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WO1998004250A1 - Compositions pharmaceutiques utiles pour la reversion de la resistance multiple aux drogues - Google Patents

Compositions pharmaceutiques utiles pour la reversion de la resistance multiple aux drogues Download PDF

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Publication number
WO1998004250A1
WO1998004250A1 PCT/FR1996/001174 FR9601174W WO9804250A1 WO 1998004250 A1 WO1998004250 A1 WO 1998004250A1 FR 9601174 W FR9601174 W FR 9601174W WO 9804250 A1 WO9804250 A1 WO 9804250A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
membrane
reversion
drugs
compound
action
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
PCT/FR1996/001174
Other languages
English (en)
Inventor
Jean Cahn
Boubacar Traore
Frédérick GAY
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Consultants Internationaux Sur Le Medicament (sarl)
Original Assignee
Consultants Internationaux Sur Le Medicament (sarl)
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Consultants Internationaux Sur Le Medicament (sarl) filed Critical Consultants Internationaux Sur Le Medicament (sarl)
Priority to PCT/FR1996/001174 priority Critical patent/WO1998004250A1/fr
Publication of WO1998004250A1 publication Critical patent/WO1998004250A1/fr
Anticipated expiration legal-status Critical
Ceased legal-status Critical Current

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    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/13—Amines
    • A61K31/135—Amines having aromatic rings, e.g. ketamine, nortriptyline
    • A61K31/137—Arylalkylamines, e.g. amphetamine, epinephrine, salbutamol, ephedrine or methadone
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Definitions

  • the present invention relates to the reversal of multiple resistance to drugs or drugs. It relates more particularly by way of illustration, but without this constituting any limitation, the reversion of the chemoresistance of Plasmodium falciparum to chloroquine and the reversion of the multiple resistance to drugs in oncology, in particular in the case of an anticancer treatment with anthracycine type products.
  • the invention relates more particularly to a pharmaceutical composition for the inhibition, or the treatment by reversion, of multiple resistance to drugs.
  • the first object of the invention is thus a pharmaceutical composition useful for the inhibition, or treatment by reversion, of multiple resistance to drugs, said composition comprising an effective amount of at least one active principle or therapeutic agent capable of acting on membrane potentials linked to Ca 2+ / Na + transmembrane movements and those linked to potassium current, in particular by inhibiting the membrane potassium channel and the membrane sodium channel, with or without parallel action on the membrane calcium channel, said agent being in in addition to a class III antiarrhythmic agent having a positive inotropic effect.
  • compositions advantageously, but without limitation, as active ingredient at least one compound chosen from bis-phenethylamines, in particular N-methyl-N-bis (3,4-dimethoxyphenylethyl) amine of general formula I or its addition salts with aceutically acceptable acid phar.
  • the present invention also relates to a pharmaceutical composition presented and / or packaged for inhibition or treatment by reversion, of multiple resistance to drugs, comprising as active principle at least one compound as defined above and / or a salt or other pharmacologically acceptable derivative thereof.
  • Said composition is advantageously in the form of tablets, tablets or lozenges, possibly effervescent, or also of solutions or oral suspensions.
  • the dosage forms of this composition comprise in practice per unit dose approximately 120 mg to 240 mg of active principle or a weight equivalent, on the basis of the pharmacological effect targeted, of any equivalent of this active principle or of their different salts. Those skilled in the art are able to determine such a weight equivalent based on their own knowledge and on routine tests. According to a preferred embodiment, the present invention comprises the use of an effective amount of at least one active compound as defined above.
  • said effective amount consists of daily doses of approximately 240 mg to 360 mg of the active principle or mixture of active principles or a dose of pharmacologically equivalent anti-reversion effect of an equivalent compound.
  • These doses may, depending on the route of administration used, the condition of the patient and the product used vary over time and be administered according to a dosage comprising administration in a single administration per day, per week or per month.
  • a daily dose as mentioned above can itself be replaced by any other dose of administration of the active ingredient, provided that the pharmacological effect obtained is substantially the same as that obtained by daily administration.
  • Oral administration is preferred.
  • the active ingredient or therapeutic agent can be administered together with a physiologically acceptable carrier or carrier or diluent to thereby form a complete pharmaceutical composition ready for use.
  • compositions advantageously contain more than 80% by weight of at least one therapeutic agent according to the invention and can be prepared by conventional techniques allowing their formulation in usual dosage forms, for example tablets, capsules, capsules, dragees, dispersible powders, syrups, elixirs, suspensions or solutions, drops, nebulizations.
  • Suitable diluents or pharmaceutical fillers include, for example, water, alcohols, oils or waxes or gums, natural or hardened, calcium or sodium carbonates, calcium phosphate, kaolin, talc and lactose, as well as suitable preservatives, such as for example methyl hydroxybenzoate, suspending agents, such as methyl cellulose, gum tragacanth and sodium alginate, wetting agents, such as lecithin, polyoxyethylene stearate and polyoxyethylene sorbitan maleate, granulating and / or disintegrating agents such as starch and acid algenic, cohesion agents, such as starch, gelatin and gum arabic, and lubricating agents such as magnesium stearate, stearic acid and talc.
  • suitable preservatives such as for example methyl hydroxybenzoate
  • suspending agents such as methyl cellulose, gum tragacanth and sodium alginate
  • wetting agents such as lecithin, polyoxyethylene stearate
  • compositions in the form of tablet can be coated by known techniques, so that the disintegration of the tablet and the absorption of the active ingredient in the gastrointestinal tract are delayed and so that a delayed and / or prolonged action is obtained over a long period. period.
  • a person skilled in the art is able to determine in each species whether or not a compound is an equivalent as above falling within the scope of the present invention by resorting to routine tests and by proceeding if necessary iteratively, preferably based on the indications and proposed methods provided below.
  • FIG. 1 represents a graph showing the current voltage curve in a stable state under control conditions (C) and in the presence of 100 ⁇ mol / 1 of compound YS 035 (100).
  • Fig. 2 represents in graph form the in vitro activity of YS 035 on a strain of P. falciparum resistant to chloroquine.
  • Fig. 3 shows in graph form the in vitro activity of YS 035 on resistance to chloroquine.
  • - Fig. 4 represents in graph form the evolution of the activity of compound YS 035, as a function of its concentration in an in vitro combination of YS 035 and chloroquine, on a strain of P. falciparum resistant to chloroquine.
  • - Fig. 5 shows in graph form the effect of YS 035, at concentrations lower than any activity of its own, on the IC50 of chloroquine of a strain of chloroquine resistant P. falciparum.
  • YS 035 was administered, in the form of hydrochloride in 1% solution, intravenously to 40 male and female rats.
  • the LD50s were as follows, 14 days after a single injection:
  • YS 035 was administered in the form of hydrochloride by the venous route.
  • the LD50s were as follows, 14 days after a single injection:
  • mice 36.1 mg / kg (32.7-39.8)
  • YS 035 was administered orally as a base in 60 male rats and 60 female rats.
  • the LD50 values were as follows, 14 days after a single administration:
  • LD50 values were as follows, 14 days after a single administration:
  • mice 253 mg / kg (218.0-295.2)
  • Chrez the males and the females 4 batches were constituted by distribution in groups constituted at random: 1 control batch and 3 batches receiving respectively 22.5 - 45 and 90 percent of the LD50 previously determined on subjects of the same origin and of the same sex, The results were: no mortality; no change in behavior; no significant change in body weight; increased food intake in males; no haematological modification; increased GP transaminase for both sexes at the higher dose; impaired renal function in the bypassed tubes at the highest dose for both sexes.
  • Histological examination in the male showed the existence, at the highest dose, of a focused fatty degeneration of the liver, an enlarged epithelium of the cells of the tubes bypassed in one case and a slight hyperchromatophilia of CA3 neurons in 3 cases, and in females the existence, at the highest dose, the existence of picnosis of CA3 neurons in only one case.
  • the half-life was 2, 3 hours.
  • the area under the curve (AUC) was 3.75 ⁇ g / ml / h.
  • the total clearance (dose / AUC) was 8 1 / h / kg.
  • X (O) being 2.52 ⁇ g / ml, the volume of distribution was 11.9
  • Mitochondria are generally considered to have two different specific Ca 2+ release systems which are respectively sensitive and insensitive to the inhibition produced by Ruthenium Red.
  • Ruthenium Red is known to ingest Ca 2+ uptake by mitochondria and that the addition of this dye to a mitochondria suspension causes Ca 2 + to be released by them (Moore CL., 1971, Biochem Biophys. Res. Comm. 42: 298-305; Rossi et al., 1973, Biochem. Biophys. Res. Comm. 50: 846-852; Stucki and Inneichen, 1974, Eur. J. Biochem. 48: 365- 375).
  • the mechanism of action of Ruthenium Red has been the subject of research by various laboratories.
  • the release of Ca 2+ from the mitochondria when Ruthenium Red is added to inhibit active uptake can be divided into its three origins: a) non-specific passive permeability due to membrane damage and sensitive to albumin and l 'ADP (Harris et al., 1979, Biochem. J. 182: 455-464); b) a rapid modification of Na + / Ca +, particularly in excitable tissues (Crompton et al., 1977, Europ. J. Biochem. 79: 549-558); c) an electroneural modification of H + / Ca 2+ (Fiskum and Lehninger, 1979, J. Biol. Che. 254: 6236-6239).
  • Nifedipine is capable by itself of causing Ca 2+ leakage, probably by decoupling effect.
  • compound D 600 another Ca 2+ antagonist and derived from Verapamil
  • it alone does not cause any mitochondrial leakage of Ca 2+ and exerts no inhibition on the action of Ruthenium red (Deana et al., Biochem. J., supra).
  • the compound YS 035 does not affect the mitochondrial release of Ca 2+ obtained after addition to the suspension medium of the mitochondria of the chelating agent EGDTA or by a decoupling (carbonyl-cyanide of p-trifluoro -methoxyphenyl- hydrazone) or a breathing inhibitor (Antimycin A)
  • Compound YS 035 at concentrations below 100 ⁇ M produces a slight modification of the common parameters for the evaluation of mitochondrial function, such as the respiratory index, the degree of ATP synthesis or the membrane potential. Nifedipine produces a drop in all these parameters from the concentration of 100 ⁇ M, which is correlated with its liberation action.
  • this compound can be considered as the ideal type of calcium antagonist.
  • One of the remarkable properties of the compound YS 035 is thus to be a membrane stabilizer, by its action both on mechanisms of capture and of extrusion of Ca 2+ , in particular by the mitochondria.
  • YS 035 The action of YS 035 was then analyzed by research on the slow action potentials of the papillary muscle isolated from the guinea pig after depolarization, with 27 ⁇ M / 1 of KC1 at approximately -45 mV.
  • the maximum increase in the slope of the slow potential which can be used as a measure of slow input of calcium current, remained virtually unchanged by YS 035 at concentrations up to 30 ⁇ M / 1 and a marked reduction did not was observed only from 100 ⁇ M / 1.
  • the amplitude of the slow action potentials and the isometric contractility were only reduced at the highest concentrations.
  • the EC 50 for reducing my V ⁇ was calculated at a value of 1.6 x 10 "4 M / 1.
  • the values of EC 5 0 of Diltiazem and Nifedipine were 2.0 x 10 " ⁇ M / 1 and 2.9 x 10 -8 M / 1.
  • the inhibitory action of YS 035 is therefore only discernible at relatively high concentrations, but is associated with a reduction in the duration of the slow action potential which is characteristic of Ca 2+ antagonists.
  • This same compound YS 035 at concentrations of 1 to 10 ⁇ M / 1, induces a marked prolongation of the slow action potential, associated with an increase in isometric contractility.
  • Compound YS 035 shows a dependence in use at 100 ⁇ M / 1, which resembles that of Nifedipine, in particular with regard to the reduction of V ma ⁇ and of contractility.
  • the compound YS 035 was found to increase, up to a concentration of 100 ⁇ M / 1, the duration of the action potential, respectively at 30 and 90% repolarization.
  • YS 035 behaves like the blocker ⁇ , d-sotalol, a class III antiarrhythmic drug.
  • YS 035 has been shown to prolong the atrial action potential.
  • concentrations of 10 ⁇ M / 1 the durations of the action potentials respectively at 30 and 90% of repolarization were increased by approximately 50% and the contractility increased in parallel.
  • the variations in the duration of the action potentials respectively at 30 and 90% of repolarization increased by 274 and 235% respectively, compared to the control values, but on the other hand the contractility was lowered to its value basic.
  • YS 035 exerts an inhibitory effect on the sodium channel, starting at 1 ⁇ M and reaching 42.8% of the control values at the concentration 100 ⁇ M / 1. It has been established that the repolarization time reaches its peak at 10 ⁇ M / 1, even with a reduction in the potential of the resting membrane. The sodium flow inhibition was increased by depolarization. The action of YS 035 on the action potentials became stronger at 10 ⁇ M / 1 and weaker at 100 ⁇ M / 1.
  • Compound YS 035 thus proved to be a powerful inhibitor of external potassium current in cardiac preparations, instantaneous current being first affected.
  • This effect begins at the concentration of approximately 1 ⁇ M / 1 and delays repolarization. This corresponds to the extension of the duration of the action potentials of the left atrium, the papillary muscle and the Purkinje fibers.
  • the effects of this compound on the sodium and calcium channels are only observed at concentrations equal to or greater than 100 ⁇ M / 1.
  • the inhibition of the sodium channel can also be increased by an increase in the pulse speed or depolarization of the cell membranes.
  • YS 035 has an extremely weak calcium antagonist effect compared to that of Verapamil as well as that of Nifedipine.
  • YS 035 which is a derivative of Verapamil, should be considered to have significant anti-calcium properties due to its weak side effects.
  • Verapamil is a class IV antiarrhythmic drug depressing atrioventricular conduction
  • compound YS 035 is a class III antiarrhythmic drug, responding in this respect to the mechanism of action of myodarone.
  • a neuroleptic such as for example Melperone or Trioruoroperazine.
  • the compound YS 035 it is therefore not the anticalcic property as with Verapamil which is the property concerned in the therapeutic effect sought, but the membrane effect Ca 2+ / Na + dependent and especially K + dependent. Phenomenon of multiple drug resistance and activity of YS 035
  • Verapamil Vpl
  • Calmodulin inhibitor TFP
  • TMP Trifluoperazine
  • the dose of YS 035 necessary (50,000 ng / ml) to stop the beating of myocytes was 200 times higher than that of Vpl (250 ng / ml) and 10 times higher than that of TFP;
  • the dose producing a detectable effect on the myocytic cardiac function was respectively 5 ng / ml for Vpl and 750 ng / ml for TFP and that necessary to stop the contraction of myocytes was respectively 250 ng / ml for Vpl and 5000 ng / ml for TFP.
  • TJ Lampidis et al. was only a sorting method, allowing only comparative analysis of chemical compounds by an in vitro method not allowing to make a significant difference between - Verapamil which is a powerful calcium antagonist, anti-arrhythmic class IV of certain toxicity,
  • Trifluoperazine which is a neuroleptic whose property is a class antiarrhythmic effect
  • Such a compound has membrane activity capable of modifying the membrane permeability, of increasing the membrane potentials when they are depressed, and this in a remarkable manner without the appearance of cytotoxicity.
  • RMD reversion This reversion is of particular interest in two areas of human pathology, malaria and cancer.
  • Cyproheptadine have all demonstrated the possibility of a reversal of chloroquine resistance, but at toxic concentrations in vitro or at doses inducing toxic effects in vivo. The same was true for the reversal of resistance to anti-cancer substances. There was therefore currently no available means capable of exerting in these types of human pathology a reversal of resistance to drugs without clinically toxic side effects.
  • Table 1 Accumulation of anthracyclines in human myelogenous leukemia cells respectively sensitive and resistant to Doxorubicin.
  • YS 035 are the basis of the present invention, while T. Lampidis et al. (Association for Cancer Research, vol. 31, p. 373, 1990) had put on the same level Verapamil (a class IV anti arrhythmic, which is a calcium antagonist), Trif luoperazine (a neuroleptic) and YS 035 (considered to be derived from Verapamil).
  • Verapamil a class IV anti arrhythmic, which is a calcium antagonist
  • Trif luoperazine a neuroleptic
  • YS 035 considered to be derived from Verapamil.
  • the invention therefore also relates to a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising a combination with an anticancer agent of anthracyclinic origin of a compound of formula I, or of its addition salts with acceptable pharmaceutical acids, with an anticancer agent of anthracyclinic origin , in proportions that a person skilled in the art is able to define suitability in each case, useful for inhibiting or avoiding the development of multiple drug resistance and induced cardiac toxicity.
  • Doxorubicin is the prototype of anticancer agents which are of the anthracycline type, capable of generating RMD and of causing cardiac disorders, just like aclarubicin, epirubicin, zorubicin, pirarubicin and idarubicin as examples.
  • YS 035 Chloroquine sulfate, sold by the Specia Laboratory, having a molecular mass of 418 and belonging to the class of amino-4-quinolines, was used.
  • YS 035 is a synthetic derivative of the Verapamil class. Its chemical formula is C21H29NO4, corresponding to N, N-bis- (3,4-dimethoxyphen-ethyl) -N-methylamine, of molecular mass 359.442.
  • YS 035 is a weak calcium pump inhibitor, which has been tested on several cell types.
  • the plasmodial strains tested were strains of P. falciparum, adapted in continuous in vitro culture and coming from malarious patients, managed in the Department of Infectious, Parasitic, Tropical and Public Health Diseases of the Pitié-Salpêtrière Hospital Group.
  • chloroquine the most widely used antimalarial agent
  • a chloroquine-resistant strain is characterized by the increase in the efflux of chloroquine outside the resistant parasite, as well as by the reversibility of this phenomenon under the action of certain molecules.
  • the inhibitory concentration 50 (IC50 in nmol / 1) of the compound YS 035 is of the order of 3 ⁇ g / ml.
  • FIG. 5 shows the effect of YS 035, at concentrations (in ⁇ g / ml) lower than any specific activity, on the IC 5 0 (in nmol / 1) of chloroquine from a strain of P. falciparum chloroquino- resistant. It seems likely that YS 035 has its own antimalarial activity for a concentration of less than 1 ⁇ g / ml.

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Abstract

L'invention concerne l'inhibition, ou le traitement par réversion, de la résistance multiple aux drogues, en particulier la réversion de la chimiorésistance de Plasmodium falciparum à la chloroquine et la réversion de la résistance multiple aux drogues en cancérologie. Le principe actif agit sur les potentiels de membrane liés aux mouvements de Ca<2+>/Na<+> transmembranaires en inhibant le canal potassique membranaire et le canal sodique membranaire, avec ou sans action parallèle sur le canal calcique membranaire. Il doit être un agent antiarythmique de classe III et avoir une action inotrope positive. Il peut être une bis-phénéthyl-amine, notamment de la N-méthyl-N-bis (3,4-diméthoxy-phényléthyl)-amine.

Description

COMPOSITIONS PHARMACEUTIQUES UTILES POUR LA REVERSION DE LA RESISTANCE MULTIPLE AUX DROGUES
La présente invention concerne la réversion de la résistance multiple aux drogues ou médicaments. Elle concerne plus particulièrement à titre illustrâtif, mais sans que cela constitue une quelconque limitation, la réversion de la chimiorésistance de Plasmodium falciparum à la chloroquine et la réversion de la résistance multiple aux drogues en cancérologie, notamment dans le cas d'un traitement anticancéreux avec des produits de type anthracyc1ine.
L'invention concerne tout particulièrement une composition pharmaceutique pour l'inhibition, ou le traitement par réversion, de la résistance multiple aux drogues .
La résistance multiple aux drogues constitue une gêne dans de nombreux traitements ou dans la prévention d'états pathologiques et les moyens proposés jusqu'ici pour y remédier se sont avérés présenter dans tous les cas une toxicité trop élevée pour en permettre l'utilisation. Au surplus, on ne savait pas jusqu'à maintenant sur quelles bases rechercher un agent thérapeutique efficace pour la réversion de la résistance multiple aux drogues et les travaux allant dans ce sens entrepris dans le passé ont même été interrompus .
Il existait donc un besoin pour pouvoir traiter efficacement les états de résistance multiple aux drogues chez les animaux, y compris l'homme, dans des conditions de non-toxicité ou de toxicité acceptable.
On a maintenant trouvé de manière inattendue qu'une bis-phénéthylamine connue par ailleurs pour son efficacité dans le traitement des maladies cardiovasculai- res et des perturbations de la circulation cérébrale peut être utilisée à des fins thérapeutiques dans la lutte contre la résistance multiple aux drogues. De plus, les mécanismes d'action décelés à ce propos permettent de proposer un moyen général efficace à cet égard et de fournir à l'homme du métier des éléments lui permettant de déterminer par de simples tests si un agent thérapeutique est à même d'être efficace dans l'application thérapeutique susdite.
L'invention a ainsi pour premier objet une composition pharmaceutique utile pour l'inhibition, ou le traitement par réversion, de la résistance multiple aux drogues, ladite composition comprenant une quantité efficace d'au moins un principe actif ou agent thérapeutique apte à agir sur les potentiels de membrane liés aux mouvements de Ca2+/Na+ transmembranaires et ceux liés au courant potassique, notamment en inhibant le canal potassique membranaire et le canal sodique membranaire, avec ou sans action parallèle sur le canal calcique membranaire, ledit agent étant en outre un agent antiarythmique de classe III et possédant un effet inotrope positif. On a en effet trouvé de manière inattendue selon l'invention qu'un composé agissant sur les potentiels de membrane liés aux mouvements de Ca2+/Na+ transmembranaires en les inhibant, notamment en inhibant le canal potassique membranaire et le canal sodique membranaire, avec ou sans action parallèle sur le canal calcique membranaire, peut donner une composition particulièrement efficace dans la lutte contre la résistance multiple aux drogues, en l'absence d'effets secondaires notables cliniquement toxiques . La composition pharmaceutique selon la présente invention comprend avantageusement, mais non limitâtive- ent, en tant que principe actif au moins un composé choisi parmi les bis-phénéthylamines, notamment de la N- méthyl-N-bis (3,4-diméthoxyphényléthyl) aminé de formule générale I
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ou ses sels d'addition avec des acides phar aceutiquement acceptables .
Le composé de formule I ci-dessus sera, à des fins de simplification, désigné dans la suite le plus souvent par la dénomination "YS 035".
Pour plus de commodité, c'est à ce dernier composé qu'il sera fait référence dans la suite de la présente description, mais tout ce qui sera exposé à son propos peut être transposé par l'homme du métier, mutatis mutan- dis, à d'autres agents thérapeutiques qui s'avéreraient ou se révéleraient être des équivalents de celui-ci, sans que l'on sorte pour autant du cadre et de la portée de la présente invention.
Rosemund, Kϋlz et Buth, dans le brevet US 2006114, dans Ber. 72 B 18-28, 1939 et dans le brevet DE 617647, ont décrit la synthèse d'une série de bis-phénéthylamines possédant des propriétés analogues à celles de la papavérine et des propriétés spasmolytiques . Bien qu'ayant cité à ce propos la N-méthyl-N-bis (3, 4-diméthoxyphényl- éthyl) aminé, ils ne disposaient pas réellement de ce produit. En effet le composé cité sous ce nom, sans indication de structure, par ces auteurs était en réalité une autre molécule et son chlorhydrate ne correspondait en rien à celui de la N-méthyl-N-bis (3, 4-diméthoxyphényl- éthyl)aminé. Ce dernier composé a été présenté pour la première fois dans le document FR-A-2 541 113 avec un procédé pour son obtention et des indications d'application dans le traitement des maladies cardiovasculaires et des perturbations de la circulation cérébrale. Le représentant des bis-phénéthylamines susdit, désigné dans la suite du présent exposé par YS 035, a la structure indiquée plus haut par la formule I, confirmée par spectroscopie:
Spectre H1 RMN (enregistré dans CDCI3, aec TMS comme référence interne) . Les valeurs des déplacements chimiques des protons, exprimées en δ, étaient: 2,35 (s,
3H, N-CH3); 2,7 (S, 8H, N-(CH2-CH2)2) 3,8 (s, 12H, 4
(OCH3)); 6,7 s, 6H aromatiques).
Le chlorhydrate du composé YS 035 présente un P.F. de 180-185°C. Analyse élémentaire pour C21H30NO41CI (PM=395,93):
Calculé (%) : C = 63,70; H = 7,63; N = 3,54; Trouvé (%) : C = 63,42; H = 7,47; N = 3,39. La présente invention a également pour objet une composition pharmaceutique présentée et/ou conditionnée pour 1 ' inhibitionn ou le traitement par réversion, de la résistance multiple aux drogues, comprenant comme principe actif au moins un composé tel que défini plus haut et/ou un sel ou autre dérivé pharmacologiquement acceptable de celui-ci. Ladite composition est avantageusement sous forme de comprimés, tablettes ou pastilles, éventuellement effervescents, ou encore de solutions ou suspensions buvables. Les formes galéniques de cette composition comportent en pratique par dose unitaire environ 120 mg à 240 mg de principe actif ou un équivalent pondéral, sur la base de l'effet pharmacologique visé, de tout équivalent de ce principe actif ou de leurs différents sels. L'homme du métier est à même de déterminer un tel équivalent pondéral en s 'appuyant sur ses propres connaissances et sur des essais de routine. Selon une forme de mise en oeuvre préférée, la présente invention comprend l'utilisation d'une quantité efficace d'au moins un composé actif tel que défini plus haut.
Plus avantageusement, ladite quantité efficace consiste en des doses journalières d'environ 240 mg à 360 mg du principe actif ou mélange de principes actifs ou d'une dose d'effet anti-réversion pharmacologiquement équivalent d'un composé équivalent. Ces doses peuvent, selon la voie d'administration employée, l'état du patient et le produit utilisé varier dans le temps et être administrées suivant une posologie comprenant une administration en une seule fois par jour, par semaine ou par mois. Ainsi une dose quotidienne telle que mentionnée ci-dessus peut être elle-même remplacée par toute autre dose d'administration du principe actif pour autant que l'effet pharmacologique obtenu soit sensiblement le même que celui procuré par une administration quotidienne. On préfère une administration par voie orale. Le principe actif ou agent thérapeutique peut être administré conjointement avec un support ou vecteur ou un diluant physiologiquement acceptable pour former ainsi une composition pharmaceutique complète prête à l'emploi. De telles compositions contiennent avantageusement plus de 80 % en poids d'au moins un agent thérapeutique selon l'invention et peuvent être préparées par des techniques classiques permettant leur formulation dans des formes galéniques habituelles, par exemple des comprimés, des capsules, des gélules, des dragées, des poudres dispersables, des sirops, des élixirs, des suspensions ou des solutions, des gouttes, des nébulisations . Des diluants ou des charges pharmaceutiques appropriés comprennent par exemple l'eau, des alcools, des huiles ou des cires ou gommes naturelles ou durcies, des carbonates de calcium ou de sodium, du phosphate de calcium, du kaolin, du talc et du lactose, ainsi que des agents conservateurs appropriés, tels que par exemple de l 'hydroxybenzoate de méthyle, des agents de mise en suspension, comme la méthyl cellulose, la gomme adragante et l'alginate de sodium, des agents mouillants, tels que la lécithine, le polyoxyéthylène stéarate et le maléate de polyoxyéthylène-sorbitan, des agents de granulation et/ou de désintégration tels que l'amidon et l'acide algénique, des agents de cohésion, tels que l'amidon, la gélatine et la gomme arabique, et des agents lubrifiants comme le stéarate de magnésium, l'acide stéarique et le talc. Les compositions sous forme de comprimé peuvent être revêtues par des techniques connues, afin que soient différées la désintégration du comprimé et l'absorption du principe actif dans le tractus gastro-intestinal et que soit ainsi procurée une action différée et/ou prolongée sur une longue période. L'homme du métier est apte à déterminer dans chaque d'espèce si un composé est ou non un équivalent tel que susdit rentrant dans le cadre de la présente invention en recourant à des essais de routine et en procédant si nécessaire de manière itérative, de préférence sur la base des indications et des propositions de méthodes fournies ci-après.
L'invention est décrite plus en détail dans les exemples, donnés ci-après à titre purement illustratif, qui ne la limitent aucunement et dans lesquels, sauf mention contraire, les posologies du principe actif sont rapportées au poids corporel.
Les essais pharmacologiques effectués et relatés plus loin sont, au moins pour partie, illustrés par les figures annexées, dans lesquelles: - Fig. 1 représente un graphe montrant la courbe de voltage de courant à l'état stable dans des conditions témoins (C) et en présence de 100 μmol/1 de composé YS 035 (100) .
Fig. 2 représente sous forme de graphe l'activité in vitro de l'YS 035 sur une souche de P. falciparum résistante à la chloroquine.
Fig. 3 représente sous forme de graphe l'activité in vitro de l'YS 035 sur la résistance à la chloroquine. - Fig. 4 représente sous forme de graphe l'évolution de l'activité du composé YS 035, en fonction de sa concentration dans une association in vitro de l'YS 035 et de chloroquine, sur une souche de P. falciparum résistante à la chloroquine.
- Fig. 5 représente sous forme de graphe l'effet de l'YS 035, à des concentrations inférieures à toute activité propre, sur la CI50 de la chloroquine d'une souche de P. falciparum chloroquinorésistante.
On a soumis le principe actif susdit à des études toxicologiques et à une série de tests pharmacotoxicologi- ques en le comparant aux médicaments connus portant les dénominations communes internationales Vérapamil, D 600,
Nifédipine et Diltiazem.
Etudes toxicologiques
I - Toxicité aiguë: a) L'YS 035 a été administré, sous forme de chlorhydrate en solution à 1%, par voie intraveineuse chez 40 rats mâles et femelles. Les DL50 étaient les suivantes, 14 jours après une injection unique:
- chez le rat mâle: 19,0 mg/kg (16,77-21,52)
- chez le rat femelle: 24,4 mg/kg (21,15-28,12) b) chez 60 souris mâles et femelles, l'YS 035 a été administré sous forme de chlorhydrate par voie veineuse. Les DL50 étaient les suivantes, 14 jours après une injection unique:
- chez la souris mâle : 36,1 mg/kg (32,7-39,8)
- chez la souris femelle: 42,3 mg/kg (39,0-45,9) c) L'YS 035 a été administré per os sous forme de base chez 60 rats mâles et 60 rats femelles. Les DL50 étaient les suivantes, 14 jours après une administration unique :
- chez le rat mâle : 217 mg/kg (179,6-264,4)
- chez le rat femelle: 313 mg/kg (277,0-354,9) d) Chez 60 souris mâles et 60 souris femelles, l'YS 035 a été administré par voie orale sous forme de base. Les DL50 étaient les suivantes, 14 jours après une administration unique:
- chez la souris mâle : 253 mg/kg (218,0-295,2)
- chez la souris femelle: 250 mg/kg (214,8-290,9)
II - Toxicité subaiguë:
Cette toxicité a été recherchée chez 20 rats mâles SD de souche CD, par voie orale. Ces rats ont reçu par voie orale en 5 jours des doses croissantes d'YS 035 (base), qui correspondaient respectivement à 44-66-99-148 et 220 mg/kg de poids corporel. Les animaux ont été sacrifiés 12 jours après la dernière administration.
Il n'y a eu aucune mortalité spontanée. La plus forte dose (soit 222,75 mg/kg) ainsi administrée pendant 5 jours a induit entre 30 et 90 minutes après chaque administration des décharges cloniques et un pseudocoma (décubitus ventral) . Aucun effet sur le poids corporel, ni sur la consommation de nourriture et d'eau n'a été observé. 12 jours après le dernier traitement, le nombre des globules touges et blancs et des plaquettes avait augmenté. Biologiquement et histologiquement on n'a pas constaté de modification des fonctions hépatocellulaires, ni de cytolyse.
III - Toxicité subchronique (4 semaines d'administration par voie orale 7 jours/7):
Cette étude a été réalisée sur 96 rats mâles et rats femelles SD de souche CD, âgés de 5 à 6 semaines et d'un poids moyen de 169 ± 1,1 g pour les mâles et de 158 ± 1,4 g pour les femelles.
Chrez les mâles et les femelles 4 lots ont été constitués par répartition en groupes constitués au hasard: 1 lot témoin et 3 lots recevant respectivement 22,5 - 45 et 90 pour cent de la DL50 précédemment déterminée sur des sujets de même origine et de même sexe, Les résultats étaient les suivants: aucune mortalité; aucune modification du comportement; aucune modification significative du poids corporel; augmentation de la prise de nourriture chez les mâles; pas de modification hématologique; augmentation de la transaminase GP pour les deux sexes à la plus forte dose; altération de la fonction rénale au niveau des tubes contournés à la plus forte dose pour les deux sexes . L'examen histologique chez le mâle a montré l'existence, à la dose la plus forte, d'une dégénérescence graisseuse focalisée du foie, d'une hypertrophie de l'épithélium des cellules des tubes contournés dans un cas et d'une légère hyperchromatophilie des CA3 neurones dans 3 cas, et chez les femelles l'existence, à la dose la plus forte, l'existence d'une picnose des CA3 neurones dans un cas seulement .
Il faut noter que les doses actives dans le traitement des atteintes ischémiques cérébrale ou cardiaque ont été dans la même espèce animale respectivement de 3 et 1,5 mg/kg par voie orale.
IV. Etude de pharmacocinétique chez le rat:
Cette étude a été faite chez le rat à jeun par voie intrapéritonéale (5 groupes de 3 rats, recevant 30 mg/kg d'YS 035 en suspension à 1 % dans de la gomme arabique) et par voie orale (5 groupes de 3 rats recevant 30 mg/kg d'YS 035 en solution à 1 % dans de la gomme arabique) . Les sacrifices des animaux ont eu lieu 0,25 - 0,50 - 1 - 2 et 4 heures après administration I.P. et 0,5 - 1 - 2 - 4 et 8 heures après administration orale, respectivement .
Sur un groupe de 3 rats gardés en cage métabolique, l'urine de 24 heures a été collectée et analysée . Par utilisation de techniques de traitement numérique des données (SAA - 27 paramètres), les cinétiques biexponentielles suivantes ont été obtenues pour l ' administration I . P . : X ( t) = l , 55e~ 3 + 0 , 97e~° ' 3 , où X est la concentration en μg/ml et t le temps en heures .
La demi-vie était de 2, 3 heures . L ' aire sous la courbe (ASC) était égale à 3 , 75 μg/ml/h . La clairance totale (dose/ASC) était égale à 8 1/h/kg. X(O) étant égale à 2 , 52 μg/ml, le volume de distribution était de 11, 9
1/kg .
Après administration orale de 30 mg/kg la cinéti- que plasmatique suivait une équation triexponentielle: X(t) = -8,03e-1'8t + 7,93e-2'0 + 0,le_0'2 .
Le pic plasmatique apparaissait à 30 minutes (0,343 μg/ml). La valeur de l'ASC était égale à 0,920 μg/ml/h. La biodisponibilité du produit calculée au moyen du rapport ASCperos/ASCip était égale à 24,5 %.
Activité de l'YS 035 sur les mouvements transmembranaires de Ca2+et comparaison avec Nifédipine et D 600
Il est généralement supposé et admis que les antagonistes du Ca2+ exercent leur action en réduisant l'entrée du Ca2+ à travers la membrane plasmique (Fleckenstein et al., 1972, Arzneim. Forsch. 22:22-33).Le composé YS 035 a donc été testé sur le transport du Ca2+ par différentes cellules . II a pu être montré une accumulation en fonction du temps du Ca2+ dans les cellulaires musculaires d'un embryon de poulet en 1 •absence et en présence du composé YS 035 et une réduction significative de cette accumulation sous l'effet d'une addition de 30 μM d'YS 035 dans le milieu d'incubation (R. Deana et al., Biochem. J. , vol. 2:8-1984).
Cet effet inhibiteur est observé pour des doses supérieures à 1 μM et est dose-dépendant entre 10 et 30 μM et n'est pas altéré à des concentrations supérieures à 50 μM. D'autres antagonistes du Ca2+, comme la Nifédipine (à 10 μM) et le D 600, se sont avérés produire une inhibition similaire.
On considère généralement que les mitochondries possèdent deux systèmes spécifiques différents de libération du Ca2+ respectivement sensibles et insensibles à l'inhibition produite par le Rouge de ruthénium. Il est connu que le Rouge de ruthénium inbibe la captâtion de Ca2+ par des mitochondries et que l'addition de ce colorant à une suspension de mitochondries provoque une libération de Ca2 + par celles-ci (Moore CL., 1971, Biochem. Biophys. Res . Comm. 42:298-305; Rossi et al., 1973, Biochem. Biophys. Res. Comm. 50:846-852; Stucki et Inneichen, 1974, Eur. J. Biochem. 48:365-375). Le mécanisme de l'action du Rouge de ruthénium a fait l'objet de recherches de différents laboratoires. La sortie du Ca2+ de la mitochondrie lorsque le Rouge de ruthénium est ajouté pour inhiber la captation active peut être divisée en ses trois origines : a) une perméabilité passive non spécifique due à une atteinte membranaire et sensible à l'albumine et à l'ADP (Harris et al., 1979, Biochem. J. 182:455-464); b) une modification rapide de Na+/Ca + particulièrement dans les tissus excitables (Crompton et al., 1977, Europ. J. Biochem. 79:549-558); c) une modification électroneurale de H+/Ca2+ (Fiskum et Lehninger, 1979, J. Biol. Che . 254:6236-6239).
Quoi qu'il en soit, la fuite du Ca + de la mitochnodrie provoquée par le Rouge de ruthénium est le résultat d'un blocage du cycle du Ca2+ à travers la membrane interne.
Selon la méthodologie connue de l'homme du métier et décrite dans les publications susdites, on a pu établir que le composé YS 035 inhibe de façon radicale la libération lente de ca2+ induite par le Rouge de ruthénium an niveau des mitochondries cardiaques et de façon partielle la fuite rapide de Ca2+ due à l'addition de NaCl.
Cet effet s'est avéré être dose-dépendant pour l'YS 035. L'inhibition par le composé YS 035 de la libération de Ca2+ dépendante de Na+ est de type non- compétitif avec un Ki apparent de 28 μM.
Il n'est pas possible actuellement d'établir si l'inhibition exercée par l'YS 035 à l'égard de la fuite en Ca2+ induite par le Rouge de ruthénium est un effet spécifique sur Ca2+/H+ ou une prévention non-spécifique de l'atteinte de la membrane mitochondriale. L'inhibition spécifique de la fuite en Ca2+ réglée par Na+/Ca2+ semble être pertinente pour les mitochondries cardiaques. La fuite de Ca2+ des mitochondries du foie provoquée par le Rouge de ruthénium est complètement bloquée par le composé YS 035, alors que celui-ci, en l'absence de Rouge de ruthénium, ne provoque aucune fuite de Ca2+.
A l'inverse, la Nifédipine est capable par elle- même de provoquer une fuite de Ca2+, probablement par effet de découplage.
Quant au composé D 600 (autre antagoniste du Ca2+ et dérivé du Vérapamil) il ne provoque à lui seul aucune fuite mitochondriale de Ca2+ et n'exerce aucune inhibition sur l'action du Rouge de ruthénium (Deana et al., Biochem. J. , supra) .
Le même auteur a également établi que le composé YS 035 n'affecte pas la libération mitochondriale de Ca2+ obtenue après addition dans le milieu de suspension des mitochondries de 1 ' agent chélateur EGDTA ou par un découplant (carbonyl-cyanure de p-trifluoro-méthoxyphényl- hydrazone) ou un inhibiteur de respiration (Antimycine A)
Le composé YS 035 à des concentrations inférieures à 100 μM produit une légère modification des paramètres communs d'évaluation de la fonction mitochondriale, comme l'index respiratoire, le degré de synthèse d'ATP ou le potentiel de membrane. La Nifédipine produit quant à elle dès la concentration de 100 μM une chute de tous ces paramètres, ce qui est en corrélation avec son action de libération de
Ca + liée à un dommage qui aboutit à un collapsus du potentiel de membrane.
Les deux mécanismes qui contribuent à augmenter la concentration cytoplasmique en Ca2+, la captâtion de Ca2+ et la libération de celui-ci par les mitochondries, étant inhibés par l'YS 035, ce composé peut être considéré comme le type idéal d'antagoniste calcique.
Une des propriétés remarquables du composé YS 035 est ainsi d'être un stabilisateur de membrane, par son action aussi bien sur des mécanismes de captation que d'extrusion du Ca2+, en particulier par la mitochondrie .
Action de l'YS 035 sur les potentiels d'action lents du muscle papillaire du cobave
L'action de l'YS 035 a été ensuite analysée par des recherches sur les potentiels d'action lents du muscle papillaire isolé du cobaye après dépolarisation, par 27 μM/1 de KC1 à approximativement -45 mV. L'augmentation maximale de la pente du potentiel lent, qui peut être utilisé comme une mesure d'entrée lente du courant calcique, restait virtuellement inchangée par l'YS 035 à des concentrations allant jusqu'à 30 μM/1 et une réduction marquée ne s'observait qu'à partir de 100 μM/1.
De plus, l'amplitude des potentiels d'action lents et la contractilité isométrique n'étaient réduits qu'aux plus fortes concentrations. La CE50 pour obtenir la réduction de Vmaχ a été calculée à une valeur de 1,6 x 10 "4 M/1. Par comparaison, les valeurs de CE50 du Diltiazem et de la Nifédipine étaient de 2,0 x 10"^ M/1 et de 2,9 x 10-8 M/1. L'action inhibitrice de l'YS 035 n'est donc discernable qu'à des concentrations relativement fortes, mais est associée à une diminution de la durée du potentiel d'action lent qui est caractéristique des antagonistes du Ca2+. Ce même composé YS 035, à des concentrations de 1 à 10 μM/1, induit une prolongation marquée du potentiel d'action lent, associée à une augmentation de la contractilité isométrique. Le composé YS 035 montre à 100 μM/1 une dépendance d'usage, qui ressemble à celle de la Nifédipine, en particulier en ce qui concerne la réduction de Vmaχ et de la contractilité.
Action du composé YS 035 sur les potentiels d'action du muscle papillaire du cobave
Sur le muscle papillaire à potentiel d'action de repos normal, le composé YS 035 s'est avéré augmenter, jusqu'à une concentration de 100 μM/1 la durée du potentiel d'action, respectivement à 30 et 90 % de repolarisation.
Pour une aumgentation de 30 % environ, les plus fortes valeurs ont été obtenues pour des concentrations de 2 à 10 μM.
Tout comme pour une réponse lente, comme décrit plus haut, dans ce cas la prolongation du potentiel d'action est associée à une augmentation de la contractilité. L'YS 035 se comporte comme le β bloqueur qu'est le d-sotalol, un antiarythmique de classe III.
A partir de 100 μM/1 et au-delà l'YS 035 réduisait la Vmax à. cause de son effet inhibiteur sur le canal sodique. Ces résultats montrent que jusqu'à 30 μM/1 l'YS 035 retarde de façon marquée la dépolarisation qui, à la concentration de 100 μM/1, est marquée par un effet inhibiteur sur les canaux calcique et sodique.
Action du composé YS 035 sur les potentiels d'action de l'oreillette σauche du cobave
Pour des concentrations de 1 μM/1 et au- dessus, l'YS 035 s'est avéré prolonger le potentiel d'action atrial. A la concentration de 10 μM/1 les durées des potentiels d'action respectivement à 30 et 90 % de repolarisation étaient augmentées d'environ 50 % et la contractilité s'est accrue parallèlement. A 100 μM/1 les variations de la durée des potentiels d'action respectivement à 30 et 90 % de repolarisation s'est accrue de 274 et 235 % respectivement, par rapport aux valeurs témoins, mais en revanche la contractilité était abaissée à sa valeur de base.
Action du composé YS 035 sur les potentiels d'action du muscle papillaire du cobave. partiellement dépolarisé
Sur le muscle papillaire dépolarisé à -72,6 mV en présence de 9 μM/1 de KC1, l'YS 035 exerce un effet inhibiteur sur le canal sodique, débutant à 1 μM et atteignant 42,8 % des valeurs témoins à la concentration de 100 μM/1. On a pu établir que le délai de repolarisation atteint son pic à 10 μM/1, même avec une réduction du potentiel de membrane de repos. L'inhibition de flux sodique a été augmentée par la dépolarisation. L'action de l'YS 035 sur les potentiels d'action devenait plus forte à 10 μM/1 et plus faible à 100 μM/1.
Action du composé YS 035 sur les courants ioniσues des fibres de Purkinπe chez le mouton
Cette action a été recherchée à l'aide d'un programme clamps. Des courbes de voltage ont été tracées, à l'état stable, chez des contrôles et en présence de 100 μM/1 d'YS 035 (voir Fig. 1). La figure 1 annexée représente de telles courbes, le voltage étant porté en abscisses en mV, tandis que 1 ' intensité ikl est portée en ordonnées en nA. L'intersection des courbes de voltage chez les contrôles et en présence d'YS 035 à -80 mV suggère que le composé YS 035 inhibe le courant i]ςl et réduit le courant externe (iout) mesuré dans des conditions stables. L'YS 035 réduit principalement les composants instantanés des potentiels étudiés de -5 à +45 mV. Cette inhibition est due aux ions potassium, ce qui explique le retard à la repolarisation.
Le composé YS 035 s'est ainsi avéré être un inhibiteur puissant du courant potassique externe dans les préparations cardiaques, le courant instantané étant d'abord affecté. Cet effet débute à la concentration d'environ 1 μM/1 et retarde la repolarisation. Cela correspond à la prolongation de la durée des potentiels d'action de l'oreillette gauche, du muscle papillaire et des fibres de Purkinje. Les effets de ce composé sur les canaux sodiques et calciques ne s'observent qu'à des concentrations égales ou supérieures à 100 μM/1. L'inhibition du canal sodique peut également ête accrue par une augmentation de la vitesse d'impulsion ou une dépolarisation des membranes cellulaires.
En ce qui concerne sa comparaison avec le Vérapamil et la Nifédipine, on doit souligner que l'YS 035 présente un effet antagoniste calcique extrêmement faible par comparaison aussi bien à celui du Vérapamil qu'à celui de la Nifédipine.
Au mieux, l'YS 035, qui est un dérivé du Vérapamil, devait être considéré comme doté de propriétés anticalciques non négligeables en raison de ses faibles effets secondaires.
De plus, le Vérapamil est un antiarythmique de classe IV déprimant la conduction auriculo-ventriculaire, alors que le composé YS 035 est un antiarythmique de classe III, répondant à cet égard au mécanisme d'action de la myodarone. Ce même mécanisme est mis en oeuvre avec un neuroleptique, comme par exemple la Melpérone ou la Trif luoropérazine. En ce qui concerne le composé YS 035, ce n'est donc pas la propriété anticalcique comme avec le Vérapamil qui est la propriété concernée dans l'effet thérapeutique recherché, mais l'effet membranaire Ca2+/Na+ dépendant et surtout K+ dépendant. Phénomène de résistance multiple aux drogues et activité de l'YS 035
En 1989, T.J. Lampidis et al., J. Cell. Pharmacol. 16-22, ont montré que le muscle cardiaque, un certain nombre de cellules cancéreuses et les cellules de la leucémie de Friend pouvaient accumuler des quantités relativement importantes d'anthracyclines et de colorants de charge positive. L'accumulation intracellulaire de ces composés à charge positive était correlée avec l'existence de potentiels électronégatifs élevés de la membrane plasmique trouvés dans ces cellules et avec une réduction du taux de P-glycoprotéine. A l'inverse, pour une résistance multiple aux drogues (RMD) on doit trouver une moindre accumulation de composés à charge positive et des potentiels de membrane plus bas .
Cela tend à montrer que la charge chimique joue un rôle important dans la sélection des fibres cardiaques intrinsèquement sensibles, des cellules cancéreuses, des cellules leucémiques de Friend et leur RMD intrinsèque ou acquise. T.J. Lampidis et al. ont été amenés à postuler que 1 'Adriamycine peut s'accumuler aussi bien dans les cellules cancéreuses à haut potentiel de membrane, comme le sont les cellules du muscle cardiaque. En d'autres termes, ils ont défini l'importance de la relation existant entre des potentiels de membrane électronégatifs et l'augmentation de l'attraction, puis de l'accumulation de composés à charge électrique positive dans des cellules sensibles et par comparaison dans des celllules présentant une RMD par le fait qu'elles acquéraient une résistance à l'Adriamycine. L'action du Vérapamil à cet égard est de restreindre l'efflux par modification de la perméabilité membranaire.
Dans une publication (Proceedings of the American Association for Cancer Research, 1990, vol. 31:373, In vitro cardiac potencies of multidrug résistance modulators, T.J. Lampidis, D. Kolanias, H. Tapiero, J.N. Savaraj et J. Cahn ont relaté que, en utilisant un système vidéo décrit par T.J. Lampidis et al. (1989, J. of Cell. Pharmacol. 16-22) et en prenant comme substances de référence le Vérapamil (Vpl) et un neuroleptique, inhibiteur de Calmoduline, la Trifluopérazine (TFP) capable de réverser la RMD dans les cellules de la leucémie de Friend, avec étude de leur action sur la contractilité spontanée des myocytes en culture, ils obtenaient les résultats suivants en recherchant l'action comparée de l'YS 035:
- la dose d'YS 035 nécessaire (50.000 ng/ml) pour arrêter les battements des myocytes était 200 fois plus élevée que celle du Vpl (250 ng/ml) et 10 fois plus élevée que celle du TFP;
- un effet chronotrope positif était toujours observé à 10 ng/ml d'YS 035, tandis qu'avec des doses aussi élevées que 20.000 ng/ml en traitement continu les battements des myocytes étaient toujours observés 24 heures plus tard;
- la dose produisant un effet détectable sur la fonction cardiaque myocytaire était respectivement de 5 ng/ml pour le Vpl et de 750 ng/ml pour la TFP et celle nécessaire pour arrêter la contraction des myocytes était respectivement de 250 ng/ml pour le Vpl et de 5000 ng/ml pour la TFP.
Cela montre clairement les différences fondamentales entre les composés ainsi comparés.
A cet égard, il faut souligner que la méthode développée par T.J. Lampidis et al. était uniquement une méthode de triage, permettant seulement d'analyser comparativement des composés chimiques par une méthode in vitro n'autorisant pas à faire de différence significative entre - le Vérapamil qui est un antagoniste calcique puissant, antiarythmique de classe IV de toxicité certaine,
- la Trifluopérazine, qui est un neuroleptique dont une propriété est un effet antiarythmique de classe
III, comme la Melpérone, mais ayant une toxicité manifeste, et
- le composé YS 035, faiblement anticalcique, pratiquement dépourvu de cytotoxicité, mais qui est en réalité un antiarythmique de classe III.
On a pu établir selon la présente invention que le composé YS 035 est au contraire particulièrement intéressant, car il s'est avéré:
. être doté d'un effet membranaire s ' exerçant principalement sur le canal potassique,
. être de type antiarythmique de classe III, et . exercer un effet cardiaque inotrope positif. Un tel composé possède l'activité membranaire capable de modifier la perméabilité de membrane, d'augmenter les potentiels de membrane lorsqu'ils sont déprimés, et ce de façon remarquable sans qu'il apparaisse de cytotoxicité.
utilisations thérapeutiques de la réversion de la RMD Cette réversion présente un intérêt tout particulier dans deux domaines de la pathologie humaine, le paludisme et le cancer.
Elle avait été pratiquement abandonnée en ce qui concerne les tentatives de lutte contre le paludisme, car les produits utilisés (Vérapamil, Imipramine et
Cyprohéptadine) ont tous démontré la possibilité d'une réversion de la chloroquino-résistance, mais à des concentrations toxiques in vitro ou à des doses induisant des effets toxiques in vivo. II en était de même pour la réversion de la résistance à des substances anti-cancéreuses. Il n'existait donc actuellement aucun moyen disponible apte à exercer dans ces types de pathologie humaine une réversion de la résistance aux médicaments sans effets secondaires cliniquement toxiques.
Action de l ' YS 035 sur la résistance multiple aux drogues en cancérologie
Des essais appropriés utilisant les techniques publiées par H . Tapiero et al . (Molecular Basis for Selectivity and Effects of Anthracyclines in Drug Résistance Mechanisms and Reversai, Enrico Mihich éd . , John Libbey - CIC Publishers, 19-21 juin 1989 , pages 233- 243 ) ont permis de vérifier des études de survie cellulaire avec la Doxorubicme (ci-après en abrégé Dox) à l ' égard d'une souche cellulaire de la leucémie myélogène humaine, et de mesurer la concentration intracellulaire de Dox comparativement aux potentiels de membrane pour des cellules normales et des cellules présentant une résistance multiple .
Selon ces auteurs , un certain nombre de produits anticancéreux dérivés des anthracyclines dont fait partie la Doxorubicine, comme par exemple la Pirarubicine, la Fluoro-Doxorubicine, la MEJ 2303 et son métabolite Ml, la Morpholino-anthracycline et 1 'Aclarubicine, qui répondent aux formules ci-après , présentent à l 'égard des cellules de la leucémie myélogène humaine susdites un comportement différent selon que ces cellules sont insensibles ou sensibles à la Doxorubicine (voir Tableau 1 ci-dessous) . DOXORUBICINE (DOX) PIRARUBICINE (THP-DOX
Figure imgf000023_0001
FLUORO -DOXORUBICINE (MEJ 2303 ) MEJ 2303 -M1
Figure imgf000023_0002
MORPHOLINO-ANTHRACYCLINE (KRN 8602) ACLARUBICINE (ACR)
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Tableau 1 : Accumulation d'anthracyclines dans les cellules de la leucémie myélogène humaine respectivement sensibles et résistantes à la Doxorubicine.
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Les cellules ont été exposées pendant la durée et à la concentration en drogue nécessaires pour induire une CI50. Elles ont ensuite été lavées, la drogue a été extraite avec du DMSO et analysée par HPLC. [ ]* : Métabolisation intracellulaire de MEJ 2303 en Ml. Cela confirme un fait bien connu du cancérologue qui prescrit des composés du groupe des anthracyclines comme agents anticancéreux, à savoir que le premier traitement déclenche un phénomène de RMD et qu'ainsi l'utilisation d'un autre produit de même origine peut se traduire par une nette toxicité cardiaque, résultant aussi de l'augmentation nécessaire de la posologie pour que l'effet anticancéreux se maintienne. Par ailleurs, les effets d" antiarythmie de classe
III démontrés avec l'YS 035 sont à la base de la présente invention, alors que T. Lampidis et al. (Association for Cancer Research, vol. 31, p. 373, 1990) avaient mis sur le même plan le Vérapamil (un anti arythmique de classe IV, qui est un antagoniste calcique), la Trif luopérazine (un neuroleptique) et l'YS 035 (considéré comme dérivé du Vérapamil). Ces auteurs n'avaient pu expliquer, sur la base des connaissances de l'époque, l'activité différente de l'YS 035, qui maintient à une concentration de 200 ng/ml, ou même de 20.000 ng/ml pendant 24 h en continu, ses effets sur les battements myocytaires pendant 24 heures sans toxicité, alors qu'on ne peut dépasser 5 ng/ml avec le Vérapamil, en raison de ses effets chronotrope et inotrope négatifs. Bien que l'on ne souhaite pas être lié par une quelconque théorie, on pense que c'est parce que l'YS 035 est un antiarythmique de classe III agissant sur les potentiels de membrane et les canaux potassiques qu'il exerce une action inotrope positive. L'invention concerne donc également une composition pharmaceutique comportant une combinaison avec un agent anticancéreux d'origine anthracycl inique d'un composé de formule I, ou de ses sels d'addition avec des acides pharmaceutiques acceptables, avec un agent anticancéreux d'origine anthracyclinique, dans des proportions que l'homme du métier est à même de définir à convenance dans chaque cas d'espèce, utile pour inhiber ou éviter l'instauration d'une résistance multiple aux drogues et la toxicité cardiaque induite.
Action de l'YS 035 sur la réversion de la. résistance à la Doxorubicine
Des essais appropriés ont été conduits pour rechercher la dose nécessaire pour que soit obtenu l'effet maximum de réversion de la RMD. Pour la doxorubicine (Dox) 20 μg/ml d'YS 035 étaient nécessaires, contre 10 μg/ml de Vpl et 1 μg/ml de TFP. Au surplus, cette dose de 20 μg/ml d'YS 035 réduisait de 40 fois la résistance à la Dox,alors que la dose de 10 μg/ml de Vpl présentait l'inconvénient majeur de constituer le l/40e de la dose capable d'arrêter le coeur, tandis que la TFP ne réduisait que de 4 fois la résistance à la Dox.
Les résultats obtenus sont d'autant plus importants que la Doxorubicine est le prototype des agents anticancéreux qui sont du type anthracycline, capables de générer une RMD et de provoquer des troubles cardiaques, tout comme 1 'aclarubicine, l'épirubicine, la zorubicine, la pirarubicine et l' idarubicine à titre d'exemples.
On peut estimer que l'efficacité et par conséquent l'intérêt du composé YS 035 et de ses équivalents, en particulier pour la réversion de la résistance multiple aux drogues in vivo à l'égard des produits anti-cancéreux, ont pour bases essentielles le faible niveau des effets secondaires cardiaques et une activité de modulateur de RMD très marquée .
Action de l 'YS 035 comme réverseur de la chimio-résistance de Plasmodium falciparum à la chlorocruine
On a util isé du sulfate de chloroquine , commercialisé par le Laboratoire Specia, ayant une masse moléculaire de 418 et appartenant à la classe des amino-4- quinoléines . L'YS 035, quant à lui, est un dérivé de synthèse de la classe du Vérapamil. Sa formule chimique est C21H29NO4, correspondant à la N,N-bis- (3,4-diméthoxyphén- éthyl) -N-méthylamine, de masse moléculaire 359,442. L'YS 035 est un inhibiteur faible de la pompe calcique, qui a été testé sur plusieurs types cellulaires.
Les souches plasmodiales testées étaient des souches de P. falciparum, adaptées en culture in vitro continue et provenant de patients impaludés, pris en charge dans le Département des Maladies Infectieuses, Parasitaires, Tropicales et de Santé Publique du Groupe Hospitalier de la Pitié-Salpêtrière.
Une souche, isolée en 1988 d'un patient ayant contracté le paludisme au Niger est restée sensible aux quatre antipaludiques que sont la chloroquine, la quinine, la Méfloquine et 1 'Halofantrine (P. Mirovsky et al.,
Trans. R. Soc. Trop. Med. Hyg., 84:511-515, 1989).
Une autre souche, isolée en 1989 d'un patient souffrant d'un accès palustre à son retour du Bénin a été adaptée et maintenue en culture au laboratoire. La souche concernée était résistante à la chloroquine et sensible à la quinine, à la Méfloquine et la 1 'Halofantrine. Elle a conservé ce profil de façon stable depuis lors.
Réverseurs de la chlorocruino-résistance
Après l'apparition de la résistance à la chloroquine (agent antipaludique le plus utilisé) dans les années 1960, plusieurs stratégies ont été adoptées pour contourner ce problème. Une souche chloroquino-résistante se caractérise par l'augmentation de l'efflux de la chloroquine hors du parasite résistant, ainsi que par la réversibilité de ce phénomène sous l'action de certaines molécules. C'est ainsi qu'ont été largement étudiées sur différentes souches de Plasmodium falciparum les propriétés synergiques des bloqueurs de la pompe calcique (principalement le Vérapamil) (Martin, S.K., Oduola, A.M.J. et Milhous, .K., 1987, Reversion de la chloroquino-résistance dans Plasmodium falciparum par le Vérapamil, Science 235:889- 901), des antidépresseurs tricycliques (Imipramine) et des antihistaminiques (Cyproheptadine) (Bitonti, A.J., Sjoerdsma, A., McCann, P.D. et al., 1988, Réversion de la chloroquino-résistance chez P. falciparum par la desipramine. Science 242:1301-1303; Peters, W., Ekong, R, Robinson, B.L., arhurst, D.C. et Pan X-Q, 1989, Drogues antihistaminiques réversant la chloroquinorésis tance dans P. falciparum, Lancet 11:334-335).
L'application in vivo de ces propositions a montré que toutes ces substances ne seraient actives chez l'animal, y compris l'homme, qu'à des concentrations toxiques. Il en était résulté que les travaux sur les réverseurs de la chloroquino-résistance avaient été pratiquement abandonnés.
On a alors trouvé de manière inattendue, comme exposé plus haut, que le composé YS 035 et tout équivalent fonctionnel de celui-ci, tel que par exemple un composé répondant à la définition d'activité indiquée plus haut en référence à l'objet de la présente invention, constitue un principe actif ou agent thérapeutique au contraire exceptionnellement efficace.
Méthodes
Test de chimiosensibilité in vitro
Dans cette étude on a utilisé le microtest isotopique décrit par R.E. Desjardins et al., Antimicrob. Agents Che other., 16:710-718, 1979. Ce microtest isotopique, qui est une application majeure du procédé de culture in vitro de P. falciparum mis au point par W. Trager et J.B. Jensen, Sciences, 193:673-675, 1976. Il est fondé sur l'incorporation par les parasites de 1 ' hypoxanthine marquée au tritium en présence de concentrations croissantes d'agents antipaludiques dans des plaques de microtitrage de 96 puits.
Après 48 heures d'incubation dans une cloche à C02 la culture a été stoppée. La radioactivité a ensuite été mesurée à l'aide d'un compteur de rayonnement bêta à scintillation liquide (modèle Beckman LS 1701) . La représentation du nombre d'impulsions par minute en fonction de la concentration de l'agent antipaludique a abouti à une courbe sigmoïde. La concentration inhibant de moitié la croissance parasitaire (CI50) a été calculée par extrapolation sur la portion linéaire de cette courbe.
Détermination de l'activité antipaludicrue propre à l'YS 035: Plusieurs gammes de concentrations de l'YS 035 ont été utilisées en présence des deux souches de P. falciparum mentionnées plus haut et testées selon la méthode isotopique précédemment décrite.
Les résultats représentés sur la Fig. (2) donnent le pourcentage d'inhibition parasitaire en fonction de la concentration de 1ΥS035.
Cette étude a révélé une activité antipaludique propre de l'YS 035 à partir de 600 ng/ml. une inhibition de 40 % de la croissance parasitaire a été obtenue avec une concentration en YS 035 de 4000 ng/ml (voir Fig. 2).
Une réversion significative de la résistance in vitro à la chloroquine a été obtenue précisément à partir d'une concentration de 4000 ng/ml de l'YS 035, qui est comme on vient de le voir la concentration du même composé entraînant une inhibition de 40 % de la croissance parasitaire (voir Fig. 3).
Egalement, lorsque le composé YS 035 est ajouté in vitro à de la chloroquine pour l'étude de ses effets sur une souche de P. falciparum résistante à la chloroquine
(Fig. 4), on observe que la concentration inhibitrice 50 (CI50 en nmol/1) du composé YS 035 est de l'ordre de 3 μg/ml .
De plus, l'examen de la Fig. 5 montre l'effet de l'YS 035, à des concentrations (en μg/ml) inférieures à toute activité propre, sur la CI50 (en nmol/1) de la chloroquine d'une souche de P. falciparum chloroquino- résistante. Il apparaît vraisemblable que l'YS 035 possède une activité antipaludique propre pour une concentration inférieure à 1 μg/ml.
Détermination de l'activité de l'YS 035 en association avec la chloroquine
Les souches susdites ont été mises en présence de concentrations croissantes de chloroquine. On a ensuite ajouté des concentrations fixes d'YS 035. Les résultats obtenus montrent un abaissement considérable de la CI50 de la chloroquine dans les divers cas étudiés.

Claims

REVENDICATIONS
1. Composition pharmaceutique utile pour l'inhibition, ou le traitement par réversion, de la résistance multiple aux drogues, caractérisée en ce qu'elle comprend une quantité efficace d'au moins un principe actif ou agent thérapeutique apte à agir sur les potentiels de membrane liés aux mouvements de Ca2+/Na+ transmembranaires et ceux liés au courant potassique en inhibant le canal potassique membranaire et le canal sodique membranaire, avec ou sans action parallèle sur le canal calcique membranaire, ledit agent thérapeutique étant en outre un agent antiarythmique de classe III et possédant un effet inotrope positif.
2. Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce que l'agent thérapeutique est un composé antiarythmique de classe III à action inotrope positive.
3. Composition selon l'une des revendications 1 ou 2, caractérisée en ce que ledit principe actif ou agent thérapeutique comprend au moins un composé choisi parmi les bis-phénéthylamines, notamment de la N-méthyl-N- bis (3,4-diméthoxyphényléthyl) aminé de formule générale I
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ou ses sels d'addition avec des acides pharmaceutiquement acceptables.
4. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisée en ce qu'elle comprend une combinaison dudit principe actif ou agent thérapeutique et d'un agent anticancéreux de type anthracycline.
5. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisée en ce qu'elle est sous une forme administrable par voie orale et comporte par dose unitaire de 120 à 240 mg d'au moins un principe actif ou agent thérapeutique tel que défini plus haut.
6. Utilisation d'une composition pharmaceutique selon l'une quelconque des revendications 1 à 5 pour l'obtention d'un médicament destiné à l'inhibition et/ou au taitement de la résistance multiple aux drogues.
7. Utilisation selon la revendication 6 pour l'obtention d'un médicament destiné à la réversion de la chimiorésistance de Plasmodium falciparum à la chloroquine.
8. Utilisation selon la revendication 6 pour l'obtention d'un médicament destiné à la réversion de la résistance multiple aux drogues en cancérologie.
9. Utilisation selon la revendication 8, caractérisée en ce que ladite composition thérapeutique comprend en outre un agent anticancéreux de type anthracycline.
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