WO1990004922A1 - Procede pour la lutte biologique contre la varroatose et dispositif pour la mise en ×uvre de ce procede - Google Patents
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Definitions
- the present invention relates to a biological control method against varroatosis, a serious parasitosis of the bee which is due to Varroa jacobsoni Oud., A specific ectoparasitic mite of the genus Apis.
- This biological control process has two aspects: first that of the diagnosis of this parasitosis, and, if it is present, the trapping and destruction of the mite.
- the present invention also relates to trapping devices for implementing this method.
- Varroa jacobsoni finds, in the colonies of the honey bee Apis MeIlifica, the optimal climatic and trophic conditions which it needs to develop. By removing the hemolyrnph from workers and males - in adults as well as in larvae and nymphs, it causes significant disturbances in these insects, which generally lead to their early death. The bee colony is therefore very weak, and it disappears after about 4 years. In addition, the parasitized colonies are rapidly contaminated by secondary infections, in particular viral infections, which further accelerate their extinction. For example, a survey carried out by the Union of Honey Producers of France at the end of 1986 revealed that, in the Mediterranean region, all the colonies were parasitized, and that a large part of them they were in a critical situation.
- Varroa jacobsoni The only treatments currently effective against Varroa jacobsoni are chemical treatments based on acaricide molecules.
- the use of these products has various drawbacks: on the one hand, the mites become more or less quickly resistant to these molecules, and, on the other hand, they risk tarnishing the image of healthy products and beehives and especially honey. Although no trace of residue has ever been detected in France, it is not possible to predict the future on this subject.
- the mode of use of these molecules can have certain drawbacks: if their duration of action is short (from a few hours to a few days), the numerous varroa mites, which are found inside the sealed cells, are not affected by the molecules and will emerge a few days later to reproduce in turn and prolong the infestation; such methods therefore have limited effectiveness. Conversely, if their duration of action is long (a few weeks), the molecules can pass into wax or honey after a certain time and contaminate them. In addition, the use of acaricides for long periods is not without presenting risks of toxicity to the bees and themselves.
- the active principles of these kairomones are at the base of the biological control process which is the subject of the present invention and the development of which has become urgent given the fact that, as indicated above, this mite currently represents, at the level international, the most serious danger which threatens the colonies of the bee the Apis mell ifica.
- the present invention therefore relates firstly to a method for the biological control of
- Varroa jacobsoni characterized in that an attractive product consisting of:
- a total hexanic extract of bee larvae in particular male larvae and worker larvae, in particular male larvae (drones), these larvae being especially bee larvae Apis mellifica ligustica; an active fraction (that is to say a fraction responsible for the attraction of Varroa jacobsoni) of a total hexane extract of bee larvae, this fraction resulting in particular from a fractionation on a silica column of l 'above-mentioned total hexane extract; at least one active ester derived from a C 1 -C 6 aliphatic alcohol, such as methanol and ethanol, and from a C 10 -C 24 carboxylic acid, with a straight branched chain, saturated or comprising one or more several cis or trans double bonds, conjugated or not, a benzene ring or a heterocycle which may be included in the chain of said acid;
- an active fraction that is to say a fraction responsible for the attraction of Varroa
- the attractive product is introduced into the medium where the Varroa jacobsoni mite can be present, at a temperature between 30 and 36 ° C.
- this adjuvant being chosen in particular from organic esters which are more volatile than those indicated above and which do not have the attractive activity according to the invention.
- the attractive product is applied in the hive, at the entrance to the hive or outside the hive, within a trap, preventing, if necessary, by means of a protective grid, the bees from entering said trap.
- this process is advantageously combined with a heat treatment, so as to increase its efficiency.
- methyl palmitate in particular is very active at 34 ° C, but that it is no longer active at 22 ° C; however, it turns out that 34 ° C is the average temperature of the bee brood.
- 34 ° C is the average temperature of the bee brood.
- the adequate temperature for its effectiveness is slightly higher than its melting point (28-30 ° C).
- the biological control method according to the invention has two complementary aspects:
- the beekeeper will thus be informed of the presence of the parasite and of the importance of the infestation and therefore possibly carry out a controlled application of acaricide treatment;
- the mites being eliminated by means of traps (the active molecules being used in chemical decoys), by simply being trapped, for example by an adhesive substance, or killed , for example, by a contact miticide.
- the present invention also relates to a device for implementing the method as it has just been defined, this device being characterized in that it consists in a trap capable of attracting the Varroa jacobsoni mite by the presence of the attractive product as defined above, optionally combined with at least one adjuvant intended to increase the volatility thereof, and / or to modulate the rate of volatilization thereof, and / or at least one inert diluent, and / or at least one hormone.
- the trap comprises a support carrying an adhesive coating in which is incorporated a quantity of attractive product, and, where appropriate, of a pesticide, an acaricide and / or a sterilizing agent, or a porous support impregnated with an amount of attractant and, if necessary, of pesticide, acaricide, and / or sterilizing agent.
- a support carrying an adhesive coating in which is incorporated a quantity of attractive product, and, where appropriate, of a pesticide, an acaricide and / or a sterilizing agent, or a porous support impregnated with an amount of attractant and, if necessary, of pesticide, acaricide, and / or sterilizing agent.
- an elongated support which will be placed flat on the floor of the hive, in the center thereof.
- the trap consists of an open housing containing the attractive product, if necessary associated with at least one adjuvant as defined above, and / or with at least one pesticide, an acaricide and / or a sterilizing agent, the opening of said housing being able to be closed by a grid preventing the bees from entering said housing.
- the devices according to the invention can also be associated with a heating means, including a heating resistor, so as to increase the efficiency of the process.
- the main advantage of the process according to the invention is to use molecules which are generally present naturally even in the colony of bees, and which therefore do not risk polluting the various products of the hive: honey, pollen , royal jelly, propolis, wax. It is a process that is easy to use, and is suitable for both professional beekeepers and amateurs.
- the male bee larvae Apis mellifica ligustica were removed two days before the cells were sealed. Three hundred larvae were extracted in 50 ml of hexane, for one hour, at room temperature (6 equivalent larvae (Eql) per ml).
- carrier gas hydrogen at 4 x 10 4 Pa
- carrier gas hydrogen 4 x 10 4 Pa.
- the CG / SM coupling unit is composed of a Varian 3400 chromatograph equipped with a Split Splitless injector and a CW 20M column (length: 50 m, diameter: 0.32 mm), helium carrier gas and a Finigan Mat Incos 50 mass spectrometer.
- the resulting chroma togr amm ⁇ is represented in FIG. 1 e) Identification if ication:
- the device was placed in an enclosure thermostatically controlled at 32 ⁇ 1 ° C (relative humidity: 90 ⁇ 5%), which is the temperature corresponding to the thermal preference of the mite (Le Conte and Arnold, ApidoIogie, 16 (2), pages 155-164 (1988). of Varroa jacobsoni in the different fields was analyzed according to two complementary methods:
- Figure 2 of the accompanying drawing shows the spatial distribution of Varroa jacobsoni females in the olfactometer.
- methyl palmitate two of the four fields (upper left and lower right) are odorized with palmitate. methyl; the other two fields are odorless.
- Figure 3 illustrates the olfactory responses of Varroa jacobsoni females to methyl palmitate and other compounds from extracts of male bee larvae.
- Each field of a dynamic four-choice olfactometer was traversed by an air flow, at the speed of 0.9 ⁇ 0.1 l / h. Depending on the case, one or two of the fields were odorized, the others being odorless.
- the bee larvae, or the various extracts and compounds whose biological efficacy was to be tested, were placed in a glass vial connected to an arm of the olfactometer.
- the extracts were deposited on a 2 x 2 Whatman (GF / F) filter paper. cm; the other vials receiving a control filter paper of the same dimensions.
- the chemical extracts were renewed every two experiments; previously, the olfactometer was cleaned with alcohol and rinsed with distilled water. The device was rotated 90 ° after 7 consecutive tests, to eliminate interference from other signals in the orientation of the mites.
- Varroas used were female lees taken from a colony of bees and kept at 22 ° C for 7 to 9 days on workers in a breeding crate.
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Abstract
Ce procédé pour la lutte biologique contre Varroa jacobsoni, acarien ectoparasite spécifique du genre Apis est caractérisé par le fait qu'on introduit, dans le milieu où peut être présent ledit acarien, un produit attractif constitué par un extrait hexanique total de larves d'abeilles; ou par une fraction active d'un tel extrait; ou par au moins un ester actif dérivant d'un alcool aliphatique en C1-C6 et d'un acide carboxylique en C10-C24; ou par un mélange des palmitates, stéarates, oléates, linoléates et linolénates de méthyle et d'éthyle, ou un mélange actif d'au moins deux de ces esters; ou du palmitate d'éthyle, du palmitate de méthyle, du linolénate de méthyle, ou leurs mélanges éventuellement avec un autre ester.
Description
PROCEDE POUR LA LUTTE BIOLOGIQUE OONTRE LA VARROATOSE ET DISPOSITIF POUR LA MISE EN OEUVRE
DE CE PROCEDE
La présente invention porte sur un procédé de lutte biologique contre la varroatose, parasitose grave de l'abeille qui est due à Varroa jacobsoni Oud., acarien ectoparasite spécifique du genre Apis. Ce procédé de luttre biologique comporte deux aspects: d'abord celui du diagnostic de cette parasitose, et, dans le cas où il est présent, le piégeage et la destruction de l 'acarien . La présente invention porte également sur des dispositifs de piégeage pour la mise en oeuvre de ce procédé.
La varroatose est apparue en France en
1982 , après s'être propagée en Asie et en Europe de l'Ouest. Elle fait également des ravages en Afrique et en Amérique du Sud, et elle est présente depuis quelques mois aux USA.
Varroa jacobsoni trouve, dans les colonies de l'abeille domestique Apis MeIlifica, les conditions climatiques et trophiques optimales dont il a besoin pour se développer. En prélevant l 'hémolyrnphe des ouvrières et des mâles - chez les adultes comme chez les larves et les nymphes'il provoque des troubles importants chez ces insectes , qui entraînent généralement leur mort précoce . La colonie d'abeilles est donc très affaiblie, et elle disparait au bout de 4 ans environ . De plus, les colonies parasitées sont rapidement contaminées par des infections secondaires, en particulier des viroses, qui accélèrent encore leur extinction.
A titre d'exemple, une enquête réalisée par le Syndicat des Producteurs de Miel de France à la fin de l'année 1986 a révélé que, dans la région méditerranéenne, toutes les colonies étaient parasitées, et qu'une grande partie d'entre elles était dans une situation critique.
La disparition, ou même l'affaiblissement, des colonies a d' importantes conséquences négatives, aussi bien au plan agronomique qu'au plan écologique:
La disparition des colonies d'abeilles entraîne une diminution de la pollinisation de nombreuses plantes cultivées, l'abeille étant le principal insecte pollinisateur. Les effets négatifs sur certaines productions végétales sont importants en grandes cultures, en production de semences hybrides, en arboriculture et en cultures de petits fruits. Egalement, la disparition des colonies d'abeilles entraîne une moins grande rentabilité des exploitations apicoles, par suite des pertes de colonies, de la diminution des récoltes de miel, et des surcoûts de production dus aux traitements chimiques . Du point de vue écologique, les abeilles participent d'une façon générale à l'équilibre écologique en pollinisant de nombreuses plantes sauvages, et leur disparition risque de contrarier cet équilibre.
Les seuls traitements actuellement efficaces contre Varroa jacobsoni sont les traitements chimiques à base de molécules acaricides. Cependant , l'utilisation de ces produits présente différents inconvénients : d'une part, les acariens deviennent plus ou moins rapidement résistants à ces molécules , et, d'autre part, ils risquent de ternir l'image des produits sains et
naturels de la ruche et en particul ier du miel . Bien qu'aucune trace de résidu n'ait jamais été détectée en France, il n'est pas possible de préjuger de l 'avenir sur ce sujet. De plus, le mode d'util isation de ces molécules peut présenter certains inconvénients : si leur durée d'action est courte (de quelques heures à quelques jours), les nombreux varroas, qui se trouvent à l ' intérieur des cel lules operculées, ne sont pas atteints par les molécules et émergeront quelques jours plus tard pour se reproduire à leur tour et prolonger l ' infestation ; de telles méthodes ont donc une efficacité limitée. A l ' inverse, si leur durée d'action est longue (quelques semaines), lès molécules peuvent passer dans la cire ou le miel au bout d'un certain temps et les contaminer. De plus , l 'utilisation d'acaricides pendant de longues périodes n'est pas sans présenter de risques de toxicité pour les abeil les el les-mêmes.
On observe que, pour se reproduire, la femelle de Varroa jacobsoni quitte l 'abeil le adulte et pénètre dans une cellule contenant une larve d'ouvrière ou de ma le, avec une préférence pour les larves de ma les, environ deux jours avant l 'operculation . Les Déposants ont alors pu démontrer l 'existence de kairomones émises par les larves d ' Apis mellifica ligustica qui ont un effet attractif sur Varroa jacobsoni dans les conditions de température de la colonie . Les principes actifs de ces kairomones sont à la base du procédé de lutte biologique qui fait l 'objet de la présente invention et dont la mise au point est devenue urgente compte tenu du fait que, comme indiqué cidessus , cet acarien représente actuellement, au niveau international , le plus grave danger qui menace les colonies de l'abeil le Apis mell ifica.
La présente invention porte donc d'abord sur un procédé pour la lutte biologique contre
Varroa jacobsoni, caractérisé par le fait qu'on introduit, dans le milieu où peut être présent ledit acarien, un produit attractif constitué par:
- un extrait hexanique total de larves d'abeilles, notamment des larves de mâles et des larves d'ouvrières, en particulier, des larves de mâles (faux-bourdons), ces larves étant notamment des larves d'abeilles Apis mellifica ligustica; - une fraction active (c'est-à-dire une fraction responsable de l'attraction de Varroa jacobsoni) d'un extrait hexanique total de larves d'abeilles,cette fraction résultant notamment d'un fractionnement sur une colonne de silice de l 'extrait hexanique total précité; - au moins un ester actif dérivant d'un alcool alîphatique en C1-C6, comme le méthanol et l'éthanol,et d'un acide carboxylique en C10-C24, à chaîne droite ramifiée, saturé ou comprenant une ou plusieurs doubles liaisons cis ou trans, conjuguées ou non, un cycle benzénique ou un hétérocycle pouvant être inclus dans la chaîne dudït acide;
- un produit constitué par un mélange de:
-palmitate de méthyle,
-palmitate d'éthyle,
-stéarate de méthyle,
-stéarate d'éthyle,
-oléate de méthyle,
-oléate d'éthyle,
-linoléate de méthyle,
- linoléate d'éthyle,
-linolénate de méthyle,
-linolénate d'éthyle;
ou encore par un mélange actif d'au moins deux de ces esters;
-du palmitate de méthyle, du palmitate d'éthyle, du linolénate de méthyle ou un mélange de deux de ces esters ou un mélange des trois, ou encore un mélange comportant au moins l'un de ces esters avec au moins un autre ester ne présentant pas en lui-même l'activité attractive,
-un mélange d'esters du type de ceux définis ci-dessus, et obtenu par transes- térification à partir d'une huile, comme l'huile d'arachide, l'huile de tournesol. Conformément à un mode de réalisation préféré de ce procédé, on introduit le produit attractif dans le milieu où l'acarien Varroa jacobsoni peut être présent, à une température comprise entre 30 et 36°C.
On peut également associer au produit attractif au moins un adjuvant destiné à en augmenter la volatilité, cet adjuvant étant choisi notamment parmi des esters organiques plus volatils que ceux indiqués ci-dessus et ne présentant pas l'activité attractive selon l' invention.
L'association avec un tel adjuvant permettra d'appliquer ce procédé de lutte biologique aux températures inférieures à 30ºC, qui peuvent régner, suivant les saisons, dans la ruche, en particulier dans la partie inférieure de la ruche, qui est la plus commode d'accès pour disposer le piège selon l' invention, tel qu' il sera décrit ciaprès .
On peut également moduler la vitesse de volatilisation du produit attractif, en solubilisant celui-ci dans une substance organique , telle qu'une paraffine, une cire végétale, la cire d'abeille ; en le plaçant sous la forme d'une suspension colloïdale dans l'eau, immobilisée ou non par un agent gélifiant ; ou encore en l'incluant dans un support solide, comme la terre d'infusoires .
Egalement, on peut prévoir d'associer au produit attractif au moins une hormone, telle qu'une hormone juvénile, ainsi qu'au moins un diluant solide inerte, comme la terre d' infusoires, l'alumine, la cellulose ou une cellulose modifiée, le polyoxyéthylène, les matières végétales sèches, les polymères comme le polyéthylène ou le polychlorure de vinyle.
Il est également envisageable d'appliquer le produit attractif par pulvérisation ou vaporisation (aérosol).
Dans le cas où l 'on vise à piéger l'acarien, on peut, ou bien associer au produit attractif un moyen pour piéger I' acarien par agglutination ; ou bien un pesticide ou un acaricide de contact notamment peu ou pas volatil, ce qui l'empêchera de proliférer.
Dans un mode de réalisation préféré, on applique le produit attractif dans la ruche, à l'entrée de la ruche ou à l'extérieur de la ruche, au sein d'un piège, en empêchant, si besoin est, au moyen d'une grille protectrice, les abeilles de pénétrer dans ledit piège.
En fonction de la température de la colonie (qui varie en particulier avec la saison et la présence de couvain), et en fonction de
l 'emplacement dans lequel on place le piège (dans, à l'entrée de ou en dehors de la ruche), on associe avantageusement à ce procédé un traitement thermique , de façon à en augmenter l'efficacité . On a en effet constaté que le palmitate de méthyle notamment est très actif à 34°C, mais qu' il ne l'est plus à 22°C; or, il se trouve que 34°C est la température moyenne du couvain d'abeilles. Pour cette molécule en particulier, il est donc intéressant de noter que la température adéquate de son efficacité est légèrement supérieure à son point de fusion (28-30°C).
Ainsi, le procédé de lutte biologique selon l' invention présente deux aspects complérrentaires :
- d'une part, il peut être utilisé comme procédé de diagnostic de la parasitose (méthode d'avertissement): l'apiculteur sera ainsi informé de la présence du parasite et de l'importance de l' infestation et donc éventuellement procéder à une application contrôlée d'un traitement acaricide;
-d'autre part, il pourra être utilisé comme procédé de lutte proprement dite, les acariens étant éliminés au moyen de pièges (les molécules actives étant utilisées en leurres chimiques), en étant simplement piégés, par exemple par une substance adhésive, ou tués, par exemple, par un acaricide de contact.
Ainsi, la présente invention concerne également un dispositif pour la mise en oeuvre du procédé tel qu' il vient d'être défini, ce dispositif étant caractérisé par le fait qu' il consiste
en un piège capable d'attirer l'acarien Varroa jacobsoni par la présence du produit attractif tel que défini ci-dessus, éventuellement associé à au moins un adjuvant destiné à en augmenter la volatilité, et/ou à en moduler la vitesse de volatilisation , et/ou à au moins un diluant inerte, et/ou à au moins une hormone.
Dans un mode de réalisation particulier, le piège comprend un support portant un revêtement adhésif dans lequel est incorporée une quantité de produit attractif, et, le cas échéant, d'un pesticide, d'un acaricide et/ou d'un agent stérilisant, ou encore un support poreux imprégné d'une quantité de produit attractif et, le cas échéant, de pesticide , d'acaricide , et/ou d'agent stérilisant . En particulier, on peut utiliser un support allongé que l'on disposera à plat sur le sol de la ruche, au centre de celle-ci.
Dans un autre mode de réalisation particulier, le piège est constitué par un boîtier ouvert renfermant le produit attractif , le cas échéant associé à au moins un adjuvant tel que défini ci-dessus, et/ou à au moins un pesticide, un acaricide et/ou un agent stérilisant, l'ouverture dudit boîtier pouvant être fermée par une grille empêchant les abeilles de pénétrer dans ledit boîtier . Ainsi, dans le cas d'une adjonction d'un acaricide de contact (par exemple, en cas de très forte infestation), il ne serait plus à craindre que cet acaricide pollue la colonie, puisque, d'une part, les abeilles n'auraient pas de contact avec ce produit (présence de la grille protectrice ); et d'autre part, l'acaricide ne serait pas diffusé dans la ruche sous la forme d'aérosol comme il l'est dans certaines méthodes
actuelleme nt autorisées , et n'atteindrait donc pas les rayons où est stockée la récolte.
Les dispositifs selon l'invention peuvent également être associés à un moyen de chauffage, comrne une résistance chauffante, de façon à accroître l'efficacité du procédé.
Ainsi, le principal avantage du procédé selon l'invention est d'utiliser des molécules qui sont généraleme nt présentes naturel leme nt dans la colonie d'abeilles, et qui ne risquent donc pas de polluer les différents produits de la ruche: miel, pollen, gelée royale, propolis, cire. C'est un procédé qui est d'un emploi aisé, et convient aussi bien aux apiculteurs professionnels qu'aux ama- teurs .
On décrira maintenant l'isolement et l' identification des substances actives de l' invention , puis le comportement d'attraction de Varroa jacobsoni par des composés extraits de larves d'abeilles.
I -Isolement et identification des substances actives
a)Extraction:
Les larves mâles d'abeilles Apis mellifica ligustica ont été prélevées deux jours avant l 'operculation de leurs cellules. Trois cents larves ont été extraites dans 50 ml d'hexane, pendant une heure, à la température ambiante (6 équivalents larves (Eql) par ml).
b)Chromatograph ie sur colonne:
8 ml d'extrait hexanique (48 Eql), ont été évaporés et chrornatographiés sur une colonne de silice SDS (70 - 230 mesh) longueur 20 cm, diamètre 0,5 cm . La colonne de silice a été lavée abondamment avec l'acétate d'éthyle et restabili
sée par l'hexane. L'extrait a été élue successivement avec 4 ml d'hexane (fraction F1), 4 ml de dichlorométhane (F2), et 4 ml d'acétate d'éthyle (F3) . La fraction active F2 (voir paragraphe II) a été évaporée sous un courant d'azote, et reprise dans 2,7 ml d'hexane. Cette solution hexanique est analysée en CPG.
c)Chromatographie en phase gazeuse: L'analyse en CPG a été effectuée sur un chromatographe Carlo Erba 6000 équipé d'un injecteur in column, d'un détecteur FID et d'un intégrateur .
Deux types de colonne capillaires ont été utilisés pour l'analyse de cette fraction active:
-OVI greffée (longueur : 50 m, diamètre:
0,32 mm, programme : 50 : 200°C/10°C/mn)
200 à 300ºC/5°C/mn,
gaz vecteur : hydrogène à 4 x 104 Pa
-Carbowax CW20M (longueur : 50 m; diamètre : 0,32 mm.
prograrmie : 40-260ºC/3ºC/mn),
gaz vecteur : hydrogène 4 x 104 Pa.
Sur la colonne apolaire OV I , on observe 6 pics avec des épaulements pour certains pics. Sur la colonne polaire CW 20M, on obtient une bonne résolution, et on observe au total 10 pics.
d)Coupiage CG/5M:
L'unité de couplage CG/SM est composée d'un chromatographe Varian 3400 équipé d'un injecteur Split Splitless et d'une colonne CW 20M (longueur : 50 m, diamètre : 0,32 mm), gaz vecteur hélium et d'un spectromètre de masse Finigan Mat Incos 50. Le chroma togr ammε résultant est représente sur la figure 1
e)Ident i f ication:
Tous les 10 pics ( a à j ) qui composent La fraction active F2 ont été identifiés et quantifiés :
a)palmitate de méthyle 0,26 μg/Eql
b )palmi tate d'éthyle 0,09 μg /Eql
c)stéarate de méthyle 0,08 μg/Eql
d)stéarate d'éthyle 0,04 μg /Eql
e)oléate de méthyle 0,07 μg /Eql
f)oléate d'éthyle 0,03 μg /Eql
g)linolénate de méthyle 0,05 μg /Eql
h)linolénate d'éthyle 0,01 μg /Eql
i)linolénate de méthyle 0,59 μg /Eql
j)linolénate d'éthyle 0,18 μg /Eql
Leurs spectres de masse et leurs temps de rétention, en CPG sur deux colonnes de polarité différente sont identiques avec ceux de référence obtenus commercialement chez Sigma.
I l .Etude du comporternent d'attraction de Varroa jacobsoni en présence de différentes substances issues de l'insecte hôte.
Cette étude a été réalisée dans un olfactomètre dynamique à quatre choix, qui permet le contrôle rigoureux des flux dans les quatre champs odorisés ou non (Vet et al, Physiol. Entomo 1.8, pâges 97 - 106 (1983); Kaiser et al, J. Insect. Behav (1988) (sous presse). Dans le protocole choisi, sur les quatre champs de l'olfactomètre , un ou deux selon les cas sont odorisés, les autres étant inodores . Le dispositif était placé dans une enceinte thermostatée à 32 ± 1°C (humidité relative : 90 ± 5%), qui est la température correspondant à la préférence thermique de l 'acarien (le Conte et Arnold, ApidoIogie, 16(2) , pages 155-164 (1988). La répartition de
Varroa jacobsoni dans les différents champs a été analysée selon deux méthodes complémentaires:
i) une représentation sous la forme de niveaux de gris d' intensité croissante, établie grâce à un programme informatisé et correspondant à la présence cumulée de Varroa jacobsoni pendant toute la durée de l'expérience (Backchine et al. 1988, en préparation ).
ii) le nombre moyen de varroas présents dans les champs odorisés et dans les champs témoins a été calculé en fonction du temps passé dans chaque champ .
La figure 2 du dessin annexé représente la distribution spatiale des femelles de Varroa jacobsoni dans l'olfactometre.
A: témoin: les quatre champs sont inodores.
B: palmitate de méthyle: deux des quatre champs (supérieur gauche et inférieur droit) sont odorisés avec du palmitate. de méthyle; les deux autres champs sont inodores.
La figure 3 illustre les réponses olfactives des femelles de Varroa jacobsoni au palmitate de méthyle et à d'autres composés d'extraits de larves males d'abeilles.
Chacun des champs d'un olfactomètre dynamique à quatre choix était traversé par un flux d'air, à la vitesse de 0,9 ± 0,1 l/h. Selon les cas, un ou deux des champs étaient odorisés, les autres étant inodores . Les larves d'abeilles, ou les différents extraits et composés dont l'efficacité biologique était à tester, étaient disposés dans une fiole en verre connectée à un bras de l'olfactomètre . Les extraits étaient déposés sur un papier filtre Whatman (GF/F) de 2 x 2
cm ; les autres fioles recevant un papier filtre témoin des mêmes dimensions. Les extraits chimiques étaient renouvelés toutes les deux expérimentations ; auparavant, l'olfactometre était nettoyé à l'alcool et rincé à l'eau distillée. Le dispositif subissait une rotation de 90° après 7 tests consécutifs , afin d'éliminer l' interférence d'autres signaux dans l'orientation des acariens.
Les varroas utilisés étaient des feme lies prélevées dans une colonie d'abeilles et maintenues à 22°C pendant 7 à 9 jours sur des ouvrières dans une cagette d'élevage.
56 varroas répartis en deux séries ont été utilisés pour chaque test. Les acariens ont été testés individuellement pendant 6 minutes 15 secondes . Leur position était relevée toutes les 5 secondes .
En l'absence de stimulation odorante, les varroas se distribuent au hasard dans l'olfactornètre (figure 2).
Le temps passé dans chacun des quatre champs ne diffère pas significativement des autres
(test de Friedman, X2 = 32,76; DDL= 57) (figure 3).
En présence de 15 larves ma les vivantes d ' Apis mellifica ligustica (âgées de 5-6 jours ), les acariens ont présenté un comportement d'attraction très significatif (X = 7,02: p<0,01) (figure 3) , démontrant ainsi que les signaux chimiques sont impliqués dans la reconnaissance des larves par les feme lies de Varroa jacobsoni.
Un extrait hexanique de larves d'abeilles mâles de même âge que les précédentes, (représentant 1,2 Eql) s'est révélé égaleme nt très attractif (X2 = 7,6 ; p<0,01). Cet extrait a été fractionné sur une colonne de silice en trois par
ties (voir paragraphe I). Chacune des trois fractions F1, F2 et F3 (représentant 1,8 Eql) a été testée au moyen du test biologique décrit cidessus ; seule la fraction F2 s'est avérée attractive (X2 = 7,28; p<0,01) (figure 3).
L'efficacité biologique des molécules identifiées à partir des dix composés présents dans cette fraction a été testée à raison de 1 μg de chaque constituant par champ odorisé. Le palmitate de méthyle (PM), le palmitate d'éthyle (PE) et le linolénate de méthyle (LM) ont provoqué séparément un comportement d'attraction de Varroa jacobsoni identique à celui de l'extrait total (figure 3), alors que les autres composés sont sans effet.
Dans un autre essai, le mélange de deux molécules : PM et SM (1/1) a été testé en compétition avec le PM seul ; aucune différence significative n'apparaît entre les deux champs odorisés (X2 = 0,04). Le SM n'a donc aucun effet synergique sur l'attractivité entraînée par le PM utilisé seul.
De plus, l'attractivité du PM est étroitement dépendante de la température ambiante . Si à la température de 32 ± 1°C l'attraction du PM est hautement significative (figure 3), utilisée à la température de 22°C, aucune différence significative dans la répartition des varroas entre les champs odorisés par le PM et les champs témoins (X = 0,42) n'a pu être mise en évidence (figure 3) . La chaleur et les facteurs chimiques ont donc un effet synergique sur la manifestation du comportement d'attraction de Varroa jacobsoni. Le
rôle crucial joué par la température dans les relations abeille-varroa a déjà été démontré (Le Conte et Arnold, 1986, 3rd Meeting of the E.C. Varroa Experts' Group, Bad Homburg RFA; Le Conte et Arnold, 1987 , Apidologie 18(4), pages 305 à 320).
Claims
1.Procédé pour la lutte biologique contre Varroa jacobsoni, acarien ectoparasite spécifique du genre Apis, caractérisé par le fait qu'on introduit, dans le milieu où peut être présent l e d i t ac a r i e n , un p r o du i t a t t r ac t i f c o n s t i t ué par un extrait hexanique total de larves d'abeilles.
2. Procédé pour la lutte biologique contre Varroa jacobsoni, acarien ectoparasite spécifique du genre Apis, caractérisé par le fait qu'on introduit, dans le milieu où peut être présent ledit acarien, un produit attractif constitué par une fraction active d'un extrait hexanique total de larves d'abeilles.
3. Procédé selon l'une des revendications 1 et 2, caractérisé par le fait qu'on utilise un extrait hexanique total issu de larves de mâles ou de larves d'ouvrières, ou la fraction active dudit extrait.
4. Procédé selon l'une des revendications 2 et 3 , caracterise par le fait qu'on utilise une fraction active qui résulte d'un fractionnement sur une colonne de silice.
5. Procédé pour la lutte biologique contre Varroa jacobsoni, acarien ectoparasite spécifique du genre Apis, caractérisé par le fait qu'on introduit, dans le milieu où peut être présent ledit acarien, un produit attractif constitué par au moins un ester actif dérivant d'un alcool aliphatique en C1-C6 et d'un acide carboxylique en C10-C24 , à chaîne droite ou ramifiée, saturé ou comprenant une ou plusieurs doubles liaisons cis ou trans, conjuguées ou non, un cycle benzénique ou un hétérocycle pouvant être inclus dans la chaîne dudit acide.
6. Procédé pour la lutte biologique contre Varroa jacobsoni , acarien ectoparasite spécifique du genre Apis, caractérisé par le fait qu'on introduit, dans le mil ieu où peut être présent ledit acarien, un produit attractif constitué par un mélange de :
- palmitate de méthyle;
- palmitate d'éthyle;
- stéarate de méthyle;
- stéarate d'éthyle;
- oléate de méthyle;
- oléate d'éthyle;
- linoléate de méthyle;
- linoléate d'éthyle;
- linolénate de méthyle; et
- linolénate d'éthyle.
ou encore un mélange actif d'au moins deux de ces esters .
7. Procédé pour la lutte biologique contre Varroa jacobsoni, acarien ectoparasite spécifique du genre Apis, caractérisé par le fait qu'on introduit, dans le mi l ieu où peut être présent ledit acarien, un produit attractif constitué par du palmitate de méthyle, du palmitate d'éthyle , du l inolénate de méthyle ou un mélange de deux de ces esters ou un mé lange des trois, ou encore un mélange comportant au moins l'un de ces esters avec au moins un autre ester ne présentant pas en lui-même l'activité attractive.
8. Procédé pour la lutte biologique contre
Varroa jacobsoni , acarien ectoparasite spécifique du genre Apis, caractérisé par le fait qu'on introduit , dans le mi l ieu où peut être présent ledit acarien, un produit attractif constitué par un mélange d'esters obtenus par transestérifica tion à partir d'une huile comme l'huile d'arachide , l'huile de tournesol.
9. Procédé selon l'une des revendications 1 à 8, caractérisé par le fait qu'on introduit le produit attractif, dans le milieu où l'acarien Varroa jacobsoni peut être présent, à une température comprise entre 30 et 36°C.
10. Procédé selon l'une des revendications 1 à 9, caractérisé par le fait qu'on associe au produit attractif au moins un adjuvant destiné à en augmenter la volatilité, comme un ester organique plus volatil que ceux définis à l'une des revendications 5 à 7.
11. Procédé selon l'une des revendications 1 à 10, caractérisé par le fait qu'on module la vitesse de volatilisation du produit attractif, en solubilisant celui-ci dans une substance organique, telle qu'une paraffine, une cire végétale, la cire d'abeille ; en le plaçant sous la forme d'une suspension colloïdale dans l'eau, immobilisée ou non par un agent gélifiant ; ou encore en l' incluant dans un support solide, comme la terre d' infusoires .
12. Procédé selon l'une des revendications 1 à 10, caractérisé par le fait qu'on associe au produit attractif au moins un diluant solide inerte, comme la terre d' infusoires, l'alumine, la cellulose ou une cellulose modifiée , le polyoxyéthylène, les matières végétales sèches, les polymères comme le polyéthylène ou le polychlorure de vinyle.
13. Procédé selon l'une des revendications 1 à 12, caractérisé par le fait qu'on associe au produit attractif au moins une hormone, telle qu'une hormone juvénile.
14. Procédé selon l 'une des revendications 1 à 9, caractérisé par le fait qu'on appl ique le produit attractif par pulvérisation ou vaporisation .
15. Procédé selon l 'une des revendications
1 à 13, visant à piéger l'acarien Varroa jacobsoni, caractérisé par le fait qu'on associe au produit attractif un moyen pour piéger l 'acarien par agglutination .
16. Procédé selon l 'une des revendications
1 à 15, visant à piéger et à détruire l 'acarien Varroa jacobsoni , ou à l 'empêcher de prol iférer, caractérisé par le fait qu'on associe au produit attractif un pesticide ou un acaricide de contact, notamment peu ou pas volatil, ou encore un agen t stéri l isant.
17. Procédé selon l 'une des revendications 1 à 16, caractérisé par le fait qu'on appl ique le produit attractif dans la ruche, à l 'entrée de la ruche ou à l 'extérieur de la ruche, au sein d'un piège , en empêchant, si besoin est, au moyen d'une grille protectrice, les abeilles de pénétrer dans ledit piège.
18. Dispositif pour la mise en oeuvre du procédé tel que défini à l 'une des revendications 1 à 13 et 15 à 17, caractérisé par le fait qu' il consiste en un piège capable d'attirer l 'acarien Varroa jacobsoni par la présence d'un produit attractif tel que défini à l 'une des revendications 1 à 8, éventuellement associé à au moins un adjuvant destiné à en augmenter la volatilité , et/ou à en moduler la vitesse de volatil isation, et/ou à au moins un diluant inerte et/ou à au moins une hormone .
19. Dispositif selon la revendication 18, caractérisé par le fait que le piège comprend un support portant un revêtement adhésif dans lequel est incorporée une quantité de produit attractif, et, le cas échéant, d'un pesticide , d'un acaricide et/ou d'un agent stérilisant, ou encore un support poreux imprégné d'une quantité de produit attractif et, le cas échéant, d'un pesticide, d'un acaricide , et/ou d'un agent stérilisant.
20. Dis positif selon la revendication 18, caractérisé par le fait que le piège est constitué par un boîtier ouvert renfermant le produit attractif , le cas échéant associé à au moins un adjuvant tel que défini à la revendication 18, et à au moins un pesticide, un acaricide et/ou un agent stérilisant, l'ouverture dudit boîtier pouvant être fermée par une grille empêchant les abeilles de pénétrer dans ledit boîtier.
21. Dispositif selon l'une des revendications 18 à 20 , caractérisé par le fait qu' il est associé à un moyen de chauffage.
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