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WO1998029125A1 - Remedes contre des troubles de la vessie - Google Patents

Remedes contre des troubles de la vessie Download PDF

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WO1998029125A1
WO1998029125A1 PCT/JP1997/004894 JP9704894W WO9829125A1 WO 1998029125 A1 WO1998029125 A1 WO 1998029125A1 JP 9704894 W JP9704894 W JP 9704894W WO 9829125 A1 WO9829125 A1 WO 9829125A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
bladder
therapeutic agent
disorder
solution
acetic acid
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
PCT/JP1997/004894
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Katsuya Takahashi
Satoshi Miyauchi
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Seikagaku Corp
Original Assignee
Seikagaku Corp
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Seikagaku Corp filed Critical Seikagaku Corp
Priority to CA002247389A priority Critical patent/CA2247389C/en
Priority to EP97949258A priority patent/EP0891775A4/en
Priority to US09/142,032 priority patent/US6232301B1/en
Publication of WO1998029125A1 publication Critical patent/WO1998029125A1/ja
Anticipated expiration legal-status Critical
Ceased legal-status Critical Current

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    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0034—Urogenital system, e.g. vagina, uterus, cervix, penis, scrotum, urethra, bladder; Personal lubricants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/10—Drugs for disorders of the urinary system of the bladder

Definitions

  • the present invention relates to a therapeutic agent for bladder disorder, and more particularly, to a therapeutic agent for bladder disorder having an excellent therapeutic effect on bladder disorder due to a bladder mucosa epithelium spreading action or a bladder mucosal repair action.
  • Cystitis (bladder disorder) is caused by a variety of causes, most of which are caused by bacteria, typically acute bacterial cystitis. Parsons, CL et al. Found that removal of the glycosaminoglycan (hereinafter sometimes abbreviated to GAG) layer that covers the bladder by acid treatment increased bacterial adhesion, at which time exogenous GAGs were used.
  • GAG glycosaminoglycan
  • Nonbacterial refractory cystitis that is similar to acute bacterial cystitis but does not respond to antibiotics is known.
  • Typical non-bacterial intractable cystitis is broadly classified into 1) interstitial cystitis, 2) eosinophilic cystitis, and 3) hemorrhagic cystitis.
  • Interstitial cystitis is a common disease in the United States and Europe, and its main symptom is frequent urination for 10 months in middle-aged women and is characterized by suprapubic pain when the bladder is filled. As the bladder volume decreases and the bladder wall stretches, petechial hemorrhage is seen beneath the mucosa and sometimes ulcers are found in the bladder. Pathologically, fibrosis of the bladder muscle layer is observed, and the etiology includes theories of collagen disease and autoimmune diseases, but these have not been elucidated. Usually, treatment is performed by injecting dimethyl sulfoxide (DMSO), oxycyclosene sodium, or the like. Since these treatments have little or no effect, ultimately surgical bladder enlargement is performed. Also, injection of DMS0 However, it has the disadvantages of increased irritability in the bladder, a garlic smell of exhalation, and the need for anesthesia because the injection of lorocene sodium is extremely painful.
  • DMSO dimethyl sulfoxide
  • bentosin polysulfate inhibits angiogenesis, cell membrane leakage, or capillary leakage or exchange in the bladder, resulting in interstitial It has been proposed to treat cystitis (US Pat. No. 4,820,693; US Pat. No. 4,966,890). Furthermore, it has been disclosed that bentosin polysulfate inhibits bacterial adhesion to the transitional epithelium of the bladder, and it has been proposed to treat interstitial cystitis by oral administration of lOOmg / day or more. Name: Elmiron) (US Patent No. 5,180,715). Although no specific treatment experiments are shown, the patent states that pentosambolic sulfate can be administered by irrigation into the bladder to treat interstitial cystitis or bacterial cystitis. .
  • Eosinophilic cystitis presents exactly the same symptoms as acute bacterial cystitis, and pusuria is also typical. Antibacterial agents do not work, and the main component of pusuria is eosinophils. This condition is an allergic reaction to a drug having an anti-allergic effect such as Tranist. The drug often resolves due to discontinuation of the causative drug, but if it does not resolve easily, steroids are effective. Cystectomy may be unavoidable in patients with ineffective steroids.
  • Hemorrhagic cystitis is a disease mainly complaining of intense hematuria.Radiation cystitis, which causes bleeding of the mucous membrane of the bladder when uterine, rectal or bladder cancer is treated with radiation, causes hematuria.
  • a typical example is drug-induced cystitis, which causes uncontrollable bladder bleeding when a malignant tumor is treated with a chemotherapeutic agent such as cyclophosphamide.
  • a chemotherapeutic agent such as cyclophosphamide.
  • intravesical electrocautery is effective in mild cases, but intravesical perfusion with alum is effective. In severe cases, cystectomy or cystectomy is performed.
  • heparin, a GAG, and pentosan polysulfate, a synthetic analog of GAG are used to treat bacterial cystitis and interstitial cystitis.
  • the former has an average molecular weight of around 10,000 and the latter has a molecular weight of about 1,600 to 60,000 and a low viscosity, so the coating effect of the high-viscosity GAG layer in the bladder is low.
  • hyaluronic acid or a salt thereof has a bladder mucosa epithelial spreading action or a bladder mucosal repair action. Furthermore, there were no reports that hyaluronic acid solution prevented bladder fibrosis in non-bacterial intractable cystitis or repaired damaged bladder mucosa. Furthermore, the effective concentration of the hyaluronic acid solution exhibiting such effects, the molecular weight of hyaluronic acid, and other parameters have not been specifically examined.
  • the present invention has been made in view of the above, and has a bladder mucosa epithelial spreading action and a bladder mucosal repair action, and has an excellent therapeutic effect on bladder disorders, particularly non-bacterial intractable bladder disorders. It is an object to provide a therapeutic agent for bladder disorders having the same.
  • the present inventors have conducted intensive studies to solve the above problems, and as a result, in the treatment of bladder disorders, a specific concentration of a solution of hyaluronic acid and / or a pharmaceutically acceptable salt thereof is directly administered into the bladder.
  • the present inventors have found that the bladder mucosal epithelium can be extended or the bladder mucosa can be repaired, thereby effectively treating a bladder disorder, thereby completing the present invention.
  • the present invention is a therapeutic agent for bladder disorders, comprising a solution containing hyaluronic acid and / or a pharmaceutically acceptable salt thereof, which contains an effective amount of bladder mucosal epithelium extension and / or bladder mucosal repair.
  • the present invention also provides a therapeutic agent for bladder disorders comprising an aqueous solution containing 0.2 to 0.6% by weight of hyaluronic acid and / or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
  • a therapeutic agent for bladder disorders comprising an aqueous solution containing 0.2 to 0.6% by weight of hyaluronic acid and / or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
  • Hyaluronic acid and Z or a pharmaceutically acceptable salt thereof used in the therapeutic agent for bladder disorder of the present invention are hyaluronic acid capable of effectively treating bladder disorder when used as a solution having a specific concentration.
  • Z or a pharmaceutically acceptable salt thereof are not particularly limited.
  • hyaluronic acid and no or a pharmaceutically acceptable salt thereof used in the therapeutic agent for bladder disorder of the present invention include hyaluronic acid and no or a pharmaceutically acceptable salt thereof having a bladder mucosal epithelial spreading action and a bladder mucosal repair action. Particularly acceptable salts are particularly preferred.
  • hyaluronic acid and / or its pharmaceutically acceptable salt used in the therapeutic agent for bladder disorders of the present invention are specifically, for example, hyaluronic acid and / or its pharmaceutically acceptable salt having the following properties: Can be mentioned.
  • the weight average molecular weight is 500,000 or more.
  • the measurement of the physical properties (A) to (E) is performed by a method usually used by those skilled in the art when measuring the physical properties of hyaluronic acids.
  • hyaluronic acid and / or a pharmaceutically acceptable salt thereof used in the therapeutic agent for bladder disorders of the present invention having the above properties, for example,
  • (A) to (D) has the properties of (A) to (D) and has a weight average molecular weight of about 500,000 to 4,000,000, preferably about 500,000 to 2,200,000.
  • Hyaluronic acid and Z or a pharmaceutically acceptable salt thereof more preferably about 600,000 to 1,200,000, most preferably about 800,000 to 1,200,000.
  • concentration or viscosity of the solution is appropriately selected, about 1,500,000 to 2,200,000, or about 1,900,000 to 3,900,000 hyaluronic acid and Z or a pharmaceutically acceptable salt thereof can also be used.
  • hyaluronic acid and / or a pharmaceutically acceptable salt thereof used in the therapeutic agent for bladder disorder of the present invention have the above-mentioned properties (A) to (E) and an intrinsic viscosity of 11.0 to Hyaluronic acid which is 45 (d 1 Zg) and / or a pharmaceutically acceptable salt thereof can also be mentioned.
  • the endotoxin content, sulfated glycosaminoglycan content, iron content, protein content, weight-average molecular weight, intrinsic viscosity, and the like, and the intrinsic viscosity, etc. are out of the above ranges, or pharmaceutically acceptable.
  • the use of salt may cause exacerbation of inflammation, exacerbation of bleeding, allergic reactions, etc., or the desired effect may not be observed.
  • hyaluronic acid and / or a pharmaceutically acceptable salt thereof used in the therapeutic agent for bladder disorder of the present invention include water-soluble pharmaceutically acceptable salts such as sodium hyaluronate, potassium hyaluronate and calcium hyaluronate. Acceptable metal salts are used. Of these, sodium hyaluronate, which is mainly used for medical purposes such as pharmaceuticals and medical devices, is preferable. Origin of hyaluronic acid and / or its pharmaceutically acceptable salt The production method is not limited, and the extract is extracted from the cockscomb, animal umbilical cord, skin, vitreous body, etc.
  • hyaluronic acid and Z in medical preparations such as pharmaceuticals are included.
  • those obtained by adjusting the concentration of the salt or the like according to the purpose can be used as the therapeutic agent for bladder disorders of the present invention.
  • preparations of hyaluronic acid and Z or a pharmaceutically acceptable salt thereof for example, sodium hyaluronate having physical properties shown in the above (A) to (D) is manufactured by Seikagaku Corporation.
  • Alu weight average molecular weight: 600,000-1200,000
  • opegan weight average molecular weight: 600,000-1200,000
  • opegan high weight average molecular weight: 190,000-390,000
  • Hyalein weight average molecular weight: 600,000 to 1200,000 manufactured by Santen Pharmaceutical Co., Ltd.
  • Operide weight average molecular weight: 153,000 to 213,000
  • Mold Pharmacia Hyron weight average molecular weight: 190,000 to 3,900,000
  • the therapeutic agent for bladder disorder of the present invention comprises the above-mentioned solution containing the hyaluronic acid and da or a pharmaceutically acceptable salt thereof in an effective amount for bladder mucosal epithelial extension and / or bladder mucosal repair.
  • the concentration of hyaluronic acid and / or a pharmaceutically acceptable salt thereof in the solution depends on the hyaluronic acid and / or Z or a pharmaceutically acceptable salt thereof contained in the solution.
  • the therapeutic agent for bladder disorder of the present invention if the content of hyaluronic acid and Z or a pharmaceutically acceptable salt thereof in the solution is less than 0.2% by weight, the bladder mucosal epithelium spreading action is not sufficient. Therefore, it may not be able to be used effectively as the therapeutic agent for bladder disorders of the present invention, and if it exceeds 0.6% by weight, urination may be difficult due to high viscosity.
  • the mucosal epithelium is extended and the mucous membrane is repaired / regenerated at the damaged or detached portion of the bladder mucosal epithelium caused by the bladder disorder.
  • the pH is preferably about 6 to 8
  • the osmotic pressure ratio is approximately 0.9 to 1.2 (substantially isotonic with respect to body fluid or physiological saline).
  • the irritation to the bladder mucous membrane which has become hypersensitive can be reduced by adjusting the pH of the solution to about 6 to 8 described above. If the pH of the solution is less than 6, the irritation to the bladder mucosa may be increased.If the pH exceeds 8, the irritation to the bladder mucosa may increase, and the repair / regeneration of the bladder mucosa may be delayed, May lose the effect of preventing fibrosis.
  • the osmotic pressure ratio of the solution to the body fluid is about 9 to 1.2, so that the bladder mucous membrane is treated similarly to the case of the pH. Irritation can be reduced. If the osmotic pressure ratio of the solution is smaller than 0.9, urination may be difficult due to an increase in viscosity, and if the osmotic pressure ratio exceeds 1.2, irritation to the bladder mucosa may be increased.
  • the therapeutic agent for bladder disorder comprising an aqueous solution containing hyaluronic acid and / or its pharmaceutically acceptable salt according to the present invention
  • the above-mentioned hyaluronic acid and Z or its pharmaceutically acceptable salt are contained.
  • an aqueous solution having an apparent viscosity of 10 to 150 mPa.s when measured at a shear rate of 9.6 sec- 1 at 20 ° C is preferably used.
  • the aqueous solution of the present invention by setting the viscosity of the aqueous solution alone to about 10 to 150 OmPas, it is possible to prevent urination difficulty and A bladder mucosa repair effect can be obtained. If the aqueous solution alone has a viscosity of less than 1 OmPas, the bladder mucosa repair effect may not be sufficient, and if the apparent viscosity exceeds 150 OmPas, urination may be difficult. May come.
  • the present inventors have found that administration of 5% acetic acid into the bladder of a laboratory animal and exfoliation of the bladder mucosal epithelium lead to irreversible progression of bladder fibrosis, resulting in a decrease in bladder volume.
  • the symptoms of the animal model treated in this way were found to be very similar to those of non-infectious refractory bladder disorders in humans.
  • 5% acetic acid means a solution containing acetic acid at a concentration of 5%.
  • a solution containing the above-mentioned hyaluronic acid and Z or a pharmaceutically acceptable salt thereof constituting the therapeutic agent for bladder disorder of the present invention more specifically, 5% acetic acid is injected into the bladder and kept for 10 minutes The solution was bleached into the heron's bladder.
  • the bladder volume after daily instillation treatment for 7 days after exfoliation of the bladder mucosa was similarly exfoliated from the bladder mucosa with 5% acetic acid.
  • phosphate buffered saline was used instead of this solution Into a heron's bladder as described above in a solution prepared so that the bladder volume is 2-3 times the bladder volume after the injection into the heron, and the bladder mucosa exfoliated with 5% acetic acid in the same manner as above
  • the bladder mucosa was similarly exfoliated with 5% acetic acid after the treatment of injecting the solution, and the bladder mucosa was similarly peeled off.
  • a treatment in which phosphate buffered saline was similarly injected instead of the solution into the bladder of a heron And a solution prepared to be 0.6 to 0.9 times the dry weight of the bladder after the reaction.
  • a solution containing the above-mentioned hyaluronic acid and Z or a pharmaceutically acceptable salt thereof constituting the therapeutic agent for bladder disorder of the present invention specifically, 5% acetic acid was injected into the bladder by 10%. After the bladder mucosa was exfoliated by holding for 1 minute, the solution was injected daily into the bladder of the heron for 7 days after exfoliation of the bladder mucosa, and then a 0.5% trypan blue aqueous solution was further injected to attach trypan blue The amount of trypan bleeding into the bladder at the time of letting go was 5% acetic acid, and the mucous membrane of the bladder was similarly exfoliated.A treatment in which phosphate buffered saline was similarly injected instead of this solution into the bladder of a heron A solution prepared so that the amount of trypan blue adhering to the bladder when trypan blue is adhered in the same manner after application is 0.5 to 0.7 times, or 5% acetic acid as described above.
  • Heron's bladder After the treatment of injecting the solution in the same manner as described above, when the trypable is adhered in the same manner as above, the area of adhesion of the trypable to the bladder mucosal exfoliation site is similar to that in 5% acetic acid.
  • a solution or the like prepared so as to have 0.25 to 0.45 times the attached area can also be used.
  • the bladder mucosa was exfoliated with 5% acetic acid in the same manner as above.
  • the amount of hydroxyproline in the bladder after the treatment of injecting the solution into the bladder of a heron in the same manner as above was the same with -5% acetic acid.
  • a solution prepared so as to be twice as large can also be mentioned.
  • the solution specifically mentioned above as a solution containing hyaluronic acid and nose or a pharmaceutically acceptable salt thereof constituting the therapeutic agent for bladder disorder of the present invention contains 5% acetic acid in the bladder.
  • the bladder mucosa was exfoliated by injecting into the bladder and holding it for 10 minutes.
  • the bladder mucosal epithelium spreading action and the Z or bladder mucous membrane repair action of the solution to the bladder were used.
  • the c such indicator is a solution that has been selected each act as an indicator of the action such as reducing the amount of intravesical inhibit mud Kishipurorin This will be described below.
  • the Egat's bladder mucosa damage model in which the bladder mucosa has been exfoliated (hereinafter referred to as the Egat's bladder mucosa damage model).
  • Acetic acid is known to have mucosal irritation, and so far gastric mucosal damage models prepared using acetic acid have been widely used for drug testing and the like. Therefore, in the present invention, a bladder mucosa injury model of a heron, in which acetic acid is allowed to act on the bladder mucosa and the bladder mucosa is exfoliated as described above, is independently produced. Is used as an index for selecting a solution constituting the therapeutic agent for bladder disorder of the present invention as described above.
  • the egret bladder mucosal injury model used in the present invention is produced, for example, as follows. After inserting a bladder catheter into the bladder of a egret that has been under general anesthesia by the usual method, the residual urine in the bladder is discharged using a syringe of an appropriate size. After excretion of residual urine, the bladder is washed with a sufficient amount of physiological saline, and then a solution obtained by diluting acetic acid with distilled water to a concentration of 5% is injected into the bladder in a sufficient amount. Leave for 10 minutes to exfoliate the bladder mucosa. Then, the acetic acid is drained, and the bladder is washed with a sufficient amount of physiological saline.
  • the model of the bladder mucosal disorder of the egret used in the present invention is based on the one treated with 5% acetic acid for 10 minutes, but a similar model can be used for evaluation tests of various drugs.
  • the acetic acid concentration of the acetic acid solution used to exfoliate the bladder mucosa is not limited to 5%, and the time for which the acetic acid solution is placed in the bladder is not limited to 10 minutes. Change these conditions appropriately according to the situation It is possible to
  • the type, age, and gender of the egret used for model preparation are not particularly limited, but preferred examples include JW male male egrets, 12 to 14 weeks of age. It is also possible to apply to animals other than Egret.
  • the degree of the bladder's inflation function can be evaluated by measuring the bladder volume. In other words, it can be said that the larger the bladder volume after the solution of various drugs is applied to the bladder in the bladder mucosal disorder model of the above-mentioned ⁇ sagi, the better the bladder swelling function is restored.
  • the bladder dry weight and the amount of hydroxyproline (collagen) in the bladder it becomes possible to evaluate the degree of fibrosis of the bladder proper muscle layer. In other words, the lower the bladder dry weight and the lower the amount of hydroxyproline in the bladder after the solution of various drugs was applied to the bladder of the bladder mucosal disorder model of the above-mentioned Egret, the more specific the bladder intrinsic muscle layer fibrosis.
  • trypan blue an acidic vital dye
  • trypan blue adhering to the bladder or the area of trypan blue adhering to the bladder mucosa detachment site was measured. By doing so, it becomes possible to evaluate the degree of extension of the bladder mucosal epithelium or the degree of repair of the bladder mucosa.
  • the bladder of the bladder mucosal disorder model of the egret is irrigated with hyaluronic acid and Z or a pharmaceutically acceptable salt thereof every day for 7 days, and a phosphate buffered saline (PBS) Was similarly irrigated daily for 7 days
  • the bladder volume is 2-3 times of PBS treatment
  • the bladder dry weight is 0.6-0.9 times of PBS treatment
  • the amount of trypable in the bladder is 0.5-0.7 times of PBS treatment
  • the bladder The area of adhesion of the trypanble to the mucosal detachment area is in the range of 0.25 to 0.45 times when treated with PBS
  • the amount of hydroxyproline in the bladder is within the range of 0.8 to 0.9 times that treated with PBS.
  • a solution containing hyaluronic acid and / or a pharmaceutically acceptable salt thereof has been selected as a preferred agent for treating a bladder disorder of the present invention.
  • the bladder volume was 2 to 3 times that of the PBS treatment, and the bladder dry weight was 0% of the PBS treatment. 6-0.9 times, the amount of trypanble in the bladder is 0.5-0.7 times when treated with PBS, and the area of trypanble attached to the bladder mucosal detachment site is? 0.25-0 when treated with 83
  • a solution containing hyaluronic acid and Z or a pharmaceutically acceptable salt thereof such that the amount of hydroxyproline does not fall within the range of 0.8 to 0.9 times when treated with PBS.
  • a solution containing hyaluronic acid and Z or a pharmaceutically acceptable salt thereof as described above may not be effectively used as the therapeutic agent for bladder disorder of the present invention. Preferred as an agent for treating disorders.
  • the therapeutic agent for bladder disorders of the present invention can be produced by dissolving the above-mentioned hyaluronic acid and / or a pharmaceutically acceptable salt thereof in an appropriate solvent within the above-mentioned content range.
  • the solvent include water, a buffer solution, physiological saline, and water containing a water-soluble organic solvent such as DMS0.In the present invention, water or physiological saline is used as the solvent. Is preferred.
  • the therapeutic agent for bladder disorder of the present invention is provided in the form of a powder of the above-mentioned hyaluronic acid and / or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and when necessary, the concentration, apparent viscosity, pH, osmotic pressure ratio, etc.
  • the solution may be prepared in the form of a solution so that the above-mentioned method is the same as that of the solution constituting the therapeutic agent for bladder disorder of the present invention described above.
  • the therapeutic agent for bladder disorder of the present invention may contain, as necessary, an optional component other than the above-mentioned hyaluronic acid and / or a pharmaceutically acceptable salt thereof and a solvent.
  • optional components include known pharmaceutically acceptable anti-inflammatory agents, analgesics, vitamins, antibacterials, growth factors, adhesion factors, buffers, stabilizers, inorganic salts And the like.
  • the concentration of hyaluronic acid and / or its salt in a solution is relatively low (for example, 0.1 to 0.8% by weight, preferably 0.2 to 0.8% by weight). (0.6% by weight), so hyaluronic acid may become low molecular weight during heat sterilization or long-term storage.
  • Such means include, for example, reducing the metal ion (e.g., iron ion) content of the hyaluronic acid and Z or salts thereof used to 20 ppm, preferably 10 ppm or less (US Pat. 559, 104), a method of incorporating known stabilizers such as citric acid, citrate, and glycerin, which can prevent the reduction of the molecular weight of hyaluronic acid. 42, JP-A-9-176020).
  • reducing the metal ion e.g., iron ion
  • Z or salts thereof used to 20 ppm preferably 10 ppm or less
  • stabilizers such as citric acid, citrate, and glycerin
  • the agent for treating a bladder disorder of the present invention is a drug to be directly administered to the bladder, and may employ the same administration method as a drug which is usually administered directly to the bladder, for example, an administration method using an intravesical catheter.
  • the dose of the therapeutic agent for bladder disorder of the present invention is, for example, an endotoxin content of 0.03 EU (endotoxin unit) / 1 O mg or less, a sulfur content of 0.01% or less in coulometric titration, and an iron content of 2% or less.
  • Phosphate-buffered saline containing 0.2 to 0.6% by weight of sodium hyaluronate having a protein content of 0.1% or less, a protein content of 0.1% or less, and a weight average molecular weight of 600,000 to 1,200,000.
  • dosages such as administration at a dose of 50 ml at a time, once to seven times a week can be mentioned.
  • the therapeutic agent for bladder disorder of the present invention can be widely applied to bladder disorders in general, as long as the bladder disorder can improve its symptoms by bladder mucosal epithelium extension and bladder mucosal repair.
  • Hemorrhagic cystitis such as drug-induced cystitis induced by administration of drugs such as bleomycin hydrochloride, bleomycin sulfate, etc., and stimulating therapies (such as auranofin) for the treatment of rheumatism; interstitial cystitis; It is particularly effective in treating eosinophilic cystitis; or non-bacterial intractable bladder disorders such as frequent urinary frequency.
  • drugs such as bleomycin hydrochloride, bleomycin sulfate, etc.
  • stimulating therapies such as auranofin
  • the bladder disorder treatment II of the present invention has a bladder mucosal epithelium spreading action and is injured by cystitis. It repairs the bladder mucous membrane that has been repaired and, as a result, has an excellent effect of suppressing fibrosis of the bladder, so that it is possible to effectively treat bladder disorders. Further, since the therapeutic agent for bladder disorder of the present invention does not have antithrombotic properties, it can be used without side effects such as easy bleeding.
  • FIG. 1 is a diagram showing the bladder volume of the control and each bladder disorder therapeutic agent administration group in a 5% acetic acid-induced heron cystitis model.
  • FIG. 2 is a representative incision photograph of the bladder showing the state of trypanble adhesion to the bladder mucosa of a control in a 5% acetic acid-induced heron cystitis model.
  • FIG. 3 is a representative incision photograph of the bladder showing the state of trypanble adhesion to the bladder mucosa in the group treated with the therapeutic agent for bladder disorder 1 in a 5% acetic acid-induced heron cystitis model.
  • FIG. 4 is a representative incision photograph of the bladder showing the state of trypanble adhesion to the bladder mucosa in the group treated with the therapeutic agent for bladder disorder 2 in a 5% acetic acid-induced heron cystitis model.
  • FIG. 5 is a typical bladder incision photograph showing the state of adhesion of tripan blue to the bladder mucosa in the group treated with the therapeutic agent for bladder disorder 3 in a 5% acetic acid-induced heron cystitis model.
  • FIG. 6 is a graph showing a control and a bladder disorder area ratio (trypan blue adhering area Z total bladder area) in a control and each bladder disorder treating agent administration group in a 5% acetic acid-induced heron cystitis model.
  • FIG. 7 is a diagram showing the dry weight of the bladder of the control and each bladder disorder therapeutic agent administration group in a 5% acetic acid-induced heron cystitis model.
  • FIG. 8 is a graph showing the amount of triprimble adhered to the bladder lesion in the 5% acetic acid-induced heron cystitis model and the bladder lesion site in each of the bladder disorder therapeutic agent administration groups.
  • 9, c Figure 1 0 shows a control and bladder Eastern Marsh Harrier Dorokishipurori emissions (collagen) amount of each bladder disorder therapeutic agent administration group in 5% acetic acid induced Usagi cystitis model, 5% acetic acid induced Usagi cystitis 4 is a stained photograph of a control bladder tissue in a model.
  • (A) is a 10x photograph of hematoxylin-eosin staining.
  • (b) is a photograph at 10 times magnification by Azan staining.
  • FIG. 11 is a stained photograph of the bladder tissue of the group treated with the therapeutic agent for bladder disorder 1 in a 5% acetic acid-induced heron cystitis model.
  • (A) is a 10 ⁇ photograph of hematoxylin-eosin staining
  • (b) is a 10 ⁇ photograph of Azan staining.
  • FIG. 12 is a stained photograph of the bladder tissue of the group treated with the therapeutic agent for bladder disorder 2 in a 5% acetic acid-induced heron cystitis model.
  • A is a 10 ⁇ photograph of hematoxylin-eosin staining
  • (b) is a 10 ⁇ photograph of Azan staining.
  • FIG. 13 is a stained photograph of the bladder tissue of the group treated with the therapeutic agent for bladder disorder 3 in a 5% acetic acid-induced heron cystitis model.
  • (A) is a 10 ⁇ photograph of hematoxylin-eosin staining
  • (b) is a 10 ⁇ photograph of Azan staining.
  • BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to Examples. Examples 1 to 3
  • the endotoxin content is 0.006 EU (endotoxin unit).
  • Example 1 Phosphate buffered saline in Example 1 so as to contain 0.1% by weight, Example 2 in a concentration of 0.2% by weight, and Example 3 in a concentration of 0.4% by weight.
  • An agent for treating disorders was prepared.
  • the bladder disorder therapeutic agents obtained in Examples 1 to 3 are referred to as a bladder disorder therapeutic agent 1, a bladder disorder therapeutic agent 2, and a bladder disorder therapeutic agent 3, respectively.
  • the intrinsic viscosity and the osmotic pressure ratio of each of the therapeutic agents for bladder disorder and PBS obtained above were measured. Table 1 shows the results. table 1
  • the therapeutic agent for bladder mucosa of the present invention with respect to a heron cystitis model induced by 5% acetic acid was used to demonstrate a bladder mucosal epithelial extension action or a bladder mucosal repair action. It was evaluated and evaluated for the therapeutic effect of bladder disorder.
  • the cystitis-induced bladder bladder of each group was obtained in the above example. 1 to 3 days after cystitis induction, 2 Om1 one day after induction, and 1 Om1 from 2 days after induction until 6 days after catheterization The injection was performed once a day using, and left for 10 minutes after the injection.
  • the average value and standard deviation of the 10 bladder volumes in each administration group were determined, and these were graphed (FIG. 1).
  • the mean value of bladder volume was 8 m1 in the control group, 17.8 m1 in the bladder disorder treatment 1 administration group, 16.3 m1 in the bladder disorder treatment 2 administration group, and bladder disorder treatment.
  • the dose was 17 ml in the group to which the agent 3 was administered.
  • “*” in Fig. 1 indicates the result of testing the difference between the mean values using the D unnett multiple comparison test after confirming the linearity of the measured data by the multitest procedure (Multitest Procedure). , Is a symbol indicating that P 0.01 is significant with respect to the control.
  • the bladder volume of the egret after administration of the therapeutic agent 1 to 3 for bladder disorder obtained in the above example to the 5% acetic acid-induced egret cystitis model was the same as that of the egret after PBS administration. It can be seen that it is significantly larger than the bladder volume.
  • This bladder volume In the control group, in the control group, after inflammation of the bladder mucosal epithelium caused by acetic acid, strong inflammation was induced, and the intrinsic muscle layer of the bladder fibrosis and swelling became extremely difficult 7 days later. In the groups administered with the agents 1 to 3, it is considered that the administration of the therapeutic agent is caused by suppression of fibrosis of the intrinsic muscle layer of the bladder and improvement of the bladder swelling function.
  • FIG. 2 shows the control
  • Fig. 3 shows the bladder disorder treatment 1 administration group
  • Fig. 4 shows the bladder disorder treatment 2 administration group
  • Fig. 5 shows the bladder disorder treatment 3 administration group. 5 is a representative photograph of the incision photographs of 10 bladders, showing the state of the trypanbles attached. '
  • Bladder disorder area ratio (3 ⁇ 4) (trypanble attachment area / total bladder area) x 100 From the above calculation results, the mean value and standard deviation of the 10 bladder disorder areas in each administration group were determined, and these were graphed (FIG. 6). Here, the average value of the bladder disorder area ratio was 74.777% in the control group, 33.28% in the bladder disorder treatment 1 group, and 28.15% in the bladder disorder treatment 2 group. In the group treated with the bladder disorder treatment agent, the ratio was 21.84%.
  • the ratio of bladder disorder area of the egret after administration of the therapeutic agent for bladder disorder 1 to 3 obtained in the above example to the 5% acetic acid-induced egret cystitis model was the same as that after PBS administration. ⁇ Compared to the ratio of bladder disorder area in the heron, it is significantly smaller. In addition, a significant linear relationship was found between the bladder disorder area ratio and the amount of sodium hyaluronate contained in the therapeutic agent for bladder disorder administered by the sample re-extraction method, and a dose dependence was observed. .
  • the bladder was freeze-dried for each individual, cut, and weighed.
  • the bladder dry weights of the herons after administration of the therapeutic agents 1 to 3 for bladder disorders obtained in the above examples to the 5% acetic acid-induced heron cystitis model were all It can be seen that the bladder's bladder dry weight is small.
  • the bladder after the above weight measurement is digested with 0.25% actinase, a part of the digested solution is filtered to obtain a supernatant, and the absorbance of the supernatant is measured at 582 nm to obtain the supernatant. From these values, the amount of trypanble adhering to the damaged area of the bladder was calculated.
  • the amount of trypan blue adhering to Egret after administration of the therapeutic agents 1 to 3 for bladder disorder obtained in the above example to the 5% acetic acid-induced Egret cystitis model was all ⁇ ⁇ ⁇ Compared to the amount of trypable on the heron, it is significantly smaller.
  • a significant linearity was observed in the amount of trypanble deposited and the amount of sodium hyaluronate contained in the administered bladder disorder treatment agent by the sample re-extraction method, and a dose dependency was observed.
  • FIGS. 10 to 13 Micrographs ( ⁇ 10) of the bladder tissue stained with hematoxylin-eosin and azan are shown in FIGS. 10 to 13.
  • Fig. 10 is for the control
  • Fig. 11 is for the bladder disorder treatment 1 administration group
  • Fig. 12 is for the bladder disorder treatment 2 administration group
  • Fig. 13 is for the bladder disorder treatment agent 3 administration group. It is a stained photograph.
  • (a) is a 10 ⁇ photograph of hematoxylin-eosin staining
  • (b) is a 10 ⁇ photograph of Azan staining.
  • Fig. 10 (a) in the control bladder, no bladder mucosal epithelium was observed over the entire circumference of the bladder, necrotic mass protruding into the cavity was observed, and the surface layer of the necrotic mass was observed. It can be seen that there is strong cell infiltration in the non-structured and inner layers. Also, from FIG. 10 (b), in the control bladder, the formation of collagen fibers stained blue by Azan staining was observed all around the bladder, which was also called bladder sclerosis. It can be seen that the image has an image that can be seen. .
  • the bladder in the group to which the therapeutic agent for bladder disorder 1 was administered had necrotic masses similar to the control, but formed mucosal epithelium that was not observed in the control, and It can be seen that the mucosal epithelial cells are irregularly arranged, but no necrosis is observed. Also, from FIG. 11 (b), it can be seen that the bladder of the group to which the therapeutic agent for bladder disorder 1 was administered exhibited an image which can be said to be bladder sclerosis as well as the control at the site where the granulation tissue formation was clear.
  • FIG. 12 (a) it can be seen that in the bladder of the group to which the agent for treating bladder disorder 2 was administered, the formation of necrotic mass protruding into the bladder was observed in a wider range than in the group to which the agent for treating bladder disorder 1 was administered.
  • FIG. 12 (b) it can be seen that in the bladder of the group to which the therapeutic agent for bladder disorder 2 was administered, a bladder sclerosis image was observed, but the state of the mucosal epithelium was close to normal.
  • bladder weight can improve the pathology
  • the histological findings show that the bladder mucosal epithelium has been repaired and improved by stretching the bladder mucosal epithelium, and thus the bladder therapeutic agent of the present invention extends the bladder mucosal epithelium for bladder disorders and repairs the bladder mucosa.
  • the bladder therapeutic agent of the present invention extends the bladder mucosal epithelium for bladder disorders and repairs the bladder mucosa.
  • effective treatment can be performed by suppressing fibrosis.
  • the therapeutic agent for bladder disorder of the present invention has an action of extending the bladder mucosal epithelium and an action of repairing the bladder mucosa, and also prevents the progression of bladder fibrosis and restores the bladder swelling function. This has an excellent therapeutic effect on bladder disorders.

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Description

明細書 膀胱障害治療剤 技術分野 本発明は、 膀胱障害治療剤に関し、 詳しくは、 膀胱粘膜上皮伸展作用または膀 胱粘膜修復作用により膀胱障害に対して優れた治療効果を有する膀胱障害治療剤 に関する。 背景技術 膀胱炎 （膀胱障害） は種々の原因により引き起こされるカ^ その多くは細菌に よるもので、 その代表は急性細菌性膀胱炎である。 Parsons, C. L. らは膀胱を被 覆するグリコサミノグリカン（以下、 GAGと略すこともある）層を酸処理で除去する と細菌の付着が増加することを見出し、 このときに外因性の GAGであるへパリ ンを 膀胱内に注入すると細菌の付着量が減少することを見出している（J. Surg. Res. 2 5 : 324-329( 1978) )。 また、 その後の研究により、 外部から投与されたへパリ ンは 膀胱表面の移行細胞を被覆し、 細菌と移行細胞とのバリァ一として作用している ことが示唆されている（Infect. Immun. 24 : 552-557( 1979) )。
急性細菌性膀胱炎と類似の症状を示しながら、 抗菌剤に反応しない非細菌性難 治性膀胱炎が知られている。 代表的な非細菌性難治性膀胱炎は、 ①間質性膀胱炎、 ②好酸球性膀胱炎、 ③出血性膀胱炎に大きく分類される。
間質性膀胱炎は、 欧米に多い疾患であり、 中年以降の女性の 1 0ヶ月に及ぶ頻 尿が主たる症状で、 膀胱充満時の恥骨上部痛が特徴である。 膀胱容積の低下を来 し、 膀胱壁が伸展すると粘膜下に点状出血がみられ、 時には膀胱内に潰瘍が見ら れることもある。 病理学的には膀胱筋層の線維化が見られ、 病因としては膠原病 説、 自己免疫疾患説などがあるが、 解明されていない。 通常、 ジメチルスルホキ シド （D M S O ) 、 ォキシクロ口セン 'ナトリウム （oxychlorosene sodium) な どの注入による治療が行われている。 これらの治療法は、 ほとんど効果が期待で きないため、 最終的には外科的に膀胱拡大術が行われている。 また、 DMS0の注入 では膀胱内の刺激反応性が増したり、 呼気がニン二ク臭を帯びること、 ロロセン ·ナトリゥムの注入は著しく苦痛を伴うために麻酔が必要であるという 欠点がある。
間質性膀胱炎の病因は上述の通り、 未解明であるが、 膀胱の移行上皮を被覆す るグリコサミノダリ力ンの異常または欠陥が、 主要な原因であることが示唆され ている（Eldrup J. 1983. British J. of Urology, 55 : 488)。 また、 グリコサミノ グリ力ンの類似物質として低分子量、 低粘度で高度に陰性荷電を帯びたペントサ ンポリ硫酸ナトリウムが知られている。 そして、 ベントサンポリ硫酸塩とステロ ィ ドを併用し、 経口投与または膀胱内注入により、 膀胱内での血管形成、 細胞膜 の漏出現象、 または毛細血管の漏出現象、 交換現象を阻止することにより、 間質 性膀胱炎を治療することが提案されている（米国特許第 4, 820, 693号、 米国特許第 4, 966， 890号）。 さらに、 ベントサンポリ硫酸塩は膀胱の移行上皮への細菌の付着 を阻害することが開示され、 lOOmg/日以上経口投与することにより間質性膀胱炎 を治療することが提案され、 経口治療剤 （商品名 ： Elmiron) として使用されてい る （米国特許第 5， 180， 715号） 。 また、 具体的な治療実験は示されていないが、 同 特許にはペントサンボリ硫酸塩を灌注により膀胱内に投与して間質性膀胱炎また は細菌性膀胱炎を治療できることが述べられている。
好酸球性膀胱炎は、 急性細菌性膀胱炎と全く同じ症状を呈し、 膿尿も典型的で ある力^ 抗菌剤は効かず、 膿尿の主体は好酸球である。 この病態は、 トラニスト 等の抗アレルギー作用を有する薬剤に対するアレルギー反応である。 原因となる 薬剤の投与中止により軽快することが多いが、 なかなか軽快しないときはステロ ィ ド剤が有効である。 ステロイ ド剤が無効の症例では、 膀胱摘出もやむを得ない ことがある。
出血性膀胱炎は、 強い血尿を主訴とする疾患であり、 子宮癌、 直腸癌または膀 胱癌を放射線治療する際に膀胱粘膜が易出血性となり、 血尿を呈する放射線性膀 胱炎や、 典型的な例として悪性腫瘍をシクロフォスフア ミ ド等の化学療法剤で治 療する際にコントロール不能の膀胱出血を来す薬剤性膀胱炎などが知られている。 放射線性膀胱炎の治療には、 軽い場合は膀胱内電気焼灼ゃミ ヨウバンの膀胱内 灌流が有効であるが、 重症例では膀胱摘出または膀胱拡大術が行われる。 一方、 薬剤性膀胱炎には、 電気焼灼ゃミ ヨウバンの膀胱内灌流は無効であり、 緊急を要 するときは、 ホルマリ ンの膀胱内注入が行われる。 ホルマリ ン注入後膀胱が萎縮 することがあるが、 その場合は膀胱拡大術が行われる。
以上の通り、 非細菌性難治性膀胱炎、 特に間質性膀胱炎と出血性膀胱炎の適切 な治療法は未だ開発されていない。 なお、 細菌性膀胱炎や間質性膀胱炎の治療に GAGであるへパリ ン、 GAGの合成アナログであるペントサンポリ硫酸塩を使用する ことは知られている。 前者は平均分子量 10, 000前後であり、 後者は分子量 1, 600〜 60, 000程度で粘度も低いため、 膀胱内の高粘度 GAG層の被覆作用が低い。 また、 分 子中に多くの硫酸基を有するためにいずれも強い抗血栓作用、 すなわち出血性を 示すことから、 細菌性膀胱炎、 間質性膀胱炎の治療の際にも粘膜からの出血に配 慮して使用する必要があり、 出血性膀胱炎の治療には使用できない。
また、 最近、 ヒアルロン酸ナトリウムの水溶液の膀胱内注入により間質性膀胱 炎の症状が緩和したことが報告されている （Proceedings of The American Urol ogical Association, Vol. 153, april 1995 supplement ; W096/25168) 。 そして、 この報告において具体的に上記の症状緩和効果が確認されているのは、 生理食塩 水 50mlに 40mgのヒアルロン酸塩を溶解した溶液 （0. 08%溶液） を使用した場合だけ であった。 しかしながら、 本発明者が追試したところ、 0. 08%のヒアルロン酸塩溶 液では、 膀胱の線維化の進行を防止できないことが見出されている。
また、 従来ヒアルロン酸やその塩が、 膀胱粘膜上皮伸展作用または膀胱粘膜の 修復作用を有するという報告は無い。 さらに、 ヒアルロン酸溶液が非細菌性難治 性膀胱炎における膀胱の線維化を防止したり、 障害された膀胱粘膜を修復すると いう報告はなかった。 またさらに、 そのような作用を示すヒアルロン酸溶液の有 効濃度、 ヒアルロン酸の分子量、 その他のパラメータについては具体的検討はな されたていなかった。 発明の開示 本発明は上記観点からなされたものであり、 膀胱粘膜上皮伸展作用及びノ又は 膀胱粘膜修復作用を有し、 膀胱障害、 特に非細菌性難治性膀胱障害に対して優れ た治療効果を有する膀胱障害治療剤を提供することを課題とする。 本発明者らは、 上記課題を解決するために鋭意研究を重ねた結果、 膀胱障害の 治療において、 特定濃度のヒアルロン酸及びノ又はその薬学的に許容される塩の 溶液を膀胱内へ直接投与することで膀胱粘膜上皮を伸展させ、 あるいは膀胱粘膜 を修復し、 それにより膀胱障害を有効に治療することができることを見出し、 本 発明を完成させた。
すなわち、 本発明は、 ヒアルロン酸及び/又はその薬学的に許容される塩の膀 胱粘膜上皮伸展及びノ又は膀胱粘膜修復有効量を含有する溶液からなる膀胱障害 治療剤である。
また、 本発明はヒアルロン酸及び/又はその薬学的に許容される塩を 0 . 2〜 0 . 6重量％含有する水性溶液からなる膀胱障害治療剤を提供する。 以下、 本発明を詳細に説明する。 まず、 本発明の膀胱障害治療剤を構成する溶 液が含有するヒアル口ン酸及び Z又はその薬学的に許容される塩について説明す る o
( 1 ) ヒアルロン酸及び/又はその薬学的に許容される塩
本発明の膀胱障害治療剤に用いられるヒアルロン酸及び Z又はその薬学的に許 容される塩は、 特定濃度の溶液として用いることにより膀胱障害を有効に治療す ることが可能なヒアル口ン酸及び Z又はその薬学的に許容される塩であれば、 特 に制限されない。 また、 本発明の膀胱障害治療剤に用いられるヒアルロン酸及び ノ又はその薬学的に許容される塩としては、 膀胱粘膜上皮の伸展作用及びノ又は 膀胱粘膜修復作用を有するヒアルロン酸及びノ又はその薬学的に許容される塩が 特に好ましい。
上記本発明の膀胱障害治療剤に用いられるヒアルロン酸及びノ又はその薬学的 に許容される塩として、 具体的には、 以下の性質を有するヒアルロン酸及び/又 はその薬学的に許容される塩を挙げることができる。
( A ) エン ド トキシン含量が 0 . 0 3 E U (エン ドトキシン単位） Z 1 0 m g以 下、
( B ) 硫黄含量が電量滴定において 0 . 0 1 %以下、 (C) 鉄含量が 2 0 p pm以下、
(D) タンパク質含量が 0. 1 %以下、
( E ) 重量平均分子量が 5 0 0， 0 00以上。
なお、 上記 （A) 〜 （E) の物性の測定は、 ヒアルロン酸類について上記物性 を測定する際に当業者によって通常用いられている方法によるものである。
さらに、 上記性質を有する本発明の膀胱障害治療剤に用いられるヒアルロン酸 及び/又はその薬学的に許容される塩のより具体的な例として、 例えば、 上記
(A) 〜 （D) の性質を有し、 さらに重量平均分子量が、 50 0, 00 0〜4， 000, 00 0程度、 好ましくは 500 , 000〜2， 2 00, 0 0 0程度、 よ り好ましくは 600, 00 0〜 1, 200, 00 0程度、 最も好ましくは 8 0 0， 00 0〜 1, 20 0， 00 0程度であるヒアルロン酸及び Z又はその薬学的に許 容される塩を挙げることができる。 また、 溶液の濃度又は粘度を適切に選択すれ ば 1, 5 00, 0 00〜 2, 2 00, 000程度、 又は 1 , 9 00， 0 00〜 3, 90 0, 00 0程度のヒアルロン酸及び Z又はその薬学的に許容される塩も使用 可能である。
また、 本発明の膀胱障害治療剤に用いられるヒアルロン酸及びノ又はその薬学 的に許容される塩として、 上記 （A) 〜 （E) の性質を有し、 さらに極限粘度が 1 1. 0〜4 5 (d 1 Zg) であるヒアルロン酸及び/又はその薬学的に許容さ れる塩を挙げることもできる。
本発明の膀胱障害治療剤において、 エンドトキシン含量、 硫酸化グリコサミノ グリカン含量、 鉄含量、 タンパク質含量、 重量平均分子量、 さらに極限粘度等が 上記範囲を外れたヒアルロン酸及びノ又はその薬学的に許容される塩を用いると- 炎症の増悪、 出血の増悪やアレルギー反応等を引き起こしたり、 あるいは所期の 効果が認められないことがある。
本発明の膀胱障害治療剤に用いられるヒアルロン酸及びノ又はその薬学的に許 容される塩としては、 通常ヒアルロン酸ナトリウム、 ヒアルロン酸カリウム、 ヒ アル口ン酸カルシウム等の水溶性の薬学的に許容される金属塩が使用される。 こ のうち、 医薬品、 医療用具等の医療目的には主に使用されるヒアルロン酸ナトリ ゥムが好ましい。 ヒアルロン酸及び/又はその薬学的に許容される塩の由来、 製 造法は限定されず、 鶏冠、 動物の臍帯、 皮膚、 硝子体等から加熱処理、 有機溶媒 処理、 細断、 プロテア一ゼ処理等を適宜に組み合わせて抽出し、 硫酸アンモニゥ ムによる塩析、 エタノール等の有機溶媒による沈澱、 四級アンモニゥム塩による 分別沈澱、 除蛋白、 吸着剤 （セライ ト、 活性炭等） による不純物の吸着、 限外濾 過、 膜濾過等を適宜に組み合わせて精製することができる （特公昭 6 1— 8 0 8 3、 特公昭 6 1— 6 0 0 8 1、 特公昭 6 1— 2 1 2 4 1、 特公平 6— 8 3 2 3、 米国特許 4 , 1 4 1 , 9 7 3、 米国特許 5 , 4 4 9 , 1 0 4等参照） 。 また、 溶 血性連鎖球菌 （ストレプトコッカス属） 等の微生物を用いる発酵法によって製造 することもできる （米国特許 4 , 9 4 6， 7 8 0、 米国特許 4， 7 8 0 , 4 1 4 等参照） 。
さらに、 この様なヒアルロン酸及び/又はその薬学的に許容される塩には市販 されているものもあるので、 これら市販品のうち、 医薬品等の医療用の製剤のヒ アル口ン酸及び Z又はその塩の濃度等を目的の応じて調節したものを、 本発明の 膀胱障害治療剤に用いることも可能である。 この様なヒアルロン酸及び Z又はそ の薬学的に許容される塩の製剤のうち、 例えば、 上記 （A ) 〜 ( D ) に示す物性 を示すヒアルロン酸ナトリゥムとして、 生化学工業 （株） 製のアルッ （重量平均 分子量： 6 0万〜 1 2 0万） 、 オペガン （重量平均分子量： 6 0万〜 1 2 0万） 、 オペガンハイ （重量平均分子量： 1 9 0万〜 3 9 0万） や、 参天製薬 （株） 製の ヒアレイン （重量平均分子量： 6 0万〜 1 2 0万） 、 （株） 資生堂製のオペリ一 ド （重量平均分子量： 1 5 3万〜 2 1 3万） 、 カビ フアルマシア （株） 製のヒ —ロン （重量平均分子量： 1 9 0万〜 3 9 0万） 等を好ましい例として挙げるこ とができる。
( 2 ) 本発明の膀胱障害治療剤
本発明の膀胱障害治療剤は、 上記ヒアルロン酸及びダ又はその薬学的に許容さ れる塩を膀胱粘膜上皮伸展及び/又は膀胱粘膜修復有効量含有する溶液からなる 本発明の膀胱障害治療剤を構成する溶液が含有するヒアル口ン酸及び Z又はその 薬学的に許容される塩の膀胱粘膜上皮伸展及び Z又は膀胱粘膜修復有効量とは、 前記溶液が膀胱障害治療剤として、 膀胱粘膜上皮に作用して膀胱粘膜上皮を伸展 させる及び Z又は膀胱粘膜に作用して膀胱粘膜を修復 ·再生させる、 に十分な量 を示す。 具体的には、 溶液が含有するヒアルロン酸及び Z又はその薬学的に許容 される塩にもよるが、 前記溶液におけるヒアルロン酸及び/又はその薬学的に許 容される塩の含有濃度が 0 . 1〜 0 . 8重量％程度、 より好ましくは 0 . 2〜 0 . 6重量％程度、 さらに好ましくは 0 . 3〜 0 . 4 5重量％程度、 最も好ましくは 約 0 . 4重量％となるような量を挙げることができる。
本発明の膀胱障害治療剤において、 前記溶液のヒアルロン酸及び Z又はその薬 学的に許容される塩の含有量が、 0 . 2重量％未満では、 膀胱粘膜上皮伸展作用 が十分でない等の理由から本発明の膀胱障害治療剤として有効に使用できないこ とがあり、 また 0 . 6重量％を越えると高い粘性のために排尿困難となることが ある。
上記有効量の投与によって、 膀胱障害によって引き起こされた膀胱粘膜上皮の 損傷又は剥離部分において、 粘膜上皮が伸展し、 粘膜が修復 ·再生される。
なお、 非細菌性難治性膀胱障害においては、 通常、 粘膜上皮の剥離により、 神 経が露出し、 膀胱充満時に疼痛を伴ったり、 膀胱が線維化することにより、 膀胱 容積が低下し、 頻尿に悩まされるが、 本発明の膀胱障害治療剤の上記のような作 用によって、 間接的に疼痛を軽減し、 膀胱の線維化の進行を防止することができ る
また、 本発明の膀胱障害治療剤を構成する上記ヒアルロン酸及び Z又はその薬 学的に許容される塩を含有する溶液においては、 p Hが約 6〜 8であることが好 ましく、 体液に対する浸透圧比は概ね 0 . 9〜 1 . 2 (体液または生理食塩液に 対してほぼ等張） であることが好ましい。
本発明の膀胱障害治療剤において、 前記溶液の p Hを上記 6〜 8程度とするこ とで過敏となっている膀胱粘膜に対する刺激性を軽減することができる。 前記溶 液の p Hが 6より小さいと膀胱粘膜に対する刺激性が強くなることがあり、 また Hが 8を越えると膀胱粘膜に対する刺激性が強くなると共に膀胱粘膜の修復 · 再生が遅れたり、 膀胱の線維化の防止効果がなくなることがある。
また、 本発明の膀胱障害治療剤において、 前記溶液の体液に対する浸透圧比を 上記 9〜 1 . 2程度とすることで、 上記 p Hの場合と同様に膀胱粘膜に対す る刺激性を軽減することができる。 前記溶液の浸透圧比が 0 . 9より小さいと、 粘度の増加により排尿困難となることがあり、 また浸透圧比が 1 . 2を越えると 膀胱粘膜に対する刺激性が強くなることがある。
さらに、 上記本発明のヒアルロン酸及びノ又はその薬学的に許容される塩を含 有する水性溶液からなる膀胱障害治療剤においては、 前記ヒアルロン酸及び Z又 はその薬学的に許容される塩を含有する水性溶液として、 2 0 °Cにおいてずり速 度 9 . 6 s e c - 1で測定したときのみかけ粘度が 1 0〜 1 5 0 0 m P a . sであ る水性溶液が好ましく用いられる。
上記本発明の水性溶液からなる膀胱障害治療剤において、 前記水性溶液のみか け粘度を 1 0〜 1 5 0 O m P a · s程度とすることで、 排尿困難を引き起こさず に、 かつ適切な膀胱粘膜修復効果を得ることが可能となる。 前記水性溶液のみか け粘度が 1 O m P a · sより小さいと、 膀胱粘膜修復効果が十分でないことがあ り、 またみかけ粘度が 1 5 0 O m P a · sを越えると排尿困難をきたすことがあ る。
本発明者らは、 実験動物の膀胱内に 5 %酢酸を投与し、 膀胱粘膜上皮を剥離す ることによって、 膀胱の線維化が不可逆的に進行し、 その結果、 膀胱容積が低下 すること、 この様に処置した動物モデルの症状が、 ヒ トの非感染性難治性膀胱障 害の症状と極めて類似することを見出した。 そして、 この動物モデルを使用し、 薬剤投与時における（A)膀胱の膨張の度合い、 （B)膀胱固有筋層の線維化の度合い、 (C)膀胱粘膜上皮の伸展 ·膀胱粘膜の修復の度合いを反映する各パラメータ、 すな わち（a)膀胱容積、 （b)膀胱乾燥重量又は膀胱內ヒ ドロキシプロリ ン量 （コラーゲ ン量） 、 （c)膀胱内トリパンブルー付着量又は膀胱粘膜の剥離部位へのトリパンブ ルー付着面積の各項目を評価することで、 非感染性難治性膀胱障害の治療に有効 な薬物を選択できることを見出した。
ここで、 本明細書において用いる 「5 %酢酸」 の用語は、 5 %濃度で酢酸を含 有する溶液を意味するものである。
本発明の膀胱障害治療剤を構成する上記ヒアルロン酸及び Z又はその薬学的に 許容される塩を含有する溶液として、 さらに具体的には、 5 %酢酸を膀胱内に注 入し 1 0分間保持することで膀胱粘膜を剥離させたゥサギの膀胱内に該溶液を膀 胱粘膜剥離後 7日間毎日注入する処理を行った後の膀胱容積が、 5 %酢酸で同様 に膀胱粘膜を剥離させたゥサギの膀胱内に該溶液の代わりにリ ン酸緩衝生理食塩 液を同様に注入する処理を行った後の膀胱容積の 2〜 3倍となるように調製され た溶液や、 上記と同様にして 5 %酢酸で膀胱粘膜を剥離させたゥサギの膀胱内に 上記と同様に該溶液を注入する処理を行った後の膀胱乾燥重量が 5 %酢酸で同様 に膀胱粘膜を剥離させたゥサギの膀胱内に該溶液の代わりにリ ン酸緩衝生理食塩 液を同様に注入する処理を行った後の膀胱乾燥重量の 0 . 6〜 0 . 9倍となるよ うに調製された溶液等を挙げることができる。
また、 本発明の膀胱障害治療剤を構成する上記ヒアルロン酸及び Z又はその薬 学的に許容される塩を含有する溶液として、 具体的には、 5 %酢酸を膀胱内に注 入し 1 0分間保持することで膀胱粘膜を剥離させたゥサギの膀胱内に該溶液を膀 胱粘膜剥離後 7日間毎日注入する処理を行った後さらに 0 . 5 %トリパンブルー 水溶液を注入してトリパンブル一を付着させたときの膀胱内へのトリパンブル一 付着量が、 5 %酢酸で同様に膀胱粘膜を剥離させたゥサギの膀胱内に該溶液の代 わりにリ ン酸緩衝生理食塩液を同様に注入する処理を行った後同様にトリパンブ ルーを付着させたときの膀胱内へのトリパンブルー付着量の、 0 . 5〜 0 . 7倍 となるように調製された溶液、 あるいは、 上記と同様にして 5 %酢酸で膀胱粘膜 を剥離させたゥサギの膀胱内に上記と同様に該溶液を注入する処理を行った後さ らに上記同様にしてトリパンブル一を付着させたときの膀胱粘膜剥離部位へのト リパンブル一付着面積が、 5 %酢酸で同様に膀胱粘膜を剥離させたゥサギの膀胱 内に該溶液の代わりにリ ン酸緩衝生理食塩液を同様に注入する処理を行った後同 様にトリパンブル一を付着させたときの膀胱粘膜剥離部位へのトリパンブル一付 着面積の、 0 . 2 5〜 0 . 4 5倍となるように調製された溶液等を挙げることも できる。
さらに、 上記と同様にして 5 %酢酸で膀胱粘膜を剥離させたゥサギの膀胱内に 上記と同様に該溶液を注入する処理を行った後の膀胱内ヒ ドロキシプロリ ン量が- 5 %酢酸で同様に膀胱粘膜を剥離させたゥサギの膀胱内に該溶液の代わりにリ ン 酸緩衝生理食塩液を同様に注入する処理を行った後の膀胱内ヒ ドロキシプロリ ン 量の、 0 . 8〜 0 . 9倍となるように調製された溶液等を挙げることもできる。 ここで、 本発明の膀胱障害治療剤を構成するヒアル口ン酸及びノ又はその薬学 的に許容される塩を含有する溶液として上記に具体的に挙げたような溶液は、 5 %酢酸を膀胱内に注入し 1 0分間保持することで膀胱粘膜を剥離させたゥサギを モデルとしてこの膀胱に対する溶液の膀胱粘膜上皮伸展作用及び Z又は膀胱粘膜 修復作用、 より具体的には、 前記 5 %酢酸で膀胱粘膜を剥離させたゥサギの膀胱 にリ ン酸緩衝生理食塩液を作用させたときとの比較において、 膀胱容積を増大さ せる作用、 膀胱乾燥重量を減少させる作用、 膀胱内付着トリパンブル一量又は膀 胱粘膜の剥離部位への卜リパンブルー付着面積を減少させる作用、 膀胱内ヒ ドロ キシプロリン量を減少させる作用等の各作用を指標として選択された溶液である c この様な指標について以下に説明する。
まず、 膀胱粘膜が剥離されたゥサギモデル （以下、 ゥサギの膀胱粘膜障害モデ ルという） について説明する。 酢酸は粘膜刺激性を有することが知られており、 これまでに酢酸を用いて作製された胃粘膜障害モデルが広く薬剤の試験等に使用 されている。 そこで、 本発明においては、 上記の様にして酢酸を膀胱粘膜に作用 させて膀胱粘膜を剥離させたゥサギの膀胱粘膜障害モデルを独自に作製し、 この モデルにおける膀胱粘膜上皮伸展 ·膀胱粘膜修復作用を示すフアクターを、 上記 の様にして本発明の膀胱障害治療剤を構成する溶液選択のための指標とした。 本発明に用いるゥサギの膀胱粘膜障害モデルは、 例えば次の様にして作製され る。 通常の方法で全身麻酔したゥサギの膀胱内に膀胱カテーテルを挿入後、 適当 な大きさの注射筒を用いて膀胱内の残尿を排出させる。 残尿排出後、 十分量の生 理的食塩液にて膀胱内を洗浄し、 次いで、 酢酸を 5 %濃度になるように蒸留水で 希釈した溶液を膀胱内に十分に満たされる量注入し、 1 0分間留置して膀胱粘膜 を剥離させる。 その後、 酢酸を排出させ、 十分量の生理的食塩液による膀胱内洗 浄を行う。
本発明において使用されるゥサギの膀胱粘膜障害モデルは 5 %酢酸で 1 0分間 処理されたものを基準にしているが、 同様なモデルを各種薬剤の評価試験に用い ることも可能であり、 その場合には、 膀胱粘膜を剥離させるために用いる酢酸溶 液の酢酸濃度は 5 %に限定されるものではなく、 また前記酢酸溶液の膀胱内留置 時間は 1 0分間に限定されるものではなく、 これら条件を状況に応じて適宜変更 することが可能である。 モデル作製に用いるゥサギの種類や週齢、 性別も特に限 定されるものではないが、 好ましい例として、 J W系雄性ゥサギ、 1 2 ~ 1 4週 齢等が挙げられる。 また、 ゥサギ以外の動物に適用することも可能である。
次に上記ゥサギの膀胱粘膜障害モデルの膀胱に薬剤溶液を作用させたときの膀 胱粘膜上皮伸展 ·膀胱粘膜修復作用を評価するファクターについて説明する。 上記の様にして酢酸により処理された膀胱は適切な治療が施されない場合には、 膀胱粘膜上皮が脱落した後、 強い炎症が惹起されて、 数日後には膀胱の固有筋層 が線維化し膨張が著しく困難になる。 これに対して有効な治療処置がなされれば、 膀胱粘膜上皮の伸展が促され、 膀胱粘膜が修復されることにより、 膀胱固有筋層 の線維化が抑制され膀胱の膨張機能は改善されることになる。
そこで、 膀胱容積を測定することにより上記膀胱の膨張機能の度合いを評価す ることができる。 つまり、 上記ゥサギの膀胱粘膜障害モデルの膀胱に各種薬剤の 溶液を作用させた後の膀胱容積が大きい溶液程、 膀胱の膨張機能をよく回復させ ているといえる。 また、 膀胱乾燥重量および膀胱内ヒ ドロキシプロリン （コラー ゲン） 量を測定することにより膀胱固有筋層の線維化の度合いを評価することが 可能となる。 つまり、 上記ゥサギの膀胱粘膜障害モデルの膀胱に各種薬剤の溶液 を作用させた後の膀胱乾燥重量が小さい溶液程、 また膀胱内ヒ ドロキシプロリ ン 量が少ない溶液程、 膀胱固有筋層の線維化を抑制する能力が大きいといえる。 さらに、 酸性生体染色剤である トリパンブル一は障害された粘膜をよく染色で きることが知られているので、 膀胱内へのトリパンブル一付着量又は膀胱粘膜の 剥離部位へのトリパンブルー付着面積を測定することにより膀胱粘膜上皮の伸展 あるいは膀胱粘膜の修復の度合いを評価することが可能となる。 つまり、 上記ゥ サギの膀胱粘膜障害モデルの膀胱に各種薬剤の溶液を作用させた後の膀胱内への トリパンブル一付着量又は膀胱粘膜剥離部位へのトリパンブルー付着面積が少な い溶液程、 膀胱粘膜上皮の伸展又は膀胱粘膜修復をよく行うことができることに なる。
本発明においては、 前記ゥサギの膀胱粘膜障害モデルの膀胱にヒアルロン酸及 び Z又はその薬学的に許容される塩含有溶液を 7日間毎日灌注したときと、 リ ン 酸緩衝生理食塩液 （P B S ) を同様に 7日間毎日灌注したときとの比較において、 膀胱容積では P B S処理時の 2〜 3倍、 膀胱乾燥重量では P B S処理時の 0. 6 〜 0. 9倍、 膀胱内トリパンブル一付着量では P B S処理時の 0. 5〜 0. 7倍、 膀胱粘膜剥離部位へのトリパンブル一付着面積では P B S処理時の 0. 2 5〜0. 4 5倍、 膀胱內ヒ ドロキシプロリン量では P B S処理時の 0. 8〜 0. 9倍の範 囲にある、 ヒアルロン酸及び/又はその薬学的に許容される塩含有溶液を、 本発 明の膀胱障害治療剤の好ましいものとして選択している。
上記膀胱粘膜障害モデルの膀胱へのヒアルロン酸及び Z又はその薬学的に許容 される塩含有溶液の投与において、 膀胱容積が P B S処理時の 2〜 3倍、 膀胱乾 燥重量が P B S処理時の 0. 6〜0. 9倍、 膀胱内トリパンブル一付着量が P B S処理時の 0. 5〜0. 7倍、 膀胱粘膜剥離部位へのトリパンブル一付着面積が ? 83処理時の0. 2 5〜 0. 4 5倍、 あるいは膀胱內ヒ ドロキシプロリ ン量が P B S処理時の 0. 8〜0. 9倍の範囲に入らないような、 ヒアルロン酸及び Z 又はその薬学的に許容される塩を含有する溶液では、 本発明の膀胱障害治療剤と して有効に使用できないことがあり、 上記範囲となるような、 ヒアルロン酸及び Z又はその薬学的に許容される塩を含有する溶液が、 本発明の膀胱障害治療剤と して好ましい。
本発明の膀胱障害治療剤は、 上記ヒアルロン酸及び/又はその薬学的に許容さ れる塩を上記含有量の範囲で、 適当な溶媒に溶解させて製造することが可能であ る。 前記溶媒としては、 水、 緩衝液、 生理食塩水、 DMS 0等の水溶性有機溶媒 を含む水等を挙げることが可能であるが、 本発明においては、 前記溶媒として水 又は生理食塩水を用いることが好ましい。 また、 本発明の膀胱障害治療剤は、 上 記ヒアルロン酸及び/又はその薬学的に許容される塩の粉末等のかたちで提供さ れて、 必要な時に、 濃度、 みかけ粘度、 pH、 浸透圧比等が上述した本発明の膀 胱障害治療剤を構成する溶液のそれと同様になるように、 溶液のかたちに用事調 製されるものであってもよい。
また、 本発明の膀胱障害治療剤においては、 上記ヒアルロン酸及び 又はその 薬学的に許容される塩と溶媒以外に必要に応じて配合される任意成分を含有する ことができる。 この様な任意成分としては、 薬学的に許容される公知の抗炎症剤、 鎮痛剤、 ビタミ ン剤、 抗菌剤、 成長因子、 接着因子、 緩衝剤、 安定化剤、 無機塩 類等を挙げることが可能である。 なお、 本発明の膀胱障害治療剤においては、 ヒ アルロン酸及び/又はその塩の溶液中の濃度が、 比較的低い （例えば、 0 . 1〜 0 . 8重量％、 好ましくは、 0 . 2〜 0 . 6重量％) ので、 加熱滅菌時または長 期保存時に、 ヒアルロン酸が低分子化するおそれがある。 この様な場合、 ヒアル 口ン酸の低分子化を防止するための公知の手段を講じることが必要である。 この 様な手段としては、 例えば、 使用するヒアルロン酸及び Z又はその塩の金属ィォ ン （鉄イオン等） 含量を 2 0 p p m、 好ましくは 1 0 p p m以下に低下させたり (米国特許第 5， 5 5 9 , 1 0 4号参照） 、 ヒアルロン酸の低分子化を防止可能 なクェン酸、 クェン酸塩、 グリセリ ン等の公知の安定化剤を含有させる方法 （特 開平 8— 1 0 4 6 4 2、 特開平 9 一 1 7 6 0 2 0参照） が挙げられる。
本発明の膀胱障害治療剤は、 直接膀胱に投与する薬剤であって、 通常膀胱に直 接投与される薬剤と同様の投与方法、 例えば、 膀胱内カテーテルによる投与方法 等を採ることができる。
本発明の膀胱障害治療剤の投与量は、 例えば、 エンドトキシン含量が 0 . 0 3 E U (ェンドトキシン単位） / 1 O m g以下、 硫黄含量が電量滴定において 0 . 0 1 %以下、 鉄含量が 2 0 p p m以下、 タンパク質含量が 0 . 1 %以下、 重量平 均分子量が 6 0万〜 1 2 0万のヒアルロン酸ナトリウムを 0 . 2〜 0 . 6重量％ 含有するリ ン酸緩衝生理食塩水を膀胱障害治療剤として用いる場合には、 1回 5 0 m 1、 週に 1回〜 7回の割合で投与するような投与量を挙げることができる。 本発明の膀胱障害治療剤は、 膀胱粘膜上皮伸展及びノ又は膀胱粘膜修復により 症状が改善されうる膀胱障害である限り、 膀胱障害一般に、 広く適用されうるも のである。 子宮癌、 直腸癌、 膀胱癌、 前立腺癌等の放射線治療に伴う放射線性膀 胱炎、 悪性腫瘍治療のための化学療法剤 （シクロホスフア ミ ド、 マイ トマイシン、 シスブラチン等の白金錯体、 メ ト トレキサ一ト、 塩酸ブレオマイシン、 硫酸ブレ ォマイシン等） 、 リウマチ治療のための刺激療法剤 （オーラノフィ ン等） などの 薬剤投与等により誘起される薬剤性膀胱炎等の出血性膀胱炎； 間質性膀胱炎 ；好 酸球性膀胱炎； あるいは神経性頻尿など非細菌性難治性膀胱障害の治療に特に有 効である。
本発明の膀胱障害治療剂は、 膀胱粘膜上皮伸展作用を有し、 膀胱炎により損傷 された膀胱粘膜を修復し、 その結果膀胱の線維化を抑制する作用に優れることか ら、 有効に膀胱障害を治療することが可能である。 また、 本発明の膀胱障害治療 剤は抗血栓性を有さないので、 出血し易くなる等の副作用もなく使用することが 可能である。
なお、 ヒアルロン酸の安全性 （毒性、 非炎症性） については、 既に数多くの実 験がなされており、 その安全性が確認されている。 図面の簡単な説明 図 1は、 5 %酢酸惹起ゥサギ膀胱炎モデルにおけるコントロールおよび各膀胱 障害治療剤投与群の膀胱容積を示す図である。
図 2は、 5 %酢酸惹起ゥサギ膀胱炎モデルにおけるコントロールの、 膀胱粘膜 へのトリパンブル一付着状態を示す代表的な膀胱の切開写真である。
図 3は、 5 %酢酸惹起ゥサギ膀胱炎モデルにおける膀胱障害治療剤 1投与群の、 膀胱粘膜へのトリパンブル一付着状態を示す代表的な膀胱の切開写真である。 図 4は、 5 %酢酸惹起ゥサギ膀胱炎モデルにおける膀胱障害治療剤 2投与群の、 膀胱粘膜へのトリパンブル一付着状態を示す代表的な膀胱の切開写真である。 図 5は、 5 %酢酸惹起ゥサギ膀胱炎モデルにおける膀胱障害治療剤 3投与群の、 膀胱粘膜への卜リパンブルー付着状態を示す代表的な膀胱の切開写真である。 図 6は、 5 %酢酸惹起ゥサギ膀胱炎モデルにおけるコントロ一ルおよび各膀胱 障害治療剤投与群の膀胱障害面積比 （トリパンブルー付着面積 Z膀胱全内面積） を示す図である。
図 7は、 5 %酢酸惹起ゥサギ膀胱炎モデルにおけるコントロールおよび各膀胱 障害治療剤投与群の膀胱乾燥重量を示す図である。
図 8は、 5 %酢酸惹起ゥサギ膀胱炎モデルにおけるコント口一ルおよび各膀胱 障害治療剤投与群の膀胱の障害部位への卜リパンブル一付着量示す図である。 図 9は、 5 %酢酸惹起ゥサギ膀胱炎モデルにおけるコントロールおよび各膀胱 障害治療剤投与群の膀胱中ヒ ドロキシプロリ ン （コラーゲン） 量を示す図である c 図 1 0は、 5 %酢酸惹起ゥサギ膀胱炎モデルにおけるコントロールの膀胱組織 の染色写真である。 （ a ) はへマトキシリ ン—ェォシン染色における 1 0倍写真 (b) はァザン染色における 1 0倍写真である。
図 1 1は、 5 %酢酸惹起ゥサギ膀胱炎モデルにおける膀胱障害治療剤 1投与群 の膀胱組織の染色写真である。 （a) はへマトキシリ ンーェォシン染色における 1 0倍写真 （b) はァザン染色における 1 0倍写真である。
図 1 2は、 5 %酢酸惹起ゥサギ膀胱炎モデルにおける膀胱障害治療剤 2投与群 の膀胱組織の染色写真である。 （a) はへマトキシリ ン—ェォシン染色における 1 0倍写真 （b) はァザン染色における 1 0倍写真である。
図 1 3は、 5 %酢酸惹起ゥサギ膀胱炎モデルにおける膀胱障害治療剤 3投与群 の膀胱組織の染色写真である。 （a) はへマトキシリ ンーェォシン染色における 1 0倍写真 （b) はァザン染色における 1 0倍写真である。 発明を実施するための最良の形態 以下に、 実施例を挙げて本発明を更に具体的に説明する 実施例 1〜 3 エン ドトキシン含量が 0. 0 06 E U (エン ドトキシン単位） ノ 1 0 m g、 電 量滴定における硫黄含量が 0. 005 %、 鉄含量が 4. 6 p pm、 タンパク質含 量が 0. 0 1 %、 重量平均分子量 89万のヒアルロン酸ナトリゥムを、 P B S
(リ ン酸緩衝生理食塩水） に、 実施例 1では 0. 1重量％、 実施例 2では 0. 2 重量％、 実施例 3では 0. 4重量％の濃度でそれぞれ含有するように、 膀胱障害 治療剤を作製した。 なお以下、 上記実施例 1〜3で得られた膀胱障害治療剤をそ れぞれ順に、 膀胱障害治療剤 1、 膀胱障害治療剤 2、 膀胱障害治療剤 3というこ ととする。 上記で得られた各膀胱障害治療剤および P B Sについて、 極限粘度お よび浸透圧比を測定した。 結果を表 1に示す。 表 1
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<酢酸惹起ゥサギ膀胱炎モデルを用いた本発明の膀胱障害治療剤の評価 >
上記実施例 1〜 3で得られた膀胱障害治療剤を用いて、 5 %の酢酸で惹起させ たゥサギ膀胱炎モデルに対する本発明の膀胱障害治療剤の膀胱粘膜上皮伸展作用 又は膀胱粘膜修復作用を検討し、 膀胱障害治療効果の評価とした。
1 ) ゥサギ膀胱炎モデルの作製
上記で得られた膀胱障害治療剤 1〜3およびコントロール （P B S) について 1群 1 1匹ずつ計 44匹のゥサギ膀胱炎モデルを以下の様にして作製した。
J W系雄性ゥサギ （C0NV. ) 、 1 2〜 14週齢、 体重約 3 k gのゥサギ 44匹に ついて、 1個体あたりケタミ ン 5mgZk gおよびキシラジン 2mgZk gの静 脈注射を行い全身麻酔した。 次いで、 8 F rサイズのバルーン付き膀胱力テ一テ ルを膀胱内に挿入し、 20 m 1注射筒を用いて膀胱內の残尿を排出させた。 尿排 出後、 2 Om 1の生理的食塩液にて 2回、 膀胱内を洗浄した。 次に、 酢酸 （和光 純薬） を 5 %濃度になるように蒸留水で希釈した溶液 1 0 m 1を膀胱内に注入し、 1 0分間留置して膀胱炎を惹起した。 惹起後、 酢酸を排出させ、 2 0m lの生理 的食塩液による膀胱内洗浄を 3回行った。
2) 膀胱障害治療剤の投与試験
上記の様にして膀胱炎を惹起させた各群のゥサギの膀胱に、 上記実施例で得ら れた膀胱障害治療剤 1〜 3およびコントロールの P B Sをそれぞれ、 膀胱炎惹起 直後に 4 O m 1、 惹起 1 日後に 2 O m 1、 惹起 2日後以降 6日後までは 1 O m 1 ずつ、 カテーテルを用いて 1 日 1回注入し、 注入後 1 0分間留置させた。 なお、
1 0分留置後にカテーテルを抜き取ったあとは、 膀胱内に残った試験液または p
B Sは自然排出させた。
3 ) 膀胱粘膜上皮伸展作用又は膀胱粘膜修復作用 （膀胱炎治療効果） の評価 上記の様にして実施例で得られた膀胱障害治療剤 1〜 3または P B Sのみを投 与されたゥサギについて、 膀胱炎惹起 7日後に、 以下の評価項目により膀胱粘膜 上皮伸展作用又は膀胱粘膜修復作用 （膀胱炎治療効果） に関する評価を行った。 なお、 以下①〜⑤の評価項目について各群 1 0匹のゥサギを用い、 ⑥の評価試験 に残りの 1匹のゥサギを用いた。
①膀胱内へのトリパンブル一注入可能量 （膀胱容積） の測定
膀胱炎惹起 7日後に、 ゥサギの膀胱内の残尿を排出後、 予め作製したトリパン ブル一 （和光純薬） の 0 . 5 %濃度水溶液の 2 0 m 1を徐々にゥサギの膀胱内に 注入していき、 陰茎先端からあふれた時点で残ったトリパンブル一水溶液量から 注入限界量を算出しこれを膀胱容積として記録した。
上記測定結果から各投与群における膀胱容積の 1 0匹の平均値及び標準偏差を それぞれ求め、 これをグラフ化した （図 1 ) 。 ここで、 膀胱容積の平均値はコン トロール群が 8 m 1、 膀胱障害治療剤 1投与群では 1 7 . 8 m 1、 膀胱障害治療 剤 2投与群で 1 6 . 3 m 1 、 膀胱障害治療剤 3投与群では 1 7 m 1であった。 な お、 図 1中の 「* *」 は、 測定データを標本再抽出法 （Multitest Procedure) に より線形性を確認したのち、 D u n n e t t型多重比較検定により平均値の差の 検定を行った結果、 コントロールに対して P 0 . 0 1で有意であることを示す 記号である。
上記平均値および図 1より、 5 %酢酸惹起ゥサギ膀胱炎モデルに上記実施例で 得られた膀胱障害治療剤 1〜 3を投与した後のゥサギの膀胱容積は何れも、 P B S投与後のゥサギの膀胱容積に比べて、 有意に大きいことがわかる。 この膀胱容 積の差は、 コントロール群では、 酢酸による膀胱粘膜上皮の脱落後、 強い炎症が 惹起されて 7日後において膀胱の固有筋層が線維化し膨張が著しく困難になって いるのに対し、 膀胱障害治療剤 1〜 3投与群では、 前記治療剤の投与により膀胱 固有筋層の線維化が抑制され膀胱の膨張機能が改善されたために起こると考えら れる。
②膀胱の障害部位へのトリパンブル—付着状態を示す写真の撮影および膀胱障害 面積比の測定
上記の様にして 0 . 5 %トリパンブル一水溶液を膀胱内に注入限界量まで注入 した後そのまま 5分間留置させてから、 ゥサギを放血堵畜し膀胱の摘出を行った c 摘出した膀胱は、 膀胱外血管に沿って切開し、 生理的食塩液中に浮かすかたちで 洗浄した。 洗浄後の膀胱を、 膀胱内壁を上にしてピンで止めながら広げて、 個体 別に同じ倍率でその全体像を写真撮影した （図 2〜図 5 ) 。 ここで、 図 2はコン トロールの、 図 3は膀胱障害治療剤 1投与群の、 図 4は膀胱障害治療剤 2投与群 の、 図 5は膀胱障害治療剤 3投与群の、 それぞれ膀胱粘膜へのトリパンブル一付 着状態を示す、 1 0匹の膀胱の切開写真のうちの、 代表的な写真である。'
酸性生体染色剤である トリパンブル一は障害された粘膜をよく染色できること が知られているが、 これらの写真から、 膀胱粘膜へのトリパンブルー付着部位、 すなわち膀胱粘膜の障害部位の大きさは、 コントロールについてトリパンブル一 付着部位が殆どの膀胱内壁に及んでいるという様に最も大きく、 次いでその約半 分の面積のトリパンブルー付着部位が観察された膀胱障害治療剤 1投与群、 膀胱 障害治療剤 2投与群、 膀胱障害治療剤 3投与群の順に小さくなっていることがわ 力、る。
また、 上記膀胱粘膜への トリパンブル一付着状態を示す写真から、 膀胱の全內 面積と、 傷害されて青く染まったトリパンブルー付着面積を測定し、 以下の計算 式により膀胱障害面積比 （％) を求めた。 膀胱障害面積比（¾) = (トリパンブル一付着面積/膀胱の全内面積） X 100 上記計算結果から各投与群における膀胱障害面積比の 1 0匹の平均値及び標準 偏差をそれぞれ求め、 これをグラフ化した （図 6 ) 。 ここで、 膀胱障害面積比の 平均値はコン トロール群が 74. 7 7 %、 膀胱障害治療剤 1投与群では 3 3. 2 8 %、 膀胱障害治療剤 2投与群で 2 8. 1 5 %、 膀胱障害治療剤 3投与群では 2 1. 84 %であった。 なお、 図 6中の 「* *」 は、 測定データを標本再抽出法 (Multitest Procedure) により線形性を確認したのち、 D u n n e t t型多重比 較検定により平均値の差の検定を行った結果、 コントロールに対して P 0. 0 1で有意であることを示す記号である。
上記平均値および図 6より、 5 %酢酸惹起ゥサギ膀胱炎モデルに上記実施例で 得られた膀胱障害治療剤 1〜 3を投与した後のゥサギの膀胱障害面積比は何れも、 P B S投与後のゥサギの膀胱障害面積比に比べて、 有意に小さいことがわかる。 また、 この膀胱障害面積比と上記投与された膀胱障害治療剤が含有するヒアル口 ン酸ナトリウム量とは、 標本再抽出法により有意なリニア （linear) がみられ、 用量依存性が認められた。 この結果は、 5 %酢酸惹起ゥサギ膀胱炎モデルに、 ヒ アルロン酸ナトリゥムを上記各含有量で含有する膀胱障害治療剤を投与すれば、 膀胱粘膜上皮の伸展が促され酢酸により障害された膀胱粘膜が修復されることを 示しているといえる。
③膀胱乾燥重量の測定
上記②における写真撮影後、 膀胱を個体別に凍結乾燥し裁断して重量を測定し た。
上記測定結果から各投与群における膀胱乾燥重量の 1 0匹の平均値および標準 偏差をそれぞれ求め、 これをグラフ化した （図 7) 。 なお、 図 7中の 「*」 は、 上記図 1のおける 「* *」 と同様に測定データを標本再抽出法 （Multitest Proc edure) により線形性を確認したのち、 D u n n e t t型多重比較検定により平均 値の差の検定を行った結果、 コントロールに対して 0. 0 1≤ P≤ 0. 0 5で有 意であることを示す記号である。
上記図 7より、 5 %酢酸惹起ゥサギ膀胱炎モデルに上記実施例で得られた膀胱 障害治療剤 1〜3を投与した後のゥサギの膀胱乾燥重量は何れも、 P B S投与後 のゥサギの膀胱乾燥重量に比べて小さいことがわかる。
④膀胱の障害部位へのトリパンブル一付着量測定
上記重量測定後の膀胱を 0 . 2 5 %ァクチナ一ゼで消化し、 消化液の一部を濾 過して上清を得、 この上清の吸光度を 5 8 2 n mで測定し、 得られた値から膀胱 の障害部位へのトリパンブル一付着量を算出した。
上記測定結果から各投与群における 卜リパンブル一付着量の 1 0匹の平均値及 び標準偏差をそれぞれ求め、 これをグラフ化した （図 8 ) 。 ここで、 ト リノ、。ンブ ルー付着量の平均値はコント口一ル群が 5 0 7 g Z膀胱、 膀胱障害治療剤 1投 与群では 3 4 1 ^ g Z膀胱、 膀胱障害治療剤 2投与群で 2 6 4 g Z膀胱、 膀胱 障害治療剤 3投与群では 2 6 5 gノ膀胱であつた。 なお、 図 8中の 「 *」 およ び 「* *」 は、 測定データを標本再抽出法 （Mul titest Procedure) により線形性 を確認したのち、 D u n n e t t型多重比較検定により平均値の差の検定を行つ た結果、 コントロールに対してそれぞれ 0 . 0 1≤P≤ 0 . 0 5および P≤ 0 . 0 1で有意であることを示す記号である。
上記平均値および図 8より、 5 %酢酸惹起ゥサギ膀胱炎モデルに上記実施例で 得られた膀胱障害治療剤 1〜 3を投与した後のゥサギのトリパンブルー付着量は 何れも、 P B S投与後のゥサギのトリパンブル一付着量に比べて、 有意に少ない ことがわかる。 また、 このトリパンブル一付着量と上記投与された膀胱障害治療 剤が含有するヒアル口ン酸ナトリゥム量とは、 標本再抽出法により有意なリニァ ( l inear) がみられ、 用量依存性が認められた。 この結果は、 5 %酢酸惹起ゥサ ギ膀胱炎モデルに、 ヒアルロン酸ナトリゥムを上記各含有量で含有する膀胱障害 治療剤を投与すれば、 膀胱粘膜上皮の伸展が促され酢酸により障害された膀胱粘 膜が修復されることを示しているといえる。
⑤膀胱中ヒ ドロキシプロリ ン （コラーゲン） 量の定量
上記で得られたァクチナ一ゼ消化液の一部を塩酸で加水分解した。 加水分解に より生成したヒ ドロキシプロリ ン量 （コラーゲン量） を常法により定量し、 膀胱 中のヒ ドロキシプロリ ン量 （コラーゲン量） を算出した。 上記測定結果から各投与群におけるヒ ドロキシプロリ ン量の 1 0匹の平均値及 び標準偏差をそれぞれ求め、 これをグラフ化した （図 9 ) 。 なお、 図 9中の 「*」 は、 測定データを標本再抽出法 （Multitest Procedure) により線形性を確認した のち、 D u n n e t t型多重比較検定により平均値の差の検定を行った結果、 コ ントロールに対して 0 . 0 1 P≤ 0 . 0 5で有意であることを示す記号である。 上記図 9より、 5 %酢酸惹起ゥサギ膀胱炎モデルに上記実施例で得られた膀胱 障害治療剤 1〜 3を投与した後のゥサギの膀胱内ヒ ドロキシプロリ ン量は何れも、 P B S投与後のゥサギの膀胱內ヒ ドロキシプロリ ン量に比べて少ないことがわか る。 この結果は、 5 %酢酸惹起ゥサギ膀胱炎モデルに、 ヒアルロン酸ナトリウム を上記各含有量で含有する膀胱障害治療剤を投与すれば、 膀胱の線維化を抑制で きることを示すものであるといえる。
⑥病理組織学的検討
膀胱炎惹起 7日後に、 ゥサギの膀胱内の残尿を排出後、 予め作製した 1 0 %リ ン酸緩衝ホルマリ ン液 1 0 m 1を膀胱内に注入して、 そのままゥサギを放血堵畜 して膀胱を摘出した。 摘出した膀胱は、 膨らませたまま 1 0 %リ ン酸緩衝ホルマ リ ン液中に入れて固定し、 へマトキシリンーェォシン染色法およびァザン染色法 によつて病理組織学的検討を実施した。
膀胱組織をへマトキシリ ン—ェォシン染色およびァザン染色したときの顕微鏡 写真 （ 1 0倍） を図 1 0〜図 1 3に示す。 図 1 0はコントロールの、 図 1 1は膀 胱障害治療剤 1投与群の、 図 1 2は膀胱障害治療剤 2投与群の、 図 1 3は膀胱障 害治療剤 3投与群の膀胱組織の染色写真である。 なお、 各図において、 （ a ) は へマトキシリ ン—ェォシン染色における 1 0倍写真 （b ) はァザン染色における 1 0倍写真である。
図 1 0 ( a ) から、 コントロールの膀胱においては、 膀胱内全周にわたり、 膀 胱粘膜上皮は認められず、 腔内に突出する壊死塊状物がみられること、 および、 壊死塊状物表層には無構造物、 内層には強い細胞浸潤がみられることがわかる。 また、 図 1 0 ( b ) から、 コントロールの膀胱においては、 ァザン染色によって 青く染色される膠原線維の形成が膀胱全周にわたって認められ、 膀胱硬化とも言 える像を呈していることがわかる。 .
図 1 1 ( a ) から、 膀胱障害治療剤 1投与群の膀胱においては、 コントロール と同様に、 壊死塊状物がみられるが、 コントロールにはみられなかった粘膜上皮 を形成していること、 および、 粘膜上皮細胞は配列が不整であるが、 壊死像はみ られないことがわかる。 また、 図 1 1 ( b ) から、 膀胱障害治療剤 1投与群の膀 胱においては、 肉芽組織形成の明瞭な部位ではコントロールと同様、 膀胱硬化と も言える像を呈していることがわかる。
図 1 2 ( a ) から、 膀胱障害治療剤 2投与群の膀胱においては、 膀胱内に突出 する壊死塊状物の形成は膀胱障害治療剤 1投与群よりも広い範囲にみられること がわかる。 し力、し、 図 1 2 ( b ) から、 膀胱障害治療剤 2投与群の膀胱において は、 膀胱硬化像が観察されるものの、 粘膜上皮の状態は正常のものに近いことが わかる。
図 1 3 ( a ) から、 膀胱障害治療剤 3投与群の膀胱においては、 膀胱内に突出 する壊死塊状物は全く認められないことがわかる。 また、 図 1 3 ( b ) から、 勝 胱障害治療剤 3投与群の膀胱においては、 膀胱硬化像は観察されないことがわか る。 これらをまとめると、 5 %酢酸惹起ゥサギ膀胱炎モデルに上記実施例で得られ た膀胱障害治療剤 1〜 3を投与した後のゥサギの膀胱は何れも、 P B S投与後の ゥサギの膀胱に比べて、 正常なゥサギの膀胱との病理組織学的な差が少なかった c さらに、 ヒアルロン酸ナトリウムを 0 . 4重量％含有する膀胱障害治療剤 3の投 与群では、 壊死塊状物が認められず極めて良好な所見が得られた。 病理組織学的 検討の結果は、 膀胱容積、 膀胱乾燥重量、 トリパンブル一付着面積、 トリパンブ ルー付着量、 ヒ ドロキシプロリ ン量 （コラーゲン量） の測定結果を裏付けている といえる。 以上の結果から、 5 %酢酸惹起ゥサギ膀胱炎モデルに上記実施例で得られた膀 胱障害治療剂 1〜 3を投与すれば、 膀胱容積、 トリパンブルー付着面積、 トリバ ンブルー付着量、 ヒ ドロキシプロリ ン量、 膀胱重量を改善することができ、 病理 組織学的所見においても膀胱粘膜上皮の伸展による膀胱粘膜の修復 ·改善効果が 認められるので、 本発明の膀胱治療剤は、 膀胱障害に対して膀胱粘膜上皮を伸展 して、 膀胱粘膜を修復し、 結果的に線維化を抑制することで有効な治療を行える と考えられる。 産業上の利用性 本発明の膀胱障害治療剤は、 膀胱粘膜上皮を伸展する作用、 膀胱粘膜を修復す る作用を有し、 また膀胱の線維化の進行を防止し、 膀胱の膨張機能を回復するこ とで膀胱障害に対して優れた治療効果を有する。

Claims

請求の範囲
1. ヒアルロン酸及び/又はその薬学的に許容される塩の膀胱粘膜上皮伸展 及び Z又は膀胱粘膜修復有効量を含有する溶液からなる膀胱障害治療剤。
2. ヒアルロン酸及び 又はその薬学的に許容される塩を 0. 2〜 0. 6重 量％で含有する水性溶液からなる膀胱障害治療剤。
3. ヒアルロン酸及び Z又はその薬学的に許容される塩の含有量が 0. 3〜 0. 4 5重量％である請求項 2記載の膀胱障害治療剤。
4. ヒアルロン酸及び Z又はその薬学的に許容される塩が以下の性質を有す ることを特徴とする請求項 1〜 3のいずれか 1項に記載の膀胱障害治療剤。
( A ) エン ド トキシン含量が 0. 03 E U (エン ドトキシン単位） 1 0 m g以 下、
(B) 硫黄含量が電量滴定において 0. 0 1 %以下、
(C) 鉄含量が 2 0 p pm以下、
(D) タンパク質含量が 0. 1 %以下、
(E) 重量平均分子量が 5 00， 000以上。
5. ヒアルロン酸及び Z又はその薬学的に許容される塩の重量平均分子量が 500， 000〜 2， 200, 000である請求項 4記載の膀胱障害治療剤。
6. ヒアルロン酸及び Z又はその薬学的に許容される塩の重量平均分子量が 6 00, 00 0〜 1， 200, 00 0である請求項 4記載の膀胱障害治療剤。
7. ヒアルロン酸及びノ又はその薬学的に許容される塩の重量平均分子量が 80 0, 00 0〜 1, 20 0， 000である請求項 4記載の膀胱障害治療剤。
8. ヒアルロン酸及び Z又はその薬学的に許容される塩の極限粘度が 1 1. 0〜4 5 (d 1 Zg) である請求項 4記載の膀胱障害治療剤。
9. 前記水性溶液を 20°Cにおいてずり速度 9. 6 s e c 1で測定したとき のみかけ粘度が 1 0〜 1 500mP a ' sである請求項 2又は 3に記載の膀胱障 害治療剤。
1 0. 前記溶液の p Hが 6〜 8である請求項 1〜 3のいずれか 1項に記載の膀 胱障害治療剤。
1 1. 前記溶液の体液に対する浸透圧比が 0. 9〜； L. 2である請求項 1〜3 のいずれか 1項に記載の膀胱障害治療剤。
1 2. 膀胱の線維化を抑制する作用を有する請求項 1〜 3のいずれか 1項に記 載の膀胱障害治療剤。
1 3. 前記溶液が、 5 %酢酸を膀胱内に注入し 1 0分間保持することで膀胱粘 膜を剥離させたゥサギの膀胱内に該溶液を膀胱粘膜剥離後 7日間毎日注入する処 理を行った後の膀胱容積が、 5 %酢酸で同様に膀胱粘膜を剥離させたゥサギの膀 胱内に該溶液の代わりにリン酸緩衝生理食塩液を同様に注入する処理を行った後 の膀胱容積の 2〜 3倍となるように調製された溶液である請求項 1〜 3のいずれ か 1項に記載の膀胱障害治療剤。
14. 前記溶液が、 5 %酢酸を膀胱内に注入し 1 0分間保持することで膀胱粘 膜を剥離させたゥサギの膀胱内に該溶液を膀胱粘膜剥離後 7日間毎日注入する処 理を行った後の膀胱乾燥重量が、 5 %酢酸で同様に膀胱粘膜を剥離させたゥサギ の膀胱内に該溶液の代わりにリン酸緩衝生理食塩液を同様に注入する処理を行つ た後の膀胱乾燥重量の 0. 6〜0. 9倍となるように調製された溶液である請求 項 1〜 3のいずれか 1項に記載の膀胱障害治療剤。
1 5. 前記溶液が、 5 %酢酸を膀胱内に注入し 1 0分間保持することで膀胱粘 膜を剥離させたゥサギの膀胱内に該溶液を膀胱粘膜剥離後 7日間毎日注入する処 理を行った後さらに 0. 5 %トリパンブルー水溶液を注入して卜リパンブル一を 付着させたときの膀胱内へのトリパンブルー付着量が、 5 %酢酸で同様に膀胱粘 膜を剥離させたゥサギの膀胱内に該溶液の代わりにリン酸緩衝生理食塩液を同様 に注入する処理を行った後同様にトリパンブル一を付着させたときの膀胱内への トリパンブルー付着量の 0. 5〜0. 7倍となるように調製された溶液である請 求項 1〜 3のいずれか 1項に記載の膀胱障害治療剤。
1 6. 前記溶液が、 5%酢酸を膀胱内に注入し 1 0分間保持することで膀胱粘 膜を剥離させたゥサギの膀胱内に該溶液を膀胱粘膜剥離後 7日間毎日注入する処 理を行ったときの膀胱内ヒ ドロキシプロリン量が、 5 %酢酸で同様に膀胱粘膜を 剥離させたゥサギの膀胱内に該溶液の代わりにリン酸緩衝生理食塩液を同様に注 入する処理を行ったときの膀胱内ヒ ドロキシプロリン量の 0. 8〜 0. 9倍とな るように調製された溶液である請求項 1〜 3のいずれか 1項に記載の膀胱障害治 療剤。
1 7 . 前記溶液が、 5 %酢酸を膀胱内に注入し 1 0分間保持することで膀胱粘 膜を剥離させたゥサギの膀胱内に該溶液を膀胱粘膜剥離後 7日間毎日注入する処 理を行った後さらに 0 . 5 %トリパンブル一水溶液を注入してトリパンブル一を 付着させたときの膀胱粘膜剥離部位へのトリパンブル一付着面積が、 5 %酢酸で 同様に膀胱粘膜を剥離させたゥサギの膀胱内に該溶液の代わりにリン酸緩衝生理 食塩液を同様に注入する処理を行った後同様にトリパンブル一を付着させたとき の膀胱粘膜剥離部位へのトリパンブル一付着面積の 0 . 2 5〜 0 . 4 5倍となる ように調製された溶液である請求項 1〜 3のいずれか 1項に記載の膀胱障害治療 剤。
1 8 . 膀胱障害が、 非細菌性難治性膀胱障害である請求項 1〜 1 7のいずれか 1項に記載の膀胱障害治療剤。
1 9 . 非細菌性難治性膀胱障害が、 間質性膀胱炎、 好酸球性膀胱炎、 出血性膀 胱炎および神経性頻尿からなる群から選択される膀胱障害である請求項 1 8記載 の膀胱障害治療剤。
2 0 . 出血性膀胱炎が、 放射線性膀胱炎または薬剤性膀胱炎である請求項 1 9 記載の膀胱障害治療剤。
2 1 . 請求項 1〜 2 0のいずれか 1項に記載された膀胱障害治療剤の膀胱粘膜 上皮伸展及びノ又は膀胱粘膜修復有効量を、 膀胱障害の患者の膀胱内に投与する ことからなる膀胱障害の処置方法。
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