TWI868049B

TWI868049B - 使用自體t細胞治療多發性硬化症之方法

Info

Publication number: TWI868049B
Application number: TW107102067A
Authority: TW
Inventors: 拉吉夫肯納; 科里史密斯; 布萊克Ｔ艾夫塔柏
Original assignee: 昆士蘭醫學研究所理事會; 美商安泰樂生物治療公司
Priority date: 2017-01-20
Filing date: 2018-01-19
Publication date: 2025-01-01
Also published as: KR20190124214A; BR112019014406A2; EP3570852A4; RU2019124454A; EP3570852A1; JP2023052033A; KR20250067948A; AU2018210375B2; JP2025098005A; CN110430886A; SG11201906097VA; WO2018136762A1; RU2019124454A3; MX2019008460A; US20250270272A1; AU2018210375A1; JP7726625B2; RU2769474C2; EP3570852B1; JP2020506901A

Abstract

本文中提供與治療個體之多發性硬化症相關的組合物及方法。

Description

使用自體T細胞治療多發性硬化症之方法

諸如多發性硬化症(MS)之自體免疫疾病係對抗人體自身組織之異常免疫反應所引起的病變。MS的特徵在於人體自身免疫細胞會分解髓鞘，髓鞘是一種包圍神經纖維之保護性脂質外殼。又稱為人類疱疹病毒4之埃-巴二氏病毒(Epstein Barr Virus，EBV)為一種普遍存在之疱疹病毒。最近，已展示，暴露於EBV可易患包括MS之自體免疫疾病或另外在自體免疫疾病之致病機制中起作用。舉例而言，近期研究已展示，診斷出患有MS之個體展示比健康個體更高含量之聚合於神經組織中的B細胞中之EBV相關蛋白。咸假設，經EBV感染之B細胞之增加及/或此類細胞之缺陷性消除可使個體易患多發性硬化症。

本文中提供用於治療MS(例如，復發緩解型MS、繼發性進行性MS、原發性進行性MS或漸進地復發性MS)之方法，該方法包含向個體投與表現T細胞受體之自體T細胞(例如，細胞毒性T細胞或CTL)，該T細胞受體與在MHC (例如，I類MHC)上呈現之EBV肽特異性結合。在一些實施例中，MS為原發性進行性MS。在一些實施例中，該方法包含藉由向個體投與表現T細胞受體之自體T細胞(例如，CTL)來改善或穩定個體之MS症狀，該T細胞受體與在I類MHC上呈現的EBV肽特異性結合。本文中亦提供藉由向個體投與表現T細胞受體之自體T細胞(例如，CTL)來減小患有MS之個體的CSF中之抗EBV IgG含量之方法，該T細胞受體與在I類MHC分子上呈現之EBV肽特異性結合。在一些實施例中，至少1%、至少5%、至少10%、至少15%或至少20%之CTL表現CD107a、IFNγ、TNF或IL-2。在一些實施例中，至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%或至少80%之CTL表現CD107a、IFNγ、TNF及IL-2。至少5%、至少7%、至少8%、至少10%、至少15%、至少20%或至少30%之CTL具有EBV反應性。在一些實施例中，EBV肽包含LMP1肽或其片段、LMP2A肽或其片段，及/或EBNA1肽或其片段。在一些實施例中，EBV肽包含表1中所列出之序列。在某些態樣中，本文中提供治療多發性硬化症(例如，復發緩解型MS、繼發性進行性MS、原發性進行性MS或漸進地復發性MS)之方法，該方法包含：自個體分離包含T細胞(例如，CTL)之樣本，產生表現T細胞受體之T細胞，且隨後向個體投與該等T細胞，該T細胞受體與在MHC (例如，I類MHC)上呈現之EBV肽特異性結合。在一些實施例中，T細胞藉由以下來產生：使用抗原呈現細胞(APC)來培育包含自體T細胞之樣本(例如，PBMC樣本)，該等抗原呈現細胞在MHC(例如，I類MHC)上呈現EBV肽，由此誘導該樣本中之增殖肽特異性T細胞(例如，肽特異性自體CTL)。在一些實施例中，藉由使用編碼EBV肽之核酸構築體(例如，AdE1-LMPpoly)培育APC來使該等APC呈現EBV肽，由此誘使APC呈現EBV肽。在一些實施例中，APC可為B細胞、抗原呈現T細胞、樹突狀細胞或人工抗原呈現細胞(例如，表現CD80、CD83、41BB-L及/或CD86之細胞株，諸如aK562細胞)。在一些實施例中，方法進一步包含分析藉由增殖肽特異性自體CTL之CD107a、IFNγ、TNF或IL-2表現，且若至少1%、至少5%、至少10%、至少15%或至少20%之增殖肽特異性自體CTL表現CD107a、IFNγ、TNF或IL-2，則向個體投與肽特異性自體CTL。在一些實施例中，至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%或至少80%之肽特異性自體CTL表現CD107a、IFNγ、TNF及IL-2。至少5%、至少7%、至少8%、至少10%、至少15%、至少20%或至少30%之肽特異性自體CTL具有EBV反應性。在一些實施例中，EBV肽包含LMP1肽或其片段、LMP2A肽或其片段，及/或EBNA1肽或其片段。在一些實施例中，EBV肽包含表1中所列出之序列。在一些實施例中，MS為原發性進行性MS。在一些實施例中，向個體投與5 × 10⁶ 、1 × 10⁷ 、1.5 × 10⁷ 或2 × 10⁷ 個細胞(例如，CTL)。在一些實施例中，投與初始劑量之T細胞(例如，自體CTL)，且隨後例如在治療過程中以增大之劑量投與一或多個額外劑量之T細胞(例如，自體CTL)。在一些實施例中，投與兩次或多於兩次、三次或多於三次、四次或多於四次或五次或多於五次劑量。T細胞(例如，自體CTL)之量可在初始劑量至額外劑量之範圍內變化。舉例而言，最初可投與較低劑量，隨後投與較高劑量。在一些實施例中，向個體投與至少一次、至少2次、至少3次、至少4次或至少5次劑量。劑量可每週或兩週一次投與。在一些實施例中，個體並不由於T細胞(例如，自體CTL)投與而經歷任何不良效應。在一些實施例中，方法包含投與連續較高數量CTL之四次劑量。在一些實施例中，方法包含投與5 × 10⁶ 個CTL之第一次劑量、1 × 10⁷ 個CTL之第二次劑量、1.5 × 10⁷ 個CTL之第三次劑量及2 × 10⁷ 個CTL之第四次劑量。在一些態樣中，方法進一步包含藉由以下評估患有多發性硬化症的個體之授受性免疫療法之療效：自個體獲得大腦脊髓液(CSF)之第一樣本；較佳地在CTL投與之前，分析該第一樣本中之CSF中之抗EBV IgG的量；以及在一段時間之後，較佳地在CTL投與之後，自個體獲得CSF的第二樣本；分析該第二樣本中之CSF中之抗EBV IgG的相對量；且若該第二樣本中之抗EBV IgG之量少於該第一樣本，則疾病已穩定且/或未惡化。一段時間可為一週、兩週、三週、四週、五週、6週、三個月、六個月或一年。在一些實施例中，給予個體診斷測試，諸如EDSS測試。在一些實施例中，在T細胞投與之前及之後給予個體EDSS評分。在T細胞投與之後，EDSS評分可保持相同或EDSS評分可減小(例如，減小至少0.5或至少1.0)。在一些態樣中，本文中提供藉由以下選擇個體用於授受性免疫療法之方法：自個體獲得包含T細胞(例如，CTL)的樣本，分離自體T細胞，確定該樣本中之自體T細胞之EBV反應性，且若至少臨限百分比(例如，至少1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、40%、50%、60%、70%或80%)之自體T細胞為EBV反應性的，則選擇該個體用於授受性免疫療法。在一些態樣中，本文中提供藉由以下選擇個體用於授受性免疫療法之方法：自個體獲得包含T細胞(例如，CTL)之樣本，分離自體T細胞，確定自體T細胞之CD107a、IFNγ、TNF及/或IL-2表現，且若至少臨限百分比(例如，至少1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、40%、50%、60%、70%或80%)之自體T細胞表現CD107a、IFNγ、TNF及/或IL-2，則選擇該個體用於授受性免疫療法。在一些實施例中，個體患有MS (例如，復發緩解型MS、繼發性進行性MS、原發性進行性MS或漸進地復發性MS)。

相關申請案本申請案主張2017年1月20日申請的美國臨時專利申請案序號62/448707及2017年10月24日申請的美國臨時專利申請案序號62/576349的優先權，該等臨時專利申請案中之每一者以全文引用之方式併入本文中。概述本文中提供使用識別一或多個EBV抗原決定基(例如，本文中所揭示之EBV抗原決定基)之自體T細胞(例如，CTL)來治療個體的多發性硬化症(例如，復發緩解型MS、繼發性進行性MS、原發性進行性MS或漸進地復發性MS)之方法。在一些實施例中，方法進一步包含自個體分離包含T細胞之樣本，使用呈現EBV肽(例如，本文中所揭示之EBV肽)的APC來培育T細胞，由此產生識別存在於MHC上之EBV肽的T細胞。本文中亦提供藉由在T細胞投與之前及之後均自個體獲得大腦脊髓液(CSF)之樣本且分析CSF中之抗EBV IgG之相對量來評估患有多發性硬化症之個體的授受性免疫療法之療效的方法。定義為方便起見，此處收集本說明書、實例及所附申請專利範圍中所採用的某些術語。本文中使用冠詞「一 (a及an)」來指該冠詞之一個或多於一個(亦即指至少一個)文法賓語。借助於實例，「一元件」意謂一個元件或多於一個元件。如本文中所使用，術語「投與」意謂向個體提供藥劑或組合物且包括但不限於由醫學專業人士投與及自投與。此試劑可含有例如本文中所描述的肽、本文中所提供之抗原呈現細胞及/或本文中所提供之T細胞。術語「胺基酸 」意欲包涵所有分子，無論天然或合成的，其包括胺基官能基及酸官能基兩者且能夠包括於天然產生之胺基酸之聚合物中。例示性胺基酸包括天然產生之胺基酸；其類似物、衍生物及同類物；具有變異側鏈之胺基酸類似物；及前述中之任一者之立體異構體。術語「結合」或「相互作用 」係指一種關聯，其可為由於例如生理條件下之靜電、疏水性、離子及/或氫鍵結相互作用在兩個分子之間，例如在TCR與肽/MHC之間的穩定關聯。術語「生物樣本 」、「組織樣本 」或僅「樣本」皆係指自個體組織獲得之細胞集。組織樣本之來源可為如來自新鮮、所冷凍及/或所保存之器官、組織樣本、活檢體或抽出物之實體組織；血液或任何血液成分、血清、血液；諸如大腦脊髓液、羊膜液、腹膜流或間質液、尿液、唾液、大便、淚液之體液；或來自個體之妊娠或發育中之任何時間的細胞。如本文中所使用，術語「細胞介素 」係指影響細胞功能且為調變免疫、發炎性或造血反應中之細胞之間的相互作用之分子之任何經分泌的多肽。細胞介素包括但不限於單核球激素及淋巴介質，無論哪種細胞產生該等單核球激素及該等淋巴介質。舉例而言，單核球激素一般稱為由諸如巨噬細胞及/或單核球之單核細胞產生及分泌。然而，多種其他細胞亦產生單核球激素，該等其他細胞諸如自然殺手細胞、纖維母細胞、嗜鹼性球、嗜中性球、內皮細胞、大腦星形膠質細胞、骨髓基質細胞、表皮角質細胞及B淋巴細胞。淋巴介質一般稱為由淋巴細胞細胞產生。細胞介素之實例包括但不限於介白素-1 (IL-1)、介白素-2 (IL-2)、介白素-6 (IL-6)、介白素-8 (IL-8)、腫瘤壞死因子α (TNFα)及腫瘤壞死因子β (TNFβ)。術語「抗原決定基 」意謂能夠與抗體或TCR特異性結合之蛋白質決定子。抗原決定基通常由諸如胺基酸或糖側鏈之分子之化學活性表面分組構成。某些抗原決定基可由抗體能夠結合之特定胺基酸序列定義。如本文中所使用，片語「醫藥學上可接受 」係指彼等試劑、化合物、材料、組合物及/或劑型在合理醫學判斷之範疇內，適用於接觸人類及動物之組織而無過度毒性、刺激、過敏性反應或其他問題或併發症，與合理的益處/風險比相稱。如本文所用，片語「醫藥學上可接受之載劑 」意謂醫藥學上可接受之材料、組合物或媒劑，諸如液體或固體填充劑、稀釋劑、賦形劑、或溶劑囊封材料，其參與將試劑自一個器官或身體之一部分運載或輸送至另一器官或身體之另一部分。各載劑在與調配物之其他成分相容且對患者無害的意義上必須為「可接受的」。可充當醫藥學上可接受之載劑之材料的一些實例包括：(1)糖，諸如乳糖、葡萄糖及蔗糖；(2)澱粉，諸如玉米澱粉及馬鈴薯澱粉；(3)纖維素及其衍生物，諸如羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素及乙酸纖維素；(4)粉末狀黃蓍；(5)麥芽；(6)明膠；(7)滑石；(8)賦形劑，諸如可可脂及栓劑蠟；(9)油，諸如花生油、棉籽油、紅花油、芝麻油、橄欖油、玉米油及大豆油；(10)二醇，諸如丙二醇；(11)多元醇，諸如丙三醇、山梨糖醇、甘露糖醇及聚乙二醇；(12)酯，諸如油酸乙酯及月桂酸乙酯；(13)瓊脂；(14)緩衝劑，諸如氫氧化鎂及氫氧化鋁；(15)褐藻酸；(16)無熱原質水；(17)等張生理鹽水；(18)林格氏溶液(Ringer's solution)；(19)乙醇；(20) pH緩衝溶液；(21)聚酯、聚碳酸酯及/或聚酸酐；及(22)醫藥調配物中所採用的其他無毒性相容物質。術語「聚核苷酸 」及「核酸」可互換地使用。其係指任何長度之核苷酸(去氧核糖核苷酸或核糖核苷酸)之聚合形式或其類似物。聚核苷酸可具有任何三維結構且可執行任何功能。以下為聚核苷酸之非限制性實例：基因或基因片段之編碼或非編碼區域、自連接分析所定義之基因座(loci/locus)、外顯子、內含子、信使核糖核酸(mRNA)、轉移RNA、核糖體RNA、核糖核酸酶、cDNA、重組聚核苷酸、分支鏈聚核苷酸、質體、載體、經分離之任何序列DNA、經分離之任何序列RNA、核酸探針及引子。聚核苷酸可包含經修飾之核苷酸，諸如甲基化核苷酸及核苷酸類似物。若存在，可在聚合物組裝之前或之後賦予核苷酸結構之修飾。可諸如藉由與標記組分結合來進一步修飾聚核苷酸。在本文中所提供之所有核酸序列中，U核苷酸可與T核苷酸互換。如本文中所使用，「預防」病狀之治療劑係指當在病症或病狀發作之前向統計樣本投與時，相對於未處理之對照樣本減少經處理樣本之病症或病狀的出現，或相對於未處理之對照樣本延遲病症或病狀之一或多個症狀的發作或降低該一或多個症狀之嚴重程度的化合物。如本文中所使用，「特異性結合 」係指TCR與MHC(例如，I類MHC或II類MHC)上呈現之肽結合的能力。通常，TCR以至少約10^- ⁴ M或更少K_D 之親和力與其肽/MHC特異性結合，且以比用於與非特異性及不相關肽/MHC複合體(例如，包含BSA肽或酪蛋白肽之非特異性及不相關肽/MHC複合體)結合之其親和性至少小10倍、至少小100倍或至少小1000倍之親和力(如由K_D 表示)與預定抗原/結合搭配物結合。如本文中所使用，術語「個體」」意謂選擇用於治療或療法之人類或非人類動物。如本文中所使用之片語「治療有效量 」及「有效量 」意謂在適用於任何醫學治療之合理的益處/風險比下在個體之至少一個亞群的細胞中有效產生所要治療效應之試劑的量。如本文中所使用，術語「治療」個體之疾病或「治療」患有或疑似患有疾病之個體係指使個體經歷醫藥治療，例如，投與本文中所描述的CTL，以使得疾病之至少一個症狀減小或預防惡化。術語「載體」係指可藉由其在生物體、細胞或細胞組分之間傳播及/或傳送核酸之工具。載體包括可能夠或可不能自主地複寫或整合至宿主細胞之染色體中之質體、病毒、噬菌體、前病毒、噬質體、轉座子及人工染色體及類似物。肽在某些態樣中，本文中提供使用表現TCR的自體T細胞(例如，CTL)來治療多發性硬化症(例如，復發緩解型MS、繼發性進行性MS、原發性進行性MS或漸進地復發性MS)之方法，該等TCR與包含呈現於MHC(例如，I類MHC)上之EBV抗原決定基的肽特異性結合。在一些實施例中，本文中提供例如藉由使用抗原呈現細胞(APC)培育包含T細胞(亦即，自體T細胞)之樣本來產生此類自體T細胞之方法，該等抗原呈現細胞呈現本文中所描述的EBV抗原決定基中之一或多者(例如，呈現包含I類MHC錯合物上之EBV抗原決定基的本文中所描述之肽的APC)。在一些實施例中，本文中所提供的肽包含任何EBV病毒蛋白之序列(例如，任何EBV蛋白的至少5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個相鄰胺基酸序列)。在一些實施例中，本文中所提供的肽包含EBV病毒蛋白之不超過25、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11或10個相鄰胺基酸。在一些實施例中，本文中所提供的肽包含LMP1之序列(例如，LMP1的至少5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個相鄰胺基酸序列)。在一些實施例中，本文中所提供的肽包含LMP1之不超過25、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11或10個相鄰胺基酸。例示性LMP1胺基酸序列提供於下文中(SEQ ID NO: 1)：在一些實施例中，本文中所提供的肽包含LMP2A之序列(例如，LMP2A的至少5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個相鄰胺基酸序列)。在一些實施例中，本文中所提供的肽包含LMP2A之不超過25、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11或10個相鄰胺基酸。例示性LMP2A胺基酸序列提供於下文中(SEQ ID NO: 2)：在一些實施例中，本文中所提供的肽包含EBNA1之序列(例如，EBNA1的至少5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個相鄰胺基酸序列)。在一些實施例中，本文中所提供的肽包含EBNA1之不超過25、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11或10個相鄰胺基酸。例示性EBNA1胺基酸序列提供於下文中(SEQ ID NO: 3)：在一些實施例中，肽包含表1中所列出之抗原決定基之序列。表 1 ： 例示性 EBV 病毒蛋白抗原決定基 在一些實施例中，本文中所提供的肽包含EBV抗原決定基中之兩者或更多者。在一些實施例中，本文中所提供的肽包含至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個EBV抗原決定基。舉例而言，在一些實施例中，本文中所提供的肽包含藉由連接子(例如，多肽連接子)所連接之EBV抗原決定基中之兩者或更多者。在一些實施例中，肽之序列包含除1個或更多(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10個或更多)個保守性序列修飾以外的EBV病毒蛋白序列。如本文中所使用，術語「保守性序列修飾」意欲指不顯著影響或改變TCR與含有呈現於MHC上之胺基酸序列的肽之間的相互作用之胺基酸修飾。此類保守性修飾包括胺基酸取代、添加(例如，將胺基酸添加至肽之N或C端)及刪除(例如，自肽之N或C端刪除胺基酸)。保守胺基酸取代為胺基酸殘基經具有類似側鏈之胺基酸殘基置換之取代。此項技術中已限定具有類似側鏈之胺基酸殘基家族。此等家族包括具有鹼性側鏈(例如離胺酸、精胺酸、組胺酸)、酸性側鏈(例如天冬胺酸、麩胺酸)、不帶電極性側鏈(例如甘胺酸、天冬醯胺、麩醯胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、酪胺酸、半胱胺酸、色胺酸)、非極性側鏈(例如丙胺酸、纈胺酸、白胺酸、異白胺酸、脯胺酸、苯丙胺酸、甲硫胺酸)、β分支鏈側鏈(例如蘇胺酸、纈胺酸、異白胺酸)及芳族側鏈(例如酪胺酸、苯丙胺酸、色胺酸、組胺酸)之胺基酸。因此，本文中所描述的肽之一或多個胺基酸殘基可經來自相同側鏈家族之其他胺基酸殘基置換，且經改變之肽可使用此項技術中已知之方法來測試TCR結合之保持力。修飾可藉由此項技術中已知之標準技術，諸如定點突變誘發及PCR介導之突變誘發引入至抗體中。在一些實施例中，本文中所提供的肽包含與EBV病毒蛋白序列(例如，EBV病毒蛋白之片段之序列)至少80%、85%、90%、95%或100%一致的序列。為確定兩個胺基酸序列之一致性百分比，出於最佳對比目的對序列進行比對(例如，可在第一及第二胺基酸序列中之一者或兩者中引入間隙以用於最佳比對且出於對比目的可忽略不一致序列)。隨後比較對應胺基酸位置處之胺基酸殘基。當第一序列中之位置被與第二序列中之對應位置相同的胺基酸殘基佔據時，則分子在該位置處一致。兩個序列之間的一致性百分比為該等序列共有之一致位置之數目之函數，考慮到間隙的數目及各間隙之長度，需要引入該等間隙以用於最佳比對該兩個序列。在一些實施例中，肽為嵌合肽或融合肽。如本文中所使用，「嵌合肽」或「融合肽」包含具有本文中所提供的序列之肽，該肽連接至具有在自然界中不與其連接之序列的獨特肽。舉例而言，獨特肽可直接地經由肽鍵或間接地經由化學連接子融合至本文中所提供的肽之N端或C端。在一些實施例中，本文中所提供之肽連接至包含獨特EBV抗原決定基之另一肽。在一些實施例中，本文中所提供之肽連接至包含來自其他病毒及/或傳染病的抗原決定基之肽。本文中所提供的嵌合肽或融合肽可以標準重組DNA技術製備。舉例而言，可根據習知之技術，將編碼不同肽序列之DNA片段以密碼框內方式(in-frame)連接在一起，例如藉由採用鈍端或交錯端末端用於連接、限制酶消化以提供適當的末端、按需要填入黏性端、鹼性磷酸酶處理以避免非所需接合，以及酶促連接。在另一實施例中，融合基因可藉由包括自動DNA合成器之習知技術合成。可替代地，基因片段之PCR擴增可使用錨定引子進行，該等錨定引子在可隨後黏接及再擴增以產生嵌合基因序列之兩個連續基因片段之間產生互補突出物(參見例如Current Protocols in Molecular Biology, Ausubel等人編, John Wiley & Sons: 1992)。此外，多個已編碼融合部分之表現載體為可商購的。本文中所提供的肽可藉由使用標準蛋白純化技術之適當純化方案自細胞或組織來源分離，且可藉由重組DNA技術製備，且/或可使用標準肽合成技術化學地合成。本文中所描述之肽可藉由表現編碼本發明之一或多個肽之核苷酸來產生於原核或真核宿主細胞中。可替代地，此類肽可藉由化學方法合成。用於表現重組宿主中之異源肽、化學合成肽且活體外轉譯之方法為此項技術中所熟知的且進一步描述於Maniatis等人，Molecular Cloning: A Laboratory Manual (1989),第2版, Cold Spring Harbor, N.Y.；Berger及Kimmel, Methods in Enzymology,第152卷, Guide to Molecular Cloning Techniques (1987),Academic Press,Inc., San Diego San Diego Calif.；Merrifield, J. (1969) J. Am. Chem. Soc. 91:501；Chaiken I. M. (1981) CRC Crit. Rev. Biochem. 11:255；Kaiser等人(1989) Science 243:187；Merrifield, B. (1986) Science 232:342；Kent, S. B. H. (1988) Annu. Rev. Biochem. 57:957；以及Offord, R. E. (1980) Semisynthetic Proteins, Wiley Publishing中，該等文獻以引用之方式併入本文中。在某些態樣中，本文中提供編碼本文中所描述之肽的核酸分子。在一些實施例中，核酸分子為載體。在一些實施例中，核酸分子為包含本文中所描述之核酸分子之病毒載體，諸如腺病毒類表現載體。在一些實施例中，本文中所提供之載體編碼複數個本文中所提供之抗原決定基(例如，作為多抗原決定基)。在一些實施例中，本文中所提供之載體編碼至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個本文中所提供之抗原決定基(例如，提供於表1中之抗原決定基)。在一些實施例中，載體為AdE1-LMPpoly。AdE1-LMPpoly載體編碼來自融合至去除Gly-Ala重複序列之EBNA1序列之LMP1及LMP2的經定義CTL抗原決定基之多抗原決定基。AdE1-LMPpoly載體描述例如於Smith等人, Cancer Research 72:1116 (2012)；Duraiswamy等人, Cancer Research 64:1483-9 (2004)；以及Smith等人, J . Immunol 117:4897-906中，該等文獻中之每一者以引用之方式併入本文中。如本文中所使用，術語「載體」係指能夠輸送另一核酸之核酸分子，該核酸分子已連接至該另一核酸。一種類型之載體為「質體」，其係指可連接額外DNA區段之環形雙股DNA環。另一類型之載體為病毒載體，其中額外DNA區段可與病毒基因組連接。某些載體能夠在其所引入之宿主細胞中自主複製(例如，具有細菌複製起點之細菌載體，游離型哺乳動物載體)。其他載體(例如非游離型哺乳動物載體)當引入至宿主細胞中時可整合至宿主細胞之基因組中，且從而與宿主基因組一起複製。此外，某些載體能夠引導基因之表現。此類載體在本文中稱為「重組表現載體」(或簡稱「表現載體」)。在一些實施例中，本文中提供可操作地連接至表現載體中之一或多個調節序列(例如，啟動子)的核酸。在一些實施例中，細胞轉錄本文中所提供之核酸且從而表現本文中所描述之肽。核酸分子可整合至細胞之基因組中或其可為染色體外的。在一些實施例中，本文中提供含有本文中所描述之核酸(例如，編碼本文中所描述之肽之核酸)的細胞。細胞可為例如原核的、真核的、哺乳動物的、禽類的、鼠類的及/或人類的。在一些實施例中，細胞為哺乳動物細胞。在一些實施例中，細胞為APC (例如，抗原呈現T細胞、樹突狀細胞、B細胞或aK562細胞)。在本方法中，本文中所描述之核酸可例如作為與遞送試劑組合而無需遞送媒劑之核酸向細胞投與。在一些實施例中，此項技術中已知之任何核酸遞送方法可用於本文中所描述之方法。適合之遞送試劑包括但不限於例如Mirus Transit TKO親脂性試劑；脂質轉染劑(lipofectin)；脂轉染胺(lipofectamine)；細胞轉染劑(cellfectin)；聚陽離子(例如，聚離胺酸)、去端肽膠原(atelocollagen)、奈米錯合物(nanoplex)及脂質體(liposome)。在本文中所描述之方法之一些實施例中，脂質體用於將核酸遞送至細胞或個體。適合用於本文中所描述之方法之脂質體可由標準囊泡形成之脂質形成，該等標準囊泡形成之脂質一般包括中性或帶負電磷脂及諸如膽固醇之固醇。通常藉由考慮諸如所需脂質體尺寸及血流中之脂質體之半衰期的因子來指導脂質之選擇。已知用於製備脂質體之各種方法，例如如Szoka等人(1980),Ann . Rev . Biophys . Bioeng . 9:467；以及美國專利第4,235,871號、第4,501,728號、第4,837,028號及第5,019,369號中所描述，該等專利之全部揭示內容以引用之方式併入本文中。自體 T 細胞本文中提供藉由向個體投與表現與MHC上呈現之EBV肽特異性結合之T細胞受體的自體T細胞(例如，CTL)治療多發性硬化症(例如，復發緩解型MS、繼發性進行性MS、原發性進行性MS或漸進地復發性MS)之方法。在一些實施例中，MHC為I類MHC。在一些實施例中，MHC為II類MHC。在一些實施例中，本文中提供呈現本文中所描述之肽(例如，包含LMP1、LMP2A或EBNA1抗原決定基序列之肽)的APC。在一些實施例中，APC為B細胞、抗原呈現T細胞、樹突狀細胞或人工抗原呈現細胞(例如，aK562細胞)。供用於該方法之樹突狀細胞可藉由自患者樣本取得PBMC且將其黏附至塑料而製備。一般而言，單核球細胞群黏附且可洗去所有其他細胞。黏附細胞群隨後使用IL-4及GM-CSF來分化以產生單核球衍生之樹突狀細胞。此等細胞可藉由添加IL-1β、IL-6、PGE-1及TNF-α(其上調樹突狀細胞之表面上的重要共刺激分子)來成熟且隨後用本文中所提供之肽中之一或多者來轉導。在一些實施例中，APC為人工抗原呈現細胞，諸如aK562細胞。在一些實施例中，人工抗原呈現細胞經改造以表現CD80、CD83、41BB-L及/或CD86。包括aK562細胞之例示性人工抗原呈現細胞描述於美國專利公開案第2003/0147869號，該公開案在此以引用之方式併入。在某些態樣中，本文中提供產生呈現本文中所描述之EBV抗原決定基中的一或多者之APC之方法，該方法包含使APC與包含EBV抗原決定基之肽及/或與編碼EBV抗原決定基之核酸接觸。在一些實施例中，APC經輻射。在一些實施例中，APC呈現本文中所描述之肽(例如，包含LMP1、LMP2A或EBNA1抗原決定基序列之肽)。呈現本文中所描述之肽之細胞可藉由此項技術中已知之標準技術來製備。舉例而言，細胞可經脈衝以促進肽吸收。在一些實施例中，細胞經編碼本文中所提供之肽之核酸轉染。本文中提供產生抗原呈現細胞(APC)之方法，該方法包含脈衝具有本文中所描述之肽之細胞。產生抗原呈現細胞之例示性實例可見於WO2013088114中，該案在此以其全部內容併入。在一些實施例中，本文中提供表現識別在MHC上呈現之本文中所描述的肽之TCR(例如，αβ TCR或γδ TCR)之T細胞(例如，CD4 T細胞及/或CD8 T細胞)。在一些實施例中，T細胞為表現識別在I類MHC上呈現之本文中所描述的肽之TCR的CD8 T細胞(例如，CTL)。在一些實施例中，T細胞為識別在II類MHC上呈現之本文中所描述的肽之CD4 T細胞(例如，輔助T細胞)。在一些實施例中，本文中提供產生、活化及/或誘使識別本文中所描述的EBV抗原決定基中之一或多者之T細胞(例如，自體CTL)增殖的方法。在一些實施例中，包含自體T細胞之樣本(例如，PBMC樣本)在具有本文中所提供之APC (例如，在I類MHC錯合物上呈現包含EBV抗原決定基之肽的APC)的培養基中培育。在一些實施例中，APC對於獲得T細胞之個體為自體的。在一些實施例中，APC對於獲得T細胞之個體不為自體的。在一些實施例中，含有T細胞之樣本用本文中所提供之APC培育2次或更多次。在一些實施例中，T細胞在至少一種細胞介素存在之情況下用APC培育。在一些實施例中，細胞介素為IL-4、IL-7及/或IL-15。使用APC來誘使T細胞增殖之例示性方法提供於例如美國專利公開案第2015/0017723號中，該公開案在此以引用之方式併入。在一些實施例中，本文中提供包含T細胞及/或本文中所提供之APC的組合物(例如，治療性組合物)，該等組合物用於藉由向個體投與有效量之組合物來治療及/或預防個體之自體免疫疾病。在一些態樣中，本文中提供使用組合物(例如，醫藥組合物，此類組合物包含自體CTL)治療多發性硬化症之方法。在一些實施例中，組合物包括本文中所提供的多個(例如，兩個或更多個) CTL之組合。治療方法 在一些實施例中，本文中提供藉由向個體投與本文中所提供之自體T細胞(例如，自體CTL)來治療個體之MS (例如，原發性進行性MS)的方法。在一些實施例中，MS為復發緩解型MS、繼發性進行性MS、原發性進行性MS或漸進地復發性MS。在一些實施例中，自體T細胞自周邊單核血液樣本分離。由自體T細胞表現生物標記可藉由諸如流式細胞量測術之任何適合之方法來評估。在一些實施例中，自體T細胞藉由包含EBV病毒肽(例如，AdE1-LMPpoly)之載體刺激。在一些實施例中，自體T細胞藉由病毒載體刺激且經由流式細胞量測術分選。舉例而言，自體T細胞可根據實例2中例示之方案進行表面染色。在一些實施例中，自體T細胞與對CD107A具有特異性之一或多種抗體一起培育且隨後藉由流式細胞量測術來分選。在一些實施例中，自體T細胞與一或多種抗體一起培育，該等抗體與胞內細胞介素結合，諸如對IFNγ、IL-2及/或TNF具有特異性之抗體。在一些實施例中，自體T細胞與供用於胞內細胞介素之抗體一起培育且隨後經由流式細胞量測術來分選。在一些態樣中，本文中提供藉由以下來選擇個體用於授受性免疫療法之方法：自個體獲得PMBC樣本，分離自體T細胞，確定自體T細胞之EBV反應性，且若至少1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、40%、50%、60%、70%或80%之自體T細胞為EBV反應性的，則選擇該個體用於授受性免疫療法。在一些態樣中，本文中提供藉由以下來選擇個體用於授受性免疫療法之方法：自個體獲得包含T細胞(例如，CTL)之樣本，分離自體T細胞，且確定自體T細胞之CD107A表現，且若至少1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、40%、50%、60%、70%或80%之自體T細胞表現CD107A，則選擇該個體用於授受性免疫療法。在一些態樣中，本文中提供藉由以下來選擇個體用於授受性免疫療法之方法：自個體獲得包含T細胞(例如，CTL)之樣本，分離自體T細胞，確定自體T細胞之IFNγ表現，且若至少1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、40%、50%、60%、70%或80%之自體T細胞表現IFNγ，則選擇該個體用於授受性免疫療法。在一些態樣中，本文中提供藉由以下來選擇個體用於授受性免疫療法之方法：自個體獲得包含T細胞(例如，CTL)之樣本，分離自體T細胞，且確定自體T細胞之TNF表現，且若至少1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、40%、50%、60%、70%或80%之自體T細胞表現TNF，則選擇該個體用於授受性免疫療法。在一些態樣中，本文中提供藉由以下來選擇個體用於授受性免疫療法之方法：自個體獲得包含T細胞(例如，CTL)之樣本，分離自體T細胞，且確定自體T細胞之IL-2表現，且若至少1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、40%、50%、60%、70%或80%之自體T細胞表現IL-2，則選擇該個體用於授受性免疫療法。在一些實施例中，方法進一步包含自個體獲得包含T細胞的樣本(例如，自個體獲得PBMC樣本)。在一些實施例中，自體T細胞(例如，CD4+ T細胞或CD8+ T細胞)自樣本分離。在一些實施例中，樣本主要或完全由自體T細胞組成。本文中提供治療或預防個體之多發性硬化症(MS)之方法，該方法包含向個體投與表現與在I類MHC上呈現的EBV肽特異性結合之T細胞受體之自體細胞毒性T細胞(CTL)。在一些實施例中，樣本中至少1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、40%、50%、60%、70%或80%之T細胞(例如，CTL)表現CD107A。在一些實施例中，樣本中至少1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、40%、50%、60%、70%或80%之T細胞(例如，CTL)表現IFNγ。在一些實施例中，樣本中至少1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、40%、50%、60%、70%或80%之T細胞(例如，CTL)表現TNF。在一些實施例中，樣本中至少1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、40%、50%、60%、70%或80%之T細胞(例如，CTL)表現IL-2。在一些實施例中，樣本中至少1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%、51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%或90%之T細胞(例如，CTL)表現CD107A及IFNγ。在一些實施例中，樣本中至少1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%、51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%或90%之T細胞(例如，CTL)表現CD107A及TNF。在一些實施例中，樣本中至少1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%、51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%或90%之T細胞(例如，CTL)表現CD107A及IL-2。在一些實施例中，樣本中至少1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%、51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%或90%之T細胞(例如，CTL)表現IFNγ及TNF。在一些實施例中，樣本中至少1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%、51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%85%、86%、87%、88%、89%或90%之T細胞(例如，CTL)表現IFNγ及IL-2。在一些實施例中，樣本中至少1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%、51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%或90%之T細胞(例如，CTL)表現TNF及IL-2。在一些實施例中，樣本中至少1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%、51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%或90%之T細胞(例如，CTL)表現IFNγ、TNF及IL-2。在一些實施例中，樣本中至少1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%、51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%或90%之T細胞(例如，CTL)表現CD107A、TNF及IL-2。在一些實施例中，樣本中至少1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%、51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%或90%之T細胞(例如，CTL)表現CD107A、IFNγ及IL-2。在一些實施例中，樣本中至少1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%、51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%或90%之T細胞(例如，CTL)表現CD107A、IFNγ及TNF。在一些實施例中，樣本中至少1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%、51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%或90%之T細胞(例如，CTL)表現CD107A、IFNγ、TNF及IL-2。在一些實施例中，1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%、51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%或90%之T細胞(例如，CTL)為EBV反應性的。 T細胞生物標記表現及/或EBV反應性可在經本文所揭示之核酸構築體、本文所揭示之多肽或APC擴展T細胞之前或之後經量測及/或分析。在一些態樣中，本文中提供藉由以下來治療或預防個體之MS之方法：使用編碼EBV肽之核酸構築體培育抗原呈現細胞(APC)，由此誘使該等APC呈現EBV肽，藉由使用抗原呈現細胞(APC)來培育包含自體T細胞(例如，CTL)之樣本而誘使肽特異性T細胞(例如，CTL)增殖，由此誘使自體T細胞(例如，CTL)增殖，且向個體投與肽特異性自體T細胞(例如，CTL)。在一些實施例中，EBV反應性及生物標記表現在使用病毒載體(例如，本文中所揭示之病毒載體)及/或APC (例如，本文中所揭示之APC)刺激自體T細胞之前經定量。可替代地或另外，EBV反應性及生物標記表現可在使用病毒載體(例如，本文中所揭示之病毒載體)及/或APC (例如，經本文中所揭示之病毒載體轉染的APC)刺激自體T細胞之後經定量。在一些實施例中，EBV反應性藉由量化樣本中表現CD107A之T細胞的百分比來量測。在一些實施例中，EBV反應性藉由量化樣本中表現IFNγ之T細胞的百分比來量測。在一些實施例中，EBV反應性藉由量化樣本中表現TNF之T細胞的百分比來量測。在一些實施例中，EBV反應性藉由量化樣本中表現IL-2之T細胞的百分比來量測。在一些實施例中，EBV反應性以表現多個生物標記(例如，CD107A、IFNγ、TNF及IL-2中之兩者或更多者，較佳地所有四者)之T細胞的百分比量測。在一些實施例中，EBV反應性藉由量化樣本中表現CD107A、IFNγ、TNF及IL-2之自體T細胞的百分比來計算。T細胞可在EBV反應性百分比定量之前或之後自樣本(例如，PBMC樣本或包含T細胞之樣本)分離。因此，在一些實施例中，EBV反應性為在主要包含T細胞之樣本中具有一或多個所需特徵的T細胞之百分比。在一些實施例中，EBV反應性藉由量化樣本中表現CD107A之CD8+淋巴細胞的百分比來量測。在一些實施例中，EBV反應性藉由量化樣本中表現IFNγ之CD8+淋巴細胞的百分比來量測。在一些實施例中，EBV反應性藉由量化樣本中表現TNF之CD8+淋巴細胞的百分比來量測。在一些實施例中，EBV反應性藉由量化樣本中表現IL-2之CD8+淋巴細胞的百分比來量測。在一些實施例中，EBV反應性以表現多個生物標記(例如，CD107A、IFNγ、TNF及IL-2中之兩者或更多者，較佳地所有四者)之CD8+淋巴細胞的百分比量測。CD8+淋巴細胞可在EBV反應性百分比定量之前或之後自樣本(例如，PBMC樣本或CD8+淋巴細胞樣本)分離。因此，在一些實施例中，EBV反應性為在主要包含CD8+淋巴細胞之樣本中具有一或多個所需特徵之CD8+淋巴細胞的百分比。在一些實施例中，EBV反應性藉由量化樣本中表現CD107A之CD3+淋巴細胞的百分比來量測。在一些實施例中，EBV反應性藉由量化樣本中表現IFNγ之CD3+淋巴細胞的百分比來量測。在一些實施例中，EBV反應性藉由量化樣本中表現TNF之CD3+淋巴細胞的百分比來量測。在一些實施例中，EBV反應性藉由量化樣本中表現IL-2之CD3+淋巴細胞的百分比來量測。在一些實施例中，EBV反應性以表現多個生物標記(例如，CD107A、IFNγ、TNF及IL-2中之兩者或更多者，較佳地所有四者)之CD3+淋巴細胞的百分比量測。CD3+淋巴細胞可在EBV反應性百分比定量之前或之後自樣本(例如，PBMC樣本或CD3+淋巴細胞樣本)分離。因此，在一些實施例中，EBV反應性為在主要包含CD3+淋巴細胞之樣本中具有一或多個所需特徵之CD3+淋巴細胞的百分比。在一些實施例中，方法進一步包含分析藉由經增殖肽特異性自體T細胞(例如，CTL)之CD107a、IFNγ、TNF或IL-2表現，且若至少1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%、51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%或90%之經增殖肽特異性自體T細胞(例如，CTL)表現CD107a、IFNγ、TNF或IL-2，則向個體投與肽特異性自體T細胞(例如，CTL)。在一些實施例中，方法進一步包含分析藉由經增殖肽特異性自體T細胞(例如，CTL)之CD107a及TNF表現，且若至少1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%、51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%或90%之經增殖肽特異性自體T細胞(例如，CTL)表現CD107a及TNF，則向個體投與肽特異性自體T細胞(例如，CTL)。在一些實施例中，方法進一步包含分析藉由經增殖肽特異性自體T細胞(例如，CTL)之CD107a及IFNγ表現，且若至少1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%、51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%或90%之經增殖肽特異性自體T細胞(例如，CTL)表現CD107a及IFNγ，則向個體投與肽特異性自體T細胞(例如，CTL)。在一些實施例中，方法進一步包含分析藉由經增殖肽特異性自體T細胞(例如，CTL)之CD107a及IL-2表現，且若至少1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%、51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%或90%之經增殖肽特異性自體T細胞(例如，CTL)表現CD107a及IL-2，則向個體投與肽特異性自體T細胞(例如，CTL)。在一些實施例中，方法進一步包含分析藉由經增殖肽特異性自體T細胞(例如，CTL)之TNF及IL-2表現，且若至少1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%、51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%或90%之經增殖肽特異性自體T細胞(例如，CTL)表現TNF及IL-2，則向個體投與肽特異性自體T細胞(例如，CTL)。在一些實施例中，方法進一步包含分析藉由經增殖肽特異性自體T細胞(例如，CTL)之IFNγ及IL-2表現，且若至少1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%、51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%或90%之經增殖肽特異性自體T細胞(例如，CTL)表現IFNγ及IL-2，則向個體投與肽特異性自體T細胞(例如，CTL)。在一些實施例中，方法進一步包含分析藉由經增殖肽特異性自體T細胞(例如，CTL)之IFNγ及TNF表現，且若至少1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%、51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%或90%之經增殖肽特異性自體T細胞(例如，CTL)表現IFNγ及TNF，則向個體投與肽特異性自體T細胞(例如，CTL)。在一些實施例中，方法進一步包含分析藉由經增殖肽特異性自體T細胞(例如，CTL)之CD107a、IFNγ及TNF表現，且若至少1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%、51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%或90%之經增殖肽特異性自體T細胞(例如，CTL)表現CD107a、IFNγ及TNF，則向個體投與肽特異性自體T細胞(例如，CTL)。在一些實施例中，方法進一步包含分析藉由經增殖肽特異性自體T細胞(例如，CTL)之CD107a、IFNγ及IL-2表現，且若至少1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%、51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%或90%之經增殖肽特異性自體T細胞(例如，CTL)表現CD107a、IFNγ及IL-2，則向個體投與肽特異性自體T細胞(例如，CTL)。在一些實施例中，方法進一步包含分析藉由經增殖肽特異性自體T細胞(例如，CTL)之CD107a、IL-2及TNF表現，且若至少1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%、51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%或90%之經增殖肽特異性自體T細胞(例如，CTL)表現CD107a、IL-2及TNF，則向個體投與肽特異性自體T細胞(例如，CTL)。在一些實施例中，方法進一步包含分析藉由經增殖肽特異性自體T細胞(例如，CTL)之IFNγ、IL-2及TNF表現，且若至少1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%、51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%或90%之經增殖肽特異性自體T細胞(例如，CTL)表現IFNγ、IL-2及TNF，則向個體投與肽特異性自體T細胞(例如，CTL)。在一些實施例中，若至少1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%、51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%或90%之肽特異性自體T細胞(例如，CTL)表現CD107a、IFNγ、TNF及IL-2，則向個體投與自體T細胞(例如，CTL)。至少1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%、51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%或90%之肽特異性自體T細胞(例如，CTL)具有EBV反應性。在一些實施例中，每劑量T細胞向個體投與約1 × 10⁵ 至約1 × 10⁸ 個T細胞。在一些實施例中，每劑量T細胞向個體投與約1 × 10⁶ 至約1 × 10⁷ 個T細胞。在一些實施例中，向個體投與5 × 10⁶ 、1 × 10⁷ 、1.5 × 10⁷ 或2 × 10⁷ 個T細胞(例如，CTL)。可向個體投與多次劑量。在一些實施例中，投與初始劑量之T細胞(例如，自體CTL)，且例如沿療法過程以增大之劑量投與一或多個額外劑量之T細胞(例如，自體CTL)。在一些實施例中，投與兩次或多於兩次、三次或多於三次、四次或多於四次、五次或多於五次、六次或多於六次、七次或多於七次、八次或多於八次、九次或多於九次、或十次或多於十次劑量。個體可經投與與初始劑量相同或不同之額外劑量。舉例而言，可投與較低劑量，隨後投與較高劑量。劑量可每天一次、一週兩次、每週一次、兩週一次、每月一次、每兩個月一次、每三個月一次或每六個月一次投與。在一些實施例中，個體並不由於T細胞(例如，自體CTL)投與而經歷任何不良效應。在一些態樣中，方法進一步包含藉由以下來評估患有多發性硬化症的個體之授受性免疫療法之療效：自個體獲得大腦脊髓液(CSF)之第一樣本；分析該第一樣本中之CSF中之抗EBV IgG的量(較佳地在CTL投與之前)；及在一段時間之後自個體獲得CSF的第二樣本(較佳地在CTL投與之後)；分析該第二樣本中之CSF中之抗EBV IgG的相對量；且若該第二樣本中之抗EBV IgG之量少於該第一樣本，則疾病已穩定且/或未惡化。可獲得額外CTF樣本且與先前樣本進行比較。本文中亦提供藉由向個體投與表現與在I類MHC上呈現之EBV肽特異性結合的T細胞受體之自體T細胞(例如，CTL)來減小患有MS之個體之CSF中的抗EBV IgG含量之方法。CSF中之抗EBV IgG含量減少可藉由CSF IgG指數來量測。在一些實施例中，CSF IgG含量可由Reiber及Felgenhauer式(亦即，參看圖1)計算。抗EBV IgG含量在投與T細胞後可減少至少1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、25%、30%、35%、40%、45%或50%。在一些實施例中，方法包含藉由向個體投與表現與在I類MHC上呈現之EBV肽特異性結合的T細胞受體之自體T細胞(例如，CTL，諸如本文中所描述之肽特異性自體CTL)來改善或穩定個體之MS的症狀(例如，視覺喪失、視覺敏銳度喪失、手靈巧性喪失或減少、增加之疲勞及/或尿急)。本文中亦提供患有MS之個體改善視覺敏銳度、改善色覺或穩定視覺喪失之方法，該方法包含向個體投與自體T細胞(例如，CTL，諸如本文中所描述之肽特異性自體CTL)。在一些實施例中，本文中提供改善患有MS之個體之運動技能、平衡或手靈巧性的方法，該方法包含向個體投與本文中所描述之自體T細胞。本文中亦提供改善個體之睡眠之方法，該方法包含向個體投與自體T細胞(例如，CTL，諸如本文中所描述之肽特異性自體CTL)。在一些實施例中，給予個體診斷測試，諸如EDSS。在一些實施例中，個體經EDSS測試且在T細胞投與之前及/或之後給予EDSS評分。EDSS評分可保持相同，或EDSS評分可在T細胞投與之後減小(例如，減小至少0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5或5.0)。本文中所揭示之各種方法可為用於改善個體，諸如患有多發性硬化症之個體之行走、視覺、平衡、認知或其他症狀的方法，及/或用於改善個體，諸如患有多發性硬化症之個體之多發性硬化症功能複合物(MSFC)、EDSS或MSSS得分的方法。因此，在某些實施例中，本文中所揭示之治療方法包括用於穩定或改善患者之功能障礙或病況(例如，運動技能/平衡/手靈巧性、睡眠、視覺敏銳度或色覺、疲勞、尿急)的方法，由此患者之功能障礙得分(如藉由此等測試或另一適合測試中之任一者所量測)在一週、兩週、四週、6週、8週、10週、三個月、六個月、一年或兩年療法之後相對於T細胞療法之前的EDSS得分高至少約1%、至少約2%、至少約5%、至少約10%、至少約25%、至少約40%、至少約50%或甚至至少約60%。舉例而言，可測試個體之EDSS評分，例如，評估在不同時間點測試之個體行為，諸如在0個月(基線)、1個月、2個月、3個月、6個月、1年及2年測試。在某些實施例中，若證明個體得分在投與T細胞之後減小，則認為MS已穩定且/或未惡化。在其他實施例中，若在投與T細胞之後個體得分既不增加或減小，則認為MS已穩定且/或未惡化。EDSS測試可在開始CTL治療之任何時刻(例如，在開始CTL治療之一週、兩週、三週、四週、一個月、兩個月、三個月)經重複以評估治療是否減緩或中斷運動技能/平衡/手靈巧性、經改善睡眠、經改善視覺敏銳度或色覺、疲勞、尿急中之任何進一步惡化。在一些實施例中，行走功能障礙之進展可使用行走測試來測試，例如，評估在不同時間點在25呎行走測試上之個體行為。在某些實施例中，若未證明行走惡化，則認為個體在行走中不具有進行性惡化。針對尚未接受T細胞療法之此類患者，展現進行性行走功能障礙之個體開始使用例如CTL之T細胞治療。行走測試可重複(例如，在自開始治療之一週、兩週、三週、四週、一個月、兩個月、三個月)以評估治療是否減緩或中斷行走行為的任何進一步惡化，例如，如藉由行走測試所量測。與MS療法相關之認知結果中之改善，是否減緩認知衰退、穩定認知衰退或改善認知功能可使用PASAT (例如，PASAT 2或PASAT 3)或SDMT測試或替代地MS-COG測試(參看Erlanger等人,J Neuro Sci 340: 123-129 (2014))來評估。本文中所提供之醫藥組合物中之活性成分之實際劑量濃度可變化以便獲得有效達成特定患者、組合物及投與模式之所需治療反應而對患者無毒性的活性成分之量。所選擇之劑量濃度將取決於包括以下之各種因素：所採用的特定試劑之活性，投與途徑，投與時間，所採用的特定化合物之分泌或代謝速率，治療持續時間，與所採用之特定化合物組合使用之其他藥物、化合物及/或材料，待治療的患者之年齡、性別、體重、病狀、一般健康及先前病史，以及如醫學領域中所熟知之類似因素。例證：實例 1 ： MS 患者研究及用 EBV 特異性 T 細胞 療法對 MS 之多種治療 參與者捐贈200-400 mL血液樣本。來自此樣本之周邊血液單核細胞用於實驗室產生懸浮於臨床級標準生理鹽水中之自體潛伏膜蛋白(LMP1及LMP2)/埃-巴二氏病毒核抗原1 (EBNA1)特異性T細胞。藉由用經重組腺病毒載體AdE1-LMPpoly (一種編碼EBV核抗原-1 (EBNA1)、潛伏膜蛋白1 (LMP1)及LMP2A之多個CD8+ T細胞抗原決定基的腺病毒載體)感染之經γ輻射自體周邊血液單核細胞刺激來產生研究性產物。隨後評估T細胞培養物之細胞產生率、存活率及T細胞頻率。在收集200-400 mL血液樣本與第一次細胞投與之間通常將過去約5週。各患者活體外接受其自身T細胞刺激以增強對EBNA1、LMP1及LMP2A之反應性，且經跟蹤26週。患者以每間隔兩星期一次地接受靜脈內T細胞療法。各劑量給予一次，初始劑量為5 × 10⁶ 個T細胞，隨後為1 × 10⁷ 、1.5 × 10⁷ 、及2 × 10⁷ 個細胞之劑量。四個總劑量在8週之時間段內給予。各細胞劑量經由靜脈線滴注投與，允許將T細胞緩慢投與至血液中，而非細胞之快速注射。十三個患者入選。三個患者在接受細胞療法之前退出：一個因為不相關惡性疾病診斷，且兩個因為不能產生EBV特異性T細胞。剩餘十個患者按照流程各接受四次T細胞輸注(表1，下文)。自體EBV-CTL具有良好耐受性，且未觀測到顯著不良跡象(AE)。僅一個患者經歷相關或可能相關的AE，其經判定為因DMSO溶劑而導致的暫時性1級「經改變味覺」。未報導4級或5級 AE。六個患者經歷症狀性及目標臨床改善，其在第一次輸注(表1)之後的2-14週開始。疲勞減少為具有臨床改善之患者的顯要特徵。觀測EBV反應性與臨床反應之間的相關性。接受具有更高EBV反應性之T細胞之患者經歷更大臨床反應。在研究中六個患者接受具有≥ 7% EBV反應性之T細胞；此等患者中之五個經歷臨床改善，其中3個患者經歷EDSS評分中之改善。四個患者接受具有≤ 3% EBV反應性之T細胞；僅此等中之一個經歷臨床改善，一個經歷EDSS惡化，而兩個未報導變化。在6個月研究週期期間之臨床改善或其缺乏亦與所投與之T細胞之EBV特異性T細胞功能之生物標記相關(圖2)。與未觀測到效益之患者相比，經歷臨床效益之患者接受顯著富集表現CD107a、IFNγ及TNFα之EBV特異性CD8+ T細胞的療法。另外，臨床效益與所投與之T細胞之多功能性(CD107a、IFNγ、TNFα及IL-2之表現)相關。自體T細胞療法對於此研究中之MS患者為安全的及具有良好耐受性，其中無嚴重AE，且與治療相關的僅有AE為味覺障礙，很可能與製劑中之DMSO而非T細胞相關。 SPMS及PPMS患者中之臨床改善來自相對固定之基線(至多5年)且不表示急性MS潮紅之消解。接受具有EBV反應性≥ 7%之T細胞的6個患者中，5個展示臨床改善，其中3個患者改善其EDSS評分。與EBV特異性T細胞之假設作用機制一致，在T細胞產物之EBV反應性與臨床改善之間似乎存在劑量-反應相關性。疲勞減少為反應者中之一致及顯要的特徵。疲勞為MS之主要失能症狀且常常可先於臨床MS發病數年。吾人之數據增加了EBV感染在MS中之致病性作用的有力證據。因為T細胞進入所有CNS隔室，所以僅靶向經EBV感染之B細胞之T細胞療法為可提供有利的安全及持久療效之新治療模式。實例 2 ： 用於多參數胞內細胞介素染色之例示性方法及對 LMP 及 EBNA1 特異性 T 細胞 之脫粒分析 1. 在RPMI1640-10% FCS中將待測試之LMP/EBNA1 CD8肽混合物(100 μg/ml儲備液)、EBNA1肽混合物(100 μg/ml儲備液)及任何經HLA匹配之肽抗原決定基(200 μg/mL儲備液)稀釋至2 µg/mL(分析中之最終濃度將為1 µg/mL)。 2. 在RPMI1640-10% FCS中以1:50稀釋細胞刺激混合液(Cell Stimulation Cocktail)。(在分析中此將為1:100最終稀釋液)。注意：電子生物科學細胞刺激混合液(eBioscience Cell Stimulation Cocktail)在RPMI中稀釋1:5之後儲存在-20℃下以製備100×之儲備液濃度。 3. 將100 µL適當肽混合物、肽抗原決定基或細胞刺激混合液或100 µL RPMI1640-10% FCS (無肽對照組)添加至96孔V型底盤之適當孔中。 4. 在RPMI1640-10% FCS中將PBMC或T細胞稀釋至5 × 10⁶ 個細胞/毫升 (此將按照分析產生5 × 10⁵ 個細胞)。 5. 將GolgiPlug (布雷菲爾德菌素A (Brefeldin A))添加至細胞中以使最終比率為2 µL/mL之細胞(分析中之GolgiPlug的最終濃度將為1 µL/mL)。 6. 將GolgiStop (莫能菌素(monensin))添加至細胞中以使最終比率為1.4 µL/mL之細胞(分析中之GolgiStop之最終濃度將為0.7 µL/mL)。 7. 將FITC共軛抗CD107a添加至細胞中以使最終比率為50 µL/mL(抗CD107a之最終量為5 µL/測試)。 8. 將100 µL細胞懸浮液/孔添加至96孔V型底盤之所要求孔中。 9. 在37℃/6.5% CO₂ 下培育4小時。 10. 將培養盤在2300 rpm下離心2分鐘。 11. 拋棄清液層。藉由每孔添加200 µL PBS-2% FCS來洗滌細胞且將培養盤在2300 rpm下離心2分鐘。重複此步驟。 12. 使用PBS-2% FCS 200 μL/洗滌每孔來洗滌細胞兩次，使試管在1000 g (2300 rpm)下離心2 min。表面細胞抗原染色 13. 使細胞再懸浮於含有0.125 perCP-Cy5.5共軛之抗CD8、0.25 µL太平洋藍(Pacific Blue)共軛之抗CD4及0.2 μL Live/Dead Near IR之50 微升/孔PBS-2% FCS中。在4℃下培育30分鐘。 14. 將培養盤在2300 rpm下離心2分鐘。拋棄清液層。藉由每孔添加200 µL PBS-2% FCS來洗滌細胞。將培養盤在2300 rpm下離心2分鐘。重複此步驟。 15. 使細胞再懸浮於100 µL/孔BD cytofix/cytoperm溶液中且在4℃下培育20分鐘。 16. 將培養盤在2300 rpm下離心2分鐘。拋棄清液層。藉由添加200 µL BD Perm/洗滌每孔來洗滌細胞。將培養盤在2300 rpm下離心2分鐘。重複此步驟。胞內細胞介素染色 17. 使固定/滲透細胞再懸浮於含有1 µL PE共軛之抗IL-2、1 µL AF700共軛之抗IFNγ及0.25 µL APC共軛之抗TNF之50 微升/孔BD Perm/清洗溶液中。在4℃下培育30分鐘。 18. 將培養盤在2300 rpm下離心2分鐘。拋棄清液層。藉由添加200 µL Perm/洗滌每孔來洗滌細胞。將培養盤在2300 rpm下離心2分鐘。重複此步驟。 19. 使細胞再懸浮於200 µL PBS-2%多聚甲醛中且儲存在4℃下。 20. 使用BD Fortessa採集細胞。使用Flow Jo軟件分析細胞介素產生/脫粒。表2

圖 1 具有兩個圖(A-B)，且展示在4年前第一治療過程之後及在今年當前試驗中的再治療之後的初始患者中之自體EBV特異性T細胞療法之前及之後的CSF。(A) CSF IgG指數，其中水平虛線指示正常範圍上限。(B)鞘內IgG產量(IgG(loc))藉由式Reiber及Felgenhauer (ref.16):IgG(loc) (mg/L) = {(CSF IgG ÷血清IgG) − [0.8 × (√((CSF白蛋白÷血清白蛋白)2 + 15))] + 1.8} ×血清IgG來計算。豎直線指示5 × 106、1 ×107、1.5 × 107及2 ×107個細胞之連續T細胞輸注。圖 2 具有兩個部分(A-B)，且展示T細胞產物之EBV特異性CD8+ T細胞反應性與對T細胞療法的臨床反應之間的相關性。圖 3 具有兩個圖(A及B)，且展示大腦MRI上之疾病活性。

<110> 昆士蘭醫學研究所理事會THE COUNCIL OF THE QUEENSLAND INSTITUTE OF MEDICAL RESEARCH) 美商安泰樂生物治療公司(ATARA BIOTHERAPEUTICS,INC.)

<120> 使用自體T細胞治療多發性硬化症之方法

<130> QAH-01470

<140> TW 107102067

<141> 2018-01-19

<150> US 62/576,349

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<150> US 62/448,707

<151> 2017-01-20

<160> 26

<170> PatentIn version 3.5

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Claims

一種自體細胞毒性T細胞(autologous cytotoxic T cells；CTLs)之用途，其係用於製造供用於治療或預防個體之繼發性進行性多發性硬化症(secondary progressive multiple sclerosis(MS))或原發性進行性多發性硬化症(primary progressive MS)之藥物，該等自體細胞毒性T細胞表現與在I類MHC上呈現之EBV肽特異性結合的T細胞受體，且其中至少30%之該等自體CTLs表現IFNγ、CD107a、TNF及IL-2之每一者。
如請求項1之用途，其中至少40%之該等自體CTLs表現IFNγ、CD107a、IL-2及TNF之每一者。
如請求項1之用途，其中至少42%之該等自體CTLs表現IFNγ、CD107a、IL-2及TNF之每一者。
如請求項1之用途，其中至少50%之該等自體CTLs表現IFNγ、CD107a、IL-2及TNF之每一者。
如請求項1之用途，其中至少60%之該等自體CTLs表現IFNγ、CD107a、IL-2及TNF之每一者。
如請求項1之用途，其中至少70%之該等自體CTLs表現IFNγ、CD107a、IL-2及TNF之每一者。
一種自體細胞毒性T細胞(CTLs)之用途，其係用於製造供用於治療或預防個體之繼發性進行性多發性硬化症(secondary progressive MS)或原發性進行性多發性硬化症(primary progressive MS)之藥物，其中該等CTLs係由以下之方法所製備，其包含：a)使用呈現EBV肽之抗原呈現細胞(antigen-presenting cells；APCs)培育包含自體CTLs之樣本，由此誘使該樣本中之肽特異性自體CTLs增殖；其中至少30%之該等經增殖之肽特異性自體CTLs表現IFNγ、CD107a、TNF及IL-2之每一者。
如請求項7之用途，其中至少40%之該等經增殖之肽特異性自體CTLs表現IFNγ、CD107a、IL-2及TNF之每一者。
如請求項7之用途，其中至少42%之該等經增殖之肽特異性自體CTLs表現IFNγ、CD107a、IL-2及TNF之每一者。
如請求項7之用途，其中至少50%之該等經增殖之肽特異性自體CTLs表現IFNγ、CD107a、IL-2及TNF之每一者。
如請求項7之用途，其中至少60%之該等經增殖之肽特異性自體CTLs表現IFNγ、CD107a、IL-2及TNF之每一者。
如請求項7之用途，其中該等APCs包含B細胞、抗原呈現T細胞、樹突狀細胞、人工抗原呈現細胞或aK562細胞。
如請求項7之用途，其中該EBV肽包含表1中所列出之胺基酸序列。
如請求項1至13中任一項之用途，其中該治療或預防個體之MS減小該患有MS之個體之大腦脊髓液(CSF)中的抗EBV IgG含量。
如請求項1至13中任一項之用途，其中該藥物係用於向該個體投與劑量約5×10⁶個CTLs、約1×10⁷個CTLs、約1.5×10⁷個CTLs或約2×10⁷個CTLs。