TWI718104B

TWI718104B - AHU-377結晶型游離酸、半鈣鹽、α-苯乙胺鹽及其製備方法和應用

Info

Publication number: TWI718104B
Application number: TW104128107A
Authority: TW
Inventors: 李響; 張磊; 申志祥; 龔素娟; 徐耀昌; 呂愛鋒
Original assignee: 大陸商上海翰森生物醫藥科技有限公司; 大陸商江蘇豪森藥業集團有限公司
Priority date: 2014-08-27
Filing date: 2015-08-27
Publication date: 2021-02-11
Also published as: TW201625520A; WO2016029828A1; CN106458857A

Abstract

本發明公開了一種NEP抑制劑AHU-377新的結晶形式，其中包括結晶型游離酸、半鈣鹽、α-苯乙胺鹽及其製備方法和應用。改善了AHU-377物化性質。發明技術成熟，可操作性強，所得產品品質高且均一穩定，提高了化學穩定性，利於儲存，具有廣闊的應用前景。

Description

AHU-377結晶型游離酸、半鈣鹽、α-苯乙胺鹽及其製備方法和應用

本發明屬於藥物技術領域，具體涉及一種NEP抑制劑AHU-377結晶型游離酸、半鈣鹽、α-苯乙胺鹽及其製備方法和應用。

中性內肽酶(EC 3.4.24.11；腦啡肽酶；必肽酶；NEP)是一種可以在芳族氨基酸的氨基末端上裂解各種肽底物的包含鋅的金屬蛋白酶。這種酶的底物非限制性地包括心鈉素(ANF，也被稱為ANP)、腦鈉肽(BNP)、met和leu腦啡肽、緩激肽、神經激肽A和P物質。

ANF是一種血管舒張、利尿和抗高血壓的肽類，一種形式--ANF 99-126是在心臟擴張情況中由心臟釋放的迴圈肽激素。ANF的功能是維持鹽和水的體內平衡以及調節血壓。ANF在迴圈中被至少兩個過程迅速滅活：受體-介導的清除和在NEP進行的酶滅活。NEP抑制劑增強了實驗動物進行藥理學ANF注射後的低血壓、利尿、促尿鈉排泄和血漿ANF回應。通過兩種特定的NEP抑制劑進行的ANF的增強，1988年，美國專利US4749688中一般性地公開了可以用NEP來增強ANF。同年，美國專利US4740499中公開了噻奧芬(thiorphan)和凱拉托芬也可以用於增強心房肽的應用。此外，NEP抑制劑可降低血壓和發揮ANF-樣作用如在一些形式的實驗性高血壓中的利尿和增加環鳥苷3’，5’-單磷酸(cGMP)排泄的作用。因為ANF的抗體將抵消血壓的降低，所以NEP抑制劑的抗高血壓作用是通過ANF介導的。長期和不進行控制的高血壓血管疾病最終將導致靶器官如心和腎的各種病理學改變。持續的高血壓也能導致中風的發生率增加。因此，強烈需要對抗高血壓治療的功效進行評估，即對除了血壓降低以外的其他心血管終點事件進行檢查以進一步發現聯合治療的益處。

1993年，Gary Ksander等在美國專利 US5217996中公開了一類聯芳基取代的4-氨基丁酸衍生物，該類化合物被發現具有明顯的NEP抑制活性，其中最具代表性的一個化合物為N-(3-羧基-1-氧代丙基)-(4S)-對-苯基苯基甲基)-4-氨基-2R-甲基丁酸乙酯(又稱AHU-377)。

在實際生產製備過程中AHU-377通常以油、狀物出現，不利於保存及後續藥物開發。AHU-377粗品經第三丁醇酯化、氫氧化鈉堿水解後得到的AHU-377鈉鹽經二氯甲烷/正己烷重結晶後聚集狀態不明，而且經發明人深入研究發現AHU-377鈉鹽吸濕性相當大，物質不穩定且不利於儲存，因此，AHU-377作為藥物活性成分，其產品品質、物質穩定性、儲存或稱量等均存在很大問題，其鈉鹽也沒有解決上述問題，雖然美國專利US5217996和WO2007056546均公開了AHU-377還可以製備成各種鹽型化合物，例如鹼金屬鹽、鹼土金屬鹽、胺鹽、烷基胺鹽、羥烷基胺鹽等，但是，主要還是從AHU-377含有一個羧基的化學結構上推斷得出，並未實際得到各種除鈉鹽之外的其他鹽型化合物，不能解決AHU-377產品品質差、物質不穩定、難以儲存及稱量等問題。

因此，鑒於現有技術存在的問題，有必要對AHU-377開發出一種穩定的游離酸聚集狀態，以符合藥物開發的需要。

此外，該藥的應用物件為有高血壓和心衰類心血管疾病的病人，鈉的攝入也會增加心血管負擔，因此十分有必要將鈉鹽更換成不含鈉離子的鹽型，或其他類對心血管無害或有益的鹽類。因此，鑒於現有技術存在的問題，有必要針對AHU-377或其鈉鹽開發出一種更穩定的游離酸聚集狀態，以符合藥物開發的需要。

鈣離子對心血管的有益作用被廣泛認同，鈣離子降血壓的作用可能由以下機制所致：1、鈣的膜穩定作用，鈣結合在細胞膜上，可降低細胞膜通透性，提高興奮閾，能使血管平滑肌鬆弛；2、鈣自身可阻斷鈣通道，使細胞外的鈣離子不能進入細胞內；3、血鈣高可對抗高鈉所致的排鉀增加，而鉀離子對穩定細胞膜起重要作用。人維持足夠的高鈣攝入，可對抗高鈉的有害作用；4、有學者認為，40%的血壓升高與甲狀旁腺有關。甲狀旁腺可產生一種耐高熱的多肽物質，這是引起高血壓的罪魁禍首，被稱為“致高血壓因數”。“致高血壓因數”的產生受低鈣飲食刺激，而高鈣飲食可抑制其產生“致高血壓因數”。現代研究證明，中老年人多吃含鈣豐富的食物可以預防動脈硬化，高血壓病人在服用降壓藥的同時配合補鈣，還能更好地使過高的血壓降到正常。所以，對於缺鈣的人，長期大量地補充鈣質，使血鈣保持正常水準，維持平滑肌細胞內外鈣代謝的平衡，避免血管平滑肌的痙攣，從而達到有效預防動脈血管硬化、降低血壓的目的。因此，將AHU-377的鈉鹽換成鈣鹽，不僅可以減少鈉鹽帶來的副作用，還可以帶來額外的對心血管疾病的有益作用。

雖然WO2008031567也公開了AHU-377游離酸製備成鈣鹽的合成路線，如下圖所示：

但是，本領域人員可以瞭解，上述常見的成鹽反映技術路線是基於含有羧基的化合物與鈣鹽成鹽的一般技術路線，但是該技術路線並不能適合所有羧基化合物，也無從知曉是否可以通過這個反映來製備出AHU-377的鈣鹽。該技術路線無實施例支援，所以更加不可知該技術路線是否可以產生晶型的鈣鹽。另外，該技術路線只有在特殊條件下成立，尤其是合成路線中第二步，是AHU-377鈉鹽與CaCl₂發生的離子交換反應，如果不能創造AHU-377鈣鹽或者氯化鈉從體系析出的特殊條件，則上述合成路線則不成立。其次，從該通用的技術路線，無法推測是否可以製備固體形式的AHU-377鈣鹽，所得鈣鹽是否為晶型，是何種晶型。因此，該通用的技術路線無法得到AHU-377鈣鹽或結晶形式的AHU-337鈣鹽晶體。

為了解決現有技術存在的問題，改善 AHU-377物化性質，例如改善的結晶性，增加溶解性，減少吸濕性，增強技術可操作性，提高化學穩定性等。發明人通過深入研究，在現有技術的基礎上開發出了一種AHU-377結晶型游離酸，大大改善了AHU-377游離酸的物化性質，例如產品品質、溶解性、吸濕性、化學穩定性等。同時，發明人在深入研究的基礎上製備得到了AHU-377半鈣鹽晶型和AHU-377 α-苯乙胺鹽晶型(α-苯乙胺，分子式為C₈H₁₁N，α-苯乙胺有兩個立體異構體：(R)-(+)-α-苯乙胺與(S)-(-)-α-苯乙胺)。通過將AHU-377製備成鈣鹽或α-苯乙胺鹽來改變AHU-377游離酸或其鈉鹽的物化性質，例如結晶性、溶解性、吸濕性等。以及解決鈉鹽帶來的心血管副作用的問題，尤其在治療心衰伴有抑鬱症併發症，有十分廣闊的前景。

本發明第一方面提供一種AHU-377結晶型游離酸(指定為晶型I)，其X線粉末衍射圖包括位於23.70±0.2°、15.84±0.2°、20.84±0.2°和8.56±0.2°的衍射角(2 θ)處的峰。

作為進一步較佳的方案，較佳係其X射線粉末衍射圖還包括位於17.06±0.2°、25.98±0.2°、18.01±0.2°、9.42±0.2°和26.91±0.2°的衍射角(2 θ)處的峰。

作為更進一步較佳的方案，較佳係其X射線粉末衍射圖復還包括位於34.70±0.2°、21.83±0.2°、25.69±0.2°、25.33±0.2°、11.67±0.2°和26.24±0.2°的衍射角(2 θ)處的峰。

作為更進一步較佳的方案，最佳係其X射線粉末衍射圖與第1圖中顯示的衍射角(2 θ)處的峰基本上相同，其X射線粉末衍射資料如所示：

本文所使用的關於X射線衍射峰位置的術語“基本上相同的”意指考慮典型的峰位置和強度可變性。例如，本領域技術人員將理解，峰位置(2θ)將由於XRPD儀器不同，而造成測量值有所變化，有時這種變化達有時多達0.2°。此外，本領域技術人員將理解，XRPD樣品制樣方法，XRPD儀器，樣品結晶度，樣品用量以及晶體擇優取向等因素將導致樣品XRPD衍射圖中相對峰強度的改變。

本發明第二方面提供一種AHU-377結晶型游離酸的製備方法，包括如下步驟，1)將AHU-377游離酸溶解在合適的有機溶劑中；2)降低溶液體系溫度，和/或加入晶種，和/或加入適量反溶劑至溶液出現渾濁，析晶；3)固液分離得到AHU-377結晶型游離酸。

作為進一步較佳的方案，包括如下步驟，1)將AHU-377游離酸在常溫或加熱狀態下溶解在合適的有機溶劑中；2)降低步驟1)中溶液體系的溫度，和/或加入晶種，析晶；3)固液分離得到AHU-377結晶型游離酸。

作為進一步較佳的方案，包括如下步驟，1)將AHU-377游離酸溶解在合適的有機溶劑中；2)將步驟1)中的溶液與反溶劑相混合；3)固液分離得到AHU-377結晶型游離酸。

較佳的，步驟2)中與反溶劑相混合之前在反溶劑中預先加入AHU-377結晶型游離酸晶種。

所述的“相混合”是指將步驟1)中的溶液滴加到反溶劑之中或者將反溶劑滴加到步驟1)中的溶液之中。

作為更進一步較佳的方案，上述製備方法中步驟1)所述合適的有機溶劑為選自醚類、環醚類、酯類、鹵代烷烴、苯類有機溶劑或其混合物，包括但不限定於以下溶劑：自乙酸乙酯、乙酸異丙酯、二氯甲烷、三氯乙烷、四氯化碳、甲基第三丁基醚、異丙醚、苯、甲苯、二甲苯或其組合物，較佳係自乙酸異丙酯、二氯甲烷、甲基第三丁基醚、異丙醚或其組合物。

作為更進一步較佳的方案，上述製備方法中步驟2)所述反溶劑是指極性較小的有機溶劑，包括但不限定於以下溶劑：正庚烷、正己烷、異辛烷、戊烷、環己烷、環戊烷、乙醚或其組合物；較佳係自正庚烷、正己烷、環己烷、乙醚或其組合物。

作為進一步較佳的方案，上述製備方法中“溶解”是指本領域的普通技術人員一般的操作，通常可以適當的加熱使AHU-377游離酸原料溶解或溶清，或者在常溫下(20~25℃)加大溶劑的用量來使AHU-377游離酸原料溶解或溶清。

作為更進一步較佳的方案，所述適當的加熱較佳係將溶劑加熱至40~80℃使AHU-377游離酸原料溶解或溶清。

作為更進一步較佳的方案，所述加大溶劑的用量較佳係結晶溶劑的

加入量為AHU-377游離酸的5-20倍體積質量比，使AHU-377游離酸原料溶解或溶清。

作為進一步較佳的方案，上述製備方法中步驟2)所述加入晶種是指在AHU-377游離酸溶液中加入同系結晶體，加入晶種量以AHU-377游離酸質量比的0.1-20.0%為佳，以質量比的0.5-5.0%為最佳。可以理解，本領域技術人員也可以進一步增加晶種的加入量，如分批次加入同樣可以達到本技術所能達到的技術效果，得到同一晶體。因此，對加入晶種的技術方案進行修改或者等同替換，其均應涵蓋在本發明的精神之內。

作為進一步較佳的方案，本發明步驟3)所得到的AHU-377結晶型游離酸其粉末X射線衍射圖包括位於23.70±0.2°、15.84±0.2°、20.84±0.2°和8.56±0.2°的衍射角(2 θ)處的峰。

本發明第三方面提供一種AHU-377半鈣鹽晶型，其X射線粉末衍射圖包括位於12.70±0.2°、7.32±0.2°、15.90±0.2°和18.56±0.2°的衍射角(2 θ)處的峰，或其X射線粉末衍射圖包括位於4.02±0.2°、3.62±0.2°和17.82±0.2°的衍射角(2 θ)處的峰。

本發明第四方面提供一種AHU-377半鈣鹽三水合物晶型(指定為晶型I)，其X射線粉末衍射圖包括位於12.70±0.2°、7.32±0.2°、15.90±0.2°和18.56±0.2°的衍射角(2 θ)處的峰。

作為進一步較佳的方案，較佳係其X射線粉末衍射圖還包括位於14.74±0.2°、15.42±0.2°、7.82±0.2°、19.42±0.2°、16.64±0.2°和17.54±0.2°的衍射角(2 θ)處的峰。

作為更進一步較佳的方案，最佳係其X射線粉末衍射圖與第4圖中顯示的衍射角(2 θ)處的峰基本上相同，其X射線粉末衍射資料如表2所示：

本發明第五方面提供一種AHU-377半鈣鹽無水晶型(指定為晶型II)，其X射線粉末衍射圖包括位於4.02±0.2°、3.62±0.2°和17.82±0.2°的衍射角(2 θ)處的峰。

作為進一步較佳的方案，較佳係其X射線粉末衍射圖還包括位於20.48±0.2°、14.50±0.2°和19.66±0.2°的衍射角(2 θ)處的峰。

作為更進一步較佳的方案，最佳係其X射線粉末衍射圖與第6圖中顯示的衍射角(2 θ)處的峰基本上相同，其X射線粉末衍射資料如表3所示：

本發明第六方面提供一種AHU-377半鈣鹽三水合物晶型的製備方法，包括，1)將AHU-377游離酸溶解或混懸在合適的溶劑中，與等量或過量可溶於該體系的苛性鹼或弱鹼性鈉鹽或鉀鹽相混合製備生成AHU-377相應的鹽，較佳係將弱鹼性鈉鹽或鉀鹽相混合；2)將上述AHU-377鹽體系與水溶性鈣鹽在水或含有機溶劑的水體系中相混合，產生AHU-377鈣鹽沉澱；3)收集上述成鹽反應過程中產物得到AHU-377半鈣鹽三水合物晶型。

作為進一步較佳的方案，步驟1)所述合適的溶劑為結晶溶劑，包括水、水溶性溶劑或其混合物。

作為更進一步較佳的方案，該等水溶性溶劑選自醇類、酮類、環醚類、醯胺類、亞碸類有機溶劑或其混合物，較佳係自甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、正丁醇、乙腈、丙酮、甲乙酮、四氫呋喃、二氧六環、N，N-二甲基甲醯胺、二甲基亞碸或其混合物；作為進一步較佳的方案，步驟1)所述苛性鹼為氫氧化鈉或氫氧化鉀。

作為進一步較佳的方案，步驟1)所述弱鹼性鈉鹽選自碳酸鈉、碳酸氫鈉、醋酸鈉、甲酸鈉、丙酸鈉、丙烯酸鈉、苯甲酸鈉或其混合物；較佳係碳酸氫鈉、醋酸鈉或其混合物；步驟1)所述弱鹼性鉀鹽選自碳酸鉀、碳酸氫鉀、醋酸鉀、甲酸鉀、丙酸鉀、丙烯酸鉀、苯甲酸鉀或其混合物；較佳係碳酸氫鉀、醋酸鉀或其混合物；作為進一步較佳的方案，步驟2)所述水溶性鈣鹽選自氯化鈣、溴化鈣、碘化鈣、硝酸鈣、氯酸鈣、次氯酸鈣，高氯酸鈣、乳酸鈣、葡萄糖酸鈣或其混合物；作為更進一步較佳的方案，步驟2)所述水溶性鈣鹽選自氯化鈣、氯酸鈣或其混合物。

作為進一步較佳的方案，所述溶解是指本領域的普通技術人員一般的操作，通常可以適當的加熱使AHU-377游離酸原料溶解或溶清，或者加大溶劑的用量來使AHU-377游離酸原料溶解或溶清。

作為更進一步較佳的方案，所述適當的加熱較佳係將結晶正溶劑加熱至30~80℃使AHU-377游離酸原料溶解或溶清。

作為更進一步較佳的方案，所述加大溶劑的用量較佳係結晶溶劑的加入量為AHU-377游離酸的2-20倍體積質量比，使AHU-377游離酸原料溶解或溶清。

作為進一步較佳的方案，步驟3)所述的收集上述成鹽反應過程中產物的步驟具體可以是直接收集上述成鈣鹽反應過程中析出的固體產物、或者通過揮發溶劑、或者加入反溶劑、或者直接降溫析晶、或者加入晶種，得到AHU-377鈣鹽多晶型。

作為更進一步較佳的方案，該等反溶劑是指極性較小的有機溶劑，包括但不限定於以下溶劑：正庚烷、正己烷、異辛烷、戊烷、環己烷、環戊烷、乙醚或其組合物。加入反溶劑的量為結晶溶劑1-10倍體積比。

作為進一步較佳的方案，本發明步驟3)所得到的AHU-377鈣鹽晶型I其粉末X射線衍射圖包括位於12.70±0.2°、7.32±0.2°、15.90±0.2°和18.56±0.2°的衍射角(2 θ)處的峰。

本發明第七方面提供一種AHU-377半鈣鹽無水晶型的製備方法，將AHU-377半鈣鹽三水合物加熱到50℃以上，使其脫水轉變成無水晶型得到AHU-377半鈣鹽無水晶型。

作為進一步較佳方案，所述加熱是本領域的普通技術人員一般的

操作，通常可以在氮氣保護下或真空條件下升溫。

作為進一步較佳方案，所述加熱溫度範圍在50-100℃。

作為進一步較佳的方案，本發明所得到的AHU-377鈣鹽無水晶型(晶型II)其X射線粉末衍射圖包括位於4.02±0.2°、3.62±0.2°和17.82±0.2°的衍射角(2 θ)處的峰。

作為進一步較佳的方案，較佳係其X射線粉末衍射圖還包括位於20.48±0.2°、14.50±0.2°和19.66±0.2°的衍射角(2 θ)處的峰。

本發明第八方面提供一種AHU-377 α-苯乙胺鹽，其X射線粉末衍射圖包括位於20.58±0.2°、24.28±0.2°、8.38±0.2°和23.20±0.2°的衍射角(2 θ)處的峰，或包括位於23.28±0.2°、18.9±0.2°、13.7±0.2°和14.72±0.2°的衍射角(2 θ)處的峰。

本發明第九方面提供一種AHU-377(R)-(+)-α-苯乙胺鹽晶型(指定為晶型I)，其X射線粉末衍射圖包括位於20.58±0.2°、24.28±0.2°、8.38±0.2°和23.20±0.2°的衍射角(2 θ)處的峰。

作為進一步較佳的方案，其X射線粉末衍射圖還包括位於19.36±0.2°、15.16±0.2°、16.78±0.2°、18.84±0.2°和22.06±0.2°的衍射角(2 θ)處的峰。

作為更進一步較佳的方案，其X射線粉末衍射圖還包括位於17.34±0.2°、7.52±0.2°、28.10±0.2°、29.66±0.2°、28.94±0.2°和10.96±0.2°的衍射角(2 θ)處的峰。

作為更進一步較佳的方案，最佳係其X射線粉末衍射圖與第7圖中顯示的衍射角(2 θ)處的峰基本上相同，其X射線粉末衍射資料如表4所示：

本發明第十方面提供一種AHU-377(S)-(-)-α-苯乙胺鹽晶型(指定為晶型II)，其X射線粉末衍射圖包括位於23.28±0.2°、18.9±0.2°、13.7±0.2°和14.72±0.2°的衍射角(2 θ)處的峰。

作為進一步較佳的方案，較佳係其X射線粉末衍射圖還包括位於3.13±0.2°、15.98±0.2°、18.36±0.2°、9.12±0.2°和32.38±0.2°的衍射角(2 θ)處的峰。

作為更進一步較佳的方案，較佳係其X射線粉末衍射圖還包括位於10.88±0.2°、22.18±0.2°、21.92±0.2°、27.66±0.2°、20.34±0.2°和27.24±0.2°的衍射角(2 θ)處的峰。

作為更進一步較佳的方案，最佳係其粉末X射線衍射圖與第9圖中顯示的衍射角(2θ)處的峰基本上相同，其X射線粉末衍射資料如表5所示：

本發明第十一方面提供一種AHU-377 α-苯乙胺鹽晶型的製備方法，包括，1)將AHU-377游離酸溶解或混懸在合適的溶劑中，與等量或過量α-苯乙胺相混合製備生成AHU-377 α-苯乙胺鹽；2)收集上述成鹽反應過程中產物得到AHU-377 α-苯乙胺鹽晶型。

該等α-苯乙胺包括(R)-(+)-α-苯乙胺、(S)-(-)-α-苯乙胺。

作為進一步較佳的方案，步驟1)所述合適的溶劑為結晶溶劑，包括水、水溶性溶劑或非水溶性溶劑。

作為更進一步較佳的方案，該等水溶性溶劑選自醇類、酮類、環醚類、醯胺類、亞碸類有機溶劑或其混合物，包括但不限定於以下溶劑：甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、正丁醇、乙腈、丙酮、甲乙酮、四氫呋喃、二氧六環、N，N-二甲基甲醯胺、二甲基亞碸或其混合物；該等非水溶性溶劑選自氯代烷烴、醚類、酯類、烷烴類、環烷烴類、苯類有機溶劑或其混合物，包括但不限定於以下溶劑：乙酸乙酯、乙酸異丙酯、二氯甲烷、三氯乙烷、四氯化碳、甲基第三丁基醚、異丙醚、苯、甲苯、二甲苯或其組合物。

作為更進一步較佳的方案，所述適當的加熱較佳係將結晶溶劑加熱至30~80℃使AHU-377游離酸原料溶解或溶清。

作為更進一步較佳的方案，所述加大溶劑的用量較佳係結晶溶劑的加入量為AHU-377游離酸的1-200倍體積質量比，使AHU-377游離酸原料溶解或溶清。

作為進一步較佳的方案，步驟2)所述的收集上述成鹽反應過程中產物的步驟具體可以是直接收集上述成α-苯乙胺鹽反應過程中析出的固體產物、或者通過揮發溶劑、或者加入反溶劑、或者直接降溫析晶、或者加入晶種，得到AHU-377 α-苯乙胺鹽晶型；較佳係直接收集上述成α-苯乙胺鹽反應過程中析出的固體產物得到AHU-377 α-苯乙胺鹽晶型。

作為更進一步較佳的方案，該等反溶劑是指極性較小的有機溶劑，包括但不限定於以下溶劑：正庚烷、正己烷、異辛烷、戊烷、環己烷、環戊烷、乙醚或其組合物。

作為進一步較佳的方案，本發明步驟2)所得到的AHU-377(R)-(+)-α-苯乙胺鹽晶型其X射線粉末衍射圖包括位於20.58±0.2°、24.28±0.2°、8.38±0.2°和23.20±0.2°的衍射角(2 θ)處的峰，或所得到的AHU-377(S)-(-)-α-苯乙胺鹽其X射線粉末衍射圖包括位於23.28±0.2°、18.9±0.2°、13.7±0.2°和14.72±0.2°的衍射角(2 θ)處的峰。

本發明第十二方面提供一種藥物組合物，該等藥物組合物包含治療有效劑量的前述AHU-377結晶型游離酸、AHU-377半鈣鹽晶型、AHU-377半鈣鹽三水合物晶型、AHU-377半鈣鹽無水晶型、AHU-377 α-苯乙胺鹽晶型、AHU-377(R)-(+)-α-苯乙胺鹽晶型、AHU-377(S)-(-)-α-苯乙胺鹽晶型以及藥學上可接受的載體或賦形劑。

作為進一步較佳的方案，該等可藥用載體或賦形劑選自稀釋劑或填充劑、崩解劑、黏合劑、助流劑、潤滑劑、著色劑或其組合。

作為更進一步較佳的方案，該等稀釋劑或填充劑選自糖粉、可壓縮糖、葡萄糖、蔗糖、乳糖、糊精、甘露醇、微晶纖維素、山梨醇、澱粉或其組合，稀釋劑或填充劑的用量為組合物重量的4.0%~60.0%，較佳係10.0%~40.0%；該等崩解劑選自澱粉、黏土、纖維素、藻酸鹽、樹膠、交聯聚合物、大豆多糖、瓜爾膠或其組合，該等交聯聚合物較佳係自交聯聚乙烯吡咯烷酮、交聯羧甲基纖維素鈉、交聯羧甲基纖維素鈣或其組合，崩解劑的用量為組合物重量的0%~65.0%，較佳係1.0%~40.0%；該等黏合劑選自澱粉、纖維素及其衍生物、蔗糖、葡萄糖、玉米糖漿、明膠、聚維酮或其組合，該等纖維素及其衍生物較佳係自微晶纖維素、羥丙基纖維素、羥乙基纖維素、羥丙基甲基纖維素或其組合；更佳係羥丙基纖維素；最佳係低取代羥丙基纖維素，黏合劑的用量為組合物重量的1.0%~60.0%，較佳係5.0%~40.0%，更佳係10.0%~30.0%；該等助流劑或潤滑劑選自膠態二氧化矽、三矽酸鎂、澱粉、滑石粉、正磷酸鈣、硬脂酸鎂、硬脂酸鋁、硬脂酸鈣、碳酸鈣、氧化鎂、聚乙二醇、粉狀纖維素、山崳酸甘油酯、硬脂酸、氫化蓖麻油、單硬脂酸甘油酯、硬脂醯醇富馬酸鈉或其組合，助流劑或潤滑劑的用量為組合物重量的0%~10.0%，較佳係0.5%~5.0%。

作為更進一步較佳的方案，該等藥物組合物復包括利尿劑；該等利尿劑選自呋塞米、依他尼酸、布美他尼、托拉塞米、氫氯噻嗪、氯噻酮、苄氟噻嗪、環戊噻嗪、泊利噻嗪、美托拉宗、吲達帕胺或其組合；利尿劑的用量為組合物重量的0.1%~10.0%，較佳係0.5%~5.0%。

作為更進一步較佳的方案，該等藥物組合物可以製備成片劑、膠囊劑、顆粒劑。

作為最較佳的方案，該等膠囊劑組分配比如下：

作為最佳的方案，該等膠囊劑組分配比如下：

本發明第十三方面提供一種前述AHU-377 結晶型游離酸、AHU-377半鈣鹽晶型、AHU-377半鈣鹽三水合物晶型、AHU-377半鈣鹽無水晶型、AHU-377 α-苯乙胺鹽晶型、AHU-377(R)-(+)-α-苯乙胺鹽晶型、AHU-377(S)-(-)-α-苯乙胺鹽晶型或前述藥物組合物在製備治療或預防與中性內肽酶有關的疾病、心血管、抗高血壓的藥物中的用途。

作為更進一步較佳的方案，該等抗高血壓的藥物是指通過改善功效和具有更高的相應率而產生了更有效的抗高血壓治療的藥物，包括但不限於抗惡性高血壓、原發性高血壓、腎血管性高血壓、糖尿病性高血壓、孤立性收縮壓高血壓或其他繼發性高血壓藥物。

本發明第十四方面提供一種前述AHU-377 結晶型游離酸、AHU-377半鈣鹽晶型、AHU-377半鈣鹽三水合物晶型、AHU-377半鈣鹽無水晶型、AHU-377 α-苯乙胺鹽晶型、AHU-377(R)-(+)-α-苯乙胺鹽晶型、AHU-377(S)-(-)-α-苯乙胺鹽晶型或前述藥物組合物在製備治療或預防急慢性心衰如、充血性心衰、左心室機能障礙、肥厚性心肌病、糖尿病性心肌病、室上性和室性心律不齊、心房纖維顫動、心房撲動或有害的血管重構藥物中的用途。

本發明第十五方面提供一種藥物組合物，該等藥物組合物包含治療有效劑量的前述AHU-377結晶型游離酸、AHU-377半鈣鹽晶型、AHU-377半鈣鹽三水合物晶型、AHU-377半鈣鹽無水晶型、AHU-377 α-苯乙胺鹽晶型、AHU-377(R)-(+)-α-苯乙胺鹽晶型、AHU-377(S)-(-)-α-苯乙胺鹽晶型和血管緊張素Ⅱ(AT1)受體拮抗劑，以及藥學上可接受的載體或賦形劑。

作為進一步較佳的方案，該等血管緊張素Ⅱ拮抗劑選自洛沙坦、厄貝沙坦、奧美沙坦、替米沙坦、纈沙坦、阿齊沙坦、坎地沙坦、依普羅沙坦、氯沙坦、沙普利沙坦、依利沙坦、他索沙坦、艾利沙坦或其可藥用鹽。

作為更進一步較佳的方案，該等血管緊張素Ⅱ拮抗劑選自纈沙坦、阿齊沙坦或其可藥用鹽。

本發明第十六方面提供一種前述藥物組合物在製備治療或預防心肌梗塞及其後遺症、動脈粥樣硬化、心絞痛、糖尿病性或非糖尿病性腎機能不全、繼發性醛固酮增多症、原發性或繼發性肺高血壓、糖尿病性腎病、腎小球腎炎、硬皮病、腎小球硬化、原發性腎病的蛋白尿、腎血管高血壓、糖尿病性視網膜病、偏頭痛、外周血管病、雷諾氏病、腔的增生、認知機能障礙、青光眼或中風藥物中的用途。

“藥物組合物”表示含有一種或多種本文所述化合物或其生理學上/藥學上可接受的鹽或前體藥物與其他化學組分的混合物，以或其他組分例如生理學/藥學上可接受的載體和賦形劑。藥物組合物的目的是促進對生物體的給藥，利於活性成分的吸收進而發揮生物活性。

含有活性成分的藥物組合物可以是適用於口服的形式，例如片劑、糖錠劑、錠劑、水或油混懸液、可分散粉末或顆粒、乳液、硬或軟膠囊，或糖漿劑或酏劑。可按照本領域任何已知製備藥用組合物的方法製備口服組合物，此類組合物可含有一種或多種選自以下的成分：甜味劑、矯味劑、著色劑和防腐劑，以提供悅目和可口的藥用製劑。片劑含有活性成分和用於混合的適宜製備片劑的無毒的藥學上可接受的賦形劑。這些賦形劑可以是惰性賦形劑，如碳酸鈣、碳酸鈉、乳糖、磷酸鈣或磷酸鈉；造粒劑和崩解劑，例如微晶纖維素、交聯羧甲基纖維素鈉、玉米澱粉或藻酸；黏合劑，例如澱粉、明膠、聚乙烯吡咯烷酮或阿拉伯膠和潤滑劑，例如硬脂酸鎂、硬脂酸或滑石粉。這些片劑可以不包衣或可通過掩蓋藥物的味道或在胃腸道中延遲崩解和吸收，因而在較長時間內提供緩釋作用的已知技術將其包衣。例如，可使用水溶性味道掩蔽物質，例如羥丙基甲基纖維素或羥丙基纖維素，或延長時間物質例如乙基纖維素、醋酸丁酸纖維素。

也可用其中活性成分與惰性固體稀釋劑例如碳酸鈣、磷酸鈣或高嶺土混合的硬明膠膠囊，或其中活性成分與水溶性載體例如聚乙二醇或油溶媒例如花生油、液體石蠟或橄欖油混合的軟明膠膠囊提供口服製劑。

水懸浮液含有活性物質和用於混合的適宜製備水懸浮液的賦形劑。此類賦形劑是懸浮劑，例如羧基甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、藻酸鈉、聚乙烯吡咯烷酮和阿拉伯膠；分散劑或濕潤劑可以是天然產生的磷脂例如卵磷脂，或烯化氧與脂肪酸的縮合產物例如聚氧乙烯硬脂酸酯，或環氧乙烷與長鏈脂肪醇的縮合產物，例如十七碳亞乙基氧基鯨蠟醇(heptadecaethyleneoxy cetanol)，或環氧乙烷與由脂肪酸和己糖醇衍生的部分酯的縮合產物，例如聚環氧乙烷山梨醇單油酸酯，或環氧乙烷與由脂肪酸和己糖醇酐衍生的偏酯的縮合產物，例如聚環氧乙烷脫水山梨醇單油酸酯。水混懸液也可以含有一種或多種防腐劑例如尼泊金乙酯或尼泊金正丙酯、一種或多種著色劑、一種或多種矯味劑和一種或多種甜味劑，例如蔗糖、糖精或阿司帕坦。

油混懸液可通過使活性成分懸浮於植物油如花生油、橄欖油、芝麻油或椰子油，或礦物油例如液體石蠟中配製而成。油懸浮液可含有增稠劑，例如蜂蠟、硬石蠟或鯨蠟醇。可加入上述的甜味劑和矯味劑，以提供可口的製劑。可通過加入抗氧化劑例如丁羥茴醚或α-生育酚保存這些組合物。

通過加入水可使適用于製備水混懸也的可分散粉末和顆粒提供活性成分和用於混合的分散劑或濕潤劑、懸浮劑或一種或多種防腐劑。適宜的分散劑或濕潤劑和懸浮劑可說明上述的例子。也可加入其他賦形劑例如甜味劑、矯味劑和著色劑。通過加入抗氧化劑例如抗壞血酸保存這些組合物。

本發明的藥物組合物也可以是水包油乳劑的形式。油相可以是植物油例如橄欖油或花生油，或礦物油例如液體石蠟或其混合物。適宜的乳化劑可以是天然產生的磷脂，例如大豆卵磷脂和由脂肪酸和己糖醇酐衍生的酯或偏酯例如山梨坦單油酸酯，和所述偏酯和環氧乙烷的縮合產物，例如聚環氧乙烷山梨醇單油酸酯。乳劑也可以含有甜味劑、矯味劑、防腐劑和抗氧劑。可用甜味劑例如甘油、丙二醇、山梨醇或蔗糖配製糖漿和酏劑。此類製劑也可含有緩和劑、防腐劑、著色劑和抗氧劑。

藥物組合物可以是無菌注射水溶液形式。可在使用的可接受的溶媒和溶劑中有水、林格氏液和等滲氯化鈉溶液。無菌注射製劑可以是其中活性成分溶於油相的無菌注射水包油微乳。例如將活性成分溶於大豆油和卵磷脂的混合物中。然後將油溶液加入水和甘油的混合物中處理形成微乳。可通過局部大量注射，將注射液或微乳注入患者的血流中。或者，最好按可保持本發明化合物恒定迴圈濃度的方式給予溶液和微乳。為保持這種恒定濃度，可使用連續靜脈內遞藥裝置。

藥物組合物可以是用於肌內和皮下給藥的無菌注射水或油混懸液的形式。可按已知技術，用上述那些適宜的分散劑或濕潤劑和懸浮劑配製該混懸液。無菌注射製劑也可以是在無毒腸胃外可接受的稀釋劑或溶劑中製備的無菌注射溶液或混懸液，例如1,3-丁二醇中製備的溶液。此外，可方便地用無菌固定油作為溶劑或懸浮介質。為此目的，可使用包括合成甘油單或二酯在內的任何調和固定油。此外，脂肪酸例如油酸也可以製備注射劑。

可按用於直腸給藥的栓劑形式給予本發明化合物。可通過將藥物與在普通溫度下為固體但在直腸中為液體，因而在直腸中會溶化而釋放藥物的適宜的無刺激性賦形劑混合來製備這些藥物組合物。此類物質包括可哥脂、甘油明膠、氫化植物油、各種分子量的聚乙二醇和聚乙二醇的脂肪酸酯的混合物。

本領域技術人員所熟知的，藥物的給藥劑量依賴於多種因素，包括但並非限定以下因素：所用特定化合物的活性、病人的年齡、病人的體重、病人的健康狀況、病人的生活情形、病人的飲食、給藥時間、給藥方式、排泄的速率、藥物的組合等；另外，最佳的治療方式如治療的模式、AHU-377或其鹽的日用量或藥學上可接受的鹽的種類可以根據傳統的治療方案來驗證。

與現有技術相比，本發明具有以下優勢：

1)本發明提供一種新的AHU-377游離酸晶型。AHU-377游離酸為油狀化合物，在技術上很難得到純淨的化合物，因為溶劑殘留很難除去，而將AHU-377結晶則可以獲得高純度的AHU-377，製備技術簡單。油狀化合物十分不利於口服固體製劑的使用和生產，而製成固體則可十分容易實現口服固體製劑的使用。晶體在穩定性上優於油狀物。

2)本發明通過將AHU-377製備成α-苯乙胺鹽來改變AHU-377游離酸的物化性質，例如結晶性、溶解性、吸濕性等，本發明技術成熟，可操作性強，所得產品品質高且均一穩定，化學穩定性，利於儲存以及AHU-377的分離純化和手性純度的提高。

3)本發明提供一種新的AHU-377鈣鹽三水合物，純度高，品質穩定可靠，改善了AHU-377或其鈉鹽的吸濕性，提高了化學穩定性等，利於儲存，符合工業化生產需要。

4)本發明所得AHU-377鈣鹽晶型I適宜臨床藥物應用，所製備的膠囊劑可以滿足醫學或藥學需要，適宜工業化。

5)本發明結晶方法可操作性強，技術成熟，易於控制。

6)本發明所得AHU-377鈣鹽和鈉鹽相比，在高血壓和心衰治療過程中，可以減少鈉的攝入，減輕了患者心血管負擔。並且鈣對血管有舒緩作用，有利於心血管疾病的治療。

因此，將AHU-377製成鈣鹽在高血壓和心衰疾病治療中的藥物安全性和有效性上較鈉鹽具有明顯的優勢。

第1圖為AHU-377游離酸晶型I的X射線粉末衍射圖，橫坐標為角度2θ(°)，縱坐標為強度。

第2圖為AHU-377游離酸晶型I的差示量熱掃描圖(DSC)圖，橫坐標為溫度(℃)，縱坐標位元熱流(W/g)。

第3圖為AHU-377游離酸晶型I的熱重分析(TGA)圖，橫坐標為溫度(℃)，縱坐標位元為失重比例(%)。

第4圖為AHU-377鈣鹽三水合物晶型的X射線粉末衍射圖(XRPD圖)。

第5圖為AHU-377鈣鹽三水合物晶型的熱重分析圖(TGA圖)。

第6圖為AHU-377鈣鹽無水晶型的X射線粉末衍射圖(XRPD圖)。

第7圖為AHU-377(R)-(+)-α-苯乙胺鹽晶型的XRPD圖，橫坐標為角度2θ(°)，縱坐標為強度。

第8圖為AHU-377(R)-(+)-α-苯乙鹽晶型的DSC圖，橫坐標為溫度(℃)，縱坐標為熱流(w/g)。

第9圖為AHU-377(S)-(-)-α-苯乙胺鹽晶型的XRPD圖，橫坐標為角度2θ(°)，縱坐標為強度。

第10圖為AHU-377(S)-(-)-α-苯乙胺鹽型的DSC圖，橫坐標為溫度(℃)，縱坐標為熱流(w/g)。

第11圖為AHU-377與2-甲基S對映異構混合物的手性色譜圖，橫坐標為時間(分鐘)，縱坐標為吸光度(mAU)。

第12圖為以AHU-377與2-甲基S對映異構混合物為原料，製備得到AHU-377(S)-(-)-α-苯乙胺鹽的手性色譜圖，橫坐標為時間(分鐘)，縱坐標為吸光度(mAU)。

以下提供的具體實施例以及製備方法例將進一步舉例說明本發明實施方案的特定方面。下列實施例的範圍將不以任何方式限制本發明的範圍。

方法和材料

AHU-377結晶型游離酸、AHU-377鈣鹽多晶型、AHU-377 α-苯乙胺晶型由它們的X射線粉末衍射圖表徵。因此，在具有使用Cu K α輻射(1.54Å)以反射方式操作的GADDS(一般面積衍射檢測器系統)CS的Bruker D8 Discover X射線粉末衍射儀上採集所述化合物的X射線粉末衍射圖。管電壓和電流量分別設置為40kV和40mA採集掃描。在3.0°至40°的2θ範圍內掃描樣品60秒的時期。針對2θ表示的峰位置，使用剛玉標準品校準衍射儀。在通常是20℃-30℃的室溫下實施所有分析。使用用於4.1.14T版WNT軟體的GADDS，採集和積分資料。使用2003年發行的具有9.0.0.2版Eva的DiffracPlus軟體，分析衍射圖。XRPD樣品的製備，通過是將樣品至於單晶矽片上，用玻璃片或等效物壓樣品粉末以確保樣品的表面平坦並有適當的高度。然後將樣品支架放入Bruker XRPD儀器，並使用上文描述的儀器參數採集X射線粉末衍射圖。由包括以下的多種因素產生與這類X射線粉末衍射分析結果相關的測量差異：(a)樣品製備物(例如樣品高度)中的誤差，(b)儀器誤差，(c)校準差異，(d)操作人員誤差(包括在測定峰位置時出現的那些誤差)，和(e)物質的性質(例如較佳的定向誤差)。校準誤差和樣品高度誤差經常導致所有峰在相同方向中的位移。一般地說，這個校準因數將使測量的峰位置與預期的峰位置一致並且可以在預期的2θ值±0.2°的範圍中。

本發明原料AHU-377游離酸是根據專利 US5217996A報導製備方法而得，產物為油狀物。本發明實施例所得晶型的角度2θ(°)值和強度值(作為最高峰值的%)已列入表1-5中。

在TA Instruments DSC Q2000上進行差示掃描量熱法(DSC)。分別使用銦和藍寶石針對電池常數和熱容量校準儀器。通過將1-3mg的樣品稱量入鋁盤，然後使用鋁蓋封蓋所述鋁盤製備樣品。使用Universal Analysis 2000分析資料。在室溫開始試驗，並且在氮氣吹掃(流速是50ml/min)下，以10℃/分鐘將樣品加熱至300℃。

非對映異構體的分析採用HPLC檢測，手性色譜分析條件為：色譜柱：大賽璐Chiralpak AD-H(4.6*250mm，5um)；流動相A：環己烷：異丙醇：冰醋酸=1000：10：1；流動相B：環己烷：異丙醇：冰醋酸=800：200：1；流動相A：流動相B=50：50；每針運行時間：22min；柱溫：30℃；波長：254nm；流速：1.0ml/min。

實施例1

稱取200mg AHU-377游離酸(油狀)置於20.0mL玻璃瓶中，然後加入4mL甲基第三丁基醚，攪拌溶清，緩慢加入正庚烷至出現渾濁(約5mL)，室溫下(20-25℃)繼續攪拌48小時，固液分離得到AHU-377結晶型游離酸，其X射線粉末衍射圖如第1圖所示。

用差示量熱掃描器(DSC，型號TA Q2000) 測量有AHU-377結晶型游離酸熔點。測量條件為從室溫加熱到250℃，升溫速率為10℃每分鐘，加熱在氮氣氣氛下進行，氮氣流量為20mL每分鐘。AHU-377結晶型游離酸的DSC圖如第2圖所示。AHU-377結晶型游離酸的熔點(onset點)為：94.3℃左右。

用熱重分析儀(TGA，型號TA Q500)測量 AHU-377結晶型游離酸的熱失重情況。測量條件為從室溫加熱到300℃，升溫速率為10℃每分鐘，加熱在氮氣氣氛下進行，氮氣流量為50mL每分鐘。AHU-377結晶型游離酸的TGA圖如第3圖所示。在100℃以內幾乎不失重，因此可以判定AHU-377結晶型游離酸為無水晶型。

實施例2

稱取50mg AHU-377游離酸(油狀)置於2.0mL玻璃瓶中，然後加入0.5mL乙酸異丙酯，加熱至50℃，攪拌溶清，緩慢加入5.0mL正己烷，然後降溫至室溫(20-25℃)，繼續保溫攪拌48小時，固液分離得到AHU-377結晶型游離酸，其X射線粉末衍射圖與第1圖一致。

實施例3

稱取50mg AHU-377游離酸(油狀)置於2.0mL玻璃瓶中，然後加入0.25mL甲苯，加熱至80℃，攪拌溶清，然後降溫至室溫(20-25℃)，緩慢加入2.0mL無水乙醚，保溫攪拌48小時，固液分離得到AHU-377結晶型游離酸，其X射線粉末衍射圖與第1圖一致。

實施例4

稱取50mg AHU-377游離酸(油狀)置於2.0mL玻璃瓶中，然後加入0.5mL甲基第三丁基醚，加熱至55-60℃，攪拌溶清，然後降溫至室溫(20-25℃)，繼續保溫攪拌48小時，固液分離得到AHU-377結晶型游離酸，其X射線粉末衍射圖與第1圖一致。

實施例5

稱取20mg AHU-377游離酸(油狀)置於2.0mL玻璃瓶中，然後加入0.5mL乙酸乙酯，攪拌溶清，緩慢加入0.2mg實施例1晶體，室溫下(20-25℃)繼續攪拌24小時，固液分離得到AHU-377結晶型游離酸，其X射線粉末衍射圖與第1圖一致。

實施例6

稱取50mg AHU-377游離酸(油狀)置於2.0mL玻璃瓶中，然後加入0.5mL乙酸異丙酯，加熱至55-60℃，攪拌溶清，然後降溫至室溫(20-25℃)，緩慢加入0.5mg實施例1晶體，室溫下(20-25℃)繼續攪拌24小時，固液分離得到AHU-377結晶型游離酸，其X射線粉末衍射圖與第1圖一致。

實施例7

稱取20mg AHU-377游離酸(油狀)置於20.0mL玻璃瓶中，然後加入2mL甲基第三丁基醚，溶解得到澄清溶液，備用。取2mg實施例1晶體，混懸在10mL正庚烷中，將AHU-377甲基第三丁基醚溶液緩慢滴加至正庚烷溶液中，滴加約1小時，邊加邊攪拌，固液分離得到AHU-377結晶型游離酸，其X射線粉末衍射圖與第1圖一致。

實施例8

稱取500mg(1.215mmol)AHU-377游離酸(油狀)置於50.0mL圓底燒瓶中，加入5.0mL丙酮，攪拌溶清，加入12.2mL濃度為0.10mmol/mL的碳酸氫鈉水溶液，攪拌反應12小時，，加入0.65mL濃度為1.0mmol/mL的氯化鈣水溶液，然後再加15mL的水，攪拌24小時使其充分反應。固液分離得到AHU-377鈣鹽晶型I，其X射線粉末衍射圖(XRPD圖)如第4圖所示。

用熱重分析儀(TGA，型號TA Q500)測量 AHU-377鈣鹽晶型I熱失重情況。測量條件為從室溫加熱到400℃，升溫速率為10℃每分鐘，加熱在氮氣氣氛下進行，氮氣流量為50mL每分鐘。AHU-377鈣鹽晶型I的TGA圖如第5圖所示。在100℃以內失重為10%，與AHU377半鈣鹽三水合物理論失重近似(理論失重為11%)因此可以判斷AHU-377鈣鹽晶型I為AHU377半鈣三水晶合物。

實施例9

稱取50mg(0.12mmol)AHU-377游離酸(油狀)置於10.0mL圓底燒瓶中，加入1.0mL異丙醇，攪拌溶清，加入0.25mL濃度為0.50mmol/mL的醋酸鈉水溶液，攪拌反應12小時，加入0.15mL濃度為0.5mmol/mL的溴化鈣水溶液，然後再加5mL的水，攪拌24小時使其充分反應。固液分離得到AHU-377鈣鹽晶型I，其X射線粉末衍射圖(XRPD圖)基本與如第4圖一致。

實施例10

稱取50mg(0.12mmol)AHU-377游離酸(油狀)置於10.0mL圓底燒瓶中，加入0.5mL四氫呋喃，攪拌溶清，加入1.0mL濃度為0.10mmol/mL的碳酸氫鉀水溶液，攪拌反應12小時，加入0.25mL濃度為0.5mmol/mL的氯化鈣水溶液溶液，然後再加5mL的水，攪拌24小時使其充分反應。固液分離得到AHU-377鈣鹽晶型I，其X射線粉末衍射圖(XRPD圖)基本與如第4圖一致。

實施例11

稱取50mg(0.12mmol)AHU-377游離酸(油狀)置於10.0mL圓底燒瓶中，加入0.3mL N，N-二甲基甲醯胺，攪拌溶清，加入0.65mL濃度為0.20mmol/mL的丙酸鉀水溶液，攪拌反應12小時，加入0.30mL濃度為0.5mmol/mL的氯化鈣水溶液，然後再加5mL的水，攪拌24小時使其充分反應。固液分離得到AHU-377鈣鹽晶型I，其X射線粉末衍射圖(XRPD圖)基本與如第4圖一致。

實施例12

稱取50mg(0.12mmol)AHU-377游離酸(油狀)置於10.0mL圓底燒瓶中，加入1.0mL乙醇，加熱至60℃攪拌溶清，加入1.4mL濃度為0.10mmol/mL的碳酸氫鉀水溶液，攪拌反應12小時，加入0.15mL濃度為0.5mmol/mL的乳酸鈣水溶液，然後再加5mL的水，攪拌24小時使其充分反應。固液分離得到AHU-377鈣鹽晶型I，其X射線粉末衍射圖(XRPD圖)基本與如第4圖一致。

實施例13

稱取50mg(0.12mmol)AHU-377游離酸(油狀)置於10.0mL圓底燒瓶中，加入1.0mL乙腈，加熱至40℃攪拌溶清，加入1.3mL濃度為0.10mmol/mL的苯甲酸鈉水溶液，攪拌反應12小時，加入0.2mL濃度為0.5mmol/mL的乳酸鈣水溶液，然後再加5mL的水，攪拌24小時使其充分反應。固液分離得到AHU-377鈣鹽晶型I，其X射線粉末衍射圖(XRPD圖)基本與如第4圖一致。

實施例14

稱取20mg AHU-377鈣鹽晶型I，在熱重分析儀中，加熱至90℃，自然降溫後，迅速取出，用XRPD檢測晶型，其X射線粉末衍射圖(XRPD圖)基本與第6圖一致。

實施例15

稱取20mg(0.049mmol)AHU-377游離酸(油狀)置於5.0mL玻璃瓶中，加入1.0mL乙酸異丙酯，攪拌溶清，加入5.9mg(0.049mmol)(R)-(+)-α-苯乙胺，繼續攪拌反應48小時，收集反應產物得到的AHU-377(R)-(+)-α-苯乙胺鹽晶型其粉末X射線衍射圖如第7圖所示，熔點：126.6℃(onset點)如第8圖所示。

實施例16

稱取20mg(0.049mmol)AHU-377游離酸(油狀)置於5.0mL玻璃瓶中，加入0.4mL異丙醇，攪拌溶清，加入6.5mg(0.053mmol)(R)-(+)-α-苯乙胺，繼續攪拌反應48小時，收集反應產物得到的AHU-377(R)-(+)-α-苯乙胺晶型，其粉末X射線衍射圖基本與如第7圖一致。

實施例17

稱取20mg(0.049mmol)AHU-377游離酸(油狀)置於5.0mL玻璃瓶中，加入0.2mL甲基第三丁基醚，加熱至50℃攪拌溶清，加入5.9mg(0.049mmol)(R)-(+)-α-苯乙胺，降溫至室溫(20~25℃)繼續攪拌反應48小時，收集反應產物得到的AHU-377(R)-(+)-α-苯乙胺鹽晶型，其粉末X射線衍射圖基本與如第7圖一致。

實施例18

稱取20mg(0.049mmol)AHU-377游離酸(油狀)置於5.0mL玻璃瓶中，加入0.2mL二氯甲烷，加熱至40℃攪拌溶清，加入6.2mg(0.051mmol)(R)-(+)-α-苯乙胺，降溫至室溫(20~25℃)繼續攪拌反應48小時，收集反應產物得到的AHU-377(R)-(+)-α-苯乙胺鹽晶型，其粉末X射線衍射圖基本與如第7圖一致。

實施例19

稱取20mg(0.049mmol)AHU-377游離酸(油狀)置於5.0mL玻璃瓶中，加入0.2mL95%乙醇，加熱至60℃攪拌溶清，加入6.0mg(0.049mmol)(R)-(+)-α-苯乙胺，降溫至室溫(20~25℃)繼續攪拌反應48小時，收集反應產物得到的AHU-377(R)-(+)-α-苯乙胺鹽晶型，其粉末X射線衍射圖基本與如第7圖一致。

實施例20

稱取20mg(0.049mmol)AHU-377游離酸(油狀)置於5.0mL玻璃瓶中，加入1.0mL乙酸異丙酯，攪拌溶清，加入5.9mg(0.049mmol)(S)-(-)-α-苯乙胺，繼續攪拌反應48小時，收集反應產物得到的AHU-377(S)-(-)-α-苯乙胺鹽晶型其粉末X射線衍射圖如第9圖所示，熔點：140.16℃(onset點)如第10圖所示。

實施例21

稱取40mg(0.096mmol)AHU-377游離酸(AHU-377與2S-甲基非對映異構體的比例約為50：50，如第11圖所示、AHU-377保留時間為10分鐘左右，2S-甲基非對映異構體保留時間為9分鐘左右)置於5.0mL玻璃瓶中，加入2.0mL乙酸異丙酯，攪拌溶清，加入1mL 5.9mg/mL(0.049mmol)(S)-(-)-α-苯乙胺乙酸異丙酯溶液，繼續攪拌反應24小時，收集反應產物得到的AHU-377(S)-(-)-α-苯乙胺鹽晶型。將取1mg AHU-377(S)-(-)-α-苯乙胺鹽加入1mL 1%醋酸水溶液中，再加入1mL乙酸乙酯，強力震搖後，靜置分層，取乙酸乙酯層用手性色譜分析AHU-377的非對映異構體的純度，HPLC結果可知AHU-377的手性純度大大提高，AHU-377與2S-甲基非對映異構體的比例約為99.5：0.5如第12圖譜圖所示。

實施例22

首先將硬脂酸鎂、膠態二氧化矽和微晶纖維素通過30目篩進行篩分。然後將上述混合物、活性成分AHU-377鈣鹽晶型I、交聯聚乙烯吡咯烷酮和聚維酮在料斗混合機中混合約120轉。使用滾壓機用30kN的壓力壓制所述混合物。壓制後，使用研磨機研磨所述混合物並經18目篩篩分，得到最終的內相或顆粒。將顆粒灌裝於膠囊，製成膠囊劑。

實施例23

首先通過40目篩篩分所述活性成分 AHU-377鈣鹽晶型I。向活性成分中加入微晶纖維素和交聯聚乙烯吡咯烷酮，通過20目篩篩分該混合物。然後將該混合物在料斗混合機中混合旋轉約100轉。然後將低取代羥丙基纖維素和膠態二氧化矽加入料斗混合機中，再使其旋轉100轉。最後加入硬脂酸鎂。然後將粉末狀混合物壓縮成片。

製劑的穩定性及溶出檢測

將實施例22的膠囊和實施例23的片劑分別置不同條件下，考察製劑的穩定性，結果如表所示：

實驗證明，本發明提供的AHU-377鈣鹽晶型I(AHU-377鈣鹽三水合物)純度高，品質穩定可靠，大大改善了AHU-377或其鈉鹽的吸濕性，提高了化學穩定性等，利於產品的儲存，符合工業化生產需要。所得AHU-377鈣鹽晶型I適宜臨床藥物的應用，所製備的膠囊劑可以滿足醫學或藥學需要。在高血壓和心衰治療過程中，可以減少鈉的攝入，減輕了患者心血管負擔，有利於心血管疾病的治療。因此將AHU-377製成鈣鹽等在高血壓和心衰疾病治療中的安全性和有效性上較鈉鹽具有明顯的優勢。

最後應當說明的是，以上實施例僅用以說明本發明的技術方案而非限制本發明，儘管參照較佳實施例對本發明進行了詳細說明，本領域的普通技術人員應當理解，可以對發明的技術方案進行修改或者等同替換，而不脫離本發明技術方案的精神和範圍，其均應涵蓋在本發明的申請專利範圍的範圍內。

本案的圖為實驗數據，並非本案的代表圖。故本案無指定代表圖。

Claims

一種N-(3-羧基-1-氧代丙基)-(4S)-對-苯基苯基甲基)-4-氨基-2R-甲基丁酸乙酯半鈣鹽三水合物晶型，其X射線粉末衍射圖包括位於12.70±0.2°、7.32±0.2°、15.90±0.2°、18.56±0.2°、14.74±0.2°、15.42±0.2°、7.82±0.2°、19.42±0.2°、16.64±0.2°和17.54±0.2°的衍射角(2 θ)處的峰。
如申請專利範圍第1項所述的N-(3-羧基-1-氧代丙基)-(4S)-對-苯基苯基甲基)-4-氨基-2R-甲基丁酸乙酯半鈣鹽三水合物晶型，其中，其X射線粉末衍射圖與第4圖中顯示的衍射角(2 θ)處的峰基本上相同。
一種製備如申請專利範圍第1項所述的N-(3-羧基-1-氧代丙基)-(4S)-對-苯基苯基甲基)-4-氨基-2R-甲基丁酸乙酯半鈣鹽三水合物晶型的製備方法，其中，包括如下步驟，1)將N-(3-羧基-1-氧代丙基)-(4S)-對-苯基苯基甲基)-4-氨基-2R-甲基丁酸乙酯游離酸溶解或混懸在合適的溶劑中，與等量或過量可溶於該體系的苛性鹼或弱鹼性鈉鹽或鉀鹽相混合製備生成N-(3-羧基-1-氧代丙基)-(4S)-對-苯基苯基甲基)-4-氨基-2R-甲基丁酸乙酯相應的鹽；2)將上述N-(3-羧基-1-氧代丙基)-(4S)-對-苯基苯基甲基)-4-氨基-2R-甲基丁酸乙酯鹽體系與水溶性鈣鹽在水或含機溶劑的水體系中相混合，產生N-(3-羧基-1-氧代丙基)-(4S)-對-苯基苯基甲基)-4-氨基-2R-甲基丁酸乙酯鈣鹽沉澱；3)收集上述成鹽反應過程中產物得到N-(3-羧基-1-氧代丙基)-(4S)-對-苯基苯基甲基)-4-氨基-2R-甲基丁酸乙酯半鈣鹽三水合物晶型；步驟1)所述合適的溶劑為結晶溶劑，包括水、水溶性溶劑或其混合物。
如申請專利範圍第3項所述的製備方法，其中，於該步驟1)中為與等量或過量的弱鹼性鈉鹽或鉀鹽相混合。
如申請專利範圍第3項所述的製備方法，其中，該等水溶性溶劑選自醇類、酮類、環醚類、醯胺類、亞碸類有機溶劑或其混合物。
如申請專利範圍第5項所述的製備方法，其中，該等水溶性溶劑選自甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、正丁醇、乙腈、丙酮、甲乙酮、四氫呋喃、二氧六環、N，N-二甲基甲醯胺、二甲基亞碸或其混合物。
如申請專利範圍第3項所述的製備方法，其中，步驟1)所述苛性鹼為氫氧化鈉或氫氧化鉀，該等弱鹼性鈉鹽選自碳酸鈉、碳酸氫鈉、醋酸鈉、甲酸鈉、丙酸鈉、丙烯酸鈉、苯甲酸鈉或其混合物，該等弱鹼性鉀鹽選自碳酸鉀、碳酸氫鉀、醋酸鉀、甲酸鉀、丙酸鉀、丙烯酸鉀、苯甲酸鉀或其混合物；步驟2)所述水溶性鈣鹽選自氯化鈣、溴化鈣、碘化鈣、硝酸鈣、氯酸鈣、次氯酸鈣，高氯酸鈣、乳酸鈣、葡萄糖酸鈣或其混合物。
如申請專利範圍第7項所述的製備方法，其中，該等弱鹼性鈉鹽選自碳酸氫鈉、醋酸鈉或其混合物，該等弱鹼性鉀鹽選自碳酸氫鉀、醋酸鉀或其混合物；所述水溶性鈣鹽選自氯化鈣、氯酸鈣或其混合物。
如申請專利範圍第3項所述的製備方法，其中，步驟3)所得到的N-(3-羧基-1-氧代丙基)-(4S)-對-苯基苯基甲基)-4-氨基-2R-甲基丁酸乙酯半鈣鹽三水合物其粉末X射線衍射圖包括位於12.70±0.2°、7.32±0.2°、15.90±0.2°、18.56±0.2°、14.74±0.2°、15.42±0.2°、7.82±0.2°、19.42±0.2°、16.64±0.2°和17.54±0.2°的衍射角(2 θ)處的峰。
一種藥物組合物，其中所述藥物組合物包含治療有效劑量的如申請專利範圍第1項所述的N-(3-羧基-1-氧代丙基)-(4S)-對-苯基苯基甲基)-4-氨基-2R-甲基丁酸乙酯半鈣鹽三水合物晶型以及藥學上可接受的載體或賦形劑。
如申請專利範圍第10項所述的藥物組合物，其中，該等可藥用載體或賦形劑選自稀釋劑或填充劑、崩解劑、黏合劑、助流劑、潤滑劑、著色劑或其組合。
如申請專利範圍第11項所述的藥物組合物，其中，該等稀釋劑或填充劑選自糖粉、可壓縮糖、葡萄糖、蔗糖、乳糖、糊精、甘露醇、微晶纖維素、山梨醇、澱粉或其組合，稀釋劑或填充劑的用量為組合物重量的4.0%~60.0%；該等崩解劑選自澱粉、黏土、纖維素、藻酸鹽、樹膠、交聯聚合物、大豆多糖、瓜爾膠或其組合，崩解劑的用量為組合物重量的0%~65.0%；該等黏合劑選自澱粉、纖維素及其衍生物、蔗糖、葡萄糖、玉米糖漿、明膠、聚維酮或其組合，黏合劑的用量為組合物重量的1.0%~60.0%；該等助流劑或潤滑劑選自膠態二氧化矽、三矽酸鎂、澱粉、滑石粉、正磷酸鈣、硬脂酸鎂、硬脂酸鋁、硬脂酸鈣、碳酸鈣、氧化鎂、聚乙二醇、粉狀纖維素、山崳酸甘油酯、硬脂酸、氫化蓖麻油、單硬脂酸甘油酯、硬脂醯醇富馬酸鈉或其組合，助流劑或潤滑劑的用量為組合物重量的0%~10.0%。
如申請專利範圍第12項所述的藥物組合物，其中，稀釋劑或填充劑的用量為組合物重量的10.0%~40.0%；該等交聯聚合物係自交聯聚乙烯吡咯烷酮、交聯羧甲基纖維素鈉、交聯羧甲基纖維素鈣或其組合；該崩解劑的用量為組合物重量的1.0%~40.0%；該等纖維素及其衍生物係自微晶纖維素、羥丙基纖維素、羥乙基纖維素、羥丙基甲基纖維素或其組合；該黏合劑的用量為組合物重量的5.0%~40.0%；該助流劑或潤滑劑的用量為組合物重量的0.5%~5.0%。
如申請專利範圍第12項所述的藥物組合物，其中，該等纖維素及其衍生物係羥丙基纖維素；該黏合劑的用量為組合物重量的10.0%~30.0%。
如申請專利範圍第13項所述的藥物組合物，其中，該等纖維素及其衍生物係低取代羥丙基纖維素。
如申請專利範圍10項所述的藥物組合物，其中，該等藥物組合物復包括利尿劑；該等利尿劑選自呋塞米、依他尼酸、布美他尼、托拉塞米、氫氯噻嗪、氯噻酮、苄氟噻嗪、環戊噻嗪、泊利噻嗪、美托拉宗、吲達帕胺或其組合；利尿劑的用量為組合物重量的0.1%~10.0%。
如申請專利範圍第16項所述的藥物組合物，其中，該利尿劑的用量為組合物重量的0.5%~5.0%。
如申請專利範圍第10項所述的藥物組合物，其中，該等藥物組合物可以製備成片劑、膠囊劑、顆粒劑。
如申請專利範圍第10項所述的藥物組合物，其中，該等膠囊劑組分配比如下：
如申請專利範圍第10項所述的藥物組合物，其中，該等膠囊劑組分配比如下：
一種如申請專利範圍第1項所述的N-(3-羧基-1-氧代丙基)-(4S)-對-苯基苯基甲基)-4-氨基-2R-甲基丁酸乙酯半鈣鹽三水合物晶型在製備治療或預防與中性內肽酶有關的疾病、心血管、抗高血壓的藥物中的用途；該等抗高血壓的藥物選自抗惡性高血壓、原發性高血壓、腎血管性高血壓、糖尿病性高血壓、孤立性收縮壓高血壓或其他繼發性高血壓藥物。
一種如申請專利範圍第10至20項中任一項所述的藥物組合物在製備治療或預防與中性內肽酶有關的疾病、心血管、抗高血壓的藥物中的用途；該等抗高血壓的藥物選自抗惡性高血壓、原發性高血壓、腎血管性高血壓、糖尿病性高血壓、孤立性收縮壓高血壓或其他繼發性高血壓藥物。
一種如申請專利範圍第1項所述的N-(3-羧基-1-氧代丙基)-(4S)-對-苯基苯基甲基)-4-氨基-2R-甲基丁酸乙酯半鈣鹽三水合物晶型在製備治療或預防急慢性心衰或有害的血管重構藥物中的用途。
一種如申請專利範圍第10至20項中任一項所述的藥物組合物在製備治療或預防急慢性心衰或有害的血管重構藥物中的用途。
如申請專利範圍第23或24項所述的用途，其中，該等急慢性心衰選自充血性心衰、左心室機能障礙、肥厚性心肌病、糖尿病性心肌病、室上性和室性心律不齊、心房纖維顫動、心房撲動。
如申請專利範圍第10項所述的藥物組合物，其中，該等藥物組合物還包含血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑。
如申請專利範圍第26項所述的藥物組合物，其中，該等血管緊張素Ⅱ拮抗劑選自洛沙坦、厄貝沙坦、奧美沙坦、替米沙坦、纈沙坦、阿齊沙坦、坎地沙坦、依普羅沙坦、氯沙坦、沙普利沙坦、依利沙坦、他索沙坦、艾利沙坦或其可藥用鹽。
如申請專利範圍第27項所述的藥物組合物，其中，該等血管緊張素Ⅱ拮抗劑選自纈沙坦、阿齊沙坦或其可藥用鹽。
一種如申請專利範圍第26或28項所述的藥物組合物在製備治療或預防心肌梗塞及其後遺症、動脈粥樣硬化、心絞痛、糖尿病性或非糖尿病性腎機能不全、繼發性醛固酮增多症、原發性或繼發性肺高血壓、糖尿病性腎病、腎小球腎炎、硬皮病、腎小球硬化、原發性腎病的蛋白尿、腎血管高血壓、糖尿病性視網膜病、偏頭痛、外周血管病、雷諾氏病、腔的增生、認知機能障礙、青光眼或中風藥物中的用途。