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WO1999024439A1 - Novel substance ft-0554 and process for producing the same - Google Patents

Novel substance ft-0554 and process for producing the same Download PDF

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WO1999024439A1
WO1999024439A1 PCT/JP1998/004178 JP9804178W WO9924439A1 WO 1999024439 A1 WO1999024439 A1 WO 1999024439A1 JP 9804178 W JP9804178 W JP 9804178W WO 9924439 A1 WO9924439 A1 WO 9924439A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
substance
microorganism
aspergillus niger
producing
culture
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
PCT/JP1998/004178
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Satoshi Omura
Kazuro Shiomi
Rokuro Masuma
Yuzuru Iwai
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Kitasato Institute
Original Assignee
Kitasato Institute
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Kitasato Institute filed Critical Kitasato Institute
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Priority to DE69823866T priority patent/DE69823866T2/de
Priority to JP2000520448A priority patent/JP4380913B2/ja
Priority to EP98943018A priority patent/EP1033370B1/en
Priority to HK00105916.0A priority patent/HK1026703B/en
Priority to AT98943018T priority patent/ATE266665T1/de
Priority to US09/509,770 priority patent/US6486197B1/en
Priority to BR9813933-9A priority patent/BR9813933A/pt
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Ceased legal-status Critical Current

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    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D493/00—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system
    • C07D493/02—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D493/04—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A61P33/10—Anthelmintics
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
    • C12P17/18—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms containing at least two hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system, e.g. rifamycin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
    • C12P17/18—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms containing at least two hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system, e.g. rifamycin
    • C12P17/181—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring heteroatoms in the condensed system, e.g. Salinomycin, Septamycin

Definitions

  • the present invention relates to a novel FTO554 substance which is effective for infectious diseases of parasites, particularly helminths, and a method for producing the same.
  • Conventional technology a novel FTO554 substance which is effective for infectious diseases of parasites, particularly helminths, and a method for producing the same.
  • Parasitic diseases have been decreasing due to improvements in the sanitary environment, advances in anthelmintic drugs, etc.In recent years, imported parasitic diseases, zoonotic parasitic diseases, opportunistic parasitic diseases, parasitic diseases derived from fresh foods, etc. Has become more prominent, and has become a major problem again. Parasitic diseases also pose a significant economic burden in livestock and agriculture. Among the parasites, for helminth infections, many compounds are currently used, for example, ivenucutin, mebendazole, and pradicantel. Problems to be solved by the invention
  • an object of the present invention is to provide a novel FT-0554 substance which can satisfy such a demand and a method for producing the same. Means for solving the problem
  • the present inventors have focused on NADH-fumarate reductase in the electron transport system, which is one of the promising targets of antihelminthic agents. Continued the search from. As a result, they found that a new compound, FT-554, produced by the FT-554 strain belonging to filamentous fungi has NADH-fumarate reductase inhibitory activity, and based on this finding, The present invention has been completed.
  • FT—0554 compound characterized by being a compound represented by the formula:
  • a microorganism having the ability to produce the FT-0554 substance belonging to the filamentous fungus represented by the following formula is cultured in a medium, and the FT-0554 substance is accumulated in the culture.
  • FT A method for producing 0554 substances characterized by sampling 0554 substances.
  • the present invention relates to a microorganism belonging to a filamentous fungus and having an ability to produce an FT- 054 substance is Aspergillus niger FT-0554.
  • the present invention relates to a microorganism belonging to a filamentous fungus and having an ability to produce an FT-0554 substance, wherein the microorganism is Aspergillus niger. (As pergillusniger) FT-0554.
  • the FT-0554 substance-producing bacterium is not particularly limited as long as it is a filamentous fungus and has an ability to produce FT-0554 substance.
  • Preferable examples of the strain used to produce the FT-05 54 material of the invention, c present the present inventors to result fungi FT _ 0554 strains isolated from sponge freshly harvested and the like
  • the bacteriological properties of the strain are as follows.
  • Table 1 shows the results of macroscopic observation of this bacterium cultured at 25 for 7 days.
  • This strain can be used in, for example, a Garbeck-East kiss agar medium containing 50% of seawater (salinity of 3.4%), a wort agar medium, a Garbeck-agar medium containing 20% sucrose, a yeast extract agar medium, a bailech agar-glucose agar medium, etc. It grew well and abundantly conidiated. Microscopic observation of the colonies grown on the Wickyak extract extract agar medium revealed that the hyphae were transparent and had partition walls, and the conidiophores grew straighter than the basal hyphae, and their length was 500 m ⁇ 2.5 mm, producing foot-ce 11 at the base.
  • the tip of the conidiophore enlarges from a sphere to a subsphere and forms an apex of 35 to 60; um in diameter.
  • Aspergillus is double-row and consists of metre and phialide, each measuring 8.4 to 11.4 x 2.4 to 3.4 m, 5.4 to 8.6 x 2.8 to 3.
  • At 3 m, metres cover the entire apex, forming a conidium head that splits from a sphere to a column You.
  • the conidium is spherical, 3 to 4.5 m in diameter, and its surface is smooth to slightly rough.
  • the optimal growth conditions for this strain are pH 5-7, temperature 16-36 ° C, and seawater concentration (Note 1) 50-100%.
  • the growth range of this strain is pH 3 to 10, temperature 12 to 45 ° C, seawater concentration (Note 2) 0 to 100%.
  • Aerobic As described above, based on the culture characteristics, morphological characteristics and physiological characteristics of the strain FT-0554, a comparison with known strains was conducted. As a result, the strain was identified as Aspergillus niger (As pergillus niger). ) was identified as a strain belonging to the genus, and named as Aspergillus niger FT-0554.
  • This strain was designated as Aspergillus niger FT-0554 by the Institute of Biotechnology, National Institute of Advanced Industrial Science and Technology at 1-3 1-3 Higashi, Tsukuba, Ibaraki Prefecture on September 1, 1997. Deposited as 163999.
  • this strain was submitted to the Bio-Industry Treaty from the original depository at the Institute of Biotechnology and Industrial Technology, the Ministry of International Trade and Industry, located at 1-3 1-3 Higashi, Tsukuba City, Ibaraki Prefecture on July 31, 1998.
  • a request for transfer to a deposit based on FERM BP-6443 was granted by the International Depositary Authority as a deposit number.
  • a microorganism having the ability to produce the FT-0554 substance belonging to a filamentous fungus may be cultured, and then separated and purified from the culture.
  • the strains that can be used in the present invention all of the FT-0554 substance producing bacteria belonging to the filamentous fungi, including the above-mentioned strains and mutants thereof, can be used.
  • the nutrient source suitable for the above FT-0 554 substance production may be any nutrient source that can be used as a nutrient source for filamentous fungi.
  • peptone for example, commercially available peptone, meat extract, corn-steep liquor, cottonseed flour, peanut flour, soybean flour, yeast extract, NZ-amine, casein hydrate, tuda nitrate, ammonium nitrate, ammonium sulfate, etc.
  • Carbohydrates such as nitrogen source, glycerin, starch, glucose, galactose, and mannose, or carbon sources such as fat, and inorganic salts such as salt, phosphate, calcium carbonate, and magnesium sulfate, alone or in combination Can be used.
  • trace amounts of metal salts and animal, plant, and mineral oils can be added as antifoaming agents. Any of these may be used as long as they are used by the producing bacteria and are useful for the production of the FT-0554 substance, and any known culture materials of filamentous fungi can be used. Liquid culture is preferred for large-scale cultivation of the FTT-554 substance, and the culture temperature can be applied within a range in which the producing bacteria can grow and produce the FTT-554 substance. The cultivation can be carried out by appropriately selecting according to the properties of the FT-0554 substance producing bacterium using the conditions described above.
  • FT-0554 substance can be extracted from the culture solution with a water-immiscible organic solvent such as black-mouthed form and ethyl acetate.
  • a water-immiscible organic solvent such as black-mouthed form and ethyl acetate.
  • known methods used for collecting fat-soluble substances such as scraping from adsorption chromatography, gel filtration chromatography, thin layer chromatography, centrifugal countercurrent distribution chromatography, and high-performance liquid chromatography Combining or repeating one or more of them as appropriate Can be collected purely.
  • the physicochemical properties of the FT-0 554 substance according to the present invention are as follows.
  • Infrared absorption maximum (KBr tablet): As shown in Fig. 2, 3430, 2960, 2920, 2850, 1740, 1660, 1466 It has a maximum absorption at 0, 1400, 1380, 1180, 1120, 1100 cm- 1 .
  • Solubility in solvents Soluble in chloroform, ethanol, 1-propanol, toluene and ethyl acetate. Poorly soluble in water, n-hexane.
  • the activity of the FT-0554 substance of the present invention to inhibit NAD H-reductase fumarate is as follows.
  • the slope of the decrease in absorbance at 340 nm was quantified as NADH-fumarate reductase enzyme activity. % Inhibited. Therefore, it is expected that the FT-0554 substance can be used as a therapeutic or prophylactic agent for helminth infection.
  • the antibacterial activity of the FT-0 554 substance of the present invention is as follows.
  • KB42 Bacillus subtilis (Bacillus subtilis) KB27 (PCI 219) Bacteroides fragilis B169
  • the FT-0554 substance of the present invention is: It showed weak growth inhibitory activity against some microorganisms.
  • FIG. 1 shows a solution of FT-0554 substance of the present invention in a solution of 1-propanol (50 UV absorption spectrum).
  • FIG. 2 shows the infrared absorption spectrum (KBr method) of the FT-0554 substance of the present invention.
  • the cells were cultured with shaking for 2 days. Then, using this as a seed culture solution, a liquid medium (pH 6.5) containing 2.4% potato dextrose broth (manufactured by Difc 0) dissolved in 50% natural seawater (using natural seawater with a salt concentration of 3.4%) was used. ) was inoculated into 30 500 ml triangular flasks, each of which was dispensed in 100 ml aliquots, and cultured with shaking at 27 ° C for 96 hours. The culture was centrifuged, and the obtained cells were extracted with 3 liters of ethanol, concentrated under reduced pressure to remove ethanol, and further extracted with n-hexane and concentrated under reduced pressure. Substance I was obtained.
  • the F T-0 554 substance of the present invention is expected to be a useful drug that can be satisfied with parasitic infections.

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Description

明 細 新規 F T - 0 5 5 4物質及びその製造法 発明の属する技術分野
本発明は、 寄生虫とくに蠕虫の感染症に有効な新規 F T 0 5 5 4物質およ びその製造法に関するものである。 従来の技術
寄生虫症は衛生環境の改善、 駆虫薬の進歩等により減少してきたが、 近年に なって輸入寄生虫症、 人獣共通寄生虫症、 日和見寄生虫症、 生鮮食品に由来する 寄生虫症などが目立つようになり、 改めて大きな問題となっている。 また牧畜や 農業においても、 寄生虫症は多大な経済的負担をもたらしている。 寄生虫の中で 蠕虫の感染症については、 現在、 たとえばィベルヌクチン、 メベンダゾ一ル、 プ ラジカンテルなど多くの化合物が使用されている。 発明が解決しょうとする課題
しかし、 現在、 使用されているこれらのィベルメクチン、 メベンダブール、 プラジ力ンテルなどの抗蠕虫剤がその有効性、 毒性などの面ですベて満足できる とはいい難く、 これらの問題点を解決し得る薬剤が強く要望されている。
従って、 本発明はこのような要望を満足し得る新規 F T— 0 5 5 4物質およ びその製造法を提供するにある。 課題を解決するための手段
本発明者らは、 抗蠕虫剤の有望な標的の一つである電子伝達系の中の N A D H—フマル酸レダクターゼに注目し、 本酵素の阻害物質について微生物培養物中 からの探索を続けた。 その結果、 糸状菌に属する FT— 0 5 5 4株の生産する新 規化合物の FT— 0 5 5 4物質が、 NADH—フマル酸レダクタ一ゼ阻害活性を 有することを見出し、 この知見に基づいて本発明を完成するに至った。
すなわち、 本発明は下記式 〔 I〕
Figure imgf000004_0001
で表される化合物であることを特徴とする FT— 0 5 5 4物質に関する, 更に、 本発明は下記式 〔 I〕
Figure imgf000004_0002
で表される糸状菌に属する FT— 0 5 54物質を生産する能力を有する微生物を 培地で培養し、 該培養物中に FT— 0 5 5 4物質を蓄積せしめ、 該培養物から F T- 0 5 5 4物質を採取することを特徴とする FT— 0 5 5 4物質の製造法に関 する。 更にまた本発明は、 糸状菌に属し、 FT - 0 5 5 4物質を生産する能力を有 する微生物が、 ァスペルギルス ニガ一 （A s p e r g i l l u s n i g e r) FT- 0 5 54である。 またさらに本発明は、 糸状菌に属し、 FT— 0 5 5 4物 質を生産する能力を有する微生物であり、 該微生物がァスペルギルス 二ガー (As p e r g i l l u s n i g e r ) F T— 0554である。
FT- 0554物質生産菌については、 糸状菌で、 FT - 0554物質生産 能を有するものであればよく、 特に制限されることはない。 本発明の FT— 05 54物質を生産するために使用される菌株の好適な一例としては、 本発明者らに よって新たに採取した海綿より分離された糸状菌 FT _ 0554株が挙げられる c 本菌株の菌学的性状を示すと以下の通りである。
FT- 0554株の菌学的性状
( 1 ) 各種寒天培地上での培養性状
本菌を 25で、 7日間培養した場合の肉眼的に観察した結果は第 1表に示し たとおりである。
第 1表 培地 培地上の生育状態 コロニ一表 可溶性
(コロニーの直径） 面の色調 面の色調 色素 ッァぺック · 良好 （82mm) 黒褐色 薄黄色
ィーストェキ ピロ一ド状、 周辺
ス寒天培地 平滑 麦芽汁寒天 良好 （ 8 1 mm)
培地 ビロード状、 黒褐色 薄黄色 無
周辺平滑
20 %ショ糖 良好 （ 82mm)
Figure imgf000006_0001
4 ッァぺック · ビロード状、 黒褐色 薄黄色 sue
、、 ーストェャ 周辺平滑
ス寒天培地 ノくレイショ · 良好 （> 8 5 mm)
、、 ifat trt? n レ、 > i
ノ 卜ゥ糖寒大 ヒ、ロ一卜状、 黑田揭日
7専黄色 無 培地 周辺平滑 二/ ff寒 やや 9f C 4 U mm; 黒？ 曰
培地 ピロ一ド状、 周辺円滑
( 2 ) 形態的特徴
本菌株は、 海水 （塩分濃度 3. 4 %) を 5 0 %含むッァペック ·イーストェ キス寒天培地、 麦芽汁寒天培地、 ショ糖 2 0 %入りッァペック ·イーストエキス 寒天培地、 バイレショ ·ブドウ糖寒天培地などで良好に生育し、 分生子も豊富に 着生した。 ッァぺック ·ィーストエキス寒天培地に生育したコロニーを顕微鏡で観察す ると、 菌糸は透明で隔壁を有しており、 分生子柄は基底菌糸より直生し、 その長 さは 5 0 0 m〜2. 5 mmで、 基部には f o o t - c e 1 1を生じる。 分生子 柄の先端は球形から亜球形に肥大し、 直径 3 5〜6 0； umの頂囊を形成する。 ァスペルギラは、 複列性でメ トレ、 フィアライドからなりそれぞれ大きさは 、 8. 4〜 1 1. 4 x 2. 4〜3. 4 m、 5. 4〜8. 6 x 2. 8〜3. 3 mで、 メ トレが頂囊の全体を覆い、 球形から円柱状に分裂した分生子頭を形成す る。 分生子は球形で大きさは直径 3〜4. 5 mでその表面は滑面からやや粗面 である。
( 3 ) 生理学的性状
1 ) 最適生育条件
本菌株の最適生育条件は、 p H 5〜 7、 温度 1 6〜 36 °C、 海水濃度 （注 1 ) 50〜 1 00 %である。
注 1 ：塩分濃度 3. 4%の天然海水を使用
2) 生育範囲
本菌株の生育範囲は、 pH 3〜 1 0、 温度 1 2〜45°C、 海水濃度 （注 2) 0-1 00 %である。
注 2 :塩分濃度 3. 4%の天然海水を使用
3) 好気性、 嫌気性の区別
好気性 以上のように、 本菌株 FT - 0554株の培養性状、 形態的特徴および生理 学的性状に基づき、 既知菌種との比較を試みた結果、 本菌株をァスペルギルス 二ガー （As p e r g i l l u s n i ge r) 属に属するー菌株と同定し、 ァ スペルギルス ニガ一 FT— 0554と命名した。
本菌株は、 ァスペルギルス ニガ一 （As p e r g i l l u s n i g e r) FT— 0554として、 茨城県つくば市東 1丁目 1番 3号に所在する工業技術院 生命工学工業技術研究所に平成 9年 9月 1日付で FERM P - 1 639 9とし て寄託されている。 更に、 本菌株は平成 1 0年 7月 3 1日に茨城県つくば市東 1 丁目 1番 3号に所在する通商産業省工業技術院生命工学工業技術研究所に原寄託 よりブ夕ぺスト条約に基づく寄託への移管請求を行い、 国際寄託当局より受託番 号として FERM BP— 6443が付与された。 本発明の F T - 0 5 5 4物質を製造するに当たっては、 先ず糸状菌に属する F T - 0 5 5 4物質を生産する能力を有する微生物を培養し、 その培養物から分 離 ·精製すればよい。 本発明に用いることのできる菌株は上記菌株、 その変異株 をはじめ、 糸状菌に属する F T— 0 5 5 4物質生産菌のすべてが使用できる。 上記 F T— 0 5 5 4物質生産に適した栄養源としては、 糸状菌の栄養源とし て使用し得るものであればよい。 例えば、 市販のペプトン、 肉エキス、 コーン - スティ一プ · リカー、 綿実粉、 落花生粉、 大豆粉、 酵母エキス、 N Z —ァミン、 カゼインの水和物、 硝酸ツーダ、 硝酸アンモニゥム、 硫酸アンモニゥム等の窒素 源、 グリセリ ン、 澱粉、 グルコース、 ガラク ト一ス、 マンノース等の炭水化物、 あるいは脂肪等の炭素源、 及び食塩、 リン酸塩、 炭酸カルシウム、 硫酸マグネシ ゥム等の無機塩を単独あるいは組み合わせて使用できる。
その他必要に応じて微量の金属塩、 消泡剤として動物 ·植物 ·鉱物油等を添 加することもできる。 これらのものは生産菌が利用し F T— 0 5 5 4物質の生産 に役立つものであればよく、 公知の糸状菌の培養材料はすべて用いることができ る。 F T— 0 5 5 4物質の大量培養には液体培養が好ましく、 培養温度は生産菌 が発育し、 F T— 0 5 5 4物質を生産できる範囲で適用できる。 培養は以上に述 ベた条件を使用する F T— 0 5 5 4物質生産菌の性質に応じて適宜選択して行う ことができる。
F T— 0 5 5 4物質は、 培養液よりクロ口ホルム、 酢酸ェチル等の水不混和 性の有機溶媒で抽出することができる。 上述の抽出法に加え、 脂溶性物質の採取 に用いられる公知の方法、 例えば吸着クロマトグラフィー、 ゲル濾過クロマトグ ラフィー、 薄層クロマトグラフィーよりのかき取り、 遠心向流分配クロマトグラ フィ一、 高速液体クロマトグラフィ一等を適宜組み合わせあるいは繰り返すこと によって純粋に採取することができる。 本発明による FT— 0 5 5 4物質の理化学的性状は次の通りである。
( 1 ) 性状： 白色粉末または飴状
(2) 分子量： 3 6 1. 23 74 (M + H、 高分解能高速原子衝撃質量分析に よる）
( 3) 分子式： C22H32〇4
(4) 比旋光度： [ひ] 。 25 = + 3 5. 3 ° (c = 0. し 1—プロパノール）
( 5) 紫外部吸収極大 （ 1—プロパノール中） ：第 1図に示すとおり、 20 5 nm (ショルダー、 ε= 1 0 8 0 0) 、 2 3 1 ηιη (ε = 2 1 0 0 0) に極大吸収を有する。
( 6) 赤外部吸収極大 （KB r錠） ：第 2図に示すとおり、 34 30、 2 9 6 0、 2 9 2 0、 2 8 5 0、 1 74 0、 1 6 6 0、 1 4 6 0、 1 4 0 0、 1 3 8 0、 1 1 8 0、 1 1 2 0、 1 0 0 0 c m—1に極大吸収を有する。
(7) プロトン核磁気共鳴スぺク トル：重クロ口ホルム中の化学シフ ト （p p m) およびスピン結合定数 （Hz) は第 2表に示すとおりである。
(8) 13C核磁気共鳴スペク トル：重クロ口ホルム中の化学シフ ト （p pm) は第 2表に示すとおりである。
( 9) 溶剤に対する溶解性： クロ口ホルム、 エタノール、 1 _プロパノール、 トルエン、 酢酸ェチルに可溶。 水、 n -へキサンに難溶。
( 1 0) 呈色反応：硫酸、 ヨウ素に陽性。 第 2表
Figure imgf000009_0001
1 7 0. 6 s
1 4 5. 2 d 5. 7 9 d d ( 1 H, J- 6. 9, 1 5. 2) 1 3 8, 9 d 5. 4 6 d d ( 1 H, J = 7. 6， 1 5. 2) 1 3 7, 9 d 6. 3 7 d d ( l H, J= 1 0. 2, 1 5. 2) 1 3 3 7 s
1 2 7 0 d 5 7 6 d ( 1 H， J= 1 0. 9 Hz)
1 2 6 0 d 6 0 2 d d ( 1 H, J二 1 0. 2, 1 5. 2) 1 24 6 d 6 1 7 d d ( l H, J二 1 0. 9, 1 5. 2) 1 22 0 d 5 4 8 d d ( 1 H, J二 7. 9， 1 5. 2)
8 0 2 d 4 9 2 d ( 1 H, J= 7. 9)
6 8 0 d 4 5 7 s ( 1 H)
5 8 5 d 3 5 2 s ( 1 H)
5 8 2 s
4 7 2 t 1 9 6 d d ( 1 H, J二 7. 7 1 3. 7)
2 0 9 d d ( 1 H, J二 7. 1 1 3. 7)
3 8 6 d 2 0 6m ( 1 H)
34 8 d 2 4 2m ( 1 H)
2 9 8 1 3 1 d q (2H, J= 7. 1， 7. 3)
2 0 2 q 0 9 8 d ( 3 H, J= 6. 8)
1 9 4 q 0 9 7 d (3H， J= 6. 8)
1 7 8 q 1 4 5 s (3H)
1 6 5 q 1 6 9 s ( 3 H)
1 1 8 q 0 8 5 t ( 3 H, J= 7. 3) 但し、 第 2表中において、 sは一重線、 dは二重線、 tは三重線、 qは四重 線、 mは多重線、 Hはプロ トンの数、 Jはスピン結合 （Hz) を示す。 以上のように、 FT— 0 5 5 4物質の各種理化学的性状やスぺクトルデータ 詳細に検討した結果、 FT— 0 5 5 4物質は下記式 〔 I〕 で表される化学構造で あることが決定された。
Figure imgf000011_0001
上記したように、 FT— 0 5 5 4物質の各種理化学的性状について詳述した が、 このような性質に一致する化合物はこれまでに全く報告されておらず、 FT - 0 5 5 4物質は新規物質であると決定した。
本発明の FT— 0 5 5 4物質の NAD H—フマル酸レダク夕一ゼ阻害活性は 次のとおりである。
豚回虫筋肉を 1 2 OmMリン酸ナトリウム溶液 （pH 7. 0) 中でホモジナ ィズ後 3, 0 0 0 X g 1 0分間遠心して上清を集めた。 それをさらに 1 0, 0 0 0 x g、 2 0分間遠心して沈殿を集めた。 その沈殿を 1 2 OmMリン酸ナ.トリ ゥム溶液 （pH 7. 0) に懸濁することにより、 ミ トコンドリア画分とした。 次に、 9 6穴マイクロプレートに 1 0 1の 5 0 %ジメチルスルホキシド溶 液試料を添加後、 0. 3 5mMの NADH、 7. 2 mMのフマル酸ニナトリウム 、 1 8mg/m 1の牛血清アルブミンを含んだ 1 2 OmMリン酸ナトリウ厶溶液 (pH 7. 0) を加えて、 マイクロプレートリーダー ELx 8 0 8 (B i o— T e k I n d u s t r i e s社製） にて 3 7°C、 5分間プレインキュベーション 行った。 そこに豚回虫ミ トコン ドリア画分を 1 0 / 1 (蛋白量 0. 3mg) 添加して 、 3 7°C、 1 0分間インキュベーションを行い、 3 4 0 nmの NADHの吸収を 1 5秒ごとに測定した。 34 0 nmの吸光度の減少の傾きを NADH—フマル酸 レダクターゼ酵素活性として定量した結果、 FT— 0 5 5 4物質は 2. 8〃Mの 濃度で NADH—フマル酸レダク夕一ゼ活性を 5 0 %阻害した。 したがって、 F T- 0 5 5 4物質は蠕虫感染症の治療用あるいは予防用薬剤として使用し得るこ とが期待される。 本発明の FT— 0 5 5 4物質の抗菌活性は次のとおりでる。
濾紙円板 （アドバンテック社製、 直径 6mm) に本発明物質の 1 mgZm 1 のクロ口ホルム溶液をそれぞれ 1 浸潰し、 一定時間、 風乾して溶媒を除去 後、 これを試験菌含有寒天平板に張りつけ、 3 7°Cあるいは 2 7°Cで 24時間培 養後、 濾紙円板の周りにできた生育阻止円の直径を下記第 3表に示した。 第 3表
Figure imgf000012_0001
ミ コノくクテリゥム - スメグマチス (Mycobacterium smegmatis)
KB42 (ATCC 607) 一 バチルス ' サブチリス （Bacillus subtilis) KB27 (PCI 219) 一 バクテロイデス · フラジリス （Bcteroides fragilis) B169
(ATCC 23745) - アコレプラズマ ' レイ ドロウィ （Acholeplasma laidrawii) KB 174 - 力ンジダ · アルビ力ンス （Candida albicans) KF1 12 サッカ dミセス ■ セノレピシェ (Saccharomyces cervisiae) KF26 - ァスペルギルス ■ 二ガー （Aspergillus niger) KF103 (ATCC 6275) - ピリキユラリア . ォリゼ （Pyricularia oryzae) KF180 土 厶コール · ラセモサス （Mucor racemosus) KF223 (IFO 4581) 10 上記の第 3表から明らかなように、 本発明の FT— 0 5 5 4物質は、 いくつ かの微生物に対して弱い生育阻害活性を示した。 図面の簡単な説明
第 1図は本発明の FT— 0554物質の 1一プロパノール溶液 （ 50 の紫外部吸収スぺクトルを示したものである。
第 2図は本発明の FT— 0 5 54物質の赤外部吸収スぺクトル （KB r法） を示したものである。 発明の実施の態様
以下に実施例を挙げて本発明を具体的に説明するが、 本発明はこれに限定さ るものではない。 実施例
寒天斜面培地で培養したァスペルギルス ニガ一 （As p e r g i 1 1 υ s n i g e r) FT— 0554株 （FERM BP— 6443) より、 グルコ —ス 2. 0%、 ポリペプトン （日本製薬社製） 0. 5%、 寒天 0. 1 %、 酵母ェ キス （オリエンタル酵母工業社製） 0. 2%、 硫酸マグネシウム 7水和物 0. 0 5%、 リン酸二水素カリウム 0. 1 %からなる液体培地 （pH 7. 0) を 50% 天然海水 （塩分濃度 3. 4%の天然海水を使用） に溶解し、 1 00 m lずつ分注 した 500 m 1容三角フラスコ 1本に 1白金耳ずつ接種し、 27 °Cで 2日間振と う培養した。 次いで、 これを種培養液として、 ポテトデキストロースブロス （D i f c 0 社製） 2. 4%を 50%天然海水 （塩分濃度 3. 4%の天然海水を使用） に溶解 した液体培地 （pH6. 5) を 1 00m lずつ分注した 500 m l容三角フラス コ 30本に 1 m 1ずつ接種し、 27°Cで 96時間振とう培養した。 培養液は遠心分離し、 得られた菌体をエタノール 3リッ トルで抽出し、 減圧 濃縮してエタノールを留去後、 更に n—へキサンで抽出して減圧濃縮し、 1. 9 gの粗物質 Iを得た。 これを n—へキサンで充塡したシリカゲルカラム （95 g 、 Me r c k Ar t. 7734 ) にのせ、 n—へキサン—酢酸ェチル （1 0 : 1) で洗浄後 n—へキサン一酢酸ェチル （1 0 : 2) で溶出し、 減圧濃縮により 22. 7mgの粗物質 I Iを得た。 これをシリカゲル薄層プレート （Me r c k Ar t. 5744 ) にのせ、 n—へキサン一酢酸ェチル （1 ： 1) で展開して 活性画分をかき取り、 それをクロ口ホルム一メタノール （2 ： 1) で溶出し、 減 圧濃縮することにより、 1 3. 4mgの粗物質 I I Iを得た。 更に、 これを溶出 溶媒にクロ口ホルム—メタノール （ 1 : 2) を用いたセフアデックス LH— 20 カラムにかけ、 これを減圧濃縮することで白色粉末の FT— 0554物質 1 0. 0 m gを得た。 発明の効果
以上に説明したように、 本発明の F T— 0 5 5 4物質は、 寄生虫の感染症に 対して満足し得る有用な薬剤として期待される。

Claims

冑
O · · · 〔 I〕 で表される化合物であることを特徴とする FT— 0 5 54物質。
2. 糸状菌に属する下記式 〔 I〕 囲
Figure imgf000016_0001
で表される FT— 0 5 5 4物質を生産する能力を有する微生物を培地で培養.し、 培養物中に FT— 0 5 5 4物質を蓄積せしめ、 該培養物から FT— 0 5 5 4物質 を採取することを特徴とする FT— 0 5 5 4物質の製造法。
3. 糸状菌に厲し、 FT - 0 5 5 4物質を生産する能力を有する微生 物が、 ァスペルギルス ニガ一 （A s p e r g i 1 1 u s n i g e r) FT - 0 5 5 4である請求の範囲第 2項に記載の製造法。
4. 糸状菌に属し、 FT— 0 5 5 4物質を生産する能力を有する微生 物。
5. 微生物が、 ァスペルギルス 二ガー （As p e r g i 1 1 u s n i g e r) FT- 0554である請求の範囲第 4項に記載の微生物。
6. ァスペルギルス 二ガー （As p e r g i l l u s n i g e r) FT— 0554 F ER BP— 6443。
7. 糸状菌に属し、 FT— 0544物質を生産する能力を有する微生 物が、 ァスペルギルス 二ガー （As p e r g i l l u s n i g e r) FT— 0554 FERM BP- 6443である請求の範囲第 2項に記載の製造法。
8. 微生物が、 ァスペルギルス ニガ一 （As p e r g i 1 1 u s n i g e r) FT- 0554 FERM B P— 6443である請求の範囲第 4 項に記載の微生物。
9. FT- 0554物質からなる NAD H—フマル酸レダクターゼ阻害 剤。
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