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TWI746177B - 一種b肝表面抗原抑制劑的晶型及其應用 - Google Patents

一種b肝表面抗原抑制劑的晶型及其應用 Download PDF

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TWI746177B
TWI746177B TW109132274A TW109132274A TWI746177B TW I746177 B TWI746177 B TW I746177B TW 109132274 A TW109132274 A TW 109132274A TW 109132274 A TW109132274 A TW 109132274A TW I746177 B TWI746177 B TW I746177B
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蔡哲
孫飛
照中 丁
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大陸商福建廣生堂藥業股份有限公司
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Abstract

本發明公開了一種B肝表面抗原抑制劑的晶型及其製備方法，還包括所述晶型在製備B肝表面抗原抑制劑中的應用。

Description

一種B肝表面抗原抑制劑的晶型及其應用
本發明涉及一種B肝表面抗原抑制劑的晶型及其製備方法，還包括所述晶型在製備B肝表面抗原抑制劑中的應用。
本申請要求申請日為2019/9/19的中國專利申請201910887908.1的優先權。本申請引用上述中國專利申請的全文。
B型病毒性肝炎，簡稱B肝，是一種由B型肝炎病毒（Hepatitis B Virus，簡稱HBV）感染機體後所引起的疾病。B型肝炎病毒是一種嗜肝病毒，主要存在於肝細胞內並損害肝細胞，引起肝細胞炎症、壞死、纖維化。B型病毒性肝炎分急性和慢性兩種。急性B型肝炎在成年人中大多數可通過其自身的免疫機制而自愈。但是慢性B型肝炎（CHB）已成為全球健康保健所面臨的極大挑戰，同時也是引起慢性肝病，肝硬化（cirrhosis）和肝癌（HCC）的主要原因。據估計，全球有20億人感染了慢性B型肝炎病毒，超過3億5千萬人口已發展成為了B型肝炎，每年近60萬人死於慢性B型肝炎的併發症。中國是B肝高發區，B型肝炎累積病人多，危害嚴重。據資料顯示，中國現有B型肝炎病毒感染者約9300萬，而其中約2000萬患者確診為慢性B型肝炎，當中10%-20%可演變成肝硬化，1%-5%可發展成肝癌。
B肝功能性治癒的關鍵是清除HBsAg（B型肝炎病毒表面抗原），產生表面抗體。HBsAg量化是一個非常重要的生物指標。在慢性感染病人中，很少能觀察到HBsAg的減少和血清轉化，這是目前治療的終點。
B型肝炎病毒(HBV)的表面抗原蛋白在HBV侵入肝細胞的過程中起非常重要的作用，對於防治HBV的感染有重要意義。表面抗原蛋白包括大（L）、中（M）和小（S）的表面抗原蛋白，共享共同的C端S區。它們從一個開放讀碼框中表達，其不同的長度是由讀碼框三個AUG起始密碼子決定的。這三個表面抗原蛋白包括前S1 /前S2 / S，前S2 / S和S域。HBV表面抗原蛋白被整合到內質網（ER）膜，由N端信號序列啟動。它們不僅構成了病毒體的基本結構，而且還形成球狀和絲狀亞病毒顆粒（SVPs，HBsAg），聚集在ER，宿主ER和前高爾基體器，SVP包含大多S表面抗原蛋白。 L蛋白，在病毒的形態發生與核衣殼相互作用方面是至關重要的，但對於SVP的形成是沒有必要的。由於它們缺乏核衣殼，所述的SVPs 是非感染性的。SVPs大大參與了疾病進展，尤其是對B肝病毒的免疫應答，在感染者的血液裡，SVPs的量至少是病毒數量的10，000倍，誘捕了免疫系統，削弱人體對B肝病毒的免疫反應。HBsAg也可抑制人的天然免疫，能夠抑制多糖（LPS）和IL-2誘導的細胞因子產生，抑制樹狀細胞DC功能以及LPS對 ERK-1/2和c-Jun N端的干擾激酶-1/2在單核細胞的誘導活性。值得注意的是，肝硬化和肝細胞癌的疾病進展很大程度也與持續分泌的HBsAg相關。這些研究結果表明HBsAg在慢性肝炎的發展中起重要作用。
目前被批准上市的抗HBV藥物主要是免疫調節劑（干擾素-α和聚乙二醇干擾素-α-2α）和抗病毒治療藥物(拉米夫定、阿德福韋酯、恩替卡韋、替比夫定、替諾福韋、克拉夫定等)。其中，抗病毒治療藥物屬於核苷酸類藥物，其作用機制是抑制HBV DNA 的合成，並不能直接減少HBsAg水平。與延長治療一樣，核苷酸類藥物顯示HBsAg清除速度類似於自然觀察結果。
臨床已有療法降低HBsAg療效不佳，因此，開發能夠有效降低HBsAg的小分子口服抑制劑是目前臨床用藥所亟需的。
羅氏公司開發了一個名為RG7834的表面抗原抑制劑用於治療B肝，並報導了該化合物在土撥鼠抗B肝模型中的藥效：在以RG7834作為單藥使用時可以降低2.57個Log的表面抗原，降低1.7個Log的HBV-DNA。目前仍然需要有新的能夠有效降低B肝表面抗原的化合物，尤其是用作預防或治療慢性B型肝炎的藥物。
本發明提供了式（I）化合物的A晶型的X射線粉末衍射圖譜在下列2θ角處具有特徵衍射峰：6.30±0.20°、9.30±0.20°和20.16±0.20°；
Figure 02_image001
。
本發明的一些方案中，上述A晶型的X射線粉末衍射圖譜在下列2θ角處具有特徵衍射峰：6.30±0.20°、9.30±0.20°、9.84±0.20°、18.68±0.20°、20.16±0.20°、23.06±0.20°、24.00±0.20°和25.38±0.20°。
本發明的一些方案中，上述A晶型的X射線粉末衍射圖譜在下列2θ角處具有特徵衍射峰：6.30±0.20°、9.30±0.20°、9.84±0.20°、12.84±0.20°、18.68±0.20°、20.16±0.20°、21.26±0.20°、23.06±0.20°、24.00±0.20°、25.38±0.20°。
本發明的一些方案中，上述A晶型的X射線粉末衍射圖譜在下列2θ角處具有特徵衍射峰：6.302°、7.883°、9.301°、9.842°、12.838°、15.436°、16.580°、18.124°、18.680°、19.459°、20.161°、20.800°、21.262°、21.704°、23.057°、24.000°、24.837°、25.382°、26.244°、26.558°、27.740°、28.119°、28.827°、29.502°、29.880°、30.261°、30.762°、31.678°、32.595°、33.061°、34.347°、35.253°、35.738°、36.642°、38.619°和39.558°。
本發明的一些方案中，上述A晶型的XRPD圖譜如圖1所示。
本發明的一些方案中，上述A晶型的XRPD圖譜解析數據如表1所示： 表1：式（I）化合物A晶型的XRPD圖譜解析數據
編號 2θ角 （°） 面間距 （Å） 強度 相對強度 （%） 編號 2θ角 （°） 面間距 （Å） 強度 相對強度 （%）
1 6.302 14.0146 613 51.0 19 26.244 3.3930 96 8.0
2 7.883 11.2067 222 18.5 20 26.558 3.3536 207 17.2
3 9.301 9.5007 1202 100.0 21 27.740 3.2133 315 26.2
4 9.842 8.9801 541 45.0 22 28.119 3.1708 301 25.1
5 12.838 6.8901 434 36.1 23 28.827 3.0946 57 4.8
6 15.436 5.7357 272 22.6 24 29.502 3.0253 66 5.5
7 16.580 5.3424 253 21.0 25 29.880 2.9878 225 18.7
8 18.124 4.8907 64 5.3 26 30.261 2.9511 103 8.6
9 18.680 4.7463 650 54.1 27 30.762 2.9041 71 5.9
10 19.459 4.5580 167 13.9 28 31.678 2,8222 119 9.9
11 20.161 4.4009 978 81.3 29 32.595 2.7449 54 4.5
12 20.800 4.2671 327 27.2 30 33.061 2.7073 83 6.9
13 21.262 4.1755 397 33.0 31 34.347 2.6088 49 4.1
14 21.704 4.0914 115 9.5 32 35.235 2.5451 30 2.5
15 23.057 3.8542 854 71.0 33 35.738 2.5104 75 6.2
16 24.000 3.7049 686 57.0 34 36.642 2.4505 180 15.0
17 24.837 3.5819 158 13.2 35 38.619 2.3295 55 4.6
18 25.382 3.5062 656 54.6 36 39.558 2.2763 109 9.1
本發明的一些方案中，上述A晶型，其差示掃描量熱曲線在224.58±3℃處具有吸熱峰的峰值。
本發明的一些方案中，上述A晶型，其DSC圖譜如圖2所示。
本發明的一些方案中，上述A晶型，其熱重分析曲線在200.00±3℃時失重達0.127%；在250±3℃時又失重達0.224%。
本發明的一些方案中，上述A晶型，其TGA圖譜如圖3所示。
本發明提供了式（I）化合物A晶型的製備方法，包括將任意一種形式的式（I）化合物加入到醇類溶劑、丙酮、乙酸乙酯、乙腈或醇類溶劑、丙酮、乙腈與水中，在一定溫度下攪拌一段時間，然後過濾，將濾餅乾燥得到晶型A。
本發明的一些方案中，上述的醇類溶劑、丙酮、乙腈與水的體積比例選自1:5~3。
本發明的一些方案中，上述的醇類溶劑、丙酮、乙腈與水的體積比例選自1:1~3。
本發明的一些方案中，上述醇類溶劑選自甲醇、乙醇或異丙醇。
本發明的一些方案中，上述攪拌溫度選自25℃~65℃。
本發明的一些方案中，上述攪拌時間選自1小時~72小時。
本發明的一些方案中，上述式（I）化合物與溶劑的重量比選自1:1~30。
本發明的一些方案中，上述式（I）化合物與溶劑的重量比選自1:5~30。
本發明還提供了上述式（I）化合物，或上述式（I）化合物的A晶型在製備治療慢性B型肝炎相關藥物上的應用。
技術效果
本發明化合物有顯著的抗B肝病毒活性。本發明化合物對細胞色素P450同工酶沒有抑制，顯示藥物-藥物相互作用的風險較低；在大鼠、人和小鼠這三個種屬中的肝微粒體穩定性優秀，顯示化合物不易被代謝；具有較好的暴露量和生物利用度；在單次給藥的神經毒性研究中耐受性較好。
本發明化合物的A晶型易於獲得、物理穩定性和化學穩定性均較好，具有很高的工業應用價值和經濟價值。
定義和說明
除非另有說明，本文所用的下列術語和短語旨在含有下列含義。一個特定的短語或術語在沒有特別定義的情況下不應該被認為是不確定的或不清楚的，而應該按照普通的含義去理解。當本文出現商品名時，旨在指代其對應的商品或其活性成分。
本發明的中間體化合物可以通過本領域具有通常知識者所熟知的多種合成方法來製備，包括下面列舉的具體實施方式、其與其他化學合成方法的結合所形成的實施方式以及本領域技術上人員所熟知的等同替換方式，優選的實施方式包括但不限於本發明的實施例。
本發明具體實施方式的化學反應是在合適的溶劑中完成的，所述的溶劑須適合於本發明的化學變化及其所需的試劑和物料。為了獲得本發明的化合物，有時需要本領域具有通常知識者在已有實施方式的基礎上對合成步驟或者反應流程進行修改或選擇。
下面會通過實施例具體描述本發明，這些實施例並不意味著對本發明的任何限制。
本發明所使用的所有溶劑是市售的，無需進一步純化即可使用。
化合物經手工或者ChemDraw®軟件命名，市售化合物採用供應商目錄名稱。
本發明粉末X-射線衍射（X-ray powder diffractometer, XRPD）方法 儀器型號：丹東浩元DX-2700BH X-射線衍射儀 測試方法：大約10 ~ 20 mg樣品用於XRPD檢測。 詳細的XRPD 參數如下： 光管：Cu, kα, (λ=1.54184Ǻ). 光管電壓：40 kV，光管電流：30 mA 發散狹縫：1 mm 探測器狹縫：0.3 mm 防散射狹縫：1 mm 掃描範圍：3-40 deg 步徑：0.02 deg 步長：0.5 秒
本發明差熱分析（Differential Scanning Calorimeter, DSC）方法 儀器型號：METTLER TOLEDO DSC1 差示掃描量熱儀 測試方法：取樣品（2~ 6 mg）置於30 UL 的DSC鍍金高壓坩鍋內進行測試，以10 ℃/min的升溫速率，加熱樣品從40℃到350℃。
本發明熱重分析（Thermal Gravimetric Analyzer, TGA）方法 儀器型號：TA TGA550熱重分析儀 測試方法：取樣品（2 ~ 10 mg）置於鋁坩堝內，然後放置於鉑金吊籃內進行測試，在氮氣（N2 ）條件下，以40 mL/min 的氣體流速，以10℃ /min的升溫速率，加熱樣品從40℃ 到500℃。
為讓本發明之上述和其他目的、特徵和優點能更明顯易懂，下文特舉實施例，並配合所附圖式，作詳細說明如下。
為了更好的理解本發明的內容，下面結合具體實施例來做進一步的說明，但具體的實施方式並不是對本發明的內容所做的限制。
實施例1：式（I）化合物的製備
Figure 02_image004
Figure 02_image006
步驟A：將1-1（10.00克，59.5毫莫耳）在0℃下溶解於二氯甲烷（500 毫升）中，然後加入磺醯氯（10.77克，79.77毫莫耳，7.98毫升），混合溶液在35℃下攪拌38小時。然後將溶液倒入300毫升飽和碳酸氫鈉水溶液中並攪拌並分液。水相經乙酸乙酯萃取（150毫升*3次），然後將合併的有機相經飽和食鹽水洗滌（40毫升*3次），並通過無水硫酸鈉乾燥，並經過減壓蒸餾得到白色殘留物。然後將白色殘留物經矽膠柱層析純化（洗脫劑：石油醚/乙酸乙酯=30/1至20/1）得到化合物1-2。1 H NMR (400MHz, MeOH-d 4 )δ 10.75 (s, 1H), 7.74 (s, 1H), 6.54 (s, 1H), 5.98 (s, 1H), 3.85 (s, 3H)。
步驟B：將1-2（8.00克，39.49毫莫耳），1-溴-3-甲氧基-丙烷（7.25克，47.39毫莫耳）溶於N，N-二甲基甲醯胺（100.00毫升），冷卻至0℃後向其中加入碳酸鉀（10.92克，78.98毫莫耳），再將混合溶液升溫至25℃並攪拌10小時。然後將乙酸乙酯（300 毫升）和水（50毫升）加入溶液中，並在25℃下攪拌10分鐘。將有機相分離出來並飽和食鹽水洗滌（40毫升*3），然後通過無水硫酸鈉乾燥，並減壓濃縮得到黃色液體。再將黃色液體經矽膠柱層析純化（洗脫劑：石油醚/乙酸乙酯=30/1至20/1）得到化合物1-3。1 H NMR (400MHz, CDCl3 ) δ 10.90 (s, 1H), 7.82 (s, 1H), 6.52 (s, 1H), 4.16 (t,J =6.0 Hz, 2H), 3.94 (s, 3H), 3.60 (t,J =6.0 Hz, 2H), 3.38 (s, 3H), 2.13 (t,J =6.0 Hz, 2H)。
步驟C：向1-3（3.64克，13.25毫莫耳），氯化苄（2.18克，17.23毫莫耳，1.98毫升）的N，N-二甲基甲醯胺（10.00毫升）溶液中加入碳酸鉀（4.76克，34.45毫莫耳），混合溶液在25℃下攪拌20小時。乙酸乙酯（150 毫升）和水（30毫升）加入溶液中，溶液在20℃下攪拌10分鐘。然後分離有機相並經過水（30毫升*2）和飽和食鹽水（30毫升*2）洗滌，然後通過無水硫酸鈉乾燥，並經減壓濃縮得到化合物1-4。
步驟D：將1-4（2.00克，5.48毫莫耳）和一水合氫氧化鋰（1.38克，32.89毫莫耳）加入到四氫呋喃（20毫升）和水（10毫升）的混合溶液中，之後在10~20℃下攪拌10小時。然後將溶液經乙酸乙酯/石油醚1/1（5毫升*3）洗滌。將水相調酸性至酸鹼度值1~2。再將溶液經二氯甲烷（50毫升*3）萃取，將有機相合併後經無水硫酸鈉乾燥，並減壓濃縮得到化合物2-苄氧基-5-氯-4-（3-甲氧基丙烷）苯甲酸。向2-苄氧基-5-氯-4-（3-甲氧基丙烷）苯甲酸甲酸（1.00克，2.85毫莫耳）的二氯甲烷（10.00毫升）溶液中加入氯化亞碸（508.60毫克，4.28毫莫耳，310.12微升），混合液在25℃下攪拌1小時。然後將溶液減壓濃縮得到殘留物。再將殘留物溶於甲苯，並繼續減壓濃縮得到殘留物，將殘留物1-5在氮氣環境下保存。1 H NMR (400MHz, DMSO-d 6 ) δ 12.87 - 12.22 (m, 1H), 7.74 (s, 1H), 7.53 (br d,J =7.2 Hz, 2H), 7.40 (t,J =7.6 Hz, 2H), 7.36 - 7.30 (m, 1H), 6.94 (s, 1H), 5.27 (s, 2H), 4.20 (s, 2H), 3.50 (s, 2H), 3.26 (s, 3H), 1.98 (t,J =6.4 Hz, 2H)。
步驟E：零下70℃下向六甲基二矽基胺基鋰（1莫耳/升，23.88毫升）的四氫呋喃（20毫升）溶液中逐滴加入（5分鐘）1-5（2.94克，7.96毫莫耳）和化合物a (1.62 g, 8.76 毫莫耳, 1.10eq )的四氫呋喃（20毫升）溶液，然後移走冷卻槽並讓混合物持續攪拌5分鐘。再將醋酸銨（3.23克，41.95毫莫耳）和醋酸（67.85克，1.13毫莫耳）加入到混合物中，並將絕大部分四氫呋喃通過旋轉蒸發儀在60℃下除去，並將殘留物在60~65℃下加熱1.5小時。將反應混合物冷卻，然後向其中加入水（40毫升）和二氯甲烷（200毫升）。混合物攪拌10分鐘後分離，有機相經水洗（10毫升*3）和碳酸氫鈉水溶液洗，乾燥，然後濃縮得到黃色殘餘物。殘餘物再經矽膠柱層析純化（洗脫劑：石油醚/乙酸乙酯=10/1）得到化合物1-6。
步驟F：向1-6(3.00 g, 6.36 毫莫耳)的四氫呋喃（20毫升）溶液中加入活化濕鈀碳（500 毫克），溶液在25℃下於氫氣（15 psi）氣氛中攪拌2小時。然後將棕色懸濁液過濾，收集濾液，並將其減壓濃縮得到殘留物。再將殘留物經石油醚/乙酸乙酯（4/1）打漿(兩次)並過濾得到化合物1-7。
步驟G：在零下10℃下，向1-8（20.00克，178.33毫莫耳）的二氯甲烷溶液（150.00毫升）中加入吡啶（2.82克，35.67毫莫耳），然後再加入五氯化磷（37.14克，178.33毫莫耳），得到的混合物在零下10℃下反應0.5小時。反應完成後，向反應體系中加入碳酸氫鈉（44.94克，534.99毫莫耳）。反應繼續攪拌0.5小時，然後通過矽藻土過濾，並用二氯甲烷（20毫升*3）洗滌，將濾液濃縮得到殘餘物1-9。1 H NMR （400 MHz, CDCl3 ）δ 7.68 (d, J=3.91 Hz, 1H), 7.35-7.44 (m, 5H), 7.22 (d, J=3.67 Hz, 1H), 6.91 (s, 1H), 5.34 (s, 2H)。
步驟H:將1-7(10.00克, 26.19 毫莫耳) ，碳酸銫（38.40克，117.86毫莫耳）和1-9（21.88克，130.95毫莫耳）的二甲亞碸（100.00毫升）溶液在100℃下攪拌16小時。反應完成後，用50毫升水淬滅反應，再用150毫升水稀釋反應液，用二氯甲烷（100毫升*3）進行萃取，再將有機相合併，用飽和食鹽水（100毫升*3）洗滌，無水硫酸鈉乾燥後，減壓濃縮得到殘餘物。殘餘物經矽膠柱層析純化（洗脫劑：二氯甲烷/乙醇=100/1至8/1）得到化合物1-10。
步驟I：將1-10經手性色譜柱製備分離（分離柱: AS(250mm*30mm,10um);流動相: [0.1% 氨水-乙醇];洗脫梯度: 40%-40%, 4.3min;120min) 純化得到兩個構型的異構體，保留時間= 2.516min 和時間=5.098 min。再將保留時間= 2.516min的異構體（55毫克，116.64微莫耳）置入甲醇（10毫升）溶液中，加入4莫耳每升的氫氧化鈉（145.80微升）。反應液在25至30℃下攪拌2小時。將反應液減壓濃縮，殘餘物溶於水（20毫升）中，用2莫耳每升的鹽酸調節pH至1~2，固體析出後過濾烘乾得到式（I）化合物（保留時間= 3.842min），ee值(對映體過量)：100%。測ee值(對映體過量)方法：OD-3S_3_40_3ML 分離柱: Chiralcel OD-3 100×4.6mm I.D., 3μm 流動相: 40% 甲醇 (0.05% 二乙胺) in CO2 流速: 3mL/min 波長: 220nm。 式（I）化合物：1 H NMR (400 MHz, CDCl3 ) δ 15.40 (s, 1H), 8.32 (s, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.41 (dd, J=1.28, 4.83 Hz, 1H), 6.93-6.98 (m, 2H), 6.91 (s, 1H), 6.88 (s, 1H), 6.62 (s, 1H), 4.09 (t, J=6.24 Hz, 2H), 3.51 (t, J=5.87 Hz, 2H), 3.28 (s, 3H), 2.05 (quin, J=6.08 Hz, 2H)。
實施例2：式（I）化合物A晶型的製備
控制溫度在40℃，將式（I）化合物(1 g) 加入到反應瓶中，然後加入丙酮 (10 mL)，將混合物在40℃攪拌24 小時，冷卻至室溫過濾，濾餅用丙酮 (10 mL) 洗滌，得到粗品，粗品經真空乾燥箱乾燥（45℃， 16 小時）得到式（I）化合物A晶型。
實施例3：式（I）化合物A晶型在高溫，高濕條件下的固體穩定性試驗
平行秤取2份式（I）化合物A晶型樣品，每份大約100 mg，置於玻璃樣品瓶的底部，攤成薄薄一層。樣品用鋁箔紙封瓶口，並在鋁箔紙上扎些小孔，保證樣品能與環境空氣充分接觸，置於40ºC/75%濕度條件恆溫恆濕箱。在上述條件下放置的樣品於第5天，10天取樣檢測，檢測結果與0天的初始檢測結果進行比較，試驗結果見下表2所示： 表2：A晶型在高溫，高濕條件下的固體穩定性試驗
時間點（天） 外觀 晶型 純度（%） 總雜質（%）
0 白色粉末 A晶型 99.79 0.21
5 白色粉末 A晶型 99.79 0.21
10 白色粉末 A晶型 99.79 0.21
實驗結論：本發明式（I）化合物A晶型穩定性好，易於成藥。
實施例4：式（I）化合物A晶型在不同溫度和濕度及光照條件下固體物理穩定性試驗
平行秤取4份式（I）化合物A晶型，每份大約100 mg，放置於玻璃樣品瓶的底部，攤成薄薄一層，鋁箔紙封瓶口，並在鋁箔紙上扎些小孔，保證樣品能與環境空氣充分接觸。把製備的4份樣品分別放置於25ºC/92.5%的相對濕度，60ºC，40ºC/75%及光照條件下，考察樣品第10天的物理穩定性。同時，單獨秤取一份大約100 mg 式（I）化合物A晶型固體，放置於玻璃樣品瓶的底部，用螺紋瓶蓋密封後，保存於-20ºC條件下，作為對照品使用。在第10天，取出所有樣品，恢復至室溫，觀察樣品外觀變化，並用XRPD檢測樣品晶型。通過對加速樣品與對照樣品的比較，判斷式（I）化合物A晶型的固體物理穩定性。下表3為A晶型固體物理穩定性實驗結果。 表3：A晶型在不同溫度和濕度條件下及光照下固體物理穩定性試驗
考察 項目 時間點 0天 （-20ºC密閉保存） （對照品） 25ºC/92.5% 相對濕度 （敞口） 60ºC （敞口） 40ºC/75% 相對濕度 （敞口） 光照
晶型 10天 A晶型 A晶型 A晶型 A晶型 A晶型
性狀 10天 白色粉末 白色粉末 白色粉末 白色粉末 白色粉末
純度（%） 10天 99.79 99.80 99.75 99.79 99.71
實驗結論：本發明式（I）化合物A晶型穩定性好，易於成藥。
實施例5：單晶X射線衍射檢測分析
式（I）化合物不易培養單晶，為了確證其絕對構型，將式（I）化合物用三甲基矽重氮甲烷甲酯化，得到式（II）化合物，再對式（II）化合物培養單晶。 製備方法如下：
Figure 02_image008
將式（I）化合物(5 克, 11.16 毫莫耳) 加到甲醇 (15 毫升)和四氫呋喃(45 毫升)的混合液中，室溫下一次性加入三甲基矽重氮甲烷(2 莫耳/升, 8.37 毫升)，然後室溫攪拌12小時。將反應液濃縮，再加入20毫升第三丁基甲醚，攪拌後過濾乾燥得到式（II）化合物。將式（II）化合物溶於甲醇，使用溶劑揮發法，室溫經過10天培養獲得式（II）化合物的單晶，衍射用晶體尺寸為0.06×0.08×0.16mm。晶體屬於三斜晶系，空間群為P1，晶胞參數為：a=13.0669(13)，b=13.4585(12)，c=14.4699(14)Å，α=90.348(4)，β=109.374(4)，γ=96.367(4)　，晶胞體積V=2383.3(4)Å3，晶胞內不對稱單位數Z=1。
用Bruker D8 venture衍射儀收集衍射強度數據，光源為CuKα輻射，掃描方式：φ/ɷ掃描，收集總衍射點數為40999個，獨立衍射點數為15341個，可觀察點數 (I/sigma≥2）為5471個。
採用直接法(Shelxs97)解析晶體結構，獲得124個非氫原子位置，使用最小二乘法修正結構參數和判別原子種類，使用幾何計算法和差值Fourier法獲得全部氫原子位置，精修後R1 =0.1357，wR2 =0.4252(w=1/α|F|2 )，S=1.817。最終確定化學計量式為4(C22 H20 ClNO6 S)，計算單個分子量為461.90，計算晶體密度為1.287g/cm3 。
該反應是在中性環境下進行的，條件溫和，手性碳不會發生翻轉。因此，式（I）化合物的絕對構型與式（II）化合物的一致。通過式（II）化合物的單晶數據，可以確定式（I）化合物的絕對構型。式（II）化合物單分子立體結構橢球圖見附圖4。式（II）化合物晶體的原子坐標（×104 ）和等價各向同性移位參數（Å2 ×103 ）見表4。式（II）化合物的鍵長（Å）和鍵角[deg]見表5。式（II）化合物扭轉角度 [deg]見表6。 表4：式（II）化合物晶體的原子坐標（×104 ）和等價各向同性移位參數（Å2 ×103 ）
  x y z U(eq)
Cl(1) -5132(6) 7567(4) 1373(5) 110(2)
Cl(2) 6227(6) 2481(4) 4348(5) 117(2)
Cl(3) 4871(6) 7558(4) 6373(5) 111(2)
Cl(4) -3762(6) 2481(4) -653(5) 115(2)
S(1) -5696(6) 1040(5) 343(5) 114(2)
S(2) 6789(6) 8996(5) 3561(5) 111(2)
S(3) 4294(6) 1034(5) 5343(5) 116(2)
S(4) -3211(6) 8991(5) -1439(5) 114(2)
O(1) -7185(15) 6424(12) 378(14) 113(5)
O(1') -1935(18) 7130(20) 1900(30) 229(16)
O(2) -5885(10) 3214(9) 844(10) 76(4)
O(2') -252(15) 5983(19) 1814(17) 164(8)
O(3) -862(15) 4102(16) 2377(15) 132(7)
O(3') 1441(14) 3930(20) 3151(18) 174(10)
O(4) -1920(30) 930(20) 2470(30) 165(11)
O(4') 3000(18) 2905(19) 2890(20) 216(14)
O(5') 8061(17) 7140(20) 6910(20) 215(14)
O(5) -489(19) 2110(20) 2500(20) 190(14)
O(6') 9741(14) 5981(18) 6858(16) 151(7)
O(6) -9850(40) 8180(30) -430(30) 360(30)
O(7) 8342(18) 3625(11) 4729(14) 127(6)
O(7') 11433(15) 3930(20) 8155(19) 206(11)
O(8) 7007(10) 6823(10) 4199(10) 78(4)
O(8') 13003(18) 2873(18) 7880(20) 208(13)
O(9) 1927(13) 5900(20) 2588(15) 150(9)
O(10) 1552(16) 7951(19) 2559(17) 156(9)
O(11) 2899(17) 8900(20) 3351(16) 145(8)
O(13) 2767(14) 6425(10) 5344(12) 99(5)
O(14) 4126(11) 3191(10) 5870(10) 86(4)
O(15) 9167(16) 4090(17) 7397(15) 137(7)
O(16) 9490(20) 2100(20) 7510(20) 193(12)
O(17) 8090(20) 950(20) 7440(30) 164(12)
O(18) 310(50) 8280(30) 4650(30) 300(30)
O(19) -1768(16) 3632(11) -309(14) 118(5)
O(20) -2994(11) 6845(9) -786(10) 81(4)
O(21) -8059(13) 5913(18) -2396(13) 134(7)
O(22) -8448(16) 7930(19) -2424(18) 156(9)
O(23) -7100(20) 8920(30) -1636(16) 149(12)
N(1) -4050(14) 3042(13) 1759(12) 81(5)
N(2) 5141(13) 7003(14) 3969(12) 78(5)
N(3) 5940(13) 3050(12) 6764(12) 75(5)
N(4) -4837(13) 6998(13) -1016(11) 73(4)
C(1) -4460(20) 5715(16) 1584(17) 84(6)
C(2) -5358(19) 6302(15) 1215(17) 82(7)
C(3) -6381(19) 5788(15) 743(16) 87(7)
C(4) -6594(18) 4796(16) 602(16) 82(6)
C(5) -5736(17) 4262(14) 972(16) 73(6)
C(6) -5241(19) 2717(15) 1629(16) 83(6)
C(7) -3738(17) 4058(16) 1742(15) 75(6)
C(8) -4671(17) 4684(14) 1435(15) 76(5)
C(9) -2664(19) 4400(20) 1937(18) 101(8)
C(10) -1850(20) 3760(30) 2180(20) 113(9)
C(11) -2220(20) 2680(20) 2174(18) 103(8)
C(12) -3263(19) 2408(17) 2004(15) 84(6)
C(13) -1560(40) 1670(40) 2330(30) 140(20)
C(14) 200(60) 1210(50) 2640(50) 270(30)
C(15) -5515(18) 1598(13) 1455(16) 88(7)
C(16) -5713(16) 912(12) 2196(17) 77(6)
C(17) -5980(20) -72(17) 1650(20) 104(8)
C(18) -5980(20) -61(15) 760(20) 103(8)
C(19) -8210(20) 6070(20) 64(17) 109(10)
C(20) -9020(20) 6810(30) -390(30) 166(16)
C(21) -9160(40) 7530(40) 90(30) 240(30)
C(22) -10350(30) 8580(40) -30(40) 250(30)
C(23) 5606(19) 4307(16) 4099(13) 82(6)
C(24) 6450(20) 3780(16) 4295(15) 80(6)
C(25) 7480(20) 4178(17) 4473(19) 93(7)
C(26) 7663(18) 5240(16) 4444(16) 84(6)
C(27) 6808(17) 5803(14) 4260(16) 74(5)
C(28) 6299(16) 7351(14) 4556(15) 76(5)
C(29) 4877(19) 5987(18) 3782(16) 83(6)
C(30) 5728(18) 5365(17) 4046(15) 79(6)
C(31) 3860(20) 5640(20) 3320(20) 98(8)
C(32) 2950(30) 6210(20) 3026(19) 122(11)
C(33) 3256(17) 7260(30) 3254(17) 110(10)
C(34) 4370(20) 7650(17) 3747(17) 90(7)
C(35) 2470(30) 7970(20) 3010(20) 117(11)
C(36) 2130(30) 9580(30) 3030(40) 220(30)
C(37) 6655(17) 8416(14) 4537(17) 89(6)
C(38) 6862(16) 9157(14) 5391(16) 81(6)
C(39) 7120(20) 10130(18) 5033(19) 117(10)
C(40) 7110(20) 10107(19) 4130(20) 106(8)
C(41) 9520(20) 4000(20) 5060(20) 111(9)
C(42) 10030(50) 2800(40) 5280(40) 270(20)
C(45) 5530(19) 5731(16) 6584(15) 88(6)
C(46) 4630(20) 6243(13) 6206(17) 88(7)
C(47) 3540(20) 5804(18) 5694(17) 86(7)
C(48) 3422(19) 4783(16) 5616(15) 88(6)
C(49) 4302(17) 4218(15) 5988(15) 76(6)
C(50) 4764(16) 2715(14) 6688(17) 82(6)
C(51) 6243(17) 4071(14) 6745(14) 73(5)
C(52) 5329(19) 4702(17) 6443(16) 79(6)
C(53) 7321(19) 4390(20) 6925(16) 97(7)
C(54) 8170(20) 3790(20) 7159(18) 104(8)
C(55) 7760(20) 2690(20) 7165(18) 100(9)
C(56) 6713(18) 2388(18) 6983(15) 91(7)
C(57) 8410(30) 1730(40) 7400(20) 162(19)
C(58) 10160(50) 1260(40) 7400(50) 540(60)
C(59) 4492(18) 1626(18) 6444(16) 92(7)
C(60) 4272(16) 929(13) 7181(17) 81(6)
C(61) 4040(30) -79(19) 6670(20) 118(9)
C(62) 4050(20) -79(17) 5750(20) 118(9)
C(63) 1662(19) 5956(19) 5048(19) 103(7)
C(64) 880(30) 6770(20) 4580(20) 138(11)
C(65) 980(40) 7580(30) 5130(30) 220(20)
C(66) -350(30) 8550(40) 4960(40) 200(20)
C(67) -4417(19) 4312(15) -921(14) 77(6)
C(68) -3580(20) 3778(14) -729(15) 80(6)
C(69) -2550(20) 4235(17) -512(16) 92(7)
C(70) -2332(17) 5295(13) -554(16) 84(7)
C(71) -3210(17) 5828(16) -762(16) 81(6)
C(72) -3670(17) 7353(15) -410(17) 86(7)
C(73) -5137(18) 5977(15) -1221(14) 73(6)
C(74) -4288(16) 5359(14) -950(15) 70(5)
C(75) -6193(18) 5650(20) -1699(15) 96(7)
C(76) -7050(20) 6300(30) -1968(19) 109(11)
C(77) -6700(20) 7370(20) -1722(17) 93(7)
C(78) -5584(19) 7637(19) -1240(15) 87(6)
C(79) -7510(30) 8010(30) -2040(30) 139(17)
C(80) -7880(20) 9610(30) -1960(40) 230(30)
C(81) -3339(17) 8440(17) -460(15) 82(6)
C(82) -3144(16) 9142(14) 412(15) 79(6)
C(83) -2890(30) 10120(20) -10(20) 132(12)
C(84) -2910(20) 10130(20) -890(30) 112(9)
C(85) -660(20) 4080(20) -90(20) 130(10)
C(86) 270(60) 3700(50) 640(50) 390(30)
C(88) 1700(50) 1330(50) 400(40) 530(30)
O(24) 140(50) 1500(40) 360(40) 511(17)
C(87) -310(40) 2930(40) -50(40) 331(19)
H(1A) -3762 6021 1916 101
H(4A) -7294 4485 267 98
H(6A) -5380 2915 2226 100
H(9A) -2467 5080 1907 121
H(12A) -3484 1735 2054 101
H(16A) -5680 1062 2834 93
H(17A) -6134 -662 1934 125
H(18A) -6127 -647 371 124
H(19A) -8394 5775 610 130
H(19B) -8316 5530 -420 130
H(20A) -8826 7086 -933 199
H(20B) -9732 6417 -673 199
H(21A) -8453 7911 416 293
H(21B) -9437 7269 594 293
H(22A) -10795 9011 -483 376
H(22B) -10809 8090 173 376
H(22C) -9859 8973 526 376
H(23A) 4912 3972 3992 98
H(26A) 8366 5552 4551 101
H(28A) 6418 7185 5239 91
H(31A) 3702 4958 3175 118
H(34A) 4562 8330 3913 108
H(36A) 2462 10242 3291 330
H(36B) 1878 9578 2326 330
H(36C) 1523 9392 3251 330
H(38A) 6829 9019 6011 97
H(39A) 7286 10720 5419 140
H(40A) 7264 10682 3823 127
H(45A) 6224 6058 6911 106
H(48A) 2729 4447 5304 106
H(53A) 7509 5071 6887 116
H(56A) 6492 1710 7001 109
H(58A) 10892 1545 7484 816
H(58B) 10167 779 7888 816
H(58C) 9831 941 6759 816
H(60A) 4277 1087 7809 97
H(61A) 3906 -664 6967 141
H(62A) 3930 -665 5367 141
H(67A) -5115 3980 -1040 93
H(70A) -1628 5608 -446 101
H(75A) -6386 4968 -1864 116
H(78A) -5344 8310 -1063 105
H(80A) -7557 10264 -1658 348
H(80B) -8091 9648 -2659 348
H(80C) -8507 9400 -1778 348
H(82A) -3172 9010 1033 95
H(83A) -2722 10707 373 159
H(84A) -2763 10713 -1189 134
表5：式（II）化合物的鍵長（Å）和鍵角[deg]
Cl(1)-C(2) 1.70(2) C(60)-C(59)-S(3) 112.8(17)
Cl(2)-C(24) 1.75(2) C(50)-C(59)-S(3) 126.8(18)
Cl(3)-C(46) 1.765(19) C(59)-C(60)-C(61) 104(2)
Cl(4)-C(68) 1.743(19) C(59)-C(60)-H(60A) 129.1
S(1)-C(18) 1.65(2) C(16)-H(16A) 0.93
S(1)-C(15) 1.70(2) C(17)-C(18) 1.29(3)
S(2)-C(37) 1.67(2) C(17)-H(17A) 0.93
S(2)-C(40) 1.64(3) C(18)-H(18A) 0.93
S(3)-C(62) 1.65(2) C(19)-C(20) 1.52(3)
S(3)-C(59) 1.70(2) C(19)-H(19A) 0.97
S(4)-C(84) 1.67(3) C(19)-H(19B) 0.97
S(4)-C(81) 1.65(2) C(20)-C(21) 1.26(5)
O(1)-C(3) 1.40(2) C(20)-H(20A) 0.97
O(1)-C(19) 1.30(3) C(20)-H(20B) 0.97
O(2)-C(5) 1.40(2) C(21)-H(21A) 0.97
O(2)-C(6) 1.39(2) C(21)-H(21B) 0.97
O(3)-C(10) 1.25(3) C(22)-H(22A) 0.96
O(4)-C(13) 1.10(6) C(22)-H(22B) 0.96
O(5)-C(13) 1.40(6) C(22)-H(22C) 0.96
O(5)-C(14) 1.57(6) C(23)-C(24) 1.33(3)
O(6)-C(22) 1.17(5) C(23)-C(30) 1.42(3)
O(6)-C(21) 1.36(4) C(23)-H(23A) 0.93
O(7)-C(25) 1.37(3) C(24)-C(25) 1.33(3)
O(7)-C(41) 1.49(3) C(25)-C(26) 1.43(3)
O(8)-C(27) 1.38(2) C(26)-C(27) 1.37(3)
O(8)-C(28) 1.44(2) C(26)-H(26A) 0.93
O(9)-C(32) 1.29(3) C(27)-C(30) 1.40(3)
O(10)-C(35) 1.16(4) C(28)-C(37) 1.46(3)
O(11)-C(35) 1.33(4) C(28)-H(28A) 0.98
O(11)-C(36) 1.40(4) C(29)-C(31) 1.31(3)
O(13)-C(47) 1.36(3) C(29)-C(30) 1.42(3)
O(13)-C(63) 1.43(3) C(31)-C(32) 1.43(4)
O(14)-C(49) 1.38(2) C(31)-H(31A) 0.93
O(14)-C(50) 1.41(2) C(32)-C(33) 1.42(4)
O(15)-C(54) 1.25(3) C(33)-C(34) 1.43(3)
O(16)-C(57) 1.40(5) C(33)-C(35) 1.44(4)
O(16)-C(58) 1.53(4) C(34)-H(34A) 0.93
O(17)-C(57) 1.10(6) C(36)-H(36A) 0.96
O(18)-C(66) 1.18(5) C(36)-H(36B) 0.96
O(18)-C(65) 1.37(4) C(36)-H(36C) 0.96
O(19)-C(69) 1.33(3) C(37)-C(38) 1.52(3)
O(19)-C(85) 1.44(3) C(38)-C(39) 1.46(3)
O(20)-C(71) 1.37(2) C(38)-H(38A) 0.93
O(20)-C(72) 1.41(2) C(39)-C(40) 1.30(3)
O(21)-C(76) 1.31(3) C(39)-H(39A) 0.93
O(22)-C(79) 1.16(4) C(40)-H(40A) 0.93
O(23)-C(79) 1.33(5) C(41)-C(42) 1.81(6)
O(23)-C(80) 1.42(3) C(45)-C(46) 1.39(3)
N(1)-C(12) 1.37(2) C(45)-C(52) 1.38(3)
N(1)-C(7) 1.38(2) C(45)-H(45A) 0.93
N(1)-C(6) 1.52(3) C(46)-C(47) 1.42(3)
N(2)-C(34) 1.36(3) C(47)-C(48) 1.36(3)
N(2)-C(29) 1.38(3) C(48)-C(49) 1.41(3)
N(2)-C(28) 1.49(2) C(48)-H(48A) 0.93
N(3)-C(56) 1.38(2) C(49)-C(52) 1.37(3)
N(3)-C(51) 1.39(2) C(50)-C(59) 1.48(3)
N(3)-C(50) 1.52(2) C(51)-C(53) 1.36(3)
N(4)-C(78) 1.33(3) C(51)-C(52) 1.49(3)
N(4)-C(73) 1.39(2) C(53)-C(54) 1.39(4)
N(4)-C(72) 1.51(3) C(53)-H(53A) 0.93
C(1)-C(2) 1.44(3) C(54)-C(55) 1.52(4)
C(1)-C(8) 1.38(3) C(55)-C(56) 1.32(3)
C(1)-H(1A) 0.93 C(55)-C(57) 1.60(4)
C(2)-C(3) 1.38(3) C(56)-H(56A) 0.93
C(3)-C(4) 1.33(3) C(58)-H(58A) 0.96
C(4)-C(5) 1.36(3) C(58)-H(58B) 0.96
C(4)-H(4A) 0.93 C(58)-H(58C) 0.96
C(5)-C(8) 1.38(3) C(59)-C(60) 1.50(3)
C(6)-C(15) 1.51(3) C(60)-C(61) 1.49(3)
C(6)-H(6A) 0.98 C(60)-H(60A) 0.93
C(7)-C(9) 1.36(3) C(61)-C(62) 1.33(3)
C(7)-C(8) 1.51(3) C(61)-H(61A) 0.93
C(9)-C(10) 1.40(4) C(62)-H(62A) 0.93
C(9)-H(9A) 0.93 C(63)-C(64) 1.58(3)
C(10)-C(11) 1.48(4) C(64)-C(65) 1.32(5)
C(11)-C(12) 1.32(3) C(67)-C(68) 1.32(3)
C(11)-C(13) 1.67(5) C(67)-C(74) 1.40(3)
C(12)-H(12A) 0.93 C(67)-H(67A) 0.93
C(15)-C(16) 1.49(3) C(68)-C(69) 1.35(3)
C(16)-C(17) 1.48(3) C(69)-C(70) 1.43(3)
C(73)-C(75) 1.34(3) C(70)-C(71) 1.37(3)
C(73)-C(74) 1.41(3) C(70)-H(70A) 0.93
C(75)-C(76) 1.45(4) C(71)-C(74) 1.42(3)
C(75)-H(75A) 0.93 C(72)-C(81) 1.49(3)
C(76)-C(77) 1.46(4) C(10)-C(9)-H(9A) 118.7
C(77)-C(78) 1.39(3) O(3)-C(10)-C(9) 121(3)
C(77)-C(79) 1.41(4) O(3)-C(10)-C(11) 123(3)
C(78)-H(78A) 0.93 C(9)-C(10)-C(11) 116(3)
C(80)-H(80A) 0.96 C(12)-C(11)-C(10) 118(3)
C(80)-H(80B) 0.96 C(12)-C(11)-C(13) 109(3)
C(80)-H(80C) 0.96 C(10)-C(11)-C(13) 133(3)
C(81)-C(82) 1.51(3) C(11)-C(12)-N(1) 125(2)
C(82)-C(83) 1.50(4) C(11)-C(12)-H(12A) 117.3
C(82)-H(82A) 0.93 N(1)-C(12)-H(12A) 118
C(83)-C(84) 1.26(4) O(4)-C(13)-O(5) 134(4)
C(83)-H(83A) 0.93 O(4)-C(13)-C(11) 124(4)
C(84)-H(84A) 0.93 O(5)-C(13)-C(11) 100(4)
C(85)-C(86) 1.47(7) C(6)-C(15)-C(16) 123.8(18)
C(86)-C(87) 1.39(7) C(6)-C(15)-S(1) 121.0(16)
C(88)-O(24) 2.06(5) C(16)-C(15)-S(1) 115.1(14)
O(24)-C(87) 2.10(7) C(17)-C(16)-C(15) 101.8(19)
C(18)-S(1)-C(15) 90.0(12) C(17)-C(16)-H(16A) 129.6
C(37)-S(2)-C(40) 93.6(13) C(15)-C(16)-H(16A) 128.5
C(62)-S(3)-C(59) 92.8(13) C(18)-C(17)-C(16) 116(2)
C(84)-S(4)-C(81) 93.4(14) C(18)-C(17)-H(17A) 122
C(3)-O(1)-C(19) 120.4(19) C(16)-C(17)-H(17A) 121.9
C(5)-O(2)-C(6) 114.7(15) C(17)-C(18)-S(1) 117.0(19)
C(13)-O(5)-C(14) 104(4) C(17)-C(18)-H(18A) 121.9
C(22)-O(6)-C(21) 119(5) S(1)-C(18)-H(18A) 121.1
C(25)-O(7)-C(41) 127.4(19) O(1)-C(19)-C(20) 116(3)
C(27)-O(8)-C(28) 111.7(15) O(1)-C(19)-H(19A) 108.5
C(35)-O(11)-C(36) 112(3) C(20)-C(19)-H(19A) 108
C(47)-O(13)-C(63) 115.4(18) O(1)-C(19)-H(19B) 108
C(49)-O(14)-C(50) 112.9(14) C(20)-C(19)-H(19B) 108.1
C(57)-O(16)-C(58) 112(4) H(19A)-C(19)-H(19B) 107.5
C(66)-O(18)-C(65) 121(4) C(21)-C(20)-C(19) 123(4)
C(69)-O(19)-C(85) 118(2) C(21)-C(20)-H(20A) 108.8
C(71)-O(20)-C(72) 111.7(16) C(19)-C(20)-H(20A) 106
C(79)-O(23)-C(80) 111(3) C(21)-C(20)-H(20B) 104.3
C(12)-N(1)-C(7) 119.0(19) C(19)-C(20)-H(20B) 107.1
C(12)-N(1)-C(6) 123.5(19) H(20A)-C(20)-H(20B) 106.5
C(7)-N(1)-C(6) 117.1(16) C(20)-C(21)-O(6) 117(5)
C(34)-N(2)-C(29) 122(2) C(20)-C(21)-H(21A) 106
C(34)-N(2)-C(28) 121(2) O(6)-C(21)-H(21A) 105.9
C(29)-N(2)-C(28) 116.2(17) C(20)-C(21)-H(21B) 110.6
C(56)-N(3)-C(51) 120.9(18) O(6)-C(21)-H(21B) 109.7
C(56)-N(3)-C(50) 121.2(18) H(21A)-C(21)-H(21B) 107.3
C(51)-N(3)-C(50) 117.3(15) O(6)-C(22)-H(22A) 110.4
C(78)-N(4)-C(73) 121.1(19) O(6)-C(22)-H(22B) 112.3
C(78)-N(4)-C(72) 120.2(18) H(22A)-C(22)-H(22B) 109.5
C(73)-N(4)-C(72) 118.2(16) O(6)-C(22)-H(22C) 105.6
C(2)-C(1)-C(8) 119(2) H(22A)-C(22)-H(22C) 109.5
C(2)-C(1)-H(1A) 120.4 H(22B)-C(22)-H(22C) 109.5
C(8)-C(1)-H(1A) 120.8 C(24)-C(23)-C(30) 122(2)
C(1)-C(2)-C(3) 117.1(19) C(24)-C(23)-H(23A) 119.1
C(1)-C(2)-Cl(1) 120.0(17) C(30)-C(23)-H(23A) 118.6
C(3)-C(2)-Cl(1) 123(2) C(23)-C(24)-C(25) 124(2)
O(1)-C(3)-C(4) 122(2) C(23)-C(24)-Cl(2) 119(2)
O(1)-C(3)-C(2) 113(2) C(25)-C(24)-Cl(2) 116(2)
C(4)-C(3)-C(2) 125(2) C(24)-C(25)-O(7) 123(2)
C(3)-C(4)-C(5) 117(2) C(24)-C(25)-C(26) 117(2)
C(3)-C(4)-H(4A) 121.7 O(7)-C(25)-C(26) 120(2)
C(5)-C(4)-H(4A) 121.7 C(27)-C(26)-C(25) 120(2)
C(8)-C(5)-O(2) 115.4(18) C(27)-C(26)-H(26A) 119.7
C(8)-C(5)-C(4) 124.2(19) C(25)-C(26)-H(26A) 120
O(2)-C(5)-C(4) 120.3(18) O(8)-C(27)-C(26) 118.9(19)
O(2)-C(6)-C(15) 110.8(17) O(8)-C(27)-C(30) 118.8(19)
O(2)-C(6)-N(1) 108.3(16) C(26)-C(27)-C(30) 122(2)
C(15)-C(6)-N(1) 111.3(17) O(8)-C(28)-C(37) 106.3(17)
O(2)-C(6)-H(6A) 108.9 O(8)-C(28)-N(2) 109.1(15)
C(15)-C(6)-H(6A) 108.5 C(37)-C(28)-N(2) 116.3(17)
N(1)-C(6)-H(6A) 108.9 O(8)-C(28)-H(28A) 108.1
C(9)-C(7)-N(1) 120(2) C(37)-C(28)-H(28A) 108.3
C(9)-C(7)-C(8) 126(2) N(2)-C(28)-H(28A) 108.5
N(1)-C(7)-C(8) 114.6(18) C(31)-C(29)-N(2) 118(2)
C(5)-C(8)-C(1) 118(2) C(31)-C(29)-C(30) 123(2)
C(5)-C(8)-C(7) 121.7(18) N(2)-C(29)-C(30) 119(2)
C(1)-C(8)-C(7) 119.9(19) C(29)-C(30)-C(27) 119(2)
C(7)-C(9)-C(10) 122(3) C(29)-C(30)-C(23) 127(2)
C(7)-C(9)-H(9A) 118.8 C(27)-C(30)-C(23) 115(2)
O(9)-C(32)-C(33) 119(3) C(29)-C(31)-C(32) 127(3)
C(31)-C(32)-C(33) 113(3) C(29)-C(31)-H(31A) 116.7
C(34)-C(33)-C(35) 116(3) C(32)-C(31)-H(31A) 116.7
C(34)-C(33)-C(32) 121(2) O(9)-C(32)-C(31) 128(3)
C(35)-C(33)-C(32) 122(3) C(61)-C(60)-H(60A) 127.2
N(2)-C(34)-C(33) 118(2) C(62)-C(61)-C(60) 115(3)
N(2)-C(34)-H(34A) 120.9 C(62)-C(61)-H(61A) 122.3
C(33)-C(34)-H(34A) 120.8 C(60)-C(61)-H(61A) 122.6
O(10)-C(35)-O(11) 110(3) C(61)-C(62)-S(3) 115(2)
O(10)-C(35)-C(33) 136(3) C(61)-C(62)-H(62A) 122.1
O(11)-C(35)-C(33) 114(3) S(3)-C(62)-H(62A) 122.6
O(11)-C(36)-H(36A) 110 O(13)-C(63)-C(64) 108(2)
O(11)-C(36)-H(36B) 109.1 C(65)-C(64)-C(63) 117(3)
H(36A)-C(36)-H(36B) 109.5 C(64)-C(65)-O(18) 113(5)
O(11)-C(36)-H(36C) 109.2 C(68)-C(67)-C(74) 123(2)
H(36A)-C(36)-H(36C) 109.5 C(68)-C(67)-H(67A) 118.5
H(36B)-C(36)-H(36C) 109.5 C(74)-C(67)-H(67A) 118.9
C(38)-C(37)-C(28) 124(2) C(67)-C(68)-C(69) 121(2)
C(38)-C(37)-S(2) 111.0(14) C(67)-C(68)-Cl(4) 121.6(19)
C(28)-C(37)-S(2) 125.2(18) C(69)-C(68)-Cl(4) 117.7(19)
C(39)-C(38)-C(37) 105.2(19) O(19)-C(69)-C(68) 116(2)
C(39)-C(38)-H(38A) 127.4 O(19)-C(69)-C(70) 123(2)
C(37)-C(38)-H(38A) 127.4 C(68)-C(69)-C(70) 121(2)
C(40)-C(39)-C(38) 115(2) C(71)-C(70)-C(69) 117(2)
C(40)-C(39)-H(39A) 122.9 C(71)-C(70)-H(70A) 122.2
C(38)-C(39)-H(39A) 122.5 C(69)-C(70)-H(70A) 121.1
C(39)-C(40)-S(2) 116(2) O(20)-C(71)-C(70) 116.5(19)
C(39)-C(40)-H(40A) 122 O(20)-C(71)-C(74) 121.4(18)
S(2)-C(40)-H(40A) 122.4 C(70)-C(71)-C(74) 122(2)
O(7)-C(41)-C(42) 97(2) O(20)-C(72)-N(4) 107.3(16)
C(46)-C(45)-C(52) 115(2) O(20)-C(72)-C(81) 106.2(18)
C(46)-C(45)-H(45A) 122.3 N(4)-C(72)-C(81) 114.5(16)
C(52)-C(45)-H(45A) 122.2 C(75)-C(73)-N(4) 119(2)
C(45)-C(46)-C(47) 125.9(19) C(75)-C(73)-C(74) 125(2)
C(45)-C(46)-Cl(3) 116.0(19) N(4)-C(73)-C(74) 116.9(18)
C(47)-C(46)-Cl(3) 118.1(17) C(71)-C(74)-C(67) 117(2)
O(13)-C(47)-C(48) 128(2) C(71)-C(74)-C(73) 117.1(18)
O(13)-C(47)-C(46) 118(2) C(67)-C(74)-C(73) 126.1(19)
C(48)-C(47)-C(46) 114(2) C(73)-C(75)-C(76) 123(3)
C(47)-C(48)-C(49) 123(2) C(73)-C(75)-H(75A) 118.7
C(47)-C(48)-H(48A) 117.9 C(76)-C(75)-H(75A) 118.1
C(49)-C(48)-H(48A) 119.4 O(21)-C(76)-C(75) 119(3)
O(14)-C(49)-C(52) 120.8(19) O(21)-C(76)-C(77) 124(3)
O(14)-C(49)-C(48) 119.8(19) C(75)-C(76)-C(77) 116(2)
C(52)-C(49)-C(48) 119(2) C(78)-C(77)-C(79) 127(3)
O(14)-C(50)-C(59) 106.3(16) C(78)-C(77)-C(76) 116(3)
O(14)-C(50)-N(3) 105.0(16) C(79)-C(77)-C(76) 117(3)
C(59)-C(50)-N(3) 110.4(17) N(4)-C(78)-C(77) 125(2)
C(53)-C(51)-N(3) 118(2) N(4)-C(78)-H(78A) 117.6
C(53)-C(51)-C(52) 126(2) C(77)-C(78)-H(78A) 117.8
N(3)-C(51)-C(52) 115.8(18) O(22)-C(79)-O(23) 113(4)
C(49)-C(52)-C(45) 122(2) O(22)-C(79)-C(77) 137(5)
C(49)-C(52)-C(51) 117(2) O(23)-C(79)-C(77) 109(4)
C(45)-C(52)-C(51) 121(2) O(23)-C(80)-H(80A) 109.5
C(51)-C(53)-C(54) 126(3) O(23)-C(80)-H(80B) 108.7
C(51)-C(53)-H(53A) 116.9 H(80A)-C(80)-H(80B) 109.5
C(54)-C(53)-H(53A) 116.7 O(23)-C(80)-H(80C) 110.2
O(15)-C(54)-C(53) 126(3) H(80A)-C(80)-H(80C) 109.5
O(15)-C(54)-C(55) 122(3) H(80B)-C(80)-H(80C) 109.5
C(53)-C(54)-C(55) 112(2) C(82)-C(81)-C(72) 120(2)
C(56)-C(55)-C(54) 122(2) C(82)-C(81)-S(4) 114.5(17)
C(56)-C(55)-C(57) 108(3) C(72)-C(81)-S(4) 125.2(16)
C(54)-C(55)-C(57) 131(3) C(83)-C(82)-C(81) 100(2)
C(55)-C(56)-N(3) 122(2) C(83)-C(82)-H(82A) 129.9
C(55)-C(56)-H(56A) 118.5 C(81)-C(82)-H(82A) 130.3
N(3)-C(56)-H(56A) 120 C(84)-C(83)-C(82) 120(3)
O(17)-C(57)-O(16) 126(3) C(84)-C(83)-H(83A) 120.1
O(17)-C(57)-C(55) 129(4) C(82)-C(83)-H(83A) 119.9
O(16)-C(57)-C(55) 105(4) C(83)-C(84)-S(4) 112(3)
O(16)-C(58)-H(58A) 109.3 C(83)-C(84)-H(84A) 124
O(16)-C(58)-H(58B) 104.4 S(4)-C(84)-H(84A) 123.7
H(58A)-C(58)-H(58B) 109.5 O(19)-C(85)-C(86) 123(4)
O(16)-C(58)-H(58C) 114.6 C(87)-C(86)-C(85) 71(4)
H(58A)-C(58)-H(58C) 109.5 C(88)-O(24)-C(87) 113(3)
H(58B)-C(58)-H(58C) 109.5 C(86)-C(87)-O(24) 114(5)
C(60)-C(59)-C(50) 120(2)    
表6：式（II）化合物扭轉角度 [deg].
C(8)-C(1)-C(2)-C(3) 1(3) C(52)-C(45)-C(46)-Cl(3) -179.6(16)
C(8)-C(1)-C(2)-Cl(1) -179.3(17) C(63)-O(13)-C(47)-C(48) 15(3)
C(19)-O(1)-C(3)-C(4) 14(4) C(63)-O(13)-C(47)-C(46) -166(2)
C(19)-O(1)-C(3)-C(2) -168(2) C(45)-C(46)-C(47)-O(13) -178(2)
C(1)-C(2)-C(3)-O(1) -177.7(19) Cl(3)-C(46)-C(47)-O(13) 1(3)
Cl(1)-C(2)-C(3)-O(1) 3(3) C(45)-C(46)-C(47)-C(48) 2(3)
C(1)-C(2)-C(3)-C(4) 0(4) Cl(3)-C(46)-C(47)-C(48) -178.7(16)
Cl(1)-C(2)-C(3)-C(4) 179.9(19) O(13)-C(47)-C(48)-C(49) 178(2)
O(1)-C(3)-C(4)-C(5) 178(2) C(46)-C(47)-C(48)-C(49) -2(3)
C(2)-C(3)-C(4)-C(5) 1(4) C(50)-O(14)-C(49)-C(52) 39(3)
C(6)-O(2)-C(5)-C(8) 39(3) C(50)-O(14)-C(49)-C(48) -143(2)
C(6)-O(2)-C(5)-C(4) -145(2) C(47)-C(48)-C(49)-O(14) -179(2)
C(3)-C(4)-C(5)-C(8) -3(4) C(47)-C(48)-C(49)-C(52) 0(3)
C(3)-C(4)-C(5)-O(2) -179(2) C(49)-O(14)-C(50)-C(59) -179.4(18)
C(5)-O(2)-C(6)-C(15) 176.0(17) C(49)-O(14)-C(50)-N(3) -62(2)
C(5)-O(2)-C(6)-N(1) -61.6(19) C(56)-N(3)-C(50)-O(14) -138.7(18)
C(12)-N(1)-C(6)-O(2) -141.7(18) C(51)-N(3)-C(50)-O(14) 50(2)
C(7)-N(1)-C(6)-O(2) 46(2) C(56)-N(3)-C(50)-C(59) -25(3)
C(12)-N(1)-C(6)-C(15) -20(3) C(51)-N(3)-C(50)-C(59) 164.4(17)
C(7)-N(1)-C(6)-C(15) 168.3(17) C(56)-N(3)-C(51)-C(53) 2(3)
C(12)-N(1)-C(7)-C(9) 2(3) C(50)-N(3)-C(51)-C(53) 172.7(19)
C(6)-N(1)-C(7)-C(9) 174(2) C(56)-N(3)-C(51)-C(52) 176.5(18)
C(12)-N(1)-C(7)-C(8) 178.4(18) C(50)-N(3)-C(51)-C(52) -12(3)
C(6)-N(1)-C(7)-C(8) -9(3) O(14)-C(49)-C(52)-C(45) -179(2)
O(2)-C(5)-C(8)-C(1) 180.0(19) C(48)-C(49)-C(52)-C(45) 2(3)
C(4)-C(5)-C(8)-C(1) 4(4) O(14)-C(49)-C(52)-C(51) 4(3)
O(2)-C(5)-C(8)-C(7) 2(3) C(48)-C(49)-C(52)-C(51) -174.9(19)
C(4)-C(5)-C(8)-C(7) -174(2) C(46)-C(45)-C(52)-C(49) -2(3)
C(2)-C(1)-C(8)-C(5) -3(3) C(46)-C(45)-C(52)-C(51) 175.2(19)
C(2)-C(1)-C(8)-C(7) 175.1(19) C(53)-C(51)-C(52)-C(49) 159(2)
C(9)-C(7)-C(8)-C(5) 160(2) N(3)-C(51)-C(52)-C(49) -16(3)
N(1)-C(7)-C(8)-C(5) -16(3) C(53)-C(51)-C(52)-C(45) -19(3)
C(9)-C(7)-C(8)-C(1) -18(3) N(3)-C(51)-C(52)-C(45) 166.9(19)
N(1)-C(7)-C(8)-C(1) 166(2) N(3)-C(51)-C(53)-C(54) -2(3)
N(1)-C(7)-C(9)-C(10) -2(4) C(52)-C(51)-C(53)-C(54) -177(2)
C(8)-C(7)-C(9)-C(10) -177(2) C(51)-C(53)-C(54)-O(15) -174(2)
C(7)-C(9)-C(10)-O(3) -179(2) C(51)-C(53)-C(54)-C(55) 2(4)
C(7)-C(9)-C(10)-C(11) 3(4) O(15)-C(54)-C(55)-C(56) 175(2)
O(3)-C(10)-C(11)-C(12) 177(2) C(53)-C(54)-C(55)-C(56) -1(4)
C(9)-C(10)-C(11)-C(12) -4(4) O(15)-C(54)-C(55)-C(57) -3(5)
O(3)-C(10)-C(11)-C(13) -4(5) C(53)-C(54)-C(55)-C(57) -179(2)
C(9)-C(10)-C(11)-C(13) 175(3) C(54)-C(55)-C(56)-N(3) 1(4)
C(10)-C(11)-C(12)-N(1) 5(4) C(57)-C(55)-C(56)-N(3) 179(2)
C(13)-C(11)-C(12)-N(1) -174(2) C(51)-N(3)-C(56)-C(55) -1(3)
C(7)-N(1)-C(12)-C(11) -4(3) C(50)-N(3)-C(56)-C(55) -172(2)
C(6)-N(1)-C(12)-C(11) -176(2) C(58)-O(16)-C(57)-O(17) 18(6)
C(14)-O(5)-C(13)-O(4) 18(8) C(58)-O(16)-C(57)-C(55) -161(3)
C(14)-O(5)-C(13)-C(11) -179(3) C(56)-C(55)-C(57)-O(17) -3(6)
C(12)-C(11)-C(13)-O(4) -14(6) C(54)-C(55)-C(57)-O(17) 176(4)
C(10)-C(11)-C(13)-O(4) 166(5) C(56)-C(55)-C(57)-O(16) 176(2)
C(12)-C(11)-C(13)-O(5) -180(2) C(54)-C(55)-C(57)-O(16) -6(4)
C(10)-C(11)-C(13)-O(5) 1(4) O(14)-C(50)-C(59)-C(60) -134.1(19)
O(2)-C(6)-C(15)-C(16) -132(2) N(3)-C(50)-C(59)-C(60) 113(2)
N(1)-C(6)-C(15)-C(16) 107(2) O(14)-C(50)-C(59)-S(3) 41(3)
O(2)-C(6)-C(15)-S(1) 44(2) N(3)-C(50)-C(59)-S(3) -73(2)
N(1)-C(6)-C(15)-S(1) -77(2) C(62)-S(3)-C(59)-C(60) -4.8(18)
C(18)-S(1)-C(15)-C(6) -178(2) C(62)-S(3)-C(59)-C(50) 180(2)
C(18)-S(1)-C(15)-C(16) -2.0(19) C(50)-C(59)-C(60)-C(61) -180(2)
C(6)-C(15)-C(16)-C(17) 178(2) S(3)-C(59)-C(60)-C(61) 5(2)
S(1)-C(15)-C(16)-C(17) 2(2) C(59)-C(60)-C(61)-C(62) -3(3)
C(15)-C(16)-C(17)-C(18) -1(3) C(60)-C(61)-C(62)-S(3) -1(4)
C(16)-C(17)-C(18)-S(1) -1(4) C(59)-S(3)-C(62)-C(61) 3(3)
C(15)-S(1)-C(18)-C(17) 1(3) C(47)-O(13)-C(63)-C(64) -175(2)
C(3)-O(1)-C(19)-C(20) -176(2) O(13)-C(63)-C(64)-C(65) -56(4)
O(1)-C(19)-C(20)-C(21) -65(5) C(63)-C(64)-C(65)-O(18) 177(4)
C(19)-C(20)-C(21)-O(6) 175(4) C(66)-O(18)-C(65)-C(64) 121(7)
C(22)-O(6)-C(21)-C(20) 149(6) C(74)-C(67)-C(68)-C(69) 3(4)
C(30)-C(23)-C(24)-C(25) 1(4) C(74)-C(67)-C(68)-Cl(4) 177.6(16)
C(30)-C(23)-C(24)-Cl(2) 179.9(15) C(85)-O(19)-C(69)-C(68) 179(2)
C(23)-C(24)-C(25)-O(7) 176(2) C(85)-O(19)-C(69)-C(70) 2(4)
Cl(2)-C(24)-C(25)-O(7) -3(3) C(67)-C(68)-C(69)-O(19) 179(2)
C(23)-C(24)-C(25)-C(26) 0(4) Cl(4)-C(68)-C(69)-O(19) 3(3)
Cl(2)-C(24)-C(25)-C(26) -179.1(16) C(67)-C(68)-C(69)-C(70) -5(4)
C(41)-O(7)-C(25)-C(24) -172(2) Cl(4)-C(68)-C(69)-C(70) -179.9(17)
C(41)-O(7)-C(25)-C(26) 4(4) O(19)-C(69)-C(70)-C(71) -179(2)
C(24)-C(25)-C(26)-C(27) 1(4) C(68)-C(69)-C(70)-C(71) 4(4)
O(7)-C(25)-C(26)-C(27) -175(2) C(72)-O(20)-C(71)-C(70) -144(2)
C(28)-O(8)-C(27)-C(26) -147(2) C(72)-O(20)-C(71)-C(74) 37(3)
C(28)-O(8)-C(27)-C(30) 38(3) C(69)-C(70)-C(71)-O(20) 179.0(19)
C(25)-C(26)-C(27)-O(8) -177.5(19) C(69)-C(70)-C(71)-C(74) -1(4)
C(25)-C(26)-C(27)-C(30) -3(4) C(71)-O(20)-C(72)-N(4) -58(2)
C(27)-O(8)-C(28)-C(37) 175.0(17) C(71)-O(20)-C(72)-C(81) 178.9(17)
C(27)-O(8)-C(28)-N(2) -59(2) C(78)-N(4)-C(72)-O(20) -142.4(18)
C(34)-N(2)-C(28)-O(8) -144.3(18) C(73)-N(4)-C(72)-O(20) 46(2)
C(29)-N(2)-C(28)-O(8) 44(2) C(78)-N(4)-C(72)-C(81) -25(3)
C(34)-N(2)-C(28)-C(37) -24(3) C(73)-N(4)-C(72)-C(81) 163.5(18)
C(29)-N(2)-C(28)-C(37) 164.1(19) C(78)-N(4)-C(73)-C(75) 3(3)
C(34)-N(2)-C(29)-C(31) 4(3) C(72)-N(4)-C(73)-C(75) 175.1(18)
C(28)-N(2)-C(29)-C(31) 176(2) C(78)-N(4)-C(73)-C(74) -179.6(18)
C(34)-N(2)-C(29)-C(30) -179.2(19) C(72)-N(4)-C(73)-C(74) -8(3)
C(28)-N(2)-C(29)-C(30) -8(3) O(20)-C(71)-C(74)-C(67) 179.0(18)
C(31)-C(29)-C(30)-C(27) 161(2) C(70)-C(71)-C(74)-C(67) -1(3)
N(2)-C(29)-C(30)-C(27) -16(3) O(20)-C(71)-C(74)-C(73) 4(3)
C(31)-C(29)-C(30)-C(23) -17(4) C(70)-C(71)-C(74)-C(73) -176(2)
N(2)-C(29)-C(30)-C(23) 166.2(19) C(68)-C(67)-C(74)-C(71) 0(3)
O(8)-C(27)-C(30)-C(29) 0(3) C(68)-C(67)-C(74)-C(73) 175(2)
C(26)-C(27)-C(30)-C(29) -175(2) C(75)-C(73)-C(74)-C(71) 159(2)
O(8)-C(27)-C(30)-C(23) 178.1(17) N(4)-C(73)-C(74)-C(71) -18(3)
C(26)-C(27)-C(30)-C(23) 4(3) C(75)-C(73)-C(74)-C(67) -16(4)
C(24)-C(23)-C(30)-C(29) 176(2) N(4)-C(73)-C(74)-C(67) 167.5(19)
C(24)-C(23)-C(30)-C(27) -3(3) N(4)-C(73)-C(75)-C(76) -3(3)
N(2)-C(29)-C(31)-C(32) -3(4) C(74)-C(73)-C(75)-C(76) -180(2)
C(30)-C(29)-C(31)-C(32) -180(2) C(73)-C(75)-C(76)-O(21) -177(2)
C(29)-C(31)-C(32)-O(9) -179(3) C(73)-C(75)-C(76)-C(77) 2(4)
C(29)-C(31)-C(32)-C(33) 2(4) O(21)-C(76)-C(77)-C(78) 178(2)
O(9)-C(32)-C(33)-C(34) 179(2) C(75)-C(76)-C(77)-C(78) -1(4)
C(31)-C(32)-C(33)-C(34) -1(3) O(21)-C(76)-C(77)-C(79) -5(4)
O(9)-C(32)-C(33)-C(35) -1(4) C(75)-C(76)-C(77)-C(79) 176(2)
C(31)-C(32)-C(33)-C(35) 179(2) C(73)-N(4)-C(78)-C(77) -3(3)
C(29)-N(2)-C(34)-C(33) -4(3) C(72)-N(4)-C(78)-C(77) -174(2)
C(28)-N(2)-C(34)-C(33) -174.8(18) C(79)-C(77)-C(78)-N(4) -175(3)
C(35)-C(33)-C(34)-N(2) -178(2) C(76)-C(77)-C(78)-N(4) 1(4)
C(32)-C(33)-C(34)-N(2) 2(3) C(80)-O(23)-C(79)-O(22) -12(5)
C(36)-O(11)-C(35)-O(10) -3(4) C(80)-O(23)-C(79)-C(77) 178(3)
C(36)-O(11)-C(35)-C(33) 176(3) C(78)-C(77)-C(79)-O(22) -179(4)
C(34)-C(33)-C(35)-O(10) 173(4) C(76)-C(77)-C(79)-O(22) 4(7)
C(32)-C(33)-C(35)-O(10) -7(5) C(78)-C(77)-C(79)-O(23) -12(5)
C(34)-C(33)-C(35)-O(11) -5(4) C(76)-C(77)-C(79)-O(23) 171(3)
C(32)-C(33)-C(35)-O(11) 175(2) O(20)-C(72)-C(81)-C(82) -132.8(19)
O(8)-C(28)-C(37)-C(38) -131.6(19) N(4)-C(72)-C(81)-C(82) 109(2)
N(2)-C(28)-C(37)-C(38) 107(2) O(20)-C(72)-C(81)-S(4) 50(2)
O(8)-C(28)-C(37)-S(2) 54(2) N(4)-C(72)-C(81)-S(4) -68(2)
N(2)-C(28)-C(37)-S(2) -68(2) C(84)-S(4)-C(81)-C(82) 0.1(18)
C(40)-S(2)-C(37)-C(38) 0.8(17) C(84)-S(4)-C(81)-C(72) 177.1(19)
C(40)-S(2)-C(37)-C(28) 176(2) C(72)-C(81)-C(82)-C(83) -177.6(19)
C(28)-C(37)-C(38)-C(39) -176(2) S(4)-C(81)-C(82)-C(83) 0(2)
S(2)-C(37)-C(38)-C(39) -1(2) C(81)-C(82)-C(83)-C(84) 1(3)
C(37)-C(38)-C(39)-C(40) 0(3) C(82)-C(83)-C(84)-S(4) -1(4)
C(38)-C(39)-C(40)-S(2) 0(3) C(81)-S(4)-C(84)-C(83) 0(3)
C(37)-S(2)-C(40)-C(39) -1(2) C(69)-O(19)-C(85)-C(86) 144(4)
C(25)-O(7)-C(41)-C(42) 177(3) O(19)-C(85)-C(86)-C(87) 55(5)
C(52)-C(45)-C(46)-C(47) 0(3) C(85)-C(86)-C(87)-O(24) -168(4)
實驗例1：式（I）化合物的HBV體外活性測試
實驗材料： 1.細胞系：HepG2.2.15 細胞 HepG2.2.15 細胞培養基 (DMEM/F12，Invitrogen-11330032；10%血清，Invitrogen-10099141；100 units/ml青黴素和100 µg/ml鏈黴素，Hyclone-SV30010；1% 非必需胺基酸，Invitrogen-11140050；2毫米 L-GLUTAMINE，Invitrogen-25030081；300 μg/ml Geneticin，Invitrogen-10131027 2.試劑： 胰酶（Invitrogen-25300062） DPBS （Corning-21031CVR） 二甲基亞碸（Sigma-D2650-100ML） 高通量DNA純化試劑盒（QIAamp 96 DNA Blood Kit，Qiagen-51162） 定量快速啟動通用探針試劑（FastStart Universal Probe Master，Roche-04914058001） B型肝炎表面抗原定量檢測試劑盒（安圖生物，CL 0310） 3.耗材與儀器： 96孔細胞培養板（Corning-3599） CO2 培養箱（HERA-CELL-240） 光學封板膜（ABI-4311971） 定量PCR 96孔板（Applied Biosystems-4306737） 螢光定量PCR儀（Applied Biosystems-7500 real time PCR system）
實驗方法： 1.種HepG2.2.15細胞（4x104 細胞/孔）到96孔板，在37℃，5 % CO2 培養過夜。 2.第二天，稀釋化合物，共8個濃度，3倍梯度稀釋。加不同濃度化合物到培養孔中，雙複孔。培養液中二甲基亞碸的終濃度為0.5%。10 µM ETV作為100% 抑制對照；0.5% 的二甲基亞碸作為0% 抑制對照。 3.第五天，更換含有化合物的新鮮培養液。 4.第八天收取培養孔中的培養液，取部分樣品ELISA測定B肝病毒S抗原的含量；取部分樣品使用高通量DNA純化試劑盒（Qiagen-51162）提取DNA。 5.PCR反應液的配製如表7所示： 表7  PCR 反應液的配製
項目 配置1個孔所需體積 (微升) 配置80個孔所需體積 (微升)
定量快速啟動通用探針試劑 12.5 1000
前引物 (10微莫耳) 1 80
後引物 (10微莫耳) 1 80
探針 (10微莫耳) 0.5 40
前引物序列：GTGTCTGCGGCGTTTTATCA 後引物序列：GACAAACGGGCAACATACCTT 探針序列：5'+ FAM + CCTCTKCATCCTGCTGCTATGCCTCATC + TAMRA -3' 6.1在96孔PCR板中每孔加入15 µL的反應混合液，然後每孔加入10 µl的樣品DNA或HBV DNA的標準品。 6.2 PCR的反應條件為：95℃ 加熱10分鐘，然後95℃變性15秒，60℃延伸1分鐘，共40個循環。 6.3 ELISA測定B肝病毒S抗原的含量取50µl樣品和標準品分別加入到反應板中，再每孔分別加入50µL酶結合物，震盪混勻，37℃溫浴60分鐘，然後用洗液洗板5次，再每孔加入50µL發光基質，混勻，室溫避光反應10分鐘，最後用酶標儀檢測化學發光強度。 6.4 數據分析： 計算抑制百分比：% Inh. =（1-樣品中的值/二甲基亞碸對照值）×100。 計算EC50 ：使用GraphPad Prism軟件計算化合物對HBV的50%抑制濃度（EC50 ）值。
實驗結果如表8所示： 表8：體外活性測試結果
實施例 HBV-DNA EC50 (nM) HBsAg EC50 (nM)
式（I）化合物 1.13 1.54
實驗結論：式（I）化合物能有效抑制HBV-DNA和B肝表面抗原（HBsAg）。
雖然本發明已以實施例揭露如上，然其並非用以限定本發明，本發明所屬技術領域中具有通常知識者，在不脫離本發明之精神和範圍內，當可作些許之更動與潤飾，因此本發明之保護範圍當視後附之申請專利範圍所界定者為準。
無
圖1為式（I）化合物A晶型的Cu-Kα輻射的XRPD譜圖。 圖2為式（I）化合物A晶型的DSC譜圖。 圖3為式（I）化合物A晶型的TGA譜圖。 圖4為式（II）化合物的單晶X射線衍射立體結構橢球圖。

Claims (16)

  1. 一種式(I)化合物的A晶型，其X射線粉末衍射圖譜在下列2θ角處具有特徵衍射峰：6.30±0.20°、9.30±0.20°、9.84±0.20°、18.68±0.20°、20.16±0.20°、23.06±0.20°、24.00±0.20°和25.38±0.20°；
    Figure 109132274-A0305-02-0037-1
  2. 如請求項1所述的A晶型，其X射線粉末衍射圖譜在下列2θ角處具有特徵衍射峰：6.30±0.20°、9.30±0.20°、9.84±0.20°、12.84±0.20°、18.68±0.20°、20.16±0.20°、21.26±0.20°、23.06±0.20°、24.00±0.20°、25.38±0.20°。
  3. 如請求項2所述的A晶型，其X射線粉末衍射圖譜在下列2θ角處具有特徵衍射峰：6.302°、7.883°、9.301°、9.842°、12.838°、15.436°、16.580°、18.124°、18.680°、19.459°、20.161°、20.800°、21.262°、21.704°、23.057°、24.000°、24.837°、25.382°、26.244°、26.558°、27.740°、28.119°、28.827°、29.502°、29.880°、30.261°、30.762°、31.678°、32.595°、33.061°、34.347°、35.235°、35.738°、36.642°、38.619°和39.558°。
  4. 如請求項1所述的A晶型，其X射線粉末衍射圖譜在下列2θ角處具有特徵衍射峰：
    Figure 109132274-A0305-02-0037-2
    Figure 109132274-A0305-02-0038-3
  5. 如請求項1所述的A晶型，其XRPD圖譜如圖1所示。
  6. 如請求項1~5任意一項所述的A晶型，其差示掃描量熱曲線在224.58℃±3℃處具有吸熱峰的峰值。
  7. 如請求項6所述的A晶型，其DSC圖譜如圖2所示。
  8. 如請求項1~5任意一項所述的A晶型，其熱重分析曲線在200.00±3℃時失重達0.127%；在250±3℃時又失重達0.224%。
  9. 如請求項8所述的A晶型，其TGA圖譜如圖3所示。
  10. 一種如請求項1~9任意一項所述的式(I)化合物A晶型的製備方法，包括將任意一種形式的式(I)化合物加入到醇類溶劑、丙酮、乙酸乙酯、乙腈或醇類溶劑、丙酮、乙腈與水中，在一定溫度下攪拌一定時間，然後過濾， 濾餅烘乾得到晶型A
    Figure 109132274-A0305-02-0039-4
  11. 如請求項10所述的製備方法，其中醇類溶劑、丙酮、乙腈與水的體積比例選自1：1~3。
  12. 如請求項10或11所述的製備方法，其中醇類溶劑選自甲醇、乙醇或異丙醇。
  13. 如請求項10所述的製備方法，其中攪拌溫度選自25℃~65℃。
  14. 如請求項10所述的製備方法，其中攪拌時間選自1小時~72小時。
  15. 如請求項10所述的製備方法，其中式(I)化合物與溶劑的重量比選自1：1~30。
  16. 一種如請求項1~9任意一項所述的A晶型在製備治療慢性B型肝炎相關藥物上的應用。
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