UA127859C2 - Вакцина проти свинячого парвовірусу - Google Patents

Abstract

Винахід стосується вірусного білка 2 (VP2) свинячого парвовірусу (PPV), що має в амінокислотній позиції 25 ізолейциновий залишок, в амінокислотній позиції 36 сериновий залишок, в амінокислотній позиції 37 ізолейциновий залишок, в амінокислотній позиції 228 глутаміновокислотний залишок або глутаматний залишок, в амінокислотній позиції 414 сериновий залишок, в амінокислотній позиції 419 глутаміновий залишок та в амінокислотній позиції 436 треоніновий залишок. Крім того, даний винахід стосується імуногенної композиції, що включає вірусний білок 2 (VP2) свинячого парвовірусу (PPV), полінуклеотида, вектора, клітини, вірусоподібної частинки, способу імунізації суб'єкта, де суб'єктом є свинка або свиноматка, способу лікування або запобігання клінічним ознакам, що викликаються інфекцією PPV, у суб'єкта, який цього потребує, способу зниження смертності ембріона й плода, способу зниження репродуктивної недостатності.

Description

Винахід стосується вірусного білка 2 (МР2) свинячого парвовірусу (РРМ), що має в амінокислотній позиції 25 ізолейциновий залишок, в амінокислотній позиції 36 сериновий залишок, в амінокислотній позиції 37 ізолейциновий залишок, в амінокислотній позиції 228 глутаміновокислотний залишок або глутаматний залишок, в амінокислотній позиції 414 сериновий залишок, в амінокислотній позиції 419 глутаміновий залишок та в амінокислотній позиції 436 треоніновий залишок. Крім того, даний винахід стосується імуногенної композиції, що включає вірусний білок 2 (МР2) свинячого парвовірусу (РРМ), полінуклеотида, вектора, клітини, вірусоподібної частинки, способу імунізації суб'єкта, де суб'єктом є свинка або свиноматка, способу лікування або запобігання клінічним ознакам, що викликаються інфекцією

РРМУ, у суб'єкта, який цього потребує, способу зниження смертності ембріона й плода, способу зниження репродуктивної недостатності.

СПИСОК ПОСЛІДОВНОСТЕЙ

Дана заявка містить перелік послідовностей відповідно до Зведення федеральних правил 37 С.Б.В. 1.821 - 1.825. Таким чином, список послідовностей, доданий до даної заявки, включений шляхом посилання в його повному обсязі.

РІВЕНЬ ТЕХНІКИ

Свинячий парвовірус являє собою автономний вірус, що реплікується, підродини

Рагмомігіпае роду Ргоїорагмомігиз у межах родини Рагуомігідає, що містить молекулу одноланцюгової ДНК із приблизно 5100 нуклеотидів (Сойтоге еї аїЇ., 2014: Агсп Мігої.: 159(5): 1239 - 1247; Моїйог еї аї., 1984: Мітоіоду: 137(2): 241 - 54.). Тільки мінус-ланцюг ДНК упакований у віріони. Геном вірусу кодує три капсидні білки (МР1, МР2, МРЗ) і один неструктурний білок (М51). Капсид парвовірусу має діаметр приблизно 22 - 25 нанометрів і складається із субодиниць УРІ1 ї МР2. Ці білки походять від почергово сплайсованих варіантів однієї й тієї ж молекули РНК ії, таким чином, частково перекриваються в послідовності. Крім того, свинячий парвовірус демонструє високий рівень подібності послідовностей з вірусом панлейкопенії кішок, парвовірусів собак і парвовірусів гризунів (Кап? еї аї., 1989: 9. деп. Міго!: 70: 2541 - 2553).

Хоча існують відмінності в штамах свинячого парвовірусу, деякі є надзвичайно патогенними, інші - менш патогенними або зовсім непатогенними, коли вірус встановлюється або стає ендемічним у даній країні, виявляється, що патогенні штами поширюються серед популяції.

Інфекція свинячого парвовірусу (РРМ) є поширеною причиною репродуктивної недостатності при розведенні свиней в усьому світі. Серологічні дослідження демонструють, що свинячий парвовірус поширений у всіх свинарських регіонах світу, причому до 80 95 тварин демонструють сероконверсію.

Свинячий парвовірус (РРУ) викликає репродуктивну недостатність у свиней, що приводить до смерті й внутрішньоутробної муміфікації й мертвонародження та інших проявів репродуктивної недостатності у вагітних свиноматок. (00 5 допп5зоп. 1976. Меїегіпагу ВиПейіп 46, 653 - 660; Мепдеїїпа. 1978. У. Ат. Меї. Мей. Авзос. 172, 1291 - 1294).

РРМ викликає репродуктивну недостатність, коли сприйнятливі (неімунні) свині й свиноматки інфікуються під час вагітності. Це єдиний час, коли вірус викликає захворювання.

Зо Інфікування свиней відбувається внаслідок споживання вірусу з їжею або його вдихання. Потім

РРМ циркулює в системі кровообігу, а у вагітних свиней проникає крізь плаценту й інфікує плоди й ембріони, що розвиваються. Після природного інфікування розвивається активний імунітет, який може тривати протягом усього життя свині. При набутті активного імунітету до вагітності поросята, що розвиваються, не піддаються небезпеці. При народженні поросята набувають материнського імунітету у молозиві свиноматки, і цей материнський імунітет зберігається до 20-тижневого віку. Чим вище рівень активного імунітету у свиноматки, тим більше материнського імунітету переходить до її поросят. Згодом може відбуватися природня інфекція РРУ.

Захворювання, яке викликається РРМ у поросят, часто називається 5МЕ0ОІ (абревіатура для мертвонародження, муміфікації, смерті ембріона й безплідності) Якщо інфікування відбувається на 0 - 30 дні вагітності це може привести до ембріональної смертності, у результаті чого зменшується розмір приплоду. Найбільш явною особливістю, що виникає внаслідок інфекції на 30 - 70 дні вагітності, є народження муміфікованих поросят. Муміфікація являє собою процес стерильного розщеплення тканин поросят, що гинуть у матці після початку отвердіння скелету. Інфікування РРМ також пов'язане з мертвонародженням і народженням слабких поросят, якщо інфікування відбувається на пізніх стадіях вагітності. Викидень також може бути результатом інфікування РРУ, однак він не є поширеною клінічною ознакою цього захворювання. У цілому інфекція РРМ знижує кількість поросят, народжуваних однією свиноматкою за рік.

Наявні в цей час вакцини проти РРМ роблять шляхом вирощування нативного вірусу на первинних клітинах свинячого походження або в стійких клітинних лініях. Після цього інфекційний вірус виділяють і інактивують хімічними агентами для одержання в підсумку цільноклітинної вбитої противірусної вакцини. Однак такі процеси вирощування нативного інфекційного вірусу проблематичні з погляду біозахисту й безпеки. Таким чином, існує потреба в рекомбінантних вакцинах РРУ.

Субодиничні вакцини на основі рекомбінантних білків можуть мати слабку імуногенність через неправильне складання білка-мішені або неналежну презентацію перед імунною системою. Крім того, цільноклітинні вбиті вакцини представляють усі антигени нативного вірусу, тоді як у субодиничній вакцині існує обмеження конкретною амінокислотною 60 послідовністю.

Рекомбінантні вакцини проти РРМ уже описувалися в джерелах існуючого рівня техніки, однак дотепер лише цільноклітинні вбиті вакцини випускаються серійно. Таким чином, схоже, що дотепер не були розроблені оптимальні рекомбінантні субодиничні вакцини проти РРУ, які виявили б свою ефективність і безпеку. Описані на даний момент рекомбінантні субодиничні вакцини проти РРМ не випробовувалися й не контролювалися в експериментах з лабораторним зараженням. Рекомбінантні субодиничні вакцини проти РРМ, що пройшли оцінку, не діяли так само, як цільноклітинні вакцини проти РРУ, або рекомбінантні субодиничні вакцини проти РРМ не були безпечними (демонстрували несприятливі реакції). Таким чином, зберігається потреба в рекомбінантних субодиничних вакцинах РРУ, які були б високоефективними й безпечними.

Були ідентифіковані польові ізоляти свинячого парвовірусу (РРУ), які генетично й антигенно відрізняються від вакцинних штамів. Вірус РРМ генотипу 2, РРУ-27а, Є високовірулентним у вагітних свиней після провокаційного інфікування, що було продемонстровано через високу смертність серед плодів свиноматок, інфікованих РРУ-27а (85

Фо), у порівнянні зі свиноматками, інфікованими іншими штамами РРУ, наприклад, РРУ-МАбОІ - 2. Однак наявні вакцини, що тепер серійно випускаються проти РРМ одержують на основі інактивованих цільновірусних препаратів штамів РРМ генотипу 1, виділених близько 30 років тому (д90о2уіК еї а! 2009; доигпаї ої Сепегаї Мігоіоду; 90; 2437 - 2441). Таким чином, існує потреба в нових вакцинах, що захищають від нових високовірулентних патогенних штамів РРУ, які б більш відповідали РРУ у даній галузі.

Іншими джерелами існуючого рівня техніки є наступні:

У документі ЕР 0 551 449 А1 розкривається спосіб одержання субодиничної вакцини УР2 проти свинячого парвовірусу.

У публікації Садаг О еї а!. (ІптТесійоп, Сепеїїс5 апа Емоїшіоп 2012, 12: 1163 - 1171) описується філогенез і еволюційна генетика свинячого парвовірусу в диких свиней.

У публікації 5ігеск АЕ еї аї. (ЧФоигпаї ої Сепега! Мігоїоду 2011, 92: 2628 - 2636) описується висока швидкість вірусної еволюції в капсидному білку свинячого парвовірусу.

Документ У/О 88/02026 стосується порожніх вірусних капсидних вакцин.

У публікації Мапіпе С еї аї. (Массіпе 1992, 10(10): 684 - 690) розкривається виробництво

Зо порожніх капсид свинячого парвовірусу з високою імуногенною активністю.

У публікації Хи Е еї аї. (Арріїей апа Епмігоптепіа! Місгобіоїоду 2007, 73(21): 7041 - 7047) описується індукція імунної відповіді у мишей після внутрішньошлункового введення бактерії

І асторасійи5 сазеї, що виробляє білок свинячого парвовірусу МР2.

Більше того, існує потреба в нових і поліпшених вакцинах проти надзвичайно патогенних штамів РРУ, які забезпечували б більш широкий захист проти різних (гетерологічних) штамів

РРМ (перехресний захист).

ДОКЛАДНИЙ ОПИС ВИНАХОДУ

Перед описом аспектів даного винаходу слід відзначити, що застосовувані в описі й доданій формулі винаходу форми однини також охоплюють посилання на множину, якщо контекст прямо не вказує на інше. Таким чином, наприклад, посилання на "антиген" включає багато антигенів, посилання на «вірус» є посиланням на один або декілька вірусів і їх еквівалентів, відомих фахівцям у даній галузі, і так далі. Якщо немає іншого визначення, усі застосовувані авторами технічні й наукові терміни мають значення в загальноприйнятому розумінні серед фахівців в галузі, до якої належить даний винахід. Хоча при практичному втіленні або випробуванні даного винаходу можуть застосовуватися будь-які способи й матеріали, подібні до описуваних авторами або еквівалентні до них, тут описуються переважні способи, обладнання й матеріали. Усі згадані авторами публікації включаються в даний опис шляхом посилання з метою опису й розкриття клітинних ліній, векторів і методологій, про яких повідомляється в публікаціях, які можуть використовуватися у зв'язку з винаходом. Жодне з положень даного опису не слід тлумачити як визнання того, що винахід не має права на протиставлення такого розкриття в силу наявності більш раннього винаходу.

Даний винахід дозволяє розв'язати проблеми, характерні для існуючого рівня техніки, і забезпечує явний прогрес відносно існуючого рівня техніки. У цілому даний винахід забезпечує вірусний білок 2 (УР2) свинячого парвовірусу (РРМ), що має в амінокислотній позиції 228 глутаміновокислотний залишок або глутаматний залишок, та/або в амінокислотній позиції 414 сериновий залишок, та/або в амінокислотній позиції 419 глутаміновий залишок, та/або в амінокислотній позиції 436 треоніновий залишок,

причому нумерація амінокислотних позицій стосується амінокислотної послідовності дикого типу РРМ МР2.

Перевага полягає в тому, що експериментальні дані, забезпечувані даним винаходом, виявляють, що субодинична вакцина проти РРМ МР2 відповідно до даного винаходу є безпечною й ефективною для профілактики віремії й інфікування плода РРМУ. Крім того, експериментальні дані, забезпечувані даним винаходом, виявляють, що вакцина відповідно до даного винаходу має широкий спектр захисту, оскільки вакцина захищає від гетерологічних північноамериканських, а також гетерологічних європейських штамів РРМ для провокаційного зараження.

Перевага полягає в тому, що експериментальні дані, забезпечувані даним винаходом, виявляють, що субодинична вакцина проти РРМ МР2 відповідно до даного винаходу є настільки ж ефективною, як і цільний убитий вірус, і цей ефект був отриманий несподівано.

Однак масштабних процесів інактивації (які необхідні для інактивації нативних РРМ при одержанні вакцин на основі цільних убитих вірусів) можна уникнути шляхом застосування рекомбінантної субодиничної вакцини, що складається з РРМ МР2.

Термін "свинячий парвовірус" або "РРУ" добре відомий серед фахівців у даній галузі. Однак "свинячий парвовірус" являє собою автономний вірус, що реплікується, роду парвовірус у межах родини Рагмомігідаеє, що містить молекулу одноланцюгової ДНК. Геном вірусу кодує три капсидні білки (МРІ, МР2, МРЗ) і один неструктурний білок (М51). Захворювання, яке викликається РРУ у поросят, часто називається ЗМЕОІ (абревіатура для мертвонародження, муміфікації, смерті ембріона й безплідності). Термін "свинячий парвовірус" охоплює всі можливі штами, генотипи, фенотипи й серотипи свинячого парвовірусу.

Термін "вірусний білок 2" або "МР2" стосується капсидного білку МР2 свинячого парвовірусу.

Термін "вірусний білок 2" або "МР2" добре відомий серед фахівців у даній галузі.

Термін "білок", "амінокислота" і "поліпептид" застосовуються взаємозамінно. Термін "білок" стосується послідовності амінокислот, що складається із природних амінокислот, а також їх похідних. Природні амінокислоти загальновідомі серед фахівців у даній галузі й описуються в стандартних підручниках з біохімії. У межах амінокислотної послідовності амінокислотні залишки з'єднуються пептидними зв'язками. Крім того, два кінці амінокислотної послідовності

Зо вказуються як карбоксильний кінець (С-кінець) і аміно-кінець (М-кінець). Термін "білок" охоплює фактично очищені білки або білкові препарати, що додатково включають інші білки. Крім того, термін також стосується фрагментів білків. Крім того, він включає хімічно модифіковані білки.

Такі модифікації можуть бути штучними модифікаціями або природними модифікаціями, такими, як фосфорилування, глікозилування, міристилування й т.п.

Термін "причому нумерація амінокислотних позицій стосується амінокислотної послідовності дикого типу РРМ МР2" стосується нумерації амінокислотних позицій, що належать до амінокислотної послідовності білка РРМ МР2 повної довжини дикого типу.

Переважно нумерація аміно-позицій згідно з даним описом вказується з посиланням на білкову послідовність РРМ МР2 дикого типу, що має 579 амінокислотних залишків, включаючи метионіновий залишок в (М-кінцевій) амінокислотній позиції 1. Термін "причому нумерація амінокислотних позицій стосується амінокислотної послідовності дикого типу РРМ МР2" охоплює РРМ МР дикого типу, як вказано для прикладу в ЗЕО ІЮ МО: 1 (РРМ 27а МР).

В одному аспекті даного винаходу РРМ МР2 також має в амінокислотній позиції 25 ізолейциновий залишок, та/або в амінокислотній позиції 36 сериновий залишок, та/або в амінокислотній позиції 37 ізолейциновий залишок.

Таким чином, даний винахід забезпечує вірусний білок 2 (МР2) свинячого парвовірусу (РРМ), що має в амінокислотній позиції 228 глутаміновокислотний залишок або глутаматний залишок, та/або в амінокислотній позиції 414 сериновий залишок, та/або в амінокислотній позиції 419 глутаміновий залишок, та/або в амінокислотній позиції 436 треоніновий залишок, причому нумерація амінокислотних позицій стосується амінокислотної послідовності дикого типу РРМ МР, і

РРМ МРІ2 також має в амінокислотній позиції 25 ізолейциновий залишок, та/або в амінокислотній позиції 36 сериновий залишок, та/або в амінокислотній позиції 37 ізолейциновий залишок.

В одному аспекті даного винаходу нумерація амінокислотних позицій стосується амінокислотної послідовності, показаної в 5ЕБЕО ІЮ МО: 1. Таким чином, даний винахід забезпечує вірусний білок 2 (МР2) свинячого парвовірусу (РРМ), що має в амінокислотній позиції 228 глутаміновокислотний залишок або глутаматний залишок, та/або в амінокислотній позиції 414 сериновий залишок, та/або в амінокислотній позиції 419 глутаміновий залишок, та/або в амінокислотній позиції 436 треоніновий залишок, причому нумерація амінокислотних позицій стосується амінокислотної послідовності дикого типу РРМ МР, ії нумерація амінокислотних позицій стосується амінокислотної послідовності, показаної в ЗЕО ІЮ МО: 1.

Таким чином, даний винахід забезпечує вірусний білок 2 (МР2) свинячого парвовірусу (РРМ), що має в амінокислотній позиції 228 глутаміновокислотний залишок або глутаматний залишок, та/або в амінокислотній позиції 414 сериновий залишок, та/або в амінокислотній позиції 419 глутаміновий залишок, та/або в амінокислотній позиції 436 треоніновий залишок, причому нумерація амінокислотних позицій стосується амінокислотної послідовності, показаної в ЗЕО ІЮ МО: 1.

В одному аспекті даного винаходу РРМ МР2 являє собою рекомбінантний РРМ МР2.

Термін "рекомбінантний" у контексті даного опису стосується, зокрема, молекули білка, яка експресується з молекули рекомбінантної ДНК, такої, як поліпептид, утворений (із застосуванням технологій рекомбінантних ДНК. Приклад таких технологій включає випадок, коли ДНК, що кодує експресований білок (наприклад, РРМ МР2), вставляють у підходящий вектор експресії, переважно вектор експресії бакуловірусу, який, у свою чергу, використовують для трансфекції або, у випадку вектора експресії бакуловірусу, для інфікування клітини-хазяїна для одержання білка або поліпептиду, що кодується ДНК. Термін "рекомбінантний РРМ МР2" у контексті даного опису, таким чином, зокрема, стосується молекули білка, яка експресується з

Зо молекули рекомбінантної ДНК.

В одному аспекті даного винаходу РРУМ МР2 являє собою експресований рекомбінантним бакуловірусом РРМ МР2.

Термін "бакуловірус" або "бакуловірусна система" добре відомий серед фахівців у даній галузі. Крім того, термін "бакуловірус" докладніше пояснюється нижче.

В одному аспекті даного винаходу вищезгаданий РРМ МР2 включає або складається з амінокислотної послідовності, яка має принаймні 90 95 ідентичності послідовності з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮО МО: 1, 5ЕО ІО МО: 2 або 5ЕО ІО МО: 5 - 16.

В одному аспекті даного винаходу вищезгаданий РРМ МР2 включає або складається з амінокислотної послідовності, яка має принаймні 90 95, принаймні 91 95, принаймні 92 95, принаймні 93 95, принаймні 94 95, принаймні 95 95, принаймні 96 95, принаймні 97 96, принаймні 98 95, принаймні 99 95, принаймні 99,1 95, принаймні 99,2 95, принаймні 99,3 95, принаймні 99,4 до, принаймні 99,5 95, принаймні 99,6 95, принаймні 99,7 95, принаймні 99,8 95, або принаймні 99,9 95 ідентичності послідовності з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮ МО: 1, ЗЕО ІЮО МО: 2 або 5ЕО ІЮ МО: 5 - 16. Таким чином, даний винахід забезпечує вірусний білок 2 (МР) свинячого парвовірусу (РРУ), що має в амінокислотній позиції 228 глутаміновокислотний залишок або глутаматний залишок, та/або в амінокислотній позиції 414 сериновий залишок, та/або в амінокислотній позиції 419 глутаміновий залишок, та/або в амінокислотній позиції 436 треоніновий залишок, причому нумерація амінокислотних позицій стосується амінокислотної послідовності дикого типу РРМ МР, і причому вищезгаданий РРМ МР2 включає або складається з амінокислотної послідовності, яка має принаймні 90 95, принаймні 91 95, принаймні 92 95, принаймні 93 95, принаймні 94 95, принаймні 95 95, принаймні 96 95, принаймні 97 95, принаймні 98 95, принаймні 99 95, принаймні 99,1 95, принаймні 99,2 95, принаймні 99,3 95, принаймні 99,4 95, принаймні 99,5 95, принаймні 99,6 95, принаймні 99,7 95, принаймні 99,8 95, або принаймні 99,9 95 ідентичності послідовності з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮО МО: 1, 5ЕО ІО МО: 2 або 5ЕО ІО МО: 5 - 16.

В одному аспекті даного винаходу вищезгаданий РРМ МР2 включає або складається з 60 амінокислотної послідовності ЗЕО ІЮ МО: 1, або 5ЕО ІЮО МО: 2 або 5ЕО ІЮО МО: 5 - 16 або включає або складається з будь-якого фрагмента, який має принаймні 210, принаймні 250 або принаймні 300 суміжних амінокислотних залишків з БЕО ІЮО МО: 1, 5ЕО ІО МО: 2 або 5ЕО ІО

МО: 5 - 16. Таким чином, даний винахід забезпечує вірусний білок 2 (МР2) свинячого парвовірусу (РРМ), що має в амінокислотній позиції 228 глутаміновокислотний залишок або глутаматний залишок, та/або в амінокислотній позиції 414 сериновий залишок, та/або в амінокислотній позиції 419 глутаміновий залишок, та/або в амінокислотній позиції 436 треоніновий залишок, причому нумерація амінокислотних позицій стосується амінокислотної послідовності дикого типу РРМ МР, і причому вищезгаданий РРМ МР2 включає або складається з амінокислотної послідовності

ЗЕО ІЮО МО: 1, або 5ЕО ІЮО МО: 2 або 5ЕО ІЮО МО: 5 - 16 або включає або складається з будь- якого фрагмента, який має принаймні 210, принаймні 250 або принаймні 300 суміжних амінокислотних залишків з ФЕО ІЮО МО: 1, 5ЕО ІЮО МО: 2 або 5ЕО ІЮО МО: 5 - 16.

В одному аспекті даного винаходу вищезгаданий РРМ МР2 включає або складається з амінокислотної послідовності 5ЕО ІЮО МО: 1, ЗЕО ІЮО МО: 2 або 5ЕО ІЮ МО: 5 - 16. Таким чином, даний винахід забезпечує вірусний білок 2 (МР2) свинячого парвовірусу (РРМ), що має в амінокислотній позиції 228 глутаміновокислотний залишок або глутаматний залишок, та/або в амінокислотній позиції 414 сериновий залишок, та/або в амінокислотній позиції 419 глутаміновий залишок, та/або в амінокислотній позиції 436 треоніновий залишок, причому нумерація амінокислотних позицій стосується амінокислотної послідовності дикого типу РРМ МР, і причому вищезгаданий РРМ МР2 включає або складається з амінокислотної послідовності

ЗЕО ІЮО МО: 1, або 5ЕО ІО МО: 2 або ЗЕО ІЮ МО: 5 - 16.

В одному аспекті даного винаходу вищезгаданий РРМ МР2 кодується нуклеотидною послідовністю, що кодує амінокислотну послідовність, яка має принаймні 90 95 ідентичності

Зо послідовності з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮ МО: 1, 5ЕО ІО МО: 2 або 5ЕО ІЮ МО: 5 - 16.

В одному аспекті даного винаходу вищезгаданий РРМ МР2 кодується нуклеотидною послідовністю, що кодує амінокислотну послідовність принаймні 90 95, принаймні 91 95, принаймні 92 95, принаймні 93 95, принаймні 94 95, принаймні 95 95, принаймні 96 95, принаймні 97 95, принаймні 98 95, принаймні 99 95, принаймні 99,1 95, принаймні 99,2 95, принаймні 99,3 905, принаймні 99,4 95, принаймні 99,5 95, принаймні 99,6 95, принаймні 99,7 95, принаймні 99,8 95, або принаймні 99,9 95 ідентичності послідовності з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮ МО: 1, ЗЕО ІЮО МО: 2 або 5ЕО ІО МО: 5 - 16. Таким чином, даний винахід забезпечує вірусний білок 2 (МР2) свинячого парвовірусу (РРУ), що має в амінокислотній позиції 228 глутаміновокислотний залишок або глутаматний залишок, та/або в амінокислотній позиції 414 сериновий залишок, та/або в амінокислотній позиції 419 глутаміновий залишок, та/або в амінокислотній позиції 436 треоніновий залишок, причому нумерація амінокислотних позицій стосується амінокислотної послідовності дикого типу РРМ МР, і вищезгаданий РРМ МР2 кодується нуклеотидною послідовністю, що кодує амінокислотну послідовність, яка має принаймні 90 95, принаймні 91 95, принаймні 92 95, принаймні 93 95, принаймні 94 95, принаймні 95 95, принаймні 96 95, принаймні 97 95, принаймні 98 95, принаймні 99 95, принаймні 99,1 95, принаймні 99,2 95, принаймні 99,3 95, принаймні 99,4 95, принаймні 99,5 95, принаймні 99,6 95, принаймні 99,7 95, принаймні 99,8 95, або принаймні 99,9 95 ідентичності послідовності з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮ МО: 1, 5ЕО ІЮО МО: 2 або

ЗЕОІЮО МО: 5 - 16.

В одному аспекті даного винаходу вищезгаданий РРМ МР2 кодується нуклеотидною послідовністю, що кодує амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ МО: 1, 5ЕО ІЮ МО: 2 або 5ЕО ІО

МО: 5 - 16. Таким чином, даний винахід забезпечує вірусний білок 2 (МР2) свинячого парвовірусу (РРМ), що має в амінокислотній позиції 228 глутаміновокислотний залишок або глутаматний залишок, та/або бо в амінокислотній позиції 414 сериновий залишок, та/або в амінокислотній позиції 419 глутаміновий залишок, та/або в амінокислотній позиції 436 треоніновий залишок, причому нумерація амінокислотних позицій стосується амінокислотної послідовності дикого типу РРМ МР, і вищезгаданий РРМ МР2 кодується нуклеотидною послідовністю, що кодує амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ МО: 1, ЗЕО ІО МО: 2 або 5ЕО ІЮ МО: 5 -16.

ЗЕО ІЮ МО: 4 являє собою кодон-оптимізовану нуклеотидну послідовність РРМ 27а МР2, яка була піддана подальшій модифікації таким чином, щоб включати два сайти рестрикційного ферменту Сіаї (в амінокислотній позиції 25 знаходиться ізолейциновий залишок, в амінокислотній позиції 36 знаходиться сериновий залишок, в амінокислотній позиції 37 знаходиться ізолейциновий залишок), щоб примикати до кодуючої ділянки МР2, що складається із гліцинових повторів. Однак сайти рестрикційних ферментів СіІа! включали таким чином, щоб не переривати кодуючу ділянку МР2. 5ЕО ІЮ МО: 2 являє собою білкову послідовність, що відповідає ЗЕО ІЮО МО: 4. 5ЕО ІЮО МО: З являє собою кодон-оптимізовану нуклеотидну послідовність РРМ 27а МР2 (без сайтів рестрикційних ферментів Сіа!). ЗЕО ІЮ МО: 1 являє собою білкову послідовність, що відповідає 5ЕО ІЮ МО: 3. 5БО ІЮ МО: 5 - 16 представляють інші білкові послідовності РРМ МР2 із сайтами рестрикційних ферментів Сіаї (ЗЕО ІЮ МО: 5 - 10) або без них (ЗЕО ІО МО: 11 - 16).

Терміни "нуклеїнова кислота" або "нуклеїновокислотна послідовність"? або "нуклеотидна послідовність" або "полінуклеотид" застосовуються в даному описі взаємозамінно й стосуються полінуклеотидів, включаючи молекули ДНК, молекули РНК, молекули кДНК або похідні. Термін охоплює одноланцюгові, а також дволанцюгові полінуклеотиди. Нуклеїнова кислота відповідно до даного винаходу охоплює виділені полінуклеотиди (тобто, виділені із природного середовища) і генетично модифіковані форми. Крім того, також включаються хімічно модифіковані полінуклеотиди, включаючи природні модифіковані полінуклеотиди, такі, як глікозиловані або метиловані полінуклеотиди, або штучні модифіковані, такі, як біотиніловані полінуклеотиди. Крім того, терміни "нуклеїнова кислота" і "полінуклеотид" є взаємозамінними й стосуються будь-якої нуклеїнової кислоти. Терміни "нуклеїнова кислота" і "полінуклеотид" також конкретно включають нуклеїнові кислоти, які складаються із основ, що відрізняються від

Зо біологічних основ (аденіну, гуаніну, тиміну, цитозину й урацилу).

Термін "ідентичність" або "ідентичність послідовностей" відомий фахівцям у даній галузі й стосується відношення між двома або більше поліпептидними послідовностями або двома або більше полінуклеотидними послідовностями, тобто, контрольною послідовністю й даною послідовністю, що підлягає порівнянню з контрольною послідовністю. Ідентичність послідовностей визначають шляхом порівняння даної послідовності з контрольною послідовністю після оптимального вирівнювання послідовностей для одержання найвищого ступеня подібності послідовностей, обумовленої шляхом співставлення між ланцюгами таких послідовностей. Після такого вирівнювання ідентичність послідовностей установлюється на основі співставлення відповідних позицій, наприклад, послідовності є "ідентичними" у конкретній позиції, якщо ця позиція, нуклеотиди або амінокислотні залишки ідентичні. Загальну кількість таких ідентичних позицій потім ділять на загальну кількість нуклеотидів або залишків у контрольній послідовності для визначення відсотка ідентичності послідовностей. Ідентичність послідовностей легко обчислюють відомими способами, включаючи, крім інших, описувані в публікаціях Сотршиїайопа! МоїІесшіаг Віоіоду, Гек, А. М., еа., Охіога Опімегейу Рге55, Мем/ Могк (1988), Віосотршийпад: Іптогітайісв5 і бепоте Рго|есіб5, тій, ОЛМУ., ед., Асадетіс Ргез55, Мем Мої (1993); Сотриїег Апаїузіз ої ЗХедоепсе Ваїа, Рап І, Сиійіп, А.М., апа сиініп, Н. С., єд5., Нитапа

Ргез5, Мем/ Уегзеу (1994); Зедиепсе Апаїувзі5 іп Моїесшіаг Віоіоду, моп Неїпде, с., Асадетіс

Ргезз (1987); Зедиепсе Апаїувзів Ріїтег, СпірзКом, М. апа Оеємегеих, у., едв5., М. БіосКіюоп Ргевв,

Мем/ ХогК (1991); і Сагійо, Н., апа Гіртап, О0., БІАМ 9. Арріїеєйа Маїб., 48: 1073 (1988), ідеї яких включаються в даний опис шляхом посилання. Переважні способи визначення ідентичності послідовностей розроблені для одержання найбільшої відповідності між досліджуваними послідовностями. Способи визначення ідентичності послідовностей кодифіковані в загальнодоступних комп'ютерних програмах послідовностей, що визначають ідентичність, між даними послідовностями. Прикладами таких програм є, крім інших, пакет програм 5СО (Оємегеих, 9., еї аїЇ., Мисієїс Асід5 Кезеагсі, 12(1): 387 (1984)), ВГ А5ТР, ВІ АЗТМ і ГАБТА (Абе, 5. Е. єї аї., У. Моїес. Віої., 215: 403 - 410 (1990). Програма ВГАЗТХ доступна на ринку від МСВІ і з інших джерел (ВІ А5ЗТ Мапиаї, Анбепиї, 5. еї аі., МСМІ ММ МІН Веїпезаа, МО 20894,

АйвсНиї, 5. Е. єї аї., У. Моїес. Віої!., 215: 403 - 410 (1990), ідеї яких включаються в даний опис шляхом посилання). Ці програми оптимально вирівнюють послідовності з використанням бо штрафів за делецію за замовчуванням з метою одержання найвищого рівня ідентичності послідовностей між даної й контрольної послідовностями. Як ілюстрація, у випадку полінуклеотиду, що має нуклеотидну послідовність, яка має принаймні, наприклад, 85 95, переважно 90 95, ще більш переважно - 95 95 "ІОдентичності послідовностей" з контрольною нуклеотидною послідовністю, мається на увазі, що нуклеотидна послідовність даного полінуклеотиду є ідентичною до контрольної послідовності, за винятком того, що дана полінуклеотидна послідовність може включати до 15, переважно до 10, ще більш переважно - до 5 точкових мутацій на кожні 100 нуклеотидів контрольної нуклеотидної послідовності.

Інакше кажучи, у полінуклеотиді, що має нуклеотидну послідовність, яка має принаймні 85 95, переважно 90 95, ще більш переважно - 95 95 ідентичності з контрольною нуклеотидною послідовністю, до 15 956, переважно до 10 95, ще більш переважно - до 5 95 нуклеотидів у контрольній послідовності можуть бути вилучені або заміщені іншим нуклеотидом, або певна кількість нуклеотидів до 15 95, переважно до 10 95, ще більш переважно - до 5 95 від загальної кількості нуклеотидів у контрольній послідовності, може бути вставлена в контрольну послідовність. Ці мутації контрольної послідовності можуть мати місце в 5'- або 3'-кінцевих позиціях контрольної нуклеотидної послідовності або в будь-якому іншому місці між цими кінцевими позиціями, або окремими вставками серед нуклеотидів у контрольній послідовності, або однією або декількома суміжними групами в межах контрольної послідовності. Аналогічним чином, у випадку поліпептиду, що має дану амінокислотну послідовність, яка має принаймні, наприклад, 85 95, переважно 90 95, ще більш переважно - 95 95 ідентичності послідовностей з контрольною амінокислотною послідовністю, мається на увазі, що дана амінокислотна послідовність поліпептиду є ідентичною до контрольної послідовності, за винятком того, що дана поліпептидна послідовність може включати до 15, переважно до 10, ще більш переважно - до 5 амінокислотних змін на кожні 100 амінокислот контрольної амінокислотної послідовності.

Інакше кажучи, для одержання даної поліпептидної послідовності, яка має принаймні 85 95, переважно 90 95, ще більш переважно - 95 95 ідентичності послідовності з контрольною амінокислотною послідовністю, до 15 95, переважно до 10 95, ще більш переважно - до 5 95 амінокислотних залишків у контрольній послідовності можуть бути вилучені або заміщені іншою амінокислотою, або певна кількість амінокислот до 15 95, переважно до 10 95, ще більш переважно - до 5 905 від загальної кількості амінокислотних залишків у контрольній

Зо послідовності, може бути вставлена в контрольну послідовність. Ці зміни контрольної послідовності можуть мати місце в аміно- або карбоксильній кінцевих позиціях контрольної амінокислотної послідовності або в будь-якому іншому місці між цими кінцевими позиціями, або окремими вставками серед залишків у контрольній послідовності, або однією або декількома суміжними групами в межах контрольної послідовності. Переважно позиції залишків, які не ідентичні, відрізняються консервативними амінокислотними заміщеннями. Однак консервативні заміщення не включаються як збіги при визначенні ідентичності послідовностей.

Терміни "ідентичність", "ідентичність послідовностей" і "відсоток ідентичності" застосовуються в даному описі взаємозамінно. З погляду цього винаходу встановлено, що для визначення відсотка ідентичності двох амінокислотних послідовностей або двох нуклеїновокислотних послідовностей послідовності вирівнюють із метою оптимального порівняння (наприклад, у послідовність першої амінокислоти або нуклеїнової кислоти можуть бути включені гепи для оптимального вирівнювання з метою співставлення із другою амінокислотною або нуклеїновокислотною послідовністю). Потім порівнюють амінокислоти або нуклеотидні залишки у відповідних амінокислотних або нуклеотидних позиціях. Коли позиція в першій послідовності зайнята тією ж амінокислотою або нуклеотидним залишком, що й відповідна позиція в другій послідовності, молекули в цій позиції є ідентичними. Відсоток ідентичності між двома послідовностями залежить від кількості ідентичних позицій, загальних для цих послідовностей | тобто, 95 ідентичності - кількість ідентичних позицій / загальна кількість позицій (тобто позицій, що перекриваються) х 100)Ї. Переважно дві послідовності мають однакову довжину.

Порівняння послідовностей здійснюють по всій довжині двох порівнюваних послідовностей або по довжині фрагмента двох послідовностей. Як правило, порівняння здійснюють по всій довжині двох порівнюваних послідовностей. Однак ідентичність послідовностей може визначатися й по ділянці, наприклад, із двадцяти, п'ятдесяти, ста або більше амінокислотних залишків.

Фахівцям у даній галузі відомо, що існує декілька різних комп'ютерних програм для визначення гомології між двома послідовностями. Наприклад, порівняння послідовностей і визначення відсотка ідентичності між двома послідовностями здійснюють із застосуванням математичного алгоритму. У кращому варіанті здійснення відсоток ідентичності між двома 60 амінокислотними або нуклеїновокислотними послідовностями визначають із застосуванням алгоритму Нідлмана-Вунша |У. Мої. Віої. (48): 444 - 453 (1970)), включеного в програму ЗАР у пакеті програм Ассеїгу5 (зо (доступний за адресою пПЕр:/Лимм.ассеїгу5.сот/ргодисів/дсо/), із застосуванням матриці Віозит 62 або матриці РАМ250О, і штрафу за відкриття гепа 16, 14, 12, 10, 8, 6 або 4 і штрафу за продовження гепа 1, 2, 3, 4, 5 або 6. Фахівцям у даній галузі стане зрозуміло, що всі ці різні параметри дають дещо різні результати, однак загальний відсоток ідентичності двох послідовностей при застосуванні різних алгоритмів значно не міняється.

Білкові послідовності або нуклеїновокислотні послідовності відповідно до даного винаходу також можуть використовуватися як "шукана послідовність" для виконання пошуку в загальнодоступних базах даних, наприклад, для ідентифікації інших представників родини або споріднених послідовностей. Такі пошуки виконують із застосуванням програм ВГІА5ТМ і

ВГАЗТР (версія 2.0) згідно з публікацією АЙй5СПиЇ, еї аІ. (1990) 9. Мої. Вісі. 215: 403 - 10. Пошук білків ВГ А5Т виконують за допомогою програми ВІ А5ТР, вага - 50, довжина слова - 3, для одержання амінокислотних послідовностей, гомологічних до білкових молекул відповідно до винаходу. Для одержання вирівнювання з гепами з метою порівняння застосовують Зарреа

ВІ А5Т, як описується в публікації Ай5спці еї аї. (1997) Мисієїс Асійа5 Кев5. 25(17): 3389 - 3402.

При застосуванні програм ВГА5БТ і Сарреа ВГА5БТ використовують параметри відповідних програм (наприклад, ВІГАБТР і ВІГАБТМ) за замовчуванням. Див. домашню сторінку

Національного центру біотехнологічної інформації за адресою пЕр:/Лумли. пері. піт. піп. дом.

Крім того, даний винахід забезпечує імуногенну композицію, що включає РРМ МР2, як описується авторами. Таким чином, даний винахід забезпечує імуногенну композицію, що включає вірусний білок 2 (МР2) свинячого парвовірусу (РРМ), що має в амінокислотній позиції 228 глутаміновокислотний залишок або глутаматний залишок, та/або в амінокислотній позиції 414 сериновий залишок, та/або в амінокислотній позиції 419 глутаміновий залишок, та/або в амінокислотній позиції 436 треоніновий залишок, причому нумерація амінокислотних позицій стосується амінокислотної послідовності дикого типу РРМ МР2.

Термін "імуногенна композиція" стосується композиції, яка включає принаймні один

Зо антиген, що викликає імунну відповідь організму-хазяїна, якому вводять цю імуногенну композицію. Така імунна відповідь може бути клітинною та/або антитілоопосередкованою імунною відповіддю на імуногенну композицію відповідно до винаходу. Переважно імуногенна композиція викликає імунну відповідь, більш переважно - забезпечує захисний імунітет проти однієї або декількох клінічних ознак інфекції РРМ. Хазяїн також описується як "суб'єкт".

Переважно будь-який з описуваних або згадуваних хазяїв або суб'єктів є свинею.

Як правило, "імунна відповідь" включає, крім іншого, один або декілька з наступних ефектів: вироблення або активації антитіл, В-клітин, хелперних Т-клітин, супресорних Т-клітин та/або цитотоксичних Т-клітин та/або гамма-дельта-Т-клітин, специфічно спрямованих на антиген або антигени, включені в імуногенну композицію відповідно до винаходу. Переважно хазяїн повинен демонструвати захисну імунну відповідь або терапевтичну відповідь. «Захисна імунна відповідь" або "захисний імунітет" демонструється через зниження або відсутність клінічних ознак, які звичайно виявляються в інфікованих хазяїв, більш швидке видужання та/або зниження тривалості інфективності або зниження титру патогену в тканинах або рідинах організму або екскрементах інфікованого хазяїна.

У випадку, якщо хазяїн демонструє захисну імунну відповідь, таку, як підвищена опірність до нової інфекції та/або зниження клінічної тяжкості захворювання, імуногенна композиція описується як "вакцина".

В одному аспекті даного винаходу імуногенну композицію рецептують для введення разовою дозою.

Об'єм разової дози визначається в інших розділах даного опису.

Імуногенну композицію переважно вводять місцево або системно. Підходящими традиційно застосовуваними шляхами введення є пероральне або парентеральне введення, таке, як інтраназальне, внутрішньовенне, внутрішньом'язове, внутрішньоочеревинне, підшкірне, а також інгаляція. Однак, залежно від характеру й способу дії сполуки, імуногенна композиція також може вводитися іншими шляхами. Однак у найбільш кращому варіанті імуногенну композицію вводять внутрішньом'язово.

В одному аспекті даного винаходу імуногенну композицію вводять внутрішньом'язово.

В одному аспекті даного винаходу імуногенна композиція є безпечною для свиней та/або свиноматок під час вагітності й лактації.

В одному аспекті даного винаходу імуногенна композиція є безпечною для свиней та/або свиноматок після 30 днів вагітності, переважно після 40 днів вагітності.

В одному аспекті даного винаходу імуногенна композиція також включає фармацевтично прийнятний носій.

Термін "фармацевтично прийнятний носій" включає будь-які й усі розчинники, диспергатори, покриття, стабілізатори, розріджувачі, консерванти, протимікробні й протигрибкові засоби, ізотонічні агенти, агенти, що сповільнюють адсорбцію, ад'юванти, імуностимулятори і їх комбінації. "Розріджувачі" можуть включати воду, сольовий розчин, декстрозу, етанол, гліцерин і т.п.

Ізотонічні агенти можуть включати, крім інших, хлорид натрію, декстрозу, маніт, сорбіт і лактозу. Стабілізатори включають, крім інших, альбумін і солі лужних металів з етилендіамінтетраоцтовою кислотою.

В одному аспекті даного винаходу фармацевтично прийнятним носієм є карбомер.

Переважно імуногенна композиція також може включати один або декілька інших імуномодуляторів, таких, як, наприклад, інтерлейкіни, інтерферони або інші цитокіни. Кількість і концентрація ад'ювантів і добавок, використовуваних у контексті даного винаходу, можуть бути легко визначені фахівцем у даній галузі.

У деяких аспектах імуногенна композиція відповідно до даного винаходу містить ад'ювант. "Ад'юванти" у контексті даного опису можуть включати гідроксид алюмінію й фосфат алюмінію, сапоніни наприклад, Оці А, 05-21 (Сатьгіддє Віоїєсп Іпс., Сатбгідде МА), СРІ-0100 (СаІепіса

Рпаптасеціїсса!5, Іпс., Віптіпопат, АС), емульсію типу вода в маслі, емульсію типу масло у воді, емульсію типу вода в маслі у воді. Емульсія, зокрема, може бути на основі легкого рідкого вазелінового масла (згідно з вимогами Європейської фармакопеї); ізопреноїдного масла, такого, як сквалан або сквален; масла, одержуваного в результаті олігомеризації алкенів, зокрема, ізобутену або децену; складних ефірів кислот або спиртів, які містять лінійну алкільну групу, більш конкретно - рослинних олій, етилолеату, пропіленглікольди-(каприлату/капрату), гліцерилтри-(каприлату/капрату) або пропіленглікольдіолеату; складних ефірів розгалужених жирних кислот або спиртів, зокрема, складних ефірів ізостеаринової кислоти. Масло застосовують у комбінації з емульгаторами для утворення емульсії. Емульгаторами переважно

Зо є неіонні поверхово-активні речовини, зокрема, складні ефіри сорбіту, маніду (наприклад, ангідроманітолеат), гліколю, полігліцерину, пропіленгліколю й олеїнової, ізостеаринової, рицинолеїнової або гідроксистеаринової кислоти, які необов'язково є етоксилованими, і блокспівполімери поліоксипропілену-поліоксіетилену, зокрема продукти типу Рішигопіс, насамперед 1121. Див. Нипієг єї аїІ., Тпе ТПеогу і Ргасіїса! Арріїсайноп ої Ад)имапів (Ед. 5іємаг-

Тий, О. Е. 5.), Чоппу/еу апа боп5, ММ, рр 51 - 94 (1995) ї Тода еї аї., Массіпе 15: 564 - 570 (1997). Типовими ад'ювантами є емульсія 5РТ, описана на сторінці 147 публікації "Массіпе

Оезідп, Тпе Бирипії апа Адіимапі Арргоасі" за редакцією М. РожеїЇ апа М. Меултап, Ріепит

Ргез5, 1995, і емульсія МЕ59, описана на сторінці 183 тієї ж книги.

Ще одним прикладом ад'юванту може бути сполука, вибрана з полімерів акрилової або метакрилової кислоти й співполімерів малеїнового ангідриду й алкенільної похідної.

Оптимальними ад'ювантними сполуками є полімери акрилової або метакрилової кислоти, зшиті, зокрема, з поліалкенільними складними ефірами цукрів або багатоатомних спиртів. Ці сполуки відомі як карбомери (Рпатеигора Мої. 8, Мо. 2, Уипе 1996). Фахівці в даній галузі також можуть звернутися до Патенту США Мо 2,909,462, у якому описуються такі акрилові полімери, зшиті з полігідроксилованою сполукою, що мають принаймні З гідроксильних групи, переважно не більше 8, причому атоми водню принаймні трьох гідроксилів замінені на ненасичені аліфатичні радикали, що мають принаймні 2 атоми вуглецю. Кращими радикалами є ті, які містять від 2 до 4 атомів вуглецю, наприклад, вініли, аліли й інші етиленненасичені групи.

Ненасичені радикали самі можуть містити інші замісники, такі, як метил. Особливо підходящими є продукти, які продаються за назвою Сагророї; (ВЕ Сооагісп, Огайо, США). Вони зшиті з алілсахарозою або з алілпентаеритритом. Серед них можна згадати Сагророї 974Р, 934Р і 971Р. Найбільш кращим є використання Сагророї 971Р. До співполімерів малеїнового ангідриду й алкенільної похідної належать співполімери ЕМА (Мопзапіос), які являють собою співполімери малеїнового ангідриду й етилену. Розчинення цих полімерів у воді веде до утворення розчину кислоти, що підлягає нейтралізації, переважно до фізіологічного рівня рн, з метою одержання розчину ад'юванта, у яку включають саму імуногенну, імунологічну або вакцинну композицію.

Інші підходящі ад'юванти включають, крім інших, ад'ювантну систему КІВІ (Кібрі Іпс.), блокспівполімер (Суїбх, АйЦапіа СА), 5БАБ-М (Спігоп, ЕтегумПШе СА), монофосфорил-ліпід А 60 ад'ювант авридин ліпід-амін, термолабільний ентеротоксин з Е. соїї (рекомбінантний або інший), холерний токсин, ІМ5 1314 або мурамілдипептид, або природні або рекомбінантні цитокіни або їх аналоги або стимулятори вивільнення ендогенного цитокіну й ін.

Очікується, що ад'ювант може додаватися в кількості від приблизно 100 мкг до приблизно 10 мг на дозу, переважно в кількості від приблизно 100 мкг до приблизно 10 мг на дозу, більш переважно - у кількості від приблизно 500 мкг до приблизно 5 мг на дозу, ще більш переважно - у кількості від приблизно 750 мкг до приблизно 2,5 мг на дозу, і найбільш переважно - у кількості від приблизно 1 мг на дозу. В альтернативному варіанті ад'ювант може бути в концентрації від приблизно 0,01 95 до 50 95, переважно в концентрації від приблизно 2 95 до 30

Фо, більш переважно - у концентрації від приблизно 5 95 до 25 95, ще більш переважно - у концентрації від приблизно 7 95 до 22 95, і найбільш переважно - у концентрації від 10 95 до 20

Фо за об'ємом готового продукту.

В одному аспекті даного винаходу імуногенна композиція включає приблизно від 0,1 мкг до 50 мкг антигену РРМ МР2. Переважно імуногенна композиція включає приблизно від 0,2 мкг і 40 мкг, більш переважно - приблизно від 0,3 мкг до 30 мкг, більш переважно - приблизно від 0,4 мкг до 20 мкг, і ще більш переважно - приблизно від 0,5 мкг до 10 мкг, причому найбільш краща кількість становить 0,5 мкг, 0,75 мкг, 1 мкг, 1,25 мкг, 1,5 мкг, 2 мкл, 2,5 мкг, З мкг, 3,5 мкг, 4 мкг, 4,5 мкг, 5 мкг, 5,5 мкг, б мкг, 6,5 мкг, 7 мкг, 7,5 мкг, 8 мкг, 8,5 мкг, 9 мкг, 9,5 мкг або 10 мкг антигену РРМ МР2.

В одному аспекті даного винаходу імуногенна композиція є вакциною.

Термін "вакцина" уже описувався в інших розділах даного опису. Однак у випадку, якщо хазяїн демонструє захисну імунну відповідь, наприклад, для підвищення опірності нової інфекції та/або зниження клінічної тяжкості захворювання, імуногенна композиція описується як "вакцина.

В одному аспекті даного винаходу імуногенна композиція захищає від гомологічного та/або гетерологічного провокаційного зараження. Перевага полягає в тому, що експериментальні дані, забезпечувані даним винаходом, виявляють, що вакцина відповідно до даного винаходу має широкий спектр захисту, оскільки вакцина захищає від гетерологічних північноамериканських, а також гетерологічних європейських штамів для провокаційного зараження.

Зо Терміни "захищає" і "профілактика" і "запобігання" застосовуються в цій заявці взаємозамінно. Ці терміни визначаються в інших розділах даного опису.

В одному аспекті даного винаходу імуногенна композиція захищає від провокаційного зараження північноамериканськими та/або європейськими ізолятами.

Термін "північноамериканські і європейські ізоляти" добре відомий серед фахівців у даній галузі. Термін "північноамериканські та/або європейські ізоляти" охоплює всі ізоляти, які були або будуть виділені в Північній Америці і Європі.

В одному аспекті даного винаходу імуногенна композиція забезпечує перехресний імунітет від північноамериканських та/або європейських ізолятів.

В одному аспекті даного винаходу імуногенна композиція ефективна для лікування та/або профілактики клінічних ознак, які викликаються інфекцією РРУ у суб'єкта, який цього потребує.

Терміни "лікування та/або профілактика", "клінічні ознаки" і "потребує" визначені в інших розділах цього опису.

Крім того, даний винахід забезпечує полінуклеотид, що включає нуклеотидну послідовність, яка кодує РРМ МР2, як описується авторами.

Крім того, даний винахід забезпечує полінуклеотид, що включає нуклеотидну послідовність, яка має принаймні 90 95, принаймні 91 95, принаймні 92 95, принаймні 93 95, принаймні 94 95, принаймні 95 95, принаймні 96 95, принаймні 97 95, принаймні 98 95, принаймні 99 95, принаймні 99,1 95, принаймні 99,2 95, принаймні 99,3 95, принаймні 99,4 95, принаймні 99,5 95, принаймні 99,6 95, принаймні 99,7 95, принаймні 99,8 95, або принаймні 99,9 95 послідовності з

БО нуклеотидною послідовністю ЗЕО ІЮ МО: З або 5ЗЕО ІЮ МО: 4.

Крім того, даний винахід забезпечує полінуклеотид, що включає або складається з нуклеотидної послідовності 5ЕО ІЮ МО: З або 5ЕО ІО МО: 4.

Крім того, даний винахід забезпечує вектор, що включає полінуклеотид, як описується авторами.

В одному аспекті даного винаходу вектор є вектором експресії.

В одному аспекті даного винаходу вектор є бакуловірусом.

Термін "вектор" добре відомий серед фахівців у даній галузі. Термін "вектор", відомий фахівцям у даній галузі, стосується полінуклеотидної конструкції, як правило, плазміди або вірусу, які використовують для переносу генетичного матеріалу в клітину-хазяїн. Вектори бо можуть бути, наприклад, вірусами, плазмідами, космідами або фагами. Вектор у контексті даного винаходу може складатися із ДНК або РНК. У деяких варіантах здійснення вектор складається із ДНК. "Вектор експресії" являє собою вектор, здатний направляти експресію білка, кодованого одним або декількома генами, які несе вектор, коли він присутній у відповідному середовищі. Вектори переважно здатні до самостійної реплікації. Як правило, вектор експресії включає промотор транскрипції, ген і термінатор транскрипції. Експресію гена звичайно здійснюють під контролем промотору, і ген вважається "функціонально зв'язаним" із промотором.

У контексті даного опису термін "функціонально зв'язаний" застосовують для опису зв'язку між регуляторними елементами й геном або його кодуючою ділянкою. Як правило, експресію гена здійснюють під контролем одного або декількох регуляторних елементів, до яких, крім інших, ставляться, наприклад, конститутивні або індуцибельні промотори, тканиноспецифічні регуляторні елементи й енхансери. Ген або кодуюча ділянка вважається "функціонально зв'язаним" або "функціонально з'єднаним" або "функціонально асоційованим" з регуляторними елементами в тому розумінні, що ген або кодуюча ділянка знаходиться під контролем або впливом регуляторного елемента. Наприклад, промотор вважається функціонально зв'язаним з кодуючою послідовністю, якщо промотор здійснює транскрипцію або експресію кодуючої послідовності.

Вектори й способи одержання та/або застосування векторів (або рекомбінантів) для експресії можуть бути ідентичними або аналогічними до способів, що розкриваються в: патентах США МоМо 4,603,112, 4,769,330, 5,174,993, 5,505,941, 5,338,683, 5,494,807, 4,722,848, 5,942,235, 5,364,773, 5,762,938, 5,770,212, 5,942,235, 382,425, публікаціях РСТ УМО 94/16716,

МО 96/39491, МО 95/30018; Раосіецйі, "Арріїсайоп5 ої рох мігив месіогз Ю массіпайоп: Ап ирааївє, "РМА5 БА 93: 11349 - 11353, Осіорег 1996; Мо55, "Сепеїїсайу епдіпеегед рохмігиб5ев ог гесотбріпапі депе ехргезвіоп, массіпайоп, апа заїеіу," РМАБ ОБА 93: 11341 - 11348, Осіорег 1996; тій еї аїЇ.,, Патенті США Мо 4,745,051 (рекомбінантний бакуловірус); Кіспагазоп, С. 0. (Едіюг), Меїйодз іп Моїесшіаг Віоіоду 39, "Васшомігив Ехргезвіоп Ргоїосої!в" (1995 Нитапа Ргез5

Іпс.); тій еї аї., "Ргодисіоп ої Нитап Веїа Іпіепегоп іп Інзесі СеїІ5 Іп'еєсієд м/йй а Васицоміги5

Ехргезвзіоп Месіог", МоїІесшціаг і СеїІшіаг Віоїоду, Оесетрбег, 1983, Мої. 3, Мо. 12, р. 2156 - 2165;

Реппоск еї аї., "Зігопуд і Кедшіастей Ехргезвзіоп ої ЕзсПегіспіа соїї В-СаІасіозідазе іп Іптесі СеїЇв5 м/йп а Васшоміги5 месіог, "МоїІесціаг і СеПшіаг Віооду Магсй 1984, Мої. 4, Мо. 3, р. 406; ЕРАО 370 573; Ш.5. арріїсайоп Мо. 920,197, Яеа Осі. 16, 1986; ЕР раїепі рибіїсайноп Мо. 0 265 785; Патенті

США Мо 4,769,331 (рекомбінантний герпесвірус); Кої2тап, "Те їшпсоп ої пегре5 5ітрієх міги5 депев: А ргітег їог депеїйс епдіпеегіпуд ої поме! месіої5," РМАБ ОБА 93: 11307 - 11312, Осіобег 1996; АпагеапзхкКу еї а!., "Те арріїсайноп ої депеїїсаПу епдіпеегей Пегре5 5ітрієх мігибве5 10 Ше неєаїтепі ої ехрегітепіа! бгаіп Іштогв5," РМАБ ОБА 93: 11313 - 11318, Осіобег 1996; Вобрепнзоп вї аІ., "Ерзівіп-Ва!т мігиб5 месіюг5 ог депе деїїмегу ю В Іутрпосуїе", РМАБ ОБА 93: 11334 - 11340,

Осіорег 1996; Егоїом еї аї., "АіІрпамігиє-базей ехргезвіоп месіогв: Зігаїедієв апа арріїсайіоп,"

РМАБ БА 93: 11371 - 11377, Осторег 1996; Кіїзоп вї аї., у). Міго!. 65, 3068 - 3075, 1991; 0.5. Раї.

Мо5. 5,591,439, 5,552,143; МО 98/00166; акцептованих заявках США, сер. МоМо 08/675,556, і 08/675,566, обидві з яких були подано З липня 1996 р. (рекомбінантний аденовірус); публікації

Стипрацз еї аї!., 1992, "Адепоміги5 аз сіопіпд месіогв," Зетіпагв іп Мігоїоду (Мої. 3) р. 237 - 52, 1993; ВайЇау єї а. ЕМВО доитгпаї, мої. 4, р. 3861 - 65, Станат, Тіріесн 8, 85 - 87, Арії, 1990;

Ргемес вї аї!., у). Сеп Мігої. 70, 42434; РСТ МО 91/11525; ЕєІдпег еї а. (1994), У. Віої. Снет. 269, 2550 - 2561, 5сіепсе, 259: 1745 - 49, 1993; і МеСіетепів еї аї., "Іттипігаєоп мйп ОМА массіпе5 епсодіпад діусоргоївїп О ог діусоргоївїп В, аіопе ог іп сотбіпаїййоп, іпдисев ргоїесіїме іттипйу іп апіта! тоде!5 ої пегрез вітрієх міги5-2 дізеазе", РМАБ ОБА 93: 11414 - 11420, Осіорег 1996; і патентах США МоМо 5,591,639, 5,589,466, і 5,580,859, а також УМО 90/11092, УМО 93/19183, УМО 94/21797, МО 95/11307, МО 95/20660; публікаціях Тапо еї аї., Маїиге, апа Еишгій еї аї!., Апаїуїсісаї

Віоспетівігу, що стосуються векторів, які експресують ДНК, їі ін. Див. також публікації УУО 98/33510; ди еї аї., Юіареіодіа, 41: 736 - 739, 1998 (лентивірусна експресуюча система); зЗапіога єї аї., 0.5. Раї. Мо. 4,945,050; Різспраснеї аї. (Іпігасе!); УМО 90/01543; Вобіпзоп еї аї.,

Зетіпагв іп Іттипоіоду мої. 9, рр. 271-283 (1997), (системи ДНК-векторів); 520оКа еї аї., Патенті

США Мо 4,394,448 (спосіб вставки ДНК у живі клітини); МеоСогтіскК еї аіІ., Патенті США Мо 5,677,178 (застосування цитопатичних вірусів); і Патенті США Мо 5,928,913 (вектори для доставки генів); а також інших згаданих авторами документах.

Терміни "регуляторний елемент" і "елемент контролю експресії" застосовуються взаємозамінно й стосуються молекул нуклеїнових кислот, які впливають на експресію функціонально зв'язаної кодуючої послідовності у конкретному організмі-хазяїні. Ці терміни застосовуються в широкому розумінні й охоплюють усі елементи, що сприяють транскрипції 60 або регулюють її, включаючи промотори, основні елементи, необхідні для фундаментальної взаємодії РНК-полімерази й факторів транскрипції, розташовані проти ходу транскрипції елементи, енхансери й елементи відповіді Типовими регуляторними елементами в прокаріотах є промотори, операторні послідовності й ділянки зв'язування рибосом. Регуляторні елементи, застосовувані в еукаріотичних клітинах, можуть включати, крім інших, транскрипційні й трансляційні контрольні послідовності, такі, як промотори, енхансери, сигнали сплайсингу, сигнали поліаденілування, термінатори, сигнали руйнування білка, елемент внутрішньої посадки рибосоми (ІКЕ5), 2А послідовності й т.п., які забезпечують та/або регулюють експресію кодуючої послідовності, та/або утворення кодованого поліпептиду в клітині-хазяїні.

У контексті даного опису термін "промотор" означає нуклеотидну послідовність, що забезпечує можливість зв'язування РНК-полімерази й направляє транскрипцію гена. Як правило, промотор розташований у 5'- некодуючій ділянці гена, наближеній до сайту ініціації транскрипції гена. Елементи послідовності в межах промоторів, які виконують Функцію ініціації транскрипції, часто характеризуються консенсусними нуклеотидними послідовностями.

Прикладами промоторів, крім інших, можуть бути промотори з бактерій, дріжджів, рослин, вірусів і ссавців (включаючи людину). Промотор може бути індуцибельним, репресованим та/або конститутивним. Індуцибельні промотори ініціюють підвищений рівень транскрипції із

ДНК під їх контролем у відповідь на деякі зміни в умовах культивування, наприклад, зміну температури.

У контексті даного опису термін "енхансер" стосується типу регуляторного елемента, який може підвищувати ефективність транскрипції, незалежно від відстані або орієнтації енхансера щодо сайту початку транскрипції.

Утворення вірусного вектора може здійснюватися із застосуванням будь-яких підходящих технологій інженерії, загальновідомих серед фахівців у даній галузі, включаючи, крім інших, стандартні технології розщеплення рестрикційної ендонуклеази, лігування, трансформації, очищення плазміди й секвенування ДНК, наприклад, як описується в публікації Затьгоок еї аї. (Моїесшіаг Сіопіпао: А Гарогаїюгу Мапиаї. Соїа 5ргіпд Нагбог І абогаїюгу Ргевзв, М.У. (1989)).

Термін "бакуловірус" добре відомий серед фахівців у даній галузі. Однак у контексті даного опису "бакуловірус" зокрема, означає систему вироблення потрібного білка в клітинах комах із застосуванням рекомбінантного бакуловірусного вектора, призначеного для експресії

Зо вищезгаданого білка. Бакуловірусна система експресії в цілому включає всі елементи, необхідні для досягнення експресії рекомбінантного білка в клітинах комах, і, як правило, включає інженерію бакуловірусного вектора для експресії потрібного білка, введення підданого інженерії бакуловірусного вектора в клітини комах, культивування клітин комах, що містять підданий інженерії бакуловірусний вектор, у підходящому середовищі для вирощування, таким чином, щоб експресувався потрібний білок, і виділення білка. Як правило, інженерія бакуловірусного вектора включає побудову й виділення рекомбінантних бакуловірусів, у яких кодуюча послідовність для вибраного гена вставлена за промотором для другорядного вірусного гена, причому більшість застосовуваних у цей час бакуловірусних систем експресії засновані на послідовності вірусу ядерного поліедрозу совки каліфорнійської люцернової (Астпру) ((Мігооду 202 (2), 586 - 605 (1994), МСВІ Ассевззіоп Мо. МС 001623). Бакуловірусні системи експресії загальновідомі серед фахівців у даній галузі й описувалися, наприклад, у публікаціях "Васціомігиз5 Ехргезвзіоп Месіоге: А І арогаїюгу Мапиаї!", Юамід Б. О'Кейу, І ої5 М ПШег,

Мегпе ГисКом/, вид-во. Охіога Опім. Рге55 (1994), "пе Васишіоміги5 Ехргезвзіоп Зузіет: А

ІГарогаїогу Сціде", іпаа А. Кіпудр, К. О. Роб5б5ее, вид-во. Спартап 5 Наї! (1992). Типовий необмежуючий приклад бакуловірусної системи для одержання рекомбінантного білка описується, наприклад, у документі МО 2006/072065 А2.

Кращі бакуловірусні вектори включають бакуловірус, такий, як Васшосоїй (ВО Віозсіепсе5

РПагтіпдеп, Зап Оіедо, Саїй.) або ОіатопаВас (Зідта А|Їагісп), зокрема, за умови, що продукуючі клітини є клітинами комах. Хоча перевага віддається бакуловірусній системі експресії, фахівцям у даній галузі стане зрозуміло, що з погляду даного винаходу можуть застосовуватися й інші системи експресії.

Крім того, даний винахід забезпечує клітину, що включає полінуклеотид або вектор, як описується авторами. Переважно вектор є бакуловірусом.

Термін "клітина" добре відомий серед фахівців у даній галузі. Термін "клітина" охоплює еукаріотичну клітину, таку, як клітина тварини, клітина найпростішого, рослинна клітина або грибкова клітина. Переважно еукаріотична клітина є клітиною ссавця, такого, як СНО, ВНК або

СО5, або грибковою клітиною, наприклад, Засспаготусев сегемізіае, або клітиною комахи, наприклад, 519.

В одному аспекті даного винаходу клітина є клітиною комахи.

"Клітина комахи" у контексті даного опису означає клітину або клітинну культуру, узяту з виду комахи. Особливий інтерес із погляду даного винаходу представляють клітини комах, узяті з видів 5родоріега Ігидірегаа і Тгіспоріивіа пі.

Переважно клітина комахи, як згадано авторами, є клітиною 5родорієга їгидірегда (55) або клітиною із клітинної лінії, узятої з Зродорієега їтидірегда, більш переважно - вибраної із групи, що складається із клітини 519 і клітини 51. Відповідно, клітини комах, згадані авторами, переважно являють собою клітини Зродорієега їштидірегда (50) або клітини із клітинної лінії, узятої з Зродорієга ігидірегаа, більш переважно - вибрані із групи, що складається із клітин 519 і клітин ГК.

В одному аспекті даного винаходу клітину комаху вибирають із групи, до якої належать клітини 519 і клітини 5.

Крім того, даний винахід забезпечує вірусоподібну частинку, що включає РРМ МР, як описується авторами.

Термін "вірусоподібна частинка" (МІ Р) охоплює порожню вірусну оболонку від вірусу, що не реплікується. МІР звичайно складаються з одного або більше вірусних білків, до яких, крім інших, належать білки, що вказуються як капсиди, білки покриття, поверхні та/або оболонки, або поліпептиди, які утворюють частинки, похідні від цих білків. МІР можуть утворюватися спонтанно після рекомбінантної експресії білка у відповідній експресуючій системі. Присутність

МІ Р після рекомбінантної експресії вірусних білків виявляють із застосуванням традиційних технологій, відомих фахівцям у даній галузі, таких, як електронна мікроскопія, рентгенівська кристалографія й т.п. Див., наприклад, Вакег еї а!., Віорпузв. 9. (1991) 60: 1445 - 1456; Надепзеє еї аї., у. Мігої. (1994) 68: 4503 - 4505. Наприклад, кріоелектронну мікроскопію виконують на вітрифікованих водних зразках даного препарату МІ Р і зображення записують при відповідних умовах експозиції.

Термін "вірусоподібна частинка" (МІ Р) також охоплює МІ Р, що складаються із багатьох РРУ

Ура.

В одному аспекті даного винаходу вірусоподібна частинка складається з багатьох РРМ МР2, як описується авторами.

Крім того, даний винахід забезпечує спосіб одержання РРМ МР, як описується авторами,

Зо що включає трансфекцію клітини вектором, як описується авторами.

Крім того, даний винахід забезпечує спосіб одержання РРМ МР, як описується авторами, що включає трансфекцію клітини, переважно клітини комахи, бакуловірусом, як описується авторами.

Композиції, у випадку потреби, можуть бути представлені в упаковці або дозуючому обладнанні, яке може містити одну або декілька одиничних лікарських форм, що містять активний інгредієнт. Упакування може включати, наприклад, металеву або пластикову плівку, наприклад, блістерна упаковка. До упакування або дозуючого обладнання можуть додаватися інструкції із введення, переважно щодо введення тваринам, зокрема, свиням. До контейнера(івр може додаватися записка у формі, що пропонується урядовим органом, що регулюють виробництво, використання або продаж фармацевтичних або біологічних продуктів, причому в записці відображається дозвіл даного органу на виробництво, використання або продаж з метою введення людині.

Таким чином, даний винахід забезпечує комплект, що включає РРМ МРО2 або імуногенну композицію, як описується авторами.

В одному аспекті даного винаходу комплект також включає інструкцію щодо лікування та/або профілактики захворювань свиней.

В одному аспекті даного винаходу комплект також включає інструкцію щодо лікування та/або профілактики інфекцій РРУ.

В іншому аспекті даного винаходу вірус РРМ відповідно до даного винаходу був інактивований, у результаті чого був отриманий цільний інактивований вірус із вірусним білком 2 (МР2), як описується авторами.

Таким чином, даний винахід також стосується інактивованого свинячого парвовірусу (РРМ), що включає вірусний білок 2 (МР), який має в амінокислотній позиції 228 глутаміновокислотний залишок або глутаматний залишок, та/або в амінокислотній позиції 414 сериновий залишок, та/або в амінокислотній позиції 419 глутаміновий залишок, та/або в амінокислотній позиції 436 треоніновий залишок, причому нумерація амінокислотних позицій стосується амінокислотної послідовності дикого бо типу РРМ МР2.

Крім того, даний винахід також стосується інактивованого свинячого парвовірусу (РРМ), що включає вірусний білок 2 (УР2), який включає або складається з амінокислотної послідовності, яка має принаймні 90 95, принаймні 91 95, принаймні 92 95, принаймні 93 95, принаймні 94 95, принаймні 95 95, принаймні 96 95, принаймні 97 95, принаймні 98 95, принаймні 99 95, принаймні 99,1 95, принаймні 99,2 95, принаймні 99,3 95, принаймні 99,4 95, принаймні 99,5 95, принай мні 99,6 95, принаймні 99,7 95, принаймні 99,8 95, або принаймні 99,9 95 ідентичності послідовності з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮО МО: 1, 5ЕО ІО МО: 2 або 5ЕО ІО МО: 5 - 16.

Крім того, даний винахід також стосується імуногенної композиції, що включає інактивований свинячий парвовірус (РРМ), що включає вірусний білок 2 (МР2), як описується авторами.

Таким чином, даний винахід також стосується імуногенної композиції, що включає інактивований свинячий парвовірус (РРУ), що включає вірусний білок 2 (МР2), який має в амінокислотній позиції 228 глутаміновокислотний залишок або глутаматний залишок, та/або в амінокислотній позиції 414 сериновий залишок, та/або в амінокислотній позиції 419 глутаміновий залишок, та/або в амінокислотній позиції 436 треоніновий залишок, причому нумерація амінокислотних позицій стосується амінокислотної послідовності дикого типу РРМ МР2.

Таким чином, даний винахід також стосується імуногенної композиції, що включає інактивований свинячий парвовірус (РРМ), що включає вірусний білок 2 (МР2), який включає або складається з амінокислотної послідовності, яка має принаймні 90 95, принаймні 91 95, принаймні 92 95, принаймні 93 95, принаймні 94 95, принаймні 95 95, принаймні 96 95, принаймні 97 95, принаймні 98 95, принаймні 99 95, принаймні 99,1 95, принаймні 99,2 95, принаймні 99,3 905, принаймні 99,4 95, принаймні 99,5 95, принаймні 99,6 95, принаймні 99,7 95, принаймні 99,8 95, або принаймні 99,9 95 ідентичності послідовності з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮ МО: 1, ЗЕО ІО МО: 2 або 5ЕО ІО МО: 5 - 16.

З погляду даного винаходу може застосовуватися будь-який традиційний спосіб інактивації.

Таким чином, інактивація може виконуватися із застосуванням способів хімічної та/або

Зо фізичної обробки, які відомі фахівцям у даній галузі. Переважні способи інактивації включають додавання циклізованого бінарного етиленаміну (ВЕЇ), що включає додавання розчину 2- бромоетиленамінгідроброміду (ВЕА), який був циклізований до бінарного етиленаміну (ВЕЇ).

Кращі додаткові засоби хімічної інактивації включають, крім інших, Тгйоп Х-100, дезоксихолат натрію, бромід цетилтриметиламонію, В-пропіолактон, тимеросал, фенол і формальдегід (формалін). Однак інактивація також може включати етап нейтралізації. Кращі засоби нейтралізації включають, крім інших, тіосульфат натрію, бісульфат натрію й т.п.

Кращі умови інактивації формаліном включають концентрацію формаліну приблизно від 0,02 95 (об'єм/об'єм) до 2,0 95 (об'єм/об'єм), більш переважно - приблизно від 0,1 95 (об'єм/об'єм) до 1,0 95 (об'єм/об'єм), ще більш переважно - приблизно від 0,15 95 (об'єм/об'єм) до 0,8 9о (об'єм/об'єм), ще більш переважно - приблизно від 0,16 9о (об'єм/об'єм) до 0,6 95 (об'єм/об'єм), і найбільш переважно приблизно від 0,2 95 (об'єм/об'єм) до 0,4 95 (об'єм/об'єм).

Час інкубації залежить від резистентності РРУ. Як правило, процес інактивації виконують доти, поки не перестане виявлятися ріст РРУ у відповідній системі культивування.

Переважно інактивований РРМУ відповідно до даного винаходу інактивують формаліном, переважно із застосуванням описаної вище концентрації.

Інактивований РРМ відповідно до винаходу може бути включений у ліпосоми із застосуванням відомої технології, такий, як описувана в публікаціях Маїшиге, 1974, 252, 252 - 254 або дошигпа! ої ІттипоЇоду, 1978, 120, 1109 - 13. В іншому варіанті здійснення винаходу інактивований РРМ відповідно до винаходу може бути кон'югований з підходящими

БО біологічними сполуками, такими, як полісахариди, пептиди, білки й т.п., або їх комбінація.

Даний винахід також стосується застосування:

РРМ МР, як описується авторами, імуногенної композиції, як описується авторами, полінуклеотиду, як описується авторами, вектора, як описується авторами, клітини, як описується авторами, бакуловірусу, як описується авторами, та/або вірусоподібних частинок, як описується авторами, для приготування медикаменту, переважно вакцини.

Даний винахід також стосується застосування РРМ МР2, як описується авторами, або імуногенної композиції, як описується авторами, для приготування медикаменту для лікування та/або профілактики інфекції РРУ, зниження, профілактики та/або лікування клінічних ознак, викликаних інфекцією РРМ, та/або для лікування та/або профілактики захворювання, викликаного інфікуванням РРУ.

Крім того, даний винахід забезпечує спосіб імунізації суб'єкта, що включає введення такому суб'єктові імуногенної композиції, як описується авторами.

Термін "імунізація" стосується активної імунізації шляхом введення імуногенної композиції суб'єктові, що підлягає імунізації, таким чином, щоб викликалася імунна відповідь проти антигену, включеного в таку імуногенну композицію.

Переважно в результаті імунізації забезпечується зменшення частоти інфікування РРМ у череді та/або зменшення тяжкості клінічних ознак, викликаних конкретною інфекцією РРМУ або пов'язаних з нею.

Крім того, результатом імунізації суб'єкта, який її потребує, імуногенними композиціями, забезпечуваними даним винаходом, є запобігання зараження суб'єкта інфекцією РРМ. У ще більш кращому варіанті результатом імунізації є ефективна, тривала імунологічна відповідь проти інфекції РРМУ. Слід розуміти, що вищезгаданий період часу повинен тривати більше 1 місяця, переважно понад 2 місяці, більш переважно - понад З місяці, більш переважно - понад 4 місяці, більш переважно - понад 5 місяці, більш переважно - понад 6 місяців. Слід розуміти, що імунізація може не бути ефективною у всіх імунізованих суб'єктів. Однак термін вимагає, щоб значна частина суб'єктів у череді була ефективно імунізована.

Переважно в контексті даного винаходу передбачається череда суб'єктів, у якій у нормальних умовах, тобто, без імунізації, проявляються клінічні ознаки, що викликаються інфекцією РРМ або пов'язані з нею. Чи ефективно імунізовані суб'єкти череди, можна визначити без зайвих зусиль із боку фахівців у даній галузі. Переважно імунізація вважається ефективною, якщо клінічні ознаки в принаймні 33 95, принаймні 50 95, принаймні 60 95, принаймні 70 95, принаймні 80 95, принаймні 90 95, ще більш переважно - у принаймні 95 95, найбільш переважно - в 100 95 суб'єктів даної череди знижуються за частотою або тяжкістю принаймні на 10 95, більш переважно - принаймні на 20 95, ще більш переважно - принаймні на

Зо 30 95, ще більш переважно - принаймні на 40 95, ще більш переважно - принаймні на 50 95, ще більш переважно - принаймні на 60 95, ще більш переважно - принаймні на 70 95, ще більш переважно - принаймні на 80 95, ще більш переважно - принаймні на 90 95, ще більш переважно - принаймні на 95 95, найбільш переважно - на 100 95, у порівнянні із суб'єктами, які або не були імунізовані, або були імунізовані імуногенною композицією, яка була в наявності до даного винаходу, але згодом були інфіковані конкретним РРУ.

Крім того, даний винахід забезпечує спосіб лікування та/або запобігання клінічних ознак, викликаних інфекцією РРМ у суб'єкта, який цього потребує, причому спосіб включає введення суб'єктові терапевтично ефективної кількості імуногенної композиції, як описується авторами.

Як перевага, як показується в розділі прикладів даного опису, забезпечувана імуногенна композиція виявилася ефективною в лікуванні та/або запобіганні клінічних ознак, які викликаються інфекцією РРУ, у суб'єкта, який цього потребує.

Термін "лікування та/або профілактика" стосується зниження частоти випадків конкретної інфекції РРМ у череді та/або зниження тяжкості клінічних ознак, викликаних конкретною інфекцією РРМ або пов'язаних з нею. Таким чином, термін "лікування та/або профілактика" також стосується зменшення кількості тварин у череді, інфікованих конкретним РРМ (- зниження частоти випадків конкретної інфекції РРМ) та/або зниження тяжкості клінічних ознак, звичайно пов'язаних з інфекцією РРМ або що викликаються нею, у групі тварин, які одержали ефективну кількість імуногенної композиції, передбачену відповідно до винаходу, у порівнянні із групою тварин, які не одержували такої імуногенної композиції. "Лікування та/або профілактика" як правило, включає введення ефективної кількості імуногенної композиції відповідно до даного винаходу суб'єктові або череді суб'єктів, які потребують такого лікування / профілактики, або для яких таке лікування / профілактика є сприятливими. Термін "лікування" стосується введення ефективної кількості імуногенної композиції після того, як суб'єкт або принаймні деякі тварини із череди вже були інфіковані таким РРМ, і такі тварини вже проявляли деякі клінічні ознаки, що викликаються такий інфекцією РРМ або пов'язані з нею. Термін "профілактика" стосується введення суб'єктові перед будь-яким інфікуванням такого суб'єкта РРУ, або ситуацію, коли хоча б така тварина або жодна із тварин у групі тварин не проявляє ніяких клінічних ознак, які викликаються інфікуванням таким РРМ, або пов'язаних з ним. Терміни "профілактика" і "запобігання" бо застосовуються в цій заявці взаємозамінно.

Термін "ефективна кількість" у контексті даного опису означає, крім іншого, кількість антигену, яка викликає або здатна викликати імунну відповідь у суб'єкта. Така ефективна кількість здатна знизити частоту випадків конкретної інфекції РРМ у череді та/або знизити тяжкість клінічних ознак конкретної інфекції РРУ.

Переважно клінічні ознаки знижуються за частотою або тяжкістю принаймні на 10 95, більш переважно - принаймні на 20 95, ще більш переважно - принаймні на 30 95, ще більш переважно - принаймні на 40 95, ще більш переважно - принаймні на 50 95, ще більш переважно - принаймні на 60 95, ще більш переважно - принаймні на 70 95, ще більш переважно - принаймні на 80 95, ще більш переважно - принаймні на 90 95, ще більш переважно - принаймні на 95 95, найбільш переважно - на 100 95, у порівнянні із суб'єктами, які не одержували лікування або одержували імуногенну композицію, яка була в наявності до даного винаходу, але згодом були інфіковані конкретним РРУ.

Термін "клінічні ознаки" у контексті даного опису стосується наявності в суб'єкта ознак інфекції РРМ. Клінічні ознаки інфекції залежать від вибраного патогену. Приклади таких клінічних ознак включають, крім інших, перехідну лейкопенію й репродуктивну недостатність, що характеризуються інфікуванням і загибеллю ембріона та/або плода, або їх комбінації.

Приклади прямо спостережуваних клінічних ознак включають зменшений розмір приплоду, підвищену муміфікацію ембріона або плода на приплід, аутолізацію ембріона або плода, зменшений розмір ембріона або плода, зменшену вагу ембріона або плода й т.п., або їх комбінації. Інші приклади таких клінічних ознак включають, крім інших, підвищену віремію, підвищене вірусне навантаження в тканинах-мішенях і крові, підвищену передачу/поширення

РРМ на тварин одного приплоду і т.п., або їх комбінації.

Переважно клінічні ознаки, які знижуються за частоті випадків або тяжкості в підданого лікуванню суб'єкта в порівнянні із суб'єктами, які або не піддавалися лікуванню, або піддавалися лікуванню імуногенною композицією, яка була в наявності до даного винаходу, але згодом були інфіковані конкретним РРМ, стосуються перехідної лейкопенії й репродуктивної недостатності, що характеризуються інфікуванням і загибеллю ембріона та/або плода, або їх комбінації.

Термін "який потребує" або "потребує" у контексті даного опису означає, що

Зо введення/лікування зв'язане зі стимулюванням або поліпшенням стану здоров'я або клінічних ознак або будь-яким іншим позитивним медичним впливом на здоров'я тварин (включаючи їх ембріони або плоди), які одержують імуногенну композицію відповідно до даного винаходу.

Термін "зниження" або "знижений" або "зменшення" або "зменшувати" застосовуються в цій заявці взаємозамінно. Термін "зниження" означає, що клінічна ознака знижується принаймні на 10 95, більш переважно - принаймні на 20 95, ще більш переважно - принаймні на 30 95, ще більш переважно - принаймні на 40 95, ще більш переважно - принаймні на 50 95, ще більш переважно - принаймні на 60 95, ще більш переважно - принаймні на 70 95, ще більш переважно - принаймні на 80 95, ще більш переважно - принаймні на 90 95, ще більш переважно - принаймні на 95 95 найбільш переважно - на 100 95 у порівнянні із суб'єктами, не підданими лікуванню (імунізації), але згодом інфікованими конкретним РРУ.

Крім того, даний винахід забезпечує спосіб зниження репродуктивної недостатності в суб'єкта в порівнянні із суб'єктом неімунізованої контрольної групи того ж виду, причому спосіб включає введення суб'єктові терапевтично ефективної кількості імуногенної композиції, як описується авторами.

Як перевага, як показується в розділі прикладів даного опису, забезпечувана імуногенна композиція виявилася ефективною для зниження репродуктивної недостатності.

Крім того, даний винахід забезпечує спосіб зниження смертності ембріона й плода в суб'єкта в порівнянні із суб'єктом неімунізованої контрольної групи того ж виду, причому спосіб включає введення суб'єктові терапевтично ефективної кількості імуногенної композиції, як описується авторами.

Як перевага, як показується в розділі прикладів даного опису, забезпечувана імуногенна композиція виявилася ефективною для зниження смертності ембріона й плода.

Крім того, даний винахід забезпечує спосіб активної імунізації племінних свиней (свиноматок і свинок) для захисту ембріонів і плодів від інфекції свинячого парвовірусу, причому спосіб включає введення таким свиням (свиноматкам і свинкам) терапевтично ефективної кількості імуногенної композиції, як описується авторами.

В одному аспекті даного винаходу вищезгаданий суб'єкт вибирають із групи, до якої належать свині, велика рогата худоба, кішки або собаки.

Переважно вищезгаданим суб'єктом є свиня. Слід розуміти, що свиню розуміють як тварину бо як жіночої, так і чоловічої статі. Сперма може містити РРУ, тому самки й самці племінних тварин охоплюються визначенням "свиня". Таким чином, визначення "свиня" включає тварин чоловічої статі, таких, як кнури, а також тварин жіночої статі, таких, як свинки й свиноматки.

Термін "свинка" у контексті даного опису переважно стосується свині до й під час першої поросності / вагітності. На відміну від нього, термін "свиноматка" у контексті даного опису переважно стосується свині після першого опоросу - як позитивного результату її першої поросності / вагітності.

В одному аспекті даного винаходу вищезгаданим суб'єктом є свиня, переважно свинка та/або свиноматка.

В одному аспекті даного винаходу імуногенну композицію вводять однократно.

Слід розуміти, що разову дозу вводять лише один раз.

Об'єм дози на суб'єкта залежить від способу вакцинації й віку суб'єкта. Переважно разова доза має загальний об'єм приблизно від 0,2 мл до 2,5 мл, більш переважно - приблизно від 0,2 мл до 2,0 мл, ще більш переважно - приблизно від 0,2 мл до 1,75 мл, ще більш переважно - приблизно від 0,2 мл до 1,5 мл, ще більш переважно - приблизно від 0,4 мл до 1,25 мл, ще більш переважно - приблизно від 0,4 мл до 1,0 мл, причому найбільша перевага віддається разовій дозі 0,5 мл або 1,0 мл. Найбільш переважно разова доза має загальний об'єм 0,5 мл, 1 мл, 1,5 мл або 2 мл.

В одному аспекті даного винаходу імуногенну композицію вводять двома або більше дозами.

Як показується в розділі прикладів даного опису, забезпечувана імуногенна композиція виявилася ефективною після введення двох доз суб'єктові, який цього потребує.

Однак імуногенна композиція може вводитися двома або більше дозами, причому першу дозу вводять перед введенням другої (бустерної) дози. Переважно другу дозу вводять принаймні через 15 днів після першої дози. Більш переважно другу дозу вводять між 15 і 40 днями після першої дози. Ще більш переважно другу дозу вводять принаймні через 17 днів після першої дози. Ще більш переважно другу дозу вводять між 17 і 30 днями після першої дози. Ще більш переважно другу дозу вводять принаймні 19 днів після першої дози. Ще більш переважно другу дозу вводять між 19 і 25 днями після першої дози. Найбільш переважно другу дозу вводять принаймні через 21 день після першої дози. Ще більш переважно другу дозу вводять приблизно через 21 день після першої дози або через 21 день після першої дози. У кращому аспекті дворазового режиму введення й першу, і другу дози імуногенної композиції вводять в однаковій кількості. Переважно кожну дозу вводять у вказаній вище переважній кількості, причому найбільш переважною є доза 1 мл або 2 мл для першої й другої дози. Крім режиму першої й другої дози, альтернативний варіант здійснення включає додаткові наступні дози. Наприклад, у цих аспектах може вводитися третя, четверта або п'ята доза. Переважно наступні третю, четверту й п'яту дози в цьому режимі вводять у такій же кількості, що й першу дозу, з інтервалом часу між дозами, відповідним до часу між вищезгаданими першої й другий дозами.

Об'єм дози на суб'єкта залежить від способу вакцинації й віку суб'єкта. Переважно загальний об'єм становить приблизно від 0,2 мл до 5 мл, більш переважно - приблизно від 0,5 мл до 3,0 мл, ще більш переважно - приблизно від 1,0 мл до 2,5 мл, ще більш переважно - приблизно від 1,0 мл до 2,0 мл. Найбільш кращий об'єм становить 1 мл, 1,5 мл, 2 мл або 2,5 мл на дозу.

Імуногенну композицію переважно вводять місцево або системно. Підходящими традиційно застосовуваними шляхами введення є пероральне або парентеральне введення, таке, як інтраназальне, внутрішньовенне, внутрішньошкірне, черезшкірне, внутрішньом'язове, внутрішньоочеревинне, підшкірне, а також інгаляція. Однак, залежно від характеру й способу дії сполуки, імуногенна композиція також може вводитися іншими шляхами. Наприклад, до таких шляхів належать внутрішньошкірний, внутрішньовенний, внутрішньосудинний, внутрішньоартеріальний, внутрішньоочеревинний, інтратекальний, інтратрахеальний, внутрішньошкірний, інтракардіальний, внутрішньодольовий, внутрішньомозковий, внутрішньолегеневий, ректальний і вагінальний. Однак у більш кращому варіанті імуногенну композицію вводять підшкірно або внутрішньом'язово. У найбільш кращому варіанті імуногенну композицію вводять внутрішньом'язово.

В одному аспекті даного винаходу вищезгадану імуногенну композицію вводять внутрішньом'язово.

В одному аспекті даного винаходу вищезгадану імуногенну композицію вводять свинкам та/або свиноматкам.

Переважно імуногенну композицію вводять свинкам та/(або свиноматкам принаймні 3- місячного віку, більш переважно принаймні 4-місячного віку, найбільш переважно принаймні 5- місячного віку.

В одному аспекті даного винаходу імуногенну композицію вводять свинкам та/або свиноматкам принаймні З-місячного віку.

В одному аспекті даного винаходу вищезгадану імуногенну композицію вводять свинкам та/або свиноматкам перед вагітністю.

У дводозовому режимі другу дозу вищезгаданої імуногенної композиції переважно вводять свинкам та/або свиноматкам за 2, 3, 4 або 5 тижнів до спарювання / запліднення, найбільш переважно - приблизно за З тижні до спарювання / запліднення. Переважно першу дозу вищезгаданої імуногенної композиції вводять свинкам та/або свиноматкам за 2, 3, 4, 5 або 6 тижнів до введення другої дози, найбільш переважно - приблизно за З тижні до введення другої дози. Однак після застосування дводозового режиму свинок та/або свиноматок переважно повторно вакцинують кожні 3, 4, 5, 6, 7 або 8 місяців, найбільш переважно - приблизно кожні 6 місяців.

В одному аспекті даного винаходу вищезгадану імуногенну композицію вводять свинкам та/або свиноматкам під час вагітності й лактації.

В одному аспекті даного винаходу імуногенна композиція є безпечною для свиней та/або свиноматок під час вагітності й лактації.

В одному аспекті даного винаходу імуногенна композиція є безпечною для свиней та/або свиноматок після 30 днів вагітності, переважно після 40 днів вагітності.

Переважно імуногенна композиція відповідно до даного винаходу включає від 0,1 мкг до 50 мкг, переважно від 0,25 мкг до 25 мкг, більш переважно - від 0,5 мкг до 12,5 мкг, ще більш переважно - від 0,5 мкг до 5 мкг, найбільш переважно - від 0,5 мкг до 2 мкг антигену РРМ МР2.

Більш переважно імуногенна композиція відповідно до даного винаходу включає антиген РРУ

МР2 відповідно до даного винаходу в кількості приблизно 0,25 мкг, 0,5 мкг, 0,75 мкг, 1 мкг, 1,25 мкг, 1,5 мкг, 1,75 мкг, 2 мкг, 2,25 мкг, 2,5 мкг, 2,75 мкг, З мкг, 3,5 мкг, 4 мкг, 4,5 мкг або 5 мкг.

В одному аспекті даного винаходу імуногенна композиція включає від 0,1 мкг до 50 мкг антигену РРМ МР2, переважно від 0,5 мкг і 10 мкг антигену РРМ МР2.

Зо В одному аспекті даного винаходу імуногенна композиція захищає від гомологічного та/або гетерологічного провокаційного зараження.

В одному аспекті даного винаходу імуногенна композиція захищає від провокаційного зараження північноамериканськими та/або європейськими ізолятами.

В одному аспекті даного винаходу імуногенна композиція забезпечує перехресний імунітет від північноамериканських та/або європейських ізолятів.

В одному аспекті даного винаходу в результаті виконання вищезгаданого способу забезпечується поліпшення параметра ефективності, вибраного із групи, до якої належать: знижена перехідна лейкопенія й репродуктивна недостатність, що характеризуються інфікуванням і загибеллю ембріона та/або плода, або їх комбінації, у порівнянні із суб'єктом неімунізованої контрольної групи того ж виду.

В одному аспекті даного винаходу в результаті виконання вищезгаданого способу забезпечується поліпшення параметра ефективності, вибраного із групи, до якої належать: зменшений розмір приплоду, підвищена муміфікація ембріона або плода на приплід, аутолізація ембріона або плода, зменшений розмір ембріона або плода, зменшена вага ембріона або плода, підвищена віремія, підвищене вірусне навантаження в тканинах-мішенях і крові, підвищена передача / поширення РРМ на тварин одного приплоду, або їх комбінації, у порівнянні із суб'єктом неімунізованої контрольної групи того ж виду.

Варіанти здійснення

Наступні пункти також описуються авторами: 1. Вірусний білок 2 (МР2) свинячого парвовірусу (РРУ), що має в амінокислотній позиції 228 глутаміновокислотний залишок або глутаматний залишок, та/або в амінокислотній позиції 414 сериновий залишок, та/або в амінокислотній позиції 419 глутаміновий залишок, та/або в амінокислотній позиції 436 треоніновий залишок, причому нумерація амінокислотних позицій стосується амінокислотної послідовності дикого типу РРМ МР2. 2. РРМ МР2 за пунктом 1, який відрізняється тим, що РРМ МР2 також має в амінокислотній позиції 25 ізолейциновий залишок, та/або бо в амінокислотній позиції 36 сериновий залишок, та/або в амінокислотній позиції 37 ізолейциновий залишок. 3. РРМ МРО2 за пунктом 1 або 2, який відрізняється тим, що нумерація амінокислотних позицій стосується амінокислотної послідовності, показаної в хЕО ІЮ МО: 1. 4. РРМ МРО2 за будь-яким з пунктів з 1 по 3, який відрізняється тим, що РРМ МР2 являє собою рекомбінантний РРМ МР2. 5. РРМ МР2 за будь-яким з пунктів з 1 по 4, який відрізняється тим, що РРМ МР2 являє собою експресований рекомбінантним бакуловірусом РРМ МР2. 6. РРМ МРАО за будь-яким з пунктів з 1 по 5, який відрізняється тим, що вищезгаданий РРУ

МР2 включає або складається з амінокислотної послідовності, яка має принаймні 90 95 ідентичності послідовності з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮ МО: 1, 5ЕО ІЮО МО: 2 або

ЗЕОІЮО МО: 5 - 16. 7. РРМ МР2 за будь-яким з пунктів з 1 по 6, який відрізняється тим, що вищезгаданий РРУ

МР2 включає або складається з амінокислотної послідовності, яка має принаймні 90 95, принаймні 91 95, принаймні 92 95, принаймні 93 95, принаймні 94 95, принаймні 95 95, принаймні 96 95, принаймні 97 95, принаймні 98 95, принаймні 99 95, принаймні 99,1 95, принаймні 99,2 905, принаймні 99,3 95, принаймні 99,4 95, принаймні 99,5 95, принаймні 99,6 95, принаймні 99,7 905, принаймні 99,8 95, або принаймні 99,9 95 ідентичності послідовності з амінокислотною послідовністю ЗЕО ІЮ МО: 1, 5ЕО ІЮО МО: 2 або 5ЕО ІЮ МО: 5 - 16. 8. РРМ МР2 за будь-яким з пунктів з 1 по 6, який відрізняється тим, що вищезгаданий РРУ

МР2 включає або складається з амінокислотної послідовності 5ХЕО ІЮ МО: 1, або ЗЕО ІЮО МО: 2 або 5ЕО ІЮ МО: 5 - 16 або включає або складається з будь-якого фрагмента, який має принаймні 210, принаймні 250 або принаймні 300 суміжних амінокислотних залишків з ХЕ ІЮ

МО: 1, БЕО ІО МО: 2 або 5ЕО ІЮ МО: 5 - 16. 9. РРМ МР2 за будь-яким з пунктів з 1 по 6, який відрізняється тим, що вищезгаданий РРУ

МР2 включає або складається з амінокислотної послідовності ФЕО ІЮ МО: 1, 5ЕО ІЮО МО: 2 або

ЗЕОІЮО МО: 5 - 16. 10. РМ МР2 за будь-яким з пунктів з 1 по 9, який відрізняється тим, що вищезгаданий РРУ

МРІ2 кодується нуклеотидною послідовністю, що кодує амінокислотну послідовність, яка має принаймні 90 95 ідентичності послідовності з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮ МО: 1, ЗЕО

Зо ІО МО: 2 або 5ЕО ІО МО: 5 - 16. 11. РРМ МР за будь-яким з пунктів з 1 по 10, який відрізняється тим, що вищезгаданий РРУ

МРІ2 кодується нуклеотидною послідовністю, що кодує амінокислотну послідовність, яка має принаймні 90 95, принаймні 91 95, принаймні 92 95, принаймні 93 95, принаймні 94 95, принаймні 95 95, принаймні 96 95, принаймні 97 95, принаймні 98 95, принаймні 99 95, принаймні 99,1 95, принаймні 99,2 96, принаймні 99,3 95, принаймні 99,4 95, принаймні 99,5 95, принаймні 99,6 9бо, принаймні 99,7 95, принаймні 99,8 956, або принаймні 99,9 95 ідентичності послідовності з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮО МО: 1, 5ЕО ІО МО: 2 або 5ЕО ІО МО: 5 - 16. 12. РРМ МР за будь-яким з пунктів з 1 по 11, який відрізняється тим, що вищезгаданий РРУ

МРА2 кодується нуклеотидною послідовністю, що кодує амінокислотну послідовність БЕО ІЮ МО: 1, ЗЕО ІЮО МО: 2 або 5ЕО ІЮО МО: 5 - 16. 13. Імуногенна композиція, що включає РРУ МРАО за будь-яким з пунктів з 1 по 12. 14. Імуногенна композиція за пунктом 13, яка відрізняється тим, що імуногенну композицію рецептують для введення разовою дозою. 15. Імуногенна композиція за пунктами 13 або 14, яка відрізняється тим, що імуногенну композицію вводять внутрішньом'язово. 16. Імуногенна композиція за будь-яким з пунктів з 13 по 15, яка відрізняється тим, що імуногенна композиція є безпечною для свиней та/або свиноматок під час вагітності й лактації. 17. Імуногенна композиція за будь-яким з пунктів з 13 по 16, яка відрізняється тим, що імуногенна композиція є безпечною для свиней та/або свиноматок після 30 днів вагітності, переважно після 40 днів вагітності. 18. Імуногенна композиція за будь-яким з пунктів з 13 по 17, яка відрізняється тим, що імуногенна композиція також включає фармацевтично прийнятний носій. 19. Імуногенна композиція за пунктом 18, яка відрізняється тим, що фармацевтично прийнятним носієм є карбомер. 20. Імуногенна композиція за будь-яким з пунктів з 13 по 19, яка відрізняється тим, що імуногенна композиція включає від 0,1 мкг до 50 мкг антигену РРМ МР2, переважно від 0,5 мкгі 10 мкг антигену РРМ МР2. 21. Імуногенна композиція за будь-яким з пунктів з 13 по 20, яка відрізняється тим, що імуногенна композиція є вакциною.

22. Імуногенна композиція за будь-яким з пунктів з 13 по 21, яка відрізняється тим, що імуногенна композиція захищає від гомологічного та/або гетерологічного провокаційного зараження. 23. Імуногенна композиція за будь-яким з пунктів з 13 по 22, яка відрізняється тим, що імуногенна композиція захищає від провокаційного зараження північноамериканськими та/або європейськими ізолятами. 24. Імуногенна композиція за будь-яким з пунктів з 13 по 23, яка відрізняється тим, що імуногенна композиція забезпечує перехресний імунітет від північноамериканських та/або європейських ізолятів. 25. |Імуногенна композиція за будь-яким з пунктів з 13 по 24, яка відрізняється тим, що імуногенна композиція ефективна для лікування та/або профілактики клінічних ознак, які викликаються інфекцією РРМУ у суб'єкта, який цього потребує. 26. Полінуклеотид, що включає послідовність, яка кодує РРМ МР2 за будь-яким з пунктів з 1 по 12. 27. Полінуклеотид, що включає нуклеотидну послідовність, яка має принаймні 90 9б5, принаймні 91 95, принаймні 92 95, принаймні 93 95, принаймні 94 95, принаймні 95 95, принаймні 96 95, принаймні 97 95, принаймні 98 95, принаймні 99 95, принаймні 99,1 95, принаймні 99,2 95, принаймні 99,3 95, принаймні 99,4 95, принаймні 99,5 95, принаймні 99,6 95, принаймні 99,7 905, принаймні 99,8 95, або принаймні 99,9 95 ідентичності послідовності з нуклеотидною послідовністю ЗЕО ІЮ МО: З або 5ЕО ІО МО: 4. 28. Полінуклеотид, що включає або складається з нуклеотидної послідовності ЗЕО ІЮО МО: З або ЗЕО ІЮ МО: 4. 29. Вектор, що включає полінуклеотид за будь-яким з пунктів з 26 по 28. 30. Вектор за пунктом 29, який відрізняється тим, що вектор є вектором експресії. 31. Вектор за пунктом 29 або 30, який відрізняється тим, що вектор є бакуловірусом. 32. Клітина, що включає полінуклеотид за будь-яким з пунктів з 26 по 28 або вектор за будь-яким з пунктів з 29 по 31. 33. Клітина за пунктом 32, яка відрізняється тим, що клітина є клітиною комахи. 34. Клітина комахи за пунктом 33, який відрізняється тим, що клітину комахи вибирають із групи, до якої належать клітини 519 і клітини 5і-к. 35. Вірусоподібна частинка, що включає РРМ МРАО за будь-яким з пунктів з 1 по 12. 36. Вірусоподібна частинка за пунктом 35, яка відрізняється тим, що вірусоподібна частинка складається з багатьох РРМ МР за будь-яким з пунктів з 1 по 12. 37. Спосіб одержання РРМ МРАО за будь-яким з пунктів з 1 по 12, що включає трансфекцію клітини вектором за будь-яким з пунктів з 29 по 31. 38. Спосіб одержання РРМ МР за будь-яким з пунктів з 1 по 12, що включає трансфекцію клітини, переважно клітини комахи, бакуловірусом за пунктом 31. 39. Комплект, що включає РРУ МРа2 або імуногенну композицію за будь-яким з пунктів з 1 по 25. 40. Комплект за пунктом 39, який відрізняється тим, що комплект також включає інструкцію щодо лікування та/або профілактики захворювань свиней. 41. Комплект за пунктом 39, який відрізняється тим, що комплект також включає інструкцію щодо лікування та/або профілактики інфекції РРУ. 42. Застосування:

РРМ МРАО за будь-яким з пунктів з 1 по 12, імуногенної композиції за будь-яким з пунктів з 13 по 25, полінуклеотиду за будь-яким з пунктів з 26 по 28, вектора за будь-яким з пунктів з 29 по 31, клітини за будь-яким з пунктів з 32 по 34, бакуловірусу за пунктом 31 та/або вірусоподібних частинок за пунктом 35 або 36 для приготування медикаменту, переважно вакцини. 43. Застосування РРМ МРАО2 за будь-яким з пунктів з 1 по 12 або імуногенній композиції за будь-яким з пунктів з 13 по 25 для приготування медикаменту для лікування та/або профілактики інфекції РРМУ, зниження, профілактики та/або лікування клінічних ознак, викликаних інфекцією РРМ, та/або для лікування та/або профілактики захворювання, викликаного інфікуванням РРУ. 44. Спосіб імунізації суб'єкта, що включає введення такому суб'єктові імуногенної композиції за будь-яким з пунктів з 13 по 25.

45. Спосіб лікування та/або запобігання клінічних ознак, викликаних інфекцією РРМ у суб'єкта, який цього потребує, причому спосіб включає введення суб'єктові терапевтично ефективної кількості імуногенної композиції за будь-яким з пунктів з 13 по 25. 46. Спосіб зниження репродуктивної недостатності в суб'єкта в порівнянні із суб'єктом неімунізованої контрольної групи того ж виду, причому спосіб включає введення суб'єктові терапевтично ефективної кількості імуногенної композиції за будь-яким з пунктів з 13 по 25. 47. Спосіб зниження смертності ембріона й плода в суб'єкта в порівнянні із суб'єктом неімунізованої контрольної групи того ж виду, причому спосіб включає введення суб'єктові терапевтично ефективної кількості імуногенної композиції за будь-яким з пунктів з 13 по 25. 48. Спосіб за будь-яким з пунктів з 44 по 47, який відрізняється тим, що вищезгаданий суб'єкт вибраний зі списку, що включає свиней, велику рогату худобу, кішок і собак. 49. Спосіб за будь-яким з пунктів з 44 по 48, який відрізняється тим, що вищезгаданим суб'єктом є свиня, переважно свинка та/або свиноматка. 50. Спосіб за будь-яким з пунктів з 44 по 49, який відрізняється тим, що імуногенну композицію вводять однократно. 51. Спосіб за будь-яким з пунктів з 44 по 49, який відрізняється тим, що імуногенну композицію вводять двома або більше дозами. 52. Спосіб за будь-яким з пунктів з 44 по 51, який відрізняється тим, що імуногенну композицію вводять внутрішньом'язово. 53. Спосіб за будь-яким з пунктів з 44 по 52, який відрізняється тим, що імуногенну композицію вводять свинкам та/або свиноматкам. 54. Спосіб за будь-яким з пунктів з 44 по 53, який відрізняється тим, що імуногенну композицію вводять свинкам та/або свиноматкам принаймні З-місячного віку. 55. Спосіб за будь-яким з пунктів з 44 по 54, який відрізняється тим, що імуногенну композицію вводять свинкам та/або свиноматкам перед вагітністю. 56. Спосіб за будь-яким з пунктів з 44 по 54, який відрізняється тим, що імуногенну композицію вводять свинкам та/або свиноматкам під час вагітності й лактації. 57. Спосіб за будь-яким з пунктів з 44 по 56, який відрізняється тим, що імуногенна композиція є безпечною для свиней та/або свиноматок під час вагітності й лактації.

Зо 58. Спосіб за будь-яким з пунктів з 44 по 57, який відрізняється тим, що імуногенна композиція є безпечною для свиней та/або свиноматок після 30 днів вагітності, переважно після 40 днів вагітності. 59. Спосіб за будь-яким з пунктів з 44 по 58, який відрізняється тим, що імуногенна композиція включає від 0,1 мкг і 50 мкг антигену РРМ МР2, переважно від 0,5 мкг і 10 мкг антигену РРМ МР2. 60. Спосіб за будь-яким з пунктів з 44 по 59, який відрізняється тим, що імуногенна композиція захищає від гомологічного та/або гетерологічного провокаційного зараження. 61. Спосіб за будь-яким з пунктів з 44 по 60, який відрізняється тим, що імуногенна композиція захищає від провокаційного зараження північноамериканськими та/або європейськими ізолятами. 62. Спосіб за будь-яким з пунктів з 44 по 61, який відрізняється тим, що імуногенна композиція забезпечує перехресний імунітет від північноамериканських та/або європейських ізолятів. 63. Спосіб за будь-яким з пунктів з 44 по 62, який відрізняється тим, що в результаті виконання вищезгаданого способу забезпечується поліпшення параметра ефективності, вибраного із групи, до якої належать: знижена перехідна лейкопенія й репродуктивна недостатність, що характеризуються інфікуванням і загибеллю ембріона та/або плода, або їх комбінації, у порівнянні із суб'єктом неїімунізованої контрольної групи того ж виду. 64. Імуногенна композиція для застосування за будь-яким з пунктів з 44 по 63, яка відрізняється тим, що в результаті виконання вищезгаданого способу забезпечується поліпшення параметра ефективності, вибраного із групи, до якої належать: зменшений розмір приплоду, підвищена муміфікація ембріона або плода на приплід, аутолізація ембріона або плода, зменшений розмір ембріона або плода, зменшена вага ембріона або плода, підвищена віремія, підвищене вірусне навантаження в тканинах-мішенях і крові, підвищена передача / поширення РРМ на тварин одного приплоду, або їх комбінації, у порівнянні із суб'єктом неімунізованої контрольної групи того ж виду. 65. Імуногенна композиція за будь-яким з пунктів з 13 по 25 для застосування згідно зі способом імунізації суб'єкта, що включає введення вищезгаданої імуногенної композиції такому суб'єктові.

66. Імуногенна композиція за будь-яким з пунктів з 13 по 25 для застосування згідно зі способом лікування або запобігання клінічних ознак, що викликаються інфекцією РРУ, у суб'єкта, який цього потребує, причому спосіб включає введення суб'єктові терапевтично ефективної кількості вищезгаданої імуногенної композиції. 67. Імуногенна композиція за будь-яким з пунктів 3 13 по 25 для застосування згідно зі способом зниження репродуктивної недостатності в суб'єкта в порівнянні із суб'єктом неімунізованої контрольної групи того ж виду, причому спосіб включає введення суб'єктові терапевтично ефективної кількості вищезгаданої імуногенної композиції. 68. Імуногенна композиція за будь-яким з пунктів з 13 по 25 для застосування згідно зі способом зниження смертності ембріона й плода в суб'єкта в порівнянні із суб'єктом неімунізованої контрольної групи того ж виду, причому спосіб включає введення суб'єктові терапевтично ефективної кількості вищезгаданої імуногенної композиції. 69. Імуногенна композиція для застосування за будь-яким з пунктів з 65 по 68, яка відрізняється тим, що вищезгаданий суб'єкт вибраний зі списку, що включає свиней, велику рогату худобу, кішок і собак. 70. Імуногенна композиція для застосування за будь-яким з пунктів з 65 по 69, яка відрізняється тим, що вищезгаданим суб'єктом є свиня, переважно свинка та/або свиноматка. 71. Імуногенна композиція для застосування за будь-яким з пунктів з 65 по 70, яка відрізняється тим, що імуногенну композицію вводять однократно. 72. Імуногенна композиція для застосування за будь-яким з пунктів з 65 по 70, який відрізняється тим, що імуногенну композицію вводять двома або більше дозами. 73. Імуногенна композиція для застосування за будь-яким з пунктів з 65 по 72, яка відрізняється тим, що імуногенну композицію вводять внутрішньом'язово. 74. Імуногенна композиція для застосування за будь-яким з пунктів з 65 по 73, яка відрізняється тим, що імуногенну композицію вводять свинкам та/або свиноматкам. 75. Імуногенна композиція для застосування за будь-яким з пунктів з 65 по 74, яка відрізняється тим, що імуногенну композицію вводять свинкам та/або свиноматкам принаймні

З-місячного віку. 76. Імуногенна композиція для застосування за будь-яким з пунктів з 65 по 75, яка

Зо відрізняється тим, що імуногенну композицію вводять свинкам та/або свиноматкам перед вагітністю. 77. Імуногенна композиція для застосування за будь-яким з пунктів з 65 по 75, яка відрізняється тим, що імуногенну композицію вводять свинкам та/або свиноматкам під час вагітності й лактації. 78. Імуногенна композиція для застосування за будь-яким з пунктів з 65 по 77, яка відрізняється тим, що імуногенна композиція є безпечною для свиней та/або свиноматок під час вагітності й лактації. 79. Імуногенна композиція для застосування за будь-яким з пунктів з 65 по 78, яка відрізняється тим, що імуногенна композиція є безпечною для свиней та/або свиноматок після

ЗО днів вагітності, переважно після 40 днів вагітності. 80. Імуногенна композиція для застосування за будь-яким з пунктів з 65 по 78, яка відрізняється тим, що імуногенна композиція включає від 0,1 мкг ії 50 мкг антигену РРМ МР2, переважно від 0,5 мкг і 10 мкг антигену РРМ МР2. 81. Імуногенна композиція для застосування за будь-яким з пунктів з 65 по 80, яка відрізняється тим, що імуногенна композиція захищає від гомологічного та/або гетерологічного провокаційного зараження. 82. Імуногенна композиція для застосування за будь-яким з пунктів з 65 по 81, яка відрізняється тим, що імуногенна композиція захищає від провокаційного зараження північноамериканськими та/або європейськими ізолятами. 83. Імуногенна композиція для застосування за будь-яким з пунктів з 65 по 82, яка відрізняється тим, що імуногенна композиція забезпечує перехресний імунітет від північноамериканських та/або європейських ізолятів. 84. Імуногенна композиція для застосування за будь-яким з пунктів з 65 по 83, яка відрізняється тим, що в результаті виконання вищезгаданого способу забезпечується поліпшення параметра ефективності, вибраного із групи, до якої належать: знижена перехідна лейкопенія й репродуктивна недостатність, що характеризуються інфікуванням і загибеллю ембріона та/або плода, або їх комбінації, у порівнянні із суб'єктом неімунізованої контрольної групи того ж виду. 85. Імуногенна композиція для застосування за будь-яким з пунктів з 65 по 84, яка 60 відрізняється тим, що в результаті виконання вищезгаданого способу забезпечується поліпшення параметра ефективності, вибраного із групи, до якої належать: зменшений розмір приплоду, підвищена муміфікація ембріона або плода на приплід, аутолізація ембріона або плода, зменшений розмір ембріона або плода, зменшена вага ембріона або плода, підвищена віремія, підвищене вірусне навантаження в тканинах-мішенях і крові, підвищена передача / поширення РРМ на тварин одного приплоду, або їх комбінації, у порівнянні із суб'єктом неімунізованої контрольної групи того ж виду. 86. Спосіб активної імунізації племінних свиней (свиноматок і свинок) для захисту ембріонів і плодів від інфекції свинячого парвовірусу, причому спосіб включає введення таким свиням (свиноматкам і свинкам) терапевтично ефективної кількості імуногенної композиції за пунктами 3 13 по 25. 87. Імуногенна композиція за будь-яким з пунктів 3 13 по 25 для застосування згідно зі способом активної імунізації племінних свиней (свиноматок і свинок) для захисту ембріонів і плодів від інфекції свинячого парвовірусу, причому спосіб включає введення таким свиням (свиноматкам і свинкам) терапевтично ефективної кількості вищезгаданої імуногенної композиції.

ПРИКЛАДИ

Наступні приклади представлені нижче для пояснення конкретних варіантів здійснення даного винаходу. Ці приклади є лише пояснювальними, їх не слід розглядати як такі, що обмежують обсяг або принципи, що лежать в основі даного винаходу.

ПРИКЛАД 1:

ПРИГОТУВАННЯ СУБОДИНИЧНОЇ ВАКЦИНИ ПРОТИ РРУ

Антиген РРМ МР2 вибирають для експресії в інфікованих бакуловірусом клітинах комах на основі німецького ізоляту РРМ 27а. Нуклеотидну послідовність свинячого парвовірусу (РРУ) 27а МР2 одержують від СепрапК під номером доступу АУ684871.1. Кодуюча ділянка РРМ 27а

МР є піддана зворотній трансляції й кодон-оптимізованою для ЮОгозорпйа (ЗЕО ІЮО МО: 4 і ЗЕО

ІЮ МО: 3). Кодон-оптимізований ген РРМ 27а МР2 хімічно синтезований в Іпіедгаїєй ОМА

ТесппоЇодіеє. Ген РРМ 27а потім субклонують у бакуловірусний вектор переносу рмі 1393 і спільно трансфікують з лінеаризованим остовом бакуловірусу ОіатопаВасфФ у клітини комах 919 для генерації рекомбінантного бакуловірусу, що містить ген РРМ 27а МР2, під контролем

Зо поліедринового промотору.

При експресії в клітинах комах 519 РРМ МР2 самоорганізується в безоболонковний МІР (дані не показані).

Антиген РРМ МР2 доповнюється карбомером як ад'ювант (Сагбророї).

ПРИКЛАД 2:

РАННЯ СТАДІЯ КЛІНІЧНОГО ДОСЛІДЖЕННЯ ВАКЦИНИ ПРОТИ РРМУ

У всіх дослідженнях на тварин тварини мають гарний стан здоров'я й аліментарний статус перед початком дослідження. Перед процедурою рандомізації проводять медичне обстеження.

Нелікарський корм використовують протягом усього дослідження. Раціон харчування підбирають згідно з віком, станом і видом досліджуваної тварини відповідно до затвердженої для центру стандартної робочої процедури. Воду забезпечували ай Ірйшт протягом усього дослідження.

Ціль цього дослідження провокаційної вакцинації полягає в забезпеченні доказу ефективності концепції визначення дози для перед спарюванням субодиничної вакцини проти свинячого парвовірусу (РРМ) (див. Приклад 1). Свинок вакцинують і осіменяють перед провокацією ізолятом живого вірулентного РРМ (РРМ 002346-5; північноамериканський штам) приблизно після 40 днів вагітності (40). Плоди оцінюють на наявність інфекції РРМ приблизно після 90 а.

План дослідження описується в Таблиці 1.

Таблиця 1

План дослідження вагітності контроль 2 мл на 00 6 мл на 080

Позитивний прав. шия ІМ і (-40ас) т-воас) контроль 2 мл на 021 раза - ра? п РРМ 002346-5

ТЗ | (цільноклітинний | лев. шия ІМ прав. шия ІМ і ІМ інактивований

РРУ

Не

МТХ - Контроль без лікування / провокації; ІМ - інтраназальне; ІМ - внутрішньом'язове; а - днів вагітності.

Використовують шістдесят сім свинок із череди, раніше випробуваної на відсутність РРУ, з відсутньою історією захворювань репродуктивної системи або вакцинації проти РРМУ. Свинок рандомізовано розбивають по 6 експериментальних групах (Т) п-9, об'єднаних в З ряди, що одержують вакцинацію на ро і стимуляцію на 021: Т1 МС (негативний контроль, що одержує воду для ін'єкцій), Т2 РРМ 10 мкг, ТЗ РС (позитивний контроль; цільний, інактивований свинячий парвовірус (РРУ), ЕгузіреЇоїНгіх ппизіораїпіає, І еріовріга сапісоїа, І. дірроїурноза, І. пага|о, І. ічегопаетотнавдіає і Г. Ротопа; серійного виробництва; застосовуються відповідно до інструкції виробника). Включають контрольних свинок, що не одержували лікування (МТХ), по одній на ряд. Після вакцинації свинок синхронізують (шляхом введення МаїгіхФ; айгеподеві,

Іптїегуеї Зспегіпд-Ріоцдп Апіта! Неакй; згідно з маркуванням протягом 14 послідовних днів, з 018 по 031), а потім спарювали між 035 і 042. П'ятдесят чотири з 67 свинок завагітніли. На рвго (приблизно 40 ас), МТХ-свинок піддають розтину, а інших свинок інокулюють б мл штаму

РРМ РРУ002346-5 (північноамериканський штам) у кількості 4,25 Іюд'оїСІЮО5о на дозу (2 мл внутрішньом'язово й 2 мл у кожну ніздрю інтраназально). У свинок щотижня брали кров, за винятком періодів синхронізації й спарювання (035 - 070). Серологічне дослідження виконують на зразках сироватки, узятих на БО, 07, 014, 021, 028 ії 073; серологічне дослідження й полімеразну ланцюгову реакцію (ПЛР) (як описується в публікації до2мік еї аї. 2009; доцигпаї ої

Сепега! Мігоіоду, 90, 2437 - 2441) на віремію виконують на зразках сироватки, узятих на 080, ре7, 094, 0101, р108, 0115, 0122 ї 0128. Свинок піддають розтину на 0129 або 0130 (приблизно 90 ас). При розтині кожний репродуктивний тракт витягають і записують позицію плода в матці, стан плода, його розмір і вагу. Збирають зразки торакального промивання й легень кожного плода. Зразки торакального промивання збирають в асептичних умовах з кожного плода. Загалом, З мл стерильного РВЗ5 шляхом ін'єкції вводять у грудну порожнину за допомогою стерильної голки й шприца. Рідину відсмоктують назад у шприц і вводять у відповідну стерильну 551 (пробірку для відділення сироватки) підходящого розміру. Зразки торакального промивання досліджують на наявність РРМ за допомогою ПЛР і на наявність антитіла РРМ за допомогою інгібування гемаглютинації (НІ). Легеневу тканину зберігають у

Зо замороженому вигляді.

Віремія свинок (РРМ)

Усі свинки є негативними на віремію РРМ перед провокацією на ро, 073 (дані не показані) і рво (Таблиця 2). Усі негативні контрольні тварини є віремічними на 087, і 4/7 є віремічними на род.

Поствакцинаційні свинки ТЗ сероконвертуються після бустерної вакцинації. Т2 виявляє серологічну відповідь на первинну вакцинацію й залишається серопозитивним після бустерної вакцинації. Контрольні свинки Т1 залишаються серологічно негативними у відношенні РРМ до провокації. Після провокації всі негативні контрольні свинки є віремічними на 087 (через сім днів після провокації). Одна свинка ТЗ є віремічною на 087. Усі інші свинки не є віремічними в ці моменти часу (див. Таблицю 2).

Свинки МТХ залишалися серологічно негативними, і їх плоди були негативними на РРУ згідно із ПЛР на зразках торакального промивання.

Таблиця 2

Розподіл частоти РРУ-позитивних свинок (ПЛР), що одержали провокаційну дозу РРМУ після 40 днів вагітності (45) на О80 11111111 Деньдослідження(йС едніввагітност)їд /-/:// оз рома ев о

ТЗ (цільноклітинний 0/9 1/9 0/9 0/9 0/9 0/8 0/8 0/8 інактивований РРУ)

МА - не застосовується.

Результати плодів

Усі плоди МТХ вважаються нормальними згідно з розтином на 080 (Таблиця 3). При остаточному розтині на 0129 і 0130 22,5 95 плодів Т1 (негативний контроль) є нормальними, і при цьому 98,39 95 плодів в ТЗ і 97,62 95 плодів в Т2 є нормальними. Середній розмір і вага плодів Т1 (негативний контроль) становить 11,5 см і 168,8 г, відповідно, тоді як середній розмір і вага плодів в Т2 становить 17,5 см і 590,1 г, відповідно.

Усі плоди 74 (МІХ) є негативними на РРМ згідно із ПЛР на зразках торакального промивання (див. Таблицю 3). Інфекція РРМ підтверджується в 67/80 негативних контрольних плодів Т1 (83,75 95). Шістдесят два з 67 негативних контрольних плодів, підтверджених як інфіковані РРУ, є муміями. На відміну від них, інфекція РРМУ підтверджується лише в 0,79 90 плодів 12.

На основі визначальних параметрів ефективності, як вказується в Європейській фармакопеї (монографія 01/2008: 0965), можна дійти висновку, що всі вакцини (включаючи позитивний контроль (цільноклітинний інактивований РРМУ/)| відповідають критеріям захисту від інфекції (280 95 плодів, негативних на РРМ).

Таблиця З

Деталі приплоду: кількість, розмір, вага й стан плодів і лабораторне підтвердження інфекції РРУ (ПЛР на зразках торакального промивання). 10 мкг інактивований РРУ) свинок | 5 1 8 Її 77777779 13 загжжплодів | 80 | 126 | -:К 12477771 144

Мумі 7777777 1621 3 | щк 2 5юЮж5Бс г "Середнійрозмір(см) | 11,51 175 | 178 | 60

ЖРРМАплоди. | 67 | 1 ЇЇ 77777773 77777771 110 обепозитивних 18375) 079 | щ БК 24277777 | 00 (безахищенихї 16251 9921| БК 97587111 х Розтин плодів МТХ після 50 днів вагітності

МС - Негативний контроль

Висновок:

Вакцина проти РРМ відповідно до даного винаходу продемонструвала захист плодів після провокації вірулентним гетерологічним РРУ. Результати дослідження показують, що вакцина безпечна при введенні в період перед спарюванням і ефективна для істотного зниження віремії й трансплацентарної інфекції плодів. Крім того, було продемонстровано, що вакцина захищає від гетерологічного північноамериканського штаму РРМ для провокаційного зараження. Крім того, було продемонстровано, що субодиничний білок РРМУ МР є настільки ж ефективним, як і цільний убитий вірус.

ПРИКЛАД 3:

УСТАНОВЛЕННЯ МІНІМАЛЬНОЇ ІМУНІЗУЮЧОЇ ДОЗИ ВАКЦИНИ ПРОТИ РРМ - ЗАХИСТ

ВІД ГЕТЕРОЛОГІЧНОГО ПІВНІЧНОАМЕРИКАНСЬКОГО ШТАМУ РРУ:

Ціль цього дослідження провокаційної вакцинації полягає у встановленні мінімальної імунізуючої дози (МІЮ) для вакцини проти свинячого парвовірусу (РРМ). Свинкам вводять провокуючу дозу ізоляту живого вірулентного РРМ серотипу 1 (РРМ 002346-5) приблизно після 40 днів вагітності (45). Вакцина вважається ефективною, якщо 2 80 95 плодів у вакцинованій групі є негативними на РРМ після провокації. До підтверджувальних параметрів належать розмір, вага й стан плода, статус віремії свинок після провокації й серологічний статус свинок.

Свинок (з відсутньою історією захворювань репродуктивної системи або вакцинації від

РРМ) рандомізовано розбивають по експериментальних групах: ТО1 - негативний контроль (відповідне до продукту плацебо (РМР)) і Т02 - 1,0 мкг РРУ/2 мл дозу). Свинок без лікування / провокації (МТХ) рандомізовано розподіляють по загонах як контрольні тварини для загального стану здоров'я.

Свинки одержують 2 мл відповідного лікарського препарату внутрішньом'язово на 00 і 021.

Після вакцинації свинок спарюють між 037 і 050, а потім оцінюють стан вагітності на 074. На

О081 вагітним свинкам вводять провокуючу дозу 6,77 І0діоїСІ2050/б6 мл РРМ серотипу 1 внутрішньом'язово й інтраназально. У свинок щотижня беруть кров, за винятком періодів синхронізації й спарювання (036 - 073). Аналізи інгібування гемаглютинації (НІ) виконують на

Зо зразках сироватки, узятих на 07, 014, 021, 0028 і 035; НІ ї полімеразну ланцюгову реакцію (ПЛР) (див. Приклад 2) на віремію виконують на зразках сироватки, узятих на 0-3, 074, 080, рев8, 095, 0102 ї 0127. Свинок піддають розтину на 0128 і 0129 (приблизно 90 ас). При розтині репродуктивний тракт кожної свиноматки витягають і записують позицію плода в матці, стан плода, його розмір і вагу. Зразки торакального промивання (див. Приклад 2) збирають із кожного плода й досліджують на наявність РРМУ за допомогою ПЛР.

Віремія свинок (РРМ)

Вакцини вважаються безпечними, оскільки у тварин не виявляється відхилень температури тіла через 24 години або 48 годин після вакцинації, аномальних місцевих реакцій, обумовлених дією вакцини, і клінічних ознак, пов'язаних з вакцинацією (дані не показані).

Усі свинки є негативними на віремію РРМУ перед вакцинацією, перед провокацією на 074 і на 080. Таким чином, після вакцинації клінічні ознаки, пов'язані із введенням вакцини, не спостерігаються. На 088 усі десять свинок ТО1 є віремічними, і всі вакциновані свинки є негативними. Усі інші зразки крові, узяті на 095, 0102 і 0127, є негативними на віремію РРМ для всіх експериментальних груп (Таблиця 4).

Таблиця 4

Розподіл частоти РРУ-позитивних свинок (ПЛР), що одержали провокаційну дозу РРМ після «40 днів вагітності (а) на 081.

Лікування / опис

" в 2 свинок було діагностовано відсутність вагітності, і, таким чином, вони були виключені із групи

Результати плодів

При остаточному розтині на 0128 і 0129, 38 95 із плодів ТО1 (негативний контроль) знаходяться у нормальному стані, тоді як у вакцинованій групі в нормальному стані перебувають 95 95 плодів. Середній розмір і вага плодів ТО1 (негативний контроль) становлять 14,4 см і 245,9 г, відповідно, тоді як середній розмір і вага плодів у вакцинованих свиней становить 19,3 см і 550 г, відповідно (Таблиця 5). Таким чином, вакцинована група відповідає критеріям захисту від інфекції РРМ, оскільки згідно з визначальним параметром для ефективності проти РРМ, установленому в Рі. Еиг. 01/2008:0965, » 80 95 плодів в експериментальній групі повинні бути негативними на РРУ.

Інфекція РРМ підтверджується в 113/146 негативних контрольних плодів (ТО01) (77 90).

Однак інфекція РРУ у вакцинованій групі (Т02) становить усього 10 95.

Таблиця 5

Деталі приплоду: кількість, розмір, вага й стан плодів, і лабораторне підтвердження інфекції РРУ (ПЛР на зразках торакального промивання) (езахищенихо//////7777777777111111111111111Ї111111111111111111111111111111119096с1С

Ж - кількість, 95 - відсоток

Висновок:

Субодинична вакцина проти РРМ МР2 відповідно до даного винаходу демонструє захист плодів після провокації вірулентним гетерологічним РРМ. Результати цього дослідження виявляють, що вакцина є безпечною й ефективною для запобігання віремії у свинок і інфекція

РРМ у плодів при застосуванні всього 1 мкг субодиничної вакцини РРМ МР2. Крім того, продемонстровано, що вакцина захищає від гетерологічного північноамериканського штаму для провокаційного зараження.

ПРИКЛАД 4:

УСТАНОВЛЕННЯ МІНІМАЛЬНОЇ ІМУНІЗУЮЧОЇ ДОЗИ ВАКЦИНИ ПРОТИ РРМ - ЗАХИСТ

ВІД ГЕТЕРОЛОГІЧНОГО ЄВРОПЕЙСЬКОГО ШТАМУ РРУ

Ціль цього дослідження полягає в оцінці початку імунітету, забезпечуваного вакциною від свинячого парвовірусу (також називаною вакциною проти РРМ або РРМ МР2). Крім того, безпеку й ефективність оцінюють із застосуванням плану рандомізованого, сліпого дослідження з негативним контролем, що включає вакцинацію й провокацію.

Зо Свинок рандомізовано розбивають на три групи. У групах 1 і 2 свинок вакцинують двічі, із тритижневим інтервалом (на 00 ї 021). Другу дозу вводять за три тижні до спарювання. Усі лікарські препарати вводять внутрішньом'язовим (ІМ) шляхом в об'ємі 2 мл. Група 2 одержує вакцину проти РРУ, тоді як група 1 є плацебо-групою, що одержує стерильний розріджувач як контрольний продукт, і група З служить як строгий контроль, без якого б не було якого-небудь лікування.

Свинок синхронізують по еструсу й через три тижні після другої вакцинації штучно осіменяють. Тварини, що завагітніли, на 084 між 39-м і 42-м днями вагітності одержують провокуючу дозу вірулентного, гетерологічного штаму РРУ.

На 0132-135, приблизно після 90-го для вагітності, свинок умертвляють, піддають розтину й досліджують плоди.

Таблиця 6

План дослідження

Група 1-е лікування СО |2-е лікування 021 Провокація О84 Розтин (2 мл у прав. стор. | (2 мл у лів. стор. | 6,0 Г ос1оГСіІЮОвов мл) доза шиї ІМ) шиї ІМ) (-40ас) 2 мл прав. шия ІМІ2 мл у кожну ніздрю інтраназально 1 (Негативний Контрольний Контрольний Євр. штам РРМ 401/09 р132-0135 контроль) продукт продукт 198669

РРМ (1 мкг/дозу) | РРМ (1 мкг/дозу) | ВР. нта бо 401/09 | р132-0135

З (Строгий ш миру | 07000107 Бепровжацї | оо

Оцінка віремії РРУ у свинок до й після провокації за допомогою ПЛР:

Усі тварини є негативними на РРМ згідно із ПЛР на 0-6 і 0-1 перед вакцинацією, що відповідає критеріям включення. Після вакцинації всі тварини в групах строгого контролю й контрольного продукту є негативними на антиген РРУ до провокації, і, таким чином, інфекція

РРМ до провокації може бути виключена.

Віремію досліджують на 7 (090), 14 (097) і 21 (0104) дні після провокації й у день розтину.

Після провокації у вакцинованих тварин віремія не виявляється, віремія має місце тільки в невакцинованих контрольних тварин.

На 090, (через 7 днів після провокації) уже 95 95 невакцинованих контрольних тварин є позитивними на РРУ. На 0097 60 95 цих тварин усе ще мали позитивний результат, тоді як на 0104 усі дослідні тварини виявилися негативними на РРУ. На відміну від них, у вакцинованій групі всі тварини, випробувані на 090, 097 або 0104, є негативними на РРУ.

Таблиця 7

Кількість тварин з віремією після провокації 7 днів після провокації 14 днів після провокації 21 день після провокації ро р97 р1і104 19/20 (95 95 12/20 (60 95 0/20 0/20 0/20 0/20

Результати плодів

Відсоток інфікованих РРМ плодів становив 91,4 95 у контрольній групі, але лише 4,3 95 у групі РРМ (див. Таблицю 8).

Таблиця 8

Відсоток позитивних плодів на групу й розмір приплоду до РРУ- о о

М М К М позит. (ПЛР) М . Мін. Фо Макс. 9о 2. 2, ількість ; Середній | позитивних | позитивних

Група Кількість | Кількість плодів для . . , - позит. розмір | плодів на плодів на свинок плодів плодів режиму приплоду| приплід приплід лікування!

РРМ ЇЇ 19 | 231 | 10 | 43 | 122 | 0 | го

1 Кіл-в РРУ-позитивних плодів / Кількість плодів на групу. М Загальна кількість

Оцінка стану плодів

Усі плоди оцінювали на їх стан і розділяли на три категорії: нормальні, муміфіковані й аутолізовані.

Більшість муміфікованих і аутолізованих плодів виявляється в контрольній групі. Лише 39,8

Фо плодів у цій групі знаходяться у нормальному стані, тоді як у вакцинованих групах 97,4 95 (РРУ-група) плодів мають нормальний стан (див. Таблицю 9).

Таблиця 9

Стан плода

ІМ (Усього)

Висновок:

Вакцина проти РРМ відповідно до даного винаходу демонструє захист плодів після провокації вірулентним гетерологічним РРМУ, що свідчить про те, що вакцина є безпечною й ефективною для профілактики віремії й інфікування плода РРМУ при застосуванні всього 1 мкг вакцини. Крім того, продемонстровано, що вакцина також захищає від гетерологічного європейського штаму для провокаційного зараження РРУ. Таким чином, вакцина має широкий спектр захисту, оскільки вакцина захищає від гетерологічних північноамериканських, а також гетерологічних європейських штамів для провокаційного зараження.

Усі композиції й способи, які розкриваються й заявляються авторами, можуть бути отримані й виконані без зайвих експериментів з урахуванням представленого опису. Хоча композиції й способи згідно із даним винаходом були описані на прикладах кращих варіантів здійснення, фахівцям у даній галузі стане зрозуміла можливість внесення змін у композиції й способи й етапи або послідовність етапів описаного авторами способу без відхилення від ідеї, суті й обсягу винаходу. Більш конкретно, стане очевидно, що деякі агенти, які є хімічно й фізіологічно спорідненими, можуть заміщати описані авторами агенти при досягненні таких же або подібних результатів. Усі подібні заміщення й модифікації, що є очевидними для фахівців у даній галузі, вважаються такими, що охоплюються суттю, об'ємом і ідеєю винаходу, які визначаються представленою нижче формулою винаходу.

Зо ПЕРЕЛІК ПОСЛІДОВНОСТЕЙ «1105 Воепгіпдекг ІпдеіПпеїшют УМестедіса стпрн «120» Вакцина проти свинячого парвовірусу «1305 01-3228 «1605 16 «1705 РабепсІпПп версія 3.5 «2105 1 «2115 1579 «2125 РЕТ «213» Свинячий парвовірус «4005 1

Меє бек бій Авп Уа1і сій біп Нів Ап Рго І1е АБп Аїа Сб1у ТПпг сі 1 З 10 15

Тец век Аїа ТПг с1у АвБп бій бек сіу сіу сіу сіу сіу сі1у с1у 1У 20 25 30 сб1у Акуд с1у Аїа сіу сіу Уаії сіу Уаії Бек ТПг сіу Бек Робе АвБп Авп 35 40 45 біп ТПпг бій Рпе сіп Ту Гей сіу сбіш с1і1у Гей Уаі Агд І1е ТПг А1а 50 55 бо

Нів Аїа бек Агд Гец Ії1е Нів Гей Авп Месє Рго біц Ні бій ТпПг Туг 65 70 75 80 пуб Агуд І1е Нів Уаі Гей Авп бек бі Бек сіу Уаі Аїа сі1у сіп Меє 85 90 95

Уаї біп Авр Авр Аза Нів ТіПг біп Месє Уаї ТПг Рго Тгр бек Ге І1е 100 105 110

Авр Аза Авп Аза Тгр бі1у Уаії Тер Робе АБп Рго Аза Авр Тгр сіп Іец 115 120 125

І1е бек Авп Авп Мес ТПг осі чІ1е А5п Те Уаї бек Рпе сій сбіп сій 130 135 140

І1е Рбе Авп Уаі! Уаї Іец пуб ТПг І1е ТПпг бій бек Аза ТПг бек Рго 145 150 155 160

Ркго ТПг пув І1е Туг АБп Авп Авр о Тецй ТПг Аза бек Гей Меє Уа1 Аї1а 165 170 175

Тем Авр ТПг Авп о Авп о ТБк оГецй Рго Туг ТПг Рго Аза Аза Рго Агд 5ег 180 185 190 біц Тс Гей сіу Рпе Тук Рго Тер Гей Рго ТПг Ппув Рго ТПг біп Туг 195 200 205

Зо

Акуд Тук Тук Пец бек Сув ТПг Агд АвБп о Тец АБп о Рго Рго ТПг Тук ТЕПг 210 215 220 сбі1у біп бек бі сбіп Іїе ТПг Авр бек Іїе сбіп ТПг сіу Гец Нів 5ег 225 230 235 240

Авр І1ї1е Меє Рре Туг ТПг Іїе біц АБп Азїа Уаї Рго Іїе Нів Іец Іец 245 250 255

Агуд Тпг с1у Авр бій Рре бек ТПг с1іу І1їе Туг Нів Рре Авр ТПг Тув 260 265 270

Рко Гец пуб Гей ТПг Нів бек Тгр біп ТПг Авп Агуд бБег Геи с1Уу ГІец 275 280 285

Ркго Рго пуб ІТец ІТецй ТПг біц Рго ТПг ТПпг бій с1у Авр біп Нів Рго 290 295 300 б1у ТПпг Гей Рго Аїа Аза АБп ТПг Агуд пув с1у Тук Нів біп ТПг І1е 305 310 315 320

Авп о Авп обект Туг ТПг бій Аза ТБПг Аза І1е Агуд Рго Аїа сіп Уа1 с1У 325 330 335

ТУк Авп оТПг Рго Тук Меє Авп Рпе бій Тук бек АвБп о с1у с1у Рго Ріе 340 345 350

Тецп ТП Рго Іїе Уаі Рго ТПпг Аза Авр ТПг біп Туг Авп Авр АБр с1и 355 3З6о 365 60

Рго Ап біу Аїа І1е Агуд Робе ТПг Меє с1у Тук сбіп Нів с1іу сіп Гец

Зо

370 375 380

ТПЕ ТпПкг Бек бек біп бій Гей сбіц Агуд Туг ТП Рпе Авп Рго біп 5ег 385 390 395 400

Тпув Сув б1у Агкуд Аїа Рго Гпув біп біп Рпе Авп сбіп сбіп бек Рго Іей 405 410 415

Ап оГей біп Авп ТЕГ АвБп о Авп о біу Тс Тецй Гей Рго бБег Авр Рго І1е 420 425 430 сі1у б1у Ппув ТПг Авп Меє Нів Рпе Меє Авп ТПг Гей Ап ТПг Туг с1У 435 440 445

Рго Гей ТіПг Аїа Гец АвБп АБп о ТПг Аза Рго Уаії Рпе Рго АБп с1у сіп 450 455 460

І1е Тгр Авр Гу біц Тец Авр ТПг Авр Гей пув Рго Агуд Гей Нів Уаї 465 470 475 480

ТПгЕ АТа Ркго Рібпе Уаї Сув Ппув Авп АвБп Рго Рго сіу біп Гей Ріе Уаї 485 490 495 пуб І1їе Аза Рго Авп Гей ТПг Авр Авр Рпе Ап Аза Авр бег Рго біп 500 505 510 біп Рго Агуд Іїе Іїе ТПг Тук бек Авп Робе Тер Тгр Гув б1у ТПг Іецй 515 520 525

Зо ТПЕ Рпе ТпПг Аїа Гуз Меє Агуд бек Бек Авп Меє Тер АБп Рго І1е сіп 530 535 540 біп Нів ТПг ТпПс ТпПг АТа бій Авп о І11е сб1у АБп Туг І1е Рго ТПг АвБп 545 550 555 560

З5

І1е сі1у с1у І1е Гпув Меє Рбе Рго біцш Тук бек сбіп Гей Іїе Рго Аг4д 565 570 575

ТГув Гечи Туг 40 «2105 2 «2115 579 «212» РЕТ 45 «213» Свинячий парвовірус «4005 2

Меє бек бій Авп Уа1і сій біп Нів Ап Рго І1е АБп Аїа Сб1у ТПпг сі 1 5 10 15 50 Тен бек Аїа ТПг с1у АвБп сій бек І1е сі1у сіу с1у с1у с1іу с1у 01Уу 20 25 30 б1у Акуд сі1у Бек Іїе сіу Уаі сіу Уаії Бек ТПг сіу Бек Робе АвБп Авп 55 біп Тпг бій Рпе сіп Ту Гей сіу сбіц сі1у Іец Уаі Агуд І1е ТПг Аїа бо

Нів Аїа бек Агд Гец Ії1е Нів Гей Авп Месє Рго біц Ні бій ТпПг Туг бо 65 70 75 80 пуб Агуд І1е Нів Уаії Гей АвБп бек біц бек біу Уаі Аї1а с1у сіп Меє 85 90 95

Уаї біп Авр Авр Аза Нів ТПг біп Меє Уаї ТіПг Рго Тгр бек Те Ше 100 105 110

Авр Аза Авп Аза Тгр бі1у Маії Тер Рпе Авп Рго Аза Авр Тгр Ссіп Іей 115 120 125

І1е бек Авп Авп Мес ТПг осі чІ1е А5п Те Уаї бек Рпе сій сбіп сій 130 135 140

І1е Рбе Авп Уаі! Уаї Іецйп Гпув ТПг Іїе ТПг бій бек Аза ТПг бек Рго 145 150 155 160

Ркго ТПг пув І1е Туг АБп Авп Авр о Тецй ТПг Аза бек Гей Меє Уа1 Аї1а 165 170 175

Тец Авр ТПг Авп Авп о ТпПг Гей Рго Туг ТПг Рго Аза Аза Рго Агд 5ег 180 185 190 біц Тс Гей сіу Рпе Тук Рго Тер Гей Рго ТПг Ппув Рго ТПг біп Туг 195 200 205

Агуд Тук Тук Тей бек Сув ТПг Агуд Ап Гей АвБп о Рго Рго ТПг Тукг ТПг 210 215 220 сбі1у біп бек бі сбіп Іїе ТПг Авр бек Іїе сбіп ТПг сіу Гец Нів 5ег 225 230 235 240

Зо

Авр І1ї1е Меє Рре Туг ТПг Іїе біц АБп Азїа Уаї Рго Іїе Нів Іец Іец 245 250 255

Акуд ТЕ сб1у Авр біц Робе бек ТПг сбіу І1е Тук Нів Рпе Авр ТПг Гув

З5 260 265 270

Рко Гец пуб Гей ТПг Нів бек Тгр біп ТПг Авп Агуд бБег Геи с1Уу ГІец 275 280 285

Рго Рго Пув Гей Гей ТПг сі Рго ТПг ТБг бі б1у Авр сіп Нів Рго 290 295 300 б1у ТПпг Гей Рго Аїа Аза АБп ТПг Агуд пув с1у Тук Нів біп ТПг І1е 305 310 315 320

Авп о Авп обект Туг ТПг бій Аза ТБг Аза І1е Агуд Рго Аїа сбіп Уаі1 0Щ1У 325 330 335

Тук Авп о ТПг Рго Тук Меє Авп Рпе сіц Туг Бек Авп о біу б1у Рго РІПе 340 345 350

Тецп ТП Рго Іїе Уаі Рго ТПпг Аза Авр ТПг біп Туг Авп Авр АвБр бій 355 3З6о 365

Рго АвБп сіу Аїа І1е Агуд Рпе ТПг Меє сіу Тук сбіп Нів с1іу сбіп Іецй 370 375 380

ТПЕ ТПкг бек бек біп бій Гей сій Агуд Туг ТБг Роре АБп Рго біп 5ег 385 390 395 400 60

Тпув Сув б1у Агкуд Аїа Рго Гпув біп біп Рпе Авп сбіп сбіп бек Рго Іей

405 410 415

Ап оГей біп Авп ТЕГ АвБп о Авп о біу Тс Тецй Гей Рго Бек Авр Рго І1є 420 425 430 сі1у б1у Ппув ТПг Авп Меє Нів Рпе Меє Авп ТПг Гей Ап ТПг Туг с1У 435 440 445

Ркго Гей ТПг Аза ІТец АБп Авп ТБПг Аза Рго Уаі Рпе Рго Ап с1у сіп 450 455 460

І1е Тгр Авр Гу біц Тец Авр ТПг Авр Гей пув Рго Агуд Гей Нів Уаї 465 470 475 480

ТПгЕ АТа Рго Рпе Ма! Сув Пув Авп о Авп Рго Рго біу сіп Гей Рпе Уаї1! 485 490 495 пуб І1їе Аза Рго Авп Гей ТПг Авр Авр Рпе Ап Аза Авр бег Рго біп 500 505 510 біп Рго Агуд Іїе Іїе ТПг Тук Бек Авп Рпе Тер Тер пув с1у Тік Іей 515 520 525

ТПЕ Рпе ТПг Аїа пуб Меє Агуд бек бек Авп Меє Тгр АБп Рго Ше сіп 530 535 540 біп Нів ТПг ТПпс Тпг АТа бій АБп о ч1І1е с1у Ап Туг І1їе Рго ТПг АвБп 545 550 555 560

Зо Іїе сі1у с1у І1їе пу Мес Рпе Рго сій Туг бек біп Гей І1їе Рго Агд 565 570 575

ТГув Гечи Туг «2105 З «2115» 1760 «2125 ДНК «213» Свинячий парвовірус «4005 З чддаєссдсса ссаєдеЕссда даасдсддад садсасаасс сдасааасдс аддсасадад бо седссоддсда ссдосааєда дадсодадодс ддадодсддсу даддадоаєду асдсддсдса 120 часодадедд дсдсЕєсдас соодаадссєсєс аасааєсааа ссчдадессєєса деассеєддоас 180 чадччаЧчЕєвсда єдсодаєсас ддсссасдсдд Ссссдассда Сбасаєсссаа сбасдссддад 240 саєдадассо асаадсдбає ссардесстд аасессддаає сдддсдссдс сододесадаєд 300

ЧдЕССаадаєд аєдсесаєас сСсадасддбд асасссодда дсссдасада сСдссаасдса 360

ЕдводдодсЧєЧдЕ додЕєсаассс сдсодаєєда садсеєдаєсаа дсаасаасає дасадаааєс 420 аасеЕєддеЕса чдЕСссдадса адачасасєє ааєдссудсдс Сдаааассає сасадададс 480 дссасдадсс ссссдасдаа чдчасссасааєс аасдасссда сддсдсссЕс даєсддссдсс 540

Ебддасасаа асаасасссе сссдсбасасс сссдсддссс сссдсадсда дассстгдддс 60 бо

ЄЕЄєваєссся додседсссас саадссаасду садсаєсєсдсс ассасссдад Ссдсасасда бо аареєєдааєс содссдасаєа сассддссад Ссддадсада Ссасддасад саєсссааасд 720 чдассеЕдсасс ссдагтаєсає чЧчЕсСессасасу агададаасу садтасссає ссассеєдстд 780 сдсасдддад асдадессссс дассддсаєс гаєсаєєєвсд асасаааасєсс сеЕєЄДдаааєвд 840 асдсасадеє додсааассаа Ссдсссдссд ддсссдсссс сааадесдсс дасддаассс 900 ассассдадд деЕдассааса сссаддсасс ссссссдсад сааасасссуд саадддстає 960 саєсєсааасда Ссаасаасад стагсбассдад дсграссдсса Сссддссадс асаддсдддва 1020 басаасасас сеЕсСасаєсєдаа сЕСсСсдаасас сСссаасоодсу дсссуєсессо дассссдата 1080

ЧдЕєссдассд ссдасасеса дсасаасдає дасдадссда асддсдссає саддеЕссасс 1140 аєдддстаєс адсасоддеєса ассдасаасоі ссдссдсаад аассддаасуд стсагбасаєєсс 1200 аасссеєсада деаадедеда ссдддсассс ааасаасадс Ссаассадса асссссастгд 1260 аассеєдсада абассаасаа Сддсасдссд ссдссаєссдуд ассссаєсдуд аддааадасс 1320 аасаєдсаєс єсасдаасас дссдаасаса Сасуддассас Єдассдсссс даасаасасс 1380 чдсасссдєсеЕ Есссрааєдуа ссадаєсєстьєду дасааададс сддасасоудада ссрдаадссс 1440 счассссасуд Єдассдсдсс сЕсЕдЕдесдс аааааєсаасс сассдддаса дЕсЧдЕссЧєс

Зо 1500 аааасадссс ссаасеєдас сдасдасссс аасдсадаса дсссісадса дссдсдааєсс 1560 аєсасставєє сдаасеЕєстд дсддаадддс асдссдассс сСсасоддссаа дасдсдсесд 1620 адсаасаєудс ддаасссаає ссадсаасає ассасаассу ссдааааєсає єддасааєссас 1680 аєссстасда асаєсаддсдд аасааадаєсд ССЕсссоададе асссссадсс саєсссасдс 1740 аадсеєдваєе аадсддссдс 1760 «2105 4 «2115» 1760 «2125 ДНК «213» Свинячий парвовірус «4005 4 чддаєссдсса ссаєдеЕссда даасдсддад садсасаасс сдасааасдс аддсасадад бо седссддсда ссддсаасда ассдаєсддс ддаддсддсд даддадаєда асодсодаєсд 120 аєсододадеду дсдЕеЕесдас сододаадсссс аасаассааа ссдадеЕеєєсєса дргасстгдддс 180 чадччаЧчЕєвсда єдсодаєсас ддсссасдсдд Ссссдассда Сбасаєсссаа сбасдссддад 240 саєдачассе асаадсдрає ссардссссд аасесодддаає соддсдЕсдс сддеЕСадаєд 300

ЧдЕССаадаєд аєдсесаєас сСсадасддбд асасссодда дсссдасада сСдссаасдса 360

ЕдводдоадсЧоєдЕ додЕссаассс єдсодаєссда садссдасаа дсаасаасає дасадаааєсс 60 420 аавЕгєвєдЧдеєва дЕсесддадса ададасассс аасдссдсдс Сдаааассає сасадададс дссасдадсс ссссдасдаа чдчасссасааєс аасдасссда сддсдсссЕс даєсддссдсс 540

Есддасасаа абаасасссе сссдрасасс сссоусддссс сссдсадсда дассстдддас бо

ЄЕЄєваєссся додседсссас саадссаасду садсаєсєсдсс ассасссдад Ссдсасасда бо аареєєдааєс содссдасаєа сассддссад Ссддадсада Ссасддасад саєсссааасд 720 чдассЕдсасеЕ ссдаєаєсає дЕсссасасу асададаасуд садсасссає ссассгдссгд 780 сдсасдддад асдадессссс дассддраєс гаєсаєєєвсд асасаааасс сеЕєЄДдаааєвд 840 асдсасадеЕс додсааассаа ЕсдсЕСсСдстУ доосссдсссс сааадсеєЧеєс дасддаассс 900 ассассдадд деЕдассааса сссаддсасс ссссссдсад сааасасссуд саадддстає 960 саєсєсааасда Ссаасаасад ссасассдад дссассдсса СсСссддссадс асаддсдддва 1020

Басаасасас сеЕсасаєдаа сЕссдаасас сссаасддсду дсссдаєссссо дассссддаєга 1080

ЧдЕєссдассд ссдасасеса дсасаасдає дасдадссда асддсдссає саддеЕссасс 1140 асддадссаєс адсасоудсса аєсдасаасе СсуєсЄсодсаад аасєддаасу стасасассс 1200 аасссеєсада деаадедеда ссдддсассс ааасаасадс Ссаассадса асссссастгд 1260 аассеєдсада абассаасаа Сддсасдссд ссдссаєссдуд ассссаєсдуд аддааадасс

Зо 1320 аасаєдсаєє єсаєдаасас дссдаасаса Сасддассас Сдассдсссс даасаагсасс 1380 чдсасссдєсеЕ Есссгааєдуда ссадаєсєсдуд дасааададс сСддасасдда сссдаадссс 1440 счассссасу Єдасеєдсудсс ссЕгЕдсдеЕдс аааааєсаасс сассддчаса Д9ФЕЕЧЕСсСсєс 1500 аааасадссс ссаасеєдас сдасдасссс аасдсадаса дсссісадса дссдсдааєсс 1560 аєсасставєє сддаасеЕєстд дсддаадддс асдссдасеє єсасддстраа даєдсдсесд 1620 адсааєсаєдеЕ ддаасссаає ссадсаасає ассасаассуд ссдаааасає сддадасааєсас 1680 аєссстасда асаєсаддсдд аасааадаєсд ССЕсссоададе асссссадсс саєсссасдс 1740 аадсєдсаєє аадсоддссдс 1760 «2105 15 «2115 579 «2125 РЕВТ «213» Свинячий парвовірус «4005 55

Меє бек бій Авп Уа1і сій біп Нів Ап Рго І1е АБп Аїа Сб1у ТПпг сі 1 2 10 15

Тец бек Аза ТПг с1у АвБп сій бБег Іїе сіу сіу сіу с1у СШ1у сш1у ЩУ 20 25 30 б1у Акуд сі1у Бек Іїе сіу Уаі сіу Уаії Бек ТПг сіу Бек Робе АвБп Авп 60 35 40 45 біп Тпг бій Рпе сіп Ту Гей сіу сі с1у Гей Уаі Агуд І1е ТПг Аїа 50 55 бо

Нів Аїа бек Агд Гец Ії1е Нів Гей Авп Месє Рго біц Ні бій ТпПг Туг 65 70 75 80 пуб Агуд І1е Нів Уаії Гей АвБп бек бі Бек біу Уаі Аї1а с1у сіп Меє 85 90 95

Уаї біп Авр Авр Аза Нів ТіПг біп Месє Уаї ТПг Рго Тгр бек Ге І1е 100 105 110

Авр Аза Авп Аза Тгр бі1у УМаії Тер Рпе Авп Рго Аза Авр Тгр Ссіп Іей 115 120 125

І1е бек Авп Авп Месє ТПг сі чІ1е Авзп Тей Уаї бек Рпе сій сіп А1а 130 135 140

І1е Рбе Авп Уаі! Уаї Іец пув ТПг Іїе ТПг бій бек Аза ТПг бек Рго 145 150 155 160

Ркго ТПг пув І1е Туг АБп Авп Авр о Тецй ТПг Аза бек Гей Меє Уа1 Аї1а 165 170 175

Тем Авр ТПг Авп о Авп о ТВбг о Тецй Рго Тук ТПг Рго Аїа Аїа Рго Агд 5ег 180 185 190 біц Тс Гей сіу Рпе Тук Рго Тер Гей Рго ТПг Ппув Рго ТПг біп Туг 195 200 205

Зо

Акуд Тук Тук Гец бек Сув І1е Агуд Авп Гей Авп Рго Рго ТПг Тук ТЕП 210 215 220 сбі1у біп бек бі сбіп Іїе ТПг Авр бек Іїе сбіп ТПг сіу Гец Нів 5ег 225 230 235 240

Авр І1ї1е Меє Рре Туг ТПг І1їе сбіц АБп Азїа Уаї Рго Іїе Нів Гей Іец 245 250 255

Агуд Тпг с1у Авр бій Рре бек ТПг с1іу І1їе Туг Нів Рре Авр ТПг Тув 260 265 270

Рко Гец пуб Гей ТПг Нів бек Тгр біп ТПг Авп Агуд бБег Геи с1Уу ГІец 275 280 285

Ркго Рго пуб ІТец ІТецй ТПг біц Рго ТПг ТПпг бій с1у Авр біп Нів Рго 290 295 300 бі1у ТПпг Гей Рго Аза Аза АБп ТПг Агуд пув с1у Тук Нів біп ТПг Тс 305 310 315 320

Авп о Авп обект Туг ТПг бій Аза ТБг Аза І1е Агуд Рго Аїа сбіп Уаі1 0Щ1У 325 330 335

ТУк Авп оТПг Рго Тук Меє Авп Рпе бій Тук бек АвБп о с1у с1у Рго Ріе 340 345 350

Тецп ТП Рго Іїе Уаі Рго ТПпг Аза Авр ТПг біп Туг Авп Авр АвБр бій 355 3З6о 365 60

Рго Ап біу Аїа І1е Агуд Робе ТПг Меє АвБр Тук сбіп Нів с1іу сіп Гец

Зб

370 375 380

ТПЕ ТПкг бек бек біп бій Гей сій Агуд Туг ТБг Роре АБп Рго біп 5ег 385 390 395 400

Тпув Сув б1у Агкуд Аїа Рго Гпув біп біп Рпе Авп сбіп сбіп бек Рго Іей 405 410 415

Ап оГей біп Авп ТЕГ АвБп о Авп о біу Тс Тецй Гей Рго Бек Авр Рго І1є 420 425 430 сі1у б1у Ппув ТПг Авп Меє Нів Рпе Меє Авп ТПг Гей Ап ТПг Туг с1У 435 440 445

Рго пей ТПг Аїа Гецй Авп АБп о ТПг Аза Ркго Уаї Рре Рго Авп с1у сіп 450 455 460

І1е Тгр Авр Гу біц Тец Авр ТПг Авр Гей пув Рго Агуд Гей Нів Уаї 465 470 475 480

ТПгЕ АТа Ркго Рбпе Уаї Сув Ппув Авп Авп Рго Рго біу біп Гей РПе Уаї 485 490 495 пуб І1їе Аза Рго Авп Гей ТПг Авр Авр Рпе Ап Аза Авр бег Рго біп 500 505 510 біп Рго Агуд Іїе Іїе ТПг Тук Бек Авп Рпе Тер Тер пув с1у Тік Іей 515 520 525

Зо ТПЕ Рпе ТпПг Аїа Гуз Меє Агуд бек Бек Авп Меє Тер АБп Рго І1е сіп 530 535 540 біп Нів ТПг ТПпс Тпг АТа бій АБп о ч1І1е с1у Ап Туг І1їе Рго ТПг АвБп 545 550 555 560

З5

І1е сі1у бі1у І1е Акуд Меє Рбе Рго біцш Тук бек сбіп Гей Іїе Рго Аг4д 565 570 575

ТГув Гечи Туг 40 «2105 6 «2115 579 «212» РЕТ 45 «213» Свинячий парвовірус «4005 6

Меє бек бій Авп Уа1і сій біп Нів Ап Рго І1е АБп Аїа Сб1у ТПпг сі 1 5 10 15 50 Темп бек Аїа ТПг с1у Авп сій бек І1їе с1у с1у сіу С1у сі1у б1у ФЩ1У 20 25 30 б1у Акуд сі1у Бек Іїе сіу Уаі сіу Уаії Бек ТПг сіу Бек Робе АвБп Авп 55 біп ТПпг бій Рпе сіп Ту Гей сіу сбіш с1і1у Гей Уаі Агд І1е ТПг А1а бо

Нів Аїа бек Агд Гец Ії1е Нів Гей Авп Месє Рго біц Ні бій ТпПг Туг бо 65 70 75 80 пуб Агуд І1е Нів Уаі Гей Авп бек бі Бек сіу Уаі Аїа сі1у сіп Меє 85 90 95

Уаї біп Авр Авр Аза Нів ТПг біп Меє Уаї ТіПг Рго Тгр бек Те Ше 100 105 110

Авр Аза Авп Аза Тгр бі1у Уаії Тер Робе АБп Рго Аза Авр Тгр сіп Іец 115 120 125

І1е бек Авп Авп Мес ТПг осі чІ1е А5п Те Уаї бек Рпе сій сбіп сій 130 135 140

І1е Рбе Авп Уаі! Уаї Іец пуб ТПг І1е ТПпг бій бек Аза ТПг бек Рго 145 150 155 160

Ркго ТПг пув І1е Туг АБп Авп Авр о Тецй ТПг Аза бек Гей Меє Уа1 Аї1а 165 170 175

Тец Авр ТПг Авп Авп о ТпПг Гей Рго Туг ТПг Рго Аза Аза Рго Агд 5ег 180 185 190 біц Тс Гей сіу Рпе Тук Рго Тер Гей Рго ТПг Ппув Рго ТПг біп Туг 195 200 205

Агдуд Тук Тук Тей бек Сув ТПг Агуд Ап Гей АвБп о Рго Рго ТПг Тукг ТПг 210 215 220 сбі1у біп бек бі сбіп Іїе ТПг Авр бек Іїе сбіп ТПг сіу Гец Нів 5ег 225 230 235 240

Зо

Авр І1ї1е Меє Рбе Туг ТПг Іїе біц АБп Азїа Уаї Рго І1їе Нів Іец Іей 245 250 255

Акуд ТЕ сб1у Авр біц Робе бек ТПг сбіу І1е Тук Нів Рпе Авр ТПг Гув

З5 260 265 270

Рко Гец пуб Гей ТПг Нів бек Тгр біп ТПг Авп Агуд бБег Гец Сс1Уу Іей 275 280 285

Рго Рго Пув Гей Гей ТПг сі Рго ТПг ТБг бі б1у Авр сіп Нів Рго 290 295 300 бі1у Тпг Гей Рго Аза Аза АБп ТПг Агуд пув с1у Тук Нів біп ТПг Ше 305 310 315 320

Авп о Авп обект Туг ТПг бій Аза ТБг Аза І1е Агуд Рго Аїа сбіп Уаі1 0Щ1У 325 330 335

Тук Авп о ТПг Рго Тук Меє Авп Рпе сіц Тук Бек Авп б1іу с1у Ркго Ре 340 345 350

Тецп ТП Рго Іїе Уаі Рго ТПпг Аза Авр ТПг біп Туг Авп Авр АвБр бій 355 3З6о 365

Рго АвБп сбіу Аїа І1е Агуд Рпе ТПг Меє сі1у Тук сіп Нів сіу сіп Гей 370 375 380

ТПЕ ТПкг бек бек біп бій Гей сій Агуд Туг ТБг Роре АБп Рго біп 5ег 385 390 395 400 60

Тпув Сув б1у Агкуд Аїа Рго Гпув біп сбіп Робе Авп о біп біп бек Рго Іецй

Зв

405 410 415

Ап оГей біп Авп ТЕГ АвБп о Авп о біу Тс Тецй Гей Рго Бек Авр Рго І1є 420 425 430 сі1у б1у Ппув ТПг Ап Меє Нів Ріе Месє Авп о ТПг Гей АБп ТПг Тух Щ1У 435 440 445

Ркго Гей ТПг Аза ІТец АБп Авп ТБПг Аза Рго Уаі Рпе Рго Ап с1у сіп 450 455 460

І1е Тгр Авр губ біц Тецй Авр ТПг Авр Гей Ппув Рго Агд Гей Нів Уаї 465 470 475 480

ТПгЕ АТа Рго Рпе Ма! Сув Пув Авп о Авп Рго Рго біу сіп Гей Рпе Уаї1! 485 490 495 пуб І1їе Аза Рго Авп Гей ТПг Авр Авр Рпе Ап Аза Авр бег Рго біп 500 505 510 біп Рго Агуд Іїе Іїе ТПг Тук Бек Авп Рпе Тер Тер пув с1у Тік Іей 515 520 525

ТПЕ Рпе ТПг Аїа пуб Меєс Агд бек бек Авп Меє Тгр АБп Рго Ше сіп 530 535 540 біп Нів ТПг ТПпс Тпг АТа бій АБп о ч1І1е с1у Ап Туг І1їе Рго ТПг АвБп 545 550 555 560

Зо Іїе сі1у с1у І1їе пу Мес Рпе Рго сій Туг бек біп Гей І1їе Рго Агд 565 570 575

ТГув Гечи Туг

З5 «2105 17 «2115 579 «212» РЕТ «213» Свинячий парвовірус 40 «4005 7

Меє бек бій Авп Уа1і сій біп Нібв АвБп Рго І1е АБп Аїа с1у ТПг сіц 1 5 10 15

Тец век Аїа ТПг с1у АвБп бій бек І1їе сіу сіу сіу сіу сі1у с1у 1У 45 20 25 30 б1у Акуд сі1у Бек Іїе сіу Уаі1 сіу УМаї бек ТПг біу бек Рпе Авп Авп сіп Тк бі Рбе сіп Тук Гей сіу біц с1у Гецп Уаі Акуд І1їе ТПг Аїа 50 55 бо

Нів Аїа бек Агд Гец І1е Ні Гей Авп Меє Рго сій Нів сіц ТПг Туг 65 70 75 80 пуб Агуд І1е Нів Уаі Гей Авп бек бі Бек сіу Уаі Аїа сі1у сіп Меє 85 90 95

Ууаї біп Авр Авр Аза Нів ТПг біп Меє Уаї ТіПг Рго Тгр бек Те Ше 60 100 105 110

Авр Аза Авп Аза Тгр бі1у Уаії Тер Робе АБп Рго Аза Авр Тгр сіп Іец 115 120 125

І1е бек Авп Авп Мес ТПг сі чІ1е А5п Тей Уаї бек Рпе сій сбіп сій 130 135 140

І1е Рбе Авп Уаі! Уаї Іец пуб ТПг І1е ТПпг бій бек Аза ТПг бек Рго 145 150 155 160

Рго ТпПг Ппув І1е Тук Авп АБп Авр Гей ТіПг АТїа бек Гей Меє Уаі1ї А1а 165 170 175

Тец Авр ТПг Авп Авп о ТпПг Гей Рго Туг ТПг Рго Аза Аза Рго Агд 5ег 180 185 190 біц Тс Гей сіу Рпе Тук Рго Тер Гей Рго ТПг Ппув Рго ТПг біп Туг 195 200 205

Акуд Тук Тук Пец бек Сув ТПг Агд АвБп о Тец АБп о Рго Рго ТПг Тук ТЕПг 210 215 220 сбі1у біп бек бі сбіп Іїе ТПг Авр бек Іїе сбіп ТПг сіу Гец Нів 5ег 225 230 235 240

Авр І1е Меє Рібе Туг ТіПг І1е біц Ав5п Аза Уаї Рго Іїе Нів Іец Іецй 245 250 255

Акуд ТЕ сб1у Авр біц Робе бек ТПг сбіу І1е Тук Нів Рпе Авр ТПг Гув 260 265 270

Зо

Рко Гец пуб Гей ТПг Нів бек Тгр біп ТПг Авп Агуд бБег Геи с1Уу ГІец 275 280 285

Ркго Рго пуб ІТец ІТецй ТПг біц Рго ТПг ТПпг бій с1у Авр біп Нів Рго 290 295 300 б1у ТПпг Гей Рго Аїа Аза АБп ТПг Агуд пув с1у Тук Нів біп ТПг І1е 305 310 315 320

АвБп о оАвп бек Туг ТПг бій Аїа ТПг Аза І1е Агуд Рго Азїа сіп Уа1 с1Уу 325 330 335

Тук Авп о ТПг Рго Тук Меє Авп Рпе сіц Туг Бек Авп о біу б1у Рго РІПе 340 345 350

Рпе Іїе Рго І1е УМаії Рго ТПг Аза АБр ТПг біп Туг Авп Авр Авр с1ц 355 3З6о 365

Рго Авп біу біу І1е Агд Робе ТПг Меє с1у Тук сбіп Нів с1іу сіп Гец 370 375 380

І1е ТПг бек бек біп біц Уаії біц Агд Тук ТПг Рпе Авп Рго сбіп Агд 385 390 395 400 пув Сув б1у Агд с1у Аїа Ппув біп біп Рпбе Авп о сіп біп бек Рго Гей 405 410 415

Авп от1І1е біп АвБп ТЕГ АБп о Авп о біу Тс І1е Гей Рго Бек Авр Рго І1є 420 425 430 60 сі1у б1у Ппув ТПг Авп Меє Нів Рпе Меє Авп о ТПг Рго Ап ТПг Туг с1У

435 440 445

Ркго Гей ТПг Аза Уаії АБп АвБп ТБПг Аза Рго Уаі Рпе Рго Ап с1у сіп 450 455 460

І1е Тгр Авр Гу біц Тец Авр ТПг Авр Гей пув Рго Агуд Гей Нів Уаї 465 470 475 480

ТПгЕ АТа Ркго Рбпе Уаї Сув Ппув Авп Авп Рго Рго біу біп Гей РПе Уаї 485 490 495 пуб І1їе Аза Рго Авп Гей ТПг Авр Авр Рпе Ап Аза Авр бег Рго сіп 500 505 510 сбіп Рго Агуд Іїе Іїе ТПкг Тук бек Авп Рпе Тгр Тер Пув біу ТПЕ Гей 515 520 525

ТПЕ Рпе ТПг Аїа пуб Меє Агуд бек бек Авп Меє Тгр АБп Рго І1е сіп 530 535 540 біп Нів ТПг ТПпс Тпг АТа бій АБп о ч1І1е с1у Ап Туг І1їе Рго ТПг АвБп 545 550 555 560

І1е сі1у сі1у І1е Гпув Меє Рбе Рго біц Тук бек біп Гец І1е Рго Агд 565 570 575

ТГув Гечи Туг

Зо «2105 8 «2115 579 «212» РЕТ «213» Свинячий парвовірус «4005 8

Меє бек біц Авп Уаі бій біп Нів АБп Рго І1їе АБп Аїа с1у ТПк сі 1 5 10 15

Тец век Аїа ТПг с1у АвБп бій бек І1їе сіу сіу сіу сіу сі1у с1у 1У 20 25 30 б1у Акуд сі1у Бек Іїе сіу Уаі сіу Уаії Бек ТПг сіу Бек Робе АвБп Авп 35 40 45 біп ТПпг бій Рпе сіп Ту Гей сіу сбіш с1і1у Гей Уаі Агд І1е ТПг А1а бо

Нів Аїа бек Агд Гец Ії1е Нів Гей Авп Месє Рго біц Ні бій ТпПг Туг 65 70 75 80 50 ув Агуд І1е Ні Уаії Гей Авп бек бій бек сіу Уаі Аїа с1у сіп Меє 85 90 95

Уаї біп Авр Авр Аза Нів ТПг біп Меє Уаї ТіПг Рго Тгр бек Іеп І1е 100 105 110 55

Авр Аза Авп Аза Тгр бі1у Уаії Тер Робе АБп Рго Аза Авр Тгр сіп Іец 115 120 125

І1е бек Авп Авп Месє ТПг осі чІ1е А5п Те Уаї бек Рпе сій сіп Аїа бо 130 135 140

А

І1е Рбе Авп Уаі! Уаї Іец пуб ТПг І1е ТПпг бій бек Аза ТПг бек Рго 145 150 155 160

Рко ТПг пув І1е Туг АБп Авп Авр о Тецй ТПг Аза бек Гец Меєс Уаї А1а 165 170 175

Тец Нів ТПг Авп Авп ТпПг Гей Рго Туг ТПг Рго Аза Аза Рго Агд 5ег 180 185 190 сій ТЕ Гец б1у Рпе Тук Рго Ткгр Гей Рго ТПг Пув Рго ТПкг сбіп Туг 195 200 205

Акуд Тук Тук Пец бек Сув І1е Агд АвБп Тец АБп Рго Рго ТПг Тук ТЕПг 210 215 220 бі1у біп бек бій сбіп І1їе ТПг Авр бек Ії1е біп ТПг б1у Іецп Нів 5бег 225 230 235 240

Авр І1ї1е Меє Рре Туг ТПг Іїе біц АБп Азїа Уаї Рго Іїе Нів Іец Іец 245 250 255

Акуд ТЕ сб1у Авр біц Рбе бек ТПг с1іу Іїе Тук Нів Рібе Авр ТПг Гу 260 265 270

Рго печп Пув Гей ТПг Нів бек Тер сбіп ТБг АвБп Агуд бек Гечп С1Уу Іецй 275 280 285

Рко Рго пуб ІТец ІТецп ТПг бій Рго ТПг ТПг бій с1у Авр біп Нів Рго 290 295 300

Зо б1у ТПпг Гей Рго Аїа Аза АБп ТПг Агуд пув с1у Тук Нів біп ТПг І1е 305 310 315 320

Авп о Авп обект Тут ТПг біц Аза ТПпг Аза І1е Агу Рго Аїа сіп Уаі с01У

З5 325 330 335

Тук Авп о ТПг Рго Тук Меє Авп Рпе сіц Туг Бек Авп о біу б1у Рго РІПе 340 345 350

Тем ТПг Рго Іїе Уаії Ркго ТПг Аза Авр ТПг біп Туг Авп Авр АБр бі1ц 355 3З6о 365

Рго Ап біу Аїа І1е Агуд Робе ТПг Меє АвБр Тук сіп Нів с1у Нів ГІец 370 375 380

ТПЕ ТПкг бек бек біп біц Те сій Агкуд Тук ТБг Роре АБп Рго біп 5ег 385 390 395 400

Тпув Сув б1у Агкуд ТПг Рго Гпув біп біп Рпе Авп сбіп сбіп бек Рго Іей 405 410 415

Ап оГей біп Авп ТЕГ АвБп о Авп о біу Тс Тецй Гей Рго Бек Авр Рго І1є 420 425 430 сіу бі1у Ппув ТПг Ап Меє Нів Рібпе Мес АвБп о ТПг Гей Ап ТПг Ту 1У 435 440 445

Ркго Гей ТПг Аза ІТец АБп Авп ТБПг Аза Рго Уаі Рпе Рго Ап с1у сіп 450 455 460 60

І1е Тгр Авр Гу біц Тец Авр ТПг Авр Гей пув Рго Агуд Гей Нів Уаї

465 470 475 480

ТПгЕ АТа Ркго Рбпе Уаї Сув Ппув Авп Авп Рго Рго біу біп Гей РПе Уаї 485 490 495 пуб І1їе Аза Рго Авп Гей ТПг Авр Авр Рпе Ап Аза Авр бег Рго біп 500 505 510 біп Рго Агуд Іїе Іїе ТПг Тук Бек Авп Рпе Тер Тер пув с1у Тік Іей 515 520 525

ТПЕ Рпе ТПг Аїа пуб Меє Агуд бек бек Авп Меє Тгр АБп Рго Ше сіп 530 535 540 сіп Нів ТПг ТрПг ТПг АТа сій Авп І1е с1у Ппув Тук І1е Рго ТПг Авп 545 550 555 560

І1е сі1у с1у І1е Гпув Меє Рбе Рго біцш Тук бек сбіп Гей Іїе Рго Аг4д 565 570 575

ТГув Гечи Туг «2105 19 «2115 579 «212» РЕТ «213» Свинячий парвовірус «4005 9

Меє бек бій Авп Уа1і сій біп Нів Ап Рго І1е АБп Аїа Сб1у ТПпг сі

Зо 1 2 10 15

Тец век Аїа ТПг с1у АвБп бій бек І1їе сіу сіу сіу сіу сі1у с1у 1У 20 25 30 с1у Акуд б1і1у Бек Іїе с1у Уаі сіу Маї бек ТПкг с1іу бек Робе АБп Авп 35 40 45 біп ТПпг бій Рпе сіп Ту Гей сіу сбіш с1і1у Гей Уаі Агд І1е ТПг А1а 50 55 бо

Нів Аїа бек Агд Гец Ії1е Нів Гей Авп Месє Рго біц Ні бій ТпПг Туг 65 70 75 80 пуб Агуд І1е Нів Уаі Гей Авп бек бі Бек сіу Уаі Аїа сі1у сіп Меє 85 90 95

Уаї біп Авр Авр Аза Нів ТПг біп Меє Уаї ТіПг Рго Тгр бек Те Ше 100 105 110

Авр Аза А5п Аза Тгр сіу Маії Тер Рпе Авп Рго А1а Авр Тер сіп Іецй 115 120 125

І1е бек Авп Авп Мес ТПг осі чІ1е А5п Те Уаї бек Рпе сій сбіп сій 130 135 140

І1е Рбе Авп Уаі! Уаї Іец пуб ТПг І1е ТПпг бій бек Аза ТПг бек Рго 145 150 155 160

Ркго ТПг пув І1е Туг АБп Авп Авр о Тецй ТПг Аза бек Гей Меє Уа1 Аї1а 60 165 170 175

Тец Авр ТПг Авп Авп о ТпПг Гей Рго Туг ТПг Рго Аза Аза Рго Агд 5ег 180 185 190 біц Тс Гей сіу Рпе Тук Рго Тер Гей Рго ТПг Ппув Рго ТПг біп Туг 195 200 205

Акуд Тук Тук Пец бек Сув ТПг Агд АвБп о Тец АБп о Рго Рго ТПг Тук ТЕПг 210 215 220 сіу біп бек біц сіп І1е ТПг Авр бек І1е сбіп ТПг с1у Гей Нів 5ег 225 230 235 240

Авр І1ї1е Меє Рре Туг ТПг Іїе біц АБп Азїа Уаї Рго Іїе Нів Іец Іец 245 250 255

Акуд ТЕ сб1у Авр біц Робе бек ТПг сбіу І1е Тук Нів Рпе Авр ТПг Гув 260 265 270

Рко Гец пуб Гей ТПг Нів бек Тгр біп ТПг Авп Агуд бБег Геи с1Уу ГІец 275 280 285

Ркго Рго пуб ІТец ІТецй ТПг біц Рго ТПг ТПпг бій с1у Авр біп Нів Рго 290 295 300 сіу ТБг Гецп Рго Аїа Аза Ап ТПг Агуд Ппувз с1у Туг Нів біп ТПгЕ Пе 305 310 315 320

Авп о Авп обект Туг ТПг бій Аза ТБг Аза І1е Агуд Рго Аїа сбіп Уаі1 0Щ1У 325 330 335

Зо

Тук Авп о ТПг Рго Тук Меє Авп Рпе сіц Туг Бек Авп о біу б1у Рго РІПе 340 345 350

Тецп ТП Рго Іїе Уаі Рго ТПпг Аза Авр ТПг біп Туг Авп Авр АвБр бій

З5 355 360 365

Рго Ап біу Аїа І1е Агуд Робе ТПг Меє с1у Тук сбіп Нів с1іу сіп Гец 370 375 380

ТПг ТрПг бек бек біп бій Гей біц Агуд Тук ТіПг Рре АвБп Рго біп 5ег 385 390 395 400

Тпув Сув б1у Агкуд Аїа Рго Гпув біп біп Рпе Авп сбіп сбіп бек Рго Іей 405 410 415

Ап оГей біп Авп ТЕГ АвБп о Авп о біу Тс Тецй Гей Рго бБег Авр Рго І1е 420 425 430 сі1у б1у Ппув ТПг Авп Меє Нів Рпе Ме бек ТПг Гей Авп ТПг Туг 1У 435 440 445

Ркго Гей ТПг Аїа ІТец АБп о Авп ТБПг Аза Рго Уаі Ропе Рго Авп сіу сіп 450 455 460

Іїе Тгр Авр Гув бі Гей Авр ТПг Авр о Тецй Гуз Рго Агуд Гечп Нів Уаї 465 470 475 480

ТПгЕ АТа Ркго Рбпе Уаї Сув Ппув Авп Авп Рго Рго сіу біп Гей Ріе Уаї 485 490 495 60 пуб І1їе Аза Рго Авп Гей ТПг Авр Авр Рпе Ап Аза Авр бег Рго біп

500 505 510 біп Рго Агуд Іїе Іїе ТПг Тук Бек Авп Робе Тер Тгр Гув б1у ТПг Іецй 515 520 525

ТПЕ Рпе ТПг Аїа пуб Меє Агуд бек бек Авп Меє Тгр АБп Рго Ше сіп 530 535 540 біп Нів ТПг ТпПс Тпг Аза бій Ап І11е сб1у АБп Туг І1е Рго ТПг АвБп 545 550 555 560

І1е сі1у с1у І1е Гпув Меє Рбе Рго біцш Тук бек сбіп Гей Іїе Рго Аг4д 565 570 575

ТПув ІТеч Туг «2105 10 «2115 579 «212» РЕТ «213» Свинячий парвовірус «4005 10

Меє бек бій Авп Уа1і сій біп Нів Ап Рго І1е АБп Аїа Сб1у ТПпг сі 1 5 10 15

Тец бек Аза ТПг с1у АвБп сій бБег Іїе сіу сіу сіу с1у сШ1у шу щу 20 25 30 б1у Акуд сі1у Бек Іїе сіу Уаі сіу Уаії Бек ТПг сіу Бек Робе АвБп Авп

Зо 35 40 45 біп Тпг бій Рпе сіп Ту Гей сіу бі с1у Гец Уаі Агуд І1е ТПг Аїа 50 55 бо

Нів Аза бек Акуд Тецй І1е Нів Гец Авп Меє Рго бій Нів сі ТПкс Туг 65 70 75 80 пуб Агуд І1е Нів Уаії Гей АвБп бек бій бек біу Уаі Аї1а с1у сіп Меє 85 90 95

Уаї біп Авр Авр Аза Нів ТПг біп Меє Уаї ТіПг Рго Тгр бек Те Ше 100 105 110

Авр Аза Авп Аза Тгр бі1у Уаі Тер Рпе Авп Рго Аза Авр Тгр Ссіп Іей 115 120 125

І1е бек Авп Авп Мес ТПг осі чІ1е А5п Те Уаї бек Рпе сій сбіп сій 130 135 140

І1е Рбе Авп Уаі! Уаї Іецйп Гпув ТПг Іїе ТПг бій бек Аза ТПг бек Рго 145 150 155 160

Ркго ТПг пув І1е Туг АБп Авп Авр о Тецй ТПг Аза бек Гей Меє Уа1 Аї1а 165 170 175

Тец Авр ТПг Авп Авп о ТпПг Гей Рго Туг ТПг Рго Аїа Аза Рго Агд 5ег 180 185 190 бо сій ТЕ Гец б1у Рпе Тук Рго Ткр Гей Рго ТПг Ппув Рго ТПг сіп Туг 195 200 205

Акуд Тук Тук Пец бек Сув ТПг Агуд АвБп о Тец АБп о Рго Рго ТПг Тук ТЕПг 210 215 220 сіу біп бек біц сіп І1е ТПг Авр бек І1е сбіп ТПг с1у Гей Нів 5ег 225 230 235 240

Авр І1ї1е Меє Рре Туг ТПг І1їе біц АБп Азїа Уаї Рго Іїе Нів Іец Іец 245 250 255

Акуд ТЕ сб1у Авр біц Робе бек ТПг сбіу І1е Тук Нів Рпе Авр ТПг Гув 260 265 270

Рко Гец пуб Гей ТПг Нів бек Тгр біп ТПг Авп Агуд бБег Геи с1Уу ГІец 275 280 285

Ркго Рго пуб ІТец ІТецй ТПг біц Рго ТПг ТПпг бій с1у Авр біп Нів Рго 290 295 300 сі1у ТБг Гецп Рго Аїа Аза Ав5п ТПг Агуд Гпув с1у Тук Нів біп ТПг Тіс 305 310 315 320

Авп о Авп обект Туг ТПг бій Аза ТБг Аза І1е Агуд Рго Аїа сбіп Уаі1 0Щ1У 325 330 335

Тук Авп о ТПг Рго Тук Меє Авп Рпе сіц Туг Бек Авп о біу б1у Рго РІПе 340 345 350

Тецп ТП Рго Іїе Уаі Рго ТПпг Аза Авр ТПг біп Туг Авп Авр АвБр бій

Зо 355 360 365

Рго Ап біу Аїа І1е Агуд Робе ТПг Меє с1у Тук сбіп Нів с1іу сіп Гец 370 375 380

ТПг ТрПг бек бек біп бі тей б1іц Агуд Тук ТБг Робе АБп Рго біп 5ег 385 390 395 400

Тпув Сув б1у Агкуд Аїа Рго Гпув біп біп Рпе Авп сбіп сбіп бек Рго Іей 405 410 415

Ап оГей біп Авп ТЕГ АвБп о Авп о біу Тс Тецй Гей Рго Бек Авр Рго І1є 420 425 430 сі1у б1у Ппув ТПг Авп Меє Нів Рпе Меє Авп ТПг Гей Ап ТПг Туг с1У 435 440 445

Ркго Гей ТПг Аза ІТец АБп Авп ТБПг Аза Рго Уаі Рпе Рго Ап с1у сіп 450 455 460

Іїе Тгр Авр Гув бі Гей Авр ТПг Авр о Тецй Гуз Рго Агуд Гечп Нів Уаї 465 470 475 480

ТПгЕ АТа Ркго Рбпе Уаї Сув Ппув Авп Авп Рго Рго біу біп Гей РПе Уаї 485 490 495 пуб І1їе Аза Рго Авп Гей ТПг Авр Авр Рпе Ап Аза Авр бег Рго біп 500 505 510 біп Рго Агуд Іїе Іїе ТПг Тук Бек Авп Рпе Тер Тер пув с1у Тік Іей 60 515 520 525

ТПЕ Рпе ТПг Аїа пуб Меє Агуд бек бек Авп Меє Тгр АБп Рго Ше сіп 530 535 540 біп Нів ТПг ТПпс Тпг АТа бій АБп о ч1І1е с1у Ап Туг І1їе Рго ТПг АвБп 545 550 555 560

І1е сі1у с1у І1е Гпув Меє Рбе Рго біцш Тук бек сбіп Гей Іїе Рго Аг4д 565 570 575

ТПув ІТеч Туг «2105 11 «2115 579 «212» РЕТ «213» Свинячий парвовірус «4005 11

Меє бек бій Авп Уа1і сій біп Нів Ап Рго І1е АБп Аїа Сб1у ТПпг сі 1 2 10 15

Тец век Аїа ТПг с1у АвБп бій бек сіу сіу сіу сіу сіу сі1у с1у 1У 20 25 30 с1у Акуд б1у Аїа сіу с1у Уаі сіу Маї бек ТПкг с1іу бек Робе АБп Авп біп ТПпг бій Рпе сіп Ту Гей сіу сбіш с1і1у Гей Уаі Агд І1е ТПг А1а бо

Зо

Нів Аїа бек Агд Гец Ії1е Нів Гей Авп Месє Рго біц Ні бій ТпПг Туг 65 70 75 80 пуб Агуд І1е Нів Уаі Гей Авп бек бі Бек сіу Уаі Аїа сі1у сіп Меє

З5 85 90 95

Уаї біп Авр Авр Аза Нів ТПг біп Меє Уаї ТіПг Рго Тгр бек Те Ше 100 105 110 40 Авр Аза А5п Аза Тгр сіу Маії Тер Рпе Авп Рго А1а Авр Тер сіп Іецй 115 120 125

І1е бек Авп Авп Месє ТПг сі чІ1е Авзп Тей Уаї бек Рпе сій сіп А1а 130 135 140 45

І1е Рбе Авп Уаі! Уаї Іец пуб ТПг І1е ТПпг бій бек Аза ТПг бек Рго 145 150 155 160

Ркго ТПг пув І1е Туг АБп Авп Авр о Тецй ТПг Аза бек Гей Меє Уа1 Аї1а 50 165 170 175

Тец Авр ТПг Авп Авп о ТпПг Гей Рго Туг ТПг Рго Аза Аза Рго Агд 5ег 180 185 190 55 сій ТЕ Гец б1у Рпе Тук Рго Ткр Гей Рго ТПг Ппув Рго ТПг сіп Туг 195 200 205

Акуд Тук Тук Гец бек Сув І1їе Агд АвБп Тец АБп о Рго Рго ТПг Тук ТЕПг 210 215 220 60 сбі1у біп бек бі сбіп Іїе ТПг Авр бек Іїе сбіп ТПг сіу Гец Нів 5ег

225 230 235 240

Авр І1ї1е Меє Рбе Туг ТПг Іїе біц АБп Азїа Уаї Рго І1їе Нів Іец Іей 245 250 255

Акуд ТЕ сб1у Авр біц Робе бек ТПг сбіу І1е Тук Нів Рпе Авр ТПг Гув 260 265 270

Рко Гец пуб Гей ТПг Нів бек Тгр біп ТПг Авп Агуд бег Гец Сс1Уу Іей 275 280 285

Ркго Рго пуб ІТец ІТецй ТПг біц Рго ТПг ТПпг бій с1у Авр біп Нів Рго 290 295 300 сіу ТБг Гецп Рго Аїа Аза Ап ТПг Агуд Гуз с1у Тук Нів біп ТП Тбг 305 310 315 320

Авп о Авп обект Туг ТПг бій Аза ТБг Аза І1е Агуд Рго Аїа сбіп Уаі1 0Щ1У 325 330 335

Тук Авп о ТПг Рго Тук Меє Авп Рпе сій Тугк Бек Авп б1іу с1у Ркго Ре 340 345 350

Тецп ТП Рго Іїе Уаі Рго ТПпг Аза Авр ТПг біп Туг Авп Авр АвБр бій 355 3З6о 365

Рго Ап біу Аїа І1е Агуд Робе ТПг Меє Авр Тукг сіп Нів сіу сіп Іей 370 375 380

Зо ТПг ТрПг бек бек біп бі тей б1іц Агуд Тук ТБг Робе АБп Рго біп 5ег 385 390 395 400

Тпув Сув б1у Агкуд Аїа Рго Ппув біп біп Робе Авп о біп біп бек Рго Іецй 405 410 415

З5

Ап оГей біп Авп ТЕГ АвБп о Авп о біу Тс Тецй Гей Рго Бек Авр Рго І1є 420 425 430 сі1у б1у Ппув ТПг Ап Меє Нів Ріе Месє Авп о ТПг Гей АБп ТПг Тух Щ1У 435 440 445

Ркго Гей ТПг Аза ІТец АБп Авп ТБПг Аза Рго Уаі Рпе Рго Ап с1у сіп 450 455 460

Іїе Тгр Авр Гув біц Гей Ар ТБг Авр о Тецй Гуз Рго Агуд Ге Нів Уаї 465 470 475 480

ТПгЕ АТа Ркго Рбпе Уаї Сув Ппув Авп Авп Рго Рго біу біп Гей РПе Уаї 485 490 495 пуб І1їе Аза Рго Авп Гей ТПг Авр Авр Рпе Ап Аза Авр бег Рго біп 500 505 510 біп Рго Агуд Іїе Іїе ТПг Тук Бек Авп Рпе Тер Тер пув с1у Тік Іей 515 520 525

ТПЕ Рпе ТПг Аїа пуб Меє Агуд бек бек Авп Меє Тгр АБп Рго Ше сіп 530 535 540 бо сіп Нів ТПг ТрПг ТПг АТа сій Авп І1е сб1у АвБп Туг І1е Рго ТПг Авп 545 550 555 560

І1е сі1у бі1у І1е Акуд Меє Рбе Рго біцш Тук бек сбіп Гей Іїе Рго Аг4д 565 570 575 пув Іеч Туг «2105 12 «2115 579 «212» РЕТ «213» Свинячий парвовірус «4005 12

Меє бек бій Авп Уаі1і сій сбіп Нібв АвБп о Рго І1е АБп Аїа с1у ТПг с1іц 1 5 10 15

Тец век Аїа ТПг с1у АвБп бій бек сіу сіу сіу сіу сіу сі1у с1у 1У сб1у Акуд с1у Аїа сіу сіу Уа1 сіу Уаї Бек ТПг сіу Бек Робе АвБп Авп 20 35 40 45 біп ТПпг бій Рпе сіп Ту Гей сіу сбіш с1і1у Гей Уаі Агд І1е ТПг А1а 50 55 бо 25 Нів Аза бек Акуд Тецй І1е Нів Гец Авп Меє Рго бій Нів сі ТПкс Туг 65 70 75 80 пуб Агуд І1е Нів Уаі Гей Авп бек бі Бек сіу Уаі Аїа сі1у сіп Меє 85 90 95

Зо

Уаї біп Авр Авр Аза Нів ТПг біп Меє Уаї ТіПг Рго Тгр бек Те Ше 100 105 110

Авр Аза Авп Аза Тгр бі1у Уаії Тер Робе АБп Рго Аза Авр Тгр сіп Іец

З5 115 120 125

І1е бек Авп Авп Мес ТПг осі чІ1е А5п Те Уаї бек Рпе сій сбіп сій 130 135 140

І1їе Рпе Авп Уаї Уаї Гей Ппув ТПг І1їе ТБг сі Бек Аїа ТПг бек Рго 145 150 155 160

Ркго ТПг пув І1е Туг АБп Авп Авр о Тецй ТПг Аза бек Гей Меє Уа1 Аї1а 165 170 175

Тец Авр ТПг Авп Авп о ТпПг Гей Рго Туг ТПг Рго Аза Аза Рго Агд 5ег 180 185 190 біц Тс Гей сіу Рпе Тук Рго Тер Гей Рго ТПг Ппув Рго ТПг біп Туг 195 200 205

Акуд Тук Тук Пец бек Сув ТПг Агд АвБп о Тец АБп о Рго Рго ТПг Тук ТЕПг 210 215 220 сіу біп бек біц сіп І1е ТПг Авр бек І1е сбіп ТПг с1у Гей Нів 5ег 225 230 235 240

Авр І1ї1е Меє Рре Туг ТПг Іїе біц АБп Азїа Уаї Рго Іїе Нів Іец Іец 245 250 255 60

Акуд ТЕ сб1у Авр біц Робе бек ТПг сбіу І1е Тук Нів Рпе Авр ТПг Гув

260 265 270

Рко Гец пуб Гей ТПг Нів бек Тгр біп ТПг Авп Агуд бБег Геи с1Уу ГІец 275 280 285

Ркго Рго пуб ІТец ІТецй ТПг біц Рго ТПг ТПпг бій с1у Авр біп Нів Рго 290 295 300 б1у ТПпг Гей Рго Аїа Аза АБп ТПг Агуд пув с1у Тук Нів біп ТПг І1е 305 310 315 320

Авп о Авп обект Туг ТПг бій Аза ТБг Аза І1е Агуд Рго Аїа сбіп Уаі1 0Щ1У 325 330 335

ТУк Авп оТПг Рго Тук Меє Авп Рпе бій Тук бек АвБп о с1у с1у Рго Ріе 340 345 350

Тецп ТП Рго Іїе Уаі Рго ТПпг Аза Авр ТПг біп Туг Авп Авр АвБр бій 355 3З6о 365

Рго Ап біу Аїа І1е Агуд Робе ТПг Меє с1у Тук сбіп Нів с1іу сіп Гец 370 375 380

ТПЕ ТПкг бек бек біп бій Гей сій Агуд Туг ТБг Роре АБп Рго біп 5ег 385 390 395 400

Тпув Сув б1у Агкуд Аїа Рго Гпув біп біп Рпе Авп сбіп сбіп бек Рго Іей 405 410 415

Зо Авп о Гей сбіп Авп о ТПг АвБп АвБп обіу Тпг Темп Гей Рго бек Авр Рго І1е 420 425 430 сі1у б1у Ппув ТПг Авп Меє Нів Рпе Меє Авп ТПг Гей Ап ТПг Туг с1У 435 440 445

З5

Ркго Гей ТПг Аза ІТец АБп Авп ТБПг Аза Рго Уаі Рпе Рго Ап с1у сіп 450 455 460

Іїе Тгр Авр Гув бі Гей Авр ТПг Авр Тецй Гуз Рго Агуд Гечп Нів Уаї 465 470 475 480

ТПгЕ АТа Ркго Рбпе Уаї Сув Ппув Авп Авп Рго Рго біу біп Гей РПе Уаї 485 490 495 пуб І1їе Аза Рго Авп Гей ТПг Авр Авр Рпе Ап Аза Авр бек Рго сіп 500 505 510 біп Рго Агуд Іїе Іїе ТПг Тук Бек Авп Рпе Тер Тер пув с1у Тік Іей 515 520 525

ТПЕ Рпе ТПг Аїа пуб Меє Агуд бек бек Авп Меє Тгр Ап Рго І1е сіп 530 535 540 сіп Нів ТПг ТрПг ТПг АТа сій Авп І1е сб1у АвБп Туг І1е Рго ТПг Авп 545 550 555 560

І1е сі1у с1і1у І1е Гпув Меє Рбе Рго біц Тук Бек сбіп Гей І1е Рго Агд 565 570 575 60

ТГув Гечи Туг

«2105 13 «2115 579 «212» РЕТ «213» Свинячий парвовірус «4005 13

Меє бек бій Авп Уа1і сій біп Нів Ап Рго І1е АБп Аїа Сб1у ТПпг сі 1 5 10 15

Тец век Аїа ТПг с1у АвБп бій бек сіу сіу сіу сіу сіу сі1у с1у 1У 20 25 30 сб1у Акуд с1у Аїа сіу сіу УМаії сіу Уаії Бек ТПг сіу Бек Робе Авп Авп 35 40 45 біп ТПпг бій Рпе сіп Ту Гей сіу сбіш с1і1у Гей Уаі Агд І1е ТПг А1а 50 55 бо

Нів Аза бек Акуд Гей І1е Нів Гей Ап Меє Рго сі Нів сій ТПг Туг 65 70 75 80 пуб Агуд І1е Нів Уаі Гей Авп бек бі Бек сіу Уаі Аїа сі1у сіп Меє 85 90 95

Уаї біп Авр Авр Аза Нів ТПг біп Меє Уаї ТіПг Рго Тгр Бек Іец І1е 100 105 110

Авр Аза Авп Аза Тгр бі1у Уаії Тер Робе АБп Рго Аза Авр Тгр сіп Іец

Зо 115 120 125

І1е Бек Авп Авп Мес ТПг осі чІ1е Ав5п Гей Уаії бек Рбе сій сіп сіц 130 135 140

І1їе Рпе Авп Уаї Уаї Гей Ппув ТПг І1їе ТБг сі Бек Аїа ТПг бек Рго 145 150 155 160

Рко ТПг пув І1е Туг АБп Авп Авр о Тецй ТПг Аїа бек Ггец Меєс Уаї А1а 165 170 175

Тец Авр ТПг Авп Авп о ТпПг Гей Рго Туг ТПг Рго Аза Аза Рго Агд 5ег 180 185 190 біц Тс Гей с1іу Рпе Тук Рго Тер Гей Рго ТПг Гув Рго ТПг біп Туг 195 200 205

Акуд Тук Тук Пец бек Сув ТПг Агд АвБп о Тец АБп о Рго Рго ТПг Тук ТЕПг 210 215 220 сіу біп бек біц сбіп І1е ТБг Авр бек Іїе сбіп ТПг с1у Гец Нів 5ег 225 230 235 240

Авр І1ї1е Меє Рре Туг ТПг Іїе біц АБп Азїа Уаї Рго Іїе Нів Іец Іец 245 250 255

Акуд ТЕ сб1у Авр біц Рбе бек ТПг с1іу Іїе Тук Нів Рібе Авр ТПг Гу 260 265 270

Рко Гец пуб Гей ТПг Нів бек Тгр біп ТПг Авп Агуд бБег Геи с1Уу ГІец 60 275 280 285

Ркго Рго пуб ІТец ІТец ТПг бій Рго ТПг ТПпг бій с1у Авр біп Нів Рго 290 295 300 б1у ТПпг Гей Рго Аїа Аза АБп ТПг Агуд пув с1у Тук Нів біп ТПг І1е 305 310 315 320

Авп о Авп обект Туг ТПг біц Аза ТБг Аза І1е Агуд Рго Аїа сбіп Уаі1 0Щ1У 325 330 335

ТУк Авп оТПг Рго Тук Меє Авп Рпе бій Тук бек АвБп о с1у с1у Рго Ріе 340 345 350

Рпе Іїе Рго І1е УМаії Рго ТПг Аза АБр ТПг біп Туг Авп Авр Авр с1ц 355 3З6о 365

Рго Авп біу біу І1е Агд Робе ТПг Меє с1у Тук сбіп Нів с1іу сіп Гец 370 375 380

І1е ТПг бек бек біп біц Уаії біц Агд Тук ТПг Рпе Авп Рго сбіп Агд 385 390 395 400

Тпув Сув б1у Акуд с1у Аїа Гпув біп біп Рпе Авп сбіп сбіп бек Рго Іей 405 410 415

АвБп отІ1е сбіп Авп о ТПг АвБп АБп о біу ТПг І1е Гей Рго бек Авр Рго І1е 420 425 430 сі1у б1у Ппув ТПг Авп Меє Нів Рпе Меє Авп о ТПг Рго Ап ТПг Туг с1У 435 440 445

Зо

Ркго Гей ТПг Аза Уаії АБп АвБп ТБПг Аза Рго Уаі Рпе Рго Ап с1у сіп 450 455 460

І1е Тгр Авр Гу біц Тец Авр ТПг Авр Гей пув Рго Агуд Гей Нів Уаї 465 470 475 480

ТПгЕ АТа Ркго Рбпе Уаї Сув Ппув Авп Авп Рго Рго біу біп Гей РПе Уаї 485 490 495 пув І1їе Аїа Рго Ап Гей ТПг Авр Авр Рре АвБп Аза Авр бек Рго сіп 500 505 510 біп Рго Агуд Іїе Іїе ТПг Тук Бек Авп Рпе Тер Тер пув с1у Тік Іей 515 520 525

ТПЕ Рпе ТПг Аїа пуб Меє Агуд бек бек Авп Меє Тгр АБп Рго Ше сіп 530 535 540 біп Нів ТПг ТПпс Тпг АТа бій АБп о ч1І1е с1у Ап Туг І1їе Рго ТПг АвБп 545 550 555 560

І1е сі1у с1у І1е Гпув Меє Рбе Рго біцш Тук бек сбіп Гей Іїе Рго Аг4д 565 570 575 пув Іеч Туг «2105 14 «2115 579 60 «2125 РЕВТ «213» Свинячий парвовірус

«4005 14

Меє бек бій Авп Уа1і сій біп Нів Ап Рго І1е АБп Аїа Сб1у ТПпг сі 1 5 10 15

Темп бек Аїа ТПг с1у Авп сій бек сбіу с1у с1у сіу С1у с1у б1у .Щ1У 20 25 30 сб1у Акуд с1у Аїа сіу сіу Уаії сіу Уаії Бек ТПг сіу Бек Робе АвБп Авп 35 40 45 біп ТПпг бій Рпе сіп Ту Гей сіу сбіш с1і1у Гей Уаі Агд І1е ТПг А1а 50 55 бо

Нів Аїа бек Агд Гец Ії1е Нів Гей Авп Месє Рго біц Ні бій ТпПг Туг 65 70 75 80 пуб Агуд І1е Нів Уаі Гей Авп бек бі Бек сіу Уаі Аїа сі1у сіп Меє 85 90 95

Уаї біп Авр Авр Аза Нів ТіПг біп Месє Уаї ТПг Рго Тгр бек Ге І1е 100 105 110

Авр Аза Авп Аза Тгр бі1у Уаії Тер Робе АБп Рго Аза Авр Тгр сіп Іец 115 120 125

І1е бек Авп Авп Месє ТПг сі чІ1е Авзп Тей Уаї бек Рпе сій сіп А1а 130 135 140

І1е Рбе Авп Уаі! Уаї Іец пуб ТПг І1е ТПпг бій бек Аза ТПг бек Рго

Зо 145 150 155 160

Ркго ТПг пув І1е Туг АБп Авп Авр о Тецй ТПг Аза бек Гей Меє Уа1 Аї1а 165 170 175

Тем Нів ТПг Авп о Авп ТБк оГецй Рго Туг ТПг Рго Аза Аза Рго Агд 5ег 180 185 190 біц Тс Гей сіу Рпе Тук Рго Тер Гей Рго ТПг Ппув Рго ТПг біп Туг 195 200 205

Акуд Тук Тук Пец бек Сув І1е Агд АвБп Тец АБп Рго Рго ТПг Тук ТЕПг 210 215 220 сбі1у біп бек бі сбіп Іїе ТПг Авр бек Іїе сбіп ТПг сіу Гец Нів 5ег 225 230 235 240

Авр І1ї1е Меє Рре Туг ТПг Іїе біц АБп Азїа Уаї Рго Іїе Нів Іец Іец 245 250 255

Агуд Тпг с1у Авр бій Рре бек ТПг с1іу І1їе Туг Нів Рре Авр ТПг Тув 260 265 270

Рко Гец пуб Гей ТПг Нів бек Тгр біп ТПг Авп Агуд бБег Геи с1Уу ГІец 275 280 285

Рко Рго пуб ІТец ІТецй ТПг біц Рго ТПг ТПг бій с1у Авр біп Нів Рго 290 295 300 бо сіу ТБг Гецп Рго Аїа Аза Ап ТПг Агуд Ппувз с1у Туг Нів біп ТПгЕ Пе 305 310 315 320

Авп о Авп обект Туг ТПг бій Аза ТБПг Аза І1е Агуд Рго Аза сбіп Уаі с01У 325 330 335

ТУк Авп оТПг Рго Тук Меє Авп Рпе бій Тук бек АвБп о с1у с1у Рго Ріе 340 345 350

Тецп ТП Рго Іїе Уаі Рго ТПпг Аза Авр ТПг біп Туг АвБп Авр АБр с1и 355 3З6о 365

Рго Ап біу Аїа І1е Агуд Робе ТПг Меє АвБр Тук сіп Нів с1у Нів ГІец 370 375 380

ТПЕ ТпПкг Бек бек біп бій Гей сбіц Агуд Туг ТПг Рпе Авп Рго біп 5ег 385 390 395 400

Тпув Сув б1у Агкуд ТПг Рго Гпув біп біп Рпе Авп сбіп сбіп бек Рго Іей 405 410 415

Авп о Гей сбіп Авп о ТПг АвБп АвБп обіу Тпг о Гецй Гей Рго бек Авр Рго Те 420 425 430 сі1у б1у Ппув ТПг Авп Меє Нів Рпе Меє Авп ТПг Гей Ап ТПг Туг с1У 435 440 445

Ркго Гей ТПг Аїа ІТец АБп о Авп ТБПг АзТа Рго Уаі1 Рпе Рго Авп сіу сіп 450 455 460

І1е Тгр Авр Гу біц Тец Авр ТПг Авр Гей пув Рго Агуд Гей Нів Уаї

Зо 465 470 475 480

ТПгЕ АТа Ркго Рібпе Уаї Сув Гув Авп АвБп Рго Рго сіу біп Гей Ріе Уаї 485 490 495 пув І1їе Аїа Рго Ап Гей ТПг Авр Авр Рре АвБп Аза Авр бек Рго сіп 500 505 510 біп Рго Агуд Іїе Іїе ТПг Тук бек Авп Робе Тер Тгр Гув б1у ТПг Іецй 515 520 525

ТПЕ Рпе ТПг Аїа пуб Меє Агуд бек бек Авп Меє Тгр АБп Рго Ше сіп 530 535 540 біп Нів ТПг ТПпс ТпПг АТа бій Авп о ч11е с1у Ппув Тукг І1ї1е Рго ТЕГ Авп 545 550 555 560

І1е сі1у с1у І1е Гпув Меє Рбе Рго біцш Тук бек сбіп Гей Іїе Рго Аг4д 565 570 575 пув Іеч Туг «2105 15 «2115 579 «2125 РЕВТ «213» Свинячий парвовірус «4005 15

Меє бек бій Авп Уа1і сій біп Нів Ап Рго І1е АБп Аїа Сб1у ТПпг сі 1 5 10 15 60

Тец бек Аза ТПг с1у АвБп сій Бек сіу бі1у б1у с1у с1у сШ1у ш1у щу

20 25 30 сб1у Акуд с1у Аїа сіу сіу Уаії сіу Уаії Бек ТПг сіу Бек Робе АвБп Авп 35 40 45 біп Тпг бій Рпе сіп Тук Гей сіу сіц сі1у Іец Уаі Агуд І1е ТПг Аїа 50 55 бо

Нів Аїа бек Агд Гец Ії1е Нів Гей Авп Месє Рго біц Ні бій ТпПг Туг 65 70 75 80 пуб Агуд І1е Нів Уаі Гей Ап бек біц бек біу Уаі Аї1а с1у сіп Меє 85 90 95

Уаї біп Авр Авр Аза Нів ТіПг біп Месє Уаї ТПг Рго Тгр бек Ге І1е 100 105 110

Авр Аза Авп Аза Тгр бі1у Маії Тер Рпе Авп Рго Аза Авр Тгр Ссіп Іей 115 120 125

І1е бек Авп Авп Мес ТПг осі чІ1е А5п Те Уаї бек Рпе сій сбіп сій 130 135 140

І1е Рбе Авп Уаі! Уаї Іецйп Ппув ТПг І1е ТПпг бій бек Аза ТПг бек Рго 145 150 155 160

Ркго ТПг пув І1е Туг АБп Авп Авр о Тецй ТПг Аза бек Гей Меє Уа1 Аї1а 165 170 175

Зо Тем Авр ТПг Авп о Авп о ТБг Гей Рго Туг ТПг Рго Аза Аза Рго Агд 5ег 180 185 190 біц Тс Гей сіу Рпе Тук Рго Тер Гей Рго ТПг Ппув Рго ТПг біп Туг 195 200 205

З5

Акуд Тук Тук Пец бек Сув ТПг Агд АвБп о Тец АБп о Рго Рго ТПг Тук ТЕПг 210 215 220 сбі1у біп бек бі сбіп Іїе ТПг Авр бек Іїе сбіп ТПг сіу Гец Нів 5ег 225 230 235 240

Авр І1ї1е Меє Рре Туг ТПг Іїе біц АБп Азїа Уаї Рго Іїе Нів Іец Іец 245 250 255

Агуд Тпг с1у Авр бій Рре бек ТПг с1іу І1їе Туг Нів Рре Авр ТПг Тув 260 265 270

Рко Гец пуб Гей ТПг Нів бек Тгр біп ТПг Авп Агуд бБег Геи с1Уу ГІец 275 280 285

Ркго Рго пуб ІТец ІТецй ТПг біц Рго ТПг ТПпг бій с1у Авр біп Нів Рго 290 295 300 б1у ТПпг Гей Рго Аїа Аза АБп ТПг Агуд пув с1у Тук Нів біп ТПг І1е 305 310 315 320

Авп о Авп обект Туг ТПг бій Аза ТБг Аза І1е Агуд Рго Аїа сбіп Уаі1 0Щ1У 325 330 335 бо ТУк Авп оТПг Рго Тук Меє Авп Рпе бій Тук бек АвБп о с1у с1у Рго Ріе 340 345 350

Тецп ТП Рго Іїе Уаі Рго ТПпг Аза Авр ТПг біп Туг Авп Авр АвБр бій 355 3З6о 365

Рго АвБп сіу Аїа І1е Агуд Рпе ТПг Меє сіу Тук сбіп Нів с1іу сбіп Іецй 370 375 380

ТПЕ ТПкг бек бек біп бій Гей сій Агуд Туг ТБг Роре АБп Рго біп 5ег 385 390 395 400

Тпув Сув б1у Агкуд Аїа Рго Гпув біп біп Рпе Авп сбіп сбіп бек Рго Іей 405 410 415

Ап оГей біп Авп ТЕГ АвБп о Авп о біу Тс Тецй Гей Рго Бек Авр Рго І1є 420 425 430 сі1у б1у Ппув ТПг Авп Меє Нів Рпе Ме бек ТПг Гей Авп ТПг Туг 1У 435 440 445

Рго пей ТПг Аїа Гецй Авп АБп о ТПг Аза Ркго Уаї Рре Рго Авп с1у сіп 450 455 460

І1е Тгр Авр Гу біц Тец Авр ТПг Авр Гей пув Рго Агуд Гей Нів Уаї 465 470 475 480

ТПгЕ АТа Ркго Рбпе Уаї Сув Ппув Авп Авп Рго Рго біу біп Гей РПе Уаї 485 490 495 пуб І1їе Аза Рго Авп Гей ТПг Авр Авр Рпе Ап Аза Авр бег Рго біп

Зо 500 505 510 біп Рго Агуд Іїе Іїе ТПг Тук Бек Авп Рпе Тер Тер пув с1у Тік Іей 515 520 525

ТПЕ Рпе ТпПг Аїа Гуз Меє Агуд бек Бек Авп Меє Тер АБп Рго І1е сіп 530 535 540 біп Нів ТПг ТпПс Тпг АТа бій АБп о ч1І1е с1у Ап Туг І1їе Рго ТПг АвБп 545 550 555 560

І1е сі1у с1у І1е Гпув Меє Рбе Рго біцш Тук бек сбіп Гей Іїе Рго Аг4д 565 570 575

ТГув Гечи Туг «2105 16 «2115 579 «212» РЕТ «213» Свинячий парвовірус «4005 16

Меє бек бій Авп Уа1і сій біп Нів Ап Рго І1е АБп Аїа Сб1у ТПпг сі 1 5 10 15

Темп бек Аїа ТПг с1у Авп сій бек сбіу с1у с1у сіу С1у с1у б1у .Щ1У 20 25 30 сб1у Акуд с1у Аїа сіу сіу Уаії сіу Уаії Бек ТПг сіу Бек Робе АвБп Авп 35 40 45 60 біп ТПпг бій Рпе сіп Ту Гей сіу сбіш с1і1у Гей Уаі Агд І1е ТПг А1а

50 55 бо

Нів Аїа бек Агд Гец Ії1е Нів Гей Авп Месє Рго біц Ні бій ТпПг Туг 65 70 75 80 пуб Агуд І1е Нів Уаі Гей Авп бек бі Бек сіу Уаі Аїа сі1у сіп Меє 85 90 95

Уаї біп Авр Авр Аза Нів ТПг біп Меє Уаї ТіПг Рго Тгр бек Те Ше 100 105 110

Авр Аза Авп Аза Тгр бі1у Уаії Тер Робе АБп Рго Аза Авр Тгр сіп Іец 115 120 125

І1е бек Авп Авп Мес ТПг осі чІ1е А5п Те Уаї бек Рпе сій сбіп сій 130 135 140

І1е Рбе Авп Уаі! Уаї Іец пуб ТПг І1е ТПпг бій бек Аза ТПг бек Рго 145 150 155 160

Ркго ТПг пув І1е Туг АБп Авп Авр о Тецй ТПг Аза бек Гей Меє Уа1 Аї1а 165 170 175

Тец Авр ТПг Авп Авп о ТпПг Гей Рго Туг ТПг Рго Аїа Аза Рго Агд 5ег 180 185 190 біц Тс Гей сіу Рпе Тук Рго Тер Гей Рго ТПг Ппув Рго ТПг біп Туг 195 200 205

Зо Агдуд Тук Тук Тей бек Сув ТПг Агуд Ап Гей АвБп о Рго Рго ТПг Тук Тіг 210 215 220 сбі1у біп бек бі сбіп Іїе ТПг Авр бек Іїе сбіп ТПг сіу Гец Нів 5ег 225 230 235 240

З5

Авр І1ї1е Меє Рбе Туг ТПг Іїе біц АБп Азїа Уа1 Рго Іїе Нів Іец Іей 245 250 255

Акуд ТЕ сб1у Авр біц Робе бек ТПг сбіу І1е Тук Нів Рпе Авр ТПг Гув 260 265 270

Рко Гец пуб Гей ТПг Нів бек Тгр біп ТПг Ап Агуд бег Гец Сс1у Іей 275 280 285

Рго Рго Пув Гей Гей ТПг сі Рго ТПг ТБг бі б1у Авр сіп Нів Рго 290 295 300 бі1у ТПпг Гей Рго Аїа Аза АБп о ТПг Агуд пув біу Тук Нів біп ТПпг ТПпс 305 310 315 320

Авп о Авп обект Туг ТПг бій Аза ТБг Аза І1е Агуд Рго Аїа сбіп Уаі1 0Щ1У 325 330 335

Тук Авп о ТПг Рго Тук Месє Авп РПе бій Тугк Бек Авп сб1іу с1у Ркго Ре 340 345 350

Тецп ТП Рго Іїе Уаі Рго ТПпг Аза Авр ТПг біп Туг Авп Авр АвБр бій 355 3З6о 365 бо Рго АвБп сбіу Аїа І1е Агуд Рпе ТПг Меєс с1і1у Тук сіп Нів сіу сіп Гей 370 375 380

ТПЕ ТПкг бек бек біп бій Гей сій Агуд Туг ТБг Роре АБп Рго біп 5ег 385 390 395 400 ув Сув б1у Агд Аїа Рго Пув біп біп Рпбе Авп о сіп біп бек Рго Гей 405 410 415

Ап оГей біп Авп ТЕГ АвБп о Авп о біу Тс Тецй Гей Рго Бек Авр Рго І1є 420 425 430 сі1у б1у Ппув ТПг Авп Меє Нів Рпе Меє Авп ТПг Гей Ап ТПг Туг с1У 435 440 445

Ркго Гей ТПг Аза ІТец АБп Авп ТБПг Аза Рго Уаі Рпе Рго Ап с1у сіп 450 455 460

І1е Тгр Авр Гу біц Тец Авр ТПг Авр Гей пув Рго Агуд Гей Нів Уаї 465 470 475 480

ТПгЕ АТа Рго Рібпе Ма1! Сув пуб АвБп о Авп Рго Рго біу сіп Гей Рпе Уаї1! 485 490 495 пуб І1їе Аза Рго Авп Гей ТПг Авр Авр Рпе Ап Аза Авр бег Рго біп 500 505 510 біп Рго Агуд Іїе Іїе ТПг Тук Бек Авп Рпе Тер Тер пув с1у Тік Іей з1і5 520 525

ТПЕ Рпе ТПг Аїа пуб Меє Агуд бек бек Авп Меє Тгр АБп Рго Ше сіп з3О0 з35 540 біп Нів ТПг ТПпс Тпг АТа бій АБп о ч1І1е с1у Ап Туг І1їе Рго ТПг АвБп 545 зо 55 560

Іїе сі1у с1у І1їе пу Мес Рпе Рго сій Туг бек біп Гей І1їе Рго Агд 565 570 575

ТГув Гечи Туг

Claims (16)

ФОРМУЛА ВИНАХОДУ

1. Вірусний білок 2 (УР2) свинячого парвовірусу (РРУ), який має: в амінокислотній позиції 25 ізолейциновий залишок, та в амінокислотній позиції 36 сериновий залишок, та в амінокислотній позиції 37 ізолейциновий залишок, та в амінокислотній позиції 228 глутаміновокислотний залишок або глутаматний залишок, та в амінокислотній позиції 414 сериновий залишок, та в амінокислотній позиції 419 глутаміновий залишок, та в амінокислотній позиції 436 треоніновий залишок, причому нумерація амінокислотних позицій стосується амінокислотної послідовності дикого типу РРМ МР, показаної в 5ЕО ІЮ МО: 1; та який Ї) складається з амінокислотної послідовності, яка має принаймні 95 95 ідентичності послідовності з амінокислотною послідовністю 5ЗЕО ІЮО МО: 2, або І) кодується нуклеотидною послідовністю, що кодує амінокислотну послідовність, яка має принаймні 95 95 ідентичності послідовності з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮО МО: 2.

2. |Імуногенна композиція, що включає РРМ МРА за п. 1.

З. Імуногенна композиція за п. 2, яка відрізняється тим, що імуногенна композиція також включає фармацевтично прийнятний носій, причому фармацевтично прийнятним носієм є карбомер. бо

4. Імуногенна композиція за п. 2 або 3, яка відрізняється тим, що імуногенна композиція є вакциною.

5. Полінуклеотид, що включає послідовність, яка кодує РРМУ МР за п. 1.

б. Вектор, що включає полінуклеотид за п. 5, який відрізняється тим, що вектор є бакуловірусом.

7. Клітина, що включає полінуклеотид за п. 5 або вектор за п. 6.

8. Вірусоподібна частинка, що включає РРМУ МР за п. 1.

9. Спосіб одержання РРМ МР за п. 1, що включає трансфекцію клітини вектором за п. 6.

10. Спосіб імунізації суб'єкта, що включає введення такому суб'єктові імуногенної композиції за будь-яким з пп. 2-4, причому суб'єктом є свинка або свиноматка.

11. Спосіб лікування та/або запобігання клінічним ознакам, викликаним інфекцією РРМ, у суб'єкта, який цього потребує, причому спосіб включає введення суб'єктові терапевтично ефективної кількості імуногенної композиції за будь-яким з пп. 2-4, а суб'єктом є свинка або свиноматка.

12. Спосіб зниження репродуктивної недостатності в суб'єкта в порівнянні із суб'єктом неімунізованої контрольної групи того ж виду, причому спосіб включає введення суб'єктові терапевтично ефективної кількості імуногенної композиції за будь-яким з пп. 2-4, а суб'єктом є свинка або свиноматка.

13. Спосіб зниження смертності ембріона й плода в суб'єкта в порівнянні із суб'єктом неімунізованої контрольної групи того ж виду, причому спосіб включає введення суб'єктові терапевтично ефективної кількості імуногенної композиції за будь-яким з пп. 2-4, а суб'єктом є свинка або свиноматка.

14. Спосіб за будь-яким з пп. 10-13, який відрізняється тим, що імуногенна композиція є безпечною для свинок або свиноматок після 30 днів вагітності, переважно після 40 днів вагітності.

15. Спосіб за будь-яким з пп. 10-14, який відрізняється тим, що імуногенна композиція захищає від гомологічного та/або гетерологічного провокаційного зараження.

16. Спосіб за будь-яким з пп. 10-15, який відрізняється тим, що в результаті виконання вищезгаданого способу забезпечується поліпшення параметра ефективності, вибраного із групи, до якої належать: знижена перехідна лейкопенія й репродуктивна недостатність, що характеризуються інфікуванням і загибеллю ембріона та/(або плода, або їх комбінації, у Зо порівнянні із суб'єктом неімунізованої контрольної групи того ж виду, причому суб'єктом є свинка або свиноматка.