WO2000047172A1

WO2000047172A1 - Hair growth stimulants and method for screening substance having hair growth stimulating effect

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Publication number: WO2000047172A1
Application number: PCT/JP2000/000694
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Inventors: Yutaka Nakaya; Seiji Arase; Koji Imamura
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Description

明細書育毛剤及び育毛作用を有する物質のスクリーニング方法技術分野

本発明は、育毛剤に関し、特に各種の外用剤として使用可能であり、優れた有効性を示す新規な作用機構を有する育毛剤に関する。また、本発明は、育毛作用を有する物質のスクリーニング方法に関し、特に新規作用機構を有する育毛作用物質のスクリ一ニング方法に関する。背景技術

これまで、ヒ卜特に男性型脱毛を治療または予防する試みにおいて、多くの薬剤の使用が提案されてきた。そのような薬剤としては、例えば、血管拡張剤、男性ホルモン受容体阻害剤、ステロイド— 5ひ一レダク夕一ゼ阻害剤、ビタミン類、免疫抑制剤等が挙げられる。しかし、実際には、これらの薬剤の育毛剤としての有効性は十分満足できるものではないのが現状である。

また、これまで、ヒト特に男性型脱毛を治療または予防する試みにおいて、いくつかの育毛物質のスクリーニング方法が提案されてきた。例えば、マウス、ラヅト、ゥサギ、モルモット等の小動物、特に適当な週齢の C 3 Hマウスや C 5 7 B Lマウス等の主として背部毛を剃り、試験物質を塗布して発毛の程度を観察する方法、マウスのヒゲ、ヒトの頭髪等を摘出し、得られた毛組織を器官培養し、試験物質を添加してその成長の程度を評価する方法、または毛組織をさらに細胞レベルにまで分画し、特に毛乳頭細胞または外毛根鞘細胞を個別にまたは共存培養した系に、試験物質を添加して増殖促進効果を試験する方法、適当な動物またはヒトでの血管拡張作用または血流促進効果を試験するもの等が試みられている。また、特に男性型脱毛においては、その発症に男性ホルモンが関与していることから、男性ホルモン受容体阻害試験や男性ホルモンであるテストステロンをジヒドロテス卜ステロンに変換させる酵素であるステロイドー 5ひ一レダク夕ーゼ阻害試験等も応用されてきた。発明の開示

本発明の目的は、従来の育毛剤と比較して発毛効果に優れた育毛剤を提供するごにめ。

また、本発明の他の目的は、従来の育毛剤とは異なる新規な作用機構を有する、優れた育毛剤を提供するためのスクリーニング方法を提供することにある。本発明の 1つの形態は、プリン受容体刺激作用を有する化合物、生体に適用後にプリン受容体刺激作用を有する化合物を遊離する化合物、若しくは、プリン受容体刺激作用を有する化合物の当該作用を増強する化合物の 1種又は 2種以上を有効成分として含有する育毛剤である。

本発明において、「プリン受容体刺激作用」とは、プリン受容体を刺激して細胞に対して何らかの現象を発生させる作用を指し、通常は、そのような刺激はプリン受容体と、該プリン受容体に特異的に結合可能な物質との相互作用によってもたらされる。

また、本発明において「生体に適用後にプリン受容体刺激作用を有する化合物を遊離する化合物」とは、皮膚、粘膜又は体内組織等への塗布又は投与等の後にプリン受容体刺激作用を有する化合物を分離して放出する機能を有する化合物であり、通常は、プリン受容体刺激作用を有する化合物に何らかの化学修飾が施された化合物である。前記化学修飾の例としては、具体的には、エステル化、アミド化等の操作が挙げられる。

ところで、プリン受容体は P 1及び P 2受容体に大別されている。 P 1受容体はアデノシンに対する親和性が高いことからアデノシン受容体とも称呼されており、 P 2受容体は A T Pに対する親和性が高いことから同様に A T P受容体とも称呼される。したがって、本発明のプリン受容体刺激作用を有する化合物にはァデノシン受容体及び/又は A T P受容体の刺激作用を有する化合物が含まれる。本発明のアデノシン受容体刺激を有する化合物としては、アデノシン、 N 6— シクロへキシルアデノシン、 N 6—シクロペンチルアデノシン、（R ) — N 6— フエニルイソプロビルアデノシン、（ S ) — N 6—フエニルイソプロビルアデノシン、（R) —フエ二ルーイソプロビルアデノシン、 N— [R— （2—べンゾチァゾリル）チォー 2—プロビル] 一 2—クロロアデノシン、 2—クロロー N6— シクロペンチルアデノシン、 N—（メチルーフエネチル）アデノシン、ミノプリ二ルーデォキシー N—ェチルリボフラヌロアミド、デフイブ口チド、 5，一 N—ェチルカルボキサミドアデノシン、 2—クロロアデノシン、 N—ェチルー 1，ーデォキシ一 1，一 [6—アミノー 2— [ 1— （ 3—ヒドロキシー 3—フエニル）プロピニル]— 9 H—プリン一 9ーィル]— ^一 D—リボフラン一 5，一ゥロナミド、 N 6 - 2 - (4ーァミノフエニル）ェチルアデノシン、 5，一 N—シクロプロビルカルボキサミドアデノシン、 N 6— （p—スルホフエニル）アデノシン、 1— デァザ一 2—クロ口一一 N6—シクロペンチルアデノシン、 8—ブチルアデノシン、 1ーシクロプロピルイソグアノシン、 6—シクロへキシルー 2，一 0—メチルアデノシン、 2— /?— D—リボフラノシルォキサゾールー 4一カルボキサミド、 2—ョ―ド—N 6—シクロペンチルアデノシン、 N 6—シクロペンチルー 2， ― メチル一 2—クロロアデノシン、 N 6—シクロへキシル一 2，一 0—メチルデノシン、 2— [P— （ 2—カルボキシェチル）フエニルェチルァミノ] — 5，一 N 一ェチルカルボキサミドアデノシン、 N 6— [4—[[[4— [[[2— [[[ (p—イソチオシアナトフェニル）アミノ]チォカルボニル]アミノ]ェチル]アミノ]カルボ二ル]メチル]ァミノカルボニル]メチル]フエニル]アデノシン、 N 6— [4一 [[[4— [[[2 -[[[ (m—イソチオシアナトフェニル）ァミノ]チォカルボニル]ァミノ]ェチル]アミノ]カルボニル]メチル]アミノカルボニル]メチル]フエニル]アデノシン、 2 -[ ( 2—アミノエチルァミノ）カルボニルェチルフエニルェチルァミノ]— 5 ' 一ェチルカルボキサミドアデノシン、 2—へキシニルー 5—メチルカルボキサミドアデノシン、 2—シクロへキシルメチリデンヒドラジノアデノシン、 N—ェチルカルボキサミドアデノシン、 N6—[2— （3， 5—ジメトキシフエ二ル）一 2 - (メチルフエニル）ェチル]アデノシン、 5，一（N—シクロプロビル）カルポキサミドアデノシン、 N— [2— (3， 5—ジメトキシフエ二ル）一 2—フエ二ルェチル]アデノシン、 N— （ 2—メチルベンジル）アデノシン、 2—ォクチニルアデノシン、 2—フエニルアミノアデノシン、 2— [2— （4一フルオロフェニル）エトキシ] アデノシン、 2— [ (シクロへキシルメチレン）ヒドラジノ] ァデノシン、 2—クロ口一 N 6— （3—ョ一ドベンジル）アデノシン一 5， - N - メチルゥロナミド、 N 6— ( 3—イソチオシアナ一トベンジル）アデノシン一 5 ，一N—メチルゥロナミド、 2—クロロー N 6— ( 3—ョ一ドベンジルアデノシンー 5，一 N—メチルカルボキサミド、ピナシジル、デフイブロチド（短鎖デォキシリボヌクレオチド）、アデノシン一 5，一モノリン酸、アデノシン一 5 ' - モノリン酸メチルエステル、 N 6—メチルアデノシン一 5，一モノリン酸、 8— ブチルアミノアデノシン又はこれらの過ヨウ素酸酸化物が好ましい。

アデノシン受容体刺激作用を有する前記化合物又は生体に適用後にアデノシン受容体刺激作用を有する化合物を遊離する化合物は、下記式 1 ：

式 1

[式中、 nは 0または 1、 1^〜11 ₂はそれぞれ水素原子または炭素原子数 1〜5 のァシル基を示し、 R ₃は水素原子または保護基を示す。 ] で示される化合物であつてもよい。

アデノシン受容体刺激作用を有する化合物の当該作用を増強する前記化合物としては、アデノシン受容体刺激作用を有する化合物の取り込み阻害剤が好ましい。ここで、「取り込み阻害剤」とは、対象となる化合物の細胞又は組織等への吸収、取り込みを阻害する作用を有する化合物を指す。前記取り込み阻害剤としては、ジビリダモール、ジラセヅプ、リドフラジン、へキソベンジン、カルボクロメン、クロモナ一ル酸、シネパジド、ジァゼパム、パパべリン、 6— （2，一ハイド口キシニトロベンジル）チォグアノシン、プロベントフィリンが好ましい。

また、アデノシン受容体刺激作用を有する化合物の当該作用を増強する化合物は、アデノシン受容体刺激作用を有する化合物の不活性化阻害剤であってもよい。ここで、「不活性化阻害剤」とは、対象となる化合物のある特性、機能又は作用の減少を阻害する作用を有する化合物を指す。したがって、アデノシン受容体刺激作用を有する化合物の不活性化阻害剤は、当該化合物のアデノシン受容体刺激作用の減少を妨げる機能を有する。アデノシン受容体刺激作用を有する化合物の前記不活性化阻害剤としては、 2， —デォキシコホルマイシン、エリスロー 9 _ ( 2—ハイドロキシ一 3—ノニル）アデニンが好ましい。本発明の別の形態は、 A T P受容体刺激作用を有する化合物の 1種または 2種以上を有効成分として含有する育毛剤である。

本発明の A T P受容体刺激作用を有する化合物としては、例えば、アデノシンジリン酸、アデノシントリリン酸及びこれらの誘導体が挙げられるが、その中ではアデノシン _ 5，一ジリン酸、アデノシン一 5 ' —トリリン酸及びこれらの誘導体が好ましい。なお、アデノシン一 5，一ジリン酸の誘導体又はアデノシン— 5 ' —トリリン酸の誘導体としては、エステル誘導体が好ましい。

前記アデノシン一 5，ージリン酸誘導体及び前記アデノシン— 5，一トリリン酸誘導体は、下記式 2 ：

式 2

[式中、 nは 2または 3、 1^〜11 ₂はそれそれ水素原子または炭素原子数 1〜5 のァシル基を示し、 R ₃は水素原子または保護基を示す。 ] で示される化合物であつてもよい。

前記アデノシン一 5，一ジリン酸誘導体としては、 α、 ?—メチレンアデノシンー 5，一ジリン酸、 2—メチルチオアデノシン _ 5 ' —ジリン酸、 2，一ベンゾィルアデノシン一 5，一ジリン酸、 3，一ベンゾィルアデノシン一 5，ージリン酸が好ましい。

前記アデノシン一 5，一トリリン酸誘導体としては、ひ、 ?—メチレンアデノシン一 5，一トリリン酸、 2—メチルチオアデノシン一 5，一トリリン酸、 2，一ベンゾィルアデノシン一 5，一トリリン酸、 3，一ベンゾィルアデノシン一 5 ' 一トリリン酸が好ましい。本発明の他の形態は、プリン受容体刺激作用を有する化合物を細胞から放出させる作用を有する化合物の 1種又は 2種以上を有効成分として含有する育毛剤である。プリン受容体刺激作用を有する化合物はアデノシン、アデノシン誘導体またはアデノシン代謝物であってもよく、また、 A T P、 A T P誘導体または A T P代謝物であってもよい。

細胞から放出されるアデノシン誘導体またはアデノシン代謝物は、アデノシンモノホスフエ一ト、アデノシンジホスフェート、またはアデノシントリホスフエ

—卜でありうる。

プリン受容体刺激作用を有する化合物、特に、アデノシン、アデノシン誘導体またはアデノシン代謝物、を細胞から放出させる作用を有する化合物は細胞に存在する AB Cトランスポー夕一への刺激作用を有する化合物とすることができる。

AB Cトランスポー夕一への刺激作用を有する化合物は、スルホニルウレァ受容体への刺激作用を有する化合物とすることができる。

スルホニルゥレア受容体への刺激作用を有する化合物は、メグリチニド、ニコランジル、レボクロマカリム、クロマカリム、ピナシジル、ジァゾキサイド、ジソビラミド、チリソロ一ル、アプリカム、ビマカリム、 MgATP、 MnATP、 CaATP、 ZnATP、 S rATP、 MgADP、 MnADP、 CaADP、 ZnADP、 S rADP、 MgAMP、 MnAMP、 CaAMP、 ZnAMP、 S r AMP, アデニル -5-ィルイミドジホスフェート、 L一リジン、 L—アルギニンからなる群より選択される化合物であってよい。

スルホニルゥレア受容体への刺激作用を有する化合物は、カルシウム、マンガン、マグネシウム、亜鉛、およびストロンチウムからなる群より選ばれる二価陽イオンを含む塩であってよい。

スルホニルゥレア受容体への刺激作用を有する化合物は、下記式 3 ：

R-S-C o A 式 3

[式中、 Rは分岐しても良い炭素数 14〜30のァシル基で、二重結合を 0~3個含む]で示される長鎖ァシルコェンザィム Aであってよい。上記の各化合物を有効成分として含有する本発明の育毛剤は、外用剤であることが好ましく、また、本発明の育毛剤において、当該有効成分の含有量は、製剤全体の 0. 01〜5重量％であることが好ましい。本発明の更なる他の形態は、 A B Cトランスポーター遺伝子とプリン誘導体に対する受容体遺伝子で形質転換させた細胞に対して被験物質を添加し、そのときの細胞内へのカルシウム流入量を指標とすることを特徴とする、育毛作用を有する物質のスクリ一ニング方法である。

上記 A B C トランスポーター遺伝子は、スルホニルゥレア受容体遺伝子とすることができる。

上記プリン誘導体に対する受容体遺伝子はアデノシン受容体遺伝子または A T P受容体遺伝子とすることができる。

細胞内へのカルシウム流入量は蛍光カルシウム指示薬を用いた蛍光強度で測定することができる。

A B Cトランスポー夕一遺伝子またはプリン誘導体に対する受容体遺伝子の形質転換を、宿主べクタ一系による遺伝子組み換え技術によって行うことができる。図面の簡単な説明

図 1 本発明の育毛剤及び本発明の方法によってスクリーニングされる物質の、作用機構を示す説明図である。

図 2 本発明のスクリーニング方法の実施例の結果を示すグラフである。

図 3 本発明のスクリーニング方法の実施例の結果を示すグラフである。発明の詳細な説明

まず、本発明の育毛剤について記述する。

本発明者らは、優れた有効性を有する育毛成分について鋭意研究の結果、驚くべきことに、アデノシン受容体及び A T P受容体を含むプリン受容体への刺激作用が育毛効果と密接な関連を有していることを見出した。本発明は、この知見に基づくものであり、

A . プリン受容体刺激作用を有する化合物、生体に適用後にプリン受容体刺激作用を有する化合物を遊離する化合物、及び、プリン受容体刺激作用を有する化合物の当該作用を増強する化合物；及び B . プリン受容体刺激作用を有する化合物を細胞から放出させる作用を有する化合物、例えば、 A B Cトランスポー夕一刺激作用を有する化合物、特にスルホ二ルゥレア受容体刺激作用を有する化合物；

を育毛成分として使用することを特徴とする。以下、上記 A及び Bのタイプの化合物をそれそれ含む育毛剤（以下、各々、プリン受容体直接刺激型、及び、プリン受容体間接刺激型と称する）について詳細に説明を行う。

1 . プリン受容体直接刺激型育毛剤

既述したように、プリン受容体はアデノシン受容体及び A T P受容体に大別される。そこで、まずアデノシン受容体を特に刺激するタイプの化合物を含有する育毛剤について説明する。

アデノシン受容体は、薬理学的及び構造的な特徴をもとに、現在、 A l、 A 2 a、 A 2 b、 A 3の 4種類のサブ夕イブに分類されている。そして、 A 1受容体は抗けいれん効果、神経保護効果、行動抑制効果、睡眠効果等を、 A 2 ( A 2 a又は A 2 b ) 受容体は行動抑制効果、睡眠効果等を、そして A 3受容体は肥満細胞の脱顆粒促進効果等の生理作用を有することが知られている。

アデノシン受容体は生体中において様々な臓器に分布しており、細胞機能及び生理機能の調節に関与しているものと考えられている。例えば、心臓の血管平滑筋に分布するアデノシン受容体は、血中のアデノシン受容体刺激作用を有する化合物との結合により、血管を拡張し、冠血管の血流量を増大させることが知られている。また、近年、細胞上に存在するアデノシン受容体の刺激が細胞内のカルシゥムイオン濃度を上昇させる等の現象を発生させることが明らかとなっている。本発明者らは、アデノシン受容体刺激作用がもたらす様々な現象が細胞組織の他の機能の調節に重要な役割を有する可能性について様々な側面から研究を重ねた結果、アデノシン受容体刺激作用が毛髪の生育に関して深く関与していることを突き止め、この知見に基づき、高い育毛効果を有する新規な育毛剤を開発した。すなわち、本発明の育毛剤の 1つの形態は、アデノシン受容体刺激作用に基づくものである。

この育毛剤の有効成分としては、アデノシン受容体刺激作用を有する化合物の

1種又は 2種以上の他に、生体に適用後にアデノシン受容体刺激作用を有する化合物を遊離する化合物、若しくは、アデノシン受容体刺激作用を有する化合物の当該作用を増強する化合物の 1種又は 2種以上が挙げられる。これらの化合物は単独で使用されてもよく、また、複数の種類が混合されて使用されてもよい。アデノシン受容体刺激作用を有する前記化合物は、アデノシン受容体を刺激する作用を有するものであれば特に限定されるものではないが、アデノシン受容体との結合性の点では、アデノシン、 N 6—シクロへキシルアデノシン、 N 6—シクロペンチルアデノシン、（R) —N 6—フエニルイソプロピルアデノシン、

( S) —N 6—フエニルイソプロビルアデノシン、（R) —フエニル一イソプロビルアデノシン、 N— [R- (2—ベンゾチアゾリル）チォ— 2—プロビル] ― 2—クロロアデノシン、 2—クロ口一 N 6—シクロベンチルアデノシン、 N6— [4-[[[4-[[[2 -[[[ (p—イソチオシアナトフヱニル）ァミノ]チォカルボ二ル]アミノ]ェチル]ァミノ]カルボニル]メチル]アミノカルボニル]メチル]フエ二ル]アデノシン、 N 6— [4— [[[4— [[[2— [[[ (m—イソチオシアナトフヱ二ル）アミノ]チォカルボニル]アミノ]ェチル]アミノ]カルボニル]メチル]アミノカルボニル]メチル]フエニル]アデノシン、 N— (メチルーフエネチル）アデノシン、ミノプリ二ルーデォキシー N—ェチルリボフラヌロアミド、 5，一 N—ェチルカルポキサミドアデノシン、 2—クロロアデノシン、 N—ェチルー 1 ' ーデォキシ - 1⁵ — [ 6—ァミノ一 2— [ 1— ( 3—ヒドロキシ一 3—フエニル）プロビニル〗一 9 H—プリン一 9一ィル]一/? -D—リボフラン一 5，一ゥロナミド、 N 6 一 2— （4ーァミノフエニル）ェチルアデノシン、 5，一 N—シクロプロピル力ルポキサミドアデノシン、 N 6— （p—スルホフエニル）アデノシン、 1—デァザ一 2—クロ口一一 N6—シクロペンチルアデノシン、 8—ブチルアデノシン、

1ーシクロプロビルイソグアノシン、 6—シクロへキシルー 2，一 0—メチルァデノシン、 2— 一D—リボフラノシルォキサゾール一 4一力ルポキサミド、 2 ーョ一ドー N 6—シクロペンチルアデノシン、 N 6—シクロペンチル一 2，ーメチルー 2—クロロアデノシン、 N 6—シクロへキシル一 2 ' — 0—メチルデノシン、 2— [ P— （2—カルボキシェチル）フエニルェチルァミノ] 一 5， - N - ェチルカルボキサミドアデノシン、 2— [ ( 2—アミノエチルァミノ）カルボニルェチルフエニルェチルァミノ]— 5，一ェチルカルボキサミドアデノシン、 2—へキシニルー 5—メチルカルボキサミドアデノシン、 2—シクロへキシルメチリデンヒドラジノアデノシン、 N—ェチルカルボキサミドアデノシン、 5 ' — ( N - シクロプロピル）カルボキサミドアデノシン、 N— [ 2— ( 3 , 5—ジメトキシフェニル）フエニルェチル]アデノシン、 N— ( 2—メチルベンジル）アデノシン、 2—才クチニルアデノシン、 2—フエニルアミノアデノシン、 2— [ 2— ( 4— フルオロフヱニル）エトキシ] アデノシン、 2— [ (シクロへキシルメチレン）ヒドラジノ] アデノシン、 2—クロ口一 N 6— ( 3—ョ一ドベンジル）アデノシン一 5，一N—メチルゥロナミド、 N 6— （ 3—イソチオシアナ一トベンジル）アデノシン一 5，一N—メチルゥロナミド、 2—クロロー N 6— ( 3—ョードベンジルアデノシン— 5，一N—メチルカルボキサミド、デフイブロチド（短鎖デォキシリボヌクレオチド）、ビナシジル、アデノシン一 5，一モノリン酸、アデノシン一 5，一モノリン酸メチルエステル、 N 6—メチルアデノシン一 5，ーモノリン酸、 8—ブチルアミノアデノシン又はこれらの過ヨウ素酸酸化物が好ましく、また、育毛効果の面では、 A 1及び A 2タイプのアデノシン受容体への刺激作用が高い化合物がより好ましい。

また、育毛効果の点では、アデノシン受容体刺激作用を有する前記化合物又は生体に適用後にアデノシン受容体刺激作用を有する化合物を遊離する前記化合物は、上記式 1に示される構造を有する化合物であることが好ましく、その場合は、 R t〜R ₂はそれそれ水素原子又は炭素原子数 1〜 5のァシル基、 R ₃は水素原子又は保護基とされることが好ましい。

ところで、アデノシンをはじめとするアデノシン受容体刺激作用を有する化合物は、生体の様々な組織においてその生成と代謝が行われている。したがって、アデノシン受容体刺激作用を有する化合物の当該作用を増強する化合物にも、ァデノシン受容体刺激作用を有する化合物と同様の効果が存在する。本発明の育毛剤に配合されるアデノシン受容体刺激作用を有する化合物の当該作用を増強する化合物としては、具体的には、アデノシン受容体刺激作用を有する化合物の取り込み阻害剤及び不活性化阻害剤が好ましい。なお、前記不活性化剤としては、ァデノシン受容体刺激作用を有する化合物の酵素による代謝を阻害する化合物を挙げることができ、例えば、アデノシンを生体内で不活性なイノシンに代謝するァデノシンデァミナーゼの阻害剤を使用してもよい。

前記取り込み阻害剤としては、取り込み阻害効果の点で、がジビリダモール、ジラセヅプ、リドフラジン、へキソベンジン、カルボクロメン、クロモナ一ル酸、シネパジド、ジァゼパム、パパべリン、 6— ( 2，一ハイドロキシニトロべンジル）チォグアノシン、プロベントフィリンが好ましく、また、前記不活性化阻害剤としては、その効果の点で、 2 ' —デォキシコホルマイシン、エリスロー 9一 ( 2—ハイドロキシ一 3—ノニル）アデニンが好ましい。次に、 A T P受容体を特に刺激するタイプの化合物を含有する育毛剤について説明する。

A T P受容体には、リガンドの刺激を細胞内に伝達する方法としてイオンの細胞膜透過を利用するものと G T P結合蛋白を介するものの 2種類があるとされており、 P 2 X型及び P 2 Y型（それそれ 7つのサブタイプを有する）と称呼されている。

A T P受容体は生体中では様々な臓器に分布しており、情報伝達や機能調節に関与しているものと考えられている。例えば、神経系ではシナプス変調作用、大動脈では血圧調節を担っているものと考えられている。しかし、いまだその分布の詳細や機能については明確にされていないのが現状である。アデノシン及び A T P (アデノシントリリン酸）はいずれもプリン環を有することから、プリン受容体の概念には、アデノシン受容体及び A T P (アデノシントリリン酸）受容体が含まれる。

ところで、近年、細胞上に存在する A T P受容体の刺激が細胞内のカルシウムイオン濃度の上昇を引き起こすこと等が明らかとなってきている。本発明者らは、 A T P受容体刺激作用が細胞組織の他の機能の調節に重要な役割を有する可能性について、様々な側面から研究を重ねた結果、 A T P受容体刺激作用が毛髪の生育に関して深く関与していることを突き止め、この知見に基づき、高い育毛効果を有する新規な育毛剤を開発した。

すなわち、本発明の育毛剤の他の形態は、アデノシン受容体以外のプリン受容体、すなわち A T P受容体への刺激作用に基づくものである。

このタイプの育毛剤の有効成分としては、 A T P受容体刺激作用を有する化合物の 1種又は 2種以上が挙げられる。これらの化合物は単独で使用されてもよく、また、複数の種類が混合されて使用されてもよい。

この育毛剤の有効成分は、 A T P受容体刺激作用を有するものであれば特に限定されるものではないが、例えば、アデノシンジリン酸、アデノシントリリン酸又はそれらの誘導体を挙げることができる。生体における機能の点では、前記ァデノシンジリン酸及び前記アデノシントリリン酸において、リン酸部分の結合位は、 5 ' 位の炭素が好ましい。したがって、上記した例の中では、アデノシン一 5 ⁵ —ジリン酸、アデノシン一 5，一トリリン酸及びこれらの誘導体が好ましい。また、育毛効果の面では、アデノシン— 5 ' —ジリン酸の誘導体又はアデノシンー 5 ' —トリリン酸の誘導体としてエステル誘導体が好ましい。なお、エステル誘導体としては、アデノシン部位の 2，又は 3，位の炭素に結合した酸素原子が、 1 〜 1 0、好適には 1〜 5の炭素原子を含むァシル基と共にエステルを形成していることが好ましい。

アデノシン一 5 ' ジリン酸の誘導体及びアデノシン _ 5 ' —トリリン酸の誘導体は、具体的には、上記式 2に示される化合物であってもよく、その場合は、 R _t〜R ₂はそれそれ水素原子又は炭素原子数 1〜 5のァシル基、 R ₃は水素原子または適当な保護基とされることが好ましい。

なお、育毛効果の点では、前記アデノシン— 5 ' —ジリン酸誘導体は、ひ、 β ーメチレンアデノシン一 5 ' —ジリン酸エステル誘導体、 2—メチルチオアデノシン一 5，一ジリン酸エステル誘導体、 2，一ベンゾィルアデノシン一 5，一ジリン酸エステル誘導体、又は、 3， —ベンゾィルアデノシン一 5， —ジリン酸ェステル誘導体であることが好ましい。

同様に、育毛効果の点では、前記アデノシン一 5，一トリリン酸エステル誘導体は、ひ、 —メチレンアデノシン一 5，一トリリン酸エステル、 2—メチルチオアデノシン一 5，一トリリン酸、 2，一ベンゾィルアデノシン一 5，一トリリン酸、又は、 3， —ベンゾィルアデノシン一 5，一トリリン酸であってもよい。

2. プリン受容体間接刺激型育毛剤

AB Cトランスポー夕一は、細胞内の ATPの細胞外への放出を引き起こす作用を有する類似タンパクの総称であり、タンパクとしては、いわゆる ABCタンパクスーパ一ファミリ一を構成する一部で、 ATPバインディングカセット、 A T P結合夕ンパク、 AB C結合トランスポ一夕一または A B Cタンパクとも呼ばれており、 MDR (P糖タンパク質、 multidrug resistance protein) 、 MRP (賺- related protein) 、 CFTR (cyctic fibrosis transmembrane conduct ance regulator) 、 SU (スルホニルゥレア受容体）などが挙げられ、様々な細胞機能の発現やその調節に重要な役割を果たしていることが明らかになつている。

例えば膝臓のベ一夕細胞膜に存在する AB Cトランスポー夕一は、隣接する A TP依存性力リゥムチヤンネルの開閉をコントロールして力リウムィオンの細胞外への放出とその後のカルシウムイオンの流入を調節し、細胞小胞内のィンスリンの細胞外への分泌をコントロールしている。さらに、心筋の ABCトランスポ一夕一はミトコンドリアに存在し、同じくミトコンドリアに存在する AT P感受性カリゥムチャンネルの機能を調節し、虚血再灌流時のプレコンディショニング効果（心筋保護効果）の発現に関与していることが明らかとなってきている。一方、 AB Cトランスポ一夕一は心筋や血管平滑筋をはじめとして、生体の様々な組織に存在していることが知られるようになつてきており、トランスポーターとしての役割、即ち細胞内の A TPの細胞外への放出を引き起こす作用も様々な調節作用に関与していることが推察されている。また、滕臓の/?細胞、血管平滑筋及び心筋に存在する AB Cトランスポー夕一はスルホニルゥレア受容体であることが明らかになつている。

スルホニルゥレア受容体は、 AT P感受性力リウムチャネルの制御因子として機能することが知られている（稲垣ら、「スルホニル尿素受容体」（生化学第 6 9巻第 9号 1067頁、 1997年））。

本発明者らは、毛乳頭細胞に AB Cトランスボー夕一と ATP受容体またはァ P P 0

15

デノシン受容体が発現していることを見出した。そして、これらの受容体、すなわちプリン受容体の刺激作用を有する化合物を細胞から放出させる作用を有する化合物、特に A B C トランスボ一夕一を刺激することによりその作用を発揮する化合物が、従来の育毛成分には見られなかった優れた有効性を示すことを見出した。プリン受容体刺激作用を有する化合物には、 A T P受容体及び/又はアデノシン受容体刺激作用を有する化合物が含まれ、具体的には、 A T P、 A T P誘導体又は A T P代謝物、及び/又は、アデノシン、アデノシン誘導体又はアデノシン代謝物が挙げられる。

プリン受容体刺激作用を有する化合物を細胞から放出させる作用と育毛効果との関連性について、本発明者らは、図 1に示すように、例えばスルホニルゥレア受容体などの A B Cトランスポ一夕一を刺激することにより、アデノシントリリン酸（A T P ) が細胞内から放出され、これが A T P受容体に作用するか、または A T Pが分解して生成したアデノシンがアデノシン受容体に作用し、細胞内力ルシゥム濃度の上昇を引き起こし、毛成長速度や毛周期を調節する機構を司っているものと考えている。または、ミトコンドリアに存在するスルホニルウレァ受容体の刺激がミトコンドリアに存在する A T P感受性力リウムチャンネルに作用し、これが A T P、アデノシン、それらの誘導体又は代謝物を細胞から放出させることも考えられる。

したがって、本発明の育毛剤の更なる他の形態は、プリン受容体刺激作用を有する化合物を細胞から放出させる作用に基づくものである。具体的には、この育毛剤の有効成分としては、 A T P、アデノシン、それらの誘導体または代謝物を細胞から放出させる作用を有する化合物の 1種又は 2種以上が挙げられる。これらの化合物は単独で使用されてもよく、また、複数の種類が混合されて使用されてもよい。

プリン受容体刺激作用を有する化合物、例えばアデノシンおよびその誘導体または代謝物、を細胞から放出させる作用の具体例としては、例えば当該細胞に存在する A B Cトランスポー夕一を刺激することがあげられる。

本発明において、アデノシンおよびその誘導体または代謝物としては、アデノシン、アデノシンモノホスフェート、アデノシンジホスフェートおよびアデノシントリホスフェートなどが挙げられる。

AB Cトランスポー夕一への刺激作用を有する化合物としては、 MDR、 MR P、 CFTR、スルホニルゥレア受容体のいずれかへの刺激作用を有する化合物を用いることができるが、好ましくはスルホニルゥレア受容体を刺激作用を有する化合物が挙げられる。

スルホニルゥレア受容体を刺激作用を有する化合物としては、例えば、メグリチニド、ニコランジル、レボクロマカリム、クロマカリム、ピナシジル、ジァゾキサイド、ジソビラミド、チリソロール、アプリカム、ビマカリム、 MgATP、 MnATP、 CaATP、 ZnATP、 SrATP、 MgADP、 MnADP、 CaADP、 ZnADP、 SrADP、 MgAMP、 MnAMP、 C a AMP, Z n AMP, S rAMP、アデニル - 5 -ィルイミドジホスフェート、 L—リジン、 L一アルギニン、カルシウム、マンガン、マグネシウム、亜鉛またはストロンチゥムの二価陽イオンを含む塩、および下記式

R-S-C o A

[式中、 Rは分岐しても良い炭素数 14~30のァシル基で、二重結合を 0〜3 個含む] で示される長鎖ァシルコェンザィム A、その中でも特にォレオイル— C 0 A ノレミトイル _CoA、ォレイル一 CoA、ミリストイルー CoA、ベン夕デカノィル一 CoA、ステアリル一 C o Aが挙げられる。

これらの物質は、カリウムチャネルの開口剤として知られている（例えば、高橋ら、「Kチャネル開口薬」、医薬ジャーナル、 vol.34, S-l, P.70-74 (1998)、および遠藤ら、「カリウムチャネル開口薬」、医薬ジャーナル、 vol.35， S-l, P. 112-119 (1999)参照）。スルホニルゥレア受容体は、 A TP感受性カリウムチヤネルの制御因子として機能しており、カリウムチャネルの開口剤が、スルホニルウレァ受容体に結合することはすでに知られている（例えば、 Brayら、 Jounal o f Bailogical Chemistry, vol.267, p.11689 (1992)参照）。そして、スルホニルウレァ受容体が、細胞内より細胞外へ AT Pの放出に関与していることもすでに提唱されている（Awqatiら、 Science vol.269, 805 (1995)参照) 。したがって、カリウムチャネルの開口剤として知られている上記物質は、スルホニルゥレア受容体に結合して、これを刺激するものと考えられる。本発明は、これらの物質のスルホニルゥレア受容体への結合によるスルホニルウレァ刺激作用、すなわち A B Cトランスポーターへの刺激作用が、 A T P、アデノシン、それらの誘導体または代謝物等のプリン受容体刺激作用を有する化合物を細胞から放出させ、育毛効果を発揮させることに初めて着目したものである。本発明の育毛剤は、外用剤であることが好ましく、 1日 1〜数回、適量を頭皮、皮膚上に塗布して使用することができる。また、本発明の育毛剤に含有される各有効成分の配合量は、好ましくは製剤全体中 0 . 0 1〜 5重量％であり、より好ましくは 0 . 1〜5重量％、特に好ましくは 1 ~ 5重量％である。この配合量が 0 . 0 1重量％未満であると、育毛効果が十分でなく、 5重量％を超えると、有効成分の製剤中での溶解安定性が低下することが多く、例えば低温保存時に結晶析出が認められるなど品質への悪影響が懸念されるため好ましくない。

本発明の育毛剤は、外用剤として通常用いられる剤形、例えばローション剤、乳剤、クリーム剤、トニック剤、軟膏剤、ゲル剤、エアゾール剤等として使用することができるが、外用剤として使用される剤形であればこれらに限定されるものではない。なお、エアゾール剤として使用する場合は、原液に対して上記のように配合量が設定される。

なお、本発明の育毛剤には、それそれ、必要に応じ水、低級アルコール（メタノール、エタノール、変性エタノール、イソプロピルアルコール等）、溶解補助剤、界面活性剤、乳化安定剤、ゲル化剤、粘着剤、その他、所望する剤型を得るために通常使用される基剤成分を配合でき、使用目的に応じて、ミノキシジル、塩化カルプロニゥム等の血管拡張剤、スピロノラクトン、フル夕ミド、シプロテ口ンアセテート、ォキセンドロン等の男性ホルモン受容体阻害剤、フイナステライド、ェビリステライド等のステロイド一 5 ひ一レダク夕一ゼ阻害剤、グリチルレチン酸、ァズレン等の抗炎症剤、酢酸ヒドロコルチゾン、酢酸デキサメサゾン等の副腎皮質ホルモン、尿素、サリチル酸等の角質溶解剤、プロピレングリコール、 1 , 3—ブチレングリコ一ル、マクロゴール、グリセリン、ジプロピレングリコール、エタノール、イソプロパノール等のアルコール類、グリセリルモノペン夕デカノエート等の脂肪酸グリセリンエステル、塩酸イソペンジル、塩酸ジフェンヒドラミン等の抗ヒスタミン剤、グルコン酸クロルへキシジン、イソプロビルべチルフエノール、第 4級アンモニゥム塩、ヒノキチオール、ビロクトンオラミン等の殺菌剤、ヒアルロン酸ナトリウム、グリセリン、コンドロイチン硫酸等の保湿剤、ィチイ、ボタンビ、カンゾゥ、オトギリソゥ、附子、ビヮ、力ワラョモギ、コンフリー、ァシ夕バ、サフラン、サンシン、ローズマリ一、セージ、モッコゥ、セィモッコゥ、ホヅプ、プラセン夕などの動植物の抽出物、酢酸レチノール、塩酸ピリドキシン、ァスコルビン酸、硝酸チアミン、シァノコバラミン、ピオチン、酢酸トコフエノール等のビタミン類、ミリスチン酸イソプロピル、パルチミン酸イソプロビル、スクヮラン、流動パラフィン、レシチン等の油分、ポリエキシェチレンソルビダン脂肪酸エステル、ソルビダン脂肪酸エステル、ポリオキシェチレン脂肪酸エステル、ポリエキシエチレン硬化ヒマシ油などの界面活性剤、ジブチルヒドロキシトルエン、イソプロビルガレート等の抗酸化剤、エチレンジアミンテトラアセテート等のキレート剤、メントール、カンフル等の清涼化剤、色素、香料、経皮吸収促進剤等の成分を本発明の効果を損なわない範囲で配合することができる。

また、適用対象又は必要とされる育毛効果の程度等にも依存するが、必要であれば、本発明の育毛剤は、上記 A及び Bのタイプの化合物の両方を含んでもよい。次に、本発明の育毛物質のスクリーニング方法について記述する。図 1に関連して既に説明したとおり、毛乳頭細胞には A B Cトランスポーターと A T P受容体又はアデノシン受容体が発現しており、これらは相互に密接に関連して育毛作用を示すものと思われる。特に、 A B Cトランスポ一夕一に対する刺激作用を有する化合物については、この A B C トランスポー夕一に対する刺激作用を介する A T P受容体またはアデノシン受容体の刺激により、細胞内カルシゥム濃度の上昇を伴って育毛効果を示すのではないかと考えられる。

そこで、毛乳頭細胞を用いて育毛剤のスクリーニングを実施したが、目的とする毛乳頭細胞は、増殖能が極めて悪く、スクリーニングに必要な細胞数を確保するには多量の毛組織が必要で、その実施には多大な労力と費用を要した。そのため、 AB C トランスポ一夕一を介して AT P受容体またはアデノシン受容体に作用して効果を示す物質を見出す簡便な方法の開発が望まれた。

そこで、本発明者らは鋭意研究の結果、 AB C トランスポーター遺伝子と、 A T P受容体遺伝子またはアデノシン受容体遺伝子を適当な宿主ベクター法による遺伝子組み替え技術によって遺伝子組み替え細胞とし、この細胞へのカルシウムの流入を測定することにより育毛物質をスクリーニングする方法を確立し、本発明を完成させた。

即ち、本発明の育毛物質のスクリーニング方法は、 AB C トランスポー夕一遺伝子およびプリン誘導体に対する受容体遺伝子を宿主ベクター法によって発現させた細胞を使用し、細胞内へのカルシウムの流入を指標とすることを特徴とする。上記したとおり、 AB C トランスポーターは、細胞内の AT Pの細胞外への放出を引き起こす作用を有する類似タンパクの総称であり、タンパクとしては、いわゆる AB Cタンパクスーパ一フアミリーを構成する一部で、 A TPバインディングカセット、 AT P結合タンパク、 AB C結合トランスポー夕一または AB C タンパクとも呼ばれている。 AB Cトランスポー夕一としては、例えば、 MDR (P糖夕ンノク質ヽ multidrug resistance protein) 、 MRP (腿 - related pr otem) 、 C F T (cyctic fibrosis transmembrane conductance regulator) 、 S UR (スルホニルゥレア受容体）などが挙げられる。中でも、本発明に用いられる AT P結合トランスポー夕一遺伝子としては特にスルホニルゥレア受容体遺伝子（以下 SUR遺伝子ともいう）が好ましい。

スルホニル受容体遺伝子は、すでに知られている SUR遺伝子配列の情報、例えば Y.Tokuyamaら、 Biochemical and Biophysical Research Communications, ύ20, p.532-538 ( 1996 )に記載されたハムス夕一 SUR遺伝子配列の情報を元に該配列から作成した適当なプローブを用いて、周知の PCR法や cDNAライブラリ一からのハイブリダィゼーシヨン法などにより得られることができる。また、ラットの SURcDN A配列も知られている（GenBank Accession No.L40624) 。ハムスター SUR遺伝子導入に関しては、 Aguilar-Bryanら、 Science, vol.268, p.423 (1995)に記載されている。ラット、マウス SURのアミノ酸配列については、稲垣ら、「スルホニル尿素受容体」（生化学第 6 9卷、第 9号、 1067頁、 1 9 97年）に記載されている。上記アデノシン誘導体に対する受容体遺伝子としては、プリン受容体遺伝子またはアデノシン受容体遺伝子が挙げられる。

アデノシン受容体遺伝子としては、すでにヒトの cDNA遺伝子配列が知られている（GenBank Accession No.X68485) 。あるいはスルホニル受容体遺伝子と同様に、周知の PCR法または cDNAライブラリーからのハイプリダイゼ一ション法などにより得られることができる。

AT P受容体遺伝子についても、ヒ卜の cDNA遺伝子配列が知られている (GenBank Accession No.X83688) 。

これらの遺伝子の種に関しては特に制限はなく、例えば、ヒ卜、ラット、マウス、ハムスター由来のものが挙げられる。

これらの遺伝子をクローン化する方法としては、例えば、 Sambrookら， Molecu lar Biology: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, New York 1989等に記載された一般的な方法を用いることができる。

上記 AB Cトランスポー夕一遺伝子またはプリン誘導体に対する受容体遺伝子としては、形質転換後に形質転換細胞内で A B Cトランスポーターまたはプリン誘導体に対する受容体として機能する範囲で、遺伝子配列の内部または末端の一部が、挿入、置換あるいは削除されたものも含む。

また、本発明に用いられる宿主としては導入した遺伝子が効率よく発現され、培養が容易なものであれば特に限定されないが、ェシェリヒア属菌である Escher ichia coliの各種菌株、バチルス属菌種である Bacillus subtilisの各種菌株、酵母としては Saccharomyces cerevisiaeの各種菌株、動物細胞としては C 0 S— 7 細胞、 CHO細胞、 PC 12細胞、 N I H3 T 3細胞、 NRK細胞、 CV— 1細胞、 CO S— 1細胞等が好ましい。

ベクタ一としては、調製が容易で効率よく導入できるものであれば特に限定されないが、大腸菌由来のプラスミド（例： pBR 322、 pUC 1 18など）、枯草菌由来のプラスミド（例： pUB 1 10、 p C 194など）、酵母由来のブラスミド（例： pSH 19など）、さらにパクテリオファージゃレトロウィルスやワクシニアウィルス等の動物ウィルス等が好ましい。さらに、該当遺伝子を発現させるために、遺伝子の上流に適当な発現プロモーターを接続する。使用するブ口モータ—は、宿主に応じて選択すればよい。例えば、宿主が大腸菌である場合には、 T7プロモーター、 l acプロモータ一、 t rpプロモーター、ァ PLプ口モー夕一などが、宿主がバチルス属菌である場合には S P 0系プロモ一夕一等が、宿主が酵母である場合には P HOプロモータ一、 GAPプロモーター、 AD Hプロモーター等が、宿主が動物細胞である場合には SV40由来プロモ一夕一、レトロウイルスプロモ一夕一等が、それそれ使用できる。

形質転換は、 DNAが、染色体外要素として、あるいは染色体組み込みにより DN Aが複製可能となるように、 DN Aを生体内に導入することを意味する。上記組み替えベクターを用いて宿主細胞を形質転換する方法としては、各宿主細胞に対して一般に用いられる形質転換方法、例えば塩化カルシウムを使用するカルシウム処理、リン酸カルシウム法によるトランスフエクシヨン、エレクト口ポレーシヨン、またはリポフエクシヨンなどが適用できる（Sambrookら， Molecu lar Biology: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, New York 1989など）。

こうして得られた形質転換細胞を適当な選択培地で培養してスクリーニングに供する。このスクリーニングのための培養は、細胞をカバ一グラス上で培養して供することが好ましい。例えば、形質転換細胞を細胞濃度 3 X 10⁷/mLとなるように培地に懸濁し、適量をカバ一グラス上に載せ、 24〜48時間程度、約 3 7 °Cで培養する。

スクリーニングの方法としては、培養細胞に、被験物質溶液を添加し、細胞内へのカルシウムの流入量を測定することにより行う。

細胞内カルシウム濃度測定法としては、カルシウムキレート剤でありカルシゥム結合量に応じてその蛍光特性が変化する周知の蛍光カルシウム指示薬、例えば f u r a- 2, f ura - 2— AM、 indo— 1、 quin2、 f luo - 3、 r ho d— 2などを用いることができるが、なかでも： f u r a— 2— AM (l-(2 -(5， -カルボキシォキサゾ一ル- 2， -ィル） -6-アミノベンゾフラン- 5-ォキシ）-2-(2 ，-アミノ -5，-メチルフエノキシ） -ェタン- Ν,Ν,Ν，，Ν，-テトラァセチックァシッドぺン夕ァセトキシメチルエステル、和光純薬（東京））を使用した蛍光強度法を用いることが好ましい（唐木、実験医学、 7 (6) 、 626 (1989) ) 。

例えば、 1〜20 /1111の 111^¾ &ー2—八1^を20~40分間口一ドし、夕イロ一ド液（135mM NaCl， 5. 6mM KC 1, 1. 2 mM MgSO 2. 2mM C a C 1 l OmMグルコース， 20mM H E P E S ( [4-(2-ヒドロキシェチル） -卜ビペラジン]エタンスルホン酸）/ N aOH (pH 7. 4) ) にて洗浄した後、細胞内カルシウム濃度の指標として 340 nmおよび 380 η mの蛍光強度の比を求める。これには、例えばカバ一ガラスを循環定温チャンバ —付蛍光測定装置（ARGUS-50、浜松フォトニクス社、浜松）を用いることができる。産業上の利用可能性

本発明により、従来の育毛剤よりも高い育毛効果を有する育毛剤を提供することが可能である。

特に、本発明の育毛剤は、例えば、 ATP、 ATP誘導体、アデノシン、アデノシン誘導体等を細胞から放出させて、 A TP受容体及び/又はアデノシン受容体を刺激して、育毛効果を発揮するという新規な作用機構に基づいており、顕著な育毛効果を奏するものである。

なお、 ATP受容体刺激作用を有する化合物を有効成分とする育毛剤では、当該化合物としてアデノシン一 5，一ジリン酸誘導体又はアデノシン一 5，一トリリン酸誘導体を用いた場合に、特に高い育毛効果を得ることができる。

また、本発明により、 AB Cトランスポー夕一への刺激作用を介するプリン受容体刺激作用、すなわち A TP受容体及び/又はアデノシン受容体刺激作用、により、育毛効果を発揮するという新規な作用機構を有する育毛作用物質のスクリ一二ングを、容易に行うことが可能である。実施例次に、製剤例及び試験例（実施例及び比較例）を挙げて本発明を更に詳細に説明する。育毛剤

製剤例 1 (外用ローション剤）：

(成分）配合量 (W/ )

2- [P- ( 2-カルホ、、キシェチル )フェニル Iチルァミノ ) 0 . 5

-5， -N-Iチルカルホ、、キサミドアテ、、ノシン

プロピレングリコール 1 0 . 0 ェ夕ノ一ル 5 0 . 0 精製水全 1 0 0 m ]

上記成分を撹拌し、均一に溶解させ外用ローション剤を調製した, 製剤例 2 (外用クリーム剤）：

(成分）配合量 (W/W5 アデノシン 1 0 中鎖脂肪酸トリグリセリド 1 8 0 ミリスチン酸ィソプロピル 1 0

2—へキシルドデカノール 4 0 ポリオキシエチレン（ 2 0 ) ソルビ夕ンモノステアレ 5 0 ソルビ夕ンモノステアレート 3 0 グリセリンモノステアレート 6 0 セタノ一ル 0 ステアリルアルコール 2 0 プロビレングリコール 5 0

P—ァミノ安息香酸メチル 0 0 5

P—ァミノ安息香酸プロビル 0 0 5 精製水全 100 g 上記成分について、乳化剤の通常の製法に準じて外用クリーム剤を調製した < 製剤例 3 (外用ゲル剤）：

(成分）配合量 (w/w%)

N 6 - (L— 2—フエニルイソプロビル）アデノシン 0. 5

ポリエチレングリコール（ 10) モノステアレート 1. 0

1， 3—ブチレングリコール 7. 0

カルボキシビニルポリマ一 1. 5

ジイソプロパノールアミン

ェ夕ノ一ル 40. 0

精製水全 100 g

上記成分について、ゲル剤の通常の製法に準じて外用ゲル剤を調製した。製剤例 4 (エアゾール剤）

(成分）配合 1(W/W¾) ピナシジル 0 ， 1

ポリオキシエチレン（20) ソルビ夕ンモノステアレ- -卜 1 . 0

グリセリン 3 . 0

ェ夕ノ一ル 20 . 0

精製水 1 5 . 0

イソペンタン 1 0 . 0

液化石油ガス 3 . 0

ジメチルェ一テル 48 . 0

上記成分について、エアゾール剤の通常の製法に準じて外用エアゾール剤を調製した。試験例：

実施例 1〜 1 5 (表 1及び表 2) の育毛剤の発毛試験を C 3H/HeNCr J マウスを用い行った。試験法はマウスを 1群 1 0匹とし、実施例 1〜 1 5、比較例 1及び 2、並びに、無投与群の 1 7群に分け、マウスの背部をパリカンおよび力ミソリにて剃毛し、それそれのサンプルを 1曰 1回、剃毛した背部 8平方 c m 当たり 1 0 0 Lずつ塗布した。実施例 1〜1 5、比較例 1及び 2の育毛剤は製剤例 1と同様に、表 1及び表 2に示す各成分を全体が均一な状態となるまで攪拌して調製した。実施例 1〜 1 5の育毛剤及び比較例 1、 2の育毛剤の投与群、並びに無投与群の塗布面積に対する毛の再生面積（ 1 5日後）を表 3及び表 4に示す。

成分名実施例 1 実施例 2 実施例 3 実施例 4 実施例 5 実施例 6 実施例 7 比較例 1 化合物 1 1 S

化合物 2 1 g

化合物 3 1 g

化合物 4 1 g

化合物 5 1 g

化合物 6 1

化合物 7 1 g

フ。ロレンク"リコール 2 0 g 2 0 g 2 0 g 2 0 g 2 0 g 2 0 g 2 0 g 2 0 g エタノール 5 0 g 5 0 g 5 0 g 5 0 g 5 0 g 5 0 g 5 0 g 5 0 g 精製水全 1 0 0 raL 全 1 0 0 mL 全 1 0 0 mL 全 1 0 0 mL 全 1 0 0 mL 全 1 0 0 mL 全 1 0 O mL 全 1 0 0 mL 化合物 1 : N 6—シクロへキシルアデノシン

化合物 2 ： 2 —クロ口一 N 6 —シクロペンチルアデノシン

化合物 3 ： 5 ' N—エヂルカルポキサミドアデノシン

化合物 4 ：アデノシン一 5 ' —モノリン酸

化合物 5 ：アデノシン一 5 ' —モノリン酸メチルエステル

化合物 6 ： N 6—メチルアデノシン一 5 ' —モノリン酸

化合物 7 ： 8—ブチルアミノアデノシン

成分名実施例 8 実施例 9 実施例 10 実施例 11 実施例 12 実施例 13 実施例 14 実施例 15 比較例 2 化合物 8 1 g

化合物 9 1

化合物 1 0 1

化合物 1 1 1 g

化合物 1 2 1

化合物 13 1 g

化合物 14 1 to 化合物 1 5 1

フ °ロヒ。レンク"リコ-ル 20 g 20 g 20 g 20 g 20 g 20 g 20 g 20 g 20 g エタノール 50 g 50 g 50 g 50 g 50 g 50 g 50 g 50 g 50 g 精製水全 100 mL 全 1 00 mL 全 1 00 raL 全 1 00 mL 全 1 00 mL 全 1 0 0 mL 全 1 00 mL 全 1 00 mL 全 1 00 mL 化合物 8 ： N 6—シクロへキシル一 2 ' —0—メチルアデノシン

化合物 9 ： R—フエニルイソプロピルアデノシン

化合物 1 0 ： 2— [p— ( 2—カルボキシェチル）フエニルェチルァミノ ]一 5' —N—ェチルカルポキサミドアデノシン

化合物 1 1 ： 2—フヱニルアミノアデノシン

化合物 12 ： 2—クロロー N 6— （3—ョードベンジル）アデノシン一 5 N—メチルゥロナミド

化合物 13 ：ジピリダモール

化合物 14 :エリス口一 9— (2—ハイド口キシ— 3—ノニル）アデニン

化合物 1 5 : 2—ォクチニルアデノシン

JP /00694

28

表 3

表 4

表 1乃至表 4の結果から明らかなように、本発明の育毛剤は毛の再生に関して高い効果を有する。

製剤例 5 (外用ローション剤）：

(成分）配合量 (W/V50 ひ、 /?—メチレンアデノシン一 5，一トリリン酸 0. 5 プロビレングリコール 1 0 . 0 エタノール 5 0 . 0 精製水全 1 0 0 m ]

上記成分を撹拌し、均一に溶解させ外用ローション剤を調製した製剤例 6 (外用クリーム剤）：

(成分）配合量 (W/W¾)

2ーメチルチオアデノシン一 5 一トリリン酸 1 0 中鎖脂肪酸トリグリセリド 2 0 0 ミリスチン酸ィソプロピル 1 0

2—へキシルドデカノール 4 0 ポリオキシエチレン（ 2 0 ) ソルビ夕ンモノステアレート 5 0 ソルビ夕ンモノステアレート 3 0 グリセリンモノステアレート 6 0 セ夕ノール 1 0 ステアリルアルコール 2 0 プロピレングリコール 1 5 0

P—ァミノ安息香酸メチル 0 0 5 P—ァミノ安息香酸プロビル 0 0 5 精製水全 1 0 0 g

上記成分について、乳化剤の通常の製法に準じて外用クリーム剤を調製した製剤例 7 (外用ゲル剤）：

(成分）配合量 (W/W%)

2， —ベンゾィルアデノシン— ₅，一ジリン酸 5 . 0

ボリエチレングリコール（ 1 0 ) モノステアレート 1 . 0

1， 3—ブチレングリコール 7 . 0

カルボキシビ二ルポリマ一 1 . 5

ジィソプロパノールアミンエタノール 40. 0

精製水全 100 g

上記成分について、ゲル剤の通常の製法に準じて外用ゲル剤を調製した, 製剤例 8 (エアゾール剤）：

(成分）配合量 (W/W¾)

3，一ベンゾィルアデノシン一 5，一ジリン酸 0 1

ポリオキシエチレン（20) ソルビ夕ンモノステアレート 1 0

グリセリン 3 0

ェ夕ノール 20 0

精製水 15 0

イソペンタン 10 0

液化石油ガス 3 0

ジメチルエーテル 48 0

上記成分について、エアゾール剤の通常の製法に準じて外用エアゾール剤を調製した。製剤例 9 (外用ローション剤）：

(成分）配合量 (W/V5 アデノシン一 5，一トリリン酸メチル 0. 01 プロビレングリコール 10. 0 ェ夕ノ一ル 50. 0 精製水全 100 ml 試験例：

実施例 16〜22 (表 5) の育毛剤の発毛試験を〇311/；« 6 〇 1-«7マゥスを用い行った。試験法はマウスを 1群 10匹とし、実施例 16~22の育毛剤投与群、比較例 3の育毛剤投与群及び無投与群の 9群に分け、マウスの背部をバリカンおよび力ミソリにて剃毛し、それそれのサンプルを 1日 1回、剃毛した背部 8平方 c m当たり 1 0 0 Lずつ塗布した。実施例 1 6〜2 2及び比較例 3の育毛剤は、製剤例 5と同様に、表 5に示す各成分を全体が均一な状態となるまで攪拌して調製した。実施例 1 6〜2 2の育毛剤及び比較例 3の育毛剤の投与群並びに無投与群の塗布面積に対する毛の再生面積（ 1 5曰後）を表 6に示す。

成分名実施例 1 6 実施例 1 Ί 実施例 18 実施例 1 9 実施例 20 実施例 2 1 実施例 22 比較例 3

化合物 1 6 1

化合物 1 7 1 g

化合物 1 8 1

化合物 1 9 1 s

化合物 20 1 g

化合物 2 1 1 g

化合物 22 1 g

7°ロレンク"リコ-ル 20 g 20 g 20 g 20 g 20 g 20 g 20 g 20 g エタノール 50 g 50 g 50 g 5 0 g 50 g 50 g 50 g 50 g 精製水全 1 00 mL 全 1 00 mL 全 1 00 raL 全 100 mL 全 1 00 mL 全 1 00 mL 全 1 00 mL 全 100 mL 化合物 1 6 : ひ、 <5—メチレンアデノシン一 5 ' — トリリン酸

化合物 1 7 : 2—メチルチオアデノシン一 5 ' — トリリン酸

化合物 1 8 : 2 ' —ベンゾィルアデノシン一 5 ' — トリリン酸

化合物 19 : 3' —ベンゾィルアデノシン一 5 ' —ジリン酸

化合物 20 ：アデノシン一 5 ' —ジリン酸メチル

化合物 2 1 ：アデノシン一 5 ' —ジリン酸

化合物 22 ：アデノシン一 5 ' — トリリン酸

≠ 5 表 6

表 5及び表 6の結果から明らかなように、本発明の育毛剤は毛の再生に関して高い効果を有する。また、本発明の化合物群の中では、アデノシン— 5 ' —ジリン酸（実施例 2 1 ) 又はアデノシン— 5， —トリリン酸（実施例 2 2 ) と比べて、それらの誘導体の方がより高い育毛効果を有することが明らかとなった。

製剤例 1 0 (外用クリーム剤）

(成分）配合量 (W/W¾) クロマカリム 1 0

中鎖脂肪酸トリグリセリド 1 8 0

ミリスチン酸ィソプロビル 1 0

2—へキシルドデカノ一ル 4 0

ポリオキシエチレン（ 2 0 ) ソルビ夕ンモノステアレ一ト 5 0

ソルビタンモノステアレート 3 0

グリセリンモノステアレート 6 0

セ夕ノール 1 0

ステアリルアルコール 2 0

プロピレングリコール 1 5 0 p—ァミノ安息香酸メチル 0. 05

P—ァミノ安息香酸プロビル 0. 05 精製水全 100 g

上記成分について、乳化剤の製法に準じ、外用クリーム剤を調製した, 製剤例 1 1 (外用ゲル剤）

(成分）配合量 (W/W%)

MgATP 1. 0

ポリエチレングリコール（ 10) モノステアレート 1. 0

1 , 3—ブチレングリコール 7. 0

カルボキシビニルポリマ一 1 - 5

ジィソプロパノールアミン

エタノール 40. 0

精製水全 1 00 g

上記成分について、ゲル剤の製法に準じ、外用ゲル剤を調製した, 製剤例 12 (エアゾール剤）

(成分）配合量 (W/W5

ォレオイル一 C oA 0. 5

ポリオキシエチレン（20) ソルビ夕ンモノステアレ卜 1 0

グリセリン 3 0

ェ夕ノ一ル 20 0

精製水 1 5 0

イソペンタン 1 0 0

液化石油ガス 3 0

ジメチルエーテル 48 0

上記成分について、エアゾール剤の製法に準じ、外用エアゾール剤を調製した, 実施例 23 (外用ローション剤） (成分）配合量 (W/V5 ニコランジル 1. 0 プロピレングリコール 20. 0 エタノール 50. 0 精製水全 100 ml

上記成分を撹拌し、均一に溶解させ外用ローション剤を調製した。実施例 24— 28

表 7に示すように、実施例 23におけるニコランジルを、ピナシジル（実施例 24) 、クロマカリム（実施例 25) 、 MnATP (実施例 26) 、メグロチニド（実施例 27) 、 L一アルギニン（実施例 28) に代えた以外は実施例 23と同様に外用ローション剤を調製した。比較例 4

表 7に示すように、実施例 23におけるニコランジルを除いた以外は実施例 2 3と同様に外用ローション剤を調製した。

成分名実施例 2 3 実施例 2 4 実施例 2 5 実施例 2 6 実施例 2 7 実施例 2 8 比較例 4 化合物 2 3 1 g

化合物 2 4 1 S

化合物 2 5 1 g

化合物 2 6 1

化合物 2 7 1 g

化合物 2 8 1

7° Πヒ。レンク"リコ-ル 2 0 g 2 0 g 2 0 g 2 0 g 2 0 g 2 0 g 2 0 g

エタノール 5 0 g 5 0 g 5 0 g 5 0 g 5 0 g 5 0 g 5 0 g

精製水全 1 0 0 mL 全 1 0 0 mL 全 1 0 0 mL 全 1 0 0 mL 全 1 0 0 mL 全 1 0 0 mL 全 1 0 0 mL 化合物 2 3 ニコランジル

化合物 2 4 ピナシジル

化合物 2 5 クロマカリム

化合物 2 6 M n A T P

化合物 2 7 メグロチニド

化合物 2 8 L一アルギニン

»7 試験例

実施例 23〜28と比較例 4の外用ローション剤を用いた発毛試験を、 C 3 H /H e NC r Jマウスを用い、以下の通り行った。

試験法はマウスを 1群 10匹とし、試料投与群および無投与群の 8群に分け、マウスの背部をバリカンおよび力ミソリにて剃毛し、それそれのサンプルを 1曰 1回、剃毛した背部 8平方 cm当たり 100 Lずつ塗布した。実施例 23-2 8の試料投与群、比較例 4の試料投与群および無投与群の塗布面積に対する毛の再生面積（ 1 5日後）を表 8に示す。表 8

上記試験例より、本発明の育毛剤は、毛の再生に関して、高い効果を持つことが確認された。スクリ一二ング方法

<目的遺伝子の細胞への形質転換 >

CO S— 1細胞（3 x 10⁵個 /直径 35 mmシャーレ）を 10%牛胎児血清を含んだダルベッコ変性 MEM培地にて 5 %C0₂雰囲気下、 37 °Cで培養した。別に、ヒトアデノシン受容体 c DNA (GenBank Accession No.X68485, 参考文献： A.Kollias - Bakerら、 The Journal of Pharmacology and Experimental Th erapeutics,281(2)， 761-768(1997)) とラットスルホニルゥレア受容体 c D N A ( GenBank Accession No.L40624、参考文献： Y · Tokuyamaら、 Biochemical and B iophysical Research Communications, 220, 532-538 (1996)) を p c DNA 3. 1ベクタ一（インビトロジェン社、カリフォルニア、米国）と p cDNA 3. 1 /Hygroベクタ一（インビトロジェン社、カリフォルニア、米国）に常法に従ってそれそれ導入し、 p c DNA 3. 1 hADおよび p c DNA 3. 1 /Hygro raS U Rを得た。 p c DN A 3. l hADは、 p c DNA 3. 1ベクターの EcoRI/Notl部位に、ヒトアデノシン受容体 c DNAの H i nd l l l/Xb a l断片（ 1. 4 kb) が挿入されたものである。

p c DN A 3. 1 /Hygro raS URは、 p c DNA 3. 1 /Hygroベクタ一の Hin dlll/Xbal部位に、ラヅトスルホニルゥレア受容体 c DNAの塩基番号 2 0 8 - 5 0 8 6の DNA断片が挿入されたものである。こうして得られた p C DNA 3. 1 hAD ( 1 ^ g) および p c DNA 3. 1 /Hygro raS UR ( l j g) を、先に培養しておいた C 0 S— 1細胞中に、リポフェク夕ミンと O p t i— ME M I試薬、 Nobuya Inagakiら、 Science, 270, 1166 -1170 (1995)に記載された方法に準じて、トランスフエクトした。

その後、細胞をさらに培養し、コンフル一ェントに達したところでリン酸緩衝生理食塩水で洗浄し、 0. 0 5 %トリプシンと 0. 5 3 mMの ED T A溶液で処理した。

ネオマイシンおよびハイグロマイシン耐性を指標にして高発現細胞株を得た。スクリーニングには細胞をカバーグラス上で培養して供した。また、細胞内力ルシゥム濃度の測定には、 FURA— 2を使用した蛍光強度法を用いた。すなわち 5 g/m 1の: f u r a— 2 amを 3 0分間ロードし、夕イロ一ド液にて洗浄した後、細胞内カルシウム濃度の指標として 3 4 0 nmおよび 3 8 0 nmの蛍光強度の比を求めた。試験例

上記操作によって得られた細胞を用いて、以下の試験を行った。

試験例 1

スルホニルゥレア受容体刺激剤として知られているニコランジルを用いて、本発明のスクリーニング法の有効性を確認した。その結果、図 2に示す通り、ニコランジル 2 5、 1 0 0 M添加により細胞内カルシウム濃度が上昇するが、この作用はアデノシン受容体の阻害剤である 8—スルホフェニルテオフィリンの前処理により抑制されることが確認された。試験例 2

アデノシン受容体刺激剤としてアデノシン 1 . 0および 1 0 . 0 z Mを添加すると、図 3に示す通り、細胞内カルシウム濃度は濃度依存的に上昇した。この作用はアデノシン受容体阻害剤である 8—スルホフェニルテオフィリン 1 Mの前処理により抑制された。

試験例 1および 2の結果から、本発明の形質導入細胞では、スルホニルゥレア受容体とアデノシン受容体が発現し、機能していることが確認できた。

なお、カルシウム除去培地ではニコランジルおよびアデノシンの作用は認められなかった。このことから、細胞内カルシウム濃度の増大は、細胞外カルシウムの流入によるものであることは明らかである。本発明で得られた形質転換細胞は、増殖能も良好で、育毛剤のスクリーニングに容易に使用することができる。

Claims

請求の範囲

1. ブリン受容体刺激作用を有する化合物、生体に適用後にブリン受容体刺激作用を有する化合物を遊離する化合物、若しくは、プリン受容体刺激作用を有する化合物の当該作用を増強する化合物の 1種又は 2種以上を有効成分として含有する育毛剤。

2. 前記プリン受容体刺激作用を有する化合物がアデノシン受容体刺激作用を有する化合物である請求項 1記載の育毛剤。

3. アデノシン受容体刺激作用を有する前記化合物が、アデノシン、 N6—シク口へキシルアデノシン、 N 6—シクロペンチルアデノシン、（R) — N 6—フエニルイソプロビルアデノシン、（S) —N 6—フエニルイソプロピルアデノシン、

(R) —フエ二ルーイソプロピルアデノシン、 N— [R— （ 2—ベンゾチアゾリル）チォ一 2—プロビル] — 2—クロロアデノシン、 2—クロロー N 6—シクロペンチルアデノシン、 N 6— [4— [[[4— [[[2— [[[ (p—イソチオシアナトフェニル）アミノ ]チォカルボニル]アミノ]ェチル]アミノ ]カルボニル]メチル]アミノカルボニル]メチル]フエニル]アデノシン、 N 6— [4一 [[[4— [[[2— [[[ (m ーィソチオシアナトフェニル）ァミノ ]チォカルボニル]アミノ ]ェチル]アミノ ]力ルボニル]メチル]アミノカルボニル]メチル]フエニル]アデノシン、 N— (メチルーフエネチル）アデノシン、ミノプリ二ルーデォキシ一 N—ェチルリボフラヌロアミド、 5，一N—ェチルカルボキサミドアデノシン、 2—クロロアデノシン、 N—ェチル一 1，一デォキシ一 1，一 [ 6—アミノー 2— [ 1— ( 3—ヒドロキシ — 3—フエニル）プロビニル]— 9 H—プリン一 9一ィル]— 3— D—リボフラン — 5，一ゥロナミド、 N 6— 2— (4—ァミノフエニル）ェチルアデノシン、 5 ，一N—シクロプロピルカルボキサミドアデノシン、 N 6— （p—スルホフエ二ル）アデノシン、 1ーデァザ一 2—クロ口一一 N 6—シクロペンチルアデノシン、 8—ブチルアデノシン、 1ーシクロプロビルイソグアノシン、 N 6—シクロへキシルー 2，一0—メチルアデノシン、 2 — D—リボフラノシルォキサゾール一 4一カルボキサミド、 2—ョードー N 6—シクロペンチルアデノシン、 N 6— シクロペンチルー 2，ーメチルー 2—クロロアデノシン、 N 6—シクロへキシル — 2，一0—メチルデノシン、 2— [ P - ( 2—カルボキシェチル）フエニルェチルァミノ] 一 5，一N—ェチルカルボキサミドアデノシン、 2— [ ( 2—ァミノェチルァミノ）カルボニルェチルフエニルェチルァミノ]— 5， —ェチルカルボキサミドアデノシン、 2—へキシニルー 5—メチルカルポキサミドアデノシン、 2 —シクロへキシルメチリデンヒドラジノアデノシン、 N—ェチルカルボキサミドアデノシン、 5，一（N—シクロプロビル）カルボキサミドアデノシン、 N— [ 2 - ( 3， 5—ジメトキシフエ二ル）フエニルェチル]アデノシン、 N— ( 2—メチルベンジル）アデノシン、 2—ォクチニルアデノシン、 2—フエニルァミノアデノシン、 2— [ 2— （4一フルオロフェニル）エトキシ] アデノシン、 2—

[ (シクロへキシルメチレン）ヒドラジノ] アデノシン、 2—クロロー N 6 - ( 3—ョ一ドベンジル）アデノシン一 5，一N—メチルゥロナミド、 N 6— （ 3 —イソチオシアナ一トベンジル）アデノシン一 5，一N—メチルゥロナミド、 2 —クロロー N 6— ( 3—ョ一ドベンジルアデノシン一 5，一N—メチルカルボキサミド、デフイブロチド（短鎖デォキシリボヌクレオチド）、ピナシジル、アデノシン一 5，一モノリン酸、アデノシン一 5，一モノリン酸メチルエステル、 N 6—メチルアデノシン一 5，一モノリン酸、 8—ブチルアミノアデノシン又はこれらの過ヨウ素酸酸化物である請求項 2記載の育毛剤。

4 . アデノシン受容体刺激作用を有する前記化合物又は生体に適用後にアデノシン受容体刺激作用を有する化合物を遊離する前記化合物が、式

[式中、 nは 0または 1、 R i〜R ₂はそれそれ水素原子または炭素原子数 1〜5 のァシル基を示し、 R ₃は水素原子または保護基を示す。 ] で示される化合物である請求項 2記載の育毛剤。

5 . アデノシン受容体刺激作用を有する化合物の当該作用を増強する前記化合物が、アデノシン受容体刺激作用を有する化合物の取り込み阻害剤若しくはアデノシン受容体刺激作用を有する化合物の不活性化阻害剤である請求項 2乃至 4のいずれかに記載の育毛剤。

6 . アデノシン受容体刺激作用を有する化合物の前記取り込み阻害剤がジビリダモール、ジラセヅプ、リドフラジン、へキソベンジン、カルボクロメン、クロモナ一ル酸、シネパジド、ジァゼパム、パパべリン、 6— （2，一ハイド口キシニトロベンジル）チォグアノシン、プロベントフィリンである請求項 5記載の育毛剤。

7 . アデノシン受容体刺激作用を有する化合物の前記不活性化阻害剤が、 2 ' デォキシコホルマイシン、エリス口一 9一（2—ハイドロキシ一 3—ノニル）ァデニンである請求項 5記載の育毛剤。

8. 前記プリン受容体刺激作用を有する化合物が ATP受容体刺激作用を有する化合物である請求項 1記載の育毛剤。

9. ATP受容体刺激作用を有する前記化合物が、アデノシンジリン酸、アデノシントリリン酸又はこれらの誘導体である請求項 8記載の育毛剤。

10. AT P受容体刺激作用を有する前記化合物が、アデノシン— 5， —ジリン酸、アデノシン— 5，一トリリン酸又はこれらの誘導体である請求項 8記載の育毛剤。

1 1. 前記アデノシン— 5' —ジリン酸誘導体又は前記アデノシン一 5， — トリリン酸誘導体がエステル誘導体である請求項 1 0記載の育毛剤。

12. 前記アデノシン一 5， —ジリン酸誘導体及び前記アデノシン— 5，一トリリン酸誘導体が、式

OR₂ [式中、 nは 2または 3、

はそれそれ水素原子または炭素原子数 1〜5 のァシル基を示し、 R₃は水素原子または保護基を示す。 ] で示される化合物である請求項 1 0記載の育毛剤。

1 3. 前記アデノシン一 5，一ジリン酸誘導体が、ひ、 —メチレンアデノシン — 5，一ジリン酸、 2—メチルチオアデノシン一 5，ージリン酸、 2，一ベンゾィルアデノシン一 5，一ジリン酸、又は、 3，一ベンゾィルアデノシン一 5，一ジリン酸である請求項 10記載の育毛剤。

14. 前記アデノシン一 5，一トリリン酸誘導体が、ひ、 ?—メチレンアデノシン一 5，一トリリン酸、 2—メチルチオアデノシン一 5，一トリリン酸、 2⁵ 一ベンゾィルアデノシン _ 5，一トリリン酸、又は、 3，一ベンゾィルアデノシン - 5 ' —トリリン酸である請求項 10記載の育毛剤。

1 5. プリン受容体刺激作用を有する化合物を細胞から放出させる作用を有する化合物の 1種又は 2種以上を有効成分として含有する育毛剤。

1 6. プリン受容体刺激作用を有する前記化合物が AT P、 ATP誘導体または A TP代謝物である、請求項 1 5記載の育毛剤。

17. プリン受容体刺激作用を有する前記化合物がアデノシン、アデノシン誘導体またはアデノシン代謝物である、請求項 15記載の育毛剤。

1 8. 細胞から放出されるアデノシン誘導体またはアデノシン代謝物が、アデノシンモノホスフェート、アデノシンジホスフェートおよびアデノシントリホスフエートからなる群より選択される物質である請求項 17記載の育毛剤。

1 9. プリン受容体刺激作用を有する化合物を細胞から放出させる作用を有する前記化合物が、細胞に存在する ABCトランスポ一ターへの刺激作用を有する化合物である請求項 15乃至 18のいずれかに記載の育毛剤。

20. AB Cトランスポ一ターへの刺激作用を有する化合物が、スルホニルウレァ受容体への刺激作用を有する化合物である請求項 19記載の育毛剤。

21. スルホニルゥレア受容体への刺激作用を有する化合物が、メグリチニド、ニコランジル、レポクロマカリム、ク Gマカリム、ビナシジル、ジァゾキサイド、ジソビラミド、チリソロ一ル、アプリカム、ビマカリム、 MgATP、 MnAT P、 CaATP、 ZnATP、 SrATP、 MgADP, MnADP、 C a AD P、 ZnADP、 S r AD P, MgAMP、 MnAMP、 C a AMP, ZnAM P、 S r AMP, アデニル -5-ィルイミドジホスフエ一ト、 L一リジン、 L—ァルギニンからなる群より選択される化合物である請求項 20記載の育毛剤。

22. スルホニルゥレア受容体への刺激作用を有する化合物が、カルシウム、マンガン、マグネシウム、亜鉛、およびストロンチウムからなる群より選択される二価陽イオンを含む塩である請求項 20記載の育毛剤。

23. スルホニルゥレア受容体への刺激作用を有する化合物が、下記式

R- S - C o A

[式中、 Rは、分岐しても良い炭素数 14〜30のァシル基で、二重結合を 0〜3 個含む]で示される長鎖ァシルコェンザィム Aである請求項 20記載の育毛剤。

24. 外用剤である請求項 1乃至 23のいずれかに記載の育毛剤。

25. 前記有効成分の含有量が製剤全体の 0. 01〜 5重量％である請求項 1乃至 24のいずれかに記載の育毛剤。

26. AB Cトランスポーター遺伝子とプリン誘導体に対する受容体遺伝子で形質転換させた細胞に対して被験物質を添加し、そのときの該細胞内へのカルシゥム流入量を指標とすることを特徴とする、育毛作用を有する物質のスクリーニング方法。

27. AB Cトランスポ一夕一遺伝子がスルホニルゥレア受容体遺伝子である請求項 26記載のスクリーニング方法。

28. プリン誘導体に対する受容体遺伝子がアデノシン受容体遺伝子である請求項 26または 27記載のスクリーニング方法。

29. プリン誘導体に対する受容体遺伝子が ATP受容体遺伝子である請求項 2 6または 27記載のスクリーニング方法。

30. 細胞内へのカルシウム流入量を、蛍光カルシウム指示薬を用いた蛍光強度で測定することを特徴とする請求項 26から 29のいずれかに記載のスクリー二ング方法。

3 1. AB Cトランスポー夕一遺伝子またはプリン誘導体に対する受容体遺伝子の形質転換を、宿主べク夕一系による遺伝子組み換え技術によって行うことを特徴とする請求項 26から 30のいずれかに記載のスクリーニング方法。