WO1992001704A1 - Oligodeoxyribonucleotides - Google Patents

Description

才 リ ゴデ才キ シ リ ボヌ ク レオチ ド類

技術分野

本発明はォ リ ゴデォキシ リ ボヌ ク レオチ ド類に関する。 さ らに詳しく は、 本発明は天然デォキシ リ ボヌ ク レオチ ドの鏡

5 像異性体を連続して結合したポ リ ヌ ク レオチ ド、 あるいは天然デ ォキ シ リ ボヌ ク レオチ ドと天然デォキ シ リ ボヌ ク レオチ ドの鏡像 異性体とを交互に結合したポ リ ヌク レオチ ドに関する。 これらの 才 リ ゴデォキシ リ ボヌ ク レオチ ド類は、 相補的配列を有する天然 型の核酸に結合するア ンチセ ンス ヌ ク レオチ ドである。

1 0 背景技術

特定のォ リ ゴデ才キシ リ ボヌ ク レオチ ド類及びその類緑体によ り遺伝子発現が制御されることが知られている。 これらは、 デォ キシ リ ボ核酸 （ D N A) や、 リ ボ核酸 （ R N A ) の 1 種であるメ ッセ ンジャ ー R N A ( m N A ) に相補的に結合し、 D N Aの複 , 5 製や転写、 m R N Aのスプラ イ シングゃタ ンパク tへの翻訳等の 過程を阻害し、 遺伝子発現を制御するものである。

こ られのヌ ク レオチ ド類は、 特にアンチセ ンスヌ ク レオチ ド類 とよばれ、 特定のデォキシ リ ボ核酸やリ ボ核酸とハィ ブリ ダィ ズ . させたり、 細胞内に導入する ことにより、 特定の細胞生物学的活

2 0 性を発揮させることができるものである。 従って、 抗ウ ィ ルス剤 や化学療法剤と しての有用性が期待されている。

この様なア ンチセ ンスヌ ク レオチ ドと しては、 天然由来のォ リ ゴデォキ シ リ ボヌ ク レオチ ドのほか、 ヌ ク レオ シ ド結合が 配位 のヌ ク レオチ ドや、 リ ン酸ヱステル結合が修飾されたヌ ク レ オチ

„ ド等の非天然型ォ リ ゴデ才キ シ リ ボヌ ク レオチ ドが知られていろ

(総 ¾と して、 P. . Mi I I er つ： 01 ι g o n u c 1 n o t i d o s inhibitors of gene expr ss ion in ] i v ι n ?, c. l ls： Ne opriunities in dr u g design, Ann. Rep. Med. Chem. , 23, 295-304, 1988 年； 及び E. Uh lmann ら： Ant i sense Oligonucleotides, A new therapeut i c principle: Chem. Rev. 90， 543, 1990 年を参照） 。

また、 ヌク レオチ ド誘導体と して L—エ リス口ペン トースを有 する リボヌ ク レオチ ドの対掌体の 2量体め報告 （タザヮ ら、 Biochemistry, 9 3499, 1970 年） がなされている。 2—デォキ シ一 L一エ リス口一べン トースを 配位の糖部分とするデォキシ リ ボヌク レ才チ ドのォ リゴマーとしては L一 （ d A d T)₃の合成 の報告があるが（CP. I k0czyら、 Chem. Abs. 110 115261t. 1988 年） 、 これらのオ リゴマーと D N A若しく は R N Aとの相互作用 が存在するとの報告はない。 報告されている才 リ ゴマ一は自己相 補的配列を有するので、 自己 2量化を起こ し天然の D N A、 R N Aとの相互作用させる目的には不適当であった。

さらに、 2 —デォキシー Lー ェ リ スロ ーペン トースを J5—配位 の糖部分とする L一才 リ ゴデ才キシリボヌク レオチ ドと D N A、 若しく は R N Aとの相互作用の存在に関する報告はない。 R N A の塩基残基であるゥ リ ジンを含む Lーデォキシゥ リ ジンの 18量体 は、 相補的配列を有する D N Aと相互作用しないことが報告され ている (D, Anderson らヽ Nucleosides and nucleotides, 3, 499, 198 年） 。

従って本発明は、 Lーデ才キシリ ボヌク レオチ ドを構成ヌク レ 才チ ドとして含むオ リ ゴヌク レオチ ドであって、 該才 リゴヌタ レ ォチ ドと相補的配列を有する D N Aまたは R N Aに対して特異的 に結合するォ リ ゴデォキシリ ボヌク レオチ ド類を提供することを 目的とする。

本発明者は上記の課題を解決すベく鋭意検討した結果、 2—デ ォキ シ一 L一エ リ ス ロ ーペン ト ースと核酸塩基とが 一配位した ヌ ク レオ シ ド （天然型ヌ ク レオ シ ドの鏡像体ヌ ク レオ シ ド ： L 一 ヌ ク レオ シ ドという） の 5'— リ ン酸エステル （ L 一ヌ ク レオチ ド という） が 3'— 5' ホスホジエス 亍 ル結合した才 リ ゴヌ ク レ才チ ド (天然型ォ リ ゴデォキシ リ ボヌ ク レオチ ドの鏡像体ォ リ ゴマ一）

5 が、 該オ リ ゴヌク レオチ ドと相補的な塩基配列を有する天然型の 核酸である D N Aや R N Aと特異的に結合することを見出し、 本 発明を完成した。

さ らに本発明者は 2 —デ才キシ一 D — リ ボースと核酸塩基とが 一配位したヌ ク レオ シ ドである天然型ヌク レオ シ ド （ D—ヌ ク

, ο レオチ ドという ） の 5' — リ ン酸エステル （ D — ヌ ク レオチ ドとい う） と、 上記の L ヌ ク レオチ ドとが、 交互に 3'—5'ホスホジェ ステル結合したォ リ ゴヌ ク レオチ ドが、 該オ リ ゴヌ ク レオチ ドと 相補的な塩基配列を有する天然型の D N A及び R N Aと強く結合 する こ とを見出し、 本発明を完成した。

1 5 発明の開示

本発明は、 2 —デォキ シ— L エ リ ス口—ベン ト 一スと核酸塩 基とが 一配位したヌ ク レオ シ ドの 5' ― リ ン酸エステルが 3，→5' ホスホジエステル結合したォ リ ゴヌ ク レオチ ドを含むォ リ ゴデォ キ シヌ ク レオチ ド、 及び該才 リ ゴヌ ク レオチ ドと相補的な塩基配 0 列を含む天然型オ リ ゴヌ ク レオチ ドと特異的に結合する上記オ リ ゴデォキシ リ ボヌク レオチ ドを提供するものである。

さ らに本発明によれば、 2 —デォキシー D — リ ボースと核酸塩 基とが 一配位したヌ ク レオ シ ドの 5' — リ ン酸エステルと、 2— デォキシ— L 一エ リ スロ ーペン ト ースと核酸塩基とが 9—配位し 5 たヌ ク レオ シ ドの 5' — リ ン酸エステルと力 、 交互に 3'→ 5'ホスホ ジエステル結合したォ リ ゴヌ ク レオチ ドを含むォ リ ゴデォキ シヌ ク レオチ ド、 及び該ォ リ ゴヌ ク レオチ ドと相補的な塩基配列を有 する天然型ォ リゴヌク レオチ ドと特異的に結合する上記ォ リゴデ ォキシリボヌクレオチ ドが提供される。

さらに本発明により、 上記オ リ ゴデ才キシリボヌク レオチ ド.を 固相法で製造するために有用なホスホロアミ ダイ ト （phosphorami dite) 誘導体が提供される。

図面の簡単な説明

第 1図は、 本発明の （ L一 d A) ₆と、 ポリ U及びポ リ d Tとの 混合曲線を示す図である。

第 2図は、 対照の天然型 （D— d A)₆と、 ポ リ U及びポリ d T との混合曲線を示す図である。

第 3図は、 本発明の （ L一 d A) ₁₂ と、 ポリ U及びポ リ d Tと の混合曲線を示す図である。

第 4図は、 本発明の （ L D— d A) ₁₂ と、 ポ リ U及びポ リ d T との混合曲線を示す図である。 第 1図ないし第 4図において、 眷 はポ リ Uについて、 □はポ リ d Tについての結果を示す。

第 5図は、 本発明の （ L一 d A ) ₆と、 ポ リ U及びポ リ d Tとの 融解曲線を示す図である。

第 6図は、 対照の天然型 （ D— d A) ₆と、 ポ リ U及びポリ d T との融解曲線を示す図である。

第 7図は、 本発明の （L D— d A) _{l 2}、 (L - d A) , ₂、 及び 対照の天然型 （D— d A) ₁₂についての、 ポ リ Uとの融解曲線を 示す図である。

第 8図は、 本発明の （L D— d A) ₁₂、 (L - d A) ₁₂、 及び 対照の天然型 （D— d A) , ₂についての、 ポ リ d Tとの融解曲線 を示す図である。

第 9図は、 本発明の （ L一 d A ) ₆、 及び対照の天然型 （ D— d Λ) _εについてのホスホジエステラーゼによる加水分解を示す図で

' ある。

第 10図は、 本発明の （ L D - d A ) ₁₂、 及び対照の天然型 （D — d A ) ₁₂についてのホスホジエステラーゼによる加水分解を示 す図である。

発明を実施するための最良の形態

本発明の才 リ ゴデォキシ リ ボヌク レオチ ドは、 2 —デォキシ一 L—エ リ ス 口 一ペン トースと核酸塩基とが /9一配位したヌク レオ シ ド （ L—ヌク レオ シ ド） の 5' — リ ン酸エステル （ Lーヌク レオ チ ド） が 3'—5'ホスホジエステル結合したオ リ ゴヌク レオチ ドを 含む。

L—ヌ ク レオ シ ドの構成要素である 2 -デォキシー L一エ リ ス ロ ーベン ト 一スは、 天然の D N Aに含まれるヌ ク レオ シ ド （ D— ヌク レオ シ ド） の構成要素である 2 —デォキシ— D— リボースの 光学対掌体であり、 以下の式で示される化合物である。

本化合物は公知化合物であり、 R. E. Deriatz ら （J. Chem. So ， 1949年巻， 1879頁） の方法により製造される。

本発明のォ リ ゴデォキシ リ ボヌク レオチ ドを構成する Lーヌク シド類は、 構成糖部分である上記 2 —デォキシ一 L—エ リ スロ ー ベン ト 一ス と核酸塩基とが^一配位したヌ ク レオ シ ドである。 該 核酸塩基と してはアデニ ン、 グァニン、 シ ト シ ン、 チ ミ ン、 ゥラ シル等の核酸塩基、 及びその修飾塩基等を挙げることができる。

Lーヌク レオ シ ドの例と しては、 例えば Lーデォキシアデノ シ ン、 Lーデォキシグアノ シン、 L一デォキシシチジン、 L—デォ キシゥ リ ジン、 L一デォキシチ ミ ジン、 L— 4 —ァセチルデォキ シシチジン、 L 一 5 — （カルボキシヒ ドロキシメ チル） デ才キシ ゥ リ ジン、 L 一 5 —カルボキシメ チルア ミ ノ メ チルー 2 —チォー デォキシゥ リ ジン、 L一 5 —カルボキシメ チル了 ミ ノ メ チルデ才 キシゥ リ ジン、 L 一 N 6 —イ ソペンテニルデォキシアデノ シン、 L - 1 —メ チルデォキシアデノ シン、 L 一 1 ーメ チルデォキシプ ソィ ドウ リ ジン、 L 一 1 メ チルデォキシグアノ シン、 L一 2 · 2 ージメ チルデォキシグアノ シン、 L— 2 —メ チルデォキシァデノ シン、 L 一 2 —メ チルデォキシグアノ シン、 L— 3 —メ チルデォ キシシチジン、 L 一 5 —メ チルデォキシシチジン、 L一： N 6 —メ チルデォキシアデノ シン、 L— 7 —メ チルデォキシグアノ シ ン等 を例示することができる。 .

これらの Lーヌク レオシ ドのうち、

L—デォキシアデノ シ ン （し - ciA ： 9 — （ 2 —デ才キシー ^— L一 エ リ ス ベン ト フ ラ ノ シル） 一 9 H —プリ ン一 6 —了 ミ ン ； L—デォキ シグアノ シン （L - dG ： 2 —ア ミ ノ ー 9 一 （ 2 —デ才キ シー） 3— L一エ リ ス ベン ト ラ ノ シル） 一 9 Ή一プリ ンー 6 ( 1 H ) -オ ン） ；

L —デォキシシチジン （し- d C ： 4 —了 ミ ノ 一 1 一 （ 2 —デ才キシ 一； 9一 L 一エ リ ス ベン ト フ ラノ シル） 一 2 ( 】 H ) —ピリ ミ ジンオ ン） ； 及び

Lーデォキシチ ミ ジン （L- dT : 1 — ( 2 —デォキシ一 i9— L ーェ リ ス ベン ト フ ラ ノ シル） 一 5 —メ チルー 2 4 ( 1 H , 3 H ) ― ピリ ミ ジンジオ ン） が好ま しい。 '

これらの L —ヌク レオシ ド類は、 上記の 2 —デォキシ一 L一ェ リ ス ロ ーペン ト ースとアデニン等の核酸構成塩基を用いて、 2— デォキシー D—エ リ ス ペン ト ース とアデ二ン等の塩基を 一 グリ コ シド結合する公知の方法に準じて製造される。 これらの方 法と して、 例えば M. J . ロ ビンズら (J. Org. Chem.， 35巻， 636 頁， 1970年） や A. ホ リ ー （Coll. Czech. Chem. Commun. 37巻， 4072頁， 1972年） 等の方法を例示することができる。 本発明の L 一ォ リ ゴデ才キシ リ ボヌ ク レオチ ドの構成成分である L—ヌ ク レ ォチ ドは、 これらの Lーヌ ク レオ シ ドの 5 ' — リ ン酸エステル体 i)る。

本発明のォ リ ゴデォキシ リ ボヌク レオチ ドは、 以下の式 （ I ) で示される化合物である。

)

また、 本発明の他のォ リゴデォキシリボヌク レ才チ ドは、 以下の式 ( Π ) で示される化合物である。

L D -オ リ ゴマー

⑩または（D い 式 （ I ) 及び式 （ Π ) において、 πは 2ないし 6 0め整数、 好 ま しく は 2ないし 4 0の整数、 特に好ま しく は 4〜 2 0の整数で ある。 Bは核酸塩基を示し、 該核酸塩基は保護基を有していても よい。 核酸塩基は、 すべて同一の塩基であってもよ く、 また異な

5 る塩基でもよい。 またこれらの化合物の塩も本発明に包含される。

この様な塩と しては塩基付加塩である ト リ エチルア ンモニゥム塩、 ナ ト リ ウム塩等を例示することができる。

本発明のォ リ ゴデォキシリ ボヌク レオチ ド類は上記の Lーヌク レオ シ ドのリ ン酸 ト リ エステル誘導体を用いて液相法によりブ π

, ο ッ ク合成するか、 若しく は固相法により製造することができる。

上記の式 （ I ) において、 nが 5であり、 かつ Bが全てアデニン であるォ リ ゴデ才キ シ リ ボヌ ク レオチ ド 〔 （ L - - d A ) 6 と略記 される〕 化合物について、 液相法での製造方法の 1 例を以下に示 す。

1 5 2 - デォキ シ一 L エ リ ス u ベ ン ト 一 ス と ァデニ ンを口 ビン ス O方 し Or?,. Chem.， 3 5巻 ： 6 3 6頁、 1 9 7 0年） 、 若 しくは立体選択的グリ コ シルイ匕 (Z. Kazimierczukら， 106巻, 6379 頁、 19&4年 » によ： グリ コ シル化し、 得られた L - - d Aを例えば N , ' ジベンゾィ ル一 5 ' - ジメ ト キ シ ト リ チ ル体と して保護 0 した後に、 例えば、 8 —キ ノ リ ルジハイ ド ロゲンホス フ ヱ イ ト に よってリ ン酸エステル化し ト リ エステル化した後に 2量化させる。

2量化に続く 4量化の後に、 さ らに 2量体と反応させると、 保護 基を有する 6量体を得ることができる。 その後に保護基を通常の 方法により除去し、 例えば液体ク πマ ト グラフ ィ 一により精製す . れば目的の （ L A ) Β が得られる。 保護基と しては上記の他、 ァセチル、 ベン ィ 儿、 \. \ ジ メ チ ルメ チ レ ン （ Ν II基に対して）、 モ ノ メ ト キ シ ト リ チ ルゃ ト リ チ ル'ォキ シ了セチ ル （ Γ) ' - 0 IIに - 1 ϋ - 対して） 、 β— シ了ノ エチル又は 0— ク ロ ロ フ ヱニル （ホスホ リ ル基に対して） などを使用することができる。 保護基の除去は Η. Takaku (Chem Lett. , 1983年巻， 1661頁） 等の方法によればよい 液体クロマ トグラフィ一において例えばト リエチルアンモニゥム 酢酸等を使用することにより （ L一 d A) sの ト リェチルアンモニ ゥム塩が得られる。

以上の工程を、 スキーム 1 に示す。

尚、 スキーム中の略号は、

Bz ベンソ"ィ ル

I o DMTr ジメ トキシ ト リチル

TMSC Ί ク ロ π ト リ メ チルシ リ ル

BzC ベンソ"イ レク ロ リ ド

DMTrC^ 塩化ジメ ト キ シ ト リ チル

QS- 8 —キノ リ ンスルホニルク ロ リ ド

Q 8—キノ リ ル

0

QO (OH) ₂ 8 —キノ リ ンジノヽィ ドロゲンホスフ ェ イ ト CeOH 2 — シァノ エタ ノ ール

Ac₂0 無水酢酸

0 Ac ァセチ レ

Te 1 H—テ ト ラ ゾール

QSNT ^ 8—キノ リ ンスルホニルー 3—二 ト π— 1， 2

4 ー ト、リ ァソニール

を示す。

丄 ：-キ , 一 1

I Υ - + ^ t ΐ f/IOd W)"0/Z6OAV 固相法においては、 上記の L —ヌク レオシド類の保護体である 本発明のホスホロアミ ダイ ト誘導体を用いることにより、 市販の D N A合成装置により製造することができる。

本発明のホスホロアミ ダイ ト誘導体は、 以下の式で示される化 合物である。

式中、 Bは核酸塩基を示し、 該核酸塩基は保護基を有していて もよい。 核酸塩基の例と してほ、 例えばアデニン、 グァニ ン、 シ ト シ ン、 チ ミ ン、 ゥラ シル、 デォキシ シ ト シ ンを挙げることがで きる。 核酸の保護基としては、 例えばァセチル、 ベンゾィル、 N N -ジメ チルメ チ レン、 イ ソプチ リ ル等を挙げるこ とができ る。 Y は水酸基の保護基を示し、 例えばジメ トキシ ト リチル基、 モノ メ トキシ ト リチル、 ト リチル才キシァセチル等を挙げることができ る。 また、 Rはシァノ エチル基又は低級アルキル基を示し、 Xは ァ ミ ノ基若しく は保護されたァ ミ ノ基を示す。 保護基を有するァ ミ ノ基と しては、 例えばジィ ソプロ ピルア ミ ノ 基、 モルホ リ ン等 を例示することができる。

本発明のホスホロアミ ダイ ト誘導体は、 上記の L ーヌ ク レオ シ ド類から、 例えば N . D . シ ンハ （ i n ha)らの方法 （Nuc l e i c

Ac i ds Res 12巻、 453Π 1984年） に準じて合成される。

f

好ましいホスホロァミ ダイ ト誘導体としては、 例えば、

' '

6 —べンゾィ ルァ ミ ノ 一 9 一 〔 2 —デォキ シー 5 — ( 4 , 4 ' ― ジメ ト キ シ ト リ チル） 一 一 L —エ リ ス 口 一ベン ト フ ラ ノ シル〕 — 9 H —プ リ ンの 3 ' — ◦ー シァノ エチル一 N， N — ジイ ソプロ ピルホスホロァ ミ ダイ ト誘導体 ；

1 一 〔 2 —デ才キ シ一 5 — ( 4 , 4 ' — ジメ ト キ シ ト リ チル） 一 /5— L —エ リ ス ロ ヒベン ト フ ラ ノ シル〕 一 5 — メ チルー 2 , 4

( 1 H , 3 H ) — ピ リ ミ ジンジオ ンの 3 ' — 〇一 シァノ エチルー 5 N， N — ジイ ソプロ ピルホスホロ ア ミ ダイ ト誘導体 ；

6 —ベンゾィ ルア ミ ノ ー 1 一 〔 2 —デ才キ シー 5— ( 4 , 4 ' 一 ジメ ト キ シ ト リ チル） 一 一 L —エ リ ス ロ ーベン ト フ ラ ノ シル〕 一

2 ( I II ) 一 ピ リ ミ ジノ ンの 3 ' — 0— シァノ エチルー N , N— ジィ ソプロ ピルホスホロ ア ミ ダイ ト誘導体 ；

, ο 2 —イ ソプチ リ ルア ミ ノ ー 9 — 〔 2 —デォキ シ一 5 — （ 4 , 4 ' 一 ジメ ト キ シ ト リ チル） 一 ；9— L —エ リ ス 口 一ベ ン ト フ ラ ノ シル〕 一 1 , 9 ー ジ ヒ ド ロ 一 6 H —プリ ン一 6 —オ ンの 3 ' — 〇一 シァノ ェチル一 N , N— ジイ ソプロ ピルホスホロア ミ ダイ ト誘導体 ； 6 —イ ソ ブチ リ ルア ミ ノ 一 1 一 〔 2 —デォキ シ一 5 — ( 4 , 4 ' 一

, 5 ジメ ト キ シ ト リ チル） 一 ； 9 一 L 一エ リ ス ロ ーベ ン ト フ ラ ノ シル〕 一

2 ( 1 H ) 一 ピ リ ミ ジノ ンの 3 ' — 0 — シァノ エチルー N， N— ジィ ソプロ ピルホスホロァ ミ ダィ ト誘導体 ；

6 — （ N， N — ジメ チルア ミ ジノ ） 一 9 一 〔 2 —デォキ シ一 5 — ( 4 ， 4 ' ー ジメ トキシ ト リチル） 一 一 L —エ リ ス σ —ペン トフ 0 ラ ノ シル〕 一 9 Η—プ リ ンの 3 ' —◦— シァノ エチルー Ν， Ν— ジイ ソプロ ピルホスホ ロ了 ミ ダイ ト誘導体 ； 及び

2 - ( Ν， Ν— ジメ チルア ミ ジノ ） 一 9 一 〔 2 —デォキ シ一 5 — ( 4， 4 ' ー ジメ ト キ シ ト リ チル） 一 9— L 一エ リ ス " --ペン ト フ ラ ノ シル〕 一 1 ， 9 ー ジ ヒ ド ロ ー 6 Η —プ リ ン一 6 —オ ンの 3 ' 5 ー シァノ エチルー Ν , Ν — ジイ ソプロ ピルホスホ π ア ミ ダイ ト誘 導体等を挙げることができる c

本発明のホスホ πア ミ ダイ ト誘導体の合成方法の 1例を以下の スキームに示す,

スキーム 2

Bz

A 1) DMTrC^

HO— I OH HO OD Tr

2) TMSC^ , BzC^

(11)

NCCH₂CH₂0P

(C£ )N(iPr)₂ Bz

DNA合成

N, N-ジィ ソプロ ピ CNCH2CH2O PO ODMT 機へ jレエチ jレア ミ ン \

N(iPr)

(12) 市販の D N A合成機 （例えばアプライ ド バイオシステム社製) において、 上記の N—ベンゾィルー Lーデォキシアデノ シンのホ スホロアミ ダイ ト誘導体を試薬と して使用し、 固相に結合したヌ ク レオ シ ドまたはオ リ ゴヌ ク レオチ ドに反応させてポ リ ヌ ク レオ チ ド鎖を伸長することにより、 本発明のォ リゴデォキシ リボヌク レオチ ドを固相法で製造することができる。

該方法は、 例えば、 )固相に固定されたデ才キシリボヌク レオ シド又は固相に固定されたォ リゴデォキシリ ボヌ.クレオチ ドの末 端ヌク レオシ ドに、 上記の L一ホスホロアミ ダイ ト誘導体を反応 させてヌ ク レオチ ド結合を形成させる第 1工程 ； 5 ' —水酸基を 了シル化する第 2工程 ； 及びリ ンを酸化する第 3工程を含むヌ ク レ チ ド結合形成工程 ； （b)上記の工程 (a)で得た固： T化ヌク レオチ ドの 5 ' —保護基を除去した後に上記の L—ホスホロァミ ダイ ト 体を用いて上記工程 (a)の第 1工程ないし第 3工程までを行うヌク レオチ ド伸長工程 ； （c)必要により工程 (b)を繰り返す工程 ； 及び、 1 Γ)

(d)得られた固定化保護ォ リ ゴデォキシ リ ボヌク レオチ ドのホスホ 口ァ ミ ダイ ト部分の保護基の離脱及び固相からの切断を行う工程 ； ォ リ ゴデォキシ リ ボヌ ク レオチ ドの塩基部分の保護基を除去す る工程 ； 及び、 5 ' —保護基を除去する工程を含む保護基除去ェ 程を含む。

例えば、 末端に所望の保護がされた 5 ' — ト リチル化ヌク レオ シ ドが結合した市販の C P G ( con t r o l l ed por e g l ass)カ ラムを 用い、 ホスホロア ミ ダイ ト体と して Rがシァノ エチル基であり Y がジメ トキシ ト リチル基である化合物を用いた場合について説明 すると、 本発明のォ リ ゴデォキ シ リ ボヌ ク レオチ ドの製造方法は C P Gカ ラムに付されているヌ ク レオ シ ドの 5 ' ― ト リ チルを ト リ ク ロル酢酸のジク ロ ロメ タ ン溶液により除去し、. L—ホスホロ ア ミ ダイ ト体等の保護ホスホア ミ ダイ ト体を含むァセ トニ ト リル 溶液をテ ト ラゾ一ルのァセ トニ ト リ ル溶液と反応させてヌク レオ チ ド結合を形成させ、 1 ーメ チルイ ミ ダゾールと無水酢酸のテ ト ラ ヒ ドロフ ラ ン溶液により未反応 5 ' 一水酸基をァセチル化し、 ピリ ジンと水を含むテ ト ラ ヒ ドロフラ ン中のヨウ素により リ ンを 酸化することによりヌ ク レオチ ド結合を形成し、 さらに、 所望の L一ホスホア ミ ダイ ト体を用いて上記の工程を繰り返してヌク レ ォチ ドを伸長し、 その後、 所定のヌク レオチ ドが生成した後に室 温下でァンモニァ水を作用させてシァノ ェチル基を離脱させ、 保 護基を有するォ リゴデォキシリボヌク レオチ ドの塩基部分の保護 基をア ンモニア水で加熱することによって除去し、 5 ' —保護基 を酢酸により除去することにより製造できる。

さ らに、 天然型ヌク レオ シ ドと Lーヌ ク レオ シ ドが交互に結合 した本発明のォ リ ゴデォキシ リ ボヌク レオチ ドを製造する方法は 例えば、 )固相に固定されたデォキシ リ ボヌク レ才シ ド又は固相 に固定されたォ リゴデォキシリ ボヌク レオチ ドの末端ヌク レオシ ドに、 上記の L—ホスホロアミ ダイ ト誘導体を反応させてヌク レ ォチ ド結合を形成させる第 1工程 ； 5 ' —水酸基をァシル化する 第 2工程 ； 及びリ ンを酸化する第 3工程を含むヌク レオチ ド結合 形成工程 ； （b)上記工程 (a)で得た固定化ヌク レオチ ドの 5 ' —保護 基を除去した後に天然型 D—ホスホロ 了 ミ ダイ ト体を用いて上記 工程 (a)の第 1工程ないし第 3工程までを行った後、 得られた固定 化ヌ ク レオチ ドの 5 ' —保護基を除去し、 L —ホスホロ ア ミ ダイ ト体を用いて上記工程 )の第 1工程ないし第 3工程までを行なう ヌク レオチ ド伸長工程 ； （c)必要により工程 (b)を繰り返す工程 ； 及 び、 （d)得られた固定化保護ォ リゴデォキシリボヌク レオチ ドのホ スホロア ミ ダイ ト部分の保護基の離脱及び固相からの切断を行う 工程 ； ォ リ ゴデォキシリボヌク レオチ ドの塩基部分の保護基を除 去する工程 ； 及び、 5 ' —保護基を除去する工程を含む保護基除 去工程を含む。

上記の様な製造方法において、 例えば天然型ヌク レオ シ ドまた は天然型ォ リ ゴヌク レオチ ドが固定された固相を用いることによ り、 L —ヌ ク レ才チ ドの才 リ ゴマ一の末端に天然型ヌ ク レオ シ ド または天然型才 リ ゴヌク レオチ ドが結合した本発明の才 リ ゴデォ キシリボヌク レオチ ドが製造される。 また、 Lーヌク レオシドま たは L 一オ リゴヌク レオチ ドが固定された固相を使用することに より効率良く本発明のォ リゴデォキシ リ ボヌク レオチ ドを製造す ることができる。 固相に固定されたヌク レオシドまたは才 リ ゴヌ ク レオシドはそれ自体でリ ンカーと しても作用するが、 これらの ヌク レオシドまたはォ リゴヌク レオチ ドは、 必要により当業者に 周知の他のリ ンカ 一を介して固相に結合されていてもよい。 この

- ようなリ ンカ一と しては、 例えば C P Gカラムから容易に脱離さ せることができる リ ンカ一と して ト リ チルォキシアルキルアルコ —ルゃ ト リ チルォキシアルキルァ ミ ン等を挙げることができる。 これらのリ ンカ一はそれ自体当業者に周知の方法で固相から離脱 させることができ、 また本発明のオ リ ゴデォキシ リ ボヌク レオチ

5 ドから除去することができる。

L 一ヌ ク レオチ ドのオ リ ゴマーの末端に天然型ヌ ク レオ シ ドが 結合したォ リ ゴデォキシ リ ボヌク レオチ ドも本発明の才 リ ゴデ才 キシ リ ボヌ ク レオチ ドに含まれる。 例えば、 上記の方法により末 端に天然型ヌク レオ シ ドを有する D— d A— ( L— d A ) ₆を製造

, 0 した場合には、 さ らにホスホジエステ ラーゼを作用させて未端の 天然アデニル酸のジエステル結合を加水分解することにより、 L —ヌク レオチ ドのへキサオ リ ゴマーである （ L 一 d A ) ₆を得るこ とができる。 加水分解には、 例えばし. Tazawa ら（B i ochem i s t ry, 9巻、 3499頁、 1970年） の条件を用いればよい。 ホスホジエステ

, 5 ラーゼと しては、 ゥ シ眸臓由来のホスホジエステラーゼやへビ毒 由来のホスホジエステラ一ゼ等を好適に使用することができる。 ゥ シ降臓由来のホスホジエステ ラ ーゼを作用させると、 例えば 3， 一末端に リ ン酸エステルが残存した L—オ リ ゴデ才キシ リ ボヌク レオチ ドが得られる。 また、 へビ毒由来のホスホジエステ ラ ーゼ 0 を作用させると、 3 ' —及び 5 ' —両末端の天然型ヌ ク レオチ ド が加水分解されて両端に天然型ヌ ク レオ シ ドを有しない L 一オ リ ゴデォキシ リ ボヌ ク レオチ ドを製造することができる。

' 上記の方法により、 L 一 d A、 L 一 d G、 L— d C、 や L— d T等の L —ヌ ク レオ シ ドが任意の配列で 3，→5'ホスホジエステル 5 結合したオ リ ゴデォキ シ リ ボヌ ク レオチ ドを製造することができ る （ L 一オ リ ゴデォキシ リ ボヌ ク レオチ ドという） 。 また、 同様 に して天然型のデ才キシス ク レオ シ ドと、 I,— d Λ、 L 一 d G、 L 一 d C、 L 一 d T等が交互に 3'→5， ホスホジエステル結合した 任意の配列を含む才 リ ゴデォキシ リ ボヌク レオチ ドを製造するこ とができる （ L D—オ リ ゴデォヰシ リ ボヌク レオチ ドという） 。

L D—オ リ ゴデォキシ リ ボヌク レオチ ドに含まれる天然型デォキ シヌク レオ シ ドと しては、 例えば D— d A、 D— d G、 D— d C、 または D— d T等の他、 前記の Lーヌク レオ シ ドに対応する天然 型 D—ヌク レオ シ ドを挙げることができる。 天然型ヌク レオシ ド 若しく は L —ヌク レオシ ドのいずれが 3'末端になつてもよ く、 ま た天然型ヌク レオシ ド若しく は Lーヌク レオ シ ドのいずれが 5'未 - 端になってもよい。 したがって、 両端が Lーヌク レオ シ ドである オ リ ゴヌク レオ シ ド、 または両端が天然型ヌク レオ シ ドであるォ リ ゴヌク レオ シ ドも L D—オ リ ゴデォキシ リ ボヌク レオチ ドに含 — まれる。

本発明のォ リ ゴデ才キシ リ ボヌ ク レオチ ドは、 上記の L 一オ リ ゴデォキシ リ ボヌク レ才チ ド、 または L D—ォ リ ゴデォキシ リ ボ ヌ ク レオチ ドを含むヌク レオチ ドであり、 L 一オ リ ゴデォキシリ ボヌク レオチ ド、 または L D—オ リ ゴデォキシ リ ボヌク レオチ ド の 3'末端も し く は 5'末端、 又はその両端に天然型のリ ボヌク レオ シ ド、 天然型ォ リ ゴリ ボヌク レオシ ドが結合していてもよい。

本発明のォ リ ゴデ才キシ リ ボヌク レオチ ドには、 例えば以下の 様な塩基配列を有するヌク レオチ ド ：

GTAGAGGATACCGA (HTLV- ΠΙ ウ ィ ルスプロモータ部） ；

GGTGTGTTTACCCT (EBウィ ルスプロモータ ー部）；

AATACTCATACTCTTC (Amp ^r プロモーター部）；

CTTCTCATACTCATAA (Amp ^Γ プ□モーター部） ボ GAAAGGCGTCGACGGAG ( Pr n Π サイ ト）；

TTTCGTCATTC (HTLV- m スプラ イ シングサイ ト）； 及び

： - - " 、 AAAGTCTGGG (HTLV - ffl スプラ イ シ ングサイ ト ）

等が舍まれるが、 本発明のォ リ ゴデォキシリ ボヌク レオチ ドはこ れらに限定されることはない。

本発明のォ リ ゴデォキシリ ボヌク レオチ ドは、 L一オ リゴデ才

5 キシリボヌク レオチ ド、 または L D—オ リ ゴデォキシリ ボヌク レ ォチ ドを含み、 該ヌク レオチ ド配列に相補的な配列を有する天然 型オ リ ゴヌク レオチ ド （天然型の配列を有する核酸） を含む核酸 と結合する。 その結果、 本発明のオ リ ゴデォキシリボヌク レオチ ドは天然型の核酸に結合して、 本来の生化学的作用の発現、 特に

,ο 遺伝子の発現を阻害しうるア ンチセ ンス DN Aとして作用する。

例えば、 本発明のォ リゴデォキシリボヌク レオチ ドに含まれる L 一オ リ ゴデォキ シ リ ボヌ ク レオチ ドの構成ヌ ク レオ シ ドが L— d Aである場合、 相補的 R N Aの構成リ ボヌ ク レオ シ ドは天然型ゥ リ ジ ンであり、 相補的 D N Aの構成デォキ シ リ ボヌ ク レオチ ドは

, 5 天然型チ ミ ジ ンである。 例えば L一 d A、 L一 d C、 L一 d T、

L— d Gから構成される L一才 リ ゴデォキシリ ボヌ ク レオチ ドで ある L— A CTGに対しては、 天然型の R N Aオ リゴマ一である U G A Cや天然型の D N Aオ リ ゴマ一である T G A Cが相補的ヌ ク レオチ ドである。 本発明の才 リ ゴヌク レオチ ドの配列が長く な

20 ると天然型 D N Aとも結合する様になる。 例えば （L— d A) 6

は相補的配列を有する天然型 R N A (ポ リ U) に結合するが、 相 補的配列を有する天然型 D N A (ポ リ d T) には結合しない。 一 方、 （ L— d A) ₁₂ はポ リ U及びポ リ d Tの両者に結合するが、 ポ リ G、 ポ リ （：、 ポ リ A、 ポ リ d G、 ポ リ d C：、 及びポ リ d Aと

：-, は結合しない。

理論に拘泥するわけではないが、 本発明のォ リ ゴデォキシリボ ヌ ク レオチ ドと相補的核酸との結合は、 水素結合、 疎水結合等の 結合により形成されるものである。 結合力の存在は当業者に自明 ,-； な物理化学的方法、 すなわち核酸類の結合 （相互作用） を検出す る公知の方法により検出することができる。 例えば両者を混合し て紫外部吸収強度の変化を測定する方法、 L一オ リ ゴデォキシリ

5 ボヌク レオチ ドと相補的核酸の混合物について融点 （Tm) を測. 定する方法、 NMRによる化学シフ トの移動を測定する方法や、 - Circular Dichroism等の方法を挙げることができる。

L—ォ リゴデォキシリボヌクレオチ ドまたは L D—ォ リ ゴデォ ' キシリボヌク レオチ ドを含む本発明の才 リゴデ才キシリボヌグレ

₁₀ ォチ ドと天然型核酸を混合し、 紫外部吸収強度の変化を測定する

場合には、 例えば本発明の才 リゴデォキシリボヌク レオチ ドであ る （L一 d A)₆や （L一 d A) ₁₂ と、 該ヌ ク レオチ ドの相捕的 R N Aであるポリ ゥ リ ジン （ポ リ U ) の混合液を、 約 8 0 tで約 1 0分加熱し、 ついで 0 °Cで数時間冷却した後に、 紫外部の吸光 i s 度を測定することにより、 両者の相互作用を示す混合曲線 （例え

ば第 1 A図を参照） を得ることができ、 両者の結合を明らかにす ることができる。 この様にして、 本発明のオ リ ゴデォキシリボヌ ： ク レオチ ドと相補的核酸との結合を測定した場合、 紫外部吸収の ヒポクロ ミ シティ 一は通常 1 0〜 3 0 %程度である。

0 本発明の才 リゴデォキシリ ボヌク レオチ ドのうち、 L一オ リゴ

デォキシリ ボヌク レオチ ドを含むリ ボヌク レオチ ドは、 L一オ リ ゴデォキシリボヌクレオチ ド配列に相補的な R N Aとは相互作用 するが、 非相捕的 R N Aとは結合しない。 一方、 該ォ ゴデォキ シ リ ボヌク レオチ ドは天然型の D—ォ リゴデォキシ ボヌク レオ

5 チ ド （DNA) との相互作用が弱いので、 該オ リゴデ才キシ リ

ヌク レオチ ドと天然型核酸との相互作用は、 相補的 R N Aに特異 的であることが明らかである。 非相補的 R N A若しく は D N Aと

: 該ォ リ ゴデォキシリ ボヌク レオチ ドとの相互作用は、 上記と同様 の方法によっては全く検出されないか、 非常に小さい。

本発明のォ リ ゴデォキ シ リ ボヌク レオチ ドのうち、 L D—ォ リ ゴデ才キシリ ボヌク レオチ ドを舍むリボヌク レオチ ドは、 L D— ォ リ ゴデォキシリ ボヌク レオチ ド配列に相補的な R N A及び D N Aの両者と強く結合するものである。

本発明の才 リ ゴデォキシリ ボヌク レオチ ドは、 特定の D N Aや R N Aに相補的に結合し、 D N Aの複写や転写、 m R N Aのスプ リ シ ングゃタ ンパク質への翻訳等の過程を阻害するア ンチセ ンス D N Aと して作用する。 従って、 本発明のオ リ ゴデォキシリ ボヌ ク レオチ ドは遺伝子発現調節剤と して種々の疾患の治療や診断等 に用いることができ、 例えば抗ゥィルス剤と して有用である。 以下に実施例により本発明をさ らに具体的に説明するが、 本発 明はこれらの実施例に限定されることはない。 尚、 実施例中化合 物蕃号はスキーム中の化合物番号に対応するものである。

実施例

実施倒〗 （ L一 d A ) ₆の液相法による合成

本合 1¾ I)—デォキシアデノ シンに対して報告されている文献 (Z. Ka'z i&r ztikら） 及び才 リ ゴ体合成法 （H. Takaku ら） に準 じて合成した。

Lーデォキシアデノ シン 7. 5 g ( 3 0 mmo 1 e)、 m. p. 1 8 8 - 1 9 1 °C、 [ a Ί + 2 6. 5 ( C = 1. 0 5、 II ₂〇） をク ロロ ト

n

リ メ チルリ.ラ ンで処理し、 続いてベンゾイ ルク ロ リ ドによりァ ミ ノ基をジベンゾィ ル化し、 次いでジメ トキシ ト リチルクロ リ ドに より N, 5 位保護体 9. 7 5 g (l)を得た。 （1)をキノ リ ンスルホニ ルク ロ リ ド存在下に 8 —キノ リ ルハィ ドロゲンホスフ ヱ一 卜で 3 位 リ ン酸ェステル化し、 次いでシァノ エタ ノ ールを付加して保護 リ ン酸化モノ マ一 (2)8. 1 1 gを得た。 （2)のト リ クロ口酢酸による 脱 ト リ チル体 (3) 1. 8 0 と ト リ エチルア ミ ンによる脱シァノ エチル 体 (4) 3. 8 3 gを 8 —キノ リ ンスルホニルー 3 —二 ト ロ ー 1， 2， 4 一 ト リァゾ一ル （Q S NT) により縮合させて 2量体 (5) 2.8 9 gを得た。 一方、 （1) 1. 1 5 gを無水酢酸で 3 ' —位をァセチル化 し、 ト リ ク ロ ル酢酸で脱ト リチル化することにより、 3 ' —ァセ _: チル保護モノ マー (6) 0.41 gを得、 さらに (6)と (4) 1.30 gを縮合させ ることにより 3 ' —ァセチル保護 2量体 (7)0.88gを得た。 （7)の脱 ト リチル化体 0.63に (5)の脱シァノ ェチル体 (8) 1.43gを縮合させて 4量体 (9)0.48gを得た。 さらに (9)の脱ト リチル体と (8) 0.4 6 6 g を縮合ざせて保護 6量体 (10) 253mgを得た。 脱保護は、 ピリ ジンァ ル ドキ シムーテ ト ラ メ チルグ了ニジ ン塩、 濃ア ンモニア水、 80%酢 酸の順に処理して行い、 最終的に H P L C (O D S逆相分取カラ ム、 0. 1 M—酢酸ト リ ェチルァ ミ ン— 9 %ァセ トニ ト リ ル） で精 製し、 脱塩、 凍結乾燥するこ とによ り目的化合物のト リ エチルァ ミ ン塩 4 3. 6 mg (全収率 0. 5 %) を得た。

NMR (400Mz, D₂0 , T S)

δ ppm 5.70 (311, m， Γ - H)，

5.83 (111, m, Γ -H),

5.98 (1H， m， -H),

6.17 (1H， t, 一 H)，

本化合物は D—デォキシアデノ シンから同一方法で合成した (D— d A) ₆と NMRスベタ ト ル、 ク ロマ ト グラ フ保持時間に於 て完全に一致し、 C Dスぺク ト ま符号が全 逆転している。 実施例 2 6 —ベンゾィ ル了 ミ ノ — 9 一 〔 2 -デォキ シ— 5 —

( 4 , 4 ' ージメ ト キ シ ト リ チル） 一 一 L—エ リ ス 口 一ベン ト フ ラ ノ シル） 一 9 H -プ リ ンの 3 ' —〇一 シァノ エチルー N , Ν — ジイ ソプロ ピルホスホ ロ ア ミ ダイ ト

D—デ才キシアデノ シ ンの保護体の合成 （文献 G. S. T i ら、 J. Am. Chem. So ， 104巻、 1316頁、 1982年） に準じて、 Lーデ

5 ォキ シアデノ シ ン 2. 5 g ( 1 0 mmo 1 ) をピ リ ジ ン中 ト リ ェチル了 ミ ンの存在下に 4 ， 4 ' ージメ トキシ ト リチルク ロ リ ドで 5 ' 位 を保護し、 次いで ト リ メ チルク ロ ルシラ ンで処理したのちベンゾ イ ルク 口 リ ドで N —ベンゾィ ル体 (11) 4. 3 9 g ( 6 6. 7 % ) を得た。 αΐ) 3 2 9 mg ( 0. 5 mM) をアルゴン気流下、 乾燥 T H Fに溶かし、

, a ジィソプロ ピルェチルア ミ ン 0. 3 5 mL ( 2 mM) および 一シァノ ェチルモノ ク ロ ルホスホロ ア ミ ダイ ト 0. 2 2 3 mし （ lmM， A l d r i ch 製） を加え、 3 5分室温で攪拌した。 析出した塩をろ別し、 濃縮 乾固した。 残査をアルゴン飽和酢酸ェチルに溶かし、 冷飽和食塩 水と 1 0 %炭酸水素ナ ト リ ゥ ム水溶液で洗い、 乾燥した。 溶媒留

, 5 去後残査をシ リ カゲルカ ラ ム ク ロ マ ト に付し、 メ チ レンクロ ラ イ ド ： 酢酸ェチル ： ト リ ェチルァ ミ ン （ 4 5 ： 4 5 ： 1 0 ) で溶出 した。 当該分画を分離濃縮しベンゼンで共沸乾燥した後、 少量の 酢酸ェチルに溶かし π-へキサンで処理して、 無色アモルフ ァ スの 02) 2 4 7 mg ( 5 7. 5 リ ン原子のジァステ レオマ一） を得た。

0 NMR (400MHz, CDCし ₃， TMS)

δ ppm 1. 19 ( 12H, m， イ ソプロ ピル CH ₃)

3. 77 (6H， d， メ ト キ シ Cll ₃)

' 6. 51 (111, m， Γ H)，

9. 04 (1 H, s， MI

5 本品は D —デォキシァデノ シ、ノの対応ホスホ口ア ミ ダイ ト と全 く 同一の N M Rを示した。

実施例 3 1 — [ 2 —デォキ シ 5 - ( . 4 ' - ジメ トキシ ト リ テル） 一 一 L一エ リ ス 口ペンタ フ ラ ノ シル] 一 5 —メ チル一

2， 4 ( 1 H, 3 H ) 一 ピ リ ミ ジンジオ ンの 3 ' — 〇ー シァノ エ チル一 N， N— ジイ ソプロ ピルホスホロ ア ミ ダィ ト

M. ホ ッ フ ァ 一 （Chem. Ber.， 93， 2777, 1960 年） の方法に準

5 じ、 5 g ( 3 7： 3 mM) の 2 —デォキ シ一丄 ー リ ボースよ り メ チル

2—デォキ シ一 3 , .5 — ビス一 0— （ 4 一メ チルベンゾィ ル） 一 L—エ リ ス ロ ーベン ト フ ラ ノ シドを得、 精製することなく クロ ル化して、 1 0. O g ( 6 9. 0 %) の 1 一 ク ロ ー 2 —デォキ シ一

3 , 5 —ビス一〇一 （ 4 — メ チルベンゾィ ル） 一 "一 L一エ リ ス - ,ο . 口 一ベン ト フ ラ ノ 一スを得た （m. P. 1 1 3 — 1 1 4 ：) 。

1 2. 6 g ( 0. 1 M ) のチ ミ ン、 2 6 ml (0. 1 2 5 M) のへヰサ メ チルジシラザン、 及び 1 m 1の ト リ メ チルシ リ ルク ロ リ ドの混合 物を 3時間還流した。 過剰のジシラザンを留去した後に、 減圧蒸 留して 1 8. 9 gの無色油状物を得た （ 7 4 — 7 6 "CZ0. 6 5 mmHg

, 5 ： 収率 7 0. 0 %) ) 。 放置することにより結晶状の 5 —メ チル

2 , 4 —ビス （ ト リ メ チルシ リ ルォキシ） ピ リ ミ ジ ンを得た （m.

P. 7 3 - 7 4 °C ) o -

1 5. 7 g ( 5 8. 1 mM) の 5 —メ チル 2， 4 一ビス （ ト リ メ チ ルシ リ ルォキ シ） ピ リ ミ ジン、 2. 5 5 g ( 1 8. 3 mM) のパラニ ト 0 口 フ ヱノ ール、 及び 1 Ί 5 m]の乾燥ジク ロ ロ メ タ ンの混合物に、

1 7. 7 g ( 4 6 mM) の 1 一ク ロ 口一 2 —デォキ シー 3， 5 —ビス " 一〇一 （ 4 —メ チ レベンソ イ レ） 一ひ一 L一エ リ ス ロ ーペ ン ト フ ラノ ースを加え,、 室温で一夜;覺拌した （ 2 0時間） 。 反応液に少 量のエタノ ール，を加え、 過^のシリ ル体を分解して、 析出した不

5 溶物をセ ライ トにより濾-」，した。 濾液を濃縮した残渣に少量のェ ' タノ ールを加えて結晶化し、 濾取して少量のエタノ ールで洗った。 結晶を乾燥し、 2 2. 9 gの無色粉末を得た。 1. 5 ^のエタノ ール より再結晶し、 1 6. 9 g ( 7 6. 9 % ) の 1 — [ 3， 5 — ビス一〇 一 （ 4 一メ チルベンゾィ ル） - 2 —デォキ シ一 一 L一エ リ ス 口 —ベン ト フ ラ ノ シル] — 5 — メ チル一 2， 4 ( 1 II , 3 H ) — ピ リ ミ ジンジ才ンを無色針状晶と して得た . P. 1 9 9 — 2 0 1 ）,

NMR (400MHz, CDC1₃, TMS)

δ ppm 6.47 (1H, dd, J=5.5, 9.2Hz, Γ H)

Anal, (for C₂₆H₂₆N₂0₇)

Cald. C: 65.26%; H: 5.48%; N: 5.86%

Found C: 65.27%； H: 5.51¾; い 5.78%

[ a j _D ²⁵ + 7 1.9 ° ( c = 0. 5 2 8、 ク ロ 口 ホルム）

3 0 O mlの乾燥メ タノ ールを氷冷下にァンモニァガスで飽和し、 1 6. 7 g ( 3 4.9 m ) の上記化合物を加えて 6時間攪拌した。 再 びア ンモニアガスを飽和し、 一夜攪拌した （ 2 0時間） 。 薄層ク 口マ トグラフィ 一で原料の消失を確認した後に濃縮し、 残渣を水 に溶解して、 不溶物を濾別し、 ク ロ口ホルムで 1 回、 エーテルで 2回洗浄した。 水を減圧留去し、 残渣に トルェ ンを加えて共沸乾 固した。 残渣を少量のエタノ ールで洗い出し、 無色粉末と して 7. 3 1 g ( 8 6. 6 %) の 1 一 （ 2 —デォキ シー 5— L一エ リスロ ー ベ ン ト フ ラ ノ シル） 一 5 —メ チル一 2， 4 ( 1 H， 3 H ) — ピ リ ミ ジ ンジ才 ン （ L一 d T ) を得た （m. p. 1 8 8.5 — 1 8 9 ：) 。

NMR ( 400MHz, D₂0， TSP)

o ppm 1.90 (3H, s, CH₃)，

6.30 (1H, t, 0Hz, 1' H)

7.66 (1H， s， 6-H)

Anal, (for C, ₀H, ₄Ν₂0₅)

Cald. C: 49.58¾：; II： 5.83%; : 11.57%

Found C: 49.34%； 11: 5.78 ; ： 11.44?i [ ]_a ²⁵ - 1 8. 9 ° ( c = 0. 9 9 6、 H₂0 )

6. 0 6 g ( 2 5 m ) の上記化合物を乾燥ピリ ジンで 2回共沸乾 燥した後に乾燥ピリ ジンに溶解し、 アルゴン気流下で 8. 8 9 g ( 2 6. 3 mM) の 4， 4 ' —ジメ トキシ ト リチルクロ リ ドを加えた。 アルゴン気流下に室温で 5時間攪拌した後に、 2. 5 mlのメ タノ ー ルを加えて溶媒留去した。 6 0 m】のクロ口ホルムに残渣を溶解し て 2回永洗し、 無水硫酸ナ ト リ ゥムで乾燥して濃縮し、 さらに乾 燥べンゼン、 乾燥ト ルェ ンで順次共沸乾燥した。 残渣を 1 6 7 mに のベンゼンに熱時溶解して濾過し、 6 7 mlの n-へキサ ンを加えて 放冷した。 1 0. 3 4 g ( 7 5. 9 %) の 1 — [ 2—デォキシー 5 — ( 4， 4 ' — ジメ ト キ シ ト リ チル） 一； 5— L—エ リ ス口一ペ ン ト フ ラ ノ シル] 一 5 —メ チル一 2， 4 ( 1 H, 3 H ) — ピ リ ミ ジン ジォンを無色微結晶として得た （m. p. 1 2 7 — 1 2 9で） 。

NM (400MHz, CDC1₃, T S)

δ ppm 1. 7 (3H, s， CH₃),

3.79 (6H, s， 0CH₃x 2)

6.42 (1H, dd, J = 5.8, 7.7Hz, Γ H)

7.58 (1H, s, 6-H)

8.70 (1H, s, NH)

1. 0 9 g ( 2 mM) の上記 DMT r化 L— d Tを.乾燥ベンゼン、 乾燥ト ルエ ン、 及び乾燥 T H Fの順で共沸乾燥した。 1 O mlの乾 燥 TH Fに溶解し、 アルゴン気流下に 1. 4 ml ( 8 mM) のジイ ソプ 口 ピルェザ ルァ ミ ンと 0. 9 ml ( 4 mM) の ー シァノ エチルモノ ク ロ ロ N , N—ジイ ソプロ ピル了 ミ ノ ホスホロ ア ミ ダイ トを順次 添加し こ。 3 5分間室温で攪拌した後に原料の消失を確認し、 ァ ルゴン気流下に塩を濾別し、 濃縮後にアルゴン飽和の酢酸ェチル 1 0 O mlに溶解した。 氷水、 ついで 4 0 mlの冷飽和食塩水で 2回 洗浄し、 無水硫酸ナ ト リ ゥムで乾燥した。 濃縮後に残渣をシリ力 ゲルカ ラ ムク ロマ ト グラ フ ィ 一に付して酢酸ェチル ： ジク ロ ロ メ タ ン （ 1 ： 1 ) で溶出し、 R f 0. 7 3付近の分画を集めて溶媒留 去し、 乾燥トルェンで共沸乾燥して、 1.1 4 g ( 76, 5 % ) の 1 一 [ 2—デォキ シ一 5— （ 4， 4 ' — ジメ ト キ シ ト リ チル） — β — L—エ リ ス 口ペ ンタ フ ラ ノ シル] — 5—メ チル一 2， 4 ( 1 Η . 3 Η ) 一 ピ リ ミ ジ ンジオ ンの 3 ' — 0— シァノ エチル一 Ν , Ν— ジィ ソプロ ピルホスホロ ァ ミ ダイ ト を無色アモルフ ァ ス （ リ ン原 子のジァステ レオマ一混合物） と して得た。

NMR ( 400MHz, CDC1₃， T S)

δ ppm 1.04-1.17 (12 m， イ ソプロ ピル CH₃)

1.43 (311, m， 5 CH₃),

6.39 (1H， m, 〗' H)

8.34 (1H, bs, H)

実施例 4 6 - -ベンゾィ ルア ミ ノ ー 1 一 [ 2—デォキ シー 5— ( 4， 4 ' — ジメ ト キ シ ト リ チル） 一 一 L エ リ ス 口ペ ンタ フ ラ ノ シル] — 2 ( 1 H ) — ピ リ ミ ジノ ンの 3， 一 0— シァノ エチ ル一 N , N— ジィ ソプロ ピルホスホ口 ア ミ ダイ ト

7.8 5 g ( 7 0 mM) のゥ ラ シル、 1 8.3 m 1 ( 8 8 mM) のへキサ メ チルジ シ ラザン、 及び 2 m 1の ト リ メ チルシ リ ルク ロ リ ドの混合 物を 2時間還流した。 ついで混合物を蒸留して 1 4.5 gの無色油 状物 （ 6 5— 6 7 °CZ0. 6 5 mmHg) を得た （ 80. 8 %) 。 6.9 2 gの上記化合物、 1. 1 7 g (8.4 mM) のパラ ニ ト ロ フ ヱ ノ ール、 及び 8 0 m]の乾燥ジクロ uメ タ ンの混合物に、 アルゴン気流下で 9.3 5 g ( 2 4 mM) の 1 一 ク ロ ロ ー 2—デォキ シ一 3， 5— ビス 一〇 -一 （ 4 — メ ト キ シベ ンゾィ ル） 一 " 一 L一 エ リ スローペン ト フ ラ ノ 一スを加え、 室温で一夜攪拃した （ 2 0時間） 。 反応液に 少量のエタノ ールを加え、 過剰の TM S体を分解して、 析出した 不溶物をセライ トにより濾去した。 濾液を濃縮した残渣に 5 0 % ェタノ 一ルを加えて洗い出し、 結晶を濾取して乾燥し、 1 2. Ί g の無色粉末を得た。 4 5 mlの酢酸ェチルより再結晶し、 7.3 6 g ( 6 6.3 %) の 1 — [ 3， 5 —ビス一〇一 （ 4一メ チルベンゾィ ル） 一 2—デォキ シ一 /5— レー エ リ スローベン ト フ ラ ノ シル] 一 2， 4 ( 1 H, 3 H) — ピ リ ミ ジンジオ ンを無色針状晶と して得 た . ρ· 2 1 5— 2 1 6 °C) 。

NMR (400MHz, CDC , TMS)

6 ppm 2.43, 2.44 (3H, s, CH₃)

6.41 (1H, dd, J--5.5, 8.4Hz, 1' -H)

8.75 (1H, s, NH)

Anal, (for C₂₅H₂₄N₂0₇)

Cald. C: 64.64%; fl : 5.21%； N: 6.03%

Found C: 64.43%; II： 5.20%; ： 5.92%

[ " ] D ²⁵ + 4 6. 3 ° ( c = 0. 7 3 6、 クロ口ホルム） 7. 9 8 g ( 1 7.2 mil) の上記化合物を 1 5 0 mlのジォキサンに 懸濁し、 4. 1 7 g (0. 6当量、 1 0. 3 mM) のロウヱ ソ ン試薬 （LQ wesson' s Reagent) を加えて 2時間還流した。 反応液を冷却して 不溶物を濾別して濾液を濃縮した。 2 0 mlのエタ ノ ールで ト リチ ユ レ一 ト して濾取し、 少量のエタ ノ 一ルで洗って乾燥し、 Ί.6 9 g ( 9 3.0 %) の黄色微結晶を得た。 エタ ノ ールで再結晶して融 点 1 8 8— 1 8 9 の 1 一 [ 3， 5—ビス一〇一 （ 4一メ チルベ ンゾィ ル） 一 2 —デォキシー ^ ー L—エ リ ス口一ペン ト フ ラ ノ シ ノレ] — 3 , 4 —ジヒ ドロ 一 4 —チォキソ ー 2 ( 1 H ) — ピ リ ミ ジ ノ ンを得た。

NMR (400MHz, CDC1₃, TMS) o ppm 2.43， 2.44 (311, s, CH₃)

6.34 (1H, dd, J = 3.9， 8.4Hz, ]， - H)

6.26 (111, d， J=7.7Hz, 6-H)

7.38 (1H， d， J = 7.7Hz, 5-H)

9.49 (1H, s， NH)

Anal, (for C₂₅H₂₄N₂0₆S)

Cal C: 62.48%; H: 5.03%; N: 5.83%

Found C: 62.34%; H: 5.00¾; N: 5.71%

1： a ]_D ²⁵ + 7 4. 0 ° ( c = 0. 5 7 2、 ク ロ 口 ホルム） 2 0 O mlの乾燥メ タ ノ 一ルを氷冷下にア ンモニアガスで飽和し. 7. 2 8 ( 1 5. 1 mM) の上記化合物を加えてス于 ンレス シ リ ンダー に封管して 1 ϋ 0 °Cで 1 0時間加熱攪拌した。 冷却後に溶媒を留 去し、 さらに水を加えて共沸乾固した。 残馇に 1 0 0 mlの水を加 えて酢酸ェチル、 エーテルの順で洗浄した。 水を留去し、 残渣に エタ ノ ールを加えて共沸乾固した後、 残渣を熱時 3 ϋ mlのメ タノ —ルに溶解して濾過し、 1 0 ϋ mlのァセ トニ ト リ ルを添加して放 冷すると、 無色プリ ズム晶と して 2. 3 5 g ( 6 8. 5 % ) の 4 ーァ ミ ノ 一 1 一 ( 2 —デォキ シ一 一 L—エ リ ス 口 一ベ ン ト フ ラ ノ シ ル） 一 2 ( 1 H ) 一 ピ リ ミ ジノ ン （ L — d C ) を得た （ m. P. 1 9 6 — 1 9 8 ：) 。

NMR ( 400MHz, D₂0, TSP)

o ppm 6.05 (1H， t, J = 7.7Hz, 5-H)

6.27 (1H, t， J=6.6Hz, 1, - H)

7.83 (1H, d, J=7.4 Hz, 6-H)

Ana 1. (for C ₉ H 1₃ N ₃0₄ )

Cald. C: 47.57¾; H: 5.77%; N: 18.49%

Found C: 47.29%； II： δ.32¾; N: 18.21% [ a ]_D ²⁵ — 60. 4 ° ( c = 0. 6 8 2、 H₂0 )

2. 2 7 g ( 1 0 mM) の上記化合物を乾燥ピリ ジンで 2回共沸乾 燥した後に乾燥ピリ ジンに溶解し、 アルゴン気流下で 6. 7 8 g

( 2 0 mM) の 4 , 4 ' ージメ トキシ ト リチルク ロ リ ドを加えた。

5 アルゴン気流下に室温で 3時間攪拌した後に、 6. 4 ml ( 5 0 mM) のト リノチルシリルクロ リ ドをシリ ンジで添加して 1 5分間攪拌 し、 さ らに 5. 8 m 1 ( 5 0 mM) のべンゾイ ルク π リ ドをシ リ ンジで 添加して、 室温で一夜 （ 2 0時間） 攪拌した。 氷冷して 1 0 mlの 氷水を添加し、 5分間攪拌した後、 2 0 mlの 2 9 %アンモニア水 , ο ·を加えて 3 0分間攪拌した。 溶媒を留去した残渣を 1 0 0 mlのク π 口ホルムに溶解し、 不溶物を濾別した後に 5 %重曹水で洗浄し、 さらに水で 2回洗浄した。 有機層を濃縮した後に、 フラ ッ シュカ ラムに付してク ロ σホルム、 2 %メ タノ ール Ζク ロ口ホルムの JH に溶出して、 Rf = 0. 4 7の分画を得た。 該分画を濃縮して得られ , 5 た無色ァモルフ ァスを 1 O mlのジク ロ口メ タ ンに溶解して濾過し、

1 5 0 mlの石油エーテルを加えて結晶化し、 4. 6 4 g ( 7 3. 2 %) の 4 —ベンゾキシア ミ ノ ー 1 一 [ 5 — 0— [ビス （ 4 —メ トキシ フエニル） フ エニルメ チル] 一 2 —デォキシ一 一 L—エ リ ス口 一ベン ト フラ ノ シル] 一 2 ( 1 H) — ピリ ミ ジノ ンを無色粉末と 0 して得た （m. p. 1 1 8 — 1 2 1 °C) 。

NMR (400MHz, CDC , TMS)

δ ppm 3.80 (6H, s, 0CH₃x2)

6.30 (1H, t, J=5.5Hz, Γ H)

8.75 (1H, bs, CONH)

5 0. 6 3 4 g ( 1 mM) の上記 DMT r化 L一 d Cを乾燥ピリ ジン、 乾燥トルエン、 及び乾燥丁 H Fの順 共沸乾燥した。 5 mlの乾燥 T H Fに溶解し、 ァルゴン気流下に 0. 7 ml ( 4 mM) のジイ ソプロ ピルェチルァ ミ ンと 0. 4 5 m 1 ( 2 mM) の β — シ了 ノ エチルモ ノ ク ロ ロ 一 Ν， Ν— ジイ ソプロ ピルア ミ ノ フ ォ スホア ミ ダイ トを順次 添加し、 室温で 4 0分間攪袢した。 析出晶を濾別し、 残渣をアル ゴン飽和の酢酸ェチルで抽出して飽和食塩水で 2回洗浄した。 無 5 水硫酸ナ ト リ ゥムで乾燥して濃縮した後に、 残渣をシリ力ゲル力 ラムク ロマ トグラフィ 一に付して酢酸ェチル ： ジクロロメ タ ン

( 2 : 1 ) で溶出し、 溶媒留去後に乾燥トルェンで共沸乾燥して、 0. 4 1 ( 4 9ノ 2 % ) の fi—ベンゾィ ルァ ミ ノ — 1 — [ 2—デォ キ シー 5— （ 4， 4 ' — ジメ ト キ シ ト リ チル） - - ；9 - - L一エ リス , 0 口 ペ ンタフ ラ ノ シル] — 2 ( 1 H ) — ピ リ ミ ジノ ンの 3 ' —〇 一 シァノ エチル一 N， N— ジイ ソプ口 ピルホスホ " 了 ミ ダイ トを無 色アモルフ ァ ス （ リ ン原子のジァステ レオマー混合物） と して得 た。

隱 ( 400MHz, CDC1₃, TMS)

, 5 δ ppm 1.07-1.18 (12H, m, イ ソプ n ピル CH₃)

4.63 (111, m, 3' -H),

6.29 (1H， m, Γ -H)

実施例 5 2—イ ソ プチ リ ルア ミ ノ — 9― [ 2―デ才キ シ一 5— ( 4， 4 ' — ジメ ト キ シ ト リ チル）一 9— L一エ リ ス ロ ー ペン ト フ 0 ラ ノ シル）一 1， 9ージ ヒ ドロ 一 6 H—プ リ ン一 6—オ ンの 3， 一

〇一 シァノ ェチルー N， N— ジィ ソプロ ピルホスホロ ァ ミ ダイ ト ' 1. 1 1 4 g ( 3 0 mM) の Nail を乾燥 n-へキサンで洗い、 4 0 0 mlの乾燥ァセ トニ ト リ ルを加えた。 3.9 2 g ( 23. 1 mM) の 2— ア ミ ノ ー 6—クロ口プリ ンを加えて 5 ϋ— 6 0 で 2時間攪拌し 5 た。 9.4 1 g ( 24.2 mM) の 1 一ク ロ口— 2—デ才キシ一 3， 5 — ビス一 0— （ 4ー メ ト キ シベンゾィ ル） 一 d— L一エ リ ス 口 一 ベン ト フラノ 一スを加えて室温で一夜攪拃した。 反応液を濾過し た後に減圧蒸留して褐色粘性の粗生成物を得た。 フ ラ ッ シュクロ マ トグラフィ一により精製し （酢酸ェチル： π-へキサン = 1 ： 2 一 2 ： 3 ) 、 タ リーム色結晶として 5.9 9 g (約 5 0 %) の 2— ア ミ ノ ー 6 —ク ロ ロ ー 9一 （ 2 —デォキ シー 3， 5 —ジ一〇一 P 一 ト ルオイ ル一 9— L一エ リ ス 口 一ベン ト フ ラ ノ シル） プ リ ンを 得た （m.p. 1 8 0— 1 8 2 ） 。

NMR (400MHz, DMS0-d₆)

δ ppm 6.40 (1H， t， J=6.6Hz, Γ -H)

7.01 (2H, s, NH₂)

8.34 (1H, s， 8-H)

Anal, (for C₂₆H₂₄C1N₅0₅)

Cal C: 59.83%； H: 4.63%； N: 13.42¾

Found C: 59.85%; H: 4.73¾; N: 13.20%

3 0 0 mlの乾燥メ タノ 一ルを氷冷下に了 ンモニァガスで飽和し. 5.9 9の上記化合物を加えて室温で一夜攪拌した。 溶媒を留去す ると一部結晶化した芳香のある白色ないし淡黄色の油状物が得ら れた。 該油状物にジク ロ ルメ タ ンを加え、 析出した結晶を濾取し- 約 1 0 0 mlのエタノ ールから再結晶して、 1.8 2 gの 2 —ァミ ノ 一 6 — ク ロ 口 一 9 一 （ 2—デォキ シ一 9一 L一エ リ ス 口 ？ン ト フ ラ ノ シル） プ リ ンを得た （in. ρ· 1 5 6.5— 1 5 °C、 分解） 。

NMR (400MHz, DMS0-d₆)

«5 ppm 6.22 (1H， t, J=7.0Hz, Γ - H)

6.95 (2H, s, NH₂)

8.34 (1H, s， 8-H)

3. 1 4 g ( 1 1. 0 mM) の上記化合物を 9 5 m 1の.2''N—水酸化力 リ ウム水溶液 （ 1 9 0 mM) を 9 5 m 1のジォキサ ンの混合液に加え て、 1 1 0 — 1 2 0 °Cの油浴で還流した。 原料は加熱するにつれ て溶解し、 反応液は黒褐色になった。 1 3時間後、 液量が半分に なるまで溶媒を留去した。 4 5 () mlの精製水を加え、 ダウエッ ク ス （Dowex) - 5 0 ( H ⁺ ) で中和して溶液の PHを 6 — 7 とすると、 中和点において溶液の色は急に薄く なつた。 樹脂を濾去し、 溶媒 5 を留去して一部結晶化した白色ないし褐色の粘性油状物を得た。

結晶を濾取してエタノ ールで洗浄し、 1. 3 9 g (収率 4 4 %) の

2 —ア ミ ノ ー 9 — ( 2 ， ーデ才キ シ一 一 L 一エ リ スロ ーベン ト フ ラ ノ シル） プ リ ン一 6 —才 ン （ L 一 d G ) を白褐色の結晶と し て得た （m. P. 3 0 0 で以上） 。

, 0 NMR ( 400MHz, DMSO- d_G)

o ppm 6. 11 (1H, t, J = 6.2, 8. 1Hz, Γ - H)

6.46 (211, s, NH₂)

7.91 (111, s, 8- H)

10.56 (1H， s, CO H)

, ₅ 3. 0 6 4 g ( 1 0. 7 mM) の上記化合物を乾燥ジメ チルホルムァ ミ ドで 2回共沸させて乾燥した。 30. 1 mlの乾燥ジメ チルホルム 了 ミ ドと 1 5 m l ( 7. 3 mM) の 1， 1， 1， 3, 3, 3-へキサメ チルジシラザ ンを加え、 アルゴン気流化に室温で 5時間攪拌した 30. l mlの ピ ジ ンと 3 0. 1 mlの無水ィ ソ酩酸を添加し、 さ らに室温で 0 一夜攪拌した。 氷冷下、 反応液に 6 4 mlの乾燥メ タノ 一ルを添加 し、 室温で 3時間放置した後に溶媒を留去し、 溶液量が 2 0 一

3 0 mlになつた時点でエーテル Zn-へキサン （ 1 ： 1 ) の混合液 1 ？ 0 mlを添加して、 十分に氷冷した。 析出した結晶を濾取して 5. 4 9 gの褐色粗結晶を得、 水 （ 2 5 ml) とメ タノ ール （ 1 2 ml) 5 の混台液から再結晶して、 2. 3 4 g (収率 6 5 %) の 2 —イ ソブ チ リ ル了 ミ ノ 一 9 一 （ 2 —デォキ シ一 一 I, —エ リ ス π ； ン ト フ ラ ノ シル） プリ ンー 6 —ォ ンを茶色がかつた白色結晶と して得 た （m. p. 3 0 0で以上） ₀

NMR (400MHz, D S0-d₆)

δ ppm 1.11， 1.13 (3H, s， CH₃ x 2)

6.21 (1H, t, J=7.7Hz, Γ - H) ' 5 8.24 (1H, s， 8-H)

Anal, (for H₁₃N₅0₅) ―

Cald. C: 49.85; H: 5.68; N:20.76

Found C: 49.50； H: 5.61； N:20.70

[ a ]_D ²⁷ + 6. 9 3 ° ( c = 1. 0 1 、 DM F )

,o 2. 0 4 の上記化合物に乾燥ピリ ジンを加えて 2回共沸させて

乾燥し、 9 3. 1 mg ( 0. 7 8 4 m ) の 4 ー ジメ チルァ ミ ノ ピ リ ジン

( 1 0 mlのピ リ ジン溶液） 、 5 0 mlのジォキサ ン、 3. 8 4 5 g ( 10. 7 mM) のジメ トキリ ト リチルクロ リ ドを添加し、 室温で 6 時間激しく攪拌した。 5 0 mlの 5 %重曹水に反応液を加え、 7 5

, 5 m 1のジク ロルメ タ ンで 2回、 2 0 m 1のジク ロ ルメ タ ンで 1回抽出

し、 飽和食塩水で洗浄した後に有機層を無水硫酸ナ ト リ ゥムで乾 燥した。 溶媒を留去して 1 4. 9 gの赤褐色粗生成物を得、 さらに シ リ カゲルカ ラ ムク ロマ ト グラ フ ィ ー （酢酸ェチルー酢酸ェチル ： メ タ ノ ール二 9 ： 1 ) で精製して、 2· 2 4 g (収率 5 9 %) の

20 9 — [ 5 — 〇一 （ 4， 4 ' ー ジメ チル ト リチル） 一 2 —デォキ シ

一 ^一 L一エ リ ス ロ ーベン ト フ ラ ノ シル] — 2 —イ ソ ブチ リ ルァ ミ ノ ープ リ ン一 6—才ンをォ レンジ色がかった白色泡状物として

こ。

NMR (400MHz, DMS0-d₆) _f

a s 5 ppm 1.11， 1.13 (3H s, Cil₃ x 2)

6.25 (1H, l, 6.6Hz， Γ— H)

6.23-7.32 (m, Ar-H) 8. 10 (1H, s, 8-H)

11.7, 12. 1 (1H, s， CONH x 2)

0. 6 4 0 g ( 1. 0 mM) の上記化合物を乾燥ピリ ジ ン （ 2回） 、 乾燥ト ルエ ン、 乾燥 T H Fで共沸して乾燥した。 アルゴンで置換 5 した後に 5 mlの乾燥 T H F、 0. 7 ml ( 4 mM) の N， N， N—ジィ ソプロ ピルェチルァ ミ ンと 0. 4 5 m 1 ( 2 0 mM) の β — シ了ノ エチ ルモノ ク ロ ロー Ν， Ν— ジイ ソプロ ピルア ミ ノ ホスホロ ア ミ ダイ トを順次添加し、 室温で 3 5分間攪拌した。 析出晶を濾別し、 残 渣をアルゴン飽和の酢酸ェチル 5 0 mlに溶解して、 4 0 mlの氷冷 , ο した飽和食塩水で 2回洗浄した。 無水硫酸ナ ト リ ゥムで乾燥して 濃縮した後に、 残渣をシ リ カゲルカ ラ ム ク ロマ ト グラ フ ィ ーに付 して酢酸ェチル ： ジク ロ ロ メ タ ン （ 2 ： 1 ) で溶出し、 溶媒留去 後に乾燥 トルェンで共沸乾燥して、 0. 7 2 2 gの 2 —イ ソブチ リ ルァ ミ ノ ー 9 一 [ 2 —デ才キシ一 5 ( 4 , 4 ' ー ジメ トキシ ト , 5 リ チル） 一 一エ リ ス 口 一ベ ン ト フ ラ ノ シル] — 1 , 9 ー ジ ヒ ド ロー 6 H—プ リ ン一 6 —オ ンの 3 ' — 0— シァノ エチル一 N， N ー ジィ ソプロ ピルホスホ ロ 了 ミ ダイ トを無色アモルフ ァ ス （ リ ン 原子のジァステ レオマ一混合物） と して得た。

N R ( 400MHz, DMS0-d₆)

o δ ppm 6.25 (111, t, J=7.2Hz, 1' - H)

8. 13 (1H, s， 8-H)

11.6 (1H, bs, CONH)

' 12. 1 ΠΗ, bs, CONH

実施例 6 固相法による （L 一 d A ) _sの合成

5 1 "モルのデォキ シアデ ノ シ ンが結合した C P Gカ ラ ム装着

D A合成機に、実施例 2で得られたホスホ πア ミ ダイ ト （ 2 5 0 mg) の容器を接続し、 6 サイ ク ル ）ヌ ク レオチ ド伸長反応を行な つた。 C P Gカ ラ ムより切り出しを行い、 濃ア ンモニア水で脱べ ンジル化し、 これを H P L Cで精製し、 再び 8 0 %酢酸により脱 ト リ チル化した。 これを H P L Cで分取し、 脱塩後凍結乾燥する ことにより 5 ' 末端に D—デォキシアデノ シン （天然型） が結合 している 7量体が得られた。 本品をへビ毒ホスホジエステラ一ゼ で処理し、 H P L Cで分取、 脱塩し、 凍結乾燥することにより化 合物 （L— d A)₆を得た （ 1 5 0 g 8 0 D単位） 。 本品は実： 施例 1の化合物と分光光学的性質 （NMRおよび C Dスぺク ト ル） がー致した。

全く同様にして （ L一 d A) ₁₂ 、 （L一 d T) ₁₂ , (L - d T) _{I 00l} (L - d G) ₁₂ 、 及び （ L一 d C) _{l 2} を合成した。 さらに、 同様 にして L一 AATACTCATACTCTT (：、 L - CTTCTCATACTCATAA. 及び L一 - TGGCCAAGCTを合成した。

表 1 C Dスぺク トルデ一タ

* 溶媒 lOmM Tris (plI7.5) -lOmMMgC ^ ₂

* * 0.01 リ ン酸緩衝液（PH7.0) 実施例 7

実施例 6で製造した （ L一 d G) ₁₂ について、 ポ リ Cとの相互 作用を C Dスぺク ト ルの測定により検討した。 両者の相互作用は 混合物の C D に ) 実測値と相互作用がない場合の C D に ) 計 算値とのずれの存在と、 高温下でのずれの消失によって観測され る。 表 2に示す C Dスペク ト ルデータ （ 1 0 mMト リ ス塩酸 Z 1 0 mM MgCl₂バッファ一中 0. 0 9 mMにて測定 ； セル長 ： 1 mm； mdeg/2 84nm) から、 両者が強く相互作用することが明らかである。 表 2 ( L ~ d G ) , 2 の C Dスぺク ト ル 才 リ ゴマ一 0。c 8 0 t

( L - d G) , 2 一 0. 5 6 一 1. 0 9

ポ リ C 4.4 G 1. 1 1

1:1 混合物 （計算値） 1.9 D 0. 5 1

1:1 混合物 （実測値） 1. 3 1 0.4 7

一 0. 6 - 0.0 4 実施例 8 固相法による （ L D— d A) ,₂ の合成

上記の N—ベンゾィルー Lーデォキシァ ψ J シ ンシァノ ェチル ホスホロア ミ ダイ ト、 及び市販の N—ベンゾィ ルー D—デォキシ アデノ シンシァノ ェチルホスホロ ァ ミ ダイ トを試薬として用い、 自動 D N A合成機 （アプライ ドバイオ シンセ シス社製） により、 天然型 [ ( D— d A) ₁₂]、 本発明の光':: '一対掌体 D N Aである [ ( L一 d A) ₁₂]、 及び D— d A及び L— d Aを交互に含む本発 明のメ ソ型 D N A [ ( L - d A p ) — d A ] 6 ( I,ーデォキシアデ 二ルー D—デォキシアデニル酸のへキサマ一 ： （ L I)一 d A ) , ₂ と略記する） を製造し、 高速液体ク πマ トグ：ソ フ ィ 一で生成した _c ( D - d A) i 2 の C Dスぺク ト ルは （ L一 d A) _{1 2} の C Dスぺク ト ルと正負が逆の同一形状のスぺク ト ルを与えたが、 （ L D — d A) .₂ はフラ ッ トなスぺク トルを与えた。 また、 （D— d A) き を標準として用い、 酵素により対応するモノ マーに加水分解した

5 後に定量した値から、 ドデカマーのモル吸光係数は ε 2 S 0 = 9 ,

7 0 0であると推定された。 さらに同様にして （L D— d Τ) , 2 を製造した。 ' - 実施例 9 ホモポリ ヌク レオチ ドと本発明の L 一ォ リ ゴデォキシ . リボヌクレオチ ドとの相互作用 （混合曲線）

,o ( L一 d A ) ₆、 ポ リ U及びポ リ dT の各々の 0. 1 mM溶液 （ 1 ひ mM Tris (PH 7.4) - 1 0 m MgC^ ₂)を作成し、 種々の量比の混合 液を作った。 これらを 8 0 t:で 1 0分加熱し、 次いで、 0 で 2 時間冷却したのち、 0 tで紫外部 （ 2 6 0 ntn) の吸光度 〔 A〕 を 測定した。 対照のために天然のデォキシアデノ シン （ D— d A) _e

, 5 についても同様に行なった。 第 1図に （ L _ d A ) _sとポ リ Uとボ リ （A ) とポ リ dT との混合曲線、 第 2図に （D— d A ) _sとポ リ Uとポ リ （A ) とポリ dT との混合曲線を示す。 ·. 第 1図及び第 2図に示された結果は、 本発明の L—ォ リ ゴデォ キシリボヌクレオチ ドである （ L — d A) _sが、 Poly dTとは相互 0 作用を示さず、 一方、 PolyUとは （D— d A) sと同等に相互作用 を有することを示す。 屈曲点における ヒ ポク ロ ミ シテ ィ 一は約 2 0 %であった。 従って、 （L 一 d A ) ₆が R N Aとのみ結合する. ことが明らかで ¾る。 同様にして （ L一 d A) ₁₂ の混合曲線 （ 0 V ) を測定した。 第 3図に示された結果から、 （L 一 d A) _{l 2} が 2低温において D N A及び R N Aの両者と相互作用することが明ら かである。 ^¾ 実施例 1 0 ホモポ リ ヌ ク レオチ ドと本発明の L D—オ リ ゴデォ キシ リ ボヌク レオチ ドとの相互作用 （混合曲線）

実施例 9 と同様にして、 実施例 7で製造した （ L D— d A) ₁₂ とポ リ U又はポ リ d Tとの相互作用を検討した。 第 4図に示され た結果から、 天然型の （D— d A) ₁₂ と同様に、 本発明の （ L D - d A) ₁₂ がポ リ U及びポ リ d Tの両者と相互作用することが明 らかである。 なお、 最大ヒポク ロ ミ シティ は約 3 0 %であった。 ( L D— d A ) , ₂ はその他のホモポ リ ヌク レオチ ドと ヒポク ロ ミ シティを示さなかったので、 本発明の （ L D— d A) ₁₂ とホモポ リ ヌク レオチ ドとの相互作用が相補的配列に特異的であることが

D 明らかである。

実施例 1 1 ホモポ リ ヌク レオチ ドと本発明の L一オ リゴデ才キ シ リ ボヌ ク レオチ ドとの相互作用 （融解曲線）

( L一 d A とポ リ U ( 1 ： 2 ) の 0. 1 mM溶液 （ 1 0 mM Tr is (pli 7.4) — 1 0 MgC 2)、 及び （ L一 d A ) 6とポ リ dT ( 1

5 ： 1 ) の 0. 1 mM溶液 （ 1 O mM Tr is(_PH 7.4) — 1 ϋ mM MgC ₂)を、 8 0 °Cで 1 0分加熱し、 4 °Cで一夜、 0 tで 2時間放置後、 紫外 吸収スぺク ト ルのセルを恒温器で徐々に加温しながら、 2 6 0 nm の吸光度 〔A〕 変化を測定した。 対象と して天然型の（D— d Α) _ε についても同様に測定した。

。 第 5図及び第 6図に各複合体の吸光度一温度変化を示す。 第 5 図に示された結果から、 本発明の L一才 リ ゴデォキシリボヌク レ ォチ ドである （ L一 d Α) ₆とポ リ Uの複合体が 3 0 :より急激な 吸光度増加を示すことがわかる。 尚、 Tm値は 3 2. 5 :であ た。 一方 （ L— d A) ₆とポ リ dTの混合体このような現象が認められな

5 かった。 天然型である （D— d A) ₆はポ リ U及びポ リ dTについて えられた結果を第 6図に示す。

実施例 1 2 ホモポ リ ヌ ク レオチ ドと本発明の L D ― ォ リ ゴデ才 キシ リ ボヌク レオチ ドとの相互作用 （融解曲線）

実施例 1 1 と同様にして、 （ L D— d A ) , ₂ とポ リ Uまたはポ リ d Tを用いて融解曲線を求めた。 （ L D _ d A) _{l 2} とポリ U、 及び （ L D— d A) ,₂ とポ リ d Tの複合体は、 それぞれ 6 1. 5 : と 5 0. 5 °Cの単一の融点を示した （第 7図及び第 8図参照） 。 こ の結果からも、 本発明の ( L D - d A) , 2 がポ リ Uとポリ d丁の 両者と相互作用することが明らかである。 同様の条件で測定した 各種複合体の融点を以下の表 3に示す。

表 3 ドデカマーとホモポ リ ヌク レオチ ドによる

複合体の融点 （Tm ： ）

実施例 1 3 ホスホジエステ ラ ーゼによる加水分解

( L - d Α) 6 ( 0. 3 3 4 〃モルー酢酸ア ンモニゥ ム緩衝液中、 pH6. 5 ) にゥ シ脾臓ホスホジエステラ一ゼ 0. 3 7ユニッ トを加え 3 7 tで 2 6 0 nmにおける吸光度変化を測定した。 第 9図に示し た結果より、 本発明の Lーォ リ ゴデ才キシ リ ボヌク レオチ ドは酵 素によってほとんど加水分解されないことが明らかである。

実施例 1 4 ホスホジエステラ ーゼによる加水分解

実施例 7で製造した （D— d A) ₁₂ 、 ( L - d A) , 2 、 及び ( L D - d A) _{1 2} に対し、 酢酸ア ンモニゥム緩衝液中 （PH6. 5 ) でゥ シ薛臓ホスホジエステラーゼ （ B S P、 2 5 U ml) を、 若 しく は重炭酸アンモニゥム緩衝液中 （PH 9 ) でへビ毒ホスホジェ ステラ一ゼ （ S V P、 2. 5 UXml) を作用させ、 3 7 °Cで 2 6 0 n mにおける吸光度を測定して加水分解の程度を調べた。 得られ た結果を第 1 0図に示す。 （ D— d A) ₁₂ はゥシ腠臓ホスホジェ ステラ一ゼ （B S P ) により 4 0分間で完全に加水分解されたが、 ( L D— d A) ,₂ はゥシ滕臓ホスホジエステラーゼ（B S P )によ 5 つて全く加水分解されず、 へビ毒ホスホジヱステラーゼ （ S V P) によってはほとんど加水分解されなかった。

さ らに、 （ L D— d A ) , ₂ にへビ毒ホスホジエステラーゼを

2 4時間させた後に高速液体ク 口マ トグラフィ一により分析した ところ、 （ L D— d A) _{l 2} が部分的に加水分解されて 4一 1 0量 ,₀ 体である （ L D— d A) _n ( nは 4 一 1 0の整数） を与えること が確認された。

産業上の利用可能性

本発明のォ リ ゴデォキシリ ボヌク レオチ ドは、 生体内でホスホ ジエステラーゼに対して安定であり、 かつ相補的核酸に特異的に , 5 結合するのでア ンチセ ンス D N Aと して有用である。 特に、 医療 や生物学的研究に有用であり、 例えば抗ゥィルス剤と しての用途 が期待される。

Claims

請 求 の 範 囲

1. 2 —デォキシー L一エ リ ス口—ベン ト一スと核酸塩基とが

一配位したヌクレオ シ ドの 5'— リ ン酸エステルが 3，→5'ホスホ ジエステル結合したォ リ ゴヌク レオチ ドを含むォ リ ゴデォキシ

5 ヌク レオチ ド。

2. 2 —デォキシ一 L一エ リ スロ ーペン ト ースと核酸塩基とが

一配位したヌ ク レオシ ドの 5'— リ ン酸エステルが 3'→5'ホスホ ジエステル結合したオ リ ゴヌク レオチ ドを含み、 該オ リゴヌク レ才チ ドと相補的な塩基配列を含む天然型才 リ ゴヌク レオチ卞 -

, ₀ と特異的に結合するオ リ ゴデォキシリ ボヌク レオチ ド。

3. 該相補的な塩基配列を含む天然型ォ リ ゴヌク レオチ ドが R N

Aである請求項 2記載のォ リ ゴデ才キシリボヌク レオチ ド。 -

4. 該相補的な塩基配列を含む天然型 D N Aには実質的に結合し ない請求項 3記載のオ リ ゴデォキシリ ボヌク レオチ ド。

, 5 5. 2 —デォキシー D— リ ボースと核酸塩基とが 一配位したヌ

ク レオシ ドの 5' — リ ン酸エステルと、 2 —デォキシー L一エ リ スローペン ト ースと核酸塩基とが 一配位したヌク レオシ ドの

5' 一 リ ン酸エステルとが、 交互に 3'→5'ホスホジエステル結合 したォ リ ゴヌク レオチ ドを含むォ リ ゴデォキシヌク レオチ ド。 . 0

6. 2—デォキシー D— リボースと核酸塩基とが； 9 一配位したヌ

ク レオシ ドの 5，一リ ン酸エステルと、 2 —デォキシー L—エ リ ス ロ ーペ ン ト ースと核酸塩基とが 一配位したヌク レオシ ドの 5，一 リ ン酸エステルとが、 交互に ，→5'ホスホジエステル結合 したォ リゴヌク レオチ ドを含み、 該ォ リゴヌク レオチ ドと相補 5 的な塩基配列を有する天然型ォ リ ゴヌク レオチ ドと特異的に結

合するオ リ ゴデォキシ リ ボヌク レオチ ド。

7. 該相補的な塩基配列を含む天然型 R N A及び相補的な塩基配 列を含む天然型 D N Aに結合する請求項 6記載のォ リ ゴデォキ シ リ ボヌ ク レオチ ド。

8. 下記の式で示されるホスホロア ミ ダイ ト誘導体 （式中、 Bは 保護基を有することもある核酸塩基を示し、 Rはシァノ エチル 基又は低級アルキル基を示し、 Xは保護基を有することもある ア ミ ノ基を示し、 Yは水酸基の保護基を示す） 。

9. 6 —べ ンゾィ ルア ミ ノ ー 9 — 〔 2 —デォキ シー 5 — ( 4 , 4 ' ージメ トキシ ト リチル） 一 一 L 一エ リ ス 口 一ペ ン ト フ ラ ノ シル〕 一 9 Η—プ リ ンの 3 ' — 0 — シァノ エチルー N， N — ジ ィ ソプロ ピルホスホロ ア ミ ダイ ト誘導体。

10. 1 一 〔 2 —デォキ シー 5 — ( 4 , 4 ' ー ジメ ト キ シ ト リ チル） 一 — L 一エ リ ス ロ ヒベン ト フ ラ ノ シル〕 ― 5 —メ チルー 2， 4 ( 1 H ， 3 Η ) 一 ピ リ ミ ジ ンジオ ンの 3 ' 一 0— シァノ ェチ ルー λ^τ， Ν — ジィ ソプロ ピルホスホロ ァ ミ ダィ ト誘導体。

11. 6 —べンゾィ ルア ミ ノ ー 1 一 〔 2 —デォキ シー 5 - ( 4 , ' ー ジメ ト キ シ ト リ チル） 一 一 L —エ リ ス 口 ^ン ト フ ラ ノ シ ル〕 一 2 ( 1 Η ) 一 ピ リ ミ ジノ ンの 3 ' — 0 — シァノ エチゾレー Ν , Ν ジィ ソプロ ピルホスホ ロ ア ミ ダイ ト誘導体。

12. 2 -ィ ソ ブチ リ ルア ミ ノ ー 9 — 〔 2 —デ才キ シー 5 — ( 4 , 4 ' ー ジメ トキシ ト リチル） 一 一 L 一エ リス ロ ーペン ト フ ラ ノ シ レ 〕 — 1 ， 9 — ジ ヒ ドロ 一 6 H —プ リ ン一 6 —オ ンの 3 ' 一 シァノ ェチル一 N， N― ジィ ソプロ ピルホスホ ロア ミ ダイ ト 誘導体。

13. 6 —イ ソプチ リ ルア ミ ノ ー 1 一 〔 2 —デォキ シ一 5— （ 4 ，

4 ' ージメ ト キ シ ト リ チル） 一 一 L一エ リ スロ ーペン ト フ ラ ノ シル〕 一 2 ( 1 H ) 一 ピ リ ミ ジノ ンの 3 ' — シァノ エチル一 N , N— ジイ ソプロ ピルホスホロ ア ミ ダイ ト誘導体。

5 14. 6— ( N , N— ジメ チルア ミ ジノ ） 一 9— 〔 2 —デォキ シー

5— （ 4 ， 4 ' ー ジメ ト キ シ ト リ チル） 一 ^一 ； L一エ リ スロ ー ベン ト フ ラ ノ シル〕 一 9 H—プ リ ンの 3 ' —〇一 シァノ エチル . - , N— ジイ ソプロ ピルホスホ σ ア ミ ダィ ト誘導体。 , ,

15. 2— ( Ν , Ν— ジメ チルア ミ ジノ ） 一 9 — 〔 2 —デォキ シ一

, 0 5 — （ 4 ， 4 ' — ジメ ト キ シ ト リ チル） 一 /5— L一エ リ スロ ー

ペン トフ ラ ノ シル〕 一 1 ， 9 ー ジ ヒ ドロ一 6 Η—プ リ ン一 6— オ ンの 3 ' — シァノ エチルー Ν， Ν— ジイ ソプロ ピルホスホロ ァ ミ ダイ ト誘導体。

16. 2 —デォキシー L 一エ リ ス ロ ーベン ト 一スと核酸塩基とが

, 5 一配位したヌ ク レオ シ ドの 5' — リ ン酸エステルが 3'→5， ホスホ

ジエステル結合したオ リ ゴヌ ク レオチ ドを含むオ リ ゴデォキ シ リボヌ ク レオチ ドの製造方法であって、

(a) 固相に固定されたデォキシリボヌク レオシ ド又は固相に固

定されたオ リ ゴデ才キ シ リ ボヌ ク レオチ ドの末端ヌク レオ シ

0 ドに、 請求項 8記載のホスホロア ミ ダイ ト誘導体を反応させ

てヌ ク レオチ ド結合を形成させる第 1工程 ； 5 ' —永酸基を ァシル化する第 2工程 ； 及びリ ンを酸化する第 3工程を含む ヌ ク レオチ ド結合形成工程 ；

(b) 工程 (a)で得た固定化ヌ ク レオチ ドの 5 ' —保護基を除去しし 5 た後に請求項 8記載のホスホロ ア ミ ダイ ト体を用いて上記 :

程 (a)の第 1工程ないし第 3工程までを行うヌ ク レオチ ド伸長 工程 ； (c) 必要により工程 (b)を繰り返す工程 ； 及び、

(d) 得られた固定化保護ォ リ ゴデォキシ リ ボヌ ク レオチ ドのホ スホロア ミ ダイ ト部分の保護基の離脱及び固相からの切断を 行う工程 ； ォ リ ゴデォキシリ ボヌク レオチ ドの塩基部分の保

5 護基を除去する工程 ； 及び、 5 ' —保護基を除去する工程を 含む保護基除去工程

を含む方法。

17. 固相に固定されたデォキシリ ボヌク レオシドが天然型ヌク レ ォシ ドである請求項 1 6記載の方法。

, ο 18. 固相に固定されたオ リ ゴデ才キシリ ボヌク レオチ ドが天然型 ヌク レオチ ドである請求項 1 6記載の方法。

19. 得られた才 リゴデ才キシ リ ボヌク レオチ ドにホスホジエステ ラ一ゼを作用させて天然型ォ リゴデォキシヌ ク レオチ ドまたは 天然型ヌク レオシ ドを除去する工程を含む、 請求項 1 7または

, 5 1 8に記載の方法。

20. 2 —デォキシ一 D— リ ボースと核酸塩基とが 一配位したヌ ク レオ シ ドの 5' — リ ン酸エステルと、 2 —デ才キ シ一 L --エ リ ス ロ ーペ ン トース と核酸塩基とが 一配位したヌ ク レオ シ ドの

5'— リ ン酸エステルとが、 交互に 3'→5， ホスホジエステル結合 0 したオ リ ゴヌ ク レオチ ドを含むォ リ ゴデ才キ シヌ ク レオチ ドの 製造方法であって、

(a) 固相に固定されたデ才キシリ ボヌク レオ シ ド又は固相に固 定されたォ リ ゴデォキ シ リ ボヌ ク レオチ ドの末端ヌ ク レオ シ ドに、 請求項 8記載のホスホロア ミ ダイ ト誘導体を反応させ 5 てヌ ク レオチ ド結合を形成させる第 1工程 ； 5 ' —水酸基を 了 シル化する第 2工程 ； 及びリ ンを酸化する第 3工程を含む ヌク レオチ ド結合形成ェ禾 A ； - ' - ' ^W" /01704 PCT/JP91/01007

- 4 6 -

(b) 工程 (a)で得た固定化ヌク レオチ ドの 5 ' —保護基を除去し

た後に天然型ヌク レオ シ ドのホスホロア ミ ダイ ト体を用いて 工程 (a)の第 1工程ないし第 3工程までを行った後、 請求項 8 記載のホスホ口アミ ダイ ト体を用いて工程 (a)の第 1工程ない し第 3工程までを行うヌク レオチ ド伸長工程 ；

(c) 必要により工程 (b)を繰り返す工程 ； 及び、

(d) 得られた固定化保護オ リゴデォキシヌク レオチ ドのホスホ

πアミ ダイ ト部分の保護基の離脱及び固相からの切断を行う 工程 ； ォ リゴデ才キシリ ボヌク レオチ ドの塩基部分の保護基 を除去する工程 ； 及び、 5 ' —保護基を除去する工程を舍む 保護基除去工程を含む方法。

21. 固相に固定されたヌク レオシ ドが天然型ヌク レオシドである

請求項 2 0記載の方法。

22. 固相に固定されたォ リ ゴデォキシ リ ボヌク レオチ ドが天然型

ヌク レオチ ドである請求項 2 0記載の方法。

23. 得られたォ リ ゴデォキシ リ ボヌク レオチ ドにホスホジエステ

ラーゼを作用させて天然型ォ リ ゴデォキシリ ボヌク レオチ ドま たは天然型ヌク レオシドを除去する工程を含む、 請求項 2 1又 は 2 2に記載の方法。

24. 2 —デォキシー L一エ リ スロ ーペン ト 一スと核酸塩基とが） 9

—配位したヌク レオシ ドの 5， 一 リ ン酸エステルが 3，→5，ホスホ ジエステル結合したオ リ ゴヌク レオチ ドを含むォ リ ゴデォキシ ヌク レオチ ドを含む遺伝子発現調節剤。

25. 2—デォキシー D— リボースと核酸塩基とが 一配位： たヌ

ク レオ シ ドの 5 ' — リ ン酸エステルと、 2 —デォキシ一 τ 一エ リ スローペン ト―スと核酸塩基とが 一配位したヌク レオ シ ドの

5' 一 リ ン酸エステルとが、 交互に 3'→5'ホスホ ジエステル結合 したォ リ ゴヌク レオチ ドを含むォ リ ゴデォキシヌ ク レオチ ドを 含む遺伝子発現調節剤。

26. 2 —デォキシ— L — エ リ ス ロ ーペ ン トースと核酸塩基とが ? 一配位したヌ ク レオ シ ドの 5'— リ ン酸エステルが 3'→5，ホスホ ジエステル結合したォ リ ゴヌ ク レオチ ドを含むアンチセンスォ リ ゴデォキシヌク レオチ ド。

27. 2—デ才キシ一 D— リボースと核酸塩基とが^—配位したヌ ク レオ シ ドの 5' — リ ン酸エステルと、 2 —デォキシ一 L —エ リ スローペン ト ースと核酸塩基とが; 9—配位したヌク レオ シ ドの

5'— リ ン酸エステルとカ 、 交互に 3'—5'ホスホジエステル結合 したォ リ ゴヌ ク レオチ ドを含むアンチセ ンスォ リ ゴデォキシヌ ク レオチ ド。