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TWI889865B - 包含類升糖素胜肽-1及介白素-1受體拮抗物的融合蛋白及其用途 - Google Patents

包含類升糖素胜肽-1及介白素-1受體拮抗物的融合蛋白及其用途

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TWI889865B
TWI889865B TW110125394A TW110125394A TWI889865B TW I889865 B TWI889865 B TW I889865B TW 110125394 A TW110125394 A TW 110125394A TW 110125394 A TW110125394 A TW 110125394A TW I889865 B TWI889865 B TW I889865B
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TW
Taiwan
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cdata
fusion protein
ser
val
glp
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Application number
TW110125394A
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TW202216747A (zh
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張明浩
吳永珉
吳娜賢
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南韓商Ｇｉ醫諾微新股份有限公司
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Publication date
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Abstract

本發明係關於一種包含類升糖素胜肽-1 (GLP-1)及介白素-1受體拮抗劑(IL-1Ra)的融合蛋白二聚體，以及使用其治療代謝性疾病的醫藥組合物。已確認，融合蛋白二聚體顯著發揮GLP-1激素之作用並有效結合IL-1受體，且因此對發炎體引起之IL-1β信號傳導具有極好的抑制作用。因此，根據本發明之融合蛋白二聚體具有GLP-1與IL-1受體拮抗劑的聯合功效，且可有效用於治療及預防諸如糖尿病、肥胖症、高脂血症之代謝性疾病，且因而具有很高的工業化應用可能性。

Description

包含類升糖素胜肽-1及介白素-1受體拮抗物的融合蛋白及其用途
發明領域
本發明係關於一種包含類升糖素胜肽-1 (GLP-1)及介白素-1受體拮抗劑(IL-1Ra)的融合蛋白二聚體；以及使用其治療代謝性疾病之組合物。
發明背景
在現代社會，由於諸如加工食品及外出就餐的增加導致營養攝入過多以及因自動化導致身體活動減少的各種原因，肥胖人口正在迅速增加，且因此導致諸如高血壓、糖尿病、動脈硬化、高脂血症、胰島素抗性及血脂異常的代謝性疾病正在增加。
代謝性疾病係由體內代謝紊亂引起的疾病的總稱，且由於病因多樣，作用複雜，難以制定明確的治療方法。
同時，類升糖素胜肽-1 (GLP-1)係由腸道中L細胞藉由諸如食物之刺激分泌的腸促胰島素激素，已知與糖尿病、肥胖症、心臟病、腦血管病、神經元發炎、動脈硬化及其類似疾病之治療效果有關。在此方面，被批准用作抗肥胖症藥物的GLP-1類似物利拉魯肽(liraglutide)已被批准作為低熱量飲食及控制體重運動的輔助手段。此藥物已被批准用於患有肥胖症、高血壓、2型糖尿病或血脂異常之肥胖或超重成人。然而，仍然存在安全性及副作用的問題。
介白素-1受體拮抗劑(IL-1Ra)係一種抑制IL-1之物質，IL-1係一種以IL-1α及IL-1β二種形式存在的炎性細胞激素，並競爭性地抑制IL-1與IL-1受體之結合以抑制IL-1的作用。同時，發炎反應中的重要介體IL-1β係由發炎體(inflammasome)產生的，最近的研究發現各種代謝性疾病均與發炎體有關(Dominic De Nardo等人, Trends Immunol., 32(8):373-379, 2011)。因此，藉由抑制發炎體及IL-1β來治療諸如與發炎體及其代謝產物IL-1β相關的代謝性疾病之各種疾病的研究正在積極進行中(Charles A Dinarello等人, Nat Rev Drug Discov., 11(8):633-652, 2012)。
發明概要 技術問題
因此，本發明人已研究開發具有用於有效治療及預防代謝性疾病之新組合的融合蛋白。結果，本發明人已確認包含GLP-1及IL-1受體拮抗劑(IL-1Ra)的融合蛋白二聚體發揮GLP-1激素之作用並有效地與IL-1受體結合以抑制發炎細胞激素IL-1的信號。基於該結果，本發明人已確認融合蛋白二聚體可有效地用作諸如糖尿病及肥胖症之代謝性疾病的治療劑，從而完成了本發明。 問題解決方案
為實現上述目的，在本發明之一態樣中，提供了一種包含GLP-1或其變異體及介白素1受體拮抗劑(IL-1受體拮抗劑)或其片段的融合蛋白；及其二聚體。
在本發明之另一態樣中，提供了編碼融合蛋白之多核苷酸、包括該多核苷酸之表現載體及已引入該表現載體之經轉型細胞。
在本發明之又另一態樣中，提供了用於預防或治療代謝性疾病之包含融合蛋白二聚體的醫藥組合物。
在本發明之再另一態樣中，提供了融合蛋白二聚體在製造供治療或預防代謝性疾病用之藥物中的用途。
在本發明之又再另一態樣中，提供了融合蛋白二聚體用於治療或預防代謝性疾病的用途。
在本發明之又再另一態樣中，提供了一種預防或治療代謝性疾病的方法，該方法包括向個體投與融合蛋白二聚體。 發明效果
根據本發明之包含GLP-1及IL-1受體拮抗劑(IL-1Ra)的融合蛋白二聚體可顯著發揮GLP-1激素之作用，GLP-1激素已知根據血糖濃度促進胰島素分泌並有抗肥胖症作用。此外，融合蛋白二聚體與IL-1受體(IL-1R)結合，且對由發炎體產生之IL-1β信號傳導具有極好的抑制作用。因此，在一功能態樣中，融合蛋白二聚體具有GLP-1及IL-1受體拮抗劑的聯合功效，且因此可有效用於預防及治療諸如糖尿病、肥胖症、高脂血症的代謝性疾病。
較佳實施例之詳細說明 包含GLP-1 及IL-1 受體拮抗劑(IL-1Ra) 的融合蛋白
在本發明之一態樣中，提供了一種包含GLP-1或其變異體及介白素-1受體拮抗劑(IL-1受體拮抗劑)或其片段的融合蛋白。
如本文所用，術語「類升糖素胜肽-1 (GLP-1)」或「類升糖素胜肽-1」係指由作為前激素之前升糖素(proglucagon)的基因轉錄產物衍生的腸促胰島素(incretin)，其係由腸道L細胞在受到腸道中之營養素或血糖濃度刺激時分泌的激素。
GLP-1由30個胺基酸組成，且已知GLP-1之胺基酸序列在所有哺乳動物中100%相同。眾所周知，升糖素係由前升糖素藉由轉錄後過程在胰島α細胞中產生的，而GLP-1係在迴腸及結腸L細胞中產生的。具體言之，GLP-1可以具有SEQ ID NO: 1之序列，但不限於此。
在本說明書中，GLP-1或其變異體可以統稱為術語「GLP-1」。GLP-1及GLP-1變異體與例如GLP-1受體(GLP-1R，類升糖素胜肽-1受體)特異性結合。此特異性結合可以利用熟習此項技術者已知的方法鑑別。
如本文所用，術語「GLP-1變異體」係指全長GLP-1的一些胺基酸經取代、缺失、添加及/或插入的形式。亦即，GLP-1變異體可以具有與野生型GLP-1不同的胺基酸序列。然而，GLP-1變異體可能具有與野生型GLP-1等效或相似的活性。在此，「GLP-1活性」可以指例如與GLP-1受體的特異性結合，並且此特異性結合可以利用熟習此項技術者已知的方法量測。
具體言之，GLP-1變異體可以藉由缺失、修飾、取代及/或添加野生型GLP-1的一些胺基酸獲得，並且可以利用熟習此項技術者已知的方法製備。GLP-1變異體可以含有野生型GLP-1序列中的至少5個胺基酸、至少10個胺基酸、至少15個胺基酸或至少20個胺基酸。
具體言之，GLP-1變異體可以藉由取代或缺失野生型GLP-1的一些胺基酸來獲得。在一實施例中，藉由胺基酸取代及缺失獲得的GLP-1變異體可以藉由將SEQ ID NO:1的胺基酸序列中的第2個及第30個胺基酸取代為其他胺基酸並在C端添加一個胺基酸來獲得。
此外，GLP-1變異體可以藉由取代及添加野生型GLP-1的一些胺基酸來獲得。在一實施例中，藉由取代及添加胺基酸獲得的GLP-1變異體可以藉由將SEQ ID NO:1的胺基酸序列中的第2個、第10個、第12個、第13個、第14個、第16個、第17個、第19個、第20個、第21個、第24個、第27個、第28個及第30個胺基酸取代為其他胺基酸並在C端添加九個胺基酸來獲得。進一步地，GLP-1變異體可以藉由將SEQ ID NO: 1的胺基酸序列中的第2個及第30個胺基酸取代為其他胺基酸並在C端添加一個胺基酸來獲得。
在此，藉由取代及/或添加引入的「胺基酸」可以係選自由以下組成之群的任一者：甘胺酸(G)、白胺酸(L)、離胺酸(K)、麩醯胺酸(Q)、甲硫胺酸(M)、麩胺酸(E)、纈胺酸(V)、精胺酸(R)、天冬醯胺(N)、脯胺酸(P)、絲胺酸(S)及丙胺酸(A)。
在一實施例中，GLP-1變異體可以係如下GLP-1變異體：其中在SEQ ID NO: 1之胺基酸序列中發生A2G及R30G取代且一個胺基酸G被添加至C端。此外，GLP-1變異體可以係如下GLP-1變異體：其中在SEQ ID NO: 1之胺基酸序列中發生A2G、V10L、S12K、Y13Q、L14M、G16E、Q17E、A19V、K20R、E21L、A24E、V27K、K28N及R30G取代且九個胺基酸PSSGAPPPS (SEQ ID NO: 21)被添加至C端。
具體言之，GLP-1變異體可以具有SEQ ID NO: 2至4中任一者的胺基酸序列。
此外，GLP-1變異體的特徵可以在於在體內作用的持續時間延長。野生型GLP-1作為藥物開發有很多困難，包括在體內被二胜肽基胜肽酶4 (DPP-4)酶以極高的速度裂解及不活化。因此，GLP-1變異體係如下變異體：藉由在野生型GLP-1引起變異而減少DPP-4酶的裂解，並且特徵可以在於與野生型GLP-1的生物半衰期(1至2分鐘)相比具有顯著更長的生物半衰期。
同時，野生型GLP-1在體內進行加工，使得前六個胺基酸自分子上裂解下來。因此，根據此項技術中之一般實踐，GLP-1之胺基末端指定為編號7，且其羧基末端指定為編號37。GLP-1 (1-37)係不具有胰島素分泌功能之形式，可按照上述加工方式加工成活性形式的GLP-1 (7-37)，並可在體內進一步修飾，使得去除C端的甘胺酸殘基並用醯胺基團取代，變成GLP-1 (7-36)醯胺(SEQ ID NO: 1之胺基酸序列)。
除非另有說明，否則「GLP-1」或「類升糖素胜肽-1」係指自任何脊椎動物來源獲得的任何野生型GLP-1，該等脊椎動物來源包括哺乳動物，例如靈長類動物(例如人類)及嚙齒動物(例如，小鼠及大鼠)。GLP-1可以自動物細胞中獲得，但亦包括自能夠產生GLP-1之重組細胞中獲得之彼等細胞。此外，GLP-1可以係野生型GLP-1或其變異體。
如本文所用，術語「介白素-1受體拮抗劑(IL-1受體拮抗劑)」或「IL-1Ra」係指抑制以IL-1α及IL-1β二種形式存在的IL-1的拮抗劑，且IL-1Ra在結構上與IL-1α及IL-1β相似，因此與IL-1受體(IL-1R)競爭性結合以抑制炎性細胞激素IL-1。因此，IL-1Ra被認為在預防由IL-1引起的疾病中發揮重要作用。同時，已知IL-1Ra在2型糖尿病及動脈粥樣硬化中具有重要的病理生理作用。具體言之，IL-1Ra可以具有SEQ ID NO: 8的胺基酸序列，但不限於此。
在本說明書中，IL-1受體拮抗劑(IL-1Ra)或其片段可以統稱為術語「IL-1Ra」。IL-1Ra及IL-1Ra片段與例如IL-1受體(IL-1R，介白素-1受體)特異性結合。此特異性結合可以利用熟習此項技術者已知的方法來確認。
如本文所用，術語「IL-1Ra片段」係指IL-1Ra之裂解形式，並且可以包含其中全長IL-1Ra之N端或C端的一部分被截斷的片段。此外，IL-1Ra片段可與「IL-1Ra變異體」在同一情形下使用，係指全長IL-1Ra的一些胺基酸被取代、缺失、添加及/或插入。亦即，IL-1Ra變異體可以具有與野生型IL-1Ra不同的胺基酸序列。然而，IL-1Ra變異體可能具有與野生型IL-1Ra等效或相似的活性。在此，「IL-1Ra活性」可以指例如與IL-1受體的特異性結合，並且此特異性結合可以利用熟習此項技術者已知的方法量測。
具體言之，IL-1Ra變異體可以藉由缺失、修飾、取代及/或添加野生型IL-1Ra的一些胺基酸來獲得，並且可以利用熟習此項技術者已知的方法製備。IL-1Ra變異體可以含有野生型IL-1Ra的至少5個胺基酸、至少10個胺基酸、至少15個胺基酸、至少20個胺基酸、至少30個胺基酸、至少40個胺基酸、至少50個胺基酸、至少60個胺基酸、至少70個胺基酸、至少80個胺基酸、至少90個胺基酸或至少100個胺基酸。
除非另有說明，否則「IL-1Ra」或「IL-1受體拮抗劑(IL-1Ra)」係指自任何脊椎動物來源獲得的任何野生型IL-1Ra，該等脊椎動物來源包括哺乳動物，例如靈長類動物(例如人類)及嚙齒動物(例如，小鼠及大鼠)。IL-1Ra可以自動物細胞中獲得，但亦包括自能夠產生IL-1Ra之重組細胞中獲得之彼等細胞。此外，IL-1Ra可以係野生型IL-1Ra或其片段。
融合蛋白可以包含免疫球蛋白Fc區。在此，免疫球蛋白之Fc區域係指包括免疫球蛋白之重鏈恆定區2 (CH2)及重鏈恆定區3 (CH3)且不包括免疫球蛋白之重鏈及輕鏈可變區及輕鏈恆定區1 (CL1)的蛋白。免疫球蛋白可以係IgG、IgA、IgE、IgD或IgM，且較佳係IgG4。
此外，免疫球蛋白之Fc區域可以係Fc區域變異體以及野生型Fc區域。此外，如本文所用，術語「Fc區域變異體」可以指在醣基化模式方面與野生型Fc區域不同的形式，與野生型Fc區域相比具有高醣基化，或與野生型Fc區域相比具有低醣基化，或係無醣基化形式。此外，其中包括無醣基化的Fc區域。Fc區域或其變異體可以經由培養條件或宿主基因操控加以調適以具有經調整之數目個唾液酸、岩藻醣基化、或醣基化。
此外，免疫球蛋白之Fc區域的醣基化可以藉由習知方法進行修飾，諸如化學方法、酶促方法及使用微生物之基因工程化方法。此外，Fc區域變異體可以係免疫球蛋白IgG、IgA、IgE、IgD或IgM的各別Fc區的混合形式。另外，Fc區域變異體可以呈其中Fc區域之一些胺基酸被其他胺基酸取代的形式。在一實施例中，Fc區域變異體可以具有SEQ ID NO: 6之胺基酸序列。
具體言之，融合蛋白可由結構式(I)或(II)組成。 N'-X-[連接子(1)]n-Fc區片段或其變異體-[連接子(2)]m-Y-C'(I) N'-Y-[連接子(1)]n-Fc區片段或其變異體-[連接子(2)]m-X-C'(II) 在此，在結構式(I)及(II)中， N'係融合蛋白之N端， C'係融合蛋白之C端， X係GLP-1或其變異體， Y係IL-1受體拮抗劑或其片段， 連接子(1)及連接子(2)係胜肽連接子，並且
n及m各自獨立地係0或1。
在此，GLP-1或其變異體及IL-1受體拮抗劑或其片段如上所述。
在此，胜肽連接子(1)可由5至80個連續胺基酸、10至70個連續胺基酸、15至60個連續胺基酸、20至50個連續胺基酸或25至40個胺基酸組成。在一實施例中，胜肽連接子(1)可由30個胺基酸組成。此外，胜肽連接子(1)可以含有至少一個半胱胺酸。具體言之，胜肽連接子(1)可以含有一個、二個或三個半胱胺酸。此外，胜肽連接子(1)可以衍生自免疫球蛋白之鉸鏈。在一實施例中，胜肽連接子(1)可以係由SEQ ID NO: 5之胺基酸序列組成的胜肽連接子。
胜肽連接子(2)可由1至50個連續胺基酸、3至30個連續胺基酸或5至20個胺基酸組成。胜肽連接子(2)可以包括(G 4S)n (在此，n係1至10的整數)，並且可以進一步包括(G)n。在此，(G 4S)n及(G)n中的n可以各自獨立地係1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一實施例中，胜肽連接子(2)可以係由SEQ ID NO: 7之胺基酸序列組成的胜肽連接子。
構成融合蛋白之各區域的胺基酸序列如下表1所示。此外，在一實施例中，GI-210B1 (GLP-1-IgG4 Fc-IL-1Ra)可以具有SEQ ID NO:10之胺基酸序列。 [表1]
分類 胺基酸序列 SEQ ID NO:
hGLP-1 HAEGTFTSDV SSYLEGQAAK EFIAWLVKGR 1
GLP-1變異體-1 HGEGTFTSDV SSYLEEQAAK EFIAWLVKGG G 2
GLP-1變異體-2 HGEGTFTSDL SKQMEEEAVR LFIEWLKNGG PSSGAPPPS 3
GLP-1變異體-3 HAEGTFTSDV SSYLEGQAAK EFIAWLVRGR G 4
第一連接子 GGGGSGGGGS GGGGSGGAES KYGPPCPPCP 5
hIgG4 Fc APEAAGGPSVFLFPPKPKDQLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVLHEALHNHYTQKSLSLSLG 6
第二連接子 GGGGSGGGGSGGGGSGG 7
IL-1Ra RPSGRKSSKMQAFRIWDVNQKTFYLRNNQLVAGYLQGPNVNLEEKIDVVPIEPHALFLGIHGGKMCLSCVKSGDETRLQLEAVNITDLSENRKQDKRFAFIRSDSGPTTSFESAACPGWFLCTAMEADQPVSLTNMPDEGVMVTKFYFQEDE 8
GI-210B1 (GLP-1-IgG4 Fc-IL-1Ra) HGEGTFTSDV SSYLEEQAAK EFIAWLVKGG G GGGGSGGGGSGGGGSGGAESKYGPPCPPCP APEAAGGPSVFLFPPKPKDQLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVLHEALHNHYTQKSLSLSLG GGGGSGGGGSGGGGSGG RPSGRKSSKMQAFRIWDVNQKTFYLRNNQLVAGYLQGPNVNLEEKIDVVPIEPHALFLGIHGGKMCLSCVKSGDETRLQLEAVNITDLSENRKQDKRFAFIRSDSGPTTSFESAACPGWFLCTAMEADQPVSLTNMPDEGVMVTKFYFQEDE 10
融合蛋白二聚體
在本發明之另一態樣中，提供了一種融合蛋白二聚體，其中結合了二個融合蛋白。在此，融合蛋白可以被包括在連接GLP-1或其變異體與免疫球蛋白Fc區之連接子中的半胱胺酸結合。在此，連接子可以包括免疫球蛋白之鉸鏈區。 編碼融合蛋白之多核苷酸
在本發明之又另一態樣中，提供了編碼包含GLP-1或其變異體及IL-1受體拮抗劑(IL-1Ra)或其片段之融合蛋白的多核苷酸。在此，在一實施例中，多核苷酸可以具有SEQ ID NO: 18或SEQ ID NO: 20。
GLP-1或其變異體及IL-1受體拮抗劑或其片段如上所述。
多核苷酸可進一步含有信號序列或前導序列。如本文所用，術語「信號序列」係指編碼指導目標蛋白分泌之信號胜肽的核酸。信號胜肽在宿主細胞中轉譯且隨後裂解。具體言之，根據本發明之信號序列係編碼啟動蛋白質跨內質網(ER)膜遷移之胺基酸序列的核苷酸。
信號序列因其特徵而為此項技術中所熟知。此類信號序列通常含有16至30個胺基酸殘基，且可含有比此類胺基酸殘基更多或更少的胺基酸殘基。典型的信號胜肽係由三個區構成：亦即鹼性N端區、中心疏水區及更具極性之C端區。中心疏水區含有4至12個疏水性殘基，其使得信號序列在不成熟多肽經由膜脂質雙層遷移期間得以固定。
啟動後，信號序列在ER腔內由通常稱為信號胜肽酶之細胞酶裂解。在此，信號序列可以係tPa (血纖維蛋白溶酶原活化)的分泌信號序列、HSV gD (單純疱疹病毒醣蛋白D之信號序列)、IgG信號序列或生長激素。較佳地，可以使用在包括哺乳動物及其類似動物在內之高等真核細胞中使用的分泌信號序列。
可用於本發明之信號序列包括抗體之輕鏈信號序列，諸如14.18抗體(Gillies等人, J. Immunol. Meth 1989. 125: 191-202)；抗體之重鏈信號序列，諸如MOPC141抗體之重鏈信號序列(Sakano等人, Nature, 1980. 286: 676-683)；以及此項技術中已知的其他信號序列(參見例如，Watson等人, Nucleic Acid Research, 1984, 12: 5145-5164)。在一實施例中，將由SEQ ID NO: 9之胺基酸組成的信號序列用作信號序列。 攜帶多核 苷酸之載體
在本發明之再另一態樣中，提供了一種表現載體，其包括編碼包含GLP-1或其變異體及IL-1受體拮抗劑或其片段之融合蛋白的多核苷酸。在此，多核苷酸可以具有SEQ ID NO: 18之序列。
如本文所用，術語「載體」旨在引入宿主細胞並能夠與宿主細胞基因體重組並插入其中。或者，載體係游離基因體(episome)並且被理解為含有可以自主複製之核苷酸序列的核酸單元。在此，載體可以與合適的啟動子可操作地連接，使得多核苷酸可以在宿主細胞中表現。載體包括線性核酸、質體、噬菌粒、黏接質體、RNA載體、病毒載體、微小染色體及其類似物。病毒載體之實例包括(但不限於)反轉錄病毒、腺病毒及腺相關病毒。此外，質體可以包括諸如抗生素抗性基因之可篩選標記，並且可以在選擇性條件下培養攜帶該質體的宿主細胞。
如本文所用，術語目標蛋白之「基因表現」或「表現」應理解為意謂DNA序列之轉錄、mRNA轉錄物之轉譯及融合蛋白產物或其片段之分泌。有用的表現載體可以係RcCMV (Invitrogen, Carlsbad)或其變異體。表現載體可以進一步含有促進哺乳動物細胞中目標基因連續轉錄之人巨細胞病毒(CMV)啟動子，以及提高轉錄後RNA穩態位準之牛生長激素多腺苷酸化信號序列。 表現融合蛋白之經轉型細胞
在本發明之又再另一態樣中，提供了一種經轉型細胞，其中引入了包括編碼融合蛋白之多核苷酸的表現載體，該融合蛋白包含GLP-1或其變異體及IL-1受體拮抗劑或其片段。
如本文所用，術語「經轉型細胞」係指其中可以引入重組表現載體之原核細胞或真核細胞。經轉型細胞可以藉由將載體引入宿主細胞以轉型宿主細胞來製備。此外，根據發明之融合蛋白可以藉由表現載體中包括的多核苷酸來生產。
可以利用各種方法進行轉型。方法沒有特別限制，只要可以由此產生根據本發明之融合蛋白即可。具體而言，作為轉型方法，可以使用CaCl 2沈澱；效率已藉由在CaCl 2沈澱中使用諸如二甲亞碸(DMSO)之還原劑提高的哈納罕法(Hanahan method)；電穿孔；磷酸鈣沈澱；原生質體融合；使用碳化矽纖維之攪拌；農桿菌介導之轉型；使用PEG之轉型；硫酸葡聚糖；脂染胺(lipofectamine)；乾燥/抑制介導之轉型；及其類似方法。此外，可以使用感染作為手段並使用病毒顆粒將目標遞送至細胞中。另外，亦可以將載體引入宿主細胞，亦可以使用基因轟擊或其類似方式。
此外，用於產生經轉型細胞之宿主細胞亦沒有特別限制，只要宿主細胞能夠產生根據本發明之融合蛋白即可。具體言之，宿主細胞可以包括原核細胞、真核細胞以及哺乳動物、植物、昆蟲、真菌或任何細胞來源之細胞。作為原核細胞之實例，可以使用大腸桿菌( Escherichia coli)。此外，作為真核細胞之實例，可以使用酵母。此外，對於哺乳動物細胞、可以使用CHO細胞、F2N細胞、COS細胞、BHK細胞、Bowes黑色素瘤細胞、HeLa細胞、911細胞、AT1080細胞、A549細胞、SP2/0細胞、人類類淋巴母細胞、NSO細胞、HT-1080細胞、PERC.6細胞、HEK293細胞、HEK293T細胞或其類似細胞。然而，哺乳動物細胞不限於此，熟習此項技術者已知的可用作哺乳動物宿主細胞之任何細胞均可以使用。 製備融合蛋白之方法
在本發明之又再另一態樣中，提供了一種製備包含GLP-1或其變異體及IL-1受體拮抗劑或其片段之融合蛋白二聚體的方法。
製備融合蛋白之方法可以包括(i)培養經轉型細胞；及(ii)收集包含GLP-1或其變異體及IL-1受體拮抗劑或其片段之融合蛋白二聚體。
如本文所用，術語「培養」係指在適當控制的環境條件下人工生長微生物之方法。
可以使用此項技術中熟知的方法培養經轉型細胞。具體言之，培養沒有特別限制，只要根據本發明之融合蛋白可以藉由表現產生即可。具體言之，培養可在分批製程中進行或在分批補料或反覆分批補料製程中連續進行。
此外，可以藉由此項技術中已知的方法自培養物中收集融合蛋白。具體言之，收集方法沒有特別限制，只要可以收集根據本發明產生之融合蛋白即可。較佳地，收集方法可以係諸如離心、過濾、萃取、噴霧、乾燥、蒸發、沈澱、結晶、電泳、分級溶解(例如硫酸銨沈澱)或層析(例如離子交換、親和、疏水性及尺寸排阻)之方法。 融合蛋白二聚體之用途
在本發明之又再另一態樣中，提供了用於預防或治療代謝性疾病的包含融合蛋白二聚體之醫藥組合物。在此，醫藥組合物之用途可以用於預防或治療代謝性疾病。
如上所述，融合蛋白可以包含GLP-1或其變異體及IL-1受體拮抗劑或其片段。
如本文所用，術語「代謝性疾病」係由體內代謝紊亂引起的疾病的總稱，代謝性疾病可選自由以下組成之群：糖尿病、肥胖症、高脂血症、高血壓、動脈硬化及高胰島素血症，但不限於此。
醫藥組合物之較佳劑量視患者之病狀及體重，疾病的嚴重程度，藥物形式及投藥途徑及持續時間而變化，並且可以由熟習此項技術者適當地選擇。在根據本發明之用於治療或預防代謝性疾病之醫藥組合物中，視應用、劑型、摻合目的或其類似因素而定，可以含有任何量(有效量)的融合蛋白，只要融合蛋白二聚體可以表現出治療代謝性疾病的活性，或特定言之對諸如糖尿病及肥胖症之疾病的治療效果，且其習知有效量以組合物的總重量計將確定在0.001 wt%至20.0 wt%的範圍內。在此，術語「有效量」係指能夠誘導改善或治療疾病之效果，且特定言之改善或治療諸如糖尿病及肥胖症之代謝性疾病的效果的活性成分的量。熟習此項技術者可在常識範圍內以實驗方式確定此類有效量。
如本文所用，術語「治療」可用於意謂治療性療法與預防性療法二者。在此，預防可用於意謂緩解或減輕個體之病理性病狀或疾病。在一實施例中，術語「療法」包括用於治療包括人類在內之哺乳動物之疾病的施藥或任何投藥形式。此外，該術語包括抑制或減緩疾病或疾病進展；且包括以下含義：恢復或修復受損或喪失的功能從而部分或完全緩解疾病；刺激低效過程；或緩解嚴重的疾病。
諸如生物可用度之藥物動力學參數及諸如清除率之基礎參數亦可能影響療效。因此，「增強的功效」(例如，功效的改進)可能係由於增強的藥物動力學參數及改進的功效，此可以藉由比較諸如測試動物或人類個體之清除率及代謝性疾病之治療或改善的參數來量測。
同時，根據本發明之醫藥組合物以「治療有效量」投與。
如本文所使用，術語「投與」係指藉由適當方法向個體引入預定物質，且組合物之投與途徑可經由任何通用途徑，只要其可達至目標組織即可。其可以係腹膜內投與、靜脈內投與、肌肉內投與、皮下投與、皮內投與、局部投與、鼻內投與、肺內投與或直腸內投與，但不限於此。
如本文所用，術語「治療有效量」或「醫藥學有效量」係指有效預防或治療所討論疾病之化合物或組合物的量，其足以以適用於醫學治療的合理益處/風險比治療該疾病，且不會造成不良反應。有效量之位準可以根據包括患者健康狀況、疾病類型及嚴重程度、藥物活性、患者對藥物的敏感性、投藥方式、投藥時間、投藥途徑及排泄率、治療持續時間、配方或同時使用的藥物、以及其他醫學領域眾所周知的因素在內的因素確定。在一實施例中，治療有效量意謂有效治療代謝性疾病之藥物量。
在此，醫藥組合物可以進一步包含醫藥學上可接受之載劑。醫藥學上可接受的載劑可以係任何載劑，只要該載劑為適用於遞送至患者之無毒物質即可。蒸餾水、酒精、脂肪、蠟及惰性固體可作為載劑包含在內。醫藥組合物中亦可以含有醫藥學上可接受之佐劑(緩衝劑、分散劑)。
具體言之，藉由包括醫藥學上可接受的載劑，可以使用此項技術中已知的習知方法根據其投與途徑將醫藥組合物製備成非經腸調配物。在此，術語「醫藥學上可接受之」係指載劑的毒性不超過待施用(開處)之個體能夠適應的毒性，同時不抑制活性成分之活性。
當醫藥組合物被製備成非經腸調配物時，其可根據此項技術中已知之方法、使用適合載劑製備成呈注射劑、經皮貼片、鼻吸入劑或栓劑形式的製劑。在製成注射劑的情況下，可以使用無菌水、乙醇、諸如甘油或丙二醇之多元醇、或其混合物作為合適的載劑；並且可以較佳使用等張溶液，諸如林格氏溶液(Ringer's solution)、含有三乙醇胺的磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)或無菌注射用水及5%葡萄糖或其類似溶液。醫藥組合物的調配係此項技術中已知的，且具體可參考Remington's Pharmaceutical Sciences (第19版, 1995)或其類似文獻。該文件被視為本說明書的一部分。
醫藥組合物之較佳劑量範圍可為每天0.01 μg/kg至10 g/kg，或0.01 mg/kg至1 g/kg，取決於患者之病狀、體重、性別、年齡、患者的嚴重程度及投藥途徑。劑量可一天投與一次或可分成一天若干次。此類劑量在任何態樣中不應解釋為限制本發明之範圍。
可施用(開處)醫藥組合物之個體為哺乳動物及人類，尤其較佳地為人類。根據本發明之醫藥組合物可以進一步含有已知對代謝性疾病具有治療作用的任何化合物或天然提取物。
在本發明之又再另一態樣中，提供了融合蛋白二聚體在製造供治療或預防代謝性疾病用之藥物中的用途。
在本發明之又再另一態樣中，提供了融合蛋白二聚體用於治療或預防代謝性疾病的用途。在此，融合蛋白二聚體、代謝性疾病、預防及治療如上所述。
在本發明之又再另一態樣中，提供了一種預防或治療代謝性疾病的方法，該方法包括向個體投與融合蛋白二聚體。在此，融合蛋白二聚體、投與、代謝性疾病、預防及治療如上所述。個體可以係哺乳動物，較佳係人。此外，個體可以係患有代謝性疾病之患者，或者更可能患有代謝性疾病之個體。
融合蛋白二聚體的投與途徑、劑量及投與頻率可根據患者的病狀及是否存在副作用而變化，因此融合蛋白二聚體可以以各種方式及量投與個體，而熟習此項技術者可以在適當的範圍內選擇最佳的投與方法、劑量及投與頻率。此外，融合蛋白二聚體可以與已知對代謝性疾病具有治療作用的任何化合物或天然提取物組合投與，或者可以與其他藥物以組合製劑的形式調配。 實施本發明之方式
在下文中，將利用以下實例更詳細地描述本發明。此等實例僅用於說明本發明，且一般熟習此項技術者將顯而易見，本發明之範圍不應被解釋為受此等實施例限制。 製備實例1. 製備GLP-1-IgG4 Fc-IL-1Ra 融合蛋白二聚體：GI-210B1
為了產生包含類升糖素胜肽-1 (GLP-1)、Fc區域及介白素-1受體拮抗劑(IL-1受體拮抗劑，IL-1Ra)的融合蛋白二聚體，將編碼包含GLP-1 (SEQ ID NO:2)、NL028鉸鏈連接子(SEQ ID NO:5)、IgG4 Fc區域(SEQ ID NO:6)、連接子(SEQ ID NO: 7)及IL-1Ra (SEQ ID NO: 8)之融合蛋白(圖1)的多核苷酸(SEQ ID NO:20)插入至pcDNA3.4載體(Genscript)中。將該載體引入CHO細胞(ExpiCHO-S細胞)中以表現具有SEQ ID NO: 10之胺基酸序列的融合蛋白。在引入載體之後，在37℃及8% CO 2濃度的無血清ExpiCHO TM表現培養基(Thermo Fisher Scientific, Inc.)中培養14天。接著，收穫培養物，且使用親和層析(親和純化管柱)自其中純化融合蛋白。
使純化的融合蛋白經歷SDS-PAGE及西方墨點法以確認其分子量及純度。作為SDS-PAGE及西方墨點法分析之結果，確認在非還原條件及還原條件下偵測到蛋白質。由此，發現純化的融合蛋白形成二聚體(圖2及3)。融合蛋白二聚體被命名為「GI-210B1 (亦稱為GLP-1-IgG4 Fc-IL-1Ra)」。 製備實例2. 製備GLP-1-IgG4 Fc 融合蛋白二聚體
為了產生作為對照組的包含類升糖素胜肽-1 (GLP-1)及Fc區域的融合蛋白二聚體，將編碼包含GLP-1 (SEQ ID NO: 2)、NL028鉸鏈連接子(SEQ ID NO: 5)及IgG4 Fc區域(SEQ ID NO: 6)的融合蛋白的多核苷酸(SEQ ID NO: 23)插入至pcDNA3.4載體(Genscript)中。將該載體引入CHO細胞(ExpiCHO-S細胞)中以表現具有SEQ ID NO: 22之胺基酸序列的融合蛋白。在引入載體之後，在37℃及8% CO 2濃度的無血清ExpiCHO TM表現培養基(Thermo Fisher Scientific, Inc.)中培養14天。接著，收穫培養物，且使用親和層析(親和純化管柱)自其中純化融合蛋白。 實驗實例1. 鑑別GI-210B1 融合蛋白二聚體與IL-1Rα 之結合能力
量測利用製備實例1之方法獲得的GI-210B1與介白素-1受體α (IL-1Rα)的結合能力。在此，使用Octet RED384 (ForteBio)檢查了與IL-1Rα的結合能力。將第2代胺反應性(AR2G)生物感測器浸入1X動力學緩衝液中10分鐘，接著使用。IL-1Rα (R&D systems)製備為1 μg/ml，生物感測器用IL-1Rα塗佈，將GI-210B1系列稀釋至15.6至1,000 nM，接著量測各濃度下的結合能力。GI-210B1與IL-1Rα的結合能力如圖4及下表2所示。 [表2]
K a(締合速率，1/Ms) K d(解離速率，1/s) K D(K d/K a，M)
2.20E+04 9.30E-03 423  nM
實驗實例2. 鑑別GI-210B1 融合蛋白二聚體之IL-1Ra 功效
確認了GI-210B1作為IL-1受體拮抗劑(IL-1Ra)之功效。第一天，在培養基(RPMI-1640+10% FBS+1%青黴素/鏈黴素+0.05 nM 2-巰基乙醇)中培養THP-1細胞(ATCC)。在分析之前，THP-1細胞經由以1,500 rpm離心5分鐘沈澱，除去培養基，接著使細胞重新懸浮。向96孔盤之每孔中接種3×10 5個細胞，接著向其中加入LPS (1 μg/ml)，且培養3小時。此後，將細胞用5 mM三磷酸腺苷(ATP)作為發炎體的誘導劑處理，並培養隔夜，發炎體係發炎反應之介體。經由以1,500 rpm離心5分鐘使上清液沈澱，並將所得上清液轉移至新管中並儲存。
第二天，在培養基(DMEM+10% FBS+1%青黴素/鏈黴素+100 μg/ml normocin)中培養HEK-Blue TM-IL-1β細胞(Invitrogen)。在分析之前，HEK-Blue TM-IL-1β細胞經由以1,500 rpm離心5分鐘沈澱，除去培養基，接著將細胞重新懸浮於分析培養基(RPMI-1640+10% FBS+1%青黴素/鏈黴素)中。將分析培養基中的4.5×10 4個細胞接種至96孔盤之各孔中，接著向其中加入不同濃度(0.2 ng/ml、2 ng/ml、20 ng/ml及200 ng/ml)的GI-210B1融合蛋白及50 μL THP-1上清液，並培養隔夜。
第三天，經由以1,500 rpm離心5分鐘使上清液沈澱，並將20 μL所得上清液及180 μl QUANTI-Blue溶液分配至96孔盤之各孔中，接著反應3小時。此後，使用讀盤器記錄在650 nm波長處的吸光度。使用GraphPad Prism軟體分析資料。結果，確認GI-210B1融合蛋白以濃度依賴性方式抑制IL-1信號傳導(圖5a及5b)。 實驗實例3. 鑑別GI-210B1 融合蛋白二聚體之GLP-1 功效
為了確認GI-210B1中所含GLP-1之功效，使用PC-12細胞進行實驗，PC-12細胞係細胞生長中依賴於GLP-1之細胞系。亦即，在PC-12細胞中量測由GI-210B1融合蛋白中所含之GLP-1介導的細胞增殖。
首先，在培養基(RPMI-1640+10% FBS+1%青黴素/鏈黴素)中培養PC-12細胞(ATCC，#CRL-1721 TM)。在分析之前，PC-12細胞經由以1,500 rpm離心5分鐘沈澱，除去培養基，接著將細胞重新懸浮在不含FBS之分析培養基中。將分析培養基中之5×10 4個細胞接種至96孔盤之各孔中。將不同濃度(0.1 nM、0.2 nM、0.4 nM、0.8 nM、1.6 nM、3.1 nM、6.25 nM、12.5 nM、25 nM、50 nM及100 nM)的GI-210B1融合蛋白加入各孔中。將分析盤在5% CO 2及37℃下培養24小時。此後，向每孔中加入10 μl WST-1 (Roche)並培養4小時。接著，使用讀盤器記錄450 nm波長處的吸光度。使用GraphPad Prism軟體分析資料。結果，發現GI-210B1融合蛋白以濃度依賴性方式促進PC-12細胞之生長(圖6)。 實驗實例4. 鑑別GI-210B1 融合蛋白二聚體抑制由棕櫚酸及油酸引起之肝細胞脂肪積聚的能力
為了確認GI-210B1是否抑制IL-1β誘導之肝細胞脂肪積聚，使用Huh1細胞作為肝細胞進行了實驗。Huh1細胞在5% CO 2及37℃的培育箱中使用培養基(DMEM+10% FBS+1%青黴素/鏈黴素)培養。在實驗中，使用0.05%胰蛋白酶-EDTA分離細胞，接著經由以1,500 rpm離心5分鐘沈澱。之後，將細胞重新懸浮於新鮮培養基中，向96孔盤之各孔中接種1×10 4個細胞，且培養24小時。為了誘導脂肪積聚，將100 μM棕櫚酸及200 μM油酸混合在2%無BSA血清的DMEM中，且在55℃下反應15分鐘，且用其處理時，亦分別用1 μg/ml IL-1Ra (peprotech，200-01RA)、3.6 μg/ml GLP-1-Fc或4.6 μg/ml GI-210B1處理細胞。在處理24小時之後，為了確認脂肪積聚的程度，細胞用4%多聚甲醛固定，且用BODIPY 493/503及DAPI染色，接著使用cytation 5成像設備量化每個細胞的脂肪積聚程度。結果確認，與IL-1Ra或GLP-1-Fc相比，GI-210B1融合蛋白顯著抑制由棕櫚酸及油酸誘導之脂肪積聚(圖7)。
(無)
圖1繪示GI-210B1 (GLP-1-IgG4 Fc-IL-1Ra)之結構，其係根據本發明之融合蛋白二聚體。 圖2係所製備的GI-210B1藉由SDS-PAGE確認的圖片。 圖3係所製備的GI-210B1藉由西方墨點法(western blot)確認的圖片。 圖4係顯示藉由量測GI-210B1與介白素1受體α (IL-1Rα)的結合能力所獲得之結果的圖。 圖5a繪示用於確認GI-210B1作為IL-1受體拮抗劑(IL-1Ra)之功效的實驗方法。 圖5b係顯示藉由確認GI-210B1作為IL-1受體拮抗劑(IL-1Ra)之功效所獲得之實驗結果的圖。 圖6係顯示藉由確認GI-210B1作為GLP-1激素的功效所獲得之結果的圖。 圖7係顯示藉由確認GI-210B1抑制由棕櫚酸及油酸引起之肝細胞中脂肪積聚之能力所獲得之結果的圖片及圖。 
                         序列表
          <![CDATA[<110>    南韓商GI醫諾微新股份有限公司 (GI Innovation, Inc.)]]>
          <![CDATA[<120>    包含類升糖素胜肽-1及介白素-1受體拮抗物的融合蛋白及其用途]]>
          <![CDATA[<140>    TW 110125394]]>
          <![CDATA[<141>    2021-07-09]]>
          <![CDATA[<150>    KR 10-2020-0085355]]>
          <![CDATA[<151>    2020-07-10]]>
          <![CDATA[<160>    23]]>
          <![CDATA[<170>    KoPatentIn 3.0]]>
          <![CDATA[<210>    1]]>
          <![CDATA[<211>    30]]>
          <![CDATA[<212>    PRT]]>
          <![CDATA[<213>    人工序列]]>
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          <![CDATA[<400>    1]]>
          His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly
            1               5                  10                  15 
          Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg
                       20                  25                  30
          <![CDATA[<210>    2]]>
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          <![CDATA[<400>    2]]>
          His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
            1               5                  10                  15 
          Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Gly Gly
                       20                  25                  30 
          <![CDATA[<210>    3]]>
          <![CDATA[<211>    39]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>    hGLP-1 mt-2(艾塞素-4(exendin-4))]]>
          <![CDATA[<400>    3]]>
          His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
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          Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
                       20                  25                  30 
          Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
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          <![CDATA[<223>    hGLP-1 mt-3(利拉魯肽)]]>
          <![CDATA[<400>    4]]>
          His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly
            1               5                  10                  15 
          Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Arg Gly Arg Gly
                       20                  25                  30 
          <![CDATA[<210>    5]]>
          <![CDATA[<211>    30]]>
          <![CDATA[<212>    PRT]]>
          <![CDATA[<213>    人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>    NL028鉸鏈連接子]]>
          <![CDATA[<400>    5]]>
          Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
            1               5                  10                  15 
          Gly Ala Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro
                       20                  25                  30
          <![CDATA[<210>    6]]>
          <![CDATA[<211>    216]]>
          <![CDATA[<212>    PRT]]>
          <![CDATA[<213>    人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>    hIgG4Fc]]>
          <![CDATA[<400>    6]]>
          Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
            1               5                  10                  15 
          Pro Lys Asp Gln Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
                       20                  25                  30 
          Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr
                   35                  40                  45 
          Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
               50                  55                  60 
          Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
           65                  70                  75                  80 
          Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
                           85                  90                  95 
          Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
                      100                 105                 110 
          Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met
                  115                 120                 125 
          Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
              130                 135                 140 
          Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
          145                 150                 155                 160 
          Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
                          165                 170                 175 
          Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val
                      180                 185                 190 
          Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
                  195                 200                 205 
          Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly
              210                 215    
          <![CDATA[<210>    7]]>
          <![CDATA[<211>    17]]>
          <![CDATA[<212>    PRT]]>
          <![CDATA[<213>    人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>    (G4S)3GG連接子]]>
          <![CDATA[<400>    7]]>
          Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
            1               5                  10                  15 
          Gly
          <![CDATA[<210>    8]]>
          <![CDATA[<211>    152]]>
          <![CDATA[<212>    PRT]]>
          <![CDATA[<213>    人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>    IL-1Ra]]>
          <![CDATA[<400>    8]]>
          Arg Pro Ser Gly Arg Lys Ser Ser Lys Met Gln Ala Phe Arg Ile Trp
            1               5                  10                  15 
          Asp Val Asn Gln Lys Thr Phe Tyr Leu Arg Asn Asn Gln Leu Val Ala
                       20                  25                  30 
          Gly Tyr Leu Gln Gly Pro Asn Val Asn Leu Glu Glu Lys Ile Asp Val
                   35                  40                  45 
          Val Pro Ile Glu Pro His Ala Leu Phe Leu Gly Ile His Gly Gly Lys
               50                  55                  60 
          Met Cys Leu Ser Cys Val Lys Ser Gly Asp Glu Thr Arg Leu Gln Leu
           65                  70                  75                  80 
          Glu Ala Val Asn Ile Thr Asp Leu Ser Glu Asn Arg Lys Gln Asp Lys
                           85                  90                  95 
          Arg Phe Ala Phe Ile Arg Ser Asp Ser Gly Pro Thr Thr Ser Phe Glu
                      100                 105                 110 
          Ser Ala Ala Cys Pro Gly Trp Phe Leu Cys Thr Ala Met Glu Ala Asp
                  115                 120                 125 
          Gln Pro Val Ser Leu Thr Asn Met Pro Asp Glu Gly Val Met Val Thr
              130                 135                 140 
          Lys Phe Tyr Phe Gln Glu Asp Glu
          145                 150        
          <![CDATA[<210>    9]]>
          <![CDATA[<211>    19]]>
          <![CDATA[<212>    PRT]]>
          <![CDATA[<213>    人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>    mIgG信號]]>
          <![CDATA[<400>    9]]>
          Met Glu Trp Ser Trp Val Phe Leu Phe Phe Leu Ser Val Thr Thr Gly
            1               5                  10                  15 
          Val His Ser
          <![CDATA[<210>    10]]>
          <![CDATA[<211>    446]]>
          <![CDATA[<212>    PRT]]>
          <![CDATA[<213>    人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>    GI-210B1(GLP-1-IgG4 Fc-IL-1Ra)]]>
          <![CDATA[<400>    10]]>
          His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
            1               5                  10                  15 
          Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Gly Gly Gly
                       20                  25                  30 
          Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
                   35                  40                  45 
          Ala Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
               50                  55                  60 
          Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
           65                  70                  75                  80 
          Gln Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
                           85                  90                  95 
          Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
                      100                 105                 110 
          Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn
                  115                 120                 125 
          Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
              130                 135                 140 
          Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro
          145                 150                 155                 160 
          Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
                          165                 170                 175 
          Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn
                      180                 185                 190 
          Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
                  195                 200                 205 
          Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
              210                 215                 220 
          Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg
          225                 230                 235                 240 
          Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys
                          245                 250                 255 
          Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
                      260                 265                 270 
          Ser Leu Ser Leu Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
                  275                 280                 285 
          Gly Gly Gly Ser Gly Gly Arg Pro Ser Gly Arg Lys Ser Ser Lys Met
              290                 295                 300 
          Gln Ala Phe Arg Ile Trp Asp Val Asn Gln Lys Thr Phe Tyr Leu Arg
          305                 310                 315                 320 
          Asn Asn Gln Leu Val Ala Gly Tyr Leu Gln Gly Pro Asn Val Asn Leu
                          325                 330                 335 
          Glu Glu Lys Ile Asp Val Val Pro Ile Glu Pro His Ala Leu Phe Leu
                      340                 345                 350 
          Gly Ile His Gly Gly Lys Met Cys Leu Ser Cys Val Lys Ser Gly Asp
                  355                 360                 365 
          Glu Thr Arg Leu Gln Leu Glu Ala Val Asn Ile Thr Asp Leu Ser Glu
              370                 375                 380 
          Asn Arg Lys Gln Asp Lys Arg Phe Ala Phe Ile Arg Ser Asp Ser Gly
          385                 390                 395                 400 
          Pro Thr Thr Ser Phe Glu Ser Ala Ala Cys Pro Gly Trp Phe Leu Cys
                          405                 410                 415 
          Thr Ala Met Glu Ala Asp Gln Pro Val Ser Leu Thr Asn Met Pro Asp
                      420                 425                 430 
          Glu Gly Val Met Val Thr Lys Phe Tyr Phe Gln Glu Asp Glu
                  435                 440                 445 
          <![CDATA[<210>    11]]>
          <![CDATA[<211>    90]]>
          <![CDATA[<212>    DNA]]>
          <![CDATA[<213>    人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>    hGLP-1]]>
          <![CDATA[<400>    11]]>
          catgccgagg gcacctttac ctccgacgtg tcctcctact tggaggaaca ggccgccaaa         60
          gagtttatcg cctggctggt caaaggtagg                                          90
          <![CDATA[<210>    12]]>
          <![CDATA[<211>    93]]>
          <![CDATA[<212>    DNA]]>
          <![CDATA[<213>    人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>    hGLP-1 mt-1]]>
          <![CDATA[<400>    12]]>
          catggcgagg gcacctttac ctccgacgtg tcctcctact tggaggaaca ggccgccaaa         60
          gagtttatcg cctggctggt caaaggtggc ggc                                      93
          <![CDATA[<210>    13]]>
          <![CDATA[<211>    90]]>
          <![CDATA[<212>    DNA]]>
          <![CDATA[<213>    人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>    NL028鉸鏈連接子]]>
          <![CDATA[<400>    13]]>
          ggaggcggag gatccggtgg tggtggatct ggtggcggag gttctggcgg agctgagtct         60
          aagtatggcc ctccttgtcc tccatgtcct                                          90
          <![CDATA[<210>    14]]>
          <![CDATA[<211>    648]]>
          <![CDATA[<212>    DNA]]>
          <![CDATA[<213>    人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>    hIgG4Fc]]>
          <![CDATA[<400>    14]]>
          gctccagaag ctgctggcgg gccctccgtg tttctgttcc ctccaaagcc taaggaccag         60
          ctgatgatct ctcggacccc tgaagtgacc tgcgtggtgg tcgatgtgtc ccaagaggac        120
          cctgaggtgc agttcaattg gtacgtggac ggcgtggaag tgcacaacgc caagaccaag        180
          cctagagagg aacagttcaa ctccacctac agagtggtgt ccgtgctgac cgtgctgcac        240
          caggattggc tgaacggcaa agagtacaag tgcaaggtgt ccaacaaggg cctgccttcc        300
          agcatcgaaa agaccatctc caaggccaag ggccagccta gggaacccca ggtttacacc        360
          ctgcctccaa gccaagagga aatgaccaag aaccaggtgt ccctgacctg cctggtcaag        420
          ggcttctacc cttccgacat tgccgtggaa tgggagagca atggccagcc tgagaacaac        480
          tacaagacca cacctcctgt gctggactcc gacggctcct tctttctgta ctcccgcctg        540
          accgtggaca agtccagatg gcaagagggc aacgtgttct cctgctctgt gctgcacgag        600
          gccctgcaca atcactacac ccagaagtcc ctcagcctgt cccttgga                     648
          <![CDATA[<210>    15]]>
          <![CDATA[<211>    51]]>
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          <![CDATA[<213>    人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>    (G4S)3GG連接子]]>
          <![CDATA[<400>    15]]>
          ggtggtggcg gctctggcgg tggcggaagt ggcggaggtg gatccggagg t                  51
          <![CDATA[<210>    16]]>
          <![CDATA[<211>    456]]>
          <![CDATA[<212>    DNA]]>
          <![CDATA[<213>    人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>    IL-1Ra]]>
          <![CDATA[<400>    16]]>
          agaccttctg gccggaagtc ctctaagatg caggccttca gaatctggga cgtgaaccag         60
          aaaaccttct acctgcggaa caaccagctc gtggccggct atctccaggg acctaacgtg        120
          aacctggaag agaagatcga cgtggtgccc atcgagcccc acgctctgtt tttgggaatc        180
          cacggcggca agatgtgcct gtcctgtgtg aagtctggcg acgagacacg gttgcagctg        240
          gaagccgtga acatcaccga cctgtccgag aaccggaagc aggacaagag attcgccttc        300
          atcagatccg acagcggccc taccacctcc ttcgagtctg ctgcttgtcc aggctggttc        360
          ctgtgcaccg ccatggaagc tgaccagcct gtgtctctga ccaacatgcc tgacgagggc        420
          gtgatggtca ccaagttcta cttccaagag gatgag                                  456
          <![CDATA[<210>    17]]>
          <![CDATA[<211>    57]]>
          <![CDATA[<212>    DNA]]>
          <![CDATA[<213>    人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>    mIgG信號]]>
          <![CDATA[<400>    17]]>
          atggaatggt cctgggtgtt cctgttcttc ctgtccgtga ccaccggcgt gcactct            57
          <![CDATA[<210>    18]]>
          <![CDATA[<211>    1395]]>
          <![CDATA[<212>    DNA]]>
          <![CDATA[<213>    人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>    編碼具有信號胜肽之GI-210B1之多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>    18]]>
          atggaatggt cctgggtgtt cctgttcttc ctgtccgtga ccaccggcgt gcactctcat         60
          ggcgagggca cctttacctc cgacgtgtcc tcctacttgg aggaacaggc cgccaaagag        120
          tttatcgcct ggctggtcaa aggtggcggc ggaggcggag gatccggtgg tggtggatct        180
          ggtggcggag gttctggcgg agctgagtct aagtatggcc ctccttgtcc tccatgtcct        240
          gctccagaag ctgctggcgg gccctccgtg tttctgttcc ctccaaagcc taaggaccag        300
          ctgatgatct ctcggacccc tgaagtgacc tgcgtggtgg tcgatgtgtc ccaagaggac        360
          cctgaggtgc agttcaattg gtacgtggac ggcgtggaag tgcacaacgc caagaccaag        420
          cctagagagg aacagttcaa ctccacctac agagtggtgt ccgtgctgac cgtgctgcac        480
          caggattggc tgaacggcaa agagtacaag tgcaaggtgt ccaacaaggg cctgccttcc        540
          agcatcgaaa agaccatctc caaggccaag ggccagccta gggaacccca ggtttacacc        600
          ctgcctccaa gccaagagga aatgaccaag aaccaggtgt ccctgacctg cctggtcaag        660
          ggcttctacc cttccgacat tgccgtggaa tgggagagca atggccagcc tgagaacaac        720
          tacaagacca cacctcctgt gctggactcc gacggctcct tctttctgta ctcccgcctg        780
          accgtggaca agtccagatg gcaagagggc aacgtgttct cctgctctgt gctgcacgag        840
          gccctgcaca atcactacac ccagaagtcc ctcagcctgt cccttggagg tggtggcggc        900
          tctggcggtg gcggaagtgg cggaggtgga tccggaggta gaccttctgg ccggaagtcc        960
          tctaagatgc aggccttcag aatctgggac gtgaaccaga aaaccttcta cctgcggaac       1020
          aaccagctcg tggccggcta tctccaggga cctaacgtga acctggaaga gaagatcgac       1080
          gtggtgccca tcgagcccca cgctctgttt ttgggaatcc acggcggcaa gatgtgcctg       1140
          tcctgtgtga agtctggcga cgagacacgg ttgcagctgg aagccgtgaa catcaccgac       1200
          ctgtccgaga accggaagca ggacaagaga ttcgccttca tcagatccga cagcggccct       1260
          accacctcct tcgagtctgc tgcttgtcca ggctggttcc tgtgcaccgc catggaagct       1320
          gaccagcctg tgtctctgac caacatgcct gacgagggcg tgatggtcac caagttctac       1380
          ttccaagagg atgag                                                        1395
          <![CDATA[<210>    19]]>
          <![CDATA[<211>    465]]>
          <![CDATA[<212>    PRT]]>
          <![CDATA[<213>    人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>    具有信號胜肽之GI-210B1]]>
          <![CDATA[<400>    19]]>
          Met Glu Trp Ser Trp Val Phe Leu Phe Phe Leu Ser Val Thr Thr Gly
            1               5                  10                  15 
          Val His Ser His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr
                       20                  25                  30 
          Leu Glu Glu Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly
                   35                  40                  45 
          Gly Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
               50                  55                  60 
          Ser Gly Gly Ala Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro
           65                  70                  75                  80 
          Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
                           85                  90                  95 
          Pro Lys Asp Gln Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
                      100                 105                 110 
          Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr
                  115                 120                 125 
          Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
              130                 135                 140 
          Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
          145                 150                 155                 160 
          Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
                          165                 170                 175 
          Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
                      180                 185                 190 
          Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met
                  195                 200                 205 
          Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
              210                 215                 220 
          Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
          225                 230                 235                 240 
          Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
                          245                 250                 255 
          Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val
                      260                 265                 270 
          Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
                  275                 280                 285 
          Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
              290                 295                 300 
          Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Arg Pro Ser Gly Arg Lys Ser
          305                 310                 315                 320 
          Ser Lys Met Gln Ala Phe Arg Ile Trp Asp Val Asn Gln Lys Thr Phe
                          325                 330                 335 
          Tyr Leu Arg Asn Asn Gln Leu Val Ala Gly Tyr Leu Gln Gly Pro Asn
                      340                 345                 350 
          Val Asn Leu Glu Glu Lys Ile Asp Val Val Pro Ile Glu Pro His Ala
                  355                 360                 365 
          Leu Phe Leu Gly Ile His Gly Gly Lys Met Cys Leu Ser Cys Val Lys
              370                 375                 380 
          Ser Gly Asp Glu Thr Arg Leu Gln Leu Glu Ala Val Asn Ile Thr Asp
          385                 390                 395                 400 
          Leu Ser Glu Asn Arg Lys Gln Asp Lys Arg Phe Ala Phe Ile Arg Ser
                          405                 410                 415 
          Asp Ser Gly Pro Thr Thr Ser Phe Glu Ser Ala Ala Cys Pro Gly Trp
                      420                 425                 430 
          Phe Leu Cys Thr Ala Met Glu Ala Asp Gln Pro Val Ser Leu Thr Asn
                  435                 440                 445 
          Met Pro Asp Glu Gly Val Met Val Thr Lys Phe Tyr Phe Gln Glu Asp
              450                 455                 460 
          Glu
          465
          <![CDATA[<210>    20]]>
          <![CDATA[<211>    1338]]>
          <![CDATA[<212>    DNA]]>
          <![CDATA[<213>    人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>    編碼GI-210B1之多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>    20]]>
          catggcgagg gcacctttac ctccgacgtg tcctcctact tggaggaaca ggccgccaaa         60
          gagtttatcg cctggctggt caaaggtggc ggcggaggcg gaggatccgg tggtggtgga        120
          tctggtggcg gaggttctgg cggagctgag tctaagtatg gccctccttg tcctccatgt        180
          cctgctccag aagctgctgg cgggccctcc gtgtttctgt tccctccaaa gcctaaggac        240
          cagctgatga tctctcggac ccctgaagtg acctgcgtgg tggtcgatgt gtcccaagag        300
          gaccctgagg tgcagttcaa ttggtacgtg gacggcgtgg aagtgcacaa cgccaagacc        360
          aagcctagag aggaacagtt caactccacc tacagagtgg tgtccgtgct gaccgtgctg        420
          caccaggatt ggctgaacgg caaagagtac aagtgcaagg tgtccaacaa gggcctgcct        480
          tccagcatcg aaaagaccat ctccaaggcc aagggccagc ctagggaacc ccaggtttac        540
          accctgcctc caagccaaga ggaaatgacc aagaaccagg tgtccctgac ctgcctggtc        600
          aagggcttct acccttccga cattgccgtg gaatgggaga gcaatggcca gcctgagaac        660
          aactacaaga ccacacctcc tgtgctggac tccgacggct ccttctttct gtactcccgc        720
          ctgaccgtgg acaagtccag atggcaagag ggcaacgtgt tctcctgctc tgtgctgcac        780
          gaggccctgc acaatcacta cacccagaag tccctcagcc tgtcccttgg aggtggtggc        840
          ggctctggcg gtggcggaag tggcggaggt ggatccggag gtagaccttc tggccggaag        900
          tcctctaaga tgcaggcctt cagaatctgg gacgtgaacc agaaaacctt ctacctgcgg        960
          aacaaccagc tcgtggccgg ctatctccag ggacctaacg tgaacctgga agagaagatc       1020
          gacgtggtgc ccatcgagcc ccacgctctg tttttgggaa tccacggcgg caagatgtgc       1080
          ctgtcctgtg tgaagtctgg cgacgagaca cggttgcagc tggaagccgt gaacatcacc       1140
          gacctgtccg agaaccggaa gcaggacaag agattcgcct tcatcagatc cgacagcggc       1200
          cctaccacct ccttcgagtc tgctgcttgt ccaggctggt tcctgtgcac cgccatggaa       1260
          gctgaccagc ctgtgtctct gaccaacatg cctgacgagg gcgtgatggt caccaagttc       1320
          tacttccaag aggatgag                                                     1338
          <![CDATA[<210>    21]]>
          <![CDATA[<211>    9]]>
          <![CDATA[<212>    PRT]]>
          <![CDATA[<213>    人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>    其他胜肽]]>
          <![CDATA[<400>    21]]>
          Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
            1               5                
          <![CDATA[<210>    22]]>
          <![CDATA[<211>    277]]>
          <![CDATA[<212>    PRT]]>
          <![CDATA[<213>    人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>    GLP-1-IgG4 Fc]]>
          <![CDATA[<400>    22]]>
          His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
            1               5                  10                  15 
          Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Gly Gly Gly
                       20                  25                  30 
          Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
                   35                  40                  45 
          Ala Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
               50                  55                  60 
          Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
           65                  70                  75                  80 
          Gln Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
                           85                  90                  95 
          Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
                      100                 105                 110 
          Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn
                  115                 120                 125 
          Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
              130                 135                 140 
          Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro
          145                 150                 155                 160 
          Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
                          165                 170                 175 
          Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn
                      180                 185                 190 
          Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
                  195                 200                 205 
          Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
              210                 215                 220 
          Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg
          225                 230                 235                 240 
          Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys
                          245                 250                 255 
          Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
                      260                 265                 270 
          Ser Leu Ser Leu Gly
                  275        
          <![CDATA[<210>    23]]>
          <![CDATA[<211>    831]]>
          <![CDATA[<212>    DNA]]>
          <![CDATA[<213>    人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>    編碼GLP-1-IgG4 Fc之多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>    23]]>
          catggcgagg gcacctttac ctccgacgtg tcctcctact tggaggaaca ggccgccaaa         60
          gagtttatcg cctggctggt caaaggtggc ggcggaggcg gaggatccgg tggtggtgga        120
          tctggtggcg gaggttctgg cggagctgag tctaagtatg gccctccttg tcctccatgt        180
          cctgctccag aagctgctgg cgggccctcc gtgtttctgt tccctccaaa gcctaaggac        240
          cagctgatga tctctcggac ccctgaagtg acctgcgtgg tggtcgatgt gtcccaagag        300
          gaccctgagg tgcagttcaa ttggtacgtg gacggcgtgg aagtgcacaa cgccaagacc        360
          aagcctagag aggaacagtt caactccacc tacagagtgg tgtccgtgct gaccgtgctg        420
          caccaggatt ggctgaacgg caaagagtac aagtgcaagg tgtccaacaa gggcctgcct        480
          tccagcatcg aaaagaccat ctccaaggcc aagggccagc ctagggaacc ccaggtttac        540
          accctgcctc caagccaaga ggaaatgacc aagaaccagg tgtccctgac ctgcctggtc        600
          aagggcttct acccttccga cattgccgtg gaatgggaga gcaatggcca gcctgagaac        660
          aactacaaga ccacacctcc tgtgctggac tccgacggct ccttctttct gtactcccgc        720
          ctgaccgtgg acaagtccag atggcaagag ggcaacgtgt tctcctgctc tgtgctgcac        780
          gaggccctgc acaatcacta cacccagaag tccctcagcc tgtcccttgg a                 831
(無)

Claims (9)

  1. 一種融合蛋白，其包含： GLP-1變異體；及 一介白素-1受體拮抗劑(IL-1受體拮抗劑)， 其中該融合蛋白由以下結構式(I)組成： N’-X-[連接子(1)]n-一Fc區片段之變異體-[連接子(2)]m-Y-C’  (I) 在該結構式(I)中， N’係該融合蛋白之N端， C’係該融合蛋白之C端， X係GLP-1變異體，其具有SEQ ID NO: 2的胺基酸序列， Y係一IL-1受體拮抗劑，其具有SEQ ID NO: 8的胺基酸序列， 該連接子(1)及該連接子(2)係胜肽連接子，並且 n及m各自獨立地係0或1， 其中該Fc區片段之變異體係由SEQ ID NO: 6的胺基酸序列組成。
  2. 一種融合蛋白二聚體，其中結合了二個如請求項1之融合蛋白。
  3. 一種多核苷酸，其編碼如請求項1之融合蛋白或如請求項2之融合蛋白二聚體。
  4. 一種表現載體，其包含如請求項3之多核苷酸。
  5. 一種經轉型細胞，其中引入了如請求項4之載體。
  6. 一種製備包含GLP-1變異體及一介白素1受體拮抗劑(IL-1受體拮抗劑)之一融合蛋白二聚體的方法，該方法包括： (i)培養如請求項5之經轉型細胞；及 (ii)收集一融合蛋白二聚體。
  7. 一種用於預防或治療一代謝性疾病之醫藥組合物，其包含如請求項2之融合蛋白二聚體。
  8. 如請求項7之醫藥組合物，其中該代謝性疾病係選自由糖尿病、肥胖症、高脂血症、高血壓、動脈硬化、脂肪肝及高胰島素血症組成之群中的任一種。
  9. 一種如請求項2之融合蛋白二聚體在製造一藥物的用途，該藥物係供治療或預防一代謝性疾病用。
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