WO1994005299A1 - Compositions medicinales - Google Patents

Description

、 明 柳 医 薬 用 組 成 物

【産業上の利用分野】

5 本発明は、 S —アデノ シル一 L — メ チォニ ン類または その塩類を有効成分とする医薬用組成物に関する。

さ らに詳 し く 言えば、 本発明は、 生体内に投与された 薬剤によ り 引き起こ される腎毒性を軽減 し得る S —アデ ノ シル一 L —メ チォニン も し く はその塩類 （以下 SAMeと

10 記す） を有効成分とする腎毒性軽減剤と して使用する医 薬用組成物に関する ものであ り、 さ らにまた、 白金錯体 化合物による抗腫瘍活性を増強 し得る SAMeを有効成分と する抗腫瘍効果増強剤と して使用する医薬用組成物に関 する。

15 【背景技術】

最近各種悪性腫瘍に対し種々 の薬剤が使用 されている 中で も シスプラ チ ン （ シス一 ジア ミ ンー ジ ク ロ ロ ブラ チ ナム ： CDDP) は、 延命が期待でき る優れた薬物であ り 、 特に睾丸腫瘍、 膀胱癌、 尿管腫瘍および卵巣癌の治療に

20 おいて顕著な延命効果が示 さ れている。 しか しなが ら CDDPは優れた抗腫瘍作用を有する反面、 重篤な毒性を も 現わすものであ り 、 中でも腎毒性が用量規制因子と され ている。 こ の毒性を軽減するために CDDPを投与する場合 に利尿剤を併用する方法やハイ ド レー シ ョ ン （ h y d ra -

25 tion) 等が行われてはいるが、 これらによ る毒性軽減効 果は、 患者に よ っ ては十分な ものではない。 特に CDDP力 く り返 し投与される場合には、 その蓄積毒性が大き く な り 、 腎毒性の発現 した患者によ っ ては用量を減 ら した り 、 或は他の薬剤に変更を余儀な く され、 その結果と して延 命の可能性が失われる こ と にな る。 他の例で言えば、 卵 巣癌の治療において、 CDDPの用量を増や しでき るだけ休 薬期間を短 く して ドーズ ' イ ンテ ン シテ ィ （dose intensity) を高める とい う 治療法において も腎毒性は大き な 問題と されている。 こ のよ う な問題に対 し、 従来、 CDDP の腎毒性を軽減 し得る化合物を探索する試みが多 く な さ れ、 例えばチォ硫酸ナ ト リ ウ ム、 ァセ タ ゾラ ミ ド、 二酸 ィ匕セ レ ン、 セ レ ン酸ナ ト リ ウ ム、 システィ ン、 3 — ア ミ ノ ベ ンズア ミ ド、 ホスホマイ シ ン或いは次硝酸 ビスマス 等が腎毒性を軽減する作用を示すこ とが報告されている が、 これ らの化合物は現在臨床上実用化さ れる ま でには 至っ ていない。 ま た近年、 グルタ チオ ンがイ タ リ アで許 可さ れ、 ア ミ ホスチ ン（amifostin) がァ メ リ カ において 申請され、 ゥ リ ナスタ チ ンが日本において臨床研究がな されている等、 腎毒性軽減作用を有する薬剤の開発が行 われている。

—方、 CDDPの投与に際 し、 腎毒性な どの副作用を抑え るために、 前述の毒性軽減剤等を併用する と CDDPその も のの抗腫瘍活性が抑制される こ とが知 られている。 こ の ため抗腫瘍作用を低下させる こ とな く 効果の増強を図 る こ とがこ の分野での技術的課題と されている。 【発明の目的】

本発明は生体内に投与された薬剤によ り 引き起こ され る腎毒性を軽減するための薬剤と して使用する医薬用組 成物であ って、 S —アデノ シル一 L —メ チォニン （以下、 SAMeと記す） を有効成分とする腎毒性の.軽減剤と して使 用 される組成物を提供 し、 さ らに、 白金錯体化合物によ る薬剤の抗腫瘍効果を増強 し得る SAMeを有効成分とする 抗腫瘍効果増強剤と して使用される医薬用組成物を提供 する こ とを目的とする ものである。

【発明の開示】

本発明者らは、 上記の目的を達成するために、 生体内 で生成される ダルタチオ ン等の SH化合物が生体内の活性 酸素や化学的に反応性のある毒物と反応する こ とによ り 無毒化する こ と に着目 し、 SAMeについて鋭意研究した結 果本発明に よ り 、 その 目的が達成 し得る こ とを見出 し i o

SAMeはあ らゆる生物の'細胞中に存在 し、 生体内でメ チ ル基の供与体と して多 く の重要な生体内反応に関与 して いる化合物であ る こ とが知 られている。 しか しながら SAMeは非常に不安定な化合物であ り、 その薬理効果を調 ベるために純粋に大量に得る こ とは困難であ つたが、 近 年 （ 1980年代） SAMeがその安定な塩と して取り 出される よ う にな り 、 SAMeについての各種薬理作用またはその生 化学的挙動の研究を行う こ とが容易にな った。 この安定 な SAMeの塩を用いる種々 の薬理効果の探索の結果、 肝障 害、 う つ病、 骨関節症に対 し （特公昭 56- 10920号公報参 照）、 急性期の脳障害に対 し（特公平 2-7293号公報参照）、 パーキ ン ソ ン病ま たはエイ ズの免疫能低下に対 し効果を 発現する こ と、 あ る いは、 あ る種の癌細胞に対 し細胞毒 性を示すこ と等が報告され、 肝障害、 う つ病、 骨関節症 に対 しては既にイ タ リ ア、 ドイ ツ等では医薬品と して臨 床の場に供されている。

本発明者 らは、 上記 SAMeにっき、 更に新 しい薬効を発 見すべ く SAMeの投与後の吸収分布代謝排泄を検討 した と こ ろ、 驚 く べき こ と に SAMeは静脈内投与後、 特異的に腎 組織に集ま り 、 そ こ で速やかに ト ラ ンスメ チ レー シ ヨ ン のプロセスを経て、 S —アデノ シルホモ システィ ン （以 下、 SAHと記す）に変換された後、 ホモ システィ ン、 シス ティ ン、 グルタ チオ ン等の SIH匕合物に変換される こ とを 見い出 した。 しか も こ れらの SHィヒ合物の血中濃度は SAMe 投与後上昇する こ と はなかっ た。

本発明者 らは、 さ らに研究を重ねた と こ ろ、 SAMeがセ フ ァ ロ リ ジ ン等の抗生物質、 免疫抑制剤であ るサイ ク ロ スポ リ ン等によ り 引 き起こ される腎組織障害の改善作用 を有する こ とを見い出 した。

さ らにま た、 本発明者 らは SAMeが CDDPの抗腫瘍作用を 減弱する こ とな く 、 腫瘍の種類に応 じては著 し く 抗腫瘍 効果を増強する作用を示すこ とを も見い出 した。

すなわち、 本発明は生体内に投与された薬剤に よ る腎 毒性を軽減する ための腎毒性軽減剤であ っ て、 S — アデ ノ シルー L 一 メ チォニ ン、 も し く は、 その塩類を有効成 分とする こ とを特徴とする腎毒性軽減剤および前記の生 体内に投与された薬剤がシスブラチ ンである腎毒性軽減 剤を提供する ものである。

SAMeは、 ラ ッ トを用いた急性毒性試験によれば、 その

LD_{5 ()}値 （腹腔内投与） は、 2, 000〜 2, 500mgZ kgであ って、 極めて安全な化合物である こ とが知られている。

SAMe類は公知の化合物であ り これらは公知の方法に従 つてあるいは公知の常用手段に準じて製造する こ とがで き る。

SAMeは、 分子内にスルホ二ゥム陽イオンが存在するた め、 常にァニオ ンとの塩の形態で存在する と同時に、 そ の分子内にア ミ ノ 基または塩基性の N原子を有している ためそれらの部分について も各種の塩が形成された状態 で存在する。

従って、 本発明の薬剤の形態と しては、 通常、 SAMeを そのま まで用いるか、 または、 SAMeを有効成分と して含 む組成物の形態で使用 される。

本発明の薬剤において用いる こ とができ る SAMeの安定 な塩の例と しては、 硫酸、 塩酸、 p — トルエンスルホ ン 酸、 メ タ ンスルホ ン酸、 エタ ンスルホ ン酸、 コ ン ドロ イ チ ン硫酸または一般式、 H0₃S(CH₂)_mS0₃H (式中、 mは 2 〜 12) で表される ジスルホ ン酸等の塩類、 あるいはこれ らの一種または二種以上からなる複合塩類な どが挙げら れる。

訂 された 上記の ジスルホ ン酸の例と しては、 例えば 1 , 2 _エタ ン ジスルホ ン酸、 1， 3—プロパ ン ジスルホ ン酸、 1 , 4— ブ タ ン ジスルホ ン酸、 1 , 5—ペ ンタ ン ジスルホ ン酸、 1， 6— へキサ ン ジスルホ ン酸、 1 , 8—オ ク タ ン ジスルホ ン酸ま た は 1， 10— デカ ン ジスルホ ン酸等を挙げる こ とができ る o

上記複合塩の具体例と しては、 硫酸 ト シル酸アデノ シ ノレ一 L— メ チォニ ン （ SAMe、 硫酸、 p — ト ルェ ンスルホ ン酸のモル比が 1 ： 2 ： 1 ) な どを挙げる こ と ができ る。

上述の白金錯体化合物類と は、 シスブラ チ ン （シス一 ジア ミ ン一 ジ ク ロ ロ ープラ チナ ； CDDP) 、 カルボプラ チ ン、 ジ ク ロ ロ 一エチ レ ン ジァ ミ ン一プラ チナ （11)、 1, 2 — ジァ ミ ノ 一サイ ク ロへキ シル一プラ チナ （ II) —マ ロ ネー ト ま たはサルフ ェ ー ト、 ジイ ソ プロ ピルア ミ ノ ー ト ラ ンス一 ジ ヒ ドロ キ シ一 シス一 ジ ク ロ ロ 一プラ チナ（IV)、 (- ) ― ( R ) — 2 —ァ ミ ノ メ チルピロ リ ジ ン （ 1, 1— シ ク ロ ブタ ン ジカ ルボキ シ レー ト ） プラ チナ （ II) —モ ノ ノヽ ィ ド レ一 ト、 シスー ジア ミ ング リ コ レー ト プラ チナな どを挙げる こ とができ る。

本発明の抗腫瘍効果増強剤においては、 その薬剤中に 白金錯体化合物類を含有させてお く こ とができ る。 その 使用量は、 該抗腫瘍剤の種類によ り 異な り 特定は されな いが実際の臨床用量および基礎的効力実験か ら 1 日 当た り 通常 0.5〜50mgZkgとするのが好ま しい。

された甩紙 規則 91) 本発明の腎毒性減剤あ る いは抗腫瘍効果増強剤におい ては、 抗腫瘍薬剤と しての白金錯体化合物類を含有させ てお く こ とができ、 その際、 その化合物と SAMe類との使 用割合は白金錯体化合物の種類および SAMe類に応 じて異 な る が、 一般的に は前者 1 モルに対 して後者を 0. 02〜 150倍モル、 好ま し く は 10〜 100倍モル用いる のがよい。

ま た、 SAMeの使用量は、 その種類と投与法によ っ て異 な るが、 た とえば、 SAMe、 硫酸、 p — トルエ ンスルホ ン 酸のモル比が 1 ： 2 ： 1 の ものを用いる場合には、 SAMe と して 1 日 当た り 100〜2， OOOmgの範囲が好ま しい。

本発明の薬剤においては、 前記 SAMeを常法に従っ て各 種の投与単位形態に製剤 した もの と各種投与単位形態に 製剤 した白金錯体化合物類を含む抗腫瘍活性薬剤とを、 同時にあ る いは別々 にあ る いは引 き続いて使用する こ と ができ る。 そのために、 こ れ らの組み合わせに よ る配合 剤の形態と してお く こ とができ る。 SAMeを先に投与 した 後、 白金錯体化合物類を投与 して も よ く 、 あ る いは、 そ の逆に白金錯体化合物類を先に投与 した後、 SAMeを投与 して も よい。 投与の順序には特に制限はない。

本発明の薬剤の剤形と しては、 治療目的に応 じて各種 の形態を選択する こ とができ る。 た とえば、 経口剤と し ては、 錠剤、 カ プセル剤、 顆粒剤、 細粒剤、 散剤ま たは 腸溶性製剤等、 あ る いは非経口用剤と しては、 注射剤、 坐剤等を挙げる こ とができ る。 上記の各剤形の製剤は、 常法に従 っ て製造される。 た とえば、 注射用薬剤と しては注射用粉末製剤の形態 とする ためには、 適当な水溶性賦形剤、 た とえば、 マ ン 二 ト ール、 蔗糖、 乳糖、 マル ト ース、 ブ ドウ糖およ びフ ルク ト ースな どの一種ま たは二種以上を使用 して水溶液 と し、 バイ アルま たはア ンプルに注入 したのち凍結乾燥 し、 密封 して製剤とする こ とができ る。

上記の注射用粉末製剤は、 一般的には、 使用に際 して、 各種塩基物質を用いて、 た とえば、 水酸化カ リ ウ ム、 水 酸化ナ ト リ ウ ム等、 ま たは こ れ らの重炭酸塩、 炭酸塩等 を用いて pHを 7 付近に調整 して用いる こ とができ る。

経口用製剤の例 と しては、 た とえば、 錠剤、 カプセル 剤、 顆粒剤、 細粒剤、 散剤ま たは腸溶性の製剤等をあげ る こ とができ る。

腸溶性の製剤 と しては、 マ ンニ ト ール、 蔗糖、 乳糖、 マル ト 一ス、 デンプ ン、 リ ン酸カルシウ ムな どの賦形剤、 ステア リ ン酸マグネ シウ ムな どの滑沢剤、 力 ルボキ シメ チノレセ ノレ ロ ー ス、 メ チノレセルロ ー ス、 ゼラ チ ン、 ァ ラ ビ ァ ゴム な どの結合剤、 カ ノレボキ シ メ チルセ ル口 一ス カ ル シゥ ムな どの崩壊剤な どを適宜選択 して用いて、 常法に よ り 、 錠剤、 顆粒剤、 細粒剤な どの形態に調製 したのち、 セルロ ー ス ア セテ ー ト フ タ レ一 ト 、 ヒ ド ロ キ シプ ロ ピル メ チルセル ロ ー ス フ タ レ ー ト、 ポ リ ビニルア ル コ ー ルフ タ レー ト 、 ス チ レ ン ' マ レ イ ン酸共重合体、 ス チ レ ン . 無水マ レイ ン酸共重合体、 ア ク リ ル酸メ チ ル · メ タ ク リ ル酸共重合体、 メ タ ク リ ル酸メ チル ' メ タ ク リ ル酸共重 合体な どの腸溶性基剤の一種ま たは二種以上を用いて コ 一チ ングを行う こ と によ り 製造する こ とができ る。

ま た、 さ らに上記の如き腸溶性の顆粒剤ま たは細粒剤 をカ プセルに充填 しカ プセル剤 とする こ と もでき る。

カ プセル剤に対 し、 腸溶性基剤でコ ーチ ン グを施 し、 あ る いは、 前記の腸溶性基剤単独ま たは こ れにゼラ チ ン を混合 して調製 したカ プセルを用いて腸溶性カ プセル剤 とする こ と も可能である。

坐剤の例 と しては、 た とえばカ カオ脂肪酸 卜リ グ リ セ ラ イ ドに脂肪酸モ ノ グ リ セラ イ ド、-脂肪酸ジグ リ セラ イ ドを種々 の割合で混合 した坐剤基剤（半合成グ リ セ リ ド） な どの親油性基剤 と ポ リ エチ レ ング リ コ ール、 グ リ セ 口 ゼラ チ ンな どの親水性基剤とを加温溶融 した ものを用い て均一に ίΐ和 し、 型に入れて成形 した も のがあ げ られ る。

以下に、 本発明の薬剤の実施例を記載する。

【実施例】

実施例 1

SAMe、 硫酸、 P — ト ノレエ ンスルホ ン酸のモル比が 1 ： 2 ： 1 であ る SAMeの複合塩 384 g とマ ンニ ト ール 240 g と を注射用蒸留水を用いて全量 3， O O Ora lの水溶液 とする。 こ れを ミ リ ポア フ ィ ルタ ー （ 0. 22ミ ク ロ ン） を用いて無 菌ろ過 し、 容量 5 m lのバイ アルに 1 . 5 m lずつ分注 したの ち、 凍結乾燥 し、 直ちに密栓 して注射用粉末製剤を調製 した。 実施例 2

実施例 1 と同 じ SAMeの複合塩 576 g とマ ンニ ト ール 360 g と を含有する粉末 936 g に注射用蒸留水を加えて全量 2 , 250 m lの水溶液 と する。 こ れを ミ リ ポア フ ィ ルタ ー (0.22ミ ク ロ ン）を用いて無菌ろ過 し、 容量 15mlのバイ ァ ルに 4. 5m lずつ分注 したのち、 凍結乾燥 し、 直ちに密栓 する こ と に よ り 注射用粉末製剤を調製 した。

実施例 3

実施例 1 と同 じ SAMeの複合塩 576 g、 マ ンニ ト ール 114 g 、 ト ウ モ ロ コ シデンプ ン 150 g、 ステア リ ン酸マ グネ シゥ ム 10 g を均一に混和 し、 常法によ り 顆粒を調製 した _c 別に、 ヒ ドロキ シプロ ピルメ チルセルロ ースフ タ レー ト 108 g 、 セラ ッ ク 28 g およびグ リ セ リ ン脂肪酸エステル 14 g を、 塩化メ チ レ ン 462 g、 イ ソプロ ピルアルコ ール 922 g . 水 462 g の混液中に分散させておき、 こ の分散液 を用いて先に得た上記の顆粒を コ ーチ ング したのち、 得 られた コ ーチ ング物 500mgずつを 1 カプセル中に充填 し カ プセル剤を調製 した。

実施例 4

実施例 1 と同 じ SAMeの複合塩 576 gを脂肪酸の ト リ グ リ セラ イ ドを主成分とする坐剤基剤、 l , 424 g中に加え て、 均一に分散させた後、 1 個当た り 2. 0 g の坐剤を調 製 した。

以下に、 本発明の薬剤と 白金錯体化合物類を併用 した 場合の副作用の軽減およ び ま たは抗腫瘍効果の増強作 用 について述べる。

以下の例中、 CDDPと しては、 シスプラ チ ン注射液 （ブ リ ブラ チ ン注 （^R)、 ブ リ ス ト ルマイ ヤー社製） を使用 し、 SAMeと しては、 前記実施例 1 で調製 した注射用粉末製剤 にっき、 4 N —水酸化ナ ト リ ウ ムを用いて、 その pHを 7 に調整 して用いた。

本発明の薬剤を静脈内投与 した後、 SAMeが特異的に腎 組織に集ま る こ と、 そ して、 ホモ システィ ン、 システィ ン、 グルタ チオ ン等の SH化合物の血中 （血漿） における 濃度は SAMe投与後上昇 しないこ とが下記の実験によ り確 認された。 試験方法 ： SD系のラ ッ ト （ 6週令） に SAMeの 生理食塩液 （ 30mgZkg, pH6 ) を静脈内投与 し、 30、 60、 120分後に血液、 腎組織中の SH基を有する化合物の濃度 を測定する 〔ジ ャ ーナル ォブ フ ア ルマ コ ロ ジカ ル イ ク ス ペ リ メ ン タ ル セラ ピー ( J. Pharmacol. Exp. Ther. ), N. Kaplowits等、 1977、 200、 279- 286) 〕 ₀

試験結果を下記表に示す。

投与後の血漿または腎組織中の SH化合物の濃度

濃度（ダルタチオン換算量） 土 SD

0分 30分 60分 120分 腎組織¹) 1029.1±58.6 1219.3±68.3* 1256.0± 125.3* 1201.1±37.8* 血漿²) 14.2±3.2 12.2±2.7 12.5±2.1 18.5±3.0 表中の腎組織および血漿中の S H化合物の濃度はすべての S H化合物がグ ルタチォンであるとして計算し、平均値土標準偏差で表したものである。

1) gZ臓器（g)

2) g/M (ml)

* : P < 0.05 (SAMe投与前値に対し） 次に、 SAMeによる CDDPの腎毒性の軽減作用を測定した 試験について述べる。

試験例 1

( SAMeによ る CDDPの腎毒性の軽減作用）

CDF1マウ ス （雄性 ； 体重 25.0〜27. 6 g ) を一群 4 匹と し、 4群に対し、 CDDPと前記実施例 1 で得られた SAMeの 複合塩とを表 2中に示 した各用量 （以下、 SAMeの用量は SAMe複合塩中に含まれる SAMe含量で表示する。 ） で第 1 群と第 2群の各マウ スに腹腔内に投与し、 6曰後に採血 し、 血清尿素窒素（BUN) およびク レアチニン量を測定 し た。 対比のために第 3群には CDDPを単独投与 し、 第 4群 には、 生理食塩水のみを投与 し対照群と した。 その結果 を下記表に示す。 表 2

クレアチニン濃度および BUN濃度は平均値士標準偏差で表した。 上記の試験結果から、 明かなよ う に CDDP投与に際 し、 本発明の薬剤を併用する と、 用量依存的に B U Nおよびク レアチニ ン量の増加を抑え、 腎毒性の著 しい軽減が見ら れた o

試験例 2

〔CDDP単回投与後の犬腎毒性に対する SAMeの効果（BUN)〕 ビーグル犬 （体重 10. 2〜14.5kg、 24〜36月齢） 9頭を 3頭ずつ 3群に分け、 1群には CDDP 4 mg/ 8 m 1 / k g ¾r 静脈内投与し、 第 2群には CDDP 4 mg/ 8 mlZkgおよび 実施例 1 の SAMe塩 （以下単に SAMe塩という） を SAMeと し て 30mgZkgまたは lOOmgZkgを静脈内投与 した（SAMe塩は pH 5 に調整 し、 CDDPの投与直前に静脈内投与 した） 。 対 照群には、 CDDPおよび生理食塩水を投与 した。 投与後 2 曰毎に BUN値を測定 し、 比較 した。

その結果を、 下記表に示す。 表 3

CDDP( 4 mgZkg)単回投与後の犬腎毒性に対する SAMeの効果（BUN)

表中の B U N濃度は平均値士標準偏差で表した 対照群は 7 日 目までに全例が死亡し、 SAMe 30mg/kg 投与群は 7 曰 目までに 3例中 2例が死亡 したが、 100 m g Z kg投与群は全例が生存 した。

試験例 3

CCDDP多回投与後の犬腎毒性に対する SAMeの効果（BUN)〕 ビーグル犬 （体重 8.3〜9. 2kg、 8〜 9月齢） 12匹を 4 群に分けた。

第 1 群には CDDP 2 mgZ 4 mlZkgと生理食塩水を 3回 (第 1 日 目、 第 11曰 目、 第 21日 目） 静脈内投与 し、 対照 群と した。

第 2群には CDDP 2 mgZ 4 ml/kgと SAMeと して 25mgZ kgの SAMe塩とを 3 回 （第 1 日 目、 第 11日 目、 第 21日 目） 静脈内投与 した。 SAMe塩は pH5 に調整し、 CDDP投与直前 に静脈内投与 した。

第 3群には CDDP 2 mg/ 4 ml/kgと SAMeと して 50mg/ kgの SAMe塩とを 3 回 （第 1 日 目、 第 11日 目、 第 21日 目） 静脈内投与 した。 SAMe塩は pH 5 に調整 し、 CDDP投与直前 に静脈内投与 した。

第 4群には CDDP 2 mg/ 4 ml/ kgと SAMeと して lOOmg/ kgの SAMe塩とを 3 回 （第 1 日 目、 第 11日 目、 第 21日 目） 静脈内投与 した。 SAMe塩は pH5 に調整 し、 CDDP投与直前 に静脈内投与 した。

上記各投与 （第 1 曰 目、 第 11日 目、 第 21日 目） 後 2 日 目毎に BUN値を測定 した。

上記測定によ り得られた BUN値を、 第 1 日 目の BUN値を 100と してその相対値と して表 した。 その第 3 曰 目、 第 13日 目 と集 23曰 目の結果を下記表に示 した。

表 4

CDDP(2ragZkg)多回投与後の犬腎毒性に対する SAMeの効果 (BUN)

1) 上記表中の BUN値は 1日目の BUN値を 100として、 平均値土 標準偏差で表した。

ネ： Pぐ 0.05、 * *： P< 0.01

SA Meの使用量を増加させる と BUN値は有意に低下 し た。

試験例 4

〔 ( CDDP単回投与後のラ ッ ト腎毒性に対する SAMeの効果 (BUN, CEE)3 ラ ッ ト （体重約 180 g )を 3 群に分け、 第 1 群には CDDP 5 mg/lOml/kg, 第 2群に ίま CDDP 5 m g / 10 m 1 k gおよ び SAMeと して 10mg "kgの SAMe塩を 1 回静脈内投与 した ( SAMe塩は pH 5 に調整 し、 CDDPの投与直前に静脈内投与 した） 。 対照群には SAMe塩の代わ り に生理食塩液を投与 した。 投与 7 日 目 に ΒϋΝ、 ク レアチニ ン （ CRE) 値を測定 した。 その結果を下記表に示す。

表 5

CDDP単回投与後のラッ ト腎毒性に対する SAMeの効果（BUN)

表内の B UN濃度および C R E濃度は平均値土標準偏差で表した。

* ： P<0.05 (CDDPおよび生理食塩水投与群に対し） 試験例 5

〔 CDDP多回投与後のラ ッ ト 腎毒性に対する SAMeの効果 (BUN) 〕

ラ ッ ト （約 180 g ) を 3群に分け、 第 1 群には CDDP 3 mg/lOml/kg. 第 2群に！ま CDDP 3 m g / 5 m 1 / k gおよび SAMe塩を SAMeと して 10mgZkg 5 日毎に 3 回静脈内投与 (SAMe塩は pH 5 に調整 し、 CDDPの投与直前に静脈内投与） した。 対照群には SAMe塩の代わ り に生理食塩水を投与 し た。 BUN値を経曰的に測定 した。 その結果を表 6 に示す。

表 6

CDDP多回投与後のラット腎毒性に対する SAMeの効果 （BUN)

表内の B U N濃度は平均値土標準偏差で表した。

*： P<0.05 (CDDPおよび生理食塩水投与群に対し） 試験例 6

〔 CD DP多回投与後のマウ ス腎毒性に対する SA Meの効果 ( BUN) 〕

マウ ス （体重約 24〜 28 g ) を 3群に分け、 第 1 群には CDDP 8 mg/ 8 ml/kg. 第 2群には CDDP 8 g/ 8 ml/ kg および SA Me塩を SAMeと して 30ng/kg、 第 3群には CDDP 8 mgZ 8 mlおよび SAMe塩 90ragZ kgを、 それぞれ、 5 日間 隔で 2 回静脈内投与 した （SA Me塩は CDDPの投与直前に SAMe塩を pH 5 に調整し、 CDDP投与時とその 30分後と 60分 後に lOmgZ kgまたは 30ragZ kgずつ 3回に分け静脈内投与 した）。 対照群には生理食塩水を投与 した。 投与後 BUN値 を経曰的に測定 した。

その結果を下記表に示す。 表 7

表内の B U N濃度は平均値士標準偏差で表した。

* ： P<0.05 (CDDPおよび生理食塩水投与群に対し）

1 ) 10 mgZkgを 30分毎に 3回静脈内投与した。

2) 30 mgZkgを 30分毎に 3回静脈内投与した。 試験例 7

(SAMe類によ る CDDPの抗腫瘍効果増強作用 （iv vitro)) マウス白血病細胞 L1210および P388を RPMI1640培養液 で 10⁴細胞数 Zmlと し、 その 2 mlを培養試験管 （Falcon No.2054)に分注 し、 炭酸ガスイ ンキュベー タ 中、 5 %炭 酸ガス存在下、 37°Cで 5時間培養 した後、 CDDPおよび Z ま たは SAMe類を各培養試験管に加え、 さ らに 1時間培養 した。 次いで 1， 600rpmで 5分間遠心 し、 培養液を吸引除 去 した後、 RPMI 1640を 2 ml加え、 上記と同 じ条件で 72時 間培養 した後、 培養液中の細胞数を コ ールタ ー · カ ウ ン タ 一 （ Model ZB) で計測 した。

その結果を表 8 に示す。 9

表 8

SAMe類による CDDPの抗腫瘍効果

増強作用（in vitro)

1) CDDPに対する SAMeの量はモル比で 1 ： 10。

2) CDDPに対する SAMeの量はモノレ比で 1 ： 100₀ 抗腫瘍効果を IC_{5 ()}値（CDDP無添加時の L1210細胞の増殖 を 50%抑制する CDDPの濃度） で表すと、 CDDPを単独で用 いた場合には、 IC₅₀値が 16.2/ίΜであった。 これに対して CDDPと本発明の実施例 1 の製法で得られた薬剤を CDDPに 対 しモ ル比で 10倍量、 100倍量併用 した と き の各々 の IC₅。値は、 6.6および 1.7pMであった。

—方、 上記の本発明の薬剤を単独で用いた と きの IC₅₀ 値は、 1， 000/iM<であった。

試験例 8

(SAMe類による CDDPの抗腫瘍効果増強作用 （ in vivo))

1 群 6 匹の 8週令の CDF1マウス （雄性 ； 体重 24〜28 g ) を用い、 その腹腔内にマウス白血病細胞 L1210を 10⁵個移 植 ( day 0 ) した。 1 曰後 （ day 1 ) および 5 曰後 （day 5 ) に CDDPおよび Zまたは実施例 1 記載の製法で得 られ た薬剤を各群の腹腔内に投与 した。 CDDPおよび CDDPと上記薬剤の併用時の L1210に対する 抗腫瘍効果を下記の式に よ つ て求め られる生命延長率 ( ILS) で示 した。

I L S (% )= (T / C - 1 )x 100

式中、 Tは、 CDDP投与群のマウ スの平均生存日数を表 し、 Cは、 CDDP非投与群 （対照群） のマウ スの平均生存 日数を表す。

なお、 30日以上生存 した場合の生存日数は 30日 と して β 弁 し 7こ。

なお、 投与方法は、 ip- ip (day 1、 5 ) であ り、 表 9 中の被検薬の用量 （ragZkg) については、 たとえば、 番 号 1では、 CDDPと SAMe塩を SAMeと して各々 4 mg、 400rag を併用 したこ とを示 している。 また、 体重変化は各群の day 1 と day 7 での平均体重の差 （ day 7 の平均体重一 day 1 の平均体重） を示 している。

その結果を下記表に示す。

表' 9

SAMe類による CDDPの抗腫瘍効果增強作用（in vivo) 用 量 ILS 30曰生存 体重変化 番号 被検 (mg/kg) (%) マ ウ ス (g)

1 CDDP 4

SAMe 400 184 2/6 -2.8

2 CDDP 6

SAMe 400 241 5/6 -4.8

3 CDDP 4 73 0/6 -2.4

4 CDDP 6 121 0/6 -4.5 上記の試験結果から、 CDDP ( 4 または 6 m / kg) と本 発明の実施例 1記載の SAMeの複合塩（SAMeと して OOmg// kg) を併用 したとき、 30日以上生存するマウスが多 く 現 れ、 本発明の薬剤が CDDPの抗腫瘍効果を著 し く 増強 して いる こ とがわかる。 一方、 本発明の薬剤と CDDPとを併用 したときの体重の減少は、 CDDPを単独投与 した場合と同 で i> つ

試験例 9

マウス結腸腫瘍細胞 Colon 26を M E M培養液で 5X 10³ 細胞 Zmlと し、 その 2 mlを培養ペ ト リ 皿に分注 した。 5 %C0₂下 37°で 24時間培養した後、 各濃度の CDDPまたは CDDPの 10倍〜 100倍モル量の SAMe共存下 1 時間培養 した。 その後培地を吸引 しコール ド （cold) PBS (—） で 1 回洗 浄後新 しい培地を 2 ml加え、 さ らに 72時間培養 した。 細 胞を ト リ プシ ン処理 し、 希釈後、 細胞数をコールター力 ゥ ンターで計測 した。

CDDPの抗腫瘍活性は ト リ プ リ ケー トの値よ り算出 し、 IC₅₀値で示 した （表 10)

試験例 10

ヒ ト腫瘍に対する抗腫瘍効果増強作用

下記の ヒ ト腫瘍細胞を RPMI1640培地（註 1 ) または MEM 培地 （註 2 ) で 5 X 10³ 2 X 10⁴細胞 Zinlと し、 その 2 mlを培養ペ ト リ皿に分注した。 5 %C0₂下 37°Cで 24時間 培養した後、 各濃度の CDDPまたはその 10倍〜 100倍モル 量の SAMe共存下 1 時間培養 した。 その後培地を吸引 し、 コ ー ル ド PBS (— ）で 1 回洗浄後、 新 しい培地を 2 ml加え、 さ らに 72時間培養 した。 細胞を ト リ プシ ン処理 し、 希釈 後、 細胞数を コ ールタ ーカ ウ ンタ 一で計測 した。 CDDPの 抗腫瘍活性は ト リ プ リ ケー ト の値よ り 算出 し、 IC₅₀値で 示 した （表 11、 12) 。

註 1 ：

RPMI 1640培地 ： 10%牛胎児血清、 20/(M 2 — メ ルカ プ ト エ タ ノ ール、 カ ナマ イ シ ン （ 100/igZinl) 。

註 2 ：

ME M培地 ： 10 %牛胎児血清、 カ ナマイ シ ン （ 60 |/ g / ml) o

使用 した ヒ ト腫瘍細胞 ：

A549 ： 肺腺癌、 LU65 ： 肺癌、 MKN28 ： 胃腺癌、 MKN45 ： 胃腺癌、 DLD-1 ： 結腸腺癌、 WiDr ： 結腸腺癌、 PA- 1 ： 卵 巣奇形腫、 MCAS ： 卵巣嚢胞腺癌、 ACHN ： 腎腺癌。

その結果を表 10、 11および表 12に示 した。

各表中、 化合物欄の表示は以下の意味を表わす。

1) CDDPに対 して 10倍量の SAMeを併用

2) CDDPに対 して 100倍量の SAMeを併用

-

0

表中 （） 内の数値は、 下記式で表される、 SAMe併用時 の CDDPの抗腫瘍活性増強の割合を示す。

(CDDPの ICS Q)/ (SAMe併用時の CDDPの IC_{5 0})

表 1 2

化 合 物 WiDr MCAS PA- 1 ACHN

CDDP 37.7 149.9 4.1 48.4

(1.0) (1.0) (1.0) (1.0)

CDDP + SAMe¹) 24.6 27.4 3.8 28.5

(1.5) (5.5) (1.1) (1.7)

CDDP + SAMe ²) 17.2 31.0 3.6 16.8

(2.2) (4.8) (1.1) (2.9) 上記表に示された試験結果から、 マウスおよびヒ ト腫 瘍細胞に対する CDDPの抗腫瘍活性は、 IC₅₀値で表すとマ ゥス腫瘍に対しては3. 5〜41. 7 #»1、 ヒ ト腫瘍に対しては 4.1〜 149.9//Mであ った。 一方、 CDDPの 10倍モル量あるい は 100倍モル量の SAMeを共存させる といずれの腫瘍細胞 に対 して も CDDPの抗腫瘍活性は増強され、 IC₅₀値で比較 する と増強の割合は 1.1〜 9.5倍であった。 また、 SAMeの 各腫瘍細胞に対する IC₅ n値はいずれにおいても Ι, ΟΟΟρΜ 以上であった。

試験例 11

( SAMe類によるマウ ス腫瘍に対する抗腫瘍効果増強作用 (腹腔内または静脈内投与） ）

1 群 6 匹の 8 〜 9週令 （体重 24〜28g ) の雄性 CDF1マ ウ スを用い、 その腹腔内にマウ ス白血病細胞 U210 ( 10⁵ 個） を移植した （day O ) 。 次いで d a y 1 および d a y 5に CDDPあるいは CDDPと SAMeを同時に腹腔内 も し く は静脈内 ( iv) 投与 した。

CDDPおよび CDDPと SAMeを併用 した時の抗腫瘍効果は ILSで求めた。

-24- た 9 表 1 3

SAMe類による CDDPの抗腫瘍効果増強作用

(腹腔内投与）

用 (mg/kg)

CDDP SAMe ILS ( % ) 30日生存マゥス

4 78

4 100 113

4 200 204 3/6

4 400 239 5X6

6 84

6 100 126

6 200 192 2/6

6 400 201 4/6 上記表に示すよ う に、 CDDP( 4 または 6 mg/ kg)と SAMe ( 100〜 400mgZkg) を同時に腹腔内投与した時、 CDDPの みを投与 した場合に比べ抗腫瘍効果が著 し く 増強 し、 30 曰以上生存するマウスが多 く 現れた。

表 1 4

SAMe類による CDDPの抗腫瘼効果増強作用（静脈内投与） 用 量 （ragZkg)

CDDP SAMe ILS ( % )

4 28

4 10 36

4 lOx 3¹) 38

4 30 48

4 30x 3^{1 }} 53

1) CDDPと SAMeを投与後、 30分間隔でさ らに同量の

SAMeを 2 回投与 した。 CDDP ( 4 mg/kg) と SAMe ( 10〜 90rag/ kg) を同時に静 脈内投与 した と き、 CDDPのみを投与 した と き に比べ抗腫 瘍効果は投与 した SAMeの用量に依存 して増強された。 ま た同量の SAMeを分割 して投与 した と きの方が大きな抗腫 瘍効果が得 られた。

ヒ ト腫瘍に対する抗腫瘍効果増強作用

1 群 3〜 4 匹の 6〜 8週令 （体重 24〜28g ) の BALB/ c 雌性ヌ ー ドマウ スを用い、 下記の ヒ ト腫瘍 （ 10⁶〜 10⁷ 個） を皮下 （sc) に移植 した。 腫瘍体積が一定の大き さ ( 200〜 300mm³) に達 した日 （day l ) か ら CDDPあ る いは CDDPと SAMe OOmgZkg) を同時に腹腔内 （ ip) も し く は 静脈内 （ iv) 投与 した。 腫瘍の長径、 短径およびその高 さ を各々 a 、 b、 h (mm) と し、 腫瘍体積を下記の式で 算出 した。

腫瘍体積 （mm³) = l / 2 x a x b x h

抗腫瘍効果は、 個々 のマウ スにおける腫瘍体積増殖率 ( day 1 に対する day n の腫瘍体積比） にて求めた。

使用 した ヒ ト腫瘍細胞は、 A549 ： 肺腺癌、 LU65 ： 肺癌、 MKN28 ： 胃腺癌、 MKN45 ： 胃腺癌、 DLD-1 ： 結腸腺癌、 WiDr： 結腸腺癌、 PA- 1 ： 卵巣奇形腫、 MCAS： 卵巣嚢胞腺 癌および ACHN : 腎腺癌 ( Rena adenocarcinoma) 等で の る 。

試験例 12

ヒ ト肺癌 （Lu65) を有する マウ スに CDDP ( 6 mg/kg) と SAMe ( 400 mg/kg) を d a y 1 および d a y 5に腹腔内投与 した。

その結果 CDDPと SAMeを併用 した場合には、 CDDPのみを 投与 した場合に比べ強い抗腫瘍効果を示 し、 腫瘍の増殖 が強 く 抑制された。 さ らに CDDPと SAMe併用群中、 腫瘍が 縮小する ものも現れた。

また、 試験した他の ヒ ト癌に対して も CDDPと SA Meを併 用 した場合、 CDDPのみを投与 した場合に比べ同等あるい はそれよ り強い腫瘍増殖抑制効果を示 した。

本発明によ り、 白金錯体化合物類を本発明の薬剤と一 緒に投与する と腎毒性および神経毒性のよ う な、 該抗腫 瘍剤を単独投与する ときに観察される副作用の著 しい軽 減ばかり でな く 、 生存日数の延長など該抗腫瘍剤の抗腫 瘍効果の著 しい増強が見られた。

Claims

請 求 の 範 囲

1. 生体内に投与された薬剤による腎毒性を軽減するた めの腎毒性軽減剤と して使用する医薬用組成物であ つ て、 S —アデノ シル一 L —メ チォニン、 も し く は、 そ の塩類を有効成分と して含有 し、 薬学的に許容される 賦形剤および Z又は佐薬を含有する医薬用組成物。

2. 前記の生体内に投与された薬剤がシ スブラチ ンであ る請求の範囲 1 記載の医薬用組成物。

3. 白金錯体化合物による抗腫瘍活性を増強する薬剤と して使用する医薬用組成物であって、 S —アデノ シル

— L —メ チォニンを有効成分と して含有 し、 薬学的に 許容される賦形剤および 又は佐薬を含有する医薬用 組成物。

4. 前記の白金錯体化合物がシ スブラチ ンである請求の 範囲 3記載の医薬用組成物。