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WO2001046451A1 - Migrastatin, process for producing the same and medicinal compositions - Google Patents

Migrastatin, process for producing the same and medicinal compositions Download PDF

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WO2001046451A1
WO2001046451A1 PCT/JP2000/009147 JP0009147W WO0146451A1 WO 2001046451 A1 WO2001046451 A1 WO 2001046451A1 JP 0009147 W JP0009147 W JP 0009147W WO 0146451 A1 WO0146451 A1 WO 0146451A1
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WO
WIPO (PCT)
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mygrass
cells
medium
culture
strain
Prior art date
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Ceased
Application number
PCT/JP2000/009147
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English (en)
French (fr)
Inventor
Tomio Takeuchi
Tsutomu Sawa
Masa Hamada
Hiroshi Naganawa
Yoshigazu Takahashi
Masaya Imoto
Kouichi Nakae
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Microbial Chemistry Research Foundation
Original Assignee
Microbial Chemistry Research Foundation
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Microbial Chemistry Research Foundation filed Critical Microbial Chemistry Research Foundation
Priority to AU24014/01A priority Critical patent/AU2401401A/en
Publication of WO2001046451A1 publication Critical patent/WO2001046451A1/ja
Anticipated expiration legal-status Critical
Ceased legal-status Critical Current

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    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
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    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
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    • C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
    • C12P17/16—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms containing two or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/465—Streptomyces

Definitions

  • the present invention relates to migrastat in, a novel bioactive substance having an inhibitory activity on cell motility and an antitumor activity, and an activity on inhibiting angiogenesis.
  • the present invention also relates to a cell motility inhibitor comprising mygrass sutin, and a pharmaceutical composition comprising migras sutin as an active ingredient. Further, the present invention relates to a method for producing mygrass. Further, the present invention includes Streptomyces sp. MK929-43F1 strain or a mutant strain thereof as a novel microorganism.
  • cancer cells first detach due to cell movement from the primary focus.
  • angiogenesis angiogenesis is initiated by the movement of vascular endothelial cells. Therefore, a substance that can inhibit cell motility is expected to inhibit cancer metastasis and angiogenesis.
  • Such inhibitors of cell motility are expected to be useful as tools or reagents for elucidating the mechanisms of cell motility and angiogenesis.
  • An object of the present invention is to provide a new substance having an activity of inhibiting cell motility and exhibiting an antitumor activity or an anticancer activity.
  • the present inventors have conducted various studies for the purpose of discovering and providing a novel substance having cell motility inhibitory activity and antitumor activity or anticancer activity as described above.
  • mygrass sutin a novel compound represented by the formula (I)
  • mygrass sutin exhibits a growth inhibitory activity of various human cancer cells or tumor cells or a cancer cell killing activity, and has a motility of human cancer cells. It has been found that the compound has an inhibitory activity, further inhibits the motility of human vascular endothelial cells, and inhibits angiogenesis by inhibiting the ability to form a lumen.
  • Mygrass sutin according to the present invention has antitumor activity and also has an inhibitory activity on the motility of cancer cells. Therefore, migrass sutin is useful as an antitumor agent or an anticancer agent. Useful as a motility inhibitor.
  • mygrass sutin can be used as a cell motility inhibitor as a means to elucidate the mechanism of cell motility in cell carcinogenesis.
  • mygrass sutin has an activity of inhibiting the motility and tube forming ability of human vascular endothelial cells, and is therefore expected to be useful as an angiogenesis inhibitor.
  • the Rf value when developed with chloroform-methanol (10: 1) as the developing solvent is 0.45.
  • cancer cells acquire metastatic ability by becoming malignant. It is essential that cells have cell motility as one of the factors that cells acquire the metastatic ability. It is known that cancer cells that have acquired metastatic potential first detach from the cancer by moving from the primary tumor.
  • Test Examples 3 and 4 demonstrate that Mygrass-tin has the activity of inhibiting the motility of cancer cells.
  • a suspension of human umbilical vein endothelial cells was prepared in a 10% FCS-box 131 medium containing 10 ng / ml bFGF (basic fibroblast growth factor) at 4 lxlO / well and collagen coated. And spread them in a 96-well microplate. After culturing for 2 days and confirming that endothelial cells had grown on the entire surface of the bottom of the microplate, the cells were linearly peeled off from the bottom surface using a tip of a microphone orifice. After removing the medium, the cells were washed twice with PBS.
  • FCS-box 131 medium containing 10 ng / ml bFGF (basic fibroblast growth factor) at 4 lxlO / well and collagen coated. And spread them in a 96-well microplate. After culturing for 2 days and confirming that endothelial cells had grown on the entire surface of the bottom of the microplate, the cells were linearly peeled off from the bottom
  • mygrass-tin inhibited the migration of HUVEC cells at a concentration of 25 g / ml or more.
  • HUVEC cells human umbilical vein endothelial cells
  • FGF fibrob 1 ast growth factor
  • tube formation of HUVEC cells was completely inhibited by 3.0 g / ml of mygrass-tin.
  • the cell growth inhibitory activity of HUVEC cells was also examined in the same manner as in Test Example 1 above. As a result, mygrass-tin showed a cell growth inhibitory activity on HUVEC cells in a concentration-dependent manner. In this case, the IC 50 of Mygrass was 3.0 ⁇ g / ml.
  • the mygrass protein of the present invention was also shown to have an activity of inhibiting angiogenesis by vascular endothelial cells.
  • Mygrass Yutin inhibited A and protein synthesis by 50% at a concentration of 60 to 75 ⁇ g / ml without inducing DNA synthesis in human small cell lung cancer Ms-1 cells.
  • a solution was prepared by dissolving Mygrass Yutin in physiological saline containing 10% dimethyl sulfoxide and Tween 80, and the solution was injected into the vein of mice. For 14 days. As a result, mygrass-tin did not show toxicity at the intravenous administration of 100 mg / kg.
  • the mygrass-tin according to the first aspect of the present invention has various biological activities as described above.
  • a second cell motility inhibitor according to the present invention comprising Mygrass-tin Alternatively, it is used as a reagent for elucidating the mechanism of cell movement in angiogenesis of vascular endothelial cells, and has the potential to be used as a therapeutic agent targeting cancer metastasis or angiogenesis.
  • composition comprising as an active ingredient a mygrass sutin.
  • the third pharmaceutical composition of the present invention can be in the form of an antitumor agent or an angiogenesis inhibitor.
  • a carrier that can be mixed with mygrass dinner as an active ingredient can be blended.
  • the carrier can be a pharmaceutically acceptable solid or liquid carrier, such as starch, lactose, water, ethanol, hydrous ethanol.
  • the administration of migras sutin can be carried out by any suitable route of administration, and in a dosage determined by the adopted route of administration. it can.
  • the administration can be performed by changing the route. It is usually administered in the form of a preparation diluted with a pharmaceutically acceptable carrier or diluent.
  • the formulation will contain 0.01-100%, preferably 0.1-70%, by weight of mygrass protein, with the balance comprising a pharmaceutically acceptable carrier and other adjuvants.
  • one typical administration method is to inject mygrass sutin as a solution dissolved in distilled water for injection or physiological saline.
  • mygrass sutin as a solution dissolved in distilled water for injection or physiological saline.
  • methods such as intraperitoneal injection, subcutaneous injection, intravenous injection into veins and arteries, and local administration by injection can be used.
  • the dose of Mygrass evening dose is determined in consideration of various situations so that the total dose does not exceed a certain amount when administered continuously or intermittently. It is about 800mg.
  • Specific dosages will vary depending on the method of administration, the condition of the patient or treated animal, e.g., age, weight, sex, susceptibility, diet, time of administration, concomitant medications, patient or degree of disease. Needless to say. Under certain conditions, the appropriate dose and frequency of administration of Mygrass evening tin must be determined by a specialist's dosage determination test based on the above guidelines.
  • a fourth aspect of the present invention is characterized in that a bacterium belonging to the genus Streptomyces and producing the mygrass sutin represented by the formula (I) is cultured in a medium, and mygrass sutin is collected from the culture.
  • the following equation (I) is characterized in that a bacterium belonging to the genus Streptomyces and producing the mygrass sutin represented by the formula (I) is cultured in a medium, and mygrass sutin is collected from the culture.
  • the manufacturing method of the mygrass resin shown by these is provided.
  • mygrasstin (migrastatin) -producing bacterium used in the fourth method of the present invention for producing mygrasstin is described in January 1998 in the Institute for Microbial Chemistry in the soil of Atami City, Shizuoka Prefecture. This is an actinomycete isolated from MK929-43 ⁇ with a strain number of MK929-43 ⁇ .
  • the MK929-43 ⁇ strain elongates aerial hyphae which are relatively longer than the branched basal hyphae to form ring-shaped branches.
  • Mature spore chains link 3 to 10 cylindrical spores.
  • the spores are about 0.4-0.7 x l.l-1.4 microns, and the spore surface is smooth. No spiral formation, fungal hypha, sporangia and motile spores are observed.
  • Yeast 'starch agar medium (0.2% of yeast extract, 1.0% of soluble starch, 2.4% of string agar, pH7.0), 10 ° C, 20. C ⁇ 24 ° C, 27 ° C, 30. C ⁇ 37.
  • K929-43 ⁇ strain As a result of testing the growth of K929-43 ⁇ strain at each temperature of C, 45 ° C, and 50 ° C, it grows at any temperature except 45 ° (:, 50 ° C. The optimum growth temperature is 30. ° C.
  • Starch hydrolysis starch 'inorganic salt agar medium, ISP-medium 4, cultivation at 27 ° C
  • Starch hydrolysis was observed around 7 days after cultivation, and the effect was moderate.
  • D-glucose and inositol It grows on D-glucose and inositol, and probably uses D-fructose. L-arabinose, D-xylose, sucrose, raffinose, rhamnose and D-mannitol are not used.
  • Nitrate reduction reaction Peptone water containing 0.1% potassium nitrate, ISP-medium 8, culture at 27 ° C
  • the K929-43F1 strain elongates aerial hyphae which are relatively longer than the branched basal hyphae to form ring-shaped branches.
  • Mature spore chains are linked with 3 to 10 or more cylindrical spores, and the surface is smooth.
  • white-yellow ash aerial hyphae grow on the growth of light yellow to light yellow tea, and no soluble pigment is observed.
  • the optimum growth temperature is around 30 ° C.
  • Melanin-like pigment formation is positive on tryptone-yeast broth and peptone-yeast 'iron agar, and negative on tyrosine agar.
  • Starch has moderate water degradability and negative reaction for nitrate reduction.
  • the 2,6-diaminobimelic acid contained in the cell wall was L L-type.
  • the main menaquinone of the bacterial cell component is MK-9 (H6).
  • MK929-43F1 strain is considered to belong to the genus Streptomyces.
  • MK929-43F1 strain was submitted to the Institute of Biotechnology and Industrial Technology, Institute of Industrial Science and Technology, 1-3-1, Tsukuba-Higashi, Ibaraki, Japan, on September 21, 1999 under the accession number FEE P-17574. Was commissioned.
  • the MK929-43F1 strain received FE BP-7166 on the transfer date of May 19, 2000 under the terms of the Budapest Treaty to the aforementioned institute. It has been accepted by the deposit number.
  • the M929-43F1 strain was identified as Streptomyces' Sep eptoces sp.) At the present time, but this strain was identified as Streptomyces caespitosus (Streptomyces caespitosus literature International Journal oi Systematic (Bacteriology, Vol. 22, p. 281, 1972).
  • the form forms a ring branch.
  • the growth (base hypha) shows a characteristic yellow color.
  • the MK929-43F1 strain also produces the antibiotic mitomycin.
  • mygrass evening chin is produced by aerobically cultivating a mygrass evening chin-producing bacterium belonging to the genus Streptomyces in an appropriate medium.
  • Myglass evening tin can be produced.
  • the composition of the culture medium used can be any containing nutrient sources that can be used by Mygrass evening tin producing bacteria. Specifically, for example, glucose, galactose, glycerol, dextrin, sucrose, maltose, starch, oils and fats can be used as a carbon source.
  • organic substances such as soybean flour, cottonseed meal, dried yeast, yeast extract and colony liquor, and inorganic salts such as ammonium salts or nitrates such as ammonium sulfate, sodium nitrate and ammonium chloride are used.
  • inorganic salts such as calcium carbonate, sodium chloride, potassium chloride, phosphates, and heavy metal salts can be added.
  • a suitable antifoaming agent such as silicone oil can be added in a conventional manner.
  • the aerobic liquid culture method is the most suitable as in the commonly used method for producing antibiotics.
  • the culture temperature is suitably 20-30 ° C, but preferably 25-30 ° C.
  • the production of Mygrass-tin increases to a maximum in 5 days of culture in either the shaking culture method or the aeration stirring culture method.
  • Mygrass-tin from the culture or culture filtrate thus obtained.
  • Any suitable method can be used.
  • One of the methods is based on a method using the principle of extraction. Specifically, mygrass protein in a culture filtrate can be extracted with a water-immiscible solvent such as ethyl acetate.
  • Another method of harvesting mygrass sunset from the culture is based on the principle of adsorption, which is based on the already liquid form of mygrass sunsetin containing, for example, culture filtrate or Using the extract obtained by performing the above extraction operation, the target Mygrass resin is adsorbed using a suitable adsorbent, for example, silica gel, and then eluted with a suitable solvent to obtain Mygrass. You can get evening chin.
  • a suitable adsorbent for example, silica gel
  • the thus obtained Mygrass thickin solution is concentrated to dryness under reduced pressure to obtain a crudely purified Mygrass thickin solution.
  • the above-mentioned extraction method, adsorption method, gel filtration method and the like may be combined as necessary and the required number of times may be performed.
  • a crudely purified Mygrass resin is subjected to silica gel chromatography developed with a hexane-ethyl acetate system, and then subjected to a gel filtration method developed with a methanol system, whereby the Mygrass resin is purified. You can get pure chin products.
  • mygrass-tin is currently obtained by culturing microorganisms in the fourth method of the present invention, it can be produced by synthesis of related compounds, chemical modification, or all-synthetic chemistry. I can do it. It is also possible to use genetic engineering techniques. That is, it is also possible to incorporate the mygrass-tin-producing gene into an appropriate microorganism, for example, Escherichia coli, culture such a transformed microorganism, and obtain from the culture.
  • a strain belonging to the genus Streptomyces which is capable of producing mygrass sutin, is used. Specifically, it has been clarified by the present inventors that the Streptomyces sp.
  • Strain MK929-43F1 strain isolated by the present inventors is a mygrass-futin-producing bacterium, but it was used in the method of the present invention. As other possible strains, it is possible to isolate an appropriate mygrass-tin-producing bacterium from nature by a conventional method of isolating a useful substance-producing bacterium.
  • Mygrass dinner including Streptomyces sp MK929-43F1 strain
  • Mygrass evening tin by genetic techniques is also possible.
  • the fifth present invention provides, as a useful and novel microorganism, Streptomyces' SP MK929-43F1 strain or a mutant strain thereof having the property of producing mygrasstin.
  • This ⁇ 929-43 ⁇ strain has the mycological properties as described above, and has been registered with the aforementioned Institute of Biotechnology, Institute of Biotechnology, Industrial Science and Technology under FERM BP-7166 under the terms of the Budapest Convention. Deposited with the deposit number.
  • FIG. 1 of the attached drawings shows an infrared absorption spectrum of Mygrass.
  • Figure 2 of the attached drawing shows the proton nuclear magnetic resonance spectrum (500 MHz in heavy chloroform) of Mygrass.
  • Fig. 3 of the attached drawing shows the carbon-13 nuclear magnetic resonance spectrum of Mygrass Xintin (125 MHz in a double-mouthed form).
  • Streptomyces' Espiri MK929-43F1 strain (FERM P-17574) cultured on an agar slant medium was prepared by adding 2% dextrin, 1% glycerol, 1% sodium peptone, 0.3% yeast extract (Wako), 0.2% ammonium sulfate, 0.2% A liquid medium containing 0.2% calcium carbonate (adjusted to ⁇ 7.4) was dispensed in 100 ml aliquots into Erlenmeyer flasks (500 m volume) and inoculated into a medium sterilized at 120 ° C for 20 minutes by a conventional method.
  • the MK929-43F1 strain was subjected to rotary shaking culture at 27 ° C for 1 day in the medium.
  • a seed culture was obtained.
  • This seed culture was dispensed in 100 ml portions into a triangular flask (500 m volume) in the same liquid medium as used for seed culture, and sterilized at 120 ° C for 20 minutes by a conventional method.
  • the culture medium was inoculated in a volume of 2 ⁇ and cultivated by rotating and shaking at 27 ° C for 5 days.
  • the culture solution (5000 ml) thus obtained was filtered.
  • the obtained culture filtrate was extracted with an equal volume of ethyl acetate.
  • the ethyl acetate extract was concentrated under reduced pressure.
  • Product (1220 lmg) was adsorbed on a silica gel column (Merck Kieselgel (4 cm0xl5 cm)), and the active fraction eluted with chloroform-methanol (100: 1) was concentrated to dryness. Omg of crude product was obtained.
  • mygrass sutin obtained according to the present invention exhibits a growth inhibitory activity or a cancer cell killing activity of various human cancer cells, and exhibits a motility of cells, particularly human cancer cells. It has an inhibitory activity, and further inhibits the motility of human vascular endothelial cells and has an inhibitory activity on angiogenesis by inhibiting the ability to form a lumen. Therefore, mygrass protein is useful as an antitumor agent or an angiogenesis inhibitor.

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Description

明 細 書
マイグラス夕チンおよびその製造法ならびに医薬組成物 技術分野
本発明は、 細胞運動能の阻害活性および抗腫瘍活性ならびに血管新生の阻害活 性を有する新規な生理活性物質であるマイグラス夕チン (migrastat in)に関する。 また、 本発明は、 マイグラス夕チンからなる細胞運動能阻害剤、 ならびにマイグ ラス夕チンを有効成分とする医薬組成物に関する。 さらに、 本発明はマイグラス 夕チンの製造法に関する。 さらに本発明は、 新規微生物としてのストレプトミセ ス ·エスピー MK929- 43F1株又はその変異株を包含する。
背景技術
抗腫瘍性物質に関しては、 すでに多数の医薬品が実用化されているが、 これら 既知の抗腫瘍剤は薬効および副作用の点で必ずしも満足できるものではない。 従って、 よりすぐれた新規な抗腫瘍性物質を提供する不断の希求があるのが現 である。 また、 細胞の運動は、 種々の因子を細胞が受け取ると、 細胞内の情報 伝達の機構の活性化を通して促進されることが知られる。
たとえば癌の転移では、 まず癌細胞が原発巣からの細胞運動により離脱する。 また血管新生においては、 血管内皮細胞の運動により血管新生が開始される。 こ のため細胞の運動能を阻害できる物質は、 癌転移を阻害すること、 また血管新生 を阻害することが期待される。 そのような細胞運動能の阻害物質は、 更に細胞運 動および血管新生の機構の解明の道具あるいは試薬としても有用であると期待さ れる。
本発明の目的の一つは、 細胞運動能を阻害できる活性をもち、 そして抗腫瘍活 性または抗癌活性を示すことのできる新しい物質を提供することにある。
発明の開示
本発明者らは、 上記のような細胞運動能阻害活性と抗腫瘍活性または抗癌活性 を有する新規な物質を発見し、 提供する目的で種々研究を重ねた。 その研究にお いて、 本発明者らは、 本発明者らが採取した土壌試料から新たに分離された放線 菌で MK929-43F1の菌株番号を付された微生物を培養し、 そしてその培養物から、 ヒト腫瘍細胞または癌細胞の増殖阻害活性をもつ物質を単離して収得することに 成功した。
この物質の化学構造を研究して、 後記の式 （I ) で示される新規な化合物であ ることを確認した。この式（ I )の新規な化合物をマイグラス夕チン（migrastatin) と命名し、 さらにマイグラス夕チンの生物学的活性を調べる研究を行った。 その 結果、 式 （I ) で示される新規化合物であるマイグラス夕チンは、 各種のヒト癌 細胞または腫瘍細胞の増殖阻害活性または癌細胞殺滅活性を示し、 またヒト癌細 胞の運動能を阻害できる活性を示し、 さらにヒト血管内皮細胞の運動能を抑制す るとともに、 管腔形成能を阻害することによる血管新生の阻害活性を有すること が知見された。
従って、 第 1の本発明においては、 次式 （I )
Figure imgf000004_0001
で示されるマイグラス夕チン（migrastatin) が提供される。
第 1の本発明によるマイグラス夕チンが前記の式 （I ) で示される化学構造を 有することは、 プロトン核磁気共鳴スペクトル、 炭素 13核磁気共鳴スペクトル、 赤外部吸収スぺクトル、マススぺクトルを詳細に検討することにより決定された。 本発明によるマイグラス夕チンは抗腫瘍活性を有し、 また癌細胞の運動能の阻 害活性を有しており、 従ってマイグラス夕チンは抗腫瘍剤または抗癌剤として有 用であるとともに、 細胞運動能阻害剤として有用である。 すなわち細胞運動阻害 剤としてマイグラス夕チンは細胞の癌化などにおける細胞の運動の機構解明の手 段として利用できる。 さらに、 マイグラス夕チンは、 ヒト血管内皮細胞の運動能 及び管腔形成能を阻害できる活性を有するので、 血管新生阻害剤として有用であ ると期待できる。
マイグラス夕チンの物理化学的性状を下記に示す。 ( 1 ) 外観：無色粉末
(2) 融点： 54〜55。C
(3)分子式： C27H39N07
(4)高分解能マススぺクトル
実験値： m/z 490.2775(M+H)+
計算値： m/z 490.2805(M+H)+
(5) 比旋光度： [ひ] D 27 +17.8° (c 3.48, メタノール）
(6) 赤外部吸収スペクトル添付図面の第 1図に示す
( 7 ) 紫外部吸収スぺクトル：末端吸収
(8) プロトン核磁気共鳴スペクトル：添付図面の第 2図に示す
(9) 炭素 13核磁気共鳴スぺクトル：添付図面の第 3図に示す
(10) 薄層クロマトグラフィー （シリカゲル 60F254 (メルク社製））
展開溶媒としてクロ口ホルム一メタノール（10:1)で展開した時の Rf 値 は 0.45である。
さらに、 マイグラス夕チンの生物学的活性を下記に説明する。 本発明によるマ ィグラス夕チンが抗腫瘍活性を有することを下記の試験例 1、 2および 7によつ て例証する。
試験例 1
ヒト食道癌細胞、 EC17細胞をゥエル中で 2 xlO4個/ mlとなるように 48ゥエル プレートにのせた 5 %血清を含む RPMI1640 培地に入れて培養した。 その培地に 種々の濃度のマイグラス夕チンを添加してマイグラス夕チンとともに 37Cで 3 日間、 癌細胞を培養した。 その後の細胞数をコ一ルターカウンタ一を用い測定し たところ、 EC17細胞の増殖を 50%阻害できるマイグラス夕チンの濃度、すなわち IC50は 3.0 /g/mlであることが認められた。
試験例 2
ヒト食道癌細胞、 TE3細胞または EC109細胞、 あるいはヒト白血病細胞 Jurkat 細胞を、 ゥエル中で 4 X104個/ ml となるように 48ゥエルプレートにのせた 5% 血清を含む RPMI1640培地に入れて培養した。その培地には種々の濃度のマイグラ ス夕チンを添カロしてマイグラス夕チンとともに 37Cで 2日間癌細胞を培養した。 その培養後にトリパンブルー細胞外排出試験法を用いてマイグラス夕チンの癌細 胞毒性を調べた。
その結果、 TE3細胞では、 2. 0 x g/mlの濃度のマイグラス夕チンは 50%の細胞 死を起すことが認められた。 さらに、 EC109細胞および Jurkat細胞では、 それぞ れに 1. 0 jug/mlの濃度のマイグラス夕チンが 50%の細胞死を起こすことが認め られた。
他方、 細胞の運動は、 種々の因子を細胞が受け取ると、 細胞内の情報伝達機構 の活性化を通して促進されるところが知られる。 ところで、 癌細胞は悪性化する ことにより転移能を獲得する。 その転移能を細胞が獲得する要素の一つとして、 細胞運動能を有することが必須である。 転移能を獲得した癌細胞はまず癌の原発 巣からの運動により離脱することが知られている。
マイグラス夕チンが癌細胞の運動能を阻害する活性を有することを次の試験例 3〜4により例証する。
隱仞 I 3
Chemotaxicel l chamberを用いる試験法 Qlal liri ら 「J . Cel l Biol . j 143巻 1087〜99頁（1998 )参照〕により細胞運動能におよぼすマイグラス夕チンの影響を 測定した。 1.8 X 105個/ mlとなるような運動能を持つヒト食道癌細胞 EC17細胞を Chemotaxicel l chamber内で、マイグラス夕チン存在下， EC17細胞の運動能の変動 を測定したところ、濃度依存的にマイグラス夕チンは EC17細胞の運動能を阻害し た。 EC17細胞の運動能を 50%阻害する濃度であるマイグラス夕チンの IC5()は 1. 0 jug/mlであった。
試験例 4
Wound healing assay ¾ C al l iri ら 「J . Cell Biol . j 143卷 1087~99頁（1998) 参照〕 を用いて、 細胞運動能におよぼすマイグラス夕チンの影響を測定した。 6 X 104個 /mlとなるような運動能を持つヒト食道癌細胞 EC17細胞を 48ゥエルプレ 一ト内で、マイグラス夕チン存在下、 EC17細胞の運動能の変動を測定したところ、 マイグラス夕チンは濃度依存的に EC17細胞の運動能を阻害した。この場合、マイ グラス夕チンの 1. 0 ug lの濃度で完全に EC17細胞の運動を阻害した。
さらに、 本発明によるマイグラス夕チンの血管内皮細胞に対する運動抑制活性 を試験例 5に、 血管新生の阻害活性を次の試験例 6により示す。
試驗例 マイグラス夕チンによるヒト臍帯静脈内皮細胞の遊走阻害作用
10ng/ml の bFGF (basic fibroblast growth factor)を含む 10%FCS-函 131 培地で l x lO4個/ well となるようにヒト臍帯静脈内皮細胞 （HUVEC細胞） の懸濁 液を調製し、 コラーゲンコートした 96穴マイクロプレートに撒いた。 2日間培養 し、 マイクロプレート底に内皮細胞が全面に生育したことを確認した後、 マイク 口ピぺッ卜のチップを用いて底面から細胞を直線状に剥ぎ取った。培地を除去後、 PBSで 2回洗浄した。 50〃 1の 10%FCS- MCDB131培地および 50 1のマイグラス夕 チン試料を含む MCDB131 培地を加え、 37°Cで一晩培養した。 培地を除去後、 PBS で洗浄し、 100〃 1の 5%グルタールアルデヒドを加え、室温で 30分間固定後、水 道水で洗浄しさらに乾燥させた。 100〃 1の 0.1 %クリスタルバイオレット（ in 0 · 1N HCl/20%MeOH)を加え 10分間染色した。水道水で洗浄後に乾燥し、顕微鏡下で細胞 の遊走を観察した。
その結果、マイグラス夕チンは HUVEC細胞の遊走を 25〃g/ml以上の濃度で阻害 した。
薩 B
血管新生のモデル系として、 1 X 105個/ ml のヒト臍帯静脈内皮細胞、 （HUVEC 細胞）を用いた。HUVEC細胞を 24ゥエルプレートにまき、 f ibrob 1 ast growth factor (FGF )10 ng/ml を添加したときの該細胞の管腔形成についてマイグラス夕チンの 与える影響について調べた〔岸本ら「Arch. Toxical.」69巻 10号 718〜21頁（1995) 参照〕。 その結果、 HUVEC細胞の管腔形成は 3.0 zg/mlのマイグラス夕チンで完 全に阻害された。 また HUVEC細胞の細胞増殖抑制活性についても上記の試験例 1 と同様の方法で検討した。 その結果、 マイグラス夕チンは濃度依存的に HUVEC細 胞についても細胞増殖抑制活性を示した。 この場合のマイグラス夕チンの IC50は 3.0 〃g/mlであった。
上記のように、 本発明のマイグラス夕チンは血管内皮細胞による血管新生を阻 害できる活性をも有することが示された。
さらに、 次の試験例 7で、 MA合成、 RNA合成、 蛋白合成に対する影響を調べた ところ、 従来の抗腫瘍剤の多くに見られた DNA合成の阻害作用は認められなかつ た。 これらの事は、 マイグラス夕チンが新しい作用^?に基づき、 癌遺伝子が形 質転換された細胞や癌化した細胞で特異的に作られる分子の R A/蛋白合成を阻 害している可能性を示している。
u. m 7 マイグラス夕チンの高分子合成阻害
5 血清を含む RPMI 1640培地に懸濁した 2.5 x 105個のヒト小細胞肺癌 Ms- 1細胞 を 24ゥエルプレートに撒き、一日培養後、培地を無血清培地に交換した後、各濃 度のマイグラス夕チンを添加した。 30分間ィンキュペートの後、 1 /Ciのトリチ ゥムラベルされたチミジン、 ゥリジン、 およびロイシンをそれぞれ添加し、 更に 1時間インキュベートした。 培地を除いた後、 10 リクロロ酢酸 (TCA)を加え、 30 分後 TCA不溶画分の放射活性を液体シンチレーシヨンカウン夕一にて測定し た。
その結果、マイグラス夕チンは、 ヒト小細胞肺癌 Ms- 1細胞の DNA合成阻害を誘 導することなく Aおよび蛋白合成を 60〜75〃g/mlの濃度で 50%阻害した。 なお、マイグラス夕チンの急性毒性を評価するために、マイグラス夕チンを 10% ジメチルスルホキシドおよびツイーン 80 含有の生理食塩水に溶解して溶液を作 り、 その溶液をマウスの静脈に注射して 14日間観察した。その結果、 マイグラス 夕チンは 100 mg/kgでの静注投与で毒性を示さなかった。
第 1の本発明によるマイグラス夕チンは、 前記したように種々な生物学的活性 を有するものである。
第 2の本発明においては、 次式 （I )
Figure imgf000008_0001
で示されるマイグラス夕チンからなる細胞運動能阻害剤が提供される。
マイグラス夕チンよりなる第 2の本発明による細胞運動能阻害剤は、 癌の転移 または血管内皮細胞の血管新生における細胞の運動の機構の解明の試薬として用 いられ、 また癌転移、 あるいは血管新生などを標的とした治療剤として使用でき る可能性を有している。
第 3の本発明においては、 次式 （I )
Figure imgf000009_0001
で示されるマイグラス夕チンを有効成分とする医薬組成物が提供される。
第 3の本発明の医薬組成物は、 抗腫瘍剤又は血管新生阻害剤の形であることが できる。 第 3の本発明による医薬組成物では、 有効成分としてのマイグラス夕チ ンと混和される担体を配合できる。 その担体は、 製薬学的に許容できる固体また は液体の担体、 例えばスターチ、 乳糖、 水、 エタノール、 含水エタノールである ことができる。
抗腫瘍剤又は血管新生阻害剤としてマイグラス夕チンを用いる場合、 マィグラ ス夕チン （本発明化合物） は合目的な任意の投与経路で投与でき、 また、 採用投 与経路によって決まる投薬量で投与できる。 また投与の都度、 経路を変えて投与 することができる。 製薬学上許容される担体あるいは希釈剤で希釈された製剤の 形で投与されるのが普通である。 一般的には製剤はマイグラス夕チンを 0.01〜 100重量％、 好ましくは 0.1〜70重量％含み、 残りとして製薬学上許容される担 体およびその他の補助剤を含む。
抗腫瘍剤又は血管新生阻害剤として本発明化合物を実際に投与する場合には、 マイグラス夕チンを注射用蒸留水または生理食塩水に溶解した溶液として注射す る方法が一つの代表的な投与法である。具体的には、動物の場合には腹腔内注射、 皮下注射、 静脈、 動脈への血管内注射、 および注射による局所投与などの方法を 利用できる。 マイグラス夕チンの投与量は、 種々の状況を勘案して、 連続的または間欠的に 投与したときに総投与量が一定量を超えないように定められ、 通常成人 1人 1曰 当たり 0.01〜800mg程度である。 具体的な投与量は、 投与方法、 患者または被処 理動物の状況、 例えば年齢、 体重、 性別、 感受性、 食餌、 投与時間、 併用する薬 剤、 患者またはその病気の程度に応じて変化することは言うまでもない。 また一 定の条件のもとにおけるマイグラス夕チンの投与の適量と投与回数は、 上記指針 をもとに専門医の適量決定試験によって決定されなければならない。
第 4の本発明においては、 ストレプトミセス属に属して式 （I ) で示されるマ ィグラス夕チンを生産する菌を培地で培養し、 その培養物よりマイグラス夕チン を採取することを特徴とする、 次式 （I )
Figure imgf000010_0001
で示されるマイグラス夕チンの製造法が提供される。
第 4の本発明によるマイグラス夕チンの製造方法で用いられるマイグラス夕チ ン （migrastatin) の生産菌の好ましい一例は、 平成 10年 1月、 微生物化学研究 所において、 静岡県熱海市の土壌より分離された放線菌で、 MK929- 43Πの菌株番 号が付された菌である。
次に、 MK929-43F1株の菌学的性質を下記に示す。
1. 形態
MK929- 43Π株は、 分枝した基生菌糸より比較的長い気菌糸を伸長し、 輪生枝を 形成する。 成熟した胞子鎖は 3〜10個の円筒形の胞子を連鎖する。 胞子の大きさ は約 0.4〜0.7 x l . l〜1.4 ミクロンであり、 胞子の表面は平滑である。 なお、 ら せん形成、 菌束糸、 胞子のうおよび運動性胞子は認められない。
2. 各種培地における生育状態 色の記載について [ ] 内に示す色の標準は、 コンテイナ一 'コ一ポレーショ ン 'ォブ 'ァメリカのカラー ·ハーモニー 'マニュアル（Container Corporation of America (D coior harmony manual) を用レヽ fe。
(1) スクロース ·硝酸塩寒天培地 （27°C培養）
無色の発育上に、 白の気菌糸をうつすらと着生し、 気菌糸は部分的に黄味灰 [1 cb, Parchment] の綿状を呈する。 溶解性色素は認められない。
(2) ィースト '麦芽寒天培地 （ISP-培地 2、 27°C培養）
うす黄茶 [2 ie, Lt Mustard Tan] の発育上に、 白の気菌糸をうつすらと着生 し、 培養後 3週目になると部分的に黄味灰 [l cb， Parchment] を呈する。 溶解性 色素は認められない。
(3) オートミール寒天培地 （ISP-培地 3、 27°C培養）
うす黄 [1 ca, Pale Yellow] 〜うす黄茶 [2 gc, Bajnboo] の発育上に、 白の気 菌糸をわずかに着生する。 溶解性色素は認められない。
(4) スターチ '無機塩寒天培地 （ISP-培地 4、 27°C培養）
うす黄 [1 ca, Pale Yellow] の発育上に、 黄味灰 [1 1/2 ca, Cream]の気菌糸 を綿状に着生し、 溶解性色素は認められない。
(5) グリセリン 'ァスパラギン寒天培地 （ISP-培地 5、 27°C培養）
うす黄 [1 ca, Pale Yellow 〜 1 1/2 ea, Lt Yellow] の発育上に、 黄味灰 [1 1/2 ca, Cream] の気菌糸をうつすらと着生し、 溶解性色素は認められない。 (6) チロシン寒天培地 （ISP-培地 7、 27°C培養）
うす黄 [1 ca, Pale Yellow] 〜灰味黄茶 [2 ig， Slate Tan] の発育上に、 黄 味灰 [1 1/2 ca, Cream] の気菌糸をうつすらと着生する。 溶解性色素はかすかに 茶色味を帯びる。
3. 生理的性質
(1) 生育温度範囲
イースト 'スターチ寒天培地（ィ一ストエキス 0.2%、溶性デンプン 1.0%、 ひも寒天 2.4%、 pH7.0) を用い、 10°C、 20。Cヽ 24°C、 27°C、 30。Cヽ 37。C、 45°C、 50°Cの各温度で K929- 43Π株の生育を試験した結果、 45° (：、 50°Cを除き、 そのい ずれの温度でも生育する。 生育至適温度は 30°C付近である。 (2)スターチの加水分解（スターチ '無機塩寒天培地、 ISP-培地 4、 27°C 培養） 培養後 7日目頃より、 スターチの加水分解を認め、 その作用は中等度である。
(3) メラニン様色素の生成（トリプトン -イースト 'ブロス、 ISP-培地 1 ；ぺプ トン ·イースト ·鉄寒天培地、 ISP-培地 6 ；チロシン寒天培地、 ISP-培地 7 ；い ずれも 27°C培養）
トリプトン 'イースト 'ブロスおよび ペプトン .イースト .鉄寒天培地では陽 性、 チロシン寒天培地は陰性である。
(4) 炭素源の利用性 （プリ ドハム ·ゴトリーブ寒天培地、 ISP-培地 9、 27°C 培 養）
D—グルコースおよびイノシトールを利用して発育し、 D—フラクトースをお そらく利用する。 L—ァラビノース、 D—キシロース、 スクロース、 ラフイノー ス、 ラムノースおよび D—マンニトールは利用しない。
(5) 硝酸塩の還元反応 （0. 1%硝酸カリウム含有ペプトン水、 ISP-培地 8、 27°C 培養）
陰性である。
以上の性状を要約すると、 K929-43F1株は、 分枝した基生菌糸より比較的長い 気菌糸を伸長し、 輪生枝を形成する。 成熟した胞子鎖には 3〜10個あるいはそれ 以上の円筒形の胞子を連鎖し、 その表面は平滑である。 種々の培地で、 うす黄〜 うす黄茶の発育上に白〜黄味灰の気菌糸を着生し、 溶解性色素は認められない。 生育至適温度は、 30°C付近である。 メラニン様色素の生成はトリプトン ·ィース ト ·ブロスおよびペプトン ·ィースト '鉄寒天培地では陽性、 チロシン寒天培地 は陰性である。 スターチの水解性は中等度、 硝酸塩の還元反応は陰性である。 な お、 細胞壁に含まれる 2, 6—ジアミノビメリン酸は L L—型であった。 菌体成分 の主要なメナキノンは、 MK- 9(H6 )である。
これらの性状より、 MK929- 43F1株はストレプトミセス ( treptomyces)属に属 すると考えられる。 MK929-43F1株を日本国、 茨城県つくば巿東 1丁目 1番 3号に 在る工業技術院生命工学工業技術研究所に寄託申請し、 1999年 9月 21 日、 受託 番号 FEE P-17574 として受託された。 さらに、 MK929- 43F1株は、 前記の研究所 にブダぺスト条約の規約下に 2000年 5月 19日の移管寄託日で FE BP- 7166の受 託番号で受託されてある。
なお、 M 929- 43F1株は現時点でストレブトミセス 'エスピー epto ces sp. ) とされたが、 この株は下記の諸点①〜④でストレブトミセス 'ケスピト一スス ( Streptomyces caespitosus 文献 International Journal oi Systematic Bacteriology 22卷、 281頁、 1972年）に類似していることを付記する。
① 形態が輪生枝を形成する。
② 発育 （基生菌糸） が特色ある黄色を呈する。
③ 炭素源の利用性が近似している。
④ MK929- 43F1菌株は、 抗生物質マイ トマイシンも生産する。
第 4の本発明方法によって、マイグラス夕チンの培養的製造を行うに当っては、 ストレブトミセス属に属するマイグラス夕チン生産菌を適切な培地で好気的に培 養し、 その培養物から目的物のマイグラス夕チンを採取することによってマイグ ラス夕チンを製造することができる。 用いる培地の組成は、 マイグラス夕チン生 産菌が利用しうる任意の栄養源を含有するものでありうる。 具体的には、 たとえ ば、 炭素源としてグルコース、 ガラクトース、 グリセロール、 デキストリン、 ス クロース、 マルトース、 スターチ及び油脂類などが使用できる。 また、 窒素源と して大豆粉、 綿実粕、 乾燥酵母、 酵母エキスおよびコ一ンスティープリカ一など の有機物並びに、 アンモニア塩または硝酸塩、 たとえば硫酸アンモニゥム、 硝酸 ナトリゥムおよび塩化アンモニゥムなどの無機塩類が利用できる。 また必要に応 じて炭酸カルシウム、 塩化ナトリウム、 塩化カリウム、 燐酸塩、 重金属塩などの 無機塩類を添加することができる。 発酵中の発泡を抑制する為に、 常法にしたが つて適当な消泡剤、 たとえばシリコーン油を添加することもできる。
培養方法としては、 一般に用いられている抗生物質の生産方法と同様に、 好気 的液体培養法がもっとも適している。 培養温度は 20— 30°Cが適切であるが、 25- 30°Cが好ましい。この培養方法でマイグラス夕チンの生産量は、振とう培養法、 または通気攪拌培養法の何れでも培養 5日間で最高に達する。
このようにして、 マイグラス夕チンの蓄積された培養物が得られる。 この培養 物中では、 マイグラス夕チンは主に培養瀘液中に存在する。
このようにして得られた培養物または培養濾液からマイグラス夕チンを採取す るには合目的な任意の方法が利用可能である。 そのひとつの方法は抽出の原理を 用いる方法に基づくものであって、 具体的には、 培養瀘液中のマイグラス夕チン を水不混和性の溶剤、 たとえば酢酸ェチルなどで抽出できる。
培養物からマイグラス夕チンを採取するほかの一つの方法は吸着の原理を用レ、 る方法に基づくものであって、すでに液状になっているマイグラス夕チン含有物、 たとえば培養瀘液あるいは上記の抽出操作を行うことによって得られた抽出液を 利用して、 適当な吸着剤、 たとえばシリカゲルを用いて目的のマイグラス夕チン を吸着させ、 その後、 適当な溶媒で溶離させることによってマイグラス夕チンを 得ることができる。 このようにして得られたマイグラス夕チン溶液を減圧下に濃 縮乾固して、 マイグラス夕チンの粗精製物が得られる。
このようにして得られたマイグラス夕チンの粗精製物をさらに精製する為には、 上記の抽出法、 吸着法およびゲル濾過法などを必要に応じて組み合わせ必要回数 おこなえばよい。 具体的には、 たとえばマイグラス夕チン粗精製物をへキサン- 酢酸ェチル系で展開されるシリカゲルクロマトグラフィーに供し、 その後、 メタ ノール系で展開されるゲル濾過法にかけることにより、 マイグラス夕チンの純品 を得ることができる。
マイグラス夕チンは、 現在のところ、 第 4の本発明方法において微生物の培養 によって得られているけれども、 類縁化合物の合成、 化学的修飾によって製造す ることも、 あるいは全合成化学的に製造することもできょう。 また、 遺伝子工学 的手法によることもできょう。 すなわち、 マイグラス夕チン生産遺伝子を適当な 微生物、 例えば大腸菌に組み込み、 このような形質転換微生物を培養し、 この培 養物から得ることも可能である。 また、 第 4の本発明方法で使用できる菌株とし ては、 ストレブトミセス属に属するマイグラス夕チン生産能を有する菌株が使用 される。 具体的には、 本発明者らが分離したス トレブトミセス ·エスピー MK929-43F1 株がマイグラス夕チン生産菌であることが本発明者等によってあき らかにされているが、 本発明方法で使用できるその他の菌株としては、 有用物質 生産菌の単離の常法によって適切なマイグラス夕チン生産菌を自然界より分離す ることが可能である。
また、 ストレブトミセス ·エスピー MK929- 43F1株を含めて、 マイグラス夕チン の生産能をもっ菌を放射線照射またはその他の変異化方法で処理することによつ て、 マイグラス夕チンの生産能を高める余地も残されている。 さらに、 遺伝子ェ 学的手法によるマイグラス夕チンの生産も可能性がある。
さらに、 第 5の本発明においては、 有用で新規な微生物として、 マイグラス夕 チンを生産する特性を有するストレプトミセス 'エスピー MK929- 43F1株またはそ の変異株が提供される。この ΜΚ929-43Π株は、前記のとおりの菌学的性質を有す るものであり、 そして前記の工業技術院生命工学工業技術研究所にブダべスト条 約の規約下に FERM BP- 7166の寄託番号で寄託されてある。
図面の簡単な説明
添付図面の第 1図はマイグラス夕チンの赤外線吸収スべクトルを示す。
添付図面の第 2図はマイグラス夕チンのプロトン核磁気共鳴スぺクトル （重ク ロロホルム中、 500MHz) を示す。
添付図面の第 3図はマイグラス夕チンの炭素 13核磁気共鳴スべクトル（重クロ 口ホルム中、 125MHz) を示す。
発明を実施するための最良の形態
次に、 本発明を下記の実施例について具体的に説明する。
幸施例 1
マイグラス夕チンの製造
寒天斜面培地に培養したストレブトミセス 'エスピ一 MK929- 43F1 株 (FERM P- 17574)を、 デキストリン 2%、 グリセロール 1、 ソィぺプトン 1%、 イーストェ クストラクト （和光） 0.3%、 硫酸アンモニゥム 0.2%、 炭酸カルシウム 0.2%を含む 液体培地 （ρΗ7· 4に調整） を三角フラスコ （500m容） に、 100m lずつ分注して から、 常法により 120°Cで 20 分間滅菌した培地に接種した。 その後、 培地中で MK929-43F1株を 27°Cで 1日間回転振とう培養した。これにより種母培養液を得た。 この種母培養液を、 上記の種母培養に用いたものと同様の液体培地を三角フラ スコ （500m容） に 100m lずつ分注してから、 常法により 120°Cで 20分間滅菌し た培地に、 2 ¾量で接種し、 27°Cで 5日間回転振とう培養した。
この様にして得られた培養液 （5000m l ) を濾過した。 得られた培養濾液を等 量の酢酸ェチルで抽出した。 酢酸ェチル抽出液を減圧下に濃縮し、 得られた残留 物 （1220. lmg) をシリカゲルカラム （メルク社製キーゼルゲル （4 cm0xl5 cm)) に吸着させ、 クロ口ホルム一メタノール （100 : 1) で溶出された活性画 分を濃縮乾固して、 314. Omgの粗精製物を得た。
これをさらに、 シリカゲルカラム （4 cm 0x15 cm) に吸着させて、 へキサ ン—酢酸ェチル （1 ： 1〜1 ： 2) で展開して、 溶出された活性画分を濃縮乾固 することにより、 42. lmgの活性画分を得た。 次いで、 この活性画分をセフアデ ックス LH20カラム （4 cm0x4Ocm) にかけ、 メタノールで展開して、 最終 的に精製されたマイグラス夕チン 6. Omgを得た。得られたマイグラス夕チンは 無色粉末であり、 54〜55°Cの融点を示した。
産業上の利用可能性
以上の説明から明らかなように、本発明によって得られたマイグラス夕チンは、 各種のヒト癌細胞の増殖阻害活性または癌細胞殺滅活性を示し、 また細胞、 特に ヒト癌細胞の運動能を阻害できる活性を示し、 さらにヒト血管内皮細胞の運動能 を抑制するとともに、 管腔形成能を阻害することによる血管新生の阻害活性を有 するものである。 従って、 マイグラス夕チンは抗腫瘍剤あるいは血管新生阻害剤 として有用である。

Claims

1 . 次式 （
青
Figure imgf000017_0001
で示されるマイグラス夕チン（migrasta 。
2 . 次式 （ I ) 囲
Figure imgf000017_0002
で示されるマイグラス夕チンからなる細胞運動能阻害剤 c
3 . 次式 （ I )
Figure imgf000017_0003
で示されるマイグラス夕チンを有効成分とする医薬組成物 c 4 . 抗腫瘍剤である請求の範囲 3に記載の医薬組成物。
5 . 血管新生阻害剤である請求の範囲 3に記載の医薬組成物。
6 . ストレプトミセス属に属して下記の式 （I ) で示されるマイグラス夕チン を生産する菌を培地で培養し、 その培養物よりマイグラス夕チンを採取すること を特徴とする、 次式 （I )
Figure imgf000018_0001
で示されるマイグラス夕チンの製造法。
7 . マイグラス夕チンを生産する特性を有するストレブトミセス 'エスピ- MK929-43F1株又はその変異株。
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