TWI728264B - 控制蚊媒傳染疾病傳播之微生物製劑 - Google Patents
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Abstract
本發明提供一種多肽鏈，包括一段具有類胰蛋白酶酵素(trypsin like protease)切位之胺基酸序列，以供蚊蟲腸道消化，以及兩端用以穩定該胺基酸序列之短肽，其中，該段胺基酸序列至少包括一離胺酸(K)或一精胺酸(R)。本發明另係關於利用該多肽鏈將一蚊蟲毒殺蛋白表現於細菌載體之細胞膜上的一種控制蚊媒傳染疾病傳播之微生物製劑，包括一細菌載體、一本發明之多肽鏈、以及一殺蚊蛋白。
Description
本發明涉及一種微生物製劑，尤其係指一種用於控制蚊媒傳染疾病傳播之微生物製劑。
臺灣、中國、東南亞國家或其他地處熱帶及亞熱帶氣候區的國家，因蚊蟲肆虐而容易造成如日本腦炎、茲卡病毒或登革熱等蚊媒傳染疾病之流行。以登革熱為例，我國已於民國93年就將登革熱列為第二類傳染病，在過去10年中，我國每年都有800件到10000件不等的登革熱確診病例，而在2015年，登革熱確診病例更上升到4萬多件，雖現今醫療發達，加上政策實施得當，登革熱病例正在逐漸減少中，但隨著全球暖化的影響，蚊蟲得以大量繁殖的區域正在逐漸擴散，以我國疾病管制署公告之統計表顯示，2017年開始，大臺北地區登革熱確診的病例數已經開始高於臺南及高雄了。
針對環境驅蚊的方式大多採用大範圍噴藥的方式，一者，殺蟲藥劑為化學產物，對環境影響甚大；二者，孑孓好生長於水中，噴灑殺蟲藥劑間接污染了水質，民眾的生活用水品質及健康影響堪慮，開發環境友善的殺蚊方法自是當務之急。目前全世界皆致力於生物防治工作，主張以生物的食物鏈及天敵的相對關係來防治害蟲，本發明便係以食物鏈的概 念設計一種可以讓孑孓於攝食當中，將蚊蟲毒殺蛋白一併攝入，並達到殺滅蚊蟲的效果。
過去研究已經指出，芽孢桿菌屬的蘇雲金芽孢桿菌(Bacillus thuringiensis)及球形芽孢桿菌(Bacillus sphaericus)本身具有可殺死蚊蟲的蚊蟲毒殺蛋白，也有一些利用蘇雲金芽孢桿菌作成的的殺蟲劑，但其缺點在於1.蘇雲金芽孢桿菌並非環境益生菌，2.蘇雲金芽孢桿菌僅在孢期才具有殺蚊的特性、3.蘇雲金芽孢桿菌製劑本身沒有複製的能力，故，本發明提供了一個新的構想，利用一段可被孑孓腸道酵素消化之多肽鏈，將蚊蟲毒殺蛋白表現在環境益生菌的細胞膜的胞膜結合蛋白上，利用該細菌載體在環境中具有自我增殖的特性，使得殺蟲劑具有複製性，且該蚊蟲毒殺蛋白可以更快又更有效率地被釋放。
本發明所述之「短肽」係指3至9個胺基酸序列之短肽鏈。
本發明之精神在於提供一種微生物製劑之平台，並表現一蚊蟲毒殺蛋白在細菌載體之上，其中，該細菌載體及該蚊蟲毒殺蛋白依其目的之不同而有不同之選擇。
本發明之目的係提供一種環境友善之控制蚊媒傳染疾病之傳播的新穎微生物製劑，其主要概念係利用一環境微生物當作載體，並表現一蚊蟲毒殺蛋白於其細胞膜上。
本發明之主要技術特徵之一為一種多肽鏈，包括一段具有類胰蛋白酶酵素(trypsin like protease)切位之胺基酸序列，以供蚊蟲腸道消化，以及兩端之短肽，用以穩定該胺基酸序列。其中，該胺基酸序列至少 包括一離胺酸(K)或一精胺酸(R)。
本發明之另一主要技術特徵係利用該多肽鏈將蚊蟲毒殺蛋白連接於細菌載體之細胞膜上的一種控制蚊媒傳染疾病傳播之微生物製劑，包括一細菌載體、一多肽鏈、以及一蚊蟲毒殺蛋白，其中該蚊蟲毒殺蛋白係指殺蚊蛋白。
依據本發明之微生物製劑，於一較佳實施方式中，該細菌載體係為一環境益生菌，包括芽孢桿菌屬(Bacillus)的細菌、光合細菌及硝化細菌等。
依據本發明之微生物製劑，於一較佳實施方式中，該多肽鏈之該胺基酸序列至少包括一離胺酸(K)或一精胺酸(R)。
依據本發明之微生物製劑，於一較佳實施方式中，該蚊蟲毒殺蛋白係包括第一型殺蚊蛋白(Mosquitocidal Toxin 1)、第二型殺蚊蛋白(Mosquitocidal Toxin 2)、第三型殺蚊蛋白(Mosquitocidal Toxin 3)、Cry蛋白(Cry family proteins)、Cyt蛋白(Cyt family proteins)、CLP蛋白(Cyclic lipopeptide protein)或其之任意組合。
依據本發明之微生物製劑，於一更佳實施方式中，該蚊蟲毒殺蛋白係第二型殺蚊蛋白(Mosquitocidal Toxin 2)，其中，當該蚊蟲毒殺蛋白係截短修飾後的第二型殺蚊蛋白(truncated Mosquitocidal Toxin 2)時，其效果更佳。
依據本發明之微生物製劑，於一較佳實施方式中，該多肽鏈係接合於該細菌載體之細胞膜上的胞膜結合蛋白上，其中，該胞膜結合蛋白依據細菌載體不同而有不同之選擇，如於大腸桿菌(E.coli)上，則該胞 膜結合蛋白可選擇AIDA蛋白或OmpA蛋白；若於枯草桿菌(B.subtilis)之上，則該胞膜結合蛋白可選擇YhcR蛋白。
本發明之主要技術特徵又包含了一重組基因，包括可轉錄出該微生物製劑之一胞膜結合蛋白基因、一多肽鏈基因、及一蚊蟲毒殺蛋白基因，其中，該多肽鏈基因係設置於該胞膜結合蛋白基因及該蚊蟲毒殺蛋白基因之間。
依據本發明之重組基因，於一較佳實施方式中，該多肽鏈基因具有一類胰蛋白酶酵素(trypsin like protease)切位之胺基酸序列之基因，其中該胺基酸序列之基因至少包括一離胺酸(K)或一精胺酸(R)之基因。
依據本發明之重組基因，於一較佳實施方式中，該蚊蟲毒殺蛋白的基因係包括第一型殺蚊蛋白(Mosquitocidal Toxin 1)基因、第二型殺蚊蛋白(Mosquitocidal Toxin 2)基因、第三型殺蚊蛋白(Mosquitocidal Toxin 3)基因、Cry蛋白(Cry family proteins)基因、Cyt蛋白(Cyt family proteins)基因、CLP蛋白(Cyclic lipopeptide protein)基因或其之任意組合。
依據本發明之微生物製劑，於一更佳實施方式中，該蚊蟲毒殺蛋白係第二型殺蚊蛋白(Mosquitocidal Toxin 2)基因，其中，當該蚊蟲毒殺蛋白係截短修飾後的第二型殺蚊蛋白(truncated Mosquitocidal Toxin 2)基因時，其效果更佳。
依據本發明之微生物製劑，於一較佳實施方式中，該胞膜結合蛋白基因依據細菌載體不同而有不同之選擇，如於大腸桿菌(E.coli)上，則該胞膜結合蛋白基因可選擇AIDA蛋白基因或OmpA蛋白基因；若於枯草桿菌(B.subtilis)之上，則該胞膜結合蛋白可選擇YhcR蛋白基因。
本發明之微生物製劑於控制蚊媒傳染疾病之用途，其係利用投以適量之本發明於水中，由於蚊子的幼蟲-孑孓係生長於水中，尤其係不流動的水，故將適量之本發明之微生物製劑投於水中，則孑孓於進食的同時，就會將本發明之微生物製劑攝入，經其腸道酵素分解該多肽鏈之後，蚊蟲毒殺蛋白隨之釋放，進而達到殺蚊以控制蚊媒傳染疾病之目的。
10‧‧‧控制蚊媒傳染疾病傳播之微生物製劑
101‧‧‧細菌載體
102‧‧‧胞膜結合蛋白
103‧‧‧多肽鏈
104‧‧‧蚊蟲毒殺蛋白
20‧‧‧孑孓
201‧‧‧孑孓的腸道酵素
圖1為本發明之實施態樣圖。
圖2為本發明用於大腸桿菌(E.coli)表現系統試驗之融合蚊蟲毒殺蛋白基因的重組基因組，KM4重組基因為本發明之重組基因實驗組1；KM6重組基因為不含有多肽鏈基因(以GGGSG取代之)的實驗組2；KM3重組基因為不含多肽鏈基因及胞膜蛋白基因的對照組。
圖3為本發明用於大腸桿菌(E.coli)表現系統試驗之融合蚊蟲毒殺蛋白的重組蛋白表現結果，左圖為SDS-PAGE的結果，右圖為以鼠源抗GST tag的一級抗體進行西方墨點法的結果。
圖4為本發明於大腸桿菌(E.coli)表現系統中對於埃及斑紋幼蟲之毒殺性結果，圖A為KM4及KM6進入幼蟲體內的實施態樣圖，圖B為KM4及KM6的毒殺試驗結果。
圖5為本發明用於枯草桿菌(B.subtilis)表現試驗之融合蚊蟲毒殺蛋白的枯草桿菌表現系統重組基因。
圖6為本發明用於枯草桿菌(B.subtilis)表現試驗之融合蚊蟲毒殺蛋白的枯草桿菌表現系統重組蛋白表現結果。
本發明提供一種控制蚊媒傳染疾病傳播之微生物製劑，包括一細菌載體、一多肽鏈、以及一蚊蟲毒殺蛋白，其中，該細菌載體、該多肽鏈及該蚊蟲毒殺蛋白係依據不同目的不同物種而加以變更，例如本發明之最佳實施方式係利用一環境微生物來控制登革熱之傳播，而登革熱係由蚊蟲傳播，其幼蟲係生長於水中的孑孓；又，枯草桿菌(B.subtilis)係常用於調整水質之環境益生菌，故，該環境益生菌選用枯草桿菌(B.subtilis)，該多肽鏈選用一段具有可被蚊蟲腸道酵素消化之切位之胺基酸序列，該蚊蟲毒殺蛋白選用殺蚊蛋白。
如圖1所示，本發明旨在建立一種控制登革熱傳播之微生物製劑10，其包括一細菌載體101、一可被孑孓腸道酵素消化之多肽鏈103、以及一蚊蟲毒殺蛋白104，其中，該蚊蟲毒殺蛋白104係藉由該多肽鏈103表現於該細菌載體101之胞膜結合蛋白102上。當孑孓20自環境中進食的同時，就會將本發明之微生物製劑一併攝入，經孑孓的腸道酵素201分解該多肽鏈103之後，該蚊蟲毒殺蛋白104隨之釋放而達到殺蚊以控制登革熱傳播之目的。
依據本發明之微生物製劑，其實施方式如下：
1. 建構大腸桿菌(E.coli)表現系統之融合蚊蟲毒殺蛋白重組基因的表現質體
本發明首先建構可於大腸桿菌(E.coli)中表現之融合蚊蟲毒殺蛋白基因的表現質體，包含一重組基因及一表現質體，以利實驗室試驗用。
本發明之該重組基因的蚊蟲毒殺蛋白基因係選用截短修飾 後的來自於31-2型球形芽孢桿菌的第二型殺蚊蛋白(truncated Mosquitocidal Toxin 2；tMTX2)基因，並將該重組基因克隆(clone)至pET42b表現質體內。請參照圖2，本發明植入之重組基因，其5’端接入GST tag基因、3’端接入AIDA胞膜蛋白基因，並於tMTX2基因及AIDA基因之間設計一段用以表現包含SEQ ID NO.1之多肽鏈(GGG-KRWY-GGG)的基因，該多肽鏈基因具有可被蚊蟲腸道消化的類胰蛋白酶酵素(trypsin like protease)切位之胺基酸序列之基因及兩端用以穩定該多肽鏈之短肽基因，稱之為KM4重組基因(實驗組1)，同時並另外設計了不含有該多肽鏈基因(以GGGSG取代GGG-KRWY-GGG)的KM6重組基因(實驗組2)、及不含該多肽鏈基因及胞膜蛋白基因的KM3重組基因(對照組)。
2. 大腸桿菌(E.coli)表現系統之融合蚊蟲毒殺蛋白的重組蛋白表現
將KM3、KM4及KM6重組基因的融合蚊蟲毒殺蛋白表現質體分別轉型(Transform)入BL21(DE3)型大腸桿菌(E.coli)表現載體中，以LB培養液培養至細菌濃度吸光值達OD600nm約為0.4時，開始加入0.1mM的異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(Isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside；IPTG)誘導(induction)培養，進行蛋白質表現，生產出KM3、KM4及KM6重組蛋白。因為KM3、KM4及KM6的蛋白質大小不同，因此在誘導時分別為KM3誘導0.5小時、KM4誘導3小時及KM6誘導1小時，以求蛋白表現量一致。其後，以SDS-PAGE及西方墨點法進行蛋白質驗證，如圖3所示，左圖為SDS-PAGE的結果，右圖為以鼠源抗GST tag的一級抗體進行西方墨點法的結果。結果顯示，KM4(SEQ ID NO.3)及KM6(SEQ ID NO.4)的表現蛋 白大小分別為預期的108kDa(千道爾吞)，而KM3(SEQ ID NO.2)的表現蛋白大小為預期的58kDa。
3. tMTX2-AIDA表現之BL21(DE3)型大腸桿菌(E.coli)對於埃及斑紋幼蟲之毒殺性測試
經蛋白表現確認之後，KM4及KM6分別用於埃及斑紋幼蟲之毒殺性測試，其中，如圖4A所示，KM4具有本發明之該多肽鏈，其tMTX2可被蚊蟲腸道酵素切割分離，KM6之tMTX2則不可被蚊蟲腸道酵素切割分離。
如圖4b所示，KM4組及KM6組以不同濃度(105cells/ml-108cells/ml)與埃及斑紋幼蟲培養60個小時(n=5，獨立且重複3次試驗)後，測量其死亡率，並以未轉型的BL21(DE3)型大腸桿菌(E.coli)(同樣在濃度為OD600nm約為0.4時，以IPTG誘導培養3小時)當作對照組。結果顯示，相較於控制組，KM4與KM6具有明顯的毒殺效果，且KM4的毒殺效果相較於KM6來得更快更有效，且其造成孑孓死亡的半數致死劑量(LC50)大約落在105cells/ml-106cells/ml左右，該結果證明本策略在大腸桿菌(E.coli)的系統上是成功的。
4. 建構枯草桿菌(B.subtilis)表現系統之融合蚊蟲毒殺蛋白重組基因的表現質體
經大腸桿菌(E.coli)表現系統證明本發明是成功的之後，本發明進一步實施於環境益生菌中，其中所選用的環境益生菌為枯草桿菌(B.subtilis)。
本發明之重組基因與大腸桿菌(E.coli)表現系統的建構方 式相同，於殺蚊蛋白(tMTX2)及胞膜結合蛋白之間設計一段用以表現包含SEQ ID NO.1之多肽鏈(GGG-KRWY-GGG)的基因，不同點則係在於，本次使用之重組基因於胞膜結合蛋白基因前多接上一段HA tag基因。由於選用枯草桿菌(B.subtilis)當作細菌載體，故胞膜結合蛋白基因選用YhcR基因，如圖5所示，本次試驗建構兩種不同的重組基因，分別命名為枯草桿菌表現系統重組基因a及枯草桿菌表現系統重組基因b，其中，枯草桿菌表現系統重組基因a可表現「(tMTX 2)-(GGG-KRWY-GGG)-(HA)-(YhcR)」之蛋白(SEQ ID NO.5)，枯草桿菌表現系統重組基因b則係在5’端多加一個GST tag，其可表現「(GST)-(tMTX 2)-(GGG-KRWY-GGG)-(HA)-(YhcR)」之蛋白(SEQ ID NO.6)。二者皆克隆(clone)至pHY300PLK表現質體內。
5. 枯草桿菌(B.subtilis)表現融合蚊蟲毒殺蛋白
將枯草桿菌表現系統重組基因a及枯草桿菌表現系統重組基因b的融合蚊蟲毒殺蛋白表現質體分別轉型(Transform)入枯草桿菌(B.subtilis)載體中表現，以LB培養液培養至細菌濃度吸光值達OD600nm約為0.6時，開始加入1mM的異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(Isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside；IPTG)誘導(induction)培養3小時，進行蛋白質表現。其後，以SDS-PAGE及西方墨點法進行蛋白質驗證，本次試驗的兩種不同重組基因，枯草桿菌表現系統重組基因a轉譯出的枯草桿菌表現系統重組蛋白a之全長共56kDa，枯草桿菌表現系統重組基因b轉譯出的枯草桿菌表現系統重組蛋白b之全長共80kDa。如圖6所示，以鼠源抗HA tag的一級抗體進行西方墨點法的結果顯示，枯草桿菌表現系統重組蛋白a並未產生預期 的56kDa蛋白，反而出現許多缺損的蛋白(約36kDa)，而枯草桿菌表現系統重組蛋白b的表現蛋白大小為預期的80kDa，證明了枯草桿菌表現系統重組蛋白b係相對穩定且被成功表現出來的。
由前述結果可以證實，將tMTX2蛋白透過本發明之多肽鏈表現在細菌載體的胞膜結合蛋白上，確實具有良好的殺滅蚊子幼蟲的效率，且本發明也成功將tMTX2蛋白表現在枯草桿菌(B.subtilis)上，本發明之微生物製劑可同時應用於水質改善及控制蚊媒傳染疾病的傳播。
<110> 高雄醫學大學(Kaohsiung Medical University)
<120> 控制蚊媒傳染疾病傳播之微生物製劑
<130> 3098-KMU-TW
<160> 6
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 4
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Polypeptide
<400> 1
<210> 2
<211> 523
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> KM3
<400> 2
<210> 3
<211> 983
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> KM4
<400> 3
<210> 4
<211> 983
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> KM6
<400> 4
<210> 5
<211> 508
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 枯草桿菌表現系統重組蛋白a
<400> 5
<210> 6
<211> 730
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 枯草桿菌表現系統重組蛋白b
<400> 6
10‧‧‧控制蚊媒傳染疾病傳播之微生物製劑
101‧‧‧細菌載體
102‧‧‧胞膜結合蛋白
103‧‧‧多肽鏈
104‧‧‧蚊蟲毒殺蛋白
20‧‧‧孑孓
201‧‧‧孑孓的腸道酵素
Claims (13)
- 一種供蚊子幼蟲腸道酵素分解之多肽鏈，其係由一段SEQ ID NO.1胺基酸序列以及兩端用以穩定該胺基酸序列之短肽所組成，其中該兩端用以穩定該胺基酸序列之短肽係GGG。
- 一種控制蚊媒傳染疾病傳播之微生物製劑，包括：一細菌載體，其細胞膜上具有至少一胞膜結合蛋白，且該細菌載體不是蘇雲金芽孢桿菌(Bacillus thuringiensis)；一供蚊子幼蟲腸道分解之多肽鏈，其係由一段SEQ ID NO.1胺基酸序列以及兩端用以穩定該胺基酸序列之短肽所組成，且該兩端用以穩定該胺基酸序列之短肽係GGG，其中該多肽鏈係一端接合於該細菌載體之細胞膜的該至少一胞膜結合蛋白上，以供蚊子幼蟲腸道酵素分解；以及一蚊蟲毒殺蛋白，其係藉由接合於該多肽鏈不同於該至少一胞膜結合蛋白的另一端而表現於該細菌載體之上。
- 如請求項2所述之微生物製劑，其中，該細菌載體係為一環境益生菌。
- 如請求項3所述之微生物製劑，其中，該環境益生菌包括芽孢桿菌屬(Bacillus)的細菌、光合細菌及硝化細菌。
- 如請求項2所述之微生物製劑，其中，該蚊蟲毒殺蛋白係包括第一型殺蚊蛋白(Mosquitocidal Toxin 1)、第二型殺蚊蛋白(Mosquitocidal Toxin 2)、第三型殺蚊蛋白(Mosquitocidal Toxin 3)、Cry蛋白(Cry family proteins)、Cyt蛋白(Cyt family proteins)、CLP蛋白(Cyclic lipopeptide protein)或其之任意組合。
- 如請求項2所述之微生物製劑，其中，該蚊蟲毒殺蛋白係第二型殺蚊蛋白(Mosquitocidal Toxin 2)。
- 如請求項2所述之微生物製劑，其中，該蚊蟲毒殺蛋白係截短修飾後的第二型殺蚊蛋白(truncated Mosquitocidal Toxin 2)。
- 如請求項2所述之微生物製劑，其中該細菌載體係選自大腸桿菌或枯草桿菌，且當該細菌載體係大腸桿菌時，則該至少一胞膜結合蛋白係AIDA蛋白；當該細菌載體係枯草桿菌時，則該至少一胞膜結合蛋白係YhcR蛋白。
- 一種重組基因，包括：一胞膜結合蛋白基因，轉譯成如請求項2所述之該細菌載體之細胞膜上的該至少一胞膜結合蛋白，且該細菌載體不是蘇雲金芽孢桿菌(Bacillus thuringiensis)；一多肽鏈基因，轉譯成如請求項2所述之多肽鏈；以及一蚊蟲毒殺蛋白的基因，轉譯成如請求項2所述之蚊蟲毒殺蛋白；其中，該多肽鏈基因係設置於該至少一胞膜結合蛋白基因及該殺蚊蛋白基因之間。
- 如請求項9所述之重組基因，其中，該蚊蟲毒殺蛋白基因係包括第一型殺蚊蛋白(Mosquitocidal Toxin 1)基因、第二型殺蚊蛋白(Mosquitocidal Toxin 2)基因、第三型殺蚊蛋白(Mosquitocidal Toxin 3)基因、Cry蛋白(Cry family proteins)基因、Cyt蛋白(Cyt family proteins)基因、CLP蛋白(Cyclic lipopeptide protein)基因或其之任意組合。
- 如請求項9所述之重組基因，其中，該蚊蟲毒殺蛋白基因係第二型殺蚊蛋白(Mosquitocidal Toxin 2)基因。
- 如請求項9所述之重組基因，其中，該蚊蟲毒殺蛋白基因係截短修飾後的第二型殺蚊蛋白(truncated Mosquitocidal Toxin 2)基因。
- 如請求項9所述之重組基因，其中該細菌載體係選自大腸桿菌或枯草桿菌，且當該細菌載體係大腸桿菌時，則該至少一胞膜結合蛋白係AIDA蛋白的基因；當該細菌載體係枯草桿菌時，則該至少一胞膜結合蛋白係YhcR蛋白的基因。
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|---|---|---|---|---|
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-
2018
- 2018-09-10 TW TW107131752A patent/TWI728264B/zh active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2006012366A2 (en) * | 2004-07-20 | 2006-02-02 | Phyllom Llc | Methods for making and using recombinant bacillus thuringiensis spores |
| WO2010077672A2 (en) * | 2008-12-08 | 2010-07-08 | University Of Florida Research Foundation, Inc. | Control of mosquito larvae with bti toxins and tmof |
Non-Patent Citations (3)
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|---|
| Chan SW et al., "Unusual Amino Acid Determinants of Host Range in the Mtx2 Family of Mosquitocidal Toxins", The Journal of Biological Chemistry, Vol. 271, No. 24, P.14183-14187, 1996/06/14 |
| Olsen JV et al., "Trypsin Cleaves Exclusively C-terminal to Arginine and Lysine Residues" Molecular & Cellular Proteomics, Vol.3, No.6, P.608-614, 2004/03/19 |
| Olsen JV et al., "Trypsin Cleaves Exclusively C-terminal to Arginine and Lysine Residues" Molecular & Cellular Proteomics, Vol.3, No.6, P.608-614, 2004/03/19 Chan SW et al., "Unusual Amino Acid Determinants of Host Range in the Mtx2 Family of Mosquitocidal Toxins", The Journal of Biological Chemistry, Vol. 271, No. 24, P.14183-14187, 1996/06/14 * |
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| Publication number | Publication date |
|---|---|
| TW202010410A (zh) | 2020-03-16 |
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