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WO1991013081A1 - Physiologically active substance well capable of permeating biomembrane - Google Patents

Physiologically active substance well capable of permeating biomembrane Download PDF

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WO1991013081A1
WO1991013081A1 PCT/JP1991/000256 JP9100256W WO9113081A1 WO 1991013081 A1 WO1991013081 A1 WO 1991013081A1 JP 9100256 W JP9100256 W JP 9100256W WO 9113081 A1 WO9113081 A1 WO 9113081A1
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WO
WIPO (PCT)
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residue
ada
leu
dissolved
phe
Prior art date
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Ceased
Application number
PCT/JP1991/000256
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Kouki Kitagawa
Toru Hibi
Noriko Tsuzuki
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Teikoku Seiyaku Co Ltd
Original Assignee
Teikoku Seiyaku Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Teikoku Seiyaku Co Ltd filed Critical Teikoku Seiyaku Co Ltd
Priority to DE69120397T priority Critical patent/DE69120397T2/de
Priority to EP91905340A priority patent/EP0516851B1/en
Publication of WO1991013081A1 publication Critical patent/WO1991013081A1/ja
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Ceased legal-status Critical Current

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    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D207/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D207/18—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member
    • C07D207/22—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D207/24—Oxygen or sulfur atoms
    • C07D207/26—2-Pyrrolidones
    • C07D207/263—2-Pyrrolidones with only hydrogen atoms or radicals containing only hydrogen and carbon atoms directly attached to other ring carbon atoms
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    • C07K14/665—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans derived from pro-opiomelanocortin, pro-enkephalin or pro-dynorphin
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    • C07K14/702—Enkephalins with at least 1 amino acid in D-form
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
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    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
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    • C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
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    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C2603/00—Systems containing at least three condensed rings
    • C07C2603/56—Ring systems containing bridged rings
    • C07C2603/58—Ring systems containing bridged rings containing three rings
    • C07C2603/70—Ring systems containing bridged rings containing three rings containing only six-membered rings
    • C07C2603/74—Adamantanes

Definitions

  • the invention relates to biomembrane permeability, more specifically the blood-brain barrier.
  • BBB blood pressure
  • This relates to a highly permeable physiologically active substance. Since the physiologically active substance of the present invention has high BBB permeability, sufficient physiological activity in the brain can be obtained even by simple subcutaneous administration or intravenous injection by intracerebroventricular administration. It is useful.
  • Morphine an obioid alkaloid contained in poppy, has been known for a long time to have a powerful analgesic effect, and has been used for the purpose of relieving severe pain typified by terminal cancer. I came.
  • morphine has the disadvantages that its use is quite limited and difficult to use, because it has side effects such as addiction and dependence, respiratory depression, and constipation. Therefore, there is a strong demand for the development of an analgesic that has an analgesic effect equal to or higher than that of morphine and that is not addictive like morphine.
  • the bioactive substance having good biomembrane permeability according to the present invention has a general formula
  • X 1 and X 2 are the same or different and are an ether bond, a ⁇ tan bond, an ester bond, or an amide bond
  • ⁇ is a lower alkylene group
  • R is a peptide, amino acid
  • the gist is that it is represented by
  • the physiologically active substance of the present invention has an adamantyl group introduced therein, so that it is possible to enhance the 88 88 permeability of a poorly bioactive substance having 88 8 permeability. Became. Therefore, it has been shown that enkephalins, which had no analgesic effect unless administered directly into the ventricle in the past, can be administered by subcutaneous injection.
  • physiologically active substance used in the present invention examples include peptides such as enkephalin, thyrotropin-releasing hormon, adrenal cortex-stimulating hormon, cholestokinin, P-substance, and GRP.
  • Amino acids such as methotrexate pericoborin and the like, aliphatic amines having a phenol skeleton such as norepinephrine and dopamine, dounorubicin, and Examples include aminosugars such as driamycin and doxorubicin, nucleosides such as zidovudine, and lactam compounds such as 2-pyrrolidone. .
  • one or more arbitrary positions of the adamantyl group may be substituted with one or more groups that enhance the BBB permeability of the physiologically active substance.
  • Specific groups include a lower alkyl group such as a methyl group and an ethyl group, a hydroxy group, a lower alkoxy group, an amino group, a carboxyl group, and a carboxy lower alkyl group.
  • the adamantyl group was added to substances with poor BBB permeability by By introducing the drug, it is possible to increase the BBB permeability, and by subcutaneous injection of enkephalins, etc., which previously had no analgesic effect unless administered directly into the ventricle The possibility was shown.
  • Figure 1 shows the structural formulas of enkephalin derivatives (prototypes ad).
  • Figure 2 is a graph showing the measured results of the in vivo analgesic activity of derivative a.
  • Figure 3 is a graph showing the results of measuring the in vivo analgesic activity of derivative b.
  • Fig. 4 is a graph showing the in vivo analgesic activity of morphine hydrochloride.
  • Fig. 5 is a graph showing the measurement results of the in vivo analgesic activity of the control.
  • the present inventors have conducted various studies for the purpose of improving the BBB permeability of the enkephaline derivative, and as a part of the studies, have tried to introduce an adamantyl group to increase the lipophilicity.
  • Z-Tyr (Bzl) -D—Ala-Gly—NHNH 2 and H-Phe-Leu-0-Ada were synthesized, and both were condensed by the azide method, and the N-terminal protected benzene was synthesized.
  • the peptide was obtained and then deprotected by catalytic reduction to obtain the derivative a.
  • H-Phe-Leu-NH-Ada was used instead of H-Phe-Leu-0-Ada, and the same treatment as in (A) above was performed to obtain derivative b.
  • GABA r-aminobutyric acid
  • D-Ala D-Alanine Z: Ben ziroxycarbonyl
  • NHAda 1-Adamantilla Mino
  • the thin-layer chromatographic (TLC) uses silica gel and the solvent system is as follows.
  • Rf 4 CHCI3: MeOH (50: 1)
  • the residue was dissolved in ethyl acetate and washed sequentially with a 10% aqueous solution of citric acid, a 5% aqueous solution of sodium carbonate, a saturated saline solution, and water. After drying over sodium sulfate, ethyl acetate was distilled off, and petroleum ether was added to the residue to form a powder. After filtration, the residue was recrystallized from ethyl acetate-petroleum ether.
  • Z-Phe-Leu-NHAda (1.00 g, 1.83 mmol) was dissolved in THF (20 ml), and 2 drops of acetic acid and 5% palladium on carbon (lg) were added thereto, and the mixture was contacted for 4 hours. After removing the catalyst by filtration, the solvent was distilled off, and the residue was dissolved in DMF (50 ml).
  • An azide component prepared from Z-T yr (B z 1)-D ⁇ A 1 a-G 1 y-NHNH 2 (1.30 g, 2.38 mmol), and triethylamine (0.70 ml, 2.38 mniol) ) And stirred at 4 with 24 hours.
  • the residue was dissolved in ethyl acetate and washed sequentially with a 5% aqueous sodium carbonate solution, a 10% aqueous citric acid solution, a saturated saline solution and water. After drying over sodium sulfate, ethyl acetate was distilled off. Further, the residue is dissolved in a black mouth form, and the black form-methanol (20: 1) is used as a liquid. Purification was performed in a single step to obtain an oily substance showing one spot.
  • Z-Tyr (Bzl) -DAl a-Gly-P e-Leu-O- (CH 2 ) 2 -Ada (287 mg, 0.3 mmol) is dissolved in 10 ml of acetic acid, and 5% palladium on carbon 1 g And catalytically reduced for 5 hours. After removing the catalyst by filtration, the filtrate was diluted with water and freeze-dried. Dissolve the lyophilized product in 5% acetic acid, place it on a column of Daion HP-20, wash with 5% acetic acid (200 ml), and wash with 5% acetic acid (200 ml). The main fraction was eluted by a gradient elution consisting of nitrile (20 O ml), concentrated and lyophilized to obtain white feather-like crystals.
  • the adamantyl-enkephalin derivatives a and b obtained from Examples 1 and 2 have analgesic effects in vivo and contraction of the isolated guinea pig intestinal tract by electrical stimulation in vitro. The inhibitory effect on was examined.
  • the adamantyl-enkephalin derivatives a and b are administered subcutaneously to mice to demonstrate the central analgesic effect of Randal Celite. (Randal 1 Selitto) method. That is, the derivatives a and b were dissolved in a mixture of DMA: saline (4: 6), and about 100 ⁇ l thereof was subcutaneously administered to a mouse (dd-Y tea; about 20 g) (l 5050 mg / kg), and the analgesic effect was measured by the Randal celite method at a certain time after administration.
  • Randal Celite Randal 1 Selitto
  • Morphine hydrochloride was used as a comparative drug, and [D-Ala 2 ] roycine enkephalin, 1-adamantanol, physiological saline, and physiological saline were used as controls.
  • Derivatives a and b in which an adamantyl group was introduced at the C-terminal side, showed analgesic activity that was inferior to morphine hydrochloride but superior to control.
  • Derivatives a and b showed contraction inhibition, and both were antagonized by naloxone. In other words, it was found that these derivatives had morphine-like activity even when an adamantyl group was introduced.
  • AZT anti-viral chemotherapeutic agent zidovudine
  • Ada-COOH (135 mg, 0.8 mmo 1) was dissolved in DMF (1 O ml), and AZT (100 mg, 0.37 mmol), DCC (162 mg, 0.79 mmol), 4,4-dimethylamino pyridine was added under ice cooling. (69 mg, 0.56 mniol) and stirred at 4 "C for 48 hours. After filtering the formed urea derivative, DMF was distilled off under reduced pressure, and ethyl acetate was added to the residue to dissolve the residue.
  • the mixture was washed three times with sodium hydrogen carbonate, saturated saline, and water three times, and the ethyl acetate layer was dried over sodium sulfate, and then the solvent was distilled off under reduced pressure.
  • the product was dissolved in ethyl acetate (7: 3) (1 ml) and purified by silica gel chromatography using the same solvent system as eluent. The fractions were collected, the solvent was distilled off under reduced pressure, the residue was triturated with ether, filtered and dried.
  • Ada-CO-Gly-OH was used instead of Ada-COOH, and the final purification was carried out by gel chromatography using eluent of black form-closed form methanol (30: 1). After performing the chromatography, the same treatment as in Example 6 was performed except that the powder was powdered with n-hexane.
  • Example 7 (1) The same treatment as in Example 7 (1) was carried out except that ⁇ -alanine was used instead of glycin.
  • Ada-C0- ⁇ -Ala-OH was used in place of Ada-COOH, and after chromatography, powdered with ether, ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ was treated in the same manner as in Example II ⁇ .
  • Example 7 The same treatment as in Example 7 (1) was carried out except that GABA was used instead of daricin.
  • Example 5 The compounds synthesized as described above (Examples 5 to 10) have an adamantyl group, and are expected to have good BBB permeability and obtain sufficient brain activity. Is done.

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Description

明 細 誊
発明の名称
生体膜透過性が良好な生理活性物質
技術分野
本発明 は生体膜透過性、 よ り 具体的 に は血液脳関門
( B B B ) 透過性の高い生理活性物質に関する ものである。 本発明の生理活性物質は B B B透過性が高いので、 脳室内投 与よ り簡便な皮下投与や静脈注射であっ ても十分な脳内生理 活性を得る こ とができ、 脳に作用する医薬品と して有用であ る。
- 背景技術
ケ シ に含ま れるオ ビオイ ド アルカ ロ イ ド であるモルヒ'ネ は、 古く から強力な鎮痛作用を有する こ と が知られ、 末期癌 に代表される激痛を和ら げる 目 的で利用されて き た。 しか. し、 モルヒ ネ は耽溺性や依存性、 呼吸抑制、 便秘作用等の副 作用を合わせ持っため、 使用がかな り制限され、 且つ使い方 が難しいという欠点を有している。 そ こ でモルヒ ネ と同程度 あるいはそれ以上の鎮痛効果を有し、 且つモルヒ ネのよ う な 耽溺性のない鎮痛薬の開発が強く 求め られている。
—方、 1 9 7 5年に は J . H u g h e sら に よ り 内因性のモルヒ ネ様物 質 （内因性オビ才イ ド ） であるエンケフ ア リ ンが発見され、 モルヒ ネ に代わ り 得る物質と して期待されたが、 エン ケ フ ァ リ ン及びその誘導体は、
( 1 ) ペプチ ドである ため、 体内の酵素によ っ て速やかに分解 される、 (2) Β Β Β透過性が悪いので、 脳内に直接投与する必要があ る、
(3) 内因性物質であるにもかかわらず、 耽溺性や依存性等に ついてはモルヒネ と同様の副作用を持つ、
という欠点を有しているこ とがわかった。
前記エンケフ ァ リ ン類の欠点を克服するために現在も様々 な研究がなされているが、 そのほとんどは i η ν i tro試験又は 脳室内投与実験における、 エンケフ ア リ ン類の鎮痛活性の増 強や副作用の軽減、 並びに生体内酵素分解に抵抗性の高い誘 導体の開発に集中している。 *発明者らはこのよ う な状態に 鑑み、 これまで余り検討されていない B B B透過性の改良を 試みた。 またエンケフ ァ リ ン類の B B B透過性を高めるこ と が出来れば、 他の B B B透過性の悪い物質の B B B透過性も 高めて、 応用範囲が広く なるものと期待された。
δ 発明の開示
本発明に係る生体膜透過性が良好な生理活性物質は、 般 式
( X - ( A ) X 一 R
Figure imgf000004_0001
(但し、 X 1 及び X 2 は同一又は異なってエーテル結合、 ゥ レタ ン結合、 エステル結合、 アミ ド結合であり、 Αは低級ァ ルキ レ ン基であ り 、 m = 0 の と き は n = 0 、 m = l の と き δ n = 0 ま た は 1 で あ る 。 ま た R はペプチ ド 、 ア ミ ノ 酸、 フ ヱノ ール骨格を有する脂肪族ァ ミ ン、 ア ミ ノ 糖、 ヌ ク レオ シ ド或はラクタ ム化合物からなる生理活性物質残基及びこれ らの生理活性誘導体残基である）
で表わされるものである こ と を要旨とする。
上記のよ う に本発明の生理活性物質はァダマ ンチル基が導 入されてお り 、 8 8 8透過性の悪ぃ生理活性物質の 8 8 8透 過性を高める こ とができ るよ う になっ た。 従っ て従来脳室内 に直接投与しなければ鎮痛作用を示さなかっ たエンケフ ァ リ ン類等を皮下注射によ り投与でき る可能性が示された。
本発明 に用い られる生理活性物質と しては例えばエン ケ フ ア リ ン、 チロ ト ロ ビ ン放出ホルモ ン、 副腎皮質刺激ホルモ ン、 コ レシス ト キニ ン、 P —物質、 G R P等のペプチ ド、 メ ト ト レキサー ト ゃロ イ コ ボ リ ン等の ア ミ ノ 酸、 ノ ルェビネ フ リ ン、 ドーパ ミ ン等のフ ヱノ ール骨格を有する脂肪族ア ミ ン、 ダウノ ルビシ ン、 ア ド リ ア マ イ シ ン、 ドキソ ルビシ'ン等 の ァ ミ ノ 糖、 ジ ド ブジ ン等のヌ ク レオ シ ド 、 2 — ピ ロ リ ド ン 等のラクタム化合 等を挙げる こ とができ る。
尚、 本発明においてァダマ ンチル基の任意の位置が生理活 性物質の B B B透過性を高めるよ う な基で 1 つ以上置換され ていてもよい。 具体的な基と してはメ チル基やェチル基等の 低級アルキル基ゃヒ ド ロキシル基、 低級アルコ キシ基、 ア ミ ノ基、 カルボキシル基、 カルボキシ低級アルキル基等が挙げ られる。 しか し、 あ ま り 親水性に傾よ ら ないこ と が望まれ る
太発明によ り B B B透過性の悪い物質に ァダマ ンチル基を 導入する こ と によ っ て B B B透過性を高める こ とが可能と な り 、 従来脳室内に直接投与しなければ鎮痛作用を示さなかつ たエン ケフ ァ リ ン類等を皮下注射によ り投与でき る可能性が 示された。
図面の簡単な説明
第 1 図はエンケフ ア リ ン誘導体 （プロ ト タ イ プ a〜 d ) の 構造式を示す図
第 2図は誘導体 a の in vivo 鎮痛活性の測定結果を示すグ ラ フ
第 3 図は誘導体 b の in vivo 鎮痛活性の測定結果を示すグ ラフ
第 4図は塩酸モルヒ ネ の i n vivo 鎮痛活性の測定結果を示 すグラ フ
第 5 図はコ ン ト ロールの i n vivo 鎮痛活性の測定結果を示 すグラ フ
発明を実施するための形態
本発明者らはエン ケ フ ァ リ ン誘導体の B B B透過性を改善 する 目的で種々検討を行ないその一環と してァダマ ンチル基 を導入し脂镕性を高める こ とを試みた。
ァダマンチル基を導入す.る前のプロ ト タ イ プと して、 ェン ケ フ ア リ ンの N末端か ら 2番目 の Gly を！) -A la に置換した誘 導体
H-Tyr-D-Ala-Gly-Phe-Leu-OH
を用いた。 こ の誘導体はァ ミ ノ べプチダーゼに対する抵抗性 が高く 、 且つ鎮痛作用も増強されている こ とが既に報告され ている誘導体である。
ァダマ ンチル基を上記誘導体に導入した下記の 4種類の誘 導体を合成した （式中 Ada はァダマ ン タ ン残基を示す） 。
(A) H-Tyr-D-Ala-Gly-Phe-Leu-0-Ada ··. a
まず、 Z-Tyr (Bzl) - D— Ala - Gly— NHNH2と H - Phe-Leu-0 - Ada と を合成し、 両者をアジ ド法にて縮合して N -末端の保護され たべ ン タペプチ ド を得、 ついで接触還元に よ る脱保護を行 なっ て誘導体 a を得た。
(B) H-Tyr-D-Ala-Gly-Phe-Leu-NH-Ada ― b
H-Phe-Leu-0-Ada の代わ り に H - P h e - L e u - N H - A d aを用レヽ、 前 記（A) と同様の処理を行なっ て誘導体 b を得た。
(C) H-Tyr-D-Ala-Gly-Phe-Leu-0-CH2-Ada … c
(D) H-Tyr-D-A.la-Gly-Phe-Leu-0- (CH2) 2-Ada - d
H— Phe—し eu— 0— CH2—— Adaま た ίま H-Phe-Leu-0- (CH2) 2-Ada を 用い、 前記（A) と同様の処理を行なっ て誘導体 c 及び d を得 た （第 1 図参照） 。
以下、 各合成ステ ッ プにっ き詳述する が、 本明細窨中に お いて使用される ア ミ ノ 酸残基及び各保護基等の略号は当該分 野での慣用に従い、 下記の略号を使用する。
Tyr ： L -チロ シ ン
Gly ： グ リ シ ン
Phe ： L-フ ヱニルァ ラ ニン
Leu ： L-ロ イ シン
GABA ： rー ァ ミ ノ 酪酸
D-Ala ： D-ァラニン Z ： ベン ジルォキ シカルボニル
Z (OMe) ： P-メ ト キ シベン ジルォキシカ ルボニル
Ada ： 1 ー ァダマ ン チル
Bzl ： ベン ジル
ONp ： P -ニ ト ロ フ エニルエステル
OSu ： N-ヒ ド ロ キシコ ノ、ク酸イ ミ ド エステル
OMe ： メ チルエステル
OAda ー ァダマ ンチルォキシ
NHAda ： 1 - ァダマ ンチルァ ミ ノ
NHNH2 ヒ ド ラ ジ ド
DCC ジシク ロへキシルカルボジィ ミ ド
DBU 1 , 8_ジァザビシク 口 [5， 4 , 0] -7-ゥ ンデセ ン
TFA ト リ フ ルォ ロ 酸
THF テ ト ラ ヒ ド ロ フ ラ ン
DMA ： N , N — ジメ チルァセ ト ア ミ ド
DMAP ： 4.4 ー ジメ チルア ミ ノ ビ リ ジ ン
DMF ： ジメ チルホルム ア ミ ド
また、 薄層ク ロ マ ト グラ フ ィ ー （TLC) はシ リ カ ゲルを用い 溶媒系は次の通り である。
Rf！ = CHC13 ： MeOH ： H20 ( 8:3:1)
Rf 2 = CHCla ： MeOH (10: 1)
Rf a = CHCls ： MeOH (20: 1)
Rf 4 = CHCI3 ： MeOH (50: 1)
Figure imgf000008_0001
実施例 1 H-Tyr-D*Ala - Gly - Phe - Leu-OAdaの製造
① Z-Leu-OAdaの製造
Z-Leu-OH (3. OOg, 11.3πιπιο1)を塩化メ チ レ ン （30 ml) に溶か し、 ァダマ ンタ ン一 1 一オール （1.9s, 12.4mraol) ,DCC (2.60g， 11.4mmol) , 及び DMAP (0.15 g , 1.24mino 1 )を加えて、 4 :で 72 時間攪拌した。 生成した ゥ レ ア誘導体を濾過で除いたのち、 溶媒を留去 した。 残渣を酢酸ェチルに溶解し、 酢酸ェチル層 を 5 %炭酸ナ ト リ ウ ム水溶液、 10%ク ェ ン酸水溶液、 飽和食 塩水及び水で順次洗浄した。 硫酸ナ ト リ ウムで乾燥後、 酢酸 ェチルを留去した。 更に残渣をク ロ 口ホルム に溶か し、 シ リ 力 ゲルカ ラ ム ク ロ マ 卜 グラ フ ィ 一 にて精製 し た。 ク ロ 口 ホル ム溶出画分から单一スポッ ト を示す油状物を得た。
収量 3.10g (69%)
② Z-Phe - Leu-OAdaの製造
Z-Leu-0Ada (6.20g, 15.5mmol) T H F (30ml) に溶か し、 酢 酸 2滴を加え、 5 %パ ラ ジウム一炭素 （2. Og)を加えて 2時間 水素ガスを通じた。 パ ラ ジ ウ ム一炭素を濾過で除いたのち濾 液を濃縮し、 残渣を DMF (70ml) に溶かした。 こ の溶液に ト リ ェチル ァ ミ ン （2.14ml， 15.5 01) , Z-Phe-0Np (4. B4g, 15.5 mmol) .を加えて 4 8時間攪拌した。 DMF を留去後、 残渣を酢 酸ェチルに溶かし、 10%ク ェ ン酸水溶液、 5 %炭酸ナ ト リ ウ ム水溶液、 飽和食塩水、 水にて順次洗浄した。 硫酸ナ ト リ ウ ム で乾燥後、 酢酸ェチルを留去した。 更に残渣をク ロ 口ホル ム に溶かし、 ク ロ 口ホルムを溶出液とするシ リ 力ゲルカ ラム ク ロ マ ト グラ フ ィ ー に よ り 、 単一スポ ッ ト を示す油状物を得 „ た。
収量 4.25s (51%)
③ Z (OMe) -D-Ala-Gly-0 eO$¾5t
Z (OMe) - D-Ala-OH (5.06 g , 2 Ommo 1 ) を DMF に溶力、し、 卜 リ エ チルァ ミ ン （3.04ml， 22minol) , イ ソ ブチルク ロ 口 ホルメ ー ト (2.88ml ,22mmol) から混酸無水物を調製した。 Η-Gly-OMe·塩 酸塩（2.07g, 16.5mmol) を DMF (20ml) に镕かし、 ト リ ェチル ァ ミ ン （2.30ml , 16.5mmol) で中和した。 両液を混和し、 氷？令 下で 2時間攪拌した。 DMF を留去後、 残渣を酢酸ェチルに溶 かし、 10%クェン酸水溶液、 5 %炭酸ナ ト リ ウム水溶液、 飽 和食塩水、 水で順次洗浄した。 硫酸ナ ト リ ウ ム で乾燥後、 酢 酸ェチルを留去し、 残渣にエーテルを加えて粉末と した。 粉 末を濾取後、 酢酸ェチル -エーテルか ら再結晶した。
収量 3.10g (58%) 融点 99-101 で
Rf 1 0.75
元素分析 C15 H2oN206
計算値 ： C 55.55 ,Η 6.22.Ν 8.64
実測値 ： C 55.41 ,Η 6.34 , Ν 8.68
④ Ζ - Tyr (Bzl) - D«Ala - Gly - OMeの製造
Z (0Me) -D-Ala-Gly-0Me (3.00g,9.25mmol) に、 氷 令下 TFA (6.0ml) — ァニソ一ル （1.5ml) を加えて 1 時間攪拌した。 TFA を留去したのち、 残渣を DMF (30ml) に溶かし、 ト リ ェチ ルァ ミ ン （1.28ml , 9.25画 1) で中和 し た。 Z-Tyr (Bzl) -OH (3.81g, 11.lmmol) ^ DMF (40ml) に溶解し、 N — メ チルモルホ リ ン .34 ra 1 , 12.2 m m 01 ) , イ ソ ブ チ ル ク ロ ロ ホ ル メ ー 卜 (1.60ml , 12.2imol) から調製した混酸無水物を加えて氷冷下 2時間攪拌した。 DMF を留去した後、 残渣を酢酸ェチルに溶 か し、 10%ク ェン酸水溶液、 5 %炭酸ナ ト リ ウ ム水溶液、 飽 和食塩水、 水で順次洗浄した。 硫酸ナ ト リ ウ ム で乾燥後、 酢 酸ェチルを留去し、 残渣にィ ソブロ ビルエーテルを加えて粉 末 と し た。 濾取後、 メ タ ノ ール - エーテルか ら再結晶 し た。
収量 3.31g (65%) 融点 157-161 :
f！ 0.81
兀 分 ίΠ" C 30 H33 N 3 O 7
計算値 ： C 65.80 ,Η 6.07 , Ν 7.67
実測値 ： C 65.33 ,Η 6.06 , Ν 7.60
⑤ Ζ - Tyr (Bzl) -!)《Ala - Gly - ΝΗΝΗ2の製造
Z-Tyr (Bzl) -D-Ala-Gly-0Me (3.20s.5.8mmol) ¾· DMF (40ml) に溶か し、 80%抱水 ヒ ド ラ ジ ン （3.60 ml .58mmol) を加え て 2 4時間攪拌した。 DMF を留去後、 残渣にエタノ ールを加え て粉末と した。 濾取後、 DMF-エタ ノ ールか ら再結晶した。
収量 3.15g (98%) 融点 171-174 t
Rf 1 0.61
元素分析 C 29 H 33 N 506 · H 2 D
計算値 ： C 61.58 , H 6.24 , K 12.38
実測値 ： C 61.73 ,Η 6.06 , Ν 12.86
(DZ-Tyr (Bzl) -D-Ala-Gly-Phe-Leu-OAda の製造
Z-Phe-Leu-0Ada (l .00g, 1.83mmol) ¾- - ト ラ ヒ ド π フ ラ ン (20ml)に溶か し、 5 %パ ラ ジ ウ ム 一炭素 （約 lg) を加え水素 ガスを通じて接触還元を行った。 2時間後、 触媒を濾過で除 いたのち溶媒を留去し、 残渣を DMF (50ml) に溶か した。 Z-Tyr (Bzl) -D -Ala-Gly-NHNH2 (1.30g, 2.38mmol) よ り調製し たァジ ド成分と、 卜 リ エチルァ ミ ン （0 ,70ml , 5. Οιηπιο,Ι)を加え て- 4でで 2 4時間攪拌した。 DMF を留去後、 残渣に水を加え て粉末と した。 粉末を濾取し、 10%クニン酸水溶液、 5 %炭 酸水素ナ ト リ ウ ム水溶液、 飽和食塩水、 水で順次洗浄した。 乾燥後、 メ タノ一ルーエーテルから 2回再結晶した。
収量 1.67s (85%) 融点 136 - 139 X：
Rf 1 0.38
元素分析 C54H65N 509 ' VsHsO
計算値 ： C 69.21 ,Η 7.17 , Ν 7.47
実測値 ： C 69.29 , Η 7.23 , Ν 7.33
⑦ Η - Tyr - D 'Ala-Gly - Phe - Leu - OAdaの製造
Z-Tyr (Bzl) -D-Ala-Gly-Phe-Leu-0Ada (250mg, 0.27mmol) を T H F (30ml)に溶かし、 5 %パラジウム一炭素（ 1 g)を加えて 5時間接触還元を行った。 触媒を據去後、 溶媒を留去し、 残 渣をク ロ口ホルム一メ タ ノ ール（10 : 1)少量に溶かした。 同瑢 媒を溶出液とするシ リ カゲルカ ラムク ロマ ト グラ フ ィ ーによ り、 单一画分を得、 溶媒を留去後、 残渣にエーテルを加え、 粉末を得た。
収量 85mg (85%) 融点 110-115 °C
Mi 0.53 , [ α ] D = + 159.6° (C-0.2 , D F , 25 で） 元素分析 C39H53N 507 * 2H20
計算値 ： C 63.31 ,Η 7.77 , Ν 9.47 実測値 ： C 63.56 ,Η 7.66 , Ν 9.05
FAB-MS ： 704.0 [M+H] +
6 N塩酸加水分解後のア ミ ノ酸分析値 ：
Gly 1.13 , Ala 1.03 ,
Leu 1.00 , Tyr 0.88 ,Phe 1.05
実施例 2
H-Tyr-D-Ala-Gly-Phe-Leu-NHAda の製造
Φ Z-Leu-NHAda の製造
Z-Leu-OH (1.75g, 6.6mmol) ¾· DMF (30ml) に溶か し、 卜 リ エ チルア ミ ン （0.94ml , 6.8mmol) , ィ ソ ブチルク ロ 口 ホルメ ー ト (0.90ml, 6.8 mnol)を加えて混酸無水物を調製した。 こ の溶液 に 1 一ァ ミ ノ ァ ダマ ン タ ン塩酸塩 （1.88g, 10mmol)を DMF (20 ml) に溶かし、 .ト リ ェチルァ ミ ン （1.38ml , lOmmol) で中和し た溶液を加え、 氷冷下 2時間攪拌した。 溶媒を留去後、 残渣 を酢酸ェチルに溶かし、 10%クェン酸水溶液、 5 %炭酸ナ ト リ ウム水溶液、 飽和食塩水、 水で順次洗浄した。 硫酸ナ ト リ クムで乾燥後、 酢酸ェチルを留去し、 残渣に石油エーテルを 加えて粉末と した。 濾取後、 酢酸ェチルー石油エーテルから 再結晶した。
収量 2.20g (84¾) 融点 103 - 105 で
Rf 5 0.44
元素分析 C24H34N2Q3
計算値 ： C 72.33 , H 8.60 , N 7.03
実測値 ： C 72.02 , H 8.78 , N 6.82
© Z-Phe-Leu-NHAda の製造 Z-Leu-NHAda (2.20g.5.5mmol)をメ タ ノ ー レ （30 ml) に溶力 し、 酢酸 2滴を加えて、 5 %パラ ジウム一炭酸 （約 ) を加 え 2時間接触還元を行なった。 触媒を濾過で除いたのち、 璩 液を濃縮 し、 残渣を DMF (20ml) に溶か し た。 Z-Phe-OH (1.98g, 6.63mmol) , ト リ ェチルァ ミ ン （ 1.00 g , 7 · 29 mmol) , イ ソブチルク ロ口ホルメー ト （0 · 96ml .7.29mmol) から調製し た混酸無水物の DMF 溶液（20ml)に前記接触還元後の溶液を加 え、 氷^下 2時間攪拌した。 DMF を留去した後、 残渣に水を 加えて粉末と し濾取した。 10%クニン酸水溶液、 5 %炭酸ナ ト リ ウム水溶液、 飽和食塩水、 水で順次洗浄した。 乾燥後、 酢酸ェチルー石油エーテルから再結晶した。
収 £ 2.20g (68%) 融点 125 - 127 t:
Rf 4 0.58
元素分析 C33H43N3Q4 ♦ V2H20
計算値 ： C 71.45 , H 8.00 , N 7.58
実測値 ： C 71.57 ,Η 8.08.N 7.61
③ Z - Tyr (Bzl) -D*Ala - Gly - Phe-Leu-NHAdaの製法
Z-Phe-Leu-NHAda (1.00g, 1.83mmol) を T H F (20ml) に溶か し、 酢酸 2滴、 5 %パラジウム一炭素（lg)を加えて 4時間接 触逢元を行った。 触媒を濾過で除いたのち、 溶媒を留去し、 残渣を DMF (50ml) に溶か し た。 Z - T y r (B z 1 ) - D · A 1 a - G 1 y - NHNH2 (1.30g,2.38mmol) よ り調製したアジ ド成分と、 卜 リ エ チルア ミ ン （0.70ml ,2.38mniol) を加えて 4でで 2 4時間攪拌 した。 DMF を留去後、 残渣に水を加えて粉末と した。 粉末を 濾取し、 10%クェン酸水溶液、 5 %炭酸水素ナ ト リ ウム水溶 液、 飽和食塩水、 水で順次洗浄した。 乾燥後、 メ タノ ール - ィ ソブロ ビルエーテルから再結晶した。
収量 1.39g (81%) 融点 145 - 149 t
Rf！ 0.75
兀 5¾分析 054Η$6ΝεΟβ · / 2 Η20
計算値 ： C 69.28 ,Η 7.28 , Ν 8.98
実測値 ： C 69.25 ,Η 7.14 , Ν 8.85
@H-Tyr-D-Ala-Gly-Phe-Leu-NHAda の製法
Z-Tyr (Bzl) -D-Ala-Gly-Phe-Leu-NHAda (500mg( 0. o4mniol) を T H F (30ml)に溶か し、 酢酸 2滴、 5 %パラ ジウム一炭素
(lg)を加えて 4時間接触還元を行っ た。 触媒を镍去後、 溶媒 を留去し、 残渣をク ロ 口ホルム少量に溶かした。 ク ロ 口ホル ムーメ タノ ール （10 : 1)を溶出液とする シリ カゲルカ ラムク ロ マ ト グラ フ ィ 一によ り 、 单一スポ ッ ト を示す画分を得た。 溶 媒を留去後、 残渣にエーテルを加えて粉末を得た。
収量 155mg (41%) 融点 141-145
Rf！ 0.51 [ α ] D = + 32.5。 (C-0.2 , DMF , 25 で） 元素分析 C39H54N 609 · 2H20
計算値 ： C 63.39 ,Η 7.91 , Ν 11.37
実測値 ： C 63.76 , Η 7.85 , Ν 11 · 21
FAB-MS ： 703.0 [Μ+Η] +
6Ν塩酸加水分解後のア ミ ノ酸分析値 ：
Gly 1.0 , Ala 1.03 , Leu 1.00,
Tyr 1.00 , Phe 1.07
実施例 3 H - Tyr - D · Al a - Giy - Phe - Leu - 0 - CH2 - Ada及び H-Tyr-D-Ala -Gly-Phe-Leu-O- (CH2) 2-Ada の製造
φ Z-Leu-0-CH2-Ada の製法
Z-Leu-OH ( 2.10g, 7.9mmol)を塩ィ匕メ チ レ ン （ 30ml) に溶か し 1 - ァ ダマ ン タ ン メ タ ノ ール （1.31g, 7.9mmol) , D C C
(1.83, 8.711111101)及び 0 U A P (97 mg , 0.79 mmo 1 ) を加えて 4で で 4 8時間攪拌した。 生成したゥ レア誘導体を濾過で除いた 後、 溶媒を留去した。 残渣を酢酸ェチルに溶解し、 酢酸ェチ ル層を 5 %炭酸ナ 卜 リ ゥ ム水溶液、 1 0 %ク ェ ン酸水溶液、 飽和食塩水及び水で順次洗浄した。 硫酸ナ ト リ ウ ムで乾燥後 酢酸ェチルを留去した。 更に残渣をク ロ 口ホルム に溶かし、 シ リ カ ゲルカ ラ ム ク ロ マ ト グラ フ ィ 一で精製し单一スポ ッ ト を示す油状物を得た。
収量 2.43g (74%)
Rf 3 0.86
FAB-MS： 414.2 [M+H] +
①， Z-Leu-0 - CH2-CH2 - Ada の製造
1 ー ァダマ ンタ ン メ タ ノ ールの代わ り に 1 ー ァダマ ン タ ン エタノ ール （1.70g， 9.4mmol) を使用 した以外は①と同様に処 理した。
収量 1.85s (46¾)
Rf 5 0.63
FAB-MS :428.0 [M+H] + - (2) Z-Phe-Leu-0-CH2-Ada の製造
Z -し eu - 0 - CH2 - Ada (2.18g,5.27画 1) を T H F ( 2 O ml) に 溶かし 5 %パ ラ ジ ウ ム一炭素 （約 2 g ) , 酢酸 （ 2 ml) を加 えて 1 0時間接触違元を行っ た。 パ ラ ジ ウ ム一炭素を濾過で 除去した後、 濾液を濃縮し、 残渣を D M F ( 2 0 ml) に溶か した。 こ の溶液に 卜 リ ェチルァ ミ ン （0.74ml .5.27mniol ) 、 Z-Phe-ONP (2.21g.5.27πιπιο1) , Ν - ヒ ド ロ キシベ ンゾ 卜 リ ア ゾール （0.36g.2.64mmol)を加えて 2 4時間攪拌した。 D M F を留去後、 残渣を酢酸ェチルに溶かし、 5 %炭酸ナ ト リ ウ ム 水溶液、 1 0 %ク ェン酸水溶液、 飽和食塩水及び水で順次洗 浄した。 硫酸ナ ト リ ウ ム で乾燥後、 酢酸ヱチルを留去した。 更に残渣をク ロ 口 ホルム に溶か し、 ク ロ 口 ホルム一メ タ ノ ー ル （ 20： 1 )を榕 出液 と す る シ リ 力 ゲ ル カ ラ ム ク ロ マ ト グ ラ フ ィ 一で精製し单一スポ ッ 卜 を示す油状物を得た。
収量 2.19g (99%)
Rf 4 0.46
FAB-MS:561.3 [M+H] +
②， Z - Phe - Leu_0 -（CH2) 2 - Adaの製造
Z-Leu-0-CH2-Ada の代わり に Z - L e u -0 - C H 2 - C H 2 - A d a (1.85 g , 4.33mmol) を用いた以外は②と同様に処理した。
収量 2.49g (100¾)
Rf 5 0.15
FAB-MS :575.0 [M+H] +
③ Z-Tyr (Bzl) - D - Ala - Gly-Phe - Leu-0 - CH2 - Adaの製造
Z-P e-Leu-0-CH2-Ada (2.0g,3.57mmol) ¾- '7- 卜 ラ ヒ ド 口 フ ラ ン （ 1 5 ml) に溶かし、 5 %パ ラ ジ ウ ム一炭素 （約 2 g ) と 酢酸 （ 1 ml) を加え 5時間接触還元を行なっ た。 触媒を濾過 して除いたのち、 濾液を濃縮した。 残渣を D M F ( 1 0 ml) に溶か し、 Z-Tyr (Bzl) -D-Ala-Gly-NHNH2 (1.60g, 2.92mol) か ら調製し た ア ジ ド成分 と ト リ エチルァ ミ ン （ 0 · 27 m 1.1.95 mmol) を加えて 4で で 4 8時間攪拌した。 D M F留去後、 残 渣.を酢酸ェチルに溶かし、 5 %炭酸ナ ト リ ウム水溶液、 1 0 %クェン酸水溶液、 飽和食塩水、 水で順次洗挣、 硫酸ナ ト リ ゥ ムで乾燥後、 酢酸ェチルを減圧留去し、 残渣にエーテルを 加えて粉末と した。 更にク ロ 口ホルム に溶かし、 ク ロ口ホル ムーメ タ ノ ール （20:1)を溶出液とするシ リ カゲルカ ラムク ロ マ ト グラ フ ィ 一で精製し、 单一スポッ ト を示す生成物を得、 メ タノ一ルーエーテルから再結晶を行なつ た。
収量 0.70g (38%) 融点 158-162で
Rf 3 0.34 [ α ] D = - 17.2° (C-0.5 , D F)
元素分析 C55H67N509 · 1/2H20
計算値 ： C 69.45 ,Η 7.21, Κ 7.36
実測値 ： C 69.61 ,Η 7.29 , Ν 7.79
③ ' Z-Tyr (Bzl) - D-Ala-Gly-Phe-Leu-O- (CH2) 2-Ada の製造
Z-Phe-Leu-0-(CH2) 2-Ada (1.15g, 2 mmol) をテ ト ラ ヒ ドロ フ ラ ン （ 1 5 ml) に溶か し、 5 %パ ラ ジ ウ ム 一炭素 （約 2 § ) と酢酸 5 mlを加えて 5時間接触逢元を行なっ た。 触媒 を濾過 し て除い た の ち 、 濾液を濃縮 し た。 残渣を D M F ( 1 O ml) に溶か し、 Z-Tyr (Bzl) - D-Ala-Gly-NHNH2 (l.2g, 2.19mol)か ら調製したアジ ド成分と ト リ エチルァ ミ ン （0.28 ml , 2 mmol) を加えて 4 t:で 4 8時間攪拌した。 D M F留去 後、 残渣を酢酸ェチルに溶か し、 5 %炭酸ナ ト リ ウ ム水溶 液、 1 0 %ク ェン酸水溶液、 飽和食塩水、 水で順次洗浄、 硫 酸ナ ト リ ウ ム で乾燥後、 酢酸ェチルを減圧留去し、 残渣に エーテルを加えて粉末と した。 更にク ロ口ホルム に溶かし、 ク ロ 口 ホルム一メ タ ノ ール （30:1)を溶出液 と す る シ リ カ ゲル カ ラムク ロマ ト グラ フ ィ ーで精製し、 单一スボッ ト を示す生 成物を得、 メ タ ノ ール一エーテルか ら再結晶を した。
収量 0.84s (51%) 融点 148-151で
Rf 3 0.31 , [ a ] D = - 13.3' (C-0.6 , DMF)
元素分析 C56H69N5G9 · 1.5H20
計算値 ： C 68.41 ,Η 7.38.Ν 7.12
実測値 ： C 68.44.Η 7.09 , Ν 7.46
@H-Tyr-D-Ala-Gly-Phe-Leu-0-CH2-Ada の製造
Z - T y r (Bzl) -D -Al a-Gly-Phe-Leu-0-CH2-Ada ( 283 m , 0.3mmol)を酢酸 （ 1 0 ml) に溶かし、 5 %パ ラ ジ ウ ム —炭素 ( 1 g ) を加えて 5時間接触還元を行なっ た。 触媒を濾過で 除いた後、 濾液を水で希釈 し凍結乾燥した。 凍結乾燥品を 5 %酢酸に溶か し、 ダイ ア イ オ ン HP-20 のカ ラ ム に乗せ、 5 %酢酸 （ 2 0 O ml) で洗浄した後、 5 %酢酸 （ 2 0 O ml) と ァセ ト ニ ト リ ル （ 2 0 0 ml) によるグラ ジェン 卜溶出によ り溶出しメ イ ン画分を濃縮、 凍結乾燥後、 白色羽毛状の結晶 を得た。
収量 135mg (56%)
Rf！ 0.30 [ α ] D = + 6.3 ° (C=0.2,DMF)
FAB-MS: 718.0 [M + H] +
元素分析 C41H54N 507 ♦ 1 ·5Η20 計算値 ： C 65.14 ,Η 7.60.Ν 9.27
実測値 ： C 65.15 ,Η 7.61 , Ν 9.39
④' Η - Tyr - D*Ala - Gly - Phe - Leu - 0 -（CH2) 2 - Adaの製造
Z-Tyr (Bzl) -D · Al a-Gly-P e-Leu-O- (CH2) 2-Ada (287 mg, 0.3 mmol) を酢酸 1 0 mlに溶かし、 5 %パラジウム一炭素 1 g を 加えて 5時間接触還元した。 触媒を濾過で除いた後、 濾液を 水で希釈し凍結乾燥した。 凍結乾燥品を 5 %酢酸に溶かし、 'ダイ アイォン HP-20 のカ ラムに乗せ、 5 %酢酸 （ 2 0 0 ml) で洗浄 し た後、 5 %酢酸 （ 2 0 0 m 1 ) と ァセ ト ニ ト リ ル ( 2 0 O ml) からなるグラ ジェン ト溶出に よ り溶出しメ イ ン 画分を濃縮、 凍結乾燥後、 白色羽毛状の結晶を得た。
収量 llQmg (50¾)
Rf ！ 0.28 [ α ] D = + 3 S。 （C-0.2.DMF)
FAB-MS: 732.0 [ + H] +
元素分析 C42H56N 507 * 2 H20
計算値 ： C 64.76 ,Η 7.76 , Ν 8.99
分析値 ： C 64.61 ,Η 7.72 , Ν 8.91
実施例 4
実施例 1 及び 2 よ り得られたァダマ ンチル化エンケフ ァ リ ン誘導体 a 及び b に っ き 、 その in vivo での鎮痛効果と in vitroでのモルモ ッ ト摘出腸管の電気剌激によ る収縮に対 する抑制効果を調べた。
in vivo 鎮痛活性の測定
ァダマンチル化エンケフ ァ リ ン誘導体 a及び b を、 マ ウス に皮下投与し、 中枢に お ける鎮痛効果をラ ンダルセ リ ッ ト (Randal 1 Selitto) 法によ り測定した。 即ち誘導体 a 及び b を、 DMA ： 生理食塩水 （4 :6) の混液に溶か し、 その約 100 μ 1 を マ ウ ス （dd-Y 茶 ； 約 20 g)の皮下に投与 し （l〜 50mg /kg) , 投与後一定時間每にその鎮痛効果をラ ンダルセ リ ッ ト 法に よ り測定した。 比較薬物と して塩酸モルヒ ネ を、 ま た コ ン ト ロールと して [D-Ala2]ロ イ シ ンエン ケ フ ア リ ン ， 1 ー ァ ダマ ン タ ノ ール ， 生理食塩水， 生理食塩水 + DMA 混合溶媒 (6:4) を夫々 用いた。 こ れ らの試験結果を第 2図 （誘導体 a ) , 第 3 図 （誘導体 b ) , 第 4図 （塩酸モル ヒ ネ ） 及び第 5 図 （ コ ン ト ロール） に示 した。
ァダマ ンチル基を C末端側に導入した誘導体 a及び b は塩 酸モルヒ ネ よ り劣るがコ ン ト ロールよ り も優れた鎮痛活性を 示した。
in vit.ro鎮痛活性の測定
ァ ダマ ン チ ル化エ ン ケ フ ァ リ ン誘導体 a 及び b の、 モ ル モ ッ ト摘出腸管の収縮に対する抑制効果は Kosterlitzらの方 法 [H. W. Kosterlitz, A. A... Watterfield, Ann. Rev. harmacol .. 15 , 29 , ( 1975 )] に従っ て測定した。 ま た比較薬剤と して塩酸 モルヒ ネ を、 コ ン ト ロール と して [D-Ala2]ロ イ シ ンエンケ フ ア リ ン'を用いた。 これらの試験結果を表 1 に示す。
( 以 下 余 白 ） 表 1 化合物 E D 50 (mol) (mean± s . e .m.) Relative Potency 塩酸モルヒネ 3.2 ±0.43x It)-8 (n»17) 1.00
[D-Ala2]ロイシン 3.6 ±1.17x 10_β (n=7) 0.89 エンケファ リ ン
誘導体 a 9.4 ±4.82xl(Ta (n = 7) 0.34 誘導体 1.5 ±0.7lx 10_e (n=5) 2.13
誘導体 a 及び b は収縮抑制を示し、 いずれもナ ロ キ ソ ン に よ っ て拮抗された。 すなわち、 こ れ ら の誘導体は ァダマ ンチ ル基が導入されて も モ ル ヒ ネ様の活性を有している こ と が わっ た。
以上の試験結果よ り 、 ァダマ ンチル化エ ンケ フ ア リ ン類は 皮下投与に よ り モ ル ヒ ネ様鎮痛作用を示す こ と が確認でき た。 これは B B B透過性の向上を示し、 安全性が確認されれ ば皮下注射剤と して臨床応用が期待される。
以上の結果によ り ァダマ ンチル基の導入によ り 生理活性を 維持したま ま B B B透過性が高め られる こ と が示され、 類似 誘導体にも同様の効果が期待されるが、 生理活性物質の性質 上ァダマ ンチル基の導入位置によ って活性が消失して しま う こ と も考え られるので、 導入にあたっ ては十分な配慮が必要 である。
更に、 抗ウィ ルス化学療法剤である ジ ド ブジン （ ア ジ ドチ ミ ジン、 以下 A Z T と略す） に下記の反応に よ り ァダマ ンチ ル基の導入を試みた。
Figure imgf000023_0001
尚 R と して
① - C O - A d a 誘導体 e
② - C O - C H 2 - A d a 誘導体 f ③ -Gly-CG-Ada ··♦誘導体 g
④ー /8 ·Αΐ 8-(;0-Αά3 …篛導体 h
©-GABA -CO-Ada ·♦♦誘導体 i
を用いた。
以下具体的に説明する。
実施例 5
AZT-CO-Ada (誘導体 e ) の製造
Ada-COOH (135mg , 0.8mmo 1) を D M F ( 1 O ml) に溶かし、 氷冷下 に A Z T (lOOmg, 0.37mmol) , D C C (162mg , 0.79 mmol) ， 4 ,4-ジメ チルアミ ノ ビ リ ジ ン （ 69mg , 0.56mniol)をカロ えて 4 "Cで 4 8時間攪拌した。 生成した ウ レ ァ誘導体を濾過 後、 D M F を減圧留去し、 残渣に酢酸ェチルを加えて溶か し、 5 %炭酸水素ナ ト リ ウ ム、 飽和食塩水、 水で順次 3·回ず つ洗浄した。 酢酸ェチル層を硫酸ナ ト リ ウ ム で乾燥後、 減圧 下溶媒を留去し、 残渣を n -へキサ ン 一酢酸ェチ ル （7 : 3) ( 1 ml) に溶かし、 同一溶媒系を溶出液とするシ リ カゲル力 ラ ム ク ロ マ ト グラ フ ィ ーで精製した。 目的物を含む画分を集 め、 溶媒を減圧留去後、 残渣をエーテルで粉末と し、 濾取後 乾燥した。
収量 66mg (41¾) 融点 120 - 123
FT - IR:2121cm -1 (-N3)
FAB-MS： 430.2 [M + H] + , 452.2 [M + Na] +
元素分析 G21H27N505
計算値 ： C 58.73 ,Η 6.34 , Ν 16.31
分析値 ： C 59.12 ,Η 6.63 , Κ 16.04 実施例 6
AZT-CO-CH2-Ada (誘導体 ) の製造
A da-COO Hの代わ り に Ada-CH2C00H を用いた以外は実施例 6 と同様に処理した。
収量 79.4mg (48¾) 融点 95 - 99 で
FT - IR:2106cm_ 1 (-N3)
FAB-MS： 444.2 [ + H] + , 466.2 [ + Na] +
元素分析 C22H29N505
計算値 ： C 59.60 ,Η 6.59 , Ν 15.79
分析値 ： C 59.74 , Η 6.95 , Ν 15.31
実施例 1
① Ada - CO - ΝΗ - CH2 - C00Hの製造
グリ シン （0.98 g , 13 mmo 1 )を 4 N水酸化ナ ト リ ゥム （ 5 ml, 20mmol) を含む水 1 5 O mlに溶かし、 1 ー ァダマ ンタ ンカル ボニルク ロ ラ イ ド （1.35g, 6.5mmol) の T H F溶液 1 O mlを 3 0分間かけて加え、 反応液を氷冷下に激し く 3 時間攪拌し た。 反応後 1 N塩酸で p H を 7 に合わせ、 T H F を留去後酢 酸ェチルに溶解し、 有機層を 1 N塩酸で 3 回飽和食塩水で 3 回、 次いで水で 3 回順次洗浄した。 酢酸ェチル層を硫酸ナ ト リ ウムで乾燥後溶媒を留去し、 残渣にエーテルを加えて粉末 と した。
収率 73% 融点 200 -203 *C
元素分析 C13H19N03 1/4H20
計算値 ： C 64.59 ,Η 8.13 , Ν 5.80
分析値 ： C 64.64 ,Η δ .15 , Ν 5.74 ② AZT-GO-CH2-NH-CO-Ada (誘導体 g ) の製造
Ada-COOHの代わ り に Ada-CO-Gly-OH を用い、 最終精製と し てクロ 口ホルム—ク ロ口ホルムメ タ ノ ール （30 :1)を溶出液と す る シ リ 力ゲルカ ラ ム ク ロ マ ト グラ フ ィ ーを行なっ た後、 n 一へキサ ン で粉末化し た以外は実施例 6 と同様に処理し た。
収量 139. lmg (76%) 融点 95-98 t
FT - IR:2109cm_ 1 (-N3)
FAB-MS: 487.2 [M + H] + , 509.2 [ + Na] +
元素分析 C23H3 DN 606 * 1/4H20
計算値 ： C 56.26 ,Η 6.26 , N 17.12
実測値 ： C 56.71 ,Η 6.29 , Ν 16.62
実施例 8
① Ada-C0- β · Al a-OH の製造
グ リ シ ンの代わ り に β ー ァ ラニン を用いた以外は実施例 7 ①と同様に処理した。
収率 85¾ 融点 187 - 192 で
元素分析 C14H21N03
計算値 ： C 66.90 ,Η 8.42 , Ν 5.57
実測値 ： C 66.82 ,Η 8.63 , Κ 5.32
(2) AZT-C0- (CH2) 2-NH-C0-Ada (誘導体 h ) の製造
Ada-COOHの代わ り に Ada-C0- β -Ala-OH を用い、 ま たク ロ マ ト グラ フ ィ ー後エーテルで粉末化した以夕 {■は実施例 Ί ②と 同様に処理した。
収量 143.9mg (77%) 融点 92 - 95 t
Figure imgf000027_0001
FAB-MS:510.3 [M + H] + , 523.3 [M + Na] +
元素分析 C24H32N 606 ' 1/4H20
計算値 ： C 57.07 , H 6.49 , Ν 16.64
実測値 ： C 57.39 , Η 6 · 75 , Ν 16.12
実施例 9
① Ada - CO - GABA - OHの製造
ダリ シンの代わ り に G A B Aを用いた以外は実施例 7 ①と 同様に処理した。
収率 84% 融点 163 - 166 t
元素分析 C15H23N03 · 1/4Η20
計算値 ： C 66.76 , Η 8.78 , Ν 5.19
分析値 ： C 67.29 ,Η 9.03 , Ν 5.16
② AZT-C0- (CH2) 2-NH-C0-Ada (誘導体 i ) の製造
Ada-COOHの代わ り に A d a - C 0- G A B A -0 Hを用いた以外は実施例
7 ②と同様に処理した。
収量 159.4mg (83%) 融点 95 - 97 "C
FT-IR 2107cm-1 (-N3)
元素分析 C25H34N 606 ' 1/4H20
.計算値 ： C 57.84 , H 6.70 , N 16.19
分析値 ： C 58.59 , H 6.99 , N 15.43
更に抗痴呆薬と して期待されている 2 — ピロ リ ド ン にァダ マ ンチル基の導入を試みた。
実施例 1 0
2 —ピロ リ ド ン （ 8 5 0 ing) と D B U ( 1.53 g ) を塩化メ チレン （ 2 0 ml) に溶かして氷泠下ァダマンチルー 1 一カル ボニルクロ ライ ド （ 1.98 g ) を塩化メ チレ ン （ 5 ml) に溶か した液を滴下し室温で 1 昼夜放置した。 有機溶媒を 0.05 N塩 酸 （ 4 0 ml) で 2回. 水 （ 4 0 ml) で 2回順次洗浄した後硫 酸ナ ト リ ウムで乾燥した。 溶媒を減圧乾固し、 下記の条件で カラム分画を行ないメイ ン区画を分取した後、 塩化メチレン に溶解しへキサンで再結晶して白色針状の結晶を得た。
収量 400mg (16%) 融点 86-86.5 で
Rf 5 0.29
力 ラム分画条件
カ ラム ： 9¾ 3 cnix 3 5 cffi
充塡斉 [I ： kieselgel 60 ( 230 -400 mesh ASTM)
榕出液 ： 塩化メ チレン
以上の様に して合成された化合物 （実施例 5〜 1 0 ) はァ ダマンチル基が導入されており、 良好な B B B透過性が付与 され十分な脳内活性を得るこ とができるものと予想される。

Claims

般式
( X M n 一 ( A ) - X 2 - R
Figure imgf000029_0001
請
(但し、 X 1 及び X 2 は同一又は異なっ てエーテル結合、 ゥ レタ ン結合、 エス テル結合、 ア ミ ド結合であ り 、 A は低級ァ ルキ レ ン基で あ り 、 m = 0 の と き は n = 0 、 m = l の と き n = 0 ま た は 1 であ る 。 ま た R はペ プチ ド 、 ア ミ ノ 酸、 囲
フ ユノ ール骨格を有する脂肪族ァ ミ ン、 ア ミ ノ 糖、 ヌ ク レオ シ ド或はラクタ ム化合物からなる生理活性物質残基及びこ れ らの生理活性誘導体残基である） で表わされる生体膜透過性が良好な生理活性物質。
2 . 請求の範囲第 1 項における Rが、 エンケフ ア リ ン、 ジ ド ブジ ン、 2 — ピロ リ ド ン残基ま たはこれらの誘導体残基であ る生体膜透過性が良好な生理活性物質。
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