UA97540U

UA97540U - METHOD OF TREATMENT OF LATER AMYOTROPHIC SCLEROSIS BY PREPARATION FROM MATERIAL OF EMBRYOPHETAL ORIGIN AND SEPARATED ITS

Info

Publication number: UA97540U
Application number: UAU201409448U
Authority: UA
Priority date: 2014-08-27
Filing date: 2014-08-27
Publication date: 2015-03-25

Abstract

Спосіб лікування бічного аміотрофічного склерозу включає приготування та введення препаратів з матеріалу ембріофетального походження та виділених з нього клітин у вигляді суспензії, що містить терапевтично ефективну кількість стовбурових клітин. Виготовляють та вводять щонайменше два препарати у вигляді суспензій кріоконсервованих стовбурових клітин, виділених з матеріалу фетуса людини 5-12 тижня гестації, одна з яких містить стовбурові клітини з фетальної печінки, а друга суспензія містить стовбурові клітини з фетального головного мозку. Суспензію кріоконсервованих стовбурових клітин з фетальної печінки вводять внутрішньовенно в об'ємі, не меншому за 0,1 мл, з кількістю ядровмісних клітин не менше за 2,64×10в 1 мл за одне введення, а суспензію кріоконсервованих стовбурових клітин з фетального головного мозку вводять підшкірно в об'ємі, не меншому за 0,1 мл, з кількістю ядровмісних клітин не менше за 1,05×10в 1 мл за одне введення. Перед введенням суспензії кріоконсервованих стовбурових клітин з фетальної печінки додатково виконують премедикацію.A method of treating lateral amyotrophic sclerosis involves the preparation and administration of preparations of embryo-fetal origin material and cells isolated from it in the form of a suspension containing a therapeutically effective amount of stem cells. At least two preparations are prepared and administered in the form of suspensions of cryopreserved stem cells isolated from human fetal material for 5-12 weeks of gestation, one containing fetal liver stem cells, and the second suspension containing fetal brain stem cells. A suspension of cryopreserved stem cells from fetal liver is injected intravenously in a volume of not less than 0.1 ml, with the number of nucleated cells of not less than 2.64 × 10v 1 ml for one injection, and a suspension of cryopreserved stem cells from fetal head of the fetal head subcutaneously in a volume of not less than 0.1 ml, with a number of nucleated cells of not less than 1.05 × 10 in 1 ml per injection. Before the introduction of a suspension of cryopreserved stem cells from fetal liver additionally perform premedication.

Description

Корисна модель належить до галузі медицини, а саме до неврології та клітинної терапії, та може бути використана при лікуванні нейродегенеративних захворювань центральної нервової системи, зокрема для лікування хворих на бічний аміотрофічний склероз шляхом введення препаратів з матеріалу ембріофетального походження та виділених з нього клітин у вигляді суспензій, що містять стовбурові клітини, зокрема стовбурові клітини з фетальної печінки та стовбурові клітини з фетального головного мозку на фоні стандартної терапії.The useful model belongs to the field of medicine, namely to neurology and cell therapy, and can be used in the treatment of neurodegenerative diseases of the central nervous system, in particular for the treatment of patients with amyotrophic lateral sclerosis by administering drugs from material of embryofetal origin and cells isolated from it in the form of suspensions , containing stem cells, in particular stem cells from fetal liver and stem cells from fetal brain against the background of standard therapy.

Бічний аміотрофічний склероз (БАС), також відомий під назвою хвороби мотонейрона (ХМН), хвороби Шарко, хвороби Лу Герига - тяжке органічне захворювання неясної етіології, характеризується появою симптомів і ознак дегенерації первинних верхніх (ВМН) їі нижніх мотонейронів (НМН) і призводить до прогресуючої слабкості бульбарних, кінцівкових, грудних і черевних м'язів. Інші невральні функції, включаючи окорухові та сфінктерні, відносно збережені, хоча також інколи можуть порушуватися. Когнітивні розлади виявляють у 20-50 9о таких хворих, у 3-5 95 розвивається деменція, зазвичай лобно-скроневого типу. Смерть настає від дихальної недостатності, в середньому через 2-4 роки від початку захворювання, хоча невелика кількість пацієнтів живе 10 і більше років. Середній вік початку хвороби становить 47-52 роки у сімейних випадках і 58-63 роки - у спорадичних. БАС найчастіше виникає у чоловіків, зазвичай у похилому віці або за наявності спадкової схильності.Amyotrophic lateral sclerosis (ALS), also known as motor neuron disease (MND), Charcot disease, Lou Gehrig's disease, is a severe organic disease of unclear etiology, characterized by the appearance of symptoms and signs of degeneration of primary upper and lower motor neurons and leads to progressive weakness of bulbar, limb, chest and abdominal muscles. Other neural functions, including oculomotor and sphincter functions, are relatively preserved, although they may also occasionally be impaired. Cognitive disorders are detected in 20-50% of such patients, 3-5% develop dementia, usually of the frontotemporal type. Death occurs from respiratory failure, on average, after 2-4 years from the onset of the disease, although a small number of patients live for 10 years or more. The average age of onset of the disease is 47-52 years in familial cases and 58-63 years in sporadic cases. ALS occurs most often in men, usually in old age or in the presence of a hereditary predisposition.

При БАС спостерігається деструкція мієліну аксонів волокон пірамідного тракту на різних рівнях цереброспінальної осі, а також волокон передніх корінців спинномозкових нервів.In ALS, there is destruction of the myelin of the axons of the fibers of the pyramidal tract at different levels of the cerebrospinal axis, as well as the fibers of the anterior roots of the spinal nerves.

Найбільша вираженість цих змін спостерігається в пірамідах довгастого мозку і у волокнах вентральних і латеральних пірамідних трактів спинного мозку.The greatest severity of these changes is observed in the pyramids of the medulla oblongata and in the fibers of the ventral and lateral pyramidal tracts of the spinal cord.

На сьогоднішній день достовірно доведено значення супероксиддисмутази-1 (СОД-1) в етіології БАС, внаслідок мутації гена Си/7, локалізованого в 21-й хромосомі ІЗ). Патологічний процес розвивається в результаті цитотоксичних властивостей мутантного білка, а не через зниження антиоксидантних властивостей ферменту і розвитку оксидативного стресу. Втім, ці мутації визначаються менш ніж у 25 95 хворих з сімейною формою БАС і у 5-7 95 хворих зі спорадичною формою БАС. Враховуючи, що сімейні форми становлять близько 10 95, то всього лише 2 95 хворих БАС мають мутантну супероксиддисмутазу (1, 2, 6). Тому до теперішнього часу етіологія БАС залишається не до кінця вивченою. Багато дослідників схиляються доTo date, the importance of superoxide dismutase-1 (SOD-1) in the etiology of ALS has been reliably proven, as a result of the mutation of the Sy/7 gene located in the 21st chromosome of ALS). The pathological process develops as a result of the cytotoxic properties of the mutant protein, and not due to a decrease in the antioxidant properties of the enzyme and the development of oxidative stress. However, these mutations are determined in less than 25 95 patients with familial form of ALS and in 5-7 95 patients with sporadic form of ALS. Considering that familial forms are about 10 95, only 2 95 patients with ALS have mutant superoxide dismutase (1, 2, 6). Therefore, to date, the etiology of ALS remains incompletely understood. Many researchers are inclined to

Зо мультифакторної теорії. Відповідно до цієї теорії, загибель мотонейронів є результатом каскаду подій, множинних факторів, які можуть ініціювати патологічний процес, - це дисфункція СОД-1, дезорганізація нейрофіламентів, глутаматна ексайтотоксичність, оксидативний стрес, порушення клітинного гомеостазу кальцію, дисфункція мітохондрій та інших органел, дефіцит нейротрофічних факторів, аутоїмунний процес, процеси апоптозу.From the multifactor theory. According to this theory, the death of motoneurons is the result of a cascade of events, multiple factors that can initiate the pathological process are SOD-1 dysfunction, disorganization of neurofilaments, glutamate excitotoxicity, oxidative stress, disruption of cellular calcium homeostasis, dysfunction of mitochondria and other organelles, neurotrophic deficiency factors, autoimmune process, apoptosis processes.

Ексайтотоксичність і окислювальний стрес є взаємопов'язаними процесами. Основним результатом дії ексайтотоксичності і оксидативного стресу є порушення фосфорилювання білків і блоку ЗН-груп з наступною їх інактивацією, гідроксилювання основ ДНК, її фрагментація, а також розвиток перекисного окиснення ліпідів і дестабілізація клітинних мембран зі зміною фосфорилювання цитоскелетних білків, порушення аксонального транспорту, особливо повільного антероградного і швидкого ретроградного. Передбачається, що вільне радикальне окислення (оксидативний стрес) сприяє прогресуванню БАС. З урахуванням даних систематичного огляду Кокранівського регістру клінічних випробувань, переконливих доказів ефективності застосування окремих антиоксидантів або антиоксидантних засобів в цілому приExcitotoxicity and oxidative stress are interrelated processes. The main result of the action of excitotoxicity and oxidative stress is a violation of the phosphorylation of proteins and the block of ZN groups with their subsequent inactivation, hydroxylation of DNA bases, its fragmentation, as well as the development of lipid peroxidation and destabilization of cell membranes with a change in the phosphorylation of cytoskeletal proteins, a violation of axonal transport, especially slow anterograde and fast retrograde. Free radical oxidation (oxidative stress) is thought to contribute to the progression of ALS. Taking into account the data of the systematic review of the Cochrane register of clinical trials, convincing evidence of the effectiveness of the use of individual antioxidants or antioxidant agents in general at

БАС не отримано. Незважаючи на те, що в ході клінічних випробувань ефективність антиоксидантної терапії не доведена, не існує і обгрунтованих протипоказань до її застосування.ALS not received. Despite the fact that the effectiveness of antioxidant therapy has not been proven in clinical trials, there are no substantiated contraindications to its use.

В останні роки активно розглядаються кілька напрямів патогенетичного лікування БАС - це пригнічення ексайтотоксичного впливу за рахунок зниження синтезу глутамату, зменшення його вивільнення з нервових терміналей і підвищення зворотного захоплення, блокування постсинаптичних ММОА-рецепторів глутамату, а також вплив на внутрішньоклітинні каскади. На теперішній час єдиним лікарським препаратом з цієї групи є Рілузол (Рілутек), який затвердилаIn recent years, several areas of pathogenetic treatment of ALS have been actively considered - suppression of excitotoxic effects by reducing glutamate synthesis, reducing its release from nerve terminals and increasing reuptake, blocking postsynaptic glutamate MMOA receptors, as well as influencing intracellular cascades. Currently, the only drug from this group is Riluzol (Rilutek), which has been approved

ЕБА 5, 81. Він призначений для того, щоб зменшити вплив глутамінової кислоти на діяльність моторних нейронів шляхом активації глутамінових транспортерів. Крім того, вважається, що препарат виконує й іншу нейропротекторну дію, шляхом блокування натрієвих і кальцієвих каналів, інгібування протеїнкінази С та активації ММОА (М-метил О-аспартат) антагонізму рецепторів.EBA 5, 81. It is designed to reduce the effect of glutamic acid on the activity of motor neurons by activating glutamine transporters. In addition, it is believed that the drug has another neuroprotective effect, by blocking sodium and calcium channels, inhibiting protein kinase C and activating MMOA (M-methyl O-aspartate) receptor antagonism.

Клінічні випробування, які проводилися на хворих з БАС, показали, що Рілузол подовжує тривалість життя пацієнтів на кілька місяців, а для тих осіб, у яких хвороба спочатку вплинула на довгастий мозок, при вживанні Рілузолу тривалість життя може збільшуватись. Крім того, бо слід починати лікування за допомогою Рілутеку перш, ніж пацієнту необхідно буде здійснювати штучну вентиляцію легень. Варто особливо наголосити, що препарат не відновлює функцій моторних нейронів, порушення діяльності яких вже відбулося.Clinical trials conducted in patients with ALS have shown that Riluzole extends the life expectancy of patients by several months, and for those in whom the disease first affects the medulla oblongata, Riluzole may increase life expectancy. In addition, treatment with Rilutek should be started before the patient needs artificial ventilation. It should be especially emphasized that the drug does not restore the functions of motor neurons whose activity has already been impaired.

Інші методи лікування БАС призначені для полегшення симптомів і покращення якості життя пацієнтів.Other treatments for ALS are designed to relieve symptoms and improve patients' quality of life.

Фізіотерапія і використання спеціального обладнання дають змогу розширити можливості пацієнтів, покращити якість їхнього життя. Легкі фізичні вправи, такі як ходіння, плавання, їзда на велосипеді, та використання велотренажера суттєво зміцнюють м'язи, поліпшують стан серцево-судинної системи і допомагають пацієнтам боротися із втомою та депресією.Physiotherapy and the use of special equipment make it possible to expand the capabilities of patients and improve their quality of life. Light physical exercises, such as walking, swimming, cycling, and using an exercise bike significantly strengthen muscles, improve the condition of the cardiovascular system, and help patients fight fatigue and depression.

Чергування рухових вправ та вправ на розтяжку можуть запобігти виникненню хворобливих спазмів і виникнення контрактур м'язів. Але особливу увагу слід звернути на запобігання перенавантажень м'язів. Для збереження мобільності пацієнтів необхідно використовувати різноманітні пристрої - пандуси, підтяжки, ходунки, інвалідні коляски.Alternating range of motion and stretching exercises can prevent painful spasms and muscle contractures. But special attention should be paid to the prevention of muscle overload. To preserve the mobility of patients, it is necessary to use various devices - ramps, braces, walkers, wheelchairs.

Клітинна терапія може стати оптимальним методом лікування при цьому захворюванні, оскільки вона може сприяти м'язовій регенерації. Клітинна суспензія містить різноманітні нейротрофічні фактори, які стимулюють роботу моторних нейронів у природних умовах.Cell therapy can be the optimal method of treatment for this disease, as it can promote muscle regeneration. The cell suspension contains a variety of neurotrophic factors that stimulate motor neurons in natural conditions.

Стовбурові клітини можуть допомогти пацієнту з БАС декількома способами. Вірогідно, можна викликати їх диференціювання в нижні мотонейрони, щоб вони замістили нейрони, які загинули внаслідок БАС. Можливо, стовбурові клітини могли б врятувати вмираючі мотонейрони, відновивши зв'язки цих нейронів з частково денервованим м'язом до того, як він остаточно атрофується. Ще краще, якщо б вдалося викликати їх диференціювання у верхні мотонейрони в корі головного мозку і встановити їх зв'язок з нижніми моторними нейронами. Що більше, реально очікувати від стовбурових клітин, що вони зможуть підтримати життєдіяльність або покращити виживаність мотонейронів І7|.Stem cells can help a patient with ALS in several ways. It is likely that they can be induced to differentiate into lower motor neurons to replace neurons that have died as a result of ALS. Perhaps stem cells could save dying motor neurons by re-connecting these neurons to partially denervated muscle before it finally atrophies. It would be even better if it was possible to induce their differentiation into upper motor neurons in the cerebral cortex and establish their connection with lower motor neurons. What is more, it is realistic to expect from stem cells that they will be able to support vital activity or improve the survival of motoneurons I7|.

Відомий спосіб лікування органічних уражень центральної нервової системи з використанням алогенних ембріональних нейроклітин, що включає отримання останніх та їх ін'єксційне ендолюмбальне введення хворому. При чому хворого до лікування додатково обстежують з метою виявлення ознак автоіїмунітету до нейробілків і, за наявності таких ознак, одноразово внутрішньовенно вводять алогенні ембріональні клітини печінки (строк гестації 7-9 тижнів) в кількості 90-100 млн. за одну ін'єкцію, після чого через 2-3 місяці після повторногоThere is a known method of treating organic lesions of the central nervous system using allogeneic embryonic neurons, which includes obtaining the latter and their endolumbar injection to the patient. Moreover, before treatment, the patient is additionally examined in order to detect signs of autoimmunity to neuroproteins and, in the presence of such signs, allogeneic embryonic liver cells (gestation period 7-9 weeks) in the amount of 90-100 million per injection are administered once intravenously, after what 2-3 months after the second

Зо імунологічного обстеження, у разі відсутності ознак автоїмунітету до нейробілків, вводять алогенні ембріональні нейроклітини у вигляді клітинної суспензії у кількості 30-40 млн. за одну ін'єкцію, яких всього може бути 2-3 (патент України на корисну модель Мо 22507, дата публікації - 25.04.2007 р.).From an immunological examination, in the absence of signs of autoimmunity to neuroproteins, allogeneic embryonic neurocells are injected in the form of a cell suspension in the amount of 30-40 million for one injection, of which there may be 2-3 in total (Ukrainian utility model patent Mo 22507, date publication - 04/25/2007).

Відомий спосіб дозволяє лікувати такі органічні ураження центральної нервової системи, як дитячий церебральний параліч, розсіяний склероз та інші захворювання. Крім того, відомий спосіб лікування дозволяє зменшити обмеження до застосування алогенних ембріональних нейроклітин у хворих з органічними ураженнями ЦНС, у яких виявили лабораторні ознаки автоїмунітету до нейробілків та не доведена ефективність цього винаходу при лікуванні хворих на БАС.The known method makes it possible to treat such organic lesions of the central nervous system as children's cerebral palsy, multiple sclerosis and other diseases. In addition, the known method of treatment allows to reduce restrictions on the use of allogeneic embryonic neurons in patients with organic lesions of the central nervous system, in whom laboratory signs of autoimmunity to neuroproteins have been detected and the effectiveness of this invention in the treatment of patients with ALS has not been proven.

Найбільш близьким до способу лікування БАС, що заявляється, є спосіб лікування БАС, що включає виділення нервових стовбурових клітин людського походження з тканин центральної нервової системи, яка включає фетальну тканину спинного мозку, культивування їх в пробірці, концентрування збільшеної популяції нервових стовбурових клітин та введення терапевтично ефективної кількості вказаних концентрованих нервових стовбурових клітин у одну або декілька областей спинного мозку шляхом ін'єкції у кількості від 0,1 до 100 мкл (патент на винахід СШАClosest to the claimed method of treating ALS is a method of treating ALS that involves isolating neural stem cells of human origin from central nervous system tissue, which includes fetal spinal cord tissue, culturing them in a test tube, concentrating an increased population of neural stem cells, and administering therapeutically an effective amount of said concentrated neural stem cells into one or more regions of the spinal cord by injection in an amount of 0.1 to 100 μl (U.S. Pat.

Мо 8,460,651, дата публікації - 06.11.2013 р.). Причому нервові стовбурові клітини отримують із ембріональних стовбурових клітин людини. А фетальна тканина спинного мозку отримана із фетусу людини 6,5-20 тижнів гестації. При цьому щонайменше 20 95 концентрованих нервових стовбурових клітин диференціюються в нейрони спинного мозку.Mo 8,460,651, publication date - 06.11.2013). Moreover, neural stem cells are obtained from human embryonic stem cells. And fetal spinal cord tissue is obtained from a human fetus 6.5-20 weeks of gestation. At the same time, at least 20 95 concentrated neural stem cells differentiate into spinal cord neurons.

В одному із варіантів здійснення винаходу спосіб дозволяє лікувати БАС, що викликаний втратою вентральних моторних нейронів шляхом введення нервових стовбурових клітин, що отримані, зокрема, із спинного мозку фетуса людини 7-9 тижня гестації, в якому нейрогенез вентральних моторних нейронів є суттєвим.In one of the variants of the invention, the method allows treating ALS caused by the loss of ventral motor neurons by introducing neural stem cells obtained, in particular, from the spinal cord of a human fetus at 7-9 weeks of gestation, in which the neurogenesis of ventral motor neurons is essential.

Недоліком відомого способу є те, що перед застосуванням фетальну тканину спинного мозку необхідно культивувати, що збільшує час проведення пацієнта в клініці. В результаті чого продовжується поступове погіршення функціонального стану хворого, процесів дихання, ковтання та мовлення.The disadvantage of the known method is that before use, the fetal tissue of the spinal cord must be cultivated, which increases the time the patient spends in the clinic. As a result, the patient's functional state, breathing, swallowing and speech processes continue to deteriorate gradually.

В основу корисної моделі поставлена задача удосконалення способу лікування БАС препаратами з матеріалу ембріофетального походження та виділених з нього клітин, в якому за бо рахунок запропонованої послідовності проведення лікування з використанням суспензій стовбурових клітин емпірично підібраного складу, забезпечується підвищення ефективності лікування БАС, зокрема, покращення функціонального стану хворого, дихання, здатності ковтати, мовлення при зменшенні прогресування слабкості й атрофії уражених м'язів без необхідності підбору донора за антигенами гістосумісності. В результаті - продовжується тривалість та якість життя, полегшуються симптоми хворих на БАС, уповільнюється прогресуюче загальне зниження м'язового тонусу і зменшується м'язова дисфункція та, відповідно, сповільнюється прогресування БАС в цілому. Крім того, забезпечується запобігання виникнення алергійних реакцій та запобігання відторгнення стовбурових клітин з фетальної печінки та стовбурових клітин з фетального головного мозку організмом хворих на БАС при проведенні лікування.The basis of the useful model is the task of improving the method of treating ALS with drugs made from material of embryo-fetal origin and cells isolated from it, in which, due to the proposed sequence of treatment using stem cell suspensions of an empirically selected composition, an increase in the effectiveness of the treatment of ALS, in particular, an improvement of the functional state, is ensured of the patient, breathing, ability to swallow, speech while reducing the progression of weakness and atrophy of the affected muscles without the need to select a donor based on histocompatibility antigens. As a result, the duration and quality of life is extended, the symptoms of ALS patients are alleviated, the progressive general decrease in muscle tone is slowed down and muscle dysfunction is reduced, and, accordingly, the progression of ALS as a whole is slowed down. In addition, prevention of allergic reactions and prevention of rejection of stem cells from the fetal liver and stem cells from the fetal brain by the body of ALS patients during treatment is ensured.

Поставлена задача вирішується тим, що запропоновано спосіб лікування БАС, що включає приготування та введення препаратів з матеріалу ембріофетального походження та виділених з нього клітин у вигляді суспензії, що містить терапевтично ефективну кількість стовбурових клітин, який відрізняється тим, що виготовляють та вводять щонайменше два препарати у вигляді суспензій кріоконсервованих стовбурових клітин, виділених з матеріалу фетуса людини 5-12 тижня гестації, одна з яких містить стовбурові клітини з фетальної печінки, а друга суспензія містить стовбурові клітини з фетального головного мозку, причому суспензію кріоконсервованих стовбурових клітин з фетальної печінки вводять внутрішньовенно в об'ємі, не меншому за 0,1 мл, з кількістю ядровмісних клітин не менше за 2,64х105 в 1 мл за одне введення, а суспензію кріоконсервованих стовбурових клітин з фетального головного мозку вводять підшкірно в об'ємі, не меншому за 0,1 мл з кількістю ядровмісних клітин не менше за 1,05х105 в 1 мл за одне введення, при цьому перед введенням суспензії кріоконсервованих стовбурових клітин з фетальної печінки додатково виконують премедикацію.The task is solved by the fact that a method of treating ALS is proposed, which includes the preparation and administration of drugs from material of embryofetal origin and cells isolated from it in the form of a suspension containing a therapeutically effective amount of stem cells, which is characterized by the fact that at least two drugs are manufactured and administered in in the form of suspensions of cryopreserved stem cells isolated from the material of a human fetus of 5-12 weeks of gestation, one of which contains stem cells from the fetal liver, and the second suspension contains stem cells from the fetal brain, and the suspension of cryopreserved stem cells from the fetal liver is injected intravenously into the in a volume of not less than 0.1 ml, with the number of nucleated cells not less than 2.64x105 in 1 ml for one injection, and a suspension of cryopreserved stem cells from the fetal brain is injected subcutaneously in a volume of not less than 0.1 ml with the number of nucleated cells not less than 1.05x105 in 1 ml per unit e introduction, while before the introduction of the suspension of cryopreserved stem cells from the fetal liver, premedication is additionally performed.

Суспензію кріоконсервованих стовбурових клітин з фетальної печінки, як правило, вводять разом із фізіологічним розчином натрію хлориду зі швидкістю 20-40 крапель за хвилину.A suspension of cryopreserved fetal liver stem cells is usually administered together with saline at a rate of 20-40 drops per minute.

При цьому премедикацію виконують шляхом внутрішньовенного введення 10 мг димедролу і мг преднізолону.At the same time, premedication is performed by intravenous administration of 10 mg of diphenhydramine and mg of prednisolone.

Перед введенням суспензії кріоконсервованих стовбурових клітин з фетальної печінки та суспензії кріоконсервованих стовбурових клітин з фетального головного мозку додатковоBefore the introduction of the suspension of cryopreserved stem cells from the fetal liver and the suspension of cryopreserved stem cells from the fetal brain additionally

Зо виконують клініко-неврологічне, та інструментальне обстеження стану хворого.They perform a clinical-neurological and instrumental examination of the patient's condition.

Перед проведенням лікування та через б і 12 місяців після введення суспензії кріоконсервованих стовбурових клітин з фетальної печінки та суспензії кріоконсервованих стовбурових клітин з фетального головного мозку здійснюють контроль стану хворого за клінічними та інструментальними показниками.Before the treatment and 2 and 12 months after the introduction of the suspension of cryopreserved stem cells from the fetal liver and the suspension of cryopreserved stem cells from the fetal brain, the patient's condition is monitored according to clinical and instrumental indicators.

Ми встановили, що за рахунок введення принаймні двох суспензій емпірично підібраного складу, що містять кріоконсервовані стовбурові клітини ембріофетального походження та кількістю ядровмісних клітин в 1 мл суспензії, згідно до корисної моделі, забезпечується зниження синтезу глутамінової кислоти, зменшення її вивільнення із нервових терміналей, блокування постсинаптичних ММОА-рецепторів глутамату, що сприяє зменшенню вмісту глутамату в синапсах між моторними нейронами, в результаті чого забезпечується захист моторних нейронів від ексайтотоксичного впливу глутамінової кислоти, нейропротекторний ефект та запобігається загибель нейронів кори головного мозку при гіпоксії. В результаті - продовжується тривалість та якість життя, полегшуються симптоми хворих на БАС, уповільнюється прогресування загального зниження м'язового тонусу і зменшується м'язова дисфункція та, відповідно, сповільнюється прогресування БАС. При цьому виключається необхідність підбору донора за антигенами гістосумісності та забезпечується можливість введення суспензії стовбурових клітин з фетальної печінки та суспензії стовбурових клітин з фетального головного мозку повторно. Крім того, проведення премедикації перед введенням суспензії стовбурових клітин з фетальної печінки дозволяє запобігти виникненню алергійних реакцій та запобігти відторгненню стовбурових клітин з фетальної печінки організмом хворих під час проведення лікування.We established that due to the introduction of at least two suspensions of an empirically selected composition containing cryopreserved stem cells of embryo-fetal origin and the number of nucleated cells in 1 ml of suspension, according to a useful model, a decrease in the synthesis of glutamic acid, a decrease in its release from nerve terminals, blocking of postsynaptic MMOA of glutamate receptors, which contributes to the reduction of glutamate content in the synapses between motor neurons, as a result of which protection of motor neurons from the excitotoxic effects of glutamic acid is ensured, a neuroprotective effect and the death of cerebral cortex neurons is prevented in hypoxia. As a result, the duration and quality of life is extended, the symptoms of ALS patients are alleviated, the progression of the general decrease in muscle tone is slowed down and muscle dysfunction is reduced, and, accordingly, the progression of ALS is slowed down. At the same time, the need to select a donor based on histocompatibility antigens is eliminated and the possibility of introducing a suspension of stem cells from the fetal liver and a suspension of stem cells from the fetal brain is provided again. In addition, premedication before the introduction of a suspension of stem cells from the fetal liver prevents the occurrence of allergic reactions and prevents the rejection of stem cells from the fetal liver by the patient's body during treatment.

Причому використання саме фетальної печінки та фетальної тканини головного мозку для отримання стовбурових клітин з метою приготування лікувальних препаратів у вигляді суспензій обумовлено їх пластичністю, зокрема, здатністю таких клітин зазнавати змін та диференціації у відповідь на навколишній вплив або, відповідно до їх внутрішньої програми. Відомо, що клітини ембріофетального походження здатні до росту, розмноження, диференціації, міграції та встановлення зв'язків з іншими клітинами. Порівняно з клітинами зрілих тканин, вони мають кращу здатність до проліферації. Їх введення є ефективнішим також з огляду на утворення великої кількості ростових факторів. Клітини з фетальної печінки можуть виробляти значну бо кількість факторів росту, нейротрофічного фактору, цитокінів, інтерлейкінів, що сприяють виживанню та росту, проліферації, диференціації, та можуть стимулювати регенерацію за рахунок оточуючих клітин господаря.Moreover, the use of fetal liver and fetal brain tissue to obtain stem cells for the purpose of preparing therapeutic drugs in the form of suspensions is due to their plasticity, in particular, the ability of such cells to undergo changes and differentiation in response to environmental influences or, in accordance with their internal program. It is known that cells of embryofetal origin are capable of growth, reproduction, differentiation, migration and establishment of connections with other cells. Compared to the cells of mature tissues, they have a better ability to proliferate. Their introduction is more effective also due to the formation of a large number of growth factors. Cells from the fetal liver can produce a significant amount of growth factors, neurotrophic factor, cytokines, interleukins, which promote survival and growth, proliferation, differentiation, and can stimulate regeneration at the expense of surrounding host cells.

Крім цього, клітини з фетальної печінки мають здатність виживати при нижчому рівні кисню, ніж їх повністю диференційовані аналоги, що робить їх стійкими до ішемічного ушкодження як під час маніпуляцій іп міїго, так і після їх введення. Проліферуючі або незрілі клітини з фетальної печінки переважно не мають довгих відростків або сильної міжклітинної адгезії і тому зазнають менших пошкоджень під час приготування суспензії клітин. Ці властивості дозволяють вводити клітини з фетальної печінки шляхом внутрішньовенної ін'єкції у вигляді суспензії (|4, 51. Ці характеристики можуть пояснити і підвищене виживання клітин і тканин фетальної печінки в порівнянні з дорослими після кріоконсервації.In addition, cells from fetal liver have the ability to survive at lower oxygen levels than their fully differentiated counterparts, making them resistant to ischemic injury both during and after administration of i.p. Proliferating or immature cells from the fetal liver mostly do not have long processes or strong intercellular adhesion and therefore suffer less damage during the preparation of the cell suspension. These properties make it possible to introduce cells from the fetal liver by intravenous injection in the form of a suspension (|4, 51. These characteristics can also explain the increased survival of cells and tissues of the fetal liver in comparison with adults after cryopreservation.

Спосіб лікування БАС препаратами з матеріалу ембріофетального походження та виділених з нього клітин здійснюють таким чином.The method of treating ALS with drugs from material of embryo-fetal origin and cells isolated from it is carried out as follows.

Виготовляють два препарати у вигляді суспензій кріоконсервованих стовбурових клітин, одна з яких містить стовбурові клітини з фетальної печінки, а друга суспензія містить стовбурові клітини з фетального головного мозку. Для цього в умовах операційної, з дотриманням правил асептики та антисептики, одержують ембріофетальний матеріал, а саме: тканину печінки, тканину головного мозку фетусів людини від 5 до 12 тижнів гестації, які загинули внаслідок аборту в випадках, коли вагітність переривали за соціальними показниками при відсутності патології розвитку чи інфікованості фетуса та наявності письмової інформованої згоди жінки- донора. Вилучені тканини ембріофетального походження поміщають в стерильне транспортне середовище розчину Хенкса з антибіотиком. В стерильних умовах тканини сепарують та гомогенізують в розчині Хенкса. Отримані суспензії піддають фільтрації та кріоконсервують. Як кріопротектор використовують диметилсульфоксид. Далі готові суспензії розливають в кріопробірки в об'ємі 0,1-14,0 мл. Кріоконсервування суспензій клітин проводять у камері програмного заморожувача за розробленою програмою. Таке кріоконсервування забезпечує практично необмежене довгострокове зберігання вказаних суспензій, дозволяє протягом необхідного часу дослідити препарати у вигляді суспензії на бактеріологічну та вірусологічну безпеку, визначити якісні та кількісні показники суспензії, сформувати банк суспензій стовбурових клітин, відповідно до визначених вимог до препаратів. Суспензії, що містятьTwo preparations are made in the form of suspensions of cryopreserved stem cells, one of which contains stem cells from the fetal liver, and the second suspension contains stem cells from the fetal brain. For this, in the conditions of the operating room, in compliance with the rules of asepsis and antiseptics, embryofetal material is obtained, namely: liver tissue, brain tissue of human fetuses from 5 to 12 weeks of gestation, which died as a result of abortion in cases where the pregnancy was terminated according to social indicators in the absence of developmental pathology or infection of the fetus and the presence of written informed consent of the donor woman. Removed tissues of embryo-fetal origin are placed in a sterile transport medium of Hanks' solution with an antibiotic. Under sterile conditions, tissues are separated and homogenized in Hanks' solution. The resulting suspensions are filtered and cryopreserved. Dimethyl sulfoxide is used as a cryoprotectant. Next, the finished suspensions are poured into cryotubes in a volume of 0.1-14.0 ml. Cryopreservation of cell suspensions is carried out in the chamber of a software freezer according to the developed program. Such cryopreservation provides practically unlimited long-term storage of the indicated suspensions, allows to examine the drugs in the form of a suspension for bacteriological and virological safety, to determine the qualitative and quantitative parameters of the suspension, to form a bank of stem cell suspensions, in accordance with the specified requirements for the drugs. Suspensions containing

Зо стовбурові клітини з фетальної печінки та клітини з фетального головного мозку, зберігають в кріобанку в рідкому азоті при температурі - 196 С.Stem cells from the fetal liver and cells from the fetal brain are stored in a cryobank in liquid nitrogen at a temperature of -196 C.

При формуванні банку суспензій з тканин ембріофетального походження для лікування хворих на БАС, суспензія стовбурових клітин з фетальної печінки та суспензія стовбурових клітин з головного мозку повинні мати такі параметри: вміст ядровмісних клітин (підраховують загальну кількість ядровмісних клітин в одиниці об'єму за допомогою клітинного аналізатора чи візуально під мікроскопом в лічильній камері) повинен становити не менше ніж 2,64х105 в 1 мл суспензії для клітин з фетальної печінки та не менше за 1,05х105 в 1 мл суспензії для ядровмісних клітин з фетального головного мозку.When forming a bank of suspensions from tissues of embryo-fetal origin for the treatment of patients with ALS, the suspension of stem cells from the fetal liver and the suspension of stem cells from the brain must have the following parameters: the content of nucleated cells (the total number of nucleated cells per unit volume is counted using a cell analyzer or visually under a microscope in a counting chamber) should be at least 2.64x105 in 1 ml of suspension for cells from fetal liver and at least 1.05x105 in 1 ml of suspension for nucleated cells from fetal brain.

Пробірки, що містять суспензію кріоконсервованих стовбурових клітин з фетальної печінки та суспензію кріоконсервованих стовбурових клітин з фетального головного мозку, безпосередньо перед введенням виймають з рідкого азоту, занурюють у водяну баню при температурі 437 "С та витримують до появи рідкої фази. Подальші маніпуляції проводять при кімнатній температурі з суворим дотриманням правил асептики. Час перебування розмороженої суспензії стовбурових клітин з фетальної печінки та суспензії стовбурових клітин з фетального головного мозку при кімнатній температурі не повинен перевищувати 10 хвилин.Tubes containing a suspension of cryopreserved stem cells from the fetal liver and a suspension of cryopreserved stem cells from the fetal brain are taken out of liquid nitrogen immediately before administration, immersed in a water bath at a temperature of 437 "C and held until the liquid phase appears. Further manipulations are carried out at room temperature temperature with strict adherence to the rules of asepsis.The time of thawed suspension of stem cells from the fetal liver and suspension of stem cells from the fetal brain at room temperature should not exceed 10 minutes.

При цьому перед введенням вказаних суспензій здійснюють додатковий контроль якості суспензії стовбурових клітин з фетальної печінки та суспензії стовбурових клітин з фетального головного мозку, зокрема, проводять мікроскопію та здійснюють підрахунок кількості життєздатних клітин за допомогою автоматичного клітинного аналізатора чи візуально під мікроскопом в лічильній камері. Вміст живих клітин після кріоконсервування - 80 95.At the same time, before the introduction of these suspensions, additional quality control of the suspension of stem cells from the fetal liver and the suspension of stem cells from the fetal brain is carried out, in particular, microscopy is carried out and the number of viable cells is counted using an automatic cell analyzer or visually under a microscope in a counting chamber. The content of living cells after cryopreservation is 80-95.

Перед початком проведення лікування хворих на БАС шляхом введення суспензії кріоконсервованих стовбурових клітин з фетальної печінки та суспензії кріоконсервованих стовбурових клітин з фетального головного мозку виконують клініко-неврологічне та інструментальне обстеження стану хворого та здійснюють контроль активності патологічного процесу за клінічними та інструментальними показниками. Далі перед введенням суспензії кріоконсервованих стовбурових клітин з фетальної печінки, з метою запобігання виникненню алергійних реакцій під час лікування, виконують премедикацію шляхом внутрішньовенного введення 10 мг димедролу і 30 мг преднізолону через систему для переливання крові. Після чого разом із фізіологічним розчином натрію хлориду вводять суспензію кріоконсервованих бо стовбурових клітин з фетальної печінки шляхом внутрішньовенного введення зі швидкістю 20-Before starting the treatment of patients with ALS by introducing a suspension of cryopreserved stem cells from the fetal liver and a suspension of cryopreserved stem cells from the fetal brain, a clinical-neurological and instrumental examination of the patient's condition is carried out and the activity of the pathological process is monitored according to clinical and instrumental indicators. Further, before the introduction of the suspension of cryopreserved stem cells from the fetal liver, in order to prevent the occurrence of allergic reactions during treatment, premedication is performed by intravenous administration of 10 mg of diphenhydramine and 30 mg of prednisolone through a blood transfusion system. After that, together with a physiological solution of sodium chloride, a suspension of cryopreserved bo stem cells from the fetal liver is administered by intravenous administration at a rate of 20-

40 крапель за хвилину. При цьому об'єм лікувальної дози суспензії для одного введення підбирають індивідуально, але не менше за 0,1 мл з кількістю ядровмісних клітин, не меншою за 2,64х105 в 1 мл. Введення суспензії кріоконсервованих стовбурових клітин з фетального головного мозку здійснюють підшкірно в об'ємі, не меншому за 0,1 мл з кількістю ядровмісних клітин не менше за 1,05х1056 в 1 мл за одне введення. Така кількість клітин забезпечує необхідну якість суспензій та достатня для отримання високої ефективності лікування хворих на40 drops per minute. At the same time, the volume of the therapeutic dose of the suspension for one administration is selected individually, but not less than 0.1 ml with the number of nucleated cells not less than 2.64x105 in 1 ml. The introduction of a suspension of cryopreserved stem cells from the fetal brain is carried out subcutaneously in a volume of not less than 0.1 ml with the number of nucleated cells not less than 1.05x1056 in 1 ml for one injection. Such a number of cells ensures the necessary quality of suspensions and is sufficient to obtain high efficiency of treatment of patients with

БАС.BASS.

Після введення суспензії кріоконсервованих стовбурових клітин з фетальної печінки та суспензії кріоконсервованих стовбурових клітин з фетального головного мозку хворий знаходиться під спостереженням. Причому після проведення лікування через 6 і 12 місяців здійснюють контроль стану хворого за клінічними та інструментальними показниками. При цьому точки спостереження вибирають згідно з протоколом клінічного застосування препарату з матеріалу ембріофетального походження та виділених з нього клітин, розробленим на основі клінічного досвіду.After the introduction of a suspension of cryopreserved stem cells from the fetal liver and a suspension of cryopreserved stem cells from the fetal brain, the patient is under observation. Moreover, after the treatment, after 6 and 12 months, the patient's condition is monitored according to clinical and instrumental indicators. At the same time, observation points are selected according to the protocol for clinical use of the drug from material of embryo-fetal origin and cells isolated from it, developed on the basis of clinical experience.

Ефективність лікування БАС оцінюють за зменшенням прогресування слабкості і атрофії уражених м'язів, зокрема, покращенням рухових можливостей, дихання, здатності ковтати, мовлення та якості життя в цілому.The effectiveness of ALS treatment is assessed by reducing the progression of weakness and atrophy of the affected muscles, in particular, improving motor abilities, breathing, swallowing, speech and quality of life in general.

Так, з 2011 по 2014 роки у клініці клітинної терапії були проліковані 171 хворий на БАС відповідно до способу лікування БАС, що заявляється. У всіх хворих спостерігався синдром раннього післяїнфузійного покращення: відбувалося поліпшення сну, дихання, у деяких хворих збільшилась сила в руках. Після проведеного введення суспензії кріоконсервованих стовбурових клітин з фетальної печінки в жодному випадку не спостерігались ускладнення чи побічні явища, в тому числі реакція "трансплантат проти господаря" (РТПГ).Thus, from 2011 to 2014, 171 patients with ALS were treated in the cell therapy clinic according to the method of treatment of ALS, which is claimed. In all patients, the syndrome of early post-infusion improvement was observed: sleep and breathing improved, and in some patients, hand strength increased. After the introduction of the suspension of cryopreserved stem cells from the fetal liver, no complications or side effects were observed in any case, including graft-versus-host reaction (GVT).

Після проведеного лікування спостерігалось покращення якості життя хворих, функціональних можливостей легенів (форсована життєва ємкість легенів (ЕМС, 95), об'єм форсованого видиху за 1 секунду (ЕЄЕМ'Т, 95) (див. рис. 1).After the treatment, there was an improvement in the quality of life of the patients, functional capabilities of the lungs (forced vital capacity of the lungs (EMS, 95), forced exhalation volume in 1 second (EEEM'T, 95) (see Fig. 1).

Отже, після проведеного лікування через б та 12 місяців спостерігалось статистично значуще покращення форсованої життєвої ємкості легенів (на 16 95 через 6 місяців та 18 95 через 12 місяців) та об'єму форсованого видиху за 1 секунду (на 10 95 та 14 95 відповідно).Therefore, after the treatment in 2 and 12 months, a statistically significant improvement in forced vital capacity of the lungs (by 16 95 after 6 months and 18 95 after 12 months) and forced expiratory volume in 1 second (by 10 95 and 14 95, respectively) was observed. .

Зо Корисна модель, що заявляється, пояснюється такими прикладами.The claimed utility model is illustrated by the following examples.

Приклад 1Example 1

Хвора К., 13.06.1972 року народження, історія хвороби Мо 17061307. Хвора знаходилась в клініці клітинної терапії з метою лікування БАС. Із анамнезу відомо, що перші симптоми з'явились в лютому місяці 2010 року зі слабкості та скутості в правому коліні. З вересня того ж року з'явилась скутість в лівій нозі, через 6 місяців приєдналась слабість в руках. З червня 2011 року відмітила, що почала втрачати м'язову масу, потім приєднались посмикування в м'язах, зміна тембру голосу. З квітня 2012 року почала користуватись інвалідним візком.Patient K., born on June 13, 1972, medical history No. 17061307. The patient was in the cell therapy clinic for the treatment of ALS. It is known from the anamnesis that the first symptoms appeared in February 2010 due to weakness and stiffness in the right knee. From September of the same year, stiffness appeared in the left leg, after 6 months weakness in the hands joined. Since June 2011, she noticed that she began to lose muscle mass, then muscle twitches and a change in the tone of her voice joined. She started using a wheelchair in April 2012.

В неврологічному статусі: в свідомості, всебічно орієнтована. Емоційно лабільна. Очні щілини, зіниці 0-5, ністагму немає. Обличчя симетричне. Позитивний хоботковий рефлекс.In neurological status: conscious, comprehensively oriented. Emotionally labile. Eye slits, pupils 0-5, no nystagmus. The face is symmetrical. Positive proboscis reflex.

Ковтальний рефлекс збережений. М'яке піднебіння - фонація збережена. Язик по середній лінії, фасцикуляції на м'язах язика, їх гіпотрофія. Дистонія, дисфагія, дизартрія. Сухожилкові рефлекси 0-5 з рук, з ніг, високі з розширеною рефлексогенною зоною. М'язова сила знижена в проксимальних відділах рук 3,5/5, в ногах - 3/5. М'язовий тонус підвищений в руках до І ступеню, в ногах - до ІЇ ступеню. Фасцикуляції м'язів плечового поясу, стегон. Гіпотрофія м'язів плечового поясу, м'язів передпліч, китиць. Утримує руки в горизонтальному положенні, зігнуті в ліктьових суглобах, може підняти ноги по черзі вгору та утримувати їх декілька секунд. Патологічних стопних знаків не виявлено. Ходить декілька метрів, притримуючись за асистента. В побуті цілком залежна від оточуючих.The swallowing reflex is preserved. Soft palate - phonation is preserved. The tongue along the middle line, fasciculations on the muscles of the tongue, their hypotrophy. Dystonia, dysphagia, dysarthria. Tendon reflexes 0-5 from the hands and feet, high with an extended reflexogenic zone. Muscle strength is reduced in the proximal parts of the hands 3.5/5, in the legs - 3/5. Muscle tone is increased in the hands to the 1st degree, in the legs - to the 2nd degree. Fasciculations of the muscles of the shoulder girdle, thighs. Hypotrophy of the muscles of the shoulder girdle, muscles of the forearms, brushes. Keeps arms in a horizontal position, bent at the elbow joints, can raise legs alternately up and hold them for several seconds. No pathological footprints were found. Walks a few meters, holding on to the assistant. In everyday life, she is completely dependent on others.

До лікування форсована життєва ємкість легенів становила 62,41 95, об'єм форсованого видиху за 1 секунду - 64,12 Об.Before treatment, the forced vital capacity of the lungs was 62.41 95, the volume of forced exhalation in 1 second - 64.12 Ob.

Перед введенням суспензії кріоконсервованих стовбурових клітин з фетальної печінки хворій була проведена премедикація шляхом внутрішньовенного введення 10 мг димедролу і 30 мг преднізолону. Введено суспензію кріоконсервованих стовбурових клітин з фетальної печінки в об'ємі 5,2 мл шляхом внутрішньовенного крапельного введення. На другий день введено суспензію кріоконсервованих стовбурових клітин з фетального головного мозку підшкірно в об'ємі 5,0 мл. Характеристика введеної суспензії кріоконсервованих стовбурових клітин з фетальної печінки: зразок К213112, вік фетуса - 12 тижнів гестації; кількість ядровмісних клітин - 43,5х105 в 1 мл. Характеристика введеної суспензії кріоконсервованих стовбурових клітин з фетального головного мозку: зразок К213212, вік фетуса - 12 тижнів гестації; кількість 60 ядровмісних клітин - 21,7х106 в 1 мл.Before the introduction of the suspension of cryopreserved stem cells from the fetal liver, the patient was premedicated by intravenous administration of 10 mg of diphenhydramine and 30 mg of prednisolone. A suspension of cryopreserved stem cells from the fetal liver in a volume of 5.2 ml was administered by intravenous drip. On the second day, a suspension of cryopreserved stem cells from the fetal brain was injected subcutaneously in a volume of 5.0 ml. Characteristics of the injected suspension of cryopreserved stem cells from the fetal liver: sample K213112, fetal age - 12 weeks of gestation; the number of nucleated cells - 43.5x105 in 1 ml. Characteristics of the injected suspension of cryopreserved stem cells from the fetal brain: sample K213212, fetal age - 12 weeks of gestation; the number of 60 nucleated cells - 21.7x106 in 1 ml.

У перші кілька діб після введення вказаних суспензій спостерігався синдром раннього післяїнфузійного покращення, який проявлявся покращенням сну та апетиту, збільшенням рухових можливостей, покращенням дихання.In the first few days after the introduction of the specified suspensions, the syndrome of early post-infusion improvement was observed, which was manifested by improved sleep and appetite, increased motor capabilities, and improved breathing.

Через 6 місяців після вказаного лікування у пацієнта форсована життєва ємкість легенів становила 74,21 95, об'єм форсованого видиху за 1 секунду - 69,82 95. Через 12 місяців після лікування - 78,23 95 та 73,52 95 відповідно.6 months after the specified treatment, the patient's forced vital capacity of the lungs was 74.21 95, forced expiratory volume in 1 second - 69.82 95. 12 months after the treatment - 78.23 95 and 73.52 95, respectively.

Також хвора відчула збільшення об'єму рухів в руках та ногах, починаючи вже через 6 місяців після лікування.The patient also felt an increase in the volume of movements in her hands and legs, starting already 6 months after the treatment.

Приклад 2Example 2

Хвора В., 12.05.1968 року народження, історія хвороби Мо 09011402. Знаходилась в клініці клітинної терапії з метою лікування БАС з тетрапарезом, більше вираженим в ногах, шийно- грудною формою, бульбарним синдромом. При поступленні виказувала скарги на порушення мови, кашель, слабкість в руках, ногах, обмеження пересування, слинотечу.Patient V., born on May 12, 1968, medical history No. 09011402. She was in the cell therapy clinic for the treatment of ALS with tetraparesis, more pronounced in the legs, cervical-thoracic form, bulbar syndrome. Upon admission, she complained of speech disorders, cough, weakness in arms and legs, restriction of movement, drooling.

З анамнезу відомо, що перші симптоми захворювання виникли в листопаді 2011 року, коли з'явилася слабкість при швидкій ході. Звернулась до лікаря, пройшла обстеження, після чого через З місяці був поставлений діагноз БАС. Призначено Рілутек по 50 мг 2 рази на добу,It is known from the anamnesis that the first symptoms of the disease appeared in November 2011, when weakness appeared when walking quickly. She went to the doctor, underwent an examination, after which 3 months later she was diagnosed with ALS. Prescribed Rilutek 50 mg 2 times a day,

Коензим 010 по 600 мг 2 рази на добу. Проблеми з мовою, ходою та кашель з'явились в 2012 році. Користується ходунками, на тривалі відстані - візком.Coenzyme 010 600 mg 2 times a day. Problems with speech, gait and cough appeared in 2012. He uses a walker, for long distances - a cart.

Неврологічний статус: в свідомості, всебічно орієнтована. Очні щілини, зіниці 0-5, ністагму немає. Об'єм рухів очних яблук повний. Обличчя симетричне. Ковтальний рефлекс знижений.Neurological status: conscious, comprehensively oriented. Eye slits, pupils 0-5, no nystagmus. The range of motion of the eyeballs is full. The face is symmetrical. The swallowing reflex is reduced.

Язик по середній лінії, атрофія м'язів язика, фібриляції м'язів язика. М'яке піднебіння - фонація знижена.Tongue in the middle line, atrophy of the tongue muscles, fibrillation of the tongue muscles. Soft palate - phonation is reduced.

Сухожилкові рефлекси 0-5 з рук, з ніг. Черевні рефлекси Ю-5. М'язова сила знижена в руках - 2/5, в ногах - 1/5. М'язовий тонус дещо підвищений в ногах. Рідкі фібрилярні посмикування м'язів передпліч, стегон. Гіпотрофія всіх груп м'язів. "Типова" установка рук.Tendon reflexes 0-5 from the hands and feet. Abdominal reflexes Yu-5. Muscle strength is reduced in the hands - 2/5, in the legs - 1/5. Muscle tone is slightly increased in the legs. Rare fibrillar twitching of the muscles of the forearms, thighs. Hypotrophy of all muscle groups. "Typical" hand placement.

Патологічних стопних знаків не виявлено. Самостійно може тримати ложку, виделку в руках, стакан може тримати двома руками. В побуті повністю залежна від сторонньої допомоги.No pathological footprints were found. He can independently hold a spoon and fork in his hands, he can hold a glass with two hands. In everyday life, she is completely dependent on outside help.

До лікування форсована життєва ємкість легенів становила 57,24 95, об'єм форсованого видиху за 1 секунду - 59,12 Об.Before treatment, the forced vital capacity of the lungs was 57.24 95, the volume of forced exhalation in 1 second - 59.12 Ob.

Зо Перед введенням суспензії кріоконсервованих стовбурових клітин з фетальної печінки хворій була виконана премедикація шляхом внутрішньовенного введення 10 мг димедролу і 30 мг преднізолону. Далі було введено суспензію кріоконсервованих стовбурових клітин з фетальної печінки в об'ємі 44 мл шляхом внутрішньовенного крапельного введення та на другий день введено суспензію кріоконсервованих стовбурових клітин з фетального головного мозку підшкірно в об'ємі 5,4 мл. Характеристика введеної суспензії стовбурових клітин з фетальної печінки: зразок К172109, вік фетуса - 9 тижнів гестації; кількість ядровмісних клітин - 22,15х105 в 1 мл. Характеристика введеної суспензії стовбурових клітин з фетального головного мозку: зразок 2172209 вік фетуса - 9 тижнів гестації; кількість ядровмісних клітин - 3,02х105 в 1 мл.Before the introduction of the suspension of cryopreserved stem cells from the fetal liver, the patient was premedicated by intravenous administration of 10 mg of diphenhydramine and 30 mg of prednisolone. Next, a suspension of cryopreserved stem cells from the fetal liver in a volume of 44 ml was administered by intravenous drip, and on the second day, a suspension of cryopreserved stem cells from the fetal brain was administered subcutaneously in a volume of 5.4 ml. Characteristics of the introduced suspension of stem cells from the fetal liver: sample K172109, fetal age - 9 weeks of gestation; the number of nucleated cells - 22.15x105 in 1 ml. Characteristics of the introduced suspension of stem cells from the fetal brain: sample 2172209 age of the fetus - 9 weeks of gestation; the number of nucleated cells - 3.02x105 in 1 ml.

У перші кілька діб після введення вказаних суспензій спостерігався синдром раннього післяїнфузійного покращення, який проявлявся покращенням сну та апетиту, покращенням дихання.In the first few days after the introduction of the indicated suspensions, a syndrome of early post-infusion improvement was observed, which was manifested by improved sleep and appetite, improved breathing.

Через 6 місяців після вказаного лікування у пацієнта форсована життєва ємкість легенів становила 69,31 95, об'єм форсованого видиху за 1 секунду - 62,31 95. Через 12 місяців після лікування - 72,12 95 та 67,2195 відповідно. Зменшились скарги на загальну слабкість, збільшились сила в руках, ногах.6 months after the specified treatment, the patient's forced vital capacity of the lungs was 69.31 95, forced expiratory volume in 1 second - 62.31 95. 12 months after the treatment - 72.12 95 and 67.2195, respectively. Complaints about general weakness decreased, strength in arms and legs increased.

Таким чином, запропонований спосіб лікування БАС препаратами з матеріалу ембріофетального походження та виділених з нього клітин дозволяє підвищити ефективність лікування при зменшенні прогресування слабкості та атрофії уражених м'язів без необхідності підбору донора за антигенами гістосумісності. В результаті - уповільнюється прогресування захворювання, покращуються рухові функції, дихання, якість та тривалість життя.Thus, the proposed method of treating ALS with drugs from material of embryo-fetal origin and cells isolated from it allows to increase the effectiveness of treatment while reducing the progression of weakness and atrophy of the affected muscles without the need to select a donor based on histocompatibility antigens. As a result, the progression of the disease slows down, motor functions, breathing, quality and life expectancy improve.

Джерела інформації: 1. Бічний аміотрофічний склероз. Керівництво для лікарів / Під ред. І.А. Завалішина. - М.:Sources of information: 1. Amyotrophic lateral sclerosis. Guide for doctors / Ed. I.A. Confusion - M.:

ОО "НА" Євразія я", 2007. - 447 с. 2. Скворцова С.А, Лімборський С.А., Соколов К.В., Левицький Г.Н. Молекулярні механізми розвитку хвороби рухового нейрона // Журнал неврології і психіатрії ім. С.С. Корсакова. - 2005. -OO "NA" Eurasia I", 2007. - 447 p. 2. Skvortsova S.A., Limborskyi S.A., Sokolov K.V., Levitskyi G.N. Molecular mechanisms of motor neuron disease development // Journal of Neurology and Psychiatry named after S.S. Korsakov - 2005. -

Т. 102. Мо 4. - С. 68-76.T. 102. Mo. 4. - P. 68-76.

3. Апаегзеп Р.М., Міїззоп Р., Кегдпеп М.-І., Еогздгеп І. еї аІ. Рнпепоїур-іс Не(егодепейу іп тоїог пешгоп адізєеазе раїйєпів мйй Сип зирег-охіде дізтиїавзе тшаїййоп5 іп бсапаїіпаміа. Вгаіп 1997; 120:1723-1737. 4. Арреї! 5. АЇІ 5: іттипе ГТасіоге іп тоїог пешгоп сеї! іпішгу // Мештобіоіоду ої АЇІ 5: едисайоп ргоагат зуПарив. - Міппеароїї5: Атегісап Асадету ої МепигоІоду, Мо 1999. - б. 101-13. 5. Спеп еї а. Тторпіс Тасіог5 сошпіеєгасі віємаїєд Гаг-2-іпдисеа іппірйоп ої адиїї пешгодепевів // Меиговіоіоду ої Адіпа.-2007.-28 (8).-1148-62. б. Казраг ВК, Егові І М, Спгівіап І., Штараті Р., Саде ЕН 5упегаду ої іпзиїп-ІїКе дгоумій Тасіог- 1 апа ехегсізе іп атуоїгорпіс Іаїега! з5сіеговів // Апп. Меишгої.-2005.-57 (5).-649-55. 7. Змепазеп СМ, І апавіоп МУ. 5ієт сеї Тог раїкіпзоп дізеазе апа А 5: геріасетепі ог ргоїесіоп? Маїиге Мей. 2004, Мо 10, С. 224-225. 8. Маідтеїієг Р.О. Ргозресів ог апііароріоїїс агпид Шегару ої пепгодедепегаїїме адізеазев //3. Apaegzep R.M., Miizzop R., Kegdpep M.-I., Eogzdgep I. ei aI. Rnpepoiur-is Ne(egodepeyu ip toiog peshgop adizeease raiiyepiv myy Syp zireg-ohide diztiiavze tshaiiiop5 ip bsapaiiipamia. Vgaip 1997; 120:1723-1737. 4. Arrei! 5. AIII 5: ittype GTasiog pishiop toiog peshgopu sei // Meshobiodopu sei! Ои АЙИ 5: edisayop rgoagat zuPariv. - Mippearoii5: Ategisap Asadetu oi MepygoIodu, Mo 1999. - p. 101-13. 5. Spey ei a. Ttorpis Tasiog5 sospieegasi viemaiyed Gag-2-ipdisea ippiryop oi adyyii peshgodepeviv oi adyyii peshgodepeviv oi Meigovioiodu oi Adipa .-2007.-28 (8).-1148-62. b. Kazrag VK, Yegovi IM, Spgiviap I., Shtarati R., Sade EN // App. Meishgoi.-2005.-57 (5).-649-55. 7. Zmepazep SM, I apaviop MU. 5iet sei Tog raikipsop disease apa A 5: geriasetepi og rgoiesiop? Maiige May. 2004, Mo 10, P. 224-225. 8. Maidteiieg RO Rgozresiv og apiiarorioiis agpid Shegaru oi pepgodedepegaiime adizeazev //

Ргод. МеигорзуспорНнаттасої. Віої. Рзуспіатгу.-2003.-27(2).-303-21.Year MeigorzusporNnattasoi. Vioi Rzuspiatgu.-2003.-27(2).-303-21.

Claims

USEFUL MODEL FORMULA

1. A method of treating amyotrophic lateral sclerosis, which includes the preparation and administration of drugs from material of embryofetal origin and cells isolated from it in the form of a suspension containing a therapeutically effective amount of stem cells, which is characterized by the fact that at least two drugs are manufactured and administered in the form of suspensions of cryopreserved stem cells isolated from the material of a human fetus of 5-12 weeks of gestation, one of which contains stem cells from the fetal liver, and the second suspension contains stem cells from the fetal brain, and the suspension of cryopreserved stem cells from the fetal liver is administered intravenously in volume, not less than 0.1 ml, with the number of nucleated cells not less than 2.64x105 in 1 ml for one injection, and the suspension of cryopreserved stem cells from the fetal brain is injected subcutaneously in a volume of not less than 0.1 ml with the number of nucleated cells is not less than 1.05x105 in 1 ml for one injection, at the same time before introducing a suspension of cryopreserved stem cells from the fetal liver, premedication is additionally performed. Zo

2. The method according to claim 1, which differs in that the suspension of cryopreserved stem cells from the fetal liver is injected together with a physiological solution of sodium chloride at a rate of 20-40 drops per minute.

Q. The method according to claim 1, which differs in that premedication is performed by intravenous administration of 10 mg of diphenhydramine and 30 mg of prednisolone.

4. The method according to claim 1, which differs in that before the introduction of the suspension of cryopreserved stem cells from the fetal liver and the suspension of cryopreserved stem cells from the fetal brain, a clinical, neurological and instrumental examination of the patient's condition is additionally performed.

5. The method according to claim 1, which differs in that before the treatment and 6 and 12 months after the introduction of the suspension of cryopreserved stem cells from the fetal liver and the suspension of cryopreserved stem cells from the fetal brain, the activity of the pathological process is monitored by clinical and instrumental indicators.