UA119742C2 - РОСЛИНА ПШЕНИЦІ З НОВИМИ АЛЕЛЯМИ Rht-B1 - Google Patents
РОСЛИНА ПШЕНИЦІ З НОВИМИ АЛЕЛЯМИ Rht-B1 Download PDFInfo
- Publication number
- UA119742C2 UA119742C2 UAA201502663A UAA201502663A UA119742C2 UA 119742 C2 UA119742 C2 UA 119742C2 UA A201502663 A UAA201502663 A UA A201502663A UA A201502663 A UAA201502663 A UA A201502663A UA 119742 C2 UA119742 C2 UA 119742C2
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- wheat
- rgo
- mai
- allele
- plant
- Prior art date
Links
- 241000209140 Triticum Species 0.000 title claims abstract description 244
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 title claims abstract description 203
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 claims abstract description 175
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 claims abstract description 132
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 132
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 129
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims abstract description 128
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims abstract description 126
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract description 96
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims abstract description 68
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 claims abstract description 51
- 238000012217 deletion Methods 0.000 claims abstract description 18
- 230000037430 deletion Effects 0.000 claims abstract description 18
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims description 277
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 108
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 106
- 230000012010 growth Effects 0.000 claims description 102
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims description 78
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 62
- 238000003780 insertion Methods 0.000 claims description 55
- 230000037431 insertion Effects 0.000 claims description 55
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 55
- 230000005059 dormancy Effects 0.000 claims description 35
- 235000013305 food Nutrition 0.000 claims description 22
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 claims description 16
- 230000035558 fertility Effects 0.000 claims description 6
- 238000012545 processing Methods 0.000 claims description 5
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 claims description 5
- 230000005070 ripening Effects 0.000 claims description 5
- 235000012041 food component Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000005417 food ingredient Substances 0.000 claims description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 2
- 101000993974 Sagittaria sagittifolia Proteinase inhibitor B Proteins 0.000 claims 2
- 244000241257 Cucumis melo Species 0.000 claims 1
- 235000015510 Cucumis melo subsp melo Nutrition 0.000 claims 1
- 241001192924 Parna Species 0.000 claims 1
- FJJCIZWZNKZHII-UHFFFAOYSA-N [4,6-bis(cyanoamino)-1,3,5-triazin-2-yl]cyanamide Chemical compound N#CNC1=NC(NC#N)=NC(NC#N)=N1 FJJCIZWZNKZHII-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 202
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 59
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 58
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 56
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 56
- 240000005979 Hordeum vulgare Species 0.000 description 55
- 235000007340 Hordeum vulgare Nutrition 0.000 description 53
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 48
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 48
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 48
- 230000007958 sleep Effects 0.000 description 46
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 44
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 33
- 206010013883 Dwarfism Diseases 0.000 description 32
- 230000035784 germination Effects 0.000 description 30
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 27
- 239000013615 primer Substances 0.000 description 27
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 26
- 239000000047 product Substances 0.000 description 20
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 18
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 18
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 18
- 241000894007 species Species 0.000 description 18
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 16
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 16
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 15
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 14
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 14
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 14
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 14
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 13
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 13
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 13
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 13
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 12
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 12
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 12
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 11
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 10
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 10
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 10
- 108090000637 alpha-Amylases Proteins 0.000 description 10
- 102000004139 alpha-Amylases Human genes 0.000 description 10
- 229940024171 alpha-amylase Drugs 0.000 description 10
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 10
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 10
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 9
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 8
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 8
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 8
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 8
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 8
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 8
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 8
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 8
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 8
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 7
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 7
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 7
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 7
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 7
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 7
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 7
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 6
- 230000008859 change Effects 0.000 description 6
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 6
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 6
- 230000006870 function Effects 0.000 description 6
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 6
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 6
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 6
- 108091092195 Intron Proteins 0.000 description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 5
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 5
- 244000062793 Sorghum vulgare Species 0.000 description 5
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 5
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 5
- 235000012149 noodles Nutrition 0.000 description 5
- 210000001938 protoplast Anatomy 0.000 description 5
- 235000011888 snacks Nutrition 0.000 description 5
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 5
- IYLGZMTXKJYONK-ACLXAEORSA-N (12s,15r)-15-hydroxy-11,16-dioxo-15,20-dihydrosenecionan-12-yl acetate Chemical compound O1C(=O)[C@](CC)(O)C[C@@H](C)[C@](C)(OC(C)=O)C(=O)OCC2=CCN3[C@H]2[C@H]1CC3 IYLGZMTXKJYONK-ACLXAEORSA-N 0.000 description 4
- 239000004382 Amylase Substances 0.000 description 4
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 4
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- 206010020649 Hyperkeratosis Diseases 0.000 description 4
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 4
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 4
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 4
- 210000005069 ears Anatomy 0.000 description 4
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 4
- 235000015243 ice cream Nutrition 0.000 description 4
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 4
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 4
- JLESVLCTIOAHPT-UHFFFAOYSA-N mmai Chemical compound C1=C(C)C(OC)=CC2=C1CC(N)C2 JLESVLCTIOAHPT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000000869 mutational effect Effects 0.000 description 4
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 4
- 235000015108 pies Nutrition 0.000 description 4
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 4
- 230000004044 response Effects 0.000 description 4
- 230000000284 resting effect Effects 0.000 description 4
- IYLGZMTXKJYONK-UHFFFAOYSA-N ruwenine Natural products O1C(=O)C(CC)(O)CC(C)C(C)(OC(C)=O)C(=O)OCC2=CCN3C2C1CC3 IYLGZMTXKJYONK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 4
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 4
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 4
- 108091093088 Amplicon Proteins 0.000 description 3
- 244000075850 Avena orientalis Species 0.000 description 3
- 235000007319 Avena orientalis Nutrition 0.000 description 3
- 235000017788 Cydonia oblonga Nutrition 0.000 description 3
- 108091027305 Heteroduplex Proteins 0.000 description 3
- 235000007238 Secale cereale Nutrition 0.000 description 3
- 235000011684 Sorghum saccharatum Nutrition 0.000 description 3
- 108020005038 Terminator Codon Proteins 0.000 description 3
- 235000019714 Triticale Nutrition 0.000 description 3
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 3
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 3
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 3
- 108010017070 Zinc Finger Nucleases Proteins 0.000 description 3
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 3
- 230000009418 agronomic effect Effects 0.000 description 3
- 235000008429 bread Nutrition 0.000 description 3
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 3
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 3
- 230000002354 daily effect Effects 0.000 description 3
- 238000003936 denaturing gel electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 3
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 3
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 3
- IXORZMNAPKEEDV-OBDJNFEBSA-N gibberellin A3 Chemical class C([C@@]1(O)C(=C)C[C@@]2(C1)[C@H]1C(O)=O)C[C@H]2[C@]2(C=C[C@@H]3O)[C@H]1[C@]3(C)C(=O)O2 IXORZMNAPKEEDV-OBDJNFEBSA-N 0.000 description 3
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 3
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 3
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 3
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 3
- 230000002028 premature Effects 0.000 description 3
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 3
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 3
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 3
- 238000005204 segregation Methods 0.000 description 3
- 230000008054 signal transmission Effects 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- 241000228158 x Triticosecale Species 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 2
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930191978 Gibberellin Natural products 0.000 description 2
- 240000003183 Manihot esculenta Species 0.000 description 2
- 235000016735 Manihot esculenta subsp esculenta Nutrition 0.000 description 2
- 238000010222 PCR analysis Methods 0.000 description 2
- 241000209056 Secale Species 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000002105 Southern blotting Methods 0.000 description 2
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 2
- 208000035199 Tetraploidy Diseases 0.000 description 2
- 108700009124 Transcription Initiation Site Proteins 0.000 description 2
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 2
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 2
- 235000007264 Triticum durum Nutrition 0.000 description 2
- 241000209143 Triticum turgidum subsp. durum Species 0.000 description 2
- ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N Uracil Chemical compound O=C1C=CNC(=O)N1 ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 2
- 150000001540 azides Chemical class 0.000 description 2
- 238000010170 biological method Methods 0.000 description 2
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 2
- 235000012970 cakes Nutrition 0.000 description 2
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 2
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 2
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 2
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 2
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 2
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 2
- 239000003517 fume Substances 0.000 description 2
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 230000007614 genetic variation Effects 0.000 description 2
- IXORZMNAPKEEDV-UHFFFAOYSA-N gibberellic acid GA3 Natural products OC(=O)C1C2(C3)CC(=C)C3(O)CCC2C2(C=CC3O)C1C3(C)C(=O)O2 IXORZMNAPKEEDV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003448 gibberellin Substances 0.000 description 2
- 108010050792 glutenin Proteins 0.000 description 2
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 2
- 235000013882 gravy Nutrition 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 230000002363 herbicidal effect Effects 0.000 description 2
- 239000004009 herbicide Substances 0.000 description 2
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 2
- 238000010884 ion-beam technique Methods 0.000 description 2
- JEIPFZHSYJVQDO-UHFFFAOYSA-N iron(III) oxide Inorganic materials O=[Fe]O[Fe]=O JEIPFZHSYJVQDO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000021374 legumes Nutrition 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 2
- 235000019713 millet Nutrition 0.000 description 2
- 239000003147 molecular marker Substances 0.000 description 2
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 2
- 235000015927 pasta Nutrition 0.000 description 2
- 102000054765 polymorphisms of proteins Human genes 0.000 description 2
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 2
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 2
- 230000008263 repair mechanism Effects 0.000 description 2
- 238000007894 restriction fragment length polymorphism technique Methods 0.000 description 2
- 235000015067 sauces Nutrition 0.000 description 2
- 235000014347 soups Nutrition 0.000 description 2
- 238000009331 sowing Methods 0.000 description 2
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N thymine Chemical compound CC1=CNC(=O)NC1=O RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000005030 transcription termination Effects 0.000 description 2
- 230000017260 vegetative to reproductive phase transition of meristem Effects 0.000 description 2
- -1 Сте1 and Сте3 Proteins 0.000 description 2
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 1
- GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 2-amino-4,6-dichloropyrimidine-5-carbaldehyde Chemical group NC1=NC(Cl)=C(C=O)C(Cl)=N1 GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150092328 22 gene Proteins 0.000 description 1
- VWEWCZSUWOEEFM-WDSKDSINSA-N Ala-Gly-Ala-Gly Chemical compound C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(O)=O VWEWCZSUWOEEFM-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- 101150076489 B gene Proteins 0.000 description 1
- 241000538568 Brachydeuterus auritus Species 0.000 description 1
- 235000011293 Brassica napus Nutrition 0.000 description 1
- 240000008100 Brassica rapa Species 0.000 description 1
- 235000000540 Brassica rapa subsp rapa Nutrition 0.000 description 1
- 101100492787 Caenorhabditis elegans mai-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100454194 Caenorhabditis elegans mei-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 235000002568 Capsicum frutescens Nutrition 0.000 description 1
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 1
- 241001137251 Corvidae Species 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- 230000004544 DNA amplification Effects 0.000 description 1
- 230000005778 DNA damage Effects 0.000 description 1
- 231100000277 DNA damage Toxicity 0.000 description 1
- 239000003155 DNA primer Substances 0.000 description 1
- 208000035240 Disease Resistance Diseases 0.000 description 1
- 108010042407 Endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 102000004533 Endonucleases Human genes 0.000 description 1
- YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N Epihygromycin Natural products OC1C(O)C(C(=O)C)OC1OC(C(=C1)O)=CC=C1C=C(C)C(=O)NC1C(O)C(O)C2OCOC2C1O YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000008620 Fagopyrum esculentum Species 0.000 description 1
- 235000009419 Fagopyrum esculentum Nutrition 0.000 description 1
- 108700028146 Genetic Enhancer Elements Proteins 0.000 description 1
- 239000005980 Gibberellic acid Substances 0.000 description 1
- 108010068370 Glutens Proteins 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 239000005562 Glyphosate Substances 0.000 description 1
- 241001562081 Ikeda Species 0.000 description 1
- 241001536374 Indicator indicator Species 0.000 description 1
- 206010021929 Infertility male Diseases 0.000 description 1
- 101150042441 K gene Proteins 0.000 description 1
- 241000209510 Liliopsida Species 0.000 description 1
- 208000007466 Male Infertility Diseases 0.000 description 1
- 108091092878 Microsatellite Proteins 0.000 description 1
- 108010021466 Mutant Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000008300 Mutant Proteins Human genes 0.000 description 1
- GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N N-[2-(1H-indol-3-yl)ethyl]-N-methylprop-2-en-1-amine Chemical compound CN(CCC1=CNC2=C1C=CC=C2)CC=C GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000244206 Nematoda Species 0.000 description 1
- 108020003217 Nuclear RNA Proteins 0.000 description 1
- 102000043141 Nuclear RNA Human genes 0.000 description 1
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 1
- 108091005461 Nucleic proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 1
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 1
- 238000002944 PCR assay Methods 0.000 description 1
- 244000046052 Phaseolus vulgaris Species 0.000 description 1
- 235000010627 Phaseolus vulgaris Nutrition 0.000 description 1
- 240000004713 Pisum sativum Species 0.000 description 1
- 235000010582 Pisum sativum Nutrition 0.000 description 1
- 108700001094 Plant Genes Proteins 0.000 description 1
- 241001047198 Scomberomorus semifasciatus Species 0.000 description 1
- 241000580858 Simian-Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 1
- 108010052160 Site-specific recombinase Proteins 0.000 description 1
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 description 1
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 description 1
- 102000008579 Transposases Human genes 0.000 description 1
- 108010020764 Transposases Proteins 0.000 description 1
- 108090000848 Ubiquitin Proteins 0.000 description 1
- 102000044159 Ubiquitin Human genes 0.000 description 1
- 241000981388 Vipio Species 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000036579 abiotic stress Effects 0.000 description 1
- 230000001133 acceleration Effects 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 101150010487 are gene Proteins 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000010165 autogamy Effects 0.000 description 1
- 235000012791 bagels Nutrition 0.000 description 1
- 230000037429 base substitution Effects 0.000 description 1
- 108010019077 beta-Amylase Proteins 0.000 description 1
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 239000003124 biologic agent Substances 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 230000031018 biological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 235000015895 biscuits Nutrition 0.000 description 1
- 238000004061 bleaching Methods 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 235000015496 breakfast cereal Nutrition 0.000 description 1
- 235000012467 brownies Nutrition 0.000 description 1
- 235000021450 burrito Nutrition 0.000 description 1
- 235000014121 butter Nutrition 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 1
- 230000008632 circadian clock Effects 0.000 description 1
- 239000002361 compost Substances 0.000 description 1
- 235000014510 cooky Nutrition 0.000 description 1
- 238000009402 cross-breeding Methods 0.000 description 1
- 235000015142 cultured sour cream Nutrition 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 238000012350 deep sequencing Methods 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 239000005547 deoxyribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002637 deoxyribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 235000021185 dessert Nutrition 0.000 description 1
- 230000009699 differential effect Effects 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 230000005782 double-strand break Effects 0.000 description 1
- 235000012489 doughnuts Nutrition 0.000 description 1
- 235000015071 dressings Nutrition 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000000408 embryogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002922 epistatic effect Effects 0.000 description 1
- 241001233957 eudicotyledons Species 0.000 description 1
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 235000014089 extruded snacks Nutrition 0.000 description 1
- 210000000416 exudates and transudate Anatomy 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 239000004222 ferrous gluconate Substances 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 235000012470 frozen dough Nutrition 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- 238000003205 genotyping method Methods 0.000 description 1
- XDDAORKBJWWYJS-UHFFFAOYSA-N glyphosate Chemical compound OC(=O)CNCP(O)(O)=O XDDAORKBJWWYJS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940097068 glyphosate Drugs 0.000 description 1
- 235000011868 grain product Nutrition 0.000 description 1
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 1
- 239000003966 growth inhibitor Substances 0.000 description 1
- 239000004463 hay Substances 0.000 description 1
- 238000003505 heat denaturation Methods 0.000 description 1
- JHGVLAHJJNKSAW-UHFFFAOYSA-N herniarin Natural products C1CC(=O)OC2=CC(OC)=CC=C21 JHGVLAHJJNKSAW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 1
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 1
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 208000000509 infertility Diseases 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 208000021267 infertility disease Diseases 0.000 description 1
- 238000003973 irrigation Methods 0.000 description 1
- 230000002262 irrigation Effects 0.000 description 1
- 238000005304 joining Methods 0.000 description 1
- 238000001638 lipofection Methods 0.000 description 1
- 238000007403 mPCR Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 108091070501 miRNA Proteins 0.000 description 1
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 description 1
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 1
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 1
- 230000004660 morphological change Effects 0.000 description 1
- 235000012459 muffins Nutrition 0.000 description 1
- 239000003471 mutagenic agent Substances 0.000 description 1
- 231100000707 mutagenic chemical Toxicity 0.000 description 1
- 230000003505 mutagenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 238000007899 nucleic acid hybridization Methods 0.000 description 1
- 230000005257 nucleotidylation Effects 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 238000009401 outcrossing Methods 0.000 description 1
- 235000012771 pancakes Nutrition 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 235000013550 pizza Nutrition 0.000 description 1
- 235000012830 plain croissants Nutrition 0.000 description 1
- 239000003375 plant hormone Substances 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 239000002685 polymerization catalyst Substances 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 235000012015 potatoes Nutrition 0.000 description 1
- 238000004382 potting Methods 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 230000004952 protein activity Effects 0.000 description 1
- 230000004853 protein function Effects 0.000 description 1
- 230000006916 protein interaction Effects 0.000 description 1
- 235000011962 puddings Nutrition 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 1
- 230000026267 regulation of growth Effects 0.000 description 1
- 230000022532 regulation of transcription, DNA-dependent Effects 0.000 description 1
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 1
- 230000002786 root growth Effects 0.000 description 1
- 235000014438 salad dressings Nutrition 0.000 description 1
- 230000014284 seed dormancy process Effects 0.000 description 1
- 230000007226 seed germination Effects 0.000 description 1
- 230000010153 self-pollination Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 description 1
- 239000004460 silage Substances 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 235000013599 spices Nutrition 0.000 description 1
- 230000037436 splice-site mutation Effects 0.000 description 1
- 238000003153 stable transfection Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 235000013547 stew Nutrition 0.000 description 1
- 239000010902 straw Substances 0.000 description 1
- 230000035882 stress Effects 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 229940113082 thymine Drugs 0.000 description 1
- 235000012184 tortilla Nutrition 0.000 description 1
- 230000005026 transcription initiation Effects 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- 230000014621 translational initiation Effects 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229940035893 uracil Drugs 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 235000012773 waffles Nutrition 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/415—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from plants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
- A01H5/00—Angiosperms, i.e. flowering plants, characterised by their plant parts; Angiosperms characterised otherwise than by their botanic taxonomy
- A01H5/10—Seeds
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
- A01H6/00—Angiosperms, i.e. flowering plants, characterised by their botanic taxonomy
- A01H6/46—Gramineae or Poaceae, e.g. ryegrass, rice, wheat or maize
- A01H6/4678—Triticum sp. [wheat]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A21—BAKING; EDIBLE DOUGHS
- A21D—TREATMENT OF FLOUR OR DOUGH FOR BAKING, e.g. BY ADDITION OF MATERIALS; BAKING; BAKERY PRODUCTS
- A21D13/00—Finished or partly finished bakery products
- A21D13/80—Pastry not otherwise provided for elsewhere, e.g. cakes, biscuits or cookies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K10/00—Animal feeding-stuffs
- A23K10/30—Animal feeding-stuffs from material of plant origin, e.g. roots, seeds or hay; from material of fungal origin, e.g. mushrooms
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
- A23L23/00—Soups; Sauces; Preparation or treatment thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
- A23L7/00—Cereal-derived products; Malt products; Preparation or treatment thereof
- A23L7/10—Cereal-derived products
- A23L7/109—Types of pasta, e.g. macaroni or noodles
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
- A23L7/00—Cereal-derived products; Malt products; Preparation or treatment thereof
- A23L7/10—Cereal-derived products
- A23L7/115—Cereal fibre products, e.g. bran, husk
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
- A23L7/00—Cereal-derived products; Malt products; Preparation or treatment thereof
- A23L7/10—Cereal-derived products
- A23L7/117—Flakes or other shapes of ready-to-eat type; Semi-finished or partly-finished products therefor
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
- A23L7/00—Cereal-derived products; Malt products; Preparation or treatment thereof
- A23L7/10—Cereal-derived products
- A23L7/198—Dry unshaped finely divided cereal products, not provided for in groups A23L7/117 - A23L7/196 and A23L29/00, e.g. meal, flour, powder, dried cereal creams or extracts
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
- C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
- C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
- C12N15/8291—Hormone-influenced development
- C12N15/8297—Gibberellins; GA3
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A40/00—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production
- Y02A40/10—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production in agriculture
- Y02A40/146—Genetically Modified [GMO] plants, e.g. transgenic plants
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02E—REDUCTION OF GREENHOUSE GAS [GHG] EMISSIONS, RELATED TO ENERGY GENERATION, TRANSMISSION OR DISTRIBUTION
- Y02E50/00—Technologies for the production of fuel of non-fossil origin
- Y02E50/10—Biofuels, e.g. bio-diesel
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Botany (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physiology (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
- Mycology (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Cereal-Derived Products (AREA)
Abstract
Винахід стосується рослини пшениці або зерна пшениці, що несуть алель Rht-B1, кодуючий поліпептид Rht-B1, причому поліпептид містить N-кінцевий домен і С-кінцевий домен, у якому амінокислотна послідовність С-кінцевого домену щонайменше на 98 % ідентична амінокислотам 50-621 SEQ ID NO: 5, яка додатково містить щонайменше вставку амінокислотної послідовності SEQ ID NO: 14 або її варіанту між амінокислотами 49 і 50 SEQ ID NО: 5, де варіант послідовності відрізняється від SEQ ID NO: 14 амінокислотними замінами, вставками або делеціями з не більше ніж 5 амінокислот, і (іі) одну або декілька замін амінокислот в С-кінцевому домені відносно амінокислот 50-621 SEQ ID NO: 5.
Description
амінокислотної послідовності ФЕО ІЮ МО: 14 або її варіанту між амінокислотами 49 і 50 5ЕО ІЮ
МО: 5, де варіант послідовності відрізняється від 562 ІЮО МО: 14 амінокислотними замінами, вставками або делеціями з не більше ніж 5 амінокислот, і (ії) одну або декілька замін амінокислот в С-кінцевому домені відносно амінокислот 50-621 5ЕО ІО МО: 5.
ГАЛУЗЬ ВИНАХОДУ
Даний винахід стосується мутантів пшениці з посиленим ростом, що несуть змінений алель
Ап-В1с. Додатково даний винахід стосується зерна таких рослин і продуктів, одержуваних з такого зерна.
РІВЕНЬ ТЕХНІКИ, ЩО ПЕРЕДУЄ ВИНАХОДУ
Рослини реагують на стимули розвитку, фізіологічні стимули і зовнішні стимули зміною швидкості росту своїх частин або у цілому. Описана множина механізмів, що включають зміни вмісту класів рослинних гормонів гіберелінів (ЗА) (розглянуто в Матадиспі, 2008) або сигнальних компонентів, що включають СА, таких як білки ЗІ! і ОЕЇГА (розглянуто у Бип, 2010). Це приводить до динамічної регуляції передачі сигналу СА так, що ріст скоординований з передачею сигналу від інших гормональних регуляторних шляхів і з факторами навколишнього середовища, такими як світло, температура і приступність води (Нагіжеск, 2008; Аспага апа
Сепзепік, 2009; Кирризату еї аї., 2009). Для пояснення добових відмінностей у швидкості росту була передбачена синхронізація передачі сигналу СА циркадними годинником (Агапа еї аї., 2011).
У рослин охарактеризований ряд мутантів по гіберелінах (БА), мимовільних по походженню або ідентифікованих після мутагенезу. Вони включають чітко виражені карликові і подовжені ("потоншені", "«Іепдег") фенотипи, які, як правило, є результатом змін вмісту СА або передачі сигналу СА. Ідентифікація залучених генів і аналіз білків, які вони кодують, сприяли досягненню розуміння регуляції росту за допомогою СА, зокрема у модельних видів рису і Агарідорвів.
Біоактивні СА зв'язуються з білюом-рецептором СА ("СІО1", Оедиспі-Тапака еї а!., 2005; Мигазе еїа!ї., 2008; 5пПітада еї аї., 2008) і формують комплекс, який потім зв'язується білками ОБГ ГА, які ідентифіковані як підродина сімейства факторів транскрипції СКАЗ (СсгіНнН5 еї аї., 2006; УМіде еї аї., 2007; Нігапо еї аї., 2010), що функціонує як інгібітори росту. В одному з випадків факти дозволяють передбачати, що зв'язування ЮЕЇ А з факторами транскрипції РІР запобігає стимуляції ними експресії генів, необхідних для посиленого росту (ае І исаз еї аї!., 2008; Репад еї а!., 2008).
Особливий інтерес представляють мутанти ОеїЇЇа ячменю і рису, оскільки вони включають два суттєво відмінні фенотипи: сильно подовжені "потоншені" типи і "нечутливі до ЗА" карликові
Зо форми. Перша ознака є рецесивною і характеризується екстремальною відповіддю на ОА, тоді як остання ознака є домінантною або напівдомінантною. До цих зовсім різних фенотипів ("подовжений потоншений" або "карликовий потоншений", ІКеда еї аї., 2001; Спапайег еї аї., 2002; Азапо еї аї., 2009) приводять різні однонуклеотидні заміни в гені 5іепаегп, кодуючому
ОЕГА. Перший з фенотипів включає мутації, що усувають здатність ОЕГГ А репресувати ріст, а останній виявляється внаслідок накопичення ОЕЇЇА через нездатність зв'язуватися з комплексом СБА-С1ІО1.
Як правило, пшениця є гексаплоїдною, і ОБ ГА кодують три гомологічних гени (КПА, ВНІ-
В1, АБО) у хромосомах 4АЇ, 485 і 405 геномів пшениці А, В і 0, відповідно, де "г" означає довге плече хромосоми, а "5" означає коротке плече хромосоми. Це робило вивчення мутантів пшениці більш складним, і, таким чином, відносно пшениці відомо менше в порівнянні з рисом і ячменем. Для геномів В і О описані "нечутливі до СА" алелі напівкарликовості (Репо еї а!., 1999;
Реагсе еї аї., 2011). Один із прикладів алеля екстремальної карликовості є алель КПІ-ВІ1с у геномі В, що є результатом вставки елемента ДНК. Теоретично розраховано, що більшість цих вставок у транскрипті гена піддається сплайсингу, але залишаються 90 нуклеотидів, і це приводить до очікуваної вставки в рамку зчитування ОБГ ГА 30 амінокислот (Реагсе еї аї., 2011;
Ми еї а!., 2011).
Гени напівкарликовості були помічені при розведенні пшениці і рису з часу сільськогосподарської революції через їх позитивний вплив на врожайність. Помірне (10-20 95) зменшення висоти напівкарликів відбувається внаслідок дефіциту стимуляції росту ендогенним
СА. У рису це відбувається в результаті такої мутації в гені біосинтезу СА, що присутньо менше активного ЗА (Моппа еї аї., 2002; Зазакі еї а!І., 2002; 5ріеІтеуег еї аї., 2002). На відміну від цього, у пшениці мутації карликовості в гені ЮОеїа приводять до росту, що відносно "нечутливий" до СА (Репо еї аї., 1999). Вихідні мутації напівкарликовості за походженням були спонтанними, і їх агротехнічне значення очевидне через їх триваюче широке використання в сучасних сортах через 50 років після першого застосування. Однак існуючі алелі КІЇ мають декілька недоліків.
Таким чином, залишається необхідність у поліпшених сортах напівкарликової пшениці.
СУТЬ ВИНАХОДУ
У першому аспекті даний винахід стосується рослини пшениці, що несе алель КП-ВІ1, кодуючий поліпептид КЛ-В1, де поліпептид містить М-кінцевий домен і С-кінцевий домен, де 60 амінокислотна послідовність С-кінцевого домену щонайменше на 98595 ідентична амінокислотам 50-621 5ЕО ІО МО:5, і де амінокислотна послідовність поліпептиду КП-В1 відрізняється від послідовності, зазначеної як ЗЕО ІЮ МО:5, щонайменше (ї) вставкою однієї або декількох амінокислот між амінокислотами 49 і 50 5ЕО ІЮ МО:5 і (ії) однією або декількома замінами амінокислот у С-кінцевому домені відносно амінокислот 50-621 5ЕО ІЮ МО:5.
У другому аспекті даний винахід стосується рослини пшениці, що несе алель КП-ВІ1, кодуючий поліпептид КЛ-В1, де поліпептид містить М-кінцевий домен і С-кінцевий домен, де амінокислотна послідовність С-кінцевого домену щонайменше на 98595 ідентична амінокислотам 50-621 5БЕО ІЮ МО:5, де амінокислотна послідовність поліпептиду ЕПІ-ВІ1 відрізняється від послідовності, зазначеної як 5ХЕО ІЮ МО:5, щонайменше вставкою однієї або декількох амінокислот між амінокислотами 49 і 50 5ЕО ІО МО:5, і де нуклеотидна послідовність алеля КПІ-В1 відрізняється від нуклеотидної послідовності, зазначеної як 5ЕО ІЮ МО-1, щонайменше присутністю мутації ділянки сплайсингу інтрона.
У третьому аспекті даний винахід стосується зерна пшениці, що несе алель КП-ВІ1, кодуючий поліпептид КЛ-В1, де поліпептид містить М-кінцевий домен і С-кінцевий домен, де амінокислотна послідовність С-кінцевого домену щонайменше на 98595 ідентична амінокислотам 50-621 5ЕО ІО МО:5, і де амінокислотна послідовність поліпептиду КП-В1 відрізняється від послідовності, зазначеної як ЗЕО ІЮ МО:5, щонайменше (ї) вставкою однієї або декількох амінокислот між амінокислотами 49 і 50 5ЕО ІЮ МО:5 і (ії) однією або декількома замінами амінокислот у С-кінцевому домені відносно амінокислот 50-621 5ЕО ІЮ МО:5.
У четвертому аспекті даний винахід стосується зерна пшениці, що несе алель КПІ-ВІ1, кодуючий поліпептид КЛ-В1, де поліпептид містить М-кінцевий домен і С-кінцевий домен, де амінокислотна послідовність С-кінцевого домену щонайменше на 98595 ідентична амінокислотам 50-621 5ЕО ІО МО:5, де амінокислотна послідовність поліпептиду КП-В1 відрізняється від послідовності, зазначеної як 5ХЕО ІЮ МО:5, щонайменше вставкою однієї або декількох амінокислот між амінокислотами 49 і 50 5ЕО ІО МО:5, і де нуклеотидна послідовність алеля КПІ-В1 відрізняється від нуклеотидної послідовності, зазначеної як 5ЕО ІЮ МО, щонайменше присутністю мутації ділянки сплайсингу інтрона.
У п'ятому аспекті даний винахід стосується клітини пшениці, що несе алель КПІ-В1, кодуючий поліпептид КЛ-В1, де поліпептид містить М-кінцевий домен і С-кінцевий домен, де амінокислотна послідовність С-кінцевого домену щонайменше на 98595 ідентична амінокислотам 50-621 5ЕО ІО МО:5, і де амінокислотна послідовність поліпептиду КП-В1 відрізняється від послідовності, зазначеної як ЗЕО ІЮ МО:5, щонайменше (ї) вставкою однієї або декількох амінокислот між амінокислотами 49 і 50 5ЕО ІЮ МО:5 і (ії) однією або декількома замінами амінокислот у С-кінцевому домені відносно амінокислот 50-621 5ЕБО ІЮ МО:5. У переважному варіанті здійснення клітина пшениці являє собою клітину ендосперму пшениці.
Такі клітини ендосперму пшениці не здатні до регенерації в рослину пшениці.
У шостому аспекті даний винахід стосується клітини пшениці, що несе алель КП-ВІ1, кодуючий поліпептид КЛ-В1, де поліпептид містить М-кінцевий домен і С-кінцевий домен, де амінокислотна послідовність С-кінцевого домену щонайменше на 98595 ідентична амінокислотам 50-621 5ЕО ІО МО:5, де амінокислотна послідовність поліпептиду КП-ВІ1 відрізняється від послідовності, зазначеної як 5ХЕО ІЮ МО:5, щонайменше вставкою однієї або декількох амінокислот між амінокислотами 49 і 50 5ЕО ІО МО:5, і де нуклеотидна послідовність алеля КПІ-В1 відрізняється від нуклеотидної послідовності, зазначеної як 5ЕО ІЮ МО-1, щонайменше присутністю мутації ділянки сплайсингу інтрона. У переважному варіанті здійснення клітина пшениці являє собою клітину ендосперму пшениці. Такі клітини ендосперму пшениці не здатні до регенерації в рослину пшениці.
У сьомому аспекті даний винахід стосується молекули нуклеїнової кислоти, кодуючої поліпептид КПЕ-ВІ, де поліпептид містить М-кінцевий домен і С-кінцевий домен, де амінокислотна послідовність С-кінцевого домену щонайменше на 98595 ідентична амінокислотам 50-621 5ЕО ІО МО:5, і де амінокислотна послідовність поліпептиду КП-В1 відрізняється від послідовності, зазначеної як ЗЕО ІЮ МО:5, щонайменше (ї) вставкою однієї або декількох амінокислот між амінокислотами 49 і 50 5ЕО ІЮ МО:5 і (ії) однією або декількома замінами амінокислот у С-кінцевому домені відносно амінокислот 50-621 5ЕО ІО МО:5. Такі молекули нуклеїнової кислоти не зустрічаються в природі. Молекула нуклеїнової кислоти може бути виділена або знаходитися як трансген в трансгенній рослині.
У восьмому аспекті даний винахід стосується молекули нуклеїнової кислоти, кодуючої поліпептид КПЕ-ВІ, де поліпептид містить М-кінцевий домен і С-кінцевий домен, де амінокислотна послідовність С-кінцевого домену щонайменше на 98595 ідентична амінокислотам 50-621 5ЕО ІО МО:5, де амінокислотна послідовність поліпептиду КП-ВІ1 60 відрізняється від послідовності, зазначеної як ЗЕО ІЮ МО:5, щонайменше вставкою однієї або декількох амінокислот між амінокислотами 49 і 50 5ЕО ІО МО:5, і де нуклеотидна послідовність алеля КПІ-В1 відрізняється від нуклеотидної послідовності, зазначеної як 5ЕО ІЮ МО-1, щонайменше присутністю мутації ділянки сплайсингу інтрона. Такі молекули нуклеїнової кислоти не зустрічаються в природі. Молекула нуклеїнової кислоти може бути виділена або знаходитися як трансген в трансгенній рослині.
У дев'ятому аспекті даний винахід стосується поліпептиду ВРІ-В1І, що містить М-кінцевий домен і С-кінцевий домен, де амінокислотна послідовність С-кінцевого домену щонайменше на 9895 ідентична амінокислотам 50-621 5ЕО ІЮО МО:5, і де амінокислотна послідовність поліпептиду КПЕ-ВІ1 відрізняється від послідовності, зазначеної як хЕО ІО МО:5, щонайменше (і) вставкою однієї або декількох амінокислот між амінокислотами 49 і 50 5ЕО ІО МО:5 і (ії) однією або декількома замінами амінокислот у С-кінцевому домені відносно амінокислот 50-621 5ЕО І
МО:5.
У десятому аспекті даний винахід стосується виділеного олігонуклеотиду, що містить щонайменше 19 суміжних нуклеотидів полінуклеотиду за сьомим або восьмим аспектом даного винаходу, де 19 суміжних нуклеотидів містять щонайменше одну з замін нуклеотидів, вибраних із групи, що складається з Сп2715А, п2726А, 42747А, с2829А, сп2831А, сп2849А, Сб2865Т,
С2966Т, С29721, 2З30О6БА, С3117Т, 23477А, С3507Т, С3519Т, 23624А, с2792А, СС2108ТА,
С23047А, с2864А, 13671А, с148А, 2148Т, 2147А, с2084А і С2083А, відносно ЗЕО ІЮО МО:1 або повністю комплементарні йому.
КОРОТКИЙ ОПИС КРЕСЛЕНЬ
Фігура 1. Приклад виділення мутантів пшениці з посиленим ростом за допомогою скринінгу в лотках. Один з мутантних паростків, що характеризується збільшеною швидкістю росту, зазначений стрілкою.
Фігура 2. Мутанти пшениці з посиленим ростом, вирощувані в контрольованих умовах, у порівнянні з батьківськими (карликовими) рослинами і рослинами дикого типу (високорослими).
Зліва направо: похідні Магіпда, що несуть ЕПІ-В1с (карликовість), КП-ВТа (високорослість) або три різні похідні КПІ-В1с з посиленим ростом. Три похідні з посиленим ростом відрізняються по їх кінцевій висоті, і стрілки вказують на верхівку кожної лінії. Два з похідних є напівкарликовими, третє є високорослим як дикий тип.
Зо Фігура 3. Схематичне зображення ділянок замін амінокислот у мутантів ячменю з посиленим ростом (верхні стрілки) і пшениці (нижні стрілки) у С-кінцевому домені СКАЗ поліпептидів
РЕА. Зазначені консервативні амінокислотні області.
Фігура 4. Паростки ячменю одного і того ж віку (зліва направо) НітаІауа (МТ), М463 (дгагб),
ТА261 (дгагб, віпіт), М240 (5іп!т), Мб640 (5іІпт1а), ТА107 (ЗіІпта.10), ТАбО (5іІпта.8).
Фігура 5. Змінена морфологія в деяких мутантних лініях пшениці. Приклад нормальної (зліва) і аномальної (справа) морфології, де останній випадок характеризується вузькими листами, тонкими стеблами, слабко розвиненою кореневою системою і, у деяких випадках, колоссям з зернами, меншими ніж нормальні.
Фігура 6. Аналіз ПЛР дуплексів ДНК (від І до г): контрольних І/ПІ-1 Магіпода, ВНЕВІс Магіпаа; двох ліній з посиленим ростом з аномальною морфологією; двох ліній з посиленим ростом з нормальною морфологією; контролю без матричної ДНК. Зліва представлені маркери розміру.
Верхня смуга являє собою ампліфікацію фрагмента алеля КПІ-В1с, а нижня смуга являє собою продукт гена КПЕО1.
Фігура 7. Вирівнювання СіивіамуУ амінокислотних послідовностей, кодованих ВПІ-Аїа (г930277), ВТ-В1 (6930278) ії ВІ-Ота(швг930281) у пшениці.
Фігура 8. Вирівнювання поліпептиду КПІ-Віа пшениці (ЗЕО ІЮ МО:5, верхня послідовність) і білка САЇ Агабідорзі5 Іпаійапа (номер доступу САА75492, нижня послідовність) за допомогою
ВіІазір. Зірочки вказують амінокислоти, що є ідентичними (консервативними) у двох поліпептидах, а символи "-" означають подібні, але не ідентичні амінокислоти.
Примітки до списку послідовностей
ЗЕО ІЮО МО:1 демонструє нуклеотидну послідовність довжиною 3892 нуклеотидів гена КПї-
Віс Магіпда/АйНі-Віс, починаючи від АТО кодуючої області білка до ТОА на кінці кодуючої області. Вставка ретротранспозона довжиною 2026 нуклеотидів у ген ЕПІ-В1 з одержанням КПІ-
ВІ1с знаходиться безпосередньо після перших 147 нуклеотидів.
ЗЕО ІО МО:2 демонструє нуклеотидну послідовність КДНК довжиною 1956 нуклеотидів, що відповідає алелю КПІ-ВІс у пшениці Магіпда/кпі-Віс. Послідовність майже ідентична нуклеотидній послідовності, наданій під номером доступу СепеВапк УМ857971 (Ми еї аї., 2011), відрізняючись тільки по 2 нуклеотидах у положеннях 813 і 1851. Вставка 90 нуклеотидів у КДНК відносно КДНК алеля ЕП-ВтТа відповідає нуклеотидам 148-237 5ЕО ІЮ МО 2.
ЗБЕО ІО МО:З3 демонструє амінокислотну послідовність поліпептиду довжиною 651 амінокислот, кодованого алелем КЛ-ВІс, тобто кодованого геном з нуклеотидною послідовністю ЗЕО ІЮ МО:1 і КкКДНК ЗЕО ІО МО:2. Вставка довжиною 30 амінокислот у поліпептид відносно поліпептиду ЕПІ-В1а являє собою амінокислоти 50-79 5ЕО ІЮ МО:3.
ЗЕО ІЮ МО:4 демонструє нуклеотидну послідовність КДНК, що відповідає алелю КМ-Віа (дикого типу), починаючи з кодону старту трансляції АТО (Реагсе еї аї., 2011) (номер доступу
СепеВапк Уг930278).
ЗБЕО ІО МО:5 демонструє амінокислотну послідовність поліпептиду КПЇ-Вта (дикого типу) (номер доступу Сепрапк УЕ930278), 621 амінокислота.
ЗЕО ІЮ МО:6 демонструє нуклеотидну послідовність довжиною 7057 нуклеотидів гена КИ -
ВІ Тійсит аевзімит для (номер доступу СепеВапк ЕМб49763) з культивару Хіасуап54.
Нуклеотиди 1-2136 відповідають промотору і 5-ОТА8 АТЕВІр, нуклеотиди 2137-4002 відповідають кодуючій області білка, що переривається нуклеотидною заміною з С на Т у положенні 2326 відносно дикого типу, і нуклеотиди 4003-7057 відповідають 3-О0ТА АПВ ї 3'- області гена.
ЗЕО ІОЮО МО:7 демонструє послідовність поліпептиду довжиною 555 амінокислот, кодованого
ВАТ-ВТЬ, що являє собою укорочений на М-кінці білок ЕМЛІ-ВІ, з видаленими першими 66 амінокислотами відносно КПІ-В1а дикого типу. Трансляція реїініціюється з амінокислоти 67.
ЗЕО ІЮ МО:8 демонструє нуклеотидну послідовність гена КПІ-АтТа Тийсит аевіїмит (АПІ-А1 дикого типу) довжиною 3463 нуклеотидів (номер доступу СепеВапк Уг930277). Нуклеотиди 1- 1600 відповідають промотору і 5-О0ТА ВП-АТа, а нуклеотиди 1601-3463 відповідають кодуючій області білка, К-АТа. Кодуюча область білка на 96 95 ідентична кодуючій області КПІ-ВТа.
ЗЕО ІЮ МО:9 демонструє послідовність поліпептиду КПІ-АТа (дикого типу) довжиною 620 амінокислот.
ЗЕО ІО МО:10 демонструє послідовність довжиною 1872 нуклеотиди кКДНК, що відповідає гену КПІ-О1а (номер доступу сСепрапк А.Ш2г42531).
ЗЕО ІЮ МО:11 демонструє послідовність поліпептиду КПЕ-ЮО1 довжиною 623 амінокислоти (номер доступу УЕ930281).
ЗЕО ІЮ МО:12 демонструє послідовність гена ячменю 5іпі! довжиною 618 амінокислот
Зо (номер доступу АКЗ3720654).
ЗБО ІЮ МО:13 демонструє послідовність поліпептиду СА! Агарідорзіз (ШПаїапа (номер доступу САА75492).
ЗЕО ІЮО МО:14 демонструє амінокислотну послідовність вставки 30 амінокислот у поліпептид
Апт-В1с.
ЗБО І МО:15 демонструє послідовність довжиною 11 амінокислот мотиву "ОейПа" у поліпептиді КПІ-Вта дикого типу пшениці, що переривається в поліпептиді КП-В1 с.
ЗБО ІЮ МО:16 демонструє нуклеотидну послідовність гена КМ-ВІс (номер доступу
УМ857970, УмМи еї аї., 2011). кКДНК відповідає нуклеотидам 206-352, об'єднаним з 2289-4097.
ЗЕО ІЮ МО:17-30 демонструють нуклеотидні послідовності олігонуклеотидних праймерів.
ДОКЛАДНИЙ ОПИС ВИНАХОДУ
Рослини
Даний винахід стосується рослин пшениці, їх частин, таких як зерно пшениці, продуктів, одержуваних з цих рослин і зерна, таких як харчові інгредієнти і харчові продукти, і способів їх одержання і використання. Як використовують у даному документі, термін "пшениця" означає рослину, частину рослини, зерно або одержуваний з них продукт, що належать до видів Тгйісит аевіїмит Г.. або Тгйісит їигдідит підвиду дигит або тритикале. Тгтйісит аевзіїмит Г.., також відома як хлібопекарська пшениця, являє собою гексаплоїдну пшеницю з організацією геному ААВВОО, що містить 42 хромосоми. Субгеноми "А", "В" ії "О" Тутйісцит аевіїмит Ї. часто позначають як "геноми". Т"ійсит їигдідит підвиду дигит, часто позначуваний як пшениця твердих сортів, являє собою тетраплоїдну пшеницю з організацією геному ААВВ, що містить 28 хромосом. Диплоїдні предки гексаплоїдної або тетраплоїдної пшениці включають вид Тгйісцт, такий як Т. чапи, Т. топососсуит або Т. роеоїїсит для геному А, Аедіїор5 зрейоїде5 для геному В і Т. їаи5оспії (також відома як Аедіор5 5дцатоза або Аедіор5 їаив5спії) для геному Ю, але вони не включені в "пшеницю", як її використовують у даному документі. Однак рослини, які одержують загальноприйнятими способами з використанням Тгйісцт аевіїмит І. як батька в статевому схрещуванні з видом бЗесаІе сегеаїе (жито), що не є Тійісцт, де це гібридне потомство позначають у даному документі як тритикале, включені в "пшеницю", як її використовують у даному документі. Переважно, для комерційного одержання зерна придатна така рослина пшениці, як комерційні сорти хлібопекарської пшениці або пшениці твердих сортів із придатними бо агрономічними характеристиками, що відомі фахівцям у даній галузі.
У першому аспекті даний винахід стосується рослини пшениці, що несе алель КП-ВІ1, кодуючий варіант (не є диким типом) поліпептиду КП-В1, переважно гомозиготної по алелю КПї-
ВІ. У варіантах здійснення рослина пшениці несе алель ЕПІ-В1, вибраний із групи, що складається з ВПІ-В1с.1, АПІ-В1с.2, ВП-В1с.3, ВПІ-В1с.4, АТ-В1с.5, ВПВІ1с.6, АПІ-В1с.7,. Вп-
В1с.8, АпПІ-В1с.9, АПІ-В1с.10, Ап-В1с.12, ВпТ-В1с.15, АПВІТс.16, ВПВІ1с.17, ВП-ВІ1Тс.18,. ВН
В1с.21, АПІ-В1с.22, АпПІ-В1с.23, АпПІ-В1с.24, ВПІ-В1с.26, ВП-ВІ1с.27, АВТ-В1с.28, ВТ-В1с.29, ВП-
Втс.30 ії АП-В1с.32, і переважно гомозиготна по цьому алелю. У переважних варіантах здійснення рослина пшениці несе алель КПІ-В1, вибраний із групи, що складається з ВНІ-
В1с.22, ВП-В1с.23, ВП-В1с.24 і ВПІ-В1с.26, і переважно гомозиготна по цьому алелю. В одному з варіантів здійснення поліпептид КПІ-В1 містить М-кінцевий домен і С-кінцевий домен, де амінокислотна послідовність С-кінцевого домену щонайменше на 98595 ідентична амінокислотам 50-621 5ЕО ІО МО:5, і де амінокислотна послідовність поліпептиду КП-В1 відрізняється від послідовності, зазначеної як ЗЕО ІЮ МО:5, щонайменше (ії) вставкою однієї або декількох амінокислот між амінокислотами 49 і 50 5ЕО ІЮ МО:5 і (ії) однією або декількома замінами амінокислот у С-кінцевому домені відносно амінокислот 50-621 5БЕО ІЮ МО:5. У 5ЕО ІЮ
МО:5 зазначена амінокислотна послідовність білка пшениці КПЇ-ВТа дикого типу з довжиною в 621 амінокислоту, який у пшениці кодує алель КПІ-Віа дикого типу і який використовують у даному документі як вихідну послідовність поліпептиду КПІ-В1 дикого типу.
Альтернативно, амінокислотна послідовність варіанта поліпептиду КПІ-В1 відрізняється від послідовності, зазначеної як 5ЕБЕО ІЮ МО:5, щонайменше вставкою однієї або декількох амінокислот приблизно між амінокислотами 49 і 50 5ЕО ІЮ МО:5, а нуклеотидна послідовність алеля КЛІ-В1, кодуюча варіант поліпептиду КПЛ-В1, відрізняється від нуклеотидної послідовності, зазначеної як 5ЕБО ІО МО:1, щонайменше присутністю мутації в ділянці сплайсингу інтрона або поруч з нею так, що зачіпає інтрон-сплайсинг транскрипту РНК алеля
АтТ-В1. Як використовують у даному документі, "ділянка сплайсингу інтрона" означає 4 нуклеотиди, що складають екзон-інтронне зчленування, а саме 2 нуклеотиди з 5'-кінця і 2 нуклеотиди з 3'-кінця від екзон-інтронного зчленування. Як використовують у даному документі, "прилеглі до ділянки сплайсингу інтрона" означає З нуклеотиди з 5"-кінця і З нуклеотиди з 3- кінця від ділянки сплайсингу інтрона. У 5ЕО ІЮ МО:1 зазначена нуклеотидна послідовність
Зо кодуючої області білка алеля КПІ-В1с, одержана на генетичній основі сорту пшениці Магіпда, починаючи з кодону ініціації трансляції АТО до кодону термінації трансляції ТА. 5ЕО ІЮ МО 1 містить ретротранспозонну вставку довжиною 2026 нуклеотидів (нуклеотиди 148-2173), що вставлена в ген КРІ-ВІ з формуванням алеля КПІ-Віс (УУи еї аї.,, 2011). У цьому варіанті здійснення амінокислотна послідовність поліпептиду, кодованого алелем КМ-ВІ, може бути ідентична 5ЕО ІЮ МО:3 або вона може відрізнятися. Алель КПІ-В!Ї може містити мутацію сплайсингу інтронів і кодувати поліпептид з відмінностями (Її) і (ії), описаними в попередньому абзаці, або, у переважному варіанті здійснення, поліпептид містить відмінності (Її) і (ії), описані вище, і не містить ніякої мутації ділянки сплайсингу інтрона.
Як використовують у даному документі, "поліпептид КП-В1" означає поліпептид, який в пшениці кодує алель КП-ВІ. Як правило, поліпептид КПЕ-ВІ містить М-кінцевий домен, зв'язаний з С-кінневим доменом приблизно з 572 амінокислот, що щонайменше на 98 95 ідентичний по амінокислотній послідовності з амінокислотами 50-621 5ЕО ІЮ МО:5. С-кінцевий домен містить те, що звичайно позначають як домен СКА5. В одному з варіантів здійснення довжина М-кінцевого домену складає приблизно від 49 до приблизно 79 амінокислот. У переважному варіанті здійснення довжина М-кінцевого домену складає приблизно 79 амінокислот з послідовністю, як, наприклад, амінокислоти 1-79 5ЕО ІЮ МО:З3 або варіант з 1-5 замінами амінокислот відносно амінокислот 1-79 5ЕБЕО ІЮО МО:3. У альтернативному варіанті здійснення поліпептид КПЇ-В1 одержаний з поліпептиду КПЛЕ-ВІ дикого типу за допомогою укорочення на М-кінці, наприклад, як поліпептид ЕМЛІ-ВТЬ (ЗЕО ІЮ МО;:7), кодований алелем Кпї-
ВІ, також відомим як ген КП. В одному з варіантів здійснення алель КПІ-В1 кодує поліпептид
ВН-ВІ, амінокислотна послідовність якого щонайменше на 98 95 ідентична 5ЕО ІЮ МО:3.
В одному з варіантів здійснення амінокислотна послідовність поліпептиду КЛ-ВІ не ідентична 5ЕО ІЮ МО:5 і не ідентична ЗЕО ІЮО МО:7, хоча вона може містити 5ЕО ІЮ МО:7. В одному з варіантів здійснення, якщо амінокислотна послідовність поліпептиду ідентична 5ЕО ІЮ
МО:3, тоді алель КПІ-В1 не містить нуклеотидної послідовності, зазначеної як ЗЕО ІЮ МО:1; замість цього він кодує варіант послідовності БЕО ІЮ МО:1 з мутацією в ділянці сплайсингу інтрона або поруч з нею відносно ЗЕО ІЮ МО: 1. У переважному варіанті здійснення амінокислотна послідовність поліпептиду не ідентична 5ЕО ІЮ МО:3. Таким чином, поліпептид відрізняється по послідовності від кожного з поліпептиду КП-Вта (дикого типу), поліпептиду КПЇ- 60 ВІТЬ ії поліпептиду КПС-ВІс. В одному з варіантів здійснення амінокислотна послідовність поліпептиду відрізняється від амінокислотної послідовності КПІ-Вта, зазначеної як ЗЕО ІЮО МО:5, щонайменше (ї) вставкою однієї або декількох амінокислот між амінокислотами 49 і 50 5ЕО ІЮ
МО:5 і (ії) однією або декількома замінами амінокислот в області поліпептиду, що відповідає амінокислотам 200-621 5ЕО ІО МО:5. Ця область поліпептиду ЕП-ВТа відповідає домену ОКАЗ поліпептиду.
У переважному варіанті здійснення вставка однієї або декількох амінокислот між амінокислотами 49 і 50 5ЕО ІО МО:5 відносно поліпептиду КПЕ-Вта ((ї) вище) являє собою вставку приблизно 30 амінокислот, послідовність яких переважно являє собою
О5АТРРОАРІ МАДАСІ ААМЕТТНІКІЗАМК (ЗЕО ІЮ МО:14; відповідна амінокислотам 50-79 5ЕО
ІО МО:3), або її варіант, де послідовність варіанта відрізняється від 5ЕО ІЮ МО:14 замінами, вставками або видаленнями не більше 5 амінокислот, переважно 1 або 2 замінами амінокислот.
Послідовність О5БАТРРОАРІ МАААСІ ААМЕТТНІКІЗАМК (5ЕБО ОО МО:14) являє собою послідовність вставки в поліпептид КПЇ-ВІс відносно поліпептиду КПЇ-В'а. Ця вставка 30 амінокислот є результатом вставки в ген КПЕ-ВІ, яка формує алель КПІ-ВІс. Ця вставка знаходиться в межах так називаного мотиву ОЕЇ А (ОБІГ ААГСМКМУ; БЕО ІЮ МО:15) поліпептиду КПІ-В1, який передбачувано необхідний для взаємодії з рецепторним білком СА,
СІОТ, так, що поліпептид із вставкою більше не зв'язує СІО1. За допомогою мутагенезу можна одержувати варіанти цієї вставленої послідовності, і вважають, що заміни, вставки або делеції 1-5 амінокислот не впливають на втрату взаємодії поліпептиду з ЗІО1.
В одному з варіантів здійснення поліпептид рослини пшениці додатково містить одну або декілька замін амінокислот, переважно консервативні заміни амінокислот, в області поліпептиду, що відповідає амінокислотам 1-200 5ЕО ІЮО МО:5, також позначуваній як домен
ОЕШСА поліпептиду КПЕ-ВІ дикого типу, оскільки вона містить амінокислотну послідовність
РЕП ААГСМУКМ (ЗЕБЕО ІО МО:15), також позначувану як мотив ЮОЕЇ ГА. Однак переважно амінокислотна послідовність поліпептиду КЛЕ-ВІ за винаходом ідентична ЗЕО І МОЗ у мутантному домені ОЕГГА, тобто містить амінокислоти 1-230 5ЕО ІЮ МО 3.
У додаткових переважних варіантах здійснення проводять одну або декілька замін амінокислот у С-кінцевому домені в області поліпептиду, що відповідає амінокислотам 200-621
ЗБЕО І МО:5. У переважному варіанті здійснення одна або декілька замін амінокислот включають заміну амінокислоти, вибрану з групи, що складається з 2260, М264, А271, с298,
А299, АЗОБ5, АЗ10, РЗ44, І 346, 377, РЗ94, Н514, Т524, 5528, 1563, М286, 0371, АЗ10, Е579, 5493, Н283, Н271, п274, А280, М234, ВН484, М285, сп230, 5488 і Сб240 відносно 5ЕО ІЮ МО:3.
Переважно заміна вибрана з групи, що складається з С2бОЕ, М264М, А271тТ, 122980, А299Т,
АЗОБТ, АЗІОМ, РЗ445, І 346Е, 13778, РЗО4Ї, А514Н, Т524І, 5528Е, 5630, М286М, 0371М,
АЗ10Т, Е579К, 5493Е, В283Н, В271Н, 22740, А280Т, М234М, Н484Н, М285Е, С2ЗОЕ, 5488 і
С240У. У більш переважному варіанті здійснення алель КПІ-В1 рослини пшениці містить варіант послідовності відносно 5ЕО ІЮО МО:1, де варіант послідовності вибраний із групи, що складається з 12715А, с2726А, п2747А, с2829А, с2891А, с22849А, С2865Т, С2966Т, С2972Т,
С23065А, С3117Т, 23477А, С3507Т, С3519Т, 13624А, с2792А, СС2108ТА, 23047А, с2864А,
С2З3671А, С2148А, с148Т, с147А, с2084А і с22083А. Ці варіанти послідовності відповідають замінам амінокислот, перерахованим безпосередньо вище, див. таблицю 3.
Переважно рослини пшениці за винаходом мають збільшену висоту рослини відносно рослини пшениці, гомозиготної по алелю КП-ВІ1с, і знижену висоту відносно рослини пшениці, гомозиготної по алелю КПІ-ВТа, коли рослини вирощують в однакових умовах. Таким чином, рослину пшениці за винаходом позначають як "напівкарликова". У переважному варіанті здійснення висота рослини пшениці за винаходом приблизно складає від 70 95 до приблизно 94 95 від висоти контрольної рослини, гомозиготної по алелю КПІ-ВтТа ("високорослий фенотип"), більш переважно приблизно від 75 95 до приблизно 90 95 від висоти рослини, гомозиготної по алелю КПЕ-ВТа. Для порівняння висота рослини пшениці, гомозиготної по алелю КП-ВІс ("карликова рослина"), складає приблизно 42 95 від висоти рослини, гомозиготної по алелю КпПї-
Вта. Висота рослини пшениці за винаходом може бути приблизно такою ж або по суті такою ж, як висота рослини пшениці, гомозиготної по алелю КПІ-В1р, що складає приблизно 80-81 95 від висоти високорослих рослин, або може бути менше висоти рослини КПІ-В1Б або більше висоти рослини КПІ-В1р. Як використовують у даному документі, "висота рослини" означає висоту зрілої рослини від рівня грунту до верху найбільш високого стебла, тобто до основи колоса.
Рослини, які гомозиготні по алелях КПІ-Віс, ВНІ-В'а або КП-В1Б і які використовують як контролі при порівнянні, переважно мають по суті одну і ту ж генетичну основу, більш переважно є майже ізогенними лініями відносно рослини пшениці за винаходом; таким чином їх позначають "відповідна рослина пшениці, гомозиготна по алелю КМ-В1с (або ЕПІ-ВТа, або КП- бо В15)у". Фахівці в даній галузі можуть легко вибрати відповідну рослину пшениці, яка придатна б для порівняння. Для проведення порівняння рослину за винаходом і контрольну рослину вирощують по суті в однакових часових умовах і умовах навколишнього середовища, наприклад у повторних польових випробуваннях, включаючи однакові температурний режим, умови освітлення, подачу живильних речовин і води і характеристики грунту. Переважно висоту рослини вимірюють у вирощуваних у польових умовах рослин, хоча для порівняння також можна використовувати рослини, вирощувані в теплицях і зростаючі відповідно до польових випробувань, як відомо в даній галузі. Висоту рослин можна вимірювати в будь-який момент циклу росту, але переважно її вимірюють при дозріванні рослин.
Крім того рослина пшениці переважно має підвищену фертильність і/або продукує збільшену кількість зерна відносно рослини пшениці, гомозиготної по алелю КП-ВІ1с, і/або має збільшену довжину колеоптилю відносно рослини пшениці, гомозиготної по алелю КПІ-ВІ1с, і/або здатна продукувати зерно з більш тривалим станом спокою відносно зерна, одержуваного з рослини пшениці, гомозиготної по алелю КПІ-Вта. Переважно, кількість зерна, продукованого рослиною, є по суті такою ж або більшою, ніж у відповідної рослини пшениці, гомозиготної по алелю КПІ-В1Б. Як використовують у даному документі, "фертильність" визначають як кількість зерен у колосі, а "кількість зерен" або "вихід зерна, продукованого рослиною", означає масу зрілого зерна, яку можна зібрати з рослини. Як правило, вміст вологи кожного зерна складає приблизно від 10 95 до приблизно 1595 мас. Рослини пшениці за даним винаходом також переважно мають збільшену довжину колеоптилю відносно рослини пшениці, гомозиготної по алелю КПІ-В1с. Переважно довжина колеоптилю рослини пшениці за даним винаходом складає від 7095 до 12095, переважно від 8095 до 10095, від довжини колеоптилю рослини, гомозиготної по алелю КПІ-Віа. Іншою переважною ознакою рослин пшениці за даним винаходом є стан спокою зерна, одержуваного з рослини. Переважно, рослини мають більш тривалий стан спокою зерна відносно рослини пшениці, гомозиготної по алелю КП-Вта.
Переважно, рослина пшениці має від 50 95 до 100 95, переважно 60 95 до 100 95, від рівня стану спокою рослини пшениці, гомозиготної по алелю КП-ВІТс. В одному з варіантів здійснення частка проростання зерна, одержуваного з рослини пшениці за винаходом, є проміжною між часткою проростання зерна рослини пшениці, гомозиготної по алелю КПІ-Вта, і зерна рослини пшениці, гомозиготної по алелю КПЕ-В1с. Частку проростання можна оцінювати, як описано в прикладі 1. Наприклад, можна оцінювати час, необхідний популяціям зерен для досягнення 50 95 проростання. У переважному варіанті здійснення зерну рослини пшениці за винаходом для досягнення 5095 частки проростання відносно зерна відповідної рослини пшениці, гомозиготної по алелю КПІ-Віа, необхідно на 1-8 тижнів більше, переважно на 2-5 тижнів більше, зберігання при кімнатній температурі ("періоду дозрівання").
Як можна зрозуміти, коли проводять порівняння між рослинами або зерном за даним винаходом і рослинами або зерном, гомозиготними по алелю КПІ-В1с або гомозиготними по алелю КПІ-Вт'а, порівняння проводять з рослинами, вирощуваними по суті з ідентичними умовами росту, часом вирощування, температурою, подачею води і живильних речовин і т.п. і для зерна, одержуваного у таких рослин.
Зерно. В другому аспекті винахід стосується зерна пшениці, яке одержують або яке можна одержувати у рослин пшениці за винаходом або яке є частиною рослин пшениці за винаходом.
Як використовують у даному документі, "зерно" означає зерно, яке звичайно збирають хлібороби у зрілих рослин пшениці, вирощуваних у полі, включаючи зерно, використовуване для виробництва харчових продуктів або у харчових продуктах, і проросле зерно після висівання, але до появи паростків. Зерно також включає зерно, яке оброблене для виробництва харчових продуктів або є інгредієнтом у харчовому продукті. Як правило, вміст вологи зібраного зерна пшениці за винаходом складає приблизно від 10 95 до приблизно 15 95 мас. В одному з варіантів здійснення зерно пшениці несе алель КПІ-В1, кодуючий варіант (не є диким типом) поліпептиду КПІ-В1, де переважно зерно гомозиготне по цьому алелю. В одному з варіантів здійснення поліпептид КПІ-В1 містить М-кінцевий домен і С-кінцевий домен, де амінокислотна послідовність С-кінцевого домену щонайменше на 98 95 ідентична амінокислотам 50-621 5ЕО
ІО МО:5, і де амінокислотна послідовність поліпептиду КП-В1 відрізняється від послідовності, зазначеної як 5ЕО ІЮ МО:5, щонайменше (ї) вставкою однієї або декількох амінокислот між амінокислотами 49 і 50 5ЕО ІО МО:5 і (ії) однією або декількома замінами амінокислот у С- кінцевому домені відносно амінокислот 50-621 5ЕО ІО МО:5. У варіантах здійснення зерно пшениці несе алель КПІ-В1, вибраний із групи, що складається з АПІ-ВІ1с.1, АПІ-ВІ1с.2, АПІ-В16с.3,
Ат-В1с.4, АпПІ-В1с.5, АПІ-В1с.6б, АНІ-В1с.7, АНІ-В1с.8, АпПІ-В1с.9, АПІ-В1с.10, АТ-В1с.12, ВАПІ-
В1с.15, АПІ-В1с.16, АТ-В1с.17, АпПІ-В1с.18, АПІ-В1с.21, АпПІ-В1с.22, АПІ-В1с.23, АПІ-В1с.24, ВПІ-
В1с.26, АпПІ-В1с.27, АПТІ-В1с.28, АпТ-В1с.29, АПІ-В1с.30 і АПІ-В1с.32, і переважно гомозиготне по бо цьому алелю. У переважних варіантах здійснення зерно пшениці несе алель КП-ВІ1, вибраний із групи, що складається з КПІ-ВІ1с.22, ВпП-В1с.23, ВАПІ-В1с.24 і КпТ-В1с.26, і переважно гомозиготне по цьому алелю.
Альтернативно, амінокислотна послідовність варіанта поліпептиду КЛ-В1 зерна відрізняється від послідовності, зазначеної як 5ХЕО ІЮ МО:5, щонайменше вставкою однієї або декількох амінокислот між амінокислотами 49 і 50 5ЕО ІО МО:5, а нуклеотидна послідовність алеля КЛІ-В1, кодуюча варіант поліпептиду КПЛ-В1, відрізняється від нуклеотидної послідовності, зазначеної як 5БО ІО МО:1, щонайменше присутністю мутації в ділянці сплайсингу інтрона або поруч з нею так, що зачіпає інтрон-сплайсинг транскрипту РНК алеля
ВТ-ВІ. У цьому варіанті здійснення амінокислотна послідовність поліпептиду, кодованого алелем КПІ-ВІ, може бути ідентична 5ЗЕО ІЮО МО:З3 або вона може відрізнятися. Алель КПЇ-ВІ1 може містити мутацію сплайсингу інтронів і кодувати поліпептид з відмінностями (Її) і (ії), описаними в попередньому абзаці, або, у переважному варіанті здійснення, поліпептид містить відмінності (і) і (ії), описані вище, і не містить ніякої мутації ділянки сплайсингу інтрона відносно
ЗЕО І МО-1.
Варіант поліпептиду КЛ-ВІ зерна й алель К-ВІ, кодуючий його, можна додатково визначати, як описано в абзацах вище відносно рослини пшениці. У переважному варіанті здійснення зерно має більш тривалий стан спокою відносно зерна, одержуваного з рослини пшениці, гомозиготної по алелю КПІ-Вта. В одному з варіантів здійснення частка проростання зерна за винаходом є проміжною між часткою проростання зерна рослини пшениці, гомозиготної по алелю КПІ-Вт'а, і зерна рослини пшениці, гомозиготної по алелю КПІ-В1с.
Частку проростання можна оцінювати, як описано в прикладі 1. Наприклад, можна оцінювати час, необхідний популяціям зерен для досягнення 50 95 проростання. У переважному варіанті здійснення зерну за винаходом, що демонструє "більш тривалий стан спокою", для досягнення 50 95 частки проростання відносно зерна відповідної рослини пшениці, гомозиготної по алелю
Впт-Вт'а, необхідно на 1-8 тижнів більше, переважно на 2-5 тижнів більше, зберігання при кімнатній температурі ("періоду дозрівання"). Також зерно пшениці за винаходом при висіванні в грунт переважно здатне до розвитку в рослину пшениці, де рослина має збільшену висоту відносно рослини пшениці, гомозиготної по алелю КПІ-В1с, і знижену висоту відносно рослини пшениці, гомозиготної по алелю КПЇ-Віа, коли рослини вирощують в однакових умовах.
Зо Рослина пшениці, що розвивається з цього зерна, може мати підвищену фертильність і/або продукує збільшену кількість зерна відносно рослини пшениці, гомозиготної по алелю КПІ-В'1с, іабо має збільшену довжину колеоптилю відносно рослини пшениці, гомозиготної по алелю
Апт-В1с.
Даний винахід також стосується способу одержання зерна за винаходом, де спосіб включає () вирощування рослини пшениці за даним винаходом і (ії) збирання зерна у рослини. У деяких варіантах здійснення зерно пшениці обробляють так, щоб воно більше не було здатним до проростання. Цього можна досягати видаленням із зерна зародка, наприклад, за допомогою перемелювання або за допомогою теплової обробки, або за допомогою іншої обробки зерна.
Зерно можна дробити, розколювати, ошпарювати окропом, розплющувати, гранулювати, розмелювати або дробити.
Даний винахід також стосується способу одержання борошна тонкого помелу, непросіяного борошна, крохмалю, гранул крохмалю або висівок, де спосіб включає одержання зерна за даним винаходом й обробку зерна з одержанням борошна тонкого помелу, непросіяного борошна, крохмалю, гранул крохмалю або висівок. Способи такої обробки добре відомі в даній галузі. Етап одержання зерна може включати, наприклад, збирання зерна рослини пшениці за винаходом або придбавання цього зерна.
Даний винахід також стосується продуктів, одержуваних з рослин або зерна за даним винаходом, таких як харчові продукти, що можуть бути інгредієнтами харчових продуктів.
Приклади харчових продуктів включають борошно тонкого помелу, крохмаль, квасний або прісний хліб, макарони, локшину, зоокорми, зерновий сніданок, закуски, пироги, солод, кондитерські вироби і харчові продукти, що містять соуси на основі борошна тонкого помелу.
Харчовий продукт може являти собою бейгл, бісквіт, хліб, здобну булку, круасан, вареник, англійську булочку, кекс, піту, бездріжджовий хліб, охолоджену/заморожену тістову заготовку, тісто, печені боби, буріто, чилі, тако, тамале, тортилью, закритий пиріг, готовий до вживання зерновий продукт, готовий до вживання продукт, начинку, призначений для приготування в мікрохвильовій печі продукт, брауні, пиріг, сирний пиріг, булочку до кави, булочку, десерт, тістечко, солодкий батончик, корж пирога, наповнення пирога, дитяче харчування, суміш для запікання, тісто, паніровку, суміш для підливи, наповнювач для м'яса, замінник м'яса, суміш спецій, супову суміш, підливу, заправку для соусу, приправу до салату, суп, сметану, локшину, 60 макарони, локшину рамен, локшину для рагу по-китайськи, локшину для ломейн, включення в морозиво, брикет морозива, ріжок для морозива, багатошарове морозиво, сухе печиво, грінку, пончик, продукт у клярі, екструдовану закуску, плодовий і зерновий батончик, призначений для приготування в мікрохвильовій печі продукт для закуски, поживний батончик, млинець, заморожений хлібобулочний напівфабрикат, сушку, пудинг, продукт на основі мюслі, закуску з чипсів, закуску, суміш для закуски, вафлі, основу для піци, корм для тварин або корм для домашніх тварин. Харчовий продукт можна одержувати змішуючи зерно або борошно тонкого помелу, непросіяне борошно або висівки зазначеного зерна з іншим інгредієнтом. Іншим продуктом є корм для тварин, такий як зібране зерно, сіно, солома або силос. Рослини за винаходом можна використовувати безпосередньо як корм для тварин, наприклад, при вирощуванні в полі.
Полінуклеотиди. У третьому аспекті даний винахід стосується молекули нуклеїнової кислоти, кодуючої поліпептид КПІ-ВІ за винаходом. Молекулу нуклеїнової кислоти можна виділяти з рослини пшениці або вона може міститися в рослині пшениці або як екзогенна молекула нуклеїнової кислоти в рослині, що може являти собою будь-яку рослину, таку як злакова рослина або рослина, відмінна від пшениці. В одному з варіантів здійснення поліпептид
ВРТ-ВІТ містить М-кінцевий домен і С-кінцевий домен, де амінокислотна послідовність С- кінцевого домену щонайменше на 98 95 ідентична амінокислотам 50-621 5ЕО ІО МО:5, Її де амінокислотна послідовність поліпептиду КПІ-В1 відрізняється від послідовності, зазначеної як
ЗЕО І МО:5, щонайменше (ї) вставкою однієї або декількох амінокислот між амінокислотами 49 і 50 5ЕО ІЮ МО:5 ії (ії) однією або декількома замінами амінокислот у С-кінцевому домені відносно амінокислот 50-621 5ЕО ІЮ МО:5. Поліпептид КПІ-В1 за винаходом можна додатково визначити, як описано в абзацах вище відносно рослини пшениці. У переважних варіантах здійснення молекула нуклеїнової кислоти несе алель ВПІ-ВІ1, вибраний із групи, що складається з ВПІ-В1с.1, АПІ-В1с.2, АПІ-В1с.3, АНПІ-В1с.4, АПІ-В1с.5, АПІ-В1с.6, АНІ-В1с.7, АПІ-В1с.8, АНІ-
В1с.9, АТ-В1с.10, АпПІ-В1с.12, АПІ-В1с.15, АПІ-В1с.16, АМПІ-В1с.17, АПІ-В1с.18, АПІ-В1с.21, АПІ-
В1с.22, АПІ-В1с.23, АТ-В1с.24, АпПІ-В1с.26, АПІ-В1с.27, АТ-В1с.28, АПІ-В1с.29, АПІ-В1с.30 і АПІ-
ВІ1с.32. У більш переважних варіантах здійснення молекула нуклеїнової кислоти несе алель
ВП-ВІ, вибраний із групи, що складається з КПІ-В1с.22, ВПІ-В1с.23, ВНПІ-В1с.24 і КП-В1с.26.
Поліпептиди. У четвертому аспекті даний винахід стосується поліпептиду КЛ-В1, що містить
М-кінцевий домен і С-кінцевий домен, де амінокислотна послідовність С-кінцевого домену щонайменше на 9895 ідентична амінокислотам 50-621 5ЕБО ІЮО МО:5, і де амінокислотна послідовність поліпептиду КП-В1 відрізняється від послідовності, зазначеної як БЗЕО ІЮО МО:5, щонайменше (ї) вставкою однієї або декількох амінокислот між амінокислотами 49 і 50 5ЕО ІЮ
МО:5 і (ії) однією або декількома замінами амінокислот у С-кінцевому домені відносно амінокислот 50-621 5ЕО ІЮ МО:5. Поліпептид КПЕ-ВІ1 за винаходом можна додатково визначити, як описано в абзацах вище відносно рослини пшениці.
Даний винахід також стосується способу генотипування рослини пшениці, де спосіб включає () одержання зразка, що містить нуклеїнову кислоту або білок, виділені з рослини пшениці, і (її) детекцію молекули нуклеїнової кислоти або поліпептиду за даним винаходом в зразку. У переважних варіантах здійснення рослина пшениці несе алель КПІ-В1, вибраний із групи, що складається з АПІ-В1с.1, АПІ-В1с.2, АПІ-В1с.3, АпПІ-В1с.4, АпПІ-В1с.5, АПІ-В1с.6, ВПІ-В1с.7, ВНІ-
В1с.8, Ат-АВ1с.9, АпПІ-В1с.10, АпПІ-В1с.12, АНІ-В1с.15, ВН-В1с.16, АНІ-В1с.17, АпТ-В1с.18,. АПІ-
В1с.21, АПІ-В1с.22, АТ-АВ1с.23, АпПІ-В1с.24, АпПІ-В1с.26, АпПІ-В1с.27, АПІ-В1с.28, АПІ-В1с.29, ВПІ-
ВІтс.30 і АПІ-В1с.32.
Даний винахід також стосується способу введення алеля КПЇ-В1 у рослину пшениці з відсутністю зазначеного алеля, де спосіб включає і) схрещування першої батьківської рослини пшениці з другою батьківською рослиною пшениці, де друга рослина являє собою рослину пшениці за даним винаходом, і її) зворотне схрещування рослини-нащадка схрещування на етапі ї) з рослиною того ж генотипу, що і перша батьківська рослина, з одержанням рослини з більшістю генотипу першого батька, але із вмістом зазначеного алеля КПІ-В1.
Молекула нуклеїнової кислоти за даним винаходом може бути функціонально зв'язана з промотором, здатним контролювати експресію молекули нуклеїнової кислоти в рослинній клітині. Також наданий вектор, що містить або кодує молекулу нуклеїнової кислоти за даним винаходом, і клітини-хазяїни, що містять цей вектор і/або молекулу нуклеїнової кислоти за даним винаходом.
Даний винахід також стосується генетично модифікованої рослини, де рослина трансформована молекулою нуклеїнової кислоти за даним винаходом, і її рослин-нащадків, що містять цю молекулу нуклеїнової кислоти. У визначених варіантах здійснення генетично модифікована рослина являє собою рослину пшениці або ячменю.
Як використовують у даному документі, злакові означають рослини або зерно сімейств однодольних Роасеає або сСгатіпає, що культивують для одержання харчових компонентів їх зерен, і включають пшеницю, ячмінь, кукурудзу, овес, жито, рис, сорго, тритикале, просо, гречку.
Переважно, злакова рослина або зерно являє собою рослину або зерно пшениці або ячменю, більш переважно рослину або зерно пшениці. У додатковому переважному варіанті здійснення злакова рослина не є рисом або кукурудзою або будь-чим з них.
Як використовують у даному документі, термін "ячмінь" стосується будь-якого виду роду
Ногаешт, включаючи його предків, а також його потомство, одержуване за допомогою схрещування з іншими видами. Переважно, рослина являє собою рослину виду Ногаеит, яку культивують комерційно, таку як, наприклад, лінія або культивар, або сорт Ногдешт уцідаге, або яка придатна для комерційного одержання зерна.
Рослини пшениці за винаходом можна використовувати множиною способів, відмінних від використання для харчових продуктів або корму для тварин, наприклад використовувати в дослідженнях або розведенні. У вирощуваних на насіння зернових, таких як пшениця, рослини можна піддавати самосхрещуванню з одержанням рослин, гомозиготних по бажаних генах, або в гаплоїдних тканинах, таких як статеві клітини, що розвиваються, можна індукувати подвоєння набору хромосом з одержанням гомозиготної рослини.
Рослини пшениці за винаходом можна схрещувати з рослинами, які містять більш бажану генетичну основу. Бажана генетична основа може включати придатну комбінацію генів, що забезпечує врожайність при комерційному виробництві й інші характеристики, такі як агрономічні характеристики або стійкість до абіотичного стресу. Генетична основа також може включати інші змінені гени біосинтезу або модифікації крохмалю, наприклад гени інших ліній пшениці. Генетична основа може містити один або декілька трансгенів, таких як, наприклад, ген, що надає стійкість до гербіциду, такого як гліфосат.
Як використовують у даному документі, термін "зчеплені" стосується маркерного локусу і другого локусу, розташованих в хромосомі в достатній близькості так, що вони успадковуються разом більше ніж у 50 95 мейозів, наприклад, не випадково. Це визначення включає випадок, коли маркерний локус і другий локус формують частини одного гена. Крім того, це визначення включає випадок, коли маркерний локус містить поліморфізм, відповідальний за ознаку, що
Зо представляє інтерес (іншими словами маркерний локус безпосередньо "зчеплений" з фенотипом). Як використовують у даному документі, термін "генетично зчеплені" є більш вузьким, і його використовують тільки відносно випадку, коли маркерний локус і другий локус знаходяться в достатній близькості в хромосомі так, що вони успадковуються разом більше ніж у 50 95 мейозів. Таким чином, відсоток рекомбінації, спостережуваний між локусами на одне покоління (сантиморган (СсМ)), складає менше 50. У конкретних варіантах здійснення винаходу генетично зчеплені локуси можуть розташовуватися в хромосомі на відстані 45, 35, 25, 15, 10, 5, 4, 3, 2 або 1 або менше СМ. Переважно, маркери знаходяться на відстані менше 5 СМ або2 сМ і найбільш переважно на відстані приблизно 0 СМ.
Як використовують у даному документі, "інші генетичні маркери" можуть являти собою будь- які молекули, що зчеплені з бажаною ознакою злакової рослини, такої як пшениця. Такі маркери добре відомі фахівцям у даній галузі і включають молекулярні маркери, зчеплені з генами, що визначають такі ознаки, як стійкість до захворювань, врожайність, морфологія рослини, якість зерна, інші ознаки стану спокою, такі як колір зерна, вміст гіберелової кислоти в зерні, висота рослини, колір борошна тонкого помелу і т. п. Приклади таких генів являють собою гени стійкості до стеблової іржі 5г2 або 5г38, гени стійкості до жовтої іржі Хг10 або Уг17, гени стійкості до нематодів, такі як Сте1 і Сте3, алелі глютенінових локусів, що визначають пружний опір тіста, такі як алелі Ах, Вх, Ох, Ау, Ву і Бу. У конкретному відношенні до стану спокою зерна інші маркери включають ген К червоного забарвлення зерна (Ніті єї а!., 2002), а також маркери, описані Магез еї а. (2005), І і еї аї. (2004), Кай еї аї. (2001), Могі еї аї. (2005) і Ргада еї аї. (2004).
Як використовують у даному документі, термін "рослина" як іменник стосується всієї рослини, але при використанні як прикметника стосується будь-якого об'єкта, що знаходиться в рослині, одержують, походить з рослини або пов'язаний з рослиною, такого як, наприклад, органи рослин (наприклад, листи, стебла, корені, квіти), одиночні клітини (наприклад, пилок), насіння, рослинні клітини і т. п. Рослини, надані або передбачувані для застосування в практичному здійсненні даного винаходу, включають однодольні і дводольні. У переважних варіантах здійснення рослини за даним винаходом являють собою сільськогосподарські культури (наприклад, злаки і зернобобові, кукурудзу, пшеницю, картоплю, тапіоку, рис, сорго, сою, просо, маніок, ячмінь або горох) або бобові. Рослини можна вирощувати для одержання придатних у їжу коренів, бульб, листів, стебел, квітів або плодів.
Як використовують у даному документі, терміни "насіння" і "зерно" мають значення, що перекриваються. "Зерно" включає насіння, яке зібрали у рослини й в основному стосується зрілого, зібраного зерна, але також може стосуватися зерна після набухання або проростання, залежно від контексту. "Насіння" може стосуватися або зрілого зерна, до або після збирання, або незрілого насіння, що розвивається в рослинах. Як правило, вміст вологи зрілого зерна складає менше ніж приблизно 10-15 95.
Як використовують у даному документі, термін "ген" варто розглядати в його найбільш широкому розумінні, і він включає дезоксирибонуклеотидні послідовності, що містять кодуючу область білка структурного гена й містять послідовності, розташовані поруч з кодуючою областю на обох 5"- і 3'-кінцях на відстані щонайменше приблизно 2 т.п.н. на кожному кінці.
Послідовності, розташовані з 5'-кінця від кодуючої області і присутні в ІРНК, позначають як 5'- нетрансльовані послідовності. Послідовності, розташовані з 3'-кінця або нижче кодуючої області і присутні в ІРНК, позначають як 3'-нсетрансльовані послідовності. Термін "ген" включає кДНК і геномну форми гена. Геномна форма або клон гена містить кодуючу область, що може перериватися некодуючими послідовностями, називаними "інтронами" або "вставними областями", або "вставними послідовностями". Інтрони являють собою ділянки гена, транскрибовані в ядерну РНК (тяЯРНК); інтрони можуть містити регуляторні елементи, такі як енхансери. Інтрони видаляються або "сплайсуються" з ядерного або первинного транскрипту; таким чином, інтрони відсутні в транскрипті інформаційної РНК (ІРНК). ІРНК функціонує при трансляції з визначенням послідовності або порядку амінокислот у поліпептиді, що утворюється. Термін "ген" включає синтетичну або злиту молекулу, кодуючу всі або частину білків за винаходом, описуваних у даному документі, і комплементарну нуклеотидну послідовність до будь-якого з зазначених вище.
Алель являє собою варіант гена по одному генетичному локусу. Гексаплоїдна пшениця, така як Тгійісит аевзіїмит Г., містить шість наборів хромосом з організацією геному ААВВОО. Кожна хромосома містить одну копію кожного гена (один алель). Якщо обидва алелі пари хромосом є однаковими, організм є гомозиготним по цьому гену, якщо алелі є різними, організм є гетерозиготним по цьому гену. Взаємовідношення між алелями в локусі, як правило, описують як домінантні або рецесивні.
Зо Рослини пшениці за винаходом можна одержувати й ідентифікувати після мутагенезу. Це може забезпечувати рослину пшениці, яка не є трансгенною, що бажано на певних ринках, або яка не містить екзогенної молекули нуклеїнової кислоти. Як правило, мутагенезу можна піддавати предкові рослинні клітини, тканину, насіння або рослину з одержанням однієї або декількох мутацій, таких як заміни, видалення, додавання нуклеотидів і/або модифікації кодонів.
Мутагенез можна проводити хімічними або радіаційними засобами, наприклад, за допомогою обробки насіння ЕМ5 або азидом натрію (маг апа СПпапаїег, 1995) або за допомогою гамма-випромінювання, добре відомих у даній галузі. Хімічний мутагенез має тенденцію до переваги замін нуклеотидів делеціям. Як ефективний спосіб мутаційної селекції з одержанням нових сортів рослин відоме опромінення пучком важких іонів (НІВ), див., наприклад, Науазбнпі еї аї., 2007, і Ка7ата еї аї, 2008. Опромінення пучком іонів для біологічної дії, що визначає ступінь ушкодження ДНК і розмір делецій ДНК, включає два фізичних фактори: дозу (Гр) і ЕТ (лінійне перенесення енергії, кеВ/мкм), і їх можна регулювати залежно від бажаного ступеня мутагенезу.
Біологічні засоби, придатні для одержання сайт-специфічних мутантів, включають ферменти, які вносять дволанцюжкові розриви в ДНК, що стимулюють ендогенні механізми репарації. Вони включають ендонуклеази, нуклеази з цинковими пальцями, ефектори ТАЇ, транспозази і сайт-специфічні рекомбінази. Нуклеази з цинковими пальцями (2ЕМ), наприклад, полегшують сайт-специфічне розщеплення в геномі, дозволяючи ендогенним або іншим механізмам репарації, що зрощують кінці, здійснювати видалення або вставки для репарації пропуску. Технологія нуклеаз з цинковими пальцями розглянута в Ге Ргомобві еї аї!., 2009, також див. Юигаї еї аї., 2005 і Пи єї аї., 2010.
Виділення мутантів можна проводити за допомогою скринінгу рослин або насіння, що мутували. Наприклад, популяцію пшениці, що мутувала, можна піддавати скринінгу безпосередньо на бажаний генотип або опосередковано за допомогою скринінгу фенотипу, такого як висота рослини. Скринінг безпосередньо на генотип переважно включає аналіз присутності мутацій, що можна спостерігати в аналізах ПЛР по відсутності маркерів, як і очікується, коли деякі гени піддають видаленню, або в аналізах на основі гетеродуплексів, як у
Тіййпу, або за допомогою глибокого секвенування. Скринінг фенотипу може включати скринінг проростання, як описано в прикладах. З використанням цієї методології скринінгу на посилений ріст, що забезпечує збільшену висоту рослини, можна піддавати великі групи насіння, що мутувало.
Потім ідентифіковані мутації можна вводити в бажану генетичну основу за допомогою схрещування мутанта з рослиною з бажаною генетичною основою і проведення придатної кількості зворотних схрещувань для видалення вихідної небажаної батьківської основи.
У контексті даної заявки "індукована мутація" або "внесена мутація" являє собою штучно індуковану генетичну варіацію, що може являти собою результат хімічної або радіаційної обробки предкового насіння або рослини. Похідні з вставками нуклеотидів включають 5'- і 3'- кінцеві злиття, а також вставки одного або декількох нуклеотидів усередину послідовності.
Варіанти з вставками в нуклеотидну послідовність являють собою варіанти, у яких у ділянку нуклеотидної послідовності, або у попередньо визначену ділянку, як це можливо в способах з нуклеазами з цинковими пальцями (2ЕМ), ефекторами ТАЇ або способах гомологічної рекомбінації або за допомогою випадкової вставки з придатним скринінгом одержаного продукту, введені один або декілька нуклеотидів. Варіанти з делеціями характеризуються видаленням одного або декількох нуклеотидів з послідовності. Переважно, мутантний ген містить тільки одну вставку послідовності нуклеотидів відносно гена дикого типу й одну або декілька мутацій замін. Варіанти з замінами нуклеотидів являють собою варіанти, у яких в послідовності видалений щонайменше один нуклеотид, а на його місце вставлений інший нуклеотид. Переважна кількість нуклеотидів, зачеплених замінами в мутантному гені відносно гена дикого типу, складає максимум десять нуклеотидів, більш переважно максимум 9, 8, 7, 6, 5, 4, З або 2, або, найбільш переважно, тільки один нуклеотид.
Як використовують у даному документі, термін "мутація" не включає мовчазні заміни нуклеотидів, що не впливають на активність гена, і, таким чином, включає тільки зміни в послідовності гена, що впливають на активність гена. Термін "поліморфізм" стосується будь- якої зміни нуклеотидної послідовності, включаючи такі мовчазні заміни нуклеотидів. Способи скринінгу можуть спочатку включати скринінг на поліморфізми, а потім на мутації в групі поліморфних варіантів.
Відбір за допомогою маркера являє собою добре відомий спосіб відбору гетерозиготних рослин, необхідний при зворотному схрещуванні з рекурентним батьком у класичній селекційній
Зо програмі. Популяція рослин у кожному поколінні зворотного схрещування є гетерозиготною по гену, що представляє інтерес, в нормі присутньому в популяції після зворотного схрещування у відношенні 1:1, і молекулярний маркер можна використовувати для розрізнення двох алелів гена. Виділяючи ДНК, наприклад з молодих пагонів, і тестуючи введення бажаної ознаки з використанням специфічного маркера, проводять ранню селекцію рослин для подальшого зворотного схрещування, при цьому концентруючи енергію і ресурси на меншій кількості рослин. Для додаткового прискорення програми зворотного схрещування можна виділяти зародки з незрілого насіння (25 діб після цвітіння) і вирощувати на живильних середовищах у стерильних умовах, а не доводити до повної зрілості насіння.
У способах за даним винаходом можна використовувати будь-який молекулярно-біологічний спосіб, відомий у даній галузі що здатний детектувати алелі КП-В1. Такі способи, як необмежувальні приклади, включають використання ампліфікації нуклеїнової кислоти, секвенування нуклеїнової кислоти, гібридизації нуклеїнової кислоти з придатним чином міченими зондами, аналіз конформації одиночних ланцюгів (55СА), електрофорез у градієнті денатуруючого гелю (ОССЕ), аналіз гетеродуплексів (НЕТ), аналіз хімічного розщеплення (ССМ), каталітичне розщеплення нуклеїнової кислоти або їх сполучення (див., наприклад,
І етієих, 2000; І апагідде еї а!., 2001). "Полімеразна ланцюгова реакція" ("ПЛР") являє собою реакцію, у якій одержують ідентичні копії полінуклеотиду-мішені з використанням "пари праймерів" або "набору праймерів", що складається з "прямого" і "зворотного" праймерів, і каталізатора полімеризації, такого як ДНК- полімераза, і, як правило, термостабільного полімеразного ферменту. Способи ПЛР відомі в даній галузі і розглянуті, наприклад, у ""СК" (Ед. М. МеоРпегзоп апа 5.65 Моїег (2000), ВІО5 зЗсіепійіс Рибіїзпетв ЦЯ, Охгога).
Праймер являє собою олігонуклеотидну послідовність, що здатна до гібридизації специфічним для послідовностей способом з послідовністю-мішенню і добудовується при ПЛР.
Амплікони або продукти ПЛР, або фрагменти ПЛР, або продукти ампліфікації являють собою продукти добудування, що містять праймер і знову синтезовані копії послідовностей-мішеней.
Системи мультиплексної ПЛР містять декілька наборів праймерів, що приводять до одночасного одержання більше одного амплікону. Праймери можуть повністю відповідати послідовності-мішені або вони можуть містити внутрішні невідповідні основи, що можуть бо приводити до внесення в конкретні послідовності-мішені рестрикційних ферментів або ділянок розпізнавання/розщеплення каталітичних нуклеїнових кислот. Також праймери можуть містити додаткові послідовності і/або містити модифіковані або мічені нуклеотиди для полегшення захоплення або детекції ампліконів. Повторювані цикли теплової денатурації ДНК, відпалу праймерів з комплементарними ним послідовностями і добудування відпалених праймерів полімеразою приводять до експонентної ампліфікації послідовності-мішені. Терміни мішень або послідовність-мішень, або матриця стосуються ампліфікованих послідовностей нуклеїнових ее
Як використовують у даному документі, терміни "трансгенна рослина" і "трансгенна рослина пшениці" стосуються рослини, що містить генну конструкцію ("трансген"), відсутню у рослини дикого типу того ж виду, сорту або культивару. Таким чином, трансгенні рослини (трансформовані рослини) містять генетичний матеріал, який вони не містили до трансформації. Як зазначено в даному документі, "трансген' має звичайне для галузі біотехнології значення і стосується генетичної послідовності, яка одержана або змінена за допомогою технології рекомбінантних ДНК або РНК і яка введена в рослинну клітину-предка, де цю клітину використовують для одержання нової рослини. Трансген може містити генетичні послідовності, які одержуються або походять з клітини рослини, або з клітини іншої рослини, або з нерослинного джерела, або із синтетичної послідовності. Як правило, трансген введений у рослину за допомогою маніпуляцій людини, наприклад, таких як трансформація, але можна використовувати будь-який спосіб, відомий фахівцю в даній галузі. Як правило, генетичний матеріал стабільно інтегрований у геном рослини. Генетичний матеріал, що вноситься, може містити послідовності, що зустрічаються у того ж виду в природі, але в переставленому порядку або в іншому розташуванні елементів, наприклад антисмислова послідовність або послідовність, кодуюча дволанцюжкову РНК або штучний попередник мікроРНК. Рослини, що містять такі послідовності, включені в даному документі в "трансгенні рослини". Як визначено в даному документі, трансгенні рослини включають усе потомство вихідної трансформованої і регенерованої рослини (рослина То), яка генетично модифікована рекомбінантними способами, де потомство містить трансген. Таке потомство можна одержувати за допомогою самозапліднення первинної трансгенної рослини або за допомогою схрещування такої рослини з іншою рослиною того ж виду. В одному з варіантів здійснення трансгенні рослини є
Зо гомозиготними по кожному і будь-якому гену (трансгену), що вноситься, так, що їх потомство не сегрегує по бажаному фенотипу. Частини трансгенної рослини включають усі частини і клітини зазначеної рослини, що містять трансген, такі як, наприклад, насіння, культивовані тканини, калюс і протопласти. "Нетрансгенна рослина", переважно нетрансгенна рослина пшениці, являє собою рослину, що генетично не модифікована за допомогою введення генетичного матеріалу за допомогою технології рекомбінантних ДНК.
Як використовують у даному документі, термін "відповідна нетрансгенна рослина" стосується рослини, що є такою ж або подібною по більшості характеристик, переважно ізогенною або майже ізогенною відносно трансгенної рослини, але не містить трансген, що представляє інтерес. Переважно, відповідна нетрансгенна рослина належить до того ж культивару або сорту, що і предок трансгенної рослини, що представляє інтерес, або сестринської лінії рослин, у якої відсутня конструкція, часто називаної "сегрегант", або являє собою рослину того ж культивару або сорту, трансформовану конструкцією "порожнього вектора", і може являти собою нетрансгенну рослину. Як використовують у даному документі, "дикий тип" стосується клітини, тканини або рослини, які не модифіковані за винаходом.
Клітини, тканини або рослини дикого типу відомі в даній галузі і їх можна використовувати як контролі для порівняння рівнів експресії екзогенних нуклеїнових кислот або ступеня і характеру модифікації ознаки з клітинами, тканинами або рослинами, модифікованими, як описано в даному документі. Як використовують у даному документі, "зерно пшениці дикого типу" означає відповідне немутоване, нетрансгенне зерно пшениці. Як використовують у даному документі, конкретне зерно пшениці дикого типу, як необмежувальні приклади, включає Зипвіаге.
Для визначення присутності трансгена в трансформованій рослині можна використовувати будь-який з декількох способів. Наприклад, можна використовувати полімеразну ланцюгову реакцію (ПЛР) для ампліфікації послідовностей, що унікальні у трансформованої рослини, з детекцією продуктів ампліфікації за допомогою електрофорезу в гелі або іншими способами.
ДНК можна виділяти з рослин загальноприйнятими способами, а реакцію ПЛР проводити з використанням праймерів, за допомогою яких можна розрізняти трансформовані і, нетрансформовані рослини. Альтернативний спосіб підтвердження позитивного трансформанта являє собою гібридизацію способом саузерн-блотингу, добре відому в даній галузі.
Трансформовані рослини пшениці також можна ідентифікувати, тобто відрізняти від бо нетрансформованих рослин пшениці або рослин пшениці дикого типу, по їх фенотипу,
наприклад, забезпечуваному присутністю гена селективного маркера, або за допомогою імунологічних аналізів, за допомогою яких детектують або кількісно визначають експресію ферменту, кодованого трансгеном, або по будь-якому іншому фенотипу забезпечуваному трансгеном.
Рослини пшениці за даним винаходом можна вирощувати або збирати на зерно переважно для застосування як харчових продуктів для споживання людиною або як корму для тварин, або для ферментації або для одержання промислової сировини, у тому числі такого, як одержання етанолу. Альтернативно, рослини пшениці можна використовувати безпосередньо як корм.
Рослина за даним винаходом переважно придатна для виробництва харчових продуктів і, зокрема, для комерційного виробництва харчових продуктів. Таке виробництво харчових продуктів може включати одержання борошна тонкого помелу, тіста, крупи або інших продуктів із зерна, що можуть бути інгредієнтами при комерційному виробництві харчових продуктів.
Винахід також стосується борошна тонкого помелу, борошна грубого помелу або інших продуктів, одержуваних із зерна. Вони можуть бути необробленими або обробленими, наприклад, за допомогою фракціонування або відбілювання.
Терміни "поліпептид" і "білок' у даному документі, як правило, використовують взаємозамінно. Як використовують у даному документі, терміни "білки" і "поліпептиди" також включають варіанти, мутанти, модифікації і/або похідні поліпептидів за винаходом, як описано в даному документі Як використовують у даному документі, "значною мірою очищений поліпептид" стосується поліпептиду, що відділений від ліпідів, нуклеїнових кислот, інших пептидів і інших молекул, з якими він асоційований у його природному стані. Переважно, значною мірою очищений поліпептид щонайменше на 6095 очищений, більш переважно щонайменше на 75 95 очищений і більш переважно щонайменше на 90 95 очищений від інших компонентів, з якими він асоційований у природі. Під "рекомбінантним поліпептидом" мають на увазі поліпептид, одержуваний рекомбінантними способами, тобто за допомогою експресії рекомбінантного полінуклеотиду в клітині, переважно в клітині рослини і більш переважно в клітині пшениці. до ідентичності поліпептиду з іншим поліпептидом можна визначати за допомогою аналізу
САР (Нідлмана і Вунша, 1970) (програма СО) зі штрафом за створення пропуску - 5 і
Зо штрафом за продовження пропуску - 0,3. Довжина аналізованої послідовності складає щонайменше 250 амінокислот, і аналіз (АР вирівнює дві послідовності на протязі області щонайменше з 250 амінокислот. Найбільш переважно два аналізованих поліпептиди вирівнюють на протязі їх повнорозмірної амінокислотної послідовності.
Застосовно до визначуваного поліпептиду варто розуміти, що показники 95 ідентичності, більші, ніж 95 ідентичності, надані вище, включають переважні варіанти здійснення. Таким чином, коли застосовно, з урахуванням мінімальних показників 9о ідентичності, поліпептид переважно містить амінокислотну послідовність, яка щонайменше на 75 95, більш переважно щонайменше на 80 95, більш переважно щонайменше на 85 95, більш переважно щонайменше на 90 95, більш переважно щонайменше на 91 95, більш переважно щонайменше на 92 95, більш переважно щонайменше на 93 95, більш переважно щонайменше на 94 95, більш переважно щонайменше на 95 95, більш переважно щонайменше на 96 95, більш переважно щонайменше на 97 95, більш переважно щонайменше на 98 95, більш переважно щонайменше на 99 95, більш переважно щонайменше на 99,1 95, більш переважно щонайменше на 99,2 95, більш переважно щонайменше на 99,395, більш переважно щонайменше на 99,495, більш переважно щонайменше на 99,595, більш переважно щонайменше на 99,695, більш переважно щонайменше на 99,7 95, більш переважно щонайменше на 99,8 95 і навіть більш переважно щонайменше на 99,9 95 ідентична відповідній зазначеній 5ЕО І МО.
Делеції в амінокислотних послідовностях, як правило, знаходяться в межах приблизно від 1 до 15 залишків, більш переважно приблизно від 1 до 10 залишків і, як правило, приблизно від 1 до 5 суміжних залишків. У мутантів із замінами в молекулі поліпептиду видалений щонайменше один амінокислотний залишок і на його місце вставлений інший залишок.
Під "виділеним" мають на увазі речовину, яка значною мірою або по суті очищена від компонентів, що у нормі знаходяться разом з нею у її природному стані. Як використовують у даному документі, "виділений полінуклеотид" або "виділена молекула нуклеїнової кислоти" означає полінуклеотид, який щонайменше частково відділений, переважно значною мірою або по суті очищений від полінуклеотидних послідовностей того ж типу, з якими він асоційований або зв'язаний у його природному стані. Наприклад, "виділений полінуклеотид" включає полінуклеотид, який очищений або відділений від послідовностей, що фланкують його в природному стані, наприклад фрагмент ДНК, що відділений від послідовностей, які у нормі бо граничать із фрагментом. Переважно, виділений полінуклеотид також щонайменше на 90 95 очищений від інших компонентів, таких як білки, вуглеводи, ліпіди і т. д. Як використовують у даному документі, термін "рекомбінантний полінуклеотид" стосується полінуклеотиду, одержуваного іп міго за допомогою маніпуляцій з нуклеїновими кислотами у формі, що у нормі не зустрічається в природі. Наприклад, рекомбінантний полінуклеотид може знаходитися у формі експресуючого вектора. Як правило, такі експресуючі вектори включають регулюючі транскрипцію і трансляцію нуклеїнові кислоти, функціонально зв'язані з нуклеотидною послідовністю, яку необхідно транскрибувати в клітині.
Даний винахід стосується застосування олігонуклеотидів, які можна використовувати як "зонди" або "праймери". Як використовують у даному документі, "олігонуклеотиди" являють собою полінуклеотиди довжиною до 50 нуклеотидів. Вони можуть являти собою РНК, ДНК або їх комбінації або похідні Як правило, олігонуклеотиди являють собою відносно короткі одноланцюжкові молекули довжиною від 10 до 30 нуклеотидів, як правило 15-25 нуклеотидів, які як правило, містять 10-30 або 15-25 нуклеотидів, ідентичних або комплементарних послідовності, що представляє інтерес. Коли його використовують як зонд або як праймер в реакції ампліфікації, мінімальним розміром такого олігонуклеотиду є розмір, необхідний для формування стабільного гібриду між олігонуклеотидом і комплементарною послідовністю в молекулі нуклеїнової кислоти-мішені. Переважно, довжина олігонуклеотидів складає щонайменше 15 нуклеотидів, більш переважно щонайменше 18 нуклеотидів, більш переважно щонайменше 19 нуклеотидів, більш переважно щонайменше 20 нуклеотидів, навіть більш переважно щонайменше 25 нуклеотидів. Полінуклеотиди, використовувані як зонд, як правило кон'югують з детектованою міткою, такою як радіоактивний ізотоп, фермент, біотин, флуоресцентна молекула або хемілюмінесцентна молекула.
Терміни "варіант полінуклеотиду" і "варіант" і т. п. стосуються полінуклеотидів, що демонструють значну ідентичність послідовності з вихідною полінуклеотидною послідовністю і здатні функціонувати аналогічним чином з такою же активністю, що і вихідна послідовність. Ці терміни також включають полінуклеотиди, які відрізняються від вихідного полінуклеотиду додаванням, видаленням або заміною щонайменше одного нуклеотиду або які при порівнянні з природними молекулами містять одну або декілька мутацій. Таким чином, терміни "варіант полінуклеотиду" і "варіант" включають полінуклеотиди, у яких додані або видалені, або заміщені іншими нуклеотидами один або декілька нуклеотидів. У цьому відношенні, у даній галузі добре відомо, що з вихідним полінуклеотидом можна провести визначені зміни, включаючи мутації, додавання, делеції і заміни, при цьому змінений полінуклеотид збереже біологічну функцію або активність вихідного полінуклеотиду. Таким чином, ці терміни включають полінуклеотиди, які кодують поліпептиди, що демонструють ферментативну або іншу регулюючу активність, або полінуклеотиди, здатні служити як селективні зонди або інші засоби, що гібридизуються.
Терміни "варіант полінуклеотиду" і "варіант" також включають природні алельні варіанти.
Мутанти можуть бути природними (таким чином виділеними з природного джерела) або синтетичними (наприклад, за допомогою проведення сайт-специфічного мутагенезу у нуклеїнової кислоти). Переважно, довжина варіанта полінуклеотиду за винаходом, кодуючого поліпептид з ферментативною активністю, складає більше 400, більш переважно більше 500, більш переважно більше 600, більш переважно більше 700, більш переважно більше 800, більш переважно більше 900 і навіть більш переважно більше 1000 нуклеотидів, аж до повнорозмірного гена.
Варіант олігонуклеотиду за винаходом включає молекули різних розмірів, що здатні до гібридизації, наприклад, з геномом пшениці в положенні, близькому до положення молекули специфічного олігонуклеотиду, визначеного в даному документі. Наприклад, варіанти можуть містити додаткові нуклеотиди (наприклад, 1, 2, 3, 4 або більше) або менше нуклеотидів, за умови, що вони усе ще гібридизуються з областю-мішенню. Крім того, можна замінити декілька нуклеотидів без впливу на здатність олігонуклеотиду до гібридизації з областю-мішенню. Крім того, можна легко сконструювати варіанти, що гібридизуються поруч (як необмежувальні приклади, у межах 50 нуклеотидів) з областю геному рослини, де гібридизуються специфічні олігонуклеотиди, визначені в даному документі.
Під "відповідає" або "відповідний" відносно полінуклеотидів або поліпептидів мають на увазі полінуклеотид, який (а) містить нуклеотидну послідовність, що по суті ідентична або комплементарна всій або частині вихідної полінуклеотидної послідовності, або (6) кодує амінокислотну послідовність, ідентичну амінокислотній послідовність у пептиді або білку. Ця фраза також охоплює пептид або поліпептид, що містить амінокислотну послідовність, яка по суті ідентична послідовності амінокислот у вихідному пептиді або білку. Терміни, використовувані для опису відношення послідовностей у двох або більше полінуклеотидів або 60 поліпептидів, включають "вихідну послідовність", "вікно порівняння", "ідентичність послідовностей", "відсоток ідентичності послідовностей", "ідентичність по суті" і "ідентичність" і визначені відносно визначеної мінімальної кількості нуклеотидів або амінокислотних залишків або переважно на всій довжині. Терміни "ідентичність послідовностей" і "іюидентичність" у даному документі використовують взаємозамінно для позначення тих випадків, коли послідовності у вікні порівняння ідентичні понуклеотидно або поамінокислотно. Таким чином, "відсоток ідентичності послідовностей" розраховують, порівнюючи дві оптимально вирівняні послідовності у вікні порівняння, визначаючи кількість положень, у яких в обох послідовностях знаходяться ідентичні нуклеїнові основи (наприклад, А, Т, С, б, У) або ідентичні амінокислотні залишки (наприклад, Аа, Рго, бег, ТНг, Спу, Маї, І ей, Пе, Рне, Туг, Тр, Гуз, Ага, Ні, Азр, Спи, Авп, Сіп, Сув і Меї)), з одержанням кількості співпадаючих положень, ділячи кількість співпадаючих положень на загальну кількість положень у вікні порівняння (тобто на розмір вікна) і множачи результат на 100 з одержанням відсотка ідентичності послідовностей. до ідентичності полінуклеотиду можна визначати за допомогою аналізу САР (Нідлмана і
Вунша, 1970) (програма ССС) зі штрафом за створення пропуску - 5 і штрафом за продовження пропуску - 0,3. Якщо не зазначено інакше, довжина аналізованої послідовності складає щонайменше 45 нуклеотидів, і в аналізі ЗАР вирівнюють дві послідовності в області щонайменше 45 нуклеотидів. Переважно, довжина аналізованої послідовності складає щонайменше 150 нуклеотидів, в аналізі (АР вирівнюють дві послідовності в області щонайменше 150 нуклеотидів. Більш переважно, довжина аналізованої послідовності складає щонайменше 300 нуклеотидів, і в аналізі (АР вирівнюють дві послідовності в області щонайменше 300 нуклеотидів або щонайменше 400, 500 або 600 нуклеотидів у кожному випадку. Також можна навести посилання на сімейство програм ВГАЗ5Т, як, наприклад, описано в Айбспиці еї аіІ., 1997. Докладне обговорення аналізу послідовностей можна знайти в розділі 19.3 Аизибеї єї аї!., 1994-1998, глава 15.
Нуклеотидні або амінокислотні послідовності позначають як "значною мірою подібні", коли ідентичність таких послідовностей складає щонайменше приблизно 98 95, більш конкретно щонайменше приблизно 98,5 95, дуже конкретно приблизно 99 95, особливо приблизно 99,5 95, більш конкретно приблизно 100 95, дуже конкретно вони є ідентичними. Зрозуміло, що, коли послідовності РНК описані як значною мірою подібні або такі, що мають визначену ідентичність послідовності з послідовностями ДНК, тимін (Т) у послідовності ДНК вважають еквівалентним урацилу ()) у послідовності РНК.
Застосовно до визначуваних полінуклеотидів варто розуміти, що показники 95 ідентичності, більші, ніж 95 ідентичності, надані вище, включають переважні варіанти здійснення. Таким чином, коли застосовно, з урахуванням мінімальних показників 95 ідентичності, полінуклеотид переважно містить полінуклеотидну послідовність, яка щонайменше на 75 95, більш переважно щонайменше на 80 95, більш переважно щонайменше на 85 95, більш переважно щонайменше на 90 95, більш переважно щонайменше на 91 95, більш переважно щонайменше на 92 95, більш переважно щонайменше на 93 95, більш переважно щонайменше на 94 95, більш переважно щонайменше на 95 95, більш переважно щонайменше на 96 95, більш переважно щонайменше на 97 95, більш переважно щонайменше на 98 95, більш переважно щонайменше на 99 95, більш переважно щонайменше на 99,1 95, більш переважно щонайменше на 99,2 95, більш переважно щонайменше на 99,395, більш переважно щонайменше на 99,4 95, більш переважно щонайменше на 99,595, більш переважно щонайменше на 99,695, більш переважно щонайменше на 99,7 95, більш переважно щонайменше на 99,8 95 і навіть більш переважно щонайменше на 99,9 95 ідентична відповідній зазначеній 5ЕО ІО МО.
У деяких варіантах здійснення даний винахід стосується жорсткості умов гібридизації для визначення ступеня комплементарності двох полінуклеотидів. Як використовують у даному документі, "жорсткість" стосується температурних умов і умов іонної сили і присутності або відсутності визначених органічних розчинників протягом гібридизації. Чим вище жорсткість, тим вище ступінь комплементарності між нуклеотидною послідовністю-мішенню і міченою полінуклеотидною послідовністю. "Жорсткі умови" стосуються температури й іонних умов, у яких гібридизуються тільки нуклеотидні послідовності з високою частотою комплементарних основ. Як використовують у даному документі, термін "гібридизуються в умовах з низькою жорсткістю, середньою жорсткістю, високою жорсткістю або дуже високою жорсткістю" описує умови гібридизації і відмивання. Посібники по проведенню реакцій гібридизації можна знайти в
Ситепі Ргоїосої5 іп Моїесшіаг Віоіоду, Чопп УМійеу б Бопв5, М.У. (1989), 6.3.1-6.3.6, включений у даний документ як посилання. Конкретні умови гібридизації, що вказуються в даному документі, є наступними: 1) умови гібридизації з низькою жорсткістю в бх хлориді натрію/цитраті натрію (5552) приблизно при 45 "С з наступними двома відмиваннями а 0,2х 55С, 0,1 956 505 при 50- бо 55"С; 2) умови гібридизації із середньою жорсткістю в бх З5С приблизно при 45"С з наступними одним або декількома відмиваннями в 0,2х 55С, 0,195 505 при 60 "С; 3) умови гібридизації з високою жорсткістю в бх 55С приблизно при 45 "С з наступними одним або декількома відмиваннями в 0,2х 55С, 0,195 505 при 65 "С; і 4) умови гібридизації з дуже високою жорсткістю являють собою 0,5ІМ фосфат натрію, 7 96 505 при 65 "С з наступними одним або декількома відмиваннями в 0,2х З5С, 1 95 505 при 65 "С.
Як використовують у даному документі, "химерний ген" або "генетична конструкція" стосується будь-якого гена, що не є природним геном у його природному положенні, тобто з ним проводили штучні маніпуляції включаючи химерний ген або генетичну конструкцію, що інтегровані в геном пшениці. Як правило, химерний ген або генетична конструкція містять регуляторні і транскрибовані або кодуючі білок послідовності, які разом у природі не зустрічаються. Таким чином, химерний ген або генетична конструкція може містити регуляторні послідовності і кодуючі послідовності, що походять з різних джерел, або регуляторні послідовності і кодуючі послідовності, що походять з одного і того ж джерела, але організовані відмінно від того, як вони існують у природі. Термін "ендогенний" застосовують у даному документі для позначення речовини, яку у нормі продукує немодифікована рослина на тій же стадії розвитку, як досліджувана рослина, переважно рослина пшениці. "Ендогенний ген" стосується природного гена в його природному положенні в геномі організму, переважно в рослині пшениці. Як використовують у даному документі, "рекомбінантна молекула нуклеїнової кислоти" стосується молекули нуклеїнової кислоти, що сконструйована або модифікована за допомогою технології рекомбінантних ДНК. Терміни "чужорідний полінуклеотид" або "екзогенний полінуклеотид", або "гетерологічний полінуклеотид" і т. п. стосуються будь-якої нуклеїнової кислоти, яку вводять у геном клітини, переважно геном пшениці, за допомогою експериментальних маніпуляцій, але яка в природі не зустрічається в цій клітині. Вони включають модифіковані форми генних послідовностей, що знаходяться в цій клітині, за умови, що ген, що вводиться, відносно природного гена містить визначену модифікацію, наприклад внесену мутацію або присутність гена селективного маркера. Чужорідні або екзогенні гени можуть являти собою гени, що існують у природі, які вводять у неприродний організм, природні гени, які вводяться в нове положення у природного хазяїна, або химерні гени або генетичні конструкції. "Трансген" являє собою ген, який вводять у геном способом трансформації. Термін
Зо "генетично модифікований" включає введення генів у клітини, мутацію генів у клітинах і зміну або модуляцію регуляції гена в клітинах або організмах, у яких проводять ці дії, або їх потомстві. "Функціонально зв'язаний" з транскрибованим полінуклеотидом промотор або енхансерний елемент означає поміщення транскрибованого полінуклеотиду (наприклад, кодуючого білок полінуклеотиду або іншого транскрипту) під регуляторний контроль промотору, який потім контролює транскрипцію цього полінуклеотиду. При конструюванні комбінацій гетерологічний промотор/структурний ген, як правило, переважно поміщати промотор або його варіант на відстані від ділянки старту транскрипції транскрибованого полінуклеотиду, яка є приблизно такою ж, як відстань між цим промотором і геном, який він контролює в його природних умовах; тобто геном, з якого одержаний промотор. Як відомо в даній галузі, проводити визначену зміну цієї відстані без втрати функції.
Як використовують у даному документі відносно злакових рослин, термін "проростання" стосується появи колеоризи з насінної оболонки після набухання. "Частка проростання" насіння стосується відсотка насіння у популяції, що проростає за визначений період часу, наприклад до 21 доби, або в період від 1 до 10 діб після початку набухання. Для визначення відсотка проростання залежно від часу популяцію насіння можна оцінювати кожну добу протягом декількох діб. Визначені аспекти винаходу стосуються зміни/модуляції частки проростання насіння. Ці зміна/модуляція можуть бути транзиторними протягом життя насіння. Наприклад, після збирання насіння трансгенної рослини за винаходом може мати змінену частку проростання при порівнянні з насінням відповідної нетрансгенної рослини після збирання, однак після шести місяців зберігання в елеваторі насіння тієї ж трансгенної рослини за винаходом може мати таку ж частку проростання при порівнянні з насінням відповідної нетрансгенної рослини після шести місяців зберігання в елеваторі, або навпаки. Іншими словами, у той самий момент протягом життя насіння воно має змінену частку проростання при порівнянні з придатним контролем (нетрансгенним або дикого типу і т. д.), що піддавався впливу тих же умов.
Як використовують у даному документі, термін "який знаходиться в стані спокою" стосується нездатності життєздатного, інтактного насіння рослини проростати в конкретних придатних умовах, зокрема відносно температури і присутності вологи. Стан спокою являє собою кількісну бо ознаку. Стосовно ячменю і пшениці, насіння рослини вважають спочиваючим, якщо після початку набухання через 7 діб при 20 "С проростає менше 90 95 життєздатного, інтактного насіння. Життєздатне насіння являє собою насіння, яке здатне проростати після порушення стану спокою, наприклад після значного періоду (тижні або місяці) зберігання при кімнатній температурі або теплової обробки, добре відомих у даній галузі.
Як використовують у даному документі, термін "не знаходиться в стані спокою" стосується здатності насіння рослини проростати в конкретних придатних умовах. Стосовно ячменю і пшениці, насіння рослини вважають таким, що не знаходиться в стані спокою, якщо після початку набухання через 7 діб при 20 С проростає щонайменше 9095 життєздатного, інтактного насіння.
Як використовують у даному документі, термін "ампліфікація нуклеїнової кислоти" стосується будь-якого способу іп міго для збільшення кількості копій молекули нуклеїнової кислоти з використанням ДНК-полімерази. Ампліфікація нуклеїнової кислоти приводить до вбудовування нуклеотидів у молекулу ДНК або праймер, таким чином утворюючи нову молекулу ДНК, комплементарну матричній ДНК. Знову утворену молекулу ДНК можна використовувати як матрицю для синтезу додаткових молекул ДНК.
Даний винахід стосується одержання різних трансгенних рослин. Як необмежувальні приклади, вони включають рослини, що несуть одну або декілька бажаних ознак, демонстрованих рослинами пшениці за даним винаходом.
Конструкції нуклеїнових кислот, придатні для одержання зазначених вище трансгенних рослин, можна легко одержувати стандартними способами. Для забезпечення відповідної експресії гена, кодуючого ІРНК, що представляє інтерес, конструкція нуклеїнової кислоти, як правило, містить один або декілька регуляторних елементів, таких як промотори, енхансери, а також послідовності термінації транскрипції або поліаденілювання. Такі елементи добре відомі в даній галузі. Область ініціації транскрипції, що містить регуляторний елемент(и), може забезпечувати регульовану або конститутивну експресію в рослині. Регуляторні елементи можна вибирати, наприклад, зі специфічних для насіння промоторів або промоторів, не специфічних для клітин насіння (таких як промотор убіквітину або промотор Самму355 або посилений промотор 355). Приклади специфічних для насіння промоторів, придатних за даним винаходом, як необмежувальні приклади, включають промотор низькомолекулярного глютеніну
Зо пшениці (Соїої єї аї., 1987), промотор експресії а-амілази в насінні пшениці (5(егТапом еї аї., 1991) і промотор гордеїну (Вгапаї еї аїІ., 1985). Промотори можуть регулювати такі фактори, як температура, світло або стрес. Як правило, регуляторні елементи знаходяться з 5'-кінця генної послідовності, що підлягає експресії. Також конструкція може містити інші елементи, що підсилюють транскрипцію, такі як області поліаденілювання поз 3' або ос5 3, або термінатори транскрипції.
Як правило, конструкція нуклеїнової кислоти містить селективний маркер. Селективні маркери допомагають в ідентифікації і скринінгу рослин або клітин, що трансформовані екзогенною молекулою нуклеїнової кислоти. Ген селективного маркера може забезпечувати клітинам пшениці стійкість до антибіотика або гербіциду або забезпечувати утилізацію таких субстратів як маноза. Селективний маркер переважно надає клітинам пшениці стійкість до гігроміцину.
Переважно, конструкція нуклеїнової кислоти стабільно вбудована в геном рослини. Таким чином, нуклеїнова кислота містить відповідні елементи, що забезпечують вбудовування молекули в геном, або конструкцію поміщають у відповідний вектор, що може вбудовуватися в хромосому клітини рослини.
Один з варіантів здійснення даного винаходу стосується рекомбінантного вектора, що містить щонайменше одну полінуклеотидну молекулу за даним винаходом, вбудовану у будь- який вектор, здатний до доставки молекули нуклеїнової кислоти в клітину-хазяїна. Такий вектор містить гетерологічні послідовності нуклеїнових кислот, що являють собою послідовності нуклеїнових кислот, які у природі не граничать з молекулами нуклеїнової кислоти за даним винаходом і які переважно походять з видів, відмінних від видів, з яких походить молекула(и) нуклеїнової кислоти. Вектор може являти собою РНК або ДНК, бути прокаріотичним або еукаріотичним, і, як правило, він являє собою вірус або плазміду.
Інший варіант здійснення даного винаходу стосується рекомбінантної клітини, що включає клітину-хазяїна, трансформовану однією або декількома рекомбінантними молекулами за даним винаходом. Трансформацію молекули нуклеїнової кислоти в клітину можна проводити будь-яким способом, яким молекулу нуклеїнової кислоти можна ввести в клітину. Способи трансформації, як необмежувальні приклади, включають трансфекцію, електропорацію, мікроін'єкцію, ліпофекцію, адсорбцію і злиття протопластів. Рекомбінантна клітина може 60 залишатися одноклітинною або може розвиватися в тканину, орган або багатоклітинний організм. Трансформовані молекули нуклеїнової кислоти за даним винаходом можуть залишатися позахромосомними або можуть інтегруватися в одну або декілька ділянок хромосоми трансформованої (тобто рекомбінантної) клітини таким чином, що зберігається їх здатність до експресії. Переважно клітини-хазяїни являють собою рослинні клітини, більш переважно клітини злакової рослини, більш переважно клітини ячменю або пшениці і навіть більш переважно клітини пшениці.
Переважно, трансгенна рослина являє собою злакову рослину. Приклади злакових рослин, як необмежувальні приклади, включають пшеницю, ячмінь, сорго, овес і жито. Більш переважно, злакова рослина являє собою пшеницю або ячмінь. У додатковому переважному варіанті здійснення злакова рослина не є рисом.
Трансгенні рослини, як визначено в контексті даного винаходу, включають рослини і їх потомство, що генетично модифіковані рекомбінантними способами. Як правило, це модулює продукцію в бажаних рослині або органі рослини щонайменше одного поліпептиду, визначеного в даному документі. Частини трансгенної рослини включають усі частини і клітини зазначеної рослини, такі як, наприклад, культивовані тканини, калюс і протопласти. Трансформовані рослини містять генетичний матеріал, який вони не містили до трансформації. Генетичний матеріал переважно стабільно інтегрований у геном рослини. Внесений генетичний матеріал може містити послідовності, що у природі знаходяться в тому ж вигляді, але в переставленому порядку або в іншому розташуванні елементів, наприклад антисмислова послідовність. Такі рослини включені в даний документі як "трансгенні рослини". "Нетрансгенна рослина" являє собою рослину, що генетично не модифікована введенням генетичного матеріалу за допомогою технологій рекомбінантних ДНК. У переважному варіанті здійснення трансгенні рослини є гомозиготними по кожному і будь-якому внесеному гену (трансгену) так, що їх потомство не сегрегує по бажаному фенотипу.
Існує декілька способів введення чужорідного генетичного матеріалу в рослинну клітину.
Такі способи включають прискорення покритих генетичним матеріалом мікрочастинок безпосередньо в клітини (див., наприклад, 05 4945050 ії 05 5141131). Рослини можна трансформувати з використанням технології агробактерій (див., наприклад, 5 5177010, 05 5104310, 005 5004863, 05 5159135). Для трансформації рослин також можна використовувати технологію електропорації (див., наприклад, УМО 87/06614, 005 5472869, 05 5384253, УМО 92/09696 і УМО 93/21335). На доповнення до численних способів трансформації рослин також можна варіювати тип тканини, що контактує з чужорідними генами. Така тканина може включати, але не обмежуватися ними, ембріогенну тканину, тканину калюсу типу І і 1, гіпокотиль, меристему і т. п. Протягом розвитку і/або диференціювання відповідними способами, описуваними в даному документі, трансформувати можна майже всі тканини рослини.
Ряд векторів, придатних для стабільної трансфекції рослинних клітин або для одержання трансгенних рослин, описаний, наприклад, у Рошмеї5 єї аї., Сіопіпуд Месіоге: А І арогагу МапаиаїЇ, 1985, з,ирр. 1987; М/єіз5басі апа М/еіззраси, Меїпод3з їог Ріапі МоіІесшаг" Віоіоду, Асадетіс Ргев5, 1989; і СеїЇмп еї аї., Ріапі МоІесшаг Віоюду Мапиаї!, Кісу'ег Асадетіс Рибіїєпег5, 1990. Як правило, експресуючі вектори рослини включають, наприклад, один або декілька клонованих генів рослини під транскрипційним контролем 5'- і 3і--регуляторних послідовностей і домінантний селективний маркер. Такі експресуючі вектори рослин також можуть містити регуляторну область промотору (наприклад, регуляторну область, що контролює індуковану або конститутивну, регульовану навколишнім середовищем або розвитком, або клітино- або тканиноспецифічну експресію), ділянку ініціації транскрипції, ділянку зв'язування рибосоми, сигнал процесингу РНК, ділянку термінації транскрипції і/або сигнал поліаденілювання.
Для визначення присутності трансформованої рослини можна застосовувати будь-який з декількох способів. Наприклад, можна використовувати полімеразну ланцюгову реакцію (ПЛР) для ампліфікації послідовностей, що унікальні у трансформованої рослини, з детекцією продуктів ампліфікації за допомогою електрофорезу в гелі або іншими способами. ДНК можна виділяти з рослин загальноприйнятими способами, а реакцію ПЛР проводити з використанням праймерів, за допомогою яких можна розрізняти трансформовані і нетрансформовані рослини.
Наприклад, можна конструювати праймери, за допомогою яких ампліфікують область ДНК від трансформуючого вектора, зчитуючи в напрямку конструкції, а зворотний праймер конструюють на основі гена, що представляє інтерес. Ці праймери дозволяють ампліфікувати фрагмент, тільки якщо рослина успішна трансформована. Альтернативний спосіб підтвердження позитивного трансформанта являє собою гібридизацію способом саузерн-блотингу, добре відому в даній галузі. Трансформовані рослини також можна ідентифікувати, тобто відрізняти 60 від нетрансформованих рослин або рослин дикого типу, по їх фенотипу, наприклад,
забезпечуваному присутністю гена селективного маркера або забезпечуваному фенотипом бажаного стану спокою насіння.
Способи трансформації злакових рослин, таких як пшениця і ячмінь, із внесенням генетичної варіації в рослини за допомогою введення екзогенної нуклеїнової кислоти і регенерації рослин з протопластів або незрілих зародків рослин, добре відомі в даній галузі, див., наприклад, УМмап апа І етаих (1994), Тіпдау еї аї., (1997), патентна заявка Канади Мо 2092588, патентна заявка Австралії Мо 61781/94, патент Австралії Мо 667939, патент США Мо 6100447, міжнародну патентну заявку РСТ/О597/10621, патент США Мо 5589617, патент США Мо 6541257 і інші способи, зазначені в описі патенту УМО 99/14314. Переважно, трансгенні рослини пшениці або ячменю одержують способами опосередкованої Адгобасіегішт шптегасіеп5 трансформації. Вектори, що несуть бажані конструкції нуклеїнової кислоти, можна вводити в регенеровані клітини пшениці культивованих у вигляді тканин рослин або експлантів або придатні рослинні системи, такі як протопласти.
Регенеровані клітини пшениці переважно одержують із щитка зародка незрілих зародків, зрілих зародків, калюсу, одержаного з них, або меристемної тканини.
Відбір за допомогою маркера являє собою широко визнаний спосіб відбору гетерозиготних рослин, необхідний при зворотному схрещуванні з рекурентним батьком у класичній селекційній програмі. Популяція рослині в кожному поколінні зворотного схрещування є гетерозиготною по гену, що представляє інтерес, у нормі присутньому в популяції зворотного схрещування у співвідношенні 1:1, і молекулярний маркер можна використовувати для розрізнення двох алелів гена. Виділяючи ДНК, наприклад, з молодих пагонів, і тестуючи введення бажаної ознаки з використанням специфічного маркера, проводять ранню селекцію рослин для подальшого зворотного схрещування, при цьому концентруючи енергію і ресурси на меншій кількості рослин. Для додаткового прискорення програми зворотного схрещування можна виділяти зародки з незрілого насіння (25 діб після цвітіння) і вирощувати на живильних середовищах у стерильних умовах, а не доводити до повної зрілості насіння.
У способах за даним винаходом можна використовувати будь-який молекулярно-біологічний спосіб, відомий у даній галузі яким можна детектувати алелі КМ-В1. Такі способи, як необмежувальні приклади, включають використання ампліфікації нуклеїнових кислот,
Зо секвенування нуклеїнових кислот, гібридизації нуклеїнових кислот із придатним чином міченими зондами, аналіз конформації одиночних ланцюгів (55СА), електрофорез у градієнті денатуруючого гелю (ОССЕ), аналіз гетеродуплексів (НЕТ), аналіз хімічного розщеплення (ССМ), каталітичне розщеплення нуклеїнової кислоти або їх сполучення (див., наприклад,
Їетівих, 2000; І апогідде еї аї.,, 2001). Винахід також включає використання способів з молекулярними маркерами для детекції поліморфізмів, зчеплених з алелями КПІ-В1. Такі способи включають детекцію або аналіз поліморфізму довжин рестрикційних фрагментів (ПДРФ), КАРОЮ, поліморфізму довжини ампліфікованих фрагментів (АРІ Р) і поліморфізму мікросателітів (простого повтору послідовності, 55К). Тісно зчеплені маркери можна легко одержувати добре відомими в даній галузі способами, такими як аналіз об'єднаних сегрегантів, як описано в І аподгідде еї аї. (2001).
Протягом даного опису слово "містити" або його варіанти, такі як "містить" або "який містить", варто розуміти як таке, що означає включення зазначеного елемента, числа або етапу або групи елементів, чисел або етапів, але не виключення яких-небудь інших елемента, числа або етапу або групи елементів, чисел або етапів.
Усі публікації, зазначені в даному описі, включені в даний документ як посилання. Будь-який опис документів, дій, матеріалів, пристроїв, виробів або т. п., що включений в даний опис, наведений винятково з метою надання контексту даного винаходу. Не слід розглядати як визнання, що будь-який або всі ці положення складають частину основи відомого рівня техніки або є загальновідомими фактами в галузі, що відповідає даному винаходу, як це існувало в
Австралії або в інших регіонах до дати пріоритету кожного пункту формули даної заявки.
Як використовують в описі теми, якщо з контексту явно не випливає інакше, форми однини включають форми множини. Таким чином, наприклад, указання однини включає один, а також два або більше.
Після загального опису винаходу, його можна більш легко зрозуміти на основі наведених нижче прикладів, що надані як ілюстрація і не призначені для обмеження.
ПРИКЛАДИ
Приклад 1. Матеріали і методи
Рослинний матеріал
Зерна високорослої пшениці сорту Магіпда (КПІ-В1а) і майже ізогенної карликової лінії (ЕП- бо В1с) на генетичній основі Магіпда одержували з А!йзіганйап Уміпіїег Сегеаіз СоПесіоп, Татуогій,
МОММ, Аийвігайа. Магіпда являє собою сорт бразильської хлібопекарської пшениці. Майже ізогенну карликову лінію одержували за допомогою семи зворотних схрещувань (ВС7) з рекурентним відбором карликового алеля (КПІ-В1с) у Магіпда (Ноодепаоогп еї аї. 1988).
У таблиці 1 описаний ячмінь Нітаїауа і три раніше охарактеризовані похідні карликові мутанти. Рослини вирощували в теплиці в 20 см горщиках, що містять суміш на основі компосту, з природним освітленням із продовженням тривалості дня до 14 годин, забезпечуваним у зимові місяці, або в полі в Віаск Мошипіаіп або на експериментальній станції сзіппіпадега Ехрегітепіа!
Зіайоп, розташованих у Канберрі, Австралія.
Мутагенез
Спосіб мутагенезу зерна ячменю і пшениці являв собою спрощення способу, використовуваного раніше (2маг апа Спапайег, 1995). 1-2 кг зерен кожної лінії вбирали воду до подвоєння їх маси при 42С протягом ночі. Їх переносили в 2-літрові мірні циліндри, заповнені водою, й аерували стисненим повітрям протягом 8 годин з однією заміною на чисту воду, проведеною через 4 години. Потім зерна інкубували протягом 2 годин у свіжоодержаному 1 мМ азиді Ма, розчиненому в 0,1М К-фосфатному буфері з рН 3,0, а потім ретельно промивали в проточній воді протягом 2 годин, поміщали у витяжну шафу для сушіння протягом ночі і висівали в полі в межах періоду декількох діб після обробки.
Конструювання похідних ліній, що несуть алелі посиленого росту
Алелі посиленого росту ячменю піддавали зворотному схрещуванню, інтеркросингу й ауткросингу з одержанням набору ліній, придатних для докладної фізіологічної характеристики.
Виявили чотири нових алелі посиленого росту Зіп1 на основі карликів дгаг2ь або дзеїп і два покоління піддали їх зворотному схрещуванню з УМТ, забезпечуючи фенотипи з посиленим ростом для порівняння у високорослих і карликових основах. Втрату вихідного алеля карликовості підтверджували ПЛР. Сім нових алелів посиленого росту 5іпі!1, що залишилися, виявили на основі карлика Зіпта і чотири з них (5іпта.7, 5іпта.8, бЗіп14а.9 і ТА103) два покоління піддавали зворотному схрещуванню з УМТ.
Продукція а-амілази напівзернами з ендоспермом
Одержували напівзерна з ендоспермом і інкубували з САз (1 мкМ) або без нього при 22260 протягом 0, 42 або 72 годин. У кожен зразок додавали 1,5 мл розчину 10 мМ Сасі», напівзерна
Зо гомогенізували й очищали аліквоту 1 мл за допомогою центрифугування (200009 протягом 5 хв.). Супернатант аналізували на активність а«-амілази з використанням способу визначення активності альфа-амілази Медаг7уте (Сега!Ірпа).
Оцінка стану спокою зерна
Рослини вирощували у вигляді одиночних рядів у полі і колосся перевіряли двічі на тиждень
З5 для моніторингу висихання. Коли колосся втрачало все зелене забарвлення, його вважали фізіологічно зрілим і зрізали і забирали в лабораторію. Колосся поміщали у витяжну шафу на термін 48 годин для проведення кінцевого сушіння, особливо базальних зерен, що мають тенденцію залишатися вологими, а потім молотили вручну. Зерна поміщали в конверт з обгорткового паперу і залишали в лабораторних умовах протягом різних періодів післязбирального дозрівання. Проростання оцінювали, інкубуючи 100 зерен кожної лінії на вологому фільтрувальному папері в середовищі при 20"С при низькоінтенсивному флуоресцентному освітленні. Відсоток проростання кожного зразка зерен оцінювали через 7 діб інкубації. Проростання в цьому контексті визначають як появу зародкового кореня з насінної оболонки. В експерименті першого сезону, багато зразків зерен, особливо високорослих рослин пшениці, демонстрували короткочасний стан спокою і спостерігали значне проростання (щонайменше 50 95 пророслих зерен) усього через 13-19 діб дозрівання. Ці лінії, як правило, більше не тестували. Інші зразки зерен через 13-19 діб дозрівання демонстрували незначне проростання і їх тестували знову через 32-33 доби, і, якщо проростання усе ще залишалося незначним, знову через 48-49 діб дозрівання. Відносні оцінки стану спокою давали по шкалі від 1 (найменший стан спокою) до 4 (найбільший стан спокою).
В експерименті другого сезону оцінки стану спокою сфокусували на напівкарликових і контрольних лініях, і проростання визначали щотижня, починаючи від збирання до втрати стану спокою, або до 12 тижнів дозрівання. Приклад результатів тестування стану спокою зерен наведений на фігурі 9. Одну з мір стану спокою зерен визначали як кількість тижнів збереження зерен (що також позначається як "дозрівання") при кімнатній температурі для того, щоб у популяції зерен проросло щонайменше 5095 зерен, як оцінювали способом, описаним у попередньому абзаці.
Довжина колеоптилю ліній ячменю і пшениці з посиленим ростом
Довжину колеоптилю визначали у паростків пшениці і ячменю через 21 добу росту в темряві з програмою добової температури 12 годин при 122 і 12 годин при 82С у присутності цілком достатньої подачі води.
Вихід на поверхню після глибокого засівання в сухих умовах
Зразки зерен висівали в грунт (стандартна грунтова горщикова суміш) у теплиці на глибину см. Вихідний вміст вологи в грунті складав 12-14 95 (мас./мас.). Проростання, ріст на ранньому етапі й утворення паростка після появи третього листа відбувалися без якого-небудь додаткового поливу для імітації сухих умов посіву в полі. Оцінювали відсоток зерен, які дають паростки, що виходять на поверхню, і час виходу на поверхню. 10 Швидкості подовження листів і криві залежності "доза-ефект" для СА
Способи описані раніше (СпапаІег апа Кобрегізоп, 1999). Криві апроксимували по точках даних з використанням 4-параметричного рівняння Хілла.
Вимірювання довжини коренів
Ріст коренів оцінюють у контрольованих умовах і у рослин, що ростуть у полі. У першому випадку довжину коренів оцінюють за допомогою сканування, тоді як у полі беруть 2-м стрижні і кількість коренів оцінюють з 10 см інтервалами уздовж стрижнів.
Ампліфікація ДНК за допомогою ПЛР і секвенування
ДНК одержували з листів ячменю або пшениці способом БЕїіїб5 еї аіІ., 2005. Послідовності пшениці ампліфікували з використанням пар праймерів, у яких один із праймерів був специфічний для гена КРІ-В1 (таблиця 2). 3ічастину гена ампліфікували з використанням консервативних прямих праймерів і зворотних праймерів, що були специфічні до генних послідовностей В у 3-ШТ-області При ампліфікації ПЛР послідовностей ячменю використовували праймери, специфічні для генів Зіп1, зруї! і с5е1. Ампліфіковані фрагменти обробляли Ехозар-ІТ (Айуптеїгіх) для видалення праймерів, а потім секвенували з використанням Від Юуе Тептпіпайог (Арріїєа Віозувзіетв).
Послідовності ДНК
Послідовності генів КПІ-АтТа, ВНІ-Вт'а і КР-О1Ь пшениці і, таким чином, кодованих білків представлені номерами доступу УБ930277, 9дЕ930278 і ОЕ6930281, відповідно. Амінокислотні послідовності вирівнюють СіивіаМуУ, демонструючи амінокислоти, що відрізняються (фігура 7).
Частина нуклеотидної послідовності гена КПІЗ3-В1с карликового похідного Магіпда представлена в ЗЕО ІЮ МО:1.
Послідовність білка КП-В1с, кодованого алелем КПІ-В1с, представлена в 5ЕО ІЮ МО:3.
Номера доступу послідовностей для генів 5іп1! і ру! ячменю являють собою АКЗ72064 і
АРО35820, відповідно.
Приклад 2. Виділення мутантів пшениці, що містять нові алелі КМІ-В1
Зерна пшениці сорту Магіпда, який містить алель ЕПІ-В1с, що викликає важку карликовість рослин, обробляли азидом натрію, як описано в прикладі 1. Зерна, що мутували, висівали в полі й одержаним рослинам Мі дозволяли самозапліднюватися. Після дозрівання з рослин М" збирали зерна М». Зерна Мео висівали в полі або при високій щільності в лотки (фігура 1) у теплиці і піддавали скринінгу на збільшену висоту протягом росту на ранньому етапі або при дозріванні в полі. Цими способами скринінгу піддали приблизно 1,6 мільйона рослин М». На фігурі 1 представлено як легко можна ідентифікувати мутантів. Вибирали приблизно 400 рослин, що демонстрували швидкості подовження раннього листа або висоту зрілої рослини, що знаходилася в діапазоні від трохи більшої, ніж карликовий батько сорту Магіпда (КП-В1с), до такої ж високорослої, як майже ізогенні рослини ЕПІ-В'а (алель дикого типу). Їх самозапліднювали і рослини-нащадки вирощували в контрольованих умовах і порівнювали з батьківськими рослинами (КПІ-В1с) і рослинами дикого типу (ЕПІ-Вта) (фігура 2). Ці рослини назвали "мутанти з посиленим ростом", тому що вони росли з підвищеними швидкостями або до збільшеної висоти зрілої рослини відносно батьківського сорту.
Мутація карликовості в алелі ЕПІЕ-В1с була наслідком вставки 2026 пар нуклеотидів у ген
ВАТ-ВІ Магіпда (Ууи еї аї!., 2011). Тестування ПЛР виявило, що приблизно половина з 400 вибраних мутантних рослин були позитивними на наявність вставки в цьому гені; такі рослини зберегли ген КПІ-В1. Вибрані рослини, що залишилися, були негативними в аналізі ПЛР і очевидно повністю втрачали ген КПІ-В1, хоча гомологічний ген, кодований у геномі Ю (КПІ-О1), основуючись на позитивних ампліфікаціях ПЛР, усе ще був присутній. Багато рослин у цій останній групі мали явні морфологічні зміни і погану фертильність колоса. Імовірно, що вони представляли делеції гена КЛПІ-В1 поряд з варіюючими кількостями фланкуючої хромосомної
ДНК. Лінії з цими делеціями далі не вивчали.
Ген КЕТ-ВІ у кожного з 139 мутантів без делецій секвенували за допомогою ампліфікації 60 областей гена за допомогою ПЛР. Ідентифіковано тридцять п'ять нових похідних алелів ЕПі-
ВІіс, кожен являє собою один варіант алеля ВПС-ВІ1с Магіпда. їх позначили ВПЕ-ВІс.1, ВП-В1с.2,
ВНТеВІ16.3 і т. д. Вони перераховані в таблиці 3. Багато які з 35 алелів представлені в декількох лініях, що містять ідентичні специфічні мутації. У деяких випадках ці декілька ліній можуть бути сестринськими, тоді як в інших випадках вони можуть представляти незалежні події мутування.
Усього спостерігали 62 незалежні події, що породили 35 алелів.
Мутанти демонстрували три різних класи мутацій, відповідальних за фенотип посиленого росту. У першому класі десять алелів містили передчасні кодони термінації трансляції в гені
ВНТВІ. У більшості випадків мутантний кодон являє собою заміну кодону ТО (кодуючого Тгр) на ТОА (стоп-кодон). У ячмені передчасні стоп-кюодони в ОЕЇ ГА приводять до подовженого потоншеного фенотипу і чоловічої стерильності. На відміну від цього, рослини цих десяти мутантних ліній пшениці, за одним виключенням, росли до висоти, що була такою ж або майже такою ж, як у високорослої (дикого типу) ізолінії і демонстрували подібну з диким типом фертильність. Передбачувано експресія білків ЕПІ-ї- геномів А і/або О у цих мутантів забезпечувала генетичну компенсацію нуль-мутантів генів геному В і обмежувала фенотипічну експресію до "високорослої, а не "потоншеноїї. Одне виключення, рослини єдиного представника ЕПІ-В1с.22 гергезепіайме (лінія ТК544) були напівкарликовими, а не "високорослими". Цей фенотип міг бути результатом альтернативного сплайсингу мутантного гена КПІ-В1с.22 у цих рослинах, який приводив до утворення білка КПІ-В1 з іншою вставкою в рамку зчитування (описано нижче).
Другий клас включав заміни амінокислот у білку КМПІ-В1, кодованому геномом В. Двадцять прикладів перераховані в таблиці 3. Представляє інтерес порівняння цих 20 замін з мутантами
РЕА із замінами, одержаними у ячменю (приклад 5), див. фігуру 3. У двох видів існує 31 одиночна заміна амінокислот, включаючи чотири ділянки, де відбулися ідентичні заміни амінокислот. Також помічено, що у ячменю й у пшениці відбулися ідентичні, хоча і незалежні, мутації, де одну і ту ж мутацію виявляли у відповідних положеннях у лініях, що походять з різних субпопуляцій зерен М».
Фігура З схематично демонструє ділянки замін амінокислот у мутантів відносно положень консервативних мотивів у С-кінцевій області білків ячменю і пшениці. Спостереження, що мутації з посиленим ростом розташовані на всьому протязі більшої частини С-кінцевої області,
Зо означає, що існує суттєвий потенціал для змін зв'язування білків ОБ ГА із взаємодіючими білковими партнерами.
Третій клас мутантів включав 5 алелів, де кожний містив мутації в областях КПІ-В1, для яких теоретично розраховано, що вони залучені у вирізання більшості вставок у ген КМП-В1, які утворювали алель КПІ-ВІс (таблиця 3). Кожний з цих алелів зачіпав один з чотирьох нуклеотидів, що безпосередньо граничать з донорною і акцепторною ділянками сплайсингу. У деяких випадках, включаючи алель КП-В1с.22, і залежно від того, яке програмне забезпечення прогнозування сплайсингу використовували, для цих змін послідовності існував потенціал зміни переважної ділянки сплайсингу, таким чином одержуючи білки ЕМІ-В1 з трохи більшими або меншими вставками в рамку зчитування. Ці алелі сплайсингу передбачувано приводили до продукції меншої кількості білка КПІ-ВІ1, що містить вставку 30 амінокислот, і/або приводили до продукції модифікованих білків КПІ-ВІ1 зі зміненими вставками в рамку зчитування.
Експериментальні дані по зміні ефективності сплайсингу одержували, досліджуючи РНК способами ЗТ-ПЛР.
Приклад 3. Фенотипічне тестування мутантів пшениці, що містять нові алелі КПС-В1
Мутанти пшениці з посиленим ростом, що містять нові алелі КПІ-В1, тестували на ряд ознак, які значимі для практичного застосування в полі для комерційного одержання пшениці.
Вимірювали довжину зрілих стебел, довжину колеоптилів і відносний стан спокою зерна для зерна, одержуваного з мутантних рослин, і порівнювали з контрольними рослинами. Дані наведені в таблиці 4. Довжину стебла зрілих рослин оцінювали в різних умовах зрошуваних полів (тобто з гарним водопостачанням) і в різних сезонах. У більшості випадків одержували чотири незалежних точки даних і використовували для розрахунку середніх, представлених у таблиці 4, які виражені у вигляді відсотків відносно рослин КПІ-Вт1а. Різні алелі приводять до різної довжини стебла, де деякі приклади (наприклад, КПІ-В1с.б, с.8, с.21) є повністю карликовими, а інші (КПІ-В1с.11, с.25, с.31) є такими високорослими, як ізолінія КПС-ВТа. У більшості випадків між лініями, що несуть один і той же алель, існують невеликі варіації. На основі напівкарликовості, спостережуваної у рослин ізолінії ЕМЛ-В1Ю, що складала приблизно 81 95 висоти рослини дикого типу (високорослої), виявили 15 нових алелів, що приводили до того ж ступеня карликовості, наприклад у діапазоні 75-91 95 від високорослої рослини.
Також у мутантних рослин вимірювали довжину колеоптилів і розраховували як відсоток від бо середньої довжини колеоптилю у рослин КПІ-Віа. Значення середньої 2-4 незалежних вимірювань наведені в таблиці 4. Спостерігали більшу варіацію довжини колеоптилів у лінії, ніж виявили для довжини стебла. Частково це може бути пов'язане з відмінностями між зернами, що походять з поля і з теплиці. Вирощувані в полі зерна доступні для абсолютної більшості ліній у наступний сезон вирощування, і проводять додаткові вимірювання колеоптилів. Очікують, що вони продемонструють меншу варіацію. У цілому спостерігали загальну позитивну кореляцію між довжиною стебла і довжиною колеоптилю. У деяких випадках необхідна додаткова робота для оцінки статистичної значимості відмінностей, де спостерігали порушення кореляції.
Стан спокою зерен більшості мутантних ліній оцінювали для зерна, що збирається за два польових сезони. В обох сезонах високорослі ізолінії Магіпда і ізолінії Магіпда Кп-ВТЬ демонстрували короткочасний стан спокою, тоді як ізолінія КЛЕ-ВІс мала відносно довгостроковий стан спокою. Спостерігали суттєві відмінності у відносних показниках стану спокою зерна між різними лініями з посиленим ростом. На фігурі 9 представлені дані для деяких ліній у порівнянні з контролем. Особливий інтерес представляли алелі, що забезпечували придатну напівкарликову висоту рослин і зберігали суттєвий стан спокою зерна, такі як ЕЙ-
В16б.9, 6.17, 6.22, 6.23, с.24, с.26, 6.27. Вони включають чотири напівкарликові лінії, що на даний час піддаються зворотному схрещуванню з елітними лініями.
Багато які з ліній на третій сезон тестували в полі. Дані по висоті рослин і показники стану спокою представлені в таблиці 8. Результати узгоджувалися з трендом попередніх двох сезонів, демонструючи, що зерну деяких мутантних ліній необхідно значно більш тривале зберігання
Сдозрівання") для проростання 50 95 зерен у стандартному тесті проростання (приклад 1). Хоча тренд відносно стану спокою між лініями і контролем залишався однаковим від сезону до сезону, абсолютні кількості для будь-якої лінії від сезону до сезону варіювали.
Приклад 4. Виділення мутантів ячменю з посиленим ростом
Для виділення мутантів ячменю з посиленим ростом як вихідний матеріал вибирали три карликових мутанти ячменю "НітаІауа". Кожен мутант містив визначену однонуклеотидну заміну в гені, залученому у (ї) біосинтез СА, а саме огаг2, кодуючому САЗ-оксидазу, (ії) рецептор
СА "С1І0О1", кодований геном с5е1, і (ії) відповідь на СА, а саме ген 5іІп1, кодуючий білок ОБ А ячменю. Зерна кожної карликової лінії обробляли азидом натрію, висівали в полі і дозволяли самозапліднюватися з одержанням насіння Мі. Його висаджували з одержанням рослин Мі, з
Зо яких збирали зерна Ме. Одержані паростки Ме, вирощувані в грунті, піддавали скринінгу на стадії другого листа на паростки, що демонструють більш швидкий ріст, ніж їх карликові сибси.
Усього з висіяних приблизно 105 зерен одержали три різних категорії мутантів, що представляють приблизно 50000 колосів Мі.
Перша категорія, найбільш відповідна даній заявці, включала 22 рослини, що росли більш швидко, ніж їх карликові сибси. Вони були повністю фертильні і їх рослини-нащадки були однорідні і демонстрували швидкий ріст. У кожному випадку присутність вихідної мутації карликовості підтверджували за допомогою секвенування відповідного фрагмента ПЛР. Їх швидкості подовження листів були вище, ніж очікувалося на основі присутності мутації карликовості. Вони демонстрували діапазон ступеня посилення росту від деяких рослин зі швидкостями подовження листів незначно, але значимо більшими, ніж у їх карликового батька, до інших, у яких подовження відбувалося так само швидко або навіть трохи швидше, ніж у відповідних високорослих рослин дикого типу (див. нижче). Висота різних мутантів з посиленим ростом при досягненні зрілості знаходилася в діапазоні від проміжної між карликовим батьком і диким типом до такої ж високорослості, як у дикого типу.
Друга категорія, одержувана тільки на генетичній основі карлика 5іІп1д4, включала три рослини, що росли більш швидко, ніж їх карликові сибси, але усе ще зберігали визначений ступінь карликовості. У наступному поколінні потомство цих рослин складалося з карликових і типових подовжених потоншених рослин у співвідношенні приблизно 3:11. Додатковий аналіз (нижче) продемонстрував, що вони містили нові алелі 5Іп1, у яких друга мутація функціонувала як внутрішньогенний супресор мутації 5іпта.
Третя категорія, спостережувана на основі карликів з порушеним біосинтезом СА і рецептором СА, складалася з типових подовжених потоншених мутантів. Їх легко розпізнавали по їх характерному сильно подовженому фенотипу і блідо-зеленому забарвленню і, після пересадження, по їх сильно подовжених стеблах і стерильності. Цей клас мутантів очікувався, оскільки нуль-алелі подовженості 5іп1 є епістатичними для дефектів у біосинтезі СА або функції рецепторів СА (Спапаїйег апа Кобрегізоп, 1999).
Приклад 5. Ідентифікація мутацій ячменю і дослідження генетичного зчеплення
З потоншених рослин трьох сегрегуючих ліній на основі карлика Зіп'йЯ4 (друга категорія вище) одержували ДНК і секвенували ген 51Іп1. Рослини кожної лінії містили різні нові мутації в бо гені 5іпї, що приводять до передчасного кодону термінації трансляції у відкритій рамці зчитування (ОКР). Нові мутантні алелі являли собою похідні Зіп'4 і, таким чином, названі 5Іпта.1, Зіпта.2, Зіп1а.3 (таблиця 1). Вони являють собою нові внутрішньоалельні мутації, де друга мутація перетворює локус карликовості 5іп14 у типовий алель з втратою функції, алель подовженості 5Іп1. Ці рослини далі не досліджували.
У кожного з мутантів з посиленим ростом (перша категорія вище) секвенували весь ген 51п1 з підтвердженням збережуваної присутності алеля 5іІпта і для визначення виникнення інших мутацій у цьому гені, оскільки він був одним з декількох генів-кандидатів, у яких нова мутація могла приводити до фенотипу посиленого росту. Нові мутації в ОКЕ 51п1 знайдені в 20 з 22 рослин. Мутації визначали одинадцять нових алелів гена 5іІп1. Деякі з рослин несли ідентичні мутації і передбачувано були сибсами. Сім з нових алелів посиленого росту Зіпі! виникли на основі карлика 5іп14 і, таким чином, являли собою алелі, що містять внутрішньогенні супресорні мутації. Їх назвали біпта.4-Зіпта.10. Три мутації виникли на основі дгагь (5іп1т, 5іпт1о, 5іп15) і одна виникла на основі дзеїп (5Іп1п). Кожний з нових алелів відрізнявся від свого батьківського алеля однонуклеотидною заміною, що приводила до заміни однієї амінокислоти в послідовності білка 5І М1. Одержані заміни амінокислот наведені в таблиці 1 (лінії ТК). Вони виникали в С- кінцевих 6095 білка 5ІМ1, що відповідають домену СКАБ, і усі відповідали аналогічним мутаціям у мутантів пшениці, описаних вище. Спостерігали дві ідентичних події мутації, що приводили до заміни амінокислоти 5829А, одна відбувалася в популяції мутантів Зіп14.7, а інша - в популяції 5Іпі5. Вони являли собою незалежні події мутацій, оскільки перший являв собою похідне алеля Зіп14д, тоді як другий виникав у гені 5іпі1 дикого типу на основі карлика дгагр.
У двох лініях з посиленим ростом (ТК26, ТК103), що залишилися, були відсутні які-небудь нові мутації в ОКЕ 5іп1 і потенційно були присутні мутації в інших генах. Вони виникали на основі карлика 5Іп1йд. Рослини цих ліній схрещували з Нітаїйауа разом з 5іІп1а.5 як позитивним контролем для оцінки генетичного зчеплення алеля карликовості 5іптїЯ4 ї нового алеля посиленого росту. Популяція Рг після схрещування контрольного УУТх5Іп1а.5 демонструвала очікуваний розподіл максимальної швидкості подовження листів 3:1 (5іпта.5:УМ/Т).
Індивідуальних рослин Е2 з уповільненою швидкістю росту батьківського 5іп1й4 не спостерігали, що вказувало на повне зчеплення вихідної мутації карликовості і вторинної мутації посиленого
Зо росту в цій відносно невеликій популяції. Таким чином, вторинна мутація являла собою внутрішньогенну супресорну мутацію. Подібний результат спостерігали для популяції Е2
ТАКТОЗхХУМУТ, що вказувало на те, що мутація посиленого росту в ТК103 демонструвала повне зчеплення з Зіп1д. На відміну від цього популяція 2 ТК2бхУуТ містила більшість паростків зі швидкостями росту, такими ж, як 5іп1д, приблизно 25 95 зі швидкостями росту, такими ж, як у
МТ, і деякі паростки з проміжними швидкостями росту. Ці результати узгоджуються з тим, що мутація посиленого росту в ТК26 знаходиться в гені, що не зчеплений з 51п1.
У ТК26 секвенували декілька інших генів-кандидатів передачі сигналу СА. Ген-кандидат рецептора СА (О5е1) і два гени-кандидати Е-рох мали таку ж послідовність, як і у дикого типу, але в послідовності 5ріпаїу! виявили однонуклеотидну заміну (5руїа, таблиця 1), що приводила до заміни амінокислоти в шостому мотиві ТРЕ ЗРУ1. У Агарідорзіз ця область важлива для активності 5РУ, оскільки вона містить декілька мутантних алелів (5іймегеопе еї аї., 2007). 5РУ1 кодує негативний регулятор передачі сигналу СА, що вперше ідентифікований у Агабрідорбів, але пізніше показано, що в ячмені (Кобегізоп еї аї., 1998) і рисі (Зпітаада еї аї., 2006) існують функціонально споріднені гени.
В результаті, 22 мутанти ячменю з посиленим ростом представляли 13 незалежних подій мутацій. Одинадцять з них являли собою нові алелі 5іпі1, що викликали заміни одиночних амінокислот у 5ІМ1. Дванадцята була тісно зчеплена з 5іІп1, але знаходилася в невизначеній області, можливо являючи собою мутацію промотору, і тринадцята являла собою новий алель у незчепленому гені, Зру1.
Приклад 6. Швидкості подовження листів ячменю, що несе нові алелі 5іп1
Надійну міру сприйнятливості до (СА являла собою максимальна добова швидкість подовження (І ЕКтах), що досягається першим листом у стандартних умовах (Спапаег апа
Кобегізоп, 1999), і, таким чином, її визначали для всіх ліній ячменю з посиленим ростом і їх предків (таблиця 5). У всіх тринадцяти вихідних ліній з посиленим ростом спостерігали значимі більш високі значення І ЕВтах, ніж у їх відповідних карликових батьків, хоча ступінь посилення росту варіював залежно від алеля. Три алелі посиленого росту (5іп1т, 5іп'п і 5іІп15) порівнювали в їх вихідній карликовій генетичній основі, а також після зворотного схрещування з високорослою рослиною на основі МУТ. Швидкості росту були систематично нижче в карликових основах, вказуючи на те, що алелі посиленого росту усе ще знаходилися під впливом зниженої бо передачі сигналу СА, що є результатом ушкодженого біосинтезу СА або ушкодженої функції рецептора СА. В основі дикого типу алелі посиленого росту мали тенденцію збільшувати швидкості росту.
Приклад 7. Продукція с-амілази напівзернами з ендоспермом
Продукція са-амілази напівзернами з ендоспермом ячменю дикого типу залежить від присутності активного СА. Таким чином, моніторинг са-амілазної активності за відсутності активного СА забезпечує зручну міру ступеня "базальної" передачі сигналу СА у мутантів. Дві контрольні лінії з нормальною чутливістю до СА (М/Т, дгагб) через 72 години інкубації з САз демонстрували майже 15-кратне збільшення а-амілазної активності в порівнянні з базальними рівнями (таблиця 5). Коли досліджували мутантів з посиленим ростом і їх карликових батьків, вихідний рівень а-амілазної активності у зрілих напівзерен з ендоспермом був дуже низьким, але при інкубації деяких ліній з посиленим ростом (5іп1ід9.4, біпіа.7, біпта.8, біпіа.9; 5іІпта, зруТа; агагь, 5іпіт; дгагр, віпіо; дгагЬ, віп15) демонстрували збільшену продукцію а-амілази відносно карликового батька, тоді як в інших (Зіп1та.5, 5іп14а.6, 5іп1д.10; дзеїп, 5Іп1п) цього не спостерігали. Серед похідних 5іпі4 з посиленим ростом, похідне 5іІп14.9 було незвичайним, накопичуючи дуже високі рівні «-амілази і через 42 години, і через 72 години інкубації, незважаючи на те, що ця лінія демонструвала тільки помірне відновлення швидкості росту (таблиця 5).
Приклад 8. Інші ознаки, асоційовані з алелями посиленого росту
Рослини ліній з посиленим ростом по виду протягом росту і при дозріванні були близькі до нормального за винятком відмінностей у загальній висоті. Існує діапазон висот у дев'яти похідних біпта з посиленим ростом, хоча жодне при дозріванні не було таким же високорослим як дикий тип. Довжина колеоптилю ліній з посиленим ростом варіювала в загальній відповідності зі значеннями ГЕВтах і з кінцевою висотою рослини.
Однією загальною характеристикою мутантних рослин ячменю з посиленим ростом було те, що вони продукували більш великі зерна, ніж їх карликові батьки. У різних врожаях у різних сезонах росту розміри зерен в основному були проміжними між батьківським карликом (маса зерна приблизно 40 мг) і високорослим диким типом (маса зерна приблизно 55 мг). Однак декілька ліній з посиленим ростом, що при дозріванні були такими ж високорослими, як дикий тип, мали значно більші колоси і зерна. У різних тепличних поколіннях зерна дгагь і віпіт у
Зо середньому були на 40 95 більше, ніж зерна карликового батька дга2р. Коли проводили зворотне схрещування з основою Нітаїауа, спостерігали 2095 середнє збільшення спостережуваної маси зерна, а при ауткросингу з комерційним сортом 5іоор спостерігали 15 95 збільшення в матеріалі ВС». Повний аналіз проводили, коли стали доступні сестринські лінії
Зіоор ВСз.
Приклад 9. Опис деяких досконалих маркерів
Нові алелі КПІ-В1с у пшениці або ячменю легко вводити в селекційні програми і їх можна відслідковувати за допомогою відбору за допомогою маркера з використанням універсального досконалого маркера для алелів посиленого росту. Наприклад, для пшениці це включає ампліфікацію ПЛР між двома праймерами, один із яких знаходиться в області вставки 2062 нуклеотидів у гені ЕП-ВІ1с, а інший знаходиться поза вставкою, наприклад в кодуючій області
ВАТ-В1. Ампліфікація відповідного продукту відбувається тільки тоді, коли матрична ДНК походить з рослинного матеріалу, що містить щонайменше одну копію алеля посиленого росту.
Два їх приклади наведені в таблиці 2. Ці ампліфікації можна використовувати для простого розрізнення нових алелів, що походять з КПІ-ВІ1с, з іншим алелем напівкарликовості КП-В1Б і геном напівкарликовості КПІ-0О10. Маркери для гена КПІ-ВІ1, відмінного від алеля КПІ-В1с або його похідних алелів, можна легко одержувати з використанням пари праймерів, яка фланкує ділянку вставки в КПІ-В1с.
Приклад 10. Зворотне схрещування вибраних алелів з іншими сортами пшениці
Дослідження схрещування у ячменю, як описано вище, продемонстрували 100 95 спільне успадковування у мутантних алелів КПІ-В1 і фенотип посиленого росту. У пшениці проводили два експерименти по схрещуванню. У першому рослини шести ліній з посиленим ростом схрещували з гомозиготами Магіпда по алелю КПІ-В1р (напівкарликовість), а рослини інших чотирьох ліній схрещували з гомозиготами Магіпда по алелю КПІ-Вта дикого типу (високий ріст).
Потомство Еї піддавали самозапиленню з одержанням рослин ЕЕ». Наявності карликових (гомозиготних по КПІ-В1с) рослин у поколінні Г2 не детектували в жодному випадку, що вказує на те, що для кожної з десяти ліній спостерігали 100 95 генетичне зчеплення між новими алелями КПРІ-В1 ії фенотипом посиленого росту, і нова мутація, що пригнічує карликовість, знаходилася в гені КПІ-В1, а не в іншому місці геному. У схрещуваннях з КПІ-В1Б у потомстві Е2 продемонстровані очікувані профілі успадковування для алелів посиленого росту і КП-В16, бо тобто співвідношення гомозигот:гетерозигот:гомозигот 1:2:1. В одному зі схрещувань батька з посиленим ростом (лінія ТК550, ЕПІ-В1с.8) спостерігали значною мірою більш карликовим, ніж
АВТ, ї популяція ЕР2 демонструвала сегрегацію по висоті (гомозиготи з посиленим ростом - 65 см, гетерозиготи - 80-85 см, гомозиготи КПІ-В160-95-100 см) у співвідношенні, що незначно відрізняється від 1:2:1, що означає, що фенотип визначали по відмінності в одному гені.
Важливо, що цей помірно карликовий алель посиленого росту в лінії ТЕ550 був асоційований з тривалим станом спокою. Крім того, популяція Ез зерен вирощених у полі рослин Р» демонструвала тривалий стан спокою для гомозиготних по КПІ-В1с.8 рослин Ег, проміжний стан спокою для гетерозиготних по КПІ-В1с.в8/АПІ-В16 рослин Р» і короткочасний стан спокою для гомозиготних по КПІ-В1Б6 рослин Р». Цей результат означає, що алель посиленого росту після схрещування є визначальним для фенотипів висоти і стану спокою.
Чотири лінії, що схрещуються з КПІ-В1а Магіпда, являли собою лінії, позначувані 544, 612, 705 і 791 (таблиця 4), що несуть алелі ЕП-ВІ ВН-В1с.22, Впйс.23, ВПІ-В1с.24 і КТВ1с.26, відповідно. У кожному випадку в поколінні Рг спостерігали очікуване співвідношення генотипної сегрегації. Рослини Ег2, гомозиготні по алелю посиленого росту, демонстрували очікуване зменшення висоти і збільшення стану спокою, що означало, що мутантні алелі КРІ-В1 можна схрещувати з іншими генетичними основами і вони збережуть фенотипічний ефект. Це також означало генетичне зчеплення двох фенотипів, а саме напівкарликової висоти рослин і більш тривалого стану спокою, зумовлюваних мутантними алелями КПІ-В1.
У другому експерименті вибрані алелі посиленого росту вводили в елітні селекційні лінії за допомогою зворотного схрещування з метою заміщення їх існуючого гена напівкарликовості (АТ-ВТЬ або КПТ-О1Б) новим алелем посиленого росту. Це проводили для комбінації фенотипу напівкарликової висоти при дозріванні з іншими сприятливими ознаками, такими як поліпшена схожість і збільшені рівні стану спокою зерен. Схрещування проводили з використанням рослин ліній 544, 612, 705 і 791 як донорів пилка з рослинами 10 різних елітних сортів пшениці, а саме
Стивадег, ЕСА Стедогу, Езрада, Гіпсоїп, Мадепіа, Мірі, Моипуд, КМ/5 Спазтіп, КМУ5 Зсігоссо,
МеМеа! і ОшіоокК. Після всіх схрещувань одержували зерна Рі, і висівали для додаткового зворотного схрещування трьох донорних алелів з рекурентними батьками. Для підтвердження гіоридності рослин Еї використовували маркери ПЛР. Один з чотирьох донорів був трохи вище, ніж рослини, що несуть КПІ-В1Б, але три з чотирьох донорів були дуже подібні по висоті один з
Зо одним і з рослинами, що несуть КПІ-В1р (напівкарликами). В експерименти по схрещуванню включають один або два додаткових алелі, які є трохи більш карликовими, ніж КПІ-В1Б, і які мають прекрасний стан спокою зерна, такі як ЕПІ-В1с.3 і/або КРЕВІ1с.17.
Обговорення
Після мутагенезу карликових сортів, що несуть алель важкої карликовості, виділяли мутанти ячменю і пшениці з посиленим ростом. Мутанти, що представляють інтерес, зберігали мутацію, яка викликає важку карликовість у батьківських сортах, але росли швидше, ніж батьківські рослини, внаслідок знову індукованої мутації в тих же генах ЕМЛЕ-В1 або 5іп1. Вони характеризуються посиленою передачею сигналу СА, хоча ступінь посилення був специфічний для обох алелів і розглянутої відповіді СА. Результати вказують на те, що гени ОеїЇа (5іп1 у ячмені, ЕПІ-В1 у пшениці) є найбільш частими ділянками мутацій посиленого росту. Тільки в одному випадку був залучений інший ген - у ячменю один з мутантів з посиленим ростом був наслідком нової мутації в Зру!1.
П'ять незалежних ліній підтримують висновок, що за фенотипи посиленого росту відповідали нові мутації в генах ОеїІа, ідентифіковані в даній роботі, а не незчеплена мутація або мутація в іншому гені або просто загальний наслідок обробки мутагеном. По-перше, для кожного з 13 мутантів ячменю секвенований "контрольний" ген (5е1) приблизно такої ж довжини, як і 5іІп1, і в жодному випадку не детектували замін основ. По-друге, спостережувані мутації були майже винятково (у 30 з 31 мутанта) замінами С на А, за умови, що С на Т представляє С на А у протилежному ланцюзі ДНК, подібно з попередніми спостереженнями за індукованими азидом мутантами по інших локусах, включаючи сзе1 (рецептор С), 5іІп1, гени біосинтезу ЗА і біосинтезу крохмалю. Внаслідок виродженості генетичного коду можна спрогнозувати, що, при випадкових замінах С на А, 33 95 не приведуть до відповідних замін амінокислот. Однак у більше ніж 90 знову індукованих мутантів, де кожний містив мутацію у відкритій рамці зчитування, в цих різних генах ячменю не спостерігали жодного випадку мовчазної заміни нуклеотиду. Ця відсутність вказує на те, що мутації відбирали тільки тоді, коли амінокислотна заміна порушувала функцію білка, приводячи до змін фенотипу. По-третє, ідентифіковані мутації майже завжди зачіпали амінокислотні залишки, що були консервативними. Наприклад, мутації ОЕЇГ ГА у видів злаків і таксономічно далекого Агарідорвів зачіпали амінокислотні залишки, що були ідентичними, тільки з двома або трьома бо виключеннями. Це можна спостерігати на фігурі 8, що демонструє вирівнювання білків САЇ пшениці КПЇ-В'а і Агабідорхі5, демонструючи ідентичні консервативні амінокислоти в двох послідовностях. Заміна висококонсервативних амінокислотних залишків з набагато більшою імовірністю приводить до функціонального порушення активності білка, ніж заміни низькоконсервативних залишків. По-четверте, незалежні схеми мутагенезу давали приклади ідентичних мутацій і, таким чином, відповідних ідентичних замін амінокислот, індукованих у ячменю, у ячменю і пшениці й у пшениці. По-п'яте, коли проводили дослідження зчеплення, після схрещування і наступної сегрегації, завжди спостерігали 100 95 зчеплення між мутантними фенотипами і мутантними послідовностями генів.
Алелі посиленого росту підсилюють передачу сигналу СА і, таким чином, найбільш ймовірно знижують кількість білла ОБГ А або його функціональну активність, останнє ймовірно зачіпає його взаємодії з іншими білками. У деяких випадках диференціального сплайсингу, також існував потенціал утворення білків ОЕ ГА з різними вставками амінокислот у рамку зчитування.
Наприклад, мутанти іноді продукували вставки, більш короткі або більш довгі, ніж вставка 30 амінокислот у білок КПІ-В1с. Заміни амінокислот можуть приводити до збільшеного руйнування
РЕА, якщо вони приводили до більш сильної афінності до комплексу (ЗА-СІО1Ї або до субодиниці Е-рбох. Малоймовірно, що випадкові заміни підсилять білкові взаємодії, хоча при ефективному скринінгу мутантів усе-таки можна одержувати дуже рідкі події. Попередні спроби визначити вміст біль»а ОЕЇ А у різних частинах рослин пшениці за допомогою способів з антитілами були безуспішними (Реагсе еї аїЇ., 2011). Автори винаходу вважають, що більш ймовірним є те, що мутантні білки ОЕЇ! ГА, одержані, як описано вище, мають знижену афінність до інших взаємодіючих білкових партнерів. Значна кількість замін амінокислот відбувалася в мотиві ІНК, області, яка у Агабідорзі5 залучена у взаємодії з РІКА і РІЇ 5 (де І исаз еї аї., 2008;
ЕРепод еї аї., 2008). Різний вплив конкретних алелів посиленого росту на ріст у порівнянні з продукцією а-амілази у ячменю свідчить, що різні області білка ОБГ ГА для регуляції цих двох відповідей взаємодіють з різними білковими партнерами.
Несподіваним виявилося те, що майже всі ідентифіковані мутації посиленого росту були в одному гені, особливо в гені, для якого показано, що він фундаментально важливий для контролю росту в ряді видів рослин у контрольованих і польових умовах. Перевага нових алелів у гені ОеїІІа, закодованого у пшениці і ячменю, підкреслило важливість цього гена для контролю
Зо росту. Наприклад, серед похідних карлика зі зміною біосинтезу (ЗА з посиленим ростом, мутантів, що могли збільшити вміст активних СА, наприклад, таких як мутації в генах катаболізму СА, не ідентифікували, незважаючи на великі кількості проаналізованих мутантів.
Успіх в одержанні множини нових мутантів у пшениці є наслідком того факту, що карликовість внаслідок напівдомінантних алелів, таких як ЕПІ-В1с, фактично була диплоїдною ознакою, що зачіпає тільки один із трьох геномів. Це забезпечило відбір ряду похідних алелів з втратою функції (відносно ЕПІ-В1с), багато які з яких включають внутрішньогенні вторинні мутації.
В обох видах нові алелі виявляли по агрономічно важливій ознаці, а саме висоті рослини.
Крім того, спостерігали варіацію інших залежних від ЗА ознак, деякі з яких мали практичний інтерес. У ячменю спостерігали більш великий розмір зерна і збільшену продукцію а«-амілази без необхідності в додаванні (ЗА. Обидві ознаки вважають корисними, наприклад, для збільшеної життєздатності раннього паростка і поліпшеної ефективності солодження, відповідно. Велика колекція мутантів пшениці включала мутанти з діапазоном у ступені карликовості крім існування алелів напівкарликовості КМІ-1, що, за очікуваннями, має значення в спрямуванні конкретних алелів у конкретні навколишні середовища (Ріїпійат еї аї., 1997).
Також спостерігали значну варіацію інших залежних від СА ознак з практичним значенням, наприклад збільшену довжину колеоптилю відносно рослин, гомозиготних по КПІ-1, і більш тривалий стан спокою зерна відносно рослин, гомозиготних по ЕПІ-Віа або КЕП-В1Б. Ці алелі повинні функціонувати як основні генетичні детермінанти при введенні ряду ознак у селекційні лінії під контролем досконалих молекулярних маркерів, доступних для гена.
Гени ЮОеМйа є висококонсервативними у різних видів. Порівняння послідовностей білка пшениці КРІ-Вта білків Агабрідорзі5 (паійапа СА! представлене на фігурі 8. Як можна бачити, існував великий ступінь ідентичності між цими білковими послідовностями у різних видів.
Важливо, що з 20 замін амінокислот, знайдених у мутантів пшениці з посиленим ростом, усі, за винятком двох або трьох, знаходилися в амінокислотах, консервативних у поліпептидах, кодованих генами пшениці і Агарідорзі5. Це переконливо підтверджує те, що залишки в цих конкретних положеннях у білках ОБГ ГА у різних видів є особливо важливими для активності.
Таблиця 1
Лінії, генотипи і мутації ячменю 10000111 дНуклеотид,/// |Амінокислота.///://Г/| 77171
Нітавуаї (МТ СГ
М778вед? |Зіпта/Злтає сто4тАЗ 0 (МЗалЛЬВ 111111
М78З3вео? |Зіпта/ЗіптаЗ с1839АЗ 00000000 (Мбіт 11111111 у тв! 0 |ЗибаєЄє 0 0с146913 54908111 тв8У |Зийїає с О839А81111100|ВаВОНО777 11111111 твІЗ 0 |Зитає | О80ЗА? 0 ф|В2абвНОГ///// 11111111 у тв26 |За, вруїа О8І2А(Зруї) |бгело(5РМ) 17771111. твБб? |За. 0 О82ЗАЇ 0 (А27ИТВ 7 /|1И1111111С1С твбОї |Зита8 с об9А? 0 1МаЗІМОГ/Г/Г/// 11111111 у тво: |Зитаб о біядаАЗ 0 ф|ВЯВІНГГ/Г//// 11111 у стві Ї 777-111 твТО? |Зитало о о84413 0 |Мевав//7///// |" че 1225 2 "ти ЛО 1 тв261 дг2б,віпіт О6ВОА 7 |0227Е.Й.::СЩ0.СССССССС|1И1111171СсСс2 твЗО5 |дг2б,віпто |С14547 ///|548БЕГ/:// 17111111 мент (2273310
Медеї |в Г/л
Мед3а о |вів 011 оМедавед? |віпів/бійіай Й
Мг47 о |врлаїдуГ Ти
Ммг48 0 Іатгбеврута.їд/ 01111111 лмг49 0 (|овейбврута./ 01111111
Виноски "Координати стосуються положень в кодуючій послідовності НмибіІп1 або амінокислотній послідовності 5І М1 Нітаїауа (номер доступу Сепрапк АКЗ72064), починаючи від АТО і закінчуючи ТОА. Для ТК26 координата стосується положення в кодуючій послідовності
Нузру! (АБО35820) або амінокислотній послідовності 5РУ1, починаючи від АТО і закінчуючи
ТА. г2Зерна являють собою потомство гетерозигот, сегрегуючих по локусу 5іІп1, як зазначено (гомозиготні подовжені потоншені рослини є стерильними).
З5Іп1а.1-5111а4.10 являють собою похідні 5іІп14 і на доповнення до зазначених нових замін містять вихідну мутацію 51Іп14. Тільки лінії з посиленим ростом (5Іп14.4-51114.10) можуть підтримуватися як гомозиготи. «Показані лінії, одержані після двох зворотних схрещувань з Нітаїауа перед відбором на гомозиготність алеля.
Таблиця 2
Нуклеотидні послідовності праймерів для ПЛР, використовуваних у даному документі (від 5' до 3") 1 |ВЙИЗАБ5 бСТОСАОСОСААТААСАТЯ З І5ЕОІЮ МОВ 11111 |вйИЗвна /// ОСТСТобАСССАсСАоСАЄ 0 І5ЕОЮ МО о |ВйИЗАВ ТАОСООСАОСАСТОСТАаАА. 7 І5ЕОЮМОгг2 111. |ВйЗнЯО (ТТСАААСТСоСОстТсАСЯ 7 І5ЕОЮ МОЯ 00000001 Вставніпраймери.ї/////77777717717111111111111111Ї111111111с1С о фвизвн5 доСстособтТабдаттТОсс 7 50 МО 11111 фвйизвна /// ОСТСТобАСССАсСАоСАЄ 0 І5ЕОІЮМО28 11111110 Специфічнідлягеномубпраймери.//./:/;///Ї.777771771сСсСсС 1. |В-О1Е /// (6бАбСТАОбСТСОСОбАТСА 7 І5ЕОЮ Мого 11111101 |В-О1А8 (СО ТТСААААСТСОСсАсА. 7 |5ЕОЮМОзо
Таблиця З
Лінії пшениці, генотип КПІ-ВІ1 і мутації вв
Продовження таблиці З
Таблиця 4
Фенотипи ліній з посиленим ростом відповідно до алеля
Висота зрілої Довжина Показник Показник
Алель КП-В1 Лінії ТК рослини колеоптилю стану спокою | стану спокою
ВІД Обвід Сезон 1 Сезон 2 високорослої) високорослої) вп-вта | 7777777771771717171171007 77771007 17771110 110 ввів ЇЇ 77777777777177777111811Ї171111118411171111о 110 впВІС ОЇ 777777777/71777171717117142 77711116 1411140 140 вл-ВІсї | 70417Й7ЙЮЙЮЙД90 4 4БЮюь»ящхЦ | 9 120 1 и 11190119 20 171 14111111 921 11111882 171 16111891 94111т1о 11 1111 ва17111111921 11111197 120 1 11178171 95...ЙЮЙЮЙ. | .Й.ЮЙЮЙЮЙ.88 Б щ її її 11191798 911 1 в 11931181 111 179517111176Ї1111171861111111111111171120 11 1778041177771111199 11187110 11 18111192 Ї17111111898111111о0 11 віз 11111932 11 111 8е711111111192|111196 120 1 18801111111195....ЮЮ.Ї..Ю.ЮЮ.9 6 ЮщЩщ її Її 18651711 96 11111211 17873 177111119811111119711 1 11178791 881 11119310 11 вл-ВІс2 | 60 17777793 4 ЮюЮщЦ| 102 | 20 1111168 1771171711196 1111198 110171 11111675 1111111196 | ....82 110 її вв 1111111881711111118811 г 1 88417711111197 11111105 11111 19111197 11111961 20 171 пл и: «У и п: Я ПО: КОНЯ ПОЛЯ НО
ВЛ-ВІс2 о |Середнє | 95 2Ющ | 95 | 13 | 9 19111111 11111781 20 120 вп-Віс4 | 885,..Й..ЙЮС 6 ДГ | 7 85.Йщ-КМЙ |.ДЦ(,(ЮЮ вл-ВІс5 | 725 | ЙЮЦБх 65 2 Щ | 6 | 30 вл-ВІсб | 875 | щ-« 59 2 Щ | 7 | 20 пил и: :х и З Я ПО: ОО ПО ОО ПО вип-ВІс6 |Середяє | 65 | 7 | 20
Продовження таблиці 4 нини ту и У п По: Я ПО А: ОО ПОЛ 11111 11160617771717111790177111117197 її 70 | г 1111111 Ї11760817717171717117195...юЮюЮЙЙ.17юЙЮЙ7юЮ7Ю788Ю 130 | С ши хи п: З Я ПОС У Я ПО ОО ни и п: З о ПО: Я ПОН: Я ВОНИ ОО 111101 11167917711111790 17771179 | 70 | г щЩщ 11 Ї176801777711119317711111190 11701 с1 то 1111911111111195. 120 | г нини и Ти о: Я ОХ ТУ Я ПО А ТОНЯ ПОЛ ни п Ти о: я Пт ПОЛЯ ПО ТАТ ВОНИ ОО 0Ї11779017771111797.17777111192 | 170 нн и т и У о ПТ: ПОЯВИ ПО ПОЛ А ПО 11111 Ї111195017711195...ЮюЮЙ17юЮ7юрюрю.108 1170 Ї111с1
ВИеВІс.7 о |Середнє | 91777171777177711111931 114 Ї111с1 вВлеВІс8 | 5 777759 .ЮюЮюЮЙ1... 80.1. .40 | 30 0111770 177711117587117177111117186 11111111 вл-ВІсЯ | 703 1юЮЙЮЙЮюЮ7Ю86..111117190 130 | щз0 0117780 1777771711791111717711171171861 1120 | 20 влеВІслЛОо | 886.17. .64 7717777717117807 1130 | СС влеВІсЛІ | 615 |17.7.7ю7ю7р7771об7 177171717171171941 1110 Її нин и т о: х В ПО: Я ПО А ТОНЯ ПОЛ 12 1711111179811111111111196 ЇЇ 20 | г нин и та и о ЕР Я ПО: ТЯ ПОЛ А ТОНЯ ПОЛ 01777111 11111111961 1110 ЇЇ нин и ТУ и и: и По: СЯ ПО А ТОНЯ ПОЛ 11111 Ї117786177771111799171111197 | 70 | г щЩ
Ї1177921771111л1ою11 11111193 111111 18755111
ВиеВІсСЛІ о |Середнє |/777/99.747.777771777171711194 11 Її влеВІсла | 687 17777753 77177717171711176 1140 влеВІслЗ | 6921. .8071777171711114 Її 1т1о пед ПЕ: ел ПТ: Я ПО ТЯ ПОЛОН ТАТ ПОН ПО 111 Ї11784617771111лот 11111118 Її 11111 Ї1717870177777111799 1.777118 1110 Її 1882 17111111787177111117187 1170111 1 189011111119017111111лою1 її 11111171171979 1.971105 | 7 0117990 111190 11119111
ВиеВІсС1З3 |Середнє 77/92 17777717198 1101111 влеВІс14 | 973 77.57 17777782 | 40 | С вилеВІсЛ5 | 911 17777771790777177717171717195...ЮЙЮЙЙ.|.ЮЙ30 | щЩщ Ж вилеВІсЛв | 5 17777777178987771777177111711192 | 20 | 20 11111101 111672177777111780117171717171185...Ю. |. 30 | щ з0 77717171 |11686 1.77 176.17.7.7777.88 1 20 | 30 01842 17777111780111111111811 11120130 влеВІслЛ8 | 63 1777771796.7 17777794 | 40 | щЩ 116 177111111931171771117117881 1130 | 21 117783 .17777171117199 111.97 | 70 | г Щ 1117805 17.77.94 17771115 1110 Її (ВлеВІс.18 |Середнє | 96 2 | 96 | 23
Продовження таблиці 4 161 111111194171171111117197 її 70 її 1111 1116481777711117197. 17777 мае 120 71111111 667 1.771798... 1....7.984Ю | 70 | гг
ВиеВІс19 |Середнє | 93 77717777 100 17116 Ї11сС1С влеВІс2о | 601 | 777793 2 щющф17777790 2 | / 11111614 177711117197 1777119 2 | 10 1110 Їв211111797. 17771190 Її 70 | г 1111 647177111111719917111111192 | 20 | г 111111 111649177111111710о2177171111195 1170171 71111111 66417771117197. 1... 98 | 170 | г щЩщ 77717171 6661777.98.4.ю71..777.98Ю | 70 | с 11111111 111716741777771117199 1.771184 170 11101 Ї1116771777711117991777111196 | 70 | гг нин У и п: По У ДЯ ПО А ТОНЯ ПОЛ 7111117 Ї177683 17771198 1.711901 70 | г щЩ 7111117 Ї17716841777771117199 171187 | 70 | г щЩщг'- пед Пс: З ПО ТЕ ОХ ПО УНН ПОН ПО 1 188911111119011111111111111Ї1111ї11 ни п: те о: я ПО: Я ПОН ТИ ВОНИ ПО 111111 17171986111111195....ЮЙ17.7ЙЮ77.122. |. 1 1717989,1118471771111191 111111
ВиеВІс2о |Середнє | 96 7777 1777777794 ЇЇ влеВІс21ї | 878 777758... 171717171711774 1130 | 1 нн хи сх Я ПО: У Я ПО Я ОО ПО
ВиЛеВІс21 |Середнє | 60777717 7811 125 |ССсСсСсС у влеВІс22 | 544 | -( 84 1777777 8671140 |т1о 1111623 17777171111761111171111111801111130 | 30 вВлеВІс24 | 542 |777/81777771777717111788 11111111 ни З п: ТЯ ПОС У Я ПО ПОН Ж ОН 1011705 .17.Й7.77171777..171717171717190 1 30 | 30 11111722 82111184 11140130 11111 Ї117231111111847177111117184171 11120 | 30 1741 111111197111711111185... 1170 0117877 177777111781111171711111171881 111130 | 20 вВлеВІс25 | 774 | ло? 177777711785.Й.|.Б т | ггссИсИсИсЙ2 00111776 17771171 11111111901 1110 Її
ВиеВІсС25 |Середнє | 1017/1777 88111101 0117753 171111117611177111111175.. |... 120 1791 1711111180111111111111831111130 30 01815 17711111117817711111711111118011711130 111 11111 111605 1.777176.177777 73 | 40 | 70 нин ши и и и по 7: ПО Я по ПО т ПО 0 Г8801111111717711111111175 |1.170 | 70 77111111 117678 1777777 827717771711185..ЮЙЮЙДЙ. | ЮЦЮюЦДто | 0
Продовження таблиці 4 77777111 Ї117690 1801778. | 70 | щ 1010 Ї111775217777717861771717171711782 11117010 вилеВІсЗї | 872 17777102 17777771788 111111 11111902 17111111л1ою1 11111119 111 Ї111 1912 1711ло 11111184 111 Ї11
ВиеВІс31 |Середнє | 10117777 8831170 Ї1111с1 влеВІсЗа | 913 ї77717917771717711111787 1117011 ни Тл У о ОТ: ПОДНЯ ПООООООЯ ОО
ВиеВІсЗ2а |Середнє | 87.77 17777875 |170Ї1111с1 влеВІс33 | 644 17777798... їв Її 1111 Ї11729171111119811111111л2 110 Її нини и Ст о: ПО ПО: Р Я ПО А ТОНЯ ПОЛ ши п: З и п: Я ПО т ПОЛЯ ПО ТАТ ВОНИ ПО
ВиеВІс33 |Середнє 97.77 177777171199 11701111 влеВІс34 | 728. 1777798.7777177111111911 110 Її нини и г о: о ПО: З Я ПО А ТОНЯ ПОЛО
ВиеВІс34 |Середнє | 96 7 1777777790 1170 Ї111с1С вилеВІс35 | 914 |1.7777795...0Юї1їЙ44К.ЙЮЙЩ 87... |... 11117197 11111196 1.92 | 170 (ВпеВІс35 |Середнє | 96 2 | 8955 | 70
Таблиця 5
Швидкості подовження листів і продукція а-амілази у мутантів ячменю з посиленим ростом 00100111 (ммідобл) | Огод.(х103) | 42год. | 72год.
Ніт(аАз) МТ 77777 5253501 |нд. | 9815086 | 23152,8 омбао(с0Аз) биїа | 12и150,3 |нд/////// |ндо нд тво 17777771 - 1111111 | 1бижом | 34 | буаомло бо омабз(сАз) ою2ь | 49,850,8 |нд. | 72050773 | 1895414 омбоз(0Аз) оветп | 3553412 |нд.//////// |ндо нд т8ЯО? оветп,війтп | 29,3540,5 | 99 | 0275003 | 0265013
Таблиця 6
Дія зрута на швидкості росту і продукцію с-амілази 11111111 Д(ммідоб7) | Огод.(х1033 | 42год. | 72год.
Таблиця 7
Довжина колеоптилів (у мм) ліній ячменю з посиленим ростом
ВЕД: ТЕХ ПО ПОН КОКС 5 КУ
Таблиця 8
Висота рослини відносно високорослого сорту (алель КПІ-В'а) і показники стану спокою зерна для рослин пшениці мутантних ліній гг вита ЇЇ 77777777771717171717171111во111111111171Ї11111111111111101111111 вв ОЇ 77777777777111111811111111111СГ1111111111110111111 виВІС ОЇ 777777777777171171717142111111111Ї11111111111111111811 виВІсС2 ЇЇ 777777777771771717171795......77777777171171111111111111111011
Продовження таблиці 8
Петя хе ТВ ПОН Те ООН КОХ Ж ОО влеВІСЛв ОЇ 777777777777777171717178981111111111111Ї1111111111111110111111
Не тотох хе ВИЙ ПОН Те ООН КОХ КО влеВІсг! ЇЇ 77777776 111111111114 влеВІС28 ЇЇ 7777777777771111111181111111111111Ї111111111111101111 " Показник стану спокою розраховували як кількість тижнів зберігання зерна до проростання 50 95 зерен у тесті проростання.
ПОСИЛАННЯ
Аспага еї а. (2009), 9. Ехрії. Вої. 60, 1085-1092.
Агапа вії а!. (2011), Ргос. Маї). Асад. 5сі. ОБА. 108, 9292-9297.
Азапо ві а!. (2009), Мої. Сепеї. Сепотісв, 281, 223-231.
Саго! єї аї. (1995), Ріапіа 197, 414-417.
Спападіег єї а. (1999), Ріапі Рнувіої. 120, 623-632.
Спападіег єї а!. (2002), Ріапі Рнувіої. 129, 181-190.
Спапаїег єї а!. (2008), Мої. Ріапі. 1, 285-294. де І исаз М. еї аї. (2008), Маїиге, 451, 480-484.
РІЇ еї аї. (2004), Ріапі Сеї, 16, 1392-1405.
Біїїв єї аї. (2005), Тпеог. Аррі. Сепеї. 111, 423-430.
Еепа еї аї. (2008), Маїиге, 451, 475-479.
Ніпінат еї аї. (1997), 9. Адгіс. сі. 128, 11-25.
Еи еї а. (2002), Ріапі Сеї, 14, 3191-3200.
СиіНИНв еї а!. (2006), Ріапі СеїІ, 18, 3399-3414.
Напмеск (2008), Ріапіа, 229, 1-13.
Нігагпо вї а!. (2010), Ріапі Сеї, 22, 2680-2696.
Ноодепдоогп єї а). (1988), п МійПег Т.Е., Коерпег В.М.О., Ргосеєдіпуд5 ої Ше 5бемепій
Іпіетаїйопа! М/пеаї Сепеїїсв Зутровішт, Іпвійше ої Ріапі бсіепсе Везеагсій, Сатбгідде, ЦО.К., рр. 1093-1100.
Ікеда еї а. (2001), Ріапі Сеїї, 13, 999-1010.
Кирризату еї а!. (2009), Ріапі Мо). Віо!. 69, 375-381.
Моппа ес! аї. (2002), ОМА Вез. 9, 11-17.
Мигавзе еї а!. (2008), Майге, 456, 459-463.
Реагсе вї а!. (2011), Ріапі Рпузіої. 0О1:10.1104/рр.111.183657.
Репа еї а). (1999), Маїшиге, 400, 256-261.
Вобрегізоп ві а!. (1998), Ріапі Сеї|, 10, 995-1007. зазакі єї а!. (2002), Майшге, 416, 701-702. зазакі єї а!. (2003), Зсієпсе, 299, 1896-1898.
Зпітада еї аї. (2006), Ріапі У. 48, 390-402.
Зпітада вї аї. (2008), Маїшге, 456, 520-544.
Зімегвіопе сеї а!. (1997), Сепеїісв, 146, 1087-1099. зЗімегвіопе еї а!. (2007), Ріапі Рпузіої. 143, 987-1000.
Зб
Зрієїтеуеєг еї а. (2002), Ргос. Маї). Асад. осі. (ОБА) 99, 9043-9048.
Зип (2010), Ріапі Рнузіо!. 154, 567-570.
Оеєдиспі-Тапака еї а!. (2005), Маїшиге, 437, 693-698.
УМ їде сеї а!. (2007), Ріапі Сеїї, 19, 1209-1220.
УМзОп еї а. (1995), Ріапі РНувзіої. 108: 495-502.
Моїрапа сеї а!. (2004), Ріапі Рпувіо!ї. 134, 769-776.
Ми еї а!. (2011), Ріапі Ріузіо!. 0О1:10.1104/рр.111.185272.
Уатадисні (2008), Аппи. Неу. Ріапі Віо!. 59, 225-251.
Уататою еї а!. (2010), Ріапі Сеї, 22, 3589-3602. «маг еї а. (1995), Ріапіа 197, 39-48.
СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
-1105 СОММОММУУЕАСТН 5СІЕМТІРІС АМО ІМОО5ТАІАГС ВЕЗЕАВСН
ОРСАМІЗАТІОМ
«1205 ПШЕНИЦЯ З НОВИМИ АЛЕЛЯМИ АНТ-В1 -1305 35103002/МОР -1605 30 «170» РаїепіНп мегвіоп 3.5 -2105 1 «2115» 3892 «212» ДНК «2135» ТШісит аевімит
Зо «4005 1 адаадсдсу адіассадда сассддадда адсддсо99юд дссддддаду сададсісд (10)
Іссдаддаса адаїааюої дісддадісо дсд9с99с99 д99адодада доаддіддас 120
З5 дадсідсідд сддсдсісд9 діасаадад юйоддсосс дссіссісдсадсодссонс 180 неносісі саїсісісаї даасасасас саїддадааа сісіасасасасасасасас 240 аассаадаад аасассоддсі дайасшос асдададодсс сісіссцо діддаасаад 300 адасіасай дідншес садсссісії ддсісасцй ісісансаї сісіссаас 360
Нааагадсі аадіасаада сідасссаад сасндссад ссдссасісі сдсадсідсі 420 аасодсссасі аасісадса сіадодссасі ааїсасаасі аасісаїдса сдсаїдсасс 480 асассддсса сіаїсасаїд ассддоасдас іаасссасіа дсіасадса дсаасіада 540
Іаасіассії аїссаїдсас іссаддасіс доасаасісса ссодасодссс содсісдіадс 600 адссдсддда сндсідсіа асдааассас дсасаїсаад ацйадідсіаасацісссс 660 сенНаа!гсії дасасодссії дссдісдасс дісаїснда асодссідадсісдасдЯісн 720 сасасдссіс сдсдсссдсі дсдасаїдсс дідсдсссос сідісассдд адййдаїдса 780 осндсаса ісдісдісас ддссдідасс садссідсо9д асссдасссо асдсаїсдас 840 дссддісаса ссдссасдда сссдассідуд сдсасідасу ссддісосас сдуідсісссї 900 бо сасдассссд дсдасаїасд ссдадсіссії ссдссоддсда сасасоссід дсдісссісї 960 дсдісссдса сдісссдсас дсаїссдасод Ідсссдасда дсссдассос адсадідсаї 1020 сссдсасдіс ссдсодсдсаї Іісдасдсдсс сдасдадссс дасадсасса дасосісасс 1080 асдідссдсс іІссодсдіссЯ ссаддсадс сассасдссд сдссіасдід ссасдсассі 1140
Іссасддіса йдссссдад ссдісдсдас сіадсосса ссасосадді ссісдсдас 1200 "7 сіссісдісї ссдсдассдс сдідсссне дсдсасасіс сссасдіссс сдсудсіссса 1260 дсссдсоусіс ссдссдсдса сдіасосоді сідсдсаасс аддіссадса ссісдасася 1320 діссасіссс дсддісссда сосасісдас асдіссадід сдсдсссаїа асасдсасся 1380 дісдсдісса асісдссосс дсаїснаїї дсссідсасс дссдсддссі ссаїдссдсс 1440 аюдсадідсс Іссасдссдс сасассдіді дсассосід сдссассаса садсодссісд 1500 7 дсоддссіссод сддїісоассдс асдіасдасу ісассдсссод ссдссіссдс сасдсусісд 1560 ссдсдсдссод садссдаїйдс сіссащісд дссдсдсаїд ссссдіссдс сасадасдсс 1620 ассдсдсдсс асоддссоссс сісдаассії діддасісіда аїассааац Пддсдссдс 1680 сіссісдсад сдссойнсії снссісіса ісісісаїда асасасасса юдадааасі 1740 сіасасасас асасасасаа ссаадаадаа сассодсіді тасшосас дададудсссі 1800 7 Ісіссноді ддаасаадад асіасайцої чншссса дсссісноа сісасіййс 1860 їсансаїсі ісіссаасії аааїадсіаа діасаадасі дасссаадса спдссадсс 1920 дссасісісуд садсідсіаа сдсссасіаа сісадсасі аддссасіаасасаасіаа 1980 сісадсаса саюдсассас ассоддссасі аїсасаїдас сдддсдасіа асссасіадс 2040 їТасадса!йд саасіадайа асіассцаї ссаїдсасіс саддасісдо саасіссасс 2100 7 ддасодссссо сісдіадсад ссдсдддасі (осідсіаас дааассасодс асаїсаадаї 2160 тадіосіаас аадаїсода сдіссдасаї ддсддаасоїд дсодсадаадс іддадсадсі 2220 ддададдсс аддадада дсдоасаід99 сдссддсдсс дсдсссдасоу асадснсоЯс о 0/ 2280 сасссассіс дссасддаса ссдідсасіа саассссасс дассісіссі ссіддаїсда 2340 дадсащсід гІсддадсіса асдсдссодсс дссдссссіс ссдсссдссс сдсадсісаа 2400 7 сдссіссасс іссіссассод Ісассддсдо содддіаснс даїсісссос ссіссдісєда 2460 сіссіссідс адсассіасд сдсідсодсс даїсссдісс ссдоассдісд сассддссда 2520 ссісіссдсс дасіссдісд дсдадаїсс саадсдда сосасіддсо дсадсадсас 2580 сісдісдіса іссісаїсої ссісісісда сддіддсдас дссаддадсі сідїддідда 2640 дсюссссо ссддідасса ссасод9дсс99 дсдсссосо сідссдаїса ісаїддїсда 2700 60 сасдсаддад дссддданс ддсюддідса сдсдсідсід асаїдсодсдо аддссуїдса 2760 дсаддадаас Нсісідссуд сддаддсодсі дддаадсад айасссійдс ддссусдіє 2820 ссадддсоддс дссаїдсдса аддісдссдс сіаснсдоас дадодсссісуд сссдссдсдї 2880 сцссдсне сдсссдсадс сддасадсіс ссіссісдас дссудсснсЯ ссдассіссї 2940 ссасдсдсас Нсїасдаді ссідссссіа ссісаадійс дссосасіїсассдссаасса 3000 "7 ддссаїссю даддсоунсд ссддсідссу ссдсдідсас дісаїсдасіїсдудсаїсаа 3060 дсаддадаї садіддсссо ссснсісса дасссіддсо сіссдісссу дсдудсссісс 03120 сісдансосдс сісассддсо Ісддсссссс дсадссддас дадассдасу сспдсадса 3180 ддаюодасідо аадсісдссс адісдсоса сассаїссос дісдасисс адіассдсдд 3240 ссісдісдсс дссасдсісд сддассідда дссонсаїд сідсадссоададдодсдадаа 3300 7 ддасссдаас даддадсссод аддіааїсдс сдісаасісу дісйсдада дсассоддсі 3360 дсісдсдсад сссдасоссс їддадаадої ссідддсасс дідсдсдссу соадссдад 3420 даїсдїсасс аіддіддадс аддаддсдаа ссасаасісс дасасайсс іддассдси 3480 сассдадісс сюдсасіасі асіссассаї дансдансі сіддадддсо дсадсіссдуд 3540 сддсссаїсс даадісісаї сіддддсдас юсідсіссі дссодссосс9у дсасддасса 3600 7 ддісаїдісс даддщіасс іІсддссодса даїсідсаас дідаїддссідсдаддадас 3660 ддадсодсаса дадсддсасод адасссідду дсадіддс9ду аассдссісд дсаасдссдд 3720
З5 дисдадасс діссассідд дсіссаадс сіасаадсад дсдадсасодс сідасасі 3780 сісдссддс дасдасоддаої асааддаідда даадааддазд досідссіда сосіддоадаід 3840 дсасасосас ссдсідаїса ссассіссос аддсоссід дссдсдссді да 3892 -2105 2 «2115 1956 «212» ДНК «2135» Тісит аевімит «4005 2 адаадсдсу адіассадда сассддадда адсддсо99юд дссддддаду сададсісд (10) зо Іссдаддаса адаїааідої дісододісу 9с99с99с99 999299999а д9а9919ддас 120 дадсідсідд сддсдсіс9д9 діасааддас іІсддсаасіс сассодасодс сссодсісаїа 180 дсадссоасода дасідсідс їаасдааасс асдсасаїса аданадідсіаасаадат 240 7 сдддсадіссЯ асаїддсдда саїддсодсад аадсіддадс адсіддада оддссадсоду 300 аддосдосо щадсодсс99 сдссосодссс дасдасадсі Ісдссассса ссісдссасу 360 60 дасассдідс асіасаассс сассдассіс іссіссіддо ісдададсаї дсідісддад 420 сісаасдсдс сдосдссдсс ссісссдссс дссссдсадс іІсаасоуссіс сассіссісс 480 ассдісассяд дсддсоддата сісдаїсіс ссосссіссо Ісдасіссіс сідсадсасс 540 і тТасдсдсідс ддссдаїссс діссссодсс дісдсдсс9до ссдассісіс сдссдасісс 600 дісдідс9оад аіїсссаадсу даїсосасі ддсдасадса дсассісадіс дісаїссіса 660
Ісдіссісіс Ісддсдаї99 сддсодссада адсісідідо юддадосідс сссоссда 720 дссдсес9дс99 ссдаїдсосс сдсдсідссо дісдісдіда ісдасасдса ддадасс99д 780 айсоадсіду юсасасасі асюдсогдс дсддадоссяо ідсадсадда даасійсісї 840 й дссдсддада сосіддідаа осадаїассс Поусіддссод сдісссадод9 сддсудссаю 900 сдсаадаісод ссдссіасії сддсдадоасс сісдсссдсс дсдісносо снпссудсссу 960 садссддаса дсісссіссі сдасдссосс Нсодссдасс іссіссасос дсасіїсіас 1020 дадіссідсс ссіассісаа діїсдсссас йсассосса ассаддссаї ссіддаддасд 1080 псоссддсі дссоассосаї дсасдісдіс даснсоддса Ісаадсадд9 даїдсадідд 1140 7 сссдсссійс іссаддсссі ддсусіссодї сссддсоддсс сісссісдН ссдссісасс 1200 досдісоддсс ссссдсадсс ддасдадасс дасоасснос адсадаюда сіддаадсіс 1260
Зо дсссаднсо содсасассаї ссдсдісдас Нссадіасс дсддссісді сдссдосасу 1320 сісдсддасс юдадссцдії садсідсад ссададддсу аддаддассс даасдаддад 1380 сссдадаїаа іІсдссдісаа сісддісне дададвсасс досідсісдс дсадсссддс 1440 7 дсссіддада аддіссідда сассдідсдс дссаїдсоддс сдадааїсаї сассдїдуаїд 1500 дадсаддаду сдаассасаа сіссддсаса йссіддасс дсисассда дісссідсас 1560
Тасіасісса ссаїдіїсда Псісіддад ддсддсадсі ссддсддссс аїссдааціє 1620 їсаїсщада сдодсідсідс Іссідссдсс дссддсасоду ассадчаоісаї діссдадаїд 1680 тассісддсс досадаїсід саасоадю дссідсдадо ддасоададсо сасадаядсяд 1740 7 сасдадассс ддосадід асддаассодс сісддсаасу ссддайсда дассдіссас 1800 сіддасісса аїдссіасаа дсаддсдадс асодсідсідд содсіснсдс сддсоддсдас 1860 дддаіасаадо дададдадаа дааддосідс сідасоасіда даїддсасас дсодсссудсід 1920 аїсдссассі ссдсадаодсо ссіддссдсд ссоща 1956 «2105» З «2115 651 «212» Білок «2135» Тісит аевімит 60 «4005 З
Меї Гуз Агу Сім Туг Сп Авр Аа Спу Спу Зег СПіу Спу Спу Агу Су 1 5 10 15
Спу Меї Сіу бЗег бег Сім Авр І уз Пе Меї Маї Зег Сіу 5ег Аа Аа 20 25 0)
Аа Спіу Спи Спу Спи Си Маї Авр Сі І еи І єи Айва Аа І ви Спу Туг 35 40 45
Гуз А5р 5ег Аа ТНиг Рго Рго Азр Аа Рго ГІ еи Маї Аа Аа Аіа Су 50 55 60
Ї еи Аїа Аа Авп Си ТАг Тнг Нів Пе Гуз Пе 5ег Аа Авп Гуз Маї 65 70 75 80
Аг Аа 5ег Ар Меї Аа Ар Маї Аа Сіп Гуз Геи Спи Сіп Гей Спи 85 90 95
Меї Аїа Меї Сіу Меї Спу Спу Ма! Спу Аа Стпу Аа Аа Рго Авр Ар 100 105 110
Зо зЗег РНє Айа Тнг Ніз І ви Аа ТАг Азвр ТНг Маї Ні Туг Авп Рго ТНг 115 120 125
Азр І єи Зег 5ег Тгр Ма! Спи Зег Меї І еи 5ег Сім І и Авп Аа Рго 130 135 140
Рго Рго Рго ГГ еи Рго Рго Аїа Рго Сіп І еи Авп Аа 5ег ТНг Зег Зег 145 150 155 160
Тпиг Ма! Тиг Спу Сіу Спу Туг Рне Авр І єи Рго Рго Зег Ма! Азр Бег 165 170 175
Зег Суз Зег ТНиг Туг Аа І єи Агу Рго Пе Рго 5ег Рго Аа Маї Аіа 180 185 190
Рго Аїа Авр І єи 5ег Аа Ар 5ег Маї Маї Аго Авр Рго І уз Агу Меї 195 200 205
Агу Тиг спу Спу 5ег Зег ТНиг Зег Зег Зег Зег Зег Зег Бег Зег І єи 210 215 220
Спіу Спу Спу Спу Аїа Агу 5ег 5ег Ма! Ма! Спи Аа Аа Рго Рго Маї 225 230 235 240 (516) ді
Аа Аа Ага Аа Су Аа Рго Аа І ви Рго Маї Маї Маї Ма! Авр Тиг 245 250 255
Сіп Сім Айа Спу Пе Ага Геи Маї Ні Ага І єи Геи Аа Суз Аа Си 260 265 270
Аа Маї Сіп Сп Спи Авп РНе 5ег Аа Аа Сім Аїа ГІ єи Маї Гуз Сип 275 280 285
Пе Рго Г еи Геи Аа Аа Зег Сіп Спіу Спу Аа Меї Аго Гуз Маї Аа 290 295 00
Аа Туг Рпе Сту Си Аа ГІ еи Аа Агу Аго Маї Ріє Ага Рне Ага Рго 305 з10 315 з20
Сіп Рго Авр 5ег 5ег І еи І еи Авр Аїа Аа Рне Аїйа Авр Геи І єи Ніб 325 330 335
Аа Ніз Рпе Туг Сім Зег Суз Рго Туг ГГ еи Гуз РНе Аїа Ні Рпе Тиг 340 345 350
Коо) Аа Авп Сп Аа Іе І еи Сіи Айа Ріє Аа Сіу Суз Агу Агу Маї Ніб 355 360 365
Ммаї Маї Авр Ріє Сту Пе Гуз Сип Спіу Меї Сіп Тер Рго Аа ГГ еи Гей 370 375 380
Сп Айа І єм Аїа І єи Ага Рго Стпу СПу Рго Рго 5ег РНе Аг Гей ТНг 385 390 395 400
Сіу Маї спу Рго Рго Сіп Рго Ар Сіи ТНг Авр Аїа І еи Сп С1пп Маї 405 до 415
Спу Тер Гуз І єи Айва Сіп Рне Аїа Ні Тнг Пе Агу Маї Азр РНе Сп 420 425 430
Туг Агу Су І єи Маї Аа Аа Тнг І єи Аа Авр І еи Си Рго Рне Меї 435 440 445
Ї еи Сп Рго Спи Спу Спи СП Авр Рго Авп Си Спи Рго Спи Маї! Пе 450 455 460
Аа Маї Авп 5ег Маї Рпе Стпи Меї Ніз Аго І єи Геи Аа Сіп Рго Спу 465 470 475 480 60
Аа Геи Сім Гуз Ма! Геи Спу ТАиг Маї Ага Аїа Маї Агу Рго Ага Іе 485 490 495 маї Тнг Маї Ма! Спи Стій Спи Аа Авп Нів Авп 5ег Сіу ТНг РНе І єи 500 505 510
Азр Агу Ре Тиг Сім Зег ГГ еи Ніз Туг Туг Зег ТАг Меї Рне Авр 5ег 515 520 525
Ї ви Спи Спіу Спу бег Зег Спу Спу Рго Зег Сіши Маї Зег 5ег Сіу Аа 530 535 540
Аа Аа Ага Рго Аїа Аїйа Аа Стпу Тиг Авр Сп Маї Меї Зег Сім Маї 545 550 555 560
ТугГеи Сіу Агу Сп Пе Сувз Авп Маї Маї Аіа Суз Сім Спу Аа Спи 565 570 575
Агу Тиг Си Аго Нів Спи ТНг Гей Спу Сіп Тур Агу Авп Аго Гей Сіу 580 585 590
Коо) Азп Аїа Сіу Рне Сім ТАг Маї Нів І еи Спу Зег Авп Аа Туг Гуз Сп 595 (100) 605
Аа 5ег ТНИгГ ей еи Аа І єи Рне Аа Сіу Спу Азр Сіу Туг Гуз Маї 610 615 620
Стій СП Гуз Спи Сіу Суз І еи ТНг І еи Спу Тер Ніз Тнг Ага Рго І єи 625 630 635 640
Пе Аа Тниг Зег Аа Тгр Ага Г еи Аа Аа Рго 645 650 «-210» 4 «211» 1866 «212» ДНК «2135» Тісит аевімит «400» 4 ащдаадсодсоу адіассадда сдссддад99 адсд9с9д9ю дсдддо9дадао саддосісд бо
Іссдаддаса адаїагцюої дісддадісо дсд9с99с99 д99адодада доаддіддас 120 дадсідсщо сддсосісду діасаад9ю сдадсодіссо асаддсода сдідасдсад 180 аадсіддадс адсіддадаї дассадад9до аїдосодосо ддосодссоду сдссдсдссс 0240 бо дасдасадсі Ісдссассса ссісдссасо дасассдідс асіасаассос сассдассіс 300
Іссіссідду Ісдададсаї дсіцдісддад сісаасдсдс сдссдссодсс ссісссдссс 0360 дссссдсадс ісаасодссіс сассіссісс ассдісассу дсдасодоіа спсддаїсіс 420 і ссдсссіссо ісдасіссіс сідсадсасс їасососідс ддссдаїссс діссссдоасс 480 дісдсдссда ссдассісіс сдссдасісс дісаїдсо99д9 аїсссаадсоу дадсодсасі 540 додсдодсадса дсассісдіс дісаїссіса Ісдіссісіс ІсддсоЯдід9 сддсодссадуд 600 аасісідідд юдадаосідс сссдссодід дссдссдсодо ссддідсосс содсосідссу 0660 дісдісаща ісдасасдса ддаддссоду айсодсідо дсасдсосіасідасаїдс 720 й дсададдссяо Ідсадсадда дааснсісї дссдсддадо сосіддідаа дсадаїассс 780 пдсюдсса сдісссаддд сддсдсса сосаадаоісд ссдссіасі сддсдадудсос 840 сісдсссдсс дсдісйссд спссдсссд садссдудаса дсісссіссі сдасдссодсс 900 псдссдасс Іссіссасдс дсасисіас дадіссідсс ссіассісаа дисдсссас 960 псассдсса ассаддссаї ссіддаддсо Нсассдасі дссдссодсаї дсасдісдіє 1020 7 даснсдоса ісаадсадда даїдсадідо сссдсссне іссаддсссі ддсосіссдї 1080 сссдусддсс сісссісдії ссдосісасс ддодісдоасс ссссдсадсс ддасдадасс 1140
Зо дасдссноас адсаддаюда сюдааодсіс дсссаднсо сдсасассаї ссдсдісдас 1200 пссадіасс дсддссісаї сдссдссаса сісдсодасс їддадссоун садсідсад 1260 ссддаддоасд аддаддассс даасдаддад сссдаддіаа іІсдссдісаа сісддаісцйс 1320 7 дадаїдсасс ддсідсісдс дсадсссддс дсссіддада адаїссю9до сассдідсдс 1380 дссудсдас сдаддаїсої сассдщаї дадсаддадо сдаассасаа сіссддсаса 1440 пссіддасс дсисассда дісссідсас їасіасісса ссаднсода Псісюдад 1500 ддсдасадсі ссддсддссс аїссдаацвдіс ісаїсідддо сддсідсідс іссідссдсес 1560 дссддсасодд ассаддісаї діссдадоїо їассісддсс ддсадаїсід саасоїддд 1620 й дссіюдсдадо дддсддадсд сасададсдд сасдадассс ддддосадід дсддаассудс 1680 сісддсаасд ссадайнсда дассдіссас сіддасісса аїдссіасаа дясадасдадс 1740 асосідсідд сдсіснсдс адасадсдас додіасаада їддадаадаа ддаддасідс 1800 сідасдсща доащддсасас дсдсссодсід аїсдссассі ссдсадаса ссіддссосЯ 1860 ссощда 1866 «2105» 5 «2115 621 «212» Білок бо «2135» Тісит аевімит
«4005» 5
Меї Гуз Агу Сім Туг Сп Авр Аа Спу Спіу Зег Спу Сіу Спу Су Спу 1 5 10 15
Спу Меї Сіу бег бег Сім Авр І уз Меї Меї Маї бег Спіу 5ег Аа Аа 20 25 0)
Аа Спіу Спи Спу Спи Си Маї Авр Сі І еи І єи Айва Аа І ви Спу Туг 35 40 45
Гуз Маї Агу Аа 5ег Азр Меї Аа Азр Маї Аа Сп Гуз І еи СП Сп 50 55 60
Ї еи Спи Меї Аа Меї Спу Меї Спіу Спу Маї Спу Аа Сту Аа Аа Рго 65 70 75 80
Азр Ар 5ег Ре Аа ТНг Ніз І ви Аа Тнг Авр ТНг Маї Ні Туг Авп 85 90 95
Рго ТНг А5р Геи Зег Зег Тр Маї Сім Зег Меї І еи Зег Сім Гей Авп 100 105 110
Зо
Аа Ріо Рго Рго Рго ГГ еи Рго Рго Аїйа Рго Сп І ви Авп Аїйа 5ег ТНг 115 120 125 зЗег Зег ТНг Ма! Тиг Спу Спіу Спу Туг Рне Азр І єм Рго Рго 5ег Маї 130 135 140
Азр Зег 5ег Сув 5ег ТНиг Туг Аіа Геи Агу Рго Іе Рго Зег Рго Аа 145 150 155 160 маї Аа Рго Айа Авр І єи 5ег Аіа Азр 5ег Маї Ма! Агу Авр Рго І уз 165 170 175
Агу Меї Агоу Тиг Спу Спу Зег Зег ТНиг Зег Зег 5ег Зег 5ег Бег ег 180 185 190 зЗег І ей Сіу Спу Сіу Сіпу Аа Ага 5ег 5ег Маї Ма! Сім Аа Аа Рго 195 200 205
Рго Маї Аа Аїйа Аа Аїйа Сіу Аа Рго Аїа І єи Рго Маї Маї Ма! Ма! 210 215 220 (510) Азр Тпиг ап Спи Аа Сту Пе Аго І єм Маї Нів Аїа І єи І єи Аа Су
225 230 235 240
Аа Сти Аа Маї Сіп Сип Сім Авп Ре 5ег Аа Айа Си Аїйа І еи Маї 245 250 255
Гуз Сп Пе Ро Гей І еи Аа Аа бег Сп Спу Спу Аа Меї Ага ГІ уз 260 265 270 маї Аа Аа Туг Рне Су Сім Аа І ей Аа Ага Агу Маї Рне Агу Рне 275 280 285
Аг Рго Сп Рго Авр 5ег 5ег І єи Гей Авр Аа Аа Ріє Аїа Авр І єи 290 295 00
Ї еи Ніз Аа Ні Рне Туг Си Зег Суз Рго Туг І єи Гуз РНе Аїа Нів 305 310 315 з20
Ре ТНиг Аа Азп Сп Аїа Іе І єи Спи Аа Рнє Аа Сіу Суз Ага Аг9 325 330 335 маї Ніз Маї Ма! Азр РНе Сту Пе Гуз Сіп Спу Меї Сіп Тр Рго Аїа 340 345 350
Зо
Ї ей Г єи Сп Аа ГІ єи Аа Гей Аг Рго Сіу Спу Рго Рго бег Рпє Аг9 355 360 365
Ї ви Тиг Су Маї Спу Рго Рго Сп Рго Ар Сім ТАг Азвр Аа Г еи Сп 370 375 380
Сіп Ма! Спу Ттр Гуз Геи Аа Сип Рне Аїа Ні Тнг Пе Аго Маї Авр 385 390 395 400
Рпє Сп Туг Аго Су Гей Маї Аа Аа Тниг Геи Аа Авр Геи Си Рго 405 а410 415
Рпе Меї Геи Сп Рго Спи сту Сти Спи Авр Рго Авзп Спи Спи Рго Спи 420 425 430 маї Ме Аа Маї Авп 5ег Маї Рнеє Сім Меї Ніз Ага ГІ єи І єи Аа Сп 435 440 445
Рго Сту Аа Гей Спи Гуз Маї Геи Сіу Тнг Маї Ага Аїа Маї Ага Рго 450 455 460 (510) Ага Іе Маї Тиг мМаї Ма! Спи Сс1п Спи Аа Авп Нів Авп Зег СПУ ТНг
465 470 475 480
Рпє І еи Авр Аг Ре Тиг Сім Зег І еи Ні Туг Туг Зег Тиг Меї Рпе 485 490 495
Азр Зег І еи Спи СПТу Спу Зег Зег Спу Спу Рго бег Сім Маї Бег Зег 500 505 510
Су Аїа Аа Аїйа Аїа Рго Аїа Аїа Аа Сіу Тпг Азр Сіп Маї Меї Зег 515 520 525
Сіи Маї Туг Геи Сіу Агу Сп Пе Сув Авп Маї Маї Аіа Суз Спи СПу 530 535 540
Аа Спи Ага Тнг Сім Ага Ні Сі ТАг ЇЇ еи Спу Сп Тер Агу Авп Ага 545 550 555 560
Ї ви Спу Азп Аа Стпу Рпе Ст ТАг Маї Нів І еи Спу Зег Авп Аа Туг 565 570 575
Гуз Сіп Аа 5ег ТАг І еи І еи Аа І єи Рне Аїа Спу Спу А5р сту Туг 580 585 590
Зо
Гуз Ма! спи Спи Гуз Спи СТу Суз І еи ТНг Гей Спу Тгр Ні Тнг Аго 595 (100) 605
Рго ГІ єи Пе Аа Тнг 5ег Аа Ттр Ага І єи Аа Аа Рго 610 615 620 -2105 6 «2115 7057 «212» ДНК «2135» Тісит аевімит «4005» 6 даансдаас ідсасаїасу їаїдаадад ассісаададї ссассдаїй ддіссайда (10)
Нагагагад дасіаайсс іссаааадда доаїсддсіс дсаїсассаа адіаїссаас 120 діасісадіє асісаадс99 аїа(дсаюа дссддсасда сноддісдсу ссдсдсадїас 180 сасасдадсяа дас99д9щ949 саїсосодаїйї асссддіссо ідсосісдіа садісасаса 240 садддсдсас сассодаїсіс даасаації сасіассссс Іссасаснс Нсізйоїд 300 дсдіасдас ддааанаїс ддсодс9додосо дідсассодю дассдаїсодудодоассссасс 360 ддаюсадсад сісіддісса сдаадассся іддіаїсссс дсддідассс ссасаддаад 420 60 аадсасаїдд сдсідссісс дсдаїаадді посіадосс ісдщдаассіассаддаїсяа 480 дсдсасдаа ісдідадасс юсдісодаї ссдсссосо99 сдассдіссуд ддсссасяд 540 садсісадсс дісісідааа дааацдієдоо ддсссасодо саасідіаді асдсасдс9да 60о0 і ддаддааааї даїааїдсодс дссадаадаа іадааїаааса даааіаадда ШИсІіадс 660 ааддагааас аааааїааад дддадчісда доіссааїсс ддіаіадсссаїсссідсіс 720 сашсідс ассдссодаої ссадідідсс дассідщдас Шідасааа щдідіасадс 780 ааасасасід асодаїсідсі їадаїсдаїс адіанадід дадаадаїаа дасаайайа 840 їадссаїад їадіадної саїашадс їаїатанії сайдунНаа! Шааїсаїс 900 й ссасаїасі аддадсаїдс аадсайнааї аднаїаці аасассаада даїадсдуїді 960 саншааї дасащшіоїо дсаїаацдіас адаїсіааа адасідаді ддаїдаїааї 1020 ішссісса ааіадааіас ашаїдада ддааааасої аададсіссд анасайда 1080 ісааідаїйаї дсадідааа дсадісісса асадацйода аїдасаїадс дсдіайайаа 1140 сааддіада ісааїідасаа ааіааїадсс айсіссаад аюааїсаса їадсіаасдс 1200 7 дасдаддадс аїсссасдді санаїсаю їасссассдс садсісааді дддіссісаї 1260 ашшосі Нсісней юсноно9 аїсіададсі іспйноїа дасидаді 1320
Зо тададоода їайдаїдаої даасаносі дасададаї іассісцді данйссосасс 1380 доунсссссс Паюйсої соїдсісна сісдааїсса ссіссааїса даадаїсдд 1440 ссдсссіаїд дсносссд їаїсадаасс дідідісдса Падсіаші айасдідіса 1500 7 сдщдадодсаа ааїісасдсаа аіасіїдааа пПоднаї їаїаїссно діааайайс 1560 досюдааї! сааїссіаса аасіааасда ссадсасдда ааадаассс аадієндда 1620 аїссаїщо ссаїаадсса садддадддс сасасдассо садсдсасоадададададад 1680 ддададддаяд ісщасдсад садададссс саїсасссдс адсоннй нНсістаай 1740 тдсададдайн сідадаща юдасісада ашодіаасі ддаїдосдаа д«шШаїсіда 1800 7 Заїааадас дсдсдсдася ааїссадісса іІсдаїссаас дсідідсосо дйодсссд 1860 ддссссдссс дссадсдасс сассасідід ссссдсоссад аїдссИссс оссссосіссса 1920 їссаїсдссс дадссцдісі асаасіасіа сдсідссдсі сссісдсідс ісідсісдсі 1980 сіссісссіс сссассссаа ссаїссссді сіссіссісс НПосіссісі сссосдассс 2040 дадаїссааа ісссддсссо ссссададсс ддааїсдадд саадсаааад сідадавда 2100 7 агадададас дадаїаддда ддасдададас дадаїсаїда адсосдадіа ссаддасадсс 2160 додадддадсо дсадіддсд9 дададдса дасісдісся аддасаадаї даюдідіся 02220 60 9991с99с99 сд9с99999а 9999929929 999асоадс юсідосодс осісдодіас 2280 аадаюсодад сдіссдасаї ддсддасаї дсодсадаадс ддадіадсі ддададдсс 2340 ащдоадааюа дсдоасоюда сассдасосс дсдсссдасо асадсісодс сасссассіс 2400 і дссасддаса ссдідсасіа саассссасс дассісіссі ссідоадісда дадсаюсід 2460
Ісддадсіса асдсдссдсс дссдссссіс ссдсссдссс сдсадсісаа сдссіссасс 2520
Іссіссассд ісассддс9д9 садоїтаснс даїсісссдс ссіссдісда сіссіссідс 2580 адсассіасд сдсідсддсс даїсссдісс ссддссдісд сдссддссда ссісіссдсс 02640 дасіссдісд дсдддаїсс саадсддаїд сдсасіддсу дсадсадсас сісдісдіса 2700 й Іссісаїсді ссісісісду сддіддсддс дссаддаєдсі сіаїддідда досідсссся 2760 ссдощасса ссасадсс99 їдсдсссосо сідссоддісо ісащдісда сасдсаддад 2820 дссдддайс дасіддоса сасусісід дсоїдсодсад аддссаїдса дсаддадаас 2880 нсісідсс9у сддадодсосі ддідаадсад агасссндс ідассосаїс ссаддодсддс 02940 дссадсодса аддісдссдс сіасісддс даддсссісу сссдссдсдї сИссосИис 03000 7 сдсссдсадс сддасадсіс ссіссісдас дссудсснсод ссдассіссі ссасдсдсас 3060 нестасдаді ссідсссста ссісааднсе дсссасіїса ссдосаасса ддссаїссід 3120
Зо дадасойсод ссддсідссу ссдсоїдсас дісдісдасі Ісддсаїсаа дсаддоадаюд 3180 садюдсссод ссснсісса дасссідосо сіссдісссу дсддсссісс сісойссЯс 03240 сісассддсод Ісддсссссс дсадссоддас дадассдасу сспдсадса ддаіддасіда 3300 7 аадсісдссс аднсдсдса сассаїссдс дісдаснсс адіассдсодод ссісдісдсс 3360 дссасдсісд сддассідда дссоуйсаїд сідсадссо99 адддсдадда даасссдаас 3420 даддаадсссяа аддіааїсос сдісаасіса дісйсдада дсассдасі дсісдсдсад 3480 сссддсдссс їддадаадаої ссідддсасс дідсдсдссо їдсддссдад даїсдісасс 3540 дюдіддадс аддаддсдаа ссасаасісс ддсасайсс юдассосії сассдадієс 3600 7 сідсасіасі асіссдссаї айсдайсі сідчадоадсо дсадсіссда сддсссаїсс 3660 даадісісаї сіддддсдас їосіосіссії дссодссоссо дсасддасса оддісаїдісс 3720 дадащшіасс Ісддссддса даїсідсаас дідаіддссі дсдаддадос ддадсудсаса 3780 дадсдасасд адасссідду дсадіддсдд аассдссісуд дсаасодссда днсдадасс 3840 діссассідад асіссааїдс сіасаадсад дсдадсасодс дсіддсосі спсдсадас 3900 7 додсдасдаді асааддвюда ддадааддад досідссіда сосіддодід дсасасдсдс 3960 ссдсідаїсо ссассіссдс аюадсоссід дссдсодссої дассдсдаді Шдаасоусі 4020 60 діаадіасас аїсдідадса ддаддасда сасаассссд дсодссоссс сдасісіссу 4080 дсдсасодсас дсасосасас ісйдаадаа даадаадаад сіааащіса дісадідаа 4140 сдсюаацо садсддссду ссасдаїсда ссдіссд9со9 даададасоу дасдасдасу 4200 і аасіссдадс сдассаїссс ассддсаююі адіаашціаа ісссНсНс діссссади 4260 сіссассдсс іссаїдаїса сссдіаааас Ісссаадссс їасіасіасіасіасіасіа 4320 сіастасіас іаїсаїій аааїдісіаї тїапдсаад іаанссі ссааісудсіс 4380 адаїсааааї аадсдсдддс сддасщтаї їадсідсісс ааїдадаа аааадаан 4440 пдіасодсаа сдсасдіссду ааасідадсс дадсісідії сіднснда їдйсадді 4500 й асо аїсааснад сіссшодс саїдшодад доспдссда аддааднціс 4560 ссдаїстадд адндсідса ааїдагдсод саїйодаа адаїсісоаїдіадшсссс 4620 сідсддшщід ддісасссс дссодсіддсі дшссідаї сіааааада ассідсасдї 4680 таоподада ддаддодсоса ісадсаїсад саїсассасс даїсддссаа ддснсддсс 04740 сідсідссда адсааїсаді даїсаааас сдааїассді йсідсасаа садсндссу 4800 7 Іістаадддса Шіасааїща юддсаїаща агасаїащці сссаасаа ааадіааш 4860 дадасассіа сашадш Нснсссаа ддсаасссас адіаадаада сісапаада 4920
Зо ааїадааааї аааааїша діасасаїдс аїсістасії Псасісаа ШИНСсадс 4980 ішдісасс ддасіїсаад сасссдссіс сіддададда іІсссдсціс сіаїссдааї 5040 сіасшасая ісаїаїссда іссіасащда садщадос аїсасснда ддсіаїдсаї 5100 7 щіасаюдас ададідссд сассоссдіа дсааїсадсі сдаїдаїсаа адсайнНаї 5160 асссдадсдс аїасдсана ссдасоадсос даїсдісої садададсадіаасішйдс 5220 ддчадоддаї щасосадад дсддасодад садіаасн дсодоадао дайддсдса 5280 дадасддосо дадсадідда аассідадад дссасідсід дсідасаїд9д содсандсса 5340 спсіднад щашсідс сісідсасад дассадсоі ддссдоассода ссіаїсдааа 5400 7 сісассдсдс сдсодсоддіаа ааднсдіс сондадс9а ддосдідада сіддоасідса 5460 дсасададаа саснаассс дсдідсаїса ісассдссад ссадссддсс адссдсддсу 5520 іссощащі асссасддда дснсідаса осадіааааа ааасасаада содаїдідіда 5580 аддаоссадїід чадаїсіддс дідсоюодсс дсаааїсісс сссоссододід асдісдддсс 5640 тдсдадсіїї нашаасс щдассідссс даддсдадодс ссддсддсса аїдддаддсес 5700 7 дсоддіадаад Шаодос999 дддаааддаа ададаададааяд аідддсдоаса дсаасадсід 5760 їссааісад9 аїсаддащюада сащісадодо адаїшдагцадї ддідддоссс дудссдісддс 05820 бо сісідссссі сссідісдаї сссадісада дасасасасс дсіадсіадс діддсіасі 5880 адсадсісід ддсосісідас ісассіссід сісддосс9ду ддасадсссо дссссассяс 5940 сдаїааадаа аасддааааа ддададддда ааїаднсїа дсдідадід9 дадсссосаас 6000 і сссадсіссуд ссдаїсс9дд9 дссадоаоо9аї саайнсосас дідідідасс ссдасдадсо 6060 сдаюаїдсс дсссссдідс саїдсссосо сасоссісос сдсіссссда ісдссодаїс 6120 аадсіссадїсуд сдсдсс9дс99 сддсдасаїа іадсссдссс сідсісдссс сасаїдсаса 6180 сддассасоас сддщдассід асссаїссаа ссдаасссда Іссіаїссіс дсдісдсддс 6240 садссдадао даддасдаї Шопнаїсс сдсддсдсдс сасдадассяо діссіаїсся 6300 й асдассддсд сассддсодса щдааанай дсдсюадосо сдосодд9а9а асоїдідадс 6360 дюїссащсе аїддаїасос чідддансс дідсдайсс одсіддссай ддссасдсад 6420 сідсааддда адаащаа щюонодаїд ададдаїсода Нсдаїдаї дідасссдді 6480 аюдідас дсодсасаїдс дасада9юа (дсдоддісад даасісаїсо дссдісцЯї 6540 дсісдаасса сісісідсад дддааадсд ссддадсссо сдісаасісу дсддісасас 6600 7 сдаїсасадо аїааддаіюда сддасдадаї дішсісії днсодаїааадаааддоаю 6660 дсонНааадс дасідсасдс ададодсодіса ддісіаїаіа аадаадацші нишаса 6720
Зо псддааааї дідадсіаді асіссіасаї асаїацдні сн йдадсаїса 6780
Тасаїащії Нешоаїйї даадососо їааатаюда йдаснаніаноудаасі 6840 ддаагацнда НПасдіааді ташанодд адсіддасаї дснасссад ідсдацаа: 6900 7 дсюдсаасіа ссіссайсії дашанад сссссндіа Шаадосаа аааааааада 6960 аацааддіс аїадшоас саїаацшса асіааіааад іаааадцнаа асаїаддада 7020 40 ааіаатана іІссдааасіа Пдісаааїа Чаанс 7057 -2105 7 «2115 555 45 «212» Білок «2135» Тісит аевімит «4005 7 50 Меї Аїа Меї Сіу Меї Спіу Спу Ма! Спіу Аа Спу Аа Аа Рго Азр Авр 1 5 10 15 зЗег РНеє Айа Тнг Ніз І ви Аа ТАг Авр ТНг Маї Ні Туг Авп Рго Тиг 55 20 25 0)
Азр І єи Зег 5ег Тгр Ма! Спи Зег Меї І еи бЗег Спи І ей Авп Аа Рго 60
Рго Рго Рго Г еи Рго Рго Аїа Рго Сіп І еи Авп Аа бег ТНг Зег Зег 50 55 бо
Тпиг Ма! Тиг Спу Сіу Спу Туг Рне Авр І єи Рго Рго Зег Ма! Авр Зег 65 70 75 80
Зег Суз Зег ТНиг Туг Аа І єи Агу Рго Іе Рго 5ег Рго Аа Маї Аа 85 90 95
Рго Аїіа Авр І еи 5ег Аа Авр 5ег Маї Ма! Агу Авр Рго І уз Агу Меї 100 105 110
Агу Тиг спу Спу 5ег Зег ТНиг Зег Зег Зег Зег Бег Зег Бе зЗег І єи 115 120 125 сСіу Спу Спу Спу Аа Агу 5ег Зег Маї Маї Сім Аа Аа Рго Рго Маї 130 135 140
Аа Аа Ага Аа Су Аа Рго Аа І ви Рго Маї Маї Маї Ма! Авр ТНг 145 150 155 160
Сп Сім Айа Спу Пе Аго Гей Маї Ні Аа І єи І єи Аа Суз Аа Спи 165 170 175
АІа Ма! Сип Сіп Сі Ап РНе 5ег Аа Аа Спи Аа І еи Маї І уз Сіп 180 185 190
Пе Рю ГІ еи І єи Аа Аа 5ег Сіп Спіу Спіу Аа Меї Ага Гуз Маї Аа 195 200 205
Аа Туг Рпе Сту Си Аа ГІ еи Аа Агу Аго Маї Ріє Ага Рне Ага Рго 210 215 220
Сіп Рго Авр 5ег 5ег І еи І еи Авр Аїа Аа Рне Аїйа Авр Геи І єи Ніб 225 230 235 240
Аа Ніз Рпе Туг Сім Зег Суз Рго Туг ГГ еи Гуз РНе Аїа Ні Рпе Тиг 245 250 255
Аа Авп СіІп Аа Іе І єи Спи Аа Рне Аа Сіу Суз Агу Агу Маї Ніб 260 265 270
Ммаї Маї Авр Ріє Сту Пе Гуз Сип Спіу Меї Сіп Тер Рго Аа ГГ еи Гей 275 280 285 (516)
Сп Айа І єм Аїа І єи Ага Рго Стпу СПу Рго Рго 5ег РНе Аг Гей ТНг 290 295 зо00
Сіу Маї спу Рго Рго Сіп Рго Ар Сіи ТНг Авр Аїа І еи Сп С1пп Маї 305 з10 315 з20
Спу Тер Гуз І єи Айва Сіп Рне Аїа Ні Тнг Пе Агу Маї Азр РНе Сп 325 з30 335
Туг Агу Су Гей Маї Аа Аа Тнг І еи Аа Авр ГГ еи Спи Рго Рне Меї 340 345 350
Ї еи Сп Рго Спи Спу Спи СП Авп Рго Авп Си Спи Рго Спи Ма! Пе 355 360 365
Аа Маї Авп 5ег Маї Рпе Стпи Меї Ніз Аго І єи Геи Аа Сіп Рго Спу 370 375 380
Аа Геи Сім Гуз Ма! Геи Спу ТАиг Маї Ага Аїа Маї Агу Рго Ага Іе 385 390 395 400
Коо) маї Тниг Маї Ма! Спи Стп Сім Аа Авп Нів Авп 5ег Спу ТАг Рне І ви 405 до 415
Азр Агу Ре Тиг Сім Зег ГГ еи Ніз Туг Туг Зег Аіа Меї РНе Азвр 5ег 420 425 430
Ї ви Спи Спіу Спу бег Зег Спу Спу Рго Зег Сіши Маї Зег 5ег Сіу Аа 435 440 445
Аа Аа Ага Рго Аїа Аїйа Аа Стпу Тиг Авр Сп Маї Меї Зег Сім Маї 450 455 460
ТугГеи Сіу Агу Сп Пе Сувз Авп Маї Маї Аіа Суз Сім Спу Аа Спи 465 470 475 480
Агу Тиг Си Аго Нів Спи ТНг Гей Спу Сіп Тр Агу Авп Ага Гей Спу 485 490 495
Азп Аїа Ссіу Рне Сім ТАг Маї Нів І еи Спу Зег Авп Аа Туг Гуз Сп 500 505 510
Аа 5еї ТНг І еи І єи Аа І єи РНе Аїа Сіу Спу Авр Стпу Туг Гуз Маї 515 520 525 60
Сім Сі Гуз Спи Сіу Суз І еи ТНг І єи Спу Тер Ніз Тнг Агу Рго І єи 530 535 540
Пе Аа Тниг Зег Аа Тгр Ага Г еи Аа Аа Рго 545 550 555 -2105» 8 «2115 3463 «212» ДНК «2135» Тісит аевімит -4005» 8 їаїасаюй діддїасіад Ноїсаїайн їадсіаїаіа НШсаайа Пааннаа (610) ісаасссаса іаіїсіаддад садсаадса Наагадна даснаасас саададаїад 120 1дідісніс Нааїаасаї доддсаїа адіасасдаї сідааадасі дадісдаїд 180 аїаащшцоіс сіссааааад ааїасашо дададаїад аасасаадаа сіссдаїсас 240 андагїсааї даїсідсаїд даааа!ді сіссадсудда НМадаадас аїадсодсдта /-З00 7 Шаасаада їаддісааї дасааааїаа іадісасіді асаададаа дасаїадсі 360 ааасідасдс ддадсаїссс агддісаїса ссадсасас ассдссаасі саадідддіє 420
Зо сіаайцйнаї пусшсіс тадшосії анддаїсіа асдунсоші діайаасі 480 щаойнаїда діддаїгацно діддадаана Чайдасії дідссіассіспШаюс 540 ссссіссссо Шіссссії сіайсаїсу ІшопПасі дааїссодссіссааїсаю 600 7 ааїандасс аїссстаща сідасссоді аїсаїаассяа ідідісосаї їадсіаїіа 660 сощісаюдс дадасааааї сашіадаїа ддісаааатю Ппоопона дайсддіса 720
Ісдаїадаса аднаддодса ісшданс асаїдайсі адааасасаї даааїдаааа (780 даносааад Насодсссаї Ноааїсаїд сасдаїнії дошоано саїсдссдда 840 аааасдюда іссншісаї даддінса діддасасіа даайссцо дааідаайас 900 7 ааадаа!сс Ндоасааата ШОЮНОЯд айсааїссі асааасіааа сдассадсас 960 ддааааадаа іссссаадда Паааадасі ссіисдайс ааададодссс ісаасадідс 1020 аагассіїса аадіснодда аїссації сссададса сідсаадсса садададддс 1080 сасасддссд садсдсасду адааддадіс адасдіадса дадссссосаї сссдсаїадс 1140 акншаш аашосддоу зашсщад дідашодосо саадашої аасіддаюа 1200 7 сдааашої сіддідаїаа ададдосос дасдааїссо іссаїсдаїс саасосідід 1260 сасуюнода сссоадддссс сдсссдссад сдасссасса сіссасссад асссадаїдс 1320 бо сцсссссіс ссаїсасссяо аїдссдісіс дсааїсіссс сссіссосії ссссіасаас 1380 їасіасіасі сосісссдсі дссосісасі сосісдсіса сідсшусі сісісіссй 1440 сценНесіс сісНеосіс ссссассссс сдсосссосда сссіддаїсс аааіїсссдас 1500 і ссіссссада ассддаасся аддсаадсаа аааснддсо саанацодо ссддадатад 1560 діададаадс дадасадсіс дсісдсдою адосдадаїс адаадсосо адіассадда 1620 сдссдосдаа адсддщаса ддаодсоосаї ддасісдісї даддасаада дадаїдіє 1680 99с99с99с9 9999299999 аддадаювда сдадсідсю осододсосісо ддїасааддії 1740 дсоддоссісс дасаїдаосодд асдідасдса даадсюдаяд саосіддада ддссаюдоа 1800 й чаддасоддс діддасоасса асоассосссс сдасдасадс йсдссассс ассісдссас 1860 ддасассодід сасіасаасс ссассдассі сіссіссідд дісдададса дсідісдда 1920 дсісаасдсд ссдссдссдс сссісссосс сдссссосад садсісаасо ссіссассіс 1980 сіссассдіс асдддсдаю ддіаснсода ісісссоссс Ісдайдасі ссіссюсад 2040 сассіасдсс сідсддссда Іссссісссс ддессддсодсс дісдддссда ссдассідіє 2100 7 сдссдасісс дідсдадасс ссаадсоддаї дсдсасідас даддадсадса ссісдісдіє 2160 дісаїссісс Ісдіссісіс Ісдд4адоЯ соссаддасдс ісідюдіда адосідсісс 02220
Зо дссддісдсао дссдддосса асдсдсссдс дсідссоддіс дісдіддісд асасдсадда 2280 ддссоаддаїй сддсддіоас асдсдсідсії ддссідсудсу даддссдідсадсаддадаа 2340 сцсісідсс дсддадодсос дддаадса датасссцо сіддссдсді сссададсодд 2400 7 сдсдагсас ааддісдссд ссіаснсдо сдаддсссіс дсссдссоса ісйссосії 2460 ссдсссдсад ссддасадсі сссіссісда сдссдосне дссдассіссіссасдсдса 2520 спсіасдад іссідссссі ассісаадії сдсссасійс ассдссаасс аддссаїссї 2580 ддаддссіс дссддсідсс дссдсоддса сдісдїсдас Нсдосаїса адсададдаї 2640 дсадщюдссс дсссіссісс аддсссісдс одсіссдієсс дасодсссіс ссісоНссЯ 2700 7 ссісассддс дісддссссс сдсадссдда сдадассдас дссндсадс аддіддосід 2760 даадсісдсс саднсодсдс асассаїссод сдісдаснс садіассдсо дссісдісдс 2820 сдссасдсіс дсддассіда адссайсаї дсідсадссоя дадддсдадо аддасссдаа 2880 сдаддадссс даддіааїсо ссдісаасіс ддіснсдад аїсассодс ідсісдсдса 2940 дсссдосодсс сіддадаадао іІссідддсас саїдсодсодсс дідсддссда оддаїсдісас 3000 7 сощдаодад саддаддсса ассасаасіс сддсасайс сіддассодсіїсассдадіє 3060
Істдсасіас їасіссасса щіїсданс ссісдададс ддсадсіссуд дсддссосаїс 3120 бо сдаацдісіса ісддадосід ссосідсісс Ідссдссдсс ддсасддасс аддісаїдіє 3180 сдадащшіас сісддссддс адаїсідсаа соїддідасс юсдадоаооду соададсддсас 3240 ададсдссас дадасосіду ддсадідаса даассддсід ддасаасодссо одіїсдадас 3300 сдюсассід оддсіссааїд ссіасаадса дасдадсасо сідсіддссс їайсдссоад 3360 сддасдасода їасаадаїо аддачаадда ддасідссід асісісдоді ддсасасдсу 3420 сссдсідаїс дссассісду саюдсоссії ддссдсдссоу ща 3463 «210» 9 «211» 620 «212» Білок «2135» Тісит аевімит «4005» 9
Меї Гуз Агу Сім Туг Сп Авр Аа Спу Спіу Зег Спу Сіу Спу Су Спу 1 5 10 15
Меї Су Зег 5ег Сім Авр І уз Меї Меї Маї 5ег Аа Аа Аа Спу Спи 20 25 Зо сСіу Спи Сім Маї Авр Сім І еи І ви Аїа Аїйа І єи Стпу Туг Гуз Маї Ага
Зо
Аа 5ег А5р Меї Аа Ар Маї Аа Сіп Гув Гей Спи Сп Ї еи Спи Меї бо 35
Аа Меї Сіу Меї Спіу Спіу Ма! Спу Аа Су Аїа Аа Рго Авр Авр 5ег 65 70 75 80 40 Ріє Аїа ТНг Нів І еи Аа ТНг Азр ТНг Маї Ні Туг Азп Рго ТНг Ар 85 90 95
Ї еи Бег Зег Ттр Ма! Сіи бег Меї І єи 5ег Сім І и Авзп Айа Рго Рго 45 100 105 110
Рго Рго І єи Рго Рго Аїа Рго Сіп Сп І ей Авп Аа 5ег ТНг 5ег 5ег 115 120 125 50
Тпиг Ма! Тиг Спу Сіу Спу Туг Рне Авр І єи Рго Рго Зег Ма! Авр Зег 130 135 140 55 зЗег Суз Зег ТАг Туг Аа І єи Агу Рго ЇІе Рго 5ег Рго Аа Сіпу Аіа 145 150 155 160 (510) маї сапу Рго Аа Азр І еи 5ег Аа Авр 5ег Маї Агу Авр Рго Гуз Ага
165 170 175
Меї Агу ТАиг Спіу Спу Зег Зег Тиг Зег Бег Зег Зег Зег Зег Зег Зег 180 185 190 зЗег І ей Сіу Спу Сіу Аа Ага 5ег 5ег Маї Ма! Сім Аа Аа Рго Рго 195 200 205 маї Ага Ага Сту Аа Авп Аа Рго Аа І! єм Рго Маї Маї Ма! Ма! Азр 210 215 220
Тиг ап Сім Айа Спу Пе Агоу І! єи Маї Нів Аїа Г еи І єи Аа Суз Аа 225 230 235 240
Сім Аа Маї Сип Сіп Сі Авп Рне 5ег Аа Аа Спи Аа І еи Маї І ув 245 250 255
Сп Пе Рю ГІ ей І еи Аа Аа бег Сіп Спіу Сіу Аіа Меї Ага Гуз Маї 260 265 270
Аа Аа Туг Рне Су Сім Аа ГІ еи Аа Ага Агу Маї РНне Аг Рне Ага 275 280 285
Зо
Рго СіІп Рго Авр 5ег 5егіІ ей І еи Авр Аа Аа Рнеє Аїа Авр І єи І єи 290 295 00
З5
Ні Аїа Ні Рне Туг Спи Зег Суз Рго Тут еи Гуз РНеє Аїа Нів Ріе 305 з10 315 з20
Тиг Айва Авп Сп Аа Пе Гей Спи Аа Рне Аа Спіу Су Агу Агу Маї 325 330 335
Ні Маї МаїЇ Авр Ре Сту Пе Гуз Сп Спу Меї Сіп Ттр Рго Ага Гей 340 345 350
Ї еи Сп Айва Г еи Айа І єи Агу Рго Стпу Сіу Рго Рго Зег РНе Ага Гей 355 360 365
Тиг ау Маї Сіу Рго Рго Сп Рго Авр Сіи ТНг Авр Аїа І єи Сп Сп 370 375 380 маї Спу Ттр Гуз І еи Аа Сіп Рне Аїа Ні ТНг Іе Агу Маї Азр Ріпе 385 390 395 400 (510) Сіп Туг Агоу Су ГГ еи Маї Ага Аа Тиг І єм Аа Авр Гей Сім Рго Рпе
405 до 415
Меї І єи Сп Рго Сіи Спіу Спи Сі Авр Рго Авп Си Спи Рго Сім Маї 420 425 430
Пе Аа Маї Авп 5ег Маї Рне Сім Меї Ніз Агу І еи І еи Аа Сіп Рго 435 440 445
Сіу Аа Геи Сіи Гуз Ма! Геи Спіу ТАг Маї Ага Аа Маї Аго Рго Ага 450 455 460
Пе Маї Тиг Маї Ма! Спи Стп Си Аа Авп Ні Азп бег Сіу Тиг Рие 465 470 475 480
Ї еи Авр Ага РНе Тнг Сім 5ег І єи Ніз Туг Туг Зег Тиг Меї Рне Азр 485 490 495 зЗегіІ ей Сім Сіу СЧу бег Зег Спіу Сіу Рго Зег Сіи Маї Зег Зег Спу 500 505 510
Аа Аа Ага Аа Рго Аїйа Аа Аа Стіу Тнг Авр Сіп Маї Меї 5ег Спи 515 520 525
Зо маї Туг ГГ єеи Сіпу Ага Сіп Пе Суз Авп Маї Маї Аіа Суз Спи СПу Аа 530 535 540
Сім Ага ТАг сти Агу Ні Спи Тит Гей Спу Сп Тер Агу Авп Аг І ви 545 550 555 560
Сіу Азп Аа Сіу РНе Сім Тнг Маї Ніз Геи Стпу бег Авзп Аа Туг Гуз 565 570 575
Сп Аа 5ег ТНгі ей Гей Аа І еи Рнеє Аа Спіу Спіу Азр Стпу Тут І ув 580 585 590 маї Спи Сім Гуз Спи Спу Суз Геи Тиг ГГ еи С1пу Тер Ні Тиг Агу Рго 595 (5100) 605
Ї ем Пе Ага Тнг з5ег Айа Тгр Ага І єи Айа Аа Рго 610 615 620 «2105 10 «2115 1872 «212» ДНК «2135» Тісит аевімит (516)
«4005» 10 адааос999 адіассадда сдссддадод адс99со99с9 9с99199с99 сагщоосісо 60
Іссдаддаса адаюацюої дісдос99с9 9с99999299 9992992991 99асдадсід 120 і сюдсодсос ісдддіасаа ддосодсодсс іссдасаїдд садасдддс дсадаадсід 180 дадсадсісд адаюдссаї ддадададс д9с91999с9 ссдудсудссдс ссссдасдас 240 адсійсдсса сссассісдс сасддасасс дідсасіаса ассссассда ссідісаїсї /-з00 тдадісдада дсаїюсіцдіс ддадсісаас дсдссдссдс сдсссосіссс дсссдссссу 360 садсісаасо ссіссассіс сіссассдіс асддасадсд дсддсіаси сдаїсісссу 420 й сссіссадїсо асіссіссад садсаїсіас дсодсідсддс сдаїсссосіс сссддссдудс 480 дсдасдодсдс соадссдассі діссдссдас іссдідс999 аїсссаадсоу даюсосасі 540 дасдддадса дсассісдіс дісаїссісс іссісдісадї сісісдаю9 ддасдссадчд (100) аасісідідд юдадасідс сссдссодіс дсддссдсду ссаасодсдас дсссососія 660 ссддісдіса ддісдасас дсаддаддсс дддансодс ддідсасодс дсідсідасЯа (720 7 їдсдсддадао ссдідсадса ддадаассіс іссдссдсдо адасосідої даадсадата 780 сссіїдсіду ссдсдіссса ддодсддсосо аїдсосаа9до ісдссдссіа спсдудсдая 840
Зо дсссісдссс дссдсдісії ссдснссдс ссдсадссоду асадсісссі ссісдасасс 900 дсснсдссу ассіссісса сдсодсасне іасдадіссі дссссіассії сааднсосд 960 саснсассд ссаассаддс саїссюдад дсонНсдссо дсідссдссо соаїдсасаїс 1020 7 дісдасійсо дсаїсаадса даддааюдсад щдасссдсас НПсіссаддс ссісдсссіс 1080 сдісссддсо асссісссіс диссодссіс ассддсдісу дссссссдса дссддасдад 1140 ассдасдссс дсадсададї ддасюдаад сісдсссаді Ісдсдсасас саїссдсдіє 1200 даснссаді ассдсддссі сдісдссдсс асдсісдсдо ассіюддадсс діїсасід 1260 садссддадо дсдаддадда сссдаасдад дадсссдада іааісдссді саасісадіє 1320 7 псдадаїдс ассддсідсі сдсдсадссс ддсдсссіда адааддіссі дддсассаїд 1380 сдсдссдідс ддсссаддаї сдісассоїд діддадсадд адосдааїса саасіссддс 1440 асайссідд ассдснсас сдацдісісід сасіасіасі ссассаїдн сдансссіс 1500 дададсддса дсіссддс99 соддсссаїсс даадісісаї сддддасідс ідсідсіссї 1560 дссдссдссод дсасддасса даїсаїдісс дадащшіасс ісддссоддса даїсідсаас 1620 7 дюдідоссї дсдадададс ддадсдсаса дадсоссаса адасосідда ссадіддсд9 1680 аассдасідд дсаасдссда айсдадасс діссассідд асіссааїідс сіасаадсад 1740 60 дсдадсасдс Ідсіддсдсі сісдссддс ддсдасодсі асааддідда ддадааддаа 1800 дудсюссщда содсіддоадід дсасасдсдс ссдсідаїсуд ссассісддс аїдроасоссід 1860 дссддоссої да 1872 «2105 11 «2115» 623 «212» Білок «2135» Тісит аевімит «4005 11
Меї Гуз Агу Сім Туг Сп Авр Аа Сіу Спіу Зег Спу Сіу Спу Су Спу 1 5 10 15
Спу Меї Сіу бЗег бег Сім Авр І уз Меї Меї Маї 5ег Аа Аа Аа СПу
Зо 20
Сі сіу Сіи Си Маї Азр Си Г еи ГГ еи Аа Аа І єи Спу Туг Гуз Маї 25
Аг Аа 5ег Ар Меї Аа Ар Маї Аа Сіп Гуз Геи Спи Сіп Гей Спи 60
Ко) Меї Аїа Меї Сіу Меї Спу Спу Ма! Спу Аа Стпу Аа Аа Рго Авр Авр 65 70 75 80 зЗег РНє Айа Тнг Ніз І ви Аа ТАг Азвр ТНг Маї Ні Туг Авп Рго ТНг 35 85 90 95
Азр І єи Зег 5ег Тгр Ма! Спи Зег Меї І еи бЗег Спи І ей Авп Аа Рго 100 105 110 40
Рго Рго Ро Геи Рго Рго Аїйа Рго Сп І еи Авп Аа 5ег ТНг 5ег 5ег 115 120 125 45
Тпиг Ма! Тиг Спу Зег Спу Спу Туг Рне Азр Г еи Рго Рго 5ег Маї Азр 130 135 140 50 зЗег Зег 5ег Зег Пе Туг Аа Геи Агу Рго Іе Рго 5ег Рго Аіа Спу 145 150 155 160
Аа ТНг Аїа Рго Аа Азр І єи 5ег Аа Ар 5ег Маї Ага Авр Рго І ув 55 165 170 175
Агу Меї Агоу Тиг Спу Спу Зег Зег ТНиг Зег Зег 5ег Зег 5ег Бег ег 180 185 190 (516) бо
Зег 5ег І єи Сіу Сіу Спу Аа Агу 5ег 5ег Маї Ма! Спи Аа Аа Рго 195 200 205
Рго Маї Ада Аа Айа Аа Авп Аа ТНг Рго Аа І єи Рго Маї Маї Маї 210 215 220 маї Авр ТАиг Сп Сім Аїа Спу Пе Ага Геи Маї Ні Ага ГІ єи ГІ еи Аа 225 230 235 240
Сув Аа Сім Аа Маї Сип Сп Спи Авп ГГ еи 5ег Аа Аа Сти Аа І ви 245 250 255 ма! Гуз Сіп Пе Рго І єи І єи Аа Аа бег Сп Сіу Спіу АІа Меї Аг 260 265 270
Гуз Маї Аа Аа Туг Рне Сту Си Аа Ге Аїа Агу Ага Маї Рне Аг9 275 280 285
Рпє Агу Рго Сп Рго Авр 5ег 5ег І ви Г еи Авр Аа Аа РНе Аа А5р 290 295 00
Коо) Ї ей Г єи Нів Аїа Ні Рпе Туг Сіи Зег Сув Рго Туг Геи Гуз Рпє Аа 305 з10 315 з20
Ні Рне Тнг Айва Авп Сп Аа Іе І єи Сім Айа Рне Аа Спу Суз Аг9 325 330 335
Аг Ма! Ніз Маї Маї Авр Рпє Сту Пе Гуз Сип Спу Меї Сп Тгр Рго 340 345 350
Аа! еп ви Сіп Аа Гей Аа Гей Ага Рго Спіу Спу Рго Рго 5ег Рпе 355 360 365
Ага ГІ еи Тнг Сіу Маї Спу Рго Рго Сп Рго Ар Сім ТНг Авр Айва І єи 370 375 380
Сіп Сп Маї Спу Тгтр Гуз Геи Аїа Сіп Рпє Ага Ні ТНиг Пе Аго Маї 385 390 395 400
Азр Ре ап Туг Ага СУ І єи Маї Ага Аа ТнНг І єи Аа Авр І єи Спи 405 до 415
Рго Рпе Меї І єи Сп Рго Сі СТу СПи Си Авр Рго Азп Сім Спи Рго 420 425 430 60
Спи Ма! Ме Аа Маї Авп 5ег Ма! Рне Спи Меї Ніз Агу І єи І еи Аа 435 440 445
Сіп Рго Сіу Аа Г еи Сіи Гуз Ма! Г еи Спу ТАг Маї Аго Аїа Маї Агд 450 455 460
Рго Ага Іе Маї Тиг Маї Ма! Спи Сп Спи Аа Авп Ні Авп 5ег Су 465 470 475 480
Тиг Ре Геи Авр Агу Ре Тнг Сім Зег І єи Ні Туг Туг Зег Тиг Меї 485 490 495
Ре Азр 5ег І єи Спи Сіу Спу Зег 5ег Сіу Спу Спіу Рго бег Сіи Маї 500 505 510 зЗег Зег Су Аа Аа Айа Аа Рго Аа Аїа Аа Стпу ТАг Авр Сп Маї 515 520 525
Меї Зег Сім Маї Туг Геи Спіу Агу Сп Пе Сувз Авп Маї Маї Аа Су 530 535 540
Ко) Сім Спу Аіа Спи Агу Тнг Сім Аго Ні Спи ТАг еи СПу Сп Тр Ага 545 550 555 560
Азп Ага ГГ еи Сіу Авп Аа Спіу Рпе Сім ТАг Маї Нів І еи Спу Зег Авп 565 570 575
Аа Туг Гуз СіІп Аа 5ег ТНг І єи І єи Аа І єи РНне Аа Спіу Спу Ар 580 585 590 сіу Тут Гуз Маї Спи Спи Гув Спи Сіу Суз Геи ТНг Геи Спу Тер Ні 595 600 605
Тпиг Агу Рго Г еи Пе Аа Тнг Зег Аа Тгр Агу Г ви Аа Спу Рго 610 615 620 «2105 12 «2115» 618 «212» Білок «213» Ногдаєит миЇдаге «4005 12
Меї Гуз Агу Спи Туг Сп Азр Спу Сіу Спу Зег Сіу Спу Спу Счцу Азр 1 5 10 15 60
Сім Меї Сіу Зег бег Агу Ар І уз Меї Меї Маї бег 5ег бег Сім Аа 20 25 Зо сСіу Спи Сіу Спи Сім Маї Авр Сім Ге І єи Аїа Аїйа І єи Спу Туг Гув 35 40 45
Ммаї Агу Аа бег Азр Меї Аїа Азр Маї Аа Сп Гуз І єи Спи Стій ей 50 55 60
Сім Меї Аа Меї Спіу Меї Спу Сіу Рго Аїа Рго Азр Авр Сіу Рпе Аа 65 70 75 80
Тиг Ніз І єи Аа Тнг Авр ТНг Маї Ніз Туг Авп Рго Тнг Азвр І єи Зег 85 90 95 зЗег Тр Ма! Спи 5ег Меї І єи 5ег Сім І и Авп Аа Рго Рго Рго Рго 100 105 110
Ї еи Рго Рго Аїа Рго Рго ап І еи Авп Аїа 5ег ТНг Зег Зег ТНг Маї 115 120 125
ТАг Спу Спу Спу Спу Тут Рне Азр І єи Рго Рго 5ег Маї Азр 5ег 5ег
Ко) 130 135 140 зЗег Зег ТАг Туг Аа І еи Аго Рго Пе Пе Зег Рго Рго Маї Аа Рго 145 150 155 160
Аа Авр І єи 5ег Аа Авр 5ег Маї Агу Авр Рго Гуз Агу Меї Ага ТНг 165 170 175
Спу Спу бег бег Тиг бЗег 5ег бег Зег 5ег бег 5ег Зег 5егіІ ви Спу 180 185 190
Сту Су Аа Аа Агу 5ег Зег Маї Ма! Сім Айа Аа Рго Рго Маї Аіа 195 200 205
Аа Аа Ага Аа Айа Рго Аїа Геи Рго Маї Маї Маї Ма! Авр Тнг Сп 210 215 220
Сім Аа Стпу Пе Ага І єи Маї Ні Айва І еи І ей Аа Суз Аа Спи Аїа 225 230 235 240 маї СіІп Сп Спи Авп ГГ еи 5ег Аа Аа Си Аїа ГГ еи Маї Гуз Сіп Пе 245 250 255 (516)
Рго І єи І еи Айва Аа бег Сп Спу Спу Аа Меї Агу Гуз Маї Аа Аіа 260 265 270
Туг Рне Су Сім Айа І єм Аа Агу Агу Маї Рне Аг Ріє Агу Рго Сіп 275 280 285
Рго Авр 5ег 5егіІ ей І еи Авр Аа Аа Рнеє Аїа Ар І єи І єи Ніз Аа 290 295 зо00
Ні РНе Туг Спи Зег Суз Рго Туг Гей Гуз Ре Аїа Ні РНе ТАг Аіа 305 з10 315 з20
Азвп ап Аїйа Іе І єи Спи Аа Рне Аа Сіу Суз Ага Агу Маї Ніз Маї 325 з30 335 маї Азвр Рпе Су Пе Гуз Сіп Спу Меї Сп Тгр Рго Аїа І єи Геи Сп 340 345 350
Аа Гей Аа Гей Агу Рго Стпу Сіу Рго Рго Зег РНеє Агу ГІ ви Тиг Спу 355 360 365 маї сапу Рго Рго Сп Рго Авр Сім ТНг Авр Аа ГГ єи Сп Сп Ма! СПУ 370 375 380
Тер Гуз ГГ еи Айва Сип Ріє Аїа Ніз ТА Пе Агу Маї Азр РНе Сп Туг 385 390 395 400
З5
Аго Сту Геи Маї Аїа Аа Тнг І єи Айїа Азвр І єи Спи Рго РНе Меї І єи 405 до 415
Сп Рго Сім Спіу Спи Си Авр Рго Азп Сім См Рго СПш Ма! Пе Аа 420 425 430 маї Авп 5ег Ма! Рне Сім Меї Ні Агоу І єи Геи Аїа Сип Рго Сіу Аа 435 440 445
Ї ви Спи Гуз Ма! Геи Спу Тнг Маї Агу Аа Маї Агу Рго Ага Іе Маї 450 455 460
ТАг маї Маї Спи Спй Спи Аа Авп Нів Авп 5ег Спу бег РНе І єи Ар 465 470 475 480
Агу Ре Тнг Си Зег І єи Ні Туг Туг Зег ТНиг Меї Рне Авр 5ег І ви 485 490 495 60
Стій Сіу Спу бег Зег Сіу Спу Рго 5ег Сіи Ма! Зег Зег Спу Спу Аа 500 505 510
Аа Рго Аа Аїа Аїа Айїа Стпу ТНиг Авр СіІп Ма! Меї Зег Спи Маї Туг 515 520 525
Ї ви Спу Аго Сп Пе Суз Азп Маї Маї Аіа Су5 Спи Сіу Тиг См Аго 530 535 540
Тиг ам Аго Нів Спи ТАг Гей Спу Сп Тер Агу Авп Ага Гей Спу Авп 545 550 555 560
Аа Спіу РНе Сім ТНг Маї Нів Геи Слпу 5ег Авп Аа Туг Гуз Сп Аа 565 570 575 зЗег ТНгІ єи Геи Аа І еи Рне Аїа Стпу Спу Азр Сіу Туг Гуз Маї Сіи 580 585 590
Сі Суз Сім СТу Суз І еи ТНг Геи Спу Тгр Ні ТАг Аго Рго І єи Пе 595 600 605
Аа Тниг 5ег Айва Тгр Ага Г еи Айїа Аа Рго 610 615 «2105 13 «2115 532 «212» Білок 213» Агарідорвів ІНаІапа «4005 13
Меї Гуз Агу Авр Нів Ні Нів Ні Ні Сіп Авр Гуз Гуз ТНг Меї Меї 1 5 10 15
Меї Авп Сім С1іи Авр Авзр Спу Авп Стпу Меї Азр Си І єи І єи Аа Маї 20 25 0)
Ї ем Слу Туг Гуз Маї Агу Зег 5ег Си Меї Аа Ар Маї Ага Сіп І ув 35 40 45
Ї ви Спи Сп Гей СП Ма! Меї Меї Зег Азп Маї Сіп Спи Авр Авр Гей 50 55 60 зЗег Сп І еи АІа Тиг Сіи ТАг Маї Ні Туг Авп Рго Аїа Сім І єи Туг 65 70 75 80 60 ТАг Тр Геи Авр 5ег Меї І єи Тнг Авр Гей Авп Рго Рго бег 5ег Авп
85 90 95
Аа Спи Туг Авр І єи Гуз Аа Пе Рго Спу Азр Аїа Іе І ви Авп Сп 100 105 110
РНе Аїа Іе Авр 5ег Аа 5ег бег 5ег Авп Суп Сіу Сіу Спу Спу Ар 115 120 125
Тиг Туг ТАг ТНг Авп Гуз Аго ГГ еи Гуз Суз 5ег Авп Сіпу Маї Ма! Спи 130 135 140
Тиг Тиг ТАг Айва Тнг Аа Сім Зег ТАг Ага Ні Маї Маї! І єи Ма! Азр 145 150 155 160 зег Сп СПи Авп Су Маї Аго ГГ еи Маї Нів Айа І єи Гей Аїа Суз Аа 165 170 175
Сім Айа Маї Сіп Гув Спи Авп І єи Тнг Маї Аа Сти Аа Г єи Маї Г ув 180 185 190
Сип Пе Спіу Рнеє І єи Аа Маї Зег Сип Пе Спіу АІа Меї Аго І уз Маї 195 200 205
Зо
Аа ТНиг Туг РНе Аїа Сіи Аа Г еи Аа Ага Ага Іе Туг Агу І еи Зег 210 215 220
З5
Рго Зег СіІп Зег Рго Пе Авр Нів 5ег Гей Зег Авр ТНг ГГ еи Сп Меї 225 230 235 240
Ні РНе Туг Спи Тнг Суз Рго Туг І єи Гуз Ріє Аїа Ні РНе ТАг Аа 245 250 255
Азвп ап Айа Іе І єи Спи Аа Рне Сп Спу Гуз Гуз Агу Маї Ніз Ма! 260 265 270
Пе А5р Ре Зег Меї Зег Сп С1пу І еи Сп Тгр Рго Аа Геи Меї Сіп 275 280 285
Аа Гей Аа Гей Агу Рго Стпу Сіу Рго Рго Маї Рнеє Ага ГІ ви Тиг Спу 290 295 00
Пе Спу Рго Рго Аїа Рго Авр Авп РНе Агвр Туг І еи Ніз Сіи Маї Су 305 з10 315 з20 60 Суз Гуз І єм Аїа Ніз І єи Аа Сім Аа Іе Ніз Маї Спи Рне Спи Туг
325 330 335
Аг Сіпу Рпе Маї Авіа Авп ТНг Геи Аїа Авр Геи Азр Аа 5ег Меї І єи 340 345 350
Сі Гей Агу Рго Зег Си Пе СП Зег Маї Аа Маї Авп 5ег Ма! Ре 355 360 365
СІМ Г еи Нів Гуз І еи І єи Спу Ага Рго Сіу Айа Пе Авр Гуз Маї І ви 370 375 380
Су Маї Маї Авп Сп Пе Гуз Рго Сім Пе Ріє Тнг Маї Ма! Спи Сп 385 390 395 400 спін Бег Азп Ні Авп 5ег Рго Іе РНе І єи Азр Агу Рпе Тниг Спи Бег 405 до 415
Ї еи Ніз Туг Туг Зег Тиг Геи Ре Авр 5ег І еи СП Спу Маї Рго Зег 420 425 430
Стпу Сп Авр Гуз Маї Меї 5Зег Сіи Маї ТугІ єи Спу Гуз Сп Пе Суб 435 440 445
Зо
Азп Маї Маї Аіа Суз Авр Сту Рго Авр Аго Маї Си Ага Ні Сіи ТАг 450 455 460
З5
Ї ви Зег Сп Тгтр Агу Авп Агу Ре Су 5ег Аа Спіу Ре Аїа Аа Аа 465 470 475 480
Нів Пе Стпу Зег Авп Аа Ре Гуз Сіп Аа 5ег Меї І єи І єи Аа Гей 485 490 495
Рпе Авп Спу Спу Спи СПу Туг Агу Ма! Спи Спи Бег Ар Стпу Суз І єи 500 505 510
Меї ГГ еи Су Тер Ні5 Тнг Аго Рго Г єи Пе Аа Тнг 5ег Аа Ттр Гуз 515 520 525
Ї еи Зег ТАг Авп 530 «2105» 14 «2115 30 «212» Білок «2135» Тісит аевімит 60
«4005» 14
Азр 5ег Аа ТАг Рго Рго Авр Аа Рго І єм Маї Аа Аа Аїа Сту Гей 1 5 10 15
Аа Аа Авп Сім Тнг Тнг Ні Пе Гуз Пе Зег Аа Авп ГГ ув 20 25 зо «2105 15 «2115 11 «212» Білок «2135» ТШісит аевіїмит «4005 15
Азр Си Г еи ГІ ви Аа Аа І єи Стпу Туг Гуз Маї 1 5 10 «2105 16 «2115 4501 «212» ДНК «2135» ТШісит аевіїмит «4005 16 адссдісіа саасіасіас дсідссдсіс ссісдсідсі сідсісдсіс іссісссісс (610)
Зо ссассссаас саїссссдіс іссіссіссі Іссіссісіс ссссдасссі ддаїссаааї 120 сссддсссдс сссададссоу дааіїсдаддс аадсаааадс Поадаїада іадададдса 180 аддіаддадад дсдададдса адаїсаюдаа дсдсдадіас саддасдссоя дадддадсоддд 0240 сдадассод9у ддадодсаїща дсісдіссда ддасаадагта аїдащісда даісддсддс 300 9ас9999929 д999299299 юдасоадсі дсідосодосо сісдддіаса адоідюно збо дсдссдссіс сісдсадсдс суненсії ссісісаїсі сісадааса сасассадд 420 адааасісіа сасасасаса сасасаасса адаадаасас сдоасідйнас Шосасдая 480 аддссссі ссіпддюдчда асаададасі асандідй Шсссадсс сіспйдусіс 540 асіцсіса йПсаїснсї ссааснааа їадсіаадіа саадасідас ссаадсасії 600 дссадссдсс асісісдсад сідсіаасдс ссасіаасіс аїдсасіадоу ссасіааїса 660 саасіаасіс аїдсасдсаї дсассасасс ддссасіаїс асащдассодо дсдасіаасс 720 сасіадсіас аїдсаїдсаа сіадаїаасі ассцаїсса дсасіссад дасісддсаа (780 сіссассдда сдссссдсіс діадсадссо саддаснос ідсіаасдаа ассасдсаса 840 їсаадайцад дсіаасаїй! ісссссосна аїсіїдасас дсспдссді сдассдісаї 900 сідаасодсс Юадсісдас дісйсасас дссіссдсдс ссасідсдас дідссдідса 960 бо сссдссідіє ассддадна аїдсадсна саїсдісдіс дісасддссу дасссадсс 1020 юсоддасссд асссдасдса ісдасдссдод іІсасассдсс асуддасссда ссіддсдсас 1080 щасассдаї сдсассаїдс ісссісасда ссссоддсдас агасодссдад сіссіссдос 1140 і додсдасасас дссіддсадіс ссісідсдіс ссдсасдісс сдсасодсаїс сдасдідссс 1200 дасдадсссд ассоасадсад дсдісссдс асдісссдсу сдсайсдас дсдсссдася 1260 адсссдасад сассадасодс Ісассасдід ссдссіссдс діссдссаю дсадссасса 1320 сдссдсдссі асдідссасу сасснссас ддісойносс ссдадссодіс дсдассіаїд 1380 сдссассасд саддіссне дсдассіссі сдісіссдсоу ассдссадїдс ссісдсдса 1440 й сасіссссас діссссдсдс ісссадсссд сдсісссдсс дсосасаїас дсдаісідсу 1500 саассаддіс садсдссісод асдсддісса сісссдсдді сссдасдсдс ісдасасаїс 1560 садіюсосас ссаїаасасд сассддісдс діссддсісЯ ссодссосаїс Пайдсссі 1620 дсассдссдс ддссіссаїд ссдссаюса дідссіссас дссдссасас сдідійдсас 1680 сдсідсдсса ссасдсадсяа ссісдасодс сіссосддіс дссдсасдїа сдасдісасс 1740 7 дсссдссдсс їссдссасдс дсісдссдсд сдссдсадсс даїдссісса щісддссудс 1800 дсаюссссо Іссдссдсду асдссассодс дсдссасодс сдссссісда асспдідас 1860
Зо Ісідааїасс аааднодас оссодссіссі сдсадсоссо Псйссс ісісаїсісї 1920 саюддаасаса сассаддад ааасісіаса сасасасаса сасаассаад аадаасассд 1980 дсіюйНасії ї(дсасдадад асссисісс Ндоїддаас аададасіас анпаїдни 2040 7 Ісссадсссі спддсісас пнсісаїй! саїсіїсісс аасцааайа дсіаадіаса 2100 адасідассс аадсаснодс садссодссас ісісдсадсі дсіаасдссс асіаасісаї 2160 дсасіаддсс асіааїсаса асіаасісаї дсасдсаїдс ассасасс9дод ссасіаїсас 2220 ащдассдддс дасіаассса сіадсіасаї дсаюсаасі адаїаасіас сцаїссад 2280 сасіссадда сісдоасаасі ссассоддасд ссссдсісодї адсадссосяа ддасцосід 2340 7 сіаасдааас сасдсасаїс ааданадід сіаасаадаї дсдддсдісс дасаїддсда 2400 асдддсоса даадсіддад садсіддада юдссадаа даддосоддс дідадсодсся 2460 дсдссдсдсс сдасдасадс йсдссассс ассісдссас ддасассодід сасіасаасс 2520 ссассдассі сіссіссідд дісдададса ідсідісдда дсісаасдсуд ссдссдссудс 2580 сссісссдсс сдосссдсаяд сісаасодссі ссассіссіс сассдісасс ддсддсоддаї 2640 7 аснсдаїсі сссодсссісс дісдасіссі ссідсадсас сіасососід сддссдаїюс 2700 сдіссссддс сдісдсдссу дссдассісі ссдссдасіс сдісдюдсодо даїсссаадс 2760 бо ддаюдсодсас Іддсддсадс адсассісдії саїсаїссіс аїсдіссісії сісддсоддад 2820 дсддсоассад дадсісідід двюдадосід ссссдссдої ддосдссосо дссудідсЯс 02880 ссдсдсідсс даїсдіса дісдасасдс аддаддссодо дайсодсід дідсасдсдс 2940 і тдсідасо9ю сдсададасс ддсадсадд адаасійсіс дссодсоддад ососюдюща 3000 адсадаїасс спдсідасс дсдісссадд дсддсодссаї дсдсааддіс дссудссіасі 3060
Ісддсдадас ссісдсссдс сдсадїсцеос одсіссоссс дсадссодас адсісссісс 3120
Ісдасдссдс спсдссдас сіссіссасд сдсаснсїа сдадіссідс сссіассіса 3180 адйсдссса сісассодсс аассаддсса Іссіддадас оісдссддс ідссдссодсЯ 3240 й юдвсасвісої сдасісддс аїсаадсадо одаїдсавдід дсссодсссії сіссаддссс 3300 тдасасісса ісссдасодс ссісссісді Іссдссісас сдасаїсодс сссссдсадс 3360 сддасдадас сдасдссіїд садсадаїда дсіддаасдсі сдсссадно дсдсасасса 3420
Іссдсдісда сінссадіас сдсддссісод ісдссдссас дсісдсддас сіддадссої 3480 їсадсідса дссддадддс даддаддасс сдаасдадда дсссдадаїа аїсдссдіса 3540 7 асісодісії сдадасас соддсідсісд сдсадссс9д9 сдсссіддад ааддіссідд 3600 дсассдідсо сдссаїдс99 ссдаддаїса ісассаїдої ддадсаддад дсдаассаса 3660
Зо асіссдасас айссіддас сдснсассод адісссідса сіасіасісс ассаїднсу 3720 айсісідда дддсдасадс іІссддсддсс саїссдааді сісаїсіддо дсдосідсід 3780 сіссідссдс сдссддсасу дассаддіса шіссдацдої діассісддс сддсадаїсі 3840 7 дсаасащаї дассідсдад ддадсддадс дсасададса дсасдадасс сідддасаді 3900 ддсддаасся ссісддсаас дссдданса адассдісса ссідддсісс аагссіаса 3960 адсаддсдад сасасіодсід дсодсісійсод саддсдасда содоїасаад чіддаддада 4020 аддаддасід ссідасосід дддідасаса сдсдсссосі даїсдссасс іссосаїддс 4080 дссіддссдс ассдїдасся сдадійнда асдсідіаад їіасасаїсої дадсадад 4140 7 дасдасасаа ссссоддсддс сдссссодсі сіссдасдса сдсасдсасо сасодсісня 4200 аадаадаада адаадсіааа ідісащіса ддаасосід аайдсадсоу дссддссасуд 4260 аїсдассдіс сддсдадаад адасодасода сдасдаасіс сдадссдасс аїсссассяд 4320 сащдіадіаа щіааїсссі існсдіссс садіїсісса ссдссіссаї даїсасссдї 4380 аааасіссса адсссіасіа сіасіасіас їасіасіасі асіасіаїса дШааад 4440 7 Іїстанану саацідіаа Нсосіссааї сдсісаїаїс ааааіїаадсуд сдддссддас 4500 4501 60
«2105» 17 «211» 24 «212» ДНК «2135» ТШісит аевіїмит «400» 17 досаадсааа адсідадаї адаї 24 «210» 18 «211» 19 «212» ДНК «2135» ТШісит аевіїмит -4005» 18 даюдсадоддс ааіаадаїд 19 «210» 19 «211» 19 «212» ДНК «2135» ТШісит аевіїмит «4005» 19 дасадсасса дасдсісас 19 «210» 20 «211» 19
Коо) «212» ДНК «2135» ТШісит аевіїмит «4005» 20 одсісісдасс саддаддад 19 «2105» 21 «2115» 18 «212» ДНК «2135» ТШісит аевіїмит «400» 21 даадсадсї ддадчаща 18 «2105» 22 «211» 20 «212» ДНК «2135» ТШісит аевіїмит «400» 22 їаддоадсадд асісдіадаа 20 «210» 23 «211» 19 «212» ДНК «2135» ТШісит аевіїмит 60 «4005» 23 дсодсдаїда адсадайїас 19 «-210» 24 «-2115» 18 -212» ДНК «213» Тійсут аевімит «4А00» 24 нсааасіся сддісасд 18 «-2105» 25 «2115 22 «212» ДНК «213» Тійсут аевімит «4005» 25 іІсіссісссі ссссасссса ас 22 «-2105» 26 «-2115» 18 -212» ДНК «213» Тійсут аевімит «4005» 26 дсоіссдаю дадндсс 18 «-2105» 27 «2115» 20 -212» ДНК «213» Тійсут аевімит «400» 27
ЯюшНшес садсссісн 20 «-2105» 28 «-2115» 19 -212» ДНК «213» Тійсут аевімит «400» 28 одсісісдасс саддаддад 19 «-2105» 29 «-2115» 18 -212» ДНК «213» Тійсут аевімит «400» 29 дадаїадсіс дсддаїса 18 «-2105» 30 «-2115» 18 60 «212» ДНК
-2135» Тийсут аевімит -4005 30 соднсаааас ісдсдада 18
Claims (18)
1. Рослина пшениці або зерно пшениці, або клітина пшениці, кожна з яких містить алель ВНІ-В1, кодуючий поліпептид АПІ-В1, де поліпептид містить М-кінцевий домен і С-кінцевий домен, де амінокислотна послідовність С-кінцевого домену щонайменше на 98 95 ідентична амінокислотам 50-621 5ЕО ІЮ МО: 5, і де амінокислотна послідовність поліпептиду ВПІ-В1 відрізняється від послідовності, вказаної як хЕО ІЮ МО: 5, щонайменше (ї) вставкою амінокислот Р5АТРРОАРІ МАДАСІ ААМЕТТНІКІЗАМК (5ЕБО ОО МО: 14) або їхнім варіантом між амінокислотами 49 і 50 5ЕО ІО МО: 5, де варіант послідовності відрізняється від БЕО ІЮО МО: 14 амінокислотними замінами, вставками або делеціями з не більше ніж 5 амінокислот, і (ії) однією або декількома замінами амінокислот в С-кінцевому домені відносно амінокислот 50-621 5ЕО ІЮ МО: 5.
2. Рослина пшениці або зерно пшениці, або клітина пшениці, кожна з яких містить алель ВНІ-В1, кодуючий поліпептид АПІ-В1, де поліпептид містить М-кінцевий домен і С-кінцевий домен, де амінокислотна послідовність С-кінцевого домену щонайменше на 98 95 ідентична амінокислотам 50-621 5ЕБЕО ІО МО: 5, де амінокислотна послідовність поліпептиду АПІ-В1 відрізняється від послідовності, вказаної як 5ХЕО ІЮО МО: 5, щонайменше вставкою амінокислот Р5АТРРОАРІ МАДАСІ ААМЕТТНІКІЗАМК (5ЕБО ОО МО: 14) або їхнім варіантом між амінокислотами 49 і 50 5ЕО ІЮО МО: 5, де послідовність варіанта відрізняється від ЗЕО ІЮО МО: 14 амінокислотними замінами, вставками або делеціями з не більше ніж 5 амінокислот, і де нуклеотидна послідовність алелю ВНІ-В1 відрізняється від нуклеотидної послідовності, вказаної як БЕО ІЮО МО: 1, щонайменше присутністю мутації ділянки сплайсингу інтрона.
3. Рослина пшениці або зерно пшениці, або клітина пшениці за п. 1 або 2, де поліпептид АНІ-ВІ1 містить одну або декілька замін амінокислот в М-кінцевому домені відносно амінокислот 1-49 5ЕО ІЮО МО: 5.
4. Рослина пшениці або зерно пшениці, або клітина пшениці за будь-яким з пп. 1-3, де вставка однієї або декількох амінокислот між амінокислотами 49 і 50 5ЕО ІЮ МО: 5 являє собою вставку 30 амінокислот, послідовність яких являє собою ОБАТРРОАРІ МАААСІ ААМЕТТНІКІЗАМК (5ЕО ІО МО: 14).
5. Рослина пшениці або зерно пшениці, або клітина пшениці за будь-яким з пп. 1 або 3-4, у якої одна або декілька замін амінокислот в С-кінцевому домені поліпептиду АМПІ-ВІ включають заміну амінокислоти, що відповідає амінокислоті (3260, М264, А271, 5298, А299, АЗО5, АЗ10, РЗА4, 1346, 5377, Р394, 514, 1524, 5528, (3563, М286, 0371 або Е579 відносно ЗЕО ІЮ МО: 3, або амінокислоти, яка відповідає 5493, 2283, 271, А280, М234, 484, М285, 5230, 5488 або С240 відносно 5ЕО ІЮО МО: 5.
6. Рослина пшениці або зерно пшениці, або клітина пшениці за п. 5, у якої заміна вибрана з групи, яка складається з 5260Е, М264М, А271Т, 52980, А299Т, АЗОБ5Т, АЗІОМ, РЗ3445, І ЗАбЕ, 5377, РЗ3941, Б514Н, Т524І, 5528Е, 55630, М286М, 0371М, АЗ10Т ії Е579К відносно 5ЕО ІЮ МО: З, ї 5493Е, В283Н, К271Н, А280Т, М234М, Р484Н, М285Е, 5230Е, 5488БЕ і С240У відносно ЗЕОІЮ МО: 5.
7. Рослина пшениці або зерно пшениці, або клітина пшениці за будь-яким з пп. 1 або 3-6, де алель ВПІ-В1 містить варіант послідовності відносно ЗЕО ІЮО МО: 1, де варіант послідовності вибраний з групи, яка складається з 52715А, 52726А, 052747А, 52829А, сп2831А, с2849А, БО С2865Т, С2966Т, С2972Т7, 3065А, С3117Т, 53477А, С3507Т, С3519Т, 53624А, 02792А, СС2108ТА, 53047А, с2864А і 253671А.
8. Рослина пшениці або зерно пшениці, або клітина пшениці за будь-яким з пп. 2-7, де алель Вп-ВІ1 містить варіант послідовності відносно 5ЕО ІЮ МО: 1, де варіант послідовності вибраний з групи, яка складається з 3148А, 5148Т, 5147А, з2084А і 2083А.
9. Рослина пшениці за будь-яким з пп. 1-8, де рослина пшениці має підвищений ріст порівняно з рослиною пшениці, яка є гомозиготною за ВАПІ-Віс алелем, і знижений ріст порівняно з рослиною пшениці, яка є гомозиготною за НАПІ-Віа алелем, коли рослини вирощують за однакових умов.
10. Рослина пшениці за будь-яким з пп. 1-9, де рослина пшениці має підвищену фертильність іл або має підвищений урожай зерна порівняно з рослиною пшениці, яка є гомозиготною за ВНї- Вс алелем.
11. Рослина пшениці за п. 10, де урожай зерна відповідає урожаю або є вищим, ніж урожай рослини пшениці, яка є гомозиготною за АПІ-В1Б6 алелем.
12. Рослина пшениці за будь-яким з пп. 1-11, де рослина пшениці має збільшену довжину колеоптилю порівняно з рослиною пшениці, яка є гомозиготною за ВПІ-Віс алелем, і де довжина колеоптилю становить 80-100 95 довжини колеоптилю рослини пшениці, яка є гомозиготною за АПІ-В'а алелем.
13. Рослина пшениці за будь-яким з пп. 1-12, де зерно має підвищений стан спокою порівняно із зерном, отриманим від рослини пшениці, яка є гомозиготною за АПІ-В'а алелем.
14. Зерно пшениці, отримане з рослини пшениці за будь-яким з пп. 1-13, що містить алель ВНЇ-
ВІ.
15. Рослина пшениці за п. 14, яка є гомозиготною по ВПІ-В'а алелю.
16. Спосіб отримання зерна пшениці, який включає (ї) вирощування рослини пшениці за пп. 1- 13, і (ї) збирання зерна з рослини.
17. Спосіб отримання борошна, непросіяного борошна або висівок, який включає переробку зерна пшениці, що містить КПІ-ВІ1 алель, отриманого від рослини пшениці за будь-яким з пп. 1- 13, де зерно має більш тривалий стан спокою порівняно із зерном, отриманим від рослини пшениці, яка є гомозиготною за ВПІ-Віа алелем.
18. Спосіб отримання харчового продукту, який включає змішування борошна, непросіяного борошна або висівок, отриманих способом за п. 17, зі щонайменше одним іншим харчовим інгредієнтом. х й ПО им ль м, А ЛІ а а в закон ан ве ВК
Фіг.
- і ; ї ен чо ЩЕ Бе ! х мі БАН ох Я щі Я 3 БЕ «Ж х А б- 0115 і ведення ца в ща ум ! ве Х Бе БА Я з ЕТ НА НИ коди КЕ ЩО, пи Сх ЕК, М аю и, є МЕ Кл нн дами АН 2 А р КИДОК ще я НО НН НЕ Я я ва М Ж У дуття о ма Я ічиши у те Жину Кия АВК
Оля. в НК ве а У ся оо в ПАВУКИ, Ти о фра ту ки А Я КОВАНІ у ше Я парова и Нв ТУ НИ вх Я ше о Є вий ктя НКУ СОИНЙ Оу них ЗУ реж я и ау Н Й ШОНТЯ шк - МИ
Фіг. З ГлЕнвх Ср СБНВЕоБРИВЕ о ВА
Фіг. З 54 рі р ; З й І М : | : и й у ї І І х м - Ес Я Ще НИ : , Е: ще | : З З ко Й ї Е, «5 т й Н : се 1 Н хх К : їх 4 ч З Ще ! і Е ; ! Я ї ї Я Ко ; ї Б ї і і ох | Я га 7 і ія ' о | Я ам 4 ч й г. й - : шк ї ї : ! ї Й | ш І З
У. Кк, Що хо я НЕ Я, кі Ко г їх й 7 ЕЯ Е с Б Її а хи сжохв ВІХДКХ зу дет тситнт Н ши у ! шшш ! ЗЕ З п х
Фіг. 5 щежле шани й а пет ! -- т із меорчхм сенс ' і й і й Ї
Фіг. 6 консенсус МКВЕХОВАВОВОСООсООМОВиВОКММУЯ АЛАСЕЗЕКУСЕНОААЬОКУ ЧЕе3б3т7 В зеніті тьютий тай ія юю іааяіа єв иєх слРО3О37В В беттлінеякивінкісяійія лізу ВВкіхчтюєустєнтлнняхх «лкЗз0281 к уватяжтєвя ую иви ії ут іі важки ші а вань зі вії 7 ві т консенсус ВАВОМАСУДОКЬВОСЕМАМОМССУЧАСАЛОООБКАТЕСАТОТУНУКРТО, ст930277? В паж юю юю юю юю житт ит ню кул итил ни тях окозог78 В дае жййютжлта тя вижити тт і дає южжя ія лтозогві х веж кю юю юю ж житя життю юю я 101 1 і ІЗ31 141 консенсує ВЕМУВЯМОВЗВІНАРРОВИВРАР- СІ МАЄТЕВТУТОа ООсХУВЬРРБХЮВаС зт930277 В пи оКУЗо7в В какая кути пи ти явку тки кит ютинї лЕ93о281 В улахжютиктфіхууіськуєттюююєиютин ст Ва аюттькисе си В 153 їі8вх і71 185 їв копсенсує БТУАГКРІБАРАСАТАВАЮВЬУАрО УКРеХВМЕТОсОВОТВВБЗББаВИ ТРУЗ0277, сежжюку єю юс евжтаюютиюу ють чтозхогтв х шля юю юучтя юю ю ююютьМюююютттютю юю ютьююх є ЛЯ, аРезоава ж «Хриляуюухччі Ви вяівитю ютлнуххчл тиж ююттлуютутхчтя я 261 1 221 231 24ї консенсус СОДЯВЕУУВААРРУААДАНА- РАБРУУЧУВТОКАВІНЬТНАССАСАЕАХО «ЗКЗ39277 В ший кіфітююіні ся Ву іх єтькія а хкаєкті тьму ав930278 В сел жиутчижкчвеіа фриз уєтакаюуєтя житті «зЕзЗзозві В шкі кююжж юю юки у ж ж тю ю тютюн я І а5і г5і 271 за 91. консенсус СЕКЕВААЕАСУКОТРЕБВАВОСОВМИКОВАУКСКАСЬВЕУЕВУКРОРОВУ ляоз0277 К кві єхзччиви є ку кукі ака юний кі юю іт г «Ттазозта в аеітіжєтустишінуєютию іх т і участі тукутутувття «530281 К сао пнатюа тінню річні яианхжч их аєчячяя зо03 311 з21 заз зах консенсух. ВЕОКАЛАБВЕЬНАНЕХЕЯСРУБКЕАНЕТАНОАХСЬЕЛЕАССВВУНУУВЕЧІК ІРУЗа277 В пухка ютіч ел южиютчучутита ні житі нку жютетиттитнитяиния стузфатв селужжєтійюуюуютя жу ючуяжтя ані тяжіння сгто3025і1 В дугалііфжттт тятиву юю ти я з51 з1 зт 381. за консенсус ОСМОМРАНСОВМЬАРКРОСеРБЕНЬ ТОР РОБВ ЕТО АКОТ КИАСКАН Чтезог и зх тати мютивччютетиююю тт а вижити таті я ХЕЗЗОгтА Кк уктуютуютіч чт ювалах чию тю юю тхит ня зтезозах дити тити та кн уки ню южт ит ай з11 421 «зі 451 консенсус ТІНЧОБОУКОМУААТЬАПЬЕРЕМЬОВЕОНЕОВНВВРВУХАУМО КЕНІЯ чЕазУвІ77, чу о я п ач и а п п в п ттозойта зах тттучттуєчуча яті іт ут чяжучя фея ттззатаї ен и ня
Фіг. 7а з3 атії вх 481 консенсус БАОРОЛІВКУТСТУНАЧВЕНІМТУУЕОБАМННМОСТяІЮВЕТЕВІНУВТМ МКЗ30277 В ит тин ій кри нудна тивна ки виня ка жлкз30278 В позаду а дк і жі жічі у ути війт юр юх чгззовІ пкт ат ламає иж ую ния юю юю я і ія ЗИ вії 51 531 541 консенсує КОСЬБОСБЗОС-ВЗЕУЗЗСААААЕАААСТОЦУМОВУХОСВОІ СУЧАСНО бЕ930277 8 вика тА ТІ и жи жи тю т я нти я трозоаУВ В кн ен ни ная сЕЗ30281 В хуктухаізаабувілтилиняжутютти уміхюуюч єси тт иєєитї и 5Бі зеї а7і ві з91 консенсус АЕНТЕВЕБ ТС ОДНЕНИПСМАСКЕТУНІОСОМАУКОАЗТЬСАСРАВОЮОХКУ ФЛЕЗЗ0277 В сити аа юку єю юююю юю тяж юти вита юяя «чезза278 В бажаю юю ух кутки юки люк ююк лРе30251 В пжужа яти т тя у ІЙ КМУ я ки ню «ах 211 3 консенсус БЕКЕОСЬТІДУЄНТВЗОІТАТЕАЯКПАДЕ скззогт7 В аж ю яхті ке юкюююния Тгезбата я чехи юю є єв ннхчюєхких прозасВІ В зу жу юта я юн юююи т як кі,
Фіг. 7 Хпез: Ккрї- Віа 22 БОКММУБСбАААаЕСЕКУрЕСЬВАСОУКУВАБОМАОМАОКОВОГКМАМОМОСУСАСАВНВ 81 во жу ж в жийвжкк жкиерейіюутикккажикиєюу й Е м саАдляа82 ті ОКЕТМУММЕЕрОСМО--МоБОЬРУСУКУНЯЗЕМАВУАОКСЕОТЕУММ----БКУОКО ОО 62 Мнеає ннЕ-Віа 872 ОЕРАТНОКТИ НУМО ТВІ ВНУ ВЕМСЗВІЬКАРРРОВВРАРЦІМАЄТОВТУТОСОВУВВЬК 1581 о до жкажижавти жи веж кадаити ск сАДТБАЗІ 653 0--БВОйАТЕТМНУМРАБОХТМНЬПОМОТВІМВР. ся синяк яю кня о 83 ЩМвреає вко-Віа 142 РБУПВБСВТУАБИРІРЕРАЧАРАЛЬСАрЕУУЮОРКИМИТОЗБЕТОаВЕБЕНООсОЯ--- 188 ж» ж ж ву жк чж жужету же СсААЗБаВих я ----ВБВМИАЕУОЬКАКРЯЮДІВ» зятя У МОЛІ ОЗАЯЗВМОСОО0ТУ 130 бен КРЕ-Ві« 185 -"ДНВЗЗУУКААРРУАЛАЛОАВАБРУТЛУРОВМ ІВ УА ОАСАБАУООВМИЯААНАТ 58 ж ж гу а. кухжуєлеьжкижиєвтежжийе ші жжжж СААТЗаВІ І131 ТТиКАБКСЕМСУУВТТТАТАКЕВТЕНУЧЬМОВОЕМОУВЬУНАССАСАБАЧОКЕНСТУАЕАТ. 190 -йрезк Вис-Біх 356 УКОТРІЛААВОЗСАМАКУАВУКОКАСАВЕМЕКЕАРОРОББОІОААКАВІНАНЕХКВСВХ 318 й ж ВЖ ЖЕ явуажчи важ жива ад ши я ШЕ о З НН я и ви сврлаазі 131 УКОТВЕМАУБОТОДМВАУВТУВАБАВАВВІХВИ- ВРЕОБРІРНЕМООТООМНЕУЕТСВХ 346 ЗвВеві в-Віа 315 ШКЕАНЕТАМОАТУЬКАВАБСЯВУВУУ1 СТЮ ТОВ РАВООАСВОВРООвеЕЕВОТаУОвр 315 сина уткинтиижми й фАВИВКХИ ф ЖВАВО ж. сАлІБаза 249 ШКРАНЕТАМОДІБКАРОЗККВУКУТОРЕНВОСіНВАСНОКОВЬВРОСвОоУТВОТЯІовЬ 38 без КВЕ-Віа зу ОРВЕТОАНУКУНКІ АОАНТ ВУ КУ КСЬУВАТЬАВІЖРЕНООРЕОБЕОРМЕЕРЕУТА «35 жасж ж дяк же кож вутужкх жи кткежу ве жоожжо в ж ке САА?ЗаВІ 309 АРОМЕртТрНеУОСкКОАНЬАВАТНУЕКЕХКОЕМАНТІАСЬОАЯМІ----ЕОВРБ-БІКБВУК 363
Фіг. Ва Мнейї ВИК-Вій 436 УМЕУЕВМНЯТИЛОРОАСЕКУОТУНАУВРЕІМУТЛКОБАННКВОТЕСОВУТЕНІНУУЯТМ з кита уюєук зайву й жк й жжкиккивутиюк вже жкжжикаИЖЖ ЖІ. СсААТЗаЗо 3бЯ4 УМВУКВЛНКЬСИРОВІВКУМЗУЧМОЇКРЕТЕТУУКОВЗМИМУРІКІШНЕТЕНВІНУВТІ: 423 яревт КАЄ-ДІВ 4565 КОБТЮСОБВОЗРОБУБООАААЛРАААЗТРОУМНЕУУ СИ ОКОУАСЕОАНВТЕННЕТЬОС 555 кажу ж ж тутжкнкизоуєживитития фй зяжкж свальа9 за ЕОБЬВОСУВЕ яти "ЗОрКУМОБУХЬСКОТСМУУАСОСРОВУВКНЕТЬВ 466 МрБеає ВБС-Вві зб ОМеАМНОСМАСЕЕТУНЬОССМАУКОВЯТОСЛЬКАСОЮЗУКУВЕКЕОСЬТЬЛМНТАРЬ1ТАТВА 615 важ жи пмукажараяжж кикжйи ккукиутки та кичвакиктжвйя СААТтапа92 «у ДИИККРОЗАЧКАААНІЯЄМАЕКОВОМІЬАЛЬРМСОВОХНЧУЕКВрОСІВЬсСЯНТВрЬТАТВА 526 МЗсак Вапк-Віа єї6 ЙВОА Бі зда Й сСсдальаза ват жев 530 и
Фіг. вЬ
Сян спаконіузерих злоліній кеаіваа 100 ат т ШО диня 80 Й ш- Й офрннт т - й їж Е Б во парна т най й Що ра я їозо3, тур? йож Е ра ЩЕ НО шк ТТ а ре: -ек- Мій С! ї ка я й - -- МАМО - -- мав в ж сн нє ни ов пет Гео пепрвавоввн нопопвоввввв полова мен вов полова пповомввовання нионннсвавннн то 0 2 й 5 8 19 12 14 Час дозрівання (ТиЖжНИ «Фіг. 9
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| AU2012903673A AU2012903673A0 (en) | 2012-08-24 | Wheat with New Alleles of RHT-B1 | |
| PCT/AU2013/000942 WO2014028980A1 (en) | 2012-08-24 | 2013-08-22 | Wheat with new alleles of rht-b1 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| UA119742C2 true UA119742C2 (uk) | 2019-08-12 |
Family
ID=50149288
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| UAA201502663A UA119742C2 (uk) | 2012-08-24 | 2013-08-22 | РОСЛИНА ПШЕНИЦІ З НОВИМИ АЛЕЛЯМИ Rht-B1 |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US10995343B2 (uk) |
| EP (1) | EP2894967A4 (uk) |
| CN (1) | CN104837335B (uk) |
| AR (1) | AR092210A1 (uk) |
| AU (1) | AU2013305488B2 (uk) |
| CA (1) | CA2882756C (uk) |
| EA (1) | EA033091B1 (uk) |
| IN (1) | IN2015DN01474A (uk) |
| MX (1) | MX381494B (uk) |
| UA (1) | UA119742C2 (uk) |
| WO (1) | WO2014028980A1 (uk) |
| ZA (1) | ZA201501196B (uk) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2017198451A1 (en) | 2016-05-17 | 2017-11-23 | Bayer Cropscience Nv | Method for increasing yield in small grain cereals such as wheat and rice |
| CN116634861A (zh) * | 2020-09-09 | 2023-08-22 | 联邦科学和工业研究组织 | 秆锈病抗性基因 |
| WO2024216103A1 (en) * | 2023-04-14 | 2024-10-17 | Purdue Research Foundation | Plant dwarfing mutation |
| WO2025132671A1 (en) | 2023-12-21 | 2025-06-26 | Basf Se | Improved hybrid cereal parent line selection |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB9717192D0 (en) | 1997-08-13 | 1997-10-22 | Innes John Centre Innov Ltd | Genetic control of plant growth and development |
| US7148401B2 (en) * | 2003-09-02 | 2006-12-12 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Brachytic2 (BR2) promoter from maize and methods of use |
| GB0815869D0 (en) | 2008-09-01 | 2008-10-08 | Plant Bioscience Ltd | Plant pathogen resistance |
| CN101760510A (zh) * | 2008-11-19 | 2010-06-30 | 李祥 | 小麦矮秆基因研究和利用进展 |
| US20120131701A1 (en) | 2009-08-05 | 2012-05-24 | Chromocell Corporation | Improved plants, microbes, and organisms |
| JP6063869B2 (ja) * | 2010-11-04 | 2017-01-18 | アリスタ シリアル テクノロジーズ プロプライエタリー リミテッドＡｒｉｓｔａ Ｃｅｒｅａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｐｔｙ Ｌｔｄ | 高アミロースコムギ |
-
2013
- 2013-08-22 EA EA201590431A patent/EA033091B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2013-08-22 EP EP13830254.2A patent/EP2894967A4/en active Pending
- 2013-08-22 US US14/423,240 patent/US10995343B2/en active Active
- 2013-08-22 UA UAA201502663A patent/UA119742C2/uk unknown
- 2013-08-22 MX MX2015002075A patent/MX381494B/es unknown
- 2013-08-22 WO PCT/AU2013/000942 patent/WO2014028980A1/en not_active Ceased
- 2013-08-22 IN IN1474DEN2015 patent/IN2015DN01474A/en unknown
- 2013-08-22 CN CN201380049952.6A patent/CN104837335B/zh active Active
- 2013-08-22 CA CA2882756A patent/CA2882756C/en active Active
- 2013-08-22 AU AU2013305488A patent/AU2013305488B2/en active Active
- 2013-08-23 AR ARP130102987A patent/AR092210A1/es active IP Right Grant
-
2015
- 2015-02-20 ZA ZA2015/01196A patent/ZA201501196B/en unknown
-
2020
- 2020-06-19 US US16/906,535 patent/US11576326B2/en active Active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US20150257353A1 (en) | 2015-09-17 |
| CA2882756C (en) | 2023-09-26 |
| EA033091B1 (ru) | 2019-08-30 |
| ZA201501196B (en) | 2017-08-30 |
| EA201590431A1 (ru) | 2015-11-30 |
| AU2013305488A1 (en) | 2015-03-05 |
| CN104837335A (zh) | 2015-08-12 |
| CN104837335B (zh) | 2018-06-05 |
| EP2894967A1 (en) | 2015-07-22 |
| AU2013305488B2 (en) | 2019-04-04 |
| IN2015DN01474A (uk) | 2015-07-03 |
| EP2894967A4 (en) | 2016-05-18 |
| US10995343B2 (en) | 2021-05-04 |
| MX381494B (es) | 2025-03-12 |
| US11576326B2 (en) | 2023-02-14 |
| WO2014028980A1 (en) | 2014-02-27 |
| US20210040497A1 (en) | 2021-02-11 |
| CA2882756A1 (en) | 2014-02-27 |
| AR092210A1 (es) | 2015-04-08 |
| BR112015003716A2 (pt) | 2017-08-08 |
| MX2015002075A (es) | 2016-03-31 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2619636C2 (ru) | Высокоамилозная пшеница | |
| US11421246B2 (en) | Rust resistance gene | |
| AU2019207409B2 (en) | Gene underlying the number of spikelets per spike qtl in wheat on chromosome 7a | |
| KR101806299B1 (ko) | 보리 및 이의 용도 | |
| US10113180B2 (en) | Wheat stem rust resistance gene | |
| US12071629B2 (en) | Wheat having high levels of beta-glucan | |
| EA025360B1 (ru) | Растения с модифицированным метаболизмом крахмала | |
| US11576326B2 (en) | Wheat with new alleles of Rht-B1 | |
| CN110092819B (zh) | 玉米苞叶宽度调控蛋白arf2及其编码基因与应用 | |
| EA034044B1 (ru) | Устойчивые к засухе растения | |
| US20240349677A1 (en) | Wheat with reduced susceptibility to late-maturity alpha-amylase | |
| US20150044349A1 (en) | Methods of controlling fructan synthesis in plants | |
| BR112015003716B1 (pt) | Processo para a produção de recipientes para grãos de trigo, molécula de ácido nucleico que codifica um polipeptídeo rht-b1, polipeptídeo rht-b1, molécula de ácido nucleico, método para produção de farinha de trigo, farinha integral ou farelo, farinha de trigo, farinha integral ou farelo e método para introdução de um alelo rht-b1 mutante em uma planta de trigo sem o dito alelo | |
| AKTER | Map-based Cloning of Panicle Apical Abortion and Dwarfing Mutant Genes in Rice |