[go: up one dir, main page]

UA126813C2 - Моноклональний кон’югат антитіло-лікарський засіб до bcma - Google Patents

Моноклональний кон’югат антитіло-лікарський засіб до bcma Download PDF

Info

Publication number
UA126813C2
UA126813C2 UAA202000974A UAA202000974A UA126813C2 UA 126813 C2 UA126813 C2 UA 126813C2 UA A202000974 A UAA202000974 A UA A202000974A UA A202000974 A UAA202000974 A UA A202000974A UA 126813 C2 UA126813 C2 UA 126813C2
Authority
UA
Ukraine
Prior art keywords
antibody
amino acid
multiple myeloma
aga
acid sequence
Prior art date
Application number
UAA202000974A
Other languages
English (en)
Inventor
Кріста Кіннір
Криста КИННИР
Ріна Варкі
Рина ВАРКИ
Сяодун СЯО
Елейн М. Герт
Элейн М. Герт
Дейвід Тайс
Дэйвид Тайс
Original Assignee
Медімм'Юн, Ллк
Медиммьюн, Ллк
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Медімм'Юн, Ллк, Медиммьюн, Ллк filed Critical Медімм'Юн, Ллк
Publication of UA126813C2 publication Critical patent/UA126813C2/uk

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A61K31/20—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having a carboxyl group bound to a chain of seven or more carbon atoms, e.g. stearic, palmitic, arachidic acids
    • A61K31/202—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having a carboxyl group bound to a chain of seven or more carbon atoms, e.g. stearic, palmitic, arachidic acids having three or more double bonds, e.g. linolenic
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
    • A61K31/4738—Quinolines; Isoquinolines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A61K31/4741—Quinolines; Isoquinolines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems condensed with ring systems having oxygen as a ring hetero atom, e.g. tubocuraran derivatives, noscapine, bicuculline
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
    • A61K31/537—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines spiro-condensed or forming part of bridged ring systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/55—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole
    • A61K31/551—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole having two nitrogen atoms, e.g. dilazep
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/55—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole
    • A61K31/551—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole having two nitrogen atoms, e.g. dilazep
    • A61K31/5513—1,4-Benzodiazepines, e.g. diazepam or clozapine
    • A61K31/5517—1,4-Benzodiazepines, e.g. diazepam or clozapine condensed with five-membered rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. imidazobenzodiazepines, triazolam
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7048—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having oxygen as a ring hetero atom, e.g. leucoglucosan, hesperidin, erythromycin, nystatin, digitoxin or digoxin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/07—Tetrapeptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/68031—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being an auristatin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/68035—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a pyrrolobenzodiazepine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A61K47/6867—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from a cell of a blood cancer
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2878—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the NGF-receptor/TNF-receptor superfamily, e.g. CD27, CD30, CD40, CD95
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C07K16/3061—Blood cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/62—DNA sequences coding for fusion proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/77—Internalization into the cell
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

Винахід спрямований на кон'югат антитіло-лікарський засіб (ADC), який містить моноклональне антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент, спрямовані проти антигену дозрівання B-клітин (BCMA), кон'юговані з цитотоксином. Винаходом також передбачені композиції, які містять кон'югат антитіла та лікарського засобу, і способи знищення клітин множинної мієломи, в тому числі стовбурових клітин множинної мієломи, що експресують BCMA, шляхом приведення клітин множинної мієломи в контакт з ADC.

Description

Винахід спрямований на кон'югат антитіло-лікарський засіб (АОС), який містить моноклональне антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент, спрямовані проти антигену дозрівання В- клітин (ВСМА), кон'юговані з цитотоксином.
Винаходом також передбачені композиції, які містять кон'югат антитіла та лікарського засобу, і способи знищення клітин множинної мієломи, в тому числі стовбурових клітин множинної мієломи, що експресують ВСМА, шляхом приведення клітин множинної мієломи в контакт з АОС.
У даний документ включений за допомогою посилання у всій своїй повноті машиночитаний перелік нуклеотидних/амінокислотних послідовностей, поданий одночасно з даною заявкою та визначений наступним чином: (текстовий) файл у форматі АЗСІЇ розміром 16498 байтів за назвою "ВСМА-100-МО-РСТ-Зеді ісіпд.ТХт", створений 31 липня 2018 р.
РІВЕНЬ ТЕХНІКИ
Множинна мієлома (ММ) являє собою злоякісне новоутворення, що характеризується накопиченням клональних плазматичних клітин (див., наприклад, Раїштбо еї а!., Мем Епдіапа 9.
Меа., 364(11): 1046-1060 (2011) та І! опіа! еї аї!., Сіїпісаї Сапсег Кев., 77(6): 1264-1277 (2011)).
Наявні засоби терапії ММ включають хіміотерапію, опромінення, хірургічне втручання, бісфосфонати та трансплантацію аутологічних стовбурових клітин (АЗСТ). Хоча ці засоби терапії часто викликають ремісію, майже всі пацієнти зрештою зазнають рецидиву та вмирають (див., наприклад, Г опіа! еї аІ., вище, та Ка)Китаг, Маїиге Кем. Сіїіпіса! Опсої, 5(8): 479-491 (2011)).
Антиген дозрівання В-клітин (ВСМА) є представником родини рецепторів фактора некрозу пухлини (ТМЕК), що експресується на клітинах В-клітинної лінії диференціювання (і аабі еї аї.,
Мисівїс Асід5 Незеагси, 22(7): 1147-1154 (1994)). Експресія ВСМА є найвищою на термінально диференційованих В-клітинах. ВСМА залучений в опосередкування виживання плазматичних клітин для підтримання довготривалого гуморального імунітету. Було встановлено зв'язок експресії ВСМА з низкою видів раку, аутоімунних порушень та інфекційних захворювань.
Декількома дослідниками РНК ВСМА була виявлена повсюдно в клітинах множинної мієломи, а білок ВСМА був виявлений на поверхні плазматичних клітин у пацієнтів із множинною мієломою (див., наприклад, Момак еї аї, Віоса, 103(2): 689-694 (2004); Меггі єї аї!., Сііпіса! Сапсег Незеагси, 73(19): 5903-5909 (2007); ВеПиссі еї аї., Віоса, 105(10): 3945-3950 (2005) та Могеаих еї аї., Віосд, 703(8): 3148-3157 (2004)). У зв'язку з цим ВСМА був досліджений як можлива терапевтична мішень у разі множинної мієломи.
Як і раніше, існує потреба в композиціях, які можуть застосовуватися у способах лікування множинної мієломи. У даному винаході передбачені такі композиції та способи.
КОРОТКИЙ ОПИС ВИНАХОДУ
У даному винаході передбачений кон'югат антитіла та лікарського засобу (АОС), який містить моноклональне антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент, спрямовані проти
Зо антигену дозрівання В-клітин (ВСМА), кон'юговані з цитотоксином. Моноклональне антитіло містить (а) варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність ділянки 1, що визначає комплементарність (НСОКІ), під 5ЕО ІЮО МО: 1, амінокислотну послідовність НСОК2 під 5ЕО ІЮО МО: 2 та амінокислотну послідовність НСОКЗ під 5ЕО ІЮ МО: 3, та (б) варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність ділянки 1, що визначає комплементарність (І СОМК1), під ЗЕО ІО МО: 4, амінокислотну послідовність
ГСОК2 під БЕО ІО МО: 5 та амінокислотну послідовність | СОКЗ під 5ЕО І МО: 6.
Крім того, у даному винаході передбачені композиції, які містять вищевказаний кон'югат антитіла та лікарського засобу, і способи знищення клітин множинної мієломи (в тому числі стовбурових клітин множинної мієломи), що експресують ВСМА, шляхом приведення клітин множинної мієломи в контакт з АОС.
У даному винаході також передбачені моноклональне антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент, спрямовані проти ВСМА, які містять (а) варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність ділянки 1, що визначає комплементарність (НСОКТІ), під БЕО ІЮ МО: 1, амінокислотну послідовність НСОК2 під 5ЕО 10
МО: 2 та амінокислотну послідовність НСОКЗ під ЗЕО ІЮ МО: 3, та (Б) варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність ділянки 1, що визначає комплементарність (-СОКІ), під БЕО ІЮО МО: 4, амінокислотну послідовність | СОК2 під БЕО ІЮ
МО: 5 та амінокислотну послідовність ЇСОРЗ під БЕО ІО МО: 6.
КОРОТКИЙ ОПИС ДЕКІЛЬКОХ ВИГЛЯДІВ ГРАФІЧНИХ МАТЕРІАЛІВ
Фіг. 1 являє собою низку графіків (Фіг. 1А-1С), які ілюструють БАСзЗ-аналіз зв'язування очищених антитіл з адгезивними клітинами 293 (Ааг93), що експресують ПИВСМА, супоВСМА,
ВАРР-К та ТАСІ, як описано в прикладі 1. Моноклональне антитіло 158201 являло собою єдине протестоване антитіло, що перехресно реагує з антигенами макаки-крабоїда, яке не зв'язувалося з ВАРЕ-К та/або ТАСІ.
Фіг. 2 являє собою графіки, що ілюструють здатність кон'югатів антитіло до ВСМА- лікарський засіб знищувати клітини множинної мієломи (ММ) та плазмоклітинного лейкозу (РСІ) іп міго, як описано в прикладі 4. На Фіг. 2А-2Н показана життєздатність специфічних ліній клітин множинної мієломи та плазмоклітинного лейкозу, що експресують ВСМА, оброблених вказаними АОС, у той час як на Фіг. 2І та 2) показана життєздатність ліній клітин, що не бо експресують ВСМА.
На Фіг. З містяться графіки, що ілюструють знищення ліній клітин множинної мієломи у присутності розчинного ВСМА за допомогою кон'югату антитіла та лікарського засобу 1582051 - 5653249 порівняно з АВС 109-5553249 у кондиціонованих середовищах, зібраних від клітин даг293, що експресують ВСМА людини (Фіг. ЗА), або порівняно з АОС ОУ6МО-тсо-ММАЕ та УЄмМОо- 553249 у кондиціонованих середовищах, зібраних від клітин Ад293, що експресують ВСМА людини (Фіг. ЗВ), як описано в прикладі 4.
Фіг. 4 являє собою графік, що ілюструє зміну об'єму пухлини в ксенотрансплантатній мишачій моделі множинної мієломи з клітин НО29 у відповідь на обробку за допомогою АЮС 158201 -5013249, 109-5253249, 115-53553249 та 9О6МО-то-ММАЕ, що націлюються на ВСМА, порівняно з необробленими мишами.
Фіг. 5 являє собою графік, що ілюструє зміну об'єму пухлини в ксенотрансплантатній мишачій моделі множинної мієломи з клітин У)М3 у відповідь на обробку за допомогою АОС 158201 -523249, 109-50233249, 115-5053249, О6МО-то-ММАБ та Ідс1 ізотипового контролю- 563249 порівняно з необробленими мишами.
Фіг. б являє собою графік, що ілюструє зміну об'єму пухлини в ксенотрансплантатній мишачій моделі плазмоклітинного лейкозу з клітин ММ.15 у відповідь на обробку за допомогою
Ар 158201 -5(423249, 109-5(43249, І 15-553249 та 2У6МО-тсо-ММАЕ порівняно з необробленими мишами.
Фіг. 7 являє собою графік, що ілюструє зміну об'єму пухлини в ксенотрансплантатній мишачій моделі плазмоклітинного лейкозу з клітин ММ.1Е. у відповідь на обробку за допомогою
Арс 158201 -5053249 та 26МО-тсо-ММАБЕ порівняно з необробленими мишами.
На Фіг 8 міститься низка графіків і проточно-цдцитометричних діаграм, на яких проілюстрована експресія ВСМА на стовбурових клітинах ММ. Експресію ВСМА виявили як на плазматичних клітинах ММ (СО019-С0138, сіра осцилограма), так і на стовбурових клітинах ММ (Сб019-00138-, чорна осцилограма).
На Фіг. 9 міститься низка графіків, що ілюструють чутливість стовбурових клітин ММ у зразках від пацієнтів ММ263 (Фіг. 9А), ММ276 (Фіг. 98), ММ277 (Фіг. 9С) та ММ284 (Фіг. 90) стосовно АВС 158201 -5053249 порівняно з АВС 2О6МО-то-ММАЕ в аналізі клоногенності.
Контролі включають необроблені клітини та неспецифічний кон'югат Ідс1-553249 у найвищій
Зо дозі 400 нг на мл. Кількість утворених колоній нормалізували стосовно кількості, утвореної в необробленій культурі, яку було встановлено як 100 95.
Фіг. 10 являє собою графіки, що ілюструють здатність кон'югату антитіло до ВСМА- лікарський засіб знищувати клітини множинної мієломи (ММ) та плазмоклітинного лейкозу (РСІ) іп міго, як описано в прикладі 7. На Фіг. 10А-10Н показана життєздатність специфічних ліній клітин множинної мієломи та плазмоклітинного лейкозу, що експресують ВСМА, оброблених вказаним АОС, у той час як на Фіг. 10І та 10) показана життєздатність ліній клітин, що не експресують ВСМА.
Фіг. 11 являє собою графік, що ілюструє зміну об'єму пухлини в ксенотрансплантатній мишачій моделі множинної мієломи з клітин НО29 у відповідь на обробку за допомогою АЮС 158201 -503400, У6МО-553400 та Ід01 ізотипового контролю-5053400, що націлюються на
ВСМА, порівняно з необробленими мишами.
Фіг. 12 являє собою графік, що ілюструє зміну об'єму пухлини в ксенотрансплантатній мишачій моделі плазмоклітинного лейкозу з клітин ММ.15 у відповідь на обробку за допомогою
Арс 1582401 -5(7:23400, У6МО-5(12:3400 та ІдсС1 ізотипового контролю-5053400, що націлюються на
ВСМА, порівняно з необробленими мишами.
Фіг. 13 являє собою графіки, що ілюструють вимірювання афінності та показників кінетики зв'язування антитіл 158201, 109, Р10 та 115 із ВСМА людини із застосуванням системи РгоїеОп на основі 5РЕ.
Фіг. 14 являє собою графіки, що ілюструють вимірювання афінності та показників кінетики зв'язування антитіл М22, МО2 та У6МО із ВСМА людини із застосуванням системи РгоїеОп на основі 5РЕ.
Фіг. 15 являє собою графіки, що ілюструють зв'язування антитіл 158201, 115, 109 або У6МО із лініями клітин МСІ-НО29, ММ.15 та Ааг293-пиВСМА, виміряне за допомогою проточної цитометрії.
ДОКЛАДНИЙ ОПИС ВИНАХОДУ
У даному винаході передбачений кон'югат антитіла та лікарського засобу (АОС), який містить моноклональне антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент, спрямовані проти антигену дозрівання В-клітин (ВСМА), кон'юговані з цитотоксином. Термін "кон'югат антитіла та лікарського засобу", використовуваний у даному документі, стосується сполуки, яка містить бо моноклональне антитіло (тАбБ) приєднане до цитотоксичного засобу (зазвичай низькомолекулярного лікарського засобу з високою системною токсичністю) за допомогою хімічних лінкерів. У деяких варіантах здійснення АЮС може містити низькомолекулярний цитотоксин, який був хімічно модифікований таким чином, щоб він містив лінкер. Лінкер потім застосовують для кон'югування цитотоксину з антитілом або його антигензв'язувальним фрагментом. Після зв'язування з антигеном-мішенню на поверхні клітини АОС інтерналізується та транспортується в лізосому, де цитотоксин вивільняється в результаті протеолізу розщеплюваного лінкера (наприклад, за допомогою катепсину В, що перебуває в лізосомі) або в результаті протеолітичного розкладання антитіла, якщо воно приєднане до цитотоксину за допомогою нерозщеплюваного лінкера. Цитотоксин потім переміщається з лізосоми в цитозоль або ядро, де він потім може зв'язуватися зі своєю мішенню залежно від його механізму дії.
Термін "моноклональні антитіла", використовуваний у даному документі, стосується антитіл, які продукуються одним клоном В-клітин і зв'язуються з одним і тим самим епітопом. На відміну від цього, термін "поліклональні антитіла" стосується популяції антитіл, які продукуються різними В-клітинами та зв'язуються з різними епітопами одного й того самого антигену. Кон'югат антитіла та лікарського засобу, описаний у даному документі, може містити ціле антитіло або фрагмент антитіла. Ціле антитіло зазвичай складається з чотирьох поліпептидів: двох ідентичних копій поліпептидного важкого (Н) ланцюга та двох ідентичних копій поліпептидного легкого () ланцюга. Кожен із важких ланцюгів містить одну М-кінцеву варіабельну (УН) ділянку та три С-кінцеві константні (СНІ, СН2 та СНЗ) ділянки, і кожен легкий ланцюг містить одну М- кінцеву варіабельну (МІ) ділянку та одну С-кінцеву константну (СІ) ділянку. Варіабельні ділянки кожної пари легкого та важкого ланцюгів утворюють антигензв'язувальний центр антитіла.
Ділянки МН та МІ. мають однакову загальну структуру, при цьому кожна ділянка містить чотири каркасні ділянки, послідовності яких є порівняно консервативними. Каркасні ділянки з'єднані трьома ділянками, які визначають комплементарність (СОК). Три СОК, відомі як СОКІ, СОКО та
СОМ, утворюють "гіперваріабельну ділянку" антитіла, яка відповідає за зв'язування антигену.
АОС може містити антигензв'язувальний фрагмент антитіла. Терміни "фрагмент антитіла", "антигензв'язувальний фрагмент", "функціональний фрагмент антитіла" та "антигензв'язувальна частина" використовуються в даному документі взаємозамінно та стосуються одного або декількох фрагментів або частин антитіла, які зберігають здатність специфічно зв'язуватися з
Зо антигеном (див. загалом Ноїїдег еї а!., Маї. Віоїесп., 23(9): 1 126-1129 (2005)). Фрагмент антитіла може містити, наприклад, одну або декілька СОК, варіабельну ділянку (або її частини), константну ділянку (або її частини) або їх комбінації. Приклади фрагментів антитіл включають без обмеження (ї) Гар-фрагмент, який являє собою одновалентний фрагмент, що складається з доменів МІ, УН, Сі. та СНІ; (ії) Е(ар)2-фрагмент, який являє собою двовалентний фрагмент, що містить два Еаб-фрагменти, зв'язані дисульфідним містком у шарнірній ділянці; (її) Ем- фрагмент, що складається з доменів Мі. та МН одного плеча антитіла; (ім) одноланцюговий Ем (5СЕм), який являє собою одновалентну молекулу, що складається з двох доменів Ем-фрагмента (тобто Мі. та МН), з'єднаних синтетичним лінкером, який дає змогу синтезувати два домени у вигляді одного поліпептидного ланцюга (див., наприклад, Віга еї аї., бсіепсе, 242: 423-426 (1988); Нивіоп еї аї., Ргос. Май. Асад. сі. ОБА, 85: 5879-5883 (1988) та О5рошигп еї аї., Маї.
Віотесппої., 16: 778 (1998)); і (м) діатіло, яке являє собою димер з поліпептидних ланцюгів, де кожен поліпептидний ланцюг містить МН, з'єднаний з МІ пептидним лінкером, який є надто коротким, щоб забезпечувати утворення пар між МН та Мі в одному і тому самому поліпептидному ланцюзі, внаслідок чого забезпечується керування утворенням пар між комплементарними доменами в різних поліпептидних ланцюгах УН-МІ. з утворенням димерної молекули, що має два функціональні антигензв'язувальні центри. Фрагменти антитіл відомі з рівня техніки та описані більш докладно, наприклад, у публікації заявки на патент США 2009/0093024 АТ.
В одному варіанті здійснення кон'югат антитіла та лікарського засобу, описаний у даному документі, містить моноклональне антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент, спрямовані проти антигену дозрівання В-клітин (ВСМА, також відомого як СО269). ВСМА є представником надродини рецепторів фактора некрозу пухлини (див., наприклад, ТПпотрзоп еї а!., У. Ехр. Медісіпе, 192(1): 129-135 (2000) та МаскКау єї аї., Аппи. Кеум. Іттипої., 21: 231-264 (2003)). ВСМА зв'язується з фактором активації В-клітин (ВАЕЕ) і лігандом А, що індукує проліферацію (АРКІГ) (див., наприклад, МасКау еї аїЇ., вище, та Каїйей еї аї, Іттипоіодісаї
Веміємв, 204: 43-54 (2005)). Повідомлялося, що серед незлоякісних клітин ВСМА експресується переважно в плазматичних клітинах і субпопуляціях зрілих В-клітин (див., наприклад, І аабі еї аІ,, ЕМВО 9., 77(11): 3897-3904 (1992); І аабі єї а!., Мисієїс Асіа5 Вев., 22(7): 1147-1154 (1994);
Капеа еї аї.,, вище; О'Соппог еї аї., У. Ехр. Меадісіпе, 199(1): 91-97 (2004) та Ма еї аї., 9У. Іттипої., бо 173(2): 807-817 (2004)). Миші з дефіцитом ВСМА є здоровими та мають нормальні показники кількості В-клітин, але виживаність довгоживучих плазматичних клітин погіршується (див., наприклад, О'Соппог еї аїЇ, вище; Хи еї аї., Мої. СеїІ. Віої., 21(12): 4067-4074 (2001) та 5спіетапп еї а. Зсієпсе, 293(5537): 2111-2114 (2001)). Декількома дослідниками РНК ВСМА була виявлена повсюдно в клітинах множинної мієломи, а біл» ВСМА був виявлений на поверхні плазматичних клітин у пацієнтів із множинною мієломою (див., наприклад, Момак еї аї, Віоса, 103(2): 689-694 (2004); Мег"і еї а!., СіІіпіса! Сапсег Везвєагсі, 73(19): 5903-5909 (2007); ВеїШссі єї а!., Віосіа, 105(10): 3945-3950 (2005) та Могеаих еї а1., Віоса, 703(8): 3148-3157 (2004)).
У деяких варіантах здійснення в даному винаході передбачені моноклональне антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент, спрямовані проти ВСМА, описаного вище, незалежно від кон'югату антитіла та лікарського засобу. Моноклональне антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент можуть містити (а) варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність ділянки 1, що визначає комплементарність (НСОКТІ), під
ЗБЕО ІЮО МО: 1, амінокислотну послідовність НСОМК2 під 5ЕО ІЮО МО: 2 та амінокислотну послідовність НСОКЗ під 5ЕО ІЮ МО: 3, та (5) варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність ділянки 1, що визначає комплементарність (І СОК1), під ЗЕ ІЮ
МО: 4, амінокислотну послідовність ЇСОК2 під 5ЕО ІЮ МО: 5 та амінокислотну послідовність
ЇСОКЗ під 5ЕБЕО ІЮ МО: 6. В іншому варіанті здійснення моноклональне антитіло містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮ МО: 7, та/або варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність під ЗЕО
ІО МО: 8.
Моноклональне антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент, спрямовані проти ВСМА, можуть передбачати будь-яку придатну афінність зв'язування з ВСМА або його епітопом.
Термін "афінність" стосується константи рівноваги для оборотного зв'язування двох засобів і виражається як константа дисоціації (Ко). Афінність антитіла або його антигензв'язувального фрагмента до антигену або епітопа, що становлять інтерес, може бути виміряна за допомогою будь-якого способу, відомого з рівня техніки. Такі способи включають, наприклад, сортування клітин з активацією флуоресценції (ЕАС5), поверхневий плазмонний резонанс (наприклад,
Віасоге, РгоїеОп), біошарову інтерферометрію (ВІ!, наприклад Осієї), аналіз кінетичного виключення (наприклад, КіпЕхА), застосування відокремлюваних гранул (наприклад, магнітних
Зо гранул), пенінг з антигеном та/або ЕГІ5А (див., наприклад, ЧУапемау еї аї. (ед5.), Іттипорбіоіоду, 5 ей., Сапапа Рибіїєпіпу, Мем/ мМогК, М.М., 2001). З рівня техніки відомо, що афінність зв'язування конкретного антитіла буде варіюватися залежно від способу, який застосовують для аналізу афінності зв'язування.
Розчинна форма ВСМА (5ВСМА) була виявлена в сироватці крові пацієнтів із множинною мієломою, при цьому зареєстровані значення перебували в діапазоні від 3,8 до 1062 нг/мл (І ее еї аіІ, Ві у) Наєтаїйю! 2016, Запспе; еї а Вг 9) Наетаїйо! 2012), та складалася з повного позаклітинного домену молекули (Гацйгепі еї. аі. Маї Соттип 2015). Отже, 5ВСМА може послабляти ефекти засобів терапії на основі антитіл. Функціональні особливості 5ВСМА та рекомбінантного мономерного ВСМА людини є подібними (І ашйгепі еї. а. Маї Соттип 2015).
Отже, для зменшення потенційних ефектів ЗВСМА щодо ефективності кон'югату антитіло до
ВСМА-лікарський засіб бажано вибрати компонент антитіла, який має слабке зв'язування з рекомбінантним мономерним ВСМА людини та сильне зв'язування із мембранозв'язаним
ВСМА.
Афінність зв'язувального засобу до ліганду, як, наприклад, афінність антитіла до епітопа, може становити, наприклад, від приблизно 1 пікомоль/л (пМ) до приблизно 1 мікромоль/л (мкМ) (наприклад, від приблизно 1 пікомоль/л (пМ) до приблизно 1 наномоль/л (НМ) або від приблизно 1 НМ до приблизно 1 мікромоль/л (мкМ)). В одному варіанті здійснення моноклональне антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент можуть зв'язуватися з ВСМА з Ко, що становить менше 100 наномоль/л або дорівнює цьому значенню (наприклад, становить 100 нМ, приблизно
БО 90 нМ, приблизно 80 нМ, приблизно 70 НМ, приблизно 60 нМ, приблизно 50 нМ, приблизно 40
НМ, приблизно 30 нМ, приблизно 20 нМ, або приблизно 10 нМ або перебуває в діапазоні, визначеному будь-якими двома з вищевказаних значень). В іншому варіанті здійснення моноклональне антитіло може зв'язуватися з ВСМА з Ко, що становить менше 10 наномоль/л або дорівнює цьому значенню (наприклад, становить приблизно 9 нМ, приблизно 8,5 НМ, приблизно 8 нМ, приблизно 7,5 нМ, приблизно 7 нМ, приблизно 6,5 нМ, приблизно 6 нМ, приблизно 5,5 нМ, приблизно 5 нМ, приблизно 4,5 нМ, приблизно 4 нМ, приблизно 3,5 НМ, приблизно З НМ, приблизно 2,5 нМ, приблизно 2 нМ, приблизно 1,5 нМ, приблизно 1 нМ, приблизно 0,9 нМ, приблизно 0,8 нМ, приблизно 0,7 нМ, приблизно 0,6 нМ, приблизно 0,5 нМ, приблизно 0,4 нМ, приблизно 0,3 нМ, приблизно 0,2 нМ, приблизно 0,1 нМ, приблизно 0,05 нМ, 60 приблизно 0,025 нМ, приблизно 0,01 нМ, приблизно 0,001 нМ або перебуває в діапазоні,
визначеному будь-якими двома з вищевказаних значень). В іншому варіанті здійснення моноклональне антитіло може зв'язуватися з ВСМА з Ко, що становить менше 200 пМ або дорівнює цьому значенню (наприклад, становить приблизно 190 пМ, приблизно 175 пМ, приблизно 150 пМ, приблизно 125 пМ, приблизно 110 пМ, приблизно 100 пМ, приблизно 90 пМ, приблизно 80 пМ, приблизно 75 пМ, приблизно 60 пМ, приблизно 50 пМ, приблизно 40 пМ, приблизно 30 пМ, приблизно 25 пМ, приблизно 20 пМ, приблизно 15 пМ, приблизно 10 пМ, приблизно 5 пМ, приблизно 1 пМ або перебуває в діапазоні, визначеному будь-якими двома з вищевказаних значень).
В одному варіанті здійснення афінність антитіла до ВСМА або його антигензв'язувального фрагмента до мономерного ВСМА, виміряна за допомогою поверхневого плазмонного резонансу (РЕ), становить приблизно 90 нМ, приблизно 80 нМ, приблизно 70 нМ, приблизно 60 НМ, приблизно 50 нМ, приблизно 40 нМ, приблизно 30 нМ або перебуває в діапазоні, визначеному будь-якими двома з вищевказаних значень, наприклад, від приблизно 50 нМ до приблизно 70 нМ, від приблизно 55 НМ до приблизно 65 нМ або від приблизно 58 нМ до приблизно 62 нМ.
В одному варіанті здійснення афінність антитіла до ВСМА або його антигензв'язувального фрагмента до мембранозв'язаного ВСМА, виміряна за допомогою РАС5, становить менше 10 наномоль/л або дорівнює цьому значенню (наприклад, становить приблизно 9 нМ, приблизно 8,5 нМ, приблизно 8 нМ, приблизно 7,5 нМ, приблизно 7 нМ, приблизно 6,5 НМ, приблизно 6 нМ, приблизно 5,5 нМ, приблизно 5 нМ, приблизно 4,5 нМ, приблизно 4 нМ, приблизно 3,5 НМ, приблизно З НМ, приблизно 2,5 нМ, приблизно 2 нМ, приблизно 1,5 нМ, приблизно 1 нМ, приблизно 0,9 нМ, приблизно 0,8 нМ, приблизно 0,7 нМ, приблизно 0,6 нМ, приблизно 0,5 нМ, приблизно 0,4 нМ, приблизно 0,3 нМ, приблизно 0,2 нМ, приблизно 0,1 нМ, приблизно 0,05 нМ, приблизно 0,025 нМ, приблизно 0,01 нМ, приблизно 0,001 нМ або перебуває в діапазоні, визначеному будь-якими двома з вищевказаних значень).
Антигензв'язувальна частина або фрагмент моноклонального антитіла можуть мати будь- який розмір за умови, що ця частина зв'язується з ВСМА. Із цього погляду антигензв'язувальна частина або фрагмент моноклонального антитіла, спрямованого проти ВСМА (що також називається в даному документі "моноклональним антитілом до ВСМА"), у бажаному випадку містить приблизно 5-18 амінокислот (наприклад, приблизно 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18 або діапазон, визначений будь-якими двома з вищевказаних значень).
В одному варіанті здійснення кон'югат антитіла та лікарського засобу містить варіабельну ділянку моноклонального антитіла до ВСМА. Із цього погляду АОС може містити варіабельну ділянку легкого ланцюга, варіабельну ділянку важкого ланцюга або як варіабельну ділянку легкого ланцюга, так і варіабельну ділянку важкого ланцюга моноклонального антитіла до
ВСМА. АС переважно містить варіабельну ділянку легкого ланцюга та варіабельну ділянку важкого ланцюга моноклонального антитіла до ВСМА. Моноклональні антитіла, які зв'язуються з
ВСМА, розкриті, наприклад, у публікації міжнародної заявки на патент МО 2010/104949. В одному варіанті здійснення моноклональне антитіло АОС, описане в даному документі, містить (а) варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність ділянки 1, що визначає комплементарність (НСОКІ), 5УЗММ (ЗЕБО ІЮ МО: 1), амінокислотну послідовність
НСОК2 5І15555ММІМАОБУКО (5БО ІЮО МО: 2) та амінокислотну послідовність. НСОКЗ
СОМУУМЕМЕРОМ (ЗЕБО І МО: 3), та (Б) варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність ділянки 1, що визначає комплементарність (СО),
КАБОМІБЗЗММІ А (5ЕО ІЮ МО: 4), амінокислотну послідовність Ї/СОК2 САБЗМКАТ (ЗЕО ІО МО: 5) та амінокислотну послідовність ГСОМКЗ О0О0УС55РІТ (5БО ІО МО: 6). В іншому варіанті здійснення моноклональне антитіло АОС, описане в даному документі, може містити варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮ МО: 7, та/або варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність під ЗЕО
ІО МО: 8.
Терміни "цитотоксин" та "цитотоксичний засіб" стосуються будь-якої молекули, яка інгібує виконання функції клітин або запобігає йому, та/або спричиняє руйнування клітин (загибель клітин), та/або чинить антипроліферативні ефекти. Буде зрозуміло, що цитотоксин або цитотоксичний засіб АОС також називається в даній галузі техніки "корисним навантаженням"
АС. З рівня техніки відомо, що низка класів цитотоксичних засобів є потенційно застосовними в молекулах АОС та можуть застосовуватися в АОС, описаному в даному документі. Такі класи цитотоксичних засобів включають, наприклад, засоби, що діють на мікротрубочки (наприклад, ауристатини та майтанзиноїди), піролобензодіазепіни (РВО), інгібітори РНК-полімерази ЇЇ (наприклад, аматоксини) та засоби, що алкілують ДНК (наприклад, псевдодимери бо індолінобензодіазепіну). Приклади конкретних цитотоксичних засобів, які можуть застосовуватися в АОС, описаному в даному документі, включають без обмеження аманітини, ауристатини, каліхеаміцин, дауноміцини, доксорубіцини, дуокарміцини, доластатини, енедіїни, лекситропсини, таксани, пуроміцини, майтанзиноїди, алкалоїди барвінка, тубулізини та піролобензодіазепіни (РВО). Більш конкретно, цитотоксичний засіб може являти собою, наприклад, АЕР, ММАЕ, ММАЕ, АЕВ, АЕМВ, ауристатин Е, паклітаксел, доцетаксел, СС-1065,
ЗІМ-38, топотекан, морфолінодоксорубіцин, ризоксин, ціааноморфолінодоксорубіцин, доластатин- 10, ехіноміцин, комбретастатин, каліхеаміцин, майтанзин, ОМ1, ОМА, вінбластин, метотрексат, нетропсин або їхні похідні або аналоги. Цитотоксини, придатні для застосування в АОС, також описані, наприклад, у публікаціях міжнародних заявок на патент МоМо УМО 2015/155345 та УМО 2015/157592.
В одному варіанті здійснення цитотоксичний засіб може являти собою засіб, що діє на мікротрубочки, такий як тубулізин, майтанзиноїд, ауристатин або їхні похідні. Терміни "засіб, що діє на мікротрубочки" та "засіб, що націлюється на мікротрубочки" є синонімічними та стосуються засобу, що інгібує поділ клітини шляхом перешкоджання функції мікротрубочок.
Тубулізини є представниками класу природних продуктів, виділених із видів міксобактерій (бБаззе єї аї., У. Апіїріої., 53: 879-885 (2000)), які діють як мітотичні отрути, що інгібують полімеризацію тубуліну та зумовлюють блокування клітинного циклу та апоптоз (З(еіптеї» евї аї.,
СНет. Іпі. Ед., 43: 4888-4892 (2004); Кнаїї єї аІ., Спет. Віоспет., 7: 678-683 (2006); Кашг еї аї.,
Віоспет. 9., 396: 235-242 (2006)). Приклади тубулізинів розкриті, наприклад, у публікаціях міжнародних заявок на патент МоМо УМО 2015/157594, ММО 2004/005326, МО 2012/019123, МО 2009/134279, МО 2009/055562, УМО 2004/005327; у патентах США 7776841, 7754885 та 7816377 та в публікаціях заявок на патент США 2010/0240701, 2011/0021568 та 2011/0263650.
У певних аспектах тубулізин являє собою сполуку, описану у УМО 2015/157594, яка включена у даний документ за допомогою посилання, таку як, наприклад, сполука, що має наступну структуру:
М о
Х
М о - М - о ем з і о о о о : о у : : М, / х о тр
Н або сполука, що має наступну структуру:
Мн,
Мо о т о ДА А он я в а 1в,, М
ІЙ : о
М о
Н
Майтанзиноїди інгібують полімеризацію білка мікротрубочок тубуліну, у такий спосіб
Зо запобігаючи утворенню мікротрубочок (див., наприклад, патент США Мо 6441163 та Кептійага еї а!І., Зсіеєпсе, 189: 1002-1005 (1975)). Було показано, що майтанзиноїди інгібують ріст пухлинних б клітин іп міїго із застосуванням моделей культур клітинних та іп мімо із застосуванням систем з лабораторними тваринами. Крім того, цитотоксичність майтанзиноїдів є у 1000 разів вищою, ніж у традиційних хіміотерапевтичних засобів, таких як, наприклад, метотрексат, даунорубіцин і вінкристин (див., наприклад, патент США 5208020). Майтанзиноїди включають майтанзин, майтанзинол, СЗ-естери майтанзинолу та інші аналоги та похідні майтанзинолу (див., наприклад, патенти США 5208020 та 6441163). СЗ-естери майтанзинолу можуть бути такими, що зустрічаються в природі, або одержані синтетичним шляхом. Крім того, як ті, що зустрічаються в природі, так і синтетичні СЗ-естери майтанзинолу можна класифікувати як С3- естери простих карбонових кислот або СЗ-естери похідних М-метил-і -аланіну, при цьому останні є більш цитотоксичними, ніж перші. Синтетичні аналоги майтанзиноїдів також відомі з рівня техніки та описані, наприклад, у Кирспап еї аї.,.). Мед. Спет., 21: 31-37 (1978). Способи одержання майтанзинолу та його аналогів і похідних описані, наприклад, у патенті США 4151042. Приклади майтанзиноїдів, які можуть застосовуватися у складі АОС, описаних у даному документі, включають без обмеження М2'-дезацетил-М2'-(З-меркапто-1- оксопропіл)майтанзин (ОМ) та М2'-дезацетил-М2"-(4-меркапто-4-метил-1- оксопентил)майтанзин (ОМА).
Ауристатини являють собою клас високоефективних антимітотичних засобів, які продемонстрували значну доклінічну активність у добре стерпних дозах (і аму єї аІ., Сапсег Кев., 66: 2328-2337 (2006); Ма еї а!., Сіп. Сапсег Вев., 12: 2591-2596 (2006); Т5е єї аї!., Сапсег Нев., 12: 1373-1382 (2006); а також ОПаодіи еї а!., Вг. У. Наєетагцої., 142: 69-73 (2008), та ОПаодім еї аІ., Сій. Сапсег Невз., 14: 6171-6180 (2008)). АОС, які містять ауристатини, на даний час оцінюються у доклінічних і клінічних випробуваннях. Приклади ауристатинів, які можуть застосовуватися у складі АОС, описаних у даному документі, включають без обмеження монометилауристатин Е (ММАЕ) і споріднену молекулу монометилауристатин Е (ММАБЕ) (див., наприклад, Рогопіпа еї аї., Маї. Віоїесппої., 21: 778-784 (2003) та Рогопіпа еї аї., Віосопічцад.
Спет., 17: 114-124 (2006)).
В одному варіанті здійснення цитотоксичний засіб може являти собою піролобензодіазепін (РВО) або похідну РВО. РВО переміщається в ядро, де він зшиває ДНК, запобігаючи реплікації під час мітозу, пошкоджуючи ДНК шляхом індукування однониткових розривів і згодом
Зо зумовлюючи апоптоз. Деякі РВО також мають здатність розпізнавати специфічні послідовності
ДНК та зв'язуватися з ними. РВО мають наступну загальну структуру: о 10 11 8 Хот Н
В та 1 1 мМ о -7 2 6 о З
РВО відрізняються числом, типом і положенням замісників як в їхніх ароматичних А-кільцях, так ії в пірольних С-кільцях, а також ступенем насиченості С-кілець. У В-кільці міститься імін (М-С), карбіноламін (МН-СН(ОН)), або метиловий етер карбіноламіну (МНА-СН(ОМе)) у положенні М10-С11, яке є електрофільним центром, що відповідає за алкілування ДНК. Усі відомі природні продукти мають (5)-конфігурацію в положенні хірального атома С11а, яка забезпечує їм праву закрученість, якщо дивитися від С-кільця в напрямку А-кільця. Ця ознака також надає РВО відповідну тривимірну форму для ізоспіральності з малою борозенкою ДНК В- форми, зумовлюючи щільне прилягання в сайті зв'язування (Копп, у: Апібіоїйс5 ПІ. Зргіпдег-
Мепад, Мем Хоїк, рр. 3-11 (1975) та Нишїєу апа Мевднат-МапОемапівег, Асс. Спет. Нев., 19: 230- 237 (1986)). РВО можуть утворювати аддукти в малій борозенці, що зумовлює перешкоджання процесингу ДНК.
Перший протипухлинний антибіотик на основі РВО, антраміцин, був виявлений у 1965 р. (Іеітдгибрег еї а!., У. Ат. Спет. 5ос., 87: 5793-5795 (1965); І еітдгибег єї а!., У. Ат. Спет. 5ос., 87: 5791-5793 (1965)). Відтоді було повідомлено про низку РВО, що зустрічаються в природі, і було розроблено більше десяти шляхів синтезу для одержання різних аналогів (ТНиг5юп еї аї.,
Спет. Веум., 433-465 (1994) та Апіопому, Ю. апа Тпигеїоп, О.Е., Спет. Кем., 111: 2815-2864 (2011)). Представники цієї родини включають абейміцин (Носпіому»кі еї аї., У. Апіібріоїіс5, 40: 145- 148 (1987)), чикаміцин (Копівпі еї аї., У. Апііріоїісв, 37: 200-206 (1984)), 00-81 (патент Японії 58180487; Тигеюп еї аї., Спет. Вії., 26: 767-772 (1990) і Возе еї аї., Теїгапедгоп, 48: 751-758 (1992)), мазетраміцин (Китіпоїо еї аї.,.У. Апіібіоїіс5, 33: 665-667 (1980)), неотраміцини А та В (ТаКеишсні єї аї., У. Апііріоїїсв, 29: 93-96 (1976)), поротраміцин (Тзипакаума еї аї.,». Апііріоїіс5, 41: 1366-1373 (1988)), протракарцин (Зпіті?и еї аї., 9. Апібіоїіс5, 29: 2492-2503 (1982) та І аподІєу апа Тпигеіоп, У. Огу. Спет., 52: 91-97 (1987)), сибаноміцин (ОС-102) (Нага є! аї., У. Апііріоїісв, 41: 702-704 (1988) та Поп еї аї., 9. Апіібіоїісв5, 41: 1281-1284 (1988)), сибіроміцин (І ебег еї аї., У. Ат.
Спет. 5ос., 110: 2992-2993 (1988)) та томаміцин (Агіта еї аї., У. Апкіріоїіс5, 25: 437-444 (1972)).
РВО, а також АБС, які містять РВО, також описані в публікаціях міжнародних заявок на патент
МоМо УМО 2015/155345 та УМО 2015/157592.
В одному варіанті здійснення РВО являє собою РВО 3249, що також називається в даному документі "5053249" та описаний докладно у УМО 2014/057074, який має наступну структуру: о у Зтре ит ит и ит и ит Ззутре ! м ро о о о у о о. о 7 он н, сс Отто. М й
КАС ОБО. о о
В іншому варіанті здійснення РВО являє собою РВО 3315, що також називається в даному документі "503315" та описаний докладно у УМО 2015/052322, який має наступну структуру:
Ї ЗТ ит ит те или тт М о Н Н о о трос о ту о і ЗЕ - он н. 7 ит " и ув о З, А
В іншому варіанті здійснення РВО являє собою 553400, що також називається сполукою 23, який докладно описаний у РСТ/ЕР2017/052988, поданій 10 лютого 2017 р., і має наступну структуру: о о о
Н Н рак ло но
М у М н в : н « наль о С, о о
Т он н, д-о М о и лтно М Н
ДК ве о о
Моноклональне антитіло до ВСМА або його антигензв'язувальний фрагмент можуть бути кон'юговані з цитотоксином за допомогою будь-якого придатного способу, відомого з рівня техніки, включаючи способи сайт-специфічного або сайт-неспецифічного кон'югування.
Традиційні стратегії кон'югування антитіл зазвичай базуються на випадковому (тобто неспецифічному) кон'югуванні корисного навантаження з оантитілом або його антигензв'язувальним фрагментом за залишками лізину або цистеїну. Відповідно, у деяких аспектах антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент є випадково кон'югованими з цитотоксичним засобом, наприклад, шляхом часткового відновлення антитіла або фрагмента антитіла з наступною реакцією з бажаним засобом із приєднаним лінкерним фрагментом або без нього. Наприклад, антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент можуть бути відновлені із застосуванням дитіотреїтолу (ОТТ) або аналогічного відновника. Цитотоксичний засіб із приєднаним до нього лінкерним фрагментом або без нього потім можна додавати у молярному надлишку до відновленого антитіла або фрагмента антитіла у присутності диметилсульфоксиду (ОМ50О). Після кон'югування можна додавати надлишок вільного цистеїну
Зо для гасіння засобу, який не прореагував. Реакційну суміш можна потім очищати та піддавати заміні буфера на фосфатно-сольовий буферний розчин (РВ5).
В інших варіантах здійснення цитотоксичний засіб може бути кон'югований (із моноклональним антитілом до ВСМА за допомогою способів сайт-специфічного кон'югування за конкретними реакційноздатними амінокислотними залишками з одержанням гомогенних препаратів АОС з однаковим стехіометричним складом. Сайт-специфічне кон'югування може відбуватися за залишком цистеїну або за неприродною амінокислотою. В одному варіанті здійснення цитотоксичний засіб може бути кон'юЮгований з антитілом або його антигензв'язувальним фрагментом за щонайменше одним залишком цистеїну. Зокрема, наприклад, цитотоксичний засіб може бути кон'югований хімічним способом із бічним ланцюгом амінокислоти за конкретним положенням згідно з Кабаї у Ес-ділянці моноклонального антитіла до ВСМА. У зв'язку з цим цитотоксичний засіб може бути кон'югований із моноклональним антитілом до ВСМА за залишком цистеїну в будь-якому придатному положенні у Ес-ділянці антитіла, включаючи без обмеження цистеїн у щонайменше одному з положень 239, 248, 254, 273, 279, 282, 284, 286, 287, 289, 297, 298, 312, 324, 326, 330, 335, 337, 339, 350, 355, 356, 359, 360, 361, 375, 383, 384, 389, 398, 400, 413, 415, 418, 422, А40, 441, 442, 443 та 446, де нумерація відповідає ЕО-індексу за Кабаї. В одному варіанті здійснення цитотоксичний засіб може бути кон'югований із моноклональним антитілом до ВСМА за залишком цистеїну в конкретних положеннях 239 та/або 442 за Караї моноклонального антитіла до ВСМА та/або за амінокислотним залишком, вставленим між положеннями 239 та 240 за Кабраї антитіла до ВСМА (рітаві єї а)., Мої Рнагт, 14(5):1501-1516 (2017). Альтернативно, цитотоксичний засіб може бути кон'югований із моноклональним антитілом до ВСМА або його антигензв'язувальним фрагментом за допомогою тіолмалеїмідного зв'язку, як, наприклад, за сульфгідрильною реакційноздатною групою в шарнірній ділянці та в парах важкого та легкого ланцюгів.
Моноклональне антитіло до ВСМА, описане в даному документі, містить щонайменше одну молекулу цитотоксину, кон'юЮговану з ним; однак, моноклональне антитілло до ВСМА може містити будь-яку придатну кількість молекул цитотоксину, кон'югованих із ним (наприклад, 1, 2, 3, 4 або більше молекул цитотоксину), для досягнення бажаного терапевтичного ефекту.
Бажано, щоб АОС, описаний у даному документі, містив дві молекули цитотоксину, кон'юговані з моноклональним антитілом до ВСМА.
Антитіло до ВСМА, описане в даному документі, є застосовним для будь-якого терапевтичного засобу, в якому є бажаним його націлювання на ВСМА, як, наприклад, в адоптивному перенесенні клітин (АСТ), біспецифічних активаторах, що привертають Т-клітини
Зо (ВІТЕ), і наночастинках. В одному варіанті здійснення у даному винаході передбачений химерний антигенний рецептор (САК), який містить антигензв'язувальний домен моноклонального антитіла до ВСМА, описаного в даному документі, зв'язаний із фрагментом, що активує Т-клітини. "Химерний антигенний рецептор (САК)" являє собою штучно сконструйований гібридний білок або поліпептид, який містить антигензв'язувальний домен антитіла (наприклад, одноланцюговий варіабельний фрагмент (5СЕм)), зв'язаний (із фрагментами, що передають сигнал в Т-клітини або активують Т-клітини. Структури САК створювалися протягом останніх двадцяти років і найчастіше містять у своєму складі одноланцюговий варіабельний фрагмент (5сЕм), одержаний із моноклонального антитіла (тАБбБ), і сигнальний мотив із б-ланцюга ТОК (і вони називаються "САК першого покоління" (див., наприклад, ОКиг, Е.М., Вгеппег, М.К., Меїйоа»5 Мої. Віої., 651: 319-45 (2010); та І ее еї аї., Сііп.
Сапсег. Вез., 18(10): 2780-2790 (2012)). Порівняно нещодавно були розроблені САК другого та третього покоління, які містять у своєму складі один ("друге покоління") або два ("третє покоління") костимулювальні активувальні мотиви, наприклад, із СО28, 4-188 (СО137) та/або
СбОр134 (0ОХ-40), які посилюють проліферацію, цитотоксичність і персистенцію іп мімо (див., наприклад, Ріппеу еї аї., 9. Іттипої., 172: 104-13 (2004); Ітаї єї а!., ениКетіа, 18: 676-84 (2004);
Мапег сеї аї., Маї Віотесппої., 20:70-5 (2002); Мііопе еї аї., Мо! Тнег., 17: 1453-64 (2009) та І ее єї а!., вище).
Антигензв'язувальний домен САК може містити ціле моноклональне антитіло або фрагмент моноклонального антитіла, описані в даному документі В одному варіанті здійснення антигензв'язувальний домен САК може містити одноланцюговий Ем-фрагмент (5сЕм) моноклонального антитіла до ВСМА. Химерні антигенні рецептори та способи одержання САК додатково описані, наприклад, у Кіміеге, І. апа М. Задеїаїп, Мої. Тпег., 25(5): 1117-1124 (2017);
Бамііа, М.І. апа М. Заадеї|аїп, Іпі. У. Нетаїй)., 104(1): 6-17 (2016) та в публікації заявки на патент
США 2015/0051266 А1.
У даному винаході також передбачена композиція, яка містить вищеописані антитіло або кон'югат антитіла та лікарського засобу та фармацевтично прийнятний (наприклад, фізіологічно прийнятний) носій. Будь-який придатний носій, відомий з рівня техніки, може застосовуватися в контексті даного винаходу. Вибір носія буде частково визначатися конкретним місцем, куди можна вводити композицію, і конкретним способом, застосовуваним для введення композиції. 60 Композиція необов'язково може бути стерильною. Композиції можуть бути одержані згідно з традиційними методиками, описаними, наприклад, у Кетіпдіоп: Те Зсіепсе апа Ргасіїсе ої
Рпаптасу, 2151 Еайіоп, ГПірріпсой УМШатв 48 УМіКіп5, РпПаадеї!рніа, РА (2001).
Бажано, щоб композиція містила антитіло або кон'югат антитіла та лікарського засобу у кількості, яка є ефективною для лікування або попередження множинної мієломи. Таким чином, у даному винаході передбачений спосіб знищення клітин множинної мієломи, який включає приведення клітин множинної мієломи, що експресують ВСМА, в контакт з антитілом або кон'югатом антитіла та лікарського засобу, описаними в даному документі, або композицією, яка містить антитіло або АОС, описаною в даному документі, завдяки чому антитіло або кон'югат антитіла та лікарського засобу зв'язуються з ВСМА на клітинах множинної мієломи та знищують клітини множинної мієломи. У даному винаході також передбачене застосування антитіла або
АОС, описаних у даному документі, або композиції, яка містить антитіло або АОС, у виготовленні лікарського препарату для лікування множинної мієломи. Як обговорюється в даному документі, множинна мієлома, також відома як плазмоклітинна мієлома або хвороба
Калера, являє собою рак з плазматичних клітин, які є типом лейкоцитів, що зазвичай відповідають за вироблення антитіл (Каар еї аї., Їапсеї, 374: 324-329 (2009)). Множинна мієлома щороку вражає 1-4 людини на 100000 людей. Захворювання є більш поширеним у чоловіків та через досі невідомі причини вдвічі частіше трапляється в афроамериканців, ніж у європеоїдних американців. Множинна мієлома є найменш поширеною гематологічною злоякісною пухлиною (14 95) і становить 1 95 від всіх видів раку (Кааб еї аї., вище). Лікування множинної мієломи зазвичай передбачає високодозову хіміотерапію із наступною трансплантацією гемопоетичних стовбурових клітин (алогенною або аутологічною); однак, у пацієнтів із множинною мієломою, які пройшли таке лікування, поширеною є висока частота рецидивів. Як обговорюється вище, ВСМА експресується на високому рівні в клітинах множинної мієломи (див., наприклад, Момак еї аї!., вище; Мегі еї аІ., вище; ВеПиссі еї аї., вище; та
Могеаих еї а!., вище).
Як продемонстровано в даному документі, ВСМА також експресується на стовбурових клітинах множинної мієломи. У зв'язку з цим у даному винаході передбачений спосіб знищення стовбурових клітин множинної мієломи, який включає приведення стовбурових клітин множинної мієломи, що експресують ВСМА, в контакт із кон'югатом антитіла та лікарського засобу, описаним у даному документі, або композицією, яка містить АОС, описаною в даному документі, внаслідок чого кон'югат антитіла та лікарського засобу зв'язується з ВСМА на стовбурових клітинах множинної мієломи та знищує стовбурові клітини множинної мієломи.
Стовбурові клітини множинної мієломи можна ідентифікувати в кістковому мозку пацієнтів із множинною мієломою за їхньою поверхневою експресією СО19 та відсутністю поверхневої експресії СО138 (див., наприклад, Маївиї еї аї., Віоса, 103: 2332-6 (2004)). Ці клітини мають унікальну клоногенність та здатність до приживлення в мишей з імунодефіцитом, у той час як плазматичні клітини мієломи, визначені як СО138-С2019-, не є такими. Стовбурові клітини множинної мієломи також є стійкими до наявних засобів терапії (Маївиї єї а!., Сапсег Вез., 68: 190-7 (2008)).
Кон'югат антитіла та лікарського засобу, описаний у даному документі, або композиція, яка містить кон'югат антитіла та лікарського засобу, можуть бути приведені в контакт із популяцією клітин множинної мієломи, що експресують ВСМА, ех мімо, іп мімо або іп міго. "Ех мімо" стосується способів, що здійснюються всередині клітин або тканини або на них у штучному середовищі поза організмом із мінімальною зміною природних умов. На відміну від цього, термін "їй мімо" стосується способу, що здійснюється усередині живих організмів у їхньому нормальному, інтактному стані, у той час як спосіб "іп міго" здійснюється із застосуванням компонентів організму, які були виділені з їхнього звичайного біологічного оточення. В одному варіанті здійснення клітини множинної мієломи є клітинами множинної мієломи людини, які приводять у контакт з АОС, описаним у даному документі, або композицією, яка містить АОС, іп мімо.
Використовувані в даному документі терміни "лікування", "здійснення лікування" тощо стосуються одержання бажаного фармакологічного та/або фізіологічного ефекту. Ефект переважно є терапевтичним, тобто ефект забезпечує часткове або повне виліковування захворювання та/або несприятливого симптому, пов'язаного із захворюванням. З цією метою спосіб згідно з даним винаходом включає введення "терапевтично ефективної кількості" антитіла, або АОС, або композиції, яка містить антитіло або АОС та фармацевтично прийнятний носій. "ТГерапевтично ефективна кількість" стосується кількості, ефективної в дозах та протягом періодів часу, необхідних для досягнення бажаного терапевтичного результату. Терапевтично ефективна кількість може варіюватися залежно від таких факторів, як хворобливий стан, вік, 60 стать і маса тіла індивідуума та здатність антитіла або АОС викликати бажану відповідь в індивідуума. Наприклад, терапевтично ефективна кількість АОС за даним винаходом являє собою кількість, яка зв'язується з ВСМА на клітинах множинної мієломи та руйнує їх.
Альтернативно, фармакологічний та/або фізіологічний ефект може бути профілактичним, тобто ефект забезпечує повне або часткове попередження захворювання або його симптому. Із цього погляду спосіб згідно з даним винаходом включає введення "профілактично ефективної кількості" АОС або композиції, яка містить АОС, ссавцю, який має схильність до множинної мієломи. "Профілактично ефективна кількість" стосується кількості, ефективної в дозах та протягом періодів часу, необхідних для досягнення бажаного профілактичного результату (наприклад, попередження початку прояву захворювання).
Терапевтичну або профілактичну ефективність можна контролювати за допомогою періодичної оцінки пацієнтів, які одержують лікування. В одному варіанті здійснення АОС, описаний у даному документі, інгібує або пригнічує проліферацію клітин мієломи, що експресують ВСМА, на щонайменше приблизно 10 95 (наприклад, на щонайменше приблизно 2095, на щонайменше приблизно 30 95, на щонайменше приблизно 40 95, на щонайменше приблизно 5095, на щонайменше приблизно 6095, на щонайменше приблизно 70 95, на щонайменше приблизно 80 95, на щонайменше приблизно 90 95 або на щонайменше приблизно 100 95). Проліферацію клітин можна вимірювати за допомогою будь-якого придатного способу, відомого з рівня техніки, такого як вимірювання включення мічених нуклеозидів (наприклад, ЗН- тимідину або бромдезоксиуридину Вга())) до складу геномної ДНК (див., наприклад, Маднамап,
Н.М., у. 5ієт Сеїї5 Ведеп. Меа., 3(1): 12-14 (2007)).
Антитіло або АОС, описані в даному документі, або композицію, яка містить АОС на основі антитіла, можна вводити ссавцю (наприклад, людині) за допомогою стандартних методик введення, в тому числі, наприклад, внутрішньовенного, внутрішньочеревинного, підшкірного.
Більш переважно, антитіло або АОС або композицію, яка їх містить, вводять ссавцю шляхом внутрішньовенної ін'єкції.
Антитіло або АОС, описані в даному документі, або композицію, яка містить антитіло або
АБС, можна вводити з одним або декількома додатковими терапевтичними засобами, які можна вводити ссавцю спільно. Термін "спільне введення", використовуваний у даному документі, стосується введення одного або декількох додаткових терапевтичних засобів та антитіла або
АОС, описаних у даному документі, або композиції, яка містить антитіло або АОС, достатньо близько за часом одне від одного так, щоб антитіло або АОС могли посилювати ефект одного або декількох додаткових терапевтичних засобів або навпаки. У зв'язку з цим антитіло або АОС або композицію, яка їх містить, можна вводити в першу чергу, а один або декілька додаткових терапевтичних засобів можна вводити в другу чергу, або навпаки. Наприклад, антитіло або АОС або композицію, яка їх містить, можна вводити в комбінації з іншими засобами (наприклад, як ад'ювантами) для лікування або попередження множинної мієломи. Із цього погляду антитіло або АОС або композицію, яка містить антитіло або АОС, можна застосовувати в комбінації з щонайменше одним іншим протираковим засобом, в тому числі, наприклад, будь-яким придатним хіміотерапевтичним засобом, відомим 3 рівня техніки, іонізувальним випромінюванням, низькомолекулярними протираковими засобами, протираковими вакцинами, біологічними засобами терапії (наприклад, іншими моноклональними антитілами, вірусами, що знищують ракові клітини, генною терапією та адоптивним перенесенням Т-клітин) та/або хірургічним втручанням.
Наступні приклади додатково ілюструють даний винахід, але, звичайно, їх не слід тлумачити як такі, що будь-яким чином обмежують його обсяг.
ПРИКЛАД 1
У даному прикладі описане одержання моноклонального антитіла, спрямованого проти антигену дозрівання В-клітин (ВСМА).
Згідно із режимом імунізації КІММ5, описаним в Кіїраїгіск еї аї., Нубгідота, 16(4): 381-389 (1997), самиці трансгенних мишей Абіехіз (Абріехі5, ГІ С, Сан-Франциско, Каліфорнія) віком шість тижнів одержували шість циклів підшкірних ін'єкцій очищеного рекомбінантного ВСМА-Ес людини (гНи) окремо (кампанія 1) або поперемінну імунізацію за допомогою як гНнНи ВСМА-Ес, так ії ВСМА-Ес макаки-крабоїда (Супо ВСМА-Ес) або адгезивних клітин 293 (Ад293), що експресують Ни ВСМА або Супо ВСМА (кампанія 2), в декілька ділянок. Мишей імунізували протягом курсу 13 днів з інтервалами у 2-3 дні. У кожному циклі імунізації мишей спочатку анестезували ізофлураном. Імуноген емульгували в повному або неповному ад'юванті Фрейнда та ад'юванті ТІТЕКМАХФО соїа (Зідта-Аїагісп, Сент-Луїс, Міссурі) та ін'єктували білатерально в декілька ділянок. Тестовані зразки крові збирали в день 13 та аналізували щодо зв'язування антигену за допомогою ЕГІЗА та ГАС5 на адгезивних клітинах 293, що експресують ВСМА бо людини та макаки-крабоїда. Мишам із добрими титрами у сироватці крові внутрішньочеревинно вводили бустерну ін'єкцію до злиття, і їх умертвляли в день 17. Клітини лімфатичних вузлів збирали та зливали з лінією клітин мієломи РЗ-Х63-А98.653 згідно зі способом злиття, опосередкованого поліетиленгліколем (Коспе Оіадпобвіїсв, Індіанаполіс, Індіана), для одержання стабільних гібридом.
Гібридоми, що виробляють антитіла, специфічні до ВСМА, ідентифікували шляхом скринінгу зразків надосадової рідини культур гібридом в аналізі ЕГІЗА з прямим зв'язуванням з наступним
ЕАС5 стосовно клітин Ааг293, що експресують ВСМА. Позитивні гібридоми додатково тестували щодо їхньої здатності зв'язувати, інтерналізувати та знищувати клітини множинної мієломи МСІ-
НУО29 іп міїго із застосуванням кон'югату на основі вторинного антитіла та сапорину РГар-2АР (Адуапсеа Тагдейпд 5узіетв, Сан-Дієго, Каліфорнія, ІТ-48) та за допомогою аналізу зв'язування з ендогенним ВСМА, що експресується в лініях клітин, за методом РАС5. З урахуванням ефективності інтерналізації та знищення клітин гібридоми потім клонували методом граничних розведень і розмножували для очищення антитіл та збереження гена варіабельної ділянки.
В ході першої кампанії було одержано панель із 44 зв'язувальних засобів, які зв'язуються лише з антигенами людини, та 4 зв'язувальних засобів із перехресною реактивністю щодо антигенів людини та макаки-крабоїда. Ці 48 антитіл потім додатково тестували за допомогою
ЕАС5 стосовно адгезивних клітин 293, що експресують ВСМА, та ліній клітин МСІ-НУО29, що експресують ендогенний пиВСМА. Лідерну панель із 25 гібридомних ліній ідентифікували шляхом ранжування антитіл за найліпшим зв'язуванням з ендогенним ВСМА людини. Загалом з 11 тібридомами переходили до субклонування, збільшення масштабу, секвенування та очищення. Клони також оцінювали щодо знищення, опосередкованого Рар-2АР. Одне антитіло (клон 4679) рекомбінантно клонували як ЇдДс1 людини для додаткового оцінювання.
В ході другої кампанії було одержано панель із 98 зв'язувальних засобів для імунізації за допомогою ВСМА-Ес гНи/Супо, дев'ять зв'язувальних антитіл для імунізації за допомогою "НишСупо ВСМА-Ес та клітин Аа293, що експресують Супо ВСМА, і жодного зв'язувального засобу для імунізації за допомогою клітин Ааг293, що експресують як Ни, так і Супо ВСМА. Ці гібридоми додатково тестували щодо зв'язування з ТАСІ та ВАРБ-К за допомогою ЕАС5, при цьому антитіла, що демонструють будь-яке виявлюване зв'язування з ТАСІ та ВАРЕРЕ-В, вилучали. Ці процедури вторинного скринінгу разом з аналізом з Рар-2АР зумовлювали
Зо ідентифікацію восьми гібридом, які передавали на клонування методом граничних розведень (Г0с). З урахуванням їхньої активності два клони (клони 756 та 1582) потім перетворювали на
ІДО1 людини для додаткового оцінювання.
Антитіла 4679, 756 та 158201 (описані нижче) аналізували за допомогою ЕБАС5 для оцінювання зв'язування антитіл із ВСМА людини, ВСМА макаки-крабоїда, ТАСІ та ВАЕРЕ-Е із застосуванням рекомбінантних форм рецепторів, що стабільно експресуються на клітинах даг93. Аналізи зв'язування проводили шляхом інкубування антитіл 4679, 756 та 158201. із 200000 клітин при 4 "С протягом 45 хвилин із наступними двома промиваннями за допомогою
РВ5--2 95 ЕВ5. Потім клітини інкубували з міченими АїІеха-РіІцог 647 вторинними антитілами при 4 "С із наступними двома промиваннями в РВ5--2 95 ЕВ5. Мічені АРС антитіла до ВАЕРЕ-В, ТАСІ та ВСМА людини додавали згідно з рекомендованим виробником розведенням у контрольні лунки. Клітини ресуспендували в 200 мкл РВ5ч2 95 ЕВ5-0АРІ, і аналізували зв'язування антитіл з живими клітинами із застосуванням цитометра Весіоп бісКіпзоп Віозсіепсе5 І ЗКІЇ. Антитіло 15820 було єдиним протестованим антитілом з перехресною реактивністю щодо антигенів макаки-крабоїда, яке не зв'язувалося з ВАРРЕ-К та/або ТАСІ, як показано на фіг. 1.
Моноклональне антитіло 1582 піддавали мутації з перетворенням на форму зародкового типу (158201) із використанням праймерів, розроблених для здійснення мутації чотирьох залишків у 1582, які не відповідають зародковому типу. ДНК 1582 дикого типу використовували як матричну ДНК для мутагенезу ОцікСпапде Гіднпіпіпуд (Адіїепі Сепотіс5, Санта-Клара,
Каліфорнія). Клітини ТВ (Іпмігодеп/ППпегтоРізпег Зсіепіййс, Волтем, Массачусетс) використовували для трансформації. Після перевірки послідовності проводили аналізи зв'язування ВСМА та кінетичні аналізи для порівняння зв'язування 1582051! та 1582УМ/Т1 й одержували сукупність лідерних оптимізованих (ГО) клонів 158201. Коротко кажучи, 1582 клонували у вектор експресії ЕАБ, розроблений для бактеріальної експресії. Кожен із двадцяти семи залишків важкого ланцюга та дев'ятнадцяти залишків легкого ланцюга піддавали економному мутагенезу із застосуванням праймерів, розроблених із забезпеченням можливості використання дев'ятнадцяти різних амінокислот, за винятком цистеїну. Мутагенез проводили із застосуванням набору для мутагенезу ОцікСпапде Гідніпіпу (Адіепі Сепотіс5, Санта-Клара,
Каліфорнія).
Приблизно сто колоній на положення піддавали скринінгу за допомогою ЕГІБА щодо бо зв'язування у загальній кількості 6000 клонів. Зв'язування під час ЕГІЗА вимірювали шляхом захоплення ВСМА людини із низькою щільністю та з використанням надосадової рідини культури бактерій після 48 годин бактеріальної експресії. Хіти визначали як такі, що більш ніж удвічі перевищують показник для контролю 158201. Окремі амінокислотні хіти підтверджували за допомогою ЕГІЗА для ВСМА макаки-крабоїда без зв'язування з неспецифічним білком.
Ідентифіковані хіти після економного скринінгу потім об'єднували для розробки праймерів для одержання комбінаторної бібліотеки. Згаданий вище скринінговий підхід 3 ЕАБ за допомогою аналізу зв'язування ЕГІЗА повторювали для комбінаторної бібліотеки з використанням 158201. як вихідної матриці та контролю для ЕЇГІЗА. Хіти, ідентифіковані після комбінаторного скринінгу, потім клонували у вектор експресії Ідс у клітинах ссавців ("Маїа"), розроблений для кон'югування з одержанням АОС. Забезпечували експресію білків у клітинах 29З3НЕК, і їх очищали за допомогою афінної хроматографії з білком А для додаткового тестування.
Здатність антитіла 158201. та І О-клонів 158201. до зв'язування, інтерналізації та знищення клітин Нео29 множинної мієломи іп міго оцінювали з використанням Рар-2АР та за допомогою аналізу зв'язування з ендогенним ВСМА, що експресується в лініях клітин, описаних вище, за методом РАС5. Коротко кажучи, антитіла інкубували з 200000 клітин протягом 30 хвилин при 4 С із наступними двома промиваннями за допомогою РВ5-2 95 ЕВ5. Клітини ресуспендували в 100 мкл холодного РВ5-2 96 ЕВ5 та витримували при 4 "С. У певні моменти часу клітини промивали та ресуспендували в теплому КРМІ-10 95 ЕВ5 та поміщали в інкубатор при 37 "С, 5 96 СО». У кінці експерименту клітини промивали, а потім інкубували з міченими АїПІеха-Ріцог 647 вторинними антитілами при 4 "С із наступними двома промиваннями в РВ5ж2 95 ЕВ5. Клітини ресуспендували в 200 мкл РВ5ш2 96 ЕВ5-ОАРІ, і аналізували зв'язування антитіл 3 живими клітинами із застосуванням цитометра Весіоп РісКіпзоп Віозсіепсе5 І ЗКІЇ. Антитіло 15820 демонструвало унікальну та швидку інтерналізацію згідно з цим способом порівняно з антитілом до ВСМА УбМО (описаним у патенті США 9273141) та І О-антитілами.
З урахуванням зв'язування ВСМА, процедур кінетичного скринінгу (обговорюваних вище) та інтерналізації було відібране моноклональне антитіло 158201, і п'ять І О-клонів (тобто 109, І 15,
Р10, М22 та МО2) були вибрані для очищення та кон'югування разом із 1582051.
Амінокислотні послідовності варіабельних ділянок важких і легких ланцюгів моноклональних антитіл 1582 (дикого типу та зародкового типу) та І О-клонів 109, І 15, Р10, М22 та МО2 показані в таблиці 1.
Амінокислотна послідовність
ЕМО МЕССІ МКРОСБІ ВІ ЗСААЗСО ЕТ ЕВЗУ5МММУУВОАРОКОЇ ЕМ У55ІВ ОМ МАОБУКІ
ЕІМІ-ТО5РСТІ ЗІ 6ЄРОЕВАТІ 6ЄСВАБЗОМІЗ5МУІ АМУООКРООАРВІЛЛІМСАЗМВАТОСІРОВЕЗОИ5О:
Варіабельна ділянка ланцюга ЕЮОЇ МЕЗО, МКРОСБІ ВІ БСААЗОЕТЕВЗУЗММУУВОАРОКаї ЕМ УЗІЗИ ЗМУ МУМАрБУКС (МН) 1582
Варіабельна ділянка ланцюга ЕІМГТО5РИТІ ЗІ ЗРЕЕВАТІ БСВАБЗОМІЗЗММУІ АММООКРИОСОАРА ІМаАЗМААТтТаІРОВЕЗОИаБаИ: (Му) 1582
ЕМО МЕССІ МКРОСБІ ВІ ЗСААЗОЕТЕ55У ММ УВОАРОКСИЇ ЕМ У551ІВ С55МУ ММ АОБУКІ
ЕІМІ-ТО5РСТІ ЗІ 6ЄРОЕВАТІ 6ЄСВАБЗОМІЗ5МУІ АМУООКРООАРВІЛЛІМСАЗМВАТОСІРОВЕЗОИ5О:
ЕМО МЕССІ МКРОСБІ ВІ ЗСААЗОЕТЕ55У5МММУВОАРОКСИ ЕМ У55ІВ СОМ УМ АОБУК.
ЕІМІ-ТО5РСТІ ЗІ 6ЄРОЕВАТІ 6ЄСВАБЗОМІЗ5ММІ АМ МООКРООАРВІ ПУСАЗМВАТСІРОВЕЗа5О.
ЕМО МЕБОСОІ МКРОСБІ ВІ ЗСААЗОЕТЕ55У5МММУВОАРОКСИ ЕМ У55ІВ СОМ УМ АОБУК
ЕІМІ-ТО5РСТІ ЗІ 6ЄРОЕВАТІ 6ЄСВАБЗОМІЗ5ММІ АМ МООКРООАРВІ ПУСАЗМВАТСІРОВЕЗа5О.
ЕМО МЕССІ МКРОСБІ ВІ ЗСААЗСЕТЕ55У5МММУВОАРОКСИЇ ЕМ У551ІВ СМ МАОБУКІ
ЕІМІ-ТО5РСТІ ЗІ 6ЄРОЕВАТІ 6ЄСВАБЗОМІЗ5МУІ АМУООКРООАРВІЛЛІМСАЗМВАТОСІРОВЕЗОИ5О:
ЕМО МЕССІ МКРОСБІ ВІ ЗСААЗСОЕТЕВ5УЗМММУВОАРОКСІ ЕМ У55ІВ СОМ МАОБМУК
ЕІМІ-ТО5РСТІ ЗІ 6ЄРОЕВАТІ 6ЄСВАБЗОМІЗ5МУІ АМУООКРООАРВІЛЛІМСАЗМВАТОСІРОВЕЗОИ5О:
Результати цього прикладу демонструють одержання моноклональних антитіл, спрямованих проти ВСМА.
ПРИКЛАД 2
У даному прикладі продемонстрований спосіб одержання кон'югату антитіла та лікарського засобу (АОС), який містить моноклональне антитіло до ВСМА, кон'юговане з цитотоксином, згідно з даним винаходом.
Моноклональне антитіло 158201. та оптимізовані клони, описані в прикладі 1, кон'югували з корисним навантаженням РВО 553249 за допомогою сайт-специфічного кон'югування (Тпотрзоп еї аї., У. Сопіго! НеІєазе, 236: 100-116 (2016); Оітаві еї аІ. Мої Рпапт. 2017 Мау 1714(5):1501-1516). Зокрема, очищене антитіло інкубували із 40-кратним молярним надлишком відновника ТСЕР (трис(2-карбоксиетил)уфосфіну) у РВ5, рН 72, з 1 мМ ЕБЕОТА (етилендіамінтетраоцтової кислоти) протягом З годин при 37 "С. Після інкубування відновник видаляли шляхом 2Х діалізу в РВ5, рН 7,2, з 1 мМ ЕОТА при 4 "С із застосуванням касет для діалізу з ММУУСО 10000 із наступним інкубуванням з 20 молярними еквівалентами дегідроаскорбінової кислоти протягом чотирьох годин при 25 "С. Потім послідовно додавали вісім еквівалентів корисного навантаження РВО 503249 із вихідного розчину в 10 95 (об./о6.) рмМ5оО з наступним інкубуванням за кімнатної температури протягом однієї години з плавним обертанням. Реакцію кон'югування гасили шляхом додавання чотирьох молярних еквівалентів (щодо 5053249) М-ацетилцистеїну.
Процес кон'югування зумовлював 8-10 905 ступінь утворення агрегатів. Макромолекулярні агрегати, реагенти для кон'югування, включаючи гашений цистеїном 5053249, видаляли за допомогою хроматографії на керамічному гідроксиапатиті І типу (СНТ), як описано раніше (Тнотрзгоп еї аї., У. Сопіго! ВеІєазе, 236: 100-116 (2016)). Сайт-специфічні АОС складали в 25
ММ гістидині-НСІ, 7 95 сахарозі, 0,02 95 полісорбаті-80, рН 6.
Для визначення вмісту мономерів, кількості агрегатів та фрагментів проводили аналітичну ексклюзійну хроматографію (5ЕС-НРІ С) із застосуванням 100 мкг (в об'ємі 100 мкл) антитіл або
АОС, які завантажували в колонку ТеКадеї СЗО00МУХГ. (Тозоп Віозсіепсе, Токіо, Японія). Рухома фаза складалася з 0,1 М сульфату натрію, 0,1 М фосфату натрію та 10 95 ізопропанолу, рН 6,8.
Швидкість потоку становила 1 мл/хв., а кожний аналіз проводили протягом 20 хвилин за кімнатної температури. Хроматографію гідрофобних взаємодій (НІС-НРІ С) застосовували для оцінки кон'югування та розподілу навантаження лікарського засобу та проводили з використанням колонки з непоруватою смолою з бутильними групами (МРК) (ІО 4,6 мкм х 3,5 см, 2,5 мкм, Тозоп Віозсіепсе). Рухома фаза А складалася з 25 мМ трис-НСЇ, 1,5 М (МНг)250, рН 8,0; а рухома фаза В складалася з 25 мМ трис-НСІ та 5 95 ізопропанолу, рН 8,0. 100 мкл антитіл або АОС у концентрації 1 мг/мл завантажували та елюювали зі швидкістю потоку 1 мл/хв. із градієнтом від 5 956 В до 100 95 В протягом 13 хв. Відновлювальну обернено-фазову хроматографію (теР-НРІ С) застосовували для підтвердження кон'югування, специфічного щодо ланцюга. Антитіла та АОС піддавали відновленню при 37" С протягом 20 хвилин із використанням 42 мМ дитіотреїтолу (ОТ) у РВЗ (рН 7,2). 10 мкг відновлених антитіл або АОС завантажували в колонку з полімерним обернено-фазовим середовищем (РІ КР-5) на 1000 А (2,1 х 50 мм) (Адііїепі ТесппоЇодіє5, Санта-Клара, Каліфорнія) та елюювали за 80 "С зі швидкістю потоку 1 мл/хв. із градієнтом від 5 90 В до 100 95 В протягом 25 хвилин (рухома фаза А: 0,1 96 трифтороцтова кислота у воді, рухома фаза В: 0,1 956 трифтороцтова кислота в ацетонітрилі).
Кон'югування за важкими та легкими ланцюгами та співвідношення лікарський засіб:антитіло (БАК) визначали за допомогою аналізу за методом відновлювальної рідинної хроматографії з мас-спектрометрією (П/СМ5), який проводили на пристрої для ЧНРІС серії Адіїепі 1290, з'єднаному з ТОБ Адійєепі 6230 (Адієпі ТесппоЇодіе5, Санта-Клара, Каліфорнія). 2 мкг відновлених антитіл або АОС завантажували в колонку ЛОКВАХ для швидкого розділення з високою роздільною здатністю (ККНО) з З00-дифенілом (2,1 х 50 мм, 1,8 мкм) (Адіїепі
Тесппоїодіех, Санта-Клара, Каліфорнія) та елюювали зі швидкістю потоку 0,5 мл/хв. із застосуванням ступеневого градієнта 80 95 В після 2,1 хв. (рухома фаза А: 0,1 95 мурашина кислота у воді та рухома фаза В: 0,195 мурашина кислота в ацетонітрилі). Одержували сканограму часопролітної М5 у режимі позитивної іонізації, а збір та обробку даних проводили за допомогою програмного забезпечення Ма55Нипіег (АдіФепі Тесппоіодіе5, Санта-Клара,
Каліфорнія). ОАК розраховували з використанням даних гі СМ5, як описано в Тпотрзоп еї аї., вище.
Ефективність кон'югування визначали за допомогою наступного рівняння, де використовували теоретичне БАК, що дорівнює 2:
Ефективність кон югування -(визначене ОАК хтеоретичне РАК) хто
Значення ефективності кон'югування та САКЕ тестованих антитіл представлені в таблиці 2.
Таблиця 2 ш Корисне Ефективність Співвідношення
Назва конструкції навантаження кон'югування лікарський засіб:антитіло (АК) поя 71111111 |8503249,777 | 77777917 Ї7717171717171711182С1С 77777711 18503249... | ...7ЙюЮюЮюЮюЙь юю сш 5 Результати цього прикладу демонструють одержання АОС, які містять моноклональне антитіло до ВСМА, кон'юговане з піролобензодіазепіном, згідно з даним винаходом.
ПРИКЛАД З
У даному прикладі продемонстрована афінність зв'язування моноклональних антитіл до
ВСМА, описаних у даному документі, із мономерним (розчинним) та мембранозв'язаним ВСМА.
Зв'язування моноклонального антитіла 158201 та оптимізованих клонів І09, 115, Р10, М22 та МО2 (описаних у прикладі 1) оцінювали з використанням мономерного 5ВСМА людини (Сепзогірі, Піскатавей, Нью-Джерсі) за допомогою пристрою РгоїеОп ХРЕЗ6 (Віо-Кай, Геркулес,
Каліфорнія). Зв'язування У6МО також оцінювали для порівняння. Застосовували стандартне зв'язування за аміногрупою для іммобілізації 25 мкг/мл поліклонального антитіла до Ес (даскзоп
ІтітипоКезеагсії, Вест-Гроув, Пенсільванія), одержаного в 10 мМ натрій-ацетатного буфера (рн 4,5), на поверхні біосенсорного чипа РгоїеОп СІ С (Віо-Кай, Геркулес, Каліфорнія), попередньо активованого за допомогою 20 ММ ЕВСАС (гідрохлориду 1-етил-3-(3- диметиламінопропіл)карбодіїміду) та 5 мМ сульфо-МН5 (М-гідроксисульфосукциніміду), із щільністю х- 200-600 резонансних одиниць (КО). 158201, 109, 115, РІО, М22, МО2 та У6мМО послідовно вводили в концентрації 1 мкг/мл для захоплення іммобілізованим поліклональним антитілом до Ес. Сенсограму реєстрували за допомогою пропускання двократних серійних розведень 5ВСМА, одержаного в РВ5 (рН 7,4) із 0,005 95 (0б6./06.) Ту'ееп-20, у діапазоні 100-- 6,25 нМ над поверхнею із захопленими антитілами протягом 150 секунд при 75 мкл/хвилина з часом дисоціації 600 секунд. Для аналізу даних застосовували програмне забезпечення для аналізу даних РгоїеОп.
Результати даного експерименту показані на фіг. 13 та Ффіг.14 і в таблиці 3.
Таблиця З
Вимірювання показників кінетики із застосуванням РгоїеОп від ВіоКайа о Антитло | //// Коп/// | Коб | ка | ямб ( поя 77777777 17111 609405 | 503 | 982209. | -( 98 щ КзЗ мог 77771711 499405 | 4975-03 | 9952-09. | щ.-:х: 99
Зв'язування 158201, 109, 115 та У6МО із мембранозв'язаним ВСМА людини оцінювали за
Зо допомогою проточної цитометрії в лініях клітин множинної мієломи та плазмоклітинного лейкозу, які ендогенно експресують ВСМА (МСІ-НО29 та ММ.15 відповідно). Зв'язування 158201, 109, 115 із мембранозв'язаним ВСМА людини також оцінювали на клітинах Ааг293, що експресують ВСМА людини. Аналізи зв'язування проводили шляхом інкубування антитіл до
ВСМА з 200000 клітин протягом 30 хвилин при 4 "С із наступними двома промиваннями за допомогою РВЗя2 96 ЕВ5 (буфера для ЕГАС5). Діапазон концентрацій антитіла оцінювали із застосуванням серії З-кратних розведень за 12 точками. Потім клітини інкубували з 5 мкг/мл вторинних антитіл кози до дб людини, мічених АЕб47 (Тпепто Різпег зЗсіепійіс, Волтем,
Массачусетс) при 4"С із наступними двома промиваннями в РВеж2 95 ЕВ5. Клітини ресуспендували в 200 мкл РВ5ж2 95 ЕВ5-0АРІ.
Флуоресценцію живих окремих клітин вимірювали із застосуванням цитометра ВО
Віозсіепсе5 І 5ЗКІЇ та програмного забезпечення ВО РАСЗРОіма (ВО Віозсіепсе5, Сан-Хосе,
Каліфорнія). Дані аналізували за допомогою програмного забезпечення Біомо (Біомлдо, ГІС,
Ешленд, Орегон). Середні значення інтенсивності флуоресценції використовували для визначення відсоткової величини зв'язування, а ЕС50О визначали із застосуванням програмного забезпечення Ргізт (СгтарпРай Зоїймаге Іпс, Ла-Хойя, Каліфорнія). Результати даного експерименту показані на Фіг. 15. Узагальнені дані про "позірну афінність", виміряну за допомогою 5РЕ та проточної цитометрії, показані в таблиці 4.
Таблиця 4
Антитіло зв'язування (нМ), клітинами мономерний ВСМА юю 77777717 1711111117198111111111154 17111148 | 5 мог ЇЇ 77771717189..... |Ммо | Ммо 7 |1МмоССсС
МО - не визначено
Результати даного прикладу демонструють, що моноклональне антитіло до ВСМА 158201. характеризується сильним зв'язуванням із мембранозв'язаним ВСМА і слабким зв'язуванням із мономерним (розчинним) ВСІМА, і воно з цього погляду є унікальним серед інших моноклональних антитіл, які аналізували в цих аналізах.
ПРИКЛАД 4
У даному прикладі продемонстровані способи знищення клітин множинної мієломи та плазмоклітинного лейкозу іп міго із застосуванням кон'югатів антитіла та лікарського засобу, описаних у даному документі.
Знищення ліній клітин множинної мієломи та плазмоклітинного лейкозу за допомогою кон'югатів антитіла та лікарського засобу, які містять 158201 або його клони з оптимізованою афінністю, кон'юговані з 553249, оцінювали іп мійго із застосуванням протоколу, рекомендованого в наборі СЕ ТІТЕК-СГОФ (Рготеда, Медісон, Вісконсин). Знищення ліній клітин множинної мієломи та плазмоклітинного лейкозу за допомогою вільного вражального елемента 553199 також оцінювали із застосуванням протоколу, рекомендованого в наборі
Зо СЕП ТІТЕВН-СОГОФ (Рготеда, Медісон, Вісконсин). Коротко кажучи, 5 х 103 клітин у 80 мкл
АРМІ--10 95 ЕВЗ додавали у внутрішні лунки 96-лункових планшетів з білими стінками (СогпіпдФ
Совіаго), Різпег зЗсіепійіс, Волтем, Массачусетс). Тестували наступні лінії клітин, що експресують
ВСМА: МСІ-НО2О, ЕОМ, ММ.1А, 99УМ3, ОРМ-2, ММ.15, 0266.81 та 1363. ВСМА-негативні лінії клітин Каїї та ЩУигкаї також тестували. Кон'югати антитіла та лікарського засобу розводили до одержання 5х вихідного розчину (2,5 мкг/мл) у КРМІ-10 95 ЕВ5. Засоби обробки потім серійно розводили 1:3 в КРМІН1О 95 ЕВ5. 20 мкл цих серійних розведень додавали до клітин у двох повторностях з одержанням у результаті кривої залежності від дози кон'югату антитіла та лікарського засобу за 12 точками в діапазоні від найвищої концентрації 0,5 мкг/мл до найнижчої концентрації З х 105 мкг/мл. Контролі, що являють собою кон'югат ізотипового антитіла та лікарського засобу (951-5553249 та Ідб1-тсо-ММАБР) та тільки середовище, також включали.
Планшети інкубували при 37 "С, 5 95 СО» протягом 96 годин. Наприкінці періоду інкубування в кожну лунку додавали 100 мкл розчину субстрату (Рготеда, Медісон, Вісконсин).
Люмінесценцію вимірювали за допомогою багатоканального планшет-рідера Епмівіоп (РегкКіп
ЕІтег, Волтем, Массачусетс). Дані аналізували та представляли графічно за допомогою програмного забезпечення СгарпРай Ргізт (СгарпРай бойуаге, Іпс., Ла-Хойя, Каліфорнія), і визначали концентрацію напівмаксимального інгібування (ІС50).
Інформацію щодо хромосомних транслокацій для кожної лінії клітин брали з Могеаих еї аї,
2011 та Воегета-мгецдаенпнії еї аї, 2004. Кількість рецепторів ВСМА визначали з використанням 1582, міченого АЕб647 (набір для мічення білків АІеха Рійог 647, Тпегто Різпег Зсіепійіс, Волтем,
Массачусетс), та набору Оцапішт"М МЕЗЕ для АїЇеха Ріцог 647 (Вапо5 І арогафгіє5, Фішерс,
Індіана).
Результати даного експерименту показані в таблиці 5 та на Фіг. 2А-23.
Таблиця 5
Цитотоксичність іп міїго у лініях клітин множинної мієломи та плазмоклітинного лейкозу
Кількість 158201 -
Лінія клітин Походження Хромосомна рецепторів ЗаЗ249, За3199, захворювання | транслокація ВСМА ІС50 (нг/мл) ІС5О (ПМ) я Лімфома ка 00100000 ллижаї 00000 |Тлімроцити МА ЇЇ 7777/0777 | 5500 | з
ВСМА - антиген дозрівання В-клітин; МА - дані відсутні; МТ - не тестували
Здатність АОС 158201 -505533249 знищувати клітини множинної мієломи іп міго у присутності розчинного ВСМА (5ВСМА) порівняно з АОС 109-553249 оцінювали в клітинах ММ.15 за допомогою описаного вище протоколу за винятком того, що тестовані лінії клітин також оброблювали кондиціонованим середовищем, що містить ВСМА, зібраним від клітин Ааг293, що експресують ВСМА людини (Фіг. ЗА і ЗВ). Знищення клітин за допомогою АОС 158201 -5553249 у присутності 7ВСМА також порівнювали з АОС, які містять антитіло до ВСМА 96МО, яке описано в патенті США 9273141. Результати даного експерименту показані на Фіг. З, на якій продемонстровано, що активність АОС 158201 -5253249 підтримується у присутності клінічно значущих рівнів ЗВСМА більшою мірою, ніж АОС 109-5Х553249 (Фіг. ЗА), У6МО-тсо-ММАЕ та О6МО- 5653249 (Фіг. ЗВ та таблиця 6).
Таблиця 6 7117101 л15826і-503249,. | 1447 | - 700 11.0 96мо-5032049,.77..7.7.7.юЮюЮ | 4816. | 77777771 711.0 пое-503249.777777777 | 2809 | 71121 111110 д96Мо-теММАє | 2928 | -:(хК 700
Результати даного прикладу демонструють, що АОС 158201 -5053249 знищує клітини множинної мієломи та плазмоклітинного лейкозу іп міго та що активність знищення клітин підтримується навіть у присутності розчинного ВСМА. Зокрема, АОС 158201 -553249 був цитотоксичним як для ММ.15, так і для МСІ-НО29 іп міго, знищуючи в середньому 95 95 пухлинних клітин у присутності 57ВСМА на рівнях, що становлять не більше ніж 720 нг/мл, із невеликим впливом на ІС50. АОС, розроблені на основі антитіл, які мають подібну афінність до мономерного ВСМА та мембранозв'язаного ВСМА, демонстрували зниження ефективності, залежне від дози 5ВСМА, із 20-кратним зсувом ІС50 у присутності 720 нг/мл 5 ВСМА.
ПРИКЛАД 5
У даному прикладі продемонстровані способи знищення клітин множинної мієломи та плазмоклітинного лейкозу іп мімо із застосуванням кон'югатів антитіла та лікарського засобу, описаних у даному документі.
Підшкірні ксенотрансплантатні мишачі моделі множинної мієломи та плазмоклітинного лейкозу створювали шляхом імплантації ліній клітин множинної мієломи або плазмоклітинного лейкозу, що експресують ВСМА (тобто МСІ-НО2г9, 9УУМ-3, ММ.15 та ММ.1К), самицям мишей СВ- 17 зі БСІО (С.8-17/ЛегНзга-Рікас-5сід) або безтимусних "голих" (Бохп1"ч) мишей із застосуванням
МАТЕАІСЕЇ м (ВО Віозсіепсе5, Сан-Хосе, Каліфорнія). Коли пухлини досягали приблизно 180 мм (клітини МСІ-НО29), 190 мм? (клітини У)М3), 160 мм? (клітини ММ.15) або 175 мм3 (клітини
ММ.1к), мишей рандомізували згідно з розміром пухлини та поміщали в групи введення доз та обробляли за допомогою АОС, що націлюються на ВСМА, як описано нижче.
Ксенотрансплантатна модель МСІ-НЗУ2гО
Мишей обробляли одноразовою внутрішньовенною дозою 0,3 мг/кг АОС 158201 -5213249,
І09-50253249, І 15-5053249, або їм внутрішньовенно вводили дози У6МО-то-ММАЕ один раз на тиждень в дозі 0,3 мг/кг протягом 2 тижнів. Контрольних мишей залишали необробленими.
Мишей, оброблених за допомогою 158201 -5Ц243249, 109-53553249 та І 15-553249, спостерігали протягом 99 днів після імплантації пухлини, при цьому ознаки відновлення росту пухлини були відсутні, як показано на Фіг. 4. У жодній із груп введення доз не спостерігалася втрата маси тіла.
Ксенотрансплантатна модель 9У)М3
Мишей обробляли одноразовою внутрішньовенною дозою 1 мг/кг АОС 158221 -5І253249, 109- 563249 та І 15-553249, або їм внутрішньовенно вводили дози АОС О6МО-тсо-ММАЕ один раз на тиждень в дозі 1 мг/кг протягом З тижнів. Контрольних мишей залишали необробленими.
Зо Мишей, оброблених за допомогою 158201 -5Ц243249, 109-53553249 та І 15-5053249, спостерігали протягом 104 днів після імплантації пухлини, при цьому ознаки відновлення росту пухлини були відсутні, як показано на Фіг. 5. У жодній із груп введення доз не спостерігалася втрата маси тіла.
Ксенотрансплантатна модель ММ.15
Мишей обробляли одноразовою внутрішньовенною дозою 1 мг/кг АОС 158201 -5Д2:3249, 109- 503249, 115-553249, або їм внутрішньовенно вводили дози .6МО-то-ММАР два рази на тиждень в дозі 1 мг/кг протягом 4 тижнів. Контрольних мишей залишали необробленими.
Мишей, оброблених за допомогою 158201 -5Ц243249, 109-53553249 та І 15-553249, спостерігали протягом 99 днів після імплантації пухлини, при цьому ознаки відновлення росту пухлини були відсутні, як показано на Фіг. 6. У жодній із груп введення доз не спостерігалася втрата маси тіла.
Ксенотрансплантатна модель ММК
Мишей обробляли одноразовою внутрішньовенною дозою 1 мг/кг 158201 -553249, або їм внутрішньовенно вводили дози У6МО-тсо-ММАЕ один раз на тиждень в дозі З мг/кг протягом 4 тижнів. Контрольних мишей залишали необробленими. Мишей, оброблених за допомогою 158201 -5653249, спостерігали протягом 109 днів після імплантації пухлини, при цьому ознаки відновлення росту пухлини були відсутні, як показано на Фіг. 7. У жодній із груп введення доз не спостерігалася втрата маси тіла.
Результати даного прикладу демонструють, що АОС 158201 -553249 проявляє підвищену протипухлинну ефективність іп мімо порівняно з іншими АОС, які націлюються на клітини, що експресують ВСМА.
ПРИКЛАД 6
У даному прикладі продемонстровано, що стовбурові клітини множинної мієломи експресують ВСМА.
У кістковому мозку пацієнтів із множинною мієломою (ММ) міститься невелика популяція ракових стовбурових клітин (С5С), які можна ідентифікувати в кістковому мозку пацієнтів за їхньою поверхневою експресією СО19 та відсутністю поверхневої експресії СО138 (Маївзиї еї аї.,
Віоса, 103: 2332-6 (2004)).
Експресію ВСМА оцінювали у популяції стовбурових клітин у зразках від чотирьох пацієнтів із множинною омієломою за допомогою проточної цитометрії. Зразки одержували від
Ргоїєодепех, Іпс. (Калвер-Сіті, Каліфорнія) (див. таблицю 7), і окремі зразки множинної мієломи бо (ММ) розморожували на водяній бані при 372С.
Таблиця 7
Інформація про пацієнтів з ММ
Етнічна Клінічний
ІО зразка Стать . : Статус захворювання приналежність діагноз
Розморожені клітини додавали до 10 мл РВ5 та підраховували із застосуванням лічильника
МСЕ тм (ВесКтап-СоиНег І Ме зсіепсе5, Індіанаполіс, Індіана). Аліквоту суспензії клітин одержували для аналізу утворення колоній, у той час як решту суспензії клітин центрифугували за низької швидкості для осадження клітин. Клітини піддавали блокуванню Ес-рецепторів згідно з інструкціями виробника, потім висівали у кількості 200000 клітин на лунку в 96б-лунковий планшет. Планшет центрифугували для осадження клітин, розчин для блокування Ес- рецепторів зливали, і зразки клітин ресуспендували в буфері для забарвлювання ВМ із наступним забарвлюванням за допомогою відповідної панелі антитіл, що складається з безпосередньо кон'югованих антитіл з комерційних джерел, які показані в таблицях 8 і 9.
Таблиця 8
Панель антитіл для забарвлювання
Окремий барвник ВУ510 соВ-вУБто, СОо34-ВМ510, СО14-8ВМ510, СО193-
Окремий барвник РЕ СО138-РЕ
Окремий барвник АРС СО19-АРС
Окремий барвник РЕ/Су7 ВСМА-РЕ/Су7 000105 0 |Беззабарвлювання./:.//././/.//СсСсСсСсС 00006 Окремий барвник САРІ рАРІ
ЕМО (ВУ510 СО138-РЕ, СО19-АРС, ВСМА-РЕ/Су?7, ОАРІ
ЕМО (РЕ) Сборз3з-ву510, СбО34-8У510, СО14-8У510, СО193- вУБб10, СО19-АРС, ВСМА-РЕ/Су?7, АРІ
Сборз3з-ву510, СбО34-8У510, СО14-8У510, СО193- а РМО (РО) ВУ510, СО138-РЕ, ВСМА-РЕ/СУ7, ОАРІ
Сборз3з-ву510, СбО34-8У510, СО14-8У510, СО193-
РМО (РЕ/Су?) вУБб10, С0О138-РЕ, СО19-АРС, рАРІ 14 Всі барвники Сборз3з-ву510, СбО34-8У510, СО14-8У510, СО193- й вУБб10, С0О138-РЕ, СО19-АРС, ВСМА-РЕ/Су7, САРІ
Сборз3з-ву510, СбО34-8У510, СО14-8У510, СО193-
РМО (ОАРІ) ВУ510, СО138-РЕ, СО19-АРС, ВСМА-РЕ/Су7
Компенсаційні гранули З
Компе со193-ВУ510
Компенсаційні гранулиз РЕ |СО138-РЕ
Компенсаційні гранули з АРС. |СО19-АРС
Компенсаційні гранули З .
Компен ВСМА-РЕ/Су7
Таблиця 9
Антитіла, застосовувані для аналізу за методом проточної цитометрії
АРІ 77777771 17117171 |Третовгівпеєбсівпііс | 622489
БеВюск 77777777 77771711 |ВОРпатіповєт//////// | 564220 ШГ-: елект вовни 01 огіг2оп Війапі (ГранулиШасотр | 77771110 |еВіовсієпсевв////// | бі-г222-42
Крім того, компенсаційні гранули забарвлювали окремо тестованими антитілами. Планшет інкубували при 49С у темряві протягом 30 хвилин. Планшет центрифугували, і клітини промивали в ОРВ5ч2 95 ЕВ5З із наступним ресуспендуванням у 200 мкл ОРВЗа2 95 ЕВ5-А0АРІ.
Клітини з кожної лунки оцінювали на проточному цитометрі ВО І КІ! (ВО Віозсіепсе5, Сан-Хосе,
Каліфорнія), і створювали ЕСо5-файли. Ідентифікацію клітин проводили із застосуванням наступної стратегії гейтування: компенсацію проводили за допомогою автоматичної комп'ютерної матриці у Біомоя10 (Ріомло Г.С, Ешленд, Орегон) із використанням даних про компенсаційні гранули та окремі барвники. Плазматичні клітини гейтували за графіком ЕЗС-А проти З5С-А, потім відбирали окремі живі клітини за графіком флуоресценції САРІ проти 5550-
ММ. Потім застосовували виключне гейтування для вилучення клітин, які характеризувалися позитивним забарвленням щодо СОЗ, СО14, СОЗ34 та СО193, за графіком флуоресценції ВМ-510 проти 550-А. Цю популяцію потім аналізували на графіку флуоресценції СО138-РЕ проти
СО19-АРС. Гістограми експресії ВСМА створювали для популяції С5С ММ, визначеної як
Ср19-/С20138-, і популяції плазматичних клітин ММ, визначеної як СО19-/С0138ж. Аналітичні гейти встановлювали з урахуванням відповідних контролів флуоресценції із комбінацією детектовних міток без однієї (ЕМО). Усі зразки демонстрували невелику відсоткову частку клітин
Ср138-2019-, які були позитивними щодо експресії ВСМА, як показано на Фіг. 7. Рівень експресії ВСМА в популяції стовбурових клітин зазвичай дорівнював рівню, спостережуваному в плазматичних клітинах, за винятком ММ277, де рівень був нижчим, але все ще позитивним щодо експресії ВСМА.
Результати даного прикладу демонструють, що ВСМА експресується на ракових стовбурових клітинах множинної мієломи.
ПРИКЛАД 7
У даному прикладі продемонстровано, що кон'югат антитіла та лікарського засобу 1582051 - 5653249 знищує стовбурові клітини множинної мієломи.
Оскільки стовбурові клітини ММ здатні утворювати колонії іп міго (Маїзвиї еї аї., Віоса, 103: 2332-6 (2004)), тестували здатність АОС 158201 -5053249, охарактеризованого в прикладі 2,
Зо знищувати клоногенні клітини в біоптатах кісткового мозку пацієнтів із ММ. Зокрема, клітини підраховували із застосуванням лічильника МіСЕЇ І! м (ВесКтап-Соціег і|йе Зсієпсев,
Індіанаполіс, Індіана) та ресуспендували в ІМОМ--2 95 ЕВ5 за щільності, у 10 разів вищої, ніж потрібно для висівання. МЕТНОСИЇ ТМ Н4і434 Сіаввіс (етсСеї! Тесппоїодіеє5, Іпс., Ванкувер,
Британська Колумбія, Канада) змішували з 2000 клітин на мл у випадку з ММ263, ММ284 та
ММ276 та 4000 клітин на мл у випадку з ММ277 згідно з інструкціями виробника. Потім у відповідні пробірки додавали 25-400 нг на мл тестованих АОС 158201 -5053249 та ДО6МО-то-
ММАР. Контрольне антитіло Ідс1-5553249 додавали тільки у високій дозі 400 нг на мл. Усі пробірки ретельно струшували для перемішування, а потім залишали в стані спокою, що давало змогу бульбашкам повітря підніматися вгору. Після того, як бульбашки піднімалися, 400 мкл видаляли за допомогою голки з тупим кінцем 16 калібру та обережно висівали в одну лунку 24-пункового планшета з наднизькою адгезією (ММ/К, Раднор, Пенсільванія). Кожен засіб обробки висівали у двох повторностях у внутрішні лунки планшета. У зовнішні лунки додавали
РВ5, і планшет інкубували при 372С протягом 7-10 днів. Колонії підраховували на око з документуванням утворення колонії шляхом сканування планшетів на відображувальному цитометрі СеїїдоФ (Мехсеют Віозсіепсе5, Лоренс, Массачусетс). Як показано на Фіг. 8, у всіх 4 випадках 158201 -553249 був здатний знищувати клоногенні клітини, у той час як .6МО-те-
ММАЕ - ні. У найвищій протестованій дозі (400 нг/мл) 158201 -5053249 був здатний знищувати 100 95 колоній у випадку з ММ263 та ММ284 та 87,5 95 і 91 95 колоній у випадку з ММ276 та
ММ277 відповідно. На відміну від цього, 400 нг/мл У6МО-то-ММАЕ не зменшували кількість утворюваних колоній у випадку з ММ263 і зумовлювали зменшення утворення колоній лише на 12,5 95, 40 95 та 50 95 у випадку з ММ276, ММ277 та ММ284 відповідно.
Результати цього прикладу демонструють, що кон'югат антитіла та лікарського засобу 158201 -5053249 націлюється на ракові стовбурові клітини множинної мієломи, що експресують
ВСМА, і знищує їх.
ПРИКЛАД 8
У даному прикладі продемонстровані способи знищення клітин множинної мієломи та плазмоклітинного лейкозу іп міго із застосуванням кон'югатів антитіла та лікарського засобу, описаних у даному документі.
Знищення ліній клітин множинної мієломи та плазмоклітинного лейкозу за допомогою кон'югатів антитіла та лікарського засобу, які містять 15820|, кон'югований з 5053400, оцінювали іп міго із застосуванням набору СЕ ТІТЕК-СГОФ (Рготеда, Медісон, Вісконсин) відповідно до описаного в прикладі 4. Тестували наступні лінії клітин, що експресують ВСМА:
МСІ-НУЗгО9, ЕОМ, ММ.ТА, 9УМ3, ОРМ-2, ММ.15, 0О266.В81 та І 363. ВСМА-негативні лінії клітин Раїі та дигКаї також тестували. Кон'югати антитіла та лікарського засобу розводили до одержання 5х вихідного розчину (25 мкг/мл) у ЕРМІ-10 95 ЕВ5. Засоби обробки потім серійно розводили 1:3 в
ВАРМІ--10 95 ЕВ5. 20 мкл цих серійних розведень додавали до клітин у двох повторностях з одержанням у результаті кривої залежності від дози кон'югату антитіла та лікарського засобу за 12 точками в діапазоні від найвищої концентрації 5 мкг/мл до найнижчої концентрації 2,8 х 105 мкг/мл. Контролі, що являють собою кон'югат ізотипового антитіла та лікарського засобу (4401- 5653400) та тільки середовище, також включали. Планшети інкубували при 37 "С, 595 СО» протягом 96 годин. Наприкінці періоду інкубування в кожну лунку додавали 100 мкл розчину субстрату (Рготеда, Медісон, Вісконсин). Люмінесценцію вимірювали за допомогою
Зо багатоканального планшет-рідера Епмізіоп (Регкіп ЕїЇтег, Волтем, Массачусетс). Дані аналізували та представляли графічно за допомогою програмного забезпечення СгарпРайд
Ргізт (СгарпРайд Зоїймаге, Іпс., Ла-Хойя, Каліфорнія). Результати даного експерименту показані на Фіг. Т0А-10.
Результати цього прикладу демонструють, що АОС 158201 -5053400 знищує клітини множинної мієломи та плазмоклітинного лейкозу іп міїго.
ПРИКЛАД 9
У даному прикладі продемонстровані способи знищення клітин множинної мієломи та плазмоклітинного лейкозу іп мімо із застосуванням кон'югатів антитіла та лікарського засобу, описаних у даному документі.
Підшкірні ксенотрансплантатні мишачі моделі множинної мієломи та плазмоклітинного лейкозу створювали шляхом імплантації ліній клітин множинної мієломи або плазмоклітинного лейкозу, що експресують ВСМА (тобто МСІ-НО29 та ММ.15), самицям мишей СВ-17 зі 5СІЮ (С.8-17/сиНза-Руикас-5сій) із застосуванням МАТКІСЕЇ М (ВО Віозсіепсе5, Сан-Хосе,
Каліфорнія). Коли пухлини досягали приблизно 200 мм (клітини МСІ-НУО29) або 180 мм (клітини
ММ.15), мишей рандомізували згідно з розміром пухлини та поміщали в групи введення доз та обробляли за допомогою АОС, що націлюються на ВСМА, як описано нижче.
Ксенотрансплантатна модель МСІ-НЗУгО
І0112| Мишей обробляли одноразовою внутрішньовенною дозою 1 мг/кг АОС Ід1-51(23400 або 0,3 мг/кг або 1 мг/кг 158201 -5053400, або їм внутрішньовенно вводили дози У6МО-5053400 в
БО одноразовій дозі 0,3 мг/кг або 1 мг/кг. Контрольних мишей залишали необробленими. Мишей, оброблених за допомогою 158201 -5(053400, спостерігали протягом 74 днів після імплантації пухлини, при цьому ознаки відновлення росту пухлини були відсутні, як показано на Фіг. 11. У жодній із груп введення доз не спостерігалася втрата маси тіла.
Ксенотрансплантатна модель ММ.15
Мишей обробляли одноразовою внутрішньовенною дозою 1 мг/кг або З мг/кг АОС Ідс1- 5653400 або 158201 -5053400, або їм внутрішньовенно вводили дози У6МО-5(53400 в дозі 1 мг/кг або З мг/кг. Контрольних мишей залишали необробленими. Мишей, оброблених за допомогою З мг/кг У6МО-5323400, спостерігали протягом 85 днів після імплантації пухлини, при цьому ознаки відновлення росту пухлини були відсутні, як показано на Фіг. 12. У жодній із груп введення доз бо не спостерігалася втрата маси тіла.
Результати цього прикладу демонструють, що АОС 1582061 -553400 проявляє протипухлинну ефективність іп мімо.
Дані, описані у прикладах, демонструють, що АОС, який містить моноклональне антитіло 158201, проявляє сильну протипухлинну активність у доклінічних моделях ММ. Важливо відзначити, що експерименти іп міго дозволяють припустити, що ця активність підтримується у присутності 5ВСМА. Ці дані додатково демонструють, що АВС 158201 -5053249, який несе сильнодійне корисне навантаження РВО, ефективно націлюється як на масу плазматичних клітин мієломи, так і на менш активні клоногенні клітини СО19-4/С0138-, що може дати можливість забезпечення більш тривалої клінічної відповіді за наявності цього генетично неоднорідного захворювання.
Усі літературні джерела, в тому числі публікації, заявки на патенти та патенти, що цитуються в даному документі, включені в даний документ за допомогою посилання тією ж мірою, як якщо б кожне літературне джерело було окремо та конкретно вказане як включене за допомогою посилання та було представлено у всій своїй повноті в даному документі.
Використання форм однини та терміна "щонайменше один" і подібних визначень у контексті опису даного винаходу (особливо в контексті нижченаведеної формули винаходу) слід тлумачити як таке, що охоплює як однину, так і множину, якщо в даному документі не вказане інше або якщо це явно не суперечить контексту. Використання терміна "щонайменше один", за яким йде список з одного або декількох елементів (наприклад, "Щонайменше один з А та В"), слід тлумачити як таке, що передбачає один елемент, вибраний зі списку елементів (А або В), або будь-яку комбінацію з двох або більше з перерахованих елементів (А та В), якщо в даному документі не вказане інше або якщо це явно не суперечить контексту. Терміни "що складається", "що має", "що включає" та "що містить" слід тлумачити як відкриті терміни (тобто які означають "такий, що включає без обмеження"), якщо не вказане інше. Передбачається, що наведення діапазонів значень у даному документі слугує лише як спосіб скороченого окремого вказання кожного окремого значення, що входить у даний діапазон, якщо в даному документі не вказано інше, і кожне окреме значення включене в даний опис, як якщо б воно було окремо згадане в даному документі. Усі способи, описані в даному документі, можуть проводитися в будь-якому придатному порядку, якщо в даному документі не вказане інше або якщо це іншим
Зо чином явно вне суперечить контексту. Застосування всіх без винятку прикладів або ілюстративних фраз (наприклад, "такий як), представлених у даному документі, передбачається лише для ліпшого висвітлення даного винаходу і не накладає обмеження на обсяг даного винаходу, якщо не заявлене інше. Жодна фраза в даному описі не має тлумачитися як вказівка на те, що будь-який незаявлений елемент є істотним для здійснення
З5 даного винаходу на практиці.
Переважні варіанти здійснення даного винаходу описані в даному документі, в тому числі найліпший спосіб здійснення даного винаходу, відомий авторам даного винаходу. Видозміни цих переважних варіантів здійснення можуть стати очевидними для середніх фахівців у даній галузі після прочитання вищевказаного опису. Автори даного винаходу очікують, що фахівці в даній галузі будуть використовувати такі видозміни як придатні, й автори даного винаходу передбачають, що даний винахід буде реалізований на практиці інакше, ніж конкретно описано в даному документі. Відповідно, даний винахід включає всі модифікації й еквіваленти об'єкта винаходу, згаданого в формулі винаходу, що додається, у межах, дозволених застосовуваним законодавством. Крім того, будь-яка комбінація вищеописаних елементів у всіх можливих їхніх видозмінах охоплюється даним винаходом, якщо в даному документі не вказане інше або якщо це іншим чином явно не суперечить контексту.

Claims (5)

ФОРМУЛА ВИНАХОДУ
1. Кон'югат антитіло-лікарський засіб (АОС), який містить моноклональне антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент, спрямовані проти антигену дозрівання В-клітин (ВСМА), кон'юговані з цитотоксином, де моноклональне антитіло містить: (а) варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність ділянки 1, що визначає комплементарність (НСОКТІ), під БЕО ІЮ МО: 1, амінокислотну послідовність НСОК2 під 5ЕО 10 МО: 2 та амінокислотну послідовність НСОКЗ під ЗЕО ІЮ МО: 3, та (Б) варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність ділянки 1, що визначає комплементарність (-СОКІ), під БЕО ІЮО МО: 4, амінокислотну послідовність | СОК2 під БЕО ІЮ МО: 5 та амінокислотну послідовність ЇСОРЗ під БЕО ІО МО: 6.
2. Кон'югат антитіло-лікарський засіб за п. 1, де варіабельна ділянка важкого ланцюга містить 60 амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮ МО: 7.
3. Кон'югат антитіло-лікарський засіб за п. 1 або 2, де варіабельна ділянка легкого ланцюга містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮ МО: 8.
4. Кон'югат антитіло-лікарський засіб за будь-яким із пп. 1-3, де варіабельна ділянка важкого ланцюга містить амінокислотну послідовність під 5ЕО ІЮ МО: 7, і варіабельна ділянка легкого ланцюга містить амінокислотну послідовність під 5ЕО ІЮ МО: 8.
5. Кон'югат антитіло-лікарський засіб за будь-яким із пп. 1-4, де цитотоксин являє собою засіб, що діє на мікротрубочки, піролобензодіазепін (РВО), інгібітор РНК-полімерази ІІ або засіб, що алкілує ДНК.
6. Кон'югат антитіло-лікарський засіб за п. 5, де цитотоксин являє собою засіб, що діє на мікротрубочки, вибраний із групи, що складається з майтанзиноїду, ауристатину та тубулізину.
7. Кон'югат антитіло-лікарський засіб за п. 5, де цитотоксин являє собою піролобензодіазепін (РВО).
8. Кон'югат антитіло-лікарський засіб за п. 7, де піролобензодіазепін являє собою 553249, який має наступну формулу: о ц Її 1 уретри Ко, / го о о о ра о о. о У он ноу отит то " й КА ОС. о о
9. Композиція, яка містить кон'югат антитіло-лікарський засіб за будь-яким із пп. 1-8 та фармацевтично прийнятний носій.
10. Спосіб знищення клітин множинної мієломи, який включає приведення клітин множинної мієломи, що експресують ВСМА, у контакт із кон'югатом антитіло-лікарський засіб за будь-яким із пп. 1-8, внаслідок чого кон'югат антитіло-лікарський засіб зв'язується з ВСМА на клітинах множинної мієломи та знищує клітини множинної мієломи.
11. Спосіб знищення клітин множинної мієломи, який включає приведення клітин множинної мієломи, що експресують ВСМА, в контакт із композицією за п. 9, внаслідок чого кон'югат антитіло-лікарський засіб зв'язується з ВСМА на клітинах множинної мієломи та знищує клітини множинної мієломи.
12. Спосіб за п. 10 або 11, де клітини множинної мієломи знаходяться в організмі людини.
13. Спосіб за п. 10 або 11, де клітини множинної мієломи знаходяться в умовах іп міїго.
14. Спосіб знищення стовбурових клітин множинної мієломи, який включає приведення Зо стовбурових клітин множинної мієломи, що експресують ВСМА, в контакт із кон'югатом антитіло-лікарський засіб за будь-яким із пп. 1-8, внаслідок чого кон'югат антитіло-лікарський засіб зв'язується з ВСМА на стовбурових клітинах множинної мієломи та знищує стовбурові клітини множинної мієломи.
15. Застосування композиції за п. 9 у виготовленні лікарського препарату для лікування множинної мієломи.
16. Моноклональне антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент, спрямовані проти антигену дозрівання В-клітин (ВСМА), які містять (а) варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність ділянки 1, що визначає комплементарність (НСОКТІ), під ЗЕО ІО МО: 1, амінокислотну послідовність НСОМК2 під 5ЕБЕО ІЮ МО: 2 та амінокислотну послідовність НСОКЗ під 5ЕО ІЮ МО: 3, та (5) варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність ділянки 1, що визначає комплементарність (І СОК1), під ЗЕ ІЮ МО: 4, амінокислотну послідовність | СОК2 під ЗЕО ІЮ МО: 5 та амінокислотну послідовність ІГСОКЗ під БЕО ІЮО МО: 6.
17. Моноклональне антитіло за п. 16, де варіабельна ділянка важкого ланцюга містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮ МО: 7.
18. Моноклональне антитіло за п. 16 або 17, де варіабельна ділянка легкого ланцюга містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮ МО: 8.
19. Моноклональне антитіло за будь-яким із пп. 16-18, де варіабельна ділянка важкого ланцюга містить амінокислотну послідовність під 5ХЕО ІЮ МО: 7, і варіабельна ділянка легкого ланцюга БО містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮ МО: 8.
20. Композиція, яка містить моноклональне антитіло за будь-яким із пп. 16-19 та фармацевтично прийнятний носій.
21. Химерний антигенний рецептор (САК), який містить антигензв'язувальний домен моноклонального антитіла за будь-яким із пп. 16-19, зв'язаний із фрагментом, що активує Т- клітини.
22. Химерний антигенний рецептор за п. 21, де антигензв'язувальний домен містить одноланцюговий Ем-фрагмент (5сЕм) моноклонального антитіла. зуа та В я Ох се ВВЗВЗ ме ЕК ЯН яв: ДИ - щ ТЕ ВКСАЯА, знаувая як Е зе ДС кожи х і СМ закажн вуабеї в Е кт я с 5 Ж ср їх занни пнакіда в Ж дао «ВСТА мекакж крав - АНЯ є ШОВ ОО ЯНАРКА дей Ех 5 ре ЖК я т Е ча ВІВ Х ТЕ А / | і В ож і 5 їв ; Ей ще є А ВА. жо ВО овен шо нн нн ще щ рми УКОСИ х - МК ї ОВО яку я Ж в Х й де, К КЗ В 3 Ж х Юемегма АВ Тор вка
З. ї
Фіг. ТЛА Фіг. 1 зна шЕ В везе ню вч о: --ОЖ ЯКА зв і во ОВ КВК макНКН. ж КрАОЕНЯ Щодо ВВЕ ; 7 Е х Як «вав В шари: Ж ж й тА Ж я Е два й я СЯ ; тав: Тк т іу Бош су Е ЩЕ 8 со ЗОВ доосккююєнякяу ЩО «кі «Ж й ї я В Ір мкс АВ
Фіг. 1С
Фіг. 1 за Ж а миня х5 В Ж до Й й хо їх « Е сжеоико хіх. с й 4, «г як оюжвно» Е БІ тов зе жеуеноя 1 вк В В і М КІНАХ як ей жу ОТ ККЯ х -і ОК окнааютя Ж ши ВЕН НН лекс се век фах НЕ я У ЖЖ г аносе у Х - х З ДЕ оОфжосжА жу -е ї Х с. а Як овхеюнов ся в 2 в Ж. : спро 1 я БО своткотахню В " а м вллеквя ще ї х Му «ом кохх КК Я ЗКУ КВК ОЗ БЕ Зона киких Е :; с Я з еянаию - 1 Ж о у ря - хх о ке епохи о ох є ї у х я а ся як хи вхК ї С а Ся В ОВ КК. я ч к. К й й хі - я ГК котре Бо |маигт і Тер Ївкегикен
Фіг. 2А фіг 7В п іг. 2 мя в - зах Ко хо ЯКО ох во х ож . зх Ж Косий ; я їх ж. дкольмоу іх в зх пхвве ме ще і ЗБ ско а ПО со мухкох Ж . Ж о Яо000поючіхвавх -е роб Ж еВ зескомхех явно Сен епоееея ПТК се хни КО вої М з хан би ОВК ВВЕЦВ Е | ОВО В жеснкові Ен І їх Бе Я ж ехрімтннх ще із Її й г в Ми фоюикко ш Ї ви КБ З осв вс одн В кі оо зкватоу ут ЗА Ї "З. х і ще ех» іс ше, КК щ осруюккІме СЯ мі Бех к кро жінку ту з Б: тож се оз ко КА - І хх х А ож оММж я. В ов ЯК МК коки Св -ї що. щк ВД ї т І с ту Ясо | хВИЗЇ іовічетня
Фіг. 2С Фіг: 20
Фіг. й ЕХ мщи.18 ша "З У - ї хе АМКУ ХІУ вк ху сеоумекищмх туї : х сот окозхе че - Ж х . 5 шою ревом Ж ії вмво ййнинян 4. пд КО Вова С: соя хм ко век Вони І я шві жо шуєомив ххх ях КЕ КК Я Я ША ож пжр ок ОА ОК, У й «йо кім жах 5 Ок в а сотні усіх ї в у де озякуку ча ш у ж х К х оті іт МОЇ о З мак па гакіа гу Ах Ж у жофка комах Ж ЗУ о йо вЕоквжен вв о Ж Ж Ор жомжумиикох и ї ДОК мк веж же Е ох т Ж обо посвемкке ої « жо й За а. в Кн щік «І. я ПТМ ут їх кн Пк вк как
Фіг. 2Е «біг. 2Е лев зе аж й жі Ки В мої Ка ! з зе певюхоях п І хяк па баз що Рода с Жду Ж ож во ЖК : шк кіж ах Ж ой ки Дб можут ватки че ШЕ ВО «Ку ск журн ЕТО МОУ КК я КО МуЖКВКМ шк ІК Ж с с о еЯ «ж век жактіх В ! тод . «веожок кох іх 5 КК Бя дес мор кажлеК шо. Ж Ко сфе сука яииахх ж и КО НН щі я о кум ме мех ХатіЕх хх Я ж ЗА Ма За «ДУ свою Я з Уже ДЕ еко скиююхе Ох -- якоукмюкюмхх
5. ще "Ж бо зріикм УЖЕ ЖК пдв вих т: її те ва. що 1 кох З кЖх о я ще х де орто Я. офис рентні енкккнкннтнтотннк ЩО х не Ф к 5 - х ів реж ей Те (чеку
Фіг. 25 Фіг. 2Н
Фіг. 2 (продовження)
х Ми - заз Яка М оіххх ЕІ ж М жк в яке ліві М чех ї йнолюхх их в Ї Дек осоооофо я КЕ У ук яВІМЕ Ш : ; х . . лико юухк Е- ВБЕРЕ ЯМ ЗО де вію ТО Е ; 5 Ж х Е х ДО тех хеох 5 : ї 7 яв. яеооУх жу - : 1 і осів хотх - : 5 Я. ами в ї з Ж о жлуду дев г ї Фр ом соя сепомя х ке " 5 ж де т. єхмах ну ДО же дюут Е ї зх уп ме кг Е : екоцмокюхах се ії ще донести ЕЛ лети лили і «Доннннннтнттттртнттуттттдтннтутттттнтнх я х -к БУ т шк ОО я -к - Мов | чекав Тов ізн
Фіг. 2 Фіг. 2.
Фіг. 2 (Продовження!) з Е і о ЩО зво вевхча
' о. Б в ве саподтулти
МОУ. КК У ОХ МА З то . . З 55 ща 5 По ех З КЕ ди З БЕ
8 . ЕЕ. Е ОО . ОО Я ве 5 . М ще М . М Зх З що яв ів с ША їх кі дя Я ще як Возченннк ВС МА ж сереловнхці снЕлн
Фіг. ЗА сини х є за КЗ шин скажу Ж еще как кА, че ужуюакюю я В В . ЖЕ з5віві ван а 5 5 З У шоу п В В | а у ЩО зем вана 5 з» о В. г. ше ін - КК І ЕЕ. ЩО пе-яоВЯ ш ВОЗ ще щ ЕЕ ВУ Шо й шиї і ШЕ. Б замовк ШЕ з г 0 В кі . А дк 00 вен сне що фен ня зе й ту ду Кчкерива ні ВСЕ т серезовне нс
Фіг. ЗЕ
Фіг. 5 ее яке Бех зреєав за ТЕНТ МАВ ДО мк ОБУК ОЗ -- ЗВО : зве ВЕН ИН ТО, мкг ЗОЇ такт я з що зе. ; я Лема ЗК ОМ Я мікк КК Ж і їх з ОК, ра з її вка ! ЇХ зодою Як Її 2 - ЇХ ї5
В. т щх : в й ун М м В ВЛ ВОВНА НОВ за щі 0 83 50 а я я 95 03 у Ж вну кю В у - сил ЗД пвескеє дорева ке как
Фіг. 4 ян ак Ко ОбропЕу ї не БВ КУВО НВК І ОК СМАК ! ей БУВ ВОЗІ мете З -х яко З ї ек ЗОН ВИН ви ЕК Е ! ; - зах ПЕК ВОЗ мене ВЕУ щи ї в яке МИ ВОНО мкг ЗК а Км 3 і воло. і ж З ях ї й Шк 3 - З о БОМЯ щЕ Е В, Зеу: х Кк х . ве А ї ! 7. що ї Я Же З 5 я | о ї і : чав» вони пн я вКя о ення фр м риніти й ОМВО Ж Во Ко ск ож зкек ве. втеч уко і, ХВНЕ ккйсовик КУКИ вЕЕКії
Фіг. 5 а х в і Я Без сбройки ; ї я Ло МВВ (І може СУЄхя) ! ше чава в | - не ЦЕ ОВІЇ міиве ЩИХ Є В «Де сля р жмрке ВВ Ж і ха В мя - З
Е.І я 10085 ех Е й Е ме й а че 5 КЕ Ж ще ; ! - їв вав Я й. і ВАнвк й рок й ох З СК а й пррюуснстрвееовненірютек се те бій кни о ев В 15 жо 3 Я хо ке та їй За 135 Дві пісня главі
Фіг. Є ; за: Змвз оре жав т НД ІНЬ ВО В хв З сах, З ї.
В. ТЕ і ; ш : и ї ш : "Я і зх З їх І З З : М, ма і ще ї. не! З В т ЕЕ З З «ожиною закид за лок, охо ВУ кре рок окре рак кн «ЩЕ Ск ус а ка я Зоб 55 Ба 075 яб Зо зве чя5 Ані після їмтьзя нта ції
Фіг. й
Ж вид пн МаюгеВИ масті В Ша ня пла : т ТК ї М Кі А х ЩЕ ся 3 муж зе ФК ММ і пах трак год еї 3 ч і Ї і І зо
ОО. і що 4 | і возі ЛОВ, ї І вояк В хх їх що «а хе иа У ТО КЕ тт» "ОЩОМ . х п і Кн ва я ВВ В нн а іс те пу Зх Кх тднія Хр чинити гі Ти Ух Я пт ЗХ, 32 Ей м г г а я ж де сне КВ кеВ КЕ ЮК шу зе бен жкиттююинях КЕ ЛИкмлотекиттиитня, Б а В сект к ков джем я Во па : їх да : ї пня кине я жов х : пох : ї х : : 13 й я 18 : Вк : Ко: їй хода щої ІВ : ОЇ : і її х : п х - МОБ: 21 : ОБ Вк : ї її х : ог Х ОВ щі. : З : РОМ: ії Зв : 25 Ж : БРАК: ЕМ В
Ж. ж Вл. : тії : її 5 : ЕК В коза 5 І : ТЕ : ях : ж Е БО ОБО. ня Кк ; свй їв ще Ка КЕ КК ТМ ФІН ЕЕ ДОМА ПВ но Мк ВВ Сея зай отче пЗмиЖвх УКВ ВМ С Контровь КМ пенні кп све шо Чкозтроль ВМО 0 Шсхеиеєтві кохнна м ВВКвС вм вена САЖаЛНИя Іронія І - х ЛЕК Я лі ХеОеНя КЗН ТИ. Фіг: 8 з дах: о ко Ж 255 ще В -к ук БЕ яти ов маку ак з 5 що ї : Ж ж ї. Я се З ї-Я К
З. Я ж 5 8 ї КЗ 5 БОМБ ад срр суден нях дотики . р в Зк о 8 - З й ЗХ т у а - Коба. ще вх сх є ще Ка МЕ Е.О де з КО Б Я ЖЖ ук один сет | В ж ла Ел ВО ще о ке ин в МЕ ВЕБ ям х шк: У Я Ж Е о З: 5 5 Ж во ших ВО Ме Б шик ВООЗ А Б ще ва Її За її М ОМ е МЕ ОС Коко, У Ж - Я м. щк КЕ МАХ ВХ Б. Я Коси ОВ х М МИ о ОМ КМУ В З М. дою МО І МВ боб МОНО Ак хо ие о НЕК КИВМ Кави тка Я «с х. УКУК Од дк Щ БОШ Я ля Сх Кк і ко Фо що «ху ЩО шо
Фіг. З ; А Фіг. ЗВ Ж - М шо НО : й о СЗШ З Матка ско зЕ5 сх х Ї с 1 мих м що шо що БЖ я З й ще ї о ве птн Ки нею ік Е В мох з їх ще ХК і і ща -е ЩО ях 5 о о о. жк ВО Х ЗА Ух Е «Вк г ВЕЖ сх семи З ВЕ а о . 5 й. . о щ 33 Б Ж З ОХ ж вх ще ВК КУ Ж Х. с Я Я М ВУХ КС : х Ух М В: Б В и. |. й ЕЕ БК. ке Ж Є шо я БЦ ЩО ше 5 - З В В М А о М І ох ЗХ КО о У ще 5 ще п до шо ж З 13000 фено МО АХ М 555 ві В жом Кн ак. що 75 й ака жо зі Я я МОБ ЯВММ ЖАЮчнеяЕ В ШО левеювюонитння Б М я яУШЕВУ Ще шк ОШОЗБИНЕСНУМЯ: 0 сне КАЄ ЩО во з Є я БО
Фіг. ЗС Фіг. 90
Фіг. З чке- ВЗН БА. зак ї СЕЛЕНА я БЕ х як меті Е і полях | Ж ї ЗВУ пхйЕтІ. КОМ: ж хі Ян х г ЧЕ з деки Вчи я Бо ово Ж іч Б ж Кк Ж НЕ у у ях Б р і Е й В, їх Ж ще ї - і хе 55 ж ях ї я що а ха х -й ЇУ ї шк 2 нжииияеуе ен Ї пак / З я х ї ї Кн Генвскі ж Зв Гном
Фіг. 10А Фіг. 10в мя ке хх Б ї кофе жк фо ЦИ ТІХ ї ! ; : ТЯ - еВ як іх шмході 000 Е ев Б в і сх В у К 5 у Ох ж х - ШО кох з х КЕ ех З з Ж і а х вх зв сш ХК З ; Я и За ш . сх х а ь х 5 З з 5 х іов яні Зце рес
Фіг. 10с Фіг. 100
Фіг. 10 зима мів. Шо зкоумкувио зак щмоунех Кам і хе шокщ ки ю 3 . о нджУВІМе С : ПЖоообсоетв ск Н «А 53 Ї М що в ска ря «ей - У,
В. У 8 : м х їн і з Би: 5 ша т дО Еч з | | я 3 КО фронт, Од ВК ж х з я : ї тя 5 5 х Тонх рум Іва (Укелнаї
Фіг. 1ОЕ Фіг. ТОБ ява ках пи сх мими Шк ЗопохлонеМ я : же ПУХКМ ЖККИКХХ : якобхрмлохкх Зоо жбежррутояу ооо Мберр
БЕ. т дв З 5 ! во мож ! х - ї ке - Ж Н Же що ж ї ЕЯ во ! -х ах ї У ху Тенх ген Існу Ризик тю
Фіг. 105 Фіг. ЛОН
Фіг. 10 (продовження)
кор ат з5е зе динею ОТ се по хм "-- 1 й яко УмІМи КІМ і бе сколи з і обедюв» паж КЗ ї ; 8 х щ в 15 я і: . Е 1 пава ге я і шо.
5. і СЕ ; й х м. х М не ет Е і в ! й ! є і ь як г т яю вже |мектняЇ Тео; че
Фіг. 101 Фіг. 10.1
Фіг. 10 (продовження!) 2359 "а оз оброк ей БВ, У КЕ Ке Я «вав ї чек завіз ЕЗАН О З мгкг ЯМ о В х я Й й я: : ш з з як- земо-яавзаво я мк вій кох У БО Й їі «ва амавааяво, | МЕЖ я М В. ш и : ЖИ ме ЧК В - у. і-й : У ЖК т Я же; ЗНМ: ші МЕ З ек М ша ї ОТ ї: ши о Я . ее я Ома ЕК пи я Канн леву БА: не М СЕК В» ща й У ще За ще то ва ЗК Я сжек : с еаюк ис ДН сок йвиксеюне я скіЕї фіг. зав с Е же в-во Ха НИК ш к. ж щк на Ї : . ке факто ВУЗ Ж З вк У Е В о «ве ЕВ аа ЕС ше да Я Е г ; Е : Ї я Же Ева зшзаиво З ноВх ук Зав я Ве Ко Шо. й 7 а КЕ у як дамо ка, ЇЇ муж Е Я БІВ Ж ЖЕ і Не звмовааа НО, й МЕКе й кі жи я в и ТА еф я ка В НД сх екол тєтикх Он др ефосесоєтют рою в Ко ВК ВВА сев їй За а 4 яв ва 385 3) «НЕ пет Еуву ва ван
Фіг. 12 з5вУ с. г і Не Ба ії два -й - 0 МОЛ ОЗІмЖ; ШОВ ОВІіє КОБИВВМ 0000 - і 1 жк З ВКА з фев н- Е СЕ ї ХЕ АЖ х ВежНН а БК я Пр т Б З МА хх Бк дах КО ВІК є фут тк Ж Шини В, «ках укскукх. Е У, Креон тяжке В ЕОЖКЯ кокон пий ОВК еВ ее еВ ех Ж БОЖА з Все духу кА ум ую у ух ум у у У У ху У У У У У УК У У У ух у У УК у У у му ху ух у у юну. «Часу юка с Т--19 аз я щ ха ЕХ Мч КЕ ою КОКС ше 1 ї хек ЩЕ БА кни п | А Я ЩЕ КА х Усе: пк ПК, ЖЕ БА хв: СЯ | ня с ЩЕ ДВА Зою я х. ЖЖ сах М КК х ОК я Ву: Е ї це ви с ве з кеае " енка - 5 1 ложкою нн КВК вн ХО АН я Кк ин нн КН а що Б щ Ж ех ка ке Час) Ка --М19 аное В ока ЦО ІЛ хат КК УВО ж Ей їде ! ЯК БА ікожих -о ї ОК ВЕ ОА х Зк што жу Ж он р, ДЕ ЗОЖВЬ » юс 7 З НЕ в тн ЗИ ЗВАНІ х Вюрютих - е ПЕ о ек ХА фе я йковюх тої 3 КОЖ НК ОВК я пт я Хна нік нн нн нн каф Ж БАНЯ е В «КМ ЖЕ ЗХ щ рас ех 5,5 л. Бе ве. ка: КЕ. ЧННОВ Ме Кв ре ВІН ОВ М ци й пк Е плити, КА ОБОХ х ВК щі я, ЗВ ВН - фхноюх в ї Зо вия МО БИЧ х ВЕК КУ. еш Ж о у М БОЖУ х внкожож ОО КЕЖя о дк щі ВОВНУ х Яке г ї Ж о ка їх х Мих Ши ККУ дню хну фе п фор о па
Фіг. 13 ще, Ок БЕ-З завалів й Кай нол ме ката ов КІХІТаЗЕчЧВОМ ї ше Ж ЕАХ- Бе ду ж т А щллАЗ - ема ш ї их щі ва - Венв -ео ЯК с жо Ж ІЙ ОА «В Я х З КК я ЩО 9 дев ооо КОВО т- «в в жо ча жа в кра іє) МН З на 1-41 ака я о жимі ке Ба ме ДО ява МІ же і Тов в лаз - Вста ЗИ | Ж ч 283 - Вста Є вав ж й В БІАЯ «їнапа ї й о А Ж ї Гл каки Орні ; ш : ТЕ о ИЙ Е і І ху ТУКА УКеея пе Ккнхмь Ка ї КЕ уро Яе п МЛМ «ВОЮ В Зпй а во БОЮ Зраве ІБВАО, 1 ве та-вв АНАЛІ БК ДУ БЕКОН ме БЕ ТІКАЛИ зе ; : сей БАХ «Ненизвачевнй- г о КО пад Нут кднокжнстх А ВЕ НенизнизенВк: щ ? : я 5. ван ОВК вк ввая «Мепизианеннй- - за ЕК и ОСЛКОКК и кв ВК БВ Невизинчеций-. во ; : вне кокосове ранвкоднктуь о В 5 0 85 ВВ ооонннннннннннннннннннинонннннтянинеянннння їі «М х ще ча КЗ КО ас
Фіг. 14
МСНЬННІЙВ «за ВІЗУ, ВЗНВИВ Я ЖК; ОВК; АЖ І КЗ за й - 4 я : 4 що Я . і З 7 Кк. зе ЕВ З я ? кое хі я ке ДІВ а й "о ВВ й з. дк оЙЙ Я в оо у у х І -Е й Я х ХЕ ЖЕ пекеервнов ТОЖ я ЗИ АРКУ З ВУЗІ НВ КАК СВІ зах кох
ЕЕ. си
В . 5 Ж в З и ЕЕ Ж ЕОМ ЖЕ зако ЗВ, ї о й які ще ; НЕ -к ЩЕ п. й тА: звМВі я. : ме оаій с тя т х Я анівтіча КАВУ Я ВИ БОМ я з паж вацнх ма кофе Хо дя З, Ко зе ЧЕ Еш Я я хх - З З Кі ВМ антена (Фіг. 15
ПЕРЕЛІК ПОСЛІДОВНОСТЕЙ «Ро МЕДІ юЮН.
ЯК «1Ддк КОНЮГАТ МОНОКЛОНАЛЬНОГО АНТИТЛА ДО ВСМА ТА НКАРСЬКОГО ЗАСОБУ кате СУКА Ще хз 217-12-08 «410» ВрРУМгМ «Ба» 2017-08 «1505 «Тих Раївепцв версія 3.5 «аз 1 «вт» 5 ката» Біпюк «135» Штучна послідовність хр «23» Синтетичний «аю Баг ТЯ аг МВ АБА 7 5
«рід 2 каз 17 «и» Білок «2132 Нігтуезна послідовність «ие кий» сСинтатичний «ке: 2 --к Ме беру Баг мн Ав Туга ТМ Буг Аа Аврег у у В 2 то то сту «й а «каре і «різ Блю «вТа» Нптучна посєпідавність «аг «ру» Синтетичний «как а сту су далогуг Буг УВС; Буг РАе схо Туг З 5 та Зб
«рій 4 «аїр ТИ хі» Білок «щі» Штучна поспіповність «и «фо Синтетичний ча 4 Ара Ага Зег Св Тук Не Бег Бег Азп тугі ви АВ 1 о за «аз й ра «12» Білок «Р13а Штучна послідовність «рий» Синтатичний «Вк 5 ЄМу Аа мех Ап Ага Аа Ті і 5 «рій б «щі» В «діа Білок
«132 Штучна послідовність кору «вай» Синтетичний «ка а Суб туюсту зер егРго де Те 1 5 «ЕК 7 «рр» 1 «ката Білок «5132 Штучна послідовність «ру «Ва Синтетичний «ЯК Я са Уа ец ма В) бЗегіу ЗІ сСбуіво щі ух Рто СЯу сту З 5 ів т5 Зегівц Авц заг Су Дід Ага Берг сну Бе я РНе Ага Баг ур о ха Зп Бег МЕС Азп Тра дя Авд сти Аа Рто сем у Ху ем тром З 30 45
Зег беге Заг му Ся Бе Ачи Ти фе Туг Ту Аа Авр бег Уді а а що уз му АД пе Тпг Не Зег Ага дар Аза Ав уз ап зегі ви гуг івцс АН Ап баггі ви Ага Лів 3 Авр ТЕ Ав оУі Буг ут ув о 5 АВ Ат сту СВУ Ап Туг ук аг ся Тут Най Тук тросу Сід зоо 305 нео Су тнгівц ма Тр Уві безе та 123 «930 В «их ЗОВ крій» Білок «2132 Штучна послідовність Б УАНе «ШУ» Синтетичний сао 5 сш Уві ви Тіла зер Рез ОМ Пе ієнсбегі ви ес Ро сху і о їв 15 СВ Аго лід Ті ец лет ув Арго Аа бе см Буг Ме бегобег дат 23 ха 30 туга Ав Тр Бук Са є! уз Ро су св Ар гто Аді вав ен «і 45 Те Гук сту Дів Бег Ап Аго Аа ППР ОГУ фа Ро Аа Аго Не Баг щ ца БО Оу жк Оу Бех сму 1ППг Азов ТЕ ен те Не БегАтщі ецу 55 то ТВ во Рююц Авзр не А Уа Тут Тут Суз С ОВ Ту ОР Бер бек Ро 85 оп по Бе Пе Рбе сту Сппізу Пгіузі ен ою Деу 1 не «а «412 Я хро» Білок «2132 Штучна послідовність
«Рой» свв» Синтетичний «А З сві йе отівц уд сп Бексбу Су сту івц У уз Ро Су су І В ла 5 дерЕеанАтіви Беру А Ав Бегону Ре Пе Ре Ага Бе Ту БеЕРА Ада По УВА о Аз то Очі ме ве сми тро! За 40 45 аг ер ек С3У баг Бег АБИ Туг Же Гр Туг Ада Аєвр вегоУві ув СУ Ага Рів Ті бе зегАго Азр Ап Ав і ух Аап епі ец гук ца т 75 во Тенти МЕГА Богіен Ага Ав Об АБ Пе Аідівч тм РМ Су Ав Аг) у Сту доп турі ма сла г Неї Тук ігр Су ха то ех Но су Тпгівц ул Тр Уя! Бег хаег
«Ап» 10
«рів ТЯ
«їй» вілок.
«й13» Штучна послідовність
«ро
«ай» Слентатичний
«Ах ЗО са бе Уа ец ТВО бер то су чі ецжегіец ер Рго Оу
З 5 за та п Ат Ае тк ец ен Суд Аа дів ак ом Бут Ме Бере Ап
20 Кк зв Тур ецн А ттр о тТуг сма спі ук Ро Су ств Дів зо Аді єн ец ЗА 3 ай
Ще Бук сну Аіз Бер Азп Ага Аг ТНЕУ Ве го Ахо Ага Бе бог ца Ва
Сху я аг су Зетізім ж сСбФу Ре Ббгі ва тр пе зе Аг г ви
Рос Аз; Ре Аа ана ту суз сф Св Буг Оу на Заг Ро
85 що 5 ба тяг ее ОК Сп сиу трі ув ецізн беї ув ча 105 хр 4 хв 12 «рійх Білок «2183 Штучна послідовність «вух хР?З» Синтетичний кад 4 сш уві ви Уві зер сну СОУ Сів аг у Ро бсту їху З 2 та 15 Зегіво рівно Зегісух Лія Ав Бек Оу пе Пе Не Безе тУг щергМукі Аза Тго мі Аго см Ага го Оу 1 уз сСву ес Ттроуяі З ЗО 45 егжерг ба ваг Су бЗегег Ап Тур бе Бук Тут АВ Ар Бен Уді що 55 що уз слу Ажр РБе Ті Це БегАра Азр Ап Ав уз Ап Боегієц г Ве та 75 ва Гечім АВТ Аза еегіец Ар лів З Аво Ті АМа Уа тус тує сСув 85 во що діа Ага слу Ст Али Ту пе ді ОО Тут Реп сп пр му СО 100 не НН сту п іец уд Пн Уді Бех зег тр 120 са 1 кеглі Юа я Білок «18» Штучна послідовність «ад: «ра» Синтетичний «А хи Ще Уаї вц Пк Ст зе Ро» су Птівц ері ец бег Рго Су
1 5 КО 15 СВ Аг Аа тег ен Зегітуз Ак Аа Бегіа Гуг Пе бе ВЕгГ АБИ Тугісен Аа го Бурі ов у Ре СМу іп Арго дві ечі ви З «І ай Те Гая бу Ав Баг Аяп Ав Аа ТК СПУ Ва то Ар Ага Ре Баг що о що іму заг су ат у ТІ Адо Ббре Ті ач т За БекбАгрі еп и З5 т 73 во Рю цар Вайда у тус туру Он св бус Зег Зег Азов Та
БЕ що що Та Пе ББезом ою Сбу Пгіузієсц сті пев ух
100 305 ха 13 ка112 320 сао» Білок «2132 Штучна послідовність их «ура» Сантетичний «а 13 сер співи уд єму Бегоу Су Су і ви Уві уз Рез сну Су і а їв та бЗепіенАтщіви БегСуз Ав Дів Бек сну Ре тіж РНе бекЗег Гук 26 га зо шегіще: Аа Ігро УВІ Ага Сіл АВ та слу г уз Сну гена труді за 40 45 -егзегйв зе Єйу Смак Аза Б бе Буг Туг АВ Ар бБег ма Гуз У Ага Ре Тія пе зе Аг Ар АБ Аа ув Ап озері Тут езіа МегАсп о зегі ви Агро АС Ар Тк Ага уві ТУ Буг був Аа Ага СУ СУ Аа Гугл УВС туге сю тує Тріму ст т тк та
У піт вису ТВ Уві бе зе ї5 120 кан а кари ЗОВ ЕРИ Білок 8135 Штучна послідовність «лох свй» сбинтатичний ка а ов це уві еч ж сі бег то у ріс бегівн ЗегРто іщу ї 5 30 ї5 СЯз Ага а Прі ец зе су Ага Лія Бе сп Ту Ма ска щег Ап 2 25 Зо Авт ез Ав тр іугічва мі у то см Ов діа Рг Агар вці ве З за «5 те Терсну Дід бег АЛ А Ага г сну а то Аза Ага Ве щег І за о єму заг СЯу бек СУ Пе Ар Ре пгіец Пе Не бер Арі вц СН
55 та 75 що Р б Ар епе Аа УВІ г ТУг су СХ ОП ТУГА Аа г Ро 90 За Бе тагРра б с су прі ув ен С На вух то з «не 15 «21» 480 рід» Білок ж?» ПШітучна поєпідовність «рух кро» Синтетичний «а о я УЕеп в ец о син ек сбу Сіу Су і во уві уз Ро У Су і к то т -аівАтщівн баегісух Ав Аз Се су Бе іх Ра бер бег Гуг 220 25 за Заг е Ас пз УВА ха А то Сех Б ув іМу ви см Пров! зЗ5 за 45 шегбег фе Бе сіу сі шерА Тугів ги тм АюврАзрв Зег Уві що 55 ВО уч сЯу А Не Тік Пе зег Ага Авр Ап АВ у Ап Бегі ец г уг 7 75 во Бецпбйв Ме Ап Бегі сн Ап АКРЕОНВІ дар тпг Аа У тур Гурітує Ав Ага схуУ СМУ Ав Буг Туєб Мабсйа тут Ба СЯвй Тур тр 3 Ст ча 105 те Су Геггец ма ТАК Оля Зег бег «Кк 18 «ар» ЗОВ «212» вБіпок -о132 Штучна послідовність «ЕЕ» «йг32е Синтетичний «ак 16 сш бе Уудії ви ппгізв еер то сту Пі ве) Бегі ен заг Рго су
UAA202000974A 2017-08-01 2018-07-31 Моноклональний кон’югат антитіло-лікарський засіб до bcma UA126813C2 (uk)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201762539825P 2017-08-01 2017-08-01
US201762596194P 2017-12-08 2017-12-08
PCT/IB2018/055753 WO2019025983A1 (en) 2017-08-01 2018-07-31 CONJUGATED MONOCLONAL ANTIBODY-MEDICINE DIRECTED AGAINST BCMA

Publications (1)

Publication Number Publication Date
UA126813C2 true UA126813C2 (uk) 2023-02-08

Family

ID=63405281

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UAA202000974A UA126813C2 (uk) 2017-08-01 2018-07-31 Моноклональний кон’югат антитіло-лікарський засіб до bcma

Country Status (22)

Country Link
US (3) US10988546B2 (uk)
EP (1) EP3661963A1 (uk)
JP (3) JP7150820B2 (uk)
KR (2) KR102748628B1 (uk)
CN (2) CN117018219A (uk)
AU (4) AU2018311503C1 (uk)
BR (1) BR112020001989A2 (uk)
CA (1) CA3070539A1 (uk)
CL (1) CL2020000263A1 (uk)
CO (1) CO2020000772A2 (uk)
CR (1) CR20200100A (uk)
EC (1) ECSP20014523A (uk)
IL (2) IL312451A (uk)
MA (1) MA51447A (uk)
MX (1) MX2025001287A (uk)
MY (1) MY203183A (uk)
PH (1) PH12020500177A1 (uk)
SG (1) SG11202000499RA (uk)
TW (2) TWI815815B (uk)
UA (1) UA126813C2 (uk)
WO (1) WO2019025983A1 (uk)
ZA (2) ZA202001219B (uk)

Families Citing this family (42)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
PT3129406T (pt) * 2014-04-11 2019-04-24 Medimmune Llc Compostos conjugados que compreendem anticorpos com manipulação de cisteínas
CN111234027A (zh) 2015-05-21 2020-06-05 哈普恩治疗公司 三特异性结合蛋白质及使用方法
US11623958B2 (en) 2016-05-20 2023-04-11 Harpoon Therapeutics, Inc. Single chain variable fragment CD3 binding proteins
BR112018073739A2 (pt) 2016-05-20 2019-02-26 Harpoon Therapeutics, Inc. proteína de ligação de albumina sérica de domínio único
US11535668B2 (en) 2017-02-28 2022-12-27 Harpoon Therapeutics, Inc. Inducible monovalent antigen binding protein
CA3063359A1 (en) 2017-05-12 2018-11-15 Harpoon Therapeutics, Inc. Mesothelin binding proteins
WO2019025983A1 (en) * 2017-08-01 2019-02-07 Medimmune, Llc CONJUGATED MONOCLONAL ANTIBODY-MEDICINE DIRECTED AGAINST BCMA
IL315737A (en) 2017-10-13 2024-11-01 Harpoon Therapeutics Inc B-cell maturation antigen-binding proteins
UA129446C2 (uk) 2017-10-13 2025-04-30 Гарпун Терап'Ютікс, Інк. Триспецифічні білки і способи їх застосування
MD3823665T2 (ro) 2018-07-19 2024-05-31 Regeneron Pharma Receptori antigenci chimerici cu specificitate BCMA și utilizările acestora
TWI838389B (zh) 2018-07-19 2024-04-11 美商再生元醫藥公司 雙特異性抗-BCMAｘ抗-CD3抗體及其用途
US12195544B2 (en) 2018-09-21 2025-01-14 Harpoon Therapeutics, Inc. EGFR binding proteins and methods of use
EP3856771A4 (en) 2018-09-25 2022-06-29 Harpoon Therapeutics, Inc. Dll3 binding proteins and methods of use
AU2020228367A1 (en) * 2019-02-26 2021-10-14 Vivasor, Inc. Antigen binding proteins that bind BCMA
MX2021011141A (es) 2019-03-21 2022-01-19 Regeneron Pharma Combinacion de inhibidores de la via de il-4/il-13 y ablacion de celulas plasmaticas para el tratamiento de alergia.
MX2021013391A (es) * 2019-05-03 2022-01-26 Celgene Corp Conjugado de anticuerpo anti-bcma, composiciones que comprenden el mismo, y metodos de fabricacion y uso del mismo.
US20220362394A1 (en) * 2019-05-03 2022-11-17 Sutro Biopharma, Inc. Anti-bcma antibody conjugates
UY38700A (es) * 2019-05-20 2020-12-31 Novartis Ag Conjugados de anticuerpo-fármaco inhibidores de mcl-1 y sus métodos de uso
PH12021552986A1 (en) * 2019-05-31 2023-08-14 Dana Farber Cancer Inst Inc Combination therapy
BR112022001546A2 (pt) * 2019-07-30 2022-03-22 Jiangsu Hansoh Pharmaceutical Group Co Ltd Anticorpo anti-bcma, fragmento de ligação ao antígeno do mesmo e uso médico do mesmo
CN112409482B (zh) * 2019-08-20 2022-08-26 杭州尚健生物技术有限公司 Bcma抗体
CN115279781B (zh) * 2020-03-26 2025-05-09 上海翰森生物医药科技有限公司 抗体药物偶联物及其医药用途
CN113637073B (zh) * 2020-05-11 2024-04-12 上海赛比曼生物科技有限公司 Bcma抗体及其制备和应用
CN116096752B (zh) * 2020-06-05 2025-10-28 卫材R&D管理有限公司 抗bcma抗体-药物缀合物及其使用方法
CN112285361B (zh) * 2020-09-27 2023-12-05 中国人民解放军空军军医大学 排除抗-cd38单克隆抗体药物对抗人球蛋白检测干扰的试剂
WO2022097047A1 (en) * 2020-11-04 2022-05-12 Medimmune, Llc Treatment methods using anti-bcma antibody-drug conjugates
CN114763383B (zh) * 2021-01-13 2024-12-17 博生吉医药科技(苏州)有限公司 靶向人bcma的单克隆抗体及其应用
CN112812185B (zh) * 2021-02-08 2022-01-18 华道(上海)生物医药有限公司 一种抗b细胞成熟抗原的单克隆抗体及其应用
CA3210069A1 (en) * 2021-03-03 2022-09-09 Tong Zhu Antibody-drug conjugates comprising an anti-bcma antibody
US11931420B2 (en) 2021-04-30 2024-03-19 Celgene Corporation Combination therapies using an anti-BCMA antibody drug conjugate (ADC) in combination with a gamma secretase inhibitor (GSI)
CN116745325A (zh) * 2021-08-16 2023-09-12 上海优替济生生物医药有限公司 Bcma靶向抗体、嵌合抗原受体及其应用
CA3236930A1 (en) * 2021-11-03 2022-04-21 Hangzhou Dac Biotech Co., Ltd. Specific conjugation of an antibody
US12311033B2 (en) 2023-05-31 2025-05-27 Capstan Therapeutics, Inc. Lipid nanoparticle formulations and compositions
US20250127728A1 (en) 2023-10-05 2025-04-24 Capstan Therapeutics, Inc. Constrained Ionizable Cationic Lipids and Lipid Nanoparticles
WO2025076113A1 (en) 2023-10-05 2025-04-10 Capstan Therapeutics, Inc. Ionizable cationic lipids with conserved spacing and lipid nanoparticles
CN117164714B (zh) * 2023-10-08 2024-04-23 北京奇迈永华生物科技有限公司 一种靶向bcma的抗体及其应用
US20250242056A1 (en) 2024-01-26 2025-07-31 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for using plasma cell depleting agents and/or b cell depleting agents to suppress host anti-aav antibody response and enable aav transduction and re-dosing
WO2025160340A2 (en) 2024-01-26 2025-07-31 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Combination immunosuppression for inhibiting an immune response and enabling immunogen administration and re-administration
WO2025184567A1 (en) 2024-03-01 2025-09-04 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for re-dosing aav using anti-cd40 antagonistic antibody to suppress host anti-aav antibody response
WO2025217452A1 (en) 2024-04-11 2025-10-16 Capstan Therapeutics, Inc. Constrained ionizable cationic lipids and lipid nanoparticles
WO2025217454A2 (en) 2024-04-11 2025-10-16 Capstan Therapeutics, Inc. Ionizable cationic lipids and lipid nanoparticles
CN119841951B (zh) * 2024-12-25 2025-10-14 厦门大学附属第一医院(厦门市第一医院、厦门市红十字会医院、厦门市糖尿病研究所) 一种抗bcma抗体或其抗原结合片段及其制备方法和应用

Family Cites Families (28)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4151042A (en) 1977-03-31 1979-04-24 Takeda Chemical Industries, Ltd. Method for producing maytansinol and its derivatives
JPS58180487A (ja) 1982-04-16 1983-10-21 Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd 抗生物質ｄｃ−８１およびその製造法
US5208020A (en) 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
US6441163B1 (en) 2001-05-31 2002-08-27 Immunogen, Inc. Methods for preparation of cytotoxic conjugates of maytansinoids and cell binding agents
WO2004005326A2 (de) 2002-07-09 2004-01-15 Morphochem Aktiengellschaft Fu Tubulysinkonjugate
WO2004005327A1 (de) 2002-07-09 2004-01-15 Morphochem Ag Komb Chemie Neue tubulysinanaloga
DE10254439A1 (de) 2002-11-21 2004-06-03 GESELLSCHAFT FüR BIOTECHNOLOGISCHE FORSCHUNG MBH (GBF) Tubulysine, Herstellungsverfahren und Tubulysin-Mittel
JP2010520748A (ja) 2007-02-20 2010-06-17 アナプティスバイオ インコーポレイティッド 体細胞超変異系
US20110263650A1 (en) 2007-07-20 2011-10-27 Helmholtz-Zentrum Für Infektions-Forschung Gmbh Tubulysin D Analogues
WO2009134279A1 (en) 2007-07-20 2009-11-05 The Regents Of The University Of California Tubulysin d analogues
WO2009055562A1 (en) 2007-10-25 2009-04-30 Endocyte, Inc. Tubulysins and processes for preparing
HRP20161194T1 (hr) * 2009-03-10 2016-11-04 Biogen Ma Inc. Anti-bcma protutijela
MX2013001402A (es) 2010-08-06 2013-08-29 Endocyte Inc Proceso para preparar tubulisinas.
UA112434C2 (uk) 2011-05-27 2016-09-12 Ґлаксо Ґруп Лімітед Антигензв'язувальний білок, який специфічно зв'язується з всма
PH12013502421A1 (en) 2011-05-27 2014-01-06 Glaxo Group Ltd Bcma (cd269/tnfrsf17) -binding proteins
WO2013154760A1 (en) 2012-04-11 2013-10-17 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Chimeric antigen receptors targeting b-cell maturation antigen
HUE045435T2 (hu) 2012-10-12 2019-12-30 Medimmune Ltd Pirrolobenzodiazepinek és konjugátumaik
TW201425336A (zh) * 2012-12-07 2014-07-01 Amgen Inc Ｂｃｍａ抗原結合蛋白質
US9243058B2 (en) * 2012-12-07 2016-01-26 Amgen, Inc. BCMA antigen binding proteins
GB201317982D0 (en) 2013-10-11 2013-11-27 Spirogen Sarl Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
WO2015155345A1 (en) 2014-04-11 2015-10-15 Medimmune Limited Antibodies and antibody-drug conjugates
TW201625662A (zh) 2014-04-11 2016-07-16 麥迪紐有限責任公司 妥布賴森（ｔｕｂｕｌｙｓｉｎ）衍生物
EP3129055B1 (en) 2014-04-11 2020-07-01 MedImmune, LLC Bispecific her2 antibodies
US20190209704A1 (en) * 2014-10-20 2019-07-11 Igenica Biotherapeutics, Inc. Novel antibody-drug conjugates and related compounds, compositions and methods of use
ES3012402T3 (en) * 2015-04-13 2025-04-09 Pfizer Therapeutic antibodies and their uses
PT3337824T (pt) * 2015-08-17 2020-09-10 Janssen Pharmaceutica Nv Anticorpos anti-bcma, moléculas de ligação a antigénio biespecíficas que ligam bcma e cd3, e suas utilizações
WO2019025983A1 (en) 2017-08-01 2019-02-07 Medimmune, Llc CONJUGATED MONOCLONAL ANTIBODY-MEDICINE DIRECTED AGAINST BCMA
PH12021552986A1 (en) * 2019-05-31 2023-08-14 Dana Farber Cancer Inst Inc Combination therapy

Also Published As

Publication number Publication date
IL312451A (en) 2024-06-01
KR20200035066A (ko) 2020-04-01
US20240294666A1 (en) 2024-09-05
CR20200100A (es) 2020-05-09
IL272304B1 (en) 2024-06-01
TWI815815B (zh) 2023-09-21
BR112020001989A2 (pt) 2020-08-18
TW202423990A (zh) 2024-06-16
CL2020000263A1 (es) 2020-10-30
TW201920286A (zh) 2019-06-01
AU2024200847A1 (en) 2024-05-02
SG11202000499RA (en) 2020-02-27
MY203183A (en) 2024-06-13
AU2024200847B2 (en) 2025-05-22
JP7150820B2 (ja) 2022-10-11
NZ761939A (en) 2024-07-26
CN110997721A (zh) 2020-04-10
AU2025203224A1 (en) 2025-05-29
CN117018219A (zh) 2023-11-10
WO2019025983A1 (en) 2019-02-07
US11912782B2 (en) 2024-02-27
TWI881438B (zh) 2025-04-21
AU2018311503B2 (en) 2021-12-02
US20190040152A1 (en) 2019-02-07
EP3661963A1 (en) 2020-06-10
MX2025001287A (es) 2025-03-07
PH12020500177A1 (en) 2020-09-14
CN110997721B (zh) 2023-08-15
JP7754906B2 (ja) 2025-10-15
CA3070539A1 (en) 2019-02-07
ZA202106131B (en) 2025-04-30
IL272304B2 (en) 2024-10-01
ECSP20014523A (es) 2020-05-29
JP2020529424A (ja) 2020-10-08
AU2018311503A1 (en) 2020-03-05
ZA202001219B (en) 2023-04-26
JP7377327B2 (ja) 2023-11-09
JP2022191301A (ja) 2022-12-27
AU2018311503C1 (en) 2023-11-30
AU2022201397A1 (en) 2022-03-24
KR20250009550A (ko) 2025-01-17
MA51447A (fr) 2020-06-10
KR102748628B1 (ko) 2025-01-03
AU2022201397B2 (en) 2023-11-09
CO2020000772A2 (es) 2020-01-31
US10988546B2 (en) 2021-04-27
JP2024012396A (ja) 2024-01-30
IL272304A (en) 2020-03-31
US20210214460A1 (en) 2021-07-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
UA126813C2 (uk) Моноклональний кон’югат антитіло-лікарський засіб до bcma
US12121579B2 (en) Antibodies specific to human t-cell immunoglobulin and ITIM domain (TIGIT)
JP7611196B2 (ja) 癌幹細胞を含む癌の診断および治療法
JP7206360B2 (ja) 非常に特異的な腫瘍細胞表面抗原を標的とするヒト抗体を用いた腫瘍特異的ペイロード送達及び免疫活性化
JP7337824B2 (ja) 抗ｃｄ３３および抗ｃｄ７併用療法
KR20100063048A (ko) 신생물성 또는 감염성 장애의 면역예방 또는 면역치료를 위한 폴리펩티드-핵산 접합체
WO2012170470A1 (en) Compositions and methods for detection and treatment of cancer
CN120076831A (zh) 抗ror1抗体和抗体缀合物、包含抗ror1抗体或抗体缀合物的组合物、以及制备和使用抗ror1抗体和抗体缀合物的方法
Liu et al. Targeted apoptosis activation with GrB/scFvMEL modulates melanoma growth, metastatic spread, chemosensitivity, and radiosensitivity
US20250161477A1 (en) Novel methods of therapy
HK40055232A (en) Diagnosis and therapy of cancer involving cancer stem cells
HK40040716A (en) Diagnosis and therapy of cancer involving cancer stem cells
HK40026260A (en) Bcma monoclonal antibody-drug conjugate
HK1223543A1 (en) Diagnosis and therapy of cancer involving cancer stem cells
HK1223543B (en) Diagnosis and therapy of cancer involving cancer stem cells