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WO1999016859A1 - Microbial agricultural chemical - Google Patents

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WO1999016859A1
WO1999016859A1 PCT/JP1998/004257 JP9804257W WO9916859A1 WO 1999016859 A1 WO1999016859 A1 WO 1999016859A1 JP 9804257 W JP9804257 W JP 9804257W WO 9916859 A1 WO9916859 A1 WO 9916859A1
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bacteria
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Hideaki Tateishi
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Kureha Corp
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    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/38—Pseudomonas

Definitions

  • the present invention provides an antibacterial activity against bacterial pathogens occurring in grass seedlings, which is selected from plants, soil, seeds or seed inoculated liquids, etc., using tropolone resistance and tropolone non-productivity as an index. It relates to a screening method. Further, the present invention is characterized in that it is resistant to tropolone and non-producing tropolone, and is effective against bacteria having an antagonistic action against bacterial pathogens occurring in rice seedlings and their spores. It relates to a microbial pesticide as a component.
  • Conventional technology Conventional technology
  • the present inventors have repeatedly conducted research on a biological control material that is superior in controlling pesticidal chemicals against bacterial diseases of grasses, and have conducted research on rice seedlings. Focusing on tropolone, a pathogenic toxin of corn, and searching for tropolone-resistant and tropolone-non-producing bacteria from rice plants, a screening method for antagonistic microorganisms was established, which led to the prevention of bacterial diseases. As a result of the search for microbial materials that can be used for the purpose, we succeeded in separating bacteria having an antagonistic action against the pathogenic bacteria from rice seedlings. The present invention has been completed. Disclosure of the invention
  • the present invention provides an antibacterial activity against bacterial pathogens occurring in grass seedlings, which is selected from plants, soil, seeds or seed inoculated liquids, etc., using tropolone resistance and tropolone non-productivity as an index. It relates to a screening method.
  • the present invention is characterized in that it is resistant to tropolone and non-producing tropolone, and comprises a bacterium having an antagonistic action against bacterial pathogens occurring in grass seedlings and spores thereof as an active ingredient. Microbial pesticides.
  • a bacterium belonging to any of the genus Pseudomonas, Bacillus, or Enterobacter which has an antagonistic effect on a pathogenic bacterium of a bacterial disease occurring in a gramineous plant, or a mixture of two or more of them Of a grassy plant characterized by treating the seeds with the seedlings or including the seedlings in a seedling soil, or adding the bacterial cells to a seeding solution, or spraying the bacterial solution on a grassy plant in a field.
  • microbial pesticides that control diseases.
  • Examples of the bacterium belonging to the genus Baci llus include bacteria of the species Bacillus polymyxa, and more specifically, Bacillus polymyxa B36.
  • the bacterium belonging to the Enterobacter genus can be, for example, Enterobacter cloacae bacteria of the species, 0 Pseudomonas aureofaciens B5 more specifically can be mentioned Ente robacter cloacae B51, Baci l lus polymyxa B36 and Enterobacter cloacae B51 Shows bacteriological properties of.
  • These bacteria are resistant to tropolone and are non-tropolone-producing bacteria, and have an antagonistic action against pathogenic bacteria of mainly bacterial diseases that occur in grasses.
  • the effective diseases include: Pseudomonas plantarii, Pseudomonas glumae, Rice brown blight (Pseudomonas avenae), Rice leaf blight (Xanthomonas campestris), Rice blight (Pseudomonas) syringae pv. oryzae), rice strain rot (Erwinia chrysanthemi pv.
  • coronafaciens > henno, suzaku wilt (Pseudo banded as syringae pv. striafaciens), corn streak (Pseudomonas avenae) ⁇ Erwinia chrysanthemi pv. Zea e), fescue ryegrass moss blight (Pseudomonas syringae pv. Atropurprea), recudomonas syringae pv. Atropurprea), recgum strip i Bacterial disease (Pseudomonas andropogoni s). zoctonia) and the like.
  • the microbial pesticide of the present invention contains these bacteria and / or their spores as active ingredients.
  • a suspension of the above bacteria may be dressed, sprayed, smeared on a gramineous plant or seed thereof, or immersed in a suspension of a grassy seed with a suspension of these bacteria, or Adding a bacterial suspension or these cells to the seeding solution, irrigating and mixing the seedling soil (floor or cover soil), or spraying the plant with a suspension of these bacteria in the field Can be performed.
  • the appropriate concentration of the bacterial suspension varies depending on the application method described above. For example, when rice seed is immersed, the concentration of these bacteria is 1 ⁇ 1 on to 1 ⁇ 10 2 m, preferably 1 ⁇ 1 on.
  • the suspension may be a culture solution, or a suspension obtained by removing the medium from the culture solution by centrifugation or the like, and resuspending the cells in water, physiological saline, a buffer, or the like.
  • a resuspended solution of bacteria in which the cells have been stably stored directly or by freeze-drying using an appropriate dispersion medium can also be used.
  • the microbial pesticide of the present invention may use the above-mentioned antagonistic bacterium and / or its spores having an antagonistic action against bacterial pathogens generated during seedling raising of a grass plant as a suspension, but may be used as a suspension.
  • Mix with various carriers such as carriers and liquid carriers, and if necessary, add additives and other formulation auxiliaries; wettable powders, suspensions, powders, granules, pastes, microcapsules It can be used as a preparation adjusted to
  • Examples of the solid carrier used in the formulation include mineral carriers such as kaolin clay, pyrophyllite, bentonite, montmorillonite, diatomaceous earth, acid clay, vermiculite, perlite, ammonium sulfate, ammonium phosphate, and ammonium nitrate. Inorganic salts such as ammonium, urea, ammonium chloride, and calcium carbonate can be used. Also, fine organic powder such as flour, bran and rice bran can be used. it can. Liquid carriers include vegetable oils such as soybean oil and cottonseed oil, glycerol, ethylene glycol, polyethylene glycol, propylene glycol, polypropylene glycol and the like.
  • fixatives and dispersants examples include casein, gelatin, starch, gum arabic, alginic acid, polysaccharides such as cell mouth derivatives, lignin derivatives, sugars, vegetable oils, mineral oils, and synthetic water-soluble polymers.
  • anti-freezing agents can be used as necessary as pharmaceutical auxiliaries.
  • the antagonistic bacterium of the present invention can be used in combination with a seed disinfectant or a spraying agent for fungal diseases.
  • a seed disinfectant or a spraying agent for fungal diseases for example, ibconazole, perfurazolate, triflumizole, prochloraz, fludioxonil, benomyl, thiophane-methyl, fusaride, tricyclazole, pyroquilon, carpropamide, ferrimson, isoprothiolane, EDDP, carboxin and the like.
  • insecticides nematicides, acaricides, fungicides, herbicides, plant growth regulators, synergists and the like.
  • the preparation of the microbial pesticide of the present invention usually contains about 0.1 to 95% by weight of the antagonistic bacterium of the present invention (as wet weight). Also about 10 3 to about 10 1 per lg of formulation. It is preferable to contain the co- ⁇ -unit.
  • the bacterium does not produce trobolone, it does not show red. Not red A colony is selected and cultured with shaking at 30 ° C. for 2 days in a PPG medium, and then centrifuged at 500 ⁇ X for 30 minutes to remove and separate the medium.
  • the obtained cells are resuspended in sterile water, and the seedling-killing fungus paddy is added to the cell suspension 2 (TC
  • the treated paddy is immersed under appropriate conditions, seeded after germination, and cultivated.
  • a strain which has a control effect as compared with the case of no treatment is selected as an antagonistic bacterium.
  • P Pseudomonas aureofaciens B5, Bacillus polymyxa B36, and Enterobacter cloacae B51 as antibacterials were each cultured in PPGA medium at 30 ° C for 24 hours, and the medium was removed by centrifugation and resuspended in sterile water. Tested using The diseased seeds are immersed in an antibacterial suspension (bacterial concentration: 1 X 10 Vml) at a bath ratio of 1: 1 for 24 hours.
  • the medium After culturing the antagonistic bacterium of the present invention in a suitable liquid medium with shaking, the medium is centrifuged to remove the medium components, and re-suspended by addition of kaolin clay and water or an appropriate buffer, followed by freeze-drying. This is gently pulverized in a mortar, and the pulverized substance is mixed well at a ratio of 85% by weight, 10% of polyoxyethylene nonylphenyl ether and 5% of sodium ligninsulfonate to prepare a wettable powder formulation. obtain. Industrial applicability
  • the microbial pesticide containing the bacterium selected by the screening method of the present invention and its spore as an active ingredient can obtain a higher control effect than the chemical pesticide, and is also expected to be effective against bacteria resistant to a specific chemical pesticide. it can. Therefore, by replacing conventional chemical pesticides, the release of chemicals into the environment can be reduced. ADVANTAGE OF THE INVENTION By this invention, the economical loss which a farmer receives by the occurrence of bacterial disease in a gramineous plant can be reduced. Reference to microorganisms

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Description

明 細 書 微生物農薬
技術分野
本発明は、 植物体、 土壌、 種子または種子の浸種液等より、 トロボロン耐性、 かつ、 トロポロン非生産性であることを指標として選抜するイネ科植物育苗中に 発生する細菌性病原菌に対する拮抗菌のスクリーニング方法に関する。 また、 本 発明は、 トロボロン耐性であり、 かつ、 トロボロン非生産性であることを特徴と し、 イネ科植物育苗中に発生する細菌性病原菌に対して拮抗作用を有する細菌お よびその芽胞を有効成分とする微生物農薬に関する。 従来の技術
イネ科植物育苗中に発生する病害としては、 代表的に糸状菌によって起こるば か苗病、 ごま葉枯病、 いもち病あるいは細菌によって起こるもみ枯細菌病、 苗立 枯細菌病、 褐条病などが挙げられる。 これらの病害の防除には種子消毒剤、 土壌 混和剤、 土壌灌注剤、 緑化後の茎葉散布剤などが有効であるとされ、 これら薬剤 を単独あるいは組み合わせによる体系使用が行われている。 糸状菌による病害に ついては近年効果の高い E B I剤によって高率で防除が可能になってきている。 また、 細菌によって起こされる病害については化学農薬の使用によって防除され ているが、 細菌病が激発した場合には、 化学農薬は一般にその効果が低く十分に 防除できないという問題が残されている。 細菌病が激発した場合には発病苗は廃 棄するしかないのが現状である。 細菌病の激発を予防 ·防除できる農薬の開発が 望まれている。
本発明者等は、 上述のような現状に鑑み、 イネ科植物の細菌病に対し化学農薬 の防除効果に優る生物的な防除資材の探索を課題として研究を重ね、 ィネ苗立枯 細菌病菌の病原毒素であるトロボロンに着目し、 トロボロンに耐性の菌でありか つトロポロン非生産性菌をィネ体より検索することにより拮抗微生物のスクリ一 ニング方法を確立するに至り、 細菌病防除のために供し得る微生物資材を銳意探 索の結果、 病原菌に拮抗作用を有する細菌をィネ苗から分離することに成功し、 本発明を完成するに到った。 発明の開示
本発明は、 植物体、 土壌、 種子または種子の浸種液等より、 トロボロン耐性、 かつ、 トロポロン非生産性であることを指標として選抜するイネ科植物育苗中に 発生する細菌性病原菌に対する拮抗菌のスクリーニング方法に関する。 また、 本 発明はトロボロン耐性であり、 かつ、 トロボロン非生産性であることを特徵とし、 ィネ科植物育苗中に発生する細菌性病原菌に対して拮抗作用を有する細菌および その芽胞を有効成分とする微生物農薬に関する。 詳しくは、 イネ科植物、 特にそ の育苗中に発生する細菌性病害に拮抗作用を有する細菌として Pseudomonas 属、 Baci llus属、 Enterobacter属のいずれかに属する細菌を拮抗菌とする微生物農薬 に関する。 またはこれらの中から 2種類以上を混合して使用する微生物農薬に関 する。 詳しくは、 イネ科植物に発生する細菌性病害の病原性細菌に拮抗作用を有 する Pseudomonas 属、 Baci l lus属、 Enterobacter属のいずれかに属する細菌を、 またはこれらの中から 2種類以上の混合物を種子に処理、 または育苗土壌に含有 させること、 または当該菌体を浸種液に添加する、 あるいは圃場において当該菌 液をィネ科植物体に散布することを特徵とするイネ科植物の細菌性病害を防除す る微生物農薬関する。 発明の実施のための最良の形態
本発明のスクリーニング方法は、 イネ等の植物の断片、 磨砕抽出液、 土壌、 種 子、 種子の浸種液等をトロボロンを添加した適当な固形培地に塗沫または置床し、 得られたトロポロン耐性菌のコロニーを鉄ィォン添加の適当な固形培地に植菌し、 この鉄添加培地で赤色を呈さないコロニーを釣り菌して適当な培地で培養して増 殖させ、 集菌して得られた菌体を製剤化するか、 あるいは直接生菌懸濁液で罹病 扨を処理した後、 育苗し防除効果を調查して有効菌株を選抜することにより行う c なお、 本発明のスクリ一ニングにおいてトロボロンの代わりにトロボロン誘導体、 も用いることができる。
本発明のスクリーニングにより選抜でき、 イネ科植物育苗中に発生する細菌性 病原菌に対して拮抗作用を有する細菌またはその芽胞を有効成分とする微生物農 薬として利用することができる。 本発明において用いる生物防除資材は上記スク リーニング方法により得られ、 例えば Pseudomonas 属、 Baci l lus属、 Enterobact er属のいずれかに属する細菌であり、 またはこれらの中から 2種類以上を混合し て使用してもよい。 Pseudomonas 属に属する細菌としては、 例えば Pseudomonas aureofaciens種の細菌を挙げることができ、 より具体的には Pseudomonas aureof aciens B5 を挙げることができる。 Baci l lus属に属する細菌としては、 例えば Ba ci l lus polymyxa種の細菌を挙げることができ、 より具体的には Baci l lus polym yxa B36 を挙げることができる。 また、 Enterobacter属に属する細菌としては、 例えば Enterobacter cloacae種の細菌を挙げることができ、 より具体的には Ente robacter cloacae B51を挙げることができる 0 Pseudomonas aureofaciens B5 、 Baci l lus polymyxa B36 および Enterobacter cloacae B51の細菌学的な諸性質を 示す。
(表 1 )
Pseudomonas aureofaciens B5 の諸性質 試験項目 試験結果 形態
グラム染色性
胞子
運動 +
鞭毛 極 セ
酸素に対する性質 好気性
ォキシダーゼ +
力タラ一ゼ +
0/ F 〇
コロニーの色調 特徴的色素生成せず
蛍光色素の生成 + 水溶性色素の生成 + (オレンジ系）
PHPの蓄積
4 1ででの生育
レバンの生成
アルギニンジヒドロラーゼ +
脱窒反応
硝酸塩の還元
ゼラチン液化 +
デンプンの加水分解
Tween 80の分解 +
炭素源資化性
グルコース +
トレノヽロース +
2—ケトグルコン酸 +
イノシトール +
ゲラニオール
L—バリ ン +
β—Ύラニン +
DL—アルギニン +
ァ ドニトール
ソルビトール
キノン系 Q- 9
菌体内 DNAの GC含量 （mol%) 63
(表 2)
Bacillus polymyxa B36 の諸性質
試験項目 試験結果 形態
グラム染色性 + 胞子 +
形 楕円形 亜端立 胞子囊 膨出 運動性 + 酸素に対する性質 通性嫌気性 力タラ一ゼ + 嫌気下での生育 +
V P反応 +
V Pブロスの p H 4. 7 グルコースから酸の生成 + グルコースからガスの生成 + ゼラチンの液化 + デンプンの加水分解 + クェン酸塩の利用
プロピオン酸塩の利用
卵黄反応
硝酸塩の還元 + ジヒドロキシァセトンの生成 +
PH6. 8 での生育（ ニュ-トリエントブロス） +
PH5. 7 での生育 +
5%NaCl存在下での生育
7° NaCl存在下での生育
5 °Cでの生育
10°Cでの生育 +
40°Cでの生育 +
50°Cでの生育 菌体内 DNAの GC含量 （mol%) 45
(表 3)
Enterobacter cloacae B51の諸性質
試験項目 試験結果
形態
グラム染色性
運動性 + 黄色色素
赤色色素
マッコンキ-寒天培地での生育 + シモンス'クェン 酸塩寒天培地での生育 + ウレァ一ゼ
ォキシダ一ゼ
H2 S (TS I ) の生成
硝酸塩の還元 + マロン酸塩の利用 +
ONPG + アルギニンジヒ ドロラーゼ + リジンデカルボキシラーゼ
オル二チンデカルボキシラーゼ + カゼィン加水分解
DNase
グルコースからガス産生 + 酸：
マンニッ ト + ァ ドニッ ト
ァラビノース +
イノシッ 卜
ラムノース +
ソルビッ ト +
マルトース +
サッカロ一ス
I P A
VP反応 +
ィンドール産生
これら 3種の細菌は、 イネ苗から本発明者等によって分離されたものであり、 以上の性質から Bergy' s Manual of Systematic Bacteriology Vol.1， Vol.2およ び Bergy' s Manual of Systematic Bacteriology (第 9版） を参考にするとそれ ぞれ Pseudomonas aureofaciens Bacillus polymyxa、 Enterobacter cloacaeと 同定された。 各細菌を Pseudomonas aureofaciens B5、 Bacillus polymyxa B36、 Enterobacter cloacae B51と命名した。 これら細菌は、 通商産業省工業技術院生 命工学工業技術研究所にそれぞれ FERM BP- 6067 , FERM BP - 6068、 FERM B P— 6069として寄託されている。
これらの細菌はトロボロン耐性であり、 かつ、 トロボロン非生産性菌であって、 イネ科植物に発生する主として細菌性病害の病原細菌に対して拮抗作用を有し、 その有効な病害の例としてはイネ植物苗立枯細菌病（Pseudomonas plantarii) 、 イネもみ枯細菌病 (Pseudomonas glumae)、 ィ不褐条病 (Pseudomonas avenae)、 ィ ネ白葉枯病 (Xanthomonas campestris) 、 ィ不カヽさ枯两 (Pseudomonas syringae pv. oryzae)、 イネ株腐病（Erwinia chrysanthemi pv. zeae)、 イネ内穎褐変病（Erw inia herbcola)、 イネ葉鞘褐変病（Pseudomonas fuscovaginae). イネばか苗病（G ibberella fujikuroi) イネごま葉枯病（Cochliobolas miyabeanus). イネいも ち病 (Pyricularia oryzae)、 ォォ厶ギ · コムギ黒節病（Pseudomonas syringae pv. japoni ca) 、 ェンノくクかさ枯病 (Pseudoraonas syringae pv. coronafaciens)> ェ ンノ、クすじ枯病（Pseudo匪 as syringae pv. striafaciens)、 トウモロコシ褐条病 (Pseudomonas avenae)^ 卜ゥモロコシ倒伏細菌病 (Erwinia chrysanthemi pv. zea e)、 フェスク · ライグラスかさ枯两 (Pseudomonas syringae pv. atropurprea) 、 ソノレガム条 i 細菌病（Pseudomonas andropogoni s). シノ、 '葉枯（Rhizoctonia solan i)、 シバ赤焼病（Rhi zoctonia) 等を挙げられる。
本発明の微生物農薬は、 これら細菌および/ またはその芽胞を有効成分とする。 例えば、 上記細菌の懸濁液を例えばイネ科植物またはその種子にこれら菌を粉衣、 吹き付け、 塗沫またはィネ科種子をこれらの細菌の懸濁液に浸潰することにより、 あるいはこれらの細菌の懸濁液もしくはこれらの菌体を浸種液に添加、 育苗土壌 (床土あるいは覆土） に灌注、 混和するか、 または圃場においてイネ科植物体に これらの細菌の懸濁液を撒布することにより行うことができる。 細菌の懸濁液の 適当な濃度は上記した施用法によって異なるが、 例えばイネ種籾を浸漬処理する 場合には、 これらの細菌の濃度としては 1 X 1 o n〜 l X 1 0 2 m 好ましく は 1 X 1 0 1 0〜 1 X 1 0 Zmlで、 5 °C〜 4 0 °C、 好ましくは 1 5 °C〜 3 0でで、 1〜2日程度行う。 このとき懸濁液は培養菌液でもよく、 また培養菌液より遠心 分離などにより培地を除去し、 菌体を水または生理食塩水、 緩衝液等に再懸濁し たものでもよい。 また、 菌体を直接または適当な分散媒を用いて凍結乾燥などに よって安定に保存した細菌を再懸濁した液を用いることもできる。
本発明の微生物農薬は、 イネ科植物育苗中に発生する細菌性病原菌に対して拮 抗作用を有する上記の拮抗細菌および/ またはその芽胞をそのまま懸濁液として 使用してもよいが、 例えば固体担体、 液体担体等の各種担体と混合し、 必要な場 合には添加剤、 その他の製剤助剤を加えて、 水和剤、 懸濁剤、 粉剤、 粒剤、 糊状 剤、 マイクロカプセル剤に調整した製剤として使用することができる。
製剤化の際に用いる固体担体としては、 例えばカオリンクレ一、 パイロフイラ イト、 ベントナイト、 モンモリロナイト、 珪藻土、 酸性白土、 バーミキユライト、 パーライトなどの鉱物質担体、 硫酸アンモニゥ厶、 リン酸アンモニゥ厶、 硝酸ァ ンモニゥ厶、 尿素、 塩化アンモニゥム、 炭酸カルシウムなどの無機塩を用いるこ とができる。 また、 小麦粉、 フスマ、 米ぬかなどの有機物微粉末も用いることが できる。 液体担体としては大豆油、 綿実油などの植物油、 グリセロール、 ェチレ ングリコール、 ポリエチレングリコール、 プロピレングリコール、 ポリプロピレ ングリコール等が挙げられる。
固着剤や分散剤等の製剤としては、 カゼイン、 ゼラチン、 澱粉、 アラビアガム、 アルギン酸、 セル口一ズ誘導体などの多糖類、 リグニン誘導体、 糖類、 植物油、 鉱物油、 合成性水溶性高分子が挙げられる。
その他、 製剤用補助剤として凍結防止剤、 消泡剤、 増粘剤等を必要に応じて用 いるることができる。
また、 本発明の拮抗細菌は糸状菌病害を対象とした種子消毒剤または散布剤と の混用が可能である。 例えば、 イブコナゾール、 ぺフラゾェート、 トリフルミゾ —ル、 プロクロラズ、 フルジォキソニル、 べノ ミル、 チオファネ一トメチル、 フ サライ ド、 トリシクラゾール、 ピロキロン、 カルプロパミ ド、 フェリ厶ゾン、 ィ ソプロチオラン、 EDDP、 カルボキシンなどが挙げられる。
さらに、 殺虫剤、 殺線虫剤、 殺ダニ剤、 殺菌剤、 除草剤、 植物成長調節剤、 共 力剤等と、 混合し、 または混合せずに同時に用いることもできる。
本発明微生物農薬の製剤には、 本発明の拮抗細菌 （湿重量として） を通常約 0. 1 〜95重量％含有させる。 また製剤 l g 当たり約 103 〜約 101。のコ α二一形成単 位含有させることが好ましい。
【実施例】
以下、 スクリーニング例、 試験例、 製剤例を挙げて本発明を説明する。
【スクリ一ニング例】
(イネ苗からの拮抗細菌の分離）
イネ苗立枯細菌病罹病苗の地際部約 1 cmを切り取り、 少量の滅菌水を加えて乳 鉢中で磨砕する、 この磨砕液を適宜滅菌水で希釈し、 トロボロンを 1 0 O ppm添 加した P P G A培地に塗沫後、 3 0 °Cで 5日間インキュベートする。 出現したコ ロニーを F e + + + が 5 O ppm となるように塩化第二鉄を添加した P P G A培地に 移植し、 3 0 °Cで 5日間ィンキュベ一卜する。 形成されたコロニーがイネ苗立枯 細菌病菌であり、 トロボロンを生産していれば培地中の F e + + + と錯体を形成し て赤色を呈する。 トロボロン非生産菌であれば赤色を呈さない。 赤色を呈さない コロニーを選抜して P P G培地で 3 0 °Cで 2日間振とう培養し、 5 0 0 0 X g、 3 0分遠心分離し培地を除去分離する。
得られた菌体を滅菌水に再懸濁し、 苗立枯細菌病菌籾を菌体懸濁液に 2 (TCで
2 4時間浸漬する。 この処理籾を適当な条件で浸種、 催芽後播種し育苗を行う。 無処理扨の場合と比較して防除効果が得られた菌株を拮抗細菌として選抜する。
【試験例 1】
(イネ苗立枯細菌病に対する防除効果）
イネ苗立枯細菌病菌を開花期に接種したイネ種子 （品種： 日本晴） および拮抗 細菌として上記のようにして得られたトロボロン耐性、 かつ、 トロボロン非生産 菌である Pseudomonas aureofaciens B5、 Baci l lus polymyxa B36、 Enterobact er cloacae B51を用いてイネ苗立枯細菌病に対する種子処理による防除効果を調 ベた。
洁抗細菌としての Pseudomonas aureofaciens B5、 Baci l lus polymyxa B36、 Enterobacter cloacae B51はそれぞれ P P G A培地で 3 0 °C 2 4時間培養し、 遠 心分離で培地を除去し、 滅菌水に再懸濁したものを用いて試験した。 罹病種子を 拮抗菌懸濁液 （菌濃度 1 X 1 0 Vml) ) に浴比 1 ： 1で 2 4時間浸潰し、 ついで
3 0 °C、 3日間浸種 （浴比 1 ： 1 ) を行った後、 市販のイネ育苗用粒状培養土 (商品名： くみあい粒状培土） を詰めた育苗用箱 （ 1 0 X 1 5 c m) に箱当たり 乾籾 5 g播種した （ 1区 3反復） 。 その後、 出芽器中で 3 2 °C、 4日間保持して 出芽させ、 以後はガラス温室内で育苗した。 播種 1 5日後に各試験区の発病状況 を次の指数で評価した。 また、 比較のため、 市販の種子消毒剤であるスポルタツ クスターナ一 S E水和剤の 2 0 0倍希釈溶液を用いて同様の試験をした。 結果を 表 4に示す。
0 ：無発病、 1 ：白化苗の発生が見られるが枯死苗はない、 2 ：枯死苗 25%以 下、 3 ：枯死苗 25〜50%、 4 ：枯死苗 50〜80%、 5 ：枯死苗 80%以上 （殆ど全て が枯死）
【表 4】
各菌株のィネ苗立枯細菌病に対する効果 菌株または薬剤名 発病指数
Pseudomonas aureofaciens B5 0. 0
Baci l lus polymyxa B36 0. 3
Enterobacter cloacae B51 0. 3
スポルタックスターナ一水和剤 2. 3
(200 倍希釈）
無処理 4. 0
【試験例 2】
(ィネもみ枯細菌病に対する防除効果）
イネもみ枯細菌病懸濁液を減圧下で接種したイネ種子 （品種： 日本晴） を、 お よび拮抗細菌として Pseudomonas aureofaciens B5 を用いて、 拮抗細菌の種子処 理による防除効果を調べた。 試験は試験例 1同様の方法に行った。 評価は、 播種
1 5日後に無処理区の枯死苗量を 5とした達観指数により調査した。 結果を表 5 に示す。
【表 5】
各菌株または薬剤のイネもみ枯細菌病に対する効果 菌株または薬剤名 発病度
Pseudomonas aureofaciens B5 1. 5
スポルタックス夕一ナ一水和剤 200 倍 2. 4
無処理 5. 0
【製剤例】
本発明の拮抗細菌を適当な液体培地で振盪培養後、 遠心分離して培地成分を除 去し、 カオリンクレーと水または適度な緩衝液を加え再懸濁し、 凍結乾燥する。 これを乳鉢中で穏やかに粉砕し、 この粉砕物を重量で 85%、 ポリオキシエチレン ノニルフヱニルエーテル 10%、 リグニンスルホン酸ナトリウム 5 %の割合でよく 混合し、 水和剤形式の製剤を得る。 産業上の利用可能性
本発明のスクリーニング方法により選抜された細菌およびその芽胞を有効成分 とする微生物農薬は、 化学農薬より高い防除効果を得ることができ、 また特定の 化学農薬の耐性菌にも有効であることが期待できる。 従って、 従来の化学農薬に 代わって施用することにより、 環境中への化学物質の放出を減少させることがで きる。 本発明により、 イネ科植物における細菌性病害の発生により農家が受ける 経済的損失を軽減することができる。 微生物への言及
1)寄託機関：通商産業省工業技術院生命工学工業技術研究所
住所： 日本国茨城県つくば市東 1丁目 1番 3号
寄託日 ： 平成 9年 8月 2 1曰
受託番号： FERM BP- 6067
2)寄託機関：通商産業省工業技術院生命工学工業技術研究所
住所： 日本国茨城県つくば市東 1丁目 1番 3号
寄託日 ： 平成 9年 8月 2 1日
受託番号： FERM BP- 6068
3)寄託機関：通商産業省工業技術院生命工学工業技術研究所
住所： 日本国茨城県つくば市東 1丁目 1番 3号
寄託日 ： 平成 9年 8月 2 1日
受託番号： FERM BP- 6069

Claims

請 求 の 範 囲
1. 植物体、 土壌、 種子または種子の浸種液等より、 トロボロン耐性、 かつ、 ト 口ポロン非生産性であることを指標として選抜するイネ科植物育苗中に発生する 細菌性病原菌に対する拮抗菌のスクリ一二ング方法。
2. トロボロンを添加した固形培地に、 植物体、 土壌、 種子またはこれらの粉碎 抽出物、 種子の浸種液を置床または塗沫し、 形成したコロニーを F e+++ を含む 固形培地上に移植し、 赤褐色またはこれに類似の呈色をしないコロニーを選抜す ることによってトロボロン耐性、 かつ、 トロボロン非生産性の拮抗菌をスクリ一 ニングする方法。
3. トロボロン耐性であり、 かつ、 トロボロン非生産性であることを特徴とし、 ィネ科植物育苗中に発生する細菌性病原菌に対して拮抗作用を有する細菌、 その 芽胞を有効成分とする微生物農薬。
4. イネ科植物育苗中に発生する細菌性病原菌に対して拮抗作用を有する Pseudo monas属、 Bacillus属および Enterobacter属のいずれかに属する細菌を拮抗菌と する請求項 3に記載の微生物農薬。
5. Pseudomonas属細菌が、 Pseudomonas aureoiaciensである請求項 4に記載の 微生物農薬。
6. Pseudomonas属細菌が、 Pseudomonas aureofaciens B5 (FERM BP— 6067) である請求項 4に記載の微生物農薬。
7. Bacillus属細菌が、 Bacillus polymyxaである請求項 4に記載の微生物農薬。
8. Bacillus属細菌が、 Bacillus polymyxa B36 (FERM BP - 6068 ) である請求項 4に記載の微生物農薬。
9. Enterobacter属細菌が、 Enterobacter cloacaeである請求項 4に記載の微生
1 0. Enterobacter属細菌が、 Enterobacter cloacae B51 (FERM BP - 6 069 ) である請求項 4に記載の微生物農薬。
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