WO1999044639A1

WO1999044639A1 - Remedies for brain infarction

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Publication number: WO1999044639A1
Application number: PCT/JP1999/000995
Authority: WO
Inventors: Masamichi Okada; Masayasu Takahashi; Satoshi Hayashibe
Original assignee: Yamanouchi Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Yamanouchi Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1998-03-03
Filing date: 1999-03-02
Publication date: 1999-09-10
Anticipated expiration: 2000-09-03
Also published as: AU2642699A; EP1059090A1; EP1059090A4

Description

脳梗塞治療^

技術分野

本発明は， mGluRI拮抗作用を有する化合物の脳梗塞の治療剤としての新規な医薬に関する。背景技術

脳梗塞とは、脳血管の一部の閉塞ないしは灌流圧低下により、局所脳血流が著明に低下することで脳の局所に虚血部分が生じ、神経細胞が不可逆的壊死に陥った状態である。梗塞部分は時間の経過と共に拡大し、重篤な高次機能障害を引き起こすため、発症後、できるだけ早く処置を行うことが必要である。

虚血による神経細胞死は、血流の減少によるエネルギーの枯渴によるだけでなく、グルタミン酸神経細胞毒性やフリーラジカル障害など様々な過程が関与していることが明らかになつている。

グルタミン酸仮説は虚血時の神経細胞死に関する有力な仮説である。脳虚血時に細胞外グルタミン酸濃度が上昇し（Stroke, 21， 1727-1733， 1990) 、このグルタミン酸が神経細胞を過剰に興奮させる。これにより、細胞内カルシウム濃度が過剰に、かつ、持続的に上昇し、神絰細胞は死に至ると考えられている。

グルタミン酸受容体には様々なサプタィプがぁリ NMDA受容体や AMPA受容体、 kainate受容体等が知られている。

グルタミン酸受容体には、この他に代謝調節型のサブタイプが存在する

(Neuropharmacology 34, 1-26, 1995) o

代謝調節型のグルタミン酸受容体には、さらに mGluR1-8のサブタイプが存在する。これらは、遺伝子レベルの相同性や薬理学的プロフィールで Groupl(mGluR1、 mGluR5)、 Groupll(mGluR2、 mGluR3)、及び Grauplll(mGluR4、 mGluR6、 mGluR7、 mGluR8)の 3グループに分類されている。

上記グルタミン酸受容体のうち、 NMDA受容体や AMPA受容体の拮抗薬は神経細胞死を抑制でき（Ann. Neurol. 24, 543-551 , 1988; J. Pharmacol. Exp. Thr. 276， 84-92, 1996)、脳血管障害急性期の脳神経保護に対する臨床的検討が行われている。代謝調節型のグルタミン酸受容体も虚血時にグルタミン酸によるシグナルを伝達していることが考えられるが、その役割は明らかではない。特に、細胞内 IP₃系に共役している mGluFM および mGluR5は、グルタミン酸により細胞内カルシウムを上昇させることから（Nature 383, 89-92， 1996) 、これらの受容体による持続的過剰伝達は神経細胞死を誘発する可能性があると考えられる。

虚血時の mGluFM拮抗作用を持つ化合物の神経細胞保護作用について、 Cozziらは、砂ネズミの 5 分間両側総頸動脈結紮モデルを用い、 AIDA ((RS)-1 -aminoindan-1 ,5- dicaroxylic acid) を脳室内投与することで、海馬 CA1領域での神経細胞の脱落を抑制できることを報告している (Society for Neuroscience Abstracts vol 23， 788.2, 1997) 。

し力、しながら、同じモデレにおいて、 Henrich-Noackらは、 Group I antagonist / Group II agonistである 4C3HPG ((S)-4-carboxy-3-hydroxyphenylglycine は有効であるが、 Group I antagonistである 4CPG ( (S)-4-carboxyphenylglycine) は無効であることを報告している (Society for Neuroscience Abstracts vol 23, 756.8， 1997) 。その理由としては、これらの mGluFM 拮抗作用を有する物質の効力や、選択性が十分ではないことが考えられる。従って虚血時の mGluFM 拮抗作用を有する物質の神経細胞の保護作用については明確に証明されていないと考えられる。

一方、虚血時の神経細胞死には、急性神経細胞死、遅発性神経細胞死、又は slowly progressive neuronal death等多様性を有することが知られている（Brain Hypoxia 10 p109 (1996))。

前述の砂ネズミの 5分間両側総頸動脈結紮モデルは、ヒ卜では心肺同時停止に伴う全脳虚血の病態を反映した特殊なモデルである。全脳虚血モデルは、短時間（5— 1 0分）の全脳虚血状態の後、再灌流することにより虚血に脆弱な特定の神経細胞への影響を観察できるモデルである。このモデルでは、再灌流後、数日間は形態的に細胞死は起こっていないが、虚血後 4日目に海馬の特定の神経細胞が死ぬ遅発性神経細胞死が観察される (Brain Res. 239, 57-69 (1982)) 。

一方、脳梗塞モデルは線条体や大脳皮質の神経細胞が閉塞後数時間で死ぬ急性神経細胞死を引き起こし（丄 Cereb. Blood Flow Metab. 1， 53-60 (1981 )) 梗塞巣を形成する。このように全脳虚血モデルは、梗塞巣が形成されないが脳全体に及ぶ短時間の一過性虚血侵襲後、血流を再開した後に生じる遅発性神経細胞死の抑制効果を判定するモデルである。

一方、臨床上最も高頻度にみられる脳梗塞は、脳動脈の閉塞による局所脳虚血であり、細胞死は発症直後から起こり、梗塞巣が形成される。

このため全脳虚血モデルと脳梗塞モデルでは、障害を受ける部位や、神経細胞が異なり、神経細胞死の機構も異なると考えられている。

従って脳梗塞モデルにおける薬物評価は、局所的な虚血侵襲後、血流を再開せずに梗塞部分の縮小効果を判定するので、ヒ卜の脳梗塞に対する効果を確認する方法として最も適切であると考えられている。以上のことから、現在までに mGluRI 拮抗作用を有する物質の虚血時における神経細胞死の抑制効果は十分に証明されておらず、更にこれまでに神経細胞死の抑制効果を確認したと報告されている例においては、その試験法から遅発性神経細胞死に対する影響を見ているにすぎない。

従って、これらの知見から mGluFM 拮抗作用を有する物質が局所脳虚血における梗塞体積を縮小し、これにより脳梗塞、特に急性期の治療薬としての効果を予測することは困難である。この為これらの治療薬として有効であることを確認するためには、ヒ卜の脳梗塞の病態を反映した適切な動物モデルにおいて有効性を確認する必要があり、その確認が待望されていた。発明の開示

本発明の目的は優れた脳梗塞治療剤を提供することである。本発明者らは上記の課題を達成すベく鋭意研究を行つたところ、選択的な mGluRI 拮抗作用を有する物質がヒ卜の脳梗塞の病態に最も近い中大脳動脈（M C A )永久閉塞モデルに対し有効であることを見いだし、本発明を完成させた。

即ち、本発明は mGluRI 拮抗作用を有する物質を含有する脳梗塞治療剤に関するものである。本発明について更に説明すると，次の通りである。

mGluRI拮抗作用を有する化合物からなる脳梗塞治療のための医薬組成物、好ましくは脳梗塞急性期の治療のための医薬組成物に関する。好ましくは、選択的 mGluRI 拮抗作用を有する化合物を有効成分とする脳梗塞治療のための医薬組成物、更に好ましくは、選択的 mGluRI 拮抗作用を有する化合物が 6—アミノー N—シクロへキシルー N， 3 —ジメチルチアゾロ [ 3， 2— a】ベンゾイミダゾ一ルー 2 —カルボキサミド. 2塩酸塩である脳梗塞治療のための医薬組成物に関する。

また、治療学的有効董の mGluRI 拮抗作用を有する化合物を投与することからなる脳梗塞の治療方法、好ましくは脳梗塞急性期の治療方法に関する。更に好ましくは、治療学的有効量の選択的 mGluRI 拮抗作用を有する化合物を投与することによる脳梗塞の治療方法、最も好ましくは、選択的 mGluFM 拮抗作用を有する化合物が 6— アミノー N—シクロへキシル—N， 3 —ジメチルチアゾロ [ 3， 2— a】ベンゾイミダゾールー 2—カルボキサミド. 2塩酸塩である脳梗塞の治療方法に関する。

更に、脳梗塞の治療薬の製造のための mGluRI 拮抗作用を有する化合物の使用、好ましくは、脳梗塞急性期の治療薬の製造のための mGluRI 拮抗作用を有する化合物の使用、更に好ましくは脳梗塞の治療薬の製造のための選択的 mGluRI 拮抗作用を有する化合物の使用、最も好ましくは脳梗塞の治療薬の製造のための 6—アミノー N—シクロへキシルー N， 3 _ジメチルチアゾロ [ 3， 2— a]ベンゾイミダゾールー 2—カルボキサミド. 2塩酸塩の使用に関する。脳梗塞とは、前記に定義したとおり、脳血管の閉塞や灌流圧低下により、脳に局所的な虚血部分が生じ、神経細胞の不可逆的壊死を呈した状態をいう。

脳梗塞の急性期とは、発症後 4 8時間以内をいう。

本発明の脳梗塞治療剤の有効成分である mGluFM 拮抗作用を有する物質は、 mGluRI受容体に強力な拮抗作用を有する化合物であれば構造は問わず、ペプチドィ匕合物であっても、非ペプチド化合物であってもよい。

このような mGluRI antagonistの例としては、下記の文献又は特許に記載の化合物を挙げることができる。

特開平 8— 1 6 9 8 8 4号

WO 9 5 / 2 5 1 1 0号 WO 9 7/05 1 09号

WO 9 7/05 1 3 7号

WO 98/06 7 24号

特願平 9— 3 5 7 552号

特に好ましくは、下記一般式で示される化合物及び製薬学的に許容される塩である。

(ここに、式中の記号は以下の意味を表す。

R ¹ ： ( 1 ) 一 A¹ - CO— N (R⁶) — R⁷、

(2) 一 A¹— CO— A²— R⁸、

(3) 一 A¹ - CO - A³ - N (R⁶) 一 R⁷、

(4) 一 A¹ - O— A² - R⁹、

(5) -A¹ - R⁹

(6) -A¹ -N (R⁶) 一 R⁷、

(7) — A¹— N (R⁶) 一 CO— R⁷、又は

(8) — N (R ¹ °) 一 C〇一 O - R "。

A¹及び A²：同一又は異なって、結合又はヒドロキシル基で置換されていてもよい低級アルキレン基。

R ⁶及び R ⁷：同一又は異なって、水素、置換されていてもよい炭化水素、又は置換されていてもよいへテロ環基。ただし、 R ⁶及び R ⁷は隣接する窒素原子と一体となって、置換基を有していてもよく、他にヘテロ原子を有していてもよいへテロ環を形成していてもよい。

R⁸ ：水素、置換基を有していてもよい炭化水素又は置換基を有していてもよいへテロ環、ヒドロキシル、又は低級アルキル一 O—基。

A ³ ：ヒドロキシル基で置換されていてもよい低級アルキレン基。 R⁹ ：水素、置換されていてもよい炭化水素、又は置換されていてもよいへテ口環基。

R¹⁰：水素、又は低級アルキル基。

R ^{1 1} ：置換基を有していてもよい炭化水素又は置換基を有していてもよいへテ口環基。

R² ：水素、低級アルキル、ハロー低級アルキル、ヒドロキシー低級アルキル、低級アルキル一 0—低級アルキル、ァミノ—低級アルキル、又は（モノ若しくはジー低級アルキル—ァミノ）一低級アルキル基。

R³、 R⁴及び R⁵ ：同一又は異なって、水素、ハロ、低級アルキル、ハロー低級アルキル、ヒドロキシ—低級アルキル、ヒドロキシ、低級アルキル— 0—、シァノ、一 COOR¹⁴、ァシル、ァシル— 0—、ニトロ、又は一 A4— N (R ¹²) - (R ¹³) 基。

R ¹²及び R¹³：同一又は異なって、水素、又は、ァシル、ァリール、七ドロキシル、 —COOR"、若しくはヘテロ環基で置換されていてもよい低級アルキル基。

R¹⁴ ：水素又は低級アルキル基。

A ⁴ ：結合、又は低級アルキレン基。）

尚、上記の本発明医薬の有効成分として好ましい化合物は、前記公知文献や未公開出願に記載された一般式に包括される化合物の全てを含むものであり、その公知文献に示された上位概念あるいは選択肢の定義をそのまま本発明の上位概念又は選択肢の定義となりうる。すなわち、簡略に説明すれば、「低級」とは炭素数が 1乃至 6個の直鎖又は分岐状の炭素鎖を意味し、低級アルキルとは、メチル、ェチル基等の _₆アルキルであり、低級アルキレンとは、メチレン、エチレン基等の C，— ₆アルキレンである。

置換基を有していてもよい「炭化水素基」とは、（1 ) 低級アルキル（上記と同様の意味を示す）（2) 低級アルケニル：ビニル、プロぺニル等の C₂_₆アルケニル (3) ァリール：フエニル、ナフチル、ビフエニル等の全体として 6〜 1 4員の芳香族炭化水素環基（4)ベンゼン環と縮合していてもよく架橋していてもよい飽和若しくは不飽和の〇₃_,。脂環式基。更に詳しくは、 1 ) C₃— ₈シクロアルキル：好ましくはシクロペンチル、シクロへキシル等。 2) C ₃— ₈シクロアルケニル：好ましくはシクロへキセニル基等。 3) ベンゼン環と縮合した C₃— ₈シクロアルキル：好ましくはテ卜ラヒドロナフチル、へキサヒドロベンゾァゼピニル等。 4) ベンゼン環と縮合した C₃_₈シクロアルケニル：好ましくはジヒドロナフチル、テ卜ラヒドロベンゾァゼピニル等。 5) 架橋した飽和若しくは不飽和の。脂環基：好ましくはビシクロ [2. 2. 1 ] ヘプチル、ビシクロ [3. 2. 1 ] 才クチル、ビシクロ Γ3. 3. 1 ] ノニル、ビシクロ [3. 2. 1 ] ォクテニル、ァダマンチル等。

上記の基は 1以上の置換基を有していてもよい。

置換基を有していてもよい「ヘテロ環基」とは、酸素、硫黄及び窒素原子からなるヘテロ原子を 1〜 4個有する単環若しくは二環式の全体として 4 ~1 4員の飽和又は不飽和のヘテロ環を意味し、ビシクロ体及びスピロ体を包含する。

(1 )酸素、硫黄及び窒素原子からなるヘテロ原子を 1〜 4個有する 4〜 7員で飽和若しくは不飽和の単環へテロ環基。好ましくは、ピロリジニル、ピペリジル、ピペラジニル、ホモピペラジニル、へキサヒドロアゼピニル、モルホリニル、ピリジル基等。

(2)ベンゼン環と縮合した酸素、硫黄及び窒素原子からなるヘテロ原子を 1〜4個有する 4〜 7員で飽和若しくは不飽和の単環へテロ環基。好ましくは、ベンゾフラ二ル、テ卜ラヒドロベンゾフラニル、インドリル、イソインドリル、ベンゾァゼピニル、テ卜ラヒドロキノリル、又はテ卜ラヒドロイソキノリル等。

(3)酸素、硫黄及び窒素原子からなるヘテロ原子を 1〜4個有する全体で 6〜1 4 員の飽和若しくは不飽和の二環式へテロ環基。好ましくは、デカヒドロキノリル、 2 ーァザビシクロ [2. 2. 1 ] ヘプチル、 1 —ァザスピロ [4. 5] デシル、 1 一才キサスピロ [4. 5] デシル、 1， 4—ジ才キサスピロ [4. 5] デシル、ピリド才キサジニル、才クタヒドロべンゾ才キサジニル等。

これらは 1以上の置換基を有していてもよい。

八口とは、フッ素、塩素等のハロゲン原子を意味し、モノ若しくはジ低級アルキル —ァミノとは、上記低級アルキルの 1又は 2で置換されたアミノ基を意味する。

ァリールとは、上記炭化水素基中で定義されたとおりであり、ァシルとは、低級ァルキルー CO—、又は、ァリール一 CO—を意味し、好ましくは、低級アルキル一 C 0—である。

置換されていてもよい、あるいは置換基を有していてもよい基の置換基とは、以下の通りである。置換基は、置換される基の当該分野で慣用される通常の置換基を意味するが、好ましくは口、低級アルキル、ハロ低級アルキル、ヒドロキシ、ヒドロキシ低級アルキル、低級アルキル— 0—、才キソ、ァシル、ァシル— O—、 C O O H、低級アルキル一 0— C O—、低級アルキル— 0—低級アルキル、 N 0 ₂、シァノ、 N H ₂、モノ若しくはジ—低級アルキルーァミノ、フタルイミド基からなる群より選択される。置換基の数は置換可能であれば特に限定されるものではないが、 1 ~ 4個が好ましい。また、本発明医薬の有効成分には，塩酸等の無機酸、フマル酸等の有機酸、ナ卜リゥ厶等の無期塩基、ジエタノールァミン等の有機塩基と塩を形成する場合、 4級アンモニゥ厶を形成する場合があリ、本発明の有効成分には上記ィヒ合物の製薬学的に許容される塩が含まれる。また、本発明の有効成分には各種異性体の分離されたもの，あるいは混合物、水和物、溶媒和物、各種結晶形の物質の全てが含まれる。製造法

本発明に用いる上記特許出願に開示された mGluRI 拮抗作用を有する物質は該特許出願の明細書に記載の方法で製造することができ、その他 mGluRI 拮抗作用を有する物質は常法により製造することができる。

特に好ましい化合物の代表的製造法を以下に示す。

(式 1 )

ぼ 2 )

( 3 b ) ( I a ! (式中、 R '〜R ⁵は前記の通りであり、 R ^{1 5}、 R ^{1 6}は低級アルキル基を、 X ¹はハロを示す。）

基本骨格となるチアゾロ [ 3， 2— a ]ベンゾイミダゾール（1 a ) は式 1、式 2に示す常法により製造できる。即ちエタノール、メタノール等のアルコール系溶媒、あるいはテ卜ラヒドロフラン、ジメチルホルムアミド、アセトン、ァセ卜二卜リル等の不活性溶媒中、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水素化ナトリウム、炭酸力リウ厶等の塩基存在下、また中性条件下、室温から加温条件下において 2—メルカプトべンゾイミダゾール（2 ) と α—ハロケ卜ン（5 ) とを反応させることにより（3 a ) とし、これを酸ハライド、酸無水物もしくは混合酸無水物（6 ) とピリジン、酢酸ナトリウム等の塩基存在下、加温することにより製造できる。また、（3 a ) をピリジン、卜リエチルァミン等の塩基存在下、反応対応置の酸ハライド（7 ) 、酸無水物または混合酸無水物（6 ) により N—ァシル化することにより（4 ) とし、これを単離した後、ピリジン等の塩基存在下、ァセ卜二卜リル等の不活性溶媒中で加温することによっても製造できる。また、式 2に示す様に化合物（3 b ) を濃硫酸等の強酸中、あるいは酢酸溶媒中、硫酸等の触媒を用いて室温、あるいは加温下にて脱水環化させることによつても製造できる。

また、チアゾロ [ 3， 2— a]ベンゾイミダゾ一ルの 6位を通常のニトロ化条件によリニ卜ロイヒした後、下記製造例に示される方法によつて還元することにより 6位にァミノ基を導入することもできる。本発明に用いるィヒ合物又はその塩の 1種又は 2種以上を有効成分として含有する製剤は，通常製剤^に用いられる担体ゃ賦形剤，その他の添加剤を用いて調製される。

製剤用の担体ゃ賦形剤としては，固体又は液体いずれでも良く，例えば乳糖，ステアリン酸マグネシウム，スターチ，タルク，ゼラチン，寒天，ぺクチン，アラビアゴ厶，才リーブ油，ゴマ油，カカオバター，エチレングリコール等やその他常用のものが挙げられる。

投与は通常静注，筋注等の注射剤による投与が好ましく，坐剤，経皮等による非経口投与，あるいは錠剤，丸剤，カプセル剤，顆粒剤，散剤，液剤等による経口投与の形態であってもよい。投与量は症状，投与対象の年齢，性別等を考慮して個々の場合に応じて適宜決定されるが，通常成人 1人当たり， 1 日につき 0 . 0 5 ~ 5 0 gの範囲で，好ましくは 1〜2 0 gの範囲で， 1 日 1回から数回に分け静脈内投与されるか，又は， 1 日 1時間〜 2 4時間の範囲で静脈内持続投与される。又は成人 1人当たり， 1 日につき 1〜5 0 gの範囲で 1 日 1回から数回に分け経口投与される。もちろん前記したように，投与量は種々の条件で変動するので，上記投与量範囲より少ない量で十分な場合もある。

非経口投与のための注射剤としては、無菌の水性又は非水性の溶液剤、懸濁剤、乳濁剤を包含する。水性の溶液剤、懸濁剤としては、例えば注射用蒸留水及び生理食塩水が含まれる。非水溶性の溶液剤、懸濁剤としては、例えばプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、才リーブ油のような植物油、エタノールのようなアルコール類、ポリソルベー卜 8 0等がある。このような組成物はさらに防腐剤、湿潤剤、乳化剤、分散剤、安定化剤（例えば、ラク卜ース）、溶解補助剤（例えば、グルタミン酸、ァスパラギン酸）のような補助剤を含んでいてもよい。これらは例えばパクテリァ保留フィルターを通す濾過、殺菌剤の配合又は照射によって無菌化される。また、これらは無菌の固体組成物を製造し、使用前に無菌水又は無菌の注射用溶媒に溶解して使用することもできる。

本発明による経口投与のための固体組成物としては、錠剤、散剤、顆粒剤等が用いられる。このような固体組成物においては、一つまたはそれ以上の活性物質が、少なくとも一つの不活性な希釈剤、例えば乳糖、マンニ卜ール、ブドウ糖、ヒドロキシプ口ピルセルロース、微結晶セルロース、デンプン、ポリビニルピロリドン、メタケイ酸、アルミン酸マグネシウムと混合される。組成物は、常法に従って、不活性な希釈剤以外の添加剤、例えばステアリン酸マグネシウムのような潤滑剤や繊維素ダルコ一ル酸カルシウムのような崩壊剤、ラク卜ースのような安定化剤、グルタミン酸又はァスパラギン酸のような溶解補助剤を含有していてもよい。錠剤又は丸剤は必要によりショ糖、ゼラチン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレー卜等の胃溶性あるいは腸溶性物質のフイルムで被膜してもよい。経口投与のための液体組成物は、薬剤的に許容される乳濁剤、溶液剤、懸濁剤、シロップ剤、エリキシル剤等を含み、一般的に用いられる不活性な希釈剤、例えば精製水、エタノールを含む。この組成物は不活性な希釈剤以外に湿潤剤、懸濁剤のような補助剤、甘味剤、風味剤、芳香剤、防腐剤を含有していてもよい。実施例次に，実施例により本発明をさらに詳細に説明するが，本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。実施例（静脈内用製剤の製造）

化合物 A 6 gおよび塩化ナトリウム 2 7 gを注射用水約 1 8 0 0 m l に溶解し、さらに注射用水を加え全量を 3 0 0 0 m l とする。この溶液を孔径 0 . 2 2 mメンブランフィルターを用いて濾過し、注射剤を製する。以下に本発明に関する薬理試験法及び薬理効果について説明する。

6—アミノー N—シクロへキシルー N , 3 —ジメチルチアゾロ f 3， 2— alベンゾイミダゾールー 2 -カルボキサミド. 2塩酸塩（化合物 A) による脳梗塞抑制作用

1 . 選択性

(細胞培養）

mGluRI αおよび mGluR5aを発現させた NIH3T3細胞は、 10 % 透析胎児牛血清、 100 units/mU 0.1 mg/ml streptomycin sulfateを含む DMEMで培養した。 mGluR2， R3, R4, R6および R7を発現させた CHO細胞は、 10 % 透析胎児牛血清、 100 units/mk 0.1 mg/ml streptomycin sulfate, 2 mMグルタミンを含む DMEMで培養した。

(細胞内カルシウム濃度測定）

mGluR5aを発現した細胞を既報（Nature 383， 89-92, 1996) に従って、蛍光分光光度計を用いて細胞内カルシウム濃度を測定した。

(ホスファチジルイノシトール（PI) 加水分解測定）

³H-inositolをあらかじめ取り込ませた mGluRI 発現細胞を用い、既報（Nature 383， 89-92, 1996) に従ってホスファチジルイノシトールの加水分解を測定した。

(細胞内 cAMP測定）

mGluR2, R3, R4， R6および R7を発現した細胞を用い、既報 (Neuron, 8, 169-179, 1992) に従って、旧 MX存在下でフォルスコリン刺激後の cAMP産生量を cAMP測定キッ卜により測定した。

2 . 脳梗塞抑制作用

(MCA永久閉塞モデル）ィ匕合物 Aを生理食塩水に溶解し、 6 mg/3 mlに調整した。

既報 (J. Pharmacol. Exp. Thr. 276, 84-92, 1996) に従い、 Fischer-344系ラッ卜の左 MCAを永久閉塞し、その 5分後よリィヒ合物 Aを、 6 mg/3 ml/kg/hの投与量で無麻酔-無拘束下で 24時間静脈内持続投与した。投与終了後断頭、脳を摘出し、 2,3,5- triphenyltetrazolium hydrochloride (TTC)染色を施し、梗塞体積を測定した。

1 . 選択性

mGluR2, R3, R4, R6および R7に対しては、化合物 A 100 At Mまでァゴニス卜性、アンタゴニス卜性ともに認められなかった。 mGluR5に対しては、化合物 A 10 n M までァゴニス卜性、アンタゴニス卜性ともに認められなかった。

従って化合物 A はメタボトロピックグルタメ一卜の他の Group (Group II 及び Grouplll) に対する作用を有さないことが証明された。

図 1は mGluRI αに対する化合物 Aの抑制効果を用量依存的に示すものである。 mGluRI αに対しては、図 1 に示したように、 100 Μのグルタミン酸で亢進した ΡΙ産生を用量依存的に抑制し、そのに ₅₀値は 24 ηΜであった。

2 . 脳梗塞体積縮小作用

結果を図 2に示す。

図 2は化合物 Αを投与した際の大脳半球（Hemisphere) 、大脳皮質（Cortex) 及び線条体（striatum) における脳梗塞体積をコントロールと比較したものである。図 2に示したように、ィ匕合物 Aは脳梗塞体積を有意に縮小させ、その抑制率は、大脳半球（Hemisphere) および大脳皮質（Cortex) において、それぞれ 29%および 36° /。であった。上記試験の結果 mGluRI に選択的且つ強力な拮抗作用を有する化合物が、局所虚血による梗塞域を呈する脳梗塞の動物モデルにおいて、脳梗塞体積の縮小効果を示した。これらのことより、 mGluRI拮抗作用を持つ化合物の脳梗塞治療の有効性が証明され、脳梗塞の急性期の治療に有用であることが確認された。製造例 1

6—アミノー N—シクロへキシル—N， 3—ジメチルチアゾロ [3， 2— a]ベンゾイミダゾールー 2—カルボキサミド. 2塩酸塩

N—シクロへキシルー N， 3—ジメチルー 6—二トロチアゾロ [3， 2— a]ベンゾイミダゾールー 2—カルボキサミド（5. 35 g) の TH F (8 Om I ) —メタノール（3 Om I ) 溶液に室温下、ヒドロサルフアイ卜ナトリウム（1 2. 5 g) の水溶液（5 Om I )を加えて同温にて 1 2時間攪拌した。次いでこれに濃塩酸（1 Om l ) を加えて 1時間加熱環流した。次いで減圧下、 TH F、メタノールを留去し、これを水で希釈した後、 28%アンモニア水で中和した。酢酸ェチルで抽出した後、水、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥、溶媒を減圧留去した。残留物をカラ厶クロマトグラフィー（溶出液；クロ口ホルム：メタノール =20 ： 1 ) で精製し、さらにこれを塩酸塩とした後、メタノ一ルー酢酸ェチルより再結晶することによリ標記の化合物（3. 78 g) を淡褐色結晶として得た。

NMR:8.11 (d，1 H),7.84(d,1 Η)，7·41 (dd,1 H),4.20-5.75(br),3.80-4.20(br,1 Η),

2.94(s,3H),2.71 (s,3H), .50-1.85(m，7H),1.22-1.40(m,2H),1.02-1.18 (m,1 H).

MS(FAB):343(M+1).

Claims

請求の範囲 mGluRI 拮抗作用を有する化合物を有効成分とする脳梗塞治療のための医薬組成物

脳梗塞急性期の治療のための請求の範囲 1記載の医薬組成物

選択的 mGluRI 拮抗作用を有する化合物を有効成分とする請求項 1記載の医薬組成物

選択的 mGluRI 拮抗作用を有するィ匕合物が 6—アミノー N—シクロへキシル— N , 3 —ジメチルチアゾロ [ 3， 2— a】ベンゾイミダゾールー 2 —カルボキサミド. 2塩酸塩である請求項 3記載の医薬組成物