, which is a fusion protein from the non-selective cation channel OTRPC4 and another protein. Such a fusion protein can be produced, for example, by recombinant expression of the OTRPC4 nucleic acid according to the invention, which is fused to a further nucleic acid which contains all the coding information “in frarne”. This can be, for example, a marker protein or a reporter protein such as GFP or LacZ. Other fusion partners are known to the person skilled in the art. Another important aspect of the present invention relates to a polypeptide according to the invention, which is a glycosylation variant of the non-selective cation channel OTRPC4. The invention comprises processes for the production of polypeptides according to the invention, characterized in that a host according to the invention is cultivated and said polypeptide is expressed. Said hosts can be transfected, for example, stably or transiently with a vector or an expression vector which contains a nucleic acid coding for an OTRPC4 polypeptide or fragment. For example, the OTRPC4 polypeptide or fragment according to the invention is expressed on the cell surface of the host. Said polypeptide can also be secreted into the medium. The OTRPC4 polypeptides or fragments according to the invention can be used in a method according to the invention, for example in fungi, such as. B. Pichia pastoris, Saccharomyces cerevisiae, Schizosaccharomyces, Trichoderma with vectors that lead to surface expression, are prepared. The method according to the invention for producing the OTRPC4 polypeptides or fragments can also be carried out with insect cells, eg. B. as a transient or stable expression system or baculovirus expression system. For example, Sf-9 insect cells are infected with, for example, Autographa californica nuclear polyhedrosis virus (AcNPV) or related viruses. The E. coli transfer vectors described above contain, for example, as a promoter the DNA coding for polyhedrin, behind which the DNA coding for the OTRPC4 polypeptide or fragment according to the invention is cloned. After identification of a specific transfer vector clone in E. coli, this is transfected together with incomplete baculovirus DNA into an insect cell and recombined with the baculovirus DNA to form functional baculoviruses. With the help of strong insect cell promoters, large amounts of the OTRPC4 polypeptide or fragment according to the invention are formed in a method according to the invention.

Insektenzellexpressionssysteme für die Expression von OTRPC4-Polypeptid oder -Fragment sind kommerziell erhältlich. Auch ein Säugetierexpressionssystem, z.B. in einem erfindungsgemäßen Wirt, z.B. die HEK293 -Zelle oder die Heia-Zelle, die beispielsweise in einem Expressionsvektor eine erfindungsgemäße Nukleinsäure kodierend für OTRPC4 oder ein Fragment hiervon enthält, kann zur Expression des OTRPC4-Kationenkanals verwendet werden, wobei der besagte Wirt unter dem Fachmann bekannten Bedingungen kultiviert wird und das OTRPC4- Polypeptid oder -Fragment z.B. an der Zelloberfläche exprimiert wird. Vorteilhaft an Säugetierexpressionssystemen ist, daß sie sehr gute Glykosilierungs- und Faltungsbedingungen ermöglichen. Säugerzellen, sind mit transienten Expressionssystemen, stabilen Expressionssystemen und mit viralen Expressionsystemen z. B. Vaccinia, Semliki- Forest- Virus, Adenovirus verwendbar, die kommerziell erhältlich sind. Auch transgene Tiere z. B. Kühe, Ziegen, Mäuse sind geeignet für ein erfindungsgemäßes Verfahren. Auch transgene Pflanzen wie Nicotiana tabacum (Tabak) sind in einem erfindungsgemäßen Verfahren einsetzbar. Diese eignen sich insbesondere für die Herstellung von erfindungsgemäßen OTRPC4-Polypeptid oder -Fragment. Nach genomischer Integration der erfindungsgemäßen Nukleinsäure, welche für ein erfindungsgemäßes OTRPC4- Polypeptid oder -Fragment kodiert, die an eine Signalsequenz fusioniert ist, kann die Oberflächenexpression des OTRPC4-Polypeptides oder -Fragmentes oder die Sekretion in den interstitiellen Raum erreicht werden.Insect cell expression systems for the expression of OTRPC4 polypeptide or fragment are commercially available. A mammalian expression system, for example in a host according to the invention, for example the HEK293 cell or the Heia cell, which contains, for example in an expression vector, a nucleic acid according to the invention coding for OTRPC4 or a fragment thereof, can be used to express the OTRPC4 cation channel, the said Host is cultivated under conditions known to those skilled in the art and the OTRPC4 polypeptide or fragment is expressed, for example, on the cell surface. An advantage of mammalian expression systems is that they enable very good glycosylation and folding conditions. Mammalian cells are with transient expression systems, stable expression systems and with viral expression systems such. B. Vaccinia, Semliki Forest virus, adenovirus can be used, which are commercially available. Also transgenic animals e.g. B. cows, goats, mice are suitable for a method according to the invention. Transgenic plants such as Nicotiana tabacum (tobacco) can also be used in a method according to the invention. These are particularly suitable for the production of OTRPC4 polypeptide or fragment according to the invention. After genomic integration of the nucleic acid according to the invention, which codes for an OTRPC4 polypeptide or fragment according to the invention, which is fused to a signal sequence, the surface expression of the OTRPC4 polypeptide or fragment or the secretion into the interstitial space can be achieved.

Die Herstellung mit prokaryontischen Expressionssystemen wie Escherichia coli, Bacillus subtilis, Streptomyces oder auch Proteus mirάbilis eignet sich bevorzugt für erfindungsgemäße OTRPC4-Fragmente, aber auch für das ganze OTRPC4-Polypeptid. Die erfindungsgemäßen OTRPC4-Polypeptide werden in einem erfindungsgemäßen Verfahren entweder bevorzugt an der Oberfläche, beispielsweise in die Außenhülle, d.h. eine der beiden bakteriellen Zellmembranen oder die Pyptidoglycanschicht der Außenhülle bei Gramnegativen Bakterien oder in die Zellmembran bei Gram-positiven Bakterien integriert, oder intrazellulär, z.B. in Inklusionskörpern oder durch periplasmatische Sekretion in Gramnegativen Bakterien mittels hierfür geeigneten Vektoren hergestellt.Production using prokaryotic expression systems such as Escherichia coli, Bacillus subtilis, Streptomyces or Proteus mirάbilis is preferably suitable for OTRPC4 fragments according to the invention, but also for the entire OTRPC4 polypeptide. In a method according to the invention, the OTRPC4 polypeptides according to the invention are either preferably on the surface, for example in the outer shell, i.e. one of the two bacterial cell membranes or the pyptidoglycan layer of the outer shell in Gram-negative bacteria or integrated in the cell membrane in Gram-positive bacteria, or intracellularly, e.g. in inclusion bodies or by periplasmic secretion in Gram-negative bacteria using vectors suitable for this purpose.

Ein weiterer Aspekt der vorliegenden Erfindung bezieht sich auf ein Antikörperprotein, dadurch gekennzeichnet, daß es spezifisch für ein erfindungsgemäßes Polypeptid ist. Daher bindet das erfindungsgemäße Antikörperprotein an ein Epitop von OTRPC4 oder an ein Epitop einer der oben beschriebenen Varianten.Another aspect of the present invention relates to an antibody protein, characterized in that it is specific for a polypeptide according to the invention. The antibody protein according to the invention therefore binds to an epitope of OTRPC4 or to an epitope of one of the variants described above.

Für viele Anwendungen der erfindungsgemäßen Antikörper sind möglichst kleine antigenbindende, d.h. OTRPC4-bindende Einheiten wünschenswert. Daher ist in einer weiteren bevorzugten Ausführungsform ein erfindungsgemäßes Antikörperprotein ein Fab- Fragment (Englisch „Fragment antigen-binding = Fab"). Diese erfindungsgemäßen OTRPC4-spezifischen Antikörperproteine bestehen aus den variablen Regionen beider Ketten, die durch die anschließende konstante Region zusammengehalten werden. Diese können durch Protease- Verdau wie z.B. mit Papain aus herkömmlichen Antikörpern entstehen, ähnliche Fab-Fragmente können jedoch auch mittlerweile gentechnologisch hergestellt werden. In einer weiteren bevorzugten Ausführungsform ist ein erfindungsgemäßes Antikörperprotein ein F(ab')2 Fragment, welches durch proteolytische Spaltung mit Pepsin hergestellt werden kann.For many applications of the antibodies according to the invention, the smallest possible antigen-binding, ie OTRPC4-binding units are desirable. Therefore, in a further preferred embodiment, an antibody protein according to the invention is a Fab fragment ("fragment antigen-binding = Fab"). These OTRPC4-specific antibody proteins according to the invention consist of the variable regions of both Chains that are held together by the subsequent constant region. These can arise from conventional antibodies by digestion of proteases, such as with papain, but similar Fab fragments can now also be produced using genetic engineering. In a further preferred embodiment, an antibody protein according to the invention is an F (ab ') 2 fragment which can be produced by proteolytic cleavage with pepsin.

Mit Hilfe von gentechnischen Methoden ist es möglich, verkürzte Antikörperfragmente herzustellen, die nur noch aus den variablen Regionen der schweren (VH) und der leichten Kette (VL) bestehen. Diese werden als Fv-Fragmente (Englisch: „Fragment variable" = Fragment des variablen Teils) bezeichnet. In einer weiteren bevorzugten Ausführungsform ist ein erfindungsgemäßes, OTRPC4-spezifisches Antikörpermolekül ein solches Fv- Fragment. Da diesen Fv-Fragmenten die kovalente Verknüpfung beider Ketten durch die Cysteine der konstanten Ketten fehlt, werden die Fv-Fragmente oft stabilisiert. Vorteilhaft ist es, die variablen Regionen der schweren und der leichten Kette durch ein kurzes Peptidstück, beispielsweise von 10 bis 30 Aminosäuren, bevorzugt 15 Aminosäuren, zu verknüpfen. Hierdurch wird ein einziger Peptidstrang aus VH und VL, verbunden durch einen Peptidlinker, erhalten. Ein solches Antikörperprotein wird als Fv-Einzelkette oder Englisch: „single-chain-Fv" (scFv) bezeichnet. Beispiele aus dem Stand der Technik für solche scFv-Antikörperproteine sind in Huston et al. (1988, PNAS 16: 5879-5883) beschrieben. Daher ist in noch einer weiteren bevorzugten Ausführungsform ein erfindungsgemäßes, OTRPC4-spezifisches Antikörperprotein eine Fv-Einzelkettenprotein (scFv).With the help of genetic engineering methods, it is possible to produce shortened antibody fragments that only consist of the variable regions of the heavy (VH) and light chain (VL). These are referred to as Fv fragments ("fragment variable" = fragment of the variable part). In a further preferred embodiment, an OTRPC4-specific antibody molecule according to the invention is such an Fv fragment. Because these Fv fragments are the covalent linkage of both chains because the cysteines of the constant chains are missing, the Fv fragments are often stabilized. It is advantageous to link the variable regions of the heavy and the light chain by means of a short piece of peptide, for example from 10 to 30 amino acids, preferably 15 amino acids a single peptide strand of VH and VL, connected by a peptide linker, is obtained. Such an antibody protein is referred to as an Fv single chain or "single-chain Fv" (scFv). Prior art examples of such scFv antibody proteins are described in Huston et al. (1988, PNAS 16: 5879-5883). Therefore, in yet another preferred embodiment, an OTRPC4-specific antibody protein according to the invention is an Fv single chain protein (scFv).

Es wurden in den letzten Jahren verschiedene Strategien entwickelt, um scFv als multimere Derivate herzustellen. Dies sollte insbesondere zu rekombinanten Antikörpern mit verbesserten Pharmakokinetik- und Biodistributionseigenschaften sowie mit erhöhten Bindungsaviditäten führen. Um eine Multimerisierung der scFv zu erzielen, wurden scFv als Fusionproteine mit Multimerisierungsdomänen hergestellt. Als Multimerisierungsdomänen dienen z. B. die CH3 -Region eines IgG oder coiled coil-Stxuktuxen (Helix-Strukturen) wie Leucin-zipper-Doxnänen. Es gibt jedoch auch Strategien bei denen die Interaktion zwischen den VH/VL-Regionen des scFv zur Multimerisierung herangezogen werden (z. B. Di-, Tri- und Pentabodies). Daher ist in einer weiteren bevorzugten Ausführungsform ein erfindungsgemäßes Antikörperprotein ein für ein OTRPC4-Epitop spezifisches Diabody- Antikörperfragment. Unter Diabody versteht der Fachmann ein bivalentes homodimeres scFv-Derivat (Hu et al., 1996, PNAS 16: 5879-5883). Die Verkürzung des Linkers in einem scFv-Molekül auf 5- 10 Aminosäuren führt zur Bildung von Homodimeren bei denen eine inter-Ketten VH/VL-Zusammenlagerung stattfindet. Diabodies können zusätzlich durch den Einbau von Disulfidbrücken stabilisiert werden. Beispiele aus dem Stand der Technik für Diabody-Antikörperproteine finden sich bei Perisic et al. (1994, Structure 2: 1217-1226). Unter Minibody versteht der Fachmann ein bivalentes, homodimeres scFv-Derivat. Es besteht aus einem Fusionsprotein, das die CH3 -Region von einem Immunglobulin, bevorzugt IgG, ganz besonders bevorzugt IgGl als Dimerisierungsregion enthält, die über eine Hwge-Region (z.B. ebenfalls von IgGl) und eine E/'rcfer-Region mit dem scFv verbunden ist. Die Disulfidbrücken in der Hinge-Region werden meist in höheren Zellen und nicht in Prokaryonten ausgebildet. In einer weiteren bevorzugten Ausführungsform ist ein erfindungsgemäßes Antikörperprotein ein OTRPC4-spezifisches Minibody- Antikörperfragment. Beispiele aus dem Stand der Technik für Minibody-Antikörperproteine finden sich bei Ηu et al. (1996, Cancer Res. 56: 3055-61).Various strategies have been developed in recent years to produce scFv as multimeric derivatives. In particular, this should lead to recombinant antibodies with improved pharmacokinetic and biodistribution properties and with increased binding avidities. In order to achieve multimerization of the scFv, scFv were produced as fusion proteins with multimerization domains. Serve as multimerization domains. B. the CH3 region of an IgG or coiled coil stuctucts (helix structures) such as leucine zipper doxnaen. However, there are also strategies in which the interaction between the VH / VL regions of the scFv is used for multimerization (e.g. di-, tri- and pentabodies). Therefore, in a further preferred embodiment, an antibody protein according to the invention is a diabody specific for an OTRPC4 epitope. Antibody fragment. The person skilled in the art understands diabody as a bivalent homodimeric scFv derivative (Hu et al., 1996, PNAS 16: 5879-5883). The shortening of the linker in an scFv molecule to 5-10 amino acids leads to the formation of homodimers in which an inter-chain VH / VL assembly takes place. Diabodies can also be stabilized by incorporating disulfide bridges. Prior art examples of diabody antibody proteins are found in Perisic et al. (1994, Structure 2: 1217-1226). The person skilled in the art understands minibody as a bivalent, homodimeric scFv derivative. It consists of a fusion protein which contains the CH3 region of an immunoglobulin, preferably IgG, very particularly preferably IgGl as the dimerization region, which is linked to the scFv via an Hwge region (eg also from IgGl) and an E / ' rcfer region is. The disulfide bridges in the hinge region are mostly formed in higher cells and not in prokaryotes. In a further preferred embodiment, an antibody protein according to the invention is an OTRPC4-specific minibody antibody fragment. Prior art examples of minibody antibody proteins can be found in Ηu et al. (1996, Cancer Res. 56: 3055-61).

Unter Triabody versteht der Fachmann ein: trivalentes homotrimeres scFv-Derivat (Kortt et al. 1997 Protein Engineering 10: 423-433). ScFv-Derivate bei denen VΗ-VL direkt ohne Linkersequenz fusioniert sind, führen zur Ausbildung von Trimeren. Unter Tetravalent Miniantibody versteht der Fachmann ein tetravalentes homodimeres scFv- Derivat (Pack et al., 1995 J. Mol. Biol. 246: 28-34). Die Multimerisierung erfolgt durch tetramere coiled cσzY-Domäne.The person skilled in the art understands triabody as: a trivalent homotrimeric scFv derivative (Kortt et al. 1997 Protein Engineering 10: 423-433). ScFv derivatives in which VΗ-VL are fused directly without a linker sequence lead to the formation of trimers. The skilled person understands a tetravalent miniantibody as a tetravalent homodimeric scFv derivative (Pack et al., 1995 J. Mol. Biol. 246: 28-34). The multimerization is carried out by tetrameric coiled cσzY domain.

Besonders bevorzugt ist ein erfindungsgemäßes Antikörperprotein vollständig human. Ein weiterer Aspekt der vorliegenden Erfindung bezieht sich auf ein Verfahren zur Herstellung von einem erfindungsgemäßen Antikörperprotein, welches die folgenden Schritte umfaßt: ein Wirt ausgewählt aus einer eukaryontischen oder prokaryontischen Zelle, welcher einen oder mehrere Vektoren mit einer oder mehreren Nukleinsäuren spezifisch für das Antikörperprotein enthält, wird unter Bedingungen, unter denen besagtes Antikörperprotein durch besagte Wirtszelle exprimiert wird, kultiviert und besagtes Antikörperprotein wird isoliert. Die erfindungsgemäßen Antikörperproteine können in einem erfindungsgemäßen Verfahren auch in Pilzen, wie z. B. Pichia pastoris, Saccharomyces cerevisiae, Schizosaccharomyces, Trichoderma mit Vektoren, die zur intrazellulären Expression oder zur Sekretion führen, hergestellt werden. Auch mit Insektenzellen kann das erfindungsgemäße Verfahren zur Herstellung der Antikörperproteine durchgeführt werden, z. B. als transientes oder stabiles Expressionsystem oder Baculovirus-Expressionssystem, vergleichbar wie oben beschrieben. Insektenzellexpressionssysteme für die Expression von Antikörperproteinen sind kommerziell erhältlich. Insektenzellexpressionssysteme eignen sich insbesondere für die erfindungsgemäßen scFv-Fragmente und Fab- bzw. F(ab')2-Fragmente und Antikörperproteine bzw. Fragmente hiervon, welche mit Effektormolekülen fusioniert sind, aber auch für vollständige Antikörpermoleküle.An antibody protein according to the invention is particularly preferably completely human. Another aspect of the present invention relates to a method for producing an antibody protein according to the invention, which comprises the following steps: a host selected from a eukaryotic or prokaryotic cell which contains one or more vectors with one or more nucleic acids specific for the antibody protein, is cultured under conditions in which said antibody protein is expressed by said host cell, and said antibody protein is isolated. The antibody proteins of the invention can also be used in a method according to the invention in fungi such as. B. Pichia pastoris, Saccharomyces cerevisiae, Schizosaccharomyces, Trichoderma with vectors which lead to intracellular expression or secretion, getting produced. The method according to the invention for producing the antibody proteins can also be carried out with insect cells, for. B. as a transient or stable expression system or baculovirus expression system, comparable to that described above. Insect cell expression systems for the expression of antibody proteins are commercially available. Insect cell expression systems are particularly suitable for the scFv fragments according to the invention and Fab or F (ab ') 2 fragments and antibody proteins or fragments thereof, which are fused with effector molecules, but also for complete antibody molecules.

Vorteilhaft an Säugetierexpressionssystemen ist, daß sie sehr gute Glykosilierungs- und Faltungsbedingungen ermöglichen, z.B. transiente Expressionssysteme, z. B. in COS-Zellen oder stabile Expressionssysteme z. B. BHK-, CHO-, Myelomzellen. Säugerzellen sind auch z. B. mit viralen Expressionsystemen z. B. Vaccinia, Semliki-Forest- Virus, Adenovirus verwendbar. Auch transgene Tiere z. B. Kühe, Ziegen, Mäuse sind geeignet für ein erfindungsgemäßes Verfahren. Auch transgene Pflanzen wie Nicotiana tabacum (Tabak) sind in einem erfindungsgemäßen Verfahren einsetzbar. Nach genomischer Integration der erfindungsgemäßen Nukleinsäure, welche für ein erfindungsgemäßes Antikörperprotein kodiert, die an eine Signalsequenz fusioniert ist, kann die Sekretion des Antikörperproteins in den interstitiellen Raum erreicht werden. Die Herstellung mit prokaryontischen Expressionssystemen wie Escherichia coli, Bacillus subtilis, Streptomyces oder auch Proteus mirabilis eignet sich bevorzugt für erfindungsgemäße Antikörperfragmente, wie Fab-, F(ab')2-, scFv-Fragmente, Minibodies, Diabodies und Multimere besagter Fragmente. Die Erfindungsgemäßen Antikörperproteine werden in einem erfindungsgemäßen Verfahren entweder intrazellulär, z.B. in Inklusionskörpern oder durch periplasmatische Sekretion in Gram-negativen Bakterien mittels hierfür geeigneten Vektoren hergestellt. Ebenfalls von der Erfindung umfaßt ist die Verwendung eines erfindungsgemäßen Polypeptides zum Auffinden von Blocker, Aktivatoren oder Modulatoren besagter Polypeptide.An advantage of mammalian expression systems is that they allow very good glycosylation and folding conditions, e.g. transient expression systems, e.g. B. in COS cells or stable expression systems such. B. BHK, CHO, myeloma cells. Mammalian cells are also e.g. B. with viral expression systems such. B. Vaccinia, Semliki Forest virus, adenovirus can be used. Also transgenic animals e.g. B. cows, goats, mice are suitable for a method according to the invention. Transgenic plants such as Nicotiana tabacum (tobacco) can also be used in a method according to the invention. After genomic integration of the nucleic acid according to the invention, which codes for an antibody protein according to the invention and which is fused to a signal sequence, the secretion of the antibody protein into the interstitial space can be achieved. Production with prokaryotic expression systems such as Escherichia coli, Bacillus subtilis, Streptomyces or Proteus mirabilis is preferably suitable for antibody fragments according to the invention, such as Fab, F (ab ') 2, scFv fragments, minibodies, diabodies and multimers of said fragments. The antibody proteins according to the invention are either intracellular, e.g. in inclusion bodies or by periplasmic secretion in Gram-negative bacteria using suitable vectors. The invention also encompasses the use of a polypeptide according to the invention for finding blockers, activators or modulators of said polypeptides.

Unter Blocker sind Substanzen zu verstehen, die durch Bindung an den OTRPC4- Kationenkanal selbst, durch Bindung an regulatorische Untereinheiten oder durch Interaktion mit der Zellmembran oder Teilen derselben die Ionenpermeabilität des Kanals hemmen. Unter Aktivatoren sind Substanzen zu verstehen, die durch Bindung an den OTRPC4- Kationenkanal selbst, durch Bindung an regulatorische Untereinheiten oder durch Interaktion mit der Zellmembran oder Teilen derselben die Ionenpermeabilität des Kanals stimulieren. Unter Modulatoren sind Substanzen zu verstehen, die durch Bindung an den OTRPC4- Kationenkanal selbst, durch Bindung an regulatorische Untereinheiten oder durch Interaktion mit der Zellmembran oder Teilen derselben die Ionenpermeabilität des Kanals verändern, z.B. die Selektivität des Kanals gegenüber von Kalzium und Natrium verändern. Blocker, Aktivatoren oder Modulatoren können ihre jeweilige pharmakologische Eigenschaften entfalten abhängig von physikalischen Einflüssen, wie z.B. pH, Temperatur und Ionenkonzentrationen des intra- oder extrazellulären Mileus oder auch abhängig von dem Aktivierungszustand des Kanals.Blockers are understood to mean substances which inhibit the ion permeability of the channel by binding to the OTRPC4 cation channel itself, by binding to regulatory subunits or by interaction with the cell membrane or parts thereof. Activators are understood to mean substances which stimulate the ion permeability of the channel by binding to the OTRPC4 cation channel itself, by binding to regulatory subunits or by interaction with the cell membrane or parts thereof. Modulators are understood to mean substances which, by binding to the OTRPC4 cation channel itself, by binding to regulatory subunits or by interaction with the cell membrane or parts thereof, change the ion permeability of the channel, for example change the selectivity of the channel towards calcium and sodium. Blockers, activators or modulators can develop their respective pharmacological properties depending on physical influences, such as pH, temperature and ion concentrations of the intracellular or extracellular mileus, or also depending on the activation state of the channel.

Weiterhin von der Erfindung umfaßt ist die Verwendung eines erfindungsgemäßen Wirtes zum Auffinden von Blocker, Aktivatoren oder Modulatoren von OTRPC4-Kanälen. Ein weiterer, bevorzugter Aspekt der Erfindung ist ein Verfahren zum Auffinden von Blocker, Aktivatoren oder Modulatoren von OTRPC4, dadurch gekennzeichnet, daß ein erfindungsgemäßer Wirt mit einer Testsubstanz inkubiert wird.The invention furthermore encompasses the use of a host according to the invention for finding blockers, activators or modulators of OTRPC4 channels. Another preferred aspect of the invention is a method for finding blockers, activators or modulators of OTRPC4, characterized in that a host according to the invention is incubated with a test substance.

Ein weiterer, ganz besonders bevorzugter Aspekt der Erfindung ist ein erfindungsgemäßes Verfahren, dadurch gekennzeichnet, daß ein Membranstrom gemessen wird, besagter Membranstrom mit einem Membranstrom verglichen wird, der bei besagtem Wirt nach Inkubation mit einer bekannten Kontrollsubstanz oder in Abwesenheit der Testsubstanz gemessen wird. Ein solches Verfahren ist exemplarisch in Beispiel 1, Abbildung 7 der Erfindung beschrieben. Ein weiterer, ganz besonders bevorzugter Aspekt der Erfindung ist ein erfindungsgemäßes Verfahren worin besagter Aktivator an einen Kanal gebunden ist, besagter Wirt mit einer Testsubstanz inkubiert wird und die Verdrängung des an den Kanal gebundenen Aktivator durch die Testsubstanz gemessen wird.A further, very particularly preferred aspect of the invention is a method according to the invention, characterized in that a membrane flow is measured, said membrane flow is compared with a membrane flow which is measured in said host after incubation with a known control substance or in the absence of the test substance. Such a method is described by way of example in Example 1, Figure 7 of the invention. Another, very particularly preferred aspect of the invention is a method according to the invention in which said activator is bound to a channel, said host is incubated with a test substance and the displacement of the activator bound to the channel is measured by the test substance.

Ein weiterer, ganz besonders bevorzugter Aspekt der Erfindung ist ein erfindungsgemäßes Verfahren, worin ein erfindungsgemäßer Wirt mit einer Testsubstanz inkubiert wird, die intrazelluläre Menge eines divalenten Kationes bestimmt wird und besagte Menge des divalenten Kationes mit der Menge besagten divalenten Kationes verglichen wird, die bei der Inkubation besagten Wirtes mit einer bekannten Kontrolle oder in der Abwesenheit der Testsubstanz gemessen wird. Ein solches Verfahren ist exemplarisch in Beispiel 1 der Erfindung beschrieben.A further, very particularly preferred aspect of the invention is a method according to the invention, in which a host according to the invention is incubated with a test substance, the intracellular amount of a divalent cation is determined and said amount of the divalent cation is compared with the amount of said divalent cation, which in the Incubation of said hosts with a known control or in the absence of the Test substance is measured. Such a method is described by way of example in Example 1 of the invention.

Ein weiterer, ganz besonders bevorzugter Aspekt der Erfindung ist ein erfindungsgemäßes Verfahren, welches ein Hochdurchsatzmusterungstest (Englisch: „high throughput screening = HTS") oder ein Ultrahochdurchsatzmusterungstest (Hochdurchsatzmusterungstest (Englisch: „ultra high throughput screening = UHTS") ist. HTS bezieht sich im Rahmen der Erfindung auf ein experimentelles Verfahren, bei dem eine große Anzahl an Testsubstanzen gleichzeitig getestet werden. Vorzugsweise wird ein HTS-Verfahren in Mikrotiterplatten ausgeführt, teilweise oder vollständig automatisiert und an elektronische Geräte wie z.B. Computer zur Datenspeicherung, -Analyse und Interpretation mittels Bioinformatik angeschlossen. Bevorzugt werden zur Automatisierung Roboter eingesetzt, die eine große Anzahl von Mikrotiterplatten gleichzeitig handhaben können und mehrere tausend Tests pro Tag ausführen können. Vorzugsweise wird eine Testsubstanz auf eine erwünschte Aktivator-, Blocker- oder Modulatorfunktion in einem zeilbasierten System mit einer erfindungsgemäßen Zelle getestet. Der Ausdruck HTS umfaßt auch Ultrahochdurchsatzmusterungstests (UHTS). Vorzugsweise werden besagte UHTS- Verfahren unter Verwendung von 384- or 1536-Loch-Mikrotiterplatten, Submikroliter- und Subnanoliterpipettoren, verbesserten Plattenlesegeräten und Verfahren um Verdunstung zu verhindern, ausgeführt. HTS Verfahren sind beispielhaft in den Patenten US 5876946 A oder US 5902732 A beschrieben. Der Durchschnittsfachmann kann die oben und in den Beispielen beschriebenen Verfahren an ein HTS oder UHTS Format anpassen, ohne selbst erfinderisch tätig zu sein.A further, very particularly preferred aspect of the invention is a method according to the invention, which is a high throughput screening test (English: "high throughput screening = HTS") or an ultra high throughput screening test (high throughput screening test (English: "ultra high throughput screening = UHTS"). HTS refers in the context of the invention to an experimental method in which a large number of test substances are tested simultaneously, preferably an HTS method is carried out in microtiter plates, partially or completely automated and to electronic devices such as computers for data storage, analysis and interpretation by means of bioinformatics Robots which can handle a large number of microtiter plates at the same time and can carry out several thousand tests per day are preferably used for automation purposes, and a test substance is preferably tuned to a desired activator, blocker or modulator radio tion tested in a line-based system with a cell according to the invention. The term HTS also includes ultra high throughput patterning (UHTS) tests. Preferably, said UHTS methods are performed using 384 or 1536 well microtiter plates, submicroliter and subnanoliter pipettors, improved plate readers, and methods to prevent evaporation. HTS processes are described by way of example in the patents US 5876946 A or US 5902732 A. The average person skilled in the art can adapt the methods described above and in the examples to an HTS or UHTS format without being inventive.

Ein HTS zur Identifizierung von Blockern, Aktivatoren oder Modulatoren des OTRPC4- Kanals kann erfolgen, wie in Beispiel 1 beschrieben, kann aber auch mit sogenannten induzierbaren Expressionssystemen durchgeführt werden, beispielsweise ein durch Tetracyclin induzierbares Plasmid (Gossen M, Bonin AL, Freundlieb S, Bujard H: Inducible gene expression Systems for higher eukaryotic cells. Curr Opin Biotechnol 1994, 5, 516-20) oder ein durch den Ecdyson-Rezeptor induzierbares System (Invitrogen). Diese Systeme, aber auch andere, sind kommerziell erhältlich. Noch ein wichtiger Aspekt der vorliegenden Erfindung ist ein Aktivator von OTRPC4, auffindbar mit einem erfindungsgemäßen Verfahren. Noch ein wichtiger Aspekt der vorliegenden Erfindung ist ein Blocker von OTRPC4, auffindbar mit einem erfindungsgemäßen Verfahren.A HTS for identifying blockers, activators or modulators of the OTRPC4 channel can be carried out as described in Example 1, but can also be carried out using so-called inducible expression systems, for example a plasmid inducible by tetracycline (Gossen M, Bonin AL, Freundlieb S, Bujard H: Inducible gene expression Systems for higher eukaryotic cells. Curr Opin Biotechnol 1994, 5, 516-20) or a system inducible by the ecdysone receptor (Invitrogen). These systems, as well as others, are commercially available. Another important aspect of the present invention is an activator of OTRPC4, which can be found using a method according to the invention. Another important aspect of the present invention is a blocker of OTRPC4, which can be found using a method according to the invention.

Noch ein wichtiger Aspekt der vorliegenden Erfindung ist ein Modulator von OTRPC4, auffindbar mit einem erfindungsgemäßen Verfahren. s Eine weitere bevorzugte Ausführungsform der Erfindung umfaßt eine Anti-Sinn- Nukleinsäure, dadurch gekennzeichnet, daß sie an einen Teil einer erfindungsgemäßen Nukleinsäure unter stringenten Bedingungen hybridisieren kann.Another important aspect of the present invention is a modulator of OTRPC4, which can be found using a method according to the invention. A further preferred embodiment of the invention comprises an anti-sense nucleic acid, characterized in that it can hybridize to a part of a nucleic acid according to the invention under stringent conditions.

Unter Anti-Sinn-Nukleinsäure (Englisch: „anti-sense nucleic acid" oder auch „anti-sense oligonucleotide") werden DNS oder RNS-Moleküle im Rahmen dieser Erfindung o verstanden, die komplementär zu zumindest einem Teil eines erfindungsgemäßen, d.h. für ein OTRPC4-Polypeptid oder -Fragment kodierenden mRNS Molekül sind. Eine Definition von Anti-Sinn-Nukleinsäure findet sich auch im Stand der Technik (Weintraub HM, 1990 Scientific American, 262, 34-40). In der Zelle hybridisieren Anti-Sinn- Nukleinsäuremoleküle an die Korrespondierende mRNS und bilden ein s Doppelstrangmolekül. Die erfindungsgemäßen Anti-Sinn-Nukleinsäuren interferieren mit der Translation der für OTRPC4-Polypeptid oder ein OTRPC4-Fragment kodierenden mRNS, da die Zelle besagte doppelsträngige mRNS nicht translatieren wird. Die zentrale Region der Anti-Sinn-Nukleinsäure im Rahmen dieser Erfindung enthält mindestens 14 Nukleotide, die komplementär zu der Ziel-RNS sind. Die Erfindung umfaßt auch Peptid- 0 Nukleinsäuren, Phosphodiester-Anti-Sinn-Nukleinsäuren und Phosphothioat- Oligonukleotide, die komplementär zu zumindest einem Teil eines erfindungsgemäßen für ein OTRPC4-Polypeptid oder -Fragment kodierenden mRNS Molekül sind. Solche für andere Ziel-RNS spezifischen Substanzen sind aus dem Stand der Technik bekannt (Boado RJ et al., 1998 JPharm Sei 87: 1308-1315.).Anti-sense nucleic acid (English: “anti-sense nucleic acid” or also “anti-sense oligonucleotides”) in the context of this invention is understood to mean DNA or RNA molecules which are complementary to at least part of an inventive, i.e. mRNA coding for an OTRPC4 polypeptide or fragment. A definition of anti-sense nucleic acid can also be found in the prior art (Weintraub HM, 1990 Scientific American, 262, 34-40). In the cell, anti-sense nucleic acid molecules hybridize to the corresponding mRNA and form a double-stranded molecule. The anti-sense nucleic acids according to the invention interfere with the translation of the mRNA coding for OTRPC4 polypeptide or an OTRPC4 fragment, since the cell will not translate said double-stranded mRNA. The central region of the anti-sense nucleic acid in the context of this invention contains at least 14 nucleotides that are complementary to the target RNA. The invention also encompasses peptide nucleic acids, phosphodiester anti-sense nucleic acids and phosphothioate oligonucleotides which are complementary to at least part of an mRNA molecule coding for an OTRPC4 polypeptide or fragment according to the invention. Such substances specific for other target RNA are known from the prior art (Boado RJ et al., 1998 JPharm Sei 87: 1308-1315.).

2s In Beispiel 1 (Tabelle 1) sind fünf Anti-Sinn-Sequenzen beispielhaft aufgeführt und die Kriterien, die zu der Auswahl dieser Sequenzen führten, dargestellt. Eine weitere bevorzugte Ausführungsform der Erfindung umfaßt eine erfindungsgemäße Anti-Sinn-Nukleinsäure, die ein Ribozym ist. Ribozym im Rahmen dieser Erfindung ist ein RNS-Molekül, das spezifisch mit der Ziel-RNS, d.h. der erfindungsgemäßen für ein2s In Example 1 (Table 1), five anti-sense sequences are listed as examples and the criteria that led to the selection of these sequences are shown. Another preferred embodiment of the invention comprises an anti-sense nucleic acid according to the invention which is a ribozyme. Ribozyme in the context of this invention is an RNA molecule that is specific to the target RNA, i.e. the invention for a

30 OTRPC4-Polypeptid oder -Fragment kodierenden mRNS interagieren und diese irreversibel an einer spezifischen Stelle schneiden kann. Vorzugsweise besitzt das erfindungsgemäße Ribozym eine zentrale Sequenz, die zur Ziel-RNS nicht komplementär ist und für dessen katalytische Aktivität verantwortlich ist (katalytischer Bereich (a)) und zwei flankierende Sequenzen, die zu zwei benachbarten Sequenzen der Ziel-RNS im wesentlichen komplementär sind (Hybridisierungsbereich (b)), so die Bindung des Ribozyms über Basenpaarung und dadurch die selektive Spaltung der Ziel-RNS erlauben. Eine bevorzugte Ausführungsform des erfindungsgemäßen Ribozyms kann durch folgende generelle Formel dargestellt werden: (b) (a) (b)30 OTRPC4 polypeptide or fragment encoding mRNA can interact and irreversibly cut them at a specific location. The ribozyme according to the invention preferably has a central sequence which is not complementary to and for the target RNA catalytic activity (catalytic region (a)) and two flanking sequences which are essentially complementary to two adjacent sequences of the target RNA (hybridization region (b)), so the binding of the ribozyme via base pairing and thereby the selective cleavage of the target Allow RNS. A preferred embodiment of the ribozyme according to the invention can be represented by the following general formula: (b) (a) (b)

5' [N3-20] [CUGANGARNo-soSGAAA] [N3-20] 3 ', worin N ein G, C, A oder U, R ein Purin und S ein Pyrimidin ist und worin die zentrale Region No-3o der Sequenz (a) durch einen Linker ersetzt werden kann, der keine Nukleinsäure ist, nämlich beispielsweise eine Kohlenwasserstoffkette (s.a. Thomson et al., 1993, Nucleic Acids Res 21, 5600-5603.). Die erfindungsgemäßen Ribozyme können beispielsweise ein „Hammerhead"- „Hairpin"- oder „Axehead"-Ribozym sein. Die Struktur von „Hammerhead"-Ribozymen ist dem Fachmann bekannt und auch beispielhaft in Symons RH (1992, Annu Rev Biochem 61, 641-671) bzw. Rossi JJ (1993, Methode 5, 1-5.) beschrieben. „Hairpin" Ribozyme können Ziel-RNS wirksam in trans spalten, wobei der Wirkmechanismus ähnlich dem „Hammerhead" Ribozym ist (s. a. Rossi, supra, und Hampel et al., 1990, Nucleic Acids Res 18, 299-304.). Auch „Axehead"-Ribozyme können wirksam in trans spalten. Sie sind beispielsweise in Been MD et al., (1994 Trends Biochem Sei 19, 251-256) und Wu HN et al. (1993, Nucleic Acids Res 21, 4193-4199) beschrieben. Der Fachmann kann anhand der aus dem Stand der Technik bekannten Daten die für die Spaltung erforderlichen Minimalsequenzen bzw. -Struktur ermitteln und Ribozyme konstruieren, die die für die Zwecke der Erfindung erforderlichen Eigenschaften aufweisen. Besagtes Ribozym kann auch im Rahmen der Erfindung modifiziert werden, um eine erhöhte Nukleasenresistenz zu erhalten. Beispiele hierfür sind die Substitution der 2'-OH Gruppen der Ribose durch 2'-H, 2'-O-methyl, 2'-O-allyl, 2'-Fluor or 2'-Aminogruppen (Paolella et al., 1992, und Pieken et al., 1991) oder die Modifikation von Phosphodiesterbindungen, z.B. indem ein oder zwei Sauerstoffatome gegen Schwefel ausgetauscht werden (Phosphorthioat bzw. Phosphordithioat; Eckstein, 1985, und Beaton et al., in: Eckstein, F. (Hrsg.) Oligonucleotides and analogues - A practical approach - Oxford, JRL Press (1991), 109-135) bzw. durch eine Methylgruppe (Methylphosphonat; Miller, ebenda, 137-154). Weitere Modifikationen umfassen die Konjugation der RNS mit poly-L-Lysin, Polyalkylderivaten, Cholesterin oder PEG. Vorzugsweise enthalten die erfindungsgemäßen Ribozyme mindestens eine der vorstehend beschriebenen Phosphatmodifikationen und/oder mindestens eine der vorstehend beschriebenen Ribosemodifikationen. Ein weiterer, wichtiger Aspekt der Erfindung ist eine pharmazeutische Zusammensetzung, die eine erfindungsgemäße Nukleinsäure sowie pharmazeutisch akzeptable Träger- oder Hilfsstoffe enthält.5 '[N 3-20 ] [CUGANGARNo-soSGAAA] [N 3-20 ] 3', where N is G, C, A or U, R is purine and S is pyrimidine and the central region is No -3 o Sequence (a) can be replaced by a linker that is not a nucleic acid, namely, for example, a hydrocarbon chain (see also Thomson et al., 1993, Nucleic Acids Res 21, 5600-5603.). The ribozymes according to the invention can be, for example, a "hammerhead""hairpin" or "axehead" ribozyme. The structure of "hammerhead" ribozymes is known to the person skilled in the art and is also exemplified in Symons RH (1992, Annu Rev Biochem 61, 641- 671) and Rossi JJ (1993, Method 5, 1-5.). "Hairpin" ribozymes can effectively cleave target RNA in trans, the mechanism of action being similar to the "hammerhead" ribozyme (see also Rossi, supra, and Hampel et al., 1990, Nucleic Acids Res 18, 299-304.). "Axehead" ribozymes can also effectively cleave in trans. They are described, for example, in Been MD et al. (1994 Trends Biochem Sei 19, 251-256) and Wu HN et al. (1993, Nucleic Acids Res 21, 4193-4199 The person skilled in the art can use the data known from the prior art to determine the minimal sequences or structure required for the cleavage and to construct ribozymes which have the properties required for the purposes of the invention, said ribozyme can also be modified within the scope of the invention to obtain increased nuclease resistance, examples of which are the substitution of the 2'-OH groups of the ribose by 2'-H, 2'-O-methyl, 2'-O-allyl, 2'-fluorine or 2'- Amino groups (Paolella et al., 1992, and Pieken et al., 1991) or the modification of phosphodiester bonds, e.g. by exchanging one or two oxygen atoms for sulfur (phosphorothioate or phosphorodithioate; Eckstein, 1985, and Beaton et al., In : Eckstein, F. (ed.) Oligon ucleotides and analogues - A practical approach - Oxford, JRL Press (1991), 109-135) or by a methyl group (methylphosphonate; Miller, ibid., 137-154). Further modifications include the conjugation of the RNA with poly-L-lysine, polyalkyl derivatives, cholesterol or PEG. The ribozymes according to the invention preferably contain at least one of the phosphate modifications described above and / or at least one of the ribose modifications described above. Another important aspect of the invention is a pharmaceutical composition which contains a nucleic acid according to the invention and pharmaceutically acceptable carriers or auxiliaries.

Ein weiterer, wichtiger Aspekt der Erfindung ist eine pharmazeutische Zusammensetzung, die eine erfindungsgemäße Anti-Sinn-Nukleinsäure sowie pharmazeutisch akzeptable Träger- oder Hilfsstoffe enthält.Another important aspect of the invention is a pharmaceutical composition which contains an anti-sense nucleic acid according to the invention and pharmaceutically acceptable carriers or excipients.

Ein weiterer, wichtiger Aspekt der Erfindung ist eine pharmazeutische Zusammensetzung, die ein erfindungsgemäßes Polypeptid sowie pharmazeutisch akzeptable Träger- oder Hilfsstoffe enthält. Pharmazeutisch akzeptable Trägerstoffe oder Hilfsstoffe in dieser Erfindung können physiologisch akzeptable Verbindungen sein, die beispielsweise die Absorption von OTRPC4-Aktivator, -Blocker oder -Modulatoren stabilisieren oder verbessern. Solche physiologisch akzeptable Verbindungen umfassen beispielsweise Kohlenhydrate wie Glukose, Sucrose oder Dextrane, Antioxidatien, wie Ascorbinsäure oder Glutathion, Chelatbildner, niedermolekulare Verbindungen oder andere Stabilisatoren oder Hilfsstoffe (s. a. Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Auflage, Mack Publ., Easton.). Der Fachmann weiß, daß die Auswahl eines pharmazeutisch akzeptablen Trägerstoffes z.B. von der Administrationsroute der Verbindung abhängig.Another important aspect of the invention is a pharmaceutical composition which contains a polypeptide according to the invention and pharmaceutically acceptable carriers or excipients. Pharmaceutically acceptable carriers or adjuvants in this invention can be physiologically acceptable compounds that, for example, stabilize or improve the absorption of OTRPC4 activator, blocker or modulator. Such physiologically acceptable compounds include, for example, carbohydrates such as glucose, sucrose or dextrans, antioxidants such as ascorbic acid or glutathione, chelating agents, low molecular weight compounds or other stabilizers or auxiliaries (see also Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th edition, Mack Publ., Easton.). Those skilled in the art know that the selection of a pharmaceutically acceptable carrier e.g. depends on the administration route of the connection.

Ein weiterer, wichtiger Aspekt der Erfindung ist eine pharmazeutische Zusammensetzung, die einen erfindungsgemäßen Vektor sowie pharmazeutisch akzeptable Träger- oder Hilfsstoffe enthält. Die besagte pharmazeutische Zusammensetzung kann auch einen erfindungsgemäßen Vektor für die Gentherapie enthalten und kann zusätzlich als Hilfsstoff ein kolloidales Dispersionssystem oder Liposomen für eine zielgerichtete Applikation der pharmazeutischen Zusammensetzung umfassen. Ein weiterer, wichtiger Aspekt der Erfindung ist eine pharmazeutische Zusammensetzung, die einen erfindungsgemäßen Wirt sowie pharmazeutisch akzeptable Träger- oder Hilfsstoffe enthält. Auch ein Wirt oder eine Wirtszelle, die einen erfindungsgemäßen Vektor enthält, kann in einer pharmazeutischen Zusammensetzung im Rahmen dieser Erfindung, beispielsweise zur Gentherapie, verwendet werden.Another important aspect of the invention is a pharmaceutical composition which contains a vector according to the invention and pharmaceutically acceptable carriers or excipients. Said pharmaceutical composition can also contain a vector according to the invention for gene therapy and can additionally comprise as an adjuvant a colloidal dispersion system or liposomes for targeted application of the pharmaceutical composition. Another important aspect of the invention is a pharmaceutical composition which contains a host according to the invention and pharmaceutically acceptable carriers or auxiliaries. Also a host or a host cell which has a vector according to the invention contains, can be used in a pharmaceutical composition in the context of this invention, for example for gene therapy.

Ein Beispiel für ein zielgerichtetes Applikationssystem, z.B. für erfindungsgemäße Anti- Sinn-Oligonukleotide oder Ribozyme ist besagtes kolloidales Dispersionssystem. Kolloidale s Dispersionssysteme umfassen Makromolekülkomplexe, Nanokapseln, Kügelchen und Lipid- basierte Systeme einschließlich Öl-in-Wasser Emulsionen, Mizellen, gemischte Mizellen und Lipsomen oder Liposom-Formulierungen. Das bevorzugte kolloidale System der Erfindung sind Liposomen. Liposomen sind artifizielle Membranvesikel, die als Vehikel in vitro und in vivo nützlich sind. Diese Formulierungen können kationische, anionische oder neutrale o Ladung tragen. Es wurde gezeigt, daß große unilamellare Vesikel („large unilamellar vesicles" LUV), die eine Größe von 0.2-4.0 μm haben, einen Großteil einer wässrigen Pufferlösung mit großen Makromolekülen umschließen können. RNS, DNS und intakte Virione können in die wässrige Phase im Inneren eingekapselt werden und in einer biologisch aktiven Form an das Ziel transportiert werden (Fraley R et al., 1981, Trends s Biochem Sei 6, 77-80). Neben Säugerzellen haben sich Liposomen auch für den zielgerichten Transport von Nukleotiden in pflanzlichen-, Hefe- und bakteriellen Zellen als geeignet erwiesen. Um ein effizientes Gentransfervehikel zu sein, sollten die folgenden Eigenschaften vorhanden sein: (1) die Gene sollten mit einer hohen Effizienz eingeschlossen werden, ohne dabei ihre biologische Aktivität zu verringern; (2) es sollte präferentielle und 0 substantielle Bindung an die Zielzelle im Vergleich zu nicht-Zielzellen erfolgen; (3) die wässrige Phase des Vehikels sollte mit hoher Effizienz in das Zielzellzytoplasma transferiert werden; und (4) die genetische Information sollte akkurat und effizient exprimiert werden (Mannino RJ et al., 1988, BioTechniques 6, 682-690). Die Zusammensetzung der Liposomen besteht üblicherweise aus einer Kombination von s Phospholipiden, insbesondere Hoch-Phase-Übergangstemperatur-Phospholipide (Englisch "high-phase-transition-temperature"), z.B. in Kombination mit Steroiden, z.B. Cholesterin. Andere Phospholipide oder andere Lipide können auch verwendet werden. Die physikalischen Charakteristika der Liposomen hängen vom dem pH, der Ionenkonzentration und der Gegenwart divalenter Kationen ab.An example of a targeted application system, e.g. for anti-sense oligonucleotides or ribozymes according to the invention is said colloidal dispersion system. Colloidal dispersion systems include macromolecule complexes, nanocapsules, beads, and lipid-based systems including oil-in-water emulsions, micelles, mixed micelles and lipomas, or liposome formulations. The preferred colloidal system of the invention is liposomes. Liposomes are artificial membrane vesicles that are useful as vehicles in vitro and in vivo. These formulations can carry cationic, anionic or neutral charge. It has been shown that large unilamellar vesicles (LUV), which have a size of 0.2-4.0 μm, can enclose a large part of an aqueous buffer solution with large macromolecules. RNA, DNA and intact virions can enter the aqueous phase in the Encapsulated internally and transported to the target in a biologically active form (Fraley R et al., 1981, Trends s Biochem Sei 6, 77-80). In addition to mammalian cells, liposomes have also been used for the targeted transport of nucleotides in plant, To be an efficient gene transfer vehicle, the following properties should be present: (1) the genes should be included with high efficiency without reducing their biological activity; (2) it should be preferential and 0 substantial binding to the target cell compared to non-target cells; (3) the aqueous phase of the vehicle should be with ho efficiency can be transferred into the target cell cytoplasm; and (4) the genetic information should be expressed accurately and efficiently (Mannino RJ et al., 1988, BioTechniques 6, 682-690). The composition of the liposomes usually consists of a combination of phospholipids, in particular high-phase transition-temperature phospholipids (English "high-phase transition temperature"), e.g. in combination with steroids, e.g. Cholesterol. Other phospholipids or other lipids can also be used. The physical characteristics of the liposomes depend on the pH, the ion concentration and the presence of divalent cations.

30 Die pharmazeutische Zusammensetzung der gegenwärtigen Erfindung kann auch einen erfindungsgemäßen Vektor als nackten „Genexpressionsvektor" enthalten. Dies bedeutet, der erfindungsgemäße Vektor ist nicht mit einem Hilfsstoff für zielgerichtete Applikation assoziiert (z.B. Liposomen, kolloidale Partikel etc.). Ein prinzipieller Vorteil von nackten DNS-Vektoren ist das Fehlen einer Immunantwort, die durch den Vektor selbst hervorgerufen wird. Die Erfindung betrifft auch die Verwendung einer erfindungsgemäßen Nukleinsäure zur Herstellung eines Medikamentes für die Behandlung von einer Krankheit ausgewählt aus der Gruppe von Diabetes, Hyperlipidämie, Hyperproteinämie, Hypertonus, Schlaganfall, Niereninsuffizienz, Schock sowie weiteren pathophysiologischen Zuständen, die durch Hyper- und Hypoosmolarität charakterisiert sind. Dies sind beispielsweise andere pathophysiologische Zustände, die mit einer Erhöhung oder Erniedrigung der extrazellulären Osmolarität einhergehen, wie z.B. Schockzustände unterschiedlicher Genese, wie z.B. kardiogener, metabolischer, septischer, anaphylaktischer Schock oder Schockzustände ausgelöst durch Verbrennungen oder Polytraumata. Unter Schock wird im Rahmen dieser Erfindung ein pathophysiologischer Zustand verstanden, der zu einer generalisierten schwerwiegenden Reduktion der Gewebeperfusion und einer konsekutiven Gewebeschädigung führt.The pharmaceutical composition of the present invention can also contain a vector according to the invention as a bare “gene expression vector”. This means that the vector according to the invention is not provided with an adjuvant for targeted application associated (e.g. liposomes, colloidal particles, etc.). A fundamental advantage of naked DNA vectors is the lack of an immune response that is caused by the vector itself. The invention also relates to the use of a nucleic acid according to the invention for the manufacture of a medicament for the treatment of a disease selected from the group consisting of diabetes, hyperlipidemia, hyperproteinemia, hypertension, stroke, renal insufficiency, shock and other pathophysiological conditions which are characterized by hyper- and hypoosmolarity , These are, for example, other pathophysiological conditions which are associated with an increase or decrease in extracellular osmolarity, such as shock states of different origins, such as cardiogenic, metabolic, septic, anaphylactic shock or shock states triggered by burns or polytrauma. In the context of this invention, shock is understood to be a pathophysiological condition which leads to a generalized, serious reduction in tissue perfusion and consecutive tissue damage.

Die Erfindung betrifft auch die Verwendung einer erfindungsgemäßen Anti-Sinn- Nukleinsäure zur Herstellung eines Medikamentes für die Behandlung von einer Krankheit ausgewählt aus der Gruppe von Diabetes, Hyperlipidämie, Hyperproteinämie, Hypertonus, Schlaganfall, Niereninsuffizienz und und Schock. Dies sind beispielsweise andere pathophysiologische Zustände, die mit einer Erhöhung oder Erniedrigung der extrazellulären Osmolarität einhergehen, wie z.B. Schockzustände unterschiedlicher Genese, wie z.B. kardiogener, metabolischer, septischer, anaphylaktischer Schock oder Schockzustände ausgelöst durch Verbrennungen oder Polytraumata. Die Erfindung betrifft auch die Verwendung eines erfindungsgemäßen Vektors zur Herstellung eines Medikamentes für die Behandlung von einer Krankheit ausgewählt aus der Gruppe von Diabetes, Hyperlipidämie, Hyperproteinämie, Hypertonus, Schlaganfall, Niereninsuffizienz und und Schock. Dies sind beispielsweise andere pathophysiologische Zustände, die mit einer Erhöhung oder Erniedrigung der extrazellulären Osmolarität einhergehen, wie z.B. Schockzustände unterschiedlicher Genese, wie z.B. kardiogener, metabolischer, septischer, anaphylaktischer Schock oder Schockzustände ausgelöst durch Verbrennungen oder Polytraumata. Die Erfindung betrifft auch die Verwendung eines erfindungsgemäßen Wirts zur Herstellung eines Medikamentes für die Behandlung von einer Krankheit ausgewählt aus der Gruppe von Diabetes, Hyperlipidämie, Hyperproteinämie, Hypertonus, Schlaganfall, Niereninsuffizienz und und Schock. Dies sind beispielsweise andere pathophysiologische Zustände, die mit einer Erhöhung oder Erniedrigung der extrazellulären Osmolarität einhergehen, wie z.B. Schockzustände unterschiedlicher Genese, wie z.B. kardiogener, metabolischer, septischer, anaphylaktischer Schock oder Schockzustände ausgelöst durch Verbrennungen oder Polytraumata.The invention also relates to the use of an anti-sense nucleic acid according to the invention for the manufacture of a medicament for the treatment of a disease selected from the group of diabetes, hyperlipidemia, hyperproteinemia, hypertension, stroke, renal insufficiency and and shock. These are, for example, other pathophysiological conditions which are associated with an increase or decrease in extracellular osmolarity, such as shock states of different origins, such as cardiogenic, metabolic, septic, anaphylactic shock or shock states triggered by burns or polytrauma. The invention also relates to the use of a vector according to the invention for the manufacture of a medicament for the treatment of a disease selected from the group of diabetes, hyperlipidemia, hyperproteinemia, hypertension, stroke, renal failure and and shock. These are, for example, other pathophysiological conditions which are associated with an increase or decrease in extracellular osmolarity, such as shock states of different origins, such as cardiogenic, metabolic, septic, anaphylactic shock or shock states triggered by burns or polytrauma. The invention also relates to the use of a host according to the invention for the manufacture of a medicament for the treatment of a disease selected from the group of diabetes, hyperlipidemia, hyperproteinemia, hypertension, stroke, renal failure and and shock. These are, for example, other pathophysiological conditions which are associated with an increase or decrease in extracellular osmolarity, such as shock states of different origins, such as cardiogenic, metabolic, septic, anaphylactic shock or shock states triggered by burns or polytrauma.

Noch ein wesentlicher Aspekt der Erfindung ist ein nicht menschlicher Säuger, dadurch gekennzeichnet, daß er zusätzlich zu seinem Genom eine erfindungsgemäße Nukleinsäure (Transgen) enthält. Hierunter wird ein nicht menschliches, transgenes Säugetier verstanden, das zusätzlich zu seinem Genom eine erfindungsgemäße für OTRPC4 bzw. ein Fragment hiervon kodierende Nukleinsäuresequenz stabil in einen Teil seiner Körperzellen (Chimäre) oder in alle Körperzellen integriert hat und das OTRPC4-Polypeptid bzw. Fragment exprimiert. Dem Fachmann sind transgene Säugetiere bekannt, die für andere Sequenzen transgen sind (s.a. Schenkel, L, Spektrum Akad. Verl., 1995). Erfindungsgemäße transgene Säuger sind beispielsweise transgene Nagetiere, wie Ratten, Mäuse und Hamster, aber auch Ziegen, Rinder, Schweine, Schafe sowie weitere dem Fachmann bekannte nicht menschliche Säuger. Ganz besonders bevorzugt sind Mäuse.Another essential aspect of the invention is a non-human mammal, characterized in that it contains a nucleic acid (transgene) according to the invention in addition to its genome. This is understood to mean a non-human, transgenic mammal which, in addition to its genome, has stably integrated a nucleic acid sequence according to the invention for OTRPC4 or a fragment thereof into part of its body cells (chimera) or into all body cells and expresses the OTRPC4 polypeptide or fragment , The person skilled in the art is aware of transgenic mammals which are transgenic for other sequences (see also Schenkel, L, Spektrum Akad. Verl., 1995). Transgenic mammals according to the invention are, for example, transgenic rodents, such as rats, mice and hamsters, but also goats, cattle, pigs, sheep and other non-human mammals known to the person skilled in the art. Mice are very particularly preferred.

Noch ein wesentlicher Aspekt der Erfindung ist ein nicht menschlicher Säuger, dadurch gekennzeichnet, daß in seinem Genom eine erfindungsgemäße Nukleinsäure inaktiviert (Gen-Knock-out) ist. Hierunter wird ein nicht menschliches, sog. Knock-out Säugetier verstanden, in dessen Genom die einer erfindungsgemäßen, für OTRPC4 bzw. ein Fragment hiervon kodierende Nukleinsäuresequenz entsprechende endogene Nukleinsäuresequenz inaktiviert ist und in der kein oder nur geringe Mengen an OTRPC4-Polypeptid bzw. Fragment hiervon exprimiert werden. Geringe Mengen bedeutet, daß die Expression von OTRPC4-Polypeptid oder -Fragment um mindestens 50%, bevorzugt über 50 bis 80%, besonders bevorzugt über 80 bis 100% gegenüber vergleichbaren, nicht knock-out Säugern reduziert ist. Die Inaktivierung erfolgt oft durch Einklonierung einer Reportersequenz, beispielsweise des Gens für Neomycinresistenz. Dem Fachmann sind weitere knock-out Säugetiere bekannt, bei denen andere Sequenzen inaktiviert sind. Erfindungsgemäße knockout Säuger sind beispielsweise knock-out Nagetiere, wie Ratten, Mäuse und Hamster, aber auch Ziegen, Rinder, Schweine, Schafe sowie weitere dem Fachmann bekannte nicht menschliche Säuger. Ganz besonders bevorzugt sind Mäuse. Verfahren zur Herstellung eines erfindungsgemäßen Knock-out Säugers sind unten beschrieben. Die Konstruktion eines rekombinanten Vektors für einen konditioneilen Knock-out ist exemplarisch in Beispiel 1 beschrieben.Another essential aspect of the invention is a non-human mammal, characterized in that a nucleic acid according to the invention is inactivated (gene knock-out) in its genome. This is understood to mean a non-human, so-called knock-out mammal, in whose genome the endogenous nucleic acid sequence corresponding to an inventive nucleic acid sequence coding for OTRPC4 or a fragment thereof is inactivated and in which no or only small amounts of OTRPC4 polypeptide or fragment of which are expressed. Small amounts mean that the expression of OTRPC4 polypeptide or fragment is reduced by at least 50%, preferably more than 50 to 80%, particularly preferably more than 80 to 100% compared to comparable, non-knock-out mammals. The inactivation is often carried out by cloning a reporter sequence, for example the gene for neomycin resistance. Other knock-out mammals in which other sequences are inactivated are known to the person skilled in the art. Knockout mammals according to the invention are, for example, knock-out rodents, such as rats, mice and hamsters, however also goats, cattle, pigs, sheep and other non-human mammals known to those skilled in the art. Mice are very particularly preferred. Methods for producing a knock-out mammal according to the invention are described below. The construction of a recombinant vector for a conditional knock-out is described as an example in Example 1.

Noch ein wesentlicher Aspekt der Erfindung ist ein nicht menschlicher Säuger, dadurch gekennzeichnet, daß in seinem Genom eine erfindungsgemäße Nukleinsäure modifiziert (Gen-Knock-in) ist. Diese Modifikation kann mittels homologer Rekombination der kodierenden Nukleinsäure erfolgen und führt dazu, daß in diesem Säuger beispielsweise ein OTRPC4-Polypeptid bzw. Fragment hiervon mit veränderten Eigenschaften exprimiert wird. Dies kann z.B. durch eine Mutation in einem kleinen Teil der kodierenden Nukleinsäure erfolgen. Erfindungsgemäße knock-out Säuger sind beispielsweise Knock-in Nagetiere, wie Ratten, Mäuse und Hamster, aber auch Ziegen, Rinder, Schweine, Schafe sowie weitere dem Fachmann bekannte nicht menschliche Säuger. Ganz besonders bevorzugt sind Mäuse. Verfahren zur Herstellung eines erfindungsgemäßen Knock-in Säugers sind unten beschrieben.Another essential aspect of the invention is a non-human mammal, characterized in that a nucleic acid according to the invention is modified (gene knock-in) in its genome. This modification can be carried out by means of homologous recombination of the coding nucleic acid and has the result that, for example, an OTRPC4 polypeptide or fragment thereof is expressed in this mammal with modified properties. This can e.g. by mutation in a small part of the coding nucleic acid. Knock-out mammals according to the invention are, for example, knock-in rodents, such as rats, mice and hamsters, but also goats, cattle, pigs, sheep and other non-human mammals known to the person skilled in the art. Mice are very particularly preferred. Methods for producing a knock-in mammal according to the invention are described below.

Die erfindungsgemäßen nicht menschlichen transgenen bzw. knock-out bzw. knock-in Säuger eignen sich hervorragend, die Funktion des OTRPC4-Genes bzw. -Polypeptides zu analysieren. Hierbei können jeweils die erfindungsgemäßen Säuger mit Säugern derselben Spezies oder vorteilhafterweise desselben Wurfes („littermates") verglichen werden und dadurch die Funktion des erfindungsgemäßen Polypeptides untersucht werden. Ebenso von der Erfindung umfaßt sind Verfahren zur Herstellung eines nicht menschlichen Säugers, dadurch gekennzeichnet, daß a) embryonale Stammzellen des besagten nicht menschlichen Säugetiers mit einem Vektor transfiziert werden, der eine erfindungsgemäße Nukleinsäure sowie eineThe non-human transgenic or knock-out or knock-in mammals according to the invention are outstandingly suitable for analyzing the function of the OTRPC4 gene or polypeptide. In this case, the mammals according to the invention can each be compared with mammals of the same species or advantageously of the same litter (“littermates”) and the function of the polypeptide according to the invention can thereby be investigated. The invention also includes methods for producing a non-human mammal, characterized in that a ) embryonic stem cells of said non-human mammal are transfected with a vector which contains a nucleic acid according to the invention and a

Rekombination zwischen der genomischen DNA, des besagten nicht menschlichen Säugetieres und der im Vektor enthaltenen Nukleinsäure ermöglicht b) stabil transfizierte Stammzellen aus Schritt a) isoliert werden und diese in die Keimbahn eines weibliches Tieres des besagten nicht menschlichen Säugetieres überführt werden c) die Nachkommen des besagten weiblichen Tieres aus Schritt b) mit einem männlichen Tier derselben Art werden auf Tiere, die das durch die Nukleinsäure aus Schritt a) kodierte Polypeptid exprimieren, analysiert. Embryonale Stammzellen (ES) lassen sich durch Kultivierung der inneren Zellmasse von Blastozysten gewinnen und in Gewebekultur vermehren. Zum Zwecke der Erfindung wird die Differenzierung der Stammzellen verhindert, in dem man sie auf Nährzellen aus Fibroblasten kultiviert oder dem Kulturmedium Leukämie-inhibierenden-Faktor (LIF) zusetzt. Das Einschleußen von erfindungsgemäßer Nukleinsäure in ES Zellen, beispielsweise DNS kodierend für OTRPC4 oder ein Fragment hiervon wird beispielsweise mittels Transfektion, Retrovirusinfektion oder Elektroporation durchgeführt. Ein solcher Vektor trägt beispielsweise das Neomycin-Gen, das Resistenz gegenüber G418 verleiht. Damit können erfolgreich transfizierte embryonale Stammzellen identifiziert werden, indem dem Kulturmedium G418 zugesetzt wird. Nur erfolgreich transfizierte ES können unter diesen Bedingungen wachsen. Solche transfizierte ES werden beispielsweise in Blastozysten wieder überführt und diese werden in die Keimbahn eines weiblichen erfindungsgemäßen Säugers überführt. Die mutierten Zellen werden in den sich entwickelnden Embryo integriert und nehmen an der Entwicklung aller Gewebe teil. Hierdurch gelangt das erfindungsgemäße Transgen in die Keimbahn. Es bilden sich chimäre Tiere, die z.B. durch vorherige Auswahl von ES-Zellen und Empfängerblastozysten von Tieren unterschiedlicher Fellfarbe charakterisiert werden können. Durch mehrfache Züchtung der chimären Tiere erhält man homozygote Tiere, die das Transgen in jedem Gewebe exprimieren. Ein weiteres erfindungsgemäßes Verfahren zur Herstellung von nicht menschlichen transgenen Säugern umfaßt die Isolierung von befruchteten Eizellen, die Mikroinjektion von erfindungsgemäßer, für OTRPC4 oder ein Fragment hiervon kodierender Nukleinsäure, die Implantation besagter befruchteter Eizellen in die Keimbahn eines pseudoschwangeren, weibUchen Tieres besagten nicht menschlichen Säugers und die Untersuchung der Nachkommen besagten weiblichen Tieres mit einem männlichen Tier derselben Art auf Expression des Transgenes. Die durch Mikroinjektion eingebrachte Nukleinsäure, bevorzugt DNS, integriert sich oft an anderer Stelle als die vergleichbare endogene Nukleinsäure, wird meist jedoch genauso exprimiert. Besagte erfindungsgemäße Nukleinsäure kann in einer, aber auch in zahlreichen, d.h. 2 bis mehreren hundert oder tausenden Kopien in das Genom integriert sein. Details zu Verfahren zur Herstellung von transgenen, nicht-menschlichenRecombination between the genomic DNA, said non-human mammal and the nucleic acid contained in the vector enables b) stably transfected stem cells from step a) to be isolated and these are transferred into the germ line of a female animal of said non-human mammal c) the progeny of the said female animal from step b) with a male animal of the same type are analyzed for animals which express the polypeptide encoded by the nucleic acid from step a). Embryonic stem cells (ES) can be obtained by cultivating the inner cell mass of blastocysts and multiplied in tissue culture. For the purposes of the invention, the differentiation of the stem cells is prevented by culturing them on fibroblast nutrient cells or by adding leukemia inhibiting factor (LIF) to the culture medium. The nucleic acid according to the invention is introduced into ES cells, for example DNA coding for OTRPC4 or a fragment thereof, for example by means of transfection, retrovirus infection or electroporation. Such a vector carries, for example, the neomycin gene, which confers resistance to G418. Successfully transfected embryonic stem cells can be identified by adding G418 to the culture medium. Only successfully transfected ES can grow under these conditions. Such transfected ES are, for example, transferred back into blastocysts and these are transferred into the germ line of a female mammal according to the invention. The mutated cells are integrated into the developing embryo and take part in the development of all tissues. As a result, the transgene according to the invention enters the germline. Chimeric animals form which can be characterized, for example, by prior selection of ES cells and recipient blastocysts from animals of different coat colors. Multiple breeding of the chimeric animals gives homozygous animals that express the transgene in each tissue. Another method according to the invention for the production of non-human transgenic mammals comprises the isolation of fertilized egg cells, the microinjection of nucleic acid according to the invention coding for OTRPC4 or a fragment thereof, the implantation of said fertilized egg cells into the germ line of a pseudo-pregnant, female animal, said non-human mammal and the examination of the progeny of said female animal with a male animal of the same type for expression of the transgene. The nucleic acid introduced by microinjection, preferably DNA, often integrates at a different location than the comparable endogenous nucleic acid, but is usually expressed in the same way. Said nucleic acid according to the invention can be in the genome in one, but also in numerous, ie 2 to several hundred or thousands of copies be integrated. Details on processes for the production of transgenic, non-human

Säugern sind dem Fachmann bekannt (s.a. Schenkel, J., Spektrum Akad. Verl., 1995).Mammals are known to the person skilled in the art (see also Schenkel, J., Spektrum Akad. Verl., 1995).

Ebenso von der Erfindung umfaßt sind Verfahren zur Herstellung eines nicht menschlichenThe invention also includes methods for producing a non-human

Säugers, dadurch gekennzeichnet, daß s d) embryonale Stammzellen des besagten nicht menschlichen Säugetiers mit einemMammal, characterized in that s d) embryonic stem cells of said non-human mammal with a

Vektor transfiziert werden, der eine Nukleinsäure enthält, die an eine erfindungsgemäße Nukleinsäure unter stringenten Bedingungen hybridisieren kann, und durch Lnsertion einer zusätzlichen Nukleinsäuresequenz inaktiviert ist, sowie eine Rekombination zwischen der genomischen DNA des besagten nicht o menschlichen Säugetieres und der im Vektor enthaltenen Nukleinsäure ermöglicht e) stabil transfizierte Stammzellen aus Schritt d) isoliert werden und diese in die Keimbahn eines weiblichen Tieres des besagten nicht menschlichen Säugetieres überführt werden. f) die Nachkommen des besagten weiblichen Tieres aus Schritt e) mit einem s männlichen Tier derselben Art werden auf Tiere, die das durch die Nukleinsäure ausTransfected vector, which contains a nucleic acid that can hybridize to a nucleic acid according to the invention under stringent conditions, and is inactivated by inserting an additional nucleic acid sequence, and a recombination between the genomic DNA of said non-human mammal and the nucleic acid contained in the vector enables e ) Stably transfected stem cells from step d) are isolated and these are transferred into the germ line of a female animal of said non-human mammal. f) the offspring of the said female animal from step e) with a male animal of the same type are animals which are characterized by the nucleic acid

Schritt d) kodierte Polypeptid exprimieren, analysiert. Um einen erfindungsgemäßen Säuger herzustellen, bei dem das endogene Gen, das einer erfindungsgemäßen OTRPC4 Nukleinsäuresequenz entspricht oder eine solche umfaßt, durch sogenanntes knock-out inaktiviert ist, wird besagtes Gen durch homologe 0 Rekombination angesteuert und inaktiviert. Unter homologer Rekombination versteht der Fachmann Verfahren, die es ermöglichen, Nukleinsäure z.B. DNS gezielt in Gene einzubauen. Eine Monierte Kopie des endogenen Genes wird durch eine funktionslose Kopie ersetzt. Beispielsweise wird die eingeschleuste Kopie durch eine eingefügte Kopie eines oder mehrerer Antibiotikumresistenzgene(s) unterbrochen, was zur Inaktivierung s führt. Beispielsweise kann die Sequenz für das Zielgen durch das Neomycinresistenzgen unterbrochen sein. Beispielsweise durch Einbringen Herpes-simplex Virus Thymidinkinase (HSV-tk), z.B. am Ende des Konstruktes, können diejenigen Zellen identifiziert werden, bei denen homologe Rekombination stattgefunden hat. Im Rahmen der Erfindung wird eine in einen geeigneten Vektor klonierte, inaktivierte Kopie einer für OTRPC4 oder ein Fragment s hiervon kodierender Nukleinsäure in embryonale Stammzellen (wie oben beschrieben) mit einer geeigneten Methode, d.h. durch Transfektion, Retrovirusinfektion oder Elektroporation in die ES eingeschleust. Die eingeschleuste Nukleinsäure geht in einem Teil der ES mit der entsprechenden zellulären Kopie des OTRPC4 Genes eine homologe Rekombination ein und ersetzt das Gen durch die erfindungsgemäße, eingeführte Nukleinsäure. Beispielsweise können mittels des Antibiotikums G418 und der antiviralen Substanz Ganciclovir diejenigen ES identifiziert werden, bei denen homologe Rekombination stattgefunden hat. ES, bei denen homologe Rekombination erfolgt ist, werden in eine Blastozyste injiziert, die in den Uterus eines weiblichen nicht menschlichen Säugers der selben Art wie der ES eingesetzt. Es bilden sich chimäre Tiere, die z.B. durch vorherige Auswahl von ES-Zellen und Empfängerblastozysten von Tieren unterschiedlicher Fellfarbe charakterisiert werden können. Durch mehrfache Züchtung der chimären Tiere erhält man homozygote Tiere, bei denen das Zielgen vollständig in jedem Gewebe inaktiviert ist.Step d) express the encoded polypeptide, analyzed. In order to produce a mammal according to the invention in which the endogenous gene which corresponds to or comprises an OTRPC4 nucleic acid sequence according to the invention is inactivated by so-called knock-out, said gene is activated and inactivated by homologous recombination. A person skilled in the art understands homologous recombination to be methods which make it possible to specifically incorporate nucleic acid, for example DNA, into genes. A criticized copy of the endogenous gene is replaced by a non-functional copy. For example, the inserted copy is interrupted by an inserted copy of one or more antibiotic resistance genes, which leads to inactivation. For example, the sequence for the target gene can be interrupted by the neomycin resistance gene. For example, by introducing herpes simplex virus thymidine kinase (HSV-tk), for example at the end of the construct, those cells can be identified in which homologous recombination has taken place. In the context of the invention, an inactivated copy of a nucleic acid coding for OTRPC4 or a fragment s thereof, cloned into a suitable vector, is introduced into embryonic stem cells (as described above) using a suitable method, ie by transfection, retrovirus infection or electroporation. The introduced nucleic acid goes in one part the ES with the corresponding cellular copy of the OTRPC4 gene a homologous recombination and replaces the gene with the introduced nucleic acid according to the invention. For example, those ES in which homologous recombination has taken place can be identified by means of the antibiotic G418 and the antiviral substance ganciclovir. ES, in which homologous recombination has occurred, are injected into a blastocyst, which is inserted into the uterus of a female non-human mammal of the same type as the ES. Chimeric animals form which can be characterized, for example, by prior selection of ES cells and recipient blastocysts from animals of different coat colors. Multiple breeding of the chimeric animals gives homozygous animals in which the target gene is completely inactivated in each tissue.

Ebenso von der Erfindung umfaßt sind Verfahren zur Herstellung eines nicht menschlichen Säugers, dadurch gekennzeichnet, daß g) embryonale Stammzellen des besagten nicht menschlichen Säugetiers mit einem Vektor transfiziert werden, der eine Nukleinsäure enthält, die an eine erfindungsgemäße Nukleinsäure unter stringenten Bedingungen hybridisieren kann, und durch Insertion einer zusätzlichen Nukleinsäuresequenz modifiziert ist, sowie eine Rekombination zwischen der genomischen DNA des besagten nicht menschlichen Säugetieres und der im Vektor enthaltenen Nukleinsäure ermöglicht h) stabil transfizierte Stammzellen aus Schritt g) isoliert werden und diese in die Keimbahn ein weibliches Tier des besagten nicht menschlichen Säugetieres überführt werden i) die Nachkommen des besagten weiblichen Tieres aus Schritt h) mit einem männlichen Tier derselben Art werden auf Tiere, die das durch die Nukleinsäure aus Schritt g) kodierte Polypeptid exprimieren, analysiert. Das Verfahren zur Herstellung von Knock-in Tieren wird in Anlehnung an das Verfahren zur Herstellung von Knock-out Tieren durchgeführt mit dem Unterschied, daß das Zielgen nicht inaktiviert, sondern modifiziert wird.The invention also encompasses methods for producing a non-human mammal, characterized in that g) embryonic stem cells of said non-human mammal are transfected with a vector which contains a nucleic acid which can hybridize to a nucleic acid according to the invention under stringent conditions, and is modified by insertion of an additional nucleic acid sequence, and a recombination between the genomic DNA of said non-human mammal and the nucleic acid contained in the vector enables h) stably transfected stem cells from step g) to be isolated and into the germ line a female animal of said non-human Mammals are transferred i) the offspring of the said female animal from step h) with a male animal of the same type are analyzed for animals which express the polypeptide encoded by the nucleic acid from step g). The method for producing knock-out animals is carried out in a manner similar to the method for producing knock-out animals, with the difference that the target gene is not inactivated but modified.

Das folgende Beispiel soll dem Verständnis der Erfindung dienen und in keiner Weise als limitierend für die Breite der Erfindung angesehen werden.The following example is intended to help understand the invention and should in no way be considered to limit the breadth of the invention.

Beispiel 1 Struktur eines OTRPC4-Kanalsexample 1 Structure of an OTRPC4 channel

Im nachfolgenden Beispiel wird exemplarisch die Klonierung und Struktur eines erfindungsgemäßen OTRPC4-Polypeptides bzw. OTRPC4-Kationenkanals beschrieben. Die s Beschreibung bzw. Verwendung des Begriffes OTRPC4-DNA, -RNA, Protein oder -Kanal soll in keiner Weise limitierend für die Breite der Erfindung gesehen werden, sondern nur dazu dienen, die Erfindung näher zu illustrieren. Weitere OTRPC4-DNA, -RNA, -Proteine oder -Kanäle sind in der Beschreibung dargestellt.In the example below, the cloning and structure of an OTRPC4 polypeptide or OTRPC4 cation channel according to the invention is described as an example. The description and use of the term OTRPC4-DNA, RNA, protein or channel should in no way be seen as limiting the breadth of the invention, but only serve to illustrate the invention in more detail. Additional OTRPC4 DNA, RNA, proteins or channels are shown in the description.

o Die mRNA-Expression wurde durch Northern-Blot-Hybridisierungen mit EST-Fragmenten (Englisch EST = „expressed sequence tag") AA139413 und W53556 untersucht, (hinterlegt in der Genebank). Ein RNA-Trankript einer Länge von 3,3 kb vor allem in Leber, Herz, Niere und Testis exprimiert wird, wurde identifiziert (Abbildung lb). Aus der aus der Niere einer Maus aufgereinigten RNA wurde mit Hilfe der RACE-PCR-Methode eine cDNA s kloniert mit einer Länge von 3277 bp, die einen offenen Leserahmen von 2616 bp enthält (siehe erfindungsgemäße Sequenzen, supra und Ansprüche 19 und 20). Die genomische Organisation der murine Sequenz von OTRPC4 wurde durch Sequenzierung der Intron- Exon-Übergänge geklärt und ist beispielhaft in Abbildung 2 dargestellt. In situ Hybridisierungen mit einem Fragment aus dem kodierenden Bereich der OTRPC4-DNA 0 zeigten eine hohe Expression der OTRPC4-RNA im distalen Konvolut der Niere, aber auch Plexus choreoideus in den Hirnventrikeln (Abbildung 3).o The mRNA expression was examined by Northern blot hybridizations with EST fragments (English EST = “expressed sequence tag”) AA139413 and W53556, (deposited in the gene bank). An RNA transcript of a length of 3.3 kb was provided everything expressed in the liver, heart, kidney and testis was identified (Figure 1b). From the RNA purified from the kidney of a mouse, a cDNA s with a length of 3277 bp was cloned using the RACE-PCR method contains an open reading frame of 2616 bp (see sequences according to the invention, supra and claims 19 and 20.) The genomic organization of the murine sequence of OTRPC4 was clarified by sequencing of the intron-exon transitions and is shown by way of example in Figure 2. In situ hybridizations with a Fragments from the coding region of the OTRPC4-DNA 0 showed a high expression of the OTRPC4-RNA in the distal bundle of the kidney, but also plexus choreoid in the brain ventricles (Figure 3).

Die cDNA von OTRPC4 wurde in ein eukaryotisches Expressionsplasmid kloniert, das C- terminal ein GFP-Fusionsanteil (GFP="green fluoreszent protein" grün fluoreszierendes Protein) enthielt (pEGFP-Nl). Dieses Plasmid wurde für die nachfolgenden s Expressionsstudien verwendet. Von der Nukleotidsequenz kann abgeleitet werden, daß das OTRPC4-Protein beispielsweise aus 871 Aminosäuren bestehen kann und sechs mögliche transmembranäre Segmente enthält mit einer Sequenz, zwischen Segment 5 und 6, die möglicherweise für eine Porenregion eines Kanals kodiert (Abbildung la).The cDNA of OTRPC4 was cloned into a eukaryotic expression plasmid which contained a GFP fusion component (GFP = “green fluorescent protein” (fluorescent protein) (pEGFP-NI)) at the C-terminal. This plasmid was used for the following expression studies. From the nucleotide sequence it can be deduced that the OTRPC4 protein can consist, for example, of 871 amino acids and contains six possible transmembrane segments with a sequence, between segments 5 and 6, which may code for a pore region of a channel (Figure la).

30 Die Erfindung betrifft in einem weiteren Aspekt einen humanen OTRPC4 mit der Aminosäuresequenz: MADSSEGPRAGPGEVAELPGDESGTPGGEAFPLSSLANLFEGEDGSLSPSPADASRPIn a further aspect, the invention relates to a human OTRPC4 with the amino acid sequence: MADSSEGPRAGPGEVAELPGDESGTPGGEAFPLSSLANLFEGEDGSLSPSPADASRP

AGPGDGRPNLRMKFQGAFRKGWNPMLLESTLYESSV GPKKAPMDSLFDYGTAGPGDGRPNLRMKFQGAFRKGWNPMLLESTLYESSV GPKKAPMDSLFDYGT

YRHHSSDNKRWRKKIFFIKQPQSPKAPAPQPPPILKVFNRPILFDINSRGSTADLDGLLYRHHSSDNKRWRKKIFFIKQPQSPKAPAPQPPPILKVFNRPILFDINSRGSTADLDGLL

PFLLTHKKRLTDEEFREPSTGKTCLPKALLNLSNGRNDTIPVLLDIAERTGNMREFΓNPFLLTHKKRLTDEEFREPSTGKTCLPKALLNLSNGRNDTIPVLLDIAERTGNMREFΓN

SPFRDIYNΠRGQTALFFLAMRRCKHYVELLVAQGADVHAQARGRFFQPKDEGGYFYFSPFRDIYNΠRGQTALFFLAMRRCKHYVELLVAQGADVHAQARGRFFQPKDEGGYFYF

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KTVTKMYDLLLLKCARLFPDSΝLEAVLΝΝDGLSPLMMAAKTGKIGIFQHIIRREVTKTVTKMYDLLLLKCARLFPDSΝLEAVLΝΝDGLSPLMMAAKTGKIGIFQHIIRREVT

DEDTRHLSRKFKDWAYGPVYSSLYDLSSLDTCGEEASVLEILVYΝSKIEΝRHEMLADEDTRHLSRKFKDWAYGPVYSSLYDLSSLDTCGEEASVLEILVYΝSKIEΝRHEMLA

VEPIΝELLRDKWRKFGAVSFYIΝVVSYLCAMVIFTLTAYYQPLEGTPPYPYRTTVDVEPIΝELLRDKWRKFGAVSFYIΝVVSYLCAMVIFTLTAYYQPLEGTPPYPYRTTVD

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Nach transienter Transfektion (die mit Hilfe des FuGENE 6 Transfektionsreagenz durchgeführt wurde) des Expressionplasmids kodierend für das OTRPC4-GFP-After transient transfection (which was carried out using the FuGENE 6 transfection reagent) of the expression plasmid coding for the OTRPC4-GFP-

Fusionprotein in HEK293 -Zellen konnte 24-36 Stunden später eine gepunktete Fluoreszenz in der Plasmamembran festgestellt werden. Damit konnte der Nachweis erbracht werden, daß das GFP-Fusionsprotein und damit das OTRPC4-Kanal-Protein exprimiert wird und in die Plasmamembran eingebaut wird. Für die nachfolgenden Experimenten wurden HEK293 -Zeilen mit dem oben genanntenFusion protein in HEK293 cells 24-36 hours later showed a dotted fluorescence in the plasma membrane. It was thus possible to demonstrate that the GFP fusion protein and thus the OTRPC4 channel protein is expressed and incorporated into the plasma membrane. For the following experiments, HEK293 lines with the above mentioned

OTRPC4-enthaltenden Expressionsplasmid transient transfiziert und 24-36 Stunden später zu nicht transfizierten Kontrollzellen verglichen.Expression plasmid containing OTRPC4 was transiently transfected and compared to non-transfected control cells 24-36 hours later.

Northern-Blots zum Nachweis von OTRPC4 RNA in humanen Geweben Mit einem Sondenmix, basierend auf einem partiellen Klon, der aus einer humanen Speicheldrüsen cDNA-Bank isoliert worden war, wurde ein kommerzieller Northern-Blot der Firma Clontech hybridisiert. Das Sondengemisch bestand aus drei Fragmenten, die durch Restriktion des Klons mit Stu I gewonnen worden waren. Die Fragmente waren 496 bp, 556 bp und 698 bp lang und entsprechen den drei 3 'Stu I -Fragmenten der humanen DNS des OTRPC4.Northern blots for the detection of OTRPC4 RNA in human tissues A commercial Northern blot from Clontech was hybridized with a probe mix based on a partial clone that had been isolated from a human salivary cDNA bank. The probe mix consisted of three fragments, the by restriction of the clone with Stu I. The fragments were 496 bp, 556 bp and 698 bp long and correspond to the three 3 'Stu I fragments of the human DNA of OTRPC4.

Unter den verwendeten Bedingungen, konnte auf dem Filter mit RNAs aus zwölf humanen Geweben ein Signal in der Niere gezeigt werden. Es wurden zusätzlich Filter (Clontech) mit RNA aus cardiovaskulären Geweben, aus Geweben des Verdauungssystems . und aus Geweben des endokrinen System hybridisiert. Auf diesen Northern Blots zeigte sich kein eindeutiges Signal.Under the conditions used, a signal in the kidney could be shown on the filter with RNAs from twelve human tissues. There were also filters (Clontech) with RNA from cardiovascular tissues, from tissues of the digestive system. and hybridized from tissues of the endocrine system. No clear signal was shown on these Northern blots.

Erhöhung der intrazellulären Kalzium-Konzentration in HEK293-Zellen, die den OTRPC4-Kanal exprimierenIncrease in intracellular calcium concentration in HEK293 cells that express the OTRPC4 channel

Um die Funktion des OTRPC4-Kanales zu studieren wurden HEK293 -Zellen transient mit Expressionsplasmid, das das OTRPC4-GFP-Fusion Konstrukt enthielt, transfiziert und anschließend die Konzentration der intrazellulären Kalziumkonzentration ([Ca2+]i) mit Hilfe der FURA-2-Methode unter Verwendung eines monochromatischen Einzelzellkalziummessplatzes gemessen (Abbildung 4). Die basale [Ca2+]j in OTRPC4- exprimierenden Zellen war im Vergleich zu den Kontrollzellen signifikant erhöht (94+11 nM; 50 Zellen gemessen in drei unabhängigen Experimenten versus 41±3 nM; 63 Zellen gemessen in drei unabhängigen Experimenten). Um nachzuweisen, daß die Erhöhung der [Ca2+Ji durch einen Einstrom von extrazellulären Kalzium bedingt ist, wurden sog. Mangan-Quench-Experimente durchgeführt, die ergaben, daß das FURA-2-Signal durch Zugabe von 200 nM Mangan zur extrazellulären Lösung gehemmt wurde. Zusätzlich führte das Weglassen des Kalziums aus der extrazellulären Lösung eine Hemmung des basal erhöhten FURA-2-Signals (siehe Abbildung 4). Beide Ergebnisse zeigen, daß es sich bei OTRPC4 um einen Kalzium-durchlässigen Kationenkanal der Membran handelt.To study the function of the OTRPC4 channel, HEK293 cells were transiently transfected with expression plasmid containing the OTRPC4-GFP fusion construct and then the concentration of the intracellular calcium concentration ([Ca 2+ ] i) using the FURA-2 Method measured using a monochromatic single cell calcium measuring station (Figure 4). The basal [Ca 2+ ] j in OTRPC4-expressing cells was significantly increased compared to the control cells (94 + 11 nM; 50 cells measured in three independent experiments versus 41 ± 3 nM; 63 cells measured in three independent experiments). To prove that the increase in [Ca 2+ Ji is due to an influx of extracellular calcium, so-called manganese quench experiments were carried out, which revealed that the FURA-2 signal was obtained by adding 200 nM manganese to the extracellular solution was inhibited. In addition, the omission of calcium from the extracellular solution led to an inhibition of the basally increased FURA-2 signal (see Figure 4). Both results show that OTRPC4 is a calcium-permeable cation channel of the membrane.

Messung der OTRPC4 vermittelten Änderung der intrazellulären Kalzium- Konzentration in HEK293 Zellen, die den OTRPC4 Kanal exprimieren Um die Funktion der mit dem OTRPC4 transfizierten HEK293 Zellen mit einer weiteren Methode zu testen, wurde die intrazelluläre Ca2+ -Konzentration mit FURA-2 gemessen. Die Experimente wurden auf einem Luminescence Spectrometer LS 50 B (Perkin Eimer) durchgeführt.Measurement of the OTRPC4 mediated change in the intracellular calcium concentration in HEK293 cells which express the OTRPC4 channel. In order to test the function of the HEK293 cells transfected with the OTRPC4 using another method, the intracellular Ca 2+ concentration was measured with FURA-2. The experiments were carried out on a Luminescence Spectrometer LS 50 B (Perkin Elmer).

Um das Ausmaß des Kalziumeinstroms in die Zellen zu testen, wurde die maximale intrazelluläre Ca2+ -Konzentration mit Ionomycin hervorgerufen. Diese [Ca2+]ι konnte mit EGTA wieder auf den Ausgangswert gebracht werden. Als Nachweis für den Einstrom von extrazellulärem Kalzium über den OTRPC4 wurde die Änderung der intrazellulären Ca2+ - Konzentration durch Erniedrigung der Osmolarität um 100 mosmol/1 (von 320 mosmol/1 auf 220 mosmol/1) gezeigt. Durch die hypotone Lösung ergab sich eine Erhöhung der [Ca2+]i, die durch EGTA gequencht werden konnte. Nach Gabe von LOE908 (Embaco A, Romanin C, Birke FW, Kukovetz WR, Groschner K : Inhibition of a store-operated Ca2+ entry pathway in human endothelial cells by the isoquinoline derivative LOE 908. British Journal ofPharmacology(1996) 119 702-706) (100 μM) konnte die Erhöhung der [Ca2+]i durch hypotone Lösung zur Hälfte blockiert werden (Abbildung 9). Das Ergebnis zeigt, daß es sich bei dem OTRPC 4 um einen Kationenkanal handelt und LOE908 den OTRPC4 blockiert.In order to test the extent of calcium influx into the cells, the maximum intracellular Ca 2+ concentration was induced with ionomycin. This [Ca 2+ ] ι could be brought back to the initial value with EGTA. As evidence of the influx of extracellular calcium via the OTRPC4, the change in the intracellular Ca 2+ concentration was shown by lowering the osmolarity by 100 mosmol / 1 (from 320 mosmol / 1 to 220 mosmol / 1). The hypotonic solution resulted in an increase in [Ca 2+ ] i, which could be quenched by EGTA. After administration of LOE908 (Embaco A, Romanin C, Birke FW, Kukovetz WR, Groschner K: Inhibition of a store-operated Ca2 + entry pathway in human endothelial cells by the isoquinoline derivative LOE 908. British Journal of Pharmacology (1996) 119 702-706 ) (100 μM) half of the [Ca 2+ ] i increase could be blocked by hypotonic solution (Figure 9). The result shows that the OTRPC 4 is a cation channel and LOE908 blocks the OTRPC4.

OTRPC4 als Regulator der Osmolarität körpereigener FlüssigkeitenOTRPC4 as a regulator of the osmolarity of the body's own liquids

Die vorstehend beschriebenen Experimente zeigen, dass OTRPC4 die Osmolarität körpereigener Flüssigkeiten regulieren kann, die durch Sekretion gebildet werden, wie zum Besipiel Liquor im Gehirn, das Kammerwasser des Auges (und damit auch den Augeninnendruck), der Speichel der Speicheldrüsen etc.. Bei Abweichungen wie zum Beispiel Hypoosmolarität werden dabei mit einem Calciumeinstrom gegenregulierende Prozesse eingeleitet.The experiments described above show that OTRPC4 can regulate the osmolarity of the body's own fluids, which are formed by secretion, such as cerebrospinal fluid, the aqueous humor of the eye (and thus the intraocular pressure), the saliva of the salivary glands, etc. In the event of deviations such as For example, hypoosmolarity is initiated with a calcium influx counter-regulating processes.

Die vorliegende Erfindung betrifft daher auch die Verwendung von Modulatoren von OTRPC4 bzw. der biologischen Aktivität von OTRPC4, insbesondere Inhibitoren oder Aktivatoren, zur Regulierung der Osmolarität körpereigener Flüssigkeiten, insbesondere Liquor des Gehirns, Kammerwasser des Auges, und/oder Speichel. Die vorliegende Erfindung betrifft ferner pharmazeutische Zusammensetzungen, die Modulatoren, Inhibitoren, und/oder Aktivatoren von OTRPC4 enthalten, sowie die Verwendung von Modulatoren, Inhibitoren, und/oder Aktivatoren von OTRPC4 zur Herstellung pharmazeutischer Zusammensetzungen zur prophylaktischen oder therapeutischen Regulierung der Osmolarität körpereigener Flüssigkeiten, die durch Sekretion gebildet werden, insbesondere Liquor des Gehirns, Kammerwasser des Auges, und/oder Speichel, bei Erkrankungen oder gesundheitlichen Zuständen, bei denen dies notwendig ist.The present invention therefore also relates to the use of modulators of OTRPC4 or the biological activity of OTRPC4, in particular inhibitors or activators, for regulating the osmolarity of the body's own liquids, in particular cerebrospinal fluid, aqueous humor in the eye, and / or saliva. The present invention further relates to pharmaceutical compositions which contain modulators, inhibitors and / or activators of OTRPC4, and the use of modulators, inhibitors and / or activators of OTRPC4 for the production of pharmaceutical compositions for prophylactic or therapeutic Regulation of the osmolarity of the body's own fluids, which are formed by secretion, in particular cerebrospinal fluid, aqueous humor in the eye, and / or saliva, for diseases or health conditions where this is necessary.

Die OTRPC4-vermitteIte Änderung der intrazellulären Kalziumkonzentration ist abhängig von der Osmolarität der extrazellulären LösungThe OTRPC4-mediated change in the intracellular calcium concentration depends on the osmolarity of the extracellular solution

Der Einfluß der extrazellulären Osmolarität auf die Kanalaktivität von OTRPC4 wurde untersucht. Nach Verringerung der Osmolarität der extrazellulären Lösung konnte eine langer, transienter und reversibler Anstieg der [Ca2+]j in den OTRPC4 exprimierenden, aber nicht in den Kontrollzellen beobachtet werden (Abbildung 5). Erhöhung der Osmolarität der extrazeliulären Lösung hingegen verminderte [Ca2+]j (siehe kleine Abbildung in Abbildung 4). Eine signifikante Änderung der [Ca2+]i wurde bereits bei einer Änderung der Osmolarität der extrazellulären Lösung um 30 mosmol/1 beobachtet. Die Änderungen der [Ca2+]j, ausgelöst durch Veränderung der Osmolarität der extrazellulären Lösung, erfolgte schnell und erreichte ihr Maximum nach ca. 30 Sekunden, variierten allerdings von Zelle zu Zelle (siehe Abbildung 4). Nach Rückkehr zu normoosmolaren Lösung kehrte [Ca2+]j schnell wieder zu dem Basalwert zurück. Um zwischen einem Einstrom von Kalzium aus dem extrazellulären Medium und einer Freisetzung von Kalzium aus intrazellulären Kalziumspeicher zu unterscheiden, wurde im extrazellulären Medium Kalzium durch EGTA ersetzt, während die Zellen einem hypotonen Medium ausgesetzt wurden. Unter diesen Bedingungen kehrte das FURA-2 Signal auf den Basalwert zurück (siehe Abbildung 4). Wurden die intrazellulären Speicher durch vorherige Zugabe von Thapsigargin (5 μM), einem Hemmer der Kalzium-ATPase des endoplasmatischen Retikulums, (23) entleert, änderte dies nicht an der Amplitude des FURA-2 Signals, ausgelöst durch hypotones Medium.The influence of extracellular osmolarity on the channel activity of OTRPC4 was examined. After reducing the osmolarity of the extracellular solution, a long, transient and reversible increase in [Ca 2+ ] j was observed in the OTRPC4-expressing cells, but not in the control cells (Figure 5). In contrast, increasing the osmolarity of the extracellular solution decreased [Ca 2+ ] j (see small figure in Figure 4). A significant change in [Ca 2+ ] i was already observed when the osmolarity of the extracellular solution was changed by 30 mosmol / 1. The changes in [Ca 2+ ] j, triggered by changes in the osmolarity of the extracellular solution, were rapid and reached their maximum after approx. 30 seconds, but varied from cell to cell (see Figure 4). After returning to normoosmolar solution, [Ca 2+ ] j quickly returned to basal. To distinguish between an influx of calcium from the extracellular medium and a release of calcium from intracellular calcium storage, calcium was replaced by EGTA in the extracellular medium while the cells were exposed to a hypotonic medium. Under these conditions, the FURA-2 signal returned to basal (see Figure 4). If the intracellular stores were emptied by adding thapsigargin (5 μM), an inhibitor of calcium ATPase of the endoplasmic reticulum, (23), this did not change the amplitude of the FURA-2 signal, triggered by hypotonic medium.

Diese beiden Ergebnisse belegen, daß in den OTRPC4-exprimierenden Zellen ein Kanal in der Membran exprimiert wird, der für einen osmotisch regulierten Einstrom von Kalzium aus dem extrazellulären Medium verantwortlich ist. Von den beiden Lanthaniden Gd?+ und La3+, die die meisten kalziumpermeablen Kationenkanäle blockieren (siehe Ref. 11, 14, 24- 26), hemmte LaCl3 bei einer Konzentration von 100 μM den durch Hypoosmolarität ausgelösten Kalziumeinstrom in OTRPC4-exprimierenden Zellen zu etwa 50%. Die Mitglieder der STRPC-Subfamilie der TRPC-Kanäle werden durch Signale aktiviert, die bedingt durch die Aktivierung der Phospholipase C-ß (PLC-ß) entstehen (6-15). Die Aktivierung der endogen exprimieren muskarinergen Rezeptoren und damit Aktivierung der PLC-ß in OTRPC4-exprimierenden Zellen zeigte keinen Effekt auf den Kalziumeinstrom in s diesen Zellen.These two results demonstrate that in the OTRPC4-expressing cells a channel is expressed in the membrane, which is responsible for an osmotically regulated influx of calcium from the extracellular medium. Of the two lanthanides Gd? + and La 3+ , which block most calcium-permeable cation channels (see Ref. 11, 14, 24-26), at a concentration of 100 μM, LaCl 3 inhibited the calcium influx induced by hypoosmolarity in OTRPC4-expressing cells by approximately 50%. The members of the STRPC subfamily of the TRPC channels are activated by signals that result from the activation of the phospholipase C-ß (PLC-ß) (6-15). Activation of the endogenously expressing muscarinic receptors and thus activation of PLC-ß in OTRPC4-expressing cells had no effect on the calcium influx in these cells.

Die Zugabe von Capsaicin (10 μM) und Resiniferatoxin (10 μM), wie auch die kurzfristige Erhöhung der Temperatur auf 65°C hatten keinen Effekt auf Zellen, die OTRPC4 exprimierten.The addition of capsaicin (10 μM) and resiniferatoxin (10 μM), as well as the short-term increase in temperature to 65 ° C had no effect on cells that expressed OTRPC4.

o Elektrophysiologische Charakterisierung von OTRPC4o Electrophysiological characterization of OTRPC4

Parallel zu der Erhöhung der basalen [Ca2+]j zeigten Zellen, die OTRPC4 exprimierten, (detektiert durch Fluoreszenz des GFP-Fusionanteils), einen basalen Ionenstrom gemessen im der sog. Ganzzellkonfiguration. Aufgrund des schnellen „run-down" der Ionenströme wurden die weiteren Experimente mit der sog. „perforated patch"-Methode durchgeführt. s Gemessen in Standard-extrazellülärer Lösung zeigte die Strom-Spannungskurve, gemessen durch das Anlegen von Spannungsrampen, eine auswärts rektifizierende Form mit einem Umkehrpotential von ca. 0 mV (Abbildung 6). Wurde aus der extrazellulären Lösung die Na+- und Ca2+-Ionen entfernt, verschwand der Einwärtsstrom und das Umkehrpotential verschob sich in den negativen Bereich. Die durchschnittüchen Ionenströme bei -100 bzw. 0 +100 mV gemessen mit Hilfe von Rampenprotokollen lagen bei -12,8+1,1 bzw. +32,2±2,7 pA/pF (n=17, Cm=9, 6+5,5 pF). Diese Werte unterschieden sich deutlich von den Werten, die in den Kontrollzellen unter gleichen Bedingungen gemessen wurden; die Kontrollzellen zeigten nur geringe Ionenströme (-2,6±0,7 und +3,9+0,9 pA/pF, n=5, Cm=13,4+1,5 pF) mit einer nicht-linearen Strom-Spannungs-Kurve und einem Er von -16+2,1 mV. s Der Austausch der extrazellulären Standart-Lösung gegen eine Lösung, die 100 mM NaCl und 100 mM Mannitol enthielt (Osmolarität: 320 mosmol/1) verschob Er zu einem negativeren Potential (-11,2+1,6 mV, n=14), wie es von einem durch Kationen getragenen Strom bei der Reduktion der extrazellulären Natriumkonzentration zu erwarten wäre (siehe Abbildung 6). Desweiteren wurden die einwärts- als auch die auswärts gerichteteIn parallel to the increase in basal [Ca 2+ ] j, cells expressing OTRPC4 (detected by fluorescence of the GFP fusion part) showed a basal ion current measured in the so-called whole cell configuration. Because of the rapid "run-down" of the ion currents, the further experiments were carried out using the "perforated patch" method. s Measured in standard extracellular solution, the current-voltage curve, measured by the application of voltage ramps, showed an outward rectifying form with a reversal potential of approx. 0 mV (Figure 6). If the Na + and Ca 2+ ions were removed from the extracellular solution, the inward current disappeared and the reversal potential shifted into the negative region. The average ion currents at -100 and 0 +100 mV measured using ramp protocols were -12.8 + 1.1 and + 32.2 ± 2.7 pA / pF (n = 17, C m = 9, 6 + 5.5 pF). These values differed significantly from the values measured in the control cells under the same conditions; the control cells showed only low ion currents (-2.6 ± 0.7 and + 3.9 + 0.9 pA / pF, n = 5, C m = 13.4 + 1.5 pF) with a non-linear current Voltage curve and an E r of -16 + 2.1 mV. s Replacing the standard extracellular solution with a solution containing 100 mM NaCl and 100 mM mannitol (osmolarity: 320 mosmol / 1) shifted E r to a more negative potential (-11.2 + 1.6 mV, n = 14 ), as would be expected from a current carried by cations when reducing the extracellular sodium concentration (see Figure 6). Furthermore, the inward as well as the outward were

30 Stromkomponente reduziert (-7,0±0,8 und 22,7±2,7 pA/pF bei -100 bzw. +100 mV) (siehe Abbildung 6). Die Applikation eine hypoosmolaren Lösung (215 mosmol/1) führte mit einer Verzögerung von wenigen Sekunden (ca. 18 Sekunden im Mittel) zu einer Erhöhung des einwärts, wie auch des auswärts gerichteten Stroms (Abbildung 7). Das Maximum dieser Erhöhung wurde im Mittel nach 50 Sekunden eπeicht. Die maximalen Stromdichten des einwärts bzw. auswärts gerichteten Stroms betrugen -16,9+1,4 bzw. 66,0±6,1 pA/pF (n=13). Die Strom-Spannungs-Kurve des durch hypoosmolare Lösung aktivierten Stroms hatte die gleiche Form wie die des spontanen Stromes in OTRPC4 exprimierenden Zellen, allerdings war das Umkehrpotential zu stärker positivem Potential verschoben (-5,6+0,7 mV). Die Entfernung von Natrium- und Kalziumionen aus der extrazellulären Lösung führte zu einem kompletten aber reversiblen Block des Einwärtsstromes und reduzierte die auswärts gerichtete Stromkomponenten (siehe Abbildung 7). Nach Austausch der hypotonen Lösung durch Lösung mit 320 mosmol/1 wurden wieder niedrige Stomflüsse gemessen, vergleichbar zu den Ausgangswerten vor Zugabe der hypotonen Lösung. In den Kontrollzellen löste die Zugaben von hypotoner extrazellulärer Lösung einen Stromfluß aus, der die Eigenschaften von Chlorid-Kanälen aufwies, die durch Volumenänderung aktiviert werden (27). Die Aktivierung dieser Stöme konnte durch die Zugabe des Chloridkanal- Blockers NPPB (50 μM) vollständig gehemmt werden, während die durch hypotone Lösung ausgelösten Kationenstöme in OTRPC4 exprimierenden Zellen durch diesen Blocker nicht beeinflußt wurden.30 current components reduced (-7.0 ± 0.8 and 22.7 ± 2.7 pA / pF at -100 or +100 mV) (see Figure 6). The application of a hypoosmolar solution (215 mosmol / 1) led to an increase in the delay with a delay of a few seconds (approx. 18 seconds on average) inward, as well as the outward current (Figure 7). The maximum of this increase was calibrated after 50 seconds on average. The maximum current densities of the inward and outward current were -16.9 + 1.4 and 66.0 ± 6.1 pA / pF (n = 13). The current-voltage curve of the current activated by hypoosmolar solution had the same shape as that of the spontaneous current in cells expressing OTRPC4, but the reversal potential was shifted to a more positive potential (-5.6 + 0.7 mV). Removal of sodium and calcium ions from the extracellular solution resulted in a complete but reversible block of the inward flow and reduced the outward flow components (see Figure 7). After replacing the hypotonic solution with a solution containing 320 mosmol / 1, low current flows were measured again, comparable to the initial values before the hypotonic solution was added. In the control cells, the addition of hypotonic extracellular solution triggered a current flow that showed the properties of chloride channels that are activated by volume changes (27). The activation of these strains could be completely inhibited by the addition of the chloride channel blocker NPPB (50 μM), while the cation streams triggered by hypotonic solution in cells expressing OTRPC4 were not influenced by this blocker.

Um die Ionenselektivität von OTRPC4 zu bestimmen, wurde die hypotone Lösung, die zur Auslösung der Ströme verwendet wurde, durch hypotone Lösungen ersetzt, die entweder nur Natrium oder nur 20 mM Kalzium als Kationen enthielten. Die gemessenen Umkehrpotentiale betrugen für eine Lösung, die nur 100 mM Natrium enthielt, -14,5+8,8 mV (n=5) und für eine Lösung, die nur 20 mM Kalzium enthielt, +5,7±1,4 mV (n=5). Von diesen Werten konnte ein Verhältnis der Ionenpermeabilität von 6,3±0,5 für Pca^Na un<* 0,8+0,3 für PNa^Ca bestimmt werden.To determine the ion selectivity of OTRPC4, the hypotonic solution used to initiate the currents was replaced with hypotonic solutions containing either only sodium or only 20 mM calcium as cations. The reversal potentials measured were -14.5 + 8.8 mV (n = 5) for a solution containing only 100 mM sodium and + 5.7 ± 1.4 mV for a solution containing only 20 mM calcium (n = 5). From these values a ratio of the ion permeability of 6.3 ± 0.5 for Pca ^ N a and < * 0.8 + 0.3 for P N a ^ C a could be determined.

Um zu testen, ob Zugkräfte an der Membran die durch OTRPC4 getragen Ströme auslösen kann, wurden positive und negative Drücke auf die Patch-Pipette angelegt, wobei die Ganzzellstöme sowohl in der „cell-attached-", als auch in der Ganzellkonfiguration gemessen wurden. Es wurde keine Beeinflussung der durch OTRPC4 getragenen Ströme durch Druckänderungen festgestellt.In order to test whether tensile forces on the membrane can trigger the currents carried by OTRPC4, positive and negative pressures were applied to the patch pipette, the whole cell currents being measured both in the "cell-attached" and in the whole configuration. The currents carried by OTRPC4 were not influenced by changes in pressure.

Die Ströme, die durch Hypoosmolarität aktiviert werden konnten, waren reversibel mit den Kationen Gd3+ und La3+ zublockieren. Gd3+ in einer Konzentration von 100 μM hatte den stärksten Effekt und reduzierte den Strom um 70 %, wohingegen La3+ in der selben Konzentration einen schwächeren inhibitorischen Effekt zeigte. Ruthenium Rot, ein Inhibitor des VRl und des VRL-1 konnte Ströme durch den OTRPC4 vollständig aufheben.The currents that could be activated by hypoosmolarity were reversibly blocked with the cations Gd 3+ and La 3+ . Gd 3+ in a concentration of 100 μM had the strongest effect and reduced the current by 70%, whereas La 3+ showed a weaker inhibitory effect at the same concentration. Ruthenium red, an inhibitor of VRl and VRL-1, was able to completely cancel currents through the OTRPC4.

High-throughput Screen zur Identifizierung eines Blockers, Aktivators oder Modulators des OTRPC4-KationenkanalsHigh-throughput screen to identify a blocker, activator or modulator of the OTRPC4 cation channel

Das oben beschriebene eukaryotische Expressionsplamid mit der OTRPC4-cDNA enthält zusätzlich auch ein Gen, daß den Zellen, die mit diesem Plasmid transfiziert werden, eine Resistenz gegen das Antibiotikum G418 verleiht. HEK293 -Zellen wurden durch Lipofection wie oben beschrieben transfiziert und stabil exprimierende Zellen durch Selektion mit G418 isoliert. Damit der OTRPC4-Kanal während der Selektionsperiode nicht konstitutiv aktiv ist, wurden die HEK293 -Zellen in einem Medium kultiviert, dessen Osmolarität auf 320 mosmol/1 eingestellt war. Die den OTRPC4-Kanal stabil exprimierenden HEK293 -Zellen wurden in 384 well Platten ausgesät und in den Zellen mit Hilfe eines „Fluoresecence Imaging Plate Readers" (FLIPR) die durch Zugabe von hypotonen Medium ausgelöste Erhöhung der [Ca2+]i gemessen.The above-described eukaryotic expression plamide with the OTRPC4 cDNA additionally also contains a gene which confers resistance to the antibiotic G418 to the cells which are transfected with this plasmid. HEK293 cells were transfected by lipofection as described above and stably expressing cells isolated by selection with G418. In order that the OTRPC4 channel is not constitutively active during the selection period, the HEK293 cells were cultivated in a medium whose osmolarity was set to 320 mosmol / 1. The HEK293 cells stably expressing the OTRPC4 channel were sown in 384 well plates and the increase in the [Ca 2+ ] i triggered by the addition of hypotonic medium was measured in the cells with the aid of a fluorescence imaging plate reader (FLIPR).

Konstuktion eines rekombinanten Vektors für einen konditioneilen Gene Knock-out: Für eine erfolgreiche homologe Rekombination in vivo ist eine identische Sequenz von 6-8 kb Länge notwendig. Das entsprechende Exons muß dabei nicht in der Mitte liegen, sondern es wird allgemein eine asymmetrische Anordnung bevorzugt. Diese erlaubt eine PCR-Analyse der Zellklone der transfizierten ES-Zellen über einen kurzen Bereich von ca 2-3 kb. Dabei bleibt ein langer Arm mit ca 5-6 Kb auf der anderen Seite. Übertragen auf die vorhandene Genstruktur des murinen OTRPC4-Kanals (siehe Abbildung 2) und dem Wunsch die Porenregion zu inaktivieren, boten sich folgende DNA-Konstrukte an. Intron 11, bei Base 1965 gelegen, hat eine Größe > 5 kb, sodaß hier die DNA für den langen Arm gewonnen werden kann. Exon 12 mit ca 420 bp wurde zum Zweck des konditionellen Knock-outs mit flankierenden LoxP-Sites getaggt. Intron 12, bei Base 2286bp liefert noch ausreichende Größe für einen kurzen Arm. Damit fehlt nach dem Knock-out und der Insertion der Neomycin-Kassette das Exon 12 und damit dem Kanalprotein ein Teil der fünften transmembranären Region, die Pore, die sechste transmembranäre Region und ein Teil des anschließenden zytosolischen Bereiches. Das OTRPC4-Protein, das in den konditioneilen Knock-out Mäusen exprimiert wird, wirdin vivo fünktionell inaktiv sein.Construction of a recombinant vector for a conditional gene knock-out: For a successful homologous recombination in vivo, an identical sequence of 6-8 kb in length is necessary. The corresponding exon does not have to lie in the middle, but an asymmetrical arrangement is generally preferred. This allows a PCR analysis of the cell clones of the transfected ES cells over a short range of approx. 2-3 kb. A long arm with about 5-6 Kb remains on the other side. Transferred to the existing gene structure of the murine OTRPC4 channel (see Figure 2) and the desire to inactivate the pore region, the following DNA constructs presented themselves. Intron 11, located at base 1965, has a size> 5 kb, so that the DNA for the long arm can be obtained here. Exon 12 with approx. 420 bp was tagged with accompanying LoxP sites for the purpose of conditional knock-out. Intron 12, at base 2286bp still provides enough size for a short arm. After knock-out and insertion of the neomycin cassette, exon 12 and thus the channel protein are therefore missing part of the fifth transmembrane region, the pore, the sixth transmembrane region and one Part of the subsequent cytosolic area. The OTRPC4 protein expressed in the conditional knock-out mice will be functionally inactive in vivo.

Auswahl von Sequenzen zur Herstellung von Anti-sense Oligonukleotiden zur Inaktivierung des OTRPC4-Kanals:Selection of sequences for the production of anti-sense oligonucleotides for inactivating the OTRPC4 channel:

Die in Tabelle 1 aufgeführten Anti-sense Sequenzen wurden nach folgenden Regeln ausgewählt:The anti-sense sequences listed in Table 1 were selected according to the following rules:

Die Sequenzen weisen möglichst wenig Homologie zu den anderen Kanälen derThe sequences show as little homology as possible to the other channels of the

OTRPC Familie auf. - Cluster von Guaninen (GGGG) wurden vermieden, da diese zu Sekundärstrukturen und damit zu unspezifischen Interaktionen mit Proteinen führen.OTRPC family on. - Clusters of guanines (GGGG) were avoided because they lead to secondary structures and thus to unspecific interactions with proteins.

GC und AT Basenpaare sind in etwa gleich verteilt sein eine der Sequenzen überdeckt das ATG, um zusätzlich zur Induktion einer RNAse H, die die Target-RNA degradiert, die Hemmung des Translationsstartes als Mechanismus einzuschließen.GC and AT base pairs are roughly evenly distributed. One of the sequences covers the ATG in order to include, in addition to the induction of an RNAse H, which degrades the target RNA, the inhibition of the translation start as a mechanism.

Tabelle 1:Table 1:

Antisense-Oligo 1/Base 6-21 (5'-UTR) CGT CTG CAC TGC TCA GAntisense-Oligo 1 / Base 6-21 (5 ' -UTR) CGT CTG CAC TGC TCA G

Antisense-Oligo 2/Base 41-55 (kodierend)Antisense-Oligo 2 / Base 41-55 (coding)

CCT TCG CTG GAA TCCCCT TCG CTG GAA TCC

Antisense-Oligo 3/Base 123-137 (kodierend)Antisense-Oligo 3 / Base 123-137 (coding)

GAGGAGAGAGGAAAAGC Antisense-Oligo 4/Base 225-240 (kodierend)GAGGAGAGAGGAAAAGC Antisense-Oligo 4 / Base 225-240 (coding)

CAT GCGCAGATTTGGTGCCAT GCGCAGATTTGGTGC

Antisense-Oligo 5/Base 303-320 (kodierend)Antisense-Oligo 5 / Base 303-320 (coding)

CACCGAGGACTCATATAGCACCGAGGACTCATATAG

Die ausgewählten Antisense Sequenzen können auch als flankierende Sequenzen zur Konstruktion von Ribozymen verwendet werden.The selected antisense sequences can also be used as flanking sequences for the construction of ribozymes.

Erhöhung der intrazellulären Kalzium-Konzentration in Zellen des Plexus choroideus (Schwein) Um die Funktion des Kanals in Primärzellen zu untersuchen, wurden Zellen des Plexus choroideus vom Schwein in Kultur genommen und ihre Reaktion auf hypoosmotische Lösung untersucht. Die Experimente wurden mit der FURA-2 Methode durchgeführt, wodurch die Veränderungen der [Ca2+]; registriert werden konnten. Die mit FURA-2 s beladenen Zellen des Plexus choroideus zeigten ähnlichen Ca2+ abhängige Fluoreszenzänderungen wie die mit dem OTRPC4 transfizierten HEK293 Zellen (Abbildung 10). Es ergab sich durch hypoosmolare Lösung ein Ca2+ -Anstieg in den Zellen, der durch Ca2+ Entzug des extrazellulären Mediums unter das Ausgangniveau gesenkt werden konnte. Durch Ca + Zugabe konnte der erhöhte Ausgangsspiegel wieder erreicht werden. Nach der o Zugabe von 20 μM Serotonin zeigte sich ein Peak in der [Ca2+],, der langsam erst auf die Ausgangskonzentration zurückging. Damit wurde die Vitalität der Zellen und die Sensibilität der Methode überprüft.Increase in intracellular calcium concentration in cells of the choroid plexus (pig) To investigate the function of the channel in primary cells, pork choroid plex cells were cultured and their response to hypoosmotic solution examined. The experiments were carried out with the FURA-2 method, whereby the changes in [Ca 2+ ]; could be registered. The cells of the choroid plexus loaded with FURA-2 s showed similar Ca 2+ -dependent fluorescence changes as the HEK293 cells transfected with the OTRPC4 (Figure 10). There was an increase in Ca 2+ in the cells due to hypoosmolar solution, which could be reduced below the initial level by Ca 2+ withdrawal of the extracellular medium. The increased initial level could be reached again by adding Ca + . After the addition of 20 μM serotonin, there was a peak in the [Ca 2+ ], which only slowly returned to the initial concentration. This checked the vitality of the cells and the sensitivity of the method.

Aus diesen Experimenten läßt sich schließen, daß ein Kanal wie der OTRPC4 in den Zellen des Plexus choroideus vorkommen kann und dort für die osmotische Regulation zuständig s ist.From these experiments it can be concluded that a channel like OTRPC4 can occur in the cells of the choroid plexus and is responsible for osmotic regulation there.

Entwicklung eines Antikörpers zum Nachweis des OTRPC4 ProteinsDevelopment of an antibody for the detection of the OTRPC4 protein

Für den Nachweis des OTRPC4 Proteins wurde ein Antikörper hergestellt. DieAn antibody was produced for the detection of the OTRPC4 protein. The

Proteinsequenz gegen die der Antikörper gerichtet ist entspricht dem distalen C-Terminus 0 des murinen OTRPC4 Proteins. Die Peptidsequenz ist folgende:Protein sequence against which the antibody is directed corresponds to distal C-terminus 0 of the murine OTRPC4 protein. The peptide sequence is as follows:

CDGHQQGYAPKWRTDDAPLCDGHQQGYAPKWRTDDAPL

Zur Herstellung des Antikörpers wurden Kaninchen mit 1 mg KLH-Konjugat des oben dargestellten Peptides immunisiert.To produce the antibody, rabbits were immunized with 1 mg of KLH conjugate of the peptide shown above.

Mit dem AK wurde ein Westernblot mit drei verschiedenen Fraktionen aus HEK293 Zellen, 5 die mit dem OTRPC4 transfiziert worden waren, hybridisiert. Die Kontrollzellen waren native HEK293 Zellen. Die Fraktionen aus dem Cytosol und das Cholatextrakt zeigte keinA Western blot with three different fractions from HEK293 cells, 5 which had been transfected with the OTRPC4, was hybridized with the AK. The control cells were native HEK293 cells. The fractions from the cytosol and the cholate extract showed no

Signal für das OTRPC4 Fagment, die Zellmenbranfraktion zeigte in den transfiziertenSignal for the OTRPC4 fragment, the cell membrane fraction showed in the transfected

HEK293 Zellen ein eindeutiges Signal für das Vorkommen des OTRPC4 in derHEK293 a clear signal for the occurrence of the OTRPC4 in the

Zellmembran (Abbildung 8). so In einem Immunfluoreszenzassay wurden mit murinem OTRPC4 transient transfizierte 293Cell membrane (Figure 8). 293 transiently transfected with murine OTRPC4 in an immunofluorescence assay

HEK-Zellen auf das Vorkommen des OTRPC4 Proteins in der intakten Zellen untersucht.HEK cells examined for the presence of the OTRPC4 protein in the intact cells.

Der Primärantikörper war der oben beschriebene Peptidantikörper. Als Sekundär- AK wurde ein ant-rabbit-AK mit einem FITC-Konjugat verwendet (Abbildung). Die FITC -The primary antibody was the peptide antibody described above. As a secondary AK used an ant-rabbit AK with a FITC conjugate (Figure). The FITC -

Fluoreszenz ist deutlich im Bereich der Zellwand zu erkennen, was mit den Daten aus demFluorescence can be clearly seen in the area of the cell wall, what with the data from

Western blot übereinstimmt.Western blot matches.

Das bedeutet, daß OTRPC4 in den mit dem OTRPC4 transfizierten HEK293 Zellen in derThis means that OTRPC4 in the HEK293 cells transfected with the OTRPC4 in the

Zellmembran als natives Protein integriert ist und der Antikörper das OTRPC4 Protein erkennt und im Western blot oder in der lebenden Zelle über Immunfluoreszenz nachweisen kann. Cell membrane is integrated as a native protein and the antibody recognizes the OTRPC4 protein and can detect it in Western blot or in the living cell via immunofluorescence.

Literaturstellenreferences

1. Lang, F. et al. Functional significance of cell volume regulatory mechanisms. Physiol. Rev. 78, 247-306 (1998). s 2. Colbert, H. A. et al. OSM-9, a novel protein with structural similarity to Channels, is required for olfaction, mechanosensation and olfactory adaptation in Caenorhabditis elegans. J. Neurosci. 17, 8259-8269 (1997).1. Lang, F. et al. Functional significance of cell volume regulatory mechanisms. Physiol. Rev. 78, 247-306 (1998). s 2. Colbert, H.A. et al. OSM-9, a novel protein with structural similarity to Channels, is required for olfaction, mechanosensation and olfactory adaptation in Caenorhabditis elegans. J. Neurosci. 17, 8259-8269 (1997).

3. Montell, C. & Rubin, G. M. Molecular characterization of the Drosophila trp locus: a putative integral membrane protein required for phototransduction. Neuron 2, 1313- w 1323 (1989).3. Montell, C. & Rubin, G. M. Molecular characterization of the Drosophila trp locus: a putative integral membrane protein required for phototransduction. Neuron 2, 1313-w 1323 (1989).

4. Harteneck, C. et al. From worm to man: three subfamilies of TRP Channels. Trends Neurosci. 23, 159-166 (2000).4. Harteneck, C. et al. From worm to man: three subfamilies of TRP channels. Trends Neurosci. 23, 159-166 (2000).

5. Phillips, A. M. et al. Identification of a Drosophila gene encoding a calmodulin-binding protein with homology to the trp phototransduction gene. Neuron 8, 631-642 (1992). is 6. Wes, P. D. et al. TRPC1, a human homolog of a Drosophila store-operated Channel. Proc. Natl. Acad. Sei. USA 92, 9652-9656 (1995).5. Phillips, A.M. et al. Identification of a Drosophila gene encoding a calmodulin-binding protein with homology to the trp phototransduction gene. Neuron 8, 631-642 (1992). is 6. Wes, P.D. et al. TRPC1, a human homolog of a Drosophila store-operated channel. Proc. Natl. Acad. Be. USA 92, 9652-9656 (1995).

7. Zhu, X. et al. Molecular cloning of a widely expressed human homologue for the Drosophila trp gene. FEBS Lett. 373, 193-198 (1995).7. Zhu, X. et al. Molecular cloning of a widely expressed human homologue for the Drosophila trp gene. FEBS Lett. 373: 193-198 (1995).

8. Wissenbach, U. et al. Structure and mRNA expression of a bovine trp homologue related to mammalian trρ2. FEBS Lett. 429, 61-66 (1998).8. Wissenbach, U. et al. Structure and mRNA expression of a bovine trp homologue related to mammalian trρ2. FEBS Lett. 429, 61-66 (1998).

9. Zhu, X. et al. trp, a novel mammalian gene family essential for agonist-activated capacitative Ca2+ entry. Cell 85, 661-671 (1996).9. Zhu, X. et al. trp, a novel mammalian gene family essential for agonist-activated capacitive Ca 2+ entry. Cell 85, 661-671 (1996).

10. Philipp, S. et al. A mammalian capacitative calcium entry channel homologous to Drosophila TRP and TRPL. EMBO J. 15, 6166-6171 (1996).10. Philipp, S. et al. A mammalian capacitative calcium entry channel homologous to Drosophila TRP and TRPL. EMBO J. 15, 6166-6171 (1996).

2s 11. Okada, T. et al. Molecular cloning and functional characterization of a novel reeeptor- activated TRP Ca2+ Channel from mouse brain. J. Biol. Chem. 273, 10279-10287 (1998). 12. Philipp, S. et al. A novel capacitative calcium entry Channel expressed in excitable cells. EMBO J. 17, 4274-4282 (1998).2s 11. Okada, T. et al. Molecular cloning and functional characterization of a novel reeeptor- activated TRP Ca 2+ Channel from mouse brain. J. Biol. Chem. 273, 10279-10287 (1998). 12. Philipp, S. et al. A novel capacitative calcium entry channel expressed in excitable cells. EMBO J. 17, 4274-4282 (1998).

30 13. Boulay, G. et al. Cloning and expression of a novel mammalian homologue of Drosophila transient receptor potential (TRP) involved in calcium entry secondary to activation of reeeptors coupled by the Gq class of G protein. J. Biol. Chem. 272, 29672-29680 (1997). 14. Okada, T. et al. Molecular and functional characterization of a novel mouse transient receptor potential protein homologue TRP7. J. Biol. Chem. 274, 27359-27370 (1999).30 13. Boulay, G. et al. Cloning and expression of a novel mammalian homologue of Drosophila transient receptor potential (TRP) involved in calcium entry secondary to activation of reeeptors coupled by the G q class of G protein. J. Biol. Chem. 272, 29672-29680 (1997). 14. Okada, T. et al. Molecular and functional characterization of a novel mouse transient receptor potential protein homologue TRP7. J. Biol. Chem. 274, 27359-27370 (1999).

15. Hofmann, T. et al. Direct activation of human TRPC6 and TRPC3 Channels by diacylglycerol. Nature 397, 259-263 (1999). s 16. Caterina, M. et al. The capsaicin receptor: a heat-activated ion Channel in the pain pathway. Nature 389, 816-824 (1997).15. Hofmann, T. et al. Direct activation of human TRPC6 and TRPC3 channels by diacylglycerol. Nature 397, 259-263 (1999). s 16. Caterina, M. et al. The capsaicin receptor: a heat-activated ion channel in the pain pathway. Nature 389, 816-824 (1997).

17. Tominaga, M. et al. The cloned capsaicin receptor integrates multiple pain-producing Stimuli. Neuron 21, 531-543 (1998).17. Tominaga, M. et al. The cloned capsaicin receptor integrates multiple pain-producing stimuli. Neuron 21, 531-543 (1998).

18. Caterina, M. et al Capsaicin receptor homologue with a high threshold for noxious heat. o Nature 398, 436-441 (1999).18. Caterina, M. et al Capsaicin receptor homologue with a high threshold for noxious heat. o Nature 398, 436-441 (1999).

19. Kanzaki, M. et al. Translocation of a calcium-permeable cation Channel induced by insulin- like growth factor-I. Nat. Cell Biolog. 1, 165-170 (1999).19. Kanzaki, M. et al. Translocation of a calcium-permeable cation channel induced by insulin-like growth factor-I. Nat. Cell biologist. 1, 165-170 (1999).

20. Hoenderop, J. G. J. et al. Molecular identification of the apical Ca^+ Channel in 1,25- dihydroxyvitamin D3-resρonsive epithelia. J. Biol. Chem. 274, 8375-8378 (1999). s 21. Peng, J. B. et al. Molecular cloning and characterization of a channel-like transporter mediating intestinal calcium absorption. J. Biol. Chem. 274, 22739-22746 (1999).20. Hoenderop, JGJ et al. Molecular identification of the apical Ca ^ + Channel in 1,25-dihydroxyvitamin D 3 -resρonsive epithelia. J. Biol. Chem. 274, 8375-8378 (1999). s 21. Peng, JB et al. Molecular cloning and characterization of a channel-like transporter mediating intestinal calcium absorption. J. Biol. Chem. 274, 22739-22746 (1999).

22. Hunter, J.J. et al. Chromosomal locaüzation and genomic characterization of the mouse melastatin gene (Mlsnl). Genomics 54, 116-123 (1998)22. Hunter, J.J. et al. Chromosomal location and genomic characterization of the mouse melastatin gene (Mlsnl). Genomics 54, 116-123 (1998)

23. Nagami, K. et al. Molecular cloning of a novel putative Ca^ " Channel protein (TRPC7) 0 highly expressed in brain. Genomics 54, 124-131 (1998)23. Nagami, K. et al. Molecular cloning of a novel putative Ca ^ " Channel protein (TRPC7) 0 highly expressed in brain. Genomics 54, 124-131 (1998)

22. Thastrup, O. et al. Thapsigargin, a tumor promoter, discharges intracellular Ca2+ strores by specific inhibition of the endoplasmic reticulum Ca2+-ATPase. Proc. Natl. Acad. Sei. USA 87, 2466-2470 (1990).22. Thastrup, O. et al. Thapsigargin, a tumor promoter, discharges intracellular Ca 2+ strores by specific inhibition of the endoplasmic reticulum Ca2 + -ATPase. Proc. Natl. Acad. Be. USA 87: 2466-2470 (1990).

23. Foskett, J. K. in Cellular and Molecular Physiology of Cell Volume Regulation (ed. 5 Strange, K.) 259-277 (CRC Press, Boca Raton, 1994).23. Foskett, J.K. in Cellular and Molecular Physiology of Cell Volume Regulation (ed. 5 Strange, K.) 259-277 (CRC Press, Boca Raton, 1994).

24. Yang, X. C. & Sachs, F. Block of stretch-activated ion Channels in Xenopus oocytes by gadolinium and calcium ions. Science 243, 1068-1071 (1989).24. Yang, X. C. & Sachs, F. Block of stretch-activated ion channels in Xenopus oocytes by gadolinium and calcium ions. Science 243: 1068-1071 (1989).

25. Urbach, V. et al. Mechanosensitive calcium entry and mobilization in renal A6 cells. J. Memb. Biol. 168, 29-37 (1999).25. Urbach, V. et al. Mechanosensitive calcium entry and mobilization in renal A6 cells. J. Memb. Biol. 168, 29-37 (1999).

30 26. Nilius, B. et al. Volume-activated Cl- Channels. Gen. Pharmacol. 27, 1131-1140 (1996). Legenden zu den Abbildungen30 26. Nilius, B. et al. Volume-activated Cl channels. Gene. Pharmacol. 27, 1131-1140 (1996). Legends for the illustrations

Abbildung 1: Aminosäuresequenz der vorgergesagten Porenbildenden Struktur von OTRPC4 und die Gewebeverteilung der Expression von OTRPC4. s (a) Dargestellt ist die Aminosäuresequenz der vorhergesagten fünften und sechsten transmembranären Domäne und der benachbarten cytosolischen Domäne von OTRPC4. Die transmembranäre Region 5 und 6 und die vermutliche Porenbildende cytoplasmatische Domäne sind als solche bezeichnet, und die konservierten Aminosäuren sind hinterlegt, (b) Autoradiogramm eines Northern-Blots unterschiedlicher Maus Geweben unter Verwendung w der EST-Sequenzen der Maus-cDNA codierend für OTRPC4 als Probe. Ein 3,3 kb Fragment wird in der RNA von Herz, Leber, Niere und Testis nachgewiesen, ein zusätzliches 2,2 kb Fragment kann in der RNA von Leber und Niere nachgewiesen werden.Figure 1: Amino acid sequence of the predicted pore-forming structure of OTRPC4 and the tissue distribution of the expression of OTRPC4. s (a) The amino acid sequence of the predicted fifth and sixth transmembrane domains and the neighboring cytosolic domain of OTRPC4 is shown. The transmembrane regions 5 and 6 and the putative pore-forming cytoplasmic domain are designated as such, and the conserved amino acids are deposited, (b) autoradiogram of a Northern blot of different mouse tissues using w the EST sequences of the mouse cDNA coding for OTRPC4 as Sample. A 3.3 kb fragment is detected in the heart, liver, kidney and testis RNA, an additional 2.2 kb fragment can be detected in the liver and kidney RNA.

Abbildung 2: Sequenzen der cDNA codierend für OTRPC4 der Maus und Organisation is des genomischen Klones von OTRPC4. Der Translationsstart, der Stopcodons, sowie die Übergänge zwischen Exons und Introns und die Länge der Introns sind bezeichnet. Unter der DNA-Sequenz ist die Aminosäuresequenz dargestellt, die vorhergesagten transmembranären Regionen und die Ankyrin-Bindungstelle sind bezeichnet.Figure 2: Sequences of the cDNA coding for OTRPC4 of the mouse and organization is of the genomic clone of OTRPC4. The translation start, the stop codons, as well as the transitions between exons and introns and the length of the introns are indicated. The amino acid sequence is shown below the DNA sequence, the predicted transmembrane regions and the ankyrin binding site are indicated.

20 Abbildung 3: In-situ-Hybridisierung von Maus-Niere und -Hirn zum Nachweis der Expression von OTRPC4.20 Figure 3: In situ hybridization of mouse kidney and brain to detect the expression of OTRPC4.

Darstellt sind ein Sagittallschnitt (a) und ein Horizontalschnitt (f) einer gesamten Maus Niere, zwei Vergrößerungen des Sagittalschnittes der Niere (b, c), ein Sagittalschnitt (e), ein Koronarschnitt (f), ein Horizonalschnitt (g) eines gesamten Maus-Hirns und eineShown are a sagittal section (a) and a horizontal section (f) of an entire mouse kidney, two enlargements of the sagittal section of the kidney (b, c), a sagittal section (e), a coronary section (f), a horizontal section (g) of an entire mouse -Brain and one

25 Vergrößerung des Sagittalschnittes eines Maus-Hirns (h). Die entsprechenden Schnitte wurden nach Fixierung des Gewebes mit einem Mikrotom angefertigt und anschließend mit einer radioaktiv markierten RNA-Sonde des kodierenden Bereiches von Maus-OTRPC4 hybridisiert. Gezeigt ist die Expression von OTRPC4 im distalen Konvolut der Niere (b, c) und im Plexus choroideus der Hirn- Ventrikel (h).25 Magnification of the sagittal section of a mouse brain (h). The corresponding sections were made after fixation of the tissue with a microtome and then hybridized with a radioactively labeled RNA probe of the coding region of mouse OTRPC4. The expression of OTRPC4 is shown in the distal bundle of the kidneys (b, c) and in the choroid plexus of the brain ventricles (h).

3030

Abbildung 4: Zunahme der intrazellulären Kalziumkonzentration in HEK293 Zellen transfiziert mit einem Plasmid, das die cDNA von OTRPC4 exprimiert. Die intrazelluläre Kalziumkonzentration wurde mit Hilfe der FURA-2-Technik in Zellen gemessen, die OTRPC4 exprimieren und zu Zellen verglichen, die diesen Kanal nicht exprimieren. DieFigure 4: Increase in the intracellular calcium concentration in HEK293 cells transfected with a plasmid that expresses the cDNA of OTRPC4. The intracellular calcium concentration was measured using the FURA-2 technique in cells that express OTRPC4 and compared to cells that do not express this channel. The

3s Zellen wurden anfänglich in isotoner Lösung, die 100 mM Mannitol und 1 mM CaCl2 enthielt, kultiviert. Der obere horizontale Balken gibt den Wechsel der extrazellulären Lösung, mit der die Zellen umspült wurden, zu einer 200 mM Lösung an. Der Wechsel der Osmolarität wurde dadurch erreicht, daß das Mannitol weggelassen wurde. In dem Zeitraum, der durch den unteren horizontalen Balken angegeben wird, wurde das Kalzium3s cells were initially cultured in isotonic solution containing 100mM mannitol and 1mM CaCl2. The upper horizontal bar indicates the change of the extracellular solution with which the cells were washed to a 200 mM solution. The change in osmolarity was achieved by omitting the mannitol. In the period indicated by the lower horizontal bar, the calcium

4 in der extrazellulären Lösung durch EGTA ersetzt. Die gezeigten Spuren stellen die Mittelwerte aus 17 Zellen (für die OTRPC4-exprimierenden Zellen) und 21 Zellen (für die Kontrollzellen) dar im gleichen Experiment dar. Die kleine Abbildung zeigt die entsprechenden Meßspuren für einzelne OTRPC4-exprimierenden Zellen desselben Experimentes.4 replaced in the extracellular solution by EGTA. The traces shown represent the mean values of 17 cells (for the OTRPC4-expressing cells) and 21 cells (for the control cells) in the same experiment. The small figure shows the corresponding measurement traces for individual OTRPC4-expressing cells in the same experiment.

4545

Abbildung 5: Osmolaritätsabhängige Änderung der intrazellulären Kalziumkonzentration in HEK293 -Zellen, die OTRPC4 transient exprimieren. Gezeigt ist der maximalen Fluoreszenzquotienten des Kalzium-beladenen und -unbeladen FURA-2 Farbstoffes in Abhängigkeit zur Osmolarität der extrazellulären Lösung.Figure 5: Osmolarity-dependent change in intracellular calcium concentration in HEK293 cells that transiently express OTRPC4. The maximum is shown Fluorescence quotients of the calcium-loaded and unloaded FURA-2 dye depending on the osmolarity of the extracellular solution.

Abbildung 6: Abnahme des Ionenflusses in OTRPC4-exprimierenden Zellen in einer hyperosmolaren extrazellulären Lösung. Der Ionenfluß wurde durch Spannungsrampen von -100 bis +100 mM in einer Standart extrazellulären Lösung (Osmolarität 305 mosmol/1; 1) und nach Zugabe einer Mannitol enthaltenden Lösung mit einer Osmolarität von 320 mosmol/1 (2) aufgenommen, die kleine Abbildung zeigt den Zeitverlauf des Effektes ausgelöst durch die Erhöhung der Osmolarität der extrazellulären Lösung.Figure 6: Decrease in ion flow in OTRPC4-expressing cells in a hyperosmolar extracellular solution. The ion flow was recorded by voltage ramps from -100 to +100 mM in a standard extracellular solution (osmolarity 305 mosmol / 1; 1) and after adding a solution containing mannitol with an osmolarity of 320 mosmol / 1 (2), the small picture shows the time course of the effect triggered by the increase in the osmolarity of the extracellular solution.

Abbildung 7: Zunahme des Ionenflusses getragen durch Kationen ausgelöst durch hypotone extrazelluläre Lösung in Zellen, die OTRPC4 exprimieren. (A) Der Ganzzell- Ionenstrom einer OTRPC4 exprimierenden Zelle wurde gemessen bei -100 und +100 mV. Zu dem Zeitpunkt, die am horizontalen Balken angegeben sind, wurde die extrazelluläre Standard-Lösung ausgetauscht gegen eine Lösung, die 100 mM NaCl und 100 mM Mannitol (Osmolarität 320 mosmol/1) enthielt, dann gegen ein Lösung ohne Mannitol (215 mosmol/1) und dann wiederum durch eine hypoosmolare Lösung, in der Natrium und Kalzium durch NMDG ersetzt war. Zum Schluß wurde die Zelle wieder mit 320 milliosmolare Lösung umspült. (B) Aufgetragen ist der Ionenstrom, der durch eine einzelne Spannungsrampe in einer OTRPC4 exprimierenden Zelle zu den Zeitpunkten, die in (A) mit Zahlen bezeichnet sind, ausgelöst wurde.Figure 7: Increase in ion flow carried by cations triggered by hypotonic extracellular solution in cells that express OTRPC4. (A) The whole cell ion current of an OTRPC4 expressing cell was measured at -100 and +100 mV. At the time indicated on the horizontal bar, the standard extracellular solution was exchanged for a solution containing 100 mM NaCl and 100 mM mannitol (osmolarity 320 mosmol / 1), then for a solution without mannitol (215 mosmol / 1 ) and then again with a hypoosmolar solution in which sodium and calcium were replaced by NMDG. Finally, the cell was rinsed again with 320 milliosmolar solution. (B) The ion current is plotted, which was triggered by a single voltage ramp in an OTRPC4-expressing cell at the points in time denoted by numbers in (A).

Abbildung 8: Western Blot von OTRPC4 in subzellulären Fraktionen. Mit dem Antikörper wurde ein Westernblot mit drei verschiedenen Fraktionen aus HEK293 Zellen, die mit dem OTRPC4 transfiziert worden waren, hybridisiert. Die Kontrollzellen waren native HEK293 Zellen. Die Fraktionen aus dem Cytosol und das Cholatextrakt zeigte kein Signal für das OTRPC4 Fagment, die Zellmenbranfraktion zeigte in den transfizierten HEK293 Zellen ein eindeutiges Signal für das Vorkommen des OTRPC4 in der Zellmembran.Figure 8: Western blot of OTRPC4 in subcellular fractions. A western blot with three different fractions from HEK293 cells which had been transfected with the OTRPC4 was hybridized with the antibody. The control cells were native HEK293 cells. The fractions from the cytosol and the cholate extract showed no signal for the OTRPC4 fragment, the cell membrane fraction in the transfected HEK293 cells showed a clear signal for the occurrence of OTRPC4 in the cell membrane.

Abbildung 9: Zunahme der intrazellulären Kalziumkonzentration in Zellen, die OTRPC4 exprimieren. Die erste Substanzzugabe erfolgte nach 1 min, die zweite nach 2 min. Die Osmolarität des Messpuffers betrug 320 mosmol/1. Leerwert Ionomycin (2 μM) EGTA hypotone Lösung (220 mosmol/1) EGTA LOE908(100 μM) hypotone Lösung (220 mosmol/1)Figure 9: Increase in intracellular calcium concentration in cells expressing OTRPC4. The first substance was added after 1 min, the second after 2 min. The osmolarity of the measurement buffer was 320 mosmol / 1. Blank ionomycin (2 μM) EGTA hypotonic solution (220 mosmol / 1) EGTA LOE908 (100 μM) hypotonic solution (220 mosmol / 1)

Abbildung 10: Zunahme des Ionenflusses getragen durch Kationen ausgelöst durch hypotone extrazelluläre Lösung in Zellen des Plexus choroideus. Zu dem Zeitpunkt, die am horizontalen Balken angegeben sind, wurde die extrazelluläre Standard-Lösung ausgetauscht gegen eine Lösung, die eine Osmolarität von 300 mosmol/1 hatte, dann gegen ein Lösung mit 230 mosmol/ und dann wiederum durch die Ausgangslösung (Osmolarität 300 mosmol/1). Zum Schluß wurden die Zellen mit 20 μM Serotonin angeregt, um die Vitalität der Zellen und die Sensibilität der Methode zu überprüfen.Figure 10: Increase in ion flow carried by cations triggered by hypotonic extracellular solution in cells of the choroid plexus. At the time indicated on the horizontal bar, the extracellular standard solution was exchanged for a solution which had an osmolarity of 300 mosmol / 1, then for a solution with 230 mosmol / and then again for the starting solution (osmolarity 300 mosmol /1). Finally, the cells were stimulated with 20 μM serotonin in order to check the vitality of the cells and the sensitivity of the method.

Aufgetragen ist der die Ratio spezifische zu unspezifischer Fluoreszenz bei einer FURA-2 Messung gegen die Zeit. The ratio-specific to non-specific fluorescence is plotted in a FURA-2 measurement against time.

Claims

Patentansprüche claims 1. Nukleinsäure, dadurch gekennzeichnet, daß sie für den nicht-selektiven Kationenkanal OTRPC4 oder für ein Fragment, eine fünktionelle Variante, eine allele Variante, eine Untereinheit kodiert, oder Varianten der besagten Nukleinsäure aufgrund des degenerativen Kodes oder eine Nukleinsäure, die an besagte Nukleinsäure hybridisieren kann.1. Nucleic acid, characterized in that it codes for the non-selective cation channel OTRPC4 or for a fragment, a functional variant, an allelic variant, a subunit, or variants of said nucleic acid due to the degenerative code or a nucleic acid attached to said nucleic acid can hybridize. 2. Nukleinsäure nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß sie RNS ist.2. Nucleic acid according to claim 1, characterized in that it is RNA. 3. Nukleinsäure nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß sie DNS ist.3. Nucleic acid according to claim 1, characterized in that it is DNA. 4. Nukleinsäure nach einem der Ansprüche 1 oder 3, dadurch gekennzeichnet, daß sie 5' oder 3' oder 5' und 3' untranslatierte Regionen enthält.4. Nucleic acid according to one of claims 1 or 3, characterized in that it contains 5 'or 3' or 5 'and 3' untranslated regions. 5. Nukleinsäure nach einem der Ansprüche 1 bis 4, dadurch gekennzeichnet, daß sie für ein Fragment des nicht-selektiven Kationenkanals OTRPC4 kodiert.5. Nucleic acid according to one of claims 1 to 4, characterized in that it codes for a fragment of the non-selective cation channel OTRPC4. 6. Nukleinsäure nach einem der Ansprüche 1 bis 5, dadurch gekennzeichnet, daß sie für eine fünktionelle Variante des nicht-selektiven Kationenkanals OTRPC4 kodiert.6. Nucleic acid according to one of claims 1 to 5, characterized in that it codes for a functional variant of the non-selective cation channel OTRPC4. 7. Nukleinsäure nach einem der Ansprüche 1 bis 6, dadurch gekennzeichnet, daß sie für eine allele Variante des nicht-selektiven Kationenkanals OTRPC4 kodiert.7. Nucleic acid according to one of claims 1 to 6, characterized in that it codes for an allelic variant of the non-selective cation channel OTRPC4. 8. Nukleinsäure nach einem der Ansprüche 1 bis 7, dadurch gekennzeichnet, daß sie für Varianten der Nukleinsäure aufgrund des degenerativen Kodes kodiert.8. Nucleic acid according to one of claims 1 to 7, characterized in that it codes for variants of the nucleic acid due to the degenerative code. 9. Nukleinsäure, dadurch gekennzeichnet, daß sie an eine Nukleinsäure nach einem der Ansprüche 1 bis 8 unter stringenten Bedingungen hybridisieren kann.9. nucleic acid, characterized in that it can hybridize to a nucleic acid according to one of claims 1 to 8 under stringent conditions. 10. Nukleinsäure nach einem der Ansprüche 1 bis 9, dadurch gekennzeichnet, daß besagter nicht-selektiver Kationenkanal OTRPC4 ein Säugerkationenkanal ist.10. Nucleic acid according to one of claims 1 to 9, characterized in that said non-selective cation channel OTRPC4 is a mammalian cation channel. 11. Nukleinsäure nach einem der Ansprüche 1 bis 10, dadurch gekennzeichnet, daß besagter nicht-selektiver Kationenkanal OTRPC4 murin ist.11. Nucleic acid according to one of claims 1 to 10, characterized in that said non-selective cation channel OTRPC4 is murine. 12. Nukleinsäure nach einem der Ansprüche 1 bis 11, dadurch gekennzeichnet, daß besagter nicht-selektiver Kationenkanal OTRPC4 human ist.12. Nucleic acid according to one of claims 1 to 11, characterized in that said non-selective cation channel OTRPC4 is human. 13. Nukleinsäure, dadurch gekennzeichnet, daß sie die Sequenz13. Nucleic acid, characterized in that it has the sequence CTCTCACCGCCTACTACCAGCCGCTGGAGGGCACAATGGCGGATTCCAGCGAA GGCCCCCGCGCGGGGCCCGGGGAGGTGGCTGAGCTCCCCGGGGATGAGAGTGG CACCCCAGGTGGGGAGGCTTTTCCTCTCTCCTCCCTGGCCAATCTGTTTGAGGG GGAGGATGGCTCCCTTTCGCCCTCACCGGCTGATGCCAGTCGCCCTGCTGGCCC AGGCGATCrGGCGACCAAATCTGCGCATGAAGTTCCAGGGCGCCTTCCGCAAGG GGGTGCCCAACCCCATCGATCTGCTGGAGTCCACCCTATATGAGTCCTCGGTGG TGCCTGGGCCCAAGAAAGCACCCATGGACTCACTGTTTGACTACGGCACCTATC GTCACCACTCCAGTGACAACAAGAGGTGGAGGAAGAAGATCATAGAGAAGCAG CCGCAGAGCCCCAAAGCCCCTGCCCCTCAGCCGCCCCCCATCCTCAAAGTCTTC AACCGGCCTATCCTCTTTGACATCGTGTCCCGGGGCTCCACTGCTGACCTGGAC GGGCTGCTCCCATTCTTGCTGACCCACAAGAAACGCCTAACTGATGAGGAGTTT CGAGAGCCATCTACGGGGAAGACCTGCCTGCCCAAGGCCTTGCTGAACCTGAG CAATGGCCGCAACGACACCATCCCTGTGCTGCTGGACATCGCGGAGCGCACCG GCAACATGCGGGAGTTCATTAACTCGCCCTTCCGTGACATCTACTATCGAGGTC AGACAGCCCTGCACATCGCCATTGAGCGTCGCTGCAAACACTACGTGGAACTTC TCGTGGCCCAGGGAGCTGATGTCCAcGCCCAGGCCCGTGGGCGCTTCTTCCAGC CCAAGGATGAGGGGGGCTACTTCTACTTTGGGGAGCTGCCCCTGTCGCTGGCTG CCTGCACCAACCAGCCCCACATTGTCAACTACCTGACGGAGAACCCCCACAAGA AGGCGGACATGCGGCGCCAGGACTCGCGAGGCAACACAGTGCTGCATGCGCTG GTGGCCATTGCTGACAACACCCGTGAGAACACCAAGTTTGTTACCAAGATGTAC GACCTGCTGCTGCTCAAGTGTGCCCGCCTCTTCCCCGACAGCAACCTGGAGGCC GTGCTCAACAACGACGGCCTCTCGCCCCTCATGATGGCTGCCAAGACGGGCAA GATTGGGATCTTTCAGCACATCATCCGGCGGGAGGTGACGGATGAGGACACAC GGCACCTGTCCCGCAAGTTCAAGGACTGGGCCTATGGGCCAGTGTATTCCTCGC TTTATGACCTCTCCTCCCTGGACACGTGTGGGGAAGAGGCCTCCGTGCTGGAGA TCCTGGTGTACAACAGCAAGATTGAGAACCGCCACGAGATGCTGGCTGTGGAG CCCATCAATGAACTGCTGCGGGACAAGTGGCGCAAGTTCGGGGCCGTCTCCTTC TACATCAACGTGGTCTCCTACCTGTGTGCCATGGTCATCTTCACTCTCACCGCCT ACTACCAGCCGCTGGAGGGCACACCGCCGTACCCTTACCGCACCACGGTGGAC TACCTGCGGCTGGCTGGCGAGGTCATTACGCTCTTCACTGGGGTCCTGTTCTTC TTCACCAACATCAAAGACTTGTTCATGAAGAAATGCCCTGGAGTGAATTCTCTC TTCATTGATGGCTCCTTCCAGCTGCTCTACTTCATCTACTCTGTCCTGGTGATCG TCTCAGCAGCCCTCTACCTGGCAGGGATCGAGGCCTACCTGGCCGTGATGGTCT TTGCCCTGGTCCTGGGCTGGATGAATGCCCTTTACTTCACCCGTGGGCTGAAGC TGACGGGGACCTATAGCATCATGATCCAGAAGATTCTCTTCAAGGACCTTTTCC GATTCCTGCTCGTCTACTTGCTCTTCATGATCGGCTACGCTTCAGCCCTGGTCTC CCTCCTGAACCCGTGTGCCAACATGAAGGTGTGCAATGAGGACCAGACCAACT GCACAGTGCCCACTTACCCCTCGTGCCGTGACAGCGAGACCTTCAGCACCTTCC TCCTGGACCTGTTTAAGCTGACCATCGGCATGGGCGACCTGGAGATGCTGAGCA GCACCAAGTACCCCGTGGTCTTCATCATCCTGCTGGTGACCTACATCATCCTCACTCTCACCGCCTACTACCAGCCGCTGGAGGGCACAATGGCGGATTCCAGCGAA GGCCCCCGCGCGGGGCCCGGGGAGGTGGCTGAGCTCCCCGGGGATGAGAGTGG CACCCCAGGTGGGGGAGGCTTTTCCTCGTGGGGGGAGGCTTTTCCTCGTGGGGGGAGGCTTTTCCTCGTGGGGGGGGGTTTTCCTCGTGGGGGGGGGTTTTCCTCGTGGGGG AGGCGATCrGGCGACCAAATCTGCGCATGAAGTTCCAGGGCGCCTTCCGCAAGG GGGTGCCCAACCCCATCGATCTGCTGGAGTCCACCCTATATGAGTCCTCGGTGG TGCCTGGGCCCAAGAAAGCACCCATGGACTCACTGTTTGACTACGGCACCTATC GTCACCACTCCAGTGACAACAAGAGGTGGAGGAAGAAGATCATAGAGAAGCAG CCGCAGAGCCCCAAAGCCCCTGCCCCTCAGCCGCCCCCCATCCTCAAAGTCTTC AACCGGCCTATCCTCTTTGACATCGTGTCCCGGGGCTCCACTGCTGACCTGGAC GGGCTGCTCCCATTCTTGCTGACCCACAAGAAACGCCTAACTGATGAGGAGTTT CGAGAGCCATCTACGGGGAAGACCTGCCTGCCCAAGGCCTTGCTGAACCTGAG CAATGGCCGCAACGACACCATCCCTGTGCTGCTGGACATCGCGGAGCGCACCG GCAACATGCGGGAGTTCATTAACTCGCCCTTCCGTGACATCTACTATCGAGGTC AGACAGCCCTGCACATCGCCATTGAGCGTCGCTGCAAACACTACGTGGAACTTC TCGTGGCCCAGGGAGCTGATGTCCAcGCCCAGGCCCGTGGGCGCTTCTTCCAGC CCAAGGATGAGGGGGGCTACTTCTACTTTGGGGAGCTGCCCCTGTCGCTGGCTG CCTGCACCAACCAGCCCCACATTGTCAACTACCTGACGGAGAACCCCCACAAGA AGGCGGACATGCGGCGCCAGGACTCGCGAGGCAACACAGTGCTGCATGCGCTG GTGGCCATTGCTGACAACACCCGTGAGAACACCAAGTTTGTTACCAAGATGTAC GACCTGCTGCTGCTCAAGTGTGCCCGCCTCTTCCCCGACAGCAACCTGGAGGCC GTGCTCAACAACGACGGCCTCTCGCCCCTCATGATGGCTGCCAAGACGGGCAA GATTGGGATCTTTCA GCACATCATCCGGCGGGAGGTGACGGATGAGGACACAC GGCACCTGTCCCGCAAGTTCAAGGACTGGGCCTATGGGCCAGTGTATTCCTCGC TTTATGACCTCTCCTCCCTGGACACGTGTGGGGAAGAGGCCTCCGTGCTGGAGA TCCTGGTGTACAACAGCAAGATTGAGAACCGCCACGAGATGCTGGCTGTGGAG CCCATCAATGAACTGCTGCGGGACAAGTGGCGCAAGTTCGGGGCCGTCTCCTTC TACATCAACGTGGTCTCCTACCTGTGTGCCATGGTCATCTTCACTCTCACCGCCT ACTACCAGCCGCTGGAGGGCACACCGCCGTACCCTTACCGCACCACGGTGGAC TACCTGCGGCTGGCTGGCGAGGTCATTACGCTCTTCACTGGGGTCCTGTTCTTC TTCACCAACATCAAAGACTTGTTCATGAAGAAATGCCCTGGAGTGAATTCTCTC TTCATTGATGGCTCCTTCCAGCTGCTCTACTTCATCTACTCTGTCCTGGTGATCG TCTCAGCAGCCCTCTACCTGGCAGGGATCGAGGCCTACCTGGCCGTGATGGTCT TTGCCCTGGTCCTGGGCTGGATGAATGCCCTTTACTTCACCCGTGGGCTGAAGC TGACGGGGACCTATAGCATCATGATCCAGAAGATTCTCTTCAAGGACCTTTTCC GATTCCTGCTCGTCTACTTGCTCTTCATGATCGGCTACGCTTCAGCCCTGGTCTC CCTCCTGAACCCGTGTGCCAACATGAAGGTGTGCAATGAGGACCAGACCAACT GCACAGTGCCCACTTACCCCTCGTGCCGTGACAGCGAGACCTTCAGCACCTTCC TCCTGGACCTGTTTAAGCTGACCATCGGCATGGGCCAGGCTGGTCTCTAGGGTCTCT S CCTTTGTGCTGCTCCTCAACATGCTCATTGCCCTCATGGGCGAGACAGTGGGCC AGGTCTCCAAGGAGAGCAAGCACATCTGGAAGCTGCAGTGGGCCACCACCATC CTGGACATTGAGCGCTCCTTCCCCGTATTCCTGAGGAAGGCCTTCCGCTCTGGG GAGATGGTCACCGTGGGCAAGAGCTCGGACGGCACTCCTGACCGCAGGTGGTG CTTCAGGGTGGATGAGGTGAACTGGTCTCACTGGAACCAGAACTTGGGCATCA O TCAACGAGGACCCGGGCAAGAATGAGACCTACCAGTATTATGGCTTCTCGCATA CCGTGGGCCGCCTCCGCAGGGATCGCTGGTCCTCGGTGGTACCCCGCGTGGTG GAACTGAACAAGAACTCGAACCCGGACGAGGTGGTGGTGCCTCTGGACAGCAT GGGGAACCCCCGCTGCGATGGCCACCAGCAGGGTTACCCCCGCAAGTGGAGGA CTGAGGACGCCCCGCTCTAGGGACTGCAGCCCAGCCCCAGCTTCTCTGCCCACT S CATTTCTAGTCCAGCCGCATTTCAGCAGTGCCTTCTGGGGTGTCCCCCCACACC CTGCTTTGGCCCCAGAGGCGAGGGACCAGTGGAGGTGCCAGGGAGGCCCCAGG ACCCTGTGGTCCCCTGGCTCTGCCTCCCCACCCTGGGGTGGGGGCTCCCGGCCA CCTGTCTTGCTCCTATGGAGTCACATAAGCCAACGCCAGAGCCCCTCCACCTCA GGCCCCAGCCCCTGCCTCTCCATTATTTATTTGCTCTGCTCTCAGGAAGCGACG 0 TGACCCCTGCCCCAGCTGGAACCTGGCAGAGGCCTTAGGACCCCGTTCCAAGTG CACTGCCCGGCCAAGCCCCAGCCTCAGCCTGCGCCTGAGCTGCATGCGCCACCA TTTTTGGCAGCGTGGCAGCTTTGCAAGGΌGCTGGGGCCCTCGGCGTGGGGCCA TGCCTTCTGTGTGTTCTGTAGTGTCTGGGATTTGCCGGTGCTCAATAAATGTTTAS CCTTTGTGCTGCTCCTCAACATGCTCATTGCCCTCATGGGCGAGACAGTGGGCC AGGTCTCCAAGGAGAGCAAGCACATCTGGAAGCTGCAGTGGGCCACCACCATC CTGGACATTGAGCGCTCCTTCCCCGTATTCCTGAGGAAGGCCTTCCGCTCTGGG GAGATGGTCACCGTGGGCAAGAGCTCGGACGGCACTCCTGACCGCAGGTGGTG CTTCAGGGTGGATGAGGTGAACTGGTCTCACTGGAACCAGAACTTGGGCATCA O TCAACGAGGACCCGGGCAAGAATGAGACCTACCAGTATTATGGCTTCTCGCATA CCGTGGGCCGCCTCCGCAGGGATCGCTGGTCCTCGGTGGTACCCCGCGTGGTG GAACTGAACAAGAACTCGAACCCGGACGAGGTGGTGGTGCCTCTGGACAGCAT GGGGAACCCCCGCTGCGATGGCCACCAGCAGGGTTACCCCCGCAAGTGGAGGA CTGAGGACGCCCCGCTCTAGGGACTGCAGCCCAGCCCCAGCTTCTCTGCCCACT S CATTTCTAGTCCAGCCGCATTTCAGCAGTGCCTTCTGGGGTGTCCCCCCACACC CTGCTTTGGCCCCAGAGGCGAGGGACCAGTGGAGGTGCCAGGGAGGCCCCAGG ACCCTGTGGTCCCCTGGCTCTGCCTCCCCACCCTGGGGTGGGGGCTCCCGGCCA CCTGTCTTGCTCCTATGGAGTCACATAAGCCAACGCCAGAGCCCCTCCACCTCA GGCCCCAGCCCCTGCCTCTCCATTATTTATTTGCTCTGCTCTCAGGAAGCGACG 0 TGACCCCTGCCCCAGCTGGAACCTGGCAGAGGCCTTAGGACCCCGTTCCAAGTG CACTGCCCGGCCAAGCCCCAGCCTCAGCCTGCGCCTGAGCTGCATGCGCCACCA TTTTTGGCAGCGTGGCAGCTTTGCAAGGΌGCTGGGGCCCTCGGCGTGGGGCCA TGCCTTCTG TGTGTTCTGTAGTGTCTGGGATTTGCCGGTGCTCAATAAATGTTTA TTCATTGACGGTGAAAAAAAAAAAAAAAAAAA s oder eine Teilsequenz hiervon, eine Nukleinsäure, die an besagte Sequenz unter stringentenTTCATTGACGGTGAAAAAAAAAAAAAAAAAAA s or a partial sequence thereof, a nucleic acid attached to said sequence under stringent Bedingungen hybridisieren kann, eine allele Variante oder eine fünktionelle Variante von besagter Sequenz oder eine Variante der Nukleinsäure aufgrund des degenerativen Kodes umfaßt.Conditions can hybridize, an allelic variant or a functional variant of said sequence or a variant of the nucleic acid comprises due to the degenerative code. 14. Nukleinsäure, dadurch gekennzeichnet, daß sie die Sequenz o CTCTCACCGCCTACTACCAGCCGCTGGAGGGCACAATGGCGGATTCCAGCGAA14. Nucleic acid, characterized in that it has the sequence o CTCTCACCGCCTACTACCAGCCGCTGGAGGGCACAATGGCGGATTCCAGCGAA GGCCCCCGCGCGGGGCCCGGGGAGGTGGCTGAGCTCCCCGGGGATGAGAGTGGGGCCCCCGCGCGGGGCCCGGGGAGGTGGCTGAGCTCCCCGGGGATGAGAGTGG CACCCCAGGTGGGGAGGCTTTTCCTCTCTCCTCCCTGGCCAATCTGTTTGAGGG GGAGGATGGCTCCCTTTCGCCCTCACCGGCTGATGCCAGTCGCCCTGCTGGCCC AGGCGATGGGCGACCAAATCTGCGCATGAAGTTCCAGGGCGCCTTCCGCAAGG GGGTGCCCAACCCCATCGATCTGCTGGAGTCCACCCTATATGAGTCCTCGGTGG TGCCTGGGCCCAAGAAAGCACCCATGGACTCACTGTTTGACTACGGCACCTATC GTCACCACTCCAGTGACAACAAGAGGTGGAGGAAGAAGATCATAGAGAAGCAG CCGCAGAGCCCCAAAGCCCCTGCCCCTCAGCCGCCCCCCATCCTCAAAGTCTTC AACCGGCCTATCCTCTTTGACATCGTGTCCCGGGGCTCCACTGCTGACCTGGAC GGGCTGCTCCCATTCTTGCTGACCCACAAGAAACGCCTAACTGATGAGGAGTTT CGAGAGCCATCTACGGGGAAGACCTGCCTGCCCAAGGCCTTGCTGAACCTGAG CAATGGCCGCAACGACACCATCCCTGTGCTGCTGGACATCGCGGAGCGCACCG GCAACATGCGGGAGTTCATTAACTCGCCCTTCCGTGACATCTACTATCGAGGTC AGACAGCCCTGCACATCGCCATTGAGCGTCGCTGCAAACACTACGTGGAACTTC TCGTGGCCCAGGGAGCTGATGTCCACGCCCAGGCCCGTGGGCGCTTCTTCCAGC CCAAGGATGAGGGGGGCTACTTCTACTTTGGGGAGCTGCCCCTGTCGCTGGCTG CCTGCACCAACCAGCCCCACATTGTCAACTACCTGACGGAGAACCCCCACAAGA AGGCGGACATGCGGCGCCAGGACTCGCGAGGCAACACAGTGCTGCATGCGCTG GTGGCCATTGCTGACAACACCCGTGAGAACACCAAGTTTGTTACCAAGATGTAC GACCTGCTGCTGCTCAAGTGTGCCCGCCTCTTCCCCGACAGCAACCTGGAGGCC GTGCTCAACAACGACGGCCTCTCGCCCCTCATGATGGCTGCCAAGACGGGCAA GATTGGGATCTTTCAGCACATCATCCGGCGGGAGGTGACGGATGAGGACACAC GGCACCTGTCCCGCAAGTTCAAGGACTGGGCCTATGGGCCAGTGTATTCCTCGC TTTATGACCTCTCCTCCCTGGACACGTGTGGGGAAGAGGCCTCCGTGCTGGAGA TCCTGGTGTACAACAGCAAGATTGAGAACCGCCACGAGATGCTGGCTGTGGAG CCCATCAATGAACTGCTGCGGGACAAGTGGCGCAAGTTCGGGGCCGTCTCCTTC TACATCAACGTGGTCTCCTACCTGTGTGCCATGGTCATCTTCACTCTCACCGCCT ACTACCAGCCGCTGGAGGGCACACCGCCGTACCCTTACCGCACCACGGTGGAC TACCTGCGGCTGGCTGGCGAGGTCATTACGCTCTTCACTGGGGTCCTGTTCTTC TTCACCAACATCAAAGACTTGTTCATGAAGAAATGCCCTGGAGTGAATTCTCTC TTCATTGATGGCTCCTTCCAGCTGCTCTACTTCATCTACTCTGTCCTGGTGATCG TCTCAGCAGCCCTCTACCTGGCAGGGATCGAGGCCTACCTGGCCGTGATGGTCT TTGCCCTGGTCCTGGGCTGGATGAATGCCCTTTACTTCACCCGTGGGCTGAAGC TGACGGGGACCTATAGCATCATGATCCAGAAGATTCTCTTCAAGGACCTTTTCC GATTCCTGCTCGTCTACTTGCTCTTCATGATCGGCTACGCTTCAGCCCTGGTCTC CCTCCTGAACCCGTGTGCCAACATGAAGGTGTGCAATGAGGACCAGACCAACT GCACAGTGCCCACTTACCCCTCGTGCCGTGACAGCGAGACCTTCAGCACCTTCC TCCTGGACCTGTTTAAGCTGACCATCGGCATGGGCGACCTGGAGATGCTGAGCA s GCACCAAGTACCCCGTGGTCTTCATCATCCTGCTGGTGACCTACATCATCCTCA CCTTTGTGCTGCTCCTCAACATGCTCATTGCCCTCATGGGCGAGACAGTGGGCC AGGTCTCCAAGGAGAGCAAGCACATCTGGAAGCTGCAGTGGGCCACCACCATC CTGGACATTGAGCGCTCCTTCCCCGTATTCCTGAGGAAGGCCTTCCGCTCTGGG GAGATGGTCACCGTGGGCAAGAGCTCGGACGGCACTCCTGACCGCAGGTGGTG o CTTCAGGGTGGATGAGGTGAACTGGTCTCACTGGAACCAGAACTTGGGCATCA TCAACGAGGACCCGGGCAAGAATGAGACCTACCAGTATTATGGCTTCTCGCATA CCGTGGGCCGCCTCCGCAGGGATCGCTGGTCCTCGGTGGTACCCCGCGTGGTG GAACTGAACAAGAACTCGAACCCGGACGAGGTGGTGGTGCCTCTGGACAGCAT GGGGAACCCCCGCTGCGATGGCCACCAGCAGGGTTACCCCCGCAAGTGGAGGA s CTGAGGACGCCCCGCTCTAGGGACTGCAGCCCAGCCCCAGCTTCTCTGCCCACT CATTTCTAGTCCAGCCGCATTTCAGCAGTGCCTTCTGGGGTGTCCCCCCACACC CTGCTTTGGCCCCAGAGGCGAGGGACCAGTGGAGGTGCCAGGGAGGCCCCAGG ACCCTGTGGTCCCCTGGCTCTGCCTCCCCACCCTGGGGTGGGGGCTCCCGGCCA CCTGTCTTGCTCCTATGGAGTCACATAAGCCAACGCCAGAGCCCCTCCACCTCA 0 GGCCCCAGCCCCTGCCTCTCCATTATTTATTTGCTCTGCTCTCAGGAAGCGACG TGACCCCTGCCCCAGCTGGAACCTGGCAGAGGCCTTAGGACCCCGTTCCAAGTG CACTGCCCGGCCAAGCCCCAGCCTCAGCCTGCGCCTGAGCTGCATGCGCCACCA TTTTTGGCAGCGTGGCAGCTTTGCAAGGGGCTGGGGCCCTCGGCGTGGGGCCA TGCCTTCTGTGTGTTCTGTAGTGTCTGGGATTTGCCGGTGCTCAATAAATGTTTA s TTCATTGACGGTGAAAAAAAAAAAAAAAAAAA hat.CACCCCAGGTGGGGAGGCTTTTCCTCTCTCCTCCCTGGCCAATCTGTTTGAGGG GGAGGATGGCTCCCTTTCGCCCTCACCGGCTGATGCCAGTCGCCCTGCTGGCCC AGGCGATGGGCGACCAAATCTGCGCATGAAGTTCCAGGGCGCCTTCCGCAAGG GGGTGCCCAACCCCATCGATCTGCTGGAGTCCACCCTATATGAGTCCTCGGTGG TGCCTGGGCCCAAGAAAGCACCCATGGACTCACTGTTTGACTACGGCACCTATC GTCACCACTCCAGTGACAACAAGAGGTGGAGGAAGAAGATCATAGAGAAGCAG CCGCAGAGCCCCAAAGCCCCTGCCCCTCAGCCGCCCCCCATCCTCAAAGTCTTC AACCGGCCTATCCTCTTTGACATCGTGTCCCGGGGCTCCACTGCTGACCTGGAC GGGCTGCTCCCATTCTTGCTGACCCACAAGAAACGCCTAACTGATGAGGAGTTT CGAGAGCCATCTACGGGGAAGACCTGCCTGCCCAAGGCCTTGCTGAACCTGAG CAATGGCCGCAACGACACCATCCCTGTGCTGCTGGACATCGCGGAGCGCACCG GCAACATGCGGGAGTTCATTAACTCGCCCTTCCGTGACATCTACTATCGAGGTC AGACAGCCCTGCACATCGCCATTGAGCGTCGCTGCAAACACTACGTGGAACTTC TCGTGGCCCAGGGAGCTGATGTCCACGCCCAGGCCCGTGGGCGCTTCTTCCAGC CCAAGGATGAGGGGGGCTACTTCTACTTTGGGGAGCTGCCCCTGTCGCTGGCTG CCTGCACCAACCAGCCCCACATTGTCAACTACCTGACGGAGAACCCCCACAAGA AGGCGGACATGCGGCGCCAGGACTCGCGAGGCAACACAGTGCTGCATGCGCTG GTGGCCATTGCTGACAACACCCGTGAGAACACCAAGTTTGTTACCAAGATGTAC GACCTGCTGCTGCTCAAGTGTGCCCGCCTCTTCCCCGACAGCAACCTGGAGGCC GTGCTCAACAACGAC GGCCTCTCGCCCCTCATGATGGCTGCCAAGACGGGCAA GATTGGGATCTTTCAGCACATCATCCGGCGGGAGGTGACGGATGAGGACACAC GGCACCTGTCCCGCAAGTTCAAGGACTGGGCCTATGGGCCAGTGTATTCCTCGC TTTATGACCTCTCCTCCCTGGACACGTGTGGGGAAGAGGCCTCCGTGCTGGAGA TCCTGGTGTACAACAGCAAGATTGAGAACCGCCACGAGATGCTGGCTGTGGAG CCCATCAATGAACTGCTGCGGGACAAGTGGCGCAAGTTCGGGGCCGTCTCCTTC TACATCAACGTGGTCTCCTACCTGTGTGCCATGGTCATCTTCACTCTCACCGCCT ACTACCAGCCGCTGGAGGGCACACCGCCGTACCCTTACCGCACCACGGTGGAC TACCTGCGGCTGGCTGGCGAGGTCATTACGCTCTTCACTGGGGTCCTGTTCTTC TTCACCAACATCAAAGACTTGTTCATGAAGAAATGCCCTGGAGTGAATTCTCTC TTCATTGATGGCTCCTTCCAGCTGCTCTACTTCATCTACTCTGTCCTGGTGATCG TCTCAGCAGCCCTCTACCTGGCAGGGATCGAGGCCTACCTGGCCGTGATGGTCT TTGCCCTGGTCCTGGGCTGGATGAATGCCCTTTACTTCACCCGTGGGCTGAAGC TGACGGGGACCTATAGCATCATGATCCAGAAGATTCTCTTCAAGGACCTTTTCC GATTCCTGCTCGTCTACTTGCTCTTCATGATCGGCTACGCTTCAGCCCTGGTCTC CCTCCTGAACCCGTGTGCCAACATGAAGGTGTGCAATGAGGACCAGACCAACT GCACAGTGCCCACTTACCCCTCGTGCCGTGACAGCGAGACCTTCAGCACCTTCC TCCTGGACCTGTTTAAGCTGACCATCGGCATGGGCGACCTGGAGATGCTGAGCA s GCACCAAGTACCCCGTGGTCTTCATCATCCTGCTGGTGACCTACATCATCCTCA CCTTTGTGCTGCTCCTCAACATGCTCATTGCCCTCATGGGCGAGACAGTGGGCC AGGTCTCCAAGGAGAGCAAGCACATCTGGAAGCTGCAGTGGGCCACCACCATC CTGGACATTGAGCGCTCCTTCCCCGTATTCCTGAGGAAGGCCTTCCGCTCTGGG GAGATGGTCACCGTGGGCAAGAGCTCGGACGGCACTCCTGACCGCAGGTGGTG o CTTCAGGGTGGATGAGGTGAACTGGTCTCACTGGAACCAGAACTTGGGCATCA TCAACGAGGACCCGGGCAAGAATGAGACCTACCAGTATTATGGCTTCTCGCATA CCGTGGGCCGCCTCCGCAGGGATCGCTGGTCCTCGGTGGTACCCCGCGTGGTG GAACTGAACAAGAACTCGAACCCGGACGAGGTGGTGGTGCCTCTGGACAGCAT GGGGAACCCCCGCTGCGATGGCCACCAGCAGGGTTACCCCCGCAAGTGGAGGA s CTGAGGACGCCCCGCTCTAGGGACTGCAGCCCAGCCCCAGCTTCTCTGCCCACT CATTTCTAGTCCAGCCGCATTTCAGCAGTGCCTTCTGGGGTGTCCCCCCACACC CTGCTTTGGCCCCAGAGGCGAGGGACCAGTGGAGGTGCCAGGGAGGCCCCAGG ACCCTGTGGTCCCCTGGCTCTGCCTCCCCACCCTGGGGTGGGGGCTCCCGGCCA CCTGTCTTGCT CCTATGGAGTCACATAAGCCAACGCCAGAGCCCCTCCACCTCA 0 GGCCCCAGCCCCTGCCTCTCCATTATTTATTTGCTCTGCTCTCAGGAAGCGACG TGACCCCTGCCCCAGCTGGAACCTGGCAGAGGCCTTAGGACCCCGTTCCAAGTG CACTGCCCGGCCAAGCCCCAGCCTCAGCCTGCGCCTGAGCTGCATGCGCCACCA TTTTTGGCAGCGTGGCAGCTTTGCAAGGGGCTGGGGCCCTCGGCGTGGGGCCA TGCCTTCTGTGTGTTCTGTAGTGTCTGGGATTTGCCGGTGCTCAATAAATGTTTA s TTCATTGACGGTGAAAAAAAAAAAAAAAAAAA has. 15. Nukleinsäure, dadurch gekennzeichnet, daß sie die Sequenz15. Nucleic acid, characterized in that it has the sequence ATGGCGGATTCCAGCGAAGGCCCCCGCGCGGGGCCCGGGGAGGTGGCTGAGCT CCCCGGGGATGAGAGTGGCACCCCAGGTGGGGAGGCTTTTCCTCTCTCCTCCCT o GGCCAATCTGTTTGAGGGGGAGGATGGCTCCCTTTCGCCCTCACCGGCTGATGC CAGTCGCCCTGCTGGCCCAGGCGATGGGCGACCAAATCTGCGCATGAAGTTCC AGGGCGCCTTCCGCAAGGGGGTGCCCAACCCCATCGATCTGCTGGAGTCCACC CTATATGAGTCCTCGGTGGTGCCTGGGCCCAAGAAAGCACCCATGGACTCACTG TTTGACTACGGCACCTATCGTCACCACTCCAGTGACAACAAGAGGTGGAGGAA GAAGATCATAGAGAAGCAGCCGCAGAGCCCCAAAGCCCCTGCCCCTCAGCCGC CCCCCATCCTCAAAGTCTTCAACCGGCCTATCCTCTTTGACATCGTGTCCCGGG GCTCCACTGCTGACCTGGACGGGCTGCTCCCATTCTTGCTGACCCACAAGAAAC GCCTAACTGATGAGGAGTTTCGAGAGCCATCTACGGGGAAGACCTGCCTGCCC AAGGCCTTGCTGAACCTGAGCAATGGCCGCAACGACACCATCCCTGTGCTGCTG GACATCGCGGAGCGCACCGGCAACATGCGGGAGTTCATTAACTCGCCCTTCCGT GACATCTACTATCGAGGTCAGACAGCCCTGCACATCGCCATTGAGCGTCGCTGC AAACACTACGTGGAACTTCTCGTGGCCCAGGGAGCTGATGTCCAcGCCCAGGCC CGTGGGCGCTTCTTCCAGCCCAAGGATGAGGGGGGCTACTTCTACTTTGGGGA GCTGCCCCTGTCGCTGGCTGCCTGCACCAACCAGCCCCACATTGTCAACTACCT GACGGAGAACCCCCACAAGAAGGCGGACATGCGGCGCCAGGACTCGCGAGGC AACACAGTGCTGCATGCGCTGGTGGCCATTGCTGACAACACCCGTGAGAACAC CAAGTTTGTTACCAAGATGTACGACCTGCTGCTGCTCAAGTGTGCCCGCCTCTT CCCCGACAGCAACCTGGAGGCCGTGCTCAACAACGACGGCCTCTCGCCCCTCAT GATGGCTGCCAAGACGGGCAAGATTGGGATCTTTCAGCACATCATCCGGCGGG AGGTGACGGATGAGGACACACGGCACCTGTCCCGCAAGTTCAAGGACTGGGCC TATGGGCCAGTGTATTCCTCGCTTTATGACCTCTCCTCCCTGGACACGTGTGGG GAAGAGGCCTCCGTGCTGGAGATCCTGGTGTACAACAGCAAGATTGAGAACCG CCACGAGATGCTGGCTGTGGAGCCCATCAATGAACTGCTGCGGGACAAGTGGC GCAAGTTCGGGGCCGTCTCCTTCTACATCAACGTGGTCTCCTACCTGTGTGCCA TGGTCATCTTCACTCTCACCGCCTACTACCAGCCGCTGGAGGGCACACCGCCGT ACCCTTACCGCACCACGGTGGACTACCTGCGGCTGGCTGGCGAGGTCATTACGC TCTTCACTGGGGTCCTGTTCTTCTTCACCAACATCAAAGACTTGTTCATGAAGA AATGCCCTGGAGTGAATTCTCTCTTCATTGATGGCTCCTTCCAGCTGCTCTACTT CATCTACTCTGTCCTGGTGATCGTCTCAGCAGCCCTCTACCTGGCAGGGATCGA GGCCTACCTGGCCGTGATGGTCTTTGCCCTGGTCCTGGGCTGGATGAATGCCCT TTACTTCACCCGTGGGCTGAAGCTGACGGGGACCTATAGCATCATGATCCAGAA GATTCTCTTCAAGGACCTTTTCCGATTCCTGCTCGTCTACTTGCTCTTCATGATC GGCTACGCTTCAGCCCTGGTCTCCCTCCTGAACCCGTGTGCCAACATGAAGGTG TGCAATGAGGACCAGACCAACTGCACAGTGCCCACTTACCCCTCGTGCCGTGAC AGCGAGACCTTCAGCACCTTCCTCCTGGACCTGTTTAAGCTGACCATCGGCATG GGCGACCTGGAGATGCTGAGCAGCACCAAGTACCCCGTGGTCTTCATCATCCTG CTGGTGACCTACATCATCCTCACCTTTGTGCTGCTCCTCAACATGCTCATTGCCC TCATGGGCGAGACAGTGGGCCAGGTCTCCAAGGAGAGCAAGCACATCTGGAAG CTGCAGTGGGCCACCACCATCCTGGACATTGAGCGCTCCTTCCCCGTATTCCTG AGGAAGGCCTTCCGCTCTGGGGAGATGGTCACCGTGGGCAAGAGCTCGGACGG CACTCCTGACCGCAGGTGGTGCTTCAGGGTGGATGAGGTGAACTGGTCTCACTG GAACCAGAACTTGGGCATCATCAACGAGGACCCGGGCAAGAATGAGACCTACC AGTATTATGGCTTCTCGCATACCGTGGGCCGCCTCCGCAGGGATCGCTGGTCCT CGGTGGTACCCCGCGTGGTGGAACTGAACAAGAACTCGAACCCGGACGAGGTG GTGGTGCCTCTGGACAGCATGGGGAACCCCCGCTGCGATGGCCACCAGCAGGG TTACCCCCGCAAGTGGAGGACTGAGGACGCCCCGCTCTAG oder eine Teilsequenz hiervon, eine Nukleinsäure, die an besagte Sequenz unter stringenten Bedingungen hybridisieren kann, eine allele Variante oder eine fünktionelle Variante von besagter Sequenz oder eine Variante der Nukleinsäure aufgrund des degenerativen Kodes umfaßt.ATGGCGGATTCCAGCGAAGGCCCCCGCGCGGGGCCCGGGGAGGTGGCTGAGCT CCCCGGGGATGAGAGTGGCACCCCAGGTGGGGAGGCTTTTCCTCTCTCCTCCCT o GGCCAATCTGTTTGAGGGGGAGGATGGCTCCCTTTCGCCCTCACCGGCTGATGC CAGTCGCCCTGCTGGCCCAGGCGATGGGCGACCAAATCTGCGCATGAAGTTCC AGGGCGCCTTCCGCAAGGGGGTGCCCAACCCCATCGATCTGCTGGAGTCCACC CTATATGAGTCCTCGGTGGTGCCTGGGCCCAAGAAAGCACCCATGGACTCACTG TTTGACTACGGCACCTATCGTCACCACTCCAGTGACAACAAGAGGTGGAGGAA GAAGATCATAGAGAAGCAGCCGCAGAGCCCCAAAGCCCCTGCCCCTCAGCCGC CCCCCATCCTCAAAGTCTTCAACCGGCCTATCCTCTTTGACATCGTGTCCCGGG GCTCCACTGCTGACCTGGACGGGCTGCTCCCATTCTTGCTGACCCACAAGAAAC GCCTAACTGATGAGGAGTTTCGAGAGCCATCTACGGGGAAGACCTGCCTGCCC AAGGCCTTGCTGAACCTGAGCAATGGCCGCAACGACACCATCCCTGTGCTGCTG GACATCGCGGAGCGCACCGGCAACATGCGGGAGTTCATTAACTCGCCCTTCCGT GACATCTACTATCGAGGTCAGACAGCCCTGCACATCGCCATTGAGCGTCGCTGC AAACACTACGTGGAACTTCTCGTGGCCCAGGGAGCTGATGTCCAcGCCCAGGCC CGTGGGCGCTTCTTCCAGCCCAAGGATGAGGGGGGCTACTTCTACTTTGGGGA GCTGCCCCTGTCGCTGGCTGCCTGCACCAACCAGCCCCACATTGTCAACTACCT GACGGAGAACCCCCACAAGAAGGCGGACATGCGGCGCCAGGACTCGCGAGGC AACACAGTGCTGCATGCGCTGGTGGCCATTGCTGACAACACCCGTGAGAACAC CAAGTTTGTTACCAAGATGTACGACCTGCTGCTGCTCAAGTGTGCCCGCCTCTT CCCCGACAGCAACCTGGAGGCCGTGCTCAACAACGACGGCCTCTCGCCCCTCAT GATGGCTGCCAAGACGGGCAAGATTGGGATCTTTCAGCACATCATCCGGCGGG AGGTGACGGATGAGGACACACGGCACCTGTCCCGCAAGTTCAAGGACTGGGCC TATGGGCCAGTGTATTCCT CGCTTTATGACCTCTCCTCCCTGGACACGTGTGGG GAAGAGGCCTCCGTGCTGGAGATCCTGGTGTACAACAGCAAGATTGAGAACCG CCACGAGATGCTGGCTGTGGAGCCCATCAATGAACTGCTGCGGGACAAGTGGC GCAAGTTCGGGGCCGTCTCCTTCTACATCAACGTGGTCTCCTACCTGTGTGCCA TGGTCATCTTCACTCTCACCGCCTACTACCAGCCGCTGGAGGGCACACCGCCGT ACCCTTACCGCACCACGGTGGACTACCTGCGGCTGGCTGGCGAGGTCATTACGC TCTTCACTGGGGTCCTGTTCTTCTTCACCAACATCAAAGACTTGTTCATGAAGA AATGCCCTGGAGTGAATTCTCTCTTCATTGATGGCTCCTTCCAGCTGCTCTACTT CATCTACTCTGTCCTGGTGATCGTCTCAGCAGCCCTCTACCTGGCAGGGATCGA GGCCTACCTGGCCGTGATGGTCTTTGCCCTGGTCCTGGGCTGGATGAATGCCCT TTACTTCACCCGTGGGCTGAAGCTGACGGGGACCTATAGCATCATGATCCAGAA GATTCTCTTCAAGGACCTTTTCCGATTCCTGCTCGTCTACTTGCTCTTCATGATC GGCTACGCTTCAGCCCTGGTCTCCCTCCTGAACCCGTGTGCCAACATGAAGGTG TGCAATGAGGACCAGACCAACTGCACAGTGCCCACTTACCCCTCGTGCCGTGAC AGCGAGACCTTCAGCACCTTCCTCCTGGACCTGTTTAAGCTGACCATCGGCATG GGCGACCTGGAGATGCTGAGCAGCACCAAGTACCCCGTGGTCTTCATCATCCTG CTGGTGACCTACATCATCCTCACCTTTGTGCTGCTCCTCAACATGCTCATTGCCC TCATGGGCGAGACAGTGGGCCAGGTCTCCAAGGAGAGCAAGCACATCTGGAAG CTGCAGTGGGCCACCACCATCCTGGACATTGAGCGCTCCTTCCCCGTATTCCTG AGGAAGGCCTTCCGCTCTGGGGAGATGGTCACCGTGGGCAAGAGCTCGGACGG CACTCCTGACCGCAGGTGGTGCTTCAGGGTGGATGAGGTGAACTGGTCTCACTG GAACCAGAACTTGGGCATCATCAACGAGGACCCGGGCAAGAATGAGACCTACC AGTATTATGGCTTCTCGCATACCGTGGGCCGCCTCCGCAGGGATCGCTGGTCCT CGGTGGTACCCCGCGTGGTGGAACTGAACAAGAACTCGAACCCGGACGAGGTG GTGGTGCCTCTGGACAGCATGGGGAACCCCCGCTGCGATGGCCACCAGCAGGG TTACCCCCGCAAGTGGAGGACTGAGGACGCCCCGCTCTAG or a partial sequence thereof, a nucleic acid capable of hybridizing to said sequence under stringent conditions, an allelic variant or a fünktionelle variant of said sequence, or a variant of the nucleic acid due to the degenerative codes comprises , 16. Nukleinsäure, dadurch gekennzeichnet, daß sie die Sequenz16. Nucleic acid, characterized in that it has the sequence ATGGCGGATTCCAGCGAAGGCCCCCGCGCGGGGCCCGGGGAGGTGGCTGAGCT CCCCGGGGATGAGAGTGGCACCCCAGGTGGGGAGGCTTTTCCTCTCTCCTCCCT GGCCAATCTGTTTGAGGGGGAGGATGGCTCCCTTTCGCCCTCACCGGCTGATGC CAGTCGCCCTGCTGGCCCAGGCGATGGGCGACCAAATCTGCGCATGAAGTTCC AGGGCGCCTTCCGCAAGGGGGTGCCCAACCCCATCGATCTGCTGGAGTCCACC CTATATGAGTCCTCGGTGGTGCCTGGGCCCAAGAAAGCACCCATGGACTCACTG TTTGACTACGGCACCTATCGTCACCACTCCAGTGACAACAAGAGGTGGAGGAA GAAGATCATAGAGAAGCAGCCGCAGAGCCCCAAAGCCCCTGCCCCTCAGCCGC CCCCCATCCTCAAAGTCTTCAACCGGCCTATCCTCTTTGACATCGTGTCCCGGG GCTCCACTGCTGACCTGGACGGGCTGCTCCCATTCTTGCTGACCCACAAGAAAC GCCTAACTGATGAGGAGTTTCGAGAGCCATCTACGGGGAAGACCTGCCTGCCC AAGGCCTTGCTGAACCTGAGCAATGGCCGCAACGACACCATCCCTGTGCTGCTG GACATCGCGGAGCGCACCGGCAACATGCGGGAGTTCATTAACTCGCCCTTCCGT GACATCTACTATCGAGGTCAGACAGCCCTGCACATCGCCATTGAGCGTCGCTGC AAACACTACGTGGAACTTCTCGTGGCCCAGGGAGCTGATGTCCAcGCCCAGGCC CGTGGGCGCTTCTTCCAGCCCAAGGATGAGGGGGGCTACTTCTACTTTGGGGA GCTGCCCCTGTCGCTGGCTGCCTGCACCAACCAGCCCCACATTGTCAACTACCT GACGGAGAACCCCCACAAGAAGGCGGACATGCGGCGCCAGGACTCGCGAGGC AACACAGTGCTGCATGCGCTGGTGGCCATTGCTGACAACACCCGTGAGAACAC CAAGTTTGTTACCAAGATGTACGACCTGCTGCTGCTCAAGTGTGCCCGCCTCTT CCCCGACAGCAACCTGGAGGCCGTGCTCAACAACGACGGCCTCTCGCCCCTCAT GATGGCTGCCAAGACGGGCAAGATTGGGATCTTTCAGCACATCATCCGGCGGG AGGTGACGGATGAGGACACACGGCACCTGTCCCGCAAGTTCAAGGACTGGGCC TATGGGCCAGTGTATTCCTCGCTTTATGACCTCTCCTCCCTGGACACGTGTGGG GAAGAGGCCTCCGTGCTGGAGATCCTGGTGTACAACAGCAAGATTGAGAACCG CCACGAGATGCTGGCTGTGGAGCCCATCAATGAACTGCTGCGGGACAAGTGGC GCAAGTTCGGGGCCGTCTCCTTCTACATCAACGTGGTCTCCTACCTGTGTGCCA TGGTCATCTTCACTCTCACCGCCTACTACCAGCCGCTGGAGGGCACACCGCCGT ACCCTTACCGCACCACGGTGGACTACCTGCGGCTGGCTGGCGAGGTCATTACGC TCTTCACTGGGGTCCTGTTCTTCTTCACCAACATCAAAGACTTGTTCATGAAGA AATGCCCTGGAGTGAATTCTCTCTTCATTGATGGCTCCTTCCAGCTGCTCTACTT CATCTACTCTGTCCTGGTGATCGTCTCAGCAGCCCTCTACCTGGCAGGGATCGA GGCCTACCTGGCCGTGATGGTCTTTGCCCTGGTCCTGGGCTGGATGAATGCCCT TTACTTCACCCGTGGGCTGAAGCTGACGGGGACCTATAGCATCATGATCCAGAA GATTCTCTTCAAGGACCTTTTCCGATTCCTGCTCGTCTACTTGCTCTTCATGATC GGCTACGCTTCAGCCCTGGTCTCCCTCCTGAACCCGTGTGCCAACATGAAGGTG TGCAATGAGGACCAGACCAACTGCACAGTGCCCACTTACCCCTCGTGCCGTGAC AGCGAGACCTTCAGCACCTTCCTCCTGGACCTGTTTAAGCTGACCATCGGCATG GGCGACCTGGAGATGCTGAGCAGCACCAAGTACCCCGTGGTCTTCATCATCCTG CTGGTGACCTACATCATCCTCACCTTTGTGCTGCTCCTCAACATGCTCATTGCCC TCATGGGCGAGACAGTGGGCCAGGTCTCCAAGGAGAGCAAGCACATCTGGAAG CTGCAGTGGGCCACCACCATCCTGGACATTGAGCGCTCCTTCCCCGTATTCCTG AGGAAGGCCTTCCGCTCTGGGGAGATGGTCACCGTGGGCAAGAGCTCGGACGG CACTCCTGACCGCAGGTGGTGCTTCAGGGTGGATGAGGTGAACTGGTCTCACTG GAACCAGAACTTGGGCATCATCAACGAGGACCCGGGCAAGAATGAGACCTACC AGTATTATGGCTTCTCGCATACCGTGGGCCGCCTCCGCAGGGATCGCTGGTCCT CGGTGGTACCCCGCGTGGTGGAACTGAACAAGAACTCGAACCCGGACGAGGTG GTGGTGCCTCTGGACAGCATGGGGAACCCCCGCTGCGATGGCCACCAGCAGGGATGGCGGATTCCAGCGAAGGCCCCCGCGCGGGGCCCGGGGAGGTGGCTGAGCT CCCCGGGGATGAGAGTGGCACCCCAGGTGGGGAGGCTTTTCCTCTCTCCTCCCT GGCCAATCTGTTTGAGGGGGAGGATGGCTCCCTTTCGCCCTCACCGGCTGATGC CAGTCGCCCTGCTGGCCCAGGCGATGGGCGACCAAATCTGCGCATGAAGTTCC AGGGCGCCTTCCGCAAGGGGGTGCCCAACCCCATCGATCTGCTGGAGTCCACC CTATATGAGTCCTCGGTGGTGCCTGGGCCCAAGAAAGCACCCATGGACTCACTG TTTGACTACGGCACCTATCGTCACCACTCCAGTGACAACAAGAGGTGGAGGAA GAAGATCATAGAGAAGCAGCCGCAGAGCCCCAAAGCCCCTGCCCCTCAGCCGC CCCCCATCCTCAAAGTCTTCAACCGGCCTATCCTCTTTGACATCGTGTCCCGGG GCTCCACTGCTGACCTGGACGGGCTGCTCCCATTCTTGCTGACCCACAAGAAAC GCCTAACTGATGAGGAGTTTCGAGAGCCATCTACGGGGAAGACCTGCCTGCCC AAGGCCTTGCTGAACCTGAGCAATGGCCGCAACGACACCATCCCTGTGCTGCTG GACATCGCGGAGCGCACCGGCAACATGCGGGAGTTCATTAACTCGCCCTTCCGT GACATCTACTATCGAGGTCAGACAGCCCTGCACATCGCCATTGAGCGTCGCTGC AAACACTACGTGGAACTTCTCGTGGCCCAGGGAGCTGATGTCCAcGCCCAGGCC CGTGGGCGCTTCTTCCAGCCCAAGGATGAGGGGGGCTACTTCTACTTTGGGGA GCTGCCCCTGTCGCTGGCTGCCTGCACCAACCAGCCCCACATTGTCAACTACCT GACGGAGAACCCCCACAAGAAGGCGGACATGCGGCGCCAGGACTCGCGAGGC AACACAGTGCTGCATGCGCTGGTGGCCATTGCTGACAACACCCGTGAGAACAC CAAGTTTGTTACCAAGATGTACGACCTGCTGCTGCTCAAGTGTGCCCGCCTCTT CCCCGACAGCAACCTGGAGGCCGTGCTCAACAACGACGGCCTCTCGCCCCTCAT GATGGCTGCCAAGACGGGCAAGATTGGGATCTTTCAGCACATCATCCGGCGGG AGGTGACGGATGAGGACACACGGCACCTGTCCCGCAAGTTCAAGGACTGGGCC TATGGGCCAGTGTATTCCTCGCTTTATGACCTCTCCTCCCTGGACACGTGTGGG GAAGAGGCCTCCGTGCTGGAGATCCTGGTGTACAACAGCAAGATTGAGAACCG CCACGAGATGCTGGCTGTGGAGCCCATCAATGAACTGCTGCGGGACAAGTGGC GCAAGTTCGGGGCCGTCTCCTTCTACATCAACGTGGTCTCCTACCTGTGTGCCA TGGTCATCTTCACTCTCACCGCCTACTACCAGCCGCTGGAGGGCACACCGCCGT ACCCTTACCGCACCACGGTGGACTACCTGCGGCTGGCTGGCGAGGTCATTACGC TCTTCACTGGGGTCCTGTTCTTCTTCACCAACATCAAAGACTTGTTCATGAAGA AATGCCCTGGAGTGAATTCTCTCTTCATTGATGGCTCCTTCCAGCTGCTCTACTT CATCTACTCTGTCCTGGTGATCGTCTCAGCAGCCCTCTACCTGGCAGGGATCGA GGCCTACCTGGCCGTGATGGTCTTTGCCCTGGTCCTGGGCTGGATGAATGCCCT TTACTTCACCCGTGGGC TGAAGCTGACGGGGACCTATAGCATCATGATCCAGAA GATTCTCTTCAAGGACCTTTTCCGATTCCTGCTCGTCTACTTGCTCTTCATGATC GGCTACGCTTCAGCCCTGGTCTCCCTCCTGAACCCGTGTGCCAACATGAAGGTG TGCAATGAGGACCAGACCAACTGCACAGTGCCCACTTACCCCTCGTGCCGTGAC AGCGAGACCTTCAGCACCTTCCTCCTGGACCTGTTTAAGCTGACCATCGGCATG GGCGACCTGGAGATGCTGAGCAGCACCAAGTACCCCGTGGTCTTCATCATCCTG CTGGTGACCTACATCATCCTCACCTTTGTGCTGCTCCTCAACATGCTCATTGCCC TCATGGGCGAGACAGTGGGCCAGGTCTCCAAGGAGAGCAAGCACATCTGGAAG CTGCAGTGGGCCACCACCATCCTGGACATTGAGCGCTCCTTCCCCGTATTCCTG AGGAAGGCCTTCCGCTCTGGGGAGATGGTCACCGTGGGCAAGAGCTCGGACGG CACTCCTGACCGCAGGTGGTGCTTCAGGGTGGATGAGGTGAACTGGTCTCACTG GAACCAGAACTTGGGCATCATCAACGAGGACCCGGGCAAGAATGAGACCTACC AGTATTATGGCTTCTCGCATACCGTGGGCCGCCTCCGCAGGGATCGCTGGTCCT CGGTGGTACCCCGCGTGGTGGAACTGAACAAGAACTCGAACCCGGACGAGGTG GTGGTGCCTCTGGACAGCATGGGGAACCCCCGCTGCGATGGCCACCAGCAGGG TTACCCCCGCAAGTGGAGGACTGAGGACGCCCCGCTCTAG hat.TTACCCCCGCAAGTGGAGGACTGAGGACGCCCCGCTCTAG has. 17. Nukleinsäure, dadurch gekennzeichnet, daß sie die Sequenz s GGCCACGCGTCGACTAGTACGGGGGGGGGGGGGGGGGTGGCRGSRGGAKCAG GACTCGGCCGGAGGGATCAGGAAGCGGCGGCGCTGCGCCCGCGTCCTGAGGCT GAGAAGTACAAACAGATCTGGGTCCAGTATGGCAGATCCTGGTGATGGTCCCC GTGCAGCGCCTGGGGAGGTGGCTGAGCCCCCTGGAGATGAGAGTGGTACCTCT GGTGGGGAGGCCTTCCCCCTCTCTTCCCTGGCCAATCTGTTTGAGGGGGAGGAA o GGCTCCTCTTCTCTTTCCCCGGTGGATGCTAGCCGCCCTGCTGGCCCTGGCGAT GGACGTCCAAACCTGCGTATGAAGTTCCAGGGCGCTTTCCGCAAGGGGGTTCCC AACCCCATTGACCTGTTGGAGTCCACCCGGTACGAGTCCTCAGTAGTGCCTGGG CCCAAGAAAGCGCCCATGGATTCCTTGTTCGACTACGGCACTTACCGTCACCAC CCCAGTGACAACAAGAGATGGAGGAGAAAGGTCGTGGAGAAGCAGCCACAGA s GCCCCAAAGCTCCTGCACCCCAGCCACCCCCCATCCTCAAAGTCTTCAATCGGC CCATCCTCTTTGACATTGTGTCCCGGGGCTCCACTGCGGACCTAGATGGACTGC TCTCCTTCTTGTTGACCCACAAGAAGCGCCTGACTGATGAGGAGTTCCGGGAGC CGTCCACGGGGAAGACCTGCCTGCCCAAGGCGCTGCTGAACCTAAGCAACGGG CGCAACGACACCATCCCGGTGTTGCTGGACATTGCGGAGCGCACCGGCAACAT 0 GCGTGAATTCATCAACTCGCCCTTCAGAGACATCTACTACCGAGGCCAGACATC CCTGCACATTGCCATCGAACGGCGCTGCAAGCACTACGTGGAGCTGCTGGTGG CCCAGGGAGCCGACGTGCACGCCCAGGCCCGCGGCCGCTTCTTCCAGCCCAAG GATGAGGGAGGCTACTTCTACTTTGGGGAGCTGCCCTTGTCCCTGGCAGCCTGC ACCAACCAGCCGCACATCGTCAACTACCTGACAGAGAACCCTCACAAGAAAGC 5 TGACATGAGGCGACAGGACTCGAGGGGGAACACGGTGCTGCACGCGCTGGTGG CCATCGCCGACAACACCCGAGAGAACACCAAGTTTGTCACCAAGATGTACGAC CTGCTGCTTCTCAAGTGTTCACGCCTCTTCCCCGACAGCAACCTGGAGACAGTT CTCAACAATGATGGCCTTTCGCCTCTCATGATGGCTGCCAAGACAGGCAAGATC GGGGTCTTTCAGCACATCATCCGACGTGAGGTGACAGATGAGGACACCCGGCA17. Nucleic acid, characterized in that the sequence s GGCCACGCGTCGACTAGTACGGGGGGGGGGGGGGGGGTGGCRGSRGGAKCAG GACTCGGCCGGAGGGATCAGGAAGCGGCGGCGCTGCGCCCGCGTCCTGAGGCT GAGAAGTACAAACAGATCTGGGTCCAGTATGGCAGATCCTGGTGATGGTCCCC GTGCAGCGCCTGGGGAGGTGGCTGAGCCCCCTGGAGATGAGAGTGGTACCTCT GGTGGGGAGGCCTTCCCCCTCTCTTCCCTGGCCAATCTGTTTGAGGGGGAGGAA o GGCTCCTCTTCTCTTTCCCCGGTGGATGCTAGCCGCCCTGCTGGCCCTGGCGAT GGACGTCCAAACCTGCGTATGAAGTTCCAGGGCGCTTTCCGCAAGGGGGTTCCC AACCCCATTGACCTGTTGGAGTCCACCCGGTACGAGTCCTCAGTAGTGCCTGGG CCCAAGAAAGCGCCCATGGATTCCTTGTTCGACTACGGCACTTACCGTCACCAC CCCAGTGACAACAAGAGATGGAGGAGAAAGGTCGTGGAGAAGCAGCCACAGA s GCCCCAAAGCTCCTGCACCCCAGCCACCCCCCATCCTCAAAGTCTTCAATCGGC CCATCCTCTTTGACATTGTGTCCCGGGGCTCCACTGCGGACCTAGATGGACTGC TCTCCTTCTTGTTGACCCACAAGAAGCGCCTGACTGATGAGGAGTTCCGGGAGC CGTCCACGGGGAAGACCTGCCTGCCCAAGGCGCTGCTGAACCTAAGCAACGGG CGCAACGACACCATCCCGGTGTTGCTGGACATTGCGGAGCGCACCGGCAACAT 0 GCGTGAATTCATCAACTCGCCCTTCAGAGACATCTACTACCGAGGCCAGACATC CCTGCACATTGCCATCGAACGGCGCTGCAAGCACTACGTGGAGCTGCTGGTGG CCC AGGGAGCCGACGTGCACGCCCAGGCCCGCGGCCGCTTCTTCCAGCCCAAG GATGAGGGAGGCTACTTCTACTTTGGGGAGCTGCCCTTGTCCCTGGCAGCCTGC ACCAACCAGCCGCACATCGTCAACTACCTGACAGAGAACCCTCACAAGAAAGC 5 TGACATGAGGCGACAGGACTCGAGGGGGAACACGGTGCTGCACGCGCTGGTGG CCATCGCCGACAACACCCGAGAGAACACCAAGTTTGTCACCAAGATGTACGAC CTGCTGCTTCTCAAGTGTTCACGCCTCTTCCCCGACAGCAACCTGGAGACAGTT CTCAACAATGATGGCCTTTCGCCTCTCATGATGGCTGCCAAGACAGGCAAGATC GGGGTCTTTCAGCACATCATCCGACGTGAGGTGACAGATGAGGACACCCGGCA 3 TCTGTCTCGCAAGTTCAAGGACTGGGCCTATGGGCCTGTGTATTCTTCTCTCTA CGACCTCTCCTCCCTGGACACATGCGGGGAGGAGGTGTCCGTGCTGGAGATCCT GGTGTACAACAGCAAGATCGAGAACCGCCATGAGATGCTGGCTGTAGAGCCCA TTAACGAACTGTTGAGAGACAAGTGGCGTAAGTTTGGGGCTGTGTCCTTCTACA TCAACGTGGTCTCCTATCTGTGTGCCATGGTCATCTTCACCCTCACCGCCTACTA TCAGCCACTGGAGGGCACGCCACCCTACCCTTACCGGACCACAGTGGACTACCT GAGGCTGGCTGGCGAGGTCATCACGCTCTTCACAGGAGTCCTGTTCTTCTTTAC CAGTATCAAAGACTTGTTCACGAAGAAATGCCCTGGAGTGAATTCTCTCTTCGT CGATGGCTCCTTCCAGTTACTCTACTTCATCTACTCTGTGCTGGTGGTTGTCTCT GCGGCGCTCTACCTGGCTGGGATCGAGGCCTACCTGGCTGTGATGGTCTTTGCC CTGGTCCTGGGCTGGATGAATGCGCTGTACTTCACGCGCGGGTTGAAGCTGAC GGGGACCTACAGCATCATGATTCAGAAGATCCTCTTCAAAGACCTCTTCCGCTT CCTGCTTGTGTACCTGCTCTTCATGATCGGCTATGCCTCAGCCCTGGTCACCCTC CTGAATCCGTGCACCAACATGAAGGTCTGTGACGAGGACCAGAGCAACTGCAC GGTGCCCACGTATCCTGCGTGCCGCGACAGCGAGACCTTCAGCGCCTTCCTCCT GGACCTCTTCAAGCTCACCATCGGCATGGGAGACCTGGAGATGCTGAGCAGCG CCAAGTACCCCGTGGTCTTCATCCTCCTGCTGGTCACCTACATCATCCTCACCTT CGTGCTCCTGTTGAACATGCTTATCGCCCTCATGGGTGAGACCGTGGGCCAGGT GTCCAAGGAGAGCAAGCACATCTGGAAGTTGCAGTGGGCCACCACCATCCTGG ACATCGAGCGTTCCTTCCCTGTGTTCCTGAGGAAGGCCTTCCGCTCCGGAGAGA TGGTGACTGTGGGCAAGAGCTCAGATGGCACTCCGGACCGCAGGTGGTGCTTC AGGGTGGACGAGGTGAACTGGTCTCACTGGAACCAGAACTTGGGCATCATTAA CGAGGACCCTGGCAAGAGTGAAATCTACCAGTACTATGGCTTCTCCCACACCGT GGGGCGCCTTCGTAGGGATCGTTGGTCCTCGGTGGTGCCCCGCGTAGTGGAGC TGAACAAGAACTCAAGCGCAGATGAAGTGGTGGTACCCCTGGATAACCTAGGG AACCCCAACTGTGACGGCCACCAGCAGGGCTACGCTCCCAAGTGGAGGACGGA CGATGCCCCACTGTAGGGGCCGTGCCAGAGCTCGCACAGATAGTCCAGGCTTG GCCTTCGCTCCCACCTACATTTAGGCATTTGTCCGGTGTCTTCCCACACCCGCAT GGGACCTTGGAGGTGAGGGCCTCTGTGGCGACTCTGTGGAGGCCCCAGGACCC TCTGGTCCCCGCCAAGACTTTTGCCTTCAGCTCTACTCCCCACATGGGGGGGCG GGGCTCCTGGCTACCTGTCTCGCTCGCTCCCATGGAGTCACCTAAGCCAGCACA AGGCCCCTCTCCTCGAAAGGCTCAGGCCCCATCCCTCTTGTGTATTATTTATTGC TCTCCTCAGGAAAATGGGGTGGCAGGAGTCCACCCGCGGCTGGAACCTGGCCA GGGCTGAAGCTCATGCAGGGACGCTGCAGCTCCGACCTGCCACAGATCTGACC TGCTGCAGCCCTGGCTAGTGTGGGTCTTCTGTACTTTGAAGAGATCGGGGCCGC TGGTGCTCAATAAATGTTTATTCTCGGTGGAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA3 TCTGTCTCGCAAGTTCAAGGACTGGGCCTATGGGCCTGTGTATTCTTCTCTCTA CGACCTCTCCTCCCTGGACACATGCGGGGAGGAGGTGTCCGTGCTGGAGATCCT GGTGTACAACAGCAAGATCGAGAATCGCTCCCA TTAACGAACTGTTGAGAGACAAGTGGCGTAAGTTTGGGGCTGTGTCCTTCTACA TCAACGTGGTCTCCTATCTGTGTGCCATGGTCATCTTCACCCTCACCGCCTACTA TCAGCCACTGGAGGGCACGCCACCCTACCCTTACCGGACCACAGTGGACTACCT GAGGCTGGCTGGCGAGGTCATCACGCTCTTCACAGGAGTCCTGTTCTTCTTTAC CAGTATCAAAGACTTGTTCACGAAGAAATGCCCTGGAGTGAATTCTCTCTTCGT CGATGGCTCCTTCCAGTTACTCTACTTCATCTACTCTGTGCTGGTGGTTGTCTCT GCGGCGCTCTACCTGGCTGGGATCGAGGCCTACCTGGCTGTGATGGTCTTTGCC CTGGTCCTGGGCTGGATGAATGCGCTGTACTTCACGCGCGGGTTGAAGCTGAC GGGGACCTACAGCATCATGATTCAGAAGATCCTCTTCAAAGACCTCTTCCGCTT CCTGCTTGTGTACCTGCTCTTCATGATCGGCTATGCCTCAGCCCTGGTCACCCTC CTGAATCCGTGCACCAACATGAAGGTCTGTGACGAGGACCAGAGCAACTGCAC GGTGCCCACGTATCCTGCGTGCCGCGACAGCGAGACCTTCAGCGCCTTCCTCCT GGACCTCTTCAAGCTCACCATCGGCATGGGAGACCTGGAGATGCTGAGCAGCG CCAAGTACCCCGTGGTCTTCATCCTCCTGCTGGTCACCTACATCATCCTCACCTT CGTGCTCCTGTTGAACATGCTTATCGCCCTCATGGGTGAGACCGTGGGCCAGGT GTCCAAGGAGAGCAAGCACATCTGGAAGTTGCAGTGGGCCACCACCATCCTGG ACATCGAGCGTTCCTTCCCTGTGTTCCTGAGGAAGGCCTTCCGCTCCGGAGAGA TGGTGACTGTGGGCAAGAGCTCAGATGGCACTCCGGACCGCAGGTGGTGCTTC AGGGTGGACGA GGTGAACTGGTCTCACTGGAACCAGAACTTGGGCATCATTAA CGAGGACCCTGGCAAGAGTGAAATCTACCAGTACTATGGCTTCTCCCACACCGT GGGGCGCCTTCGTAGGGATCGTTGGTCCTCGGTGGTGCCCCGCGTAGTGGAGC TGAACAAGAACTCAAGCGCAGATGAAGTGGTGGTACCCCTGGATAACCTAGGG AACCCCAACTGTGACGGCCACCAGCAGGGCTACGCTCCCAAGTGGAGGACGGA CGATGCCCCACTGTAGGGGCCGTGCCAGAGCTCGCACAGATAGTCCAGGCTTG GCCTTCGCTCCCACCTACATTTAGGCATTTGTCCGGTGTCTTCCCACACCCGCAT GGGACCTTGGAGGTGAGGGCCTCTGTGGCGACTCTGTGGAGGCCCCAGGACCC TCTGGTCCCCGCCAAGACTTTTGCCTTCAGCTCTACTCCCCACATGGGGGGGCG GGGCTCCTGGCTACCTGTCTCGCTCGCTCCCATGGAGTCACCTAAGCCAGCACA AGGCCCCTCTCCTCGAAAGGCTCAGGCCCCATCCCTCTTGTGTATTATTTATTGC TCTCCTCAGGAAAATGGGGTGGCAGGAGTCCACCCGCGGCTGGAACCTGGCCA GGGCTGAAGCTCATGCAGGGACGCTGCAGCTCCGACCTGCCACAGATCTGACC TGCTGCAGCCCTGGCTAGTGTGGGTCTTCTGTACTTTGAAGAGATCGGGGCCGC TGGTGCTCAATAAATGTTTATTCTCGGTGGAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA AAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA AA oder eine Teilsequenz hiervon, eine Nukleinsäure, die an besagte Sequenz unter stringentenAA or a partial sequence thereof, a nucleic acid attached to said sequence under stringent Bedingungen hybridisieren kann, eine allele Variante oder eine fünktionelle Variante von besagter Sequenz oder eine Variante der Nukleinsäure aufgrund des degenerativen Kodes umfaßt, worin R ein A oder G, M ein A oder C, S ein C oder G, Y ein C oder T, K ein G oder T und W ein A oder T sein kann.Can hybridize conditions, comprises an allelic variant or a functional variant of said sequence or a variant of the nucleic acid based on the degenerative code, wherein R is an A or G, M is an A or C, S is a C or G, Y is a C or T, K can be a G or T and W can be an A or T. 18. Nukleinsäure, dadurch gekennzeichnet, daß sie die Sequenz18. Nucleic acid, characterized in that it has the sequence GGCCACGCGTCGACTAGTACGGGGGGGGGGGGGGGGGTGGCRGSRGGAKCAGGGCCACGCGTCGACTAGTACGGGGGGGGGGGGGGGGGTGGCRGSRGGAKCAG GACTCGGCCGGAGGGATCAGGAAGCGGCGGCGCTGCGCCCGCGTCCTGAGGCTGACTCGGCCGGAGGGATCAGGAAGCGGCGGCGCTGCGCCCGCGTCCTGAGGCT GAGAAGTACAAACAGATCTGGGTCCAGTATGGCAGATCCTGGTGATGGTCCCCGAGAAGTACAAACAGATCTGGGTCCAGTATGGCAGATCCTGGTGATGGTCCCC GTGCAGCGCCTGGGGAGGTGGCTGAGCCCCCTGGAGATGAGAGTGGTACCTCTGTGCAGCGCCTGGGGAGGTGGCTGAGCCCCCTGGAGATGAGAGTGGTACCTCT GGTGGGGAGGCCTTCCCCCTCTCTTCCCTGGCCAATCTGTTTGAGGGGGAGGAAGGTGGGGAGGCCTTCCCCCTCTCTTCCCTGGCCAATCTGTTTGAGGGGGAGGAA GGCTCCTCTTCTCTTTCCCCGGTGGATGCTAGCCGCCCTGCTGGCCCTGGCGATGGCTCCTCTTCTCTTTCCCCGGTGGATGCTAGCCGCCCTGCTGGCCCTGGCGAT GGACGTCCAAACCTGCGTATGAAGTTCCAGGGCGCTTTCCGCAAGGGGGTTCCCGGACGTCCAAACCTGCGTATGAAGTTCCAGGGCGCTTTCCGCAAGGGGGTTCCC AACCCCATTGACCTGTTGGAGTCCACCCGGTACGAGTCCTCAGTAGTGCCTGGGAACCCCATTGACCTGTTGGAGTCCACCCGGTACGAGTCCTCAGTAGTGCCTGGG CCCAAGAAAGCGCCCATGGATTCCTTGTTCGACTACGGCACTTACCGTCACCACCCCAAGAAAGCGCCCATGGATTCCTTGTTCGACTACGGCACTTACCGTCACCAC CCCAGTGACAACAAGAGATGGAGGAGAAAGGTCGTGGAGAAGCAGCCACAGACCCAGTGACAACAAGAGATGGAGGAGAAAGGTCGTGGAGAAGCAGCCACAGA GCCCCAAAGCTCCTGCACCCCAGCCACCCCCCATCCTCAAAGTCTTCAATCGGCGCCCCAAAGCTCCTGCACCCCAGCCACCCCCCATCCTCAAAGTCTTCAATCGGC CCATCCTCTTTGACATTGTGTCCCGGGGCTCCACTGCGGACCTAGATGGACTGCCCATCCTCTTTGACATTGTGTCCCGGGGCTCCACTGCGGACCTAGATGGACTGC TCTCCTTCTTGTTGACCCACAAGAAGCGCCTGACTGATGAGGAGTTCCGGGAGCTCTCCTTCTTGTTGACCCACAAGAAGCGCCTGACTGATGAGGAGTTCCGGGAGC CGTCCACGGGGAAGACCTGCCTGCCCAAGGCGCTGCTGAACCTAAGCAACGGGCGTCCACGGGGAAGACCTGCCTGCCCAAGGCGCTGCTGAACCTAAGCAACGGG CGCAACGACACCATCCCGGTGTTGCTGGACATTGCGGAGCGCACCGGCAACATCGCAACGACACCATCCCGGTGTTGCTGGACATTGCGGAGCGCACCGGCAACAT GCGTGAATTCATCAACTCGCCCTTCAGAGACATCTACTACCGAGGCCAGACATCGCGTGAATTCATCAACTCGCCCTTCAGAGACATCTACTACCGAGGCCAGACATC CCTGCACATTGCCATCGAACGGCGCTGCAAGCACTACGTGGAGCTGCTGGTGGCCTGCACATTGCCATCGAACGGCGCTGCAAGCACTACGTGGAGCTGCTGGTGG CCCAGGGAGCCGACGTGCACGCCCAGGCCCGCGGCCGCTTCTTCCAGCCCAAGCCCAGGGAGCCGACGTGCACGCCCAGGCCCGCGGCCGCTTCTTCCAGCCCAAG GATGAGGGAGGCTACTTCTACTTTGGGGAGCTGCCCTTGTCCCTGGCAGCCTGCGATGAGGGAGGCTACTTCTACTTTGGGGAGCTGCCCTTGTCCCTGGCAGCCTGC ACCAACCAGCCGCACATCGTCAACTACCTGACAGAGAACCCTCACAAGAAAGCACCAACCAGCCGCACATCGTCAACTACCTGACAGAGAACCCTCACAAGAAAGC TGACATGAGGCGACAGGACTCGAGGGGGAACACGGTGCTGCACGCGCTGGTGGTGACATGAGGCGACAGGACTCGAGGGGGAACACGGTGCTGCACGCGCTGGTGG CCATCGCCGACAACACCCGAGAGAACACCAAGTTTGTCACCAAGATGTACGACCCATCGCCGACAACACCCGAGAGAACACCAAGTTTGTCACCAAGATGTACGAC CTGCTGCTTCTCAAGTGTTCACGCCTCTTCCCCGACAGCAACCTGGAGACAGTT CTCAACAATGATGGCCTTTCGCCTCTCATGATGGCTGCCAAGACAGGCAAGATC GGGGTCTTTCAGCACATCATCCGACGTGAGGTGACAGATGAGGACACCCGGCA TCTGTCTCGCAAGTTCAAGGACTGGGCCTATGGGCCTGTGTATTCTTCTCTCTA CGACCTCTCCTCCCTGGACACATGCGGGGAGGAGGTGTCCGTGCTGGAGATCCT s GGTGTACAACAGCAAGATCGAGAACCGCCATGAGATGCTGGCTGTAGAGCCCA TTAACGAACTGTTGAGAGACAAGTGGCGTAAGTTTGGGGCTGTGTCCTTCTACA TCAACGTGGTCTCCTATCTGTGTGCCATGGTCATCTTCACCCTCACCGCCTACTA TCAGCCACTGGAGGGCACGCCACCCTACCCTTACCGGACCACAGTGGACTACCT GAGGCTGGCTGGCGAGGTCATCACGCTCTTCACAGGAGTCCTGTTCTTCTTTAC o CAGTATCAAAGACTTGTTCACGAAGAAATGCCCTGGAGTGAATTCTCTCTTCGT CGATGGCTCCTTCCAGTTACTCTACTTCATCTACTCTGTGCTGGTGGTTGTCTCT GCGGCGCTCTACCTGGCTGGGATCGAGGCCTACCTGGCTGTGATGGTCTTTGCC CTGGTCCTGGGCTGGATGAATGCGCTGTACTTCACGCGCGGGTTGAAGCTGAC GGGGACCTACAGCATCATGATTCAGAAGATCCTCTTCAAAGACCTCTTCCGCTT 5 CCTGCTTGTGTACCTGCTCTTCATGATCGGCTATGCCTCAGCCCTGGTCACCCTC CTGAATCCGTGCACCAACATGAAGGTCTGTGACGAGGACCAGAGCAACTGCAC GGTGCCCACGTATCCTGCGTGCCGCGACAGCGAGACCTTCAGCGCCTTCCTCCT GGACCTCTTCAAGCTCACCATCGGCATGGGAGACCTGGAGATGCTGAGCAGCG CCAAGTACCCCGTGGTCTTCATCCTCCTGCTGGTCACCTACATCATCCTCACCTT 0 CGTGCTCCTGTTGAACATGCTTATCGCCCTCATGGGTGAGACCGTGGGCCAGGT GTCCAAGGAGAGCAAGCACATCTGGAAGTTGCAGTGGGCCACCACCATCCTGG ACATCGAGCGTTCCTTCCCTGTGTTCCTGAGGAAGGCCTTCCGCTCCGGAGAGA TGGTGACTGTGGGCAAGAGCTCAGATGGCACTCCGGACCGCAGGTGGTGCTTC AGGGTGGACGAGGTGAACTGGTCTCACTGGAACCAGAACTTGGGCATCATTAA s CGAGGACCCTGGCAAGAGTGAAATCTACCAGTACTATGGCTTCTCCCACACCGT GGGGCGCCTTCGTAGGGATCGTTGGTCCTCGGTGGTGCCCCGCGTAGTGGAGC TGAACAAGAACTCAAGCGCAGATGAAGTGGTGGTACCCCTGGATAACCTAGGG AACCCCAACTGTGACGGCCACCAGCAGGGCTACGCTCCCAAGTGGAGGACGGA CGATGCCCCACTGTAGGGGCCGTGCCAGAGCTCGCACAGATAGTCCAGGCTTG so GCCTTCGCTCCCACCTACATTTAGGCATTTGTCCGGTGTCTTCCCACACCCGCAT GGGACCTTGGAGGTGAGGGCCTCTGTGGCGACTCTGTGGAGGCCCCAGGACCC TCTGGTCCCCGCCAAGACTTTTGCCTTCAGCTCTACTCCCCACATGGGGGGGCG GGGCTCCTGGCTACCTGTCTCGCTCGCTCCCATGGAGTCACCTAAGCCAGCACA AGGCCCCTCTCCTCGAAAGGCTCAGGCCCCATCCCTCTTGTGTATTATTTATTGC TCTCCTCAGGAAAATGGGGTGGCAGGAGTCCACCCGCGGCTGGAACCTGGCCA GGGCTGAAGCTCATGCAGGGACGCTGCAGCTCCGACCTGCCACAGATCTGACC TGCTGCAGCCCTGGCTAGTGTGGGTCTTCTGTACTTTGAAGAGATCGGGGCCGC TGGTGCTCAATAAATGTTTATTCTCGGTGGAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA AAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA AA hat, worin R ein A oder G, M ein A oder C, S ein C oder G, Y ein C oder T, K ein G oder T und W ein A oder T sein kann.CTGCTGCTTCTCAAGTGTTCACGCCTCTTCCCCGACAGCAACCTGGAGACAGTT CTCAACAATGATGGCCTTTCGCCTCTCATGATGGCTGCCAAGACAGGCAAGATC GGGGTCTTTCAGCACATCATCCGACGTGAGGTGACAGATGAGGACACCCGGCA TCTGTCTCGCAAGTTCAAGGACTGGGCCTATGGGCCTGTGTATTCTTCTCTCTA CGACCTCTCCTCCCTGGACACATGCGGGGAGGAGGTGTCCGTGCTGGAGATCCT s GGTGTACAACAGCAAGATCGAGAACCGCCATGAGATGCTGGCTGTAGAGCCCA TTAACGAACTGTTGAGAGACAAGTGGCGTAAGTTTGGGGCTGTGTCCTTCTACA TCAACGTGGTCTCCTATCTGTGTGCCATGGTCATCTTCACCCTCACCGCCTACTA TCAGCCACTGGAGGGCACGCCACCCTACCCTTACCGGACCACAGTGGACTACCT GAGGCTGGCTGGCGAGGTCATCACGCTCTTCACAGGAGTCCTGTTCTTCTTTAC o CAGTATCAAAGACTTGTTCACGAAGAAATGCCCTGGAGTGAATTCTCTCTTCGT CGATGGCTCCTTCCAGTTACTCTACTTCATCTACTCTGTGCTGGTGGTTGTCTCT GCGGCGCTCTACCTGGCTGGGATCGAGGCCTACCTGGCTGTGATGGTCTTTGCC CTGGTCCTGGGCTGGATGAATGCGCTGTACTTCACGCGCGGGTTGAAGCTGAC GGGGACCTACAGCATCATGATTCAGAAGATCCTCTTCAAAGACCTCTTCCGCTT 5 CCTGCTTGTGTACCTGCTCTTCATGATCGGCTATGCCTCAGCCCTGGTCACCCTC CTGAATCCGTGCACCAACATGAAGGTCTGTGACGAGGACCAGAGCAACTGCAC GGTGCCCACGTATCCTGCGTGCCGCGACAGCGAGACCTTCAGCGCCTTCCTCCT GGACCTCTTCAAGCTCACCATCGGCATGGGAGACCTGGAGATGCTGAGCAGCG CCAAGT ACCCCGTGGTCTTCATCCTCCTGCTGGTCACCTACATCATCCTCACCTT 0 CGTGCTCCTGTTGAACATGCTTATCGCCCTCATGGGTGAGACCGTGGGCCAGGT GTCCAAGGAGAGCAAGCACATCTGGAAGTTGCAGTGGGCCACCACCATCCTGG ACATCGAGCGTTCCTTCCCTGTGTTCCTGAGGAAGGCCTTCCGCTCCGGAGAGA TGGTGACTGTGGGCAAGAGCTCAGATGGCACTCCGGACCGCAGGTGGTGCTTC AGGGTGGACGAGGTGAACTGGTCTCACTGGAACCAGAACTTGGGCATCATTAA s CGAGGACCCTGGCAAGAGTGAAATCTACCAGTACTATGGCTTCTCCCACACCGT GGGGCGCCTTCGTAGGGATCGTTGGTCCTCGGTGGTGCCCCGCGTAGTGGAGC TGAACAAGAACTCAAGCGCAGATGAAGTGGTGGTACCCCTGGATAACCTAGGG AACCCCAACTGTGACGGCCACCAGCAGGGCTACGCTCCCAAGTGGAGGACGGA CGATGCCCCACTGTAGGGGCCGTGCCAGAGCTCGCACAGATAGTCCAGGCTTG so GCCTTCGCTCCCACCTACATTTAGGCATTTGTCCGGTGTCTTCCCACACCCGCAT GGGACCTTGGAGGTGAGGGCCTCTGTGGCGACTCTGTGGAGGCCCCAGGACCC TCTGGTCCCCGCCAAGACTTTTGCCTTCAGCTCTACTCCCCACATGGGGGGGCG GGGCTCCTGGCTACCTGTCTCGCTCGCTCCCATGGAGTCACCTAAGCCAGCACA AGGCCCCTCTCCTCGAAAGGCTCAGGCCCCATCCCTCTTGTGTATTATTTATTGC TCTCCTCAGGAAAATGGGGTGGCAGGAGTCCACCCGCGGCTGGAACCTGGCCA GGGCTGAAGCTCATGCAGGGACGCTGCAGCTCCGACCTGCCACAGATCTGACC TGCTGCAGCCCTGGCTAGTGTGGGTCTTCTGTACTTTGAAGAGATCGGGGCCGC TGGTGCTCAATAAATGTTTATTCTCGGTGGAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA AAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA AA is wherein R is A or G, M is A or C, S C or G, Y is C or T, K is G or T and W can be an A or T. 19. Nukleinsäure, dadurch gekennzeichnet, daß sie die Sequenz19. Nucleic acid, characterized in that it has the sequence ATGGCAGATCCTGGTGATGGTCCCCGTGCAGCGCCTGGGGAGGTGGCTGAGCC CCCTGGAGATGAGAGTGGTACCTCTGGTGGGGAGGCCTTCCCCCTCTCTTCCCT GGCCAATCTGTTTGAGGGGGAGGAAGGCTCCTCTTCTCTTTCCCCGGTGGATGC TAGCCGCCCTGCTGGCCCTGGCGATGGACGTCCAAACCTGCGTATGAAGTTCCA GGGCGCTTTCCGCAAGGGGGTTCCCAACCCCATTGACCTGTTGGAGTCCACCCG GTACGAGTCCTCAGTAGTGCCTGGGCCCAAGAAAGCGCCCATGGATTCCTTGTT CGACTACGGCACTTACCGTCACCACCCCAGTGACAACAAGAGATGGAGGAGAA AGGTCGTGGAGAAGCAGCCACAGAGCCCCAAAGCTCCTGCACCCCAGCCACCC CCCATCCTCAAAGTCTTCAATCGGCCCATCCTCTTTGACATTGTGTCCCGGGGCT CCACTGCGGACCTAGATGGACTGCTCTCCTTCTTGTTGACCCACAAGAAGCGCC TGACTGATGAGGAGTTCCGGGAGCCGTCCACGGGGAAGACCTGCCTGCCCAAG GCGCTGCTGAACCTAAGCAACGGGCGCAACGACACCATCCCGGTGTTGCTGGA CATTGCGGAGCGCACCGGCAACATGCGTGAATTCATCAACTCGCCCTTCAGAGA CATCTACTACCGAGGCCAGACATCCCTGCACATTGCCATCGAACGGCGCTGCAA GCACTACGTGGAGCTGCTGGTGGCCCAGGGAGCCGACGTGCACGCCCAGGCCC GCGGCCGCTTCTTCCAGCCCAAGGATGAGGGAGGCTACTTCTACTTTGGGGAGC TGCCCTTGTCCCTGGCAGCCTGCACCAACCAGCCGCACATCGTCAACTACCTGA CAGAGAACCCTCACAAGAAAGCTGACATGAGGCGACAGGACTCGAGGGGGAAC ACGGTGCTGCACGCGCTGGTGGCCATCGCCGACAACACCCGAGAGAACACCAA GTTTGTCACCAAGATGTACGACCTGCTGCTTCTCAAGTGTTCACGCCTCTTCCCC GACAGCAACCTGGAGACAGTTCTCAACAATGATGGCCTTTCGCCTCTCATGATG GCTGCCAAGACAGGCAAGATCGGGGTCTTTCAGCACATCATCCGACGTGAGGTATGGCAGATCCTGGTGATGGTCCCCGTGCAGCGCCTGGGGAGGTGGCTGAGCC CCCTGGAGATGAGAGTGGTACCTCTGGTGGGGAGGCCTTCCCCCTCTCTTCCCT GGCCAATCTGTTTGAGGGGGAGGAAGGCTCCTCTTCTCTTTCCCCGGTGGATGC TAGCCGCCCTGCTGGCCCTGGCGATGGACGTCCAAACCTGCGTATGAAGTTCCA GGGCGCTTTCCGCAAGGGGGTTCCCAACCCCATTGACCTGTTGGAGTCCACCCG GTACGAGTCCTCAGTAGTGCCTGGGCCCAAGAAAGCGCCCATGGATTCCTTGTT CGACTACGGCACTTACCGTCACCACCCCAGTGACAACAAGAGATGGAGGAGAA AGGTCGTGGAGAAGCAGCCACAGAGCCCCAAAGCTCCTGCACCCCAGCCACCC CCCATCCTCAAAGTCTTCAATCGGCCCATCCTCTTTGACATTGTGTCCCGGGGCT CCACTGCGGACCTAGATGGACTGCTCTCCTTCTTGTTGACCCACAAGAAGCGCC TGACTGATGAGGAGTTCCGGGAGCCGTCCACGGGGAAGACCTGCCTGCCCAAG GCGCTGCTGAACCTAAGCAACGGGCGCAACGACACCATCCCGGTGTTGCTGGA CATTGCGGAGCGCACCGGCAACATGCGTGAATTCATCAACTCGCCCTTCAGAGA CATCTACTACCGAGGCCAGACATCCCTGCACATTGCCATCGAACGGCGCTGCAA GCACTACGTGGAGCTGCTGGTGGCCCAGGGAGCCGACGTGCACGCCCAGGCCC GCGGCCGCTTCTTCCAGCCCAAGGATGAGGGAGGCTACTTCTACTTTGGGGAGC TGCCCTTGTCCCTGGCAGCCTGCACCAACCAGCCGCACATCGTCAACTACCTGA CAGAGAACCCTCACAAGAAAGCTGACATGAGGCGACAGGACTCGAGGGGGAAC ACGGTGCTGCACGCGC TGGTGGCCATCGCCGACAACACCCGAGAGAACACCAA GTTTGTCACCAAGATGTACGACCTGCTGCTTCTCAAGTGTTCACGCCTCTTCCCC GACAGCAACCTGGAGACAGTTCTCAACAATGATGGCCTTTCGCCTCTCATGATG GCTGCCAAGACAGGCAAGATCGGGGTCTTTCAGCACATCATCCGACGTGAGGT GACAGATGAGGACACCCGGCATCTGTCTCGCAAGTTCAAGGACTGGGCCTATGGACAGATGAGGACACCCGGCATCTGTCTCGCAAGTTCAAGGACTGGGCCTATG GGCCTGTGTATTCTTCTCTCTACGACCTCTCCTCCCTGGACACATGCGGGGAGGGGCCTGTGTATTCTTCTCTCTACGACCTCTCCTCCCTGGACACATGCGGGGAGG AGGTGTCCGTGCTGGAGATCCTGGTGTACAACAGCAAGATCGAGAACCGCCATAGGTGTCCGTGCTGGAGATCCTGGTGTACAACAGCAAGATCGAGAACCGCCAT GAGATGCTGGCTGTAGAGCCCATTAACGAACTGTTGAGAGACAAGTGGCGTAAGAGATGCTGGCTGTAGAGCCCATTAACGAACTGTTGAGAGACAAGTGGCGTAA GTTTGGGGCTGTGTCCTTCTACATCAACGTGGTCTCCTATCTGTGTGCCATGGTGTTTGGGGCTGTGTCCTTCTACATCAACGTGGTCTCCTATCTGTGTGCCATGGT CATCTTCACCCTCACCGCCTACTATCAGCCACTGGAGGGCACGCCACCCTACCCCATCTTCACCCTCACCGCCTACTATCAGCCACTGGAGGGCACGCCACCCTACCC TTACCGGACCACAGTGGACTACCTGAGGCTGGCTGGCGAGGTCATCACGCTCTTTTACCGGACCACAGTGGACTACCTGAGGCTGGCTGGCGAGGTCATCACGCTCTT CACAGGAGTCCTGTTCTTCTTTACCAGTATCAAAGACTTGTTCACGAAGAAATGCACAGGAGTCCTGTTCTTCTTTACCAGTATCAAAGACTTGTTCACGAAGAAATG CCCTGGAGTGAATTCTCTCTTCGTCGATGGCTCCTTCCAGTTACTCTACTTCATCCCCTGGAGTGAATTCTCTCTTCGTCGATGGCTCCTTCCAGTTACTCTACTTCATC TACTCTGTGCTGGTGGTTGTCTCTGCGGCGCTCTACCTGGCTGGGATCGAGGCCTACTCTGTGCTGGTGGTTGTCTCTGCGGCGCTCTACCTGGCTGGGATCGAGGCC TACCTGGCTGTGATGGTCTTTGCCCTGGTCCTGGGCTGGATGAATGCGCTGTACTACCTGGCTGTGATGGTCTTTGCCCTGGTCCTGGGCTGGATGAATGCGCTGTAC TTCACGCGCGGGTTGAAGCTGACGGGGACCTACAGCATCATGATTCAGAAGATTTCACGCGCGGGTTGAAGCTGACGGGGACCTACAGCATCATGATTCAGAAGAT CCTCTTCAAAGACCTCTTCCGCTTCCTGCTTGTGTACCTGCTCTTCATGATCGGCCCTCTTCAAAGACCTCTTCCGCTTCCTGCTTGTGTACCTGCTCTTCATGATCGGC TATGCCTCAGCCCTGGTCACCCTCCTGAATCCGTGCACCAACATGAAGGTCTGTTATGCCTCAGCCCTGGTCACCCTCCTGAATCCGTGCACCAACATGAAGGTCTGT GACGAGGACCAGAGCAACTGCACGGTGCCCACGTATCCTGCGTGCCGCGACAGGACGAGGACCAGAGCAACTGCACGGTGCCCACGTATCCTGCGTGCCGCGACAG CGAGACCTTCAGCGCCTTCCTCCTGGACCTCTTCAAGCTCACCATCGGCATGGGCGAGACCTTCAGCGCCTTCCTCCTGGACCTCTTCAAGCTCACCATCGGCATGGG AGACCTGGAGATGCTGAGCAGCGCCAAGTACCCCGTGGTCTTCATCCTCCTGCTAGACCTGGAGATGCTGAGCAGCGCCAAGTACCCCGTGGTCTTCATCCTCCTGCT GGTCACCTACATCATCCTCACCTTCGTGCTCCTGTTGAACATGCTTATCGCCCTCGGTCACCTACATCATCCTCACCTTCGTGCTCCTGTTGAACATGCTTATCGCCCTC ATGGGTGAGACCGTGGGCCAGGTGTCCAAGGAGAGCAAGCACATCTGGAAGTTATGGGTGAGACCGTGGGCCAGGTGTCCAAGGAGAGCAAGCACATCTGGAAGTT GCAGTGGGCCACCACCATCCTGGACATCGAGCGTTCCTTCCCTGTGTTCCTGAGGCAGTGGGCCACCACCATCCTGGACATCGAGCGTTCCTTCCCTGTGTTCCTGAG GAAGGCCTTCCGCTCCGGAGAGATGGTGACTGTGGGCAAGAGCTCAGATGGCAGAAGGCCTTCCGCTCCGGAGAGATGGTGACTGTGGGCAAGAGCTCAGATGGCA CTCCGGACCGCAGGTGGTGCTTCAGGGTGGACGAGGTGAACTGGTCTCACTGGCTCCGGACCGCAGGTGGTGCTTCAGGGTGGACGAGGTGAACTGGTCTCACTGG AACCAGAACTTGGGCATCATTAACGAGGACCCTGGCAAGAGTGAAATCTACCAAACCAGAACTTGGGCATCATTAACGAGGACCCTGGCAAGAGTGAAATCTACCA GTACTATGGCTTCTCCCACACCGTGGGGCGCCTTCGTAGGGATCGTTGGTCCTCGTACTATGGCTTCTCCCACACCGTGGGGCGCCTTCGTAGGGATCGTTGGTCCTC GGTGGTGCCCCGCGTAGTGGAGCTGAACAAGAACTCAAGCGCAGATGAAGTGGGGTGGTGCCCCGCGTAGTGGAGCTGAACAAGAACTCAAGCGCAGATGAAGTGG TGGTACCCCTGGATAACCTAGGGAACCCCAACTGTGACGGCCACCAGCAGGGCTGGTACCCCTGGATAACCTAGGGAACCCCAACTGTGACGGCCACCAGCAGGGC TACGCTCCCAAGTGGAGGACGGACGATGCCCCACTGTAG oder eine Teilsequenz hiervon, eine Nukleinsäure, die an besagte Sequenz unter stringentenTACGCTCCCAAGTGGAGGACGGACGATGCCCCACTGTAG or a partial sequence thereof, a nucleic acid attached to said sequence under stringent Bedingungen hybridisieren kann, eine allele Variante oder eine fünktionelle Variante von besagter Sequenz oder eine Variante der Nukleinsäure aufgrund des degenerativen Kodes umfaßt. Conditions can hybridize, an allelic variant or a functional variant of said sequence or a variant of the nucleic acid comprises due to the degenerative code. 20. Nukleinsäure, dadurch gekennzeichnet, daß sie die Sequenz20. Nucleic acid, characterized in that it has the sequence ATGGCAGATCCTGGTGATGGTCCCCGTGCAGCGCCTGGGGAGGTGGCTGAGCC CCCTGGAGATGAGAGTGGTACCTCTGGTGGGGAGGCCTTCCCCCTCTCTTCCCT GGCCAATCTGTTTGAGGGGGAGGAAGGCTCCTCTTCTCTTTCCCCGGTGGATGC s TAGCCGCCCTGCTGGCCCTGGCGATGGACGTCCAAACCTGCGTATGAAGTTCCA GGGCGCTTTCCGCAAGGGGGTTCCCAACCCCATTGACCTGTTGGAGTCCACCCG GTACGAGTCCTCAGTAGTGCCTGGGCCCAAGAAAGCGCCCATGGATTCCTTGTT CGACTACGGCACTTACCGTCACCACCCCAGTGACAACAAGAGATGGAGGAGAA AGGTCGTGGAGAAGCAGCCACAGAGCCCCAAAGCTCCTGCACCCCAGCCACCC o CCCATCCTCAAAGTCTTCAATCGGCCCATCCTCTTTGACATTGTGTCCCGGGGCT CCACTGCGGACCTAGATGGACTGCTCTCCTTCTTGTTGACCCACAAGAAGCGCC TGACTGATGAGGAGTTCCGGGAGCCGTCCACGGGGAAGACCTGCCTGCCCAAG GCGCTGCTGAACCTAAGCAACGGGCGCAACGACACCATCCCGGTGTTGCTGGA CATTGCGGAGCGCACCGGCAACATGCGTGAATTCATCAACTCGCCCTTCAGAGA 5 CATCTACTACCGAGGCCAGACATCCCTGCACATTGCCATCGAACGGCGCTGCAA GCACTACGTGGAGCTGCTGGTGGCCCAGGGAGCCGACGTGCACGCCCAGGCCC GCGGCCGCTTCTTCCAGCCCAAGGATGAGGGAGGCTACTTCTACTTTGGGGAGC TGCCCTTGTCCCTGGCAGCCTGCACCAACCAGCCGCACATCGTCAACTACCTGA CAGAGAACCCTCACAAGAAAGCTGACATGAGGCGACAGGACTCGAGGGGGAAC ACGGTGCTGCACGCGCTGGTGGCCATCGCCGACAACACCCGAGAGAACACCAA GTTTGTCACCAAGATGTACGACCTGCTGCTTCTCAAGTGTTCACGCCTCTTCCCC GACAGCAACCTGGAGACAGTTCTCAACAATGATGGCCTTTCGCCTCTCATGATG GCTGCCAAGACAGGCAAGATCGGGGTCTTTCAGCACATCATCCGACGTGAGGT GACAGATGAGGACACCCGGCATCTGTCTCGCAAGTTCAAGGACTGGGCCTATG s GGCCTGTGTATTCTTCTCTCTACGACCTCTCCTCCCTGGACACATGCGGGGAGG AGGTGTCCGTGCTGGAGATCCTGGTGTACAACAGCAAGATCGAGAACCGCCAT GAGATGCTGGCTGTAGAGCCCATTAACGAACTGTTGAGAGACAAGTGGCGTAA GTTTGGGGCTGTGTCCTTCTACATCAACGTGGTCTCCTATCTGTGTGCCATGGT CATCTTCACCCTCACCGCCTACTATCAGCCACTGGAGGGCACGCCACCCTACCC 0 TTACCGGACCACAGTGGACTACCTGAGGCTGGCTGGCGAGGTCATCACGCTCTT CACAGGAGTCCTGTTCTTCTTTACCAGTATCAAAGACTTGTTCACGAAGAAATG CCCTGGAGTGAATTCTCTCTTCGTCGATGGCTCCTTCCAGTTACTCTACTTCATC TACTCTGTGCTGGTGGTTGTCTCTGCGGCGCTCTACCTGGCTGGGATCGAGGCC TACCTGGCTGTGATGGTCTTTGCCCTGGTCCTGGGCTGGATGAATGCGCTGTAC TTCACGCGCGGGTTGAAGCTGACGGGGACCTACAGCATCATGATTCAGAAGAT CCTCTTCAAAGACCTCTTCCGCTTCCTGCTTGTGTACCTGCTCTTCATGATCGGC s TATGCCTCAGCCCTGGTCACCCTCCTGAATCCGTGCACCAACATGAAGGTCTGT GACGAGGACCAGAGCAACTGCACGGTGCCCACGTATCCTGCGTGCCGCGACAG CGAGACCTTCAGCGCCTTCCTCCTGGACCTCTTCAAGCTCACCATCGGCATGGG AGACCTGGAGATGCTGAGCAGCGCCAAGTACCCCGTGGTCTTCATCCTCCTGCT GGTCACCTACATCATCCTCACCTTCGTGCTCCTGTTGAACATGCTTATCGCCCTC o ATGGGTGAGACCGTGGGCCAGGTGTCCAAGGAGAGCAAGCACATCTGGAAGTT GCAGTGGGCCACCACCATCCTGGACATCGAGCGTTCCTTCCCTGTGTTCCTGAG GAAGGCCTTCCGCTCCGGAGAGATGGTGACTGTGGGCAAGAGCTCAGATGGCA CTCCGGACCGCAGGTGGTGCTTCAGGGTGGACGAGGTGAACTGGTCTCACTGG AACCAGAACTTGGGCATCATTAACGAGGACCCTGGCAAGAGTGAAATCTACCA 5 GTACTATGGCTTCTCCCACACCGTGGGGCGCCTTCGTAGGGATCGTTGGTCCTC GGTGGTGCCCCGCGTAGTGGAGCTGAACAAGAACTCAAGCGCAGATGAAGTGG TGGTACCCCTGGATAACCTAGGGAACCCCAACTGTGACGGCCACCAGCAGGGC TACGCTCCCAAGTGGAGGACGGACGATGCCCCACTGTAG hat. 0 21. Rekombinanter Vektor, dadurch gekennzeichnet, daß er eine Nukleinsäure nach einem der Ansprüche 1 bis 20 enthält.ATGGCAGATCCTGGTGATGGTCCCCGTGCAGCGCCTGGGGAGGTGGCTGAGCC CCCTGGAGATGAGAGTGGTACCTCTGGTGGGGAGGCCTTCCCCCTCTCTTCCCT GGCCAATCTGTTTGAGGGGGAGGAAGGCTCCTCTTCTCTTTCCCCGGTGGATGC s TAGCCGCCCTGCTGGCCCTGGCGATGGACGTCCAAACCTGCGTATGAAGTTCCA GGGCGCTTTCCGCAAGGGGGTTCCCAACCCCATTGACCTGTTGGAGTCCACCCG GTACGAGTCCTCAGTAGTGCCTGGGCCCAAGAAAGCGCCCATGGATTCCTTGTT CGACTACGGCACTTACCGTCACCACCCCAGTGACAACAAGAGATGGAGGAGAA AGGTCGTGGAGAAGCAGCCACAGAGCCCCAAAGCTCCTGCACCCCAGCCACCC o CCCATCCTCAAAGTCTTCAATCGGCCCATCCTCTTTGACATTGTGTCCCGGGGCT CCACTGCGGACCTAGATGGACTGCTCTCCTTCTTGTTGACCCACAAGAAGCGCC TGACTGATGAGGAGTTCCGGGAGCCGTCCACGGGGAAGACCTGCCTGCCCAAG GCGCTGCTGAACCTAAGCAACGGGCGCAACGACACCATCCCGGTGTTGCTGGA CATTGCGGAGCGCACCGGCAACATGCGTGAATTCATCAACTCGCCCTTCAGAGA 5 CATCTACTACCGAGGCCAGACATCCCTGCACATTGCCATCGAACGGCGCTGCAA GCACTACGTGGAGCTGCTGGTGGCCCAGGGAGCCGACGTGCACGCCCAGGCCC GCGGCCGCTTCTTCCAGCCCAAGGATGAGGGAGGCTACTTCTACTTTGGGGAGC TGCCCTTGTCCCTGGCAGCCTGCACCAACCAGCCGCACATCGTCAACTACCTGA CAGAGAACCCTCACAAGAAAGCTGACATGAGGCGACAGGACTCGAGGGGGAAC ACGGTGCTGC ACGCGCTGGTGGCCATCGCCGACAACACCCGAGAGAACACCAA GTTTGTCACCAAGATGTACGACCTGCTGCTTCTCAAGTGTTCACGCCTCTTCCCC GACAGCAACCTGGAGACAGTTCTCAACAATGATGGCCTTTCGCCTCTCATGATG GCTGCCAAGACAGGCAAGATCGGGGTCTTTCAGCACATCATCCGACGTGAGGT GACAGATGAGGACACCCGGCATCTGTCTCGCAAGTTCAAGGACTGGGCCTATG s GGCCTGTGTATTCTTCTCTCTACGACCTCTCCTCCCTGGACACATGCGGGGAGG AGGTGTCCGTGCTGGAGATCCTGGTGTACAACAGCAAGATCGAGAACCGCCAT GAGATGCTGGCTGTAGAGCCCATTAACGAACTGTTGAGAGACAAGTGGCGTAA GTTTGGGGCTGTGTCCTTCTACATCAACGTGGTCTCCTATCTGTGTGCCATGGT CATCTTCACCCTCACCGCCTACTATCAGCCACTGGAGGGCACGCCACCCTACCC 0 TTACCGGACCACAGTGGACTACCTGAGGCTGGCTGGCGAGGTCATCACGCTCTT CACAGGAGTCCTGTTCTTCTTTACCAGTATCAAAGACTTGTTCACGAAGAAATG CCCTGGAGTGAATTCTCTCTTCGTCGATGGCTCCTTCCAGTTACTCTACTTCATC TACTCTGTGCTGGTGGTTGTCTCTGCGGCGCTCTACCTGGCTGGGATCGAGGCC TACCTGGCTGTGATGGTCTTTGCCCTGGTCCTGGGCTGGATGAATGCGCTGTAC TTCACGCGCGGGTTGAAGCTGACGGGGACCTACAGCATCATGATTCAGAAGAT CCTCTTCAAAGACCTCTTCCGCTTCCTGCTTGTGTACCTGCTCTTCATGATCGGC s TATGCCTCAGCCCTGGTCACCCTCCTGAATCCGTGCACCAACATGAAGGTCTGT GACGAGGACCAGAGCAACTGCACGGTGCCCACGTATCCTGCGTGCCGCGACAG CGAGACCTTCAGCGCCTTCCTCCTGGACCTCTTCAAGCTCACCATCGGCATGGG AGACCTGGAGATGCTGAGCAGCGCCAAGTACCCCGTGGTCTTCATCCTCCTGCT GGTCACCTACATCATCCTCACCTTCGTGCTCCTGTTGAACATGCTTATCGCCCTC o ATGGGTGAGACCGTGGGCCAGGTGTCCAAGGAGAGCAAGCACATCTGGAAGTT GCAGTGGGCCACCACCATCCTGGACATCGAGCGTTCCTTCCCTGTGTTCCTGAG GAAGGCCTTCCGCTCCGGAGAGATGGTGACTGTGGGCAAGAGCTCAGATGGCA CTCCGGACCGCAGGTGGTGCTTCAGGGTGGACGAGGTGAACTGGTCTCACTGG AACCAGAACTTGGGCATCATTAACGAGGACCCTGGCAAGAGTGAAATCTACCA 5 GTACTATGGCTTCTCCCACACCGTGGGGCGCCTTCGTAGGGATCGTTGGTCCTC GGTGGTGCCCCGCGTAGTGGAGCTGAACAAGAACTCAAGCGCAGATGAAGTGG TGGTACCCCTGGATAACCTAGGGAACCCCAACTGTGACGGCCACCAGCAGGGC TACGCTCCCAAGTGGAGGACGGACGATGCCCCACTGTAG has. 21. Recombinant vector, characterized in that it contains a nucleic acid according to one of claims 1 to 20. 22. Rekombinanter Vektor nach Anspruch 21, dadurch gekennzeichnet, daß er ein Expressionsvektor ist.22. Recombinant vector according to claim 21, characterized in that it is an expression vector. 23. Wirt, dadurch gekennzeichnet, daß er einen Vektor nach Anspruch 21 oder 22 enthält.23. Host, characterized in that it contains a vector according to claim 21 or 22. 2s 24. Wirt nach Anspruch 23, dadurch gekennzeichnet, daß er eine eukaryontische Wirtszelle ist.2s 24. Host according to claim 23, characterized in that it is a eukaryotic host cell. 25. Wirt nach Anspruch 23 oder 24, dadurch gekennzeichnet, daß er eine Insektenzelle ist.25. Host according to claim 23 or 24, characterized in that it is an insect cell. 26. Wirt nach einem der Ansprüche 23 bis 25, dadurch gekennzeichnet, daß er eine Sf9-, HEK293- oder HeLa- Zelle ist. so26. Host according to one of claims 23 to 25, characterized in that it is an Sf9, HEK293 or HeLa cell. so 27. Wirt nach Anspruch 23, dadurch gekennzeichnet, daß er ein Bakteriophage ist.27. Host according to claim 23, characterized in that it is a bacteriophage. 28. Wirt nach Anspruch 23, dadurch gekennzeichnet, daß er eine prokaryontische Wirtszelle ist. 28. Host according to claim 23, characterized in that it is a prokaryotic host cell. 29. Polypeptid, dadurch gekennzeichnet, daß es durch eine Nukleinsäure nach einem der Ansprüche 1 bis 20 kodiert wird, oder ein Fragment, eine fünktionelle Variante, eine allele Variante, eine Untereinheit, eine Variante aufgrund des degenerativen Nukleinsäure-Kodes, ein chemisches Derivat hiervon, ein Fusionsprotein mit besagtem s Polypeptid oder eine Glykosilierungs- Variante hiervon.29. Polypeptide, characterized in that it is encoded by a nucleic acid according to one of claims 1 to 20, or a fragment, a functional variant, an allelic variant, a subunit, a variant based on the degenerative nucleic acid code, a chemical derivative thereof , a fusion protein with said s polypeptide or a glycosylation variant thereof. 30. Polypeptid nach Anspruch 29, dadurch gekennzeichnet, daß es ein Fragment des nichtselektiven Kationenkanals OTRPC4 ist.30. Polypeptide according to claim 29, characterized in that it is a fragment of the non-selective cation channel OTRPC4. 31. Polypeptid nach einem der Ansprüche 29 oder 30, dadurch gekennzeichnet, daß es eine fünktionelle Variante des nicht-selektiven Kationenkanals OTRPC4 ist. o31. Polypeptide according to one of claims 29 or 30, characterized in that it is a functional variant of the non-selective cation channel OTRPC4. O 32. Polypeptid nach einem der Ansprüche 29 bis 31, dadurch gekennzeichnet, daß es eine allele Variante des nicht-selektiven Kationenkanals OTRPC4 ist.32. Polypeptide according to one of claims 29 to 31, characterized in that it is an allelic variant of the non-selective cation channel OTRPC4. 33. Polypeptid nach einem der Ansprüche 29 bis 32, dadurch gekennzeichnet, daß es eine Untereinheit des nicht-selektiven Kationenkanals OTRPC4 ist.33. Polypeptide according to one of claims 29 to 32, characterized in that it is a subunit of the non-selective cation channel OTRPC4. 34. Polypeptid nach einem der Ansprüche 29 bis 33, dadurch gekennzeichnet, daß es eine s Variante des nicht-selektiven Kationenkanals OTRPC4 aufgrund des degenerativen34. Polypeptide according to one of claims 29 to 33, characterized in that it is a variant of the non-selective cation channel OTRPC4 due to the degenerative Nukleinsäure-Kodes ist.Is nucleic acid codes. 35. Polypeptid nach einem der Ansprüche 29 bis 34, dadurch gekennzeichnet, daß es ein chemisches Derivat des nicht-selektiven Kationenkanals OTRPC4 ist.35. Polypeptide according to one of claims 29 to 34, characterized in that it is a chemical derivative of the non-selective cation channel OTRPC4. 36. Polypeptid nach einem der Ansprüche 29 bis 35, dadurch gekennzeichnet, daß es ein Fusionsprotein aus dem nicht-selektiven Kationenkanals OTRPC4 und einem weiteren36. Polypeptide according to one of claims 29 to 35, characterized in that it is a fusion protein from the non-selective cation channel OTRPC4 and another Protein ist.Is protein. 37. Polypeptid nach einem der Ansprüche 25 bis 36, dadurch gekennzeichnet, daß es eine Glykosilierungs- Variante des nicht-selektiven Kationenkanals OTRPC4 ist.37. Polypeptide according to one of claims 25 to 36, characterized in that it is a glycosylation variant of the non-selective cation channel OTRPC4. 38. Verfahren zur Herstellung von Polypeptiden nach einem der Ansprüche 29 bis 37, 5 dadurch gekennzeichnet, daß ein Wirt nach einem der Ansprüche 23 bis 28 kultiviert wird und besagtes Polypeptid isoliert wird.38. Process for the preparation of polypeptides according to one of claims 29 to 37, 5 characterized in that a host according to one of claims 23 to 28 is cultivated and said polypeptide is isolated. 39. Antikörpeφrotein, dadurch gekennzeichnet, daß es spezifisch für ein Polypeptid nach einem der Ansprüche 29 bis 37 ist.39. Antikörpeφrotein, characterized in that it is specific for a polypeptide according to one of claims 29 to 37. 40. Verfahren zur Herstellung von einem Antikörperprotein nach Anspruch 39, dadurch so gekennzeichnet, daß es die folgenden Schritte umfaßt: Ein Wirt ausgewählt aus einer eukaryontischen oder prokaryontischen Zelle, welcher einen oder mehrere Vektoren mit einer oder mehreren Nukleinsäuren spezifisch für das Antikörperprotein enthält, wird unter Bedingungen, unter denen besagtes Antikörperprotein durch besagte Wirtszelle exprimiert wird, kultiviert, und besagtes Antikörpeφrotein wird isoliert.40. A method for producing an antibody protein according to claim 39, characterized in that it comprises the following steps: A host is selected from a eukaryotic or prokaryotic cell which contains one or more vectors with one or more nucleic acids specific for the antibody protein under conditions under which said antibody protein is expressed by said host cell, and said antibody protein is isolated. 41. Verwendung eines Polypeptides nach einem der Ansprüche 29 bis 37 zum Auffinden von Antagonisten, Agonisten oder Modulatoren besagter Polypeptide.41. Use of a polypeptide according to any one of claims 29 to 37 for finding antagonists, agonists or modulators of said polypeptides. 42. Verwendung eines Wirtes nach einem der Ansprüche nach einem der Ansprüche 23 bis 28 zum Auffinden von Blocker, Aktivatoren oder Modulatoren von OTRPC4 Kanälen.42. Use of a host according to any one of claims 23 to 28 for locating blockers, activators or modulators of OTRPC4 channels. 43. Verfahren zum Auffinden von Blocker, Aktivatoren oder Modulatoren von OTRPC4, dadurch gekennzeichnet, daß ein Wirt nach einem der Ansprüche 23 bis 28 mit einer Testsubstanz inkubiert wird.43. A method for finding blockers, activators or modulators of OTRPC4, characterized in that a host according to one of claims 23 to 28 is incubated with a test substance. 44. Verfahren nach Anspruch 43, dadurch gekennzeichnet, daß ein Membranstrom gemessen wird, besagter Membranstrom mit einem Membranstrom verglichen wird, der bei besagtem Wirt nach Inkubation mit einer bekannten Kontrollsubstanz oder in Abwesenheit der Testsubstanz gemessen wird.44. The method according to claim 43, characterized in that a membrane stream is measured, said membrane stream is compared with a membrane stream which is measured in said host after incubation with a known control substance or in the absence of the test substance. 45. Verfahren nach einem der Ansprüche 43 oder 44, dadurch gekennzeichnet, daß besagter Blocker an einen Kanal gebunden ist, besagter Wirt mit einer Testsubstanz inkubiert wird und die Verdrängung des an den Kanal gebundenen Blockers oder Aktivators durch die Testsubstanz gemessen wird.45. The method according to any one of claims 43 or 44, characterized in that said blocker is bound to a channel, said host is incubated with a test substance and the displacement of the blocker or activator bound to the channel is measured by the test substance. 46. Verfahren nach einem der Ansprüche 43 bis 45, dadurch gekennzeichnet, daß ein Wirt nach einem der Ansprüche 23 bis 28 mit einer Testsubstanz inkubiert wird, die intrazelluläre Menge eines divalenten Kationes bestimmt wird und besagte Menge des divalenten Kationes mit der Menge besagten divalenten Kationes verglichen wird, die bei der Inkubation besagten Wirtes mit einer bekannten Kontrolle oder in der Abwesenheit der Testsubstanz gemessen wird.46. The method according to any one of claims 43 to 45, characterized in that a host according to one of claims 23 to 28 is incubated with a test substance, the intracellular amount of a divalent cation is determined and said amount of the divalent cation with the amount of said divalent cation is compared, which is measured in the incubation of said host with a known control or in the absence of the test substance. 47. Verfahren nach einem der Ansprüche 43 bis 46, dadurch gekennzeichnet, daß besagtes Verfahren ein Hochdurchsatzmusterungstest (HTS) oder ein Ultrahochdurchsatzmusterungstest (UHTS) ist.47. Method according to one of claims 43 to 46, characterized in that said method is a high-throughput pattern test (HTS) or an ultra-high-throughput pattern test (UHTS). 48. Aktivator von OTRPC4, auffindbar mit einem Verfahren nach Anspruch 43 bis 47.48. Activator of OTRPC4, can be found by a method according to claims 43 to 47. 49. Blocker von OTRPC4, auffindbar mit einem Verfahren nach Anspruch 43 bis 47.49. Blocker of OTRPC4, findable with a method according to claims 43 to 47. 50. Modulator von OTRPC4, auffindbar mit einem Verfahren nach Anspruch 43 bis 47.50. Modulator of OTRPC4, can be found with a method according to claims 43 to 47. 51. Anti-Sinn-Nukleinsäure, dadurch gekennzeichnet, daß sie an einen Teil einer Nukleinsäure nach einem der Ansprüche 1 bis 20 unter stringenten Bedingungen hybridisieren kann. 51. Anti-sense nucleic acid, characterized in that it can hybridize to part of a nucleic acid according to one of claims 1 to 20 under stringent conditions. 52. Anti-Sinn-Nukleinsäure nach Anspruch 51, dadurch gekennzeichnet, daß sie ein Ribozym ist.52. Anti-sense nucleic acid according to claim 51, characterized in that it is a ribozyme. 53. Pharmazeutische Zusammensetzung, dadurch gekennzeichnet, daß sie eine Nukleinsäure nach einem der Ansprüche 1 bis 20 sowie pharmazeutisch akzeptable Träger- oder s Hilfsstoffe enthält.53. Pharmaceutical composition, characterized in that it contains a nucleic acid according to one of claims 1 to 20 and pharmaceutically acceptable carriers or excipients. 54. Pharmazeutische Zusammensetzung, dadurch gekennzeichnet, daß sie eine Anti-Sinn- Nukleinsäure nach einem der Ansprüche 51 bis 52 sowie pharmazeutisch akzeptable Träger- oder Hilfsstoffe enthält.54. Pharmaceutical composition, characterized in that it contains an anti-sense nucleic acid according to any one of claims 51 to 52 and pharmaceutically acceptable carriers or excipients. 55. Pharmazeutische Zusammensetzung, dadurch gekennzeichnet, daß sie ein Polypeptid o nach einem der Ansprüche 29 bis 37 sowie pharmazeutisch akzeptable Träger- oder55. Pharmaceutical composition, characterized in that it is a polypeptide according to one of claims 29 to 37 and pharmaceutically acceptable carrier or Hilfsstoffe enthält.Contains auxiliaries. 56. Pharmazeutische Zusammensetzung, dadurch gekennzeichnet, daß sie einen Vektor nach einem der Ansprüche 21 bis 22 sowie pharmazeutisch akzeptable Träger- oder Hilfsstoffe enthält. s56. Pharmaceutical composition, characterized in that it contains a vector according to any one of claims 21 to 22 and pharmaceutically acceptable carriers or excipients. s 57. Pharmazeutische Zusammensetzung, dadurch gekennzeichnet, daß sie einen Wirt nach einem der Ansprüche 23 bis 28 sowie pharmazeutisch akzeptable Träger- oder Hilfsstoffe enthält.57. Pharmaceutical composition, characterized in that it contains a host according to one of claims 23 to 28 and pharmaceutically acceptable carriers or auxiliaries. 58. Verwendung einer Nukleinsäure nach einem der Ansprüche 1 bis 20 zur Herstellung eines Medikamentes für die Behandlung von einer Krankheit ausgewählt aus der Gruppe 0 von Diabetes, Hyperlipidämie, Hypeφroteinämie, Hypertonus, Schlaganfall,58. Use of a nucleic acid according to any one of claims 1 to 20 for the manufacture of a medicament for the treatment of a disease selected from group 0 of diabetes, hyperlipidemia, hypeφroteinemia, hypertension, stroke, Niereninsuffizienz, Schock sowie weiteren pathophysiologischen Zuständen, die durch Hyper- und Hypoosmolarität charakterisiert sind.Renal insufficiency, shock and other pathophysiological conditions characterized by hyper- and hypoosmolarity. 59. Verwendung einer Anti-Sinn-Nukleinsäure nach einem der Ansprüche 51 bis 52 zur Herstellung eines Medikamentes für die Behandlung von einer Krankheit ausgewählt aus 5 der Gruppe von Diabetes, Hyperlipidämie, Hypeφroteinämie, Hypertonus, Schlaganfall,59. Use of an anti-sense nucleic acid according to any one of claims 51 to 52 for the manufacture of a medicament for the treatment of a disease selected from 5 from the group of diabetes, hyperlipidemia, hypoproteinemia, hypertension, stroke, Niereninsuffizienz, Schock sowie weiteren pathophysiologischen Zuständen, die durch Hyper- und Hypoosmolarität charakterisiert sind.Renal insufficiency, shock and other pathophysiological conditions characterized by hyper- and hypoosmolarity. 60. Verwendung eines Vektors nach einem der Ansprüche 21 bis 22 zur Herstellung eines Medikamentes für die Behandlung von einer Krankheit ausgewählt aus der Gruppe von60. Use of a vector according to any one of claims 21 to 22 for the manufacture of a medicament for the treatment of a disease selected from the group of 30 Diabetes, Hyperlipidämie, Hypeφroteinämie, Hypertonus, Schlaganfall,30 diabetes, hyperlipidemia, hypereproteinemia, hypertension, stroke, Niereninsuffizienz, Schock sowie weiteren pathophysiologischen Zuständen, die durch Hyper- und Hypoosmolarität charakterisiert sind. Renal insufficiency, shock and other pathophysiological conditions characterized by hyper- and hypoosmolarity. 61. Verwendung eines Wirts nach einem der Ansprüche 23 bis 28 zur Herstellung eines Medikamentes für die Behandlung von einer Krankheit ausgewählt aus der Gruppe von Diabetes, Hyperlipidämie, Hypeφroteinämie, Hypertonus, Schlaganfall, Niereninsuffizienz, Schock sowie weiteren pathophysiologischen Zuständen, die durch s Hyper- und Hypoosmolarität charakterisiert sind.61. Use of a host according to any one of claims 23 to 28 for the manufacture of a medicament for the treatment of a disease selected from the group consisting of diabetes, hyperlipidemia, hypothyroidemia, hypertension, stroke, renal insufficiency, shock and other pathophysiological conditions caused by hypertension. and hypoosmolarity are characterized. 62. Nicht menschlicher Säuger, dadurch gekennzeichnet, daß er zusätzlich zu seinem Genom eine Nukleinsäure nach einem der Ansprüche 1 bis 20 (Transgen) enthält.62. Non-human mammal, characterized in that, in addition to its genome, it contains a nucleic acid according to one of Claims 1 to 20 (transgene). 63. Nicht menschlicher Säuger, dadurch gekennzeichnet, daß in seinem Genom eine Nukleinsäure nach einem der Ansprüche 1 bis 20 inaktiviert (Gen-Knock-out) ist. o63. Non-human mammal, characterized in that a nucleic acid according to one of claims 1 to 20 is inactivated (gene knock-out) in its genome. O 64. Nicht menschlicher Säuger, dadurch gekennzeichnet, daß in seinem Genom eine Nukleinsäure nach einem der Ansprüche 1 bis 20 modifiziert (Gen-Knock-in) ist.64. Non-human mammal, characterized in that a nucleic acid according to one of claims 1 to 20 is modified in its genome (gene knock-in). 65. Verfahren zur Herstellung eines nicht menschlichen Säugers, dadurch gekennzeichnet, daß a) embryonale Stammzellen besagten nicht menschlichen Säugetiers mit einem Vektor s transfiziert werden, der eine Nukleinsäure nach einem der Ansprüche 1 bis 20 enthält sowie eine Rekombination zwischen der genomischen DNA besagten nicht menschlichen Säugetieres und der im Vektor enthaltenen Nukleinsäure ermöglicht b) stabil transfizierte Stammzellen aus Schritt a) isoliert werden und diese in die Keimbahn ein weibliches Tier besagten nicht menschlichen Säugetieres überführt 0 werden c) die Nachkommen besagten weiblichen Tieres aus Schritt b) mit einem männlichen Tier derselben Art werden auf Tiere, die das durch die Nukleinsäure aus Schritt a) kodierte Polypeptid exprimieren, analysiert.65. A method for producing a non-human mammal, characterized in that a) embryonic stem cells of said non-human mammal are transfected with a vector s which contains a nucleic acid according to one of claims 1 to 20 and a recombination between the genomic DNA of said non-human Mammal and the nucleic acid contained in the vector enables b) stably transfected stem cells from step a) to be isolated and these transferred into the germline of a female animal of said non-human mammal 0 c) the progeny of said female animal from step b) with a male animal thereof Species are analyzed for animals which express the polypeptide encoded by the nucleic acid from step a). 66. Verfahren zur Herstellung eines nicht menschlichen Säugers, dadurch gekennzeichnet, 5 daß d) embryonale Stammzellen des besagten nicht menschlichen Säugetiers mit einem Vektor transfiziert werden, der eine Nukleinsäure enthält, die an eine Nukleinsäure nach einem der Ansprüche 1 bis 20 unter stringenten Bedingungen hybridisieren kann und durch Insertion einer zusätzlichen Nukleinsäuresequenz inaktiviert ist 0 sowie eine Rekombination zwischen der genomischen DNA des besagten nicht menschlichen Säugetieres und der im Vektor enthaltenen Nukleinsäure ermöglicht e) stabil transfizierte Stammzellen aus Schritt d) isoliert werden und diese in die Keimbahn eines weiblichen Tieres des besagten nicht menschlichen Säugetieres überführt werden. f) die Nachkommen des besagten weiblichen Tieres aus Schritt e) mit einem s männlichen Tier derselben Art werden auf Tiere, die das durch die Nukleinsäure aus66. A method for producing a non-human mammal, characterized in that 5) d) embryonic stem cells of said non-human mammal are transfected with a vector which contains a nucleic acid which hybridizes to a nucleic acid according to one of claims 1 to 20 under stringent conditions can and is inactivated by insertion of an additional nucleic acid sequence 0 and enables a recombination between the genomic DNA of said non-human mammal and the nucleic acid contained in the vector e) stably transfected stem cells from step d) are isolated and these are transferred into the germ line of a female animal of said non-human mammal. f) the offspring of the said female animal from step e) with a male animal of the same type are animals which are characterized by the nucleic acid Schritt d) kodierte Polypeptid gering oder überhaupt nicht exprimieren, analysiert. Step d) express the encoded polypeptide little or not at all. 67. Verfahren zur Herstellung eines nicht menschlichen Säugers, dadurch gekennzeichnet, daß g) embryonale Stammzellen des besagten nicht menschlichen Säugetiers mit einem o Vektor transfiziert werden, der eine Nukleinsäure enthält, die an eine Nukleinsäure nach einem der Ansprüche 1 bis 20 unter stringenten Bedingungen hybridisieren kann und durch Insertion einer zusätzlichen Nukleinsäuresequenz modifiziert ist, sowie eine Rekombination zwischen der genomischen DNA besagten nicht menschlichen Säugetieres und der im Vektor enthaltenen Nukleinsäure ermöglicht s h) stabil transfizierte Stammzellen aus Schritt g) isoliert werden und diese in die67. A method for producing a non-human mammal, characterized in that g) embryonic stem cells of said non-human mammal are transfected with an vector which contains a nucleic acid which hybridizes to a nucleic acid according to one of Claims 1 to 20 under stringent conditions can and is modified by insertion of an additional nucleic acid sequence, as well as a recombination between the genomic DNA of said non-human mammal and the nucleic acid contained in the vector enables sh) stably transfected stem cells from step g) to be isolated and these into the Keimbahn ein weibliches Tier des besagten nicht menschlichen Säugetieres überführt werden i) die Nachkommen des besagten weiblichen Tieres aus Schritt h) mit einem männlichen Tier derselben Art werden auf Tiere, die das durch die Nukleinsäure aus 0 . Schritt g) kodierte Polypeptid exprimieren, analysiert. Germline a female animal of said non-human mammal are transferred i) the offspring of said female animal from step h) with a male animal of the same type are transferred to animals which are derived from the nucleic acid from 0. Step g) express the encoded polypeptide, analyzed. 68. Pharmazeutische Zusammensetzung, enthaltend einen Modulator, Aktivator, oder Inhibitor von OTRPC4.68. Pharmaceutical composition containing a modulator, activator, or inhibitor of OTRPC4. 69. Verwendung eines Modulators, Aktivators oder Inhibitors zur Herstellung einer pharmazeutischen Zusammensetzung zur Regulierung der Osmolarität köφereigener Flüssigkeiten.69. Use of a modulator, activator or inhibitor for the production of a pharmaceutical composition for regulating the osmolarity of the body's own liquids. 70. Verwendung nach Anspruch 69, dadurch gekennzeichnet, dass die Flüssigkeit Liquor, Kammerwasser, und/oder Speichel ist.70. Use according to claim 69, characterized in that the liquid is liquor, aqueous humor, and / or saliva. 71. Polypeptid nach Anspruch 29 mit der Aminosäuresequenz71. Polypeptide according to claim 29 with the amino acid sequence MADSSEGPRAGPGEVAELPGDESGTPGGEAFPLSSLANLFEGEDGSLSPSPADAMADSSEGPRAGPGEVAELPGDESGTPGGEAFPLSSLANLFEGEDGSLSPSPADA SRPAGPGDGRPNLRMKFQGAFRKGVPNPIDLLESTLYESSVVPGPKKAPMDSLFSRPAGPGDGRPNLRMKFQGAFRKGVPNPIDLLESTLYESSVVPGPKKAPMDSLF DYGTYRHHSSDNKRWRKXIIEKQPQSPK PAPQPPP]LK NRPLLFDIVSRGSTDYGTYRHHSSDNKRWRKXIIEKQPQSPK PAPQPPP] LK NRPLLFDIVSRGST ADLDGLLPFLLTHKKRLTDEEFREPSTGKTCLPKALLNLSNGRNDTΓPVLLDIAEADLDGLLPFLLTHKKRLTDEEFREPSTGKTCLPKALLNLSNGRNDTΓPVLLDIAE RTGNMREFINSPFRDIYYRGQTALHIAFFIRRCKHYVELLVAQGADVHAQARGRFRTGNMREFINSPFRDIYYRGQTALHIAFFIRRCKHYVELLVAQGADVHAQARGRF FQPKDEG<ΤYFWGELPLSLAACTNQPMVNYLTENPHKKADMRRQDSRGNTVLFQPKDEG <ΤYFWGELPLSLAACTNQPMVNYLTENPHKKADMRRQDSRGNTVL HALVAIADNTRENTKFVTKMYDLLLLKCARLFPDSNLEAVLNNDGLSPLMMAHALVAIADNTRENTKFVTKMYDLLLLKCARLFPDSNLEAVLNNDGLSPLMMA AKTGKIGffQffllRREVTDEDTRHLSRKFKDWAYGPVYSSLYDLSSLDTCGEEASAKTGKIGffQffllRREVTDEDTRHLSRKFKDWAYGPVYSSLYDLSSLDTCGEEAS VLEILVYNSKMNRHEMLAVEPINELLPΩKWRKFGAVSFYINVVSYLCAMVIFTVLEILVYNSKMNRHEMLAVEPINELLPΩKWRKFGAVSFYINVVSYLCAMVIFT LTAYYQPLEGTPPYPYRTTVDYLRLAGEVITLFTGVLFFFTNIKDLFMKKCPGVLTAYYQPLEGTPPYPYRTTVDYLRLAGEVITLFTGVLFFFTNIKDLFMKKCPGV NSLFROGSFQLLYFIYSVLVIVSAALYLAGFFIAYLAVMWALVLGWMNALYFTRNSLFROGSFQLLYFIYSVLVIVSAALYLAGFFIAYLAVMWALVLGWMNALYFTR GLKLTGTYSIMIQKILFKDLFRFLLVYLLFMIGYASALVSLLNPCANMKVCNEDGLKLTGTYSIMIQKILFKDLFRFLLVYLLFMIGYASALVSLLNPCANMKVCNED QTNCTWTYPSCRDSETFSTFLLDLFKLTIGMGDLEMLSSTKYPVVFIILLVTYΠQTNCTWTYPSCRDSETFSTFLLDLFKLTIGMGDLEMLSSTKYPVVFIILLVTYΠ LTFVLLLNMLIALMGETVGQVSKESKHΓWKLQWATTILDIERSFP LRKAFRSLTFVLLLNMLIALMGETVGQVSKESKHΓWKLQWATTILDIERSFP LRKAFRS GEMVTVGKSSDGTPDRRWCFRVDEVNWSHWNQNLGΓΓNEDPGKNETYQYYGGEMVTVGKSSDGTPDRRWCFRVDEVNWSHWNQNLGΓΓNEDPGKNETYQYYG FSHTVGRLRRDRWSSWPRWELNKNSNPDEWVPLDSMGNPRCDGHQQGYPFSHTVGRLRRDRWSSWPRWELNKNSNPDEWVPLDSMGNPRCDGHQQGYP RKWRTEDAPL RKWRTEDAPL
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB9826359D0 (en) * 1998-12-01 1999-01-27 Glaxo Group Ltd Novel receptors
JP2003513669A (en) * 1999-11-12 2003-04-15 アボット・ラボラトリーズ Human vanilloid receptor gene
EP1257578A2 (en) * 1999-12-23 2002-11-20 Incyte Genomics, Inc. Transporters and ion channels
US20020072101A1 (en) * 2000-01-21 2002-06-13 Gaughan Glen T. Novel human nucleic acid molecules and polypeptides encoding cation channels

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2003087158A3 (en) * 2002-04-16 2004-06-10 Bayer Healthcare Ag Regulation of human transient receptor potential channel

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