[go: up one dir, main page]

WO1995014086A1 - Cartouche pour la preparation d'acides nucleiques purifies - Google Patents

Cartouche pour la preparation d'acides nucleiques purifies Download PDF

Info

Publication number
WO1995014086A1
WO1995014086A1 PCT/FR1994/001327 FR9401327W WO9514086A1 WO 1995014086 A1 WO1995014086 A1 WO 1995014086A1 FR 9401327 W FR9401327 W FR 9401327W WO 9514086 A1 WO9514086 A1 WO 9514086A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
tube
dialysis
filter
cartridge according
cartridge
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
PCT/FR1994/001327
Other languages
English (en)
Inventor
Jean Boquet
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Bertin Technologies SAS
Original Assignee
Bertin et Cie SA
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Bertin et Cie SA filed Critical Bertin et Cie SA
Priority to JP7514254A priority Critical patent/JPH10513339A/ja
Priority to US08/637,713 priority patent/US5789243A/en
Publication of WO1995014086A1 publication Critical patent/WO1995014086A1/fr
Anticipated expiration legal-status Critical
Ceased legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
    • G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
    • G01N1/34—Purifying; Cleaning
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D61/00—Processes of separation using semi-permeable membranes, e.g. dialysis, osmosis or ultrafiltration; Apparatus, accessories or auxiliary operations specially adapted therefor
    • B01D61/24—Dialysis ; Membrane extraction
    • B01D61/243—Dialysis
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D61/00—Processes of separation using semi-permeable membranes, e.g. dialysis, osmosis or ultrafiltration; Apparatus, accessories or auxiliary operations specially adapted therefor
    • B01D61/24—Dialysis ; Membrane extraction
    • B01D61/28—Apparatus therefor
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D61/00—Processes of separation using semi-permeable membranes, e.g. dialysis, osmosis or ultrafiltration; Apparatus, accessories or auxiliary operations specially adapted therefor
    • B01D61/58—Multistep processes
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D63/00—Apparatus in general for separation processes using semi-permeable membranes
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
    • G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
    • G01N1/40—Concentrating samples
    • G01N1/4005—Concentrating samples by transferring a selected component through a membrane
    • G01N2001/4016—Concentrating samples by transferring a selected component through a membrane being a selective membrane, e.g. dialysis or osmosis

Definitions

  • the invention relates to a cartridge for the extraction and purification of nucleic acids, in particular genoic DNA, from a blood sample, a sample of tissue cells or cells. of culture.
  • This cartridge automates extractive operations. tion and purification of nucleic acids, operations which take place in the cartridge and without manipulation thereof.
  • the present invention relates to improvements to this cartridge, aimed at simplifying its structure and its manufacture, reducing its cost and improving its operation, its performance and its reliability.
  • a cartridge for the preparation of purified nucleic acids comprising a dialysis enclosure, means for introducing into this enclosure a sample of cells and reaction products, means for output of the reaction products.
  • the filter and the dialysis enclosure are constituted by a flexible filtering tube and a flexible dialysis tube placed one inside the other, the filter tube being open at one end and closed at the other, the dialysis tube being open at its two ends, these being mounted with at least one end open the filter tube in plastic or elastomeric ends intended to receive the aforementioned means of introduction and output.
  • each end piece comprises a part or a hollow body made of self-sealing material after drilling, receiving an open end of the filter tube and / or of the dialysis tube and embedded in a sealing material .
  • the end pieces are more rigidly connected to each other, for example by longitudinal uprights which are fixed by interlocking and / or by bonding to the ends.
  • the cartridge according to the invention is intended to be placed in a tube or a housing connected to means for circulating a dialysis liquid.
  • FIG. 1 schematically shows a cartridge according to the invention
  • FIG. 2 schematically represents a tube in which this cartridge is intended to be mounted
  • Figures 3 and 4 are schematic views of the filter tube and the dialysis tube
  • Figure 5 schematically illustrates a phase of mounting a cartridge according to the invention
  • Figure 6 is a schematic perspective view of a tip
  • Figure 7 is a schematic view in axial section of another embodiment of the cartridge
  • FIGS. 8 and 9 schematically represent two stages in the manufacture of the cartridge of FIG. 7.
  • the cartridge according to the invention represented in FIG. 1 essentially comprises a flexible cylindrical tube 10 ⁇ e dialysis inside which is a flexible cylindrical tube 12 filtering, produced in a microporous material having a property of retention of the nuclei of the cells, and end caps 14, 16 rigidly connected to each other by uprights 18 outside the dialysis tube 10, and in which the ends of the dialysis tube 10 and of the filter tube 12 are mounted.
  • Axial blind conduits 24 are formed in the end pieces 14 and 16 from their outer end and extend in the direction of the flared and open ends of the tubes 10 and 12.
  • At least one O-ring seal 26 is mounted on the cylindrical surface of each end piece and the upper end piece 14 has an enlarged head 28.
  • a cartridge is intended to be used in a cylindrical tube or housing 30 such that that shown in FIG. 2, the internal diameter of which corresponds substantially to the external diameter of the end pieces 14 and 16 or of their O-rings 26.
  • the cartridge can be mounted in leaktight manner inside the tube 30 thanks to its end pieces 14, 16 which seal the upper and lower ends of the tube, the head 28 of the endpiece 14 being applied to the upper end of the tube 30.
  • the latter comprises two radial conduits 32,
  • the filter tube 12 is shown in Figure 3 and consists of a cylindrical film of semi-material Cropper capable of retaining the nuclei of cells, this microporous material being for example a polyester fabric having a thickness of the order of 0.1 milli ⁇ meter and a porosity of the order of a micron. Such a filter cloth is commercially available.
  • This tube 12 is closed in the vicinity of its lower end by a transverse line 20 of sealed weld and two openings 40 are made in the tube immediately below this weld line.
  • other holes 42 are formed, the role of which will be explained later, in the tube 12 in the immediate vicinity of its ends.
  • the dialysis tube 10 shown in Figure 4 has substantially the same length as the filter tube 12 and a diameter slightly greater than that of the filtering tube.
  • the dialysis tube 10 is open at its two ends, as already indicated, and has holes 44 in the immediate vicinity of its ends, these holes 44 corresponding to the holes 42 of the filter tube 12.
  • This dialysis tube 10 is made for example of a nylon film having a thickness of the order of 0.1 millimeters and a porosity of the order of 0.1 ⁇ .
  • the tubes 10 and 12 may have a length of the order of 50 mm, the filter tube 12 having a diameter of the order of 5 mm and the diameter tube.
  • ⁇ lysis 10 a diameter of the order of 6.5 mm.
  • the filter tube 12 is placed inside the dialysis tube 10 and the ends of these tubes are mounted in the end pieces 14 and 16 in the manner which will be described with reference to FIG. 5.
  • Each end piece 14, 16 essentially consists of a body 46, 48 of generally hollow cylindrical shape, made of an elastomeric material of the self-sealing type after drilling, such as a "bromobutyl".
  • Each body 46,48 is formed with the blind pipe 24 above and the upper body 46 includes the enlarged head 28 above.
  • a complete purging or emptying of the filter tube 12 and of the dialysis tube 10 can be carried out by closing the needle of the upper end piece or by removing this needle, the material of the body 46 being self-contained. closable, and by connecting the needle of the lower nozzle to a source of vacuum, which has the effect of flattening completely on themselves the filter tube 12 and the dialysis tube 10, leaving no residue residual volume inside these tubes.
  • the open upper ends of the dialysis tube 10 and the filter tube 12 are threaded onto the part 72 of the upper end piece 64 and possibly onto the chimney 74 carrying the part 72, and are embedded in an adhesive material 76, for example of the polymerizable type, which fills the internal space of the end piece 64 around the chimney 74.
  • the open lower end of the dialysis tube 10 is threaded onto the part 72 and onto the chimney 74 of the lower end piece 66 and is embedded in an identical adhesive material 76 which at least partially fills the lower end piece 66.
  • the ends of the tubes 10, 12 mounted on the parts 72 and / or the chimneys 74 are relatively flattened and therefore have a substantially elliptical cross section, suitable for promoting the complete flattening of these tubes when they are placed under vacuum.
  • the ends 64 and 66 are rigidly connected to each other by uprights 78, similar to the uprights 18 of the first embodiment, these uprights 78 may be constituted by portions of cylinders to promote guiding of the cartridge in a tube intended for receive it, such as the tube of figure 2.
  • the cartridges according to the invention can be used like the cartridge of the aforementioned International Application WO93 / 01312, the content of which is incorporated herein by reference, and all the processes described in this International Application can be used with the cartridges according to the invention.

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Water Supply & Treatment (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Separation Using Semi-Permeable Membranes (AREA)
  • External Artificial Organs (AREA)

Abstract

L'invention concerne une cartouche pour la préparation d'acides nucléiques purifiés obtenus à partir d'un échantillon de cellules, cette cartouche comprenant un tube filtrant (12) disposé à l'intérieur d'un tube de dialyse (10), les extrémités de ces tubes étant montées dans des embouts d'extrémité (14, 16) réunis entre eux par des montants rigides (18), ces embouts étant conçus pour être reliés à des moyens d'introduction et de sortie de produits tels qu'un échantillon de cellules, des produits de réaction et des produits de rinçage.

Description

CARTOUCHE POUR LA PREPARATION D'ACIDES NUCLEIQUES PURIFIES
L' invention concerne une cartouche pour l'extraction et la purification d'acides nucléiques, no- tamment d'ADN géno igue, à partir d'un échantillon de sang, d'un échantillon de cellules de tisε _ ou de cel¬ lules de culture.
Par la Demande Internationale WO93/01312, on connaît déjà une cartouche de ce type qui représente une avance notable sur les dispositifs concurrents par sa simplicité d'emploi, son efficacité, sa fiabilité et ses conditions économiques de fabrication et de mise en oeuvre.
La cartouche décrite dans cette Demande anté- rieure comprend un cadre plat sur les deux faces duquel sont collées des membranes de dialyse délimitant entre elles une enceinte de dialyse. Un filtre plan de ré¬ tention des noyaux de cellules est monté dans le cadre entre les membranes, et des moyens sont prévus pour faire circuler entre les membranes un échantillon de cellules lysées, des produits de lavage et de rinçage des noyaux retenus par le filtre, et des produits de lyse des noyaux et de dégradation des protéines. Les acides nucléiques libérés dans 1 'enceinte sont purifiés par dialyse. Pour certaines cellules, l'ensemble des opérations de lyse des cellules, lyse des noyaux, dégradation des protéines et autres contaminants, et dialyse peut se faire directement dans 1 'enceinte.
Cette cartouche permet d'automatiser les opé- rations d'extr. tion et de purification des acides nu¬ cléiques, opérations qui ont lieu dans la cartouche et sans manipulation de celle-ci.
La présente invention a pour objet des perfec¬ tionnements à cette cartouche, visant à simplifier sa structure et sa fabrication, à réduire son coût et à amé¬ liorer son fonctionnement, ses performances et sa fiabi¬ lité. Elle propose à cet effet une cartouche pour la préparation d'acides nucléiques purifiés, comprenant une enceinte de dialyse, des moyens d'introduction dans cette enceinte d'un échantillon de cellules et de produits de réaction, des moyens de sortie des produits de réaction et des acides nucléiques purifiés, et un filtre de réten¬ tion des noyaux des cellules, ce filtre étant disposé dans l'enceinte de dialyse, caractérisée en ce que le filtre et l'enceinte de dialyse sont constitués par un tube souple filtrant et un tube souple de dialyse placés l'un dans l'autre, le tube filtrant étant ouvert à une extrémité et fermé à l'autre, le tube de dialyse étant ouvert à ses deux extrémités, celles-ci étant montées avec au moins 1 ' extrémité ouverte du tube filtrant dans des embouts de matière plastique ou élastomère destinés à recevoir les moyens précités d'introduction et de sortie.
Les structures tubulaires souples du filtre et de 1 ' enceinte de dialyse permettent une purge totale du système par dépression, la dépression ayant pour effet d'aplatir sur eux-mêmes le tube filtrant et le tube de dialyse sans laisser subsister de volumes internes rési¬ duels . De plus, 1 ' enceinte de dialyse ne contient aucun corps étranger à l'exception du tube filtrant, ce qui ré¬ duit les risques de contamination ou de pollution. Dans un mode de réalisation préféré de l'invention, chaque embout comprend une pièce ou un corps creux en matière auto-obturable après perçage, recevant une extrémité ouverte du tube filtrant et/ou du tube de dialyse et noyé dans une matière d' étanchéité. Les embouts sont de plus reliés rigidement entre eux, par exemple par des montants longitudinaux qui sont fixés par emboîtement et/ou par collage sur les em¬ bouts .
De façon générale, la cartouche selon l'invention est destinée à être placée dans un tube ou un logement relié à des moyens de circulation d'un liquide de dialyse.
L'invention sera mieux comprise et d'autres caractéristiques, détails et avantages de celle-ci appa- raitront plus clairement à la lecture de la description qui suit, faite à titre d'exemple en référence aux des¬ sins annexés dans lesquels : la figure 1 représente schématiquement une cartouche selon l'invention; la figure 2 représente schématiquement un tube dans lequel cette cartouche est destinée à être montée; les figures 3 et 4 sont des vues schématiques du tube filtrant et du tube de dialyse; la figure 5 illustre schématiquement une phase du montage d'une cartouche selon l'invention; la figure 6 est une vue schématique en pers¬ pective un embout; la figure 7 est une vue schématique en coupe axiale d'un autre mode de réalisation de la cartouche; les figures 8 et 9 représentent schématique¬ ment deux étapes de fabrication de la cartouche de la fi¬ gure 7.
La cartouche selon 1 ' invention représentée en figure 1 comprend essentiellement un tube cylindrique souple 10 αe dialyse à l'intérieur duquel se trouve un tube cylindrique souple 12 filtrant, réalisé en une ma¬ tière microporeuse ayant une propriété de rétention des noyaux des cellules, et des embouts d'extrémités 14, 16 reliés rigidement entre eux par des montants 18 ex- térieurs au tube de dialyse 10, et dans lesquels sont montés les extrémités du tube de dialyse 10 et du tube filtrant 12.
Le tube de dialyse 10 est ouvert à ses deux extrémités, tandis que le tube filtrant 12 est ouvert à son extrémité supérieure et fermé au voisinage de son ex¬ trémité inférieure par exemple par une ligne transversale 20 de soudure étanche. Par ailleurs, le tube de dialyse 10 et le tube filtrant 12 sont, au voisinage de leurs ex¬ trémités, pinces et aplatis de façon élastique à leur en¬ trée dans les embouts 14 et 16, comme indiqué en 22, les extrémités proprement dites de ces tubes allant ensuite en s ' évasant à 1 ' intérieur des embouts 14 et 16 comme on peut le voir sur le dessin.
Des conduits borgnes axiaux 24 sont formés dans les embouts 14 et 16 depuis leur extrémité exté- rieure et s ' étendent en direction des extrémités évasées et ouvertes des tubes 10 et 12.
Au moins un joint torique d'étanchéité 26 est monté sur la surface cylindrique de chaque embout et l'embout supérieur 14 comporte une tête élargie 28. Une telle cartouche est destinée à être utili¬ sée dans un tube ou un logement cylindrique 30 tel que celui représenté en figure 2, dont le diamètre interne correspond sensiblement au diamètre externe des embouts 14 et 16 ou de leurs joints toriques 26. Ainsi, la car- touche peut être montée de façon étanche à l'intérieur du tube 30 grâce à ses embouts 14, 16 qui obturent à étan- chéité les extrémités supérieure et inférieure du tube, la tête 28 de l'embout 14 étant appliquée sur l'extrémité supérieure du tube 30. Ce dernier comprend deux conduits radiaux 32,
34 décalés en hauteur et formés de façon à déboucher à l'intérieur du tube 30 entre les embouts 14 et 16 de la cartouche, ces conduits radiaux étant destinés à être re¬ liés à des moyens 36, 38 d'amenée et de sortie de liquide de dialyse, ainsi qu'à des moyens de mise en pression ou dépression de la cartouche.
On se réfère maintenant aux figures 3 à 6 pour décrire de façon plus détaillée la structure et le mon¬ tage de cette cartouche selon l'invention. Le tube filtrant 12 est représenté en figure 3 et est constitué d'un film cylindrique d'une matière mi- croporeuse apte à la rétention des noyaux des cellules, cette matière microporeuse étant par exemple un tissu de polyester ayant une épaisseur de l'ordre de 0,1 milli¬ mètre et une porosité de l'ordre du micron. Un tel tissu filtrant est disponible dans le commerce.
On ferme ce tube 12 au voisinage de son extré¬ mité inférieure par une ligne transversale 20 de soudure étanche et on pratique deux ouvertures 40 dans le tube immédiatement en dessous de cette ligne de soudure. De plus, on forme d'autres trous 42, dont le rôle sera ex¬ pliqué par la suite, dans le tube 12 au voisinage immé¬ diat de ses extrémités.
Le tube de dialyse 10 représenté en figure 4 a sensiblement la même longueur que le tube filtrant 12 et un diamètre légèrement supérieur à celui du tube fil¬ trant. Le tube de dialyse 10 est ouvert à ses deux extré¬ mités, comme déjà indiqué, et comporte des trous 44 au voisinage immédiat de ses extrémités, ces trous 44 cor¬ respondant aux trous 42 du tube filtrant 12. Ce tube de dialyse 10 est réalisé par exemple en un film de nylon ayant une épaisseur de l'ordre de 0,1 millimètre et une porosité de l'ordre de 0,1 μ .
Pour fixer les idées, on indiquera à titre d'exemple uniquement que les tubes 10 et 12 peuvent avoir une longueur de l'ordre de 50 mm, le tube filtrant 12 ayant un diamètre de 1 ' ordre de 5 mm et le tube de dia¬ lyse 10 un diamètre de l'ordre de 6,5 mm.
Le tube filtrant 12 est placé à 1 ' intérieur du tube de dialyse 10 et les extrémités de ces tubes sont montées dans les embouts 14 et 16 de la façon qui va être décrite en référence à la figure 5.
Chaque embout 14, 16 est constitué essentiellement d'un corps 46, 48 de forme générale cylindrique creuse, réalisé en une matière élastomère du type auto-obturable après perçage, telle qu'un "bromobutyle" . Chaque corps 46,48 est formé avec le conduit borgne 24 précité et le corps supérieur 46 comporte la tête élargie 28 précitée.
Les extrémités en regard de ces corps comprennent chacune une fente allongée très étroite de passage des extrémités des tubes 10 et 12, cette fente étant délimitée par deux lèvres 50 orientées l'une vers l'autre et appliquées l'une sur l'autre, la largeur de la fente ainsi formée étant sensiblement nulle. La paroi in¬ terne de chaque corps opposée à cette fente peut comprendre une saillie 52 à section triangulaire, qui est orientée vers la fente et qui s ' engage au moins partiel¬ lement dans les extrémités des tubes 10 et 12 pour les ouvrir et les évaser légèrement.
Comme on le voit mieux en figure 6, la paroi cylindrique de chaque corps 46, 48 est constituée par des bras qui délimitent de larges ouvertures latérales 54, donnant de la souplesse aux lèvres 50. Les ouvertures sont obturées ultérieurement par une matière d' étanchéité. Chaque corps 46, 48 est enserré dans deux coquilles semi-cylindriques 56, réalisées par exemple en matière plastique rigide et venant de moulage avec les montants 18 précités dont chacun relie une coquille 56 d'un embout à une coquille 56 de l'autre embout. Les deux coquilles semi-cylindriques 56 de chaque embout sont assemblées 1'une à 1' autre par exemple par des moyens d' encliquetage élastique tels que ceux représentés en 58 et 60, et/ou au moyen des joints toriques 26 qui sont enfilés sur ces coquilles et engagés dans des gorges annulaires prévues à cet effet. Lorsque les coquilles 56 sont ainsi assemblées l'une à l'autre, elles entourent le corps 46, 48 à la façon d'un moule. On peut alors par l'intermédiaire d'une aiguille creuse introduite dans le conduit 24 de chaque corps 46, 48 et traversant le fond de celui-ci, injecter dans chaque corps une matière d' étanchéité telle qu'un silicone par exemple, qui est relativement mou et qui adhère bien aux extrémités des tubes 10 et 12 et aux parois du corps 46 ou 48. Les orifices 42 et 44 formés au voisinage immédiat des extrémités des tubes 10 et 12 facilitent le passage de la matière injectée et le remplissage des corps 46, 48 par cette matière.
Les extrémités ouvertes des tubes 10 et 12 sont ainsi complètement noyées dans cette matière d' étanchéité. La cartouche selon 1 ' invention est utilisée de la façon suivante : elle est montée à étanchéité dans le tube ou le logement cylindrique 30 de la figure 2 par enfoncement jusqu'à ce que la tête élargie 28 de l'embout supérieur 14 vienne s ' appliquer sur 1 ' extrémité supérieure du tube ou du logement cylindrique 30. On peut alors introduire une aiguille creuse d'injection dans le conduit borgne 24 de chaque embout et percer la matière de l'embout jusqu'à faire déboucher 1 ' extrémité de 1 ' aiguille à 1 ' intérieur du tube filtrant 12. Pour éviter de détériorer le tube filtrant ou le tube de dialyse, on utilise une aiguille à extrémité fermée et arrondie, comprenant des orifices la¬ téraux d'injection.
L'aiguille montée dans l'embout supérieur 14 peut être reliée à des récipients divers contenant notam¬ ment un échantillon de cellules, des produits de lyse des cellules et des noyaux des cellules, des produits de dé¬ gradation des protéines, des produits de rinçage. L'introduction de ces produits à l'intérieur du tube fil- trant 12 peut se faire par mise en pression des réci¬ pients ou par liaison de 1 ' aiguille de 1 ' embout inférieur 16 à une source de dépression.
On peut réaliser une purge ou une vidange com¬ plète du tube filtrant 12 et du tube de dialyse 10 en ob- turant l'aiguille de l'embout supérieur ou en retirant cette aiguille, la matière du corps 46 étant auto- obturable, et en connectant l'aiguille de l'embout infé¬ rieur à une source de dépression, ce qui a pour effet d'aplatir complètement sur eux-mêmes le tube filtrant 12 et le tube de dialyse 10, en ne laissant subsister aucun volume résiduel à l'intérieur de ces tubes.
Les trous ou orifices 40 formés dans le tube filtrant 12 immédiatement en dessous de la ligne de sou¬ dure étanche 20, permettent aux produits contenus entre le tube filtrant 12 et le tube de dialyse 10 d'être éva- eues au moyen de l'aiguille de l'embout inférieur 16.
On a représenté en figure 7 une coupe axiale d'un mode de réalisation préféré de l'invention, qui dif¬ fère du mode de réalisation précédent en ce que les extrémités supérieures ouvertes du tube de dialyse 10 et du tube filtrant 12 sont montées par collage sur un embout supérieur 64 tandis que 1 ' extrémité inférieure ouverte du tube de dialyse 10 est montée par collage sur un embout inférieur 66, le tube filtrant 12 étant plus court que le tube de dialyse 10 et étant fermé à son extrémité inférieure, par exemple par une ligne transversale de soudure, de telle sorte qu'il se trouve suspendu par son extrémité supérieure à 1 ' intérieur du tube de dialyse 10.
Les embouts 64 et 66 sont des pièces moulées en matière plastique ou en élastomère, comportant un passage axial 68, 70 respectivement de réception d'une aiguille d'injection ou d'aspiration, l'extrémité du passage 68, 70 qui débouche à l'intérieur du tube de dialyse 10 étant fermée par une pièce rapportée 72 en matière auto-obturable qui est par exemple emboîtée dans un chambrage formé à l'extrémité du passage 68, 70 dans une cheminée 74 en saillie axiale sur la face interne de l'embout 64, 66 correspondant.
Les extrémités supérieures ouvertes du tube de dialyse 10 et du tube filtrant 12 sont enfilées sur la pièce 72 de 1 ' embout supérieur 64 et éventuellement sur la cheminée 74 portant la pièce 72, et sont noyées dans une matière adhésive 76, par exemple du type polyméri- sable, qui remplit l'espace interne de l'embout 64 autour de la cheminée 74. De même, l'extrémité inférieure ouverte du tube de dialyse 10 est enfilée sur la pièce 72 et sur la chem ée 74 de l'embout inférieur 66 et est noyée dans une matière adhésive identique 76 qui remplit au moins en partie l'embout inférieur 66. Les extrémités des tubes 10, 12 montées sur les pièces 72 et/ou les cheminées 74 sont relativement aplaties et ont donc une section transversale sensiblement elliptique, propre à favoriser 1' aplatissement complet de ces tubes quand on les met en dépression.
Les embouts 64 et 66 sont reliés rigidement entre eux par des montants 78, analogues aux montants 18 du premier mode de réalisation, ces montants 78 pouvant être constitués par des portions de cylindres pour favo- riser le guidage de la cartouche dans un tube destiné à la recevoir, tel que le tube de la figure 2.
La cartouche de la figure 7 est fabriquée sim¬ plement de la façon suivante : on commence par placer l'embout supérieur 64 à l'envers sur un support 80, comme représenté schématique¬ ment en figure 8, on met en place la pièce correspondante 72 dans le chambrage de la cheminée 74, on remplit à peu près complètement de matière adhésive 76 le volume in¬ terne de l'embout 64 autour de la cheminée 74, on met en place le tube filtrant 12 sur la pièce 72, on place le tube de dialyse 10 autour du tube filtrant 12 et on en¬ gage son extrémité inférieure sur la pièce 72 et éven¬ tuellement sur la cheminée 74, on place les montants 78 sur l'embout 64, en maintenant leurs extrémités supé- rieures au moyen d'un chapeau 82 comportant éventuelle¬ ment un doigt central s ' engageant dans 1 ' extrémité supé- rieure ouverte du tube de dialyse 10 pour maintenir cette extrémité ouverte, et on laisse polymériser ou prendre la matière adhésive 76.
De cette façon, la pièce 72, les extrémités des tubes 10, 12 et celles des montants 78 sont fixées sur 1 ' embout 64.
Après quoi, et comme représenté schématique¬ ment en figure 9, on pose l'embout inférieur 66 sur un support 84, on met en place la pièce 72 dans l'embout in- férieur 66, on remplit de la matière adhésive 76 le vo¬ lume intérieur de l'embout 66 autour de la cheminée 74 et de la pièce 72, et on vient mettre en place sur 1 ' embout inférieur 1'ensemble réalisé précédemment après 1'avoir retourné et après avoir ôté le chapeau 82, 1'extrémité inférieure du tube de dialyse 10 venant s ' engager sur la pièce 72 et éventuellement sur la cheminée 74 de l'embout inférieur 66, les montants 78 venant s'emboîter à leur extrémité inférieure sur l'embout 66, et on laisse prendre ou polymériser la matière adhésive 76, ce qui a pour effet de fixer la pièce 72, l'extrémité du tube 10 et les extrémités des montants 78 sur l'embout 66 .
Dans une variante, la cartouche qui vient être décrite ne comprend pas les pièces 72. Dans ce cas, les passages 68, 70 débouchent directement dans les tubes souples 10, 12 et sont obturés par la matière adhésive 76, qui est alors du type auto-obturable, les extrémités du tube de dialyse et du tube filtrant étant enfilées et fixées sur les cheminées 74 traversées par les passages 68, 70. La cartouche de la figure 7 est utilisable comme celle des figures précédentes et présente les mêmes avantages, en étant en outre plus facile à utiliser du fait que les extrémités du tube de dialyse et du tube filtrant ne sont pas fermées par pincement élastique, mais sont au contraire ouvertes largement ce qui facilite la mise en place des aiguilles d'aspiration et d'injection de produit.
De façon générale, les cartouches selon 1 ' invention peuvent être utilisée comme la cartouche de la Demande Internationale WO93/01312 précitée, dont le contenu est incorporé ici par référence, et tous les pro¬ cédés décrits dans cette Demande Internationale peuvent être utilisés avec les cartouches selon l'invention.
Brièvement, ces procédés consistent notamment à introduire un échantillon de cellules et un produit de lyse dans le tube filtrant 12, puis à évacuer ce mélange par aspiration, les noyaux des cellules étant retenus par le tube 12, à effectuer des rinçages, puis à injecter dans le tube 12 des produits de lyse des noyaux et de dégradation des protéines, à effectuer une dialyse dans le tube ou logement 30, et à extraire 1'ADN du tube de dialyse 10 par aspiration.
Avantageusement, la simplicité de la structure des cartouches selon 1 ' invention et de leur fabrication permet d'en faire des produits jetables, qui ne sont utilisés qu'une seule fois.

Claims

REVENDICATIONS
1. Cartouche pour la préparation d'acides nu¬ cléiques purifiés, comprenant une enceinte de dialyse (10), des moyens d'introduction dans cette enceinte d'un échantillon de cellules et de produits de réaction, des moyens de sortie des produits de réaction et des acides nucléiques purifiés et un filtre de rétention des noyaux des cellules, ce filtre étant disposé dans l'enceinte de dialyse (10), caractérisée en ce que le filtre et 1 ' enceinte de dialyse sont constitués par un tube souple filtrant (12) et un tube souple de dialyse (10) placés l'un dans l'autre, le tube filtrant (12) étant ouvert à une extrémité et fermé à l'autre, le tube de dialyse (10) étant ouvert à ses deux extrémités, celles-ci étant mon- tées avec au moins l'extrémité ouverte du tube filtrant dans des embouts (14, 16, 64, 66) de matière plastique ou élastomère destinés à recevoir les moyens précités d'introduction et de sortie.
2. Cartouche selon la revendication 1, carac- térisée en ce que les extrémités du tube filtrant (12) et du tube de dialyse (10) qui sont montées dans les embouts précités, sont noyées dans une matière d'étanchéité (76) .
3. Cartouche selon 1 'une des revendications précédentes, caractérisée en ce que chaque embout com- prend une pièce ou un corps creux (46, 48, 72) en matière auto-obturable après perçage, recevant une extrémité ouverte du tube filtrant (12) et/ou du tube de dialyse (10) et noyé dans une matière d'étanchéité (76) .
4. Cartouche selon l'une des revendications précédentes, caractérisée en ce que le tube filtrant (12) est suspendu par son extrémité supérieure ouverte à l'intérieur du tube de dialyse (10) .
5. Cartouche selon 1 'une des revendications précédentes, caractérisée en ce que les extrémités du tube filtrant (12) et du tube de dialyse (10) montées dans les embouts (64, 66) sont relativement aplaties et de forme sensiblement elliptique.
6. Cartouche selon 1 'une des revendications précédentes, caractérisée en ce que les embouts (14, 16, 64, 66) sont reliés rigidement entre eux.
7. Cartouche selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que le tube filtrant (12) et le tube de dialyse (10) ont sensiblement la même longueur et sont montés à leurs extrémités dans les embouts (14, 16) précités, le tube filtrant (12) étant fermé au voisinage de son extrémité inférieure par une ligne transversale de soudure (20) .
8. Cartouche selon 1'une des revendications précédentes, caractérisée en ce que les embouts (14, 16, 64, 66) sont reliés par des montants longitudinaux (18, 78) fixés sur les embouts par emboîtement et/ou collage.
9. Cartouche selon 1 'une des revendications 1 à 7, caractérisée en ce que les embouts sont montés dans des bagues cylindriques (56) reliées rigidement entre elles par des montants longitudinaux (18) .
10. Cartouche selon l'une des revendications précédentes, caractérisée en ce qu'elle est destinée à être utilisée dans un tube (30) relié à des moyens (36, 38) de circulation d'un liquide de dialyse.
PCT/FR1994/001327 1993-11-16 1994-11-15 Cartouche pour la preparation d'acides nucleiques purifies Ceased WO1995014086A1 (fr)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP7514254A JPH10513339A (ja) 1993-11-16 1994-11-15 精製核酸製造用カートリッジ
US08/637,713 US5789243A (en) 1993-11-16 1994-11-15 Cartridge for preparing purified nucleic acids

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR9313621A FR2712511B1 (fr) 1993-11-16 1993-11-16 Cartouche pour la préparation d'acides nucléiques purifiés.
FR93/13621 1993-11-16

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO1995014086A1 true WO1995014086A1 (fr) 1995-05-26

Family

ID=9452877

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/FR1994/001327 Ceased WO1995014086A1 (fr) 1993-11-16 1994-11-15 Cartouche pour la preparation d'acides nucleiques purifies

Country Status (4)

Country Link
US (1) US5789243A (fr)
JP (1) JPH10513339A (fr)
FR (1) FR2712511B1 (fr)
WO (1) WO1995014086A1 (fr)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2003085109A3 (fr) * 2002-04-09 2004-04-01 Genesystems Procede et automate d'extraction d'acides nucleiques a partir d'un melange complexe

Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB2337261B (en) * 1998-05-15 2002-09-18 Fsm Technologies Ltd Separation of nucleic acids
EP1265710B1 (fr) * 2000-03-22 2010-11-10 Dewalch Technologies, Inc. Procede et appareil destines a traiter des substances dans un conteneur unique
US20080260593A1 (en) * 2000-03-22 2008-10-23 Dewalch Norman Binz Method and apparatus for processing substances in a single container
DE10160975A1 (de) * 2001-12-10 2003-06-18 Univ Schiller Jena Probenplatte zur Verwendung in Dialysesystemen
RU2264410C1 (ru) * 2004-04-29 2005-11-20 Федеральное государственное учреждение Российский научно-исследовательский противочумный институт "Микроб" Министерства здравоохранения РФ (РосНИПЧИ "Микроб") Способ подготовки препарата днк из бактериальных клеток для постановки полимеразной цепной реакции
US20060018799A1 (en) * 2004-07-21 2006-01-26 Wong Cai Ne W Universal tissue homogenizer device and methods
US8304185B2 (en) * 2009-07-17 2012-11-06 Canon U.S. Life Sciences, Inc. Methods and systems for DNA isolation on a microfluidic device
EP2315848B1 (fr) * 2008-07-18 2014-12-10 Canon U.S. Life Sciences, Inc. Procédés et systèmes pour une préparation d'échantillon d'adn microfluidique

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0245945A2 (fr) * 1986-04-11 1987-11-19 Applied Biosystems, Inc. Appareil automatique pour l'extraction des acides nucléiques
US4787963A (en) * 1987-05-04 1988-11-29 Syntro Corporation Method and means for annealing complementary nucleic acid molecules at an accelerated rate
US4921952A (en) * 1988-01-21 1990-05-01 The United States Of America As Represented By The United States Department Of Energy Nucleic acid isolation process
WO1990015148A1 (fr) * 1989-06-02 1990-12-13 Mathias Uhlen Appareil et procede pour la purification automatisee, au moyen d'un dispositif de reaction, d'adn extra-chromosomique contenu dans une suspension cellulaire
EP0431905A1 (fr) * 1989-12-06 1991-06-12 Tosoh Corporation MÀ©thode pour la purification de DNA phagique
WO1993001312A1 (fr) * 1991-07-09 1993-01-21 Bertin & Cie Cartouche, dispositif et procede de preparation d'acides nucleiques purifies, a partir d'un echantillon de cellules

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0245945A2 (fr) * 1986-04-11 1987-11-19 Applied Biosystems, Inc. Appareil automatique pour l'extraction des acides nucléiques
US4787963A (en) * 1987-05-04 1988-11-29 Syntro Corporation Method and means for annealing complementary nucleic acid molecules at an accelerated rate
US4921952A (en) * 1988-01-21 1990-05-01 The United States Of America As Represented By The United States Department Of Energy Nucleic acid isolation process
WO1990015148A1 (fr) * 1989-06-02 1990-12-13 Mathias Uhlen Appareil et procede pour la purification automatisee, au moyen d'un dispositif de reaction, d'adn extra-chromosomique contenu dans une suspension cellulaire
EP0431905A1 (fr) * 1989-12-06 1991-06-12 Tosoh Corporation MÀ©thode pour la purification de DNA phagique
WO1993001312A1 (fr) * 1991-07-09 1993-01-21 Bertin & Cie Cartouche, dispositif et procede de preparation d'acides nucleiques purifies, a partir d'un echantillon de cellules

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2003085109A3 (fr) * 2002-04-09 2004-04-01 Genesystems Procede et automate d'extraction d'acides nucleiques a partir d'un melange complexe

Also Published As

Publication number Publication date
JPH10513339A (ja) 1998-12-22
US5789243A (en) 1998-08-04
FR2712511B1 (fr) 1996-02-09
FR2712511A1 (fr) 1995-05-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP0271378B1 (fr) Appareil de chromatographie en phase liquide
FR2461512A1 (fr) Perfectionnements aux dialyseurs a fibres creuses
EP1567094B1 (fr) Procede et dispositif d'emballage sterile d'une lentille intraoculaire hydrophile souple prete a l'emploi
FR2558847A1 (fr) Dispositif et procede de controle microbiologique de liquides
WO1997002853A1 (fr) Percuteur de perfusion
FR2539303A1 (fr) Dispositif d'introduction de songe medicale
FR2758088A1 (fr) Dispositif d'injection de liquide medical
FR2522776A1 (fr) Connecteur pour equipement de dialyse peritoneale ambulatoire continue
FR2540992A1 (fr) Dispositif pour verifier la sterilite de fluides et procede de fabrication de recipients de verification de la sterilite
FR2702950A1 (fr) Dispositif et procédé médicaux pour prélever un échantillon des liquides du corps humain.
FR2550704A1 (fr) Recipient souple pour usage medical, notamment pour dialyse
WO1995014086A1 (fr) Cartouche pour la preparation d'acides nucleiques purifies
FR2901806A1 (fr) Dispositif et ensemble de controle microbiologique
FR2799986A1 (fr) Unite de filtration d'une substance virucide
FR2617286A1 (fr) Dispositif de prelevement comportant une tete de prelevement sterilisable en position montee sur un bioreacteur
FR2468375A1 (fr) Seringue perfectionnee dotee de moyens pour isoler l'echantillon de sang apres l'evacuation des agents de contamination
FR2542203A1 (fr) Dialyseur a fibres creuses
WO2001041836A1 (fr) Unite de filtration d'un fluide
EP0725600A1 (fr) Instrument chirurgical pour le traitement d'un kyste hydatique
FR2855818A1 (fr) Dispositif applicateur de produit liquide
EP0145614A2 (fr) Appareil à fibres creuses semi-perméables dans lequel, au moins dans une masse d'empotage, un joint est disposé dans une gorge
FR2542620A1 (fr) Filtre et procede pour l'obtention d'echantillons de plasma sanguin
FR2593144A1 (fr) Conteneur souple a moyen de prelevement ou d'injection de liquide.
FR2534811A1 (fr) Systeme de prelevement de liquide physiologique, tel que du sang et recipient pour un tel systeme
CH642853A5 (fr) Dispositif medical de separation, notamment pour rein artificiel, et procede de fabrication d'un tel dispositif.

Legal Events

Date Code Title Description
AK Designated states

Kind code of ref document: A1

Designated state(s): JP US

AL Designated countries for regional patents

Kind code of ref document: A1

Designated state(s): AT BE CH DE DK ES FR GB GR IE IT LU MC NL PT SE

DFPE Request for preliminary examination filed prior to expiration of 19th month from priority date (pct application filed before 20040101)
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application
WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 08637713

Country of ref document: US

ENP Entry into the national phase

Ref country code: JP

Ref document number: 1995 514254

Kind code of ref document: A

Format of ref document f/p: F

122 Ep: pct application non-entry in european phase