TWI711452B - 癌症的倂用治療法 - Google Patents

Abstract

本發明之課題為提供一種組合具有MDM2抑制活性的化合物與具有FLT3抑制活性的化合物而成之醫藥/癌症的治療方法。

本發明之解決手段為提供一種組合(3’R、4’S,5’R)-N-[(3R,6S)-6-胺甲醯基四氫-2H-哌喃-3-基]-6”-氯-4’-(2-氯-3-氟吡啶-4-基)-4,4-二甲基-2”-側氧-1”,2”-二氫二螺[環己烷-1,2’-吡咯啶-3’,3”-吲哚]-5’-甲醯胺或者其藥學上可容許之鹽、與N-(5-三級丁基-異

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Description

癌症的併用治療法

本發明係有關於組合具有鼠雙微體2(Murine Double Minute 2，MDM2)抑制活性的化合物與具有類Fms第三型酪胺酸激酶(Fms-like tyrosine kinase，FLT3)抑制活性的化合物而成之醫藥/癌症的治療方法。

作為抑制細胞之癌化的重要因子之一，已知p53。p53係回應各樣的壓力而誘導涉及細胞週期或細胞之凋亡的基因之表現的轉錄因子。茲認為p53是藉由此轉錄調節機能而抑制細胞之癌化，實際上，於人類之癌症的約半數觀察到p53基因的缺失或突變。

另一方面，作為儘管p53為正常但仍癌化的細胞之癌化的要因之一，已知E3泛蛋白連接酶之1種的MDM2(murine double minute 2)之過度表現。MDM2係因p53而其表現被誘導之蛋白質。MDM2係與p53之轉錄活性域(transcription activity domain)結合而使p53的轉錄活性降低之同時，將p53排出核外，且進一步作為對p53之泛素化連接酶作用而中介p53的分解，藉以將p53作負調控。因此，茲認為在MDM2過度表現之細胞，p53機能 的不活化及分解被促進，而引起癌化(非專利文獻1)。

著眼於如此的MDM2之機能，已有進行許多將阻礙MDM2所致p53之機能抑制的物質作為抗腫瘤劑之候補的方案。就將MDM2與p53之結合部位作為標的之MDM2抑制劑而言，已報告螺吲哚酮(spirooxindole)衍生物(專利文獻1~15、非專利文獻1~3)、吲哚衍生物(專利文獻16)、吡咯啶-2-甲醯胺衍生物(專利文獻17)、吡咯啶酮衍生物(專利文獻18)、異吲哚啉酮衍生物等(專利文獻19、非專利文獻4)、二螺吡咯啶化合物(專利文獻20)等。

茲認為FLT3係與KIT、FMS、及PDGFR等一起為屬於受體型酪胺酸激酶第III型的蛋白質，涉及造血系統(非專利文獻5~8)。於結構上係具有包含5個類免疫球蛋白域的細胞外區域、與1個膜鄰近區域(JM域)、被夾在激酶插入域(KI域)的2個酪胺酸激酶域(TK1及TK2)、及C末端域。FLT3係於腦、胎盤、肝臟、造血幹細胞中強烈地表現(非專利文獻6~9)。

FLT3的配體(FL)係於骨髓的基質細胞表現，單獨或是與其他細胞激素一起作用而刺激幹細胞(非專利文獻10~13)。茲認為FL與FLT3所致之配體-受體的相互作用係於造血系統中擔負重要機能。

另一方面，在急性骨髓性白血病(AML)或急性淋巴性白血病(ALL)患者的樣品，係大部分的情況觀察到FLT3的高表現，在慢性骨髓性白血病(CML)也見到FLT3的高表現。又，已知藉由FL的刺激，而AML細胞的增殖係比ALL細胞還顯著地升高(非專利文獻14~18)。又 ，本基因係於急性骨髓性白血病(AML)的病例中最頻繁地見到突變之基因，在約自30%至35%的患者確認到於膜鄰近區域的基因內縱列重複(ITDs)(非專利文獻19)、或於FLT3的活性化環狀區域(非專利文獻20)的突變之任一者。FLT3-ITD或活性化環狀區域的突變係有關於酪胺酸激酶活性之恆定的活性化。

關於具有FLT3抑制活性之N-(5-三級丁基-異

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啉-4-基-乙氧基)咪唑[2,1-b][1,3]苯并噻唑-2-基]苯基}脲(奎扎替尼(Quizartinib))，已知其抗腫瘤活性。於文獻中有提案使用了奎扎替尼之各樣的癌症之治療。有報告各樣的投予方案(administration regimen)，可參照例如專利文獻21~23(此等之全部係藉由參照而以該等之整體被納入本說明書中。)。又，有報告關於奎扎替尼與蒽環(anthracycline)、拓樸異構酶(topoisomerase)抑制劑或腫瘤細胞代謝拮抗劑之併用效果(專利文獻24)。

關於MDM2抑制劑與FLT3抑制劑之關聯性，有報告適合對於患者的細胞含有具活性化突變之FLT3之患者投予MDM2抑制劑(專利文獻25)。在本文獻中，亦提及關於適合對於患者的細胞含有具活性化突變之FLT3之患者將FLT3抑制劑與MDM2抑制劑併用投予，但並未顯示關於具體之藥劑之組合的具體之併用效果。

有各種報告關於各種MDM2抑制劑與各種抗腫瘤劑之併用效果(專利文獻26~29)。

[先前技術文獻] [專利文獻]

[專利文獻1]WO2006/091646

[專利文獻2]WO2006/136606

[專利文獻3]WO2007/104664

[專利文獻4]WO2007/104714

[專利文獻5]WO2008/034736

[專利文獻6]WO2008/036168

[專利文獻7]WO2008/055812

[專利文獻8]WO2008/141917

[專利文獻9]WO2008/141975

[專利文獻10]WO2009/077357

[專利文獻11]WO2009/080488

[專利文獻12]WO2010/084097

[專利文獻13]WO2010/091979

[專利文獻14]WO2010/094622

[專利文獻15]WO2010/121995

[專利文獻16]WO2008/119741

[專利文獻17]WO2010/031713

[專利文獻18]WO2010/028862

[專利文獻19]WO2006/024837

[專利文獻20]WO2012/121361

[專利文獻21]美國專利申請公開US 2007/0232604

[專利文獻22]美國專利申請公開US 2009/0123418

[專利文獻23]美國專利申請公開US 2009/0131426

[專利文獻24]WO2010/111172

[專利文獻25]WO2011/127058

[專利文獻26]EP1712235

[專利文獻27]WO2007/115289

[專利文獻28]WO2013/139724

[專利文獻29]WO2014/107713

[非專利文獻]

[非專利文獻1]J.Am.Chem.Soc.、2005、127、10130-10131

[非專利文獻2]J.Med.Chem.、2006、49、3432-3435

[非專利文獻3]J.Med.Chem.、2009、52、7970-7973

[非專利文獻4]J.Med.Chem.、2006、49、6209-6221

[非專利文獻5]Genomics、1991、19、380-385

[非專利文獻6]Oncogene、1991、6、1641-1650

[非專利文獻7]Cell、1991、65、1143-1152

[非專利文獻8]Blood、1993、82、1110-1119

[非專利文獻9]Blood、1996、87、1317-1325

[非專利文獻10]Nature、1994、368、643-648

[非專利文獻11]Blood、1995、86、3413-3420

[非專利文獻12]Blood、1995、85、1762-1768

[非專利文獻13]Leukemia、1996、10、1012-1018

[非專利文獻14]Blood、1995、86、4105-4114

[非專利文獻15]Leukemia、1996、10、1584-1591

[非專利文獻16]Blood、1996、88、3987-3997

[非專利文獻17]Blood、1992、80、2584-2593

[非專利文獻18]Leukemia、1996、10、261-270

[非專利文獻19]Leukemia、1996、10、1911-1918

[非專利文獻20]Blood、2001、97 2434-2439

本發明係提供一種組合具有MDM2抑制活性的化合物與具有FLT3抑制活性的化合物而成之醫藥/癌症的治療方法。

本發明者們專心致力研討之結果，發現到藉由將具有MDM2抑制活性的化合物之(3’R,4’S,5’R)-N-[(3R,6S)-6-胺甲醯基四氫-2H-哌喃-3-基]-6”-氯-4’-(2-氯-3-氟吡啶-4-基)-4,4-二甲基-2”-側氧-1”,2”-二氫二螺[環己烷-1,2’-吡咯啶-3’,3”-吲哚]-5’-甲醯胺或者其藥學上可容許之鹽與具有FLT3抑制活性的化合物之N-(5-三級丁基-異

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啉-4-基-乙氧基)咪唑[2,1-b][1,3]苯并噻唑-2-基]苯基}脲或者其藥學上可容許之鹽組合而使用，可獲得體重減少等副作用係保持為低的狀態而特別優異之抗腫瘤效果，完成了本發明。

亦即，本發明係有關以下的[1]~[21]。

[1]一種用於癌症治療之醫藥，其特徵為(3’R,4’S,5’R)-N-[(3R,6S)-6-胺甲醯基四氫-2H-哌喃-3-基]-6”-氯-4’-(2-氯-3-氟吡啶-4-基)-4,4-二甲基-2”-側氧-1”,2”-二氫二螺[環己烷-1,2’-吡咯啶-3’,3”-吲哚]-5’-甲 醯胺或其藥學上可容許之鹽與N-(5-三級丁基-異

唑-3-基)-N’-{4-[7-(2-

啉-4-基-乙氧基)咪唑[2,1-b][1,3]苯并噻唑-2-基]苯基}脲或其藥學上可容許之鹽係組合而被投予。

[2]請求項1所記載之醫藥，其特徵為(3’R,4’S,5’R)-N-[(3R,6S)-6-胺甲醯基四氫-2H-哌喃-3-基]-6”-氯-4’-(2-氯-3-氟吡啶-4-基)-4,4-二甲基-2”-側氧-1”,2”-二氫二螺[環己烷-1,2’-吡咯啶-3’,3”-吲哚]-5’-甲醯胺或其藥學上可容許之鹽與N-(5-三級丁基-異

唑-3-基)-N’-{4-[7-(2-

啉-4-基-乙氧基)咪唑[2,1-b][1,3]苯并噻唑-2-基]苯基}脲或其藥學上可容許之鹽係各自作為不同製劑的有效成分而被含有，且在同時、或在不同時間被投予。

[3]請求項1所記載之醫藥，其特徵為(3’R,4’S,5’R)-N-[(3R,6S)-6-胺甲醯基四氫-2H-哌喃-3-基]-6”-氯-4’-(2-氯-3-氟吡啶-4-基)-4,4-二甲基-2”-側氧-1”,2”-二氫二螺[環己烷-1,2’-吡咯啶-3’,3”-吲哚]-5’-甲醯胺或其藥學上可容許之鹽與N-(5-三級丁基-異

唑-3-基)-N’-{4-[7-(2-

啉-4-基-乙氧基)咪唑[2,1-b][1,3]苯并噻唑-2-基]苯基}脲或其藥學上可容許之鹽係被含有於單一製劑中。

[4]請求項1所記載之醫藥，其特徵為其係包含(3’R,4’S,5’R)-N-[(3R,6S)-6-胺甲醯基四氫-2H-哌喃-3-基]-6”-氯-4’-(2-氯-3-氟吡啶-4-基)-4,4-二甲基-2”-側氧-1”,2”-二氫二螺[環己烷-1,2’-吡咯啶-3’,3”-吲哚]-5’-甲醯胺或其藥學上可容許之鹽與N-(5-三級丁基-異

唑-3-基)-N’-{4-[7-(2-

啉-4-基-乙氧基)咪唑[2,1-b][1,3]苯并噻唑-2- 基]苯基}脲或其藥學上可容許之鹽的套組製劑。

[5]一種癌症的治療方法，其特徵為將(3’R,4’S,5’R)-N-[(3R,6S)-6-胺甲醯基四氫-2H-哌喃-3-基]-6”-氯-4’-(2-氯-3-氟吡啶-4-基)-4,4-二甲基-2”-側氧-1”,2”-二氫二螺[環己烷-1,2’-吡咯啶-3’,3”-吲哚]-5’-甲醯胺或其藥學上可容許之鹽與N-(5-三級丁基-異

唑-3-基)-N’-{4-[7-(2-

啉-4-基-乙氧基)咪唑[2,1-b][1,3]苯并噻唑-2-基]苯基}脲或其藥學上可容許之鹽組合而投予。

[6]請求項1~4之任1項所記載之醫藥，其中上述各自之化合物的鹽係(3’R,4’S,5’R)-N-[(3R,6S)-6-胺甲醯基四氫-2H-哌喃-3-基]-6”-氯-4’-(2-氯-3-氟吡啶-4-基)-4,4-二甲基-2”-側氧-1”,2”-二氫二螺[環己烷-1,2’-吡咯啶-3’,3”-吲哚]-5’-甲醯胺的對甲苯磺酸鹽、與N-(5-三級丁基-異

唑-3-基)-N’-{4-[7-(2-

啉-4-基-乙氧基)咪唑[2,1-b][1,3]苯并噻唑-2-基]苯基}脲的二鹽酸鹽。

[7]請求項5所記載之治療方法，其中上述各自之化合物的鹽係(3’R,4’S,5’R)-N-[(3R,6S)-6-胺甲醯基四氫-2H-哌喃-3-基]-6”-氯-4’-(2-氯-3-氟吡啶-4-基)-4,4-二甲基-2”-側氧-1”,2”-二氫二螺[環己烷-1,2’-吡咯啶-3’,3”-吲哚]-5’-甲醯胺的對甲苯磺酸鹽、與N-(5-三級丁基-異

唑-3-基)-N’-{4-[7-(2-

啉-4-基-乙氧基)咪唑[2,1-b][1,3]苯并噻唑-2-基]苯基}脲的二鹽酸鹽。

[8]請求項1~4及6之任1項所記載之醫藥，其中癌症為血液癌症(白血病、淋巴瘤、多發性骨髓瘤)、腦腫瘤、頭頸部癌症、食道癌、胃癌、闌尾癌、大腸癌、肛門 癌、膽囊癌、膽管癌、胰臟癌、胃腸道基質瘤、肺癌、肝臟癌、間皮瘤、甲狀腺癌、腎臟癌、前列腺癌、神經內分泌瘤、黑色素瘤、乳癌、子宮體癌、子宮頸癌、卵巢癌、骨肉瘤、軟組織肉瘤、卡波西氏肉瘤、肌肉瘤、腎臟癌、膀胱癌或睾丸癌。

[9]請求項5或7所記載之治療方法，其中癌症為血液癌症(白血病、淋巴瘤、多發性骨髓瘤)、腦腫瘤、頭頸部癌症、食道癌、胃癌、闌尾癌、大腸癌、肛門癌、膽囊癌、膽管癌、胰臟癌、胃腸道基質瘤、肺癌、肝臟癌、間皮瘤、甲狀腺癌、腎臟癌、前列腺癌、神經內分泌瘤、黑色素瘤、乳癌、子宮體癌、子宮頸癌、卵巢癌、骨肉瘤、軟組織肉瘤、卡波西氏肉瘤、肌肉瘤、腎臟癌、膀胱癌或睾丸癌。

[10]請求項1~4及6之任1項所記載之醫藥，其中癌症為白血病。

[11]請求項5或7所記載之治療方法，其中癌症為白血病。

[12]請求項1~4及6之任1項所記載之醫藥，其中癌症為具有FLT3之活性型突變的白血病。

[13]請求項5或7所記載之治療方法，其中癌症為具有FLT3之活性型突變的白血病。

[14]請求項1~4及6之任1項所記載之醫藥，其中癌症為急性骨髓性白血病(AML：acute myelogenous leukemia)。

[15]請求項5或7所記載之治療方法，其中癌症為急 性骨髓性白血病(AML：acute myelogenous leukemia)。

[16]請求項1~4及6之任1項所記載之醫藥，其中癌症為具有FLT3-ITD突變的急性骨髓性白血病(AML：acute myelogenous leukemia)。

[17]請求項5或7所記載之治療方法，其中癌症為具有FLT3-ITD突變的急性骨髓性白血病(AML：acute myelogenous leukemia)。

[18]請求項1~4及6之任1項所記載之醫藥，其中癌症為具有野生型TP53的癌症。

[19]請求項5或7所記載之治療方法，其中癌症為具有野生型TP53的癌症。

[20]請求項1~4及6之任1項所記載之醫藥，其中癌症為使用基因印記(gene signature)而被判定為MDM2抑制劑感受性的癌症。

[21]請求項5或7所記載之治療方法，其中癌症為使用基因印記而被判定為MDM2抑制劑感受性的癌症。

本發明係作為癌症的治療方法、及/或抗癌劑為有用的。

第1圖係顯示對於具有FLT3-ITD突變、野生型TP53的人類急性骨髓性白血病細胞株MOLM-13小鼠皮下移植腫瘤之(3’R,4’S,5’R)-N-[(3R,6S)-6-胺甲醯基四氫-2H-哌喃-3-基]-6”-氯-4’-(2-氯-3-氟吡啶-4-基)-4,4-二甲基 -2”-側氧-1”,2”-二氫二螺[環己烷-1,2’-吡咯啶-3’,3”-吲哚]-5’-甲醯胺甲苯磺酸鹽(化合物A)與N-(5-三級丁基-異

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啉-4-基-乙氧基)咪唑[2,1-b][1,3]苯并噻唑-2-基]苯基}脲(奎扎替尼)的活體內(in vivo)之併用效果及併用投予時的體重變化之圖。於第1-1圖中，×記號表示未處理對照組，白色圓形記號表示奎扎替尼0.5mg/kg，黑色圓形記號表示奎扎替尼1mg/kg，白色三角形記號表示化合物A 25mg/kg，白色四方形記號表示化合物A 25mg/kg+奎扎替尼0.5mg/kg，黑色四方形記號表示化合物A 25mg/kg+奎扎替尼1mg/kg。橫軸表示腫瘤移植後的天數。上段縱軸表示由腫瘤徑算出之推定腫瘤體積，下段縱軸表示對投予首日之體重的體重變化率。於第1-2圖中，×記號表示未處理對照組，白色圓形記號表示奎扎替尼0.5mg/kg，黑色圓形記號表示奎扎替尼1mg/kg，黑色三角形記號表示化合物A 50mg/kg，白色四方形記號表示化合物A 50mg/kg+奎扎替尼0.5mg/kg，黑色四方形記號表示化合物A 50mg/kg+奎扎替尼1mg/kg。橫軸表示腫瘤移植後的天數。上段縱軸表示由腫瘤徑算出之推定腫瘤體積，下段縱軸表示對投予首日之體重的體重變化率。第1-1圖、第1-2圖之橫軸上或橫軸下的黑色三角形記號表示各化合物的投予日。

[實施發明之形態]

於本發明中，(3’R,4’S,5’R)-N-[(3R,6S)-6-胺甲醯基四氫-2H-哌喃-3-基]-6”-氯-4’-(2-氯-3-氟吡啶-4-基)-4,4-二甲基-2”-側氧-1”,2”-二氫二螺[環己烷-1,2’-吡 咯啶-3’,3”-吲哚]-5’-甲醯胺係WO2012/121361的實施例70之化合物。本化合物可藉由WO2012/121361所記載的方法製造(WO2012/121361係藉由參照而全部被納入本說明書中)。

於本發明中，N-(5-三級丁基-異

唑-3-基)-N’-{4-[7-(2-

啉-4-基-乙氧基)咪唑[2,1-b][1,3]苯并噻唑-2-基]苯基}脲亦有被表記為1-(5-三級丁基-1,2-

唑-3-基)-3-(4-{7-[2-(

啉-4-基)乙氧基]咪唑[2,1-b][1,3]苯并噻唑-2-基}苯基)脲的情況，也有被表示為奎扎替尼(Quizartinib)、AC220的情況，係下述式

所表示之化合物。本化合物可藉由WO2007/109120所記載之方法製造(WO2007/109120係藉由參照而全部被納入本說明書中。)。

於本發明中，(3’R,4’S,5’R)-N-[(3R,6S)-6-胺甲醯基四氫-2H-哌喃-3-基]-6”-氯-4’-(2-氯-3-氟吡啶-4-基)-4,4-二甲基-2”-側氧-1”,2”-二氫二螺[環己烷-1,2’-吡咯啶-3’,3”-吲哚]-5’-甲醯胺及N-(5-三級丁基-異

唑-3-基)-N’-{4-[7-(2-

啉-4-基-乙氧基)咪唑[2,1-b][1,3]苯并噻唑-2-基]苯基}脲亦可為各種之藥學上可容許之鹽。

就鹽而言，可舉出例如鹽酸鹽、氫碘酸鹽等之氫鹵酸鹽；硝酸鹽、過氯酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽等之 無機酸鹽；甲磺酸鹽、三氟甲磺酸鹽、乙磺酸鹽等之低級烷磺酸鹽；苯磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽等之芳香基磺酸鹽；蟻酸、乙酸、蘋果酸、富馬酸鹽、琥珀酸鹽、檸檬酸鹽、酒石酸鹽、草酸鹽、馬來酸鹽等之有機酸鹽；及鳥胺酸鹽、麩胺酸鹽、天門冬胺酸鹽等之胺基酸鹽；鈉鹽、鉀鹽、鋰鹽等之鹼金屬鹽；鈣鹽、鎂鹽等之鹼土金屬鹽；銨鹽等之無機鹽；二苯胺鹽、

啉鹽、苯基甘胺酸烷基酯鹽、乙二胺鹽、N-甲基葡糖胺鹽、二乙胺鹽、三乙胺鹽、環己胺鹽、二環己胺鹽、N,N’-二芐基乙二胺鹽、二乙醇胺鹽、N-芐基-N-(2-苯基乙氧基)胺鹽、哌

鹽、四甲銨鹽、參(羥甲)胺基甲烷鹽等之有機胺鹽等。

就(3’R,4’S,5’R)-N-[(3R,6S)-6-胺甲醯基四氫-2H-哌喃-3-基]-6”-氯-4’-(2-氯-3-氟吡啶-4-基)-4,4-二甲基-2”-側氧-1”,2”-二氫二螺[環己烷-1,2’-吡咯啶-3’,3”-吲哚]-5’-甲醯胺的鹽而言，較佳為對甲苯磺酸鹽。就N-(5-三級丁基-異

唑-3-基)-N’-{4-[7-(2-

啉-4-基-乙氧基)咪唑[2,1-b][1,3]苯并噻唑-2-基]苯基}脲的鹽而言，較佳為鹽酸鹽，特佳為二鹽酸鹽。

於本發明中，(3’R,4’S,5’R)-N-[(3R,6S)-6-胺甲醯基四氫-2H-哌喃-3-基]-6”-氯-4’-(2-氯-3-氟吡啶-4-基)-4,4-二甲基-2”-側氧-1”,2”-二氫二螺[環己烷-1,2’-吡咯啶-3’,3”-吲哚]-5’-甲醯胺及N-(5-三級丁基-異

唑-3-基)-N’-{4-[7-(2-

啉-4-基-乙氧基)咪唑[2,1-b][1,3]苯并噻唑-2-基]苯基}脲或者該等之藥學上容許之鹽也有作為游離體或者溶劑合物存在的情形。也有藉由將空氣中的 水分吸收等而作為水合物存在的情形。就溶劑合物而言，若為醫藥上可容許者，則不被特別限定，但具體而言，較佳為水合物、乙醇合物等。又，於氮原子存在於通式(1)所表示之化合物中的情況，亦可成為N-氧化物，此等溶劑合物及N-氧化物體亦被包含在本發明之範圍中。

(3’R,4’S,5’R)-N-[(3R,6S)-6-胺甲醯基四氫-2H-哌喃-3-基]-6”-氯-4’-(2-氯-3-氟吡啶-4-基)-4,4-二甲基-2”-側氧-1”,2”-二氫二螺[環己烷-1,2’-吡咯啶-3’,3”-吲哚]-5’-甲醯胺及N-(5-三級丁基-異

唑-3-基)-N’-{4-[7-(2-

啉-4-基-乙氧基)咪唑[2,1-b][1,3]苯并噻唑-2-基]苯基}脲或者該等之藥學上容許之鹽會因該等之構造可產生立體異構物。此等之立體異構物、及此等之立體異構物的任意之比例的混合物也全部包含。立體異構物的定義係如1996 IUPC，Pure and Applied Chemistry 68，2193-2222所示。(3’R,4’S,5’R)-N-[(3R,6S)-6-胺甲醯基四氫-2H-哌喃-3-基]-6”-氯-4’-(2-氯-3-氟吡啶-4-基)-4,4-二甲基-2”-側氧-1”,2”-二氫二螺[環己烷-1,2’-吡咯啶-3’,3”-吲哚]-5’-甲醯胺及N-(5-三級丁基-異

唑-3-基)-N’-{4-[7-(2-

啉-4-基-乙氧基)咪唑[2,1-b][1,3]苯并噻唑-2-基]苯基}脲或者該等之藥學上容許之鹽作為互變異構物存在的情況，該等之互變異構物以平行狀態存在的情況、或某形態係支配性地存在的情況之任一者也都被包含在本發明之範圍中。互變異構物係指因分子之1個原子的質子位移至其他原子而產生的異構物。

又，(3’R,4’S,5’R)-N-[(3R,6S)-6-胺甲醯基四 氫-2H-哌喃-3-基]-6”-氯-4’-(2-氯-3-氟吡啶-4-基)-4,4-二甲基-2”-側氧-1”,2”-二氫二螺[環己烷-1,2’-吡咯啶-3’,3”-吲哚]-5’-甲醯胺及N-(5-三級丁基-異

唑-3-基)-N’-{4-[7-(2-

啉-4-基-乙氧基)咪唑[2,1-b][1,3]苯并噻唑-2-基]苯基}脲或者該等之藥學上容許之鹽，亦可為在活體內之生理條件下藉由酵素或胃酸等所致反應而引起酵素性氧化、還原、水解等，或藉由胃酸等而引起水解等，被變化為所期待之化合物的「醫藥上可容許之前藥化合物」。

就上述前藥而言，可舉出被醯化、烷化、磷酸化之化合物等。

化合物的前藥係可藉由公知的方法而由化合物(1)製造。又，化合物的前藥亦包含如(日本)廣川書店1990年刊「醫藥品的開發」第7卷分子設計163頁~198頁所記載的，在生理性條件下變化為所期待之化合物者。

於本發明中，「腫瘤」及「癌症」之用語係能夠交換地被使用。又，於本發明中，亦有將腫瘤、惡性腫瘤、癌症、惡性新生物、癌腫、肉瘤等統稱而表現為「腫瘤」或「癌症」的情況。

於本發明中，「FLT3」係意指類Fms第三型酪胺酸激酶(FLT3)，與FLK2、STK1、CD135、FLK-2同義，亦包含來自各種之動物種的同系物。人類FLT3係於NCBI被登錄為RefSEQ：accession NM_004119.2(蛋白質：RefSeq NP_004110.2)的分子。

FLT3 mRNA係具有下述所示之序列，但須理 解即便是未發生突變的FLT3，亦藉由多態性等而於序列會產生個體差異。

FLT3蛋白質的胺基酸序列係如下述，但須理解即便是未發生突變的FLT3，亦藉由多態性等而於序列會產生個體差異。

於本發明中，「FLT3的活性型突變」係意指會引起FLT3之配體非依存性活性化的突變，並不被特別限定，但可舉出例如在膜鄰近區域(Juxtamembrane：JM區域)之基因內縱列重複(Internal Tandem Duplication：ITD)、或於FLT3之活性化環狀區域發生的點突變D835V、D835E、D835N、D835Y、D835H等。FLT3-ITD突變係集中於JM區域的外顯子14，其他也於外顯子15有被確認。

於本發明中，「野生型TP53」係意指編碼p53蛋白質之基因TP53是具有於NCBI被登錄為RefSEQ：accession NM_000546(蛋白質：RefSeq NP_000537)之序列的基因。

野生型TP53的mRNA係具有下述所示序列， 但須理解即便是未發生突變的TP53，亦藉由多態性等而於序列會產生個體差異。

TP53蛋白質的胺基酸序列係如下述，但須理解即便是未發生突變的TP53，亦藉由多態性等而於序列會產生個體差異。

於本發明中，「基因印記」係意指單一的基因、或包含複數的基因之基因群其表現型式於對某種疾病之罹患、對某種醫藥之反應性、某種疾病之預後等之生物學上的表現型或醫學上的狀態具有特徵之該基因、或基因群。

於本發明中，「生物學上的樣品(biological sample)」係指由個體所單離之組織、液體、細胞、及該等之混合物，可舉出例如腫瘤生檢、腦脊髓液、胸水、腹水、淋巴液、皮膚切片、血液、尿、糞便、痰、呼吸器官、腸管、生殖泌尿道、唾液、乳汁、消化器官、及由此等所採集之細胞，但不被限定於此等。「生物學上的樣品」係較佳可例示例如：在以癌症疾病之治療目的所進行的手術之際獲得之來自受試者之切除組織的一部份、由被懷疑癌症疾病之受試者藉由生檢等所採集之組織的一部份、或是來自胸水或腹水的細胞。

生物學上的樣品亦可為從由個體所單離的組織、液體、細胞、及該等之混合物等製備的蛋白質萃取液或核酸萃取液。蛋白質萃取液或核酸萃取液的製備係利用其本身公知的蛋白質製備法或核酸製備法而可實施。

本發明之一態樣係關於一種用於癌症治療的醫藥，其特徵為(3’R,4’S,5’R)-N-[(3R,6S)-6-胺甲醯基四氫-2H-哌喃-3-基]-6”-氯-4’-(2-氯-3-氟吡啶-4-基)-4,4-二 甲基-2”-側氧-1”,2”-二氫二螺[環己烷-1,2’-吡咯啶-3’,3”-吲哚]-5’-甲醯胺或其藥學上可容許之鹽與N-(5-三級丁基-異

唑-3-基)-N’-{4-[7-(2-

啉-4-基-乙氧基)咪唑[2,1-b][1,3]苯并噻唑-2-基]苯基}脲或其藥學上可容許之鹽係組合而被投予。

於本發明中，(3’R,4’S,5’R)-N-[(3R,6S)-6-胺甲醯基四氫-2H-哌喃-3-基]-6”-氯-4’-(2-氯-3-氟吡啶-4-基)-4,4-二甲基-2”-側氧-1”,2”-二氫二螺[環己烷-1,2’-吡咯啶-3’,3”-吲哚]-5’-甲醯胺或者其藥學上可容許之鹽與N-(5-三級丁基-異

唑-3-基)-N’-{4-[7-(2-

啉-4-基-乙氧基)咪唑[2,1-b][1,3]苯并噻唑-2-基]苯基}脲或者其藥學上可容許之鹽係「組合而被投予之醫藥」，是指被假定為兩藥劑係組合而被投予之醫藥。

於本發明中，(3’R,4’S,5’R)-N-[(3R,6S)-6-胺甲醯基四氫-2H-哌喃-3-基]-6”-氯-4’-(2-氯-3-氟吡啶-4-基)-4,4-二甲基-2”-側氧-1”,2”-二氫二螺[環己烷-1,2’-吡咯啶-3’,3”-吲哚]-5’-甲醯胺或者其藥學上可容許之鹽與N-(5-三級丁基-異

唑-3-基)-N’-{4-[7-(2-

啉-4-基-乙氧基)咪唑[2,1-b][1,3]苯并噻唑-2-基]苯基}脲或者其藥學上可容許之鹽係「組合而被投予」是意指於某一定期間中，被投予對象將兩藥劑攝入其體內。可投予兩藥劑被包含於單一製劑中的製劑，又可各自分別地被製劑化且分別地被投予。分別地被製劑化的情況，其投予的時期並未被特別限定，可於同時被投予，亦可間隔時間而於不同時間、或於不同日子被投予。(3’R,4’S,5’R)-N-[( 3R,6S)-6-胺甲醯基四氫-2H-哌喃-3-基]-6”-氯-4’-(2-氯-3-氟吡啶-4-基)-4,4-二甲基-2”-側氧-1”,2”-二氫二螺[環己烷-1,2’-吡咯啶-3’,3”-吲哚]-5’-甲醯胺或者其藥學上可容許之鹽與N-(5-三級丁基-異

唑-3-基)-N’-{4-[7-(2-

啉-4-基-乙氧基)咪唑[2,1-b][1,3]苯并噻唑-2-基]苯基}脲或者其藥學上可容許之鹽係各自於不同時間或日子被投予的情況，其投予的順序並未被特別限定。通常，各自之製劑係按照各自之投予方法被投予，所以該等之投予也有成為同樣次數的情況，也有成為不同的次數的情況。又，各自係分別地被製劑化的情況，各製劑的投予方法(投予途徑)亦可相同，亦可以不同的投予方法(投予途徑)被投予。又，並無兩藥劑同時存在於體內之必要，只要於某一定期間(例如，一個月中，較佳為1週中、進一步較佳為數日中，進一步更佳為1日中)當中被攝入體內即可，亦可於任一者之投予時另一者之有效成分由體內消失。

若例示本發明之醫藥的投予形態，則可舉出例如：1)包含(3’R,4’S,5’R)-N-[(3R,6S)-6-胺甲醯基四氫-2H-哌喃-3-基]-6”-氯-4’-(2-氯-3-氟吡啶-4-基)-4,4-二甲基-2”-側氧-1”,2”-二氫二螺[環己烷-1,2’-吡咯啶-3’,3”-吲哚]-5’-甲醯胺或者其藥學上可容許之鹽與N-(5-三級丁基-異

唑-3-基)-N’-{4-[7-(2-

啉-4-基-乙氧基)咪唑[2,1-b][1,3]苯并噻唑-2-基]苯基}脲或者其藥學上可容許之鹽的單一製劑之投予；2)將(3’R,4’S,5’R)-N-[(3R,6S)-6-胺甲醯基四氫-2H-哌喃-3-基]-6”-氯-4’-(2-氯-3-氟吡 啶-4-基)-4,4-二甲基-2”-側氧-1”,2”-二氫二螺[環己烷-1,2’-吡咯啶-3’,3”-吲哚]-5’-甲醯胺或者其藥學上可容許之鹽與N-(5-三級丁基-異

唑-3-基)-N’-{4-[7-(2-

啉-4-基-乙氧基)咪唑[2,1-b][1,3]苯并噻唑-2-基]苯基}脲或者其藥學上可容許之鹽分別地製劑化所獲得的2種製劑以同樣投予途徑之同時投予；3)將(3’R,4’S,5’R)-N-[(3R,6S)-6-胺甲醯基四氫-2H-哌喃-3-基]-6”-氯-4’-(2-氯-3-氟吡啶-4-基)-4,4-二甲基-2”-側氧-1”,2”-二氫二螺[環己烷-1,2’-吡咯啶-3’,3”-吲哚]-5’-甲醯胺或者其藥學上可容許之鹽與N-(5-三級丁基-異

唑-3-基)-N’-{4-[7-(2-

啉-4-基-乙氧基)咪唑[2,1-b][1,3]苯并噻唑-2-基]苯基}脲或者其藥學上可容許之鹽分別地製劑化所獲得的2種製劑以同樣投予途徑隔著時間差之投予；4)將(3’R,4’S,5’R)-N-[(3R,6S)-6-胺甲醯基四氫-2H-哌喃-3-基]-6”-氯-4’-(2-氯-3-氟吡啶-4-基)-4,4-二甲基-2”-側氧-1”,2”-二氫二螺[環己烷-1,2’-吡咯啶-3’,3”-吲哚]-5’-甲醯胺或者其藥學上可容許之鹽與N-(5-三級丁基-異

唑-3-基)-N’-{4-[7-(2-

啉-4-基-乙氧基)咪唑[2,1-b][1,3]苯并噻唑-2-基]苯基}脲或者其藥學上可容許之鹽分別地製劑化所獲得的2種製劑以不同的投予途徑之同時投予；5)將(3’R,4’S,5’R)-N-[(3R,6S)-6-胺甲醯基四氫-2H-哌喃-3-基]-6”-氯-4’-(2-氯-3-氟吡啶-4-基)-4,4-二甲基-2”-側氧-1”,2”-二氫二螺[環己烷-1,2’-吡咯啶-3’,3”-吲哚]-5’-甲醯胺或者其藥學上可容許之鹽與N-(5-三級丁基-異

唑-3-基)-N’-{4-[7-(2-

啉-4-基-乙氧基)咪唑[2,1-b][1,3]苯并噻唑-2-基]苯 基}脲或者其藥學上可容許之鹽分別地製劑化所獲得的2種製劑以不同的投予途徑隔著時間差之投予等。

於本發明中，作成2種不同製劑的情況，亦可使成為包含該等之套組。

本發明關聯之醫藥係包含(3’R,4’S,5’R)-N-[(3R,6S)-6-胺甲醯基四氫-2H-哌喃-3-基]-6”-氯-4’-(2-氯-3-氟吡啶-4-基)-4,4-二甲基-2”-側氧-1”,2”-二氫二螺[環己烷-1,2’-吡咯啶-3’,3”-吲哚]-5’-甲醯胺或者其藥學上可容許之鹽及/或N-(5-三級丁基-異

唑-3-基)-N’-{4-[7-(2-

啉-4-基-乙氧基)咪唑[2,1-b][1,3]苯并噻唑-2-基]苯基}脲或者其藥學上可容許之鹽、與藥學上可容許之載體，可作為靜脈內注射、肌肉內注射、皮下注射等之各種注射劑、或是藉由經口投予或經皮投予等之各種的方法來投予。藥學上可容許之載體，係意指涉及將本發明之化合物或包含本發明之化合物的組成物由某器官或臟器輸送至其他器官或臟器的藥學上可容許之材料(例如賦形劑、稀釋劑、添加劑、溶媒等)。

就製劑的製備方法而言，係可因應投予法而選擇適當的製劑(例如經口劑或注射劑)，且以通常所使用之各種製劑的製備法而製備。就經口劑而言，可例示例如錠劑、散劑、顆粒劑、膠囊劑、丸劑、片劑(troche)、溶液劑、糖漿劑、酏劑、乳劑、或油性或水性的懸浮液等。在經口投予的情況，以游離體直接、或鹽的樣式之任一者皆可。水性製劑係可藉由與藥學上可容許之酸形成酸加成物、或成為鈉等之鹼金屬鹽而製備。注射劑 的情況，亦可於製劑中使用安定劑、防腐劑或助溶劑等。也可以將亦有含有此等之佐劑等的情形之溶液收納於容器後，藉由冷凍乾燥等製成固體製劑而作為用時製備之製劑。又，可將一次投予量收納於一個容器，還可將複數次投予量收納於一個容器。

就固體製劑而言，可舉出例如錠劑、散劑、顆粒劑、膠囊劑、丸劑、或片劑。此等之固體製劑亦可與本發明的化合物一起含有藥學上可容許之添加物。就添加物而言，可舉出例如填充劑類、增量劑類、結合劑類、崩解劑類、增溶劑類、潤濕劑類或潤滑劑類，可將此等因應必要來選擇而混合且製劑化。

就液體製劑而言，可舉出例如溶液劑、糖漿劑、酏劑、乳劑、或懸浮劑。就添加物而言，可舉出例如防止沈澱劑或乳化劑，可將此等因應必要來選擇而混合且製劑化。

作為製劑用的物質可舉出以下之物，但不被限制於此等：甘胺酸、丙胺酸、麩胺酸、天冬醯胺酸、精胺酸或離胺酸等之胺基酸類、抗菌劑、抗壞血酸、硫酸鈉或亞硫酸氫鈉等之抗氧化劑、磷酸、檸檬酸、硼酸緩衝液、碳酸氫鈉、三鹽酸(Tris-HCl)溶液等之緩衝劑、甘露醇或甘胺酸等之填充劑、乙二胺四乙酸(EDTA)等之螯合劑、咖啡因、聚乙烯吡咯啶、β-環糊精或羥丙基-β-環糊精等之錯合劑、葡萄糖、甘露糖或糊精等之增量劑、單醣類、雙醣類等之其他碳水化合物、著色劑、調味劑、稀釋劑、乳化劑或聚乙烯吡咯啶等之親水聚合物、 低分子量多肽、鹽形成對離子、氯化苄烷銨、安息香酸、水楊酸、硫柳汞(thimerosal)、苯乙醇、對羥苯甲酸甲酯、對羥苯甲酸丙酯、洛赫西定(chlorhexidine)、山梨酸或過氧化氫等之防腐劑、甘油、丙二醇或聚乙二醇等之溶媒、甘露醇或山梨醇等之糖醇、懸浮劑、去水山梨醇酯、聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80等之聚山梨醇酯、Triton、三木甲胺(tromethamine)、卵磷脂或膽固醇等之界面活性劑、蔗糖或山梨醇等之安定化增強劑、氯化鈉、氯化鉀或甘露醇、山梨醇等之彈性增強劑、輸送劑、賦形劑、及/或藥學上之佐劑。此等之製劑用的物質之添加量係相對於藥劑之重量為0.01~100倍、特佳為添加0.1~10倍。製劑中之適合的醫藥組成物之組成可由本技術領域中具有通常知識者因應適用疾病、適用投予途徑等而適當決定。

醫藥組成物中的賦形劑或載體係液體或固體皆可。適當的賦形劑或載體為注射用的水或生理食鹽水、亦可為人工腦脊髓液或通常被用於非經口投予之其他物質。亦可於載體使用中性的生理食鹽水或含血清白蛋白的生理食鹽水。於醫藥組成物可含有pH7.0-8.5的Tris緩衝液、pH4.0-5.5的乙酸緩衝液、pH3.0-6.2的檸檬酸緩衝液。又，亦可於此等之緩衝液含有山梨醇或其他化合物。

就N-(5-三級丁基-異

唑-3-基)-N’-{4-[7-(2-

啉-4-基-乙氧基)咪唑[2,1-b][1,3]苯并噻唑-2-基]苯基}脲或者其藥學上可容許之鹽的製劑之適合的例子而言， 可舉出WO2014/055397所記載之製劑(WO2014/055397係藉由參照而其全部被納入本說明書中。)。

本發明可用於哺乳類，特別是人類的癌症治療。本發明之醫藥的投予量及投予間隔，係依疾病的場所、患者的身高、體重、性別或病歷，根據醫師的判斷而可被適當選擇。將本發明之醫藥對人投予的情況，投予量的範圍係針對一種類的有效成分，每日約0.01mg/kg體重~約500mg/kg體重，較佳為約0.1mg/kg體重~約100mg/kg體重。對人投予的情況，較佳為每日1次，或是分為2至4次被投予，較佳為以適當的間隔反覆進行。又，1日量係根據醫師的判斷而依必要亦可超過上述之量。

就N-(5-三級丁基-異

唑-3-基)-N’-{4-[7-(2-

啉-4-基-乙氧基)咪唑[2,1-b][1,3]苯并噻唑-2-基]苯基}脲或者其藥學上可容許之鹽的投予方法之例示而言，藉由參照WO2009/061446所記載之方法、WO2010/132787所記載之方法、US8357690所記載之方法，而該等之全部被納入本說明書中。亦可1週中、2週中、3週中、4週中或5週中以1日1次進行投予。作為較佳例可列舉28日中連續投予本劑12~450mg，例如20mg、30mg、40mg、50mg、60mg、90mg、135mg、200mg、300mg或450mg的方法；8-21日中與其他抗癌劑一起連續投予的方法；4-17日中與其他抗癌劑一起連續投予的方法等。

成為治療的對象之癌症的種類若為對於本發明之併用治療而感受性被確認的癌症，則不被特別限定，但可舉出血液癌症(白血病、淋巴瘤、多發性骨髓瘤) 、腦腫瘤、頭頸部癌症、食道癌、胃癌、闌尾癌、大腸癌、肛門癌、膽囊癌、膽管癌、胰臟癌、胃腸道基質瘤、肺癌、肝臟癌、間皮瘤、甲狀腺癌、腎臟癌、前列腺癌、神經內分泌瘤、黑色素瘤、乳癌、子宮體癌、子宮頸癌、卵巢癌、骨肉瘤、軟組織肉瘤、卡波西氏肉瘤、肌肉瘤、腎臟癌、膀胱癌或睾丸癌。其中較佳為白血病，特別可舉出急性骨髓性白血病(AML：acute myelogenous leukemia)，進一步較佳為具有FLT3之活性型突變的白血病，特佳為具有FLT3-ITD突變的急性骨髓性白血病。

就檢出本發明中的「FLT3之活性型突變」的方法而言，除了檢出基因體DNA上之突變的方法以外，於該基因體DNA上之突變係被反映於轉錄產物中的鹼基之變化或轉譯產物中的胺基酸之變化的情況，也包含檢出此等轉錄產物或轉譯產物中之該變化的方法(亦即，間接性的檢出)，或因FLT3藉由活性化而伴隨磷酸化程度的上升，而亦包含藉由檢出磷酸化FLT3的方法。

檢出突變的方法之較佳態樣係可舉出藉由直接決定來自受試者之生物學上的樣品中之基因區域的鹼基序列而檢出突變的方法。於本發明中「FLT3基因區域」係意指包含FLT3基因之基因體DNA上的固定區域。於該區域亦包含FLT3基因的表現調控區域(例如啟動區域、增強區域)或FLT3基因的3’末端非轉譯區域等。此等區域中之突變會對於例如FLT3基因的轉錄活性造成影響。

於此方法中，首先由來自受試者之生物學上的樣品製備DNA樣品。就DNA樣品而言，可舉出藉由基 因體DNA樣品、及由RNA之逆轉錄所製備的cDNA樣品。

就由生物學上的樣品萃取基因體DNA或RNA的方法而言，可無特別限制地適當選擇使用公知的手法，例如，就萃取基因體DNA的方法而言，可舉出SDS酚法(將保存於含脲之溶液或乙醇中的組織、以蛋白質分解酵素(proteinase K)、界面活性劑(SDS)、及酚使該組織的蛋白質變性，以乙醇由該組織使DNA沈澱而萃取的方法)、使用Clean Columns(註冊商標，NexTec公司製)、AquaPure(註冊商標，Bio-Rad公司製)、ZR Plant/Seed DNA Kit(Zymo Research公司製)、Aqua Genomic Solution(註冊商標，Mo Bi Tec公司製)、prepGEM(註冊商標，ZyGEM公司製)、BuccalQuick(註冊商標，TrimGen公司製)的DNA萃取方法。又，就萃取RNA的方法而言，可舉出例如使用酚與離序鹽(chaotropic salts)的萃取方法(更具體而言，使用Trizol(Invitrogen公司製)、ISOGEN(和光純藥公司製)等之市售套組的萃取方法)、或使用其他市售套組(RNAPrep總RNA萃取套組(Beckman Coulter公司製)、RNeasy Mini(QIAGEN公司製)、RNA Extraction Kit(Pharmacia Biotech公司製)等)的方法。再者，就用於由所萃取之RNA製備c DNA的逆轉錄酵素而言，並無被特別限制之情形，可舉出例如RAV(勞斯聯合病毒(Rous associated virus))或AMV(禽類成髓細胞瘤病毒(Avian myeloblastosis virus))等之來自逆轉錄病毒的逆轉錄酵素、或MMLV(莫洛尼氏鼠類白血腫瘤病毒(Moloney murine leukemia virus))等之來自小鼠的逆轉錄病毒的逆轉錄 酵素。

於此態樣中，接著，單離包含FLT3基因區域之突變部位的DNA，決定單離之DNA的鹼基序列。該DNA的單離，係可使用例如被設計為如挾持FLT3基因區域的突變之一對的寡核苷酸引子，藉由以基因體DNA、或是RNA為鑄模之PCR等來進行。所單離之DNA的鹼基序列之決定，係可藉由Maxam-Gilbert法或Sanger法等本技術領域中具有通常知識者所公知的方法來進行。

可藉由將所決定之DNA或者cDNA的鹼基序列與對照組(例如來自同樣受試者的非癌症組織之DNA或者cDNA的鹼基序列)比較，而判別受試者的癌症細胞中之FLT3基因區域的突變之有無。

用以檢出FLT3基因區域之突變的方法，係於直接測定DNA或cDNA之鹼基序列的方法以外，可藉由突變的檢出為可能之各種的方法來進行。

例如，作為一種方法，係首先由生物學上的樣品製備DNA或者cDNA樣品。接著，製備對包含FLT3基因區域之突變的鹼基序列具有互補的鹼基序列，且被標識有偵測(reporter)螢光色素及抑制(quencher)螢光色素的寡核苷酸探針。然後，於前述DNA樣品使前述寡核苷酸探針雜交，進而將前述寡核苷酸探針所雜交之前述DNA樣品作為鑄模，放大包含FLT3基因區域之前述突變的鹼基序列。然後，藉由伴隨前述放大之寡核苷酸探針的分解，而檢出前述偵測螢光色素所發出之螢光，接著將所檢出的前述螢光與對照組比較。就如此的方法而言 ，可舉出雙染料探針法(Double Dye Probe method)，所謂的TaqMan(註冊商標)探針法。

再者，於別的方法中，由生物學上的樣品製備DNA或者cDNA樣品。接著，於含有被插入DNA雙股間就會發出螢光之嵌入物(intercalator)的反應系統中，將前述DNA樣品作為鑄模而放大包含FLT3基因區域之前述突變的鹼基序列。然後，使前述反應系統的溫度變化，檢出前述嵌入物所發出之螢光的強度之變動，將伴隨所檢出之前述溫度的變化之前述螢光的強度之變動與對照組比較。就如此的方法而言，可舉出HRM(high resolution melting，高解析度融離曲線解析)法。

再者，於別的方法中，首先，由生物學上的樣品製備DNA或者cDNA樣品。接著，放大包含FLT3基因區域之突變部位的DNA。再者，將所放大之DNA利用限制酵素切斷。接著，將DNA斷片因應其大小而單離。接著將所檢出之DNA斷片的大小與對照組比較。就如此的方法而言，可舉出例如利用限制酵素斷片長度突變(限制性斷片長度多形性(Restriction Fragment Length Polymorphism/RFLP))的方法或PCR-RFLP法等。

再者，於別的方法中，首先，由生物學上的樣品製備DNA或者cDNA樣品。接著，放大包含FLT3基因區域之突變部位的DNA。再者，使所放大之DNA解開成單股DNA。接著，在非變性凝膠上單離所解開的單股DNA。將所單離之單股DNA之在凝膠上的移動度與對照組比較。就如此的方法而言，可舉出例如PCR-SSCP(單股結 構多形性(single-strand conformation polymorphism)，單股高階結構突變)法。

再者，於別的方法中，首先，由生物學上的樣品製備DNA或者cDNA樣品。接著，放大包含FLT3基因區域之突變部位的DNA。再者，在DNA變性劑的濃度逐漸升高之凝膠上單離所放大之DNA。接著，將所單離之DNA之在凝膠上的移動度與對照組比較。就如此的方法而言，可舉出例如變性劑濃度梯度凝膠電泳(變性梯度凝膠電泳(denaturant gradient gel electrophoresis：DGGE))法。

再者，就別的方法而言，有使用由生物學上的樣品所製備之包含FLT3基因區域之突變部位的DNA、及固定有雜交於該DNA之寡核苷酸探針的基板之方法。就如此的方法而言，可舉出例如DNA陣列法(DNA array method)等。

再者，於別的方法中，首先，由生物學上的樣品製備DNA或者cDNA樣品。又，製備「具有FLT3基因區域之突變部位的鹼基之1鹼基3’側之鹼基及對其3’側之鹼基序列互補的鹼基序列的寡核苷酸探針引子」。接著，以該DNA為鑄模，使用該引子而進行ddNTP引子延長(extension)反應。接著，將引子延長反應產物利用質譜儀進行質量測定。接著，由質量測定的結果決定基因型。接著，將所決定的基因型與對照組比較。就如此的方法而言，可舉出例如基質輔助雷射脫附游離飛行時間式質譜儀(MALDI-TOF/MS，Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization Time-of-Flight Mass Spectrometry)法。

再者，於別的方法中，首先，由生物學上的樣品製備DNA或者cDNA樣品。接著，製備包含5’-「FLT3基因區域之突變部位的鹼基及與其5’側之鹼基序列互補的鹼基序列」-「FLT3基因區域之突變部位之1鹼基3’側的鹼基及不與其3’側之鹼基序列雜交的鹼基序列」-3’(片段)的寡核苷酸探針。又，製備「具有FLT3基因區域之突變部位的鹼基及其與3’側之鹼基序列互補的鹼基序列的寡核苷酸探針」。接著，使上述2種類的寡核苷酸探針對所製備的DNA進行雜交。接著，將雜交的DNA以單股DNA切斷酵素切斷，使片段游離。就單股DNA切斷酵素而言，並無特別限制，可舉出例如cleavase。於本方法中，接著使係具有與片段互補的序列的寡核苷酸探針且標識有偵測螢光及抑制螢光的寡核苷酸探針對片段進行雜交。接著，測定發生之螢光的強度。接著，將所測定之螢光的強度與對照組比較。就如此的方法而言，可舉出例如Invader法。

再者，於別的方法中，首先，由生物學上的樣品製備DNA或者cDNA樣品。接著，放大包含FLT3基因區域之突變部位的DNA。然後，使所放大的DNA解開成單股，所解開的單股DNA之中，僅將一股單離。接著，從FLT3基因區域之突變部位的鹼基的附近起1鹼基1鹼基地進行延長反應，使於彼時所生成的焦磷酸酵素性地發光，測定發光的強度。然後，將所測定之螢光的強度 與對照組比較。就如此的方法而言，可舉出例如Pyrosequencing法。

再者，於別的方法中，首先，由生物學上的樣品製備DNA或者cDNA樣品。接著，放大包含FLT3基因區域之突變部位的DNA。接著，製備「具有FLT3基因區域之突變部位的鹼基之1鹼基3’側之鹼基及對其3’側之鹼基序列互補的鹼基序列的寡核苷酸探針引子」。接著，在經螢光標定之核苷酸存在下，以所放大的DNA為鑄模，使用所製備的引子進行一鹼基延長反應。然後，測定螢光的偏光度。接著，將所測定之螢光的偏光度與對照組比較。就如此的方法而言，可舉出例如AcycloPrime法。

再者，於別的方法中，首先，由生物學上的樣品製備DNA或者cDNA樣品。接著，放大包含FLT3基因區域之突變部位的DNA。接著，製備「具有FLT3基因區域之突變部位的鹼基之1鹼基3’側之鹼基及對其3’側之鹼基序列互補的鹼基序列的寡核苷酸探針引子」。接著，在經螢光標定之核苷酸存在下，以所放大的DNA為鑄模，使用所製備的引子進行一鹼基延長反應。接著，判定於一鹼基延長反應被使用的鹼基種。接著，將所判定的鹼基種與對照組比較。作為如此的方法，可舉出例如SNuPE法。

此外，若突變係伴隨FLT3蛋白質中之胺基酸的變化(例如取代、缺失、插入)者，則由生物學上的樣品所製備的樣品亦可為蛋白質。如此的情況，要檢出突 變可利用使用專一性地結合於因該突變而發生胺基酸之變化的部位之分子(例如抗體)的方法。

由於藉由FLT3的活性化突變而FLT3的磷酸化程度會上升，所以亦可藉由定量磷酸化FLT3來檢出FLT3的活性型突變。就定量地測定磷酸化FLT3蛋白質的方法而言，可使用公知的磷酸化蛋白質測定法。可適用例如使用抗磷酸化FLT3蛋白質之抗體的各種方法。具體而言，可舉出西方墨點法、免疫沉澱法、酵素免疫吸附法(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA)、及放射免疫測定法(Radio ImmunoAssay，RIA)等。

此外，抗突變FLT3蛋白質或磷酸化FLT3蛋白質之抗體，係將突變FLT3蛋白質或磷酸化FLT3蛋白質當作抗原者，只要會專一性地結合於該抗原，則可適當使用人類型抗體、小鼠抗體、大鼠抗體、兔抗體、羊抗體等。抗體係多株抗體或單株抗體均可，在可穩定地生產均質的抗體方面，較佳為單株抗體。多株抗體及單株抗體係藉由本技術領域中具有通常知識者所周知的方法而可製作。又，亦可由市售之抗體選擇所期待之抗體來利用。

產生單株抗體之融合瘤，基本上是使用公知技術，如以下地進行而可製作。亦即可藉由下述方法製作：使用目的之抗原或表現目的之抗原的細胞作為致敏抗原，使按照通常的免疫方法將此對所期待之動物進行免疫所得的免疫細胞藉由通常的細胞融合法而與已知的母細胞融合之後，以通常的篩選方法來篩選所期待之單 株抗體產生細胞(融合瘤細胞)。融合瘤的製作可依照例如Millstein等人之方法(「酵素學方法(Methods of Enzymology)」，1981年，第73卷，p.3-46)等而實施。

在此，於製作單株抗體之際，可使用磷酸化FLT3蛋白質或其斷片作為抗原。此外，磷酸化FLT3蛋白質或其斷片係依照例如Sam brook等人編「Molecular Cloning：A Laboratory Manual」，第2版，第1-3卷，Cold Spring Harbor Laboratory Press出版，New York 1989年等之書籍所記載的方法，而若為本技術領域中具有通常知識者即可輕易地取得。

為了磷酸化FLT3蛋白質之定量，亦可將該蛋白質、其斷片及抗體固定於支撐物使用。支撐物若為可固定化蛋白質者則未被限定，一般而言，可例示玻璃板、矽晶片、樹脂等之無機材料或天然高分子材料之硝化纖維素或合成高分子材料之耐綸或聚苯乙烯等。

就檢出FLT3之活性型突變的方法而言，更具體地可舉出WO9817808號及對應美國專利公報US6846630號(WO9817808號及US6846630係藉由參照而以整體被納入本說明書中。)所記載之檢出FLT3-ITD突變的方法，本方法可藉由使用由Takara Bio公司等所市售之檢出套組來進行。

再者，就別的類似之方法而言，亦可使用以下方法：使用由來自受試者之生物學上的樣品所得之mRNA，RT-PCR後進行毛細管電泳(Leukemia，2005 19，1479-1482係藉由參照而以整體被納入本說明書中。)。

就檢出磷酸化FLT3蛋白質的方法而言，可具體地舉出WO2010/054185號(藉由參照而以整體被納入本說明書中。)所記載的方法。

就成為治療之對象的癌症之種類而言，從別的觀點，較佳為以對MDM2抑制劑具有感受性之癌症為對象，較佳為具有野生型TP53之癌症。

就確認TP53為野生型的方法而言，可同樣地適用作為確認上述FLT3之突變的方法所述之各種手法。更具體而言，可舉出對突變DNA序列使用專一性的探針之微陣列法(AmpliChip p53，Roche Molecular Systems、Inc.等、http：//www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/21319261)、對突變DNA序列使用專一性的探針之PCR法(qBiomarker Somatic Mutation PCR Arrays，QIAGEN等)、藉由Sanger氏定序儀而讀取p53基因序列之方法(http：//p53.iarc.fr/Download/TP53_DirectSequencing_IARC.pdf)、藉由次世代定序儀而讀取p53基因序列之方法(TruSeq Amplicon-Cancer Panel，Illumina http：//www.illuminakk.co.jp/products/truseq_amplicon_cancer_panel.ilmn，Oncomine® Cancer Research Panel，Lifetechnologies http：//www.lifetechnologies.com/jp/ja/home/clinical/preclinical-companion-diagnostic-development/oncomine-cancer-research-panel-workflow.html等)。

再者，亦可合適地使用作為預測對MDM2抑制劑之感受性的方法而使用了基因印記之方法。就用以預測對MDM2抑制劑之感受性的基因印記而言，並不被 特別限定，但可舉出例如WO2014/020502所記載之基因群(WO2014/020502係藉由參照而其全部被納入本說明書中。)。更具體而言，可合適地使用至少含有1個(亦可含有全部)選自包含MDM2,CDKN1A、ZMAT3、DDB2、FDXR、RPS27L、BAX、RPM2B、SESN1、CCNG1、XPC、TNFSF10B及AEN之群組的基因之基因群。就其他例示而言，可舉出WO2015/000945所記載之基因群(WO2014/000945係藉由參照而其全部被納入本說明書中。)。更具體而言，可合適地使用至少含有1個(亦可含有全部)選自包含BAX、RPS27L、EDA2R、XPC、DDB2、FDXR、MDM2、CDKN1A、TRIAP1、BBC3、CCNG1、TNFRSF10B及CDKN2A之群組的基因之基因群。基因群所含有的基因數並未被限定。基因印記所含有的基因之表現高的情況，可合適地使用判定為對MDM2抑制劑具有感受性的感受性印記。

本發明關聯之醫藥亦可與其他抗腫瘤劑併用而使用。可舉出例如抗腫瘤抗生素、抗腫瘤性植物成分、BRM(生物學的應答性調控物質)、激素、維生素、抗腫瘤性抗體、分子標靶藥物、烷化劑、代謝拮抗劑其他的抗腫瘤劑等。

更具體地就烷化劑而言，可舉出例如氮芥劑(nitrogen mustard)、氮芥劑N-氧化物、普癌汰(Bendamustine)或者氮芥苯丁酸等之烷化劑、卡波醌(Carboquone)或者沙奧特帕(Thiotepa)等之吖環丙烷系烷化劑、二溴甘露醇或者二溴甜醇等之環氧化物系烷化劑、卡莫司汀(carmustine )、洛莫司汀(lomustine)、司莫司汀(semustine)、尼莫司汀鹽酸鹽(nimustine hydrochloride)、鏈尿佐菌素(streptozocin)、氯尿佐菌素(chlorozotocin)或者雷莫司汀(ranimustine)等之亞硝基脲系烷化劑、硫酸布他卡因(busulfan)、甲苯磺酸英丙舒凡(improsulfan tosilate)、替莫唑胺(temozolomide)或達卡巴仁(Dacarbazine)等。

就各種代謝拮抗劑而言，可舉出例如6-硫醇嘌呤、6-硫鳥嘌呤或者硫肌苷(thioinosine)等之嘌呤代謝拮抗劑、氟尿嘧啶(fluorouracil)、替加氟(tegafur)、友復(tegafur．uracil)、卡莫氟(carmofur)、去氧氟尿苷、溴尿苷、賽德薩(cytarabine)或者依諾他濱(enocitabine)等之嘧啶代謝拮抗劑、胺甲喋呤(methotrexate)或者曲美沙特(trimetrexate)等之葉酸代謝拮抗劑等。

就抗腫瘤性抗生素而言，可舉出例如絲裂黴素C、博萊黴素、培洛黴素(peplomycin)、道諾黴素、阿克拉黴素(aclacinomycin)、阿黴素(doxorubicin)、艾達魯比辛(idarubicin)、畢拉魯比辛(pirarubicin)、THP-阿德力黴素、4’-表阿黴素(4’-epidoxorubicin)或者泛艾黴素(epirubicin)、色黴素A3或放線菌素D等。

就抗腫瘤性植物成分及該等之衍生物而言，可舉出例如長春花醯胺(vindesine)、長春花新鹼(vincristine)或者長春花鹼(vinblastine)等之長春花生物鹼(vinca alkaloid)類、紫杉醇(paclitaxel)、歐洲紫杉醇(docetaxel)、卡巴他賽(cabazitaxel)等之紫杉烷類、或依妥普賽(etoposide)或者替尼泊苷(teniposide)等之表鬼臼毒素(epi podophyllotoxin)類。

就BRM而言，可舉出例如腫瘤壞死因子或吲哚美辛(indometacin)等。

就激素而言，可舉出例如氫皮質酮、迪皮質醇(dexamethasone)、甲基培尼皮質醇(methylprednisolone)、培尼皮質醇(prednisolone)、去氫異雄甾酮(prasterone)、貝皮質醇(betamethasone)、特安皮質醇(triamcinolone)、羥甲烯龍(oxymetholone)、諾龍(nandrolone)、美替諾龍(methenolone)、磷雌酚(fosfestrol)、乙炔基雌二醇(ethynylestradiol)、氯地孕酮(chlormadinone)、美雄烷(mepitiostane)或甲羥助孕酮等。

就維生素而言，可舉出例如維生素C或維生素A等。

就抗腫瘤性抗體、分子標靶藥物而言，可舉賀癌平(Trastuzumab)、莫須瘤(Rituximab)、爾必得舒(Cetuximab)、泰欣生(Nimotuzumab)、癌骨瓦(Denosumab)、癌思停(Bevacizumab)、因福利美(Infliximab)、易普利姆瑪(Ipilimumab)、Nivolumab、Pembrolizumab、Avelumab、Pidilizumab、Atezolizumab、Ramucirumab、伊馬替尼(Imatinib Mesylate)、Dasatinib、艾瑞莎(Gefitinib)、得舒緩(Erlotinib)、Osimertinib、紓癌特(Sunitinib)、泰嘉錠(Lapatinib)、Dabrafenib、Trametinib、Cobimetinib、福退癌(Pazopanib)、Palbociclib、Panobinostat、蕾莎瓦(Sorafenib)、截剋瘤(Crizotinib)、Vemurafenib、Ibrutinib、萬科(Bortezomib)、卡非佐米 (Carfilzomib)、Ixazomib、Gilteritinib等。

就其他的抗腫瘤劑而言，可舉出例如順鉑(Cisplatin)、卡鉑(Carboplatin)、歐力普(Oxaliplatin)、泰莫西芬(Tamoxifen)、復乳納(Letrozole)、安美達(Anastrozole)、依西美坦(Exemestane)、托瑞米芬檸檬酸鹽(toremifene citrate)、氟維司群(Fulvestrant)、百克攝(Bicalutamide)、氟他胺(Flutamide)、Mitotane、柳菩林(Leuprorelin)、戈舍瑞林乙酸鹽(goserelin acetate)、喜樹鹼(Camptothecin)、好克癌(Ifosfamide)、環磷醯胺(Cyclophosphamide)、威克瘤(Melphalan)、L-天冬醯胺酶、醋葡醛內酯(Aceglatone)、裂褶菌多醣(Schizophyllan)、必醫你舒(Picibanil)、甲基苄肼(Procarbazine)、哌泊溴烷(Pipobroman)、乃可治(Neocarzinostatin)、羥基脲(Hydroxyurea)、烏苯美司(Ubenimex)、阿扎胞苷(Azacitidine)、帝希他濱(Decitabine)、沙利度胺(Thalidomide)、Lenalidomide、Pomalidomide、賀樂維(Eribulin)、視網酸(tretinoin)或克速鎮(Krestin)等。

本發明之別的態樣，係關於預測對於藉由3’R,4’S,5’R)-N-[(3R,6S)-6-胺甲醯基四氫-2H-哌喃-3-基]-6”-氯-4’-(2-氯-3-氟吡啶-4-基)-4,4-二甲基-2”-側氧-1”,2”-二氫二螺[環己烷-1,2’-吡咯啶-3’,3”-吲哚]-5’-甲醯胺或者其藥學上可容許之鹽與N-(5-三級丁基-異

唑-3-基)-N’-{4-[7-(2-

啉-4-基-乙氧基)咪唑[2,1-b][1,3]苯并噻唑-2-基]苯基}脲或者其藥學上可容許之鹽之癌症的治療之應答性的方法，其包含使用來自受試者之生物學上的 樣品，檢出該生物學上的樣品中所含有的FLT3之活性型突變的有無，判定被檢出FLT3之活性型突變的受試者具有對於藉由3’R,4’S,5’R)-N-[(3R,6S)-6-胺甲醯基四氫-2H-哌喃-3-基]-6”-氯-4’-(2-氯-3-氟吡啶-4-基)-4,4-二甲基-2”-側氧-1”,2”-二氫二螺[環己烷-1,2’-吡咯啶-3’,3”-吲哚]-5’-甲醯胺或者其藥學上可容許之鹽與N-(5-三級丁基-異

唑-3-基)-N’-{4-[7-(2-

啉-4-基-乙氧基)咪唑[2,1-b][1,3]苯并噻唑-2-基]苯基}脲或者其藥學上可容許之鹽的組合之癌症的治療之應答性。

又，本發明之別的態樣，係關於篩選藉由3’R,4’S,5’R)-N-[(3R,6S)-6-胺甲醯基四氫-2H-哌喃-3-基]-6”-氯-4’-(2-氯-3-氟吡啶-4-基)-4,4-二甲基-2”-側氧-1”,2”-二氫二螺[環己烷-1,2’-吡咯啶-3’,3”-吲哚]-5’-甲醯胺或者其藥學上可容許之鹽與N-(5-三級丁基-異

唑-3-基)-N’-{4-[7-(2-

啉-4-基-乙氧基)咪唑[2,1-b][1,3]苯并噻唑-2-基]苯基}脲或者其藥學上可容許之鹽的組合之癌症的治療之對象的方法，其包含使用來自受試者之生物學上的樣品，檢出該生物學上的樣品中之FLT3之活性型突變的有無，並篩選被檢出FLT3之活性型突變的受試者作為藉由3’R,4’S,5’R)-N-[(3R,6S)-6-胺甲醯基四氫-2H-哌喃-3-基]-6”-氯-4’-(2-氯-3-氟吡啶-4-基)-4,4-二甲基-2”-側氧-1”,2”-二氫二螺[環己烷-1,2’-吡咯啶-3’,3”-吲哚]-5’-甲醯胺或者其藥學上可容許之鹽與N-(5-三級丁基-異

唑-3-基)-N’-{4-[7-(2-

啉-4-基-乙氧基)咪唑[2,1-b][1,3]苯并噻唑-2-基]苯基}脲或者其藥學上可容許之鹽之 癌症的治療之對象。

再者，前述FLT3之活性型突變，係關於預測對於是FLT3-ITD突變之前述癌症的治療之應答性的方法或篩選癌症的治療之對象的方法。

來自受試者之生物學上的樣品之採集方法、該生物學上的樣品中之FLT3之活性型突變或FLT3-ITD突變的檢出方法係如上述。

[實施例]

藉由以下所示實施例而具體地說明本發明，但本發明並非被限定於此等者，此等於任何之意義上都不被限定性地解釋。

(試驗例1 化合物A與奎扎替尼之活體內併用效果的研討)

使用磷酸緩衝生理食鹽水，以成為5×10⁷細胞/mL之方式，懸浮具有FLT3-ITD突變、野生型TP53之人類急性骨髓性白血病細胞株MOLM-13細胞，對NOD-SCID小鼠(雄性，5~7週齢)的皮下移植所製備之細胞懸浮劑0.1mL。於移植後第6日確認腫瘤體積的平均超過100mm³之後，使用腫瘤體積值而進行分群(N=6/群)，將化合物A以25mg/kg或者50mg/kg、奎扎替尼(LC Laboratories)以0.5mg/kg或者1mg/kg對小鼠強制經口投予。於併用群中係將化合物A 25mg/kg或者50mg/kg與奎扎替尼0.5mg/kg或者1mg/kg依序強制經口投予。投予係由分群當日(移植後第6日)起1日1次連續5日中(移植後第6日至第10日)進行之後，間隔2日中之停藥而1日1次連續 4日中(移植後第13日至第16日)進行。經時性地以電子數位游標卡尺量測腫瘤的長徑(mm)及短徑(mm)，以藉由以下所示計算式(4)所算出之判定日(腫瘤移植後第17日)的腫瘤增殖抑制率(TGI%)來評價。又，經時性地使用小動物用自動秤來測定體重，並藉由以下所示計算式(5)而算出體重變化率(Body weight change%)，於研討藥劑投予之對於體重的影響之同時，將最近的體重測定結果用於投予量算出。

TGI(%)=(1-A/B)×100‧‧‧(4)

A：化合物投予群之判定日的平均腫瘤體積(＊)

B：未處理對照組之判定日的平均腫瘤體積(＊)

＊：腫瘤體積係以1/2×[腫瘤長徑]×[腫瘤短徑]×[腫瘤短徑]算出。

Body weight change(%)=各個體之體重變化率的平均值‧‧‧(5)

各個體之體重變化率=(1-BWn/BWs)×100

BWn：第n日的體重

BWs：投予開始日的體重

於第1圖及表1顯示結果。

<110> 第一三共股份有限公司

<120> 癌症的併用治療法

<130> DS2014066

<160> 4

<170> PatentIn版本3.5

<210> 1

<211> 3848

<212> DNA

<213> 智人

<220>

<221> misc_特徵

<223> 編碼FLT3蛋白質之FLT3 mRNA(SEQ ID NO.2)

<220>

<221> CDS

<222> (83)..(3064)

<400> 1

<210> 2

<211> 993

<212> PRT

<213> 智人

<400> 2

<210> 3

<211> 2591

<212> DNA

<213> 智人

<220>

<221> misc_特徵

<223> 編碼TP53蛋白質之TP53 mRNA(SEQ ID NO.4)

<220>

<221> CDS

<222> (203)..(1384)

<400> 3

<210> 4

<211> 393

<212> PRT

<213> 智人

<400> 4

Claims (7)

1. 一種用於血液癌症治療之醫藥組合，其中血液癌症係選自具有FLT3-ITD突變且具有野生型TP53的白血病、淋巴瘤及多發性骨髓瘤，其特徵為(3’R,4’S,5’R)-N-[(3R,6S)-6-胺甲醯基四氫-2H-哌喃-3-基]-6”-氯-4’-(2-氯-3-氟吡啶-4-基)-4,4-二甲基-2”-側氧-1”,2”-二氫二螺[環己烷-1,2’-吡咯啶-3’,3”-吲哚]-5’-甲醯胺或其藥學上可容許之鹽與N-(5-三級丁基-異

   

   唑-3-基)-N’-{4-[7-(2-

   

   啉-4-基-乙氧基)咪唑[2,1-b][1,3]苯并噻唑-2-基]苯基}脲或其藥學上可容許之鹽係組合而被投予。
2. 如請求項1之醫藥組合，其中(3’R,4’S,5’R)-N-[(3R,6S)-6-胺甲醯基四氫-2H-哌喃-3-基]-6”-氯-4’-(2-氯-3-氟吡啶-4-基)-4,4-二甲基-2”-側氧-1”,2”-二氫二螺[環己烷-1,2’-吡咯啶-3’,3”-吲哚]-5’-甲醯胺或其藥學上可容許之鹽與N-(5-三級丁基-異

   

   唑-3-基)-N’-{4-[7-(2-

   

   啉-4-基-乙氧基)咪唑[2,1-b][1,3]苯并噻唑-2-基]苯基}脲或其藥學上可容許之鹽係各自作為不同製劑的有效成分而被含有，且於同時或於不同時間被投予。
3. 如請求項1之醫藥組合，其中(3’R,4’S,5’R)-N-[(3R,6S)-6-胺甲醯基四氫-2H-哌喃-3-基]-6”-氯-4’-(2-氯-3-氟吡啶-4-基)-4,4-二甲基-2”-側氧-1”,2”-二氫二螺[環己烷-1,2’-吡咯啶-3’,3”-吲哚]-5’-甲醯胺或其藥學上可容許之鹽與N-(5-三級丁基-異

   

   唑-3- 基)-N’-{4-[7-(2-

   

   啉-4-基-乙氧基)咪唑[2,1-b][1,3]苯并噻唑-2-基]苯基}脲或其藥學上可容許之鹽係被含有於單一製劑中。
4. 如請求項1至3中任一項之醫藥組合，其中該各自之化合物的鹽為(3’R,4’S,5’R)-N-[(3R,6S)-6-胺甲醯基四氫-2H-哌喃-3-基]-6”-氯-4’-(2-氯-3-氟吡啶-4-基)-4,4-二甲基-2”-側氧-1”,2”-二氫二螺[環己烷-1,2’-吡咯啶-3’,3”-吲哚]-5’-甲醯胺的對甲苯磺酸鹽、與N-(5-三級丁基-異

   

   唑-3-基)-N’-{4-[7-(2-

   

   啉-4-基-乙氧基)咪唑[2,1-b][1,3]苯并噻唑-2-基]苯基}脲的二鹽酸鹽。
5. 如請求項1至3中任一項之醫藥組合，其中血液癌症為具有FLT3-ITD突變且具有野生型TP53的血液癌症之急性骨髓性白血病(AML：acute myelogenous leukemia)。
6. 如請求項1至3中任一項之醫藥組合，其中血液癌症為使用基因印記而被判定為MDM2抑制劑感受性的血液癌症。
7. 一種套組，其特徵為包含如請求項1至6中任一項之醫藥組合。

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