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WO1997019166A1 - Novel strain belonging to exserohilum monoceras and use of the same - Google Patents

Novel strain belonging to exserohilum monoceras and use of the same Download PDF

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WO1997019166A1
WO1997019166A1 PCT/JP1996/003384 JP9603384W WO9719166A1 WO 1997019166 A1 WO1997019166 A1 WO 1997019166A1 JP 9603384 W JP9603384 W JP 9603384W WO 9719166 A1 WO9719166 A1 WO 9719166A1
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WO
WIPO (PCT)
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strain
jtb
monoceras
hilum
strains
Prior art date
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Ceased
Application number
PCT/JP1996/003384
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Hiroshi Tsukamoto
Michiyo Takabayashi
Tadaharu Hieda
Masatoshi Gohbara
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Japan Tobacco Inc
Original Assignee
Japan Tobacco Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=17899900&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=WO1997019166(A1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Japan Tobacco Inc filed Critical Japan Tobacco Inc
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Priority to US08/875,079 priority patent/US6313069B1/en
Priority to AU75884/96A priority patent/AU709814B2/en
Priority to BR9607247A priority patent/BR9607247A/pt
Priority to KR1019970704777A priority patent/KR100251230B1/ko
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
    • C12N1/145—Fungal isolates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
    • A01N63/30—Microbial fungi; Substances produced thereby or obtained therefrom
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/645—Fungi ; Processes using fungi

Definitions

  • the present invention relates to a novel strain belonging to Exserohilum monoceras, a weed controlling agent and a method for controlling weeds using the same.
  • Herbicides using weed pathogenic microorganisms are one of them. Weed pathogenic microorganisms are ubiquitous in weeds, and microbial herbicides that use them are less harmful to small animals such as humans, fish and shellfish, and insects, and may cause phytotoxicity to plants. Is known to be low. In addition, microbial herbicides have high specificity for the target weeds, and are therefore highly selective and are unlikely to disrupt ecosystems.
  • microbial herbicides include Stranglervine (Potatoceae) herbicide D e Vine using Phytophthora palmi vora, and Northern joint vetch (Kusanem) using Coiletotric hum gloeosporioides f. Sp. Aeschynomene3 ⁇ 4 ” Round-leaved ma 1 low herbicide Co llgo and Colletotrichum gloeosporioid es f. Sp. Malvae io M a 1
  • microbial herbicides against the most important weed, Nobies include Cochli obolus lunatus (Anamonolev: Curvularia lunata) [Weed Research (1987), 27, 43-47, JP-A-5-284963], or Ustilago trichophora. 3/0565 6), Drechslera monoceras (synonym of Exserohi lum monoceras) (JP-A-3-219883, JP-A-4-226905, JP-A-4-360678, JP-A-4-370090, A controlling agent using a method disclosed in Japanese Unexamined Patent Publication No. Hei 6-277042, Japanese Unexamined Patent Publication No. Hei 6-329513, Japanese Unexamined Patent Publication No. Hei 6-247822] is known.
  • An object of the present invention is to provide a microorganism that exhibits a sufficient herbicidal effect and has a high spore-producing ability. Disclosure of the invention
  • the present inventors selected strains having a high herbicidal effect from strains having pathogenicity to Nobies and found a group of strains having a high spore-producing ability in addition to a high herbicidal effect. Furthermore, when the intracellular esterase zymogram pattern was examined, it was found that all of these strains showed the same staining pattern, and that the staining pattern was not similar to any of the known strains. Was obtained. Based on the above findings, the present inventors have completed the following invention.
  • the present invention relates to a strain belonging to the genus Exeguchi hilum monoceras which exhibits the esterase zymogram pattern shown in FIG.
  • the present invention is a weed controlling agent comprising the above-mentioned strain as an active ingredient. Further, the present invention is a weed controlling method using the above-described weed controlling agent.
  • the strain of the present invention has been isolated from the diseased fly, and its bacteriological properties are as follows.
  • Conidiospores are dark-colored, multivesicular with 2-8 internal and external septa, spindle-shaped, widest in center, narrowing on both sides. In addition, a hollow (hilum) protrudes from the base end. The size of the conidiospores ranges from 40 to 150 x 150 to 25 m.
  • the genus name of the genus Hexem follows the classification of A.SIVANESAN. LUTTRELL (Revue de Mycologie 41, 271-279, 1977) and ALCORN (Mycotaxon 8, 411-414, 1978) also support this classification. Ellis
  • strain of the present invention include: JTB—012, JTB—013, JTB—
  • JTB—013 is FERM BP-5272 (deposit date: October 27, 1995)
  • JTB—79 9 is FERM BP-5273 (deposited on October 27, 1995)
  • JTB—803 is FERM BP-5274 (deposited on October 10, 1995)
  • JTB-808 is a FERM BP-5275 (deposit date: October 27, 1995) with the accession number of JTB-808 (Higashi Tsukuba, Ibaraki, Japan) It has been deposited at 1-chome 1-3.
  • these strains have different stellar zymogram patterns from known strains belonging to Exeguchi Hilum monoceras, IF09800, IM I125854, I1125855, ATCC24641, and ATCC58346. Show.
  • the strain can be cultured in the same manner as a known strain belonging to Hexerum monoceras.
  • the medium any of a synthetic medium and a natural medium can be used as long as the medium appropriately contains assimilable carbon sources, nitrogen sources, inorganic substances and necessary growth promoting substances.
  • Specific examples of the medium include an automeal sucrose agar medium, an automeal agar medium, a potato sucrose agar medium, a V-8 juice agar medium, and a Wapek-Dox agar medium.
  • the temperature at 15 to 30 ° C, preferably 20 to 25 ° C, and the pH at 3 to 9, preferably 5 to 8. Under the above conditions? After culturing for about 14 days, a sufficient amount of spores are formed on the medium surface.
  • the weed control agent of the present invention is prepared by using the above spores as an active ingredient, and adding a surfactant and the like thereto. Spore concentration can be determined arbitrarily within a range that achieves the herbicidal effect, 1 0 2 to 1 0 6 spores / m 1, and preferably from to 1 0 3 to 1 0 5 spores Z m 1.
  • spores amount per ares 1 0 9-1 0 'preferably sprayed so that ° pieces.
  • the weed controlling agent of the present invention mainly targets Novie, but is not limited thereto.
  • the condensed spores were formed by inoculating the excised lesions in a moist chamber at 25 ° C according to a conventional method.
  • the conidia are picked up with a handle and placed on potato sucrose agar. Then, monospore separation was performed.
  • Each strain was inoculated on oatmeal sucrose agar medium and cultured at 25 ° C for 14 days to form conidia. Thereafter, 0.0 in 2% Tw free JJ JJJIt een 2 0 aqueous solution, were suspended spores, 5 m 1 per 1 0 3 1 0
  • Nobies (20 individuals per pot) were grown up to 1.5 leaves in 1 / 100th pots, and then flooded to a depth of about 5 cm. The spore suspension was subjected to a drop treatment of 5 ml per pot, left in a greenhouse for 3 weeks, and the control effect was examined. The nobies herbicidal effect was evaluated as shown below.
  • Pest control effect [1 1 (Number of surviving individuals Z 2 0) 3 1 0 0
  • Each strain was cultivated in a potato sucrose medium at 25 ° C. in the dark for 7 to 10 days to form bacterial cell mats.
  • the obtained bacterial cell mat was washed with distilled water several times, frozen at 180 ° C, and freeze-dried.
  • the cells After crushing the cells in 50 mM Tris-hydrochloric acid buffer (pH 7.4), the cells are filtered with filter paper, and the filtrate is centrifuged at 1000 rpm to use the supernatant as a sample. Using. The protein concentration in the sample was determined by the Lowry method. Using an acrylamide gel (concentrated gel: 4.5%, separation gel: 10%) on a large slab gel electrophoresis layer, about 50 g of protein per sample was electrophoresed at 30 mA for 2 hours.
  • esterase activity staining was performed. After dissolving 40 mg of naphthyl acetic acid in 4 ml of 50% aqueous acetone solution, add 200 mg of fast violet B salt and 200 ml of 50 mM Tris monohydrochloride buffer. In addition, a staining solution was used. The gel was immersed in the staining solution, gently shaken, and stained for 30 minutes. Thereafter, the gel was washed with distilled water, and the mobility of each band was measured.
  • this strain group includes known strains IFO-980, IMI-125-854, IMI-125-855, ATC C-24641, and ATC C-588. 3 4 6 ⁇ beauty Patent 5 ⁇ ⁇ 6- 3 2 9 5 1 3 ⁇ this Drechsrela monoceras var. from different from the esterase the I mode grams pattern of Microspores, the strain group novel strains different from the known strains indicated It became clear that it was.
  • Lac Bokuichisu 9% were suspended Zeorai sheet 1% water 90% mixture 1 m 1 per conidium (J TB- 0 1 2 strains) 1 0 7 a. After air-drying, the dried product was mixed and pulverized to prepare a wettable powder.
  • Kieselguhr 1 5% was suspended kaolin 7 7%, polyoxyethylene alkyl off We alkylsulfonyl ether 8% mixture 1 g per conidium (J TB- 8 0 8 strain) 1 0 7 a. After air-drying, the dried product was mixed in a powdered frame to prepare a wettable powder.
  • Diatomaceous earth 3 3% was suspended carboxymethylcellulose 0.3 3% water 6 6.6 7% mixed-solution 1 m 1 per conidium (J TB- 7 9 9 strain) 1 0 7 a. After air-drying, the dried product was mixed and pulverized to prepare a wettable powder.
  • the present invention provides a novel strain belonging to Exeguchi Hilum 'Monoceras.
  • This strain has a higher herbicidal effect and a higher spore-producing ability than conventional strains belonging to Exeguchi hilum 'Monoceras, and has properties suitable as a component of a microbial herbicide.

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Description

明糸田 » ェキセ口ヒルム · モノセラスに属する新規な菌株及びその用途
発明の技術分野
本発明は、 ェキセ口ヒルム ' モノセラス （Exserohi lum monoceras) に属する 新規菌株、 並びにそれを用いた雑草防除剤及び雑草防除方法に関する。 発明の背景技術
安定した食料生産のため、 農耕地では農薬の使用が不可欠となっている。 しか し、 自然界に存在しない化学物質を含む化学合成農薬を長期間大量に農耕地に散 布するため、 様々な弊害が現れている。 最も重要な問題は農薬による直接的な人 畜への影響と生態系の破壊である。 近年、 化学農薬の雑草、 害虫、 病原菌に対す る特異性が飛躍的に向上してきたため、 人畜に対する影響は低減されてきたが、 農薬散布時等の高濃度の薬剤に接触する機会には十分な注意が必要であることに 変わりはない。 さらに、 化学農薬は対象雑草、 害虫、 病原菌に対する選択性が必 ずしも高くないので、 生態系を乱すことが多い。
以上の問題を解決するため、 対象外生物種に全く影響を及ぼさない環境保全型 の農薬の開発が望まれてきた。 雑草病原微生物を用いる除草剤はそのひとつであ る。 雑草病原微生物は雑草中に普遍に存在するものであり、 これを利用した微生 物除草剤は、 人畜、 魚介類、 昆虫等の小動物に危害を与えることが少なく、 植物 に薬害を起こす可能性が低いことが知られている。 また、 微生物除草剤は目的と する雑草に対する特異性が高いので、 選択性が高く、 生態系を乱す可能性が低い と考えられる。 現在、 商品化されている微生物除草剤には、 Phytophthora palmi voraを用いた Stranglervine (ががいも科） の除草剤 D e V i n e、 Coiletotric hum gloeosporioides f. sp. aeschynomene¾"用いた Northern jointvetch (クサ ネムの近緣種） の除草剤 C o l l e g o, そして Colletotrichum gloeosporioid es f. sp. malvaeを用 こ round— leaved ma 1 low (マノレノくゼニァオイ） の除草斉 ijB i o M a 1力くある。
水田において、 最も重要な雑草であるノビエに対する微生物除草剤には Cochli obolus lunatus (アナモノレフ ： Curvularia lunata) [Weed Research(1987), 27 , 43-47、 特開平 5-284963号公報〕 、 あるいは Ustilago trichophora 師 3/0565 6〕 、 Drechslera monoceras (Exserohi lum monocerasの異名) 〔特開平 3 - 219883 号公報、 特開平 4-226905号公報、 特開平 4- 360678号公報、 特開平 4- 370090号公報 、 特開平 6- 277042号公報、 特開平 6- 329513号公報、 特開平 6- 247822号公報〕 を用 いる防除剤が公知である。
しかし、 Cochiiobolus lunatusは、 十分な効果を出すために 1 8時間以上の露 点時間が必要であり、 Ustilago trichophoraは、 十分な効果が現れるまでに薬剤 散布後 4から 5週間必要であり、 Drechslera monocerasは、 胞子生産量が低いと いう問題をそれぞれ有している。 このため、 上記した微生物を利用した防除剤は いずれも未だ実用化されていない。 発明が解決しょうとする課題
本発明は、 十分な除草効果を示し、 かつ胞子生産能の高い微生物を提供するこ とを目的とする。 発明の開示
本発明者らは、 ノビエに病原性を有する菌株の中から、 除草効果が高い菌株の 選抜を行ったところ、 除草効果が高いことに加え、 胞子生産能も高い一群の菌株 を見出した。 さらに、 それらの菌体内エステラーゼザィモグラムパターンを調べ たところ、 それら一群の菌株はいずれも同様な染色パターンを示し、 また、 その 染色パターンは、 公知の菌株のどの染色パターンとも類似しないという知見を得 た。 以上のような知見に基づき、 本発明者らは、 以下の発明を完成した。
即ち、 本発明は、 図 1に示すエステラーゼザィモグラムパターンを示すェキセ 口ヒルム · モノセラスに属する菌株である。
また、 本発明は、 上記記載の菌株を有効成分として含有することを特徴とする 雑草防除剤である。 さらに、 本発明は、 上記記載の雑草防除剤を用いた雑草防除方法である。
以下、 本発明を詳細に説明する。
本発明の菌株は、 罹病ノビェ中より分離されたものであり、 その菌学的性質は 以下の通りである。
好気性菌であり、 ジャガイモ蔗糖寒天培地上において、 集落は濃暗灰色あるい は黒色である。 また、 白色あるいは灰色の気中菌糸がみられることもある。 分生 胞子は暗色、 多胞で 2〜 8内外の隔壁があり、 紡錘形で中央部の幅が最も広く、 両側に向かって細くなる。 また、 基端部にへソ （hilum ) が突出している。 分生 胞子の大きさは 4 0~ 1 5 0 X 1 0〜2 5 m内外である。
上記結果を A. S1VANESAN 著の 「GRAM1NIC0L0US SPECIES OF BIPOLAR IS, CURVUL ARIA, DRECIISLERA, EXSEROHILUM AND THEIR TBLBOMORPHS J (Mycological Paper s， No.158, p-261, Nov.1987) の p201- 237で調査した結果、 集落の形状、 分生胞 子の形態が同一である等の理由により、 上記菌株をェキセ口ヒルム · モノセラス
(Exserohilum monoceras と同定した。
なお、 ェキセ口ヒルム属という属名は、 A.SIVANESAN の分類に従うものである 。 また、 LUTTRELL (Revue de Mycologie 41 巻， 271-279, 1977 年） と ALCORN ( Mycotaxon 8 巻 411-414， 1978年） もこの分類法を支持している。 一方、 Ellis
(Dematioceous Hyphomycetes, CMI, Kew, 608, 1971 年） は、 ェキセ口ヒルム属と ビポラリス属 （Bipolaris ) をドレクスレラ属 （Drechslera) に含めドレクスレ ラ属だけを採用している。 し力、し、 近年 Ellis以外の研究者でェキセ口ヒルム属 とビポラリス属を認めない者はいないので、 ェキセ口ヒルム属を採用することが 適当であると考えられる。 また、 ェキセ口ヒルム属の完全世代はセトスファエリ ァ属 （Setosphaeria) であることが知られているので、 セトスファエリア属と分 類される微生物についても本発明の技術的範囲に含まれる。
本発明の菌株を具体的に示すと、 J TB— 0 1 2、 J TB— 0 1 3、 J TB—
7 9 9、 J TB— 8 0 3、 J TB— 8 0 8を挙げることができる。 J T B— 0 1
2は FERM BP- 5271 (寄託日平成 7年 1 0月 2 7 日） 、 J TB— 0 1 3は FERM BP - 5272 (寄託日平成 7年 1 0月 2 7日） 、 J TB— 7 9 9は FERM BP- 5273 (寄託日 平成 7年 1 0月 2 7 日） 、 J TB— 8 0 3は FERM BP- 5274 (寄託日平成 7年 1 0 月 2 7 日） 、 J T B— 8 0 8は FERM BP- 5275 (寄託日平成 7年 1 0月 2 7 日） と いう受託番号で工業技術院生命工学工業技術研究所 （日本国茨城県つくば市東 1 丁目 1番 3号） に寄託されている。
図 2に示すように、 これらの菌株は、 公知のェキセ口ヒルム ·モノセラスに属 する菌株である I F09800 、 IM I 125854 、 I 1 125855 、 ATCC24641 、 ATCC58346 と は異なるエステラ一ゼザィモグラムパターンを示す。
本菌株の培養には、 特別な方法を用いる必要はなく、 公知のェキセ口ヒルム . モノセラスに属する菌株と同様の方法で培養することができる。 培地としては資 化可能な炭素源、 窒素源、 無機物及び必要な生育促進物質を適当に含有する培地 であれば、 合成培地、 天然培地のいずれも用いることができる。 具体的な培地と しては、 オー トミール蔗糖寒天培地、 オー ト ミール寒天培地、 ジャガイモ蔗糖寒 天培地、 V— 8 ジュース寒天培地、 ッァペック一 ドックス寒天培地等を例示する ことができる。 培養に際しては、 温度を 1 5〜3 0 °C、 好ましくは 2 0〜2 5 °C 、 p Hを 3〜 9、 好ましくは 5〜 8に維持することが望ましい。 以上のような条 件で？〜 1 4 日程度培養すると、 培地表面に十分な量の胞子が形成される。
本発明の雑草防除剤は、 上記の胞子を有効成分とし、 これに界面活性剤等を加 えて調製する。 胞子濃度は、 除草効果を奏する範囲で任意に定めることができる 、 1 0 2 ~ 1 0 6 胞子/ m 1、 好ましくは 1 0 3 〜 1 0 5 胞子 Z m 1 とするの が適当である。
本発明の雑草防除剤を実際の圃場に散布する場合は 1 0アールあたり胞子量が 1 0 9 〜 1 0 ' °個になるように散布するのが好ましい。
本発明の雑草防除剤は、 主にノ ビェを対象とするが、 これに限定されるわけで はない。 実施例
〔実施例 1〕 ノ ビエ防除効果試験
日本全国から罹病したノビェを採集した後、 常法に従い、 切り出した病斑部分 を 2 5 °Cの湿室下でィンキュペートすることによって、 分生胞子を形成させた。 この分生胞子を柄付き針で取り、 ジャガイモ蔗糖寒天培地上に置床することによ つて、 単胞子分離を行った。 それぞれの菌株をオートミール蔗糖寒天培地に接種 し、 2 5 °Cで、 1 4日間の培養を行い、 分生胞子を形成させた。 この後、 0. 0 2 %Tw無J J JJJIt e e n 2 0水溶液中に、 胞子を懸濁させた後、 5 m 1当たり 1 03、 1 0
M処 TTTTTMM TTTTTTF
\ 及び 1 0理 BBBBB BBOBBBCIII 5胞子になるように調製した。
一方、 1 0 0 0 0分の 1アールのポッ トにノビエ （ 1ポッ ト当たり 2 0個体） を 1. 5葉期まで生育させた後、 水深約 5 c mまで湛水した。 上記胞子懸濁液を 各ポッ ト当たり 5 m 1滴下処理を行い、 3週間温室内に静置した後、 防除効果を 調査した。 なお、 ノビエ除草効果は、 以下に示すように、 評価した。
防除効果 = 〔 1 一 （生存個体数 Z 2 0) 3 1 0 0
表 1. 菌株とノビエ防除効果 株名 防除効果
< V V V
1 0 1 04 1 0
0 3 8 9 5 0 0 0 3 5 7 0 9 5 7 4 7 0 0 0 0 8 3 5 0 0 0 0 8 3 2 0 0 0 0 1 8 5 5 0 2 2 5
0
〔実施例 2〕 分生胞子生産能試験
それぞれの菌株をオートミール蔗糖寒天培地に接種し、 2 5 °Cで、 1 4日間静 置培養した。 その後、 培地上の分生胞子を 0. 1 %Twe e n 2 0に懸濁するこ とによって回収した。 分生胞子生産量を表 2に示した。
表 2. 菌株と分生胞子生産能 株 分生胞子生産量 Z c m:
一 0 0
一 0 0
一 7 0
一 8 0
一 8 0
- 9 0
― 1 0
一 1 0
C一 0
AT C C 0 J TB - 0 1 2、 J TB_ 0 1 3、 J TB - 7 9 9、 J TB - 8 0 3、 J T B 一 8 0 8からなる該菌株群の分生胞子生産量は、 4. 4 X 1 05胞子 Zcm2以上 であった。 一方、 公知菌株で最も分生胞子生産能が高い菌株は I M I - 1 2 5 8 5 5であり、 その分生胞子生産量は 4. 0 X 1 0 4胞子/ "c m2であった。 その他 の公知菌株の分生胞子生産量は、 全て検出限界以下であった。 このことから、 該 菌株群は公知菌株より分生胞子生産量が 1 0倍以上高いことが明らかとなった。 〔実施例 3〕 エステラーゼザィモグラムの解析
J TB— 0 1 2、 J TB - 0 1 3、 J TB - 7 9 9、 J TB - 8 0 3、 J T B
— 8 0 8、 I FO— 9 8 0 0、 I M I - 1 2 5 8 5 4、 I M I - 1 2 5 8 5 5、 AT C C - 2 4 6 4 ATC C— 5 8 3 4 6の 1 0菌株を試料に用いた。 各菌 株の粗酵素液の調製は、 特開平 6— 3 2 9 5 1 3号公報の方法に従った。
各菌株をジャガイモ蔗糖培地中、 2 5 °C、 暗所で 7— 1 0 日静置培養し、 菌体 マツ トを形成させた。 得られた菌体マツ トを蒸留水で数回洗浄し、 一 8 0°Cで凍 結した後、 凍結乾燥した。
5 0 mMトリス一塩酸バッファー （p H 7. 4 ) 中で菌体を破砕した後、 ろ紙 でろ過し、 ろ液を 1 0 0 0 0 r pmで遠心分離して、 その上清をサンプルとして 用いた。 サンプル中のタンパク濃度は Lowry の方法で定量した。 ラージスラブゲ ル電気泳動層でァク リルァミ ドゲル （濃縮ゲル： 4. 5 %、 分離ゲル 1 0 %) を 用いて、 1サンプル当たり約 5 0 gのタンパク量を 3 0 mAで 2時間電気泳動 した。
電気泳動後、 エステラーゼの活性染色を行った。 4 m 1の 5 0 %アセ トン水溶 液に 4 0 m gのな—ナフチル酢酸を溶解させた後、 2 0 O mgの fast violet B saltと 2 0 0 m 1の 5 0 mMトリス一塩酸バッファーを加えて、 染色液とした。 この染色液中にゲルを浸し、 静かに振盪して 3 0分間染色を行った。 この後、 蒸 留水でゲルを洗浄し、 各バンドの移動度を測定した。
この結果、 図 1及び図 2に示すように、 J TB— 0 1 2、 J TB— 0 1 3、 J TB— 7 9 9、 J TB— 8 0 3、 J TB— 8 0 8のエステラーゼザィモグラムパ ターンは全て同一であったことから、 J TB— 0 1 2、 J T B - 0 1 3、 J TB
— 7 9 9、 J TB_ 8 0 3、 J T B— 8 0 8は同一の菌株群であることが明らか である。 また、 本菌株群は公知菌株である I FO— 9 8 0 0、 I M I - 1 2 5 8 5 4、 I M I — 1 2 5 8 5 5、 ATC C— 2 4 6 4 1、 ATC C— 5 8 3 4 6及 び特開5 Ρ· 6— 3 2 9 5 1 3 ίこ示される Drechsrela monoceras var. microspores のエステラーゼザィモグラムパターンと異なることから、 本菌株群は公知菌株と 異なる新規な菌株であることが明らかとなつた。
〔製剤例〕
製剤例 1 (液剤）
ェキセ口ヒルム ' モノセラス J TB— 0 1 3株の分生胞子 （ 2 X109 個） 、 T we e n80 (4 g) を滅菌水 2 0 Lに加えて混合し、 液剤を調製した。
製剤例 2 (水和剤）
マルトース 9 %、 クレイ 1 %、 水 9 0 %混合液 1 m 1当たり分生胞子 （ J TB 一 8 0 3株） 1 07 個を懸濁した。 これを風乾した後、 乾燥物を混合粉砕し、 水 和剤を調整した。
製剤例 3 (水和剤）
ラク 卜一ス 9 %、 ゼォライ ト 1 %、 水 9 0 %混合液を 1 m 1当たり分生胞子 （ J TB- 0 1 2株） 1 07 個を懸濁した。 これを風乾した後、 乾燥物を混合粉砕 し、 水和剤を調整した。
製剤例 4 (水和剤）
珪藻土 1 5 %、 カオリ ン 7 7 %、 ポリオキシエチレンアルキルフヱニルエーテ ル 8 %混合液 1 g当たり分生胞子 （ J TB— 8 0 8株） 1 07 個を懸濁した。 こ れを風乾した後、 乾燥物を混合粉枠し、 水和剤を調整した。
製剤例 5 (水和剤）
珪藻土 3 3 %、 カルボキシメチルセルロース 0. 3 3 %、 水 6 6. 6 7 %混 合液 1 m 1当たり分生胞子 （J TB— 7 9 9株） 1 07 個を懸濁した。 これを風 乾した後、 乾燥物を混合粉砕し、 水和剤を調整した。
製剤例 6 (粉剤）
ヒ ドロキシプロピル一 S—シクロデキス ト リ ン 1 4 %、 ホワイ 卜カーボン 1 2 クレー 7 4 %の混合物 1 gあたり分生胞子 （ J T B— 0 1 2株） 1 07 個を 混合した。 これを乾燥後、 均一に粉砕することによって、 粉剤を調整した。 W 71 製剤例 7 (粒剤）
S—シクロデキストリ ン 1 5 %、 デンプン 2 %、 ベントナイ ト 1 8 %、 炭酸力 ルシゥム 3 6 %、 水 2 9 %の混合物 1 g当たり分生胞子 （J TB— 8 0 8株） 1 07 個を加えて練った後、 造粒機で造粒し、 乾燥することによって、 粒剤を調整 し 7v- o
製剤例 8 (乳剤）
ポリオキシエチレンノニルフェニルエーテルリ ン酸アンモニゥム 1 8 %、 ポリ ォキシエチレンノニルフユニルエーテル 6 %、 リン酸トリェチル 2 9 %、 リン酸 トリブチル 4 7 %の混合物 1 g当たり分生胞子 （J TB— 7 9 9株） 1 07 個を 加えて均一に懸濁し、 乳剤を調整した。
製剤例 9 (油剤）
スピンドルオイル 9 5 %、 ひまし油 4 %、 シリコーンオイル 1 %の混合液 1 m 1中に分生胞子 （J TB— 8 0 3株） 1 07 個を懸濁し、 油剤を調整した。
製剤例 1 0 (ドライフロアブル剤）
アルキルベンゼンスルホン酸ナトリウム 1 2 %、 ポリエチレングリコールェ一 テル 8 8 %の組成物 1 m 1中に分生胞子 （ 丁8— 0 1 3株） 1 07 個を懸濁し 、 ドライフロアブル剤を調整した。
製剤例 1 1 (カプセル剤）
アルギン酸ナトリウム 0. 7 %、 カオリン 5 %、 グリセリン 1 5 %、 水 7 9. 3 %混合液 1 m 1中に分生胞子 （J TB— 8 0 3株） 1 07 個を懸濁し、 0. 2 モル酢酸カルシウム溶液中に滴下してカプセル状生成物を得た。 これを細断した 後、 篩にかけ、 風乾しカプセル剤を調製した。
製剤例 1 2 (カプセル剤）
アルギン酸ナトリウム 0. 7 %、 珪藻土 5 %、 グリセリン 1 5 %、 水 7 9. 3 %混合液 1 m 1中に分生胞子 （ J TB— 0 1 3株） 1 07 個を懸濁し、 0. 2モ ル塩化カルシウム溶液中に滴下してカプセル状生成物を得た。 これを細断した後 、 篩にかけ、 風乾しカプセル剤を調製した。 発明の効果 本発明は、 ェキセ口ヒルム ' モノセラスに属する新規な菌株を提供する。 この 菌株は、 従来のェキセ口ヒルム 'モノセラスに属する菌株に比べ、 除草効果及び 胞子生産能が高く、 微生物除草剤の成分として好適な性質を有している。 図面の簡単な説明
図 1
本発明の新規菌株のエステラーゼザィモグラムを示す図である。
図 2
本発明の新規菌株及び公知菌株のエステラーゼザィモグラムを示す図である。

Claims

請求の範匪
1. 図 1 に示すエステラーゼザィモグラムパターンを示すェキセ口ヒルム · モノ セラスに属する菌株。
2. ェキセ口ヒルム ' モノセラス J TB— 0 1 2、 ェキセ口ヒルム · モノセラス J T B - 0 1 3、 ェキセ口ヒルム · モノセラス J TB— 7 9 9、 ェキセ口ヒルム • モノセラス J TB— 8 0 3、 又はェキセ口ヒルム ' モノセラス J TB— 8 0 8 である請求項 1記載の菌株。
3. 請求項 1又は 2記載の菌株を有効成分として含有することを特徴とする雑草 防除剤。
4. 雑草がノ ビエであることを特徴とする請求項 3記載の雑草防除剤。
5. 請求項 3記載の雑草防除剤を用いた雑草防除方法。
6. 雑草がノビエであることを特徴とする請求項 5記載の雑草防除方法。
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