TWI781996B

TWI781996B - 合成ｍｃｌ-１抑制劑之方法

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Publication number: TWI781996B
Application number: TW107110205A
Authority: TW
Inventors: 克雷格史都華; 賽門哈迪; 安德魯史塔克; 亞歷山大荷德; 沁葉; 鄭曉蘭; 迪巴席斯哈撒; 卡迪費拉爾; 珍柯克
Original assignee: 瑞典商阿斯特捷利康公司
Priority date: 2017-03-31
Filing date: 2018-03-26
Publication date: 2022-11-01
Also published as: CN110536884B; JP7032428B2; KR102604876B1; CO2019010035A2; EA038226B1; MX387814B; BR112019019686A2; IL269410A; ES2909751T3; TW201902868A; WO2018178227A1; EP3601230B1; JP2020515557A; KR20190136039A; EA201992235A1; US20210122735A1; MX2019011468A; CN110536884A; IL269410B; CA3056712A1

Abstract

揭露了合成化合物1之中間體和方法。

Description

合成MCL-1抑制劑之方法

骨髓細胞白血病1（Mcl-1）係BCL-2家族蛋白的重要抗凋亡成員和細胞存活的主要調節劑。已經在多種癌症類型中觀察到MCL1基因的擴增和/或Mcl-1蛋白的過表現，並且通常涉及腫瘤發展。事實上，MCL1係人類癌症中最常擴增的基因之一。在許多惡性腫瘤中，Mcl-1係關鍵的存活因子並且已經顯示出其介導對多種抗癌劑的耐藥性。

Mcl-1藉由結合至促凋亡蛋白如Bim、Noxa、Bak和Bax並中和其死亡誘導活性來促進細胞存活。由此Mcl-1的抑制釋放該等促凋亡蛋白，通常導致在依賴於Mcl-1而存活的腫瘤細胞中誘導凋亡。因此，單獨地或與其他療法組合在治療上靶向Mcl-1係治療眾多惡性腫瘤並克服許多人類癌症中的耐藥性的有希望的策略。該化合物化學名為 (R_a )-(+)-17-氯-5,13,14,22-四甲基-28-氧雜-2,9-二硫雜-5,6,12,13,22-戊氮雜庚環[27.7.1.1^4,7 .0^11,15 .0^16,21 .0^20,24 .0^30,35 ]三十八碳-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-十三烯-23-甲酸（稱為化合物1）：

化合物 1 係有效的Mcl-1抑制劑，如下面更詳細描述的。因此，需要開發以有效的方式合成化合物1的新方法。

本文提供可用於合成化合物1之方法和中間體：

化合物 1

在一些實施方式中，揭露了以下中間體及其任何鹽、及其合成：

在一些實施方式中，本文提供了用於合成(R_a )-(+)-17-氯-5,13,14,22-四甲基-28-氧雜-2,9-二硫雜-5,6,12,13,22-戊氮雜庚環[27.7.1.1^4,7 .0^11,15 .0^16,21 .0^20,24 .0^30,35 ]三十八碳-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-十三烯-23-甲酸（化合物1）的方法和中間體：

化合物 1

如下文實例1所示，化合物1係有效的Mcl-1抑制劑，並且可用於治療癌症，包括惡性血液病如急性骨髓性白血病、多發性骨髓瘤、套膜細胞淋巴瘤、慢性淋巴球性白血病、彌漫性大B細胞淋巴瘤、柏基特淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤，以及實體瘤例如非小細胞肺癌（NSCLC）、小細胞肺癌（SCLC）、乳癌、成神經細胞瘤、前列腺癌、黑素瘤、胰腺癌、子宮癌、子宮內膜癌和結腸癌。由於化合物1的結構複雜性，在開發化合物1作為潛在的癌症治療方面，實現有效合成可以是一個重要方面。中間體

在一些實施方式中，揭露了(E/Z)-二甲基2-(2-(2-溴-3-氯苯基)亞肼基)己二酸酯（中間體1）：

中間體 1

在一些實施方式中，揭露了具有化學式 (d) 之化合物：

(d) 其中R1係保護基團或氫。在一些實施方式中，R1係對甲氧基苄基。在一些實施方式中，具有化學式 (a) 之化合物係(±)-3-(2-羧乙基)-6-氯-7-(3-(((4-甲氧基苄基)氧基)甲基)-1,5-二甲基-1H-吡唑-4-基)-1-甲基-1H-吲哚-2-甲酸（中間體6）：

中間體 6

在一些實施方式中，揭露了具有化學式 (e) 之化合物：

(e) 其中R1係保護基團或氫。在一些實施方式中，R1係對甲氧基苄基。在一些實施方式中，具有化學式 (b) 之化合物係 (R_a )-3-(2-羧乙基)-6-氯-7-(3-(((4-甲氧基苄基)氧基)甲基)-1,5-二甲基-1H-吡唑-4-基)-1-甲基-1H-吲哚-2-甲酸-(1R )-1-(2-硝基苯基)乙胺（1 : 1鹽）（中間體7）：

中間體 7

在一些實施方式中，揭露了5-(((4-羥基萘-2-基)硫代)甲基)-1-甲基-1H-吡唑-3-甲酸甲酯（中間體12）：

中間體 12

在一些實施方式中，揭露了3-(((3-(羥甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)甲基)硫代)萘-1-醇（中間體13）：

中間體 13 在一些實施方式中，揭露了3-(((3-(氯甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)甲基)硫代)萘-1-醇（中間體14）：

中間體 14

在一些實施方式中，揭露了3-(((3-(氯甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)甲基)硫代)萘-1-基乙酸酯（中間體15）：

中間體 15

在一些實施方式中，揭露了3-(((3-((乙醯硫代)甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)甲基)硫代)萘-1-基乙酸酯（中間體16）：

中間體 16 。合成

在一些實施方式中，揭露了合成(E/Z)-二甲基2-(2-(2-溴-3-氯苯基)亞肼基)己二酸酯（中間體1)的方法：

中間體 1 包括以下步驟：（i）使2-溴-3-氯苯胺與2-側氧基環戊烷-1-甲酸甲酯與重氮化劑在酸性水性系統中接觸；（ii）將2-側氧基環戊烷-1-甲酸甲酯和水性鹼添加到酸性水性系統中；（iii）分離得到的腙；（iv）使腙與酸性溶液接觸；並且（v）分離(E/Z)-二甲基2-(2-(2-溴-3-氯苯基)亞肼基)己二酸酯（中間體1）。在一些實施方式中，重氮化劑係NaNO₂ 、Ca(NO₂ )₂ 或KNO₂ 。在一些實施方式中，重氮化劑係NaNO₂ 。在一些實施方式中，酸性水性系統包含質子酸和水。在一些實施方式中，質子酸係鹽酸。在一些實施方式中，水性鹼係乙酸鉀、氫氧化鉀、氫氧化鈉、碳酸鉀、碳酸鈉或磷酸鉀。在一些實施方式中，水性鹼係乙酸鉀。在一些實施方式中，酸性溶液包含酸和醇。在一些實施方式中，酸性溶液包含濃硫酸和甲醇，甲磺酸和甲醇或對甲苯磺酸和甲醇。在一些實施方式中，酸性溶液包含濃硫酸和甲醇。

在一些實施方式中，揭露了合成7-溴-6-氯-3-(3-甲氧基-3-側氧基丙基)-1H-吲哚-2-甲酸甲酯（中間體2）的方法：

中間體 2 包括以下步驟：（i）使(E/Z)-二甲基2-(2-(2-溴-3-氯苯基)亞肼基)己二酸酯（中間體1）與酸性溶液接觸；並且（ii）分離7-溴-6-氯-3-(3-甲氧基-3-側氧基丙基)-1H-吲哚-2-甲酸甲酯（中間體2）。在一些實施方式中，酸性溶液包含酸和醇。在一些實施方式中，酸性溶液包含濃硫酸和甲醇，甲磺酸和甲醇或對甲苯磺酸和甲醇。在一些實施方式中，酸性溶液包含濃硫酸和甲醇。在一些實施方式中，合成中間體2的方法還包括在分離中間體2之前對酸性溶液加熱的步驟。

在一些實施方式中，揭露了合成具有化學式 (a) 之化合物之方法：

(a) 其中R1係保護基團或氫，包括以下步驟：（i）在第一溶劑的存在下使1,5-二甲基-1H-吡唑-3-甲酸乙酯與還原劑接觸以形成第一溶液；（ii）分離(1,5-二甲基-1H-吡唑-3-基)甲醇；（iii）在第二溶劑的存在下使(1,5-二甲基-1H-吡唑-3-基)甲醇與溴化劑接觸以形成(4-溴-1,5-二甲基-1H-吡唑-3-基)甲醇；（iv）分離(4-溴-1,5-二甲基-1H-吡唑-3-基)甲醇；（v）在第三溶劑中使(4-溴-1,5-二甲基-1H-吡唑-3-基)甲醇與鹼（視情況相轉移催化劑）和保護基團先質接觸；並且（v）分離具有化學式 (a) 之化合物。在一些實施方式中，還原劑選自氫化鋁鋰（LAH）、氫化二異丁基鋁（DIBAL）、硼氫化鋰（LiBH₄ ）、氫化雙(2-甲氧基乙氧基)鋁鈉（Red-Al®）和硼氫化鈉（NaBH₄ ）。在一些實施方式中，還原劑係氫化鋁鋰。在一些實施方式中，第一溶劑選自甲苯、THF、2-甲基四氫呋喃、MTBE、甲醇，乙醇和乙醚。在一些實施方式中，第一溶劑係四氫呋喃。在一些實施方式中，第二溶劑係四氫呋喃。在一些實施方式中，溴化劑係1,3-二溴-5,5-二甲基乙內醯脲（DBDMH）。在一些實施方式中，溴化劑係N-溴代琥珀醯亞胺。在一些實施方式中，鹼為氫氧化鋰、氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫化鈉、氫化鋰或氫化鉀。在一些實施方式中，使用相轉移催化劑，例如Bu₄ N·HSO₄ 或苄基三甲基氯化銨。在一些實施方式中，鹼係氫氧化鉀，並且相轉移催化劑係四丁基硫酸氫銨。在一些實施方式中，保護基團先質係1-(氯甲基)-4-甲氧基苯。在一些實施方式中，R1係對甲氧基苄基。在一些實施方式中，具有化學式 (a) 之化合物係4-溴-3-(((4-甲氧基苄基)氧基)甲基)-1,5-二甲基-1H-吡唑（中間體3）：

中間體 3

在一些實施方式中，揭露了合成具有化學式 (b) 之化合物之方法：

（b）中其中R1係保護基團或氫，包括以下步驟：（i）在溶劑的存在下使具有化學式 (a) 之化合物與金屬化試劑接觸；（ii）添加2-異丙氧基-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜環戊硼烷（dioxaborolane）；（iii）添加酸性溶劑溶液；並且（iv）分離具有化學式 (b) 之化合物。在一些實施方式中，金屬化劑係正丁基鋰。在一些實施方式中，溶劑係四氫呋喃。在一些實施方式中，酸性溶劑溶液包含乙酸和甲苯。在一些實施方式中，R1係對甲氧基苄基。在一些實施方式中，具有化學式 (a) 之化合物係4-溴-3-(((4-甲氧基苄基)氧基)甲基)-1,5-二甲基-1H-吡唑（中間體3）。在一些實施方式中，具有化學式 (b) 之化合物係3-(((4-甲氧基苄基)氧基)甲基)-1,5-二甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜環戊硼烷-2-基)-1H-吡唑（中間體4）：

中間體 4

在一些實施方式中，揭露了合成具有化學式 (c) 之化合物的方法：

(c) 其中R1係保護基團或氫，包括以下步驟：（i）使具有化學式 (b) 之化合物與7-溴-6-氯-3-(3-甲氧基-3-側氧基丙基)-1H-吲哚-2-甲酸甲酯（中間體2）與鈀催化劑在鹼和溶劑的存在下接觸；並且（ii）分離具有化學式 (c) 之化合物。在一些實施方式中，鈀催化劑選自四(三苯基膦)鈀(0)、雙(二三級丁基(4-二甲基胺基苯基)膦)二氯化鈀(II)和1,1'-雙(二三級丁基膦)二茂鐵二氯化鈀。在一些實施方式中，鹼係碳酸鉀或磷酸鉀。在一些實施方式中，鈀催化劑係1,1'-雙(二三級丁基膦)二茂鐵二氯化鈀。在一些實施方式中，溶劑係二𠮿㗁，水或其組合。在一些實施方式中，R1係對甲氧基苄基。在一些實施方式中，具有化學式 (b) 之化合物係3-(((4-甲氧基苄基)氧基)甲基)-1,5-二甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜環戊硼烷-2-基)-1H-吡唑（中間體4）。在一些實施方式中，具有化學式 (c) 之化合物係(±)-甲基6-氯-3-(3-甲氧基-3-側氧基丙基)-7-(3-(((4-甲氧基苄基)氧基)甲基)-1,5-二甲基-1H-吡唑-4-基)-1H-吲哚-2-甲酸酯（中間體5）：

中間體 5

在一些實施方式中，揭露了合成具有化學式 (d) 之化合物之方法：

(d) 其中R1係保護基團或氫，包括以下步驟：（i）使具有化學式 (c) 之化合物與甲基化劑在溶劑中接觸；（ii）用酯水解試劑處理得到的甲基化衍生物，並且（iii）分離具有化學式 (d) 之化合物。在一些實施方式中，具有化學式 (c) 之化合物係中間體5。在一些實施方式中，酯水解試劑係選自氫氧化鋰、氫氧化鉀和氫氧化鈉的氫氧化物鹼。在一些實施方式中，甲基化試劑選自甲基碘、二甲基硫酸酯和二甲基甲醯胺-二甲基縮醛（DMF-DMA）。在一些實施方式中，甲基化試劑係二甲基甲醯胺-二甲基縮醛。在一些實施方式中，溶劑係甲苯。

在一些實施方式中，R1係對甲氧基苄基。在一些實施方式中，具有化學式 (c) 之化合物係(±)-甲基6-氯-3-(3-甲氧基-3-側氧基丙基)-7-(3-(((4-甲氧基苄基)氧基)甲基)-1,5-二甲基-1H-吡唑-4-基)-1H-吲哚-2-甲酸酯（中間體5）。在一些實施方式中，具有化學式 (d) 之化合物係(±)-3-(2-羧乙基)-6-氯-7-(3-(((4-甲氧基苄基)氧基)甲基)-1,5-二甲基-1H-吡唑-4-基)-1-甲基-1H-吲哚-2-甲酸（中間體6）：

中間體 6

在一些實施方式中，揭露了合成具有化學式 (e) 之化合物之方法：

(e) 其中R1係保護基團或氫，包括以下步驟：（i）使具有化學式 (d) 之化合物與(1R )-1-(2-硝基苯基)乙胺鹽酸鹽在鹼和溶劑的存在下接觸；並且（ii）分離具有化學式 (e) 之化合物。在一些實施方式中，鹼為氫氧化鈉、氫氧化鉀、二異丙基乙胺或三乙胺。在一些實施方式中，鹼係氫氧化鈉。在一些實施方式中，溶劑係水、THF、甲醇、乙醇、異丙醇、正丁醇、甲基乙基酮或其組合。在一些實施方式中，溶劑係水、乙醇或其組合。在一些實施方式中，R1係對甲氧基苄基。在一些實施方式中，具有化學式 (d) 之化合物係(±)-3-(2-羧乙基)-6-氯-7-(3-(((4-甲氧基苄基)氧基)甲基)-1,5-二甲基-1H-吡唑-4-基)-1-甲基-1H-吲哚-2-甲酸（中間體6）。在一些實施方式中，具有化學式 (e) 之化合物係(R _a )-3-(2-羧乙基)-6-氯-7-(3-(((4-甲氧基苄基)氧基)甲基)-1,5-二甲基-1H-吡唑-4-基)-1-甲基-1H-吲哚-2-甲酸-(1R )-1-(2-硝基苯基)乙胺（1 : 1鹽）（中間體7）：

中間體 7

在一些實施方式中，揭露了合成(R _a )-甲基6-氯-7-(3-(羥甲基)-1,5-二甲基-1H-吡唑-4-基)-3-(3-甲氧基-3-側氧基丙基)-1-甲基-1H-吲哚-2-甲酸酯（中間體8）的方法：

中間體 8 包括以下步驟：（i）在第一溶劑的存在下使具有化學式 (e) 之化合物與酸接觸；（ii）分離具有化學式 (e) 之化合物的游離酸組分；（iii）在第二溶劑中用甲基化劑或甲醇處理游離酸；（iv）視情況在第三溶劑中除去保護基團；並且（v）分離(R _a )-甲基6-氯-7-(3-(羥甲基)-1,5-二甲基-1H-吡唑-4-基)-3-(3-甲氧基-3-側氧基丙基)-1-甲基-1H-吲哚-2-甲酸酯（中間體8）。在一些實施方式中，具有化學式 (e) 之化合物係R _a )-3-(2-羧乙基)-6-氯-7-(3-(((4-甲氧基苄基)氧基)甲基)-1,5-二甲基-1H-吡唑-4-基)-1-甲基-1H-吲哚-2-甲酸-(1R )-1-(2-硝基苯基)乙胺（1 : 1鹽）（中間體7）。在一些實施方式中，第一溶劑係四氫呋喃、甲苯或其組合。在一些實施方式中，甲基化劑係DMF-DMA。在一些實施方式中，第二溶劑係甲苯。在一些實施方式中，第三溶劑係甲醇。在一些實施方式中，保護基團係藉由乙醯氯除去。在一些實施方式中，保護基團係藉由甲醇中的乙醯氯除去。在一些實施方式中，保護基團係藉由酸，例如藉由乙醯氯與甲醇反應而原位形成的鹽酸除去。

在一些實施方式中，揭露了合成(R_a )-甲基6-氯-7-(3-(羥甲基)-1,5-二甲基-1H-吡唑-4-基)-3-(3-羥基丙基)-1-甲基-1H-吲哚-2-甲酸酯（中間體9）之方法：

中間體 9 包括以下步驟：（i）使(R _a )-甲基6-氯-7-(3-(羥甲基)-1,5-二甲基-1H-吡唑-4-基)-3-(3-甲氧基-3-側氧基丙基)-1-甲基-1H-吲哚-2-甲酸酯（中間體8）與還原劑在溶劑的存在下接觸；並且（ii）分離(R_a )-甲基6-氯-7-(3-(羥甲基)-1,5-二甲基-1H-吡唑-4-基)-3-(3-羥基丙基)-1-甲基-1H-吲哚-2-甲酸酯（中間體9）。在一些實施方式中，還原劑係二異丁基氫化鋁。在一些實施方式中，溶劑係THF、己烷或其組合。

在一些實施方式中，揭露了合成5-(氯甲基)-1-甲基-1H-吡唑-3-甲酸甲酯（中間體10）之方法：

中間體 10 包括以下步驟：（i）在溶劑的存在下使1-甲基-1H-吡唑-3,5-二羧酸二甲酯與還原劑接觸；（ii）分離3-(羥甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-甲酸甲酯；（iii）使3-(羥甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-甲酸甲酯與氯化劑接觸；並且（iv）分離5-(氯甲基)-1-甲基-1H-吡唑-3-甲酸甲酯（中間體10）。在一些實施方式中，溶劑係甲醇和2-甲基四氫呋喃的混合物。在一些實施方式中，還原劑係硼氫化鈉或硼氫化鋰。在一些實施方式中還原劑係硼氫化鈉。在一些實施方式中，溶劑係甲醇、乙醇、水、2-甲基四氫呋喃、二甲基乙醯胺、DCM、THF、環戊基甲基醚、乙腈或其混合物。在一些實施方式中，溶劑係甲醇和2-甲基四氫呋喃的混合物。

在一些實施方式中，揭露了合成3-(乙醯硫代)萘-1-基乙酸酯（中間體11）之方法：

中間體 11 包括以下步驟：（i）使4-羥基萘-2-磺酸鈉與三苯基膦和碘在溶劑中接觸；（ii）分離3-巰基萘-1-醇；（iii）在胺鹼和親核催化劑的存在下使3-巰基萘-1-醇與醯化劑接觸；並且（iv）分離3-(乙醯硫代）萘-1-基乙酸酯（中間體11）。在一些實施方式中，溶劑係乙腈。在一些實施方式中，醯化劑係乙酸酐或乙醯氯。在一些實施方式中，醯化劑係乙酸酐。在一些實施方式中，胺鹼選自三乙胺、吡啶或二異丙基乙胺。在一些實施方式中，胺鹼係三乙胺。在一些實施方式中，親核催化劑選自4-二甲基胺基吡啶、吡啶和N-甲基咪唑。在一些實施方式中，親核催化劑係4-二甲基胺基吡啶。

在一些實施方式中，揭露了合成5-(((4-羥基萘-2-基)硫代)甲基)-1-甲基-1H-吡唑-3-甲酸甲酯（中間體12）之方法：

中間體 12 包括以下步驟：（i）在鹼和溶劑的存在下使3-(乙醯硫代)萘-1-基乙酸酯（中間體11）與5-(氯甲基)-1-甲基-1H-吡唑-3-甲酸甲酯（中間體10）接觸；並且（ii）分離5-(((4-羥基萘-2-基)硫代)甲基)-1-甲基-1H-吡唑-3-甲酸酯（中間體12）。在一些實施方式中，鹼選自碳酸鉀、氫氧化鋰、1,8-二氮雜雙環[5.4.0]十一碳-7-烯、氫氧化鈉、氫氧化鉀和乙醇鈉。在一些實施方式中，鹼係碳酸鉀。在一些實施方式中，溶劑選自甲醇、乙醇、水及其組合。在一些實施方式中，溶劑係甲醇。

在一些實施方式中，揭露了合成3-(((3-(羥甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)甲基)硫代)萘-1-醇（中間體13）之方法：

中間體 13 包括以下步驟：（i）使5-(((4-羥基萘-2-基)硫代)甲基)-1-甲基-1H-吡唑-3-甲酸甲酯（中間體12）與還原劑在溶劑中接觸；並且（ii）分離3-(((3-(羥甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)甲基)硫代)萘-1-醇（中間體13）。在一些實施方式中，還原劑係二異丁基氫化鋁。在一些實施方式中，溶劑係四氫呋喃、己烷或其組合。

在一些實施方式中，揭露了合成3-(((3-(氯甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)甲基)硫代)萘-1-醇（中間體14）之方法：

中間體 14 包括以下步驟：（i）使3-(((3-(羥甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)甲基)硫代)萘-1-醇（中間體13）與氯化劑接觸；並且（ii）分離3-(((3-(氯甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)甲基)硫代)萘-1-醇（中間體14）。在一些實施方式中，溶劑選自THF、二氯甲烷、二甲基甲醯胺及其組合。在一些實施方式中，溶劑係二甲基甲醯胺。在一些實施方式中，氯化劑係甲磺醯氯或亞硫醯氯。在一些實施方式中，氯化劑係甲磺醯氯。在一些實施方式中，步驟（i）進一步包括氯化鋰。

在一些實施方式中，揭露了合成3-(((3-(氯甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)甲基)硫代)萘-1-基乙酸酯（中間體15）之方法：

中間體 15 包括以下步驟：（i）使3-(((3-(氯甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)甲基)硫代)萘-1-醇（中間體14）與乙酸酐、任選的胺鹼和親核催化劑在溶劑中接觸；並且（ii）分離3-(((3-(氯甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)甲基)硫代)萘-1-基乙酸酯（中間體15）。在一些實施方式中，胺鹼係三乙胺。在一些實施方式中，親核催化劑選自4-二甲基胺基吡啶、N-甲基咪唑或吡啶。在一些實施方式中，親核催化劑係4-二甲基胺基吡啶。在一些實施方式中，溶劑係乙腈。

在一些實施方式中，揭露了合成3-(((3-((乙醯硫代)甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)甲基)硫代)萘-1-基乙酸酯（中間體16）之方法：

中間體 16 包括以下步驟：（i）使3-(((3-(氯甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)甲基)硫代)萘-1-基乙酸酯（中間體15）與硫代乙酸鉀在溶劑中接觸；並且（ii）分離3-(((3-((乙醯硫代)甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)甲基)硫代)萘-1-基乙酸酯（中間體16）。在一些實施方式中，溶劑係乙腈。

在一些實施方式中，揭露了合成(R _a )-(+)-甲基17-氯-5,13,14,22-四甲基-28-氧雜-2,9-二硫雜-5,6,12,13,22-戊氮雜庚環[27.7.1.1^4,7 .0^11,15 .0^16,21 .0^20,24 .0^30,35 ]三十八碳-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-十三烯-23-甲酸酯之方法

中間體 17 包括以下步驟：（i）使(R_a )-甲基6-氯-7-(3-(羥甲基)-1,5-二甲基-1H-吡唑-4-基)-3-(3-羥基丙基)-1-甲基-1H-吲哚-2-甲酸酯（中間體9）與磺醯化試劑在非質子鹼和溶劑的存在下接觸以形成第一溶液；（ii）向第一溶液中添加碘化物鹽；（iii）分離6-氯-7-[3-(碘甲基)-1,5-二甲基-吡唑-4-基]-1-甲基-3-(3-甲基磺醯氧基丙基)吲哚-2-甲酸甲酯；（iv）使3-(((3-((乙醯硫代)甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)甲基)硫代)萘-1-基乙酸酯（中間體16）與甲醇鈉的甲醇溶液接觸以形成第二溶液；（v）將6-氯-7-[3-(碘甲基)-1,5-二甲基-吡唑-4-基]-1-甲基-3-(3-甲基磺醯氧基丙基)吲哚-2-甲酸甲酯添加到第二溶液；並且（vi）分離(R _a )-(+)-甲基17-氯-5,13,14,22-四甲基-28-氧雜-2,9-二硫雜-5,6,12,13,22-戊氮雜庚環[27.7.1.1^4,7 .0^11,15 .0^16,21 .0^20,24 .0^30,35 ]三十八碳-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-十三烯-23-甲酸酯。在一些實施方式中，非質子鹼係二異丙基乙胺或N-甲基嗎啉。在一些實施方式中，非質子鹼係二異丙基乙胺。在一些實施方式中，磺醯化劑選自甲磺醯基酸酐、甲磺醯氯和對甲苯磺酸酐。在一些實施方式中，磺醯化劑係甲磺醯基酸酐。在一些實施方式中，溶劑係非質子溶劑。在一些實施方式中，非質子溶劑係四氫呋喃。在一些實施方式中，碘化物鹽係碘化鋰。

在一些實施方式中，揭露了合成化合物1之方法：

化合物 1 包括以下步驟：（i）使(R _a )-(+)-甲基17-氯-5,13,14,22-四甲基-28-氧雜-2,9-二硫雜-5,6,12,13,22-戊氮雜庚環[27.7.1.1^4,7 .0^11,15 .0^16,21 .0^20,24 .0^30,35 ]三十八碳-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-十三烯-23-甲酸酯與酯水解試劑在溶劑中接觸，並且（ii）分離(R _a )-(+)-17-氯-5,13,14,22-四甲基-28-氧雜-2,9-二硫雜-5,6,12,13,22-戊氮雜庚環[27.7.1.1^4,7 .0^11,15 .0^16,21 .0^20,24 .0^30,35 ]三十八碳-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-十三烯-23-甲酸。在一些實施方式中，酯水解試劑係選自氫氧化鋰、氫氧化鈉和氫氧化鉀的氫氧化物鹼。在一些實施方式中，鹼係氫氧化鈉。在一些實施方式中，溶劑選自甲醇、乙醇、異丙醇、DMSO、水及其組合。

術語“分離的”係指從反應混合物中獲得所需化合物的任何合適的方法。術語“分離的”包括萃取、過濾、乾燥、結晶、蒸發、層析（例如HPLC、柱層析）、金屬清除等。術語“分離的”包括從反應混合物中獲得未純化和純化的化合物之方法。在一些實施方式中，可以藉由萃取從反應混合物中分離化合物，並且即使化合物尚未被純化或從溶劑中除去，反應中的下一個步驟也可以進行。熟習該項技術者能夠確定從反應混合物中分離出所需化合物的合適方法。

術語“保護基團”包括羥基保護基團，例如苄基、對甲氧基苄基（PMB）、四氫哌喃基（THP）、對甲氧基苯基（PMP）和三級丁基二甲基矽基（TBDMS）、

、

、

、

、

、

、

、

、

等等。熟習該項技術者能夠無需過度的實驗鑒定合適的羥基保護基團。

術語“保護基團先質”包括將保護基團添加到所需部分的試劑。在一些實施方式中，保護基團先質為羥基保護基團先質，例如苄基氯、4-甲氧基苯酚、溴甲基吡唑、二氫哌喃、對甲氧基苯酚、氯甲基吡唑、三級丁基二甲基氯矽烷、三級丁基二甲基氯矽烷和1-(氯甲基)-4-甲氧基苯。熟習該項技術者將能夠無需過度的實驗容易地鑒定合適的保護基團先質。

術語“還原劑”包括氫化鋁鋰、硼氫化鈉、二異丁基氫化鋁等。

術語“溶劑”包括非極性溶劑、非質子溶劑和質子溶劑。術語“非極性溶劑”包括戊烷、環戊烷、己烷、庚烷、環己烷、苯、甲苯、氯仿、乙醚、環戊基甲基醚、三級丁基甲基醚、三級戊基甲基醚、二氯甲烷和甲基乙基酮。術語“非質子溶劑”包括四氫呋喃、乙酸乙酯、丙酮、二甲基甲醯胺、乙腈、2-甲基四氫呋喃、1,4-二𠮿㗁、二甲基乙醯胺和二甲亞碸。術語“質子溶劑”包括正丁醇、異丙醇、正丙醇、乙醇、甲醇、乙酸和水。在一些實施方式中，溶劑可以包括任何前述溶劑的組合。熟習該項技術者通常能夠確定用於特定反應的合適的溶劑或溶劑組合。

術語“溴化劑”包括1,3-二溴-5,5-二甲基乙內醯脲（DBDMH）和N-溴代琥珀醯亞胺（NBS）。

術語“重氮化劑”包括亞硝酸鈉（NaNO₂ ）、亞硝酸鈣（Ca(NO₂ )₂ ）和亞硝酸鉀（KNO₂ ）。

術語“金屬化劑”包括正丁基鋰（n-BuLi）。

術語“酯水解劑”包括氫氧化鈉（NaOH）、氫氧化鉀（KOH）、氫氧化鋰（LiOH）、氯化鈉（NaCl）和碘化鋰（LiI)。

術語“鹼”包括乙酸鉀（KOAc）、碳酸鉀（K₂ CO₃ ）、碳酸鈉（Na₂ CO₃ ）、磷酸鉀（K₃ PO₄ ）、氫氧化鉀、氫氧化鈉、雙(三甲基矽基)醯胺鈉（NaHMDS）、雙(三甲基矽基)醯胺（LiHMDS）、氫化鈉（NaH）、三級丁基硫酸氫銨、正丁基鋰、三級丁基鋰（t-BuLi）、鎂、鋅、氫氧化鋰、二異丙基胺鋰（LDA）、胺基鈉（NaNH₂ ）、三級丁醇鉀、吡啶、三乙胺（TEA）、二異丙基乙胺（DIEA）、1,8-二氮雜雙環[5.4.0]十一碳-7-烯（DBU）、甲醇鈉（NaOMe）和乙醇鈉（NaOEt）。術語“鹼”還包括鹼性相轉移催化劑，例如四丁基硫酸氫銨（Bu₄ ·HSO₄ ）、苄基三甲基氯化銨、聚乙二醇及其衍生物、18-冠醚-6和其他冠醚。

術語“酸”包括鹽酸（HCl）、硫酸（H₂ SO₄ ）、對甲苯磺酸（p-TsOH）、甲磺酸和乙酸。在一些實施方式中，酸係濃縮的。

術語“醇”包括甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、正丁醇、異丁醇和三級丁醇。

術語“還原劑”包括氫化鋁鋰（LAH）、硼烷-二甲基硫醚錯合物、硼烷-四氫呋喃錯合物、二異丁基氫化鋁（DIBAL）、硼氫化鋰（LiBH₄ ）、雙(2-甲氧基乙氧基）氫化鋁鈉（Red-Al®）和硼氫化鈉（NaBH₄ ）。

術語“甲基化劑”包括甲基碘、二甲基硫酸酯和二甲基甲醯胺-二甲基縮醛（DMF-DMA）。

術語“醯化劑”包括乙酸酐和乙醯氯。

術語“親核催化劑”包括二甲基胺基吡啶（DMAP）、吡啶和N-甲基咪唑。

術語“胺鹼”包括三乙胺、吡啶和二異丙基乙胺。

術語“磺醯化劑”包括甲苯磺酸酐、甲磺醯氯、對甲苯磺醯氯和甲磺醯酸酐。

術語“碘化物鹽”包括碘化鋰、碘化鈉和碘化鉀。

在一些實施方式中，術語“鈀催化劑”包括1,1'-雙(二三級丁基膦)二茂鐵二氯化鈀、[1,1′-雙(二三級丁基膦)二茂鐵]二氯化鈀(II)（Pd 188, PdCl₂ (dtbpf)）、(R )-(-)-4,12-雙(二苯基膦)-[2.2]-對環蕃（R-Phanephos）、(S )-(-)-4,12-雙(二苯基膦)-[2.2]-對環蕃（S-Phanephos）、(2-二環己基膦-2′,4′,6′-三異丙基-1,1′-聯苯)[2-(2′-胺基-1,1′-聯苯)]鈀(II)甲磺酸鹽（XPhos-G3-環鈀，XPhos-Pd-G3), (2-二環己基膦-2′,6′-二異丙氧基-1,1′-聯苯)[2-(2′-胺基-1,1′-聯苯)]鈀(II)甲磺酸鹽（RuPhos-G3-環鈀，RuPhos-Pd-G3）、(2-二環己基膦-2′,6′-二異丙氧基-1,1′-聯苯)[2-(2′-胺基-1,1′-聯苯)]鈀(II)甲磺酸鹽（RuPhos-G3-環鈀，RuPhos-Pd-G3）、[(2-二環己基膦-3,6-二甲氧基-2′,4′,6′-三異丙基-1,1′-聯苯)-2-(2′-胺基-1,1′-聯苯)]鈀(II)甲磺酸鹽（BrettPhos G3）、tBuXPhos-Pd-G3、[(2-二-三級丁基膦-2′,4′,6′-三異丙基-1,1′-聯苯)-2-(2′-胺基-1,1′-聯苯)]鈀(II)甲磺酸鹽（tBu XPhos G3）、四(三苯基膦)鈀(0)和雙(二三級丁基(4-二甲胺基苯基)膦)二氯化鈀(II)

在一些實施方式中，化合物1可以如方案I-VII中所示合成：方案 I

A=i）NaNO₂ 、水性HCl；ii）2-側氧基環戊烷-1-甲酸甲酯、水性KOAc；iii）H₂ SO₄ 、MeOH B=H₂ SO₄ 、MeOH方案 Ⅱ

C=i）LiAlH₄ 、THF；ii）NBS iii）PMBCl、KOH、Bu₄ NHSO₄ 、THF D=i）n-BuLi、THF；ii）i-PrOBPin方案 Ⅲ

E=Pd(di-t-BPF)Cl₂ 、K₂ CO₃ 、1,4-二𠮿㗁、H₂ O F=i）DMF-DMA、PhMe；ii）水性NaOH、MeOH G=(1R)-1-(2-硝基苯基)乙胺鹽酸鹽、NaOH、EtOH、H₂ O。 H=i）水性HCl、PhMe、THF；ii）DMF-DMA、PhMe；iii）AcCl、MeOH I=iBu₂ AlH、THF方案 Ⅳ

J=i）NaBH₄ 、MeOH、MeTHF方案 Ⅴ

K=i）PPh₃ 、I₂ 、MeCN；ii）Ac2O、Et₃ N、DMAP方案 Ⅵ

L=K₂ CO₃ 、MeOH M=i-Bu₂ AlH、THF N=MeSO₂ Cl、LiCl、DMF O=Ac₂ O、DMAP、MeCN P=KSAc、MeCN方案 VII

Q=i）中間體9、(MeSO₂ )₂ O、i-Pr₂ NEt；ii）LiI、MeCN；iii）在單獨的容器中，中間體16、NaOMe、MeOH；iv）來自iii的溶液）添加到來自ii的在MeCN中的化合物中；v）添加到熱DMSO中 R=NaOH、DMSO、EtOH、H₂ O [實例]

本揭露的多個方面可以藉由參考以下非限制性實例進一步定義，該等實例詳細描述了本揭露的某些化合物和中間體的製備以及用於使用本揭露的化合物之方法。熟習該項技術者應當清楚的是可以實踐對於材料和方法兩者的許多修改而不偏離本揭露之範圍。

除非另行說明：（i）除非另行說明，否則在環境溫度（即在17ºC到25ºC範圍內）下和在如氮氣的惰性氣體的氣氛下進行合成；（ii）藉由旋轉蒸發或使用Genevac設備或Biotage v10蒸發器在減壓下進行蒸發；（iii）在自動化Novasep Hipersep®或Teledyne Isco CombiFlash®Rf或Teledyne Isco CombiFlash® Companion®系統上使用Kromasil®60-10-SIL二氧化矽（10 μm顆粒，60Å孔徑）或使用預裝的RediSep Rf Gold™二氧化矽柱（20-40 μm，球形顆粒）、GraceResolv™濾芯（Davisil®二氧化矽膠）或Silicycle濾芯（40-63 μm）進行矽膠層析純化。（iv）在具有UV檢測的沃特斯（Waters）X5 SFC-MS或具有UV和ELSD檢測的沃特斯（Waters）UPC2 SFC-MS或具有UV檢測的安捷倫（Agilent）1100 HPLC系統上進行手性分析層析。（v）如果存在，產率不一定是可達到的最大值；（vi）通常，分離的化合物的結構藉由NMR光譜證實；使用溶劑殘留峰作為內部標準，以δ尺規測量NMR化學位移值[使用裝有QCI冷凍探針的Bruker Ultrashield Avance III 500MHz光譜儀、裝有BBFO探針的Bruker Ultrashield Avance III 400 MHz光譜儀、Bruker Avance 500（500 MHz）、Bruker Avance 400（400 MHz）、Bruker Avance 300（300 MHz）或Bruker DRX（300 MHz）儀器測定質子磁共振譜]；除非另有說明，測量在27ºC進行；已使用以下縮寫：s，單峰；d，雙峰；t，三重峰；q，四重峰；m，多重峰；dd，雙二重峰；ddd，雙二重峰的雙重峰；bs，寬峰信號。（vii）一般而言，還使用裝有沃特斯（Waters）SQ或QDa質譜儀的沃特斯（Waters）UPLC，藉由液質聯用來表徵分離的化合物（柱溫度30ºC或40ºC，UV=220-300 nm或210-400 nm或190-400 nm，質譜 = ESI具有正/負切換的ESI），使用97% A + 3% B至3% A + 97% B的溶劑系統，經1.50 min（加上平衡回到起始條件等的總執行時間為1.70 min）以1 mL/min的流速進行，其中A=0.1%甲酸或0.05%三氟乙酸水溶液（用於酸性運行）或0.1%氫氧化銨水溶液（用於鹼性運行）且B = 乙腈。對於酸性分析，使用的柱為沃特斯（Waters）Acquity HSS T3（1.8 μm，2.1×50 mm或2.1×30 mm）或沃特斯（Waters）Acquity BEH C18（1.7μm，2.1×50 mm或2.1×30 mm），對於中性-pH分析，使用沃特斯（Waters）Acquity BEH C18（1.7 μm，2.1×50 mm）柱，並且對於鹼性分析，所使用的管柱係沃特斯（Waters）Acquity BEH C18（1.7 μm，2.1×50 mm或2.1×30 mm）。或者，使用經1.5 min（加上平衡回到起始條件的總執行時間為2 min）2%至98% B的溶劑梯度，其中A=0.1%甲酸水溶液，B=0.1%甲酸於乙腈中的溶液（用於酸性運行）或A=0.1%氫氧化銨水溶液和B=乙腈（用於鹼性運行）。可替代地，經3.6 min（加上平衡回到起始條件等的總循環時間為5.1 min），使用92% A + 5% B + 3% C至7% A + 90% B + 3% C或90% A + 5% B + 5% D至5% A + 90% B + 5% D的溶劑梯度，其中A=水，B=乙腈，C=1% TFA的水溶液和D=250 mM乙酸銨的水溶液；除非另有說明，所報導的分子離子對應於[M+H]+；對於具有多種同位素模式（Br、Cl等）的分子，除非另有說明，報導的值係用最高強度獲得的。（viii）一般而言，在定量條件下藉由質子NMR測定化合物的wt%純度（相對於合適的內部參比標準品（例如1,2,4,5-四氯-3-硝基苯、馬來酸或苯甲酸苄酯））。（ix）在裝有傳熱套並用適當的輔助設備維護的反應器中進行大規模反應；和（x）已使用以下縮寫： MeCN 乙腈 aq. 水性 Conc. 濃 DCM 二氯甲烷 di-t-BPF 1,1'-雙(二-三級丁基膦)二茂鐵 DIBAH 氫化二異丁基鋁DMAP 4-二甲胺基吡啶 DMF N,N-二甲基甲醯胺 DMF-DMA N,N-二甲基甲醯胺二甲基縮醛 DMSO 二甲亞碸 e.e 鏡像異構物過量值 ES 電灑模式 HPLC 高效液相層析 IPA 異丙醇 LAH 氫化鋁鋰 MS 質譜 MTBE 甲基三級丁基醚 NBS N-溴琥珀醯亞胺 NMR 核磁共振 PMB 4-甲氧基苄基 TFA 三氟乙酸 THF 四氫呋喃 UPLC 超高效液相層析 wt% 重量百分比中間體 1 ：(E/Z)-二甲基2-(2-(2-溴-3-氯苯基)亞肼基)己二酸酯

將2-溴-3-氯苯胺（2.00 kg，9.69 mol），鹽酸（36wt%，4.85 L，58.1 mol）和水（5 L）的混合物攪拌1 h。將所得溶液冷卻至0ºC，然後在0ºC-5ºC下經1 h逐漸添加NaNO₂ （702 g，10.2 mol）於水（2.4 L）中的溶液。攪拌1 h後，在0ºC-5ºC逐漸添加2-側氧基環戊烷-1-甲酸甲酯（1.38 kg，9.69 mol）。然後逐漸添加KOAc（13.3 kg，136 mol）於水（20 L）中的溶液。使所得溶液在0ºC-5ºC再反應45 min。然後將溶液用DCM萃取三次（每次萃取12 L）。將合併的有機萃取物用鹽水（10 L）洗滌，然後裝填到另一個含有濃硫酸（4.75 kg，48.5 mol）於MeOH（3.1 kg）中的溶液的反應器中。使得到的溶液在10ºC-20ºC下反應3 h。將溶液濃縮至約8 L，然後完成添加MeOH（每循環18 L）和減壓下蒸餾除去溶劑（每循環18 L）的兩個循環。將所得漿液冷卻至0ºC-10ºC，攪拌1 h，然後過濾。用MeOH（2×2L）洗滌固體，然後在烘箱中減壓乾燥，以給出(E/Z)-二甲基2-(2-(2-溴-3-氯苯基)亞肼基)己二酸酯，（中間體 1 ，3.3 kg，94 wt%，82%)；m/z (ES+), [M+H]⁺ = 391。¹ H NMR (500 MHz, 氯仿-d , 27ºC) δ 1.98 (m, 2H), 2.41 (t, 2H), 2.59 (t, 2H), 3.66 (s, 3H), 3.87 (s, 3H), 7.05 (dd, 1H), 7.17 – 7.23 (m, 1H), 7.49 (dd, 1H), 12.48 (bs, 1H)。中間體 2 ： 7-溴-6-氯-3-(3-甲氧基-3-側氧基丙基)-1H-吲哚-2-甲酸甲酯

將(E/Z)-二甲基2-(2-(2-溴-3-氯苯基)亞肼基)己二酸酯（中間體 1 ，3.3 kg，93.7 wt%，7.9 mol）於濃硫酸（8.4 kg，84 mol）和MeOH（26 L）中的溶液在80ºC下攪拌72 h。將反應混合物冷卻至0ºC。藉由過濾收集得到的固體，用MeOH（2 L）洗滌，然後在40ºC的真空烘箱中乾燥，以給出2.5 kg固體。將該固體與以相同規模以相同方式製備的另外3批合併，以給出由13.6 kg（93.7wt%，32.5 mol）起始材料得到的總計11.9 kg的未純化產物。

將一半未純化的產物添加到攪拌的MeOH（36 L）中。將混合物加熱至65ºC，並將所得溶液在65ºC下保持1 h，之後冷卻至0ºC。將所得漿液在0ºC下攪拌1 h，然後過濾。濾餅用MeOH（3 L）洗滌並在40ºC的真空烘箱中乾燥。對剩餘的材料重複這一過程，並將該等材料合併以給出9.7 kg固體。將其中的3.7 kg與活性炭（0.74 kg）、DCM（3.4 L）和MeOH（34 L）混合，並將漿液加熱至65ºC-70ºC保持1 h。漿液冷卻至55ºC並過濾。將濾餅用DCM（10 L）洗滌，然後藉由在真空下蒸餾除去溶劑將合併的濾液濃縮至約8 L。完成添加MeOH（10 L）和真空下蒸餾除去溶劑（10 L）的兩個循環，然後將得到的漿液與來自剩餘固體的其他類似製備的漿液合併。將合併的漿液冷卻至0ºC並攪拌1 h，之後過濾。將濾餅用MeOH（3 L）洗滌並在40ºC真空烘箱中乾燥，得到7-溴-6-氯-3-(3-甲氧基-3-側氧基丙基)-1H-吲哚-2-甲酸甲酯（中間體 2 ，9.4 kg，97.7 wt%，76%）；m/z (ES+), [M+H]⁺ = 374。¹ H NMR (500 MHz, DMSO-d ₆ , 27ºC), δ 2.60 (t, 2H), 3.26 (t, 2H), 3.53 (s, 3H), 3.89 (s, 3H), 7.28 (d, 1H), 7.73 (d, 1H), 11.62 (bs, 1H)。中間體 3 ： 4-溴-3-(((4-甲氧基苄基)氧基)甲基)-1,5-二甲基-1H-吡唑

在4ºC-23ºC下，經1.5 h，將LAH（1.05 M於THF中，15.0 kg，17.4 mol）逐漸添加至1,5-二甲基-1H-吡唑-3-羧酸乙酯（5.33 kg，31.7 mol）於THF（10.7 L）中的攪拌溶液中，隨後添加THF（1.0 L）。30 min後，將溶液冷卻至15ºC，在繼續冷卻的同時，經20 min逐漸添加水（0.66 L，37 mol）於THF（1.9 L）中的溶液。然後經幾分鐘添加水性NaOH（15wt%，0.66 L，2.8 mol），隨後添加水（2.0 L）。將所得漿液在4ºC-11ºC下攪拌20 min，然後在抽吸下過濾。將收集的固體用THF（每次洗滌用10.7 L）洗滌四次，以給出(1,5-二甲基-1H-吡唑-3-基)甲醇，作為在收集的濾液中的溶液。

將反應器用1 M HCl、水和THF沖洗，之後再次裝入濾液。向該溶液中裝填三份NBS（每份1.82 kg，99.4wt%，總共30.6 mol），在19ºC-27ºC下在裝填各份之間攪拌7-8 min，然後之後在21ºC-28ºC下攪拌45 min。然後添加由Na₂ SO₃ （0.81 kg，99wt%，6.4 mol），NaOH（50wt%於水中，4.6 kg，57 mol）和水（16 L）製備的溶液，並將所得混合物在25ºC-26ºC攪拌10 min。將層分離並將下層用THF（16 L）洗滌。將上層合併並蒸發至乾燥，以給出呈固體狀的(4-溴-1,5-二甲基-1H-吡唑-3-基)甲醇。

將該未純化的(4-溴-1,5-二甲基-1H-吡唑-3-基)甲醇重新溶於THF（18.8 L）中並在攪拌下加熱至50ºC，然後添加四丁基硫酸氫銨（0.32 kg，0.95 mol ）、1-(氯甲基）-4-甲氧基苯（5.4 L，97.6wt%，40 mol）和THF（2.8 L）管線洗滌液。在47ºC-57ºC下，經45 min逐漸添加KOH（45wt%於水中，13.7 L，159 mol）至劇烈攪拌的混合物中，之後在55ºC-50ºC繼續攪拌4 h。然後將混合物冷卻至20ºC並在攪拌下保持63 h。將該混合物重新加熱至50ºC，添加水（18.7 L）並將該混合物攪拌10 min。除去下層，將留在反應器中的溶液冷卻至20ºC。添加作為結晶晶種的4-溴-3-(((4-甲氧基苄基)氧基)甲基)-1,5-二甲基-1H-吡唑（0.01 kg，0.03 mol）隨後逐漸經45 min來添加庚烷（32 L），在此期間開始結晶。將漿液在20ºC下攪拌30 min，之後經45 min逐漸裝填更多庚烷（22 L）並冷卻至0ºC。17 h後，添加更多的庚烷（11 L）。在0ºC下再過1 h後，抽吸過濾漿液。將濾餅用庚烷（17 L）和THF（4.3 L）的冷卻（0ºC）混合物洗滌，然後在40ºC真空烘箱中乾燥，以給出4-溴-3-(((4-甲氧基苄基)氧基)甲基)-1,5-二甲基-1H-吡唑（中間體 3 ，8.78 kg，96 wt%，82%）；m/z (ES+), [M+H]⁺ = 325。¹ H NMR (500 MHz, DMSO-d ₆ , 27ºC) δ 2.22 (s, 3H), 3.74 (s, 3H), 3.75 (s, 3H), 4.32 (s, 2H), 4.39 (s, 2H), 6.87 – 6.93 (m, 2H), 7.22 – 7.27 (m, 2H)。中間體 4 ： 3-(((4-甲氧基苄基)氧基)甲基)-1,5-二甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜環戊硼烷-2-基)-1H-吡唑

在-73ºC至-66ºC下經1.5 h向4-溴-3-(((4-甲氧基苄基)氧基)甲基)-1,5-二甲基-1H-吡唑（中間體 3 ，5.27 kg，96 wt%，15.6 mol）於THF（43 L）中的攪拌漿液中逐漸添加丁基鋰（15 wt%在己烷中，7.27 kg，17.3 mol）。將所得溶液在-77ºC至-66ºC攪拌1.7 h，然後經15 min添加2-異丙氧基-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜環戊硼烷（3.4 L，16 mol）、隨後添加THF（3.0 L）管線洗滌液。將溶液在-77ºC至-63ºC下攪拌1.5 h，然後在-77ºC至-58ºC下經15 min逐漸添加乙酸（0.89 L，16 mol）於甲苯（25.3 L）中的溶液。然後將混合物加溫至20ºC，之後加熱並在67ºC-82ºC（大氣壓）下蒸餾除去溶劑（48 L）。將混合物冷卻至65ºC，添加水（25.5 L）並將混合物攪拌10 min。除去下層，然後在72ºC-119ºC（大氣壓；最終蒸氣溫度108ºC）下蒸餾去除更多的溶劑（25.4 L）。將所得溶液冷卻至40ºC，並經10 min用庚烷（50.6 L）稀釋，在此期間混合物冷卻至21ºC並開始自發結晶。而將3-(((4-甲氧基苄基)氧基)甲基)-1,5-二甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜環戊硼烷-2-基)-1H-吡唑（29 g）作為晶種添加。將漿液在約21ºC下攪拌0.6 h，經1.5 h冷卻至約-5ºC，然後在該溫度下保持過夜（18 h）。抽吸過濾漿液，然後用冷（約0ºC）庚烷洗滌濾餅，之後在40ºC真空烘箱中乾燥，以給出3-(((4-甲氧基苄基)氧基)甲基)-1,5-二甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜環戊硼烷-2-基)-1H-吡唑（中間體 4 ，4.50 kg，99 wt%，77%)；m/z (ES+), [M+H]⁺ = 373。¹ H NMR (500 MHz, DMSO-d ₆ , 27ºC) δ 1.23 (s, 12H), 2.34 (s, 3H), 3.68 (s, 3H), 3.73 (s, 3H), 4.40 (s, 2H), 4.42 (s, 2H), 6.85 – 6.91 (m, 2H), 7.20 – 7.25 (m, 2H)。中間體 5 ： (±)-甲基6-氯-3-(3-甲氧基-3-側氧基丙基)-7-(3-(((4-甲氧基苄基)氧基)甲基)-1,5-二甲基-1H-吡唑-4-基)-1H-吲哚-2-甲酸酯

在氮氣下向100 L反應器中裝填3-(((4-甲氧基苄基)氧基)甲基)-1,5-二甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜環戊硼烷-2-基)-1H-吡唑（中間體 4 ，3.30 kg，99 wt%，8.78 mol)，7-溴-6-氯-3-(3-甲氧基-3-側氧基丙基)-1H-吲哚-2-甲酸甲酯（中間體 2 ，3.20 kg，97.7 wt%，8.35 mol）、K₂ CO₃ （1.60 kg，11.6 mol）和1,1'-雙(二三級丁基膦基)二茂鐵二氯化鈀（0.132 kg，0.203 mol）。然後將反應器頂部空間抽真空並再次充入氮氣三次。將1,4-二𠮿㗁（26.3 L）和水（3.3 L）用氮氣在減壓下鼓泡5-10 min，之後將它們順序添加，並將所得漿液伴隨攪拌在80ºC加熱5 h。將反應混合物冷卻至20ºC並保持過夜（16 h），之後用MTBE（33 L）和水（33 L）稀釋。添加N -乙醯半胱胺酸（0.165 kg，1.01 mol）並將混合物攪拌15 min。下層一旦沈降即被去除。然後依次用在水（30 L）中的鹽酸（37wt%，2.7 L，33 mol）然後用水（32 L）洗滌上層，以給出(±)-甲基6-氯-3-(3-甲氧基-3-側氧基丙基)-7-(3-(((4-甲氧基苄基)氧基)甲基)-1,5-二甲基-1H-吡唑-4-基)-1H-吲哚-2-甲酸酯（中間體 5 ， 22.9 kg，19.1 wt%，97%）的MTBE溶液。中間體 6 ： (±)-3-(2-羧乙基)-6-氯-7-(3-(((4-甲氧基苄基)氧基)甲基)-1,5-二甲基-1H-吡唑-4-基)-1-甲基-1H-吲哚-2-甲酸

將(±)-甲基6-氯-3-(3-甲氧基-3-側氧基丙基)-7-(3-(((4-甲氧基苄基)氧基)甲基)-1,5-二甲基-1H-吡唑-4-基)-1H-吲哚-2-甲酸酯（中間體 5 ， 22.94 kg，19.1 wt%，8.12 mol）的MTBE溶液在20ºC下用巰丙基官能化的二氧化矽基鈀清除劑（Quadrasil^™ MP，1.1 kg）和甲苯（44 L）攪拌1 h。過濾漿液，將廢物固體用甲苯（13 L）洗滌。藉由在75ºC-107ºC蒸餾去除溶劑（44 L）濃縮合併的濾液。然後在91ºC添加DMF-DMA（5.5 L，41 mol）。將溶液加熱至回流，在大約108ºC下保持22 h，在此期間蒸餾去除四份溶劑（2、4.5、4.5和4.4 L）（在達到回流後立即蒸餾去除，然後在達到回流後2.0、3.4和4.8 h蒸餾去除），然後冷卻至55ºC。裝填NaCl（2.2 kg）於水（20 L）中的溶液，然後將所得的兩相混合物從容器中去除並通過5 μm管線過濾器過濾回來。將經篩選的混合物在50ºC-53ºC攪拌10 min，然後一旦沈降，將下層除去。然後添加MeOH（22 L）和在水（18 L）中的NaOH（3.3 kg，50wt%，41 mol）水溶液，並將所得的兩相混合物在55ºC攪拌3 h。沈降後，將層去除以分離容器。然後將下層（含產物）送回反應器並在55ºC下攪拌。然後經25 min逐漸添加乙酸（4.6 kg，77 mol）在水（4.4 L）中的溶液，隨後添加3-(2-羧乙基)-6-氯-7-(3-(((4-甲氧基苄基)氧基)甲基)-1,5-二甲基-1H-吡唑-4-基)-1-甲基-1H-吲哚-2-甲酸(0.02 kg, 0.04 mol）結晶晶種。將混合物在49ºC-56ºC保持2 h，經2 h冷卻至20ºC，然後在20ºC保持13 h。抽吸過濾得到的漿液。使用水（11 L）沖洗反應器和濾餅，然後藉由在環境溫度下繼續抽吸6 h而在濾器上部分乾燥，並在40ºC真空烘箱中完全乾燥，以給出(±)-3-(2-羧乙基)-6-氯-7-(3-(((4-甲氧基苄基)氧基)甲基)-1,5-二甲基-1H-吡唑-4-基)-1-甲基-1H-吲哚-2-甲酸（中間體 6 ，3.78 kg，99.0 wt%，86%）；m/z (ES+), [M+H]⁺ = 526。¹ H NMR (500 MHz, DMSO-d ₆ , 27ºC) δ 2.01 (s, 3H), 2.50 – 2.57 (m, 2H), 3.18 – 3.29 (m, 2H), 3.40 (s, 3H), 3.68 (s, 3H), 3.82 (s, 3H), 4.08 (d, 1H), 4.14 (d, 1H), 4.19 (d, 1H), 4.21 (d, 1H), 6.64 – 6.69 (m, 2H), 6.69-6.74 (m, 2H), 7.25 (d, 1H), 7.75 (d, 1H), 12.71 (bs, 1H)。中間體 7 ： (R _a )-3-(2-羧乙基)-6-氯-7-(3-(((4-甲氧基苄基)氧基)甲基)-1,5-二甲基-1H-吡唑-4-基)-1-甲基-1H-吲哚-2-甲酸- (1R )-1-(2-硝基苯基)乙胺（1 : 1鹽）

在20ºC下將NaOH（50 wt%在水中，0.95 L，18 mol）添加到(±)-3-(2-羧乙基)-6-氯-7-(3-(((4-甲氧基苄基)氧基)甲基)-1,5-二甲基-1H-吡唑-4-基)-1-甲基-1H-吲哚-2-甲酸（中間體 6 ，9.38 kg，97.5 wt%，17.4 mol）和(1R )-1-(2-硝基苯基)乙胺鹽酸鹽（2.48 kg，91 wt%，11.1 mol）在水（7.4 kg）和乙醇（64 L）中的攪拌漿液中，隨後用乙醇（1.8 L）沖洗。在將所得溶液加熱至78ºC時，開始產物的自發結晶（在或低於41ºC）。加熱至78ºC後，完成經1.3 h將漿液冷卻至63ºC、經0.6 h加熱回到78ºC並保持10 min的三個循環。然後將漿液經1.2 h冷卻至63ºC，然後經1.6 h冷卻至20ºC，然後保持在20ºC過夜，然後抽吸過濾。用乙醇（18 L）沖洗反應器和濾餅。一旦充分脫液，濾餅返回到反應器中。（該固體通常具有大約92% e.e.所需的二酸）。裝填水（7.3 L）和乙醇（66 L），並將反應器內容物在攪拌下加熱至78ºC。將所得漿液經1.3 h冷卻至63ºC，然後經1.6 h冷卻至20ºC，之後保持在20ºC過夜，然後抽吸過濾。用乙醇（18 L）沖洗反應器和濾餅。將濾餅在40ºC真空烘箱中乾燥，以給出(R _a )-3-(2-羧乙基)-6-氯-7-(3-(((4-甲氧基苄基)氧基)甲基)-1,5-二甲基-1H-吡唑-4-基)-1-甲基-1H-吲哚-2-甲酸- (1R )-1-(2-硝基苯基)乙胺（1 : 1鹽）（中間體 7 ，5.23 kg，97.5 wt%，99.0% e.e.，7.36 mol)產率為42.3%；m/z(ES+)，[M+H]⁺ = 526(酸), 167 (胺)。¹ H NMR (500 MHz, DMSO-d ₆ , 27ºC) δ 1.49 (d, 3H), 2.00 (s, 3H), 2.61 (t, 2H), 3.10 – 3.22 (m, 2H), 3.38 (s, 3H), 3.68 (s, 3H), 4.11 (d, 1H), 4.14 (d, 1H), 4.17 (d, 1H), 4.22 (d, 1H), 4.66 (q, 1H), 6.67 – 6.72 (m, 2H), 6.75 – 6.80 (m, 2H), 7.18 (d, 1H), 7.54 – 7.60 (m, 1H), 7.63 (d, 1H), 7.76 – 7.82 (m, 1H), 7.90 – 7.94 (m, 1H), 7.93 – 7.97 (m, 1H), 9.16 (bs, 3H)。手性純度分析HPLC方法細節：柱=Chiralpak AD-H（4.6×250 mm，5 μm）；溫度=25ºC；流動相=70 : 30己烷 : 含有0.2% TFA的乙醇（按體積計），流速1.0 mL/min；在254 nm處藉由UV檢測；注射體積=10 μL（這可以調整為達到合適的檢測限）；R _a 和S _a 鏡像異構物的保留時間分別為4.8和13.7 min。中間體 8 ： (R _a )-甲基6-氯-7-(3-(羥甲基)-1,5-二甲基-1H-吡唑-4-基)-3-(3-甲氧基-3-側氧基丙基)-1-甲基-1H-吲哚-2-甲酸酯

在45ºC下，將鹽酸（37 wt%，0.77 L，9.2 mol）添加到(R _a )-3-(2-羧乙基)-6-氯-7-(3-(((4-甲氧基苄基)氧基)甲基)-1,5-二甲基-1H-吡唑-4-基)-1-甲基-1H-吲哚-2-甲酸- (1R )-1-(2-硝基苯基)乙胺（1 : 1鹽）（中間體 7 ，5.23 kg，97.5 wt%，7.36 mol）在THF（20.5 L）和水（20.5 L）中的攪拌漿液中。5 min後，添加甲苯（41 L）並將混合物攪拌10 min。除去下層，將上層用甲苯（20.5 L）稀釋，並藉由在48ºC-92ºC下減壓（590 mbar）蒸餾去除溶劑（60 L）來濃縮。在90ºC下向所得混合物中添加DMF-DMA（3.45 L，25.8 mol），得到溶液，將溶液加熱至回流，保持回流（98ºC）8 h，然後冷卻至49ºC並保持16 h。添加DMF-DMA（1.0 L，7.5 mol）並將混合物在100ºC下再回流3.6 h，之後冷卻至50ºC。添加水（12.7 L）並將該混合物攪拌15 min。將下層除去。向上層添加MeOH（20 L），然後向攪拌的溶液中逐漸添加乙醯氯（2.15 L，29.9 mol）10 min。溶液在60ºC加熱21 h，然後轉移到容器中。將甲苯（10 L）和在水（20.5 L）中的K₂ CO₃ （2.56 kg，18.4 mol）裝填入空的反應器中，並將混合物加熱至55ºC。然後經20 min將完成的反應溶液逐漸加回到反應器中，隨後用甲苯（10 L）沖洗。在55ºC再攪拌10 min後停止攪拌，一旦沈降，則除去下層。藉由在55ºC-93ºC下減壓（540 mbar）蒸餾去除溶劑（21 L）來濃縮上層。將該溶液在50ºC下用庚烷（10 L）稀釋，然後接種(R _a )-甲基6-氯-7-(3-(羥甲基)-1,5-二甲基-1H-吡唑-4-基)-3-(3-甲氧基-3-側氧基丙基)-1-甲基-1H-吲哚-2-甲酸酯（16 g，0.037 mol）。在50ºC下建立結晶1 h後，經1 h逐漸添加更多的庚烷（20 L）。然後經2 h將漿液冷卻至20ºC並攪拌65 h，之後抽濾。將濾餅用庚烷（10 L）洗滌，然後在40ºC真空烘箱中乾燥，以給出(R _a )-甲基6-氯-7-(3-(羥甲基)-1,5-二甲基-1H-吡唑-4-基)-3-(3-甲氧基-3-側氧基丙基)-1-甲基-1H-吲哚-2-甲酸酯（中間體 8 ，2.85 kg，98 wt%，87%）；m/z (ES+), [M+H]⁺ = 434。¹ H NMR (500 MHz, DMSO-d ₆ , 27ºC) δ 1.95 (s, 3H), 2.57 – 2.64 (m, 2H), 3.17 – 3.33 (m, 2H), 3.44 (s, 3H), 3.57 (s, 3H), 3.79 (s, 3H), 3.84 (s, 3H), 4.13 (dd, 1H), 4.23 (dd, 1H), 4.72 (dd, 1H), 7.26 (d, 1H), 7.72 (d, 1H)。中間體 9 ： (R _a )-甲基6-氯-7-(3-(羥甲基)-1,5-二甲基-1H-吡唑-4-基)-3-(3-羥基丙基)-1-甲基-1H-吲哚-2-甲酸酯

將(R _a )-甲基6-氯-7-(3-(羥甲基)-1,5-二甲基-1H-吡唑-4-基)-3-(3-甲氧基-3-側氧基丙基)-1-甲基-1H-吲哚-2-甲酸酯（中間體 8 ，2.25 kg，98 wt%，5.08 mol）溶於THF（13.3 L）中，並將所得溶液冷卻至-45ºC。然後在-41ºC或低於-41ºC下經1.1 h添加DIBAH（20.3wt%於己烷中；11.0 kg，15.7 mol）。將反應混合物在約-45ºC下保持另外的4.4 h,，在此期間在1.4 h、2.8 h和3.7 h之後添加另外三份DIBAH（20.3 wt%於己烷中；1.32、0.25和0.07 kg；1.88、0.36和0.10 mol），然後向反應混合物中添加IPA（2.2 L，29 mol），然後經2 h加熱至20ºC，並在該溫度下保持2.5 h。

同時，在另一反應器中，裝填四水合酒石酸鈉鉀（6.47 kg，22.9 mol）和水（22 L）。在20ºC攪拌幾分鐘後，形成溶液，然後添加乙酸異丙酯（22 L）。將得到的兩相混合物加熱至50ºC。

將酯還原反應混合物在50ºC下經20 min轉移到劇烈攪拌的水性酒石酸鹽和乙酸異丙酯混合物中，隨後用THF（1.5L）沖洗。在50ºC繼續劇烈攪拌1.9 h。將下層除去。將上層用水（4.45 L）洗滌，然後除去並通過5 μm管線過濾器過濾回到反應器中，隨後用乙酸異丙酯（1.1 L）進行管線洗滌。藉由在58ºC-74ºC（大氣壓）下蒸餾去除溶劑（32 L）來濃縮溶液，然後冷卻至20ºC。將溶液轉移到較小的容器中，隨後用乙酸異丙酯（1.1 L）進行管線洗滌，然後藉由在73ºC-85ºC（大氣壓）下蒸餾去除更多的溶劑（15 L）而進一步濃縮（至約9 L）。然後將攪拌的溶液冷卻至70ºC，接種(R _a )-甲基6-氯-7-(3-(羥甲基)-1,5-二甲基-1H-吡唑-4-基)-3-(3-羥基丙基)-1-甲基-1H-吲哚-2-甲酸酯（2 g，97.9 wt%，5 mmol），經1小時冷卻至20ºC並在20ºC下保持24 h。抽吸過濾得到的漿液。將濾餅用乙酸異丙酯（2.2 L）洗滌，然後在40ºC真空烘箱中乾燥，以給出(R _a )-甲基6-氯-7-(3-(羥甲基)-1,5-二甲基-1H-吡唑-4-基)-3-(3-羥基丙基)-1-甲基-1H-吲哚-2-甲酸酯（中間體 9 ，1.76 kg，98.0 wt%，84%）；m/z (ES+), [M+H]⁺ = 406。¹ H NMR (500 MHz, DMSO-d ₆ , 27 ºC) δ 1.68 – 1.77 (m, 2H), 1.96 (s, 3H), 2.93 – 3.05 (m, 2H), 3.43 (s, 3H), 3.42 – 3.48 (m, 2H), 3.80 (s, 3H), 3.84 (s, 3H), 4.14 (dd, 1H), 4.23 (dd, 1H), 4.48 (t, 1H), 4.71 (dd, 1H), 7.25 (d, 1H), 7.71 (d, 1H)。中間體 10 ： 5-(氯甲基)-1-甲基-1H-吡唑-3-甲酸甲酯

在20ºC±5ºC下將碳酸鈉（2.14 kg，20.2 mol）添加到攪拌的1-甲基-1H-吡唑-3,5-二甲酸二甲酯（7.95 kg，40.1 mol）於MeOH（80 L）中的溶液中。將漿液攪拌0.5 h，然後過濾。將濾餅用2-甲基THF（16 L）洗滌，然後將濾液返回到反應器中，隨後添加2-甲基THF（24 L）。將該溶液冷卻至15ºC±3ºC，並在15ºC±3ºC下分十份添加硼氫化鈉（3.05 kg，80.7 mol）。添加NaBH₄ 後，將混合物在18ºC±3ºC下攪拌2 h。然後藉由在18ºC±3ºC下逐漸裝填丙酮（16.4 kg，283 mol）進行淬滅，然後在20ºC±5ºC下攪拌1 h。然後緩慢添加水性HCl（37wt%，約8.6 kg，87 mol），保持溫度低於30ºC，以將pH調節至2-3，然後將混合物攪拌1 h。然後緩慢添加飽和水性Na₂ CO₃ （約4 L）以將pH調節至5-6，然後將混合物攪拌3 h。過濾混合物，並將濾餅用DCM（16 L）洗滌。藉由減壓蒸餾將濾液濃縮至約20 L，加熱不超過40ºC，然後用DCM（40 L）稀釋並藉由在減壓下蒸餾去除溶劑（約40 L）來再次濃縮。裝填DCM（80 μL）和純水（32 μL）並將所得混合物攪拌至少10 min。收集下層（有機）相，並用更多的DCM（40 L/份）將上層（水性）相萃取四次。藉由低於40ºC的真空蒸餾將合併的有機相濃縮至約20 L。添加DCM（80 μL），並藉由蒸餾去除溶劑（約40 μL）再次濃縮溶液。然後用DCM（80 L）稀釋所得的5-(羥甲基)-1-甲基-1H-吡唑-3-甲酸甲酯溶液並冷卻至10ºC±5ºC，於是在保持溫度低於15ºC的同時逐漸添加亞硫醯氯（4.80 kg，40.4 mol）。然後將混合物在20ºC±5ºC下攪拌1 h。藉由低於40ºC的真空蒸餾將混合物濃縮至不超過20 L，然後添加DCM（64 L）和純水（80 L）。相分離後，將下層（有機）相用水性Na₂ CO₃ （9 wt%，每份80 L）洗滌兩次，然後用純水（80 L）洗滌。藉由低於40ºC的真空蒸餾將經洗滌的有機相濃縮至約14 L。然後完成緩慢添加庚烷（40 L）然後在低於45ºC真空蒸餾至約24 L的兩個循環。緩慢添加更多的庚烷（40 L），並將所得漿液在20ºC±5ºC下攪拌至少0.5 h，之後過濾。將濾餅用庚烷（8.0 L）洗滌，然後在45ºC真空烘箱中乾燥，以給出5-(氯甲基)-1-甲基-1H-吡唑-3-甲酸甲酯（中間體 10 , 4.87 kg, 64%）；m/z (ES+), [M+H]⁺ = 189。¹ H NMR (500 MHz, CDCl₃ , 27ºC) δ 3.91 (s, 3H), 3.99 (s, 3H), 4.59 (s, 2H), 6.82 (s, 1H)。中間體 11 ： 3 -(乙醯硫代)萘-1-基乙酸酯

將MeCN（102 μL）、4-羥基萘-2-磺酸鈉（17.00 kg，69.05 mol）、三苯基膦（65.1 kg，248 mol）和碘（14.0 kg，55.2 mol）的攪拌混合物在80ºC±5ºC下加熱6 h。將混合物冷卻並在0ºC±5ºC下攪拌至少2 h。濾除廢固體，以給出溶解在濾液（也含有大量三苯基膦氧化物）中的粗3-巰基萘-1-醇，將濾液重新裝填到反應器中，隨後裝填DMAP（0.84 kg，6.9 mol）。保持溫度低於25ºC，逐漸添加三乙胺（21.0 kg，207 mol），然後添加乙酸酐（17.6 kg，173 mol）。將混合物在15ºC-20ºC下攪拌2 h，然後在減壓下蒸餾至小於85 L，不要加熱超過45ºC。添加DCM（85 L），然後將混合物在減壓下蒸餾至小於85 L，不要加熱超過40ºC。添加更多的DCM（170 L），然後將混合物用水（170 L）洗滌，然後用水性NaCl（17 wt%，170 L）洗滌。將下層有機相在減壓下蒸餾至小於51 L，不要加熱超過40ºC。然後完成用MeOH（85 L）稀釋該溶液並在低於40ºC在減壓下蒸餾至少於51 L的三個循環，以產率71%給出粗3-(乙醯硫代)萘-1-基乙酸酯（中間體 11 ，40.9 kg，31.3 wt%，49.2 mol）的甲醇溶液。將還含有大量三苯基膦氧化物的溶液直接用於製備中間體 12 。中間體 12 ： 5-(((4-羥基萘-2-基)硫代)甲基)-1-甲基-1H-吡唑-3-甲酸甲酯

在15ºC-20ºC下攪拌3-(乙醯硫代)萘-1-基乙酸酯（中間體 11 ，40.9 kg，31.3 wt%在甲醇中，49.2 mol）、甲醇（64 L）和K₂ CO₃ （13.6 kg,98.4 mol）。分部分添加5-(氯甲基)-1-甲基-1H-吡唑-3-甲酸甲酯（中間體 10 ，7.40 kg，39.2 mol），同時保持溫度低於25ºC。然後將漿液在20ºC-25ºC下攪拌2 h。回應於HPLC分析，裝填另外四份5-(氯甲基)-1-甲基-1H-吡唑-3-甲酸甲酯（中間體 10 ，0.46 kg，2.4 mol/份），在裝填每份之後在20ºC-25ºC下攪拌1 h。在15ºC-20ºC下逐漸添加純水（109 L），攪拌所得混合物持續至少2 h，然後靜置至少3 h。藉由管道除去液體，將沈降的粘性固體留在反應器中，然後向其中添加乙醇（25.5 L）。在15ºC±5ºC下將混合物攪拌至少1 h，之後過濾得到的漿液。將濾餅用乙醇（6.4 L）洗滌，然後在45ºC±5ºC真空烘箱中乾燥，以給出5-(((4-羥基萘-2-基)硫代)甲基)-1-甲基-1H-吡唑-3-甲酸甲酯（中間體 12 ，13.05 kg，99.3 wt%，81%）；m/z (ES+), [M+H]⁺ = 329。¹ H NMR (500 MHz, DMSO, 27ºC) δ 3.72 (s, 3H), 3.90 (s, 3H), 4.39 (s, 2H), 6.63 (s, 1H), 6.79 (d, 1H), 7.28 – 7.32 (m, 1H), 7.38 (ddd, 1H), 7.45 (ddd, 1H), 7.72 (d, 1H), 8.07 (d, 1H), 10.55 (bs, 1H)。中間體 13 ： 3-(((3-(羥甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)甲基)硫代)萘-1-醇

在30ºC±5ºC將5-(((4-羥基萘-2-基)硫代)甲基)-1-甲基-1H-吡唑-3-甲酸甲酯（中間體 12 ，12.7 kg，99.3 wt%，38.4 mol）溶於THF（254 L），然後將溶液冷卻至15ºC±5ºC。緩慢添加DIBAH（1 M在己烷中，155 L，155 mol），同時將溫度保持在15ºC±5ºC。然後將混合物在20ºC±5ºC下攪拌0.5 h，藉由HPLC分析，然後在5ºC-20ºC逐漸轉移到水性鹽酸（4 M，114 L，456 mol）中。將兩相混合物在低於40ºC真空蒸餾至不超過約120 L。將所得漿液冷卻至15ºC±5ºC，然後過濾。將濾餅用純水（25 L）洗滌，然後與DCM（57 L）和THF（6.4 L）一起再次裝填入反應器中。在20ºC±5ºC下攪拌混合物至少10 h後，將其過濾。將濾餅用DCM（25 L）洗滌，然後在45ºC±5ºC的真空烘箱中乾燥，以給出3-(((3-(羥甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)甲基)硫代)萘-1-醇（中間體 13 ，10.45 kg，95.5 wt%，87%）；m/z (ES+), [M+H]⁺ = 301。¹ H NMR (500 MHz, DMSO-d ₆ , 27ºC) δ 3.77 (s, 3H), 4.28 (s, 2H), 4.37 (s, 2H), 4.87 (bs, 1H), 6.14 (s, 1H), 6.81 (d, 1H), 7.35 (d, 1H), 7.39 (ddd, 1H), 7.47 (ddd, 1H), 7.72 – 7.75 (m, 1H), 8.03 – 8.06 (m, 1H), 10.34 (s, 1H)。中間體 14 ： 3-(((3-(氯甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)甲基)硫代)萘-1-醇

將甲磺醯氯（6.28 kg，54.8 mol）逐漸添加到3-(((3-(羥甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)甲基)硫代)萘-1-醇（中間體 13 ，10.30 kg，95.5 wt%，32.7 mol）、無水氯化鋰（2.91 kg，68.6 mol）和DMF（51.5 L）的攪拌混合物中，同時保持溫度低於10ºC。將混合物在15ºC-20ºC攪拌2 h。然後添加EtOAc（155 L），然後添加純水（155 L）並將混合物充分混合。將下層去除並將上層用水性NaCl（17 wt%；每份155 L）洗滌兩次。然後將上層在低於35ºC下真空蒸餾至小於50 L。然後在30ºC±5ºC緩慢添加庚烷（155 L），之後將混合物冷卻至0ºC-5ºC。攪拌漿液至少1 h後，過濾。將濾餅用庚烷（10.3 L）洗滌，然後在30ºC-35ºC的真空烘箱中乾燥，以給出3-(((3-(氯甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)甲基)硫代)萘-1-醇（中間體 14 ，9.72 kg，95.3 wt%，89%）；m/z (ES+), [M+H]⁺ = 319。¹ H NMR (500 MHz, CDCl₃ , 27 ºC) δ 3.80 (s, 3H), 4.07 (s, 2H), 4.50 (s, 2H), 6.11 (s, 1H), 6.70 (d, 1H), 7.38 – 7.42 (m, 1H), 7.45 – 7.52 (m, 2H), 7.52 (bs, 1H), 7.68 – 7.74 (m, 1H), 8.16 – 8.20 (m, 1H)。中間體 15 ： 3-(((3-(氯甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)甲基)硫代)萘-1-基乙酸酯

將乙酸酐（3.65 kg，35.8 mol）逐漸裝填入3-(((3-(氯甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)甲基)硫代)萘-1-醇（中間體 14 ，9.51 kg，95.3 wt%，28.4 mol）、DMAP（360 g，2.95 mol）和MeCN（95 L）的攪拌混合物中，同時保持溫度低於25ºC。將混合物在15ºC-20ºC攪拌2 h。然後添加EtOAc（95 L），隨後添加水性NaCl（10 wt%，95 L）。徹底混合後，將下層除去。將上層用另外兩份水性NaCl（10 wt%，每份95 L）洗滌，然後進行在低於40ºC真空蒸餾至小於29 L、然後添加MTBE（95 L）的三個循環。將混合物在低於40ºC真空蒸餾至小於48 L，在約20ºC下攪拌至少1 h，然後冷卻至0ºC-5ºC。緩慢添加庚烷（95 L），將漿液在0ºC-5ºC攪拌至少1 h，之後進行過濾。將濾餅用庚烷（17 L）洗滌，然後在35ºC-40ºC的真空烘箱中乾燥，以給出3-(((3-(氯甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)甲基)硫代)萘-1-基乙酸酯（中間體 15 ，8.67 kg，96.1 wt%，81%）；m/z (ES+), [M+H]⁺ = 361。¹ H NMR (500 MHz, CDCl₃ , 27 ºC) δ 2.46 (s, 3H), 3.82 (s, 3H), 4.11 (s, 2H), 4.49 (s, 2H), 6.10 (s, 1H), 7.19 (d, 1H), 7.48 – 7.55 (m, 2H), 7.65 – 7.67 (m, 1H), 7.73 – 7.79 (m, 1H), 7.79 – 7.85 (m, 1H)。中間體 16 ： 3-(((3-((乙醯硫代)甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)甲基)硫代)萘-1-基乙酸酯

將硫代乙酸鉀（4.15 kg，36.3 mol）添加到3-(((3-(氯甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)甲基)硫代)萘-1-基乙酸酯（中間體 15，8.62 kg，96.1 wt%，23.0 mol）和MeCN（86 L）的混合物中，同時保持溫度低於25ºC。將混合物在15ºC-20ºC攪拌3 h。然後添加EtOAc（86 L），隨後添加水（86 L）。徹底混合後，將下層除去。將上層用兩份水性NaCl（15 wt%，每份86 L）洗滌，然後進行在低於40ºC真空蒸餾至小於29 L、然後添加MTBE（86 L×3，且在最後的循環中為60 L）的四個循環。將混合物在30ºC-35ºC攪拌至少1 h，冷卻至低於0ºC，然後在低於10ºC攪拌至少1 h，然後緩慢添加庚烷（86 L）。過濾之前，將漿液冷卻至0ºC-5ºC並保持至少1 h。將濾餅用庚烷（17 L）洗滌，然後在35ºC-40ºC的真空烘箱中乾燥，以給出3-(((3-((乙醯硫代)甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)甲基)硫代)萘-1-基乙酸酯（中間體 16 ，8.44 kg，97 wt%，89%）；m/z (ES+), [M+H]⁺ = 401。¹ H NMR (500 MHz, DMSO-d ₆ , 27ºC) δ 2.28 (s, 3H), 2.45 (s, 3H), 3.75 (s, 3H), 3.91 (s, 2H), 4.42 (s, 2H), 6.04 (s, 1H), 7.36 (d, 1H), 7.53 (ddd, 1H), 7.58 (ddd, 1H), 7.82 (d, 1H), 7.85 (d, 1H), 7.90 (d, 1H)。中間體 17 ： (R _a )-(+)-甲基17-氯-5,13,14,22-四甲基-28-氧雜-2,9-二硫雜-5,6,12,13,22-戊氮雜庚環[27.7.1.1^4,7 .0^11,15 .0^16,21 .0^20,24 .0^30,35 ]三十八碳-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-十三烯-23-甲酸酯

在0ºC-30ºC下，經15 min，將甲磺酸酐（1.20 kg，6.89 mol）在MeCN（2.5 L）中的溶液添加到(R _a )-甲基6-氯-7-(3-(羥甲基)-1,5-二甲基-1H-吡唑-4-基)-3-(3-羥丙基)-1-甲基-1H-吲哚-2-甲酸酯（中間體 9 ，1.19 kg，97.6 wt%，2.86 mol)和N ,N -二異丙基乙胺（1.5 L，8.6 mol）在THF（8.7 L）中的溶液中，隨後用MeCN（0.3 L）進行管線洗滌。將所得溶液在20ºC攪拌5 h，之後冷卻至約-5ºC。同時，藉由在低於30ºC分部分添加（每部分0.25 kg）至MeCN（13 L）來製備LiI（1.53 kg，11.4 mol）溶液。在大約-5ºC下，經20 min將LiI溶液逐漸添加到甲磺醯化反應混合物中，隨後用MeCN（1.2 L）進行管線洗滌。將所得漿液升溫至5ºC並在該溫度下攪拌5 h，之後冷卻至約-15ºC並保持16 h。順序地添加甲苯（5.8 L）、水（11.6 L），然後添加鹽酸（37wt%，0.23 L，2.8 mol）在水（1.1 L）中的溶液，隨後用水（0.12 L）進行管線洗滌。在整個添加過程中，反應混合物的溫度保持在或低於-9ºC。除去下層，向上層添加水（11.6 L），攪拌得到的混合物並加熱至0ºC。將下層除去並且在約0ºC下用水（每次洗滌用11.6 L）洗滌上層兩次，在沈降之前充分混合並且每次除去下層。然後藉由在減壓（210 mbar-250 mbar，30ºC至52ºC）下蒸餾去除溶劑（8 L）來濃縮反應器中剩餘的經洗滌的溶液，之後用MeCN（2.9 L）稀釋並在500 mbar下回流30 min，以徹底將溶液除氣。然後將其冷卻並保持在0ºC持續69 h（經週末），之後在長時間保持期間任何空氣進入的情況下在氮氣下重複減壓回流。然後將6-氯-7-[3-(碘甲基)-1,5-二甲基-吡唑-4-基]-1-甲基-3-(3-甲基磺醯氧基丙基)吲哚-2-甲酸甲酯的該溶液冷卻至-14ºC。

同時，將3-(((3-((乙醯硫代)甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)甲基)硫代)萘-1-基乙酸酯（中間體 16 ，1.40 kg，97.8 wt%，3.42 mol)和MeOH（7.25 L）的混合物加熱至回流並在氮氣下保持回流持續30 min，之後冷卻至0ºC。然後經10 min逐漸添加甲醇甲醇鈉（25 wt%，1.6 L，7.0 mol），之後將所得溶液加溫至20ºC並保持在此溫度持續1.7 h。在約-15ºC下經20 min將一部分該溶液（約0.35 M；6.6 L，約2.3 mol）逐漸添加到上述6-氯-7-[3-(碘甲基)-1,5-二甲基-吡唑-4-基]-1-甲基-3-(3-甲基磺醯氧基丙基)吲哚-2-甲酸甲酯溶液中。將所得混合物保持在-10ºC下持續1.4 h。添加另一部分的3-(((1-甲基-3-(硫代甲基)-1H-吡唑-5-基)甲基)硫代)萘-1-醇二鈉溶液（約0.35 M；1.5 L，約0.53 mol），之後將反應混合物保持在-10ºC持續18 h。將混合物加溫至20ºC並從反應容器中取出，隨後用MeOH（0.6 L）沖洗。裝填DMSO並將其在攪拌下加熱至100ºC。然後將中間體溶液（約15 L）在100ºC下經2.8 h泵回到反應器中，隨後用DMSO（0.6 L）沖洗。將反應混合物保持在100ºC持續0.8 h，然後將其冷卻至略低於60ºC後，添加甲苯（29 L）和水（5.8 L）。將混合物的溫度調節至50ºC，然後添加水性NaOH（50 wt%，160 g，2.02 mol）和水（0.9 L）的混合物，隨後用水（0.12 L）沖洗。10 min後，除去下層。將上層在53ºC下用NaCl（1.74 kg）在水（18.6 L）中的溶液洗滌，然後藉由在160 mbar和夾套溫度85ºC下蒸餾去除溶劑（6 L）進行濃縮，以給出粗產物（19.2 kg，6.1wt%，1.7 mol）的甲苯溶液。將其與另一種從(R _a )-甲基6-氯-7-(3-(羥甲基)-1,5-二甲基-1H-吡唑-4-基)-3-(3-羥基丙基)-1-甲基-1H-吲哚-2-甲酸酯（中間體 9 ，1.19 kg，98.0 wt%，2.87mol）按照相同的程序製備的這樣的溶液合併。在Kromasil^® 二氧化矽（3.0 kg，10 μm粒徑，60 Å孔徑）的壓縮柱（20 cm直徑×22 cm長）上用甲苯和乙醇的混合物洗脫（大致體積比93%的甲苯 : 7%乙醇）來藉由層析法分部分純化合並的溶液（每部分0.84 L，51個部分）。將產物級分分兩部分在50ºC減壓蒸發，直到蒸餾停止，以給出泡沫狀產物（91 g和2.40 kg）。將批料溶於DMSO（148 g和3.22 kg）中，以給出(R _a )-(+)-甲基17-氯-5,13,14,22-四甲基-28-氧雜-2,9-二硫雜-5,6,12,13,22-戊氮雜庚環[27.7.1.1^4,7 .0^11,15 .0^16,21 .0^20,24 .0^30,35 ]三十八碳-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-十三烯-23-甲酸酯（中間體 17 ，239 g，32.2 wt%，0.112 mol和5.63 kg，37.9 wt%，3.11 mol）的DMSO溶液，合併產率為56%；m/z (ES+), [M+H]⁺ = 686。¹ H NMR (500 MHz, DMSO-d ₆ , 27 ºC) δ 1.97 (s, 3H), 2.16 – 2.27 (m, 1H), 2.32 – 2.42 (m, 1H), 2.89 (d, 1H), 3.08 (d, 1H), 3.07 – 3.14 (m, 1H), 3.16 (d, 1H), 3.36 – 3.42 (m, 1H), 3.43 (d, 1H), 3.48 (s, 3H), 3.69 (s, 3H), 3.76 (s, 3H), 3.77 – 3.83 (m, 1H), 3.84 (s, 3H), 4.13 (td, 1H), 4.22 (d, 1H), 4.29 (d, 1H), 4.77 (s, 1H), 6.65 (d, 1H), 7.18 (d, 1H), 7.39 – 7.40 (m, 1H), 7.44 – 7.48 (m, 1H), 7.47 – 7.51 (m, 1H), 7.71 – 7.74 (m, 1H), 7.90 (d, 1H), 8.08 – 8.12 (m, 1H)。化合物 1 ： (R _a )-(+)-17-氯-5,13,14,22-四甲基-28-氧雜-2,9-二硫雜-5,6,12,13,22-戊氮雜庚環[27.7.1.1^4,7 .0^11,15 .0^16,21 .0^20,24 .0^30,35 ]三十八碳-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-十三烯-23-甲酸

(R _a )-(+)-甲基17-氯-5,13,14,22-四甲基-28-氧雜-2,9-二硫雜-5,6,12,13,22-戊氮雜庚環[27.7.1.1^4,7 .0^11,15 .0^16,21 .0^20,24 .0^30,35 ]三十八碳-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-十三烯-23-甲酸酯（中間體 17 ，37.9 wt%於DMSO中，含有57.3 wt% DMSO；2.81 kg，1.55 mol），將DMSO（2.81 kg）和乙醇（1.68 kg）裝填入20 L反應器中，並將溶液在攪拌下加熱至50ºC。然後添加NaOH（50 wt%於水中；186 g，2.33 mol），隨後添加水（267 mL）管線洗滌液。1.5 h後，添加乙酸（267 mL，4.66 mol）。然後添加水性乙醇（34.5 wt%；3.0 L），隨後添加形式A (R _a )-(+)-17-氯-5,13,14,22-四甲基-28-氧雜-2,9-二硫雜-5,6,12,13,22-戊氮雜庚環[27.7.1.1^4,7 .0^11,15 .0^16,21 .0^20,24 .0^30,35 ]三十八碳-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-十三烯-23-甲酸一水合物（0.8 g，0.001 mol）結晶晶種。將混合物在50ºC攪拌4.5 h，然後逐漸添加另外兩份（4.2和1.3 L）水性乙醇（34.5 wt%）（分別經4.1 h和0.7 h）。經2 h將漿液冷卻至20ºC並在20ºC下保持17 h。抽吸過濾漿液，將濾餅用水性乙醇（34.5wt%；每次洗滌用2.7 L）洗滌兩次，之後在40ºC真空烘箱中乾燥，以給出形式A (R _a )-(+)-17-氯-5,13,14,22-四甲基-28-氧雜-2,9-二硫雜-5,6,12,13,22-戊氮雜庚環[27.7.1.1^4,7 .0^11,15 .0^16,21 .0^20,24 .0^30,35 ]三十八碳-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-十三烯-23-甲酸一水合物（化合物 1 ，1.01 kg，99.4 wt%，≥ 99.9% e.e.，94%）；m/z (ES+), [M+H]⁺ = 672。¹ H NMR (500 MHz, DMSO-d ₆ , 27 ºC) δ 1.96 (s, 3H), 2.16 – 2.28 (m, 1H), 2.30 – 2.42 (m, 1H), 2.88 (d, 1H), 3.06 (ddd, 1H), 3.12 (d, 1H), 3.18 (d, 1H), 3.42 (d, 1H), 3.41 – 3.48 (m, 1H), 3.51 (s, 3H), 3.72 (s, 3H), 3.75 (s, 3H), 3.84 (td, 1H), 4.09 (td, 1H), 4.25 (d, 1H), 4.28 (d, 1H), 4.75 (s, 1H), 6.67 (d, 1H), 7.13 (d, 1H), 7.37 – 7.40 (m, 1H), 7.43 – 7.47 (m, 1H), 7.45 – 7.50 (m, 1H), 7.68 – 7.74 (m, 1H), 7.84 (d, 1H), 8.07 – 8.13 (m, 1H), 13.36 (bs, 1H)。

手性純度分析HPLC方法細節：管柱=ChiralPak IE-3，3 µm 4.6 x 250 mm；溫度=40ºC；流動相=50 : 50乙醇 : 含有0.1% TFA的己烷（按體積計），流速0.8 mL/min；在305 nm處藉由UV檢測；注射體積=10 μL（這可以調整為達到合適的檢測限）；R _a 和S _a 鏡像異構物的保留時間分別為8.5和11.5 min。

形式A的XRPD如圖 1 所示，並且結果列表如下（表1）。[ 表 2. ] 針對形式A的XRPD峰

DSC分析表明形式A具有在約121ºC開始並且在約158ºC達到峰的脫溶劑的吸熱事件，隨後是在約181ºC開始並且在約194ºC達到峰的熔融/分解的吸熱事件。TGA表明形式A展現出從約25ºC加熱至約160ºC後約4.0%的質量損失。形式A的代表性DSC/TGA熱譜圖示於圖 2 中。

單晶體結構分析證明形式A係一水合物形式。晶體學數據：空間群單斜晶系P 2（1），晶胞尺寸：a =13.83(3) Å，b =7.578(14) Å，c =33.57(6) Å，β=90.23(2)º，V =3518(12) Å³ 。X 射線粉末繞射（ XRPD ）分析

XRPD分析使用Bruker D4繞射儀進行，該繞射儀可商購自布魯克AXS公司（Bruker AXS Inc™）（麥迪森，威斯康辛州）。該XRPD光譜藉由將用於分析的材料樣品（約20 mg）安裝在單矽晶體晶片支架上（例如，布魯克矽零背景X射線繞射樣品架）並且借助於顯微鏡載片將該樣品鋪展成薄層獲得。將該樣品以30轉/分鐘旋轉（以改善計數統計）並且用由在40 kV 和40 mA下操作的銅制長細聚焦管產生的具有1.5406埃（即，約1.54埃）的波長的X射線來照射。以θ-θ 模式中在從2º至40º的 2-θ的範圍內，使樣品每0.02º 的2-θ 增量（連續掃描模式）暴露1秒。執行時間為31分鐘41秒。

XRPD 2θ值可在合理的範圍內變化，例如在± 0.2º的範圍內變化，並且當由於各種各樣的原因（包括例如較佳的方向）對基本上相同的晶體形式進行測量時XRPD強度可能變化。XRPD的原理描述於出版物中，例如像Giacovazzo, C等人（1995），Fundamentals of Crystallography[晶體學基礎]，牛津大學出版社（Oxford University Press）；Jenkins，R和Snyder，R. L.（1996），Introduction to X-Ray Powder Diffractometry[X射線粉末繞射儀簡介]，約翰·威利父子公司出版社（John Wiley & Sons），紐約）；以及Klug，H. P.&Alexander，L. E.（1974），X-ray Diffraction Procedures[X射線繞射程序]，約翰·威利父子公司出版社（John Wiley & Sons），紐約。DSC 分析

對於根據標準方法製備的樣品，使用可獲得自TA INSTRUMENTS®（紐卡斯爾，德拉瓦州）的Q SERIES™ Q1000 DSC熱量計進行DSC分析。將樣品（大約2 mg）稱量到鋁樣品盤中並且轉移到該DSC。將該儀器用氮氣以50 mL/min吹掃並且使用約10ºC/分鐘的動態加熱速率收集在約22ºC與300ºC之間的數據。將熱數據使用標準軟體，例如，來自TA INSTRUMENTS®的通用v.4.5A進行分析。熱重量分析（ TGA ）

對於根據標準方法製備的樣品，使用可從TA儀器INSTRUMENTS®（紐卡斯爾，德拉瓦州）獲得的Q SERIES™ Q5000 熱重量分析儀進行TGA。將樣品（大約5 mg）放入鋁樣品盤中並且轉移到TGA爐內。將該儀器用氮氣以50 mL/min吹掃，並且使用10ºC/分鐘的動態加熱速率收集在25ºC與300ºC之間的數據。將熱數據使用標準軟體，例如，來自TA INSTRUMENTS®的通用v.4.5A進行分析。實例 1 ：化合物 1 的體外活性

半胱天冬酶活性測定：這係用於在用Mcl-1抑制劑處理6 h之後測量在MOLP-8（多發性骨髓瘤）、KMS-12-BM（多發性骨髓瘤）、MV4;11（急性骨髓性白血病）、和NCI-H23（非小細胞肺癌）細胞中誘導細胞凋亡的細胞測定。在第一天，將3000個（MOLP-8，KMS-12-BM，MV4;11）或1250（NCI-H23）個細胞/孔接種在384-孔白色微板中的50 µL的生長培養基（IMDM + 10% FBS + 2 mM L-Glu用於MV4;11，並且RPMI-1640 + 10% FBS + 2 mM L-Glu用於所有其他類）中，並且孵育過夜（37ºC，5% C0₂ ，80% RH）。在第二天，將該等細胞使用ECHO聲學液體處理器（10點半-對數連續稀釋，31.5 μm最高濃度，0.3%最終DMSO濃度）用化合物I進行處理。孵育（37ºC，5% C0₂ ，80% RH）6 h之後，將25 µL的半胱天冬酶-Glo 3/7試劑（普洛麥格公司（Promega））添加至每個孔中，並且將該等板在室溫下避光孵育30 min。使用Infinite M200酶標儀（帝肯公司（Tecan））以100 ms積分時間記錄發光。使用GeneData分析軟體計算EC₅₀ 值並示於下表2中。[ 表 2. ] 來自體外半胱天冬酶活性測定的結果

[ 圖 1 ] 展示了形式A (R _a )-17-氯-5,13,14,22-四甲基-28-氧雜-2,9-二硫雜-5,6,12,13,22-戊氮雜庚環[27.7.1.1^4,7 .0^11,15 .0^16,21 .0^20,24 .0^30,35 ]三十八碳-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-十三烯-23-甲酸一水合物的粉末X射線繞射圖。

[ 圖 2 ] 展示了形式A (R _a )-17-氯-5,13,14,22-四甲基-28-氧雜-2,9-二硫雜-5,6,12,13,22-戊氮雜庚環[27.7.1.1^4,7 .0^11,15 .0^16,21 .0^20,24 .0^30,35 ]三十八碳-1(37),4(38),6,11,14,16,18,20,23,29,31,33,35-十三烯-23-甲酸一水合物的示差掃描熱析法（DSC）和熱重分析（TGA）跡線。

Claims

一種選自以下的化合物或其鹽：
以及