UA126472C2 - Композиція та спосіб для зміни цвітіння та архітектури рослин для поліпшення потенційної врожайності - Google Patents

Abstract

Винахід стосується рекомбінантної ДНК-конструкції, вектора та молекули, що застосовуються для послаблення та/або усунення експресії флоригенного гена або трансгена FT за допомогою націлюючих послідовностей малих молекул РНК. Також запропоновано трансгенні рослини, рослинні клітини та тканини, а також частини рослин, які містять вказані рекомбінантні конструкції, вектори та молекули. За рахунок пригнічення трансгенні рослини, які містять флоригенний трансген FT, можуть давати більше насінних коробочок, стручків, фруктів, горіхів або бобів на вузол трансгенної рослини у порівнянні з контрольною рослиною або рослиною дикого типу. Додатково запропоновано способи внесення рекомбінантних ДНК-конструкцій, векторів і молекул у рослину та посадки трансгенних рослин у полі з високою щільністю. Трансгенні рослини згідно з цим винаходом можуть забезпечити більшу потенційну врожайність, ніж рослини дикого типу або контрольні рослини.

Description

ПЕРЕХРЕСНЕ ПОСИЛАННЯ НА СПОРІДНЕНІ ЗАЯВКИ

ПІ Ця заявка заявляє пріоритет попередньої заявки США Ме 62/410355, поданої 19 жовтня 2016 р., і попередньої заявки США Мо 62/411408, поданої 21 жовтня 2016 р., які обидві у повному обсязі включено у цей документ за допомогою посилання.

ГАЛУЗЬ ТЕХНІКИ

(2) Цей винахід відноситься до композицій і способів для модуляції флорального розвитку та вегетативного росту шляхом генетичної модифікації культурних рослин для підвищення врожайності.

ВКЛЮЧЕННЯ ПЕРЕЛІКУ ПОСЛІДОВНОСТЕЙ

ІЗЇ Перелік послідовностей, який міститься у файлі під назвою РЗ4461УУ000 5ЕОХ, що має розмір 177799 байтів (визначений у М5-УмМіпдом/5Ф)) і був створений 18 жовтня 2017 р., містить 110 нуклеотидних послідовностей і був поданий разом з цим документом у електронній формі, й у повному обсязі включений за допомогою посилання.

РІВЕНЬ ТЕХНІКИ

І4Ї Перехід від вегетативного росту до цвітіння є важливим процесом під час розвитку рослини, який потрібен для отримання урожаю зерна в культурних рослинах. Існує декілька основних шляхів регуляції часу цвітіння у наземних рослин, які реагують на пов'язані з довкіллям і розвитком стимули, включаючи фотоперіодизм (тобто довжину дня), яровізацію (тобто відповідь на зимовий холод) і рослинні гормони (наприклад, гібереліни або ГК), на додаток до автономних (незалежних від умов довкілля) шляхів. Молекулярні мережі, що регулюють час цвітіння у рослин, включають шляхи яровізації та фотоперіодизму. В індуктивних фотоперіодичних умовах активність гена СОМеТАМе (СО) у первинному листі підвищує експресію гена РГОМ/ЕВІМИ ОСОБ Т (ЕТ), який транслокується у меристему, запускаючи експресію нижчерозташованих генів, що активують цвітіння ГЕАЕМ (ІЕМ), АРЕТАГА1 (АРІ) і

ЗИРРКЕББЗОК ОЄ ОМЕКЕХРКЕ55ІОМ ОЕК СО 1 (5ОСТ). Дія інших генів, таких як Р ОМЕКІМО

ГОСИиЗ5 С (РІ С) і ТЕЕМІМАГ. РІ ОУМЕК 1 (ТР), інгібує експресію або активність цих генів.

ІЇ5|За виключення нейтральних щодо довжини дня рослин, більшість квітучих рослин сприйнятливі до добових фотоперіодичних циклів і можуть бути класифіковані як рослини короткого дня (КД) або довгого дня (ДД) на підставі фотоперіодичних умов, необхідних для індукції цвітіння. Фотоперіод відноситься до відносної довжини або тривалості світлих і темних періодів у 24-годинному циклі. У загальному випадку рослини довгого дня демонструють тенденцію до цвітіння, коли довжина дня перевищує деякий пороговий фотоперіод (наприклад, коли дні стають довшими навесні), тоді як рослини короткого дня демонструють тенденцію до цвітіння, коли довжина дня зменшується нижче порогового фотоперіоду (наприклад, коли дні стають коротшими після літнього сонцестояння). Іншими словами, рослини КД цвітуть, коли дні стають коротшими, тоді як рослини ДД цвітуть, коли дні стають довшими. Соя є прикладом рослини короткого дня (КД), цвітіння якої індукується, коли рослини поміщають в умови коротшого світлового дня.

ІЄЇ Рослинники завжди знаходяться у пошуку нових способів впливу на врожайність рослин, особливо підвищення урожаю насіння важливих сільськогосподарських культур. Таким чином, у цій галузі техніки існує постійна необхідність у поліпшенні композицій і способів для підвищення врожайності різних культурних рослин. У цьому документі зроблене припущення, що поліпшення врожайності культур можна забезпечити, підвищуючи агрономічні характеристики, пов'язані з цвітінням і генеративним розвитком.

СТИСЛИЙ ОПИС СУТНОСТІ ВИНАХОДУ

ЇЇ Відповідно до одного аспекту у цьому винаході запропоновано рекомбінантну ДНК- конструкцію, яка містить першу експресійну касету та другу експресійну касету, причому перша експресійна касета містить полінуклеотидну послідовність, що кодує флоригенний білок ЕТ, функціонально зв'язану з першим промотором придатним для експресії в рослинах, а друга експресійна касета містить послідовність ДНК придатну для транскрипції, що кодує молекулу

РНК, яка містить націлюючу послідовність, яка є щонайменше на 8095 комплементарною щонайменше 15 послідовним нуклеотидам полінуклеотидної послідовності першої експресійної касети, і при цьому послідовність ДНК придатна для транскрипції функціонально зв'язана з другим промотором придатним для експресії в рослинах.

ІВЇ Відповідно до одного аспекту у цьому винаході запропоновано рекомбінантну ДНК- конструкцію, яка містить полінуклеотидну послідовність, що кодує флоригенний білок ЕТ, функціонально зв'язану з першим промотором придатним для експресії в рослинах, причому полінуклеотидна послідовність містить послідовність, яка кодує цільовий сайт або сенсор у

МРНК-транскрипті, що кодується полінуклеотидною послідовністю, і при цьому цільовий сайт бо МРНК-транскрипту є щонайменше на 8095 комплементарним ендогенній молекулі РНК, такій як ендогенна молекула мікроРНК або мігРНК.

ІЗЇ Відповідно до одного аспекту у цьому винаході запропоновано рекомбінантну ДНК- конструкцію, яка містить послідовність ДНК придатну для транскрипції, що кодує молекулу РНК, яка містить націлюючу послідовність яка є щонайменше на 8095 комплементарною щонайменше 15 послідовним нуклеотидам полінуклеотидної послідовності, що кодує флоригенний білок ЕТ, причому послідовність ДНК придатна для транскрипції функціонально зв'язана з промотором придатним для експресії в рослинах.

Відповідно до одного аспекту у цьому винаході запропоновано трансгенні рослини, клітини рослин, тканини рослин і фрагменти рослин, які містять вставку рекомбінантної ДНК- 10 конструкції згідно з цим винаходом у геномі таких рослин, клітин рослин, тканин рослин і фрагментів рослин. 1) Відповідно до одного аспекту у цьому винаході запропоновано способи отримання трансгенної рослини, які включають (а) трансформацію щонайменше однієї клітини експлантату рекомбінантною ДНК-конструкцією згідно з цим винаходом; і (б) регенерацію або вирощування трансгенної рослини з трансформованого експлантату. Ці способи можуть додатково включати (с) відбір трансгенної рослини, що має одну або більше з наступних ознак або фенотипів: більш раннє цвітіння, триваліший генеративний період або період цвітіння, збільшене число квіток на вузол, збільшене число квіткових китиць на вузол, збільшене число бобів, насінних коробочок, стручків, фруктів або горіхів на вузол і збільшене число насіння на вузол, у порівнянні з контрольною рослиною, яка не містить рекомбінантну ДНК-конструкцію. 21 Відповідно до одного аспекту у цьому винаході запропоновано способи посадки трансгенної культурної рослини, яка включають посадку трансгенної культурної рослини з підвищеною іщільністю у полі, при цьому трансгенна культурна рослина містить вставку рекомбінантної ДНК-конструкції згідно з цим винаходом.

П13| Відповідно до одного аспекту у цьому винаході запропоновано трансгенну рослину, яка містить полінуклеотидну послідовність, що кодує полінуклеотидну послідовність, що кодує флоригенний білок ЕТ, функціонально зв'язану з першим промотором придатним для експресії в рослинах, а друга експресійна касета містить послідовність ДНК придатну для транскрипції, що кодує молекулу РНК, яка містить націлюючу послідовність, яка є щонайменше на 80905 комплементарною щонайменше 15 послідовним нуклеотидам полінуклеотидної послідовності першої експресійної касети, і при цьому послідовність ДНК придатна для транскрипції функціонально зв'язана з другим промотором придатним для експресії в рослинах. Відповідно до одного аспекту у цьому винаході запропоновано трансгенну рослину, яка містить послідовність ДНК придатну для транскрипції, що кодує молекулу РНК, яка містить націлюючу послідовність яка є щонайменше на 8095 комплементарною щонайменше 15 послідовним нуклеотидам полінуклеотидної послідовності, що кодує флоригенний білок ЕТ, причому послідовність ДНК придатна для транскрипції функціонально зв'язана з промотором придатним для експресії в рослинах. 1141 Відповідно до одного аспекту у цьому винаході запропоновано трансгенну рослину, яка може у середньому мати більше насіння, стручків, насінних коробочок, плодів, фруктів, горіхів або бульб на вузол, ніж нетрансгенна контрольна рослина, наприклад, у середньому щонайменше на 195, щонайменше на 295, щонайменше на 595, щонайменше на 1095, щонайменше на 1595, щонайменше на 2095, щонайменше на 2595, щонайменше на 3095, щонайменше на 3595, щонайменше на 4095, щонайменше на 4595, щонайменше на 50965, щонайменше на 6095, щонайменше на 7095, щонайменше на 7595, щонайменше на 8095, щонайменше на 9095, щонайменше на 10095, щонайменше на 12595, щонайменше на 150965, щонайменше на 17595, щонайменше на 20095, щонайменше на 25095, щонайменше на 300965, щонайменше на 35095 або щонайменше на 40095 більше насіння, бобів, насінних коробочок, стручків, фруктів, горіхів або бульб на вузол, ніж нетрансгенна контрольна рослина. Відповідно до одного аспекту трансгенна рослина може у середньому мати щонайменше на 2, щонайменше на 3, щонайменше на 4, щонайменше на 5, щонайменше на 6, щонайменше на 7, щонайменше на 8, щонайменше на 9 або щонайменше на 10 більше насіння, бобів, насінних коробочок, стручків, фруктів, горіхів або бульб на вузол, ніж нетрансгенна контрольна рослина.

Відповідно до одного аспекту трансгенна рослина може у середньому мати на 2-10, 2-9, 2-8, 2-7,2-6,2-5,2-4,2-3, 3-10, 3-9, 3-8, 3-7, 3-6, 3-5, 3-4,4-10,4-9,4-8,4-7, 46 або 4-5 більше насіння, бобів, насінних коробочок, стручків, фруктів, горіхів або бульб на вузол, ніж нетрансгенна контрольна рослина. Відповідно до одного аспекту трансгенна рослина може у середньому мати щонайменше на 1, щонайменше на 2, щонайменше на 3, щонайменше на 4, щонайменше на 5, щонайменше на 6, щонайменше на 7, щонайменше на 8, щонайменше на 9 60 або щонайменше на 10 більше насіння, бобів, насінних коробочок, стручків, фруктів, горіхів або бульб на вузол у порівнянні з контрольною рослиною дикого типу або нетрансгенною контрольною рослиною. Відповідно до одного аспекту трансгенна рослина може зацвітати щонайменше на 1, щонайменше на 2, щонайменше на 3, щонайменше на 4, щонайменше на 5, щонайменше на 6, щонайменше на 7, щонайменше на 8, щонайменше на 9, щонайменше на 10, щонайменше на 11, щонайменше на 12, щонайменше на 13, щонайменше на 14, щонайменше на 15, щонайменше на 20, щонайменше на 25, щонайменше на 30, щонайменше на 35, щонайменше на 40 або щонайменше на 45 днів раніше, ніж нетрансгенна контрольна рослина. 151 Відповідно до одного аспекту у цьому винаході запропоновано трансгенну рослину, яка містить полінуклеотидну послідовність, що кодує флоригенний білок ЕТ, функціонально зв'язану з промотором вегетативної стадії, при цьому експресія флоригенного білка ЕТ пригнічується у пізній вегетативній та/або генеративній тканині.

І16Ї Відповідно до одного аспекту у цьому винаході запропоновано рекомбінантну ДНК- конструкцію, яка містить полінуклеотидну послідовність, що кодує флоригенний білок Я і функціонально зв'язана з промотором вегетативної стадії, і щонайменше одну послідовність, що кодує РНК-націлюючу послідовність, яка є комплементарною щонайменше частині полінуклеотидної послідовності.

П171 Відповідно до одного аспекту у цьому винаході запропоновано трансгенну рослину, яка містить рекомбінантну полінуклеотидну послідовність, що кодує флоригенний білок ЕТ, функціонально зв'язану з промотором вегетативної стадії при цьому експресія полінуклеотидної послідовності обмежена у просторі та у часі малою молекулою РНК. 18) Відповідно до одного аспекту у цьому винаході запропоновано рекомбінантну ДНК- конструкцію, яка містить експресійну касету, причому експресійна касета містить полінуклеотидну послідовність, що кодує флоригенний білок ЕТ, функціонально зв'язану з промотором, при цьому промотор містить полінуклеотидну послідовність, яка щонайменше на 7095, щонайменше на 7595, щонайменше на 8095, щонайменше на 8595, щонайменше на 9095, щонайменше на 9195, щонайменше на 9295, щонайменше на 9395, щонайменше на 945965, щонайменше на 9595, щонайменше на 9695, щонайменше на 9795, щонайменше на 98595, щонайменше на 9995 або на 10095 ідентична до полінуклеотидної послідовності, обраної з групи, що складається з 5ЕО ІЮ МО: 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, Аб, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53 або

Зо 54, або її функціональної частини.

КОРОТКИЙ ОПИС ГРАФІЧНИХ МАТЕРІАЛІВ

П19| Фіг. ЛА ілюструє матричну таблицю, в якій наведено порівняння нуклеотидних послідовностей для кожної комбінації різних генів ЕТ, включаючи відсоток їх ідентичності. (20) Фіг. 18 ілюструє матричну таблицю, в якій наведено порівняння білкових послідовностей для кожної комбінації різних генів ЕТ, включаючи відсоток їх ідентичності. (211 Фіг. 1С ілюструє множинне вирівнювання послідовностей СГ ОБЗТАЇ. 2.0.9 для різних білків ЕТ, ідентифікованих як от.ЕТ2а з 5ЕО ІЮО МО: 2, ст.260 з БЕО ІЮО МО: 6, І е.ЕТ з 5ЕО ІЮ

МО: 12, РЕЕТ з БЕО ІЮ МО: 20, О5.НОЗа з 5ЕО ІЮО МО: 18, АКЕТ з 5ЕО ІО МО: 14, А. Т5Е з БЕО

ІО МО: 16, МЕТ з ЗЕО ІО МО: 10, Ст.ЕТ5а з ЗЕО ІЮ МО: 4 і 2т.2СМ8 з ЗЕО ІЮО МО: 8. (22 Фіг. 2 ілюструє загальні рівні транскрипту ЕТ у тканинах листя та верхівок сої, зібраних на 1, З і 5 дні після вирощування в умовах короткого або довгого світлового дня. (23) Фіг. ЗА-3О і Фіг. 4А-40О ілюструють профіль експресії промотора рАї.Егесіа через відстежування активності 55 на ранніх стадіях розвитку сої. Фіг. ЗА-3О являють собою набір чорно-білих зображень забарвлених тканин, а зображення на Фіг. 4А-40О відповідають фіг. ЗА-

ЗО, але відібрані за синім забарвленням (305. Фіг. ЗА-3С і 4А-4С ілюструють експресію у 3- денних паростках; Фіг. 30-31 і 40-41 ілюструють експресію у 10-денних вегетативних пагонах (вирощуваних в умовах 14 годин світлого/10 годин темного фотоперіоду); Фіг. 39-31 і 49-41 ілюструють експресію у 16-денних генеративних пагонах; а Фіг. 3ЗМ-3О і 4М-40 ілюструють експресію у З0-денному зрілому та незрілому листі генеративного пагона. Планки відповідають 100 мкм. (24) Фіг. 5А-5БЕ і Фіг. бА-6Е ілюструють профіль експресії З5О5 з промотором рАТ.Егесіа під час КІ і квітковою стадій розвитку (35-40 днів після проростання). Фіг. БА-5Е являють собою набір чорно-білих зображень забарвлених тканин, а зображення на Фіг. бА-6Е відповідають фіг.

БА-5Е, але відібрані за синім забарвленням 505. фіг. 5А і бА ілюструють експресію у стеблах або стеблинках суцвіть (стрілки), а Фіг. 58 і 6В ілюструють експресію у квітконіжках (стрілки).

Також проілюстрована експресія у судинних і паренхіматозних клітинах (Фіг. 5С і 6с), у тичинкових нитках (Фіг. 50 і 60; стрілка) і у незапилених сім'ябруньках (Фіг. 5Е, 5Е, 6Е і 6бЕ; стрілки). Планки відповідають 1 мм. (25) Фіг. 7 ілюструє зображення зрізів апікальної меристеми пагонів (АМП) з рослин дикого бо типу та трансгенних рослин з експресією сСтЕтТ2а через 7 днів після посадки, отримані методом скануючої електронної мікроскопії (СЕМ). (26) На Фіг. 8 проілюстровано отримані методом скануючої електронної мікроскопії (СЕМ) мікрофотографії аксилярного примордію суцвіття з рослини дикого типу (зібраної через 27 днів після посадки) порівняно з аксилярним примордієм суцвіття з трансгенної рослини з експресією

Ст.ЕТ2а (зібраної через 9 днів після посадки). (27| Фіг. ЗА-9С ілюструють ефекти експресії ст.ЕТ2а під управлінням промотора Аї.Егесіа у сої. Фіг. 9А ілюструє нульовий сегрегант, що демонструє нормальні пазушні бруньки, тоді як кожна з фіг. 9В і Фіг. 9С (що відповідають рослинам, гомозиготним або гемізигсотним щодо трансгена Ст.ЕтТга, відповідно) ілюструє раннє цвітіння та збільшену кількість бобів на вузол у порівнянні з нульовим сегрегантом. (28) Фіг. 10 ілюструє зображення цілої рослини нульового сегреганта дикого типу поряд з рослинами, гемізиготними та гомозиготними щодо трансгена Ст.ЕтТга, як зазначено. (29) Фіг. 11 ілюструє зображення основного стебла рослин, які є гомозиготними або гемізиготними щодо трансгена рАїСЕгесіа-зт.ЕТ2а у порівнянні з нульовим сегрегантом, як зазначено.

ЇЗОЇ Фіг. 12 ілюструє зображення цілих рослин, трансформованих рАї.Егесіа:ст.ЕТг2а або рАї.Егесіа:Ссіт. ЕТга / рАР1 :тівМА-ЕТга :Т-Арх.

ІЗ1) Фіг. 13 ілюструє зображення цілих рослин, трансформованих тільки рАї.Егесіа:Ст.ЕТг2а або рАї.Егесіа:Ссіт.ЕТга хз цільовий сайт тік172.

ДЕТАЛЬНИЙ ОПИС ВИНАХОДУ

ІЗ2| Мета поліпшення врожайності є звичайною для усіх культурних рослин у сільському господарстві. Цей винахід включає способи та композиції для поліпшення врожайності квітучих (покритонасінних) або насінних рослин шляхом модифікації характеристик, пов'язаних з часом цвітіння, генеративним розвитком і вегетативним ростом, для поліпшення однієї або більше характеристик або одного або більше фенотипів, пов'язаних з цвітінням та/або врожайністю, таких як число квіток, насіння та/або бобів на рослину та/або число квіток, насіння та/або бобів на вузол (та/або на головне стебло) рослини. Не обмежуючись жодною теорією, вважається, що композиції і способи згідно з цим винаходом можна застосовувати для поліпшення врожайності рослини за рахунок збільшення числа флоральних меристем, підвищення синхронізації появи

Зо латеральної меристеми та/або збільшення періоду часу для розвитку боба або сім'я у рослині (наприклад, тривалості генеративного періоду).

ЇЗЗЇ Раніше було виявлено, що вирощування рослин короткого дня, таких як соя, в умовах довгого дня (наприклад, близько 14-16 годин світла на добу), а потім короткочасне вміщення цих рослин в умови росту з коротким світловим днем (наприклад, близько 9-11 годин світла на добу протягом близько 3-21 дня) перед поверненням рослин в умови росту з довгим світловим днем (неіндуктивні), дозволяє отримати рослини, які мають більше число бобів/насіння на рослину (і бобів/насіння на вузол та/або на гілку). Дивіться, наприклад, патент США Мо 8935880 і патентну заявку США Мо 2014/0259905, повний зміст яких включено у цей документ за допомогою посилання. Штучні індуктивні умови «короткого світлового дня» під час вегетативних стадій розвитку дозволили виявити не лише те, що час цвітіння можна змінювати так, щоб змінювати при цьому одну або більше пов'язаних з врожайністю ознак або фенотипів (наприклад, призводячи до збільшення числа бобів або насіння на вузол рослини), але також те, що ефект застосування цих умов був дозозалежним, коли число квіток, насіння та/або бобів на рослину (та/або на вузол рослини) залежало від (ї) тривалості застосування умов короткого дня (тобто дози сигналу індукції цвітіння) і (її) довжини фотоперіодів після умов короткого дня в умовах довгого дня (тобто дози або довжини сигналу, що індукує вегетативний ріст, після сигналу індукції короткого дня). Рослини сої, поміщені в умови меншої або менш тривалої ранньої індукції короткого дня (рікдД) (перед поверненням в умови росту з довгим світловим днем), мали більше квіток, бобів і насіння на рослину з більш нормальною висотою та мірою зрілості рослини, тоді як рослини сої, поміщені в умови більшої або тривалішою рікдД, давали менші, раніше гинучі рослини з меншим числом бобів і насіння на рослину (хоча, можливо, з більшим числом бобів та/або насіння на вузол).

ІЇЗ4Ї Фенотип індукції короткого дня у сої використовували для визначення генів, які мають змінену експресію у цих рослинах, за допомогою профілізації транскрипції. Ці дослідження дозволили визначити декілька генів зі зміненою експресією у цих оброблених рослинах сої, включаючи ендогенний ген ЕТ, Ст.ЕТга, який має підвищену експресію у відповідь на умови індукції короткого дня. Тому припустили, що можна використовувати трансгенну експресію ЕТ замість індукції короткого дня для підвищення врожаю насіння, зміни генеративних ознак або фенотипів в рослинах, або і того і іншого. Ектопічну експресію трансгена Ст.РТ2а або іншої 60 послідовності ЕТ, або їх функціонального фрагмента, гомолога або ортолога у квітучій або сім'яносній рослині можна використовувати для підвищення врожаю насіння та/або зміни одного або більше генеративних фенотипів або ознак, що може означати збільшення числа бобів/насіння на рослину (та/або числа бобів/насіння на вузол або головне стебло рослини). Як додатково пояснюється нижче та у залежності від конкретного виду рослини, ці пов'язані з врожайністю або генеративні фенотипи або ознаки також можна застосовувати щодо інших ботанічних структур, аналогічних бобам бобових рослин, таких як насінні коробочки, стручки, фрукти, горіхи, бульби і т. ін. Таким чином, рослина з ектопічною експресією послідовності ЕТ може мати збільшене число насінних коробочок, стручків, фруктів, горіхів, бульб і т. ін. на вузол (-ли), головне стебло та/або гілку (-и) рослини, та/або збільшене число насінних коробочок, стручків, фруктів, горіхів, бульб і т. ін. на рослину.

ЇЗБЇ Гени Ріомеїтіпад І осив Т (ЕТ) грають ключову роль у більшому рості рослин, а їх функція полягає в інтеграції шляхів цвітіння. Було показано, що у різних видах білки ЕТ функціонують як мобільний сигнал або флориген, що передається від листя до верхівок пагонів, де він ініціює генеративний розвиток. Дивіться, наприклад, дЧаєдег, К.Е. еї аї., "ІпіегіосКкіпд Тееабаск Іоорв5 домег пе аупатіс Бепаміог ої пе Погаї! їгап5йоп іп Агарідорзів," Пе Ріапі Сеїї, 25:820-833 (2013);

Согрезвіег, І еї аї., "ЕТ ргоївіп тометепі сопігіршез (0 Іопд дібїапсе 5ідпаїйпд іп йога! іпаископ ої

Агарідорвзів, Зсіепсе 316: 1030-1033 (2007); Ччаедег, КЕ еї аї., "ЕТ ргоївїп асі5 аз а Іопд гапде зідпа! іп Агарідорзів," Сигг Віо! 17: 1050-1054 (2007); ії Атавзіпо, К.М. еї аї., "Те Тітіпд ої

Ніожегіпд," Ріапі Рпузіоіоду, 154(2):516-520 (2010), повний зміст яких включено у цей документ за допомогою посилання. В Агабідорвів білки ЕТ зв'язуються з білками 14-3-3 і Ріомегіпд І оси5 Ю (ЕС) у меристемі з утворенням комплексу цвітіння, який ініціює активацію ключових генів ідентичності квіткової меристеми АРЕТАТАЇ!1 (АРІ) ії 5ОС1 у верхівці пагона. Дивіться, наприклад, ТаокКа, К. еї аї., "14-3-3 ргоївїп асі аз іпігасеїІшіаг гесеріог5 ог се НаЗа Погідеп."

Маїшге 476:332-335 (2011). Ген ТЕВМІМАЇ. РГОМ/ЕВ 1 (ТЕРІ1) є ключовим репресором мішеней

ЕТ, який підтримує центр апікальної меристеми пагона (АМП) у вегетативному стані. ТЕР діє шляхом репресії генів ГЕАЕМ (ЕХ) ї АРІ. Отже, відносні концентрації ЕТ і ТЕР 1 у цільових тканинах діють конкурентним чином, контролюючи час генеративного переходу меристем з вегетативного стану, що може призводити до термінації подальшого вегетативного росту.

Дивіться, наприклад, Абе, М еї аї., Зсіеєпсе 309:1052-1055 (2005); і МсоСагту, КС еї аї., Ріапі

Зсієпсе 188/189: 71-81 (2012).

ІЗБЇ Гени ЕТ були ідентифіковані у багатьох різних видах, і повідомлялося, що ектопічна експресія ЕТ індукує раннє цвітіння. Дивіться, наприклад, Копод, Р. еї аІ., "їмо Соогаїіпасеїу

Веашаїей Нотоїооз ої Ріомегіпу І оси5 Т Аге Іпмоїмей іп Ше Сопіго! ої Риоїорегіодіс Ріоуетпа іп зоуреап, Ріапі Рпузіоюду 154: 1220-1231 (2010); ТигсК, Р. еї аї.,, "Кедшіайоп апа ідепійу ої

Погідеп: Ріомегіпд Госи5 Т томез сепіег 5іаде," Апп Кем Ріапі Віо! 59: 573-594 (2008); ВіасКтап,

ВК еї аї., "Тпе гоїе ої гесепіу дегімей ЕТ рага!одз іп зипПоугег дотезіїсайоп," Си Віої! 20: 629-635 (2010); І ї5спйя, Е. еї аї., "Те отаїйо ЕТ огіпоЇодз іддеге зузіетіс 5ідпаї5 паї гедшагсе дгоулі апа

Пом'егіпд апа 5!ир5ійше ог дімегзе епмігоптепіаї 5іїтиїї," РМАБЗ 103: 6398-6403 (2006); ТтапКпег",

С. еї аІ., "Омег-ехргезвіоп ої ап ЕТ-потоіодоив депе ої арріє іпдисе5 єапу Поуегіпд іп аппиа! апа регеппіа! ріапі5," Ріапіа 232: 1309-1324 (2010); і Хіапо, Г. еї аїЇ.,, "Рипсбопаї апаїувзів ої Ріомегіпа

Госив Т оппоЇод5 їот 5ргіпду огспід (Сутбрідіит доегіпдії Вспб. 1.) їйаї гедшаїев Ше медеїаїме їо гергодисіїме Ігапзйіоп," Ріапі Сеї! 5 Віоспет 58: 98-105 (2012), повний зміст яких включено у цей документ за допомогою посилання. Проте у попередніх дослідження з експресією трансгенів ЕТ використовувалися конститутивні або тканиноспецифічні промотори, які давали або дуже виражені фенотипи, неклітинні автономні (системні) фенотипи, або автономні специфічні щодо листя фенотипи з більш раннім цвітінням рослин або сходом у порівнянні з контролем і термінацією на більш ранніх стадіях розвитку. Враховуючи ці факти, ектопічну експресію ЕТ у цілому не розглядали як життєздатний підхід до підвищення врожайності у рослинах за рахунок індукції появи квіток або зміни часу цвітіння.

ЇЗ7 Не обмежуючись жодною теорією, вважається, що ранній флоригенний сигнал (наприклад, короткий день для сої та інших рослин КД) може ініціювати ранній перехід від вегетативного до генеративного стану у рослин, але також може призводити до термінації частини первинної меристеми. При цьому повернення цих рослин у неіндуктивні умови росту (наприклад, довгий день для рослин КД) після початкового КД-сигналу може зберегти резерви меристеми рослини, які залишилися, що зробить можливим продовження вегетативного росту рослини. Таким чином, під час подовженої генеративної фази може розвиватися більше число продуктивних квіток, бобів та/або насіння на вузол (та/або на рослину). У разі індукції раннього цвітіння також можна створити більше перекриття між генеративним розвитком і вегетативним ростом рослини, що може додатково стимулювати велику тривалість генеративного періоду бо та/або періоду цвітіння або співпадати з ними. У контексті цього документу вираз «тривалість генеративного періоду» відноситься до часу від ініціації цвітіння до кінця розвитку сім'я/боба та/або наповнення, тоді як «тривалість цвітіння» або «тривалість періоду цвітіння» відноситься до часу від появи першої відкритої квітки до в'янення останньої відкритої квітки. За допомогою повернення до неіндуктивних умов росту після індукції раннього цвітіння більші ресурси будуть доступні та спрямовані на збільшення числа раніше синхронізованих і продуктивних (тобто не пустих) квіток, бобів та/або насіння на рослину, на відміну від нормального квіткового розвитку у рослинах короткого дня, в яких пізніше може відбуватися зменшення рослинних ресурсів внаслідок термінації меристематичного росту та дозрівання рослини.

ІЗВІ| Проте, як зазначено вище, сигнал індукції цвітіння (наприклад, ранні умови короткого дня) також може призводити до ранньої термінації рослини окрім раннього цвітіння. Отже, було зроблено припущення, що можуть знадобитися оптимальна доза та час сигналу індукції цвітіння для максимізації врожайності за рахунок дотримання балансу між (ї) раннім переходом від вегетативної до генеративної стадії та/або синхронізацією цвітіння з раннім сигналом індукції цвітіння (що призводить до потенційного приросту врожайності у кожному вузлі рослини) і (ії) ранньою термінацією росту (що призводить до менших рослин з меншим числом міжвузлів, меншим галуженням і меншим числом вузлів та/або квіток на рослину). Менших доз сигналу індукції цвітіння може бути досить, щоб індукувати цвітіння, при цьому знижуючи або мінімізуючи ефект ранньої термінації рослини, з отриманням більших рослин зі збільшеним числом квіток, бобів та/або насіння на вузол (та/або на рослину). З іншого боку, більш високі дози сигналу індукції цвітіння можуть призводити до ранньої термінації рослини (окрім раннього цвітіння) з отриманням менших рослин з відносно невеликим числом квіток, бобів та/або насіння на рослину внаслідок меншого розміру рослини з меншим числом міжвузлів та/або гілок на рослину, незважаючи на можливу наявність більшого числа квіток, бобів та/або насіння на вузол (та/або на рослину) у порівнянні з рослиною дикого типу або контрольною рослиною у нормальних умовах росту. Як зазначено вище, ці ефекти ектопічної експресії ЕТ також можуть включати збільшене число насінних коробочок, стручків, фруктів, горіхів, бульб і т. ін. на вузол (та/або на рослину) залежно від конкретного виду рослини.

ЇЗ9|Ї індукційний фенотип «короткого світлового дня», згаданий вище для сої, використовували для скринінгу щодо генів, які мають змінену експресію у цих рослинах, за

Зо допомогою профілізації транскрипції, що привело до визначення ендогенного гена ЕТ, Ст.ЕтТга, який має підвищену експресію у відповідь на умови індукції з коротким днем. Відповідно, було зроблене припущення, що експресію флоригенного трансгена ЕТ, такого як Ст.ЕТга, можна використовувати в якості сигналу індукції цвітіння, щоб викликати раннє цвітіння та збільшити число квіток, бобів та/або насіння на вузол (та/або на рослину) у порівнянні з рослиною дикого типу або контрольною рослиною, що не містить трансген ЕТ. Відповідно до варіантів реалізації цього винаходу відповідний контроль часу, локації та дози експресії флоригенного ЕТ під час вегетативних стадій розвитку можна використовувати, щоб індукувати цвітіння та отримати рослини, які мають більше число квіток, бобів та/або насіння на вузол у порівнянні з рослиною дикого типу або контрольною рослиною, що не містить трансген ЕТ. Замість світлових умов рІКД ЕТ можна експресувати на низькому рівні у вегетативній меристемі, щоб забезпечити сигнал індукції раннього цвітіння. Відповідно, промотор з гена Егесіа (рЕгесіа або рЕр), який характеризується нижчою меристематичною експресією під час вегетативних стадій розвитку, був обраний для початкового дослідження з трансгеном Ст.ЕТ2га. Проте враховуючи, що попередні дослідження показали, що конститутивна експресія ЕТ дає рослини, які мають виражений фенотип з ранньою термінацією, і додатково, що сайт дії для ЕТ, що виробляється периферично та транслокований з листя, знаходиться у меристемі, існувала можливість, що пряма меристематична експресія ЕТ може давати навіть сильніші та більш виражені фенотипи (та/або нежиттєздатні рослини) у порівнянні з конститутивною експресією ЕТ.

І40| Ефект надекспресії сОт.ЕТ2а з промотором рЕгесіа негайно проявлявся у поколінні Ко трансформованих рослин сої, які характеризувалися раннім цвітінням, зниженою врожайністю насіння (наприклад, тільки близько 8 насінин/рослину) і дуже ранньою термінацією, що дозволяє припустити, що баланс між індукцією цвітіння та репресією цвітіння/вегетативним ростом був сильно зміщений у бік цвітіння та ранньої загибелі. Проте з цих рослин було зібрано досить насіння К1, щоб можна було проводити додаткові експерименти. Було зроблено припущення, що вирощування насіння сої покоління К: в умовах фотоперіоду з довгим днем (репресивний щодо цвітіння) у теплиці може уповільнити розвиток фенотипів, пов'язаних з ранніми цвітінням і загибеллю, спостережуваних в рослинах Ко. З урахуванням теоретичної відповіді на дозу було зроблене додаткове припущення, що сегрегацію гомозиготних, гемізиготних і нульових щодо

ЕТ2а рослин сої можна досліджувати разом у теплиці, щоб оцінити відповідь на дозу у бо результаті надекспресії ЕТ. У цих експериментах (додатково описаних нижче) спостерігали, що сегреговані рослини мали різні фенотипи: нульові рослини мали подібність з рослинами дикого типу у термінах архітектури рослини та числа бобів на вузол (і на рослину), тоді як гомозиготні рослини рано гинули та мали сильно виражений карликовий фенотип (хоча, можливо, зі збільшеним числом бобів на вузол). При цьому гемізиготні рослини були більшими та більш схожими на нульові рослини або рослини дикого типу, але демонстрували фенотип з посиленим цвітінням зі збільшеним числом бобів на вузол (та/або на рослину). Ці відкриття показують, що експресію трансгена ЕТ на вегетативній стадії талабо у меристемі можна використовувати для отримання високоврожайної рослини (аналогічно застосуванню умов рікд) і що ефект експресії ЕТ може бути дозозалежним, оскільки рослини сої, гемізиготні щодо трансгена ЕТ2а, під управлінням слабкого меристематичного промотора демонстрували високоврожайний фенотип зі збільшеним числом бобів на вузол без більш виражених фенотипів з ранньою загибеллю та малою висотою рослини, спостережуваних у гомозиготних щодо ЕТга рослин у разі вирощування в умовах довгого дня (вегетативних). 41 Відповідно експресію трансгена ЕТ на вегетативній стадії при відповідному рівні дози можна використовувати, щоб індукувати раннє цвітіння та отримувати рослини, які мають збільшене число квіток, бобів, насінних коробочок, стручків, фруктів, горіхів, бульб та/або насіння на вузол у порівнянні з рослиною дикого типу або контрольною рослиною, що не містить трансген ЕТ. Відповідний рівень дози ЕТ можна забезпечити за допомогою промотора, обраного для управління експресією трансгена ЕТ. Слабший або нижчий рівень експресії трансгена ЕТ у вегетативній меристемі можна використовувати, щоб забезпечити сигнал індукції раннього цвітіння, при цьому зберігаючи або подовжуючи тривалість генеративного та/або квіткового розвитку і не призводячи до занадто ранньої термінації розвитку рослини. Знову, промотор з гена Егесіа (рЕгесіа або рЕг), який характеризується нижчою меристематичною експресією під час вегетативних стадій розвитку, був обраний для початкового дослідження з трансгеном

Ст.ЕтТга у рослинах сої. Як додатково описано нижче, інші промотори зі схожими профілями та рівнями експресії у вегетативній меристемі мали схожі ефекти в рослинах сої, такі як раннє цвітіння та/або збільшене число бобів на вузол. Окремо або на додаток до вибору промотора для впливу на рівень експресії трансгена можна використовувати різні трансгени ЕТ з сої або інших видів, які можуть знижувати «дозу» раннього сигналу ЕТ, що доставляється у вегетативну

Зо меристему, залежно від рівня активності трансгенного білка ЕТ у клітині рослини. Дійсно, досліджували декілька трансгенів ЕТ із сої та інших видів рослин, і було показано, що вони мають різні ефекти на цвітіння та інші генеративні ознаки у разі трансгенної експресії в рослинах сої. (42) Не обмежуючись теорією, було зроблено додаткове припущення, що збільшене число бобів на вузол у рослинах з трансгеном ЕТ може бути результатом, щонайменше частково, збільшення числа меристем суцвіть і флоральних меристем, індукованих з вегетативних апікальних і аксилярних меристем пагонів у кожному з підданих дії вузлів, що може призвести до появи більшого числа квіток та/або випущених квіткових грон у цих вузлах. Таке збільшення числа флоральних меристем, індуковане у кожному вузлі рослини у відповідь на надекспресію

ЕТ, може відбуватися за рахунок одного або більше механізмів або шляхів, які можуть не залежати від часу цвітіння та/або тривалості генеративної стадії. Проте меристематичні зміни можуть спочатку бути мікроскопічними і, отже, під час спостереження не викликати «раннє цвітіння» на такій стадії у разі простого візуального огляду, хоча генеративні зміни у меристемі можуть вже почати відбуватися. Рання вегетативна експресія ЕТ може призводити до більш раннього у порівнянні зі звичайним формування та розвитку генеративних меристем в одному або більше вузлах трансгенної рослини. Потім ці генеративні меристеми можуть забезпечувати або зумовлювати утворення більшого числа квіткових китиць з подальшою появою на них квіток у кожному вузлі. Не обмежуючись теорією, було зроблене додаткове припущення, що пізніша експресія ЕТ під час генеративних стадій може пригнічувати розвиток квіток у кожному вузлі.

Таким чином, квітки, що розвиваються пізніше, у рамках відповідної китиці можуть гинути і, таким чином, більше рослинних ресурсів може бути спрямовано на квітки, що розвиваються раніше, і генеративні структури у рамках китиці для ефективнішого утворення повнорозмірних бобів. Сигнал індукції раннього цвітіння також може призводити до того, що велика частка існуючого меристематичного потенціалу ставатиме генеративною та проходитиме стадію розвитку квіток. Відповідно, може відбуватися підвищена синхронізація квіткового розвитку з утворенням більшого числа зрілих бобів на вузол рослини.

І43| Проте, як зазначено вище, сигнал індукції цвітіння також призводить до ранньої термінації розвитку рослини окрім раннього цвітіння. Хоча рослини сої, які експресують різні трансгени ЕТ з меристематичним промотором вегетативної стадії, таким як промотор реЕгесіа, 60 мають збільшене число бобів на вузол на головному стеблі рослини, багато цих рослин все ще демонструють зменшену висоту рослини та/або знижене галуження, що призводить до меншого числа вузлів на рослину, головне стебло та/або гілку. Таким чином, хоча рівень експресії ЕТ у рослині можна регулювати вибором промотора конкретної вегетативної стадії для пригнічення типів, що виходять за рамки розвитку, і підвищення врожайності за допомогою уповільнення ранньої термінації, трансгенні рослини сої, що експресують ЕТ, можуть все ще мати знижене число квітучих вузлів на рослину, що може знижувати загальну врожайність рослини, незважаючи на підвищене число вузлів на існуючий вузол на головному стеблі.

І44| Отже, у цьому документі зроблене припущення, що незважаючи на спостережуване збільшення числа бобів на вузол у рослинах сої з експресією ЕТ на вегетативній стадії, може бути необхідно додатково послабити, регулювати або обмежити рівень експресії трансгена ЕТ для пом'якшення цих фенотипів ранньої термінації і, таким чином, досягнення оптимальної врожайності. Якщо можна зберегти збільшене число бобів (або інших ботанічних структур, таких як насінні коробочки, стручки, фрукти, горіхи, бульби і т. ін.) на вузол рослини, збільшуючи при цьому число бобів на рослину, наприклад, за допомогою уникнення або уповільнення термінації, тоді можна буде додатково оптимізувати або поліпшити загальну врожайність рослини.

І45) Відповідно до варіантів реалізації цього винаходу у цьому документі зроблене припущення, що врожайність рослини можна збільшити або підвищити шляхом послаблення або модифікації рівня та/або часу експресії трансгена ЕТ за допомогою супресії. Як додатково описано нижче, кількість або просторово-часовий профіль трансгенного ЕТ можна зменшити та/або скоректувати за допомогою природних та/або штучно створених молекул РНК, які націлені на трансгенний ЕТ для супресії. Було зроблене припущення, що хоча експресія трансгенного ЕТ в аксилярній і апікальній меристемі може ініціювати їх перенесення у флоральну меристему, подовження експресії ЕТ, наприклад, під час генеративних стадій розвитку, може призвести до ранньої термінації меристеми та зупинки росту та галуження усієї рослини. Хоча можна обрати та використовувати промотор вегетативної стадії для експресії трансгена ЕТ для послаблення фенотипу ранньої термінації та підтримки або подовження вегетативного росту та тривалості генеративної стадії рослини, додаткова супресія трансгена

ЕТ може додатково пом'якшити фенотип ранньої термінації та поліпшити або посилити ріст,

Зо розвиток і тривалість генеративної стадії рослини. Дійсно, автори цього винаходу спостерігали, що супресія трансгена ЕТ у сої може призводити до більш нормальних висоти та галуження рослини з великим числом вузлів на рослину у порівнянні тільки з експресією трансгенного ЕТ (тобто без супресії. Рослини сої з комбінованою експресією/супресією трансгена ЕТ зберігатимуть більше число бобів на вузол з додатковим пом'якшенням фенотипу ранньої термінації, спостережуваного тільки у разі експресії трансгенного ЕТ.

І46Ї Супресію трансгена ЕТ можна забезпечувати різними шляхами. Відповідно до першого підходу трансген ЕТ першої експресійної касети можна пригнічувати за допомогою другої експресійної касети, що кодує молекулу РНК, націлену на трансген ЕТ для супресії. Молекула

РНК може кодуватися послідовністю ДНК придатною для транскрипції, функціонально зв'язаною з промотором придатним для експресії в рослинах, при цьому послідовність ДНК придатна для транскрипції містить націлюючу послідовність, яка відповідає щонайменше частині трансгена ЕТ та/або комплементарній з нею послідовності. Відповідно до другого підходу трансген ЕТ може кодувати цільовий сайт для ендогенної молекули РНК, при цьому цільовий сайт є комплементарним з ендогенною молекулою РНК так, що ендогенна молекула РНК націлена на трансген ЕТ для супресії. Ендогенна молекула РНК може природним чином існувати у клітині рослини, в якій експресується трансген ЕТ. Відповідно до цього підходу для супресії не потрібна друга експресійна касета. Також обидва ці підходи для супресії можна використовувати разом.

Наприклад, трансген ЕТ може знаходитися у першій експресійній касеті та використовуватися у комбінації з другою експресійною касетою, що містить послідовність ДНК придатну для транскрипції, яка кодує молекулу РНК, що містить націлюючу послідовність, яка відповідає щонайменше частині трансгена ЕТ (та/або комплементарну з нею послідовність) (тобто перший цільовий сайт), так що молекула РНК націлена на трансген ЕТ для супресії, і при цьому трансген ЕТ додатково містить другий цільовий сайт для ендогенної молекули РНК, яка також націлена на трансген ЕТ для супресії. Перший і другий цільові сайти можуть бути однаковими або різними за послідовністю та можуть знаходитися в одній або у різних локаціях у транскрипті

ЕТ. У контексті цього документу перша полінуклеотидна послідовність або молекула «відповідає» другій полінуклеотидній послідовності або молекулі, якщо перша послідовність або молекула є схожою, ідентичною та/або комплементарною з другою послідовністю або молекулою, наприклад, більш ніж на 3095, більш ніж на 4095, більш ніж на 5095, більш ніж на 60 6095, більш ніж на 7095, більш ніж на 8095, більш ніж на 9095, більш ніж на 9595 або на 10095 ідентичною та/або комплементарною.

І47| Відповідно до одного аспекту цього винаходу запропоновано рекомбінантні молекулу

ДНК, вектор або конструкцію, які містять щонайменше дві експресійні касети, включаючи першу експресійну касету та другу експресійну касету, при цьому перша експресійна касета містить полінуклеотидну послідовність, що кодує білок ЕТ (тобто трансген ЕТ), функціонально зв'язану з першим промотором придатним для експресії в рослинах, а друга експресійна касета містить послідовність ДНК придатну для транскрипції, функціонально зв'язану з другим промотором придатним для експресії в рослинах, причому послідовність ДНК придатна для транскрипції містить послідовність, яка відповідає щонайменше частині трансгена ЕТ. Послідовність ДНК придатна для транскрипції може кодувати молекулу РНК, яка містить націлюючу послідовність, що є комплементарною щонайменше частині пре-мРНК або зрілій мРНК, кодованій полінуклеотидною послідовністю, що кодує білок ЕТ (тобто трансген ЕТ) першої експресійної касети, так що функція молекули РНК полягає у пригніченні трансгена ЕТ. «Націлююча послідовність» молекули РНК, кодованої послідовністю ДНК придатною для транскрипції, може містити усю або частину молекули РНК і кодується послідовністю послідовності ДНК придатної для транскрипції, яка відповідає щонайменше частині трансгена ЕТ та/або комплементарній з нею послідовності. Таким чином, послідовність ДНК придатна для транскрипції може кодувати молекулу РНК, яка містить націлюючу послідовність, що є комплементарною щонайменше частині мРНК-транскрипту трансгена ЕТ. Залежно від конкретного трансгена ЕТ та/або націлюючої послідовності молекули РНК, кодованої послідовністю ДНК придатною для транскрипції, також може відбуватися супресія ендогенного гена ЕТ другою експресійною касетою окрім трансгена ЕТ або ж може відбуватися супресія ендогенного гена ЕТ другою експресійною касетою замість трансгена ЕТ. Багато генних і білкових послідовностей ЕТ можуть бути ідентичними або схожими з одним або більше нативними або ендогенними генами ЕТ у трансформованій рослині і, таким чином, слугувати в якості базису для конструювання молекул

РНК ї націлюючих послідовностей для супресії цих нативних і ендогенних генів. Коли послідовність ДНК придатна для транскрипції кодує молекулу РНК, яка націлена та пригнічує трансген ЕТ, ендогенний ген ЕТ або їх обох, загальний рівень експресії та активності генів і трансгенів ЕТ можна регулювати, обмежувати або знижувати в одній або більше тканинах

Зо трансгенної рослини. В одному аспекті молекула нуклеїнової кислоти, що містить націлюючу послідовність, здатна гібридизуватися з комплементарною послідовністю нуклеїнової кислоти (наприклад, цільовим сайтом) з утворенням дволанцюгової нуклеїнової кислоти (наприклад,

ДлЛРНК). В одному аспекті гібридизація націлюючої послідовності першої молекули нуклеїнової кислоти (наприклад, супресорної молекули РНК) з послідовністю цільового сайту другої молекули нуклеїнової кислоти (наприклад, мРНК-транскрипту трансгена ЕТ) може призводити до супресії другої молекули нуклеїнової кислоти. Наприклад, якщо полінуклеотидна послідовність трансгена ЕТ є нативною для рослини, в якій вона експресується (або близькоспорідненою), то молекула РНК може бути додатково націлена на відповідний нативний ген ЕТ для супресії, особливо якщо молекула РНК націлена на кодуючу послідовність (екзон) трансгена ЕТ. У таких випадках комбінована супресія нативних і трансгенних генів ЕТ за допомогою молекули РНК, що кодується послідовністю ДНК придатною для транскрипції, може додатково знижувати дозу білка ЕТ у відповідних тканинах рослини. Проте навіть у разі трансгенної експресії нативного гена ЕТ послідовності, що не кодують білок, такі як 5' НТО, 3"

НТО, лідерні та/або інтронні послідовності, можна варіювати, не впливаючи на послідовність кодованого білка ЕТ. У контексті цього документу «кодуюча полінуклеотидна послідовність» або «полінуклеотидна послідовність» трансгена можуть містити не лише послідовності, що кодують білок (або екзонні), але також інші придатні для транскрипції послідовності, зв'язані з кодуючою послідовністю трансгена, які можуть утворювати частину кодованої послідовності пре-мРНК або зрілої МРНК, такі як 5' НТО, 3' НТО, лідерні та/або інтронні послідовності. Таким чином, у контексті цього документу вирази «кодуюча полінуклеотидна послідовність» трансгена Я і «полінуклеотидна послідовність», що кодує білок ЕТ, можна вживати взаємозамінно.

І48) Відповідно до варіантів реалізації цього винаходу перша експресійна касета та друга експресійна касета можуть знаходитися в одній рекомбінантній молекулі ДНК, векторі або конструкції або ж перша експресійна касета та друга експресійна касета можуть знаходитися в окремих рекомбінантних молекулах ДНК, векторах або конструкціях. Таким чином, відповідно до деяких варіантів реалізації винаходу можуть бути забезпечені дві рекомбінантні молекули РНК, два вектори або дві конструкції, що містять першу рекомбінантну молекулу ДНК, вектор або конструкцію та другу рекомбінантну молекулу ДНК, вектор або конструкцію, при цьому перші рекомбінантні молекула ДНК, вектор або конструкція містять першу експресійну касету, що бо містить полінуклеотидну послідовність, яка кодує білок ЕТ (тобто трансген ЕТ), функціонально зв'язану з першим промотором придатним для експресії в рослинах, а другі рекомбінантні молекула ДНК, вектор або конструкція містять другу експресійну касету, що містить послідовність ДНК придатну для транскрипції, функціонально зв'язану з другим промотором придатним для експресії в рослинах, причому послідовність ДНК придатна для транскрипції відповідає щонайменше частині трансгена ЕТ та/або комплементарній з нею послідовності.

Послідовність ДНК придатна для транскрипції може кодувати молекулу РНК, яка містить націлюючу послідовність, що є комплементарною щонайменше частині пре-мРНК або зрілій

МРНК, кодованій трансгеном ЕТ першої експресійної касети, так що функція молекули РНК полягає у пригніченні трансгена ЕТ.

І49| Запропоновані у цьому документі рекомбінантні молекулу ДНК, вектор або конструкцію, які містять трансген ЕТ, можна використовувати під час трансформації рослини для створення трансгенної рослини, що містить трансген ЕТ. Відповідно до деяких варіантів реалізації винаходу трансген ЕТ може знаходитися у першій експресійній касеті та використовуватися у комбінації з другою експресійною касетою, яка містить послідовність ДНК придатну для транскрипції, що кодує молекулу РНК, що містить націлюючу послідовність, яка відповідає щонайменше частині трансгена ЕТ та/або комплементарній з нею послідовності, при цьому першу та другу експресійні касети трансформують в рослину у вигляді однієї або окремих подій трансформації. Відповідно до деяких варіантів реалізації винаходу трансген ЕТ, трансформований у рослину, може містити цільовий сайт для ендогенної молекули РНК, яка може бути націлена на трансген ЕТ і ініціювати його супресію.

БОЇ Кодуюча полінуклеотидна послідовність трансгена ЕТ може включати Ст.ЕТга (ЗЕО ІЮ

МО: 1) або будь-яку полінуклеотидну послідовність, яка кодує білок зт.ЕТ2а (5ЕО ІЮ МО: 2).

Кодуюча полінуклеотидна послідовність трансгена ЕТ також може відповідати іншим генам ЕТ у сої або інших рослинах. Наприклад, інші кодуючі полінуклеотидні послідовності з сої, які можна використовувати в якості трансгена ЕТ відповідно до представлених варіантів реалізації винаходу, включають: (зт.ЕТ5а (5ЕО ІЮО МО: 3) або полінуклеотидну послідовність, яка кодує білок зт.ЕТ5а (ЗЕО ІЮ МО: 4), або Ст.ЕТ25 (ЗЕО ІО МО: 5) або полінуклеотидну послідовність, яка кодує білок Сіт.ЕТ20 (ЗЕО ІЮ МО: 6). Крім того, приклади кодуючих полінуклеотидних послідовностей з інших видів рослин, які можна використовувати, включають: 27т.2СМ8 (ЗЕО 10

Зо МО: 7) з кукурудзи або полінуклеотидну послідовність, яка кодує білок 2т.2СМ8 (5ЕО ІЮО МО: 8),

МЕ ЕТ-подібний або МЕРТ4 (ЗЕО ІО МО: 9) з тютюну або полінуклеотидну послідовність, яка кодує МІ.РТ-подібний білок або білок МІ.ЕТ4 (5ЕО ІЮ МО: 10), Ге. або 5ЕТ (ЗЕО ІО МО: 11) з томату або полінуклеотидну послідовність, яка кодує білок І е.ЕТ або ЗЕТ (ЗЕО ІО МО: 12), АК.ЕТ (ЗЕО ІЮ МО: 13) з Агабідорзі5 або полінуклеотидну послідовність, яка кодує білок АСЕТ (ЗЕО ІЮ

МО: 14), АСТЗЕ (ЗЕО ІО МО: 15) з Агарідорзі5 або полінуклеотидну послідовність, яка кодує білок АСТ5Е (ЗЕБЕО ІЮ МО: 16), О5.НОЗа (ЗЕБЕО ІЮ МО: 17) з рису або полінуклеотидну послідовність, яка кодує білок О5.НОЗа (5ЕО ІЮ МО: 18), або РІ.ЕТ (5ЕО ІЮО МО: 19) з Рорши5 ігіспосагра або полінуклеотидну послідовність, яка кодує білок РІ.ЕТ (ЗЕО ІО МО: 20). Додаткові приклади кодуючих полінуклеотидних послідовностей для трансгенів і білків ЕТ, які також можна використовувати, включають наступні: (ст.ЕТ5р (5БО ІО МО: 21) з сої або будь-яку полінуклеотидну послідовність, яка кодує білок сзт.ЕТ5Б6 (ЗЕО ІЮО МО: 22); СпП.ЕТ1 (ЗЕО ІЮ МО: 23) з бавовни або будь-яку полінуклеотидну послідовність, яка кодує білок СП.ЕТ1 (ЗЕО ІЮ МО: 24); Вп.ЕТАга (ЗЕО ІЮ МО: 25) з каноли або будь-яку полінуклеотидну послідовність, яка кодує білок Вп.ЕТАг2га (ЗЕО ІЮ МО: 26); ТайгТ3В1 (ЗЕБЕО ІО МО: 27) з пшениці або будь-яку полінуклеотидну послідовність, яка кодує білок Та.еТЗ3В1 (5ЕО ІЮ МО: 28); або Р5.ЕРТа1 (ЗЕО ІЮ

МО: 29) з гороху або будь-яку полінуклеотидну послідовність, яка кодує білок Р5.ЕТа! (5ЕО ІЮ

МО: 30). Кодуючі полінуклеотидні послідовності для трансгенів ЕТ, які кодують додаткові білки

АТ з інших видів, що мають відомі амінокислотні послідовності, також можна використовувати відповідно до варіантів реалізації цього винаходу, які можуть, наприклад, включати наступні:

Ма.еТ1 ї Ма.гтТ2 з яблуні (Маїй5 аотевбвіїса); Ниу.ЕТ2 і Ну.єТ3 з ячменю (Ногаешт миЇдаге);

С5.ЕТІЗ з хризантеми; І 5.ЕТ з латуку (Гасіиса заїїма); Рп.ЕТ1 і Рп.ЕеЕТ2 з пірамідальної тополі (РоршиФвх підга); Ра.ЕТ з кленолистого платану (Ріагапих асегітоїйа); ОІ.ЕТ1 з лонгану (Оітосагрив5

Іопдап); Р5.ЕТа1, Р5.ЕТаг, Р5.ЕТр1, Р5.ЕТра і Р5.ЕТсе з гороху (Різит заїїмит); Ас.ЕТ з ананасу (Апапа5 сотов5ив); Ст-ЕТІ 1 і Ст-ЕТІ12 з гарбуза (Сисигріа тахіта); Ко. з троянди; СО.ЕТ з весняної орхідеї (Сутбідішт); Ем.ЕТ1 з суниці (Егадагіа мезса); Ву.ЕТ2 з цукрового буряка (Веїа

МиїЇдагіє); На.гТ4 з соняшнику (Неїїапійиє аппии5); і Таїєї або ТагТт1 з пшениці (Тгйісит аевіїмит), і послідовності, які є щонайменше на 6095 ідентичними, щонайменше на 65905 ідентичними, щонайменше на 7095 ідентичними, щонайменше на 7595 ідентичними, щонайменше на 8095 ідентичними, щонайменше на 8595 ідентичними або щонайменше на 90595, 60 щонайменше на 9195, щонайменше на 9295, щонайменше на 9395, щонайменше на 945965,

щонайменше на 9595, щонайменше на 9695, щонайменше на 9795, щонайменше на 9895 або щонайменше на 9995 ідентичними з однією або більше такими відомими полінуклеотидними та/або білковими послідовностями. Дивіться, наприклад, Уміскіапа, ОР еї аї., "Те Ріоуегіпд

Госи5 Т/ГТептіпаї! РІоууег 1 Сепе Батійу: Еипсбопа! Емоїшіоп апа МоІесшаг Меспапібтв", Моїесшаг

Ріапі 8: 983-997 (2015), повний зміст якої включено у цей документ за допомогою посилання.

І51| Якщо не зазначено інше, описані у цьому документі послідовності нуклеїнових кислот або полінуклеотидні послідовності наведені (зліва направо) у напрямку від 5 до 3,а амінокислотні або білкові послідовності наведені (зліва направо) у напрямку від М-кінця до С- кінця. Відповідно до варіантів реалізації цього винаходу також можна використовувати додаткові відомі або виявлені пізніше гени та білки ЕТ з цих або інших видів. Ці гени ЕТ можуть бути відомі або відновлені за їх нуклеотидними та/або білковими послідовностями, які можуть бути визначені шляхом візуального огляду або за допомогою комп'ютерних інструментів пошуку та ідентифікації або комп'ютерного програмного забезпечення (і баз даних) на основі алгоритму порівняння з відомими послідовностями, структурними доменами НТ і т. ін. і відповідно до будь- якого відомого методу вирівнювання послідовностей, такого як ВІ А5Т, ЕАЗТА і т. ін.

ІБ2І Відповідно до варіантів реалізації цього винаходу трансген ЕТ рекомбінантних молекули

ДНК, вектору або конструкції може містити полінуклеотидну послідовність, яка у разі оптимального вирівнювання є щонайменше на 6095 ідентичною, щонайменше на 65905 ідентичною, щонайменше на 7095 ідентичною, щонайменше на 7595 ідентичною, щонайменше на 8095 ідентичною, щонайменше на 8595 ідентичною або щонайменше на 9095, щонайменше на 9195, щонайменше на 9295, щонайменше на 939565, щонайменше на 9495, щонайменше на 9595, щонайменше на 9695, щонайменше на 9795, щонайменше на 9895, щонайменше на 9990 або на 10095 ідентичною одній або більше кодуючим полінуклеотидним послідовностям ЕТ, переліченим вище (наприклад, 5ЕО ІЮО МО: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27 або 29), або будь-якій іншій відомій кодуючій послідовності флоригенного ЕТ. Відсоток ідентичності послідовностей серед полінуклеотидних послідовностей перелічених вище кодуючих послідовностей генів ЕТ наведено на Фіг. 1А. У кожній комірці у таблиці на Фіг. ТА наведено відсоток ідентичності для гена ЕТ у відповідному ряду (запитувана послідовність) у порівнянні з геном ЕТ у відповідній колонці (задана послідовність), ділений на загальну довжину запитуваної послідовності, а число у дужках представляє загальне число ідентичних основ між запитуваною та заданою послідовностями. Як проілюстровано на цій фігурі, відсоток ідентичності серед полінуклеотидних послідовностей для цих зразків генів ЕТ знаходиться у діапазоні від близько 6095 до близько 9095 ідентичності. Таким чином, полінуклеотидну послідовність, яка потрапляє в один або більше з цих діапазонів ідентичності послідовностей або має більш високу ідентичність послідовності, можна використовувати відповідно до варіантів реалізації цього винаходу для індукції цвітіння, підвищення урожаю та/або зміни однієї або більше генеративних ознак рослини. Схожі кодуючі полінуклеотидні послідовності для ЕТ можна конструювати або обирати на підставі відомих білкових послідовностей ЕТ, консервативних амінокислотних залишків і доменів, виродженості генетичного коду та будь-якого відомого варіанту оптимізації кодонів для конкретного виду рослин, що підлягає трансформації.

І5З| Відповідно до варіантів реалізації цього винаходу трансген ЕТ може містити полінуклеотидну послідовність, яка кодує амінокислотну або білкову послідовність, яка (у разі оптимального вирівнювання) є щонайменше на 6095 ідентичною, щонайменше на 6595 ідентичною, щонайменше на 7095 ідентичною, щонайменше на 7595 ідентичною, щонайменше на 8095 ідентичною, щонайменше на 8595 ідентичною або щонайменше на 9095, щонайменше на 9195, щонайменше на 9295, щонайменше на 939565, щонайменше на 9495, щонайменше на 9595, щонайменше на 9695, щонайменше на 9795, щонайменше на 9895, щонайменше на 9990 або на 10095 ідентичною одній або більше кодуючим полінуклеотидним послідовностям ЕТ, переліченим вище (наприклад, 5ЕО ІЮ МО: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28 або 30), або будь-якій іншій відомій білковій послідовності флоригенного ЕТ або її функціональному фрагменту. Такий «функціональний фрагмент» визначається як білок, що має поліпептидну послідовність, ідентичну або дуже схожу з повнорозмірним білком ЕТ, але в якій відсутні один або більше амінокислотних залишків, частин, білкових доменів і т. ін. повнорозмірного білка ЕТ, за умови, що фрагмент залишається активним щодо того, що він призводить до одного або більше фенотипічних ефектів або змін аналогічно повнорозмірному білку, у разі трансгенної експресії в рослині. Відсоток ідентичності послідовностей серед перелічених вище повнорозмірних білків ЕТ наведено на Фіг. 18. Відсоток розрахований, як описано вище з посиланням на Фіг. ТА на підставі числа ідентичних амінокислотних залишків "у дужках) між запитуваною та заданою білковими послідовностями ЕТ. Множинне вирівнювання цих білків ЕТ бо також проілюстроване на Фіг. 1С. Як видно на цих фігурах, відсоток ідентичності серед білкових послідовностей для цих генів ЕТ знаходиться у діапазоні від близько 6095 до близько 9095 ідентичності. Таким чином, полінуклеотидну послідовність, що кодує амінокислотну або білкову послідовність, яка потрапляє в один або більше з цих діапазонів ідентичності послідовностей або має більш високу ідентичність послідовності, можна використовувати відповідно до варіантів реалізації цього винаходу для індукції цвітіння, підвищення урожаю та/або зміни однієї або більше генеративних ознак рослини. Ці білкові послідовності ЕТ, що кодуються полінуклеотидною послідовністю згідно з цим винаходом, можна конструювати або обирати на підставі відомих білкових послідовностей ЕТ і їх консервативних амінокислотних залишків і доменів. 54 Як описано нижче, трансген ЕТ, який містить одну з наведених вище кодуючих послідовностей, може додатково містити один або більше експресійних та/або регуляторних елементів, таких як енхансер (-и), промотор (-и), лідерна (-ї) послідовність (-ості), інтрон (-и) і т. ін., і трансген ЕТ може містити геномну послідовність, що кодує білок ЕТ або амінокислотну послідовність, або їх фрагмент або частину. 55) У контексті цього документу «ідентичність послідовності» або «відсоток ідентичності» відноситься до міри, в якій дві оптимально вирівняні послідовності ДНК або білка є ідентичними.

У цій галузі техніки відомі різні алгоритми та програми для попарного або множинного вирівнювання послідовностей, такі як СіивіаМу і т. ін., які можна використовувати для порівняння ідентичності або схожості послідовностей між двома або більше послідовностями, наприклад, між двома або більше генами або білковими послідовностями ЕТ, або між генною (нуклеотидною) або білковою послідовністю ЕТ і іншою нуклеотидною або білковою послідовністю. Наприклад, відсоток ідентичності однієї послідовності (запитуваної) з іншою послідовністю (заданою) можна розрахувати, як описано вище з посиланням на Фіг. ТА і 18 (тобто при оптимальному вирівнюванні послідовностей розділити число ідентичних основ або залишків на загальне число основ або залишків для запитуваної послідовності та помножити на 10095). Хоча у цій галузі техніки відомі інші методи вирівнювання та порівняння, вирівнювання та відсоток ідентичності між двома послідовностями (включаючи відсоток ідентичності у вищеописаному діапазоні) можуть бути визначені за допомогою алгоритму СіиеїамуУ, дивіться, наприклад, Спеппа К. еї аї., "Микіріє зедоепсе аідптепі м/йп Ше Сіиеїа! 5егіез5 ої ргодгатв,"

Зо Мисівїс Асід5 Незеагсп 31: 3497-3500 (2003); Тпотрзоп 9У0 еї аї., "СІивїа! МУ: Ітргоміпд Те вепзййміну ої ргодгез5іме тийіріє зедоепсе аіїдптепі ШгоцдіП зедоепсе меїдніїпоу, розпйоп-5ресіїїс дар репакіе5 апа меїдні таїгіх споісе," Мисівїс Асід5 Незеагсй 22: 4673-4680 (1994); і Гагкіп МА еї аї., "Сішеїга! УМ апа Сіоєга! Х мегвіоп 2.0," Віоіп'оптаїййсв5 23: 2947-48 (2007), повний зміст яких включено у цей документ за допомогою посилання. У цілях цього винаходу при оптимальному вирівнюванні двох послідовностей (з допущенням гепів у вирівнюванні) «відсоток ідентичності» для запитуваної послідовності розраховують, як описано вище з посиланням на Фіг. ТА і 18 - тобто відсоток ідентичності - (число ідентичних позицій між запитуваною та заданою послідовностями / загальне число позицій у запитуваній послідовності) х 10095, де кожна послідовність складається з ряду позицій (нуклеотидних основ або амінокислотних залишків).

Дві оптимально вирівняні послідовності також можна описати як такі, що мають певний відсоток ідентичності. Необов'язково, відсоток ідентичності може бути описаний з посиланням на певне вікно порівняння (наприклад, вікно вирівнювання) між двома послідовностями, у разі чого число ідентичних позицій у вікні порівняння ділять на довжину у нуклеотидах вікна порівняння та множать на 10095. Вікно вирівнювання може бути визначене як область ідентичності, схожості або перекриття між двома послідовностями.

І56Ї Рекомбінантні полінуклеотидна або білкова молекула, або конструкція, або вектор можуть бути виділеними. У контексті цього документу термін «виділений» відноситься до щонайменше часткового відділення молекули від інших молекул, зазвичай пов'язаних з нею в її природному стані. В одному варіанті реалізації винаходу термін «виділений» відноситься до молекули ДНК, яку відокремлено від нуклеїнових кислот, які зазвичай фланкують молекулу ДНК в її природному стані. Наприклад, молекула ДНК, що кодує білок, яка в природному стані присутня у бактерії, вважається виділеною молекулою ДНК, якщо вона не знаходиться у ДНК бактерії, в якій у природному стані можна виявити молекулу ДНК, що кодує білок. Таким чином, молекула ДНК, злита або функціонально зв'язана з однією або більше молекулами ДНК, з якими б вона не була б зв'язана у природному стані, наприклад, у результаті застосування технологій рекомбінантних ДНК або трансформації рослин, вважається у цьому документі виділеною. Такі молекули вважаються виділеними, навіть коли вони інтегровані у хромосому клітини-хазяїна або знаходяться у розчині нуклеїнових кислот з іншими молекулами ДНК.

І57| Білкова послідовність ЕТ, що кодується полінуклеотидною послідовністю, або трансген 60 згідно з цим винаходом також можуть бути сконструйовані або обрані так, щоб містити одну або більше амінокислотних замін, які є хімічно та/або структурно консервативними (наприклад, заміщення однієї амінокислоти іншою, що має схожі хімічні або фізичні властивості, такі як гідрофобність, полярність, заряд, стеричний ефект, кисла/основна хімія, схожі групи бічних ланцюгів, такі як гідроксильні, сульфгідрильні, аміно і т. ін.), для того, щоб уникнути або мінімізувати структурні зміни у білці, які можуть вплинути на його функцію. Наприклад, валін часто є консервативною заміною аланіну, а треонін може бути консервативною заміною серину.

Додаткові приклади консервативних амінокислотних замін у білках включають: валін/лейцин, валін/ізолейцин, фенілаланін/тирозин, лізин/аргінін, аспарагінова кислота/глутамінова кислота та аспарагін/глутамін. Білкова послідовність ЕТ, що кодується полінуклеотидною послідовністю, або трансген згідно з цим винаходом також можуть включати білки, які відрізняються однією або більше амінокислотами від відомої білкової послідовності ЕТ або схожої послідовності у результаті наявності делеції (-ій) та/або вставки (-ок), що включають одну або більше амінокислот.

ІЗ8) Можна ідентифікувати різні гени та білки ЕТ від різних видів рослин і розглядати їх як гомологи ЕТ або ортологи для застосування у цьому винаході, якщо вони мають схожу послідовність нуклеїнової кислоти та/або білкову послідовність і містять консервативні амінокислоти та/або структурні домени з щонайменше одним відомим геном або білком ЕТ. У контексті цього документу мається на увазі, що термін «гомолог» щодо гена або білка ЕТ включає будь-які гомологи, аналоги, ортологи, паралоги і т. ін. гена або білка ЕТ, а термін «гомологічний» щодо полінуклеотидних або білкових послідовностей означає схожі або ідентичні послідовності, включаючи синтетичні, штучні або сконструйовані полінуклеотидні або білкові послідовності. Такий гомолог ЕТ також може бути визначений як такий, що має таку ж або схожу біологічну функцію, що й відомі гени ЕТ (наприклад, з аналогічною дією на цвітіння та/або інші генеративні або пов'язані з врожайністю ознаки або фенотипи у разі ектопічної експресії в рослині).

ІБ9| Аналіз послідовностей і вирівнювання білкових послідовностей ЕТ з різних видів рослин дозволив додатково виявити деяке число консервативних амінокислотних залишків і щонайменше один консервативний структурний домен. У разі застосування до різних вирівняних білкових послідовностей ЕТ (дивіться, наприклад, Фіг. 18 ії 1С) інструменту для визначення білкових доменів з використанням бази даних Ріат (наприклад, версії Ріат 26.0, випущеної у листопаді 2011 р., або пізніших версій), було виявлено, що ці білки ЕТ містять щонайменше частину припустимого фосфатидилетаноламін-зв'язуючого білкового (РЕВР) домену (назва домену за Ріат: РВР М; номер доступу: РЕО1161). Дивіться, наприклад, Вапіїеї!а,

М.) еї аїІ., "Те вігисіиге ої Апійтвпіпит сепігогадіаїйє ргоївіп (СЕМ) зиддевіб5 а гоЇїе а5 а Кіпазе іпрірйог, доигпа! ої Мої ВіоїІ., 297(5): 1159-1170 (2000), повний зміст якої включено у цей документ за допомогою посилання. Було виявлено, що цей домен РЕВР відповідає, наприклад, амінокислотам 28-162 повнорозмірного білка ст.ЕТ2а (дивіться таблицю 5, нижче). Таким чином, білки ЕТ, включені у варіанти реалізації цього винаходу, можуть включати ідентифіковані або охарактеризовані як такі, що мають або містять щонайменше домен РЕВР (номер доступу:

РЕО1161) відповідно до аналізу Ріат. Відповідно, цей винахід може додатково включати полінуклеотидні послідовності, які кодують білок ЕТ, що містить щонайменше домен РЕВР. Як відомо у цій галузі техніки, база даних «Ріат» є великою колекцією множинних вирівнювань послідовностей і прихованих моделей Маркова, що покривають багато поширених білкових сімейств, і містить інформацію про різні білкові сімейства та їх доменні структури. За допомогою визначення припустимих структурних доменів Ріат для заданої білкової послідовності можна з'ясувати або визначити класифікацію та функцію білка. Дивіться, наприклад, Ріпп, КО еї аї., "Те Ріат ргоївіп Татійез дагаразе, Мисівїс Асід5 Кезеагсп (Оабаразе Іззцие), 42:0222-0230 (2014), повний зміст якої включено у цей документ за допомогою посилання.

ІЄОЇ Варіанти реалізації цього винаходу можуть додатково включати полінуклеотидні послідовності, які кодують індуктивні або флоригенні білки ЕТ. Білок ЕТ, кодований полінуклеотидною послідовністю, може бути «індуктивним» або «флоригенним», якщо білок ЕТ у разі ектопічної експресії в рослині здатний призводити до більше раннього цвітіння та/або підвищення родючості у контексті числа квіток, бобів, насінних коробочок, стручків, фруктів, горіхів, бульб та/або насіння на один або більше вузлів рослини. Не обмежуючись теорією, було зроблене додаткове припущення, що таке підвищення родючості у контексті числа квіток, бобів, насінних коробочок, стручків, фруктів, горіхів, бульб та/або насіння на один або більше вузлів рослини може бути результатом збільшення числа меристем у цих вузлах, які переходять від вегетативної до генеративної стадії та дають квітки. Така підвищена родючість у кожному вузлі внаслідок ектопічної експресії «флоригенного» ЕТ може бути пов'язана з підвищенням бо синхронізації випускання та флорального розвитку ранніх китиць і латеральних меристем у кожному вузлі. Хоча функція «флоригенного» білка ЕТ може полягати в індукції раннього цвітіння у разі ектопічної експресії в рослині, трансгенний експресований «флоригенний» білок

ЕТ може збільшувати число квіток, бобів, насінних коробочок, стручків, фруктів, горіхів, бульб та/або насіння на вузол (вузли) рослини за рахунок одного або більше шляхів або механізмів, незалежно або на додаток до будь-яких флоригенних ефектів, пов'язаних з часом цвітіння та/або тривалістю генеративної стадії.

ІЄТ| Флоригенні ЕТ-подібні гени з різних видів рослин у загальному випадку відрізняються високою мірою консервативності. Проте багато білків у сімействі РЕВР мають амінокислотні послідовності, які є по суті схожими з флоригенними білками ЕТ, але не проявляють себе як флоригени. Наприклад, гени Тептіпа! Ріожег (ТЕ) з різних видів рослин мають схожі білкові послідовності з флоригенними генами ЕТ, але насправді уповільнюють цвітіння. У нещодавній роботі були визначені конкретні амінокислотні залишки, які у загальному випадку не є спільними для флоригенних білків ЕТ і інших білків РЕВР, таких як ТЕЇ, і було показано, що заміни у багатьох з цих позицій перетворюють флоригенні білки ЕТ у білки-репресори цвітіння. Дивіться, наприклад, Но апа Умеїде!, Ріапі Се 26: 552-564 (2014); бапієм5Кауа еї аї., Ріапі Рпузіоіюду 146(1): 250-264 (2008); Нагід вї а!., Ріапі доштпаї 72: 908-921 (2012); Нзи єї а!., Ріапі Сеї! 18: 1846- 1861 (2006); Кота еї аї., Ріапі Се! Рпузіоїосду 43(10): 1096-1105 (2002); Копа еї аї., Ріапі

Рпузіоіоду 154: 1220-1231 (2010); Моїїпего-Козаїез еї аї!., Ріапіа 218: 427-434 (2004); 7Наї еї аї.,

РГо5 ОМЕ, 9(2): е89030 (2014), і ММісКіапа ОР еї аї. (2015), вище, повний зміст яких включено у цей документ за допомогою посилання. Таким чином, амінокислотні залишки можуть слугувати показниками для додаткового визначення та встановлення відмінностей флоригенних білків ЕТ згідно з цим винаходом.

Іб2І| Відповідно до варіантів реалізації цього винаходу «індуктивний» або «флоригенний» білок ЕТ може бути додатково визначений або охарактеризований як такий, що містить один або більше з наступних амінокислотних залишків (амінокислотні позиції відносяться до відповідних або оптимально вирівняних позицій повнорозмірного білка ЕТ з Агабідорзі5, ФЕО ІЮ

МО: 14): пролін в амінокислотній позиці 21 (Р21); аргінін або лізин в амінокислотній позиції 44 (К44 або Ка44); гліцин в амінокислотній позиції 57 (557); глутамінова кислота або аспарагінова кислота в амінокислотній позиції 59 (Е59 або 059); тирозин в амінокислотній позиції 85 (У85);

Зо лейцин в амінокислотній позиції 128 (І 128); гліцин в амінокислотній позиції 129 (5129); треонін в амінокислотній позиції 132 (Т132); аланін в амінокислотній позиції 135 (А135); триптофан в амінокислотній позиції 138 (УМ138); глутамінова кислота або аспарагінова кислота в амінокислотній позиції 146 (Е146 або 0146); та/або цистеїн в амінокислотній позиції 164 (С164).

Відповідні амінокислотні позиції інших білків ЕТ можна визначити за допомогою вирівнювання з послідовністю ЕТ Агарідорзів (дивіться, наприклад, Фіг. 1С). Фахівець у цій галузі техніки зможе визначити відповідні амінокислотні позиції інших білків ЕТ на підставі вирівнювання послідовностей. Декілька з цих ключових залишків знаходяться у межах зовнішнього петлевого домену ЕТ-подібних білків, який визначається амінокислотами 128-145 повнорозмірної послідовності ЕТ Агарідорзіє (ЗЕО ІЮ МО: 14) і відповідних послідовностей інших білків ЕТ (дивіться, наприклад, Фіг. 12). Таким чином, полінуклеотиди згідно з цим винаходом можуть кодувати флоригенні білки ЕТ, які мають один або більше з цих консервативних амінокислотних залишків.

ІЗ) Флоригенні білки ЕТ згідно з цим винаходом також можуть містити одну або більше інших амінокислот в одній або більше з визначених вище позицій залишків. Наприклад, у випадку наведених вище амінокислотних позицій послідовності білка ЕТ Агабідорвів (Аї.ЕТ) (ЗЕО ІО МО: 14), флоригенний білок ЕТ може, в альтернативному варіанті, містити одну або більше з таких амінокислот: аланін (замість проліну) у позиції, що відповідає позиції 21 послідовності білка АСЕТ (Р21А), або, можливо, інші невеликі амінокислотні залишки, такі як гліцин або валін, у цій позиції; гістидин (замість лізину або аргініну) в амінокислотній позиції, що відповідає позиції 44 послідовності білка АСЕТ, або, можливо, інші полярні амінокислоти у цій позиції; аланін або цистеїн (замість гліцину) в амінокислотній позиції, що відповідає позиції 57 послідовності білка АГ.ЕТ, або, можливо, інші невеликі неполярні залишки, такі як пролін або валін, у цій позиції; аспарагін або серин (замість глутамінової кислоти або аспарагінової кислоти) в амінокислотній позиції, що відповідає позиції 59 послідовності білка АКЕТ, або, можливо, інші невеликі полярні залишки, такі як глутамін, цистеїн або треонін, у цій позиції; різні полярні та неполярні незаряджені залишки (відмінні від лейцину) в амінокислотній позиції, що відповідає позиції 85 послідовності білка АРТ; неполярний або гідрофобний незаряджений залишок (відмінний від лейцину), такий як ізолейцин, валін або метіонін, в амінокислотній позиції, що відповідає позиції 128 послідовності білка АїЕТ; різні менші неполярні та 60 незаряджені залишки (відмінні від гліцину), такі як аланін, валін, лейцин, ізолейцин, метіонін і т.

ін., в амінокислотній позиції, що відповідає позиції 129 послідовності білка АСЕТ, хоча у цій позиції можуть допускатися деякі заряджені та полярні залишки; полярний незаряджений залишок (відмінний від треоніну) в амінокислотній позиції, що відповідає позиції 132 послідовності білка АСЕТ; різні амінокислоти, відмінні від проліну, такі як треонін, в амінокислотній позиції, що відповідає позиції 135 послідовності білка АЇ.ЕТ; різні інші об'ємні неполярні або гідрофобні амінокислоти (замість триптофану), такі як метіонін або фенілаланін, в амінокислотній позиції, що відповідає позиції 138 послідовності білка Аг.ЕТ; різні інші полярні або непозитивно заряджені амінокислоти, такі як аспарагін або серин, в амінокислотній позиції, що відповідає позиції 146 послідовності білка АЇЕТ; та/або різні інші полярні або неполярні амінокислоти (замість цистеїну), такі як ізолейцин, в амінокислотній позиції, що відповідає позиції 164 послідовності білка Аї.ЕТ. Фахівець у цій галузі техніки зможе визначити відповідні амінокислотні позиції і заміни білків ЕТ на підставі вирівнювання їх послідовностей з послідовністю білка ЕТ Агарідорзів. Крім того, також передбачається, що в об'єм флоригенних білків ЕТ можуть потрапляти інші хімічно консервативні амінокислотні заміни, припустимі з точки зору фахівця в області біохімії білків. Відповідно, полінуклеотиди згідно з цим винаходом можуть додатково кодувати флоригенні білки ЕТ, які мають одну або більше консервативних амінокислотних замін. Дійсно, флоригенні білки ЕТ, кодовані полінуклеотидами згідно з цим винаходом, включають нативні послідовності та штучні послідовності, які містять одну або більше консервативних амінокислотних замін, а також їх функціональні фрагменти.

ІЄ4Ї Флоригенні білки ЕТ згідно з цим винаходом також можуть бути визначені як такі, що виключають (тобто що не містять) одну або більше амінокислотних замін, які можуть бути характерними для ТЕРЇ або інших нефлоригенних або антифлоригенних білків або бути зв'язаними з ними. Наприклад, у випадку амінокислотних позицій послідовності білка ЕТ

Агабідорвів (ЗЕО І МО: 14), у флоригенному білку ЕТ можуть бути виключені одна або більше з наступних амінокислот (тобто у відповідних або оптимально вирівняних позиціях флоригенного білка ЕТ): фенілаланін або серин у позиції, що відповідає позиції 21 послідовності білка АСЕТ (наприклад, замість проліну або аланіну); фенілаланін у позиції, що відповідає позиції 44 послідовності білка АГ.ЕТ (наприклад, замість аргініну або лізину); гістидин, глутамінова кислота або аспарагінова кислота у позиції, що відповідає позиції 57 послідовності білка АКСЕТ

Зо (наприклад, замість гліцину); гліцин або аланін у позиції, що відповідає позиції 59 послідовності білка АСКЕТ (наприклад, замість глутамінової кислоти або аспарагінової кислоти); гістидин у позиції, що відповідає позиції 85 послідовності білка АСЕТ (наприклад, замість тирозину); лізин, аргінін, аланін або метіонін у позиції, що відповідає позиції 109 послідовності білка АГ.ЕТ; лізин або аргінін у позиції, що відповідає позиції 128 послідовності білка АЇ.ЕТ (наприклад, замість лейцину); глутамін або аспарагін у позиції, що відповідає позиції 129 послідовності білка АСЕТ (наприклад, замість гліцину); валін або цистеїн у позиції, що відповідає позиції 132 послідовності білка АЇ.ЕТ (наприклад, замість треоніну); лізин, аргінін або аланін у позиції, що відповідає позиції 134 послідовності білка Аї.ЕТ (наприклад, замість тирозину); пролін у позиції, що відповідає позиції 135 послідовності білка АСЕТ (наприклад, замість аланіну або треоніну); серин, аспарагінова кислота, глутамінова кислота, аланін, лізин або аргінін у позиції, що відповідає позиції 138 послідовності білка АЇ.ЕТ (наприклад, замість триптофану або метіоніну); лізин або аргінін у позиції, що відповідає позиції 140 послідовності білка АЇ.ЕТ; лізин або аргінін у позиції, що відповідає позиції 146 послідовності білка АЇ.ЕТ (наприклад, замість кислих або незаряджених полярних залишків); лізин або аргінін у позиції, що відповідає позиції 152 послідовності білка Аї.ЕТ; та/або аланін у позиції, що відповідає позиції 164 послідовності білка

А.Т (наприклад, замість цистеїну або ізолейцину). Фахівець у цій галузі техніки зможе визначити відповідні амінокислотні позиції та заміни інших білків ЕТ на підставі вирівнювання їх послідовностей. Відповідно, варіанти реалізації цього винаходу можуть виключати полінуклеотиди, які кодують ЕТ-подібні білкию, що мають одну або більше вищезгаданих амінокислотних замін, пов'язаних з ТРЇ або іншими антифлоригенами. Проте у білку ЕТ можуть допускатися одна або декілька таких амінокислотних замін, якщо він зберігає при цьому флоригенну активність. 65) Флоригенний білок ЕТ згідно з цим винаходом також може бути визначений як схожий з відомим білком ЕТ на додаток до того, що він має один або більше з вищезгаданих характерних або консервативних амінокислотних залишків. Наприклад, флоригенний білок може бути визначений як такий, що має щонайменше 6095, щонайменше 6595, щонайменше 70965, щонайменше 7595, щонайменше 8095, щонайменше 8595, щонайменше 9095, щонайменше 91905, щонайменше 9295, щонайменше 9395, щонайменше 9495, щонайменше 9595, щонайменше 96965, щонайменше 9795, щонайменше 9895 або щонайменше 9995 ідентичності з послідовністю, 60 вибраною з групи, що складається з ЗБЕО ІЮ МО: 2,4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 2681

30, або її функціональним фрагментом, на додаток до одного або більше з наступних характерних залишків: тирозин або інший незаряджений полярний або неполярний залишок (наприклад, аланін, триптофан, метіонін, лейцин, треонін, цистеїн, серин або аспарагін) в амінокислотній позиції, що відповідає позиції 85 послідовностей білка Аї.ЕТ; лейцин або інший неполярний або гідрофобний залишок (наприклад, ізолейцин, валін або метіонін) в амінокислотній позиції, що відповідає позиції 128 послідовностей білка АСЕТ; та/або триптофан або інший великий неполярний або гідрофобний залишок (наприклад, метіонін або фенілаланін) в амінокислотній позиції, що відповідає позиції 138 послідовностей білка АКСЕТ. Такий флоригенний білок ЕТ може бути додатково визначений як такий, що має додаткові характерні амінокислотні залишки, такі як один або більше з наступних: гліцин або інший невеликий неполярний і незаряджений залишок (наприклад, аланін, валін, лейцин, ізолейцин або метіонін) в амінокислотній позиції, що відповідає позиції 129 послідовностей білка Аї.ЕТ; та/або треонін в амінокислотній позиції, що відповідає позиції 132 послідовності білка АЇ.ЕТ.

ІЄ6Ї Флоригенний білок ЕТ згідно з цим винаходом також може бути визначений як такий, що має щонайменше 6095, щонайменше 659565, щонайменше 7096, щонайменше 7595, щонайменше 8096, щонайменше 8595, щонайменше 9095, щонайменше 9195, щонайменше 9295, щонайменше 9395, щонайменше 9495, щонайменше 9595, щонайменше 9695, щонайменше 97965, щонайменше 9895 або щонайменше 9995 ідентичності з послідовністю, вибраною з групи, що складається з

ЗЕО ІЮ МО: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28 і 30, або її функціональним фрагментом, але не має (тобто виключає) один або більше нефлоригенних або антифлоригенних залишків, таких як один або більше з наступних: гістидин в амінокислотній позиції, що відповідає позиції 85 послідовностей білка Аї.ЕТ; лізин або аргінін в амінокислотній позиції, що відповідає позиції 128 послідовностей білка АСЕТ; та/або серин, аспарагінова кислота, глутамінова кислота, лізин або аргінін в амінокислотній позиції, що відповідає позиції 138 послідовностей білка АСЕТ. Такий флоригенний білок ЕТ може бути додатково визначений як такий, що не має (тобто виключає) один або більше додаткових залишків, таких як один або більше з наступних: глутамін або аспарагін в амінокислотній позиції, що відповідає позиції 129 послідовностей білка АГЕТ; та/або валін або цистеїн в амінокислотній позиції, що відповідає позиції 132 послідовності білка АЇ.ЕТ.

Зо ІЄ7| Відповідно до варіантів реалізації цього винаходу запропоновано рекомбінантні молекулу ДНК, вектор або конструкцію, які містять полінуклеотидну послідовність, що кодує білок ЕТ, яка функціонально зв'язана з одним або більше промоторами та/або іншими регуляторними елементами, чиєю функцією у клітині рослини є регуляція або зміщення часу та/або локації експресії ЕТ, у разі трансформації в рослину. Відповідно до деяких варіантів реалізації винаходу трансген ЕТ може знаходитися у першій експресійній касеті та використовуватися разом з другою експресійною касетою, що містить послідовність ДНК придатну для транскрипції яка відповідає щонайменше частині трансгена ЕТ та/або комплементарній з нею послідовності, і кодує молекулу РНК, яка націлює трансген ЕТ для супресії. Відповідно до деяких варіантів реалізації винаходу трансген ЕТ може містити цільовий сайт для ендогенної молекули РНК, яка може бути націлена на трансген ЕТ і ініціювати його супресію. 68) Як загальноприйнятно вважати у цій галузі техніки, термін «промотор» загалом може відноситися до послідовності ДНК, яка містить сайт зв'язування РНК-полімерази, сайт ініціації транскрипції та/або ТАТА-бокс і викликає, ініціює, регулює, підтримує та/або стимулює транскрипцію та експресію зв'язаної придатної для транскрипції полінуклеотидної послідовності та/або гена (або трансгена). Промотор може бути створений синтетично, сконструйований, варійований та/або отриманий з відомої або природної промоторної послідовності або іншої промоторної послідовності (наприклад, запропонованої у цьому документі). Промотор також може включати химерний промотор, що містить комбінацію двох або більше гетерологічних послідовностей. Таким чином, промотор згідно з цим винаходом може включати варіанти промоторних послідовностей, які є схожими за композицією, але не ідентичними з іншими промоторними послідовностями, запропонованими у цьому документі. У контексті цього документу термін «функціонально зв'язаний» відноситься до такого функціонального зв'язку між промотором або іншим регуляторним елементом і зв'язаною придатною для транскрипції полінуклеотидною послідовністю або кодуючою послідовністю гена (або трансгена), що функція промотора і т. ін. полягає в ініціації, підтримці, зміні, викликанні, регуляції та/або стимуляції транскрипції та експресії зв'язаної кодуючої або придатної для транскрипції полінуклеотидної послідовності, щонайменше у конкретній (-их) тканині (-ах), на конкретній (-их) стадії (-ях) розвитку та/"або в інших визначених умовах. Вираз «промотор придатний для експресії в бо рослинах» відноситься до промотора, який можна використовувати для експресії в рослині,

клітині рослини та/або тканині рослини зв'язаної кодуючої послідовності, трансгена або придатної для транскрипції полінуклеотидної послідовності, яка функціонально зв'язана з промотором.

ІЄЗ| Промотор можна класифікувати відповідно до різних критеріїв, пов'язаних з профілем експресії кодуючої послідовності або гена (включаючи трансген), функціонально зв'язаною з промотором, наприклад, як конститутивний, пов'язаний з розвитком, тканиноспецифічний, індуцибельний і т. ін. Промотори, які ініціюють транскрипцію в усіх або у більшості тканин рослини, називаються «конститутивними» промоторами. Промотори, які ініціюють транскрипцію під час певних періодів або стадій розвитку, називаються «пов'язаними з розвитком» промоторами. Промотори, чия експресія посилюється у певних тканинах рослини у порівнянні з іншими тканинами рослини, називаються «тканинопідсиленими» або «тканинопереважними» промоторами. Таким чином, «тканинопереважний» промотор викликає відносно велику або переважну експресію у конкретній (-их) тканині (-ах) рослини, але має нижчі рівні експресії в іншій (-их) тканині (-ах) рослини. Промотори, які забезпечують експресію у конкретній (-их) тканині (-ах) рослини, але при цьому в інших тканинах рослини експресія незначна або відсутня, називаються «тканиноспецифічними» промоторами. Промотор, який забезпечує експресію у конкретному типі клітин рослини, називається «специфічним щодо типу клітин» промотором. «Індуцибельним» промотором називається промотор, який ініціює транскрипцію у відповідь на зовнішній стимул, такий як холод, посуха, тепло або світло або інші стимули, такі як ушкодження або застосування хімічних речовин. Промотор також можна класифікувати у термінах його походження як гетерологічний, гомологічний, химерний, синтетичний і т. ін. Термін «гетерологічний» щодо промотора або іншої регуляторної послідовності, пов'язаної з полінуклеотидною послідовністю (наприклад, послідовністю ДНК придатною для транскрипції, кодуючою послідовністю, геном або трансгеном), відноситься до промотора або регуляторної послідовності, які не зв'язані з такою полінуклеотидною послідовністю у природі, наприклад, промотор або регуляторна послідовність мають походження, відмінне від зв'язаної з ними полінуклеотидною послідовністю, та/або у природі не зустрічаються у виді рослини, що підлягає трансформації промотором або регуляторною послідовністю. У ширшому сенсі термін «гетерологічний» включає комбінацію двох або більше молекул або послідовностей ДНК, якщо

Зо така комбінація зазвичай не зустрічається у природі. У контексті цього документу «зазвичай не зустрічається у природі» означає не зустрічається у природі без втручання людини. Наприклад, дві або більше молекули або послідовності ДНК будуть гетерологічними між собою, якщо вони зазвичай знаходяться у різних геномах або у різних локусах одного генома, або якщо вони не скомбіновані ідентичним чином у природі. Відповідно до багатьох варіантів реалізації винаходу промотор експресії в рослині, функціонально зв'язаний з полінуклеотидною послідовністю, що кодує білок ЕТ, є гетерологічним щодо полінуклеотидної послідовності, що кодує білок ЕТ.

Ї70)Ї Відповідно до варіантів реалізації цього винаходу запропоновано рекомбінантні молекулу ДНК, вектор або конструкцію, які містять флоригенний трансген ЕТ або кодуючу послідовність, функціонально зв'язані з промотором, який є функціональним в рослині, які можна вносити або трансформувати в рослину, щоб змінити пов'язаний з цвітінням, генеративністю або урожаєм ознаку або фенотип. У варіантах реалізації цього винаходу запропоновано рекомбінантну молекулу ДНК, що містить трансген ЕТ або кодуючу послідовність, функціонально зв'язані з промотором «вегетативної стадії», щоб у разі внесення або трансформації в рослину викликати експресію трансгена ЕТ на більш ранніх стадіях розвитку рослини (тобто під час фази вегетативного росту рослини) для отримання підвищеного рівня ЕТ в цільових тканинах у порівнянні з тим, який в іншому випадку був би в рослині дикого типу на тій самій стадії розвитку. Час експресії трансгена ЕТ під час вегетативної (-их) стадії (-ій) розвитку може бути важливим для впливу на однією або більше пов'язаних з генеративністю, цвітінням та/або врожайністю ознак або фенотипів за допомогою забезпечення часово- індуктивного сигналу для генерації збільшеної кількості рлоральних меристем і продуктивних квіток в одному або більше вузлах рослини. Експресія на вегетативній стадії може бути потрібна для ініціації раннього цвітіння та можливості поліпшення пов'язаних з генеративністю, цвітінням та/або врожайністю ознак або фенотипів, таких як більше число квіток, бобів і т. ін. на вузол рослини. Не обмежуючись жодною теорією, було зроблено припущення, що експресія трансгена

ЕТ в рослині на вегетативній стадії може призводити до синхронізації та/л"або підвищення раннього цвітіння в одному або більше вузлах з отриманням більшого числа квіток на вузол рослини. Промотори, описані нижче як частина цього винаходу, забезпечують варіанти для регуляції часу експресії ЕТ.

Г11У контексті цього документу промотор «вегетативної стадії» включає будь-який бо промотор, який ініціює, викликає, регулює і т. ін. транскрипцію або експресію зв'язаного з ним гена, трансгена або послідовності ДНК придатної для транскрипції під час однієї або більше вегетативних стадій розвитку рослини, наприклад, під час однієї або більше з Ме, Мс, М1, М2, М3,

МА і т. ін., та/або будь-якої або усіх більш пізніх вегетативних стадій розвитку (наприклад, до стадії Ми). ІНШИМИ словами термін «вегетативна стадія» відноситься до вегетативної (-их) стадії (-їй) розвитку рослини у цілому. Такий промотор «вегетативної стадії» може бути додатково визначено як такий, що ініціює, викликає, регулює і т. ін. транскрипцію або експресію зв'язаного з ним гена/грансгена або послідовності ДНК придатної для транскрипції в одній або більше вегетативних тканинах рослини, таких як одна або більше вегетативних меристематичних тканин. Такий промотор «вегетативної стадії» може бути додатково визначено як «переважний щодо вегетативної стадії» промотор, який ініціює, викликає, регулює і т. ін. транскрипцію або експресію зв'язаного з ним гена, трансгена або послідовності ДНК придатної для транскрипції щонайменше переважно або головним чином, якщо не виключно, під час однієї або більше вегетативних стадій розвитку рослини (на противагу генеративним стадіям). При цьому кожен з промотора «вегетативної стадії» та «переважного щодо вегетативної стадії» промотора також може забезпечувати, допускати, викликати, регулювати і т. ін. транскрипцію або експресію зв'язаного з ним гена, трансгена або послідовності ДНК придатної для транскрипції під час генеративної (-их) фази (фаз) або стадії (-ій) розвитку в одній або більше клітинах або тканинах рослини, наприклад, в одній або більше квіткових або генеративних тканинах. Насправді промотор «вегетативної стадії» може навіть ініціювати, викликати, регулювати і т. ін. транскрипцію або експресію зв'язаного з ним гена, трансгена або послідовності ДНК придатної для транскрипції в одній або більше генеративних або квіткових тканинах на більш високому рівні або більшою мірою, ніж у вегетативній (-их) тканині (-ах), за умови, що промотор «вегетативної стадії» також ініціює, викликає, регулює і т. ін. транскрипцію або експресію зв'язаного з ним гена, трансгена або послідовності ДНК придатної для транскрипції під час однієї або більше вегетативних стадій розвитку рослини.

І/2| Ознаки та характеристики, пов'язані з вегетативними стадіями розвитку для заданого виду рослини, відомі у цій галузі техніки. У випадку дводольних рослин вегетативні морфологічні ознаки та характеристики рослини під час вегетативних стадій розвитку можуть включати певну форму сім'ядолі, наявність вегетативних меристем (апікальної,

Зо латеральної/аксилярної та кореневої), розташування листя, форму листя, форму країв листя, жилкування листя, черешки, прилистки, розтруби, підсім'ядольне коліно та корені. Відповідно до варіантів реалізації цього винаходу промотор «вегетативної стадії» також може бути додатково визначено за конкретною вегетативною стадією, під час якої він уперше викликає, ініціює і т. ін. спостережувану або виражену транскрипцію або експресію зв'язаного з ним гена (або трансгена). Наприклад, промотор вегетативної стадії може бути промотором стадії Мс, промотором стадії М1, промотором стадії М2, промотором стадії МЗ ії т. ін. Отже, промотор «стадії Мс» визначається як промотор вегетативної стадії, який уперше ініціює або викликає транскрипцію зв'язаного з ним гена, трансгена або послідовності ДНК придатної для транскрипції під час стадії Ме розвитку рослини, промотор «стадії М1» визначається як промотор вегетативної стадії, який уперше ініціює або викликає транскрипцію зв'язаного з ним гена, трансгена або послідовності ДНК придатної для транскрипції під час стадії М1 розвитку рослини, промотор «стадії М2» визначається як промотор вегетативної стадії, який уперше ініціює або викликає транскрипцію зв'язаного з ним гена, трансгена або послідовності ДНК придатної для транскрипції під час стадії М2 розвитку рослини і т. ін., хоча експресія зв'язаного гена, трансгена або послідовності ДНК придатної для транскрипції може відбуватися безперервно або з перервами в одній або більше тканинах під час пізніших вегетативних (та/або генеративних) стадій розвитку. Фахівець у цій галузі техніки зможе визначити час експресії заданого гена, трансгена або послідовності ДНК придатної для транскрипції під час розвитку рослини, використовуючи різні методи та техніки молекулярного аналізу, відомі у цій галузі техніки.

Г7З| Відповідно до варіантів реалізації цього винаходу промотор «вегетативної стадії» може включати конститутивний, тканинопереважний або тканиноспецифічний промотор. Наприклад, промотор вегетативної стадії може регулювати експресію зв'язаного з ним гена/трансгена ЕТ або послідовності ДНК придатної для транскрипції в одній або більше тканинах рослини, наприклад, в одному або більше з коренів, стебел, листя, меристем і т. ін. під час вегетативної (сих) стадії (-їй) розвитку рослини. При цьому такий промотор вегетативної стадії може переважно регулювати експресію зв'язаного з ним трансгена ЕТ або кодуючої послідовності, або послідовності ДНК придатної для транскрипції в одній або більше меристем рослини.

Відповідно до багатьох варіантів реалізації винаходу промотор «вегетативної стадії» може бути «меристемо-специфічним» або «меристемо- переважним» промотором, який викликає 60 експресію трансгена ЕТ або кодуючої послідовності, або послідовності ДНК придатної для транскрипції у меристематичній тканині. Відомо, що білки ЕТ функціонують у меристемі рослини, допомагаючи ініціювати перехід від вегетативного до генеративного росту після транслокації білка ЕТ з листя. На противагу цьому, у варіантах реалізації цього винаходу запропоновано експресію трансгена ЕТ безпосередньо у меристемі рослини для індукції цвітіння та надання рослині змінених пов'язаних з генеративністю та/(або врожайністю ознаки або фенотипу. Таким чином, відповідно до варіантів реалізації цього винаходу запропоновані рекомбінантні молекула ДНК, конструкція або вектор, які містять трансген ЕТ або кодуючу послідовність, функціонально зв'язані з «меристемо-специфічним» або «меристемо- переважним» промотором, який регулює експресію трансгена ЕТ щонайменше переважно в одній або більше меристематичних тканинах рослини, у разі трансформації у рослину. У контексті цього документу «меристемо-переважний промотор» відноситься до промоторів, які переважно викликають експресію зв'язаного гена, трансгена або послідовності ДНК придатної для транскрипції щонайменше в одній меристематичній тканині рослини у порівнянні з іншими тканинами рослини, наприклад, в одній або більше апікальних та/або аксилярних меристемах, тоді як «меристемо-специфічний промотор» відноситься до промоторів, які викликають експресію зв'язаний гена, трансген або послідовності ДНК придатної для транскрипції виключно (або майже виключно) щонайменше в одній меристематичній тканині рослини. 74) Відповідно до варіантів реалізації цього винаходу запропоновано рекомбінантну молекулу ДНК, яка містить кодуючу послідовність ЕТ, функціонально зв'язану з промотором вегетативної стадії який також може бути меристемо-переважним та/або меристемо- специфічним промотором. Наприклад, промотор може включати промотор рАЇ.Егесіа из

Агарідорвзів (ЗЕО ІЮ МО: 31) або його функціональні фрагмент або частину. Два приклади усіченої частини промотора рАї.Егесіа відповідно до варіантів реалізації даного винаходу наведено як ЗЕО ІО МО: 32 і 5ЕО ІЮО МО: 48. Дивіться, наприклад, УоКоуата, К. еї аї., "Те

Агарідорзіз ЕВЕСТА депе і5 ехргеззеа іп Ше 5поої аріса! тегієтет апа огдап ргітогаїа," Те Ріапі

Уоитаї! 15(3): 301-310 (1998). рАї.Егесіа є прикладом промотора вегетативної стадії, який також є меристемо-переважним. Інші меристемо-переважні або меристемо-специфічні промотори вегетативної стадії були ідентифіковані на підставі їх характерного профілю експресії (дивіться, наприклад, приклади 4 і 7 нижче), і їх також можна використовувати для управління експресією

Зо ЕТ відповідно до варіантів реалізації цього винаходу. Наприклад, були ідентифіковані промотори з наступних генів рецептор-подібної кінази (КІ К), які можна використовувати як меристемо-переважні промотори вегетативної стадії: Спіута!0938730 (5ЕБО І МО: 33),

СіІутабй9д27950 (5ЕО ІО МО: 34), Сіутабйб905900 (5ЕО ІО МО: 35) і СІута17934380 (5ЕО ІЮ МО: 36) і будь-які їх функціональні частини. Меристемо-переважні промотори вегетативної стадії відповідно до варіантів реалізації цього винаходу також можуть включати промотори генів рецептор-подібної кінази (КІК) з картоплі: РОБСО0ОЗОМР4А00032802 (З5ЕБО ІЮО МО: 37)і

РОЗСОООЗОМРА0О0054040 (5ЕО ІЮ МО: 38) і будь-які їх функціональні частини. З урахуванням наведеної у цьому документі характеристики промотора рАї.Егесіа, який управляє експресією

ЕТ, і аналогічних профілів експресії, визначених для інших генів КІ К, Егесіа або Егесіа-подібних (ЕП), меристемо-переважні або меристемо-специфічні промотори вегетативної стадії згідно з цим винаходом можуть додатково включати будь-які відомі або ідентифіковані пізніше промоторні послідовності генів КІ К, Егесіа і Егесіа- подібних, з інших видів дводольних, що мають профіль експресії на вегетативній стадія у меристемі рослини.

І75) Додаткові приклади меристемо-переважних або меристемо-специфічних промоторів можуть включати промотори з наступних генів Агарідорвзів: Ріппеад (АКРМН) (ЗЕО ІЮО МО: 39),

Апдивійойа З або АКАМЗ (5ЕО ІО МО: 40), Аї.МУВ17 (АЇІМІ2 або І аїе Мегібієт Ідепійу 2;

АїЗаб1250) (ЗЕО ІО МО: 41), Кіпезіп-подібний ген (Аї5д55520) (5ЕО І МО: 42), АР2/ВЗ-подібні гени, включаючи АІАЕМ17 (ЗЕБЕО ІЮ МО: 43) або АЇ.ВЕМТІ9, і Егесіа-подібні гени 1 і 2, АКЕГ (ЗЕО ІО МО: 44) і АМЕпПг (ЗЕО ІО МО: 45) і будь-які їх функціональні частини. Іншим прикладом є промотор ААРІ (рАГКАРІ або рАРІ) з Агарідорзіз (ЗЕО ІЮ МО: 49) або його функціональна частина. Проте промотор рАКАРІ може вважатися промотором більш пізньої вегетативної та генеративної стадії. Враховуючи пізній профіль експресії на вегетативній та генеративній стадії, промотор рАЇАРІ їі споріднені промотори можна застосовувати для управління експресією трансгена ЕТ та/або супресійного елементу трансгена ЕТ. Додаткові приклади, ідентифіковані зі схожих генів та/або генів, що мають схожий профіль експресії з промотором рАСКАРІ у нативних видах рослин, можуть включати промотор з одного з наступних генів: АТ1526310.1 (5ЕО ІЮ МО: 50), АТ3030260.1 (5БО ІО МО: 51) або АТ5О60910.1 (5ЕБО ІЮ МО: 52) з Агабрідорвзів;

Сіутаб01908150 (5ЕО ІО МО: 53), Сіпутабйг2913420 (5ЕО І МО: 54), Сіутайв4936380 (5ЕО І МО: 55) або Сіута16б913070 (5ЕО ІО МО: 56) з сої; Зоїус029065730 (ЗЕО ІЮ МО: 57), Зоїусо29089210 (510) (ЗЕО ІЮ МО: 58), 5оїус039114830 (ЗЕО ІЮ МО: 59) або боіІус0об9069430 (5ЕО ІЮ МО: 60) з томату; або ОКМ2М2с148693 (5БО І МО: 61) а8!МиМ20553379 (5БО ІО МО: б6г),

ОКМ2М26072582 (5ЕО ІО МО: 63), або ОКМАМ20147716 (5ЕО ІЮ МО: 64) з кукурудзи, або будь-яку їх функціональну частину.

Ї76Ї Промотор вегетативної стадії, який також може бути меристемо-переважним та/або меристемо-специфічним промотором, може включати як ранні, так і пізні промотори вегетативної стадії залежно від профілю їх експресії під час вегетативних стадій розвитку.

Промотор «ранньої вегетативної стадії» уперше ініціює або викликає спостережувану або виражену транскрипцію або експресію зв'язаного з ним гена/гтрансгена або послідовності ДНК придатної для транскрипції під час однієї або більше ранніх вегетативних стадій (тобто стадій

Ме-М5), тоді як промотор «пізньої вегетативної стадії» уперше ініціює або викликає спостережувану або виражену транскрипцію або експресію зв'язаного з ним гена/трансгена або послідовності ДНК придатної для транскрипції під час однієї або більше пізніх вегетативних стадій (тобто стадії Мб і пізніше). Промотор ранньої або пізньої вегетативної стадії також може бути переважним щодо ранньої або пізньої вегетативної стадії промотором. «Переважний щодо ранньої вегетативної стадії» промотор ініціює, викликає, регулює і т. ін. транскрипцію або експресію зв'язаного з ним гена/грансгена або послідовності ДНК придатної для транскрипції переважно або більшою мірою під час однієї або більше ранніх вегетативних стадій (тобто стадій Ме-У5) у порівнянні з більш пізніми вегетативними стадіями. «Переважний щодо пізньої вегетативної стадії» промотор ініціює, викликає, регулює і т. ін. транскрипцію або експресію зв'язаного з ним гена/грансгена або послідовності ДНК придатної для транскрипції переважно або більшою мірою під час однієї або більше пізніх вегетативних стадій (тобто стадії Мб і пізніше) у порівнянні з більш ранніми вегетативними стадіями. Відповідно, промотор ранньої вегетативної стадії також може бути переважним щодо пізньої вегетативної стадії промотором, якщо промотор уперше ініціює або викликає спостережувану або виражену транскрипцію або експресію зв'язаного з ним гена/трансгена або послідовності ДНК придатної для транскрипції під час більш ранніх вегетативних стадій, але також ініціює, викликає, регулює і т. ін. транскрипцію або експресію зв'язаного з ним гена/трансгена або послідовності ДНК придатної для транскрипції переважно або більшою мірою під час більш пізніх вегетативних стадій. Перелічені вище приклади промоторів вегетативної стадії можуть включати промотори ранньої та пізньої

Зо вегетативної стадії, які також можуть бути переважними щодо ранньої вегетативної стадії або переважними щодо пізньої вегетативної стадії.

Ї7/7| Полінуклеотидна послідовність промотора вегетативної стадії (або /- його функціонального фрагмента або частини) також може мати нестрогу ідентичність послідовності щодо будь-якого з наведених вище промоторів вегетативної стадії і при цьому зберігати схожий або ідентичний профіль експресії зв'язаних послідовності ДНК придатної для транскрипції, гена або трансгена, функціональної зв'язаних з промотором. Наприклад, промотор вегетативної стадії може містити полінуклеотидну послідовність, яка є щонайменше на 6095, щонайменше на 6595, щонайменше на 7095, щонайменше на 7595, щонайменше на 8095, щонайменше на 8595, щонайменше на 9095, щонайменше на 9195, щонайменше на 9295, щонайменше на 93965, щонайменше на 9495, щонайменше на 9595, щонайменше на 9695, щонайменше на 97965, щонайменше на 9895 або щонайменше на 9995 ідентичною полінуклеотидній послідовності, обраній з наведених вище ЗЕО ІЮ МО: 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63 або 64, або її функціональній частині. «Функціональна частина» відомої або запропонованої промоторної послідовності визначається як одна або більше безперервних або переривчастих частин відомої або запропонованої промоторної послідовності, які можуть функціонально регулювати, викликати, стимулювати і т. ін. експресію зв'язаного з ними гена, трансгена або послідовності ДНК придатної для транскрипції ідентичним або схожим чином з відомою або запропонованою промоторною послідовністю. З урахуванням цього винаходу фахівець у цій галузі техніки зможе визначити, чи призводить промотор, який містить одну або більше частин відомої або запропонованої промоторної послідовності, таЛлабо який має коротшу послідовність або послідовність з менш строгою ідентичністю послідовності відносно відомої або запропонованої промоторної послідовності, до схожого профілю експресії таЛлабо схожих фенотипів або ефектів, коли зв'язаний з ним репортерний ген або трансген ЕТ експресується у рослині, у порівнянні з відомою або запропонованою промоторною послідовністю. 78) Відповідно до деяких варіантів реалізації винаходу промотор «генеративної стадії» (визначений нижче) може бути функціонально зв'язаний та використаний для експресії трансгена ЕТ або кодуючої послідовності, за умови, що промотор генеративної стадії забезпечує (тобто ініціює, викликає, регулює і т. ін) щонайменше деякий рівень експресії бо трансгена ЕТ під час вегетативної (-их) стадії (-ій) розвитку рослини для забезпечення сигналу індукції раннього цвітіння. Приклади промоторів генеративної стадії наведено нижче.

Віднесення заданого промотора до категорії промотора ранньої або пізньої вегетативної стадії та/або промотора генеративної стадії залежить від конкретного виду рослини, в якій використовується промотор. Промотор, який має певний профіль експресії в одному виді рослини, наприклад, у своєму нативному виді рослини, може мати відмінний, змінений або зміщений профіль експресії у разі експресії в іншому виді рослини (наприклад, гетерологічно в іншому виді рослини), хоча передбачається, що профіль експресії із заданим промотором часто буде схожим (якщо не ідентичним або майже ідентичним) для різних видів рослин. Наприклад, промотор генеративної стадії в одному виді рослини може функціонувати як промотор ранньої вегетативної стадії і разі застосування для експресії трансгена або послідовності ДНК придатної для транскрипції в іншому виді рослини. Таким чином, промотор генеративної стадії можна використовувати у деяких випадках гетерологічно для експресії трансгена ЕТ і індукції раннього цвітіння. Наприклад, промотор рАСАРІ (ЗЕО ІО МО: 49) має прийнятніший щодо генеративної стадії профіль експресії в його нативному рослинному виді Агарідорзі5, але може регулювати ранній профіль експресії на вегетативній стадії у меристемі у разі гетерологічного застосування у рослині сої окрім регуляції експресії на генеративній стадії.

І79| Як зазначено вище, рекомбінантні молекула ДНК, конструкція або вектор згідно з цим винаходом можуть містити експресійну касету, яка містить полінуклеотидну послідовність, що кодує білок ЕТ (тобто трансген ЕТ), яка функціонально зв'язана з промотором вегетативної стадії який також може бути меристемо-переважним та/або меристемо-специфічним промотором. Кодуюча полінуклеотидна послідовність трансгена ЕТ або експресійна касета також може бути функціонально зв'язана з одним або більше додатковими регуляторними елементами, такими як енхансери, лідерні послідовності, сайти ініціації транскрипції (СІТ), лінкери, 5 ї 3 нетрансльовані області, інтрони, сигнали поліаденілювання, області або послідовності термінації і т. ін., які підходять або потрібні для регуляції або забезпечення експресії трансгена ЕТ або касети для ефективного вироблення білка ЕТ у клітині рослини. Такі додаткові регуляторні елементи можуть бути необов'язковими та використовуватися для підвищення або оптимізації експресії трансгена. У цілях цього винаходу «енхансер» можна відрізнити від «промотора» за тим, що в енхансері зазвичай відсутній сайт ініціації транскрипції,

ТАТА-бокс або еквівалентна послідовність, і тому його одного недостатньо для управління транскрипцією. У контексті цього документу «лідерна послідовність» може бути у загальному випадку визначена як послідовність ДНК нетрансльованої 5 області (57 НТО) гена (або трансгена) між сайтом ініціації транскрипції (СІТ) і стартовим сайтом послідовності, що кодує білок.

ІЇВО|Ї У контексті цього документу у застосуванні до полінуклеотиду «конструкція» є сегментом або послідовністю полінуклеотиду, які містять один або більше елементів послідовності, таких як кодуюча послідовність або послідовність ДНК придатна для транскрипції, і один або більше експресійних або регуляторних елементів, таких як промотор, енхансер і т. ін. «Експресійна касета» є типом конструкції, яка містить кодуючу послідовність або послідовність ДНК придатну для транскрипції яка може експресувати кодуючу послідовність або послідовність ДНК придатну для транскрипції у відповідному хазяїні, такому як рослинна або бактеріальна клітина, і один або більше промоторів та/або регуляторних елементів, функціонально зв'язаних з кодуючою послідовністю або послідовністю ДНК придатною для транскрипції. «Вектор» є полінуклеотидом або молекулою ДНК, які можуть містити одну або більше конструкцій та/або експресійних касет і які підходять для стабільності, зберігання або інших застосувань або цілей, таких як доставка, трансформація та/або підтримка у рослині або клітині-хазяїні. «Вектор» може включати плазміду або кільцеву молекулу ДНК, лінійну молекулу ДНК, трансформаційний вектор, придатний для трансформації рослин, і т. ін.

Молекула ДНК або вектор можуть містити одну або більше конструкцій, експресійних касет, селективних маркерів, елементів реплікації та/або підтримки і т. ін.

ІЗ1Ї Відповідно до варіантів реалізації цього винаходу термін «рекомбінантний» у застосуванні до молекули полінуклеотиду (ДНК або РНК), білка, конструкції, вектору і т. ін. відноситься до полінуклеотидної або білкової молекули або послідовності, яка зазвичай не зустрічається у природі та/або знаходиться в умовах, у яких вона зазвичай не зустрічається у природі, включаючи молекулу полінуклеотиду (ДНК або РНК), білок, конструкцію і т. ін., що містять комбінацію двох або більше полінуклеотидних або білкових послідовностей, які у природі не були б безперервними або не знаходилися б одна поблизу одної без втручання людини, та/або молекулу ДНК, конструкцію і т. ін., що містять щонайменше дві послідовності

ДНК, гетерологічні одна до одної. Рекомбінантна молекула ДНК, конструкція і т. ін. може містити 60 послідовності ДНК, які відокремлено від інших полінуклеотидних послідовностей, які знаходяться поблизу таких послідовностей ДНК у природі, та/або послідовність ДНК, яка є суміжною (або безперервною) з іншими полінуклеотидними послідовностями, які у природних умовах не знаходяться одна поблизу одної. Рекомбінантна молекула ДНК, конструкція і т. ін. також може відноситися до молекули або послідовності ДНК, яка була генетично спроектована та сконструйована за межами клітини. Наприклад, рекомбінантна молекула ДНК може включати відповідну плазміду, вектор і т. ін. і може включати лінійну або кільцеву молекулу ДНК. Такі плазміди, вектори і т. ін. можуть містити різні допоміжні елементи, включаючи прокаріотичну точку початку реплікації та селективний маркер, а також трансген, що експресує ЕТ, або експресійну касету, можливо, на додаток до гена рослинного селективного маркера і т. ін.

ІВ2| Відповідно до варіантів реалізації цього винаходу запропоновано другу експресійну касету, яка містить придатну для транскрипції полінуклеотидну або ДНК-послідовність, функціонально зв'язану з промотором придатним для експресії в рослинах, при цьому послідовність ДНК придатна для транскрипції містить послідовність, яка відповідає щонайменше частині трансгена ЕТ та/або комплементарній з нею послідовності та націлена на трансген ЕТ для супресії. Придатна для транскрипції послідовність ДНК може кодувати молекулу РНК, яка містить націлюючу послідовність, що є комплементарною щонайменше частині пре-мРНК або зрілій мРНК, кодованій полінуклеотидною послідовністю, що кодує білок

ЕТ (тобто трансген ЕТ), так що молекула РНК пригнічує трансген ЕТ. Відповідно, запропоновано рекомбінантні молекулу ДНК, конструкцію або вектор для трансформації у рослину, які містять другу експресійну касету. Такі рекомбінантні молекула ДНК, конструкція або вектор можуть додатково містити першу експресійну касету, яка містить кодуючу полінуклеотидну послідовність, що кодує білок ЕТ (тобто трансген ЕТ), функціонально зв'язану з першим промотором придатним для експресії в рослинах, і при цьому друга експресійна касета містить послідовність ДНК придатну для транскрипції, функціонально зв'язану з другим промотором придатним для експресії в рослинах. В альтернативному варіанті, можуть бути надані дві рекомбінантні молекули ДНК, конструкції або два вектори для трансформації рослини, які містять першу рекомбінантну молекулу ДНК, конструкцію або вектор і другу рекомбінантну молекулу ДНК, конструкцію або вектор, при цьому перша рекомбінантна молекула ДНК, конструкція або вектор містить першу експресійну касету, що містить трансген ЕТ, а друга

Зо рекомбінантна молекула ДНК, конструкція або вектор містить другу експресійну касету, що містить послідовність ДНК придатну для транскрипції, яка містить послідовність, що відповідає щонайменше частині трансгена ЕТ та/або комплементарній з нею послідовності. Відповідно до деяких варіантів реалізації винаходу промотор придатний для експресії в рослинах функціонально зв'язаний з послідовністю ДНК придатною для транскрипції, яка кодує молекулу

РНК для супресії гена ЕТ, або ж трансген є гетерологічним щодо послідовності ДНК придатної для транскрипції.

ІЗЗ| Для супресії трансгена ЕТ відповідно до варіантів реалізації цього винаходу можна використовувати будь-який відомий у цій галузі техніки спосіб, включаючи експресію антисмислових РНК, дволанцюгових РНК (длРНК) або послідовностей РНК з інвертованими повторами, або за допомогою спільної супресії або РНК-інтерференції (РНКІі) за допомогою експресії малих інтерферуючих РНК (міРНК), коротких шпилькових РНК (кшШРНК), транс-діючих міРНК (тд-міР НК) або мікро-РНК (мікроРНК). Дивіться, наприклад, публікації патентних заявок

США Мо 2009/0070898, 2011/0296555 і 2011/0035839, зміст яких включено у цей документ за допомогою посилання. Відповідно, молекула РНК, кодована послідовністю ДНК придатною для транскрипції, може являти собою антисмислову РНК, дволанцюгову РНК (длРНК) або РНК з інвертованими повторами, малу інтерферуючу РНК (міРНК), коротку шпилькову РНК (кшРНК), транс-діючу міРНК (тд-міРНК) або мікро-РНК (мікроРНК), включаючи РНК-попередники, такі як міРНК- або мікроРНК-попередники, які можуть процесуватися або розщеплюватися до зрілої молекули РНК, такої як зріла міРНК або мікроРНК. У контексті цього документу термін «супресія» відноситься до зниження, зменшення або елімінації рівня експресії мРНК та/або білка, що кодується цільовим геном та/або трансгеном у рослині, клітині рослини або тканині рослини, яке може бути обмежене конкретною тканиною та/або стадією розвитку рослини залежно від промотора, використовуваного для експресії молекули РНК.

ІВ4Ї Відповідно до варіантів реалізації цього винаходу запропоновано рекомбінантні молекулу ДНК, конструкцію або вектор, які містять послідовність ДНК придатну для транскрипції та/або елементи супресії, що кодують молекулу РНК або послідовність, націлені на трансген ЕТ для супресії, при цьому послідовність ДНК придатна для транскрипції функціонально зв'язана з промотором придатним для експресії в рослинах. Оскільки молекула РНК призначена для супресії, молекула РНК, кодована послідовністю ДНК придатною для транскрипції, може бути бо некодуючою молекулою РНК. У цілях цього винаходу «некодуюча молекула РНК» є молекулою

РНК, яка не кодує білок. Відповідно до деяких варіантів реалізації винаходу рекомбінантні молекула ДНК, конструкція або вектор можуть містити першу експресійну касету, що містить трансген ЕТ, і другу експресійну касету, що містить послідовність ДНК придатну для транскрипції, яка кодує молекулу РНК, націлену на трансген ЕТ для супресії. В альтернативному варіанті перша експресійна касета, що містить трансген ЕТ, і друга експресійна касета, що містить послідовність ДНК придатну для транскрипції для супресії трансгена ЕТ, можуть знаходитися у двох різних рекомбінантних молекулах ДНК, конструкціях або векторах.

ІЗ5Ї Послідовність ДНК придатна для транскрипції може містити елемент супресії, який має довжину щонайменше 15 нуклеотидів, наприклад, довжину від близько 15 нуклеотидів до близько 27 нуклеотидів, або довжину 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26 або 27 нуклеотидів, при цьому елемент супресії відповідає щонайменше частині цільового трансгена

ЕТ, що підлягає супресії, та/або комплементарній з ним послідовності ДНК. У багатьох варіантах реалізації винаходу послідовність ДНК придатна для транскрипції або елемент супресії можуть мати довжину щонайменше 17, щонайменше 19, щонайменше 20, щонайменше 21, щонайменше 22 або щонайменше 23 нуклеотидів (або більше) (наприклад, довжину щонайменше 25, щонайменше 30, щонайменше 50, щонайменше 100, щонайменше 200, щонайменше 300, щонайменше 500, щонайменше 1000, щонайменше 1500, щонайменше 2000, щонайменше 3000, щонайменше 4000 або щонайменше 5000 нуклеотидів). Залежно від довжини та послідовності послідовності ДНК придатної для транскрипції або елементу супресії можуть допускатися одне або більше неспівпадінь у послідовності або некомплементарних основ без втрати функції супресії. Насправді навіть короткі елементи супресії РНКІі з довжиною у діапазоні від близько 15 нуклеотидів до близько 27 нуклеотидів можуть мати одне або більше неспівпадінь або некомплементарних основ, але при цьому ефективно пригнічувати цільовий трансген ЕТ. Відповідно, смисловий або антисмисловий елемент супресії може містити послідовність яка є щонайменше на 8095, щонайменше на 8595, щонайменше на 90965, щонайменше на 9595, щонайменше на 9695, щонайменше на 9795, щонайменше на 98595, щонайменше на 9995, щонайменше на 99,595 або на 10095 ідентичною або комплементарною відповідній послідовності щонайменше сегменту або частини цільового трансгена ЕТ або її комплементарній послідовності, відповідно.

ІЗ6Ї Послідовність ДНК придатна для транскрипції згідно з цим винаходом для націленої супресії трансгена ЕТ може містити один або більше з наступних елементів супресії та/або націлюючих послідовностей: (а) послідовність ДНК, яка містить щонайменше одну антисмислову послідовність ДНК, яка є антисмисловою або комплементарною щонайменше одному сегменту або одній частині цільового трансгена ЕТ; (Б) послідовність ДНК, яка містить безліч копій щонайменше однієї антисмислової послідовності ДНК, яка є антисмисловою або комплементарною щонайменше одному сегменту або одній частині цільового трансгена ЕТ; (с) послідовність ДНК, яка містить щонайменше одну смислову послідовність ДНК, яка містить щонайменше один сегмент або одну частину цільового трансгена ЕТ; (4) послідовність ДНК, яка містить безліч копій щонайменше однієї смислової послідовності ДНК, кожна з яких містить щонайменше один сегмент або одну частину цільового трансгена ЕТ; (е) послідовність ДНК, яка містить сегмент або частину цільового трансгена ЕТ з інвертованими повторами та/або транскрибується у РНК для супресії цільового трансгена ЕТ шляхом утворення дволанцюгової

РНК, при цьому транскрибована РНК містить щонайменше одну антисмислову послідовність

ДНК, яка є антисмисловою або комплементарною щонайменше одному сегменту або одній частині цільового трансгена ЕТ, і щонайменше одну смислову послідовність ДНК, яка містить щонайменше один сегмент або одну частину цільового трансгена ЕТ; (Її) послідовність ДНК, яка транскрибується в РНК для супресії цільового трансгена ЕТ шляхом утворення однієї дволанцюгової РНК і містить безліч антисмислових послідовностей ДНК, кожна з яких є антисмисловою або комплементарною щонайменше одному сегменту або одній частині цільового трансгена ЕТ, і безліч смислових послідовностей ДНК, кожна з яких містить щонайменше один сегмент або одну частину цільового трансгена ЕТ; (у) послідовність ДНК, яка транскрибується в РНК для супресії цільового трансгена ЕТ шляхом утворення великої кількості дволанцюгових РНК і містить безліч антисмислових послідовностей ДНК, кожна з яких є антисмисловою або комплементарною щонайменше одному сегменту або одній частині цільового трансгена ЕТ, і безліч смислових послідовностей ДНК, кожна з яких містить щонайменше один сегмент або одну частину цільового трансгена ЕТ, при цьому безліч антисмислових сегментів ДНК і безліч смислових сегментів ДНК впорядковані у серії з інвертованих повторів; (п) послідовність ДНК, яка містить нуклеотиди, отримані з мікроРНК, переважно рослинної мікроРНК; (ії) послідовність ДНК, яка містить нуклеотиди з міРНК; (Її) бо послідовність ДНК, яка транскрибується в РНК-аптамер, здатний зв'язуватися з лігандом; і (К)

послідовність ДНК, яка транскрибується в РНК-аптамер, здатний зв'язуватися з лігандом, і ДНК, яка транскрибується в регуляторну РНК, здатну регулювати експресію цільового трансгена ЕТ, при цьому регуляція цільового трансгена ЕТ залежить від конформації регуляторної РНК, а на конформацію регуляторної РНК має алостеричний ефект стан зв'язування РНК-аптамера лігандом. Послідовність ДНК придатна для транскрипції може містити один або більше вищезгаданих елементів супресії талабо одну або більше націлюючих послідовностей, які можуть відповідати одній або більше послідовностям трансгена БТ та/або його комплементарній послідовності.

ЇВ7 Множинні смислові та/або антисмислові послідовності супресії послідовності ДНК придатної для транскрипції для однієї або більше цільових послідовностей трансгена ЕТ можуть бути впорядковані періодично у тандемі або впорядковані у тандемні сегменти або повтори, такі як тандемні інвертовані повтори, які також можуть перериватися однією або більше спейсерними послідовностями. Крім того, смислова або антисмислова послідовність послідовності ДНК придатної для транскрипції або елементу супресії може ідеально не співпадати або не бути комплементарною з цільовою послідовністю трансгена ЕТ, залежно від послідовності та довжини послідовності ДНК придатної для транскрипції або елементу супресії.

Насправді навіть короткі елементи супресії РНКі з довжиною у діапазоні від близько 15 нуклеотидів до близько 27 нуклеотидів можуть мати одне або більше неспівпадінь або некомплементарних основ залежно від довжини елементу супресії або націлюючої послідовності, наприклад, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 або 10 (або більше) неспівпадань, але при цьому ефективно пригнічувати цільовий трансген ЕТ. Відповідно, смисловий або антисмисловий елемент супресії може містити послідовність, яка є щонайменше на 8095, щонайменше на 8595, щонайменше на 9095, щонайменше на 9595, щонайменше на 9695, щонайменше на 9795, щонайменше на 9895, щонайменше на 9995, щонайменше на 99,595 або на 10095 ідентичною або комплементарною відповідній послідовності щонайменше сегменту або частини цільового трансгена ЕТ або її комплементарній послідовності, відповідно.

ІЗ8) У випадку антисмислової супресії послідовність ДНК придатна для транскрипції може містити послідовність, яка є антисмисловою або комплементарною щонайменше частині або сегменту цільового трансгена ЕТ. Послідовність ДНК придатна для транскрипції та/або елемент

Зо супресії можуть містити безліч антисмислових послідовностей, які є комплементарними одній або більше частинам або одному або більше сегментам цільового трансгена ЕТ, або безліч копій антисмислової послідовності, комплементарної цільовому трансгену ЕТ. Антисмислова послідовність може бути щонайменше на 8095, щонайменше на 8595, щонайменше на 9095, щонайменше на 9595, щонайменше на 9695, щонайменше на 9795, щонайменше на 98595, щонайменше на 9995, щонайменше на 99,595 або на 10095 ідентичною послідовності ДНК, комплементарній щонайменше сегменту або частині мРНК цільового трансгена ЕТ. Іншими словами, антисмислова послідовність може бути щонайменше на 8095, щонайменше на 8595, щонайменше на 9095, щонайменше на 9595, щонайменше на 9695, щонайменше на 97965, щонайменше на 9895, щонайменше на 9995, щонайменше на 99,595 або на 10095 комплементарній цільовому трансгену ЕТ.

ЇВО|Ї У контексті цього документу терміни «відсоток комплементарності» або «доля комплементарності» у застосуванні до двох нуклеотидних послідовностей схожі за концепцією з відсотком ідентичності, але відносяться до відсоткової долі нуклеотидів послідовності, які демонструють оптимальне парування основ або гібридизуються з нуклеотидами референсної послідовності, коли дві послідовності впорядковані лінійно та демонструють оптимальне парування основ без вторинних згорнутих структур, таких як петлі, стебла або шпильки, але з допущенням неспівпадінь і гепів у паруванні основ між двома послідовностями. Такий відсоток комплементарності може спостерігатися між двома ланцюгами ДНК, двома ланцюгами РНК або ланцюгом ДНК і ланцюгом РНК. «Відсоток комплементарності» можна розрахувати шляхом (Її) оптимального парування основ або гібридизації двох нуклеотидних послідовностей у лінійному та повністю розгорнутому впорядкуванні (тобто без згортання або вторинних структур) у вікні порівняння (наприклад, вікні вирівнювання), (ії) визначення числа позицій, в яких спостерігається парування основ між двома послідовностями у вікні порівняння для отримання числа комплементарних позицій, (ії) ділення числа комплементарних позицій на загальне число позицій у вікні порівняння і (м) множення цього результату на 10095 для отримання відсотка комплементарності двох послідовностей. У цих цілях вікно вирівнювання визначається як область комплементарності між двома послідовностями. Оптимальне парування основ між двома послідовностями можна визначити на підставі відомого парування нуклеотидних основ, таких як 0-С, А-Т і А-У, за допомогою водневого зв'язування. Якщо «відсоток бо комплементарності» розраховують відносно референсної або запитуваної послідовності без уточнення конкретного вікна порівняння, то відсоток ідентичності визначають, ділячи число комплементарних позицій між двома лінійними послідовностями на загальну довжину референсної послідовності. У цілях цього винаходу, коли дві послідовності (запитувана та задана) мають оптимальне парування основ (з допущенням гепів і неспівпадінь або неспарених нуклеотидів), «відсоток комплементарності» для запитуваної послідовності (коли вікно порівняння не визначене) дорівнює числу спарених позицій між двома послідовностями, що ділиться на загальне число позицій у запитуваній послідовності по усій її довжині, яке потім множиться на 10095.

ІЗОЇ Для супресії трансгена ЕТ за допомогою інвертованого повтору або транскрибованої

ДЛРНК послідовність ДНК придатна для транскрипції може містити смислову послідовність, яка містять сегмент або частину цільового трансгена ЕТ і антисмислову послідовність, яка є комплементарною сегменту або частині цільового трансгена ЕТ, при цьому смислова та антисмислова послідовності ДНК розташовані у тандемі. Кожна із смислової та антисмислової послідовностей, відповідно, може бути менш ніж на 10095 ідентичною або комплементарною сегменту або частині цільового трансгена ЕТ, як описано вище. Смислова та антисмислова послідовності можуть бути розділені спейсерною послідовністю так, щоб молекула РНК, транскрибована з послідовності ДНК придатної для транскрипції, утворювала стебло, петлю або структуру типу «стебло-петля» між смисловою та антисмисловою послідовностями. В іншому випадку послідовність ДНК придатна для транскрипції може містити безліч смислових і антисмислових послідовностей, які розташовані у тандемі, які також можуть бути розділені однією або більше спейсерними послідовностями. Послідовність ДНК придатна для транскрипції, яка містить безліч смислових і антисмислових послідовностей, може бути впорядкована у вигляді груп смислових послідовностей за якими йдуть групи антисмислових послідовностей, або у вигляді груп тандемно розташованих смислових і антисмислових послідовностей.

І91| Для супресії трансгена ЕТ за допомогою мікро-РНК (мікроРНК) послідовність ДНК придатна для транскрипції може містити послідовність ДНК, отриману з послідовності мікроРНК, нативної для вірусу або еукаріоту, такого як тварина або рослина, або модифіковану або отриману з такої нативної послідовності мікроРНК. Такі нативні або отримані з нативних

Зо послідовності мікроРНК можуть утворювати структуру з гібридизацією «у собі» і слугувати каркасом для мікроРНК-попередника, і також можуть відповідати стебловій області нативної послідовності мікроРНК-попередника, такій як у нативній (або отриманій з нативної) послідовності при-мікроРНК або пре-мікроРНК. При цьому, окрім цих нативних або отриманих з нативних каркасних або препроцесованих послідовностей мікроРНК, сконструйовані мікроРНК згідно з цим винаходом додатково містять послідовність, яка відповідає сегменту або частині цільового трансгена ЕТ. Таким чином, окрім препроцесованих або каркасних послідовностей, елемент супресії може бути сконструйовано, щоб додатково містити смислову та/або антисмислову послідовність, яка відповідає сегменту або частині цільового трансгена ЕТ, та/або послідовність, яка є з ним комплементарною, хоча допускається наявність одного або більше неспівпадінь у послідовності.

ІЗ2| Сконструйовані мікроРНК застосовні для націленої супресії генів з підвищеною специфічністю. Дивіться, наприклад, Рагі2оцо еї аїЇ., Сепе5 ЮОеу. 18:2237-2242 (2004), і публікації патентних заявок США Мо 2004/0053411, 2004/0268441, 2005/0144669 і 2005/0037988, зміст яких включено у цей документ за допомогою посилання. мікроРНК являють собою некодуючі РНК.

Під час розщеплення молекули мікроРНК-попередника утворюється зріла мікроРНК, яка, зазвичай, має довжину від близько 19 до близько 25 нуклеотидів (зазвичай довжину від близько 20 до близько 24 нуклеотидів у рослинах), наприклад, довжину 19, 20, 21, 22, 23, 24 або 25 нуклеотидів, і має послідовність, що відповідає гену-мішені супресії та/або його комплементарній послідовності. Зріла мікроРНК гібридизується з цільовими транскриптами

МРНК і управляє зв'язуванням комплексу білків з цільовими транскриптами, що може інгібувати трансляцію та/або призводити до руйнування транскрипту, здійснюючи, таким чином, негативну регуляцію або пригнічення експресії цільового гена. мікроРНК-попередники також застосовні у рослинах для управління синфазним виробленням міРНК, транс-діючих міРНК (тд-міРНК) у процесі, в якому потрібна РНК-залежна РНК-полімераза для супресії цільового гена. Дивіться, наприклад, Айеп еї аї., СеїЇ 121:207-221 (2005), Маиспегеї Зсіепсе ЗТКЕ, 2005:ре43 (2005), і

Уозпікаула еї ам. Сепе5 ЮОєум., 19:2164-2175 (2005), зміст яких включено у цей документ за допомогою посилання.

ІЗ9З)Ї Відповідно до варіантів реалізації цього винаходу запропоновано рекомбінантні молекулу ДНК, конструкцію або вектор, ДНК, які містять послідовність ДНК придатну для бо транскрипції, які кодують молекулу мікроРНК або мікроРНК-попередника для націленої супресії трансгена ЕТ. Така послідовність ДНК придатна для транскрипції може містити послідовність завдовжки щонайменше 19 нуклеотидів, яка відповідає трансгену ЕТ та/або послідовності, комплементарній трансгену ЕТ, хоча допускається наявність одного або більше неспівпадінь у послідовності та/або неспарених нуклеотидів.

І94| Трансген ЕТ також можна супресувати за допомогою однієї або більше малих інтерферуючих РНК (міРНК). Шлях міРНК включає несинфазне розщеплення довшою проміжною дволанцюговою РНК («подвійної спіралі РНК») на малі інтерферуючі РНК (міРНК).

Розмір або довжина мігРНК, зазвичай, знаходиться у діапазоні від близько 19 до близько 25 нуклеотидів або пар основ, але звичайні класи міРНК включають такі, що містять 21 пару основ або 24 пари основ. Таким чином, послідовність ДНК придатна для транскрипції згідно з цим винаходом може кодувати молекулу РНК завдовжки щонайменше від близько 19 до близько 25 нуклеотидів, наприклад, завдовжки 19, 20, 21, 22, 23, 24 або 25 нуклеотидів. Для супресії за допомогою міРНК запропоновано рекомбінантні молекулу ДНК, конструкцію або вектор, які містять послідовність ДНК придатну для транскрипції та/або елемент супресії, які кодують молекулу міРНК для націленої супресії трансгена ЕТ.

ІЗ95Ї Відповідно до варіантів реалізації цього винаходу запропоновано рекомбінантні молекулу ДНК, вектор або конструкцію, які містять послідовність ДНК придатну для транскрипції, що кодує некодуючу молекулу РНК, яка зв'язується або гібридизується з послідовністю цільової мРНК у клітині рослини, такою як кодуюча (екзон) та/або нетрансльована (НТО) послідовність цільової МРНК, при цьому цільова молекула мРНК кодує білок ЕТ, а послідовність ДНК придатна для транскрипції функціонально зв'язана з промотором придатним для експресії в рослинах. Окрім націлювання на послідовність зрілої мРНК, некодуюча молекула РНК, кодована послідовністю ДНК придатною для транскрипції, може бути націлена на інтронну послідовність трансгена або транскрипту ЕТ. Відповідно до інших варіантів реалізації винаходи запропоновано рекомбінантні молекулу ДНК, вектор або конструкцію, які містять послідовність ДНК придатну для транскрипції, що кодує некодуючу молекулу РНК (попередника), яка розщеплюється або процесується до зрілої некодуючої молекули РНК, яка зв'язується або гібридизується з цільовою мРНК у клітині рослини, при цьому цільова молекула

МРНК кодує білок ЕТ, а послідовність ДНК придатна для транскрипції функціонально зв'язана з

Зо промотором придатним для експресії в рослинах, який може бути тканиноспецифічним, тканинопереважним, пов'язаним з розвитком та/або промотором іншого типу.

І96Ї Відповідно до варіантів реалізації цього винаходу запропоновано рекомбінантні молекулу ДНК, вектор або конструкцію, які містять послідовність ДНК придатну для транскрипції, що кодує некодуючу молекулу РНК, при цьому некодуюча молекула РНК є щонайменше на 8095, щонайменше на 8595, щонайменше на 9095, щонайменше на 9595, щонайменше на 9695, щонайменше на 9795, щонайменше на 9895, щонайменше на 99965, щонайменше на 99,595 або на 10095 комплементарною щонайменше сегменту або частині молекули мРНК (ї), що експресується з трансгена ЕТ та/або (ії) що кодує білок ЕТ у рослині або клітині рослини, при цьому послідовність ДНК придатна для транскрипції функціонально зв'язана з промотором придатним для експресії в рослинах. Некодуюча молекула РНК може бути націлена на послідовність зрілої МРНК або мРНК-попередника, 5' або 3' нетрансльовану область (НТО), що кодує послідовність (екзон) та/або інтрон або інтронну послідовність трансгена або транскрипту ЕТ. Відповідно до деяких варіантів реалізації винаходу некодуюча молекула РНК націлена на трансген ЕТ для супресії і є щонайменше на 8095, щонайменше на 85965, щонайменше на 9095, щонайменше на 9595, щонайменше на 9695, щонайменше на 9795, щонайменше на 9895, щонайменше на 9995, щонайменше на 99,595 або на 10095 комплементарною щонайменше 15, щонайменше 16, щонайменше 17, щонайменше 18, щонайменше 19, щонайменше 20, щонайменше 21, щонайменше 22, щонайменше 23, щонайменше 24, щонайменше 25, щонайменше 26 або щонайменше 27 послідовним нуклеотидам полінуклеотидної (кодуючої) послідовності, що кодує білок ЕТ (наприклад, 5ЕО І

МО: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27 або 29), або будь-якій іншій відомій кодуючій послідовності флоригенного ЕТ. Відповідно до інших варіантів реалізації винаходу некодуюча молекула РНК є щонайменше на 8095, щонайменше на 8595, щонайменше на 9095, щонайменше на 9595, щонайменше на 9695, щонайменше на 9795, щонайменше на 98595, щонайменше на 9995, щонайменше на 99,595 або на 10095 комплементарною щонайменше 15, щонайменше 16, щонайменше 17, щонайменше 18, щонайменше 19, щонайменше 20, щонайменше 21, щонайменше 22, щонайменше 23, щонайменше 24, щонайменше 25, щонайменше 26 або щонайменше 27 послідовним нуклеотидам молекули мРНК, що кодує білок

ЕТ, який є щонайменше на 8095, щонайменше на 8595, щонайменше на 9095, щонайменше на 60 9595, щонайменше на 9695, щонайменше на 9795, щонайменше на 9895, щонайменше на 9995,

щонайменше на 99,595 або на 10095 ідентичним 5ЕО ІЮ МО: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28 або 30, або будь-якій іншій відомій білковій послідовності флоригенного ЕТ або її функціональному фрагменту. У контексті цього документу термін «послідовний» у застосуванні до полінуклеотидної або білкової послідовності означає відсутність делецій або гепів у послідовності. Відповідно до варіантів реалізації цього винаходу некодуюча молекула РНК, кодована послідовністю ДНК придатною для транскрипції рекомбінантних молекули ДНК, вектору або конструкції, запропонованих у цьому документі, може бути зрілою мікроРНК або міРНК, або мікроРНК- або міРНК-попередником, які можуть процесуватися або розщеплюватися у клітині рослини з утворенням зрілої мікроРНК або міРНК.

І97| Відповідно до деяких варіантів реалізації винаходу послідовність ДНК придатна для транскрипції може містити послідовність, яка кодує націлюючу послідовність молекули РНК, яка є комплементарною та/або гібридизується з мРНК конкретного гена або трансгена Ст.ЕТ2а для націлювання на ген або трансген Ст.ЕТ2а для супресії. Послідовність ДНК придатна для транскрипції може містити послідовність (наприклад, ЗЕО ІО МО: 65), яка кодує націлюючу послідовність (наприклад, ЗЕО І МО: 66) молекули РНК, кодованої послідовністю ДНК придатною для транскрипції або такої, що транскрибується з неї. Націлююча послідовність молекули РНК може бути будь-якою послідовністю достатньої довжини, яка є комплементарною з сегментом або частиною мРНК, кодованої трансгеном ЕТ, а послідовність ДНК придатна для транскрипції може містити послідовність, яка кодує націлюючу послідовність молекули РНК або транскрибується в неї. Наприклад, послідовність ДНК придатна для транскрипції, яка кодує мікроРНК-попередника, може містити 5ЕО ІЮ МО: 67, яка може процесуватися у зрілу мікроРНК, що містить ЗЕО ІЮ МО: 67, націлену на ген або трансген Сіт.ЕТга для супресії. мРНК, кодована цільовим геном або трансгеном ЕТ, може містити цільовий сайт для молекули РНК, що кодується послідовністю ДНК придатною для транскрипції. Такий цільовий сайт у мРНК трансгена ЕТ може містити, наприклад, 5ЕО ІЮ МО: 68, яка може кодуватися послідовністю (наприклад, 5ЕО ІЮ МО: 69) гена або трансгена ЕТ. Таким чином, кодуюча полінуклеотидна послідовність трансгена ЕТ може містити послідовність, яка кодує цільовий сайт для молекули

РНК.

ІЗ98)Ї Окрім промотора придатного для експресії в рослинах, рекомбінантні молекула ДНК,

Зо конструкція, вектор або експресійна касета, які містять послідовність ДНК придатну для транскрипції, що кодує некодуючу молекулу РНК для супресії трансгена ЕТ, також можуть бути функціонально зв'язані з одним або більше додатковими регуляторними елементами, такими як енхансери, сайти ініціації транскрипції (СІТ), лінкери, сигнали поліаденілювання, 5' та/або 3' каркасні або остовні послідовності, послідовності або області термінації і т. ін., які підходять, потрібні або переважні для регуляції або забезпечення експресії послідовності ДНК придатної для транскрипції у клітині або тканині рослини. Такі додаткові регуляторні елементи можуть бути необов'язковими та використовуватися для підвищення або оптимізації експресії послідовності ДНК придатної для транскрипції.

І99| Відповідно до деяких варіантів реалізації винаходу послідовність ДНК придатна для транскрипції може містити послідовність, яка відповідає щонайменше частині некодуючої послідовності трансгена ЕТ та/або комплементарній з ним послідовності, таку як 5' або 3 нетрансльована область (НТО) або інтронна послідовність трансгена ЕТ, що може забезпечити можливість вибіркової супресії трансгена ЕТ у порівнянні з ендогенним геном ЕТ. «Некодуючі послідовності трансгена ЕТ» (не плутати з «некодуючою молекулою РНК», кодованою послідовністю ДНК придатною для транскрипції, для супресії гена або трансгена ЕТ) є послідовностями трансгена ЕТ, які транскрибуються та утворюють частину пре-мРНК та/або зрілої МРНК, але не кодують трансгенний білок ЕТ. Відповідно, послідовність ДНК придатна для транскрипції може кодувати молекулу РНК, що містить націлюючу послідовність, яка відповідає щонайменше частині некодуючої послідовності трансгена ЕТ та/або комплементарній з нею послідовності. Таким чином, послідовність ДНК придатна для транскрипції може містити послідовність, яка відповідає щонайменше частині пре-мРНК або зрілій мРНК, що кодується трансгеном ЕТ. Послідовність послідовності ДНК придатної для транскрипції та кодована націлююча послідовність молекули РНК залежать від конкретних некодуючих послідовностей трансгена ЕТ, які можуть бути однаковими або різними або унікальними відносно ендогенного (- их) гена (-ів) ЕТ. Відповідно до деяких варіантів реалізації винаходу запропоновано рекомбінантні молекулу ДНК, вектор або конструкцію, що містять експресійну касету, яка містить послідовність ДНК придатну для транскрипції, що має послідовність, яка відповідає щонайменше частині некодуючої послідовності трансгена ЕТ та/або комплементарній з нею послідовності. Аналогічно, як описано вище, можуть бути надані дві або більше експресійні бо касети, включаючи першу експресійну касету та другу експресійну касету, при цьому перша експресійна касета містить полінуклеотидну послідовність, що кодує білок ЕТ (тобто трансген

ЕТ), функціонально зв'язану з першим промотором придатним для експресії в рослинах, а друга експресійна касета містить послідовність ДНК придатну для транскрипції, функціонально зв'язану з другим промотором придатним для експресії в рослинах, причому послідовність ДНК придатна для транскрипції містить послідовність, яка відповідає щонайменше частині некодуючої послідовності трансгена ЕТ та/або комплементарній їй послідовності. Перша та друга експресійні касети можуть знаходитися в одній молекулі ДНК, одному векторі або одній конструкції або в окремих молекулах ДНК, векторах або конструкціях. 100) Послідовність ДНК придатна для транскрипції, що кодує молекулу РНК, яка націлена на трансген ЕТ для супресії, може бути функціонально зв'язана з промотором придатним для експресії в рослинах. Профіль експресії молекули РНК може залежати від конкретного промотора придатного для експресії в рослинах. Як описано вище, експресію трансгена ЕТ під управлінням промотора вегетативної стадії можна використовувати для ініціації раннього цвітіння та підвищення числа квіток, бобів і т. ін. на вузол рослини, але також вона може призводити до ранньої загибелі рослини. Нещодавно було зроблено припущення, що додаткову експресію молекули РНК, націленої на трансген ЕТ для супресії, можна використовувати для коригування та/"або послаблення профілю та рівня експресії трансгена ЕТ для додаткового пом'якшення фенотипів ранньої термінації. Це може відбуватися за допомогою зниження кількості транскрипту та білка з трансгена ЕТ (тобто зниження рівня експресії) та/або модифікації профілю експресії (тобто коригування або обмеження профілю трансгенної експресії ЕТ). Не обмежуючись теорією, вважається, що зниження експресії трансгена ЕТ може бути достатньо для індукції раннього цвітіння з пом'якшенням фенотипів ранньої термінації.

Аналогічно, обмежений просторово-часовий профіль експресії ЕТ може знижувати експресію ЕТ у конкретних тканинах та/або на конкретних стадіях розвитку, коли трансгенний ЕТ може викликати ранню термінацію. Таким чином, відповідно до варіантів реалізації цього винаходу час і профіль експресії трансгена ЕТ і молекули РНК (націленої на трансген ЕТ для супресії) можуть бути однаковими, такими, що перекриваються, або різними. 1011 Відповідно до багатьох варіантів реалізації винаходу, наведених вище, можуть бути надані щонайменше дві експресійні касети, включаючи першу експресійну касету та другу

Зо експресійну касету, при цьому перша експресійна касета містить трансген ЕТ, функціонально зв'язаний з першим промотором придатним для експресії в рослинах, а друга експресійна касета містить послідовність ДНК придатну для транскрипції, функціонально зв'язану з другим промотором придатним для експресії в рослинах, причому послідовність ДНК придатна для транскрипції кодує молекулу РНК, націлену на трансген ЕТ для супресії. Дві експресійні касети можуть знаходитися в одній рекомбінантній молекулі ДНК, конструкції або векторі або знаходитися в окремих рекомбінантних молекулах ДНК, конструкціях або векторах. Як описано вище, перший промотор придатний для експресії в рослинах, функціонально зв'язаний з трансгеном ЕТ, може бути промотором вегетативної стадії, який також може бути меристемо- специфічним або меристемо-переважним промотором. Другий промотор придатний для експресії в рослинах, функціонально зв'язаний з послідовністю ДНК придатною для транскрипції, може включати різні типи промоторів, включаючи конститутивні, індуцибельні, пов'язані з розвитком, тканиноспецифічні, тканинопереважні, вегетативної стадії, генеративної стадії і т. ін., але час і профіль експресії молекули РНК повинні щонайменше частково перекриватися з часом і профілем експресії трансгена ЕТ. Відповідно до деяких варіантів реалізації винаходу другий промотор придатний для експресії в рослинах може бути конститутивним промотором або промотором вегетативної стадії для зниження рівня експресії трансгена ЕТ. Такий конститутивний промотор або промотор вегетативної стадії також може бути тканиноспецифічним або тканинопереважним промотором та/або може характеризуватися широким перекриттям з часом і профілем експресії трансгена ЕТ. Насправді конститутивний профіль або профіль, що перекривається, експресії послідовності ДНК придатної для транскрипції (і супресорної молекули РНК) по відношенню до трансгена ЕТ може бути ефективним у разі зниження кількості або дози експресії ЕТ, особливо якщо супресія трансгена

ЕТ є неідеальною або неповною. У деяких випадках трансген ЕТ і супресорна конструкція навіть можуть бути функціонально зв'язані з однаковими або схожими промоторами. Наприклад, перший промотор придатний для експресії в рослинах, який управляє експресією трансгена ЕТ, може бути промотором ранньої або пізньої вегетативної стадії та/або генеративної стадії, а другий промотор придатний для експресії в рослинах, який управляє експресією послідовності

ДНК придатної для транскрипції, що кодує молекулу РНК для супресії, може бути промотором ранньої або пізньої вегетативної стадії та/або генеративної стадії. бо МПО21У цій галузі техніки відомо багато прикладів конститутивних промоторів, таких як промотор вірусу мозаїки кольорової капусти (Саму) 355 і 195 (дивіться, наприклад, патент США

Мо 5352605), посилений промотор Самм 355, такий як промотор Самм 355 з областю омега (дивіться, наприклад, Нопогї, 5. еї аї., Ріапі МоїІесшіаг Віоіоду, 29: 637-646 (1995) або подвійний посилений промотор Саму (дивіться, наприклад, патент США Мо 5322938), промотор вірусу мозаїки ранника (ЕМУ) 355 (дивіться, наприклад, патент США Мо 6372211), промотор вірусу мозаїки мірабіліс (ММУ) (дивіться, наприклад, патент США Мо 6420547), промотор колімовірусу хлоротичної смугастості арахісу (дивіться, наприклад, патент США Мо 5850019), нопаліновий або октопіновий промотор, убіквітиновий промотор, такий як поліубіквітиновий промотор сої (дивіться, наприклад, патент США Мо 7393948), промотор 5З-аденозилметіонінсинтетази

Агабідорвзіз (дивіться, наприклад, 8809628) і т. ін., або будь-які функціональні частини вищезгаданих промоторів, при цьому зміст кожного з наведених вище посилань включено у цей документ за допомогою посилання. В альтернативному варіанті другий промотор придатний для експресії в рослинах може бути промотором вегетативної та/або генеративної стадії, приклади яких наведено у цьому документі. 1103) Відповідно до інших варіантів реалізації винаходу другий промотор придатний для експресії в рослинах може мати час та/або профіль експресії, що більше відрізняються, наприклад, в інших тканинах рослини та/або на інших стадіях розвитку, у порівнянні з трансгеном ЕТ. Таким чином, ефективний просторово-часовий профіль експресії трансгена ЕТ можна модифікувати, змінювати та/або коригувати залежно від відносних часу та профілів експресії трансгена ЕТ і послідовності ДНК придатної для транскрипції, що кодує молекулу РНК для супресії трансгена ЕТ (а також конкретної молекули РНК, що націлює послідовності). При цьому, відповідно до багатьох варіантів реалізації винаходу послідовність ДНК придатна для транскрипції (і молекула РНК) може експресуватися на більш пізній стадії розвитку або у більш пізній тканині відносно початку експресії трансгена ЕТ, так що трансген ЕТ може забезпечувати сигнал індукції раннього цвітіння перед супресією більш пізньої експресії супресорної молекули

РНК, або, іншими словами, трансген ЕТ може супресуватися після сигналу індукції раннього цвітіння для зниження або пом'якшення ранньої термінації. Наприклад, перший промотор придатний для експресії в рослинах, який управляє експресією трансгена ЕТ, може бути промотором ранньої вегетативної стадії а другий промотор придатний для експресії в

Зо рослинах, який управляє експресією послідовності ДНК придатної для транскрипції, що кодує молекулу РНК для супресії може бути промотором пізньої вегетативної стадії та/або промотором генеративної стадії, або перший промотор придатний для експресії в рослинах може бути промотором пізньої вегетативної стадії, а другий промотор придатний для експресії в рослинах може бути промотором генеративної стадії. У ширшому сенсі другий промотор придатний для експресії в рослинах може ініціювати, викликати та/або регулювати експресію зв'язаного з ним трансгена або послідовності ДНК придатної для транскрипції на більш пізній стадії розвитку, ніж перший промотор придатний для експресії в рослинах, так, щоб супресорна конструкція у загальному випадку експресувалася після початкового сигналу індукції ЕТ цвітіння під час більш ранньої (-їх) вегетативної (-их) стадії (-ій) розвитку. Таким чином, другий промотор придатний для експресії в рослинах може бути промотором більш пізньої стадії розвитку, ніж перший промотор придатний для експресії в рослинах. Наприклад, другий промотор придатний для експресії в рослинах може управляти експресією на більш пізній стадії розвитку, ніж перший промотор придатний для експресії в рослинах, але у тих самих типах тканин або лініях диференціювання (наприклад, у меристемі), що й перший промотор придатний для експресії в рослинах. Такий промотор вегетативної стадії та/"або генеративної стадії також може бути тканиноспецифічним або тканинопереважним промотором, таким як меристемо-специфічний або меристемо-переважний промотор. Приклади промоторів пізньої вегетативної стадії наведено вище. 1104) За допомогою експресії послідовності ДНК придатної для транскрипції та молекули

РНК для супресії трансгена ЕТ під час однієї або більше пізніх стадій розвитку рослини відносно трансгена ЕТ, ефективний профіль експресії трансгена ЕТ можна модифікувати, змінювати та/або коригувати до більш ранніх стадій розвитку та/або тканин відносно експресії одного трансгена ЕТ. У деяких випадках експресія трансгена ЕТ на вегетативній стадії може затримуватися або тривати під час більш пізніх вегетативних та/або генеративних стадій або у більш пізніх тканинах у рослині. Таким чином, експресія молекули РНК, яка націлена на трансген ЕТ для супресії, може знижувати рівень трансгена ЕТ на цих більш пізніх стадіях та/або у більш пізніх тканинах для ефективного обмеження рівня експресії трансгена ЕТ до більш ранніх стадій розвитку та/або тканин. У результаті можна підтримувати або зберігати сигнал індукції раннього цвітіння, тоді як більш пізню експресію ЕТ можна послабляти або бо зменшувати, щоб уникнути або уповільнити ранню термінацію решти меристематичних резервів рослини та забезпечити можливість подовження вегетативного росту та розвитку рослини після цвітіння. 1051 У контексті цього документу промотор «генеративної стадії» визначається як будь-який промотор, який ініціює, викликає, регулює і т. ін. транскрипцію або експресію зв'язаного з ним гена, трансгена або послідовності ДНК придатної для транскрипції під час однієї або більше генеративних стадій розвитку рослини, наприклад, під час однієї або більше із стадій розвитку

К1, К2, КЗ, К4, К5, Кб, К7/ та/або К8. Такий промотор «генеративної стадії» може бути додатково визначено як «переважний щодо генеративної стадії» промотор, який ініціює, викликає, регулює і т. ін. транскрипцію або експресію зв'язаного з ним гена/гтрансгена або послідовності ДНК придатної для транскрипції щонайменше переважно або головним чином, якщо не виключно, під час однієї або більше генеративних стадій розвитку рослини (на противагу вегетативним стадіям). При цьому кожен з промотора «генеративної стадії» та «переважного щодо генеративної стадії» промотора також може ініціювати, забезпечувати, допускати, викликати, регулювати і т. ін. транскрипцію або експресію зв'язаного з ним гена, трансгена або послідовності ДНК придатної для транскрипції під час вегетативної (-их) фази (фаз) або стадії (-ій) розвитку в одній або більше клітинах або тканинах рослини. Таким чином, промотор генеративної стадії також може бути промотором вегетативної стадії і разі експресії під час обох фаз розвитку (тобто під час як вегетативної, так і генеративної стадій розвитку).

Такий промотор генеративної стадії також може бути тканиноспецифічним або тканинопереважним промотором, таким як меристемо-специфічний або меристемо-переважний промотор. Промотор «генеративної стадії» може бути додатково визначено як такий, що ініціює, викликає, регулює і т. ін. транскрипцію або експресію зв'язаного з ним гена/грансгена або послідовності ДНК придатної для транскрипції в одній або більше генеративних тканинах рослини. Такий промотор «генеративної стадії» також може бути визначено як «флорально- переважний» промотор, який ініціює, викликає, регулює і т. ін. транскрипцію або експресію зв'язаного з ним гена/грансгена або послідовності ДНК придатної для транскрипції щонайменше переважно або головним чином, якщо не виключно, щонайменше в одній флоральній або генеративній тканині, такій як флоральна меристема, або «флорально-специфічний» промотор, який ініціює, викликає, регулює і т. ін. транскрипцію або експресію зв'язаного з ним

Зо гена/трансгена або послідовності ДНК придатної для транскрипції виключно (або майже виключно) щонайменше в одній флоральній або генеративній тканині. Ознаки та характеристики цих генеративних стадій розвитку для заданого виду рослини відомі у цій галузі техніки.

І106| Приклади промоторів генеративної стадії, які також можуть бути промоторами ранньої або пізньої вегетативної стадії залежно від їх профілю експресії у заданому виді рослини, можуть включати наступні промотори з генів томату: промотор 51.Мой (рзі.Моа, рі е.Мой або рмод) (5ЕО ІЮ МО: 70), промотор 5І.МАО5З5 (рзІ.МАО5Б5, рі е.МАОЮ5З5 або рРМАЮ55) (ЗЕО ІЮ МО: 71) або промотор 5І.МАОЗ-ВІМ (реІ.МАО5Б-ВІМ, рі е.МАО5Б-КІМ або РрРМАЮ5З-ВІМ) (ЗЕО ІЮ МО: 72), або їх функціональну частину. Додаткові приклади, ідентифіковані як такі, що мають гомологію тал"або схожий профіль експресії з промотором роІ.МАО55 та/або рЗзІ.МАО5З-КІМ у нативних видах рослин, можуть включати промотор з одного з наступних генів: АТ1524260.1 (ЗЕБЕО І МО: 73), АТ2045650.1 (ЗЕО ІЮ МО: 74), АТ3602310.1 (5БО ІЮ МО: 75), або

АТ5ЬС15800.1 (5ЕО ІЮ МО: 76), або АТ2503710.1 (ЗЕО ІО МО: 77) з Агарідорзіб; СІутай5д28140 (ЗЕБЕО ІО МО: 78), Сіута0вд11120 (5ЕО ІО МО: 79), Сіута!17936890 (5ЕО ІЮ МО: 80),

СІутабйвдо27670 (ЗЕО ІЮО МО: 81), Сіута1!3906730 (5ЕО І МО: 82), або Сіута19904320 (ЗЕО ІЮ

МО: 83) з сої; БоЇус029089200 (5БО І МО: 84), 5оІус039114840 (5БО ІО МО: 85),

ЗоїЇус121038510 (ЗЕО ІЮ МО: 86), Зоїус0494005320 (5ЕО ІЮ МО: 87) або 5оїус059056620 (ЗЕО І

МО: 88) з томату; або СОЕМ2АМ20159397 (ЗЕО ІО МО: 89), ОЕМЯМ20003514 (ЗЕО ІЮО МО: 90), вАМИМ2СИ160565 (5ЕО І МО: 91), ОАМАМ2с097059 (5ЕО ІЮ МО: 92), ЧНМАМ2а099522 (5ЕО

І МО: 93) або СОЕМЯМ2071620 (ЗЕО ІЮ МО: 94) з кукурудзи або будь-яку функціональну частину будь-якого з наведених вище промоторів. 1107| Відповідно до варіантів реалізації цього винаходу промотор «генеративної стадії» також може бути додатково визначено за конкретною генеративною стадією, під час якої він уперше викликає, ініціює і т. ін. спостережувану або виражену транскрипцію або експресію зв'язаного з ним гена, трансгена або послідовності ДНК придатної для транскрипції. Наприклад, промотор генеративної стадії може бути промотором стадії К1, промотором стадії К2, промотором стадії КЗ і т. ін. Отже, промотор «стадії К1» визначається як промотор генеративної стадії, який уперше ініціює або викликає транскрипцію зв'язаного з ним гена, трансгена або послідовності ДНК придатної для транскрипції під час стадії КІ розвитку рослини, промотор бо «стадії К2» визначається як промотор генеративної стадії, який уперше ініціює або викликає

Зо транскрипцію зв'язаного з ним гена, трансгена або послідовності ДНК придатної для транскрипції під час стадії К2 розвитку рослини, і т. ін., хоча експресія зв'язаного гена, трансгена або послідовності ДНК придатної для транскрипції може відбуватися безперервно або з перервами в одній або більше тканинах під час пізніших генеративних стадій розвитку.

Перехід від вегетативної до генеративної стадії (і початок стадії К1 ) визначається відповідно до стандартних у цій галузі техніки конвенцій для заданої культурної рослини (тобто зазвичай, як у разі сої, це видима поява першої відкритої квітки на рослині). Фахівець у цій галузі техніки зможе визначити час експресії заданого гена, трансгена або послідовності ДНК придатної для транскрипції під час розвитку рослини, використовуючи різні методи та техніки молекулярного аналізу, відомі у цій галузі техніки, якщо цей час експресії вже не відомий. 1108) Відповідно до варіантів реалізації цього винаходу промотор «генеративної стадії» може включати конститутивний, тканинопереважний або тканиноспецифічний промотор.

Наприклад, промотор генеративної стадії може регулювати експресію зв'язаного з ним гена, трансгена або послідовності ДНК придатної для транскрипції в одній або більше тканинах рослини, наприклад, в одному або більше з коренів, стебел, листя, меристем і т. ін. під час генеративної (-их) стадії (-ій) розвитку рослини. При цьому такий промотор генеративної стадії може переважно регулювати експресію зв'язаного з ним гена, трансгена або послідовності ДНК придатної для транскрипції в одній або більше меристем рослини. Відповідно до багатьох варіантів реалізації винаходу промотор «генеративної стадії» може бути «меристемо- специфічним» або «меристемо-переважним» промотором, який викликає експресію зв'язаного з ним гена, трансгена або послідовності ДНК придатної для транскрипції у меристематичній тканині, яка щонайменше частково відповідає профілю експресії трансгена ЕТ і послаблює та/або коригує експресію трансгена ЕТ.

І109| Полінуклеотидна послідовність цих промоторів (або їх функціональних фрагментів або частин) також може мати нестрогу ідентичність послідовності та при цьому зберігати схожий або ідентичний профіль експресії зв'язаних гена, трансгена або послідовності ДНК придатної для транскрипції, функціональної зв'язаних з промотором. Наприклад, промотор пізньої вегетативної та/або генеративної стадії може містити полінуклеотидну послідовність, яка є щонайменше на 7095, щонайменше на 7595, щонайменше на 8095, щонайменше на 85965, щонайменше на 9095, щонайменше на 9195, щонайменше на 9295, щонайменше на 93965, щонайменше на 9495, щонайменше на 9595, щонайменше на 9695, щонайменше на 97965, щонайменше на 9895, щонайменше на 9995 або на 10095 ідентичною полінуклеотидній послідовності, обраній з наведених вище ЗЕО ІЮ МО: 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93 або 94, або її функціональній частині. «Функціональна частина» відомої або запропонованої промоторної послідовності визначена вище.

П10| Відповідно до варіантів реалізації цього винаходу молекула РНК, кодована другою експресійної касетою, що містить послідовність ДНК придатну для транскрипції, функціонально зв'язану з другим промотором придатним для експресії в рослинах, може викликати зниження або елімінацію рівня експресії мРНК та/або білка, кодованих трансгеном ЕТ в одній або більше тканинах рослини за допомогою супресії трансгена ЕТ. У разі застосування другої експресійної касети рівень експресії транскрипту трансгенного ЕТ та/або білка може бути знижено щонайменше на 195, щонайменше на 295, щонайменше на 395, щонайменше на 4595, щонайменше на 595, щонайменше на 1095, щонайменше на 2095, щонайменше на 25965, щонайменше на 3095, щонайменше на 4095, щонайменше на 5095, щонайменше на 6095, щонайменше на 7095, щонайменше на 7595, щонайменше на 8095, щонайменше на 9095, щонайменше на 9595, щонайменше на 9695, щонайменше на 9795, щонайменше на 9895 або щонайменше на 9995 в одній або більше тканинах рослини, таких як одна або більше меристематичних тканини, у порівнянні з рівнями транскрипту мРНК та/або білка трансгена ЕТ, які спостерігалися б в тих самих тканинах рослини без другої експресійної касети. Рівні транскрипту мРНК та/або білка трансгена ЕТ можуть бути знижені на 195-10095, 196-759, 190-

БОбю, 1905-2596, 59о-10095, 5905-9595, 5590-9096, 595-8590, 5590-8095, 590-750, 590-700, 9590-6590, 590- бою, 590-556, 590-509, 590-459, 5У0-4090, 590-350, З9о-З096, 590-259, 5У0-20905, 590-159, 590- 1095, 1096-10090, 1095-9090, 1095-8090, 1090-7095, 1095-6095, 1096-5095, 1090-4090, 1096-3090, 1 09о- 2095, 2596-10095, 2590-7590, 2590-5095, 5090-10096, 5090-7595 або 7595-10095 в одній або більше тканинах рослини у порівнянні з рівнями транскрипту мРНК та/або білка трансгена ЕТ, які спостерігалися б в тих самих тканинах рослини без другої експресійної касети. 111) Відповідно до додаткових варіантів реалізації винаходу в іншому випадку друга експресійна касета може бути сконструйована так, щоб кодувати молекулу РНК, яка націлена на ендогенний ген ЕТ для супресії. Вибіркову супресію ендогенного гена ЕТ можна забезпечувати бо шляхом націлювання на його кодуючу послідовність, якщо трансоген ЕТ має відмінну від ендогенного гена кодуючу послідовність (тобто молекула РНК може містити націлюючу послідовність яка є комплементарною щонайменше частині кодуючої послідовності ендогенного гена ЕТ). В альтернативному варіанті, навіть якщо кодуючі послідовності трансгена

ЕТ ії ендогенного гена ЕТ є однаковими або схожими, друга експресійна касета може бути сконструйована так, щоб кодувати молекулу РНК, яка націлена на нетрансльовану або некодуючу послідовність мРНК, що кодується ендогенним геном ЕТ, наприклад, у межах 5' НТО,

З'НТО, інтронних та/або лідерних послідовностей мРНК-транскрипту ендогенного ЕТ, якщо ці послідовності відрізняються або відсутні у трансгені ЕТ (тобто молекула РНК може містити націлюючу послідовність, яка є комплементарною щонайменше частині нетрансльованої або некодуючої послідовності ендогенного гена ЕТ). Відповідно до цих варіантів реалізації винаходу послідовність ДНК придатна для транскрипції другої експресійної касети може бути сконструйована відповідно до запропонованих у цьому документі принципів для націлювання на конкретну кодуючу або нетрансльовану (некодуючу) послідовність мРНК, яка кодується ендогенним геном ЕТ, для супресії, замість послідовності мРНК, яка кодується трансгеном ЕТ. 1121 Відповідно до іншого широкого аспекту цього винаходу запропоновано рекомбінантні молекулу ДНК, конструкцію або вектор, які містять полінуклеотидну послідовність, що кодує білок ЕТ (тобто трансген ЕТ), функціонально зв'язану з промотором придатним для експресії в рослинах, при цьому полінуклеотидна послідовність додатково містить послідовність, що кодує цільовий сайт або сенсор для ендогенної молекули РНК, такий як ендогенна мікроРНК або міРНК, при цьому цільовий сайт або сенсор знаходяться у транскрипті пре-мРНК та/або зрілої

МРНК, який кодується трансгеном ЕТ, наприклад, у межах 5' НТО, З'НТО, інтронних та/або лідерних послідовностей. У контексті даного документі «сенсор» є цільовим сайтом малої некодуючої РНК у мРНК-транскрипті трансгена ЕТ, який є комплементарним ендогенній молекулі РНК, такій як ендогенна мікроРНК або міРНК. Ендогенна молекула РНК може зустрічатися у природі в клітині або тканині рослини та функціонувати, пригнічуючи один або більше цільових генів, які мають цільовий сайт для ендогенної молекули РНК. У цьому документі зроблено припущення, що трансген ЕТ може бути додатково сконструйований так, щоб містити послідовність, яка кодує цільовий сайт або сенсор мРНК для ендогенної молекули

РНК, так, щоб відбувалася супресія трансгена ЕТ ендогенною молекулою РНК. Отже, супресію

Зо трансгена ЕТ можна використовувати для пом'якшення фенотипів ранньої термінації, спостережуваних у разі тільки експресії трансгенного ЕТ (тобто без супресії), аналогічно супресії за допомогою другої експресійної касети, що кодує супресійну молекулу РНК. Ендогенна молекула РНК може бути будь-якою відомою малою молекулою РНК, що зустрічається в природі, такою як мікроРНК, міРНК і т. ін., чия функція полягає в ініціації супресії одного або більше цільових генів у клітині рослини. Відповідно до багатьох варіантів реалізації винаходу ендогенна молекула РНК може природним чином експресуватися під час пізніх вегетативних та/або генеративних стадій розвитку (наприклад, в одній або більше пізніх вегетативних, генеративних та/або флоральних тканинах) так, що ендогенна молекула РНК викликає супресію трансгена ЕТ після забезпечення початкового сигналу індукції цвітіння. Відповідно до багатьох варіантів реалізації винаходу промотор придатний для експресії в рослинах, цільовий сайт трансгена ЕТ або вони обидва є гетерологічними по відношенню до кодуючої полінуклеотидної послідовності трансгена ЕТ. 113) Відповідно до деяких варіантів реалізації винаходу ендогенна молекула РНК може являти собою одну або більше ендогенних молекул мікроРНК, наприклад, одну або більше з молекул РНК тік156 та/або тік172. Послідовності ендогенних молекул тік156 і тік172 залежатимуть від конкретного виду рослини, в якій буде експресуватися трансген ЕТ. Трансген

ЕТ може бути сконструйований так, щоб кодувати цільовий сайт або сенсор мРНК для молекули тік156 або тік172 у виді рослини, що представляє інтерес, яка може бути обрана на підставі рівня та часу експресії однієї або більше молекул тік156 і тікК172. У сої існує три молекули тік172, які експресуються на більш високих рівнях у час, близький до переходу від вегетативної до генеративної стадії, тікМА172а (5ЕБЕО ІЮ МО: 95), тікМА172с (5ЕБЕО ІЮ МО: 96), або тікМА172К (5ЕБО ІО МО: 97), ії існує три молекули тік156, які присутні у надлишку під час переходу від молодої до дорослої рослини, тік15ба (ЗЕО ІЮ МО: 103), тік156бс (ЗЕО ІЮО МО: 104), або тік15бд (5ЕО ІЮ МО: 105). Таким чином, полінуклеотидна послідовність, що кодує білок ЕТ, може додатково містити послідовність, яка кодує один або більше цільових сайтів або сенсорів для однієї або більше таких ендогенних молекул РНК тік156 або тік172. Кожен з цільових сайтів або сенсорів тік15б6 або тік172 може знаходитися у транскрипті пре-мРНК та/або зрілої мРНК, який кодується трансгеном ЕТ, наприклад, у межах кодуючої, 5' НТО, З'НТО та/або інтронної послідовності мРНК, кодованої полінуклеотидною послідовністю трансгена ЕТ, 60 хоча цільові сайти або сенсори тік156 або тік172 частіше знаходяться у некодуючій та/або нетрансльованій послідовності. Приклади послідовностей, які кодують цільовий сайт або сенсор для молекули тік156 сої, включають ЗЕО ІЮО МО: 106, 108, 109 ї 110, які є комплементарними з однією або більше молекулами тік156. Наприклад, послідовність, наведена як 5ЕО ІЮ МО: 106, кодує ЗЕО ІО МО: 107 як цільовий сайт або сенсор мРНК для тік156. Приклади послідовностей, які кодують цільовий сайт або сенсор для молекули тікК172 сої, включають

ЗЕО ІЮ МО: 98, 100 ії 101, які є комплементарними з однією або більше молекулами тік172.

Наприклад, послідовність, наведена як 5ЕО ІЮО МО: 98, кодує 5ЕО ІЮО МО: 99 як цільовий сайт або сенсор мРНК для тік172. При цьому послідовність цільового сайту або сенсора трансгена

ЕТ можна визначити на підставі комплементарної послідовності відомої молекули тік156 або тік172. Насправді, залежно від послідовності однієї або більше ендогенних молекул тік156, тік172 та/або інших малих молекул РНК, що зустрічаються у природному стані у заданому виді рослини, експресійну касету трансгенного ЕТ, що трансформується у такий вид рослини, можна сконструювати так, щоб вона кодувала цільовий сайт або сенсор для такої ендогенної молекули тік156, тік172 або іншої малої молекули РНК. Відповідно до деяких варіантів реалізації винаходу першу експресійну касету, яка містить трансген ЕТ, можна сконструювати так, щоб вона мала послідовність, що кодує цільовий сайт або сенсор для ендогенної молекули тік156, тік172 або іншої малої молекули РНК, навіть якщо в тих самих рекомбінантних молекулі ДНК, конструкції або векторі, або у тій самій трансгенній рослині присутня друга експресійна касета, яка містить послідовність ДНК придатну для транскрипції, що кодує молекулу РНК, яка додатково націлена на той самий трансген ЕТ для супресії. 1114) Відповідно до варіантів реалізації цього винаходу цільовий сайт для ендогенної молекули РНК залежатиме від рослини, у якій буде експресуватися трансген ЕТ. Для багатьох дводольних видів відомі послідовності тік 156 і тік 172 (і їх цільові сайти та сенсори). Цільовий сайт або сенсор мРНК трансгенного ЕТ, комплементарний з ендогенною молекулою РНК, може мати довжину 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26 або 27 (або більше) нуклеотидів. Зазвичай, цільовий сайт або сенсор трансгена БТ сконструйований так, щоб бути на 100965 комплементарним ендогенній тік15б6 або тік172. Проте цільовий сайт або сенсор для ендогенної супресорної молекули РНК не обов'язково має бути на 10095 комплементарним ендогенній тік156 або тік172, щоб бути ефективним (тобто, щоб гібридизуватися з тік156

Зо або тік172 і бути мішенню для супресії). Наприклад, не повністю ідеальна комплементарність може забезпечити гібридизацію більш ніж однієї молекули тік156, тік172 та/або іншої ендогенної молекули РНК з цільовим сайтом або сенсором. Для будь-якого заданого виду рослини цільовий сайт або сенсор, що кодується кодуючою полінуклеотидною послідовністю трансгена ЕТ, може деякою мірою варіюватися, але при цьому зв'язуватися або гібридизуватися з ендогенною молекулою РНК, такою як ендогенна молекула РНК тік156 або тік172, у разі експресії у клітині рослини. Відповідно, цільовий сайт мРНК-транскрипту, що кодується трансгеном ЕТ, може містити одне або більше неспівпадіння, наприклад 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 або більше неспівпадінь, залежно від довжини вирівнювання між ендогенною молекулою РНК (наприклад, тік156, тікК172) і мРНК-транскриптом. Насправді, цільовий сайт, що кодується кодуючою полінуклеотидною послідовністю трансгена ЕТ, може бути щонайменше на 8095, щонайменше на 8595, щонайменше на 9095, щонайменше на 9195, щонайменше на 925965, щонайменше на 9395, щонайменше на 9495, щонайменше на 9595, щонайменше на 9695, щонайменше на 97956 щонайменше на 9895, щонайменше на 9995, щонайменше на 99,5965, щонайменше на 99,995 або на 10095 комплементарним з націлюючою послідовністю ендогенної молекули РНК (наприклад, тік156 або тік172), наприклад, як цільовий сайт або сенсор для молекули а тік172 у сої (ЗЕО ІЮ МО: 98, 100 чи 101) цільовий сайт або сенсор для молекули а тік 156 у сої (ЗЕО ІО МО: 106, 108, 109 або 110). 115) Відповідно до іншого широкого аспекту цього винаходу запропоновано способи трансформації клітини, тканини або експлантату рослини рекомбінантною молекулою ДНК, конструкцією або вектором, запропонованими у цьому документі, для отримання трансгенної рослини. Рекомбінантні молекула ДНК, конструкція або вектор можуть містити трансген ЕТ або експресійну касету. Залежно від типу супресії, трансген ЕТ може додатково містити цільовий сайт для ендогенної молекули РНК. Рекомбінантні молекула ДНК, конструкція або вектор можуть містити другу експресійну касету, що містить послідовність ДНК придатну для транскрипції, яка кодує молекулу РНК, націлену на трансген ЕТ для супресії. В альтернативному варіанті трансген ЕТ і послідовність ДНК придатна для транскрипції, яка кодує молекулу РНК, можуть знаходитися у двох окремих молекулах ДНК, конструкціях або векторах, які можна трансформувати в рослини разом або окремо. Рекомбінантні молекулу ДНК, конструкцію або вектор, які містять трансген ЕТ і послідовність ДНК придатну для транскрипції, що кодує бо молекулу РНК, яка націлена на трансген ЕТ для супресії, можна трансформувати у рослину.

Відповідно до інших варіантів реалізації винаходу першу рекомбінантну молекулу ДНК, конструкцію або вектор, які містять трансген ЕТ, і другу рекомбінантну молекулу ДНК, конструкцію або вектор, які містять послідовність ДНК придатну для транскрипції, що кодує молекулу РНК, яка націлена на трансген ЕТ для супресії, можна спільно трансформувати у рослину. Відповідно до інших варіантів реалізації винаходу рослину, трансформовану першою експресійної касетою, яка містить трансген ЕТ, можна трансформувати другою експресійної касетою, яка містить послідовність ДНК придатну для транскрипції, що кодує молекулу РНК, яка націлена на трансген ЕТ для супресії, або рослину, трансформовану першою експресійної касетою, яка містить послідовність ДНК придатну для транскрипції, що кодує молекулу РНК, яка націлена на трансген ЕТ для супресії, можна трансформувати другою експресійної касетою, яка містить трансген ЕТ. Відповідно до додаткових варіантів реалізації винаходу перша трансгенна рослина, яка містить першу експресійну касету, що містить (ї) трансген ЕТ або (ії) послідовність

ДНК придатну для транскрипції, що кодує молекулу РНК, яка націлена на трансген ЕТ для супресії, можна схрещувати з другою рослиною, яка містить другу експресійну касету, що містить (ї) послідовність ДНК придатну для транскрипції, що кодує молекулу РНК, яка націлена на трансген ЕТ для супресії, або (ії) трансген ЕТ, так, щоб можна було отримати одну або більше дочірніх рослин, які містять як першу, так і другу експресійні касети (тобто як трансген

ЕТ, так і послідовність ДНК придатну для транскрипції). 116) У цій галузі техніки відомі численні способи трансформації хромосом у клітинах рослин рекомбінантними молекулою ДНК, конструкцією або вектором, які можна застосовувати відповідно до способів цього винаходу для отримання клітини трансгенної рослини, частини рослини та рослини. Відповідно до представлених способів можна застосовувати будь-які відповідні способи або методики для трансформації рослинних клітин, відомі у цій галузі техніки. Ефективні способи трансформації рослин включають бактеріально-опосередковану трансформацію, таку як Адгорасіепт-опосередкована або ВНі2побіит-опосередкована трансформація та опосередкована бомбардуванням мікрочастинками трансформація. У цій галузі техніки відомі різні способи трансформації експлантатів трансформаційним вектором шляхом бактеріально-опосередкованої трансформації або бомбардування мікрочастинками та подальшого культивування і т. ін. цих експлантатів для регенерації або вирощування

Зо трансгенних рослин. Інші способи трансформації рослин, такі як мікроін'єкція, електропорація, вакуумна інфільтрація, застосування високого тиску, ультразвуку, перемішування з карбідокремнієвими волокнами, ПЕГ-опосередкована трансформація і т. ін., також відомі у цій галузі техніки. Трансгенні рослини, отримувані за допомогою цих способів трансформації, можуть бути химерними або нехимерними щодо події трансформації, залежно від використовуваних способів і експлантатів. Відповідні способи пластидної трансформації рекомбінантною молекулою ДНК або конструкцією також відомі у цій галузі техніки.

І117| Додатково запропоновано способи експресії трансгена ЕТ в одній або більше клітинах або тканинах рослини під управлінням промотора вегетативної стадії, який також може бути меристемо- переважним або меристемо-специфічним промотором. Експресію трансгена ЕТ можна модифікувати, послаблювати та/або коригувати за рахунок наявності цільового сайту або сенсора для ендогенної молекули РНК у мРНК, що кодується трансгеном ЕТ, так, щоб ендогенна молекула РНК була націлена на трансген ЕТ для супресії. Окрім трансгена ЕТ, молекула РНК, яка націлена на трансген ЕТ для супресії, також може експресуватися з послідовності ДНК придатної для транскрипції, трансформованої у рослину. Такі способи можна використовувати для зміни часу цвітіння рослини та/(або числа продуктивних або успішних квіток, фруктів, бобів та/або насіння на вузол рослини у порівнянні з рослиною дикого типу або контрольною рослиною, яка не містить трансген ЕТ. Насправді, способи згідно з цим винаходом можна застосовувати для зміни пов'язаних з генеративністю або врожайністю фенотипів або ознак трансгенної рослини. 118) Трансформацію цільового рослинного матеріалу або експлантату можна здійснювати на практиці у тканинній культурі у поживному середовищі, наприклад, суміші поживних речовин, які забезпечують ріст клітин іп міго. Цільові реципієнтні клітини або експлантати можуть включати, але не обмежуються цим, меристеми, кінчики пагонів, протопласти, підсім'ядольні коліна, калюс, незрілі або зрілі ембріони, пагони, бруньки, вузлові секції, листя, гамети, такі як мікроспори, пилок, спермії, яйцеклітини, і т. ін. або будь-які їх відповідні частини.

Передбачається, що в якості мішені для трансформації можна використовувати будь-яку трансформовану клітину або тканину, з якої можна регенерувати або виростити фертильну рослину. Трансформовані експлантати, клітини або тканини можна піддавати додатковим етапам культивування, таким як індукція калюсу, селекція, регенерація і т. ін., як відомо у цій бо галузі техніки. Трансформовані клітини, тканини або експлантати, які містять вставку рекомбінантної ДНК, можна вирощувати або регенерувати у трансгенні рослини в культурі, наповнювачі або грунті відповідно до відомих у цій галузі техніки способів. Трансгенні рослини можна додатково схрещувати між собою або з іншими рослинами для отримання трансгенного насіння та потомства. Трансгенну рослину також можна отримувати шляхом схрещування першої рослини, яка містить рекомбінантну послідовність ДНК або подію трансформації, з другою рослиною, в якій відсутня вставка. Наприклад, рекомбінантну послідовність ДНК можна вносити у першу лінію рослин, що підлягають трансформації, які потім можна схрещувати з другою лінією рослин для інтрогресії рекомбінантної послідовності ДНК у другу лінію рослин.

Потомство від такого схрещування можна додатково багаторазово зворотно схрещувати з більш бажаними лініями, наприклад, упродовж 6-8 поколінь зворотного схрещування, для отримання потомства з по суті таким самим генотипом, що й початкова батьківська лінія, але з внесеною рекомбінантною послідовністю ДНК.

І119| Рекомбінантну ДНК-конструкцію або експресійну касету згідно з цим винаходом можна включати в ДНК-трансформаційний вектор для використання під час трансформації цільових клітини, тканини або експлантату рослини. Такий трансформаційний вектор згідно з цим винаходом може у загальному випадку містити послідовності або елементи, необхідні або корисні для ефективної трансформації, окрім послідовності ДНК придатної для транскрипції та/лабо трансгена ЕТ або експресійної касети. У разі Адгобрасієгійт-опосередкованої трансформації трансформаційний вектор може містити сегмент сконструйованої транспортної

ДНК (або Т-ДНК) або область, яка має дві граничні послідовності, ліву межу (ЛМ) і праву межу (ПМ), що фланкують щонайменше послідовність ДНК придатну для транскрипції та/або трансген ЕТ, так, що вставка Т-ДНК у геном рослини створить подію трансформації для послідовності ДНК придатної для транскрипції та/або трансгена ЕТ. Іншими словами, послідовність ДНК придатна для транскрипції та/або трансген ЕТ були б розташовані між лівою та правою межами Т-ДНК, можливо, разом з додатковими трансгенами або експресійними касетами, такими як трансген рослинного селективного маркера та/або інші гени, що представляють агрономічний інтерес, які можуть забезпечувати рослині ознаку або фенотип, що представляє агрономічний інтерес. Окрім кодуючих білок послідовностей, гени, що представляють агрономічний інтерес, можуть додатково містити полінуклеотидну послідовність,

Зо яка кодує супресорний РНК-елемент. Відповідно до деяких варіантів реалізації винаходу послідовність ДНК придатна для транскрипції та/(або трансген ЕТ і трансген рослинного селективного маркера (або інший ген, що представляє агрономічний інтерес) можуть знаходитися в окремих сегментах Т-ДНК в одній або різних рекомбінантних молекулах ДНК, наприклад, як для спільної трансформації. Трансформаційний вектор або конструкція можуть додатково містити прокаріотичні підтримувальні елементи, які у випадку Адгобасієгійт- опосередкованої трансформації можуть знаходитися в остові вектору за межами області (-ей) Т-

ДНК. 120) Відповідно до деяких варіантів реалізації винаходу перша експресійна касета, яка містить трансген ЕТ, і друга експресійна касета, яка містить послідовність ДНК придатну для транскрипції, що кодує молекулу РНК, яка націлена на трансген ЕТ для супресії, можуть знаходитися в одній Т-ДНК трансформаційного вектору (тобто між одними правою та лівою межами Т-ДНК); перша експресійна касета, яка містить трансген ЕТ, може знаходитися у першій

Т-ДНК (що містить першу праву межу та першу ліву межу), а друга експресійна касета, яка містить послідовність ДНК придатну для транскрипції, що кодує молекулу РНК, яка націлена на трансген ЕТ для супресії, може знаходитися у другій Т-ДНК (що містить другу праву межу та другу ліву межу), при цьому перша та друга Т-ДНК знаходяться в одному трансформаційному векторі; або перша експресійна касета, яка містить трансген ЕТ, може знаходитися у першій Т-

ДНК першого трансформаційного вектору, а друга експресійна касета, яка містить послідовність

ДНК придатну для транскрипції, що кодує молекулу РНК, яка націлена на трансген ЕТ для супресії, може знаходитися у другій Т-ДНК другого трансформаційного вектору. Першу та другу експресійні касети, які знаходяться в одному або двох трансформаційних векторах, можна спільно трансформувати у клітину рослини, або ж перша та друга експресійні касети можуть знаходитися у двох окремих трансформаційних векторах, і їх трансформують у клітини рослини окремо. Першу та другу експресійні касети можна трансформувати в одну або більше клітин рослин, які вже містять подію трансформації щодо іншої експресійної касети, або ж першу та другу експресійні касети можна трансформувати у різні клітини рослини, які можна вирощувати або регенерувати у першу та другу трансгенну рослину. Першу або другу трансгенні рослини та/або їх потомство можна схрещувати між собою так, щоб звести разом першу та другу експресійні касети в одній рослині. бо П21| Трансген рослинного селективного маркера у трансформаційному векторі або конструкції згідно з цим винаходом можна використовувати для допомоги у відборі трансформованих клітин або тканин внаслідок наявності селекційного агента, такого як антибіотик або гербіцид, при цьому трансген рослинного селективного маркера забезпечує стійкість або резистентність до селекційного агента. Таким чином, селекційний агент може підтримувати або сприяти виживаності, розвитку, росту, проліферації і т. ін. трансформованих клітин, які експресують ген рослинного селективного маркера, так, щоб збільшити долю трансформованих клітин у рослині Ко. Зазвичай використовувані гени рослинних селективних маркерів включають, наприклад, ті, які забезпечують стійкість або резистентність до антибіотиків, таких як канаміцин або паромоміцин (пріїй|), гігроміцин В (арй ІМ), стрептоміцин або спектиноміцин (аадА) і гентаміцин (аас3 і аасС4), або ті, які забезпечують стійкість або резистентність до гербіцидів, таких як глюфосинат (баг або раї), дикамба (ОМО) і гліфосат (агоА або ЕРБРБ). Також можна використовувати гени рослинних селективних маркерів, які забезпечують можливість візуального скринінгу щодо трансформантів, наприклад, люциферази або зеленого флуоресцентного білка (ЗФБ), або ген, що експресує бета-глюкуронідазу, або ген шаА (505), для якого відомі різні хромогенні субстрати. (1221 Відповідно до варіантів реалізації цього винаходу способи трансформації клітини, тканини або експлантату рослини рекомбінантною молекулою ДНК або конструкцією можуть додатково включати сайт-спрямовану або націлену інтеграцію. Відповідно до цих способів частину рекомбінантної донорної матричної молекули ДНК (тобто послідовність для вставки) можна вставляти або інтегрувати у необхідний сайт або локус у геномі рослини. Послідовність для вставки донорної матриці може містити трансген або конструкцію, такі як (ї) трансген ЕТ або конструкцію, що містить полінуклеотидну послідовність, яка кодує білок ЕТ, функціонально зв'язану з промотором вегетативної стадії, який також може бути меристемо-переважним або меристемо-специфічним промотором, та/або (ії) послідовність ДНК придатну для транскрипції, що кодує молекулу РНК, яка націлена на трансген ЕТ для супресії, і функціонально зв'язана з промотором вегетативної стадії та/або промотором генеративної стадії, який також може бути меристемо- переважним або меристемо-специфічним промотором. Донорна матриця також може мати одне або два плеча гомології, що фланкують послідовність вставки, для стимуляції події націленої вставки за допомогою гомологічної рекомбінації та/або гомологічної репарації.

Таким чином, рекомбінантна молекула ДНК згідно з цим винаходом може додатково містити донорну матрицю для сайт-спрямованої або націленої інтеграції трансгена або конструкції, такої як трансген або конструкція ЕТ, у геном рослини. 1231 Будь-який сайт або локус у геномі рослини потенційно може бути обрано для сайт- спрямованої інтеграції трансгена або конструкції згідно з цим винаходом. У разі сайт- спрямованої інтеграції спочатку може створюватися дволанцюговий розрив або «нік» в обраному геномному локусі за допомогою сайт-специфічной нуклеази, такої як, наприклад, цинк-пальцева нуклеаза (2ЕМ), мегануклеаза, нуклеаза, подібна активаторам транскрипції (ТАГЕМ), Агдопаше (необмежуючі приклади білків Агаопаше включають Пептив Іепторніййи5

Агдопаціє (ТІАдо), Ругососсив їшпіобиб5 Агдопашіе (РІАдо), Маїгопорасієгішт дгедогуі Агдопашіе (МдАдо), РНК-напрямлена нуклеаза (необмежуючі приклади РНК-напрямлених нуклеаз включають Сабз1, Саз518, Саз52, Саз53, Са54, Са55, Са5зб, Са57, Сазв8, Са59 (також відому як С5п1 і Се5х12), Са510, Сзу!, Свзу2, С5уЗ3, Сбе1, Сбе2, С5с1, С5с2, Сва5, С5п2, С5т2, С5т3, Сет,

Сто, бетб, Стії, Стг3, Стг4, Стг5, Стгб, С5Б1, С5р2, С5653, Сех17, Сех14, бех10, Свх16,

Сзах, С5х3, Сех1, Сех15, С5И, С512, С5іЗ, Сеї4, Ср, їх гомологи або їх модифіковані версії); рекомбінази (без обмежень, наприклад, тирозинової рекомбінази, приєднаної до мотиву розпізнавання ДНК (наприклад, рекомбінази Сте, рекомбінази Рір, рекомбінази Тпр11), серинової рекомбінази, приєднаної до мотиву розпізнавання ДНК (наприклад, інтегрази РПЇСЗ31, інтегрази

К4, інтегрази ТР-901); транспозази (без обмежень, наприклад, ДНК-транспозази, приєднаної до

ДНК-зв'язуючого домену); або будь-якої їх комбінації. Також запропоновано направляючі РНК (наприклад, РНК СКІБЗРК (сгРНК), транс-активуючі РНК СКІ5БРК (ІгасгтРНК), направляючі РНК (НРНК), одинарні направляючі РНК (онРНК)), застосовні у способах з використанням РНК- напрямлених нуклеаз. Можна застосовувати будь-який відомий у цій галузі техніки спосіб для сайт-спрямованої інтеграції. У присутності донорної матричної молекули може відбуватися репарація дволанцюгового розриву або «ніку» за допомогою гомологічної рекомбінації між плечима гомології донорної матриці та геномом рослини або за допомогою негомологічного з'єднання кінців (НГЗК), призводячи до сайт-спрямованої інтеграції послідовності вставки у геном рослини для створення події націленої вставки у сайті дволанцюгового розриву або «ніку» або поблизу нього. Таким чином, можна забезпечити сайт-специфічную вставку або інтеграцію трансгена або конструкції. бо П124|У контексті цього документу термін «вставка» у застосуванні до трансформації

Зб рослини або сайт-спрямованої інтеграції відноситься до вставки або інтеграції екзогенного полінуклеотиду або ДНК-конструкції, молекули або послідовності, такої як послідовність трансформаційного вектору або Т-ДНК або послідовність вставки донорної матриці, у геном рослини. У цьому контексті термін «екзогенний» відноситься до полінуклеотиду або ДНК- конструкції молекули або послідовності, які вносять у клітину або тканину рослини, використовуючи відповідний спосіб або метод трансформації рослини або редагування генома, відомий у цій галузі техніки. 1251 Відповідно до варіантів реалізації цього винаходу рослина, яку можна трансформувати рекомбінантною молекулою ДНК або трансформаційним вектором, який містить трансген ЕТ та/або послідовність ДНК придатну для транскрипції, що кодує молекулу РНК, яка націлена на трансген ЕТ для супресії, може включати безліч квітучих рослин або покритонасінних рослин, які можуть бути додатково визначені як такі, що включають різні види двосім'ядольних (дводольних) рослин, таких як соя, бавовна, люцерна, канола, цукровий буряк, люцерна та інші бобові рослини. Дводольна рослина може бути представником виду Вгавзвзіса 5р. (наприклад, В. парих, В. гара, В. |псеєа), зокрема, видів Вгаззіса, використовуваних як джерело рослинних олій, люцерною (Медісадо заїїма), соняшником (Неїїапіпиє аппиив), сафлором (Саппатив

Ппсюгійв), олійною пальмою (ЕПІаеї5 5рр.), кунжутом (5езатит 5рр.), кокосом (Сосоз5 5рр.), соєю (Сіусіпе тах), тютюном (Місоїіапа їіарасит), картоплею (Зоїапит Шшрегозит), арахісом (Агаснпів пуродаєа), бавовною (Соб5зурішт бБагпрадепзе, Созвурішт Пігешит), солодкою картоплею (ротова бБаїайве), маніокою (Мапійої езсціепіа), кавою (СоПеа 5рр.), чаєм (Сатейа 5рр.), фруктовими деревами, такими як яблуня (МаїЇй5 5рр.), Ргипи5 5рр., такі як слива, абрикоса, персик, вишня і т. ін., груша (Руги5 5рр.), інжир (Рісив сазіса), банан (Миза 5рр.) ії т. ін., цитрусовими деревами (Сіїгив5 5рр.), кокосом (ТПеобгота сасас), авокадо (Рег5єа атегісапа), оливою (ОІєа епгораєа), мигдалем (Ргипиб5 атудааішв5), волоським горіхом (дидіап5 5рр.), суницею (Егадагіа 5рр.), кавуном (СйгиПШи5 Іапагш5), перцем (Сарзісшт 5рр.), цукровим буряком (Веїа миїЇдагіз), виноградом (Міїї5, Мизсадіпіа), томатом (Гусорегзісоп езсшіепішт, БоЇїапит

Іусорегвісцт) і огірком (Сиситів б5аїїміє). Бобові рослини включають боби та горох. Боби включають, наприклад, гуар, ріжкове дерево, гуньбу, сою, квасолю звичайну, коров'ячий горох, маш, квасолю Ліми, звичайний біб, сочевицю та нут. Враховуючи, що цей винахід може відноситися до широкого діапазону видів рослин, цей винахід додатково відноситься до інших ботанічних структур, аналогічних бобам бобових рослин, таких як насінні коробочки, стручки, фрукти, горіхи, бульби і т. ін. 126) Відповідно до варіантів реалізації цього винаходу та залежно від конкретного трансформованого виду рослини, рослина з ектопічною експресією послідовності флоригенного

ЕТ, яку можна модифікувати за допомогою супресії, як запропоновано у цьому документі, може мати змінене або більше число насінних коробочок, стручків, фруктів, горіхів, бульб і т. ін. на вузол (-ли), головне стебло та/або гілку (-и) рослини, та/або змінене або більше число насінних коробочок, стручків, фруктів, горіхів, бульб і т. ін. на рослину у порівнянні з рослиною дикого типу або контрольною рослиною, яка не містить трансген ЕТ.

П127| Відповідно до іншого широкого аспекту цього винаходу запропоновано трансгенні рослини, клітини рослин, насіння та частини рослин, які містять одну або більше подій трансформації або одну або більше вставок у геномі щонайменше однієї клітини рослини, при цьому подія трансформації або вставка містять (ї) рекомбінантну послідовність ДНК, конструкцію або полінуклеотид, що містять трансген Ріоуегіпд Госив5 Т (ЕТ), причому трансген

ЕТ містить полінуклеотидну послідовність, яка кодує білок ЕТ, функціонально зв'язану з промотором вегетативної стадії, який також може бути меристемо-переважним або меристемо- специфічним промотором, та/або (ії) послідовність ДНК придатну для транскрипції, що кодує молекулу РНК, яка націлена на трансген ЕТ для супресії, функціонально зв'язану з промотором вегетативної стадії та/або промотором генеративної стадії, який також може бути меристемо- переважним або меристемо-специфічним промотором. Як запропоновано у цьому документі можна здійснювати націлювання на трансген ЕТ для супресії за допомогою трансгенно експресованої та/або ендогенної молекули РНК. Молекула РНК може кодуватися послідовністю

ДНК придатною для транскрипції, яку також трансформують у рослину, частину рослини, сім'я рослини або клітину рослини. Білок ЕТ, який кодується полінуклеотидною послідовністю, може відповідати нативному гену ЕТ у трансгенній рослині, трансформованому полінуклеотидною кодуючою послідовністю, або бути гомологічним або схожим з білком ЕТ, нативним для трансгенної рослини (тобто не нативним для трансгенної рослини, але схожим з нативним або ендогенним білком ЕТ), або гетерологічним для трансгенної рослини. Таку трансгенну рослину можна отримувати будь-яким зручним способом трансформації, за яким можуть йти селекція, бо культивування, регенерація, розвиток і т. ін., у разі бажання або необхідності отримання трансгенної рослини Ко, яку потім можна самозапилювати або схрещувати з іншими рослинами для створення насіння Кі! і подальших поколінь і насіння за допомогою додаткового схрещування і т. ін. Аналогічно, варіанти реалізації цього винаходу додатково включають клітину, тканину, експлантат і т. ін. рослини, які містять одну або більше трансгенних клітин, що мають подію трансформації або геномну вставку рекомбінантної ДНК або полінуклеотидної послідовності, що містить трансген ЕТ та/або послідовність ДНК придатну для транскрипції, що кодує молекулу РНК, яка націлена на трансген ЕТ для супресії. 128) Трансгенні рослини, клітини рослин, насіння та частини рослин згідно з цим винаходом можуть бути гомозиготними або гемізиготними щодо трансгенної події або вставки трансгена ЕТ та/або послідовності ДНК придатної для транскрипції у геном щонайменше однієї клітини рослини, або можуть містити будь-яке число копій трансгенних подій або вставок, які містять трансген ЕТ та/або послідовність ДНК придатну для транскрипції. Доза або кількість експресії трансгена ЕТ можуть змінюватися залежно від його зиготності та/або числа копій, що може впливати на ступінь або міру фенотипічних змін у трансгенній рослині і т. ін. Відповідно до деяких варіантів реалізації винаходу трансгенна рослина, яка містить трансген ЕТ та/або елемент супресії ЕТ, які можна модифікувати, послаблювати та/або коригувати, як запропоновано у цьому документі, може додатково характеризуватися як така, що має один або більше змінених фенотипів або ознак, пов'язаних з цвітінням або генеративністю, які можуть включати змінені пов'язані з врожайністю ознаки або фенотипи, такі як підвищення числа квіток, бобів і т. ін. та/або насіння на рослину (та/або на вузол рослини) у порівнянні з рослиною дикого типу або контрольною рослиною, яка не містить трансген ЕТ (та/або не містить елемент супресії

ЕТ). Така трансгенна рослина може додатково характеризуватися як така, що має змінену структуру, морфологію та/або архітектуру внаслідок зміни висоти рослини, профілю галуження, числа квіткових вузлів і т. ін. у порівнянні з рослиною дикого типу або контрольною рослиною.

Насправді, пов'язані з врожайністю фенотипи або ознаки, що змінюються надекспресією ЕТ у трансгенній рослині, можуть включати: час цвітіння, тривалість генеративної стадії, тривалість цвітіння, кількість або час обпадання квіток, бобів, стручків, насінних коробочок, фруктів, горіхів і т. ін., число квіток на вузол, число китиць на вузол, число гілок на рослину, число вузлів на рослину, число вузлів на головному стеблі, число вузлів на гілках, число бобів, насінних

Зо коробочок, стручків, фруктів, горіхів і т. ін. на рослину, число бобів, насінних коробочок, стручків, фруктів, горіхів і т. ін. на вузол, число бобів, насінних коробочок, стручків, фруктів, горіхів і т. ін. на головному стеблі, число бобів, насіння, насінних коробочок, стручків, фруктів, горіхів і т. ін. на гілках, масу насіння (наприклад, масу 1000 насінин), число насінин на рослину, число насінин на головному стеблі, число насінин на вузол та/або змінену архітектуру рослини, у порівнянні з рослиною дикого типу або контрольною рослиною, яка не містить трансген ЕТ (та/або яка не містить елемент супресії ЕТ). У контексті цього документу термін «надекспресія» у застосуванні до трансгена ЕТ включає ектопічну експресію трансгена.

П1291| У цілях цього винаходу «рослина» може включати експлантат, сіянець, паросток або цілу рослину на будь-якій стадії регенерації або розвитку. У контексті цього документу термін «трансгенна рослина» відноситься до рослини, чий геном був змінений за допомогою інтеграції або вставки рекомбінантної молекули ДНК, конструкції або послідовності. Трансгенна рослина включає рослину Ко, вирощену або регенеровану з початкової (-их) трансформованої (-их) клітини (-ин) рослини, а також потомство трансгенних рослин у подальших поколіннях або продукти схрещування трансгенної рослини Ко. У контексті цього документу термін «частина рослини» може відноситися до будь-якого органу або інтактної тканини рослини, таких як меристема, орган/структура пагона (наприклад, лист, стебло та бульба), корінь, квітка або орган/структура квітки (наприклад, приквіток, чашолисток, пелюстка, тичинка, плодолисток, пильовик і сім'ябрунька), сім'я (наприклад, ембріон, ендосперм і насінна оболонка), фрукт (наприклад, зріла зав'язь), пропагула або інші тканини рослини (наприклад, судинна тканина, покривна тканина і т. п.), або будь-якої їх частині. Частини рослини згідно з цим винаходом можуть бути життєздатними, нежиттєздатними, такими, що підлягають регенерації та/або що не підлягають регенерації. «Пропагула» може включати будь-яку частину рослини, яка здатна вирости у цілу рослину. У цілях цього винаходу клітина рослини, трансформована трансгеном

ЕТ та/або елементом супресії ЕТ відповідно до варіантів реалізації цього винаходу, може включати будь-яку клітину рослини, яка є компетентною для трансформації, як відомо у цій галузі техніки, з урахуванням способу трансформації, таку як клітина меристеми, ембріональна клітина, клітина калюсу і т. ін. У контексті цього документу термін «клітина трансгенної рослини» просто відноситься до будь-якої клітини рослини, трансформованої стабільно інтегрованою рекомбінантною молекулою ДНК або послідовністю. Клітина трансгенної рослини може 60 включати початкову трансформовану клітину рослини, клітину трансгенної рослини регенерованої або вирощеної рослини Ко, або клітину трансгенної рослини з будь-якої дочірньої рослини трансформованої рослини Ко, включаючи клітини сім'я або ембріона рослини, або культивовані клітини рослини або клітини калюсу і т. ін.

П1З0Ї Відповідно до багатьох варіантів реалізації винаходу трансгенна рослина може містити полінуклеотидну послідовність, яка кодує флоригенний білок ЕТ, функціонально зв'язану з промотором вегетативної стадії. Відповідно до деяких варіантів реалізації винаходу експресію флоригенного білка ЕТ у трансгенній рослині можна пригнічувати на вегетативній та/або генеративній стадії та/або у вегетативній та/або генеративній тканині трансгенної рослини, наприклад, за допомогою ендогенної та/або трансгенно або ектопічно експресованої молекули

РНК. Відповідно до деяких варіантів реалізації винаходу експресія флоригенного білка ЕТ у трансгенній рослині може бути просторово та/або часово обмежена малою молекулою РНК.

Відповідно до деяких варіантів реалізації винаходу трансгенна рослина може містити послідовність ДНК придатну для транскрипції, що кодує молекулу РНК, яка націлена на флоригенний ген або трансген ЕТ для супресії.

І1911| Варіанти реалізації цього винаходу можуть додатково включати способи створення або отримання трансгенних рослин, які мають змінені пов'язані з генеративністю та/або врожайністю ознаки або фенотипи, наприклад, шляхом трансформації, схрещування і т. ін., при цьому спосіб включає внесення рекомбінантної молекули ДНК, конструкції або послідовності, що містить трансген ЕТ та/або послідовність ДНК придатну для транскрипції, що кодує молекулу РНК, яка націлена на трансген ЕТ для супресії, у клітину рослини, і потім регенерацію або вирощування трансгенної рослини з трансформованої клітини рослини, що можна здійснювати в умовах селекційного тиску, сприятливих для трансгенної події. Такі способи можуть включати трансформацію клітини рослини рекомбінантною молекулою ДНК або послідовністю, яка містить трансген ЕТ та/або послідовність ДНК придатну для транскрипції, і відбір рослини, що має один або більше змінених фенотипів або ознак, таких як одне або більше з наступного: час цвітіння, тривалість генеративної стадії, тривалість цвітіння, кількість або час обпадання квіток, бобів, стручків, насінних коробочок, фруктів, горіхів і т. ін., число квіток на вузол, число китиць на вузол, число гілок на рослину, число вузлів на рослину, число вузлів на головному стеблі, число вузлів на гілках, число бобів, насінних коробочок, стручків, фруктів, горіхів і т. ін. на

Зо рослину, число бобів, насінних коробочок, стручків, фруктів, горіхів і т. ін. на вузол, число бобів, насінних коробочок, стручків, фруктів, горіхів і т. ін. на головному стеблі, число бобів, насіння, насінних коробочок, стручків, фруктів, горіхів і т. ін. на гілках, масу насіння (наприклад, масу 1000 насінин), число насінин на рослину, число насінин на головному стеблі, число насінин на вузол та/або змінену архітектуру рослини, у порівнянні з рослиною дикого типу або контрольною рослиною, яка не містить трансген ЕТ (та/або яка не містить елемент супресії ЕТ). Наприклад, варіанти реалізації цього винаходу можуть включати способи отримання трансгенної рослини, яка має збільшене число квіток, бобів та/або насіння на рослину (та/або збільшене число квіток, бобів та/або насіння на вузол рослини), при цьому спосіб включає внесення рекомбінантної молекули ДНК, яка містить трансген ЕТ та/або послідовність ДНК придатну для транскрипції, у клітину рослини, і потім регенерацію або вирощування трансгенної рослини з клітина рослини.

Потім можна проводити відбір трансгенної рослини на підставі однієї або більше вищезгаданих пов'язаних з генеративністю та/або врожайністю ознак або фенотипів. Відбір трансгенної рослини, клітини рослини або тканини рослини також можна проводити на підставі присутності трансгена ЕТ та/або елементу супресії ЕТ, використовуючи один або більше способів або наборів, відомих у цій галузі техніки, таких як секвенування ДНК, гібридизація, зв'язування антитіл та/або інші молекулярні технології. (132) Відповідно до варіантів реалізації цього винаходу трансгенна рослина може мати щонайменше на 195, щонайменше на 295, щонайменше на 595, щонайменше на 10965, щонайменше на 1595, щонайменше на 2095, щонайменше на 2595, щонайменше на 3095, щонайменше на 3595, щонайменше на 4095, щонайменше на 4595, щонайменше на 5095, щонайменше на 6095, щонайменше на 7095, щонайменше на 7595, щонайменше на 8095, щонайменше на 9095, щонайменше на 10095, щонайменше на 12595, щонайменше на 150965, щонайменше на 17595, щонайменше на 20095, щонайменше на 25095, щонайменше на 300965, щонайменше на 35095 або щонайменше на 40095 більше квіток, бобів, насіння, насінних коробочок, стручків, фруктів, горіхів або бульб, ніж нетрансгенна контрольна рослина.

Відповідно до деяких варіантів реалізації винаходу трансгенна рослина може у середньому мати щонайменше на 595, щонайменше на 1095, щонайменше на 1595, щонайменше на 20965, щонайменше на 2595, щонайменше на 3095, щонайменше на 3595, щонайменше на 40965, щонайменше на 4595, щонайменше на 5095, щонайменше на 6095, щонайменше на 70965, 60 щонайменше на 7595, щонайменше на 8095, щонайменше на 9095, щонайменше на 100905,

щонайменше на 12595, щонайменше на 15095, щонайменше на 17595, щонайменше на 200965, щонайменше на 25095, щонайменше на 30095, щонайменше на 35095 або щонайменше на 400965 більше квіток, бобів, насіння, насінних коробочок, стручків, фруктів, горіхів або бульб на вузол, ніж нетрансгенна контрольна рослина. Трансгенна рослина може у середньому мати щонайменше 2, щонайменше 3, щонайменше 4, щонайменше 5, щонайменше б, щонайменше 7, щонайменше 8, щонайменше 9 або щонайменше 10 бобів, насінних коробочок, стручків, фруктів, горіхів або бульб на вузол. Трансгенна рослина може у середньому мати 2-10, 2-9, 2- 8,2-7,2-6,2-5,2-4,2-3, 3-10, 3-9, 3-8, 3-7, 3-6, 3-5, 3-4,4-10,4-9,4-8,4А-7,4 6 або4-5 бобів, насінних коробочок, стручків, фруктів, горіхів або бульб на вузол. Трансгенна рослина може у середньому мати щонайменше на 1, щонайменше на 2, щонайменше на 3, щонайменше на 4, щонайменше на 5, щонайменше на 6, щонайменше на 7, щонайменше на 8, щонайменше на 9 або щонайменше на 10 більше квіток, бобів, насіння, насінних коробочок, стручків, фруктів, горіхів або бульб на вузол у порівнянні з нетрансгенною контрольною рослиною. Трансгенна рослина може бути рослиною сої, і трансгенна рослина може у середньому мати більше вузлів та/або насіння на вузол, ніж нетрансгенна контрольна рослина. Трансгенна рослина може зацвітати щонайменше на 1, щонайменше на 2, щонайменше на 3, щонайменше на 4, щонайменше на 5, щонайменше на 6, щонайменше на 7, щонайменше на 8, щонайменше на 9, щонайменше на 10, щонайменше на 11, щонайменше на 12, щонайменше на 13, щонайменше на 14, щонайменше на 15, щонайменше на 20, щонайменше на 25, щонайменше на 30, щонайменше на 35, щонайменше на 40 або щонайменше на 45 днів раніше, ніж нетрансгенна контрольна рослина. 1133) Відповідно до варіантів реалізації цього винаходу запропоновано трансгенну рослину, яка містить полінуклеотидну послідовність, що кодує флоригенний білок ЕТ, функціонально зв'язану з промотором вегетативної стадії, при цьому експресія полінуклеотидної кодуючої послідовності просторово та/"або часово послаблена, обмежена, модифікована та/або скоректована молекулою РНК, яка може бути малою некодуючою молекулою РНК. Рівень експресії або трансляції мРНК та/або білка флоригенного ЕТ у трансгенній рослині може бути пригнічений або знижений в одній або більше меристематичних, генеративних та/або флоральних тканинах та/або під час однієї або більше генеративних стадій. Відповідно до

Зо деяких варіантів реалізації винаходу тривалість генеративної стадії та/або тривалість цвітіння трансгенної рослини, яка містить трансген ЕТ та/або елемент супресії ЕТ, запропонованої у цьому документі, може бути щонайменше на 1, щонайменше на 2, щонайменше на 3, щонайменше на 4, щонайменше на 5, щонайменше на 6, щонайменше на 7, щонайменше на 8, щонайменше на 9, щонайменше на 10, щонайменше на 11, щонайменше на 12, щонайменше на 13, щонайменше на 14, щонайменше на 15, щонайменше на 20, щонайменше на 25, щонайменше на 30, щонайменше на 35, щонайменше на 40 або щонайменше на 45 днів довшою, ніж тривалість генеративної стадії та/або тривалість цвітіння рослини дикого типу або контрольної рослини, але також може бути не більш ніж (тобто не більше ніж) на 3, 4, 5,6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55 або 60 днів довшою, ніж тривалість генеративної стадії та/або тривалість цвітіння рослини дикого типу або контрольної рослини.

Відповідно до деяких варіантів реалізації винаходу початок цвітіння (тобто поява першої відкритої квітки) трансгенної рослини, яка містить трансген ЕТ та/або елемент супресії ЕТ, запропонованої у цьому документі, може бути або відбуватися щонайменше на 1, щонайменше на 2, щонайменше на 3, щонайменше на 4, щонайменше на 5, щонайменше на 6, щонайменше на 7, щонайменше на 8, щонайменше на 9, щонайменше на 10, щонайменше на 11, щонайменше на 12, щонайменше на 13, щонайменше на 14, щонайменше на 15, щонайменше на 20, щонайменше на 25, щонайменше на 30, щонайменше на 35, щонайменше на 40 або щонайменше на 45 днів раніше, ніж у рослини дикого типу або контрольної рослини, але також може бути не більш ніж (тобто не більше ніж) на 3, 4, 5,6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55 або 60 днів раніше, ніж початок цвітіння рослини дикого типу або контрольної рослини. 1134) Відповідно до деяких варіантів реалізації винаходу число квіток, насіння, насінних коробочок, стручків, фруктів, горіхів, бобів або бульб у трансгенної рослини, яка містить трансген ЕТ та/або елемент супресії ЕТ, запропонованої у цьому документі, може бути щонайменше на 195, щонайменше на 295, щонайменше на 395, щонайменше на 4595, щонайменше на 595, щонайменше на 695, щонайменше на 795, щонайменше на 8595, щонайменше на 995, щонайменше на 1095, щонайменше на 1595, щонайменше на 20965, щонайменше на 2595, щонайменше на 3095, щонайменше на 3595, щонайменше на 4095, щонайменше на 4595, щонайменше на 5095, щонайменше на 6095, щонайменше на 70965, 60 щонайменше на 7595, щонайменше на 8095, щонайменше на 9095, щонайменше на 100965,

щонайменше на 12595, щонайменше на 15095, щонайменше на 17595, щонайменше на 200965, щонайменше на 25095, щонайменше на 30095, щонайменше на 35095 або щонайменше на 400965 більше, ніж у рослини дикого типу або контрольної рослини. Відповідно до деяких варіантів реалізації винаходу число квіток, насіння, насінних коробочок, стручків, фруктів, горіхів або бобів на головному стеблі трансгенної рослини, яка містить трансген ЕТ та/або елемент супресії

ЕТ, запропонованої у цьому документі, може бути щонайменше на 195, щонайменше на 295, щонайменше на 395, щонайменше на 495, щонайменше на 595, щонайменше на 695, щонайменше на 795, щонайменше на 895, щонайменше на 995, щонайменше на 10965, щонайменше на 1595, щонайменше на 2095, щонайменше на 2595, щонайменше на 3095, щонайменше на 3595, щонайменше на 4095, щонайменше на 4595, щонайменше на 50965, щонайменше на 6095, щонайменше на 7095, щонайменше на 7595, щонайменше на 8095, щонайменше на 9095, щонайменше на 10095, щонайменше на 12595, щонайменше на 150965, щонайменше на 17595, щонайменше на 20095, щонайменше на 25095, щонайменше на 300965, щонайменше на 35095 або щонайменше на 40095 більше, ніж у рослини дикого типу або контрольної рослини. Відповідно до деяких варіантів реалізації винаходу число квіток, насіння, насінних коробочок, стручків, фруктів, горіхів або бобів на вузол на головному стеблі трансгенної рослини, яка містить трансген ЕТ та/або елемент супресії ЕТ, запропонованої у цьому документі, може бути щонайменше на 195, щонайменше на 295, щонайменше на 395, щонайменше на 495, щонайменше на 595, щонайменше на 695, щонайменше на 7965, щонайменше на 895, щонайменше на 995, щонайменше на 1095, щонайменше на 1595, щонайменше на 2095, щонайменше на 2595, щонайменше на 3095, щонайменше на 35965, щонайменше на 4095, щонайменше на 4595, щонайменше на 5095, щонайменше на 6095, щонайменше на 7095, щонайменше на 7595, щонайменше на 8095, щонайменше на 9095, щонайменше на 10095, щонайменше на 12595, щонайменше на 15095, щонайменше на 175965, щонайменше на 2009565, щонайменше на 2509565, щонайменше на 30095, щонайменше на 35090 або щонайменше на 40095 більше, ніж у рослини дикого типу або контрольної рослини.

І135)| Кожну з цих характерних кількостей або числових значень на рослину, головне стебло або гілку, такі як число квіток, насінних коробочок, насіння, стручків, фруктів, горіхів або бобів на рослину, головне стебло або гілку, можна розрахувати як середнє по двох або більше рослинах або визначити для однієї рослини, а кількості або числові значення квіток, насінних коробочок, насіння, стручків, фруктів, горіхів або бобів на вузол можна розрахувати як середнє для однієї або більше рослин. Таким чином, можна розраховувати відсоткову зміну між двома рослинами, між рослиною та середнім по двох або більше рослинах або між двома середніми значеннями (при цьому кожне середнє значення узяте по двох або більше рослинах). 1936) Відповідно до деяких варіантів реалізації винаходу число квіток, насінних коробочок, насіння, стручків, фруктів, горіхів, бобів або бульб на вузол трансгенної рослини, яка містить трансген ЕТ та/або елемент супресії ЕТ, запропонованої у цьому документі, у середньому може бути щонайменше на 195, щонайменше на 295, щонайменше на 395, щонайменше на 495, щонайменше на 595, щонайменше на 695, щонайменше на 795, щонайменше на 8595, щонайменше на 995, щонайменше на 1095, щонайменше на 1595, щонайменше на 20965, щонайменше на 2595, щонайменше на 3095, щонайменше на 3595, щонайменше на 40965, щонайменше на 4595, щонайменше на 5095, щонайменше на 6095, щонайменше на 7095, щонайменше на 7595, щонайменше на 8095, щонайменше на 9095, щонайменше на 100965, щонайменше на 12595, щонайменше на 15095, щонайменше на 17595, щонайменше на 200965, щонайменше на 25095, щонайменше на 30095, щонайменше на 35095 або щонайменше на 40095 більше, ніж у рослини дикого типу або контрольної рослини. Відповідно до деяких варіантів реалізації винаходу трансгенна рослина, яка містить трансген ЕТ та/або елемент супресії ЕТ, запропонована у цьому документі, може у середньому мати щонайменше 2, щонайменше 3, щонайменше 4, щонайменше 5, щонайменше 6, щонайменше 7, щонайменше 8, щонайменше 9 або щонайменше 10 квіток, бобів, насінних коробочок, насіння, стручків, фруктів, горіхів, бобів або бульб на вузол. Відповідно до деяких варіантів реалізації винаходу трансгенна рослина, яка містить трансген ЕТ та/або елемент супресії ЕТ, запропонована у цьому документі, може у середньому мати 2-10, 2-9, 2-8,2-7,2-6,2-5,2-4,2-3, 3-10, 3-9, 3-8, 3-7, 3-6, 3-5, 4-10, 4- 9, 4-8, 4-7, 4-6 або 4-5, або близько 2, близько 3, близько 4, близько 5, близько 6, близько 7, близько 8, близько 9 або близько 10 квіток, насінних коробочок, стручків, фруктів, горіхів, бобів або бульб на вузол. Відповідно до деяких варіантів реалізації винаходу трансгенна рослина, яка містить трансген ЕТ та/або елемент супресії ЕТ, запропонована у цьому документі, може у середньому мати щонайменше на 1, щонайменше на 2, щонайменше на 3, щонайменше на 4, щонайменше на 5, щонайменше на 6, щонайменше на 7, щонайменше на 8, щонайменше на 9 60 або щонайменше на 10 більше квіток, насінних коробочок, насіння, стручків, фруктів, горіхів,

бобів або бульби на вузол у порівнянні з нетрансгенною рослиною дикого типу або контрольною рослиною.

І197| Відповідно до деяких варіантів реалізації винаходу середнє число насінних коробочок, стручків, насіння, фруктів, горіхів, бобів або бульб та/або середнє число квіток, насінних коробочок, стручків, насіння, фруктів, горіхів, бобів або бульб на вузол трансгенної рослини, яка містить трансген ЕТ та/або елемент супресії ЕТ, запропонованої у цьому документі (або на головному стеблі такої трансгенної рослини), може бути на 195-40095, 1905-3509, 1905-3009, 190- 25, 196-200, 19У0-15090, 19У0-10090, 1906-7590, 1905-5095, 1905-2590, 59о-40095, 595-35095, 5905-3009,

Бов-25095, 590-20096, 5У0-15090, 5906-1009, 5905-9590, 590-905, 5906-8590, 5990-8095, 5Уо-7590, 590-

ТОуо, 59Уо-6595, 590-609, 590-559, 5906-5090, 9590-4590, 5Уо-4096, 590-359, 5906-3095, 5Ув-е5Ую, 59о- 2095, Був-1590, БУс-1090, 1096-4009, 1095-3506, 1090-3000, 1095-25095,10905-20096, 1095-15095, 1095-10095, 1095-9090, 1096-8095, 1090-7090, 1090-6095, 1095-5090, 1090-4095, 1095-3090, 1096-2095, 253У0-40095, 2595-35096, 2595-30095, 2590-25096, 256-009, е59У0-15096, 2595-10095, 2590-7590, 2590-5096, БОде-40095, 50-50, 5ОЗо-З30095, 5090-25096, 5095-20095, 5090-15090, 5095-1009,

БОд6-7595, 7590-40090, 7595-3509, 7590-3006, 7596-2509, 7590-0090, 7596-15095, 7590-10095, тоО56-40096, 10096-35095, 10095-30095, 10095-25095, 10095-20095 або 10095-15095 більше, ніж у рослини дикого типу або контрольної рослини. Відповідно до деяких варіантів реалізації винаходу тривалість генеративної стадії трансгенної рослини, яка містить трансген ЕТ та/або елемент супресії ЕТ, запропонованої у цьому документі, може бути на 195-40095, 1956-3509, 1905-

ЗО, 1960-2509, 1960-2000, 19У6-15090, 1906-1009, 1906-7590, 1905-5095, 1905-2590, 5У0-40095, 5906-3509,

Боб-30095, увесь, 59Уо-2009о, 5У6-15095, 59У0-10095, 5906-9590, 5590-9095, 590-856, 5У0-8090, 5Уо-

ТБ, БУо-7096, 5Уо-6595, 590-609, 590-550, 590-500, 590-456, 590-409, 5906-3590, 590-309, 590- 2595, Зуо-2О09Ув, 590-159, 5У0-109о, 1095-40090, 1095-3500, 1095-3009, 1096-2509, 1096-2009, 1090- 15096, 1О96-10096, 1095-9090, 1095-8090, 1095-7090, 1095-6090, 1095-5090, 1095-4090, 1095-3090, 1090- 2095, 2556-4009, 2595-35095, 2595-30096, 2590-2509, 2595-20095, 2590-15095, 2595-10095, 2590- 7596, еБу-5О0У, 5090-40096, 5095-35095, 5ОЗ0-З0096, 5Об0-25095, 5095-20095, 5ОЗо-15090, 50905- 10096, 56-75, 7596-4009, 7595-35095, 7590-3009, 7595-25095, 7590-2009, 7595-1509, 7590- 10096, 10096-40095, 10096-3509о, 10095-30090, 10096-25090, 10095-20095 або 10095-15095 більше, у термінах числа днів, ніж у рослини дикого типу або контрольної рослини. Відповідно до деяких

Зо варіантів реалізації винаходу початок цвітіння трансгенної рослини, яка містить трансоген ЕТ та/або елемент супресії ЕТ, запропонованої у цьому документі, може бути на 195-40095, 195- збою, 1960-3009, 19У6-25090, 1960-2000, 196-15090, 190-10090, 1906-7590, 1905-5090, 1905-2590, БУо-40090,

Боб-35095, 5960-3006, 5590-2509, 59У0-20090, БУс-15096, 59У0-10095, 5906-9590, 5906-9090, 5905-8590, 590- 8096, 590-756, ЗУо-7095, 590-659, 59У0-6б09ю, 590-550, ЗУо-5090, 590-459, 5906-4095, 590-359, 590-

З5 3095, 5Ув-2595, 590-209, 590-1595, 59Уо-1095, 1095-4000, 1095-35095, 1095-3009, 1090-2509, 1090- 20096, 1096-15095, 1095-10095, 1096-9095, 1095-8090, 1090-7095, 1095-6095, 1095-5095, 1095-4095, 1095-3096, 1096-2095, 2595-40095, 2595-3500, 2595-30095, 2596-25095, 2590-20095, 25905-15095, 259706- 10096, 2595-7596, еБУ6-5095, 5090-4009, БОЗю-35095, 5095-30095, 5096-2500, 5095-20095, 5ОФо- 15096, 5506-1009, 5096-7595, 7595-40095, 7590-3509, 7595-З30095, 7590-2509, 7595-2009, 7590- 15095, 7590-10095, 10090-40090, 10095-35095, 10095-30095, 10095-25095, 100905-20095 або 1009р05- 15095 більше, у термінах числа днів, ніж у рослини дикого типу або контрольної рослини. (138) Відповідно до варіантів реалізації цього винаходу запропоновані у цьому документі трансгенні рослини можуть мати комбінацію двох або більше ознак або фенотипів, описаних у цьому документі, наприклад, двох або більше ознак зі збільшеного числа бобів, насінних коробочок, стручків, насіння, фруктів, горіхів або бульб на вузол, збільшеного числа бобів, насінних коробочок, стручків, насіння, фруктів, горіхів або бульб на головному стеблі, підвищеної тривалості генеративної стадії, більш раннього початку цвітіння, мінімальної висоти рослини, такої як щонайменше 900 або більше міліметрів (тобто більшої або рівної 0,9 метра) у разі сої, та/"або зниженого галуження у порівнянні з рослиною дикого типу або контрольною рослиною. Відповідно до деяких варіантів реалізації винаходу трансгенні рослини можуть у середньому мати збільшене число бобів, насінних коробочок, стручків, насіння, фруктів або горіхів на вузол або більш ранній початок цвітіння у порівнянні з рослиною дикого типу або контрольною рослиною. Такі трансгенні рослини можуть додатково мати збільшене число бобів, насінних коробочок, стручків, насіння, фруктів, горіхів або бульб на головному стеблі та/або підвищену тривалість генеративної стадії у порівнянні з рослиною дикого типу або контрольною рослиною.

І139| Наприклад, запропонована у цьому документі трансгенна рослина може мати щонайменше на 195, щонайменше на 295, щонайменше на 595, щонайменше на 1095, щонайменше на 1595, щонайменше на 2095, щонайменше на 2595, щонайменше на 3095, 60 щонайменше на 3595, щонайменше на 4095, щонайменше на 4595, щонайменше на 50965,

щонайменше на 6095, щонайменше на 7095, щонайменше на 7595, щонайменше на 8095, щонайменше на 9095, щонайменше на 10095, щонайменше на 12595, щонайменше на 150965, щонайменше на 17595, щонайменше на 20095, щонайменше на 25095, щонайменше на 300965, щонайменше на 35095 або щонайменше на 40095 більше квіток, бобів, насіння, насінних коробочок, стручків, фруктів, горіхів або бульб на вузол і початок цвітіння, який відбувається щонайменше на 1, щонайменше на 2, щонайменше на 3, щонайменше на 4, щонайменше на 5, щонайменше на 6, щонайменше на 7, щонайменше на 8, щонайменше на 9, щонайменше на 10, щонайменше на 11, щонайменше на 12, щонайменше на 13, щонайменше на 14, щонайменше на 15, щонайменше на 20, щонайменше на 25, щонайменше на 30, щонайменше на 35, щонайменше на 40 або щонайменше на 45 днів раніше у порівнянні з рослиною дикого типу або контрольною рослиною. Запропонована у цьому документі трансгенна рослина може у середньому мати щонайменше на 1, щонайменше на 2, щонайменше на 3, щонайменше на 4, щонайменше на 5, щонайменше на 6, щонайменше на 7, щонайменше на 8, щонайменше на 9 або щонайменше на 10 більше квіток, бобів, насіння, насінних коробочок, стручків, фруктів, горіхів або бульб на вузол і початок цвітіння, який відбувається щонайменше на 1, щонайменше на 2, щонайменше на 3, щонайменше на 4, щонайменше на 5, щонайменше на 6, щонайменше на 7, щонайменше на 8, щонайменше на 9, щонайменше на 10, щонайменше на 11, щонайменше на 12, щонайменше на 13, щонайменше на 14, щонайменше на 15, щонайменше на 20, щонайменше на 25, щонайменше на 30, щонайменше на 35, щонайменше на 40 або щонайменше на 45 днів раніше у порівнянні з рослиною дикого типу або контрольною рослиною. Такі трансгенні рослини можуть додатково мати тривалість генеративної стадії та/або цвітіння, яка щонайменше на 1, щонайменше на 2, щонайменше на 3, щонайменше на 4, щонайменше на 5, щонайменше на 6, щонайменше на 7, щонайменше на 8, щонайменше на 9, щонайменше на 10, щонайменше на 11, щонайменше на 12, щонайменше на 13, щонайменше на 14, щонайменше на 15, щонайменше на 20, щонайменше на 25, щонайменше на 30, щонайменше на 35, щонайменше на 40 або щонайменше на 45 днів довша, ніж тривалість генеративної стадії та/або цвітіння рослини дикого типу або контрольної рослини, та/або збільшене число квіток, бобів, насіння, насінних коробочок, стручків, фруктів або горіхів на головному стеблі трансгенної рослини, яке щонайменше на 195, щонайменше на 295, щонайменше на 395, щонайменше на 495, щонайменше на 595, щонайменше на 6595, щонайменше на 795, щонайменше на 895, щонайменше на 995, щонайменше на 10965, щонайменше на 1595, щонайменше на 2095, щонайменше на 2595, щонайменше на 3095, щонайменше на 3595, щонайменше на 4095, щонайменше на 4595, щонайменше на 50965, щонайменше на 6095, щонайменше на 7095, щонайменше на 7595, щонайменше на 8095, щонайменше на 9095, щонайменше на 10095, щонайменше на 1259565, щонайменше на 15095, щонайменше на 17595 або щонайменше на 20095, щонайменше на 25095, щонайменше на 300965, щонайменше на 35095 або щонайменше на 40095 більше, ніж у рослини дикого типу або контрольної рослини. 1140) Відповідно до варіантів реалізації цього винаходу запропоновані у цьому документі трансгенні рослини можуть мати змінену архітектуру рослини з мінімальною висотою рослини та зниженим галуженням, що може супроводжуватися невеликим зниженням числа вузлів на рослину. Трансгенні рослини, що експресують тільки трансген ЕТ, можуть мати виражений карликовий фенотип внаслідок ранньої термінації, що має на увазі невелику висоту рослини разом зі зниженням галуження та кількості вузлів на рослину. За допомогою експресії трансгена

ЕТ з сенсором мікроРНК або другим супресорним елементом, націленим на трансген ЕТ, можна послабити ці виражені фенотипи ранньої термінації для отримання більш нормальної висоти рослини, зберігаючи при цьому збільшене число бобів на вузол. Відповідно до цих варіантів реалізації винаходу трансгенні рослини можуть мати (ії) мінімальну висоту рослини, яка знижена не більш ніж на 595, 1095, 1595, 2095, 2595, 3095, 3595 або 4095 у порівнянні з рослиною дикого типу або контрольною рослиною (тобто різниця у висоті рослин між трансгенною рослиною та рослиною дикого типу або контрольною рослиною не перевищує одне або більше з цих відсоткових значень), (ії) загальне число гілок, знижене щонайменше на 5095, щонайменше на 55965, щонайменше на 6095, щонайменше на 6595, щонайменше на 7095, щонайменше на 75905, щонайменше на 8095, щонайменше на 8595, щонайменше на 9095 або щонайменше на 9595 у порівнянні з рослиною дикого типу або контрольною рослиною, та/або (ії) мінімальне число вузлів на рослину (та/або на головне стебло), яке знижене не більш ніж на 595, 1095, 1595, 2095, 2595, 3095, 3595 або 4095 у порівнянні з рослиною дикого типу або контрольною рослиною (тобто різниця у числі вузлів на рослину (та/або на головне стебло) між трансгенною рослиною та рослиною дикого типу або контрольною рослиною не перевищує одне або більше з цих бо відсоткових значень). У випадку сої запропонована у цьому документі трансгенна рослина може мати мінімальну висоту, яка складає щонайменше 700 міліметрів (щонайменше), щонайменше 750 щонайменше, щонайменше 800 щонайменше, щонайменше 850 щонайменше, щонайменше 900 щонайменше, щонайменше 950 щонайменше, щонайменше 1000 щонайменше, щонайменше 1050 щонайменше, щонайменше 1100 щонайменше, щонайменше 1150 щонайменше, щонайменше 1200 щонайменше, щонайменше 1250 щонайменше, щонайменше 1300 щонайменше, щонайменше 1350 щонайменше або щонайменше 1400 щонайменше; загальне число вузлів на рослину, яке складає щонайменше 100, щонайменше 125, щонайменше 150, щонайменше 175, щонайменше 200, щонайменше 225, щонайменше 250, щонайменше 275, щонайменше 300, щонайменше 325, щонайменше 350, щонайменше 375 або щонайменше 400 вузлів; та/або загальне число гілок, яке знижене щонайменше на 7095, щонайменше на 7595, щонайменше на 8095, щонайменше на 8595, щонайменше на 9095 або щонайменше на 9595 у порівнянні з рослиною дикого типу або контрольною рослиною. Усі наведені вище числові, відсоткові та різницеві значення для рослини додатково включають значення, розраховані з середнього по множині рослин одного типу.

І141| Відповідно до іншого широкого аспекту цього винаходу запропоновано способи посадки трансгенних рослин згідно з цим винаходом за нормальної або високої щільності у полі.

Відповідно до деяких варіантів реалізації винаходу врожайність культурної рослини на акр (або на земельну площу) можна підвищити шляхом посадки трансгенних рослин згідно з цим винаходом за більш високої щільності у полі. Як описано у цьому документі, трансгенні рослини згідно з цим винаходом, які експресують флоригенний білок ЕТ під час вегетативної (-их) стадії (-їй) розвитку, та/"або з супресією трансгена ЕТ можуть демонструвати збільшене число бобів та/або насіння на вузол (зокрема, на головному стеблі), але також можуть мати змінену архітектуру рослини зі зниженим галуженням і меншим числом вузлів на гілку. Тому було зроблено припущення, що трансгенні рослини згідно з цим винаходом можна висівати за більш високої щільності для збільшення врожайності на акр у полі. Для просапних культур більш високу щільність можна забезпечувати посівом більшого числа насіння/рослин на ряд та/або шляхом зменшення відстані між рядами. Відповідно до деяких варіантів реалізації винаходу трансгенну культурну рослину згідно з цим винаходом можна висівати за щільності у полі (кількість рослин на земельну/польову площу), яка щонайменше на 595, 1095, 1595, 2095, 25965,

Зо 5095, 7595, 10095, 12595, 15095, 17595, 20095, 22595 або 25095 вища або більша, ніж нормальна щільність посіву для такої культурної рослини відповідно до стандартної сільськогосподарської практики. 1421 У випадку сої типова щільність посіву знаходиться у діапазоні від близько 100000 до 150000 насіння на акр, а типова відстань між рядами знаходиться у діапазоні від близько 26 до близько 40 дюймів, наприклад, відстань між рядами складає 30 дюймів або 36 дюймів. У рамках заданого ряду, зазвичай, можуть висівати близько 6-8 насінин сої на фут. На противагу цьому, посів з високою щільністю у разі сої може включати діапазон приблизно від 150000 до 250000 насінин на акр, а відстань між рядами може знаходитися у діапазоні від близько 10 дюймів або менш до близько 25 дюймів, наприклад, відстань між рядами складає 10 дюймів, 15 дюймів або 20 дюймів. У разі посіву за високої щільності у межах кожного ряду можна висівати приблизно 9- 12 насінин сої на фут, можливо, у комбінації з меншою відстанню між рядами. При цьому висока щільність культур може забезпечуватися вузькою відстанню між рядами без збільшення щільності посіву у межах кожного ряду.

І143) У випадку бавовни типова щільність посіву знаходиться у діапазоні від близько 28000 до 45000 насінин на акр, а типова відстань між рядами знаходиться у діапазоні від близько 38 до близько 40 дюймів, наприклад, відстань між рядами складає 38 дюймів або 40 дюймів. У рамках заданого ряду, зазвичай, можуть висівати близько 2-3 насінин бавовни на фут. На противагу цьому, посів з високою щільністю у випадку бавовни може включати діапазон приблизно від 48000 до 60000 насінин на акр, а відстань між рядами може знаходитися у

БО діапазоні від близько 30 дюймів або менш до близько 36 дюймів. У випадку посіву за високої щільності у межах кожного ряду можна висівати приблизно 3-5 насінин бавовни на фут, можливо, у комбінації з меншою відстанню між рядами. При цьому висока щільність культури у випадку бавовни може забезпечуватися вузькою відстанню між рядами без збільшення щільності посіву у межах кожного ряду. 1441 У разі каноли типова щільність посіву знаходиться у діапазоні від близько 360000 до 550000 насінин на акр, а типова відстань між рядами (між культиваторними стовбами) знаходиться у діапазоні від близько б дюймів до близько 16 дюймів. У рамках заданого ряду, зазвичай, можуть висівати близько 8-12 насінин каноли на фут. На противагу цьому, посів з високою щільністю у випадку каноли може включати діапазон приблизно від 450000 до 680000 60 насінин на акр, а відстань між рядами може знаходитися у діапазоні від близько 5 дюймів або менш до близько 10 дюймів. У випадку посіву за високої щільності у межах кожного ряду можна висівати приблизно 10-16 насінин каноли на фут, можливо, у комбінації з меншою відстанню між рядами. При цьому висока щільність культури у випадку каноли може забезпечуватися вузькою відстанню між рядами без збільшення щільності посіву у межах кожного ряду. (145) Нижче наведено необмежуючі типові варіанти реалізації цього винаходу: 1. Рекомбінантна ДНК-конструкція, яка містить першу експресійну касету та другу експресійну касету, причому перша експресійна касета містить полінуклеотидну послідовність, що кодує флоригенний білок ЕТ, функціонально зв'язану з першим промотором придатним для експресії в рослинах, а друга експресійна касета містить послідовність ДНК придатну для транскрипції, що кодує молекулу РНК, яка містить націлюючу послідовність, яка є щонайменше на 8095 комплементарною щонайменше 15 послідовним нуклеотидам полінуклеотидної послідовності першої експресійної касети, і при цьому послідовність ДНК придатна для транскрипції функціонально зв'язана з другим промотором придатним для експресії в рослинах. 2. Рекомбінантна ДНК-конструкція за варіантом реалізації винаходу 1, яка відрізняється тим, що націлююча послідовність молекули РНК має довжину від близько 15 до близько 27 нуклеотидів.

З. Рекомбінантна ДНК-конструкція за варіантом реалізації винаходу 1 або 2, яка відрізняється тим, що націлююча послідовність молекули РНК має довжину 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26 або 27 нуклеотидів. 4. Рекомбінантна ДНК-конструкція за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 1-3, яка відрізняється тим, що націлююча послідовність молекули РНК є щонайменше на 855965, щонайменше на 9095, щонайменше на 9595, щонайменше на 9695, щонайменше на 97965, щонайменше на 9895, щонайменше на 9995, щонайменше на 99,595 або на 10095 комплементарною щонайменше 15 послідовним нуклеотидам полінуклеотидної послідовності першої експресійної касети. 5. Рекомбінантна ДНК-конструкція за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 1-4, яка відрізняється тим, що націлююча послідовність молекули РНК є щонайменше на 80905 комплементарною щонайменше 15 послідовним нуклеотидам мРНК-транскрипту, що кодується полінуклеотидною послідовністю першої експресійної касети.

Зо 6. Рекомбінантна ДНК-конструкція за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 1-5, яка відрізняється тим, що націлююча послідовність молекули РНК є щонайменше на 8095 комплементарною щонайменше 15 послідовним нуклеотидам екзонної або кодуючої послідовності мРНК-транскрипту. 7. Рекомбінантна ДНК-конструкція за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 1-5, яка відрізняється тим, що націлююча послідовність молекули РНК є щонайменше на 80905 комплементарною щонайменше 15 послідовним нуклеотидам некодуючої послідовності мРНК- транскрипту. 8. Рекомбінантна ДНК-конструкція за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 1-7, яка відрізняється тим, що молекула РНК, кодована послідовністю ДНК придатною для транскрипції, є попередником мікроРНК або мігРНК. 9. Рекомбінантна ДНК-конструкція за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 1-8, яка відрізняється тим, що послідовність ДНК придатна для транскрипції містить послідовність, яка є щонайменше на 8095, щонайменше на 8595, щонайменше на 9095, щонайменше на 95965, щонайменше на 9695, щонайменше на 9795, щонайменше на 9895, щонайменше на 9995 або на 10095 комплементарною ЗЕО ІЮ МО: 68 або 69. 10. Рекомбінантна ДНК-конструкція за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 1-9, яка відрізняється тим, що послідовність ДНК придатна для транскрипції містить послідовність, яка є щонайменше на 8095, щонайменше на 8595, щонайменше на 9095, щонайменше на 9595, щонайменше на 9695, щонайменше на 9795, щонайменше на 9895, щонайменше на 9995 або на 10095 комплементарною 5ЕО ІЮ МО: 65. 11. Рекомбінантна ДНК-конструкція за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 1-10, яка відрізняється тим, що полінуклеотидна послідовність першої експресійної касети містить послідовність яка є щонайменше на 8095, щонайменше на 8595, щонайменше на 90965, щонайменше на 9595, щонайменше на 9695, щонайменше на 9795, щонайменше на 98595, щонайменше на 9995 або на 10095 ідентичною 5ЕО ІЮ МО: 69. 12. Рекомбінантна ДНК-конструкція за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 1-11, яка відрізняється тим, що флоригенний білок ЕТ містить амінокислотну послідовність, яка має щонайменше 6095, щонайменше 6595, щонайменше 7095, щонайменше 7595, щонайменше 80905, щонайменше 8595, щонайменше 9095, щонайменше 9195, щонайменше 9295, щонайменше 93965, бо щонайменше 9495, щонайменше 9596, щонайменше 9695, щонайменше 9795, щонайменше 9890 або щонайменше 99595 ідентичності з послідовністю, обраною з групи, що складається з ЗЕО ІЮ

МО: 2, 4,6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28 і 30, або її функціональним фрагментом. 13. Рекомбінантна ДНК-конструкція за варіантом реалізації винаходу 12, яка відрізняється тим, що флоригенний білок ЕТ додатково містить одну або більше з наступних амінокислот: тирозин або інший незаряджений полярний або неполярний залишок в амінокислотній позиції флоригенного білка ЕТ, що відповідає амінокислотній позиції 85 у БЕО ІЮО МО : 14; лейцин або інший неполярний залишок в амінокислотній позиції флоригенного білка ЕТ, що відповідає амінокислотній позиції 128 у ЗЕО ІЮ МО: 14; і триптофан або інший великий неполярний залишок в амінокислотній позиції флоригенного білка ЕТ, що відповідає амінокислотній позиції 138 у БЕО ІЮ МО: 14. 14. Рекомбінантна ДНК-конструкція за варіантом реалізації винаходу 12, яка відрізняється тим, що флоригенний білок ЕТ додатково містить одну або більше з наступних амінокислот: гістидин в амінокислотній позиції, що відповідає лізину або аргініну в амінокислотній позиції, що відповідає позиції 85 у 5БЕО ІЮ МО: 14; лізин або аргінін в амінокислотній позиції, що відповідає позиції 128 у ЗЕО ІЮ МО: 14; і серин, аспарагінову кислоту, глутамінову кислоту, лізин або аргінін в амінокислотній позиції, що відповідає позиції 138 у 5ЕО ІЮ МО: 14. 15. Рекомбінантна ДНК-конструкція за варіантом реалізації винаходу 12, яка відрізняється тим, що флоригенний білок ЕТ містить амінокислотну послідовність, обрану з групи, що складається з ЗЕО ІЮО МО: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28 ї 30, або її функціонального фрагмента. 16. Рекомбінантна ДНК-конструкція за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 1-15, яка відрізняється тим, що полінуклеотидна послідовність має щонайменше 6095, щонайменше 65965, щонайменше 7095, щонайменше 7595, щонайменше 8095, щонайменше 8595, щонайменше 90905, щонайменше 9195, щонайменше 9295, щонайменше 9395, щонайменше 9495, щонайменше 95965, щонайменше 9695, щонайменше 9795, щонайменше 9895 або щонайменше 9995 ідентичності з послідовністю, обраною з групи, що складається з 5ЕО І МО: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23,25, 271 і 29. 17. Рекомбінантна ДНК-конструкція за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 1-16, яка відрізняється тим, що перший промотор придатний для експресії в рослинах є промотором вегетативної стадії. 18. Рекомбінантна ДНК-конструкція за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 1-17, яка відрізняється тим, що перший промотор придатний для експресії в рослинах є меристемо- переважним або меристемо-специфічним промотором. 19. Рекомбінантна ДНК-конструкція за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 1-18, яка відрізняється тим, що перший промотор придатний для експресії в рослинах містить полінуклеотидну послідовність, яка є щонайменше на 7095, щонайменше на 7595, щонайменше на 8095, щонайменше на 8595, щонайменше на 909565, щонайменше на 9195, щонайменше на 9296, щонайменше на 9395, щонайменше на 9495, щонайменше на 9595, щонайменше на 9695, щонайменше на 9795, щонайменше на 9895, щонайменше на 9995, щонайменше на 99,595 або на 10095 ідентичною з полінуклеотидною послідовністю, обраною з групи, що складається з БЕО

ІО МО: 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45 або 48, або її функціональною частиною. 20. Рекомбінантна ДНК-конструкція за варіантом реалізації винаходу 19, яка відрізняється тим, що перший промотор придатний для експресії в рослинах містить полінуклеотидну послідовність яка є щонайменше на 7095, щонайменше на 7595, щонайменше на 80965, щонайменше на 8595, щонайменше на 9095, щонайменше на 9195, щонайменше на 925965, щонайменше на 9395, щонайменше на 9495, щонайменше на 9595, щонайменше на 9695, щонайменше на 9795, щонайменше на 9895, щонайменше на 9995, щонайменше на 99,595 або на 10095 ідентичною з ЗЕО ІО МО: 31, або її функціональною частиною. 21. Рекомбінантна ДНК-конструкція за варіантом реалізації винаходу 19, яка відрізняється тим, що перший промотор придатний для експресії в рослинах містить полінуклеотидну послідовність яка є щонайменше на 7095, щонайменше на 7595, щонайменше на 80965, щонайменше на 8595, щонайменше на 9095, щонайменше на 9195, щонайменше на 92095, щонайменше на 9395, щонайменше на 9495, щонайменше на 9595, щонайменше на 96965, щонайменше на 9795, щонайменше на 9895, щонайменше на 9995, щонайменше на 99,595 або на 10095 ідентичною з 5ЕО ІЮО МО: 32 або 5ЕО ІО МО: 48. 22. Рекомбінантна ДНК-конструкція за варіантом реалізації винаходу 19, яка відрізняється тим, що перший промотор придатний для експресії в рослинах містить полінуклеотидну послідовність яка є щонайменше на 7095, щонайменше на 7595, щонайменше на 80965, 60 щонайменше на 8595, щонайменше на 9095, щонайменше на 9195, щонайменше на 92965,

щонайменше на 9395, щонайменше на 9495, щонайменше на 9595, щонайменше на 96965, щонайменше на 9795, щонайменше на 9895, щонайменше на 9995, щонайменше на 99,595 або на 10095 ідентичною з ЗЕО ІО МО: 44, або її функціональною частиною. 23. Рекомбінантна ДНК-конструкція за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 1-22, яка відрізняється тим, що перший промотор придатний для експресії в рослинах містить полінуклеотидну послідовність, яка є щонайменше на 7095, щонайменше на 7595, щонайменше на 8095, щонайменше на 8595, щонайменше на 909565, щонайменше на 9195, щонайменше на 9296, щонайменше на 9395, щонайменше на 9495, щонайменше на 9595, щонайменше на 9695, щонайменше на 9795, щонайменше на 9895, щонайменше на 9995, щонайменше на 99,595 або на 10095 ідентичною з полінуклеотидною послідовністю, обраною з групи, що складається з ЗЕО

ІО МО: 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63 або 64, або її функціональною частиною. 24. Рекомбінантна ДНК-конструкція за варіантом реалізації винаходу 23, яка відрізняється тим, що перший промотор придатний для експресії в рослинах містить полінуклеотидну послідовність яка є щонайменше на 7095, щонайменше на 7595, щонайменше на 80965, щонайменше на 8595, щонайменше на 9095, щонайменше на 9195, щонайменше на 925965, щонайменше на 9395, щонайменше на 9495, щонайменше на 9595, щонайменше на 96965, щонайменше на 9795, щонайменше на 9895, щонайменше на 9995, щонайменше на 99,595 або на 10095 ідентичною з ЗЕО ІО МО: 49, або її функціональною частиною. 25. Рекомбінантна ДНК-конструкція за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 1-24, яка відрізняється тим, що другий промотор придатний для експресії в рослинах містить полінуклеотидну послідовність, яка є щонайменше на 7095, щонайменше на 7595, щонайменше на 8095, щонайменше на 8595, щонайменше на 9095, щонайменше на 9195, щонайменше на 9296, щонайменше на 9395, щонайменше на 9495, щонайменше на 9595, щонайменше на 9695, щонайменше на 9795, щонайменше на 9895, щонайменше на 9995, щонайменше на 99,595 або на 10095 ідентичною з полінуклеотидною послідовністю, обраною з групи, що складається з БЕО

ІО МО: 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63 або 64, або її функціональною частиною. 26. Рекомбінантна ДНК-конструкція за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 1-25, яка

Зо відрізняється тим, що другий промотор придатний для експресії в рослинах містить полінуклеотидну послідовність, яка є щонайменше на 7095, щонайменше на 7595, щонайменше на 8095, щонайменше на 8595, щонайменше на 909565, щонайменше на 9195, щонайменше на 9296, щонайменше на 9395, щонайменше на 9495, щонайменше на 9595, щонайменше на 9695, щонайменше на 9795, щонайменше на 9895, щонайменше на 9995, щонайменше на 99,595 або на 10095 ідентичною з ЗЕО ІО МО: 49, або її функціональною частиною. 27. Рекомбінантна ДНК-конструкція за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 1-26, яка відрізняється тим, що другий промотор придатний для експресії в рослинах містить полінуклеотидну послідовність, яка є щонайменше на 7095, щонайменше на 7595, щонайменше на 8095, щонайменше на 8595, щонайменше на 909565, щонайменше на 9195, щонайменше на 9296, щонайменше на 9395, щонайменше на 9495, щонайменше на 9595, щонайменше на 9695, щонайменше на 9795, щонайменше на 9895, щонайменше на 9995, щонайменше на 99,595 або на 10095 ідентичною з полінуклеотидною послідовністю, обраною з групи, що складається з БЕО

ІО МО: 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93 або 94, або її функціональною частиною. 28. Рекомбінантна ДНК-конструкція за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 1-27, яка відрізняється тим, що перший промотор придатний для експресії в рослинах є промотором вегетативної стадії, а другий промотор придатний для експресії в рослинах є промотором пізньої вегетативної стадії та/або промотором генеративної стадії. 29. Рекомбінантна ДНК-конструкція за варіантом реалізації винаходу 28, яка відрізняється тим, що перший промотор придатний для експресії в рослинах є промотором ранньої вегетативної стадії. 30. Рекомбінантна ДНК-конструкція за варіантом реалізації винаходу 28, яка відрізняється тим, що другий промотор придатний для експресії в рослинах є переважним промотором генеративної стадії. 31. Рекомбінантна ДНК-конструкція за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 1-30, яка відрізняється тим, що перший промотор придатний для експресії в рослинах ініціює придатну для виявлення експресію полінуклеотидної послідовності, яка кодує флоригенний білок ЕТ на більш ранній стадії розвитку, ніж та, на якій другий промотор придатний для експресії в рослинах ініціює придатну для виявлення експресію послідовності ДНК придатної для бо транскрипції.

32. Молекула ДНК або вектор, які містять рекомбінантну ДНК-конструкцію за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 1-31. 33. Плазмідний вектор для Адгорасіегпт-опосередкованої трансформації, який містить рекомбінантну ДНК-конструкцію за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 1-31. 34. Донорна матрична молекула для сайт-опосередкованої інтеграції, яка містить рекомбінантну ДНК-конструкцію за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 1-31. 35. Трансгенна рослина, яка містить вставку рекомбінантної ДНК-конструкції за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 1-31 у геномі щонайменше однієї клітини трансгенної рослини. 36. Трансгенна рослина за варіантом реалізації винаходу 35, яка відрізняється тим, що трансгенна рослина є гомозиготною щодо вставки рекомбінантної ДНК-конструкції. 37. Трансгенна рослина за варіантом реалізації винаходу 35, яка відрізняється тим, що трансгенна рослина є гемізиготною щодо вставки рекомбінантної ДНК-конструкції. 38. Трансгенна рослина за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 35-37, яка відрізняється тим, що трансгенна рослина є рослиною короткого дня. 39. Трансгенна рослина за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 35-38, яка відрізняється тим, що трансгенна рослина є дводольною рослиною. 40. Трансгенна рослина за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 35-39, яка відрізняється тим, що трансгенна рослина є бобовою рослиною. 41. Трансгенна рослина за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 35-40, яка відрізняється тим, що трансгенна рослина є соєю. 42. Трансгенна рослина за варіантом реалізації винаходу 41, яка відрізняється тим, що трансгенна рослина сої дає більше стручків на вузол, ніж контрольна рослина, яка не містить рекомбінантну ДНК-конструкцію. 43. Трансгенна рослина за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 35-42, яка відрізняється тим, що трансгенна рослина сої дає більше квіток на вузол, ніж контрольна рослина, яка не містить рекомбінантну ДНК-конструкцію. 44. Трансгенна рослина або її частина за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 35-43, яка відрізняється тим, що трансгенна рослина дає більше насіння, насінних коробочок, стручків, фруктів, горіхів або бобів на вузол трансгенної рослини, ніж контрольна рослина, яка не містить

Зо рекомбінантну ДНК-конструкцію. 45. Трансгенна рослина або її частина за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 35-44, яка відрізняється тим, що трансгенна рослина цвіте раніше, ніж контрольна рослина, яка не містить рекомбінантну ДНК-конструкцію. 46. Трансгенна рослина або її частина за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 35-45, яка відрізняється тим, що трансгенна рослина має більше квіткових китиць на вузол, ніж контрольна рослина, яка не містить рекомбінантну ДНК-конструкцію. 47. Частина трансгенної рослини, яка містить вставку рекомбінантної ДНК-конструкції за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 1-31 у геномі щонайменше однієї клітини частини трансгенної рослини. 48. Частина трансгенної рослини за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 44-47, яка відрізняється тим, що частина трансгенної рослини являє собою одне з наступного: сім'я, фрукт, лист, сім'ядолю, гіпокотиль, меристему, ембріон, ендосперм, корінь, пагон, стебло, біб, квітку, суцвіття, квітконіжку, стеблинку, маточку, дихальце, квітколоже, пелюстку, чашолисток, пилок, тичинку, нитку, зав'язь, сім'ябруньку, перикарпій, рлоему або судинну тканину. 49. Рекомбінантна ДНК-конструкція, яка містить полінуклеотидну послідовність, що кодує флоригенний білок ЕТ, функціонально зв'язану з першим промотором придатним для експресії в рослинах, причому полінуклеотидна послідовність містить послідовність, яка кодує цільовий сайт у мРНК-транскрипті, що кодується полінуклеотидною послідовністю, і при цьому цільовий сайт мРНК-транскрипту є щонайменше на 8095 комплементарним ендогенній молекулі РНК. 50. Рекомбінантна ДНК-конструкція за варіантом реалізації винаходу 49, яка відрізняється тим, що цільовий сайт мРНК-транскрипту має довжину щонайменше 17 нуклеотидів. 51. Рекомбінантна ДНК-конструкція за варіантом реалізації винаходу 49 або 50, яка відрізняється тим, що цільовий сайт мРНК-транскрипту має довжину 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26 або 27 нуклеотидів. 52. Рекомбінантна ДНК-конструкція за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 49-51, яка відрізняється тим, що цільовий сайт мРНК-транскрипту є щонайменше на 8095, щонайменше на 85965, щонайменше на 9095, щонайменше на 9595, щонайменше на 9695, щонайменше на 9795, щонайменше на 9895, щонайменше на 9995, щонайменше на 99,595 або на 10095 комплементарним ендогенній молекулі РНК. бо 53. Рекомбінантна ДНК-конструкція за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 49-52, яка відрізняється тим, що цільовий сайт знаходиться у некодуючій послідовності мРНК-транскрипту. 54. Рекомбінантна ДНК-конструкція за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 49-53, яка відрізняється тим, що цільовий сайт мРНК-транскрипту є щонайменше на 8095, щонайменше на 85965, щонайменше на 9095, щонайменше на 9595, щонайменше на 9695, щонайменше на 9795, щонайменше на 9895, щонайменше на 9995 або на 10095 комплементарним ЗЕО ІЮО МО: 95, 96, 97, 103, 104 або 105. 55. Рекомбінантна ДНК-конструкція за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 49-54, яка відрізняється тим, що цільовий сайт мРНК-транскрипту є щонайменше на 8095, щонайменше на 85965, щонайменше на 9095, щонайменше на 9595, щонайменше на 9695, щонайменше на 9795, щонайменше на 9895, щонайменше на 9995 або на 10095 комплементарним ЗЕО ІЮО МО: 95 або 103. 56. Рекомбінантна ДНК-конструкція за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 49-55, яка відрізняється тим, що полінуклеотидна послідовність, яка кодує флоригенний білок ЕТ, містить послідовність яка є щонайменше на 8095, щонайменше на 8595, щонайменше на 90965, щонайменше на 9595, щонайменше на 9695, щонайменше на 9795, щонайменше на 98595, щонайменше на 9995 або на 10095 ідентичною 5ЕО ІЮ МО: 98, 99, 100, 101, 106, 107, 108, 109 або 110. 57. Рекомбінантна ДНК-конструкція за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 49-54 або 56, яка відрізняється тим, що цільовий сайт мРНК-транскрипту є щонайменше на 8095, щонайменше на 8595, щонайменше на 9095, щонайменше на 9595, щонайменше на 9695, щонайменше на 9795, щонайменше на 9895, щонайменше на 9995 або на 10095 ідентичним ЗЕО

ІО МО: 99 або 107. 58. Рекомбінантна ДНК-конструкція за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 49-57, яка відрізняється тим, що флоригенний білок ЕТ містить амінокислотну послідовність, яка має щонайменше 6095, щонайменше 6595, щонайменше 7095, щонайменше 7595, щонайменше 80965, щонайменше 8595, щонайменше 9095, щонайменше 9195, щонайменше 9295, щонайменше 93965, щонайменше 9495, щонайменше 9595, щонайменше 9695, щонайменше 9796, щонайменше 9890 або щонайменше 99595 ідентичності з послідовністю, обраною з групи, що складається з ЗЕО ІЮ

МО: 2, 4,6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28 і 30, або її функціональним фрагментом.

Зо 59. Рекомбінантна ДНК-конструкція за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 49-58, яка відрізняється тим, що флоригенний білок ЕТ додатково містить одну або більше з наступних амінокислот: тирозин або інший незаряджений полярний або неполярний залишок в амінокислотній позиції флоригенного білка ЕТ, що відповідає амінокислотній позиції 85 у ЗЕО ІЮ

МО : 14; лейцин або інший неполярний залишок в амінокислотній позиції флоригенного білка

ЕТ, що відповідає амінокислотній позиції 128 у БЕО ІЮО МО: 14; і триптофан або інший великий неполярний залишок в амінокислотній позиції флоригенного білка ЕТ, що відповідає амінокислотній позиції 138 у ЗЕО ІЮ МО: 14. 60. Рекомбінантна ДНК-конструкція за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 49-58, яка відрізняється тим, що флоригенний білок ЕТ не містить одну або більше з наступних амінокислот: гістидин в амінокислотній позиції, що відповідає лізину або аргініну в амінокислотній позиції, що відповідає позиції 85 у 5ЕО ІО МО: 14; лізин або аргінін в амінокислотній позиції, що відповідає позиції 128 у 5ЕБЕО ІЮ МО: 14; і серин, аспарагінову кислоту, глутамінову кислоту, лізин або аргінін в амінокислотній позиції, що відповідає позиції 138 у БЕО ІЮ МО: 14. 61. Рекомбінантна ДНК-конструкція за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 49-61, яка відрізняється тим, що флоригенний білок ЕТ містить амінокислотну послідовність, обрану з групи, що складається з 5ЕО ІЮ МО: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28 і 30, або її функціональний фрагмент. 62. Рекомбінантна ДНК-конструкція за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 49-62, яка відрізняється тим, що полінуклеотидна послідовність має щонайменше 6095, щонайменше 65965, щонайменше 7095, щонайменше 7595, щонайменше 8095, щонайменше 8595, щонайменше 90965, щонайменше 9195, щонайменше 9295, щонайменше 9395, щонайменше 9495, щонайменше 95905, щонайменше 9695, щонайменше 9795, щонайменше 9895 або щонайменше 9995 ідентичності з послідовністю, обраною з групи, що складається з 5ЕО ІЮО МО: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23,25, 271 і 29. 63. Рекомбінантна ДНК-конструкція за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 49-62, яка відрізняється тим, що промотор придатний для експресії в рослинах є промотором вегетативної стадії. 64. Рекомбінантна ДНК-конструкція за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 49-63, яка бо відрізняється тим, що промотор придатний для експресії в рослинах є меристемо-переважним або меристемо-специфічним промотором. 65. Рекомбінантна ДНК-конструкція за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 49-64, яка відрізняється тим, що промотор придатний для експресії в рослинах містить полінуклеотидну послідовність яка є щонайменше на 7095, щонайменше на 7595, щонайменше на 80965, щонайменше на 8595, щонайменше на 9095, щонайменше на 9195, щонайменше на 925965, щонайменше на 9395, щонайменше на 9495, щонайменше на 9595, щонайменше на 9695, щонайменше на 9795, щонайменше на 9895, щонайменше на 9995, щонайменше на 99,595 або на 10095 ідентичною з полінуклеотидною послідовністю, обраною з групи, що складається з ЗЕО

ІО МО: 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45 або 48, або її функціональною частиною. 66. Рекомбінантна ДНК-конструкція за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 49-65, яка відрізняється тим, що промотор придатний для експресії в рослинах містить полінуклеотидну послідовність яка є щонайменше на 7095, щонайменше на 7595, щонайменше на 8095, щонайменше на 8595, щонайменше на 9095, щонайменше на 9195, щонайменше на 925965, щонайменше на 9395, щонайменше на 9495, щонайменше на 9595, щонайменше на 96965, щонайменше на 9795, щонайменше на 9895, щонайменше на 9995, щонайменше на 99,595 або на 10095 ідентичною з ЗЕО ІО МО: 31, або її функціональною частиною. 67. Рекомбінантна ДНК-конструкція за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 49-65, яка відрізняється тим, що промотор придатний для експресії в рослинах містить полінуклеотидну послідовність яка є щонайменше на 7095, щонайменше на 7595, щонайменше на 80965, щонайменше на 8595, щонайменше на 9095, щонайменше на 9195, щонайменше на 925965, щонайменше на 9395, щонайменше на 9495, щонайменше на 9595, щонайменше на 96965, щонайменше на 9795, щонайменше на 9895, щонайменше на 9995, щонайменше на 99,595 або на 10095 ідентичною з 5ЕО ІЮО МО: 32 або 5ЕО ІО МО: 48. 68. Рекомбінантна ДНК-конструкція за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 49-65, яка відрізняється тим, що промотор придатний для експресії в рослинах містить полінуклеотидну послідовність яка є щонайменше на 7095, щонайменше на 7595, щонайменше на 80965, щонайменше на 8595, щонайменше на 9095, щонайменше на 9195, щонайменше на 925965, щонайменше на 9395, щонайменше на 9495, щонайменше на 9595, щонайменше на 9695, щонайменше на 9795, щонайменше на 9895, щонайменше на 9995, щонайменше на 99,595 або на 10095 ідентичною з ЗЕО ІО МО: 44, або її функціональною частиною. 69. Рекомбінантна ДНК-конструкція за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 49-68, яка відрізняється тим, що промотор придатний для експресії в рослинах містить полінуклеотидну послідовність яка є щонайменше на 7095, щонайменше на 7595, щонайменше на 80965, щонайменше на 8595, щонайменше на 9095, щонайменше на 9195, щонайменше на 925965, щонайменше на 9395, щонайменше на 9495, щонайменше на 9595, щонайменше на 96965, щонайменше на 9795, щонайменше на 9895, щонайменше на 9995, щонайменше на 99,595 або на 10095 ідентичною з полінуклеотидною послідовністю, обраною з групи, що складається з ЗЕО

ІО МО: 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63 або 64, або її функціональною частиною. 70. Молекула ДНК або вектор, які містять рекомбінантну ДНК-конструкцію за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 49-69. 71. Плазмідний вектор для Адгобрасієгішт-опосередкованої трансформації, який містить рекомбінантну ДНК-конструкцію а будь-яким з варіантів реалізації винаходу 49-69. 72. Донорна матрична молекула для сайт-опосередкованої інтеграції, яка містить рекомбінантну ДНК-конструкцію за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 49-69. 73. Трансгенна рослина, яка містить вставку рекомбінантної ДНК-конструкції за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 49-69 у геномі щонайменше однієї клітини трансгенної рослини. 74. Трансгенна рослина за варіантом реалізації винаходу 73, яка відрізняється тим, що трансгенна рослина є гомозиготною щодо вставки рекомбінантної ДНК-конструкції. 75. Трансгенна рослина за варіантом реалізації винаходу 73, яка відрізняється тим, що трансгенна рослина є гемізиготною щодо вставки рекомбінантної ДНК-конструкції. 76. Трансгенна рослина за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 73-75, яка відрізняється тим, що трансгенна рослина є рослиною короткого дня. 77. Трансгенна рослина за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 73-76, яка відрізняється тим, що трансгенна рослина є дводольною рослиною. 78. Трансгенна рослина за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 73-77, яка відрізняється тим, що трансгенна рослина є бобовою рослиною. 79. Трансгенна рослина за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 73-78, яка бо відрізняється тим, що трансгенна рослина є соєю. 5О0

80. Трансгенна рослина за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 73-79, яка відрізняється тим, що трансгенна рослина сої дає більше бобів на вузол, ніж контрольна рослина, яка не містить рекомбінантну ДНК-конструкцію. 81. Трансгенна рослина за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 73-80, яка відрізняється тим, що трансгенна рослина сої дає більше квіток на вузол, ніж контрольна рослина, яка не містить рекомбінантну ДНК-конструкцію. 82. Трансгенна рослина або її частина за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 73-81, яка відрізняється тим, що трансгенна рослина дає більше насінних коробочок, стручків, фруктів, горіхів або бобів на вузол трансгенної рослини, ніж контрольна рослина, яка не містить рекомбінантну ДНК-конструкцію. 83. Трансгенна рослина або її частина за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 73-82, яка відрізняється тим, що трансгенна рослина цвіте раніше, ніж контрольна рослина, яка не містить рекомбінантну ДНК-конструкцію. 84. Трансгенна рослина або її частина за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 73-83, яка відрізняється тим, що трансгенна рослина має більше квіткових китиць на вузол, ніж контрольна рослина, яка не містить рекомбінантну ДНК-конструкцію. 85. Частина трансгенної рослини, яка містить вставку рекомбінантної ДНК-конструкції за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 49-69 у геномі щонайменше однієї клітини частини трансгенної рослини. 86. Частина трансгенної рослини за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 82-85, яка відрізняється тим, що частина трансгенної рослини являє собою одне з наступного: сім'я, фрукт, лист, сім'ядолю, гіпокотиль, меристему, ембріон, ендосперм, корінь, пагон, стебло, біб, квітку, суцвіття, квітконіжку, стеблинку, маточку, дихальце, квітколоже, пелюстку, чашолисток, пилок, тичинку, нитку, зав'язь, сім'ябруньку, перикарпій, рлоему або судинну тканину. 87. Рекомбінантна ДНК-конструкція, яка містить послідовність ДНК придатну для транскрипції, що кодує молекулу РНК, яка містить націлюючу послідовність, яка є щонайменше на 8095 комплементарною щонайменше 15 послідовним нуклеотидам полінуклеотидної послідовності, що кодує флоригенний білок ЕТ, причому послідовність ДНК придатна для транскрипції функціонально зв'язана з промотором придатним для експресії в рослинах.

Зо 88. Рекомбінантна ДНК-конструкція за варіантом реалізації винаходу 87, яка відрізняється тим, що націлююча послідовність молекули РНК має довжину від близько 15 до близько 27 нуклеотидів. 89. Рекомбінантна ДНК-конструкція за варіантом реалізації винаходу 87 або 88, яка відрізняється тим, що націлююча послідовність молекули РНК є щонайменше на 855965, щонайменше на 9095, щонайменше на 9595, щонайменше на 9695, щонайменше на 97965, щонайменше на 9895, щонайменше на 9995, щонайменше на 99,595 або на 10095 комплементарною щонайменше 15 послідовним нуклеотидам полінуклеотидної послідовності, що кодує флоригенний білок ЕТ. 90. Рекомбінантна ДНК-конструкція за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 87-89, яка відрізняється тим, що націлююча послідовність молекули РНК є щонайменше на 8090 комплементарною щонайменше 15 послідовним нуклеотидам мРНК-транскрипту, що кодується полінуклеотидною послідовністю, що кодує флоригенний білок ЕТ. 91. Рекомбінантна ДНК-конструкція за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 87-90, яка відрізняється тим, що націлююча послідовність молекули РНК є щонайменше на 8095 комплементарною щонайменше 15 послідовним нуклеотидам екзонної або кодуючої послідовності мРНК-транскрипту. 92. Рекомбінантна ДНК-конструкція за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 87-91, яка відрізняється тим, що націлююча послідовність молекули РНК є щонайменше на 8095 комплементарною щонайменше 15 послідовним нуклеотидам некодуючої послідовності мРНК- транскрипту. 93. Рекомбінантна ДНК-конструкція за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 87-92, яка відрізняється тим, що молекула РНК, кодована послідовністю ДНК придатною для транскрипції, є попередником мікроРНК або міРНнК. 94. Рекомбінантна ДНК-конструкція за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 87-93, яка відрізняється тим, що флоригенний білок ЕТ, кодований полінуклеотидною послідовністю, містить амінокислотну послідовність, яка має щонайменше 6095, щонайменше 6595, щонайменше 7095, щонайменше 7595, щонайменше 8095, щонайменше 8595, щонайменше 90905, щонайменше 9195, щонайменше 9295, щонайменше 9395, щонайменше 9495, щонайменше 95965, щонайменше 9695, щонайменше 9795, щонайменше 9895 або щонайменше 9995 ідентичності з 60 послідовністю, обраною з групи, що складається з 5ЕО ІЮ МО: 2, 4,6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20,

22, 24, 26, 28 і 30, або її функціональним фрагментом. 95. Рекомбінантна ДНК-конструкція за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 87-94, яка відрізняється тим, що флоригенний білок ЕТ додатково містить одну або більше з наступних амінокислот: тирозин або інший незаряджений полярний або неполярний залишок в амінокислотній позиції флоригенного білка ЕТ, що відповідає амінокислотній позиції 85 у БЕО ІЮ

МО : 14; лейцин або інший неполярний залишок в амінокислотній позиції флоригенного білка

ЕТ, що відповідає амінокислотній позиції 128 у ЗЕО ІО МО: 14; і триптофан або інший великий неполярний залишок в амінокислотній позиції флоригенного білка ЕТ, що відповідає амінокислотній позиції 138 у ЗЕО ІЮ МО: 14. 96. Рекомбінантна ДНК-конструкція за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 87-94, яка відрізняється тим, що флоригенний білок ЕТ не містить одну або більше з наступних амінокислот: гістидин в амінокислотній позиції, що відповідає лізину або аргініну в амінокислотній позиції, що відповідає позиції 85 у ЗЕО ІЮ МО: 14; лізин або аргінін в амінокислотній позиції, що відповідає позиції 128 у 5ЕБО ІО МО: 14; і серин, аспарагінову кислоту, глутамінову кислоту, лізин або аргінін в амінокислотній позиції, що відповідає позиції 138 у БЕО ІЮ МО: 14. 97. Рекомбінантна ДНК-конструкція за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 87-96, яка відрізняється тим, що флоригенний білок ЕТ містить амінокислотну послідовність, обрану з групи, що складається з 5ЕО ІЮ МО: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 281 30, або її функціональним фрагментом. 98. Рекомбінантна ДНК-конструкція за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 87-97, яка відрізняється тим, що полінуклеотидна послідовність, що кодує флоригенний білок ЕТ, має щонайменше 6095, щонайменше 6595, щонайменше 709565, щонайменше 7595, щонайменше 80905, щонайменше 8595, щонайменше 9095, щонайменше 9195, щонайменше 9295, щонайменше 93965, щонайменше 9495, щонайменше 9596, щонайменше 9695, щонайменше 9795, щонайменше 9890 або щонайменше 99595 ідентичності з послідовністю, обраною з групи, що складається з 5ЕО ІЮ

МО: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25,27 і 29. 99. Рекомбінантна ДНК-конструкція за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 87-98, яка відрізняється тим, що промотор придатний для експресії в рослинах містить полінуклеотидну послідовність яка є щонайменше на 7095, щонайменше на 7595, щонайменше на 80965, щонайменше на 8595, щонайменше на 9095, щонайменше на 9195, щонайменше на 925965, щонайменше на 9395, щонайменше на 9495, щонайменше на 9595, щонайменше на 96965, щонайменше на 9795, щонайменше на 9895, щонайменше на 9995, щонайменше на 99,595 або на 10095 ідентичною з полінуклеотидною послідовністю, обраною з групи, що складається з ЗЕО

ІО МО: 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63 або 64, або її функціональною частиною. 100. Рекомбінантна ДНК-конструкція за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 87-99, яка відрізняється тим, що промотор придатний для експресії в рослинах містить полінуклеотидну послідовність яка є щонайменше на 7095, щонайменше на 7595, щонайменше на 8095, щонайменше на 8595, щонайменше на 9095, щонайменше на 9195, щонайменше на 925965, щонайменше на 9395, щонайменше на 9495, щонайменше на 9595, щонайменше на 96965, щонайменше на 9795, щонайменше на 9895, щонайменше на 9995, щонайменше на 99,595 або на 10095 ідентичною з ЗЕО ІО МО: 49, або її функціональною частиною. 101. Рекомбінантна ДНК-конструкція за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 87-100, яка відрізняється тим, що промотор придатний для експресії в рослинах містить полінуклеотидну послідовність, яка є щонайменше на 7095, щонайменше на 7595, щонайменше на 8095, щонайменше на 8595, щонайменше на 909565, щонайменше на 9195, щонайменше на 9296, щонайменше на 9395, щонайменше на 9495, щонайменше на 9595, щонайменше на 9695, щонайменше на 9795, щонайменше на 9895, щонайменше на 9995, щонайменше на 99,595 або на 10095 ідентичною з полінуклеотидною послідовністю, обраною з групи, що складається з ЗЕО

ІО МО: 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93 або 94, або її функціональною частиною. 102. Рекомбінантна ДНК-конструкція за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 87-101, яка відрізняється тим, що промотор придатний для експресії в рослинах є промотором вегетативної стадії. 103. Рекомбінантна ДНК-конструкція за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 87-102, яка відрізняється тим, що промотор придатний для експресії в рослинах є промотором пізньої вегетативної стадії та/або промотором генеративної стадії. 104. Рекомбінантна ДНК-конструкція за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 87-103, бо яка відрізняється тим, що промотор придатний для експресії в рослинах є гетерологічним щодо послідовності ДНК придатної для транскрипції. 105. Молекула ДНК або вектор, які містять рекомбінантну ДНК-конструкцію за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 87-104. 106. Трансгенна рослина, яка містить вставку рекомбінантної ДНК-конструкції за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 87-104 у геномі щонайменше однієї клітини трансгенної рослини. 107. Трансгенна рослина за варіантом реалізації винаходу 106, яка відрізняється тим, що трансгенна рослина є рослиною короткого дня. 108. Трансгенна рослина за варіантом реалізації винаходу 106 або 107, яка відрізняється тим, що трансгенна рослина є дводольною рослиною. 109. Трансгенна рослина за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 106-108, яка відрізняється тим, що трансгенна рослина є бобовою рослиною. 110. Трансгенна рослина за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 106-109, яка відрізняється тим, що трансгенна рослина є соєю. 111. Частина трансгенної рослини, яка містить вставку рекомбінантної ДНК-конструкції за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 87-103 у геномі щонайменше однієї клітини частини трансгенної рослини. 112. Частина трансгенної рослини за варіантом реалізації винаходу 111, яка відрізняється тим, що частина трансгенної рослини являє собою одне з наступного: сім'я, фрукт, лист, сім'ядолю, гіпокотиль, меристему, ембріон, ендосперм, корінь, пагон, стебло, біб, квітку, суцвіття, квітконіжку, стеблинку, маточку, дихальце, квітколоже, пелюстку, чашолисток, пилок, тичинку, нитку, зав'язь, сім'ябруньку, перикарпій, рлоему або судинну тканину. 113. Спосіб отримання трансгенної рослини, який включає (а) трансформацію щонайменше однієї клітини експлантату рекомбінантною ДНК- конструкцією за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 1-31, 49-69 або 87-104; і (б) регенерацію або вирощування трансгенної рослини з трансформованого експлантату. 114. Спосіб за варіантом реалізації винаходу 113, який додатково включає: (с) відбір трансгенної рослини, що має одну або більше з наступних ознак або фенотипів: більш раннє цвітіння, триваліший генеративний період або період цвітіння, збільшене число квіток на вузол, збільшене число квіткових китиць на вузол, збільшене число бобів, насінних

Зо коробочок, стручків, фруктів або горіхів на вузол і збільшене число насіння на вузол, у порівнянні з контрольною рослиною, яка не містить рекомбінантну ДНК-конструкцію. 115. Спосіб за варіантом реалізації винаходу 113 або 114, який відрізняється тим, що етап трансформації (а) проводять за допомогою Адгобасієгійт-опосередкованої трансформації або бомбардування мікрочастинками експлантату. 116. Спосіб за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 113-115, який відрізняється тим, що етап трансформації (а) включає сайт-спрямовану інтеграцію рекомбінантної ДНК-конструкції. 117. Спосіб посадки трансгенної культурної рослини, який включає: посадку трансгенної культурної рослини з підвищеною щільністю у полі, при цьому трансгенна культурна рослина містить вставку рекомбінантної ДНК-конструкції за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 1-31, 49-69 або 87-104. 118. Спосіб за варіантом реалізації винаходу 117, який відрізняється тим, що трансгенна культурна рослина є соєю, і при цьому на акр висаджують від близько 150000 до 250000 насінин трансгенної соєвої рослини. 119. Спосіб за варіантом реалізації винаходу 117, який відрізняється тим, що трансгенна культурна рослина є бавовну, і при цьому на акр висаджують від близько 48000 до 60000 насінин трансгенної бавовняної рослини. 120. Спосіб за варіантом реалізації винаходу 117, який відрізняється тим, що трансгенна культурна рослина є канолу, і при цьому на акр висаджують від близько 450000 до 680000 насінин трансгенної рослини каноли. 121. Трансгенна рослина за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 35-46, 73-84 або 106- 110, яка відрізняється тим, що трансгенна рослина має щонайменше на 195, щонайменше на 2956, щонайменше на 595, щонайменше на 1095, щонайменше на 1595, щонайменше на 2095, щонайменше на 2595, щонайменше на 3095, щонайменше на 3595, щонайменше на 40965, щонайменше на 4595, щонайменше на 5095, щонайменше на 6095, щонайменше на 70965, щонайменше на 7595, щонайменше на 8095, щонайменше на 9095, щонайменше на 100965, щонайменше на 12595, щонайменше на 15095, щонайменше на 17595, щонайменше на 20095, щонайменше на 25095, щонайменше на 30095, щонайменше на 35095 або щонайменше на 400965 більше насіння, бобів, насінних коробочок, стручків, фруктів, горіхів або бульб, ніж нетрансгенна контрольна рослина. бо 122. Трансгенна рослина за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 35-46, 73-84 або 106-

110, яка відрізняється тим, що трансгенна рослина має у середньому щонайменше на 595, щонайменше на 1095, щонайменше на 1595, щонайменше на 2095, щонайменше на 25965, щонайменше на 3095, щонайменше на 3595, щонайменше на 4095, щонайменше на 45965, щонайменше на 5095, щонайменше на 6095, щонайменше на 7095, щонайменше на 75965, щонайменше на 8095, щонайменше на 90956, щонайменше на 10095, щонайменше на 12595, щонайменше на 15095, щонайменше на 17595, щонайменше на 20095, щонайменше на 25095, щонайменше на 30095, щонайменше на 35095 або щонайменше на 40095 більше насіння, бобів, насінних коробочок, стручків, фруктів, горіхів або бульб на вузол, ніж нетрансгенна контрольна рослина. 123. Трансгенна рослина за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 35-46, 73-84 або 106- 110, яка відрізняється тим, що трансгенна рослина має у середньому щонайменше 2, щонайменше 3, щонайменше 4, щонайменше 5, щонайменше 6, щонайменше 7, щонайменше 8, щонайменше 9 або щонайменше 10 бобів, насінних коробочок, стручків, фруктів, горіхів або бульб на вузол. 124. Трансгенна рослина за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 35-46, 73-84 або 106- 110, яка відрізняється тим, що трансгенна рослина має у середньому 2-10, 2-9, 2-8, 2-7, 2-6, 2-5, 2-4, 3-10, 3-9, 3-8, 3-7, 3-6, 3-5, 4-10, 4-9, 4-8, 4-7, 4-6 або 4-5 бобів, насінних коробочок, стручків, фруктів, горіхів або бульб на вузол. 125. Трансгенна рослина за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 35-46, 73-84 або 106- 110, яка відрізняється тим, що трансгенна рослина має у середньому щонайменше на 1, щонайменше на 2, щонайменше на 3, щонайменше на 4, щонайменше на 5, щонайменше на 6, щонайменше на 7, щонайменше на 8, щонайменше на 9 або щонайменше на 10 більше насінних коробочок, стручків, фруктів, горіхів або бобів на вузол у порівнянні з нетрансгенною контрольною рослиною. 126. Трансгенна рослина за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 35-46, 73-84 або 106- 110, яка відрізняється тим, що трансгенна рослина цвіте щонайменше на 1, щонайменше на 2, щонайменше на 3, щонайменше на 4, щонайменше на 5, щонайменше на 6, щонайменше на 7, щонайменше на 8, щонайменше на 9, щонайменше на 10, щонайменше на 11, щонайменше на 12, щонайменше на 13, щонайменше на 14, щонайменше на 15, щонайменше на 20,

Зо щонайменше на 25, щонайменше на 30, щонайменше на 35, щонайменше на 40 або щонайменше на 45 днів раніше, ніж нетрансгенна контрольна рослина. 127. Трансгенна рослина за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 121, 122, 123, 124, 125 або 126, яка відрізняється тим, що трансгенна рослина є соєвою рослиною та трансгенна рослина має у середньому більше бобів на вузол, ніж нетрансгенна контрольна рослина. 128. Трансгенна рослина, яка містить полінуклеотидну послідовність, що кодує флоригенний білок ЕТ, функціонально зв'язану з промотором вегетативної стадії, при цьому експресія флоригенного білка ЕТ пригнічується у пізній вегетативній та/або генеративній тканині. 129. Трансгенна рослина за варіантом реалізації винаходу 128, яка відрізняється тим, що експресія флоригенного білка ЕТ пригнічується малою молекулою РНК. 130. Рекомбінантна ДНК-конструкція, яка містить полінуклеотидну послідовність, що кодує флоригенний білок ЕТ і функціонально зв'язана з промотором вегетативної стадії, і щонайменше одну послідовність ДНК придатну для транскрипції, що кодує молекулу РНК, що містить націлюючу послідовність, яка є комплементарною щонайменше частині полінуклеотидної послідовності. 131. Трансгенна рослина, яка містить вставку рекомбінантної ДНК-конструкції за варіантом реалізації винаходу 130 у геномі щонайменше однієї клітини трансгенної рослини. 132. Трансгенна рослина, яка містить рекомбінантну полінуклеотидну послідовність, що кодує флоригенний білок ЕТ, функціонально зв'язану з промотором вегетативної стадії, при цьому експресія полінуклеотидної послідовності обмежена у просторі та у часі малою молекулою РНК. 133. Рекомбінантна ДНК-конструкція, яка містить експресійну касету, причому експресійна касета містить полінуклеотидну послідовність, що кодує флоригенний білок ЕТ, функціонально зв'язану з промотором придатним для експресії в рослинах, при цьому промотор придатний для експресії в рослинах містить полінуклеотидну послідовність, яка щонайменше на 70905, щонайменше на 7595, щонайменше на 8095, щонайменше на 8595, щонайменше на 9095, щонайменше на 9195, щонайменше на 9295, щонайменше на 9395, щонайменше на 945965, щонайменше на 9595, щонайменше на 9695, щонайменше на 9795, щонайменше на 98595, щонайменше на 9995 або на 10095 ідентична до полінуклеотидної послідовності, обраної з 60 групи, що складається з ЗЕО ІЮО МО: 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63 або

64, або її функціональної частини. 134. Рекомбінантна ДНК-конструкція за варіантом реалізації винаходу 130 або 133, яка відрізняється тим, що флоригенний білок ЕТ містить амінокислотну послідовність, яка має щонайменше 6095, щонайменше 6595, щонайменше 7095, щонайменше 7595, щонайменше 80965, щонайменше 8595, щонайменше 9095, щонайменше 9195, щонайменше 9295, щонайменше 93965, щонайменше 9495, щонайменше 9595, щонайменше 9695, щонайменше 9795, щонайменше 9890 або щонайменше 99595 ідентичності з послідовністю, обраною з групи, що складається з ЗЕО ІЮ

МО: 2, 4,6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28 і 30, або її функціональним фрагментом. 135. Молекула ДНК або вектор, які містять рекомбінантну ДНК-конструкцію за варіантом реалізації винаходу 130 або 133. 136. Плазмідний вектор для Аагобасієгішт-опосередкованої трансформації, який містить рекомбінантну ДНК-конструкцію за варіантом реалізації винаходу 130 або 133. 137. Донорна матрична молекула для сайт-опосередкованої інтеграції, яка містить рекомбінантну ДНК-конструкцію за варіантом реалізації винаходу 130 або 133. 138. Трансгенна рослина, яка містить вставку рекомбінантної ДНК-конструкції за варіантом реалізації винаходу 130 або 133 у геномі щонайменше однієї клітини трансгенної рослини. 139. Трансгенна рослина за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 131, 132 або 138, яка відрізняється тим, що трансгенна рослина є гомозиготною щодо вставки рекомбінантної ДНК- конструкції. 140. Трансгенна рослина за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 131, 132, 138 або 139, яка відрізняється тим, що трансгенна рослина є гемізиготною щодо вставки рекомбінантної

ДНК-конструкції. 141. Трансгенна рослина за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 131, 132 або 138-140, яка відрізняється тим, що трансгенна рослина є рослиною короткого дня. 142. Трансгенна рослина за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 131, 132 або 138-141, яка відрізняється тим, що трансгенна рослина є дводольною рослиною. 143. Трансгенна рослина за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 131, 132 або 138-142, яка відрізняється тим, що трансгенна рослина є бобовою рослиною. 144. Трансгенна рослина за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 131, 132 або 138-143,

Зо яка відрізняється тим, що трансгенна рослина є соєю. 145. Трансгенна рослина або її частина за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 35-46, 73-84, 106-110, 131, 132 або 138-144, яка відрізняється тим, що трансгенна рослина дає більше насіння, насінних коробочок, стручків, фруктів, горіхів або бобів на вузол трансгенної рослини, ніж контрольна рослина, яка не містить рекомбінантну ДНК-конструкцію. 146. Трансгенна рослина або її частина за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 35-46, 73-84, 106-110, 131, 132 або 138-145, яка відрізняється тим, що трансгенна рослина цвіте раніше, ніж контрольна рослина, яка не містить рекомбінантну ДНК-конструкцію. 147. Трансгенна рослина або її частина за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 35-46, 73-84, 106-110, 131, 132 або 138-146, яка відрізняється тим, що трансгенна рослина є соєвою рослиною, яка має висоту, що складає щонайменше близько 700 міліметрів, на стадії К8. 148. Трансгенна рослина або її частина за будь-яким з варіантів реалізації винаходу 35-46, 73-84, 106-110, 131, 132 або 138-147, яка відрізняється тим, що трансгенна рослина є соєвою рослиною, яка має щонайменше 100 вузлів на рослину на стадії К8. 149. Частина трансгенної рослини, яка містить вставку рекомбінантної ДНК-конструкції за варіантом реалізації винаходу 130 або 133 у геномі щонайменше однієї клітини частини трансгенної рослини.

ПРИКЛАДИ

Приклад 1. Умови індукції з коротким днем для сої та ідентифікація генів Ріожегіпд Госи5 Т (ЕТ) за допомогою профілізації транскрипції.

І146) Цей приклад раніше був описаний у заявці на патент США Мо 15/131987, що одночасно знаходиться на розгляді, і міжнародній заявці Ме РСТ/О52016/028130, які у повному обсязі включено у цей документ за допомогою посилання. Способи фотоперіодичної світлової обробки (тобто індукції цвітіння рослин в умовах короткого дня) описані у патенті США Мо 8935880 і публікації патентної заявки США Мо 2014/0259905, які у повному обсязі включено у цей документ за допомогою посилання. Як додатково описано у них, рання індукція в умовах короткого дня дозволяла отримувати рослини сої, які мають змінені генеративні ознаки, включаючи збільшене число бобів/насіння на рослину. Експерименти з профілізацією транскрипції проводили, використовуючи експресійні мікроматриці для визначення наявності підвищуючої регуляції для конкретного транскрипту у цих світлоіїндукованих рослинах, щоб бо ідентифікувати гени, які можуть відповідати за опосередковування фенотипів короткоденної індукції. В цих експериментах проводили аналіз транскриптів для тканин листя та квіткових верхівок сої, зібраних з рослин через 1, З і 5 днів після їх поміщення в індуктивні умови короткого світлового дня (короткий день), порівняно з тканинами рослин, які не поміщали в індуктивні умови (довгий день).

І147| Як проілюстровано на Фіг. 2, підвищене накопичення транскриптів спостерігали для конкретного гена Ріом'егіпуд І осив Т, Ст.ЕРТга (ЗЕО ІЮ МО: 1), у листі, зібраному через З і 5 днів після застосування умов ранньої індукції короткого дня (рікдД), порівняно із зразками, отриманими з (ї) тканин квіткових верхівок тих самих рослин, підданих короткоденній індукції, (ії) тканин листя та квіткових верхівок рослин сої, які замість цього поміщали в умови довгого дня.

Ці дані підтримують висновок, що експресія Ст.ЕТ2а індукується у тканинах листя рослин, підданих умовам рікд, що не спостерігалося у рослинах, які вирощували в умовах довгого дня.

Також експресію Сіт.ЕТга не спостерігали у квіткових верхівках оброблених рікД рослин, що узгоджується з моделлю експресії білка ЕТ, яка індукується у периферичних листових тканинах у відповідь на індуктивні фотоперіодичні умови, а потім переміщується у ділянку своєї дії у меристемах для індукції цвітіння. Проте додаткові експерименти із застосуванням чутливішого аналізу секвенування РНК для транскриптів показали наявність деякої індукції (1т.ЕТга у верхівках пагонів і аксилярних бруньках у відповідь на умови рікд (дані не показані).

Приклад 2. Вивчення характеристик профілів експресії промотора рАЇ.Егесіа у сої.

І148)| Для досягнення необхідних ознак або фенотипів за допомогою трансгенних підходів може бути потрібна регуляція часових і просторових профілів ектопічної експресії гена ЕТ.

Фізіологічні експерименти з соєю для визначення експресії Ст.ЕТ2а у вегетативних тканинах після умов короткоденної індукції (дивіться Фіг. 2) показали, що досягнення позитивних щодо врожайності ознак може грунтуватися на більш ранній експресії ЕТ під час вегетативної стадії. З іншого боку, попри те, що транскрипти ЕТ не виявляються у вегетативних верхівках, було показано, що білок ЕТ долає велику відстань від листя до апікальної тканини, де він ініціює перехід від вегетативної стадії до генеративної. Дивіться, наприклад, І їб5спії2, Е. еї аї., (2006), вище; і Согреїізег, Ї. еї аЇ., "ЕТ Ргоївіп Мометепі Сопігібшез о І опод-Оівїапсе 5ідпаїїпу іп Ріога!

Іпдисіоп ої Агарідорвівз", Зсіепсе 316: 1030-1033 (2007). Таким чином, у світлі наших власних спостережень, ми запропонували використовувати промотор вегетативної стадії, який є

Зо активним у меристемі, для регуляції ектопічної експресії ЕТ у рослині. За допомогою експресії морфогенетичного сигналу ЕТ безпосередньо у меристемі на необхідній стадії розвитку можна обійти або уникнути багатьох ендогенних шляхів і регуляторних відгуків (наприклад, регуляцію трансдукції ЕТ у листі та транслокацію сигналу ЕТ на велику відстань). Попередні експерименти з короткоденними індукційними умовами (описаними вище у прикладі 1) виявили підвищену регуляцію гена Ст.Егесіа у меристемах рослин сої. Було показано, що промотор рЕгесіа (ЗЕО

ІО МО: 31) з Агарідорзі5 має слабку експресію у меристемі рослин під час вегетативних стадій розвитку. Відповідно, промотор рАї.Егесіа було обрано для перших експериментів з експресії

ЕТ.

І149| Додаткові експерименти проводили, щоб додатково вивчити профілі експресії рАгЕгесіа, злитого з геном репортера 5И5 у вегетативних і флоральних меристематичних тканинах. Аналіз профілів експресії 35 під час розвитку саджанців сої показав, що промотор рАгЕгесіа демонструє часовий і просторовий профіль експресії, переважно у меристематичних тканинах під час вегетативної стадії розвитку. Фіг. ЗА-3О і 4А-40О і Фіг. 5А-5Е і б6А-6Е включають два набори зображень, щоб проілюструвати профіль забарвлення 55. На Фіг. ЗА-

ЗО і БА-5Е представлені чорно-білі зображення забарвлених тканин, а на Фіг. 4А-40 і бА-6БЕ, відповідно, представлені чорно-білі зображення, що відповідають Фіг. ЗА-3О і 5А-Б5Е, відповідно, але з кольоровою фільтрацією для демонстрації профілю та інтенсивності синього забарвлення 5И5. Таким чином, профіль експресії забарвлення 505 можна оцінити за цими чорно-білими зображеннями шляхом порівняння відповідних зображень на Фіг. ЗА-3О і 4А-40 або Фіг. 5А-5Е і бА-6РЕ. Як проілюстровано на Фіг. ЗА-3О і 4А-40, забарвлення 505 було виявлене у незрілих однолистих пластинках і черешках сої (Фіг. 4А і 4В) через три дні після посіву/проростання. Експресія рАї.Егесіа:ї005 також добре виявлялася у ділянках трилистого примордію, апікальної меристеми пагонів (АМП) і аксилярної меристеми на цій ранній вегетативній стадії (Фіг. 4С). Активність ЗОЗ не виявлялася у повністю розгорнутому однолистому та трилистому листі через десять днів після проростання або посіву (Фіг. 40 і 4Е).

Проте активність 5И5 виявлялася у проксимальній частині незрілої, нерозгорненої, але повністю розвиненої трилистої пластини та з адаксіального боку черешка (Фіг. 4Р). Детальне спостереження апікальної тканини, що розвивається, показало, що сильна експресія зберігалася у незрілому листовому примордії, що розвивається, аксилярних меристемах і бо апікальних меристемах пагонів (Фіг. 4-1).

150) На ранній генеративній стадії активність промотора рАї.Егесіа не виявлялася у зрілих листових пластинах і була знижена у листовому примордії, що розвивається. Сигнал 505 не виявлявся на проміжній вегетативній стадії у верхівках в апікальній меристемі пагонів (АМП) або в аксилярній меристемі (АМ) після того, як у цих тканинах почали формуватися суцвіття (Фіг. 42-41). На усіх пізніх стадіях у верхівках або у пазухах квіткового примордію не можна було виявити будь-яку додаткову меристематичну активність. Проте експресія ЗИО5 тривала з адаксіального боку черешків і у проксимальній частині незрілої листової пластини (Фіг. 4М і 4М), але не в повністю розгорнутих листових пластинах (Фіг. 40). Профілі експресії 5ЗИ5 з промотором рАї.Егесіа також аналізували на пізніших стадіях розвитку К1 (35-40 днів після проростання). Аналогічно з більш ранніми стадіями розвитку, у зрілому листі або зрілих стеблах експресія не виявлялася. Проте сильна промоторна активність була виявлена у стеблах суцвіть (Фіг. 5А і бА; дивіться стрілку) і квітконіжках (Фіг. 5В і 6В; дивіться стрілку). В обох тканинах експресія виявлялася у судинних і паренхіматозних клітинах (Фіг. 5С і 6С). На цій стадії експресія також виявлялася у тичинкових нитках (Фіг. 50 і 60; дивіться стрілки) і у незапилених сім'ябруньках (Фіг. 5Е, 5Е, 6Е і 6Е; дивіться стрілки на 6Е).

І151| Раніше промотор рАї.Егесіа був вивчений в Агабрідорзіз. Цікаво, що профілі експресії рАї.Егесіа в Агабідорзіз були порівнянні з профілями, спостережуваними у сої під час вегетативної стадії, але не під час пізніх генеративних стадій. На противагу цьому, профіль експресії рАЇ.Егесіа у сої знижений у ранніх генеративних тканинах, але знову підвищується у деяких більш пізніх генеративних органах і тканинах, включаючи стебла суцвіть і квітконіжки.

Дивіться, наприклад, Спеп, М-К еї а!Ї., РЕЕВ5 І ейеге 588: 3912-17 (2014); Мокоуата, ЕВ еї аї.;

Зпрак, ЕО еї аї., Зсієпсе 309: 290-293 (2005); і Мокоуата, К еї аї., Ріапі У 15(3): 301-310 (1998), повний зміст яких включено у цей документ за допомогою посилання. Таким чином, промотор рАї.Егесіа забезпечує новий профіль експресії у сої.

Приклад 3. Експресія гена РіІожегіпд Госи5 Т, Сіт.ЕТга, під управлінням рАї. Промотор

Егесіа змінює час цвітіння та число бобів на вузол у сої.

І152)| Трансгенні рослини сої отримували шляхом трансформації експлантатів сої рекомбінантною молекулою ДНК (тобто трансформаційним вектором на основі Т-ДНК), яка містить промотор рАїЕгесіа, функціонально зв'язаний з геном Ст.ЕТ2га, за допомогою

Зо Адгорасіегйт-опосередкованої трансформації для створення чотирьох подій рАї.Егесіа:Ст.ЕТ2а, які залишали для додаткового дослідження. Ефект надекспресії ЕТ2а негайно проявлявся в рослинах Ко, які характеризувалися дуже раннім цвітінням і термінацією зі зниженим урожаєм насіння (наприклад, тільки близько 8 насінин/рослина). Ці трансгенні рослини (С1т.ЕТ2а також мали невелику висоту та дуже мало гілок, якщо взагалі мали.

Сегрегуючі рослини Кі і їх потомство згодом вирощували у теплиці в умовах довгого дня для початкового вивчення та отримання характеристик. У разі вирощування цих рослин в умовах довгого дня виражені карликові фенотипи, спостережувані для Ст. ЕТга-трансгенних рослин Ко, були поліпшені. У цих експериментах як гомозиготні, так і гемізиготні рослини, які вирощуються у теплиці в умовах 16-годинного світлового дня (тобто 16/8-годинні фотоперіоди день/ніч), цвіли набагато раніше, ніж нульові сегреганти дикого типу. Ст.ЕТга-трансгенні рослини цвіли через близько 19-22 дня після посадки або посіву. (дивіться, наприклад, Фіг. 9А-90). У цих умовах росту трансгенні рослини сої, що експресують Ст.ЕтТга, додатково мали збільшене число бобів на вузол на головному стеблі у порівнянні з контролем дикого типу (дивіться, наприклад, Фіг. 10 і 11, додатково обговорювані нижче).

І153| Рослини, що містять одну з трансгенних подій рАЇ.Егесіа:Ст.ЕТ2а (подія 1), які вирощуються у регульованих зовнішніх умовах, додатково аналізували за допомогою скануючої електронної мікроскопії (СЕМ). Аналіз апікальної меристеми пагонів (АМП) цих трансгенних рослин (зібраних через 7 днів після посадки) виявив ранній перехід АМП у меристему суцвіть (МО) і флоральну меристему (ФМ) (Фіг. 7). На противагу цьому, АМП рослин сої дикого типу не диференціювалася у МС на цій стадії росту. Аналогічно, візуалізація аксилярної меристеми трансформантів ЕТ2а (зібраних через 9 днів після посадки) показала розвиток дормантних меристем суцвіть (дМС) (або латеральних прімордіальних китиць) у МС і ФМ (фіг. 8), призводячи до більш раннього розвитку квіткових гілок (китиць) у вузлах цих трансгенних рослин. Вивчення додаткових фенотипічних характеристик виявило раннє цвітіння на стадії М1 у рослинах сої з експресією Сіт.ЕТ2га, яке відбувалося задовго до переходу до цвітіння у нульових сегрегуючих рослинах (Фіг. 9ЗА-90). Ці дані у комбінації з вищеописаним профілем експресії рАїЕгесіа:сйИ5 показують, що раннє цвітіння і, зокрема, формування суцвіть і флоральної меристеми було індуковане ектопічною експресією (1т.ЕТга під час вегетативної стадії у листовому примордії та апікальній меристемі пагонів і аксилярній меристемі сходів. бо Вважається, що утворення більшої кількості меристем суцвіть і флоральних меристем додатково викликає більш ранню появу та ріст вторинних і третинних китиць, призводячи до більшого числа продуктивних квіток і бобів, що формуються у вузлі.

І154|Ї Ст.РТга-трансгенні рослини сої не лише демонстрували більш раннє цвітіння та давали більше бобів на вузол на головному стеблі (у порівнянні з сегрегуючими нульовими рослинами), але також виявилось, що ефекти ектопічної експресії Ст.ЕТ2га у трансгенних рослинах є дозозалежними. Хоча як гомозиготні, так і гемізиготні рослини мали меншу висоту та менше галуження, рослини, гомозиготні щодо трансгена Ст.ЕтТга, відчули сильніший вплив, ніж гемізиготні рослини, можливо тому, що гомозиготні рослини містять дві копії трансгена (тобто велику дозу) на відміну від тільки однієї копії (тобто меншої дози) в гемізиготних рослинах. В умовах росту довгого дня гомозиготні рослини гинули раніше і мали меншу загальну висоту з меншою кількістю вузлів і гілок на головному стеблі у порівнянні з рослинами, гемізиготними щодо трансгена (Фіг. 10). На відміну від гомозиготних рослин, які демонстрували велике число субоптимальних карликових фенотипів, включаючи дуже мале (у разі наявності) число гілок на головному стеблі, гемізиготні рослини мали проміжний фенотип у термінах вегетативного росту, висоти рослини та числа вузлів, присутніх на головному стеблі, у порівнянні з рослинами дикого типу та гомозиготними рослинами. В умовах 16-годинного довгого дня гемізиготні рослини мали більш нормальну висоту рослин з деякою мірою галуження та велику тривалість цвітіння у порівнянні з гомозиготними рослинами (Фіг. 10). Гемізиготні рослини також цвіли впродовж 40- 64 днів після ініціації К1, тоді як гомозиготні рослини цвіли тільки впродовж 16-24 днів внаслідок ранньої термінації. 1155) Додаткові експерименти проводили з рослинами, трансформованими конструкцією

Ст.ЕТга (3 події) в умовах довгого дня (16 годин) і контрольованих зовнішніх умовах, щоб додатково вивчити характеристики доза-відповідь для гемізиготних і гомозиготних рослин.

Різниця у числі вузлів і бобів на головному стеблі та гілках, а також середнє число бобів на вузол і середня висота на рослину наведені у таблиці 1 для трьох гомозиготних подій (гомо- подія 2, гомо-подія З, гомо-подія 4) і трьох гемізиготних подій (гемі-подія 2, гемі-подія З, гемі- подія 4). Ці події відрізняються від вищеописаної події 1.

Таблиця 1

Дані з рівня подій для гомозиготних і гемізиготних Зт.ЕТ2а-трансгенних рослин.

Зиготність- : : : й : Висота . вузлів ГС на вузлів Гл бобів ГС бобів Гл Бобів на .

Подія Ж (дюйми) на рослину на рослину | нарослину | на рослину вузол рослину

Гомо-пподія2| 11,8 | 69 | 46 | 9 | 29 | 175

Гомо-подіяЗ| 12,3 | 65 | 664 | 9 | 4 | 21

Гомо-подія4| 12,5 | 68 | 496 | 91 | З | 195 (Геміподія4| 254 | 1553 | 18668... | 58 | 6 | 45

Зо І156| Як показано у таблиці 2, гемізиготні рослини мали відповідно більше число вузлів на головному стеблі (ГО) і гілках (ГЛ) і більшу висоту рослин, ніж гомозиготні рослини. Таким чином, гемізиготні рослини у цілому підпали під менший вплив, ніж гомозиготні рослини, і більше нагадують рослини дикого типу. Гемізиготні рослини також мали більше число бобів на вузол і більше число бобів на головному стеблі та гілках у порівнянні з гомозиготними рослинами. Отже, гемізиготні рослини у цілому мали ближчу до нормальної рослини архітектуру з великим числом бобів на вузол (і на рослину), імовірно, внаслідок меншої дози трансгена

Ст.РТ2а. Відносний рівень дози Ст.ЕТга на підставі зиготності трансгена було додатково підтверджено додатковими експериментами, які показують, що рівні транскрипту Сіт.ЕТга були вищими у тканинах з гомозиготних рослин, ніж у тканинах з гемізиготних рослин (дані не показані).

І157| Рання індукція цвітіння у цих Ст.ЕТга-трансгенних рослинах була пов'язана з великим числом бобів (і насіння) на вузол на головному стеблі як у гемізиготних, так і у гомозиготних рослинах. Гомозиготні та гемізиготні рослини, які містять трансген Ст.ЕТга, мали більше число бобів/насіння на вузол на головному стеблі рослини у порівнянні з сегрегантами дикого типу (Фіг. 11). Також було виявлено, що розподіл бобів на головному стеблі є різним для Ст.ЕТг2а- трансгенних рослин і нульових рослин дикого типу. Було виявлено, що як гомозиготні, так і гемізиготні рослини, які вирощуються в умовах довгого дня, мають більше бобів щонайменше у нижніх вузлах головного стебла та більше бобів на вузол у середньому у порівнянні з нульовими рослинами дикого типу (дані не показані). Рослини, гемізиготні щодо трансгена

Ст.ЕтТга, містили найбільше число бобів на вузлі по усій довжині головного стебла. Проте ці ефекти залежали від конкретних умов росту, включаючи довжину дня і т. ін. У цілому, експерименти, що проводилися з соєю в умовах довшого дня демонстрували тенденцію до більшої різниці між трансгенними та нульовими рослинами. (158) Дозозалежні ефекти трансгенної експресії Ст.ЕТ2а також спостерігали у польових експериментах. У польових експериментах рослини сої, гемізиготні щодо двох подій Ст.ЕТ2а (події 1 і 2, вище), демонстрували у середньому близько 2,68 бобів на вузол на головному стеблі, а рослини, гомозиготні щодо цих подій, мали у середньому близько 1,40 бобів на вузол, тоді як сегрегуючі нульові рослини мали близько 1,63 бобів на вузол. Проте у ранніх польових випробуваннях було виявлено, що рослини, гемізиготні щодо трансгенного Ст.ЕтТга (подія 2), мали у середньому близько 3,21 бобів на вузол у порівнянні з близько 3,05 бобів на вузол у середньому у гомозиготних рослинах і близько 2,19 бобів на вузол у сегрегуючих нульових рослинах. В іншому експерименті на невеликій ділянці, який проводиться в іншій польовій локації, було виявлено, що рослини, гемізиготні щодо трансгена Ст.ЕТга (подія 1) мають у середньому близько 2,17 бобів на вузол у порівнянні з близько 2,05 бобів на вузол у середньому у рослинах, гомозиготних щодо трансгена Ст.ЕТга (подія 2), і близько 1,30 бобів на вузол у сегрегуючих нульових рослинах. Таким чином, число бобів на вузол у рослинах, які містять трансген Ст.ЕТга, може залежати від безлічі чинників, включаючи дозу трансгена ЕТ, зовнішні та польові умови і, можливо, різницю у сільськогосподарській практиці. Проте, подібно до Сіт.ЕТга-трансгенних рослин, які вирощували у теплиці, гомозиготні та гемізиготні Ст.ЕТ2а- трансгенні рослини, які вирощували у польових умовах, часто мали менше вузлів на головному стеблі, меншу загальну висоту та/або зменшене галуження у трансгенних рослинах. Насправді, рослини дикого типу, зазвичай, характеризуються більшим галуженням і більшим загальним числом вузлів на рослину, ніж гемізиготні та гомозиготні Сіт.ЕТга-рослини.

І159І| Додаткові фізіологічні дані отримували від гомозиготних Ст.ЕТга-трансгенних рослин і контрольних рослин дикого типу (ДТ), які вирощували у теплиці в умовах 14-годинного довгого

Зо дня (дивіться таблицю 2). Ці дані представляють усереднені виміри, зроблені для шести

Ст.ЕТга-трансгенних рослин для кожної події або для восьми рослин дикого типу.

І160| Для отримання фенотипічних характеристик цих рослин були зібрані наступні матриці:

Дні до цвітіння на К1 (СОЕКТ); дні до К7 (ОК); тривалість генеративної стадії у дні від К1 до

К7 (РОКІ1К?7); число гілок на рослину (ВКРР); загальне число фертильних вузлів на гілках (ЕМВК); загальне число фертильних вузлів на рослину (ЕМІ-Р); загальне число фертильних вузлів на головному стеблі (ЕМ5Т); число вузлів на гілках (МОВЕ); число вузлів на головному стеблі (МОМ5); число вузлів/рослина (МОРІ); відсоток фертильних вузлів на гілках (РЕМВ); відсоток загального числа фертильних вузлів (РЕММ); відсоток фертильних вузлів на головному стеблі (РЕМ5); число бобів на рослину (РОРР); число бобів на головному стеблі (РОЮМ5); число бобів на гілках (РООВЕ); середнє число бобів/вузол; число насінин на рослину на К8 (ЗОРРЕЗ8); і маса 1000 насіння (5УМ1000). Кожен з цих вимірів проводили під час збирання, якщо не зазначено інший час.

Таблиця 2

Фенотипічні дані рівня конструкції для трансгенних гомозиготних щодо Зт.ЕТ2а рослин і рослин

Дт. 11111111 дт | рАцЕесасотетга./

Таблиця 2

Фенотипічні дані рівня конструкції для трансгенних гомозиготних щодо Зт.ЕТ2а рослин і рослин

Дт. 11111111 дт | рАцЕтесасотетга./

І161| Відповідно до вищеописаних спостережень, гомозиготні Ст. ЕТга-трансгенні рослини демонстрували більш ранню індукцію цвітіння, ніж рослини ДТ (ФОЕКІ1 близько 21 дня після посадки замість близько 33-34 днів для рослин дикого типу). Ці виміри додатково показали, що

Б число гілок (й інші виміри, пов'язані з галуженням, такі як число вузлів або бобів на гілках) було сильно зменшене. Оскільки трансгенні рослини мали меншу висоту та дуже слабке галуження, загальне число вузлів або бобів на рослину також було сильно зменшене. Проте число бобів на вузол на головному стеблі було підвищене у трансгенних рослинах (наприклад, у середньому близько 3,8 бобів/вузол) у порівнянні з нульовими рослинами дикого типу (наприклад, близько 2,4 бобів/вузол).

І162| Не обмежуючись жодною теорією, вважається, що причиною більшого числа бобів на вузол, спостережуваного для трансгенних рослин сої, які експресують ЕТга у меристемі під час вегетативних стадій розвитку, щонайменше частково може бути синхронізація раннього цвітіння з ранньою появою вторинних та/або третинних китиць та/або краще використання ресурсів з отриманням більшої кількості квіток, що дають боби, на вузол. Рання експресія ЕТ у меристемі (дивіться, наприклад, Фіг. З і 4) може викликати ранню появу дормантних меристем суцвіть з отриманням більшого числа китиць на вузол рослини так, що більше число китиць дає зрілі квітки та повністю розвинені боби у кожному вузлі. Проте подальша експресія ЕТ у генеративній тканині (дивіться, наприклад, Фіг. 5 або 6) може припиняти флоральний розвиток квіток, що розвиваються пізніше, у кожному вузлі, призводячи до ефективнішого розміщення ресурсів у китицях, квітках і бобах, що розвиваються більш рано. У рослинах сої дикого типу набагато менший відсоток вторинних і третинних китиць давали квітки та повністю розвинені боби у порівнянні з первинними китицями, а квітки первинної китиці, що розвиваються пізніше, зазвичай, не дають зрілих квіток та/або повнорозмірних бобів перед обпаданням. Таким чином, було зроблено припущення, що більше число бобів на вузол може формуватися у рослинах, які експресують білки ЕТ у вегетативній меристемі за рахунок синхронізації раннього розвитку квіток з ранньою появою бічних китиць в одному або більше вузлах рослини. З щонайменше промотором рАЇ.Егесіа, який управляє експресією ЕТ, квітки, що розвиваються пізніше (які в іншому випадку могли б не дати повністю розвинені або повнорозмірні боби), також можуть

Зо термінувати експресією ЕТ на більш пізній генеративній стадії для напрямлення ресурсів у квітки, що розвиваються більш рано.

Приклад 4. Експресія гена РіІожегіпд Госи5 Т, Сіт.ЕТга, під управлінням альтернативних промоторів вегетативної стадії у сої.

І163)| На підставі фенотипів, спостережуваних у попередньому прикладі 3, для управління експресією трансгена Ст.ЕТ2а було запропоновано два промотори, які вважаються переважними щодо листя промоторами вегетативної стадії: рАїВІ5 (5ЕБО ІО МО: 46) і рАГАЇ Мб (ЗЕО ІО МО: 47). У контексті цього документу «переважний щодо листя» відноситься до промотора, який переважно ініціює транскрипцію зв'язаного з ним гена у тканинах листя у порівнянні з іншими тканинами рослини. Оскільки вважається, що ЕТ функціонує як мобільний флориген, рання експресія ЕТ під час вегетативних стадій у периферичних тканинах, таких як листя, з переважним щодо листя або специфічним щодо листя промотором може призводити до фенотипів, схожих з меристемо-переважною експресією рАї.Егесіа:сСт.ЕТ2а. Додатково було зроблено припущення, що експресія ЕТ з вегетативним листовим промотором також може послаблювати сигнал індукції цвітіння і, отже, пом'якшувати фенотипи ранньої термінації, спостережувані у разі гомозиготної експресії ЕТ у меристемі, і збільшувати висоту та галуження рослини. бо

І164| У цих експериментах конструювали трансформаційні вектори для рАКАЇ МТб:Сшт.ЕТг2а і рАї.ВІ 5:Сіт.ЕТга і використовували для трансформації лінії сої за допомогою Адгобрасіегійт- опосередкованої трансформації. Було показано, що експресія з промотором рАЇВІ5 починається у листовому примордії номер 5 (р5) і експресується у первинних жилках листя тільки до переходу до цвітіння, а промотор рАСЦАЇМТб також є вегетативним листовим промотором з експресією на більш пізніх стадіях розвитку у порівнянні з рАї.ВІ 5. Дивіться, наприклад, Етїопі еї аї., "А Ргоїгасіеа апа ОСупатіс Майигайоп 5спедиіе Опаегіїе5 Агабрідорбів І еаї

РемеІюортепі," Те Ріапі Сеї! 20(9): 2293-2306 (2008); і папі еї аї., "Маде-5ресіїїс Веашаїйоп ої

ЗоЇапит Іусорегзісит І еаї Маїштайоп Бу Сіаєз 1 КМОТТЕО1-лІКЕ НОМЕОВОХ Ргоїеїіп5," Те

Ріапі Се 21(10): 3078-3092 (2009). Отримували трансгенні рослини сої для кожної з цих векторних конструкцій і вивчали щодо фенотипів у камерах для вирощування у 14-годинних фотоперіодичних умовах порівняно з рослинами дикого типу. Для кожної з промоторних конструкцій рАїВІ 5 досліджували шість трансгенних подій (5 рослин на подію), а для промотора рАї.АЇ МТ досліджували сім трансгенних подій (5 рослин на подію). Для кожної з цих конструкцій контрольні дані отримували від п'яти рослин дикого типу.

І165| Для отримання фенотипічних характеристик цих трансгенних рослин були зібрані наступні матриці (таблиці З і 4). Окремі вимірювання аналогічні визначеним вище, а отримання фенотипічних характеристик проводили для рослин, гомозиготних щодо трансгена.

Таблиця З

Фенотипічні дані рівня конструкції для рослин рАг.АЇ МТ6:От.ЕтТ2а і рослин ДТ. 11110171 дт1 | рАСАЇМТбсстетга./

ВАР 1С1Ї1111111111177711111111111111111111117188111171

Кв Тет ПН КОН: Ж: ПОН КОН ТК ОН

Таблиця 4

Фенотипічні дані рівня конструкції для рослин рАїЇ.ВІ 5::С1т.ЕТга і рослин ДТ. 11111111 дт | рАщВІ5сОтетга.//

Таблиця 4

Фенотипічні дані рівня конструкції для рослин рАїЇ.ВІ 5::С1т.ЕТга і рослин ДТ. 11111111 дт | рАщВІ5сОтетга.//

І166| Трансгенні рослини, які експресують Сіт.ЕТ2а під управлінням альтернативних промоторів рАЇ.АЇ МТ і рАї.ВІ 5 були фенотипічно більш схожими з рослинами дикого типу (ДТ), ніж трансгенні рослини рАТ.Егесіа:Ст.ЕТ2а. Рослини, трансформовані конструкціями рАГСАЇ МТ6:Ст.ЕтТга і рАї.ВІ 5:Сітп.ЕТга, мали час цвітіння та ознаки вегетативного росту, схожі з контрольними рослинами дикого типу, можливо, з трохи збільшеним числом вузлів на гілках у порівнянні з рослинами дикого типу (таблиці З і 4). Ці дані можна інтерпретувати, як такі, що показують, що час і локація експресії трансгенного ЕТ важливі для отримання пов'язаних з генеративністю та врожайністю ознак або фенотипів, які відрізняються від рослин дикого типу.

Просто експресії трансгена ЕТ під час більш ранніх вегетативних стадій розвитку (наприклад, у тканинах листя) може бути недостатньо для зміни пов'язаних з генеративністю та врожайністю фенотипів рослини (наприклад, числа бобів на вузол). Таким чином, відповідно до варіантів реалізації цього винаходу, промотор, функціонально зв'язаний з флоригенним трансгеном ЕТ, може переважно бути меристемо-специфічним або меристемо-переважним промотором окрім управління експресією під час вегетативних стадій розвитку рослини. Проте, коли профілі експресії для двох вищезгаданих переважних щодо листя промоторів досліджували у рослинах сої, у листі, що розвивається, не спостерігали забарвлення 55 з промотором рАЇ.ВІ5, а промотор рАї.АЇ МТб не забезпечував придатну для виявлення експресію 5И5 у листі до пізніх вегетативних стадій з набагато більш високою експресією під час ранніх генеративних стадій.

Таким чином, залишається можливість того, що експресії трансгенів ЕТ у периферичних тканинах (листі) під час ранніх вегетативних стадій із застосуванням різних тканиноспецифічних промоторів може бути досить, у деяких випадках, для індукції раннього цвітіння та/або інших пов'язаних з генеративністю та врожайністю ознак або фенотипів, які також можуть залежати від конкретного досліджуваного виду рослини.

Приклад 5. Ідентифікація білкових доменів гомологів ЕТ за допомогою аналізу Ріат.

І167| Ортологи Ст.РТ2а ідентифікували за допомогою аналізу послідовностей і огляду літератури, а декілька прикладів цих гомологів ЕТ перелічені у таблиці 5 разом з Ст.ЕТга. Вони включають інші гени ЕТ сої, а також декілька генів ЕТ з інших видів рослин. Амінокислотні послідовності цих білків ЕТ аналізували, щоб ідентифікувати будь-які білкові домени Ріат,

Зо використовуючи програмне забезпечення НМІМЕК і бази даних Ріат (версія 27.0). Було виявлено, що ці білкові послідовності ЕТ (ЗЕО ІЮО МО: 2, 4, 6, 8, 10 їі 12) мають однаковий домен

Ріат, визначений як білок фосфатидилетаноламін-зв'язуючого домену (РЕВР), що має назву

Ріат-домену «РВР М» і номер доступу Ріат РЕО1161. Розташування доменів РВР М у кожній з цих послідовностей білка ЕТ також наведено у таблиці 5. Розташування домену РВР М в інших білках ЕТ можна визначити за допомогою вирівнювання послідовностей. Отже, мається на увазі, що будь-яку послідовність ДНК, яка кодує щонайменше білок ЕТ, що містить домен

РВР М, можна використовувати у рекомбінантній молекулі ДНК згідно з цим винаходом, за умови, що відповідний білок ЕТ має флоригенну активність у разі ектопічної експресії у меристемі рослини.

Таблиця 5

Розташування домену РВР. М (Р'іат) у послідовностях білків ЕТ.

ЗЕО ІЮ МО. нн житлі ни ши я су пиши нн І ЕТ: В ПО сх С

Таблиця 5

Розташування домену РВР. М (Р'іат) у послідовностях білків ЕТ.

БЕЛОК Назва гена Розташування домен 5ЕО ІО МО. У домену

МЕ Т-подібний 25-159

Се.5ЕТ 29-161

Приклад 6. Експресія гомологів ЕТ під управлінням промотора рАЇї.Егесіа у сої. 1168) Конструювали додаткові трансформаційні вектори, які містять інші гомологи ЕТ (таблиця 6) під управлінням промотора рАЇ.Егесіа, і використовували для трансформації сої за допомогою Адгорасіегійт-опосередкованої трансформації. Трансгенні рослини, створені за допомогою цих подій, вивчали щодо їх фенотипів у теплиці з 14-14,5-годинним природним фотоперіодом світлового дня. Для кожної конструкції досліджували шість подій (б рослин на подію). Також досліджували шість рослин і проводили усереднення для контрольних рослин дикого типу (ДТ). Різні групи експериментів (А-Е) проводили, як показано у таблиці 6, з окремими контролями дикого типу.

Таблиця 6

Перелік конструкцій для деяких От.ЕтТ2а і їх гомологів з їх білюовими послідовностями.

БІЛКОВА 5ЕО ІЮ .

Опис конструкції Назва гена МО Досліджувана група од. Егесіа:Сіт.Етга Ст.Ртга од. Егесіа:сіт.ЕТар Ст.Етар 26111111 од. Егеста"От.Ет5а Ст.Ет5а

ОА. Егесіас2т.2СМ8 2т.2СМВ 281 Г1111111в'б од. Егесіа МІ. ЕТ-подібний МЕЕТ-подібний |0000000101В

ОА. Егесіа:сі-е.ЗЕТ Се.5ЕТ ла Її

І169| Наступні матриці були зібрані для отримання фенотипічних характеристик рослин, трансформованих кожною з конструкцій, перелічених у таблиці 6, для експресії гомологів ЕТ з промотором рАЇ.Егесіа на додаток до даних, отриманих для конструкції Ст.ЕТга, як описано вище. Окремі вимірювання аналогічні визначеним вище, а отримання фенотипічних характеристик трансформантів проводили для рослин, гомозиготних щодо трансгена. 1701 Фенотипічні дані були отримані для рослин, які експресують трансгени 7т.2СМВ8 і

МЕ ЕТ-подібний під управлінням промотора рАї.Егесіа (дивіться таблиці 7 і 8). Характерні значення для кожної події у таблицях 7 і 8 усереднено по усіх досліджуваних рослинах, що містять подію. Також наведено колонку з усередненням значень події для кожної ознаки.

Таблиця 7

Фенотипічні дані рівня конструкції та події для рослин 7т.2СМ8 і рослин ДТ.

РОВІ ро 106,9 100,3

РОВІВ? | 76,5 | 641 | 698 | 60 | 59 | 595 | 71,7 | 648

ВАРР

ЕМВА 190,6 | 269. | З2 | 8 | 7 | 23 | 9553 | 17

ЕМ Р 214,6 132,5

ЕМ

Мов 2114 | 302 | 325 | 9 | 75 | 35 | 110,8

МОМ

МОРІ. 244,9 155,5

РОРР 575,8 317,5 498,3 144,8 208,8

РЕМВ

Таблиця 7

Фенотипічні дані рівня конструкції та події для рослин 7т.2СМ8 і рослин ДТ.

РЕМ5 | 714 | 932 | 979 | 925 | 979 906 | 821 | 981 (грами)

Таблиця 8

Фенотипічні дані рівня конструкції та події для рослин МІ.ЕТ-подібний та рослин ДТ

ВАРР,. | 201 | 98 | 20 | 83 | 23 | 53 | 17 | 6 (грами) 1711 Трансгенні рослини сої, які експресують білки 2т.2СМ8 і МЕ ЕТ-подібний, цвіли раніше, ніж контрольні рослини дикого типу та мали збільшене число бобів на вузол (аналогічно рослинам, які експресують трансген Сіт.ЕТга). Насправді, рослини сої, які експресують 2т.2СМ8 і МЕЕБТ-подібний, мали декілька фенотипів, схожих з Сіт.ЕТга-трансгенними рослинами, включаючи менше число днів до цвітіння (0ОЕКІ1), менше число гілок (ВКРР), менше вузлів на рослину (МОРІ), менше вузлів на гілках (МОВЕК), менше число бобів на рослину (РОРР) і менше бобів на гілках (РООВК), разом зі збільшенням числа бобів на вузол і зменшенням числа насіння на рослину (таблиці 7 і 8) у порівнянні з контролями дикого типу.

Проте декілька негативних фенотипів, спостережуваних у гомозиготних щодо Ст.ЕТга рослинах, були менш виражені у трансгенних рослинах, які експресують 7т.2С0М8 і МЕЕТт- подібний. У цілому, рослини, які експресують трансген 7т.2СМ8, мали меншу висоту та менше галуження, але більше бобів на вузол на головному стеблі. Аналогічно, рослини, які експресують трансген МІ.ЕТ-подібний, мали меншу висоту, менше галуження, збільшене число бобів на вузол на головному стеблі у порівнянні з контрольними рослинами дикого типу. 1721 Дві трансгенні події 7т.2СМ8 і чотири події МЕ ЕТ-подібний з вищеперелічених також досліджували у польових випробуваннях у двох різних локаціях. Фенотипічні дані були отримані для рослин, які експресують трансгени 7т.2СМ8 і МІ ЕТ-подібний під управлінням промотора рАї.Егесіа (таблиці 9 і 10). У випадку польових вимірювань ознаки були аналогічними з переліченими вище для таблиць з даними по теплицях, за винятком того, що БОМК8 і РОКІК8 представляють кількість днів до К8 і тривалість генеративної стадії між К1 і К8. Крім того, усі інші ознаки визначали під час збирання (тобто на стадії К8) замість стадії К7. Події 1 і 2 у таблиці 9 відповідають подіям 2 і З з таблиці 7, а події 1-4 у таблиці 10 відповідають подіям 1-4 у таблиці 8, відповідно. За виключення кількості днів до цвітіння на КТ (ОЕМ) і тривалості генеративної стадії у днях від К! до К8 (РОКІТКВ), усі фенотипічні вимірювання отримано на підставі даних, зібраних у двох локаціях. Аналогічно спостереженням у теплиці, трансгенні рослини сої, які експресують білки 7т.2СМ8 і МІ.ЕТ-подібний, також цвіли раніше, ніж контрольні рослини дикого типу у полі. 2т.2СМ8-трансгенні рослини мали збільшене число бобів на вузол, тоді як рослини МІ.ЕТ-подібний не демонстрували чіткого збільшення числа бобів на вузол у польових випробуваннях.

Таблиця 9

Фенотипічні дані з польових випробувань для рослин 21т.2СМ8 і рослин ДТ. 11111111 до | Середнє | Подія! | Подія?2

ВАРРАВ 7 | 126 17771701 11111102 | 00 1 8ЗОРРАВ 7777 | 1999 | щЦ- 66 | 557. (| 805 2 « (- дані з однієї локації)

Таблиця 10

Фенотипічні дані з польових випробувань для рослин МІ.ЕТ-подібний і рослин ДТ. 77...7.7.7.юЮМШЮ | Дт | Середнє | Подія! | Подія | Подія3 | Подія4 мова | 97 | 27 | 92 | 05 | 08 | 03 мом5не | 71893 | 17,5 | 7185 | 99 | 76 | 101

ТРВВВ8 | 95 | 26 | 84 | 05 | 08 | 05

ЗОРРАВ | 999 | 49,99 986 | 3693 | 250 | 397 (- дані з однієї локації) 1173) Додаткові фенотипічні дані були отримані для рослин, які експресують трансген

Ст.ЕТ2б під управлінням промотора рАї.Егесіа (таблиця 11).

Таблиця 11

Фенотипічні дані рівня конструкції та події для рослин ст.ЕТта2б і рослин ДТ.

РОВІН7 | баг | 658 | 533 | 66 | 772 | 672 | 615 | 635

РОРР | з874 | 743,0 | 167 | 140 | 96 | 145,7 | 108,7 | 2007

РООВА | 2849 | 902 | 109939 | 96 | 43 | 947 | 553 | 143 (грами)

І174| Трансгенні рослини сої, які експресують трансген Ст.ЕТ2р, цвіли раніше та мали менше галуження, ніж контрольні рослини дикого типу. Рослини сої з експресією Сіт.ЕТ2р характеризувалися зменшеною кількістю днів до цвітіння (ОЕКІ), зменшеним числом гілок (ВЕРР), меншим числом вузлів на рослину (МОРІ), меншим числом вузлів на гілках (МОВК), зменшеним числом бобів на рослину (РОРР) і меншим числом бобів на гілках (РОЮВК) (таблиця 9). Проте Ст.ЕТ2р-трансгенні рослини не демонстрували збільшення числа бобів на вузол. У цілому, рослини, які експресують трансген С1іт.ЕТ2р0, мали меншу висоту та менше галуження у порівнянні з контрольними рослинами дикого типу. Трансгенні рослини сої, які експресують чотири різні події трансгена Ст.ЕТ2рБ, також досліджували у польових експериментах. Фенотипічні дані були отримані для рослин, які експресують трансген Ст.ЕТ2р під управлінням промотора рАїЕгесіа (таблиця 12). Події 1-4 у таблиці 11 відповідають подіям 3, 2, 1 ї 4 у таблиці 12, відповідно. Аналогічно спостереженням у теплиці, рослини сої, які експресують Ст. ЕТ2б, демонстрували зменшену кількість днів до цвітіння (ОЕМ) у полі. Інші фенотипічні вимірювання також демонстрували аналогічні із спостережуваними у теплиці ознаки у порівнянні з контрольними рослинами дикого типу.

Таблиця 12

Фенотипічні дані з польових випробувань для рослин ст.ЕТ2Б і рослин ДТ. 7... | Дт | Середнє | Подія! | Подія2 | Подія3 | Подія (грами) 1751 Додаткові фенотипічні дані були отримані для рослин, які експресують трансген І е.ЗЕТ під управлінням промотора рАї.Егесіа (таблиця 13).

Таблиця 13

Фенотипічні дані рівня конструкції та події для рослин ГІ е.5ЕТ і рослин ДТ. ров? | 7086 | 103,8 | 90,7 | 1062 | 99 / 91,5 | 116,5 | 119

МБТ | 25,03 | 137 | 13 | 17,7 | 137 | 173 | 9 | З

МОРІ | 71724 | 56,67, | 19 | 1557 | 212 | 22 | 6333 | 60

РЕМВ | 941 | 940 | 7100 | 969 | 833 / 7100 | 92,9, |ШЖ "90,7 (грами)

П176| У цілому, рослини сої, які експресують трансген І є.5ЕТ, мали меншу висоту з меншим галуженням і у середньому збільшене число бобів на вузол у порівнянні з контрольними рослинами дикого типу (таблиця 13). Проте ці ефекти варіювалися та залежали від події.

Наприклад, події 1, 3 ії 4 демонстрували раннє цвітіння (ОЕКІ1), тоді як інші події були нейтральними або фактично мали затримку цвітіння. Крім того, деякі з трансгенних подій

Ге.5ЕТ демонстрували збільшення числа бобів на вузол у середньому різною мірою, тоді як пара подій були нейтральними у сенсі числа бобів на вузол. Цікаво, що дві події (події 5 і б) мали у середньому найбільше число бобів на вузол, незважаючи на затримку цвітіння.

І177| Додаткові фенотипічні дані були отримані для рослин, які експресують трансген

Ст.ЕТ5а під управлінням промотора рАї.Егесіа (таблиця 14).

Таблиця 14

Фенотипічні дані рівня конструкції та події для рослин от.ЕтТ5а і рослин ДТ. рон? | лю | 925 | 966 | 904 | 91 | 928 | 918

РЕММ | 981 | 970 | 959 | 90 | 991 | 100 | 00

РООВА | 23354 | 165 | 605 | 8 | 4 | 6 | 4

РООМ5 | 751 | 708,6 | 159 | 985 | 95 | 925 | 98

Таблиця 14

Фенотипічні дані рівня конструкції та події для рослин от.ЕтТ5а і рослин ДТ. (грами) 178) Трансгенні рослини сої, які експресують трансген Ст.ЕТ5а, цвіли значно раніше, ніж контрольні рослини дикого типу та мали збільшене число бобів на вузол (аналогічно рослинам, які експресують трансген Ст.ЕТга). Насправді, рослини сої, які експресують Ст.ЕТ5ба, мали декілька фенотипів (схожих з С1п.ЕТга-трансгенними рослинами), включаючи менше число днів до цвітіння (ОЕКТ), менше число гілок (ВКРР), менше вузлів на рослину (МОРІ), менше вузлів на гілках (МОВК), менше число бобів на рослину (РОРР) і менше бобів на гілках (РООВЕК), разом зі збільшенням числа бобів на вузол і зменшенням числа насіння на рослину (таблиця 14). У цілому, рослини, які експресують трансген Сіт.ЕТба, мали меншу висоту та менше галуження, але більше бобів на вузол (зокрема, на головному стеблі) у порівнянні з контрольними рослинами дикого типу.

І179| Не обмежуючись жодною теорією, ці дані підтримують модель дії надекспресії ЕТ дозозалежним чином зі ступенем або мірою пов'язаних фенотипів (наприклад, раннє цвітіння, збільшення числа бобів на вузол і зміну архітектури рослини) залежно від (ї) рівня та часу експресії ЕТ, (її) тканинної специфічності експресії ЕТ і (ії) відносної активності та цільової специфічності конкретного експресованого білка ЕТ. Наприклад, експресія ортологів білка ЕТ з інших видів рослин у сої може вказувати на слабкіший ефект у порівнянні з надекспресією ендогенного білка ЕТ (Ст.ЕТга) у сої, що може бути пов'язано з тим, що ненативні гомологи білка ЕТ мають нижчу активність у сої. Проте експресія деяких нативних білків ЕТ може не призводити до істотних фенотипічних ефектів, якщо вони мають відмінну спеціалізовану роль у своєму нативному стані або контексті. Різні білки ЕТ також можуть діяти на різні тканинні мішені та рецептори і, отже, мати різні ефекти на різні пов'язані з архітектурою рослин і цвітінням ознаки та фенотипи.

І180| Незалежно від рівня активності конкретного гомолога ЕТ зміна пов'язаних з генеративністю та архітектурою рослини фенотипів корелює з часом і локацією експресії ЕТ.

Експресія трансгенів ЕТ на вегетативній стадії може бути потрібна для індукції раннього цвітіння та/або збільшення числа флоральних меристем, квіток, бобів і т. ін. на вузол рослини.

Насправді, показано, що експресія ЕТ у меристематичних тканинах під час вегетативних стадій розвитку з відповідною дозою трансгена ЕТ викликає генеративні зміни у рослинах, які

Зо призводять до збільшення числа квіток, бобів та/або насіння на вузол. На противагу цьому, експресія трансгена Ст.ЕТга під управлінням переважних щодо листя промоторів призводила до дуже невеликих, у разі їх наявності, фенотипічних змін, у порівнянні з рослинами дикого типу.

Ці дані показують, що як час, так і тканинна специфічність (або тканинна переважність) експресії

ЕТ є важливими чинниками, які впливають на генеративні та/або пов'язані з врожайністю фенотипічні зміни у трансгенних рослинах.

І181| Представлені дані дозволяють припустити, що різні білюи ЕТ можуть мати різні рівні активності та/або різну тканинну специфічність, незважаючи на експресію з одним й тим самим промотором рЕгесіа. Хоча декілька конструкцій, які експресують Ст.ЕТг2а, 7т.2СМ8, МЕЕТ- подібний і Ст.ЕТ5а, викликали ранні цвітіння та термінацію окрім збільшення числа бобів на вузол, інші конструкції, які експресують Сіт.ЕТ2Ь і І еє.5ЕТ, чинили інші корелятивні ефекти на цвітіння. Експресія Ст.ЕТ2Бб не викликала ранні цвітіння та термінацію рослин, але й не відрізнялася істотним збільшенням числа бобів на вузол. З іншого боку, експресія І є.5ЕТ демонструвала збільшення числа бобів на вузол і ранню термінацію, незважаючи на затримку цвітіння. Цікаво, що збільшення числа бобів на вузол у ЕТ-трансгенних рослинах не корелює з подовженням генеративної стадії (РОКІК7) і не завжди супроводжувало раннє цвітіння (СОКЕКТ), як зазначено вище. Ці дані дозволяють припустити, що генеративні зміни у відповідь на експресію білків ЕТ у меристемі на вегетативній стадії можуть відбуватися за допомогою одного або більше незалежних механізмів або шляхів. Збільшення числа бобів на вузол у ЕТ- трансгенних рослинах може залежати від числа меристем суцвіть і флоральних меристем, індукованих з вегетативної меристеми у кожному вузлі, що може відбуватися незалежно від часу цвітіння та/або тривалості генеративної стадії. Проте, як зазначено вище, тривалість генеративної стадії не обов'язково може корелювати з тривалістю цвітіння.

Приклад 7. Ідентифікація додаткових меристематичних промоторів вегетативної стадії.

І182| Після спостереження фенотипічних ефектів з експресією Стт.ЕТ2а під управлінням меристемо-переважного промотора вегетативної стадії рАї.Егесіа, передбачається, що можна використовувати інші меристемо-переважні (меристемо-специфічні) промотори вегетативної стадії для управління експресією білків ЕТ для ініціації пов'язаних з генеративністю або врожайністю ознак або фенотипів у рослинах, таких як збільшене числом бобів на вузол (та/або на рослину або головне стебло). Використовуючи вивчений профіль експресії промотора рАї.Егесіа (дивіться приклад 2), були ідентифіковані інші меристемо-переважні (меристемо- специфічні) промотори вегетативної стадії з сої, картоплі та Агарідорзі5. Використовували два біоїнформаційні підходи для ідентифікації кандидатних генів з інших видів дводольних, включаючи, наприклад, Агарідорвіб5, сою, Медісадо, картоплю та томат, які мають схожі профілі експресії з рАїЕгесіа: ВАК Езргеззоїюд і Ехргеззіоп Апдієг. Дивіться, наприклад, ВАВ ехргез50109д ідепійісайоп: ехргеззіоп ргойе зітіїапу гапкіпуд ої пПотоіодоиз депез іп ріапі з5ресіє5,"

Ріапі У 71(6): 1038-50 (2012); і Тошйпдні, К еї аІ., "Те Воїапу Аітау Кезоигсе: е-МопНегпв,

Ехргезвіоп Апдіїпуд, апа рготоїег апаіузе5з, Ріапі У 43(1): 153-163 (2005). Отже, промоторні послідовності з цих генів були запропоновані для застосування у разі експресії трансгенів ЕТ відповідно до варіантів реалізації цього винаходу.

І183| Приклади промоторів генів, ідентифікованих у цьому аналізі, включають наступні: чотири гени рецептор-подібної кінази (КІ К) з сої, включаючи Сіута10938730 (5ЕО ІО МО: 33),

СіутабЗ9д2г7950 (5ЕО ІЮ МО: 34), СЇІутабйб4905900 (ЗЕО ІЮ МО: 35) і СІута17934380 (5ЕО ІО МО: 36). Додаткові приклади включають промотори гена рецептор-подібної кінази (РІК) з картоплі,

РєРОоБСОООЗОМРІА00032802 (5БО ІЮО МО: 37) їі РОБСО0ОЗОМРА0О0054040 (БО ІО МО: 38).

Можливо, що ці гени КІ К можуть бути структурно та/або функціонально спорідненими з генами

Егесіа і Егесіа-подібний з Агарідорзіз і інших видів, оскільки вони теж є генами КІК. Інші меристемо-переважні промотори вегетативної стадії з генів Агарідорзіз включають наступні:

Аї.МУВ17 (АК МІ2; АіЗ961250) (5ЕО ІО МО: 41), Кіпезіп-подібний ген (Аїб5а55520) (5ЕО І МО: 42), АР2/ВЗ-подібні гени, включаючи Аї.ВЕМ17 (ЗЕО ІЮ МО: 43) або Аї.ВЕМТІ9 їі гени Егесіа- подібний 1 і 2, АКЕТІ (ЗЕО ІЮ МО: 44) і АКЕпП2 (ЗЕО ІЮ МО: 45). Кожен з цих промоторів і схожих

Зо функціональних послідовностей може бути функціонально зв'язаний з геном ЕТ для ініціації ектопічної експресії генів ЕТ в одній або більше меристемах рослин щонайменше під час вегетативної (-их) стадії (-ій) розвитку.

І184| Щодо гена Аї.МУВ17 (АГКІ МІг) дивіться Разіоге, І. еї аІ., ЗАТЕ МЕКІЗТЕМ ІСЕМТІТУ 2 асів юдеїнег мій І ЕАЕУ 0 асіїмаєе АРЕТАГАТ1," ЮОемеІортепі 138: 3189-3198 (2011), повний зміст якої включено у цей документ за допомогою посилання. Щодо гена Кіпебхіп-ІїКе дивіться Ріенигу,

О еї аІ., "Пе Агарідорзів Іпаійапа Нотої!од ої Уеазі ВКЕ1 Наз а Еипсіоп іп СеїЇ Сусіє Кедшайоп дигіпуд Еапу Сеаї апа Коої Сгоулп," Ріапі Сеїї, 19(2): 417-432 (2007), повний зміст якої включено у цей документ за допомогою посилання. Щодо генів КЕМ17 і КЕМ19 Агабрідорвзі5 дивіться

Мапіеда?7а, О еї аї., "Апаїузіз ої (Ше Агарідорзіз ВЕМ депе Татіу ргедісів Тпсіоп5 дигіпа Помег демеІортепі," Апп Вої 114(7): 1507-1515 (2014), повний зміст якої включено у цей документ за допомогою посилання. Додатково щодо гена Аї.Еп2 дивіться "Зресіа! Із5це: Кесеріог-ІйКе

Кіпазев5," ЛРВ 55(12): 1181-1286 (2013), і, зокрема, ЗпракК, Е., "Оіїмегзе Коїе5 ої ЕВЕСТА ЕРатіу

Сепез іп Ріапї Оемеюортепі" УРВ 55(12): 1251-1263 (2013), повний зміст яких включено у цей документ за допомогою посилання.

Приклад 8. Експресія гена Ріоугегіпд Госи5 Т, С1т.ЕТга, під управлінням промотора рАї.Егії змінює час цвітіння та число бобів на вузол у сої. (185) Конструювали трансформаційний вектор, що містить От.ЕТ2а під управлінням меристемо-переважного промотора вегетативної стадії рАБЕН! (5ЕО ІЮ МО: 44) ії використовували для трансформації сої за допомогою Адгобасієгійт-опосередкованої трансформації. Трансгенні рослини, створені за допомогою цих подій, вивчали щодо їх фенотипів у теплиці з 14-14,5-годинним природним фотоперіодом світлового дня. Для кожної конструкції рАСЕНІ :Ст.РТ2а досліджували шість подій (б рослин на подію) у теплиці. Також досліджували шість рослин і проводили усереднення для контрольних рослин дикого типу (ДТ).

Також досліджували чотири події у полі з 12 паралельними ділянками поля на подію та порівнювали з контролями ДТ на тому самому полі. Для отримання фенотипічних характеристик цих рослин були зібрані наступні матриці та виражені у вигляді середнього для кожної події (а також рослин дикого типу) у разі вирощування у теплиці (дивіться таблицю 15) і у полі (дивіться таблицю 16). Також наведено колонку з усереднюванням по усіх подіях на ознаку.

Таблиця 15

Фенотипічні дані для рослин рАСЕг1:т.ЕТг2а і рослин ДТ, які вирощували у теплиці. ров? | 115 | 99,0 | 1097 | 990 | 990 | 930 | 91,7 | 101,7

РОВІН7 | 690 | 664 | 697 | 667 | 650 | 637 | 635 | 698

ВАРР | 23,5 | 74 | 160 | 60 | 97 | 13 | 43 | 73

МОРІ | 3074 | 113,0 | 246,3 | 8593 | 1720 | 340 | 507 | 900 (грами)

Таблиця 16

Фенотипічні дані для рослин рАСЕгІ1:т.ЕтТ2аї рослин ДТ, які вирощували у полі. 77711717.7.7.юЮМЮ | Дт | Середнє | Подія! | Подія2 | Подія4 | Подіяб

ВАРРАВ | 21 | 08 | 75 | тї2 | 03 | 03 мова | 80 | 32 | 56 | 52 | 10 | 09

РОРРАВ | 5601 | 578 | 574 | 606 | 531 | 602 тТРВАВ | 83 | 40 | 66 | 74 | 09 | 70 (унції)

І186) Трансгенні рослини сої, які експресують конструкцію рАїЕпПІ:Сст.ЕТга, цвіли раніше, ніж контрольні рослини дикого типу та мали збільшене число бобів на вузол (аналогічно рослинам, які експресують трансген Ст.ЕТ2а під управлінням промотора рАЇ.Егесіа).

Насправді, рослини сої, які експресують рАКЕІ:Ст.ЕТга, мали декілька фенотипів, схожих з рАї.Егесіа:Ст.ЕТ2а-трансгенними рослинами, включаючи менше число днів до цвітіння (СОКГКТ), менше число днів до К7 (ОК), менше число гілок на рослину (ВЕРР), менше вузлів на рослину (МОРІ), менше число бобів на рослину (РОРР), разом зі збільшенням числа бобів на вузол (таблиця 15) у порівнянні з контрольними рослинами дикого типу. Проте декілька фенотипів, спостережуваних у рослинах рАЇ.Егесіа:Сіт.ЕТга, таких як число бобів на головному стеблі (РОЮОМ5), число бобів на гілках (РООВЕ) і маса 1000 насіння (ЗУМ1000), були менш вираженими у трансгенних рослинах, які експресують рАКЕІ :С"т.ЕТга. Ранні результати на другий рік польових досліджень також продемонстрували раннє цвітіння, що вказує на схожі генеративні ознаки. Як наслідок, вимірювання для цих ознак можуть бути скорочені по-іншому, наприклад, РОРР або РООРР для числа бобів на рослину, РОМ5 або РООМ5 для числа бобів на головному стеблі, РОВК або РООВЕ для числа бобів на гілках, ТРВК для загального числа бобів на гілках і т. ін.

І187| Профіль експресії для промотора Егесіа-подібний 1 Агабідорвхі5 (рАї.ЕпІ) у сої, вимірюваний за забарвленням 55, є більш обмеженим, ніж профіль експресії рАї.Егесіа у сої,

описаний вище. рАїЕгп! управляє експресією 55 у вегетативних аксилярних меристемах і у ранніх флоральних меристемах, отриманих з аксилярної тканини. Проте забарвлення 55 не спостерігається в апікальній меристемі пагонів на будь-якій стадії, на якій її можна відрізнити від інших меристематичних тканин рослини, що розвивається. Експресія репортера БИ під управлінням промотора рАЇ.Егп! не спостерігається у тканині листя, стеблі або коренях на будь- якій стадії (дані не показані). Враховуючи, що експресія ЕТ під управлінням промотора рАїЕгесіа або рАКБЕЙІ індукувала раннє цвітіння та збільшення числа бобів на вузол, вегетативної експресії трансгена ЕТ у меристеме рослини або поблизу неї у цілому може бути досить для індукції цих пов'язаних з генеративністю та врожайністю фенотипів або ознак.

Приклад 9. Експресія мікроРНК, націленої на Ст.РТ2а для супресії

І188)| Було зроблене припущення, що зниження рівня експресії трансгена Ст.ЕТ2а під управлінням промотора вегетативної стадії у генеративних або флоральних тканинах за допомогою супресії РНК може подовжити генеративну стадію у рослинах сої. Щоб дослідити, чи впливає супресія ендогенного Сіт.ЕТга на генеративні або морфологічні фенотипи рослин сої, конструювали трансформаційний вектор, що містить послідовність ДНК придатну для транскрипції, яка кодує мікроРНК (мікроРНК-ЕТ2а; 5ЕБО ІО МО: 67), націлену на експресію ендогенного Ст.ЕТ2а під управлінням промотора пізньої вегетативної та/(або генеративної стадії, промотора рАїМАРІ (ЗЕО ІО МО: 49) або промотора роІ.МАО5Б-ВІМ (ЗЕО ІО МО: 72) і використовували для трансформації рослин сої за допомогою Адгобасієегйт-опосередкованої трансформації. Трансгенні рослини, створені за допомогою цих подій, вивчали у теплиці в умовах 14-14,5-годинного фотоперіоду світлового дня. Досліджували по шість рослин на подію та порівнювали у середньому з контрольними рослинами дикого типу (ДТ). Усереднені фенотипічні дані, отримані по рослинах рАРІ1: :тікМА-ЕТ і рослинах дикого типу у теплиці, наведено у таблиці 17. У таблиці 18 наведено фенотипічні спостереження для рослин РМАО5Б-

ВІМ::тіВАМА-НЕТ і рослин дикого типу у теплиці та виражено у вигляді середнього для кожної події та у вигляді середнього по подіях і рослинах дикого типу.

Таблиця 17

Фенотипічні дані для рослин рАР1 ::тівМА-ЕтТга і рослин ДТ, які вирощували у теплиці. 11111111 дт | 777 рАРІстіВМаЕТ СС

Потої; ДІ ПОКИ: ИН КОНТ: ПОН

І189| У тепличних умовах час і початок цвітіння у рослинах, які експресують конструкцію

Зо рАРІ::тівВМА-РТ2а, були приблизно такими самими, що й у контрольних рослинах ДТ.

Трансгенні рослини, які експресують конструкцію рАРІ::тівМА-ЕТ2а або рМАО5-ВІМ :тівМА-

ЕТ2а, також вирощували у польових умовах. Досліджували шість рослин, які містили чотири різні події конструкції рАРІ:тіАМА-РТ2а, і порівнювали у середньому з контрольними рослинами дикого типу (ДТ). У випадку польових експериментів вимірювання проводили під час збирання (стадія К8), якщо не зазначено інше. ЗОАККЗ представляє кількість насіння на площу (тобто на квадратний фут) на стадії К8. Усереднені фенотипічні дані, отримані для вирощених у полі рослин, наведено у таблиці 18 для конструкції рАР1::тівМА-ЕТга і у таблиці 20 для конструкції РМАО5-ВІМ::тівВМА-ЕТга.

Таблиця 18

Фенотипічні дані для вирощених у полі рослин рАР1::тікМА-ЕтТга і рослин ДТ. 77111117. | ДТ | Середнє | Подія! | Подія2 | Подія3 | Подія

Таблиця 18

Фенотипічні дані для вирощених у полі рослин рАР1::тікМА-ЕтТга і рослин ДТ. 77111111... | ДТ | Середнє | Подія! | Подія2 | Подія3 | Подія

ТРВВВ 7 177/79,5 | 80 | 68 | 98 | 80 | юЮД БГ7З (унції)

П90|У польових умовах рослини сої, трансформовані конструкцією рАР1І:тівМА-ЕТга знову мали у середньому приблизно такі самі ознаки цвітіння та генеративні ознаки, що й контрольні рослини ДТ, хоча рАР1::тійМА-ЕТга-трансгенні рослини могли мати трохи менше бобів (РОРРЕК8, РОМЗК8, ТРВЕ8, бобів/вузол) у порівнянні з контрольними рослинами ДТ на стадії К8.

Приклад 10. Модифікація експресії Ст.ЕТ2а штучною мікроРНК під управлінням промотора рАРІ, змінює генеративні фенотипи у тепличних умовах. 91|Щоб показати, що супресія Ст.ЕТ2а у пізніх вегетативних та/або генеративних тканинах після початкової ектопічної експресії трансгенного Ст.ЕТ2а може подовжувати генеративну стадію у рослинах сої та/або протидіяти ранній термінації, конструювали трансформаційний вектор, що містить Зт.ЕТ2а під управлінням меристемо-переважного промотора вегетативної стадії рАї.Егесіа (5ЕО ІЮО МО: 31) з областю термінатора Арх або І пср2 (Т-Арх і Т-І пера), і придатну для транскрипції молекулу ДНК, яка кодує штучну мікроРНК (ЗЕО

ІО МО: 67), націлену на Ст.ЕТга для супресії та під управлінням промотора рАсСАРІ (ЗЕО ІЮ

МО: 49) з областю термінатора САРОН (кожна конструкція позначена рАгСЕгесіа:Зт.Ет2а рАРІ::ті!йМА-ЕТ2а) і використовували для трансформації сої за допомогою Аагобасівгійт- опосередкованої трансформації. Трансгенні рослини, створені за допомогою цих подій, вивчали у теплиці з 14-14,5-годинним фотоперіодом світлового дня. Для кожної конструкції рАї.Егесіа:Ст.ЕТ2а | рАРІ::тівМА-РТ2а досліджували шість подій (б рослин на подію) і усереднювали дані. Усереднені дані для кожної конструкції також усереднювали по подіях.

Також досліджували шість контрольних рослин дикого типу (ДТ) і усереднювали як контроль. У таблицях 19 і 20 наведені фенотипічні дані, отримані для шести подій, а також середні значення для рослин рАСЕгесіа:бт.ЕТ2а | рАРІ:тівВМА-ЕТ2а і ДТ з двома різними областями термінатора (Т-Арх і Т-І перга).

Таблиця 19

Фенотипічні дані для рослин рАїЕгесіа:Ст.ЕТ2а:Т-Арх | рАРІ1 :тівМА-РТга::Т-САРОБН їі рослин

ДТ у тепличних умовах. рОгнТ | 33,5 | 2865 | - | з00 | 280 | 280 | 280 | 283

РОВІН7 | 765 | 701 | - | 688 | 703 | 650 | 742 | 720 мовА | 211,4 | 1771 | 268,8 | 2100 | 1700 | 900 | 168,3 | 15533

Таблиця 19

Фенотипічні дані для рослин рАїЕгесіа:Ст.ЕТ2а:Т-Арх | рАРІ1 :тівМА-РТга::Т-САРОБН їі рослин

ДТ у тепличних умовах. (грами)

Таблиця 20

Фенотипічні дані для рослин рАї.Егесіа:Сст.ЕТга:Т-І небр2г | рАРІ1 стівМА-ЕТга "Т-САРОН і рослин ДТ у тепличних умовах. рОгнТ | 3355 | 282 | 28 | - | 28 | 28 | 292 ДЮ ЖГ28

РОВІН7 | 765 | 7,7 | 686 | - | 73 | 718 | 703 | 747

ВАРР | 201 | 9 | 58 | 85 | 85 | 6З | 15 | 103

ЕМРІ | 214,6 | 130,05 | 1123 | 80 | 126,5 | 117 | 184,3 / 1628 (грами)

П192|У цьому експерименті у теплиці трансгенні рослини сої, що містять конструкції рАї.Егесіа:Ст.ЕТга | рАРІ1:тівМА-ЕТга, характеризувалися більш раннім початком цвітіння (СОНКТ) і збільшеним числом бобів на вузол (і на головне стебло) у порівнянні з контрольними рослинами ДТ (бобів/вузол, РОЮМ5). Трансгенні рослини з комбінованою конструкцією рАї.Егесіа:Ст.ЕТга | рАРІ1::тівМА-ЕТга мали велику висоту рослин і підвищене галуження, а також збільшене число вузлів на рослину (і на головне стебло) і збільшене число бобів на рослину (і на головне стебло) у порівнянні з рослинами сої тільки з трансгеном рАСЕгесіа:т.ЕТ2а без супресорної касети мікроРНК (дивіться, наприклад, таблицю 2). На Фіг. 12 наведено повні зображення рослин, гомозиготних щодо рАї.Егесіа:ст.ЕТ2а або рАї.Егесіа:Ст.ЕТ2а / рАР1::тівМА-ЕТга, які демонструють, що додаткова супресія трансгена

Ст.ЕТ2а є ефективною для пом'якшення фенотипів ранньої термінації, спостережуваних з одним трансгеном рАїЕгесіа:Сбт.ЕТ2а, включаючи невелику висоту рослин і зменшене галуження. 193) Ці дані показують, що супресія Ст.ЕТга у пізніх вегетативних та/або генеративних тканинах після більш ранньої ектопічної дози трансгена Сіт.ЕТ2а є ефективною для ініціації раннього цвітіння та збереження збільшеного числа бобів на вузол, пом'якшуючи при цьому фенотипи ранньої термінації, спостережувані у рослинах, що містять один трансген Ст.ЕтТга.

Цікаво, що збільшене число бобів на вузол у цих рослинах спостерігали без очевидного збільшення тривалості генеративної стадії.

Приклад 11. Модифікація експресії Ст.ЕТ2а штучною мікроРНК під управлінням промотора рАРІ, змінює генеративні фенотипи у польових умовах.

М94|Три з чотирьох трансформаційних подій (залежно від року) конструкції рАї.Егесіа:Ст.ЕТг2а:Т-Арх | рАР1 :тівМА-ЕТга::Т-САРОН, описаних у прикладі 10, вирощували та досліджували у польових умовах упродовж двох послідовних років. Для кожної з подій і контролю ДТ отримували та усереднювали фенотипічні дані (події пронумеровані для відповідності). У таблицях 21 і 22 наведено усереднені фенотипічні дані, отримані для цих рослин, а також у вигляді середнього по трьох подіях. (195) Чотири трансформаційні події конструкції рАї.Егесіа:Ст.ЕТга:тТ-І прсг | рАРІ тів МА-

ЕТ:Т-САРБН, описані у прикладі 10, вирощували та досліджували у польових умовах упродовж двох послідовних років. Для кожної події та контролю ДТ отримували та усереднювали фенотипічні дані по деякій кількості рослин. У таблицях 23 і 24 наведено усереднені фенотипічні дані, отримані для цих рослин, а також у вигляді середнього по чотирьох подіях.

Таблиця 21

Фенотипічні дані для рослин рАї.Егесіа:ст.ЕТ2а:Т-Арх | рАР1 стівМА-ЕТ :Т-САРОН і рослин

ДТ, вирощених у полі (рік 1).

ВАРРАВ | 26 | 09 | 71 | 70 | 05 (унції)

Таблиця 22

Фенотипічні дані для рослин рАї.Егесіа:ст.ЕТ2а:Т-Арх | рАР1 стівМА-ЕТ :Т-САРОН і рослин

ДТ, вирощених у полі (рік 2). 777777.7.7.7.7ЮИЮИ | ДТ | Середнє | Подія | Подіяз | Подія4 | Подіяб

ВАРРАВ 7721 | 09 | 1ї2 | 20 | 02 | 03 мова 77780 | 47 | 75 | 8 | 15 | 15

РОРРАВ 561 | 642 | 655 | 660 | 632 | 622 (унції)

Таблиця 23

Фенотипічні дані для рослин рАї.Егесіа:ст.ЕТ2а:т- І прсг | рАР1Т :тівМА-ЕТ :Т-САРОБН їі рослин

ДТ, вирощених у полі (рік 1). 77711117171.7юЮМЮ | ДТ | Середнє | Подія! | Подія | Подіяз | Подія4

ВАРРАВ | 26 | 06 | 04 | 04 | 06 | 10

ТРВАВ | 95 | ї2 | 05 |ЮюДж 60619 | 17 (унції)

Таблиця 24

Фенотипічні дані для рослин рАї.Егесіа:ст.ЕТ2а:т- І прсг | рАР1Т :тівМА-ЕТ :Т-САРОБН їі рослин

ДТ, вирощених у полі (рік 2). 77711717.7.7.юЮМЮ | Дт | Середнє | Подія! | Подія2 | Подія3 | Подія

ВАРРАВ | 21 | 07 | 03 | 03 | 06 | з мова | 80 | 18 | 08 | ї2 | 14 | 38

РОРРАВ | 5601 | 63,6 | 606 | 683 | 594 | 660

РОМ5В8 | 47,9 | 609 | 5858 | 655 | 580 | 612 (унції) 196) Рослини сої, які містять будь-яку з конструкцій рАї.Егесіа:СсСт.ЕТга | рАРІ::тівМА-

ЕТга (з будь-яким термінатором) цвіли раніше (БОРКІ) і мали трохи подовжену генеративну стадію (у днях) між стадіями КІ і К8 (РОКІКВ8) і збільшене число бобів на вузол (і на рослину) на стадії К8 (РОРРКЗ8, бобів/вузол) у разі вирощування у польових умовах у порівнянні з контрольними рослинами ДТ. Проте, рослини сої, які містять конструкцію рАї.Егесіа:Ст.ЕТга рАРІ::тівМА-ЕТга:Т-САРОН, також характеризувалися зменшеним галуженням (ВЕРРЕЗ8) у порівнянні з контрольними рослинами ДТ. Ранні результати на третій рік польових досліджень рослин з конструкцією рАїСЕгесіа:сот.ЕТ2а | рАРІ:тівМА-ЕТ2а:Т-САРОН /- також продемонстрували раннє цвітіння, що вказує на схожі генеративні ознаки.

І197| Ці польові результати показують, що обидві конструкції рАї.Егесіа:Ст.ЕТг2а рАРІ ::тівМА-ЕТга:Т-САРОН з різними термінаторами здатні підвищувати ознаки врожайності та пом'якшувати фенотипи ранньої термінації у польових умовах (дивіться, наприклад, приклад

З, вище), що узгоджується з тепличними даними, наведеними у прикладі 10, вище. Ці дані додатково підтримують модель, що супресія трансгена Ст.ЕТ2а допомагає зменшити або пом'якшити фенотипи ранньої термінації та архітектуру рослин, включаючи зменшення висоти рослин, галуження та числа вузлів на рослину (або на головне стебло), у порівнянні з експресією одного трансгена Ст.ЕтТга.

Приклад 12. Модифікація експресії Ст.ЕТ2а штучною мікроРНК під управлінням промотора роОІ.МАО55, змінює генеративні фенотипи у тепличних умовах.

П198| Окрім промотора рАРІ, використовували інші промотори генеративної стадії для експресії молекули мікроРНК, націленої на трансген Ст.РТ2а для супресії. В одній групі експериментів конструювали трансформаційний вектор, що містить зт.ЕТ2а під управлінням промотора рАЇї.Егесіа і послідовність ДНК придатну для транскрипції, яка кодує штучну мікроРНК, націлену на Ст. ЕТ2а для супресії та під управлінням промотора Зоіапит

Іусорегзісит МАО55 (рбі.МАО55; 5ЕО ІЮ МО: 71) і використовували для трансформації сої за допомогою Адгорасіегійт-опосередкованої трансформації. Трансгенні рослини, створені за допомогою цих подій, вивчали щодо їх фенотипів у теплиці з 14-14,5-годинним фотоперіодом світлового дня. Для кожної конструкції рАї.Егесїа:ст.ЕТ2а:тТ-Ійср2 | роІ.МАО55:тівМА-

ЕТг2а:Т-САРОН досліджували шість подій (б рослин на подію). Також досліджували шість рослин і проводили усереднення для контрольних рослин дикого типу (ДТ).

І199| У таблиці 25 наведено усереднені фенотипічні дані для кожної події та рослини ДІ і усереднене значення за кожною ознакою по усіх досліджуваних подіях. («--» означає, що дані не отримані)

Таблиця 25

Фенотипічні дані для рослин рАї.Егесіа:Зт.ЕТ2а:Т-І пера | рР5І.МАО55 стівМА-ЕТ: :Т-САРОНі рослин ДТ у тепличних умовах.

ОгВТ 1 1933,5 | 280 | 280 |- щ |- | - 1 - | 280

РОВІН7 176,65 | 585 | 560 |- щ | - |- | - | 610

ВАРР 12011721 1110 | 75 | - | 40 | 20 | 20

МВА 1906 1. .79 | 30 | 50 | - | 165 | 77 | 73

МОВА 2114 1 84 | 30 | 60 |- | 170 | 80 | 80

РЕМВ 904 | 946 | 1000 | 875 |- | 984 | 952 | 921

РЕММ 1 878 | 966 | 958 | 975 | 97,8 | 990 | 949 | 949

РООВА 4873 | 120 | 30 | 55 | - | 330 | 97 | 8,7 (грами) (200| Аналогічно з попередніми прикладами, обмеження ектопічної експресії Сх1т.ЕТг2а за допомогою штучної мікроРНК, яка експресується у генеративних тканинах, призводило до отримання рослин сої, які цвіли раніше (СОРЕКІ), ніж контрольні рослини ДТ. Проте трансгенні рослини сої, які містять конструкцію рАї.Егесіа:Ссіт.ЕТга:Т-І Нераг | роІ.МАО55 :тівМА-ЕТга:т-

САРОН, мали менше бобів на рослину (РОРР), менше вузлів на рослину (МОРІ), зменшене число гілок (ВКРР), менше насіння на рослину на стадії К8 (5ОРР8В) і меншу тривалість генеративної стадії між стадіями КІ і К7 (РОК1ТК?7) у порівнянні з контрольними рослинами ДТ, хоча ці трансгенні рослини мали більше число бобів на вузол (і на головне стебло) у порівнянні з контрольними рослинами ДТ (бобів/вузол, РОЮОМ5) і фенотипи з поліпшеною архітектурою рослин у порівнянні з експресією одного рАї.Егесіа:Сіт.ЕТга (дивіться, наприклад, таблицю 2). (2011 Ці дані додатково підтримують модель, що супресія трансгена Ст.ЕТ2а допомагає зменшити або пом'якшити фенотипи ранньої термінації з одним трансгеном Ст.ЕТга, але експресія мікроРНК-ЕТ2а з промотором РМАЮО55 може не бути настільки ефективною, як у разі промотора рАРІ, щодо пом'якшення фенотипів ранньої термінації.

Приклад 13. Модифікація експресії Ст.ЕТ2а штучною мікроРНК під управлінням промотора роОІ.МАО55, змінює генеративні фенотипи у полі. (202| Трансгенні рослини, які містять три або чотири трансформаційні події конструкції рАї.Егесіа:Ст.ЕТ2а | розі. мМАр55:тівВМА-РТ2а, описані у прикладі 12, вирощували та досліджували у польових умовах упродовж двох послідовних років. У випадку кожної події та контролю ДТ отримували дані для шести рослин (події пронумеровані для відповідності). У таблицях 26 і 27 наведено усереднені фенотипічні дані, отримані для кожної події та контролю

ДТ й усереднене значення за кожною ознакою по усіх подіях.

Таблиця 26

Фенотипічні дані для рослин рАї.Егесіа:Зт.ЕТ2а:Т-І пера | реІ.МАО55 :тівМА-ЕТга:Т-САРОН і рослин ДТ, вирощених у полі (рік 1).

ВАРРАВ | 2617011 17710111 111100 | о.

ТРВВВ 7 | 795 ющЩ | 02 | 03 | 00 | 03 (унції)

Таблиця 27

Фенотипічні дані для рослин рАї.Егесіа:Зт.ЕТ2а:Т-І пере | рої е-МАО55::тівМА-ЕТга :т-

САРБН і рослин ДТ, вирощених у полі (рік 2). 777771771.7.7.юЮМЮ | Дт | Середнє | Подія2 | Подія3 | Подія4 | Подія моввнВ | 80 | 11 | 08 | 08 | 20 | 07 (унції) (2ОЗ| Рослини сої, які містять конструкцію рАї.Егесіа:Ст.РТга | рб5І.МАО55::тівМА-ЕТга, цвіли раніше (ООЕКТІ) і мали трохи подовжену генеративну стадію (у днях) між стадіями КІ і Кв (РОКІ1Р8) і збільшене число бобів на вузол на стадії К8 (бобів/вузол) у польових умовах у порівнянні з контрольними рослинами ДТ. Проте, рослини сої, які містять конструкцію рАї.Егесіа:сбт.ЕТ2а | рзІ.МАО55:тівМА-РТ2а, також характеризувалися зменшеним галуженням (ВКРРЕЗ8) у порівнянні з контрольними рослинами ДТ.

Приклад 14. Модифікація експресії Ст.ЕТ2а штучною мікроРНК під управлінням промотора рОЇ.МОб, змінює генеративні фенотипи у тепличних умовах.

(2041 Третій промотор (роІ.МОб), що регулює експресію мікроРНК-ЕТ2а, також досліджували у тепличних умовах. Конструювали трансформаційний вектор, що містить Зт.ЕТ2а під управлінням промотора рАїСЕгесіа (5ЕБО ІЮ МО: 31) і послідовність ДНК придатну для транскрипції, яка кодує мікроРНК-РТ2а (5ЕО ІЮО МО : 67) під управлінням промотора Зоїапит

Іусорегзісшт МОЮ (рбІ.МОЮ; 5ЕБЕО ІО МО: 70) і використовували для трансформації сої за допомогою Адгобасієгішт-опосередкованої трансформації. Трансгенні рослини, що містять шість подій цієї конструкції рАгЕгесіа:Зт.ЕТ2а | реІ.МОр ::тівМА-ЕТза (шість рослин на подію), вирощували у теплиці з 14-14,5-годинним фотоперіодом світлового дня. Дані отримували для шести рослин для кожної події та контролю дикого типу (ДТ). У таблиці 28 наведено усереднені фенотипічні дані, отримані для кожної події та контролю ДТ й усереднене значення за кожною ознакою по усіх подіях.

Таблиця 28

Фенотипічні дані для вирощених у теплиці рослин рАї.Егесіа:ст.ЕТга | реІ.МОО :тікМА-ЕтТга і рослин ДТ. рон? | 1073 | 909 / 872 | 860 | 968 | 860 | 860 | 996

РОВІН7 | 673 | 705 | 668 | 656 | 76,0 | 654 | 660 | 794

ВАРР 11179 1 33 | - | 20 | 77 | 15 | 20 | -

МВА 1 1823 | 343 | - | 190 | 1060 | 45 | 75 | -

МОВА 12310 1 373 | - | 200 | 1140 | 55 | 95 | -

РЕМВ 71 78,9 1 856 | - | 950 | 933 | 750 | 789 | -

РООВА 0 584,8 126,5 | - | 1000 | 3903 | 50 | 7105 | -

Бобів/!вузол. | 2,7. | 5б | 63 | 65 | 39 | 48 | 59 | 68 (грами) (2О5І| Рослини сої, які містять конструкцію рАї.Егесіа:ст.ЕТга | реІ.МОО::тівМА-ЕТга, цвіли раніше (ООРКІ), ніж контрольні рослини ДТ і мали коротшу генеративну стадію (РОКІТК?7), менше гілок на рослину (ВКРР), менше вузлів на рослину (МОРІ) і менше бобів на рослину (РОРР) у теплиці у порівнянні з контрольними рослинами ДТ. Проте ці трансгенні рослини мали більше число бобів на вузол (і на головне стебло) у порівнянні з рослинами ДТ (бобів/вузол,

РОЮМ5) і фенотипи з поліпшеною архітектурою рослин у порівнянні з експресією одного рАї.Егесіа:Ст. ЕТга (дивіться, наприклад, таблицю 2). (206) Ці дані додатково підтримують модель, що супресія трансгена Ст.ЕТ2а допомагає зменшити або пом'якшити фенотипи ранньої термінації, але експресія мікроРНК-ЕТ2а під управлінням промотора роІ.МОЮ може не бути настільки ж ефективною, як у разі промотора рАРІ, у сенсі пом'якшення фенотипів ранньої термінації, хоча ці трансгенні рослини мали більше число бобів на вузол (і на головне стебло), ніж контрольні рослини ДТ (бобів/вузол,

РОЮМ5).

Приклад 15. Модифікація ектопічної експресії Ст.ЕТг2а за допомогою цільового сайту для гетерологічної тік172 змінює генеративні фенотипи у тепличних умовах. (207| В якості альтернативного підходу для супресії (х4т.ЕТ2а створювали конструкції, які

Зо містять трансген Ст.ЕтТга і сконструйовану мішень або сайт зв'язування (або сенсор) мікроРНК, який розпізнається ендогенною мікроРНК у сої, які слугували для послаблення та/або коригування ектопічної експресії трансгена Ст.ЕТга. Конструювали трансформаційні вектори, що містять бт.ЕТ2а під управлінням промотора рАїЕгесіа (ЗЕО ІЮ МО: 31) з областю термінатора Арх або І пср2 (Т-Арх і Т-І пебг), і додатково містять послідовність (ЗЕО ІЮ МО: 98), яка кодує цільовий сайт мікроРНК тік172 (ЗЕО ІЮ МО: 99) у мРНК трансгенного Сіт.ЕтТга і використовували для трансформації сої за допомогою Адгобасієгійт-опосередкованої трансформації. Трансгенні рослини, створені за допомогою цих подій, вивчали щодо їх фенотипів у теплиці з 14-14,5-годинним фотоперіодом світлового дня. Для кожної з двох конструкцій рАї.Егесіа:ст.ЕТ2а з сайтом зв'язування тік172 досліджували шість подій (6 рослин на подію). Також досліджували шість рослин і проводили усереднення для контрольних рослин дикого типу (ДТ). У таблицях 29 і 30 наведено усереднені фенотипічні дані, отримані для кожної події та контролю ДТ для кожної з двох конструкцій і усереднене значення за кожною ознакою по усіх досліджуваних подіях.

Таблиця 29

Фенотипічні дані для рослин рАї.Егесіа :Сіт.ЕТга:Т-Арх / цільовий сайт тік172 і рослин ДТ. рОгнТ | 3355 | 280 | - | 280 | - | - | - | -

РОВІ? | 765 | 645 | - | 645| - | - | - | -

ВАРР | 201 | 39 | 15 | 40 | - | 115 | 15 | 10

МВА | 1906 | 216 | 40 | 213 | - | 750 | 33 | 45 мова | 2114 | 268 | 40 | 253 | - | 965 | 35 | 45

РЕМВ | 904 | 931 | 7000 | 837 | - | 8893 | 93,8 | 100

РЕМ5 | 714 | 934 | 974 | 909 | 991 | 822 | 934 | 97,7

РООВА | 4873 | 608 | 45 | 820 | - | 2060 50 | 65

Бобів'луол.ї | 24 | 64 | 74 | 67 | 75 | бл | 39 | 68 (грами)

Таблиця 30

Фенотипічні дані для рослин рАСЕгесіа:Зт.ЕТг2а::тТ-І пер2 / цільовий сайт тікК172 і рослин ДТ. рон? | 1165 | 999 | 966 | 880 | 970 123,0 1024 | 927

ЕМРІ | 1858 | 657 | 690 | 243 | 320 128,39 703 | 703

РЕМ5 | 690 | 864 | 945 | 947 | 964 | 664 | 713 | 951

РООВА | 5048 | 158,8 | 131,7 | 80 | 8,5 478,5 150,5 | 1753

Таблиця 30

Фенотипічні дані для рослин рАСЕгесіа:Зт.ЕТг2а::тТ-І пер2 / цільовий сайт тікК172 і рослин ДТ. (грами (208) Рослини сої, які містять будь-яку з двох конструкцій рАї.Егесіа:Ст.ЕТга / цільовий сайт тік172, цвіли раніше (ОЕКІ), але характеризувалися зменшеним галуженням (ВЕКРР) і меншим числом бобів і вузлів на рослину (РОРР, МОРІ) у порівнянні з контрольними рослинами

ДТ. Проте ці трансгенні рослини мали більше число бобів на вузол (і на головне стебло) у порівнянні з контрольними рослинами ДТ (бобів/вузол, РОЮМ5) і фенотипи з поліпшеною архітектурою рослин у порівнянні з експресією одного рАї.Егесіа:С1т.ЕТга (дивіться таблицю 2). (2091 Ці дані підтримують гіпотезу, що супресія трансгена Сіт.ЕТга за допомогою цільового сайту для ендогенної тік172 є ефективною для зменшення або пом'якшення фенотипів ранньої термінації, спостережуваних у разі експресії трансгена Ст.ЕТ2а, але супресія трансгена

Ст.ЕТга за допомогою цільового сайту для сконструйованої тік172 може не бути настільки ж ефективною (щонайменше у деяких випадках), як експресія штучної мікроРНК для супресії

Ст.ЕТга з використанням промотора пізньої вегетативної та/або генеративної стадії, такого як промотор рАРІ, для пом'якшення фенотипів ранньої термінації, хоча Сіт.ЕТга-трансгенні рослини, які містять цільовий сайт тік172, мали більше число бобів на вузол (і на головне стебло), ніж контрольні рослини ДТ (бобів/вузол, РОЮОМ5) з фенотипами з поліпшеною архітектурою рослин у порівнянні з експресією одного С1т.ЕТга. На Фіг. 13 наведено повні зображення рослин, гомозиготних щодо рАЇ.Егесіа:Сіт.ЕТга або рАїЇ.Егесіа:Ст.ЕТга / цільовий сайт тік172, які демонструють, що додаткова супресія за допомогою цільового сайту тік172 є ефективною для пом'якшення фенотипів ранньої термінації, спостережуваних з одним трансгеном рАї.Егесіа:Ст.ЕтТга, включаючи невелику висоту рослин і зменшене галуження.

Приклад 16. Модифікація ектопічної експресії Ст.ЕТг2а за допомогою цільового сайту для тік172 змінює генеративні фенотипи у польових умовах. (210| Трансгенні рослини, що містять чотири трансформаційні події конструкції рАї.Егесіа:Ст.ЕТ2а:Т-Арх / цільовий сайт тік172, описані у прикладі 15, вирощували та досліджували у польових умовах. Події 1-4 у таблиці 29 відповідають подіям 1-4 у таблиці 31, відповідно. Дані отримували для шести рослин для кожної події та контролю ДТ. У таблиці 31 наведено усереднені фенотипічні дані, отримані для кожної події та контролю ДТ й усереднене значення за кожною ознакою по усіх подіях.

Зо

Таблиця 31

Фенотипічні дані для вирощених у полі рослин рАї.Егесіа:Зт.ЕТ2а:Т-Арх / цільовий сайт тік172 і рослин ДТ. 77771111.1.7.юЮМШЦЮ| Дт | Середнє | Подія! | Подія2 | Подія3 | Подія мом5не | 71893 | 708 | 125 | 112 | 107 | 898 (211) Аналогічно тепличним даним, рослини сої з конструкцією рАї.Егесіїа:Ссіт.ЕТга:Т-Арх / цільовий сайт тік172 цвіли раніше (ОЕКТ) і мали більше число бобів на вузол (і на головне стебло) на стадії КВ (РОРРКЗ, бобів/вузол) у польових умовах у порівнянні з контрольними рослинами ДТ. Проте ці рослини сої з конструкцією рАї.Егесіа:Ст.ЕТга:Т-Арх / цільовий сайт тік172 також мали зменшене галуження (ВЕРРЕЗ8) і зменшене число бобів і вузлів на рослину (РОРРКЗ8, МОРІ К8) у порівнянні з контрольними рослинами ДТ.

Приклад 17. Модифікація ектопічної експресії Ст.ЕТг2а за допомогою усіченого промотора рАїСЕгесіа і цільового сайту для гетерологічної тік172 змінює генеративні фенотипи у тепличних умовах. (212| Усічений промотор рАї.Егесіа використовували для управління послабленим рівнем експресії трансгена Ст.ЕРТ2а і сполучали з цільовим сайтом для мікроРНК тік172, щоб можливо додатково послабити та/або скоректувати ектопічну експресію трансгена Ст.ЕтТга.

Конструювали трансформаційні вектори, що містять трансген Ст.ЕТ2а під управлінням усіченого промотора рАї.Егесіа (5ЕО ІЮ МО: 32) з областю термінатора І йпср2 (Т-І пса), і додатково містять послідовність (5ЕО ІЮ МО: 98), яка кодує цільовий сайт тік172 (ЗЕО ІЮО МО: 99) і використовували для трансформації рослин сої за допомогою Адгобасівегит- опосередкованої трансформації. Трансгенні рослини, створені за допомогою цих подій, вивчали щодо їх фенотипів у теплиці з 14-14,5-годинним фотоперіодом світлового дня. Для конструкції рАг.Егесіа ігипсагейа:ст.ЕтТга з цільовим сайтом тік172 досліджували шість подій (б рослин на подію). Також досліджували шість рослин і проводили усереднення для контрольних рослин дикого типу (ДТ). У таблиці 32 наведено усереднені фенотипічні дані, отримані для кожної події та контролю ДТ й усереднене значення за кожною ознакою по усіх досліджуваних подіях.

Таблиця 32

Фенотипічні дані для рослин рЕгесіа ігипсаїей::зт.ЕТга::т-І пБрс2 / цільовий сайт тікК172 і рослин ДТ.

РЕМ5 1 690 | 721 | 780 | 970 | 743 | 672 | 530 | 632 паб о 1ве,) нм, лев ітев) зво | ово тва | то (грами) (213) Рослини сої, які містять конструкцію рЕгесіа Мипсаїєд:сСт.ЕТга:Т-І пЬс2 / цільовий сайт тік172, цвіли раніше (ОЕКІ), але характеризувалися трохи зменшеним галуженням (ВКРР) ії меншим числом вузлів на рослину (МОРІ) у порівнянні з контрольними рослинами ДТ.

Проте ці трансгенні рослини мали більше число бобів на вузол (і на головне стебло) у порівнянні з контрольними рослинами ДТ (бобів/вузол, РОЮМ5) і фенотипи з поліпшеною архітектурою рослин у порівнянні з експресією одного рАЇ.Егесіа:Сіт.ЕТга (дивіться, наприклад, таблицю 2).

Зо (2141 Ці дані підтримують гіпотезу, що супресія трансгена Сіт.ЕТга за допомогою цільового сайту для ендогенної тік172 є ефективною для зменшення або пом'якшення ранньої термінації, спостережуваної у разі експресії трансгена Сіт.ЕТга, та/або що експресія трансгена

Ст.ЕТга з усіченим промотором рАїЕгесіа може додатково пом'якшувати фенотипи ранньої термінації для експресії одного Ст.ЕтТ га.

Приклад 18. Модифікація ектопічної експресії Ст.ЕТг2а за допомогою усіченого промотора рАїг.Егесіа і цільового сайту тік172 змінює генеративні фенотипи у полі. (215) Трансгенні рослини щодо трьох подій конструкції рАї.Егесіа ігипсаївд:Ст.ЕТг2а:тТ-

Гпрсг / цільовий сайт тік172, описані у прикладі 18, вирощували та досліджували у польових умовах. Події 1, 2 ії 5 у таблиці 32 відповідають подіям 1-3 у таблиці 33, відповідно. Дані отримували для шести рослин для кожної події та контролю ДТ. У таблиці 33 наведено усереднені фенотипічні дані для кожної події та контролю ДТ й усереднене значення за кожною ознакою по усіх подіях.

Таблиця 33

Фенотипічні дані для рослин рЕгесіа ігипсаїей::зт.ЕТга::т-І пБрс2 / цільовий сайт тікК172 і рослин ДТ у полі.

ВАРРАВ 7 | 26 | 07 | 70 | 00 | м (унції) (216) Аналогічно тепличним даним, рослини сої З конструкцією рАї.Егесіа пипсаїєд:ст.ЕТ2а / цільовий сайт тік172 цвіли раніше (ОЕМ) і мали більше число бобів на вузол (і на головне стебло) на стадії 8 (РОМ5К8, бобів/вузол) у польових умовах у порівнянні з контрольними рослинами ДТ. Проте ці рослини сої з конструкцією рАї.Егесіа Шпипсаїєд:и:ст.ЕТ2а / цільовий сайт тік172 також мали зменшене галуження (ВКЕРРЕЗ8) і зменшене число бобів і вузлів на рослину (МОРІ К8) у порівнянні з контрольними рослинами ДТ.

Приклад 19. Модифікація ектопічної експресії Сбет.ЕТ2а і нативної експресії Ст.ЕТга,

Ст.ЕТ5а ії Ст.ЕТ5Б у сої за допомогою штучної мікроРНК змінює генеративні фенотипи. (217| Конструювали трансформаційний вектор і використовували для трансформації рослин сої за допомогою Адгобасіегйт-опосередкованої трансформації, при цьому вектор містив трансген Сіт.ЕТ2а, як описано вище, під управлінням меристемо-переважного промотора вегетативної стадії рАїЕгесіа (ЗЕО І МО: 31) з областю термінатора І йср2 (Т-І Пера), і послідовність ДНК придатну для транскрипції, що кодує штучну мікроРНК (ЗЕО ІЮ МО: 102), яка націлена не лише на Ст.ЕТга (ектопічний і ендогенний), але також на ендогенні гени Ст.ЕТ5а і

Ст.ЕТ5Б для супресії, при цьому послідовність ДНК придатна для транскрипції, що кодує мікроРНК, знаходиться під управлінням промотора рАїСАРІ (5ЕБЕО ІО МО: 49) з областю термінатора САРОН. Трансгенні рослини, створені за допомогою цих подій, вивчали у теплиці в

Зо умовах 14-14,5-годинного фотоперіоду світлового дня. Дані отримували для шести рослин для кожної події та контролю ДТ. У таблиці 34 наведено усереднені фенотипічні дані, отримані для кожної події та контролю ДТ й усереднене значення за кожною ознакою по усіх подіях.

Таблиця 34

Фенотипічні дані для рослин рАї.Егесіа:ст.ЕТ2а:т-І прсг | рАР1 :тівМА-ЕТг2а/ЕТ5а/гт5ри:ит-

САРБН і рослин ДТ, вирощених у теплиці.

ВАРРАВ | 16,8. 99 | 13,8 | 127 | 122 | 18 | 890 | 97 моване | 225,8 609 | 643 | 723 | 938 | 92 | 553 | 707

РОМОМ5НВ| 23 / 60 | бе | 66 | 52 | 54 | 66 | 57 (грами) (218) У таблиці 34 наведено вимірювання деяких додаткових ознак, включаючи РОМОВАНВ8 (число бобів на вузол на гілках) і РОМОМ5НА8 (число бобів на вузол на головному стеблі) на стадії КВ, РНТЕКЗ8 (висота рослини на стадії К8 у міліметрах), ЗОРОКЗВ (число насіння на біб на

К8) і МОМ (число насіння она рослину). Рослини сої, які експресують касету рАї.Егесіа:Ст.ЕТ2а з комбінованою супресією Сит.ЕТ2а, Ст.ЕТба і Ст.ЕТ5БЬ, цвіли раніше (ОРЕ) і мали істотно збільшене число бобів на вузол (і збільшене число бобів на головному стеблі), але зменшене галуження у порівнянні з контрольними рослинами ДТ.

Приклад 20. Експресія ектопічного (4т.ЕТ2а під управлінням промотора рАРІ змінює час цвітіння та число бобів на вузол у сої. (219| Конструювали трансформаційний вектор, що містить От.ЕТ2а під управлінням промотора рАЇ.АРІ з областю термінатора І псбг, і використовували для трансформації сої за допомогою Адгорасіегійт-опосередкованої трансформації. Трансгенні рослини, створені за допомогою цих подій, вивчали у теплиці з 14-14,5-годинним фотоперіодом світлового дня. Дані отримували для шести рослин для кожної події та контролю ДТ. У таблиці 35 наведено усереднені фенотипічні дані, отримані для кожної події та контролю ДТ й усереднене значення за кожною ознакою по усіх подіях.

Таблиця 35

Фенотипічні дані для рослин рАСАР1::т.ЕтТга::Т-І прсаг і рослин ДТ, які вирощували у теплиці.

РОВІН?7 | 683 | 666 | 645 | 6б2 | 673 | 655 | 672 | 692

Таблиця 35

Фенотипічні дані для рослин рАСАР1::т.ЕтТга::Т-І прсаг і рослин ДТ, які вирощували у теплиці. (грами) (220 Рослини сої, які експресують касету рАгКАРІ Ст. ЕТга:тТ-І прсг, цвіли раніше (БОЕРІ1) і мали істотно збільшене число бобів на вузол (і збільшене число бобів на головному стеблі), але зменшене галуження у порівнянні з контрольними рослинами ДТ. Ранні польові дослідження з цією конструкцією також продемонстрували раннє цвітіння, показуючи, таким чином, що у рослинах, які вирощуються у польових умовах, спостерігатимуться схожі генеративні ознаки.

Приклад 21. Експресія ектопічного Ст. ЕТга під управлінням промотора роі.Моа у сої. (221| Конструювали трансформаційний вектор, що містить От.ЕТ2а під управлінням промотора рзі.Моа з областю термінатора І песбг, і використовували для трансформації сої за допомогою Адгорасіегійт-опосередкованої трансформації. Трансгенні рослини, створені за допомогою цих подій, вивчали у теплиці з 14-14,5-годинним фотоперіодом світлового дня. Дані отримували для шести рослин для кожної події та контролю ДТ. У таблиці 36 наведено усереднені фенотипічні дані, отримані для кожної події та контролю ДТ й усереднене значення за кожною ознакою по усіх подіях.

Таблиця 36

Фенотипічні дані для рослин рзі.Моа:т.ЕТга::Т-І прог і рослин ДТ у теплиці. (грами) (222|У цих експериментах не спостерігали істотних змін між рослинами рої. Моасст.ЕТ2га:Т-ЇйЬс2 і рослинами ДТ. Ранні польові результати з цією конструкцією додатково показують відсутність змін на початку цвітіння.

Приклад 22. Модифікація Ст.ЕТ2а під управлінням промотора рАЕЙІ за допомогою штучної мікроРНК під управлінням промотора рзІ.МАО5-КІМ у сої. (223|Щоб перевірити гіпотезу, що супресія Ситт.ЕТ2а у пізніх вегетативних та/або генеративних тканинах після початкової ектопічної експресії трансгенного Ст.ЕТ2га може подовжувати генеративну стадію у рослинах сої, конструювали трансформаційний вектор, що містить Зт.ЕТ2а під управлінням меристемо-переважного промотора вегетативної стадії рАСЕМІ (5ЕБЕО ІЮ МО: 44) з областю термінатора САРОН (Т-САРОН), і послідовність. ДНК придатну для транскрипції, що кодує штучну мікроРНК (ЗЕО І МО: 67), націлену на Ст.ЕТга

Б для супресії та під управлінням промотора розІ.МАЮ5-КІМ (ЗЕБЕО І МО: 72) з областю термінатора Т-Арх і використовували для трансформації сої за допомогою Адгобасієгійт- опосередкованої трансформації. Трансгенні рослини, створені за допомогою цих подій, вивчали у теплиці з 14-14,5-годинним фотоперіодом світлового дня. Дані отримували для шести рослин для кожної події та контролю ДТ. У таблиці 37 наведено усереднені фенотипічні дані, отримані для кожної події та контролю ДТ й усереднене значення за кожною ознакою по усіх подіях.

Таблиця 37

Фенотипічні дані для рослин рАСЕГгІ1::5т.ЕТ2а:Т-САРОН | реІ.МАО5-ВІМ:тівМА-ЕТга:: Т-Арх і рослин ДТ, які вирощували у теплиці. ров? | 107,5 | 999 | 98,7 | 985 / 990 | 1058 | 1010 | 965 (грами) (224|Рослини сої, які експресують касети рАСЕП1:От.ЕТ2а:Т-ЗАРОН | роіІ.МАО5Б-

ВІМ::тівВМА-ЕТ2а, цвіли трохи раніше (СОНРКТ) і мали трохи збільшене число бобів на вузол (і трохи збільшене число бобів на головному стеблі) і помірне зменшення галуження у порівнянні з контрольними рослинами ДТ. Ранні польові результати з цією конструкцією також продемонстрували помірно-раннє цвітіння, показуючи, що у рослинах, вирощуваних у польових умовах, спостерігатимуться схожі помірні зміни у генеративних ознаках.

Приклад 23. Модифікація ектопічної експресії (т.ЕТ2а за допомогою промотора рАЇ.Е і сенсора тік156 змінює час цвітіння. (225) Конструювали трансформаційний вектор, що містить От.ЕТ2а під управлінням меристемо-переважного промотора вегетативної стадії рАїЕПІ (ЗЕО ІЮ МО: 44) з цільовим сайтом тік156 (ЗЕО ІЮ МО: 106) і областю термінатора САРОН (Т-САРОН) і використовували для трансформації сої за допомогою Адгобасієгішт-опосередкованої трансформації. Трансгенні рослини, створені за допомогою цих подій, досліджували у полі. Дані отримували для шести рослин для кожної події та контролю ДТ. Ранні польові результати з цією конструкцією продемонстрували раннє цвітіння, показуючи, що у рослинах, вирощуваних у теплиці або у полі, ймовірно спостерігатимуться помірні зміни у генеративних ознаках, включаючи збільшене число бобів на вузол.

Зо Приклад 24. Модифікація ектопічної експресії Ст.ЕТг2а за допомогою усіченого промотора рАг.Егесіа змінює час цвітіння. (226| Конструювали трансформаційний вектор, що містить ст.ЕТ2а під управлінням більш короткого усіченого промотора рАїЕгесіа (ЗЕО ІЮ МО: 48) з областю термінатора Іпсба2 (Т-

І пер2г) ї використовували для трансформації сої за допомогою Аадагобасієгіит-опосередкованої трансформації. Трансгенні рослини, створені за допомогою цих подій, досліджували у полі. Дані отримували для шести рослин для кожної події та контролю ДТ. Ранні польові результати з цією конструкцією продемонстрували трохи більш ранній початок цвітіння, показуючи, що у рослинах, вирощуваних у теплиці або у полі, ймовірно спостерігатимуться невеликі або помірні зміни у генеративних ознаках, включаючи трохи збільшене число бобів на вузол.

Таким чином, найбільш послаблені генеративні фенотипи та пом'якшені ефекти ранньої термінації можуть забезпечуватися цим більш мінімальним усіченим промотором рАїЇ.Егесіа (у порівнянні з прикладами З і 17).

(227| Після детального опису цього винаходу стане очевидною можливість модифікацій, варіацій і еквівалентних варіантів реалізації без відступу від суті та об'єму цього винаходу, описаного у цьому документі та формулі винаходу, що додається.

Крім того, слід розуміти, що усі приклади у цьому описі наведено в якості необмежуючих прикладів.

й г пф тм УП КуН на я КОМ У ВН

ИОЛСтж; МИХ ВКА сТМлЙртІдАИ У ТАК у жожнє МУХА КИ СМАКАМ АТОК

ЄВИ тут аж

ПпРОМІМЦЄЕ ВК; ЗЕ гудот Фк

ШІКХ,. ЖТНаляУ Зк певен перуку

ПВЕВЕВТ, Клхай нн НН

ШшОБООНМІСХ. Дівка ех зу х, КУ

МИХ, Міша з З елитухит г жрлнокий

ММК, ВИЩА кдуВуУтВ їзіутх ст Ех, ХВ. помити УА

ТАЖ ІМК У ОТУШУММ

ШІАВОММХ, МЕТУ ру вежу Тими ця ПУ боб збу тим КОМІ СВиИцІ УА ІОСОвИ дим ЗМІНИ ПБКЕБІЦКЯ сил ук тям ит дих ПІ; ПУТ ту МНЕ Хі ВВЕ пу пет

ТА ДРАШДСТЕКИТУЮВ КОКО МВ ДОМ ПОМУКІЦОКМНЯ ПОТЕН НОХ есКАМНОК І гчотвжкя пдв шли жи 0 БО УВЕДАО

Сена т ше вд тв

ХОМ ОО БУ АКОТ ТУО

«ДЖ Дн 1-1 екту КИТ мий о ут З РУ «Ауше пк ща ах еччи печеня ший шмат АА шк ТА

МОЖ щуку ож

Киеве ох куми я се м. МО

КО КТК ОО юЖЮЦЕ Ю ЖИВЕ 0. ш сп ії

КАМ х сталою пох жипЕ ви лох

УП Дю ТУ кт и ЖАР их, гілку жи жк хід ЗМК УЦШІЛУВ НИЖ

ПТК ї

ЮА прутик піхв цу КУКИ. фени Ко ічмжевую Код озичіхих ІМ Фе щл

ІЧ сечаи запо шоКисеимиК зло цеашев байки саза пика кгшах че сер ев луків рми х Болт трлуюм и суч діри ЗИ ие пли р Кир хору «ие тЕзази астсакавко сатани .сепасвахв всвчачахче сичсвахоца 1яшХ дерми щих сонати мі щи Кк см ди Божі ие. еф ЗД шЗЕ таз'бсува вази сз заслано свесназоатя аа сс пе атах х указу ми ВУ ком ов м скцомічттируУЄМОЮ. Кучми аю тих пити мое ери, ТУ гу сказав ска каюие аа орати шосе чем Б пек Міф о льоміли вид БІК би ДИ КОМУ сп дІжи дути Турки у ЕН

ЛАПУ МОрІеМУ бами ютли Бош втхчаАМахюо сфе ЗІ х у вок пе ри фо тиж пороки Ко тех тиви им ок в ж в семисот зчапезнказе ашесолеавеас ссававссаФ Мазеауи шосвкшциЕКу СОЖКе пушки жахів тою пече ви сети помер же БІ терІх рю ах печену пеашпшерешя єства щосили пуття афиша ту Беж ско т в схе М ців Жду Бити оку са Б мес жит ви бук ери жири ДОМУ аву пев хору Мавка пасиви бета У О кали тати ве сла сира пал в шо звикати ммс аиФосмесх силове зма а роя «ВІК -влх, Р: жилою Ек шк тя КИ ери хат ких 0 ЩА ХМК

Кор по амеа их тах

УрЯни мм ах причи семи ких бдих Жртди Кк Хдук соми пвх. биту тот 11 Хі клі ху жилих ХЕ Су що лк

ЖМА МО МУ. МЕЖ ЖЖ шк АМС ЖМУЕК ЗИМ МА У жа РАМ МКУ ДОМ МАЕ шк у у і: Не я

А І М на ж а ан ЗШ тшлих Фк же Му жо нен Но тане йхм-шОої пи их. чав У Бе БИ вЕЗ Кпе оо КЕ ДеЖ ЗЕ ЕКО МОЗОК Мега буниі ЗБЕ ТУХ з сек х

КУ: БОКУ У

Кн не НК Фо кутю пи ошукю и тужтт. УЇ рю Ух Ус і бі суттю 7 щі хни дв жо Бар ща я БА у МО КлЖЖК їх ЕКО Бу ЖК ВК ох Мох не Ожя КОЖ,

З ДІ ЕЕ ху ер и; Укинх дод щі ши жі г хи гу пов хи боти ду жах Ше чі ан шо БЕ ді бі ВЕК ті Фі пе дир о АЗЕ сама ку жх БЖ

Ка: що Ка «ек мом Таз: а й до дет Южу жа Жов що Зк 0;уко чу Се йо Ше

ТУх ин іхзд її Ліж Уах дер вхо вро БЕ БкоО ек Бе Шдеж дер; о вта

В ТО їх щи хе соду: дою Урі сіру Я вих фо ср я дя Хр се о доші жо же срср

ККУ жа і ра о З 3 УНІ Ж (КЗ СК ЯИ МІ ГУ ЕХ МЖК. Б ва би Ед са Тує фев НІЖ СХрвоза ЗВ ЖКЕ йо тіє ВІЗ й КЕ ве «о я5 яхти ЖЖ ТА ялисихє Ук ПИ дах я кА жид Чую ря ЗХ У Мак у буках Мом

Таж Сб їх ИЙ бле Оу Кий аб май ак МАК ТУхХ ша Зах вКо ка чл шк хх ля КУ тож они Хан ок и ен я Я дух Хр ж чт ТУВху. БалНн теж ЖЕ Тр Є Ух Солі жа ет МІ ие Бтіе Між Зхжов їжа Мі ББ-о бал Бив бл ро ОМ З

Не МИ ТБ

НН ше о яю Му ЖК гдхжує М фун лу У ку та ху Ху х ОЛооку Ку плшж ов сумо чих ні ЖУК Аля БЕ ЗО ЖЕ о АкоОа бл ЛІ бле Ач ОТО

У чолрх, тд

ХУ МОхУ АТЕМ

Фітяюи УТА тЦеум ВІ О їх Ж СЕ жид Код, ою лошуєю: тю хи ІВ св дмІЖЕ І ЕТ АЛ 1 Бен КЕ Ви УА Су Бен та МН ма ВА Ук їЯх ЕВ т55 ТЕЗ зму Жеуш: сш ух М яу ще СЕ ІИ ду мл жхтвуж Б екю соми см хо Упіхче

Теж БпЕе оВшв їЇхе біб вх За ше ЗУ вих бу бл вка вх ев Тух їв Ка іт улову сш

ООН ИН чат Сх ши ІА по шжийя шосе Мах вин « хом во а ни ВК ВН В НА ЧК и аЕшолате позвассткав щас пласмн прати база висе свасошнвех 2 ри у ни р р и и НН ЧК НЕ ИН оку фатевцемсоо сепсис коп савжс водо сатана созеицова ху шкал сквадактв кащкевЕнЕк вінки Я Клена коала ха шкалами сопавчЄели банкою аа шуКая Кдесафит дося АЮ сн в кН НН НН НН Кия св ассжлсхасв спостаченат зЗзцаешєсв пчаклповсскв зосссевасва сосну о аапавасоеаци Клер бортові земле в спасе ав еенао алі корка х пиву сука См кПоНдЄєкх иа еНаЕККИ ЕВ МДО КВ) р і и щоки жк, схе ук дко жур кін ДЕ ни тк заз ном какао дадоссоцуни спкжєаюат зав еешюєт ває АВ ср В М ж юю очи щу суч ук ух ту євих хо гфичлую дути опе щіІт орі хих. сх ому доп цчивлсожлєлс вочозасезцаа сздасвсаєве чесати сезавашцча сип аавоє Оу плуги пов винкс пд фа твми є фо еремтихдуити Мжоцк тю длех й фшактечацавз века дастадтавс сеспшевкио шоссе МІВ ЧСсав ка ожив ВХ У Іва ким уж кури ви оди ДИМУ т и о ле

ПЕНЬ вес СФЕ Фр а ВАН КК за Я ся й «ЕМ Я сяк «КЛ меж века их хи БІЛОК

УЖ о, Лос ух : ви МАШИН МАУ; «ках Я х х Я: хо ст: се тече СТ ойжчі. ЛЯ Ж КЕ кт жк ЖЖ ко був їх ех АЖ Ак 01 о Вдй Ште ре ма лав ом о О5ту же біє піт вва ящі ня 2 15 ІЗ зок будую їси Зі Моє ие дну хх важ Жим ух о но НЯ

Бечза вай бко вве: ах ше бек хащі бе їм ЖАХ бай дек ли Ав Аж ра З в ї пох кн Чи я я, да ки. чу их их п. Тож. КУ. с у, шк- ку у ит.

Зка вій Зіе Бех да сі тт ем ім Бей йде Ехо жежЖ шу УВА ад в

ОХ дах сл хоть фах дже ик бра щі спі путх; ЖЖ пошту ремррофбржтр о Жррю Бер чЧиху сМКре

ВЕШОЖжКО лЖщ ж ЛК Ух МУ ша КО ЯКО АЕМО ЖЕК жо жКОФбОКУХ Кп

У що доші су Мед ЖИ бутку МОЯ о пАсдук м них Ме Ду гУхрат ешеях. уж ЛО ит,

Хива Жах Меу хе вав ваз о йпшЕ діщ рі ех Ех Бех дм жа Ма дя шк "Ку шк пІх т. 73 Ж шл2 гоьакя ТЛ ко сту хм тлу, ЕХ от Коко дих ди тру йо як; бики ДТ сука Ху х отує

МЕ Фа ух лама Мао КО МЕТ Уву Ех АВЕООКажЖ БЖ АВК пе ак АВ

БУ що 5

А КА А п хг ТК соту Сйхехше вх йони Фу ма Що ше ху

Яїа ВеаюК ва ФіУ АКЯ Біб бі УВІ вде стеж піч Бех БО 0 Бра Бе іч їх 18 їх ТУ: ке ше шо нан КУ А Кал Хо Ж (Лю Хм бух І щу жа у бів наз Ат схе УВА Бе УВУ Веб бе 1 пла о ідві У АХ тих т-ва 15к поет Ким бу СМ у Чую Му Кон де. Мк Фо дових єкшу жиє Му ще йти Ту ті Зіж й вка БА товар омав ал жОФ ма пшх АФ АВ

Ух до ІЗ «вою зд у жі в тка Же я дк. Тжою САУ у АТ а ою

БЖвБе ді со їіз дв о йзо їхні дів Бо Ма дій АТ Лід тех Ат ДЕЙ ва 155 ва їжи І пз Я Ж тлі уеуху тку тю кі хе хх си Мих Мо беж Кс Дуо ре бі пта пі Біт вс АК ук тд Ух ів и «ки їх

В ЗНННю е ми ши ее есатрлих, же як ДН штир КУ хисту мк: пуд ша ше: пах «ЕМВ. лу пк НН в НН ших зіслимнич завобасня спимо пекуднсма малепосчоє кова КИ нев ин и нн су в яв о и Кк В пре, сежитшнаває збе асти пахових с впскаслевка засвавоахщи своапавраай ж с що ч е г. ще с. 4 г м зош чно простив ин овречну по тв ові полі щи Коток Кн ще шБижлезтопа асо ласт заеМаксває свасиаиава павашвісо бозонакчах А и и Нв НН в НН НН трах шКІшвоадчваси шстжесасКМс двошчс пахесисвилю сю азесп ваше ши пуф і вело уи щОбо і пика тику зу о жиф оо пвх вики мі помити ук гливи до «витсптивчвцу захи ХЕ ЗО а зеалаште ов овасеми пр аої, ЗО кжтічужиую у ща сим М ик ль мохеру ми зи их а п ач За сенописеаср вс Ззсазе аЕаІцазсває соводвосий ее спивесакака Би ке ин п м ан п ж пк о чн п мн и п о нм о а м пи аа жур т титр йІх чека паси ета а сашичсада саше їж щоИзсеЕ вносив КИ

В А в НН о А Зежжууй милу тв мо фиюум пуу ЩрМ мрію вра р. ОВ «акттшдтїз совчаладкК стлетдазихи Едлеаахсшпо ЯЗ що КО ода соус уник пи по у не ен С п о п о а и и и ГУ как ствасв спсодавоВ алюховІчи засно зашай зош у ТЕМ.

СА В

ЧЕМ пи сх ат «А ВВ «ША ун тт ПЕ кити дл сл са ІСІ ве щах «З, ЕЕ «Зм є

Миша дж тужи, юю лианих кн М Гео а нн НН НН о но Ко КН ню

Ме ЖЕО вич їуУ Бе Аж ше о жКо Бе МІ УЗА зі Аа МАХ дв Оошху х ц 1 5 х К. я АХ

Ввробні лезо Ве Бк БМБ Оу Сбуж бек бра БкОМ Мек Ага Мао отих Те с а 5

ЧАННЯ Жолхи Тх сг хижа рук Ск: Бу Ху обоє сЖркім ду ЛИ що за обний пт бею ої бек Два ошім суб сю Бпє Був жу пек фа а шк з 5

БУ БІ СХ хрщсв о Жадер Й в дме Дн СК із сджеу Страх бу ту ЖЕЛОЮ Мвт пршух Бик йо дір ЯЗ: ба доме щійп РЕ Аа тів як ї1 бі» ЗЕУ Дело дж в оВБа БІВ я ОрлЄє ак че

Же жЖве тай тій віль М Ащіх бут шо б ше ше ик дру ди їх шВЕ ей Бі Аза Уаї дев вхо Бер вів Бо ех вро ек дев овес -ц ср Укр ци-ї мл КЕ вас: ше зу бичем йо ЇХ ат сих бу фр сиаежх ї,зує Ка ла вушвуУ, Сех шк Ж м МКУ ат Ба АкЩ о сблм о жух лем нан ошЕв лм Ух Че ВВЕ Ж Ба ль рих

ТУ Уж й

Вк Зо З

Утрмо (Лі ха ХУху піч ви лах дою Ту яю ЖЕ тА кюкує М ж ОБЛ т яли Же ун Укуч и

ХХ ОЖУ ХО ХМ СБІНМ Оу зи ща Ух жа ти Ж їн Вт хтО УТ тегу: ча р

НН МУ АВ хх Мих о дк: он нн о и и НЕ «вил дах хКщл тя жит ких пк гл вхо Мах Мет дім сте пу ха Ті Уві БбАЖж о Май фем бло? дк ло (а ча долю як

ВАСА ЖУПХ АиИ гло м Су бури Мер сб щі бат хе беж; й Мім щель біду ті рр сти жо люд отит ай отит від то ШАХ ЖЕ йо ща ват БїнУ Ті РЕ

ТУ зп з ях АЛ уче пн КИ, п. шо я Тодуже Ме Мо нн Ши ху тю лом ка тех т ІН ПЕ хі 17 З ях ОУН зх АЙ Сг их В РН Кх о Ще дл ви ке ді ол шещ Жук мих ем кі сві Бк мл пла дз Мах тах ех чик зх

КУ їли КАШУ Іо

Фк дес Ай її: Зіпв о Ара бі Чек ЩІ Уч фу іє дет Ж Той КВ

ХК дав п мА Зп ли у ЗБЕ А КУБ бу ААУ ЖМЕТЬ Кр ОХ лу ох узи «тк

МУ АЛЕ Ку люк ті жит : арени пщлид воеечя У ану ух ваз «ЖУК дом Уа ВУ у є я:

М нн и НН Ки НН нн І втатсзосав слові ек алегУух сальса смак оГрАК БУ пази екщи и Коіхихиєех В оу хх вої сви сире ув зей Води вічних попеув ав гм сх

ЗОМ ТИШИих Умовно аяпавсзака дваслевеаснел Бас варимо хи.

ОоОКологри т Фет уермтк щоу люиз сУжІи ту к м Меч сухих Мет оки Ек, І стадах сок зага алив сеачеьстааиа поча шосе кю она чна Чи а и и и Не у Нора па м пк дк п по а КЕ Ко За хх шишок сопе х КТК ХЯ експе чЕЙСВЕКМИВ тлевгсстьиа по спкезути укр ваю фіви мав іи свв івіцівц сдрфіхеовсуувц споді В гачки. Ін шана ех лим ах зх жи мли хм шУВЮХУ шашки шлю пет шк ЖЕ муки ки уп Ми г тиву тре сит ВЕ Зі шати ва МАСОВЕ ше Метт Сеат та же ХО їй ДУХ Е БК ис ЮушОВа Уют Мед аам СЕ ОУЄ ХЛ СІМ КАН КО Не авссщчаечйна пиві шо ЧосвавевьшвИ сша У ссВшелитчни зем тадо Як дефіс т те а в и НН ра попка парус стра лоеатьа папу я вам КУТУ «й а рних Ст

А Бе «КЕ Валик

У УСу ЖІ зов. хіх СМмЕМаА МКУ У.

Уа її

УТКАЛА т іон дик дерму ОВ дю лиже под сб ду. Ком МІщ дашки соки як Скла Тур Му хх как о сЖх Ммащ о :МК оОЖе АХА ОК оОжща Мет ве ом У АЖ АТ А Ж 1 5 що 5 тим; дет Шк Зк спи дк! ма ах би Том Аа т трі тіж. Мох шт їжа дже о бКОо бе Хлх Ехо лак Сів Бро Бее» бу лав ЖАХ ТУую ви сені с тец, с ях «ТА 555 фот Таміхм Лоу Та беж із СХ до ши Тзу: Ти Шезу бує Ша два ау

ЖК Мел мА да КЕ ШЕ р лжа шРМЕ мУМ ше я Олю жХКАМ МІХ ех

Ко Б хх, сх З ТЕХ

ТУ дух км хі дет Іі Міо іхк Сюж Ма мекв т щід о швах ок ку му кКжх мером ЗУБІ ван ЖМу ху смж мух жк АЖ Б ком ЖЕ ТМ

Бе У ГУ ок ха 5 Хома Ол ух й ке ух, Уж Аня ее "их Ух рей он ел ІК У тех вена Ма оби жів де БО бажав діа БТ ек Ева пес БУ бус Зах фа що ке Не що

Маму 1 бе бух 15 шо Му; Мав ха і у ау Ж ут Бах бує ІА. ту

ЖІ АВС МІХ НІВ ту томах же СХ АЖ АЖ БЖІ б УМ ОХАХО их соц лох су

З Зо ха ж буму Зі п лю ТІ ую ки Яесзи ЖХУ тка СХ ля Мт ху Боже ШУМ Ку ж Авло Буре бу МАХ ОЛЯ Зхам Та Блю фФуУЮ сам ВЖИ Ехо мав Ето йхщ

ЕН зах тай

Му МО же сем та тях За ач тихої щих Зище жащіз Ук доку там а ще

ЗеХ А аж ВЛ АХЛОЇ Без ай Вб Уа бїжні ЕВае б ба БМ у Ах З

Б Зох прилю,

ОМ КЕ хх

ЕТ трах ска. ши о уки ма. жа тов жо ЖЖ: Ом Тих пкт пух й с У жЖАК чад Ба Адже Бір а НВК бор дя Яка; БТиХ лад тпужа Кер хна к дл - 5 я во

ММ А Ам ши ЗМ у сочиниж КУ Піно Кри тот их ТИ еще Мою Ох спрею рух УК же.

Ж вл Вк А Бу на шей жк ща ав оКИК АХА тв ноя ЕН ДАВ т.к Упо т за

Бе У М. АлУЄ так Ж У ді соках СК тужах фтрхе сів а йбтлу змо сану рах фр і у

МОЖЕ ОХМУЖЮ Їх КшНАЛА ЩІ шОобеу шк о хю шоу МО ОФУЄЗ ве ЖЕ ПОЛА ХК СУМІ та тА тк ектої ОМ М рою шо ех дл ше ЛУК «лю Іще

Ззщи ЕМІМХ еле и НН Х «Ех рес шщльи ІА ТКНКИ с НЕ

ВИ пк ур ев аа о Нв НН НК НН ЧК шу асчлосзалеа Звищессеиє чапеачивеайх сус чачанскекх вона ютя о пеки дриля вожді у БІчІУЮ і вух сфе птуєту спохуУТ ЄМ дуид рем иа В сих зр

Виазвттске склав схЕвИЇ езгоракерях аасватааоч зачвсаасва пес УОс Ка тек усу ів сб щи ВН кову еух доль суч иу В ек лу СК потен що Бацевич З уу скчавазослих сепавакКЗЄ засласнпассх вози саза стовпа спакекеоще КЕ поз ожотьитою УК у щи ер ужити. фу ит и пет к ме Ши в ху уоя ТАТУ

ЗаеЕЕтть шити зосрии МУК ФАК ЗЕІМИ М ВО ж прик шк сн НК и НН НА лют вона ЄСвУдеНиЄ чех сасацах вссовчовза сичевивУви везе БІ ях моху тд т а ни и В и КК КН НН ту автачачкта бапоссасае зЗазкесаслав «спасе сват санст спека коке Ба; пі кре ух сф Мити Можу они сук Ви тиж жу Кит гя й жтиІщчеканки чзпазекежя сзсовавсе чено во папи косасавнеих ВИ сти Ж пюучаиь вучущикт и гриму жир ти ек В дви ек Колеюк ух Зо азцсзопзвасаФ асесеконвазче вчи позсває спбеченто сеча еко Чеки мо дор фею жит пуп сту уК перук сви сени до чек во шити ой ХФЕДУАТЬМ Її с шовк ЯКЕ СО КОТХЕ КВ Є овїсавз УК «шіїЮх 1 не НН де Ко шхутЬт дк ел чаш КипОюЕ

ФМ СКРі Уж щжлю Б увнетВ ам тет ВЕНУ мВх

Ка їх ях ХО

Ме. ірсох обом ра Аа тих лим ря» щі сту й ЗМК Од сті веж ск

Май Бре вх б ар обко меш лає Таф пі вт ай ові спі АЮ ОВ ї Е Мо їх

СЯ Зушню бани і СМ дути бу Ж ее СУ пу чи

МЕД ЛЕ ОМЖФ ККжЕ ТЕ ЕМ ех ща ВО осмшЖе Вб Зам Уа Кук АВМ її

В 5 КВ

У « «КК

Мт У; їм дю подо схкд ща пи охо флуду пах Я спр ака ім жаі Ер одер ді су шЕм зи: МУ РКО деж БІ Ті Уві влх

ЗБ 5 ЗУ тіл лиже лют й ку СКУ пт хк Мк ших фолу Тех дя й (Му Мр бут

ММАЛЬ КЛІК МЕ УЖих і для те и АЖ АВ ЛОЮ ОстМа Ма мий гл УЖ ТЕ г це г ве ше г ч хх. ка Я М Кі. тю: т диктх сі їв исих, Ск у Ти ючих, ТУ Лов ев оУаї Ме сбві дал же дав одаів Еко Щек ВЕ хек ЛАВИ КО вва Бех 5 ке 75 В с Жар т У г, ск зе Яся кох те пак Ж яю ен а ух ка бій Жук їж Ніж Туї Бека ТВі Жак Бер отле руб Аква лк ТЕ Два да За зе умі мо фу: хіх Тр кк Мшк як ж Как Між СТИЛЬ туру бе их МИ Ту пох

Теж ек Бк соу Ап бі УаЬ їі Суш Жук БО дп тс хм ВкОо жх що МО МО

Іотзух УЗА Ст ду Мр рух, Ух хр, джкии лий бод МК ие Су туї хх МО аю ім Сіж дій МІЖ ке БАК УФІ ЕМ УКХ жев Бе до КА СеО се дм тк 138 хв во ї4ю ВИЙ лих п лу Сх кашки: ОМА м сука и фл ле суутн Хе ККУ кри пох жіш Твк о Уво ТУЕ Аза ро бом Тжр вх Ів ав Бе Бек Тих Аа Ер зх З лх зт

КА Кк вна

Жуфрхти радо (ла УДО о лхуу сла ток ХХ -бу Шк ЗІ бує у Зі из Жду

Ба Віа ока ЧЗА тує вени би Оу цей» ке Уві вес ока Уа тую вна 145 НЕ Ма їжа ох тки рик КИ в не Не на НН У НН НН ва див нів дхо Бій яею сіб ТВЖ сіб спі вхо вкл Ма ух 155 130 «еІй клип, пух сю СУЛЯ ях сх стихи Дак

Фе порідніне топок нхижі Оу ши жещКтя МАТЧ уко КУА КЛІК

Кв НУ жи дю вкщештзай авсаканиє: семи час чичея кабана вки е що тещу саше Моллі ват КБ то ря пер желв ої одежу Ол хтсВовацеав сова сеє з«ацазсЕВеВ сесецвовов чвуаащсевя пайок їі нн нн и НН В, НН НН Ул чвоастскивУ Зипшловайи: вастазссеЗ псвацчауєм запо анчапивосиа іщ5О унафоіив аю вує рі ируюю вусик жікцах ск кін смскдиуф мекв фік т шкарасансек Бивсекссує сасцесоуднс соска с сааусссохя аа соавЕ шо пхерасаслиаи зп зБЕищеиВи Фев Уста БІО. КУ сте тут В Кожух учи и пусте и р НН ків м жит

Чпадчевасеаваа падав стя бочазвзавсса завссзесав мера пала ке яки

ФУ я тиви пок «Що мі сумму м ий ажурну пух мік лу г, дося кхшщукиУтах коша асааянх «осла всвпечаі свемниеречуУ Ясен БУ фе окт ку дути ми кг В Кох між слу у в пс мих опр кре уж буру аю м жа сксвасасих зво саадсивиає апбелленя фаст апа а зщу калу вуєии щує Су Ки ую жи фр щти су гу мулі ка он ет и. Ж «їй

Митна тко ази кошик ох лев вва щих їх й 5 ож ЯКУ

М 15

ШК ху чт тк 3 ох Ж дом

АД ЖЛНМх реження ходи 0 СКжИЖюМИНИ Кушавеу им ди: ух их жк

МАО сту иа о НН НН НК НОЯ ее на че нов и НАМ УЛ ил йому, ек КИ АХ сло Асе Язвв; Бус дну жах ад ша ВХ да жав пе ВЕ

У Кк. ШИ чок : ХХ ме ке; се НА бЖухкжа бус ех баки бю сб Й Сб Мк слошуїл Мжку ХЕОЮООЖ шу им, у, тш рем же Би ваш отл те ТБЖ о ЖЕ слу ши бе Зах їі Щук й тах п, т ям ТУ щМ

Міша думи Ул У о су х ому каш Уфа є стокихА. ан Мф ще дах ух,

ТУЮ Ж сив о же ЛЬ Ач сх МДЖ ХВ и Ж ша дишЖ ХКРІ жа ОА «КО чк хх шу ер о жектя Жар зв бли; хр тхи КУБа; ож оду ба душа прух Бх ру ЗБЕ.

Ай са оЕЖО вЕОЇ Мих бно ша балу У АВЕ вл дшвро вич хлх тгУОжх це

ЩЕ п ш а т. хх: х Хо го Хо Ле Ху жк, й Може Аж Ж диких Хо Ген ке Тут,

ТЕЖ дм Ул ме УВА бак еф Але АкЗз жо щакобт ме Баш БЕ АВ а то ч5 ко тує ак УСІ бу Комі Я ху Жожмрі ХААО Жв похух ати де кош срок

АІЛЮ ДУК ба СКМ ЇяМ ВУЗ СКК ІМ жаЛО Сб УК лом вх: АзвотБЕж Твх їх Зо ак

УЖ ж жах ше ІМ ши Ж и З тулат тлі Я Мул срхуи Ла Зх Шут Дали Же ху ЛЯХ мя ЕТ ЗК Ж ст Ам да У ск Тут сама ешх Ко хро т хе жи

Ам МВ А сту ду ри т ші йо окт фі. їх сушену ДЖ полу сукна боже У ни Ж хе р цек Мет сі її1565 Ні дк Ре Маї Бе мні їжи ББе оАев ра Бебі у

ТІ тий 15 ки в о во Ви Не Жужсит (ТИ тебуку щоку Жах ан Зак Сг Ку їж ша мл УЖ ТШХ Ааа Біт шу ТЕ ЕВ ІЙ БО пе зе щих щу

ІЗ 158 зад

Пух іх Ану тт, пи ЗМ Ма нею; Тофухт Ме ВА ди У хе пуху. аврОоБве Віз січ Бен шк дай ев ошіу мец Мта вх ів Аїш УМХ СБуХ ко г Уш ек ККЗ

Три бої: хг А тих жду. Кк мі ЖИ хи їх Аме ту М пух и

Епе да ев са ке св Хв бів бек бі сі ба беч Ах Бах Аа в яти вух ол и мих кІіЖ «вах ІВ ша суту поре

Млини 0 МИХ

ЖЖ Же Млин керу Бо сах уверх хтів «ак потрі цк оцоущ с ий ує т жук доми ОК Кожен сити и В тм пл чипсмранпав згсатавсовув соскосспава сова ЄтФмтеае еп етьх Бе пит в ково тім усу ЖУК СУ ЩЕИЕ ВЕ риє Коуєамититох спещоукі хвої ІІ мех аа пезессаасв Забосзволаєт сссвваччек зсксвкччсс ваза чвоовасоо МКМ пленер зесиекскесв ща сававс вазссоаеав шЕдчащакойЯ кКауак ІК межу ужив ую ОО жи дк ікон р пут захво Жов ия боутт кими ВУ АТ штсеннвтазих хсфбвкашсвЄ пахова пасе бессшаттю паса КН пн в и НН і НК в В В Же х сесиссскиас веж жксвса кощшеєнс шшераювимх шосе шу хаео ва вон нн и В и в на Кк не ех тм азкл випас кснеапе піІдсалняияе пшипадиосий сесверайт мови жо ів ожвж ам ня фер ж іхщвух су й вже пу вве І приро скік до. ішЕсаках спека ско савасаЧеяк писати ЕХ сич дотри в вити статини кеди ою ин у Ба пеки шЕсФИВИКИ КО ЕшадавК Бо ся роли Мх ше ко пана ен о у НИ ЧІ щих пилстнсоаакх пусачеаса зашищомшає ча лая масу и «ати 4 дал пегу ко ом «вій шЕдех ар ну ужити б кута Км Кут ши жу ма СК Б хижими й

ХО А дою дише му ни сАсщо Мовок у и оч нн и Ше в НН НК НН ННЯ

Мек ше Зі бЕВ Гб АХхЯ Бше ЕКО Бе ців бах БЕ АжЖаЩ бак мах їжу те ц їх їц

КЯ У КУ КО фан МИ и шо. Ж Жщоу дуга днем бод РК тю роя бо. ту ри ху х ої М їх Ав БК Бе й; Дж Жах ТІ ТИХ ШЕ Бу МЛ ОЖНЯ ЖУК

ОО а ЗИ шт; У гух ужив Оті ЗАщу би ск жк ик Тл іш рю Вер ек сло лих

СБУ сбхАТЬ АХ УББ ЖЖ СКТУЄ сх бек у дм МК мем о мхщ м Хе о баль Уєкх зу ат ДЕ; ж я ах

НН и ши нн ИН НА ОН ан я ШЕ Я їх хх; тла ГУ, пу бом Доки от пс ше нм шу КЕ Еш Ж ЮЛ ша МАМ схБуУ МО АЮ Ух МКК ТК ге

У и о

Пеук Ває ск лм лк лих ща бю Зах ЛЮ Шк им о бе Стзає бе я

Жук тн дб Уді Ме тв вовк двш Ух ЕЖХУ БК КО дек ба шко де рр Блим пл їхІх и ка ау

Фо тд ще МЛ беж Темі М те. тхі а ВЕ кжу ау ки; Во ж

МІВ цен о дж іа Тех фе Мія ТЕО їєме Ма ТБ Аза Тіс Вхо Вів Ти:

ЖК стіх чек СТВ БІ тії йти сира т УЛ гм см лик суще ших вві сів тил Ту Бе біб дей сім іє ча Су шк зр вай Ка же

ІН ах БО:

ХА Ах ША

Шеку Пре Ал сх Же щі Дт в бі має бі бенз Мк бують Хр тота

Еко Жик о Вив о спа ТІ ів о де ві мах вТНЕ Зі Її) Ве хар жі Шед лох, зла зх,

КМУ Акжю ку ж Жан їй м ЗКУ аю сю Ж Ме фл сич Зк що сдту Зілух йо тік ша жк їн алХ УМ Кук т КХФ ому чер АЖ їх Ав ББЖ дж СКТУЄ ля з 145

Ку КУ Ае

Тускст (Лад ла их 0335 шо Ман. уж сени НТ ВНІ НН ОН ШИ Ж В

Ес Фа ше віщо ша Бе Же дизиа ще у ж ема ЖЕ ВЕ ВАВ АКА ЗХ зах их потр, дащлї в ПМ Вл Й труді сбхру ой с о та жу ТХзла дв суб юю фло Та мія дае рт ол пе ЖУХ АЖ Суш бі БЕ Аа Бек Оу Шев СБУ ЩіУу Акорд БЕ іЕ5 АТО ВЕТ5 силі й

КО ОКУ ов Ше хорами ЛЕ яхту к, п б мк ДК КТ

Ох докт мук що МІУ пу

ЕОМ АКА МИМО ХЛДАЛЯМВ

Кон НЯ печу Кале шик вдо Кос дур Бити еурк т скор ЖЕ КІВІ ВВ во кі п зкакстекав пили аца зесопевє поза після сет пав щ- паз раси схем жуками ВЕЖ до ци во ехжом жі ктіжетих щоБсзіжурт Кднк цивіеруких зол пижхкшстаов У ХХ Еш кам Б вах КО ЕЕ шлю схему КЕ М х а и чи НИК НК и НЯ пат комахам том ЗО твЕнх аа ацивво пазл Фет МУ фокусу юю вот ев нн ни а ол

Ессен ебвилешим зчемапач| сзеслсвоаакхв каси ас асе КИ сплив ія пуп кіт: фе Ко рук линии подих изфоих уні Ви цу уми сут пассвзаея азів есктовеа списа ва асспахвоас сбоесюшстає спало змо

Он ЧА ЧА па ПО ОКО ан п в п п и м м п о ДЕ С А ще ча спхчоспапоа вп е левова шими секс плато Как кисневе сепоссзссв зсеошеаата свазоозкЕє зсасассяое заоч ЩО гц цих вежу фу у Кинув и РКК ит фор жу ур рю. ит шпасдисссчаса скосу кчуачєк сома вис все ЧЕК зе кх я каткосавис фосаааала чес: привода чазвепіац пло «ек ДУ штук я лтх, жиди ВОК

СУТ г и нм КЕЛИХ сенено нн НН ли ОВЕВОАОрМаию ПВХ под д «ац ЖЕ саме умо тод сплю Ма жи ик дух тов М ха ху дикою ла дл

Ме Зах їжа дж БЕЦ АКО ук Мт мА Ма Хі ша ЖЕ ж Ук су і є Ек хе ї с м. МІК буму ХЕ Бош бук Тудтих ших ри рути томря дн ик Жозеф ХФ р дум

М-ує ща мЕшУ Ал ОКО Же» Те вищ демо ех шен ув у ТвЖ Ух

Ко 5 же я «ОХ ЗО

ЇїїтТхУ що Ми 1 1 Мох Ку дю г Жок: Зак бах лек пух мк ЕТ зач

Ммау НЕЗ о де Фо а мпЖ ж см сзЕНАа ЕЕ зх КО Бхт жЕат щей М

Б Я

: Е т т дію ті о у шкон не со их Тужах. пош Ю

Пез олео гмев же Лів вь Біб Її Пі БУ два бр же Акоа вай Коае сих. с Ол пх ІК ж ме сукихя ща ХЕ Жду дл лак Тожіж буси ХЕ думаю буд біиох Фени фо Тюою

ЖЕ ЖЕ Бем мі Ме баїі Вп Бе Вль УВІ шко Бет БО це а вка ом ее тр Ні готоу НЕ; МУ М з тіло ори Му сх схоже ЗА я бУбахує. жу МЕЖ о жук А - Укщетх С зу Сп

Ні шуй дж пам туЖ Ббеб За от Бе) ах Таж Вер з Бхз дів тиме

Ж-У У куту що в в

Е ше КИМТроку лук З ж мк «дк пику МИ ан ДУ Кк пк БУХ Фтидтиє Жуфжеих Лют.

ТЕ сів дяй діа БР бу й шк очВі тУЩХ У Тує Бфи цес Кт Адже

ЩО 5 Ко їх, жу іх СІ ке С шк Жохни ту хто Зсгухі їх Кен Кн о м ттО Бо ех міш блж Ніз Акщ бла Зі Мем Уві Мем о БиЄб деш ба бе ї-щ яожхХ ЗУ

КУ очи их

РУ ху баку ПЛ Ж о ток ДК Кур хз толк щоку їі У т кА ду ЛИррю піт вх ів тр мазі Те: діа жо сб жк Ве Ша Хв о Біе Ви ТУ

ЗО Ма Ії моих пить А М що вия У ок слуху в м ФМ. слу жовт дум джу Му мл у: хч пли кб діа б Їж ТУ Ве Леді сла ву ХО мі аа мо ех їх ще ік їЩщО тим СВІ им Що їх Ж єю аж ЛА фу Ж хх їж Мт фот: рах рух

УЖ жа до Сус зжій Лу Піб дей БаУ шу щу Бім ж МК ХЕ

Ва ВУ шк п педа КОНЯ ши ОСЛАМ дови пеки хо МК

СТР 0 сужіх пр хе ким бжутва ака в. «МВ, НЯ вка ЧУ ен На НН о ки а о Но НН о З зісчсесосав зичимо пазадасийе соло півазеках се щХ жовту вчу Ки С цих щоки и ог хг пр ттуУтом о дит уЗевК ери ххх сталої шсасисцавя састсезасеот вача пешекссаз пасує що

Вес ій ши села сьо роя и. МИМО МАНХ ОАЕ ра КЗ пф ит іму уже мож о моно гум дев ту вухо суми кмуєМ й по утя сУоіжечи м щі БУК васзтаиасча Ффіасаееките сзаслескосю вка сивсра ос асо «Ко ни м ин ни ші ж ум та ОК вечору шк кт дян ик лу прим ззахррти Ти

ЕРИ ВО песо тил сват БЦ ВИТ ЗА реа ХА БО З. ЕН іжужиу ри КМ ню скинути В скачуємо амери ик. жири уу Ек січі тихих ЗЕ дтитЗзЕсщимМисИ поусавивоае Фасососххн чвиавсслийа Фо сат соус ши пеутруиууВИК кузтрф ти в фу вуровиж их паси сви па ер ву кру и дику «Че коза ев совцсвоска опосчкиноав сестокасє чес я: жд их ру ге. пр НН НН НИ Каси хар счнаенат бееиенове чок штне двора св вето юс У

Чопик ане сало єсв числова щишшломУ повзе шиацу а «и В студ срнх уд «А КТ жжЖ ки ЖЕО є отут ши ик, пек КОЮ жк код Куй чакжув но Кри й «(щих 15

Фдижж й в опал, Зак спіАж ую як вує йщіЄ ШУ Ліда ха ка мл ск ад

МУ хів шу жк о слеу дАКЕФОоАЗе з Ов ОКУ Бе охала Уа хм ю АІФОУлУ 1 щи я. І сил їду йхдх Що їдь бе Бу Мур: ХМ бою спихах ОО У. Тихії Ток. ХЕ що

Ух їхку ГЕ Ов змен БО лІіщ гВж о сжал ККщ о МмеК жди вас ВО мех УдХх сх Ум З дк, Кок М тебе смикає 1 ху Мих бо Ом а Иию й СІ котки ЛО: Тука хг ЖЕК оз

ТЕ бик Оу Бех обуз Тв Уа Зак Ал шіУу Су діа пев Буд Бко поз пк м «п

Ж ЗВ ї мак м Вк пам в Бу Ммже жа ж ал сії о їз» йайй Кви Ми мет

Мет Уа ке нах сій вх дип Ушо бі УВУ СА бу ЗО Аа МН Ахо ших т пом

ТК КА шк же пи пз лк їду Мало Мав о хлАЛ лу їУки: ДЕ ВІ бю ше ух дак їм ЕМа ух щих цех ма Зах У АЗОМЗ БхЗ ВЕр ів Бтє Бах Бк Зах

Б зе чх щх щи м, Не о

Тепло дн Ах: ми жо аж здо - оожк их А сх гл

Всю пр ОЕМ бу Об ру ву шо сит Бу ж р сив ду Чо би

ЗНО ЕКО БЕ ха ми са КТК М Ж Ж МДОУ ВОБВЕ ІК Ка Ж х ЗО 5 пах барв ви іш й сжиюу інею 2 хо фл ВИ ру ож дО смтхга Мем ЗМ: ух ж ЖК КМХ аа муху ех ЕТ ФА ФК ТММ ОжФІ МЕ в жшЕ пр о МщЕХх дл паж яд шко ТОЖ хе

Ше Ді би спа сМмиаке Жтрк 1, Ще йорир о тахгіу ХКЩОР пе ЗР ва бижеко

ХХ Кр ММ ГТК НВ їх) у дю ФУКО БД Ух МлЛЖК МЕ дим мТл зак з єс золх хі в, М У

Уж жі Жамі пла бум Ж и З хи До х. їм ЇЗхю пуч дювіа Її «1 шу Св шаЕ ММ А КТ хх їв ожиж бах З Ук ой Би пу же й пає БЕ КЕ

КНУ 55 1 дош Яд стик ех ЦК прожкію тов таку де лі Стр пщусв о бйету пі для бейоїму Бу ВЕБ ОББе Аа сур епі Ж МЕ лю ма шу ск ОБжОа УЗ Б

Уа КК це тА ді хв жюю обі шт їн в доми їх 35 о ля бр Ух фл: Ще ве їх ОХ ж Е ж АТМ Ку ет КЕ ма можем їУУ шЕЖж У -Ку МУ БЕЗ - й хіх «жк «ТУ БоМх МОБ др руки пр

УВА ЖУК жо гій ій чи АМИМО ОД «Ві КИ злу ще лиж ДН доль іму брамі ж ех вимо

ТОЖ МІК ЗУ ЕНА М Ж Лот Кр «ад ли море вих мису м фо тю меси мити Мих пе НН ду печичсавнм З ствола Китосих МК бецлзс пси У кн нн НН и НН НН НН яолЕсу зеоаставаци плели суха МаустТшослаеи дач ишае пак ко еру ств ие ж хи ут схе мити су лук схрестити у их Ко

АЗИ УЖ ШІТУ а СИНИ ТХнНИу Мухи т дес томутли трах МО зажими деки Банах сука спот авл слив Маг ваших все онає КАПС дю ОК Коса ме ж повік ща мууМ Кі фж ЕК сживК сущим дув мл моих ких с уми ех ик ур ухлуЕ В яя Чу

ОЗ В іх понтахко ФК ПУБ ДеІсолУ сеяихи викла танки У пткретуз ето КІВ Кік уреИИ сУукроричеимиІх що Мт Ку мими в гу ях поасеанував слюрщЕлю Кодак вро оалай бецчгоа са топки Ба

МЛК х шу щемиатТУ сазсхвиапайа осБуцешаеке шинка єю сири ше ша А ен в в ВН НН я Бех

ШКАЛІ ИЦІВІЦ ЕД ТЗ ли ФЕМ вах хнаанх лиса КІВ о и НН В в Я ЖК я

УМОВІ Воно саму сту пути ява ПЛ струм тУїх ких Лю дою тд

Па киИ АМЕНОВ. п рух сер іх ко кіля Есаумвта: жхістюлахма

Кн:

Мене льки. ле Фуко досто кт й Шрі Ладу чик т тут; сот хро т шву бує

Мет Зак псй пер дя ВеЕроБес Беб ох ВЕ оту дія Мак шле ся т к зт лк

А М А вх св о тдхр; бах пес Бфа ше їдеш о бохо біс Фу Там: Дике яд тум стерво ба че й бас шес БЖ отв груш бек о біс Ядеж о ец Дт УщЬ Ттвх Тех ше пк Ук Ум кї дих КяВ сгуУ жк офоютт КИТ тж хв ах кое її хи техщо тля ддуур тео віх ма тя с зд бе ши мом ЗА да ДЕК оОшАМ ПУВ ФІ тнещ пуд окжс ек сив ВМ ЖЕ

В, З ФУ де иа Ви, ДаероцЯ Жауу члу хе бік лі уд тим дове евро Же Зк деп ошік РКО хв очаї й я АЖ їж БВ аю омеш пЕМ о ЗБЕ Клея ух «оту і ее в Я Мо ск х в КУ Уже Кос Коди оку. Кт, х - с. ше І ек яка хи. х кт су тТвж їзо Уа Ме ве Аяро Бк БЮ ка Ббко ех то дет ОО дгО ше п ТО 5 що ожатеу Му У юю ку ТЕХ лож бю лох й юю За ек о ж у мем Бк ба ТЕ ей вла Таж зе Ма жИис Ар о те бо йду ТКх Ле пік що щи шим кю бик ух ха би ха Ж і ШК ик Букі ша ів ех жав сі Бл жа Тек Мі Су Жук ба яви Був дез Еке тихе ще я т

АБО 15 АВ труд сю Три сити Джо боксу регу Ужоу Зм Ж ок усю дулю и Фу ж

ХМ омах су хаФонвьвовКЗ МЕ У бі ба ев АТ АхФф о шав е шує

КЕ Ваш Ка руси; Бу в КУ: Зм прхку Од шати МОБ Му хх У у решт ли Ж Що им лю дж кВ же Уа Тук пав вхо сот Тк о йхо бій дей ее дза Тпх Ка йо іх І м ис За біжу т.к сх йиу сх щини ва Узин бароБре діа Оле аз Тк вже де СІ бек па Уві ВЗ дів УК Ух

Ой М, про Вщх Зх

ЕХ ЕВ ХУ ТУЮ у: тус: и у он дея Їх. бу ЩО и лю ТТ Ту КО Кя Має птн: Аж сш БІЛ Аж піч ех Бу йеж бл ху ВЕЧ хо ап па сну

ВЕ ЕК

«ВІ ді «иа іфи сжух окт ти «лих лиЕ и лам вив свдж мили Суха пЗХ ками КУ дидфлоивисенч асдешесиск сеспасвооч сала песець ою свакєсенеее 5 спору ук Ккал рою ж дж ків цлумоиї пиво ци (ХК ово лу ее тт ях «сиядтштшН МешшЕКисна сасшесадио зар ие сасевиасоа шосе 1 о я о НН і НН А а Я о ек УК печати слава бек ом зва тюсюч ши ЗЕ фаза систе Му по вивів сло ек вас юв фр ем как ОД зесбснеасєв засне вах забез акте пасок доска схе юв шви руту у туя ри пеки ик змо риму у босу рід м клоун ке вир пит зтачадсаш кеша соуаих сшешвсвсоВє векисафих сбопасавье вази ви деку отр ім во чох серии соте щочесдтх садки ств вик ещет ве КА зпещаччахтя силова сдачсесдаае сстхсвосеа Зазбемахеат всвиаеНкиах КМ

Ем ва их дені умі теку ий пажеую щих ху ци се. дя й агжинакЕсс Фа сазечвивВиЕ чеше седка ою Фах клкх чн адітемодевцд зи пк ВАК хи с удо Кури ЖК коро аг часкисаоав воша авосажкаву сСЄкасеассо хкичсашиашми КЕЗДепивал апМ

Зх цодтвщт пір мит стиха сід коло причал воЧшЧшчиа сна вовки ща «займ 2

КЕ Не м ли БЛлУК.

ШО УИЖю У ядих вх пр шим КАШУ ШИ ня ту «о ше маше Міо дач у Мт ФК То ЗК ж пу лу ЯР рах тлі Ж Хиоу

МО КУ ХЕ лах АБИ БЕЗ їх Ме Те Б щу М фа ошух вах х х м їх зош бік Шкиих пох. Ху о ко ЗМ СХра свіжа Зифужу ЯМУ их ши жи пе це дур Му тм ТЕ її ВХ УВІ ЗК ле ТЕ ів Жех жів БВ бал

МУ ТЕ, М

ПИ ХО ЕЕ вАчеЯ ЯН ва в НШья мав Як туя С. СН Хо ТУ. Я хх. ке у ТЕТУ хг -.

Зк Я Тех зх хо і х Хачи бут ау о З ака діа дів жек йти слу Сем о шжіч Меп ств; ШКО дех Бій УВУ МА Ат -к ще ЕЕ ш У дк «КУ аю Б ту ФК: фони ЗЕ ру лу тки лу: шоу йо ух: их Ме Міші схо УКВ вка ЕК дж ха ВЖЕ ад лм су Би пр одем бу БЕ Бпе жух ЗХ по Я й

Хоклу ча Ми АЛ ду чуу МЛ піша ечисих Медик. Му, Перша сушум, ФУм й З Ста

Мей УВА МшеХ Мел ВВЕ БАЗ веж вів БО Зах КО Бех дв вх Уа гей пт за Б щи

В ТИ ТЕ щи щу її ху гиеур 134 хо тую дж Мр Мч шу Сб) су беж ах смію Ко мя дк пів їх де мав кв ом УЩІ Ех дврБОбіє же Ма ХХ Тех Аа пох, ст м що ши КЕ що о боюу Бих сухе лях пр и Ких бах ЖеРіу ди фея у СВ І СУКИ

Та бу Бі: пі Ду тій ві ша тих бо щі Же Зк Дах Шо пови вів ак ЖЕ КАаУ ЖОМУ Ущх БжУ жЕжЖ ЩО лак шх лущх шко ее

І7УКУ 155 в кА ДАКУ МАМ ої я я жу ом диня доня ЩО мих Ж тові жов А М тях дк бот

МІЛЬ УМ МАХ ЛЮ АТО НАМ СУА ТИХ БА ІДВІ ГУЮЖ алі УМвІХ РМ МОУ ЕТО

ІН БУ Ме

Мій хя Ж

Мо кни КК Мих Ле ММ ЖУтух о ик яю буху кт Тут. я. и ще дзротви МаАД ГР тв же па ТхробБхе Ні во Бе Во бек деа Аве з в за

КАХ КУ АХА

ІК Св я Ул хи Дахи іх 3 т зи Р А до жі мод М Ту

ЕВ ОМів бю Гі Авт Дай і-й дій кю Уплі віа ВЗ дах СУМ хів. пух ках що тая ї85 хво три жу ла детрит по фі рію дою ую; жук су Бій Виза сі дж лику Ста Сі сім Ар вх ТУ їК5 178 та гу т

ЗЕВЖЮКО од пк шує «ши СК

СОУ Мч зви ЯН Х «ем пеовзурія Віжкешкмих шани жа прііжеитЯ цалжодує зо мужмуеучихо ШОМУ сек ідимежеушоя Море ди и КК ОК жит у Ея. щі дклествиач зов ксс везе Е сирна паЗзицВиВа Зо еих пк м п р о па з ка пн ЗИ опо оо пр о кори и ПИ о и я ярих

КЕКалавот сСбакЕтовшс соаонассвок Квбесевссв поза сао Не. сови сини Ми у хоче КЕ Кс поимту ти доми тати ІК ог; уж у Ху б ий тин Би. пезскуеаю папки у че паза пошани виш сабо НЕ зір и дищееокеме Зако мУВЕ страви по втук ств КІ дих ки жачакшЕис вс свбачечоВе сере саапбспавЯ позови аЙ Я ше и в і ня иа соусачзставс векпоупасея Чис сови ассссяЗ соасависца поесавцехее дк пер к кри Корея Курт сту ум ко Ким вЕкутх Ей месяц хеческаслкв шчачацосса саастазопоч Кодчсвтсла сек лі

Фоми кіт. іт сзучекииктиу єр отут пи ую тур ну фер Кит Ду шим ану ов іме ерешаа пледи сексом утлю пси? дим фону до я, ме и си ен и поч о КИ Си ен п и ок БІ схсвасисев Зола вчазчсеКІвеК авостлоеии попа е папок МИ

Ку НК Я Юм ие, косих ситу г ох птоавотт Зипщерлленави Впала долали ат пл

УСТ е ла си ой се ти 174 жо А УЗ.

ЖЕК ШК ринки ли КхлоеК

Май ХУтхишурвайНИ ТВО

ЖЕ -х ян» сша

Мі духу Жуля зу Жук Ж Тошюуя ДКіул Лк их фр ХЕ ЩО Хо РИХ бу дрекух,

Мет ВБке бку дер ака да Есе Бей о уві У зіУ йо Ма бо ім дав ї т ЗІ з х 3 ї к ї У тт соби САокех шк Ше чок буку фМмУМ Сі шт Моя Ан та скррує рю ЗУ

Зв їхи ВЕБ БКО БВе Жах дКклОЄбЗКЕ Жде ше и йо тах пах тТух ев «хг ЗЕ зе лях ля он таж йти думки Ж Ж: Лю дя І Кия ТоіхА: жом дес бір І и л3.х і

АТЬМООКМИТИ Ку: УА ОСНХ лИХИ хи У Ж в МЯЦ БУВ ОКХ З ож Ми ШІ Мі

ХЕ З У жує ух дум му ЕХ юд, Тд рях лах жу: й она Мою У, Та ук

Мат жк Ки вх дах мВ ха іїхлу У жим мав Я Бе лах Бе УК

З УЗ. Іо іч аю тоді ОМ МАК ЗА Доу б йору ую Тхузчуз оту ХУ й дк, Люку; бот хЛАЖ мана Ум жа Уша зр о кжо дн омеа го шеЖ РЕ ООЗжшХ леж пис дО ке зе Ін се ща НЕ Б

Жоедя Айчию тА сппхжує тот г о Можеш бок ЯКУ юю е жор же АТ Я прю ру, мамо шаль ХУ М ЕД ЖЕ ХХ оз ВВ ОМЛЖ АВ Мжшж вже Аа КОХ

Б а ак що 5 З ших ху то тую Мох сирах ФО ВЛ хр СК сх мес фло Жеиеує Км бояник о Же уж ледд Зк же У сіб За У Уа Су теж по Бех Ехо В Бей кт ло тд ших в сх ку бно; дра Ко фУурчу ту 45 во дує Шу дії пі я о їлумр Би щу теру тя п шва бу дл Кам ох ца Уде ККе Хай дев вит да Ба мед ошУут тв 1 Ук дл

Мт АХ Ка рію ж у Тк Ця М кум ки пу Ман ку Мода Туру дами: СТ Се

ТК біт АХ жа. СКУ ЖЕ Ж ау СЕТ ДЛ ау ВІ тож ММ МК ог їЗи я ве хат ме йо п т хижа Ти У тацію ха ДЕ Мі дово ах ру

Ав оБпЄ дів жав Бевз ЖЕ Ап о Бо бі Бей БЕ Маі ліз Аів У тТух тд, Ук У ко дих

АЖ АЮ ЛК АЖ їУкуих божі стиха ТЛ у ди і еко 25 ку шику ЛІ хх» А КУ Стр у кМе Аве ув ша Акт бі шШеж СТУ ФК ОошУю БЕе вже АХ ХХ зкВ Іо шлержюю пелу

ММ ТИ стаїїх жЕВ

Ж НК ях шк код скид -каМ шина пари сти «ху ши ху ші ха ер ША НН НН НН дл зшстеисттня пиши мопшакезеЗ зоволоаани МЕЧ вшА ШЕ ВИХ ке вм кфричттло пкт рукитти Косів др роб аевити опо ер схо рік ха мкг сасна Ззвссаакшлея Кс аних деБедтасих ее часваак КМ

Фомін х мі сере уЄ хм шию ами удо мож Кок вжи МУКУ МА УЖ М 5 схдзаксева чок вах сксвис злива сів авКОча кача Мх нав дже рих и свіжу вимовою сне Кк дкужур ФМ рек Вед дну рю и Чижик их пет плевестиавсЕ игсвивеСЕК о ше кала Ек пи афиких хЗцламисих ї ме пори ситу пр. б и жуки чн и чн м на в п и и у чи п ОН МЕ пох спайс псочаз заз стали вписав свого хоушедсевя ПІ штЕжоссааеи водЕвокоуєх возсонавеє сосавфутессоа шспоруоюаюк опе Би прин ко шсиваса пса свпайвояате вобавоса вика их

ІИОМУК у дк питаю о може ти у Коди и и сири ситет уЖі дже ур п птатослейнсв стояки щрпессока свовахсш зсееюсуєцах зако ау фе уж мкл дж иукиз хурми лют аж їж хи хости уд ож ою пох шксталазвксо зисацадоссеь заоч фревсоспаа заВеКкщя ЗА чена м

Еш ще «и ОО чн АН ши ОКХ ЛА рт, Федик колу дек тв. дики БЕН БАХ

А ту хна ше блема ик тоди рвали Ж лунку їжи бМулО ЖК фл я си ХАОС тл - «х

ММК ОТЖЕ мА лан АЖ ЇхжМц УКІш: МЖшЕ ША жах дО Оу КЕ жа УК ко ї х «тк Кк х 4 І доти МК лоша хо де ЖИМ Сп но Сян шим СЕ Й с буки ХК ру прурю дов жа іа шаль ув ВН ТК дже шек ха вав о бей жк ак ТЕ ух ме тп ку «М Й БІ т дю лож лудеою я и и: доки: моху Ктуми сдожує оХодту Суму бум о Хдіяє Я у у піт зав о вкш щі ад же вв ще БемоОбаю їх вх ВК Ошеж БАК Ма, заг я аг ее за дл

Жох модкж тику пен Мотя дл дж Же кю пла ШИХ м «її Ток. Му УДК

Мед дело ше БІЛЬ дже УВА ВОДА Оу бе сам АВ їх Ду ОВ їн по 55 ЩЕ

Мижеко бує Тих: Ми Ме що А Іди рю ХжюЮО л У ЗИ бух їМую дак кг

ТУХ тТВЕ їяр ад Мей Ув3 ве ЕКО ДЕ Ул вк ЗЕ бе бек еВ БК

БЖ С а Ух що ТО їх 5 с Б оси МТ яру Кор т ше луки, Бу що ух юо я Ж Жак рука нів пев овал Ка Бук Бе; Ніж Тева Уві Так дав тує Бо Ат жиє

У щк щ

Таж БЕ сни щвмт ПИІ-, І а Пи ЖЕ дає піч Кр я даю Ху дня

ХК Ошаж тп Ат є БО удо бо Же вало леж жує с сек шо зах їх, чт

ЗМІЮ ККУ 135 ди Ву х не нан НН нн нн Но НІВ о ду УЖ мія плтІ ЕТ ДОВЖ ЖК АФ Я КТ ОБАЖУ МДУ УМ СУХЕ км БО Ах аль БЕ хуц доки жк

МА Кн «МАС. г кі її Ме Су Лиш чехи м ЧЕ Худ У жу ех - м КК їУ дк. "як:

Ії док ї пу іще х 301 ту фкт сла следу кі сл за Ле йет Кк їжи КАК Є и А Ух ЗА Юхс су ДЕ АКТУ схе МД БО За оОтоХ 135 155 135 бок ах ди: Ср жі Тодухі схід Жодат тт х тує їжи ЗАЛОМ ко що хи

ТУКА ж КДБ Ол МО ЗА їж КОМ ЗееА бе мМ БІО ха вав ВМО

А 5-5 хожоту Ку

ХХ КМУ АСУ хх

Фати хх ау КТК Жде Жоютею Кг пд Ки пт и тя ще фрхитю о дини

Би СВ ек КЕ ж ба АЖ шаг Зак слу Су беж Ку ке ДЕ о жех

У воВ, тла птуе

ХК їла Кая шрот о шої тюлю ша

Ме ьо со М

М САМАЄ

ІД сти юі думку ххх ОАЕ пов ТИ ее ху

Са од папу виду сів В.О фм о паж Е. ти Вот ух дових М буд ки ВМ т зуІчЕсІУКаЯ паса ззотспючлеК свои вадах Кошик ще пед лівои и имУуи оиу ІКЩ ОК ДМІМИТК ці щує що дифе боком уюеу. сх ту ом их ях «шпаЕтавико Ксссосюсеав пасинок ск вана азс ше ит ох «Ук ен А а пута уні стеку кві іже їх : спізапатиах сюорсвеІчО вел лтеазосла сдачтоазев стзЗсусяш полоса хо писав пса питна вева чесна поса состав п пошита сосок умо трасу песика с Кс кю порів Кох мокриці матових вки Мом спо хрестин М тт орех БУ псозоазассти попасти чекало в кероее ФО ХХ ща ща ша сиих м де хх КіощІхе ви п Нв В НН зт пазцзоаси шапка вас своав ство ско схактсвис зе х. ЗМІ тУк семи сир ми суму и тік ужІит в мм ЖЕ Ж Меч дім дир Мо суму ТТ шосе восени печу пешУшицшек швея воша чхо пазу ване Кур флуду ер кіна цю вану іх дих «цито свсайо зпплоденвио дина: вБсзчвоакна офсет веЗлексВнх я ік дівтиюч поета ую втіху дуг узами плітки и Болі учив ку сзксзазоцо застчеакс писала зачати азаа свое копа ту ори: пис че МЖК кути стику сш Силу «шлю лшт

ХО УЖ кулю -ї сама жди дитЕСрИх ху в діда де і див

ЖЕ щит СКЕЖЕХтіми еВ АЙ сю ЖИ восени чи ко шщ Ж щі що два кою ваш юю ад, дути дв ді томі 31. йду Худ еп ожех пліва дів БЕК КІ Би са УВО ЕВ оМпЕжЖ УВУ Бей осал ев да ї х, т щ

Зоєвіти бус ку ОїУю у Брут СПО ит лирум. ЕХ Слух Хо духо жк Мову хат. р САУ

Мей овею БЖ ме жюеЕ ЩЕ мих УХЮМ БЕЖш о Кжна Вхщд о лІв Ку уж Бай оАти

ЖИ КОХ З щейк заз цяі Та Аа жі ща сі Тому Щи Шут; йоімв й у т гу ух о Аж УВА Бащ дл сш міш см пе мо жи: ЗепоКІА Ка АХ шХ же дк ж

У М ях жк Мк ут в шу бів «аю сх поро щі и ьо ІНН НЯ

МУ ЕКО вхо ад дв хів біу щіУ Бек хв ожех бу Ме Бе тую Те «их к- й яКМЕ ПОХ ра чия Ж Та ці щу Буті Де МБіщо Шеих Жоіж бух Шк Я о ЖШетх Ж їду миши ваш ЗЕ аа маю БІВ о ЗщЮ мі Ба ше МЖК а в'я ЛЕК ше п Зх Б зи а 1 їх З

Ту У я ша 114 де рних ше ТЕ друшмо бу ХХ дю Ук юю жу сук ж вило сив би БЕ ОонНІіВв же Меї Уді ех 5 водо КО Сбеу жи те МЕ

ЗО 5

МК ав ших сія п ж рі том ЩЖщрт хх Важ У Др Жуки. ПИЛ Ех сіни СМ у

АЖ М ЖІН ФА АФ ХМ дим УА Ж ЖЕ см о МЕД БЖ с КЕс БІ їди зи тій

АКМО т КУ при у. ток ТЗ омо локна Хв їкщо я (уд бом Шміх Зах сть о Фоєаї ххх Же ек му їІіФ ж о бша Ме Ха Те біт дм шт З їхУМ фр Ж АБО т Ух З З

АХ КС Ма пре ною Мн ДУююи Ж о фекам джу г кі ідомо лок їх демо таж фот лох ху Ж Уж КМ сума БО Вт ха ЖУК БК РКО КРТ са у лу ВЛ раБчя ЗЕ «од

КО 135 да смс Міла Суха жу трхук о бики ши тк дмуї жі що дм сб Мод клт о ла вжи рУХх ша лим нм Хлжшо Мал ХА Ві МЖК СКМ МТУКБ ТЕХ ххх зд з ку лот

ФАХ ке ке ХХ

Етегх и ж ичи ЙИУ хх тожУХ їю хом кі Те км домах. щолях пу, Хм биттх 21 хі кю. мя аль КО сх 1 ОХ Зех шаАм їх - ак щомхлр жопа АХ СУ Яна пом ХХ ж 175 їв г т га сх ек піп ошіє ОД

ЗЕ

АИМХ еко ША мА ул яка полю ла шу Х сх, спри «сю ДИЖ шлю лют шуб желе сім ху М а ЖАВИ ІНД МОМ мот «кг,

ЯН» сш джеми судив ВИ хви ай ву амтукху Жов тере сто КЕ ера шт крою прове пох зе вахта мк -к сечо кум акме ритму их еомуа скали падках г прекесдеааа звик пк в Кекс вав шина щи ИВ К и ази х Ки уж их оечихуки й и У тнчищи сзлюуити хух Журі хжи кох ту щі дини т, Б кщхеацшиа засисосєсе сан вас севосоаа сазана порада КРД КМ соки пд дев фотки ви сужем' ців его Драми -уат

ТОХУЛЕКА ЩА КИК КЕ КВК КІ МАХ КЕ ФІ ДНК ВК ВИЗ ТВ «153 мекв ета МЕ дет що Кф мити скинув спади щи ую я природ их туп шпик атош аавосисм касова асіпасаткос сацетаскає спасе ЗИ и нн в В НН о НН я ду спсолтназоя вести сво емо ситалезиа нта пак Мк ЖИ сумую сука Боже кохо ди и спад Я суч єв УК Ірит рт Яни зи Би КЕ пива сеазоих код Де ХІННМИ ЛИЦІ ЄМ чем ин НН Нв В НН Ху захис свазна спеаласлеаее поемах сесадепЕло паза пол щемх Зо

Кар ев сд ие ТІВ хе рифи м гуси усу ІВ ОК луєтог о тд сисшивстазсе сплевзазвцчеде чан зіва да шт ХО В ПЕОКХ

Ср юх кА У «ВЕ 176 судив Ж є ре пОКЛХЮ дух ха шал шві чук

М Баш вам

Ку: тп

Селен о Мі що ди дтвує бик кі Зкшж ех Тлмх Віщ иа Мир ж Ж Ку дх

ХВ а саму шк Се Кф ОМ Б Ба ла МА А ОХ ЗАХО ВАЖКО ХМУ

З г г ХК

А х ІЛ ЛУ

Фа 1 жи йо їж Співи. Тл Мяї що бно Я ЖУжух бом бух Ел у ба дози Ух ЇМ А Бий ше шли Ба ших Жах хо Хана Мир ах тех у ЖЖ

Ех 5 за

У «л о мпрьхк Ши ба бовту хІ Кох то 1 хм тла ж Брю луку Муюшо Мод хг -ямм хх Ка ли ме лиЗМа ЗОЗ ЗАМ КУЩ ОЗ южшМц уж вд ше МБО Ма зи З КЖя

БУ ЗА й гиляя фу о Жриуу бус та шу мал Ві зх дулі; бету Тит дхт; дв От їн ту ЗХ дМІЛЬ МУЗ АХ жа вм УВО злу пуш Али аб зем Бу ФММ Зах

Б я кий

Тл ТИ МО тоди ХВ теща дути. Шуми дулі Факти Же им: ЖКаєи. іш у 0 душу. СШУжоих

КшЖ ХР їжа УВА 1 Уж МНК КБУ йЕЮ од КЕ дех КЕ ЗФХ МК ми хк «ух ек ен їнке ме же Б срїхат паху боки ал хи б овехж дв пет у сровкух у ми Жщу Ук Шачу уз у прю хмиЖ о кля МЕМ жУХ зм опа хр одмМм Мах длХх АВ дл ЖЖО АВ ОЮМХ ше ЗИ Зк сур бут ЗА буда рр гаї зх оду ЇХЗЯ:х Тл ця Зорю тб туз Вих бро Щит

КР ХММКО Уліл. ХИЖІ КК ОСА БЖ ХМ ДуФ МВ ож Ух сл ЖК КО БІ пи гр ті

КО ху гіщ

АХ МАХ Ку

Шк СИБумо жиє їЗЛ є т 415 о щмо Нр хМц ДУКНи гло їду (ЗМ Лююіж ТІ о. ТОМ

ЕЖжт ах МЕ ба Дж МАВ ЩЕ ЖНЕ І БМК дю ЕОМ ФК АТ ЇМО

Не: ї50 ії сю Дюк у щи Ин М у фу. У ту оку СЛУХ я боаюту еодо Мохих Ку шу оАЕВщ зал вх Уа ЖЕ ваш ЕКО мі ХО пе жав БЖ ЖИВ дач ХлХх ях ти «ях

Не ТУ иа ям ДАМУ Мч хо їі. Мі: ла сіє Моді Мчаеж Ж Лама Сл). Жора букс М Біт для дл

ТАЖ ШБКХЬ Ж сим нАЛЮ У ХХ ЛАВИ зе ОоїхМу ЖЖ ЖІ Мо маше ів Мах дк, цу Ущи І

Зх А «ЖЕ ККУ сплю бах йо спам пух ож рію бува ХЛ Жрую ох; 2» фожею ми бичех Ар

ЕТ ЕБе ат у У аАНАХЬ ВХЩ їм дев ХМю см СУМ АМІЖ КККеЮ СКТКЙ МТМ МІХ

Не зу чок

ЗХ пу М ер -- и А Олі з и жд ПНЯ кет те жа МЕ ху тк о оч мод й ши КОЛО В спали А. де ам ЛА прасок ду мо пласт оцту зовн подо пдв у В Ед де і важити ХОМА ох Бема НКУ КА МКК ШО, їде я оз ее НН НН и НН НН КК пес аоуа болях зЗалзелатл полоз есте атаках яки и в НН На НН ЗМУ чавхнаишиимМ пом пев є рела Ковш азавашо ЯКЕ КЕКВ ЕВ ОНХЕКХ Ко же дововодтуєІ ті о У кт ую гео о ж вх ладу «акаЕствасав зіпсована восвеастав вшлеешило попало м ММА ТОК БО зуватравих заазіаноцза чвісчведназ авсвозкїва зусвайсавая вваєклихаох ша доц и ще пікові Іуди ЖК ІВ що ук пудри и пил вази статах апаваесшви Фахова совок ношьвяе трапара лих ХОМИЧ жи юс вітці попу Уггі ехо у у оду хе вок уі дугу

ХАЛАКУМ УМХ сх рни КІЗ ЕМЦа є Вес щрихе е ам ІМ аВ и Бе ЛУ сту ж орд петунія п доде пи т бочниювию нем вр пуф ит Кв юю в ек питсскктях соассапшост пастазсвио беж е шт еУи КВК аг фору вач ке па и о а ка КО Ко а о з п и си ШИ кое кспасецеимх втсрстес пазл зоазизчазаєт вози список Іл пат нн нн НН НВ пуфи лот тити ук я пк и пах

МІЖ ОКЦИУ аа ххх ета чеспЗавоана гати ЗЕ ИІ ТУ

ШоЖеди кожух ли сх дово мли ро Мох хуя сут жв ую іт Кі щен що их перу и шт шкал алосиоа саван пли сб Бесполодив осмис нх кох Ух се кову суми КК ів ді мара мо ки м и Не КЗ СИНЯ ох, сесктаювна щксхссипемх ставив спшешЕнеКЕ сопел писати шкі пд м фе: піде супи щіви Ка дою узи сита віх МЕЖ УчНИ шЕшичкеех мими вапхеуметає вано паенах мхтких дпа ки ТЕ резина ча она пи а о С о КЕ м и п п о и ДК под

ЗІКА за ли дис веазе пса Мих то еопаде важеля сети х й почту фу нов цо мі вотккхих хистом В тод тку ек

ХИТ АВ ОЖИНА СЯМВ сут важка посох БЕЗ вИиЄ г зп хх шлю

Є ЛЕ стр ту

ЕМ МУ

Кт ЖУК теодомЖи ит РАХУНКУ

Кен . гефкха тв фр лук «ил вх оюкй Біржі ката

КН Я

КирІММ ли стелити судить мово юцо луку лу рез іцфодиКО во ков в су ца, й зазвссадлсо пашпсовасоива авспоцеимав саспепавай соав'евеа Косар ЗУ тоди и ж чі о дові вашим су іт дин щу ет посухою міх отиту пхчуЗсоав споссазввоса ававистаноо сао сасве Кослевавки згини мя дожив духу. жи же у сум пох ІІ Уж ку ву ее пу те ІК ут тд зазавичх Зопаахлоа пунк их У мое зивиазвииах АЖ пак сук ол ва супу фак доц кп мог тдті їчшахесказсв впшзащи хи дове ЕХ ЕЕ ЖЕ МИХ Е ПІСЛЯ ЛОЮ ВАХ БА зт авеЕ сова сек ЗЕ ВсдавоВ ее Ква виплЕбивиЕ І

МКК СМАК МИКІ МКШКю Км М слуха ММ Ка Вел Б меш а о п я пов слухи у КЮ ВОК оф нирки УК ва ьо песня постати асист ФК МТУХТХ Ж Мел слов ЗЕ о ни НК и НК НН ІМ ит триженяа Шрот ви зашикатис пасти Єва Емо уєу пах м и НН НН коту тив их пед волуні прути ди мулаотуив тт пи ппазацевех вл зваве паза зливи взамаваачея вив евиааа ПІ шию ву в в уми іо мясо супе вк Фе лк аа сити зво шпик псом силь о шкі хіжир од КУМ

«ій ДЕК «ЖІіВх діуреійв «ах чав ОЇ сетчацива сатани КОМОЮ ФПОБИВЕХИЄ За вес й печати СЕ сий пЕпасЕнвиВЕ Сессбаверия баси ат сесзаневюма 2 кетеасвійо азизічкезе паза став вослевохавас вавсяосвану вЗастакавмх. ще ххх свазасаааа сасїзаваєвз Ччесезахтв ВЕсвВкОВЕ ЗОВ ав паалтвзаса оавсзесєкац пааасцатсв стесазшеах звайхзазцвх ска свие МН сещессіжс вка таова закон ооаа аніс веваван ксдтааоека Ж шпака У ВосжЕтасе чесрещашев левова стосу ктюм сов єа йо

Устуатказ кс атекурвв зе воовЗововВю саке жива гауВх ВО авесатвопе таксексвс сова еих ЕзЄсЗавшЕМ чЕЕжесюОюОВ шККаБЕКеКе що хткдвсцаву "тво васвбтсвеє естазахкец васкттовяя спам яБО зЗавасевсток коуасавцоа басссесяадає ессоетекех дасаттаєцю даавастосює о шсевазазвасс поса тое бвсссспева кооссвКесоЗ щусавсувай КБаажаскксх ЩА стазаксатиах сгааодскова заасецеєка ствіавеакек зовано зує ТО постав с ЕКЕЖЕЕЕКЕК Ес усцав ВЕК ВЕ вових квота Я

Зеспевакос се ВЕЕк а сваоава Вед аВко СЕК Коваси алабвзавце ЗО веївисние есе с всоусвчївеЕ врахо мвих ем шкцесве сооваевка Зо хтасетуєва звескенших пшесосевОю спахтавзса санавасеє савсжекаве рЕев: змити шафою ствах шЕшисеа Севааасовях ВКВкяа Є ВІ авітаттеькк ахстетакаха зазасвсвав звшквбзя зававлает аавлапакава ітац какакслакиз звикає внЕлаїстна зокевисеве сшескиссое ов Цеех. зав зЕсеецешсв віспаосааає вежсвістсро зсвадисесв еннивсщоюік Кене таЖо заваксзЕсвоЗ аровасчокя оса все суасавовдют сатачінав ведемо І355О днк а фуд уд их нки хх ХВ ік щі в одремааштуттти СК фотулу ев фору фо я вх Іс лем чахмхУ пасли саке бай смозаза КІВ птах ща шк ЗМО уж ВОМ ко дріж ДОК Ко іх В мое луїх м Ж. жду м В Мою пе лузую ку в зайти зканпжиттов сМгхахеєна пахова соазвеасназ зЕквозчавке азсЕаек Іа пи в и В НН дае плац Кущ ЮК ох Укл зачксезисви вздсассос коза сазов азів асх завкекозе Кпазащик ва А и НН и А А Нв на змо атлас весхахиаз чевовеависв саБІвтиеха вазбозахх стслайвавя КАК ред могою ух ис ви ги дов ери о Бурак лопне с БК х за зрос аай иссхвоове пази срака сезонах чан зв зів сидів піки сутки их Мері Му шик о Ук зисСнсківаЗза зназастазое ес тавас соасосцави везе ака ОХ сецтуціи я Імтк ти гоюКи Мои еп стІху ам смфордрие ПЗ дос ТАТ прашмавиКпх КЕ БУМ ІН НЕК зима фак АСЯЛКИ ом ан НН о Нв В На ко НН иа І1щУ шосе о всаезбоновк сли псів шати «ЕКОН А и нн НЕ в НН и зад их шлахМ шим слллтатяв шими дтУупалети пилом ах МВ пет учтєщані є Зою анаоцие ціх сфисих деМокехимзс тм Зло у ох Коди туту

ФІНІКИ ШОЛОМ Вол «иа ногмоЬ Слова нови пам аси тА ож кою юю. щурі доп диких співачки кн ци др рев сим хи ч хЦ пецІхахтУк застава свое Мосесеїви: сабо котився лм дер ж а уж к.е мав стих

ТеИ ШО ХОМ. шМІ «Шк ла ви ек лм яті

Траст сх

А ИИЖ

«Ло ДЕ

М АМЖА

ФІ т». «жк ух МА ие КУА пах сві й

СЯ І

-: «очі й що й подох кодек ко ек ач їй тому ф чом Канади дв ке цоколь Ки ектм в пок ЕВ меча зіксхЗ пачавивзав вавстигваве чан ис ЗІ ж вот иЕгавах о шнек ц джеми (пкт ВІ. влрдо дме жк лох плед плату

Ес ост позив Чиста ис вв миИх ссебанова ши ЗВ. їв Мк піжом юку Юкка ци о фу кос кту цу Кох у В сх цем о зу ох осв М кА у штшжт ака ШшХЛИИМИМНУХ ш тгвдЕвннх БаЦЕВО ува ВЕБ сдзавиа их жах МУ з очиток оцодиї удонЯ вон уд о пов декади Ковка ель в аг хитуєкиат Уся памНакоав Зло иавив мимо аю неаптшхиана КУ в ЕІ вся як з о дю пекли тю и дак дожив о шоюфоцокю мк т ців оці ем і пи тів Есеат зовекнатав свасеасави засайвиаана ака саекЯкє ХМ он и НН НЯ рату пивавчктаи хаймасяаьиосю сотбавачешс спуска вах мире тавиеви ан кх. У пкт хи ха имудє Же мл пи юммм омОМІЗИви ЩИК и пк ие ери щоку кісдахвсута вЗесовсвеасве пасів аз иавсаназвеа зазахаааккх чини м пронос юц ніх опо жін оно мив стовпці ами фату гр Ба

ЗВасміанажух сива КМ Комаха щас ше Уттруяй УК Уя ЯК о Не в НН НН В Но о кн ва в ана хо азасеставої атадишимтв помисли піз ловиов спазшеаната зешазескх Ту хек тава каса пІсаїнтІор антлщснио деобзкеато зЗсЕсвксвВИВ Б сцпасовивсо сзаємантссь слоессснок пса еа зво зпечаахеи щей мита епопея Зазсевалр ато біс ов ак павЕх жо епЕекккстнХ звпсвівчОс поезочеванвак шишок ке ек акал СВО Во скчайзаЧехи сожКакаккач зчвсесавта додевевава тевЕокожав свеікеаевик Не палав пава сватє їдзасзавтииа ситах сееКезнучщє свекра І зиску завзасзизав зевазосадаа свказавази кчесасексхе сЕаскеКеви во зактчалехх встсесоч сзсасзстаа братик с зеобсвсяюЕ баз їОЕВ зеівсзвзовсве завзаїсавеЕ спабазксва віпазозавия пазокоеюта ававееУєяЕ ЇМО зи щастимт пев снавес швасвЕкиха ВЕзанмЕзвУ ВЕ сВиЕ Бека єв Іо кттлднжЕке зовано на аа сшак захкенактх зе каки ази ІК зтстатаєтка волсзазтьазе спо плавеюь зжтобваєта аказкдаа пепеивлчма ТЕКИ сш лвасає визвисашоие ие ава шсвхссавнх асо вспашцюєзхих Не спштехвави щхжоссєа пахв вовттовіта звачбпузьае ОВК 1їВО кала ввссвЗовижУ захчазскио засипав пеезссивасВ сект О їжа щЩпбетлеваєтв авіавовивВи паствсаив ааованивОой сала спас вламишвисхе АБО сксасхассЕк жслакаєкск засктзазко затв к хахжактнсов ке Е нау їЇ5ЩшО

Міда сиве вес бпавташикх какая хедсхмсавви схована хмие 1

Зк кавоав сесзіквотсх акавзанахє зЗсзбвеасикв щас Мпа лавЗ ТЕКУ сеютеЖлеске вужикЕаЕКО асвазасксв зсевссоває шоаискахвЕ пазавнавов УТ ваежтазесна астазевела зповавкекат собзалускаш плаасасняе серпа оєх їінпО шивсктексс звавсзксмак запас авосю ссбкповише заштвазано Бокакелкмаа 18 аїіказаттаа Куправоаеаає весно зчаасзмочие саводуанс пвоакавккх МЕ кшес тах казпастакав скавтапсво зов закис ева спе. нка зазатснатсеат впеамаєвих пп вебесаснцво паааснпаєеє ожив соах акт сскЕжежКенї вик сува вабив паса оєва саосавасяй попа кьея 125 недецацвох фадазжуевя оавгднасет зов оуся сефкфакова мзвувсьїя ЗІБ чопвапавокви зосдеколах зазсаклтахк зопазаснає зккасдасчнс спедтвока з3за зовано сват тає теспштошее шотовтавас всаповиска саікесско 2225

БтсвВееисвУу пошавесоше счсвсхсеве зошслеаскишх слати паску В

Хиастовос зола исада сети ашосвлЕквс сасвасечио зач зада сепапевиек сеезисктсав сшпсстсвЕск плеса срок ваза е 34

Мекка Ве орЕ заз тшМ ев ШОЕ «их их зано ДАТ «Кі» шіжсісев щах сам 5 патіївавтав ктставазав спвлаювавасєх вфгдсвовсв авбсппасайх сазсавасих що тактів баса звзназвавмакх есе лча дедазмлантво віча зо засгпазассеа загсасасса ашасзвависа всех звався ВВЕ. ХВ еакоссроаає сорпавуох тебавккнІ Вк ассає сззабзклий сопачоваа зай всзаавевако сайтов сане пессвосксва сСевананохє вежа нив вУБорВІНоВ зай есте абс севадевяха акЕлесзакк кабсеновкся атбокаваяа ЗЕй втамасяктит асан Безе Бах б штами сах Ка Уде скфсссеціє асавпозйве зозлізевта кетскаєтще тайнкщечавк везїхаєких 483 зіганевнах Ееабесєкас бисвевааак тазсваишьЕ тодовеее счзкактЕкЕ 5 пекасканко звцеавоєе звтсвиєьке бабтжкевавтї вод екаєци фев ките во зжаксасвкї зкбоавовав дборавсовай воаваатасвя всааєкаєте кеавеетов во

«пзактїк саваакЕвай зстзаасккя ЧЕК днав авспьвнаво пававевцав ТИМ пссвссуаа слини щіавкЕвоа сапомстєа скит Еншсос все ВЕСНУ пісаслаєсваз зовезвскеа фо снтисвяк кшЕхсакавсв шибок оасвася хспаасавов Ва пактвасзесз плочевчися сепІсастнчвах вестешевику асахочиозе запчастей ЗІ ект азшся кКешвокалит Запали кив дова саЗівшхнуе КипшоФаВИиВ ЗИ спезазізнемр посисаштое шесвоатасе КеВлемУкх споидДемовкве З'важиккаи іже посисзчсасв кчавптазеосе ассаесекає певен скВо сзсвааловас вес авих ово пазбсзазаво співали аватар сСевдежсзех сила зи стя ТІ зіхказкивав зсквавачасй запахазайва ЗбзЕчоивво: аазсвЕсеКще ВЕК МЕ зешспавеват смепивашиє асхтзуавнах Кук иааох ФЕВ В ішисВцяВо МЕЖ ацазазтсяк Єпахтазеаск завайвате авіа пдекомиириє Клежпачиа ГО ткавазаио апавсасиви вшпаштоваех анавшоаиа бостакаиєв савани її зх імаасеаае попавтаек шва фрезеристваєав доза тай дефуднваля схвалоратихіє сус фев я ТА ХЛ ФММ УМ УТ ХХО У спла єтьс восаацевист чосвчаосчая вустастево Вфсеа тс ак юта ух БЕ асбслевсаву сечова зазасечвас звааакави зазнсвквис асан ця їБДО пачачаФаса савежсавозсе замериню слова поезоасвшй Євовказнча зБщО схема кцса зо посашо сала своВ ока вВасВцучра вокткаратя Еш вуалазтсзх ЗиеаЕсаєт зЕеаиаЕна гео кеве ексювеєох Бас еВвує ЩО діІадткснах авкшЕСеТКтт еко их пер туатя фея їБ5БО актова кесс ескатиєксв дефосвераве намооюив маса кеи сбакосакоа їзда саксвостов асоабавія зувнскаши боса анох авеасеаешя юажоаосюто їн пасвотшнех зксзбкавня ково

ВН Яка пуд, б Ах «ВК

«ЕТ ІО хв ОДНЕ. впав сту

АЛ Еф е щах «вах ЗБ часа свс апоствасшщаа пумсоеащо сбсасакога азбпласлазе заваакееия о жеадфусяактаю село нвуює асосссеювеу зов еваваю сою спсокщкашех до ува кх зиаижвосоє павпасастав зт аваш ашшековзасе зесаботнеа ЕМ заваснпансв пхахазксва зУкасскзаз дажоскавана сзазесвоцва заказу єта шо вазцийчсеат нашиачажива кавадакаасв всвеааавне аскесацєви ЗБЕ 3: шежназетту воски заки зазахіяві Куаваллямї сенат ов якись ма КО екзазствихса сводсавеах тав каве: Бавалитакт екс Вае БЕБуОЕКа ах шчскактеуспенсо аванс кчсх сесвансавлта засос аснт зош вяо васвакиаяих Б шпасвосзчкЗе сзавказтса зеставевос ав сжов еепаттивьає аваючла ка 35 автзавіштс дово зослесаалас очах саза аа ллвияв двазащтлака МО зва тац азоававаче сакаасаксл сзаесоекави кесалиукає давало м їцисавіаза чзаззадчеся вазсаласишє Фкороєаюкию зазшоуаео свеееуєев Ж мадеавзаптай зепаскаттх сславсиКе зсчЕавОшх весавкссвакв «ааЕвЕВКаа 8) пазазеВвить павезаесв ВЕК Кота асах вашсвсасна сацавшавев МУ пазазсавахоа пазсклвув бКававсавеВ взазасасзьцв софраптихУ мага ОО дасаекоави ссоозстзооанпав сФепвазчаха баса х сСтвабкіоо сплеск ще чЕхсвакоха посповасвай сзазавеаза зивясвавосвЗ вессевздвЕ пери х МО засаваавчія спроптвеВс аванс как тона бекох пе тваат посох МІ тавсвівааа ЗЕсматаєба авеЕЕТЕКсшс пасе дЧиемнавіо кова аюка То спас зазнає зоссеасвоав забез сноава зсачненаєш аяассленку ІАО деазаневств шкавевтаМ писасечвав сзквовтсве копесесвеВ Блек іаБи атлас еи бохо СЕМЕН ФО сюнсЕМаисоя шемрапева їЗхо павжссоптузчя азсевавНиє ваааесвее сзсвосвсии зосасвасо асаатавЕоє 5 сита вие засеадавлає спасе оасвт евтвеМсищи запа азеня вп цлаааса уко ай М КАЗАВ ЦАЕ пре Кк хв сао ко чвиац т, ТВі ь «А Ч у -ї - їх е з Езуво ЕЕ де іхдв азс пазеваас че сФрозчакок кеказвссква заезеавах «Вввииккх уща каску МЕК сема БЕБІ сУх БЕсеКуОБЕК сЕЕовХ КЕ пібсІщиаВо Ідда

КХИКЕЦОУК сто ФУКО ЮЄЮ фено СЕП пров тЕшщО звзпстуто зсотоювнсту Єевскаскев зевехтуєая фест авя Фо їчЗ40 закочувати зчпасацавах зЕастацкл МАачеЕлсевай сала смш пахв Твена списки Ссвноассака попав си,в зЗУчизовоа чес тах возеноссвих тжко зайастекує рові к: зскбопасоу сосок схдвосваза ЗсЕКековаЗ тт важать єто аква ктосцоюов Бак фура кур х іо павожнксовеї вот во0о «ДК «ті 1355 чия ДЕК «АЮ Беата кОм кВиМ ча Ух зазчазаває спасаввевошса кБіІзазщаесо вав часовою замах са зпаасспавка срітевгазе лпаздимовзсв дхсзсиаста савспасвах сповасавих, Ів похазмачсв пасив спе мтвеаве паза ссвав ЕКбмваваасо озквосоах тва хЕкеказвск зеЕшкЧеяв бовасежави вЗееашткае пак пмакеклУєе шдо «Ктвавктне СЗЗ ІНЕяк нік ченикях сао кІБавковтх акашощаєв чав їппрайкугуУ завтсааБЕЕ ЖЕ тивка фссстваказ Ідасавкова кавбважесв тва аЕЕкакжнк кезосоплаває сзбзазлавза чесавасає Хабеаскея зазеевавих їй вербвлакасх пазсвасвес бптвавниа сбаЕЗковеІа Екбвааваза зкоаєоаВиа «8 ктацжнасих деесвакоза аепасвочвВ вала ри іч вааа взувати Бе заапантвав вгзакозаах апп дедалі печу біо ща зрази кис сіаваеЕЕса ааезасаевт занос срувацчосоо восушеивВи ХК сСтекантклв Фбпшфусвевааво аозововаст зада вавав тва КК ТО тат Інну тен ВЕКЛОЦ Кер сслерки лева тав бат ше партами свати КЕ вази тас сосни Кідсвсацат ва асиаї пагававосва воша ацех Б чекало бавбйдеаспеапкх еавбазвавшт втакслечах зас хеевв са ух ВИ впІвчсаанит пед ааЕсЇ зазнав зиасвовава зозовасчаш аа Б твастктасию асоаеастов стзисисва бвасисхаве зонд е саше Дод диккчевиаи сетсккокЕи девсевошее поКевасьеше сеатшетшеса ен ІБК

Бетретокстс соток Ек стеоКесхеке зоні стасуву пзвасицах аосезкЗа ЗО

Босха хл ази сенах стали «свамщртнаиог асан шок ВЕДУ авласисийи забсссвзаав стежка сиКевивтшМ вала Усе ни Іди атпахкоток песптомекає зееилсзвке певзахосеО аз ососвея ас чЕкХх ІУДИ свашесаан Зпувс;сідаче сзщцсзсесвави зе КЕ есе е їв зас севлв паеавикаєти Зах и Ук

І ДОМ кожи ЩЕ.

ШИМКО Пл «чо» З пса ачокастайно качок ахцов ах азІва захват втазайахли ЩІ позиатавів сода чекостзавах каша а зазчавеюааь сн НКУ дЕтджачионєх вус цвейи кавовнвссеє Кишсешеаше хавковЗлаа шк НЕ шЕкавоктча пасаслещея абосамиви кЕсаикеваХ шого Оса ваза:

Бити нак кошиках пк сових шюмо шк Єовас ведемо Бе зе сенис дичсотзвасдва саке ода паса вларещфеави КВ десваєсажао аск к твсодеаоуд сучас чекала секавекаях Зо хкстсеавнсво бозбкавота всзремесв аоассУек вехчесьвино зав: їк3 хвсвослсвеа Зачовакек севсбхас:х бота» каксвавасивх аск КсяВе У везе МазазжквЕК збовЕсаноВ пане Ва не ванає вагове оо хкЕщЕпуссЕВ пакт ева та заставні звавсозеви вошсастайна вовк шокжа ко сплнрохеанви Касасавео звався зва вая васала венах ТЕ азказасеааи пааваєтьх пбсеавеюєвмй лики сала мЕн МКК ВИУ та шояаншващт кусувиайаа самсоватва завназова стЕчешсвек Ким гою. шо аваскксс У Катеасиних зКуаскадчкй зФаштацева вацеавквеа свое кава БК сжхаавовоаи вакаешеам віск сскана елект Ваш акє пЕБОВАСАХ Зо кавова окЕ захи веш Есе Ффасеволковз вста ває вени деео МЕ перовсеазсв зУсзазвцетн хптссквайе Кк швасваа ВКбасаакоу косе ВЕ пхлаттвцал спека завасліскм вБЕстЕМснваз вабепаАкоя сатешуикею Ву шосакчккас вжива бзестасазе збпоамсхва актхазкаст вчусазако БЕХ «жзвакзсяою вислав сеавиаасао зовітосвия свои зазнати МИ ианвссваОткх сталу ткакс звессавкчв вувахковає асбжащекет шевксссну Ух х«вцеизссаа козаки зкашствека са кова пише оакае пана ІЗ зівувцовав штсвтавЕКе свксковеев сис таваа сЄКоамасвав сисайеах ВЕ часте еане зебозатазх заказтазе їасвіалах соваєеєвих СЕБЕ КМУ кчсасиава їдеш ауани зсзкскавКе саазтозеь» Фавапекешєс аскехкохкав 155 зажив воиа саке зказастазя пазазеахще сзташоєсас все иКане ККУ вм одеяи Водно Фест а пасе КВ вищих ще

Кекс кх паска внкав себто зозасосовзас сасовкаосе зок вЯБЕНА ожини щі пост уути мк ах М Я опа між ву и ул сук веди ких сучок ит, УНК епеста сан зизсачсгця сзбставвани вва ВОК уича Кекс НЕ пт йихиких тр живи пн ин п чо но чи чи мое де пи од ри фл ЖЕ щту пес сруста вою бокс ЗЕ елек Баки МТУ ік в їх юю ЩО ик ЕМВ и п и НК и НЯ я хаус

КсеповЗистс зба саа ТЕ ПОМ ЗА ТАЛТИЦПЖВОХ З Каса скине МЗИХ

Ек бек Жертви дики МЕДИ КИЙ пром з пи

Ес Кшй пек Ка ожоцих ва вс мих ФК ПИ Ед М

Мао сі щуз МИ щІНИ пока песваваВК У ям У

ПК юю дк

ЖЖ чо «їй НЕ жи КАТЕ.

МВ дЕВВІЗОЮИи КОХ ИВ «ах ло он і НН НН НЕ НН У пе пзлутчасазе соавнавейае завше питво вВЕссвинах Ва е ЩЕ же гажеіхсу В у жит тету Жук имя гріти кто. с Мові мк их тв опр, басснувгас пазделовив зони а вза ащав вче аснЕ плавав ї-ки

КК оа еич и ЧИН ач мк р а р а п п а и и п ИН а а а о пд ик вну м. ру печиво пазах ав вести СМУФЮ ВСУ ВІТ ЕЕ лк полив. НОЖУ м и В В В НН зах шиеачсазкнча Фазова Заледпвоа сеча силовики ооо киЮ и НК укр М. М орви ою. пити ув АТ

ЧО Фраза чпацазазвзчавз засво кУ але беж асслеаиси ЕКЗ ее о в НН и КК я ЗЕ стазеашедна соепектеаю води коик азейчастасеа важ єкатс лек Ка мед етцлУД цфе щи фейк фресках здав дже дО лсмзіснсяава вісжнацєтм фетиш сеосапоктлх аксв'васа пиво. Ел пекар и ака Иив упину вії що що АТ патштвтси товста ча вик Етівк своп і ная зва ох 1 похо гу

ОДУ М пояс Ся жи АСИЯ од «бБійз дик

Фа суУ Ж в суєті пд ггтух кю бува ЗОориаш лаз «аз 45 здачу юс ви сут у Мод сти зон мов фам ци у цу шх штами пев вил аксови слина ЧК шпон Не п іх св ціх пов по по емо скор их сур м КІ же пі золю чаваававаас сазиалавнв звонка сбвлоЗчеа Уч свашеаша УЖ Кам

Кф ек окуехуу о ца пс п о Мом. сф утік У Я цур в их кат ик в ти ту хжкливусиахх соосанах мих пухка фам чаша кум ре

ТІХЖІМЛОЮМОМКОВЕК скани шу ФАХ СМИ ШИЯ МО ДОМА ТЕМІ АТ ХУ ІК САЛО ку чзсвасеатуху стаз зав ее веахлтаєтю: ож наеат сапоеатка Б засаштаєкс вЗсзасисцо опачасвавз вщіслезУинвоива КаказЗвоков аа ве чазпавцатих поета саласенисв десвссивиа вазазевееа тема З праска вшстеааикЕк коса тивес «акти кава оаз ши Акелш Ко ХЕ пажесцізмеу стисле пахцвЕ пазазвескав восессосва савзавасяес кока я веавсштчата адтквехсеайе залашвивав саакоссвс пазлоказав во еєли о зазасистих бптвкаксва паглеавасв сабсдазкокі зе кжслаз задово ВИ шпаксЕЕокЕ шищеашнека ашІассвиВ сбававказвий спасе звпепшюча тя зпацсвавас апащоссвиаве засововав спевтеавеашиа певзаваєає шптаспаве ва ТЕ зтвазахтниа сдЕкЕНосвВиха поса ва вайтссссва аочавішкях ваакдовшна В висз'каєзви апа залі а вратесвова хсвВсАиахах Видав е Бе зчласастстяпа свбвсасасея запас ав се какх оц йвляакяиа СиВсУх ЖЕО вкижиасивац Зп козам ває аассматсста зсвасзсв свеанозака мо засзчоваха баквичонав засос леє сопиахтаєе зазеаловвих слорсасеа МОшО ших ХХ полита сепадаоао ехо вата са еая ік суха ант ХВ ях вовна Боксер кешу ксе севЕкскави БА хода сиВш УМ Еш Тих «а ЧА «МІВ Та «йди ЩЕ «ЕІ діва ООВЕЕ паті «І Ві ттсвечеакк стасекшаЕвов шо Зьхах вади КЕ а схоавнкс щи зпзчачянсви пебссвосої зпозаснаяє чена важаке ваашкишиє вовк 12О заїаквтсаз вуакакцчткну сеспаавнаста заовоаксов шулазсвесв зер ї5О визнавала авасццвеаа сквозавес Чвазасеаи Чем жІрвАаСЬи пед орсх я всапетайтча свізваката хавасоааос спасе КоБоеяєнк желе щі «вчиашоелои пшЕНшшнск совка о щчочапссса ЗассЕаслся свасалетт З шижичютУта гос ЕУВи шспочвекио ФоуввнкшткЕк Хе аловай поалвчххиаа ЗО цидцавеаки;а аалпазашефує кошеня азпхпсзаста завести алпадпикляа 5 зва аеана Стос єеав хадесабслиає совка зсзатевио спе а АВ як зевашк ковтає язки саКевевВКОс дач кна фасок І зсдавианвшах жа кщахшию ши ВКІХ МопшеасиюКат зишлнхикс мЕаштваших БИ щоксзававас зактокавоа Квевнсазове кава сс ка овес ТЕО

Чеказазевоа зезчвичжеє счБавізесо чесакувас страв соби КЕ кшеавКЕко вісі тоавсх пкт аск аш спсвеЕцсс Має З пласвкстаз зе усск сзбовсксвУ зомавебекскс века чав ХНИ песант сист давати ах пхаюм осла сип мнанляМ пулу яко шатадчакхи кеелацекКх Феаскссасу віавазалват епавалсаакс саванах аюх шо поасаесоет я зе ктакІ Вополихозая есе собу сеса ее савеа 10 саваспсвах звевачпискка повзати читай осо свою сокола 1155 состав є зишеМеиКиук секція шлдлавсвосв савЕсцІВех свІБссадне жо шкижшижЕтВІх ЕІ ксспІсавах пази ліве застсгяваз васлакийка АЖ

Естсвонотих авастовкеч сбкспсвікоо стствкаскк свісвазчасоу всзренана ВІКО спацпассацес сезавчхасают кактуси Фони Мадам ксв КеЖКВото МЕ

КВК СЛКЄ Аж ЕВеКОЄ совеЄОу шошкСиЄЯк повеоснке захована іа зачЕссзстж пепщетсзЗах вне меЕик Косик пошко палива ТИВ цазасіссаз завади: сзсвусках печера апавсяа КБ «ПА» Я

«ше п

КВН Те сш ДИКЕ леж оку кажи в ж рю шик УБІК Я взізщиа

ЖАН у еатисаиам «орав мттае пунш «нате давав паж співах пл ваУ щО на ар В НК Ви зв цтспуевазсосо фраваягслому зеслвчаавт зпсшваотз вапно часов КУКИ

Кн НК НН паж адиуих дю хо п оди аа ОМС ЕЕ озерах ФвшливВиутас ЗЕзиЄтшяа «иа КО ак ируюи паці джем рено судив. Жодні дих зай

Фати цесу сив в стопа маси пана ши тещі кІдо дилерів ферит. ечдоК у учи сг и пд ставсвсовказ засос сцартуютхс сиза єм оса зазелцастя ЛЕМ пк НН Но чо и чн ду зассвикиас сашасадайв сла ек асущютувим кто лепшвшАекя КИ пиву додаю Фк мінова М ЕУМоек ви ох кірки дл палавтчов заеатшсееес боосЕслиатс шов посудом паза хв

Мои віки вих папу ф аж хх дат

Мити ВаКсОНЕ Ж ати віти хх тм КИ м.

ШІ ню плющ

Жожр до ЗК шт тих пере

ОН МН.

МК Моска ма гуюч в ВОМ ук хі МН ЛИМУХНО В МОМ ех ва ян о и ни Нв НН НА ЕН й асиЧасвие есЕсамахує пакт еа повалеосзуяс сапезоашов воза БО срежі В сходу тіж Вії соту Кв йождовоцвоов фго ді ажтуєт меч хг частих щоелаеса асо мпеива дивне Ха Мова Ка а ни НН НН НЯ 3 злили анксх цавтаеелв штука к ссогаванаю спав вВУпбщенихя ще в НВ В НН я теж

Фе авця сла села са сазшвихиВ. ик МК «Ж кафе вва в Жив нед каєву ВИ вик гуру Б пек КшвеКсв со КвЕв СеКЕЕККОК соку теату бКИЕФБОКОВ схе тех Я кох туєю КК дру

ЛТД та вия АЛ БУ их й хх Ми? Мо «ЕМ І тю тх пащі ек НО ваш дик ик ня кати ккхї»М жЕБЕлЯсЮІа Свагтіала «ВІД ах по ин я дек іувог сок ве ох шк вотсивЗ дже евовивоа савани с зеедичовов себввнласа заз Аккх щи сс вікаста двовчсвахиа папсвсгайов чеках БОопадоваає азс а жо зжатикласкш астшкозавВи чЧезивкахае сзЗаОено селах вка оатка ТВО впакадессо аапевашкех КквзЗавевй звававуєва также ше Ве Кт хо ш"шпсунаняих Кавсзуаназ сасеаиковс Ззежаисева завсвазазес аа каєт: ЛЕ васксиапве дазсзсвеасе зако заселили зазессакса зале жо шижтцчЕнави зу лаєта збу своє аа еваво сосок их зухооуззих сс ща сазсвссике асозлошаєсле зескавсксс аеаєкеовекяу ЯВИ шити сптматєвсає вилов ске спзаклечскха часа писав Ва

БЕКЕ КОН васшаАтОцксВа яснах ептлвафеоює века сраки ЗК вікна. Мелвахжженк кет юасна «часа песскевече каси ВО

Бвіжозалиайи засос свсосасеаця оосводаща зевазихивни вавлтсаская Ка авокадо ктшксасвВзос тазатасяює свеащваєтнах воазаваєеиа чакр та зассспаходи пасли сккв сесиехеацдяає олово бв ававсанлі паса ах за зеновсваса зуби Е веассаааза пецівзослаа СКЖОбсвава возбвлянтах в

Молю ЕТ у ЕТО ТК шва пасти лав ших. ЖЕ пацевусвах вача сосвавнове повазвавсає акжеКеваЕ босвачаиикЕ Мило паковакя певну Ве сосках все сюаа ЗЕ сжНКо м

ПЕД МЕ КВУ Е сссковеси воску ов зак аснтя зевашваоє МО васксзсвай боках тва ввпасесиЕк ваше мсщех ке св пика їж кешевноуваа зосхесосча датазаоват встівоваве слава ссав ше та Її касажсасов зносу паасрсавоста сеспактака снення бен о дж сставеасмата савеекссия шпв'двасиа азоазоляаст сечова вдова БО пепопува тає мУці изусл хлу ху ол сУХОЖлоМ ов Ж мож ут дже Му Во щодо т ях у оду авадишлшняи псувати еанасових каси дОЦрОМувув ака ТКУ мслеавсацева вштедастой зеавоссрова зсоввосвзиаа спе павиве пика В НН смс зазак сееекочевс засасоовсис скавескоаЕ СЕВсоСссвоВ зЗВбдевайио ЕКО

ПпжЕеИОрутТУу ана хм рИМеУМ ЗИ ХЛИДТИЄ Є ото ше КЕКС КЕ шижеЕквишНя песни захв солещиссасе КекивасвиЯ прис оВе ТБ хижевестие вет чикяєс спі сІло лес Зеса зіззакавос бсептакадо КЕН» хобвзаєсадксх БЕТсЄСВЕВИЄ сеЕвакякса Кбедосакх ха ксвй вне щуаваАЕ мщю завозу а завад соши Ел азкакк зх зос зазбовастчо звасоавеех ІВ исшепЕнеккх КЕБтВИВКаМ бесасиее пвВокоцеее чес. завасшсвио ХК взччсчстана зазактваст сіззоазаваш бсасцассас зоашаессво асбассовасе Іо ааассетвсс поза свов аби оссва взавазасає ЖЕСТ КОКС Ох ям штиль Кемпізаасв везе юкУ ками сави пава стае КОВО

Финактссви пес свиКав вошиомжш Басов свов совсавнує Мер амє ее

Квсоссавскшх повавазнайч вазони смимоваветр Штат Де. ше савзсукоак сссиакоракає пази васавтхака сесбаказіу зачавцеюта ий И паицссиКає пазеалукає звастсмови касжвастаз впазаклаєт бачзавооакЕ дя закивашкая сазана сосна вач сзавквссза созадиаико че ставасоссудв восзанвавех вовжвасале сова авсчЕчемо випав ВВ сабо ссаї зпазекчазих совеЗсавек ахтокасевНне ссповспвеК сзсказааве КУ щІнатасеннІх деассваски пахло спав Е остео зсовававко ТВО пеплшваєсаєт стаскапавс) забава ссв ЗІйОНЕею БО ЮВИи певна ї-9О зкавахеика асозавесна свеакасвек зааЗбзисає паасеєсенет влтекеркеУмх Я стиках зУїсктнави текла СВК вовасе Кипаваянов дани тих ЖЕ чУвасствиана сазсЕченвою зелавайок сешоКаншк заводи ВОК ЕКеКах ж ашкЕкасісю ксобосавназ Скот оФає зшучеаиш вом завше ищО атайсананва зиск Фасон посежавств бусеавнсає звис с КЕ падати ваше аасяа фассважнтсюх квиаєскаса стек клг иа виЕе МН акакавсвсв зЕоидсвсза кевавтсвзав себеаблоша сфе виа вища зав піни ваесчаєтааа чекастскаю вососсора сексровсяс зталавтава виеКУ вавсопатаомя саївраваста пиво вово бищеВи вай спупаводмас вабксстасма КЗ

ВЕК Єтксаснсви зас веєва фкафаавих Фест сенат кв ат Ки

КВУ; сут юки М СД да УВУ ух уж ми МІУ оду й гію шк ому У МІУ ми ее шини М духа к сваха шеМИстаей чавласласиаякс еВ ваИ їз азазссвати акактозцека васевсвста зсесісбойана авсфсасави свованаєта з азс уттх доски певахсемя Боаваоаке засевасиеи сан азевана ЗЕ шсвоатюте ж ежкекост сакошогесс пестектвеа есосеНчков стела зва статеве писалася поспапазає спасе асом: спасає З савеасиж: асоєсзекаде васофоис квзовнозавос засос фесвескса зкив звавсвассх Бестнавтт ббвасоссоцї вояк лес сек астах аааенскаве чвгй поні жсовоа чезазошвссс бабастано азазуєионе айечюктсав собазсвех жд ктзссвтої сВаБоЗкТсе вісвеВаєнВ зваосвоєва нгпаснева) мросанаєво 00 ЗТ хеввсвоусахв сакатаенот шсвсастее пасезатєкко кодфищетсех вакасюансх зад кісасоузсся зКсЗвІвой ЧеБоеклаацев збрасстоюи Бощесслеанк век звав

КшжишшЄстЕт ай зм: «ах ах «Иіз обо чих» Ди

ЩІ Вкарібменкя КПВУЮВия шовк У зісжкснкаа пепслувцве сесслатака парк іаскак спосвах пт бесєвиее кв казактксесв кавесксвся чук ваваттас закона спевактаа 15 зевстаєФіве зеблаубвха сосщєвказ соскеназия зад Келво срака твекх 155 зх сраза поткжкчекя зчсвевасої Фставовови восжжетеасвос зсЗЕВоовиа ї2О азиасттчасс зідлжаочов збасавсниа вела ахсва запо зосаачаи ЗКУ завслакалеи пацани пає седсеавоа сзаспавиях вл закис За чипантстаси півсасмає зплазахлтжха асегеланав аеесеюеКкит кормове СХ; питан асх пактозавак зподавечаа сазалааєа авіа пв поза онеат що скоса вспеучотав соззоаачна Фчсоауаєова вити зас аиу аа

ТеЗФащсКЕсЇ всеФнавани стоовлане колода восо їси ссаа сспузасеко КІН аксвцєсатли сома шасих зЗзцІкеЕсвих песавзепов тари КепеКищих й

Час оя вифлаватто Звасастшви кавовий веде пек КВХ Що кевпоптавопе зи стасинава Уелактиаа схнесевима аванси палала мно КЕ. зишкскатої асайестоко авоснцееиа сенат шен МЕС о коса авня Ффіавсвииї зву анау сан а Фрасамцанує Фени енх ВОМ с ЛММЮТМХ Же сжиавиа Метан ЖК КМ ЖИЛУММХ пек еВМ МБма слави е БЕБЕКАсТВ пІКавлоВеЕ воазблпвасв есседеюав екв воаво Упже сівсецеасес свевтанчл певазестав всазестазї тапазоачказ авзасечвази ТОЩО акжукаксва ажфуеопасаво кекс ансвеопеци вакеаеасся сяк МІЖИ саавазасаї бзавапссца нонзазаавкЕ ссавасссвУ вказати Мапевавоив ТВО: акстцаЕтох соусах бесвосовак свсовесейв повксвасеа вазона Ей позазвцавчсвтї «акекцаеи спасе жито вожшееаХ Капоте Тло тодзлехяв Кусто шоролштюту сумою всю твя дез Зако щисеіплямно сова ов зало шток вОисжюбжОек борту іо «ав Хаос щас сасвасзчиєсе автазеахюво «каз ДО каста ека соозскваций ставав адалех вади саше ашраеюєви ї55и павук сазан сановозаЕ Єпвеаачжза кове зкаве зони анах їжи вичсмастсза свое кед овоча взеспазецкк сескшкоков ше сочичислоа обоз кажан мкв есе пю пекжооКоМо сипких кІіщО вемалатстно зпбекаеки потоп спосте поптоансю зисропшуя МКОК ситЕкіссок КодеоеКсес савсадвоооє взасос пекло штпехЕ ВЖИ дати тчако боса севсазачек оавсоачоМме вас шист сласжсацах кала азашеети бодгдссоваа заезискшеека сосен зочеЕацче пики 18 кохала вцнаа пава щОЧЕ «пив ах как ато сизїи ННЕ ша е бив вав ПВА «СЯ шуеасиртнака гзасначска подано сша паска спо чх ще шкода зкушесавшея стсвІзаціс Состав есеке саше сои шишки ІВ шити айв сісти босксозЕВІЗа ківі вок цснаевх Іо папасамаєт сеозахекісй спахооскцсх стае паца шовк я паз петрияа павісянлиа паза завіз севотлао ває е вала хи

Чбодеескмаст востей зЗсваваси постає щен ЛАК СЕа КЕ пезаставсав спевлазкаяй соби ова ВІЗ КсвсвВ Фопвовасах пахова ЯКЕ песавсатех вас секУ свои састшЕУуюх «пово Бак а о вищості сушізчацеце БсксвившуУ сесссвавах восени певна их За асскссавод зпасевазва саввохувкв аЗпзіваєсо сайжеошсас шасвееакех щ поташ освсюве засос ков Басов МЕ иа ШВИ й Са поса шексакиье своих впо шашка. бота юва КМ хапЕЗІЗЕВа ПІКІВ сома зхгапасовс шт семлВоАх НУ зачоассвасЕ еассшикУ схазжеав сецазУувсос запасна сова нах тщО

Казав'ваах пазу осваю бпссасеває завстоевисяа векшсвкорає сдоа се ЛИ ие нн НН о НН в НН НЯ су иї

Савседкевшиє пиво єтосвав вслсомакаса зона вепакт сбагцанячси щузаао КЗ в в В В и НІ три

Фзвавцуагьано дили ХасоАлаюай дл пехв сли сита вах ЕН ново пут мг степу кі Ки Оу мой ху Ки В в м Код зок иадешиоми «ск тсс увсшиашх Брав сша паса сЕКесЕ шо пт мопуєтть пово МОЮ село мо и ють б их В дя фе код аж колу сп опроуєую хисту ис і пох жу ахаплвланлий свлнхвИсихИ хешникиасах БИЗИПКВш ЗЕлМВОМиат Іа КОТОВ сову щих окт Кр ох м У и щоб пом і гум их пух ково плиту пазававтахя паза вобвасацО вгзасвайиато сеписесонцяа шпал ешва каз статки вот Важке дації годую Ко двеюєк ке

Чашки КЕ ОА еВ Коростень КБ ІА пава сака ДАІ

Бісквіт в ев дидектуди доці юіІкдЄ ффожекщі Біт щу зскнух тлсмнакачтлх все Еса своп нава завис Кишосавашао Мозок ТО ноут тих садом тик ре и сири Кт Ковка еВ і дикі їла

ТАТІ ТАЗА КИ СЕМЛОИМІАКУКЮ пишу пяти КУМ а Меса са асист ща ДлжхІ хід ик ух к ст дур. стани куті У пи вдяки ВО фе во рю и мор ув и тд ета ХК мах ПОКИ Моск шишки секЕтУЮВ АЯЩИ

Кок кри ие ном Кк и вч о под суку и у УфБоез ж иух их Уа звкЕЕтКсУзиЕ сслацайийа пика зазалапу полках ще лХчАшО вони пек ких ек фо вд КО кор Усе гу часпашатвки ик теК пшЕКОККВКЕХК Ач УВ

МеСшгрріх пот. ве «ВЕ Юта кри неви ШХя

Оки ДІА он нн НН «кжкшх кава чоювна спадний ери як А: нн в но не НК НН діт

ПпХЛра ла тАух людин шпак МИХ ЕЦдиНмИ ХК шсиВвОа Ввокеавмавей живе шо секс Еакас зак всава сопсвааває ства еае бдоайчстьв едаазадади а

Еш оса шосе поз ашетєсе со спала Пе добіхДдаме Мо зем жое Крим спла МУ мое ціх ІВ сходом ру Кг Кт Ме вусасчоев списує капела сои каша Фах пеххахлии КУКА х пи шеф уд Дн В Б у дк вдо ско сів в с ціщ в твх кКиК пічеко соду тп певи М ссовевненни базовим ставав ла зві а руси шум м НН НК НН НН я мих дитоволвихМмУХ авт'тсаави она хлАВШИ Уста У овалу СМІТОМ Х ЗМУ жди и Ком ж стр ий Ж об хх труси им сину фот свт и м ХА чЧіазвосвтшах МЕШКО СЕ анамиє форс сосвкесосса ас севая Мю шу ит жити пуск в люду КІ КО пеки их м КО ду В Млюгі штами ЗК моМии Мена са ссавишниави паза ских пеАшеКиоУ БУ пд пюцдУжк тки ох пово. падку кити поп цидщ с иціу ди в да

Часта ле збзасеанаї досезсвовло свивнелино Бадвзйвавев папа мае ве

ФДМ их У молю Му оя писк цими ГТМ хі Ж дону в ер а ат вазослеашики ВЗазтазсовеав зассоалик сбсруввиов Сни саме ши:

здзіазауеу: завасчаках васиассвию как заочна Кекс та В далека чвевсечавч пса сечею завафекох пев ко таборах їосовтзоайе всих зопсвУвиаае зесшпасевх зокакаса я ТО

СаО рои зазчптецеисе ставсоессо зіпсоване опале ках оц ма ВЕ асп чазч птствшсст совспатеших кеократавяаши ЕКО ЕтОЯ кепастат ах що авихзазав СЕЗ ваво; сдаванивк звкавахказ вес спека й акстазсвоах паебсоланев воамрахлвааа сСопедичяанев шеозЗашпОк зас каВмоВ ЗЕ ствчсвохи чаптбопапав завали виако зопавлсстай сеазасшцах спали х ВИКО птЕхасвазтх всеж таФфаневато зУшСЕКівах паси щуюєсВ МеВ БВ зешетевежи стезмассвкв свощеєсваи пехбсаєиав пава песен М1435 зешвасткихва аасздкасяя севстсинав ваевкесаїтиа заковаващи СІ паиех Іо сис повоче впали Кеграм вив слина фена щи тва УшКО заїхвакциху спазми сич чев ваствсувана зона зм имиа 52 сквобзассв звеосвайва сова совїа повна есв сааскцаах апа ЕК Е кіщасскЕсА зесзоевчааї сасоавлеуа бочка асо вас коукавосо кам стЕшисвава щфосвиавосов сазоксанею сбасоквоссво ссваесвиеа сок ВО шкшатЕкиск саке кссюв васиксозує атававтасс сосочка зшхвисисек МБО скзквасеоо стеиасшеее сбасасуеесв вовна вссцуаааня плен тев ТЖЮ дейесшляата аск св азасоатеє зоичавоеВк косаскавих пак І15ЩО деле вахти васю алесвівоя Мпвакатешх уасесвано ша тя спека піди еще ссулюзасива сливове аа МТВ «иа Я

СЕРЖ УЗ ха ДКЖ «ло Я» кави клав потом ах

ХХ чу пути Ви ч Ка ми Кіт июня ножик я о сити Я и м Кдеком шт вишлавиазХ слишенанетми хх ахи Ж ошИжеКсЄ тка васмитсеиє ККУ є Б пхмитеь цію. хо волю Федик, в НН НН диких слоти чшхекамистЕ зе Сакс стсейсидещ сова Ми жк ічихрчевої АаКЕ нм сідел Кидати к тую ее хх мив вався кАту ехцюваесья зЗсеавакіак ХЕ КУН Ме пла дути Ух и мо Кф и: поз м ре сю лю ДУ ту ХК І ДУ гру: - ев жан питевсанаве секс їзЗо,веяксах взапававзав ачавиававаа Босак яльИ юшижши не Ваха ПЦМ их «ТЕТ тих, хх

ЕОМ с ківасрею са тЕу ха СТГ пох лу т

ЖЕ КЕ еко нн и Не Я «їй щевнійовній Спзікале

С КНУ долина кож ксрцови: палі вим Жертви два и ледве У авсзсвакакх засо вана Камаз зсвейцасай апасавна щи пори кім То оо хотіти ух ит кермо диво зи

Ввід ктаЩа астми м зав вимх чих пет еваСКе КасЕшАаУКх Ак до дію ти Моди т раюю БОЮ итф вужі яю по ОДИН Киї схід р ки хх кв оре зх щишвеатиЕкхо умвеєлекншх хе о зсуву поса ако шовк АщМ крики уа де виуК діоди вих зді г пикецте мож Кк вок БК пшаАталтата пани сш ами шашки с сесвевсви ашОКавео Кз5 си кн в в НН НН НН лих

Іде жор дулосихьасяК мен астезх хром шк «ка А НОВ. деку кл оте пу ці пинаУдІя Юда пу М ме ми, пр чи лох асжусвнося свиВКчшеще вшсашнесовш засво ЗВО жпакВ зааваВп 5 пзавзслой Зрази поза сат киев со оКо спосо щи

МІЖ ЮК ПВХ ОДУ ХОДУ ОМУМ ОМВК МУХА ТХМ У Су ума Ку со АХ прив щі ща масці цк цу атак кхмкх во в ке зи закчзичивак пданавикоава сикЕваскув засолу зимою сви Ва ких Ж

Кк дім живи Ева ці Блум цкоаць Кік жуЕ юки дви в кжхкасаснд сссзаккеви кОКтлтвзЗав совлцевсавВі папа возах Б плукоцітуююм ситу у іх ден мовити рос ря Ко п ких поко их щу мк пуху закескунав зсвиасечоа стада песавзновкх сввеЕвс вавочвеаавгх КІ «ЕВ ТКХІЖІФуІх СУ ВК ЛУУ. МЕХІКО акти Іа салати ав. АЖ: суд ККУ. дос мою АВ ДЕК сумі так де що Кові чі завеаишЕих засзалежака соски ссишавасск спалах саме са кт пе жор муки при кдуих й б ефвиюих фік вх х В отр ітих че ше ию Жофантуих вдлуЮ зем

Фиазснишаи ансалиийт слова шоб анаст ощисаной шпака БВ жикАамтуЕ вико фо муж. пмодоатеюуит ово ту доль свити дод кава мг свктачсенкІк сскскавощєе ЕКалесаюВ Какоесетав собдеаетсиму сапсвелеє иа сн вн в НН НН дих

ШЕ ЕЕКЕ опаАх їхтЯ ак апещфахнона дилазоНяк шХЄ Таасмву полова ТМ пазазавува яаствіусвийх аодпещескє есе везе сФаваекчВу ЗО сезаоаєкиє бат еви вт ешвоке зсчавеезчасях ссазанічва света ІВ ме вохя авпзновуях візцасахая субнсваасє взавтіжкоасеї забез сзиа ХВО «вадах праг мтм АКТ али имий МОСК Кола КО ша шок

ВиМшКи ВВЕ пт, кшна тА тата Мора СЕ вруВ КК и тезах чаз збе навкя Фсрбалавека пелет есе шелест І2ЕО ескцассттас завтссловося зпосоаюае позсвовчте щесваиче кепсВсксх І1З5О встбаавсв ства свачеаиачаК сови ас пксвЗооска пази а 1Но шпажках засадах беКщетаава саваещот шиєю лапо ссаавачани Ну висчівавах аа свасна езнавтчка зівеаадиав аковавайиа апа ЛОКК лот севла скехцесКеч пачахстасв зусайвош сповосваве Зсвавасава ЇБО шісчпасатио зйомну сечо с шатавуцима сшпляпатаии КШЕЖМЕ ВУ фа вищих воешсшваКио пипаклтто ахсековас мошок Беасоувсанав. во ктасчаамис звсаковусь сиза сажтчвавех колесо весло аах ши азеесаєтох Чапека васвацечаа восвашева чек МТ ду» о «я МОЗ еЕУАМ ик кий» ВЕБ ОДИаІя МВА ама дек хо ахкшссвскка звана сьва ЗЕшнОвоцам давався дацадаває пес юя ЩО аоспезахент зве сеахчаконе авта каванви зл шкесВх. Бек На

Киказазазвт «зала соаабааеча попозаває зом сце 180 правша вассвсзиє ден штая зп засо ксолшвВе педа ЖАХ зЗдисілетак спосо висч совет Емо фо уюют. вебуодертцеа А зивктчакав звазавиавс пахавсссах сассцвишис Капбзасчоі азам де зцетазлева зислазажата саслазосяс азесоісновВ сиспстисев личка сВсх и штхеашкесвт Епдасофезца шашштткала Фокса БЕсаСУВОсЕ шасі ЗІщКЗ кв пчагЕшоскву засвтакЕх ХКЕшувавих звали ааецевасса афеукеккг Зах затанкссмтає МУооитлиррї скавцваесви Ковазіеасат вата сопсожевова БО кхкцчазстисв збтоузсазст зошІеекОкО Корал свах вовною кеВ ХУ аазозсвцсв заслчаназвиї азот кіковслмєвае жав прова жд пвоейксвися кави ск саскатї вазеважков себе БОМ УВІ ткО дехазазвкхх Зо чузк свахвстаза пазезапдиєв вчасавосес зовекеаюнив їЗо товасасно збе ссамкх севедсацеасс завещахвах аесеанео зовозавкт па тксощечеаи пвелкасаоаш шкспавновЕ позазтавав слецаслинаа пал по сс акекх есзкачазах завадив садова вела як зсопааея Ме звсатсуадпе дсвавссвав взанешканя сш ккмсокої Ко уовє пДКшю В МА текедасках садно сзоапасахе сайтов ссср ва Кан 15 тІхвоасвак зок двасх созспщсосоВ бесавеенук СЕшИКЕВОКО опа ВЕИО птназлечх зидкатссих сзассв'ооя сдипатосмпата МЕ птсваси ст ограхтрв Ва зіхквсхзаз слоцоввва бішсспавева воваатлаці двисоашсю хпятевадЕх.

КЛиЕ чЧчечеасназав хпаласкктщ ессмзвтсая восихоривис сдозсвкачеЕ впевевесЕх їй зехакауек здосвтщована соках вас вазон Мепвабуевз вислав АЗИ чЕсаклсонах повесочаче бЕженКЕтУЮ Ктсхвзавай асавсавенав сосок КМлх катжвасаси мисцививосї бавозахиє росі освУ ЕК ая ввовашати ІБ шпахкмЕквис ткахжЕаКик пебазадзаа база сово сазбоеалоя далека ІБ аепапектао запсоващсє впала вп свшлса сбеававорови зЗеВшВиштя ІБУ асттсксацавиа пазпаданоз сопакачиаво сяеавашвис сБЛЗшЄЦЬ ОВ ЕЕ

«шк А «кі ОХ «чшіш ДИЕ «Із Бевмлвонов сити В «Яни Ж дихирзазава поту вазсувтвийх евскЕксая взшетакеиих сисвеошее пи пасок хя пава вих совка повин ввезення басма ІВ авасствость записках спавчавске тозазавиаєк свои сома М плскаптосо потокове є оче сомсвоссная сот ако стчсвайцеа «БО зазлеасстшиих вікна сови зізазащкає саввавланпа шОпавтакоВ ЕВ зкшссссвних зіатсвивиК їз Кс ваше савав шасі КшпсиВОКе ЕЕ кеассакєйвє ставити бетони вахосковев штесисквомь вошей яки ам теанпакес тиви соска тоЕ празазтоеї авесксовієв оз ваках БЕЗ штуках уопштпнайис пелпспасзав заасакахжо звавайкяє паса ми УК

ЧЕМ зкшеашнІк два лєвеаси вашестпат шЕшеМ ЕВ сша є КН ктхгазавев спагахаскУ соссвноваз аоасевазимя важке сва зала ай стабакеЕксахх зіавнави зовано впсвавея печеекаєаю свопоуюеють то димшкцеов зогависвов сспаптопавца бзавсатаза збеєвстах дао юцю ТВ

ЖЕД луса ЗВУКО спи аІнеЗа сових вегеакбаюа пугаплямАе шо чеказавата зопоасспавио спалено остов саеспосавца доза шаєео І зсеасеивЯх втспеесеукає вжхдчквсхваво вставок вевсснесис опе ашека Не

Кацтссвоєх Зевс витече всивашекся двактзеева пеабаАчексМ МІЯ стЕдчсами: зас вана свеїзасаве влдлавтвоє авбвяєвахта песабзеакев ТОВ седхщнавнай саазсаситве кетанов зеазсвисно задавав вва неа ТІ ткани тавоу спепсогвихК ощовчетає ЄСпассевов Зала втюв сто ІЙ зЕисвсват пазавиесав собу своеве вас есе єтк яаоахочиа мм пора ит ит ит коки сних опр их ви у ок и поковок оцом ово попроуєх лати лсрт: дез вас сазавивв сябагахата песо іо в Фокс о В тини зав давав ЕФЕ вІа вх «Олю ках втв тиви снаги песни в вгшшииши ВЕБ ОЗ яки КВ пек Фгумолуєхи ти коксу ви Козу хо хо вими ре сви тай вМахнтевиасеав зплстатаїтне чипакцчааву сасавававив вишите Ва певаие їпо

І ду еюитйкх ФВ Кома віх. Жду пам вах. мітки ее Ех хв кажи ково рки пттллюусацхя зага швеюшасаВ ап МЕМ пли каш нан ож кан фряии о у, мок суюов юю по довжини усу су пижІю ци сих сих ук я пити касуют вжжтстиамейї Митвкатяк в МТА орви ПАЛЬ ТТКУТУ бла ха М ТАТУ о жк а и п п о ки курити м піти печу ю т сів ЕК пах 5-х спасацевее кЕЧаАссЇІВО ХавишвшвВІнь БИКОВ зеагетвя З Кшжях дещо ху оюі и Кік Ключ сук Ку щоки пек щімксксвов о Кос Ми ких ЕІ

Волос нхитина Фоанвслацо Кола сколи ше КМ па кала МЖК

Кислі ок ж Ким дими ик ді ве КМ ие Б жи ох пордх станах рі «вра ллитнаВ шк Кай ТЕ ЛУ КА МК ВА Ми под р и НИ НН НН ЧИ Зо гх хкчУвишеких Фарбу є шеЕрЕ аю спасає БЕпОечеЧЕя вав жево а в в НН Нв НН чи Уущкгл звивлчаата папа слава запсецвеваЖї бпвафтосзнавт сепштоеаках мис ос: АЛ ааскссвек БЕсЕВОКеКЕ саацааао діра єВ БОБ сеВоКе ЕЕ ЕКВеВЕ тарт; всех шишках ХТО М БУТИ пе ЕЧИХ Іво с гу ле ум ана и оту Ки Ж Та Ки Кан ИЙ ДЕКО ЗУ вен м ве ко вс о а о вв а а В и о СМ КЕ о з в в и Ко М м у в ов сво «ЛЕ. дерти ру т КД ДЕК почую. ситу

УКХ МАМАЯ АНІ

«ЛЕВ щу вк. тику ек НО

Ж АМАЯ во НИМ ик КАТУЖО слу кох м.п щ сш юка о «КА вжашаьвмвики МивКіале код шо св 5 ших луйтіакук учи пе пвх тт сти дію боги Во ик ук сут их сук пре дії хлипацелие сира строю шию раса ВИ слівце Ве в пом У ТУ В сс о КН о о НН на ІНН ее жке герц павансавеваа Задвзадвсвавй слава лассве зишиасашакх щу МІВ Ми прик лежсзихихиметт сморід що свтж о ММ іх тчих. бух М божу щоки Ка ВЕ ОБ

ІШЕНЕЕИН А Я УВА Ж МЕ ТАКЕ КОТОВ ОХ БМВ ХУ із М Лю р НН ЧК Н пт пишна кове ка скор Евие пасок ОД сЄхе Зак хОя ми М жди ВОК кину их ужучІЖ М оІхииюю пижуУгуМ сиж Ку од око мо гу

ПоМщІЄ Ен ХІМ Оле ІлаМх о вжи У каштан ска «МИ п НН я і НН НН тидйгт йезавсосазеас совавчаасс паса екекх Ве МУКУ ИВЯКХ ХЕ ЛОВЕТ ОКХ ке

Ед па доки, п С А Ш окрутижирі що ца вом кох оц кипоУх до тжЕлстажтх завсаствиа савствівта вач еотанеа ЗЕ ЄУК шалдоеующая хи пов ци М аманиу сем щі М ВКМ дме МЖК УК пу Коко щи скат к пилюка ХК шоу вел леми сх Сея зсесозуаз зкЕКсВастї батетазваак пасвекиваВ КЕрбоєєтев ввозу МАЕ засешнсуєюру Стетеавкекс аванс втакевоао зазексавка вадою ФК пайлжбачанас висвазоаааь сезавссовас бусвасвавя сСекжачаваа зач ваКх Ей хеатзаткоце ваасзснаає ввести асан ася з'зееКате стчсеавакЕ ЗЕИ зпесзааваа азасеанаеє чари Е соеповабЕї сязаеназиє десни У кашкет сЕ здпавасрев зазнав що фор КоеОК о задспассвей сети ватя копав сабо нестве загс ає звик ж стсифрасивас свасвкосне засосесвкя Бас осаве вазажхкоссв засво З хптсвиксве БЕцеатаваси вивешпеЕте бобсцестуя дейзавчшчс сша о ого заз овсаЕ сесаваєноа давнє авкалюеазовв вачксесево вшквюокеКи БОве кетскозспе сс вузося зов тУу фраза ЕКЕВесоВав зовасуєва Кене зацчікоссва чзсзевакаса зада асеео закувееає Кедкайсетя баваскальв ХЖИЙ «хосвсхеск зекчевасв ас тавЗава зозДдопаєта азаслвеасо екс КчЧева ХВО втеазсваси паскясевьа аг ІЗвч заекавсовсоА если Вивих ЕКЗ зикавечтназ севзнкакает секс оова Зерова БЕ Бек шуа ее ІЗКЕ чоевасчкчих сода в дчебаєссаве сазсактсає чес судове їЯпиИ зорових срукуковта тсзвкакасе сасвасашеє астоазесвив вваптесава ї15що зва есів вові ссзака ассаакєавк фавсоваєва сканер т заквосеавю Т58О вавссаФи Ку свсвих азсвавесве сразсбосавкв сбавеекмкоЇ базовакечи ЇБлО тазвхоцататє авссавісає сабваастакх пек твесЕкссваа совок Ха ОБ «кас сос спе накев збосолаєее Кеактовссва кавасвсвкх азкековУха 1 аиєесттатс пезааюечєс авізастозх аапассзая зесеосзаси ебрасечих БОЮ аск хаба ІІ сш УА «шві «кій жщНК «ши тиша нихе «аа 5 кососечи НЕ соазсовеве калесасї преса какх пасоската пса щи певчекссєса аладвачеьяц сліассмазвеч асасляасопва восеосовоа есавичан Ми вспасчачеюя безазаєсеос васовешхшя шЕжЕтеЕИТХ єбашсмжвих СЕН 15 ведккзаснке сспаєкемаз засесвовех вассховзуае Фкбшаккене Ка ексе п шик стоела аопссавіає їхав пава спевея зеаваавсоя ЗЕВС о зічасалУка чес ованавеамй впатаЕКНКа вста тасу аеБЕкасВк сававкаких З акасосвазу асновкапав апесовесес тссазавсво виточки я каперси ся БЖ авдтетакцоая Кишсепемт зватссесзя вето беееоєтх ЕКкеУкокавня зо дазазекох зУваскатах ставцекик садка бспвловеце Єашовеаюсх хЯо впасти в'тиакоат акаклаквие КЕКОКаких бала ніУкає зикЕнткавтх МО

Качсезасеме кестассві асазчесєняка зокре й фот БИЕлЕВКошИ ре твескЕКтата сатоекжшену бкжсавзаза каско вкавоазака ЕЕ ОВТ КУ зискассгллоча псовтдвахс засжкастсв сосбрЗезиеих пакцецесаєч араледакнт ТВО кдсазазавтао сеавтіКаху повбоцако) Честаспоза псопессїзаа вела еКх шо песзацепсяа ассттазасла Кассвівоса беспикІкатс таксесбсвої ббзазпаксваа ЗЕ

Ето свасх актсасвова КапсзевсВЕ акскавшовай ссосесвесов СвеБИВОВИ о квезоазизле авсавасзтсє Бозі воз ваааатавсвст зазксзакае чис МКБАТ зупеЧчеклавс згваваскадк ЕКЕЗаеєвавй астааеивев саше БУ Мао кхказтініле зчкаавасев Еванс ета жеває сзвазааазса зас акулеє Вл авганцааиах всвизасеке сцессмаеавна повсосавав сеанс сповна я ік песо амсх вазу савео тавезекисК став двасіавасле хОсваВаЦУ ТЕО ооо ди пн о заой попра аю хі ие вом Кажу г діа гв. Зх лютух сзісквадех завактавіо шкаоасмхсва вишки єтарроетиа кесаватекв ТЕМА себто уник олувр тв юю у ре оч пи иа и п а МК ВК ЧИ ЗВ ЧК КАК Я я люки семлтосвсяних пачЧазтчнах савазеистова питав шебоашисви чали ММ

Феодор шою виде пику ук ую у ери и уник вир и ум Живи ВВ пут путем, З а

ВХ МО Меси Хассе осво аопЧчаваєшас сіминисаєни устано ха

Коул пі и куски: м ху се порту ую св на ту пк пів ув Я Кох «егаттвксон спасає ссслшатак сезавсавав воаякахсви засос кх КІ уфиеМИхИ льо стоку жит иЖ су у ие ху серржоруик жі ие своих уже дух уми, ЗО вацеедиаве пдасеновоя шиасасеоа чес оче св ес 155 пити трасаєи пасли свадавеи КЕ вшити схх вдассвивиа бедавашиии ч гоК їх ке она А км и чо зн м ма в и М М о В В а п в а о В ВХ чик дону рати тів міти ув іно сир тов В куки му ща дО ду Кох чи кі ват сІзЕсастсвеа всослинюес вавсазЕшвЕ есссаис века кскиас блю 1259 здо иаєв се всквсв писана сиитеодваше сини Коня м фа Ки са ПІНА ВШ КВК Ю ИН ПМС ЕВ но а а чи ач Кен сг Іжу лугом жтоуом ль ек нн ок Кал патсаснсевкв слиз бепаца золатавзаяа шелак вавощиєтосв сит НЕ пт зукиі в ВО руки іх де уи и ух ен я и ЗА ен паро ни СН В НИ А КВ ЗИ тсвссисаКЕ косими бтадссотов секс БЕК Спо Є КК прожи ти я ху у ку Же мк их у Фежсум вих ів ки подію шу КК Оси І лЬту чер кщчеки ше ле Пп Епс КОН авнмНу паса вижене АК песо а а че Чи а пи п ан В в о З а о а Чим а а о в мих та КН хх тсхвлешна Мел шх «аа повивазкаві мен гоах кашка їмо зазавновав пази а х Кк рум т хи ха ж А Кедр «ші ОХ шарах СРИг сей ик ях лож т ких к дув саїйх Фібсіде тах м гуу пд «Ки 5 надан щем Е. дж рев фллтрвеєти м крило я оду о Керн аев що ев квсаю асо мвашицасапе спе дае швеасмрасхвах КНИЗІ шо пу: суті ють ПД мою ту о и пф ж мих кожухи Ки осв вм порив щих ула чачизкЕчав зсоксваоа бебекепоко кдапсовосека ївсшксовНВ Завивка кю зиск вка ви стеки сф дало и вид Ба ке їй масках ккззазквовй чавопвошкакт піз о ак ккач вок ДНО корору фу ов С тА У ОК ж жи В жи понти жи мі рн лаг кЕсеаїчесва сапссозавс часи вви вашосспасна чакевчк засво о зи ня поруки М вок шия оя у в ушу сюди р деки ВК тт ТИЖ,

Кр х ля алла іч аВцВ Сем еаН хз ча ВО іх З ХУ пюре три ту о Кия вом спри рн оду ково юю КК Юди проц в свити ЗАЗ аксвлавтслва спаеаскеч зсикекавест взавесиями шен ско 35 кеди НА НН че в НН Ух педвета паповаФгиав да ашвиве свои ес веемав ФЕВ ве ж ектів, лизун Би ки дяки СЕ Ду лу яви Во ЕК ТК по у ау шшЕЕссоваса сазазнчказ ссапексака пеавкаттее пс еши пава ше своамчиасє пестнаїко всватедаяає авжспекск псхвтсерванло залив в пазацевазе Мозсвссксв амЕчок ассссвоав хочеш сала са пло пекеЕллхмаян валпастсветч сЗскзасом кЕпихеассаз шавпеокозе мМепавчавя щи піпватссете зоазовевої БутаВзессва псктасахев збаватиеа расжнаюнм ТЕ папшесачак часах штока зак чаз спосезаКОох зіуспузавх та зслтасанеги соваачеаея КВМЕКфлІмт Кетлвссшише шоавчекасс вера ся ща казапефниее седксзасьо беозшоавовеа КбвасшекО шпдаеаавахи кадсичкка Ва зекжтеацтач пасти БосеваХхав зе дуюмиьх впешвсайи лу лКух З сессктсовиї зваволассй запсезсвох всісеза та сеасо оси кавих іо запис пак задавав чмлавзкссяв абвпявасх фововикаве застав МЗжО «вікі ноаваєх вза ЧнеЄЕ вавхнатаває Кбжсавккає Зевса атає парах їтаО аказсЕлука фесавоанава зевискавас всасалених Бен сежа влваасеа БЕ апіваватта кутку завісвакие шбассваєає Бовсосвах жов йо авсккзааєеа звавксттся Ксеня ворсшоеиай вказа айви ая 125 шезжвссве запсвкжасо ше «заюкоксве ссТевскови баса Іду пмрсауУяк косе свкс соки сбосвовази зпазисвасов бак ссвазва ша зесексвася саташчацс сосок свуваУвазе взіавовЕсне сват Ма пучснтатейає занскасажу асесесвома асасавиаи восвскассо азсвакеия БУ папсцватацет човен сиввсташие «вемкешеєо заасствчвех сова 12 понос зссовюто студен" воамувоєаєкх їпслитанеке зовесавох МЕ пед на косив аск ароя скоєне виго сопла ВІ едисуасвс січроссвве пазчозатчах сосасозеена асзавжеоссви воза КО й свое уяимкє ФотсассКЕк сежостжесю сота зош сексу івЕИ теза еат азс зави мочки са укава воза ааав сваспааекх М зсіаачскат собазчатска остан оваї збазївиоеї всваскакть ках 1585

Вафшаихуея од еааа У 2 «ха 5

Ж

«ах пЕх «Кі» дфіусівв шах кап ща зопвайачаас впаавеааніца зсвзахаднаня стейоаоссков швподавиосо дис пазтта кв кекси ас шеєтт ачкасакоєв школам швом ека ссавця та зпеуссвсшех сасонекавн бекахпеок сажа зстосацесса шрсавкЕнова ІВ здзоптаваєте ввасисвова зесазсахас соашвазишко саке слова ще щхагапіхаво саше нсзва сбсовссваюу связи спасстсява актуа єя зи чсдвссвоас сазан сесія є «пабайшшес вашижкоіуви ав аВОка кв знватловозие вози оав сеоонававка зкачтутав сова авУуковавсшя 350 паза ахи беівавиадоа сезони ана «евпспавощеа пава Багасааах зно

Чесваавахл Бівласозсх звекакадсе ївтакакеак апп авва сива: а кітазавнав куізнавжеах авкснакеве севасзасаї бвівавесва кеекасвиая ев ксвасшешаса вас ає кави кава ВИНУ ех Ей заїтаскяука спавасааих содвшитавчав вадтавзскаж свксхахтваз вебвовквий зи зваїнавнкат сбекосжака есавнанкса кесезкекає авезавкаяу сеавабавко зво зваткткачак сесоковаска вдова соска зваа ВІВ ЕМОваа капи ддо свв зазат задо вссва доптонлакає сопе єн Клочек ав «в босвсзнтаві девсЗщерос ЧевсдасВее «сс икх вавссвісеву певсикчава дк чинна са четчастявоав садово Ффпайпалеза вКссавшАик спина. ТОД звазвсавави совазавуцсв зеазласеавг сват сеча пове «288 я дик Кия КИ ож жди лу вих сти ікиищя Вуж и іти иких пад Еу ВІКИ хх ле лк савсаказиа асбаассайос сазксоочачєю спасає везе аия ее ДАІ пак сдайрсвачди всиалитищ ставі мо сег; жо пре г: феітих бах й

Зчшклшнкими саме кПа со шаввиМми пазЗжсчако аа ще А тесті Жатки снеки фев віІ й КТК дитя дива тещі кадчсцінос все теН поко щсае соках шва свеакУа пазах Као сер шишка пишу єи шихти сжаи СЕщЗЕКЕке ЗИ КТ Не пу кеутчихогуи колою С ститжстроиних еМоюоу мачит о у то же аж их уже фо плов юмор ЗО жКи впишачаківа поса очов швсераполв свестзнєст сЯсзазчиеке навлвигвах Ра ккаоссзаїохи асречавово сезон сеаадесаво ставив ав аа тий клав МА ХА ІЕМ СКЗ ОИАІВКЕИХ КОНЮ ШЕ вряхУ В УІМсАх, ви авзепшшевеки чес сазалх сало «аву денти папельу їзад ММ нин НН и зЕши руш МаВа и жан в хлор ЖоеатлаНииє висно анае пав зве кто поси даова Зекакайива Сорок смаком и ре Би уки ВО трудо я иа гуде шум хх уж ря пики ут зцо дв лує Фен допущ 4 ди чи шзскесв «ач ово авоескозаєч асотсвошиоє асавеввове вкрав авех ча зем дір тиКМ М ар ВОК о дю кої джу Кук ІІ их. доб щи ЗИ жсвіалиаи веетлевих Еш ючю вира зп Ву АКЦИ їж щшапжшоеаслива зиавсса селен паче ФМ их ЖИ

У мі сухих гук ДІД В мою ся жи о мими мов фен во цех поп миня з джих шповсквшеи сети сесспесемея визнана шпссказваеюс ваше ше тую втетв гжижЕК вові зіва Кізі жнив как реж зору стели стиих позу еацш щих о пивсадиаша ВИС СІМЯ пох Чх Є Х їв ке Уваги кава вімчлуцоцощи пікс це ціх дб цик цьо деку рт ці 35 пише тв зе ксгих бопазавайз зпапавлуова чушчоувахоат яптазЗКкнаш КЕХ позна кавих впав є сови ера сенмЕХая за тв Оу де ух, Кк

ХА шо «ЕДЕМ ВЕБ пирію зе хи МКК. шле пулу: жу

СЕ же анпе щих коду ха ях ОК р м о в НН и НИ НН ЧУ я пошеченсиух слюдссвалеає дпедецевов Ззбвисечиа попсаваєкем випа МО ооо НН о не А А жу у ви их сивих утри. еру ВВ ку спстзавещися восаочвасоса Ккал авосававик соошвшвищ спитає а 19 пбтртве туррию се Ве Бо ви вир еВ ідо гектар пав шпевзлхмаце чопосаежитег келисткотаст акаде лекс пава 3 пуер ЄЮ смс ер ох омо ооо димові ЕМ зу чем кт суто куту п агазееесек Ччеповзазчаз есе ва ассочавашася вошсеестеви вептрасесо А полк ет Кок ово вид пі уесвт правом Коган Бо рев чай коКЕКЕНКеЮЄ Тевканвснаає баба авоє зварка Врековивеа гавкав Б тЗтайавзена блауслазив вувеаФфкосоа астасслашо дчастестатвое азаапачтая ЗЕ ттакастаєум цеваеакто стакан асраслесвтсв ке птаксавека «тб акідваавсву зоазаскукеЕ бавасзвусьа азкавсянов збразкрнасвя сзвеаавваї о звівавнсв зовесашова сажпавчева азу ааца сеї свева ВУ ІВКХ «ай звавдачаса асосовзеава зазесекееа забою сувою соц «п пефсваваєї бурцдадесес обоє асеевезак осасскаава ОО ка кв квівсавсак хпБсВАсСЬчЕс Шевасиессх Часастесочаа восидацевия казасчзечас з

Еко бесрювеев ее Тости шеалесясеюатю слова тв пасвазочачак збеневаоє щфосезстаз пасе асавсашоеає ваша кад попатсоюю зсосеачеа сваслсгава айзастасся єдеснеекмо кавова зо ассаскечис зосаавссис зва Ффзасвияка задо ок аксон зай кассвотоге счЧечщаеКеко сеосвсбазле воеззозавов соошиваве: ашвЕессох зв совівсетво покамаайву свацобквке зазсасеееЕ скупа Зсопорекго івВй сховок Зескоевецу Чаадеавочва зсааєтьох зовахаася Свбанесаяя 155 пиазазаваа жа савк ве іже «аж ж «Вії дО «1» дих «Віа оБоіївтаеа гуде іт «ан 57 зссостовав завозу е бвуззсщаце сссенавсю Єпеал фіат Зх статлюесІча азеоякави чекевсвеме все иЕек чавасшотзе фата з БЕ; агсваансіха зассекааве зазевиквиас зва снаа спа аеє веворатоемх ІВ псачазлвмч сазсанизов ауазасоюта ак таває Фраза ує фожетавиа ай аксвваковс какао скікавацєся аскаттсзбе Ффедферавосся кована за счечавтвзх зсесаавуас сртотавеке якшоссоава ксесвааааю аоаекееває ЗОЗ чеснспавут спосте зшита акавеенумк вшисошнмеикое тема р зивсшаиМк фура ассве сясизаекца шоссе павфіусазко боасевацує яв лоза саван повсеасеавтя бе еоаи сг хм кВ ВІ впакадеасв песЕистлида Кіста аешипоаз зносу си 52 зЗиакіЕКОВЕ таке каска зовано пасок тва е-о штаелесаве зепечаслів стисАСЕвай авзбазиваи ЗПС ваї МЕП ре: дабитанЕкУ кесазеееКєе Косово пава зетак забесвазая КаЗзекеаси ТЕ щшізвадиЕК вохтвзасиає кекси ассенаєшаю банкою Комп ща квалі захса аївастсвав впелізаає спо заново ов асеах ан вакапаланаз завстааавай совка таксваики воавоаескх вес З квсвстааз славовзавьх ЄЗЕкВЕксаЄ завівехеео среосвавака зИсежешоюа хол свакавска Ктссснавоа сзшхавсваа авкеижечх вежах попе анема МО аксвиютовос ревсесуко зозвчаашке авесвасвя радо аск що вттоачиплеавс пезпиакчини ахсзпеаднавя Базаяеавиоя всех КТК крав чевсвастх кчсовесна баз полаза зале чаашочвисо аа або вусі ске бастасеакаєс сасвоцвіва сазвсцтвте асайссзна сових ІЗЕВ вехсавтио амезвсваваєс Коаавувияся вадосесвай своею живеш ВЕ чевсактаци зсевисаці рак щивев зе вовиє азвавасккеш соц Тапо

Балта натнтє чек саейу срака т олія улов тенанчУ пери ВОЮ зесвізазаа звана казоавсосвсок вес ладааси засЕпенея сопе НН азвапкеавиУ запо сеста зквосснаво почесно шлаки пазазаавая ЖБК

Франк ся «мтс ское свакаласа асисвпслт спаси ша пера ТБ беЕсЕкесахУ зассотазео чзвоватасее зажБекеККХ сваєтаєвная каска ЕТЯ

Кончіта пік сухо че ум ФК Кок шоку га дови зош сакасссовав завгавсака чес ка захопив есте азам НЕЗНН заці УЮаЮЮМ о ср ума де кі под вЕсравшлиут Води ки дл ди зви зазжолтвЕки содссавВкІ бкчадиаск вспазиаках сазана завкивівис уки

Ще ре тя прі у ут орто тут «еошимщт ВК. подо оутжцю ноу БОБ рик Ко ки з ще зиск слав сзЕвастяза волає: вавейвтшча спе шшевите срваеноаеа ізщ тат пе. 7: потрі ана но кАняя пс сон еко кине я т. язотуи у. Ух мому луєх ще п тота пут пами заскЧеасзай свое заз ласв ашобстлоза еепакаавкс сковаЖшяах їз)

ЕК и ок Кн а к- ТУКА чали далее є ФАХМКХ «тю чокух, кдд

ММА ООХКМ

В АНУ ши ЖАХ поту р тру «вій пе слух, ще : Мен хх ЕМО щМиоЬ АМІЦІВЕНИХИМХ «Я Ух шшмоВиХ М Ви ідіом водна еногУ ПуМоУЛИХНАВ ЗЕ ХТкК сце й тус ілі сур сус и тих зум ФІУМ а щисіУ уми ЖК УЖ мир ин ту Ж лих рук тики пиві чзакстслчесо пес сссов сосссаствеє сшешспшеВе динею стору А «сипати пес шВК савани ши пе шик о вер ка падати взидссмадсв пера пес етері татк дтп пи жу

І ям ия ФАК ТИВ ВИШ СКК ЕЮ ААУ КА СОПКО МЛИНА кое керу лу ок тов одюю пот литих ЖоджіщО Кокош в вик ри Сак води о кс пл соававсвЕе спІзасайза палко ВЕС Коаваовце СЕ КваЕх КК ке чн о п м а с п А ОЕМ нн п о Чи С о и а Про о Чи ше зІзекаскка сис оца каш ОчеКк бала кича Масексїачх сеча кеВ іі су ик позу умов модем я КО ву мом во уж моху уже можу Кто КУ КО еко рок В я БКая птаху щи бумуавіслнист Фета ееюєє ваше шин Кз; гу ї. пЕКксвав вдаслхатЗа птоз вав зада зила гЕкававсай села кзжкечи ака числу тма МІрарМушсЗє пошана вижеазІкаща ФУ ема сина о пивашнтєса Зпшечшпас запа внах вашою сатмва вЕваваемас чеки -О якіх ин ких А Пов и НН НН о КО щи асист засво вс ге витяка засяяло созеававах соска ВО «места с каві каза соствусва зей пава є ЗоБасечееВ ЕВ зику их ух п сн бу ви ву й о и кН ен Уж троер ц о вчікспачеш апа МаштЕвсвий спадомувимяк ВОК КЕОЮта шрам НеОВи

Форд т кущ кіт біжи ВКМ В водлую кре вою арку дорозі ТЕЩІ паза каз звксечвиса еп ЕащЕ спе усичаниа сис МІК ах й к сіння й й з о ще - М тіж ся і оо ко с о пкт, к-. гу дова ю ту шнек дл ви Мк ок те рми ліутю ввжавЕжив Вик плас зазезастав засіб виска бсадовкаас осот васиа пдв СВК ше вою ул Ух жу моих - фам мот посеж ум а жом о вози др и тих п епі задае зас коІга полоса если К какао тик п пи ни НН НИ в НН я пд акти к зазна К поеазчаочов споковааиа пасайевлев ех. У тези авази скастаззчва заспсансслос засво мака звсаваянат сек УЧ ваозвкчаса шкЕсосаяєав кешу зем алаЗк зов сетАко оса КЗ що звокчанчлах иа зсвазкхавио Кована зажили Е Зоакеамепа. КН: ппаслтвоктс зазсваанах скаоасевеа сцававчевн всзависаамхІ впВвисИоиаВ ШАТИ сива ч салом ас ваозавасшол сеоунававе свати спав їж пстоввавхви: запа свв МЕВЕ свестаслева вавбшссво з:спасвяава 1 їзавсз:чеця зас авях оразасикЕ есасеаааєе всяка авЕеккуВа НО

ТЕМУ сплати Коляка бМевеєишети ие виаика иа и їжа цасатевках зізазеєна здвевосаста сзказслсовау вечваєтава капсебвсеа Не ссектлосеасе мазозачсає акаскавава хведзаспаєс певзавсояає пссазеЗзива ХНУ тези всио вашеаанайсї свасваткак пдесеансв шпасеецсева зесоЗКешая КО зигїсевів вовсввахио асчововави саенасашавав Базис павскаии ТЕ віпатешнеок зда зічеваеаа зими чєов зуокавсово Сечашеопау ЕТО стедцечивкас тв св свусвиан сеастащещювя сесисемоае пошта М зсксжкахах сеча сеа певен сеи беасесавтє авмсовававе ев астеа КБ вало соспаасомки вах авемию спи севи вовшие дамо МОХ застане спас та повзає есе апассосоов скавеитжая КчВО хеБшпзсзЗзігеай вчасна у лан

ХК КІ ЯКО ЛУК, «и ж кА З «а» ДИКЕ «ії» шеіавицю Тсореквісиив яна вра пЕтссчесава затв ков васпежкакт доме асеаи всБосксощає кекс ща сІжкзсссассг поліса азаз сеатжвасЕк квчссКоаних засто запасах іо гізецлззтах аавнавчаве сопазаєвеа сшвссована скаадвинств попав анма КНУ пізапцатаа: звізаєсавзз свлазсощає ктсвсшскиє пек овВ Сови вшкса КЕН псестчслазив сповавайка спасщепт паз бази є плсспавовоа зага саЕ Зо каздсвиикх бказузавах Кшкавасєтає базсдасаво вжи ешкесв сазглеррааав ЗВО пратеврижа веддассази азни Окіа веасскЕЕаЄ оспасзасаав саспадевиа СЕ стома веітсвоайва ОО Є сабиставас глек Фксиавоєву ВО похвазесує ста асаєс кехсвасике зов Чеки сс иЕ в. О вести свивіодех пекасисев аасзразсшцє поза лає ост ерете Не їзаспсайзе цдзесавсвава павпЕкЕВек сплавах ЗІКаХиКЕкА себвзаваятє ЩЕ айенансссв асчазснайе славою Колавсвиах ЗКЕБОКЕКасЄ ПІБ КОх Тло сЕсвасиаск азитаєвах фпіхасєкскоу азбсозказаво ЄКавнЕсесць кісвомваєв тив есе кахаза екв засвастава кекенескис дазкссуааа Ківавренов ЗЕ) акжсасасвох асдеазавийе спевакевие свои кає зоба зва а ще авсазавтзве зЗасавовває ссававадсї вкаасавааа веилесвазавна зіваскЕВиц За «вказав застава ЗсОгЕзаве копоасваха змраєсвкакх ретосевая ТОхО

Кора южя зектудощши і ох слов к Ущ М суО, поз Кв кдд В. ЗЕ кави спазазаїса чазштавнтаз зпипаниие вели ке Є КАЖЕ каскасавитчв зпоЗїзбате спадловеев сстолосзси дае ахаса штвцснОєкх БІЛО часто: зеоздпнсвоа пЕцасиснние ші зсзасза иа воша ен - ще Кк аю домо. як дек - я. - тони ке її ц СК вивошовиья паса; зсазашасяк савеассевкс оскактова зчкакеовосв хакмаєковна АЖЕИ тацеактазває сеазкааавса сік дсоза савани на завававних сення ІЗИХ ккісєсЕтев астазасжов сттсеваеє азс сакатсаххх азвеачавиав ІЗЩО аква асаза пессеЕкацає соеаеаскааи кБосвинаая врбпновеве зва кн МВ попав Мщетсняних Бптанграциоза Кава вавачаках ше псашшакє КМ ківазчшпак ковзевчанк Капісавилає зксповзесшва пачки саван ї5ЕЙ звісеазаска дкстаасмру зсукаадпвис апозававах гвабтазаї сасвсвавия ЗО з.засрЕсех знавассвцо сантазуаа соаваасааи зоб ещЕк ово а хавЕ вкхпавївах ачавевзово поеапавахиев вас сема пебантавшю засо авевах в: шести жюКсх свзеаобзазадчи зістакеааає бесвсавсви водень сг кх ВО заскавквея ще НІ «305 КУ еТЕв 158 «ув ДЕК «КА» феї вунма 1Успригкєкня капох В ск лдаазв всего Екя доасававтає ссовазтово пзазаовоава вав що тТЕктхазеаа вгозазЗує Є єтава кошчЕкако есе повен ї255 папосеаттат ккановкате бота дедахь зсссожсавит мете лк слави ЩО пезусснюр сна еутя доски сраки Ффулюмтяеваиов пиво во пелузааи сацтзвахщає ашрвзессосо бсвсповасєста апасстшаїа звисажкеака по бсаєтсвов вксвсеаеюк сЕковазаєв вавкасКею» ЄссеВКЕКає венах їБ5О

ПЕК Клоюя Шива кох веавкасаниья еле вакєа раса ато «кукнАМКеАК АВИ зсвтаковою секазевкоав кпавсвавсов актуа заощанасжа живакіке ВИ відзсвазає апезаеашшо рсваявазев соснова загвазастоа пса ада БОБ зваарактлача зпоааакчет Бевотватий дФусемовищи зоасезаавие Бесекевича що казвігастої зжшпававк кепка сабопсеОвВ вавиванаютою фест БЕ засктоожву секактаск фоссесзваєе косе ах свшксвкове засвоєна тей кссхвавасвоу сао еває вовка сопавсевстяв чеслазеая меле ТВО кокс ах сек аскн соссвевута косксауа апа ха жо сао моху Звсжстаоех Ккзвиазаве спека печена ЖО завЕбзациас спахчЕкеЕк зізівасстчоЯ бебацнскжнх ВЕВаКаКто сякевИакКе БИ авіа зеза БЕЗОС ВОСВЗКОх вазассівав бЕжсласавс зОсвевтазна КЕКС ае Мо азс астма важка згвеззайно зЗслЗшосим зу УПБ твікопсоцаса пеавеоасксв сезеасслаа свававиев саапазншко паца ВА скЕВТАКЕка зар акжтсат пікс асеай БЕтбота сво сізбапатва пере санчя їКЗ їжі васевВУ тохаувавкв зчетакеазке зобасотов ссзаясаза вахававнов Іо звсактвсаа зезувеалех дкекаєає КетЕкоавкаєх забуосвсва Фаріон Ка ВІЖО сзаситзау чочоаецекм сдизчдоеавеа себоцазолаеа зкатсесава астазасвке КАщХ азашсвеее есе ливи сб ктва вок щетиое Бавеекадих пава 1455 тсевсвЕсв всвавовУє свавессена «рвав Кров вЕевавоиея о загазсваат Бастагщсса зов завтє реЕзаєваса СвВЕКЗЕКЕВВ зеВВецяаЕА МЛЮБЕ лакасткваз весвавтляна сутакакеюв вікова ДВЗ есте ІБ авт тадивт повазавасиа заалусваве кова свибоинов перс ія чепастІзя слозсвацая богам аєну шана фена бек ва І740 піжхоаспсЗох спавссдоєве аслеовстиве севтсссемо саке косов кеВ МО шивкжксков ссксасащчов сце брів сатУудеуялтея оба їв вивкасакеає чвар а ВК КІВ «ІК вх «ії ЕК теіїш ДЕ «тт Ше Ну «ах БІ песцссовоє вайсоваєсо соссовоєвикоа сезашсесь сова дисвуухояя ВУ чиста сло сибтлессктт оаеаснинию фсспомаунало сема шекееав ї15ю сасповзіаац сода кіааво вазсвасває ззасаївкяє зеасезнени зе я що зчастаєсвоє езадеУуєкив зкабтсотає аеосвевеЕо звабтекахх засадах ве поезасачико гочепсвско позасавно бахаї Кекешладеах пива у БУЗНЯ соди рехає пікет ка аск асоцчаз Зевса сина нувеяа зоезузевех 35 карависзчах зпаксчкЕва сосок звела всови бозорчаках спарщенаку БУ тастщоачка содамспсеУ пачпавксогов сазежусатка соссвсттеав бос пемеа ВИ кеассенюмає солома Каптзаззаь ставав звзасососсяв пов акове 40 сс ссасту зо маєє бзаїасвцєс спадкових впасти псапскочво НО чис сав зсдвассцнса зт асас всвлетлсас сзцсоешоов сешкаєава ШХ потре Як засеататмі тбвсасксяа сжпшназех авосоавосв сови То хнамасттссх аліоЗсоае кастсчасал азот ових чівтасасах ше диаех Бе чесне срсвусвавс слави ВЕН асають севскщЧєєю севИиСтаВ, а восачисчсса сосками звикло ктака Кави вусказаеця есрщисваса а такзксатзї Коссзевоос зако акавеадско зазкосавех десаспакновз ЗЕ спасЕдасвя мита нівмаМ свои звана КЕ Цвх се ЛлеНІВКИ ЛУКА воасолосто чесати кове ноєс бусечозаси давасоаеса Касвавки пн стече ссасокетуєв зессшкшие асевлсочктв вс скеке бозсвовокВ НЕ кулочавийст зплеавновас зийпоевовох асгпспеасеве вчасоє сових ТЯ засазксас зепеснаас вчсвшвааа БрокошовЕ уставу керів іш стані це есЕтоє бкшкволаи сосок вка Зевачеох ТЕ авксешпавсе Баха цзівсвсвух евевивастоо ооо вайе пасе Іо икозснатнах Морусемун смак фата око фреон хай свсбієсвоа схем ечесаї сеспезслеак пакспсадеца вес шхавеваєних що чех вакскакх панк схо ссвс поштова аспЕчВОИмт чекав се ШТ ассзссака сири аве: завше пови авиК кассваенаи сумні ве ТЕО тазових совка тава засссвисея щеазсазсвое вла Пелех ха п нн нн о В и ИН «стру плпАлслтов зЗиапссшае сизослоаснаа зопвавлтача Фата папули ща печасестіо зосвзаєсоца згбсцзцасайо вассосулеса собвсааасв океани ІНпо и В жив ри ки вних ррек в ек твЕй

МОХИ СЕК КТ ХМК ше омаа ис са ши ПЕНІ їв ему ери пу БЕ их спирт у рих, ТК Кир ке и оц шоком т зипессіаниш сс месет реко серошеасито спедосснтІє КВ) ри и и и НИ и софрискх певен совно боса падав азс спасе Ко смт длрта во власти жна тиву сасич вчесзалусна «АМКУ ту У ши жд пл ЕВ чи ЕНН чи МИ «КЛ шеф прамя уз чім Ви коди лук грорики тки вовк в вж в карднюю акта вкл те го сват с сах сшвося ЕЕ пакХ тастЕцемних дае овавта косах Б сраку р Ки Куда сук вових ПК КК рути ДК Код фев Код утри г

ФИЗСВКИ Кк КІрІта тазех звозвпаплази ах г папа: аміак пазавссцих Мк ен НН я лапка вки как нКл Мишка ве шини села їси авазахесвеа сспизчавиавімІ вно о сах пк В чствасакисв зас свач ассЕшІпчаа папи песпсайавайи серии щ пев нн ВН В в НН я сю завочзасм згаавосваєч Запечена пассескаєтч апавтексек пазажианає дО он в НН НК В я су іст раттнх сода пава слано селам песоравцяа дев ои я касисненш дес скеЕвк заховані слсазахова света бекувілоат що зпвиаедася спала стала півавлвзКо сспавзаспавИи злети ав зга З що режі при ие пі дуриимі в мкл пе ча а и В я Уа зустасіохо свасгазссгва Згадав сбебизасаєи паст савай Зотова УЗ

ФлпапзоавУуа водила с саавнахкав втвмаслаяиєс ччиалеевш ваафедсиат шк поту кт жому со срср ухсуєх пихи са дик дик ТУ звана пз ссвзіво чспрасаезас знесвксвзове всолпашссвеа свое ТУШ ї зеих фею п фол роту пад и нят МН фігу или мив Були порт пожокрик оли г яті їзспекахв аквсптавави ВВЕ сова кав свати збишАКеих Ж годі трюк пакета киева жди Кажани й кві атх пам тах зт ок ЕЕ ча горох вовисИкаюе сш шиаКш шт Масова спо атех У дя кто як, нку ли у ую КО К ог ужито я приді у СМ ау пу у фа сах авеваансве пиосаассвкаА ЕСЕ ошоася зеавфавцивих вашкадаия пес ше пою тю. Агов ур и пою буті мохи щих пл ізспанацеси пашпишескиа шина мек еп ши НБУ СИМ Зо дити щих ІВ ОК оці Кл хе дини изд том жом охо те Оу Ву ни воскових ка взеЕЕнцВик Кесакееиоо возив о вопанчавтає засезвовина по «куток Біт зго фло о ЕВ моля фор Кеті уник а кквазавахка дес аа зксавахвкя скстсзавис пос бощо сс а МЕРЕ «жир кити с пив сук між дм іІмКуу фтимЖеМ в учи тих сиза и туж щі поцужтлуєтири лк. зсєуснаста фс АК Коеякоцеє стусуктеоа СОЄВІ вет Нау пкт и, тмжогтгиИ У КІ Удиу СКИТ жи. сини жити тую стежити дети ох числа о щаукимохо пополам тости спидпастии пости КЗ) вари рогтучиуи пу дов сирі туту мото СУТІ ФеІ В ит КИ рости ужи ОК Я ух у отут;

ТЕ. Е СЕС НК ХІМІК ВАТА КОМА КК КД Тл и нн о В їз

СМ ВИ. Фр МснКАаюроми ЕЛ ИИЕНХ шо аск: орупроаие їх по з Вк в п о пн п п о п п пе я око сами БЕБІ СРО с енек Максим «сф Битумиюх ОЖИНА

ЗКовлу юю и че о а и о и и и І НН НИ з почесне септєссае сома сепЕтаЯек Золотою сушею 15 у а у В и КН и у ї4а чесссвоючк пкпссчсосхв сапки зспокацесе сасеевопоє числа іо

УК тки ит дю Страж, при кути дуйФек в пря р фо дик ку уд ке я злу ксевскиова зЗлазсаазав зт ао секс ках вес зи А

Фоми они ери ую жид вижити ниви оку Урериту и пви ЕЕ езЧоиш пелоосептех сптсшайеа пав єт сад чаше аа ЗІКЕМІ шин в и В В В зда парів мо Зоя ау паші пору Уже кКал 3

Тр пюмикі ди БИ «ши ДЯК

ЖК УЖ 0 шеиеую зда уже ще НМУ «аа ОЗ пихе кот пив ес Зевс се ацрт прасреломв шу дл ЕХ щи вих вежа ши ЗкишиаиКИИ шмат рать реж коацасевиво Зспцава аЗзаваЕасю зазИаВвечне заз их каса КЗ іти туи ую тресту дуети уки ці сли сит ви сиии кети кт ОК

ПО Ей ЛОВИ ВХІД КЕКВ КК: ПЕК КТК КУ КЕШ КИ МТ

МД тт вшир ати вас ЯМАМИ щує ортена ЗХ тм ТЕТ сту р п шко (и КАК Ку щі поза сти дасть соло пюре писався пера Ох о в и В КН ню нон писав зе ннми пвх ах зр аещи зосауети шов ате ще ИЕ ех ооо ча и в В и НК АН о и Не КН дя

Ка В, чита ах с НУЄ СИХ В о ЕК пив ах

ФОР я у: Же ку ю вохю вро фу ВИКО ик и Котику ФЕВ дути одлулу дим пики Ук

Ве Сет сиве сви шссво Ссоущаюнк скати вс

Гасчвавстя зЗбассочаке сзаавчуснсвав зозкоееВКЕ дак Бевза КН тішстваисв пабосвосако зовано стовп вкв вести мапах ОК

Екаскосиит асп еМВе осо сава свое вгтевесеиЄ хтабекдаи ек пЧикаттакее появ осе своя сжвежесва шва Осва кове О Ка щуку пафос ОПЕК нО зер власна цо віза У чізсзсакат атасасвавт павасавтек секта шоб ечиво вазовевова БІ ківоватссмє лоза ссКтовтшве коасевкцвих Чебчаскекс пезвбдкеее ЗІ жевсскеккв зчазчавецавс астосесик паксасеввав свивссказа воза ЗМ кивок Еує ес жкшек пезамоикся заз теса перева СевеЕкащє ї05О воазацпізра васарсїств Зчзезаакає бат ацчеою завести Субота Ас О товка св свукЕзуе сомасаквах бебвазксюа досашюакє кекси Не чесрассвос сповусиеа пул совосвацес звавкасайх сапки МеНО касах зовн сопе базссповна ссгазаски слеватрав їла

Ес чавих дах цаза повоскакьх фоскжасгева Вир дова пасив іо васкозанк: кбдааства ссабкщесьвВ вадзасцчков соте коси сс ьаве КЕ

Єпоапссатоє сососуєзс зезешецаее стаєте че васасосвене аксесвех їЇЯ5О шпеаравстивза БолазКЕес шкзайнасак пече шкеавя ект чеше ВУ петвсднахе пдктштеКеве сон а савахачуве Зсшктссаве зоввакееке МиЖО пики касавт аскштсавов сни шесоєс БеКЕВКювво боса Кава їв

ВЗИшИКИВУ Фран ефролатраа соски приреєноюаим коза ЕІ песо чоепе засаветратя заоч сеЗас заз епаце сзгостих трупа ре часа вобещисевк сосгсвавоє вена оме сс сна ЗЛО пет сксошенсо аспезсесах Фбестлноше пасіснслеює поспалоовх ВВЕ памксссвш вестлансше сапаєсквай сесикенеш пасив Зевс ї8-О коро стиУє пазеесеосю фосзчесесв ссоусеевча сосудчача зачувасое 1880 еанксиоаа соната ОЇ «КЛ Ба еаажи ЗНА «кім ДНЕ

ХО ЖИВІ ДИКУ В кап ща шасоссчене чЕпсооет пах Беспоснучсло ЧЕК Чернов щу шпсасскаса сестосозаси з'сдвсозеа сеча есс здозссечве чав зщескя 15 жорен се ссувск зесссесоє схосцествете пооруєсеу скоса ма ткЕдасчещач ссозслазаеаоти чспоскаУє зала ат зас ксссос Веста ша

ЕпесвакЕХх закшсмесси хоста чм зксоеаса вала «КувсвачКе ЗО пизстчссеста пекдаспасай зопслесваює вонсодаксг вес зачассоцчає БЕЗ чистчозеаа созбЕноплав спати к зоре сасусвовАне сазан С певсчісацо зок Чцеазоо скастсчемака позкссведа хайваих пезавсвиах я вамтасчккво поцбаоанрев дассасчвсе вссспеекоє велике нева саше За заз ьесви савані соФфнкваке сьвсзешвий Бо казиви Без Бонеа ре села вВ пове аакі вззрарасттав соснова ба оу сао ру саксвусиив ЕК евчКЕ своаввсовеВЕ сонце паса зазадчацеца тво такспдеанст спас сети скссоешисї що вЕКОе соуси а ТО засеуьоаке зе авгбавсваче закона свошсавтат сок ивасви ща сскжецсосв весзавсає кате мацає сашосвоао весвоасаая саше що виспоссвів сссвтішває кесавкеув саше века весла єає чо бсЕФепреикс Кахаслашеою базова позує завивка пкувсвеаа їх акавсаса зассвочиче свекра са Завтвайиеї асвевалщак зекушсекоа хОВЕ сжсскиссаза павесскжкасв козак евави сасвсжева Кебвоваек шефа во в:

нерж луків пишному. вусами хо вик тт ов чну чи рин уні зкеассзве чсвосвассї зівзпеазетно авзваастоаха поко ова пики атада Би ік тужити суб МЕ В І Ки и ку суді ШАХ ожив ЗА луки мо слух сх. ех ек шко дах Врата зва шкали ЩЕ шк жКишМм дура ріки, пута: поза сут Ви и р Ежетумививих пічки ль вия Кия ри и От ах га папа асп часеяса вчуввасасеє Фе міІ востеаванощ ас всницхя Пи динаміці киє пики. ех и подув нео У дова сх даси Х емо они орати хо А НИ АЖ рр и В і НК я ад дпедвсаслаелае зазчсвавуа ис Бакацеслиас давала Зк ее чн ан и о а о ор и а ПИ п и я Ж фтор м сиг уми их чих ча повзсласстсев спеці носос било есте бурщессвсва повисусвос шим рн чн Уже ле дату лев рун ВОК ротухи рі три сво чу аванси: Бівайнкасте «свососсвеє слпелесиши ВБевоцата есте. КАН кв рути р що привести ца

ФТІ ит СМІТТ щи

Ем куту тую ом Х сетюртую де киш ЩЕ але Ше ПИ пиву зи

Же Зх МУШЛІ МИХ «В КВ фот дусі дер МУ

ХК Ку В Ко ЕК ВЕ ТУ М. «Іва КЕ ярі 31

Со ие сей ЕНЖ «пра» шести жди

Ха дк БЕККЕТЬВ ВХ «ІН папйпіннІвще стра а поцдесчнозеє списа Ммацх о є УНН рр от «ДО НУ петюртюя ж сш ЗВ чари МщИиЖ ил дреуояна шень «отим, ве

Сич, К Ф1. рик тили с «Киак щтусзна поснідавнасЕк «ах ал зЗобледасюи пасок жбососецсє «соошсваоеса епох виє вже мирову уж у жити учи вивих т (у жи че чи НК о в ки і о КО засни засос сеозаудета апласелоки шани его КК гир ж лук аю септик о флуитв пі плов ж слу вх их зсепсгсвасес ссвсвавсава Зтпшетвкав ссазсвасви закщаетоцви спакцавтве їщ5о фо етут сит сві оп пусте озигсдуй о УЖ сет о их (У или у с муж ти іні дит у уч у вки, сту саспутзавасє випас чЕ Рана их СЕЛА КО, ЕТ ТКИ ПОВІК Е А ШУ пт Ктиуютю фену кую ки спо диню Кок уозувт р веж дн вия пики руни тА зіачабичаит брало закафншесга спсвоУшее товбеаиеко добра А зайстсвииих ска зар иноз Зк

Ст г. оз

Ж КУ й от БЖ с 31

Са ня кри. жди «аа» ВНЕ клх аж ; «БЕ біжеїце птах

НА КанН Бе хе БЕ писсшемаая дома св ях кОм Бе

КА БУ

«МЕ кА лу ву же чі не

А ШОУ Кл оме і ух пот «Р шу пМа

Кене ех хУжмММ ши педижр ктири еЕ Ков и «ех

ЕІ КЕКВ КО ВТ А ен «І То тт щу кА я ОМ

Кри тк «юЩИВ пек сен о НН жк ЗОНІ зтобраехнасимх дна чу лати ке авісноваас свайвнакавн зчнаваевееиь кода юашенаковек писав - пкт ку і и дю Щолютьня жевч код одежі кім опіка щовіАМКМ ОО фа мою ці тре ий зх

ПЕдИВЖКХ КІВ ом ХМа Ка ока КЛІ ХНстяХ Ким шмат ках в ча а ка и оо по у На ЗЕ М ни Я о м С У ПЕ С НН м у В НН НИ 155 зштвссвакт Заказ ає свою вака зусунажає ваза шоакцу заливних що віка чсваикашиЕ савани ЗУ пет лик шо шви піді Кок КЕ тькмещ куди кс подвиги иа аакжесахсв зацваєкеке секс оцовоссВ зе швеаик ВЗЕоюєта Янка 2 сердито Бощаче ктищо фдоен вав сова и сот в В у газнвізанспа пошечшлилва пев лшвши феашшишеиси пошани аптваао БО долонею кокос Кеди кістю дерев их ху ки СЯе задала палали сбвізпаЕЗЕ Кубочестза зссаеесве сли шемоа яку везасанавс застувсзаса хаопсвоухам азсечсзсле чбвчаЧКЕї зва що соопивсяхх есе нодаа аазаакуєЗь Засади опе азкоалувене ВО хзіцеазчсвос Фгазіксазаа сезонах соезакапатде вазон віє По птевосстата бував сзінжевавя ракаувииаи сезону фо єВ БЕ. квусасвсве есидасчясє созаацовах азазвеиаЕк Чесеєтасляа зве Ти звикеавнаа севеацєнИє тес бааебссквя везе Євеспаєсво ВИ свое Хє ПЕК ЕКОККи асасазвцхра зсуві винає сопдеалейко асо ЕВЕННУ свое повтееекас ссозоваакш соемраушев сто еасямавака м кикоаоаза повассвнваз аесЕсвсвеа гавкасехайе пашказацнс чпатазчеваде ВЕ хшКенесах сазсвисчсв сзавсаасиє бЕпапднета еп ачоне Масове во иЖУ атгзсвтавока читав мхдавсвнката сексвоаєає вкла ноєв вадісавах МО сиза засакопжаУє вус свасао чебоспаксеоє песвавцека еамазееках 319450 шеиасасвиЕи кохай ата сасасваєик кВонайлхмива КК Кемве саке епенх нео мачевсаех звик оєва авта Бороєвекаа казок са сакаєваеке дО чаач:нсаи зосзстичаа спос снс ссвсвтстав Зі еюаеи бана ТЗ збвсзсваас вказане сзгвкавсЕє Базбазавсай вік осчеасв сестсвавиа ІВ каксвженов сксссвавза авастававк созеаваевнко апедекесаае чеСпоюцдх тая зачелесная соесисаее схаавсвває вбеабуплето ерсвекнов косою ММ псзсзих ню заазаавечцоа свплекснцися каз асх сеазжилсеє сива весВе ІБ сецсткосео всвесском фаскою аасихавова «ссмасаашеж спасе ї5БШЕ питав Сепозсчеах Кехатсоков запасне Бакежвавло БоалиаЕкех МЕ апівзавносеа їз ксавсв сКевавксах аравкоава казани Фаїна Уа шписассвавї чсБавзтавав веасвианах сзававсвзова запа певавевОно ІВ спатесвови зсзтагаизав сфсквівукка зарзсавкаи бЕЕВвЕІнасе ката коче ішЕо

Ссзбаазаєт какксасвах скузузесво тбедкозет вес оаЗЕ зізахаКЕщх мес їтастсеисьос бозазазесї сасптазеваї зсоооавемя кедатоасн хека їй песчеавсове бевавкегаз ссспізбака азевиксваа" застосо еадбвивхв Я) чазЕвексою зако павує апсовавсаха Макшикокоя сабаують селен ХО ївевчесвс зпваскекає зпансовсвощ синте зибашерана бом ем АВ автасксозаєк вапанкоаше пектактаах вол овмом каббавіака птлссфкакене я аадавевасЕ поста засаавааає свсвоєвави ве ЕКНиЕ сопе стая МО ахасктЕхиви Коза валеє сосзпаассва базова зіва зпвавааса ха Б кесасоастмс ската ка сесвжававк заббвеавЕт ака кжрасєваех. ад аккаксхтах зплосчсая свазсстеаве пазахасосви влсвадлсксо петатадках ся ваза жкжзквавикх пековавнше Баїкаватає зедавевакх Садсвопсена дБ кстастацив засуайховж воза дедасзувос свксатамникх.

Сиазуацчеих ХУО зексоавитЕ бот кеовцсча азавмовквяє Басов браєпавенах асп вЕВУ йо зивкакасав сзавішксва асссбасєков зссесксвай чсвоккахос шкуєтавнюха шо спазассеве скан аа КЕКтосавс вссзстаєво асктавеяиєє овЕктававе то с«асзависиа сабо е зсодвсазає запас вави: козсшнасовВ свржасвое Бе собпасавоя свівадевнє стезехескає фнЕрасває: веБовсаєка сзасбаєаух УБІО зпсвавахза атаспадех засаттасес абсчозотова застава глаапевеєв.

Кано о : - Ч не де що є. не Е рон зевсвавшусва фвановвенас окт рах ТАКТ вив еюА жи зканайкахи таескаасаста сатеанеосв фев БЕЖ АКВА ЮВ Ван са А я ОК «шій ДНЕ «13 сіно 1 Усвраеаниия «ах Зі текідіїсовак підасетсай акавсвайса абоскасцас авта Ещеатх васеасвша БИ пола ю кет Кок и кв ви ую ше оці Вдоцов ів ОК орую дуоо прут звишйпщикимах сте Тв ВИ славі впав Баавлашкаа ен асвгя їжа сплю пухир усі я шо. же ну дея щи дЕф ух діжі не еууичиіукити лутри в ту пр, зал саасастстита сзасесвтає часових бчесавеацня Єва ец омела Іо кора Вели Вже КД сек кит клав супи лит зд їтазашеви ода іо бавос секс ВЕ ТК хз васовсваав віха ШИ това дет ему пл во фуда ккд фо до ки ча виховання чер пес О зеаздадино повосчиксЕ сзозаєечау А Ба пудопои ев Із іеию спопзимиир и УК ож ле Еф ОО ту ку виє а есе епос ват му м ис Іра тотова шашаснииКює зви пед кании дек дере віх сна і ди піци Кит дних ЖИ зас азава Сепсис ках вищими песо аск стве ХВО КИ ТМ пулу В ут и Ко отут у пе оди ду гу Ум шпак ласва щоки свист «Кави а шт вайвсв скачав ШК или живе вік ставиа маки свои вагах Ба а ни о а о пк чор ек а не ин и а р а ИН яти сеассазаше ковалів скщекавнеск теговевосе завтлевиеве сови МІК

Фе Вк ж Ж ОБ рю т з ри сук ж я зер дя Дух ги жу в п, Вуд педа алази капевЕаваєк ссскасшиавжЕ апа книт живота сша БК

Фіогу хсУЄ М МО УМО. Ох ло тую ОМ ОВ Ки жор прик у ог кум ОК оухии М руху. свому зиа шавеастаая ха ЕКО ПЕК ОВУ пава шк нти Ве руду паж мам Кк пд вам дім фам мсивма бод ие "ре пващаааок спуксвксеюах аасзащивЕК зсвазцавтає бацсозайеа ана вамикие НЯ

ПАМ МЕКУ ВК хау М саше В. ЕЕ сапьазаолв ваги «сива вЯЯ п чл вЕслвслащи Зо со оашнсвоаВ сСеЗоВшУх Євдзаааами ЗЕ ЗУ шодо ноту юю о годівлю. ж и Ав що п і Вик фа дви птафвгуд я тю ще ааяшшошаикв чезпанвенко пес тав сБлемМ вип зах есвиМаи ЗЕ приро дю пики кн и и рери

ОХ пасе тє видна ча шив сншс спос аа т ле З и бапсду МОм пані М кни ВОК реко. Міхов ек туиут сек ік Жнкомици тп зспишпенсо ставку єнава поразавева воабкозазвсє сасававащи Новое ХХХ

ЕК хви НКТ КК ве КЛ БМК шт МЕ, пп кл пом кож ки че що пе сяк дожив - ножні з туго гер дових ки у жакети чення - тлугюх сх ам св стр залах вакще зловсвіане бікс свнаЗз оса сивис ваз нависв вошчоссва кош

ДОКИ смів Іо тя Кон моду юю жО пжвуи К Біув ожив вт вигуків іх зд вуасецєваев впсшачвіа зазашииВЕ Фессчсмази балами сера іх фот ик Ми сю ж Пи о У кидку йно в орі с В КО ен ее ЗЛ

ХК се хвизедакса певен хесє свзеичекаа вах паса хатина Ко пресів. прово фл юуеюю вж джипи замки докори вм сиве ВлАМ вз'лннояатия битим ВУвисентва МТМ АТАК МОЗМ зд уримтвотют то у й кту итстри т ножні ти слати ит у та ож ет еться уко поему мих ТО ста ваш Баумана Миша юю Ввко аж щий Зоо МКК зр асхр падав Зсидктоссалак села чйес пив авсат писав слуг мтс оср пава пса пежспяак сукуп ачисс апЕвлиснвийи сепесвасаЗх лю пресу між с мити. сек в маю вн асв ужив м фу хи коти яко пику дуже кош зравочско зЗКассовєє паса зиск Ессе вВсока суда аУИО серии КО Віджет вн ому жо ех воиж сус ет вт ходи шершсткивим «ав рких песеасшся схсвеазсаве сасасвасв засво дОММХ дина ви ВИТКИ слава авиав КО икИка сени вавих МаавиаВаВ МЖК нн и в НН в НН ше о п НК яр їзизішаста ВИКО ККсКЕ пазспксов'ас «вевсізашх васуалтевя папа І

КК в НН НЕ КН А ЧАННЯ Вл взазканекж сзсттчскав вахта лаве Ббадазшсаса мові Вари ТІщНХ ен нн и нн о и ни КО, пи НН холу ху ее хи

ЕшидЕиКЕМ ЕЕ ше нІ ера а ЕК ала абсьднавгси спо носа чвааиа ПО БЕХ ки и НН орех си тя ик их пою пикож ек ау «ваше ог ааазчават палав асани спе з пасти МИ зайде «Ес айва Башеваниснв Зпавасадеийе зага славЕ сива НЯ завше мк било єЄьаощх сот щи ОАСсатьйХМ омела сша сану х дими зввцищири Кир нащо таса кидати пдв подай Мане завсвтставесє спочив саден а квест хмаспискчиаа чових кА КК пулу живи бхи У У киж их дру вк пре и дю у рек ДЮ. вм ко яи лу І зйпасеаваи баса кввав зоанавичис апа Кос алара пасе хо АЮ ни НН ша пастви Загеавнтває списки пасанащито Чвосзавадк везе у ен ни Нв НН в НН НК СУТ, тачевзаш чи З еашека кн щі: ПЕВ пом Ка КитеЕ МИят мох у ог т ВОЮ сукуп ухилу ик, пек ау пазах папсзспзаний авадма я «ма ТИ

ШТ х ро хОЖАЮК оку тки ЕЕ

МЖК ЖАТИМ

Кельн Шия б ок ну джин х кін се ше МаМеМ ушорекие хни «еіпй» 7 ша в НК А пи жопа злидні феод лУДО ВЖК пуер у в, г втоми Мітевкавай спасе бавбслвааєх сазана вро пе од Ком суки у у Кр ді що ВВ КодерКоВИО вооуКВ Ж зак тжекви савцссвосвв вогнева зіва шовосша ВУ алиакио казав КЕ ре НН НК пт що моду аж фо в еовижи о груствико гу гою І ї па тихим зи мшеаяху уазехраві еспзсвалахи кед мер виплати я їх стерті мкА кі пух ливав ггУхдозтитви вне дий пара а сеЗозЗсвгвАх зЗбавсаавсекоа зучвелвавс Зссаазчавне есвашцчсажа зуаеалрраще дО пу лу й др ижурі м Іюум. проф ца ау ож и но у с и по пюю суми сх павтопаєто овоч кви зезветаваг ЛАКИ ВЕ бецав то віза ав ЗА мекв смт Мк зятем атм пиши реф. су зкачассвива свастаєттає сасквцеЕ чсесакосова взасос статеве в сему у мкм пиву й пулу ду жу лу. ке, застуди. поривом оМтх часа т мКекувазасе засчараває аск веНвт ака вет х чик зквсаасвзка кеша воІпскасевс стекла ктвааваає зва я зісвтвссси вата вянї осасустваво поаваоетная ваше есква певен яв зЗКжссмоцвсо вхазсвавиї адек цяєя жївеївахся авасеєвевк завесожевих БК

Кс сзавсав зи мевсвист асан каси засшсекоши фубенутата БЕЗ ВО 5 казав взасос сказав золпаснацчєм зате пекжастлнав; жа зеатстесчиах їтпаасчвастла ЧвКЕшчиКЕя статти саасеассеох маса Ко зекчаколтув вас ає сопавнисдоа засзсначв сасевивеи зве ща куакасаео: сасставевко своводеава закщсвасе вази века ОК зссзізави: закопати ззесзЕскаа аакснешає сере насв вок КЕ БО звасзувідас авівас за сповоиаазає завзезисяа сЕпЕЕесасо вити беанвив І.О

ЖЕКи Вассво состава пахоєтовКе сатвеатесаї тесазе інв зсвайоавдех ЗК зкббзазазах пвзазавскма пувЕвевиех вадкактсеє Сесвопакаса сова воцасє ев скасаззя сеасквени ЕП авнов певне сади аседа ЗМ слия ТИ аванеленоа асавачоааас пис КЕКЄ саспасааооа зааваласх з'кфасаои не штсовлісвих Всвзакуоава спопозаииее ке азосце абрсвавна севнаваций їз авкатассоса савазавеве сазЗававтю себоасдка Басаснаова авшекщана ТЗ секссваата пасасцвтвс Збводслахав всеотавеке Засасеаавих дошавопаеся 45

Кокасасаву сасзеаласкт засеклквня апа засо якщо сях пиаосЕвма КУМ

Фасшссесево зеспавазкУє есе че Зодчих зеЗзСаваюса соску ЖИ папгатиатоесо чоечаскезЕк сажпеткака саауезеаво касове Коссак Ра85 зиЗкЕзвоф ссвсааскас стравкоавсзе база Яксвакека воаваакия ва ситсюзучов всяке заеслаазово зазасзевкї сзавнекКвє рілтомірай їн зесччЕжсвсо двасесчавк заз кев співає авчасакнех вза ХЕ всткавочвиа вазсланасва пса: ваваз аиБеавоанта вас вазєв аБазайаса МБО сазсвеавві їпапатахла бсцазщатяа сехаавеве пвеамксве села ай. Ща2о саємажнася мя век иемо «самє СКЕКСВКОМОЮ Франко спав пк скани а Євусзавасе звавезамивх аби кшкешнеюх сеозувасна Мини ува клеха падала висватиМвих спжисткве Завбавиовей зе авцея МЖкОВ сатин пазспаааяс талан ка сві НО ВОК СВк ТЕГ васЗзоеаиаць кишка счча заваснавье свовавийва казав шЕасаєиЕх яЕие сире ішава спав вся ж Та «ше 30 «дів ЦК «нії» досві стевія сна іна «ае їЯ вптзсвтаси супсваслтяєх пахв зопассстсв» ван евиЕ сдавканео ви аоазгецаза чзазавсох гавеевзасеше арсоеЕзик завеакетто шаашсевеав їі акжкцтино сек БхчеЗЕ сахесвває бас м; ее авКовВоа аопука іа шхиациво бехахссекаЗ сравзоачее аву єсвие КЕссазьиста ВЕ кацее ша зузозванаи чини с сеалевавнуя кчасзоекеи сужотевихї песецаятея ЗщО квцазатмаз Кавтіхравай слсукасевва заксовувнсв ЄрЕзедвсов БЕКЕоВЕИОВ КЕ азсасчекоааЗ зоволсачац запакована санахствкех вач оакистовея БЖ зкцазатних ватвахоев Фоорахо ереком рубає Хе х ЗК «вивоавевеУ все саа спав х пезасєестоь Бедавсакске завше ачева 3 меси ах ссалеаве сСекупасеея вазввантке асп уаювия УК ЕК ші ківстпакта азссчвчкео Фазова фура соками Бодлер МО

Тлуна М КІ КЛОН: ема Басов ой и скалре ати ТплХ схтвоминекх чіл нЕх сеча ваза спол тацехх ковила ТВО пвшпвакасте МЕМ спек ж лова созівттвше з,бовазат: КВЧ КО В совавутзат вопаваких Ісака позов авасенетах шва О ЗО «вав азвей дзштаеиО повавмтмай пбопІвазеа чаша шив то заааскаттчи зазна ввасвівеаве зозасававса засазчайнвих спавквеааи І0- зІівкацеса Кискдоуєєви сова с щсспчвеако зозадвссовіоз бере схВа АК пеисклазчьо сема: дсездвеоіва сек совотанчья зоба її5а сюшрасаея дижхофуанома ФЕпагпрешевя дпавасеєь пасезееаши шик х Іа зоаисканває сихаксваскк секс слова саттцадису ЗБЕ КУ ВІКО хевсккощис акорд едзачожеє болта а їз сій т «клав сяді «лій ДНК

ЗМ» Ахарьасраьа штат ЕВиа шани а аавіаванийх Касова сешисишкоце пезшимдева вослеьйко збе 5

Міка сваетез затесзесваа зас аксвЕ перевів авістечиво засиовиаах А перакчавкос качки ї бобзазсока сооусаваоа дусазевасєи вавсехеєце ЇВ каваахатиов сазана песавлоаВу сасесзавтя беашекнищи врата оуєя жо чис вистеаз сповиснастоа вето авака стат еках СЕбспаВфАх ше лево БІК

Ки киси зслиазаних апавпакакта сбвтславсо сЗшацали вільною ЗБ зезактисто секеавцасив сеазасеашию всзшчссияаюе саЗксзасва вера ека чо жашсткасиае ЗлазавзаУс ачсацаєвстп октуесвтяка бетоввекакх зво ква з кшвасектлох сови рива маш сака боса вва СоБсиХкла в з«аевчипоазав азатесчізя сазавлслав акесшесюто КсбгавомІсс вад аз БО песвазчска акта ати чектЕЗавсоя асжеасскімтв заеасиоює забавка Бе діатези х сасвезсвех часнавеасе козавеайаь: звікаднеави валове кеви ТЕЗ акасквцсва Єбаавсвова засзавков брапасасв свсзсонаго згасає то тавсовахсва встатавцев зеївзасасви зеніатинає впапасневи поцазаУє во песрвнесекс звссвиомаї зезазУуєвавс зисогаая вовки сувеоеева ЗЧо ашпшпаєуве векіаншова сустцечео пет овавях вве ех хУЕшТрито ви послав совеаеаатв писочшвави ЕКапвиаеии авіа юювих Вал ТИ

ЧЕватсхают хсоіюкцаКЕ бсадеєтаву тадесвттх ависенавшви вЕсчавеьтає ШО засптакнов Зпвкасасна сЕцеЗастих васеисав СОС плеВссО бабка Мо поважав итє саше зпоакактек штока пиво пивилясвеВ. ЯКО ази зоасесосоу сувувнявав басвссовеє афнаааняє сосна ши зе саванах дасусцанвах сосок ваеих савчсзаисв ши Засоква ВЗ

Ккдтсавійюса феоозствіся ссобезаскс абссцаваек десаскевея аоесвовасу шо фоновим Вик ую. люта ему свому тир тв НЕ Кая пишну Ваш киУмпа: Птобсвозає «осо запи шукана я зсамаксев вка естскесає воскіевняа дпаквевеса вссвоуютаєа шо заиоааясатт заховав сссцазааса взагалі ЧесроваскЕ даваоародю ши чекистниака езаазачова зевезчеваязЯя «вав тавкавттвй заговузая Т55

Басов ковзає совок свасоеаної фотки Зовевеевою о впаасоаєн часова беїзасккоз соссовссеав Сеасвраасце пепсевевее Мтах

Хавитктке втасвалайией ре ташиох спзцтр КЕбеЗслатас хлацдвох М

Каажавсква Безхаана БЕК засне е акквассах вксоплеваа іо зЕкцеваятв ззвосанакеє ахвЕзсаєе сейтвеяхне апсуукаиасе яти е 7 сейбкставит впсстеЕзаза звана асс вайксековИ поза анов ввеоааао ме допздвеона дюфауавая х шо «ік 5 сій НЕ

«тій» дхзвіереюв спвікайе шани СХ косах сушити Коштукасі секс естим Кун Ме апа «о пиовзавлвся болсссвеао кбсемексоса азпшсччес зсдосааасне свв О 12 чапзанотазе паби каа поліо Біне чаша хі тазавим ТВ авсжиноМмо вессвевнтав сосзеаксса гаоасешисв Фест овен віия Зах асчскіссаи есе квои здкшсасево чесна сметани срок х зав ваквошшкео хсввюшнишва виш анваа кала содяьо «Епажкактою вавцаваєюс зд

Чавітаанат зпазозакста сзпккквайа сесаактоє азвехза шквхвкаюУь ЗзщО пежаскозає сбахаєтаюь зслазсекає вкзеазкока саимававсстю вах що пазаааанав завааскскиї свасезитоа Зак псесаств акжбаасозссох девпокави «ай ша весикв ЗвоасЕаана Копокста зпововоик песо хе кр знаках звожКевоза возсЕвехщва впошесвио коливавав аа Ей скавсвнмнл йпаАхекдешев сдуозеакта дпеачавацеа пасе ахкоцолава чих сеїкожикс вессостао зво виасев ведені сопксакеево СІВ ЕКотвах зва гксвовощос зсовоаванадо спека Кесазаєчаз сасцтвочко кеЗшОКекох дя зЕксессссх вістакІсцв сааоасова Зк віссю ап совашКЕ за шЕнНакЕКОст поко уваєв соийашЕВОЗК коходаесоВ пасок зах цЄваия за аіванавтся позосаднає жксватнозе пвовектиає скраю дешевих свй кацричесее сочвасевоа врата асе часам дасаашиахо сере зах казала піастксвка асесотактаз ватзазлеке лах воовасєтх 1 казспастаги аква Ксижвоавкв зерна ава КІ БЕКОН ій зврвлекаке псзсказтох сечо вчама свловикоких сузвщсвакх вацеєкакта 138 чекавзасала завсовасєис ззавакакви сводкнх щішататео Вес шаюа ча зав тавниск зате иса пиво вВес кБекасвавая болавсісов схевзайегея їхав вок цим жилим печу ку Фиву у щі М се жо гуд ку сс и У г пишЕмсвати МОпувезкех зоасптатеВКЕ птлоазиачку соззУзассв азс кад а В и НН в НК НН НН А ощовкту са аптися засеацоеа закачати ох ЕЕ щих сатавтх мах хни ЕТО ке ек и а чн и ЕК а а Пр а оо пи а М п М и КК СИ о и ЗО КИ бика тсксВв ЕХ наИ ї пере очеаспа бсалпазевавив фаст пк х. МТУ вроди в зим о дет дю болонка пою во УДОЖЕ; пев х ВМО Ок ВатА пе зпакий ШИ рт, ке, «вух ТЕ

Киї ІЕ дра пнк им ДК пк у туя шеуруєхю і шо вієці о квух «і Аслікоісвів вБивіїами «ХНУ

Ер Кожен в свити оч уекрВ тов щі пд вав ще

ЖИВ УКЛ ЯКУ УЖ М Ж МОВІ Ж ШУЮ ЗЛУКИ УКВ АХ ТУ шою сих пдв Моне оду кл ж о с п м а р ми Чи ДИ В КЕ З Мн я их полу тлаас зас восиви спади Фа лилася ша Зх а ВОДО ХВ МАМ сп ж атм сич о ІК Мадам КК злу оювк ие ор у. жо окту ОК чо «ати певне соку Ес СкКХ жест ка казка 5 тд т тр серій провину х сус рад єю ит вовкові окт сх

ВИМИ УК І Хе а еКЕ дон саше ЩО ТА лЬх Ми дж м ВЕ Ед щ мокко ЩЕ щує км вки зи пал ж ЕЖКМ ямки Кука вика авше чеше клала лУВЛИЖЕ Іа АХ пе ММ видати, Іти як фея св ик ях. босщртогу й тропи «пола ху ли ях. ОА бух повісив пами сивих каижсдвааеаєв вавзоваЗивИаа сливи 5 ласаслеиансов пташок пва видео васенневом сви аа зсаажериля З подув додав мив ккд АЕІ СУМ ких дже дімкво гово кемо я пев сявих апсвизука смаках аця ще скжелиє бвбсласвекеа сезаесЕкова БІ зібрало х. сит сома вдів Вт цдя ка мими дики су АН тхюрех к ЖКИ ую Ху І КВ АІАТІ МО дм КИМУМІК КТ ХУ Ум р У Ку вибув с вдих жу думи итужкх Би Ворольитихбощои ощІЮВ В Ж ЦДИВаЖт дра Крот рих СОН вшщасщтзинтсо вда шава песик школе ча пкшкКцю Ву М

Кисть склу у смути ву КК ою пу о вишок: жому лу ЕК шу.

Кареняюасеах Фчевсашанкм стадах ссшкжнисаа авто КАН КІ спла Фест с пивжатЕКтм сао ттава баватперєтал таке Ти фони вмію ект Кірик ВЖЕ дос міді ицЕ сл еуневи те со спшЕкенхтх Кокоезазкха палосхарав обоє заси зіавоолосех два КО лови Кепки ді дісудиаимч схжКица ги випа дще ща Баку щи пд

ХЛЕСЛИУМ Оу ПЕС НАЦЬІМЕМІ БИК ИИКІ ЕЛУМКМЕА ХОМ сам КОВКА ХУ тях ати літ НЕ ме кишку пики сети Ук що ик ри авесависчо взеасааснсає втсвевнесек зок КИ сраівоссоюя пава ва сив или Комо мікс ее МО о ззуух ол ер им дев М тою о схе лу й оки Мо Ми оду М ди тшшкасишМха вас е сезакдецоло ЗЕМ Ффаашмааши СПК ВЕХК ОХ У темі сащс ківі вав спозавзавня зоазівавсви стаз саавкасеве 125 завадити паза зЗесаоосекх асаапаше Коса ВАВ НВА ісво зга ка саптоесевавз соззоУежех састосотоаза зЗсУєстася сезон ака АМКЯО ати Єм каже канеа вибо ихю Білу питав фрак ВЕ аспецжатшниї втпвлаєкаств волозаваиляи паса кал ха спиеа еЕплепшавоая їв пазчасозаз сесзавтзеє акшсяеказеа зсзасошоеех ачцактатає плахти ЗО шосескочлов вавоаковеє своскасаєт забава сао паеавеста зе сивнацсвчє зчазсвкщЕЄ басехтхчуВ сззаекос щи Кшсасо зашаеасВцх ау

Етика В Сова зУи вана сє асезавеоя аседвдЕвяк ВсБЕКжИда М стажист пиасоетяє завести сасвашксе МІлелошее ва ІТИ вк ши МКУ «вій ДК «ше дЕВЗВІЯОЮЕія Щфка1 Бара каші с«вЕдеавнека баловегеви ЗзбупозаЗза сесвессторь вабсвивава пелена ЕЗНУ зчасгапнано соизЕачая вбавоуаша беКшвсзсча казок є вва ІЕЕ «вових дао т садове безе ає рама меш що шінакшитс» джек свфравакіая бета схфурювеея додавав х ас «асан саввчесваа азам песо ає зкезосакоВа банан ся З зсвазссасов стос свищно чада вУВ хауса саден кажана я Зв севазскавис ссшсеазави пасссквзаа аешгавссма пес Е Все вх ло завада аза дзвоазжекоє вавсаєсевеу спе всововта секавееч сша ІВ тик Е тю сшуЩрІсаЦх шощалушя зЕМКаМмає селах шаг Бе псзсзайхавз зестазаисє звис коса аа ЕКкасава Вища НО БК тачрававтя себсацьсто сопавцвайн зависехаес вспаввасосим села Квт ко севидккивя тсежишетаса паксхасаМе вставав сеча висгй все опа ех каптаклоса спацпедиаои сказав ке своававит зазори ява куву вже вгаттлсвиат аксееавеЕ палпсвлаваї аеаказвази сс мацЕтних спе Б вавизсекмо зсавлсеваве КожшкосиКа зесваеааве пшиастививо са ехнат Се впсесвсвче ззпакаавЕк збе кавсс ска ЗЕ сазсв Став КО спи ква сопел есо Веазавшека сопдосзавува засада база райа КЯКНУ звавсакати бепівЧаоде совісв КЕ сво оков кобасвавсв сзсвосавеає Іо пита кам ал Юти сетей Фета сваха поши свасавааих их

Совепізрово село ксвке спахчнасва свои: авссю пабеснасзна зофасекох 125 «ках захта пастсквихе васусвиоке сзівачитак зЕктдУвал ЕЕ еВ кшствосЕ взшесатавхях сеавсЕаВе яса Зола попа 153 хвкзвсахсві запчкавехв Каси това аванси павича полита леани 13 «ЗкЕчависВ кепка вену воа за азаая Вацак іва сосессетах НЯ звазачевосжка завше стави ско кЕсВї зсаваавсва вад авза пава Би пзкавтвнах збо ає дзадлавове газавназно феалнастата зазатеиимх млі спиевоаватміив талан ма спавоовахкех сала» ваза вейа пшетерруаеае кахО застав Чеки сс зчшесвос сіссЗсвлав сопвсвВосваа їв етан споваачакхх засссвавсве зазачавис Сзавсасаде сис ВЕ75О псевтсастай сайплатсвое ссптпсвсся сова Фів чава зшисеакксаї КЕН зпишекзщамс ява ча пашлакоскУув фешеалесс езевЕакяажшя шшсВИВЕ АНКО стастовкаса систе ева зво зпзещчїзтат зазнав Субсевасх хо бару са чедасвавзав счпазолацчазе сопеовискоя ЗЕ спорах КБ чвасеасвцвя жави ох. ХМ,

шу, їх

Ух т «им 1УБЯ «Ем НЕ чаї шіжсузе мах ша З зшвиінястат козою ав аскев тавкавжосЕ сзвшвасиоя ХешКЖиКЕТИ ЩО таксивсвксоя ствсскатя ставок стека стаавшоввє ксвравеен ща «ака ху свЕ сан свЕос сежкашкаває Су важнцув аква Зо зга нсвя чидзадневав СКЗ саяВ сер вая зо вело вою ВО паїачедисо троп вос восвпсссвв всвссалато сесвканлахе сплаті Зо зкекссасіш козак ставк сахууатиав сопоксзагка ач К всбибооу У дова шпон файасавнос спеЕозеуне сепшккаає поко є ЕН поет саавна засававксих зксавнсвеи ЗВО зцаговаса калі тане що впейщинакї зкеавеаннаи зеаскксма ква енсУк пана пак апеЕая аю тачка здав а пасе бодай дал давус свищ шли кошпасвханя азХнешамо сазан онвспзаншанг паса М свашнаеНме шиє акалаеняах Міша поза лавкс ссавежиийс кщлоазащи девиВелаАх КО

Качоскстаза бас свак стацасео секр авщєв сек а постає ЖИ «шив пана нцас состава ащомоуссвах забиФасаде ву еВе Ж че ечаве созазасво зпсзесвазе сова ома фУусасеваях пава ЕМ

Зимна клею захи шШосвкшисВЕ давшошншах лає вИ. ВТО ВИ чяісеакава кс тасесєся ссаезбЕтаве вставка са весен зе зап певжсащоав плеса хавет текло все ївам вусасаваа ліс КшМа цк завочакаосв совЕсаса свейзасказ залито срастаноа свое аку «хевцізацпь: взаваіокоса асо рат аємх вотадтєвше. халва БАХ азпсвозасеє Свзоставзсве засада бсбсиазвасих всопкевказа ема тка звів а чапассавтав зе пастора ваша Вбсяоватта МО зви и золю МІ Козу ви су жилки Кф вич СМковох м рІидо па люмівІфк жу ЗОНІ востжнУуваеа заипусаАвих сети БЛЕМИ пхО ши але «ІА і ах пл свт про уч по пи паю им Мухи ЖІ оМмІВи их м Мом Божок п поту «адасзассовиа злам св сот саитив косами сел азах ЩЕ ВУХ, мае пакети рков мВ р оУ Еф Кук р Вміє тай сити хиЕпЕе звсесанеютс авлсасвеи севлшСКЕЕ кавакквайв авошоацеасах хі прикусу тт фору су ев лу й ому оце ую могу ке ру ком юМО Сб од ут уж дих, заклав х хаос попе хнсов вссвеимеиа пеки ажх ВИБООКщО Ам: ер кох оміжіх лиц кеВ ціІє Ва тЖ повуєціІЖ М Джо хцоучиюуюмію у Кує Кер Б омІКД ОВТ зи

ЕМВ УЖНУ кижаени Ка наче ко в Сода сш СЕ КО КИ Аж ик Ше «ХУ Та жтУля тк

Жди ХМК «ри» пих хека ЩЕ штук род . нь и ЛО мжУт я ЕЕ, о

ЛО. АЛЕ пОХ рана ИН

У Не пед лиміх Мп, Фк дов пет ше КІТ шк ВЕ жде в паї залу ат состав пупазоа влпувазсака пвпшуахайо вНАКЕЖИКВ ШУ нн и НК ям в Канон в дви В ож спуйИк я кв ОК Мов жи Тл шказвошткатах хати ка Блез саск чека апа сита Ах зо уві УЖ МІЖ дя маки Кк иВИ КИ ЖІ В му їх іх лісам сплави аа па уки ви ЯН ІеЗни ПМК КАМ ЗАВ АД ок соч виу сус н і ож М шк сх ри подо з долу шарму Кк оухехики ІВ пох залосзавос дзазекаекк пк їЗЕ сао вала пет шюа пера ЧУ

ІК ХОЧУ КВІТКУ ОА ФИЛДОЛАХНУМЮТМ Кл Т х я ПСАЖКУИ ЖЕК, ем гу пічні ше пам юкоустиєв м код клав туди окр кт Вх зе зосежсовИшус совскзесав ЗСУ пис каста свташтво сита мех лк

КК дв м я мою ко из ут р Ок колу Око уривка ху их Крему и жук и МО я СВОЯ шили ккив по КиІшшаш ие За ле Семи СшЗСВИКИХ чи о В и Нв и НК БЖ пшона Кале еайвих века МАК ваКИТ щефилум З тлавитаах ян теп адами адитіункат щадне пе мет поащекть вався кох пече кава папок Ірак ПМЖ Я ОМЧНХУю ЗОМ ТМ клпазаавийа пплацищиий веди кЗа падвазкасавщ аск сла ЕІ ща сорт стул енАатьОМх ЛІ Ки МОЛ ЕТАюА МЕСТО М ФК я ВМ кож рожсумии сек опо см им КіІ хо боку куми ЖЖ сумо тре шО кажан сосен сва сви кКвих шсебтшкавах атаках зе ж мч и в НН НН НН НН Мч понасхнадвжав вими Ух санки кеВ ищ зи чо БИТИ Малая їкУ

Не НН НИ кжту влидещиахлЕ зввасктвае чзшсйвсвкха сви всязайо вахасеатиаа Ва х ТАК піни іно пуд нию ик ЖИ Ку отих пови руту СОМ суйощоутю жук Ворді дах акшвіттива зт счсвси ховав аева «наше БУ аниМ ТРК БУК ЩИХ ВУ мив спо луці сфор босі плтудж ноу дики викид сл їаказахтеа засво аат вебосвапа зак ЕМ аск акх виш паща ик фани рн и НК Ко дво ве лу форуми МИ их ст стазсеслаиаз пива пазвпв впз'твсазави зЗбвапвлпиавиеє аавшовесмав спиш кКо мак авивжреник звааксасєза бакозтазієв себозаєвов саженеесе кекс егх МОХИ захнаихнам еко ох се гслодовя щеоптяаезсв дише пес вия 1 пкт я пебодпаеоррх зочесуавнсо векаекіає Субавоеаве канви тіяу

Між сєсавх вазостсасова зоеслеазай аваставевка щепевЕХнек зессавЗксаЕ КО кествчаии злу ако бевшккшвсЗ сцасозавох сеавевакак коза ТВО ач осах вича читав вевилеон виМуваклив сдиенахка їЖВК тивне свіваазаєх змова фас авнецх бваасмЕши ве ееО 158 кзезсстах соках ава пазсахквеЕ воза скоцих падав ат петесменЕ То аакаватлеятт ахианкеваве капу хса два тоюа «вас еая бою мМ дир вуха сусла шоссе МеВ М

ШІ ВП

«АК Оп іш ДЕК «іх шітсюа щих «ах БО вкхвачстав вксавечеи бдайставев шовк с авесрозос сени щи ззавсзпактеа пасив вУускахеуна тоже ема бебвауєао ХВ кразаствас бавзсзаєсчцяЗ совеаакакнє сравевзава ссвасчанех азакацотак хво аштсхсаве ссасексоеж: зок свИска попри ласте саспскотий бааваавиа вай пкавслимс;а Ковацианск бтсеєвайеа пвлаенемаяиє кет евкще ев Вих о зхкзахтасха сЕПечЕзасх ща МЕС КЕа Все КХ дошгатлоувюя шо зазаскоемат зЗагсскався алое ниве севпвссхтач іч азива вівавсКЕке ай зешазаакКи стос иканх Беказаваос аск сваа Мешко виш ЕККяЕ шах чЧисвсЕквих спйатаєшат чевасесвоя бЕвствеою савашкасес бекон ея Ве ахтз'заааа атосзсвахо кбвгасасся весело пиппачцщапя позик ВИ вічкатевов ах важи пахесвахе двеазілцесв вавпеВвоякЕ пік окКх ВО ссшвасисаМ ЗіпсевБКВиК ства спообосезеК засЕталокУ що аков ж сил ваза песбвовисЗ спасе пев сша певно яка секскжиаєє фав'лаечає сорапаласєв кв'чижиєов ска снака завасаєстх чи мнапшжсви песпіасса Фпсласаюх запсвищасв сага оазис Ба аксвиаиавта затзкпанахє ппавсвоєеа асекоаекеш паза збі Ухавах БЕ жи окас ссоадаскавов томата псвсазашвта зала акред ке бвзазвизати зчспоассвав сліз иваскЕ пепетаївав есе наєа зако аких що зистткиназав везе сна аа жав аске впала вик галь Я кпшсжосвка седхавилиа Кааскасвої всазівзсваа пепехатиту вавишсндаа їй зивисчвав зеакеашНе кору юав Кота таесванаєсо орви або зееассаа шкеасикомо сля сКстбоутака сет цо кокони ІЗ плавлених сі настома стиха сшопчиаску песня ка Купе ІЗ сиве ни сао сок посох велику плавки що сказсиВасео шлиссковоюєс вапсекоюоса веЕосеквЬ ЕКО К ско ке Васко совки пло асиех спаабиащес сизим сесво ака компаса сиае МО семан х закбксвосв чан ккк поросла Жозе сова здо закис псвавсквамр спазавсаза дацесесдчиеся Фапвоааае вада е ЗБ їзаскскоза пспазевксс збівссаєвх совокісасс сувгразчаве зов авке МО «всі ссмакх сехазеваса Збакацваса сазана Барто геосестивх ТЕП пахласталех спос вкове аспакасааз вла иася попала Аж Єя ІВЕб певццщоеекас вкашашаєка пачадавсає застава» зви екв ек забита пп сви шкеле оазис соаазсвсон пот ах їчо сала за чаплі в ВІКА пово за ве о пев дес Я полив Ме -

ки ві «ві БО «ий» ДЕК ее суду пах а жу чачалазахн кшптс поза собаці савес тес уаМиаАх ИН Фара квояи БО бвесдсакцяс ешивтеках кобза Бакапссадиа важеевеацев ака х іще свиаащжимоя павпзсчазе зе сиви «ек лексвв Зара пасе 15 шпощшечекакт сстзстаскот всаозсечеих звосваває совно бавратеалосве в закщейала актуа дей шллимхь ох амавтлв ах вкМсєт ханпеУле я я

Павнскадава ВОзсткОЗКа свіспаскве пазвбеаснтв шен кава щи чзавзевтакас зсхковазад свесссваз зацозссацк шкакКовака пава асиКа али засни тУв сзактвсякУя ааевсжаає соски сведнавави везе ще пехахивеаалт вавсжааса СЕК автак весквклиєа еще ткани У тлошосхплаевех сли Енике са азавадв шосе шлам Мосс иикх БУВ видали Е тлесавесвяа бекшижикає вавсвевиВ шксвахивйе споевезине БІ кеди Фі сосиає совосчсвох сзаваисво пек мот во заабиштавсис сповзати мив папи ивЕ стискає бога овоч ве зесктсавко ссезафесва саескавнах садово дасавкевов севовавраюа ЗО таза ска взстсзаток попав сват зв оавє засо еваЕ ЗХ витзасацнія панди слрадовіиаак звапапових БЕК гщанвах сиву В ЗЕ ахтвасавуя спав аиьвх звасиссаає вва БЕСбОВаВНншє жваве Ве квкзатавис песякакаке Чакмсвотеє аКолесессс пазжксеастя бокова Мо заквтскІнє своє садасбевболпа сзсававеєчи зазгакаєь батексктк іпщ зиекизиКцих соло савй фе маливо сектосвекЕ авжкЕвИас хорах зви павевавис ссвпсекота сЕпелюсави зашпепасвиа око аасаао смавовнива КН: крил свали тес щКся скачав БЕМІНсви ЗЕД Кя жави Кт:

авиазтежловзо зе кайає босвесксва факасцечах засл паєтеткериє Клео шичеоссскоех повоазсацв пазавасзаве спезаєлексв стдсяаасая завесмаєтиа жах човна чепачетов даапасаачя совсовашайЕ Вага есе ав Мао звасчатакис ЗУККККшАВ сука совсесакає сасвасако зепаецєетє МОЮ «пек Есосс сасочааася зодшаЗ зво пачка вощичессве зекесацЕя Ева зані піакшклав павастасчех веасаечаниая щисвпучав вази їх пзсозславаси зпазасзавсв псаасстіва Зоевшюєх ЩиЕККваВ зередаченх ОБ

ПТ ЛУлУ І Даша Мах АТ ее а у ИБП В ХУ птевсясат залвзсвишсье сепекетикє Бштсопаево Бета лсє овес ІІ чЧЕксзавиасо Кбусасевхо бланка Зепісєшствша БКЦ стою Еш зчзсвооваз дедзоалнваео зазозаттаз зазоцавеазеє азтавависс вазааваано БО

Уазазатов саезасезе асеслвавкао зазнсвайеє брала пила КЗ

Чала етткиа сват а Е ОО тиша БЕ «Тіз ака «лій» ДИК «ТАМ ша утде Ви ших Ж

БТазазакасв касаасаком оо азкаєс свазихасакта азаставато зовано З ззаїлазаєс зсзававвах вобтвасеазаї вгацесавси зав'свЕх зепатавнми їй тазакахасте тата змка свсівтасеоє кю ксУ ДЕКО МЕЛвТ Мвт з їщо засажаде севззсоувакки звеїхавзав засвиващмх аападнавстав настав ЧИ каиспавасзав вевзадуаеа пазах чикек сао ва взовсаптавша фаавВпокехх ІК тестя созав зпсчедавна пепекатаає скізахкєва за заавла азбевсраст ЗИ тхвавасесу внвзазашка пав азат спаваипока захавиккєт сад кесав Се ївазавнаве фзвааватисв сему гвобасекох Яапевацаау сода З шчопаєтат твіссевкок лава єке бесаавеии звоскнан щсеанажкя Бас пфшаневиеи ес вави забава їсте віи валася мішок о зсхакинасз захи кевах спзжуцавмач пакавешниве вбив єх тиха вх У пазхлпаск:і вавсазкває зв'акетавь зоававшстат балет феаванслхкав. ТЕ запас фвисх стопповасвез ставах зозавехках зЗкївевесис засававиєа. Б каша восч вісзаусеа аклацтвзаве потових восвасчева покаявся шо зкпаАХОВКо звіоолскаЕсе сова сасква шбоктеснкіх ссЗсосеви зав веяу що пев сераєяна легше Фу песо страт пев о пЕПОВШшЕВЯЄ ШучнасесВи їацазанавад ХфвсвоаВОЄ Шхшовавиак секковеоє 152О тнидасвовоє сакокссасия састсчозов став бота азовдеаане шо виховати пса о пехахначб вано ви ЕЕ зесовававеа 1155 шли чиалЗадзеаки зе Встпшмахеков во вани пшона БО пожнонавк сзсассосв певасошК зевослоах заешвоаввав жкатазвених КИ ваваасниакя звшвнпсмео засазеавзе ссаачимоза Барасасаас чек АйкИ шкала Зазепсут кто Єшє бпшсесесюсс ссвааакьЕНО ВО У аж скавдоукссюм адек пф менх сешаоюший пек сиве іа

Фцгнлвиатата ачеаслетаси: сапваваєьяя зсув плати сь шалені І5ЩИ азазевсава сова сесЗсвіаваа коавалаваза васзавсчяка кладоуаваяа ХВЕЗ

ФідвавастАЄ пеховаїІ плвзасаїва зчиноегнвовЕ ваевааниатка паска нох НА О ато повіка ХЕ іх «І В «І ШОК «жали ВЕК ки яМускдя жах

«ПіЇМк. З зщокаксхсв сесвзавзтиах свабпастз ссаводисваї бавсолазоав чив їй часа жиє пвеяктот: патасвЕкеєв хаккасавцв БЕЗЕ Ке ФкфЕВМОоВаК Зо суатек астазастес пайескавий ваакеаствс вага зазая висока са ЗО бтастосщес хапссевсаз певповеече србвпаєсву кссвсЗЕзся «вевийнавя ка асдзеахаанх пЕЗассасе взкокасбео безсвишкжех завеенатих Боно зов стасажитви павоасатсаїи пкспавзтопа савани зесттааскІ ставав ЖЕ «секс есе заскавзсвай зсбзевааве кЕВАСЦасеХ ВВА «вк пвобздависав запасах Божа созаасшнвВи ство завли беаспаавета що звзазетряєс стлтЇнасьх свзасавства забевасево вксвзавахку збавамиюа зай аакаопсттавх Кавессавав засвасавих азасижзвака зазгавіаКО сіпакаваци щЩюЮ зазізтсзеа савнозиссав сктвисктоа запа пшона вових кв поакжсстоеЕ дсвзаваєиє доиссоаучаста піст сосо віск звовасовея тв зЕчіЕвсвюя БЕЕБасатуив добокетсва катосавово абаблучкух вазабковех 55 нвакфокахає безнавстав австасваєк зсвтбтзоуах явавасвег хобтАКЯОО Я шпекцвзвуте КпасиаеЕса ЗвавпесЕи віза ковкоя асо Пп зов пвешттакттта азашсасіка совесадавкех сова сзпаповиа вМЕхшовац зва піватіхакчо агсвдаавіси аасевінеа ватра цагавеївав твасвецуаоа 1259 зедвазсвеї жвеамусав авшвозоах совка ікіхсвваа взакакзаца ВІ золотий сещеквсокве зсханевик касова поса ваеав шквкаКцчива її-й пазах баахисскае «овен асск леслосвата певне сла щи с«кдвавцатк завсклтсак ссосяо: ззаазасоя впссазвоях ес ковво Не щирих ЗШ сосен кесмецсаоЕ щебеню соусах о чЕвеаневасай ссовсанатвЕ Вптссіваав зовкасесац Бона шнатать ЗТукштОЮЧ: із

ЕОСОЕН заавсвооро восесовитс ваацазизео вовссосуау рого 1348 пн в НИ НН НН НЯ ук кн о ХА у туя я БИК лиашю ЗА МИХ М КОП КК сх Мт ом а Ши и НК и В В тещу

УК ФУ АК и ЕКОЛО САТ ЛА ПТУ МАХ ПОДІЛИВ ДТ Мао прожи Водно стече ІВ зловили рі спос ціх судердКр ги поує В стик Елі саквсЕлах зах чазавии З авсазасеа ЗдкавсеазиЗ вача зач оає М пен Нв и НВ я Чем печати ав завіса тик чесгвиса Поза вита ТИХ Ма МО на а и с на Пн кН и п п о а и и и п З о тр ха чиив или Х пи пою хасриМомЕ З ЧКХИКЕ КУ тіадти МоцумЕитих аив ом кити ие ж о юка ких димові флюс аж хут «КК рими ех ЗОМ пастухи х Ірак є ШЕ Кос сват Фата пу шецаи МЛК дод щии щи ди. кто див морс пу КІН щі міуцоціаеи мох т Ед

Вуха ва акупансвом свосеавое дамо чиа сова вовна ВЖК п НА и НН СУ пІжАЛОВюЮЧУА САТИРУ МІФУ ФУ КОД ЕщІВУХ САНЯХ саоради ци ПИ ехотвоз рв. Бткекуриц пов лру є в піуєт пами паж Фо піків о суку «ай шисаашииХх ПКТ сзаавт «нава стекао пове снщуаа Увисеалиашек пехараКачеМв о о чи дит т оту стих вкхясуквсй азазашаКек Ваня жк ша «ШІ ха «ії Зал

ВК кЕлиКки еетнно НОЯ зд ІК шля Кл ехідедимй есе со важки КУДИ АК Ю К ОМ ХАТИВИ

У ди «ОМ п пояс дату вич Зх ЕК и Вр КО Коди жи пятою плюку о ияті ї дор ува пом, е- затавовсслв вазиваши пвощшисваве назасизвай вис ЕВКЕК парі дея «й сер истмаа Вт БасКки падав дсп доави Мпа пня лова ул зала весУкакЕех зазусизах ака подаю жива ах пед ов ха секр м сухих сміх сх мухеуєчіхтужомих спуєц вх в. пт Міо ци тВвипшізвавке тачка сова Мм же сс певна аВОКюКм АК поко піуєх еко о дае оо сміх в домі поудоіЗ КЕ ерЬ с дав похо оду шпиавеже не семи оиЄх века жиспвакнами ВУХОМ ких «Ж фот лавці схему сом увичкМо хм вир см тм ви окоу и ую схо о Вт в пи вена сира вх КЕ п баз водстата скан жвавим УМО при, шк сук діт жу мес фюмимоьх ех уау т ху ет Оу у, ре авт зисоав: заз за вовк лпнсзав сиайалии ВМО м ТАМ, па

І ни в НВ В НН ля зЕКссвасна «алое седвстевис оголити БОКИ срака Ех

ЩЕ пласких дв моти лу у поомнодКоміщо Еф опи их киотивомо чре с черц Во БІК шкала пікова засл МеВ шужНаутття тут ча коуч слон вердикт ває квт ства вика вициь гр

Оса Е Зо нт х КЕН ОВ сасбславасалй сомсвВенисЕ МО У ЯУК

КЕКВ пет пики. дежжвдиної Вацак ще НИХ втекти висхкаИщк ах ше ба о всловидао па фа Цякоя мим сактнитиек пшскЕКакКх завада пЕкокочаАкО Все ави савайавцх о чЗишвнисзади чопраскЕтої зазвазвасна писназианист вас втра ЖЕО сваасевамУ пачок зЗказаван еворавсьаов бустватееє певковсосо ТЕ вставка ЗзеоБЕестУю обо пави звасвезац станеш ВевКБоах ат павич касттс стаж асово кіловат закшскеуса шШешисавекя тет дукоох що «ІЧ мас вспсазавіс сбсбичінава шепослеавоааи ВБИТИ МеВ ВХ ви печії сьсча в'цтзавеав сазавеасзчиви застає бічна ЗХ КХ ВИ паздетжлтлва сеЕтанссоо сао виВО закдсасвав саван в патока МЕ пешрсваніов авувавненовя спаси сокас візЗаснавта фаза вищо а 1158 чЧавсстевавав паса ева дасешжечев се шике свешвовив сеапеЕкли ВО тік бвзеадчко ссоасівау сесасствзав зрспоеводУуєс званої ва сте а 1558 зциказазио чкасиазнака саваасмвийо есе Мова єсця Каша ІЗ звиегавзслтеа вІшшкета човнами саше нвив замки вада 13 кв еасК пвпоракачво зспевосаей бзбсовомає Масассавия сесепекоаох ль задкстадиль свист епос Фалло есваиовова оса 1500 питна фапсвхасе зак коєоа вста ЗО ТТ сф кий В атлтистосвзисе зезоаеасаи Задати с сома во вишасвзя масова БЖ хзЗазавейл» сала вопдаштеавоюм сталих аавФфриалек зах сенвих їі зиспхвазсовеа вЕсмкавах садоасеавки евоссстсаав чіпа зозавикшя Ка завоамазажма спав шпик Бе кираяа саше. саван Мо засазасиа зчсрзасвач засешеешак весен зсесоамає записах КЕКВ улов спек омих звис зу швюа сли ожшаВь вода тсекАяя іп5и васмануєссьа давав кавЗзсласааз абазвеукача павашеьк сиву ВО

ПІЧ шздора них ІІ чиїх ВЕ тм УТ «ій ДИКЕ «ША ЯВ божапем дусовекв св «аг й півсвоссзосое зссазваваї соеваацетеа вавзсвеацаз бешссвескя бар акове 5 цхкавреанва дошка биеїксванв сша каксй вкасасекео МЖеЖКМКУТ Кл киаколаслт вптасшолона акевнивевт зале Кеча абс пса їв чес сс десвкасеик озузсанта косо омнх сасочошева ав цас шли впасти Мк амемова певухсезав сепалапятия павовасвахиш УВК ЗІ акскатакауї свесвозава асаесавоасс зчозчЧвовей зЕраБсавова Кока. Зо

Чкввоскеаа «за иаляша псолкекасиє скоса пцовоєка: віееваваз йо бвізасзавиа псекатвоосх сасоасавай вассбалассти фр аках пох 285 кеасщитізатз чузсссоІсав седЕкацвсдяа поипавсваво освоює ака повя МО чічассзаши сасктивкче виш кавеви копав сват ша, ОО ккзавосссай сасозсвовно свтсвазота здечосавея сапу поА сальто ВИ засаїнакав сашслисеас захв екадзаках зеБЕЄВеату бооразашика ТИ завсзасоко свізавайио атласи заслано пес Мора тва авіківавчї «зач авВЕ зазважееов идущочеки ВЕКЕваУувою хеовакавия вай

Чопик ект авкяєя кбсовссаши апатавемив пЕкжтсвноЗ шана що пекчЧеавтає кактатвкає завказтанаєс акгассвчсе засрекскчв зичу апаве з тдисвовзейе севкитатсе звдсавакчс зевовавкех авееноцця паща ТУ завескакєв вестоасцава свлазозати зЗбалервее аЕболос Зло васклав ТНК шрам пора штани. сумарна ніде ам склався У МТ зазнав залазсатс застакоакса ткжеЕнаЗцле зазаєчанею бок юана ЗАЧ свкзаесава чекав запиши бос пествае вувасвстааи аавеОвеУЄЄх УуйЕо полова яспавчосах века спосо брзасва папа х за жести Факт езкм песо сота згтазазаава вата Іо

ЗеЖЕзЕОЄв Вот ссавнах страте са свобхтотавз ТАКЕ Вваєка кЕбахеекав Іо їхсакевуса звковкаєсх свзовавУсао все ов зажесвахик сус иЕ М шухнамютих сизим шМлвеаиша чашею СВК е пе МК псзачацив зізсакочвна ацсхлоаківа звана шести зе слевах зд птеїбоосеах завссасзай соезбвивеакУ векокачвою всшсековкх Ківоне я і закін хнав чекати вза хеайниа ЕК Сб пустою КЗЯв чсиветакних Чазекаека ссавтанеех мталстнвах вааазтсваха заз ев. ТС мвлсзаиеи сова ІМ ши МЛ ВЕ «ЕК ким А киш ДЕ ст лів Тео екиьмМ «а БЕ їхшвазвахх каБдоУка савани піка сюв меня паскою МЕ

Мекапшешхо какахасвеа хесївЕВсвка пАБасИааи списиивиееа пес аяНео ІК їавастлвЕх пактенеких асист сваахликкв аж кололи МжО свасксочсаа зсскавасає «Кекс КовсодиВе епос: Саки За бЕтдкЖЕКХЗ ставав Х дек вазавиа зезахавнЕЕ ах сазвбаеєксв КУ

Кекастапцах ект сляе сачоагла козла ав паза кає алипааакає БУ птахтувесвних слоесаеанвкх етпоклесвв сяк ну ака цавла казала ЕК заїсааавчани хаос козак всевурастедио скачав лами хних ри зЕсЕпасазкх звасаспою застати касова поет ваза я зветачневзивІс ав чЕсалас акиавокас ссавзавссви заз аис свиашеКаКе ГОЕКВУ чезівІВа сваастосака сСвовпехаєа геаїаівовта гвасСватеав вказа еаа ВЕ бвививовка засно осв Квозвкцчке Чадпасасвех сЕБсСвавч о Басадеах ТЕ тазшимІнев зпедсовазях ссісвужучав вспатстази все сов ссаковнева ВЕ казкові стола аасї попсаловазе схпадкбсзаоих зЕБКЕацвей реве МЕ козсвсвзаа зкізантєву зезвкатиКс галка їдча епі васлсяа сек Еа воо

Ева ас вбипастене вас вОсв зате клота Сказ лчах Ззпувасиякх о пекЕпотакав птатавайее вав збвескшказ КЕлЕдаєияе вена ЩОДО закстжахцх аташе вдлокакнлов заїаїзасие чсовзавеаих саке ама ЕЕ статти згасає завасовнває зиасосавсва ЗЕ стовах паскою тая сечсзтвнака саше екак абатаскстав сусвувкава кавсосцсвад зазнавши ках М : й й А пит азаслацесви сазсвтосає воссеанпатеая аж уванвя стевеависка бана ММ азів зазшасвосяв сивкєзавас сатвзИхссв вадосевав аква. 1580 їзжЕЕтоєва Мав втзазодоя посвтжатотя васматгщаа гео ЗО тхлавстаза пбочіннаїв зпізаваачк пос азсв заесопчкчю сток зо

ЧкЕкснатЕви ззвасаеЕес стовзалслава бваавескх сжжВексавяу ЕКО вавех 1550 заваачісас срсптіваває ства ваза вессВищихЕ чвощклввах ее ар їЇжщез зоні свао Зевконавоав казок сазаскастеє вес тях сквер а їБшО цезазсахе атосазеЕвЕ вілюксвосв папа саасвтшаю шЕссраеєу ТЕВО згстслйзав васциосї сВосрсвшас вавпастива палшЕаеКО ад МТВ кЕсспосазав зказавасва БЕсїтазова баазазаєуе чепасаєвав вкфаавоваюи Мо касассовзавй світ свіава болсккаксв впслазсосеа очка: асуа еаебоовав. 150 спуЗахвнайий зас евася пе кикое бсешвесовк кааеЕнових ЗТ шНеМ ЗО садасеацеи вана шевця асан «сво сиКЕх Мосс аше ВЗН : дл сага еще ОХ

«їй» я? «лат ДЯК кжіЯх вВоїяоме зроорекжуктвих «Нм ВУ пушнмваеи шичІрсрЕвО бестчвисе Брест евО зУптавсяасає авакаєких «в

Чис ссат зе авкзвсовсва бежсасаво ато мев тах е 155 зкжазцєвкх жкавтунвеви чамаевастимх яп каме папееохаа ска цач цих пашЕсківла сиди тисеєх сапсстансв атака во авнах Фев я зчеасаказеа авбвашесвс базсхикакес їцаззсааиЕ даксааснех звавтавеЕк зва акбпаповиєс засйзассс саспавевех «сбікацчазс сосожвавка ОеВОшЕВЕ ш часвасте а сааветоєв саке єни есте є боса бобепаЕжах «55 завчасно віва зсвезаса кишкцаАяЯКУ ауди севи вайедаиове ау шлайие ати жан нови каса зчекЕетовю свавоавеек сбозакеюса заттвевока щк пстактсточ засо авто бавс завбеасвах вкавасевав сфор що чІБевдзеїж КЕКВ акайаєрако расбевистав спіда є зЕзадфктстеав й возваскос ов зЗзссезатка аЕнсчузаєт зазаескднвиеа СежшВЕсрав вивоуеаатї ОО злакечкаяи яв назкаии сопе аасдасаєняа ЕСЕ вовяя все ВИ зігнІцазав скесавксай збитках асаавевЕне вваспазивав аесесаа со зав зЗсвавиааас тет лазавнє зескасва:с вата: ззааВщиКЕх сеаккексов ня паскксаназ зсезсекавай акавсаакви стоссВоВКЕ Зїосакестав со жВКх кв засесзсзай зведе чзезоаспакех часова подо заз вЕе ге ававцасекє свкасовауе тасаккашта Фососскаєв сбодаваюєве сарасютаох МОНО завсссвиаа зссовакосаї двсооаалвава нагасссваз ставка зара віжа чиста зсоас рас давсакасавс зечасав ска чкасєз ваза е ех зссбавеанлс взеавасучв сплата абсавсавсй бепявщево звастаакща зав зЧавазвийеи песпачехса бвтсвзазинсов таслсспадит себдааасоишх спла аг хтетссвксвов захпаслахаст зкастптачною хслвеазаа спешекастя сао дл ЗО

Мачевшаос втедеакавсх зсовсвсов ссваескКава кЕсВОСВаеЄВ ВЕК яв зазнати кому влочнаєнане КелеЮешіаюет соосеавсаое апа ачесдевнау ІВБОО катскеаоусав сспавзазавк Квосвазоває кре сссщска бала акцевВ Бавеввотек ЕВЕО завше зи шкЕисМ Башасечає збашетвиик сбеошмскеоек дао кетх 1 зоадесняивиш асан зхасвоваа солозсвнешк павБакевох баюсопавоаа НЕ сщісчлеакла Камо Катасовиаж вгавовкиос зтесеактх. двавиасехе ІБН аватссвадевк бузезасєсвт збвайссвеаяй амесзекави сви сбианнисх папок ує Не «васпсвавх десазавов Завеакаска апсваваця се асиана пасма ВО чавастенях псосвааншисе ва ІВ «их ЕХ «ків 1574 «Маю пе а ДЕК «ше ема Кусопек ис «са НВ азсузавеаи завианизав сиаатасаєс позову ве Еназажечца наших СЗЗ сепвотиик БК есусак бака запо кео ск ваємх ож ТІВ азкІнасакз чаша пасзбвитшка ксжпсвевеах асан зчошавасвох ЕВ

ФакекЕвсви едавактваВ са вОу: абвшаккерЄ БесусякЕв акамваакай жу наклали голе мото блокада Кожвацаяу аску аке еко у чхазжшкеекс седасвадоея додасте стозиктавим МеИБЕКюка АС Есавцкх ЇВ пічиааваси свахккназя пазавеасЗа Феопсватикл Заасотеааи сао як тптквзасеах щесихкокика позах таве сшхвкогавеє азавсеамео сек ая 50 зевсокассзох пазватиаіє вскоссозаву воосавеке бзавшаслео Фа ща квазвтакіетя Зак вУує жБжвевемва МОБ КасМЕХ ваза Кайпжваа ВО

Ккхссашрктд ссосовивва спсашешки «вавкатвав вастеввЕво Бідсогівавя Ва деки цоєсве дзалатювсва списів пацсесщосв сесвавсває ЗК и воскова закла свзасеевиве сатібозецув веселе зомтфестхз. Ка чакинасаат зе автвав ач аве севзававкат їЗсКайикиє зоававенатає Вт паассацеек сасеекокис абавоКкчаа паасзсаває сови маз віка аваз ОО

Баптаесексов Мк павеєзає акавсаває псвасаим всаавеикЕм песик Б кетвавееКук пазнкеческо авасеекавня повассевеах ставкксаа нова х їп235 тазвпїпасає взадоваави свзасасаав васзшишсах чав сома ХМ весна їпакейижива сгапассвааз зисовснике сівсваскав садив їлаї акЕкКувзастю Ессен Ек пасксссвзс звахавкока кхаассесвсв воскова Кр аск ма сассвівавк пепазчшокЕ сЄсоактМЕнК сісти зковсастаа їащо вапсежвсває апсвсастазе вовавесвсв звана хака пакеекоаво азс аву ЕВ ававзтазаз сзеїваству косе піс сяа зіва всв Здай сао ще ах вовче зовн аназе спав савс ващиівнвасва пепавлавиє совка шт асзотанови пакевЕстаз вешцазвавмі паса о саван кірок Там скати залаасаз сесвасамнк свосеаснее хУусажло птасвива я аву зе максвсво віх і «ші Ж «я ВІН стих ДЕК пли ДНК жХ АЛ Мжив бМБуВ «І ща зпаншхеснок тп Ччскоовсе фест сювиоВ воссоая бопаооанає аабекавошоє ЩО сакчскавсЕ пчсзовчакх записи сазса сескоааека чес ваше аа їпО зізчшаснох зьазсасек ссвастазав ака слух аа стлуже МЕ палозттях дасте паза спе савшенссес слова уютае РИ шк сЗпекк зеосовсвос дпссспаві азопсссвакх Кестоваєнх секс Зо зпйеасекеає звзасиевоаса ктзкшастлеах асо чоавоК Езезспцося ваше огУуВ ЗК зиск: как коса ВиаеЕх Фа сво вача зола ЗБЕ зоаспіеами Фріс засааватсив сосни сарааюаея сода лсевах Б кисскаскиє бевшнотоетв завоасекоке кокалесюши бадососакс сода 58 заекзавссок аскоцвовиси кесвссрова адижззатоє врахо бесосечаиє що сесващш флоту сера стю атих вщевохаси ЗИ БИ завмзстое зем тах спасе софатейомо сф догани ТЕО зок КЕ ОМО моти «амура зсоероша сфе та ацілосисая саке састосогао Номер ааНом боса спос цаки я теории Мотпрасеннрах сором папесІМервиЕ сторо празаена ВщО

Зевса зоквсосвсм КСВ ССККОЇ колес дес є кеВО Че ЗО тТкідеснии асхбусОуккя чего чер нексоо косе певросее МЕ щасвсеще село сосвусесео чсмосктекя сЗафснасе со сваста Ван есе соус Ффссосиуво ссавця «рив засос щіло

Зло уалеи меду сии а слалом СМ ТМВ Феруму В, ПЛУГ ас унваи песо сша пера ния «вм сомм лолацомая МУ зсзоузахецив зоаасасчеви засво Біо Их ЄСосековиа соасааЕосто ІВ мом нн охорутречя ох ор ко дув чи езисуаши сасбсвосаче снювКиа вазу сажа сус ХИТАХ капсттстдиє еще здзсосси спос оасо ззжфасеавая софацеоою 185 вшчасосчас сдзозасвосу поза очами сип ше х їла задо сдвелелаасчо садах звосоасоза сослабсоахо зе ММ аштзаходих площечоайас псовопдеюєсе чансолитесс сассовраче Бех олудя КО папчестесиий асом сова псосизисеУм фа лих пише АВИЕ вчу ачцял саше сс зоассх соспсисвом оце юпко шосте МКК сн я чу ФУКО ит. Усіма и вир кри Іжа чути ук и их, ОХ

Ло М ХЕ МАЙКА ЗАТЕ МЛ КАЛ ще же КИ недок АХ ра» ще ПО Зоя ОТО ОХ МК теле скаи с и т пиття Ер жи Кір Кп корми вих титзешкови стече зфоствушись скосу боесрамбоююєв оси МК и и ВК ЧИ А дах шити іме САКЕ МшТА пев шити аМа рН ЕК МУТМХ БЕ че ча а ок и а п ке моижфк иа ниви М фу ужити и пек им пло ОБ: ване свити нХк сосни бейаломани Бека ств пса тал мечі русских еко вевжиу жо тр ура ирим вію ВЕ стих ик тип пса чани ЩО щури кермо сира МО ефек міри умру СЕ ггуя пюфсриецеекий роли онатек ос ШХНІ ее о шиття БЖ І

ШИК ОКХ аску сте жі шАМО ЖАГА. и ОМ ши МІ БУ Е «аю СХ зашДТтналяІ ср ах спомнустанави зва авкх авшЕашивк чив тю зер сраки вия сцен пні ков ЕВ Кущ травм зх задав савеа сере Жичх снлваассна па шк щи Кир сш ККУ БЕ вве аийк жкацлаввв М кц кі Ек циниц ДВК сину ех У щ кшЕштттрашчх кава цКкц пошу со шеа МИСКУ де ЦИХ ло мн и а а чи кан о НН Мовомсв ау тлу ВК у о кути, бах

ЗЕ нуских хсхшекеимах с евсавито всомивеова їоавссотади сто хацее ЖІ пах МВ ОТ рих ОМ з ик щи ми сс ии г оитіжуїикА тегу молу Зх пе МЮУ, пе нак ни о и нт о в в ов з о в о о о в в м м п в ок оо стік ет міх пущу Ж евия пе вид ую Мои Кт Уя ЗРК дідові ЖІ ут и ке стчпасрвь вазочку пове ше сосна сова пошли КО втік пиши; БІ питаю щ сце вити Жди в ук пох

ТОМУ МИ птах Блю олтати сосен зим її Що пшкиу ТКшК суда Кі ВІТ ЕК теє ему юю па ути ту КВ И ва

Заст мхит Хе сама бери пасли ек чаю ие п в и НН ка

УЖ ЛІВХ КМ: ШКЛО КО уИ СЕК ЛІВУ ТИ я ХІМ и У КІЮДЖ НИТКУ КА се рве, Ж КК пзгчиуя ху еко нд вумихи МЕЖ В свіжо З нори всих. Коен пит

Фасон секс сдасв са нссве ех иклацом шашок мето Таж екв и Ну ве в о В Ес В М о А КО С Я С шт сх Ват іоном еіуровтміхе пує ми піти суєту У пи УК В ижи домі еу Ку томів стиму лих кщеадивиах вес зоваає асо ссодасзета часа спека КИ пшОисектуавна зи аа чвар авах всяка шив матем о уюаияі Ви плерошенист есе окЕ сток сенс Зоо саше па пселтиоцрасос воекавквим сосчсхит все тасна овеспьсвиу садна ЗО вацсскацсв пеаскЕосае создєювоисс се ссаке сват лчовевееВх БО севжсусвкв васала сазацалосав сосна пвчазоааа пойпахосоа пло части ах кн ня аа Зі «Й шим хийи ДИКЕ «ШУМ ша шах «М ВІ соапекзатих ЩшпсонеМе шосе Косова меоях Фолс пепашосиКЕ « люде св давсвеся Фк теве сценах казанок зо ских їй чсепевончтс повзає оц айпеа зазаневтла ачавлеок МИпесате іа чтаваказих птвасптасу сказав пеоздецевее скстцєиск Как ТОме Я по тасеекстах тнезавскас аствсесевс совішвеиа аваєваєєт спеосахуюти дО зсзиовсаваеах седпозавсча анозосие сатин ау екик зБефувивос Я ківцсшутив вптсещисаКа спесислесос скзпованавнйа авайвсоеесо схов еу Ба асисЕкаксв ап ичавих сосок совіссасцює щкашсси шнек їв. зтасизиеа сабвовашк «списав зи аса соків даця соби ЩО втдитсжсосеє зпезешеасє созамноса фБобксокаве сізайикикх стос во кклуаеених вач утяви себе свах Опов ема шома шодапоцься й пекосчевата сатана кт поз зосщасш спауаенсн зЗазЗбеещавиля гроза ТЕО пвсзчсеанх Коса сек овоев КІ ше пе менмнІя За штах ТЕ апцесловео сопла сасцає века сосна спасе зівнувевиах КІ пит фтане зала сиочалисиМі засос Е Фати спо кх що

Тосаетаер ер куми Млин сертмжиаях спаде воза ями застеаєсани сива пепипааштвав сауна онааусвесях пювтсваня 130 гасла саю сжачачсех позчеслечх спа апстова пору піша Мо шо снстах сосвЕводла дакірустєв состава счештоеючУв возах Кене звпвосзааєюаєс севосассаве чесвасссває очах вес пап АТО ткаввсказцасх свсссекаєо црсосакс сосок епцеє касок єв ЕКОеКЕплуола КЛ преп нося чисто ана техно канонами ЦО Бодя ІЗ5О ачоссвзазус звосзасасво Зассцочаесх суазрвоциу саке пиво ЕКО зедачагпоама азс сСазпословеаст шощпематемо сссасенає фура ІВ ззшецскм и сосок світає свтосатсвоу повббксоое сашасшокає ГУ зкасвлсїсди спе оаезселся база псоссаВио попалася ІБ свриІдссІе шоБоактвос сеаес псашева звсососвевиНс ЗиосаекВие Гея спав штпКкЕЕкак гі казасчо кочопоазчос чЧапеасачаї севпсУвиов їщБа зІчсачавище зепавтчавца сосзсдачво сдосасчому счекавацав чсаслосвищи МУ шсаспатсавсви айазичвист щен сс фею веса поефахравнс КІ5ОВ цен МОНУ ПЕС ЕИМИИ ТК ВХ миють попри 1Б5И савстивиах Бл ацецо сода боває воссасавеа седсовоє вело но еВ) стижсдтадаце поси Єзечвевкяо все гоюлеазитаа плову хе каззпасоае вок А «о» ВУ «Еріх БИК «ил ДЕК «ЕЛ Же сви «а ВИ чїссозаземвУ суасеанаиши МеВ ве питоме воеацбаюеь досера плас що тайодежамо свускшктов сахлесеява Екеокосвсса Казкесесо сатани їяй сиди тло дбенавові вола акс соб віпихасов зпавкснвИ і-55 шромнахсає запасу оса плавно мхвяаз васбеекааоє содоасаше ве сеесосксевш сЕбтивакее ЕПпоссануке свкацевиоя пасе са асавкатада ке твсакдиаа чоппово асжхакосста зЕсокекже сСпатосешта поплив щае Ка датенащиии кекс ва весело наве засво хе зиск КО езатасоюв опади аа сзчачшсви аУшУкукач човна касви пасстсвадх БВО сакссасоцєв воза а звана сва ЗК шИЯИКа се Еава Мопадоемх ЗИ хіжсзовежа звосвавЕцаКе свовіанавж соазавнтаи Зо азна еко Бах ЩО каосскІзів зпоколисиа засос касосарсей васоковева песо шках ж зквссевсних заховав списів каз босх авсосавиха оо ТЕ вувосзсоз ме цдавтамо коза: зага тадчавсеах каслект КИ сасакизаах вассссктВк асо ссаст пасе ках св асвии Хазувевата шо зшиті аац пасе пезопташоше ктсавщенай апакасевня сваха й сала х Ева Касети Зсув все оузел сек ваза ЗаКеВаМОВ ЗЕ зЕкжасотчсх Одеси зсзсааноосвиа пива са бсасасчайсв МАМ паспазазий сова махошисике фїсвоазтон: своих пон х ї1с8О ааздисосатчй стсспевоє ве ралевся сесвзтмала ас сазав сала 15 штора ксУєх азсстфувня соаонвесвокаї апечаонос пМіхссцоазаЗ авошувощв АК ваассуако апп коє шов кс место меит фризусраию ис ІК частсвиах Ффосааєсс звссодеееиюк боса зазвбетевес доска юху КО спвазсисав слссноващ воли кс чех аацаВ Боделоусє саавпаа що хнацдасемваєи талии ш соска сса хвосвошко седзазканое експер шО сазсттоах сзУскценсва адосвишєов валося поевосезоава ваша ВИ чис косо соптбстеват спуповосскоу попазисоко воша МУЖЕ всаЧческощс заесзазцаса часову св зашачвоая сао звеала оце іа ззавезсзаЗ зососозчайвит смс Е зазсваави чел вва і вка зчвосоазатцся зісазсозЗаоайо зач запо Зх сЕссваИви спорах зо пассзесктів сопиаааеою сват спуска коню юаесмх док БЕБеКи

Осо поСесеЕжаме свт дошки ше КУКИ іч без КЕ жо свшовоИ Фк е зо кссесУу пауссповца пава А пшваскшисв доска Бешбееує зеакоєото перук фс а ІБ песни Епос є ші «Аме ЗЕ ехлаз БК хан ДЕК «ВІЗ ЩЕ паж сам 5 зЕсчвасасв дочко азасвавазе зазна опсспаих див пносиа БО свині сода часа чем и скляну ЧЕК см и вах чекових ЗО кУа фжфаракоов завада зравзаснв бою і5О подкасти вгасгасуава птазатеечає сусазщвиса сакечеания вбачав лу зок апанадасвае заклик бен лея маше аВасератимя ЗщшИ кайасліснії воша пкемо косшжиих фомшестоеах пасестждесв педософами Ас чЧисвоцаох ке сЕкКЕк спалено ач сало сис щи стщацзсаслаФ систем: чпасзсчісає азесчаековВ баби Кр ак звссвоасосос чессокеошз соспочишко систе теп спос ав засне туст ам тсвтас сушею порта супу прасок Ен зачаття оемоансА академ супи Челастицов сапачанаоа ВО звана еВ кю Лех ен ЕН кіл, жи мм ОМ

ХК Фу пихи ташиК же па жХ «вс» ща промені УЖ ие среди дет цМ ЕТ ріг ж вЕЗзжшстОа сок овоссисх фзапшисачас пази спе ЗЕ ре зва вслеа пива ми сопе пах хи зва ВКси З ами з ни с вн нм аа а п о в в п а па ВВ оту зако дек НІ ери зе літа Ки рик ЖУКИ ту пива ву ріки маже іч лі тутАЩ свуці фот цім цих Бут МІіхТМутУ ЦИХ ДЖЕ ИХ их тки ит юодк повалити висзалевткх своваашк сизим ша сецисаиа М ад пола сири ло ав ТАТ ТАКЕ ЕНН «ККУ иа В НК НН и НН їщ кипавнкснє висохла смена сеиолеис, поси Есетих сп ах СЕ ва худих ин яння ев НК о ШЕ но кон ння ДІ:

МІК КИ БЕК пеплюнстоо псом пис ХУ КУкХ Зам фони их окт йецо см ІВ ЦІМ О сУуЄТ УМ сВУрИУ МИТ титул их мих ее рух оця шоиретесскс ссладосаас Зчсвешиаше вцосвсвосви Сапсасашчш сеавищос о емо щем Зима Вста Е спав свв а км ах киш о соду сна под оо азаоекК шани фата хи З асист семи ле сим ху пек КВ Е пию и Не р НК и АН ОК швавотеасиє спесстшсвеа павкешаа сна калі уєхнихоа пІлесанаве ше ведотазсо Фишпксачес возом спла пси момнц скол ЕВ кое ШИШКНЯ

АДАМ Оу

БЮ ше ха ЖНХ

См У зи чих пох,

Ха их МУшим ННЕХ. «НЕ ах швами пси о док «Іі» ЗЕ ями з

ВАТ КА нжюяк пд

Он о

ЖЕ їхвуюІЄа юшвЕ «ах За дИДЕНУІ МИ Ха с й

ОС хів У

Ку вух

ТУ ху ЖИЖ

МОм Є друк жк що до ДМА «ВОК ОКУ ттеров мер зів ху ол

МОЛОКО АА ЛАКУН жА пі гмо туВ

АХ М ся з: киІіх ша пуху 0 тт хи ДОД дж 0 Писеустукюті учи к Я тррх кі їжте

АКА ж УЗНВО пОсСлюДдиеВ ук. тилу

ХХІХ

Тл и ни «киш мжтжина попаде ХсКЕ ох пе «ай пу уж сви ую х. оо ж я лі пУучИвссеси зЗілещакте їх ях є рІюх Од ек лих

ЖАХ

«КИМ ВЕ

БИ» шіусьве шах «М ЖИ шт ци их тив пизих мери тах и деле цеаю Фу м жк мен ту З ще ХА МАХ уро и

Жажх ДО м пет зле «ЕМ МЕ «Ж Ціамлохд пед цімивицісурх теж и шу чКа поши ЕНЕ Уха де ше кс штучна пеплідевить. хожлм 0 Ам они и Ба «паса пайст аговашакоп х «КЕ ду пря

ЕЛ ОКХ вику кт шт ож пе Мих:

Є уж ка ДЕК «іже Щшуусна пове ВОвнІУюВ.

СВИТИ.

ХАТИ

ТК я блем пику х за схе хіштяниМ МКЕШЖМВА ТЕМНО

ВАЗ Ке ВИШНЕКУ ешшеаиМм щини г А «ші ТИ шлю ев

Ж жи У хлют лю о лу ми ЖАХУ

ОЕМ; Мел жеіюх вики ВЕ Крук у кц,

МИ АЛЕЯ УП чна ТКУ МЛ ОО НКТ

СА

БЕ сок митутчний пола дивне

Ту, трамрих хирим Ж МиЕ и в В НН НН В щи

Орлеан лоні Кс спина Оки ОХ НК

Те ЖИТ В ОКО що хи хечююиіу тку щі УК флту тити сжКжлдуММ МОМ Ми а спчепшльака восени ско ат воша БИ ваишшеХ воша ММ причи сук цоуа вфіу сиженув сож в рв у . іжу их Вовчі КЗ зах псессчва дпвиававслхе сечова пасиви зате ийки сота Яр КІ и ВН НК НН и ситу касова випас захе Зсзпоанвивес пптваовІаМ пошила осо У джу віжки ин в о НК НН НН ЩІ3гу заоисачшка билася вата пом МКМ ААУ ОКХ ем ен ни крдУттут м их п зазвпсзилло фас ралі ХМ сирів ср

Машо мит ЖАХ мое ЧШКОНУ хо МА ккійх тик шк дз хви ут - кА шахи щЩщаАХх

КАКуг я ан НИ

ОТКМ Я БК сірі еу жо муки у я ра шжіаатаазасе спали нт в кА «фійх 185 отр ху кт вика ря «ШО ОБНЕ ятук жк : хом УЖАСЖТ ВІХИ МУХИ

СК ї14ч 4 шо ду зх херуєт суми лету р ут т

Мурат ат Фора Ах ЗУ шві В поан

ВАНН НИННОХ

Йти тім, У ох Мр СЕК стук пе ге щи ста голе юю ти

МАЛИ УКМутЛ НИ МАХ пдтуд МЕ ху Ж репруз тт пери я те сич сженлава ДаЦиемМаюВ ла ХУ

СІ пе

УА ДУХ

ОН І шию. сли сежашжУ ПИиК

ППС Пітт єеуує и пр по

УЖ вЖуУчВА ПОСЛАВ

КО итьх как

Кеш шийтзистямо тиж рез й ех,

Жают шжЖучит песо мнНи сю ех тик

Кв НК я ща

ХК СВТ МЕ МАПИ В І ша У

Кожне зе я А шли Ши пив ЖЕНЕ ее на Я

ЖАХ ЇЖУ СИТВ ЗЕ

Сто ТТ ск ДО

Іа а о НН таті питома тею шив З Бкя ек ЛОВ вв чОВе

Ба п с САХХ кл АТучна посадове

ОТУТ ви

ХЛюМЕ ліехицімо зиції ххх діжа ЩЕ УМмНІ ТІК М «аїцю ід не яв Я дер іже кот ев км хх кл

МД ЛЕК ТУТ ИЙ

«ЕМ ОЙ «віз 21

Кл и пуд «де ДиЖ

Ех лучна носіть

ТУТ ю

ТУ ІТ м ет. се ще ї ми, «С ИЩох рев пі і ше цуку Уа КИ МОВІ ХХ дДкдстокске КУЄ В М.

«ша ТО

«ар 2

«їй» НЕ

«им Чвечна послідовність

«Ва пи щетУчна посідав

«005 110 ашессевсас сек еос св хі

Claims (43)

ФОРМУЛА ВИНАХОДУ

1. Рекомбінантна ДНК-конструкція, яка містить першу експресійну касету та другу експресійну касету, причому перша експресійна касета містить полінуклеотидну послідовність, що кодує флоригенний білок ЕТ, функціонально зв'язану з першим промотором, придатним для експресії в рослинах, де флоригенний білок ЕТ містить амінокислотну послідовність, що має щонайменше 90 95 ідентичності з послідовністю, вибраною з групи, що складається з ЗЕО ІЮ МО: 2, 4,6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28 та 30, або її функціональним фрагментом, а друга експресійна касета містить послідовність ДНК, придатну для транскрипції, що кодує молекулу РНК, яка містить націлюючу послідовність, яка є щонайменше на 90 95 комплементарною щонайменше 21 послідовному нуклеотиду полінуклеотидної послідовності першої експресійної касети, і при цьому вказана послідовність ДНК, придатна для транскрипції, функціонально зв'язана з другим промотором, придатним для експресії в рослинах, і де перший промотор, придатний для експресії в рослинах, є промотором вегетативної стадії, а другий промотор, придатний для експресії в рослинах, є промотором пізньої вегетативної стадії та/або промотором генеративної стадії.

2. Рекомбінантна ДНК-конструкція за п. 1, яка відрізняється тим, що послідовність ДНК, придатна для транскрипції, містить послідовність, яка є щонайменше на 80 956 комплементарною ЗЕО І МО: 65, 68 або 69.

3. Рекомбінантна ДНК-конструкція за п. 1, яка відрізняється тим, що флоригенний білок ЕТ додатково містить одну або більше з наступних амінокислот: тирозин або інший незаряджений полярний або неполярний залишок в амінокислотній позиції флоригенного білка ЕТ, що відповідає амінокислотній позиції 85 у зЗЕО ІЮ МО: 14; лейцин або інший неполярний залишок в амінокислотній позиції флоригенного білка ЕТ, що відповідає амінокислотній позиції 128 у ЗЕО ІЮ МО: 14; і триптофан або інший великий неполярний залишок в амінокислотній позиції флоригенного білка ЕТ, що відповідає амінокислотній позиції 138 у ЗЕО ІЮ МО: 14.

4. Рекомбінантна ДНК-конструкція за п. 1, яка відрізняється тим, що флоригенний білок ЕТ не містить одної або більше з наступних амінокислот: гістидин в амінокислотній позиції, що відповідає лізину або аргініну в амінокислотній позиції, що відповідає позиції 85 у БЕ ІЮ МО: 14; лізин або аргінін в амінокислотній позиції, що відповідає позиції 128 у ЗЕО ІЮО МО: 14; і серин, аспарагінову кислоту, глутамінову кислоту, лізин або аргінін в амінокислотній позиції, що відповідає позиції 138 у ЗЕО ІЮ МО: 14.

5. Рекомбінантна ДНК-конструкція за п. 1, яка відрізняється тим, що полінуклеотидна послідовність є щонайменше на 60 95 ідентичною з послідовністю, вибраною з групи, що складається з ЗЕО ІЮ МО: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23,25,27 129.

6. Рекомбінантна ДНК-конструкція за п. 1, яка відрізняється тим, що перший промотор, придатний для експресії в рослинах, містить полінуклеотидну послідовність, яка є щонайменше на 70 95 ідентичною з полінуклеотидною послідовністю, вибраною з групи, що складається з ЗЕО ІЮ МО: 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45 та 48, або її функціональною частиною.

7. Рекомбінантна ДНК-конструкція за п. 1, яка відрізняється тим, що перший промотор, придатний для експресії в рослинах, містить полінуклеотидну послідовність, яка щонайменше на 70 95 ідентична з полінуклеотидною послідовністю, вибраною з групи, що складається з БЕО ІО МО: 31, 32 та 48.

8. Рекомбінантна ДНК-конструкція за п. 1, яка відрізняється тим, що другий промотор, придатний для експресії в рослинах, містить полінуклеотидну послідовність, яка є щонайменше на 70 95 ідентичною з полінуклеотидною послідовністю, вибраною з групи, що складається з ЗЕО ІО МО: 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, або її функціональною частиною.

9. Рекомбінантна ДНК-конструкція за п. 1, яка відрізняється тим, що другий промотор, придатний для експресії в рослинах, містить полінуклеотидну послідовність, щонайменше на 70 до ідентичну ЗЕО ІЮ МО: 49.

10. Рекомбінантна ДНК-конструкція за п. 1, яка відрізняється тим, що другий промотор, придатний для експресії в рослинах, містить полінуклеотидну послідовність, яка є щонайменше на 70 95 ідентичною з полінуклеотидною послідовністю, вибраною з групи, що складається з ЗЕО ІО МО: 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93 і 94, або її функціональною частиною.

11. Рекомбінантна ДНК-конструкція за п. 1, яка відрізняється тим, що перший промотор, придатний для експресії в рослинах, є промотором ранньої вегетативної стадії.

12. Рекомбінантна ДНК-конструкція за п. 1, яка відрізняється тим, що другий промотор, придатний для експресії в рослинах, є промотором, якому надається перевага на генеративній стадії.

13. Рекомбінантна ДНК-конструкція за п. 1, яка відрізняється тим, що перший промотор, придатний для експресії в рослинах, ініціює придатну для виявлення експресію полінуклеотидної послідовності, яка кодує флоригенний білок ЕТ, на більш ранній стадії розвитку, ніж та, на якій другий промотор, придатний для експресії в рослинах, ініціює придатну для виявлення експресію послідовності ДНК, придатної для транскрипції.

14. Трансгенна рослина або частина рослини, яка містить вставку рекомбінантної ДНК- конструкції за п. 1 у геномі щонайменше однієї клітини трансгенної рослини. Зо

15. Трансгенна рослина або частина рослини за п. 14, де трансгенна рослина є соєю.

16. Трансгенна рослина або частина рослини за п. 15, де трансгенна рослина сої дає більше стручків на вузол, ніж контрольна рослина, яка не містить рекомбінантної ДНК-конструкції.

17. Трансгенна рослина або частина рослини за п. 14, де трансгенна рослина сої дає більше квіток на вузол, ніж контрольна рослина, яка не містить рекомбінантної ДНК-конструкції.

18. Трансгенна рослина або частина рослини за п. 14, де трансгенна рослина дає більше насіння, насінних коробочок, стручків, фруктів, горіхів або бобів на вузол трансгенної рослини, ніж контрольна рослина, яка не містить рекомбінантної ДНК-конструкції.

19. Трансгенна рослина або частина рослини за п. 14, де трансгенна рослина цвіте раніше, ніж контрольна рослина, яка не містить рекомбінантної ДНК-конструкції.

20. Трансгенна рослина або частина рослини за п. 15, де трансгенна рослина має більше квіткових китиць на вузол, ніж контрольна рослина, яка не містить рекомбінантної ДНК- конструкції.

21. Рекомбінантна ДНК-конструкція, яка містить полінуклеотидну послідовність, що кодує флоригенний білок ЕТ, функціонально зв'язану з промотором, придатним для експресії в рослинах, де флорогенний білок ЕТ містить амінокислотну послідовність, щонайменше на 90 95 ідентичну послідовності, вибраній з групи, що складається з 5ЕО ІО МО: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28 і 30, або їх функціональний фрагмент, і де промотор, придатний для експресії в рослинах, являє собою промотор вегетативної стадії, і причому полінуклеотидна послідовність містить послідовність, яка кодує цільовий сайт у мРНК-транскрипті, що кодується полінуклеотидною послідовністю, і при цьому цільовий сайт мРНК-транскрипту є щонайменше на 90 95 комплементарним щонайменше 21 послідовному нуклеотиду ендогенної молекули РНК.

22. Рекомбінантна ДНК-конструкція за п. 21, яка відрізняється тим, що цільовий сайт мРНК- транскрипту має довжину щонайменше 17 нуклеотидів.

23. Рекомбінантна ДНК-конструкція за п. 21, яка відрізняється тим, що цільовий сайт мРНК- транскрипту є щонайменше на 80 956 комплементарним ендогенній молекулі РНК.

24. Рекомбінантна ДНК-конструкція за п. 21, яка відрізняється тим, що цільовий сайт мРНК- транскрипту є щонайменше на 80 95 комплементарним ЗЕО ІЮ МО: 95, 96, 97, 103, 104 або 105.

25. Рекомбінантна ДНК-конструкція за п. 21, яка відрізняється тим, що полінуклеотидна послідовність, що кодує флоригенний білок ЕТ, містить послідовність, яка є щонайменше на 80 (510) до ідентичною ЗЕО ІЮ МО: 98, 99, 100, 101, 106, 107, 108, 109 або 110.

26. Рекомбінантна ДНК-конструкція за п. 21, яка відрізняється тим, що цільовий сайт мРНК- транскрипту є щонайменше на 80 95 ідентичним ЗЕО ІЮ МО: 99 або 107.

27. Рекомбінантна ДНК-конструкція за п. 21, яка відрізняється тим, що промотор, придатний для експресії в рослинах, є меристемо-переважним або меристемо-специфічним промотором.

28. Рекомбінантна ДНК-конструкція за п. 21, яка відрізняється тим, що промотор, придатний для експресії в рослинах, містить полінуклеотидну послідовність, яка є щонайменше на 70 90 ідентичною з полінуклеотидною послідовністю, вибраною з групи, що складається з 5ЕО ІЮ МО: 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45 та 48, або її функціональною частиною.

29. Трансгенна рослина або частина рослини, яка містить вставку рекомбінантної ДНК- конструкції за п. 21 у геномі щонайменше однієї клітини трансгенної рослини.

30. Трансгенна рослина або частина рослини за п. 29, де трансгенна рослина є соєю.

31. Трансгенна рослина або частина рослини за п. 30, де трансгенна рослина сої дає більше стручків на вузол, ніж контрольна рослина, яка не містить рекомбінантної ДНК-конструкції.

32. Трансгенна рослина або частина рослини за п. 29, де трансгенна рослина сої дає більше квіток на вузол, ніж контрольна рослина, яка не містить рекомбінантної ДНК-конструкції.

33. Трансгенна рослина або частина рослини за п. 29, де трансгенна рослина дає більше насінних коробочок, стручків, фруктів, горіхів або бобів на вузол трансгенної рослини, ніж контрольна рослина, яка не містить рекомбінантної ДНК-конструкції.

34. Трансгенна рослина або частина рослини за п. 29, де трансгенна рослина цвіте раніше, ніж контрольна рослина, яка не містить рекомбінантної ДНК-конструкції.

35. Трансгенна рослина або частина рослини за п. 29, де трансгенна рослина має більше квіткових китиць на вузол, ніж контрольна рослина, яка не містить рекомбінантної ДНК- конструкції.

36. Трансгенна рослина або частина рослини, яка містить полінуклеотидну послідовність, що кодує флоригенний білок ЕТ, функціонально зв'язану з промотором вегетативної стадії, де флоригенний білок ЕТ містить амінокислотну послідовність, що має щонайменше 90 95 ідентичності послідовності, вибраній з групи, що складається з ЗЕО ІО МО: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28 і 30, або її функціональному фрагменту, і при цьому експресія флоригенного білка ЕТ пригнічується у пізній вегетативній та/або генеративній тканині. Зо

37. Трансгенна рослина або частина рослини за п. 36, де експресія флоригенного білка ЕТ пригнічується малою молекулою РНК.

38. Рекомбінантна ДНК-конструкція за п. 36, яка відрізняється тим, що промотор вегетативної стадії містить полінуклеотидну послідовність яка щонайменше на 70 95 ідентична полінуклеотидній послідовності, вибраній з групи, яка складається з БЕО ІЮ МО: 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45 та 48.

39. Рекомбінантна ДНК-конструкція, яка містить полінуклеотидну послідовність, що кодує флоригенний білок ЕТ і функціонально зв'язана з промотором вегетативної стадії, де флоригенний білок ЕТ містить амінокислотну послідовність, що має щонайменше 90 95 ідентичності послідовності, вибраній з групи, що складається з БЕО ІЮ МО: 2, 4,6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28 та 30, або її функціональному фрагменту, і щонайменше одну послідовність ДНК, придатну для транскрипції, що кодує молекулу РНК, що містить націлюючу послідовність яка щонайменше на 90 95 комплементарна щонайменше 21 послідовному нуклеотиду вказаної полінуклеотидної послідовності.

40. Конструкція рекомбінантної ДНК за п. 38, яка відрізняється тим, що промотор вегетативної стадії містить полінуклеотидну послідовність яка щонайменше на 70 95 ідентична полінуклеотидній послідовності, вибраній з групи, що складається з 5БЕО ІЮО МО: 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45 та 48.

41. Трансгенна рослина або частина рослини, яка містить вставку рекомбінантної ДНК- конструкції за п. 39 у геномі щонайменше однієї клітини трансгенної рослини.

42. Трансгенна рослина або частина рослини, яка містить рекомбінантну полінуклеотидну послідовність, що кодує флоригенний білок ЕТ, функціонально зв'язану з промотором вегетативної стадії, де флоригенний білок ЕТ містить амінокислотну послідовність, що має щонайменше 90 95 ідентичності послідовності, вибраній з групи, що складається з 5ЕО ІЮО МО: 2, 4,6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28 та 30, або її функціональному фрагменту, при цьому експресія вказаної полінуклеотидної послідовності обмежена у просторі та у часі малою молекулою РНК.

43. Трансгенна рослина або частина рослини за п. 42, де промотор вегетативної стадії містить полінуклеотидну послідовність, яка є щонайменше на 70 95 ідентична полінуклеотидній послідовності, вибраній з групи, що складається з 5ЕО ІЮ МО: 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 60 40, 41, 42, 43, 44, 45 та 48.

одежі! й 12131 4151 617189 0 І | сте в 5 | ЛО |бБ, 06 67 62 74 вб5 й Щ (ВТ) 136) 10377 35 (302) 65) | СИ) 90) 353) стеть 3081. 0878 | 899 642 | 584 1650) 62 | 704 658 В (350) (3) (3) 30) 350) 1329) 374) 50) з ме 3884 7681674 | 585 87 629 | 73 | БВ (389) (359) (402) (54) (30700852) (330387) 6) 4 |їекто0 706 0895 753). 8674 | 801 674 | 846 | 73 869 877) 87) | 2) | (360) | 2) 160) (45), (0) | 57 | сСтетхі | 682 657 1882) 694611 1659) 626 707 | 657. ОБ) 435) (360) (732) | (ОБ) БИ бо яплсма ВО ВЛ ВИ 808 600057 533 Я 563 322) 810) 1 307 р 321) | (7) (30) 813) 34) 297) ши нн пли пак в па а я п пан п В 7 дв ВМ) 883 то я | 571 00859725 802 185) 3503352) 380) 142 (0 (МВ 83) З) во бенозд б 1809 БМ раю во в рА |у ШИ ПИ) 329) 1330) Р (345) | (305) | (313) | (348) 85) вовк 0 М3 0 М2 0 43 в в З ОМВО 70001890) 14874) (387) | 390) 13673 | 32) | 383) | (384) ат о длсе 069863 | 674 | вв Бі | 563182 165340 пе 1853) 1350) 356) (57 0) ов М От Фіг ТА

4 сте 909 744795 855 602 1722 | 7871 802 | МВ) Шк (ВОЮ 3) МО) МВ) МО6) 27 35 40) І з | отить 09. 1722 1758 5 54 мя Мем М (во) 27 33) 0092 00026 В И3Ю | 25), з вт 153 З 000078 855 1809 Ми 1 8178724 ИЗМ Игл ЗБ) 03) 29) 125) 95) 1 28) 4 ла ТММ ОМ 763 вв 1595 757 | 7 ВАЛ 7 що 40) 035) (135) (7) 1 005) 03 | 40 МБО) 83 | стетта 674 834 863 | 68 587 651 651892) 674. й ПИВ) 09 (4) | (7) ПОТ (М 2) 09 (6) тома 606 1577 1589 605. | 583 1623 588 7 00В) 9 003) 05) 00 (993 102209) 099) тів тат 1 16566000 МЯ4 М, ри В 2) 3 02) 89) ПОБИВ | 3) вія А 4 0808 7182 826 57 898 793 898 І вечо щка шАи в ШИ ШИН В НН В ОКО зв ов мав) (40) 00 (5 (2) пов) Фо вв 06 77 776 | 802 | вв | 28782 В 01758 102) | И38) МБО) 09) 09) З) и) и що дев 007 174072 76 663) 566 817 | МАЯ тА м 26) 125) 26) 33 МБ) 98343) 252 ЗО)

Фіг. 18

СШПБТАЇ. 2.0.9 МНОЖИННЕ ВИРІВНЮВАННЯ ПОСЛІДОВНОСТЕЙ

Ст.втов МРО--О5ВОРІМУССУТСОУСОРЕКТЗІРМЕУТУНМВОУЗМОСЕККРООУУМОРВУМІСЄ

Ст. ЕТоВ МЕВ--О5ВОРІМУСВУТСОУПОРЕЕСВІ РМВУТУММКОУЗМОСТЕКРООТЛЛІЮРВІМІСЄ Те, ЕТ МЕ---ВЕВОРІХУСВУУЄЬТУТОРЕТВТІССВУТУВОВЕУНМОСВ ВОООТТКОВВУКУЄС

РЕ.ЕТ ме---ВОВОРІЗУСВУТСОУТОРЕТКОІ ЗБУТУ ЗБВЕУММОСТІКРООУАМОРВУТІСС

О8.НОЗа МАСОБЕОВОРБУУСВУУСОМТОАРУВОТМЬКУТІСОКТУЗМОСВІКРОМУТНОРВУ КУЄ МЕТ М5--ІХІВОРЕТУВВАЛІСЮМТОРЕМВАТТКУТУСОВВУТМСТО В РООУОМКРЕУКТСС

АК.ТОЕ М5--ГЕВВОРГУУСОУУСОМОРЕТВТУВІКУТУСЕВЕУТКСТОГВРООУТМКЕТУКТОС

МЕ.ЕТ ----МРЕТОРСТУСВУУСОУ ОРЕТВОУСЬВУУУНИВЕИМАССТЬКРООТУТОРВУОТСС

Ст.ЕТ5а ----МАБЕМРІУТОСУІСОУТ МРЕТО5УЄТТУЗІМНКВАТОМСЬК ЕРООУУМЕРВУТУСС т, СВ ----МОАТОНСЬУМАВУТОПУТОРЕТРТІРЬВІТ МВТ БРОАБІКРЗАУУЗКРЕУЮІСС Р Я Же КжКкк ко РИ ие Я «Ж «ай рт. :. г. нини п

Ст.ЕТоа СОБВМЕУТІТАУОРОАРОРООРМІВЕУ ТОМІ УТОІРАТТСАРСВЕУУТУВ РЕРММОЇ В Сто Ето ПОБЕМЕХТІТАМОРОАРЕРЗОРМЕВЕХ ДИ ТОУТВІРАТТОРТЕСНЕУУТТЕКРЕРММОСТ В Те, ЕТ ООТЕТЕЕТЬИМУЮРОАВОРЗПЛМ ВУ БНИКУТОТРАТТОЕВЕСОВТУЗТЕЗРЕРОМСТ В

РЕ. ЕОСВТЕХТЬММУрРОАРОРЗОРО ТВЕН УТОТРАТТСАЗЕСНЕТУСТЕ В РВРТМОТІ О5, ра МОМЕТЕУТОУМУЮРОАРУРОЛЕМІАКУТНИСУТОТРОТТААОРСОКУМСУВОРАРТМСТВ АК,ЕТ ЕОСЕМЕУТІАМУЮРОУРОРОМРНІВЕТЬНИУТОІРАТТСТТЕСМЕТУСУЕКРОРТАСІВ

ДЕ. ПОБЕМЕУТІУМУЮЕСУВОРОМРНОВЕУТНИТУТОТРАТТОМАРОМЕУУСУЕЗРВРРБСТН

МЕ.ЕТ ПОБЕМЕУТБУМУПРОАРОРОМРМЬВЕУ ДИТ УТОІРАТТВТОЕСМЕУІСУЕМРОРВІСІВ

Ст.ЕтТоа ЕОСЕТЕУТЬУМУРАСАРОРОМРУТВЕХБНИМУТОІРАТТМАЗЕСВЕУУЕУЕОРМРОУСІВ т. 2СМВ ЗОМЕАРУТЬУЬІОРОАРОРОНРОБЕЕУБНИМУТОТРЕТТОУМЕСОВІТЕТЕВРОРЕОСІВ ех Хажк, Ж, ЖжЖЖ ж йХЕЖЖЖежЕЖКХ ЖЖ и : жк ож Ж ЖЖ Фіг 1сС

Ст. та ВІУКУБЕВОБСВЕТУТАРОЯВОМЕМТКЕРАВІУМІСЬРУААУУЕМІОВЕВоссВВ-- 176

Ст. Ето ВІУКУБЕВООСВЕТУТАРСИВОМРІТВЕРАВІЛИСЬРУААУТИМТОВЕЗОСССВВЬС- 176 пе.їт ВЕУКУБЕВОТСВОТУТАРСИВОМИМТЕСРАКІУМЬСІРУААУТЕМСОВЕСОЗСОВЕВ А 177

РЕ.ЕТ ВЕУКУБЕВОБСЕОТУТАРОИВОМЕМТВОТАКУ УМ СОРУДАУТЕМСОВЕЗОССКВВ- 174

Ов. 8038 ВЕУКУБРООССКОТУТАРСИВОМЕМТКОЕАКІУМ СОР УААУТЕМСОВЕАОоСсВЕУТрА 179

АК. ВАЛУКТЕВОССВОТУТАРОИВОМЕМТВЕРАКТ ОСС РУВАУЕУМСОВКООСОСВЕІн- 0175

АБ.Т5Е ВІУТУБРВОССВОТУТАРОИВООККТВЕТАКІ УМ СТРУВАЗУКМСОВЕМОСОСВАТн 175

МЕ. ВЕУКУБЕВОБСЕЕТУТАРОМВОМЕСТВОТАБУИСЬРУСАУУЕМСНВЕССТОСВВАУ 174

Ст. та ВІУТУБРООЬСВОТУТТРЕИВЕМРМЗВМРАБІМК-РУВААХАМСОВЕВОССОВЕУ--- 0172 тт. 7СМВ ВІУКУБЕВОССВСТУРАРЕМВИМЕМСВОРАВОУНОСІАТАТ-БЕМСОВКСОЗОСВКАЖВЕЕ 175 Ж жінках ЖЖ ЖЖ їх Хзаж Ж, ех п ЬШ Ж "ЖЖ Ж о жжжх Фіг 1С ПРОДОВЖЕННЯ дтагих КОРОТКИЙ й ДОВГИЙ КОРОТКИМ ДЕНЬ ДЕНЬ ЛЕНЬ ДЕНЬ іденти тенти нення ет тяняктентннет нн о ЗАВ нн та Вр трттттттлтттттттттттттт тт тт тт Йти - мі щи 1Ї дряпання тт тт тт тя тн тт тт тт тт тт чних ний в шк і й; щ Девід в а 1 Й Ве нин нн пн с сх ІНН - Гі ин нн нн нн зи п: ЗОН кі КД) сф. одлгчлтчлхт дл о фрлктудрттолтлов ли лілія лики плоклллілиі тла и или клі плели лили жили ги окт ли кліті жити лиж ги потоки, шо лох я ; офис ЕН В нн В дно ретро рт ренту ртттттттртт м пі роки о Зроао зиоор ді мол поті пови зво зрівіи пидви пови пот про ол пор по пр поло пророі пор і зай пови опора о пива оо зов оав пЕ дО ЕХО шк ДЕ ДЕ дЕ дж ЩЕ ОО шк Ода ле ЩЕ ще де де жо ще в, Ж, у Б Б, во Во, В, Ку МК, ЖК, Ок, ВІОООВИ, во же, Ж,

Н . Ії ї х ї Ії Н 1 Н пою г су стос схо шу па топа сх топ ої ПЛОДІВ ТУ стопу па алю с тт дей їди кт ех ОМ, а шк жо ОК, жо У У зт шт жшх жо яких КУ ше а ши зп Оз: по де АК АНЯ в м М бої їж ве мн: Іо їж 7я тю жо же ЗК по жо жо по ж жо хо к. же мо оч по Кок по жо п ко шк т-7 є ді ші сєз єї тов ее свої їв ш в в сао св св ща є) о З КАК р 2 «о ОО Ж ох й паО Кт 5 ; со СЕ о ЕКО Зоре ос -шОЖ ОХ о ОО вн Я шо ОЩ ша ся ек со со що бе ще «ос ос -о с сл о бе гос пояс Яни обро поп тої б пе ОО т 55 5 мо Ту ку ом у ше ла Ша Ша пове ци а Шах Мр Ре дя 1. - І: то. ТА у. з ка НИ -х А що щит ся бе об» бе ми йо бо 0 оо сок ко що ОВ еко 5 в ся о жк м; о и Осо 0 кодек ся Од Ох ча) сл ох со кУ Оу ВЕРХІВКА пИСТЯ крам о ІОКЕВІКО ЦО

ОО о Ж І, ОО ох ЗВ о СК А БЕЗ Зх - | о Однолит. с 0 000 ЕВ с Одно 5. її її а. п ВХ 5 СВК М КК о СО вев о о 1 о 0 с о. г ТАКО; о па СИН о Я шов ПЕС о яеНя МОЗ хо подаю У нм юю ТО

Фіг. ЗВ

Фіг. ЗА : кон и п ння СНИ ї ; Кн о , с ї 5 0 вехвки. о о : КОКО ОО п З «ВЗН Ве ЗОН . о й як Но ше 0 оЕРЕСТА:ОЦЬ во З ПЕВ І рАЄ Шо З0А5 : еВ вне і Фіг. 30 Фіг ЗС 0, с я «мине: м 0606Д6060Й6ЙДЙДЮДюЮю0О и. 6 її с Бо о: її По о с ЗК Не п о г с ОО о я а КЕКВ с. Он ЯЯ с . Б. с і и, Е с шшн п 000 НИЙ ши З я ЕЕ 0 ше 0 ОБНЕСТАСОЦЮЄ По як, ла и ра . а о МШрАВБ ст я ! Фіг ЗЕ

Фіг. ЗЕ о КК ин 000 Зоо овитм вв аННЕ ОО ІНК КЕ КН ПоККои еВ одне ошеие я ОО З ПОН ОО В ЯН ПК ПОБУ шен ПО СЕЕон п М Мен нни ЗО о я Я шо о В НП ьо В Он З 0 В ВОНО МЕН пе ЕСНШЕ КАМИ ВЕК їх ВВЕ ЕЕ о ПО ЗОВ де ОК КО ОКЕАН с СК НЕ КС ЕК мо й о ОВ ЗОН ОК ли ЗВ НН, пов о ЗОШ ЗОН я 0 й ТЕДПОЕН ОКО їх дкши КК ЗК с ОХ ще М М я Я 4 Оп ОО ЗЕ В о З п о о В Но ЗШ п ОО ЗБЕ я

:. ПД ВО ККУ НЕ З Он ОВ : ше ав ЕЕ о ХВ с о пн св а оо ЗНИК со М я СОЯ я нн КВ о К У он ПИ : сш з ШЕ т п с хх ВО З м ПОМ КОКО я. ЗВ НЕ о ОК З СОМ Ки Мох Ж. В ЕЕ ОО ОН ОО ПеКК Я : с о МО З ОО ОУН ЗШ шо нь о Щі Ко з з мк і НИК Не АЕН Б ; ОПЕК НЕ го чН о ЗНЕ О я ел ок ЗЕ Ока ОА н.с ВаЕВВНИВОЄЧЬВ ХХХ ин ІТК Е СКМ укр Мох и СУУХК хе от ол КК НИ: ЗОЗ р яЕКЕСТА 65 16 ПА їх ЗМ 2 т щі СИ НВЙ КОКОН о й ПМК КЕ, ОН ОО по сне, Встнер 3 Е: МІК В зас ВО ОО З а ООВОЮ КК ПЕВ КО и я у В ПО Я ОН с КК Я ОО я ПЕКИ еВ о о о ШЕ с ши я АМІИ а в о я З КО ЕМВ Оки, МЕДИ ЕН ШК ПимЕМх ХЕ ОА В ех Вон Коко Ви ЗМК Маки с п шо в КО Я ВИНУ Ко пВНрКН он В ОН Б ПК і нн СОЯ ДЕ п В. ЕХ пі ОА ж 5 Я ЕК и ння В ик Е В ПОД ВХ В ММ Ме ЗЕ Мах о ПЕВ ОО КК НЕК НК КК 5. МЕБОКОВ и. КЕ с п ВОК, ПП З У 85 КЕ Мо ОККО МНН СЕМ НИК . с о 0. г А М пк КИ ОКХ її ХЕ ЕК КН М ОО ЕКЕСТА 5 10 її 5 | ОВ п ПІ Я ох і. Ум 1 сн ЗХ х У В КЕКВ ЗК Я шини ШИЙКИ оо я МЕЖ в Ох ВЕ ПЕН Пе КВ ОКЕ У МОП и У К ОК АХ Кн, пи КМ КИ ВО ОО КО ЕЕОКеЯ ВХ т ун ХЕ НН зе пе ЗЕРЕСТАХО ШО ТЕ ПА.

ІГ. І Нивки но олова ; і ооо -- ща ий й ОК КО вия сих ен КОМ: ХО я ОО я ДИ я Е я ЗК и ; Ен У ВМО ЗК ел о. У ЗО МНН ня ; МОЯ ОВ Е: окр аньом нини НЛО МКК Кн винах Те х й о . с п В ши МКК яЕех ВК о, З ООН КК ПЕН КА ШЕ і М. ОО с В КК Ко ОККО ООН БЕ ПАК я ЕХ М ну я ьо МО І пон ООН ОО под я МКК Бе о НТ ОШНВК мое що В М НУ ПИпли СОМ ки БенКннн З о. Ву с: ї о в а ОМС Я Сх З о ПОНКЕти пою З о ЗВ сне 3 у с сем Я п ПО Я Зх ОЕМ он ЕНН Я УК Ох Ох ПЕ А З і ФМ ОБО Як у с і. : их Я МОХ нии ЕИЖХЕ ТЕ: днини ПП Е МЕ

В 5. АаМО ОМ ши Я на Е: 55. а п а Б С ЕК ОК я а и З с а ОО У Й те с ЗЯ Е НИК х ОККО Бо ДИКЕ ПИ І МПД РУН о Ех СЕК. и а Я но ООН З ПИ У и п ОО ФМ ПЕН Е ЕЕ ПО я Я Я о ОМ с с - ту о іон С ХО НКУ ОУН Я Акт " х ше МО є пи А Миио ПЕ МЕ де СН ен пи ит : ЕНН ОКУ Бе я сер моні кра ПИТНЕ МИ с мкВ КО тАСИ НИЙ Й ПИ, с НУ п ре кА ж с Е де Ве З ПИ ся пл закл І й. ке с І Ж ' й ТОЛІ с ДИТ КЕ ВК. У Не З У пирА Нм Кк я п ВОМ Ій А МКУ її пд КК Ки нн КК Кк ВН он нення ис коня КОС УНК ретеєя : ОО ЛЕ ОО ро Кен СЯ шк ОК ННЯ о ПОН ХО ПоВНН Ан Ин ОО о сорт со 0000 оБРЕСТАСНО ОАЄ СС й 0 пада Б КАН ке ан

1 п КО сто ЩЕ с її

ОМ М

! с і ден нн ш | Е

00 ЗРІЛИЙТРИЛИНИКЇ С

0 ЕВЕетАСПа А пАс

Со ОЕКЕСТАООЗ ОА ше п Оп щ ш-к-к- ще шо ШЕ шк. ги ЕЕ 0 ШЕ ( 000 ШИ Її ши ст Б РЕРЕСТАСОИВ ЗО МДОЕНЕСТАССЦЄ З ОАЄ Фіг 4А Фіг 4В кмин ШИ НЕННЯ міжвузля я Щ ВЕРХІВКИ РН я з І : Ше ОВ ЩА і З Я во їх воАх : РЕКЕСТАСООЬ в- 305 ор Фіг 40 і Фі: 40 згоРНУТИЙ ЩЕ І НЕЗРІЛИЙ ЩО ТРИЛИСНИК І ї ТРИЛИСНИК Би ТЕ ї щи їх п й ВЕКЕСТАХОЦВ | шаацоь ВШ 008 ШИ До Фіг АЕ Фіг. АГ о . г ЕЕ ШШИЦЕЕКЕСТАССЮ 10 ОАЗДДВІЙ ши

Фіг. 40 Фіг АН ЕД й ше В НИ що шо Її ШОЕКЕСТАССВ ОА В БОЕКЕСТАХООВ 15 ОА

Фіг. 4 Фіг. 4) ше Ї тРИЛИСТНИК ї ши не й | в шт БО ШИ ЕРЕСТАСВ 19 ПАЗВ

Фіг. 4К Фіг 41

Кене 30 ОА Що кеЕстАССЮВ ЗО АВ Фіг 4М Фіг 4М ШИСЕВЕСТА ОВ ЗО ОАОВ

Фіг. 40 кекннн нон нн ккал кннконня кон АК шо 0 о и 5 в ОХ п с Кос КОН он в А Я З М в є о с с с . с 5. и ее сх ЗО с . г с с В БО о п. р У ОУ о Я ВО не ВО с о. 5 М о с с о. с с а с с с

5. Се о. З о З 5 ОО оо о. СЕК со о а с І. с Во о. а ОО ос с с о В и МК о МОВ ХОМ Ни п КО ри плен в о З о и та ОХ КЕН МК ша ЕВ НН К УКХ в КК

В о. 0. М о щ в с с о. Воно о о ЗА З с о Ух Ох ТВ Ко Зк Б А . ХО ПДМ и БОМ З ох о ; ВОК : ОО . с Ко о с і Б й ЕК ех В ОО ; п и с МИ х о. Е ши 5 КК ВК х ПЕНЯ КОХ моти ТЕ ння сов Е В ОО . І с ше 0 оо. ще . о о шо п. З Е 5-00 НН. с у : о квВІТКонІЖКИ о пе, о. її. щі с А о я : ШИК ИЕ т ПИ ЕН, ще за шо МОУ . рн ПІ М - ; по У дк и ЗО ПИ Клен и КЕНЕ ОЗОН Е с п шо 3 с я Пшоо о Ж 0 Б шою п о БО нн ої: с о : ще ие. с ЩЕ ЕН НО МО СЕ З Пд НЕ ОО ПЕВ еще Е с і: о . Б. о с 5 ЩЕ ши Й і. нн а с г. о о. с В я Ох ПЕН КО . МО о о 5 п вва ЕХ КЕ о . З п. о. 1 пере що ще і. | - ех о 6 шо. КОКО " Зк З ка щи ОО Ва ВХ з КО Зк ОХ З ОЖКМІМ С СК ВЕК ще Б 5 Зніжки Мо в С ра 5 ЩЕ с . о . 00 й в СО ЗМОВ М ХХ з З Я со со КК ее Е пи в ОХ ОО ОО ТО ПЕШЛЕСІ ПЕД Е ши х ще ОК п 5 у МИЛИ МК ПЕКИ Ки НВК З Мн с СО ї и ЗМЕН ПИ Е По пе о з Ме г. ; ше Он Бе З Е ПЕН КОН Ве ПО В : про я с . а. ДВК КНТ они В с М и ВО я Б з КЕ С ОО Бонн що пон нення В 0 НН ще п НИ щ и. її сон ож вн п 5 спо в ЗХ Мн; о шо век ве її НН и кс 7 ШО мн а Я пев МО еЧНЯе в ШЕ. КДКА ВЕК ЕК Я ПАНИ нин ж У ВЕК ПИТел КЗ пен В я КЕН нт ЕЕ ОКО М МЕН НН ж

Б. п реа Не АК ДВ З ОО Ох Ще М З ення ЕН по о й 0. с КОВО ОО С ОК ЕЕ ОХ СК МІШННИОМВ ОО ще її 5 п жо в С их Он в ОСІ Ваня шо м я о о о ОО я ЕС В в ПО и о ВО о 5: а ша и КЕ ши БІ, Б. ЕК ВВ пе ИН Сак оо (о (((БП.ЬКВЖВ ПЛ (КЖКЛХКМБ КККД СХ я п НВ ооо ен

Фіг бА Фіг 68 ання й ЕН ї Не м М а Е Боно г ! в ей : ШЕ и и ши. |. Фіг 6С Фіг 60

Фіг. бЕ Фіг бЕ

; вет 7 ДНІВ, Е о ха: ув о о пово о 7 ДНІВ, ДИКИМ ТИП ому о он ов с ОО соо хорове Но Я ХО У КК не КИ вн МОХ МОНА Ки У ох МОХ ОКО денс г с с с є 5 о ох 3. с С я ОО ОО я я Пон с оо во я о КО ко ОО в. ОВ Уа СХ Же МО Зо п о я с Око В ЗО ЦИ Зо в о о с р 5. під: о. со ди Ох о п я с о я я п ОО ВОЗ а А п о Ся А ох Ся о я ЗОВ С У я Пд о и Бо о. и У пе ОН о м а ре пох ес Я ОО ОМ ОМ ОО Ко МОМ ОК с я с я о. 5 о х о с Зоо их я р кох п КИ ПО ПК с ОХ хи о я ЕВ о с Соя и ОО о В ОКХ С КЕ и А МУ ее ох ОК С о я и КИ о ЯМ я о Ки Пе ВАНИХ пе ОВ ОД же с о я ор ЗО ОО КК М о я то ОО с я п о я п о з ох 2 я УК ох мя Мини о ПО О я ОО СООСиХ В я У КИ ск ЕЕ п с що 0. з Є З а с ОО а Шо Пе, ке ох ОО и ЛК В М с ж. с с я ох ОО я ОО поря М п ОЗ її с с АК о. с о я ноя У дО я м В С я ОО КЕ ОМ СН о КО и КН ОН КА КВ еВ до пу кв с 5 я Бо о ПО о ОВ М о ДЕ и а Ся Ох В 5 М и ОХ оо нюх оо о со я ОК ВХ о п о с ОК ОО. п о її о с З с 5 СС: Б с с а ех ОО Юх ОО ОХ де, п А я М п Мо в В о КОНЯ хвоя ОК в В МО М Як В я ОО я ОО СОЯ и М я А я о Ко З ОО ох па с г КК Кн Я ОК Ох ке о о ОО я М о пе Ве зн о у о 5. ее виш я о АК с і с а с у ОК нЯ ук Ук ООН МО ОК Ки и Ух М Я МУ КО ОКУ Ко о оо оо МО ОХ ОКОМ ОМ М я ОМ ПО я о по В ки я а а в В дено а Ма Я ооо ЩО 0 Зб мем М и Он ЩО я Оу МЕ ше нн она они вази які М МА ХК ен ву у Кн ссання ТВ хи 208 МЕМ М и ЗДНІВ КИ Янв, но о о ; гл ОО я я 77 ДНІВ. ДЕКИЙ ТИЙ в о ен с ГУД с демороовоююко Ух ЕКО ОК Й мне око одо пос демюося МО Я о вх М ПО х КО ПК Я ОО о ПО ОК Но У О Я о М ж Х МОЯ о ше ПК п я а о в я В ОО А Ви я СК ОККО еОя МО и я М Моя п 5 о Є с о Я мак я о я 0 о и я я Кох Я. 5 5 КОХ п я МК ПЕВ я ОН Ор ОО М я кош о о п З о В вою ОН м ДЕ ох З У НО я о п я с о і я жо що о. Б 5 хи ден о ОО: о ОХ УК ВА Оса ООФКК СУ М СЕ ПО СтоОКК Он В В о о я В о в о Коко : ДОДЕВ ОК М я я и МОХ У ОКО о Я В Я р 55 са шо вх М, Я у. Б СО НК А вия ЕЕ ЕК ОК М ОМА ОК КВ с ее оо» ОХ с, дО п ОК и ся ПО Не и о ОО п я Он КО Ко я я с В я о» Се ен; НЯ ОНИ Вр М о м В ВО я ШО я ПА Ох 5. с со п. о з й. 5, о. у ЗАКО ях но ОК о СХ Ох ен М ОО ко У я о я в я я ЗЕ ЗО ен В шх ОК УМО м я ОК о я У УК оЕ ВКОСч Ж ов Ся и В и Бо я Со о Ве о сук о в о у ОК о ОК В КК СЕ КМ Моя шо а Я с СО МО п о я о я С мое с М о З о а Я ОО о я ОК ПК Я я Зо мя ОО м ОО ШИ о Ж де ЗХ А ОО З о сх ОКО Ко ОО о о Я ПК оо я ПОМРЕ оо ше З о. Оу о Ох ОН о ДО М КО ОО МК с ОО ух ДЕ не о о р СЕ В о о в Кв о я Я МО Я ЗО ОО Ме Ки У я, МК еВ А Ко и ОКО оо НО Вр о А ОА Кая МО 3-0 о с . ОО МЕ о о 0. м о. и ПО По Он М я о я п о я я З о ОК ОО я с поОКВ В М ОХ о, я с З уки я о М ВМ ПО В ни о М я Ко у КК У ОО МО Ки у ОО МОМ я до о Ки о Я З В по я КО ВО о о о о Б є де сов Ех й я с В о МОЯ а и 0 с и. оку ПО си Ме ВО о Є Кн МОН ПО Ко а ПО В я М я ОО ВО М о я КК ВО ПАК А з я Б КАООВВ ОО Шин ши БК мкм ЕКО СКК но СК ОМ ПАЮ ці 15 че М Х 5 ня оо ох й КК пиши По ТКУ ох ОК она в вобик оо ІТИ ЩІ га гу Бо о о в а ен В а п За ооо с | о о З ЕВ о п с не М ЕК о МОЯ ОК еко НЯ ще 0. а КЕ ве ди ВВ ЕК У п ОВ ЕК В 0 0: а вив оо СС о и т с п п Я Мн а с пе о я Ви Я вих ще оо о ПЕС ОО сх с о п, СЯ Он За . о . со ОН Ох СКК о ни о В Ух ОК ПЕК ЕК В БОжЯ що 0 що о По в Я Я о с п. ЕК о Я МИХ Во дн я УМ КЕЙ ІК ке сш

Зх. Ото Пон По ОК ин и ВЕС «ОВ ОХ МАК Ки Ко с о Б о о і и ПО о о о пе Ко М о ооо оо ОО ос ооКВв хе п ОО п Ж РЕ ЕВ ОО С СОВОК о о и оо В А й ОХ Се ОВУ и В ЕХ ОВ В В ПО ОН о 0 Мо ЗОН вия Мая и ОН Б ООН и и, МІ КО дх а Вон ВН не МО ня м ООН ЗЕ ДМ ооо и З М о с о ПМ ов я Ко о ВВ Й КА ЕЕ ок ВВ ПЕТИКТИУМКу со о я Б ро плете ОК о о ов М В и пе МЕКИ ОКХ Ки 5 її. п о ЕКО Мн а оо НН Сон ВВ сш КО нн с: о в а КО о Й СУМ я. ЖОВ КЕ В НКИ В 3: КК с Ето Ді Де о с - п Б ой В Ве ОЗ о о ЗК ее о ОН ох М о я оо її с 1. її лан До м КК ВВ сновок о плов и ен я 1 а п.

п п. о ок ОКО КИ а Ко ООН с А ЕЙ ОО ПУНКТ СО вия шо о о я М У 0 3 Ме п вв я а . с 1 о 0 В Ну СОКИ В о КВ с я о Шо ов о с ше МОВ М ох ВНУ пе ОН и о с її с ФО ОН ПМ М т п я З В о ПО ВИ т с | о ж М ОО ше ах о о, ОВ М М ф С ОО ж ОМ В п а ол о. 5 а не вн о А оо о М МК Ох я Он ЕЕ Ко в МК ОК ДК о с Я КО ОК Я рин, ши с п х о В А Ки т око п вних о МО МО ек ее ММ я М я ж г МИМОМЕТЕ КК ен МВ оЕ и пе Б о с. ен я ЗО А ВХ ши п Ве, Ве ПМК В в зоощ ик ве їх сх М о п а ОО п По Ве я ОКО Вк Я НУЛЬ па ШИЯ З поки КИ В гомо а пмя Тит ве КЕ: ві Хе В ра шитисюнті ККД о о Ор п ОВ пт М о о р ОО Мем ОО о 5 Шидеан ен ПЕ я п я ОХ кеш й п с ССС 0 ПОСТІЙННЯ ЧО с с: ОСТІЙНИЙ 16-ГОДИННИЙ ФОТО п Ом а ОКХ о ех ПО ки ект сення о в и о в м в о і ТВА ин ОО а ов Ох ооо ОО ОВ В о ЕКО и и ПЕВ у МЕН и Ж МО ОККО поко ТОВ нм в в а о я пис ох Пе о я Мо и в Он ОК ОК КА злих ЗО ОО МО и о о пов деко ке о шо в и кави и в шо и І ОО я но ки шо о с о в о сю ого о. А я п я ОО з Ки ВИТ МО ОК вх я ПО ОК я ОО с с . ах я о ОО А о У ПО в о М У ОО М ПЕК Ое о у в ДО с а ки м ее ПО о ок АН о о о в ою У п. ОКУ де о в о и в МВ ОО в пе ПН и хо о г о п ОО СО я Кв ОК Є а МЕ КА о и УК ле МК ж Ме о Ки З ун Ко: о о мед о З С ОК МАЯ М ня Ох о с 3 о ох ОКО Ко де ее ОО а ОМ оо о с в Сх ИН ОКО о У о и КО Я с о. о ОКА и У и Мене я Ко ОК, с 53 п ша ОО п. с я Ки и Я По С В и я с 3. і о КК я УК в А з НЯ МЕ В ПУ в ВК ВО м я х о С. по ОО нах ОК и В Я Моя ша З. о В Кн о УВК о Око ОО я Ко я фе В КК В я с с с п о в НК Кан о М ПК я я ва о ВО и а о о ноя м ву о 3 а Б ГО с о я по с в ве о Е; с о . Ен я Вс ВЕ М Я о ПОКОВК, о 0 Ах о З КУ 0 ня шо В ОК и ай о В ПЕД не с п пі но М ЗО и и ОВ окон У ру ника МІ с п. . с ее її . ЕН у Кт вв шо Коня с ок КУ а о кв МО с ши Її с п и о, о, ке я п п Ов ша с о :-: я ше о 6 з о КО я Пе о с их с о В З о. о о й НП ОО є о. о КО ах и в В шк ОО ОО т. ПО тов ОО , у ОО ИН її: Он ВО о у п ке Мирон Он о М о В ОВ ЗЕ ОО о а и ОВ п в й шен У с З ех ПВ а ОМ о нн М ПО Во нання и НУ В о Ві ОКО и Кир пон о їн а п ГЕМІЗИГОТНІ Ки Енн ее ЕВ ОК А 5; я ех ГОМОЗАгОНІ ек о ДВ я ден Во ДВ одшетян свя с а, що я. в 1 Б я ше с с | що я с.

0. с я НН . от с а ву с о її о о. с 5. п о. с шо ; я з що 0. я о с у п ПТН я до Оле Ся ФЕВ вою Я ОД що Б ох ях о с Б щу о с .

п.с ян " й а 1. г. с и й ї с її Я Мк я ві я с ж я . с с о: 1-. в ко в що 5 сс й. ЕЕ г с с в г сш ие й І 0 ш й ще их й вн осо і в ня Б ще й ре й ій й в п о с о у ання с в й я Як ШО СЕ З її ОБ я і шт Її . й у й. пу в. й я .

2. с 7 а в 2 1 З ІЙ я о, ЖИТ ше. Ей шо. 5-3 ох | п ша Ве, 0 ЯК с. й Й с с я Бо . о а а СИ? й я ше и п о з дя 56 с ува с од ей с о г п. п й о и ревнентяя о : КС КОХ о ж Ж й я о е | я с ак . і : во о. - г я. ох й за . іш о ; З я я я в с є соя о й й. г о. т о її й ще. в я | в я в Я ех ДИ З ХА де т: ЖЕ Не роя х НАВ дя же Б г. й

НУ. а 5 . 1 . Г Б У я 3» Б в і ши о я льОВІ й а ЕЕ , По ой ва бе шо ДО І що у ЕЕ й в я їх й сЕКеол опи наша МІЗИГОТНІ "гомо: ДН І М ЕНЕСТА ВН ТВ

ПА й Са Ех о З о дж ВООЗ ОХ ох о о . Ме її. в КО оче тн БИК МО ЗК ВО ОО З : с. . - о ЗО щХ о. Се т я що З Во Ше ех с ММК ХХ ХУ НЕ: МАХ КК од КОНИК Ка СО М СОХНЕ с КОХ МО ВЕБ ЕХ ЗО СБ пед В п Зх о с Ох МО МОХ п а З сн ОХ У що і с ХК З о ОО Я БА СОС СО ПОБУ 1 ОХ с . о. с. с с з ОК дао ОДН п, с а с о ее х М с с п Хе СаЯ ММ й до За с с ОВ ЗОН А шо ОО с 0. кшо СІ с с ОК СО кон у Ой

0. ВАХ що о СОЯ МО с МО ке с БЖ УДК ЗХ 5 0 . ч - п ВХ КО а Ес ОН ПК о У с с З о ж о с х 5 КОХ ХВ КАК ж Кон соя їх с с БОБ зх ПИТ С си 0 я ши пнети ти ту ХК с с у со о В п Я 1 шо еще о шт ще СО Ой 5 ПЕН с о Моя НУ те п, 0 ЗВ ее сн ПЕН В ДИВ о. ОО ЗЕ СЕ ЕВ БЕ. о КЕ солиеи ще ПМ ПЕ си Же ПИЙ я с о Пе с о"

с о. КОВО Е Як ПЗ Кох З ННЯ Ж о о г 1. г КО 6 с ОВ 5 . о - . : с с с ї 0 с с о. о в 7 | т с с с ща ж СК М с . о ск х с с : г о з с о. . п - с 2-8 МЕ що ах - с с х ОО В -56 с п : 5 ТЯ с З шо с Он АХ п хх п ши Я п. с У ЛЕО мк: о ХХ ях с с З Коста ІКАВ со КОВО С ЗУ її с : її ОО 5 с о Я о СО ОВ С с с ЩА п . о. . п о. с що с о с с ще с с о. с в.

с. 1 . З ! в с с с о. З СНО х КОНЯ ЛУ ШИ с З с по ПОВ За о ОКО БІК с АХ пн п о. . . . .

0. з ат Сех я Ву панех . - її є СЕ Оу р п п. ЕМ КО СКК ПОЕШОЕ о дн о с со Ах її ж с. о. с ши ооо г с 0. Пл ЗХ о. ЗО Я ВЕ в. о. КМ 7 її с ПК ОН й. її. і о ( З чех с: ж с Кох о ооо. То и Є з НІ. 0 ї ик МВ С ПАК Е гес й й. 4 Х о. . о. .

о. їх 5 . о: С зе В ;

с. г ще р тА ії с РА ЕТ пи І і ' КИ , . таг: сті зр А А, Егесіта: й Я р.

х х ОК 5 оон се ; серед; пров ОККО ау жа су (ев У СИХ ХК МК х ОА ЕВ Кров Он Мен МС Ох Ох с о - ще що о о. СХ ОК В ОК НН ПК с І ши ни о Б ОХ щ С усе ПЕ М нн п МОХ А КОКОН МОЯ ЗК о В ОК АК ОХ ОН В ВАХ КО ВХ и ОХ МК НЯ ПЕ є Хр ХК М ЕМ ОН до п ХОМ В в о с ХО ОВ ЗОВ КК ОК НК КОКОН о ПЕН ух МОЯ о В С ОН. їх о вх ОО ОКОМ В КО шк се А Ох ОМ ЕК ВНУ ОО НИ хо ЕН ЕКО ВЕК КО ПК 0 о ВЕН ПК ВО ВОК спо Ки ХЕ ши ОО СЕ МА КК СК В с с. о я Ве о С КК Пе с ОО оо Ж и Б в нн х о о. я ня о о ОХ ПО НВ МЕ У НИ АЕН ХМ С ВИ 3 М ОК их ОКО 5. 5 ПК в І ПО і ш о г с с ОКО ТО пити В КК СОУ п УМО ДН ОМ КВН ДОК

5. ХУХОК НИХ ГАК СВ ЗАер КО МО о ХО Я о ом. с п с и п с 5 щас С ен Ши п ОКО М ННЯ ВК ВЕД Ве МН ЕН О ХТО ЕКО ОО ж о Ок МО 6 ВаКе шо Хо 5 я и У я а о с ня и сон Я с 0. ОО ОВ: НЕ с с с В Я СОМ 5 с Ї с ЕН Я о еВ 5 є КК Баку о с ОО в Ме У КУ в я 0 5 Ед МО ОВ ПЕКІН вив Пон ООН КО ще Ин си КК я ОО Ко Во ОК с ОО с о ПО вк Бо КК ей ОКО В ОВ ДОБ Я о: с с КЕ ВВ Ен я о ех М ОБО МОЛ оо Моя я ОО НН я МН

Є г. аж х ЗО в с о од З МЕ хнее ПО АК Я ООН ЕВ, КОС МОМОМ ОЯ ши с Он Кооаес ЗМ ВУХ і Я ОКО ве ОК Р НЯ о НИ ХМК ООН: МЕНЯ Кн ОК ие ОК ООН ЕЕ я у с 0 З шо о й вх ОК КВ ОК; ВН МИСОК ЕН В ОС Ки НО. АК и КК вх с с п М В ек кОКОХМ я ПУСКОМ МКК НЯ КК ЕК АВК ОК КВ СОВИ о а В п ОВЕ ОК У ВХ я М сх ВАК ЕК дя ОК НО КСВ я СИМ С РІ п ЕТ2а 12 рРАСЕтТесіа:х: Ст. а рАЄЕтТеста:: Ст, й пня я т. 5 х 4 Ж нільовни сані Кк ло