TWI902351B - 嘧啶胺類nuak抑制劑及其製備方法和用途 - Google Patents

Abstract

本申請提供了一種嘧啶胺類化合物，其特徵在於所述嘧啶胺類化合物為由式I表示的化合物，或其立體異構體、互變異構體、同位素衍生物、水合物、溶劑化物、前藥以及藥學上可接受的鹽。本申請所述嘧啶胺類化合物具有優異的NUAK1/NUAK2激酶抑制活性，可通過抑制NUAK1/NUAK2用於預防或治療以下疾病：神經精神類疾病、代謝性疾病、腫瘤、內臟纖維化疾病、皮膚纖維化疾病。

Description

嘧啶胺類NUAK抑制劑及其製備方法和用途

相關申請的交叉引用

本申請要求於2023年7月13日提交的申請號為202310860150.9的中國專利申請的優先權，其全部內容通過引用的方式併入本文。

本發明屬於小分子化合物領域，具體地，涉及一種嘧啶胺類NUAK抑制劑及其製備方法和用途。所述化合物通過抑制NUAK1/NUAK2，可用於預防或治療以下疾病：神經精神類疾病、代謝性疾病、腫瘤、內臟纖維化疾病、皮膚纖維化疾病，或單獨用於減輕外傷和手術後疤痕。

蛋白激酶是一組參與調節細胞代謝、極性、生長、分裂和分化的重要功能性蛋白，人類基因組編碼500多種蛋白激酶，這些激酶能將ATP（adenosine triphosphate）上的磷酸基團轉移到底物蛋白的特定絲胺酸、蘇胺酸或酪胺酸殘基上而使之磷酸化；大部分蛋白激酶為絲胺酸/蘇胺酸激酶，酪胺酸激酶不到100種。單磷酸腺苷活化蛋白激酶 （adenosine monophosphate-activated protein kinase，AMPK）屬於絲胺酸/蘇胺酸蛋白激酶（serine/threonine kinases，STK），是哺乳動物體內細胞能量穩態（cellular energy homeostasis）的重要調節因數，通過感應代謝壓力（如缺氧，熱休克）下細胞內AMP（Adenosine monophosphate）/ATP、或ADP（adenosine diphosphate）/ATP比例變化來調節糖和脂類代謝、細胞增生和細胞極性，可謂代謝感應蛋白(metabolic sensor protein)。AMPK在進化上非常保守，是一種異三聚體蛋白，由含有激酶結構域（kinase domain，KD）的α亞單位、以及調節激酶活性的β亞單位和γ亞單位組成，γ亞單位上含有四個CBS功能域（Cystathionine-β-synthase (CBS) domains），負責檢測細胞內AMP/ATP和ADP/ATP比例的變化（Hardie DG, Trends in Cell Biology. 2016, 26:190）。

AMPK功能紊亂會導致肥胖、糖尿病、炎症性疾病和腫瘤等多種疾病，因此機體對AMPK功能的調控非常關鍵。首先AMPK的啟動需要上游激酶對其α亞單位第172位元上的蘇胺酸（T172）進行磷酸化，目前已知的AMPK上游激酶有三種：肝激酶B1（liver kinase B1，LKB1），鈣離子/鈣調蛋白依賴性蛋白激酶2（Ca ²⁺/calmodulin-dependent PK kinase 2，CaMKK2），以及轉化生長因數β啟動激酶1（transforming growth factor-β-activated kinase 1，TAK1）。與上游激酶通過磷酸化T172位點啟動AMPK相對應，已知有三種蛋白磷酸酶能通過移除T172上的磷酸基來抑制AMPK的活性，包括蛋白磷酸酶2A（protein phosphatase 2A, PP2A），蛋白磷酸酶2C（protein phosphatase 2C, PP2C），以及鎂/錳依賴性蛋白磷酸酶1E（Mg ²⁺-/Mn ²⁺-dependent protein phosphatase 1E，PPM1E）。當細胞處於低能狀態時（高AMP/ATP或ADP/ATP比例），AMPK的α亞單位KD和γ亞單位緊密交聯，同時β亞單位豆蔻醯化，確保蛋白磷酸酶無法接觸到T172位元點而保持啟動狀態。而當細胞處於高能狀態時，KD和γ亞單位鬆開，T172暴露給磷酸酶而導致AMPK失活（Steinberg GR, Nature Reviews Drug Discovery. 2019, 18:527）。

除去AMPK上游激酶和蛋白磷酸酶能分別啟動和滅活AMPK，還有一類AMPK相關性激酶（AMPK-related kinases， ARKs）參與調節AMPK的功能，目前一共發現有12種ARKs（BRSK1，BRSK2，NUAK1，NUAK2，QIK，QSK，SIK，MARK1，MARK2，MARK3，MARK4和 MELK），都屬於絲胺酸/蘇胺酸蛋白激酶，ARKs的激酶結構域和AMPK的α亞單位有很高的同源性，除MELK外都能被LKB1啟動，並且其激酶活化的磷酸化位點也和AMPK的T172相當，功能上也都參與細胞代謝、增生和極性的調控。不過由於不像AMPK具備調控亞單位，ARKs不能直接被細胞內AMP/ATP比例所調控（Bright NJ, Acta Physiologica. 2009, 196:15）。

ARKs又因蛋白結構和功能特徵的不同而分成數個ARK亞家族，其中NUAK（Nu (novel) and AMPK-related kinase）ARK亞家族含有NUAK1（最早被命名為ARK5）和NUAK2（最早被命名為sucrose nonfermenting-like/AMPK related kinase，SNARK）兩個成員，兩者的胺基酸序列大約55%同源，根據胺基酸序列，NUAK1和NUAK2的推測分子量分別為76和69 kDa；其蛋白結構很相近，胺基端為激酶結構域，羧基端為泛素交聯域（ubiquitin-associated domain），目前尚不清楚NUAK是否和AMPKs一樣也是異三聚體結構。NUAK1和NUAK2在大部分組織中有表達，其中NUAK1在腦、皮膚、肌肉、消化道上段、內分泌等器官組織中表達明顯高於其它部位，NUAK2表達最高的器官組織為消化道、女性生殖系統、皮膚、骨骼、腦和內分泌等，其中NUAK2的表達更多地顯示出組織特異性。值得一提的是，NUAK1和其它ARKs及AMPK蛋白主要分佈在細胞漿內，而NUAK2則主要分佈在細胞核內，並有跡象表明NUAK2作為轉錄調節因數參與代謝壓力相關的基因表達（Sun X, J of Molecular Endocrinology. 2013, 51:R15）。

作為絲胺酸/蘇胺酸蛋白激酶，NUAK1和NUAK2可磷酸化多種蛋白底物，包括參與細胞信號傳導、代謝、細胞增殖、細胞凋亡、自噬和細胞骨架組織的蛋白質。 已知NUAK1可以磷酸化AMPK，LATS1/2，p53腫瘤抑制蛋白，以及調節肌動蛋白細胞骨架組織的肌球蛋白磷酸酶靶亞基 1 (Mypt1)等。NUKA2能磷酸化Hedghog信號通路的轉錄因數Gli3，FoxO1，驅動蛋白輕鏈 1 (KLC1)，以及Rho GDP 解離抑制劑α (Rho GDIα)等。

NUAK1和NUAK2的功能調控涉及多種細胞內信號系統，除了能被LKB1磷酸化啟動（T211，相當於AMPK的T172）和被鈣離子/PKC活化，NUAK1是AMPK相關蛋白家族裡唯一能被Akt啟動的成員，NUAK1活性升高也見於一些生長因數如胰島素樣生長因數1（insulin-like growth factor 1, IGF1）信號通路的啟動，骨骼肌細胞處於收縮狀態時也伴隨NUAK1的活性增強。NUAK1和NUAK2都能被LKB1啟動(T211/NUAK1，T208/NUAK2, 相當於AMPK的T172)，但是NUAK2可以進行自磷酸化活化，NUAK2能與X染色體上的泛素特異性蛋白酶9（ubiquitin-specific protease 9，X chromosome，USP9X)進行交互作用，後者是一種去泛素化酶，能夠維持NUAK2的活性。在不同的細胞內，低滲透壓、DNA損傷、氧化、營養不足等刺激均可導致NUAK2的啟動，NUAK2的活化也見於骨骼肌細胞細胞的收縮（Brooks D, Data in Brief. 2022, 43:108482）。

多項研究表明NUAK在代謝性疾病、腫瘤、神經退行性疾病和纖維化疾病等疾病的發病過程中扮演重要的角色，NUAK1和NUAK2純合敲除基因鼠基本都導致胚胎期死亡，NUAK1雜合缺失小鼠導致機體和神經組織（如腦皮質和外周神經元）發育不良，人NUAK1雜合基因突變與孤獨症（autism spectrum disorders, ASD），認知缺陷，多動症（attention deficit/hyperactivity disorder, AD/HD）及精神分裂症(schizophrenia)相關。人NUAK2基因缺失導致無腦兒的形成，是一種引起胎兒發育缺陷的嚴重神經管畸形，其機理和YAP的功能喪失有關（Bonnard C, J Exp Med. 2020, 217:e20191561 ）。骨骼肌細胞特異性敲除NUAK1基因可以避免高脂飲食誘導的亞臨床糖尿病；而NUAK2雜合缺失小鼠出現的表型則與人二型糖尿病伴肥胖的一系列臨床表現相近，這些現象可能與細胞自噬機制失衡有關（Bennison SA, Cellular Signaling. 2022, 100:110472; Blazejewski SM, Scientific Reports. 2011, 11:8156）。

Akt和其它蛋白激酶導致的NUAK1啟動能促進腫瘤細胞在能量不足的環境下生存並保護腫瘤細胞免於發生凋亡，NUAK2也通過類似的機制抑制TNFα和CD95誘導的細胞凋亡。此外，NUAK1啟動後通過上調機制金屬蛋白酶（matrix metalloproteinases，MMP）促進腫瘤細胞的侵襲和轉移，NUAK2則通過加強腫瘤細胞的活動性參與腫瘤轉移的發生（Hou X, Oncogen. 201, 30:2933; Chen Y, Cell Death and Disease. 2020, 11:712; Molina E, Cells. 10:2760; Humbert N, The EMBO Journal. 2010, 29:376）。很多證據表明NUAK1和NUAK2在腫瘤形成和轉移中發揮作用，比起NUAK1，NUAK2存在更強的促進腫瘤形成和轉移的作用，NUAK2抑制劑應該比NUAK1抑制劑更有可能成為新的靶向抗腫瘤藥物。

最新研究表明NUAK通過和轉化生長因數-β (TGF-β) 信號通路交互影響在組織纖維化的發展中起著關鍵作用。首先TGF-β能在多種上皮細胞如角質形成細胞（keratinocytes）和人皮膚纖維母細胞（dermal fibroblasts）內上調NUAK1和NUAK2的基因轉錄，而MAPK（ERK1/2 and p38）信號失活抑制TGF-β依賴性NUAK2表達；此外，NUAK2通過和TGF-β的細胞內信號仲介SMAD3蛋白結構上的交聯域和MH2域結合來抑制SMAD3在細胞內的降解，類似的機制在NUAK2和TβRI之間也存在。TGF-β誘導的編碼纖連蛋白（fibronectin，FN）, 纖溶酶原啟動物抑制劑1（plasminogen activator inhibitor 1, PAI1），組織金屬蛋白酶抑制蛋白1（tissue inhibitor of metalloproteinase-1, TIMP1）等促纖維化分子的基因表達依賴於NUAK2的存在，可見NUAK2促進纖維化的發生。研究也表明 NUAK1通過上調TGF-β和YAP兩個信號通路促進腎、肺和肝纖維化，動物試驗中抑制NUAK1能減輕新創傷引起的瘢痕和陳舊性瘢痕組織（Gill MK, Nature Communications. 2018. 9:3510）。有趣的是，研究發現NUAK1敲基因的角質形成細胞內編碼FN的基因表達上調，NUAK1可能通過負反饋機制影響TGF-β信號傳導從而抑制纖維化（van de Vis RAJ, Cancers. 2021, 13：3377）。總體來講，抑制NUAK可能可以有效抑制參與組織器官的纖維化進程。

由於激酶從結構和功能上一直是理想的小分子藥物靶點，而NUAK1和NUAK2又參與多種疾病的發生，目前已經有一些NUAK抑制劑處於早期研發階段，其有效性和安全性依然存疑（Banerjee S, The Biochemical Journal. 2014, 457:215）。因此開發NUAK選擇性抑制劑和NUAK1/2雙靶點抑制劑有望為神經精神類疾病（如帕金森氏病，阿茲海默症）、代謝性疾病（如糖尿病，高脂血症，肥胖）、腫瘤（如肝癌，白血病，淋巴瘤，腫瘤轉移）、內臟纖維化疾病（如肝硬化，腎纖維化，肺纖維化，和心肌炎後遺症）以及皮膚纖維化疾病（如硬皮病，瘢痕疙瘩，肥厚性瘢痕，或單純用於減輕外傷和手術後瘢痕）等提供創新治療的新方向，開發新一代NUAK抑制劑具有巨大的潛在臨床應用價值。

本發明的目的旨在獲得有效的NUAK1/NUAK2抑制劑，可用於製備預防或治療以下疾病的藥物：神經精神類疾病（如帕金森氏病，阿茲海默症症）、代謝性疾病（如糖尿病，高脂血症，肥胖）、腫瘤（如肝癌，白血病，淋巴瘤，腫瘤轉移）、內臟纖維化疾病（如肝硬化，腎纖維化，肺纖維化，和心肌炎後遺症）以及皮膚纖維化疾病（如硬皮病，瘢痕疙瘩，肥厚性瘢痕，或單純用於減輕外傷和手術後瘢痕）。

為了實現上述目的，在一方面，本發明提供了一種嘧啶胺類化合物，所述嘧啶胺類化合物為由如下所示的式I表示的化合物，或其立體異構體、幾何異構體、互變異構體、同位素衍生物、水合物、溶劑化物、前藥以及藥學上可接受的鹽： ，

其中，A為可被m個R ₃取代的苯基，或可被p個R ₄取代的5元雜芳基；

B為任選取代的3-10元環烷基或任選取代的3-10元雜環烷基；

A或B上的取代基選自鹵素、胺基、羥基、硝基、氰基、巰基、任選取代的C1-8烷基、任選取代的C1-8烷基氧基、任選取代的C1-8烷基硫基、任選取代的C1-8烷基胺基的一個或多個；

D為 或 ，X為N或CH，X為CH時，H可被R ₅或R ₆取代；

E為-C(O)-NHR ₇R ₈、-C(O)-R ₇R ₈、-NR ₇-C(O)R ₈、-NR ₇-S(O) ₂-R ₈、-任選取代的C3-8雜環烷基-S(O) ₂-R ₈、-任選取代的C3-8環烷基-S(O) ₂-R ₈，R ₈為任選取代的C1-8烷基、任選取代的C3-8環烷基、任選取代的C3-8環烷基C1-8烷基，環烷基或雜環烷基上的取代基選自鹵素，胺基、羥基、硝基、氰基、巰基、任選取代的C1-8烷基、任選取代的C1-8烷基氧基、任選取代的C1-8烷基硫基、任選取代的C1-8烷基胺基的一個或多個；

R ₁、R ₇各自獨立地為H、任選取代的C1-8烷基；

R ₂、R ₃、R ₄、R ₅、R ₆各自獨立地為鹵素、胺基、羥基、硝基、氰基、巰基、任選取代的C1-8烷基、任選取代的C1-8烷基氧基、任選取代的C1-8烷基硫基、任選取代的C1-8烷基胺基；

C1-8烷基上的取代基選自鹵素、胺基、羥基、硝基、氰基、巰基中的一個或多個；

n為0、1或2，m為0、1、2、3或4，p、q、r分別為0、1、2或3。

在一組實施方式中，E為下式之一： 、 、 、 、 、 或 。

在一組實施方式中，B為任選取代的3-6元環烷基，優選任選取代的5-6元環烷基，更優選為任選取代的哌啶基、任選取代的哌嗪基、任選取代的吡咯烷基。

進一步地，B為下式之一： 、 或 。

R ₉為鹵素、胺基、羥基、硝基、氰基、巰基、任選取代的C1-8烷基、任選取代的C1-8烷基氧基、任選取代的C1-8烷基硫基、任選取代的C1-8烷基胺基；

R ₁₀為H或任選取代的C1-8烷基；

C1-8烷基上的取代基選自鹵素、胺基、羥基、硝基、氰基、巰基中的一個或多個；

s、t分別為0、1、2、3或4，u為0、1、2或3。

更進一步地，B為下式之一： 、 、 、 、 或 。

在一組實施方式中，A為任選取代的以下基團之一： 。

其中A上方與胺基相連，A下方與B基團相連。

進一步地，A為任選取代的苯基；更進一步地，A被甲氧基取代，優選取代在胺基的鄰位。

在一組實施方式中，R ₂為氯，優選取代在胺基的對位。

在一組實施方式中，所述式I表示的化合物為以下化合物之一： 。

在一組實施方式中，所述藥學上可接受的鹽為甲酸鹽。

在一組實施方式中，所述同位素衍生物為氘代物。

另一方面，本申請還提供了所述嘧啶胺類化合物的製備方法，其包含以下步驟：

由式II化合物和式III化合物製備式I化合物；

或

當D為 時，也可以由式IV與式II化合物製備式V化合物，再由式V化合物製備式I化合物； ；

其中，Y為離去基團，優選Y為鹵素，更優選Y為Cl，其他各基團的定義如上所述。

在一組實施方式中，先對式II中B環上的胺基或亞胺基進行保護，與式III化合物偶聯後，再脫除保護基製備式I化合物。

在一組實施方式中，當D為 時，對式IV化合物中D環上的亞胺基進行保護，任選對式II中B環上的胺基或亞胺基進行保護，之後經保護的式IV化合物與任選保護的式II化合物偶聯、脫除D環上的取代基製備式V化合物，最後經偶聯反應、任選脫除B環上的保護基得到式I化合物。

本申請提供了一種藥物組合物，以本申請以上所述的嘧啶胺類化合物作為有效成分；藥物組合物進一步包含藥學上可接受的載體或賦形劑。

本申請提供了所述嘧啶胺類化合物用於製備NUAK1或NUAK2抑制劑的用途。

本申請提供了所述嘧啶胺類化合物用於製備藥物的用途，其特徵在於所述化合物通過抑制NUAK1或NUAK2用於預防或治療以下疾病：神經精神類疾病、代謝性疾病、腫瘤、內臟纖維化疾病、皮膚纖維化疾病。

在一個實施方式中，所述疾病為帕金森氏病、阿茲海默症、糖尿病、高脂血症、肥胖、肝癌、白血病、淋巴瘤、腫瘤轉移、肝硬化、腎纖維化、肺纖維化、心肌炎後遺症、硬皮病、瘢痕疙瘩、肥厚性瘢痕、或單獨用於減輕外傷和手術後疤痕。

本發明的有益效果為：

本發明提供了一類嘧啶胺類化合物，體外激酶活性抑制試驗顯示，本發明化合物對NUAK1/NUAK2激酶具有優異的抑制活性。可通過抑制NUAK1或NUAK2用於預防或治療以下疾病：神經精神類疾病、代謝性疾病、腫瘤、內臟纖維化疾病、皮膚纖維化疾病。

以下對本發明的具體實施方式進行詳細說明。應當理解的是，此處所描述的具體實施方式僅用於說明和解釋本發明，並不用於限制本發明。

在本文中所披露的範圍的端點和任何值都不限於該精確的範圍或值，這些範圍或值應當理解為包含接近這些範圍或值的值。對於數值範圍來說，各個範圍的端點值之間、各個範圍的端點值和單獨的點值之間，以及單獨的點值之間可以彼此組合而得到一個或多個新的數值範圍，這些數值範圍應被視為在本文中具體公開。

在詳細描述本發明前，應瞭解，在此使用的術語只在於描述特定的實施方式，而不希望限制本發明的範圍，本發明的範圍僅由所附權利要求書限定。為了更完全地瞭解在此描述的本發明，採用以下術語，它們的定義如下所示。除非另外定義，在此使用的所有技術和科學術語具有與本發明所屬領域的普通技術人員所理解的相同的含義。

定義

除另有規定外，本發明所指的以下術語具有下述定義。

作為一個實施方式或一組實施方式的部分而說明或描述的特徵可以用於另一實施方式或另一組實施方式中，來產生更進一步的實施方式。

本發明中，環基團上相連的 ，代表可有n個R ₂、q個R ₅、r個R ₆、s個R ₉、t個R ₉、u個R ₉連接在所述環基團的任意可能位置。

本發明中部分取代基中“ ”處表示連接位點。D為 或 時，D左側與嘧啶相連，D右側與E基團相連。

除非另有說明，所述“任選取代”是指被取代基團上的氫未被取代或取代基團的一個或多個可取代位點獨立地被取代基取代，取代基獨立地選自一個或多個氘、鹵素、胺基、羥基、硝基、氰基、巰基、氧代、任選取代的C1-8烷基、任選取代的C1-8烷基氧基、任選取代的C1-8烷基硫基、任選取代的C1-8烷基胺基的一個或多個；C1-8烷基上的取代基選自氘、鹵素、胺基、羥基、硝基、氰基、巰基中的一個或多個；取代基選自“氧代”的情況是指同一取代位置的兩個氫原子被氧原子所取代。

術語“雜芳基”表示含有5‑10元結構，或優選5‑8元結構，更優選5‑6元結構的芳香單環或者多環環狀系統，其中1個、2個、3個、4個或更多個環原子為雜原子且其餘原子為碳，雜原子獨立地選自O、N或S，雜原子數量優選為1個、2個、3個或4個。雜芳基可為含有1-2個選自N或S的5元結構的芳香單環，可為含有1-2個N的5元結構的芳香單環。雜芳基的實例包括但不限於呋喃基、噻吩基、噁唑基、噻唑基、異噁唑基、噁二唑基、噻二唑基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、三唑基、四唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、噠嗪基、硫代二唑基、三嗪基、酞嗪基、喹啉 基、異喹啉基、喋啶基、嘌呤基、吲哚基、異吲哚基、吲唑基、苯並呋喃基、苯並噻吩基、苯並吡啶基、苯並嘧啶基、苯並吡嗪基、苯並咪唑基、苯並酞嗪基、吡咯並[2 ,3‑b]吡啶基、咪唑並 [1 ,2‑a]吡啶基、吡唑並[1 ,5‑a]吡啶基、吡唑並[1 ,5‑a]嘧啶基、咪唑並[1 ,2‑b]噠嗪基、[1 , 2 ,4]三唑並[4 ,3‑b]噠嗪基、[1 ,2 ,4]三唑並[1 ,5‑a]嘧啶基、[1 ,2 ,4]三唑並[1 ,5‑a]吡啶基等。

術語“環烷基”表示含有3‑10個碳原子的，飽和單環、雙環或者三環體系，其中單環、雙環或三環中不包含芳香環。雙環基包括橋環基、螺環基、並環基等。優選地包含3‑10個碳原子(C3‑10環烷基)，進一步優選3-8個碳原子（C3-8環烷基）、3‑6個碳原子 (C3‑6環烷基)、4‑6個碳原子(C4‑6環烷基)、5‑6個碳原子(C5‑6環烷基)。實例包括但不限於環丙基、環丁基、環戊基、環己基、甲基環丙基、2‑乙基‑環戊基、二甲基環丁基等。

術語“雜環烷基”是指飽和的單環、雙環或多環環狀烴基團，優選包含3‑10個環原子，其中1個、2個、3個或更多個環原子選自N、O或S，其餘環原子為C，包括橋環基、螺環基、並環基等。優選包含3～8 個環原子(3‑8元雜環烷基)，或3-6個環原子(3‑6元雜環烷基)，或4-6個環原子(4‑6元雜環烷基)，或5-6個環原子(5‑6元雜環烷基)。雜原子優選1‑4個，更優選1～3個(即1個、2個或3個)。雜環烷基可為含有1-2個N的5‑6元單環雜環烷基。雜環烷基的實例包括吡咯烷基、咪唑烷基、四氫呋喃基、哌啶基、哌嗪基、吡喃基、氮雜環丙烷基、氧雜環丙烷基、硫雜環丙烷基、氮雜環丁烷基、氧雜環丁烷基、硫雜環丁烷基、氧雜環己烷、嗎啉基、硫代嗎啉基、二噁烷基、 二硫雜環己基、噁唑烷基、噻唑烷基、吡唑烷基、咪唑啉啶等。

術語“烷基”指一價飽和脂肪族烴基團，優選包含1‑8個碳原子(C1‑8烷基)直鏈或支鏈基團（碳原子數量在1-8之間，具體地為1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個或8個），更優選包含 1‑6個碳原子(即C1‑6烷基，碳原子數量在 1‑6之間，具體地為1個、2個、3個、4個、5個或6個)。實例包括但不限於甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、新戊基、1 ,1‑二甲基丙基、1 ,2‑二甲基丙基、2 ,2‑二甲基丙基、1‑乙基丙基、2‑甲基丁基、3‑甲基丁基、正己基、正庚基、正辛基等。

術語“烷基氧基”、“烷基硫基”、“烷基胺基”分別指‑O‑烷基、-S-烷基、-NH-烷基或二烷基胺基，所述烷基的定義同上。代表的例子包括但不限於甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、丁氧基、1‑甲基丙氧基、2‑甲基丙氧基、叔丁氧基等；甲硫基、乙硫基、丙硫基、異丙硫基、丁硫基、1‑甲基丙硫基、2‑甲基丙硫基、叔丁硫基等；甲胺基、乙胺基、丙胺基、二甲胺基、二乙胺基、二丙胺基、甲基乙基胺基等。

術語“鹵素”是指F、Cl、Br、I。

本發明所述的活性化合物，解釋為包括所述化合物及其立體異構體、互變異構體、同位素衍生物、水合物、溶劑化物、前藥或其藥學上可接受的鹽。所述化合物的立體異構體、互變異構體、同位素衍生物、水合物、溶劑化物、前藥、同位素衍生物或其藥學上可接受的鹽通過本領域常規技術手段獲得，在體內外以與所述化合物基本相同的作用機理，發揮相同或相似的效用。

術語“立體異構體”是指由分子中原子在空間上排列方式不同所產生的異構體，包括構型異構體和構象異構體，其中，構型異構體又包括幾何異構體(或順反異構體)和光學異構體(包含對映異構體和非對映異構體)。幾何異構體可以存在於本化合物中。光學異構體指的是分子結構完全相同，物理化學性質相近，但光性不同的物質。 本發明的化合物在R或S構型中可以含有不對稱取代的碳原子，其中術語“R”和“S”如IUPAC 1974 Recommendations for Section E, Fundamental Stereochemistry , Pure Appl .Chem . (1976) 45 ,13‑10所定義。具有不對稱取代的碳原子的化合物(具有相等數量的R和S構型)在那些碳原子處是外消旋的。具有過量的一種構型(相對於另一個)的原子使該構型存在更高數量，優選過量大約85%‑90%，更優選過量大約95%‑99%，更加優選過量大於大約99%。 相應地，本發明包括外消旋混合物、相對和絕對光學異構體和相對與絕對光學異構體的混合物。

術語“互變異構體”是指具有不同能量的可通過低能壘互相轉化的結構異構體。若互變異構是可能的(如在溶液中)，則可以達到互變異構體的化學平衡。例如，質子互變異構體(也稱為質子轉移互變異構體)包括通過質子遷移來進行的互相轉化，如酮‑烯醇異構化和亞胺‑烯胺異構化。價鍵互變異構體包括通過一些成鍵電子的重組來進行的互相轉化。

術語“同位素衍生物”是指本發明的化合物可以以同位素示蹤的或富集形式存在，含有一個或多個原子，這些原子的原子量或質量數不同於自然界中發現的最大量的原子的原子量或質量數。同位素可以是放射性或非放射性的同位素。原子例如氫、碳、磷、硫、氟、氯 和碘的同位素包括但不局限於： ²H , ³H , ¹³C , ¹⁴C , ¹⁵N , ¹⁸O , ³²P , ³⁵S , ¹⁸F , ³⁶Cl和 ¹²⁵I。含有這些和/或其它原子的其它同位素的化合物在本發明範圍之內。本發明的同位素標記的化合物可以利用本領域普通技術人員熟知的一般方法來製備。

術語“水合物”是指一個或多個水分子與本發明的化合物所形成的締合物。

術語“溶劑化物”是指一個或多個溶劑分子與本發明的化合物所形成的締合物。

術語“前藥”是設計的活性藥物的衍生物，其可以改善一些確定的、不合需要的物理或生物學性質。物理性能通常是相關的溶解度(過高或不足的脂質或水溶 性)或穩定性，而有問題的生物學特性包括代謝太快或生物利用率差，這本身可能與物理化性質相關。

術語“藥學上可接受的鹽”是指在合理醫學判斷範圍內適用於與哺乳動物特別是人的組織接觸而無過度毒性、刺激、過敏反應等並與合理的效益/風險比相稱 的鹽。如果所述化合物為鹼性，則藥學上可接受的鹽包含選自無機酸製備的鹽，也包括選自有機酸製備的鹽。如果所述化合物為酸性的，則藥學上可接受的鹽包括無機堿和/或有機堿製備的鹽。

術語“藥學上可接受的載體”或“藥學上可接受的賦形劑”包括但不限於任何被相關的政府管理部門許可為可接受供人類或家畜使用的佐劑、載體、賦形劑、助流劑、增甜劑、稀釋劑、防腐劑、染料/著色劑、矯味劑、表面活性劑、潤濕劑、分散劑、助懸劑、穩定劑、等滲劑、溶劑或乳化劑等。

如本文所用，術語“治療”是指根據治療性方案的治療性試劑的任何施用，所述治療性方案達到所需效果，即部分或完全減輕、改善、緩解、抑制、延遲發作、降低嚴重程度和/或降低特定疾病、障礙和/或病症的一種或多種症狀或特徵的發生率；在一些實施方式中，根據治療性方案的治療性試劑的施用與所需效果的實現相關。這種治療可以針對沒有表現出相關疾病、障礙和/或病症的受試者和/或針對僅表現出疾病、障礙和/或病症的早期跡象的受試者。替代地或另外地，這種治療可以針對表現出相關疾病、障礙和/或病症的一種或多種所確定跡象的受試者。在一些實施方式中，治療可以針對已被診斷患有相關疾病、障礙和/或病症的受試者。在一些實施方式中，治療可以針對已知具有一種或多種易感因素的受試者，所述易感因素在統計學上與相關疾病、障礙和/或病症發展的風險增加相關。

根據本發明，本申請所述製藥用途中制得的藥物除了可以包含本發明的嘧啶胺類化合物作為有效成分之外，還可以包含其他可用於預防或治療相關疾病的藥劑作為另一種有效成分。當該藥物包含多種有效成分時，各有效成分可以根據醫師的判斷同時、依次或分開施用。

以下，將通過實施例對本發明的特定化合物的效果進行詳細描述。

實施例

實施例1 合成化合物534的一般方法（TDM-181134）

步驟 1: 化合物 534c

4-（2-氯嘧啶-4-基）-1H-吡唑-1-羧酸叔丁酯

向100mL的三口燒瓶中加入化合物 534a (1 g，6.7 mmol), 化合物 534b(1.97 g，6.7 mmol), 1,1'-雙二苯基膦二茂鐵二氯化鈀 (490 mg，0.67 mmol), 碳酸銫 (4.4 g，2 mmol)，1,4-二氧六環 (60 mL) 和水(6 mL)，反應液用氬氣置換數次，升溫至70℃攪拌一小時，檢測反應完全，後處理：將反應液倒入冰水(200 mL)，水相用乙酸乙酯(3*100 mL)萃取兩次，合併有機相，並用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，抽濾，拉乾，得到的粗品過柱，[洗脫劑: (PE/EA) = 0~30%]，得到黃色固體目標化合物(化合物 534c，900 mg，產率47.8 %)，LCMS [M+1] ⁺=282。

步驟 2: 化合物 534d

2-氯-4-（1H-吡唑-4-基）嘧啶

向化合物 534c (1 g，3.56 mmol)的二氯甲烷 (80 mL)和甲醇(8 mL)溶液中加入鹽酸-二氧六環 (8.9 mL，35.6 mmol)溶液，反應液升溫至40℃攪拌6小時，檢測反應完全，後處理：反應液直接拉乾，得到白色固體目標化合物 (化合物 534d，850 mg，產率 68 %)，LCMS [M+1] ⁺=181。

步驟 3: 化合物 534f

3-（4-（2-氯嘧啶-4-基）-1H-吡唑-1-基）吡咯烷-1-羧酸叔丁酯

向化合物 534d (755.2 mg，4.18 mmol)的乙腈 (150 mL)溶液中加入化合物 534e (1.255 g，5.02 mmol)和碳酸銫(4.08 g，12.54 mmol)。反應液升溫至50℃攪拌過夜，檢測反應完全。後處理：將反應液直接拉乾，加入水和乙酸乙酯萃取，合併有機相，並用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，抽濾，拉乾，得到的粗品過柱，[洗脫劑: EA/PE= 0~50%]，得到白色固體目標化合物 (化合物 534f，136 mg，產率 9.3 %)，LCMS [M+1] ⁺=350。

步驟 4: 化合物 534g

2-氯-4-（1-（吡咯烷-3-基）-1H-吡唑-4-基）嘧啶

向化合物 534f (136 mg，0.39 mmol) 的二氯甲烷 (15 mL)溶液中加入鹽酸-二氧六環(1.5 mL，0.86 mmol)溶液，反應液室溫攪拌2小時，檢測反應完全。後處理：將反應液直接拉乾，得到白色固體目標化合物 (化合物 534 g，97 mg，產率 93 %)，LCMS [M+1] ⁺=250。

步驟 5: 化合物 534i

2-氯-4-（1-（乙基磺醯基）吡咯烷-3-基）-1H-吡唑-4-基）嘧啶

向化合物 534g (97.38 mg，0.39 mmol)的N,N-二甲基甲醯胺(6 mL)溶液中加入三乙胺 (78.9 mg，0.78 mmol)和化合物 534h (75.2 mg，0.59 mmol)，反應液室溫攪拌2小時，檢測反應完全。後處理：將反應液倒入水中，水相用乙酸乙酯(3* 50 mL)萃取，合併有機相，並用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，抽濾，拉乾，得到的粗品過柱，[洗脫劑:EA/PE= 0~50%]，得到白色固體目標化合物(化合物 534i，70 mg，yield 52.5 %)，LCMS [M+1] ⁺=342。

步驟 6: 化合物 534k

叔丁基-4-（4-（（4-（1-（乙基磺醯基）吡咯烷-3-基）-1H-吡唑-4-基）嘧啶-2-基）胺基）-1H--吡唑-1-基）哌啶-1-羧酸酯

向100 mL的三口燒瓶中加入化合物 534i (48.5 mg，0.14 mmol)，化合物 534j (45.3 mg，0.17 mmol), 醋酸鈀 (6.37 mg，0.03 mmol), 4,5-雙(二苯基膦)-9,9-二甲基氧雜蒽(32.84 mg，0.06 mmol)，碳酸銫(92.46 mg，0.28 mmol)，1,4-dioxane二氧六環 (8 mL)，反應液用氬氣置換數次，升溫至100℃攪拌2小時，檢測反應完全。後處理：將反應液拉乾，加入乙酸乙酯 (100 mL) 和水 (100 mL)萃取，合併有機相，並用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，抽濾，拉乾，得到的粗品過柱，[洗脫劑: (二氯甲烷:甲醇=10:1)/DCM= 0~50%]，得到白色固體目標化合物(化合物 534k，59 mg，產率50.5 %)，LCMS [M+1] ⁺=573。

步驟 7: 化合物 534

4-（1-（1-（乙基磺醯基）吡咯烷-3-基）-1H-吡唑-4-基）-N-（1-（哌啶-4-基]-1H-吡啶-4-基]嘧啶-2-胺

向化合物 534k (59.1 mg，0.1 mmol)的二氯甲烷 (5 mL)和甲醇（1 mL）溶液中加入鹽酸-二氧六環 (0.52 mL，2.07 mmol)溶液，反應液室溫攪拌兩小時，檢測反應完全。後處理：將反應液拉乾，粗品通過製備純化，得到白色固體目標化合物 (化合物 534，7.7 mg，產率 5.5 %)， LCMS [M+1] ⁺=472.3。

¹H NMR (400 MHz, DMSO) δ 9.37 (s, 1H), 8.53 (s, 1H), 8.35 (d, J = 5.0 Hz, 2H), 8.16 (s, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.00 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 5.20-5.09 (m, 1H), 4.31 (s, 1H), 3.84-3.79 (m, 2H), 3.63 (d, J = 6.3 Hz, 1H), 3.53 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 3.21-3.11 (m, 4H), 2.77 (t, J = 11.9 Hz, 2H), 2.47-2.38 (m, 2H), 2.03 (d, J = 11.2 Hz, 2H), 1.92 (d, J = 11.1 Hz, 2H), 1.22 (t, J = 7.4 Hz, 3H)。

實施例2 合成化合物535的一般方法（TDM-181135）

步驟 1: 化合物 535c

2-氯-4-硝基吡唑嘧啶

向化合物535a (2 g，0.013 mol)，化合物535b（1.44 g，0.013 mol）的乙腈（24 mL）溶液中加入化合物N,N-二異丙基乙胺（1.91 g，0.01mol），將反應溶液在室溫下攪拌16小時。反應結束將混合物在減壓下濃縮，向殘餘物中加入水（60 mL）並用乙酸乙酯（3*30 mL）萃取，合併有機層，用飽和食鹽水洗滌，用硫酸鈉乾燥。濾液減壓濃縮，殘餘物通過矽膠色譜法純化（石油醚/乙酸乙酯=0~24/76），得到白色固體化合物 (化合物535c，713.3 mg，23.6%收率)。LCMS [M+1] ⁺= 226.0。

步驟2:  化合物 535d

2-氯嘧啶-4-基吡唑胺

向化合物535c（50 mg，0.222 mmol），氯化銨（59.27 mg，1.11 mmol）和鐵粉（61.89 mg，1.108 mmol）的四氫呋喃（7.4 mL）的溶液中加入水（7.4 mL），將反應溶液在65°C下攪拌16小時。反應結束將混合物在減壓下濃縮，向殘餘物中加入水（60 mL）並用乙酸乙酯（3*30 mL）萃取，合併有機層，用飽和食鹽水洗滌，用硫酸鈉乾燥。濾液減壓濃縮，殘餘物用矽膠柱層析（乙酸乙酯/石油醚=0~38/62）純化，得到黃色固體產物(化合物535d，45 mg，粗品)，LCMS [M+1] ⁺= 196.0。

步驟 3: 化合物 535f

1-（2-氯嘧啶-4-基）-4-吡唑基丙烷磺醯胺

向化合物535d（43.36 mg，0.222 mmol）的二氯甲烷溶液中加入三乙胺(67.29 mg，0.67 mmol)和化合物535e (63.17 mg，0.443 mmol)，將混合物在40 ℃下攪拌16小時。反應結束將混合物在減壓下濃縮，向殘餘物添加水（30 mL），並用乙酸乙酯（40 mL* 3）萃取，合併有機層，用鹽水（50 mL）洗滌，用硫酸鈉乾燥，將濾液在減壓下濃縮，將殘餘物用矽膠柱層析純化（二氯甲烷：含10％甲醇的二氯甲烷＝0~44/56），得到白色固體化合物(化合物535f，42.9 mg，收率64%)，LCMS [M+1] ⁺= 302.1。

步驟4: 化合物 535h

叔丁基4-（4-（4-丙基磺醯胺基）-1H-吡唑-1-基嘧啶-2-基胺基）-1H-吡唑-1-基）哌啶-1-羧酸酯

向化合物535f (50 mg，0.166 mmol)，化合物535g (53.05 mg，0.2 mmol)的鹽酸二氧六環(3 mL)溶液中加入4，5-雙二苯基膦-9，9-二甲基氧雜蒽 (40.5 mg，0.07 mmol)，醋酸鈀(6.74 mg，0.03 mmol) 和碳酸銫 (107.52 mg，0.33 mmol)，將混合物在真空下脫氣，用Ar置換，並將反應溶液在100°C下攪拌2 h。反應結束將混合物在減壓下濃縮，將殘餘物用矽膠柱層析純化（二氯甲烷：含10％甲醇的二氯甲烷＝0~60/40)，得到黃色固體產物(化合物535h，64.9 mg，73.5%產率)， LCMS [M+1] ⁺= 532.2。

步驟5: 化合物 535

2-（1-（哌啶-4-基）-1H-吡唑-4-基）胺基嘧啶-4-基）-1H-吡唑-4-基丙烷磺醯胺

向化合物535h (64.90 mg，0.122 mmol)的溶液A(二氯甲烷:甲醇=10:1)中加入鹽酸二氧六環(0.61 mL)，並將反應溶液在常溫下攪拌2 h。反應結束將混合物減壓濃縮，殘餘物通過製備型（甲酸）純化，得到白色固體化合物（化合物535，19.8 mg。產率37.6%)。LCMS [M+1] ⁺= 532.2。

¹H NMR (400, DMSO) δ 9.73 (s, 1H), 8.48 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 8.35 (d, J = 5.8 Hz, 2H), 7.95 (s, 1H), 7.73 (s, 1H), 7.56 (s, 1H), 7.12 (d, J = 5.4 Hz, 1H), 4.36-4.27 (m, 2H), 3.22 (d, J = 12.6 Hz, 3H), 3.11-3.06 (m, 2H), 2.82 (t, J = 11.8 Hz, 3H), 2.06 (s, 2H), 1.98 (s, 2H), 1.70 (dd, J = 15.1, 7.5 Hz, 2H), 0.96 (t, J = 7.4 Hz, 4H).

以實施例2類似方法合成2-（2-甲氧基-4-（4-甲基哌嗪-1-苯基）胺基嘧啶-4-基）-1H-吡唑-4-基丙烷磺醯胺（TDM-181136），黃色固體 (16.9 mg，21%收率)；以及2-（2-（2-甲氧基-4-哌啶基苯基）胺基嘧啶-4-基）-4-基吡唑基丙烷-1-磺醯胺（TDM-181138），白色固體 (7.5 mg，16.3% 產率)。

TDM NO.	Structure	LCMS [M+1] +	1H-NMR
TDM-181136		487.0	1H NMR (400 MHz , MeOD) δ 8.42 (d, J = 6.1 Hz, 2H), 8.39 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 7.97 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.69 (d, J = 0.6 Hz, 1H), 7.22 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 6.72 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 6.62 (dd, J = 8.8, 2.6 Hz, 1H), 3.90 (s, 3H), 3.37-3.33 (m, 4H), 3.12-3.09 (m, 4H), 3.07 (dd, J = 5.9, 3.7 Hz, 2H), 2.71 (s, 3H), 1.86-1.79 (m, 2H), 1.04 (t, J = 7.5 Hz, 3H).
TDM-181138		472.2	1H NMR (400, MHz, DMSO) δ 8.46 (d, J = 5.4 Hz, 2H), 8.40 (s, 1H), 8.30 (s, 1H), 7.84 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.72 (d, J = 0.7 Hz, 1H), 7.17 (d, J = 5.4 Hz, 1H), 6.93 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 6.81 (dd, J = 8.2, 1.6 Hz, 1H), 3.84 (s, 3H), 3.24 (s, 2H), 3.08 – 3.04 (m, 2H), 2.84 (dd, J = 12.6, 10.1 Hz, 2H), 2.74 (dd, J = 16.1, 7.7 Hz, 1H), 1.85 (s, 2H), 1.71 (td, J = 15.6, 8.1 Hz, 4H), 0.96 (t, J = 7.4 Hz, 3H).

實施例3 合成化合物539的一般方法（TDM-181139）

步驟 1: 化合物 539c

N-（氰基甲基）-1H-吡唑-4-甲醯胺

向化合物539b（124 mg，1.338 mmol）的乙腈（5 mL）溶液中加入N,N-二異丙基乙胺（472 mg，3.65 mmol），攪拌混合物，然後加入2-(7-氮雜苯並三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯（407mg，1.07 mmol）和化合物539a（100mg，0.892 mmol），混合物在室溫下攪拌2小時。減壓濃縮混合物，通過矽膠色譜法（10%甲醇（NH ₃）的二氯甲烷/二氯甲烷＝0～80/20）純化殘餘物，得到黃色油狀產物（化合物539c，402 mg，粗品）。LCMS [M+1] ⁺=151。

步驟 2：化合物 539e

1-（2-氯嘧啶-4-基）-N-（氰基甲基）-1H-吡唑-4-甲醯胺

向化合物539d（133 mg，0.892 mmol）和化合物539c（粗品）的乙腈（10 mL）溶液中加入碳酸鉀（370 mg，2.676 mmol），將混合物加熱至50度並攪拌過夜。將混合物加入水（100 mL），用乙酸乙酯（40 mL*3）萃取，合併有機層，用鹽水洗滌，硫酸鈉乾燥，濾液在減壓下濃縮，殘餘物通過矽膠色譜法（乙酸乙酯/石油醚＝0~40/60）純化，得到白色固體產物（化合物539e，91 mg，產率38.8%）。 LCMS [M+1] ⁺=249。

¹H NMR (400 MHz, DMSO) δ 9.28 – 9.22 (m, 2H), 8.89 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 8.34 (s, 1H), 7.98 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 4.34 (d, J = 5.5 Hz, 2H).

步驟 3: 化合物 539

N-（氰基甲基）-1-（2-（（2-甲氧基-4-（4-甲基哌嗪-1-基）苯基）胺基）嘧啶-4-基）-1H-吡唑-4-甲醯胺

向化合物539e（45 mg，0.171 mmol）、化合物539f（45.4 mg，0.206 mmol）、醋酸鈀（7.7 mg，0.034 mmol）、xantphos（40 mg，0.068 mmol）和碳酸銫（111 mg，0.342 mmol）的混合物中加入二氧六環（5 mL）。將混合物在真空下脫氣，用氬氣置換數次，加熱至100度並攪拌2小時。將混合物在減壓下濃縮，殘餘物通過矽膠色譜（10%甲醇的二氯甲烷/二氯甲烷＝0～40/60）和製備HPLC（流動相含千分之五的甲酸）純化，得到棕色固體產物（化合物539，TDM-181139，7.6 mg，9%產率）。LCMS [M+1] ⁺=448。

¹H NMR (400 MHz, DMSO) δ 9.25 (t, J = 5.4 Hz, 1H), 8.99 (s, 1H), 8.50 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 8.35 (s, 1H), 8.26 (s, 1H), 8.15 (s, 1H), 7.66 (t, J = 8.9 Hz, 1H), 7.19 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 6.66 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 6.54 (dd, J = 8.7, 2.3 Hz, 1H), 4.37-4.28 (m, 2H), 3.81 (s, 3H), 3.20-3.14 (m, 4H), 2.53 (s, 4H), 2.27 (s, 3H).

實施例4 合成化合物540的一般方法（TDM-181140）

步驟 1: 化合物 540c

叔丁基-4-（4-（（4-（4-（氰基甲基）胺基甲醯基）-1H-吡唑-1-基）嘧啶-2-基）胺基）-1H-吡啶-1-基）哌啶-1-甲酸酯

向化合物540a（100 mg，0.381 mmol）、化合物540b（122 mg，0.457 mmol）、醋酸鈀（17 mg，0.076 mmol）、xantphos（88 mg，0.152 mmol）和碳酸銫（248 mg，0.762 mmol）的混合物中加入二氧六環（8 mL）。將混合物在真空下脫氣，用氬氣置換數次，加熱至100度並攪拌2小時。將混合物在減壓下濃縮，殘餘物通過矽膠色譜（10%甲醇的二氯甲烷/二氯甲烷＝0～45/55）純化，得到黃色固體產物（化合物540c，146 mg，77.8%產率）。LCMS [M+1-100] ⁺=393。

步驟 2: 化合物 540

N-（氰基甲基）-1-（2-（（1-（哌啶-4-基）-1H-吡唑-4-基）胺基）嘧啶-4-基）1H-吡唑-4-甲醯胺

在氬氣氛圍下向化合物540c（60 mg，0.122 mmol）在二氯甲烷（5 mL）和甲醇（1 mL）的溶液中加入溴化鋅（220 mg，0.976 mmol），將混合物在室溫下攪拌2小時。減壓濃縮混合物，通過製備HPLC（甲酸）純化殘餘物，得到黃色固體產物（化合物540，TDM-181140，17.4 mg，36.3%產率）。 LCMS [M+1] ⁺=393。

¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 9.09 (s, 1H), 8.50 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 8.17 (s, 1H), 8.12 (s, 1H), 7.67 (s, 1H), 7.28 (d, J = 5.4 Hz, 1H), 4.60 (s, 1H), 4.34 (s, 2H), 3.58 (d, J = 13.0 Hz, 2H), 3.28-3.17 (m, 2H), 2.41-2.20 (m, 4H).

實施例5 合成化合物545的一般方法（TDM-181145）

步驟 1: 化合物 545c

3-（3-甲氧基-4-硝基苯基）-2，5-二氫吡咯-1-甲酸叔丁酯

向化合物545a(534.6 mg，2.85 mmol)，化合物545b (842.0 mg，2.85 mmol)，1,1'-雙二苯基膦二茂鐵二氯化鈀(104.63 mg，0.14 mmol)和碳酸鈉(694.76 mg，6.56 mmol)的混合物中加入二氧六環（20 mL）和水（5 mL），然後在真空下將混合物脫氣，用氮氣置換，將混合物加熱到102℃並攪拌16小時。反應結束將混合物在減壓下濃縮，向殘餘物中添加水（100 mL），並用乙酸乙酯（60 * 3）萃取，合併有機層，將濾液在減壓下濃縮，將殘餘物用矽膠柱層析純化（石油醚/乙酸乙酯=0~44/56），反應結束將混合物在減壓下濃縮，殘餘物通過矽膠色譜法純化（石油醚/乙酸乙酯＝0~76/24），得到黃色固體化合物（化合物545c，478.3 mg，52.4%收率）。LCMS [M+1-56] ⁺=265.1。

步驟 2: 化合物 545d

3-甲氧基-4-硝基苯基-2，5-二氫吡咯

向化合物545c(378.3 mg，1.181 mmol)的溶液A(二氯甲烷:甲醇=10:1)(15mL)中加入鹽酸二氧六環(5.91 mL)，並將反應溶液在常溫下攪拌2小時。反應結束將混合物在減壓下濃縮，向殘餘物中添加水（60 mL），並用乙酸乙酯（30 * 3）萃取，合併有機層，用鹽水（50 mL）洗滌，用硫酸鈉乾燥。將濾液在減壓下濃縮，反應結束將混合物減壓濃縮，得到棕色固體化合物（化合物545d，194.6 mg，74.8%產率) 。LCMS [M+1] ⁺=221.2。

步驟 3: 化合物545e

3-甲氧基-4-硝基苯基-2，5-二氫吡咯

向化合物545d (194.6 mg，0.884 mmol)的甲醇(12 mL)溶液中加入甲醛(214.86 mg)，該混合液先常溫攪拌半小時，然後再加入醋酸硼氫化鈉(749.1 mg，3.53 mmol)，反應液繼續攪拌十分鐘。反應結束將混合物在減壓下濃縮，殘餘物通過矽膠色譜法純化（石油醚/乙酸乙酯＝0%~100%），得到黃色固體化合物（化合物545e，85.3 mg，產率41.2%）。LCMS [M+1] ⁺=235.2。

步驟 4: 化合物 545f

2-甲氧基-4-（1-甲基吡咯烷-3-基）苯胺

在室溫下向化合物545e (85.3 mg，0.36 mmol)的甲醇（3 mL）溶液中加入鈀碳( 20 mg)，然後在真空下將混合物脫氣，用氫氣置換，將混合物攪拌3小時。反應結束將混合物在減壓下濃縮，將殘餘物用矽膠柱層析純化(二氯甲烷：含10％甲醇的二氯甲烷＝0~77/23) 得到黃色固體化合物（化合物545f，29 mg，產率38.7%）反應結束減壓濃縮混合物，殘餘物直接用於下一步反應，LCMS [M+1] ⁺=207.2。

步驟5: 化合物 545

N-氰甲基-1-（2-甲氧基-4-（1-甲基吡咯烷-3-苯基）胺基）嘧啶-4-基）-1H-吡唑-4-甲醯胺

向化合物545f (36.76 mg，0.14 mmol)，化合物545g (29 mg，0.14 mmol)的二氧六環(4 mL)溶液中加入4，5-雙二苯基膦-9，9-二甲基氧雜蒽(32.4 mg，0.06 mmol)，醋酸鈀(6.27 mg，0.028 mmol)和碳酸銫(91.23 mg，0.28 mmol)，將混合物在真空下脫氣，用氬氣置換，並將反應溶液在100°C下攪拌2小時。反應結束將混合物在減壓下濃縮，向殘餘物中添加水（30 mL），並用乙酸乙酯（30 * 3）萃取，合併有機層，用鹽水（50 mL）洗滌，用硫酸鈉乾燥。將濾液在減壓下濃縮，反應結束將混合物在減壓下濃縮，將殘餘物用矽膠柱層析純化(二氯甲烷：含10％甲醇的二氯甲烷＝0~100/0)，再通過製備型HPLC（甲酸）純化，得到白色固體化合物（化合物545，6.5 mg，10.7%產率）。LCMS [M+1] ⁺=433.2。

¹H NMR (400 MHz, DMSO) δ 9.28 (s, 1H), 9.06 (s, 1H), 8.57 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 8.39 (s, 1H), 8.26 (d, J = 11.4 Hz, 2H), 7.94 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.27 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 7.01 (s, 1H), 6.94 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 4.34 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 3.86 (s, 3H), 3.42 -3.33 (m, 1H), 3.04 (t, J = 8.6 Hz, 1H), 2.80 (t, J = 6.9 Hz, 2H), 2.64 (t, J = 8.5 Hz, 1H), 2.43 (s, 3H), 2.36-2.22 (m, 1H), 1.87 (dd, J = 12.6, 7.6 Hz, 1H), 1.23 (s, 1H).

實施例6 合成化合物546的一般方法（TDM-181146）

步驟 1: 化合物 546c

1-（2-氯嘧啶-4-基）-1H-吡咯-3-羧酸甲酯

在0℃下向化合物546b (1 g，9.59 mmol)的N,N-二甲基甲醯胺(20 mL)溶液中加入鈉氫 (384 mg，9.59 mmol)，反應液升溫至室溫攪拌30分鐘，然後降溫至0℃，將化合物 546a (1.43 g，9.59 mmol)加入到上述溶液中，反應液室溫攪拌3h。檢測反應完全，後處理：將反應液倒入水中，加入乙酸乙酯 (60 mL*3)萃取，合併有機相，並用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，抽濾，拉乾，得到的粗品過柱，[洗脫劑: (EA:PE) =0~15%]，得到白色固體目標化合物 (化合物546c，987 mg，yield 41 %)，LCMS [M+1] ⁺=238。

¹H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.83 (d, J = 5.7 Hz, 1H), 8.39 (s, 1H), 8.08 (d, J = 5.7 Hz, 1H), 7.88-7.79 (m, 1H), 6.74 (dd, J = 3.1, 1.4 Hz, 1H), 3.79 (s, 3H).

步驟 2: 化合物 546d

1-（2-氯嘧啶-4-基）-1H-吡咯-3-羧酸

將化合物 546c (550 mg, 2.3 mmol)的醋酸 (17.5 mL)和濃鹽酸(8.75 mL)溶液升溫至50℃攪拌7小時，檢測反應完全，後處理：將反應液倒入水中，水相用乙酸乙酯 (2*100 mL)萃取，合併有機相，並用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，抽濾，拉乾，得到的粗品過柱，[洗脫劑:(二氯甲烷:甲醇=10:1)/二氯甲烷=0~80%]，得到白色固體目標化合物 (化合物 546d，95.8 mg，產率 18.6 %)，LCMS [M+1] ⁺=224。

步驟 3: 化合物 546f

1-（2-氯嘧啶-4-基）-N-（氰基甲基）-1H-吡咯-3-甲醯胺

向化合物546d (64 mg，0.29 mmol)的N,N-二甲基甲醯胺(10 mL)溶液中加入2-(7-氮雜苯並三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸鹽(163.1 mg，0.43 mmol), N,N-二異丙基乙胺(92.4 mg，0.72 mmol)和 化合物546e (26.4 mg，0.29 mmol)，反應液室溫攪拌2小時，檢測反應完全。後處理：將反應液倒入水中，加入乙酸乙酯 (3*100 mL)萃取，合併有機相，並用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，抽濾，拉乾，得到的粗品過柱，[洗脫劑:(二氯甲烷:甲醇=10:1)/二氯甲烷=0~80%]，得到白色固體目標化合物 (化合物 546f，59.7 mg，產率 53.3 %)， LCMS [M+1] ⁺=262。

步驟 4: 化合物 546

N-（氰基甲基）-1-（2-（（2-甲氧基-4-（4-甲基哌嗪-1-基）苯基）胺基）嘧啶-4-基）-1H-吡咯-3-甲醯胺

向100 mL的三口燒瓶中加入化合物 546f (30 mg，0.12 mmol), 化合物546g (30.5 mg，0.14 mmol), 醋酸鈀 (5.16 mg，0.02 mmol), 4,5-雙(二苯基膦)-9,9-二甲基氧雜蒽(26.6 mg，0.05 mmol)，碳酸銫 (75 mg，0.23 mmol)，1,4-二氧六環(6 mL)，反應液用氬氣置換數次，升溫至100℃攪拌2小時，檢測反應完全。後處理：將反應液濃縮拉乾，加入乙酸乙酯 (100 mL) 和水 (100 mL)分層萃取，合併有機相，並用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，濃縮，拉乾，得到的粗品製備純化，得到白色固體目標化合物 (化合物 546，59 mg，產率50.5 %)， LCMS [M+1] ⁺=447.2。

¹H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.84 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 8.42 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 8.25 (s, 2H), 8.17 (s, 1H), 7.72-7.67 (m, 1H), 7.64 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.10 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 6.74 (dd, J = 3.2, 1.6 Hz, 1H), 6.65 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 6.53 (dd, J = 8.8, 2.4 Hz, 1H), 4.27 (d, J = 5.5 Hz, 2H), 3.81 (s, 3H), 3.19-3.12 (m, 4H), 2.49 (d, J = 5.1 Hz, 4H), 2.25 (s, 3H).

以實施例6類似方法合成N-（氰甲基）-1-（2-（（4-（4-甲基哌嗪-1-基）苯基）胺基）嘧啶-4-基）-1H-吡咯-3-甲醯胺（TDM-181147），白色固體 (11.8 mg, 產率24.6%)。

TDM NO.	Structure	LCMS [M+1] +	1H-NMR
TDM-181147		417.2	1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 9.55 (s, 1H), 8.85 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 8.48 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 8.28 (t, J = 1.9 Hz, 1H), 8.17 (s, 1H), 7.73 (dd, J = 3.2, 2.3 Hz, 1H), 7.56 (d, J = 9.1 Hz, 2H), 7.12 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 6.93 (d, J = 9.1 Hz, 2H), 6.77 (dd, J = 3.2, 1.7 Hz, 1H), 4.28 (d, J = 5.6 Hz, 3H), 3.11-3.07 (m, 4H), 2.49 (d, J = 4.4 Hz, 4H), 2.25 (s, 3H).

實施例7 合成化合物548的一般方法（TDM-181148）

步驟 1: 化合物 548c

叔丁基-4-（4-（（4-（4-（氰基甲基）胺基甲醯基）-1H-吡唑-1-基）嘧啶-2-基）胺基）-3-甲氧基苯基）哌啶-1-甲酸酯

向化合物548a（70 mg，0.266 mmol）、化合物548b（98 mg，0.319 mmol），醋酸鈀（12 mg，0.053 mmol），xantphos（61.6 mg，0.106 mmol）和碳酸銫（173 mg，0.532 mmol）的混合物中加入二氧六環（5 mL）。將混合物在真空下脫氣，用氬氣置換數次，加熱至100度並攪拌2小時。將混合物在減壓下濃縮，殘餘物通過矽膠色譜（10%甲醇的二氯甲烷/二氯甲烷＝0~14/86）純化，得到黃色固體產物（化合物548c，81 mg，57.2%產率）。 LCMS [M+1] ⁺=533。

步驟 2: 化合物 548

N-（氰基甲基）-1-（2-（（2-甲氧基-4-（哌啶-4-基）苯基）胺基）嘧啶-4-基）-1H-吡唑-4-甲醯胺

在氬氣氛圍下向化合物548c（73 mg，0.137 mmol）在二氯甲烷（5mL）和甲醇（0.5mL）溶液中加入溴化鋅（247 mg，1.096 mmol），將混合物在室溫下攪拌2小時。在減壓下濃縮混合物，通過製備HPLC（甲酸）純化殘餘物，得到無色油狀的所需產物（化合物548，TDM-181148，6 mg，10.1%產率）。 LCMS [M+1] ⁺=433。

¹H NMR (400 MHz, DMSO) δ 9.46 (s, 1H), 9.08 (s, 1H), 8.57 (d, J = 5.4 Hz, 1H), 8.48 (s, 1H), 8.40 (s, 1H), 8.28 (d, J = 6.2 Hz, 1H), 7.98 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.28 (d, J = 5.4 Hz, 1H), 6.96 (s, 1H), 6.88 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 4.34 (d, J = 4.9 Hz, 2H), 3.87 (s, 3H), 3.67 (s, 1H), 3.32 (d, J = 11.6 Hz, 2H), 2.92 (t, J = 11.5 Hz, 2H), 2.80 (t, J = 11.5 Hz, 1H), 1.98 – 1.76 (m, 4H).

實施例8: 合成化合物552的一般方法（TDM-181152）

步驟 1: 化合物 552c

叔丁基4-（4-（（4-（3-（（氰基甲基）胺基甲醯基）-1H-吡咯-1-基）嘧啶-2-基）胺基）-3-甲氧基苯基）哌啶-1-甲酸酯

向化合物552a（80 mg，0.306 mmol）、化合物552b（112 mg，0.367 mmol）、醋酸鈀（14 mg，0.061 mmol）、xantphos（70.8 mg，0.112 mmol）和碳酸銫（199 mg，0.612 mmol）的混合物中加入二氧六環（5 mL）。將混合物在真空下脫氣，用氬氣置換數次，加熱至100度並攪拌2小時。將混合物在減壓下濃縮，殘留物通過矽膠色譜法（10%甲醇的二氯甲烷/二氯甲烷＝0~55/45）純化，得到黃色固體產物（化合物552c，96 mg，59%產率）。LCMS [M+1] ⁺=532。

步驟2: 化合物 552

N-（氰基甲基）-1-（2-（（2-甲氧基-4-（哌啶-4-基）苯基）胺基）嘧啶-4-基）-1H-吡咯-3-甲醯胺

在氬氣氛圍下向化合物552c（96 mg，0.181 mmol）在二氯甲烷（10mL）和甲醇（1mL）中的溶液中加入溴化鋅（325 mg，1.445 mmol），將混合物在室溫下攪拌2h。減壓下濃縮混合物，通過製備HPLC（甲酸）純化殘餘物，得到白色固體產物（化合物552，TDM-181152，20 mg，25.6%產率）。 LCMS [M+1] ⁺=432。

¹H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.91 (t, J = 5.3 Hz, 1H), 8.49 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 8.40 (s, 1H), 8.31 (d, J = 6.7 Hz, 2H), 7.94 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.74 (s, 1H), 7.19 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 6.93 (s, 1H), 6.85 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 6.77 (s, 1H), 4.28 (d, J = 5.4 Hz, 2H), 3.86 (s, 3H), 3.66 (s, 1H), 3.28 (d, J = 11.7 Hz, 2H), 2.87 (t, J = 11.7 Hz, 2H), 2.77 (t, J = 11.8 Hz, 1H), 1.89 (d, J = 12.3 Hz, 2H), 1.78 (dd, J = 22.6, 12.1 Hz, 2H).

以實施例8類似方法合成N-（氰基甲基）-1-（2-（（1-（哌啶-4-基）-1H-吡唑-4-基）胺基）嘧啶-4-基）1H-吡咯-3-甲醯胺（TDM-181153），類白色固體 (8.5 mg，產率，9%)；以及N-（氰甲基）-1-（2-（（4-（哌啶-4-基）苯基）胺基）嘧啶-4-基]-1H-吡咯-3-甲醯胺（TDM-181154），白色固體 (25.2 mg，產率 28.6%)。

TDM NO.	Structure	LCMS [M+1]+	1H-NMR
TDM-181153		392.1	1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 9.68 (s, 1H), 8.88 (s, 1H), 8.49 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 8.28 (d, J = 13.5 Hz, 2H), 7.93 (s, 1H), 7.75 (s, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.10 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 6.78 (s, 1H), 4.40 (s, 1H), 4.29 (d, J = 5.5 Hz, 2H), 3.28 – 3.23 (m, 2H), 2.92 (s, 2H), 2.10 (s, 2H), 2.01 (d, J = 10.7 Hz, 2H).
TDM-181154		402.47	1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 9.77 (s, 1H), 8.90 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 8.53 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 8.39 (s, 1H), 8.31 (t, J = 1.9 Hz, 1H), 7.76 (dd, J = 3.2, 2.3 Hz, 1H), 7.69 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.23-7.15 (m, 3H), 6.79 (dd, J = 3.2, 1.7 Hz, 1H), 4.29 (d, J = 5.5 Hz, 2H), 3.27 (d, J = 12.4 Hz, 2H), 2.87 (dd, J = 12.6, 10.4 Hz, 2H), 2.73 (s, 1H), 1.86 (d, J = 12.7 Hz, 2H), 1.79-1.65 (m, 2H).

實施例9: 合成化合物555的一般方法（TDM-181155）

步驟1: 化合物 555c

1-（2,5-二氯嘧啶-4-基）-1H-吡咯-3-羧酸甲酯

向化合物 555a (500 mg，2.73 mmol) 和化合物 555b (341 mg，2.73 mmol)的乙腈 (50 mL)溶液中加入碳酸鉀 (1131.9 mg，8.19 mmol)，反應液升溫至50℃攪拌過夜，檢測反應完全。後處理：將反應液倒入水中，加入乙酸乙酯 (2*50 mL)萃取，合併有機相，並用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，抽濾，拉乾，得到的粗品過柱，[洗脫劑:TLC，PE/EA=3:1，過柱時，PE/EA=100:0-85:15]，得到白色固體目標化合物(化合物 555c，510 mg，產率 68.72 %)，LCMS [M+1] ⁺=272。

步驟 2:化合物 555d

1-（2,5-二氯嘧啶-4-基）-1H-吡咯-3-羧酸甲酯

將化合物 555c (1.1 g，4.04 mmol)加入到醋酸 (30 mL)和濃鹽酸(15 mL)溶液中，反應液升溫至50℃攪拌10小時，檢測反應完全。後處理：將反應液倒入水中，水相用乙酸乙酯(2*100 mL)萃取，合併有機相，並用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，抽濾，拉乾，得到的粗品過柱，[洗脫劑:TLC，二氯甲烷/甲醇=10:1，過柱時，二氯甲烷/甲醇=100:0-20:80 ]，得到白色固體目標化合物 (化合物 555d，315 mg，產率30 %)，LCMS [M+1] ⁺=258,260。

步驟 3: 化合物 555f

1-（2-氯嘧啶-4-基）-N-（氰基甲基）-1H-吡咯-3-甲醯胺

向化合物555d (170 mg，0.66 mmol)的N,N-二甲基甲醯胺 (17 mL)溶液中加入2-(7-氮雜苯並三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸鹽(375.7 mg，0.99 mmol), N,N-二異丙基乙胺(212.5 mg，1.65 mmol)和 化合物555e (61.2 mg，0.66 mmol)，反應液在室溫下攪拌10分鐘，檢測反應完全。後處理：將反應液倒入水中，水相用乙酸乙酯(3*100 mL)萃取，合併有機相，並用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，抽濾，拉乾，得到的粗品過柱，[洗脫劑:TLC，PE/EA=10:1，過柱時，PE/EA=100:0-50:50]，得到白色固體目標化合物 (化合物 555f，117 mg，產率54 %)，LCMS [M+1] ⁺=296,298。

步驟4: 化合物 555

1-（5-氯-2-（（2-甲氧基-4-（4-甲基哌嗪-1-基）苯基）胺基）嘧啶-4-基）-N-（氰基甲基）-1H-吡咯-3-甲醯胺

向100mL的三口燒瓶中加入化合物 555f (20 mg，0.07 mmol)，化合物555g (15 mg，0.07 mmol)，醋酸鈀 (3 mg，0.01 mmol), 4,5-雙(二苯基膦)-9,9-二甲基氧雜蒽(15.6 mg，0.03 mmol)，碳酸銫 (44 mg，0.14 mmol)，1,4-二氧六環 (4 mL)。反應液用氬氣置換數次，升溫至100℃攪拌2小時。檢測反應完全，後處理：反應液濃縮拉乾，殘留物加入乙酸乙酯 (100 mL) 和水 (100 mL)分層萃取，合併有機相，並用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，抽濾，拉乾，得到的粗品製備純化得到黃色固體目標化合物(化合物 555，3.2 mg，產率 9.8 %)，LCMS [M+1] ⁺=481,483。

¹H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.86 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 8.71 (s, 1H), 8.53 (s, 1H), 8.16 (s, 1H), 8.14 (s, 1H), 7.53 (s, 1H), 7.41 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 6.73 (dd, J = 3.2, 1.6 Hz, 1H), 6.63 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 6.50 (dd, J = 8.7, 2.5 Hz, 1H), 4.27 (d, J = 5.5 Hz, 2H), 3.78 (s, 3H), 3.17 – 3.12 (m, 4H), 2.47 (d, J = 4.9 Hz, 4H), 2.24 (s, 3H).

以實施例9類似方法合成N-（氰甲基）-1-（2-（（2-甲氧基-4-（1-甲基哌啶-4-基）苯基）胺基）嘧啶-4-基-1H-吡咯-3-甲醯胺（TDM-181156），白色固體 (7.4 mg，產率，16.8%)； 1-（5-氯-2-（（2-甲氧基-4-（哌啶-4-基）苯基）胺基）嘧啶-4-基]-N-（氰甲基）-1H-吡咯-3-甲醯胺（TDM-181157），白色固體 (27.7 mg，產率 47%)；N-氰甲基-1-（2-甲氧基-4-甲基吡咯烷-3-苯基）胺基）嘧啶-4-基吡咯-3-甲醯胺（TDM-181158），白色固體(6.2 mg, 3.4% 產率)。

TDM No.	Structure	LCMS [M+1] +	1H-NMR
TDM-181156		446.2	1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.86 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 8.48 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 8.31 – 8.26 (m, 2H), 8.22 (s, 1H), 7.91 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.76 – 7.71 (m, 1H), 7.18 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 6.95 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 6.86 (dd, J = 8.2, 1.6 Hz, 1H), 6.76 (dd, J = 3.2, 1.6 Hz, 1H), 4.28 (d, J = 5.5 Hz, 2H), 3.85 (s, 3H), 2.93 (d, J = 11.3 Hz, 2H), 2.48 (s, 1H), 2.25 (s, 3H), 2.10 – 2.01 (m, 2H), 1.74 (dt, J = 12.1, 7.3 Hz, 4H).
TDM-181157		446.2	1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.88 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 8.81 (s, 1H), 8.60 (d, J = 3.1 Hz, 1H), 8.26 (s, 1H), 8.17 (t, J = 1.8 Hz, 1H), 7.70 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.63 – 7.52 (m, 1H), 6.92 (d, J = 1.4 Hz, 1H), 6.83 (dd, J = 8.2, 1.5 Hz, 1H), 6.75 (dd, J = 3.2, 1.7 Hz, 1H), 4.27 (d, J = 5.5 Hz, 2H), 3.83 (s, 3H), 2.93 (t, J = 11.5 Hz, 4H), 2.79 (d, J = 12.2 Hz, 1H), 1.93 (d, J = 12.5 Hz, 2H), 1.79 (t, J = 11.2 Hz, 2H).
TDM-181158		432.2	1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.87 (t, J = 5.4 Hz, 1H), 8.49 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 8.30 (s, 2H), 8.24 (s, 1H), 7.92 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.74 (s, 1H), 7.19 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 6.99 (s, 1H), 6.92 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 6.77 (s, 1H), 4.28 (d, J = 5.5 Hz, 2H), 3.38 (dd, J = 16.4, 8.2 Hz, 2H), 3.02 (t, J = 8.7 Hz, 1H), 2.79 (t, J = 7.0 Hz, 2H), 2.65-2.59 (m, 1H), 2.42 (s, 3H), 2.34-2.24 (m, 1H), 1.86 (dd, J = 12.7, 7.6 Hz, 1H).

實施例10: 合成化合物559的一般方法（TDM-181159）

步驟 1: 化合物 559c

2-氯-4-硝基吡唑嘧啶

向化合物559a (3 g，0.02 mol)、化合物559b (430.74 mg，2.01 mmol)的乙腈(36 mL)溶液中加入化合物N,N -乙基二異丙胺(2.84 g，0.03 mol)，將反應溶液在常溫下攪拌16小時。反應結束後將混合物在減壓下濃縮，向殘餘物中加入水（100 mL），並用乙酸乙酯（3*50毫升）萃取，合併有機層，用鹽水（50 mL）洗滌，用硫酸鈉乾燥。濾液減壓濃縮，殘餘物通過矽膠色譜法純化（石油醚/乙酸乙酯=0~76/24），得到無色固體化合物 (化合物559c，1.334 g，29.6%收率)。LCMS [M+1] ⁺= 226.1。

步驟2: 化合物 559e

叔丁基4-（4-（4-硝基吡唑-1-基）胺基嘧啶-1-胺基）-1H-吡唑-1-基哌啶-1-羧酸酯

向化合物559c (50 mg, 0.23 mmol)、化合物559d (50.2 mg, 0.23 mmol)的二氧六環（2mL）溶液中再加入4，5-雙二苯基膦-9，9-二甲基氧雜蒽(53.3 mg，0.09 mmol)，醋酸鈀(10.3 mg，0.046 mmol)和碳酸銫(149.9 mg，0.46 mmol)，將混合物在真空下脫氣，用氬氣置換，並將反應溶液在100℃下攪拌2 h。反應結束後將混合物在減壓下濃縮，向殘餘物中加入水（30 mL），並用碳酸鉀溶液調堿，再加入乙酸乙酯（3*20毫升）萃取，合併有機層。濾液減壓濃縮，將殘餘物用矽膠柱層析純化（石油醚/乙酸乙酯=0~50/50）到黃色化合物(化合物559e，55.7 mg，55.2%產率)，LCMS[M+1-56] ⁺=400.1。

步驟 3: 化合物 559f

4-（4-（4-（4-胺基吡唑-1-基）胺基嘧啶-2-基）胺基-1H-吡唑-1-基哌啶-1-羧酸叔丁酯

向化合物559e (390.4 mg，0.86 mmol)的四氫呋喃(25 mL)溶液中加入氯化胺(229.24 mg，4.29 mmol)、鐵粉(239.35 mg，4.29 mmol)和水(25 mL)，將混合物在65℃下攪拌6小時。反應結束將混合物過濾，減壓下濃縮，向殘餘物中添加水（60 mL），並用乙酸乙酯（40 * 3）萃取，合併有機層，用鹽水（50 mL）洗滌，用硫酸鈉乾燥，將濾液在減壓下濃縮，將殘餘物用矽膠柱層析純化（二氯甲烷：含10％甲醇的二氯甲烷＝0~43/57)，得到白色固體化合物(化合物559f，203.7 mg，收率55.7%)，LCMS[M+1] ⁺=426.2。

步驟4: 化合物 559h

4-（4-（4-（4-（2，2-二氟環丙烷-1-甲醯胺基）-1H-吡唑-1-基胺基嘧啶）-1H-吡唑-1-基胺基哌啶

向化合物559g (34.4 mg，0.28 mmol)的N,N-二甲基甲醯胺(5 mL)溶液中加入2-(7-氮雜苯並三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(107.2 mg，0.28 mmol)和N,N-二異丙基乙胺(36.4 mg，0.28 mmol)，將混合物在常溫下攪拌反應10分鐘。然後再加入化合物559f (80 mg，0.19 mmol)，將混合物在常溫下攪拌反應1小時。反應結束將混合物過濾，減壓下濃縮，向殘餘物中添加水（30 mL），並用乙酸乙酯（20 * 5）萃取，合併有機層，用鹽水(3*30 mL)洗滌，用硫酸鈉乾燥，將濾液在減壓下濃縮，將殘餘物用矽膠柱層析純化反應結束將混合物在減壓下濃縮，將殘餘物用矽膠柱層析純化(二氯甲烷：含10％甲醇的二氯甲烷＝0~37/63)，得到黃色固體產物（化合物559h，84.3 mg，86.6%產率）。LCMS [M+1] ⁺=530.3。

步驟5: 化合物 559

2，2-二氟-N-（1-2-（1-哌啶-4-基）-1H-吡唑-4-胺基）嘧啶-4-基）-1H-吡唑-4-基）環丙烷-1-甲醯胺

向化合物559f (36.76 mg，0.14 mmol)的溶液A(二氯甲烷:甲醇=10:1) (3 mL)中加入鹽酸二氧六環(0.38mL)，並將反應溶液在常溫下攪拌2 h。反應結束將混合物減壓濃縮，殘餘物通過製備型HPLC（甲酸）純化，得到白色固體化合物（TDM-181159，化合物559，18.1 mg, 49.5%產率)。LCMS [M+1] ⁺= 430.1。

¹H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.94 (s, 1H), 8.54 (s, 1H), 8.40 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 8.20 (s, 1H), 7.76 (s, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.22 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 4.51 (t, J = 11.1 Hz, 1H), 3.51 (dd, J = 7.8, 3.6 Hz, 2H), 3.21 – 3.12 (m, 2H), 2.73 – 2.64 (m, 1H), 2.38 (s, 2H), 2.24 (dd, J = 24.6, 12.9 Hz, 2H), 2.09 (dt, J = 13.7, 6.9 Hz, 1H), 1.96 – 1.86 (m, 1H).

實施例11：合成化合物 569的一般方法 (TDM-181169)

步驟 1: 化合物 569c

1-甲基-4-（4-硝基-1H-吡唑-1-基）哌啶

在氮氣保護下向100 mL的三口燒瓶中加入化合物 569b (146.6 mg，1.3 mmol)，化合物 569a (149.3 mg，1.3 mmol), 三苯基膦 (682 mg，2.6 mmol)，無水四氫呋喃 (10 mL)。隨後降溫至0℃加入偶氮二羧酸二異丙酯(0.46 mL，2.6 mmol)，反應液在室溫下攪拌過夜。檢測反應完全，後處理：將反應液倒入水中，加入乙酸乙酯 (3*50 mL)萃取，合併有機相，並用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，抽濾，拉乾，得到的粗品過柱 [洗脫劑: (二氯甲烷:甲醇=10:1)/DCM= 0~40%]，得到黃色油狀目標化合物 (化合物 569c，110 mg，產率 40.3 %)，LCMS [M+1] ⁺=211。

步驟 2: 化合物 569d

1-（1-甲基哌啶-4-基）-1H-吡唑-4-胺

向化合物 569c (120 mg，0.57 mmol)的甲醇 (10 mL)溶液中加入鈀炭(10 mg)，反應液用氫氣球置換數次，室溫攪拌兩小時，檢測反應完全。後處理：將反應液抽濾，濾餅用甲醇洗滌，濾液濃縮拉乾，得到白色固體目標化合物（化合物 569d，83.7 mg，產率 81.5 %)，LCMS [M+H] ⁺=181。

步驟 3: 化合物 569g

4-（2-氯嘧啶-4-基）-1H-吡唑-1-甲酸叔丁酯

向一個100 mL的三口燒瓶中加入化合物 569e (500 mg，3.36 mmol)，化合物569f (988 mg，3.36 mol)，1,1'-雙二苯基膦二茂鐵二氯化鈀 (254.80 mg，0.34 mmol)，碳酸銫 (2189.3 mg，6.72 mmol), 1,4-二氧六環 (25 mL) 和水(2.5 mL)。反應液用氬氣置換數次，升溫至70℃攪拌1小時，檢測反應完全。後處理： 將反應液倒入水中，用乙酸乙酯 (3* 400 mL)萃取，合併有機相，並用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，濃縮，拉乾，得到的粗品過柱，[洗脫劑: (PE/EA) = 0~30%]得到白色固體目標化合物 (化合物 569 g，588.1 mg，收率 62.4 %)，LCMS [M+H] ⁺=281。

步驟 4: 化合物 569h

叔丁基-4-（2-（（1-（1-甲基哌啶-4-基）-1H-吡唑-4-基）胺基）嘧啶-4-基）1H-吡唑-1-甲酸酯

向一個100mL的三口燒瓶中加入化合物 569g (504.8 mg，1.8 mmol)，化合物 569d (389 mg，2.16 mmol)，醋酸鈀 (80.8 mg，0.36 mmol)，4,5-雙(二苯基膦)-9,9-二甲基氧雜蒽(416.6 mg，0.72 mmol)，碳酸銫 (1173 mg，3.6 mmol)，1,4-二氧六環 (25 mL)，反應液用氬氣置換數次，升溫至100℃攪拌兩小時，檢測反應完全。後處理：將反應液濃縮拉乾，加入乙酸乙酯 (100 mL)和水 (100 mL)，分層萃取，合併有機相，飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，濃縮拉乾，得到的粗品過柱，[洗脫劑: (二氯甲烷:甲醇=10:1)/DCM=0-100%]，得到黃色固體目標化合物 (化合物 569h，225.8 mg，產率 29 %)，LCMS [M+H] ⁺=425。

步驟 5: 化合物 569i

N-（1-（1-甲基哌啶-4-基）-1H-吡唑-4-基）-4-（1H-吡唑-4-）嘧啶-2-胺

向化合物569h (225.8 mg，0.53 mmol)的二氯甲烷(20 mL)溶液中加入三氟乙酸 (2.2 mL)，反應液在室溫下攪拌一小時，檢測反應完全。後處理：將反應液倒入水中，加入乙酸乙酯 (2*100 mL)萃取兩次，合併水相，並調pH至鹼性，水相用乙酸乙酯 (2*100 mL)萃取兩次，合併有機相，飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，濃縮，拉乾，得到白色固體目標化合物 (化合物 569i，172.5 mg，產率 92 %)，LCMS [M+H] ⁺=325。

步驟 6: 化合物 569

環丙基（4-（2-（（1-（1-甲基哌啶-4-基）-1H-吡唑-4-基）胺基）嘧啶-4-基）1H-吡唑-1-基）甲酮

向化合物569j (61.1 mg，0.71 mmol)的N,N-二甲基甲醯胺(5 mL)溶液中加入2-(7-氮雜苯並三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸鹽(270 mg，0.71 mmol)，N,N-二異丙基乙胺(92 mg，0.71 mmol)和化合物569i (152.5 mg，0.47 mmol)。反應液升溫至50℃攪拌2小時，檢測反應完全。後處理：將反應液倒入水中，加入乙酸乙酯 (3*100 mL)萃取三次，合併有機相，飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，濃縮，拉乾，得到的粗品過柱，[洗脫劑: (二氯甲烷:甲醇=10:1)/DCM=0-50%]，得到的粗品再通過甲醇重結晶，得到白色固體目標化合物 (化合物 569，11.7 mg，產率 9.2 %)，LCMS [M+H] ⁺=393.2。

¹H NMR (400 MHz, ) δ 9.56 (s, 1H), 9.34 (s, 1H), 9.12 (s, 1H), 8.54 (s, 1H), 8.46 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.28 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 4.48 (s, 1H), 3.57 (d, J = 12.1 Hz, 2H), 3.12 (ddd, J = 12.3, 7.8, 4.6 Hz, 3H), 2.85 (s, 3H), 2.21 (d, J = 31.1 Hz, 4H), 1.35-1.12 (m, 4H).

實施例12：合成化合物 570的一般方法 (TDM-181170)

步驟 1: 化合物 570c

1-（2,5-二氯嘧啶-4-基）-1H-吡咯-3-羧酸甲酯

向化合物570a (1.46 g，8 mmol)和化合物570b (1 g，8 mmol)的乙腈 (100 mL)溶液中加入碳酸鉀 (2.21 g，16 mmol)，反應液升溫至50℃攪拌過夜，檢測反應完全。後處理：將反應液倒入水(150 mL)中，加入乙酸乙酯 (2*200 mL)萃取兩次，合併有機相，並用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，濃縮，拉乾，得到的粗品過柱，[洗脫劑: TLC：PE/EA =3:1，過柱時，PE:EA= 100:0-85:15]，得到白色固體目標化合物 (化合物 570c，1.89 g，產率87.5 %)，LCMS [M+1] ⁺=272。

步驟 2: 化合物 570d

1-（2,5-二氯嘧啶-4-基）-1H-吡咯-3-羧酸

向化合物570c (1.89 g，6.95 mmol)的醋酸 (40 mL)溶液中加入濃鹽酸(20 mL)，反應液升溫至50℃攪拌15小時，檢測反應完全。後處理：將反應液倒入水中，加入乙酸乙酯 (2*100 mL)萃取兩次，合併有機相，並用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，濃縮，拉乾，得到的粗品過柱，[洗脫劑: (二氯甲烷:甲醇=10:1) /二氯甲烷=0~15%]，得到白色固體目標化合物 (化合物 570d，495 mg，產率 26.7 %)，LCMS [M+1] ⁺=258，260。

步驟 3: 化合物 570f

1-（2,5-二氯嘧啶-4-基）-N-甲基-1H-吡咯-3-甲醯胺

向化合物570d (158.6 mg，0.62 mmol)的N,N-二甲基甲醯胺(15 mL)溶液中加入 2-(7-氮雜苯並三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸鹽(353.6 mg，0.93 mmol)，N,N-二異丙基乙胺(200 mg，1.55 mmol) 和化合物 570e (41.8 mg，0.62 mmol)。反應液在室溫下攪拌10分鐘，檢測反應完全。後處理：將反應液倒入水中，加入乙酸乙酯 (3*100 mL)萃取三次，合併有機相，並用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，濃縮，拉乾，得到的粗品過柱，[洗脫劑: (二氯甲烷:甲醇=10:1)/二氯甲烷 =0~15%]，得到黃色固體目標化合物 (化合物 570f，129.8 mg，產率65 %)，LCMS [M+1] ⁺=271，273。

步驟 4: 化合物 570

1-（5-氯-2-（（4-（4-甲基哌嗪-1-基）苯基）胺基）嘧啶-4-基）-N-甲基-1H-吡咯-3-甲醯胺

向一個100 mL的三口燒瓶中加入化合物 570f (104.8 mg，0.39 mmol)，化合物570 g (88.7 mg，0.46 mmol)，醋酸鈀 (17.4 mg，0.08 mmol)，4,5-雙(二苯基膦)-9,9-二甲基氧雜蒽(89.6 mg，0.16 mmol)，碳酸銫 (252.2 mg，0.77 mmol)，1,4-二氧六環 (20 mL)。反應液用氬氣置換數次，升溫至100℃攪拌兩小時，檢測反應完全。後處理：將反應液濃縮拉乾，得到的粗品過柱，[洗脫劑: (二氯甲烷:甲醇=10:1)/二氯甲烷 =0~50%]，得到的粗品再通過製備純化，得到黃色固體目標化合物 (化合物 570，48.9 mg，產率24 %)，LCMS [M+1] ⁺=426.2。

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.79 (s, 1H), 8.59 (s, 1H), 8.16 (s, 1H), 8.09 (q, J = 2.4, 2.0 Hz, 2H), 7.56 (dd, J = 3.3, 2.3 Hz, 1H), 7.54-7.46 (m, 2H), 6.98-6.86 (m, 2H), 6.73 (dd, J = 3.3, 1.7 Hz, 1H), 3.08 (dd, J = 6.4, 3.6 Hz, 4H), 2.74 (d, J = 4.5 Hz, 3H), 2.46 (d, J = 4.9 Hz, 4H), 2.23 (s, 3H).

以實施例12類似方法合成1-（5-氯-2-（（4-（4-甲基哌嗪-1-基）苯基）胺基）嘧啶-4-基）-N-（環丙基甲基）-1H-吡咯-3-甲醯胺（TDM-181171），黃色固體 (65 mg，產率，26%)。

TDM No.	Structure	LCMS [M+1] +	1H-NMR
TDM-181171		466.2	1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.80 (s, 1H), 8.60 (s, 1H), 8.22 (t, J = 5.8 Hz, 1H), 8.15 (s, 1H), 8.13 (t, J = 2.0 Hz, 1H), 7.57 (dd, J = 3.3, 2.2 Hz, 1H), 7.54 – 7.47 (m, 2H), 6.96 – 6.87 (m, 2H), 6.77 (dd, J = 3.3, 1.7 Hz, 1H), 3.10 (q, J = 6.0, 5.1 Hz, 6H), 2.49 – 2.45 (m, 4H), 2.24 (s, 3H), 1.07 – 0.95 (m, 1H), 0.49 – 0.38 (m, 2H), 0.26 – 0.19 (m, 2H).

實施例13: 合成化合物577的一般方法 (TDM-181177)

步驟 1: 化合物 577c

2，5-二氯-4-（4-硝基吡唑-1-基）嘧啶

向化合物577a (1.02 g，0.006 mol)的乙腈(20 mL)溶液中加入化合物577b (0.6 g，0.0052 mol)，再加入N,N-二異丙基乙胺(0.78 g，0.006 mol)。反應液升溫至30℃攪拌3小時。LCMS [M+1] ⁺=260，檢測反應完全。後處理：反應液濃縮拉乾，粗品加乙酸乙酯(120 mL)和水 (60 mL)分層，分出的有機相用水洗，飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，得到的粗品過柱，[洗脫劑: EA/PE = 0~30 %]，得到白色固體目標化合物(化合物 577c，1.02 g，產率 65.4 %)，LCMS [M+1] ⁺=260。

步驟2: 化合物 577d

1-（2，5-二氯嘧啶-4-基）-1H-吡唑-4-胺

向化合物577c (917.80 mg，3.53 mmol)的四氫呋喃 (30 mL)溶液中加入氯化銨(944.10 mg，17.65 mmol) 和鐵粉(985.64 mg，17.65 mmol)，再加入水(30 mL)。反應液升溫至65℃攪拌3小時。LCMS [M+1] ⁺=230.1，檢測反應完全。後處理：抽濾，有機相加乙酸乙酯(100 mL)和水 (50 mL)分層，分出的有機相用水洗，飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，得到的粗品過柱，[洗脫劑: EA/PE = 0~50 %]得到黃色固體目標化合物(化合物 577d，741 mg，產率 82 %)，LCMS [M+1] ⁺=230.1。

步驟 3: 化合物 577f

N-（1-（2，5-二氯嘧啶-4-基）-1H-吡唑-4-基）丙烷-1-磺醯胺

在0℃向化合物 577d (400 mg，1.74 mmol) 的無水四氫呋喃 (20 mL)溶液中加入吡啶(275.07 mg，3.48 mmol) 和化合物 577e (488.80 mg，3.43 mmol)，反應液在室溫下攪拌一小時，用N ₂置換數次，然後反應液升溫至40℃攪拌一晚。LCMS [M+1] ⁺=336，檢測反應完全。後處理：反應液濃縮拉乾，粗品加乙酸乙酯(100 mL)和水 (50 mL)分層，分出的有機相用水洗，飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，得到的粗品過柱，[洗脫劑: EA/PE = 0~40 %]得到黃色液體目標化合物(化合物 577f，531 mg，產率 86 %)，LCMS [M+1] ⁺=336。

步驟 4: 化合物 577h

4-（（5-氯-4-（4-丙基磺醯胺基）-1H-吡唑-1-基）嘧啶-2-基胺基）-1H-吡唑-1-基）哌啶-1-羧酸叔丁酯

向化合物 577f(100 mg，0.297 mmol) 中加入化合物 577g (79.10 mg，0.297 mmol)，醋酸鈀(13.34 mg，0.059 mmol), 4,5-雙(二苯基膦)-9,9-二甲基氧雜蒽(68.74 mg，0.119 mmol) 和碳酸銫(193.53 mg，0.594 mmol), 反應液用氬氣置換數次，再加入無水1,4二氧六環 (10 mL)。反應液用氬氣置換三次。升溫至100℃攪拌二小時。LCMS [M-100] ⁺=466.2，檢測反應完全。後處理：反應液加水 (30 mL)和乙酸乙酯(60 mL)分層，分出的有機相用水洗，飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，得到的粗品過柱，[洗脫劑: EA/PE = 0~50 %]得到黃色液體目標化合物(化合物 577h，41 mg，產率 24.39 %)，LCMS [M-100] ⁺=466.2。

步驟 5: 化合物 577

N-（1-（5-氯-2-（1-（4-哌啶基）-1H-吡唑-4-胺基）嘧啶-4-基）-1H-吡唑-4-基）丙烷-1-磺醯胺

在0℃向化合物 577h (31.9 mg，0.06 mmol)的二氯甲烷 (3 mL)溶液中加入三氟乙酸(0.3 mL)。反應液升溫至室溫後攪拌一小時。LCMS [M+1] ⁺=466.1，檢測反應完全。後處理：反應液濃縮拉乾後得到粗品，粗品再通過製備純化得到黃色固體目標化合物(化合物 577，19.8 mg，收率 70.82 %)，LCMS [M+1] ⁺=466.1。

¹H NMR (400 MHz, DMSO) δ 9.99 (s, 1H), 8.59 (s, 1H), 8.29 (d, J = 50.1 Hz, 2H), 7.93 (s, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.58 (s, 1H), 4.39 (s, 1H), 3.29 (s, 2H), 3.13-3.07 (m, 2H), 2.93 (t, J = 11.1 Hz, 2H), 2.17-1.95 (m, 5H), 1.78-1.65 (m, 2H), 0.97 (t, J = 7.4 Hz, 3H).

實施例14: 合成化合物579的一般方法 (TDM-181179)

步驟 1: 化合物 579c

苄基4-（5-（（5-氯-4-（4-（丙基磺醯胺基）-1H-吡唑-1-基）嘧啶-2-基）胺基）噻唑-2-基）哌啶-1-甲酸酯

向化合物579a（39 mg，0.117 mmol）、化合物579b（37mg，0.115mmol）、醋酸鈀（5 mg，0.023 mmol）、xantphos（27 mg，0.047 mmol）和碳酸銫（76 mg，0.233 mmol）的混合物中加入二氧六環（5 mL）。將混合物在真空下脫氣，用氬氣置換數次，加熱至100℃並攪拌2小時。將混合物在減壓下濃縮，殘留物通過矽膠色譜法（10%甲醇的二氯甲烷/二氯甲烷＝0～25/75）純化，得到棕色固體產物（化合物579c，40 mg，55.4%產率）LCMS [M+1] ⁺=617。

步驟2: 化合物 579

N-（1-（5-氯-2-（（2-（哌啶-4-基）噻唑-5-基）胺基）嘧啶-4-基）-1H-吡唑-4-基）丙烷-1-磺醯胺

在0℃下把化合物579c（40 mg，0.065 mmol）溶於HBr-AcOH（2 mL）中，將混合物在0℃攪拌30分鐘。混合物在45℃減壓濃縮，殘餘物通過製備HPLC（甲酸）純化，得到黃色固體產物（化合物579，TDM-181179，7 mg，22.3%產率）。 LCMS [M+1] ⁺=483。

¹H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.68 (s, 1H), 8.48 (s, 1H), 8.37 (s, 1H), 7.79 (s, 1H), 7.41 (s, 1H), 3.20 (d, J = 12.2 Hz, 2H), 3.16 (s, 1H), 3.12-3.07 (m, 2H), 2.85 (t, J = 11.4 Hz, 2H), 2.52 (s, 1H), 2.09 (d, J = 12.2 Hz, 2H), 1.84 (s, 2H), 1.71 (dq, J = 14.9, 7.5 Hz, 2H), 0.96 (t, J = 7.4 Hz, 3H).

測試例 NUAK1/NUAK2激酶抑制劑的酶活性抑制檢測

本申請涉及的嘧啶胺類小分子對NUAK1和NUAK2激酶抑制活性的效應採用了基於P81濾紙結合熱點技術的激酶活性測試方法（Nat Biotechnol. 2011, 29:1039），簡述如下：

測試緩衝液體系含20 mM Hepes (pH 7.5)，10 mM MgCl ₂，1 mM EGTA，0.01% Brij35（L23聚氧乙烯月桂醚），0.02 mg/ml BSA（小牛血清白蛋白），0.1 mM Na ₃VO ₄， 2 mM DTT， 1% DMSO。

測試步驟:

1. 用新配製的測試緩衝液配製20 µM的底物溶液，底物為CHKtide多肽片段（Sanchez Y. Science. 1997, 277: 1497-1501）；

2. 加入激酶並輕輕混勻（NUAK1的終濃度為10 nM；NUAK2的終濃度為50 nM）；

3. 用聲波移液技術（Echo550；納升級）向上述激酶反應混合液加入溶於100% DMSO中的測試化合物，室溫孵育5分鐘；

4. 加入 ³³P標記的ATP（非標記ATP /標記ATP比例為25:1或2.5:1）；

5. 室溫孵育2小時；

6. 通過P81濾紙結合熱點技術檢測激酶活性。

根據上述檢測計算測試化合物對NUAK1/NUAK2的IC ₅₀，具體結果參見表1。

IC ₅₀計算採用S形劑量-反應曲線（可變斜率）得到的公式：

Y=Bottom + (Top-Bottom)/(1+10^((LogEC50-X)*斜率，其中X是化合物濃度的Log值，Y是反應（激酶活性的抑制率），Y隨著濃度的升高從bottom沿S形曲線升到top。

表1 本申請測試化合物對NUAK1/NUAK2的IC ₅₀（nM）

測試化合物	NUAK1	NUAK2
TDM-181134	122	622
TDM-181135	34	265
TDM-181139	474	991
TDM-181140	305	210
TDM-181146	260	602
TDM-181147	19	77
TDM-181152	977	未測試
TDM-181153	84	107
TDM-181154	58	239
TDM-181155	43	69
TDM-181156	607	未測試
TDM-181157	194	487
TDM-181158	394	未測試
TDM-181159	337	419
TDM-181169	209	495
TDM-181170	14	78
TDM-181171	9	50
TDM-181177	9	72
TDM-181179	6	42

從表1的結果可以看出，本申請的嘧啶胺類化合物對NUAK1/NUAK2均具有優異的抑制活性，是一種雙靶點小分子激酶抑制劑，所述化合物對NUAK1/NUAK2的IC ₅₀可達到幾nM/幾十nM。因此，通過以上實驗已經證明了本申請的嘧啶胺類化合物能夠作為NUAK1/NUAK2抑制劑使用。

以上詳細描述了本發明的優選實施方式，但是，本發明並不限於上述實施方式中的具體細節，在本發明的技術構思範圍內，可以對本發明的技術方案進行多種簡單變型，這些簡單變型均屬於本發明的保護範圍。

另外需要說明的是，在上述具體實施方式中所描述的各個具體技術特徵，在不矛盾的情況下，可以通過任何合適的方式進行組合，為了避免不必要的重複，本發明對各種可能的組合方式不再另行說明。

此外，本發明的各種不同的實施方式之間也可以進行任意組合，只要其不違背本發明的思想，其同樣應當視為本發明所公開的內容。

Claims (20)

1. 一種嘧啶胺類化合物，所述嘧啶胺類化合物為由如下所示的式I表示的化合物，或其立體異構體、互變異構體、同位素衍生物、水合物以及藥學上可接受的鹽；；其中，A為苯基或被1個C1-8烷基氧基取代的苯基，或可被p個R₄取代的5元雜芳基；B為任選取代的5-6元環烷基或任選取代的5-6元雜環烷基；B上的取代基選自鹵素、胺基、羥基、硝基、氰基、巰基、任選取代的C1-8烷基、任選取代的C1-8烷基氧基、任選取代的C1-8烷基硫基、任選取代的C1-8烷基胺基的一個或多個；D為或，X為N或CH，X為CH時，H可被R₅或R₆取代；E為-C(O)-NHR₈、-C(O)-R₈、-NR₇-C(O)R₈、-NR₇-S(O)₂-R₈、-任選取代的C3-8雜環烷基-S(O)₂-R₈、-任選取代的C3-8環烷基-S(O)₂-R₈，R₈為任選取代的C1-8烷基、任選取代的C3-8環烷基、任選取代的C3-8環烷基C1-8烷基；環烷基或雜環烷基上的取代基選自鹵素、胺基、羥基、硝基、氰基、巰基、任選取代的C1-8烷基、任選取代的C1-8烷基氧基、任選取代的C1-8烷基硫基、任選取代的C1-8烷基胺基的一個或多個；R₁、R₇各自獨立地為H、任選取代的C1-8烷基；R₂、R₄、R₅、R₆各自獨立地為鹵素、胺基、羥基、硝基、氰基、巰基、任選取代的C1-8烷基、任選取代的C1-8烷基氧基、任選取代的C1-8烷基硫基、任選取代的C1-8烷基胺基；C1-8烷基上的取代基選自鹵素、胺基、羥基、硝基、氰基、巰基中的一個或多個；n為0、1或2，p、q、r分別為0、1、2或3。
2. 如請求項1所述的嘧啶胺類化合物，其中，E為下式之一：、、、、、或。
3. 如請求項1所述的嘧啶胺類化合物，其中，B為任選取代的哌啶基、任選取代的哌嗪基、任選取代的吡咯烷基。
4. 如請求項3所述的嘧啶胺類化合物，其中，B為下式之一：、或；R₉為鹵素、胺基、羥基、硝基、氰基、巰基、任選取代的C1-8烷基、任選取代的C1-8烷基氧基、任選取代的C1-8烷基硫基、任選取代的C1-8烷基胺基；R₁₀為H或任選取代的C1-8烷基；C1-8烷基上的取代基選自鹵素、胺基、羥基、硝基、氰基、巰基中的一個或多個；s、t分別為0、1、2、3或4，u為0、1、2或3。
5. 如請求項4所述的嘧啶胺類化合物，其中，B為下式之一：、、、、或。
6. 如請求項1所述的嘧啶胺類化合物，其中，A為苯基或被1個C1-8烷基硫基取代的苯基；或A為任選取代的以下基團之一， 。
7. 如請求項6所述的嘧啶胺類化合物，其中，A為甲氧基取代的苯基，甲氧基取代在胺基的鄰位。
8. 如請求項1所述的嘧啶胺類化合物，其中，R₂為氯。
9. 如請求項8所述的嘧啶胺類化合物，其中，R₂取代在胺基的對位。
10. 如請求項1所述的嘧啶胺類化合物，其中，所述式I表示的化合物為以下化合物之一： 。
11. 如請求項1所述的嘧啶胺類化合物，其中，所述藥學上可接受的鹽為甲酸鹽。
12. 如請求項1所述的嘧啶胺類化合物，其中，所述同位素衍生物為氘代物。
13. 一種請求項1-12中任一項所述的嘧啶胺類化合物的製備方法，其包含以下步驟：由式II化合物和式III化合物製備式I化合物；或當D為時，也可以由式IV與式II化合物製備式V化合物，再由式V化合物製備式I化合物；任選地，製備過程中包含必要的保護和脫保護步驟； ；其中，Y為離去基團，其他各基團的定義同請求項1-14中所定義。
14. 如請求項13所述的製備方法，其中，Y為鹵素。
15. 如請求項14所述的製備方法，其中，Y為Cl。
16. 一種藥物組合物，以請求項1-12任一所述的嘧啶胺類化合物作為有效成分。
17. 如請求項16所述的藥物組合物，其包含藥學上可接受的載體或賦形劑。
18. 一種請求項1-12中任一項所述的嘧啶胺類化合物用於製備NUAK1或NUAK2抑制劑的用途。
19. 一種請求項1-12中任一項所述的嘧啶胺類化合物用於製備藥物的用途，其中所述化合物通過抑制NUAK1或NUAK2用於預防或治療以下疾病：神經精神類疾病、代謝性疾病、腫瘤、內臟纖維化疾病、皮膚纖維化疾病。
20. 如請求項19所述嘧啶胺類化合物用於製備藥物的用途，其中，所述疾病為帕金森氏病、阿爾茨海默病、糖尿病、高脂血症、肥胖、肝癌、白血病、淋巴瘤、腫瘤轉移、肝硬化、腎纖維化、肺纖維化、心肌炎後遺症、硬皮病、瘢痕疙瘩、肥厚性瘢痕、或單獨用於減輕外傷和手術後疤痕。