TWI733713B

TWI733713B - 用於治療神經促進性酪氨酸受體激酶相關之異常的化合物與組成物

Info

Publication number: TWI733713B
Application number: TW105137936A
Authority: TW
Inventors: 史蒂文馬克溫洛斯基; 昌德拉塞卡曼德拉; 尼爾比富爾科; 約瑟夫金
Original assignee: 美商纜圖藥品公司
Priority date: 2015-11-19
Filing date: 2016-11-18
Publication date: 2021-07-21
Also published as: US10370379B2; RU2018122089A; AR106756A1; KR20180081790A; EP3377497A1; CN108431008A; US20170145018A1; JP2019500328A; MX2018006195A; HK1259453A1; RU2018122089A3; SG10201912607SA; AU2016355196A1; ZA201803530B; TW201720826A; US20190382410A1; BR112018010024A2; PH12018501065A1; WO2017087778A1; CA3005741A1

Abstract

本發明係有關於神經促進性酪氨酸受體激酶(NTRK；neurotrophic tyrosine receptor kinase)的抑制劑，係對於原生型神經促進性酪氨酸受體激酶和其抗性突變體具有活性之抑制劑。

Description

用於治療神經促進性酪氨酸受體激酶相關之異常的化合物與組成物

本申請案主張2016年11月19日提出之U.S.S.N.62/257,476案之優先權，該安內容也於此併入做為參考。

神經促進性酪氨酸受體激酶(NTRK；neurotrophic tyrosine receptor kinase)1、2和3係受體酪氨酸激酶(receptor tyrosine kinases；RTKs)，後者活化有關細胞增殖(proliferation)和存留(survival)中的複數下游路徑(multiple downstream pathways)，起因於這些受體酪氨酸激酶的基因編碼(genes coding)的畸變染色體易位(aberrant chromosomal translocations)的各種遺傳融合(genetic fusions)，則關聯到複數癌症的病因學(etiology)，包括高惡性和低惡性神經膠質瘤(high and low grade glioma)、膽管癌(cholangiocarcinoma)、甲狀腺乳突癌(papillary thyroid carcinoma)、直腸癌(colon cancer)和非小細胞肺癌(non-small cell lung cancer)。一個在激酶融合物(kinase fusions)格局地景上的基因體學分析(genomics analysis)確認在各式各樣額外的癌症類型的一個神經促進性酪氨酸受體激酶融合物(NTRK fusions)，這些癌症包括頭頸部鱗狀上皮細胞癌(head and neck squamous cell carcinoma)、胰臟癌(pancreatic adenocarcinoma)、惡性肉瘤(sarcoma)和黑色素瘤(melanoma)，因此提供更進一步的治療基礎理論(therapeutic rationale)，有效應用這些激酶的抑制劑來治療複數的腫瘤適應症(oncologic indications)。

確定神經促進性酪氨酸受體激酶(NTRK)融合物是某些癌症的起因後，促進了數種神經促進性酪氨酸受體激酶抑制劑(NTRK kinase inhibitors)的發現和臨床發展，可以用來治療隱藏一個神經促進性酪氨酸受體激酶融合物蛋白質的腫瘤。早期臨床數據因對特殊人類惡性腫瘤有利而支持這種方法的可行性，然而最終，儘管臨床活性清楚，大多數病人的癌症對激酶抑制劑治療產生抵抗性，導致該疾病的復發(relapse)和進展(progression)，一旦抵抗性產生，病人的治療選擇通常就非常受限，因此需要一個化合物可以抑制神經促進性酪氨酸受體激酶(NTRK)和它的抵抗性突變體(resistant mutants)。

本發明提供神經促進性酪氨酸受體激酶(NTRK)和神經促進性酪氨酸受體激酶突變體例如神經促進性酪氨酸受體激酶抗性突變體《如此處之定義》的抑制劑，舉例來說，結構式(I)和其藥劑學上可接受的鹽類和組成物之抑制劑；本發明更進一步提供使用本發明化合物和其藥劑學上可接受的鹽類和組成物之方法，以抑制一個細胞或病人內的神經促進性酪氨酸受體激酶或其突變體的活性；本發明更進一步提供使用本發明化合物和其藥劑學上可接受的鹽類和組成物之方法，以治療一個因畸變神經促進性酪氨酸受體激酶活性(aberrant NTRK activity)導致的狀況例如癌症的個體。

於一個面向中，本發明描述一個結構式(I)的化合物或其一個藥劑學上可接受的鹽類，其中：

環A係選自單環(monocyclic)或雙環(bicyclic)芳基(aryl)、單環或雙環雜芳基(heteroaryl)、環烷基(cycloalkyl)和雜環基(heterocyclyl)；每一個R^A係獨立地選自單環或雙環芳基(aryl)、單環或雙環雜芳基(heteroaryl)、單環或雙環環烷基(cycloalkyl)和單環或雙環雜環基(heterocyclyl)、C₁-C₆烷基(alkyl)、C₁-C₆烷氧基(alkoxy)、鹵代(halo)、C₁-C₆鹵代烷基(haloalkyl)、C₁-C₆鹵代烷氧基(haloalkoxy)、C₁-C₆羥基烷基(hydroxyalkyl)、C₁-C₆雜烷基(heteroalkyl)、-N(R¹)(R¹)、硝基(nitro)、氰基(cyano)、-C(O)R¹、-OC(O)R¹、-C(O)OR¹、-SR¹、-S(O)₂R¹、-S(O)₂-N(R²)(R²)、-(C₁-C₆亞烷基)-S(O)₂-N(R²)(R²)、-C(O)-N(R²)(R²)、-N(R²)(R²)-C(O)R¹、-(C₁-C₆亞烷基)-N(R²)-C(O)R¹、-NR²S(O)₂R¹、-P(O)(R¹)(R¹)、和-OR¹；其中，每一個芳基、雜芳基、環烷基、雜環基、烷基、烷氧基、鹵代烷基、羥基烷基、雜烷基係獨立地以0-5個R^a取代；每一個R^B係獨立地選自C₁-C₆烷基(alkyl)、C₁-C₆烷氧基(alkoxy)、鹵代(halo)、C₁-C₆鹵代烷基(haloalkyl)、C₁-C₆鹵代烷氧基(haloalkoxy)、C₁-C₆羥基烷基(hydroxyalkyl)、C₁-C₆雜烷基(heteroalkyl)、-N(R¹)(R¹)、硝基(nitro)、氰基(cyano)、和-OR¹；每一個R¹係獨立地選自氫、C₁-C₆烷基(alkyl)、C₁-C₆鹵代烷基(haloalkyl)、C₁-C₆鹵代烷氧基(haloalkoxy)、C₁-C₆羥基烷基(hydroxyalkyl)、C₁-C₆雜烷基(heteroalkyl)、環烷基、環烷基烷基(cycloalkylalkyl)、雜環基、和雜環基烷基，其中C₁-C₆烷基、C₁-C₆鹵代烷基、C₁-C₆羥基烷基、C₁-C₆雜烷基、環烷基、環烷基烷基、雜環基、和雜環基烷基係獨立地以0-5個R^b取代；每一個R²係獨立地選自氫、C₁-C₆烷基(alkyl)、C₁-C₆鹵代烷基(haloalkyl)；或2個R²和氮在一起，連結形成一個雜環，可用0-5個R^b取代。

每一個R^a和R^b係獨立地選自鹵代(halo)、氰基(cyano)、羥基(hydroxyl)、C₁-C₆烷基(alkyl)、C₁-C₆烷氧基(alkoxy)、C₁-C₆鹵代烷氧基(haloalkoxyl)、-N(R’’)(R’’)、-C(O)-N(R’’)(R’’)、-N(R’’)-C(O)R’、和-(C₁-C₆亞烷基)-N(R’’)-C(O)R’；每一個R’和R’’係獨立地選自氫和C₁-C₆烷基或C₁-C₆羥基烷基；m係0、1、2、3、4、或5；以及n係0、1、或2；如果該化合物不是(R)-5-(2-(2,5-二氟苯基)吡咯烷-1-基)吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-腈((R)-5-(2-(2,5-difluorophenyl)pyrrolidin-1-yl)pyrazolo[1,5-a]pyrimidine-3-carbonitrile)。

於另一個面向中，本發明提供藥劑組成物，包含一個結構式(I)的化合物或其一個藥劑學上可接受的鹽類和一個藥劑學上可接受的載體。

於另一個面向中，本發明提供一個方法，用於抑制一個細胞內或一個病人體內的神經促進性酪氨酸受體激酶活性；在某些具體模式例中，所述之方法包含接觸細胞的步驟或投與該病人一個結構式(I)的化合物或其一個藥劑學上可接受的鹽類或組成物。

於另一個面向中，本發明提供一個方法，用於治療一個因畸變神經促進性酪氨酸受體激酶活性(aberrant NTRK activity)導致的狀況例如癌症的個體；在某些具體模式例中，所述之方法包含投與該病人一個有療效數量的一個結構式(I)的化合物或其一個藥劑學上可接受的鹽類或組成物。

於另一個面向，本發明提供一個方法，用於治療一個已經對一個癌症治療發生抵抗性的個體；在某些具體模式例中，所述之方法包含投與該病人一個有療效數量的一個結構式(I)的化合物或其一個藥劑學上可接受的鹽類或組成物。

於一個面向，本發明描述一個結構式(I)的化合物或其一個藥劑學上可接受的鹽類，其中：

環A係選自單環(monocyclic)或雙環(bicyclic)芳基(aryl)、單環或雙環雜芳基(heteroaryl)、環烷基(cycloalkyl)和雜環(heterocyclyl)；每一個R^A係獨立地選自單環或雙環芳基(aryl)、單環或雙環雜芳基(heteroaryl)、單環或雙環環烷基(cycloalkyl)和單環或雙環雜環基(heterocyclyl)、C₁-C₆烷基(alkyl)、C₁-C₆烷氧基(alkoxy)、鹵代(halo)、C₁-C₆鹵代烷基(haloalkyl)、C₁-C₆鹵代烷氧基(haloalkoxy)、C₁-C₆羥基烷基(hydroxyalkyl)、C₁-C₆雜烷基(heteroalkyl)、-N(R¹)(R¹)、硝基(nitro)、氰基(cyano)、-C(O)R¹、-OC(O)R¹、-C(O)OR¹、-SR¹、-S(O)₂R¹、-S(O)₂-N(R²)(R²)、-(C₁-C₆亞烷基)-S(O)₂-N(R²)(R²)、-C(O)-N(R²)(R²)、-N(R²)(R²)-C(O)R¹、-(C₁-C₆亞烷基)-N(R²)-C(O)R¹、-NR²S(O)₂R¹、-P(O)(R¹)(R¹)、和-OR¹；其中，每一個芳基、雜芳基、環烷基、雜環基、烷基、烷氧基、鹵代烷基、羥基烷基、雜烷基係獨立地以0-5個R^a取代；每一個R^B係獨立地選自C₁-C₆烷基(alkyl)、C₁-C₆烷氧基(alkoxy)、鹵代(halo)、C₁-C₆鹵代烷基(haloalkyl)、C₁-C₆鹵代烷氧基(haloalkoxy)、C₁-C₆羥基烷基(hydroxyalkyl)、C₁-C₆雜烷基(heteroalkyl)、-N(R¹)(R¹)、硝基(nitro)、氰基(cyano)、和-OR¹；每一個R¹係獨立地選自氫、C₁-C₆烷基(alkyl)、C₁-C₆鹵代烷基(haloalkyl)、C₁-C₆鹵代烷氧基(haloalkoxy)、C₁-C₆羥基烷基(hydroxyalkyl)、C₁-C₆雜烷基(heteroalkyl)、環烷基、環烷基烷基(cycloalkylalkyl)、雜環基、和雜環基烷基，其中C₁-C₆烷基、C₁-C₆鹵代烷基、C₁-C₆羥基烷基、C₁-C₆雜烷基、環烷基、環烷基烷基、雜環基、和雜環基烷基係獨立地以0-5個R^b取代；每一個R²係獨立地選自氫、C₁-C₆烷基(alkyl)、C₁-C₆鹵代烷基(haloalkyl)；或2個R²和氮在一起，連結形成一個雜環，可用0-5個R^b取代。

每一個R^a和R^b係獨立地選自鹵代(halo)、氰基(cyano)、羥基(hydroxyl)、C₁-C₆烷基(alkyl)、C₁-C₆烷氧基(alkoxy)、C₁-C₆鹵代烷氧基(haloalkoxyl)、-N(R’’)(R’’)、-C(O)-N(R’’)(R’’)、-N(R’’)-C(O)R’、和-(C₁-C₆亞烷基)-N(R’’)-C(O)R’；每一個R’和R’’係獨立地選自氫和C₁-C₆烷基或C₁-C₆羥基烷基；m係0、1、2、3、4或5；以及n係0、1或2；如果該化合物不是(R)-5-(2-(2,5-二氟苯基)吡咯烷-1-基)吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-腈((R)-5-(2-(2,5-difluorophenyl)pyrrolidin-1-yl)pyrazolo[1,5-a]pyrimidine-3-carbonitrile)。

於某些具體模式例，化合物具有結構式(Ia-1)：

於某些具體模式例，至少有一個R^A是鹵代。

於其他具體模式例，化合物具有結構式(Ib)：

在一些具體模式例中，一個R^A是鹵代且一個R^A是芳基或雜芳基。

於某些具體模式例，化合物具有結構式(Ic)：

或結構式(Ic-1)：

，其中：X是氮(N)或C(R⁹)；R^A1是氟代(fluoro)或-CN；R^A2是氟代(fluoro)或氫(hydrogen)；R^B1是氫或氟代；R⁹係選自氫、鹵代、-CN、-C₁-C₄烷基、-C(O)N(R¹¹)(R¹¹)、和-S(O)₂N(R¹¹)(R¹¹)，其中R⁹的任何烷基部分係可選擇地以一個或一個以上的選自-OH和-F的取代基來取代。

R¹⁰係選自氫、鹵代、-O-(C₁-C₄烷基)，可選擇地以一個或一個以上的鹵代和-C(O)N(R¹¹)(R¹¹)來取代。

每一個R¹¹係獨立地選自氫、和C₁-C₄烷基，可選擇地以一個或一個以上的選自-OH和環丙基(cyclopropyl)的取代基來取代。

於某些結構式(Ic)的具體模式例中，R⁹係選自氫、氟代(fluoro)、氯代(chloro)、-CN、-C(O)NH₂,-C(O)NHCH₃、-C(O)N(CH₃)₂、-C(O)NHCH₂CH₂OH、 -C(OH)(CH₃)₂、-S(O)₂NH₂、和N-(環丙基甲基)氨基甲醯(N-(cyclopropylmethyl)carbamyl)。

於某些結構式(Ic)的具體模式例中，R¹⁰係選自氫、氟代、氯代、-OCH₃、-OCF₃和-C(O)NH₂。

在另一個面向中，本發明描述一個方法，在一個細胞中或一個病人中抑制神經促進性酪氨酸受體激酶活性，包含接觸該細胞、或投與該病人一個此處描述的化合物《例如：一個表1中的化合物》或其一個藥劑學上可接受的鹽類、或其一個藥劑組成物的步驟。

在又另一個面向中，本發明描述一個方法，用於治療一個因畸變神經促進性酪氨酸受體激酶活性(aberrant NTRK activity)所導致之狀況的個體，包含投與該個體一個有療效數量的一個此處描述的化合物《例如：一個表1中的化合物》或其一個藥劑學上可接受的鹽類、或其一個藥劑組成物。

在又另一個面向中，本發明描述一個方法，用於治療一個已經對一個癌症治療發生抵抗性的個體之方法，包含投與該病人一個有療效數量的一個此處描述的化合物《例如：一個表1中的化合物》或其一個藥劑學上可接受的鹽類、或其一個藥劑組成物。

名詞定義

如本文所用，名詞『病人(patient)』、『個體(subject)』、『個人(individual)』、和『宿主(host)』表示一個人類或一個非人類動物之任一者患有或懷疑患有一個與畸變的神經促進性酪氨酸受體激酶表現(aberrant NTRK expression)《亦即，增加的神經促進性酪氨酸受體激酶活性係透過神經促進性酪氨酸受體激酶的發信號所導致》或生物學活性相關的疾病或違常狀況(disorder)。

『治療(Treat)』和『做治療(treating)』此種疾病或違常，表示改善該疾病或違常至少一個徵狀(symptom)。這些用語，用在與一種情況例如癌症相關時，係表示一個或多個以下情形：阻止癌症生長、使癌症重量或體積萎縮、延長病人的預期存活時間、抑制腫瘤生長、減少腫瘤團塊、減少轉移病灶(metastatic lesions)的大小或數目、抑制新轉移病灶的發展、延長存活期、延長無惡化存活期(progression-free survival)、延長腫瘤惡化的時間(time to progression)，及/或加強生活品質。

名詞『預防(preventing)』用在與一種情況或疾病例如癌症相關時，係表示該情況或疾病的徵候的一個頻率減少、或延後發生，因此癌症預防包括：舉例來說，在一個接受一個預防性治療的病人族群相對於一個對照族群，減少可偵測的癌生長物(cancerous growths)的數目，及/或延後可偵測的癌生長物的出現，例如靠一個統計上的及/或臨床上的有意義數量，在一個被治療族群相對於未治療的對照族群的比較。

用語『治療效果(therapeutic effect)』表示在一個動物，特別是哺乳動物(mammal)、且更特定為人類，的一個有效益的局部或系統作用，該作用係由投與本發明的一個化合物或組成物(composition)所產生。片語『治療上有效數量(therapeutically-effective amount)』意指本發明的一個化合物或組成物的數量在治療一個因神經促進性酪氨酸受體激酶過度表現(over expression)或畸變的神經促進性酪氨酸受體激酶生物活性(aberrant NTRK biological activity)所引起的疾病或違常狀況，於一個合理的效益風險比(benefit/risk ratio)是有效的；這類物質的治療上有效數量會因個體和治療的疾病情況、該個體的體重和年齡、疾病情況的嚴重程度、投藥方式等等而改變，本領域的專業人員能夠很快地決定這些情形。

如本文所用，『發生抵抗性(developing resistance)』意指：當一個藥物第一次投與給一個病人，病人的徵狀有改善，無論是以腫瘤體積減少、新病灶數目減少、或醫師用來評斷疾病進展(disease progression)的一些其他方法來量測；然而，這些徵狀停止改善、或甚至在某些地方更壞，於此時點，該病人被稱為已經對該藥物發生抵抗性。

『脂族基(Aliphatic group)』意指一個直鏈、分枝鏈、或環狀碳氫基(hydrocarbon group)並包括飽和和不飽和基，例如一個烷基、一個烯基(alkenyl)、和一個炔基(alkynyl)。

『亞烷基(Alkylene)』表示一個烷基的一個二價基團(divalent radical)，例如：-CH₂-’-CH₂CH₂-’和-CH₂CH₂CH₂-。

『烯基(Alkenyl)』意指一個脂族基含有至少一個雙鍵(double bond)。

『烷氧基(Alkoxyl或alkoxy)』意指一個烷基，具有一個氧自由基(oxygen radical)附屬於其上。代表性的烷氧基包括甲氧基(methoxy)、乙氧基(ethoxy)、丙氧基(propyloxy)、特-丁氧基(tert-butoxy)及其他相似物。名詞『鹵代烷氧基(haloalkoxy)』表示一個烷氧基，其中一個或多個氫原子被鹵素取代，也包括全部氫原子被鹵素取代的烷氧基部分(alkoxy moieties)《例如，全氟烷氧基(perfluoroalkoxy)》。

『烷基(Alkyl)』係指一個飽和直鏈或分枝鏈碳氫化合物(hydrocarbon)的一個單價基(monovalent radical)，例如一個1-12、1-10、或1-6個碳原子的直鏈或分枝鏈基團，如本文中提及，分別是C₁-C₁₂烷基、C₁-C₁₀烷基、和C₁-C₆烷基。例示的烷基包括，但非侷限：甲基、乙基、丙基、異丙基、2-甲基-1-丙基、2-甲基-2-丙基、2-甲基-1-丁基、3-甲基-1-丁基、2-甲基-3-丁基、2,2-二甲基-1-丙基、2-甲基-1-戊基、3-甲基-1-戊基、4-甲基-1-戊基、2-甲基-2-戊基、3-甲基-2-戊基、4-甲基-2-戊基、2,2-二甲基-1-丁基、3,3-二甲基-1-丁基、2-乙基-1-丁基、丁基、異丁基、特-丁基、戊基、異戊基、新戊基(neopentyl)、己基、庚基(heptyl)、辛基(octyl)等等。

『亞烯基(Alkenylene)』係指一個烯基(alkenyl group)具有兩個連接點；例如，『亞乙烯基(ethenylene)』表示化學基-CH=CH-。亞烯基也是有不飽和型式或飽和型式，並可有一個或多個取代物。

『炔基(Alkynyl)』係指一個直鏈或分枝鏈的碳氫鏈包含2-12個碳原子並具有一個或多個三鍵(triple bonds)為特徵。炔基的實例包括但非侷限，有：乙炔基(ethynyl)、丙炔基(propargyl)、和3-己炔基(3-hexynyl)。三鍵的碳原子的其中之一可以選擇性地作為炔基取代基(alkynyl substituent)的連接點(point of attachment)。

『亞炔基(Alkynylene)』係指一個炔基具有兩個接點(connecting points)，例如『亞乙炔基(ethynylene)』代表化學基-C≡C-。亞炔基也可以是一個無取代型式、或一個有一或多個取代基的有取代型式。

『羥基亞烯基(Hydroxyalkylene)』或『羥基烷基(hydroxyalkyl)』係指一個亞烯基或烷基基團(moiety)，其中一個亞烯基或烷基氫原子被一個羥基取代；羥基亞烯基或羥基烷基包括超過一個氫原子被一個羥基取代的基團。

『芳香環系統(Aromatic ring system)』係本領域公認的(art-recognized)，係指一個單環、雙環、或多環的碳氫環系統，其中至少一個環是芳香環。

『芳基(Aryl)』係指一個芳香環系統的一個單價基(monovalent radical)。代表性的芳基包括完全芳香環系統(fully aromatic ring systems)，例如苯基(phenyl)、萘基(naphthyl)、和蒽基(anthracenyl)；及環系統，其中一個芳香碳環融合到一或多個非芳香碳環，例如二氫茚基(indanyl)、酞醯亞胺基(phthalimidyl)、萘醯亞胺基(naphthimidyl)、或四氫萘基(tetrahydronaphthyl)、及同類物。

『芳基烷基(Arylalkyl)』或『芳代脂烷基(aralkyl)』表示一個烷基基團(alkyl moiety)，其中一個烷基氫原子被一個芳基取代；芳代脂烷基包括超過一個氫原子被一個芳基取代的族群。『芳基烷基』或『芳代脂烷基』的實例包括苄基(benzyl)、2-苯基乙基、3-苯基丙基、9-芴基(fluorenyl)、二苯甲基(benzhydryl)、和三苯甲基(trityl)的族群。

『芳氧基(Aryloxy)』表示-O-(芳基)，其中芳香雜環基團(heteroaryl moiety)如本文所定義。

『鹵代(Halo)』係指一個任何鹵素的自由基，例如：氟(-F)、氯(-Cl)、溴(-Br)、或碘(-I)。

『鹵代烷基(Haloalkyl)』和『鹵代烷氧基(haloalkoxyl)』係指烷基和烷氧基結構被一或多個鹵代基取代或其合併。舉例來說，名詞『氟代烷基(fluoroalkyl)』和『氟代烷氧基(fluoroalkoxy)』分別包括鹵代烷基和鹵代烷氧基，其中鹵代係氟(fluorine)。『鹵代亞烯基(Haloalkylene)』係指一個二價的烷基，例如-CH₂-、-CH₂CH₂-、和-CH₂CH₂CH₂-，其中一或多個氫原子被鹵代取代，且包括所有氫原子都被鹵代取代的烷基基團。

『雜烷基(Heteroalkyl)』係指一個可選擇性被取代的烷基，其一個或多個的骨架鏈原子選自碳以外的原子，例如氧、氮、硫、磷或併用這些原子。給予一個數值範圍(numerical range)例如C₁-C₆雜烷基表示化學鏈上的碳原子數，於此實例中，係包括1至6個碳原子。舉例來說，一個-CH₂OCH₂CH₃自由基表示一個『三碳(C₃)』雜烷基，與分子的其餘部分連接可以藉由一個雜原子(heteroatom)或一個在雜烷基鏈上的碳原子。『雜亞烷基(Heteroalkylene)』係指一個雙價的可選擇性被取代的烷基，其一個或多個的骨架鏈原子選自碳以外的原子，例如氧、氮、硫、磷或併用這些原子。

『碳環系統(Carbocyclic ring system)』表示一個單環、雙環、或多環的碳氫環系統，其中每一個還可以是完全飽和或含有一個或多個不飽和單元，但沒有一個環屬芳香族。

『碳環基(Carbocyclyl)』表示一個碳環系統的一個單價自由基。代表性的碳環基族群包括環烷基類(cycloalkyl)《例如：環丙基、環丁基、環戊基、環己基和其同類物》、和環烯類(cycloalkenyl)《例如：環戊烯基(cyclopentenyl)、環己烯基、環戊二烯基(cyclopentadienyl)和其同類物》。

『環烷基(Cycloalkyl)』表示一個具有3至12個碳原子的單環、雙環、三環、或多環的非芳香族碳氫化合物類。任何可被取代的環原子都可以被取代《例如，被一個或多個取代基取代》，環烷基類可以包含融合的或螺旋形環(fused or spiro rings)，融合的環係共用一個相同的碳原子。環烷基部分的實例包括但非侷限於此，有：環丙基、環己基、甲基環己基、金剛烷基(adamantyl)、和降莰基(norborny)。

『環烷基烷基(Cycloalkylalkyl)』表示一個-(環烷基)-烷基的自由基，其中環烷基和烷基如本文所揭示。『環烷基烷基』係藉由環烷基與原體分子結構(parent molecular structure)鍵結。

『雜芳香環系統(Heteroaromatic ring system)』係本領域所公認(art-recognized)，且係指一個單環、雙環、或多環的系統，其中至少一個環不但是芳香環而且包含至少一個雜原子《例如氮、氧、或硫》；且其中也沒有其他環是雜環(heterocyclyl)《定義如下》。於某些例子中，有一個環是芳香環且包含一個雜原子，這樣的環中含有1、2、3、或4環雜原子。

『雜芳基(Heteroaryl)』係一個雜芳香環系統的一個單價自由基(monovalent radical)。代表性的雜芳基族群包括以下：(i)每一個環包含一個雜原子且是芳香環，例如，咪唑基(imidazolyl)、噁唑基(oxazolyl)、噻唑基(thiazolyl)、三唑基(triazolyl)、吡咯基(pyrrolyl)、呋喃基(furanyl)、苯硫基(thiophenyl)、吡唑基(pyrazolyl)、吡啶基(pyridinyl)、吡嗪基(pyrazinyl)、噠嗪基(pyridazinyl)、嘧啶基(pyrimidinyl)、吲哚嗪基(indolizinyl)、嘌呤基(purinyl)、萘啶基(naphthyridinyl)、和喋啶基(pteridinyl)；(ii)每一個環是芳香環或碳環，至少一個芳香環包含一個雜原子且至少另一個環是碳氫環或例如吲哚基(indolyl)、異吲哚基(isoindolyl)、苯噻嗯基(benzothienyl)、苯並呋喃基(benzofuranyl)、二苯並呋喃基(dibenzofuranyl)、吲唑基(indazolyl)、苯並咪唑基(benzimidazolyl)、苯並噻唑基(benzthiazolyl)、喹啉基(quinolyl)、異喹啉基(isoquinolyl)、

啉基(cinnolinyl)、呋嗪基(phthalazinyl)、喹唑啉基(quinazolinyl)、喹喔啉基(quinoxalinyl)、氮芴基(carbazolyl)、吖啶基(acridinyl)、吩嗪基(phenazinyl)、吩噻嗪基(phenothiazinyl)、吩噁嗪基(phenoxazinyl)、吡啶並[2,3-b]-1,4-噁嗪-3-(4氫)-酮(pyrido[2,3-b]-1,4-oxazin-3-(4H)-one)、5,6,7,8-四氫喹啉基(5,6,7,8-tetrahydroquinolinyl)和5,6,7,8-四氫異喹啉基(5,6,7,8-tetrahydroisoquinolinyl)；(iii)每一個環是芳香環或碳環，且至少一個芳香環與另一個芳香環共用一個橋頭雜原子(bridgehead heteroatom)，例如4H-喹嗪基(4H-quinolizinyl)。

在某些具體模式例中，雜芳基可以包括

和

，其中R是氫(H)或C_1-6烷基。

『雜環系統(Heterocyclic ring system)』係指一個單環、雙環、或多環的系統，其中至少一個環是飽和的或部分不飽和(partially unsaturated)《但不是芳香環》而且包含至少一個雜原子；一個雜環系統可以在其任何一個雜原子或碳原子連結它的側基(pendant group)，而產生一個穩定的結構，且任何一個環園子都可選擇性地被取代。

『雜環(Heterocyclyl)』係指一個雜環系統的單價自由基；代表性的雜環族群包括以下：(i)每一個環是非芳香環且至少一個環包含一個雜原子，例如：四氫呋喃基(tetrahydrofuranyl)、四氫吡喃基(tetrahydropyranyl)、四氫噻吩基(tetrahydrothienyl)、吡咯烷基(pyrrolidinyl)、吡咯烷酮基(pyrrolidonyl)、哌啶基(piperidinyl)、吡咯啉基(pyrrolinyl)、十氫喹啉基(decahydroquinolinyl)、

唑烷基(oxazolidinyl)、哌嗪基(piperazinyl)、二噁烷基(dioxanyl)、二氧戊烷基(dioxolanyl)、二氮雜卓基(diazepinyl)、氧氮雜卓基(oxazepinyl)、硫氮雜卓基(thiazepinyl)、嗎啉基(morpholinyl)、和奎寧環基(quinuclidinyl)；(ii)至少一個環為非芳香環且包含一個雜原子同時至少一個其他環是一個芳香碳環(aromatic carbon ring)，例如：1,2,3,4-四氫喹啉基(1,2,3,4-tetrahydroquinolinyl)、1,2,3,4-四氫異喹啉基(1,2,3,4-tetrahydroisoquinolinyl)；以及(iii)至少一個環為非芳香環且包含一個雜原子同時至少一個其他環是一個芳香環且包含一個雜原子，例如：3,4-二氫-1H-吡喃[4,3-c]吡啶(3,4-dihydro-1H-pyrano[4,3-c]pyridine)、和1,2,3,4-四氫-2,6-萘啶(1,2,3,4-tetrahydro-2,6-naphthyridine)。

『雜環烷基(Heterocyclylalkyl)』表示一個烷基被一個雜環基取代。

『氰基(Cyano)』表示一個-CN自由基。

『硝基(Nitro)』表示-NO₂。

『羥基(Hydroxy或hydroxyl)』表示-OH。

『羥基烷基(Hydroxyalkyl)』表示一個二價烷基，例如：-CH₂-、-CH₂CH₂-、和-CH₂CH₂CH₂-，其中一個或多個氫原子被羥基替換，且包括烷基基團(alkyl moieties)的所有氫原子被羥基取代。

『(被)取代(Substituted)』無論前面是否加上名詞『可選擇地(optionally)』，都意指特定基團部分的一個或多個氫原子被一個合適的取代物替換；除非另有說明，一個『可選擇地(被)取代(optionally substituted)』化學基可以具有在化學基的每一個可取代位置的一個合適取代物，且若在任何特定結構中超過一個位置可以被一個以上選自特定族群的取代基取代時，在每一個位置的這些取代基可以相同或不同。本發明預期的取代基組合最好是導致穩定的(stable)或化學上可行的(chemically feasible)化合物的形成。名詞『穩定的(stable)』，如本文所用，係指化合物，當受到的情況是在它們的製造(production)、檢測(detection)、和在某些具體模式例中，它們的復原(recovery)、純化(purification)、和於本文揭示的一或多個目標的使用時，不會實質改變。

如本文所用，每一個用詞的定義，例如烷基、m、n等，當在任何結構中出現一次以上時，意指其定義獨立於在相同結構中的其他地方。

本發明的某些化合物可能存在於特定的幾何(geometric)或立體異構(stereoisomeric)型式中，本發明預期所有這些化合物，只要落入本發明範圍內者，包括順式(cis-)和反式(trans-)異構物(isomer)、右型《順時針》和左型《逆時針》鏡像異構物(R-and S-enantiomers)、非鏡像異構物(diastereomers)、右式異構物((D)-isomers)、左式異構物((L)-isomers)、其消旋混合物(racemic mixtures)、和其他混合物；額外的不對稱碳原子可能出現在一個取代物如烷基中，所有這類異構物以及其混合物都主張被包括在本發明中。

舉例來說，如果想要一個本發明化合物的特別的鏡像異構物，可以藉由不對稱合成(asymmetric synthesis)、或藉由對掌性助劑(chiral auxiliary)衍生來製備，其中產生的非鏡像異構混合物被分離而助劑被切開，生成想要的純化的鏡像異構物。另外，若分子含有一個鹼性功能基例如氨基(amino)、或一個酸性功能基例如羧基(carboxyl)，則用一個適當的光學活性的酸或鹼可以形成非鏡像異構物鹽類，然後藉由本領域熟知的分次結晶(fractional crystallization)或色層分析方法(chromatographic means)溶解所形成的非鏡像異構物，接著復原純淨的鏡像異構物。

除非另有說明，當一個揭露的化合物以一個結構被命名或描述而無具體說明立體化學(stereochemistry)且具有一或多個對掌中心(chiral centers)，可理解係代表該化合物的所有可能的立體異構物、及其非鏡像異構物的混合物。

一個化合物的『鏡像異構物過量值(enantiomeric excess)』或『鏡像異構物過量值百分比(% enantiomeric excess)』可以應用下述所式公式計算，下述實施例中，一個組成物含有90%的一種鏡像異構物例如右型《順時針》鏡像異構物，和10%的另一種鏡像異構物例如左型《逆時針》鏡像異構物。

ee=(90-10)/100=80%

因此，一個組成物含有90%的一種鏡像異構物和10%的另一種鏡像異構物被稱為具有一個80%的鏡像異構物過量值。

本文所描述之化合物或組成物可以包含至少50%、75%、90%、95%、或99%的該化合物的一個型式(form)例如左型《逆時針》鏡像異構物(S-enantiomers)的一個鏡像異構物過量值；換句話說，這種化合物或組成物包含一個左型《逆時針》鏡像異構物超過右型《順時針》鏡像異構物的鏡像異構物過量值。

本文所描述之化合物也可以在一個或多個構成此化合物的原子含有非自然比例(unnatural proportions)的原子同位素(atomic isotopes)，舉例來說，該化合物可以用放射性同位素(radioactive isotopes)如氘《重氫》(²H)、氚《三重氫》(³H)、碳13(carbon-13；¹³C)、或碳14(carbon-14；¹⁴C)，做放射性標記(radiolabel)。所有本文所描述之化合物的同位素變種(isotopic variations)，無論是否有放射性，都主張包括在本發明的範圍內，此外，本文所描述之該化合物的所有互變異構型式(tautomeric forms)也主張包括在本發明的範圍內。

化合物可以游離鹼(free base)或鹽類使用，代表性的鹽類包括溴化氫、氯化氫、硫酸鹽(sulfate)、硫酸氫鹽(bisulfate)、磷酸鹽、硝酸鹽、醋酸鹽、戊酸鹽(valerate)、油酸鹽(oleate)、棕櫚酸鹽(palmitate)、硬脂酸鹽 (stearate)、月桂酸鹽(laurate)、苯甲酸鹽(benzoate)、乳酸鹽(lactate)、甲苯磺酸鹽(tosylate)、檸檬酸鹽(citrate)、馬來酸鹽(maleate)、延胡索酸鹽(fumarate)、琥珀酸鹽(succinate)、酒石酸鹽(tartrate)、萘二甲酸鹽(napthylate)、甲磺酸鹽(mesylate)、葡萄糖酸鹽(glucoheptonate)、乳糖酸鹽(lactobionate)、和十二烷基硫酸鹽(laurylsulphonate)，及同類物《參照，例如，Berge等人(1977)“Pharmaceutical Salts”，J.Pharm.Sci.66：1-19》。

以下表1顯示本文描述之化合物的結構。

這些化合物的藥劑學上可接受的鹽類也預期可應用於本文所描述之用途。

『藥劑學上可接受的鹽類(Pharmaceutically acceptable salt)』係指本發明的一個化合物的任何鹽類，保留其生物性質且無毒性或其他不符藥劑使用期望之處。藥劑學上可接受的鹽類可以從各種本領域熟知的有機和無機的相反離子(counter-ions)衍生而來，這類鹽類包括：(1)酸加成鹽(acid addition salts)，由有機和無機的酸所做成，例如氫氯酸《鹽酸》、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、胺磺酸(sulfamic acid)、醋酸(acetic acid)、三氟醋酸(trifluoroacetic acid)、三氯醋酸、丙酸(propionic acid)、己酸(hexanoic acid)、環戊基丙酸(cyclopentylpropionic acid)、乙醇酸(glycolic acid)、戊二酸(glutaric acid)、丙酮酸(pyruvic acid)、乳酸、丙二酸(malonic acid)、琥珀酸(succinic acid)、山梨酸(sorbic acid)、抗壞血酸(ascorbic acid)、蘋果酸(malic acid)、馬來酸(maleic acid)、延胡索酸(fumaric acid)、酒石酸(tartaric acid)、檸檬酸(citric acid)、苯甲酸《安息香酸》(benzoic acid)、3-(4-羥基苯甲醯基)苯甲酸(3-(4-hydroxybenzoyl)benzoic acid)、苦味酸(picric acid)、肉桂酸(cinnamic acid)、苦杏仁酸(mandelic acid)、酞酸《苯二酸》(phthalic acid)、月桂酸(lauric acid)、甲烷磺酸(methanesulfonic acid)、乙烷磺酸(ethanesulfonic acid)、1,2-乙烷-二磺酸(1,2-ethane-disulfonic acid)、2-羥基乙烷磺酸、苯磺酸(benzenesulfonic acid)、4-氯苯磺酸(4-chlorobenzenesulfonic acid)、2-萘磺酸(2-naphthalenesulfonic acid)、4-甲苯磺酸(4-toluenesulfonic acid)、樟腦酸(camphoric acid)、樟腦磺酸(camphorsulfonic acid)、4-甲基二環[2.2.2]辛-2-烯-1-羧酸(4-methylbicyclo[2.2.2]-oct-2-ene-1-carboxylic acid)、葡庚糖酸(glucoheptonic acid)、3-苯基丙酸、三甲基醋酸、特-丁基醋酸、月桂醇硫酸(lauryl sulfuric acid)、葡萄糖酸(gluconic acid)、安息香酸(benzoic acid)、谷胺酸(glutamic acid)、羥基萘甲酸(hydroxynaphthoic acid)、水楊酸(salicylic acid)、硬脂酸(stearic acid)、環己基胺磺酸(cyclohexylsulfamic acid)、奎尼酸(quinic acid)、黏康酸(muconic acid)和其類似的酸；或(2)當一個酸性質子出現於原體化合物(parent compound)時，無論是(a)被一個金屬離子取代，例如一個鹼金屬離子(alkali metal ion)；一個鹼土離子(alkaline earth ion)或一個鋁離子；或鹼金屬或鹼土金屬氫氧化物，例如氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化鈣、氫氧化鎂、氫氧化鋁、氫氧化鋰、氫氧化鋅、和氫氧化鋇；氨(ammonia)；或(b)與一個有機鹼(organic base)相配，例如脂族胺(aliphatic amines)；脂環胺(alicyclic amines)；或芳香族有基氨(aromatic organic amines)，例如胺(ammonia)、甲基氨(methylamine)、二甲基氨、二乙基氨、甲基吡啶《皮考啉》(picoline)、乙醇胺《氨基乙醇》(ethanolamine)、二乙醇胺(diethanolamine)、三乙醇胺、乙二胺(ethylenediamine)、離氨酸(lysine)、精氨酸(arginine)、鳥氨酸(ornithine)、膽鹼(choline)、N,N'-二苄基乙二胺(N,N'-dibenzylethylene-diamine)、氯普魯卡因(chloroprocaine)、普魯卡因(procaine)、N-苄基苯乙胺(N-benzyl phenethylamine)、N-葡甲胺哌嗪(N-methylglucamine piperazine)、三個(羥甲基)氨基甲烷(tris(hydroxymethyl)-aminomethane)、氫氧化四甲銨(tetramethylammonium hydroxide)、和其同類物。

藥劑學上可接受的鹽類更進一步包括：僅是例示，鈉、鉀、鈣、鎂、氨、四烷基氨(tetraalkylammonium)和其同類物；又當該化合物含有一個鹼性官能性(basic functionality)，包括：無毒的有機或無機酸的鹽類，例如氫氯酸鹽、氫溴酸鹽、酒石酸鹽、甲磺酸鹽(mesylate)、苯磺酸鹽(besylate)、醋酸鹽、馬來酸鹽(maleate)、草酸鹽(oxalate)和其同類物。

藥劑組成物

本發明之藥劑組成物包含一或多個本發明之化合物和一或多個生理學上(physiologically)或藥劑學上(pharmaceutically)可接受的載體(carrier)。名詞『藥劑學上可接受的載體(pharmaceutically acceptable carrier)』表示一個藥劑學上可接受的材料、組成物或載具(vehicle)，例如一個液體或固體填料(filler)、稀釋劑(diluent)、賦形劑(excipient)、溶劑或包封材料(encapsulating material)，用於攜帶或運送任何主體組成物(subject composition)或其成分。每一個載體必須是『可接受的(acceptable)』表示必須與主體組成物和它的成份相容(compatible)，且不會對病人有傷害。

可做為藥劑學上可接受的載體的材料的某些實例包括：(1)醣類，例如乳糖、葡萄糖和蔗糖；(2)澱粉類，例如玉米澱粉和馬鈴薯澱粉；(3)纖維素(cellulose)和其衍生物，例如鈉羧甲基纖維素(sodium carboxymethyl cellulose)、乙基纖維素(ethyl cellulose)和醋酸纖維素(cellulose acetate)；(4)西黃蓍膠粉(powdered tragacanth)；(5)麥芽；(6)明膠(gelatin)；(7)滑石粉；(8)賦形劑，例如可可脂(cocoa butter)和栓劑蠟(suppository waxes)；(9)油類，例如花生油、棉籽油(cottonseed oil)、紅花籽油(safflower oil)、芝麻油、橄欖油、玉米油和大豆油；(10)二醇類(glycols)，例如丙二醇(propylene glycol)；(11)多元醇(polyols)，例如甘油、山梨糖醇(sorbitol)、甘露醇(mannitol)和聚乙二醇(polyethylene glycol)；(12)酯類，例如油酸乙酯(ethyl oleate)和月桂酸乙酯(ethyl laurate)；(13)瓊脂(agar)；(14)緩衝劑，例如氫氧化鎂和氫氧化鋁；(15)海藻酸(alginic acid)；(16)無致熱原水(pyrogen-free water)；(17)等滲壓鹽溶液(isotonic saline)；(18)林格氏溶液(Ringer’s solution)；(19)乙醇；(20)磷酸鹽緩衝液；以及(21)其他應用於藥劑配方中的無毒性相容物質。

本發明之組成物的投與方式有口服、腸道外給藥(parenterally)、藉由吸入噴霧(by inhalation spray)、局部、經肛門、噴鼻、口腔含服(buccally)、經陰道或經過一個植入型貯藏器(implanted reservoi)。名詞『腸道外給藥(parenteral)』如本文所用，係包括皮下、靜脈內、肌肉內、關節內(intra-articular)、滑膜內(intra-synovial)、胸骨內(intrasternal)、鞘內(intrathecal)、肝內(intrahepatic)、病灶內(intralesional)和顱內(intracranial)的注射(injection)或灌注(infusion)技術。於某些具體模式例中，本發明之組成物係以口服、腹膜內(intraperitoneally)或靜脈內投與。本發明之組成物的無菌注射型式可以是水性或油性懸浮液，這些懸浮液可以依照本領域所知之技術使用適當的分散劑(dispersing agents)或潤濕劑(wetting agents)和懸浮劑(suspending agents)來配方。無菌注射製劑也可以是在一個無毒性腸道外可接受的稀釋劑或溶劑中的一個無菌注射溶液或懸浮液，例如一個在1,3-丁二醇中的溶液。在可接受的載具和溶劑中，可能使用水、林格氏液和等滲透壓氯化鈉溶液；此外，無菌的不揮發油(fixed oils)傳統上被用作為溶劑或懸浮介質。

為了這個目的，可以使用任何刺激性少的不揮發油包括合成的單或雙甘油脂(mono-or di-glycerides)。脂肪酸例如油酸(oleic acid)和它的甘油脂衍生物可用於注射劑的製備，就如同天然的藥劑學上可接受的油類如橄欖油或蓖麻油(castor oil)，特別是它們的聚乙氧基化變體(polyoxyethylated versions)，這些油溶液或懸浮液也可以含有一個長鏈醇類稀釋劑或分散劑，例如羧甲基纖維素或通常使用於藥劑學上可接受的劑型(dosage forms)包括乳劑(emulsions)和懸浮劑的配方中的相同分散劑；其他常用的介面活性劑(surfactants)，例如吐溫《非離子活性劑》(Tween)、司盤類(Spans)和其他乳化劑或常用於藥劑學上可接受的固體、液體、或其他劑型的製造之生物可利用率促進劑(bioavailability enhancers)，也可以使用於做成配方的目的。

本發明之藥劑學上可接受的組成物能以任何口服可接受的劑型口服投與，這些劑型包括但非侷限於此，有膠囊、錠劑、水性懸浮液或溶液。如果是口服用的錠劑，通常使用的載體包括乳糖和玉米澱粉；柔滑劑(lubricating agents)如硬脂酸鎂(magnesium stearate)通常也會添加。對於以膠囊型式的口服投與方式，有用的稀釋劑包括乳糖和乾燥的玉米澱粉；若需要水性懸浮劑作為口服投與方式，活性成分則與乳化劑或懸浮劑併用；如果有需要，某些甜味劑、芳香劑或著色劑也可以添加。

另一方面，本發明之藥劑學上可接受的組成物能以栓劑型式投與，作為直腸給藥(rectal administration)；這些栓劑的製備係將藥物與一個安定無刺激性的賦形劑混合，該賦形劑在室溫為固體而在直腸溫度為液體，因此在直腸內會融解，釋出藥物，這類材料包括可可脂、蜂蠟(beeswax)和聚乙二醇(polyethylene glycols)。

本發明之藥劑學上可接受的組成物也能局部投與，特別是當治療的標靶包括局部使用時很快到達的區域或器官，如眼、皮膚或下腸道(lower intestinal tract)的疾病；用於這些區域或器官的適當的局部配方很容易製備。用於下腸道的局部配方應用可以用一個直腸栓劑配方《參照前述》或一個適當的灌腸劑(enema)配方。局部的穿皮貼劑(transdermal patches)也可使用。

關於局部使用，本藥劑學上可接受的組成物可以配方在一個適當的軟膏劑(ointment)裡，其中活性成分係懸浮於或溶解於一個或多個載體中。用於本發明之化合物的局部投與的載體包括但非侷限，有礦物油(mineral oil)、液體石蠟(liquid petrolatum)、白石蠟、丙二醇、聚氧乙烯(polyoxyethylene)、聚氧乙烯化合物、乳化蠟(emulsifying wax)和水。另一方面，本藥劑學上可接受的組成物可以配方在一個適當的洗劑(lotion)或霜劑(cream)裡，其中活性成分係懸浮於或溶解於一個或多個藥劑學上可接受的載體中。適當的載體包括但非侷限，有礦物油、山梨醇酐硬脂酸酯(sorbitan monostearate)、聚山梨醇酯60(polysorbate 60)、十六烷基酯蠟(cetyl esters wax)、鯨蠟醇(cetearyl alcohol cetearyl alcohol)、辛基十二烷醇(2-octyldodecanol)、苯甲醇(benzyl alcohol)和水。

本發明之藥劑學上可接受的組成物也可以用鼻用氣化噴霧劑(nasal aerosol)或吸入劑(inhalation)方式投與，這類組成物依照已知的藥劑學配方領域之技術即可製備，且可製作為鹽水溶液，使用芐醇(benzyl alcohol)或其他適當的防腐劑、吸收促進劑(absorption promoters)來加強生體可用率；氟碳化合物(fluorocarbons)、及/或其他傳統增溶劑(solubilizing agents)或分散劑(dispersing agents)。

本發明之化合物可與載體原料合併做成一個單一劑量型式的組成物，化合物數量會隨著治療對象、特定投與模式而改變。

劑量

本發明化合物包括藥劑學上可接受的鹽類和氘化變異物(deuterated variants)的毒性(Toxicity)和治療效果可以用細胞培養(cell cultures)或實驗動物的標準藥劑學程序(standard pharmaceutical procedures)來測定。半數致死量(LD₅₀)是指總體的50%致死的劑量，半數有效量(ED₅₀)是總體的50%發生治療效果的劑量，在毒性和治療效果之間的劑量比率(LD₅₀/ED₅₀)就是治療指數(therapeutic index)，展現較大的治療指數的化合物是吾人所願。當可能使用呈現毒性副作用的化合物時，就必須謹慎設計一個對準被影響部位的該化合物遞送系統，要能對未感染細胞的潛在損害減至最低，從而減少副作用。

得自細胞培養測定和動物研究的數據可以應用於劑量範圍的配方設計以供人類使用，這類化合物的劑量會落在一個包括極小或沒有毒性的半數有效量的血中濃度(circulating concentrations)的範圍內，劑量隨著使用的劑型和應用的投與途徑可以在這個範圍內改變。對於任何化合物，治療上有效劑量可以從細胞培養測定做初次估計，一個劑量可以用動物模型做配方設計以達到一個循環系統的血漿濃度範圍其中包括半數抑制濃度(IC₅₀)《亦即，試驗化合物的濃度達到一個症狀的半數最大抑制(half-maximal inhibition of symptoms)》，這類資訊能被應用以便更正確地決定對人類的有用劑量，例如藉由高效液相色層分析(high performance liquid chromatography)可以測量血漿中的濃度。

吾人亦應了解，對於任何一個特定病人的特定劑量和治療方法係隨著各種因素改變，包括所使用之特定化合物的活性、年齡、體重、一般健康狀況、性別、飲食、給藥的時間、排泄速率、藥物併用、和治療醫師的判斷及所治療疾病的嚴重度。在組成物中的本發明之一個化合物的數量也隨著組成物中特定化合物而變。

治療

神經促進性酪氨酸受體激酶融合物(NTRK fusions)在數種類型癌症中都有關聯，這些融合物包藏一個未受觸動的(intact)神經促進性酪氨酸受體激酶結構域(NTRK kinase domain)，係和天生的(native)或原生型形式(wild-type form)的受體相同；因此，如本文所用，任何神經促進性酪氨酸受體激酶蛋白質《神經促進性酪氨酸受體激酶1、2、3(NTRK1,2 or 3)》帶有與原生型神經促進性酪氨酸受體激酶相同的激酶結構域都被認為是『原生型神經促進性酪氨酸受體激酶(wild-type NTRK)』；突變可能發生在神經促進性酪氨酸受體激酶結構域，導致突變體對激酶抑制劑治療產生抵抗性，利用結構生物學(structural biology)和計算分析(computational analyses)，這些抗性突變體(resistance mutations)可以被預測，以及藉由檢測密碼子序列(codon sequences)，其中一個序列改變產生對於一個不同的氨基酸的一個密碼子。

另一方面，對一個特定抑制劑的抗性突變體可以用實驗方法確認，藉由投與該抑制劑《例如，一個已知的神經促進性酪氨酸受體激酶原生型抑制劑》和將細胞暴露於一個突變促進劑(mutation-promoting agent)如N-乙基-N-亞硝基尿素(ENU；N-ethyl-N-nitrosourea)中，洗滌細胞，然後鍍上漸增濃度《2-100倍增殖半數抑制濃度》的選定化合物；3-4星期後，收集具有細胞贅生物(cellular outgrowth)的培養井。特別是，在神經促進性酪氨酸受體激酶融合物《神經促進性酪氨酸受體激酶1原生型編號(NTRK1 wt numbering)》中的胺基酸位置595的一個突變體，經由兩種方法都可確認一個從一個甘氨酸變成一個精氨酸殘基《迄今為止，標明為『G595R』》的改變發生，此突變體隨後展示對兩個經過臨床上評估的神經促進性酪氨酸受體激酶抑制劑產生重要的抵抗性《顯示於下列表中》。如同表中所示，化合物對原生型神經促進性酪氨酸受體激酶具有活性，但明顯地對神經促進性酪氨酸受體激酶融合物的G595R突變體型式活性較少。

本發明提供化合物，係抑制原生型神經促進性酪氨酸受體激酶和其突變體包括G595R突變體；再進一步，抑制劑可以對原生型神經促進性酪氨酸受體激酶、超越其他激酶，具專屬性，因此可以減少因抑制其他激酶所產生的毒性；因為化合物對於原生型神經促進性酪氨酸受體激酶和其突變體的活性，本文所描述之化合物可以用來治療一個因畸變神經促進性酪氨酸受體激酶活性相關狀況的病人，也可以用來治療各種癌症。在某些具體模式例中，癌症係選自非小細胞肺癌(non-small cell lung cancer)、乳癌(breast cancer)、黑色素瘤(melanoma)、低惡性和高惡性神經膠質瘤(low and high grade glioma)、神經膠母細胞瘤(glioblastoma)、小兒星細胞瘤(pediatric astrocytoma)、大腸直腸癌(colorectal cancer)、甲狀腺癌(thyroid carcinoma)、胰臟癌(pancreatic cancer)、膽管癌(biliary cancer)、頭頸部癌(head and neck cancer)、原發性中樞神經系統腫瘤(primary CNS tumors)、膽管癌(cholangiocarcinoma)、急性骨髓性白血病(acute myelogenous leukemia)、唾液腺癌(salivary gland cancer)、惡性肉瘤(sarcoma)和spitzoid氏腫瘤(spitzoid neoplasms)。

這些化合物也可以使用於治療一個對原生型神經促進性酪氨酸受體激酶抑制劑已發展抵抗性的病人、或一個具有特定神經促進性酪氨酸受體激酶突變體如G595R突變體的病人。本方法包括投與一個對神經促進性酪氨酸受體激酶抵抗性突變體具有活性的本發明化合物或組成物的步驟。用生化學方法分析時，由於『有活性(active)』係表示一個化合物至少對於一個抗性突變體具有低於1微莫耳濃度(μM)、500奈莫耳濃度(nM)、250奈莫耳濃度、100奈莫耳濃度、75奈莫耳濃度、50奈莫耳濃度、25奈莫耳濃度、10奈莫耳濃度、或5奈莫耳濃度的半數抑制量(IC₅₀)。

本文所描述之化合物或組成物可以單獨給予或與其他化合物包括其他神經促進性酪氨酸受體激酶調和(NTRK-modulating)化合物或其他治療劑併用。在某些具體模式例中，本發明化合物或組成物可以和一個或多個選自以下之化合物合併給藥：卡博替尼(Cabozantinib)《COMETRIQ》、凡德他尼(Vandetanib)《CALPRESA》、索拉非尼《蕾莎瓦》(Sorafenib)《NEXAVAR》、舒尼替尼《舒癌特》(Sunitinib)《SUTENT)》、瑞格菲尼《癌瑞格》(Regorafenib)《癌瑞格》、普納替尼(Ponatinib)《ICLUSIG》、貝伐斯抗(癌思停)(Bevacizumab)《AVASTIN》、克里替尼(Crizotinib)《XALKORI》、或吉非替尼《艾瑞莎》(Gefitinib)《IRESSA》的化合物併用投與；本發明化合物或組成物可以同時或順次與其他治療藥物以相同或不同投與路徑給藥。本發明之化合物可以和其他治療藥劑做成一個單一配方、或做成個別的配方。

合成

本發明之化合物包括其鹽類和其N-氧化物，使用已知的有機合成技術即可製備，且依照眾多合成途徑之任一者如下述合成計畫方案(Synthetic Protocols)所述者即可合成，製備本發明化合物的反應可以在一個有機合成領域的專業人員很快選出的適當溶劑中進行，適當溶劑可以是實質地在反應實施時的溫度，與起始原料《反應物(reactants)》、中間產物(intermediates)、或產物(products)不發生反應(non-reactive)，例如溫度可以是從溶劑的冰點(freezing temperature)到溶劑的沸點(boiling temperature)；一個特定的反應可以在一個溶劑中實施或一個以上溶劑的混合物中實施，依照特殊的反應步驟，用於一個特殊反應步驟的適當溶劑可以由熟知該領域的專業人員選出。

本發明化合物的製備可以包含不同化學官能基的保護(protection)和去保護(deprotection)；對於保護和去保護的需求、以及合適的保護基的選用，一個本領域之具有通常技術者可以很快決定，保護基的化學可以找到，例如Wuts和Greene著，『有機合成中的保護基(Protective Groups in Organic Synthesis)第4版』書中，《John Wiley & Sons公司出版：新澤西(New Jersey)2006年》，此書整體於此處併入做為參考。

依照本領域所習知之的任何適當方法可以監測反應，舉例來說，產物形成可以用光譜分析方法(spectroscopic means)監測，例如核磁共振光譜分析(nuclear magnetic resonance(NMR)spectroscopy)《例如¹H或¹³C》、紅外線光譜分析(infrared(IR)spectroscopy)、分光光度測定法(spectrophotometry)《例如紫外線至可見光(UV-visible)》、質譜分析儀(mass spectrometry(MS))、或色層分析方法如高效液相色層分析(high performance liquid chromatography(HPLC))或薄層色層分析(thin layer chromatography(TLC))。用於化合物特性記述的分析儀器和方法：液相色層分析-質譜分析(LC-MS)：除非另有說明，所有液相色層分析-質譜分析(liquid chromatography-mass spectrometry(LC-MS))數據《分析樣本純度和確認樣本》係得自於在22.4℃時，一個使用一個安捷倫型號6120質譜分析儀的安捷倫型號-1260液相色層分析系統(Agilent model-1260 LC system)，該質譜分析儀利用安裝於一個安捷倫Poroshell 120《EC-C18，粒子大小2.7微米，直徑3.0x50毫米》反相管柱(Agilent Poroshell 120 reverse-phase column)的電噴霧離子化-大氣壓離子化(ES-API ionization；electrospray ionization-atmospheric pressure ionization)。移動相(mobile phase)包含一個0.1%甲酸(formic acid)於水之溶液和0.1%甲酸於乙腈(acetonitrile)之溶液的溶劑混合物，利用一個固定梯度(constant gradient)從95%水性/5%有機到5%水性/95%有機的移動相(mobile phase)經過流動路程4分鐘，流速為固定的每分鐘1毫升(1mL/min)。

製備型液相色層分析-質譜分析(Prep LC-MS)：製備型高效液相色層分析(Preparative HPLC)係在22.4℃時，於安裝一個Luna 5u C18(2)100A、AXIA封裝、250x21.2毫米之反相管柱的一個島津發現製備系統(Shimadzu Discovery VP® Preparative system)上實施；移動相包含一個0.1%甲酸(formic acid)於水之溶液和0.1%甲酸於乙腈之溶液的溶劑混合物，利用一個固定梯度(constant gradient)從95%水性/5%有機到5%水性/95%有機的移動相經過流動路程25分鐘，流速為固定的每分鐘20毫升(20mL/min)，化學反應係在微波爐中實施，在一個Biotage公司的微波合成儀(Biotage Initiator microwave)單元中也是如此。

對掌性液相色層分析(Chiral HPLC)：解析對掌性混合物(chiral mixtures)的製備型高效液相色層分析係在一個塔爾超臨界流體色層分析儀器(Thar SFC Pre-80 instrument)上實施，該儀器裝備一個對掌博AS-H管柱(Chiralpak AS-H column)《5毫米，3.0釐米內徑x25釐米長(3.0cm id x 25cm L)》；移動相(mobile phases)包含超臨界流體二氧化碳(Supercritical Fluid(SFC)CO₂)《A》和甲醇/0.1%氫氧化銨(MeOH/0.1% NH₄OH)《B》，保持一個從67%至33%《B》的固定梯度，流速為65公克/分鐘(g/min)，系統背壓為100巴(bar)；分離進展情形係以波長220奈米之紫外線偵測方式來監控。

矽凝膠色層分析法(Silica gel chromatography)：矽凝膠色層分析法可以在一個Teledyne Isco CombiFlash® Rf單元或一個Biotage® Isolera Four單元中實施。

質子核磁共振光譜分析(Proton NMR)：除非另有說明，所有質子核磁共振波譜(¹H NMR spectra)係得自於瓦里安400百萬赫茲高磁場核磁共振儀(Varian 400MHz Unity Inova 400MHz NMR instrument)《擷取時間(acquisition time)=3.5秒帶有1秒遲延；16至64掃描》，其特徵為：對於殘渣二甲基亞碸(residual Dimethyl sulfoxide；DMSO)《2.50百萬分率》，所有在氘代二甲基亞碸(Deuterated DMSO；dimethyl sulfoxide-d₆)溶劑中的質子係以百萬分率(parts-per million(ppm))報告。

實施例

以下實施例係用來說明，並且不代表任何侷限之意義。

以下的圖解方案意在提供製備本發明化合物相關連之一般指引，一個熟習本領域之專家應了解，顯示於圖解方案的製備方法可以用有機化學的一般知識加以修改、或選擇性地使用有機化學的一般知識來製備不同的本發明化合物。

合成計畫方案1：

一般合成計畫方案1包含：在溫熱條件下，於一個鹼如碳酸銫(cesium carbonate)的存在中，透過將5-氨基-1H-吡唑-4-腈(5-amino-1H-pyrazole-4-carbonitrile)和(E)-3-乙氧基丙烯酸乙酯(ethyl(E)-3-ethoxyacrylate)或適當的相等物的環化(cyclization)，做成5-羥基吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-腈(5-hydroxypyrazolo[1,5-a]pyrimidine-3-carbonitrile)；藉由與三氯一氧化磷(磷醯氯)(phosphorous oxychloride)的反應，羥基被轉化成一個離去基團(leaving group)如氯化物(chloride)，在一個溶劑如二噁烷(dioxane)或正-丁醇(n-butanol)中，於一個鹼如二異丙基乙基胺(DIPEA；Diisopropylethylamine)存在下，氯代基團(chloro group)被一個胺(amine)取代，或在例如布赫瓦德條件(Buchwald conditions)下，經由鈀催化交叉偶聯反應(Pd-catalyzed cross-coupling)得到所要的產物。

一般合成計畫方案2包含：透過將5-氨基-1H-吡唑-4-腈(5-amino-1H-pyrazole-4-carbonitrile)和2-氟丙二酸二乙酯(diethyl 2-fluoromalonate)或一個適當的相等物的環化(cyclization)，做成6-氟-5,7-二羥基吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-腈(6-fluoro-5,7-dihydroxypyrazolo[1,5-a]pyrimidine-3-carbonitrile)；藉由與三氯一氧化磷(磷醯氯)(phosphorous oxychloride)的反應，羥基被轉化成一個氯化物(chloride)，於一個還原劑(reducting agent)如鋅(zinc)的存在下，在5-氯代基團的存在下，7-氯代基團(7-chloro group)能選擇性地被還原，在一個溶劑如二噁烷(dioxane)或正-丁醇(n-butanol)中，於一個鹼如二異丙基乙基胺(DIPEA；Diisopropylethylamine)存在下，留下來的氯代基團被一個胺(amine)取代，或在例如布赫瓦德條件(Buchwald conditions)下，經由鈀催化交叉偶聯反應(Pd-catalyzed cross-coupling)得到所要的產物。

實施例1：5-((2R,4S)-4-氟-2-(5-氟吡啶-3-基)吡咯烷-1-基)吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-腈(5-((2R,4S)-4-fluoro-2-(5-fluoropyridin-3-yl)pyrro1idin-1-yl)pyrazolo[1,5-a]pyrimidine-3-carbonitrile)《化合物1》

步驟1：合成5-羥基吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-腈(5-hydroxypyrazolo[1,5-a]pyrimidine-3-carbonitrile)

一個5-氨基-1H-吡唑-4-腈(5-amino-1H-pyrazole-4-carbonitrile)《10.00公克，92.51毫莫耳》在二甲基甲醯胺(DMF；Dimethylformamide)《350.00毫升》中的混合物，加入(E)-3-乙氧基丙烯酸乙酯(ethyl(E)-3-ethoxyacrylate)《13.34公克，92.51毫莫耳》和碳酸銫(Cs₂CO₃；cesium carbonate)《60.38公克，185.02毫莫耳》，在100℃攪拌該混合物2小時；當液相色層分析-質譜分析(LC-MS)顯示反應已完畢，將反應混合物冷卻至25℃，然後加入水《300毫升》，用鹽酸(HCl)《1莫耳濃度(M)》酸化直到酸鹼值=4，然後過濾；將濾餅(filter cake)在真空中乾燥，得到一個白色固體的5-羥基吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-腈(5-hydroxypyrazolo[1,5-a]pyrimidine-3-carbonitrile)《10.00公克，生成率：67.51%》。

步驟2：合成5-氯吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-腈(5-chloropyrazolo[1,5-a]pyrimidine-3-carbonitrile)

一個5-羥基吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-腈(5-hydroxypyrazolo[1,5-a]pyrimidine-3-carbonitrile)《10.00公克，62.45毫莫耳》在三氯一氧化磷(POCl₃；phosphorous oxychloride)《200.00毫升》中的混合物加熱至150℃持續4小時；當薄層液相色層分析《聚乙烯(PE)：乙酸乙酯(EtOAc)=1：1》顯示反應已完畢，將反應物濃縮以移除三氯一氧化磷，然後溶解於二氯甲烷(DCM；dichloromethane)《100.00毫升》中，用矽凝膠上的管柱色層分析《二氯甲烷》濃縮及純化，得到 5-氯吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-腈(5-chloropyrazolo[1,5-a]pyrimidine-3-carbonitrile)，係一個白色固體《6.00公克，生成率：53.80%》。

步驟3：合成5-((2R,4S)-4-氟-2-(5-氟吡啶-3-基)吡咯烷-1-基)吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-腈(5-((2R,4S)-4-fluoro-2-(5-fluoropyridin-3-yl)pyrrolidin-1-yl)pyrazolo[1,5-a]pyrimidine-3-carbonitrile)

一個5-氯吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-腈(5-chloropyrazolo[1,5-a]pyrimidine-3-carbonitrile)《86.00毫克，334.49微莫耳(umol)，1.20當量(eq)》和3-氟-5-((2R,4S)-4-氟吡咯烷-2-基)吡啶鹽酸鹽(3-fluoro-5-((2R,4S)-4-fluoro pyrrolidin-2-yl)pyridine HCl)《49.78毫克，278.74微莫耳，1.00當量》在二噁烷(dioxane)《6.00毫升》的混合物中，加入二異丙基乙基胺(DIPEA；Diisopropylethylamine)《108.07毫克，836.23微莫耳，3.00當量》成為一部分；在130℃攪拌混合物16小時，當液相色層分析-質譜分析(LC-MS)顯示反應已完畢，反應混合物用酸性製備型高效液相色層分析(acidic prep-HPLC)純化，得到5-((2R,4S)-4-氟-2-(5-氟吡啶-3-基)吡咯烷-1-基)吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-腈(5-((2R,4S)-4-fluoro-2-(5-fluoropyridin-3-yl)pyrrolidin-1-yl)pyrazolo[1,5-a]pyrimidine-3-carbonitrile)，係一個黃色的油《90.60毫克，163.43微莫耳，生成率：58.63%》。

實施例2： (R)-5-(4,4-二氟-2-(5-氟吡啶-3-基)吡咯烷-1-基)吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-腈((R)-5-(4,4-difluoro-2-(5-fluoropyridin-3-yl)pyrrolidin-1-yl)pyrazolo[1,5-a]pyrimidine-3-carbonitrile)《化合物3》

一個5-氯吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-腈(5-chloropyrazolo[1,5-a]pyrimidine-3-carbonitrile)《40.00毫克，223.99微莫耳(umol)，1.00當量(eq)》和3-[(2R)-4,4-二氟吡咯烷-2-基]-5-氟-吡啶(3-[(2R)-4,4-difluoropyrrolidin-2-yl]-5-fluoro-pyridine)《61.62毫克，223.99微莫耳，1.00當量》在正-丁醇(n-BuOH)《2.00毫升》中的混合物，加入二異丙基乙基胺(DIPEA)《144.74毫克，1.12毫莫耳，5.00當量》，生成的混合物在100℃攪拌16小時；將混合物濃縮，並用酸性製備型高效液相色層分析《三氟乙酸系統(TFA system；trifluoroacetic acid system)》純化粗產物，得到(R)-5-(4,4-二氟-2-(5-氟吡啶-3-基)吡咯烷-1-基)吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-腈((R)-5-(4,4-difluoro-2-(5-fluoropyridin-3-yl)pyrrolidin-1-yl)pyrazolo[1,5-a]pyrimidine-3-carbonitrile)，係一個褐色固體《48.70毫克，85.09微莫耳，生成率：38%》。

實施例3：6-氟-5-((2R,4S)-4-氟-2-(5-氟吡啶-3-基)吡咯烷-1-基)吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-腈(6-fluoro-5-((2R,4S)-4-fluoro-2-(5-fluoropyridin-3-yl)pyrrolidin-1-yl)pyrazolo[1,5-a]pyrimidine-3-carbonitrile)《化合物4》

步驟1：6-氟-5,7-二羥基吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-腈(6-fluoro-5,7-dihydroxypyrazolo[1,5-a]pyrimidine-3-carbonitrile)

新鮮製備的乙氧[化]鈉(或稱乙醇鈉)(NaOEt；sodium ethoxide)《4.34公克，63.83毫莫耳，1.38當量》在無水乙醇(EtOH)《100.00毫升》中的混合物，在20℃，加入5-氨基-1H-吡唑-4-腈(5-amino-1H-pyrazole-4-carbonitrile)《5.00公克，46.25毫莫耳，1.00當量》和2-氟丙二酸二乙酯(diethyl 2-fluoromalonate)《8.65公克，48.56毫莫耳，1.05當量》，生成的混合物加熱至120℃維持32小時；濃縮混合物以移除乙醇，再將產生的殘留物溶解於水《50.00毫升》中，水層用鹽酸《1莫耳濃度》酸化至酸鹼值=2~3，產生一個白色沉澱，過濾收集固體並在真空中乾燥，得到一個白色固體的粗產物為6-氟-5,7-二羥基吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-腈(6-fluoro-5,7-dihydroxypyrazolo[1,5-a]pyrimidine-3-carbonitrile)《4.00公克，生成率：44.54%》。¹H-NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ ppm 7.92(s,1H)。

步驟2：5,7-二氯-6-氟吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-腈(5,7-dichloro-6-fluoropyrazolo[1,5-a]pyrimidine-3-carbonitrile)

一個6-氟-5,7-二羥基吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-腈(6-fluoro-5,7-dihydroxypyrazolo[1,5-a]pyrimidine-3-carbonitrile)《4.00公克，20.61毫莫耳，1.00當量》在三氯一氧化磷(POCl₃；phosphorous oxychloride)《80.00毫升》中的混合物，加入二甲基甲醯胺(DMF)《150.61毫克，2.06毫莫耳，158.53微升，0.10當量》，將混合物加熱至100℃持續16小時；濃縮混合物以得到粗產物，粗產物用矽凝膠上的快速管柱色層分析(flash columnchromatography on silica gel)《二氯甲烷(DCM)》加以純化，得到一個黃色固體的5,7-二氯-6-氟吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-腈(5,7-dichloro-6-fluoropyrazolo[1,5-a]pyrimidine-3-carbonitrile)《1.30公克，生成率：27.32%》。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ ppm 8.48(s,1H)。

步驟3：5-氯-6-氟吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-腈(5-chloro-6-fluoropyrazolo[1,5-a]pyrimidine-3-carbonitrile)

一個5,7-二氯-6-氟吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-腈(5,7-dichloro-6-fluoropyrazolo[1,5-a]pyrimidine-3-carbonitrile)《1.30公克，5.63毫莫耳，1.00當量》在乙醇/四氫呋喃/水(EtOH/THF/H₂O)《50.00毫升，體積/體積/體積=3/1/2》中的混合物，加入鋅粉末(Zn powder)《1.84公克，28.14毫莫耳，5.00當量》和氯化銨(NH₄Cl)《1.20公克，22.51微莫耳，786.96微升，4.00當量》，在20℃攪拌混合物0.1小時；濃縮混合物以移除乙醇和四氫呋喃，用醋酸乙酯《10毫升x2次》抽提混合物，有機層通過硫酸鈉乾燥並濃縮，得到一個黃色固體的5-氯-6-氟吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-腈(5-chloro-6-fluoropyrazolo[1,5-a]pyrimidine-3-carbonitrile)《1.00公克，粗產物》。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ ppm 8.75(d,1H,J=2.4Hz)、8.40(s,1H)。

步驟4：6-氟-5-((2R,4S)-4-氟-2-(5-氟吡啶-3-基)吡咯烷-1-基)吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-腈(6-fluoro-5-((2R,4S)-4-fluoro-2-(5-fluoropyridin-3-yl)pyrrolidin-1-yl)pyrazolo[1,5-a]pyrimidine-3-carbonitrile)

一個5-氯-6-氟吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-腈(5-chloro-6-fluoropyrazolo[1,5-a]pyrimidine-3-carbonitrile)《200.50毫克，1.02毫莫耳，1.00當量》在二噁烷《5.00毫升》的混合物，加入二異丙基乙基胺(DIPEA)《395.47毫克，3.06毫莫耳，3.00當量》和3-氟-5-((2R,4S)-4-氟吡咯烷-2-基)吡啶(3-fluoro-5-((2R,4S)-4-fluoropyrrolidin-2-yl)pyridine)《187.87毫克，1.02毫莫耳，1.00當量》，在100℃攪拌混合物2小時；濃縮混合物以得到粗產物，再以製備型高效液相色層分析《三氟乙酸系統》純化粗產物，得到6-氟-5-((2R,4S)-4-氟-2-(5-氟吡啶-3-基)吡咯烷-1-基)吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-腈(6-fluoro-5-((2R,4S)-4-fluoro -2-(5-fluoropyridin-3-yl)pyrrolidin-1-yl)pyrazolo[1,5-a]pyrimidine-3-carbonitrile)，係一個黃色的油《163.30毫克，生成率：46.50%》。

實施例4：5-((2R,4S)-4-氰基-2-(2,5-二氟苯基)吡咯烷-1-基)吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-腈(5-((2R,4S)-4-cyano-2-(2,5-difluorophenyl)pyrrolidin-1-yl)pyrazolo[1,5-a]pyrimidine-3-carbonitrile)《化合物5》

一個5-氯吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-腈(5-chloropyrazolo[1,5-a]pyrimidine-3-carbonitrile)《50.00毫克，279.99微莫耳(umol)》在正-丁醇(n-BuOH)《3.00毫升》的混合物，加入二異丙基乙基胺(DIPEA)《72.37毫克，559.98微莫耳》和(3S,5R)-5-(2,5-二氟苯基)吡咯烷-3-腈((3S,5R)-5-(2,5-difluorophenyl)pyrrolidine-3-carbonitrile)《58.30毫克，279.99微莫耳》，在100℃攪拌混合物16小時；當液相色層分析-質譜分析顯示反應已完成，將反應混合物濃縮，得到粗產物，粗產物再以中性製備型高效液相色層分析純化，得到一個白色固體的5-((2R,4S)-4-氰基-2-(2,5-二氟苯基)吡咯烷-1-基)吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-腈(5-((2R,4S)-4-cyano-2-(2,5-difluorophenyl)pyrrolidin-1-yl)pyrazolo[1,5-a]pyrimidine-3-carbonitrile)《10.60毫克，30.26微莫耳，生成率：10.81%》。

實施例5： 5-((2R,4S)-2-(3-氰基-5-氟苯基)-4-氟吡咯烷-1-基)吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-腈(5-((2R,4S)-2-(3-cyano-5-fluorophenyl)-4-fluoropyrrolidin-1-yl)pyrazolo[1,5-a]pyrimidine-3-carbonitrile)《化合物6》

5-氯吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-腈(5-chloropyrazolo[1,5-a]pyrimidine-3-carbonitrile)《0.075公克，0.420毫莫耳》、3-氟-5-((2R,4S)-4-氟吡咯烷-2-基)苯甲腈(3-fluoro-5-((2R,4S)-4-fluoropyrrolidin-2-yl)benzonitrile)《0.096公克，0.462毫莫耳》和碳酸銫《0.411公克，1.260毫莫耳》放在二噁烷《2毫升》中，加入三個(二亞苄基丙酮)二鈀(Pd₂(dba)₃；Tris(dibenzylideneacetone)dipalladium)《0.038公克，0.042毫莫耳》和2,2'-二個(二苯膦基)-1,1'-聯萘(BINAP；2,2'-bis(diphenylphosphino)-1,1'-binaphthyl)《0.052公克，0.084毫莫耳》，在110℃攪拌4小時；然後在真空中移除溶劑，賸餘物經由反相色層分析《0-100%乙腈/水(ACN/H₂O)》純化，得到5-((2R,4S)-2-(3-氰基-5-氟苯基)-4-氟吡咯烷-1-基)吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-腈(5-((2R,4S)-2-(3-cyano-5-fluorophenyl)-4-fluoropyrrolidin-1-yl)pyrazolo[1,5-a]pyrimidine-3-carbonitrile)，係一個白色泡沫(foam)《0.015公克，0.043毫莫耳，生成率：10.20%》。

實施例6：5-((2R,4S)-4-氟-2-(5-氟-2-甲氧基吡啶-3-基)吡咯烷-1-基)吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-腈(5-((2R,4S)-4-fluoro-2-(5-fluoro-2-methoxypyridin-3-yl)pyrrolidin-1-yl)pyrazolo[1,5-a]pyrimidine-3-carbonitrile)《化合物7》

一個5-氯吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-腈(5-chloropyrazolo[1,5-a]pyrimidine-3-carbonitrile)《88.5毫克，0.50毫莫耳》、5-氟-3-((2R,4S)-4-氟吡咯烷-2-基)-2-甲氧基吡啶鹽酸鹽(5-fluoro-3-((2R,4S)-4-fluoropyrrolidin-2-yl)-2-methoxypyridine hydrochloride)《124毫克，0.50毫莫耳》和二異丙基乙胺(DIEA；diisopropylethylamine)《0.26毫升，1.50毫莫耳》在正-丁醇《2.5毫升》中的混合物，在110℃於一個微波反應器中加熱60分鐘，反應混合物濃縮以移除溶劑，賸餘物以矽凝膠上的管柱色層分析純化，得到一個白色固體的5-((2R,4S)-4-氟-2-(5-氟-2-甲氧基吡啶-3-基)吡咯烷-1-基)吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-腈(5-((2R,4S)-4-fluoro-2-(5-fluoro-2-methoxypyridin-3-yl)pyrrolidin-1-yl)pyrazolo[1,5-a]pyrimidine-3-carbonitrile)《168毫克，生成率：95%》。

實施例7：5-((2R,4S)-4-氟-2-(5-氟-1-甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)吡咯烷-1-基)吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-腈(5-((2R,4S)-4-fluoro-2-(5-fluoro-1-methyl-2-oxo-1,2-dihydropyridin-3-yl)pyrrolidin-1-yl)pyrazolo[1,5-a]pyrimidine-3-carbonitrile)《化合物8》步驟1：合成5-((2R,4S)-4-氟-2-(5-氟-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)吡咯烷-1-基)吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-腈 (5-((2R,4S)-4-fluoro-2-(5-fluoro-2-oxo-1,2-dihydropyridin-3-yl)pyrrolidin-1-yl)pyrazolo[1,5-a]pyrimidine-3-carbonitrile)

一個5-((2R,4S)-4-氟-2-(5-氟-2-甲氧基吡啶-3-基)吡咯烷-1-基)吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-腈(5-((2R,4S)-4-fluoro-2-(5-fluoro-2-methoxypyridin-3-yl)pyrrolidin-1-yl)pyrazolo[1,5-a]pyrimidine-3-carbonitrile)《110毫克，0.31毫莫耳》和鹽酸的二噁烷液《4莫耳濃度，0.4毫升，1.50毫莫耳》在二噁烷《1.2毫升》中的混合物，在85℃加熱8小時；反應混合物用飽和碳酸氫鈉溶液淬熄，並用醋酸乙酯淬取，將合併的有機層透過硫酸鈉乾燥並濃縮，得到粗產物，不再純化就直接應用於下一個步驟。

步驟2：合成5-((2R.4S)-4-氟-2-(5-氟-1-甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)吡咯烷-1-基)吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-腈(5-((2R,4S)-4-fluoro-2-(5-fluoro-1-methyl-2-oxo-1,2-dihydropyridin-3-yl)pyrrolidin-1-yl)pyrazolo[1,5-a]pyrimidine-3-carbonitrile)

一個5-((2R,4S)-4-氟-2-(5-氟-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)吡咯烷-1-基)吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-腈(5-((2R,4S)-4-fluoro-2-(5-fluoro-2-oxo-1,2-dihydropyridin-3-yl)pyrrolidin-1-yl)pyrazolo[1,5-a]pyrimidine-3-carbonitrile)《100毫克，0.29毫莫耳》在二甲基甲醯胺(DMF)《1.5毫升》的溶液，在0℃加入氫化納(NaH)《60%分散(dispersion)，14毫克，0.35毫莫耳》，將溶液加溫至15℃維持15分鐘；再一次將反應混合物冷卻至0℃，加入碘甲烷(甲基碘)(MeI；iodomethane；Methyl iodide)《0.022毫升，0.35毫莫耳》，再加熱至室溫過夜；液相色層分析-質譜分析顯示起始原料已耗盡，將混合物用水稀釋，並用醋酸乙酯淬取《2次》，合併的有機層用水洗滌《3次》，透過硫酸鈉乾燥，濃縮得到粗產物，以矽凝膠上的管柱色層分析純化，得到一個白色固體的5-((2R,4S)-4-氟-2-(5-氟-1-甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基)吡咯烷-1-基)吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-腈(5-((2R,4S)-4-fluoro-2-(5-fluoro-1-methyl-2-oxo-1,2-dihydropyridin-3-yl)pyrrolidin-1-yl)pyrazolo[1,5-a]pyrimidine-3-carbonitrile)《86毫克，生成率：83%》。

實施例8：5-((2R,4S)-4-氟-2-(3-氟-5-(2-羥基丙-2-基)苯基)吡咯烷-1-基)吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-腈(5-((2R,4S)-4-fluoro-2-(3-fluoro-5-(2-hydroxypropan-2-yl)phenyl)pyrrolidin-1-yl)pyrazolo[1,5-a]pyrimidine-3-carbonitrile)《化合物14》步驟1：合成1-(3-((2R,4S)-1-(特-丁基磺醯基)-4-氟吡咯烷-2-基)-5-氟苯基)乙-1-酮(1-(3-((2R,4S)-1-(tert-butylsulfonyl)-4-fluoropyrrolidin-2-yl)-5-fluorophenyl)ethan-1-one)

一個(2R,4S)-2-(3-溴-5-氟苯基)-1-(特-丁基磺醯基)-4-氟吡咯烷((2R,4S)-2-(3-bromo-5-fluorophenyl)-1-(tert-butylsulfonyl)-4-fluoropyrrolidine)《200.00毫克，523.20微莫耳，1.00當量》在甲苯(toluene)《5.00毫升》的混合物，加入四個(三苯基膦)鈀(Pd(PPh₃)₄；Tetrakis(triphenylphosphine)palladium(0))《60.46毫克，52.32微莫耳，0.10當量》和三丁基(1-乙氧基乙烯基)錫(tributyl(1-ethoxyvinyl)stannane)《226.74毫克，627.84微莫耳，211.91微升，1.20當量》，在110℃於氮氣環境下攪拌混合物16小時，然後濃縮混合物得到粗產物，粗產物再以製備型薄層色層分析(prep-TLC)《聚乙烯(PE)：醋酸乙酯(EtOAc)=3：1》加以純化，得到1-(3-((2R,4S)-1-(特-丁基磺醯基)-4-氟吡咯烷-2-基)-5-氟苯基)乙-1-酮(1-(3-((2R,4S)-1-(tert-butylsulfonyl)-4-fluoropyrrolidin-2-yl)-5-fluorophenyl)ethan-1-one)《150.00毫克，434.28微莫耳，生成率：83.00%》，係一個黃色的油。

步驟2：合成1-(3-氟-5-((2R,4S)-4-氟吡咯烷-2-基)苯基)乙-1-酮(1-(3-fluoro-5-((2R,4S)-4-fluoropyrrolidin-2-yl)phenyl)ethan-1-one)

一個三氟甲磺酸(TfOH；Trifluoromethanesulfonic acid)《195.53毫克，1.30毫莫耳，115.02微升，3.00當量》在二氯甲烷(DCM)《5.00毫升》中的混合物，在-40℃，加入大茴香醚(苯甲醚)(anisole)《70.44毫克，651.42微莫耳，70.44微升，1.50當量》，然後將一個1-(3-((2R,4S)-1-(特-丁基磺醯基)-4-氟吡咯烷-2-基)-5-氟苯基)乙-1-酮(1-(3-((2R,4S)-1-(tert-butylsulfonyl)-4-fluoropyrrolidin-2-yl) -5-fluorophenyl)ethan-1-one)《150.00毫克，434.28微莫耳，1.00當量》在二氯甲烷(DCM)《5.00毫升》的溶液加到前述溶液中，加入後，將混合物在25℃攪拌2小時；薄層色層分析《聚乙烯(PE)：醋酸乙酯(EtOAc)=3：1》顯示反應已完成，將飽和碳酸鉀水溶液(Saurated aq.K₂CO₃)《3.00毫升》加入混合物中，，然後用二氯甲烷淬取《3毫升，2次》，濃縮有機層，得到1-(3-氟-5-((2R,4S)-4-氟吡咯烷-2-基)苯基)乙-1-酮(1-(3-fluoro-5-((2R,4S)-4-fluoropyrrolidin-2-yl)phenyl)ethan-1-one)《100.00毫克，粗產物》，係一個黃色的油。

步驟3：5-((2R,4S)-2-(3-乙醯基-5-氟苯基)-4-氟吡咯烷-1-基)吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-腈(5-((2R,4S)-2-(3-acetyl-5-fluorophenyl)-4-fluoropyrrolidin-1-yl)pyrazolo[1,5-a]pyrimidine-3-carbonitrile)

一個5-氯吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-腈(5-chloropyrazolo[1,5-a]pyrimidine-3-carbonitrile)《80.00毫克，447.98微莫耳，1.00當量》在二噁烷《5.00毫升》中的混合物，加入二異丙基乙基胺(DIPEA)《173.69毫克，1.34毫莫耳，234.72微升，3.00當量》和1-(3-氟-5-((2R,4S)-4-氟吡咯烷-2-基)苯基)乙-1-酮(1-(3-fluoro-5-((2R,4S)-4-fluoropyrrolidin-2-yl)phenyl)ethan-1-one)《99.89毫克，443.50微莫耳，0.99當量》，在100℃攪拌混合物2小時；液相色層分析-質譜分析(LC-MS)顯示反應已完畢後，濃縮該混合物，得到粗產物，藉由製備型薄層色層分析(prep-TLC)《聚乙烯(PE)：醋酸乙酯(EtOAc)=1：1》加以純化，得到5-((2R,4S)-2-(3-乙醯基-5-氟苯基)-4-氟吡咯烷-1-基)吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-腈(5-((2R,4S)-2-(3-acetyl-5-fluorophenyl)-4-fluoropyrrolidin-1-yl)pyrazolo[1,5-a]pyrimidine-3-carbonitrile)《100.00毫克，272.22微莫耳，生成率：60.77%》，係一個黃色的油。

步驟4：5-((2R,4S)-4-氟-2-(3-氟-5-(2-羥基丙-2-基)苯基)氟吡咯烷-1-基)吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-腈(5-((2R,4S)-4-fluoro-2-(3-fluoro-5-(2-hydroxypropan-2-yl)phenyl)pyrrolidin-1-yl)pyrazolo[1,5-a]pyrimidine-3-carbonitrile)

一個5-((2R,4S)-2-(3-乙醯基-5-氟苯基)-4-氟吡咯烷-1-基)吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-腈(5-((2R,4S)-2-(3-acetyl-5-fluorophenyl)-4-fluoropyrrolidin-1-yl)pyrazolo[1,5-a]pyrimidine-3-carbonitrile)《50.00毫克，136.11微莫耳，1.00當量》在四氫呋喃(THF)《5.00毫升》中的混合物，在-78℃逐滴加入甲基溴化鎂(MeMgBr；Methylmagnesium bromide)《3莫耳濃度，136.11微升，3.00當量》，加入後，將混合物在25℃攪拌16小時；高效液相色層分析(HPLC)顯示起始原料已消耗約60%時，將甲醇《2毫升》加入混合物中，然後濃縮，得到粗產物，粗產物再用製備型高效液相色層分析(prep-HPLC)《三氟乙酸(TFA)》純化，得到一個白色固體的5-((2R,4S)-4-氟-2-(3-氟-5-(2-羥基丙-2-基)苯基)氟吡咯烷-1-基)吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-腈(5-((2R,4S)-4-fluoro-2-(3-fluoro-5-(2-hydroxypropan-2-yl)phenyl)pyrrolidin-1-yl)pyrazolo[1,5-a]pyrimidine-3-carbonitrile)《14.00毫克，36.52微莫耳，生成率：26.83%》。¹H-NMR(400MHz,CD₃OD)δ ppm 8.35(br.s,1H)、 8.11(s,1H)、7.28(s,1H)、7.10(d,1H,J=8.0Hz)、6.91(d,1H,J=8.8Hz)、6.17(br.s,1H)、5.42(d,1H,J=52.4Hz)、5.23(br.s,1H)、4.16-4.08(m,1H)、2.91(br.s,1H)、2.31-2.17(m,1H)、1.47(d,6H,J=3.6Hz)。質譜分析計算值(MS Calcd.)：383.4，質譜分析結果(MS Found)：384.1，406.0([M+1]⁺和[M+23]⁺)。

實施例9：3-((2R,4S)-1-(3-氰基吡唑並[1,5-a]嘧啶-5-基)-4-氟吡咯烷-2-基)-5-氟-N-甲基苯甲醯胺(3-((2R,4S)-1-(3-cyanopyrazolo[1,5-a]pyrimidin-5-yl)-4-fluoropyrrolidin-2-yl)-5-fluoro-N-methylbenzamide)《化合物20》步驟1：甲基3-((2R,4S)-1-(特-丁基磺醯基)-4-氟吡咯烷-2-基)-5-氟苯甲酸酯(Methyl 3-((2R,4S)-1-(tert-butylsulfonyl)-4-fluoropyrrolidin-2-yl)-5-fluorobenzoate)

一個(2R,4S)-2-(3-溴-5-氟苯基)-1-(特-丁基磺醯基)-4-氟吡咯烷((2R,4S)-2-(3-bromo-5-fluorophenyl)-1-(tert-butylsulfonyl)-4-fluoropyrrolidine)《2.00公克，5.23毫莫耳，1.00當量》在甲醇《10.00毫升》中的混合物，加入三乙胺(Et₃N；Triethylamine)《1.59公克，15.70毫莫耳，3.00當量》、二個(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀(Pd(dppf)Cl₂；Bis(diphenylphosphino)ferrocene-palladium(II)dichloride)《194.41毫克，261.60微莫耳，0.05當量》，在70℃於一氧化碳(CO)氣體下《50帕(Psi)》攪拌混合物16小時；將混合物過濾，濃縮濾液得到粗產物，粗產物再用矽凝膠上的管柱色層分析《聚乙烯：乙酸乙酯=15：1~8：1》純化，得到一個紅色固體的甲基3-((2R,4S)-1-(特-丁基磺醯基)-4-氟吡咯烷-2-基)-5-氟苯甲酸酯(methyl 3-((2R,4S)-1-(tert-butylsulfonyl)-4-fluoropyrrolidin-2-yl)-5-fluorobenzoate)《1.20公克，3.30毫莫耳，生成率：63.46%》。

步驟2：甲基3-氟-5-((2R,4S)-4-氟吡咯烷-2-基)氟苯甲酸酯(Methyl 3-fluoro-5-((2R,4S)-4-fluoropyrrolidin-2-yl)benzoate)

一個三氟甲磺酸(TfOH；Trifluoromethanesulfonic acid)《1.37公克，9.12毫莫耳，3.00當量》在二氯甲烷(DCM)《50.00毫升》中的混合物，在-40℃，加入大茴香醚(苯甲醚)(anisole)《493.12毫克，4.56毫莫耳，1.50當量》，然後將一個甲基3-((2R,4S)-1-(特-丁基磺醯基)-4-氟吡咯烷-2-基)-5-氟苯甲酸酯(methyl 3-((2R,4S)-1-(tert-butylsulfonyl)-4-fluoropyrrolidin-2-yl)-5-fluorobenzoate)《1.10公克，3.04毫莫耳，1.00當量》在二氯甲烷(DCM)《30.00毫升》中的溶液，在-40℃、經過0.1小時時間、以逐滴方式加入該混合物中；加入後，將混合物加熱至0℃，並在0℃攪拌1小時；再加入碳酸鉀《水溶液，10毫升》攪拌0.1小時；混合物用二氯甲烷《10毫升，2次》淬取，有機層濃縮，然後加入鹽酸/醋酸乙酯《10毫升，4莫耳濃度》，生成的混合物在20℃攪拌0.5小時，然後過濾，在真空中將濾餅乾燥，得到一個黃色固體的甲基3-氟-5-((2R,4S)-4-氟吡咯烷-2-基)氟苯甲酸酯(methyl 3-fluoro-5-((2R,4S)-4-fluoropyrrolidin-2-yl)benzoate)《550.00毫克，粗產物，鹽酸鹽》。

步驟3：甲基3-((2R,4S)-1-(3-氰基吡唑並[1,5-a]嘧啶-5-基)-4-氟吡咯烷-2-基)-5-氟苯甲酸酯(Methyl 3-((2R,4S)-1-(3-cyanopyrazolo[1,5-a]pyrimidin-5-yl)-4-fluoropyrrolidin-2-yl)-5-fluorobenzoate)

一個甲基3-氟-5-((2R,4S)-4-氟吡咯烷-2-基)氟苯甲酸酯(methyl 3-fluoro-5-((2R,4S)-4-fluoropyrrolidin-2-yl)benzoate)《400.00毫克，2.24毫莫耳，1.00當量》在二噁烷《50.00毫升》的混合物，加入二異丙基乙基胺(DIPEA)《868.45毫克，6.72毫莫耳，3.00當量》和5-氯吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-腈(5-chloropyrazolo[1,5-a]pyrimidine-3-carbonitrile)《540.00毫克，2.24毫莫耳，1.00當量》，在100℃攪拌該混合物16小時，濃縮混合物，得到粗產物，粗產物再用矽凝膠上的管柱色層分析《聚乙烯：乙酸乙酯=10：1~3：1》純化，得到甲基3-((2R,4S)-1-(3-氰基吡唑並[1,5-a]嘧啶-5-基)-4-氟吡咯烷-2-基)-5-氟苯甲酸酯(methyl 3-((2R,4S)-1-(3-cyanopyrazolo[1,5-a]pyrimidin-5-yl)-4-fluoropyrrolidin-2-yl)-5-fluorobenzoate)《650.00毫克，1.70毫莫耳，生成率：75.89%》，係一個黃色的油。¹H-NMR(400MHz,CD₃OD)δ ppm 8.30-8.24(m,1H)、6.94-6.83(m,2H)、5.64(t,1H,J=9.2Hz)、5.41(d,1H,J=52.0Hz)、4.48-4.38(m,2H)、3.97(s,3H)、2.79-2.69(m,1H)、2.20-2.06(m,1H)。

步驟4： 3-((2R,4S)-1-(3-氰基吡唑並[1,5-a]嘧啶-5-基)-4-氟吡咯烷-2-基)-5-氟苯甲酸(3-((2R,4S)-1-(3-cyanopyrazolo[1,5-a]pyrimidin-5-yl)-4-fluoropyrrolidin-2-yl)-5-fluorobenzoic acid)

一個甲基3-((2R,4S)-1-(3-氰基吡唑並[1,5-a]嘧啶-5-基)-4-氟吡咯烷-2-基)-5-氟苯甲酸酯(methyl 3-((2R,4S)-1-(3-cyanopyrazolo[1,5-a]pyrimidin-5-yl)-4-fluoropyrrolidin-2-yl)-5-fluorobenzoate)《530.00毫克，1.38毫莫耳，1.00當量》在甲醇/水(MeOH/H₂O)《20.00毫升，體積：體積=3：1》的混合物，加入氫氧化鈉《110.40毫克，2.76毫莫耳，2.00當量》，在20℃攪拌混合物16小時；濃縮混合物以除去甲醇，水層加入鹽酸直到酸鹼值低於7，然後用醋酸乙酯淬取水層《3毫升，3次》，生成的有機層透過硫酸鈉乾燥並濃縮，得到一個白色固體的3-((2R,4S)-1-(3-氰基吡唑並[1,5-a]嘧啶-5-基)-4-氟吡咯烷-2-基)-5-氟苯甲酸(3-((2R,4S)-1-(3-cyanopyrazolo[1,5-a]pyrimidin-5-yl)-4-fluoropyrrolidin-2-yl)-5-fluorobenzoic acid)《400.00毫克，1.80毫莫耳，生成率：78.48%》。

步驟5：3-((2R,4S)-1-(3-氰基吡唑並[1,5-a]嘧啶-5-基)-4-氟吡咯烷-2-基)-5-氟-N-甲基苯甲醯胺(3-((2R,4S)-1-(3-cyanopyrazolo[1,5-a]pyrimidin-5-yl)-4-fluoropyrrolidin-2-yl)-5-fluoro-N-methylbenzamide)

一個3-((2R,4S)-1-(3-氰基吡唑並[1,5-a]嘧啶-5-基)-4-氟吡咯烷-2-基)-5-氟苯甲酸(3-((2R,4S)-1-(3-cyanopyrazolo[1,5-a]pyrimidin-5-yl)-4-fluoropyrrolidin-2-yl)-5-fluorobenzoic acid)《80.00毫克，216.61微莫耳，1.00當量》在二甲基甲醯胺《2.00毫升》的混合物，加入二異丙基乙基胺《83.99毫克，649.84微莫耳，113.49微升，3.00當量》、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU；O-(7-Azabenzotriazol-1-yl)-N,N,N',N'-tetramethyluroniumhexafluorophosphate)《98.84毫克，259.94微莫耳，1.20當量》和甲胺(methanamine)《17.55毫克，259.93微莫耳，1.20當量，鹽酸鹽》，在20℃攪拌混合物1小時；液相色層分析-質譜分析(LC-MS)顯示反應已完全，然後將混合物濃縮，產生粗產物，用製備型高效液相色層分析《三氟乙酸系統(TFA)》純化粗產物，得到3-((2R,4S)-1-(3-氰基吡唑並[1,5-a]嘧啶-5-基)-4-氟吡咯烷-2-基)-5-氟-N-甲基苯甲醯胺(3-((2R,4S)-1-(3-cyanopyrazolo[1,5-a]pyrimidin-5-yl)-4-fluoropyrrolidin-2-yl)-5-fluoro-N-methylbenzamide)《50.70毫克，102.14微莫耳，生成率：47.15%，三氟乙酸系統》，係一個褐色的油。

實施例10：2-((2R,4S)-1-(3-氰基吡唑並[1,5-a]嘧啶-5-基)-4-氟吡咯烷-2-基)-4-氟苯甲醯胺(2-((2R,4S)-1-(3-cyanopyrazolo[1,5-a]pyrimidin-5-yl)-4-fluoropyrrolidin-2-yl)-4-fluorobenzamide)《化合物22》步驟1： 5-((2R,4S)-2-(2-溴-5-氟苯基)-4-氟吡咯烷-1-基)吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-腈(5-((2R,4S)-2-(2-bromo-5-fluorophenyl)-4-fluoropyrrolidin-1-yl)pyrazolo[1,5-a]pyrimidine-3-carbonitrile)

一個5-氯吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-腈(5-chloropyrazolo[1,5-a]pyrimidine-3-carbonitrile)《500.00毫克，2.33毫莫耳，1.00當量，鹽酸鹽》、(2R,4S)-2-(2-溴-5-氟-苯基)-4-氟-吡咯烷((2R,4S)-2-(2-bromo-5-fluoro-phenyl)-4-fluoro-pyrrolidine)《694.17毫克，2.33毫莫耳，1.00當量，鹽酸鹽》、二異丙基乙基胺(DIPEA)《751.26毫克，5.81毫莫耳，1.02毫升，2.50當量》在二噁烷《8.00毫升》中的混合物，在80℃攪拌16小時；薄層色層分析《聚乙烯(PE)：醋酸乙酯(EtOAc)=3：1》顯示反應已完成，在混合物中加入水《10毫升》，然後用醋酸乙酯淬取混合物《10毫升，3次》，有機層合併後透過硫酸鈉乾燥，在真空中濃縮，得到5-((2R,4S)-2-(2-溴-5-氟苯基)-4-氟吡咯烷-1-基)吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-腈(5-((2R,4S)-2-(2-bromo-5-fluorophenyl)-4-fluoropyrrolidin-1-yl)pyrazolo[1,5-a]pyrimidine-3-carbonitrile)《1.00公克，粗產物》，係一個黃色的油。

步驟2：甲基2-((2R,4S)-1-(3-氰基吡唑並[1,5-a]嘧啶-5-基)-4-氟吡咯烷-2-基)-4-氟苯甲酸酯(Methyl 2-((2R,4S)-1-(3-cyanopyrazolo[1,5-a]pyrimidin-5-yl)-4-fluoropyrrolidin-2-yl)-4-fluorobenzoate)

一個5-((2R,4S)-2-(2-溴-5-氟苯基)-4-氟吡咯烷-1-基)吡唑並[1,5-a]嘧啶-3-腈(5-((2R,4S)-2-(2-bromo-5-fluorophenyl)-4-fluoropyrrolidin-1-yl)pyrazolo[1,5-a]pyrimidine-3-carbonitrile)《900.00毫克，2.23毫莫耳，1.00當量》、二個(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀(Pd(dppf)Cl₂)《326.34毫克，446.00微莫耳，0.20當量》、三乙胺(Et₃N；Triethylamine)《676.96毫克，6.69毫莫耳，927.34微升，3.00當量》在甲醇《10.00毫升》中的混合物，脫氣(degassed)後，用一氧化碳(CO)淨化3次；接著在一氧化碳氣體下《50帕》於70℃攪拌混合物120小時；液相色層分析-質譜分析顯示大多數起始原料已消耗，就將混合物過濾，然後在真空下濃縮濾液，生成一個黃色固體的甲基2-((2R,4S)-1-(3-氰基吡唑並[1,5-a]嘧啶-5-基)-4-氟吡咯烷-2-基)-4-氟苯甲酸酯(methyl 2-((2R,4S)-1-(3-cyanopyrazolo[1,5-a]pyrimidin-5-yl)-4-fluoropyrrolidin-2-yl)-4-fluorobenzoate)《700.00毫克，粗產物》。

步驟3：2-((2R,4S)-1-(3-氰基吡唑並[1,5-a]嘧啶-5-基)-4-氟吡咯烷-2-基)-4-氟苯甲酸(2-((2R,4S)-1-(3-cyanopyrazolo[1,5-a]pyrimidin-5-yl)-4-fluoropyrrolidin-2-yl)-4-fluorobenzoic acid)

一個甲基2-((2R,4S)-1-(3-氰基吡唑並[1,5-a]嘧啶-5-基)-4-氟吡咯烷-2-基)-4-氟苯甲酸酯(methyl 2-((2R,4S)-1-(3-cyanopyrazolo[1,5-a]pyrimidin-5-yl)-4-fluoropyrrolidin-2-yl)-4-fluorobenzoate)《700.00毫克，1.83毫莫耳，1.00當量》、氫氧化鈉《146.08毫克，3.65毫莫耳，2.00當量》在甲醇《5.00毫升》和水《5.00毫升》的混合物，於25℃攪拌16小時；當液相色層分析-質譜分析顯示反應已完全，在真空下移除甲醇，然後加入已稀釋的鹽酸《1莫耳濃度》直到酸鹼值=6導致形成一個黃色沉澱，收集沉澱並在真空下乾燥，生成一個黃色固體的2-((2R,4S)-1-(3-氰基吡唑並[1,5-a]嘧啶-5-基)-4-氟吡咯烷-2-基)-4-氟苯甲酸(2-((2R,4S)-1-(3-cyanopyrazolo[1,5-a]pyrimidin-5-yl)-4-fluoropyrrolidin-2-yl)-4-fluorobenzoic acid)《280.00毫克，758.15微莫耳，生成率：41.43%》。

步驟4：2-((2R,4S)-1-(3-氰基吡唑並[1,5-a]嘧啶-5-基)-4-氟吡咯烷-2-基)-4-氟苯甲醯胺(2-((2R,4S)-1-(3-cyanopyrazolo[1,5-a]pyrimidin-5-yl)-4-fluoropyrrolidin-2-yl)-4-fluorobenzamide)

一個2-((2R,4S)-1-(3-氰基吡唑並[1,5-a]嘧啶-5-基)-4-氟吡咯烷-2-基)-4-氟苯甲酸(2-((2R,4S)-1-(3-cyanopyrazolo[1,5-a]pyrimidin-5-yl)-4-fluoropyrrolidin-2-yl)-4-fluorobenzoic acid)《100.00毫克，270.77微莫耳，1.00當量》、氯化銨(NH₄Cl)《43.45毫克，812.31微莫耳，28.40微升，3.00當量》、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)《113.25毫克，297.85微莫耳，1.10當量》和三乙胺(Et₃N)《82.20毫克，812.31微莫耳，112.60 微升，3.00當量》在二甲基甲醯胺(DMF)《2.00毫升》的混合物，於25℃攪拌16小時；當液相色層分析-質譜分析顯示反應已完全，在真空下濃縮混合物，並用製備型高效液相色層分析《三氟乙酸系統(TFA)》純化，得到2-((2R,4S)-1-(3-氰基吡唑並[1,5-a]嘧啶-5-基)-4-氟吡咯烷-2-基)-4-氟苯甲醯胺(2-((2R,4S)-1-(3-cyanopyrazolo[1,5-a]pyrimidin-5-yl)-4-fluoropyrrolidin-2-yl)-4-fluorobenzamide)《26.70毫克，72.49微莫耳，生成率：26.77%》，係一個黃色的油。

實施例11：中間產物(Intermediates)的合成 4-氟-2-芳基吡咯烷(4-fluoro-2-arylpyrrolidin)

4-氟-2-芳基吡咯烷(4-fluoro-2-arylpyrrolidine)的一般合成方式如上所示。(R)-4-羥基吡咯烷-2-酮((R)-4-Hydroxypyrrolidin-2-one)由一個矽基(silyl)如特-丁基二甲基矽基(TBS；tert-butyldimethylsilyl)保護，然而該內醯胺(lactam)係由一個適當的保護官能基如特-丁基氧羰基(Boc；tert-butyloxycarbonyl)所保護；一個親核性桂格納試劑(nucleophilic Grignard reagent)打開內醯胺，生成二保護(di-protected)的4-氨基-3-羥基-1-苯基丁-1-酮(4-amino-3-hydroxy-1-phenylbutan-1-one)，用一個還原劑如氫硼化鈉(sodium borohydride)將酮還原成二級醇(secondary alcohol)；將醇轉化為一個離去基 (leaving group)，例如形成甲磺酸鹽(mesylate)，導致環閉合而生成二保護的4-氟-2-羥基吡咯烷類(di-protected 4-fluoro-2-hydroxypyrrolidines)；先用氟化物來源或酸做醇去保護，接著與親核性氟化物(nucleophilic fluorine)如三氟化二乙氨基硫(DAST；Diethylaminosulfur trifluoride)或三氟化双(2-甲氧基乙基)氨基硫(BAST；Bis(2-methoxyethyl)aminosulfur trifluoride)反應，生成氟吡咯烷(fluoro pyrrolidine)，該氟吡咯烷可以在酸性情況例如用四丁基氟化銨(TBAF；Tetrabutylammonium fluoride)下去保護，生成所要的4-氟-2-芳基吡咯烷類(4-fluoro-2-aryl pyrrolidines)。

(R)-4,4-二氟-2-苯基吡咯烷類((R)-4,4-Difluoro-2-phenylpyrrolidines)

(R)-4,4-二氟-2-苯基吡咯烷類的製備如上所示，從特-丁基(4R)-4-羥基-2-苯基吡咯烷-1-羧酸鹽(tert-butyl(4R)-4-hydroxy-2-phenylpyrrolidine-1-carboxylate)用一個氧化劑例如2,2,6,6-四甲基哌啶1-氧基自由基(TEMPO；2,2,6,6-tetramethylpiperidine 1-oxyl)或戴斯-馬丁氧化劑(Dess-Martin periodinane)、經由二級醇氧化成一個酮，然後用一個試劑如三氟化二乙氨基硫(DAST)氟化，使特-丁基氧羰基(Boc)官能基發生酸性去保護，得到所要的芳基吡咯烷。

4-取代的2-芳基吡咯烷類也可以藉由從特-丁基(4R)-4-羥基-2-苯基吡咯烷-1-羧酸鹽的甲磺酸化所生成之二級甲磺酸鹽(secondary mesylate)的親核置換(nucleophilic displacement)而得到，特-丁基氧羰基(Boc)官能基的酸性去保護提供所要的芳基吡咯烷類。

製備4-氟-2-芳基吡咯烷類的另一個方法含括從苯甲醛類(benzaldehydes)做成亞磺醯胺類(sulfinamides)，係立體選擇性地與丙烯基親核體(allyl nucleophiles)如丙烯基鋅(allylzinc)或丙烯基桂格納試劑(allyl Grignard reagents)反應；在酸性情況下轉換為游離胺(free amine)，接著乙醯化(acetylation)且以碘使環閉合(ring closure)，做成2-芳基吡咯烷類；以一個官能基如特-丁基氧羰基(Boc)做氨基的保護，醋酸鹽的去保護及以一個試劑如2,2,6,6-四甲基哌啶1-氧基自由基(TEMPO；2,2,6,6-TETRAMETHYLPIPERIDINE 1-OXYL)或戴斯-馬丁氧化劑(Dess-Martin periodinane)的氧化反應提供了酮類，該酮可以被選擇性地以氫硼化鈉(sodium borohydride)還原為二級醇；氨基去保護後接著氟化，生成所要的芳基吡咯烷類。

3-氟-5-((2R,4S)-4-氟吡咯烷-2-基)吡啶(3-Fluoro-5-((2R,4S)-4-fluoropyrrolidin-2-yl)pyridine)

步驟1：(R)-4-((特-丁基二甲基矽基)氧基)吡咯烷-2-酮((R)-4-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)pyrrolidin-2-one)

一個(R)-4-羥基吡咯烷-2-酮((R)-4-hydroxypyrrolidin-2-one)《9.0公克，89.1毫莫耳》在二甲基甲醯胺(DMF)《50毫升》的混合物中，在0℃加入咪唑(imidazole)《9.09公克，134毫莫耳》和特丁基二甲基氯矽烷(TBDMSCl；tert-Butyldimethylsilyl chloride)《14.1公克，93.6毫莫耳》做為一份；反應混合物25℃在攪拌3小時，薄層色層分析《二氯甲烷/甲醇=10/1，比移植(R_f)=0.8》顯示反應已完畢時，加入水《200毫升》，以過濾方法收集生成的沉澱，並在真空中乾燥，得到一個白色固體的(R)-4-((特-丁基二甲基矽基)氧基)吡咯烷-2-酮((R)-4-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)pyrrolidin-2-one)《15.5公克，生成率：80.7%》。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ ppm 5.90(br.s,1H)、4.55-4.53(m,1H)、3.60-3.56(m,1H)、3.24-3.21(m,1H)、2.56-2.50(m,1H)、2.28-2.23(m,1H)、0.87-0.85(m,9H)、0.06-0.00(m,6H)。

步驟2：特-丁基(R)-4-((特-丁基二甲基矽基)氧基)-2-氧代吡咯烷-1-羧酸鹽(tert-butyl(R)-4-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)-2-oxopyrrolidine-1-carboxylate)

(R)-4-((特-丁基二甲基矽基)氧基)吡咯烷-2-酮((R)-4-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)pyrrolidin-2-one)《15.5公克，72.0毫莫耳》在乙腈(CH₃CN；acetonitrile)《150毫升》的混合物，在0℃加入三乙胺(Et₃N)《8.72公克，86.4毫莫耳》、4-二甲氨基吡啶(DMAP；4-Dimethylaminopyridine)《4.39公克，36毫莫耳》、和二碳酸二特丁酯(Boc₂O；Di-t-butyl dicarbonate)《20.4公克，93.7毫莫耳》做為一份；反應混合物25℃在攪拌10小時，薄層色層分析《聚乙烯/醋酸乙酯=3/1》顯示反應已完畢時，加入水《600毫升》，以過濾方法收集生成的沉澱，並在真空中乾燥，得到一個粉紅色固體的特-丁基(R)-4-((特-丁基二甲基矽基)氧基)-2-氧代吡咯烷-1-羧酸鹽(tert-butyl(R)-4-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)-2-oxopyrrolidine-1-carboxylate)《19.2公克，生成率：84.6%》。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ ppm 4.33-4.30(m,1H)、3.81-3.77(m,1H)、3.56-3.54(m,1H)、2.67-2.6(m,1H)、2.41-2.37(m,1H)、1.46(s,9H)、0.80(s,9H)、0.00(s,6H)。

步驟3：特-丁基((2R)-2-((特-丁基二甲基矽基)氧基)-4-(5-氟吡啶-3-基)-4-羥基丁基)氨基甲酸鹽(tert-butyl((2R)-2-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)-4-(5-fluoropyridin-3-yl)-4-hydroxybutyl)carbamate)

於3-溴-5-氟-吡啶《3.35公克，19.02毫莫耳，1.20當量》在四氫呋喃(THF)《40.00毫升》中的混合物，在0℃經過30分鐘以上時間《放熱反應(exothermic)》，逐滴加入異丙基氯化鎂-氯化鋰絡合物(i-PrMgCl-LiCl；Isopropylmagnesium chloride-Lithium chloride complex)《1.3莫耳濃度，17.56毫升，1.44當量》；加完後，以1小時以上時間將溫度升至25℃，並在25℃攪拌30分鐘；薄層色層分析《聚乙烯/醋酸乙酯=10/1》顯示反應產生一個新點(new spot)，指出鎂試劑(Mg reagent)已成功製備。

然後，在-78℃以30分鐘以上時間，逐滴地加入特-丁基(R)-4-((特-丁基二甲基矽基)氧基)-2-氧代吡咯烷-1-羧酸鹽(Tert-butyl(R)-4-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)-2-oxopyrrolidine-1-carboxylate)《5.00公克，15.85毫莫耳，1.00當量》在四氫呋喃(THF)《50毫升》中的混合物，以1小時以上時間將混合物加溫至25℃，然後在25℃攪拌16小時，薄層色層分析《聚乙烯/醋酸乙酯=3/1》顯示反應起始原料已完全消耗、且已偵測到所要之產物特-丁基((R)-2-((特-丁基二甲基矽基)氧基)-4-(5-氟吡啶-3-基)-4-氧代丁基)氨基甲酸鹽(tert-butyl(R)-(2-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)-4-(5-fluoropyridin-3-yl)-4-oxobutyl)carbamate)；於0℃加入甲醇《50毫升》來淬熄反應混合物，然後在0℃加入硼氫化鈉(NaBH₄)《1.20公克，31.70毫莫耳，2.00當量》，接著於25℃攪拌混合物4小時，薄層色層分析《聚乙烯/醋酸乙酯=2/1》和液相色層分析-質譜分析(LC-MS)顯示反應已完畢時，合併的反應混合物《4並行反應(parallel reactions)》藉由氯化銨溶液《400毫升》淬熄，並用醋酸乙酯淬取《600毫升，3次》。

合併的有機層通過硫酸鈉乾燥，並在真空中乾燥，賸餘物用高效液相色層分析純化，得到特-丁基((2R)-2-((特-丁基二甲基矽基)氧基)-4-(5-氟吡啶-3-基)-4- 羥基丁基)氨基甲酸鹽(tert-butyl((2R)-2-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)-4-(5-fluoropyridin-3-yl)-4-hydroxybutyl)carbamate)《1.24公克，生成率：18.91%》，為一個黃色的油。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ ppm 8.26-8.22(m,2H)、7.37(d,1H,J=8.8Hz)、4.95-4.88(m,2H)、4.69(br.s,1H)、4.00-3.98(m,2H)、3.23-3.10(m,2H)、1.73(br.s,2H)、1.32(s,9H)、0.80-0.79(m,9H)、0.00(s,6H)。

步驟4：特-丁基(4R)-4-((特-丁基二甲基矽基)氧基)-2-(5-氟吡啶-3-基)吡咯烷-1-羧酸鹽(tert-butyl(4R)-4-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)-2-(5-fluoropyridin-3-yl)pyrrolidine-1-carboxylate)

一個特-丁基((2R)-2-((特-丁基二甲基矽基)氧基)-4-(5-氟吡啶-3-基)-4-羥基丁基)氨基甲酸鹽(tert-butyl((2R)-2-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)-4-(5-fluoropyridin-3-yl)-4-hydroxybutyl)carbamate)《8.70公克，20.98毫莫耳，1.00當量》和三乙胺(Et₃N)《31.84公克，314.70毫莫耳，15.00當量》在二氯甲烷(DCM)《500.00毫升》中的混合物，於-60℃經過0.5小時，逐滴地加入甲烷磺醯氯(MsCl；Methanesulfonyl Chloride)《31.24公克，272.74毫莫耳，13.00當量》，然後在-60℃攪拌混合物1小時，接著讓反應混合物加溫至25℃並攪拌18小時；液相色層分析-質譜分析顯示起始原料已完全消耗後，用水洗滌《200毫升，3次》混合物，用二氯甲烷淬取《200毫升，4次》水相層；合併的有機層通過硫酸鈉乾燥，並在真空中乾燥，得到粗產物的特-丁基(4R)-4-((特-丁基二甲基矽基)氧基)-2-(5-氟吡啶-3-基)吡咯烷-1-羧酸鹽(tert-butyl (4R)-4-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)-2-(5-fluoropyridin-3-yl)pyrrolidine-1-carboxylate)《8.30公克，粗產物》，為一個黑色/褐色的油，此物不再純化而直接使用。

步驟5：特-丁基(4R)-2-(5-氟吡啶-3-基)-4-羥基吡咯烷-1-羧酸鹽(tert-butyl(4R)-2-(5-fluoropyridin-3-yl)-4-hydroxypyrrolidine-1-carboxylate)

一個特-丁基(4R)-4-((特-丁基二甲基矽基)氧基)-2-(5-氟吡啶-3-基)吡咯烷-1-羧酸鹽(tert-butyl(4R)-4-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)-2-(5-fluoropyridin-3-yl)pyrrolidine-1-carboxylate)《8.30公克，20.93毫莫耳，1.00當量》在四氫呋喃(THF)《250.00毫升》的混合物，在25℃加入氟化四丁基銨(TBAF；tetrabutylammonium fluoride)《9.43公克，41.86毫莫耳，2.00當量》，在25℃攪拌混合物16小時；當薄層色層分析(TLC)《聚乙烯/醋酸乙酯=1/1》顯示反應已完畢後，濃縮該混合物，將賸餘物溶解於醋酸乙酯《600毫升》，用水洗滌《200毫升，5次》，通過硫酸鈉乾燥並濃縮，粗產物用高效液相色層分析純化，得到特-丁基(4R)-2-(5-氟吡啶-3-基)-4-羥基吡咯烷-1-羧酸鹽(tert-butyl(4R)-2-(5-fluoropyridin-3-yl)-4-hydroxypyrrolidine-1-carboxylate)《4.70公克，16.65毫莫耳，生成率：79.54%》，為一個褐黑色的油。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ ppm 8.37-8.33(m,2H)、7.48(br.s,1H)、5.09-4.89(m,1H)、4.56-4.54(m,1H)、3.80-3.65(m,2H)、2.63-2.43(m,1H)、2.03-1.96(m,1H)、1.56-1.20(m,9H)。

步驟6：特-丁基(2R,4S)-4-氟-2-(5-氟吡啶-3-基)吡咯烷-1-羧酸鹽(tert-butyl(2R,4S)-4-fluoro-2-(5-fluoropyridin-3-yl)pyrrolidine-1-carboxylate)

一個特-丁基(4R)-2-(5-氟吡啶-3-基)-4-羥基吡咯烷-1-羧酸鹽(tert-butyl(4R)-2-(5-fluoropyridin-3-yl)-4-hydroxypyrrolidine-1-carboxylate)《4.70公克，16.65毫莫耳，1.00當量》在二氯甲烷《150.00毫升》的混合物，於-78℃經過0.5小時逐滴地加入三氟化二乙氨基硫(DAST；Diethylaminosulfur trifluoride)《29.52公克，183.15毫莫耳，11.00當量》，將反應混合物在-78℃攪拌2小時，然後使其加溫至25℃並攪拌20小時；當薄層色層分析《聚乙烯/醋酸乙酯=10/1》顯示起始原料已消耗完畢後，將混合物冷卻至0℃並以飽和碳酸氫鈉溶液《100毫升》逐滴地淬熄；分離有機相並通過硫酸鈉乾燥，濃縮生成賸餘物，然後用矽凝膠上的管柱色層分析純化《聚乙烯：醋酸乙酯，從10：1、8：1、至5：1、然後3：1》，得到特-丁基(2R,4S)-4-氟-2-(5-氟吡啶-3-基)吡咯烷-1-羧酸鹽(tert-butyl(2R,4S)-4-fluoro-2-(5-fluoropyridin-3-yl)pyrrolidine-1-carboxylate)《1.36公克，4.85毫莫耳，生成率：29.15%，比移值=0.53》，為一個白色固體；以及特-丁基(2S,4S)-4-氟-2-(5-氟吡啶-3-基)吡咯烷-1-羧酸鹽(tert-butyl(2S,4S)-4-fluoro-2-(5-fluoropyridin-3-yl)pyrrolidine-1-carboxylate)《1.36公克，4.78毫莫耳，生成率：28.73%，比移值=0.43》，為一個黃色的油。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ ppm 8.31-8.27(m,2H)、7.20-7.18(m,1H)、5.18(d,1H,J=51.6Hz)、4.97-4.88(m,1H)、4.04-4.00(m,1H)、3.64(dd,1H,J=38.8,12.8Hz)、2.67(dd,1H,J=15.6,6.8Hz)、1.97-1.67(m,1H)、1.56-1.12(m,9H)。

步驟7：3-氟-5-((2R,4S)-4-氟吡咯烷-2-基)吡啶(3-Fluoro-5-((2R,4S)-4-fluoropyrrolidin-2-yl)pyridine)

一個特-丁基(2R,4S)-4-氟-2-(5-氟吡啶-3-基)吡咯烷-1-羧酸鹽(tert-butyl(2R,4S)-4-fluoro-2-(5-fluoropyridin-3-yl)pyrrolidine-1-carboxylate)《1.38公克，4.85毫莫耳，1.00當量》在醋酸乙酯《10毫升》的混合物，於0℃逐滴地加入鹽酸/醋酸乙酯(HCl/EtOAc)《40.00毫升，4莫耳濃度》，將混合物加溫至25℃並攪拌3小時；當薄層色層分析《聚乙烯：醋酸乙酯=1：1》顯示反應已完成後，經溶劑蒸發，得到3-氟-5-((2R,4S)-4-氟吡咯烷-2-基)吡啶(3-fluoro-5-((2R,4S)-4-fluoropyrrolidin-2-yl)pyridine)《1.25公克，4.86毫莫耳，生成率：100.00%》，為一個褐色固體。¹H-NMR(400MHz,CD₃OD)δ ppm 8.84-8.81(m,2H)、8.31(d,1H,J=9.2Hz)、5.62(dt,1H,J=52.0,2.4Hz)、5.23-5.18(m,1H)、4.00-3.95(m,1H)、3.88-3.71(m,1H)、2.67(td,1H,J=16.0,6.0Hz)、1.69-1.59(m,1H)。

(R)-3-(4,4-二氟吡咯烷-2-基)-5-氟吡啶((R)-3-(4,4-difluoropyrrolidin-2-yl)-5-fluoropyridine)

步驟1：特-丁基(2R,4R)-4-((特-丁基二甲基矽基)氧基)-2-(5-氟吡啶-3-基)吡咯烷-1-羧酸鹽(tert-butyl (2R,4R)-4-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)-2-(5-fluoropyridin-3-yl)pyrrolidine-1-carboxylate)

一個特-丁基((2R)-2-((特-丁基二甲基矽基)氧基)-4-(5-氟吡啶-3-基)-4-羥基丁基)氨基甲酸鹽(tert-butyl((2R)-2-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)-4-(5-fluoropyridin-3-yl)-4-hydroxybutyl)carbamate)《6.80公克，16.40毫莫耳》和三乙胺(Et₃N)《24.89公克，246.00毫莫耳》在二氯甲烷(DCM)《500.00毫升》中的混合物，於-60℃經過30分鐘，逐滴地加入甲烷磺醯氯(MsCl；Methanesulfonyl Chloride)《24.42公克，213.20毫莫耳》，然後在-60℃攪拌混合物1小時，接著讓反應混合物加溫至25℃並攪拌18小時；液相色層分析-質譜分析顯示起始原料已完全消耗後，用水洗滌《200毫升，3次》混合物，用二氯甲烷淬取《200毫升，4次》水相層；合併的有機層通過硫酸鈉乾燥，並在真空中乾燥，生成賸餘物用矽凝膠上的管柱色層分析純化《聚乙烯：醋酸乙酯=50/1、20/1、10/1》，得到特-丁基(2S,4R)-4-((特-丁基二甲基矽基)氧基)-2-(5-氟吡啶-3-基)吡咯烷-1-羧酸鹽(tert-butyl(2S,4R)-4-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)-2-(5-fluoropyridin-3-yl)pyrrolidine-1-carboxylate)《2.70公克，生成率：41.52%》和特-丁基(2R,4R)-4-((特-丁基二甲基矽基)氧基)-2-(5-氟吡啶-3-基)吡咯烷-1-羧酸鹽(tert-butyl(2R,4R)-4-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)-2-(5-fluoropyridin-3-yl)pyrrolidine-1-carboxylate)《2.40公克，生成率：36.89%》，為褐色的油。¹H-NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm 8.40(br.s,2H)、7.56-7.45(m,1H)、5.11-4.94(m,2H)、4.53(br.s,1H)、3.85-3.79(m,1H)、3.66-3.53(m,1H)、2.62-2.58(m,1H)、2.04-2.01(m,1H)、1.56(s,3H)、1.32(s,6H)、0.99-0.88(m,9H)、0.18-0.00(m,6H)。

步驟2：特-丁基(2R,4R)-2-(5-氟吡啶-3-基)-4-羥基吡咯烷-1-羧酸鹽(tert-butyl(2R,4R)-2-(5-fluoropyridin-3-yl)-4-hydroxypyrrolidine-1-carboxylate)

一個特-丁基(2R,4R)-4-((特-丁基二甲基矽基)氧基)-2-(5-氟吡啶-3-基)吡咯烷-1-羧酸鹽(tert-butyl(2R,4R)-4-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)-2-(5-fluoropyridin-3-yl)pyrrolidine-1-carboxylate)《2.40公克，6.05毫莫耳》在四氫呋喃(THF)《60.00毫升》的混合物，在25℃加入氟化四丁基銨(TBAF；tetrabutylammonium fluoride)《3.16公克，12.10毫莫耳》作為一份，於50℃減壓下濃縮該混合物，將賸餘物加入水《20毫升》中，水相層用醋酸乙酯淬取《30毫升，3次》，合併的有機層再以飽和鹽水洗滌《20毫升，2次》，通過硫酸鈉乾燥，真空中過濾並濃縮，賸餘物用矽凝膠色層分析純化《聚乙烯：醋酸乙酯=20/1、10/1、1/3》，得到特-丁基(2R,4R)-2-(5-氟吡啶-3-基)-4-羥基吡咯烷-1-羧酸鹽(tert-butyl(2R,4R)-2-(5-fluoropyridin-3-yl)-4-hydroxypyrrolidine-1-carboxylate)《1.30公克，生成率：76.11%》，為一個黃色固體。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ ppm 8.26(d,2H,J=12.8Hz)、7.39(br.s,1H)、4.95-4.81(m,1H)、4.48-4.47(m,1H)、3.73(br.s,1H)、3.56-3.53(m,1H)、2.55(br.s,1H)、1.97-1.98(m,1H)、1.65-1.16(m,9H)。

步驟3：特-丁基(R)-2-(5-氟吡啶-3-基)-4-氧代吡咯烷-1-羧酸鹽(tert-butyl(R)-2-(5-fluoropyridin-3-yl)-4-oxopyrrolidine-1-carboxylate)

一個特-丁基(2R,4R)-2-(5-氟吡啶-3-基)-4-羥基吡咯烷-1-羧酸鹽(tert-butyl(2R,4R)-2-(5-fluoropyridin-3-yl)-4-hydroxypyrrolidine-1-carboxylate)《1.30公克，4.60毫莫耳》和三氯異氰尿酸(trichloroisocyanuric acid)《1.10公克，4.60毫莫耳》的混合物，在-10℃加入2,2,6,6-四甲基哌啶1-氧基自由基(TEMPO；2,2,6,6-tetramethylpiperidine 1-oxyl)《72.41毫克，460.49毫莫耳》，將混合物在-10℃攪拌15分鐘，然後加溫至25℃並攪拌1小時；當薄層色層分析(TLC)《醋酸乙酯》顯示反應已完畢後，有機相(organic phase)用碳酸氫鈉洗滌《20毫升，2次》，通過硫酸鈉乾燥，在真空中過濾並濃縮，賸餘物用矽凝膠色層分析純化《石油醚(petroleum ether)/醋酸乙酯=50/1、10/1》，得到特-丁基(R)-2-(5-氟吡啶-3-基)-4-氧代吡咯烷-1-羧酸鹽(tert-butyl(R)-2-(5-fluoropyridin-3-yl)-4-oxopyrrolidine-1-carboxylate)《1.10公克，生成率：85.32%》，為一個褐色的油。

步驟4：特-丁基(R)-4,4-二氟-2-(5-氟吡啶-3-基)吡咯烷-1-羧酸鹽(tert-butyl(R)-4,4-difluoro-2-(5-fluoropyridin-3-yl)pyrrolidine-1-carboxylate)

一個特-丁基(R)-2-(5-氟吡啶-3-基)-4-氧代吡咯烷-1-羧酸鹽(tert-butyl(R)-2-(5-fluoropyridin-3-yl)-4-oxopyrrolidine-1-carboxylate)《1.00公克，3.57毫莫耳》在二氯甲烷《100.00毫升》的混合物，於-70℃在氮氣下逐滴地加入三氟化二乙氨基硫(DAST)《14.39公克，89.25毫莫耳》，將反應混合物在-70℃攪拌30分鐘，然後又在25℃攪拌16小時；將混合物在0℃以飽和碳酸氫鈉溶液逐滴地淬熄，並用二氯甲烷《50毫升，4次》淬取水相(aqueous phase)，合併的有機相用飽和鹽水洗滌《30毫升》，通過硫酸鈉乾燥，在真空中過濾並濃縮，賸餘物用矽凝膠色層分析純化《石油醚/醋酸乙酯=100/1、30/1》，得到特-丁基(R)-4,4-二氟-2-(5-氟吡啶-3-基)吡咯烷-1-羧酸鹽(tert-butyl(R)-4,4-difluoro-2-(5-fluoropyridin-3-yl)pyrrolidine-1-carboxylate)《1.00公克，生成率：92.66%》，為一個褐色的油。¹H-NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm 8.40(s,1H)、8.34(s,1H)、7.30-7.21(m,1H)、5.06(br.s,1H)、4.14-3.85(m,2H)、2.91-2.84(m,1H)、2.39-2.32(m,1H)、1.43-1.14(m,9H)。

步驟5：(R)-3-(4,4-二氟吡咯烷-2-基)-5-氟吡啶((R)-3-(4,4-difluoropyrrolidin-2-yl)-5-fluoropyridine)

一個特-丁基(R)-4,4-二氟-2-(5-氟吡啶-3-基)吡咯烷-1-羧酸鹽(tert-butyl(R)-4,4-difluoro-2-(5-fluoropyridin-3-yl)pyrrolidine-1-carboxylate)《1.00公克，3.31毫莫耳》在鹽酸/醋酸乙酯《50.00毫升，4莫耳濃度》中的混合物，在25℃攪拌2小時，於30℃減壓下濃縮混合物，得到(R)-3-(4,4-二氟吡咯烷-2-基)-5-氟吡啶((R)-3-(4,4-difluoropyrrolidin-2-yl)-5-fluoropyridine)《840.00毫克，生成率：92.25%》，為一個白色固體，係雙鹽酸鹽(bis HCl salt)。¹H-NMR(400MHz,MeOD)δ ppm 8.68-8.63(m,1H)、7.97(d,1H,J=9.2Hz)、5.26-5.21(m,1H)、4.03-3.90(m,2H)、3.13-2.92(m,2H)。

(3S,5R)-5-(2,5-二氟苯基)吡咯烷-3-腈((3S,5R)-5-(2,5-difluorophenyl)pyrrolidine-3-carbonitrile)

步驟1：特-丁基((2R)-2-((特-丁基二甲基矽基)氧基)-4-(2,5-二氟苯基)-4-羥基丁基)氨基甲酸鹽(tert-butyl((2R)-2-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)-4-(2,5-difluorophenyl)-4-hydroxybutyl)carbamate)

一個2-溴-1,4-二氟-苯(2-bromo-1,4-difluoro-benzene)《3.01公克，15.60毫莫耳，1.20當量》在四氫呋喃(THF)《15毫升》的溶液，在0℃於氮氣環境下，逐滴地加入異丙基氯化鎂絡合物(isopropylmagnesium chloride complex)《2.27公克，15.60毫莫耳，1.20當量》，在15℃攪拌反應物1小時，以製備(2,5-二氟苯基)溴化鎂((2,5-difluorophenyl)magnesium bromide)《23毫升》。

一個特-丁基(R)-4-((特-丁基二甲基矽基)氧基)-2-氧代吡咯烷-1-羧酸鹽(tert-butyl(R)-4-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)-2-oxopyrrolidine-1-carboxylate)《4.10公克，13.00毫莫耳，1.00當量》在四氫呋喃《50毫升》的溶液，在0℃以30分鐘時間，逐滴地加入(2,5-二氟苯基)溴化鎂((2,5-difluorophenyl)magnesium bromide)《23毫升》，將反應混合物在0℃攪拌1小時；然後將甲醇《20毫升》加入反應混合物中，接著在0℃加入硼氫化鈉(NaBH₄)《738毫克，19.50毫莫耳，1.50當量》，又將反應混合物在0℃攪拌1小時，，然後倒進10%氯化銨水溶液中；反應混合物用醋酸乙酯淬取《20毫升，2次》，合併的有機層用鹽水洗滌，通過硫酸鈉乾燥，過濾並濃縮，生成的粗產物用中壓液相色層分析(medium pressure liquid chromatography(MPLC))純化，得到特-丁基((2R)-2-((特-丁基二甲基矽基)氧基)-4-(2,5-二氟苯基)-4-羥基丁基)氨基甲酸鹽(tert-butyl((2R)-2-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)-4-(2,5-difluorophenyl)-4-hydroxybutyl)carbamate)《2.22公克，5.14毫莫耳，生成率：39.6%》。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ ppm 7.17-7.15(m,1H)、6.86-6.79(m,2H)、5.11-5.06(m,1H)、4.70(br.s,1H)、4.02-3.98(m,1H)、3.69(br.s,0.5H)、3.46(br.s,0.5H)、3.33-3.14(m,2H)、1.80-1.69(m,2H)、1.35(s,9H)、0.84-0.82(9H,m)、0.04-0.03(6H,m)。

步驟2：特-丁基(4R)-4-((特-丁基二甲基矽基)氧基)-2-(2,5-二氟苯基)吡咯烷-1-羧酸鹽(tert-butyl(4R)-4-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)-2-(2,5-difluorophenyl)pyrrolidine-1-carboxylate)

一個特-丁基((2R)-2-((特-丁基二甲基矽基)氧基)-4-(2,5-二氟苯基)-4-羥基丁基)氨基甲酸鹽(tert-butyl ((2R)-2-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)-4-(2,5-difluorophenyl)-4-hydroxybutyl)carbamate)《13.40公克，31.05毫莫耳，1.00當量》和三乙胺(Et₃N)《9.43公克，93.14毫莫耳，3.00當量》在二氯甲烷《50毫升》的溶液，在-60℃於氮氣下，逐滴地加入甲烷磺醯氯(methanesulfonyl chloride)《5.33公克，46.57毫莫耳，1.50當量》，在-60℃攪拌混合物2小時，然後在15℃攪拌16小時；液相色層分析-質譜分析顯示起始原料已消耗完畢後，用二氯甲烷《30毫升，2次》淬取反應混合物，將合併的有機層以鹽水《50毫升》洗滌，通過硫酸鈉乾燥，過濾並濃縮，得到特-丁基(4R)-4-((特-丁基二甲基矽基)氧基)-2-(2,5-二氟苯基)吡咯烷-1-羧酸鹽(tert-butyl(4R)-4-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)-2-(2,5-difluorophenyl)pyrrolidine-1-carboxylate)《12.00公克，26.11毫莫耳，生成率：84.10%，純度：90%》，不再進一步純化而直接應用。

步驟3：特-丁基(2R,4R)-2-(2,5-二氟苯基)-4-羥基吡咯烷-1-羧酸鹽(tert-butyl(2R,4R)-2-(2,5-difluorophenyl)-4-hydroxypyrrolidine-1-carboxylate)

一個特-丁基(4R)-4-((特-丁基二甲基矽基)氧基)-2-(2,5-二氟苯基)吡咯烷-1-羧酸鹽(tert-butyl(4R)-4-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)-2-(2,5-difluorophenyl)pyrrolidine-1-carboxylate)《4.50公克，10.88毫莫耳，1.00當量》在四氫呋喃(THF)《30毫升》的溶液，於15℃加入四丁基氟化銨/四氫呋喃(TBAF(Tetrabutylammonium fluoride)/THF)《1莫耳濃度，14.15毫升，1300當量》，混合物在15℃攪拌16小時；薄層色層分析(TLC)《聚乙烯：乙酸乙酯=3：1》顯示起始原料已消耗完畢後，用水《50毫升》將反應混合物淬熄，用乙酸乙酯《30毫升，2次》淬取，將合併的有機層以鹽水《10毫升》洗滌，通過硫酸鈉乾燥，在真空中過濾並濃縮，賸餘物以中性製備型高效液相色層分析(neutral prep-HPLC)純化，得到特-丁基(2R,4R)-2-(2,5-二氟苯基)-4-羥基吡咯烷-1-羧酸鹽(tert-butyl(2R,4R)-2-(2,5-difluorophenyl)-4-hydroxypyrrolidine-1-carboxylate)《1.00公克，3.34毫莫耳，生成率：30.70%》，為一個白色固體。¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ ppm 7.04-6.80(m,3H)、5.10-5.00(m,1H)、4.43(s,1H)、3.75(br.s,1H)、3.53-3.49(m,1H)、2.53(br.s,1H)、1.93-1.90(m,1H)、1.40-1.16(m,9H)。

步驟4：特-丁基(2R,4R)-2-(2,5-二氟苯基)-4-((甲基磺醯基)氧基)吡咯烷-1-羧酸鹽(tert-butyl(2R,4R)-2-(2,5-difluorophenyl)-4-((methylsulfonyl)oxy)pyrrolidine-1-carboxylate)

一個特-丁基(2R,4R)-2-(2,5-二氟苯基)-4-羥基吡咯烷-1-羧酸鹽(tert-butyl(2R,4R)-2-(2,5-difluorophenyl)-4-hydroxypyrrolidine-1-carboxylate)《3.00公克，10.02毫莫耳，1.00當量》和三乙胺(Et₃N)《2.03公克，20.04毫莫耳，2.00當量》在二氯甲烷《80.00毫升》的溶液，在0℃逐滴地加入甲烷磺醯氯(MsCl；Methanesulfonyl Chloride)《1.61公克，14.03毫莫耳，1.40當量》，反應混合物在18℃攪拌2小時，然後用水《30毫升》淬熄；以二氯甲烷淬取水相《50毫升，3次》，合併的有機層通過硫酸鈉乾燥，在減壓下濃縮，得到特-丁基(2R,4R)-2-(2,5-二氟苯基)-4-((甲基磺醯基)氧基)吡咯烷-1-羧酸鹽(tert-Butyl(2R,4R)-2-(2,5-difluorophenyl)-4-((methylsulfonyl)oxy)pyrrolidine-1-carboxylate)《3.60公克，9.54毫莫耳，生成率：95.20%》，為一個褐色固體。

步驟5：特-丁基(2R,4S)-4-氰基-2-(2,5-二氟苯基)吡咯烷-1-羧酸鹽(tert-butyl(2R,4S)-4-cyano-2-(2,5-difluorophenyl)pyrrolidine-1-carboxylate)

一個特-丁基(2R,4R)-2-(2,5-二氟苯基)-4-((甲基磺醯基)氧基)吡咯烷-1-羧酸鹽(tert-Butyl(2R,4R)-2-(2,5-difluorophenyl)-4-((methylsulfonyl)oxy)pyrrolidine-1-carboxylate)《3.60公克，9.54毫莫耳，1.00當量》在二甲基亞碸(DMSO)《20.00毫升》中的混合物，加入氰化鉀(KCN)《745.49毫克，11.45毫莫耳，1.20當量》作為一份；在90℃攪拌反應混合物3小時，將80毫升水加入混合物中，該混合物再用醋酸乙酯《80毫升，4次》淬取；合併的有機層在減壓下濃縮，賸餘物以矽凝膠色層分析《聚乙烯/醋酸乙酯=40：1，30：1，10：1》加以純化，得到特-丁基(2R,4S)-4-氰基-2-(2,5-二氟苯基)吡咯烷-1-羧酸鹽(tert-Butyl(2R,4S)-4-cyano-2-(2,5-difluorophenyl)pyrrolidine-1-carboxylate)《1.60公克，5.19毫莫耳，生成率：54.40%》，為一個淡綠色液體。

步驟6：(3S,5R)-5-(2,5-二氟苯基)吡咯烷-3-腈((3S,5R)-5-(2,5-difluorophenyl)pyrrolidine-3-carbonitrile)

一個特-丁基(2R,4S)-4-氰基-2-(2,5-二氟苯基)吡咯烷-1-羧酸鹽(tert-Butyl(2R,4S)-4-cyano-2-(2,5-difluorophenyl)pyrrolidine-1-carboxylate)《800.00毫克，2.59毫莫耳，1.00當量》在三氟乙酸《4.00毫升》/二氯甲烷《20.00毫升》(TFA/DCM)中的混合物，在18℃攪拌3小時，反應混合物在氮氣下乾燥，得到(3S,5R)-5-(2,5-二氟苯基)吡咯烷-3-腈((3S,5R)-5-(2,5-difluorophenyl)pyrrolidine-3-carbonitrile)《780.00毫克，2.42毫莫耳，生成率：93.44%》，為一個淡黃色固體。

3-氟-5-((2R,4S)-4-氟吡咯烷-2-基)苯甲醯胺(3-fluoro-5-((2R,4S)-4-fluoropyrrolidin-2-yl)benzamide)

3-氟-5-((2R,4S)-4-氟吡咯烷-2-基)苯甲醯胺(3-Fluoro-5-((2R,4S)-4-fluoropyrrolidin-2-yl)benzonitrile)《0.050公克，0.240毫莫耳》《如WO 2012/034095所述之製備》放入三氟乙酸(TFA)《0.800毫升，10.38毫莫耳》和硫酸(H₂SO₄)《0.200毫升，3.75毫莫耳》中，在室溫攪拌過夜，反應混合物用冰水《3毫升》稀釋，過濾分離出固體，並直接使用。

2-氯-5-氟-3-((2R,4S)-4-氟吡咯烷-2-基)吡啶(2-chloro-5-fluoro-3-((2R,4S)-4-fluoropyrrolidin-2-yl)pyridine)

步驟1：(S,Z)-N-((2-氯-5-氟吡啶-3-基)亞甲基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺((S,Z)-N-((2-chloro-5-fluoropyridin-3-yl)methylene)-2-methylpropane-2-sulfinamide)

在0℃，將2-氯-5-氟煙醛(2-chloro-5-fluoronicotinaldehyde)《20公克，125毫莫耳》放入四氫呋喃《150毫升》中，然後加入(R)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺((R)-2-Methylpropane-2-sulfinamide)《16.71公克，138毫莫耳》，接著逐滴地加入鈦酸四丁酯(titanium tetraethanolate)《22.88毫升，150毫莫耳》；在升溫至室溫時攪拌反應混合物，3小時以後，將反應混合物冷卻至0℃，然後加入150毫升鹽水並攪拌20分鐘；以矽藻土(Celite)過濾混合物，分離水層並丟棄，有機層通過硫酸鈉乾燥，並移除溶劑，得到(S,Z)-N-((2-氯-5-氟吡啶-3-基)亞甲基)-2- 甲基丙烷-2-亞磺醯胺((S,Z)-N-((2-chloro-5-fluoropyridin-3-yl)methylene)-2-methylpropane-2-sulfinamide)《32公克，122毫莫耳，生成率：97%》，不再進一步純化地使用。LCMS：263 M+H。

步驟2：(R)-N-((R)-1-(2-氯-5-氟吡啶-3-基)丁-3-烯-1-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺((R)-N-((R)-1-(2-chloro-5-fluoropyridin-3-yl)but-3-en-1-yl)-2-methylpropane-2-sulfinamide)

將(R,E)-N-((2-氯-5-氟吡啶-3-基)亞甲基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺((R,E)-N-((2-chloro-5-fluoropyridin-3-yl)methylene)-2-methylpropane-2-sulfinamide)《32.9公克，125毫莫耳》溶解於六甲基磷醯胺(HMPA；Hexamethylphosphoramide)《100毫升》中，並冷卻至0℃；在加入鋅(Zinc)《16.37公克，250毫莫耳》、溴化烯丙基(allyl bromide)《21.67毫升，250毫莫耳》和水《2.256毫升，125毫莫耳》，將反應混合物升溫至室溫過夜；液相色層分析-質譜分析顯示已完全轉化為所要的產物後，在室溫加入100毫升的水並攪拌30分鐘，又加入30毫升的甲基特-丁基醚(MBTE；methyl tert-butyl ether)，接著加入60毫升的10%檸檬酸(citric acid)，再攪拌反應混合物30分鐘；將混合物通過矽藻土過濾並用甲基特-丁基醚洗滌，有機層再以10%檸檬酸、水、和鹽水洗滌，真空下移除溶劑，得到(R)-N-((R)-1-(2-氯-5-氟吡啶-3-基)丁-3-烯-1-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺((R)-N-((R)-1-(2-chloro-5-fluoropyridin-3-yl)but-3-en-1-yl)-2-methylpropane-2-sulfinamide)《14.5公克，47.6毫莫耳，生成率：38.0%》，為一個橘色的油。LCMS：305M+H。

步驟3：(R)-1-(2-氯-5-氟吡啶-3-基)丁-3-烯-1-胺，鹽酸鹽((R)-1-(2-chloro-5-fluoropyridin-3-yl)but-3-en-1-amina,HCl)

(R)-N-((R)-1-(2-氯-5-氟吡啶-3-基)丁-3-烯-1-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺((R)-N-((R)-1-(2-chloro-5-fluoropyridin-3-yl)but-3-en-1-yl)-2-methylpropane-2-sulfinamide)《7.5公克，24.61毫莫耳》放入10毫升甲醇中，加入鹽酸《4莫耳濃度於二噁烷中》《30.8毫升，123毫莫耳》並在室溫攪拌1小時；真空下移除溶劑，賸餘物稀釋於二氯甲烷中，並用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌，分離不同液層，將有機層通過硫酸鈉乾燥，並在真空下移除溶劑，收回(R)-1-(2-氯-5-氟吡啶-3-基)丁-3-烯-1-胺，鹽酸鹽((R)-1-(2-chloro-5-fluoropyridin-3-yl)but-3-en-1-amine,HCl)《5.83公克，24.59毫莫耳，生成率：100%》，為一個固體。LCMS：201 M+H。

步驟4：(R)-N-(1-(2-氯-5-氟吡啶-3-基)丁-3-烯-1-胺)乙醯胺((R)-N-(1-(2-chloro-5-fluoropyridin-3-yl)but-3-en-1-yl)acetamide)

(R)-1-(2-氯-5-氟吡啶-3-基)丁-3-烯-1-胺．鹽酸鹽((R)-1-(2-chloro-5-fluoropyridin-3-yl)but-3-en-1-amine．HCl)《5.83公克，24.59毫莫耳》在二氯甲烷《70.3毫升》中，在0℃加入三乙胺(TEA；Triethanolamine) 《4.11毫升，29.5毫莫耳》和醋酸酐(acetic anhydride)《2.320毫升，24.59毫莫耳》，攪拌混合物2小時；將反應混合物倒進飽和碳酸氫鈉水溶液中，並用二氯甲烷淬取，有機層用鹽水洗滌，通過硫酸鈉乾燥，並在減壓下蒸發，收回(R)-N-(1-(2-氯-5-氟吡啶-3-基)丁-3-烯-1-胺)乙醯胺((R)-N-(1-(2-chloro-5-fluoropyridin-3-yl)but-3-en-1-yl)acetamide)《5.97公克，24.60毫莫耳，生成率：100%》，並且不再進一步純化就應用。LCMS：243 M+H。

步驟5：(5R)-5-(2-氯-5-氟吡啶-3-基)吡咯烷-3-基醋酸鹽((5R)-5-(2-chloro-5-fluoropyridin-3-yl)pyrrolidin-3-yl acetate)

將(R)-N-(1-(2-氯-5-氟吡啶-3-基)丁-3-烯-1-胺)乙醯胺((R)-N-(1-(2-chloro-5-fluoropyridin-3-yl)but-3-en-1-yl)acetamide)《5.97公克，24.60毫莫耳》放入四氫呋喃《56.2毫升》和水《14.06毫升》中，然後加入碘(I₂)《18.73公克，73.8毫莫耳》，在室溫攪拌過夜；粗反應以飽和碳酸氫鈉溶液和硫代硫酸鈉(Na₂S₂O₃)溶液稀釋，再以醋酸乙酯淬取2次；將水層用飽和碳酸氫鈉水溶液鹼化並以醋酸乙酯淬取，得到(5R)-5-(2-氯-5-氟吡啶-3-基)吡咯烷-3-基醋酸鹽((5R)-5-(2-chloro-5-fluoropyridin-3-yl)pyrrolidin-3-yl acetate)《5.9公克，22.81毫莫耳，生成率：93%》，為一個黃色的油。LCMS：259 M+H。

步驟6：(2R)-特-丁基4-乙醯氧基-2-(2-氯-5-氟吡啶-3-基)吡咯烷-1-羧酸鹽((2R)-tert-butyl 4-acetoxy-2-(2-chloro-5-fluoropyridin-3-yl)pyrrolidine-1-carboxylate)

一個(5R)-5-(2-氯-5-氟吡啶-3-基)吡咯烷-3-基醋酸鹽((5R)-5-(2-chloro-5-fluoropyridin-3-yl)pyrrolidin-3-yl acetate)《5.9公克，22.81毫莫耳》在二噁烷《76毫升》和水《76毫升》中的溶液，加入二碳酸二特-丁基酯(BOC-anhydride；Di-tert-butyl dicarbonate)《7.94毫升，34.2毫莫耳》，然後小心地加入2當量濃度(N)的氫氧化鈉《7毫升》，使酸鹼值達到9；在室溫攪拌反應混合物1小時，用水稀釋反應混合物，再以醋酸乙酯淬取3次；將有機層通過硫酸鈉乾燥，然後在真空下移除溶劑，得到(2R)-特-丁基4-乙醯氧基-2-(2-氯-5-氟吡啶-3-基)吡咯烷-1-羧酸鹽((2R)-tert-butyl 4-acetoxy-2-(2-chloro-5-fluoropyridin-3-yl)pyrrolidine-1-carboxylate)《3.5公克，9.75毫莫耳，生成率：42.8%》，並且不再進一步純化就應用。LCMS：359 M+H。

步驟7：(2R)-特-丁基2-(2-氯-5-氟吡啶-3-基)-4-羥基吡咯烷-1-羧酸鹽((2R)-tert-butyl 2-(2-chloro-5-fluoropyridin-3-yl)-4-hydroxypyrrolidine-1-carboxylate)

將(2R)-特-丁基4-乙醯氧基-2-(2-氯-5-氟吡啶-3-基)吡咯烷-1-羧酸鹽((2R)-tert-butyl 4-acetoxy-2-(2-chloro-5-fluoropyridin-3-yl)pyrrolidine-1-carboxylate)《3.5公克，9.75毫莫耳》放入甲醇《48.8毫升》中，然後加入2莫耳濃度的氫氧化鈉《5.37毫升，10.73毫莫耳》，在室溫攪拌反應混合物2小時；在真空下移除溶劑，並將水層以1當量濃度的鹽酸中和，再以醋酸乙酯淬取3次；合併的有機層通過硫酸鈉乾燥，在真空下移除溶劑，賸餘物以矽凝膠色層分析《0-70% 己烷/醋酸乙酯》純化，得到(2R)-特-丁基2-(2-氯-5-氟吡啶-3-基)-4-羥基吡咯烷-1-羧酸鹽((2R)-tert-butyl 2-(2-chloro-5-fluoropyridin-3-yl)-4-hydroxypyrrolidine-1-carboxylate)《2.1公克，6.63毫莫耳，生成率：68.0%》。LCMS：317 M+H。

步驟8：(R)-特-丁基2-(2-氯-5-氟吡啶-3-基)-4-氧代吡咯烷-1-羧酸鹽((R)-tert-butyl 2-(2-chloro-5-fluoropyridin-3-yl)-4-oxopyrrolidine-1-carboxylate)

將(2R)-特-丁基2-(2-氯-5-氟吡啶-3-基)-4-羥基吡咯烷-1-羧酸鹽((2R)-tert-butyl 2-(2-chloro-5-fluoropyridin-3-yl)-4-hydroxypyrrolidine-1-carboxylate)《2.1公克，6.63毫莫耳》放入二氯甲烷《66.3毫升》和碳酸氫鈉《0.557公克，6.63毫莫耳》中，然後加入戴斯-馬丁氧化劑(Dess-Martin periodinane)《8.44公克，19.89毫莫耳》，攪拌反應混合物整夜；然後加入水《0.119毫升，6.63毫莫耳》，接著加入戴斯-馬丁氧化劑(Dess-Martin periodinane)《8.44公克，19.89毫莫耳》，並攪拌18小時；用飽和碳酸氫鈉溶液調整酸鹼值達到7，再以二氯甲烷淬取3次，合併有機層，通過硫酸鈉乾燥，在真空下移除溶劑，賸餘物經快速色層分析(flash chromatography)《0-70%己烷/醋酸乙酯》純化，生成(R)-特-丁基2-(2-氯-5-氟吡啶-3-基)-4-氧代吡咯烷-1-羧酸鹽((R)-tert-butyl 2-(2-chloro-5-fluoropyridin-3-yl)-4-oxopyrrolidine-1-carboxylate)《1.6公克，5.08毫莫耳，生成率：77%》。LCMS：315 M+H。

步驟9：(2R,4R)-特-丁基2-(2-氯-5-氟吡啶-3-基)-4-羥基吡咯烷-1-羧酸鹽((2R,4R)-tert-butyl 2-(2-chloro-5-fluoropyridin-3-yl)-4-hydroxypyrrolidine-1-carboxylate)

將(R)-特-丁基2-(2-氯-5-氟吡啶-3-基)-4-氧代吡咯烷-1-羧酸鹽((R)-tert-butyl 2-(2-chloro-5-fluoropyridin-3-yl)-4-oxopyrrolidine-1-carboxylate)《1.6公克，5.08毫莫耳》懸浮於乙醇(ethanol)《33.9毫升》中並冷卻至0℃，分批地加入硼氫化鈉(NaBH₄)《0.096公克，2.54毫莫耳》並在0℃攪拌45分鐘；用飽和氯化銨慢慢淬熄反應，再加溫至室溫，然後用二氯甲烷淬取溶液3次，合併有機層，通過硫酸鈉乾燥，賸餘物經快速色層分析法《0-70%己烷/醋酸乙酯》加以純化，得到(2R,4R)-特-丁基2-(2-氯-5-氟吡啶-3-基)-4-羥基吡咯烷-1-羧酸鹽((2R,4R)-tert-butyl 2-(2-chloro-5-fluoropyridin-3-yl)-4-hydroxypyrrolidine-1-carboxylate)《1.446公克，4.57毫莫耳，生成率：90%》。LCMS：317 M+H。

步驟10：(2R,4S)-特-丁基2-(2-氯-5-氟吡啶-3-基)-4-氟吡咯烷-1-羧酸鹽((2R,4S)-tert-butyl 2-(2-chloro-5-fluoropyridin-3-yl)-4-fluoropyrrolidine-1-carboxylate)

(2R,4R)-特-丁基2-(2-氯-5-氟吡啶-3-基)-4-羥基吡咯烷-1-羧酸鹽((2R,4R)-tert-butyl 2-(2-chloro-5-fluoropyridin-3-yl)-4-hydroxypyrrolidine-1-carboxylate)《1.0公克，3.16 毫莫耳》放入二氯甲烷《25毫升》中並冷卻至-78℃，加入三乙胺-氫氟酸(TEA-HF)《1.098毫升，9.47毫莫耳》並攪拌10分鐘；加入(二乙氨基)二氟鋶鎓四氟硼酸鹽(XtalFluor-E；(Diethylamino)difluorosulfonium tetrafluoroborate)1.446公克，6.31毫莫耳》，10分鐘後將反應混合物轉移到一個冰浴中並使其加溫至0℃；經過2小時後，用二氯甲烷稀釋反應混合物，再用飽和碳酸氫鈉水溶液淬熄；分離出有機層，在真空下除去溶劑，賸餘物經由全自動快速色層分離純化系統(ISCO)《0-50%己烷/醋酸乙酯；12公克管柱》純化，得到(2R,4S)-特-丁基2-(2-氯-5-氟吡啶-3-基)-4-氟吡咯烷-1-羧酸鹽((2R,4S)-tert-butyl 2-(2-chloro-5-fluoropyridin-3-yl)-4-fluoropyrrolidine-1-carboxylate)《0.805公克，2.53毫莫耳，生成率：80%》，為一個白色固體。LCMS：319 M+H。

步驟11：2-氯-5-氟-3-((2R,4S)-4-氟吡咯烷-2-基)吡啶，鹽酸鹽(2-chloro-5-fluoro-3-((2R,4S)4-fluoropyrrolidin-2-yl)pyridine,HCl)

(2R,4S)-特-丁基2-(2-氯-5-氟吡啶-3-基)-4-氟吡咯烷-1-羧酸鹽((2R,4S)-tert-butyl 2-(2-chloro-5-fluoropyridin-3-yl)-4-fluoropyrrolidine-1-carboxylate)《0.805公克，2.53毫莫耳》放入醋酸乙酯《5毫升》中，然後加入4當量濃度的鹽酸/二噁烷(HCl/dioxane)《3毫升》，在室溫攪拌反應混合物1小時；過濾出沉澱，用乙醚(ether)洗滌，並在高真空下乾燥整夜，得到2-氯-5-氟-3-((2R,4S)-4-氟吡咯烷-2-基)吡啶，鹽酸鹽(2-chloro-5-fluoro-3-((2R,4S)-4-fluoropyrrolidin-2-yl)pyridine,HCl)《0.612公克，2.399毫莫耳，生成率：76%》，係一個白色固體。LCMS：219 M+H。

5-氟-3-((2R,4S)-4-氟吡咯烷-2-基)-2-甲氧基吡啶(5-fluoro-3-((2R,4S)-4-fluoropyrrolidin-2-yl)-2-methoxypyridin)

5-氟-3-((2R,4S)-4-氟吡咯烷-2-基)-2-甲氧基吡啶的製備係與3-氟-5-((2R,4S)-4-氟吡咯烷-2-基)苯甲醯胺(3-fluoro-5-((2R,4S)-4-fluoropyrrolidin-2-yl)benzamide)的製備方法相同，以5-氟-2-甲氧基煙醛(5-fluoro-2-methoxynicotinaldehyde)取代2-氯-5-氟煙醛(2-chloro-5-fluoronicotinaldehyde)。

3-氟-5-((2R,4S)-4-氟吡咯烷-2-基)苯磺醯胺(3-fluoro-5-((2R,4S)-4-fluoropyrrolidin-2-yl)benzenesulfonamide) 步驟1：(2R,4S)-2-(3-(苄硫基)-5-氟苯基)-1-(特-丁基磺醯基)-4-氟吡咯烷((2R,4S)-2-(3-(benzylthio)-5-fluorophenyl)-1-(tert-butylsulfonyl)-4-fluoropyrrolidine)

一個(2R,4S)-2-(3-溴-5-氟苯基)-1-(特-丁基磺醯基)-4-氟吡咯烷((2R,4S)-2-(3-bromo-5-fluorophenyl)-1-(tert-butylsulfonyl)-4-fluoropyrrolidine)《1.00公克，2.62毫莫耳，1.00當量》在二噁烷《3.00毫升》的混合物，加入特丁醇鈉(t-BuONa；Sodium tert-butoxide)《502.80毫克，5.23毫莫耳，2.00當量》、苯基甲硫醇(phenylmethanethiol)《649.82毫克，5.23毫莫耳，613.04微升，2.00 當量》、4,5-雙二苯基膦-9,9-二甲基氧雜蒽(Xantphos；4,5-Bis(diphenylphosphino)-9,9-dimethylxanthene)《151.37毫克，261.60微莫耳，0.10當量》和三個(二亞苄基丙酮)二鈀(Pd₂(dba)₃；Tris(dibenzylideneacetone)dipalladium)《239.55毫克，261.60微莫耳，0.10當量》，加入後，在80℃於氮氣環境下攪拌混合物16小時，濃縮混合物，生成粗產物，混合物以矽凝膠上的管柱色層分析《聚乙烯：乙酸乙酯=20：1~8：1》加以純化，得到(2R,4S)-2-(3-(苄硫基)-5-氟苯基)-1-(特-丁基磺醯基)-4-氟吡咯烷((2R,4S)-2-(3-(benzylthio)-5-fluorophenyl)-1-(tert-butylsulfonyl)-4-fluoropyrrolidine)《700.00毫克，1.64毫莫耳，生成率：62.78%》，係一個紅色的油。

步驟2：3-((2R,4S)-1-(特-丁基磺醯基)-4-氟吡咯烷-2-基)-5-氟苯磺醯胺(3-((2R,4S)-1-(tert-butylsulfonyl)-4-fluoropyrrolidin-2-yl)-5-fluorobenzenesulfonamide)

一個(2R,4S)-2-(3-(苄硫基)-5-氟苯基)-1-(特-丁基磺醯基)-4-氟吡咯烷((2R,4S)-2-(3-(benzylthio)-5-fluorophenyl)-1-(tert-butylsulfonyl)-4-fluoropyrrolidine)《700.00毫克，1.64毫莫耳，1.00當量》在二氯甲烷《16.00毫升》/乙酸(AcOH；Acetic acid)《8.00毫升》/水《4.00毫升》的混合物，在0℃，使一個穩定氯氣氣流在混合物中連續不絕地冒泡6分鐘，噴灑氮氣6分鐘使反應混合物消散；然後將產生的氯化雙-磺醯基(bis-sulfonyl chloride)用過量一水合氨(氨水)(NH₃ ^．H₂O)處理直到水相的酸鹼值為9-10並加溫至25℃，再攪拌16小時；液相色層分析-質譜分析顯示反應已完畢時，用二氯甲烷淬取混合物《20毫升，3次》，濃縮有機層，得到3-((2R,4S)-1-(特-丁基磺醯基)-4-氟吡咯烷-2-基)-5-氟苯磺醯胺(3-((2R,4S)-1-(tert-butylsulfonyl)-4-fluoropyrrolidin-2-yl)-5-fluorobenzenesulfonamide)《600.00毫克，粗產物》，係一個黃色的油。

步驟3：3-氟-5-((2R,4S)-4-氟吡咯烷-2-基)苯磺醯胺(3-fluoro-5-((2R,4S)-4-fluoropyrrolidin-2-yl)benzenesulfonamide)

一個三氟甲磺酸(TfOH；Trifluoromethanesulfonic acid)《706.35毫克，4.71毫莫耳，415.50微升，3.00當量》在二氯甲烷(DCM)《20.00毫升》中的混合物，在-40℃，加入大茴香醚(苯甲醚)(anisole)《254.48毫克，2.36毫莫耳，254.48微升，1.50當量》，然後在-40℃經過0.1小時將一個3-((2R,4S)-1-(特-丁基磺醯基)-4-氟吡咯烷-2-基)-5-氟苯磺醯胺(3-((2R,4S)-1-(tert-butylsulfonyl)-4-fluoropyrrolidin-2-yl)-5-fluorobenzenesulfonamide)《600.00毫克，1.57毫莫耳，1.00當量》在二氯甲烷(DCM)《10.00毫升》的溶液逐滴地加到前述混合物中，加入後，將混合物加溫至25℃，在25℃攪拌1小時；薄層色層分析《聚乙烯(PE)：醋酸乙酯(EtOAc)=1：1》顯示起始原料已消耗完畢，將飽和碳酸鉀水溶液(Saturated aq.K₂CO₃)《100毫升》加入混合物中並攪拌0.1小時，混合物用二氯甲烷淬取《10毫升，3次》，然後濃縮有機層，得到3-氟-5-((2R,4S)-4-氟吡咯烷-2-基)苯磺醯胺(3-fluoro-5-((2R,4S)-4-fluoropyrrolidin-2-yl)benzenesulfonamide)《300.00毫克，粗產物》，係一個黃色的油。

此處揭示之化合物的核磁共振波譜(NMR)和液相色層分析-質譜分析(LC-MS)數據也顯示於下。

1毫莫耳濃度腺嘌呤核甘三磷酸的原生型神經促進性酪氨酸受體激酶1之試驗

一個有384個試驗井(384-well)的試驗盤的每一個試驗井中，1微莫耳濃度(nM)-1.5微莫耳濃度的神經促進性酪氨酸受體激酶1(NTRK1)的酵素《BPS生物科技公司(BPS Bioscience)；40280》放在一個帶有1微莫耳濃度(μM)CSKtide《塔夫斯大學(Tuft’s University)或Anaspec公司；EITC-AHA-KKKKD DIYFFFG-NH2》和1毫莫耳濃度腺嘌呤核甘三磷酸(ATP；adenosine triphosphate)的總數為12.5微升的緩衝液《100毫莫耳濃度的4-羥乙基哌嗪乙磺酸(HEPES；4-(2-Hydroxyethyl)-1-piperazineethanesulfonic acid)、酸鹼值7.5；0.015%布里杰35《十二烷基聚乙二醇醚》(BriJ35；Polyoxyethylene Lauryl Ether)；10毫莫耳濃度的氯化鎂；1毫莫耳濃度的二硫蘇糖醇(DTT；Dithiothreitol)》中，於一個劑量濃度系列的化合物《1%二甲基亞碸(DMSO)最終濃度》之存在或不存在情形下，在25℃孵育(incubate)60分鐘；反應的中止係藉由加入70微升的停止緩衝液(Stop buffer)《100毫莫耳濃度的4-羥乙基哌嗪乙磺酸、酸鹼值7.5；0.015%布里杰35；35毫莫耳濃度的乙二胺四乙酸(EDTA；Ethylene diamine tetraacetic acid)；和0.2%的塗覆試劑3(Coating Reagent 3)(卡尺生命科學公司)》；然後在一個卡尺公司便利閱讀器2(Caliper EZReader 2)《協議設定：-1.7帕(psi)；上行電壓：-500；下行電壓：-3000；提交樣本量：35s》上讀取試驗盤，將數據正常化為0%至100%抑制控制(inhibition controls)，並用一個切合核心實驗室資訊管理系統(CORE LIMS)的4-參數來計算半數抑制濃度(IC₅₀)。

神經促進性酪氨酸受體激酶原生型和G595R突變體之細胞學試驗計畫方案

從美國國家癌症研究所(National Cancer Institute(NCI))取得包藏有肌原纖維蛋白質3-神經促進性酪氨酸受體激酶1(TPM3(Tropomyosin 3) -NTRK1(neurotrophic tyrosine receptor kinase 1))融合蛋白質(fusion protein)的昆明小鼠12原生型大腸癌細胞系(KM12 wild type colon carcinoma cell line)，此細胞系先前已顯示依賴神經促進性酪氨酸受體激酶活性，該活性係源於供生長和存活的神經促進性酪氨酸受體激酶融合蛋白質。昆明小鼠12可里夫(KM12 Cliff)《G595R》細胞系的生成係用一個去氧核醣核酸(DNA；Deoxyribonucleic Acid)甲基化劑(methylating agent)誘變原生型昆明小鼠12細胞系產生突變，然後選取慢性暴露於一個高濃度的已知的神經促進性酪氨酸受體激酶抑制劑《克里替尼(Crizotinib)》有抵抗性者作群殖(clones)。

首先以每個有完全培養基(complete media)《10%胎牛血清(FBS；fetal bovine serum)和1%青黴素/鏈黴素(pen/strep；Penicillin/Streptomycin)》試驗井1000個細胞的方式將細胞放入有384個試驗井(384-well)的試驗盤，並在37℃孵育整夜，然後用布拉沃液體分注系統(Bravo liquid handling system)給予細胞不同濃度的試驗檢品，濃度範圍從25微莫耳濃度(uM)下降至9.5微微莫耳濃度(pM)《4重稀釋(4-fold dilutions)，總共10濃度》，每個試驗井的每一個化合物都一式二份地進行，二甲基亞碸(DMSO)和星形孢菌素(staurosporine)《25微莫耳濃度》包括在每一個試驗盤上作為生長抑制的負向和正向控制；給藥後72小時，用CellTiter-Glo《Promega公司》檢測試驗盤已發展，生成的冷光(luminescence)在Envision讀盤儀(Envision plate reader)讀取，用切合演算法(algorithm)的一個4-參數曲線(4-parameter curve)來確定半數抑制濃度(IC₅₀)。

下表摘要出前述生物學試驗的結果，以下代號係用於說明活性：A<10.00奈莫耳濃度(nM)；B=10.01-100.0奈莫耳濃度；C=100.01-1000.0奈莫耳濃度；及D>1000.1奈莫耳濃度。

參引合併

此處所述之所有出版發表和專利其全部於此併入做為參考，猶如每一個獨立的出版發表或專利係獨特地和個別地被指示併入做為參考。

等效物

本領域所屬技術人員，至多使用常規實驗，可以認知、或能夠確知此處所描述之本發明的特殊具體模式例的許多等效物(equivalents)，這些等效物也將被包含在以下申請專利範圍。

Claims

一種式(Ib)化合物或其藥劑學上可接受的鹽類，其中：
一個R^A是鹵代且一個R^A是苯基或單環雜芳基，其中每一個苯基及單環雜芳基係獨立地以0-5個R^a取代；每一個R^a係獨立地選自鹵代(halo)、氰基(cyano)、羥基(hydroxyl)、C₁-C₆烷基(alkyl)、C₁-C₆烷氧基(alkoxy)、C₁-C₆鹵代烷氧基(haloalkoxyl)、-N(R’’)(R’’)、-C(O)-N(R’’)(R’’)、-N(R’’)-C(O)R’、和-(C₁-C₆亞烷基)-N(R’’)-C(O)R’；每一個R’和R’’係獨立地選自氫、C₁-C₆烷基及C₁-C₆羥基烷基；其中該單環雜芳基包含1、2、3或4個選自N、O或S之環雜原子。
如請求項1之化合物或其藥劑學上可接受的鹽類，其中一個R^A是單環雜芳基。
如請求項1之化合物或其藥劑學上可接受的鹽類，其中一個R^A是吡啶基。
如請求項1之化合物或其藥劑學上可接受的鹽類，其中一個R^A是苯基。
一種選自下表所列之任一者之化合物及其藥劑學上可接受的鹽類，
一種選自下表所列之任一者之化合物及其藥劑學上可接受的鹽類，
一種具有以下結構式之化合物及其藥劑學上可接受的鹽類，
一種具有以下結構式之化合物及其藥劑學上可接受的鹽類，
一種具有以下結構式之化合物及其藥劑學上可接受的鹽類，
一種具有以下結構式之化合物及其藥劑學上可接受的鹽類，
一種具有以下結構式之化合物及其藥劑學上可接受的鹽類，
一種藥劑組成物，其包含如請求項1至11中任一項之化合物或其藥劑學上可接受的鹽類和藥劑學上可接受的載體。
一種如請求項1至11中任一項之化合物或其藥劑學上可接受的鹽類或組合物之用途，其係用於製備抑制細胞或病人中的神經促進性酪氨酸受體激酶(NTRK)活性之藥劑。
一種如請求項1至11中任一項之化合物或其藥劑學上可接受的鹽類或組合物之用途，其係用於製備治療因畸變神經促進性酪氨酸受體激酶活性(aberrant NTRK activity)所導致之狀況的個體之藥劑。
一種如請求項1至11中任一項之化合物或其藥劑學上可接受的鹽類或組合物之用途，其係用於製備治療已經對癌症治療發生抵抗性的個體之藥劑。
一種如請求項1至11中任一項之化合物或其藥劑學上可接受的鹽類或組合物之用途，其係用於製備治療以下癌症之藥劑：非小細胞肺癌、乳癌、黑色素瘤、低惡性和高惡性神經膠質瘤、神經膠母細胞瘤、小兒星細胞瘤、大腸直腸癌、甲狀腺癌、胰臟癌、膽管癌、頭頸部癌、原發性中樞神經系統腫瘤、膽管癌、急性骨髓性白血病、唾液腺癌、惡性肉瘤或斯皮茨腫瘤(spitzoid neoplasms)。