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WO1994004175A1 - Promoteur de la production du facteur de croissance des hepatocytes - Google Patents

Promoteur de la production du facteur de croissance des hepatocytes Download PDF

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WO1994004175A1
WO1994004175A1 PCT/JP1993/001177 JP9301177W WO9404175A1 WO 1994004175 A1 WO1994004175 A1 WO 1994004175A1 JP 9301177 W JP9301177 W JP 9301177W WO 9404175 A1 WO9404175 A1 WO 9404175A1
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WO
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disease
hgf
prostaglandin
heparin
interleukin
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PCT/JP1993/001177
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French (fr)
Inventor
Toshikazu Nakamura
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    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
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    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
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    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/20—Interleukins [IL]
    • A61K38/2006—IL-1

Definitions

  • the present invention relates to an agent for promoting HGF (Hepatoc to Growth Factor, hepatocyte growth factor) production, and more particularly to a substance that promotes HGF production of HGF-producing cells.
  • HGF Hepatoc to Growth Factor, hepatocyte growth factor
  • HGF is a protein that the present inventors have found in regenerated liver rat serum as a factor for growing mature hepatocytes in vitro (Biochem Biophys Res Commun, 122, 1450, 1984). The present inventors have further succeeded in isolating HGF from rat platelets (Proc. Natl. Acad. Sci, 83, 6489, 1986, FFBS Letter, 22, 311, 1987), and identified the amino acid sequence of the same. Department decided. Furthermore, the present inventors performed human and rat-derived HGF cDNA cloning based on the elucidated HGF amino acid sequence, and recombined the cDNA into animal tissues to proliferate hepatocyte cells. The factor was successfully obtained as a protein (human HGF: Nature, 342, 440, 1989; rat HGF: Proc. Natl. Acad. Sci, 87, 3200, 1990).
  • HGF The molecular weight of HGF is 82-85 kD by SDS-polyacrylamide gel electrophoresis.
  • Rat HGF molecules have a heterodimer structure in which an ⁇ chain consisting of 463 amino acid residues and a 9 chain consisting of 233 amino acid residues are bridged by a single disulfide bond. Each chain has two darcosamine-type sugar chain binding sites.
  • Human HGF also has almost the same physiological activity. It consists of an ⁇ -chain consisting of 463 amino acid residues and a / chain consisting of 234 amino acid residues.
  • the ⁇ chain has four kringle structures similar to the fibrinolytic enzyme plasmin, and the amino acid sequence of the ⁇ chain is approximately 37% homologous to the ⁇ chain of plasmin, which has serine mouth opening activity. Having. The homology of the amino acid sequences of rat HGF and human HGF was 91.6%, Has a very high homology of 88.9%, and their activities are completely compatible.
  • HGF which was discovered as a factor that specifically proliferates hepatocytes, has been shown to show various activities in vivo based on recent research results by the present inventors and other researchers. Expectations are growing for its application not only as a drug but also as a therapeutic agent for humans and animals.
  • HGF acts not only on hepatocytes but also on epithelial cells as a growth factor, and have achieved several inventions.
  • HGF promotes the proliferation of renal proximal tubule cells, and thus aims to develop its application as a therapeutic agent for renal diseases.
  • HGF promotes the growth of normal epithelial cells such as melanocytes and keratinocytes, and is being developed as an epithelial cell promoting agent for the treatment of wounds, skin ulcers, and hair root cell proliferating agents. Fulfilled and disclosed the details.
  • HGF is more suitable for practical use because it does not have the canceration effect and cancer cell proliferation activity found in many other growth factors such as EGF.
  • EGF epidermal growth factor
  • the present inventors have disclosed in Japanese Patent Application No. 3-140812, cancer cells such as Hep G2 cell line derived from human liver cancer of HGF and IM9 cell line derived from lymphoblastoid cancer. Utilizing its growth inhibitory activity, it disclosed that it can be used as an anticancer agent.
  • HGF is useful as a side effect inhibitor for cancer therapy, which can reduce the damage to normal cells and tissues in cancer treatment and reduce or prevent side effects. It is disclosed that there is.
  • HGF is useful for the prevention and treatment of chronic and acute lung diseases such as pneumonia, emphysema, chronic obstructive pulmonary disease, pneumoconiosis, and swallowing pneumonia in Japanese Patent Application No. 4-298053. Is disclosed.
  • HGF may be an entity of a neural inducing factor that contributes to the developmental stage of the central nervous system, and that it is useful for central diseases and useful for eye diseases, that is, Its usefulness in tongue has been clarified.
  • HGF is involved in the formation of osteoclasts, it inhibits osteoclast resorption, promotes osteoblast formation, and is useful for bone diseases, and it promotes osteoarthritis through the promotion of proteogliin synthesis.
  • the usefulness of HGF as a drug has been clarified, and the potential of HGF as a drug is not only liver disease, but also kidney disease, skin disease, blood disease, eye disease, lung disease, stomach, duodenal disease, It is becoming clear that the disease is diverse, such as cancer and related diseases and bone diseases.
  • HGF histoneum growth factor
  • HGF-producing cells are not epithelial cells themselves, but mainly mesenchymal cells such as K upffer cells and sinusoidal vascular endothelial cells in the liver, capillary endothelial cells in the kidney, and alveolar macrophage vascular endothelial cells in the lung. It has been elucidated that it is produced by cells, and it has been clarified that the so-called paracrine mechanism, in which HGF is supplied from neighboring cells as needed, has been established.
  • HGF is supplied by the so-called endocrine mechanism: That is, substances that promote HGF production are secreted from the injured tissue. It is thought to reach the HGF-producing cells via blood and release HGF stored in the cells, or to initiate new production.
  • HGF is administered for the purpose of wound healing and renal regeneration, but if a substance that promotes HGF production is administered, the same effect is expected to be obtained with a smaller dose and the number of administrations.
  • administration of the HGF production promoting substance can maintain the blood concentration of HGF for a longer period of time. It is expected that the dose and frequency of administration can be reduced.
  • the substance that promotes HGF production has transdermal absorbability, it becomes possible to obtain a preparation that promotes HGF production by transdermal absorption. As formulation and use become easier, application can be expected to expand.
  • the HGF production promoting factor is useful not only for studying the function of compensating for organ damage such as liver and kidney and for studying the mechanism of HGF expression, but also for healing tissue and organ damage of living organisms having HGF receptor. However, it is clear that it is very useful as a therapeutic drug.
  • HGF production promoting factors that control the entire repair function of organ injury, not only parenchymal cells but also non-parenchymal cells, such as supporting tissues such as peri-sinusoidal connective tissue, can be regenerated throughout Will be accelerated and true restoration will be promoted.
  • the HGF production promoting factor can be used as a therapeutic agent, the injury will be treated much more mildly and promptly than the conventional use of various cell growth factors alone. And its usefulness is immense.
  • an object of the present invention is to provide a therapeutic agent for various diseases as described above by having an HGF production promoting action. Disclosure of the invention
  • the present invention relates to interleukin-1 ⁇ , interleukin-1 / 9, heparin or a derivative thereof, heparan sulfate, prostaglandin II , prostaglandin II 2 , prostaglandin I2, and these prostaglandins. And a prostaglandin or an inclusion compound of these derivatives as an active ingredient. Two or more of these active ingredients may be used in combination.
  • Another invention is a method for treating liver disease or the like, which comprises administering an effective amount of the above compound to a human.
  • FIG. 1 is a diagram showing the relationship between the concentration of interleukin-1 ⁇ and interleukin-11 ⁇ and the amount of HGF production in Example 1.
  • Hata indicates interleukin-1 ⁇ and ⁇ indicates Interleukin-1 1 S is shown.
  • FIG. 2 is a graph showing the relationship between heparin concentration and HGF production in Example 2.
  • FIG. 3 is a graph showing the relationship between prostaglandin (hereinafter referred to as PG) concentration and HGF production amount in Example 3.
  • PG prostaglandin
  • FIG. 4 is a diagram showing the relationship between the culture time and the amount of HGF production in Example 5.
  • Qin the presence of P GE 2, ⁇ indicates a control.
  • FIG. 5 is a graph showing a time-dependent change in LI (labeling index) when lmgZkg of heparin was administered to a rat in Example 6.
  • ⁇ indicates a system to which heparin was administered
  • ⁇ indicates a control.
  • FIG. 6 is a graph showing the change over time in blood HGF concentration when 1 mg / kg of heparin was administered to a rat in Example 6.
  • ⁇ indicates the system to which heparin was administered, and ⁇ indicates the control.
  • Interleukin-1a and interleukin-11 are known substances, which are the active ingredients of the HGF production promoter of the present invention, are isolated from mammalian tissues and the like according to a conventional method. Any of the above-mentioned substances may be used, such as those prepared by genetic engineering means, etc. Further, the above-mentioned substances may be substances in which a part of the amino acid sequence has been deleted or substituted with other amino acids, or other amino acid sequences. , A substance in which one or more amino acids are bound to the N-terminus and Z- or C-terminus, a substance in which a sugar chain is added, substituted or deleted, etc.
  • Heparin and heparan sulfate are also known substances, and those isolated from mammalian tissues or the like according to a conventional method can be used.
  • Heparin derivatives include low-molecular-weight heparin (average molecular weight of about 440,600) obtained by chemical treatment of heparin, and functional groups of heparin (for example, hydroxyl group). , Carboxyl group, etc.) and a chemical treatment (eg, acylation, alkylation, esterification, amidation, etc.) into which a substituent is introduced.
  • a salt thereof (e.g., alkali metal salts) may be in the form of £
  • the active ingredient of the present invention, PGE,? ⁇ 5 2 and ⁇ 1 2 is the substance of the publicly known, for example, can be used commercially.
  • the derivatives of these PGs include compounds that have been subjected to various chemical modifications in order to improve stability, enhance action, etc., and are PGs and derivatives thereof having a carboxyl group. In the case of a compound, it may be in the form of a pharmaceutically acceptable salt.
  • inclusion compounds of the above PGs and derivatives thereof include inclusion compounds of these compounds with ⁇ -cyclodextrin, ⁇ -cyclodextrin and the like.
  • Examples of the above PG derivatives and clathrate compounds include, for example,
  • the accelerator of the present invention can take various formulation forms (for example, liquids, solids, capsules, etc.), and generally, the active ingredients interleukin-1 ⁇ , interleukin-1 ⁇ , heparin or heparin Only one or two or more components selected from the group consisting of derivatives thereof, heparan sulfate, PGE PGE 2 PGI 2 , derivatives of these PGs, and clathrates of these PGs or derivatives thereof, or They are used as injections with conventional carriers, or as external drugs with conventional carriers.
  • the injection can be prepared by a conventional method.
  • the above active ingredient is dissolved in an appropriate solvent (eg, sterile water, buffer solution, physiological saline, etc.), and then filtered through a filter or the like. And then filled in a sterile container.
  • an appropriate solvent eg, sterile water, buffer solution, physiological saline, etc.
  • the content of the active ingredient in the injection is appropriately adjusted.
  • external preparations for example, they are formulated into ointments, gels, liquids, etc., and the active ingredient content in the preparations should be adjusted as appropriate according to the disease, site of application, etc. But it can.
  • a stabilizer is preferably added, and examples of the stabilizer include albumin, globulin, gelatin, mannitol, glucose, dextran, ethylene glycol and the like. Further, it may contain additives necessary for preparation, for example, excipients, solubilizers, antioxidants, soothing agents, tonicity agents and the like.
  • a liquid preparation it is desirable to store it after freezing or freezing it by lyophilization. The freeze-dried preparation is used after reconstitution by adding distilled water for injection at the time of use.
  • the accelerator of the present invention can be administered by an appropriate administration route depending on the form of the preparation.
  • it can be administered in the form of injection, intravenously, arterial, subcutaneously, intramuscularly and the like.
  • the dose is appropriately adjusted according to the patient's condition, age, weight, and the like.
  • the HGF production promoter of the present invention is, for example, a therapeutic agent for liver disease, a therapeutic agent for renal disease, or a therapeutic agent for wound as described above.
  • liver disease eg, hepatitis, cirrhosis, liver failure
  • renal disease eg, glomerulonephritis, renal failure, renal anemia, diabetic nephropathy, renal injury after drug administration, etc.
  • skin disease eg, vitiligo disease, burn
  • Floor rub skin ulcer, baldness, etc.
  • blood disease eg, thrombocytopenia, bone marrow transplant, etc.
  • eye disease eg, corneal ulcer, etc.
  • lung disease eg, corneal ulcer, etc.
  • pulmonary tuberculosis chronic obstructive pulmonary disease, pneumoconiosis, pulmonary fibrosis, etc.
  • gastroduodenal diseases e.g., gastritis, gastric ulcer, duodenal ulcer, etc.
  • cancer diseases and related diseases e.g., various cancers, Side effects from cancer therapy, such as prevention of hepatotoxicity, nephrotoxicity, nausea, vomiting, thrombocytopenia, hair loss, etc., bone diseases (eg, osteoporosis, osteodysplasia, osteoarthritis, etc.), central diseases (eg, It is useful for prevention and treatment of diseases such as neuropathy.
  • Industrial applicability e.g., pneumonia, emphysema, pulmonary tuberculosis, chronic obstructive pulmonary disease, pneumoconiosis, pulmonary fibrosis, etc.
  • gastroduodenal diseases e.g., gastritis, gastric ulcer,
  • HGF production can be promoted, Can promote the healing of injuries of tissues and organs, such as liver disease, kidney disease, skin disease, blood disease, eye disease, lung disease, gastroduodenal disease, cancer And its related diseases, bone diseases, central diseases and the like.
  • tissues and organs such as liver disease, kidney disease, skin disease, blood disease, eye disease, lung disease, gastroduodenal disease, cancer And its related diseases, bone diseases, central diseases and the like.
  • Human skin fibroblasts were seeded on a 24-well plate at a density of 5 ⁇ 10 4 cells / cm 2 and cultured for 24 hours. The medium was replaced with fresh DMEM (Dulbecco, modified Eagle's medium) supplemented with 1% fetal calf serum (FCS), and then interleukin-1 ⁇ or interleukin-1 ⁇ was added. Cultured for hours. The HGF produced by the culture was measured by an enzyme immunoassay using a perforated anti-human HGF polyclonal antibody according to a conventional method.
  • Figure 1 shows the results.
  • ⁇ indicates interleukin-1 1
  • ⁇ indicates interleukin-1 1 ⁇ .
  • FIG. 1 it was found that both interleukin-11 ⁇ and interleukin-11 ⁇ significantly promote HGF production even at low concentrations.
  • MRC-5 human embryonic lung fibroblasts were seeded on a 24-well plate at a density of 5 ⁇ 10 4 cells / cm 2 and cultured for 24 hours. After the medium was replaced with fresh DMEM supplemented with 1% FCS, heparin dissolved in phosphate buffer was added, and the cells were cultured for 24 hours. HGF produced by the culture was measured by an enzyme immunoassay using a rabbit heron anti-human HGF polyclonal antibody according to a standard method. Figure 2 shows the results. As shown in FIG. 2, heparin was found to significantly promote HGF production even at low concentrations.
  • Human skin fibroblasts were seeded on a 24-well plate at 5 ⁇ 10 4 cells / cm 2 and cultured for 24 hours.
  • the medium was replaced with 1% FCS new Korea was added DMEM, 1 0- 12 1 0- 6 M PG such (i.e., is a P GE, derivatives or inclusion compound of P GE 2 and PEI 2 0P2507 and ONO41483) were added and cultured for 24 hours.
  • the HGF produced by the culture was measured by an enzyme immunoassay using an anti-human rabbit HGF polyclonal antibody according to a conventional method.
  • FIG. 3 shows the results.
  • PGE P indicates PGE 2 port ⁇ ⁇ 2507 ⁇ indicates ON041483 respectively.
  • P GE, P GE 2 OP 2 5 07 and ⁇ _NO 4 1 4 8 3 are all 1 0- S HGF production promoting action from M was observed, with 1 0- 6 M Showed maximum promotion. Promoting production at this time, 3 0.6 times P GE 1 as compared to the control, 6.7-fold with PGE 2, 0 2 5 07 7 5.4 times, 0 N 04 1 4 8 3 2 It was 0.7 times.
  • Human skin fibroblasts and MRC-5 cells were seeded at 5 ⁇ 10 4 cells Z cm 2 on 24-well plates and cultured for 24 hours.
  • the medium was replaced with 1% FC S Fresh was added pressure of DMEM, PG such 1 0- 6 M a (PGE, PGE 2 0 2 5 07 and Rei_1 ⁇ 7 04 1 4 8 3) was added
  • the cells were cultured for 24 hours.
  • the HGF produced by the culture was measured by an enzyme immunoassay using a perforated anti-human HGF polyclonal antibody according to a conventional method. The results are shown in Table 1.
  • Human skin fibroblasts were seeded on a 24-well plate at 5 ⁇ 10 4 cells / cm 2 and cultured for 24 hours.
  • the medium after replaced with fresh DME M supplemented with 1% FCS, the presence or absence of PGE 2 in 1 0- 6 M (Control port Lumpur), 3, 6, 9, 1 2 and Cultured for 24 hours.
  • HGF produced in the culture system was measured by an enzyme immunoassay using a rabbit heron anti-human HGF polyclonal antibody according to a conventional method.
  • Figure 4 shows the results. In the figure, - is the presence of PGE 2, ⁇ is shows the control.
  • a part of the liver fixed with 70% ethanol was embedded in paraffin, and immunohistochemically stained with an anti-BrdU monoclonal antibody according to a conventional method. After staining, a photograph was taken in a 100-fold visual field, the ratio (%) of the number of stained cells in four randomly selected visual fields was determined, and the average was defined as a labeling index (hereinafter referred to as LI).
  • LI labeling index
  • Plasma was prepared from whole blood collected at the time of sacrifice and stored at 4 ° C.
  • the plasma was partially purified on a heparin-Sepharose column according to the procedure described below, and the HGF concentration was measured by an enzyme immunoassay using a polyclonal alfa ⁇ -rat HGF antibody.
  • Table 2 shows the relationship between the heparin dose and LI 24 hours later.
  • Figure 6 shows the time course of blood HGF concentration when heparin was administered at 1 mg / kg. As shown in FIG. 6, the control showed a peak after 12 hours, and then gradually decreased. In contrast, when heparin was administered, a significant increase in blood HGF concentration was similarly observed after 12 hours, and an increase in blood HGF concentration was also observed after 48 hours. The increase in blood HGF concentration is observed after administration of c . The two peaks are presumed to be due to the increase in blood HGF concentration due to different mechanisms of action (t) Example 7
  • Example 6 A test similar to that of Example 6 was performed using low-molecular-weight heparin [Fragmin IV (trade name), average relative molecular weight of about 5,000] instead of heparin.
  • Table 3 shows the LI values 24 hours and 36 hours after administration of lmgZkg of palin to the low molecule.
  • Example 6 A test similar to that of Example 6 was performed using PGs ( ⁇ P—2507, PGE,) instead of heparin.
  • the dosing method was subcutaneous administration to the back, PGs were administered immediately after hepatectomy and 12 hours later, and sacrificed 24 hours later.
  • Table 4 shows the LI value and the blood HGF concentration after 24 hours when PGs were administered at 100 g / kg or SOgZkg.

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Description

明 細 書 H G F産生促進剤 技術分野
本発明は H G F (Hepatoc to Growth Factor, 肝細胞増殖因子） 産生 促進剤に関し、 より詳細には H G F産生細胞の H G F産生を促進する物 質に関する。 従来技術
H G Fは本発明者らが再生肝ラッ 卜血清中から成熟肝実質細胞を in vitro で増殖させる因子として見いだしたタンパク質である （Biochem Biophys Res Commun, 122, 1450， 1984) 。 本発明者らはさらに、 H G Fをラッ ト血小板より単離することに成功し （Proc. Natl. Acad. Sci, 83, 6489, 1986， FFBS Letter, 22， 311, 1987) 、 そのアミノ酸配列を 一部決定した。 さらに、 本発明者らは解明された H G Fアミノ酸配列を もとにヒ トおよびラッ ト由来の H G F c DN Aクロ一ニングを行い、 こ の c DN Aを動物組織に組換えて肝実質細胞増殖因子をタンパク質とし て得ることに成功した （ヒ 卜 H G F ： Nature, 342， 440, 1989 ; ラッ 卜 H G F ： Proc. Natl. Acad. Sci, 87, 3200, 1990) 。
H G Fの分子量は S D S—ポリアクリルアミ ドゲル電気泳動で 8 2〜 8 5 k Dである。 ラッ 卜 H G F分子は 4 6 3アミノ酸残基からなる α鎖 と 2 3 3ァミノ酸残基からなる / 9鎖が 1個のジスルフィ ド結合により架 橋したヘテロダイマー構造を持ち、 ひ.、 ^両鎖とも 2個のダルコサミン 型糖鎖結合部位が存在する。 ヒ 卜 H G Fもまたほぼ同じ生理活性を有し. 4 6 3アミノ酸残基からなる α鎖と 2 3 4 アミノ酸残基からなる / 鎖と からなる。 α鎖中には線溶酵素プラスミンと同様のク リングル構造が 4 個存在し、 ^鎖のァミノ酸配列においてもセリンブ口テア一ゼ活性を冇 するプラスミンの Β鎖と約 3 7 %のホモロジ一を有する。 ラッ 卜 H G F とヒ 卜 H G Fのアミノ酸配列のホモロジ一はび鎖において 91.6%、 鎖 において 88.9%と非常に高い相同性を持ち、 その活性は全く互換性があ る。
肝実質細胞を特異的に増殖させる因子として発見された H G Fは、 本 発明者をはじめとする研究者による最近の研究成果によって、 生体内で 種々の活性を示している事が明らかとなり、 研究対象としてのみならず ヒ 卜や動物の治療薬などへの応用に期待が集まっている。
本発明者らは、 H G Fが増殖因子として肝細胞のみならず広く上皮系 細胞に働く事を明らかにし、 いくつかの発明を成就した。 日本特開平 4 - 4 9 24 6号においては、 H G Fが腎の近位尿細管細胞の増殖を促進 することより、 腎疾患治療剤としての応用開発を、 また日本特願平 2— 4 1 9 1 5 8号においては、 H G Fがメラノサイ 卜、 ケラチノサイ トな ど正常上皮細胞の増殖を促進することより、 上皮細胞促進剤として創傷 治療や皮膚潰瘍治療、 毛根細胞の増殖剤などへの応用開発を成就し、 そ の詳細を開示した。 特に、 H GFは EG F等他の多くの増殖因子に見ら れるガン化作用やガン細胞増殖活性を有さないことから、 より実用に適 している。 さらに本発明者らは、 日本特願平 3— 1 4 0 8 1 2号におい て HG Fのヒ 卜肝ガン由来 H e p G 2細胞株、 リンパ芽球ガン由来 I M 9細胞株などのガン細胞増殖抑制活性を利用し、 制ガン剤としても利用 可能であることを開示した。
また、 日本特願平 3— 3 2 1 4 1 2号において H G Fが癌治療におけ る正常細胞、 組織の受ける傷害を緩和し、 副作用を軽減ないし防止でき る癌療法用副作用防止剤として有用であることを開示している。
さらに、 日本特願平 4 - 2 9 8 0 5 3号において H G Fが慢性及び急 性の肺疾患、 例えば肺炎、 肺気腫、 慢性閉塞性肺疾患、 塵肺、 燕下性肺 炎の予防及び治療に有用であることを開示している。
そのほか、 本発明者等は H G Fが中枢神経系の発生段階に寄与する神 経誘導因子の実体である可能性を指摘しており、 中枢疾患への有用性や 眼疾患における有用性、 即ち、 角膜潸癡における有用性を明らかにして きている。 これらは、 本発明者等の種々の文献の中でも言及されており その有用性は明白である (Medical immunology, 26, No 1， 1993等) ;, 本発明者等の最近の報告の一部のなかでは、 Biochemical and Resear ch Co匪 uin. 191， No 2, 1993において H G Fの有用性が消化器にも及 ぶことを明らかにしている。
そのほか、 H G Fが破骨細胞の形成に関与することから破骨細胞吸収 阻害もしくは、 骨芽細胞形成促進を介して骨疾患への有用性やプロテオ グリ力ン合成促進作用を介する変形性関節炎への有用性も明白になつて きており、 H G Fの医薬品としての可能性は、 肝疾患はもとより、 当初 予期できなかった腎疾患、 皮膚疾患、 血液疾患、 眼疾患、 肺疾患、 胃、 十二指腸疾患、 癌及び関連疾患、 骨疾患等多岐にわたることが明らかに なってきている。
H G Fの医薬品としての実用性を考える上でさらに重要な点は、 H G Fが G 1期、 すなわち増殖期に入った細胞のみを増殖促進し、 G O期、 すなわち静止期にある細胞には作用しないことである。 このことは、 傷 害のある組織の増殖再生は促進するが、 傷害を受けていない組織に対し ては全く作用を及ぼさないことを意味する。 従って、 過剰に H G Fを投 与しても、 あるいは血液などを介して非患部に H G Fが到達しても、 正 常組織にガン化を誘導したり過剰な増殖を起こすことがないと考えられ る。
前記のように H G Fが肝細胞だけでなく広く上皮細胞の増殖を促進し、 またガン細胞の増殖抑制活性を有することから、 生体内では H G Fが組 織傷害治癒に働いていることが予想される。 H G F産生細胞は上皮細胞 自身ではなく、 肝臓では K u p f f e r細胞や類洞壁血管内皮細胞、 腎 臓では毛細血管内皮細胞、 肺では肺胞マクロファ一ジゃ血管内皮細胞な ど主に間葉系の細胞によリ産生されていることが解明されておリ、 近隣 細胞から必要に応じて H G Fが供給される、 いわゆるパラクリン機構が 成立していることが明らかにされている。
しかしながら、 肝臓や腎臓に傷害を受けたとき、 傷害を受けていない 臓器、 例えば肺などにおいても H G Fの産生が高まることから、 いわゆ るエン ドクリン機構によっても H G Fが供給されていると考えられる： すなわち、 H G Fの産生を促進する物質は傷害を受けた組織から分秘 され、 血液などを介して HGF産生細胞に到達し、 細胞内に蓄えられた HGFを放出させたり、 新たに産生を開始させる働きを持つと考えられ る。
創傷治癒ゃ腎再生促進を目的として HG Fを投与することは勿論であ るが、 HGF産生を促進する物質を投与すれば、 より少ない投与量、 投 与回数で同じ効果が得られると予想される。 より詳細には、 組織傷害治 療法として HGFを直接投与する場合と比較すると、 HG F産生促進物 質を投与するほうが、 H G Fの血中濃度を長時間維持することが可能で あり、 一回の投与量や投与回数を減らすことができると予想される。 ま た、 HG Fを経皮吸収させることは困難であるが、 HGFの産生を促進 する物質が経皮吸収性を有するなら、 経皮吸収により H G F産生を促進 する製剤を得ることが可能となり、 製剤化及び使用法が容易になると共 に適用の拡大も期待できる。
一方、 生体は呼吸器、 皮膚、 消化器を始めとするあらゆる組織、 器官 において外的、 内的を問わず常に物理的、 化学的、 あるい.は微生物によ る傷害を受けている。 これに対して HGF、 F GF、 EGF、 PDGF など細胞増殖因子を始め、 あらゆる機能を動員して、 器官の機能組織細 胞、 マトリクス細胞などの修復作業を行うことが、 ホメォスタシスの一 つの重要な要因であるが、 その補償機能ネッ トワークを作動させ、 調節 する中心的な因子が組織内に存在すると考えられてきた。
HGF産生促進因子は、 肝臓、 腎臓等の臓器傷害の補償機能や HGF の発現機構を研究するのに有用であるだけでなく、 生体の H G F受容体 を有する組織、 器官傷害を治癒する因子であり、 治療薬として非常に有 用であることは明らかである。 その有用性は前述の H G Fの有用性を考 慮すれば明白であるが、 例えば、 肝臓について考えれば、 肝切除や肝炎 による器官傷害の際、 H G F投与によって肝実質細胞のみを再生させる ことができるのに対し、 器官傷害の修復機能全体をコン トロールする H G F産生促進因子を投与することにより、 実質細胞のみならず、 非実質 細胞である類洞周囲結合組織など支持組織を始め傷害部位全体の再生が 加速され、 真の修復促進が行われる。 すなわち、 H G F産生促進因子を治療薬として利用することができれ ば、 従来の発見されてきた種々の細胞増殖因子を単独で使用するのに比 ベて、 格段にマイルドかつすみやかに傷害を治療することができ、 その 有用性は計リ知れない。
かかる観点から、 本発明者は、 H G F産生を促進する物質を鋭意研究 した結果、 インターロイキン一 1 α、 インターロイキン一 1 ^9、 へパリ ン及びその誘導体、 へパラン硫酸、 プロスタグランジン Ε,及びその誘 導体、 プロスタグランジン Ε2及びその誘導体、 プロスタグランジン 1 2 及びその誘導体、 並びにこれらプロスタグランジン類又はその誘導体の 包接化合物に顕著な H G F産生促進作用があることを見出して本発明を 完成した。 即ち、 本発明は、 H G F産生促進作用を有することによリ前 述のごとく多岐にわたる疾患に関する治療剤を提供することを目的とす る。 発明の開示
本発明は、 インタ一ロイキン一 1 α、 インターロイキン一 1 /9、 へパ リン又はその誘導体、 へパラン硫酸、 プロスタグランジン Ε,、 プロス タグランジン Ε 2、 プロスタグランジン I 2、 これらプロスタグランジン 類の誘導体、 及びこれらプロスタグランジン類又はその誘導体の包接化 合物からなる群より選ばれた少なくとも一種を有効成分として含有する H G F産生促進剤である。 なお、 これらの有効成分は、 二種以上を併用 してもよい また、 他の発明は、 上記の化合物の有効量をヒ 卜に投与す ることからなる肝疾患等の処置方法である。 図面の簡単な説明
図 1 は、 実施例 1 におけるインターロイキン一 1 α及びインタ一ロイ キン一 1 ^濃度と H G F産生量の関係を示す図である： 図中、 秦はイン タ一ロイキン一 1 αを、 〇はインタ一ロイキン一 1 S を示す。
図 2は、 実施例 2におけるへパリン濃度と H G F産生量の関係を示す 図である。 図 3は、 実施例 3におけるプロスタグランジン（以下、 P Gという）類 濃度と HG F産生量の関係を示す図である。 図中、 拿は P GE 〇は P GE2、 口は〇 P 2 5 07、 △は ON04 1 4 8 3をそれぞれ示す。 図 4は、 実施例 5における培養時間と HGF産生量の関係を示す図で ある。 図中、 秦は P GE2の存在下を、 〇はコントロールを示す。
図 5は、 実施例 6におけるへパリン l mgZk gをラッ 卜に投与した ときの L I (ラベリングインデックス） の経時変化を示す図である。 図 中、 ·はへパリンを投与した系を、 〇はコントロールを示す。
図 6は、 実施例 6におけるへパリン 1 m gZk gをラッ 卜に投与した ときの血中 HGF濃度の経時変化を示す図である。 図中、 拿はへパリン を投与した系を、 〇はコントロールを示す。 発明を実施するための最良の形態
本発明の H G F産生促進剤の有効成分であるィンターロイキン— 1 a 及びィンタ一ロイキン一 1 (9は公知の物質であリ、 これらは常法に準じ て哺乳動物組織等から単離されたもの、 遺伝子工学的手段で調製された ものなど何れも用いることができる。 更に、 上記の物質は、 そのアミノ 酸配列の一部が欠失又は他のアミノ酸に置換された物質、 他のアミノ酸 配列が挿入された物質、 N末端及び Z又は C末端に 1又は 2以上のアミ ノ酸が結合した物質、 糖鎖が付加、 置換又は欠失した物質等であっても よ
また、 へパリン及びへパラン硫酸も公知の物質であり、 これらは常法 に準じて哺乳動物組織等から単離されたものを用いることができる。 へ パリンの誘導体としては、 へパリンを化学処理することによリ低分子化 した低分子へパリン （平均分子量 4 4 0 0 5 , 6 0 0程度） 、 へパ リンの官能基 （例えば、 水酸基、 カルボキシル基等） に化学処理 （例え ば、 ァシル化、 アルキル化、 エステル化、 アミ ド化等） をすることによ り置換基を導入した化合物などが例示される。 上記のへパリン及びへパ リン誘導体は、 その塩 （例えば、 アルカリ金属塩等） の形態であっても よい £ さらに、 本発明の有効成分である P G E, ？〇 52及び 〇 12は公 知の物質であり、 例えば、 市販のものを用いることができる。 これら P G類の誘導体としては、 安定性の向上、 作用の増強などを図るために種 々の化学的な修飾を加えた化合物が包含され、 上記 P G類及びその誘導 体であってカルボキシル基を有する化合物の場合には、 医薬として許容 され得る塩の形態であってもよい。 また、 上記の P G類及びその誘導体 の包接化合物としては、 例えば、 これらの化合物と α—シクロデキス 卜 リン、 ^—シクロデキストリン等との包接化合物が例示される。
上記の P G類誘導体及び包接化合物としては、 例えば、 日本特公昭 5
3— 3 6 4 5 8 5 4— 3 2 7 7 3 5 7— 2 0 3 0 5、 日本特開昭 4 9一 4 7 3 5 2 5 1 — 1 0 1 9 6 1 5 1 — 1 2 2 04 0 5 2 - 2 7 7 5 3 5 2 - 4 2 8 5 6 5 3— 8 4 9 4 2 5 4— 4 4 6 3 9 5 5— 1 0 0 3 6 0 5 8— 4 7 6 2 5 8 - 2 0 3 9 6 4 , 5 8 - 2 0 3 9 1 1 5 9 - 2 0 2 6 7等に記載の化合物又はこれらの公報に記 載の方法又はこれに準じて調製した化合物が挙げられる。 P G類誘導体 及び包接化合物の好適な例としては、 例えば、 0 2 5 0 7及び01^〇
4 1 4 8 3などが挙げられる。
本発明の促進剤は種々の製剤形態 （例えば、 液剤、 固形剤、 カプセル 剤など） をとりうるが、 一般的には有効成分であるインターロイキン一 1 α、 インターロイキン一 1 β、 へパリン又はその誘導体、 へパラン硫 酸、 P GE P G E2 P G I 2、 これら P G類の誘導体、 及びこれら P G類又はその誘導体の包接化合物からなる群より選ばれた一種若しく は二種以上の成分のみ又はそれらと慣用の担体と共に注射剤とされる力、、 又は慣用の担体と共に外用薬とされる。 当該注射剤は常法によリ調製す ることができ、 例えば、 上記の有効成分を適切な溶剤 （例えば、 滅菌水、 緩衝液、 生理食塩水等） に溶解した後、 フィルタ一等で濾過して滅菌し、 次いで無菌的な容器に充填することにより調製することができる： 注射 剤中の有効成分含量は、 適宜調整される。 また、 外用薬としては、 例え ば、 軟膏状、 ゲル状、 液状などの剤形に製剤化され、 製剤中の有効成分 含量は、 外用薬の適用疾患、 適用部位などに応じて適宜調整することが できる。
製剤化に際して、 好ましくは安定化剤が添加され、 安定化剤としては、 例えば、 アルブミン、 グロブリン、 ゼラチン、 マンニトール、 グルコ一 ス、 デキストラン、 エチレングリコールなどが挙げられる。 さらに、 製 剤化に必要な添加物、 例えば、 賦形剤、 溶解補助剤、 酸化防止剤、 無痛 化剤、 等張化剤等を含んでいてもよい。 液状製剤とした場合は凍結保存、 又は凍結乾燥等により水分を除去して保存するのが望ましい。 凍結乾燥 製剤は、 用時に注射用蒸留水などを加え、 再溶解して使用される。
本発明の促進剤は、 該製剤の形態に応じた適当な投与経路により投与 され得る。 例えば、 注射剤の形態にして静脈、 動脈、 皮下、 筋肉内等に 投与することができる。 その投与量は、 患者の症状、 年齢、 体重などに よリ適宜調整される。
H G Fは生体の組織、 器官などの傷害の治癒を促進する作用を有する 従って、 本発明の H G F産生促進剤は、 前述したような、 例えば、 肝疾 患治療剤、 腎疾患治療剤、 創傷治療剤、 皮膚潰瘍治療剤、 毛根細胞増殖 剤、 制ガン剤、 肺傷害治療剤、 ガン療法用副作用防止剤などの用途を有 し、 より具体的には、 例えば、 肝疾患 （例えば、 肝炎、 肝硬変、 肝不全、 外科手術後の肝再生等） 、 腎疾患 （例えば、 糸球体腎炎、 腎不全、 腎性 貧血症、 糖尿病性腎症、 薬剤投与後の腎傷害等） 、 皮膚疾患 （例えば、 白斑病、 熱傷、 床擦れ、 皮膚潰瘍、 禿頭症等） 、 血液疾患 （例えば、 血 小板減少症、 骨髄移植等） 、 眼疾患 （例えば、 角膜潰瘍等） 、 肺疾患
(例えば、 肺炎、 肺気腫、 肺結核、 慢性閉塞性肺疾患、 塵肺、 肺線維症 等） 、 胃十二指腸疾患 （例えば、 胃炎、 胃潰瘍、 十二指腸潰瘍等） 、 癌 疾患及びその関連疾患 （例えば、 各種癌、 癌療法による副作用、 例えば 肝毒性、 腎毒性、 悪心、 嘔吐、 血小板減少、 脱毛などの予防等） 、 骨疾 患 （例えば、 骨粗鬆症、 骨異形成症、 変形性関節炎等） 、 中枢疾患 （例 えば、 神経分化異常症等） などの疾患の予防 · 治療に有用である。 産業上の利用可能性
本発明の促進剤によれば、 H G Fの産生を促進することができ、 生体 の組織、 器官な ifの傷害の治癒を促進することができるなどの効果、 よ り具体的には、 肝疾患、 腎疾患、 皮膚疾患、 血液疾患、 眼疾患、 肺疾患、 胃十二指腸疾患、 癌及びその関連疾患、 骨疾患、 中枢疾患などの治療に 有用である。 実施例
以下、 実施例に基づいて本発明をより詳細に説明するが、 本発明はこ れらの実施例に限定されるものではない。
実施例 1
インターロイキン一 1 及びインターロイキン一 1 βの HG F産生促進 活性
ヒ 卜皮膚線維芽細胞を 24穴プレートに、 5 X 1 04細胞/ c m2とな るように播種し、 24時間培養した。 培地を、 1 %ゥシ胎児血清 （F C S ) を添加した新鮮な DMEM(Dulbecco， s modified Eagle' s medium) に交換した後、 インターロイキン一 1 α又はインタ一ロイキン一 1 βを 添加し、 24時間培養した。 培養により産生された HGFは、 常法に準 じて、 ゥサギ抗ヒ 卜 HGFポリクロナール抗体を用いた酵素免疫測定法 により測定した。
その結果を図 1に示す。 図中、 ·はインタ一ロイキン一 1 を、 〇は インタ一ロイキン一 1 ^を示す。 図 1 に示されるように、 インタ一ロイ キン一 1 α及びインターロイキン一 1 βは共に低濃度においても H G F 産生を著しく促進することが判明した。
実施例 2
へパリンの H G F産生促進活性
MRC— 5ヒ 卜胎芽肺線維芽細胞を 24穴プレー トに、 5 X 1 04細 胞ノ c m2となるように播種し、 24時間培養した。 培地を、 1 % F C Sを添加した新鮮な D M E Mに交換した後、 リン酸緩衝液に溶解したへ パリンを添加し、 24時間培養した。 培養により産生された H G Fは、 常法に準じて、 ゥサギ抗ヒ ト H G Fポリクロナール抗体を用いた酵素免 疫測定法により測定した- その結果を図 2に示す。 図 2に示されるように、 へパリンは低濃度に おいても HGF産生を著しく促進することが判明した。
実施例 3
P G類の HG F産生促進活性
ヒ ト皮膚線維芽細胞を 24穴プレー卜に、 5 X 1 04細胞/ c m2とな るように播種し、 24時間培養した。 培地を、 1 %F C Sを添加した新 鮮な DMEMに交換した後、 1 0— 12 1 0— 6Mの P G類 （すなわち、 P GE, P GE2並びに P E I 2の誘導体又は包接化合物である 0 P 2 5 07及び ONO 4 1 4 8 3 ) を添加し、 24時間培養した。 培養によ リ産生された HGFは、 常法に準じて、 ゥサギ抗ヒ ト HG Fポリクロナ ール抗体を用いた酵素免疫測定法により測定した。
その結果を図 3に示す。 図 3において、 書は P GE 〇は P GE2 口は Ο Ρ 2 5 07 Δは ON04 1 4 8 3をそれぞれ示す。
図 3に示されるように、 P GE, P GE2 O P 2 5 07及び〇NO 4 1 4 8 3は、 いずれも 1 0— SMから H G F産生促進作用が認められ、 1 0— 6Mで最大促進を示した。 この時の産生促進は、 対照と比較して P GE1で3 0. 6倍、 P G E2で 6. 7倍、 0 2 5 07で7 5. 4倍、 0 N 04 1 4 8 3で 2 0. 7倍であった。
実施例 4
ヒ 卜皮膚線維芽細胞及び MR C— 5細胞の HGF産生に及ぼす種々の P G類の効果
ヒ 卜皮膚線維芽細胞及び MR C— 5細胞は、 24穴プレー 卜に 5 X 1 04細胞 Z c m2で播種し、 24時間培養した。 培地を、 1 %FC Sを添 加した新鮮な DMEMに交換した後、 1 0— 6Mの P G類 （ P G E, P G E2 0 2 5 07及び〇1\704 1 4 8 3) を添加し 24時間培養し た。 培養により産生された HG Fは、 常法に準じて、 ゥサギ抗ヒ ト H G Fポリクロナール抗体を用いた酵素免疫測定法により測定した。 その結 果を表 1に示す。
表 1に示されるように、 ヒ ト皮膚線維芽細胞において、 著しい H G F 産生促進作用を示したのは、 P G E,と、 P G I zの誘導体である〇 P 2 5 ◦ 7であった。
一方、 MRC— 5細胞においては、 逆に P G I 2の誘導体よりも P G E,及び P GE2の方が HG F産生促進作用がわずかながら強いことが分 かった。
表 1
P G類 （ 1 0 M) HGF産生量 （n gZmg蛋白）
ヒ卜皮膚線維芽細胞 MRC— 5細胞 コン卜ロール 0. 0 2 5 3. δ
P G E, 3. 4 3 3 7 1. 8
P G E2 0. 7 5 3 8 5. 2
0 P 2 5 0 7 8. 6 3 5 6. 7
0 N 04 1 4 8 3 2. 3 3 1 8 3. 3 実施例 5
ヒ 卜皮膚線維芽細胞における P G Ε こよる H G F産生の経時変化
ヒ卜皮膚線維芽細胞は、 24穴プレートに 5 X 1 04細胞/ c m2で播 種し、 24時間培養した。 培地を、 1 %F C Sを添加した新鮮な DME Mに交換した後、 1 0— 6Mの P G E2の存在下又は非存在下 （コント口 ール） に、 3、 6、 9、 1 2及び 24時間培養した。 各培養時間におい て、 培養系に産生された H G Fを、 常法に準じて、 ゥサギ抗ヒ ト HGF ポリクロナール抗体を用いた酵素免疫測定法により測定した。 その結果 を図 4に示す。 図中、 ·は P G E2の存在下を、 〇はコントロールを示 す。
図 4に示されるように、 コントロールと比較して、 〇 £2の ^〇？ 産生促進作用は添加直後から認められ、 H GFの産生が増加した。 更に. 添加後 6時間から急激に HG F産生が増加しはじめ、 1 2〜 24時間で ブラ トーに達した。
実施例 6
3 0 %部分肝切除ラッ 卜に対するへパリンの投与効果
3 0 %部分肝切除ラッ 卜にへパリンを投与したときの効果 （DXA合 成変化、 血中 H G F濃度変化） を、 以下の方法にて試験した。 ( 1 ) 方法
①動物の処理
雄性ウィスターラッ ト （体重 120-210g ) を用い、 エーテル麻酔下に 開腹し、 左側葉のみを脱転し、 結紮 · 切除した。 ほぼ全体の 3 0 %の肝 を切除できる。 肝切除直後及び切除後 1 2時間おきに所定濃度のへパリ ンを腹腔内に投与し、 1 2、 24、 3 6、 4 8及び 7 2時間後に屠殺し た。 屠殺 1時間前に、 5—プロモー 2' —デォキシゥリジン （B r d U) 5 O mgZk gを腹腔内投与した。 屠殺時に、 下大静脈より全採血した 後、 残余肝を摘出し、 重量を測定すると共に一部は組織染色試験用に 7 0 %エタノール固定し、 他は一 8 0°Cで凍結保存した。 なお、 へパリン に代え、 生理食塩水を投与した系を対照 （コントロール） とした。
② DN A合成
7 0 %エタノ一ル固定した肝の一部をパラフィン包埋後、 常法に準じ、 抗 B r d Uモノクロ一ナル抗体を用いて免疫組織染色した。 染色後、 1 00倍視野でカラ一写真を撮影し、 ランダムに選んだ 4視野中の染色細 胞数の比率 （％) を求め、 その平均をラベリングインデックス （以下、 L I という） とした。
③血中 HG F濃度
屠殺時に採取した全血より血漿を調製し、 4°Cに保存した。 血漿を、 下記に示す手順で、 へパリンーセファロ一スカラムにて部分精製し、 H G F濃度をポリクローナルー α—ラッ ト H G F抗体を用いた酵素免疫測 定法によリ測定した。
(a)血漿 1 m丄 を 4 m 1の低塩濃度 H S (Hartman' s solution)緩衝液 で希釈する。
(b)低塩濃度 H S緩衝液にて平衡化したへパリン—セファロ—スカラ ム C L— 6 B (べッ ド容積 1 m〗 ） に上記のサンプルを通す ί: .
(c)低塩濃度 H S緩衝液 5 m】 にてカラムを洗挣する。
( 高塩濃度 H S緩衝液（ 2 M塩化ナ卜リゥム含有） δ rn ] にて溶出す る。 最初の 2 m 1 を回収する =
(e)回収した溶出液を十分量の W. E. 液に対して一夜透析し、 透析 後、 酵素免疫法で H G F濃度を測定する。
( 2 ) 結果
上記の方法で試験した結果は以下のとおりであった。
① DNA合成
へパリン 1 m g/k gを投与したときの L I の経時変化を図 5に示す, 図 5に示されるように、 2 4時間後に非常に強い DN A合成の促進が認 められた。 また、 3 6〜4 8時間にかけても対照よりやや高い DN A合 成の促進が認められた。
次に、 へパリン投与量と 2 4時間後の L I の関係を表 2に示す。
表 2
Figure imgf000015_0001
表 2に示されるように、 2 4時間後の L I値はへパリン投与量に対し て相関していた。
以上の結果に示されるように、 へパリンの投与により D N A合成が促 進されることが明らかになった。
②血中 H G F濃度
へパリン 1 m g / k gを投与したときの血中 H G F濃度の経時変化を 図 6に示す。 図 6に示されるように、 コン トロールにおいては 1 2時間 後にピークを示し、 その後徐々に減少する傾向を示した。 それに対し、 へパリンを投与すると、 同様に 1 2時間後に血中 H G F濃度の著しい上 昇が見られ、 さらに 4 8時間後にも血中 H G F濃度の上昇が認められた, このように、 へパリンの投与により血中 H G F濃度の上昇が認めれる c なお、 2つのピークは、 異なる作用機構により血中 H G F濃度が上昇し ているものと推察され 't) 実施例 7
3 0 %部分肝切除ラッ トに対する低分子へパリンの投与効果
へパリンに代え、 低分子へパリン [フラグミン静注 （商品名） 、 平均 相対分子量約 5 , 0 0 0] を用いて、 実施例 6 と同様な試験を行った。 低分子へパリン l mgZ k gを投与したときの 2 4時間及び 3 6時間 後の L I値を表 3に示す。
表 3
Figure imgf000016_0001
表 3に示されるように、 低分子へパリンの投与によリ DN A合成が促 進されることが明らかになつた。
実施例 8
3 0 %部分肝切除ラッ トに対する P G類の投与効果
へパリンに代え、 P G類 （〇 P— 2 5 0 7、 P G E, ) を用いて、 実 施例 6と同様な試験を行った。 なお、 投与方法は、 背部皮下投与とし、 肝切除直後及び 1 2時間後に P G類を投与し、 24時間後に屠殺した。
P G類を 1 0 0 g/k g又は S O gZk g投与したときの 24時 間後の L I値及び血中 H GF濃度を表 4に示す。
' 表 4
Figure imgf000016_0002
表 4に示されるように、 P G類の投与により DN A合成が促進され 血中 H G F濃度が上昇することが明らかになつた。

Claims

請 求 の 範 囲
1. インタ一ロイキン一 l a、 インターロイキン一 1 /9、 へパリン又 はその誘導体、 へパラン硫酸、 プロスタグランジン Ε,、 プロスタグラ ンジン Ε2、 プロスタグランジン 12、 これらプロスタグランジン類の誘 導体、 及びこれらプロスタグランジン類又はその誘導体の包接化合物か らなる群より選ばれた少なくとも一種を有効成分として含有する HGF
(Hepatocyto Growth Factor, 肝細胞増殖因子） 産生促進剤。
2. 肝疾患、 腎疾患、 皮膚疾患、 血液疾患、 眼疾患、 肺疾患、 胃十二 指腸疾患、 癌疾患、 癌関連疾患、 骨疾患又は中枢疾患の治療に用いられ る請求の範囲第 1項記載の HGF産生促進剤。
3. 有効成分が、 インタ一ロイキン一 1 又はィンターロイキン一 1 βである請求の範囲第 1項記載の H G F産生促進剤。
4. 有効成分が、 へパリン若しくはその誘導体又はへパラン硫酸であ る請求の範囲第 1項記載の HGF産生促進剤。
5. 有効成分が、 プロスタグランジン Ε,、 プロスタグランジン Ε2、 プロスタグランジン 12、 これらプロスタグランジン類の誘導体、 及び これらプロスタグランジン類又はその誘導体の包接化合物からなる群よ り選ばれた少なく とも一種である請求の範囲第 1項記載の H GF産生促 進剤。
6. 有効成分が、 高分子へパリン又は低分子へパリンである請求の範 囲第 4項記載の H G F産生促進剤。
7. インタ一ロイキン一 1 ひ 、 インタ一ロイキン一 1 /3、 へパリン又 はその誘導体、 へパラン硫酸、 プロスタグランジン Εい プロスタグラ ンジン Ε2、 プロスタグランジン 12、 これらプロスタグランジン類の誘 導体、 及びこれらプロスタグランジン類又はその誘導体の包接化合物か らなる群よリ選ばれた少なくとも一種の化合物の有効量をヒ 卜に投与す ることからなる肝疾患、 腎疾患、 皮膚疾患、 血液疾患、 眼疾患、 肺疾患, 胃十二指腸疾患、 癌疾患、 癌関連疾患、 骨疾患又は中枢疾患の処置方法 :
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5654404A (en) * 1992-09-16 1997-08-05 Genentech, Inc. Protection against liver damage by HGF
US7601365B2 (en) 2000-08-28 2009-10-13 Damavand Wound, AB Synergetic effects of HGF and antibacterial treatment

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH03285693A (ja) * 1990-04-03 1991-12-16 Mitsubishi Kasei Corp ヒト肝実質細胞増殖因子の生産方法および該因子を産生する形質転換体
JPH0436189A (ja) * 1990-05-30 1992-02-06 Otsuka Pharmaceut Co Ltd 肝細胞増殖因子の製造方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH03285693A (ja) * 1990-04-03 1991-12-16 Mitsubishi Kasei Corp ヒト肝実質細胞増殖因子の生産方法および該因子を産生する形質転換体
JPH0436189A (ja) * 1990-05-30 1992-02-06 Otsuka Pharmaceut Co Ltd 肝細胞増殖因子の製造方法

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5654404A (en) * 1992-09-16 1997-08-05 Genentech, Inc. Protection against liver damage by HGF
US7601365B2 (en) 2000-08-28 2009-10-13 Damavand Wound, AB Synergetic effects of HGF and antibacterial treatment

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