WO1997024145A1 - Diagnostic drugs - Google Patents

Description

明 細 書 診 断 用 薬 剤 技 術 分 野

本発明は、 生体組織に存在する活性酸素やフリーラジカルを検出する 薬剤に関し、 更に詳細には、 脳、 心臓あるいはそれ以外の組織中の活性 酸素やフリーラジカルに関する情報を、 磁気情報として得ることにより、 腫瘍や虚血性疾患等の活性酸素もしくはフリーラジカルに関連する疾患 を診断する薬剤およびこれを利用する当該疾患の検出方法に関する。 背 景 技 術

活性酸素とは、 短寿命ながら反応性に富み、 さまざまな生体内酸化反 応に関与する酸素種と定義できる。 その範囲は定義により違ってくるが、 狭義の意味では、 ヒ ドロキシルラジカル （· Ο Η) 、 スーパ一ォキサイ ド (〇₂— )、 1重項酸素 （' 0₂)、 過酸化水素 （H ₂ O を指す。 広義の意 味では、 上記の活性種と生体成分 （例えば不飽和脂肪酸 L ) との反応に 由来するペルォキシラジカル （L O O ' ) やアルコキシラジカル （L O - ) および Η ₂ Ο ₂と C 1—からミエ口ペルォキシダーゼなどとの反応で生成 する次亜塩素酸イオン （C 1 Ο ) なども活性酸素である。 ヒ ドロキシ ルラジカルとスーパ一ォキサイ ドはラジカルであるが、 ラジカルとは、 1個又はそれ以上の不対電子を有する原子あるいは分子と定義される。 一方、 1重項酸素や過酸化水素はそれ自身ラジカルではないが、 ある種 のラジカル反応から生じたり、 他のラジカル反応を起したりするもので ある。

活性酸素やラジカルは一般的に不安定であり、 その寿命は、 気相中の ベンジルラジカルは 1 0— ⁵〜 1 0— ⁴秒、 常圧気相中の簡単なメチルラジ カル、 ヒ ドロキシルラジカルなどは 1 0―²〜 1 0— ²秒である。

生体内でさまざまな生理活性を示す活性酸素やフリーラジカルが近年、 生物学、 医学及び薬学の分野で注目され、 研究が進められている。 この 活性酸素や、 フリーラジカルが生体内で生成する原因としては、 紫外線、 放射線、 大気汚染、 酸素、 脂質過酸化、 金属イオン、 虚血，再灌流など が挙げられる。

これらの原因により発生した活性酸素や生体内フリーラジカルは、 月旨 質を過酸化し、 蛋白を変性し、 核酸を分解するなど各種の生体内反応を 起こす。 そして、 このような現象にともなう疾患としては、 脳虚血、 心 疾患、 消化器疾患、 癌、 老化、 炎症などが知られている。 このように活 性酸素や生体内フリーラジカルは、 数々の疾患と関係しているので、 こ れを体外より非侵襲的に検出できれば、 数々の疾患の原因究明ができ、 医学上有用な情報となり うる。

従来より知られているフリーラジカルの検出法としては、 反応系に反 応試薬をいれ、 その結果起こる反応系の吸光度の変化や発光を検出する 間接法とフリーラジカルの不対電子を直接検出する電子スピン共鳴 1 ectoron Spin Resonance ； E S R ) 法とがある。 E S R法は溶液、 固 体の何れの試料でも測定でき、 不透明のものゃ不均一系試料でも測定対 象になるため、 採取された生体試料中や生体中の活性酸素の検出にはき わめて有利となる。

しかし、 これまで一般的に使用されてきた E S R装置は、 X—バンド (約 9 . 5 G H z ) のマイクロ波が用いられていたため、 水による誘電損 失が大きく、 大容量の生体試料の計測は不可能であった。 最近、 L—バ ン ド （ 3 9 0〜 1 5 5 Ο Μ Π _Z ) と呼ばれる低周波のマイクロ波を用い る E S R装置 （以下 「しーバンド£ 3 1¾装置」 という） が開発され、 水 分の多い大容量試料、 特に生体試料中のフリーラジカルのイン · ビボ (in vivo) 測定が可能になりつつある。

この E S R法の原理は、 生体内に投与された安定なラジカルが生体内 の酸化還元酵素の作用を受けたり、 種々のラジカルなどの活性酸素ゃァ スコルビン酸などの還元剤と反応することで常磁性を失なうので、 この シグナル変化を測定、 解析することにより、 非侵襲的に生体内活性酸素 やフリーラジカル反応を画像化するというものである。

従って、 E S R法を実施するためには、 E S R造影剤とでもいうべき 安定なラジカル化合物を含有する診断剤の提供が必須であった。

一方、 核磁気共鳴 (Nuclear Magnetic Resonance； NMR) 法の原理 は、 1 9 4 5年に発見されたが、 それを医療用の画像化装置 （Magnetic Resonance Imaging； MR I ) iこ応用したの fま、 1 9 7 3年の し auterb ur が最初である。 その後のこの診断法の進歩はめざましく、 現在では、 もっとも汎用される診断法の一つとなった。

MR Iは当初、 造影剤の必要としない診断方法として登場したが、 陰 影のつきにくい病変部位の検出能を高めるのために、 現在、 造影剤の使 用の有用性が認識され、 一般化している。 それに伴いより検出能の高い 造影剤の出現が望まれている。

現在、 MR I用造影剤には数種のものがあり、 ニトロキシドラジカル もその一つである。 ニトロキシドラジカルの一つである P C A (2, 2 , 5, 5—テトラメチルピロリジン一 1—ォキシ一 3—カルボン酸； 3— カルボキシプロキシル） は、 腫瘍や心筋梗塞部位の造影剤として研究さ れ、 その造影効果が立証されている [例えば Magn. Reson. Imaging 3: 89-97; 1985, Investigative Radiology 20:591-595; 1985 参照] 。

しかし、 例えば脳のように現在の MR I造影剤では造影できない臓器 もあり、 更に新しい MR I造影剤の登場が待たれている。 また、 脳には多数の神経細胞があり、 その活動に伴なう起電力の変化 は脳電図 （el ectroencephal ogram, E E G ；脳波） として広く用いられ ている。 一方、 このような起電力に伴なう神経を流れる電流はその周囲 に磁場を作り、 これにより作られる磁界の記録を脳磁図 （magnetoeneph alogram, M E G ) と呼ばれる。 磁場の強さ及び方向は、 電流の位置、 強さ及び方向で決まるため、 脳磁場の測定は、 脳波の測定と基本的に等 価である。 脳電図は、 生体の電気伝導度が一定でなく組織や骨などで大 きく変わること、 電位の強度情報しか得られないことから、 正確に活動 部位を推定することは困難である。

これに対し、 生体磁気に起因する磁場変化を計測する脳磁図は、 生体 組織中の磁場の透過率が空気中とほぼ等しく一定で磁場が歪まないので、 正確に活動部位を推定することが可能である。 しかしながら、 脳からの 磁界は地磁気の 1億分の 1 と極めて微弱なため、 その計測には高感度な 磁気センサ一が必要であり、 困難であった。 ところが、 2 0年ほど前、 超電導量ナ十渉素子 (Superconduct ing Quantum Interference Dev ice^ S Q U I D ) を用いた磁束計が開発され、 初めて安定した脳などの生体 磁気記録が可能となった。 現在では、 この磁束計を利用して、 脳内神経 細胞の活動部位を非侵襲的に外部より画像化できる医療用機器が開発さ れている。

この診断法は、 てんかん発作の焦点発見に利用され、 てんかんの外科 的治療の適用判定に有用な検査法となりつつある。 将来は、 ァルツハイ マー病の初期症状診断に応用されると期待されているが、 上述したよう に、 脳からの磁界が極めて弱いので、 これを補う有用な脳磁図用造影剤 の登場が望まれている。

非侵襲的測定法である磁気共鳴法により、 生体組織内の活性酸素ゃフ リーラジカルに関する情報が生体画像として得られれば、 脳虚血、 心疾 患、 消化器疾患、 癌、 老化、 炎症、 白内障のような活性酸素ゃフリーラ ジカルが関与していると考えられる病態 （以下、 「活性酸素等関連疾 患」 という） の研究及びこれらの疾患又は症状の診断に有用である。 従って R、 種々の生体組織、 特に脳組織を造影することのできる診断用 薬剤の提供が求められている。 発 明 の 開 示

本発明者らは、 生体内の活性酸素やフリーラジカルに関する情報を磁 気共鳴法ゃ脳磁図による生体画像として得るために利用しうる安定なラ ジカル化合物を検索していたところ、 特定な 5員環 N—ォキシル化合物 は、 容易に活性酸素やフリ一ラジカルを検出することができ、 しかも従 来造影が困難であった脳組織をも造影することができるため、 活性酸素 ゃフリーラジカルに関する情報を磁気共鳴法や脳磁図による生体画像と して得るのに有用であることを見いだし、 本発明を完成した。

すなわち本発明は、 次の式 （I) または （I I )

( I ) ( I I )

(式中、 Rは炭素数 1から 4までのアルキル基を示し、 R ,ないし R ₅は それぞれ水素原子または炭素数 1から 4までのアルキル基を示す） で表される 5員環 N—ォキシル化合物を有効成分とする診断用薬剤を提 供するものである。 図面の簡単な説明

図 1は、 3—カルボキシープロキシルによるマウス脳しバンド 1'： S R 一 C T像を示す図面である。

図 2は、 3—カルボキシ一プロキシルメチルエステルによるマウス脳 Lバンド E S R— C T像を示す図面である。

図 3は、 3—カルボキシープロキシルェチルエステルによるマウス脳 Lバンド E S R— C T像を示す図面である。

図 4は、 2 —ェチル— 2， 5 , 5— トリメチルォキサゾリジンォキシル によるマウス脳 Lバンド E S R— C T像を示す図面である。 発明を実施するための最良の形態

本発明で用いることのできる 5員環 N—ォキシル化合物は、 上記式 ( I ) で表わされる化合物および式 （I I) で表される化合物である。 このうち、 化合物 （I) はカルボキシル基を有するピロリジンォキシル 誘導体とアルコールとのエステルであり、 公知であるか、 公知化合物の 製法に準じて容易に製造できる化合物である。 好ましい化合物 （I ) の 例としては、 3—カルボキシープロキシルメチルエステル、 3—カルボ キシープロキシ/レエチルエステルが挙げられる。

一方、 化合物 （Π) は、 例えば、 ァミノアルコールとケトンを縮合す ることにより製造できるものであり、 好ましい化合物の例としては、 2 ーェチルー 2 , 5 , 5—トリメチルォキサゾリジンォキシル等が挙げられ る。

上記の 5員環 N—ォキシル化合物を用いて、 本発明の診断用薬剤を調 製するには、 当該化合物を適当な薬学的に許容される溶媒、 例えば、 生 理食塩水、 等張リン酸緩衝液等に溶解し、 必要によりプロピレングリコ ール、 ベンジルアルコール等の任意成分を添加して製剤化すれば良い。 本発明の診断用薬剤の好ましい剤形としては、 注射剤、 点滴用剤、 塗 布剤、 点眼剤等が挙げられる。

以上の如く して得られる本発明の診断用薬剤は、 脈管内投与により活 性酸素ゃフリーラジカルの存在を検出する活性酸素等関連疾患診断剤と して利用することができ、 例えば、 脳、 心臓などの疾患の M R I用造影 や脳磁図用あるいは E S R用造影のために用いることができる。

また、 本発明の薬剤は、 正常実験動物や疾患モデル実験動物に投与し、 正常または疾患時における組織や臓器より発生する活性酸素ゃフリーラ ジカルを外部より検出し、 画像化できる。 この結果により、 活性酸素や フリ一ラジカルがどの疾患に関与するかを調べるための検出試薬として 用いることができ、 医学上有用な情報が得られる。

更に、 採取された生体試料を均質化し、 適当な緩衝溶液と本発明の薬 剤を加え、 適当な時間反応させた後、 E S Rを測定することにより、 生 体組織中の活性酸素やフリーラジカルの有無や量を測定することができ る検出用試薬として用いることができる。

本発明の診断用薬剤の使用量は、 その目的や対象となる臓器、 疾患に よっても異なる力 一般には 0 . 1〜 5 0 O m g Z k gとなる程度の量を 投与すれば良い。 実 施 例

以下、 合成例および実施例を挙げて本発明を更に具体的に説明するが、 本発明はこれら実施例に何ら制約されるものではない。 合 成 例 1

3一カルボキシ一プロキシルメチルエステルの合成：

3—カルボキシ一プロキシル 1 g ( 5 . 3 7 m m o 1 ) をジクロロメ タン 1 0 m 1 に溶解した。 室温でメタノール 0. 65m l ( 1 6. 1 mm o j ) 、 次いでジメチルァミノピリジン 525 mg (4. 30mm o 】） を加えた後、 反応混合物を 0°Cに冷却し、 ジシクロへキシルカル ボジィミ ド 1. 22 g (5. 9 1 mmo i ) を加え、 0"Cで 1時間撹拌 した。 反応混合物をジクロロメタン 1 0m 1 で希釈し、 水洗、 乾燥

(N a₂SO 、 溶媒留去した。 残渣をカラムクロマ トグラフィー （シリ 力ゲル、 へキサン ：酢酸ェチル =4 ： 1 ) で精製し、 黄色油状物 76 5 m g (7 〗％) を得た。 このものは、 冷所で保管した。 合 成 例 2

3一カルボキシ一プロキシルェチルエステルの合成：

メタノールをエタノールに代える以外は、 合成例 1 と同様にして 3—力 ルボキシープロキシルェチルエステル 2. () 4 g (収率 59. 1 %) を 得た。 このものも冷所で保管した。 合 成 例 3

2—ェチル一 2， 5, 5— トリメチルォキサゾリジンォキシル の合成：

ケアナ （Keana) らの方法 [J. Am. Chem. Soc. , 89， 3055〜3056 (19 67)] を参考にし、 下記の如く して合成を行った。

( 1 ) 2—ェチルー 2 , 5 , 5— トリメチルォキサゾリジンの合成

2—ァミ ノ一 2—メチル一 1一プロパノ一ル 40 g (449 m m o 1 ) 、 2—ブタノン 40 g (5 54 mm o 1 ) 、 および p— トルエンス ルホン酸 300 m g ( 1. 6 mm o ] ) を 300m l のベンゼンに溶か し、 7日間加熱還流した。 還流中、 50 m 1のベンゼンと 40 gの 2— ブタノンの混合液を 24時間おきに加えた （環流により、 脱水反応が起 こりォキサゾリジン環が形成される） 。 反応終了後、 冷却し、 飽和炭酸 水素ナトリウム溶液 5 0 m 1 で 3回、 飽和塩化ナトリウム溶液 5 0 m 1で 1回洗浄し、 無水硫酸ナトリゥムで乾燥後、 溶媒を留去した。

(2) 2—ェチルー 2, 5, 5— トリメチルォキサゾリジンォキシル の合成

上記 （ 1 ) で得た 2—ェチル一 2 , 5 , 5—トリメチルォキサゾリジン 2. 0 5 gに無水ェ一テル 3 Om l を加え、 混和した後、 氷浴中で 3— クロ口過安息香酸 2. 8 1 gの無水エーテル溶液 1 0 Om l を攪拌しな がら、 ゆっく り加えた。 溶液が 3—クロ口過安息香酸により酸化され黄 色になったことを確認した後、 攪拌を止め室温で一昼夜放匱した。

放置後、 飽和炭酸水素ナトリウム溶液 5 O m l で 3回、 飽和塩化ナト リゥム溶液 50m lで 1回洗浄し、 無水硫酸ナトリゥムで乾燥後、 溶媒 を留去した。 続いて、 シリカゲルカラム （直径 3 c mX長さ 5 7 c m、 ヮコ一ゲル C— 200、 1 5 0 g ) を用レヽ、 へキサン ェ一テル （ 9 9 : 1— 2 5 : 1 (vZv) ) を溶出溶媒として精製し、 分取した _e 分取 した各画分を E S Rならびに T LCで調べ、 目的物を含む分取液の溶媒 を留去し、 2—ェチルー 2， 5， 5—トリメチルォキサゾリジンォキシル 3 20 m g (収率 1 4. 2%) を得た。 このものは冷所で保管した。 実 施 例 1

生 体 内 分 布：

被験試料として、 3—カルボキシ—プロキシル、 3—カルボキシープ 口キシノレメチルエステノレ、 3—カルボキシープロキシ/レエチルエステル および 2—ェチルー 2， 5, 5—トリメチルォキサゾリジンォキシルを用 い、 E S Rによる生体内分布の試験を行った。

実験動物としては、 マウス （d d Y 雌性） 3 6匹を 1群 3匹として用 いた。 実験は、 マウスの尾静脈内に、 無麻酔下被験試料を 7. 5 μ mo 】投与し、 3、 1 0、 30分間放置した。 次いで、 すばやく脱血をおこ ない、 脳を摘出した。 続いて、 摘出した脳と血液の 9倍量のリン酸緩衝 液を加え、 ホモジナイズした。 このホモジナイズの一部を取り、 これに フェリシアン化カリウム溶液を最終濃度が 5 mMとなるように加え、 生 体内の活性酸素等によりヒ ドロキシルァミン体となった被験試料を二卜 口キシドラジカルに再変換し （一電子酸化） 、 E S R用試料を得た。 一電子酸化後の被験試料の濃度を X—バンド E S Rで測定し、 生体試 料中の濃度とした。

一方、 マウスへ投与した量と同じ量の被験試料溶液を調製し、 9倍量 のリン酸緩衝液を加える以降と同様の条件で処理し、 被検試料の濃度を X—バンド E S Rで測定し、 全投与量とした。

各試料は、 1 00 1のキヤビラリ一 （長さ 1 1 6. 5 mm) に 1 5 m m取り、 これを石英セルに入れ E S Rスぺク トルを ド記条件で測定した。

( 測 定 条 件 ）

測 定 装 置 ： 電子スピン共鳴装置 [ J E S— R E 1 X (H本電子

(株） ） ]

外 部 磁 場 ： 33 1. 5 ± 5mT

磁 場 変 調 ： 1 00 k H z

磁場変調幅 ： 0. 1 mT

時 定 数 ： 0.03秒

マイクロ波出力 ： 5mW

掃 引 時 間 ： 2分

測 定 温 度 ： 室温

E S Rスペク トルから、 全投与量に対する脳および血液中の被験化合 物 （スピンプロ一ブ） の割合 （％d o s e) 、 この。 /od o s eを脳およ び血液の重さで割った値 （。/。d o s e/g) 、 標的臓器である脳の。 /o d o s e/gと血液の。 /o d o s e /gとの比を求めた。 この結果をそれぞ れ表 1〜表 3に示す

t t

αι o

脳 血 液

被 験 化 合 物

J 刀 ■1 リ 刀 3 分 1 0分 3 0分 一力ノレボキシプロキシ /レ 0 . 0 4 9 0. 2 9 9 0. 1 6 2 1 4 • 0 5 8 Ί ft Q 4

3一カルボキシプロキシル

メチノレエステノレ 1 . 3 0 5 0. 6 7 2 0. 2 0 6 4 . 6 2 2 2. 6 7 6 2. 1 7 7

3一力ルポキシプロキシル

ェチノレエステノレ 0 . 7 8 9 0. 7 4 2 0. 1 1 6 3 . 4 5 8 2. 9 1 9 3. 3 7 5

2—ェチノレ一 2 , 5 , 5 - トリメチルォキサゾリジ 1 . 6 2 5 1. 6 3 6 0. 5 2 1 4 • 5 2 4 3. 6 9 0 0. 8 1 0 ンォキシル

(表中、 数字は。/。d o s eを示す）

to t

en o 〇 cn

脳 血 液

被 験 化 合 物

3 分 1 0分 3 0分 3 分 0分 3 0刀

3一カルボキシプロキシル 0. 1 2 5 0. 6 9 4 0. 4 0 6 7. 8 8 9 4. 4 26 2. 5 7 9 3一力ルポキシプロキシル

メチ/レエステノレ 3. 1 4 0 1. 8 2 3 0. 4 7 9 2. 4 7 6 7 4 3 1. 3 60

3一カルボキシプロキシル

ェチゾレエステノレ 1. 8 94 1. 8 3 9 0. 2 8 2 2. 0 1 8 2. 1 9 9 2. 1 0 9

2—ェチルー 2, 5 , 5 - 卜 リメチルォキサゾリジ 3. 8 1 0 4. 1 2 4 】 . 2 1 1 2. 5 4 7 2. 3 1 8 1. 3 0 4

(表中、 数字は。/。 d o s e Zgを示す）

t t

〇 〇 cn

3 J rfilnl fi の 卜し

餘 "^ 物

3分 1 o分 30分

3—カルボキシプロキシル 0. 0 1 6 0. 1 5 7 0. 0 3 0

3—カルポキシプロキシル

メチノレエステ/レ 1. 2 7 0 1. 0 5 2 0. 1 4 3

3一カルボキシプロキシル

ェチ /レエステノレ 0. 9 3 9 0. 8 3 6 0. 0 4 8

2—ェチルー 2， 5 , 5—

トリメチルォキサゾリジ 1. 4 9 6 1. 7 7 9 1. 7 2 4 ンォキシル

表 3に示すように、 脳と血液の比は、 3—カルボキシープロキシルで は 1 0分後で 0. 1 57であるのに対し、 他の被験化合物では 0. 836 〜 1. 77 9と高い値を示した。 このことは、 3—カルボキシ一プロキ シルに比し、 他の 3種の被験化合物は脳血管関門を通過し、 脳内に移行 しゃすいこと、 つまり脳内の造影剤として利用し得ることが示された。 実 施 例 2

マウス脳 Lノくンド E S R— CT像の測定：

ネンブタール麻酔 （75mg/k g、 筋注） したマウスの尾静脈內に 実施例 1の 4種の化合物を 1 5 μ mo 1投与し、 頭部横断面の Lバンド E S R— CT画像を下記条件で測定した。

( Lバンド E S R— CTの測定条件 ）

測 定 装 置 ： 電子スピン共鳴装置 [ J E S— RE 3 L (日本電子

(株） ） ]

外 部 磁 場 38. 5 mT

磁 場 勾 配 0. 6 mT/ cm

掃 引 幅 1. 84 mT

サンプリング · ポイン ト ： 5

積 算 回 数 ： 1 0

射 影 数 ： 1 8 (1 0° 毎）

磁 場 変 調 ： 1 00 k H z

磁場変調幅 ： 0. 1 mT

時 定 数 ： R a p i d

マイク口波出力 ： 1 mW

測 定 温 度 ： 室 温

( 結 果 ） 比較である 3—カルボキシ—プロキシルについての、 マウス脳 Lバン ド E S R— C T像を図 1に、 本発明の 3—カルボキシープロキシルメチ ルエステノレ、 3—カルボキシープロキシルェチノレエステ/レ及び 2—ェチ ルー 2 , 5 , 5— トリメチルォキサゾリジンォキシルのそれぞれのマウス 脳 Lバンド E S R— C T像を図 2、 図 3および図 4に示す。

この結果から明らかなように、 3—カルボキシ一プロキシルは脳下部 に高濃度に集まっており、 脳内に殆ど移行していない。 これに対し、 他 の 3種の化合物は、 脳部位にも高濃度に集まっており、 明瞭なマウス脳 Lバンド E S R— C T像が得られた。 産業上の利用可能性

本発明の診断用薬剤の有効成分である 5員環 N—ォキシル化合物は、 十分な半減期を有し、 生体内のフリーラジカルと相互作用するので、 磁 気共鳴法によるフリーラジカルの分布の生体画像を得るのに有用で、 脳 虚血、 心疾患、 消化器疾患、 癌、 老化、 炎症、 白内障のような活性酸素 ゃフリ一ラジカルが関与していると考えられる活性酸素等関連疾患又は 症状の診断薬として使用することができる。

すなわち、 5員環 N—才キシル化合物を含む本発明の診断用薬剤を生 体に投与した後、 当該化合物の生体內でのシグナル変化を E S R、 NM R等で検出することにより、 上記の活性酸素等関連疾患を検出、 診断す ることができる。

特に、 5員環 N—ォキシル化合物は、 脳血管関門を通過し、 かつ脳內 でフリーラジカルと相互作用するので、 従来磁気共鳴法による画像化が 困難であった、 脳虚血、 脳腫瘍について画像化が可能となる。

従って、 本発明の診断用薬剤は、 M R I、 脳磁図のために使用される 他、 ヒ ト頭部のような極めて大容量の生体試料の測定を可能にする E S R装置が開発された後は、 E S R法により脳内フリーラジカルの分布の 画像を得て、 活性酸素やフリーラジカルの関与する疾患又は症状の非侵 襲的診断を行うことが期待できる。

また、 5員環 N—ォキシル化合物は、 正常実験動物や疾患モデル実験 動物に投与し、 正常または疾患時における組織や臓器より発生する活性 酸素やフリーラジカルを外部より検出し、 画像化できる。 この結果より 活性酸素ゃフリーラジカルがどの疾患に関与するかの検出用試薬として 用いることができ、 医学上有用な情報が得られる。

更に、 採取された生体試料を均質化し、 適当な緩衝溶液と 5員環 N— ォキシル化合物を加え、 適当な時問反応させた後、 シグナル強度を E S Rで測定することにより、 生体組織中の活性酸素やフリーラジカルの有 無や、 その量を測定することができる。

Claims

. 次の式 （1) または （II)

ー上

(i (II )

の (式中、 Rは炭素数 1から 4までのアルキル基を示し、 R>ないし R₅は 囲

それぞれ水素原子または炭素数 1から 4までのアルキル基を示す） で表される 5員環 N—ォキシル化合物を有効成分とする診断用薬剤。

2. N—ォキシル化合物が、 3—カルボキシ—プロキシルメチルエステ ル、 3—カルボキシープロキシルェチルエステルまたは 2—ェチルー

2， 5, 5—トリメチルォキサゾリジンォキシルである請求項第 1項記載 の診断用薬剤。

3. E S R、 NMRまたは脳磁図用の造影剤である請求項第 1項または 第 2項記載の診断用薬剤。

4. 活性酸素またはフリーラジカル検出剤である請求項第 1項または第 2項記載の診断用薬剤。

5. 生体内に次の式 （1) または （II)

(I I )

(ι )

(式中、 Rは炭素数 1から 4までのアルキル基を示し、 ないし R₅は それぞれ水素原子または炭素数 1から 4までのアルキル基を示す） で表される 5員環 N—ォキシル化合物を投与し、 当該化合物の生体内で のシグナル変化を E S Rまたは NMRで検出することを特徴とする活性 酸素等関連疾患の検出法。

6. 活性酸素等関連疾患が、 脳虚血、 心疾患、 消化器疾患、 癌、 老化、 炎症および白内障から選ばれた疾患である請求項第 4項記載の検出法。

7. 採取された生体組織を均質化した後、 次の式 （I) または （II)

R -

(ΐ ) (II )

(式中、 Rは炭素数 1から 4までのアルキル基を示し、 R,ないし R_sは それぞれ水素原子または炭素数 1から 4までのアルキル基を示す） で表される 5員環 N—ォキシル化合物を加えて反応させた後、 シグナル 強度を E S Rで測定することを特徴とする活性酸素の検出法。

8. E S R、 NMRまたは脳磁図用の造影剤製造のための、 次の式 （I) または (II)

(I ) (II )

(式中、 Rは炭素数 1から 4までのアルキル基を示し、 R,ないし R₅は それぞれ水素原子または炭素数 1から 4までのアルキル基を示す） で表される 5員環 N—ォキシル化合物の使用。

9. 活性酸素検出剤製造のための、 次の式 （I) または （II)

(I ) (II )

(式中、 Rは炭素数 1から 4までのアルキル基を示し、 R,ないし R₅は それぞれ水素原子または炭素数 1から 4までのアルキル基を示す） で表される 5員環 N—ォキシル化合物の使用。