TWI843702B - 細胞結構體之用途 - Google Patents

Abstract

本發明之課題為提供一種優異之溶酶體病處置劑。依據本發明， 可提供一種溶酶體病處置劑，其包含細胞結構體，該細胞結構體包含複數個生物相容性高分子嵌段和至少1種類的複數個細胞，且在複數個上述細胞的間隙至少配置有1個上述高分子嵌段。

Description

細胞結構體之用途

本發明係有關一種包含在複數個細胞的間隙配置有複數個高分子嵌段之細胞結構體之溶酶體病處置劑。

溶酶體病為因如下原因而發病之疾病的統稱，該原因為：由於因基因異常而位於溶酶體中之1個以上的酶缺乏活性，因此未分解之物質貯積於細胞內胞器亦即溶酶體內、或者因位於溶酶體中的之膜蛋白的功能障礙而物質貯積於溶酶體內。關於溶酶體病，分別依據具有異常之酶或基因分類為複數種，且為存在60種以上之疑難雜症。

通常，對於溶酶體病，進行從體外人工補充酶之酶補充療法。例如進行針對法布瑞氏症(Fabry Disease)(瀰漫性軀體血管角化瘤)之酶補充療法，但是酶製劑的體內滯留時間顯著較短，因此必須以2週1次的頻率終生持續施用酶製劑，對於患者來說負擔較大且QOL(生活品質：Quality of Life)較低。並且，亦有不存在酶製劑之溶酶體病，在該情形下沒有有效的治療方法。

並且，還研發了如下技術：將過度表達溶酶體病的治療中所需之酶的基因之細胞用於治療中。例如，在專利文獻1中，記載有過度表達人α-galA，並且以分泌之方式經遺傳修飾之人細胞亦即α-半乳糖苷酶A缺乏症治療用細胞。並且，在專利文獻2中記載有：將未進行基因引入之多能成體祖細胞(MAPC)等幹細胞用於溶酶體病。

另一方面，在專利文獻3中記載有細胞結構體，該細胞結構體包含具有生物相容性之高分子嵌段和細胞，且在複數個上述細胞之間的間隙配置有複數個上述高分子嵌段之細胞結構體。

【先前技術文獻】 【專利文獻】

【專利文獻1】日本專利第4313381號公報

【專利文獻2】美國專利第7，927，587號公報

【專利文獻3】國際公開WO2011/108517號

從針對生物的有害性及危險性的觀點考慮，使用如專利文獻1中所記載那樣之過度表達基因之細胞亦不佳。並且，在如專利文獻2中所記載那樣之單獨使用多能成體祖細胞(MAPC)等幹細胞之情形中，其效果不會持續，無法用於治療中。本發明應解決之課題為提供優異之溶酶體病處置劑。

為了解決上述問題，本發明人進行深入研究，其結果發現了包含生物相容性高分子嵌段和細胞，且在複數個細胞的間隙配置有複數個生物相容性高分子嵌段之細胞結構體有利於處置溶酶體病，從而完成了本發明。

亦即，依據本發明，提供以下發明。

<1>一種溶酶體病處置劑，其包含細胞結構體，該細胞結構體包含複數個生物相容性高分子嵌段和至少1種類的複數個細胞，且在複數個上述細胞的間隙至少配置有1個上述高分子嵌段。

<2>如<1>所述之處置劑，其中上述細胞至少包含間葉系幹細胞或纖維母細胞。

<3>如<1>或<2>所述之處置劑，其中上述細胞結構體的每一個細胞包含0.0000001μg以上1μg以下的生物相容性高分子嵌段。

<4>如<1>至<3>中任一項所述之處置劑，其中1個上述生物相容性高分子嵌段的大小為10μm以上300μm以下。

<5>如<1>至<4>中任一項所述之處置劑，其中上述細胞結構體的厚度或直徑為100μm以上3cm以下。

<6>如<1>至<5>中任一項所述之處置劑，其中上述生物相容性高分子嵌段由重組肽構成。

<7>如<6>所述之處置劑，其中上述重組肽由下述式表示。

式：A-[(Gly-X-Y)_n]_m-B

式中，A表示任意的胺基酸或胺基酸序列，B表示任意的胺基酸或胺基酸序列，n個X分別獨立地表示任意的胺基酸，n個Y分別獨立地表示任意的胺基酸，n表示3~100的整數，m表示2~10的整數。另外，n個Gly-X-Y可以彼此相同，亦可以彼此不同。

<8>如<6>或<7>所述之處置劑，其中上述重組肽為下述之任一者：由序列編號1所記載之胺基酸序列構成之肽；由在序列編號1所記載之胺基酸序列中有1個或者數個胺基酸缺失、 取代或者加成之胺基酸序列構成，並且具有生物相容性之肽；或由與序列編號1所記載之胺基酸序列具有80%以上的序列相同性之胺基酸序列構成，並且具有生物相容性之肽。

<9>如<1>至<8>中任一項中所記載之處置劑，其中上述生物相容性高分子嵌段中，上述生物相容性高分子藉由熱、紫外線或酶而進行交聯。

<10>如<1>至<9>中任一項所述之處置劑，其中上述生物相容性高分子嵌段處於藉由對生物相容性高分子的多孔體進行粉碎而獲得之顆粒的形態。

<11>如<1>至<10>中任一項所述之處置劑，其中溶酶體病為法布瑞氏症。

<12>如<11>所述之處置劑，其中藉由在生物體內分泌α-半乳糖苷酶A來降低生物體內的神經醯胺三己糖苷(Globotriaosylsphingosine)。

依據本發明，還提供以下發明。

(A)一種溶酶體病的處置方法，該方法包含將細胞結構體移植到需要處置溶酶體病之對象者之製程，該細胞結構體包含複數個生物相容性高分子嵌段和至少1種類的複數個細胞，且在複數個上述細胞的間隙至少配置有1個上述高分子嵌段。

(B)一種細胞結構體，用於處置溶酶體病，並包含複數個生物相容性高分子嵌段及至少1種類的複數個細胞，且在複數個上述細胞的間隙配置有至少1個上述高分子嵌段。

(C)一種細胞結構體的應用，該細胞結構體用於製造溶酶體病處置劑，並包含複數個生物相容性高分子嵌段和至少1種類的複數個細胞，且在複數個上述細胞的間隙至少配置有1個上述高分子嵌段。

【發明效果】

本發明的處置劑適用於溶酶體病處置劑。

圖1表示條件A中所記載之試驗的液溫剖析。

圖2表示條件B中所記載之試驗的液溫剖析。

圖3表示條件C中所記載之試驗的液溫剖析。

圖4表示源自人骨髓之間葉系幹細胞(hBMSC)中之溶酶體病相關酶的表達量。

圖5表示源自人骨髓之間葉系幹細胞(hBMSC)中之溶酶體病相關酶的表達量。

圖6表示源自人骨髓之間葉系幹細胞(hBMSC)、源自人脂肪之幹細胞(hADSC)及源自人牙髓之幹細胞(hDPSC)中之溶酶體病相關酶的表達量。關於NEU1、CTSA、GLB1及HEXA，未研發酶製劑，並且相當於患者數較多者中的前6種。IDS為患者數最多者中的1種。

圖7表示源自人骨髓之間葉系幹細胞(hBMSC)、源自人脂肪之幹細胞(hADSC)及源自人牙髓之幹細胞(hDPSC)中之溶酶體病相關酶的表達量。關於PPTI和GNPTAB，未研發酶製劑，並且相當於患者數較多者中的前6種。

圖8表示對從細胞或細胞結構體分泌出之αGalA酶量進行測量而得之結果。

圖9表示確定由各種給藥路徑施用細胞結構體之後經4週後的肝臟中的神經醯胺三己糖苷(LysoGb3)量而得之結果。

圖10表示確定由各種給藥路徑施用細胞結構體之後經4週後的腎臟中的LysoGb3量而得之結果。

圖11表示確定由各種給藥路徑施用細胞結構體之後經4週後的心臟中的LysoGb3量而得之結果。

圖12表示確定將細胞施用於門靜脈內、或將細胞結構體施用於尾靜脈內之後經4週後的肝臟中的LysoGb3量而得之結果。

圖13表示確定將細胞結構體移植到腎包膜下之後經4週後的肝臟中的LysoGb3量而得之試驗的流程。

圖14表示確定將細胞結構體移植到腎包膜下之後經4週後的肝臟中的LysoGb3量而得之結果。

圖15表示將細胞結構體移植到腎包膜下之後經4週後的腎包膜下的細胞結構體的蘇木素．伊紅(HE)染色圖像。

以下，對用於實施本發明之形態進行詳細說明。

本說明書中，有時將本發明中所使用之細胞結構體還稱為鑲嵌細胞塊(呈鑲嵌狀之細胞塊)。並且，本說明書中，“~”表示將其前後中所記載之樹脂分別作為最小值及最大值而包含之範圍。

本發明係有關一種溶酶體病處置劑，其包含細胞結構體，該細 胞結構體包含複數個生物相容性高分子嵌段和至少1種類的複數個細胞，且在複數個上述細胞的間隙至少配置有1個上述高分子嵌段。藉由本發明的溶酶體病處置劑，能夠持續維持處置效果。

如後述實施例所示可知：與未施用細胞結構體之群組及僅施用了細胞之群組相比，對法布瑞氏症小鼠施用了細胞結構體之群組中，肝臟中的LysoGb3顯著減少。依據實施例所示之結果明確可知：在施用了細胞來作為細胞結構體之情形下，對法布瑞氏症小鼠顯示出高效性，這係完全出乎意料之效果。

(1)生物相容性高分子嵌段

(1-1)生物相容性高分子

所謂生物相容性，係指與生物接觸時不會引起如長期且慢性炎症反應等那樣的顯著的不良反應。關於本發明中所使用之生物相容性高分子，只要為對生物具有相容性者，則對在生物體內是否進行分解並無特別限定，生物可降解高分子為較佳。作為非生物可降解材料，具體而言，可舉出聚四氟乙烯(PTFE)、聚胺酯、聚丙烯、聚酯、氯乙烯、聚碳酸酯、丙烯酸、不銹鋼、鈦、聚矽氧及MPC(2-甲基丙烯醯氧乙基磷酸膽鹼)等。作為生物可降解材料，具體而言，可舉出源自天然之肽、重組肽或化學合成肽等聚肽(例如，以下所說明之明膠等)、聚乳酸、聚甘醇酸、乳酸．甘醇酸共聚物(PLGA)、玻尿酸、醣胺聚醣、蛋白多糖、軟骨素、纖維素、洋菜醣、羧甲基纖維素、幾丁質及幾丁聚醣等。上述中，重組肽為特佳。針對該些生物相容性高分子，可以對提高細胞黏接性進行研究。具體而言，關於“由相對於基材表面之細胞黏接基質(纖維接合素、玻璃黏連蛋白、 層連結蛋白)、細胞黏接序列(由胺基酸單字母標記表示之RGD序列、LDV序列、REDV序列、YIGSR序列、PDSGR序列、RYVVLPR序列、LGTIPG序列、RNIAEIIKDI序列、IKVAV序列、LRE序列、DGEA序列及HAV序列)肽進行之包覆”，能夠使用“基材表面的胺基化、陽離子化”或“基材表面的電漿處理、藉由電暈放電進行之親水性處理”等方法。

關於包含重組肽或化學合成肽之聚肽的種類，只要為具有生物相容性者，則並無特別限定，例如明膠、膠原蛋白、端膠原蛋白、彈性蛋白、纖維接合素、Pronectin、層連結蛋白、固生蛋白、纖維蛋白、絲蛋白、巢蛋白、血小板反應素、纖維連接蛋白(註冊商標)為較佳，最佳為明膠、膠原蛋白、端膠原蛋白。作為用於本發明中之明膠，較佳為天然明膠、重組明膠或化學合成明膠，進一步較佳為重組明膠。在此所說之天然明膠，係指由源自天然之膠原蛋白製成之明膠。

所謂化學合成肽或化學合成明膠，係指經人工合成之肽或明膠。關於明膠等肽的合成，可以係固相合成，亦可以係液相合成，但較佳為固相合成。對於本領域技術人員來說肽的固相合成係公知的，例如可舉出使用Fmoc基團(茀基-甲氧基-羰基：Fluorenyl-Methoxy-Carbonyl基團)來作為胺基的保護之Fmoc基團合成法、以及使用Boc基團(叔丁氧羰基：tert-Butyl Oxy Carbonyl基團)來作為胺基的保護之Boc基團合成法等。另外，化學合成明膠的較佳的形態能夠應用在本說明書中後述之重組明膠中所記載之內容。

本發明中所使用之生物相容性高分子的親水性值“1/IOB”值係0至1.0為較佳。更佳為0至0.6，進一步較佳為0至0.4。所謂IOB，係指 基於由藤田淳提出之表示有機化合物的極性/非極性之有機概念圖之、親疏水性的親指標，關於其詳細內容，例如在“"Pharmaceutical Bulletin”，vol.2，2，pp.163-173(1954)、“化學的領域”vol.11，10，pp.719-725(1957)、“Fragrance Journal”，vol.50，pp.79-82(1981)等中進行了說明。簡言之，將所有的有機化合物的來源設為甲烷(CH₄)，且其他化合物均視作甲烷的衍生物，對其碳數、取代基、轉換部、環等分別設定一定的數值，並將該得分加在一起而求出有機性值(OV)、無機性值(IV)，將該值繪製在將有機性值作為X軸且將無機性值作為Y軸之圖上。所謂有機概念圖中之IOB，係指有機概念圖中之無機性值(IV)與有機性值(OV)之比，亦即“無機性值(IV)/有機性值(OV)”。關於有機概念圖的詳細內容，參閱“新版有機概念圖-基礎和應用-”(甲田善生等著，SANKYO SHUPPAN Co.,Ltd，2008)。本說明書中，由取IOB的倒數而得之“1/IOB”值表示親疏水性。其為表示“1/IOB”值越小(接近0)，越親水之標記。

藉由將本發明中所使用之高分子的“1/IOB”值設在上述範圍，親水性變高，並且吸水性變高，藉此有效地作用於保持營養成分，作為結果，推斷為有助於本發明之細胞結構體(鑲嵌細胞塊)中之細胞的穩定化/生存力。

在本發明中所使用之生物相容性高分子為聚肽之情形下，由總平均親水性(Grand average of hydropathicity(GRAVY))值表示之親疏水性指標中，0.3以下且-9.0以上為較佳，0.0以下且-7.0以上為進一步較佳。總平均親水性值能夠藉由“Gasteiger E.,Hoogland C.,Gattiker A.,Du vaud S.,Wilkins M.R.,Appel R.D.,Bairoch A.；Protein Identification and Analysis Tools on the ExPASy Server；(In)John M.Walker(ed)：The Proteomics Protocols Handbook，Humana Press(2005).pp.571-607”及“Gasteiger E.,Gattiker A.,Hoogland C.,Ivanyi I.,Appel R.D.,Bairoch A.；ExPASy：the proteomics server for in-depth protein knowledge and analysis.；Nucleic Acids Res.31：3784-3788(2003).”的方法來獲得。

藉由將本發明中所使用之高分子的GRAVY值設在上述範圍，親水性變高，並且吸水性變高，藉此有效地作用於營養成分的保持，作為結果，推斷為有助於本發明之細胞結構體(鑲嵌細胞塊)中之細胞的穩定化/生存力。

(1-2)交聯

本發明中所使用之生物相容性高分子可以係經交聯者，亦可以係未經交聯者，但是經交聯者為較佳。藉由使用經交聯之生物相容性高分子，可獲得如下效果：防止在培養基中進行培養時及移植到生物時瞬間分解。作為一般的交聯方法，已知有熱交聯、使用醛類(例如，甲醛、戊二醛等)之交聯、使用縮合劑(碳二亞胺、氰胺等)之交聯、酶交聯、光交聯、紫外線交聯、疏水性相互作用、氫鍵及離子性相互作用等，本發明中亦能夠使用上述交聯方法。作為本發明中所使用之交聯方法，進一步較佳為熱交聯、紫外線交聯、或酶交聯，特佳為熱交聯。

在使用酶進行交聯之情形下，作為酶，只要為具有高分子材料之間的交聯作用者，則並無特別限定，能夠較佳地使用轉麩醯胺酸酶或蟲漆酶進行交聯，最佳地使用轉麩醯胺酸酶進行交聯。作為使用轉麩醯胺酸 酶進行酶交聯之蛋白質的具體例，只要為具有離胺酸殘基及麩醯胺酸殘基之蛋白質，則並無特別限制。關於轉麩醯胺酸酶，可以係源自哺乳類者，亦可以係源自微生物者，具體而言，可舉出AJINOMOTO CO.,INC.製造的Activa系列、作為試劑銷售之源自哺乳類之轉麩醯胺酸酶，例如Oriental Yeast Co.,ltd.製造、Upstate USA Inc.製造、Biodesign International製造等的源自天竺鼠肝臟之轉麩醯胺酸酶、源自山羊之轉麩醯胺酸酶、源自兔之轉麩醯胺酸酶等以及源自人之凝血因子(因子(Factor)XIIIa，Haematologic Technologies,Inc.)等。

關於進行交聯(例如，熱交聯)時的反應溫度，只要能夠進行交聯，則並無特別限定，較佳為-100℃~500℃，更佳為0℃~300℃，進一步較佳為50℃~300℃，特佳為100℃~250℃，最佳為120℃~200℃。

(1-3)重組明膠

所謂本發明中所說之重組明膠，係指藉由轉基因技術製成並具有與明膠類似之胺基酸序列之聚肽或者蛋白樣物質。能夠用於本發明中之重組明膠係具有重複由膠原蛋白的特徵性Gly-X-Y表示之序列(X及Y分別獨立地表示任意的胺基酸)的者為較佳。在此，複數個Gly-X-Y可以彼此相同，亦可以彼此不同。較佳為，在一分子中包含2個序列以上的細胞黏接信號。作為本發明中所使用之重組明膠，能夠使用源自膠原蛋白的部分胺基酸序列之胺基酸序列之重組明膠。例如，能夠使用EP1014176、美國專利6992172號、國際公開WO2004/85473、國際公開WO2008/103041等中所記載者，但是並不限定於它們。作為本發明中所使用之重組明膠，較佳為以下形態的重組明膠。

依據天然明膠原有的性能，重組明膠的生物相容性優異，且不係源自天然的，因此不用擔心牛海綿狀腦病(BSE)等，且非感染性優異。並且，與天然明膠相比，重組明膠均勻，且其序列係確定的，因此在強度及分解性方面，亦能夠藉由交聯等而模糊較少且精密地設計。

關於重組明膠的分子量，並無特別限定，較佳為2000以上100000以下(2kDa(千道爾頓)以上100kDa以下)，更佳為2500以上95000以下(2.5kDa以上95kDa以下)，進一步較佳為5000以上90000以下(5kDa以上90kDa以下)，最佳為10000以上90000以下(10kDa以上90kDa以下)。

重組明膠具有由膠原蛋白的特徵性Gly-X-Y表示之序列的重複為較佳。在此，複數個Gly-X-Y可以彼此相同，亦可以彼此不同。在Gly-X-Y中，Gly表示甘胺酸，X及Y表示任意的胺基酸(較佳為，除甘胺酸以外的任意的胺基酸)。所謂由膠原蛋白的特徵性Gly-X-Y表示之序列，係指明膠．膠原蛋白的胺基酸組成及序列中之、與其他蛋白質相比非常特異的部分結構。在該部分中，甘胺酸佔整體的約3分之1，且胺基酸序列中以每3個為1個的方式重複。甘胺酸係最簡單的胺基酸，且對分子鏈的配置的限制亦較少，對凝膠化時的螺旋結構的再生貢獻較大。在由X及Y表示之胺基酸中大量包含亞胺基酸(脯胺酸、羥基脯胺酸)，佔整體的10%~45%為較佳。較佳為重組明膠的序列的80%以上、進一步較佳為95%以上、最佳為99%以上的胺基酸為Gly-X-Y的重複結構。

關於一般的明膠，極性胺基酸中帶電荷者與不帶電荷者以1：1存在。在此，所謂極性胺基酸，具體而言，係指半胱胺酸、天門冬酸、麩 醯胺酸酸、組胺酸、離胺酸、天門冬素、麩醯胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、酪胺酸及精胺酸，其中，所謂極性不帶電荷的胺基酸，係指半胱胺酸、天門冬素、麩醯胺酸、絲胺酸、蘇胺酸及酪胺酸。本發明中所使用之重組明膠中，所構成之所有胺基酸中，極性胺基酸的比例為10~40%，較佳為20~30%。並且上述極性胺基酸中的不帶電荷的胺基酸的比例為5%以上且小於20%，較佳為5%以上且小於10%。在序列上不包含絲胺酸、蘇胺酸、天門冬素、酪胺酸及半胱胺酸中的任一個胺基酸、較佳為2以上的胺基酸為進一步較佳。

通常，聚肽中，已知有作為細胞黏接信號發揮作用之最小胺基酸序列(例如，Nagai co.,Ltd出版發行“病態生理”Vol.9、No.7(1990年)527頁)。關於本發明中所使用之重組明膠，在一分子中具有2個以上的該些細胞黏接信號為較佳。作為具體的序列，從所黏接之細胞的種類較多之方面考慮，由胺基酸單字母標記表示之、RGD序列、LDV序列、REDV序列、YIGSR序列、PDSGR序列、RYVVLPR序列、LGTIPG序列、RNIAEIIKDI序列、IKVAV序列、LRE序列、DGEA序列及HAV序列的序列為較佳。進一步較佳為RGD序列、YIGSR序列、PDSGR序列、LGTIPG序列、IKVAV序列及HAV序列，特佳為RGD序列。RGD序列中，較佳為ERGD序列。藉由使用具有細胞黏接信號之重組明膠，能夠提高細胞的基質生成量。

作為本發明中所使用之重組明膠中之RGD序列的配置，RGD之間的胺基酸的數量在0~100之間不均勻為較佳，RGD之間的胺基酸的數量在25~60之間不均勻為更加。

從細胞黏接、增殖性的觀點考慮，關於該最小胺基酸序列的含量，在蛋白質1分子中較佳為3~50個，進一步較佳為4~30個，特佳為5~20個，最佳為12個。

本發明中所使用之重組明膠中，相對於胺基酸總數，RGD模體的比例至少為0.4%為較佳。在重組明膠包含350個以上的胺基酸之情形下，350個胺基酸的每一段(stretch)至少包含1個RGD模體為較佳。相對於胺基酸總數，RGD模體的比例更佳為至少係0.6%，進一步較佳為至少係0.8%，更加進一步較佳為至少係1.0%，特佳為至少係1.2%，最佳為至少係1.5%。關於重組肽內的RGD模體的數量，每250個胺基酸，較佳為至少4個，更佳為至少6個，進一步較佳為至少8個，特佳為12個以上16個以下。0.4%的RGD模體的比例對應於每250個胺基酸至少為1個RGD序列。RGD模體的數量為整數，因此為了滿足0.4%的特徵，由251個胺基酸構成之明膠至少包含2個RGD序列。關於本發明的重組明膠，較佳為每250個胺基酸至少包含2個RGD序列，更佳為每250個胺基酸至少包含3個RGD序列，進一步較佳為每250個胺基酸至少包含4個RGD序列。作為本發明的重組明膠的另一形態，較佳為至少包含4個RGD模體，更佳為至少包含6個RGD模體，進一步較佳為至少包含8個RGD模體，特佳為包含12個以上16個以下的RGD模體。

重組明膠可以被局部水解。

較佳為，本發明中所使用之重組明膠由式1：A-[(Gly-X-Y)_n]_m-B表示。n個X分別獨立地表示任意的胺基酸，n個Y分別獨立地表示任意的胺基酸。m表示2~10的整數為較佳，表示3~5的整數為更佳。n 係3~100的整數為較佳，15~70的整數為進一步較佳，50~65的整數為最佳。A表示任意的胺基酸或胺基酸序列，B表示任意的胺基酸或胺基酸序列。另外，n個Gly-X-Y可以彼此相同，亦可以彼此不同。

更佳為，本發明中所使用之重組明膠表示由Gly-Ala-Pro-[(Gly-X-Y)₆₃]₃-Gly(式中，63個X分別獨立地表示任意的胺基酸，63個Y分別獨立地表示任意的胺基酸。另外，63個Gly-X-Y可以彼此相同，亦可以彼此不同。)表示。

在重複單元上鍵結複數個天然存在之膠原蛋白的序列單元為較佳。在此所說之天然存在之膠原蛋白，只要是天然存在者，則可以係任意者，較佳為I型、II型、III型、IV型、或V型膠原蛋白。更佳為I型、II型、或III型膠原蛋白。依據另一形態，上述膠原蛋白的來源較佳為人、牛、豬、小鼠或大鼠，更佳為人。

本發明中所使用之重組明膠的等電點較佳為5~10，更佳為6~10，進一步較佳為7~9.5。關於重組明膠的等電點的測量，如等電聚焦法(參閱Maxey，C.R.(1976；Phitogr.Gelatin2，Editor Cox，P.J.Academic，London，Engl.)中所記載那樣，能夠藉由對使1質量%明膠溶液通過陽離子及陰離子交換樹脂的混晶柱之後的pH進行測量而實施。

較佳為，重組明膠不被去胺基化。

較佳為，重組明膠不具有端肽。

較佳為，重組明膠藉由編碼胺基酸序列之核酸而製備且實質上為純聚肽。

作為本發明中所使用之重組明膠，特佳為下述之任一者：(1)由序列編號1所記載之胺基酸序列構成之肽；(2)由在序列編號1所記載之胺基酸序列中有1個或者數個胺基酸缺失、取代或者加成之胺基酸序列構成，並且具有生物相容性之肽；或(3)由與序列編號1所記載之胺基酸序列具有80%以上(進一步較佳為90%以上，特佳為95%以上，最佳為98%以上)的序列相同性的胺基酸序列構成，並且具有生物相容性之肽。

本發明中之序列相同性係指由下述式計算之值。

%序列相同性=[(相同殘基數)/(對準長度)]×100

2個胺基酸序列中之序列相同性能夠藉由本領域技術人員公知的任意的方法來確定，能夠使用BLAST(基本局部比對搜索工具：Basic Local Alignment Search Tool)程式(J.Mol.Biol.215：403-410，1990)等來確定。

所謂“1個或者數個胺基酸經缺失、取代或者加成而得到之胺基酸序列”中之“1個或者數個”，係指較佳為1~20個，更佳為1~10個，進一步較佳為1~5個，特佳為1~3個。

本發明中所使用之重組明膠能夠藉由本領域技術人員公知的轉基因技術來製造，例如能夠依據EP1014176A2號公報、美國專利第6992172號公報、國際公開WO2004/85473號、國際公開WO2008/103041號等中所記載之方法來製造。具體而言，獲取編碼既定的重組明膠的胺基酸序列之基因，並將其嵌入到表達載體中，製作重組表達載體，並將其引入到合適的宿主中來製作轉化體。藉由在合適的培養基中培養所獲得之轉化體來生成重組明膠，因此能夠藉由從培養物中回收所生成之重組明膠來製備本發明中所使用之重組明膠。

(1-4)生物相容性高分子嵌段

本發明中，使用由上述生物相容性高分子構成之嵌段(塊)。

本發明中之生物相容性高分子嵌段的形狀並無特別限定。例如，為不定形、球狀、粒子狀(顆粒)、粉狀、多孔狀、纖維狀、紡錘狀、扁平狀及片狀，較佳為不定形、球狀、粒子狀(顆粒)、粉狀及多孔狀。所謂不定形，表示表面形狀不均勻者，例如表示如岩石那樣的具有凹凸者。另外，上述形狀的示例並非為分別不同的概念，例如，作為粒子狀(顆粒)的從屬概念的一例，有時成為不定形。

如上所述，本發明中之生物相容性高分子嵌段的形狀並無特別限定，但是敲緊密度較佳為10mg/cm³以上500mg/cm³以下，更佳為20mg/cm³以上400mg/cm³以下，進一步較佳為40mg/cm³以上220mg/cm³以下，特佳為50mg/cm³以上150mg/cm³以下。

敲緊密度為表示一體積中能夠緊密地填充多少嵌段之值，且可知值越小，則越無法緊密地填充，亦即嵌段的結構複雜。所謂生物相容性高分子嵌段的敲緊密度，認為表示生物相容性高分子嵌段的表面結構的複雜性、及在收集生物相容性高分子嵌段來作為集合體之情形下形成之空隙的量。敲緊密度越小，生物相容性高分子嵌段之間的空隙則越大，從而細胞的植入區域變多。並且，由於敲緊密度不會過小，因此生物相容性高分子嵌段能夠適當地存在於細胞彼此之間，在作為細胞結構體之情形下能夠對相同結構體內部輸送營養成分，因此認為收容於上述範圍內為較佳。

本說明書中所說之敲緊密度並無特別限定，能夠如下那樣進行 測量。為了測量，準備(直徑6mm、長度21.8mm的圓筒狀：容量0.616cm³)的容器(以下，記載為蓋(cap))。首先，對只有蓋的質量進行測量。然後，將漏斗與蓋進行連接，並從漏斗注入以使嵌段滞留於蓋中。在裝入足夠量的嵌段之後，在桌子等坚硬處敲擊蓋部分200次等，取下漏斗，用刮勺使其平满。在將該蓋裝得平满之狀態下測量質量。依據與只有蓋的質量之差計算只有嵌段的質量，並除以蓋的體積，藉由能夠求出敲緊密度。

本發明中之生物相容性高分子嵌段的交聯度並無特別限定，較佳為2以上，進一步較佳為2以上30以下，進一步較佳為4以上25以下，特佳為4以上22以下。

生物相容性高分子嵌段的交聯度(每一分子的交聯數)的測量方法並無特別限定，在生物相容性高分子為CBE3之情形下，例如能夠藉由後述實施例中所記載之TNBS(2,4,6-三硝基苯磺酸)法來進行測量。具體而言，能夠以如下方式計算，亦即，分別製備將生物相容性高分子嵌段、NaHCO₃水溶液及TNBS水溶液進行混合並在37℃下使其反應3小時之後停止反應而得到之試樣、及將生物相容性高分子嵌段、NaHCO₃水溶液及TNBS水溶液進行混合，緊接著使反應停止而得到之空白培養基，並對用純水進行稀釋而得到之試樣及空白培養基的吸光度(345nm)進行測量，依據下述(式2)及(式3)而計算交聯度(每一1分子的交聯數)。

(式2) (As-Ab)/14600×V/w

(式2)表示每1g生物相容性高分子嵌段的離胺酸量(莫耳等量)。

(式中，As表示試樣吸光度，Ab表示空白培養基吸光度，V表示反應液量(g)，w表示生物相容性高分子嵌段質量(mg)。)

(式3) 1-(試樣(式2)/未交聯的高分子(式2))×34

(式3)表示每一分子的交聯數。

本發明中之生物相容性高分子嵌段的吸水率並無特別限定，較佳為300%以上，更佳為400%以上，進一步較佳為500%以上，特佳為600%以上，最佳為700%以上。另外，吸水率的上限並無特別限定，通常為4000%以下，或2000%以下。

生物相容性高分子嵌段的吸水率的測量方法並無特別限定，例如能夠藉由後述實施例中所記載之方法來進行測量。具體而言，能夠以如下方式求出，亦即，在25℃下向3cm×3cm的尼龍網製造的袋子中填充約15mg的生物相容性高分子嵌段，並使其在離子交換水中溶脹2小時之後，風乾10分鐘，在每一個階段測量質量，依據(式4)求出吸水率。

(式4)吸水率=(w2-w1-w0)/w0

(式中，w0表示吸水前的材料的質量，w1表示吸水後的空袋子的質量，w2表示吸水後的包含材料之袋子整體的質量。)

一個本發明中之生物相容性高分子嵌段的大小並無特別限定，較佳為20μm以上200μm以下，更佳為20μm以上150μm以下，進一步較佳為50μm以上120μm以下，特佳為53μm以上106μm以下。

藉由將1個生物相容性高分子嵌段的大小設在上述範圍內，能夠良好地從外部向細胞結構體的內部輸送營養。另外，所謂1個生物相容性高分子嵌段的大小，並不係指複數個生物相容性高分子嵌段的大小的平均值在上述範圍，而係指使複數個生物相容性高分子嵌段通過篩子而獲得之每一 個生物相容性高分子嵌段的尺寸。

1個嵌段的大小能夠由將嵌段進行分類時所使用之篩子的大小來定義。例如，能夠將通過180μm的篩子，並使所通過之嵌段通過106μm的篩子時殘留在篩子上之嵌段設為106~180μm大小的嵌段。接著，能夠將通過106μm的篩子，並使所通過之嵌段通過53μm的篩子時殘留在篩子上之嵌段設為53~106μm大小的嵌段。接著，能夠將通過53μm的篩子，並使所通過之嵌段通過25μm的篩子時殘留在篩子上之嵌段設為25~53μm大小的嵌段。

(1-5)生物相容性高分子嵌段的製造方法

生物相容性高分子嵌段的製造方法並無特別限定，例如能夠藉由如下方式獲得生物相容性高分子嵌段，亦即，使用粉碎機(新動力磨機等)，對含有生物相容性高分子之固體物質(生物相容性高分子的多孔體等)進行粉碎。含有生物相容性高分子之固體物質(多孔體等)例如能夠藉由對含有生物相容性高分子之水溶液進行冷凍乾燥來獲得。

如上所述，藉由對含有生物相容性高分子之固體物質進行粉碎，能夠製造表面形狀不均勻之不定形的生物相容性高分子嵌段。

作為製造生物相容性高分子的多孔體之方法，並無特別限定，還能夠藉由對包含生物相容性高分子之水溶液進行冷凍乾燥來獲得。例如，藉由包含使在溶液內液溫最高的部分的液溫(內部最高液溫)在未冷凍狀態下成為“溶劑熔點-3℃”以下之冷凍製程，能夠使所形成之冰成為球狀。經該製程，冰被乾燥，藉此可獲得具有球狀的各向同性的孔隙(球孔)之多孔體。不包含使在溶液內液溫最高的部分的液溫(內部最高液溫)在 未冷凍狀態下成為“溶劑熔點-3℃”以上之冷凍製程，而藉由冷凍，能夠使所形成之冰成為柱狀/平板狀。若經該製程，冰被乾燥，則可獲得在1個軸或者2個軸上具有較長的、柱狀或者平板狀的孔隙(柱孔/平板孔)之多孔體。對生物相容性高分子的多孔體進行粉碎，製造生物相容性高分子嵌段時，粉碎前的多孔體的孔隙會影響所獲得之生物相容性高分子嵌段的形狀，因此如上所述，藉由調整冷凍乾燥的條件，能夠調整所獲得之生物相容性高分子嵌段的形狀。

作為生物相容性高分子的多孔體的製造方法的一例，可舉出如下方法，但是並不限定於上述方法，該方法包含：(a)於在溶液內液溫最高的部分溫度與在溶液內液溫最低的部分的溫度之差為2.5℃以下，並且在溶液內液溫最高的部分的溫度為溶劑的熔點以下之條件下，在未冷凍狀態下對生物相容性高分子的溶液進行冷卻之製程；(b)對在製程(a)中所獲得之生物相容性高分子的溶液進行冷凍之製程；及(c)對在製程(b)中所獲得之所經冷凍之生物相容性高分子進行冷凍乾燥之製程。

在未冷凍狀態下對生物相容性高分子的溶液進行冷卻時，使液溫最高的部分的溫度與在溶液內液溫最低的部分的溫度之差為2.5℃以下(較佳為2.3℃以下，更佳為2.1℃以下)，亦即將溫差設為較小，藉此所獲得之多孔的細孔的大小的偏差變少。另外，液溫最高的部分的溫度與在溶液內液溫最低的部分的溫度之差的下限並無特別限定，只要0℃以上既 可，例如可以係0.1℃以上、0.5℃以上、0.8℃以上或0.9℃以上。藉此，使用了利用所製造之多孔體製造出之生物相容性高分子嵌段之細胞結構體，實現了顯示較高的細胞數之效果。

製程(a)的冷卻中，例如，經由導熱率比水低的材料(較佳為，特氟龍(teflon)(註冊商標))進行冷卻為較佳，能夠將在溶液內液溫最高的部分假設為自冷卻側最遠的部分，且能夠將在溶液內液溫最低的部分假設為冷卻面的液溫。

較佳為，製程(a)中，即將凝固發熱之前的、在溶液內液溫最高的部分的溫度與在溶液內液溫最低的部分的溫度之差為2.5℃以下，更佳為2.3℃以下，進一步較佳為2.1℃以下。在此，所謂“即將凝固發熱之前的溫差”，係指在凝固發熱時的1秒前~10秒前之間溫差變得最大時的溫差。

較佳為，製程(a)中，在溶液內液溫最低的部分的溫度為溶劑熔點-5℃以下，更佳為溶劑熔點-5℃以下且溶劑熔點-20℃以上，進一步較佳為溶劑熔點-6℃以下且溶劑熔點-16℃以上。另外，所謂溶劑熔點的溶劑，係指生物相容性高分子的溶液的溶劑。

製程(b)中，對製程(a)中所獲得之生物相容性高分子的溶液進行冷凍。用於藉由製程(b)進行冷凍之冷卻溫度，並無特別限制，雖然根據進行冷卻之機器而不同，但是較佳為比在溶液內液溫最低的部分的溫度低3℃至30℃之溫度、更佳為低5℃至25℃之溫度，進一步較佳為低10℃至20℃之溫度。

製程(c)中，對製程(b)中所獲得之經冷凍之生物相容性高 分子進行冷凍乾燥。冷凍乾燥能夠藉由常規方法來進行，例如，能夠藉由以低於溶劑的熔點的溫度進行真空乾燥、進而以室溫(20℃)進行真空乾燥來進行冷凍乾燥。

本發明中，較佳為，藉由對上述製程(c)中所獲得之多孔體進行粉碎而能夠製造生物相容性高分子嵌段。

(2)細胞

關於本發明中所使用之細胞，其種類並無特別限定，能夠較佳地使用作為本發明的目的之具有處置溶酶體病之功能之細胞，依據實時的治療目的，能夠使用任意的細胞。並且，所使用之細胞可以係1種，亦可以組合使用複數種細胞。作為所使用之細胞，較佳為動物細胞，更佳為源自脊椎動物之細胞，特佳為源自人之細胞。源自脊椎動物之細胞(尤其，源自人之細胞)的種類可以係多能細胞、體幹細胞、先驅細胞或成熟細胞(Mature cell)中的任一者，特佳為體幹細胞。

作為多能細胞，例如能夠使用胚胎幹(ES)細胞、生殖幹(GS)細胞或人工多能幹(iPS)細胞。作為體幹細胞，例如能夠使用間葉系幹細胞(MSC)、造血幹細胞、羊膜細胞、臍帶血細胞、源自骨髓之細胞(例如，源自骨髓之MSC等)、心肌幹細胞、源自脂肪之幹細胞、或神經幹細胞。作為先驅細胞及成熟細胞，例如能夠使用源自皮膚、真皮、表皮、肌肉、心肌、神經、骨、軟骨、內皮、腦、上皮、心臟、腎臟、肝臟、胰臟、脾臟、口腔內部、角膜、骨髓、臍帶血、羊膜或毛髮之細胞。作為源自人之細胞，例如能夠使用ES細胞、iPS細胞、MSC、軟骨細胞、成骨細胞、成骨先驅細胞、間充質細胞、成肌細胞、心肌細胞、心臟成肌細胞、 神經細胞、肝細胞、β細胞、纖維母細胞、角膜內皮細胞、血管內皮細胞、角膜上皮細胞、羊膜細胞、臍帶血細胞、骨髓由來細胞或造血幹細胞。並且，細胞的來源可以係自體細胞或異體細胞中的任一者。並且，可以係從ES細胞、iPS細胞分化衍生之間質細胞、間葉系幹細胞。上述中，作為細胞，使用至少間葉系幹細胞或纖維母細胞為較佳。作為間葉系幹細胞，源自脂肪之間葉系幹細胞或源自骨髓之間葉系幹細胞為較佳。作為間葉系幹細胞的來源，源自人或源自狗為較佳。

本發明中所使用之細胞係藉由引入溶酶體病的治療中所需之基因而不過度表達上述基因之細胞為較佳。

(3)細胞結構體

本發明的細胞結構體為包含上述本發明之複數個生物相容性高分子嵌段和至少1種類的複數個細胞，且在複數個上述細胞的間隙至少配置有1個上述高分子嵌段之細胞結構體。本發明中，使用上述生物相容性高分子嵌段和上述細胞，在複數個細胞的間隙將複數個高分子嵌段以三維的方式配置成鑲嵌狀，藉此將生物相容性高分子嵌段和細胞以三維的方式配置成鑲嵌狀，從而形成細胞在結構體中均勻地存在之三維細胞結構體，如前所述，具有物質滲透性。

關於本發明的細胞結構體，在複數個細胞的間隙配置有複數個高分子嵌段，但是在此，所謂“細胞的間隙”，無需為藉由所構成之細胞而封閉之空間，只要夾在細胞之間即可。另外，無需在所有的細胞中具有間隙，可以存在細胞彼此接觸之部位。夾著高分子嵌段之細胞的間隙的距離、亦即選擇一細胞與存在於自該細胞最短距離處之細胞時的間隙距離， 並無特別限制，係高分子嵌段的大小為較佳，較佳的距離亦係高分子嵌段的較佳的大小的範圍。

並且，本發明之高分子嵌段為夾在細胞之間之結構，但是無需在所有的高分子嵌段之間具有細胞，可以存在高分子嵌段彼此接觸之部位。夾著細胞之高分子嵌段之間的距離、亦即選擇高分子嵌段與存在於自該高分子嵌段最短距離處之高分子嵌段時的距離，並無特別限制，係收集到1個~數個所使用之細胞時的細胞的塊的大小為較佳，例如為10μm以上1000μm以下，較佳為10μm以上100μm以下，更佳為10μm以上50μm以下。

另外，本說明書中使用了“細胞在結構體中均勻地存在之三維細胞結構體”等、“均勻地存在”這樣的表現，但是並不表示完全的均勻。

關於本發明的細胞結構體的厚度或直徑，能夠設為所希望的厚度，作為下限，100μm以上為較佳，215μm以上為更佳，400μm以上為進一步較佳，730μm以上為最佳。厚度或直徑的上限並無特別限定，作為使用中的一般的範圍，3cm以下為較佳，2cm以下為更佳，1cm以下為進一步較佳。並且，作為細胞結構體的厚度或直徑的範圍，較佳為100μm以上3cm以下，更佳為400μm以上3cm以下，更加較佳為500μm以上2cm以下，進一步較佳為720μm以上1cm以下。

較佳為，本發明的細胞結構體的由高分子嵌段構成之區域及由細胞構成之區域配置成鑲嵌狀。另外，所謂本說明書中之“細胞結構體的厚度或直徑”，表示如下者。選擇細胞結構體中的某一點A時，在穿過該點A之直線內，將以自細胞結構體外部的距離成為最短之方式分割細胞 結構體之線段的長度設為線段A。選擇該線段A在細胞結構體中成為最長之點A，並將此時的線段A的長度設為“細胞結構體的厚度或直徑”。

本發明的細胞結構體中，細胞與高分子嵌段的比率並無特別限定，較佳為每一個細胞的高分子嵌段的質量係0.0000001μg以上1μg以下為較佳，更佳為0.000001μg以上0.1μg以下，進一步較佳為0.00001μg以上0.01μg以下，最佳為0.00002μg以上0.006μg以下。藉由設在上述範圍，能夠使細胞進一步均勻地存在。並且，藉由將下限設在上述範圍，能夠在用於上述用途中時發揮細胞的效果，藉由將上限設在上述範圍，能夠將任意存在之高分子嵌段中的成分供給於細胞。在此，高分子嵌段中的成分並無特別限制，但是可舉出後述培養基中所包含之成分。

(4)細胞結構體的製造方法

本發明中所使用之細胞結構體能夠藉由混合生物相容性高分子嵌段和至少一種細胞來製造。更具體而言，本發明的細胞結構體能夠藉由交替配置生物相容性高分子嵌段(由生物相容性高分子構成之塊)和細胞來製造。另外，所謂交替，並不係指完全的交替，例如係指混合有生物相容性高分子嵌段和細胞之狀態。製造方法並無特別限定，較佳為在形成高分子嵌段之後接種細胞之方法。具體而言，能夠藉由對生物相容性高分子嵌段與含有細胞之培養液的混合物進行孵化來製造細胞結構體。例如，在容器中，保持於容器中之液體中，將細胞和預先製作之生物相容性高分子嵌段配置成鑲嵌狀。作為配置的方法，使用自然凝聚、自由下落、離心、攪拌，藉此促進或抑制由細胞和生物相容性高分子嵌段構成之鑲嵌狀的序列形成為較佳。

作為所使用之容器，由細胞低黏接性材料、細胞非黏接性材料製成之容器為較佳，更佳為由聚苯乙烯、聚丙烯、聚乙烯、玻璃、聚碳酸酯、聚對酞酸乙二酯製成之容器。容器底面的形狀為平底型、U字形、V字形為較佳。

藉由上述方法獲得之鑲嵌狀細胞結構體例如能夠藉由如下方法來製造所希望之大小的細胞結構體：(a)使分別製備之鑲嵌狀細胞塊彼此融合；或(b)在分化培養基或增殖培養基下增大體積；等。融合的方法、增大體積的方法並無特別限制。

例如，在對生物相容性高分子嵌段與含有細胞之培養液的混合物進行孵化之製程中，能夠藉由將培養基變更為分化培養基或增殖培養基來增大細胞結構體的體積。較佳為，在對生物相容性高分子嵌段與含有細胞之培養液的混合物進行孵化之製程中，能夠藉由進一步添加生物相容性高分子嵌段來製造所希望的大小的細胞結構體，該細胞結構體中，細胞均勻地存在。

所謂上述使分別製備之鑲嵌狀細胞塊彼此融合之方法，具體而言，係指包含使複數個細胞結構體融合之製程之細胞結構體的製造方法，該細胞結構體包含複數個生物相容性高分子嵌段和複數個細胞，且在藉由上述複數個細胞形成之複數個間隙的一部分或全部配置有1個或複數個上述生物相容性高分子嵌段。

關於本發明中所使用之細胞結構體的製造方法中之“生物相容性高分子嵌段(種類、大小等)”、“細胞”、“複數個細胞的間隙”、“所獲得之細胞結構體(大小等)”、“細胞與高分子嵌段的比率”等的較佳的範 圍，與本說明書中的上述內容相同。

(5)溶酶體病處置劑

所謂溶酶體病，係指因基因異常而位於溶酶體中之酶缺乏活性1個或者複數個，因此在細胞內胞器亦即溶酶體內未分解之物質會貯積、或者因位於溶酶體中之膜蛋白的功能障礙而物質貯積在溶酶體中而發病之疾病的統稱。

關於溶酶體病，依據各自具有異常之酶、基因而分類為複數種，存在60種以上。

作為溶酶體病，可舉出法布瑞氏症、高歇氏病、唾液腺病、尼曼-匹克二氏病A型、B型、半乳糖唾液沉積症、尼曼-匹克二氏病C型、I-細胞病、黏脂貯積病III型、GM1神經節醣苷病、β半乳糖苷酶缺乏症、α-甘露醣儲積症、GM2神經節醣苷病、β-甘露醣儲積症、克拉培氏病、岩藻糖苷酶缺乏症、異染性白質失養症、天門冬葡萄糖胺尿(aspartylglucosaminuria)、Multiplesulfatase缺乏症、辛德勒/神崎病、Farber氏病、龐貝氏病、Hurler-Scheie氏症候群、伍爾曼氏病、Hunter氏症候群、Danon氏病、Sanfilippo症候群、游離唾液酸貯積病、Morquio氏症候群、蠟脂褐質病(ceroid-lipofuscinosis)、馬-拉二氏症(Maroteaux-Lamy二氏症)、Sly氏症、β葡萄醣醛酸酶缺乏症、山多夫氏病及膽固醇酯貯積病。上述中，法布瑞氏症為較佳。

關於本發明的處置劑，能夠藉由在生物體內分泌α-半乳糖苷酶A來降低生物體內中之神經醯胺三己糖苷，藉此能夠處置法布瑞氏症。

在每一種溶酶體病中確認到致病基因/蛋白質之情形較多。將其 具體例示於後述表1中。

所謂處置，係指針對各種疾病之預防或治療等。

所謂預防，係指預先抑制作為対象之疾病所特有的症狀的進展，包含抑制發病、減低發病風險或延遲發病等。進展的抑制程度並沒有任何限定，即使程度極少，只要能夠抑制進展，則包含在預防中。

所謂治療，係指作為対象之疾病或狀態的改善或進展的抑制等。

所謂處置劑，以處置的目的提供之物質。

本發明的溶酶體病處置劑能夠移植到生物而使用。作為移植方法，能夠使用切開、注射、內視鏡等方法。本發明的溶酶體病處置劑與細胞片等細胞移植物不同，能夠減小結構體的尺寸，因此能夠實現藉由注射進行之移植等低侵入的移植方法。

移植本發明的溶酶體病處置劑時的量能夠依據移植対象(人、動物)的狀態等而適當選擇，但是作為所移植之細胞數，1.0×10⁵cells/kg以上2.0×10⁹cells/kg以下為較佳，1.0×10⁶cells/kg以上2.0×10⁸cells/kg以下為更佳。

關於本發明的溶酶體病處置劑的移植次數，可只移植1次，亦能夠依據需要移植2次以上。

(6)各種用途

依據本發明，提供一種包含將本發明中所規定之細胞結構體移植到需要處置溶酶體病之對象者之製程之溶酶體病的處置方法。上述溶酶體病的處置方法中，細胞結構體的較佳的範圍與前述相同。

依據本發明，提供一種用於處置溶酶體病之、本發明中所規定 之細胞結構體。上述細胞結構體中，細胞結構體的較佳的範圍與前述相同。

依據本發明，提供一種用於製造溶酶體病處置劑之、本發明中所規定之細胞結構體的應用。上述應用中，細胞結構體的較佳的範圍與前述相同。

藉由以下的實施例對本發明進行進一步具體的說明，但是本發明並不受實施例限制。

【實施例】

[參照例1]重組肽(重組明膠)

準備了下述CBE3來作為重組肽(重組明膠)(國際公開WO2008/103041號公報中所記載)。

CBE3：

分子量：51.6kD

結構：GAP[(GXY)₆₃]₃G

胺基酸的數量：571個

RGD序列：12個

亞胺基酸含量：33%

幾乎100%的胺基酸係GXY重複結構。在CBE3的胺基酸序列中不包含絲胺酸、蘇胺酸、天門冬素、酪胺酸及半胱胺酸。CBE3具有ERGD序列。

等電點：9.34

GRAVY值：-0.682

1/IOB值：0.323

胺基酸序列(序列表的序列編號1)(與國際公開WO2008/103041號公報的序列編號3相同。其中末尾的X修正為“P”

[參照例2]重組肽多孔體的製作

[PTFE厚度．圓筒形容器]

準備了底面厚度為3mm、直徑為51mm、側面厚度為8mm、高度為25mm的聚四氟乙烯(PTFE)製圓筒杯狀容器。將圓筒杯的曲面設為側面時，側面被8mm的PTFE封閉，且底面(圓形的平板狀)亦被3mm的PTFE封閉。另一方面，上表面設為開放之形態。藉此，圓筒杯的內徑成為43mm。之後，將該容器稱為PTFE厚度．圓筒形容器。

[鋁玻璃板．圓筒形容器]

準備了厚度為1mm、直徑為47mm的鋁製圓筒杯狀容器。將圓筒杯的曲面設為側面時，側面被1mm的鋁封閉，且底面(圓形的平板狀)亦被1mm的鋁封閉。另一方面，上表面設為開放之形態。並且，僅對側面的內部均勻地鋪滿壁厚為1mm的特氟龍(註冊商標)，作為結果，圓筒杯的內徑成為45mm。並且，設為在該容器的底面，除了鋁以外，還接合有2.2mm的玻璃板之狀態。之後，將該容器稱為鋁玻璃．圓筒形容器。

[溫差較小的冷凍製程及乾燥製程]

向PTFE厚度．圓筒形容器或鋁玻璃板．圓筒形容器注入CBE3水溶液，在真空冷凍乾燥機(TF5-85ATNNN：TAKARA.Co.Ltd)內使用冷卻隔板從底面開始對CBE3水溶液進行了冷卻。如下所述那樣準備了此時的容器、CBE3水溶液的最終濃度、液量及隔板溫度的設定的組合。

條件A：

PTFE厚度．圓筒形容器中，CBE3水溶液的最終濃度為4質量%，且水溶液量為4mL。關於隔板溫度的設定，冷卻至-10℃，在-10℃下冷凍了1小時，然後在-20℃下冷凍了2小時，進而在-40℃下冷凍了3小時，最後在-50℃下冷凍了1小時。針對該冷凍品，接著將隔板溫度恢復到-20℃的設定之後在-20℃下進行24小時的真空乾燥，24小時之後，在該狀態下持續進行真空乾燥之狀態下使隔板溫度上升為20℃，進而在20℃下實施了48小時的真空乾燥，直至真空度充分下降(1.9×105Pa)，之後從真空冷凍乾燥機取出。藉此獲得了多孔體。

條件B：

鋁．玻璃板．圓筒形容器中，CBE3水溶液的最終濃度為4質量%，且水溶液量為4mL。

關於隔板溫度的設定，冷卻至-10℃，在-10℃下冷凍了1小時，然後在-20℃下冷凍了2小時，進而在-40℃下冷凍了3小時，最後在-50℃下冷凍了1小時。針對該冷凍品，接著將隔板溫度恢復到-20℃的設定之後在-20℃下進行24小時的真空乾燥，24小時之後，在該狀態下持續進行真空乾燥之狀態下使隔板溫度上升為20℃，進而在20℃下實施了48小時的真空乾燥，直至真空度充分下降(1.9×105Pa)，之後從真空冷凍乾燥機取 出。藉此獲得了多孔體。

條件C：

PTFE厚度．圓筒形容器中，CBE3水溶液的最終濃度為4質量%，且水溶液量為10mL。關於隔板溫度的設定，冷卻至-10℃，在-10℃下冷凍了1小時，然後在-20℃下冷凍了2小時，進而在-40℃下冷凍了3小時，最後在-50℃下冷凍了1小時。針對該冷凍品，接著將隔板溫度恢復到-20℃的設定之後在-20℃下進行24小時的真空乾燥，24小時之後，在該狀態下持續進行真空乾燥之狀態下使隔板溫度上升為20℃，進而在20℃下實施了48小時的真空乾燥，直至真空度充分下降(1.9×105Pa)，之後從真空冷凍乾燥機取出。藉此獲得了多孔體。

[各冷凍製程中的溫度測量]

關於條件A~條件C的每一個，測量了容器內的圓中心部的水表面液溫來作為在溶液內自冷卻側最遠處之液溫(非冷卻面液溫)，並且測量了容器內的底部的液溫來作為在溶液內自冷卻側最近處之液溫(冷卻面液溫)。

其結果，各溫度與其溫差的分佈如圖1~圖3所示。

依據圖1、圖2、圖3可知，在條件A、條件B、條件C中，在隔板溫度為-10℃的設定區間(下降到-20℃之前)，液溫低於熔點亦即0℃，並且為在該狀態下未發生冷凍之(未冷凍．過度冷卻)狀態。並且，該狀態下，冷卻面液溫與非冷卻面液溫的溫差成為2.5℃以下。另外，本說明書中，所謂“溫差”係指“非冷卻面液溫”-“冷卻面液溫”。然後，進而使隔板溫度下降到-20℃，藉此確認到液溫迅速地上升至0℃左右之時機， 在此可知產生凝固熱並開始了冷凍。並且，還確認到在該時機實際上已開始形成冰。然後，溫度會在0℃左右停留一定時間。在此，成為存在水和冰的混合物之狀態。最後，溫度再次從0℃開始下降，但此時，液體部分小時而成為冰。因此，所測量之溫度成為冰內部的固體溫度，亦即不係液溫。

以下，關於條件A、條件B、條件C，記載了非冷卻面液溫成為熔點(0℃)時的溫差、使隔板溫度即將從-10℃下降到-20℃之前的溫差及即將凝固發熱之前的溫差。另外，本發明中所說之“即將~之前的溫差”，表示在事件(凝固發熱等)的1秒前~20秒前之間能夠檢測到之溫差中的最高溫度。

條件A

非冷卻面液溫成為熔點(0℃)時的溫差：1.1℃

即將從-10℃下降到-20℃之前的溫差：0.2℃

即將凝固發熱之前的溫差：1.1℃

條件B

非冷卻面液溫成為熔點(0℃)時的溫差：1.0℃

即將從-10℃下降到-20℃之前的溫差：0.1℃

即將凝固發熱之前的溫差：0.9℃

條件C

非冷卻面液溫成為熔點(0℃)時的溫差：1.8℃

即將從-10℃下降到-20℃之前的溫差：1.1℃

即將凝固發熱之前的溫差：2.1℃

[參照例3]生物相容性高分子嵌段的製作(多孔體的粉碎和交聯)

藉由新動力磨機(OSAKA CHEMICAL Co.,Ltd.，新動力磨機PM-2005)對參照例2中所獲得之條件A及條件B的CBE3多孔體進行了粉碎。關於粉碎，在最大轉速下為1分鐘×5次，共進行了5分鐘的粉碎。關於所獲得之粉碎物，用不銹鋼製篩子進行尺寸分類，獲得了25~53μm、53~106μm、106~180μm的未交聯嵌段。然後，在減壓下以160℃實施熱交聯(實施了8小時、16小時、24小時、48小時、72小時、96小時這6種交聯時間)，從而獲得了生物相容性高分子嵌段(CBE3嵌段)。

以下，將源自實施了48小時交聯之條件A的多孔體之嵌段稱為E，且將源自實施了48小時交聯之條件B的多孔體之嵌段設為F。E及F為由藉由溫差較小的冷凍製程製造出之多孔體製作出之溫差小嵌段。另外，關於交聯時間的差異，在本實施例的評價中未觀察到對性能產生之影響，因此之後將進行48小時交聯者用作代表。並且，在E及F中未觀察到性能的差異。以下的參照例、實施例及比較例中，使用了以條件A、53~106μm的尺寸、48小時的交聯時間製作之生物相容性高分子嵌段。

[參照例4]生物相容性高分子嵌段的敲緊密度測量

敲緊密度為表示在一體積中能夠緊密地填充多少嵌段之值，可以說值越小，越無法緊密地填充亦即嵌段的結構複雜。敲緊密度以如下方式進行了測量。首先，準備在漏斗的前端安裝有蓋(直徑為6mm且長度為21.8mm的圓筒狀：容量0.616cm³)者，對只有蓋的質量進行了測量。然後，將蓋安裝於漏斗，以嵌段滞留於蓋上之方式從漏斗注入。裝入足夠量的嵌 段之後，在桌子等坚硬處敲擊蓋部分200次等，取下漏斗，用刮勺使其平满。在將該蓋裝得平满之狀態下測量了質量。依據與只有蓋的質量之差計算只有嵌段的質量，並除以蓋的體積，藉由能夠求出敲緊密度。

其結果，參照例3的生物相容性高分子嵌段的敲緊密度為98mg/cm³。

[參照例5]生物相容性高分子嵌段的交聯度測量

對在參照例3中進行交聯之嵌段的交聯度(每一分子的交聯數)進行了計算。測量使用了TNBS(2,4,6-三硝基苯磺酸)法。

<試樣製備>

向玻璃小瓶添加試樣(約10mg)、4質量%NaHCO₃水溶液(1mL)及1質量%的TNBS水溶液(2mL)，並在37℃下經3小時晃動了混合物。然後，添加37質量%鹽酸(10mL)及純水(5mL)之後，將混合物在37℃下靜放16小時以上，從而製成試樣。

<空白培養基調整>

向玻璃小瓶添加試樣(約10mg)、4質量%NaHCO₃水溶液(1mL)及1質量%TNBS水溶液(2mL)之後，緊接著添加37質量%鹽酸(3mL)，在37℃下經3小時晃動了混合物。然後，添加37質量%鹽酸(7mL)及純水(5mL)之後，將混合物在37℃下靜放16小時以上，從而製成空白培養基。

對用純水進行了10倍稀釋之試樣及空白培養基的吸光度(345nm)進行測量，依據以下的(式2)及(式3)計算出交聯度(每一分子的交聯數)。

(式2) (As-Ab)/14600×V/w

(式2)表示每1g重組肽的離胺酸量(莫耳等量)。

(式中，As表示試樣吸光度，Ab表示空白培養基吸光度，V表示反應液量(g)，w表示重組肽質量(mg)。)

(式3) 1-(試樣(式2)/未交聯重組肽(式2))×34

(式3)表示每一分子的交聯數。

其結果，參照例3的生物相容性高分子嵌段的交聯度為4.2。

[參照例6]生物相容性高分子嵌段的吸水率測量

計算出在參照例3中製作之生物相容性高分子嵌段的吸水率。

在25℃下，向3cm×3cm的尼龍網製造的袋子中，填充約15mg的生物相容性高分子嵌段，並使其在離子交換水中溶脹2小時之後，風乾了10分鐘。在每一階段中對質量進行測量，依據(式4)，求出吸水率。

(式4)

吸水率=(w2-w1-w0)/w0

(式中、w0表示吸水前的材料的質量，w1表示吸水後的空袋子的質量，w2表示包含吸水後的材料之袋子整體的質量。)

其結果，參照例3的嵌段的吸水率為786%。

[參照例7]細胞的溶酶體病相關酶的表達確認試驗

關於源自人骨髓之間葉系幹細胞(hBMSC)、源自人脂肪之幹細胞(hADSC)、源自人牙髓之幹細胞(hDPSC)，藉由聚合酶鏈反應(PCR)對細胞的mRNA進行檢測，藉此對有無溶酶體病相關酶的表達進行了評價。其結果，如圖4~圖7所示，可知hBMSC、hADSC及hDPSC表達下述表中所示之50種相關酶的基因。圖4~圖7中，hBMSC、hADSC及hDPSC分別標記為BMSC、ADSC及DPSC，所謂P5，表示第5次繼代。

[實施例1]源自細胞結構體(鑲嵌細胞塊)之溶酶體病相關酶的分泌試驗細胞結構體的準備：

藉由DMEM(Dulbecco’s Modified Eagle Medium：杜爾貝寇改進的伊戈培養基)+10%FBS(Fetal Bovine Serum：胎牛血清)培養基，將源自人骨髓之間葉系幹細胞(hMSC)調整為10方cells/mL，將在參照例3中製作之生物相容性高分子嵌段(53-106μm)以成為0.1mg/mL之方式進行添加之後，將200μL接種於Sumilon Celltight X96U板(Sumitomo Bakelite Co.,Ltd.，底面為U字形)上，藉由桌上平板離心機進行離心(600g，5分鐘)，靜放24小時，製作了由直徑為1mm的球狀的生物相容性高分子嵌段和hMSC細胞構成之鑲嵌細胞塊(每一個細胞，為0.001μg的嵌段)。另外，由於係在U字形的板中製作的，因此本細胞結構體為球狀。

溶酶體病相關酶的分泌量測量：

關於如上所述那樣獲得之細胞結構體，藉由酶聯免疫吸附法(ELISA)(GLA/ALPHA Galactosidase ELISA Kit。LifeSpan Biosciences。LS-F-10765-1)對培養48小時之後的上清中所包含之、溶酶體病原因酶亦即αGalA進行了測量。另外，作為比較，對不形成細胞結構體且以相同的細胞數進行平面培養之情形下的上清亦進行了測量。其結果已知，如圖8所示，關於每一個細胞的αGalA(別名GLA)酶分泌量，平面培養時(只有細胞)為1.5×10^-6ng/cell，相對於此，在細胞結構體中為3.6×10^-5ng/cell，出乎意料地，源自細胞結構體之αGalA酶分泌量飛躍性地(24倍左右)變多。

[實施例2]細胞結構體(鑲嵌細胞塊)的製作

使源自小鼠脂肪之幹細胞(mADSC)懸浮於含有10%FBS之D-MEM培養基中，向該培養基中添加在參照例3中製作之生物相容性高分子嵌段(53-106μm)，最終將mADSC(1.2×10⁸cells)和生物相容性高分子嵌 段(0.25mg)在懸浮於4mL的培養基中之狀態下，接種於細胞非黏接性的35mm皿亦即EZSPHERE(註冊商標)皿Type903(球體孔口徑800μm，球體孔深度300μm，球體孔數約為1,200個孔。底面為具有凹部之培養面，具有豎立設置於培養面的周緣之側外壁部。AGC TECHNO GLASS CO.,LTD.製造)。藉由在CO₂培養器中在37℃下靜放48小時，獲取了約1,200個均勻的細胞結構體。

[實施例3]使用法布瑞氏症小鼠進行之有效性試驗

法布瑞氏症小鼠使用了6週齡的B6；129-Glawblo/GrsrJ(Charles River Laboratories International,Inc.)。上述小鼠中，已知LysoGb3作為病因物質貯積於肝臟中，其為法布瑞氏症的原因。作為有效性試驗，施用被驗物質，測量4週後的肝臟中的LysoGb3量是否減少，藉此進行了評價。另外，藉由用藉由LC-MS/MS(液相色譜法-質譜/質譜法：liquid chromatography-mass spectrometry/mass spectrometry)進行LysoGb3的定量之總蛋白質量標準化而進行了評價。具體而言，如下。

藉由通過門靜脈經由或皮下給藥或尾靜脈內給藥施用了在實施例2中製作之mADSC的細胞結構體。以關於給藥量，每一只的細胞結構體成為400個(4.0×10⁵cells的細胞+0.08mg的高分子嵌段)之方式，作為細胞結構體進行了給藥。藉由LC-MS/MS對從給藥4週後的肝臟中的LysoGb3量進行定量，藉此評價了與未給藥之法布瑞氏症小鼠相比LysoGb3是否減少。

在以下示出LC-MS/MS的測量條件。

試劑

作為內部標準物質，使用了N,N-二甲基-D-赤-神經鞘胺醇(N,N-Dimethyl-D-erythro-sphingosine)。從Matreya公司(Pleasant Gap，PA)採購了Lyso-Gb3及N,N-二甲基-D-赤-神經鞘胺醇。

從Wako Pure Chemical Industries,Ltd.採購了用於試樣製備及LC-MS/MS中之甲醇(MeOH、LC-MS等級)以及甲酸(FA、LC-MS等級)。

蛋白質定量中使用了Pierce BCA Protein Assay Kit(Thermo Fisher Scientific Inc.，Waltham、MA、USA)。

試樣製備

從健康的小鼠、施用了mADSC的細胞結構體之法布瑞氏症小鼠以及未施用mADSC的細胞結構體之法布瑞氏症小鼠中採集小鼠器官，並在液態氮中進行了快速冷凍。冷凍器官使用Multi-Beads Shocker(Yasui Kikai Corporation)而進行粉碎，添加組織重量的10倍的磷酸鹽緩衝生理鹽水(PBS)而作為器官懸浮液。首先，用甲醇對N,N-二甲基-D-赤-神經鞘胺醇進行稀釋，以使終濃度成為0.5ng/mL，從而製作了IS溶液(內部標準溶液)。接著，製作了標準試樣。具體而言，在健康的小鼠的器官懸浮液20μL中添加100μL的內部標準物質的甲醇溶液，進而添加5μL的Lyso-Gb3溶液，以使成為0nmol/L、2nmol/L、4nmol/L、20nmol/L、40nmol/L及200nmol/L的終濃度，從而製作了標準試樣。將其混合之後進行離心，去除了蛋白質。另一方面，施用了mADSC的細胞結構體之法布瑞氏症小鼠及未施用mADSC的細胞結構體之法布瑞氏症小鼠的器官亦同樣地製作器官懸浮液，相對於該器官懸浮液20μL，添加100μL的內部標準物質的 甲醇溶液，且添加5μL的甲醇並進行混合之後進行離心，去除了蛋白質。離心之後，在80μL的所獲得之混合液的上清中添加0.1%甲酸水溶液80μL而進行了混合。對該混合液進行離心之後，用0.1%甲酸水溶液/50%甲醇對上清進行4倍稀釋，將所獲得之試樣注入到UPLC(超高液相色譜：ultra performance liquid chromatography)-MS/MS系統中。

機器及定量方法

作為UPLC系統，LC使用了ACQUITY UPLC(Waters、Milford、MA、USA)。試樣注入量使用了5μL，且柱使用了ACQUITY UPLC BEH Phenyl Column、130Å(埃)、1.7μm，2.1mm×50mm(Waters)。溶劑A使用0.1%甲酸水溶液，溶劑B使用0.1%甲酸甲醇溶液，使用了4.5分鐘的梯度(0分鐘、50%溶劑B；0.5分鐘、70%溶劑B；1分鐘、90%溶劑B；2.5分鐘、100%溶劑B；3.5分鐘、100%溶劑B；3.51分鐘、50%溶劑B；4.5分鐘、50%溶劑B)。流速設為0.4μL/分鐘。MS使用了Triple Quad5500(AB SCIEX Framingham、MA、US)。以MRM(多重反應監測)模式實施了Lyso-Gb3的定量。關於作為靶之質量，相對於Lyso-Gb3設為m/z786.336，相對於Lyso-Gb3-IS設為m/z328.190。為了定量，使用了源自神經鞘胺醇之強度最強之峰值。相對於Lyso-Gb3設為m/z282.400，相對於Lyso-Gb3-IS設為m/z110.000。

蛋白質定量方法

作為蛋白質定量，校準曲線用BSA使用套組中所添加的Albumin Standard Ampules、2mg/mL，在與注入到LC-MS/MS中之試樣相同的組成的溶劑進行稀釋而製作，以使終濃度成為2000、1500、1000、750、500、 250、125、25及0μg/mL。檢測時使用TECAN infinite F200，測量了550nm的吸光度。

依據基於上述LC-MS/MS系統之分析結果及基於BCA Assay之蛋白質定量結果，計算了健康的小鼠、施用了mADSC的細胞結構體之法布瑞氏症小鼠以及未施用mADSC的細胞結構體之法布瑞氏症小鼠的器官中之lyso-Gb3的濃度。亦即，將基於LC-MS/MS之Lyso-Gb3量設為x(nmol/mL)，將基於BCA Assay之蛋白質量設為y(mg/mL)，Lyso-Gb3量由x/y(nmol/mg蛋白質(nmol/mg protein))表示。

其結果已知，如表2及圖9所示，將細胞結構體施用於門靜脈內之群組中，與未給藥之個體(69nmol/mg蛋白質)相比，給藥後1週中肝臟中的LysoGb3顯著減少(52nmol/mg蛋白質)，給藥後4週中進而顯著減少(30nmol/mg蛋白質)。

本說明書中，所謂Fabry小鼠係指法布瑞氏症小鼠。

並且，關於適用於尾靜脈內之個體，已知給藥後1週顯示顯著 減少(24nmol/mg蛋白質)，給藥後4週亦顯示顯著減少(27nmol/mg蛋白質)。其結果，皮下給藥亦存在相同的傾向。

在表3及圖10中顯示了腎臟中的Lyso-Gb3量，且在表4及圖11中顯示了心臟中的Lyso-Gb3量。關於表4及圖11的心臟中的Lyso-Gb3量，已知與肝臟同樣地，與未施用細胞結構體之群組相比，施用了細胞結構體之群組中，Lyso-Gb3量顯著減少。

而且同時還確認到，為了比較，在只將mADSC以相同的細胞數(4.0×10⁵cells/只)施用於門靜脈內或尾靜脈內之情形下，與給藥4週的肝臟中的LysoGb3(門靜脈給藥：53nmol/mg蛋白質，尾靜脈內給藥：36nmol/mg蛋白質)相比，施用細胞結構體4週後(門靜脈給藥：30nmol/mg蛋白質，尾靜脈內給藥：27nmol/mg蛋白質)的減少顯著較高。將結果示於圖12中。

藉此明確可知，在施用細胞來作為細胞結構體之情形下，出乎意料地發現對法布瑞氏症小鼠具有較高的有效性。

[實施例4]細胞結構體(鑲嵌細胞塊)的製作

使源自小鼠胚胎之纖維母細胞(MEF)懸浮於含有10%FBS之D-MEM培養基中，並調整為10方cells/mL，添加參照例3中所製作之生物相容性高分子嵌段53-106μm以使成為0.1mg/mL，然後將200μL接種於Sumilon Celltight X96U板(Sumitomo Bakelite Co.,Ltd.，底面為U字形)上，藉由桌上平板離心機進行離心(600g，5分鐘)，靜放24小時，製作了由直徑為1mm的球狀的生物相容性高分子嵌段和hADSC細胞構成之鑲嵌細胞塊(每一個細胞，為0.001μg的嵌段)。另外，由於係在U字形的平板中製作的，因此本細胞結構體為球狀。

然後，用吸管將與100孔(well)對應之量的內容物全部移到30mL單一使用之生物反應器(商品名稱)(ABLE Corporation，BWV-S03A)(具備攪拌機構之第二培養容器)，經7天在培養基30mL中實施攪拌培養，從而獲取了細胞結構體。其結果，細胞結構體為100個。

[實施例5]使用法布瑞氏症小鼠進行之有效性試驗

與實施例3同樣地評價了藉由對法布瑞氏症小鼠的給藥而肝臟中的LysoGb3是否減少。在腎包膜下移植了20個或者40個實施例4中所製作之MEF的細胞結構體。另外，在移植20個時，每一只施用了4.0×10⁵cells的細胞數及0.4mg的高分子嵌段，在移植40個中，每一只施用了8.0×10⁵cells的細胞數及0.8mg的高分子嵌段。試驗的流程如圖13所示。

其結果，如表6及圖14所示，將細胞結構體移植到腎包膜下之 群組(無論係20個移植群組，還係40個移植群組)中，與未給藥之個體(56nmol/mg蛋白質)相比，給藥後4週中肝臟中的LysoGb3顯著減少。並且，與20個移植群組(43nmol/mg蛋白質)相比，40個移植群組(39nmol/mg蛋白質)中確認到LysoGb3顯著減少。

並且，製作移植4週後的移植部位的組織切片，實施組織學評價之結果，如圖15所示，移植4週後亦確認到細胞和高分子嵌段，還確認到血管在細胞結構體內部衍生。由於從血管向細胞結構體內的細胞供給營養、氧分，藉此可預料到本效果在今後亦會一直持續下去。

<110> 富士軟片股份有限公司(FUJIFILM Corporation)

<120> 細胞結構體之用途

<130> 17F01407TW01

<140> TW107122617

<141> 2018-06-29

<160> 10

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 571

<212> PRT

<213> 重組

<400> 1

<210> 2

<211> 4

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列之描述：細胞黏接信號

<400> 2

<210> 3

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列之描述：細胞黏接信號

<400> 3

<210> 4

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列之描述：細胞黏接信號

<400> 4

<210> 5

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列之描述：細胞黏接信號

<400> 5

<210> 6

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列之描述：細胞黏接信號

<400> 6

<210> 7

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列之描述：細胞黏接信號

<400> 7

<210> 8

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列之描述：細胞黏接信號

<400> 8

<210> 9

<211> 4

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列之描述：細胞黏接信號

<400> 9

<210> 10

<211> 4

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列之描述：細胞黏接信號

<400> 10

Claims (11)

1. 一種細胞結構體之用途，其用以製造用於治療溶酶體病的醫藥，其中該細胞結構體包含複數個生物相容性高分子嵌段和至少1種類的複數個細胞，且在複數個該細胞的間隙至少配置有1個該高分子嵌段；該細胞至少包含間葉系幹細胞或纖維母細胞。
2. 如請求項1之用途，其中該細胞結構體的每一個細胞包含0.0000001μg以上1μg以下的生物相容性高分子嵌段。
3. 如請求項1之用途，其中該生物相容性高分子嵌段1個的大小為10μm以上300μm以下。
4. 如請求項1之用途，其中該細胞結構體的厚度或直徑為100μm以上3cm以下。
5. 如請求項1之用途，其中該生物相容性高分子嵌段由重組肽構成。
6. 如請求項5之用途，其中該重組肽由下述式表示，式：A-[(Gly-X-Y)_n]_m-B式中，A表示任意的胺基酸或胺基酸序列，B表示任意的胺基酸或胺基酸序列，n個X分別獨立地表示任意的胺基酸，n個Y分別獨立地表示任意的胺基酸，n表示3~100的整數，m表示2~10的整數，另外，n個Gly-X-Y可以彼此相同，亦可以彼此不同。
7. 如請求項5之用途，其中該重組肽為下述之任一者：由序列編號1所記載之胺基酸序列構成之肽；由在序列編號1所記載之胺基酸序列中有1個或 者數個胺基酸缺失、取代或者加成之胺基酸序列構成，並且具有生物相容性之肽；或由與序列編號1所記載之胺基酸序列具有80%以上的序列相同性之胺基酸序列構成，並且具有生物相容性之肽。
8. 如請求項1之用途，其中該生物相容性高分子嵌段中，該生物相容性高分子藉由熱、紫外線或酶而進行交聯。
9. 如請求項1之用途，其中該生物相容性高分子嵌段處於藉由粉碎生物相容性高分子的多孔體而獲得之顆粒的形態。
10. 如請求項1之用途，其中溶酶體病為法布瑞氏症(Fabry Disease)。
11. 如請求項10項之用途，其中藉由在生物體內分泌α-半乳糖苷酶A來降低生物體內的神經醯胺三己糖苷(globotriaosylsphingosine)。