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TWI892069B - 用於偵測Tau蛋白或其片段的方法與套組 - Google Patents

用於偵測Tau蛋白或其片段的方法與套組

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TWI892069B
TWI892069B TW112101274A TW112101274A TWI892069B TW I892069 B TWI892069 B TW I892069B TW 112101274 A TW112101274 A TW 112101274A TW 112101274 A TW112101274 A TW 112101274A TW I892069 B TWI892069 B TW I892069B
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索曼 蘇米亞 帕里伊
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克勞德 米謝 威斯奇克
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英商Ｇｔ創新公司
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Abstract

本發明係關於一種使用針對tau之關鍵抗原決定基的諸如抗體之類特異性結合分子偵測唾液樣本中之tau蛋白或其片段的試管內方法。本發明可用於診斷tau蛋白病。

Description

用於偵測Tau蛋白或其片段的方法與套組
本發明係關於一種使用針對tau之關鍵抗原決定基的諸如抗體之類特異性結合分子偵測唾液樣本中之tau蛋白或其片段的試管內方法。本發明可用於診斷tau蛋白病(tauopathy)。
與tau相關之病症統稱為神經退化性tau蛋白病。阿茲海默氏病(Alzheimer's disease，AD)係此類神經退化性疾病之一部分。失智如阿茲海默氏病(AD)之病況通常以患病患者之腦中由tau構成的諸如β-澱粉樣斑塊及神經纖維纏結(NFT)之類具有蛋白質結構之細胞內及/或細胞外沈積物的逐漸積累為特徵。tau聚集病變之出現在很大程度上與病理性神經纖維退化及腦萎縮以及認知障礙相關。在AD中，tau蛋白自組裝形成配對螺旋絲(paired helical filament，PHF)及直絲，該等絲構成腦中神經元及營養不良性神經突內的神經纖維纏結。蛋白質錯誤摺疊形成澱粉樣原纖維係統稱為類澱粉樣變性症之許多不同疾病的標誌，該等疾病各自以特定前驅蛋白為特徵。
關於AD及其他蛋白質構象病症之成因的長期研究並未在診斷或治療方法方面引起所希望的重大進展。普遍認為，進展有限的一個原因係缺乏靶向tau之關鍵抗原決定基的高親和力特異性結合分子。此缺點係如以WisTa Laboratories有限公司之名義申請的PCT申請案第PCT/EP2021/069160號(以全文 引用的方式併入本文中)中所描述，藉由產生其中所揭示之特異性結合分子來解決。所揭示之特異性結合分子係來源於自利用全長tau蛋白及來自PHF核心之截短之tau片段免疫的綿羊分離之抗體。使用綿羊作為特異性結合分子之來源被認為可促成本發明之特異性結合分子的高親和力。PCT申請案第PCT/EP2021/069160號描述在樣本中使用特異性結合分子，該樣本可為血漿樣本、全血樣本、腦溶胞產物或腦脊髓液(CSF)樣本。
H.Pekeles等人，Alzheimer's & Dementia：Diagnosis,Assessment & Disease Monitoring 11(2019)53-6054描述阿茲海默氏病中唾液tau生物標誌物的研究及驗證。作者報導S396磷酸化位點處磷酸化tau與總tau(p-tau/t-tau)的比率明顯升高。然而，作者認為AD唾液tau水平之大幅變化將限制此測試作為臨床生物標誌物的效用。
本發明人已開發出用於偵測唾液樣本中之tau蛋白或其片段的檢定，其包含使該樣本與第一特異性結合分子接觸，其中該第一特異性結合分子結合至自配對螺旋絲(PHF)之蛋白水解穩定性核心(SEQ ID NO：1之殘基297至391)分離之主要片段。該等檢定可使用一或多個PCT申請案第PCT/EP2021/069160號中所描述之特異性結合分子，由此可提供包括高親和力引起敏感性增加在內的優勢。本發明人已意外地鑑別出，使用結合至SEQ ID NO：1之殘基297至391的第一特異性結合分子能夠藉由第二特異性結合分子穩健地偵測唾液tau，但相反的使用(結合在SEQ ID NO：1之殘基297至391外的第一特異性結合分子及結合SEQ ID NO：1之殘基297至391內的第二特異性結合分子)可能無法偵測唾液tau，即使是在使用結合至SEQ ID NO：1之殘基297至391的高親和力特異性結合分子時亦如此。
根據第一態樣，本發明提供一種用於偵測唾液樣本中之tau蛋白或其片段的試管內方法，其包含使該樣本與第一特異性結合分子接觸，其中該第一特異性結合分子結合至SEQ ID NO：1之殘基297至391內的抗原決定基。
根據第二態樣，本發明提供一種用於根據第一態樣之方法中的裝置。
根據第三態樣，本發明提供一種套組，其包含適用於根據第一態樣之方法中的特異性結合分子及用於偵測唾液樣本中之tau蛋白或其片段的試劑，其中該第一特異性結合分子結合至SEQ ID NO：1之殘基297至391內的抗原決定基。
參考以下多個圖式：[圖1.]根據Kabat、Chothia及Martin的關於S1D12之替代性CDR定義。
[圖2.]自配對螺旋絲(PHF)之蛋白水解穩定性核心分離的主要片段之序列(Wischik等人，1988)。此片段(稱為『dGAE』)包含全長tau之殘基296-391且涵蓋藉由低溫電子顯微鏡檢查鑑別為構成PHF核心之片段(殘基308-378)(Fitzpatrick等人，2017)且示於圖3中。亦顯示所選抗體/scAb之抗原決定基的位置。
[圖3.]在PHF之環境中顯示的PHF核心。
[圖4.]與核心之基本C形次單元結構有關的具有相應抗原決定基之相同核心序列及位置。1D12抗原決定基形成C形次單元之關鍵摺疊或「髮夾」。
[圖5.]顯示新穎dGAE單元如何逐漸地展開且變得與現有寡聚物之結構對準的分子模型化。
[圖6.]以3個階段顯示的對應於dGAE之關鍵區段及其抗原決定基逐漸結合成寡聚物的連接序列。可以看出，1D12識別之鉸鏈區係連接之主要部位，隨後為其他域之逐漸對稱結合。
[圖7.](A)在多輪免疫之後綿羊多株血清之dGAE抗原特異性免疫反應。(B)在多輪免疫之後綿羊多株血清之hT40抗原特異性免疫反應。包括塗佈MPBS之孔作為陰性對照。
[圖8.]使用hT40、dGA及dGAE抗原進行的『E』組scAb之交叉反應性的基於ELISA之特徵界定：(A)E1E8 scAb、(B)E2B7 scAb、(C)E2C5 scAb、(D)E2E8 scAb、(E)E1B8 scAb。除E1B8外的所有此等scAb皆顯示特異性dGAE結合且因此需要C末端可接近之『391E』抗原決定基實現免疫反應性。E1B8與dGA交叉反應且其結合區之具體定位示於圖9中。
[圖9.]顯示與tau肽之特異性結合之E1B8 scAb的詳細定位，該tau肽表示hT40蛋白質上自313-336之胺基酸。
[圖10.]使用具有對應於hT40胺基酸殘基之編號的各種短tau片段進行的『NS』組scAb之交叉反應性的基於ELISA之特徵界定。(A)337-368、(B)275-305、(C)266-359(R1-3)、(D)360-378、(E)369-391、(F)369-390。結合至此等較短抗原之特定NS scAb的彙總示於表16中。
[圖11.]使用根據hT40分子上之相應胺基酸殘基編號之各種短tau片段進行的『S』組scAb之交叉反應性的基於ELISA之特徵界定。(A)186-350、(B)275-305、(C-D)266-359(R1-3)、(E-I)297-391、(J)360-378、(K-N)369-391、(O-R)369-390。結合至此等較短抗原之特定『S』scAb的彙總示於表16中。
[圖12.]使用根據hT40分子上之相應胺基酸殘基編號之各種短tau片段進行的『C』組scAb之交叉反應性的基於ELISA之特徵界定。(A)1-49、(B)1-155、(C-D)1-319、(E)113-251、(F)113-319、(G)186-350、(H)239-441、(I)266-359(R1- 3)、(J)297-441、(K)348-441、(L)391-441。結合至此等較短抗原之特定『C』scAb的彙總示於表17中。
[圖13.]『412』組scAb與hT40之交叉反應性。(A)顯示scAb與生物素化412-441肽之結合，該肽被用作選擇C末端結合物之抗原。(B)在hT40結合ELISA中顯示出交叉反應性之四個scAb的結合輪廓。
[圖14.]使用根據hT40分子上之相應胺基酸殘基編號之各種短tau片段進行的『3a』組及『3b』組scAb之交叉反應性的基於ELISA之特徵界定。(A)1-49、(B)1-111、(C)1-155、(D)113-251。結合至此等較短抗原之特定『3a』組及『3b』組scAb之彙總示於表18中。
[圖15.](A)CE2 scAb與親本肽及在表19中指示之位置處之一系列丙胺酸取代之殘基的免疫反應性。(B)500nM scAb與此等ASM肽中之各者之結合相對於與親本肽之結合的百分比。
[圖16.](A-B)S1D12 scAb與親本肽及在表20中指示之位置處之一系列丙胺酸取代之殘基的免疫反應性。(C)500nM scAb與此等ASM肽中之各者之結合相對於與親本肽之結合的百分比。
[圖17.](A-B)ME12 scAb與親本肽及在表20中指示之位置處之一系列丙胺酸取代之殘基的免疫反應性。(C)100nM scAb與此等ASM肽中之各者之結合相對於與親本肽之結合的百分比。
[圖18.](A)CA4 scAb與親本肽及在表21中指示之位置處之一系列丙胺酸取代之殘基的免疫反應性。(B)500nM scAb與此等ASM肽中之各者之結合相對於與親本肽之結合的百分比。
[圖19.](A-B)S1G2 scAb與親本肽及在表22中指示之位置處之一系列丙胺酸取代之殘基的免疫反應性。(C)500nM scAb與此等ASM肽中之各者之結合相對於與親本肽之結合的百分比。
[圖20.]各種367-379區域scAb與ASM肽之結合相對於與親本肽之結合的百分比。測試之scAb包括(A)S1B1、(B)CA12、(C)CB2、(D)CB8、(E)S1D9、(F)S1G10、(G)S2C6、(H)S1F4、(I)MC5、(J)MD12。此等scAb之關鍵結合殘基與代表性殖株(clone)S1G2類似，其中在位置370、373、374、377或378中之丙胺酸取代引起抗體結合減少。
[圖21.]使用hT40進行的抗tau scAb之結合親和力的排序。使用kD值已知之scAb，諸如NS2A1及S1D12來對測試scAb之相對結合親和力排序，且具有類似結合輪廓之scAb進入候選名單且被選擇用於Biacore分析(A)『S』組殖株、(B-C)『C』殖株、(D)『412』殖株、(E)『3a』殖株。
[圖22.]用於計算各種抗體對之LoD的夾心ELISA形式之示意性表示。
[圖23.]使用S1G2 mAb作為捕捉抗體且使用HRP結合之S1D12 mAb偵測來計算LoD的夾心ELISA形式之示意性表示。
[圖24.]顯示使用S1G2 mAb作為捕捉抗體且使用HRP標記之S1D12 mAb偵測實現之LoD的夾心ELISA圖。使用化學發光量測抗體結合且在此檢定設置中hT40之LOD係約1ng/ml。
[圖25.]使用S1D12 mAb捕捉及CB7 scAb偵測生成之ELISA#1 hT40標準曲線。四份加料樣本，即樣本A、樣本B、樣本C及樣本D之濃度係藉由在此標準曲線上標繪其各別吸光度值來測定。樣本C並不產生結合信號且因此證實在此混合物中不存在具有N末端區域之任何tau物種。由此檢定推斷之tau物種之濃度及類型在表29中給出。
[圖26.]使用S1D12 mAb捕捉及E2E8 scAb偵測生成之ELISA#2 dGAE標準曲線。四份加料樣本，即樣本A、樣本B、樣本C及樣本D之濃度係藉由在此標準曲線上標繪各別吸光度值來測定。樣本A、樣本C及樣本D並不產生任何結合信號且因此證實在此等混合物內不存在dGAE物種。由此檢定推斷之tau物種之濃度 及類型在表29中給出。
[圖27.]使用S1D12 mAb捕捉及S1G2 scAb偵測生成之ELISA#3平均標準曲線。四份加料樣本，即樣本A、樣本B、樣本C及樣本D之濃度係藉由在此標準曲線上標繪各別吸光度值來測定。由此檢定推斷之tau物種之濃度及類型在表29中給出。
[圖28.]在夾心ELISA系統中經各種SDS(+/- Triton X-100)處理之dGAE單體或聚集物之結合輪廓的比較。使用S1D12 mAb作為捕捉抗體且S1G2作為偵測scAb。此處，觀察到SDS+Triton X-100在恢復免疫反應性方面之作用。此mAb-scAb配對可在簡單夾心ELISA中偵測到約2ng/ml dGAE聚集物。
[圖29.]A)含有人類tau(hT40)以及點突變P301S及G335D(2N4R Tau，441個胺基酸)之L66 cDNA；B)L1 cDNA編碼人類tau胺基酸殘基296-390且具有信號序列及鼠類Thy1表現序列，如Melis等人，2015中所描述。
[圖30.](A)使用S1D12 mAb捕捉及S-1G2 scAb偵測進行的自WT、L1、L66+/-及L66+/+小鼠分離之50μg腦勻漿中tau蛋白之偵測。當使用核心區特異性抗體配對偵測時，全部四份樣本具有類似的tau水平。(B)使用S1D12mAb捕捉及CB7 scAb偵測進行的自WT、L1、L66+/-及L66+/+小鼠分離之50μg腦勻漿中tau蛋白之偵測。N'末端定向之CB7 scAb可特異性偵測品系66同型接合及異型接合樣本中之人類tau且能夠區分該兩個組之間之表現水平。
[圖31.]WT(5個月：1.947ng/ml)、(9個月：2.177ng/ml)；L66(5個月)(+/-：0.567ng/ml)、(+/+：1.937ng/ml)；及L1(5個月：12.355ng/ml)(9個月，13.661ng/ml)中的血漿tau水平。使用S1D12 mAb捕捉及S1G2 scAb偵測收集資料。使用針對WT及L66之hT40以及針對L1之dGA(296-390)的標準曲線測定Tau物種之濃度。
[圖32.]在1.5個月時第23號品系66+/+小鼠樣本中血漿tau水平之偵測以及使 用兩種不同的夾心ELISA配對與年齡相配之野生型小鼠血漿相比較。(A)顯示使用S1D12 mAb捕捉及CB7 scAb偵測得到的品系66+/+及野生型小鼠之化學發光信號讀數。(B)使用S1D12 mAb捕捉及S1G2 scAb偵測得到的相同樣本之信號讀數。當使用S1D12 mAb-CB7 scAb對特異性偵測此樣本中之N末端hT40時，品系66+/+小鼠顯示信號強度相較於野生型有至少1000倍增加。
[圖33.]使用S1D12-S1G12(核心區域)及S1D12-CB7(N末端)偵測對測定的AD樣本與年齡相配之對照中血漿tau水平的比較。
[圖34.]顯示核心區域scAb與在LMTM存在下製備的dGAE『總』、『上清液』及『沈澱物』聚集抑制樣本之免疫反應性增加的夾心ELISA圖。包括dGAE單體作為檢定對照以指示各測試scAb與非聚集樣本中其各別抗原決定基之結合輪廓。(A-C)CA4 scAb、(D-F)CA9、(G-I)CB3 scAb、(J-L)CE2 scAb、(M-O)CE3、(P-R)S1D12 scAb。利用SDS凝膠證實，在一些dGAE+LMTM沈澱物樣本中抗體結合之缺乏對應於此組中存在之不存在蛋白質(資料未包括在內)。
[圖35.]dGAE聚集物之mAb捕捉。將所指示之各種抗體塗佈於固相ELISA上並使用該等抗體捕捉dGAE之聚集物。對於除S1G2 mAb外的所有捕捉抗體，使用S1G2 scAb偵測經捕捉之dGAE。對於S1G2 mAb捕捉，使用S1D12 scAb作為偵測劑抗體。
[圖36.]顯示經結合小鼠tau中不存在之N末端抗原決定基(殘基13-25)的人類特異性CB7抗體標記之腦源性tau的西方墨點。譜帶存在於含有來自5個月大的L66+/+小鼠腦之20μg蛋白質勻漿的泳道中，但不存在於含有來自WT或L1+/腦之樣本的泳道中。疊加於墨點左側上之蛋白質梯提供凝膠上蛋白質之相對大小的近似值，但已知，tau之表觀大小明顯大於實際分子質量。
[圖37.]顯示經識別殘基145-157內之抗原決定基的人類特異性CC7抗體標記之tau的西方墨點。人類特異性tau僅在L66+/+小鼠腦中偵測到且在來自WT或 L1+/+之樣本中未偵測到。蛋白質梯如圖36中所描述。
[圖38.]經S1D12 tau核心抗體標記之西方墨點。譜帶存在於含有來自5個月大之L66+/+、L1及WT小鼠腦之20μg蛋白質勻漿的泳道中。小鼠tau(以下部箭頭指示)看來為各樣本中的約55kDa之譜帶。人類tau(以上部箭頭指示)看來為在68kDa處之蛋白質，該蛋白質僅存在於L66+/+樣本中。蛋白質梯如圖36所示。
[圖39.]經S1G2核心抗體標記之西方墨點。譜帶存在於含有來自5個月大之L66+/+、L1+/+及WT小鼠腦之20μg蛋白質勻漿的泳道中。小鼠tau(以下部箭頭指示)看來為各樣本中在約55kDa處之譜帶。人類tau(以上部箭頭指示)看來在約68kDa處，但僅在L66+/+樣本中。使用此抗體，在L1+/+樣本中可見在約10kDa處之譜帶。蛋白質梯如圖36中所示。
[圖40.]人類tau與小鼠tau之序列比較。所顯示的人類tau之序列由SEQ ID No.1組成(引入兩個空位以允許序列比對)且小鼠tau之序列由SEQ ID NO：589組成。將含有候選抗體之抗原決定基的蛋白質區域疊加。人類tau中之CB7及CC7結合區不存在於小鼠tau中。相比之下，含有抗體S1D12及S1G2之抗原決定基的蛋白質區域在該2個物種之間顯示100%同源性。
[圖41.]A)利用S1D12捕捉及CB7偵測進行之配對抗體ELISA顯示在來自L66+/+小鼠之腦勻漿樣本中信號隨著年齡增長逐漸減弱。B)當逆轉該檢定之取向且在腦勻漿樣本中使用CB7作為捕捉抗體且S1G2作為偵測劑時，觀察到類似的信號隨年齡增長而減弱之模式。
[圖42.]對於L66+/+小鼠，利用CB7捕捉及HT7偵測進行之配對抗體ELISA顯示信號隨年齡增長逐漸增加。此表明藉由tau蛋白或蛋白質片段之核心區域與N末端區域之間之截短所產生的小N末端完整片段之積累。
[圖43.](A)健康對照(HC)及確診患有阿茲海默氏病或輕度認知障礙之患者(AD/MCI)體內的血漿tau水平。在健康對照中使用S1D12捕捉珠粒與作為偵測 劑之BT2之配對量測的核心-脯胺酸區域之濃度明顯高於AD/MCI樣本中之濃度。使用Simoa®檢定分析總計12份健康對照血漿樣本及42份AD/MCI樣本。****p<0.0001。(B)NT1檢定資料(Chen等人，2019)報導與NC(正常對照)相比較，使用Tau12-BT2抗體偵測到AD-MCI(AD生物標誌物陽性-輕度認知障礙)及AD(AD生物標誌物陽性-臨床AD)患者中NT-1血漿tau水平的略微增加。
[圖44.]健康對照(HC)及確診患有阿茲海默氏病或輕度認知障礙之患者(AD/MCI)體內的血漿tau水平。在健康對照中使用S1D12捕捉珠粒與HT7偵測劑之配對量測的核心-脯胺酸區域之濃度明顯高於AD/MCI樣本中之濃度。使用Simoa®檢定分析總計4份健康對照血漿樣本及34份AD/MCI樣本。****p<0.0001
[圖45.]藉由化學發光ELISA量測的來自患有臨床上確診之AD之個體的AD樣本；來自年齡相配之無認知障礙之個體的CU樣本之S1D12(捕捉)/BT2(偵測劑)血漿tau。
[圖46.]在人類血漿實驗中使用各種抗體組合檢定生成的Simoa®校準器曲線。
[圖47.]免疫沈澱及胰蛋白酶消化LC-MS揭露人類血漿中含有tau片段之核心區域。在免疫沈澱(IP)及LC-MS分析之後藉由豐度偵測的人類血漿樣本中之Tau片段。亦給出在不進行免疫沈澱情況下自摻加htau40之樣本偵測的片段進行比較。
[圖48.]S1D12 mAb治療使小鼠血漿中之核心tau水平增加。使用CA4(355-367)及S1G2(367-379)抗體，觀察到與L1中之媒劑組相比較，在用S1D12治療之L66小鼠中核心區域tau水平明顯升高(超過100倍增加)。一式兩份，分析個別小鼠樣本，且值表示藉由CA4-S1G2抗體配對偵測到的tau片段之平均濃度。在L66中，在治療組中實現超過三倍增加，而在野生型小鼠中，觀察到不到兩倍增加。n=5或6，誤差條表示SEM，在媒劑組與治療組之間執行不成對t檢驗，****P< 0.0001；**P<0.01。
根據第一態樣，本發明提供一種用於偵測唾液樣本中之tau蛋白或其片段的試管內方法，其包含使該樣本與第一特異性結合分子接觸，其中該第一特異性結合分子結合至SEQ ID NO：1之殘基297至391內的抗原決定基。
本揭示案中Tau蛋白序列及結構之所有殘基編號皆係指SEQ ID NO：1之殘基，該序列係人類Tau蛋白(Uniprot ID P10636-8)之四種重複同功異構物2N4R的序列，或其他物種中之同源位置或其變異體。人類Tau同功異構物2N4R(Uniprot ID P10636-8)對應於全長Tau(Uniprot ID P10636或P10636-1)之胺基酸1-124、376-394及461-758，以SEQ ID NO：2提供。SEQ ID NO：2與在周邊神經系統(PNS)中發現但在中樞神經系統(CNS)中未發現的Tau之較長形式相關。如本文所使用，提及「全長」tau係指SEQ ID NO：1(CNS之相關序列)且不指SEQ ID NO：2(其在CNS中不相關)。
SEQ ID NO：1(同功異構物Tau-F，又稱為Tau-4、2N4R，441個胺基酸)：
>微管相關蛋白質tau之sp|P10636-8|TAU_HUMAN同功異構物Tau-F，OS=智人(Homo sapiens)OX=9606GN=MAPT
SEQ ID NO：2(全長人類Tau，同功異構物PNS-Tau，758個胺基酸)；
>sp|P10636-1|TAU_HUMAN微管相關蛋白質tau OS=智人OX=9606 GN=MAPT PE=1 SV=5
如本文所使用，「小鼠tau」係指同功異構物Tau-A，其具有Uniprot ID P10637-2之序列，以SEQ ID NO：589提供：
dGAE97係指如SEQ ID NO：3中所描述N末端在殘基Asp-295處且C末端在殘基Glu-391處，或在其他物種中之同源位置處的Tau(2N4R)之97個殘基之片段(提及之殘基參照人類或小鼠Tau序列，該等殘基在此區域中一致)。熟練技術人員將顯而易見的是，dGAE97亦對應於N末端在Asp-612處且C末端在Glu-708處的同功異構物PNS-Tau(P10636-1)之片段。
SEQ ID NO：3(dGAE97，人類/小鼠，97個胺基酸)：
dGAE95係指如SEQ ID NO：4中所描述N末端在殘基Ile-297處且C末端在殘基Glu-391處，或在其他物種中之同源位置處(提及之殘基參照人類或小鼠Tau序列，該等殘基在此區域中一致)的Tau(2N4R)之95個殘基之片段。熟練 技術人員將顯而易見的是，dGAE95亦對應於N末端在Ile-614處且C末端在Glu-708處的同功異構物PNS-Tau(P10636-1)之片段。此序列有時可簡稱為「dGAE」。Tau(2N4R)之殘基297至391又稱為自配對螺旋絲(PHF)之蛋白水解穩定性核心分離的主要片段。因此，本文中提及「SEQ ID NO：1之殘基297至391」可藉由提及SEQ ID NO：4取代。
SEQ ID NO：4(dGAE95或「dGAE」，人類/小鼠，95個胺基酸)：
「dGA」係指如SEQ ID NO：5中所描述N末端在殘基Ile-297處且C末端在殘基Ala-390處或在其他物種中之同源位置處(提及之殘基參照人類或小鼠Tau序列，該等殘基在此區域中一致)的Tau(2N4R)之94個殘基之片段。
SEQ ID NO：5(dGA，人類/小鼠，94個胺基酸)：
dGAE73係指如SEQ ID NO：6中所描述N末端在殘基Val-306處且C末端在殘基Phe-378處，或在其他物種中之同源位置處(提及之殘基參照人類或小鼠Tau序列，該等殘基在此區域中一致)的Tau(2N4R)之片段。此片段對應於藉由cryo-EM鑑別為自AD腦組織分離之PHF之核心的序列之殘基306-378(Fitzpatrick等人，2017；Nature)。該核心可延伸超過此等殘基，但受到cryo-EM解析度之限制。熟練技術人員將顯而易見的是，dGAE73亦對應於N末端在Val-623處且C末端在Phe-695處的同功異構物PNS-Tau(P10636-1)之片段。
SEQ ID NO：6(dGAE73，人類/小鼠，73個胺基酸)：
PHF核心係指如SEQ ID NO：3中所描述的Tau(2N4R)之殘基296至391，或在其他物種中之同源位置(提及之殘基參照人類或小鼠Tau序列，該等殘基在此區域中一致)。
PHF核心之另一片段係如SEQ ID NO：7中所描述N末端在殘基Ile-308處且C末端在殘基Phe-378處的Tau(2N4R)之殘基308至378，或在其他物種中之同源位置(提及之殘基參照人類或小鼠Tau序列，該等殘基在此區域中相同)。
SEQ ID NO：7(dGAE71，2N4R之殘基308至378，人類/小鼠，71個胺基酸)：
第一特異性結合分子
該方法包含使樣本與第一特異性結合分子接觸，其中該第一特異性結合分子結合至SEQ ID NO：1之殘基297至391內的抗原決定基。該第一特異性結合分子可為結合至SEQ ID NO：1之殘基297至391內、較佳地SEQ ID NO：1之殘基307至391內、更佳地SEQ ID NO：1之殘基337至379內之抗原決定基的本文所揭示之任何特異性結合分子。以下描述該第一特異性結合分子。在此子標題下關於一特異性結合分子或該特異性結合分子之任何參考均指第一特異性結合分子。
該第一特異性結合分子之抗原決定基可在SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6或SEQ ID NO：7內。
該特異性結合分子之抗原決定基可在SEQ ID NO：1之殘基297至391內。全長Tau之殘基297至391亦已知為自配對螺旋絲(PHF)之蛋白水解穩定性核心分離之主要片段，或PHF核心片段。因此，該特異性結合分子之抗原決定基可在PHF核心內或在dGAE片段內。因此，該特異性結合分子之抗原決定基可在SEQ ID NO4內。
該特異性結合分子之抗原決定基可在SEQ ID NO：1之殘基297至 390內。全長Tau之殘基297至390又稱為dGA片段。因此，該特異性結合分子之抗原決定基可在dGA片段內。因此，該特異性結合分子之抗原決定基可在SEQ ID NO：5內。該特異性結合分子之抗原決定基可在dGAE73及/或dGAE71內。因此，該特異性結合分子之抗原決定基可在SEQ ID NO：6及/或SEQ ID NO：7內。
該特異性結合分子之抗原決定基可在SEQ ID NO：1之殘基308至378內。全長Tau之殘基308至378又稱為PHF核心。因此，該特異性結合分子之抗原決定基可在PHE核心內。因此，該特異性結合分子之抗原決定基可在SEQ ID NO：7內。
典型地，特異性結合分子結合至包含其抗原決定基之多肽或蛋白質分子。因此，該特異性結合分子可結合至SEQ ID NO：1或其包含SEQ ID NO：1之殘基297至391之片段。該特異性分子可結合至SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6及/或SEQ ID NO：7。該特異性分子可結合至PHF或dGAE片段。該特異性結合分子可結合至dGA片段。該特異性結合分子可結合至PHF核心。該特異性結合分子可結合至包含選自由以下者組成之群之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子；SEQ ID NO：1之殘基337至355、SEQ ID NO：1之殘基367至379、SEQ ID NO：1之殘基331至360、SEQ ID NO：1之殘基355至367、SEQ ID NO：1之殘基379至391、SEQ ID NO：1之殘基297至390、SEQ ID NO：1之殘基369至390、SEQ ID NO：1之殘基337至368、SEQ ID NO：1之殘基1至319、SEQ ID NO：1之殘基186至350、SEQ ID NO：1之殘基239至348、SEQ ID NO：1之殘基266至359、SEQ ID NO：1之殘基277至319、SEQ ID NO：1之殘基319至331、SEQ ID NO：1之殘基348至390、SEQ ID NO：1之殘基348至441、SEQ ID NO：1之殘基359至391及SEQ ID NO：1之殘基360至390。
該第一特異性結合分子可結合至SEQ ID NO：1之殘基307至391內的抗原決定基。該第一特異性結合分子可結合至SEQ ID NO：1之殘基337至379 內的抗原決定基。該第一特異性結合分子可結合至由SEQ ID NO：1之殘基337至349組成的抗原決定基。該第一特異性結合分子可結合至由SEQ ID NO：1之殘基337至355組成之抗原決定基。此抗原決定基可被本文中稱為「S1D12」之特異性結合分子的CDR結合。
該第一特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：16(NNAVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：18(GCSSDGTCYYNSALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：21(GHYSIYGYDYLGTIDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：24(SGSSSNVGGGNSVG)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：26(DTNSRPS)中所示之序列；VLCDR3包含SEQ ID NO：29(VTGDSTTHDDL)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列。
該第一特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：16(NNAVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：18(GCSSDGTCYYNSALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：21(GHYSIYGYDYLGTIDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：24(SGSSSNVGGGNSVG)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：26(DTNSRPS)中所示之序列；且 VLCDR3包含SEQ ID NO：29(VTGDSTTHDDL)中所示之序列。
該第一特異性結合分子可包含構架區(FR)VHFR1、VHFR2、VHFR3、VHFR4、VLFR1、VLFR2、VLFR3及VLFR4，其中該等FR各自包含以下胺基酸序列：VHFR1包含SEQ ID NO：435(QVQLQESGPSLVKPSQTLSLTCTVSGFSLN)中所示之序列；VHFR2包含SEQ ID NO：436(WVRQAPGKVPESLV)中所示之序列；VHFR3包含SEQ ID NO：437(RLDITRDTSKNQISLSLSSVTTDDAAVYYCTR)中所示之序列；VHFR4包含SEQ ID NO：438(WGPGLLVTVSS)中所示之序列；VLFR1包含SEQ ID NO：439(QAVLTQPSSVSGSLGQRVSITC)中所示之序列；VLFR2包含SEQ ID NO：440(WYQHLPGSGLKTIIY)中所示之序列；VLFR3包含SEQ ID NO：441(GVPDRFSGSRSGNTATLTINSLQAEDEGDYYC)中所示之序列；VLFR4包含SEQ ID NO：442(VGSGTRLTVLG)中所示之序列；或對於各FR序列，(i)與該序列具有至少50%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸取代的胺基酸序列。
該第一特異性結合分子可包含：(a)包含SEQ ID NO：443(QVQLQESGPSLVKPSQTLSLTCTVSGFSLNNNAVGWVRQAPGKVPESLVGCSSDGTCYYNSALKSRLDITRDTSKNQISLSLSSVTTDDAAVYYCTRGHYSIYGYDYLGTIDYWGPGLLVTVSS)中所示之序列 的VH域；及/或(b)包含SEQ ID NO：444(QAVLTQPSSVSGSLGQRVSITCSGSSSNVGGGNSVGWYQHLPGSGLKTIIYDTNSRPSGVPDRFSGSRSGNTATLTINSLQAEDEGDYYCVTGDSTTHDDLVGSGTRLTVLG)中所示之序列的VL域；或其人源化變異體。
該第一特異性結合分子可以小於約500pM之KD特異性結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基337至355之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子，視需要其中該特異性結合係藉由表面電漿子共振(SPR)量測且視需要其中i.結合至SEQ ID NO：1之KD係約50pM至約150pM，及/或ii.結合至SEQ ID NO：5之KD係約300pM至約400pM。
該第一特異性結合分子可結合至由SEQ ID NO：1之殘基367至379組成之抗原決定基。此抗原決定基可被本文中稱為「S1G2」之特異性結合分子的CDR結合。
該第一特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：42(SNSVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：46(GIDTDGEEGYNPALNS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：54(SYRADGLAYGYVQAIDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：63(SGSFIGISSVG)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：70(ASDGRPS)中所示之序列；VLCDR3包含SEQ ID NO：73(GSSDRTPYTGV)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或 (ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列。
該第一特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：42(SNSVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：46(GIDTDGEEGYNPALNS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：54(SYRADGLAYGYVQAIDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：63(SGSFIGISSVG)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：70(ASDGRPS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：73(GSSDRTPYTGV)中所示之序列。
該第一特異性結合分子可包含構架區(FR)VHFR1、VHFR2、VHFR3、VHFR4、VLFR1、VLFR2、VLFR3及VLFR4，其中該等FR各自包含以下胺基酸序列：VHFR1包含SEQ ID NO：447(QVQLQESGPSLVKPSQTLSLTCTVSGFSLT)中所示之序列；VHFR2包含SEQ ID NO：448(WVRQAPGKAPEWVA)中所示之序列；VHFR3包含SEQ ID NO：449(RLSITRDTSKSQVSLSLSSVTSEDTAVYYCGR)中所示之序列；VHFR4包含SEQ ID NO：450(WGPGLLVTVSS)中所示之序列；VLFR1包含SEQ ID NO：451(QAVVTQPSSVSGSLGQRVSITC)中所示之序列；VLFR2包含SEQ ID NO：452(WFQQLPGSGLRTIIV)中所示之序列；VLFR3包含SEQ ID NO：453(GVPDRFSMSKSGNTATLTISSLQAEDEADYFC)中所示之序列； VLFR4包含SEQ ID NO：454(FGSGTRLTVLG)中所示之序列；或對於各FR序列，(i)與該序列具有至少50%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸取代的胺基酸序列。
該第一特異性結合分子可包含：(a)包含SEQ ID NO：455(QVQLQESGPSLVKPSQTLSLTCTVSGFSLTSNSVGWVRQAPGKAPEWVAGIDTDGEEGYNPALNSRLSITRDTSKSQVSLSLSSVTSEDTAVYYCGRSYRADGLAYGYVQAIDYWGPGLLVTVSS)中所示之序列的VH域；及/或(b)包含SEQ ID NO：456(QAVVTQPSSVSGSLGQRVSITCSGSFIGISSVGWFQQLPGSGLRTIIVASDGRPSGVPDRFSMSKSGNTATLTISSLQAEDEADYFCGSSDRTPYTGVFGSGTRLTVLG)中所示之序列的VL域；或其人源化變異體。
該第一特異性結合分子可以小於約500pM之KD特異性結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基367至379之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子，視需要其中該特異性結合係藉由表面電漿子共振(SPR)量測且視需要其中i.結合至SEQ ID NO：1之KD係約100pM至約200pM，及/或ii.結合至SEQ ID NO：5之KD係約400pM至約500pM。
該第一特異性結合分子可與結合至SEQ ID NO：1之殘基297至391內之抗原決定基的本文所揭示之任何特異性結合分子競爭結合至SEQ ID NO：1。該第一特異性結合分子可與S1D12或S1G2競爭結合至SEQ ID NO：1。
所屬技術領域中具有通常知識者可在不採取過多實驗或需要發揮發明創造情況下(例如藉由使用常規競爭結合檢定)即可鑑別出競爭抗體。如 本文所使用，與另一特異性結合分子競爭的特異性結合分子係藉由涉及與同一目標特異性結合的競爭來進行該競爭。
在一個較佳具體實例中，該第一特異性結合分子可包含選自由S1D12、S1G2及CA4組成之群之特異性結合分子的CDR，視需要另外包含構架區，視需要包含VH域及/或VL域。
該第一特異性結合分子可結合至由SEQ ID NO：1之殘基355至367組成之抗原決定基。因此，該抗原決定基可在SEQ ID NO：330之胺基酸序列(GSLDNITHVPGGG)內。此抗原決定基可被本文中稱為「CA4」之特異性結合分子的CDR結合。
該第一特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：83(SYSVY)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：84(IMYASGRVDYNPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：89(GIEN)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：91(RTSQSVNNYLS)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：95(YATRLYT)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：97(LQYDSTPLA)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列。
該第一特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列： VHCDR1包含SEQ ID NO：83(SYSVY)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：84(IMYASGRVDYNPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：89(GIEN)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：91(RTSQSVNNYLS)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：95(YATRLYT)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：97(LQYDSTPLA)中所示之序列。
該第一特異性結合分子可包含構架區(FR)VHFR1、VHFR2、VHFR3、VHFR4、VLFR1、VLFR2、VLFR3及VLFR4，其中該等FR各自包含以下胺基酸序列：VHFR1包含SEQ ID NO：555(QVQLQESGPSLVKPSQTLSLTCTVSGFSLT)中所示之序列；VHFR2包含SEQ ID NO：556(WVRQAPGQALEWIS)中所示之序列；VHFR3包含SEQ ID NO：557(RLSITRDTSKSQFSLSLSSVTTEDTAVYYCTR)中所示之序列；VHFR4包含SEQ ID NO：558(WGPGLLVTVSS)中所示之序列；VLFR1包含SEQ ID NO：559(DIQVTQSPSSLSASLTERVSITC)中所示之序列；VLFR2包含SEQ ID NO：560(WYQQKPGQAPKLLIY)中所示之序列；VLFR3包含SEQ ID NO：561(DVPSRFSGSGSGTDYTLTITSLEADDTATYYC)中所示之序列；VLFR4包含SEQ ID NO：562(FGGGTNVEIK)中所示之序列；或對於各FR序列，(i)與該序列具有至少50%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸取代的胺基酸 序列。
該第一特異性結合分子可包含：(a)包含SEQ ID NO：563(QVQLQESGPSLVKPSQTLSLTCTVSGFSLTSYSVYWVRQAPGQALEWISIMYASGRVDYNPALKSRLSITRDTSKSQFSLSLSSVTTEDTAVYYCTRGIENWGPGLLVTVSS)中所示之序列的VH域；及/或(b)包含SEQ ID NO：564(DIQVTQSPSSLSASLTERVSITCRTSQSVNNYLSWYQQKPGQAPKLLIYYATRLYTDVPSRFSGSGSGTDYTLTITSLEADDTATYYCLQYDSTPLAFGGGTNVEIK)中所示之序列的VL域；或其人源化變異體。
該第一特異性結合分子可CA4競爭結合至SEQ ID NO：1。
該第一特異性結合分子可與S1D12、S1G2或CA4競爭結合至SEQ ID NO：1。
在一個較佳具體實例中，該第一特異性結合分子可包含選自由S1D12及S1G2組成之群之特異性結合分子的CDR，視需要另外包含構架區，視需要包含VH域及/或VL域。
該第一特異性結合分子可包含S1D12、S1G2或CA4，或者與S1D12、S1G2或CA4中之任一者或多者具有鄰近或重疊抗原決定基的替代特異性結合分子的CDR。舉例而言，該第一特異性結合分子可為結合至SEQ ID NO：1之殘基307至391內或與殘基307至391重疊之抗原決定基的本文所揭示之任何特異性結合分子。該第一特異性結合分子可為結合至SEQ ID NO：1之殘基337至379內或與殘基337至379重疊之抗原決定基的本文所揭示之任何特異性結合分子。該第一特異性結合分子可包含表1、表2、表3、表4、表9、表10(其中該抗原決定基係在SEQ ID NO：1之殘基307至391內或與殘基307至391重疊)或表11中所闡明之殖株的CDR序列。
第二特異性結合分子
該方法可另外包含使樣本與第二特異性結合分子接觸。該第二特異性結合分子結合至SEQ ID NO：1內之抗原決定基。使樣本與第二特異性結合分子接觸可為使樣本與該第一特異性結合分子接觸相獨立的步驟。使樣本與該第二特異性結合分子接觸係在使樣本與該第一特異性結合分子接觸之後進行。以下描述該第二特異性結合分子。在此子標題下關於一特異性結合分子或該特異性結合分子(其未被鑑定為與該第一特異性結合分子相關)的任何參考係指第一特異性結合分子。
該第二特異性結合分子可為本文所揭示之任何特異性結合分子，諸如PCT申請案第PCT/EP2021/069160號中所描述之特異性結合分子，其中該第二特異性結合分子不同於第一特異性結合分子。該第二特異性結合分子可為以大於抗體mAb423結合至SEQ ID NO：1內之抗原決定基之結合親和力的結合親和力結合至SEQ ID NO：1內之抗原決定基的特異性結合分子。
該第二特異性結合分子之抗原決定基可在SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6或SEQ ID NO：7內。
若第二特異性結合分子不同於第一特異性結合分子，則該第二特異性結合分子可具有關於該第一特異性結合分子所描述之特徵的任何組合。舉例而言，該第二特異性結合分子之抗原決定基及/或任何一或多個序列可如上文關於該第一特異性結合分子所描述。或者，該第二特異性結合分子之抗原決定基及/或任何一或多個序列可不同於如上文關於該第一特異性結合分子所描述者。該第二特異性結合分子之抗原決定基可不在SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6或SEQ ID NO：7內。
該第二特異性結合分子可為已知之特異性結合分子，諸如HT7、 BT2、Tau12或Tau146。該第二特異性結合分子可為HT7或BT2。BT2及HT7描述於US6010913A中及論文Merken等人，1992-Affinity Purification of Human tau Proteins and the Construction of a Sensitive Sandwich Enzyme-Linked Immunosorbent Assay for Human tau Detection中，兩者特此以全文引用之方式併入。
該第二特異性結合分子可結合至在SEQ ID NO：1之殘基151至243內的抗原決定基。
該第二特異性結合分子可結合至由SEQ ID NO：1之殘基194至198組成的抗原決定基。該第二特異性結合分子可為BT2。
該第二特異性結合分子可結合至由SEQ ID NO：1之殘基159至163組成的抗原決定基。該第二特異性結合分子可為HT7。
該第二特異性結合分子可與BT2或HT7競爭結合至SEQ ID NO：1。該第二特異性結合分子可包含HT7或本文所揭示的具有鄰近或重疊抗原決定基之替代特異性結合分子，諸如結合至SEQ ID NO：1之殘基147至157內之鄰近抗原決定基之3aA6及3aD6的CDR。
HT7及/或BT2之替代第二特異性結合分子可包含表8中所闡明之殖株的特異性結合分子之CDR(視需要另外包含FW區且視需要包含VH域及/或VL域)。舉例而言，該第二特異性結合分子可包含3aA6或3aD6之CDR。該第二特異性結合分子可包含3aA6或3aD6之CDR及FW區。該第二特異性結合分子可包含3aA6或3aD6之VH域及/或VL域。
該第二特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：198(SNAVI)中所示之序列； VHCDR2包含SEQ ID NO：200(LIDVDGDAAYDPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：202(DYGSWGYVSDIDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：204(SGSDIGGADVG)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：206(DNDNRPS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：208(GTYSGANYGI)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基147至157之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之CDR具有100%一致性之CDR的特異性結合分子在本文中稱為「3aD6」。
該第二特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：198(SNAVI)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：200(LIDVDGDAAYDPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：202(DYGSWGYVSDIDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：204(SGSDIGGADVG)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：206(DNDNRPS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：208(GTYSGANYGI)中所示之序列。
該第二特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：17(SNAVG)中所示之序列； VHCDR2包含SEQ ID NO：201(LIDIDGDTAYNPALES)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：203(HYDKWGYADSIDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：138(SGSSSNVGYGDYVG)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：207(DATTRAS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：209(ASYQNERSGV)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基147至157之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之CDR具有100%一致性之CDR的特異性結合分子在本文中稱為「3aA6」。
該第二特異性結合分子可以小於約50nM之KD結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基147至157之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。KD可小於約40nM、小於約30nM或小於約20nM。KD可較佳地為結合至SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：191之KD。結合至SEQ ID NO：1之KD可為約10nM至約20nM。結合至SEQ ID NO：1之KD可為約16.5nM，視需要其中該特異性結合分子包含3aD6之CDR。
該第二特異性結合分子可包含與SEQ ID NO：418具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基147至157之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。該特異性結合分子之CDR可與SEQ ID NO：418之CDR至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致。該等CDR可與SEQ ID NO：418之CDR具有100%一致性。該特異性結合分子可包含與SEQ ID NO：418具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或 至少99%一致性之胺基酸序列，其中CDR與SEQ ID NO：418之CDR具有100%一致性。該特異性結合分子可包含SEQ ID NO：418之胺基酸序列。
SEQ ID NO：418(3aA6胺基酸序列)
該第二特異性結合分子可包含與SEQ ID NO：419具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基147至157之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。該特異性結合分子之CDR可與SEQ ID NO：419之CDR至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致。該等CDR可與SEQ ID NO：419之CDR具有100%一致性。該特異性結合分子可包含與SEQ ID NO：419具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列，其中CDR與SEQ ID NO：419之CDR具有100%一致性。該特異性結合分子可包含SEQ ID NO：419之胺基酸序列。
SEQ ID NO：419(3aD6胺基酸序列)
該第二特異性結合分子可包含BT2或本文所揭示的具有鄰近或重疊抗原決定基之替代特異性結合分子的CDR。
HT7及/或BT2之替代第二特異性結合分子可包含表10中所闡明之殖株的特異性結合分子之CDR(視需要另外包含FW區且視需要包含VH域及/或VL域)。舉例而言，該第二特異性結合分子可包含3bD11、CB11、CA2、CB6、CA7、CA8、CB10、CC7、CB12、CC3、CA1、CA3、CD2、CC4、CD1或CC5之 CDR。該第二特異性結合分子可包含3bD11、CB11、CA2、CB6、CA7、CA8、CB10、CC7、CB12、CC3、CA1、CA3、CD2、CC4、CD1或CC5之CDR及FW區。該第二特異性結合分子可包含3bD11、CB11、CA2、CB6、CA7、CA8、CB10、CC7、CB12、CC3、CA1、CA3、CD2、CC4、CD1或CC5之VH域及/或VL域。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含表10中所示之VHCDR1胺基酸序列；VHCDR2包含表10中所示之VHCDR2胺基酸序列；VHCDR3包含表10中所示之VHCDR3胺基酸序列；VLCDR1包含表10中所示之VLCDR1胺基酸序列；VLCDR2包含表10中所示之VLCDR2胺基酸序列；且VLCDR3包含表10中所示之VLCDR3胺基酸序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至SEQ ID NO：1內的抗原決定基。VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3可來自表10中所闡述之單個殖株。該殖株可選自由以下者組成之群：3bD11、CB11、CA2、CB6、CA7、CA8、CB10、CC7、CB12、CC3、CA1、CA3、CD2、CC4、CD1及CC5。
第一特異性結合分子及/或第二特異性結合分子之一般特徵
以下大體上描述特異性結合分子之特徵且包括PCT申請案第PCT/EP2021/069160號中所描述之特異性結合分子的詳情。在此子標題下關於一特異性結合分子或該特異性結合分子(其未被鑑定為特定地與第一特異性結合 分子或第二特異性結合分子相關)之任何參考係指一般特異性結合分子且明確地涵蓋與第一特異性結合分子或第二特異性結合分子之任何特徵的組合，其限制條件為，該第一特異性結合分子結合至SEQ ID NO：1之殘基297至391內的抗原決定基(因此，提及本文所揭示的不結合至SEQ ID NO：1之殘基297至391內之抗原決定基的特異性結合分子僅指第二特異性結合分子)。
該特異性結合分子之抗原決定基可在SEQ ID NO：1之殘基297至391內。全長Tau之殘基297至391亦已知為自配對螺旋絲(PHF)之蛋白水解穩定性核心分離之主要片段，或PHF核心片段。因此，該特異性結合分子之抗原決定基可在PHF內或在dGAE片段內。因此，該特異性結合分子之抗原決定基可在SEQ ID NO4內。
該特異性結合分子之抗原決定基可在SEQ ID NO：1之殘基297至390內。全長Tau之殘基297至390又稱為dGA片段。因此，該特異性結合分子之抗原決定基可在dGA片段內。因此，該特異性結合分子之抗原決定基可在SEQ ID NO：5內。該特異性結合分子之抗原決定基可在dGAE73及/或dGAE71內。因此，該特異性結合分子之抗原決定基可在SEQ ID NO：6及/或SEQ ID NO：7內。
該特異性結合分子之抗原決定基可在SEQ ID NO：1之殘基308至378內。全長Tau之殘基308至378又稱為PHF核心。因此，該特異性結合分子之抗原決定基可在PHF核心內。因此，該特異性結合分子之抗原決定基可在SEQ ID NO：7內。
該特異性結合分子之抗原決定基可在SEQ ID NO：1之殘基297至386內。該特異性結合分子之抗原決定基可在SEQ ID NO：1之殘基306至391內。該特異性結合分子之抗原決定基可在SEQ ID NO：1之殘基306至386內。
該特異性結合分子之抗原決定基可在選自由以下者組成之群之胺基酸序列內：SEQ ID NO：1之殘基306至391、SEQ ID NO：1之殘基307至391、 SEQ ID NO：1之殘基337至355、SEQ ID NO：1之殘基367至379、SEQ ID NO：1之殘基331至360、SEQ ID NO：1之殘基355至367、SEQ ID NO：1之殘基379至391、SEQ ID NO：1之殘基297至390、SEQ ID NO：1之殘基369至390、SEQ ID NO：1之殘基337至368、SEQ ID NO：1之殘基337至379、SEQ ID NO：1之殘基412至441、SEQ ID NO：1之殘基1至49、SEQ ID NO：1之殘基49至111、SEQ ID NO：1之殘基147至157、SEQ ID NO：1之殘基1至155、SEQ ID NO：1之殘基1至238、SEQ ID NO：1之殘基1至319、SEQ ID NO：1之殘基13至25、SEQ ID NO：1之殘基49至113、SEQ ID NO：1之殘基49至155、SEQ ID NO：1之殘基49至238、SEQ ID NO：1之殘基113至238、SEQ ID NO：1之殘基155至227、SEQ ID NO：1之殘基155至238、SEQ ID NO：1之殘基186至263、SEQ ID NO：1之殘基186至350、SEQ ID NO：1之殘基239至348、SEQ ID NO：1之殘基266至359、SEQ ID NO：1之殘基277至319、SEQ ID NO：1之殘基319至331、SEQ ID NO：1之殘基348至390、SEQ ID NO：1之殘基348至441、SEQ ID NO：1之殘基359至391及SEQ ID NO：1之殘基360至390。
該特異性結合分子之抗原決定基可在選自由以下者組成之群之胺基酸序列內：SEQ ID NO：1之殘基337至355、SEQ ID NO：1之殘基367至379、SEQ ID NO：1之殘基331至360、SEQ ID NO：1之殘基355至367、SEQ ID NO：1之殘基379至391、SEQ ID NO：1之殘基297至390、SEQ ID NO：1之殘基369至390、SEQ ID NO：1之殘基337至368、SEQ ID NO：1之殘基412至441、SEQ ID NO：1之殘基1至49、SEQ ID NO：1之殘基49至111及SEQ ID NO：1之殘基147至157。
該特異性結合分子之抗原決定基可在選自由以下者組成之群之胺基酸序列內：SEQ ID NO：1之殘基337至355、SEQ ID NO：1之殘基367至379、SEQ ID NO：1之殘基331至360及SEQ ID NO：1之殘基355至367。
該特異性結合分子之抗原決定基可在選自由SEQ ID NO：1之殘基341至353組成之群的胺基酸序列內。
本發明之特異性結合分子的抗原決定基可為如例如實施例5至實施例12中所描述，藉由ELISA或丙胺酸掃描突變誘發指示為含有關鍵結合殘基的SEQ ID NO：1之任何胺基酸序列。
本文所描述之抗原決定基可標識為「包含」某一胺基酸序列或藉由片語「該特異性結合分子結合至包括含殘基......之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子」標識。熟練技術人員將顯而易見的是，當一特異性結合分子結合包含其抗原決定基之多肽或蛋白質分子時，其將亦結合由其抗原決定基組成之多肽或蛋白質分子。如本文所使用，片語「該特異性結合分子結合至包括含殘基......之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子」因此可替代地用別處出現的以下片語替代：片語「該特異性結合分子結合至包含由殘基......組成之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子」；片語「該特異性結合分子結合至由包含殘基......之胺基酸序列組成的多肽或蛋白質分子」；或片語「該特異性結合分子結合至由殘基......組成之胺基酸序列組成的多肽或蛋白質分子」。
熟練技術人員意識到抗原決定基內並非所有殘基皆始終為必需的。特異性結合分子可保持結合至與抗原決定基具有至少70%一致性之胺基酸序列。該特異性結合分子可結合至本文所揭示之抗原決定基中的任一者或與其具有至少70%一致性之胺基酸序列。
特異性結合分子可保持結合至與抗原決定基具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列。該特異性結合分子可結合至本文所揭示之抗原決定基中的任一者或與其具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列。
在特異性結合分子保持結合至與SEQ ID NO：1(或SEQ ID NO：3至7中之任一者或本文所定義之任何其他抗原決定基)之胺基酸序列具有小於100%序列一致性之胺基酸序列的本發明之具體實例中，該抗原決定基序列可藉 由SEQ ID NO：1(或SEQ ID NO：3至7中之任一者或本文所定義任何其他抗原決定基)之序列中適當數目之胺基酸的取代、添加或缺失來改變。在本發明之另一個具體實例中，該抗原決定基可藉由相對於SEQ ID NO：1(或SEQ ID NO：3至7中之任一者或本文所定義任何其他抗原決定基)至多2個胺基酸之取代、添加或缺失進行修飾，其限制條件為所得抗原決定基序列與SEQ ID NO：1(或SEQ ID NO：3至7中之任一者或本文所定義任何其他抗原決定基)具有至少85%或90%序列一致性，如上文所闡述。「取代、添加或缺失」包括取代、添加與缺失的組合。
當抗原決定基序列藉由用特定胺基酸殘基取代進行修飾時，該取代可為保守胺基酸取代。如本文所使用，術語「保守胺基酸取代」係指一個胺基酸殘基經具有類似側鏈之另一胺基酸殘基置換的胺基酸取代。具有類似側鏈之胺基酸往往具有類似特性，且因此可預期對於多肽之結構或功能至關重要之胺基酸的保守取代對多肽結構/功能的影響小於在相同位置處非保守胺基酸取代的影響。具有類似側鏈之胺基酸殘基的家族在此項技術中已有定義，包括鹼性側鏈(例如離胺酸、精胺酸、組胺酸)、酸性側鏈(例如天冬胺酸、麩胺酸)、不帶電極性側鏈(例如天冬醯胺、麩醯胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、酪胺酸)、非極性側鏈(例如甘胺酸、半胱胺酸、丙胺酸、纈胺酸、白胺酸、異白胺酸、脯胺酸、苯丙胺酸、甲硫胺酸、色胺酸)及芳族側鏈(例如酪胺酸、苯丙胺酸、色胺酸、組胺酸)。因此，保守胺基酸取代可視為特定胺基酸殘基經同一家族之不同胺基酸殘基取代的取代。然而，抗原決定基殘基之取代同樣可為非保守取代，其中一個胺基酸經具有屬於不同家族之側鏈的另一胺基酸取代。
該抗原決定基可為至少五個、至少六個、至少七個、至少八個、至少九個、至少10個、至少11個、至少12個、至少13個、至少14個、至少15個、至少16個、至少17個、至少18個、至少19個或至少20個胺基酸長。該抗原決定基可為五至20個胺基酸長。該抗原決定基可為五至15個胺基酸長。該抗原決定基可 為五至12個胺基酸長。該抗原決定基可為六至12個胺基酸長。該抗原決定基可為七至12個胺基酸長。
如本文所使用，術語「在......內」意謂「在......內所包含之」或「完全在......內」。被認為對於特異性結合分子結合至其目標至關重要的殘基不在該抗原決定基之外。在抗原決定基之外的殘基並不明顯促成結合。舉例而言，在特異性結合分子之抗原決定基係在SEQ ID NO：1之殘基337至355內的情況下，在殘基337至355之外的殘基並不明顯促成結合。
該抗原決定基可包含SEQ ID NO：1內該特異性結合分子所結合之任何殘基。該抗原決定基可為連續抗原決定基或不連續抗原決定基。
連續抗原決定基可為SEQ ID NO：1內被該特異性結合分子所結合之任何連續殘基。連續殘基在多肽之一級結構中彼此相鄰。
不連續抗原決定基可為SEQ ID NO：1內被該特異性結合分子所結合之任何不連續殘基。不連續抗原決定基典型地由在三維空間中因多肽摺疊而呈現鄰近位置之不連續殘基形成。
典型地，特異性結合分子結合至包含其抗原決定基之多肽或蛋白質分子。因此，該特異性結合分子可結合至SEQ ID NO：1或其片段。該特異性分子可結合至SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6及/或SEQ ID NO：7。該特異性分子可結合至PHF或dGAE片段。該特異性結合分子可結合至dGA片段。該特異性結合分子可結合至PHF核心。該特異性結合分子可結合至包含選自由以下者組成之群之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子：SEQ ID NO：1之殘基337至355、SEQ ID NO：1之殘基367至379、SEQ ID NO：1之殘基331至360、SEQ ID NO：1之殘基355至367、SEQ ID NO：1之殘基379至391、SEQ ID NO：1之殘基297至390、SEQ ID NO：1之殘基369至390、SEQ ID NO：1之殘基337至368、SEQ ID NO：1之殘基412至441、SEQ ID NO：1之殘基1至49、SEQ ID NO：1之殘 基49至111、SEQ ID NO：1之殘基147至157、SEQ ID NO：1之殘基1至155、SEQ ID NO：1之殘基1至238、SEQ ID NO：1之殘基1至319、SEQ ID NO：1之殘基13至25、SEQ ID NO：1之殘基49至113、SEQ ID NO：1之殘基49至155、SEQ ID NO：1之殘基49至238、SEQ ID NO：1之殘基113至238、SEQ ID NO：1之殘基155至227、SEQ ID NO：1之殘基155至238、SEQ ID NO：1之殘基186至263、SEQ ID NO：1之殘基186至350、SEQ ID NO：1之殘基239至348、SEQ ID NO：1之殘基266至359、SEQ ID NO：1之殘基277至319、SEQ ID NO：1之殘基319至331、SEQ ID NO：1之殘基348至390、SEQ ID NO：1之殘基348至441、SEQ ID NO：1之殘基359至391及SEQ ID NO：1之殘基360至390。
該特異性結合分子可結合至包含SEQ ID NO：1之殘基341至353之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。
在本文中之序列中，「/」意謂「或」且表示本發明人顯示之殘基可如所指定的一般變化。在此情形下，「-」意謂空位或無胺基酸。X係任何胺基酸。舉例而言，「N/S」意謂可為N或S之殘基。同樣，「G/-」意謂可為G或不存在之殘基。同樣，「H/F/Y」意謂可為H、F或Y之殘基。在指定序列一致性值之情況下，序列一致性可自藉由「/」分隔開之殘基中之任一者開始來計算。
該特異性結合分子之抗原決定基可在包含SEQ ID NO：1之殘基337至355的胺基酸序列內。在包含SEQ ID NO：1之殘基337至355之胺基酸序列內的特異性結合分子之抗原決定基可在包含SEQ ID NO：1之殘基341至353之胺基酸序列內。因此，該抗原決定基可在SEQ ID NO：8之胺基酸序列(VEVKSEKLDFKDR)內。
該抗原決定基可在包含SEQ ID NO：1之殘基337至349之胺基酸序列內，較佳地在包含SEQ ID NO：1之殘基337至355之胺基酸序列內。此抗原決定基可被本文中稱為「S1D12」之特異性結合分子的CDR結合。該抗原決定基可 包含SEQ ID NO：8之胺基酸序列(VEVKSEKLDFKDR)。該抗原決定基可包含與SEQ ID NO：8(VEVKSEKLDFKDR)具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列。該抗原決定基之關鍵殘基可為殘基343(K)、346(F)及/或349(R)(根據SEQ ID NO：1編號)。該抗原決定基可包含SEQ ID NO：9之胺基酸序列(XXXXXXXKXXFXXR，其中X係任何胺基酸)。該抗原決定基可包含SEQ ID NO：8之胺基酸序列，其中除殘基編號343(K)、346(F)及/或349(R)外的任一個或多個殘基皆經非保守胺基酸取代置換(根據SEQ ID NO：1編號)。該抗原決定基可包含SEQ ID NO：8之胺基酸序列，其中除殘基編號343(K)、346(F)及/或349(R)外的任一個或多個殘基皆經保守胺基酸取代置換(根據SEQ ID NO：1編號)。該抗原決定基可包含SEQ ID NO：8之胺基酸序列，其中除殘基編號343(K)、346(F)及/或349(R)外的任一個或多個殘基皆經保守胺基酸取代置換(根據SEQ ID NO：1編號)且除殘基編號343(K)、346(F)及/或349(R)外的任一個或多個殘基皆經非保守胺基酸取代置換(根據SEQ ID NO：1編號)。
該抗原決定基可由SEQ ID NO：1之殘基337至349組成，較佳地由SEQ ID NO：1之殘基337至355組成。該抗原決定基可由SEQ ID NO：8之胺基酸序列(VEVKSEKLDFKDR)組成。該抗原決定基可由與SEQ ID NO：8(VEVKSEKLDFKDR)具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列組成。
該特異性結合分子可結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基337至355之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。該特異性結合分子可包含CDR VLCDR1、VLCDR2、VLCDR3、VHCDR1、VHCDR2及VHCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：10(N/S N A V G)中所示之序列； VHCDR2包含SEQ ID NO：11(G C S S D G T/K C Y Y/H N S A L K S)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：12(G H/F/Y Y S/P I/V Y G Y D Y L/S G T I D Y)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：13(S G S S S N V G/-G G/R N S/D V G/A)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：14(D/N/G T N/T S R P S)中所示之序列；VLCDR3包含SEQ ID NO：15(V/A T/S G D S T/S T/A H/I D/N D L/I)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列。
該序列一致性係至少約85%序列一致性且因此可為至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致性。較佳地，該序列一致性係至少90%或至少95%。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：16(NNAVG)或SEQ ID NO：17(SNAVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：18(GCSSDGTCYYNSALKS)、SEQ ID NO：19(GCSSDGKCYHNSALKS)或SEQ ID NO：20(GCSSDGKCYYNSALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：21(GHYSIYGYDYLGTIDY)、SEQ ID NO：22 (GFYSIYGYDYSGTIDY)或SEQ ID NO：23(GYYPVYGYDYLGTIDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：24(SGSSSNVGGGNSVG)或SEQ ID NO：25(SGSSSNVGRNDVA)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：26(DTNSRPS)、SEQ ID NO：27(NTNSRPS)或SEQ ID NO：28(GTTSRPS)中所示之序列；VLCDR3包含SEQ ID NO：29(VTGDSTTHDDL)、SEQ ID NO：30(VTGDSSTHDDL)或SEQ ID NO：31(ASGDSSAINDI)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基337至355之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：16(NNAVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：18(GCSSDGTCYYNSALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：21(GHYSIYGYDYLGTIDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：24(SGSSSNVGGGNSVG)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：26(DTNSRPS)中所示之序列；VLCDR3包含SEQ ID NO：29(VTGDSTTHDDL)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列， 其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基337至355之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之CDR具有100%一致性之CDR的特異性結合分子在本文中稱為「S1D12」(或縮寫為「1D12」)。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：16(NNAVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：18(GCSSDGTCYYNSALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：21(GHYSIYGYDYLGTIDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：24(SGSSSNVGGGNSVG)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：26(DTNSRPS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：29(VTGDSTTHDDL)中所示之序列。
本文所揭示之任何特異性結合分子可進一步由提及的一或多個構架區(FR)定義。構架區(FR)係與CDR序列一起形成可變域之非CDR序列。
VH域可具有下式：VHFR1-VHCDR1-VHFR2-VHCDR2-VHFR3-VHCDR3-VHFR4。
VL域可具有下式：VLFR1-VLCDR1-VLFR2-VLCDR2-VLFR3-VLCDR3-VLFR4。
熟練技術人員能夠使用本文中別處所描述的已知方法鑑別在可變域之胺基酸序列內的CDR及構架區。因此，本文所揭示之任何特異性結合分子可參考其CDR及FR定義。在一些情況下，一些FR殘基可促成特異性結合分子結合其目標之親和力。然而，不受理論束縛，與置換CDR殘基時相比，置換FR殘基時功能更可能得到保留。舉例而言，FR殘基通常可在人源化程序期間經來自人類序列之相應殘基置換。因此，FR序列對胺基酸取代之耐受性可高於CDR序列的耐受性。
該特異性結合分子可包含：(a)構架區(FR)VHFR1、VHFR2、VHFR3、VHFR4、VLFR1、VLFR2、VLFR3及VLFR4，其中該等FR各自包含來自本文所揭示之任何特異性結合分子的胺基酸序列；或對於各FR序列，(i)與該序列具有至少50%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸取代的胺基酸序列；且(b)CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含來自本文所揭示之任何特異性結合分子的胺基酸序列，或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列。
CDR序列中的該序列一致性為至少約85%序列一致性且因此可為至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致性。較佳地，該序列一致性為至少90%或至少95%。
FR序列中的該序列一致性為至少約50%序列一致性且因此可為至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致性。較佳地，該序列一致性為至少90%或至少95%。
在FR序列與作為本文所揭示之特異性結合分子之一部分揭示之FR序列具有至少50%一致性(但小於100%一致性)的情況下，FR序列可為人源化序列。換言之，胺基酸序列之變化可僅為使該序列人源化所需之變化。
在FR序列相對於作為本文所揭示之特異性結合分子之一部分揭示之FR序列具有一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸取代的情況下，FR序列可為人源化序列。換言之，該等取代可僅為使該序列人源化所需的取代。
該特異性結合分子可包含：(a)構架區(FR)VHFR1、VHFR2、VHFR3、VHFR4、VLFR1、VLFR2、VLFR3及VLFR4，其中該等FR各自包含來自本文所揭示之任何特異性結合分子的胺基酸序列；及(b)CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含來自本文所揭示之任何特異性結合分子的胺基酸序列。
典型地，該等FR各自將來自本文所揭示之同一特異性結合分子。典型地，該等CDR各自將來自本文所揭示之同一特異性結合分子。典型地，在所定義之FR與CDR之間將無額外胺基酸殘基插入；該等FR中之各者及該等CDR中之各者因此可認為由來自本文所揭示之任何特異性結合分子的胺基酸序列組成。
如本文所使用，片語「包含CDR」亦涵蓋包含本文所揭示之特異性結合分子之CDR及FR的特異性結合分子，包括含以上所描述之FR的FR之變異體，諸如人源化FR。其亦涵蓋包含本文所揭示之特異性結合分子之VH域及/或VL域的特異性結合分子，包括含以上所描述之FR的FR之變異體，諸如人源化FR。其亦涵蓋包含本文所揭示之特異性結合分子之重鏈及/或輕鏈的特異性結合分子，包括含以上所描述之FR及恆定區的FR及恆定區之變異體，諸如人源化FR及人源化恆定區。
該特異性結合分子可包含構架區(FR)VHFR1、VHFR2、VHFR3、VHFR4、VLFR1、VLFR2、VLFR3及VLFR4，其中該等FR各自包含以下胺基酸序列： VHFR1包含SEQ ID NO：435(QVQLQESGPSLVKPSQTLSLTCTVSGFSLN)中所示之序列；VHFR2包含SEQ ID NO：436(WVRQAPGKVPESLV)中所示之序列；VHFR3包含SEQ ID NO：437(RLDITRDTSKNQISLSLSSVTTDDAAVYYCTR)中所示之序列；VHFR4包含SEQ ID NO：438(WGPGLLVTVSS)中所示之序列；VLFR1包含SEQ ID NO：439(QAVLTQPSSVSGSLGQRVSITC)中所示之序列；VLFR2包含SEQ ID NO：440(WYQHLPGSGLKTIIY)中所示之序列；VLFR3包含SEQ ID NO：441(GVPDRFSGSRSGNTATLTINSLQAEDEGDYYC)中所示之序列；VLFR4包含SEQ ID NO：442(VGSGTRLTVLG)中所示之序列；或對於各FR序列，(i)與該序列具有至少50%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸取代的胺基酸序列。
該特異性結合分子可包含構架區(FR)VHFR1、VHFR2、VHFR3、VHFR4、VLFR1、VLFR2、VLFR3及VLFR4，其中該等FR各自包含以下胺基酸序列：VHFR1包含SEQ ID NO：435(QVQLQESGPSLVKPSQTLSLTCTVSGFSLN)中所示之序列；VHFR2包含SEQ ID NO：436(WVRQAPGKVPESLV)中所示之序列；VHFR3包含SEQ ID NO：437(RLDITRDTSKNQISLSLSSVTTDDAAVYYCTR)中所示之序列； VHFR4包含SEQ ID NO：438(WGPGLLVTVSS)中所示之序列；VLFR1包含SEQ ID NO：439(QAVLTQPSSVSGSLGQRVSITC)中所示之序列；VLFR2包含SEQ ID NO：440(WYQHLPGSGLKTIIY)中所示之序列；VLFR3包含SEQ ID NO：441(GVPDRFSGSRSGNTATLTINSLQAEDEGDYYC)中所示之序列；VLFR4包含SEQ ID NO：442(VGSGTRLTVLG)中所示之序列；或對於各FR序列，(i)與該序列具有至少50%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基337至355之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之FR具有100%一致性之FR的特異性結合分子在本文中稱為「S1D12」(或縮寫為「1D12」)。
該特異性結合分子可包含：(a)構架區(FR)VHFR1、VHFR2、VHFR3、VHFR4、VLFR1、VLFR2、VLFR3及VLFR4，其中該等FR各自包含以下胺基酸序列：VHFR1包含SEQ ID NO：435(QVQLQESGPSLVKPSQTLSLTCTVSGFSLN)中所示之序列；VHFR2包含SEQ ID NO：436(WVRQAPGKVPESLV)中所示之序列；VHFR3包含SEQ ID NO：437(RLDITRDTSKNQISLSLSSVTTDDAAVYYCTR)中所示之序列；VHFR4包含SEQ ID NO：438(WGPGLLVTVSS)中所示之序列；VLFR1包含SEQ ID NO：439(QAVLTQPSSVSGSLGQRVSITC)中所示之序 列；VLFR2包含SEQ ID NO：440(WYQHLPGSGLKTIIY)中所示之序列；VLFR3包含SEQ ID NO：441(GVPDRFSGSRSGNTATLTINSLQAEDEGDYYC)中所示之序列；VLFR4包含SEQ ID NO：442(VGSGTRLTVLG)中所示之序列；或對於各FR序列，(i)與該序列具有至少50%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸取代的胺基酸序列；以及(b)CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：16(NNAVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：18(GCSSDGTCYYNSALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：21(GHYSIYGYDYLGTIDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：24(SGSSSNVGGGNSVG)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：26(DTNSRPS)中所示之序列；VLCDR3包含SEQ ID NO：29(VTGDSTTHDDL)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列
其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基337至355之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之FR及CDR具有100%一致性之FR及CDR的特異性結合分子在本文中稱為「S1D12」(或縮寫為「1D12」)。
該特異性結合分子可包含： (a)構架區(FR)VHFR1、VHFR2、VHFR3、VHFR4、VLFR1、VLFR2、VLFR3及VLFR4，其中該等FR各自包含以下胺基酸序列：VHFR1包含SEQ ID NO：435(QVQLQESGPSLVKPSQTLSLTCTVSGFSLN)中所示之序列；VHFR2包含SEQ ID NO：436(WVRQAPGKVPESLV)中所示之序列；VHFR3包含SEQ ID NO：437(RLDITRDTSKNQISLSLSSVTTDDAAVYYCTR)中所示之序列；VHFR4包含SEQ ID NO：438(WGPGLLVTVSS)中所示之序列；VLFR1包含SEQ ID NO：439(QAVLTQPSSVSGSLGQRVSITC)中所示之序列；VLFR2包含SEQ ID NO：440(WYQHLPGSGLKTIIY)中所示之序列；VLFR3包含SEQ ID NO：441(GVPDRFSGSRSGNTATLTINSLQAEDEGDYYC)中所示之序列；VLFR4包含SEQ ID NO：442(VGSGTRLTVLG)中所示之序列；或對於各FR序列，(i)與該序列具有至少50%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸取代的胺基酸序列；及(b)CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：16(NNAVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：18(GCSSDGTCYYNSALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：21(GHYSIYGYDYLGTIDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：24(SGSSSNVGGGNSVG)中所示之序列； VLCDR2包含SEQ ID NO：26(DTNSRPS)中所示之序列；VLCDR3包含SEQ ID NO：29(VTGDSTTHDDL)中所示之序列；其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基337至355之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之FR及CDR具有100%一致性之FR及CDR的特異性結合分子在本文中稱為「S1D12」(或縮寫為「1D12」)。
該特異性結合分子可包含：(a)包含SEQ ID NO：443(QVQLQESGPSLVKPSQTLSLTCTVSGFSLNNNAVGWVRQAPGKVPESLVGCSSDGTCYYNSALKSRLDITRDTSKNQISLSLSSVTTDDAAVYYCTRGHYSIYGYDYLGTIDYWGPGLLVTVSS)中所示之序列的VH域；及/或(b)包含SEQ ID NO：444(QAVLTQPSSVSGSLGQRVSITCSGSSSNVGGGNSVGWYQHLPGSGLKTIIYDTNSRPSGVPDRFSGSRSGNTATLTINSLQAEDEGDYYCVTGDSTTHDDLVGSGTRLTVLG)中所示之序列的VL域；或其人源化變異體。
該特異性結合分子可包含：(a)包含SEQ ID NO：445(QVQLQESGPSLVKPSQTLSLTCTVSGFSLNNNAVGWVRQAPGKVPESLVGCSSDGTCYYNSALKSRLDITRDTSKNQISLSLSSVTTDDAAVYYCTRGHYSIYGYDYLGTIDYWGPGLLVTVSSAKTTAPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITCNVAHPASSTKVDKKIEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTP GK)中所示之序列的重鏈；及/或(b)包含SEQ ID NO：446(QAVLTQPSSVSGSLGQRVSITCSGSSSNVGGGNSVGWYQHLPGSGLKTIIYDTNSRPSGVPDRFSGSRSGNTATLTINSLQAEDEGDYYCVTGDSTTHDDLVGSGTRLTVLGGQPKSSPSVTLFPPSSEELETNKATLVCTITDFYPGVVTVDWKVDGTPVTQGMETTQPSKQSNNKYMASSYLTLTARAWERHSSYSCQVTHEGHTVEKSLSRADCS)中所示之序列的輕鏈；或其人源化變異體。
該特異性結合分子可包含下表1中所闡明之殖株的CDR序列。該抗原決定基可在SEQ ID NO：1之殘基337至355內。
本文中說明之CDR係根據Kabat定義。熟練技術人員意識到，用於鑑別CDR之其他方法係可用的，諸如Chothia及Martin。使用替代方法界定CDR有時可改變定義為屬於一或多個CDR之殘基。舉例而言，根據Chothia及Martin進行的S1D12之替代CDR定義示於圖1中。本文所揭示之特異性結合分子序列的任何替代CDR定義在本發明之範圍內。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含表1中所示之VHCDR1胺基酸序列；VHCDR2包含表1中所示之VHCDR2胺基酸序列；VHCDR3包含表1中所示之VHCDR3胺基酸序列；VLCDR1包含表1中所示之VLCDR1胺基酸序列；VLCDR2包含表1中所示之VLCDR2胺基酸序列；且VLCDR3包含表1中所示之VLCDR3胺基酸序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基337至355之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。
該特異性結合分子可以小於約500pM之KD結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基337至355之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。KD可小於約400pM、小於約300pM、小於約200pM或小於約150pM。KD可較佳地為結合至SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：5之KD。結合至SEQ ID NO：1之KD可為約50pM至約150pM。結合至SEQ ID NO：1之KD可為約101pM或122pM，視需要其中該特異性結合分子包含S1D12之CDR。結合至SEQ ID NO：5之KD可為約300pM至約400pM。結合 至SEQ ID NO：5之KD可為約344pM，視需要其中該特異性結合分子包含S1D12之CDR。
該特異性結合分子可包含與SEQ ID NO：32具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基337至355之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。該特異性結合分子之CDR可與SEQ ID NO：30之CDR至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致。該等CDR可與SEQ ID NO：32之CDR具有100%一致性。該特異性結合分子可包含與SEQ ID NO：30具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列，其中CDR與SEQ ID NO：32之CDR具有100%一致性。該特異性結合分子可包含SEQ ID NO：32之胺基酸序列。
SEQ ID NO：32(S1D12胺基酸序列)
該特異性結合分子之抗原決定基可在包含SEQ ID NO：1之殘基367至379的胺基酸序列內。因此，該抗原決定基可在SEQ ID NO：33之胺基酸序列(GNKKIETHKLTFR)內。
該抗原決定基可在包含SEQ ID NO：1之殘基367至379的胺基酸序列內。此抗原決定基可被本文中稱為「S1G2」之特異性結合分子的CDR結合。
該抗原決定基可包含SEQ ID NO：33之胺基酸序列(GNKKIETHKLTFR)。該抗原決定基可包含與SEQ ID NO：33(GNKKIETHKLTFR)具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列。該抗原決定基之關鍵殘基可為殘基370(K)及 /或374(H)(根據SEQ ID NO：1編號)。該抗原決定基可包含SEQ ID NO：34之胺基酸序列(XXXKXXXHXXXXX，其中X係任何胺基酸)。該抗原決定基可包含SEQ ID NO：33之胺基酸序列，其中除殘基編號370(K)及/或374(H)外的任一個或多個殘基經非保守胺基酸取代置換(根據SEQ ID NO：1編號)。該抗原決定基可包含SEQ ID NO：33之胺基酸序列，其中除殘基編號370(K)及/或374(H)外的任一個或多個殘基經保守胺基酸取代置換(根據SEQ ID NO：1編號)。該抗原決定基可包含SEQ ID NO：33之胺基酸序列，其中除殘基編號370(K)及/或374(H)外的任一個或多個殘基經保守胺基酸取代置換(根據SEQ ID NO：1編號)且除殘基編號370(K)及/或374(H)外的任一個或多個殘基經非保守胺基酸取代置換(根據SEQ ID NO：1編號)。
該抗原決定基可由SEQ ID NO：33之胺基酸序列(GNKKIETHKLTFR)組成。該抗原決定基可由與SEQ ID NO：33(GNKKIETHKLTFR)具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列組成。
該特異性結合分子可結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基367至379之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。該特異性結合分子可包含CDR VLCDR1、VLCDR2、VLCDR3、VHCDR1、VHCDR2及VHCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：35(S/T N/Y S/A/Y V G)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：36(G/S/N I/V D/Y T/S D/T G E/Y/D/R E/T/A G/Y/F Y/F N P A/V L N/K S)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：37(S/T Y/V/A R/N A/T/G/SD/-G/-L/Y/F/-A/-Y/H G/P Y/D V Q/Y A/Y I D/E Y/R/K)或SEQ ID NO：265(GSYYHGGGNGMVDFFDY)中所示之序列； VLCDR1包含SEQ ID NO：38(S G S/R F/Y/D I/L/V G/S I/S/R S S/R/A/G V G)或SEQ ID NO：39(SGSSSNVGYGNYVG)中所示之序列VLCDR2包含SEQ ID NO：40(A/D S/A D/S/T G/S R P/A S)中所示之序列；VLCDR3包含SEQ ID NO：41(G/S S/I/V S/F/Y/T D/G/A/Q R/P/-T/-P/Q/D/G Y/R/H/N T/N G/Y V/I/L)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列。
該序列一致性為至少約85%序列一致性且因此可為至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致性。較佳地，該序列一致性為至少90%或至少95%。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：42(SNSVG)、SEQ ID NO：17(SNAVG)、SEQ ID NO：44(SYYVG)或SEQ ID NO：45(TNSVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：46(GIDTDGEEGYNPALNS)、SEQ ID NO：47(SVDSDGYTYYNPALKS)、SEQ ID NO：48(GIDSDGEEGYNPALNS)、SEQ ID NO：49(GIDSDGEEGYNPALKS)、SEQ ID NO：50(SVDSDGDTYYNPALKS)、SEQ ID NO：51(GIDTDGEEGYNPALKS)、SEQ ID NO：52(NIYSTGRAFYNPALKS)或SEQ ID NO：53(GIDTDGEEGFNPVLKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：54(SYRADGLAYGYVQAIDY)、SEQ ID NO：55(SYRTDGLAYGYVQAIDY)、SEQ ID NO：56(SVNGHPDVYYIDR)、SEQ ID NO：57(TYRTDGYAYGYVQAIDY)、SEQ ID NO：58(SYRSDGLAYGYVQAIDY)、SEQ ID NO：59(SANGHPDVYYIDK)、SEQ ID NO：60(TYRTDGFAYGYVQAIDY)、SEQ ID NO：61(SYRTDGLAYGYVQAIEY)或SEQ ID NO：265(GSYYHGGGNGMVDFFDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：63(SGSFIGISSVG)；SEQ ID NO：64(SGSYISSSRVG)；SEQ ID NO：65(SGSDLGSSRVG)；SEQ ID NO：66(SGSYIGSSAVG)；SEQ ID NO：67(SGRFIGISSVG)；SEQ ID NO：68(SGSYIGSSGVG)；或SEQ ID NO：69(SGSYVSRSRVG)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：70(ASDGRPS)；SEQ ID NO：71(DSSSRPS)；或SEQ ID NO：72(AATSRAS)中所示之序列；VLCDR3包含SEQ ID NO：73(GSSDRTPYTGV)；SEQ ID NO：74(GSSDRTQYTGV)；SEQ ID NO：75(GVFGDRNYI)；SEQ ID NO：76(GIFGDRNYI)；SEQ ID NO：77(GSTAPTPHTGV)；SEQ ID NO：78(SSYQRGNTGV)；SEQ ID NO：79(GSSDRTQYTGL)；或SEQ ID NO：80(GIYGDRNYI)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基367至379之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：42(SNSVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：46(GIDTDGEEGYNPALNS)中所示之序列； VHCDR3包含SEQ ID NO：54(SYRADGLAYGYVQAIDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：63(SGSFIGISSVG)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：70(ASDGRPS)中所示之序列；VLCDR3包含SEQ ID NO：73(GSSDRTPYTGV)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基367至379之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之CDR具有100%一致性之CDR的特異性結合分子在本文中稱為「S1G2」。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：42(SNSVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：46(GIDTDGEEGYNPALNS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：54(SYRADGLAYGYVQAIDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：63(SGSFIGISSVG)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：70(ASDGRPS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：73(GSSDRTPYTGV)中所示之序列。
該特異性結合分子可包含構架區(FR)VHFR1、VHFR2、VHFR3、VHFR4、VLFR1、VLFR2、VLFR3及VLFR4，其中該等FR各自包含以下胺基酸序列：VHFR1包含SEQ ID NO：447(QVQLQESGPSLVKPSQTLSLTCTVSGFSLT)中所示之序列；VHFR2包含SEQ ID NO：448(WVRQAPGKAPEWVA)中所示之序列； VHFR3包含SEQ ID NO：449(RLSITRDTSKSQVSLSLSSVTSEDTAVYYCGR)中所示之序列；VHFR4包含SEQ ID NO：450(WGPGLLVTVSS)中所示之序列；VLFR1包含SEQ ID NO：451(QAVVTQPSSVSGSLGQRVSITC)中所示之序列；VLFR2包含SEQ ID NO：452(WFQQLPGSGLRTIIV)中所示之序列；VLFR3包含SEQ ID NO：453(GVPDRFSMSKSGNTATLTISSLQAEDEADYFC)中所示之序列；VLFR4包含SEQ ID NO：454(FGSGTRLTVLG)中所示之序列；或對於各FR序列，(i)與該序列具有至少50%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸取代的胺基酸序列。
該特異性結合分子可包含構架區(FR)VHFR1、VHFR2、VHFR3、VHFR4、VLFR1、VLFR2、VLFR3及VLFR4，其中該等FR各自包含以下胺基酸序列：VHFR1包含SEQ ID NO：447(QVQLQESGPSLVKPSQTLSLTCTVSGFSLT)中所示之序列；VHFR2包含SEQ ID NO：448(WVRQAPGKAPEWVA)中所示之序列；VHFR3包含SEQ ID NO：449(RLSITRDTSKSQVSLSLSSVTSEDTAVYYCGR)中所示之序列；VHFR4包含SEQ ID NO：450(WGPGLLVTVSS)中所示之序列；VLFR1包含SEQ ID NO：451(QAVVTQPSSVSGSLGQRVSITC)中所示之序列； VLFR2包含SEQ ID NO：452(WFQQLPGSGLRTIIV)中所示之序列；VLFR3包含SEQ ID NO：453(GVPDRFSMSKSGNTATLTISSLQAEDEADYFC)中所示之序列；VLFR4包含SEQ ID NO：454(FGSGTRLTVLG)中所示之序列；或對於各FR序列，(i)與該序列具有至少50%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基367至379之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之FR具有100%一致性之FR的特異性結合分子在本文中稱為「S1G2」。
該特異性結合分子可包含：(a)構架區(FR)VHFR1、VHFR2、VHFR3、VHFR4、VLFR1、VLFR2、VLFR3及VLFR4，其中該等FR各自包含以下胺基酸序列：VHFR1包含SEQ ID NO：447(QVQLQESGPSLVKPSQTLSLTCTVSGFSLT)中所示之序列；VHFR2包含SEQ ID NO：448(WVRQAPGKAPEWVA)中所示之序列；VHFR3包含SEQ ID NO：449(RLSITRDTSKSQVSLSLSSVTSEDTAVYYCGR)中所示之序列；VHFR4包含SEQ ID NO：450(WGPGLLVTVSS)中所示之序列；VLFR1包含SEQ ID NO：451(QAVVTQPSSVSGSLGQRVSITC)中所示之序列；VLFR2包含SEQ ID NO：452(WFQQLPGSGLRTIIV)中所示之序列；VLFR3包含SEQ ID NO：453 (GVPDRFSMSKSGNTATLTISSLQAEDEADYFC)中所示之序列；VLFR4包含SEQ ID NO：454(FGSGTRLTVLG)中所示之序列；或對於各FR序列，(i)與該序列具有至少50%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸取代的胺基酸序列；及(b)CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：42(SNSVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：46(GIDTDGEEGYNPALNS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：54(SYRADGLAYGYVQAIDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：63(SGSFIGISSVG)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：70(ASDGRPS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：73(GSSDRTPYTGV)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列
其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基367至379之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之FR及CDR具有100%一致性之FR及CDR的特異性結合分子在本文中稱為「S1G2」。
該特異性結合分子可包含：(a)構架區(FR)VHFR1、VHFR2、VHFR3、VHFR4、VLFR1、VLFR2、VLFR3及VLFR4，其中該等FR各自包含以下胺基酸序列：VHFR1包含SEQ ID NO：447(QVQLQESGPSLVKPSQTLSLTCTVSGFSLT) 中所示之序列；VHFR2包含SEQ ID NO：448(WVRQAPGKAPEWVA)中所示之序列；VHFR3包含SEQ ID NO：449(RLSITRDTSKSQVSLSLSSVTSEDTAVYYCGR)中所示之序列；VHFR4包含SEQ ID NO：450(WGPGLLVTVSS)中所示之序列；VLFR1包含SEQ ID NO：451(QAVVTQPSSVSGSLGQRVSITC)中所示之序列；VLFR2包含SEQ ID NO：452(WFQQLPGSGLRTIIV)中所示之序列；VLFR3包含SEQ ID NO：453(GVPDRFSMSKSGNTATLTISSLQAEDEADYFC)中所示之序列；VLFR4包含SEQ ID NO：454(FGSGTRLTVLG)中所示之序列；或對於各FR序列，(i)與該序列具有至少50%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸取代的胺基酸序列；及(b)CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：42(SNSVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：46(GIDTDGEEGYNPALNS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：54(SYRADGLAYGYVQAIDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：63(SGSFIGISSVG)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：70(ASDGRPS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：73(GSSDRTPYTGV)中所示之序列。
其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基367至379之胺基 酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之FR及CDR具有100%一致性之FR及CDR的特異性結合分子在本文中稱為「S1G2」。
該特異性結合分子可包含：(a)包含SEQ ID NO：455(QVQLQESGPSLVKPSQTLSLTCTVSGFSLTSNSVGWVRQAPGKAPEWVAGIDTDGEEGYNPALNSRLSITRDTSKSQVSLSLSSVTSEDTAVYYCGRSYRADGLAYGYVQAIDYWGPGLLVTVSS)中所示之序列的VH域；及/或(b)包含SEQ ID NO：456(QAVVTQPSSVSGSLGQRVSITCSGSFIGISSVGWFQQLPGSGLRTIIVASDGRPSGVPDRFSMSKSGNTATLTISSLQAEDEADYFCGSSDRTPYTGVFGSGTRLTVLG)中所示之序列的VL域；或其人源化變異體。
該特異性結合分子可包含：(a)包含SEQ ID NO：457(QVQLQESGPSLVKPSQTLSLTCTVSGFSLTSNSVGWVRQAPGKAPEWVAGIDTDGEEGYNPALNSRLSITRDTSKSQVSLSLSSVTSEDTAVYYCGRSYRADGLAYGYVQAIDYWGPGLLVTVSSAKTTAPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITCNVAHPASSTKVDKKIEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK)中所示之序列的重鏈；及/或((i))包含SEQ ID NO：458(QAVVTQPSSVSGSLGQRVSITCSGSFIGISSVGWFQQLPGSGLRTIIVASDGRPSGVPDRFSMSKSGNTATLTISSLQAEDEADY FCGSSDRTPYTGVFGSGTRLTVLGGQPKSSPSVTLFPPSSEELETNKATLVCTITDFYPGVVTVDWKVDGTPVTQGMETTQPSKQSNNKYMASSYLTLTARAWERHSSYSCQVTHEGHTVEKSLSRADCS)中所示之序列的輕鏈；或其人源化變異體。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：42(SNSVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：46(GIDTDGEEGYNPALNS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：55(SYRTDGLAYGYVQAIDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：63(SGSFIGISSVG)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：70(ASDGRPS)中所示之序列；VLCDR3包含SEQ ID NO：74(GSSDRTQYTGV)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基367至379之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之CDR具有100%一致性之CDR的特異性結合分子在本文中稱為「S1B1」。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：42(SNSVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：46(GIDTDGEEGYNPALNS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：55(SYRTDGLAYGYVQAIDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：63(SGSFIGISSVG)中所示之序列； VLCDR2包含SEQ ID NO：70(ASDGRPS)中所示之序列；VLCDR3包含SEQ ID NO：74(GSSDRTQYTGV)中所示之序列。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：42(SNSVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：48(GIDSDGEEGYNPALNS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：57(TYRTDGYAYGYVQAIDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：63(SGSFIGISSVG)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：70(ASDGRPS)中所示之序列；VLCDR3包含SEQ ID NO：74(GSSDRTQYTGV)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基367至379之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之CDR具有100%一致性之CDR的特異性結合分子在本文中稱為「S1D9」。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：42(SNSVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：48(GIDSDGEEGYNPALNS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：57(TYRTDGYAYGYVQAIDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：63(SGSFIGISSVG)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：70(ASDGRPS)中所示之序列；VLCDR3包含SEQ ID NO：74(GSSDRTQYTGV)中所示之序列。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：42(SNSVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：46(GIDTDGEEGYNPALNS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：54(SYRADGLAYGYVQAIDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：63(SGSFIGISSVG)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：70(ASDGRPS)中所示之序列；VLCDR3包含SEQ ID NO：74(GSSDRTQYTGV)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基367至379之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之CDR具有100%一致性之CDR的特異性結合分子在本文中稱為「S1F4」。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：42(SNSVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：46(GIDTDGEEGYNPALNS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：54(SYRADGLAYGYVQAIDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：63(SGSFIGISSVG)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：70(ASDGRPS)中所示之序列；VLCDR3包含SEQ ID NO：74(GSSDRTQYTGV)中所示之序列。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列： VHCDR1包含SEQ ID NO：42(SNSVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：46(GIDTDGEEGYNPALNS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：54(SYRADGLAYGYVQAIDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：63(SGSFIGISSVG)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：70(ASDGRPS)中所示之序列；VLCDR3包含SEQ ID NO：74(GSSDRTQYTGV)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基367至379之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之CDR具有100%一致性之CDR的特異性結合分子在本文中稱為「S1G10」。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：42(SNSVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：46(GIDTDGEEGYNPALNS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：54(SYRADGLAYGYVQAIDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：63(SGSFIGISSVG)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：70(ASDGRPS)中所示之序列；VLCDR3包含SEQ ID NO：74(GSSDRTQYTGV)中所示之序列。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：42(SNSVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：51(GIDTDGEEGYNPALKS)中所示之序列； VHCDR3包含SEQ ID NO：60(TYRTDGFAYGYVQAIDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：63(SGSFIGISSVG)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：70(ASDGRPS)中所示之序列；VLCDR3包含SEQ ID NO：74(GSSDRTQYTGV)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基367至379之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之CDR具有100%一致性之CDR的特異性結合分子在本文中稱為「S2C6」。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：42(SNSVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：51(GIDTDGEEGYNPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：60(TYRTDGFAYGYVQAIDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：63(SGSFIGISSVG)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：70(ASDGRPS)中所示之序列；VLCDR3包含SEQ ID NO：74(GSSDRTQYTGV)中所示之序列。
該特異性結合分子可包含下表2中所闡明之殖株的CDR序列。該抗原決定基可在SEQ ID NO：1之殘基367至379內。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含表2中所示之VHCDR1胺基酸序列；VHCDR2包含表2中所示之VHCDR2胺基酸序列；VHCDR3包含表2中所示之VHCDR3胺基酸序列；VLCDR1包含表2中所示之VLCDR1胺基酸序列；VLCDR2包含表2中所示之VLCDR2胺基酸序列；且VLCDR3包含表2中所示之VLCDR3胺基酸序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基367至379之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。
該特異性結合分子可以小於約500pM之KD結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基367至379之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。KD可小於約400pM、小於約300pM或小於約200pM。KD可較佳地為結合至SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：5之KD。結合至SEQ ID NO：1之KD可為約100pM至約200pM。結合至SEQ ID NO：1之KD可為約140pM或170pM，視需要其中該特異性結合分子包含S1G2之CDR。結合至SEQ ID NO：5之KD可為約400pM至約500pM。結合至SEQ ID NO：5之KD可為約447pM，視需要其中該特異性結合分子包含S1G2之CDR。
該特異性結合分子可包含與SEQ ID NO：81具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基367至379之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。該特異性結合分子之CDR可與SEQ ID NO：81之CDR至少85%、 至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致。該等CDR可與SEQ ID NO：81之CDR具有100%一致性。該特異性結合分子可包含與SEQ ID NO：81具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列，其中CDR與SEQ ID NO：81之CDR具有100%一致性。該特異性結合分子可包含SEQ ID NO：81之胺基酸序列。
SEQ ID NO：81(S1G2胺基酸序列)
該特異性結合分子可包含與SEQ ID NO：412具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基367至379之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。該特異性結合分子之CDR可與SEQ ID NO：412之CDR至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致。該等CDR可與SEQ ID NO：412之CDR具有100%一致性。該特異性結合分子可包含與SEQ ID NO：412具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列，其中CDR與SEQ ID NO：412之CDR具有100%一致性。該特異性結合分子可包含SEQ ID NO：412之胺基酸序列。
SEQ ID NO：412(S1B1胺基酸序列)
該特異性結合分子可包含與SEQ ID NO：413具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列，其中該特 異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基367至379之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。該特異性結合分子之CDR可與SEQ ID NO：413之CDR至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致。該等CDR可與SEQ ID NO：413之CDR具有100%一致性。該特異性結合分子可包含與SEQ ID NO：413具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列，其中CDR與SEQ ID NO：413之CDR具有100%一致性。該特異性結合分子可包含SEQ ID NO：413之胺基酸序列。
SEQ ID NO：413(S1D9胺基酸序列)
該特異性結合分子可包含與SEQ ID NO：414具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基367至379之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。該特異性結合分子之CDR可與SEQ ID NO：414之CDR至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致。該等CDR可與SEQ ID NO：414之CDR具有100%一致性。該特異性結合分子可包含與SEQ ID NO：414具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列，其中CDR與SEQ ID NO：414之CDR具有100%一致性。該特異性結合分子可包含SEQ ID NO：414之胺基酸序列。
SEQ ID NO：414(S1F4胺基酸序列)
該特異性結合分子可包含與SEQ ID NO：415具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基367至379之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。該特異性結合分子之CDR可與SEQ ID NO：415之CDR至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致。該等CDR可與SEQ ID NO：415之CDR具有100%一致性。該特異性結合分子可包含與SEQ ID NO：415具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列，其中CDR與SEQ ID NO：415之CDR具有100%一致性。該特異性結合分子可包含SEQ ID NO：415之胺基酸序列。
SEQ ID NO：415(S1G10胺基酸序列)
該特異性結合分子可包含與SEQ ID NO：416具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基367至379之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。該特異性結合分子之CDR可與SEQ ID NO：416之CDR至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致。該等CDR可與SEQ ID NO：416之CDR具有100%一致性。該特異性結合分子可包含與SEQ ID NO：416具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列，其中CDR與SEQ ID NO：416之CDR具有100%一致性。該特異性結合分子可包含SEQ ID NO：416之胺基酸序列。
SEQ ID NO：416(S2C6胺基酸序列)
該特異性結合分子之抗原決定基可在包含SEQ ID NO：1之殘基337至368的胺基酸序列內。因此，該抗原決定基可在SEQ ID NO：82之胺基酸序列(VEVKSEKLDFKDRVQSKIGSLDNITHVPGGGN)內。
該抗原決定基可在包含SEQ ID NO：1之殘基337至368的胺基酸序列內。此抗原決定基可被本文中稱為「NS2A3」之特異性結合分子的CDR結合。
該抗原決定基可包含SEQ ID NO：82之胺基酸序列(VEVKSEKLDFKDRVQSKIGSLDNITHVPGGGN)。該抗原決定基可包含與SEQ ID NO：82(VEVKSEKLDFKDRVQSKIGSLDNITHVPGGGN)具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列。
該抗原決定基可由SEQ ID NO：82之胺基酸序列(VEVKSEKLDFKDRVQSKIGSLDNITHVPGGGN)組成。該抗原決定基可由與SEQ ID NO：82(VEVKSEKLDFKDRVQSKIGSLDNITHVPGGGN)具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列組成。
該特異性結合分子可結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基337至368之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：83(S Y S V Y)中所示之序列VHCDR2包含SEQ ID NO：84(I M Y A S G R V D Y N P A L K S)中所示之序列VHCDR3包含SEQ ID NO：85(G I E N/D)中所示之序列 VLCDR1包含SEQ ID NO：86(R T S/N Q/E S/N V/I N/G/D N/S Y/G L S/A)中所示之序列VLCDR2包含SEQ ID NO：87(Y A T Y L Y/H T)中所示之序列VLCDR3包含SEQ ID NO：88(L Q Y D/G/E S/T T P L A/T)中所示之序列或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列。
該序列一致性為至少約85%序列一致性且因此可為至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致性。較佳地，該序列一致性為至少90%或至少95%。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：83(SYSVY)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：84(IMYASGRVDYNPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：89(GIEN)或SEQ ID NO：90(GIED)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：91(RTSQSVNNYLS)、SEQ ID NO：92(RTNESVGNYLS)、SEQ ID NO：93(RTSQNIDNGLA)或SEQ ID NO 94(RTSQSVGSYLS)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：95(YATRLYT)或SEQ ID NO：96(YATRLHT)中所示之序列；VLCDR3包含SEQ ID NO：97(LQYDSTPLA)、SEQ ID NO：98(LQYDSTPLT)、SEQ ID NO：99(LQYESTPLA)或SEQ ID NO：100 (LQYGTTPLA)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基337至368之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：83(SYSVY)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：84(IMYASGRVDYNPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：89(GIEN)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：91(RTSQSVNNYLS)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：95(YATRLYT)中所示之序列；VLCDR3包含SEQ ID NO：97(LQYDSTPLA)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基337至368之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之CDR具有100%一致性之CDR的特異性結合分子在本文中稱為「NS2A3」。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：83(SYSVY)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：84(IMYASGRVDYNPALKS)中所示之序列； VHCDR3包含SEQ ID NO：89(GIEN)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：91(RTSQSVNNYLS)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：95(YATRLYT)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：97(LQYDSTPLA)中所示之序列。
該特異性結合分子可包含下表3中所闡明之殖株的CDR序列。該抗原決定基可在SEQ ID NO：1之殘基337至368內。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含表3中所示之VHCDR1胺基酸序列；VHCDR2包含表3中所示之VHCDR2胺基酸序列；VHCDR3包含表3中所示之VHCDR3胺基酸序列；VLCDR1包含表3中所示之VLCDR1胺基酸序列；VLCDR2包含表3中所示之VLCDR2胺基酸序列；且VLCDR3包含表3中所示之VLCDR3胺基酸序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基337至368之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。
該特異性結合分子可以小於25nM、較佳地小於20nM、15nM或10nM之KD結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基337至368之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。KD可較佳地為結合至SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：5之KD。
該特異性結合分子之抗原決定基可在包含SEQ ID NO：1之殘基369至390的胺基酸序列內。因此，該抗原決定基可在SEQ ID NO：101之胺基酸序列(KKIETHKLTFRENAKAKTDHGA)內。
該抗原決定基可在包含SEQ ID NO：1之殘基369至390的胺基酸序列內。此抗原決定基可被本文中稱為「NS4E3」之特異性結合分子的CDR結合。
該抗原決定基可包含SEQ ID NO：101之胺基酸序列(KKIETHKLTFRENAKAKTDHGA)。該抗原決定基可包含與SEQ ID NO：101(KKIETHKLTFRENAKAKTDHGA)具有至少70%、至少75%、至少80%、至少 90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列。
該抗原決定基可由SEQ ID NO：101之胺基酸序列(KKIETHKLTFRENAKAKTDHGA)組成。該抗原決定基可由與SEQ ID NO：101(KKIETHKLTFRENAKAKTDHGA)具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列組成。
該特異性結合分子可結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基369至390之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。該特異性結合分子可包含CDR VLCDR1、VLCDR2、VLCDR3、VHCDR1、VHCDR2及VHCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：102(R E S I A)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：103(G V G I D G T S Y Y S P A L K S)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：104(N Y I D F E Y)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：105(S G S S/N/Y S/N/-N/-V/-G/I Y/S/A/G E/G/S D/N/T Y/G/D V N/S/G)中所示之序列VLCDR2包含SEQ ID NO：106(G/R T/N/S T/S N/T/R R P/A S)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：107(L/A/G S Y D R/T/G/S S/T G/N S/R/-N/G/S/I F/I/V)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列。
該序列一致性為至少約85%序列一致性且因此可為至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少 93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致性。較佳地，該序列一致性為至少90%或至少95%。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：102(RESIA)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：103(GVGIDGTSYYSPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：104(NYIDFEY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：108(SGSSSNVGYEDYVN)、SEQ ID NO：109(SGSNIAGNGVG)、SEQ ID NO：110(SGSSNNVGSGDYVS)或SEQ ID NO：111(SGSYIGSTDVG)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：112(GTTNRPS)、SEQ ID NO：113(GSTRRPS)、SEQ ID NO：114(RNSNRPS)或SEQ ID NO：115(RTTTRAS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：116(LSYDRSGSNF)、SEQ ID NO：117(ASYDTSNRGI)、SEQ ID NO：118(GSYDGTNSF)或SEQ ID NO：119(ASYDSNNSIV)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基369至390之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：102(RESIA)中所示之序列； VHCDR2包含SEQ ID NO：103(GVGIDGTSYYSPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：104(NYIDFEY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：108(SGSSSNVGYEDYVN)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：112(GTTNRPS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：116(LSYDRSGSNF)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基369至390之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之CDR具有100%一致性之CDR的特異性結合分子在本文中稱為「NS4E4」。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：102(RESIA)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：103(GVGIDGTSYYSPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：104(NYIDFEY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：108(SGSSSNVGYEDYVN)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：112(GTTNRPS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：116(LSYDRSGSNF)中所示之序列。
該特異性結合分子可包含下表4中所闡明之殖株的CDR序列。該抗原決定基可在SEQ ID NO：1之殘基369至390內。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含表4中所示之VHCDR1胺基酸序列；VHCDR2包含表4中所示之VHCDR2胺基酸序列；VHCDR3包含表4中所示之VHCDR3胺基酸序列；VLCDR1包含表4中所示之VLCDR1胺基酸序列；VLCDR2包含表4中所示之VLCDR2胺基酸序列；且VLCDR3包含表4中所示之VLCDR3胺基酸序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基369至390之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。
該特異性結合分子可以小於25nM、較佳地小於20nM、15nM或10nM之KD結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基369至390之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。KD可較佳地為結合至SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：5之KD。
該特異性結合分子之抗原決定基可在包含SEQ ID NO：1之殘基412至441的胺基酸序列內。因此，該抗原決定基可在SEQ ID NO：120之胺基酸序列(SSTGSIDMVDSPQLATLADEVSASLAKQGL)內。
該抗原決定基可在包含SEQ ID NO：1之殘基412至441的胺基酸序列內。此抗原決定基可被本文中稱為「412E10」之特異性結合分子的CDR結合。
該抗原決定基可包含SEQ ID NO：120之胺基酸序列(SSTGSIDMVDSPQLATLADEVSASLAKQGL)。該抗原決定基可包含與SEQ ID NO：120(SSTGSIDMVDSPQLATLADEVSASLAKQGL)具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列。
該抗原決定基可由SEQ ID NO：120之胺基酸序列(SSTGSIDMVDSPQLATLADEVSASLAKQGL)組成。該抗原決定基可由與SEQ ID NO：120(SSTGSIDMVDSPQLATLADEVSASLAKQGL)具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列組成。
該特異性結合分子可結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基412至441之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。該特異性結合分子可包含CDR VLCDR1、VLCDR2、VLCDR3、VHCDR1、VHCDR2及VHCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：121(S/N D/Y S/G/A V/L A/G)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：122(A/N S/I G/Y/W S/R S/G G N/S/R K/T/I Y/E Y N P A L K S)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：123(G I/G I/V A/G G/S V D V)或SEQ ID NO：124(SGGD)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：125(S G S/G S/N N V/I G Y/R G N/D/T Y/F V G/D)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：126(G T/A A/D/T I/S/R R A/P S/P)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：127(A S/T Y Q/D S/Y/R N/S Y/D/N/E A/G/D/S-/G/M/V-/I F/V/I)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列。
該序列一致性為至少約85%序列一致性且因此可為至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致性。較佳地，該序列一致性為至少90%或至少95%。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：128(SDSVA)、SEQ ID NO：129(NYGVG)或SEQ ID NO：130(SYALG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：131(ASGSSGNKYYNPALKS)、SEQ ID NO：132(NIWRGGRIEYNPALKS)或SEQ ID NO：133(NIYSGGSTYYNPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：134(GIIAGVDV)、SEQ ID NO：135(GGVGSVDV)或SEQ ID NO：124(SGGD)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：39(SGSSSNVGYGNYVG)、SEQ ID NO：137(SGGRNNIGRGTFVD)及SEQ ID NO：138(SGSSSNVGYGDYVG)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：139(GTAIRAS)、SEQ ID NO：140(GAASRAS)、SEQ ID NO：141(GATSRAS)或SEQ ID NO：142(GTDRRPP)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：143(ASYQSNYAF)、SEQ ID NO：144(ASYDRSESVV)、SEQ ID NO：145(ASYDSSDGGV)或SEQ ID NO 146(ATYDYSNDMII)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或 (ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基412至441之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：128(SDSVA)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：131(ASGSSGNKYYNPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：134(GIIAGVDV)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：39(SGSSSNVGYGNYVG)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：139(GTAIRAS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：143(ASYQSNYAF)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基412至441之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之CDR具有100%一致性之CDR的特異性結合分子在本文中稱為「412E10」。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：128(SDSVA)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：131(ASGSSGNKYYNPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：134(GIIAGVDV)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：39(SGSSSNVGYGNYVG)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：139(GTAIRAS)中所示之序列；且 VLCDR3包含SEQ ID NO：143(ASYQSNYAF)中所示之序列。
該特異性結合分子可包含構架區(FR)VHFR1、VHFR2、VHFR3、VHFR4、VLFR1、VLFR2、VLFR3及VLFR4，其中該等FR各自包含以下胺基酸序列：VHFR1包含SEQ ID NO：459(QVQLQESGPSLVKPSQTLSLTCTVSGFSVI)中所示之序列；VHFR2包含SEQ ID NO：460(WVRQAPGKVPEWLG)中所示之序列；VHFR3包含SEQ ID NO：461(RLSITRDTSKSQVSLSLSSVTTEDTAVYYCAR)中所示之序列；VHFR4包含SEQ ID NO：462(WGRGLLVTVSS)中所示之序列；VLFR1包含SEQ ID NO：463(QAVLTQPSSVSGSLGQRVSITC)中所示之序列；VLFR2包含SEQ ID NO：464(WYQQVPGSAPKLLIY)中所示之序列；VLFR3包含SEQ ID NO：465(GVPDRFSGSRSGDTATLTITSLQAEDEADYYC)中所示之序列；VLFR4包含SEQ ID NO：466(FGSGTRLTVLG)中所示之序列；或對於各FR序列，(i)與該序列具有至少50%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸取代的胺基酸序列。
該特異性結合分子可包含構架區(FR)VHFR1、VHFR2、VHFR3、VHFR4、VLFR1、VLFR2、VLFR3及VLFR4，其中該等FR各自包含以下胺基酸序列：VHFR1包含SEQ ID NO：459(QVQLQESGPSLVKPSQTLSLTCTVSGFSVI) 中所示之序列；VHFR2包含SEQ ID NO：460(WVRQAPGKVPEWLG)中所示之序列；VHFR3包含SEQ ID NO：461(RLSITRDTSKSQVSLSLSSVTTEDTAVYYCAR)中所示之序列；VHFR4包含SEQ ID NO：462(WGRGLLVTVSS)中所示之序列；VLFR1包含SEQ ID NO：463(QAVLTQPSSVSGSLGQRVSITC)中所示之序列；VLFR2包含SEQ ID NO：464(WYQQVPGSAPKLLIY)中所示之序列；VLFR3包含SEQ ID NO：465(GVPDRFSGSRSGDTATLTITSLQAEDEADYYC)中所示之序列；VLFR4包含SEQ ID NO：466(FGSGTRLTVLG)中所示之序列；或對於各FR序列，(i)與該序列具有至少50%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基412至441之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之FR具有100%一致性之FR的特異性結合分子在本文中稱為「412E10」。
該特異性結合分子可包含：(a)構架區(FR)VHFR1、VHFR2、VHFR3、VHFR4、VLFR1、VLFR2、VLFR3及VLFR4，其中該等FR各自包含以下胺基酸序列：VHFR1包含SEQ ID NO：459(QVQLQESGPSLVKPSQTLSLTCTVSGFSVI)中所示之序列；VHFR2包含SEQ ID NO：460(WVRQAPGKVPEWLG)中所示之序列； VHFR3包含SEQ ID NO：461(RLSITRDTSKSQVSLSLSSVTTEDTAVYYCAR)中所示之序列；VHFR4包含SEQ ID NO：462(WGRGLLVTVSS)中所示之序列；VLFR1包含SEQ ID NO：463(QAVLTQPSSVSGSLGQRVSITC)中所示之序列；VLFR2包含SEQ ID NO：464(WYQQVPGSAPKLLIY)中所示之序列；VLFR3包含SEQ ID NO：465(GVPDRFSGSRSGDTATLTITSLQAEDEADYYC)中所示之序列；VLFR4包含SEQ ID NO：466(FGSGTRLTVLG)中所示之序列；或對於各FR序列，(i)與該序列具有至少50%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸取代的胺基酸序列；及(b)CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：128(SDSVA)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：131(ASGSSGNKYYNPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：134(GIIAGVDV)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：39(SGSSSNVGYGNYVG)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：139(GTAIRAS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：143(ASYQSNYAF)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列， 其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基412至441之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之FR及CDR具有100%一致性之FR及CDR的特異性結合分子在本文中稱為「412E10」。
該特異性結合分子可包含：(a)構架區(FR)VHFR1、VHFR2、VHFR3、VHFR4、VLFR1、VLFR2、VLFR3及VLFR4，其中該等FR各自包含以下胺基酸序列：VHFR1包含SEQ ID NO：459(QVQLQESGPSLVKPSQTLSLTCTVSGFSVI)中所示之序列；VHFR2包含SEQ ID NO：460(WVRQAPGKVPEWLG)中所示之序列；VHFR3包含SEQ ID NO：461(RLSITRDTSKSQVSLSLSSVTTEDTAVYYCAR)中所示之序列；VHFR4包含SEQ ID NO：462(WGRGLLVTVSS)中所示之序列；VLFR1包含SEQ ID NO：463(QAVLTQPSSVSGSLGQRVSITC)中所示之序列；VLFR2包含SEQ ID NO：464(WYQQVPGSAPKLLIY)中所示之序列；VLFR3包含SEQ ID NO：465(GVPDRFSGSRSGDTATLTITSLQAEDEADYYC)中所示之序列；VLFR4包含SEQ ID NO：466(FGSGTRLTVLG)中所示之序列；或對於各FR序列，(i)與該序列具有至少50%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸取代的胺基酸序列；及(b)CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列： VHCDR1包含SEQ ID NO：128(SDSVA)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：131(ASGSSGNKYYNPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：134(GIIAGVDV)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：39(SGSSSNVGYGNYVG)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：139(GTAIRAS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：143(ASYQSNYAF)中所示之序列；其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基412至441之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之FR及CDR具有100%一致性之FR及CDR的特異性結合分子在本文中稱為「412E10」。
該特異性結合分子可包含：(a)包含SEQ ID NO：467(QVQLQESGPSLVKPSQTLSLTCTVSGFSVISDSVAWVRQAPGKVPEWLGASGSSGNKYYNPALKSRLSITRDTSKSQVSLSLSSVTTEDTAVYYCARGIIAGVDVWGRGLLVTVSS)中所示之序列的VH域；及/或(b)包含SEQ ID NO：468(QAVLTQPSSVSGSLGQRVSITCSGSSSNVGYGNYVGWYQQVPGSAPKLLIYGTAIRASGVPDRFSGSRSGDTATLTITSLQAEDEADYYCASYQSNYAFFGSGTRLTVLG)中所示之序列的VL域；或其人源化變異體。
該特異性結合分子可包含：(a)包含SEQ ID NO：469(QVQLQESGPSLVKPSQTLSLTCTVSGFSVISDSVAWVRQAPGKVPEWLGASGSSGNKYYNPALKSRLSITRDTSKSQVSLSLSSVTTEDTAVYYCARGIIAGVDVWGRGLLVTVSSAKTTAPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITCNVAHPASSTKVDKKIEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYN STLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK)中所示之序列的重鏈；及/或(b)包含SEQ ID NO：470(QAVLTQPSSVSGSLGQRVSITCSGSSSNVGYGNYVGWYQQVPGSAPKLLIYGTAIRASGVPDRFSGSRSGDTATLTITSLQAEDEADYYCASYQSNYAFFGSGTRLTVLGGQPKSSPSVTLFPPSSEELETNKATLVCTITDFYPGVVTVDWKVDGTPVTQGMETTQPSKQSNNKYMASSYLTLTARAWERHSSYSCQVTHEGHTVEKSLSRADCS)中所示之序列的輕鏈；或其人源化變異體。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：128(SDSVA)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：131(ASGSSGNKYYNPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：134(GIIAGVDV)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：138(SGSSSNVGYGDYVG)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：140(GAASRAS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：145(ASYDSSDGGV)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基412至441之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之CDR具有100%一致性之CDR的特異性結合分子在本文中稱為「412B9」。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：128(SDSVA)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：131(ASGSSGNKYYNPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：134(GIIAGVDV)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：138(SGSSSNVGYGDYVG)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：140(GAASRAS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：145(ASYDSSDGGV)中所示之序列。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：129(NYGVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：133(NIYSGGSTYYNPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：135(GGVGSVDV)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：137(SGGRNNIGRGTFVD)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：142(GTDRRPP)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：146(ATYDYSNDMII)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基412至441之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之CDR具有100%一致性之CDR的特異性結合分子在本文中稱為「412E6」。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列： VHCDR1包含SEQ ID NO：129(NYGVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：133(NIYSGGSTYYNPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：135(GGVGSVDV)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：137(SGGRNNIGRGTFVD)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：142(GTDRRPP)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：146(ATYDYSNDMII)中所示之序列。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：130(SYALG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：132(NIWRGGRIEYNPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：124(SGGD)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：39(SGSSSNVGYGNYVG)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：141(GATSRAS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：144(ASYDRSESVV)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基412至441之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之CDR具有100%一致性之CDR的特異性結合分子在本文中稱為「412G11」。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：130(SYALG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：132(NIWRGGRIEYNPALKS)中所示之序列； VHCDR3包含SEQ ID NO：124(SGGD)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：39(SGSSSNVGYGNYVG)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：141(GATSRAS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：144(ASYDRSESVV)中所示之序列。
該特異性結合分子可包含下表5中所闡明之殖株的CDR序列。該抗原決定基可在SEQ ID NO：1之殘基412至441內。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含表5中所示之VHCDR1胺基酸序列；VHCDR2包含表5中所示之VHCDR2胺基酸序列；VHCDR3包含表5中所示之VHCDR3胺基酸序列；VLCDR1包含表5中所示之VLCDR1胺基酸序列；VLCDR2包含表5中所示之VLCDR2胺基酸序列；且VLCDR3包含表5中所示之VLCDR3胺基酸序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基412至441之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。
該特異性結合分子可以小於約25nM之KD結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基412至441之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。KD可小於約20nM、小於約15nM或小於約10nM。KD可較佳地為結合至SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：120之KD。結合至SEQ ID NO：1之KD可為約1nM至約10nM。結合至SEQ ID NO：1之KD可為約3.16nM或9.0nM，視需要其中該特異性結合分子包含412E10之CDR。
該特異性結合分子可包含與SEQ ID NO：147具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基412至441之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。該特異性結合分子之CDR可與SEQ ID NO：147之CDR至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至 少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致。該等CDR可與SEQ ID NO：147之CDR具有100%一致性。該特異性結合分子可包含與SEQ ID NO：147具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列，其中CDR與SEQ ID NO：147之CDR具有100%一致性。該特異性結合分子可包含SEQ ID NO：147之胺基酸序列。
SEQ ID NO：147(412E10胺基酸序列)
該特異性結合分子可包含與SEQ ID NO：417具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基412至441之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。該特異性結合分子之CDR可與SEQ ID NO：417之CDR至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致。該等CDR可與SEQ ID NO：417之CDR具有100%一致性。該特異性結合分子可包含與SEQ ID NO：417具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列，其中CDR與SEQ ID NO：417之CDR具有100%一致性。該特異性結合分子可包含SEQ ID NO：417之胺基酸序列。
SEQ ID NO：417(412B9胺基酸序列)
該特異性結合分子可包含與SEQ ID NO：418具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基412至441之胺基酸序列的多肽 或蛋白質分子。該特異性結合分子之CDR可與SEQ ID NO：418之CDR至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致。該等CDR可與SEQ ID NO：418之CDR具有100%一致性。該特異性結合分子可包含與SEQ ID NO：418具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列，其中CDR與SEQ ID NO：418之CDR具有100%一致性。該特異性結合分子可包含SEQ ID NO：418之胺基酸序列。
SEQ ID NO：418(412E6胺基酸序列)
該特異性結合分子可包含與SEQ ID NO：434具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基412至441之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。該特異性結合分子之CDR可與SEQ ID NO：434之CDR至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致。該等CDR可與SEQ ID NO：434之CDR具有100%一致性。該特異性結合分子可包含與SEQ ID NO：434具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列，其中CDR與SEQ ID NO：434之CDR具有100%一致性。該特異性結合分子可包含SEQ ID NO：434之胺基酸序列。
SEQ ID NO：434(412G11胺基酸序列)
該特異性結合分子之抗原決定基可在包含SEQ ID NO：1之殘基1 至49的胺基酸序列內。因此，該抗原決定基可在SEQ ID NO：148之胺基酸序列(MAEPRQEFEVMEDHAGTYGLGDRKDQGGYTMHQDQEGDTDAGLKESPLQ)內。較佳地，在包含SEQ ID NO：1之殘基1至49之胺基酸序列內的該特異性結合分子之抗原決定基可在包含SEQ ID NO：1之殘基1至15之胺基酸序列內。
該抗原決定基可在包含SEQ ID NO：1之殘基1至49的胺基酸序列內。此抗原決定基可被本文中稱為「3aG3」之特異性結合分子的CDR結合。
該抗原決定基可在包含SEQ ID NO：1之殘基1至49之胺基酸序列內，較佳地在包含SEQ ID NO：1之殘基1至15之胺基酸序列內。此抗原決定基可被本文中稱為「3bG4」之特異性結合分子的CDR結合。
該抗原決定基可包含SEQ ID NO：148之胺基酸序列(MAEPRQEFEVMEDHAGTYGLGDRKDQGGYTMHQDQEGDTDAGLKESPLQ)。該抗原決定基可包含與SEQ ID NO：148(MAEPRQEFEVMEDHAGTYGLGDRKD QGGYTMHQDQEGDTDAGLKESPLQ)具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列。
該抗原決定基可由SEQ ID NO：148之胺基酸序列(MAEPRQEFEVMEDHAGTYGLGDRKDQGGYTMHQDQEGDTDAGLKESPLQ)組成。該抗原決定基可由與SEQ ID NO：148(MAEPRQEFEVMEDHAGTYGLGD RKDQGGYTMHQDQEGDTDAGLKESPLQ)具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列組成。
該特異性結合分子可結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基1至49之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。該特異性結合分子可包含CDR VLCDR1、VLCDR2、VLCDR3、VHCDR1、VHCDR2及VHCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：149(S N G V G)中所示之序列； VHCDR2包含SEQ ID NO：150(D I S/A S S/V/G G K A/K/V Y A/S/G N/H P A L K S)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：151(CR D G G V S/T Y G Y D I/S D Y)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：152(S G S S/T S/G N I/V G G/S/Y G N/D Y/D L/V S/G)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：153(G A/V T S/N/E R/L A S)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：154(A/G S F/Y D T/S/D S/N S G G I/V)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列。
該序列一致性為至少約85%序列一致性且因此可為至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致性。較佳地，該序列一致性為至少90%或至少95%。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：149(SNGVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：155(DISSSGKAYANPALKS)、SEQ ID NO：156(DISSGGKVYGHPALKS)、SEQ ID NO：157(DISSVGKKYANPALKS)或SEQ ID NO：158(DIASSGKAYSNPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：159(CRDGGVSYGYDIDY)、SEQ ID NO：160(CRDGGVSYGYDSDY)或SEQ ID NO：161(CRDGGVTYGYDIDY)中所示之 序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：163(SGSSSNIGGGNYLS)、SEQ ID NO：138(SGSSSNVGYGDYVG)、SEQ ID NO：165(SGSSGNVGYGDYVS)或SEQ ID NO：166(SGSTSNVGSGNDVS)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：141(GATSRAS)、SEQ ID NO：168(GVTERAS)、SEQ ID NO：169(GATNLAS)或SEQ ID NO：170(GATNRAS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：171(ASFDTSSGGI)、SEQ ID NO：172(ASYDDSSGGI)、SEQ ID NO：173(ASYDSSSGGV)或SEQ ID NO：174(GSYDSNSGGI)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基1至49之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：149(SNGVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：155(DISSSGKAYANPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：159(CRDGGVSYGYDIDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：163(SGSSSNIGGGNYLS)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：141(GATSRAS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：171(ASFDTSSGGI)中所示之序列；或對於各CDR序列， (i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基1至49之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之CDR具有100%一致性之CDR的特異性結合分子在本文中稱為「3aG3」。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：149(SNGVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：155(DISSSGKAYANPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：159(CRDGGVSYGYDIDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：163(SGSSSNIGGGNYLS)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：141(GATSRAS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：171(ASFDTSSGGI)中所示之序列。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：149(SNGVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：156(DISSGGKVYGHPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：160(CRDGGVSYGYDSDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：138(SGSSSNVGYGDYVG)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：168(GVTERAS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：172(ASYDDSSGGI)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列， 其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基1至49之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之CDR具有100%一致性之CDR的特異性結合分子在本文中稱為「3aD3」。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：149(SNGVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：156(DISSGGKVYGHPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：160(CRDGGVSYGYDSDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：138(SGSSSNVGYGDYVG)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：168(GVTERAS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：172(ASYDDSSGGI)中所示之序列。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：149(SNGVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：157(DISSVGKKYANPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：161(CRDGGVTYGYDIDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：165(SGSSGNVGYGDYVS)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：169(GATNLAS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：173(ASYDSSSGGV)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基1至49之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之CDR具有100%一致性之CDR的特異 性結合分子在本文中稱為「3aH6」。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：149(SNGVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：157(DISSVGKKYANPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：161(CRDGGVTYGYDIDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：165(SGSSGNVGYGDYVS)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：169(GATNLAS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：173(ASYDSSSGGV)中所示之序列。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：149(SNGVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：158(DIASSGKAYSNPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：161(CRDGGVTYGYDIDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：166(SGSTSNVGSGNDVS)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：170(GATNRAS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：174(GSYDSNSGGI)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基1至49之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之CDR具有100%一致性之CDR的特異性結合分子在本文中稱為「3bG4」。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、 VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：149(SNGVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：158(DIASSGKAYSNPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：161(CRDGGVTYGYDIDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：166(SGSTSNVGSGNDVS)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：170(GATNRAS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：174(GSYDSNSGGI)中所示之序列。
該特異性結合分子可包含構架區(FR)VHFR1、VHFR2、VHFR3、VHFR4、VLFR1、VLFR2、VLFR3及VLFR4，其中該等FR各自包含以下胺基酸序列：VHFR1包含SEQ ID NO：471(QVQLQESGPSLVKPSQTLSLTCTISGFSLI)中所示之序列；VHFR2包含SEQ ID NO：472(WVRQAPGKVPEWVG)中所示之序列；VHFR3包含SEQ ID NO：473(RLSITRDTSKSQVSLSLRSVTTEDTAVYYCVR)中所示之序列；VHFR4包含SEQ ID NO：474(WGPGLLVTVSS)中所示之序列；VLFR1包含SEQ ID NO：475(QAVLTQPSSVSKSLGQSVSITC)中所示之序列；VLFR2包含SEQ ID NO：476(WFQQVPGSAPKLLFY)中所示之序列；VLFR3包含SEQ ID NO：477(GVPDRFSGSRSGNTATLTITSLQAEDEADYYC)中所示之序列；VLFR4包含SEQ ID NO：478(FGSGTRLTVLG)中所示之序列；或對於各FR序列，(i)與該序列具有至少50%一致性的胺基酸序列，及/或 (ii)相對於該序列具有一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸取代的胺基酸序列。
該特異性結合分子可包含構架區(FR)VHFR1、VHFR2、VHFR3、VHFR4、VLFR1、VLFR2、VLFR3及VLFR4，其中該等FR各自包含以下胺基酸序列：VHFR1包含SEQ ID NO：471(QVQLQESGPSLVKPSQTLSLTCTISGFSLI)中所示之序列；VHFR2包含SEQ ID NO：472(WVRQAPGKVPEWVG)中所示之序列；VHFR3包含SEQ ID NO：473(RLSITRDTSKSQVSLSLRSVTTEDTAVYYCVR)中所示之序列；VHFR4包含SEQ ID NO：474(WGPGLLVTVSS)中所示之序列；VLFR1包含SEQ ID NO：475(QAVLTQPSSVSKSLGQSVSITC)中所示之序列；VLFR2包含SEQ ID NO：476(WFQQVPGSAPKLLFY)中所示之序列；VLFR3包含SEQ ID NO：477(GVPDRFSGSRSGNTATLTITSLQAEDEADYYC)中所示之序列；VLFR4包含SEQ ID NO：478(FGSGTRLTVLG)中所示之序列；或對於各FR序列，(i)與該序列具有至少50%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基1至49之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之FR具有100%一致性之FR的特異性結合分子在本文中稱為「3bG4」。
該特異性結合分子可包含：(a)構架區(FR)VHFR1、VHFR2、VHFR3、VHFR4、VLFR1、VLFR2、VLFR3及VLFR4，其中該等FR各自包含以下胺基酸序列：VHFR1包含SEQ ID NO：471(QVQLQESGPSLVKPSQTLSLTCTISGFSLI)中所示之序列；VHFR2包含SEQ ID NO：472(WVRQAPGKVPEWVG)中所示之序列；VHFR3包含SEQ ID NO：473(RLSITRDTSKSQVSLSLRSVTTEDTAVYYCVR)中所示之序列；VHFR4包含SEQ ID NO：474(WGPGLLVTVSS)中所示之序列；VLFR1包含SEQ ID NO：475(QAVLTQPSSVSKSLGQSVSITC)中所示之序列；VLFR2包含SEQ ID NO：476(WFQQVPGSAPKLLFY)中所示之序列；VLFR3包含SEQ ID NO：477(GVPDRFSGSRSGNTATLTITSLQAEDEADYYC)中所示之序列；VLFR4包含SEQ ID NO：478(FGSGTRLTVLG)中所示之序列；或對於各FR序列，(i)與該序列具有至少50%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸取代的胺基酸序列；及(b)CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：149(SNGVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：158(DIASSGKAYSNPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：161(CRDGGVTYGYDIDY)中所示之序列； VLCDR1包含SEQ ID NO：166(SGSTSNVGSGNDVS)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：170(GATNRAS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：174(GSYDSNSGGI)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基1至49之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之FR及CDR具有100%一致性之FR及CDR的特異性結合分子在本文中稱為「3bG4」。
該特異性結合分子可包含：(a)構架區(FR)VHFR1、VHFR2、VHFR3、VHFR4、VLFR1、VLFR2、VLFR3及VLFR4，其中該等FR各自包含以下胺基酸序列：VHFR1包含SEQ ID NO：471(QVQLQESGPSLVKPSQTLSLTCTISGFSLI)中所示之序列；VHFR2包含SEQ ID NO：472(WVRQAPGKVPEWVG)中所示之序列；VHFR3包含SEQ ID NO：473(RLSITRDTSKSQVSLSLRSVTTEDTAVYYCVR)中所示之序列；VHFR4包含SEQ ID NO：474(WGPGLLVTVSS)中所示之序列；VLFR1包含SEQ ID NO：475(QAVLTQPSSVSKSLGQSVSITC)中所示之序列；VLFR2包含SEQ ID NO：476(WFQQVPGSAPKLLFY)中所示之序列；VLFR3包含SEQ ID NO：477(GVPDRFSGSRSGNTATLTITSLQAEDEADYYC)中所示之序列；VLFR4包含SEQ ID NO：478(FGSGTRLTVLG)中所示之序列； 或對於各FR序列，(i)與該序列具有至少50%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸取代的胺基酸序列；及(b)CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：149(SNGVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：158(DIASSGKAYSNPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：161(CRDGGVTYGYDIDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：166(SGSTSNVGSGNDVS)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：170(GATNRAS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：174(GSYDSNSGGI)中所示之序列；其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基1至49之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之FR及CDR具有100%一致性之FR及CDR的特異性結合分子在本文中稱為「3bG4」。
該特異性結合分子可包含：(a)包含SEQ ID NO：479(QVQLQESGPSLVKPSQTLSLTCTISGFSLISNGVGWVRQAPGKVPEWVGDIASSGKAYSNPALKSRLSITRDTSKSQVSLSLRSVTTEDTAVYYCVRCRDGGVTYGYDIDYWGPGLLVTVSS)中所示之序列的VH域；及/或(b)包含SEQ ID NO：480(QAVLTQPSSVSKSLGQSVSITCSGSTSNVGSGNDVSWFQQVPGSAPKLLFYGATNRASGVPDRFSGSRSGNTATLTITSLQAEDEADYYCGSYDSNSGGIFGSGTRLTVLG)中所示之序列的VL域；或其人源化變異體。
該特異性結合分子可包含：(a)包含SEQ ID NO：481(QVQLQESGPSLVKPSQTLSLTCTISGFSLISNGVGWVRQAPGKVPEWVGDIASSGKAYSNPALKSRLSITRDTSKSQVSLSLRSVTTEDTAVYYCVRCRDGGVTYGYDIDYWGPGLLVTVSSAKTTAPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITCNVAHPASSTKVDKKIEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK)中所示之序列的重鏈；及/或(b)包含SEQ ID NO：482(QAVLTQPSSVSKSLGQSVSITCSGSTSNVGSGNDVSWFQQVPGSAPKLLFYGATNRASGVPDRFSGSRSGNTATLTITSLQAEDEADYYCGSYDSNSGGIFGSGTRLTVLGGQPKSSPSVTLFPPSSEELETNKATLVCTITDFYPGVVTVDWKVDGTPVTQGMETTQPSKQSNNKYMASSYLTLTARAWERHSSYSCQVTHEGHTVEKSLSRADCS)中所示之序列的輕鏈；或其人源化變異體。
該特異性結合分子可包含下表6中所闡明之殖株的CDR序列。該抗原決定基可在SEQ ID NO：1之殘基1至49內。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含表6中所示之VHCDR1胺基酸序列；VHCDR2包含表6中所示之VHCDR2胺基酸序列；VHCDR3包含表6中所示之VHCDR3胺基酸序列；VLCDR1包含表6中所示之VLCDR1胺基酸序列；VLCDR2包含表6中所示之VLCDR2胺基酸序列；且VLCDR3包含表6中所示之VLCDR3胺基酸序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基1至49之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。
該特異性結合分子可以小於約25nM之KD結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基1至49之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。KD可小於約20nM、小於約15nM或小於約10nM。KD可較佳地為結合至SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：148之KD。結合至SEQ ID NO：1之KD可為約1nM至約20nM。結合至SEQ ID NO：1之KD可為約1nM至約10nM。結合至SEQ ID NO：1之KD可為約19.1nM，視需要其中該特異性結合分子包含3aD3之CDR。結合至SEQ ID NO：1之KD可為約3.6nM，視需要其中該特異性結合分子包含3aH6之CDR。結合至SEQ ID NO：1之KD可為約6.1nM，視需要其中該特異性結合分子包含3aG3之CDR。結合至SEQ ID NO：1之KD可為約8.9nM，視需要其中該特異性結合分子包含3bG4之CDR。
該特異性結合分子可包含與SEQ ID NO：422具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列，其中該特 異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基1至49之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。該特異性結合分子之CDR可與SEQ ID NO：422之CDR至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致。該等CDR可與SEQ ID NO：422之CDR具有100%一致性。該特異性結合分子可包含與SEQ ID NO：422具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列，其中CDR與SEQ ID NO：422之CDR具有100%一致性。該特異性結合分子可包含SEQ ID NO：422之胺基酸序列。
SEQ ID NO：422(3aD3胺基酸序列)
該特異性結合分子可包含與SEQ ID NO：423具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基1至49之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。該特異性結合分子之CDR可與SEQ ID NO：423之CDR至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致。該等CDR可與SEQ ID NO：423之CDR具有100%一致性。該特異性結合分子可包含與SEQ ID NO：423具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列，其中CDR與SEQ ID NO：423之CDR具有100%一致性。該特異性結合分子可包含SEQ ID NO：423之胺基酸序列。
SEQ ID NO：423(3aH6胺基酸序列)
該特異性結合分子可包含與SEQ ID NO：424具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基1至49之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。該特異性結合分子之CDR可與SEQ ID NO：424之CDR至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致。該等CDR可與SEQ ID NO：424之CDR具有100%一致性。該特異性結合分子可包含與SEQ ID NO：424具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列，其中CDR與SEQ ID NO：424之CDR具有100%一致性。該特異性結合分子可包含SEQ ID NO：424之胺基酸序列。
SEQ ID NO：424(3aG3胺基酸序列)
該特異性結合分子可包含與SEQ ID NO：425具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基1至49之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。該特異性結合分子之CDR可與SEQ ID NO：425之CDR至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致。該等CDR可與SEQ ID NO：425之CDR具有100%一致性。該特異性結合分子可包含與SEQ ID NO：425具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列，其中CDR與SEQ ID NO：425之CDR具有100%一致性。該特異性結合分子可包含SEQ ID NO：425之胺基酸序列。
SEQ ID NO：425(3bG4胺基酸序列)
該特異性結合分子之抗原決定基可在包含SEQ ID NO：1之殘基49至111的胺基酸序列內。因此，該抗原決定基可在SEQ ID NO：175之胺基酸序列(QTPTEDGSEEPGSETSDAKSTPTAEDVTAPLVDEGAPGKQAAAQPHTEIPEGTTAEEAGIGDT)內。
該抗原決定基可在包含SEQ ID NO：1之殘基49至111的胺基酸序列內。此抗原決定基可被本文中稱為「3bF4」之特異性結合分子的CDR結合。
該抗原決定基可包含SEQ ID NO：175之胺基酸序列(QTPTEDGSEEPGSETSDAKSTPTAEDVTAPLVDEGAPGKQAAAQPHTEIPEGTTAEEAGIGDT)。該抗原決定基可包含與SEQ ID NO：175(QTPTEDGSEEPGSETSDAKSTPTAEDVTAPLVDEGAPGKQAAAQPHTEIPEGTTAEEAGIGDT)具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列。
該抗原決定基可由SEQ ID NO：175之胺基酸序列(QTPTEDGSEEPGSETSDAKSTPTAEDVTAPLVDEGAPGKQAAAQPHTEIPEGTTAEEAGIGDT)組成。該抗原決定基可由與SEQ ID NO：175(QTPTEDGSEEPGSETSDAKSTPTAEDVTAPLVDEGAPGKQAAAQPHTEIPEGTTAEEAGIGDT)具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列組成。
該特異性結合分子可結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基49至111之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。該特異性結合分子可包含CDR VLCDR1、VLCDR2、VLCDR3、VHCDR1、VHCDR2及VHCDR3，其中該等CDR各自包含 以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：149(S N G V G)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：176(D I/K S S V/A G K K/T Y A/G N P A L K S)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：177(C R D G G V T Y G Y D I/V D Y)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：178(S G S S S N V G L/Y R/G N/D Y/V V T/S)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：179(G A/T T S/T R A S)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：180(A S A/F D T/S N/D D/S G G V/I)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列。
該序列一致性為至少約85%序列一致性且因此可為至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致性。較佳地，該序列一致性為至少90%或至少95%。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：149(SNGVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：157(DISSVGKKYANPALKS)或SEQ ID NO：182(DKSSAGKTYGNPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：161(CRDGGVTYGYDIDY)或SEQ ID NO：184 (CRDGGVTYGYDVDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：185(SGSSSNVGLRNYVT)或SEQ ID NO：186(SGSSSNVGYGDVVS)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：141(GATSRAS)或SEQ ID NO：188(GTTTRAS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：189(ASADTNDGGV)或SEQ ID NO：190(ASFDSDSGGI)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基49至111之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：149(SNGVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：157(DISSVGKKYANPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：161(CRDGGVTYGYDIDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：185(SGSSSNVGLRNYVT)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：141(GATSRAS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：189(ASADTNDGGV)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基49至111之胺基酸 序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之CDR具有100%一致性之CDR的特異性結合分子在本文中稱為「3bF4」。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：149(SNGVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：157(DISSVGKKYANPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：161(CRDGGVTYGYDIDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：186(SGSSSNVGYGDVVS)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：141(GATSRAS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：189(ASADTNDGGV)中所示之序列。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：149(SNGVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：182(DKSSAGKTYGNPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：184(CRDGGVTYGYDVDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：186(SGSSSNVGYGDVVS)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：188(GTTTRAS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：190(ASFDSDSGGI)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基49至111之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之CDR具有100%一致性之CDR的特異性結合分子在本文中稱為「3aB7」。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：149(SNGVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：182(DKSSAGKTYGNPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：184(CRDGGVTYGYDVDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：186(SGSSSNVGYGDVVS)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：188(GTTTRAS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：190(ASFDSDSGGI)中所示之序列。
該特異性結合分子可包含下表7中所闡明之殖株的CDR序列。該抗原決定基可在SEQ ID NO：1之殘基49至111內。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含表7中所示之VHCDR1胺基酸序列；VHCDR2包含表7中所示之VHCDR2胺基酸序列；VHCDR3包含表7中所示之VHCDR3胺基酸序列；VLCDR1包含表7中所示之VLCDR1胺基酸序列；VLCDR2包含表7中所示之VLCDR2胺基酸序列；且VLCDR3包含表7中所示之VLCDR3胺基酸序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基49至111之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。
該特異性結合分子可以小於約250nM之KD結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基49至111之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。KD可小於約200nM、小於約150nM或小於約100nM。KD可較佳地為結合至SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：175之KD。結合至SEQ ID NO：1之KD可為約1nM至約20nM。結合至SEQ ID NO：1之KD可為約50nM至約150nM。結合至SEQ ID NO：1之KD可為約69nM，視需要其中該特異性結合分子包含3aB7之CDR。結合至SEQ ID NO：1之KD可為約140nM，視需要其中該特異性結合分子包含3bF4之CDR。
該特異性結合分子可包含與SEQ ID NO：420具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基49至111之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。該特異性結合分子之CDR可與SEQ ID NO：420之CDR至少85%、至 少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致。該等CDR可與SEQ ID NO：420之CDR具有100%一致性。該特異性結合分子可包含與SEQ ID NO：420具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列，其中CDR與SEQ ID NO：420之CDR具有100%一致性。該特異性結合分子可包含SEQ ID NO：420之胺基酸序列。
SEQ ID NO：420(3aB7胺基酸序列)
該特異性結合分子可包含與SEQ ID NO：421具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基49至111之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。該特異性結合分子之CDR可與SEQ ID NO：421之CDR至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致。該等CDR可與SEQ ID NO：421之CDR具有100%一致性。該特異性結合分子可包含與SEQ ID NO：421具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列，其中CDR與SEQ ID NO：421之CDR具有100%一致性。該特異性結合分子可包含SEQ ID NO：421之胺基酸序列。
SEQ ID NO：421(3bF4胺基酸序列)
該特異性結合分子之抗原決定基可在包含SEQ ID NO：1之殘基146至157的胺基酸序列內。因此，該抗原決定基可在SEQ ID NO：191之胺基酸序 列(GKTKIATPRGA)內。
該抗原決定基可在包含SEQ ID NO：1之殘基147至157的胺基酸序列內。此抗原決定基可被本文中稱為「3aD6」之特異性結合分子的CDR結合。
該抗原決定基可包含SEQ ID NO：191之胺基酸序列(GKTKIATPRGA)。該抗原決定基可包含與SEQ ID NO：191(GKTKIATPRGA)具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列。
該抗原決定基可由SEQ ID NO：191之胺基酸序列(GKTKIATPRGA)組成。該抗原決定基可由與SEQ ID NO：191(GKTKIATPRGA)具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列組成。
該特異性結合分子可結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基147至157之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。該特異性結合分子可包含CDR VLCDR1、VLCDR2、VLCDR3、VHCDR1、VHCDR2及VHCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：192(S N A V I/G)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：193(L I D V/I D G D A/T A Y D/N P A L K/E S)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：194(D/H Y G/D S/K W G Y V/A S/D D/S I D Y)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：195(S G S D/S-/S-/N-/V I/G G/Y G A/D D/Y V G)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：196(D N/A D/T N/T R P/A S)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：197(G/A T/S Y S/Q G/N A/E N/R Y/S G I/V)中所 示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列。
該序列一致性為至少約85%序列一致性且因此可為至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致性。較佳地，該序列一致性為至少90%或至少95%。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：198(SNAVI)或SEQ ID NO：17(SNAVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：200(LIDVDGDAAYDPALKS)或SEQ ID NO：201(LIDIDGDTAYNPALES)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：202(DYGSWGYVSDIDY)或SEQ ID NO：203(HYDKWGYADSIDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：204(SGSDIGGADVG)或SEQ ID NO：138(SGSSSNVGYGDYVG)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：206(DNDNRPS)或SEQ ID NO：207(DATTRAS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：208(GTYSGANYGI)或SEQ ID NO：209(ASYQNERSGV)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或 (ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基147至157之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：198(SNAVI)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：200(LIDVDGDAAYDPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：202(DYGSWGYVSDIDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：204(SGSDIGGADVG)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：206(DNDNRPS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：208(GTYSGANYGI)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基147至157之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之CDR具有100%一致性之CDR的特異性結合分子在本文中稱為「3aD6」。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：198(SNAVI)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：200(LIDVDGDAAYDPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：202(DYGSWGYVSDIDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：204(SGSDIGGADVG)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：206(DNDNRPS)中所示之序列；且 VLCDR3包含SEQ ID NO：208(GTYSGANYGI)中所示之序列。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：17(SNAVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：201(LIDIDGDTAYNPALES)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：203(HYDKWGYADSIDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：138(SGSSSNVGYGDYVG)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：207(DATTRAS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：209(ASYQNERSGV)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基147至157之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之CDR具有100%一致性之CDR的特異性結合分子在本文中稱為「3aA6」。
該特異性結合分子可包含下表8中所闡明之殖株的CDR序列。該抗原決定基可在SEQ ID NO：1之殘基147至157內。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含表8中所示之VHCDR1胺基酸序列；VHCDR2包含表8中所示之VHCDR2胺基酸序列；VHCDR3包含表8中所示之VHCDR3胺基酸序列；VLCDR1包含表8中所示之VLCDR1胺基酸序列；VLCDR2包含表8中所示之VLCDR2胺基酸序列；且VLCDR3包含表8中所示之VLCDR3胺基酸序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基147至157之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。
該特異性結合分子可以小於約50nM之KD結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基147至157之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。KD可小於約40nM、小於約30nM或小於約20nM。KD可較佳地為結合至SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：191之KD。結合至SEQ ID NO：1之KD可為約10nM至約20nM。結合至SEQ ID NO：1之KD可為約16.5nM，視需要其中該特異性結合分子包含3aD6之CDR。
該特異性結合分子可包含與SEQ ID NO：418具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基147至157之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。該特異性結合分子之CDR可與SEQ ID NO：418之CDR至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致。 該等CDR可與SEQ ID NO：418之CDR具有100%一致性。該特異性結合分子可包含與SEQ ID NO：418具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列，其中CDR與SEQ ID NO：418之CDR具有100%一致性。該特異性結合分子可包含SEQ ID NO：418之胺基酸序列。
SEQ ID NO：418(3aA6胺基酸序列)
該特異性結合分子可包含與SEQ ID NO：419具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基147至157之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。該特異性結合分子之CDR可與SEQ ID NO：419之CDR至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致。該等CDR可與SEQ ID NO：419之CDR具有100%一致性。該特異性結合分子可包含與SEQ ID NO：419具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列，其中CDR與SEQ ID NO：419之CDR具有100%一致性。該特異性結合分子可包含SEQ ID NO：419之胺基酸序列。
SEQ ID NO：419(3aD6胺基酸序列)
該特異性結合分子之抗原決定基可在包含SEQ ID NO：1之殘基379至391的胺基酸序列內。因此，該抗原決定基可在SEQ ID NO：221之胺基酸序列(RENAKAKTDHGAE)內。
該抗原決定基可包含SEQ ID NO：221之胺基酸序列 (RENAKAKTDHGAE)。該抗原決定基可包含與SEQ ID NO：221(RENAKAKTDHGAE)具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列。該抗原決定基可在包含SEQ ID NO：1之殘基379至391的胺基酸序列內。此抗原決定基可被本文中稱為「E2E8」之特異性結合分子的CDR結合。該抗原決定基之關鍵殘基可為殘基391(E)(根據SEQ ID NO：1編號)。該抗原決定基可包含SEQ ID NO：222之胺基酸序列(XXXXXXXXXXXXE，其中X係任何胺基酸)。該抗原決定基可包含SEQ ID NO：8之胺基酸序列，其中除殘基編號391(E)外的任一個或多個殘基經非保守胺基酸取代置換(根據SEQ ID NO：1編號)。該抗原決定基可包含SEQ ID NO：221之胺基酸序列，其中除殘基編號391(E)外的任一個或多個殘基經保守胺基酸取代置換(根據SEQ ID NO：1編號)。該抗原決定基可包含SEQ ID NO：221之胺基酸序列，其中除殘基編號391(E)外的任一個或多個殘基經保守胺基酸取代置換(根據SEQ ID NO：1編號)且除殘基編號391(E)外的任一個或多個殘基經非保守胺基酸取代置換(根據SEQ ID NO：1編號)。
該抗原決定基可包含SEQ ID NO：221之胺基酸序列(RENAKAKTDHGAE)。該抗原決定基可包含與SEQ ID NO：221(RENAKAKTDHGAE)具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列。
該抗原決定基可由SEQ ID NO：221之胺基酸序列(RENAKAKTDHGAE)組成。該抗原決定基可由與SEQ ID NO：221(RENAKAKTDHGAE)具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列組成。
該特異性結合分子可結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基379至391之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。該特異性結合分子可包含CDR VLCDR1、VLCDR2、VLCDR3、VHCDR1、VHCDR2及VHCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：223(D/S R/W G V A)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：224(T M R S G G T/G I/T D/E Y/D N P A L K S)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：225(G Y L S G D/I/V R/H Y A)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：226(S G S R/S S D/N I/V G Y/D/A G N/D/R Y V S/G)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：227(D/S/G T/A N/R/T T/N/S R A S)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：228(A N/S I D S/T S/G R/N S/N H/L L/I)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列。
該序列一致性為至少約85%序列一致性且因此可為至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致性。較佳地，該序列一致性為至少90%或至少95%。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：229(DRGVA)、SEQ ID NO：230(DWGVA)或SEQ ID NO：231(SWGVA)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：232(TMRSGGTIDYNPALKS)、SEQ ID NO：233 (TMRSGGGTEYNPALKS)或SEQ ID NO：234(TMRSGGTTDDNPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：235(GYLSGDRYA)、SEQ ID NO：236(GYLSGIHYA)或SEQ ID NO：237(GYLSGVHYA)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：238(SGSRSDIGYGNYVS)、SEQ ID NO：239(SGSSSNVGAGNYVG)、SEQ ID NO：240(SGSSSNVGDGDYVG)或SEQ ID NO：241(SGSSSNVGDGRYVS)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：242(DTNTRAS)、SEQ ID NO：243(DTTSRAS)、SEQ ID NO：170(GATNRAS)或SEQ ID NO：244(SARNRAS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：245(ANIDSSRSHL)、SEQ ID NO：246(ASIDSGNNLL)或SEQ ID NO：247(ASIDTSRSHI)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基379至391之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：229(DRGVA)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：232(TMRSGGTIDYNPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：235(GYLSGDRYA)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：238(SGSRSDIGYGNYVS)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：242(DTNTRAS)中所示之序列；且 VLCDR3包含SEQ ID NO：245(ANIDSSRSHL)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基379至391之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之CDR具有100%一致性之CDR的特異性結合分子在本文中稱為「E2E8」。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：229(DRGVA)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：232(TMRSGGTIDYNPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：235(GYLSGDRYA)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：238(SGSRSDIGYGNYVS)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：242(DTNTRAS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：245(ANIDSSRSHL)中所示之序列。
該特異性結合分子可包含構架區(FR)VHFR1、VHFR2、VHFR3、VHFR4、VLFR1、VLFR2、VLFR3及VLFR4，其中該等FR各自包含以下胺基酸序列：VHFR1包含SEQ ID NO：483(QVQLQESGPSLVKPSQTLSLTCTVSGFSLT)中所示之序列；VHFR2包含SEQ ID NO：484(WVRQAPGKALEWVG)中所示之序列；VHFR3包含SEQ ID NO：485(RLSITRDTSKSQVFLSLSSVTTEDMAMYYCAR)中所示之序列；VHFR4包含SEQ ID NO：486(WGRGLLVTVSS)中所示之序列； VLFRI包含SEQ ID NO：487(QAVLTQPSSVSKSLGQSVSIAC)中所示之序列；VLFR2包含SEQ ID NO：488(WFQQIPGSAPKLLIY)中所示之序列；VLFR3包含SEQ ID NO：489(GVPDRFSGARSGNTATLTINSLQAEDEADYYC)中所示之序列；VLFR4包含SEQ ID NO：490(FGSGTRLTVLG)中所示之序列；或對於各FR序列，(i)與該序列具有至少50%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸取代的胺基酸序列。
該特異性結合分子可包含構架區(FR)VHFR1、VHFR2、VHFR3、VHFR4、VLFRI、VLFR2、VLFR3及VLFR4，其中該等FR各自包含以下胺基酸序列：VHFR1包含SEQ ID NO：483(QVQLQESGPSLVKPSQTLSLTCTVSGFSLT)中所示之序列；VHFR2包含SEQ ID NO：484(WVRQAPGKALEWVG)中所示之序列；VHFR3包含SEQ ID NO：485(RLSITRDTSKSQVFLSLSSVTTEDMAMYYCAR)中所示之序列；VHFR4包含SEQ ID NO：486(WGRGLLVTVSS)中所示之序列；VLFRI包含SEQ ID NO：487(QAVLTQPSSVSKSLGQSVSIAC)中所示之序列；VLFR2包含SEQ ID NO：488(WFQQIPGSAPKLLIY)中所示之序列；VLFR3包含SEQ ID NO：489(GVPDRFSGARSGNTATLTINSLQAEDEADYYC)中所示之序列； VLFR4包含SEQ ID NO：490(FGSGTRLTVLG)中所示之序列；或對於各FR序列，(i)與該序列具有至少50%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基379至391之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之FR具有100%一致性之FR的特異性結合分子在本文中稱為「E2E8」。
該特異性結合分子可包含：(a)構架區(FR)VHFR1、VHFR2、VHFR3、VHFR4、VLFR1、VLFR2、VLFR3及VLFR4，其中該等FR各自包含以下胺基酸序列：VHFR1包含SEQ ID NO：483(QVQLQESGPSLVKPSQTLSLTCTVSGFSLT)中所示之序列；VHFR2包含SEQ ID NO：484(WVRQAPGKALEWVG)中所示之序列；VHFR3包含SEQ ID NO：485(RLSITRDTSKSQVFLSLSSVTTEDMAMYYCAR)中所示之序列；VHFR4包含SEQ ID NO：486(WGRGLLVTVSS)中所示之序列；VLFR1包含SEQ ID NO：487(QAVLTQPSSVSKSLGQSVSIAC)中所示之序列；VLFR2包含SEQ ID NO：488(WFQQIPGSAPKLLIY)中所示之序列；VLFR3包含SEQ ID NO：489(GVPDRFSGARSGNTATLTINSLQAEDEADYYC)中所示之序列；VLFR4包含SEQ ID NO：490(FGSGTRLTVLG)中所示之序列；或對於各FR序列， (i)與該序列具有至少50%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸取代的胺基酸序列；及(b)CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：229(DRGVA)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：232(TMRSGGTIDYNPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：235(GYLSGDRYA)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：238(SGSRSDIGYGNYVS)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：242(DTNTRAS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：245(ANIDSSRSHL)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基379至391之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之FR及CDR具有100%一致性之FR及CDR的特異性結合分子在本文中稱為「E2E8」。
該特異性結合分子可包含：(a)構架區(FR)VHFR1、VHFR2、VHFR3、VHFR4、VLFR1、VLFR2、VLFR3及VLFR4，其中該等FR各自包含以下胺基酸序列：VHFR1包含SEQ ID NO：483(QVQLQESGPSLVKPSQTLSLTCTVSGFSLT)中所示之序列；VHFR2包含SEQ ID NO：484(WVRQAPGKALEWVG)中所示之序列；VHFR3包含SEQ ID NO：485 (RLSITRDTSKSQVFLSLSSVTTEDMAMYYCAR)中所示之序列；VHFR4包含SEQ ID NO：486(WGRGLLVTVSS)中所示之序列；VLFR1包含SEQ ID NO：487(QAVLTQPSSVSKSLGQSVSIAC)中所示之序列；VLFR2包含SEQ ID NO：488(WFQQIPGSAPKLLIY)中所示之序列；VLFR3包含SEQ ID NO：489(GVPDRFSGARSGNTATLTINSLQAEDEADYYC)中所示之序列；VLFR4包含SEQ ID NO：490(FGSGTRLTVLG)中所示之序列；或對於各FR序列，(i)與該序列具有至少50%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸取代的胺基酸序列；及(b)CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：229(DRGVA)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：232(TMRSGGTIDYNPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：235(GYLSGDRYA)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：238(SGSRSDIGYGNYVS)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：242(DTNTRAS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：245(ANIDSSRSHL)中所示之序列；其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基379至391之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之FR及CDR具有100%一致性之FR及CDR的特異性結合分子在本文中稱為「E2E8」。
該特異性結合分子可包含： (a)包含SEQ ID NO：491(QVQLQESGPSLVKPSQTLSLTCTVSGFSLTDRGVAWVRQAPGKALEWVGTMRSGGTIDYNPALKSRLSITRDTSKSQVFLSLSSVTTEDMAMYYCARGYLSGDRYAWGRGLLVTVSS)中所示之序列的VH域；及/或(b)包含SEQ ID NO：492(QAVLTQPSSVSKSLGQSVSIACSGSRSDIGYGNYVSWFQQIPGSAPKLLIYDTNTRASGVPDRFSGARSGNTATLTINSLQAEDEADYYCANIDSSRSHLFGSGTRLTVLG)中所示之序列的VL域；或其人源化變異體。
該特異性結合分子可包含：(a)包含SEQ ID NO：493(QVQLQESGPSLVKPSQTLSLTCTVSGFSLTDRGVAWVRQAPGKALEWVGTMRSGGTIDYNPALKSRLSITRDTSKSQVFLSLSSVTTEDMAMYYCARGYLSGDRYAWGRGLLVTVSSAKTTAPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITCNVAHPASSTKVDKKIEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK)中所示之序列的重鏈；及/或(b)包含SEQ ID NO：494(QAVLTQPSSVSKSLGQSVSIACSGSRSDIGYGNYVSWFQQIPGSAPKLLIYDTNTRASGVPDRFSGARSGNTATLTINSLQAEDEADYYCANIDSSRSHLFGSGTRLTVLGGQPKSSPSVTLFPPSSEELETNKATLVCTITDFYPGVVTVDWKVDGTPVTQGMETTQPSKQSNNKYMASSYLTLTARAWERHSSYSCQVTHEGHTVEKSLSRADCS)中所示之序列的輕鏈； 或其人源化變異體。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：230(DWGVA)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：234(TMRSGGTTDDNPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：237(GYLSGVHYA)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：241(SGSSSNVGDGRYVS)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：243(DTTSRAS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：246(ASIDSGNNLL)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基379至391之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之CDR具有100%一致性之CDR的特異性結合分子在本文中稱為「E1E8」。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：230(DWGVA)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：234(TMRSGGTTDDNPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：237(GYLSGVHYA)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：241(SGSSSNVGDGRYVS)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：243(DTTSRAS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：246(ASIDSGNNLL)中所示之序列。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、 VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：230(DWGVA)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：234(TMRSGGTTDDNPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：237(GYLSGVHYA)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：239(SGSSSNVGAGNYVG)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：70(GATNRAS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：247(ASIDTSRSHI)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基379至391之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之CDR具有100%一致性之CDR的特異性結合分子在本文中稱為「E2A6」。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：230(DWGVA)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：234(TMRSGGTTDDNPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：237(GYLSGVHYA)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：239(SGSSSNVGAGNYVG)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：70(GATNRAS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：247(ASIDTSRSHI)中所示之序列。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：231(SWGVA)中所示之序列； VHCDR2包含SEQ ID NO：233(TMRSGGGTEYNPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：236(GYLSGIHYA)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：240(SGSSSNVGDGDYVG)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：244(SARNRAS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：247(ASIDTSRSHI)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基379至391之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之CDR具有100%一致性之CDR的特異性結合分子在本文中稱為「E2B7」。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：231(SWGVA)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：233(TMRSGGGTEYNPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：236(GYLSGIHYA)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：240(SGSSSNVGDGDYVG)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：244(SARNRAS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：247(ASIDTSRSHI)中所示之序列。
該特異性結合分子可包含下表9中所闡明之殖株的CDR序列。該抗原決定基可在SEQ ID NO：1之殘基379至391內。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含表9中所示之VHCDR1胺基酸序列；VHCDR2包含表9中所示之VHCDR2胺基酸序列；VHCDR3包含表9中所示之VHCDR3胺基酸序列；VLCDR1包含表9中所示之VLCDR1胺基酸序列；VLCDR2包含表9中所示之VLCDR2胺基酸序列；且VLCDR3包含表9中所示之VLCDR3胺基酸序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基379至391之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。
特異性結合分子可以小於約25nM之KD結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基379至391之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。KD可小於約20nM、小於約15nM或小於約10nM。KD可較佳地為結合至SEQ ID NO：4之KD。該特異性結合分子可與SEQ ID NO：1不具有可偵測之結合。結合至SEQ ID NO：4之KD可為約300pM至約10nM。結合至SEQ ID NO：4之KD可為約300pM至約500pM。結合至SEQ ID NO：4之KD可為約1nM至約10nM。結合至SEQ ID NO：4之KD可為約401pM，視需要其中該特異性結合分子包含E1E8之CDR。結合至SEQ ID NO：4之可為約6.3nM，視需要其中該特異性結合分子包含E1E8之CDR。
該特異性結合分子可包含與SEQ ID NO：248具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基379至391之胺基酸序列的多肽 或蛋白質分子。該特異性結合分子之CDR可與SEQ ID NO：248之CDR至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致。該等CDR可與SEQ ID NO：248之CDR具有100%一致性。該特異性結合分子可包含與SEQ ID NO：248具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列，其中CDR與SEQ ID NO：248之CDR具有100%一致性。該特異性結合分子可包含SEQ ID NO：248之胺基酸序列。
SEQ ID NO：248(E2E8胺基酸序列)
該特異性結合分子可包含與SEQ ID NO：250具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基379至391之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。該特異性結合分子之CDR可與SEQ ID NO：250之CDR至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致。該等CDR可與SEQ ID NO：250之CDR具有100%一致性。該特異性結合分子可包含與SEQ ID NO：250具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列，其中CDR與SEQ ID NO：250之CDR具有100%一致性。該特異性結合分子可包含SEQ ID NO：250之胺基酸序列。
SEQ ID NO：250(E1E8胺基酸序列)
該特異性結合分子可包含與SEQ ID NO：252具有至少70%、至少 75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基379至391之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。該特異性結合分子之CDR可與SEQ ID NO：252之CDR至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致。該等CDR可與SEQ ID NO：252之CDR具有100%一致性。該特異性結合分子可包含與SEQ ID NO：252具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列，其中CDR與SEQ ID NO：252之CDR具有100%一致性。該特異性結合分子可包含SEQ ID NO：252之胺基酸序列。
SEQ ID NO：252(E2A6胺基酸序列)
該特異性結合分子可包含與SEQ ID NO：254具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基379至391之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。該特異性結合分子之CDR可與SEQ ID NO：254之CDR至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致。該等CDR可與SEQ ID NO：254之CDR具有100%一致性。該特異性結合分子可包含與SEQ ID NO：254具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列，其中CDR與SEQ ID NO：254之CDR具有100%一致性。該特異性結合分子可包含SEQ ID NO：254之胺基酸序列。
SEQ ID NO：254(E2B7胺基酸序列)
該特異性結合分子之抗原決定基可在包含SEQ ID NO：1之殘基113至238之胺基酸序列內。因此，該抗原決定基可在SEQ ID NO：255之胺基酸序列(SLEDEAAGHVTQARMVSKSKDGTGSDDKKAKGADGKTKIATPRGAAPPGQKGQANATRIPAKTPPAPKTPPSSGEPPKSGDRSGYSSPGSPGTPGSRSRTPSLPTPPTREPKKVAVVRTP PKSPSS)內。
該抗原決定基可在包含SEQ ID NO：1之殘基113至238之胺基酸序列內。此抗原決定基可被本文中稱為「CB11」之特異性結合分子的CDR結合。
該抗原決定基可包含SEQ ID NO：255之胺基酸序列(SLEDEAAGHVTQARMVSKSKDGTGSDDKKAKGADGKTKIATPRGAAPPGQKGQANATRIPAKTPPAPKTPPSSGEPPKSGDRSGYSSPGSPGTPGSRSRTPSLPTPPTREPKKVAVVRTP PKSPSS)。該抗原決定基可包含與SEQ ID NO：255(SLEDEAAGHVTQARMVSKSKDGTGSDDKKAKGADGKTKIATPRGAAPPGQKGQANATRIPAKTPPAPKTPPSSGEPPKSGDRSGYSSPGSPGTPGSRSRTPSLPTPPTREPKKVAVVRTPPKSPSS)具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列。
該抗原決定基可由SEQ ID NO：255之胺基酸序列(SLEDEAAGHVTQARMVSKSKDGTGSDDKKAKGADGKTKIATPRGAAPPGQKGQANATRIPAKTPPAPKTPPSSGEPPKSGDRSGYSSPGSPGTPGSRSRTPSLPTPPTREPKKVAVVRTP PKSPSS)組成。該抗原決定基可由與SEQ ID NO：255(SLEDEAAGHVTQARMVSKSKDGTGSDDKKAKGADGKTKIATPRGAAPPGQKGQANATRIPAKTPPAPKTPPSSGEPPKSGDRSGYSSPGSPGTPGSRSRTPSLP TPPTREPKKVAVVRTPPKSPSS)具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列組成。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：198(SNAVI)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：200(LIDVDGDAAYDPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：202(DYGSWGYVSDIDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：256(SGSNIGSNDVG)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：257(DNNNRPS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：258(GGYAGSSSNFL)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基113至238之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之CDR具有100%一致性之CDR的特異性結合分子在本文中稱為「CB11」。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：198(SNAVI)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：200(LIDVDGDAAYDPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：202(DYGSWGYVSDIDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：256(SGSNIGSNDVG)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：257(DNNNRPS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：258(GGYAGSSSNFL)中所示之序列。
該特異性結合分子之抗原決定基可在包含SEQ ID NO：1之殘基1至155之胺基酸序列內。因此，該抗原決定基可在SEQ ID NO：293之胺基酸序列(MAEPRQEFEVMEDHAGTYGLGDRKDQGGYTMHQDQEGDTDAGLKESPLQTPTEDGSEEPGSETSDAKSTPTAEDVTAPLVDEGAPGKQAAAQPHTEIPEGTTAEEAGIGDTPSLEDEAAGHVTQARMVSKSKDGTGSDDKKAKGADGKTKIATPR)內。
該抗原決定基可在包含SEQ ID NO：1之殘基1至155之胺基酸序列內。此抗原決定基可被本文中稱為「CA2」之特異性結合分子的CDR結合。
該抗原決定基可包含SEQ ID NO：293之胺基酸序列(MAEPRQEFEVMEDHAGTYGLGDRKDQGGYTMHQDQEGDTDAGLKESPLQTPTEDGSEEPGSETSDAKSTPTAEDVTAPLVDEGAPGKQAAAQPHTEIPEGTTAEEAGIGDTPSLEDEAAGHVTQARMVSKSKDGTGSDDKKAKGADGKTKIATPR)。該抗原決定基可包含與SEQ ID NO：293具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列(MAEPRQEFEVMEDHAGTYGLGDRKDQGGYTMHQDQEGDTDAGLKESPLQTPTEDGSEEPGSETSDAKSTPTAEDVTAPLVDEGAPGKQAAAQPHTEIPEGTTAEEAGIGDTPSLEDEAAGHVTQARMVSKSKDGTGSDDKKAKGADGKTKIATPR)。
該抗原決定基可由SEQ ID NO：293之胺基酸序列(MAEPRQEFEVMEDHAGTYGLGDRKDQGGYTMHQDQEGDTDAGLKESPLQTPTEDGSEEPGSETSDAKSTPTAEDVTAPLVDEGAPGKQAAAQPHTEIPEGTTAEEAGIGDTPSLEDEAAGHVTQARMVSKSKDGTGSDDKKAKGADGKTKIATPR)組成。該抗原決定基可由與SEQ ID NO：293(MAEPRQEFEVMEDHAGTYGLGDRKDQGGYTMHQDQEGDTDAGLKESPL QTPTEDGSEEPGSETSDAKSTPTAEDVTAPLVDEGAPGKQAAAQPHTEIPEGTTAEEAGIGDTPSLEDEAAGHVTQARMVSKSKDGTGSDDKKAKGADGKTKIATPR)具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列組成。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：259(SNGVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：157(DISSVGKKYANPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：161(CRDGGVTYGYDIDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：165(SGSSGNVGYGDYVS)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：169(GATNLAS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：173(ASYDSSSGGV)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基1至155之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之CDR具有100%一致性之CDR的特異性結合分子在本文中稱為「CA2」。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：259(SNGVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：157(DISSVGKKYANPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：161(CRDGGVTYGYDIDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：165(SGSSGNVGYGDYVS)中所示之序列； VLCDR2包含SEQ ID NO：169(GATNLAS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：173(ASYDSSSGGV)中所示之序列。
該特異性結合分子之抗原決定基可在包含SEQ ID NO：1之殘基1至238之胺基酸序列內。因此，該抗原決定基可在SEQ ID NO：260之胺基酸序列(MAEPRQEFEVMEDHAGTYGLGDRKDQGGYTMHQDQEGDTDAGLKESPLQTPTEDGSEEPGSETSDAKSTPTAEDVTAPLVDEGAPGKQAAAQPHTEIPEGTTAEEAGIGDTPSLEDEAAGHVTQARMVSKSKDGTGSDDKKAKGADGKTKIATPRGAAPPGQKGQANATRIPAKTPPAPKTPPSSGEPPKSGDRSGYSSPGSPGTPGSRSRTPSLPTPPTREPKKVAVVRTPPKSPSS)內。
該抗原決定基可在包含SEQ ID NO：1之殘基1至238之胺基酸序列內。此抗原決定基可被本文中稱為「CB6」之特異性結合分子的CDR結合。
該抗原決定基可包含SEQ ID NO：260之胺基酸序列(MAEPRQEFEVMEDHAGTYGLGDRKDQGGYTMHQDQEGDTDAGLKESPLQTPTEDGSEEPGSETSDAKSTPTAEDVTAPLVDEGAPGKQAAAQPHTEIPEGTTAEEAGIGDTPSLEDEAAGHVTQARMVSKSKDGTGSDDKKAKGADGKTKIATPRGAAPPGQKGQANATRIPAKTPPAPKTPPSSGEPPKSGDRSGYSSPGSPGTPGSRSRTPSLPTPPTREPKKVAVVRTPPKSPSS)。該抗原決定基可包含與SEQ ID NO：260(MAEPRQEFEVMEDHAGTYGLGDRKDQGGYTMHQDQEGDTDAGLKESPLQTPTEDGSEEPGSETSDAKSTPTAEDVTAPLVDEGAPGKQAAAQPHTEIPEGTTAEEAGIGDTPSLEDEAAGHVTQARMVSKSKDGTGSDDKKAKGADGKTKIATPRGAAPPGQKGQANATRIPAKTPPAPKTPPSSGEPPKSGDRSGYSSPGSPGTPGSRSRTPSLPTPPTREPKKVAVVRTPPKSPSS)具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列。
該抗原決定基可由SEQ ID NO：260之胺基酸序列(MAEPRQE FEVMEDHAGTYGLGDRKDQGGYTMHQDQEGDTDAGLKESPLQTPTEDGSEEPGSETSDAKSTPTAEDVTAPLVDEGAPGKQAAAQPHTEIPEGTTAEEAGIGDTPSLEDEAAGHVTQARMVSKSKDGTGSDDKKAKGADGKTKIATPRGAAPPGQKGQANATRIPAKTPPAPKTPPSSGEPPKSGDRSGYSSPGSPGTPGSRSRTPSLPTPPTREPKKVAVVRTPPKSPSS)組成。該抗原決定基可由與SEQ ID NO：260具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列(MAEPRQEFEVMEDHAGTYGLGDRKDQGGYTMHQDQEGDTDAGLKESPLQTPTEDGSEEPGSETSDAKSTPTAEDVTAPLVDEGAPGKQAAAQPHTEIPEGTTAEEAGIGDTPSLEDEAAGHVTQARMVSKSKDGTGSDDKKAKGADGKTKIATPRGAAPPGQKGQANATRIPAKTPPAPKTPPSSGEPPKSGDRSGYSSPGSPGTPGSRSRTPSLPTPPTREPKKVAVVRTPPKSPSS)組成。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：259(SNGVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：157(DISSVGKKYANPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：161(CRDGGVTYGYDIDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：261(SGSSSNIGTGNYVG)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：262(GAVTRAS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：263(ASYDSTSGGV)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基1至238之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之CDR具有100%一致性之CDR的特 異性結合分子在本文中稱為「CB6」。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：259(SNGVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：157(DISSVGKKYANPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：161(CRDGGVTYGYDIDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：261(SGSSSNIGTGNYVG)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：262(GAVTRAS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：263(ASYDSTSGGV)中所示之序列。
該特異性結合分子之抗原決定基可在包含SEQ ID NO：1之殘基1至319之胺基酸序列內。因此，該抗原決定基可在SEQ ID NO：264之胺基酸序列(MAEPRQEFEVMEDHAGTYGLGDRKDQGGYTMHQDQEGDTDAGLKESPLQTPTEDGSEEPGSETSDAKSTPTAEDVTAPLVDEGAPGKQAAAQPHTEIPEGTTAEEAGIGDTPSLEDEAAGHVTQARMVSKSKDGTGSDDKKAKGADGKTKIATPRGAAPPGQKGQANATRIPAKTPPAPKTPPSSGEPPKSGDRSGYSSPGSPGTPGSRSRTPSLPTPPTREPKKVAVVRTPPKSPSSAKSRLQTAPVPMPDLKNVKSKIGSTENLKHQPGGGKVQIINKKLDLSNVQSKCGSKDNIKHVPGGGSVQIVYKPVDLSKVT)內。
該抗原決定基可在包含SEQ ID NO：1之殘基1至319之胺基酸序列內。此抗原決定基可被本文中稱為「CA7」、「CA8」及「CB10」之特異性結合分子的CDR結合。
在包含SEQ ID NO：1之殘基1至319之胺基酸序列內的抗原決定基可較佳地在包含SEQ ID NO：1之殘基37至49之胺基酸序列內。此抗原決定基可至少被本文中稱為「CA7」之特異性結合分子的CDR結合。
該抗原決定基可包含SEQ ID NO：264之胺基酸序列(MAEPRQEFEVMEDHAGTYGLGDRKDQGGYTMHQDQEGDTDAGLKESPLQTPTEDGSEEPGSETSDAKSTPTAEDVTAPLVDEGAPGKQAAAQPHTEIPEGTTAEEAGIGDTPSLEDEAAGHVTQARMVSKSKDGTGSDDKKAKGADGKTKIATPRGAAPPGQKGQANATRIPAKTPPAPKTPPSSGEPPKSGDRSGYSSPGSPGTPGSRSRTPSLPTPPTREPKKVAVVRTPPKSPSSAKSRLQTAPVPMPDLKNVKSKIGSTENLKHQPGGGKVQIINKKLDLSNVQSKCGSKDNIKHVPGGGSVQIVYKPVDLSKVT)。該抗原決定基可包含與SEQ ID NO：264(MAEPRQEFEVMEDHAGTYGLGDRKDQGGYTMHQDQEGDTDAGLKESPLQTPTEDGSEEPGSETSDAKSTPTAEDVTAPLVDEGAPGKQAAAQPHTEIPEGTTAEEAGIGDTPSLEDEAAGHVTQARMVSKSKDGTGSDDKKAKGADGKTKIATPRGAAPPGQKGQANATRIPAKTPPAPKTPPSSGEPPKSGDRSGYSSPGSPGTPGSRSRTPSLPTPPTREPKKVAVVRTPPKSPSSAKSRLQTAPVPMPDLKNVKSKIGSTENLKHQPGGGKVQIINKKLDLSNVQSKCGSKDNIKHVPGGGSVQIVYKPVDLSKVT)具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列。
該抗原決定基可由SEQ ID NO：264之胺基酸序列(MAEPRQEFEVMEDHAGTYGLGDRKDQGGYTMHQDQEGDTDAGLKESPLQTPTEDGSEEPGSETSDAKSTPTAEDVTAPLVDEGAPGKQAAAQPHTEIPEGTTAEEAGIGDTPSLEDEAAGHVTQARMVSKSKDGTGSDDKKAKGADGKTKIATPRGAAPPGQKGQANATRIPAKTPPAPKTPPSSGEPPKSGDRSGYSSPGSPGTPGSRSRTPSLPTPPTREPKKVAVVRTPPKSPSSAKSRLQTAPVPMPDLKNVKSKIGSTENLKHQPGGGKVQIINKKLDLSNVQSKCGSKDNIKHVPGGGSVQIVYKPVDLSKVT)組成。該抗原決定基可由與SEQ ID NO：264 (MAEPRQEFEVMEDHAGTYGLGDRKDQGGYTMHQDQEGDTDAGLKESPLQTPTEDGSEEPGSETSDAKSTPTAEDVTAPLVDEGAPGKQAAAQPHTEIPEGTTAEEAGIGDTPSLEDEAAGHVTQARMVSKSKDGTGSDDKKAKGADGKTKIATPRGAAPPGQKGQANATRIPAKTPPAPKTPPSSGEPPKSGDRSGYSSPGSPGTPGSRSRTPSLPTPPTREPKKVAVVRTPPKSPSSAKSRLQTAPVPMPDLKNVKSKIGSTENLKHQPGGGKVQIINKKLDLSNVQSKCGSKDNIKHVPGGGSVQIVYKPVDLSKVT)具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列組成。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：44(SYYVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：52(NIYSTGRAFYNPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：265(GSYYHGGGNGMVDFFDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：39(SGSSSNVGYGNYVG)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：72(AATSRAS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：78(SSYQRGNTGV)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基1至319之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之CDR具有100%一致性之CDR的特異性結合分子在本文中稱為「CA7」。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列： VHCDR1包含SEQ ID NO：44(SYYVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：52(NIYSTGRAFYNPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：265(GSYYHGGGNGMVDFFDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：39(SGSSSNVGYGNYVG)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：72(AATSRAS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：78(SSYQRGNTGV)中所示之序列。
該特異性結合分子可包含構架區(FR)VHFR1、VHFR2、VHFR3、VHFR4、VLFR1、VLFR2、VLFR3及VLFR4，其中該等FR各自包含以下胺基酸序列：VHFR1包含SEQ ID NO：495(RVRLQGSGPSLVKPSQTLSLTCTVSGFSFD)中所示之序列；VHFR2包含SEQ ID NO：496(WVRQAPGKALEWLG)中所示之序列；VHFR3包含SEQ ID NO：497(RLSITRDTSKSQVSLSVSSVTIEDTALYYCVR)中所示之序列；VHFR4包含SEQ ID NO：498(WSPGLLVTVSS)中所示之序列；VLFR1包含SEQ ID NO：499(QVVRTQPSSVSGSLGQRVSITC)中所示之序列；VLFR2包含SEQ ID NO：500(WFQQVPGSAPKLLIY)中所示之序列；VLFR3包含SEQ ID NO：501(GVPDRFSGSRSGNTATLTIDSLQAEDEADYYC)中所示之序列；VLFR4包含SEQ ID NO：502(FGSGTRLTVLG)中所示之序列；或對於各FR序列，(i)與該序列具有至少50%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸取代的胺基酸 序列。
該特異性結合分子可包含構架區(FR)VHFR1、VHFR2、VHFR3、VHFR4、VLFR1、VLFR2、VLFR3及VLFR4，其中該等FR各自包含以下胺基酸序列：VHFR1包含SEQ ID NO：495(RVRLQGSGPSLVKPSQTLSLTCTVSGFSFD)中所示之序列；VHFR2包含SEQ ID NO：496(WVRQAPGKALEWLG)中所示之序列；VHFR3包含SEQ ID NO：497(RLSITRDTSKSQVSLSVSSVTIEDTALYYCVR)中所示之序列；VHFR4包含SEQ ID NO：498(WSPGLLVTVSS)中所示之序列；VLFR1包含SEQ ID NO：499(QVVRTQPSSVSGSLGQRVSITC)中所示之序列；VLFR2包含SEQ ID NO：500(WFQQVPGSAPKLLIY)中所示之序列；VLFR3包含SEQ ID NO：501(GVPDRFSGSRSGNTATLTIDSLQAEDEADYYC)中所示之序列；VLFR4包含SEQ ID NO：502(FGSGTRLTVLG)中所示之序列；或對於各FR序列，(i)與該序列具有至少50%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基1至319之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之FR具有100%一致性之FR的特異性結合分子在本文中稱為「CA7」。
該特異性結合分子可包含： (a)構架區(FR)VHFR1、VHFR2、VHFR3、VHFR4、VLFR1、VLFR2、VLFR3及VLFR4，其中該等FR各自包含以下胺基酸序列：VHFR1包含SEQ ID NO：495(RVRLQGSGPSLVKPSQTLSLTCTVSGFSFD)中所示之序列；VHFR2包含SEQ ID NO：496(WVRQAPGKALEWLG)中所示之序列；VHFR3包含SEQ ID NO：497(RLSITRDTSKSQVSLSVSSVTIEDTALYYCVR)中所示之序列；VHFR4包含SEQ ID NO：498(WSPGLLVTVSS)中所示之序列；VLFR1包含SEQ ID NO：499(QVVRTQPSSVSGSLGQRVSITC)中所示之序列；VLFR2包含SEQ ID NO：500(WFQQVPGSAPKLLIY)中所示之序列；VLFR3包含SEQ ID NO：501(GVPDRFSGSRSGNTATLTIDSLQAEDEADYYC)中所示之序列；VLFR4包含SEQ ID NO：502(FGSGTRLTVLG)中所示之序列；或對於各FR序列，(i)與該序列具有至少50%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸取代的胺基酸序列；及(b)CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：44(SYYVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：52(NIYSTGRAFYNPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：265(GSYYHGGGNGMVDFFDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：39(SGSSSNVGYGNYVG)中所示之序列； VLCDR2包含SEQ ID NO：72(AATSRAS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：78(SSYQRGNTGV)中所示之序列。
或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基1至319之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之FR及CDR具有100%一致性之FR及CDR的特異性結合分子在本文中稱為「CA7」。
該特異性結合分子可包含：(a)構架區(FR)VHFR1、VHFR2、VHFR3、VHFR4、VLFR1、VLFR2、VLFR3及VLFR4，其中該等FR各自包含以下胺基酸序列：VHFR1包含SEQ ID NO：495(RVRLQGSGPSLVKPSQTLSLTCTVSGFSFD)中所示之序列；VHFR2包含SEQ ID NO：496(WVRQAPGKALEWLG)中所示之序列；VHFR3包含SEQ ID NO：497(RLSITRDTSKSQVSLSVSSVTIEDTALYYCVR)中所示之序列；VHFR4包含SEQ ID NO：498(WSPGLLVTVSS)中所示之序列；VLFR1包含SEQ ID NO：499(QVVRTQPSSVSGSLGQRVSITC)中所示之序列；VLFR2包含SEQ ID NO：500(WFQQVPGSAPKLLIY)中所示之序列；VLFR3包含SEQ ID NO：501(GVPDRFSGSRSGNTATLTIDSLQAEDEADYYC)中所示之序列；VLFR4包含SEQ ID NO：502(FGSGTRLTVLG)中所示之序列；或對於各FR序列， (i)與該序列具有至少50%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸取代的胺基酸序列；及(b)CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：44(SYYVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：52(NIYSTGRAFYNPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：265(GSYYHGGGNGMVDFFDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：39(SGSSSNVGYGNYVG)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：72(AATSRAS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：78(SSYQRGNTGV)中所示之序列。
其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基1至319之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之FR及CDR具有100%一致性之FR及CDR的特異性結合分子在本文中稱為「CA7」。
該特異性結合分子可包含：(a)包含SEQ ID NO：503中所示之序列的VH域(RVRLQGSGPSLVKPSQTLSLTCTVSGFSFDSYYVGWVRQAPGKALEWLGNIYSTGRAFYNPALKSRLSITRDTSKSQVSLSVSSVTIEDTALYYCVRGSYYHGGGNGMVDFFDYWSPGLLVTVSS)；及/或(b)包含SEQ ID NO：504中所示之序列的VL域(QVVRTQPSSVSGSLGQRVSITCSGSSSNVGYGNYVGWFQQVPGSAPKLLIYAATSRASGVPDRFSGSRSGNTATLTIDSLQAEDEADYYCSSYQRGNTGVFGSGTRLTVLG)；或其人源化變異體。
該特異性結合分子可包含：(a)包含SEQ ID NO：505(RVRLQGSGPSLVKPSQTLSLTCTVSGFSFDSYYVGWVRQAPGKALEWLGNIYSTGRAFYNPALKSRLSITRDTSKSQVSLSVSSVTIEDTALYYCVRGSYYHGGGNGMVDFFDYWSPGLLVTVSSAKTTAPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITCNVAHPASSTKVDKKIEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK)中所示之序列的重鏈；及/或(b)包含SEQ ID NO：506(QVVRTQPSSVSGSLGQRVSITCSGSSSNVGYGNYVGWFQQVPGSAPKLLIYAATSRASGVPDRFSGSRSGNTATLTIDSLQAEDEADYYCSSYQRGNTGVFGSGTRLTVLGGQPKSSPSVTLFPPSSEELETNKATLVCTITDFYPGVVTVDWKVDGTPVTQGMETTQPSKQSNNKYMASSYLTLTARAWERHSSYSCQVTHEGHTVEKSLSRADCS)中所示之序列的輕鏈；或其人源化變異體。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：266(SNAVV)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：267(AIDKDGDTIYNPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：268(DPSGWGYPDVDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：269(SGTYIGSSDVG)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：270(GTSSRPS)中所示之序列；且 VLCDR3包含SEQ ID NO：271(ATYESSYHNSV)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基1至319之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之CDR具有100%一致性之CDR的特異性結合分子在本文中稱為「CA8」。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：266(SNAVV)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：267(AIDKDGDTIYNPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：268(DPSGWGYPDVDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：269(SGTYIGSSDVG)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：270(GTSSRPS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：271(ATYESSYHNSV)中所示之序列。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：272(SNTVA)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：273(EINSGGSTYYNPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：274(GARSTYAAY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：275(SGSSSDVGYSTWVY)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：276(HISNRAS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：277(AAYDSSNNVWI)中所示之序列；或對於各CDR序列， (i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基1至319之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之CDR具有100%一致性之CDR的特異性結合分子在本文中稱為「CB10」。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：272(SNTVA)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：273(EINSGGSTYYNPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：274(GARSTYAAY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：275(SGSSSDVGYSTWVY)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：276(HISNRAS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：277(AAYDSSNNVWI)中所示之序列。
該特異性結合分子之抗原決定基可在包含SEQ ID NO：1之殘基13至25之胺基酸序列內。因此，該抗原決定基可在SEQ ID NO：278(DHAGTYGLGDRKD)之胺基酸序列內。
該抗原決定基可在包含SEQ ID NO：1之殘基13至25之胺基酸序列內。此抗原決定基可被本文中稱為「CB7」之特異性結合分子的CDR結合。
該抗原決定基可包含SEQ ID NO：278之胺基酸序列(DHAGTYGLGDRKD)。該抗原決定基可包含與SEQ ID NO：278(DHAGTYGLGDRKD)具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列。
該抗原決定基可由SEQ ID NO：278之胺基酸序列(DHAGTYGLGDRKD)組成。該抗原決定基可由與SEQ ID NO：278 (DHAGTYGLGDRKD)具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列組成。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：279(NYRVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：280(NIRSGGTTWYNPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：281(DSSGDLYAYDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：282(SGSSSNVGYGNYMA)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：141(GATSRAS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：263(ASYDSTSGGV)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基13至25之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之CDR具有100%一致性之CDR的特異性結合分子在本文中稱為「CB7」。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：279(NYRVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：280(NIRSGGTTWYNPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：281(DSSGDLYAYDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：282(SGSSSNVGYGNYMA)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：141(GATSRAS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：263(ASYDSTSGGV)中所示之序列。
該特異性結合分子可包含構架區(FR)VHFR1、VHFR2、VHFR3、VHFR4、VLFR1、VLFR2、VLFR3及VLFR4，其中該等FR各自包含以下胺基酸序列：VHFR1包含SEQ ID NO：507(QVQLQESGPSLVKPSQTLSLTCTVSGFSLT)中所示之序列；VHFR2包含SEQ ID NO：508(WVRQAPGKALEWVS)中所示之序列；VHFR3包含SEQ ID NO：509(RLSITADTSKSQVSLSLSSVTTEDTAVYYCAR)中所示之序列；VHFR4包含SEQ ID NO：510(WGPGLLVTVSS)中所示之序列；VLFR1包含SEQ ID NO：511(QAVLTQPSSVSRSLGQSVSMTC)中所示之序列；VLFR2包含SEQ ID NO：512(WFQQVPGSAPKLLIY)中所示之序列；VLFR3包含SEQ ID NO：513(GVPDRFSGSRSGNTATLTISSLQAEDEADYYC)中所示之序列；VLFR4包含SEQ ID NO：514(FGSGTRLTVLG)中所示之序列；或對於各FR序列，(i)與該序列具有至少50%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸取代的胺基酸序列。
該特異性結合分子可包含構架區(FR)VHFR1、VHFR2、VHFR3、VHFR4、VLFR1、VLFR2、VLFR3及VLFR4，其中該等FR各自包含以下胺基酸序列：VHFR1包含SEQ ID NO：507(QVQLQESGPSLVKPSQTLSLTCTVSGFSLT)中所示之序列； VHFR2包含SEQ ID NO：508(WVRQAPGKALEWVS)中所示之序列；VHFR3包含SEQ ID NO：509(RLSITADTSKSQVSLSLSSVTTEDTAVYYCAR)中所示之序列；VHFR4包含SEQ ID NO：510(WGPGLLVTVSS)中所示之序列；VLFR1包含SEQ ID NO：511(QAVLTQPSSVSRSLGQSVSMTC)中所示之序列；VLFR2包含SEQ ID NO：512(WFQQVPGSAPKLLIY)中所示之序列；VLFR3包含SEQ ID NO：513(GVPDRFSGSRSGNTATLTISSLQAEDEADYYC)中所示之序列；VLFR4包含SEQ ID NO：514(FGSGTRLTVLG)中所示之序列；或對於各FR序列，(i)與該序列具有至少50%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基13至25之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之FR具有100%一致性之FR的特異性結合分子在本文中稱為「CB7」。
該特異性結合分子可包含：(a)構架區(FR)VHFR1、VHFR2、VHFR3、VHFR4、VLFR1、VLFR2、VLFR3及VLFR4，其中該等FR各自包含以下胺基酸序列：VHFR1包含SEQ ID NO：507(QVQLQESGPSLVKPSQTLSLTCTVSGFSLT)中所示之序列；VHFR2包含SEQ ID NO：508(WVRQAPGKALEWVS)中所示之序列；VHFR3包含SEQ ID NO：509 (RLSITADTSKSQVSLSLSSVTTEDTAVYYCAR)中所示之序列；VHFR4包含SEQ ID NO：510(WGPGLLVTVSS)中所示之序列；VLFR1包含SEQ ID NO：511(QAVLTQPSSVSRSLGQSVSMTC)中所示之序列；VLFR2包含SEQ ID NO：512(WFQQVPGSAPKLLIY)中所示之序列；VLFR3包含SEQ ID NO：513(GVPDRFSGSRSGNTATLTISSLQAEDEADYYC)中所示之序列；VLFR4包含SEQ ID NO：514(FGSGTRLTVLG)中所示之序列；或對於各FR序列，(i)與該序列具有至少50%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸取代的胺基酸序列；及(b)CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：279(NYRVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：280(NIRSGGTTWYNPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：281(DSSGDLYAYDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：282(SGSSSNVGYGNYMA)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：141(GATSRAS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：263(ASYDSTSGGV)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基13至25之胺基酸 序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之FR及CDR具有100%一致性之FR及CDR的特異性結合分子在本文中稱為「CB7」。
該特異性結合分子可包含：(a)構架區(FR)VHFR1、VHFR2、VHFR3、VHFR4、VLFR1、VLFR2、VLFR3及VLFR4，其中該等FR各自包含以下胺基酸序列：VHFR1包含SEQ ID NO：507(QVQLQESGPSLVKPSQTLSLTCTVSGFSLT)中所示之序列；VHFR2包含SEQ ID NO：508(WVRQAPGKALEWVS)中所示之序列；VHFR3包含SEQ ID NO：509(RLSITADTSKSQVSLSLSSVTTEDTAVYYCAR)中所示之序列；VHFR4包含SEQ ID NO：510(WGPGLLVTVSS)中所示之序列；VLFR1包含SEQ ID NO：511(QAVLTQPSSVSRSLGQSVSMTC)中所示之序列；VLFR2包含SEQ ID NO：512(WFQQVPGSAPKLLIY)中所示之序列；VLFR3包含SEQ ID NO：513(GVPDRFSGSRSGNTATLTISSLQAEDEADYYC)中所示之序列；VLFR4包含SEQ ID NO：514(FGSGTRLTVLG)中所示之序列；或對於各FR序列，(i)與該序列具有至少50%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸取代的胺基酸序列；及(b)CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：279(NYRVG)中所示之序列； VHCDR2包含SEQ ID NO：280(NIRSGGTTWYNPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：281(DSSGDLYAYDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：282(SGSSSNVGYGNYMA)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：141(GATSRAS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：263(ASYDSTSGGV)中所示之序列；其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基13至25之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之FR及CDR具有100%一致性之FR及CDR的特異性結合分子在本文中稱為「CB7」。
該特異性結合分子可包含：(a)包含SEQ ID NO：515(QVQLQESGPSLVKPSQTLSLTCTVSGFSLTNYRVGWVRQAPGKALEWVSNIRSGGTTWYNPALKSRLSITADTSKSQVSLSLSSVTTEDTAVYYCARDSSGDLYAYDYWGPGLLVTVSS)中所示之序列的VH域；及/或(b)包含SEQ ID NO：516(QAVLTQPSSVSRSLGQSVSMTCSGSSSNVGYGNYMAWFQQVPGSAPKLLIYGATSRASGVPDRFSGSRSGNTATLTISSLQAEDEADYYCASYDSTSGGVFGSGTRLTVLG)中所示之序列的VL域；或其人源化變異體。
該特異性結合分子可包含：(a)包含SEQ ID NO：517(QVQLQESGPSLVKPSQTLSLTCTVSGFSLTNYRVGWVRQAPGKALEWVSNIRSGGTTWYNPALKSRLSITADTSKSQVSLSLSSVTTEDTAVYYCARDSSGDLYAYDYWGPGLLVTVSSAKTTAPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITCNVAHPASSTKVDKKIEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHRED YNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK)中所示之序列的重鏈；及/或(b)包含SEQ ID NO：518(QAVLTQPSSVSRSLGQSVSMTCSGSSSNVGYGNYMAWFQQVPGSAPKLLIYGATSRASGVPDRFSGSRSGNTATLTISSLQAEDEADYYCASYDSTSGGVFGSGTRLTVLGGQPKSSPSVTLFPPSSEELETNKATLVCTITDFYPGVVTVDWKVDGTPVTQGMETTQPSKQSNNKYMASSYLTLTARAWERHSSYSCQVTHEGHTVEKSLSRADCS)中所示之序列的輕鏈；或其人源化變異體。
該特異性結合分子之抗原決定基可在包含SEQ ID NO：1之殘基145至157之胺基酸序列內。因此，該抗原決定基可在SEQ ID NO：283之胺基酸序列(ADGKTKIATPRGA)內。
該抗原決定基可在包含SEQ ID NO：1之殘基145至157之胺基酸序列內。此抗原決定基可被本文中稱為「CC7」之特異性結合分子的CDR結合。
該抗原決定基可包含SEQ ID NO：283之胺基酸序列(ADGKTKIATPRGA)。該抗原決定基可包含與SEQ ID NO：283(ADGKTKIATPRGA)具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列。
該抗原決定基可由SEQ ID NO：283之胺基酸序列(ADGKTKIATPRGA)組成。該抗原決定基可由與SEQ ID NO：283(ADGKTKIATPRGA)具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列組成。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、 VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：198(SNAVI)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：200(LIDVDGDAAYDPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：202(DYGSWGYVSDIDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：292(SGSYITGSSVG)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：284(DNNDRPS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：285(ASYDTSNIGL)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基145至157之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之CDR具有100%一致性之CDR的特異性結合分子在本文中稱為「CC7」。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：198(SNAVI)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：200(LIDVDGDAAYDPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：202(DYGSWGYVSDIDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：292(SGSYITGSSVG)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：284(DNNDRPS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：285(ASYDTSNIGL)中所示之序列。
該特異性結合分子可包含構架區(FR)VHFR1、VHFR2、VHFR3、VHFR4、VLFR1、VLFR2、VLFR3及VLFR4，其中該等FR各自包含以下胺基酸序列： VHFR1包含SEQ ID NO：519(QVQLQESGPSLVKPSQTLSLTCTVSGFSLT)中所示之序列；VHFR2包含SEQ ID NO：520(WVRQAPGKAPEWVA)中所示之序列；VHFR3包含SEQ ID NO：521(RLSITRDTSKSQVSLSLRSVTTEDTAVYYCAR)中所示之序列；VHFR4包含SEQ ID NO：522(WGPGLLVTVSS)中所示之序列；VLFR1包含SEQ ID NO：523(RVVRTQPSSVSGSLGQRVSITC)中所示之序列；VLFR2包含SEQ ID NO：524(WFQQVPGSGLKTVIY)中所示之序列；VLFR3包含SEQ ID NO：525(GVPDRFSGSKSGDTATLTISSLQAEDEADYYC)中所示之序列；VLFR4包含SEQ ID NO：526(FGSGTRLTVLG)中所示之序列；或對於各FR序列，(i)與該序列具有至少50%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸取代的胺基酸序列。
該特異性結合分子可包含構架區(FR)VHFR1、VHFR2、VHFR3、VHFR4、VLFR1、VLFR2、VLFR3及VLFR4，其中該等FR各自包含以下胺基酸序列：VHFR1包含SEQ ID NO：519(QVQLQESGPSLVKPSQTLSLTCTVSGFSLT)中所示之序列；VHFR2包含SEQ ID NO：520(WVRQAPGKAPEWVA)中所示之序列；VHFR3包含SEQ ID NO：521(RLSITRDTSKSQVSLSLRSVTTEDTAVYYCAR)中所示之序列； VHFR4包含SEQ ID NO：522(WGPGLLVTVSS)中所示之序列；VLFR1包含SEQ ID NO：523(RVVRTQPSSVSGSLGQRVSITC)中所示之序列；VLFR2包含SEQ ID NO：524(WFQQVPGSGLKTVIY)中所示之序列；VLFR3包含SEQ ID NO：525(GVPDRFSGSKSGDTATLTISSLQAEDEADYYC)中所示之序列；VLFR4包含SEQ ID NO：526(FGSGTRLTVLG)中所示之序列；或對於各FR序列，(i)與該序列具有至少50%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基145至157之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之FR具有100%一致性之FR的特異性結合分子在本文中稱為「CC7」。
該特異性結合分子可包含：(a)構架區(FR)VHFR1、VHFR2、VHFR3、VHFR4、VLFR1、VLFR2、VLFR3及VLFR4，其中該等FR各自包含以下胺基酸序列：VHFR1包含SEQ ID NO：519(QVQLQESGPSLVKPSQTLSLTCTVSGFSLT)中所示之序列；VHFR2包含SEQ ID NO：520(WVRQAPGKAPEWVA)中所示之序列；VHFR3包含SEQ ID NO：521(RLSITRDTSKSQVSLSLRSVTTEDTAVYYCAR)中所示之序列；VHFR4包含SEQ ID NO：522(WGPGLLVTVSS)中所示之序列；VLFR1包含SEQ ID NO：523(RVVRTQPSSVSGSLGQRVSITC)中所示之序 列；VLFR2包含SEQ ID NO：524(WFQQVPGSGLKTVIY)中所示之序列；VLFR3包含SEQ ID NO：525(GVPDRFSGSKSGDTATLTISSLQAEDEADYYC)中所示之序列；VLFR4包含SEQ ID NO：526(FGSGTRLTVLG)中所示之序列；或對於各FR序列，(i)與該序列具有至少50%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸取代的胺基酸序列；及(b)CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：198(SNAVI)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：200(LIDVDGDAAYDPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：202(DYGSWGYVSDIDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：292(SGSYITGSSVG)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：284(DNNDRPS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：285(ASYDTSNIGL)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基145至157之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之FR及CDR具有100%一致性之FR及CDR的特異性結合分子在本文中稱為「CC7」。
該特異性結合分子可包含： (a)構架區(FR)VHFR1、VHFR2、VHFR3、VHFR4、VLFR1、VLFR2、VLFR3及VLFR4，其中該等FR各自包含以下胺基酸序列：VHFR1包含SEQ ID NO：519(QVQLQESGPSLVKPSQTLSLTCTVSGFSLT)中所示之序列；VHFR2包含SEQ ID NO：520(WVRQAPGKAPEWVA)中所示之序列；VHFR3包含SEQ ID NO：521(RLSITRDTSKSQVSLSLRSVTTEDTAVYYCAR)中所示之序列；VHFR4包含SEQ ID NO：522(WGPGLLVTVSS)中所示之序列；VLFR1包含SEQ ID NO：523(RVVRTQPSSVSGSLGQRVSITC)中所示之序列；VLFR2包含SEQ ID NO：524(WFQQVPGSGLKTVIY)中所示之序列；VLFR3包含SEQ ID NO：525(GVPDRFSGSKSGDTATLTISSLQAEDEADYYC)中所示之序列；VLFR4包含SEQ ID NO：526(FGSGTRLTVLG)中所示之序列；或對於各FR序列，(i)與該序列具有至少50%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸取代的胺基酸序列；及(b)CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：198(SNAVI)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：200(LIDVDGDAAYDPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：202(DYGSWGYVSDIDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：292(SGSYITGSSVG)中所示之序列； VLCDR2包含SEQ ID NO：284(DNNDRPS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：285(ASYDTSNIGL)中所示之序列；其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基145至157之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之FR及CDR具有100%一致性之FR及CDR的特異性結合分子在本文中稱為「CC7」。
該特異性結合分子可包含：(a)包含SEQ ID NO：527(QVQLQESGPSLVKPSQTLSLTCTVSGFSLTSNAVIWVRQAPGKAPEWVALIDVDGDAAYDPALKSRLSITRDTSKSQVSLSLRSVTTEDTAVYYCARDYGSWGYVSDIDYWGPGLLVTVSS)中所示之序列的VH域；及/或(b)包含SEQ ID NO：528(RVVRTQPSSVSGSLGQRVSITCSGSYITGSSVGWFQQVPGSGLKTVIYDNNDRPSGVPDRFSGSKSGDTATLTISSLQAEDEADYYCASYDTSNIGLFGSGTRLTVLG)中所示之序列的VL域；或其人源化變異體。
該特異性結合分子可包含：(a)包含SEQ ID NO：529(QVQLQESGPSLVKPSQTLSLTCTVSGFSLTSNAVIWVRQAPGKAPEWVALIDVDGDAAYDPALKSRLSITRDTSKSQVSLSLRSVTTEDTAVYYCARDYGSWGYVSDIDYWGPGLLVTVSSAKTTAPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITCNVAHPASSTKVDKKIEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTP GK)中所示之序列的重鏈；及/或(b)包含SEQ ID NO：530(RVVRTQPSSVSGSLGQRVSITCSGSYITGSSVGWFQQVPGSGLKTVIYDNNDRPSGVPDRFSGSKSGDTATLTISSLQAEDEADYYCASYDTSNIGLFGSGTRLTVLGGQPKSSPSVTLFPPSSEELETNKATLVCTITDFYPGVVTVDWKVDGTPVTQGMETTQPSKQSNNKYMASSYLTLTARAWERHSSYSCQVTHEGHTVEKSLSRADCS)中所示之序列的輕鏈；或其人源化變異體。
該特異性結合分子之抗原決定基可在包含SEQ ID NO：1之殘基155至227之胺基酸序列內。因此，該抗原決定基可在SEQ ID NO：294之胺基酸序列(RGAAPPGQKGQANATRIPAKTPPAPKTPPSSGEPPKSGDRSGYSSPGSPGTPGSRSRTPSLPTPPTREPKKVA)內。
該抗原決定基可在包含SEQ ID NO：1之殘基155至227之胺基酸序列內。此抗原決定基可被本文中稱為「CB12」及「CC3」之特異性結合分子的CDR結合。
該抗原決定基可包含SEQ ID NO：294之胺基酸序列(RGAAPPGQKGQANATRIPAKTPPAPKTPPSSGEPPKSGDRSGYSSPGSPGTPGSRSRTPSLPTPPTREPKKVA)。該抗原決定基可包含與SEQ ID NO：294(RGAAPPGQKGQANATRIPAKTPPAPKTPPSSGEPPKSGDRSGYSSPGSPGTPGSRSRTPSLPTPPTREPKKVA)具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列。
該抗原決定基可由SEQ ID NO：294之胺基酸序列(RGAAPPGQKGQANATRIPAKTPPAPKTPPSSGEPPKSGDRSGYSSPGSPGTPGSRSRTPSLPTPPTREPKKVA)組成。該抗原決定基可由與SEQ ID NO：294具有 至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列(RGAAPPGQKGQANATRIPAKTPPAPKTPPSSGEPPKSGDRSGYSSPGSPGTPGSRSRTPSLPTPPTREPKKVA)組成。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：259(SNGVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：182(DKSSAGKTYGNPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：286(CRDGGVSYGYDVDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：287(SGSSSNVGGDYVG)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：288(DTTSRPS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：289(ASVDKTTGGV)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基155至227之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之CDR具有100%一致性之CDR的特異性結合分子在本文中稱為「CB12」。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：259(SNGVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：182(DKSSAGKTYGNPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：286(CRDGGVSYGYDVDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：287(SGSSSNVGGDYVG)中所示之序列； VLCDR2包含SEQ ID NO：288(DTTSRPS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：289(ASVDKTTGGV)中所示之序列。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：259(SNGVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：182(DKSSAGKTYGNPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：286(CRDGGVSYGYDVDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：290(SGSSSNVGYGTYVS)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：188(GTTTRAS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：291(ASYDTGSGGV)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基155至227之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之CDR具有100%一致性之CDR的特異性結合分子在本文中稱為「CC3」。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：259(SNGVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：182(DKSSAGKTYGNPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：286(CRDGGVSYGYDVDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：290(SGSSSNVGYGTYVS)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：188(GTTTRAS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：291(ASYDTGSGGV)中所示之序列。
該特異性結合分子之抗原決定基可在包含SEQ ID NO：1之殘基155至238之胺基酸序列內。因此，該抗原決定基可在SEQ ID NO：295之胺基酸序列(RGAAPPGQKGQANATRIPAKTPPAPKTPPSSGEPPKSGDRSGYSSPGSPGTPGSRSRTPSLPTPPTREPKKVAVVRTPPKSPSS)內。
該抗原決定基可在包含SEQ ID NO：1之殘基155至238之胺基酸序列內。此抗原決定基可被本文中稱為「CA1」之特異性結合分子的CDR結合。
該抗原決定基可包含SEQ ID NO：295(RGAAPPGQKGQANATRIPAKTPPAPKTPPSSGEPPKSGDRSGYSSPGSPGTPGSRSRTPSLPTPPTREPKKVAVVRTPPKSPSS)之胺基酸序列。該抗原決定基可包含與SEQ ID NO：295(RGAAPPGQKGQANATRIPAKTPPAPKTPPSSGEPPKSGDRSGYSSPGSPGTPGSRSRTPSLPTPPTREPKKVAVVRTPPKSPSS)具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列。
該抗原決定基可由SEQ ID NO：295之胺基酸序列(RGAAPPGQKGQANATRIPAKTPPAPKTPPSSGEPPKSGDRSGYSSPGSPGTPGSRSRTPSLPTPPTREPKKVAVVRTPPKSPSS)組成。該抗原決定基可由與SEQ ID NO：295(RGAAPPGQKGQANATRIPAKTPPAPKTPPSSGEPPKSGDRSGYSSPGSPGTPGSRSRTPSLPTPPTREPKKVAVVRTPPKSPSS)具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列組成。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：198(SNAVI)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：296(DIRADGATNYNAALKS)中所示之序列； VHCDR3包含SEQ ID NO：297(PGNYYYGAGRDVARLAD)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：298(SGSSSNIGGGNAVG)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：288(DTTSRPS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：299(AAMDSSSLIGV)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基155至238之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之CDR具有100%一致性之CDR的特異性結合分子在本文中稱為「CA1」。
該特異性結合分子之抗原決定基可在包含SEQ ID NO：1之殘基186至263之胺基酸序列內。因此，該抗原決定基可在SEQ ID NO：300之胺基酸序列(GEPPKSGDRSGYSSPGSPGTPGSRSRTPSLPTPPTREPKKVAVVRTPPKSPSSAKSRLQTAPVPMPDLKNVKSKIGST)內。
該抗原決定基可在包含SEQ ID NO：1之殘基186至263之胺基酸序列內。此抗原決定基可被本文中稱為「CA3」之特異性結合分子的CDR結合。
該抗原決定基可包含SEQ ID NO：300之胺基酸序列(GEPPKSGDRSGYSSPGSPGTPGSRSRTPSLPTPPTREPKKVAVVRTPPKSPSSAKSRLQTAPVPMPDLKNVKSKIGST)。該抗原決定基可包含與SEQ ID NO：300(GEPPKSGDRSGYSSPGSPGTPGSRSRTPSLPTPPTREPKKVAVVRTPPKSPSSAKSRLQTAPVPMPDLKNVKSKIGST)具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列。
該抗原決定基可由SEQ ID NO：300之胺基酸序列 (GEPPKSGDRSGYSSPGSPGTPGSRSRTPSLPTPPTREPKKVAVVRTPPKSPSSAKSRLQTAPVPMPDLKNVKSKIGST)組成。該抗原決定基可由與SEQ ID NO：300(GEPPKSGDRSGYSSPGSPGTPGSRSRTPSLPTPPTREPKKVAVVRTPPKSPSSAKSRLQTAPVPMPDLKNVKSKIGST)具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列組成。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：259(SNGVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：182(DKSSAGKTYGNPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：184(CRDGGVTYGYDVDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：301(SGSSGNIGYDDYVS)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：302(GATRRSS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：303(ASYDSSGGGV)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基186至263之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之CDR具有100%一致性之CDR的特異性結合分子在本文中稱為「CA3」。
該特異性結合分子之抗原決定基可在包含SEQ ID NO：1之殘基186至350之胺基酸序列內。因此，該抗原決定基可在SEQ ID NO：304之胺基酸序列(GEPPKSGDRSGYSSPGSPGTPGSRSRTPSLPTPPTREPKKVAVVRTPPKSPSSAKSRLQTAPVPMPDLKNVKSKIGSTENLKHQPGGGKVQIINKKLDLSNV QSKCGSKDNIKHVPGGGSVQIVYKPVDLSKVTSKCGSLGNIHHKPGGGQVEVKSEKLDFKDRV)內。
該抗原決定基可在包含SEQ ID NO：1之殘基186至350之胺基酸序列內。此抗原決定基可被本文中稱為「CD2」之特異性結合分子的CDR結合。
該抗原決定基可包含SEQ ID NO：304之胺基酸序列(GEPPKSGDRSGYSSPGSPGTPGSRSRTPSLPTPPTREPKKVAVVRTPPKSPSSAKSRLQTAPVPMPDLKNVKSKIGSTENLKHQPGGGKVQIINKKLDLSNVQSKCGSKDNIKHVPGGGSVQIVYKPVDLSKVTSKCGSLGNIHHKPGGGQVEVKSEKLDFKDRV)。該抗原決定基可包含與SEQ ID NO：304(GEPPKSGDRSGYSSPGSPGTPGSRSRTPSLPTPPTREPKKVAVVRTPPKSPSSAKSRLQTAPVPMPDLKNVKSKIGSTENLKHQPGGGKVQIINKKLDLSNVQSKCGSKDNIKHVPGGGSVQIVYKPVDLSKVTSKCGSLGNIHHKPGGGQVEVKSEKLDFKDRV)具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列。
該抗原決定基可由SEQ ID NO：304之胺基酸序列(GEPPKSGDRSGYSSPGSPGTPGSRSRTPSLPTPPTREPKKVAVVRTPPKSPSSAKSRLQTAPVPMPDLKNVKSKIGSTENLKHQPGGGKVQIINKKLDLSNVQSKCGSKDNIKHVPGGGSVQIVYKPVDLSKVTSKCGSLGNIHHKPGGGQVEVKSEKLDFKDRV)組成。該抗原決定基可由與SEQ ID NO：304(GEPPKSGDRSGYSSPGSPGTPGSRSRTPSLPTPPTREPKKVAVVRTPPKSPSSAKSRLQTAPVPMPDLKNVKSKIGSTENLKHQPGGGKVQIINKKLDLSNVQSKCGSKDNIKHVPGGGSVQIVYKPVDLSKVTSKCGSLGNIHHKPGGGQVEVKSEKLDFKDRV)具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列組成。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：198(SNAVI)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：200(LIDVDGDAAYDPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：202(DYGSWGYVSDIDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：305(SGSNIGDADVG)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：306(YNENRPS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：307(GSYAGDTYNHGV)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基186至350之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之CDR具有100%一致性之CDR的特異性結合分子在本文中稱為「CD2」。
該特異性結合分子之抗原決定基可在包含SEQ ID NO：1之殘基239至348之胺基酸序列內。因此，該抗原決定基可在SEQ ID NO：308之胺基酸序列(AKSRLQTAPVPMPDLKNVKSKIGSTENLKHQPGGGKVQIINKKLDLSNVQSKCGSKDNIKHVPGGGSVQIVYKPVDLSKVTSKCGSLGNIHHKPGGGQVEVKSEKLDFKD)內。
該抗原決定基可在包含SEQ ID NO：1之殘基239至348之胺基酸序列內。此抗原決定基可被本文中稱為「CB9」之特異性結合分子的CDR結合。
該抗原決定基可包含308之胺基酸序列(AKSRLQTAPVPMPDLKNVKSKIGSTENLKHQPGGGKVQIINKKLDLSNVQSKCGSKDNIKHVPGGGSVQIVYKPVDLSKVTSKCGSLGNIHHKPGGGQVEVKS EKLDFKD)。該抗原決定基可包含與308(AKSRLQTAPVPMPDLKNVKSKIGSTENLKHQPGGGKVQIINKKLDLSNVQSKCGSKDNIKHVPGGGSVQIVYKPVDLSKVTSKCGSLGNIHHKPGGGQVEVKSEKLDFKD)具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列。
該抗原決定基可由308之胺基酸序列(AKSRLQTAPVPMPDLKNVKSKIGSTENLKHQPGGGKVQIINKKLDLSNVQSKCGSKDNIKHVPGGGSVQIVYKPVDLSKVTSKCGSLGNIHHKPGGGQVEVKSEKLDFKD)組成。該抗原決定基可由與308(AKSRLQTAPVPMPDLKNVKSKIGSTENLKHQPGGGKVQIINKKLDLSNVQSKCGSKDNIKHVPGGGSVQIVYKPVDLSKVTSKCGSLGNIHHKPGGGQVEVKSEKLDFKD)具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列組成。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：42(SNSVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：48(GIDSDGEEGYNPALNS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：54(SYRADGLAYGYVQAIDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：67(SGRFIGISSVG)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：70(ASDGRPS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：74(GSSDRTQYTGV)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列， 其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基239至348之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之CDR具有100%一致性之CDR的特異性結合分子在本文中稱為「CB9」。
該特異性結合分子之抗原決定基可在包含SEQ ID NO：1之殘基266至359之胺基酸序列內。因此，該抗原決定基可在SEQ ID NO：309之胺基酸序列(LKHQPGGGKVQIINKKLDLSNVQSKCGSKDNIKHVPGGGSVQIVYKPVDLSKVTSKCGSLGNIHHKPGGGQVEVKSEKLDFKDRVQSKIGSLDN)內。
該抗原決定基可在包含SEQ ID NO：1之殘基266至359之胺基酸序列內。此抗原決定基可被本文中稱為「CG11」之特異性結合分子的CDR結合。
該抗原決定基可包含SEQ ID NO：309之胺基酸序列(LKHQPGGGKVQIINKKLDLSNVQSKCGSKDNIKHVPGGGSVQIVYKPVDLSKVTSKCGSLGNIHHKPGGGQVEVKSEKLDFKDRVQSKIGSLDN)。該抗原決定基可包含與SEQ ID NO：309(LKHQPGGGKVQIINKKLDLSNVQSKCGSKDNIKHVPGGGSVQIVYKPVDLSKVTSKCGSLGNIHHKPGGGQVEVKSEKLDFKDRVQSKIGSLDN)具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列。
該抗原決定基可由SEQ ID NO：309之胺基酸序列(LKHQPGGGKVQIINKKLDLSNVQSKCGSKDNIKHVPGGGSVQIVYKPVDLSKVTSKCGSLGNIHHKPGGGQVEVKSEKLDFKDRVQSKIGSLDN)組成。該抗原決定基可由與SEQ ID NO：309(LKHQPGGGKVQIINKKLDLSNVQSKCGSKDNIKHVPGGGSVQIVYKPVDLSKVTSKCGSLGNIHHKPGGGQVEVKSEKLDFKDRVQSKIGSLDN)具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列組成。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、 VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：310(NYPVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：311(NIENDGSANYASALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：312(EFGGSDGYTYFVDIDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：313(SGSSSNVGYGNYVS)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：141(GATSRAS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：314(ASYDGSSSGV)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基266至359之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之CDR具有100%一致性之CDR的特異性結合分子在本文中稱為「CG11」。
該特異性結合分子之抗原決定基可在包含SEQ ID NO：1之殘基277至319之胺基酸序列內。因此，該抗原決定基可在SEQ ID NO：315之胺基酸序列(IINKKLDLSNVQSKCGSKDNIKHVPGGGSVQIVYKPVDLSKVT)內。
該抗原決定基可在包含SEQ ID NO：1之殘基277至319之胺基酸序列內。此抗原決定基可被本文中稱為「CA10」之特異性結合分子的CDR結合。
該抗原決定基可包含SEQ ID NO：315之胺基酸序列(IINKKLDLSNVQSKCGSKDNIKHVPGGGSVQIVYKPVDLSKVT)。該抗原決定基可包含與SEQ ID NO：315(IINKKLDLSNVQSKCGSKDNIKHVPGGGSVQIVYKPVDLSKVT)具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列。
該抗原決定基可由SEQ ID NO：315之胺基酸序列(IINKKLDL SNVQSKCGSKDNIKHVPGGGSVQIVYKPVDLSKVT)組成。該抗原決定基可由與SEQ ID NO：315(IINKKLDLSNVQSKCGSKDNIKHVPGGGSVQIVYKPVDLSKVT)具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列組成。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：259(SNGVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：157(DISSVGKKYANPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：161(CRDGGVTYGYDIDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：316(SGSSSNVGYGNYVT)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：317(DATTRVS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：318(AAHDSSSGGV)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基277至319之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之CDR具有100%一致性之CDR的特異性結合分子在本文中稱為「CA10」。
該特異性結合分子之抗原決定基可在包含SEQ ID NO：1之殘基297至390之胺基酸序列內。因此，該抗原決定基可在SEQ ID NO：5之胺基酸序列(IKHVPGGGSVQIVYKPVDLSKVTSKCGSLGNIHHKPGGGQVEVKSEKLDFKDRVQSKIGSLDNITHVPGGGNKKIETHKLTFRENAKAKTDHGA)內。
該抗原決定基可在包含SEQ ID NO：1之殘基297至390之胺基酸序列內。此抗原決定基可被本文中稱為「CC12」之特異性結合分子的CDR結合。
該抗原決定基可包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列(IKHVPGGGSVQIVYKPVDLSKVTSKCGSLGNIHHKPGGGQVEVKSEKLDFKDRVQSKIGSLDNITHVPGGGNKKIETHKLTFRENAKAKTDHGA)。該抗原決定基可包含與SEQ ID NO：5(IKHVPGGGSVQIVYKPVDLSKVTSKCGSLGNIHHKPGGGQVEVKSEKLDFKDRVQSKIGSLDNITHVPGGGNKKIETHKLTFRENAKAKTDHGA)具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列。
該抗原決定基可由SEQ ID NO：5之胺基酸序列(IKHVPGGGSVQIVYKPVDLSKVTSKCGSLGNIHHKPGGGQVEVKSEKLDFKDRVQSKIGSLDNITHVPGGGNKKIETHKLTFRENAKAKTDHGA)組成。該抗原決定基可由與SEQ ID NO：5(IKHVPGGGSVQIVYKPVDLSKVTSKCGSLGNIHHKPGGGQVEVKSEKLDFKDRVQSKIGSLDNITHVPGGGNKKIETHKLTFRENAKAKTDHGA)具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列組成。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：42(SNSVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：48(GIDSDGEEGYNPALNS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：54(SYRADGLAYGYVQAIDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：67(SGRFIGISSVG)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：70(ASDGRPS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：74(GSSDRTQYTGV)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或 (ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基297至390之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之CDR具有100%一致性之CDR的特異性結合分子在本文中稱為「CC12」。
該特異性結合分子之抗原決定基可在包含SEQ ID NO：1之殘基319至331之胺基酸序列內。因此，該抗原決定基可在SEQ ID NO：319(TSKCGSLGNIHHK)之胺基酸序列內。
該抗原決定基可在包含SEQ ID NO：1之殘基319至331之胺基酸序列內。此抗原決定基可被本文中稱為「CE2」或「E1B8」之特異性結合分子的CDR結合。該抗原決定基之關鍵殘基可為殘基323(G)、324(S)、325(L)、326(G)、327(N)及/或328(I)(根據SEQ ID NO：1編號)。該抗原決定基可包含SEQ ID NO：320之胺基酸序列(XXXXGSLGNIXXX，其中X係任何胺基酸)。該抗原決定基可包含SEQ ID NO：319之胺基酸序列，其中除殘基編號323(G)、324(S)、325(L)、326(G)、327(N)及/或328(I)外的任一個或多個殘基經非保守胺基酸取代置換(根據SEQ ID NO：1編號)。該抗原決定基可包含SEQ ID NO：319之胺基酸序列，其中除殘基編號323(G)、324(S)、325(L)、326(G)、327(N)及/或328(I)外的任一個或多個殘基經保守胺基酸取代置換(根據SEQ ID NO：1編號)。該抗原決定基可包含SEQ ID NO：319之胺基酸序列，其中除殘基編號323(G)、324(S)、325(L)、326(G)、327(N)及/或328(I)外的任一個或多個殘基經保守胺基酸取代置換(根據SEQ ID NO：1編號)且除殘基編號323(G)、324(S)、325(L)、326(G)、327(N)及/或328(I)外的任一個或多個殘基經非保守胺基酸取代置換(根據SEQ ID NO：1編號)。
該抗原決定基可包含SEQ ID NO：319之胺基酸序列(TSKCGSLGNIHHK)。該抗原決定基可包含與SEQ ID NO：319 (TSKCGSLGNIHHK)具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列。
該抗原決定基可由SEQ ID NO：319之胺基酸序列(TSKCGSLGNIHHK)組成。該抗原決定基可由與SEQ ID NO：319(TSKCGSLGNIHHK)具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列組成。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：310(NYPVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：311(NIENDGSANYASALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：312(EFGGSDGYTYFVDIDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：313(SGSSSNVGYGNYVS)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：141(GATSRAS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：314(ASYDGSSSGV)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基319至331之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之CDR具有100%一致性之CDR的特異性結合分子在本文中稱為「CE2」或「E1B8」。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：310(NYPVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：311(NIENDGSANYASALKS)中所示之序列； VHCDR3包含SEQ ID NO：312(EFGGSDGYTYFVDIDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：313(SGSSSNVGYGNYVS)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：141(GATSRAS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：314(ASYDGSSSGV)中所示之序列。
該特異性結合分子可包含構架區(FR)VHFR1、VHFR2、VHFR3、VHFR4、VLFR1、VLFR2、VLFR3及VLFR4，其中該等FR各自包含以下胺基酸序列：VHFR1包含SEQ ID NO：531(QVQLQESGPSLVKPSQTLSLTCTVSGFSLT)中所示之序列；VHFR2包含SEQ ID NO：532(WVRQAPGKALEWIG)中所示之序列；VHFR3包含SEQ ID NO：533(RLSITRDTSKNQVSLSLSSATTEDTAVYYCGR)中所示之序列；VHFR4包含SEQ ID NO：534(WGPGLLVTVSS)中所示之序列；VLFR1包含SEQ ID NO：535(QAVLTQPSSVSKSLGQSVSITC)中所示之序列；VLFR2包含SEQ ID NO：536(WFQQVPGSAPKILIY)中所示之序列；VLFR3包含SEQ ID NO：537(GVPDRFSGSRSGNTATLTITSLQAEDEADYYC)中所示之序列；VLFR4包含SEQ ID NO：538(FGSGTRLTVLG)中所示之序列；或對於各FR序列，(i)與該序列具有至少50%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸取代的胺基酸序列。
該特異性結合分子可包含構架區(FR)VHFR1、VHFR2、VHFR3、 VHFR4、VLFR1、VLFR2、VLFR3及VLFR4，其中該等FR各自包含以下胺基酸序列：VHFR1包含SEQ ID NO：531(QVQLQESGPSLVKPSQTLSLTCTVSGFSLT)中所示之序列；VHFR2包含SEQ ID NO：532(WVRQAPGKALEWIG)中所示之序列；VHFR3包含SEQ ID NO：533(RLSITRDTSKNQVSLSLSSATTEDTAVYYCGR)中所示之序列；VHFR4包含SEQ ID NO：534(WGPGLLVTVSS)中所示之序列；VLFR1包含SEQ ID NO：535(QAVLTQPSSVSKSLGQSVSITC)中所示之序列；VLFR2包含SEQ ID NO：536(WFQQVPGSAPKILIY)中所示之序列；VLFR3包含SEQ ID NO：n537(GVPDRFSGSRSGNTATLTITSLQAEDEADYYC)中所示之序列；VLFR4包含SEQ ID NO：538(FGSGTRLTVLG)中所示之序列；或對於各FR序列，(i)與該序列具有至少50%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基319至331之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之FR具有100%一致性之FR的特異性結合分子在本文中稱為「CE2」。
該特異性結合分子可包含：(a)構架區(FR)VHFR1、VHFR2、VHFR3、VHFR4、VLFR1、VLFR2、VLFR3及VLFR4，其中該等FR各自包含以下胺基酸序列： VHFR1包含SEQ ID NO：531(QVQLQESGPSLVKPSQTLSLTCTVSGFSLT)中所示之序列；VHFR2包含SEQ ID NO：532(WVRQAPGKALEWIG)中所示之序列；VHFR3包含SEQ ID NO：533(RLSITRDTSKNQVSLSLSSATTEDTAVYYCGR)中所示之序列；VHFR4包含SEQ ID NO：534(WGPGLLVTVSS)中所示之序列；VLFR1包含SEQ ID NO：535(QAVLTQPSSVSKSLGQSVSITC)中所示之序列；VLFR2包含SEQ ID NO：536(WFQQVPGSAPKILIY)中所示之序列；VLFR3包含SEQ ID NO：537(GVPDRFSGSRSGNTATLTITSLQAEDEADYYC)中所示之序列；VLFR4包含SEQ ID NO：538(FGSGTRLTVLG)中所示之序列；或對於各FR序列，(i)與該序列具有至少50%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸取代的胺基酸序列；及(b)CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：310(NYPVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：311(NIENDGSANYASALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：312(EFGGSDGYTYFVDIDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：313(SGSSSNVGYGNYVS)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：141(GATSRAS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：314(ASYDGSSSGV)中所示之序列； 或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基319至331之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之FR及CDR具有100%一致性之FR及CDR的特異性結合分子在本文中稱為「CE2」。
該特異性結合分子可包含：(a)構架區(FR)VHFR1、VHFR2、VHFR3、VHFR4、VLFR1、VLFR2、VLFR3及VLFR4，其中該等FR各自包含以下胺基酸序列：VHFR1包含SEQ ID NO：531(QVQLQESGPSLVKPSQTLSLTCTVSGFSLT)中所示之序列；VHFR2包含SEQ ID NO：532(WVRQAPGKALEWIG)中所示之序列；VHFR3包含SEQ ID NO：533(RLSITRDTSKNQVSLSLSSATTEDTAVYYCGR)中所示之序列；VHFR4包含SEQ ID NO：534(WGPGLLVTVSS)中所示之序列；VLFR1包含SEQ ID NO：535(QAVLTQPSSVSKSLGQSVSITC)中所示之序列；VLFR2包含SEQ ID NO：536(WFQQVPGSAPKILIY)中所示之序列；VLFR3包SEQ ID NO：537(GVPDRFSGSRSGNTATLTITSLQAEDEADYYC)含中所示之序列；VLFR4包含SEQ ID NO：538(FGSGTRLTVLG)中所示之序列；或對於各FR序列，(i)與該序列具有至少50%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸取代的胺基酸 序列；及(b)CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：310(NYPVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：311(NIENDGSANYASALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：312(EFGGSDGYTYFVDIDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：313(SGSSSNVGYGNYVS)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：141(GATSRAS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：314(ASYDGSSSGV)中所示之序列；其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基319至331之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之FR及CDR具有100%一致性之FR及CDR的特異性結合分子在本文中稱為「CE2」。
該特異性結合分子可包含：(a)包含SEQ ID NO：539(QVQLQESGPSLVKPSQTLSLTCTVSGFSLTNYPVGWVRQAPGKALEWIGNIENDGSANYASALKSRLSITRDTSKNQVSLSLSSATTEDTAVYYCGREFGGSDGYTYFVDIDYWGPGLLVTVSS)中所示之序列的VH域；及/或(b)包含SEQ ID NO：540(QAVLTQPSSVSKSLGQSVSITCSGSSSNVGYGNYVSWFQQVPGSAPKILIYGATSRASGVPDRFSGSRSGNTATLTITSLQAEDEADYYCASYDGSSSGVFGSGTRLTVLG)中所示之序列的VL域；或其人源化變異體。
該特異性結合分子可包含：(a)包含SEQ ID NO：541(QVQLQESGPSLVKPSQTLSLTCTVSGFSLTNYPVGWVRQAPGKALEWIGNIENDGSANYASALKSRLSITRDTSKNQVSLS LSSATTEDTAVYYCGREFGGSDGYTYFVDIDYWGPGLLVTVSSAKTTAPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITCNVAHPASSTKVDKKIEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK)中所示之序列的重鏈；及/或(b)包含SEQ ID NO：542(QAVLTQPSSVSKSLGQSVSITCSGSSSNVGYGNYVSWFQQVPGSAPKILIYGATSRASGVPDRFSGSRSGNTATLTITSLQAEDEADYYCASYDGSSSGVFGSGTRLTVLGGQPKSSPSVTLFPPSSEELETNKATLVCTITDFYPGVVTVDWKVDGTPVTQGMETTQPSKQSNNKYMASSYLTLTARAWERHSSYSCQVTHEGHTVEKSLSRADCS)中所示之序列的輕鏈；或其人源化變異體。
該特異性結合分子之抗原決定基可在包含SEQ ID NO：1之殘基331至360之胺基酸序列內。因此，該抗原決定基可在SEQ ID NO：321之胺基酸序列(KPGGGQVEVKSEKLDFKDRVQSKIGSLDNI)內。
該抗原決定基可在包含SEQ ID NO：1之殘基331至360之胺基酸序列內。此抗原決定基可被本文中稱為「CE3」之特異性結合分子的CDR結合。
該抗原決定基可包含SEQ ID NO：321之胺基酸序列(KPGGGQVEVKSEKLDFKDRVQSKIGSLDNI)。該抗原決定基可包含與SEQ ID NO：321(KPGGGQVEVKSEKLDFKDRVQSKIGSLDNI)具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列。
該抗原決定基可由SEQ ID NO：321之胺基酸序列 (KPGGGQVEVKSEKLDFKDRVQSKIGSLDNI)組成。該抗原決定基可由與SEQ ID NO：321(KPGGGQVEVKSEKLDFKDRVQSKIGSLDNI)具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列組成。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：17(SNAVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：20(GCSSDGKCYYNSALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：23(GYYPVYGYDYLGTIDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：25(SGSSSNVGRNDVA)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：28(GTTSRPS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：31(ASGDSSAINDI)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基331至360之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之CDR具有100%一致性之CDR的特異性結合分子在本文中稱為「CE3」。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：17(SNAVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：20(GCSSDGKCYYNSALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：23(GYYPVYGYDYLGTIDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：25(SGSSSNVGRNDVA)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：28(GTTSRPS)中所示之序列；且 VLCDR3包含SEQ ID NO：31(ASGDSSAINDI)中所示之序列。
該特異性結合分子可包含構架區(FR)VHFR1、VHFR2、VHFR3、VHFR4、VLFR1、VLFR2、VLFR3及VLFR4，其中該等FR各自包含以下胺基酸序列：VHFR1包含SEQ ID NO：543(QVRLQESGPSLVKPSQTLSVTCTVSGFSLI)中所示之序列；VHFR2包含SEQ ID NO：544(WVRQAPGKVPESLA)中所示之序列；VHFR3包含SEQ ID NO：n545(RLDITRDTSKNQISLSLSSVTTDDAAVYYCTR)中所示之序列；VHFR4包含SEQ ID NO：546(WGPGLLVTVSS)中所示之序列；VLFR1包含SEQ ID NO：547(QAVLTQPSSVSGSLGQRVSITC)中所示之序列；VLFR2包含SEQ ID NO：548(WFQQLPGSGLRTIIY)中所示之序列；VLFR3包含SEQ ID NO：549(GIPDRFSGSKSGVTATLTIDSLQAEDEADYFC)中所示之序列；VLFR4包含SEQ ID NO：550(FGSGTRLTVLG)中所示之序列；或對於各FR序列，(i)與該序列具有至少50%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸取代的胺基酸序列。
該特異性結合分子可包含構架區(FR)VHFR1、VHFR2、VHFR3、VHFR4、VLFR1、VLFR2、VLFR3及VLFR4，其中該等FR各自包含以下胺基酸序列：VHFR1包含SEQ ID NO：543(QVRLQESGPSLVKPSQTLSVTCTVSGFSLI) 中所示之序列；VHFR2包含SEQ ID NO：544(WVRQAPGKVPESLA)中所示之序列；VHFR3包含SEQ ID NO：545(RLDITRDTSKNQISLSLSSVTTDDAAVYYCTR)中所示之序列；VHFR4包含SEQ ID NO：546(WGPGLLVTVSS)中所示之序列；VLFR1包含SEQ ID NO：547(QAVLTQPSSVSGSLGQRVSITC)中所示之序列；VLFR2包含SEQ ID NO：548(WFQQLPGSGLRTIIY)中所示之序列；VLFR3包含SEQ ID NO：549(GIPDRFSGSKSGVTATLTIDSLQAEDEADYFC)中所示之序列；VLFR4包含SEQ ID NO：550(FGSGTRLTVLG)中所示之序列；或對於各FR序列，(i)與該序列具有至少50%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基331至360之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之FR具有100%一致性之FR的特異性結合分子在本文中稱為「CE3」。
該特異性結合分子可包含：(a)構架區(FR)VHFR1、VHFR2、VHFR3、VHFR4、VLFR1、VLFR2、VLFR3及VLFR4，其中該等FR各自包含以下胺基酸序列：VHFR1包含SEQ ID NO：543(QVRLQESGPSLVKPSQTLSVTCTVSGFSLI)中所示之序列；VHFR2包含SEQ ID NO：544(WVRQAPGKVPESLA)中所示之序列； VHFR3包含SEQ ID NO：545(RLDITRDTSKNQISLSLSSVTTDDAAVYYCTR)中所示之序列；VHFR4包含SEQ ID NO：546(WGPGLLVTVSS)中所示之序列；VLFR1包含SEQ ID NO：547(QAVLTQPSSVSGSLGQRVSITC)中所示之序列；VLFR2包含SEQ ID NO：548(WFQQLPGSGLRTIIY)中所示之序列；VLFR3包含SEQ ID NO：549(GIPDRFSGSKSGVTATLTIDSLQAEDEADYFC)中所示之序列；VLFR4包含SEQ ID NO：550(FGSGTRLTVLG)中所示之序列；或對於各FR序列，(i)與該序列具有至少50%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸取代的胺基酸序列；及(b)CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：17(SNAVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：20(GCSSDGKCYYNSALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：23(GYYPVYGYDYLGTIDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：25(SGSSSNVGRNDVA)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：28(GTTSRPS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：31(ASGDSSAINDI)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列， 其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基331至360之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之FR及CDR具有100%一致性之FR及CDR的特異性結合分子在本文中稱為「CE3」。
該特異性結合分子可包含：(a)構架區(FR)VHFR1、VHFR2、VHFR3、VHFR4、VLFR1、VLFR2、VLFR3及VLFR4，其中該等FR各自包含以下胺基酸序列：VHFR1包含SEQ ID NO：543(QVRLQESGPSLVKPSQTLSVTCTVSGFSLI)中所示之序列；VHFR2包含SEQ ID NO：544(WVRQAPGKVPESLA)中所示之序列；VHFR3包含SEQ ID NO：545(RLDITRDTSKNQISLSLSSVTTDDAAVYYCTR)中所示之序列；VHFR4包含SEQ ID NO：546(WGPGLLVTVSS)中所示之序列；VLFR1包含SEQ ID NO：547(QAVLTQPSSVSGSLGQRVSITC)中所示之序列；VLFR2包含SEQ ID NO：548(WFQQLPGSGLRTIIY)中所示之序列；VLFR3包含SEQ ID NO：549(GIPDRFSGSKSGVTATLTIDSLQAEDEADYFC)中所示之序列；VLFR4包含SEQ ID NO：550(FGSGTRLTVLG)中所示之序列；或對於各FR序列，(i)與該序列具有至少50%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸取代的胺基酸序列；及(b)CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列： VHCDR1包含SEQ ID NO：17(SNAVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：20(GCSSDGKCYYNSALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：23(GYYPVYGYDYLGTIDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：25(SGSSSNVGRNDVA)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：28(GTTSRPS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：31(ASGDSSAINDI)中所示之序列；其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基331至360之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之FR及CDR具有100%一致性之FR及CDR的特異性結合分子在本文中稱為「CE3」。
該特異性結合分子可包含：(a)包含SEQ ID NO：551(QVRLQESGPSLVKPSQTLSVTCTVSGFSLISNAVGWVRQAPGKVPESLAGCSSDGKCYYNSALKSRLDITRDTSKNQISLSLSSVTTDDAAVYYCTRGYYPVYGYDYLGTIDYWGPGLLVTVSS)中所示之序列的VH域；及/或(b)包含SEQ ID NO：552(QAVLTQPSSVSGSLGQRVSITCSGSSSNVGRNDVAWFQQLPGSGLRTIIYGTTSRPSGIPDRFSGSKSGVTATLTIDSLQAEDEADYFCASGDSSAINDIFGSGTRLTVLG)中所示之序列的VL域；或其人源化變異體。
該特異性結合分子可包含：(a)包含SEQ ID NO：553(QVRLQESGPSLVKPSQTLSVTCTVSGFSLISNAVGWVRQAPGKVPESLAGCSSDGKCYYNSALKSRLDITRDTSKNQISLSLSSVTTDDAAVYYCTRGYYPVYGYDYLGTIDYWGPGLLVTVSSAKTTAPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITCNVAHPASSTKVDKKIEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLG GPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK)中所示之序列的重鏈；及/或(b)包含SEQ ID NO：554(QAVLTQPSSVSGSLGQRVSITCSGSSSNVGRNDVAWFQQLPGSGLRTIIYGTTSRPSGIPDRFSGSKSGVTATLTIDSLQAEDEADYFCASGDSSAINDIFGSGTRLTVLGGQPKSSPSVTLFPPSSEELETNKATLVCTITDFYPGVVTVDWKVDGTPVTQGMETTQPSKQSNNKYMASSYLTLTARAWERHSSYSCQVTHEGHTVEKSLSRADCS)中所示之序列的輕鏈；或其人源化變異體。
該特異性結合分子之抗原決定基可在包含SEQ ID NO：1之殘基348至390之胺基酸序列內。因此，該抗原決定基可在SEQ ID NO：322之胺基酸序列(DRVQSKIGSLDNITHVPGGGNKKIETHKLTFRENAKAKTDHGA)內。
該抗原決定基可在包含SEQ ID NO：1之殘基348至390之胺基酸序列內。此抗原決定基可被本文中稱為「CA6」之特異性結合分子的CDR結合。
該抗原決定基可包含SEQ ID NO：322之胺基酸序列(DRVQSKIGSLDNITHVPGGGNKKIETHKLTFRENAKAKTDHGA)。該抗原決定基可包含與SEQ ID NO：322(DRVQSKIGSLDNITHVPGGGNKKIETHKLTFRENAKAKTDHGA)具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列。
該抗原決定基可由SEQ ID NO：322之胺基酸序列(DRVQSKIGSLDNITHVPGGGNKKIETHKLTFRENAKAKTDHGA)組成。該抗原決定基可由與SEQ ID NO：322(DRVQSKIGSLDNITHVPGGGNKKIETHKLTFRENAKAK TDHGA)具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列組成。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：259(SNGVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：323(DKSSGGKTYGNPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：161(CRDGGVTYGYDIDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：324(SGSRNNIGYGNHVG)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：207(DATTRAS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：325(ASFDRGSGGI)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基348至390之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之CDR具有100%一致性之CDR的特異性結合分子在本文中稱為「CA6」。
該特異性結合分子之抗原決定基可在包含SEQ ID NO：1之殘基348至441之胺基酸序列內。因此，該抗原決定基可在SEQ ID NO：326之胺基酸序列(DRVQSKIGSLDNITHVPGGGNKKIETHKLTFRENAKAKTDHGAEIVYKSPVVSGDTSPRHLSNVSSTGSIDMVDSPQLATLADEVSASLAKQGL)內。
該抗原決定基可在包含SEQ ID NO：1之殘基348至441之胺基酸序列內。此抗原決定基可被本文中稱為「CA11」之特異性結合分子的CDR結合。
該抗原決定基可包含SEQ ID NO：326之胺基酸序列(DRVQSK IGSLDNITHVPGGGNKKIETHKLTFRENAKAKTDHGAEIVYKSPVVSGDTSPRHLSNVSSTGSIDMVDSPQLATLADEVSASLAKQGL)。該抗原決定基可包含與SEQ ID NO：326(DRVQSKIGSLDNITHVPGGGNKKIETHKLTFRENAKAKTDHGAEIVYKSPVVSGDTSPRHLSNVSSTGSIDMVDSPQLATLADEVSASLAKQGL)具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列。
該抗原決定基可由SEQ ID NO：326之胺基酸序列(DRVQSKIGSLDNITHVPGGGNKKIETHKLTFRENAKAKTDHGAEIVYKSPVVSGDTSPRHLSNVSSTGSIDMVDSPQLATLADEVSASLAKQGL)組成。該抗原決定基可由與SEQ ID NO：326(DRVQSKIGSLDNITHVPGGGNKKIETHKLTFRENAKAKTDHGAEIVYKSPVVSGDTSPRHLSNVSSTGSIDMVDSPQLATLADEVSASLAKQGL)具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列組成。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：272(SNTVA)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：273(EINSGGSTYYNPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：274(GARSTYAAY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：327(SGSGSNIGAGNWVS)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：328(GATSRPS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：329(AAYDSGSSIV)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列， 其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基348至441之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之CDR具有100%一致性之CDR的特異性結合分子在本文中稱為「CA11」。
該特異性結合分子之抗原決定基可在包含SEQ ID NO：1之殘基355至367之胺基酸序列內。因此，該抗原決定基可在SEQ ID NO：330之胺基酸序列(GSLDNITHVPGGG)內。
該抗原決定基可在包含SEQ ID NO：1之殘基355至367之胺基酸序列內。此抗原決定基可被本文中稱為「CA4」之特異性結合分子的CDR結合。該抗原決定基之關鍵殘基可為殘基358(D)、360(I)、361(T)、362(H)及/或364(P)(根據SEQ ID NO：1編號)。該抗原決定基可包含SEQ ID NO：331之胺基酸序列(XXXDXITHXPXXX，其中X係任何胺基酸)。該抗原決定基可包含SEQ ID NO：330之胺基酸序列，其中除殘基編號358(D)、360(I)、361(T)、362(H)及/或364(P)(根據SEQ ID NO：1編號)外的任一個或多個殘基經非保守胺基酸取代置換(根據SEQ ID NO：1編號)。該抗原決定基可包含SEQ ID NO：330之胺基酸序列，其中除殘基編號358(D)、360(I)、361(T)、362(H)及/或364(P)(根據SEQ ID NO：1編號)外的任一個或多個殘基經保守胺基酸取代置換(根據SEQ ID NO：1編號)。該抗原決定基可包含SEQ ID NO：330之胺基酸序列，其中除殘基編號358(D)、360(I)、361(T)、362(H)及/或364(P)(根據SEQ ID NO：1編號)外的任一個或多個殘基經保守胺基酸取代置換(根據SEQ ID NO：1編號)且除殘基編號358(D)、360(I)、361(T)、362(H)及/或364(P)(根據SEQ ID NO：1編號)外的任一個或多個殘基經非保守胺基酸取代置換(根據SEQ ID NO：1編號)。
該抗原決定基可包含SEQ ID NO：330之胺基酸序列(GSLDNITHVPGGG)。該抗原決定基可包含與SEQ ID NO：330 (GSLDNITHVPGGG)具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列。
該抗原決定基可由SEQ ID NO：330之胺基酸序列(GSLDNITHVPGGG)組成。該抗原決定基可由與SEQ ID NO：330(GSLDNITHVPGGG)具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列組成。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：83(SYSVY)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：84(IMYASGRVDYNPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：89(GIEN)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：91(RTSQSVNNYLS)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：95(YATRLYT)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：97(LQYDSTPLA)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基355至367之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之CDR具有100%一致性之CDR的特異性結合分子在本文中稱為「CA4」。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：83(SYSVY)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：84(IMYASGRVDYNPALKS)中所示之序列； VHCDR3包含SEQ ID NO：89(GIEN)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：91(RTSQSVNNYLS)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：95(YATRLYT)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：97(LQYDSTPLA)中所示之序列。
該特異性結合分子可包含構架區(FR)VHFR1、VHFR2、VHFR3、VHFR4、VLFR1、VLFR2、VLFR3及VLFR4，其中該等FR各自包含以下胺基酸序列：VHFR1包含SEQ ID NO：555(QVQLQESGPSLVKPSQTLSLTCTVSGFSLT)中所示之序列；VHFR2包含SEQ ID NO：556(WVRQAPGQALEWIS)中所示之序列；VHFR3包含SEQ ID NO：557(RLSITRDTSKSQFSLSLSSVTTEDTAVYYCTR)中所示之序列；VHFR4包含SEQ ID NO：558(WGPGLLVTVSS)中所示之序列；VLFR1包含SEQ ID NO：559(DIQVTQSPSSLSASLTERVSITC)中所示之序列；VLFR2包含SEQ ID NO：560(WYQQKPGQAPKLLIY)中所示之序列；VLFR3包含SEQ ID NO：561(DVPSRFSGSGSGTDYTLTITSLEADDTATYYC)中所示之序列；VLFR4包含SEQ ID NO：562(FGGGTNVEIK)中所示之序列；或對於各FR序列，(i)與該序列具有至少50%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸取代的胺基酸序列。
該特異性結合分子可包含構架區(FR)VHFR1、VHFR2、VHFR3、 VHFR4、VLFR1、VLFR2、VLFR3及VLFR4，其中該等FR各自包含以下胺基酸序列：VHFR1包含SEQ ID NO：555(QVQLQESGPSLVKPSQTLSLTCTVSGFSLT)中所示之序列；VHFR2包含SEQ ID NO：556(WVRQAPGQALEWIS)中所示之序列；VHFR3包含SEQ ID NO：557(RLSITRDTSKSQFSLSLSSVTTEDTAVYYCTR)中所示之序列；VHFR4包含SEQ ID NO：558(WGPGLLVTVSS)中所示之序列；VLFR1包含SEQ ID NO：559(DIQVTQSPSSLSASLTERVSITC)中所示之序列；VLFR2包含SEQ ID NO：560(WYQQKPGQAPKLLIY)中所示之序列；VLFR3包含SEQ ID NO：561(DVPSRFSGSGSGTDYTLTITSLEADDTATYYC)中所示之序列；VLFR4包含SEQ ID NO：562(FGGGTNVEIK)中所示之序列；或對於各FR序列，(i)與該序列具有至少50%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基355至367之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之FR具有100%一致性之FR的特異性結合分子在本文中稱為「CA4」。
該特異性結合分子可包含：(a)構架區(FR)VHFR1、VHFR2、VHFR3、VHFR4、VLFR1、VLFR2、VLFR3及VLFR4，其中該等FR各自包含以下胺基酸序列： VHFR1包含SEQ ID NO：555(QVQLQESGPSLVKPSQTLSLTCTVSGFSLT)中所示之序列；VHFR2包含SEQ ID NO：556(WVRQAPGQALEWIS)中所示之序列；VHFR3包含SEQ ID NO：557(RLSITRDTSKSQFSLSLSSVTTEDTAVYYCTR)中所示之序列；VHFR4包含SEQ ID NO：558(WGPGLLVTVSS)中所示之序列；VLFR1包含SEQ ID NO：559(DIQVTQSPSSLSASLTERVSITC)中所示之序列；VLFR2包含SEQ ID NO：560(WYQQKPGQAPKLLIY)中所示之序列；VLFR3包含SEQ ID NO：561(DVPSRFSGSGSGTDYTLTITSLEADDTATYYC)中所示之序列；VLFR4包含SEQ ID NO：562(FGGGTNVEIK)中所示之序列；或對於各FR序列，(i)與該序列具有至少50%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸取代的胺基酸序列；及(b)CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：83(SYSVY)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：84(IMYASGRVDYNPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：89(GIEN)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：91(RTSQSVNNYLS)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：95(YATRLYT)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：97(LQYDSTPLA)中所示之序列； 或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基355至367之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之FR及CDR具有100%一致性之FR及CDR的特異性結合分子在本文中稱為「CA4」。
該特異性結合分子可包含：(a)構架區(FR)VHFR1、VHFR2、VHFR3、VHFR4、VLFR1、VLFR2、VLFR3及VLFR4，其中該等FR各自包含以下胺基酸序列：VHFR1包含SEQ ID NO：555(QVQLQESGPSLVKPSQTLSLTCTVSGFSLT)中所示之序列；VHFR2包含SEQ ID NO：556(WVRQAPGQALEWIS)中所示之序列；VHFR3包含SEQ ID NO：557(RLSITRDTSKSQFSLSLSSVTTEDTAVYYCTR)中所示之序列；VHFR4包含SEQ ID NO：558(WGPGLLVTVSS)中所示之序列；VLFR1包含SEQ ID NO：559(DIQVTQSPSSLSASLTERVSITC)中所示之序列；VLFR2包含SEQ ID NO：560(WYQQKPGQAPKLLIY)中所示之序列；VLFR3包含SEQ ID NO：561(DVPSRFSGSGSGTDYTLTITSLEADDTATYYC)中所示之序列；VLFR4包含SEQ ID NO：562(FGGGTNVEIK)中所示之序列；或對於各FR序列，(i)與該序列具有至少50%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸取代的胺基酸 序列；及(b)CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：83(SYSVY)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：84(IMYASGRVDYNPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：89(GIEN)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：91(RTSQSVNNYLS)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：95(YATRLYT)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：97(LQYDSTPLA)中所示之序列；其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基355至367之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之FR及CDR具有100%一致性之FR及CDR的特異性結合分子在本文中稱為「CA4」。
該特異性結合分子可包含：(a)包含SEQ ID NO：563(QVQLQESGPSLVKPSQTLSLTCTVSGFSLTSYSVYWVRQAPGQALEWISIMYASGRVDYNPALKSRLSITRDTSKSQFSLSLSSVTTEDTAVYYCTRGIENWGPGLLVTVSS)中所示之序列的VH域；及/或(b)包含SEQ ID NO：564(DIQVTQSPSSLSASLTERVSITCRTSQSVNNYLSWYQQKPGQAPKLLIYYATRLYTDVPSRFSGSGSGTDYTLTITSLEADDTATYYCLQYDSTPLAFGGGTNVEIK)中所示之序列的VL域；或其人源化變異體。
該特異性結合分子可包含：(a)包含SEQ ID NO：565(QVQLQESGPSLVKPSQTLSLTCTVSGFSLTSYSVYWVRQAPGQALEWISIMYASGRVDYNPALKSRLSITRDTSKSQFSLSLSSVTTEDTAVYYCTRGIENWGPGLLVTVSSAKTTAPSVVPLAPVCGDTTGSSVTLGC LVKGYFPEPVTLTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITCNVAHPASSTKVDKKIEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK)中所示之序列的重鏈；及/或(b)包含SEQ ID NO：566(DIQVTQSPSSLSASLTERVSITCRTSQSVNNYLSWYQQKPGQAPKLLIYYATRLYTDVPSRFSGSGSGTDYTLTITSLEADDTATYYCLQYDSTPLAFGGGTNVEIKGQPKSSPSVTLFPPSSEELETNKATLVCTITDFYPGVVTVDWKVDGTPVTQGMETTQPSKQSNNKYMASSYLTLTARAWERHSSYSCQVTHEGHTVEKSLSRADCS)中所示之序列的輕鏈；或其人源化變異體。
該特異性結合分子之抗原決定基可在包含SEQ ID NO：1之殘基359至391之胺基酸序列內。因此，該抗原決定基可在SEQ ID NO：332之胺基酸序列(NITHVPGGGNKKIETHKLTFRENAKAKTDHGAE)內。
該抗原決定基可在包含SEQ ID NO：1之殘基359至391之胺基酸序列內。此抗原決定基可被本文中稱為「CB2」之特異性結合分子的CDR結合。
該抗原決定基可包含SEQ ID NO：332之胺基酸序列(NITHVPGGGNKKIETHKLTFRENAKAKTDHGAE)。該抗原決定基可包含與SEQ ID NO：332(NITHVPGGGNKKIETHKLTFRENAKAKTDHGAE)具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列。
該抗原決定基可由SEQ ID NO：332之胺基酸序列(NITHVPGGGNKKIETHKLTFRENAKAKTDHGAE)組成。該抗原決定基可由 與SEQ ID NO：332(NITHVPGGGNKKIETHKLTFRENAKAKTDHGAE)具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列組成。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：45(TNSVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：53(GIDTDGEEGFNPVLKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：55(SYRTDGLAYGYVQAIDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：68(SGSYIGSSGVG)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：70(ASDGRPS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：79(GSSDRTQYTGL)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基359至391之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之CDR具有100%一致性之CDR的特異性結合分子在本文中稱為「CB2」。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：45(TNSVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：53(GIDTDGEEGFNPVLKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：55(SYRTDGLAYGYVQAIDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：68(SGSYIGSSGVG)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：70(ASDGRPS)中所示之序列；且 VLCDR3包含SEQ ID NO：79(GSSDRTQYTGL)中所示之序列。
該特異性結合分子之抗原決定基可在包含SEQ ID NO：1之殘基360至390之胺基酸序列內。因此，該抗原決定基可在SEQ ID NO：333之胺基酸序列(ITHVPGGGNKKIETHKLTFRENAKAKTDHGA)內。
該抗原決定基可在包含SEQ ID NO：1之殘基360至390之胺基酸序列內。此抗原決定基可被本文中稱為「CB3」之特異性結合分子的CDR結合。
該抗原決定基可包含SEQ ID NO：333之胺基酸序列(ITHVPGGGNKKIETHKLTFRENAKAKTDHGA)。該抗原決定基可包含與SEQ ID NO：333(ITHVPGGGNKKIETHKLTFRENAKAKTDHGA)具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列。
該抗原決定基可由SEQ ID NO：333之胺基酸序列(ITHVPGGGNKKIETHKLTFRENAKAKTDHGA)組成。該抗原決定基可由與SEQ ID NO：333(ITHVPGGGNKKIETHKLTFRENAKAKTDHGA)具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列組成。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：334(SVAVN)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：335(GIISNGGTGYNPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：336(GVEWEGSMDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：337(SGSSSNVGAGSYVG)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：338(GATKRAS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：339(VSYQTDFTLV)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或 (ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基360至390之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之CDR具有100%一致性之CDR的特異性結合分子在本文中稱為「CB3」。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：334(SVAVN)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：335(GIISNGGTGYNPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：336(GVEWEGSMDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：337(SGSSSNVGAGSYVG)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：338(GATKRAS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：339(VSYQTDFTLV)中所示之序列。
該特異性結合分子之抗原決定基可在包含SEQ ID NO：1之殘基367至379之胺基酸序列內。因此，該抗原決定基可在SEQ ID NO：33之胺基酸序列(GNKKIETHKLTFR)內。
該抗原決定基可在包含SEQ ID NO：1之殘基367至379之胺基酸序列內。此抗原決定基可被本文中稱為「CA9」及「CA12」之特異性結合分子的CDR結合。該抗原決定基之關鍵殘基可為殘基370(K)及/或374(H)(根據SEQ ID NO：1編號)。該抗原決定基可包含SEQ ID NO：34之胺基酸序列(XXXKXXXHXXXXX，其中X係任何胺基酸)。該抗原決定基可包含SEQ ID NO：33之胺基酸序列，其中除殘基編號370(K)及/或374(H)外的任一個或多個殘基經非保守胺基酸取代置換(根據SEQ ID NO：1編號)。該抗原決定基可包含SEQ ID NO：33之胺基酸序列，其中除殘基編號370(K)及/或374(H)外的任一個或多個殘基經保守胺基酸取代置換(根據SEQ ID NO：1編號)。該抗原決定 基可包含SEQ ID NO：33之胺基酸序列，其中除殘基編號370(K)及/或374(H)外的任一個或多個殘基經保守胺基酸取代置換(根據SEQ ID NO：1編號)且除殘基編號370(K)及/或374(H)外的任一個或多個殘基經非保守胺基酸取代置換(根據SEQ ID NO：1編號)。
該抗原決定基可包含SEQ ID NO：33之胺基酸序列(GNKKIETHKLTFR)。該抗原決定基可包含與SEQ ID NO：33(GNKKIETHKLTFR)具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列。
該抗原決定基可由SEQ ID NO：33之胺基酸序列(GNKKIETHKLTFR)組成。該抗原決定基可由與SEQ ID NO：33(GNKKIETHKLTFR)具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列組成。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：42(SNSVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：46(GIDTDGEEGYNPALNS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：58(SYRSDGLAYGYVQAIDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：63(SGSFIGISSVG)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：70(ASDGRPS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：74(GSSDRTQYTGV)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基367至379之胺基 酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之CDR具有100%一致性之CDR的特異性結合分子在本文中稱為「CA9」。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：42(SNSVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：46(GIDTDGEEGYNPALNS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：58(SYRSDGLAYGYVQAIDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：63(SGSFIGISSVG)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：70(ASDGRPS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：74(GSSDRTQYTGV)中所示之序列。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：44(SYYVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：52(NIYSTGRAFYNPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：265(GSYYHGGGNGMVDFFDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：39(SGSSSNVGYGNYVG)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：72(AATSRAS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：78(SSYQRGNTGV)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基367至379之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之CDR具有100%一致性之CDR的特異性結合分子在本文中稱為「CA12」。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：44(SYYVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：52(NIYSTGRAFYNPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：265(GSYYHGGGNGMVDFFDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：39(SGSSSNVGYGNYVG)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：72(AATSRAS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：78(SSYQRGNTGV)中所示之序列。
該特異性結合分子之抗原決定基可在包含SEQ ID NO：1之殘基49至113之胺基酸序列內。因此，該抗原決定基可在SEQ ID NO：340之胺基酸序列(QTPTEDGSEEPGSETSDAKSTPTAEDVTAPLVDEGAPGKQAAAQPHTEIPEGTTAEEAGIGDTPS)內。
該抗原決定基可在包含SEQ ID NO：1之殘基49至113之胺基酸序列內。此抗原決定基可被本文中稱為「CB5」之特異性結合分子的CDR結合。
該抗原決定基可包含SEQ ID NO：340之胺基酸序列(QTPTEDGSEEPGSETSDAKSTPTAEDVTAPLVDEGAPGKQAAAQPHTEIPEGTTAEEAGIGDTPS)。該抗原決定基可包含與SEQ ID NO：340(QTPTEDGSEEPGSETSDAKSTPTAEDVTAPLVDEGAPGKQAAAQPHTEIPEGTTAEEAGIGDTPS)具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列。
該抗原決定基可由SEQ ID NO：340之胺基酸序列(QTPTEDGSEEPGSETSDAKSTPTAEDVTAPLVDEGAPGKQAAAQPHTEIPEGTTAEEAGIGDTPS)組成。該抗原決定基可由與SEQ ID NO：340(QTPTEDGSEEPGSETSDAKSTPTAEDVTAPLVDEGAPGKQAAAQPHTEIPEG TTAEEAGIGDTPS)具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列組成。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：259(SNGVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：341(DITSGGRTYGNLALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：160(CRDGGVSYGYDSDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：342(SGSSSNVGSGDHVN)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：343(RTTNRAS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：344(ASHDNNSGGV)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基49至113之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之CDR具有100%一致性之CDR的特異性結合分子在本文中稱為「CB5」。
該特異性結合分子之抗原決定基可在包含SEQ ID NO：1之殘基49至155之胺基酸序列內。因此，該抗原決定基可在SEQ ID NO：345之胺基酸序列(QTPTEDGSEEPGSETSDAKSTPTAEDVTAPLVDEGAPGKQAAAQPHTEIPEGTTAEEAGIGDTPSLEDEAAGHVTQARMVSKSKDGTGSDDKKAKGADGKTKIATPR)內。
該抗原決定基可在包含SEQ ID NO：1之殘基49至155之胺基酸序列內。此抗原決定基可被本文中稱為「CC4」及「CD1」之特異性結合分子的CDR結合。
該抗原決定基可包含SEQ ID NO：345之胺基酸序列(QTPTEDGSEEPGSETSDAKSTPTAEDVTAPLVDEGAPGKQAAAQPHTEIPEGTTAEEAGIGDTPSLEDEAAGHVTQARMVSKSKDGTGSDDKKAKGADGKTKIATPR)。該抗原決定基可包含與SEQ ID NO：345(QTPTEDGSEEPGSETSDAKSTPTAEDVTAPLVDEGAPGKQAAAQPHTEIPEGTTAEEAGIGDTPSLEDEAAGHVTQARMVSKSKDGTGSDDKKAKGADGKTKIATPR)具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列。
該抗原決定基可由SEQ ID NO：345之胺基酸序列(QTPTEDGSEEPGSETSDAKSTPTAEDVTAPLVDEGAPGKQAAAQPHTEIPEGTTAEEAGIGDTPSLEDEAAGHVTQARMVSKSKDGTGSDDKKAKGADGKTKIATPR)組成。該抗原決定基可由與SEQ ID NO：345(QTPTEDGSEEPGSETSDAKSTPTAEDVTAPLVDEGAPGKQAAAQPHTEIPEGTTAEEAGIGDTPSLEDEAAGHVTQARMVSKSKDGTGSDDKKAKGADGKTKIATPR)具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列組成。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：259(SNGVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：158(DIASSGKAYSNPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：161(CRDGGVTYGYDIDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：346(SGSSSNVGYTNLGYSNLVT)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：170(GATNRAS)中所示之序列；且 VLCDR3包含SEQ ID NO：347(ASYDSSNGGI)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基49至155之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之CDR具有100%一致性之CDR的特異性結合分子在本文中稱為「CC4」。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：259(SNGVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：182(DKSSAGKTYGNPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：286(CRDGGVSYGYDVDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：290(SGSSSNVGYGTYVS)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：188(GTTTRAS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：291(ASYDTGSGGV)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基49至155之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之CDR具有100%一致性之CDR的特異性結合分子在本文中稱為「CD1」。
該特異性結合分子之抗原決定基可在包含SEQ ID NO：1之殘基49至238之胺基酸序列內。因此，該抗原決定基可在SEQ ID NO：348之胺基酸序列(QTPTEDGSEEPGSETSDAKSTPTAEDVTAPLVDEGAPGKQAAAQPHT EIPEGTTAEEAGIGDTPSLEDEAAGHVTQARMVSKSKDGTGSDDKKAKGADGKTKIATPRGAAPPGQKGQANATRIPAKTPPAPKTPPSSGEPPKSGDRSGYSSPGSPGTPGSRSRTPSLPTPPTREPKKVAVVRTPPKSPSS)內。
該抗原決定基可在包含SEQ ID NO：1之殘基49至238之胺基酸序列內。此抗原決定基可被本文中稱為「CC5」之特異性結合分子的CDR結合。
該抗原決定基可包含SEQ ID NO：348之胺基酸序列(QTPTEDGSEEPGSETSDAKSTPTAEDVTAPLVDEGAPGKQAAAQPHTEIPEGTTAEEAGIGDTPSLEDEAAGHVTQARMVSKSKDGTGSDDKKAKGADGKTKIATPRGAAPPGQKGQANATRIPAKTPPAPKTPPSSGEPPKSGDRSGYSSPGSPGTPGSRSRTPSLPTPPTREPKKVAVVRTPPKSPSS)。該抗原決定基可包含與SEQ ID NO：348(QTPTEDGSEEPGSETSDAKSTPTAEDVTAPLVDEGAPGKQAAAQPHTEIPEGTTAEEAGIGDTPSLEDEAAGHVTQARMVSKSKDGTGSDDKKAKGADGKTKIATPRGAAPPGQKGQANATRIPAKTPPAPKTPPSSGEPPKSGDRSGYSSPGSPGTPGSRSRTPSLPTPPTREPKKVAVVRTPPKSPSS)具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列。
該抗原決定基可由SEQ ID NO：348之胺基酸序列(QTPTEDGSEEPGSETSDAKSTPTAEDVTAPLVDEGAPGKQAAAQPHTEIPEGTTAEEAGIGDTPSLEDEAAGHVTQARMVSKSKDGTGSDDKKAKGADGKTKIATPRGAAPPGQKGQANATRIPAKTPPAPKTPPSSGEPPKSGDRSGYSSPGSPGTPGSRSRTPSLPTPPTREPKKVAVVRTPPKSPSS)組成。該抗原決定基可由與SEQ ID NO：348(QTPTEDGSEEPGSETSDAKSTPTAEDVTAPLVDEGAPGKQAAAQPHTEIPEGTTAEEAGIGDTPSLEDEAAGHVTQARMVSKSKDGTGSDDKKAKGADGKTKIATPRGAAPPGQKGQANATRIPAKTPPAPKTPPSSGEPPKSGDRSGYSSPGSPGTPGSRSRTPSLPTPPTREPKKVAVVRTPPKSPSS)具有至少70%、至少75%、至少 80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列組成。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：259(SNGVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：349(DISSVGKKYASPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：161(CRDGGVTYGYDIDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：39(SGSSSNVGYGNYVG)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：141(GATSRAS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：350(ASYDSSNGGV)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基49至238之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之CDR具有100%一致性之CDR的特異性結合分子在本文中稱為「CC5」。
該特異性結合分子之抗原決定基可在包含SEQ ID NO：1之殘基373至385之胺基酸序列內。因此，該抗原決定基可在SEQ ID NO：351之胺基酸序列(THKLTFRENAKAK)內。
該抗原決定基可在包含SEQ ID NO：1之殘基373至385之胺基酸序列內。此抗原決定基可被本文中稱為「MD9」或「MoD9」之特異性結合分子的CDR結合。
該抗原決定基可包含SEQ ID NO：351之胺基酸序列(THKLTFRENAKAK)。該抗原決定基可包含與SEQ ID NO：351(THKLTFRENAKAK)具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95% 或至少99%一致性之胺基酸序列。
該抗原決定基可由SEQ ID NO：351之胺基酸序列(THKLTFRENAKAK)組成。該抗原決定基可由與SEQ ID NO：351(THKLTFRENAKAK)具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列組成。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：102(RESIA)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：103(GVGIDGTSYYSPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：104(NYIDFEY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：352(SGSSSNVGIYDVS)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：353(GTNNRPS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：354(AAGDSSTIAV)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基373至385之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之CDR具有100%一致性之CDR的特異性結合分子在本文中稱為「MD9」或「MoD9」。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：102(RESIA)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：103(GVGIDGTSYYSPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：104(NYIDFEY)中所示之序列； VLCDR1包含SEQ ID NO：352(SGSSSNVGIYDVS)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：353(GTNNRPS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：354(AAGDSSTIAV)中所示之序列。
該特異性結合分子之抗原決定基可在包含SEQ ID NO：1之殘基275至305及/或殘基337至368之胺基酸序列內。因此，該抗原決定基可在SEQ ID NO：355(VQIINKKLDLSNVQSKCGSKDNIKHVPGGGS)及/或SEQ ID NO：356(VEVKSEKLDFKDRVQSKIGSLDNITHVPGGGN)之胺基酸序列內。
該抗原決定基可在包含SEQ ID NO：1之殘基275至305及/或殘基337至368之胺基酸序列內。此抗原決定基可被本文中稱為「NS1G7」之特異性結合分子的CDR結合。
該抗原決定基可包含SEQ ID NO：355(VQIINKKLDLSNVQSKCGSKDNIKHVPGGGS)及/或SEQ ID NO：356(VEVKSEKLDFKDRVQSKIGSLDNITHVPGGGN)之胺基酸序列。該抗原決定基可包含與SEQ ID NO：355(VQIINKKLDLSNVQSKCGSKDNIKHVPGGGS)及/或SEQ ID NO：356(VEVKSEKLDFKDRVQSKIGSLDNITHVPGGGN)具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列。
該抗原決定基可由SEQ ID NO：355(VQIINKKLDLSNVQSKCGSKDNIKHVPGGGS)及/或SEQ ID NO：356(VEVKSEKLDFKDRVQSKIGSLDNITHVPGGGN)之胺基酸序列組成。該抗原決定基可由與SEQ ID NO：355(VQIINKKLDLSNVQSKCGSKDNIKHVPGGGS)及/或SEQ ID NO：356(VEVKSEKLDFKDRVQSKIGSLDNITHVPGGGN)具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列組成。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、 VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：357(SYGVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：358(SISSGGTTFYNPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：359(DVHIYYNDYGAAYGDRDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：360(SGSSSNIGGGNYVS)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：361(GTTSRAS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：362(ASYDTNSGSV)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基275至305及/或殘基337至368之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之CDR具有100%一致性之CDR的特異性結合分子在本文中稱為「NS1G7」。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：357(SYGVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：358(SISSGGTTFYNPALKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：359(DVHIYYNDYGAAYGDRDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：360(SGSSSNIGGGNYVS)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：361(GTTSRAS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：362(ASYDTNSGSV)中所示之序列。
該特異性結合分子可包含下表10中所闡述之殖株的CDR序列。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含表10中所示之VHCDR1胺基酸序列；VHCDR2包含表10中所示之VHCDR2胺基酸序列；VHCDR3包含表10中所示之VHCDR3胺基酸序列；VLCDR1包含表10中所示之VLCDR1胺基酸序列；VLCDR2包含表10中所示之VLCDR2胺基酸序列；且VLCDR3包含表10中所示之VLCDR3胺基酸序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至SEQ ID NO：1內的抗原決定基，視需要其中該特異性結合分子具有小於約25nM之KD。
KD可小於約20nM、小於約15nM或小於約10nM。KD可較佳地為結合至SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：5之KD。結合至SEQ ID NO：1之KD可為約1nM至約20nM。結合至SEQ ID NO：1之KD可為約1nM至約10nM。結合至SEQ ID NO：1之KD可為約1.23nM至6.9nM，視需要其中該特異性結合分子包含CC7之CDR。結合至SEQ ID NO：1之可為約1.3nM至3.61nM，視需要其中該特異性結合分子包含CA4之CDR。結合至SEQ ID NO：1之KD可為約3.79nM至16.7nM，視需要其中該特異性結合分子包含CE3之CDR。結合至SEQ ID NO：1之KD可為約5.03nM至11nM，視需要其中該特異性結合分子包含CE2之CDR。結合至SEQ ID NO：1之KD可為約3.7nM至5.19nM，視需要其中該特異性結合分子包含CB7之CDR。
該特異性結合分子可包含與SEQ ID NO：363具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列，其中該特 異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基1-155之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。該特異性結合分子之CDR可與SEQ ID NO：363之CDR至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致。該等CDR可與SEQ ID NO：363之CDR具有100%一致性。該特異性結合分子可包含與SEQ ID NO：363具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列，其中CDR與SEQ ID NO：363之CDR具有100%一致性。該特異性結合分子可包含SEQ ID NO：363之胺基酸序列。
SEQ ID NO：363(CA2胺基酸序列)
該特異性結合分子可包含與SEQ ID NO：364具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基13-25之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。該特異性結合分子之CDR可與SEQ ID NO：364之CDR至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致。該等CDR可與SEQ ID NO：364之CDR具有100%一致性。該特異性結合分子可包含與SEQ ID NO：364具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列，其中CDR與SEQ ID NO：364之CDR具有100%一致性。該特異性結合分子可包含SEQ ID NO：364之胺基酸序列。
SEQ ID NO：364(CB7胺基酸序列)
該特異性結合分子可包含與SEQ ID NO：365具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基145至157之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。該特異性結合分子之CDR可與SEQ ID NO：365之CDR至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致。該等CDR可與SEQ ID NO：365之CDR具有100%一致性。該特異性結合分子可包含與SEQ ID NO：365具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列，其中CDR與SEQ ID NO：365之CDR具有100%一致性。該特異性結合分子可包含SEQ ID NO：365之胺基酸序列。
SEQ ID NO：365(CC7胺基酸序列)
該特異性結合分子可包含與SEQ ID NO：366具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基319至331之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。該特異性結合分子之CDR可與SEQ ID NO：366之CDR至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致。該等CDR可與SEQ ID NO：366之CDR具有100%一致性。該特異性結合分子可包含與SEQ ID NO：366具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列，其中CDR與SEQ ID NO：366之CDR具有100%一致性。該特異性結合分子可包含SEQ ID NO：366之胺基酸序列。
SEQ ID NO：366(CE2/E1B8胺基酸序列)
該特異性結合分子可包含與SEQ ID NO：367具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基331至360之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。該特異性結合分子之CDR可與SEQ ID NO：367之CDR至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致。該等CDR可與SEQ ID NO：367之CDR具有100%一致性。該特異性結合分子可包含與SEQ ID NO：367具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列，其中CDR與SEQ ID NO：367之CDR具有100%一致性。該特異性結合分子可包含SEQ ID NO：367之胺基酸序列。
SEQ ID NO 367：(CE3胺基酸序列)
該特異性結合分子可包含與SEQ ID NO：368具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基355至367之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。該特異性結合分子之CDR可與SEQ ID NO：368之CDR至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致。該等CDR可與SEQ ID NO：368之CDR具有100%一致性。該特異性結合分子可包含與SEQ ID NO：368具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列，其中CDR與SEQ ID NO：368之CDR具有100%一 致性。該特異性結合分子可包含SEQ ID NO：368之胺基酸序列。
SEQ ID NO：368(CA4胺基酸序列)
該特異性結合分子可包含與SEQ ID NO：369具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基359至391之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。該特異性結合分子之CDR可與SEQ ID NO：369之CDR至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致。該等CDR可與SEQ ID NO：369之CDR具有100%一致性。該特異性結合分子可包含與SEQ ID NO：369具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列，其中CDR與SEQ ID NO：369之CDR具有100%一致性。該特異性結合分子可包含SEQ ID NO：369之胺基酸序列。
SEQ ID NO：369(CB2胺基酸序列)
該特異性結合分子可包含與SEQ ID NO：370具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基360至390之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。該特異性結合分子之CDR可與SEQ ID NO：370之CDR至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致。該等CDR可與SEQ ID NO：370之CDR具有100%一致性。該特異性結合分子可包 含與SEQ ID NO：370具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列，其中CDR與SEQ ID NO：370之CDR具有100%一致性。該特異性結合分子可包含SEQ ID NO：370之胺基酸序列。
SEQ ID NO：370(CB3胺基酸序列)
該特異性結合分子可包含與SEQ ID NO：371具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基367至379之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。該特異性結合分子之CDR可與SEQ ID NO：371之CDR至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致。該等CDR可與SEQ ID NO：371之CDR具有100%一致性。該特異性結合分子可包含與SEQ ID NO：371具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列，其中CDR與SEQ ID NO：371之CDR具有100%一致性。該特異性結合分子可包含SEQ ID NO：371之胺基酸序列。
SEQ ID NO：371(CA9胺基酸序列)
該特異性結合分子可包含與SEQ ID NO：372具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基367至379之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。該特異性結合分子之CDR可與SEQ ID NO：372之CDR至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至 少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致。該等CDR可與SEQ ID NO：372之CDR具有100%一致性。該特異性結合分子可包含與SEQ ID NO：372具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列，其中CDR與SEQ ID NO：372之CDR具有100%一致性。該特異性結合分子可包含SEQ ID NO：372之胺基酸序列。
SEQ ID NO：372(CA12胺基酸序列)
該特異性結合分子可包含與SEQ ID NO：373具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基373至385之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。該特異性結合分子之CDR可與SEQ ID NO：373之CDR至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致。該等CDR可與SEQ ID NO：373之CDR具有100%一致性。該特異性結合分子可包含與SEQ ID NO：373具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列，其中CDR與SEQ ID NO：373之CDR具有100%一致性。該特異性結合分子可包含SEQ ID NO：373之胺基酸序列。
SEQ ID NO：373(MD9/MoD9胺基酸序列)
該特異性結合分子可包含與SEQ ID NO：637具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基37至49之胺基酸序列的多肽或 蛋白質分子。該特異性結合分子之CDR可與SEQ ID NO：637之CDR至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致。該等CDR可與SEQ ID NO：637之CDR具有100%一致性。該特異性結合分子可包含與SEQ ID NO：637具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列，其中CDR與SEQ ID NO：637之CDR具有100%一致性。該特異性結合分子可包含SEQ ID NO：637之胺基酸序列。
SEQ ID NO：637(3bD11胺基酸序列)
該特異性結合分子可包含與SEQ ID NO：374具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基275至305及/或337至368之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。該特異性結合分子之CDR可與SEQ ID NO：374之CDR至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致。該等CDR可與SEQ ID NO：374之CDR具有100%一致性。該特異性結合分子可包含與SEQ ID NO：374具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列，其中CDR與SEQ ID NO：374之CDR具有100%一致性。該特異性結合分子可包含SEQ ID NO：374之胺基酸序列。
SEQ ID NO：374(NS1G7胺基酸序列)
該特異性結合分子之抗原決定基可在包含SEQ ID NO：1之殘基297至390之胺基酸序列內。因此，該抗原決定基可在SEQ ID NO：5之胺基酸序列(IKHVPGGGSVQIVYKPVDLSKVTSKCGSLGNIHHKPGGGQVEVKSEKLDFKDRVQSKIGSLDNITHVPGGGNKKIETHKLTFRENAKAKTDHGA)內。
該抗原決定基可在包含SEQ ID NO：1之殘基297至390之胺基酸序列內。此抗原決定基可被本文中稱為「S1E12」之特異性結合分子的CDR結合。
該抗原決定基可包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列(IKHVPGGGSVQIVYKPVDLSKVTSKCGSLGNIHHKPGGGQVEVKSEKLDFKDRVQSKIGSLDNITHVPGGGNKKIETHKLTFRENAKAKTDHGA)。該抗原決定基可包含與SEQ ID NO：5(IKHVPGGGSVQIVYKPVDLSKVTSKCGSLGNIHHKPGGGQVEVKSEKLDFKDRVQSKIGSLDNITHVPGGGNKKIETHKLTFRENAKAKTDHGA)具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列。
該抗原決定基可由SEQ ID NO：5之胺基酸序列(IKHVPGGGSVQIVYKPVDLSKVTSKCGSLGNIHHKPGGGQVEVKSEKLDFKDRVQSKIGSLDNITHVPGGGNKKIETHKLTFRENAKAKTDHGA)組成。該抗原決定基可由與SEQ ID NO：5(IKHVPGGGSVQIVYKPVDLSKVTSKCGSLGNIHHKPGGGQVEVKSEKLDFKDRVQSKIGSLDNITHVPGGGNKKIETHKLTFRENAKAKTDHGA)具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列組成。
該特異性結合分子可結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基297至390之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：136(S/R/D/T N/E/Y/H S/G V/I G/A)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：162(G I/V D/G/N T/I/Y/S D G E/T/R E/S/T G/Y/E Y/F N/S P/S A/V L N/K S)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：164(S/N/D/T Y/-/S R/-/K A/-/G/S/T D/-G/-L/-/Y A/-/G Y/-/W G/-Y/-/H V/Y Q/I/Y A/D/Q I/F D/E Y)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：167(S G S F/N/S/Y I/S G/N I/S/V S/A/G S/Y/G-/G-/D-/Y V G/T/S)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：181(A/R/D S/N/A D/R/T G/N R P/A S)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：183(G/A S S/Y/H D/-R/Q/D T/S/N Q/W/R Y/G/I T/S G/A V/L)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列。
該序列一致性為至少約85%序列一致性且因此可為至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致性。較佳地，該序列一致性為至少90%或至少95%。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：42(SNSVG)、SEQ ID NO：187(SHSVG)、SEQ ID NO：45(TNSVG)、SEQ ID NO：102(RESIA)或SEQ ID NO：199(DYGIG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：46(GIDTDGEEGYNPALNS)、SEQ ID NO：205(GINYDGRTEYNSALKS)、SEQ ID NO：103(GVGIDGTSYYSPALKS)、SEQ ID NO：53(GIDTDGEEGFNPVLKS)或SED ID NO：48(GIDSDGEEGYNPALNS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：54(SYRADGLAYGYVQAIDY)、SEQ ID NO：55(SYRTDGLAYGYVQAIDY)、SEQ ID NO：210(TYRSDGYAYGYVQAIDY)、SEQ ID NO：104(NYIDFEY)或SEQ ID NO：211(DSKGGWGHVYQFDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：63(SGSFIGISSVG)、SEQ ID NO：68(SGSYIGSSGVG)、SEQ ID NO：212(SGSNIGSASVT)或SEQ ID NO：213(SGSSSNVGYGDYVS)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：70(ASDGRPS)、SEQ ID NO：214(RNRNRPS)或SEQ ID NO：215(DATNRAS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：74(GSSDRTQYTGV)、SEQ ID NO：79(GSSDRTQYTGL)、SEQ ID NO：216(ASHDNRISAV)或SEQ ID NO：217(GSYQSWGSGV)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基297至390之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。
該特異性結合分子可結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基297至 390之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：426(S/T N/H S V G)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：427(G I D T/S D G E E G Y/F N P A/V L N/K S)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：428(S/T Y R A/T/S D G L/Y G Y V Q A I D Y)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：429(S G S F/Y I G I/S S S/G V G)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：70(A S D G R P S)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：432(G S S D R T Q Y T G V/L)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列。
該序列一致性為至少約85%序列一致性且因此可為至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致性。較佳地，該序列一致性為至少90%或至少95%。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：42(SNSVG)、SEQ ID NO：187(SHSVG)或SEQ ID NO：45(TNSVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：46(GIDTDGEEGYNPALNS)、SEQ ID NO：53(GIDTDGEEGFNPVIKS)或SED ID NO：48(GIDSDGEEGYNPALNS)中所示 之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：54(SYRADGLAYGYVQAIDY)、SEQ ID NO：55(SYRTDGLAYGYVQAIDY)或SEQ ID NO：210(TYRSDGYAYGYVQAIDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：63(SGSFIGISSVG)或SEQ ID NO：68(SGSYIGSSGVG)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：70(ASDGRPS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：74(GSSDRTQYTGV)或SEQ ID NO：79(GSSDRTQYTGL)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基297至390之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：42(SNSVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：46(GIDTDGEEGYNPALNS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：54(SYRADGLAYGYVQAIDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：63(SGSFIGISSVG)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：70(ASDGRPS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：74(GSSDRTQYTGV)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或 (ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基297至390之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之CDR具有100%一致性之CDR的特異性結合分子在本文中稱為「S1E12」。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：42(SNSVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：46(GIDTDGEEGYNPALNS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：54(SYRADGLAYGYVQAIDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：63(SGSFIGISSVG)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：70(ASDGRPS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：74(GSSDRTQYTGV)中所示之序列。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：45(TNSVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：53(GIDTDGEEGFNPVLKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：55(SYRTDGLAYGYVQAIDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：68(SGSYIGSSGVG)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：70(ASDGRPS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：79(GSSDRTQYTGL)中所示之序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基297至390之胺基 酸序列的多肽或蛋白質分子。包含與上文給出之CDR具有100%一致性之CDR的特異性結合分子在本文中稱為「NS2A1」。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含SEQ ID NO：45(TNSVG)中所示之序列；VHCDR2包含SEQ ID NO：53(GIDTDGEEGFNPVLKS)中所示之序列；VHCDR3包含SEQ ID NO：55(SYRTDGLAYGYVQAIDY)中所示之序列；VLCDR1包含SEQ ID NO：68(SGSYIGSSGVG)中所示之序列；VLCDR2包含SEQ ID NO：70(ASDGRPS)中所示之序列；且VLCDR3包含SEQ ID NO：79(GSSDRTQYTGL)中所示之序列。
該特異性結合分子可包含下表11中所闡述之殖株的CDR序列。該抗原決定基可在SEQ ID NO：1之殘基297至390內。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含表11中所示之VHCDR1胺基酸序列；VHCDR2包含表11中所示之VHCDR2胺基酸序列；VHCDR3包含表11中所示之VHCDR3胺基酸序列；VLCDR1包含表11中所示之VLCDR1胺基酸序列；VLCDR2包含表11中所示之VLCDR2胺基酸序列；且VLCDR3包含表11中所示之VLCDR3胺基酸序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基297至390之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。
該特異性結合分子可以小於約25nM之KD結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基297至390之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。KD可小於約20nM、小於約15nM或小於約10nM。KD可較佳地為結合至SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：5之KD。結合至SEQ ID NO：1之KD可為約500pM至約15nM。結合至SEQ ID NO：1之KD可為約500pM至約1nM。結合至SEQ ID NO：1之KD可為約829pM，視需要其中該特異性結合分子包含S1E12之CDR。結合至SEQ ID NO：1之KD可為約1nM至約15nM。結合至SEQ ID NO：1之KD可為約2.9nM至10nM，視需要其中該特異性結合分子包含NS2A1之CDR。結合至SEQ ID NO：5之KD可為約1nM至約15nM。結合至SEQ ID NO：1之KD可為約3nM至約8nM。結合至SEQ ID NO：1之KD可為約5.4nM，視需要其中該特異性結合分子包含NS2A1之CDR。
該特異性結合分子可包含與SEQ ID NO：218具有至少70%、至少 75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基297至390之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。該特異性結合分子之CDR可與SEQ ID NO：218之CDR至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致。該等CDR可與SEQ ID NO：218之CDR具有100%一致性。該特異性結合分子可包含與SEQ ID NO：218具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列，其中CDR與SEQ ID NO：218之CDR具有100%一致性。該特異性結合分子可包含SEQ ID NO：218之胺基酸序列。
SEQ ID NO：218(S1E12胺基酸序列)
該特異性結合分子可包含與SEQ ID NO：220具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至包括含SEQ ID NO：1之殘基297至390之胺基酸序列的多肽或蛋白質分子。該特異性結合分子之CDR可與SEQ ID NO：220之CDR至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致。該等CDR可與SEQ ID NO：220之CDR具有100%一致性。該特異性結合分子可包含與SEQ ID NO：220具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致性之胺基酸序列，其中CDR與SEQ ID NO：220之CDR具有100%一致性。該特異性結合分子可包含SEQ ID NO：220之胺基酸序列。
SEQ ID NO：220(NS2A1胺基酸序列)
本文結合不同殖株揭示之CDR可組合成特異性結合分子。
該特異性結合分子可包含本文結合表1至表11中之任一者中所標識之殖株所揭示之一或多個CDR序列，其中其餘CDR序列在本文中結合表1至表11中之任一者中所標識之一或多個其他殖株揭示。該特異性結合分子可包含來自表1至表11中之任一者中所標識之兩個、三個、四個、五個或六個殖株的CDR。
該特異性結合分子可包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列：VHCDR1包含表1至表11中之任一者中所示的VHCDR1胺基酸序列；VHCDR2包含表1至表11中之任一者中所示的VHCDR2胺基酸序列；VHCDR3包含表1至表11中之任一者中所示的VHCDR3胺基酸序列；VLCDR1包含表1至表11中之任一者中所示的VLCDR1胺基酸序列；VLCDR2包含表1至表11中之任一者中所示的VLCDR2胺基酸序列；且VLCDR3包含表1至表11中之任一者中所示的VLCDR3胺基酸序列；或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至SEQ ID NO：1內的抗原決定基。
該特異性結合分子可包含選自由以下者組成之群之殖株的CDR：S1D12、E2E8、E1E8、E2A6、E2B7、NS2A1、S1E12、S1B1、S1D9、S1F4、S1G2、S1G10、S2C6、MD9、412E10、412B9、412E6、412G11、CA2、CA4、CA9、CA12、CB2、CB3、CB7、CC7、CE2、CE3、3aA6、3aD6、3aB7、3bF4、3aD3、3aH6、3aG3、3bG4及NS1G7； 或對於各CDR序列，(i)與該序列具有至少85%一致性的胺基酸序列，及/或(ii)相對於該序列具有一個、兩個或三個胺基酸取代的胺基酸序列，其中該特異性結合分子結合至SEQ ID NO：1內的抗原決定基。
該特異性結合分子可包含選自由以下者組成之群之殖株的CDR：S1D12、E2E8、E1E8、E2A6、E2B7、NS2A1、S1E12、S1B1、S1D9、S1F4、S1G2、S1G10、S2C6、MD9、412E10、412B9、412E6、412G11、CA2、CA4、CA9、CA12、CB2、CB3、CB7、CC7、CE2、CE3、3aA6、3aD6、3aB7、3bF4、3aD3、3aH6、3aG3、3bG4及NS1G7。
不受理論束縛，該特異性結合分子被認為單價結合至其目標。該特異性結合分子可為單價結合物。
該特異性結合分子可以小於25nM、小於20nM、小於15nM、小於10nM、小於8nM、小於6nM、小於5nM、小於4nM、小於3nM、小於2nM、小於1nM、小於0.5nM、小於0.4nM、小於0.3nM、小於0.2nM或小於0.15nM之KD結合至SEQ ID NO：1或其片段。
該特異性結合分子可以小於10nM之KD結合至SEQ ID NO：1或其片段。
該特異性結合分子可具有5nM至25nM之KD。該特異性結合分子可具有5nM至20nM之KD。該特異性結合分子可具有6nM至25nM之KD。該特異性結合分子可具有6nM至20nM之KD。
該特異性結合分子可競爭結合至與mAb423所結合之抗原決定基相同的抗原決定基。不受理論束縛，mAb423之抗原決定基被視為DHGAE，對應於SEQ ID NO：1之殘基387-391。據認為，mAb423之結合為Glu-391特異性的。因此，mAb423不結合至DHGA，對應於SEQ ID NO：1之殘基387-390。因此，該特 異性結合分子可競爭結合至DHGAE，對應於SEQ ID NO：1之殘基387至391。因此，本文所揭示的具有包含SEQ ID NO：1之殘基387至391中之一或多者的抗原決定基之任何特異性結合分子可競爭結合至與mAb423所結合之抗原決定基相同的抗原決定基。舉例而言，具有在包含SEQ ID NO：1之殘基369至390之胺基酸序列內的抗原決定基之特異性結合分子可競爭結合至與mAb423所結合之抗原決定基相同的抗原決定基。較佳地，競爭結合至與mAb423所結合之抗原決定基相同之抗原決定基的特異性結合分子為Glu-391特異性的。因此，競爭結合至與mAb423所結合之抗原決定基相同之抗原決定基的特異性結合分子可選自由以下者組成之群：E1E8、E2A6、E2B7、E2E8及E1B8。
針對dGAE片段之殖株的抗原決定基可包括被認為涉及PHF核心之「C形」架構形成的殘基(參見圖2至圖4)。此類殖株之結合可藉由空間位阻及/或抑制關鍵殘基之締合來削弱PHF核心之「C形」架構的形成或抑制次單元與現有寡聚物之結合。
該特異性結合分子可與在SEQ ID NO：1之殘基296至391內之第一區與在SEQ ID NO：1之殘基296至391內之第二區的結合競爭。因此，該特異性結合分子可與在dGAE片段內之第一區與在dGAE片段內之第二區的結合競爭。
該特異性結合分子可與在SEQ ID NO：1之殘基296至390內之第一區與在SEQ ID NO：1之殘基296至390內之第二區的結合競爭。因此，該特異性結合分子可與在dGA片段內之第一區與在dGA片段內之第二區的結合競爭。
該特異性結合分子可與在SEQ ID NO：1之殘基308至378內之第一區與在SEQ ID NO：1之殘基308至378內之第二區的結合競爭。因此，該特異性結合分子可與在dGAE73及/或dGAE71內之第一區與在dGAE73及/或dGAE71內之第二區的結合競爭。
該特異性結合分子可與在SEQ ID NO：1之殘基296至386內之第 一區與在SEQ ID NO：1之殘基296至386內之第二區的結合競爭。
該特異性結合分子可與在SEQ ID NO：1之殘基306至391內之第一區與在SEQ ID NO：1之殘基306至391內之第二區的結合競爭。
該特異性結合分子可與在SEQ ID NO：1之殘基306至386內之第一區與在SEQ ID NO：1之殘基306至386內之第二區的結合競爭。
該第一區與該第二區可在同一多肽分子內。因此，該特異性結合分子可抑制PHF核心之髮夾結構的形成。該特異性結合分子可抑制PHF核心之摺疊。
該PHF核心由沿原絲之長度延伸而呈C形架構的八個β片(β1-8)構成。
自PHF之末端開始，在β 1-2與β 8之間形成異質型交叉β界面。有序核心之N末端係由六肽306VQIVYK311(SEQ ID NO：430)形成，該六肽與來自相對β 8之殘基373-378藉由疏水性基團之面對面堆積而形成互補的堆積界面。該特異性結合分子可與SEQ ID NO：1之殘基306至311與SEQ ID NO：1之殘基373至378之結合競爭。本文所揭示的具有重疊SEQ ID NO：1之306至311或SEQ ID NO：1之殘基373至378之抗原決定基的任何特異性結合分子均可與SEQ ID NO：1之殘基306至311與SEQ ID NO：1之殘基373至378的結合競爭。舉例而言，具有在SEQ ID NO：1之殘基367至379內之抗原決定基的特異性結合分子可與SEQ ID NO：1之殘基306至311與SEQ ID NO：1之殘基373至378的結合競爭。舉例而言，包含S1G2(或其衍生物)之CDR的特異性結合分子可與SEQ ID NO：1之殘基306至311與SEQ ID NO：1之殘基373至378的結合競爭。
股β 2(SEQ ID NO：1之殘基313-322)及β 8(SEQ ID NO：1之殘基368-378)經由極性拉鏈模體相對於彼此堆積。該特異性結合分子可與SEQ ID NO：1之殘基313至322與SEQ ID NO：1之殘基368至378之結合競爭。本文所揭示 的具有重疊SEQ ID NO：1之313至322或SEQ ID NO：1之殘基368至378之抗原決定基的任何特異性結合分子均可與SEQ ID NO：1之殘基313至322與SEQ ID NO：1之殘基368至378的結合競爭。舉例而言，具有在SEQ ID NO：1之殘基367至379內之抗原決定基的特異性結合分子可與SEQ ID NO：1之殘基313至322與SEQ ID NO：1之殘基368至378的結合競爭。舉例而言，包含S1G2(或其衍生物)之CDR的特異性結合分子可與SEQ ID NO：1之殘基313至322與SEQ ID NO：1之殘基368至378的結合競爭。
L324、I326及V363之疏水性叢集使緊接在PHF核心之轉角之後的區域穩定且在β 3與β 7之間的交叉β界面進一步藉由H328與T361之側鏈之間的氫鍵接合。該特異性結合分子可與SEQ ID NO：1之殘基327至331與SEQ ID NO：1之殘基356至363之結合競爭。本文所揭示的具有重疊SEQ ID NO：1之324至331或SEQ ID NO：1之殘基356至363之抗原決定基的任何特異性結合分子均可與SEQ ID NO：1之殘基327至331與SEQ ID NO：1之殘基356至363的結合競爭。
舉例而言，具有在SEQ ID NO：1之殘基319至331內之抗原決定基的特異性結合分子可與SEQ ID NO：1之殘基327至331與SEQ ID NO：1之殘基356至363的結合競爭。舉例而言，包含CE2(或其衍生物)之CDR的特異性結合分子可與SEQ ID NO：1之殘基327至331與SEQ ID NO：1之殘基356至363的結合競爭。
作為另一實例，具有在SEQ ID NO：1之殘基355至367內之抗原決定基的特異性結合分子可與SEQ ID NO：1之殘基327至331與SEQ ID NO：1之殘基356至363的結合競爭。舉例而言，包含CA4(或其衍生物)之CDR的特異性結合分子可與SEQ ID NO：1之殘基327至331與SEQ ID NO：1之殘基356至363的結合競爭。
PHF核心之兩個「側面(side)」經由β-螺旋結構接合，該β-螺旋 結構係藉由SEQ ID NO：1之殘基337至368中的三個β-股(β 4-6)界定。PHF核心之「鉸鏈」區域可定義為SEQ ID NO：1之殘基337至355且可替代地定義為「關鍵異常摺疊」。兩個殘基(E342、K343)及三個殘基(347KDR349)之β-弧形轉角插入三角形β-螺旋幾何結構中，該幾何結構以關鍵的約70°之甘胺酸構象(G355)封閉。疏水性叢集、脂族胺基酸堆疊(V339、L344、V350及I354)及芳族胺基酸堆疊(F346)使β-螺旋之內部穩定。本文所揭示的具有重疊SEQ ID NO：1之殘基337至355之抗原決定基的任何特異性結合分子均可與SEQ ID NO：1之殘基337至355與SEQ ID NO：1之殘基337至355的結合競爭。舉例而言，具有在SEQ ID NO：1之殘基337至355內之抗原決定基的特異性結合分子可與SEQ ID NO：1之殘基337至355與SEQ ID NO：1之殘基337至355的結合競爭。舉例而言，包含S1D12(或其衍生物)之CDR的特異性結合分子可與SEQ ID NO：1之殘基337至355與SEQ ID NO：1之殘基337至355的結合競爭。
競爭以上描述之區域之結合的特異性結合分子可具有防止PHF核心結構形成且因此抑制tau聚集之效用。競爭以上描述之多個區域之結合的特異性結合分子之組合可具有增加的防止PHF核心結構形成且因此抑制tau聚集之效用。
或者，第一區與第二區可在不同多肽分子內。因此，該特異性結合分子可抑制第一多肽與第二多肽之結合。該第一多肽及該第二多肽可包含PHF核心。
如圖5及圖6中所繪示，新穎dGAE單元逐漸地展開且變得與現有寡聚物之結構對準。此連接序列可以對應於dGAE及其抗原決定基之關鍵區段逐漸結合成寡聚物的3個階段理解。可以看出，S1D12識別之鉸鏈區係連接之主要部位，隨後為其他域之逐漸對稱結合。
特異性結合分子可與包含胺基酸序列 GGGQVEVKSEKLDFKDRVQSK(SEQ ID NO：375-對應於SEQ ID NO：1之殘基333至353)之第一多肽與包含PHF核心之第二多肽的結合競爭。該特異性結合分子可與包含SEQ ID NO：1之殘基333至353之第一多肽與包含SEQ ID NO：1之殘基333至353之第二多肽的結合競爭。本文所揭示的具有重疊SEQ ID NO：1之殘基333至353之抗原決定基的任何特異性結合分子均可與包含SEQ ID NO：1之殘基333至353之第一多肽與包含PHF核心及/或SEQ ID NO：1之殘基333至353之第二多肽的結合競爭。舉例而言，具有在SEQ ID NO：1之殘基337至355內之抗原決定基的特異性結合分子可與包含SEQ ID NO：1之殘基333至353之第一多肽與包含PHF核心及/或SEQ ID NO：1之殘基333至353之第二多肽的結合競爭。舉例而言，包含S1D12(或其衍生物)之CDR的特異性結合分子可與包含SEQ ID NO：1之殘基333至353之第一多肽與包含PHF核心及/或SEQ ID NO：1之殘基333至353之第二多肽的結合競爭。
該特異性結合分子可與包含胺基酸序列CGSLGNIHHKPG(SEQ ID NO：376-對應於SEQ ID NO：1之殘基322至333)之第一多肽與包含PHF核心之第二多肽的結合競爭。該特異性結合分子可與包含SEQ ID NO：1之殘基322至333之第一多肽與包含SEQ ID NO：1之殘基322至333之第二多肽的結合競爭。本文所揭示的具有重疊SEQ ID NO：1之殘基322至333之抗原決定基的任何特異性結合分子均可與包含SEQ ID NO：1之殘基322至333之第一多肽與包含PHF核心及/或SEQ ID NO：1之殘基322至333之第二多肽的結合競爭。舉例而言，具有在SEQ ID NO：1之殘基319至331內之抗原決定基的特異性結合分子可與包含SEQ ID NO：1之殘基322至333之第一多肽與包含PHF核心及/或SEQ ID NO：1之殘基322至333之第二多肽的結合競爭。舉例而言，包含CE2(或其衍生物)之CDR的特異性結合分子可與包含SEQ ID NO：1之殘基322至333之第一多肽與包含PHF核心及/或SEQ ID NO：1之殘基322至333之第二多肽的結合競爭。
該特異性結合分子可與包含胺基酸序列SLDNITHVP(SEQ ID NO：377-對應於SEQ ID NO：1之殘基356至364)之第一多肽與包含PHF核心之第二多肽的結合競爭。該特異性結合分子可與包含SEQ ID NO：1之殘基356至364之第一多肽與包含SEQ ID NO：1之殘基356至364之第二多肽的結合競爭。本文所揭示的具有重疊SEQ ID NO：1之殘基356至364之抗原決定基的任何特異性結合分子均可與包含SEQ ID NO：1之殘基356至364之第一多肽與包含PHF核心及/或SEQ ID NO：1之殘基356至364之第二多肽的結合競爭。舉例而言，具有在SEQ ID NO：1之殘基355至367內之抗原決定基的特異性結合分子可與包含SEQ ID NO：1之殘基356至364之第一多肽與包含PHF核心及/或SEQ ID NO：1之殘基356至364之第二多肽的結合競爭。舉例而言，包含CA4(或其衍生物)之CDR的特異性結合分子可與包含SEQ ID NO：1之殘基356至364之第一多肽與包含PHF核心及/或SEQ ID NO：1之殘基356至364之第二多肽的結合競爭。
該特異性結合分子可與包含胺基酸序列VQIVYKPVD(SEQ ID NO：378-對應於SEQ ID NO：1之殘基306至314)之第一多肽與包含PHF核心之第二多肽的結合競爭。該特異性結合分子可與包含SEQ ID NO：1之殘基306至314之第一多肽與包含SEQ ID NO：1之殘基306至314之第二多肽的結合競爭。本文所揭示的具有重疊SEQ ID NO：1之殘基306至314之抗原決定基的任何特異性結合分子均可與包含SEQ ID NO：1之殘基306至314之第一多肽與包含PHF核心及/或SEQ ID NO：1之殘基306至314之第二多肽的結合競爭。舉例而言，具有包含SEQ ID NO：1之殘基306至314之抗原決定基的特異性結合分子可與包含SEQ ID NO：1之殘基306至314之第一多肽與包含PHF核心及/或SEQ ID NO：1之殘基306至314之第二多肽的結合競爭。
該特異性結合分子可與包含胺基酸序列KKIETHKLTF(SEQ ID NO：379-對應於SEQ ID NO：1之殘基369至378)之第一多肽與包含PHF核心之第 二多肽的結合競爭。該特異性結合分子可與包含SEQ ID NO：1之殘基369至378之第一多肽與包含SEQ ID NO：1之殘基369至378之第二多肽的結合競爭。本文所揭示的具有重疊SEQ ID NO：1之殘基369至378之抗原決定基的任何特異性結合分子均可與包含SEQ ID NO：1之殘基369至378之第一多肽與包含PHF核心及/或SEQ ID NO：1之殘基369至378之第二多肽的結合競爭。舉例而言，具有在SEQ ID NO：1之殘基367至379內之抗原決定基的特異性結合分子可與包含SEQ ID NO：1之殘基369至378之第一多肽與包含PHF核心及/或SEQ ID NO：1之殘基369至378之第二多肽的結合競爭。舉例而言，包含S1G2(或其衍生物)之CDR的特異性結合分子可與包含SEQ ID NO：1之殘基369至378之第一多肽與包含PHF核心及/或SEQ ID NO：1之殘基369至378之第二多肽的結合競爭。
不受理論束縛，在特異性結合分子之結合與在SEQ ID NO：1之殘基296至391內之第一區與在SEQ ID NO：1之殘基296至391內(或在其他範圍或以上陳述的SEQ ID NO：1之殘基內)之第二區之結合競爭的任何具體實例中，該特異性結合分子可抑制tau聚集。無論第一區及第二區係在相同多肽分子內還是在不同多肽分子內，此皆適用。因此，用於確定競爭性結合或用於篩選tau聚集抑制劑之任何適合測試均可用於確認特異性結合分子與在SEQ ID NO：1之殘基296至391內之第一區與在SEQ ID NO：1之殘基296至391內之第二區的結合競爭。適合篩選方法包括硫代黃素T檢定、tau-tau免疫檢定及用於評估聚集之tau在細胞培養物中之作用的檢定。用於評估聚集之tau在細胞培養物中之作用的適合檢定揭示於2020年7月10日申請的英國申請案第GB2010620.9號以及2021年7月9日申請且主張英國申請案第GB2010620.9號之優先權的國際(PCT)申請案第PCT/EP2021/069138號中，二者特此以全文引用之方式併入。
本發明係關於對配體具有高親和力之特異性結合分子。對配體具有高親和力之特異性結合分子在本發明中係有利的，因為一般而言，與對配體具 有較低親和力之特異性結合分子相比，實現特定作用需要較少的對相同配體具有高親和力之特異性結合分子。舉例而言，若該特異性結合分子係用於治療用途，則可預期的是，需要的對配體具有高親和力之特異性結合分子的劑量將低於對相同配體具有較低親和力之特異性結合分子。此對可能需要較少或較小劑量特異性結合分子，例如抗體之患者可為有利的，且亦將為更經濟的，因為療法將需要較少的特異性結合分子。
結合分子對其配體(或結合搭配物)之親和力，諸如抗體對其目標抗原之親和力可藉由結合分子與配體之複合物的解離常數(KD)定量地定義。特異性結合分子，例如抗體之KD值對應於結合分子解離速率(亦即，其如何快速地自其配體解離)與結合分子締合速率(亦即，其如何快速地結合其配體)的比率。較低的KD值對應於較高的結合分子對其配體之結合親和力。KD可在適合特異性結合分子與其配體結合之任何條件下，較佳地在鑑別為最佳的條件下量測。可使用如實施例中所描述之方法。或者，可使用鑑別為促進該特異性結合分子與包含SEQ ID NO：1內該特異性結合分子所結合之抗原決定基之肽的結合之任何其他條件。可用於計算特異性結合分子與其配體之間相互作用之KD的多種方法係此項技術中熟知的。已知技術包括SPR(例如Biacore)及偏振調變式斜入射反射率差異法(polarization-modulated oblique-incidence reflectivity difference，OI-RD)。
該特異性結合分子可為經分離之特異性結合分子。
如所指示的，該特異性結合分子包含6個由多肽序列組成之CDR。如本文所使用，「蛋白質」與「多肽」為可互換的，且各自指藉由一或多個肽鍵接合的2個或多於2個胺基酸之序列。因此，該特異性結合分子可為多肽。或者，該特異性結合分子可包含一或多個含CDR序列之多肽。較佳地，該特異性結合分子係抗體或抗體片段。
當CDR序列藉由取代特定胺基酸殘基進行修飾時，取代可為保守胺基酸取代。然而，CDR殘基的取代同樣可為將一個胺基酸用具有屬於不同家族之側鏈之另一個胺基酸取代的非保守取代。
在本申請案描述相對於指定CDR序列包含一個、二個或三個胺基酸取代之CDR序列時，該一個、二個或三個胺基酸取代可為保守胺基酸取代。較佳地，CDR序列包含兩個保守胺基酸取代。更佳地，CDR序列包含一個保守胺基酸取代。
當FR序列藉由用特定胺基酸殘基取代進行修飾時，該取代可為保守胺基酸取代。然而，FR殘基之取代同樣可為一個胺基酸用具有屬於不同家族之側鏈之另一胺基酸取代的非保守取代。
本申請案描述相對於指定FR序列包含一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸取代之FR序列時，該一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸取代可為保守胺基酸取代。較佳地，FR序列包含四個保守胺基酸取代。較佳地，FR序列包含三個保守胺基酸取代。較佳地，FR序列包含兩個保守胺基酸取代。更佳地，FR序列包含一個保守胺基酸取代。
在本發明之範圍中的胺基酸取代或添加可使用由基因密碼編碼的蛋白型胺基酸、未由基因密碼編碼的蛋白型胺基酸或非蛋白型胺基酸進行。較佳使用蛋白型胺基酸進行任何胺基酸取代或添加。構成CDR序列的胺基酸可包括天然不存在但為天然存在之胺基酸之修飾的胺基酸。倘若此等非天然存在之胺基酸不改變序列且不影響特異性，則其可用於產生本文所描述之CDR而不降低序列一致性，亦即，被視為提供CDR之胺基酸。舉例而言，可使用胺基酸之衍生物，諸如甲基化胺基酸。該特異性結合分子可為非天然分子，亦即，自然界中未發現之分子。
可使用任何適合技術，諸如編碼DNA序列之定點突變誘發或固 態合成來修飾本文中所闡述之CDR的胺基酸序列。
本文所揭示之特異性結合分子包含如本文所描述之CDR。另外，此類分子可含有連接子部分或構架序列，以允許適當呈現CDR。亦可存在可便利地賦予額外特性的額外序列，例如允許對含有CDR之分子(諸如上文所描述者)進行分離或鑑別的肽序列。在此類情況下，可產生融合蛋白。
特異性結合分子之CDR可定義為與本文所描述之一或多個SEQ ID NO具有某一序列一致性百分比。可藉由任何便利方法來評估序列一致性。然而，為了測定序列之間的序列一致性程度，進行序列之成對比對或多次比對的電腦程式係有用的，例如，可使用EMBOSS Needle或EMBOSS stretcher(二者皆來自Rice,P.等人，Trends Genet.,16,(6)第276-277頁，2000)進行成對序列比對，而Clustal Omega(Sievers F等人，Mol.Syst.Biol.7：539,2011)或MUSCLE(Edgar,R.C.,Nucleic Acids Res.32(5)：1792-1797,2004)則可用於多序列比對，不過任何其他適當程式也可使用。無論該比對為成對比對還是多個比對，其皆必須整體(亦即，在整個參考序列內)而非局部進行。
序列比對及一致性百分比計算可使用例如標準Clustal Omega參數確定：Gonnet矩陣、空位開放罰分6、空位延伸罰分1。或者，可使用標準EMBOSS Needle參數：BLOSUM62矩陣、空位開放罰分10、空位延伸罰分0.5。可替代地使用任何其他適合參數。
出於本申請案之目的，若在由不同方法獲得的序列一致性值之間存在爭議，則應將藉由使用具有預設參數之EMBOSS Needle整體成對比對獲得的值視為有效的。
在本揭示案提供與指定CDR序列具有至少85%一致性之CDR序列時，該序列一致性係至少約85%序列一致性且因此可為至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至 少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致性。較佳地，該序列一致性係至少90%或至少95%。
如上所陳述，該特異性結合分子較佳地為抗體或抗體片段。「抗體」係具有上文所描述之特徵的免疫球蛋白。亦涵蓋如下文所論述的天然存在之抗體的變異體，該等變異體保持CDR但以不同構架形式存在，且以相同方式作用，亦即，保持對抗原之特異性。因此，抗體包括功能等效物或同源物，其中天然存在之域已部分地或完全地置換成以相同方式發揮功能的天然或非天然等效物或同源物。
第一特異性結合分子及/或第二特異性結合分子可為免疫球蛋白、免疫球蛋白Fab區、Fab'、Fv、Fv-Fc、單鏈Fv(scFv)、scFv-Fc、(scFv)2、雙功能抗體(diabody)、三功能抗體(triabody)、四功能抗體(tetrabody)、雙特異性T細胞接合子(BiTE)、內含肽、VNAR域、單域抗體(sdAb)或VH域。
當該特異性結合分子係抗體時，其較佳地為單株抗體。「單株抗體」意謂由單一抗體物種組成的抗體製劑，亦即，該製劑中之所有抗體均具有相同胺基酸序列，包括相同CDR，且因此以相同作用結合其目標抗原上的相同抗原決定基(「目標抗原」意謂含有由特定抗體所結合之抗原決定基的抗原，亦即抗2N4R抗體的目標抗原為2N4R)。換言之，該抗體較佳地不為抗體多株混合物之一部分。
在如上所描述之抗體中，CDR序列係定位於重鏈及輕鏈的可變域中。CDR序列位於多肽構架內，多肽構架對CDR進行適當定位以用於抗原結合。因此，可變域之其餘部分(亦即，不形成任一CDR之一部分的可變域序列部分)構成構架區。成熟可變域的N末端形成構架區1(FR1)；CDR1與CDR2之間的多肽序列形成FR2；CDR2與CDR3之間的多肽序列形成FR3；且將CDR3連接至恆定域的多肽序列形成FR4。在抗體中，可變區構架區可具有任何適當的胺基酸序列 以使得抗體經由其CDR結合至SEQ ID NO：1或其片段。恆定區可為任何哺乳動物(較佳人類)抗體同型的恆定區。
在本發明之某些具體實例中，該特異性結合分子可為多特異性的，例如雙特異性單株抗體。多特異性結合分子含有結合至少兩個不同的分子結合搭配物，例如結合至兩個或多於兩個不同的抗原或抗原決定基之區域或域(抗原結合區)。在雙特異性抗體之情況下，抗體包含在如上所描述之形成中的兩條重鏈及輕鏈，兩條重鏈及兩條輕鏈的可變域分別不同且因此形成兩個不同的抗原結合區的情況除外。在多特異性(例如雙特異性)結合分子，例如單株抗體中，一個抗原結合區具有如本文所定義之特異性結合分子的CDR序列且因此結合SEQ ID NO：1或其片段。該多特異性結合分子之另一抗原結合區不同於CDR所形成之抗原結合區，例如具有序列不同於本文關於特異性結合分子所定義之序列的CDR。該特異性結合分子，例如雙特異性抗體中的額外(例如第二)抗原結合區亦可結合SEQ ID NO：1或其片段，但在與結合至SEQ ID NO：1或其片段之第一抗原結合區不同的抗原決定基處結合(其具有該特異性結合分子之CDR)。或者，該額外(例如第二)抗原結合區可結合一或多個額外(例如第二)的不同抗原，該一或多個額外抗原不為SEQ ID NO：1或其片段。在一替代性具體實例中，特異性結合分子中，例如抗體中之兩個或多於兩個抗原結合區可各自結合至相同抗原，亦即，提供多價(例如二價)分子。
該特異性結合分子可為能夠結合人類SEQ ID NO：1或其片段之抗體片段或合成構築體。抗體片段論述於Rodrigo等人，Antibodies，第4(3)卷，第259頁至第277頁，2015中。抗體片段較佳為單株的(亦即，其不為抗體片段多株混合物之一部分)。抗體片段包括例如Fab、F(ab')2、Fab'及Fv片段。Fab片段論述於Roitt等人，Immunology第二版(1989),Churchill Livingstone,London中。Fab片段由抗體之抗原結合域組成，亦即，可發現個別抗體含有兩個Fab片段，其各自由輕鏈 及其與重鏈之接合N末端部分組成。因此，Fab片段含有完整輕鏈以及其所結合之重鏈的VH域及CH1域。Fab片段可藉由用番木瓜蛋白酶消化抗體獲得。
F(ab')2片段由抗體之兩個Fab片段，加上重鏈域的鉸鏈區組成，包括將兩條重鏈連接在一起的二硫鍵。換言之，F(ab')2片段可被視為兩個共價接合的Fab片段。F(ab')2片段可藉由用胃蛋白酶消化抗體獲得。還原F(ab')2片段產生兩個Fab'片段，其可視為含有另一硫氫基的Fab片段，該硫氫基可用於該片段與其他分子的結合。
Fv片段僅由輕鏈及重鏈之可變域組成。此等片段未經共價連接且僅藉由非共價相互作用較弱地保持在一起。Fv片段可經修飾以產生稱為單鏈Fv(scFv)分子的合成構築體。此類修飾典型地藉由對抗體基因進行工程改造而以重組方式進行以產生融合蛋白，其中單一多肽包含VH域與VL域。scFv片段一般包括將VH區與VL區共價接合的肽連接子，肽連接子促成分子的穩定性。連接子可包含1至20個胺基酸，諸如1、2、3或4個胺基酸、5、10或15個胺基酸或在1至20範圍內的其他中間數值(若適宜)。肽連接子可由任何通常適宜的胺基酸殘基形成，諸如甘胺酸及/或絲胺酸。適合連接子的一個實例為Gly4Ser。可使用此類連接子的多聚體，諸如二聚體、三聚體、四聚體或五聚體，例如(Gly4Ser)2、(Gly4Ser)3、(Gly4Ser)4或(Gly4Ser)5。然而，連接子並非必需存在，且VL域可藉由肽鍵連接至VH域。scFv在本文中定義為抗體片段。
特異性結合分子可為scFv的類似物。舉例而言，scFv可連接至其他特異性結合分子(例如其他scFv、Fab抗體片段及嵌合IgG抗體(例如具有人類構架))。scFv可連接至其他scFv以便形成多聚體，亦即，多特異性結合蛋白，例如二聚體、三聚體或四聚體。雙特異性scFv有時被稱為雙功能抗體，三特異性scFv被稱為三功能抗體且四特異性scFv被稱為四功能抗體。在其他具體實例中，scFv可結合至其他相同的scFv分子，由此形成具有單特異性的多價多聚體，例如可形 成二價二聚體或三價三聚體。可使用之合成構築體包括CDR肽。此等肽為包含抗原結合決定子的合成肽。亦可使用肽模擬物。此等分子通常為構形約束之有機環，該等有機環模擬CDR環之結構且包括抗原相互作用側鏈。
特異性結合分子可為scAb(單鏈抗體)。scAb可包含scFv。scFv可包含視需要藉由如上文所描述之可撓性蛋白質連接子接合的可變重鏈域及可變輕鏈域。scAb可另外包含輕鏈恆定域。輕鏈恆定域可為人類的，諸如人類Ck域。
該抗體或抗體片段可為嵌合抗體，或較佳地可經人源化。在單株抗體及抗體片段的情況下尤其如此。當將分子用作人類治療劑時，需要人源化或嵌合抗體或抗體片段。用鼠類抗體無法有效地對人類進行治療性治療，原因有多種，例如該抗體的活體內半衰期短；由於人類免疫效應細胞上的Fc受體對鼠類重鏈恆定區的識別低，使得小鼠重鏈恆定區介導的效應功能弱；患者對抗體過敏且產生人類抗小鼠抗體(HAMA)反應；以及HAMA中和小鼠抗體，導致治療功效損失。
如上文所詳述，抗體之同型係由其重鏈恆定區的序列界定。嵌合抗體可具有任何人類抗體同型及各同型內之任何亞類的恆定區。舉例而言，嵌合抗體可具有IgA、IgD、IgE、IgG或IgM抗體的Fc區(亦即，嵌合抗體可分別包含重鏈α、δ、ε、γ或μ的恆定域)，但較佳地，抗體屬於IgG同型。因此，嵌合抗體可屬於任何同型。嵌合抗體之輕鏈可為κ輕鏈或λ輕鏈，亦即，其可包含人類λ輕鏈或人類κ輕鏈的恆定區。相應地，嵌合抗體片段為包含恆定域的抗體片段(例如Fab、Fab'或F(ab')2片段)。嵌合抗體片段之恆定域可如上文關於嵌合單株抗體所描述。
嵌合抗體可使用任何適合技術產生，例如重組DNA技術，其中鼠類可變域之DNA序列與人類恆定域之DNA序列融合，以便編碼嵌合抗體。嵌合 抗體片段可藉由使用重組DNA技術以產生編碼此類多肽的DNA序列獲得，或藉由加工嵌合抗體以產生如上文所描述之所需片段獲得。預期嵌合抗體可克服與人類療法中使用鼠類抗體相關的活體內半衰期短及效應功能弱的問題，且可降低患者過敏及HAMA發生之機率。然而，由於可變域中存在鼠類序列，故當向人類患者投予嵌合抗體時仍可能出現患者過敏及HAMA。
因此，較佳地，該抗體或抗體片段為完全人源化的。人源化抗體為來源於另一物種，例如小鼠之抗體，其中不僅抗體鏈之恆定域經人類恆定域置換，而且可變區之胺基酸序列經修飾，特定言之，外來(例如鼠類)構架序列經人類構架序列置換，使得較佳地，僅抗體中之非人類序列為CDR序列。人源化抗體可克服與在人類中治療性使用非人類抗體相關的所有問題，包括避免患者過敏及HAMA發生或將患者過敏及HAMA機率降至最低。
抗體人源化一般係藉由稱為CDR移植之方法進行，但亦可使用此項技術中的任何其他技術。CDR移植充分描述於Williams,D.G.等人，Antibody Engineering第1卷，R.Kontermann及S.Dübel編輯，第21章，第319-339頁。在此方法中，首先產生如上文所描述的嵌合抗體。隨後對外來(例如鼠類)可變域的人源化涉及在最適當之人類可變區的FR內嵌入來自各免疫球蛋白鏈的鼠類CDR。此係藉由將鼠類可變域與已知人類可變域的資料庫(例如IMGT或Kabat)比對來實現。適當人類構架區係由經最佳比對的可變域鑑別，例如在人類構架區與鼠類構架區之間具有高序列一致性的域、含有相同長度CDR的域、具有最類似結構的域(基於同源模型化)等。接著，使用重組DNA技術將鼠類CDR序列移植至主要人類構架序列中的適當位置處，且接著產生人源化抗體且針對其與目標抗原的結合進行測試。抗體人源化之方法為所屬技術領域中具有通常知識者已知且理解的，所屬技術領域中具有通常知識者可在無進一步說明之情況下執行該技術。抗體人源化服務亦由許多商業公司，例如GenScript(美國/中國)或MRC Technology(英國)提供。人源化抗體片段可由如上文所描述之人源化抗體容易地獲得。
因此，抗體或抗體片段可來源於任何物種，例如其可為鼠類抗體或抗體片段。然而，較佳地，抗體或抗體片段為嵌合抗體或抗體片段，亦即，抗體或抗體片段中僅可變域為非人類的，且恆定域皆為人類的。最佳地，該抗體或抗體片段為人源化抗體或抗體片段。
Tau蛋白病
tau蛋白聚集係稱為「tau蛋白病」之疾病的標誌。已識別出各種tau蛋白病症，其特徵在於在神經元及/或神經膠質中具有顯著tau病變，且此術語已在此項技術中使用若干年。此等病理包涵體與在諸如AD之類疾病中之特有tau包涵體之間的類似性指示，共用結構特徵且病理學的表面形貌分佈將引起所觀察到的不同臨床表型。特定言之，已預先獲得AD、匹克氏病(Pick's disease)(額顳葉型失智亞型)、慢性創傷性腦病(CTE)及皮質基底核退化(CBD)中聚集之Tau的低溫電子顯微鏡結構，且全部顯示出共同的構象特徵，指示能夠調節例如PHF(如在AD中觀察到的)中Tau聚集的化合物亦可調節其他tau蛋白病中Tau之聚集。除下文論述之特定疾病外，一般所屬技術領域中具有通常知識者可藉由認知或行為症狀之組合，摻加經由使用PET或MRI顯現的聚集之tau之適當配體的使用鑑別出tau蛋白病，諸如WO02/075318中所描述者。
本發明各態樣係關於「tau蛋白病」。以及阿茲海默氏病(AD)、神經退化性病症諸如匹克氏病及進行性核上神經麻痹症(PSP)之致病機制看來分別與新皮質之齒狀回及星形椎體細胞中病理性截短之tau聚集物之積累相關。相關失智包括額顳葉型失智(frontotemporal dementia，FTD)；行為型額顳葉型失智(bvFTD)；染色體17相關額顳葉型失智伴帕金森氏症(FTDP-17)；去抑制 -失智-帕金森氏症-肌萎縮複症症候群(disinhibition-dementia-parkinsonism-amyotrophy complex，DDPAC)；蒼白球-腦橋-黑質變性(pallido-ponto-nigral degeneration，PPND)；關島型ALS症候群(Guam-ALS syndrome)；蒼白球-黑質-盧易體變性(pallido-nigro-luysian degeneration，PNLD)；皮質基底核退化(CBD)；嗜銀顆粒性失智(dementia with argyrophilic grains，AgD)；拳擊手型失智(DP)，其中儘管表面形貌不同，但NFT與在AD中觀察到的NET類似(Bouras等人，1992)；慢性創傷性腦病(CTE)，一種包括DP以及反覆及體育相關腦震盪之tau蛋白病(McKee等人，2009)。其他論述於Wischik等人，2000中，相關詳細論述，尤其是表5.1)。
在唐氏症候群(Down's Syndrome，DS)(Flament等人，1990)及路易氏體失智(dementia with Lewy bodies，DLB)(Harrington等人，1994)中亦發現NFT中之異常tau。在腦炎後型帕金森氏症(Postencephalitic parkinsonism，PEP)中亦發現Tau陽性NFT(Charpiot等人，1992)。在亞急性硬化性泛腦炎(Subacute sclerosing panencephalitis，SSPE)中觀察到神經膠質tau纏結(Ikeda等人，1995)。其他tau蛋白病包括第C型尼曼-匹克二氏病(Niemann-Pick disease type C，NPC)(Love等人，1995)；第B型聖菲利柏氏症候群(Sanfilippo syndrome type B)(或黏多糖病III B、MPSIII B)(Ohmi等人，2009)；肌緊張性營養不良(DM)，即DM1(Sergeant等人，2001及其中所引用之參考文獻)及DM2(Maurage等人，2005)。另外，文獻中越來越多的共識認為，tau病理學亦可更普遍地導致認知缺陷及衰退，包括輕度認知障礙(MCI)(參見例如Braak等人，2003,Wischik等人，2018)。
主要或部分以異常tau聚集為特徵的所有此等疾病在本文中稱為「tau蛋白病」或「tau蛋白聚集疾病」。在與tau蛋白病相關的本發明之態樣中，tau蛋白病可選自本文所定義之任何tau蛋白病。不希望受理論所束縛，本發明人咸 信所解析的tau蛋白病之所有結構皆涵蓋Tau之dGAE區。因此，可合理地預期使不易於藉由與dGAE結合來組裝的dGAE之構形穩定的特異性結合分子適用於所有tau疾病，包括但不限於AD。
tau蛋白病可選自由以下者組成之群：阿茲海默氏病、原發性年齡相關型tau蛋白病(PART)、神經纖維纏結優勢型老年失智症、慢性創傷性腦病(CTE)、進行性核上神經麻痹症(PSP)、皮質基底核退化症(corticobasal degeneration，CBD)、額顳葉型失智(FTD)、行為變異型額顳葉型失智(bvFTD)；染色體17相關額顳葉型失智伴帕金森氏症(FTDP-17)、匹克氏病、去抑制-失智-帕金森氏症-肌萎縮複症症候群(DDPAC)、蒼白球-腦橋-黑質變性(PPND)、關島型ALS症候群；蒼白球-黑質-盧易體變性(PNLD)、嗜銀顆粒性失智(AgD)、唐氏症候群(DS)、路易氏體失智(DLB)、腦炎後型帕金森氏症(PEP)、拳擊手型失智(DP)、創傷性腦損傷(TBI)、中風、局部缺血(ischemia)、利替可-波帝格氏病(Lytico-bodig disease)(關島型帕金森-失智複症症候群(Parkinson-dementia complex of Guam))、神經節膠質細胞瘤(ganglioglioma)、神經節瘤(gangliocytoma)、腦膜血管瘤病(meningioangiomatosis)、腦炎後型帕金森氏症、亞急性硬化性泛腦炎(SSPE)、鉛毒腦病(lead encephalopathy)、結節性硬化症、泛酸激酶相關性神經退化、脂褐質症(lipofuscinosis)及輕度認知障礙(MCI)。
tau蛋白病可選自由以下者組成之群：阿茲海默氏病、額顳葉型失智(FTD)、行為變異型FTD(bvFTD)及輕度認知障礙(MCI)。
tau蛋白病可為阿茲海默氏病。
tau蛋白片段包括SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6及SEQ ID NO：7。
「接觸」意思指「暴露於」。其不需要方向性；tau蛋白或其片段 可暴露於特異性結合分子或特異性結合分子可暴露於tau蛋白或其片段。接觸係在容許特異性結合分子與tau蛋白或其片段結合之條件下發生。
樣本
樣本可定義為「患者樣本」或「生物樣本」。樣本可來自罹患tau蛋白病或有患tau蛋白病之風險的個體。樣本可來自任何個體，包括無症狀個體。樣本可來自人類。
樣本典型地係在執行本發明之方法之前獲得。因此，本發明之方法為試管內或活體外方法。在一些替代具體實例中，該方法可另外包含一或多個樣本收集步驟。
該樣本係唾液樣本。該樣本可為未經刺激之唾液。該樣本可為全唾液或唾液上清液。較佳地，該樣本係唾液上清液。該樣本可來自在樣本收集之前禁食至少15分鐘、至少30分鐘、至少1小時、至少2小時或至少5小時的個體。該樣本可來自在樣本收集之前禁食至少30分鐘的個體。該樣本可來自在樣本收集之前用例如水漱口之個體。該樣本可在至少0.5ml、至少1ml、至少1.5ml、至少2ml或至少5ml唾液中收集。該樣本可在至少1ml唾液中收集。該樣本可收集後經歷離心。舉例而言，該樣本可以約10,000×g離心約5分鐘或以任何其他適合的離心參數離心以將唾液上清液與任何碎片分開。該樣本可在任何適合條件下儲存，例如該樣本可等分及/或在-80℃儲存。
在偵測樣本中之tau蛋白或其片段之前，樣本可以任何適合方式加工。tau蛋白或其片段可自樣本分離、萃取及/或純化。該分離、萃取及/或純化可藉由任何適合技術執行。
本發明之方法可另外包含自樣本分離、萃取及/或純化tau蛋白或其片段之初始步驟。因此，該方法可另外包含自樣本分離tau蛋白或其片段。該 方法可另外包含自樣本萃取tau蛋白或其片段。該方法可另外包含自樣本純化出tau蛋白或其片段。
獲得樣本之步驟及/或自樣本分離、萃取及/或純化tau蛋白或其片段之步驟可在該方法後續步驟之不同位置發生。因此，該方法可另外包含運輸樣本及/或運輸tau蛋白或其片段之步驟。
樣本(術語「樣本」包括自其分離及/或純化之tau蛋白或其片段)可例如藉由用十二烷基硫酸鈉(SDS)處理而變性。該方法可另外包含在使樣本與特異性結合分子接觸之前，使tau蛋白或其片段變性的步驟。變性較佳地可藉由使樣本與十二烷基硫酸鈉(SDS)接觸來進行。因此，樣本可包含變性蛋白質。tau蛋白或其片段可為變性的。
偵測
如本文所使用，術語「偵測」包含定量或定性偵測。「偵測」可包括量測及/或定量樣本中tau蛋白或其片段之量(或水平)。
tau蛋白或其片段可使用免疫檢定偵測。免疫檢定具有微型化以在微流控裝置或測試條上操作之潛力且可能更適合於臨床定點照護應用。因此，併入免疫檢定的本發明之具體實例可由主要醫療保健提供商原位使用以幫助個別患者進行規定治療。
樣本中tau蛋白或其片段之量(或水平)可使用均質或異質免疫檢定量測。
因此，在一些具體實例中，可藉由結合至過量存在的本發明之特異性結合分子來量測溶液中tau蛋白或其片段之量(或水平)，其中結合將改變標記之可偵測特性。因此，存在的tau蛋白或其片段之量將影響具有特定可偵測特性之標記的量。如此項技術中所熟知，該標記可包含放射性標記、螢光標記或具 有顯色或化學發光受質之酶，該顯色或化學發光受質在酶作用下會著色或引起或允許發螢光。
或者，可以使用異質形式，其中藉由表面結合之抗體捕捉至少一種tau蛋白或其片段進行分離及定量。在一些具體實例中，可使用夾心檢定，其中藉由結合經標記之二次抗體來對表面結合之tau蛋白或其片段定量。
適當地，免疫檢定可包含酶免疫檢定(EIA)，其中標記係酶，諸如辣根過氧化酶(HRP)。適用於HRP之受質為此項技術中熟知的且包括例如ABTS、OPD、AmplexRed、DAB、AEC、TMB、高香草酸及魯米諾(luminol)。在一些具體實例中，可使用ELISA免疫檢定；夾心ELISA檢定可為尤佳的。
免疫檢定可為競爭性或非競爭性的。因此，在一些具體實例中，可藉由如上文所描述之均質或異質方法直接量測tau蛋白或其片段之量。或者，可在溶液中用過量存在之特異性結合分子螯合樣本中之量的tau蛋白或其片段，且接著藉由結合至表面結合之tau蛋白或其片段來測定剩餘特異性結合分子之量以得到初始樣本中tau蛋白或其片段之量的間接讀出。在另一變化形式中，可使tau蛋白或其片段與已知量之經標記tau蛋白或其片段競爭結合至表面結合之特異性結合分子。
表面結合之特異性結合分子或者tau蛋白或其片段可固定於此項技術中已知種類的任何適合表面上。舉例而言，特異性結合分子或者tau蛋白或其片段可固定於孔或盤之表面上或複數個磁性或非磁性珠粒之表面上。
在一些具體實例中，免疫檢定可為競爭性檢定，其另外包含已知量之tau蛋白或其片段，該tau蛋白或其片段與樣本中待定量者相同，但用可偵測標記標示。經標記之tau蛋白或其片段可藉由針對tau蛋白或其片段之特異性結合分子親和結合至適合表面。在添加樣本後，一部分經標記之tau蛋白或其片段可自表面結合之特異性結合分子轉移，由此提供對樣本中tau蛋白或其片段之水平 的量測。
在一些具體實例中，免疫檢定可包含與樣本中待定量之tau蛋白或其片段相同的表面結合之tau蛋白或其片段，以及相對於溶液中之tau蛋白或其片段過量的已知量之特異性結合分子。先將樣本與特異性結合分子在溶液中混合，以使得一部分特異性結合分子與樣本中之tau蛋白或其片段結合。接著，可藉由結合至表面結合之tau蛋白或其片段量測剩餘未結合之特異性結合分子的量。
在一些具體實例中，免疫檢定可包含針對tau蛋白或其片段或針對tau蛋白或其片段之一次抗體的經標記之二次抗體以定量結合至表面結合之抗體的tau蛋白或其片段之量或結合至固定於表面上之tau蛋白或其片段的一次抗體之量。
可藉由用於量測樣本中tau蛋白或其片段之水平的設備量測tau蛋白或其片段之水平，該設備包含樣本收集裝置及免疫檢定。該設備可另外包含用於在免疫檢定中偵測經標記之tau蛋白或其片段或針對tau蛋白或其片段的經標記之抗體的偵測器。適合標記在以上有所提及，但在一較佳具體實例中，標記可為具有顯色或化學發光受質之酶，該受質在酶作用下會著色或引起或允許發螢光。
免疫檢定或設備可併入用於量測生物樣本中tau蛋白或其片段之水平的微型化裝置中。適當地，該裝置可包含實驗室晶片(lab-on-a-chip)。
可藉由用於量測獲自患者之樣本中至少一種tau蛋白或其片段之水平的裝置來量測tau蛋白或其片段之水平，該裝置包含界定具有入口端及反應區之內部通道的一或多個部分，其中樣本中之tau蛋白或其片段可與固定的針對tau蛋白或其片段之一次抗體反應以捕捉該tau蛋白或其片段，或溶液中針對tau蛋白或其片段的過量一次抗體在與反應區上游之樣本混合之後可與tau蛋白或其片 段反應，以直接地或間接地定量樣本中tau蛋白或其片段之量，該tau蛋白或其片段與樣本中待量測者相同，但固定於反應區內之表面上。
接著，捕捉之tau蛋白或其片段或者一次抗體可使用針對tau蛋白或其片段或者一次抗體的二次抗體偵測，該二次抗體經酶標示。
如上文所描述，酶可具有發色或化學發光受質，該受質在酶作用下會著色或引起或允許發螢光。適當地，界定通道，至少相鄰反應區的裝置之一或多個部分可為透光的，至少透過在包含受質之顏色或螢光之波長範圍內的光以允許使用定位於通道或其他通道外部的適合偵測器，諸如光電二極體偵測與tau蛋白或其片段或一次抗體與二次抗體之間的反應。
在一些具體實例中，該裝置可包含用於並行量測樣本中複數個不同tau蛋白或其片段之水平的複數個通道，各通道具有其自身的入口端。因此，各通道可包括不同的各別經固定之一次抗體或者tau蛋白或其片段。
適當地，該裝置可包含與一或多個入口端相聯的一或多個可選擇性操作之閥，用於控制一系列不同試劑進入該等通道中，諸如樣本、洗滌溶液、一次抗體、二次抗體及酶受質。
因此，該裝置可包含微流控裝置。通道可包括反應區。微流控裝置為所屬技術領域中具有通常知識者已知的。微流控免疫檢定或蛋白質診斷晶片微陣列之評述提供於Chin等人，2012.Lab on a Chip.2012；12：2118-2134中。適於在定點照護時進行ELISA免疫檢定之微流控裝置揭示於Chan CD,Laksanasopin T,Cheung YK,Steinmiller D等人，「Microfluidics-based diagnostics of infectious diseases in the developing world」.Nature Medicine.2011；17(8)：1015-1019中，該案之內容以引用的方式併入本文中。
tau蛋白或其片段可使用包含質譜，例如免疫沈澱隨後質譜法來偵測。質譜法可為LC-MS。
第一特異性結合分子及第二特異性結合分子
該方法可包含使樣本與結合至SEQ ID NO：1之殘基296至391內、較佳地殘基307至391內之抗原決定基的第一特異性結合分子接觸以及使樣本與結合至SEQ ID NO：1內、較佳地SEQ ID NO：1之殘基151至243內之抗原決定基的第二特異性結合分子接觸。本文中明確地涵蓋本文所揭示的結合至SEQ ID NO：1之殘基296至391內、較佳地殘基307至391內之抗原決定基的第一特異性結合分子以及使樣本與本文所揭示的結合至SEQ ID NO：1內、較佳地SEQ ID NO：1之殘基151至243內之抗原決定基之第二特異性結合分子接觸的任何及所有組合。
該第一特異性結合分子可以小於25nM、小於20nM、小於15nM、小於10nM、小於8nM、小於6nM、小於5nM、小於4nM、小於3nM、小於2nM、小於1nM、小於0.5nM、小於0.4nM、小於0.3nM、小於0.2nM或小於0.15nM之KD結合至SEQ ID NO：1或其片段。高親和力第一特異性結合分子在該第一特異性結合分子為表面結合之特異性結合分子的具體實例中可為尤其有利的。較佳的高親和力第一特異性結合分子為包含S1D12之CDR的特異性結合分子。較佳的高親和力第一特異性結合分子為包含S1D12之CDR及FW的特異性結合分子。較佳的高親和力第一特異性結合分子為包含S1D12之VH域及/或VL域的特異性結合分子。
該第一特異性結合分子可結合至SEQ ID NO：1之殘基296至391內的抗原決定基。較佳地，該第一特異性結合分子結合至SEQ ID NO：1之殘基307至391內的抗原決定基。較佳地，該第一特異性結合分子結合至SEQ ID NO：1之殘基337至355內或SEQ ID NO：1之殘基367至379內的抗原決定基。
該第一特異性結合分子可結合至SEQ ID NO：1之殘基367至379內的抗原決定基。較佳的第一特異性結合分子為包含S1G2之CDR的特異性結合 分子。較佳的高親和力第一特異性結合分子為包含S1G2之CDR及FW的特異性結合分子。較佳的高親和力第一特異性結合分子為包含S1G2之VH域及/或VL域的特異性結合分子。
該第一特異性結合分子可結合至SEQ ID NO：1之殘基355至367內的抗原決定基。較佳的第一特異性結合分子為包含CA4之CDR的特異性結合分子。較佳的高親和力第一特異性結合分子為包含CA4之CDR及FW的特異性結合分子。較佳的高親和力第一特異性結合分子為包含CA4之VH域及/或VL域的特異性結合分子。
該第二特異性結合分子可結合至與該第一特異性結合分子相同的抗原決定基或不同的抗原決定基。熟練技術人員應理解，適當抗體對可允許偵測感興趣的特定tau片段。舉例而言，在第一特異性結合分子及第二特異性結合分子之抗原決定基在SEQ ID NO：1之序列內較寬地隔開(諸如分別結合至N末端區及C末端區)的情況下，該方法可選擇性偵測全長及較長tau片段；僅被一個特異性結合分子結合(或兩個特異性結合分子皆不結合)的較短tau片段將不會被偵測到。
該第二特異性結合分子可為已知之特異性結合分子，諸如HT7、BT2、Tau12或Tau146。該第二特異性結合分子可為HT7或BT2。
在較佳組態中，該第一特異性結合分子可為S1D12、S1G2或CA4且該第二特異性結合分子可為BT2或HT7。
在較佳組態中，該第一特異性結合分子可為S1D12且該第二特異性結合分子可為BT2或HT7。該第一特異性結合分子可為S1D12且該第二特異性結合分子可為BT2。該第一特異性結合分子可為S1D12且該第二特異性結合分子可為HT7。
在較佳組態中，該第一特異性結合分子可為S1G2且該第二特異 性結合分子可為BT2或HT7。該第一特異性結合分子可為S1G2且該第二特異性結合分子可為BT2。該第一特異性結合分子可為S1G2且該第二特異性結合分子可為HT7。
在較佳組態中，該第一特異性結合分子可為CA4且該第二特異性結合分子可為BT2或HT7。該第一特異性結合分子可為CA4且該第二特異性結合分子可為BT2。該第一特異性結合分子可為CA4且該第二特異性結合分子可為HT7。
在較佳組態中，該第一特異性結合分子可為S1D12或S1G2且該第二特異性結合分子可為BT2或HT7。
本文中別處所描述的HT7及/或BT2之替代性第二特異性結合分子可取代以上所鑑別的任一較佳組態中之HT7及/或BT2。舉例而言，提及的HT7及/或BT2可經所提到的第二特異性結合分子取代，該第二特異性結合分子包含3aA6、3aD6、3bD11、CB11、CA2、CB6、CA7、CA8、CB10、CC7、CB12、CC3、CA1、CA3、CD2、CC4、CD1或CC5之CDR(視需要另外包含FW區且視需要包含VH域及/或VL域)。以上所鑑別之較佳組態中提到的S1D12、S1G2或CA4包括第一特異性結合分子，其包含S1D12、S1G2或CA4之CDR(視需要另外包含FW區且視需要包含VH域及/或VL域)。
詢問及測定患者樣本中各種tau物種或片段之水平的能力對於早期診斷tau蛋白病至關重要。因此，本發明提供一種用於測定不同tau物種之濃度的方法。該方法可使用加料樣本。該方法可使用針對tau蛋白之選定抗原決定基的特異性結合分子對。因此，該方法可為夾心ELISA檢定。
當第一特異性結合分子結合至SEQ ID NO：1之殘基337至355內的抗原決定基且第二特異性結合分子結合至SEQ ID NO：1之殘基367至379內的抗原決定基時，該方法可偵測SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6及SEQ ID NO：7。由於自配對螺旋絲(PHF)之蛋白水解穩定性核心內裂解被認為不常見的，故此具體實例因此可偵測包含PHF之總tau。
該第二特異性結合分子可結合至在SEQ ID NO：1之殘基379至391內的抗原決定基。較佳的第二特異性結合分子為包含E2E8之CDR的特異性結合分子。
如本文所描述，結合至SEQ ID NO：1之殘基379至391內之抗原決定基的特異性結合分子可為「E特異性」的；E391對於結合至關重要。當第一特異性結合分子結合至SEQ ID NO：1之殘基337至355內的抗原決定基且第二特異性結合分子結合至SEQ ID NO：1之殘基379至391內的抗原決定基時，該方法可偵測SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3及SEQ ID NO：4。由於E特異性的特異性結合分子不偵測SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6或SEQ ID NO：7，故此具體實例可因此偵測dGAE及全長tau，但並不偵測缺乏E391之片段，諸如dGA。
該第二特異性結合分子可結合至在SEQ ID NO：1之殘基13至25內的抗原決定基。較佳的第二特異性結合分子為包含CB7之CDR的特異性結合分子。
當第一特異性結合分子結合至SEQ ID NO：1之殘基337至355內的抗原決定基且第二特異性結合分子結合至SEQ ID NO：1之殘基13至25內的抗原決定基時，該方法可偵測SEQ ID NO：1。然而，此具體實例將不偵測分離之SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6及SEQ ID NO：7，因為此等片段省去SEQ ID NO：1之殘基13至25。由於在此具體實例中使用之抗原決定基隔開較遠，故此具體實例可因此偵測全長tau。
該方法可包含使樣本與至少一對第一特異性結合分子及第二特異性結合分子接觸，其中該對第一特異性結合分子及第二特異性結合分子可為 本發明之任何兩個特異性結合分子。較佳的第一特異性結合分子及第二特異性結合分子對包括：●結合至SEQ ID NO：1之殘基337至355內之抗原決定基的第一特異性結合分子及結合至SEQ ID NO：1之殘基367至379內之抗原決定基的第二特異性結合分子；●結合至SEQ ID NO：1之殘基337至355內之抗原決定基的第一特異性結合分子及結合至SEQ ID NO：1之殘基379至391內之抗原決定基的第二特異性結合分子；及●結合至SEQ ID NO：1之殘基337至355內之抗原決定基的第一特異性結合分子及結合至SEQ ID NO：1之殘基13至25內之抗原決定基的第二特異性結合分子。
該方法可包含使樣本與至少二對或至少三對第一特異性結合分子及第二特異性結合分子接觸。舉例而言，該方法可包含使樣本與以下接觸：●結合至SEQ ID NO：1之殘基337至355內之抗原決定基的第一特異性結合分子及結合至SEQ ID NO：1之殘基367至379內之抗原決定基的第二特異性結合分子；●結合至SEQ ID NO：1之殘基337至355內之抗原決定基的第一特異性結合分子及結合至SEQ ID NO：1之殘基379至391內之抗原決定基的第二特異性結合分子；及●結合至SEQ ID NO：1之殘基337至355內之抗原決定基的第一特異性結合分子及結合至SEQ ID NO：1之殘基13至25內之抗原決定基的第二特異性結合分子。
在該方法包含使樣本與兩對或多於兩對特異性結合分子接觸的情況下，各對特異性結合分子典型地分別及/或並行接觸樣本。因此，在使樣本 與特異性結合分子對接觸之前，該樣本可經等分。可使個別等分試樣與各對特異性結合分子接觸。並行接觸可為在同一時間或同時接觸。並行接觸可為在基本上相同的時間或基本上同時接觸。並行接觸可不為依序接觸或先後接觸。並行接觸典型地意謂各對特異性結合分子在獨立容器中與樣本接觸。並行接觸典型地意謂各對特異性結合分子可獨立地與樣本相互作用。
各對特異性結合分子可經組態用於偵測不同的tau蛋白或其片段。舉例而言：●分別結合至SEQ ID NO：1之殘基337至355內之抗原決定基及SEQ ID NO：1之殘基367至379內之抗原決定基的第一對特異性結合分子可經組態用於偵測包含PHF之總tau；●分別結合至SEQ ID NO：1之殘基337至355內之抗原決定基及SEQ ID NO：1之殘基379至391內之抗原決定基的第二對特異性結合分子可經組態用於偵測dGAE及全長tau，但不偵測缺乏E391之片段，諸如dGA；且●分別結合至SEQ ID NO：1之殘基337至355內之抗原決定基及SEQ ID NO：1之殘基13至25內之抗原決定基的第三對特異性結合分子可經組態用於偵測全長tau。
該方法可另外包含測定不同tau蛋白或其片段之水平的步驟。該方法可另外包含比較不同tau蛋白或其片段之水平的步驟。
在一個特定具體實例中，該方法包含偵測樣本中之tau蛋白或其片段，其包含：a)使該樣本與第一對特異性結合分子接觸，該第一對特異性結合分子包括含S1D12之CDR的特異性結合分子及含S1G2之CDR的特異性結合分子；b)使該樣本與第二對特異性結合分子接觸，該第二對特異性結合分子包括含S1D12之CDR的特異性結合分子及含E2E8之CDR的特異性結合分子；且 c)使該樣本與第三對特異性結合分子接觸，該第三對特異性結合分子包括含S1D12之CDR的特異性結合分子及含CB7之CDR的特異性結合分子；其中各對特異性結合分子並行接觸樣本。
因此，本發明提供區分及/或測定樣本中hT40、dGAE及dGA之水平。
Tau片段
該方法可為用於偵測tau蛋白片段之試管內方法。該片段之胺基酸序列可由SEQ ID NO：1之殘基113至379內的胺基酸殘基組成。本發明人已在血漿中鑑別出可藉由核心結合特異性結合分子偵測的tau片段。本發明人已鑑別出該片段可省去某些N末端及C末端胺基酸殘基，特定言之，該等片段不包括SEQ ID NO：1之殘基1至112或殘基380至441。
該片段可包含SEQ ID NO：1之殘基113至379內的至少30個、至少35個、至少40個、至少45個、至少50個、至少55個、至少60個、至少65個、至少70個、至少75個、至少80個、至少85個、至少90個、至少95個、至少100個、至少105個、至少110個、至少115個、至少120個、至少125個、至少130個、至少135個、至少140個、至少145個、至少150個、至少155個、至少160個、至少165個、至少170個或至少175個連續胺基酸殘基。
如本文所使用，術語「連續(consecutive)」可取代術語「鄰接(contiguous)」，各自指一級胺基酸序列中所發現的彼此相鄰之胺基酸殘基。因此，該片段可由SEQ ID NO：1之殘基113至379內的連續或鄰接胺基酸殘基組成。
該片段可包含SEQ ID NO：1之殘基113至379內的至少30個、至少35個、至少40個、至少45個、至少50個、至少55個、至少60個、至少65個、至少70個、至少75個、至少80個、至少85個、至少90個、至少95個、至少100個、至 少105個、至少110個、至少115個、至少120個、至少125個、至少130個、至少135個、至少140個、至少145個、至少150個、至少155個、至少160個、至少165個、至少170個、至少175個、至少180個、至少185個、至少190個、至少195個、至少200個、至少205個、至少210個、至少215個、至少220個、至少225個、至少230個、至少235個、至少240個、至少245個、至少250個、至少255個、至少260個、至少261個、至少262個、至少263個、至少264個、至少265個、至少266個或267個連續胺基酸殘基。
該片段可包含SEQ ID NO：1之殘基113至379內的至少155個、至少160個、至少165個、至少170個、至少175個、至少180個、至少185個、至少190個、至少195個、至少200個、至少205個、至少210個、至少215個、至少220個、至少225個、至少230個、至少235個、至少240個、至少245個、至少250個、至少255個、至少260個、至少261個、至少262個、至少263個、至少264個、至少265個、至少266個或267個連續胺基酸殘基。
該片段可藉由以下任一者或多者界定：SEQ ID NO：1之殘基113至379內之連續胺基酸的數目；SEQ ID NO：1自殘基297至391之連續胺基酸殘基的數目；SEQ ID NO：1自殘基244至296之連續胺基酸殘基的數目；SEQ ID NO：1自殘基151至243之連續胺基酸殘基的數目；及/或SEQ ID NO：1自殘基113至150之連續胺基酸殘基的數目。在包含SEQ ID NO：1自151至243及自297至391之胺基酸殘基的任何具體實例中，可另外存在SEQ ID NO：1之殘基244至296且其將典型地存在於SEQ ID NO：1自151至243與自297至391之殘基之間，由此使該片段包含SEQ ID NO：1自殘基151至243、殘基244至296及殘基297至391之連續胺基酸殘基，該等胺基酸殘基係SEQ ID NO：1之殘基113至379內的連續胺基酸殘基。
該片段可包含SEQ ID NO：1自殘基297至391的至少4個、至少5 個、至少6個、至少7個、至少8個、至少9個、至少10個、至少11個、至少12個、至少13個、至少14個、至少15個、至少16個、至少17個、至少18個、至少19個、至少20個、至少21個、至少22個、至少23個、至少24個、至少25個、至少26個、至少27個、至少28個、至少29個或至少30個連續胺基酸殘基。SEQ ID NO：1之殘基297至391(亦參見SEQ ID NO：4)對應於自配對螺旋絲(PHF)之蛋白水解穩定性核心分離的主要片段。
該片段可包含SEQ ID NO：1自殘基297至391的至少4個、至少5個、至少6個、至少7個、至少8個、至少9個、至少10個、至少11個、至少12個、至少13個、至少14個、至少15個、至少16個、至少17個、至少18個、至少19個、至少20個、至少21個、至少22個、至少23個、至少24個、至少25個、至少26個、至少27個、至少28個、至少29個、至少30個、至少35個、至少40個、至少45個、至少50個、至少55個、至少60個、至少65個、至少70個、至少75個、至少80個、至少85個、至少90個、至少91個、至少92個、至少93個、至少94個或95個連續胺基酸殘基。
其中該片段包含SEQ ID NO：1自殘基297至391之至少4個連續胺基酸殘基，該至少4個連續胺基酸殘基可包含SEQ ID NO：1之胺基酸殘基337至349及/或SEQ ID NO：1之胺基酸殘基370至374。該片段可包含S1D12及/或S1G2之抗原決定基。
該片段可包含SEQ ID NO：1自殘基297至391的至少30個、至少35個、至少40個、至少45個、至少50個、至少55個、至少60個、至少65個、至少70個、至少75個、至少80個、至少85個、至少90個、至少91個、至少92個、至少93個、至少94個或95個連續胺基酸殘基。
該片段可包含SEQ ID NO：1自殘基297至391之38個連續胺基酸殘基。該38個連續胺基酸可為SEQ ID NO：1之殘基337至349。該片段可包含 S1D12及S1G2之抗原決定基。該片段可包含S1D12及S1G2之抗原決定基以及插入之連續胺基酸殘基。
該片段可包含SEQ ID NO：1自殘基297至391之至少40個、至少45個、至少50個、至少55個、至少60個、至少65個、至少70個、至少75個、至少80個、至少85個、至少90個、至少91個、至少92個、至少93個、至少94個或95個連續胺基酸殘基。
該片段可包含SEQ ID NO：1自殘基297至391之至少50個、至少55個、至少60個、至少65個、至少70個、至少75個、至少80個、至少85個、至少90個、至少91個、至少92個、至少93個、至少94個或95個連續胺基酸殘基。
該片段可包含SEQ ID NO：1自殘基297至391之53個連續胺基酸殘基。該53個連續胺基酸可為SEQ ID NO：1之殘基297至349。該片段可包含S1D12之抗原決定基自殘基297至C末端的連續胺基酸殘基。
該片段可包含SEQ ID NO：1自殘基297至391之78個連續胺基酸殘基。該78個連續胺基酸可為SEQ ID NO：1之殘基297至374。該片段可包含S1G2之抗原決定基自殘基297至C末端的連續胺基酸殘基。
該片段可包含SEQ ID NO：1自殘基151至243之至少4個、至少5個、至少6個、至少7個、至少8個、至少9個、至少10個、至少11個、至少12個、至少13個、至少14個、至少15個、至少16個、至少17個、至少18個、至少19個、至少20個、至少21個、至少22個、至少23個、至少24個、至少25個、至少26個、至少27個、至少28個、至少29個或至少30個連續胺基酸殘基。兩個富含脯胺酸域跨越SEQ ID NO：1自殘基151至243之胺基酸殘基。該片段可包含來自至少一個富含脯胺酸域的至少4個、至少5個、至少6個股、至少7個、至少8個、至少9個、至少10個、至少11個、至少12個、至少13個、至少14個、至少15個、至少16個、至少17個、至少18個、至少19個、至少20個、至少21個、至少22個、至少23個、 至少24個、至少25個、至少26個、至少27個、至少28個、至少29個或至少30個連續胺基酸殘基。
其中該片段包含SEQ ID NO：1自殘基151至243之至少4個連續胺基酸殘基，該至少4個連續胺基酸殘基可包含SEQ ID NO：1之胺基酸殘基194至198及/或SEQ ID NO：1之胺基酸殘基159至163。該片段可包含BT2及/或HT7之抗原決定基。
該片段可包含SEQ ID NO：1自殘基151至243之48個連續胺基酸殘基。該48個連續胺基酸可為SEQ ID NO：1之殘基159至198。該片段可包含BT2及HT7之抗原決定基。該片段可包含BT2及HT7之抗原決定基以及插入之連續胺基酸殘基。
該片段可包含SEQ ID NO：1自殘基159至198之至少50個、至少55個、至少60個、至少65個、至少70個、至少75個、至少80個、至少85個、至少90個、至少91個、至少92個、至少93個、至少94個或95個連續胺基酸殘基。
該片段可包含SEQ ID NO：1自殘基159至198之至少60個、至少65個、至少70個、至少75個、至少80個、至少85個、至少90個、至少91個、至少92個、至少93個、至少94個或95個連續胺基酸殘基。
該片段可包含SEQ ID NO：1自殘基151至243之50個連續胺基酸殘基。該50個連續胺基酸可為SEQ ID NO：1之殘基194至243。該片段可包含自BT2之抗原決定基之N末端開始至殘基243的連續胺基酸殘基。
該片段可包含SEQ ID NO：1自殘基151至243之85個連續胺基酸殘基。該85個連續胺基酸可為SEQ ID NO：1之殘基159至243。該片段可包含自HT7之抗原決定基之N末端開始至殘基243的連續胺基酸殘基。
該片段可包含SEQ ID NO：1自殘基151至243之至少4個、至少5個、至少6個、至少7個、至少8個、至少9個、至少10個、至少11個、至少12個、 至少13個、至少14個、至少15個、至少16個、至少17個、至少18個、至少19個、至少20個、至少21個、至少22個、至少23個、至少24個、至少25個、至少26個、至少27個、至少28個、至少29個、至少30個、至少35個、至少40個、至少45個、至少50個、至少55個、至少60個、至少65個、至少70個、至少75個、至少80個、至少85個、至少90個、至少91個、至少92個或93個連續胺基酸殘基。兩個富含脯胺酸域跨越SEQ ID NO：1自殘基151至243之胺基酸殘基。該片段可包含自至少一個富含脯胺酸域起的至少4個、至少5個、至少6個、至少7個、至少8個、至少9個、至少10個、至少11個、至少12個、至少13個、至少14個、至少15個、至少16個、至少17個、至少18個、至少19個、至少20個、至少21個、至少22個、至少23個、至少24個、至少25個、至少26個、至少27個、至少28個、至少29個、至少30個、至少35個、至少40個、至少45個、至少50個、至少55個、至少60個、至少65個、至少70個、至少75個、至少80個、至少85個、至少90個、至少91個、至少92個或93個連續胺基酸殘基。
該片段可包含SEQ ID NO：1自殘基244至296之至少4個、至少5個、至少6個、至少7個、至少8個、至少9個、至少10個、至少11個、至少12個、至少13個、至少14個、至少15個、至少16個、至少17個、至少18個、至少19個、至少20個、至少21個、至少22個、至少23個、至少24個、至少25個、至少26個、至少27個、至少28個、至少29個、至少30個、至少35個、至少40個、至少45個、至少50個、至少51個、至少52個、至少53個或54個連續胺基酸殘基。典型地，SEQ ID NO：1自殘基244至296之連續胺基酸殘基將包括SEQ ID NO：1之殘基244及/或殘基296。該片段可包含SEQ ID NO：1自殘基244至296之全部54個連續胺基酸殘基。
該片段可包含SEQ ID NO：1自殘基113至150之至少1個、至少2個、至少3個、至少4個、至少5個、至少6個、至少7個、至少8個、至少9個、至 少10個、至少11個、至少12個、至少13個、至少14個、至少15個、至少16個、至少17個、至少18個、至少19個、至少20個、至少21個、至少22個、至少23個、至少24個、至少25個、至少26個、至少27個、至少28個、至少29個、至少30個、至少31個、至少32個、至少33個、至少34個、至少35個、至少36個、至少37個或38個連續胺基酸殘基。典型地，SEQ ID NO：1自殘基113至150之連續胺基酸殘基將包括SEQ ID NO：1之殘基150。該片段可包含SEQ ID NO：1自殘基113至150之全部38個連續胺基酸殘基。
該片段可包含SEQ ID NO：1之殘基113至379內的至少30個連續胺基酸殘基及(a)SEQ ID NO：1自殘基297至391之至少4個連續胺基酸殘基；及/或(b)SEQ ID NO：1自殘基151至243之至少4個連續胺基酸殘基。
該片段可包含SEQ ID NO：1之殘基113至379內的至少156個連續胺基酸殘基及(a)SEQ ID NO：1自殘基297至391之至少4個連續胺基酸殘基，視需要包含SEQ ID NO：1之殘基337至349；及/或(b)SEQ ID NO：1自殘基151至243之至少4個連續胺基酸殘基，視需要包含SEQ ID NO：1之殘基194至198。
該片段可包含SEQ ID NO：1之殘基113至379內的至少181個連續胺基酸殘基及(a)SEQ ID NO：1自殘基297至391之至少4個連續胺基酸殘基，視需要包含SEQ ID NO：1之殘基370至374；及/或(b)SEQ ID NO：1自殘基151至243之至少4個連續胺基酸殘基，視需要包含SEQ ID NO：1之殘基194至198。
該片段可包含SEQ ID NO：1之殘基113至379內的至少191個連續 胺基酸殘基及(a)SEQ ID NO：1自殘基297至391之至少4個連續胺基酸殘基，視需要包含SEQ ID NO：1之殘基337至349；及/或(b)SEQ ID NO：1自殘基151至243之至少4個連續胺基酸殘基，視需要包含SEQ ID NO：1之殘基159至163。
該片段可包含SEQ ID NO：1之殘基113至379內的至少216個連續胺基酸殘基及(a)SEQ ID NO：1自殘基297至391之至少4個連續胺基酸殘基，視需要包含SEQ ID NO：1之殘基370至374；及/或(b)SEQ ID NO：1自殘基151至243之至少4個連續胺基酸殘基，視需要包含SEQ ID NO：1之殘基159至163。
該片段可包含SEQ ID NO：1之殘基113至379內的至少156個連續胺基酸殘基及(a)SEQ ID NO：1自殘基297至391之至少53個連續胺基酸殘基，視需要包含SEQ ID NO：1之殘基337至349；及/或(b)SEQ ID NO：1自殘基151至243之至少50個連續胺基酸殘基，視需要包含SEQ ID NO：1之殘基194至198。
該片段可包含SEQ ID NO：1之殘基113至379內的至少181個連續胺基酸殘基及(a)SEQ ID NO：1自殘基297至391之至少78個連續胺基酸殘基，視需要包含SEQ ID NO：1之殘基370至374；及/或(b)SEQ ID NO：1自殘基151至243之至少50個連續胺基酸殘基，視需要包含SEQ ID NO：1之殘基194至198。
該片段可包含SEQ ID NO：1之殘基113至379內的至少191個連續 胺基酸殘基及(a)SEQ ID NO：1自殘基297至391之至少53個連續胺基酸殘基，視需要包含SEQ ID NO：1之殘基337至349；及/或(b)SEQ ID NO：1自殘基151至243之至少85個連續胺基酸殘基，視需要包含SEQ ID NO：1之殘基159至163。
該片段可包含SEQ ID NO：1之殘基113至379內的至少216個連續胺基酸殘基及(a)SEQ ID NO：1自殘基297至391之至少78個連續胺基酸殘基，視需要包含SEQ ID NO：1之殘基370至374；及/或(b)SEQ ID NO：1自殘基151至243之至少85個連續胺基酸殘基，視需要包含SEQ ID NO：1之殘基159至163。
該片段可包含SEQ ID NO：1自殘基297至391之至少30個連續胺基酸殘基及/或SEQ ID NO：1自殘基151至243之至少30個連續胺基酸殘基。
該片段可包含SEQ ID NO：1自殘基297至391之至少50個連續胺基酸殘基及/或SEQ ID NO：1自殘基151至243之至少50個連續胺基酸殘基。
該片段可包含SEQ ID NO：1自殘基297至391之至少75個連續胺基酸殘基及/或SEQ ID NO：1自殘基151至243之至少75個連續胺基酸殘基。
該片段可包含SEQ ID NO：1自殘基297至391之至少38個連續胺基酸殘基及/或SEQ ID NO：1自殘基151至243之至少48個連續胺基酸殘基。
該片段可包含SEQ ID NO：1自殘基297至391之至少53個連續胺基酸殘基及/或SEQ ID NO：1自殘基151至243之至少50個連續胺基酸殘基。
該片段可包含SEQ ID NO：1自殘基297至391之至少78個連續胺基酸殘基及/或SEQ ID NO：1自殘基151至243之至少85個連續胺基酸殘基。
該片段可包含SEQ ID NO：1之胺基酸殘基337至349及/或SEQ ID NO：1之胺基酸殘基370至374。
該片段可包含SEQ ID NO：1之胺基酸殘基194至198及/或SEQ ID NO：1之胺基酸殘基159至163。
該片段可包含SEQ ID NO：1之殘基113至379內的至少140個連續胺基酸殘基及(a)SEQ ID NO：1自殘基297至391之至少50個連續胺基酸殘基；及/或(b)SEQ ID NO：1自殘基151至243之至少50個連續胺基酸殘基。
該片段可包含SEQ ID NO：1之殘基113至379內的至少160個連續胺基酸殘基及(a)SEQ ID NO：1自殘基297至391之至少60個連續胺基酸殘基；及/或(b)SEQ ID NO：1自殘基151至243之至少60個連續胺基酸殘基。
該片段之N末端殘基可為選自由自SEQ ID NO：1之第113個殘基至SEQ ID NO：1之第193個殘基的所有殘基組成之群的殘基。
該片段之N末端殘基可為選自由自SEQ ID NO：1之第113個殘基至SEQ ID NO：1之第159個殘基的所有殘基組成之群的殘基。
該片段之N末端殘基可為選自由自SEQ ID NO：1之第159個殘基至SEQ ID NO：1之第193個殘基的所有殘基組成之群的殘基。
該片段之N末端殘基可為選自由自SEQ ID NO：1之第163個殘基至SEQ ID NO：1之第193個殘基的所有殘基組成之群的殘基。
該片段之N末端殘基可為SEQ ID NO：1之殘基113。
該片段之C末端殘基可為選自由自SEQ ID NO：1之第350個殘基至SEQ ID NO：1之第379個殘基的所有殘基組成之群的殘基。
該片段之C末端殘基可為選自由自SEQ ID NO：1之第350個殘基至SEQ ID NO：1之第370個殘基的所有殘基組成之群的殘基。
該片段之C末端殘基可為選自由自SEQ ID NO：1之第350個殘基至SEQ ID NO：1之第374個殘基的所有殘基組成之群的殘基。
由SEQ ID NO：1之殘基113至379內之胺基酸殘基組成的片段可包含以下胺基酸殘基：(a)SEQ ID NO：1之194至349；(b)SEQ ID NO：1之159至349；(c)SEQ ID NO：1之194至374；(d)SEQ ID NO：1之159至374；(e)SEQ ID NO：1之195至370；(f)SEQ ID NO：1之159至379；(g)SEQ ID NO：1之113至224；(h)SEQ ID NO：1之113至349；或(i)SEQ ID NO：1之113至370。
總之，本文所揭示之資料指示，使用S1D12作為第一特異性結合分子且BT2作為第二特異性結合分子在人類血漿中偵測到由SEQ ID NO：1之殘基113至379內的胺基酸殘基組成之片段，該片段包含SEQ ID NO：1之胺基酸殘基194至349。
總之，本文所揭示之資料指示，使用S1D12作為第一特異性結合分子且HT7作為第二特異性結合分子在人類血漿中偵測到由SEQ ID NO：1之殘基113至379內的胺基酸殘基組成之片段，該片段包含SEQ ID NO：1之胺基酸殘基159至349。
總之，本文所揭示之資料指示，使用S1G2作為第一特異性結合分子且BT2作為第二特異性結合分子在人類血漿中偵測到由SEQ ID NO：1之殘基113至379內的胺基酸殘基組成之片段，該片段包含SEQ ID NO：1之胺基酸194至 374。
總之，本文所揭示之資料指示，使用S1G2作為第一特異性結合分子且HT7作為第二特異性結合分子在人類血漿中偵測到由SEQ ID NO：1之殘基113至379內的胺基酸殘基組成之片段，該片段包含SEQ ID NO：1之胺基酸159至374。
本發明人執行多次Simoa®檢定來偵測人類血漿的tau水平，以及質譜法，此一起表明，tau之「延伸型核心」片段(在SEQ ID NO：1之共同血漿tau序列殘基113-379內)釋放至血漿中看來為tau蛋白正常加工之一部分。本發明人已顯示，與無認知障礙之對照相比較，該等片段在阿茲海默氏病血漿樣本中明顯減少。延伸型核心片段之摺疊可閉塞核心抗原決定基，產生PCT申請案第/EP2021/069160號中所描述的諸如S1D12及S1G2之類高親和力特異性結合分子偵測核心片段的優勢。
該片段之胺基酸殘基可由以下殘基內之胺基酸殘基組成：(a)SEQ ID NO：1之113至370；(b)SEQ ID NO：1之113至349；(c)SEQ ID NO：1之113至224；(d)SEQ ID NO：1之159至379；(e)SEQ ID NO：1之195至370；(f)SEQ ID NO：1之194至349；(g)SEQ ID NO：1之159至349；(h)SEQ ID NO：1之194至374；或(i)SEQ ID NO：1之159至374；該片段可由SEQ ID NO：1之胺基酸殘基113至379組成。
在本發明之第一態樣的替代陳述中，對於本文根據SEQ ID NO：1 之一或多個胺基酸殘基所界定的任何片段，一或多個胺基酸殘基可替代地陳述為「大致」相同的胺基酸殘基。舉例而言，片語「該片段可由SEQ ID NO：1之胺基酸殘基113至379組成」的替代陳述為「該片段可由SEQ ID NO：1之胺基酸殘基約113至約379組成」。在此情形中，術語「約」意謂±10，或更佳地意謂±9、±8、±7、±6、±5、±4、±3、±2或±1。作為使用「約」一詞陳述殘基編號的替代，可陳述以該殘基編號為中心之殘基編號的範圍。舉例而言，片語「該片段可由SEQ ID NO：1之胺基酸殘基113至379組成」的替代陳述為「該片段可由SEQ ID NO：1自103-123至369-389之胺基酸殘基組成」。
tau之序列可因其遺傳密碼及/或體細胞突變之差異而在個體間變化。本文所定義之任何片段均可為SEQ ID NO：1之殘基113至379內的胺基酸殘基之序列變異體。此類序列變異體可因此描述為變異體片段且具有對應於SEQ ID NO：1之殘基113至379內之胺基酸殘基的胺基酸殘基之片段可描述為野生型或典型片段。變異體片段可例如與野生型或典型片段具有至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致性。變異體片段可例如相對於野生型或典型片段具有至少一個、至少二個、至少三個、至少四個、至少五個、至少六個、至少七個、至少八個、至少九個或至少十個胺基酸取代。胺基酸取代可為保守胺基酸取代。
該方法可另外包含確定該片段之身分。確定該片段之身分可例如藉由質譜法分析該片段來進行。質譜法可為液相層析質譜分析(LC-MS)。確定該片段之身分可替代地藉由檢定一或多個其他tau片段來進行，其中打算確認身分之片段可稱為第一片段。檢定一或多個其他tau片段可包含檢定較短的tau片段及/或檢定較長的tau片段。熟練技術人員基於本揭示案之內容且根據該第一片段之長度將易於瞭解適合的此類檢定。舉例而言，使用更偏向於靶向N末端之抗體(諸如結合至SEQ ID NO：1之殘基6-18的Tau12)或更偏向於靶向C末端的抗體 (諸如結合至殘基404-441之Tau46)。檢定一或多個其他tau片段可另外包含將較短tau片段及/或較長tau片段之水平與該第一片段之水平相比較。在實質上未偵測到較短tau片段及/或較長tau片段之情況下，可確認第一tau片段之身分。在較短tau片段及/或較長tau片段低於定量下限的情況下，可確認該第一tau片段之身分。
該方法可包含偵測本文所揭示之兩個或多於兩個tau片段。
該方法可另外包含測定樣本中tau蛋白片段之濃度。
診斷
根據另一態樣，本發明提供一種診斷方法，其包含使唾液樣本與特異性結合分子接觸，其中第一特異性結合分子結合至SEQ ID NO：1之殘基297至391內的抗原決定基。
該診斷方法可包含根據第一態樣偵測樣本中之tau蛋白或其片段的試管內方法。
該方法可另外包含在偵測到tau蛋白或其片段時，診斷為tau蛋白病。
該方法可另外包含在偵測到tau蛋白或其片段時及/或在診斷為tau蛋白病時，治療tau蛋白病。
該方法可另外包含測定該樣本中該tau蛋白或其片段之濃度，並視需要將該樣本中該tau蛋白或其片段之濃度與來自健康對照之樣本中該tau蛋白或其片段之濃度或與指示為健康之個體的預先確定之該tau蛋白或其片段之濃度相比較。
其他優勢及具體實例
本發明之優勢在於提供一種用於偵測tau蛋白或其片段之檢定， 其可使用唾液樣本執行。相較於血漿或CSF樣本，獲得唾液樣本要更容易、更快且更安全。然而，在唾液樣本中可獲得的支持針對tau蛋白病，特別是阿茲海默氏病之診斷測試的公開資料極其有限。Chen等人(2019)Alzheimers Dement.15(3)：487-496中評述細胞外tau之複雜性及開發基於血液之阿茲海默氏病篩檢的有限進展。Chen等人推斷「大部分血漿tau為全長的」。並未描述靶向全長Tau之殘基297至391的抗體(參見圖1A)。作者提出在診斷環境中使用N末端檢定。描述兩種N末端檢定：
●NT1需要全長tau之殘基6至198的最小序列。
●NT2需要全長tau之殘基6至224的較長序列。
Chen等人提出在診斷環境中使用NT1檢定而非NT2檢定。因此，Chen等人教示至少在基於血液之篩選的情形中使用結合至SEQ ID NO：1之殘基296至391內之抗原決定基的特異性結合分子。
另外，在血漿樣本中，本發明人執行的核心-脯胺酸檢定要比NT1檢定敏感。據報導，NT1檢定在健康對照組中偵測到約2.13pg/ml血漿tau且在AD患者中偵測到約5.12pg/ml血漿tau(Chen等人(2018))，但在本發明人手中偵測到兩者均低於1pg/ml。相比之下，使用S1D12作為捕捉且使用HT7作為偵測劑在健康對照中偵測到約4,200pg/ml血漿tau且在AD患者中偵測到約520pg/ml血漿tau。另外，使用S1D12作為捕捉且使用BT2作為偵測劑(BT2亦用於NT1檢定中)在健康對照組中偵測到約12,800pg/ml血漿tau且在AD患者中偵測到約1,030pg/ml血漿tau。不受理論束縛，「延伸型核心」片段釋放至血漿中看來為tau蛋白正常加工之一部分，產生比N末端片段水平高的水平的核心-脯胺酸片段。此類tau蛋白加工在AD患者中可被破壞，由此使本文所揭示的針對血漿樣本中tau之核心-脯胺酸片段的檢定表示AD的出人意料有利之診斷工具。
當使用核心捕捉抗體S1D12作為抗體對之一部分時量測的tau水 平比所見到的人類血漿中現有NT1檢定之典型值高1,000倍。與所報導的NT1檢定相比，在AD/MCI患者典型地顯示出高於健康對照組之檢定值時，對於使用S1D12捕捉之檢定，利用健康對照樣本時此模式出人意料地反轉，顯示出比AD/MCI患者高的tau片段值。使用核心捕捉抗體偵測的tau水平明顯高於先前所報導之水平且表明使用S1D12揭露生物樣本中有大量先前未偵測到的tau片段。因此，在人類血漿樣本中，相對於現有NT1檢定，使用包含S1D12之CDR的特異性結合分子提供效能改善的出人意料敏感的AD/MCI診斷檢定。此等發現轉化為健康對照組中較高水平的核心-脯胺酸片段，並形成定期監測測試鑑別值得額外篩選之患者的基礎，亦即，疾病早期發作的潛在預測因子。
H.Pekeles等人，Alzheimer's & Dementia：Diagnosis,Assessment & Disease Monitoring 11(2019)53-6054描述阿茲海默氏病中唾液tau生物標誌物的研究及驗證。使用tau-4抗體量測t-tau，且此文章中報導之所有t-tau量測使用此抗體。靶向Thr181、Ser396及Ser404之磷酸特異性抗體以及組合Ser400/Thr403/Ser404位點抗體分別用於分析tau位點T181、S396及S404以及組合S400、T403及T404位點處之磷酸化水平。所描述之抗體皆不靶向全長Tau之殘基297至391。因此，作者未提出使用第一特異性結合分子結合至SEQ ID NO：1之殘基297至391內之抗原決定基，而是提出使用S396磷酸化位點處的p-tau/t-tau比率。
該方法可包含使樣本與一對特異性結合分子接觸，該對特異性結合分子分別結合至SEQ ID NO：1之殘基337至355內之抗原決定基及SEQ ID NO：1之殘基367至379內之抗原決定基。
較佳地，該方法包含使該樣本與一對特異性結合分子接觸，該對特異性結合分子包括含S1D12之CDR的第一特異性結合分子及含S1G2之CDR的第二特異性結合分子。
本發明之方法中所使用的第二特異性結合分子可為包含CB7及/ 或CC7之CDR的特異性結合分子。CB7及CC7之抗原決定基在人類tau序列與小鼠tau序列之間無同源性的tau區域中。此等特異性結合分子之診斷效用係藉由其識別針對內源性小鼠tau蛋白背景之轉殖基因小鼠腦中病理性人類tau之存在的能力展示。因此，此等特異性結合分子可用於追蹤年齡增長期間及與任何藥理學治療相關的病理性tau物種之斷裂模式，該等藥理學治療可影響(人類)tau蛋白、其聚集、體內各隔室之間(例如腦與血液之間)的移動及其斷裂模式。
本發明之試管內方法可包含使樣本與第一特異性結合分子及第二特異性結合分子對接觸，其中該第一特異性結合分子及第二特異性結合分子對其中該第一特異性結合分子在tau之核心區域內結合(諸如結合至SEQ ID NO：1之殘基337至355或367至379內的抗原決定基)且該第二特異性結合分子結合至SEQ ID NO：1之殘基13至25內的抗原決定基。該第一特異性結合分子可包含S1DI2或SIG2之CDR。該第二特異性結合分子可包含CB7之CDR。此類配對具有偵測含有跨SEQ ID NO：1自13-379之胺基酸之tau片段的優勢。本發明人已顯示，在來自L66+/+小鼠之血漿中，此類片段隨著年齡增長而減少，表明發生截短或抗原決定基閉塞事件或在L66+/+小鼠年齡增長期間發生此性質之多個事件。因此，能夠偵測含有跨SEQ ID NO：1自13-379之胺基酸之tau片段的方法可以提供病理相關事件之早期標誌物。
診斷裝置
根據第二態樣，本發明提供一種用於根據本發明之第一態樣之方法中的診斷裝置。
該裝置可包含本文所描述之任何適合組件。該裝置可包含用於量測樣本中tau蛋白或其片段之水平的設備，其包含樣本收集裝置及免疫檢定。該設備可另外包含用於在免疫檢定中偵測經標記之tau蛋白或其片段或針對tau蛋 白或其片段的經標記之抗體的偵測器。
免疫檢定或設備可併入用於量測生物樣本中tau蛋白或其片段之水平的微型化裝置中。適當地，該裝置可包含實驗室晶片。
該裝置可包含界定具有入口端及反應區之內部通道之一或多個部分。
在一些具體實例中，該裝置可包含用於並行量測樣本中複數種不同tau蛋白或其片段之水平的複數個通道，各自具有其自身的入口端。因此，各通道可包括不同的各別經固定之一次抗體或者tau蛋白或其片段。
適當地，該裝置可包含與一或多個入口端相聯的一或多個可選擇性操作之閥，用於控制一系列不同試劑進入該等通道中，諸如樣本、洗滌溶液、一次抗體、二次抗體及酶受質。
因此，該裝置可包含微流控裝置。通道可包括反應區。微流控裝置為所屬技術領域中具有通常知識者已知的。微流控免疫檢定或蛋白質診斷晶片微陣列之評述提供於Chin等人，2012.Lab on a Chip.2012；12：2118-2134中。適於在定點照護時進行ELISA免疫檢定之微流控裝置揭示於Chan CD,Laksanasopin T,Cheung YK,Steinmiller D等人，「Microfluidics-based diagnostics of infectious diseases in the developing world」.Nature Medicine.2011；17(8)：1015-1019中，該案之內容以引用的方式併入本文中。
套組
根據第三態樣，本發明提供一種套組，其包含適用於根據第一態樣之方法中的特異性結合分子及用於偵測唾液樣本中之tau蛋白或其片段的試劑，其中第一特異性結合分子結合至SEQ ID NO：1之殘基297至391內的抗原決定基。
該套組可包含結合至SEQ ID NO：1之殘基297至391內之抗原決定基的第一特異性結合分子及結合至SEQ ID NO：1內之抗原決定基的第二特異性結合分子。
該套組可包含本文所描述之任何適合組件。舉例而言，該套組可另外包含適於確定片段之一致性的試劑。
該套組可包含酶，諸如辣根過氧化酶(HRP)。適用於HRP之受質為此項技術中熟知的且包括例如ABTS、OPD、AmplexRed、DAB、AEC、TMB、高香草酸及魯米諾(luminol)。
該套組可包含固定於孔或盤之表面上或複數個磁性或非磁性珠粒之表面上的一或多個特異性結合分子或者tau蛋白或其片段。
該套組可包含針對tau蛋白或其片段或針對tau蛋白或其片段之一次抗體的經標記之二次抗體以定量結合至表面結合之抗體的tau蛋白或其片段之量或結合至固定於表面上之tau蛋白或其片段的一次抗體之量。
本發明之第二態樣及後續態樣的較佳特徵加以必要的變更，與本發明之第一態樣相關。
現將描述藉助於參照以下實施例及附圖描述本發明，該等實施例及附圖僅出於說明之目的呈現且不應解釋為限制本發明。
實施例1：使用tau蛋白抗原進行之綿羊免疫及抗原特異性免疫反應之分析
分別用全長tau蛋白(2N4R，在本研究中稱為hT40)及截短之tau(dGAE，表示對應於hT40之胺基酸297-391的核心重複區域)對兩隻威爾斯種的綿羊(Welsh bred sheep)進行超免疫以產生抗原特異性免疫反應。對於初次免疫，將500μg之hT40或dGAE與弗氏完全佐劑(Freund's complete adjuvant)以至多2ml之最終體積混合，並將其投予每隻綿羊。對於隨後以4週的時間間隔進行 的增強免疫(boost)，將250μg各抗原與弗氏不完全佐劑混合且投予每隻綿羊。藉由使用在後續增強免疫10-14天之後收集之多株血清執行結合ELISA來監測免疫反應(圖7)。
利用1μg/ml hT40或dGAE，藉由在37℃培育1小時或在4℃培育隔夜，隨後在37℃用含有2% Marvel之PBS(MPBS)阻斷1小時來塗佈ELISA盤。在各步驟之後，將該等盤用含有0.1%吐溫20(tween 20)之PBS(PBST)洗滌三次並用PBS洗滌三次。將綿羊多株血清添加至指定孔(免疫前及後續增強免疫樣本)中，在PBS中對整個盤進行兩倍稀釋並在室溫下培育1小時。將抗綿羊IgG HRP結合之二次抗體(Sigma A3415)添加至各孔中並如前所述進行培育。藉由添加SureBlue TMB受質溶液使所得免疫反應顯色，使用1M H2SO4停止反應並使用微量盤讀取器在吸光度450nm下量測吸光度值。
經hT40及dGAE免疫之綿羊在第一次增強免疫之後實現抗原特異性免疫反應(圖7a及圖7b)且反應水平在第2次、第3次及第4次增強免疫時達到峰值，但抗體力價未發生任何進一步改善。因此，在第4次增強免疫之後，自各綿羊收集大約350ml血液，使用標準技術分離出PBL並儲存於RNA later溶液中以進行mRNA之萃取以及用於文庫(library)構築之抗體基因的進一步擴增。
實施例2：由綿羊之免疫圖譜進行的噬菌體展示抗體文庫之構築
使用Accuspin系統Histopaque 1077管柱(Sigma，目錄號：A7054)，根據製造商之說明書由綿羊血液製備周邊血液淋巴球(PBL)。使用RNeasy midi套組(QIAGEN)萃取總RNA並藉由RT-PCR，使用綿羊抗體恆定區特異性引子(OvCHFOR 5'-GAC TTT CGG GGC TGT GGT GGA GGC-3'、OvCKFOR5'-GA TGG TTT GAA GAG GGA GAC GGA TGG CTG AGC-3'、OvCLFOR 5'-A CAG GGT GAC CGA GGG TGC GGA CTT GG-3')合成cDNA。按照公開之方法，藉 由PCR擴增，使用V區特異性引子產生綿羊IgG VH及Vλ/Vκ圖譜(Charlton等人，2000)。為了接合抗體基因，將PCR產物用酶消化並針對重鏈使用限制位AscI且針對輕鏈使用限制位MluI在經由PCR設計併入的15個胺基酸之纖維素酶連接子區處連接。經由PCR將選殖位及NotI併入連接之DNA中並將所得scFv DNA片段選殖至噬菌粒載體pHEN2a中(Hoogenboom等人，1991)。藉由轉形電穿孔法勝任型(electrocompetent)大腸桿菌TG1細胞(Lucigen公司)建立獨立的VH-Vλ及VH-Vκ抗體噬菌體展示文庫。
針對dGAE及hT40免疫構築兩個獨立噬菌體展示文庫，由此分別稱為tau抗體文庫1及文庫2。遵循公開的方法(Charlton等人，2001)，分別經由輔助噬菌體感染來修復此等所得VH-Vλ及VH-Vκ文庫並對其進行生物淘選(biopanning)，包括強制抗原決定基選擇以分離具有所希望之特異性及結合親和力的噬菌體結合物。
實施例3：dGAE及hT40噬菌體展示抗體文庫之選擇及篩選
採用若干生物淘選策略自文庫1及文庫2分離tau蛋白特異性結合物。
對輔助噬菌體修復之文庫1進行三項選擇活動，如表11中所概述。使用ELISA鑑別之若干噬菌體結合物篩選噬菌體單株抗體，該等單株抗體與用於選擇之抗原，即dGA(表示hT40之胺基酸序列297-390)及dGAE顯示出特異性結合。此等噬菌體結合物被分為兩組：(1)dGAE特異性結合物；(2)識別dGAE、dGA及hT40之dGAE交叉反應性結合物。DNA定序揭露所選陽性噬菌體群體中之豐富多樣性並藉由使用NcoI及NotI限制酶將各別scFv基因(VH-連接子-VL)選殖入細菌表現載體pIMS147(參考)中將獨特噬菌體殖株再格式化成單鏈抗體(scAb)。由此等選擇得到的獨特序列連同序列ID一起在獨立文件中給出。
為了區分由不同選擇策略得到之陽性殖株，使用以下命名法。
來自文庫1選擇1的所有陽性殖株皆給予字首『E』(dGAE淘選)
來自文庫1選擇2的所有陽性殖株皆給予字首『NS』(非嚴格性dGA淘選)
來自文庫1選擇2的所有陽性殖株皆給予字首『S』(嚴格dGA淘選)
來自文庫1的重複執行選擇2策略得到的所有陽性殖株皆給予字首『M』
類似地，使用以下如表2中所概述之抗原對輔助噬菌體修復之文庫2進行五種不同的選擇活動，並如先前所描述，將針對各別抗原的獨特噬菌體結合物再格式化成scAb。用於選擇之抗原為hT40、R1-3(表示hT40上區域266-359中之胺基酸)及生物素化412-441(表示hT40上區域412-441中之胺基酸)。在選擇策略4及5中，引入取消選擇dGA結合噬菌體群體之步驟以促進tau蛋白上297-390區域外之殖株的富集。
為了區分由不同選擇策略得到之陽性殖株，使用以下命名法。
來自文庫2選擇1及選擇2的所有陽性殖株皆給予字首『C』
來自文庫2選擇3的所有陽性殖株皆給予字首『412』
來自文庫2選擇4及選擇5的所有陽性殖株分別給予字首『3a』及『3b』
實施例4：細菌系統中再格式化之scAb的表現及使用親和層析法進行之純化
使陽性殖株之細菌儲備液在補充有PO4鹽、100μg/ml安比西林(ampicillin)及1% w/v葡萄糖之極品肉湯(Terrific Broth，TB)培養基中生長達到所希望之細胞密度，用1mM IPTG誘導並使用滲壓衝擊溶液(100ml的200Mm Tris-HCl-20%蔗糖、200μl的0.5M EDTA及0.5mg溶菌酶，隨後5Mm MgSO4)使周質中表現之scAb釋放，並在冰上各培育15分鐘。使用IMAC管柱，經由六組胺酸標示之蛋白質與經活化Ni-Sepharose珠粒之結合及使用200mM咪唑洗提來純化粗周質萃取物中存在之重組抗tau scAb。針對1×PBS pH 7.4透析經洗提之蛋白質樣本並使用SDS-PAGE，在4-12% Bis-Tris凝膠上進行純度分析。發現所有表現之scAb為90%純的。藉由使用SDS-PAGE，使已知濃度之標準scAb與未知樣本並排流動，並使用ImageJ比較蛋白質譜帶之強度來測定蛋白質濃度。或者，使用Ultraspec 6300 pro紫外光/可見光分光光度計(Amersham,Biosciences)量測在280nm之吸光度值並由所獲得的值測定最終scAb濃度。
實施例5：特異性結合區之定位及抗tau scAb之親和力排序
使用各種截短形式的tau蛋白及跨完整hT40分子之13聚體肽文庫 執行一系列結合ELISA以定位抗tau scAb之抗原決定基(所用蛋白質抗原之完整清單在表14中給出)。一般而言，用1μg/ml hT40或dGA或dGAE或者該蛋白質之其他截短形式塗佈ELISA盤，且在生物素化肽情況下，用5μg/ml鏈黴抗生物素蛋白，隨後用1μg/ml生物素化肽塗佈盤。用2% MPBS阻斷該等盤並添加所希望之起始濃度的scAb樣本，並對整個盤進行兩倍稀釋。使用抗人類CκHRP結合之二次抗體偵測結合且如上文所描述，使所得免疫反應顯色且量測吸光度值。
對於親和力排序ELISA，如前所述，用1μg/ml hT40或dGA或dGAE塗佈盤並以常規方式進行阻斷。將25μg/ml或1μg/ml起始濃度之抗tau scAb添加至指定孔中並在1×PBS中對各樣本執行連續稀釋。如前所述，測定結合反應，並基於吸光度值對scAb排序，且使用表面電漿子共振技術選擇多種結合最佳之scAb用於親和力研究。
實施例6：結合抗tau scAb之核心區的詳細定位
使用直接結合ELISA檢查來自文庫1選擇『E』、『NS』、『S』及『M』 殖株(如先前所描述)之陽性scAb的hT40、dGA及dGAE結合情況。將特異性結合至dGAE之scAb分組為『E』依賴性的且對hT40不顯示交叉反應性。所選E特異性scAb及其與dGAE之特異性結合顯示於下(圖8A-E)。
類似地，使用較短tau蛋白及生物素化13聚體肽對結合『NS』、『S』及『M』組scAb之dGA進一步進行抗原結合ELISA，如下文所示(圖10A-F)及(圖11A-R)。
實施例7：『C』、『412』、『3a』及『3b』系列殖株之結合的詳細定位
使用較短tau蛋白及生物素化13聚體肽對『C』、『412』、『3a』及『3b』組scAb進一步進行抗原結合ELISA，如下文所示(圖12A-F)及(圖13A-R)。
實施例8：使用丙胺酸掃描突變誘發(Alanine Scanning Mutagenesis，ASM)測定所選scAb上之關鍵結合殘基
為了進一步闡明scAb組合之抗原決定基並鑑別結合所需之關鍵胺基酸，針對scAb CE2、S1D12、CA4及S1G2執行親本13 aa肽之丙胺酸掃描突變誘發。對於殖株CE2及CA4，未觀察到用於抗原決定基定位之13聚體肽文庫中前三個及最後三個重疊胺基酸之反應性且因此，在此等抗體中僅7個核心胺基酸序列經歷丙胺酸取代。簡言之，將5μg ml鏈黴抗生物素蛋白(Thermo Fisher)吸附至Nunc 96孔MaxiSorp盤上且在37℃下培育1小時之後，以常規方式洗滌該等盤並用2% MPBS阻斷。將N末端生物素化之肽(ProImmune有限公司)添加至該等盤中並在37℃下培育1小時。隨後，添加100-500nM起始濃度的測試scAb並在整個盤中針對各肽進行兩倍稀釋，並在37℃下培育1小時。如上文所描述，進行其餘ELISA並在吸光度450nm下讀取該等盤。感興趣scAb之免疫反應性係以選定濃度之各肽所結合之scAb的百分比定量(圖15至圖20)。
實施例9；hT40上之CE2結合區：319-331
實施例10：hT40上之S1D12及ME12結合區：341-353
實施例11：hT40上之CA4結合區：355-367
實施例12：結合hT40上之區域367-379的殖株
經顯示，若干抗體殖株可結合至hT40分子上之區域367-379(表16及表17)並分組在一起，且如上文所描述，使用ASM肽對其進行關鍵結合殘基 之詳細分析。親本肽及經丙胺酸取代之突變體的胺基酸序列在表22中給出。S1G2 scAb與親本肽及突變體之結合輪廓顯示於圖19A-C中。類似地，同一組中識別hT40 367-379之其他scAb與各種經丙胺酸取代之突變體及親本肽的結合百分比顯示於圖20A-J中。
實施例13：使用hT40結合ELISA對抗tau scAb之相對結合親和力排序
如先前所描述，藉由執行hT40抗原結合ELISA對抗tau scAb之相對結合親和力排序。
實施例14：使用Biacore X100TM進行的抗tau scAb之結合動力學的分析
表面電漿子共振(SPR)被廣泛視為用於即時量測蛋白質-蛋白質相互作用諸如抗體結合的黃金標準。所有SPR實驗皆使用Biacore X100機器及HBS EP+操作緩衝液(GE Healthcare)進行。遵循『捕捉』法量測親和力，其中使用胺偶合套組使抗人類恆定κ鏈(HuCk)抗體結合至CM5感測器晶片之表面並將scAb分子經由其HuCk域固定。胺偶合係用於將配體固定至晶片表面的一種極 常用方法。晶片表面具有經羧基衍生化之葡聚糖基質，其在用N-羥基琥珀醯亞胺(NHS)及1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺(EDC)活化之後，形成反應性琥珀醯亞胺酯，由此允許經由配體(在此情況下為抗HuCk抗體)上任何可用的一級胺基(例如離胺酸)共價捕捉配體。將捕捉抗體在10mM乙酸鈉緩衝液pH 5.0中以1/100稀釋並使其越過經活化之晶片表面，持續至少420秒時段。超過12,000RU之最終配體固定水平被視為令人滿意的。
固定之後，使用標準SPR公式，利用100RU之理論RMax鑑別待捕捉之各scAb的水平。分析物MW係指hT40或dGA/dGAE分子之分子量，而配體MW係指測試scAb之分子量。RL係所希望之捕捉水平且S係指化學計算量比率：
將待測試之scAb僅添加至流槽2中，以使得流槽1可以充當對照以減去與分析物及晶片表面之任何相互作用。使用Biacore X100控制軟體中開發之wizards來利用單循環及多循環操作，該兩種操作皆為可接受的動力學分析方法(Karlsson,R.等人，Analyzing a kinetic titration series using affinity biosensors(2006)Analytical Biochemistry 349：136-47)。多循環方案如下：執行由初始捕捉待測試之scAb達到所希望之水平構成的三個啟動循環，隨後在各循環之後經30秒注射甘胺酸緩衝液pH 2.0以使晶片表面再生。再生步驟移除任何捕捉之scAb，同時使捕捉抗體保持完整且能夠在接下來的循環中重複該捕捉。在三個啟動循環之後，在所希望之scAb捕捉之後，將遞增濃度(0.15625nM-100nM)之待測試目標添加至晶片表面。添加目標保持120秒締合時段及420秒解離時段，隨後為另一次再生，在各循環之間進行30秒的甘胺酸緩衝液pH 2.0注射。
單循環動力學方案類似且利用相同之scAb捕捉水平。在三個啟動循環之後使用5種遞增濃度之分析物(6.25nM-100nM)，各濃度保持120秒締合時段，隨後保持420秒解離時段。在單循環動力學中，再生步驟僅在添加最終分 析物濃度之後執行。在Biacore X100評價軟體中分析結合反應並將資料擬合於1：1結合模型以獲得動力學及親和力特徵。主要scAb之動力學速率及平衡結合常數於表編號23-26中給出。
實施例15：IgG再格式化
藉由將各別VH基因及VL基因插入分別編碼小鼠IgG2a之恆定重鏈及輕鏈基因之雙質體真核載體系統(pEE2a)中並在哺乳動物表現系統中表現重組mAb，將最佳(top)抗tau scAb再格式化為綿羊-小鼠(IgG2a)嵌合mAb。基於DNA定序資料，藉由分別在5端及3'端處引入選殖位BssHII及BstEII(對於VH基因)以及BssHII及XhoI(對於VL基因)，分別定製合成候選抗tau scAb之VH基因及VL基因(GeneArt定製基因合成服務由Thermofisher提供)。用以上所提及之限制酶消化定製合成的各別scAb之VH基因及VL基因以及真核表現載體pEE2aMH(編碼小鼠IgG2a恆定區)及pEE2aML(小鼠λ/κ恆定域)。使用DNA凝膠萃取及純化，遵循QIAquick凝膠萃取套組製造商之說明書，分離及純化對應於抗體可變區以及pEE2a重鏈及輕鏈載體主鏈之DNA譜帶。將純化之DNA片段連接在一起並用於轉形電穿孔法勝任型大腸桿菌TG1細胞以進行質體繁殖。對萃取之質體的DNA定序證實成功再格式化成綿羊-小鼠嵌合mAb。執行各抗tau mAb殖株之重鏈及輕鏈質體的大規模製備(Qiagen Plasmid Mega套組)並使用聚伸乙亞胺(polyethylenimine，PEI)，使用該等質體轉染懸浮生長之人類胚胎腎 (HEK293F)細胞。使經轉染之細胞生長8天，隨後收集細胞培養物上清液，接著遵循標準方案，使用蛋白質A珠粒純化。使用ELISA及藉由操作如先前所描述但如下文所描述修改之Biacore檢定獲得的親和力(kD)值證實經純化mAb與T40之結合。
實施例16：使用Biacore X100TM進行的抗tau mAb之結合動力學的分析
對於抗tau mAb SPR量測，如先前所說明，使用胺偶合將htau40結合至CM5感測器晶片之表面。簡言之，使2μg/mL於10mM乙酸鈉緩衝液(pH 4.0)中之htau40越過流槽2中經活化之晶片表面(EDC/NHS)，持續45秒時段，隨後用1M鹽酸乙醇胺pH 8.5阻斷。流槽1設置為參考對照且同時阻斷。htau40之最終固定水平(Rmax)為約250RU。在最少三個啟動循環之後，將於HBS-EP+緩衝液中遞增濃度(0.78nM-25nM)之mAb以30μL/min之速率添加至晶片。添加mAb，保持120秒締合時段及600秒解離時段，隨後為在各循環之間甘胺酸緩衝液pH 1.5之30秒注射的再生循環。在Biacore X100評價軟體中分析結合反應並將資料擬合於1：1結合模型以獲得動力學及親和力特徵。主要抗tau mAb之動力學速率及平衡結合常數於下表中給出。
實施例17：高親和力抗tau抗體對之偵測限制(LoD)的測定
將各種組合之高親和力抗tau抗體(scAb及mAb形式)以各種組合配對，並在夾心(或捕捉)ELISA形式中測試以計算其偵測限制(LoD)及其區分不同tau物種的能力。在生物學上，tau以6種不同的同功異構物形式存在且經歷多種轉譯後修飾，其中一部分在神經退化之進展中起到重要作用。
對於使用比色偵測進行之夾心ELISA，在室溫下用1μg/ml捕捉抗體S1D12 mAb塗佈96孔Maxisorp盤，保持1小時，隨後以常規方式，用2% MPBS阻斷。將1μg/ml起始濃度的全長tau(hT40)添加至指定孔中並對其餘盤進行兩倍稀釋，且將其在R/T培育1小時。將10μg/ml具有不同抗原決定基識別特性之一系列偵測scAb添加至指定孔中(圖22)。對於比色偵測，使用HRP結合之抗HuCk二次抗體，並如先前所描述，顯色所得免疫反應且量測在450nm之吸光度。減去背景後，陽性結合事件之截止點為0.3之吸光度值。為了增強檢定靈敏度，採用化學發光偵測方法，其中將50μL SuperSignal ELISA Femto受質(Thermo Scientific)與抗HuCK HRP抗體一起培育且隨後洗滌後添加至各孔中。使用Clariostar Plus微量盤讀取器讀取發光。對此方案進行進一步修改，其中將各種偵測scAb與HRP直接結合且如前所述，使用化學發光方案進行偵測。使用不同偵測scAb實現的最低偵測水平以及比色偵測方法與化學發光偵測方法之比較顯示於表28中。
類似地，使用1μg/ml S1G2 mAb作為捕捉抗體及HRP結合之S1D12 mAb偵測設置夾心ELISA形式。該檢定係使用以上描述之化學發光方案進行。檢定設置及偵測限制之定量顯示於圖23及圖24中。
實施例18：使用抗體對進行之混合樣本詢問及其定量
詢問及測定患者樣本中各種tau物種或片段之水平的能力對於早期AD診斷至關重要。為此，設置實驗以評估是否能使用針對tau蛋白特定區域之各種抗體對測定加料樣本中不同tau物種之濃度。製備具有不同tau物種濃度及類型之四份加料樣本：具有5nM全長人類tau(hT40)之樣本A；具有3.3nM dGA、3.3nM dGAE及3.3nM hT40(9.9nM總蛋白質)之樣本B；具有2nM dGA之樣本C；及具有1nM hT40及4nM dGA(5nM總蛋白質)之樣本D。藉由使用S1D12 mAb捕捉混合物中之不同物種及使用具有特定抗原決定基之scAb偵測執行三次獨立的『盲法』夾心ELISA來分析此等樣本。
對於ELISA #1，用S1D12 mAb塗佈孔，阻斷並將20nM hT40添加至第一孔中用於標準曲線繪製。將四份加料樣本添加至指定列之第一孔中並在包括標準在內之整個盤中，將所有樣本於PBS中兩倍稀釋。將樣本在室溫下培育1小時，以常規方式洗滌並將1μg/ml CB7 scAb添加至各孔中且如前所述進行培育。添加二次抗體抗HuCk HRP並如先前所描述顯色反應及讀取。對於ELISA #2，將20nM dGAE添加至第一孔中並在整個盤中進行兩倍稀釋用於標準曲線繪製。與ELISA #1相同，將兩倍稀釋的未知蛋白質濃度之加料樣本添加至各別孔中。所用偵測抗體為『E』特異性E2E8 scAb且如上文所描述，執行其餘ELISA。對於ELISA #3，使用獲自起始濃度皆為20nM之hT40、dGA及dGAE之結合事件的平 均吸光度值繪製標準曲線。如前所述，使用S1D12捕捉mAb及核心結合S1G2偵測scAb測試四份加料樣本之結合。基於未知加料樣本之ELISA信號，測定混合物中存在之tau片段的類型及其個別濃度，如圖25、圖26及圖27中所示。用於摻加此等樣本之tau類型及其濃度以及自ELISA推斷之濃度的彙總在表29中給出。
實施例19：dGAE聚集物之SDS處理及免疫反應性之恢復
當dGA/dGAE片段聚集時，核心區域scAb之免疫反應性因此構象中各別抗原決定基不可用而喪失。吾人注意到十二烷基硫酸鈉(SDS)可分開dGA/dGAE聚集物並藉由執行SDS-PAGE將其分成較小片段。如下文所描述，使用ELISA重複此操作並測試。
對於聚集，將1000μL的100μM dGAE+10μL的10mM DTT添加至『LoBind』微量離心管中並在700RPM/37℃下攪動24小時。將所得樣本在17,000×g/4℃離心60分鐘並丟棄上清液以移除殘留單體。將沈澱物再懸浮於初始體積之一半中用於未來實驗並在下文稱為『聚集物』。將1μl聚集物添加至1ml PBS中並添加SDS達到1%(w/v)最終濃度。將其在實驗室工作台上培育1小時， 同時每15分鐘輕柔攪動。為了中和SDS對ELISA之作用，添加Triton X-100達到3%(v/v)最終濃度並藉由用移液管移液輕柔地混合以防止任何氣泡的形成。將200μl此混合物添加至塗佈有1μg/ml S1D12 mAb之ELISA盤的第一孔中並用2% MPBS阻斷。類似地，亦將僅用SDS或Triton X-100處理之聚集物、未處理之聚集物、僅用SDS或SDS+Titon X-100處理之dGAE單體添加至指定孔中作為對照。接著，在整個盤中對所有樣本進行兩倍稀釋，最終體積為100μl。最後一行保持無蛋白質以充當空白。使其在室溫下靜置1小時，隨後添加10μg/ml之偵測scAb-S1G2。如先前所描述，添加抗HuCk HRP標記之二次抗體且使用下圖表示所產生的ELISA資料。此外，使用以上描述之ELISA方法並取代捕捉mAb及偵測scAb計算針對SDS Triton X-100處理之dGAE聚集物的各種核心結合抗體對之偵測限制(LoD)，如表30中所示。
實施例19：在轉殖基因小鼠腦溶胞產物收集中各種tau片段的基於抗體之偵測
由野生型、品系1、品系66+/+及品系66+/-製備小鼠腦溶胞產物(Melis等人，2015，所有剩餘物來自Charles River，研究R0144之一部分)。所有動物皆為雌性，7-8個月大，但品系66+/+除外，其為5個月大。品系66小鼠構築體(圖23)含有編碼具有在P301S及G335D處之兩個點突變之最長人類tau同功異 構物(2N4R tau；441個胺基酸)的人類tau cDNA。L1 cDNA構築體(圖23)含有編碼在鼠類Thy-1表現卡匣中具有信號序列及相關序列之胺基酸殘基296-390的人類tau cDNA。對於腦溶胞產物製備，將半個腦切成四份並將個別切片在400μl含有蛋白酶及磷酸酶抑制劑之冰冷RIPA緩衝液(Cell signalling Technology)中均質化。藉由BCA檢定確定個別樣本之總蛋白質濃度且隨後，將各樣本稀釋至1mg/ml用於未來實驗。
對於捕捉ELISA，使用100μL S1D12捕捉mAb以1μg/ml塗佈nunc 96孔Maxisorp盤並在37℃下培育1小時。如先前所描述，洗滌盤且接著，在37℃下，在2% MPBS中阻斷1小時。將來自各小鼠類型之腦勻漿樣本(50ng總蛋白質)添加至第一孔中並於PBS中對整個盤進行兩倍稀釋。將此等樣本在室溫下培育1小時。接著，將包含感興趣抗原決定基之各種偵測scAb以1μg/ml添加至該盤中並在室溫下培育1小時。所用二次抗體為抗HuCk HRP並如先前所描述，使檢定顯色。使用S1D12 mAb捕捉及兩個獨立的scAb偵測劑S-1G2(圖24A)及C-B7(圖24B)，可區分L1及L66樣本與野生型。當使用s1G2 scAb時，在50μg總腦蛋白質中偵測全部四種不同樣本類型之tau蛋白。然而，利用C-B7 scAb，在L66樣本中特異性偵測到hT40 tau且相較於L66異型接合樣本，在L66同型接合組中觀察到增加。因此，S1D12-CB7對能夠使用N'末端定向之偵測scAb區分L66與L1及野生型，此係因為小鼠tau與人類tau之間序列同源性之差異(Hernandez等人，2019)。在全蛋白內，在胺基酸水平上存在約77%同源性，但該等蛋白質在N'末端區域中明顯不同。
實施例20：在轉殖基因小鼠血漿收集中tau片段的基於抗體之偵測
如所描述，獲取來自各種年齡(1.5-9個月)之WT、L1、L66+/-及L66+/+的血漿樣本。使用過量劑量之戊巴比妥鈉(sodium pentobarbital)對小 鼠進行終末麻醉，並經由用肝素化鹽水肝素(10U/ml)(肝素鈉鹽；Sigma-Aldrich)預先沖洗之Plastipak注射器心臟穿刺收集血液，且將其轉移至含有肝素鋰抗凝血劑(Sarstedt有限公司)之塑膠小瓶中。將血液樣本在冰上保持不超過30分鐘，在6℃以2000×g離心5分鐘以獲得血漿。將血漿樣本在-20℃儲存。
對於小鼠血漿捕捉ELISA，將100μL捕捉mAb以2.5μg/ml塗佈至黑色nunc96孔『maxisorp』盤之底部上並在37℃下培育1小時。以常規方式洗滌並阻斷之後，一式三份，以20ng/ml所希望蛋白質起始，產生若干已知標準溶液，隨後在其餘孔中進行兩倍稀釋。一式兩份，將小鼠樣本添加至各孔中，其中在各樣本組之間存在空白。在添加至盤之前，將品系1血漿以1：10稀釋以解釋其高濃度，而其他樣本以1：2稀釋以解釋潛在基質影響。將此等樣本在室溫下培育1小時。將HRP結合之二次scAb(結合係根據製造商之指導原則進行，Abcam)添加至各孔中並在室溫下培育1小時。使用SuperSignal ELISA Femto受質(Thermo Scientific)使ELISA顯色並在Clariostar Plus盤讀取器(BMG Labtech)上讀取總發光。在由摻加至已知濃度樣本中之重組tau蛋白生成的濃度曲線上使用4參數擬合確定Tau濃度。使用hT40作為WT及L66校準劑，而使用dGA進行L1校準。
使用S1D12捕捉及S1G2偵測，吾人能夠偵測在來自WT、L1、L66+/-及L66+/+之樣本中不同水平的含有tau片段之『核心區域』。在WT及L66中，偵測之水平為低ng/ml(5個月之WT：1.947ng/ml；9個月之WT：2.177ng/ml)；(5個月之L66+/-：0.567ng/ml)、5個月之L66+/+：1.937ng/ml)。然而，在L1樣本(5個月：12.355ng/ml；9個月：13.661ng/ml)中偵測到較高的核心區域tau物種濃度。此與L1小鼠之基因組成一致，該基因組成含有對應hT40之殘基296-390的截短之3個重複片段以及驅使其朝向內質網之信號序列。此可解釋L1小鼠血漿中升高水平的含有重複域核心之片段的存在，其係使用核心區域對S1D12 mAb及S1G2 scAb偵測到的。此區域亦與小鼠tau蛋白共有序列同源性，此係藉由在 WT、L66+/+及L66+/-血漿樣本中核心之基礎水平偵測反映。
此外，使用第二捕捉-偵測抗體對，吾人已成功地顯示在品系66小鼠中偵測到人類特異性tau片段，該等片段表現含有具點突變P301S及G335D之4個重複區域的最長tau同功異構物(hT40，441個胺基酸)(Melis等人，2014)。使用作為捕捉抗體之S1D12 mAb及CB7 scAb偵測，1.5個月大的品系66+/+小鼠之血漿顯示相較於相同年齡之野生型小鼠，可偵測水平之人類tau的存在(圖32A)。偵測scAb CB7(hT40上之抗原決定基13-25)在品系66轉殖基因模型中不與內源性小鼠tau蛋白交叉反應，因為人類tau與小鼠tau之間的N末端胺基酸序列明顯不同。此外，使用S1D12-S1G2配對，吾人已顯示在轉殖基因動物及野生型動物中共有緊密序列同源性之核心重複區域tau片段的水平類似(圖32B)。由此展示抗體對組合在偵測轉殖基因小鼠樣本中之各種tau片段及截短形式中的效用，該效用可轉換成詢問患病相對於認知正常之人類樣本中不同tau物種之存在的診斷環境。
實施例21：來自AD患者之血漿樣本中tau片段的基於抗體之偵測
自診斷AD之個體獲取六份血漿樣本且自年齡相配之對照獲取6份樣本(Logical Biological,Kent UK)，將其分成100μl等分試樣並在-80℃儲存(表31)。
對於夾心ELISA，將100μL S1D12捕捉mAb以2.5μg/ml塗佈至黑色nunc96孔『maxisorp』盤之底部上並在37℃下培育1小時。如先前所描述，洗滌盤且接著，在37℃下，在2% MPBS中阻斷1小時。一式三份，以8ng/ml起始，產生若干已知hT40標準溶液並使用50%綿羊血漿作為稀釋劑，在其餘孔中稀釋2倍以解釋任何血漿基質影響。一式兩份，將100μl以1：2稀釋於PBS中的各人類樣本添加至各孔中，其中在各樣本群組之間存在空白。將樣本以1：2稀釋以解釋潛在基質影響。將此等樣本在4℃培育隔夜。將HRP結合之二次scAb((S-1G2及C-B7)(結合係根據製造商之指導原則進行，Abcam))添加至各孔中並在室溫下培育1小時。使用SuperSignal ELISA Femto受質(Thermo Scientific)使ELISA顯色並在盤讀取器(BMG Labtech)上讀取總發光。在由摻加至已知濃度樣本中之重組人類tau蛋白生成的濃度曲線上使用4參數擬合確定Tau濃度。
偵測兩個患者組中之Tau(圖33)。取決於所使用之捕捉抗體/偵測抗體的組合，偵測值得關注的不同水平。此資料提供概念驗證，即，取決於抗原決定基，使用不同抗體對將允許偵測血漿內之不同tau片段。
實施例22：LMT介導的dGAE聚集物之抑制及免疫反應性之恢復
截短之核心重複域dGAE(297-391)係構成AD中PHF核心整體的主要片段(Wischik等人，1988)。在試管內dGAE聚集期間，dGA/dGAE上之scAb結合區被『隱藏』或『閉塞』，由此導致聚集樣本中免疫反應性之損失。此處，吾人已顯示，聚集dGAE樣本中結合區閉塞且在tau聚集抑制劑LMTM存在下免疫反應性恢復。測試結合之scAb為核心區域特異性S1D12、CA4、CB3、CE2、CE3及CA9(結合區在表22中給出)。為製備聚集物，將10μl的10mM DTT添加至1000μl之100μM dGAE中並在37℃下，在LMTM存在/不存在(1：5比率)下以700rpm攪動24小時。在隔夜攪動之後，將各樣本之三分之一作為『總』放在一邊且其餘樣本以16000 x g短暫離心30分鐘，並分成『上清液』及『沈澱物』。接著，將沈澱物再懸浮於初始體積之一半中以供進一步實驗。使用夾心ELISA形式，使用『E』特異性單株抗體423 mAb測試針對在LMTM存在/不存在下形成的dGAE聚集物之核心區域特異性scAb的免疫反應性。經顯示，此mAb特異性結合至PHF中之鏈黴蛋白酶(Pronase)抗性核心結構(Wischik等人，1988)。用10μg/ml 423 mAb塗佈ELISA盤並以常規方式阻斷。將10μg/ml起始濃度的dGAE聚集物『總』、『上清液』及『沈澱物』樣本的兩倍稀釋液以在1×PBS中之兩倍稀釋液添加至指定孔中。包括dGAE單體(非聚集)作為檢定對照。所有兩倍稀釋皆以100μl之最終體積進行。將其在實驗室工作台上培育1小時，隨後添加10μg/ml之測試scAb。如先前所描述，添加抗HuCk HRP標記之二次抗體且使用下圖表示所產生的ELISA資料。
當在LMTM存在下進行聚集時，測試的所有scAb皆顯示與聚集之dGAE『總』及『上清液』樣本之結合增加。此證實dGAE上閉塞之抗體結合區的打開或揭露，其中LMTM防止聚集事件，導致免疫反應性之增加(圖34)。
實施例23：基於捕捉dGAE聚集物之能力對Tau mAb排序
天然展開之tau聚集成不溶性絲的級聯係AD之決定性病理特徵。因此，出於治療及診斷目的，靶向聚集之tau絲係合乎邏輯的。執行以下實驗，使用捕捉ELISA方法評估dGA mAb組合結合聚集之dGAE的能力。藉由在700RPM振盪下，在37℃下將100μM dGAE及10mM dTT培育24小時來製備聚集物。次日，將dGAE聚集物以17,000×g離心20分鐘並移除上清液。用10mM磷酸鹽緩衝液洗滌剩餘沈澱物並如上所述離心。再重複洗滌兩次以移除任何剩餘的dGAE單體。將dGAE沈澱物再懸浮於100μl之10mM磷酸鹽緩衝液中。(使用基於獨立捕捉ELISA之定量，計算出dGAE聚集之效率為80%)
為評估用於聚集物結合之mAb組合，用1μg/ml各捕捉mAb(S1D12、S1G2、CA4、NS2A1、CE2、E2E8及CB7)塗佈maxisorp盤之指定列並如前所述進行阻斷。洗滌之後，將800nM聚集之dGAE添加至指定孔中，對整個盤進行兩倍稀釋，並在室溫下培育1小時。再次洗滌盤並添加1μg/ml S1G2 scAb作為偵測抗體，並在室溫下培育1小時。向使用S1G2 mAb捕捉的列中添加1μg/ml s1D12 scAb代替S1G2作為捕捉抗體。如先前所描述，使用HRP標記之HuCK使檢 定顯色。
捕捉ELISA圖指示，S1D12及S1G2 mAb以及E2E8 mAb在捕捉聚集之dGAE方面最高效，E2E8 mAb與423mAb相同，為『391E』結合物(參見圖35)。
實施例24：再格式化之抗tau mAb的抗原決定基定位及結合親和力
對於抗tau mAb SPR量測(Biacore X100TM)及抗原決定基定位，遵循以上描述之相同方法(參見實施例16)。額外抗tau mAb及hT40上識別之區域的動力學速率及平衡結合常數在下表25中給出。
實施例25：抗體顯示對L66+/+腦勻漿中人類Tau的特異性
使用CB7(hT40 13-26)及CC7(hT40 145-157)抗體，由具有各基因型之3隻動物製備的腦勻漿之西方墨點針對人類tau顯示出特異性：野生型(WT)小鼠；L66+/+小鼠；及L1+/+小鼠腦(皆為5個月大)(關於L1及L66 +/+ 之基因型及表型描述提供於最初提交的文件中)。使用4-20% bis-tris凝膠自各腦萃取物分離出相當於20μg之蛋白質，並在1×MES緩衝液中操作。圖36顯示經CB7抗體染色之墨點。在含有L66+/樣本之泳道中可見清晰譜帶，但未能偵測到其他譜帶(WT或L1+/+)。圖37顯示當用CC7抗體詢問含有相同樣本製劑之墨點時得到類 似結果。同樣，在L66樣本中可見具有65kDa之相對遷移率的譜帶，且無其他反應性譜帶存在。
當將此等結果與利用核心域抗體結合物S1D12(hT40337-355)(圖38)及S1G2(hT40367-379)(圖39)獲得的西方墨點相比較時，結果明顯不同，其中在各小鼠樣本中可見多個譜帶。在各樣本(WT、L66+/+及L1+/+)中偵測到表觀分子量為約55kDa之譜帶。此譜帶很可能對應於具有類似大小的內源性小鼠tau。在L66+/+樣本中，亦偵測到在約68kDa處流動之第二譜帶。多個其他譜帶之存在指示腦勻漿內存在tau之蛋白水解截短形式。此外，在圖39中，S1G2抗體能夠偵測病理性10kDa tau片段，該片段能夠在其他細胞中接種疾病。
將含有CB7、CC7、S1D12及S1G2之抗原決定基的人類及小鼠tau區域之胺基酸序列疊加以供比較(圖40)。很明顯，CB7及CC7抗原決定基皆在人類tau序列與小鼠tau序列之間無同源性的區域中；然而，在核心區域中，該等序列係一致的。總之，此等墨點及序列分析(圖36至圖40)突出顯示此等抗體之診斷效用，因為其能夠識別在針對內源性小鼠tau蛋白背景之轉殖基因小鼠腦中病理性人類tau的存在。此等抗體可用於追蹤衰老期間及與任何藥理學治療相關的病理性tau物種之斷裂模式，其可影響(人類)tau蛋白、其聚集、體內各隔室之間(例如腦與血液之間、血液與唾液之間或腦與血液及唾液之間)的移動及其斷裂模式。
實施例26：核心及N末端抗體對偵測衰老L66小鼠之腦勻漿中年齡相關之tau蛋白截短形式或核心區域之閉塞
如先前所描述，將來自各種年齡之L66+/+小鼠的腦(1.5個月，n=11；3個月，n=11；及5個月，n=8)均質化且藉由BCA檢定來定量蛋白質含量。接著，在成對抗體ELISA中篩選此等腦勻漿以評估tau斷裂模式之年齡相關變化。 一式兩份，在夾心ELISA中包括腦勻漿並針對hTau40標準曲線之線性段測定tau值。
當使用S1D12抗體自此等腦勻漿捕捉tau並使用CB7作為偵測劑抗體時，觀察到隨著年齡增加，tau信號明顯減少(圖41A)。此發現係藉由改變檢定取向並使用CB7作為捕捉抗體且使用S1G2作為偵測劑來證實(圖41B)。由於此檢定中使用之各配對偵測含有跨13-379之胺基酸的tau片段，故由病理學相關聚集掩蔽核心而引起的抗原決定基之任何截短或閉塞將引起較低的tau偵測。此處觀察到的信號之逐漸損失表明，發生截短或抗原決定基閉塞事件或在L66+/+小鼠之年齡增長期間發生此性質之多個事件。
為了進一步瞭解以上研究之樣本中tau基質之蛋白質斷裂狀態，使用與HT7配對之CB7抗體捕捉來測定較小N'末端片段之水平，HT7為在區域tau159-163中具有抗原決定基之市售抗體。有趣的是，隨著L66+/+小鼠年齡增長，存在信號增加之趨勢。因此，由於較長的核心至N'末端tau片段隨著年齡增長而減小(圖41)，故在此轉殖基因小鼠品系中人類tau之較小的截短片段的水平增加(圖42)。
實施例27：用於偵測生物流體中之Tau片段的超靈敏檢定
利用單分子陣列(Simoa®)技術，吾人已實質上降低檢定之偵測限制，在一些情況下降低至低於1pg/ml tau蛋白(或蛋白質片段)。Simoa®係基於珠粒之技術，其中將捕捉抗體塗佈至磁性珠粒上，接著可使用磁體將該等磁性珠粒自溶液濃縮出來。添加結合至感興趣之捕捉分子的生物素化偵測劑。鏈黴抗生物素蛋白β-D-半乳糖苷酶(SBG)結合至偵測劑且隨後，將試鹵靈(resorufin)β-D-哌喃半乳糖苷(RPG)水解成螢光產物，使用該螢光產物偵測免疫複合物。 表26概述成功地轉移至Simoa®系統的檢定之抗體對及偵測限制。
實施例28：量測AD及健康對照血漿樣本中之tau片段水平
人類血漿樣本來源於商業供應商Logical Biological有限公司。將健康對照(HC，n=12)及來自診斷AD或輕度認知障礙之個體的樣本(AD/MCI，n=42)等分至低結合微量離心管中並在-80℃儲存。
用於血漿篩選之Simoa®實驗利用針對用於血漿樣本最佳化的3步驟方案。藉由將重組hTau40摻加至Tau 2.0稀釋劑中並稀釋三倍來產生標準曲線(540pg/ml-0.7pg/ml)。將血漿樣本以1：100稀釋並一式兩份添加至Simoa®盤中，隨後添加各別捕捉珠粒。用於血漿篩選之不同抗體對在表28中說明。一般而言，將捕捉抗體塗佈之珠粒與經稀釋之血漿樣本混合，添加至各盤中並在振盪下，在30℃培育30分鐘。培育之後，使用Simoa®盤洗滌器洗滌該等盤，隨後添 加0.2μg/ml生物素化偵測劑抗體，如前所述，將其培育10分鐘。接著，再洗滌該等盤，隨後添加SBG且最後培育10分鐘。最終培育及洗滌步驟之後，將該等盤轉移至Simoa®讀取器中並針對4參數擬合曲線產生血漿tau濃度。
隨後，在GraphPad Prism v5中分析人類血漿篩選資料。有趣的是，使用各種捕捉-偵測劑抗體對偵測時，觀察到與AD組相比較，年齡相配之健康對照組中血漿tau片段之水平明顯較高(表29)。
較，診斷AD之患者(AD/MCI)中核心-脯胺酸tau水平明顯降低(使用核心-HT7及核心-BT2檢定量測，其中S1D12為捕捉抗體)。當使用核心捕捉抗體S1D12作為抗體對之一部分時量測的tau水平比現有NT1檢定所見到的人類血漿中之典型值高1,000倍。與所報導的NT1檢定相比，在AD/MCI患者典型地顯示出高於健康對照之檢定值時，對於使用S1D12捕捉之檢定，利用健康對照樣本時此模式反轉，顯示出比AD/MCI患者高的tau片段值。數據以平均值形式呈現。n.d.-未偵測(信號低於空白)
實施例29：核心捕捉抗體S1D12可量測人類血漿中奈克水平之tau
當在Simoa®檢定中使用S1D12-BT2或S1D12-HT7對時，在人類血漿中偵測到奈克水平之tau片段(表29)。迄今所報導的所有研究均已量測血漿中pg/ml濃度之tau片段，其中最高水平為約850pg/ml(Sparks等人2012；Rani等人2017)。有趣的是，且與NT1檢定相反，此核心-BT2檢定量測高出1,000至10,000倍的tau片段且與AD患者相比較，健康對照中水平較高(圖43)。類似地，利用核心-HT7檢定，在健康對照血漿中偵測到ng/ml濃度之tau且該等水平在AD/MCI血漿中較低。兩種發現轉化為健康對照中較高水平的核心-脯胺酸片段，並形成定期監測測試鑑別值得額外篩選之患者的基礎，亦即，疾病早期發作的潛在預測因子。使用核心捕捉抗體偵測之tau的水平明顯超過先前報導的水平，且表明使用S1D12揭露生物樣本中大量先前未偵測到的tau片段，其可被視為tau蛋白混合物(全長tau蛋白及tau蛋白片段群)，其可稱為『tau體(tauosome)』。AD/MCI患者之血漿中tau水平之降低表明，腦中tau清除之缺乏可能為AD發病機制之關鍵因素。
實施例30：使用Simoa®之FTD樣本分析
使用S1D12/BT2檢定以3步驟形式篩選Re：Cognition Health(London)友情捐贈的三份額顳葉型失智(FTD)血漿樣本。將樣本稀釋於Tau 2.0緩衝液中並一式兩份，取100μl添加至96孔檢定盤各孔中。針對使用三倍稀釋的自540-0.74pg/ml之hTau40製備的標準曲線操作樣本。
製備順磁性珠粒(Quanterix #103612)並藉由以下製造商提供之方法活化。將珠粒(4.2×108，約150μl經渦旋之儲備珠粒)使用洗滌緩衝液洗滌，並遵循製造商之說明書，用珠粒結合緩衝液處理。在珠粒結合緩衝液中製備1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺(EDC)(Thermo Scientific #A35391)並將其添加至珠粒中以達到0.3mg/ml之最終濃度。隨後，將珠粒在ThermomixerTM上以1,000rpm培育30分鐘進行活化。如前所述洗滌之後，藉由渦旋10秒且隨後在4℃下，在Thermomixer上以1,000rpm培育2小時，將活化之珠粒與300μl濃度為0.2mg/ml之S1D12抗體混合。
將25μl含有約500000個珠粒之S1D12捕捉珠粒溶液添加至檢定盤各孔中並在Simoa®振盪器上，在30℃及800rpm下培育30分鐘。在此培育之後，將該盤在Simoa® SR-X洗滌器上洗滌並將100μl濃度為200ng/ml之生物素-BT2偵測劑抗體(Thermofisher #MN1010B)添加至各孔中。隨後，將該盤轉移至Simoa®盤振盪器中並在800rpm及30℃培育10分鐘。將在Simoa® SBG稀釋劑(Quanterix #100376)中稀釋150pM的100μL鏈黴抗生物素蛋白β-半乳糖苷酶(SBG，Quanterix #103397)添加至各孔中，在800rpm及30℃下培育10分鐘，洗滌並在磁體上保持10分鐘直至乾燥。接著，將該盤轉移至Simoa® SR-X儀器上進行分析。亦將在800rpm及30℃振盪下再懸浮至少30分鐘的螢光試鹵靈β-d-哌喃半乳糖苷(RPG，Quanterix #103159)受質添加至該儀器以及檢定盤中用於各檢定。
自4參數擬合標準曲線測定Tau水平，乘以稀釋因數並報導於表30 中。在該組FTD樣本中觀察到較高的血漿tau水平(ng/ml，可藉由S1D12-BT2對偵測)，與在AD樣本中之觀察結果類似且先前未曾報導。
實施例31：使用化學發光ELISA之人類血漿分析
獲得來自診斷AD之個體的人類血漿及來自無認知障礙之個體的人類血漿(Logical Biological，Kent UK)，將其分成100μl等分試樣並在-80℃儲存。
如下進行偵測此等樣本中之tau片段的ELISA檢定。用2.5μg/ml S1D12 mAb(100μl)固定黑色Nunc MaxisorpTM盤。在37℃下，將該盤培育1小時，用每孔200μl PBST(0.05%吐溫20)洗滌3次並用2%(w/v)於PBS中之乳粉，藉由在37℃下培育1小時來阻斷。如前所述洗滌之後，一式兩份，將每孔100μl人類血漿樣本(1：6、1：10或1：20稀釋於PBST中)添加至檢定盤中。同時，藉由自10ng/ml至14pg/ml三倍稀釋hTau40生成校準器曲線並將該盤在室溫下培育1小時。將該盤在PBST中洗滌5次並添加在PBST中稀釋至200ng/ml之生物素化BT2偵測劑(Thermofisher #MN1010B)(每孔100μl)且在室溫下培育1小時。將100μl鏈黴抗生物素蛋白聚HRP(Thermofisher #21140)(1：10,000於PBST中)添加至洗滌過的盤中，在室溫下培育1小時並使用50μl SuperSignal ELISA Femto受質(Thermo Scientific,#37075)顯色。使用Clariostar Plus微量盤讀取器(BMG Labtech)讀取該盤之總發光。
由4參數擬合曲線得到Tau濃度並以各測試稀釋度之平均值呈現(圖45)。與基於Simoa®之分析相同，與AD組相比較，在年齡相配之健康對照 組中觀察到較高的血漿tau片段水平。
實施例32：需要超敏感核心抗體偵測人類血漿中之核心/脯胺酸tau片段
如先前所描述，使用表1.4中概述之抗體對設置各種3步驟Simoa®檢定以評估使用脯胺酸區域抗體作為捕捉分子以及核心抗體作為偵測劑量測人類血漿中tau片段之作用。
使用作為捕捉分子之S1D12以及脯胺酸結合物BT2及HT7將促進在人類血漿中回收比先前所報導之水平要高之水平的tau。另外，此等片段之水平看來在阿茲海默氏病中降低。利用一小組患者樣本，現使用S1G2作為捕捉分子重複此操作。兩種高親和力核心抗體皆偵測到在AD中降低的高水平核心/脯胺酸Tau。有趣的是，當使用CA4(結合至對應於hT40之胺基酸355-367之區域的核心抗體)作為捕捉且BT2作為偵測劑時，僅在無認知障礙(CU)樣本中偵測到較高的核心/脯胺酸tau水平。由於CA4抗體之親和力相對較低(3nM相對於S1D12之120pM及S1G2之170pM)，使得難以偵測AD樣本中之任何核心/脯胺酸tau，故該檢定之功能性定量下限為約1ng/ml(表31)。
當嘗試反轉此等檢定之形式(亦即，使用BT2或HT7作為捕捉分子且S1D12或S1G2作為偵測劑)時，在此等血漿樣本中未偵測到tau。儘管該等檢定具有優良的校準器曲線特徵(圖46)且使用濃度更高的血漿，但此為1：20稀釋，與當使用核心結合物作為捕捉分子時需要1：50稀釋形成對比。
實施例33：免疫沈澱及胰蛋白酶消化LC-MS揭露人類血漿中含有tau片段之核心區域。
為測定使用抗體對偵測之tau片段的身分，使用S1D12及BT2/HT7抗體，隨後胰蛋白酶消化及液相層析質譜法分析(LC-MS)對來自無認知障礙之(CU)個體的人類血漿樣本進行免疫沈澱(IP)。亦包括對照樣本，其中在1×PBS中摻加50ng hT40。將樣本僅用S1D12抗體進行免疫沈澱或使用S1D12及BT2/HT7抗體進行雙重免疫沈澱。對於免疫沈澱，將10μg S1D12抗體共價結合至1.4×107個磁性珠粒並將2ml無認知障礙之人類血漿或摻加hT40之樣本與塗有抗體之珠粒在室溫下混合1小時。使用磁力分離器，用1ml之0.1% PBST洗滌珠粒4次並使用30μl之0.1M甘胺酸(pH 3.0)洗提tau片段。在用6μl之1M Tris HCl(pH 8.0)中和pH之後，藉由添加1×PBS使最終體積達到1ml並將與BT2/HT7抗體結合之磁性珠粒(如上所述製備)添加至混合物中(用於雙重免疫沈澱)。4個洗滌步驟之後，如先前所描述執行最終洗提。
將樣本使用50mM碳酸氫銨稀釋並在60℃下，用200mM二硫蘇糖醇還原25分鐘。藉由添加200mM碘乙醯胺並在25℃於暗處培育30分鐘來使半胱胺酸殘基烷基化。藉由添加40μg定序級胰蛋白酶(豬，Promega V5111)並在37℃下隔夜培育來執行胰蛋白酶消化。將樣本藉由真空離心(SpeedVac)冷凍乾燥並藉由在迴轉式振盪器上混合且以14,000rpm離心2分鐘，將其溶解於10μl的0.1%三氟乙酸中。藉由將9μl溶液注射至Q Exactive Plus LC-MS系統上來分析消化樣本。液相層析系統UltiMate 3000 RSLCnano(Thermo Scientific Dionex)經組 態用於在奈米管柱之PepMap RSLC C18 75μm i.d.×25cm(Thermo ScientificP/N ES801)上進行預濃縮。此與配有EASY-Spray奈米級電噴霧源之Q Exactive Plus混合四極桿-Orbitrap質譜儀(Thermo Scientific)耦接。應用60分鐘之液體層析(LC)梯度，利用遞增百分比之緩衝液B(乙腈：UHQ水：甲酸之比為80：20：0.1)進行肽洗提；流動速率為300nL/min。在Orbitrap中，以70,000解析度自375至1750m/z獲取完全MS1掃描，隨後以資料依賴性獲取(DDA)模式，以17,500之解析度對前10種前驅物離子進行MS2掃描。
使用2.2版Proteome Discoverer(Thermo Scientific)處理原始檔案並用Mascot Server(2.6版)進行資料庫搜索。
圖47中顯示在免疫沈澱及LC-MS分析之後藉由豐度偵測的人類血漿樣本中之Tau片段。亦給出由加料樣本偵測之片段用於比較。
實施例34：S1D12免疫療法-6週的重複劑量小鼠研究
在本研究中使用總計12隻野生型雌性小鼠、12隻品系1之雌性小鼠及12隻品系66之雌性小鼠，其中品系1及品系66為轉殖基因小鼠tau蛋白病模型(Melis等人，2015)。在研究開始時，動物為2個月大。連續六週，每週一次對各基因型之小鼠腹膜內(i.p.)注射媒劑或S1D12 mAb(30mg/kg)。此研究設計概述於下表32中。
最後一次劑量後七天，執行心臟穿刺血液取樣。使用過量劑量之 戊巴比妥鈉(i.p.)使小鼠麻醉並經由用肝素化鹽水(10U/mL)預先沖洗之Plastipak注射器心臟穿刺來收集血液，並將其轉移至含有肝素鋰抗凝血劑之塑膠小瓶中。在6℃下，將血液樣本以2,000×g離心5分鐘以獲得血漿。
實施例35：S1D12免疫療法-經由核心-核心Simoa®檢定評估血漿tau
為了監測S1D12 mAb之『治療作用』，經由核心-核心homebrew Simoa®檢定評估媒劑對照及抗體治療之L66+/+小鼠的血漿tau以研究此等小鼠中核心tau池之變化。並藉由遵循先前所描述之血漿篩選方法，使用CA4抗體捕捉珠粒、S1G2偵測劑(10ng/mL)及添加的1：8稀釋之血漿樣本執行三步驟檢定並進行分析。
當在Simoa®檢定中，對L1小鼠使用核心及核心抗體對(CA4-S1G2)時，相對於未用S1D12治療之L1(3.43(0.45)ng/ml)，在用S1D12 mAb治療之小鼠中偵測到血漿tau水平的極其顯著之增加(利用S1D12治療之L1>100ng/ml)。此檢定可偵測人類及小鼠tau且相對於未用S1D12治療之L66+/+(0.76(0.21)ng/ml)，在接受抗體治療之L66+/+小鼠中觀察到tau水平的統計學上顯著之增加(用S1D12治療之L66+/+3.52(0.20)ng/ml)。在某種程度上，在用SD12治療之野生型小鼠中亦見到tau水平相對於無治療的統計學上顯著之增加(3.57(0.22)ng/ml)相對於(1.91(0.28)ng/ml)(圖48)。然而，在L1組中見到大幅增加，超過當前檢定之偵測上限。
實施例36：量測唾液中之tau片段
使用以下方案，自志願者獲得唾液樣本。告知參與者在提供樣本之前禁食至少30分鐘，且在取樣前10分鐘，告知參與者用水漱口。接著，參與者將至少1ml未經刺激之唾液吐至50ml管中。將來自各參與者之1ml唾液轉移至 個別微量離心管中並以10,000×g離心5分鐘。收集上清液部分，將其等分並在-80℃儲存。
如先前所描述，使用表33中所描述之檢定操作使用各種抗體對進行之3步驟Simoa®檢定，且結果概述於表34中。
意外的是，使用BT2作為捕捉抗體且S1D12或S1G2作為偵測劑抗體之抗體配對的逆轉會廢除偵測。此與實施例26及圖41中呈現之資料形成對比，其中核心與N末端配對偵測腦勻漿樣本中之tau，不管S1D12/S1G2(核心結合物)及CB7(其結合至hT40 13-26)係用作捕捉抗體還是偵測劑抗體。由此表明，使用結合至SEQ ID NO：1之殘基297至391內之抗原決定基的捕捉抗體對於唾液樣本係有利的。
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Claims (24)

  1. 一種用於偵測唾液樣本中之tau蛋白或其片段的試管內方法，其包含使該樣本與用於捕捉的第一特異性結合分子接觸並使該樣本與用於偵測的第二特異性結合分子接觸，且其中該第一特異性結合分子包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列： (I) VHCDR1包含SEQ ID NO: 16（NNAVG）中所示之序列； VHCDR2包含SEQ ID NO: 18（GCSSDGTCYYNSALKS）中所示之序列； VHCDR3包含SEQ ID NO: 21（GHYSIYGYDYLGTIDY）中所示之序列； VLCDR1包含SEQ ID NO: 24（SGSSSNVGGGNSVG）中所示之序列； VLCDR2包含SEQ ID NO: 26（DTNSRPS）中所示之序列；且 VLCDR3包含SEQ ID NO: 29（VTGDSTTHDDL）中所示之序列；或 (II) VHCDR1包含SEQ ID NO: 42（SNSVG）中所示之序列； VHCDR2包含SEQ ID NO: 46（GIDTDGEEGYNPALNS）中所示之序列； VHCDR3包含SEQ ID NO: 54（SYRADGLAYGYVQAIDY）中所示之序列； VLCDR1包含SEQ ID NO: 63（SGSFIGISSVG）中所示之序列； VLCDR2包含SEQ ID NO: 70（ASDGRPS）中所示之序列；且 VLCDR3包含SEQ ID NO: 73（GSSDRTPYTGV）中所示之序列；且 其中該第二特異性結合分子是BT2或HT7。
  2. 如請求項1之方法，其中該第一特異性結合分子包含(I)中的CDR胺基酸序列及構架區（FR）VHFR1、VHFR2、VHFR3、VHFR4、VLFR1、VLFR2、VLFR3及VLFR4，其中該等FR各自包含以下胺基酸序列： VHFR1包含SEQ ID NO: 435（QVQLQESGPSLVKPSQTLSLTCTVSGFSLN）中所示之序列； VHFR2包含SEQ ID NO: 436（WVRQAPGKVPESLV）中所示之序列； VHFR3包含SEQ ID NO: 437（RLDITRDTSKNQISLSLSSVTTDDAAVYYCTR）中所示之序列； VHFR4包含SEQ ID NO: 438（WGPGLLVTVSS）中所示之序列； VLFR1包含SEQ ID NO: 439（QAVLTQPSSVSGSLGQRVSITC）中所示之序列； VLFR2包含SEQ ID NO: 440（WYQHLPGSGLKTIIY）中所示之序列； VLFR3包含SEQ ID NO: 441（GVPDRFSGSRSGNTATLTINSLQAEDEGDYYC）中所示之序列； VLFR4包含SEQ ID NO: 442（VGSGTRLTVLG）中所示之序列； 或對於各FR序列， (i)與該序列具有至少50%一致性的胺基酸序列，及/或 (ii)相對於該序列具有一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸取代的胺基酸序列。
  3. 如請求項1之方法，其中該第一特異性結合分子包含： (a) 包含SEQ ID NO: 443（QVQLQESGPSLVKPSQTLSLTCTVSGFSLNNN AVGWVRQAPGKVPESLVGCSSDGTCYYNSALKSRLDITRDTSKNQISLSLSSVTTDDAAVYYCTRGHYSIYGYDYLGTIDYWGPGLLVTVSS）中所示之序列的VH域；及/或 (b) 包含SEQ ID NO: 444（QAVLTQPSSVSGSLGQRVSITCSGSSSNVG GGNSVGWYQHLPGSGLKTIIYDTNSRPSGVPDRFSGSRSGNTATLTINSLQAEDEGDYYCVTGDSTTHDDLVGSGTRLTVLG）中所示之序列的VL域； 或其人源化變異體。
  4. 如請求項1之方法，其中該第一特異性結合分子包含(II)中的CDR胺基酸序列及構架區（FR）VHFR1、VHFR2、VHFR3、VHFR4、VLFR1、VLFR2、VLFR3及VLFR4，其中該等FR各自包含以下胺基酸序列： VHFR1包含SEQ ID NO: 447（QVQLQESGPSLVKPSQTLSLTCTVSGFSLT）中所示之序列； VHFR2包含SEQ ID NO: 448（WVRQAPGKAPEWVA）中所示之序列； VHFR3包含SEQ ID NO: 449（RLSITRDTSKSQVSLSLSSVTSEDTAVYYCGR）中所示之序列； VHFR4包含SEQ ID NO: 450（WGPGLLVTVSS）中所示之序列； VLFR1包含SEQ ID NO: 451（QAVVTQPSSVSGSLGQRVSITC）中所示之序列； VLFR2包含SEQ ID NO: 452（WFQQLPGSGLRTIIV）中所示之序列； VLFR3包含SEQ ID NO: 453（GVPDRFSMSKSGNTATLTISSLQAEDEADYFC）中所示之序列； VLFR4包含SEQ ID NO: 454（FGSGTRLTVLG）中所示之序列； 或對於各FR序列， (i)與該序列具有至少50%一致性的胺基酸序列，及/或 (ii)相對於該序列具有一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸取代的胺基酸序列。
  5. 如請求項1之方法，其中該第一特異性結合分子包含： (a) 包含SEQ ID NO: 455（QVQLQESGPSLVKPSQTLSLTCTVSGFSLTS NSVGWVRQAPGKAPEWVAGIDTDGEEGYNPALNSRLSITRDTSKSQVSLSLSSVTSEDTAVYYCGRSYRADGLAYGYVQAIDYWGPGLLVTVSS）中所示之序列的VH域；及/或 (b) 包含SEQ ID NO: 456（QAVVTQPSSVSGSLGQRVSITCSGSFIGISS VGWFQQLPGSGLRTIIVASDGRPSGVPDRFSMSKSGNTATLTISSLQAEDEADYFCGSSDRTPYTGVFGSGTRLTVLG）中所示之序列的VL域； 或其人源化變異體。
  6. 如請求項1之方法，其中該第二特異性結合分子係BT2。
  7. 如請求項1之方法，其中該第二特異性結合分子係HT7。
  8. 如請求項1之方法，其中該片段由SEQ ID NO: 1之殘基113至379內的胺基酸殘基組成。
  9. 如請求項1之方法，其中該片段包含SEQ ID NO: 1自殘基297至391的至少4個連續胺基酸殘基。
  10. 如請求項1之方法，其中該片段包含SEQ ID NO: 1自殘基151至243的至少4個連續胺基酸殘基。
  11. 如請求項1之方法，其中該片段包含SEQ ID NO: 1自殘基113至379的至少30個連續胺基酸殘基及 (a) SEQ ID NO: 1自殘基297至391的至少4個連續胺基酸殘基；及 (b) SEQ ID NO: 1自殘基151至243的至少4個連續胺基酸殘基。
  12. 如請求項1之方法，其中該片段包含SEQ ID NO: 1自殘基297至391之至少30個連續胺基酸殘基及SEQ ID NO: 1自殘基151至243之至少30個連續胺基酸殘基。
  13. 如請求項1之方法，其中該片段包含SEQ ID NO: 1之胺基酸殘基337至349及/或SEQ ID NO: 1之胺基酸殘基370至374。
  14. 如請求項1之方法，其中該片段包含SEQ ID NO: 1之胺基酸殘基194至198及/或SEQ ID NO: 1之胺基酸殘基159至163。
  15. 如請求項1之方法，其中該片段包含SEQ ID NO: 1自殘基113至379的至少30個連續胺基酸殘基。
  16. 如請求項1之方法，其中該片段包含SEQ ID NO: 1自殘基113至379的至少156個連續胺基酸殘基及 (a) SEQ ID NO: 1自殘基297至391之至少53個連續胺基酸殘基，其包含SEQ ID NO: 1之殘基337至349；及 (b) SEQ ID NO: 1自殘基151至243之至少50個連續胺基酸殘基，其包含SEQ ID NO: 1之殘基194至198。
  17. 如請求項1之方法，其中該片段包含SEQ ID NO: 1自殘基113至379的至少181個連續胺基酸殘基及 (a) SEQ ID NO: 1自殘基297至391之至少78個連續胺基酸殘基，其包含SEQ ID NO: 1之殘基370至374；及 (b) SEQ ID NO: 1自殘基151至243之至少50個連續胺基酸殘基，其包含SEQ ID NO: 1之殘基194至198。
  18. 如請求項1之方法，其中該片段包含SEQ ID NO: 1之殘基113至379的至少191個連續胺基酸殘基及 (a) SEQ ID NO: 1自殘基297至391之至少53個連續胺基酸殘基，其包含SEQ ID NO: 1之殘基337至349；及 (b) SEQ ID NO: 1自殘基151至243之至少85個連續胺基酸殘基，其包含SEQ ID NO: 1之殘基159至163。
  19. 如請求項1之方法，其中該片段包含SEQ ID NO: 1自殘基113至379的至少216個連續胺基酸殘基及 (a) SEQ ID NO: 1自殘基297至391之至少78個連續胺基酸殘基，其包含SEQ ID NO: 1之殘基370至374；及 (b) SEQ ID NO: 1自殘基151至243之至少85個連續胺基酸殘基，其包含SEQ ID NO: 1之殘基159至163。
  20. 如請求項1之方法，其中該片段包含以下胺基酸殘基： (a) SEQ ID NO: 1之194至349； (b) SEQ ID NO: 1之159至349； (c) SEQ ID NO: 1之194至374； (d) SEQ ID NO: 1之159至374； (e) SEQ ID NO: 1之195至370； (f) SEQ ID NO: 1之159至379； (g) SEQ ID NO: 1之113至224； (h) SEQ ID NO: 1之113至349；或 (i) SEQ ID NO: 1之113至370。
  21. 如請求項1之方法，其中該片段之胺基酸序列由以下殘基內之胺基酸殘基組成： (a) SEQ ID NO: 1之113至370； (b) SEQ ID NO: 1之113至349； (c) SEQ ID NO: 1之113至224； (d) SEQ ID NO: 1之159至379； (e) SEQ ID NO: 1之195至370； (f) SEQ ID NO: 1之194至349； (g) SEQ ID NO: 1之159至349； (h) SEQ ID NO: 1之194至374；或 (i) SEQ ID NO: 1之159至374。
  22. 如請求項1之方法，其中該片段之胺基酸序列由SEQ ID NO: 1之胺基酸殘基113至379組成。
  23. 如請求項1之方法，其另外包含測定該樣本中該tau蛋白片段之濃度。
  24. 一種偵測套組，其適用於根據請求項1至23中任一項之方法中，所述套組包含用於捕捉的第一特異性結合分子及用於偵測的第二特異性結合分子，其中該第一特異性結合分子包含CDR VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2及VLCDR3，其中該等CDR各自包含以下胺基酸序列： (I) VHCDR1包含SEQ ID NO: 16（NNAVG）中所示之序列； VHCDR2包含SEQ ID NO: 18（GCSSDGTCYYNSALKS）中所示之序列； VHCDR3包含SEQ ID NO: 21（GHYSIYGYDYLGTIDY）中所示之序列； VLCDR1包含SEQ ID NO: 24（SGSSSNVGGGNSVG）中所示之序列； VLCDR2包含SEQ ID NO: 26（DTNSRPS）中所示之序列；且 VLCDR3包含SEQ ID NO: 29（VTGDSTTHDDL）中所示之序列；或 (II) VHCDR1包含SEQ ID NO: 42（SNSVG）中所示之序列； VHCDR2包含SEQ ID NO: 46（GIDTDGEEGYNPALNS）中所示之序列； VHCDR3包含SEQ ID NO: 54（SYRADGLAYGYVQAIDY）中所示之序列； VLCDR1包含SEQ ID NO: 63（SGSFIGISSVG）中所示之序列； VLCDR2包含SEQ ID NO: 70（ASDGRPS）中所示之序列；且 VLCDR3包含SEQ ID NO: 73（GSSDRTPYTGV）中所示之序列；且 其中該第二特異性結合分子是BT2或HT7。
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