UA123156C2 - КРИСТАЛІЧНА ФОРМА (S)-2-(8-((5-ХЛОРПІРИМІДИН-2-ІЛ)(МЕТИЛ)АМІНО)-2-ФТОР-6,7,8,9-ТЕТРАГІДРО-5H-ПІРИДО[3,2-b]ІНДОЛ-5-ІЛ)ОЦТОВОЇ КИСЛОТИ, ЇЇ ЗАСТОСУВАННЯ ТА ФАРМАЦЕВТИЧНА КОМПОЗИЦІЯ, ЩО ЇЇ МІСТИТЬ - Google Patents

Abstract

Винахід належить до кристалічної форми (S)-2-(8-((5-хлорпіримідин-2-іл)(метил)аміно)-2-фтор-6,7,8,9-тетрагідро-5Н-піридо[3,2-b]індол-5-іл)оцтової кислоти, способів її одержання, фармацевтичних композицій, що містять зазначені кристалічні форми, фармацевтичних композицій, отриманих з таких кристалічних форм, та їх застосування як лікарських засобів, особливо як модуляторів рецептора CRTH2.

Description

Винахід відноситься до нової кристалічної форми /(5)-2-(8-(5-хлорпіримідин-2- іл)ууметил)аміно)-2-фтор-6,7,8,9-тетрагідро-5Н-піридої|З,2-В|індол-5-іл)оцтової кислоти (яку надалі також називають "СПОЛУКА"), способів її одержання, фармацевтичних композицій, що включають зазначені кристалічні форми, фармацевтичних композицій, отриманих з таких кристалічних форм, та їх застосування як модуляторів рецептору простагландину О2 ("ОР рецептор"), найбільш особливо як модуляторів рецептора САТН» ("рецептор ОР2"), у лікуванні ряду хвороб і порушень, індукованих простагландином. Зокрема СПОЛУКА в кристалічній формі також може застосовуватися, самостійно або у фармацевтичних композиціях для лікування хронічних і гострих алергічних/мунних хвороб/порушень, таких як астма, алергічна астма, еозинофільна астма, важка астма, риніт, алергічний риніт, набряк Квінке, алергія на отруту комах, лікарські алергії, алергічний синусит, алергічний нефрит, алергічний кон'юнктивіт, атопічний дерматит, бронхіальна астма, харчова алергія, системні порушення мастоциту, анафілактичний шок, кропивниця, екзема, виразковий коліт, хронічна обструктивна хвороба легені (СОРО)), запальне захворювання кишечнику, ревматоїдний артрит і назальний поліпоз; хвороб, пов'язаних з еозинофілами, що включають васкуліти малих судин, такі як синдром

Черга-Страуса, гранулематоз Вегенера, мікроскопічний поліваскуліт (та орган специфічні підмножини останнього), гіпереозинофільні синдроми, такі як еозинофільна пневмонія, еозинофільний езофагіт, рефлюксний езофагіт, еозинофільний ендокардит (ендокардит

Леффлера), еозинофільно-міалгічний синдром, еозинофільний фасциїт, еозинофільний пустульозний фолікуліт (хвороба Офуджі), еозинофільні виразки, ангіолімфоїдна гіперплазія з еозинофілією (АГНЕ), еозинофільний целюліт (синдром Уелса), хронічна еозинофільна лейкемія, ОВЕ55 синдром (лікарська шкірна реакція, з еозинофілією і системними проявами) та хвороба Стіла (системний напад ювенільного ідіопатичного артриту); хвороб, пов'язаних з базофілами, включаючи базофільну лейкемію та базофільний лейкоцитоз; і кістозного фіброзу.

Передумови створення винаходу:

У якості відповіді на вплив алергену в алергічних реакціях, мастоцити активуються і звільняють медіатори, такі як гістамін, тромбоксан А2 (ТХАг), цистеїнілові лейкотриєни (Суві Т5) і простагландин О2 (РОШЮ»). Ці медіатори взаємодіють з відповідними рецепторами та викликають фізіологічні ефекти, такі як збільшена судинна прохідність, набряк, сверблячка,

Зо назальна та легенева гіперемія, бронхоконстрикція та секреція слизу. Збільшена судинна прохідність, наприклад, забезпечує надлишкове проникнення еозинофільних і базофільних лейкоцитів у тканину й, таким чином, підсилює алергічну реакцію.

Сучасні способи лікування алергічних хвороб включають агенти, які можуть блокувати або інакше переривати подібні взаємодії, такі як, антигістаміни (антагоністи рецептора гістаміну НІ), антагоністи рецептора лейкотриєну, агоністи бета-адренергічного рецептора та кортикостероїди. Звичайне лікування антигістамінами та антагоністами лейкотриєну обмежене в ефективності, і довгострокове застосування кортикостероїдів часто пов'язане з небажаними побічними ефектами.

РОЮ» являє собою агоніст, який, як відомо, діє на два пов'язані сз-протеїнових рецептора,

РОЮ» рецептор ОРІ і нещодавно ідентифікований рецептор СКТН»: (хемоатрактантний рецептор - гомологічна молекула що експресується на клітинах Тп2) (який також називають "РР2 рецептор").

Підвищені рівні РОЮ», як вважається, викликають запалення, що так само спостерігається при алергічних хворобах, таких як алергічний риніт, алергічна астма, алергічний кон'юнктивіт, атопічний дерматит і подібні. Тому, блокування взаємодії РОЮ» з його рецепторами вважають корисною терапевтичною стратегією для лікування таких хвороб. ов 2388540 розкриває застосування раматробану ((38)-3-(4-фторбензол-сульфонамідо)- 1,2,3,4-тетрагідрокарбазол-9-пропіонова кислота), антагоніста рецептору ТхА2 (який також називають "ТР рецептор") з додатковою антагоністичною активністю за СКТН», для профілактики та лікування алергічних хвороб, таких як астма, алергічний риніт або алергічний кон'юнктивіт. В Т. Ізпігика еї аї., Сагаїомазсшаг Огид Веху. 2004, 22(2), 71-90 описана дія раматробану на пізній фазі запалення. Крім того, описана біодоступність раматробану при пероральному введенні та його здатність інгібувати еозинофільну міграцію, індуковану простагландином 052 іп міго (Шошитаї! ої Рпаптасоіоду апа Ехрегітепіа! Пегарешісв5, З05(1), р. 347-352 (2003)).

Азаіндольні похідні оцтової кислоти з антагоністичною активністю САТН»: розкриті в УУО 2010/054113, МО 2010/054114 та в В.А. 5івагпз єї а!., Віоога. Мед. Спет. І ей. 2009, 19, 4647- 4651.

МО 2011/117798 її МО 2012/140612 розкривають (похідні З-геретоариламіно-1,2,3,4- бо тетрагідро-9Н-карбазол-9-іл)-оцтової кислоти та (7-гетероариламіно-6, 7,8,9-

тетрагідропіридо|1 ,2-а|індол-10-іл)уоцтової кислоти, відповідно, похідні яких мають СВАТН»? антагоністичну активність.

Несподіваним чином було встановлено, що СПОЛУКА має значно кращі властивості в іп- міо випробуванні цитотоксичності в первинних культивованих гепатоцитах пацюка. Тому очікують, що СПОЛУКА має поліпшений профіль токсичності іп-мімо.

Було встановлено, що певні кристалічні форми СПОЛУКИ можуть бути виділені за певних умов. Зазначені кристалічні форми СПОЛУКИ є новими і можуть мати перспективні властивості с погляду потенційного застосування СПОЛУКИ як активного фармацевтичного компонента.

Такі переваги можуть включати кращі реологічні властивості, меншу гігроскопічність; кращу відтворюваність у виробництві (наприклад, кращі параметри фільтрування, кращу відтворюваність формування та/або краще осадження); та/"або певну морфологію. Такі кристалічні форми СПОЛУКИ можуть особливо придатними в способі виробництва певних фармацевтичних композицій.

Опис фігур

ФІГ. 1 демонструє діаграму дифракції рентгенівських променів на порошку СПОЛУКИ у кристалічній формі 1, виміряну при 595 ВВ і 25"С, де діаграма дифракції рентгенівських променів на порошку продемонстрована щодо Си Ка опромінення. Діаграма дифракції рентгенівських променів демонструє піки, що мають відносну інтенсивність, у порівнянні з самим інтенсивним піком на діаграмі, з наступним процентним вмістом (відносна інтенсивність піку, наведена у круглих дужках) при зазначених кутах заломлення 2тета (наведено вибрані піки з діапазону 8-30" 2тета з відносною інтенсивністю, більше, ніж 10 95): 12,67 (27 Фв), 14,0 (28 95), 15,67 (11 95), 19,87 (14 95), 20,07 (11 95), 21,17 (100 9) і 26,47 (27 95).

ФІГ. 2 демонструє діаграму дифракції рентгенівських променів на порошку СПОЛУКИ в кристалічній формі 1, виміряну при 2095 ВВ ї 25 "С, де діаграма дифракції рентгенівських променів на порошку продемонстрована відносно Си Ка опромінення. Діаграма дифракції рентгенівських променів демонструє піки, що мають відносну інтенсивність, у порівнянні з самим інтенсивним піком на діаграмі, з наступним процентним вмістом (відносна інтенсивність піка, наведена у круглих дужках) при зазначених кутах заломлення 2тета (наведено вибрані піки з діапазону 8-30" 2тета з відносною інтенсивністю, більше, ніж 10 95): 12,67 (34 95), 14,0 (23 95),

Зо 19,77 (14 95), 21,17 (100 Ов) ії 26,47 (19 95).

ФІГ. З демонструє діаграму дифракції рентгенівських променів на порошку СПОЛУКИ в кристалічній формі 1, виміряну при 5095 ВВ ї 25 "С, де діаграма дифракції рентгенівських променів на порошку продемонстрована відносно Си Ка опромінення. Діаграма дифракції рентгенівських променів демонструє піки, що мають відносну інтенсивність, у порівнянні з самим інтенсивним піком на діаграмі, з наступним процентним вмістом (відносна інтенсивність піка, наведена у круглих дужках) при зазначених кутах заломлення 2тета (наведено вибрані піки з діапазону 8-30" 2тета з відносної інтенсивністю, більше, ніж 10 96): 12,67 (54 Фо), 14,0 (27 95), 19,57 (30 95), 21,17 (100 95), 21,47 (12 95), 23,07 (11 9о) і 26,17 (43 95).

ФІГ. 4 демонструє діаграму дифракції рентгенівських променів на порошку СПОЛУКИ в кристалічній формі 1, виміряну при 95595 ВВ ї 25 "С, де діаграма дифракції рентгенівських променів на порошку продемонстрована відносно Си Ка опромінення. Діаграма дифракції рентгенівських променів демонструє піки, що мають відносну інтенсивність, у порівнянні з самим інтенсивним піком на діаграмі, з наступним процентним вмістом (відносна інтенсивність піка, наведена у круглих дужках) при зазначених кутах заломлення 2тета (наведено вибрані піки з діапазону 8-30" 2тета з відносної інтенсивністю, більше, ніж 10 95): 12,67 (62 Ос), 14,0 (24 95), 16,27 (13 95), 18,97 (11 95), 19,57 (32 905), 21,17 (100 905), 21,57 (17 90), 22,97 (18 Фо) і 26,07 (47 Об).

На діаграмах дифракції рентгенівських променів з ФІГ. 1 по ФІГ. 4 кут заломлення 2тета (29) заданий на горизонтальній осі, а відлік на вертикальній осі.

Для уникнення будь-яких сумнівів, перераховані вище піки описують результати експерименту дифракції рентгенівських променів на порошку, показані на ФІГ. 1-4. Потрібно розуміти, що, на відміну від вищезгаданого списку піків, необхідний вибір тільки характерних піків, які повністю, і однозначно характеризують СПОЛУКУ у відповідній кристалічній формі даного винаходу.

ФІГ. 5 показує гравіметричну діаграму сорбції пари СПОЛУКИ в кристалічній формі 1, отриманої відповідно до Прикладу 1.

У гравіметричній діаграмі сорбції пари ФІГ. 5 відносна вологість (95 ВВ) задана на горизонтальній осі, а зміна маси (95 ат) на вертикальній осі.

ФІГ. 6 показує криву ДСК СПОЛУКИ у кристалічній формі 1.

У діаграмі ДСК на ФІГ. 6 температура СС) задана на горизонтальній осі, а потужність (мВт) бо на вертикальній осі.

Детальний опис винаходу 1) Перший варіант здійснення винаходу відноситься до кристалічної форми (5)-2-(8-((5- хлорпіримідин-2-іл)(метил)аміно)-2-фтор-6,7,8,9-тетрагідро-5Н-піридої|З,2-б|індол-5-іл)оцтової кислоти (СПОЛУКА); яка характеризується присутністю піків на діаграмі дифракції рентгенівських променів на порошку при наступних кутах заломлення 26: 12,6, 14,071 2111, де діаграма дифракції рентгенівських променів на порошку виміряна при близько 5 95, при близько 20 95, при близько 50 95, або при близько 95 95 відносній вологості та при температурі близько 2576.

Потрібно розуміти, що кристалічна форма згідно з варіантом здійснення 1) включає

СПОЛУКУ в кристалічній формі вільної кислоти (тобто не у формі солі). Крім того, зазначена кристалічна форма може включати некоординований та/або координований розчинник (особливо некоординовану та/або координовану воду). Координований розчинник (особливо координована вода) застосовують тут як термін для кристалічного сольвату (зокрема, кристалічного гідрату). Щоб уникнути сумнівів застосовності, термін "кристалічний гідрат" в цій заявці включає нестехіометричні гідрати. Аналогічно, некоординований розчинник застосовують в цій заявці як термін для фізично сорбованого або фізично захопленого розчинника (визначення відповідно до РоїЇутогрпізт іп Ше РІагтасейшііса! Іпаивігу (ЕйЯ. В. НійіКег, УСН, 2006), Спарієг 8: 0.9). Спеззег: Те Ітропапсе ої боімаїез). Також зрозуміло, що кристалічна форма може містити різну кількість координованої води залежно від відносної вологості, і що діаграма дифракції рентгенівських променів на порошку, може, таким чином, мінятися залежно від відносної вологості. Щоб уникнути сумнівів, даний винахід охоплює всі кристалічні підформи кристалічної форми, які обернено перетворюються одна в одну залежно від відносної вологості, і які характеризуються присутністю конкретних піків на діаграмі дифракції рентгенівських променів на порошку, при конкретній відносній вологості та при приблизно 25 "С. Розуміють, що посилання на вимірювання при даній відносній вологості та при даній температурі означає, що вимірювання виконали після того, як кристалічна форма адаптувалася до певної відносній вологості та температури (тобто після часу урівноважування); як правило, час урівноважування становить від близько 0,5 год. до близько 24 год., зокрема від 1 год. до 12 год. та особливо від 1 год. до 6 год.

Зо 2) Інший варіант здійснення відноситься до кристалічної форми СПОЛУКИ згідно з варіантом здійснення 1), що характеризується: а. присутністю піків на діаграмі дифракції рентгенівських променів на порошку при наступних кутах заломлення 28: 12,6, 14,0, 19,8, 20,0, 21,17 ї 26,4, де діаграма дифракції рентгенівських променів на порошку виміряна при близько 5 95 відносній вологості та при температурі близько 25 "С; або б. присутністю піків на діаграмі дифракції рентгенівських променів на порошку при наступних кутах заломлення 29: 12,6, 14,0, 19,7, 21,1, ії 26,4, де діаграма дифракції рентгенівських променів на порошку виміряна при близько 20 95 відносній вологості та при температурі близько 25 "С; або в. присутністю піків на діаграмі дифракції рентгенівських променів на порошку при наступних кутах заломлення 28: 12,6, 14,0, 19,5, 21,17 ї 26,1, де діаграма дифракції рентгенівських променів на порошку виміряна при близько 50 95 відносній вологості та при температурі близько 25"С; або г. присутністю піків на діаграмі дифракції рентгенівських променів на порошку при наступних кутах заломлення 28: 12,6, 14,0, 19,5, 21,1, 21,57 і 26,0, де діаграма дифракції рентгенівських променів на порошку виміряна при близько 95 95 відносній вологості та при температурі близько 2576.

З) Інший варіант здійснення відноситься до кристалічної форми СПОЛУКИ згідно з варіантом здійснення 1), що характеризується: а. присутністю піків на діаграмі дифракції рентгенівських променів на порошку при наступних кутах заломлення 28: 12,6, 14,0, 15,6, 19,8, 20,0, 21,1, 23,7, 26,4, 27,57 і 28,4, де діаграма дифракції рентгенівських променів на порошку виміряна при близько 5 95 відносній вологості та при температурі близько 25 "С; або б. присутністю піків на діаграмі дифракції рентгенівських променів на порошку при наступних кутах заломлення 28: 12,6, 14,0, 15,6, 19,7, 21,1, 23,3, 23,6, 26,4, 27,4, і 28,4, де діаграма дифракції рентгенівських променів на порошку виміряна при близько 20 95 відносній вологості та при температурі близько 25 "С; або в. присутністю піків на діаграмі дифракції рентгенівських променів на порошку, з наступними кутами заломлення 229: 12,6, 14,0, 15,2, 16,1, 19,5, 211, 21,4, 23,0, 2611, і 27,0, де діаграма дифракції рентгенівських променів на порошку виміряна при близько 50 95 відносній вологості та при температурі близько 25 "С; або г. присутністю піків на діаграмі дифракції рентгенівських променів на порошку при наступних кутах заломлення 28: 12,6, 14,0, 16,2, 18,9, 19,5, 21,1, 21,5, 22,9, 26,0, і 27,0, де діаграма дифракції рентгенівських променів на порошку виміряна при близько 95 95 відносній вологості та при температурі близько 25 "С. 4) Інший варіант здійснення відноситься до кристалічної форми СПОЛУКИ згідно з варіантом здійснення 1), що характеризується присутністю піків на діаграмі дифракції рентгенівських променів на порошку при наступних кутах заломлення 28: 12,6, 14,0, ії 21171 особливо 12,6, 14,0, 19,8, 20,0, 21,17 ї 26,47), де діаграма дифракції рентгенівських променів на порошку виміряна при близько 5 95 відносній вологості та при температурі близько 25 "С. 5) Інший варіант здійснення відноситься до кристалічної форми СПОЛУКИ згідно з варіантом здійснення 1), що характеризується присутністю піків на діаграмі дифракції рентгенівських променів на порошку при наступних кутах заломлення 28: 12,6, 14,0, ії 21171 особливо 12,6, 14,0, 19,7, 21,17 ї 26,47), де діаграма дифракції рентгенівських променів на порошку виміряна при близько 20 95 відносній вологості і при температурі близько 25 "С. 6) Інший варіант здійснення відноситься до кристалічної форми СПОЛУКИ згідно з варіантом здійснення 1), що характеризується присутністю піків на діаграмі дифракції рентгенівських променів на порошку при наступних кутах заломлення 28: 12,6, 14,0, ії 21171 особливо 12,6, 14,0, 19,5, 21,1, 21,42 і 26,17), де діаграма дифракції рентгенівських променів на порошку виміряна при близько 50 95 відносній вологості та при температурі близько 25 "С. 7) Інший варіант здійснення відноситься до кристалічної форми СПОЛУКИ згідно з варіантом здійснення 1), що характеризується присутністю піків на діаграмі дифракції рентгенівських променів на порошку при наступних кутах заломлення 28: 12,6, 14,0, ії 21,17(і особливо 12,6, 14,0, 19,5, 21,1, 21,57 і 26,07), де діаграма дифракції рентгенівських променів на порошку виміряна при близько 95 95 відносній вологості та при температурі близько 25 "С. 8) Інший варіант здійснення відноситься до кристалічної форми СПОЛУКИ згідно з варіантом здійснення 1), а. яка, у значній мірі, представляє діаграму дифракції рентгенівських променів зразку

Зо порошку, що зображена на ФІГ. 1, де діаграма дифракції рентгенівських променів на порошку виміряна при близько 5 95 відносній вологості та при температурі близько 25 "С; або б. яка, у значній мірі, представляє діаграму дифракції рентгенівських променів зразку порошку, що зображена на ФІГ. 2, де діаграма дифракції рентгенівських променів на порошку виміряна при близько 20 95 відносній вологості та при температурі близько 25 "С; або в. яка, у значній мірі, представляє діаграму дифракції рентгенівських променів зразку порошку, що зображена на ФІГ. 3, де діаграма дифракції рентгенівських променів на порошку виміряна при близько 50 95 відносній вологості та при температурі близько 25 "С; або г. яка, у значній мірі, представляє діаграму дифракції рентгенівських променів зразку порошку, що зображена на ФІГ. 4, де діаграма дифракції рентгенівських променів на порошку виміряна при близько 95 95 відносній вологості та при температурі близько 25 "С. 9) Інший варіант здійснення відноситься до кристалічної форми СПОЛУКИ згідно з варіантом здійснення 1), яка, у значній мірі, представляє діаграму дифракції рентгенівських променів зразку порошку, що зображена на ФІГ. 1, де діаграма дифракції рентгенівських променів на порошку виміряна при близько 5 95 відносній вологості та при температурі близько 2576. 10) Інший варіант здійснення відноситься до кристалічної форми СПОЛУКИ згідно з варіантом здійснення 1), яка, у значній мірі, представляє діаграму дифракції рентгенівських променів зразку порошку, що зображена на ФІГ. 2, де діаграма дифракції рентгенівських променів на порошку виміряна при близько 20 95 відносній вологості та при температурі близько 2576. 11) Інший варіант здійснення відноситься до кристалічної форми СПОЛУКИ згідно з варіантом здійснення 1), яка, у значній мірі, представляє діаграму дифракції рентгенівських променів зразку порошку, що зображена на ФІГ. 3, де діаграма дифракції рентгенівських променів на порошку виміряна при близько 50 95 відносній вологості та при температурі близько 2576. 12) Інший варіант здійснення відноситься до кристалічної форми СПОЛУКИ згідно з варіантом здійснення 1), яка, у значній мірі, представляє діаграму дифракції рентгенівських променів зразку порошку, що зображена на ФІГ. 4, де діаграма дифракції рентгенівських променів на порошку виміряна при близько 95 95 відносній вологості та при температурі близько (510) 2576.

13) Інший варіант здійснення відноситься до кристалічної форми, такої як особливо чиста кристалічна форма СПОЛУКИ (5)-2-(8-(5-хлорпіримідин-2-іл)у(метил)аміно)-2-фтор-6,7,8,9- тетрагідро-5Н-піридоЇЗ3,2-В|індол-5-іл)оцтової кислоти, яку одержують шляхом: а. приготування розчину СПОЛУКИ в ТГФ при 25 мг/мл; б. дозування 0,2 мл розчину в 4 мл скляну віалу; в. упарювання ТГФ, застосовуючи обладнання, що дозволяє упарювання шляхом комбінованого застосування інфрачервоного опромінення, обертання та вакууму заданого при 30 "С і 100 мбар протягом 30 хвилин (наприклад, Сотбідапсег від Нейісп АС, Зм/йгепапа); г. додавання 0,02 мл розчинника, вибраного з етилацетату, ацетонітрилу, ацетону або ізопропілового спирту (бажано ацетону) до сухого залишку та забезпечення витримки протягом

З днів при температурі навколишнього середовища в закритій віалі; і д. виділення отриманого твердого осаду. 14) Інший варіант здійснення відноситься до кристалічної форми СПОЛУКИ згідно з варіантом здійснення 13), що характеризується присутністю піків на діаграмі дифракції рентгенівських променів на порошку при наступних кутах заломлення 29: 12,6, 14,0, і 21,1, де діаграма дифракції рентгенівських променів на порошку виміряна при близько 5 95, при близько 95, при близько 50 95, або при близько 95 95 відносній вологості та при температурі близько 2576. 15) Інший варіант здійснення відноситься до кристалічної форми СПОЛУКИ згідно з 20 варіантом здійснення 13), що характеризується: а. присутністю піків на діаграмі дифракції рентгенівських променів на порошку при наступних кутах заломлення 28: 12,6, 14,0, 19,8, 20,0, 21,17 ії 26,4, де діаграма дифракції рентгенівських променів на порошку виміряна при близько 5 95 відносній вологості та при температурі близько 25"С; або б. присутністю піків на діаграмі дифракції рентгенівських променів на порошку при наступних кутах заломлення 28: 12,6, 14,0, 19,7, 21,17 ї 26,4, де діаграма дифракції рентгенівських променів на порошку виміряна при близько 20 95 відносній вологості та при температурі близько 25"С; або в. присутністю піків на діаграмі дифракції рентгенівських променів на порошку при наступних кутах заломлення 28: 12,6, 14,0, 19,5, 21,1, 21,47 ї 26,1, де діаграма дифракції рентгенівських променів на порошку виміряна при близько 50 95 відносній вологості та при температурі близько 25"С; або г. присутністю піків на діаграмі дифракції рентгенівських променів на порошку при наступних кутах заломлення 28: 12,6, 14,0, 19,5, 21,1, 21,57 і 26,0, де діаграма дифракції рентгенівських променів на порошку виміряна при близько 95 95 відносній вологості та при температурі близько 2576. 16) Інший варіант здійснення відноситься до кристалічної форми СПОЛУКИ згідно з варіантом здійснення 13), що характеризується: а. присутністю піків на діаграмі дифракції рентгенівських променів на порошку при наступних кутах заломлення 28: 12,6, 14,0, 15,6, 19,8, 20,0, 21,1, 23,7, 26,4, 27,57 і 284, де діаграма дифракції рентгенівських променів на порошку виміряна при близько 5 95 відносній вологості та при температурі близько 25 "С; або б. присутністю піків на діаграмі дифракції рентгенівських променів на порошку при наступних кутах заломлення 28: 12,6, 14,0, 15,6, 19,7, 21,1, 23,3, 23,6, 26,4, 27,47 їі 28,4, де діаграма дифракції рентгенівських променів на порошку виміряна при близько 20 95 відносній вологості та при температурі близько 25 "С; або в. присутністю піків на діаграмі дифракції рентгенівських променів на порошку при наступних кутах заломлення 28: 12,6, 14,0, 15,2, 16,1, 19,5, 21,1, 21,4, 23,0, 26,1, і 27,0, де діаграма дифракції рентгенівських променів на порошку виміряна при близько 50 95 відносній вологості та при температурі близько 25 "С; або г. присутністю піків на діаграмі дифракції рентгенівських променів на порошку при наступних кутах заломлення 28: 12,6, 14,0, 16,2, 18,9, 19,5, 21,1, 21,5, 22,9, 26,0, і 27,0, де діаграма дифракції рентгенівських променів на порошку виміряна при близько 95 95 відносній вологості та при температурі близько 25 "С. 17) Інший варіант здійснення відноситься до кристалічної форми СПОЛУКИ згідно з варіантом здійснення 13), що характеризується присутністю піків на діаграмі дифракції рентгенівських променів на порошку при наступних кутах заломлення 26: 12,6, 14,0, ії 21,17 (і особливо 12,6, 14,0, 19,8, 20,0, 21,17 ї 26,4), де діаграма дифракції рентгенівських променів на порошку виміряна при близько 5 95 відносній вологості та при температурі близько 25 "С.

18) Інший варіант здійснення відноситься до кристалічної форми СПОЛУКИ згідно з варіантом здійснення 13), що характеризується присутністю піків на діаграмі дифракції рентгенівських променів на порошку при наступних кутах заломлення 28: 12,6, 14,0, і 21,17 (і особливо 12,6, 14,0, 19,7, 21,17 ї 26,47), де діаграма дифракції рентгенівських променів на порошку виміряна при близько 20 95 відносній вологості і при температурі близько 25 "С. 19) Інший варіант здійснення відноситься до кристалічної форми СПОЛУКИ згідно з варіантом здійснення 13), що характеризується присутністю піків на діаграмі дифракції рентгенівських променів на порошку при наступних кутах заломлення 26: 12,6, 14,0, ії 21,17 (і особливо 12,6, 14,0, 19,5, 21,1, 21,47 і 26,17), де діаграма дифракції рентгенівських променів на порошку виміряна при близько 50 95 відносній вологості та при температурі близько 25 "С. 20) Інший варіант здійснення відноситься до кристалічної форми СПОЛУКИ згідно з варіантом здійснення 13), що характеризується присутністю піків на діаграмі дифракції рентгенівських променів на порошку при наступних кутах заломлення 26: 12,6, 14,0, ії 21,17 (і особливо 12,6, 14,0, 19,5, 21,1, 21,57 і 26,07), де діаграма дифракції рентгенівських променів на порошку виміряна при близько 95 95 відносній вологості та при температурі близько 25 "С. 21) Інший варіант здійснення відноситься до кристалічної форми СПОЛУКИ згідно з варіантом здійснення 13), а. яка, у значній мірі, представляє діаграму дифракції рентгенівських променів зразку порошку, що зображена на ФІГ. 1, де діаграма дифракції рентгенівських променів на порошку виміряна при близько 5 95 відносній вологості та при температурі близько 25 "С; або б. яка, у значній мірі, представляє діаграму дифракції рентгенівських променів зразку порошку, що зображена на ФІГ. 2, де діаграма дифракції рентгенівських променів на порошку виміряна при близько 20 95 відносній вологості та при температурі близько 25 "С; або в. яка, у значній мірі, представляє діаграму дифракції рентгенівських променів зразку порошку, що зображена на ФІГ. 3, де діаграма дифракції рентгенівських променів на порошку виміряна при близько 50 95 відносній вологості та при температурі близько 25 "С; або г. яка, у значній мірі, представляє діаграму дифракції рентгенівських променів зразку порошку, що зображена на ФІГ. 4, де діаграма дифракції рентгенівських променів на порошку виміряна при близько 95 95 відносній вологості та при температурі близько 25 76.

Зо 22) Інший варіант здійснення відноситься до кристалічної форми СПОЛУКИ згідно з варіантом здійснення 13), яка, у значній мірі, представляє діаграму дифракції рентгенівських променів зразку порошку, що зображена на ФІГ. 1, де діаграма дифракції рентгенівських променів на порошку виміряна при близько 5 95 відносній вологості та при температурі близько 2576. 23) Інший варіант здійснення відноситься до кристалічної форми СПОЛУКИ згідно з варіантом здійснення 13), яка, у значній мірі, представляє діаграму дифракції рентгенівських променів зразку порошку, що зображена на ФІГ. 2, де діаграма дифракції рентгенівських променів на порошку виміряна при близько 20 95 відносній вологості та при температурі близько 25276. 24) Інший варіант здійснення відноситься до кристалічної форми СПОЛУКИ згідно з варіантом здійснення 13), яка, у значній мірі, представляє діаграму дифракції рентгенівських променів зразку порошку, що зображена на ФІГ. 3, де діаграма дифракції рентгенівських променів на порошку виміряна при близько 50 95 відносній вологості та при температурі близько 25276. 25) Інший варіант здійснення відноситься до кристалічної форми СПОЛУКИ згідно з варіантом здійснення 13), яка, у значній мірі, представляє діаграму дифракції рентгенівських променів зразку порошку, що зображена на ФІГ. 4, де діаграма дифракції рентгенівських променів на порошку виміряна при близько 95 95 відносній вологості та при температурі близько 25276. 26) Інший варіант здійснення відноситься до кристалічної форми СПОЛУКИ відповідно до будь-якого з варіантів здійснення 1) - 25), яка демонструє ендотермічний процес у діапазоні від близько 260 Сб до 276"С, як виявлено диференціальною скануючою калориметрією із застосуванням способу відповідно до даного опису. 27) Інший варіант здійснення відноситься до кристалічної форми СПОЛУКИ відповідно до будь-якого з варіантів здійснення 1) - 26), яка, у значній мірі, представляє профіль гравіметричного поглинання вологи, зображений на ФіГ. 5, де профіль гравіметричного поглинання вологи виміряний при 25 70. 28) Інший варіант здійснення відноситься до кристалічної форми СПОЛУКИ відповідно до будь-якого з варіантів здійснення 1) - 12), одержуваний у варіанті здійснення 13).

На основі залежностей різних варіантів здійснення 1) - 28), як розкрито вище, відповідно є можливими, маються на увазі та при цьому особливо розкриваються в індивідуалізованій формі наступні варіанти здійснення: 1, 24411, 341, 441, 5-1, 6-1, 7-41, 8-41, 9-41, 10-41, 11--1, 1241, 13, 14-13, 15-13, 16--13, 17-13, 18-13, 19-13, 204413, 214-413, 22-13, 23413, 24-13, 254-413, 26-41, 2642-41, 2643-41, 2644-41, 26541, 264-641, 2647-41, 2648-41, 26-94, 26-10-441, 26411441, 266-12-41, 26-13, 26-14-13, 26-15-13, 2616-13, 26-17413, 26418413, 26-19-413, 2620-13, 2621-13, 2622-13, 26-23-13, 26-244-13, 26425413, 2741, 2742-41, 27341, 274441, 274541, 276-411, 2747-41, 27-8441, 2749-41, 27441041, 274411-41, 27441241, 274413, 27-4-14--13, 274-15-13, 274-16-4-413, 274-17-13, 27-18-413, 274-19-13, 274-20-43, 27-4-214-4413, 274-22-13, 2723-13, 27424413, 27425-413, 274-26-41, 27-426-2, 274-26-43, 28-41, 2842-41, 284-33-41, 28-41, 28-5-41, 28--6--1, 28--7-41, 28--8--1, 28--9--1, 28--10-41, 284411-41, 28--1241;

У наведеному вище переліку, числа відносяться до варіантів здійснення згідно з їхньою нумерацією, наведеною вище, тоді як "«" вказує на залежність від іншого варіанта здійснення.

Різні індивідуалізовані варіанти здійснення відділені комами. Інакше кажучи, наприклад, "26-21" відноситься до варіанту здійснення 26) залежному від варіанту здійснення 2), залежному від варіанту здійснення 1), тобто варіант здійснення "26--2--1" відповідає варіанту здійснення 1), який додатково характеризується ознаками варіантів здійснення 2) і 26).

Для уникнення будь-яких сумнівів, кожного разу, коли один з вищезгаданих варіантів здійснення відноситься до "піків на діаграмі дифракції рентгенівських променів на порошку при наступних кутах заломлення 298", зазначена діаграма дифракції рентгенівських променів на порошку була отримана за допомогою комбінованого Си Ка! і Ка2 опромінення, без видалення

Каг; і потрібно розуміти, що точність значень 29 передбачувано знаходиться в діапазоні «/-0,1- 0,2. Зокрема, коли визначається кут заломлення 2тета (28) для піку у варіантах здійснення винаходу та у формулі винаходу, вказане значення 29, потрібно розуміти як інтервал від вказаного значення мінус 0,27" до вказаного значення плюс 0,27 (28 ч/-0,27); і переважно від вказаного значення мінус 0,1" до вказаного значення плюс 0,17 (29 ж/-0,17).

Якщо форму множини застосовують для сполук, твердих фаз, фармацевтичних композицій, хвороб і подібного, то вона також спрямована на окрему сполуку, тверду фазу, фармацевтичну

Зо композицію, хворобу та подібне.

Визначення, наведені тут, призначені для застосування так само до об'єкта винаходу відповідно до будь-якого з варіантів здійснення 1) - 28), і зробивши відповідні зміни, до всього опису та до формули винаходу, якщо інше прямо передбачене визначення не забезпечує більш широкого або більш вузького визначення. Добре відомо, що визначення або краще визначення терміну або виразу визначає і може замінити відповідний термін або вираз незалежно від (та в комбінації з) будь-яким визначенням або кращим визначенням будь-яких або всіх інших термінів або виразів, як визначено тут.

Термін "енантіомерно збагачений" у контексті даного винаходу означає в першу чергу, що щонайменше 90, переважно щонайменше 95, і найбілоше переважно щонайменше 99 мас. відсотків СПОЛУКИ знаходиться у формі одного енантіомеру СПОЛУКИ. Розуміють, що

СПОЛУКА присутня в енантіомерно збагаченій абсолютній (5)-конфігурації.

Термін "у значній мірі чистий" у контексті даного винаходу означає особливо, що щонайменше 90, переважно щонайменше 95, і найбілош переважно щонайменше 99 мас. відсотків кристалів СПОЛУКИ присутні в кристалічній формі відповідно до даного винаходу.

Коли визначають присутність піку, наприклад, на діаграмі дифракції рентгенівських променів на порошку, загальний підхід полягає в тому, щоб робити це відносно співвідношення 5/М (5 - сигнал, М - шум). Згідно з цим визначенням, при твердженні, що пік присутній на діаграмі дифракції рентгенівських променів на порошку, то зрозуміло, що пік на діаграмі дифракції рентгенівських променів на порошку, визначений наявним співвідношенням 5/М (5 - сигнал, М - шум) більшим, ніж х (де х є числовим значенням, більшим, ніж 1), зазвичай більшим, ніж 2, особливо більшим, ніж 3.

У контексті викладеного про те, що кристалічна форма в значній мірі демонструє діаграму дифракції рентгенівських променів на порошку зразку, як зображено на ФІГ. 1,2, З або 4, відповідно, термін "у значній мірі" означає, що щонайменше основні піки діаграми, зображені на зазначених фігурах, тобто такі, що мають відносну інтенсивність більшу, ніж 20 95, особливо більшу, ніж 10 95, у порівнянні з найбільш інтенсивним присутнім на діаграмі піком. Проте, фахівець в галузі дифракції рентгенівських променів на порошку, визнає, що відносні інтенсивності в діаграмах дифракції рентгенівських променів на порошку можуть піддаватися сильним змінам інтенсивності через переважні орієнтаційні ефекти.

Якщо не застосовують у відношенні відносної вологості та температури, термін "близько", розміщений перед числовим значенням "Х", має відношення в даній заявці до інтервалу, що поширюється від Х мінус 1095 від Х до Х плюс 1095 до Х, і переважно до інтервалу, що поширюється від Х мінус 595 від Х до Х плюс 595 до Х. В особливому випадку відносної вологості, термін "близько" розміщений перед відносною вологістю "У" має відношення в даній заявці до інтервалу, що поширюється від відносній вологості М мінус З від М до М плюс здо хі переважно до інтервалу, що поширюється від МУ мінус 1 від М до М плюс 1 до У; наприклад, термін "близько 5 9о відносна вологість" відноситься до відносної вологості між 2 95 і 8 95, і переважно до відносній вологості між 4 95 і б 95. В особливому випадку температур термін "близько" розміщений перед температурою "у" має відношення в даній заявці до інтервалу, що поширюється від температури М мінус 5 "С до М плюс 5 "С, переважно до інтервалу, що поширюється від У мінус З "С до М плюс З "С. Кімнатна температура означає температуру близько 25 С.

Щоразу, коли застосовують слово "між" або "до", щоб описати числовий діапазон, потрібно розуміти, що кінцеві точки зазначеного діапазону однозначно включені в діапазон. Наприклад: якщо діапазон температури описаний між 40 "С і 80 "С (або від 40 "С до 80 "С), те це означає, що кінцеві точки 40 "С і 80 "С включені в діапазон; або якщо змінна визначена як ціле число між 1 ї 4 (або 1-4), це означає, що змінна є цілим числом 1, 2, З або 4.

Вираз 9о мас/мас відноситься до масової процентної частки відносно загальної маси розглянутої композиції. Аналогічно, вираз об/0б відноситься до співвідношення за об'ємом двох розглянутих компонентів.

Кристалічні форми, зокрема, особливо чисті кристалічні форми, СПОЛУКИ відповідно до будь-якого з варіантів здійснення 1) - 28), можуть застосовуватись як лікарські засоби, наприклад, у формі фармацевтичних композицій для ентерального (такого як, особливо, пероральне) або парентерального введення (включаючи місцеве застосування або інгаляцію). 29) Інший варіант здійснення, таким чином, відноситься до кристалічної форми сполуки (5)- 2-(8-(5-хлорпіримідин-2-іл)у(метил)аміно)-2-фтор-6,7,8,9-тетрагідро-5Н-піридо|З3,2-б|індол-5- іл)оцтової кислоти, відповідно до будь-якого з варіантів здійснення 1) - 28) для застосування як лікарського засобу.

Зо Кристалічна тверда форма, зокрема, особливо чиста кристалічна тверда форма СПОЛУКИ відповідно до будь-якого з варіантів здійснення 1) - 28), може застосовуватися як єдиний компонент або як суміш з іншими кристалічними формами або аморфною формою СПОЛУКИ.

Одержання фармацевтичних композицій може бути здійснене способом, який відомий будь- якому фахівцеві в даній галузі техніки (див., наприклад, Кетіпдіоп, Те 5сіепсе апа Ргасіїсе ої

Ріпаптасу, 2151 Ейдйіоп (2005), Рай 5, "Рпагтасешіса! Мапитасіигіпд" (Опублікована І ірріпсой

ММіШате 8 УМІКіп5!), шляхом внесення кристалічної форми даного винаходу, необов'язково в комбінації з іншими терапевтично важливими речовинами, у галенову форму введення разом з підходящими, нетоксичними, інертними, фармацевтично прийнятними твердими або рідкими матеріалами-носіями та за необхідності звичайними фармацевтичними ад'ювантами. 30) Додатковий варіант здійснення винаходу відноситься до фармацевтичних композицій, що включають як активний компонент кристалічну форму СПОЛУКИ відповідно до будь-якого з варіантів здійснення 1) - 28), і щонайменше один фармацевтично прийнятний матеріал носія. 31) Додатковий варіант здійснення винаходу відноситься до кристалічної форми СПОЛУКИ відповідно до будь-якого з варіантів здійснення 1) - 28), для застосування в одержанні фармацевтичної композиції, де зазначена фармацевтична композиція включає як активний компонент СПОЛУКУ і щонайменше один фармацевтично прийнятний матеріал носія. 32) Додатковий варіант здійснення винаходу відноситься до кристалічної форми СПОЛУКИ відповідно до будь-якого з варіантів здійснення 1) - 28) для застосування у запобіганні або лікуванні хвороб, вибраних з групи, що включає хронічні та гострі алергічні/мунні хвороби/порушення, що включають астму, алергічну астму, еозинофільну астму, важку астму, риніти, алергічні риніти, набряк Квінке, алергію на отруту комах, лікарські алергії, алергічний синусит, алергічний нефрит, алергічний кон'юнктивіт, атопічний дерматит, бронхіальну астму, харчову алергію, системні порушення мастоциту, анафілактичний шок, кропивницю, екзему, виразковий коліт, хронічну обструктивну хворобу легені (СОРО), запальне захворювання кишечнику, ревматоїдний артрит і назальний поліпоз; хвороб, пов'язаних з еозинофілами, що включають васкуліти малих судин, такі як синдром Черга-Страуса, грануломатоз Вегенера, мікроскопічний поліваскуліт (і орган специфічні підмножини останнього), гіпереозинофільні синдроми, такі як еозинофільна пневмонія, еозинофільний езофагіт, рефлюксний езофагіт, еозинофільний ендокардит (ендокардит Леффлера), еозинофільно-міалгічний синдром, бо еозинофільний фасциїт, еозинофільний пустульозний фолікуліт (хвороба Офуджі),

еозинофільні виразки, ангіолімфоїдну гіперплазію з еозинофілією (АГНЕ), еозинофільний целюліт (синдром Уелса), хронічну еозинофільну лейкемію, ОКЕ55 синдром (лікарська шкірна реакція, що супроводжується еозинофілією і системними проявами) і хворобу Стіла (системний напад ювенільного ідіопатичного артриту); хвороб, пов'язаних з базофілами, включаючи базофільну лейкемію та базофільний лейкоцитоз і кістозний фіброз. 33) Кращий варіант здійснення винаходу відноситься до кристалічної форми СПОЛУКИ відповідно до будь-якого з варіантів здійснення 1) - 28) для застосування в запобіганні або лікуванні хвороб, вибраних з групи, що включає астму, еозинофільну астму, алергічний риніт, атопічний дерматит, назальний поліпоз, харчову алергію (особливо харчову алергію, пов'язану з

Ім), кропивницю (особливо хронічну кропивницю), еозинофільний езофагіт, синдром Черга-

Страуса, гіпереозинофільний синдром, еозинофільну пневмонію (особливо хронічну еозинофільну пневмонію), ОВЕ55 синдром, хворобу Стіла, СОРО і кістозний фіброз (особливо астму, еозинофільну астму, алергічний риніт, атопічний дерматит, харчову алергію, пов'язану з

ІДЕ, хронічну кропивницю, еозинофільний езофагіт і синдром Черга-Страуса). 34) Додатковий варіант здійснення винаходу відноситься до кристалічної форми СПОЛУКИ відповідно до будь-якого з варіантів здійснення 1) - 28) для застосування в одержанні фармацевтичної композиції для запобігання або лікування хвороб, вибраних з групи, що включає хронічні та гострі алергічнілмунні хвороби/порушення, що включають астму, алергічну астму, еозинофільну астму, важку астму, риніти, алергічні риніти, ангіоедему, алергію на отруту комах, лікарські алергії, алергічний синусит, алергічний нефрит, алергічний кон'юнктивіт, атопічний дерматит, бронхіальну астму, харчову алергію, системні порушення мастоциту, анафілактичний шок, кропивницю, екземи, виразкові коліти, хронічну обструктивну хворобу легені (СОРО)), запальне захворювання кишечнику, ревматоїдний артрит і назальний поліпоз; хвороб, пов'язаних з еозинофілами, що включають васкуліти малих судин, такі як синдром

Черга-Страуса, грануломатоз Вегенера, мікроскопічний поліваскуліт (і орган специфічні підмножини останнього), гіпереозинофільні синдроми, як еозинофільна пневмонія, еозинофільний езофагіт, рефлюксний езофагіт, еозинофільний ендокардит (ендокардит

Леффлера), еозинофільно-міалгічний синдром, еозинофільний фасциїт, еозинофільний пустульозний фолікуліт (хвороба Офуджі), еозинофільні виразки, ангіолімфоїдну гіперплазію з

Зо еозинофілією (АЇНЕ), еозинофільний целюліт (синдром Уелса), хронічну еозинофільну лейкемію, ОКЕ55 синдром (лікарська шкірна реакція, що супроводжується еозинофілією і системними проявами) і хворобу Стіла (системний напад ювенільного ідіопатичного артриту); хвороб, пов'язаних з базофілами, включаючи базофільну лейкемію та базофільний лейкоцитоз і кістозний фіброз. 35) Кращий варіант здійснення винаходу відноситься до кристалічної форми СПОЛУКИ відповідно до будь-якого з варіантів здійснення 1) - 28) для застосування в одержанні фармацевтичної композиції для запобігання або лікування хвороб, вибраних з групи, що включає астму, еозинофільну астму, алергічний риніт, атопічний дерматит, назальний поліпоз, харчову алергію (особливо харчову алергію, пов'язану з ЗЕ), кропивницю (особливо хронічну кропивницю), еозинофільний езофагіт, синдром Черга-Страуса, гіпереозинофільний синдром, еозинофільну пневмонію (особливо хронічну еозинофільну пневмонію), ОКЕ55 синдром, хворобу Стіла, СОРО і кістозний фіброз (а особливо астму, еозинофільну астму, алергічний риніт, атопічний дерматит, харчову алергію, пов'язану з ІЗЧЕ, хронічну кропивницю, еозинофільний езофагіт і синдром Черга-Страуса). 36) Додатковий варіант здійснення винаходу відноситься до фармацевтичних композицій згідно з варіантом здійснення 30) для застосування в запобіганні або лікуванні хвороб, вибраних з групи, що включає хронічні та гострі алергічні/мунні хвороби/порушення, що включають астму, алергічну астму, еозинофільну астму, важку астму, риніти, алергічний риніт, ангіоедему, алергію на отруту комах, лікарську алергію, алергічний синусит, алергічний нефрит, алергічний кон'юнктивіт, атопічний дерматит, бронхіальну астму, харчову алергію, системні порушення мастоциту, анафілактичний шок, кропивницю, екзему, виразковий коліт, хронічну обструктивну хворобу легені (СОРО), запальне захворювання кишечнику, ревматоїдний артрит і назальний поліпоз; хвороб, пов'язаних з еозинофілами, що включають васкуліти малих судин, такі як синдром Черга-Страуса, грануломатоз Вегенера, мікроскопічний поліваскуліт (і орган специфічні підмножини останнього), гіпереозинофільні синдроми, як еозинофільна пневмонія, еозинофільний езофагіт, рефлюксний езофагіт, еозинофільний ендокардит (ендокардит

Леффлера), еозинофільно-міалгічний синдром, еозинофільний фасциїт, еозинофільний пустульозний фолікуліт (хвороба Офуджі), еозинофільні виразки, ангіолімфоїдна гіперплазія з еозинофілією (АЇ НЕ), еозинофільний целюліт (синдром Уелса), хронічна еозинофільна бо лейкемія, ОКЕ55 синдром (лікарська шкірна реакція, що супроводжується еозинофілією і системними проявами) і хвороба Стіла (системний напад ювенільного ідіопатичного артриту); хвороб, пов'язаних з базофілами, включаючи базофільну лейкемію та базофільний лейкоцитоз і кістозний фіброз. 37) Кращий варіант здійснення винаходу відноситься до фармацевтичних композицій згідно з варіантом здійснення 30) для застосування в запобіганні або лікуванні хвороб, вибраних з групи, що включає астму, еозинофільну астму, алергічний риніт, атопічний дерматит, назальний поліпоз, харчову алергію (особливо харчову алергію, пов'язану з ЗЕ), кропивницю (особливо хронічну кропивницю), еозинофільний езофагіт, синдром Черга-Страуса, гіпереозинофільний синдром, еозинофільну пневмонію (особливо хронічну еозинофільну пневмонію), ОРБЕ5З5 синдром, хворобу Стіла, СОР і кістозний фіброз (і особливо астму, алергічний риніт, атопічний дерматит, харчову алергію, пов'язану з ІДЕ, хронічну кропивницю, еозинофільний езофагіт і синдром Черга-Страуса).

Даний винахід також відноситься до способу запобігання або лікування хвороби або порушення, згаданих тут, що включає введення фармацевтично активної кількості кристалічної форми СПОЛУКИ відповідно до будь-якого з варіантів здійснення 1) - 28) або фармацевтичної композиції відповідно до варіанту здійснення 30).

Даний винахід також відноситься до способу одержання СПОЛУКИ в енантіомерно збагаченій формі, та до способів одержання та характеристики кристалічної форми СПОЛУКИ відповідно до будь-якого з варіантів здійснення 1) - 28). Зазначені способи описані у варіанті здійснення 13), а також у процедурах експериментальної частини нижче.

Експериментальні процедури:

Скорочення (використані вище або нижче):

Ас Ацетил (такі як в ОАс - ацетат, АСОН - оцтова кислота) ад. вода

Вос трет-бутоксикарбоніл

ВЗА Сироватка бичачого альбуміну

Ви Бутил такий як у н-Ви - н-бутил конц. Концентрований дхмМ Дихлорметан

Зо ДЕА Дієтиламін

ДІЕА Диізопропілетиламін

ДМФА М,М-Диметилформамід дев) Диметилсульфоксид дрт розпадів на хвилину

ЕДТА Етилендіамінтетраоцтова кислота

ЕІ (Б) Світлорозсіювання випарів (Детектування) екв. Еквівалент(и)

Е Етил

ЕОАс Етилацетат

ЕЮН Етанол ох Флеш-хроматографія на силікагелі

ФІГ. Фігура год. Година(и)

НЕРЕ5 /4-(2-гідроксиетил)-піперазин-1-етансульфонова кислота

І"Н-ЯМР о Протонний ядерно-магнітний резонанс

ВЕРХ Високоефективна рідинна хроматографія

РХ-МС Рідинна хроматографія - Мас-спектрометрія

М Молярність

М Точна маса (застосовується для РХ-МС)

Ме Метил месм Ацетонітрил меон Метанол

МХв Мікрохвилі

МВт мілі-Ватт мкл мікролітр

ХВ. Хвилинац(и)

Мо Мас-спекторметрія

М Нормальність

РВ5 Фосфато-сольовий буфер бо РП Феніл

РРИз Трифенілфосфін преп. Препаративна вв Відносна вологість

КТ Кімнатна температура насич. Насичений(а) тФОоК Трифтороцтова кислота тгФ Тетрагідрофуран

Їут Час утримання

ТРИС Трис-(гідроксиметил)амінометановий буфер

УФ Ультрафіолет

Усі використані розчинники та реактиви, отримані з комерційних джерел, якщо не зазначено інакше.

Температури зазначені в градусах Цельсія (С). Якщо не зазначено інакше, реакції відбуваються при кімнатній температурі (КТ).

У сумішах співвідношення частин розчинника або елюента або сумішей реактивів у рідкій формі наведені як співвідношення за об'ємом (об/об), якщо не зазначено інакше.

Сполуки очищені колонковою флеш-хроматографією на силікагелі (СГ) або препаративною

ВЕРХ. Сполуки, описані у винаході, характеризуються РХ-МС (час утримання Кг зазначений у хвилинах; молекулярна маса, отримана за мас-спектром, зазначена в г/моль, із застосуванням зазначених нижче умов).

Умови аналітичної РХ-МС, які застосовуються в прикладах нижче:

Аналізи РХ-МС виконані на системі Адіїепі 1100, обладнаній бінарним насосом Обіопех Р580, детектором з фотодіодною матрицею біопех РОА-100 і мас-спектрометром Ріппідап АОА.

Час утримання РХ отримували, застосовуючи наступні умови елюювання: - Аналітична ВЕРХ на колонці 7огбахт? 5В-АО (4,6х50 мм, 3,5 мкм, Адііепі); лінійний градієнт вода/0,04 95 ТФОК (А) і МеСМ (В) від 5 95 до 95 95 В протягом 1,5 хв; швидкість потоку 4,5 мл/хв., детектування при 210 нм.

Очищення за допомогою препаративної ВЕРХ/МС (основні умови) виконували на системі бінарного градієнтного насоса високого тиску Сіїоп 333/334 з автосемплером і колектором

Зо фракцій Сіївоп 215, детектором біопех ОМО340О АБ, детектором Роїутепаре МН-ЕЇ 5 1000

ЕГЇ 5 і детектором ТПпепто М5О Рів М5, із застосуванням колонки У/аїег5 ХВгідде С18 (10 мкм, 30х75 мм), з лінійним градієнтом вода/0,5 95 25 95 МНАОН (В) і МесСмМ (А), починаючи від 80/20 до 5/95 (В) / (А) впродовж 5 хвилин; швидкість потоку рідини 75 мл/хв.

Аналітичну ВЕРХ на хіральній стаціонарній фазі виконували на колонці Оаїсе! Спіга!Рак АО-

Н (466х250 мм, 5 мкм) або на колонці СпігаІРак АМ-Н (4,6х250 мм, 5 мкм). Звичайними умовами хіральної ВЕРХ є ізократична суміш 50 95 гептану ї- 0,05 95 ДЕА і 50 95 ЕОН--0,05 95 ДЕА, при швидкості потоку 0,8 мл/хв., детектування при 210 нм (хіральна ВЕРХ-1) або ізократична суміш 95 гептану та 60 95 ЕН -- 0,1 95 ТФОК, при швидкості потоку 1,0 мл/хв., детектування при 210 нм (хіральна ВЕРХ-2). 40 Препаративну ВЕРХ на хіральній стаціонарній фазі виконували на колонці Оаїсе! Спіга!ІРак

АР-Н (20х250 мм, 5 мкм). Звичайними умовами хіральної ВЕРХ є ізократична суміш 50 95 ЕЮН -- 0,05 95 ДЕА і 50 95 гептану, при швидкості потоку 34 мл/хв, детектування при 210 нм.

Дифракція рентгенівських променів на порошку (ХКРО)

Діаграми дифракції рентгенівських променів на порошку були отримані на рентгенівському дифрактометрі Вгикег 08 Адмапсє, обладнаному камерою задавання та керування температурною та відносною вологістю зразка Апіоп-Рааг СНОСрійибж. Дифрактометр був обладнаний детектором Іупхеує, який працює з СиКа-випромінюванням з паралельною оптикою променю та роботою в режимі відбивання. Зазвичай, рентгенівську трубку запускали при 40кВ/40мА. Застосовували крок 0,02" (28) і крок часу 95 сек. на діапазон сканування 3-35" в 28. Порошок злегка пресували в стандартний фіксатор зразку Апіоп-Рааг ТТК. Дані дифракції переглядали, застосовуючи Си Кат (А - 1,54060 А). Точність значень 26, як забезпечено тут, знаходиться у діапазоні ж/- 0,1-0,27, що, як правило, має місце для стандартно отриманих зразків діаграм дифракції рентгенівських променів на порошку.

Аналіз гравіметричної сорбції пари (3У5)

Вимірювання виконували на приладі для множини проб ЗРЗ-100п5РО-100п (Ргоіекі

Мезеїесппік, ШОІт, Сегтапу), який застосовували у кроковому режимі при 25"С. Зразок урівноважували при 4095 ВВ перед запуском попередньо заданої програми вологості (застосовували 40-0-95-0-95-40 950 ВВ) з кроком 595 ДВВ і з максимальним часом урівноважування 24 години на крок. Застосовували від близько 20 до 30 мг кожного зразка. бо Гігроскопічну класифікацію виконували згідно Еигореап РПагптасореїа Тесппіса! Спціде (1999,

сторінка 86), наприклад, незначно гігроскопічний: збільшення маси становить менше, ніж 2 95 і рівне або більше, ніж 0,2 95 мас/мас; гігроскопічний: збільшення маси менше, ніж 15 95 і рівне або більше, ніж 2 95 мас/мас. При першому адсорбційному скануванні оцінювали зміну маси між 20 9о відносною вологістю та 80 95 відносною вологістю.

Диференціальна Скануюча Калориметрія (ДСК)

ДСК дані були зібрані на системі Мешег Тоїейдо 5ТАКе Зузіет (модуль О5С822е, вимірювальна комірка з керамічним сенсором і програмним забезпеченням 5ТАК версії 13.00) обладнаному 34 позиційним автосемплером. Прилад був відкалібрований щодо енергії та температури із застосуванням сертифікованого індію. Як правило, 2 мг кожного зразка, в автоматично проколотих 40 мкл алюмінієвих кюветах Мейіег, нагрівали зі швидкістю 10 "С хв.7, якщо не зазначено інакше, від -20 "С до 320 "С. Підтримували продувку азотом над зразком зі швидкістю 20 мл хв.7.

І-хімія

Синтез (5)-2-(8-(5-хлорпіримідин-2-іл)(метил)аміно)-2-фтор-6,7,8,9-тетрагідро-5Н- піридо|3,2-б|індол-5-іл)уоцтової кислоти 1) Синтез 4-((5-хлорпіримідин-2-іл)(метил)аміно)циклогексанону до б «І: Ї я тн Мед З 2 вммемнувюн о (77) АсуджаМеА 27 НОМеОН й й пен нннтчнва стен чнння С рими пи Б И нин щ р

ЗТ 0 МмавнюАасві дм СТ ВІ і

І: А М в в (К являє собою З-хлор-піримідин-2-іл)

До розчину, комерційно доступного 1,4-діоксаспіро|4.5|декан-8-ону (1 екв.) в ДХМ (20 мл / 10 ммоль), послідовно додавали при 0 "С метиламін (8М в ЕН, 1 екв.) і Мавн(ОАс)»з (1,5 екв.).

Реакційній суміші давали нагрітися до КТ і перемішували протягом 2 год. Реакційну суміш переливали в насичений розчин МансСоОз, органічний шар промивали насиченим сольовим розчином, сушили над Мо95О4 і випаровували у вакуумі щоб одержати М-метил-1,4- діоксаспіро|4.5|декан-8-амін, який застосовували для наступного етапу без подальшого очищення.

До розчину М-метил-1,4-діоксаспіро|4.5|декан-8-аміну (1 екв.) в ДМФА (10,5 мл / 6 ммоль) додавали ДІЕА (2 екв.) і 2,5-дихлорпіримідин (1,05 екв.). Реакційну суміш перемішували при 90 7С протягом ночі. Після охолодження до КТ, додавали ізопропілацетат. Суміш промивали водою та 1095 водним розчином лимонної кислоти. Органічний шар сушили (Мо5оз) і

Зо концентрували у вакуумі. Неочищений продукт очищали ФХ (від 0 до 15 95 ЕІОАс у гептані), щоб одержати необхідну проміжну сполуку у вигляді твердої речовини.

Розчин цієї проміжної сполуки (1 екв.) у суміші 2Н НСЇІ (2,7 мл/ 5 ммоль) і МеОнН (2,7 мл/ 5 ммоль) перемішували при КТ протягом ночі. Водний шар екстрагували ДХМ. Органічний шар сушили (Мд5О»5), концентрували у вакуумі. Неочищений продукт очищали ФХ (від 0 до 17 95

ЕОАс у гептані), щоб одержати зазначену сполуку у вигляді твердої речовини.

РХ-МС: у - 0,78 хв; (МАНІ - 240.2 2.1) Синтез М-(5-хлорпіримідин-2-іл)-2-фтор-М-метил-6,7,8,9-тетрагідро-5Н-піридої|3,2-

Вііндол-8-аміну (спосіб А)

ІФ)

Ц я що х чи М - м - і і пекенктнняхннтянкнннт фо | | Мун вес чи ви ї

Мне (ВБР РЕ пірнаянн М

Мк

ІК являє собою 5-хлор-піримідин-яіл)

Розчин З-аміно-2-бром-6-фтор-піридину (1 екв.), 4-(5-хлорпіримідин-2- іл)ууметил)аміно)циклогексанону (1,2 екв.), (РізР)«Ра (0,05 екв.) і піридину (8,17 екв.) змішали у віалі. Віалу піддавали дії МХв опромінення при 160 С протягом 1 години. Знову додали (РизР)аРа (0,025 екв.) і реакційну суміш знову піддавали дії МХв опромінення при 1607 протягом 30 хв. Після охолодження до КТ, реакційну суміш змішували з водою та екстрагували двічі ДХМ. Об'єднані органічні екстракти сушили (М9504), фільтрували та концентрували у вакуумі. Залишок очищали за допомогу препаративної ВЕРХ (основні умови), щоб одержати цільовий продукт.

РХ-МС: у - 0,87 хв; МАНІ" - 332,09. 2.2) Синтез М-(5-хлорпіримідин-2-іл)-2-фтор-М-метил-6,7,8,9-тетрагідро-5Н-піридої|3,2-

Вііндол-8-аміну (спосіб В) а) Синтез ди-трет-бутил 1-(6-фторпіридин-3-іл)/гідразин-1,2-дикарбоксилату ко к Вс вд

Ь в хх Іа й М ша нн: ох "ДЕ иа я ЗА "Воє

Важ с

Розчин н-бутиллітію (1,6М у гексані, 1,1 екв.) додавали по краплям при -40 "С до розчину 5- бром-2-фтор-піридину (1 екв.) у діетиловому ефірі (14,5 екв.) в атмосфері М». Реакційну суміш перемішували протягом 20 хв. при -40 "С і потім по краплям додавали розчин трет-бутил- азодикарбоксилату (1,1 екв.) в ТГФ (18,5 екв.). Реакційну суміш перемішували при -40 С протягом 30 хв. і залишали нагрітися до КТ протягом 30 хв. Додавали воду, а потім ДХМ.

Відокремлювали органічну фазу та сушили над Мо95О», фільтрували та концентрували у вакуумі. Залишок очищали ФХ (ЕОАСс/ н-гептан: 2/8), щоб одержати цільовий продукт.

РХ-МС: у - 0,88 хв; МАНІ" - 328,12. р) Синтез М-(5-хлорпіримідин-2-іл)-2-фтор-М-метил-6,7,8,9-тетрагідро-5Н-піридоїЇ3,2-Б|індол- 8-аміну 6) ) Ум-В

М

Е М ОТ

5 НН Кк Р им ( су | їх 2 ЗМ ЗВос 495 НВО, р

Вос Н (АВ являє собою 5-хлор-піримідин-2-іл)

Розчин ди-трет-бутил 1-(6б-фторпіридин-3-іл)/гідразин-ії,2-дикарбоксилат (1 екв.), 4-((5- хлорпіримідин-2-іл)у(метил)аміно)уциклогексанон (1 екв.) в 495 водному розчині НебОх4 (10 мл/0,04 моль) перемішували при 100 "С протягом 150 хв. Після охолодження до КТ, реакційну суміш змішували з насиченим МансСоОз і екстрагували ЕІОАс. Об'єднані органічні екстракти сушили (М9505), фільтрували та концентрували у вакуумі. Залишок очищали за допомогою препаративної ВЕРХ (основні умови), щоб одержати цільовий продукт.

РХ-МС: у - 0,87 хв; (МАНІ: - 332,03. 3) Синтез (5)-етил. 2-(8-(5-хлорпіримідин-2-іл)ухуметил)аміно)-2-фтор-6,7,8,9-тетрагідро-5Н- піридо|3,2-б|індол-5-ілляацетату та (К)-етил 2-(8-(5-хлорпіримідин-2-іл)у(метил)аміно)-2-фтор- 6,7,8,9-тетрагідро-5Н-піридоїЇ3,2-б|індол-5-іл)яацетату ч М ж вм й ек м- йе зо м у-о ре 7 Ще Й шк Ї М шій х з й вом Веб в МВ ово СИВУ

Її ран ман дДМФА ї І ну ї Ї С, и У ой ще ша Що ож "СО

Ман (95 95, 56,1 мг, 2,22 ммоль, 1,2 екв.) обережно додавали до холодного розчину (0 С) М- (5-хлорпіримідин-2-іл)-2-фтор-М-метил-б, 7,8,9-тетрагідро-5Н-піридоїЇЗ3,2-б|індол-в8-аміну (614 мг, 1,85 ммоль, 1 екв.) в ДМФА (6,36 мл). Реакційну суміш перемішували 20 хв. Повільно додавали етилбромацетат (0,23 мл, 2,04 ммоль, 1,1 екв.) і реакційну суміш поступово нагрівали до КТ і перемішували протягом 2 годин. Реакційну суміш розчиняли в ЕІОАс, і промивали насиченим

Мансоз. Органічний екстракт сушили над Мо95О»5, фільтрували та концентрували у вакуумі.

Залишок очищали ФХ (н-гептан до н-гептан/г(ОАс: 7/3) до одержання цільового продукту у вигляді рацемічної суміші.

РХ-МС: ук: 0,96 хв./ (МАНІ: 418,01

Два енантіомери отриманого продукту розділяли за допомогою препаративної ВЕРХ на хіральній стаціонарній фазі. (5)-етил о 2-(8-(5-хлорпіримідин-2-іл)(метил)аміно)-2-фтор-6,7,8,9-тетрагідро-5Н-піридої|3,2-

Ві|індол-5-іл)луацетат (271 мг, 35 ув): ВЕРХ (хіральна ВЕРХ-1): у: 6,22 хВ.; (Я)-етил о 2-(8-(5-хлорпіримідин-2-іл)(метил)аміно)-2-фтор-6,7,8,9-тетрагідро-5Н-піридоїЇ3,2-

Ві|індол-5-іл)луацетат (273 мг, 35 Ус): ВЕРХ (хіральна ВЕРХ-1): їуг: 7,66 хв. 4) Синтез (5)-2-(8-(5-хлорпіримідин-2-іл)(метил)аміно)-2-фтор-6,7,8,9-тетрагідро-5Н- піридо|3,2-б|індол-5-іл)уоцтової кислоти и земавно бо ї х Ї уся попччнннккннчнннкн ї йо де джек тд ве я

Мосс Он

До розчину (5)-етил 2-(8-(5-хлорпіримідин-2-іл)(метил)аміно)-2-фтор-6,7,8,9-тетрагідро-5Н- піридо|3,2-б|індол-5-іл)ацетату (271 мг, 0,649 ммоль, 1 екв.) в ТГФ (10 мл) додавали Маон (1Н, 10 мл, 10 ммоль, 15,4 екв.) при КТ. Реакційну суміш перемішували при КТ протягом 1 години.

Зо Реакційну суміш концентрували у вакуумі до видалення тільки ТГФф. Її підкислювали НСІ конц. до рн-б-6 і перемішували при КТ. Суспензію екстрагували ЕІОАс (4х). Об'єднані органічні шари сушили над М95О»., фільтрували та концентрували у вакуумі, щоб одержати зазначену в заголовку сполуку у вигляді бежевої твердої речовини (255 мг, 100 Об).

РХ-МС: ук: 0,82 хв./ (МАНІ: 390,12

ВЕРХ (хіральна ВЕРХ-2): іуг: 4,96 хв.

ІЇ. Одержання кристалічної форми СПОЛУКИ

Приклад 1: Одержання та визначення характеристик СПОЛУКИ у кристалічній формі 1 0,1 г СПОЛУКИ розчиняли в 4 мл ТІФ, і 0,2 мл розчину поміщали в 4 мл віалу з коричневого скла. ТГФ випаровували з віали, застосовуючи установку Сотбрідапсег при 30 "С і 100 мБар протягом 30 хвилин (Нейціспй АС, Зм/йгегапа). Твердий залишок залишився в скляній віалі в аморфному стані. До твердого залишку додавали 0,02 мл ацетону, віалу герметично закривали та суміші забезпечували витримку протягом З днів при кімнатній температурі в закритій віалі.

Твердий залишок являв собою СПОЛУКУ у кристалічній формі 1. Як альтернатива ацетону в способі може бути застосований етилацетат, ацетонітрил або ізопропанол.

Таблиця 1

Характеристичні дані для СПОЛУКИ в кристалічній формі 1

ОЛВЯМР 00 щЩільнийд//1111111111111111111111Ї11111111 дек виражений ендотермічний процес менше 100 "С, | Див. ФІГ. 6 внаслідок випаровування розчинника. Далі ендотермічний процес у діапазоні від близько 260 "С до близько 276 "С і екзотермічний сигнал, що починається в діапазоні від близько 250 "С до близько 260 "С, що та розвивається за межами близько 280 С. Це інтерпретується як супутній процес плавлення/розкладання. Точна позиція супутніх процесів протилежного знаку дуже залежить від кінетики відповідних процесів, і фахівець у даній галузі техніки дійде висновків, що визначення точної точки плавлення як пікової температури не рекомендується в таких випадках. 0,2 95 і менше, ніж 2 95

ІП. Аналіз біологічної активності

Підготовка мембран рецепторів ЯСЕТН» і аналіз зсуву міченого ліганду:

У першу чергу виділяли рекомбінантні клітини НЕК293-ПСВАТН» з чашок Петрі в 5 мл буферу

А/чашку (Буфер А: 5 мМ Ттіз, 1 мМ МасСі»--6Н2О рн-7,4) застосовуючи скляну паличку з гумовим наконечником. Потім клітини переносили в пробірки для центрифуги і центрифугувались протягом 5 хвилин при 400 д. Конгломерат клітин повторно суспендували в тому ж буфері і пробірки заморожували при -80 "0. Клітини розморожували і одержували фрагменти мембран гомогенізацією, застосовуючи гомогенізатор політрон (30 секунд). Потім фрагменти мембран центрифугували при 3000 9 протягом 20 хвилин і повторно суспендцвали в буфері С (Буфер С: 75 мМ Тіз, 25 мМ Масі», 250 мМ сахарози рН 7,4). Аліквотні кількості фрагментів мембран зберігали при -20 76.

Аналіз зв'язування виконували при об'ємі кінцевому аналізу в 250 мкл. Спочатку у кожну лунку поміщали 25 мкл досліджуваної сполуки, попередньо розчиненої в зв'язуючому буфері (зв'язуючий буфер: 50 мМ Ттіз-Вазе, 100 мМ Масі, 1 мМ ЕДТА, 0,1 925 В5А (без протеази), 0,01 95

МамМз, т0мМ Мапсі» рн 7,0). Після додавання 75 мкл зв'язуючого буфера в кожну лунку додавали 50 мкл міченого ліганду "Н-РСаЮ» (у кількості 2,5 НМ (220,000 арт/лунку) з АМАУМУА АНТОббв).

Аналіз зв'язування починали додаванням 100 мкл фрагментів мембран СВАТН»: до досягнення кінцевої концентрації 20 мкг/лунку. Для неспецифічного зв'язування, в реакційну суміш додавали РООр» до кінцевої концентрації 10 мМ. Суміш зразка інкубували протягом 90 хвилин при кімнатній температурі, а потім фільтрували через 96-лунковий планшет з СЕ/С фільтром, який попередньо замочували протягом З годин в 0,5 95 поліетиленіміні (РЕЇ). Фільтрувальні лунки промивали три рази льодяним зв'язуючим буфером. Потім у кожну лунку додавали 40 мкл

Містозсіпі-40 (РаскКага) і вимірювали кількість збереженої радіоактивності на Торсошпі (Раскага).

Антагоністична активність СПОЛУКИ: ІСво-5,6 НМ.

Аналіз зсуву міченого ліганду - Альбумін сироватки людини (НБА):

Аналіз зсуву міченого ліганду в присутності альбуміну сироватки людини (НЗА) виконували, як описано вище з наступними модифікаціями. Зв'язуючий буфер-Н5А: зв'язуючий буфер їх

Зо 0,5 95 Зідта альбуміну з сироватки людини А1887 (замість 0,1 95 ВБ5А). У кожну лунку поміщали 25 мкл об'єм досліджуваної сполуки, попередньо розчиненої в зв'язуючому буфері-НЗА. Після додавання 75 мкл зв'язуючого буфера-НЗА у кожну лунку додавали 50 мкл ЗН-РОаЮ:» (у кількості 2,5 НМ (220,000 арт/лунку) з АМАУМА АКТО662). Наступний протокол був ідентичний описаному вище.

Антагоністична активність СПОЛУКИ: ІСво-5,0 НМ.

Аналіз зміни форми еозинофілу з плазмою людини

Після одержання інформованої згоди, відбирали зразки крові пункцією з вени у відповідності з протоколом, схваленим етикою комітету Базеля, Швейцарія. Поліморфнонуклеарні лейкоцити

(що місять еозинофіли, базофіли і нейтрофіли) ізолювали, застосовуючи спосіб

Роїутогрпргер' "М (Ахів-5Ппіеід). Стисло, антикоагульовану, цільну кров нашаровували на градієнт

Роїутогрпргер (щільність 1,113 г/мл) і центрифугували при 500 д протягом 30 хвилин.

Поліморфнонуклеарну фракцію клітин збирали та виснажували на еритроцити за допомогою лізису гіпотонічним сольовим розчином.

Поліморфнонуклеарні клітини повторно суспендували в буфері для аналізу (1 х РВ5 з

Са»м/Мад з додаванням 0,1 95 ВБА, 10 мМ НЕРЕЗ ії 10 мМ глюкози, рН 7,4) близько 5 х 105 клітин/мл і зафарблювали анти-С0О494-АРС (АРС-Алофікоціанін) протягом 1 години при КТ.

Досліджувані сполуки, в різних концентраціях, попередньо інкубували протягом 10 хвилин у людській плазмі (антикоагульованій інгібітором тромбіну). Потім плазму людини додавали до поліморфнонуклеарних клітин до 50 90 кінцевого аналізованого обсягу З поліморфнонуклеарними клітинами на рівні 4 х 105 клітин/мл. Після інкубування протягом 10 хвилин при 37 "С, поліморфнонуклеарні клітини активували протягом 5 хвилин при 37 "С додаванням РОЮ» при кінцевій концентрації 100 нМ. Активацію зупиняли додаванням 0,5 мл параформальдегіду (1 Об).

Відразу після фіксації параформальдегідом, зразки аналізували за допомогою проточного цитометрому ЕАСзЗСапіо (ВО Віозсіепсев) і визначали цільові клітини за їхніми характеристикам прямого розсіювання (ЕС) і бічного розсіювання (550). Еозинофіли визначали за сигналом анти-СО0494-АРС та їх характерному профілю бічного розсіювання (5552). Зміни форми відгуку, що вказують активацію еозинофілу, визначали кількісно як відсоток клітин з підвищеним прямим розсіюванням.

Антагоністична активність СПОЛУКИ: ІСво-3,1 НМ.

Іп міго цитотоксичність у первинно вирощених гепатоцитах пацюка 1. Способи 11 Виділення та вирощування гептоцитів пацюка.

Дорослих пацюків М/ієїаг чоловічої статі присипляли пентобарбіталом натрію і виділяли гепатоцити відповідно до стандартної процедури, тобто іп 5йи перфузією печінки розчином колагенази. Життєздатність очищених гепатоцитів, перевірена способом витиснення трипанового синього, була більше, ніж 85 95. Ізольовані гепатоцити повторно суспендували в

Зо стандарті МУМійате Медішт Е, без фенолового червоного, збагаченому (М/МЕ зирр.) трансферином (100 мкг/мл), трийодтироніном (10 мкг/мл), гентаміцином (50 мкг/мл), гідрокортизонгемісукцинатом (13,36 мкг/мл), глюкагоном (5 мкг/мл), НЕРЕ5З (10 мМ), інозином (10 мкг/мл), інсуліном (10 мкг/мл), стрептоміцином (100 мкг/мл) і пеніциліном (100 од/мл) і 10 Фо ембріональною бичачою сироваткою (ЕВ5). Клітини наносили на покритий колагеном 24- лунковий планшет при початковій щільності 2 х 105 клітин/лунку. Після 4 год., для фіксації на чашках Петрі, середовище видаляли та заміняли новим М/МЕ 5!ирр. без ЕВ5, що містило досліджувані сполуки, і витримували протягом 24 год. при 37 "С в атмосфері 95 95 О» і 5 95 СО».

Для кожного експерименту, тобто, з кожною партією гепатоцитів, проводили чотириразову обробку досліджуваними сполуками. У кожній чашці Петрі також проводили чотириразовий контроль (обробка тільки середовищем носія). 1.2 Іп міго експозиція досліджуваними сполуками

Вихідні розчини досліджуваних сполук одержували в ДМСО за кілька годин до початку обробки. Відповідні розведення цих вихідних розчинів додавали до живильного середовища безпосередньо перед обробкою в порядку забезпечення кінцевих концентрацій 0, 3, 10, 30, 100 і 300 мкМ. Кінцева концентрація носія ДМСО становила 1 95 (об./об.). 1.3 Життєздатність культур клітин 1.3.1 Контроль морфології моношару

Морфологія моношарів гепатоциту була проконтрольована світловою мікроскопією після 24 годинної експозиції досліджуваними сполуками. Пов'язані з проведеною обробкою ефекти описані відповідно наведеної нижче класифікації: 0 Спостерігають відсутність морфологічних після обробки при порівнянні з контрольними культурами 1-3 Обробка приводить до будь-яких морфологічних змін, наприклад, внутрішньоклітинного гранулювання, вакуолізації або загибелі клітин. Залежно від серйозності, ці зміни класифікують як незначні (1), помірні (2) або значні (3).

К Обробка закінчується 100 95 загибеллю клітин та/або повним відділенням моношару, що приводить до чистої безклітинної чашки. 1.3.2 Втрата лактатдегідрогенази

Після 24 год. обробки культур гепатоцитів, ретельно збирали аліквотні кількості 60 культивованого середовища та застосовували для аналізу активності лактатдегідрогенази

(ОН) за допомогою спектрофотометрії, застосовуючи набір виявлення цитотоксичності І ОН від

Сіопіеспй (каталожний Мо 630117, Моипіайп Міем, СА, ОБА). Для кожного експерименту застосовували додаткові посіви для визначення повної внутрішньоклітинної активності ГОН на початку обробки. Для цього 4 лунки клітинної культури за експеримент перед початком обробки вимивали холодним насиченим розчином солі, обробляли ультразвуком у свіжому середовищі та гомогенізат аналізували на загальну активність ОН. Активність ферментів у живильному середовищі оцінювали та виражали у вигляді процентної частки від загальної активності, що була у культивованих гепатоцитах на початку обробки. 2. Аналіз даних

Найнижча цитотоксична концентрація (СС) і неефективна концентрація (МОоЕгС) представлені для кожної сполуки, на основі морфології клітини та втрати ГОН після 24 год. обробки. СС визначають як найнижчу концентрацію досліджуваної сполуки, що приводить до чистого ефекту на культивованих гепатоцитах пацюка (морфологічна оцінка 2 2 або 2 2- кратного збільшення втрати І ОН). Значення СС х»300 мкМ вказує на відсутність ефекту на обох кінцевих точках при найвищій концентрації 300 мкМ досліджуваної сполуки. МОЕС визначають, як найвищу концентрацію досліджуваної сполуки, яка не мала ефекту на культивованих гепатоцитах пацюка (морфологія та втрата І ОН). 3. Результати: значення І СС і МОЕС.

МКМ МКМ МКМ МКМ

ХМ х М Е М

Е М- р В с -М у

М 2300 2300 її оо зо сон приюаад 9

СПОЛУКА з МО 2011/117798)

Іп-мімо гепатотоксичність:

Гепатотоксичність сполуки формули (І) може бути проаналізована пероральною обробкою пацюків і видів, що не мають відношення до класу гризунів, аж до 4 тижнів, застосуванням трьох різних доз сполуки. Відновлення можливої токсичності може бути досліджене за наступної обробки у вільний період (період відновлення). Рівні доз вибрані на основі діапазону доз, виявленого дослідженням відповідних зразків. Висока доза потенційно визначає токсичність для органів близько до максимально стерпної дози. Середню та низьку дозу вибирають на основі передбачуваних терапевтичних впливів на організм людини. Вплив сполуки оцінюють при кожному рівні дози.

Зо У кінці обробки та кінці відновлення оцінюють біомаркери печінки (такі як, наприклад, ферменти печінки, білок, тригліцериди або холестерин) за кров'ю. На додаток, зрізи печінки, забарвлені Гематоксиліном-Еозином досліджують за допомогою мікроскопу, щоб безпосередньо оцінити можливу шкоду для органів. Спеціалізоване забарвлення зрізів печінки може бути необхідно, щоб додатково охарактеризувати можливі результати досліджень у відношенні печінки.

Claims (13)

ФОРМУЛА ВИНАХОДУ

1. Кристалічна форма (5)-2-(8-(5-хлорпіримідин-2-ілууметил)аміно)-2-фтор-6,7,8,9-тетрагідро- БН-піридоїЇ3,2-б|індол-5-іл)уоцтової кислоти, що характеризується присутністю піків на діаграмі дифракції рентгенівських променів на порошку при наступних кутах заломлення 260: 12,6", 14,0" 1 21,17, де діаграма дифракції рентгенівських променів на порошку виміряна при відносній вологості (5ж23)95, при (20ж3)95, при (50ж23)95 або при (95:-3)95 та при температурі 25:55 "С з використанням комбінованого СиКаї і Ка2 опромінення, без видалення Каг.

2. Кристалічна форма (5)-2-(8-(5-хлорпіримідин-2-ілууметил)аміно)-2-фтор-6,7,8,9-тетрагідро- БН-піридоїЇ3,2-б|індол-5-іл)оцтової кислоти за п. 1, що характеризується: а) присутністю піків на діаграмі дифракції рентгенівських променів на порошку при наступних кутах заломлення 28: 12,67, 14,07, 19,87, 20,07, 21,17 її 26,47, де діаграма дифракції рентгенівських променів на порошку виміряна при відносній вологості (5:2-3)95 та при температурі 2515 С або б) присутністю піків на діаграмі дифракції рентгенівських променів на порошку при наступних кутах заломлення 29: 12,67, 14,07, 19,77, 21,17 ї 26,47, де діаграма дифракції рентгенівських променів на порошку виміряна при відносній вологості (202-3)95 та при температурі 25:55 "С; або в) присутністю піків на діаграмі дифракції рентгенівських променів на порошку при наступних кутах заломлення 28: 12,67, 14,07, 19,57, 21,17, 21,47 ії 26,17, де діаграма дифракції рентгенівських променів на порошку виміряна при відносній вологості (505-3)95 та при температурі 25:55 "С; або г) присутністю піків на діаграмі дифракції рентгенівських променів на порошку при наступних кутах заломлення 28: 12,67, 14,07, 19,57, 21,17, 21,57 ії 26,07, де діаграма дифракції рентгенівських променів на порошку виміряна при відносній вологості (955-43)95 та при температурі 25:55 76.

З. Кристалічна форма (5)-2-(8-(5-хлорпіримідин-2-ілу/уметил)аміно)-2-фтор-6,7,8,9-тетрагідро- БН-піридоїЇ3,2-б|індол-5-іл)оцтової кислоти за п. 1, що характеризується: а) присутністю піків на діаграмі дифракції рентгенівських променів на порошку при наступних кутах заломлення 28: 12,67, 14,07, 15,67, 19,87, 20,07, 21,17, 23,77, 26,47, 27,57 і 28,4", де діаграма дифракції рентгенівських променів на порошку виміряна при відносній вологості (523)95 та при температурі 25:15 "С або б) присутністю піків на діаграмі дифракції рентгенівських променів на порошку при наступних кутах заломлення 28: 12,67, 14,07, 15,67, 19,77, 21,17, 23,37, 23,67, 26,47, 27,47 і 28,47, де діаграма дифракції рентгенівських променів на порошку виміряна при відносній вологості (2023)95 та при температурі 25:55 "С; або в) присутністю піків на діаграмі дифракції рентгенівських променів на порошку при наступних кутах заломлення 28: 12,67, 14,07, 15,27, 16,17, 19,57, 21,17, 21,47, 23,07, 26,17 ії 27,07, де діаграма дифракції рентгенівських променів на порошку виміряна при відносній вологості (5023)95 та при температурі 25:25 "С; або г) присутністю піків на діаграмі дифракції рентгенівських променів на порошку при наступних кутах заломлення 28: 12,67, 14,07, 16,27, 18,97, 19,57, 21,17, 21,57, 22,97, 26,07 і 27,0", де діаграма дифракції рентгенівських променів на порошку виміряна при відносній вологості (95:2-3)95 та при температурі 25:55 76. Зо

4. Кристалічна форма (5)-2-(8-(5-хлорпіримідин-2-ілууметил)аміно)-2-фтор-6,7,8,9-тетрагідро- БН-піридоїЇ3,2-Б|індол-5-іл)уоцтової кислоти за п. 1, що характеризується присутністю піків на діаграмі дифракції рентгенівських променів на порошку при наступних кутах заломлення 26: 12,67, 14,07 та 21,1", де діаграма дифракції рентгенівських променів на порошку виміряна при відносній вологості (20-3)95 та при температурі 25:55 76.

5. Кристалічна форма (5)-2-(8-(5-хлорпіримідин-2-ілу/уметил)аміно)-2-фтор-6,7,8,9-тетрагідро- БН-піридоїЇ3,2-Б|індол-5-іл)уоцтової кислоти за п. 1, що характеризується присутністю піків на діаграмі дифракції рентгенівських променів на порошку при наступних кутах заломлення 26: 12,67, 14,07 та 21,1", де діаграма дифракції рентгенівських променів на порошку виміряна при відносній вологості (50-3)95 та при температурі 25:55 76.

6. Кристалічна форма (5)-2-(8-(5-хлорпіримідин-2-ілууметил)аміно)-2-фтор-6,7,8,9-тетрагідро- БН-піридоїЇЗ3,2-В|індол-5-іл)оцтової кислоти за будь-яким з пп. 1-5, яка демонструє ендотермічний процес у діапазоні від 26025 до 27625 "б, як визначено диференціальною скануючою калориметрією.

7. Кристалічна форма (5)-2-(8-(5-хлорпіримідин-2-ілу/уметил)аміно)-2-фтор-6,7,8,9-тетрагідро- БН-піридої|3,2-Б|індол-5-іл)оцтової кислоти за будь-яким з пп.1-6 для застосування як лікарського засобу.

8. Фармацевтична композиція, що включає як активний компонент кристалічну форму (5)-2-(8- ((5-хлорпіримідин-2-іл)(метил)аміно)-2-фтор-6,7,8,9-тетрагідро-5Н-піридої|З,2-б|індол-5- іл)оцтової кислоти за будь-яким з пп. 1-6 і щонайменше один фармацевтично прийнятний носій.

9. Кристалічна форма (5)-2-(8-(5-хлорпіримідин-2-ілу/уметил)аміно)-2-фтор-6,7,8,9-тетрагідро- БН-піридої|З3,2-В|індол-5-іл)оцтової кислоти за будь-яким з пп. 1-6 для застосування в одержанні фармацевтичної композиції, де зазначена фармацевтична композиція включає як активний компонент (5)-2-(8-(5-хлорпіримідин-2-іл)(метил)аміно)-2-фтор-6,7,8,9-тетрагідро-5Н-піридоїЇ3,2- В|індол-5-іл)/оцтову кислоту і щонайменше один фармацевтично прийнятний носій.

10. Кристалічна форма (5)-2-(8-(5-хлорпіримідин-2-ілууметил)аміно)-2-фтор-6,7,8,9-тетрагідро- БН-піридої|З3,2-В|індол-5-іл)оцтової кислоти за будь-яким з пп. 1-6 для застосування у запобіганні або лікуванні хвороб, вибраних з групи, що включає хронічні та гострі алергічні/мунні хвороби/порушення, що включають астму, алергічну астму, еозинофільну астму, важку астму, риніти, алергічні риніти, набряк Квінке, алергію на отруту комах, лікарські алергії, алергічний бо синусит, алергічний нефрит, алергічний кон'юнктивіт, атопічний дерматит, бронхіальну астму,

харчову алергію, системні порушення мастоциту, анафілактичний шок, кропивницю, екзему, виразковий коліт, хронічну обструктивну хворобу легені (СОРО), запальне захворювання кишечнику, ревматоїдний артрит і назальний поліпоз; хвороб, пов'язаних з еозинофілами, що включають васкуліти малих судин, такі як синдром Чарга-Стросса, грануломатоз Вегенера, мікроскопічний поліваскуліт (і органоспецифічні підмножини останнього), гіпереозинофільні синдроми, такі як еозинофільна пневмонія, еозинофільний езофагіт, рефлюксний езофагіт, еозинофільний ендокардит (ендокардит Леффлера), еозинофільно-міалгічний синдром, еозинофільний фасціїт, еезинофільний пустульозний фолікуліт (хвороба Офуджі), еозинофільні виразки, ангіолімфоїдна гіперплазія з еозинофілією (АГНЕ), еозинофільний целюліт (синдром Уеллса), хронічна еозинофільна лейкемія, ОКЕ5З5-синдром (лікарська шкірна реакція, що супроводжується еозинофілією і системними проявами) і хвороба Стілла (системний напад ювенільного ідіопатичного артриту); хвороб, пов'язаних з базофілами, включаючи базофільну лейкемію та базофільний лейкоцитоз і кістозний фіброз.

11. Кристалічна форма (5)-2-(8-(5-хлорпіримідин-2-іл)ух(метил)аміно)-2-фтор-6,7,8,9-тетрагідро- БН-піридої|З3,2-бБ|індол-5-іл)оцтової кислоти за будь-яким з пп. 1-6 для застосування в одержанні фармацевтичної композиції для запобігання або лікування хвороб, вибраних з групи, що включає хронічні та гострі алергічнілмунні хвороби/порушення, що включають астму, алергічну астму, еозинофільну астму, важку астму, риніти, алергічні риніти, набряк Квінке, алергію на отруту комах, лікарські алергії, алергічний синусит, алергічний нефрит, алергічний кон'юнктивіт, атопічний дерматит, бронхіальну астму, харчову алергію, системні порушення мастоциту, анафілактичний шок, кропивницю, екзему, виразковий коліт, хронічну обструктивну хворобу легені (СОРО)), запальне захворювання кишечнику, ревматоїдний артрит і назальний поліпоз; хвороб, пов'язаних з еозинофілами, що включають васкуліти малих судин, такі як синдром Чарга-Стросса, грануломатоз Вегенера, мікроскопічний поліваскуліт (і органоспецифічні підмножини останнього), гіпереозинофільні синдроми, такі як еозинофільна пневмонія, еозинофільний езофагіт, рефлюксний езофагіт, еозинофільний ендокардит (ендокардит Леффлера), еозинофільно-міалгічний синдром, еозинофільний фасціїт, еозинофільний пустульозний фолікуліт (хвороба Офуджі), еозинофільні виразки, ангіолімфоїдна гіперплазія з еозинофілією (А НЕ), еозинофільний целюліт (синдром Уеллса), хронічна еозинофільна Зо лейкемія, ОВЕ5З5-синдром (лікарська шкірна реакція, що супроводжується еозинофілією і системними проявами), і хвороба Стілла (системний напад ювенільного ідіопатичного артриту); хвороб, пов'язаних з базофілами, включаючи базофільну лейкемію та базофільний лейкоцитоз і кістозний фіброз.

12. Кристалічна форма (5)-2-(8-(5-хлорпіримідин-2-іл)ух(метил)аміно)-2-фтор-6,7,8,9-тетрагідро- БН-піридої|З3,2-б|індол-5-іл)оцтової кислоти за будь-яким з пп. 1-6 для застосування в одержанні фармацевтичної композиції для запобігання або лікування хвороб, вибраних з групи, що включає астму, еозинофільну астму, алергічний риніт, атопічний дерматит, назальний поліпоз, харчову алергію, кропивницю, еозинофільний езофагіт, синдром Чарга-Стросса, гіпереозинофільний синдром, еозинофільну пневмонію, ЮРВЕ55-синдром, хворобу Стілла, хронічну обструктивну хворобу легені (СОР) та кістозний фіброз.

13. Кристалічна форма (5)-2-(8-(5-хлорпіримідин-2-іл)ух(метил)аміно)-2-фтор-6,7,8,9-тетрагідро- БН-піридої|З3,2-б|індол-5-іл)оцтової кислоти за будь-яким з пп. 1-6 для застосування в одержанні фармацевтичної композиції для запобігання або лікування назального поліпозу.

ТЕ ЖЕ Я і Й СЕ

Ж г. ЩщУ ої й а ди ДА з най ? І я ЖЕ і Х , й те од Ще щК Я ще поогсгтворвтнннттсютння Бе сн І г понині тх Я У ше й Я ре не реУ Ше у й а: Кз ЖЕ, шо ЕТ Шин ш в окунів й ппокввкннн ве ї шоб Ж ін ин ВИД У сх ЖЕН

«ІГ.

ха я ЩЕ і УА ж 4 х г ЕЕ с у Фо а р в в! роя ях нави и но я Ше хх ЕІ ї 2х В т їх г с та Ге яв : - ха щі 5 дент МЕ КО І А стсстн, щ ш ср, мн г ,ящ ше Ба Ка Ява Я ях КЗ х Б ї - Ж ж ї КУ Шк я х У пкт їх і ех го щ- Й т ши Е м 5 ІЗ ВЗ ща 1 і зв ' як шк ч

Фіг. 2

ЕХ ЕЙ ЗЕ: ї й я ях 4 г де -х ох я З с вся м КБ ХЕ» же КО Ку ї не п син що ПИТ мн, КУ й і їчЯ їх сені 5 Ше ви дня -х Ми І - йо т жк роз а шия ж ка а а с те нн ка оо ни НИНІ -- ЩЕ нти х Й : дек: 3 ва сн 7х ни НО ай х 2 шт з і я 1 - оон ще ще З п неви Ж Ей З хх Ж ш о остов Й З те рі я З їх «й 3 сх с ІЕТА нанні Фф | З я се Ж КЯ з ї - о т -х я хе Ж тя я то з «х- т І о урн І ЯК тв пили ск ак ке а ме З м «х дес ХУ рожа р стю Бо що ш--ой - кокон ткткткх плянє ще с нс кннн о п шо Шк : ой ий ін ох я а Ж Фе СК я З М ння зх лу Х тв - чен скручених ВЕ ж нин «-ї х Бо п: ще ЩЕ пож ЕЕ Це по а РКК інн ку

Фіг. 4

В. шини Е | ЩЕ ж

006. фея ун інн, ЕВ та КІВ КО 40 5 а во ЕЕ ві г

ФІГ. 5

Ї у х й х, ГЕ Ге Є УК няя ЗА ЖАУКАА Є я пт я ТАЛА ЄЮ тя тяж ЖАКА тих Й ЕЕ ех ь реє тент Ь р Е ї І ! Ї я у Її й ь ї Е ї 0 ! Ь і: І в ек ! ск ї К Е ! Їх й а В ши Е ь . Ей й ь ї- Ь ь ке Я " і ї 8 ь Е СЕ

7

І. ї Бах ь ї ь ї ках і Кх Е я що ї ; ЧИ їв : ь й Е: іх г Ь ; ш--к тут ся тре тт й ще т че Бі - я- па ме "а в й - огхв чІЗНЖАЯ