TWI568361B - 葉黃素組合物及使用方法 - Google Patents

Description

葉黃素組合物及使用方法 相關申請案交叉參考

本申請案主張對2012年12月19日提出申請之美國專利第61/739,074號之優先權，該專利係全文以引用方式併入本文中。

本發明涵蓋類胡蘿蔔素組合物、產生類胡蘿蔔素組合物之製程及其使用方法。

類胡蘿蔔素(包括黃體素及其他葉黃素)係用於色素沉著組合物之天然化合物。其可發現於若干種不同植物(包括萬壽菊及辣椒植物)之提取物中。將該等植物提取物(稱為含油樹脂)處理為可用於多種工業中之類胡蘿蔔素調配物。

在一些態樣中，本揭示內容提供一種組合物，該組合物包含源自含有類胡蘿蔔素之天然含油樹脂之皂化之肥皂，其中該肥皂含有非酯化葉黃素粒子，且當在室溫下在透氧性暗袋中儲存3個月時，保持大於80%之總葉黃素濃度。

在另一態樣中，本揭示內容提供一種組合物，其包含源自含有類胡蘿蔔素之天然含油樹脂之皂化之肥皂，其中該肥皂含有非酯化葉黃素粒子，且90%之非酯化葉黃素粒子之最大直徑小於0.5微米。

在另一態樣中，提供產生具有大於10%之非酯化類胡蘿蔔素組合 物之終產物之方法。該製程包含(a)含有類胡蘿蔔素之天然含油樹脂之鹼皂化，其中該皂化係在金屬氫氧化物存在下在充分混合下進行，且在介於約110℃至約180℃之間之溫度下進行，產生包含非酯化類胡蘿蔔素之組合物，(b)所得包含非酯化類胡蘿蔔素之肥皂之霧化以產生霧化肥皂，及(c)非酯化類胡蘿蔔素之異構化，其中加熱該霧化肥皂以使得大於80%之所存在非酯化類胡蘿蔔素呈全反式異構物構型，且最終肥皂產物之非酯化類胡蘿蔔素濃度大於10%。

在另一替代態樣中，提供自水及非酯化類胡蘿蔔素濃度大於10%之終產物產生水性產物之製程。該製程包含(a)含有類胡蘿蔔素之天然含油樹脂之鹼皂化，其中該皂化係在金屬氫氧化物存在下在充分混合下進行，且在介於約110℃至約180℃之間之溫度下進行，產生包含非酯化類胡蘿蔔素之肥皂，(b)非酯化類胡蘿蔔素之異構化，其中加熱該肥皂以使得大於80%之所存在非酯化類胡蘿蔔素呈全反式異構物構型，以產生大於10%之最終肥皂產物之非酯化類胡蘿蔔素濃度，及(c)使該最終肥皂產物與足量水接觸以產生具有5%至約25%該最終肥皂產物之水性產物。

本揭示內容之其他態樣及特徵提供於本文中。

102‧‧‧第一試劑容器

104‧‧‧第二試劑容器

105‧‧‧熱轉移器件

106‧‧‧第一導管

108‧‧‧第二導管

110‧‧‧熱轉移器件

112‧‧‧第一靜態混合器

116‧‧‧高剪切混合器

118‧‧‧第二靜態混合器

120‧‧‧活塞流反應器

122‧‧‧霧化器

124‧‧‧閥

126‧‧‧異構化裝置

128‧‧‧自由流動助劑容器

130‧‧‧產物容器

圖1顯示本文所述連續流動裝置之示意圖。

圖2A-B顯示在100倍放大下偏光顯微術之結果。圖2A顯示X-40；圖2B顯示XCT。

圖3A-B顯示在400倍放大下光學顯微術之結果。圖3A顯示X-40；圖3B顯示XCT。

圖4顯示XCT及X-40之DSC曲線。

圖5A-D顯示X-40之熔化。圖5A顯示在40℃下熔化；圖5B顯示在80℃下熔化；圖5C顯示在150℃下熔化；且圖5D顯示在200℃下熔 化。

圖6提供比較性X-40製程之示意圖。

圖7A-B顯示XCT、X-40、競爭劑產物3、競爭劑產物4、競爭劑產物5及競爭劑產物6之間之比較性穩定性研究。

圖8A-D顯示用於研究之美能達(Minolta)色彩分析及DSM/Roche色扇之結果，其中針對替代產物不添加紅色色素。

圖9A-B顯示在針對替代產物投與XCT時蛋中之總葉黃素。

圖10A-D顯示用於研究之美能達色彩分析及DSM/Roche色扇之結果，其中針對替代產物不添加紅色色素。

圖11A-B顯示在針對替代產物投與XCT時蛋中之總葉黃素。

圖12A-D顯示在針對阿蔔酯(apo-ester，β-阿蔔-8’-胡蘿蔔酸乙酯)投與XCT時蛋中之總葉黃素。

圖13顯示在添加合成紅色染料時之DSM/Roche色扇結果。

圖14顯示在添加天然紅色染料時之DSM/Roche色扇結果。

圖15A-C顯示各種光譜研究之結果。圖15A顯示X-40及XCT之FTIR光譜。圖15B顯示1800至600cm^-1區域之放大。圖15C顯示X-40及XCT之Raman光譜。

圖16A-C顯示X-40及XCT之薄層層析(TLC)結果。

本發明涵蓋類胡蘿蔔素組合物、產生類胡蘿蔔素調配物之製程及使用類胡蘿蔔素組合物之方法。有利地，本發明類胡蘿蔔素組合物與藉由其他方式產生之類胡蘿蔔素組合物相比具有改良之生物利用性及提高之著色效率。

I. 組合物

本發明之一態樣涵蓋一種組合物，其包含源自含有類胡蘿蔔素之天然含油樹脂之皂化之肥皂。此一肥皂含有非酯化葉黃素粒子。本 發明肥皂亦包含初始含有類胡蘿蔔素之天然含油樹脂之其餘組份。

本發明組合物可為液體或固體，例如顆粒或粉末。一般而言，本發明固體組合物之水分含量低於10%。在一些實施例中，水分含量低於10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%或1%。在實例性實施例中，水分含量低於3%。在其他實例性實施例中，水分含量低於2%。

(a)含有類胡蘿蔔素之天然含油樹脂

本發明組合物包含源自含有類胡蘿蔔素之天然含油樹脂之皂化之肥皂。如本文所用術語「含油樹脂」係指包含植物提取物之組合物。片語「含有類胡蘿蔔素之含油樹脂」係指含有一或多種類胡蘿蔔素(其係有機色素)之含油樹脂。最後，如本文所用片語「含有類胡蘿蔔素之天然含油樹脂」係指源自植物之含有類胡蘿蔔素之含油樹脂。

含有類胡蘿蔔素之天然含油樹脂之適宜實例為業內已知。舉例而言，含有類胡蘿蔔素之天然含油樹脂可為萬壽菊含油樹脂，或可為辣椒含油樹脂，或其組合。在一個實施例中，含有類胡蘿蔔素之天然含油樹脂係萬壽菊含油樹脂。舉例而言，萬壽菊含油樹脂可為萬壽菊(Tagetes erecta)、法國萬壽菊(Tagetes patula)、細葉萬壽菊(Tagetes tenuifolia)、普米拉萬壽菊(Tagetes pumila)或雜交萬壽菊(Tagetes hybrid)含油樹脂。在另一實施例中，含有類胡蘿蔔素之天然含油樹脂係辣椒含油樹脂。舉例而言，辣椒含油樹脂可為辣椒(Capsicum annuum linn)、風鈴辣椒(Capsicum baccatum)、布佛羅辣椒(Capsicum buforum)或小米椒(Capsicum frutescens)含油樹脂。在其他實施例中，含有類胡蘿蔔素之天然含油樹脂係萬壽菊及辣椒含油樹脂之組合。舉例而言，含有類胡蘿蔔素之天然含油樹脂可包含約10：1、9：1、8：1、7：1、6：1、5：1、4：1、3：1、2：1、1：1、1：2、1：3、1：4、1：5、1：6、1：7、1：8、1：9或1：10之萬壽菊含油樹脂對辣椒含油樹脂之比率。

自植物製備含油樹脂之方法為業內已知。或者，可購買含油樹脂。

(b)非酯化葉黃素粒子

本發明組合物包含非酯化葉黃素粒子。如本文所用片語「葉黃素粒子」係指葉黃素，不論該葉黃素係結晶或非晶質。可設想結晶葉黃素對非晶質葉黃素之各種比率，介於約100%結晶至約100%非晶質範圍內。在一個實施例中，本發明組合物包含結晶及非晶質葉黃素二者。在另一實施例中，本發明組合物包含至少約10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%結晶葉黃素。在另一實施例中，本發明組合物包含至少約10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%非晶質葉黃素。

如本文所用片語「非酯化」係指已自脂肪酸酯水解之葉黃素。如在本申請案之章節III中所詳述，葉黃素可經由含有類胡蘿蔔素之天然含油樹脂之皂化自脂肪酸酯水解。

術語「葉黃素」係指包含至少一個氧原子之類胡蘿蔔素。此一化合物亦可稱作葉黃質。適宜葉黃素包括彼等發現於含有類胡蘿蔔素之天然含油樹脂中者。舉例而言，適宜葉黃素可包括黃體素、玉米黃素、新黃素、堇菜黃質、α-及β-隱黃素、辣椒紅素及辣椒紫紅素。在一個實施例中，本發明組合物包含至少一種類型之葉黃素。在另一實施例中，本發明組合物包含至少兩種類型之葉黃素。在另一實施例中，本發明組合物包含至少三種類型之葉黃素。在實例性實施例中，本發明組合物包含黃體素。在另一實例性實施例中，本發明組合物包含玉米黃素。在另一實例性實施例中，本發明組合物包含黃體素及玉米黃素二者。

i. 最大直徑之大小

一般而言，本發明組合物中葉黃素粒子之大小較小，例如小於1 微米。此係指粒子最大直徑之大小。與較大粒徑相比，此較小大小既有助於提高生物利用性亦有助於增強穩定性。

在一些實施例中，至少約90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之非酯化葉黃素粒子之最大直徑小於1.0微米。在其他實施例中，至少約90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之非酯化葉黃素粒子之最大直徑小於0.9微米。在某些實施例中，至少約90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之非酯化葉黃素粒子之最大直徑小於0.8微米。在若干實施例中，至少約90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之非酯化葉黃素粒子之最大直徑小於0.7微米。在所選實施例中，至少約80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之非酯化葉黃素粒子之最大直徑小於0.6微米。

在一個實施例中，至少約75%之非酯化葉黃素粒子之最大直徑小於0.5微米。舉例而言，在一些實施例中，至少約75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%或90%之非酯化葉黃素粒子之最大直徑小於0.5微米。在其他實施例中，至少約91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%之非酯化葉黃素粒子之最大直徑小於0.5微米。在一個實施例中，至少約90%之非酯化葉黃素粒子之最大直徑小於0.5微米。

在替代性實施例中，至少約75%之非酯化葉黃素粒子之最大直徑小於0.4微米。舉例而言，在一些實施例中，至少約75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%或90%之非酯化葉黃素粒子之最大直徑小於0.4微米。

ii. 非酯化葉黃素粒子之量

有利地，本發明組合物包含高濃度之非酯化葉黃素粒子。舉例而言，在一個實施例中，本發明組合物包含約75mg非酯化葉黃素/克源自含有類胡蘿蔔素之天然含油樹脂之皂化之肥皂。在其他實施例中，本發明組合物包含至少約76mg、77mg、78mg、79mg、80mg、81mg、82mg、83mg、84mg、85mg、86mg、87mg、88mg、89mg、90mg、91mg、92mg、93mg、94mg、95mg、96mg、97mg、98mg、99mg、100mg、101mg、102mg、103mg、104mg、105mg、106mg、107mg、108mg、109mg或110mg非酯化葉黃素/克源自含有類胡蘿蔔素之天然含油樹脂之皂化之肥皂。在其他實施例中，本發明組合物包含約100mg、101mg、102mg、103mg、104mg、105mg、106mg、107mg、108mg、109mg、110mg、111mg、112mg、113mg、114mg、115mg、116mg、117mg、118mg、119或120mg非酯化葉黃素/克源自含有類胡蘿蔔素之天然含油樹脂之皂化之肥皂。在實例性實施例中，本發明組合物包含約90mg至約110mg非酯化葉黃素/克源自含有類胡蘿蔔素之天然含油樹脂之皂化之肥皂。在另一實例性實施例中，本發明組合物包含至少約99mg非酯化葉黃素/克源自含有類胡蘿蔔素之天然含油樹脂之皂化之肥皂。在自含油樹脂移除戴奧辛(dioxin)之實施例中，本發明組合物包含約110mg、111mg、112mg、113mg、114mg、115mg、116mg、117mg、118mg、119mg或120mg、121mg、122mg、123mg、124mg、125mg、126mg、127mg、128mg、129mg、130mg、131mg、132mg、133mg、134mg、135mg、136mg、137mg、138mg、139mg、140mg非酯化葉黃素/克源自含有類胡蘿蔔素之天然含油樹脂之皂化之肥皂。

在某些實施例中，本發明乾燥組合物係至少5%、至少6%、至少 7%、至少8%、至少9%、至少10%、至少11%、至少12%、至少13%、至少14%、至少15%或更多葉黃素。舉例而言，本發明乾燥組合物可係至少約8%、8.25%、8.5%、8.75%、9%、9.25%、9.5%、9.75%、10%、10.25%、10.5%、10.75%或11%葉黃素。在實例性實施例中，本發明乾燥組合物係至少約9.5%葉黃素。在另一實例性實施例中，本發明乾燥組合物係至少約10%葉黃素。在另一替代性實施例中，隨著自含油樹脂移除戴奧辛，葉黃素之濃度可變得更高。在該等態樣中，組合物可係至少9%、9.25%、9.5%、9.75%、10%、10.25%、10.5%、10.75%、11%、11.25%、11.5%、11.75%、12%、12.25%、12.5%、12.75%、13%、13.25%、13.5%、13.75%、14%、14.25%、14.5%、14.75%、15%、15.25%、15.5%、15.75%、16%或更高。

在其他實施例中，本發明液體組合物係至少0.5%、至少1%、至少2%或至少3%葉黃素。舉例而言，本發明液體組合物可係至少約0.5%、0.75%、1.0%、1.25%、1.5%、1.75%、2.0%、2.25%、2.5%、2.75%或3.0%葉黃素。在實例性實施例中，本發明液體組合物係至少約1%葉黃素。在另一實例性實施例中，本發明液體組合物包含介於約1%與約3%之間之葉黃素。

iii. 異構現象

如業內已知，葉黃素可以不同異構物形式存在。具體而言，其可以順式異構物或全反式異構物形式存在。測定組合物中之順式異構物之量或全反式異構物之量之方法亦為業內已知。舉例而言，參見本文所包括之實例。一般而言，本發明組合物可包含至少約50%之全反式異構物。在一些實施例中，本發明組合物可包含至少約50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或99%之全反式異構物。在其他實施例中，本發明組合物可包含至少約75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%或85%之全反 式異構物。在實例性實施例中，本發明組合物可包含至少約80%之全反式異構物。

(c)穩定性

本發明組合物之葉黃素粒子非常穩定。舉例而言，若將本發明組合物在室溫下儲存於透氧袋中，則在一個月時存在至少約80%之初始葉黃素濃度。在一個實施例中，在室溫下且在透氧袋中，在一個月時存在至少約80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之初始總葉黃素濃度。在實例性實施例中，在室溫下且在透氧袋中，在一個月時存在至少約98%、99%或100%之初始總葉黃素濃度。

在另一實施例中，在室溫下且在透氧袋中，在三個月時存在至少約80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之初始總葉黃素濃度。在實例性實施例中，在室溫下且在透氧袋中，在三個月時存在至少約92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之初始總葉黃素濃度。

在另一實施例中，在室溫下且在透氧袋中，在六個月時存在至少約85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%或98%之初始總葉黃素濃度。在實例性實施例中，在室溫下且在透氧袋中，在六個月時存在至少約90%之初始總葉黃素濃度。

在另一實施例中，在室溫下且在透氧袋中，在九個月時存在至少約85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%或98%之初始總葉黃素濃度。在實例性實施例中，在室溫下且在透氧袋中，在九個月時存在至少約85%、86%、87%、 88%、89%或90%之初始總葉黃素濃度。

在將本發明組合物在50℃下儲存於不透性袋中之實施例中，在最長約六個月時存在至少約90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之初始總葉黃素濃度。在實例性實施例中，在最長約六個月時存在至少約95%、96%、97%、98%、99%或100%之初始總葉黃素濃度。

在將本發明組合物在50℃下儲存於不透性袋中之其他實施例中，在九個月時存在至少約85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之初始總葉黃素濃度。在實例性實施例中，在九個月時存在至少約85%、86%、87%、88%、89%或90%之初始總葉黃素濃度。

在另一實例性實施例中，與動物飼料混合且在室溫下儲存於暗透氧袋中之本發明組合物在一個月後維持至少約90%之初始葉黃素濃度，且在一些實施例中，在一個月後維持至少90%、91%、92%、93%或94%之初始葉黃素濃度。在另一實例性實施例中，與動物飼料混合且在室溫下儲存於暗透氧袋中之本發明組合物在三、四或六個月後維持至少約80%之初始葉黃素濃度，且在一些實施例中，在三、四或六個月後維持至少約80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%或90%之初始葉黃素濃度。

(d)調配物

本發明組合物可為液體或固體。在組合物為固體時，肥皂粒子(其至少部分包括非酯化葉黃素粒子)之最長粒子直徑通常介於約40微米至約300微米之間。該等粒子亦可形成聚集體，大小在最大約850微米範圍內。在一個實施例中，90%之肥皂粒子或聚集體介於約40微米與約850微米之間。在另一實施例中，90%之肥皂粒子或聚集體介於約70微米與700微米之間。在另一實施例中，90%之肥皂粒子或聚集 體介於約100微米與550微米之間。在另一實施例中，90%之肥皂粒子或聚集體介於約200微米與約500微米之間。此一肥皂含有非酯化葉黃素粒子。

在某些實施例中，本發明組合物可獨自調配或作為飼料之一部分調配。乾燥飼料補充料可遍佈液體、液體食物、乾燥食物、穀粒、蛋白質產物、飼料補充料或其混合物均勻分散。

在一些實施例中，可將本發明組合物調配為水性調配物。水性調配物可為溶液、分散液或乳液。可將水性調配物直接添加至動物之飲用水中，或可將其混合至或施加至乾燥或液體食物中。

(e)抗氧化劑

本發明組合物亦可包括至少一種抗氧化劑。多種抗氧化劑或抗氧化劑組合適用於本發明組合物。抗氧化劑可包含喹啉化合物。通常，喹啉化合物可為經取代1,2-二氫喹啉。適用於本發明之經取代1,2-二氫喹啉化合物一般包含式(I)：

其中：R¹、R²、R³及R⁴獨立地選自由氫及具有1至約6個碳之烷基組成之群；且R⁵係具有1至約12個碳之烷氧基。

在反覆中，經取代1,2-二氫喹啉包含式(I)，其中：R¹、R²、R³及R⁴獨立地選自由氫及具有1至約4個碳之烷基組成之群；且R⁵係具有1至約4個碳之烷氧基。

在一個較佳實施例中，經取代1,2-二氫喹啉可為6-乙氧基-1,2-二氫-2,2,4-三甲基喹啉，其包含式(II)：

化合物6-乙氧基-1,2-二氫-2,2,4-三甲基喹啉一般稱為乙氧喹，其係以商標AGRADO^®銷售。本發明亦涵蓋乙氧喹及包含式(I)之其他化合物之鹽。乙氧喹及具有式(I)之其他化合物可購自Novus International公司(St.Louis,MO)或根據業內一般已知之方法來製備，例如如美國專利第4,772,710號中所詳述，該專利係全文以引用方式併入本文中。

多種其他抗氧化劑適用於本發明組合物中。在一些實施例中，抗氧化劑可為藉由使自由基質子化，由此使其失活來中斷氧化反應之自由基鏈之化合物。或者，抗氧化劑可為清除反應性氧物質之化合物。在其他實施例中，抗氧化劑可為合成化合物、半合成化合物或天然(或天然衍生的)化合物。

適宜抗氧化劑可包括(但不限於)抗壞血酸及其鹽、抗壞血酸棕櫚酸酯、抗壞血酸硬脂酸酯、阿諾克索默(anoxomer)、n-乙醯半胱胺酸、異硫氰酸苄酯、間胺基苯甲酸、鄰胺基苯甲酸、對胺基苯甲酸(PABA)、丁羥基甲氧苯(BHA)、二丁羥基甲苯(BHT)、咖啡酸、斑螯黃質、α-胡蘿蔔素、β-胡蘿蔔素、β-阿蔔-胡蘿蔔酸、鼠尾草酚、香旱芹酚、兒茶素、沒食子酸鯨蠟酯、綠原酸、檸檬酸及其鹽、丁香提取物、咖啡豆提取物、對香豆酸、3,4-二氫苯甲酸、N,N’-二苯基-對苯二胺(DPPD)、硫代二丙酸二月桂酯、硫代二丙酸二硬脂醇酯、2,6-二第三丁基苯酚、沒食子酸十二烷基酯、依地酸(edetic acid)、鞣花 酸、異抗壞血酸、異抗壞血酸鈉、七葉樹素、七葉苷、6-乙氧基-1,2-二氫-2,2,4-三甲基喹啉(乙氧喹)、沒食子酸乙酯、乙基麥芽酚、乙二胺四乙酸(EDTA)、桉樹提取物、丁香酚、阿魏酸(ferulic acid)、類黃酮(例如，兒茶素、表兒茶素、表兒茶素沒食子酸酯、表沒食子兒茶素(EGC)、表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)、多酚表沒食子兒茶素-3-沒食子酸酯)、黃酮(例如，芹菜配質(apigenin)、金黃酮(chrysin)、木犀草素(luteolin))、黃酮醇(例如，橡精(datiscetin)、楊梅黃酮(myricetin)、山茶酚(daemfero))、黃烷酮、涔皮素(fraxetin)、延胡索酸、沒食子酸、龍膽提取物、葡萄糖酸、甘胺酸、愈創木脂、橘皮苷素、α-羥苄基膦酸、羥基桂皮酸、羥基戊二酸、氫醌、n-羥基琥珀酸、羥基酪醇、羥基脲、米糠提取物、乳酸及其鹽、蛋磷脂、蛋磷脂檸檬酸鹽；r-α-類脂酸、黃體素、番茄紅素、蘋果酸、麥芽酚、5-甲氧基色胺、沒食子酸甲酯、檸檬酸一甘油酯；檸檬酸單異丙酯；桑色素、β-萘黃酮、去甲二氫愈創木酸(NDGA)、沒食子酸辛酯、草酸、檸檬酸棕櫚基酯、啡噻、磷脂醯膽鹼、磷酸、磷酸酯、植酸、葉綠素重鉻酸酯、甜椒提取物、沒食子酸丙酯、聚磷酸酯、槲皮素、反式-白藜蘆醇、迷迭香提取物、迷迭香酸、鼠尾草提取物、芝麻酚、水飛薊素、芥子酸、琥珀酸、檸檬酸硬脂基酯、丁香酸、酒石酸、瑞香草酚、生育酚(即，α-、β-、γ-及δ-生育酚)、生育三烯酚(即，α-、β-、γ-及δ-生育三烯酚)、酪醇、香草酸、2,6-二第三丁基-4-羥甲基苯酚(即，Ionox 100)、2,4-(叁-3’,5’-二第三丁基-4’-羥苄基)-均三甲苯(即，Ionox 330)、2,4,5-三羥基丁酸酚酮、泛醌、第三丁基氫醌(TBHQ)、硫二丙酸、三羥基丁酸酚酮、色胺、酪胺、尿酸、維生素K及衍生物、維生素Q10、小麥胚芽油、玉米黃素或其組合。

實例性抗氧化劑可包括合成經取代酚類化合物，例如第三丁基氫醌(TBHQ)、丁羥基甲氧苯(BHA)或二丁羥基甲苯(BHT)；6-乙氧基- 1,2-二氫-2,2,4-三甲基喹啉(乙氧喹)；沒食子酸衍生物，例如沒食子酸正丙酯；維生素C衍生物，例如抗壞血酸棕櫚酸酯；蛋磷脂；及維生素E化合物，例如α-生育酚。

本發明組合物可包含至少一種抗氧化劑。在一些實施例中，本發明組合物可包含一種以上抗氧化劑。藉由以此方式調配抗氧化劑組合，眾多種脂肪源(包括不飽和脂肪酸相對較高之脂肪源)可與本發明組合物一起用於(例如)動物飼量或水源中。

(f)其他組份

在某些實施例中，本發明組合物可包含其他組份，例如載劑、防腐劑、自由流動助劑等。在某些實施例中，本發明組合物可包含自由流動助劑。適宜自由流動助劑為業內已知，且可包含(例如)硬脂酸鹽、SiO₂及/或滑石粉。在一些實施例中，自由流動助劑可以以總組合物重量計0%至15%之量存在，更佳地，自由流動助劑之量介於3%與15%之間，或介於5%與10%之間。類似地，本發明組合物可包含防腐劑。適宜防腐劑為業內已知。在其他實施例中，組合物可包含乳化劑。適宜乳化劑可包含(例如)源自丙二醇或聚乙二醇蓖麻油酸酯(E-484)之非離子型乳化劑。

(g)實例性實施例

在實例性實施例中，本發明組合物源自萬壽菊含油樹脂。在另一實例性實施例中，本發明組合物中90%之葉黃素粒子小於0.5微米，最終肥皂產物含有至少約75mg葉黃素/克肥皂，且80%之非酯化葉黃素係全反式異構物。在另一實例性實施例中，本發明組合物包含乙氧喹。在另一實例性實施例中，在室溫下在透氧袋中儲存一個月後，保留98%之初始存在之葉黃素。

在另一實例性實施例中，本發明粉末組合物包含介於約70%至約99%之間之萬壽菊肥皂、介於約0%至約15%之間之自由流動助劑、介 於約0.1%至約3%之間之金屬氫氧化物、介於約0.1%至約2%之間之水分及約0%至約1%之抗氧化劑(例如乙氧喹)。

在另一實例性實施例中，本發明粉末組合物包含介於約75%至約95%之間之萬壽菊肥皂、介於約0%至約15%之間之自由流動助劑及介於約0%至約8%之間之硬脂酸。

在另一實例性實施例中，本發明粉末組合物包含介於約75%至約95%之間之萬壽菊肥皂、介於約0%至約15%之間之SiO₂及介於約0%至約8%之間之硬脂酸。

在另一實例性實施例中，本發明粉末組合物包含介於約75%至約95%之間之萬壽菊肥皂、介於約0%至約15%之間之滑石粉及介於約0%至約8%之間之硬脂酸。

在另一實例性實施例中，本發明粉末組合物包含介於約75%至約95%之間之萬壽菊肥皂、介於約0%至約6%之間之SiO₂、介於約2%至約10%之間之滑石粉及介於約0%至約8%之間之硬脂酸。

在一些實例性實施例中，本發明液體組合物包含介於約5%至約25%之間之萬壽菊肥皂、介於約0%至約0.6%之間之抗氧化劑(例如乙氧喹)、介於約0%至約1%之間之乳化劑及介於約82%至約89%之間之水。在另一實例性實施例中，本發明液體組合物包含介於0.5%與3%之間之葉黃素、介於約0%至約0.6%之間之抗氧化劑(例如乙氧喹)、介於約0%至約1%之間之乳化劑及介於約82%至約89%之間之水。

在其他實例性實施例中，本發明液體組合物包含介於約5%至約25%之間之萬壽菊肥皂、介於約0%至約0.6%之間之抗氧化劑(例如乙氧喹)、介於約0%至約1%之間之聚乙二醇蓖麻油酸甘油酯(E-484)及介於約82%至約89%之間之水。在另一實例性實施例中，本發明液體組合物包含介於約0至約3%之間之葉黃素、介於約0%至約0.6%之間之抗氧化劑(例如乙氧喹)、介於約0%至約1%之間之聚乙二醇蓖麻油酸 甘油酯(E-484)及介於約82%至約89%之間之水。

II. 飼量

本發明之另一態樣涵蓋動物飼料。本發明動物飼料包含如上文章節I中所詳述之組合物。動物飼料組合物之確切配方對於本發明無關緊要。飼料成份係根據意欲使用飼料之具體動物之營養素需求來選擇；該等需求尤其取決於動物之年齡及發育期、動物之性別及其他因素。基於飼料成份之組成及其在調配飲食中之使用，可將該等飼料成份分為八個類別：乾燥草料與粗料(dry forages and roughages)；青綠飼料(pasture,range plants and forages fed fresh)；青貯料；能量飼料；蛋白質補充料；礦物補充料；維生素補充料；及添加劑。參見國立研究理事會(美國)飼料組合物附屬委員會(National Research Council(U.S.)Subcommittee on Feed Composition)，美國-加拿大飼料組合物成份表(United States-Canadian Tables of Feed Composition)，第3修訂版，National Academy Press，第2頁，145(1982)。該等類別在一定程度上係任意的，此乃因一些飼料成份可歸類為一種以上類別。通常，飼料調配物亦將取決於與每種成份相關之成本，且給予所需營養素之最便宜的成份組合物係較佳調配物。

作為非限制性實例，在一個實施例中，調配用於家禽之動物飼量。如上所述，飼料調配物部分取決於所飼餵動物之年齡及發育期。Leeson及Summers(Nutrition of the Chicken，第4版，第502-510頁，University Books,2001)闡述若干種用於新母雞、產蛋雞、肉雞及肉種雞之代表性家禽飲食。舉例而言，大多數雞飲食含有能量濃縮物，例如玉米、燕麥、小麥、大麥或高粱；蛋白質源，例如大豆粉、其他油籽粉(例如，花生、芝麻、紅花、向日葵等)、棉籽粉、動物蛋白質源(肉骨粉、乳清粉、魚粉等)、穀粒用豆類(例如，乾豆、豌豆等)及苜蓿草；以及(若需要)維生素及礦物補充料(例如，肉骨粉富含鈣及磷， 且因此在含有肉骨粉之飼量中無需補充該等礦物)。

在另一實施例中，調配用於豬之動物飼量。用於仔豬、生長及肥育豬、母豬培育、懷孕母豬及泌乳母豬之飼料調配物將各不相同。豬飼料調配物通常包含穀物(例如，玉米、大麥、穀粒用高粱、燕麥、大豆、小麥等)、粗蛋白質(例如，魚粉、麩粉、肉粉、大豆粉、廢肉渣(其係在屠宰場中熬煉脂肪後剩餘之殘餘物)等)、粗脂肪(例如，魚油、植物油、動物脂肪、黃油脂等)、補充胺基酸(例如，離胺酸、甲硫胺酸或甲硫胺酸類似物等)、維生素、礦物及其他補充劑。

在另一實施例中，調配用於水生動物(例如在水產養殖飼料中)之動物飼量。如熟練水產業者可瞭解，飼料調配物取決於所培養之生物及該生物之發育期。典型水產養殖製劑含有能量源，例如來自動物血粉、肉骨粉、禽肉粉、蟹粉、魚粉、蝦粉、烏賊粉及磷蝦之蛋白質；蛋白質/碳水化合物來自植物(例如，藻酸鹽、菜籽、玉米、玉米麩、棉籽粉、海帶粉、糖蜜、豆類、花生粉、稻、大豆、大豆蛋白濃縮物、大豆粉、小麥及小麥麩)；及油(例如，魚油、植物油)。飼料製劑可進一步補充有胺基酸(例如，精胺酸、組胺酸、異白胺酸、離胺酸、甲硫胺酸、苯丙胺酸、蘇胺酸、色胺酸及纈胺酸)；維生素、礦物及其他補充劑。

在另一實施例中，調配用於反芻動物之動物飼量。已量測多種常用反芻動物飼料成份之營養素及能量含量且公眾可獲得。國立研究理事會已出版含有常用反芻動物飼料成份表及其所量測各別營養素及能量含量之書籍。另外，提供根據牛體重對生長及肥育牛之營養素及維持能量需求之估計。國家科學院(National Academy of Sciences)，Nutrient Requirements of Beef Cattle，附錄表1-19，192-214,National Academy Press,(2000)；Nutrient Requirements of Dairy Cattle(2001)，其各自全文併入本文中。熟習此項技術者可利用此資訊來估 計具有非功能性瘤胃之牛(例如體重低於約500lb之幼仔)或具有功能性瘤胃之牛(例如生長牛或乳牛)之營養及維持能量需求。

(a)其他成份

可以飼料預混料或飼料補充料形式向動物提供本發明組合物。一般會將預混料添加至穀物濃縮物與芻料之不同調配物中以調配總動物飼量。如熟習此項技術者可瞭解，具體預混料調配物可能且將端視飼量及將被飼餵該飼量之動物而變化。除了本發明組合以外，預混料可進一步視情況包括以下中之一或多者：天然胺基酸之混合物、天然胺基酸之類似物、維生素及其衍生物、酶、動物藥物、激素、有效微生物、防腐劑及香料。

在一個實施例中，飼料預混料可包括一或多種胺基酸。胺基酸之適宜實例端視調配物可包括丙胺酸、精胺酸、天冬醯胺、天冬胺酸酯、半胱胺酸、麩胺酸酯、麩醯胺酸、甘胺酸、組胺酸、異白胺酸、白胺酸、離胺酸、甲硫胺酸、苯丙胺酸、脯氨酸、絲胺酸、蘇胺酸、色胺酸、酪胺酸及纈胺酸。作為非限制性實例，可用作飼料添加劑之其他胺基酸包括N-醯基胺基酸、羥基同系物化合物及其生理上可接受之鹽，例如胺基酸之鹽酸鹽、硫酸氫鹽、銨鹽、鉀鹽、鈣鹽、鎂鹽及鈉鹽。

在另一實施例中，飼料預混料可包括維生素或維生素之衍生物。適宜維生素及其衍生物之實例可包括維生素A、維生素A棕櫚酸酯、維生素A乙酸酯、β-胡蘿蔔素、維生素D(例如，D₂、D₃及D₄)、維生素E、甲萘醌亞硫酸氫鈉、維生素B(例如，噻胺、噻胺鹽酸鹽、核黃素、菸鹼酸、菸醯胺、泛酸鈣、泛酸膽鹼、鹽酸吡多醇、氰鈷胺、生物素、葉酸、對胺基苯甲酸)、維生素K、維生素Q、維生素F及維生素C。

在另一實施例中，飼料預混料可包括一或多種酶。酶之適宜實 例可包括蛋白酶、澱粉酶、脂肪酶、纖維素酶、木聚糖酶、聚葡萄糖酶、果膠酶、植酸酶、半纖維素酶及其他生理有效酶。

在另一實施例中，飼料預混料可包括批准用於動物之藥物。適宜動物藥物之非限制性實例可包括抗生素，例如四環素型(例如，氯四環素及氧四環素)、胺糖型、離子載體(例如，莫納菌素鈉(rumensin)、維吉尼亞菌素(virginiamycin)及班貝黴素(bambermycin))及大環內酯型抗生素。

在另一實施例中，飼料預混料可包括激素。適宜激素可包括雌性素、二苯乙烯雌酚、己雌酚、甲狀腺蛋白質、糖皮質激素、胰島素、升糖素、胃泌素、降血鈣素、生長激素及高伊特素(goitradien)。

在另一實施例中，飼料預混料可包括提高飼量適口性之物質。該等物質之適宜實例可包括天然甜味劑(例如糖蜜)及人工甜味劑(例如糖精及阿斯巴甜(aspartame))。

如熟習此項技術者可瞭解，可包括在包含本發明組合物之預混料中之該等物質中之任一者可單獨使用或彼此組合使用。該等添加劑之濃度將取決於意欲使用預混料之動物及期望結果。

(b)封裝

在另一實施例中，將產物封裝。如本文所用經封裝組合物係已被包裝於材料中之組合物。在多種情形中，封裝提供針對光、熱、氧及水分降解之保護。封裝亦可在特定條件下提供釋放或在活性成份到達消化系統中可吸收其之點之前防止其降解。在一些情況下，封裝係藉由噴塗或噴霧乾燥、擠出、一般涉及迫使熔化壁材料中之核心材料通過模具進入乾燥劑液體浴中之塗佈來提供。在接觸液體後，塗佈材料硬化形成外部封裝。在一些情況中，封裝可使用(例如)環糊精藉由包容錯合或分子包容來提供。在另一實例中，封裝可藉由凝聚、乳液相分離或脂質體包封來提供。在另一實例性實施例中，不封裝產物。

III. 製程

在另一態樣中，本發明涵蓋用於產生非酯化類胡蘿蔔素濃度大於10%之最終肥皂產物之連續製程。該製程包含(a)含有類胡蘿蔔素之天然含油樹脂之鹼皂化，其中該皂化係在金屬氫氧化物存在下在充分混合下進行，且在介於約110℃至約180℃之間之溫度下進行，產生包含非酯化類胡蘿蔔素之肥皂，(b)步驟(a)之肥皂之霧化，及(c)非酯化類胡蘿蔔素之異構化，其中加熱該霧化肥皂以使得大於80%或更多之非酯化類胡蘿蔔素以全反式異構物構型存於該肥皂中，且終產物之非酯化類胡蘿蔔素濃度大於10%。在某些實施例中，亦乾燥肥皂。例如，可在霧化期間、在霧化後、在異構化之前、在異構化期間、在異構化後或其組合實施乾燥。

(a)鹼皂化

該製程包含含有類胡蘿蔔素之天然含油樹脂之鹼皂化，其中該皂化係在金屬氫氧化物存在下在充分混合下進行，且在介於約110℃至約180℃之間之溫度下進行，產生包含非酯化類胡蘿蔔素之肥皂組合物。經由此製程，發現於含有類胡蘿蔔素之天然含油樹脂中之最初經由酯部分結合至脂肪酸之類胡蘿蔔素可藉由水解或自脂肪酸部分去酯化來釋放。從而產生非酯化類胡蘿蔔素，或在肥皂內類胡蘿蔔素不再作為脂肪酯經結合。

i. 含有類胡蘿蔔素之天然含油樹脂

將欲皂化之含有類胡蘿蔔素之天然含油樹脂進給至連續流動裝置中。端視如何自植物提取含有類胡蘿蔔素之天然含油樹脂，適宜含油樹脂可100%不含溶劑(例如超臨界萃取)或含有痕量溶劑(例如揮發性有機溶劑，包括(但不限於)丁烷及己烷)。在一些實施例中，含有類胡蘿蔔素之天然含油樹脂係自供應商購得。含有類胡蘿蔔素之天然含油樹脂可含有如所購得之抗氧化劑，或可將抗氧化劑與含有類胡蘿蔔 素之天然含油樹脂混合。在一些實施例中，在製程之前將表面活性劑、溶劑或自由流動助劑與含有類胡蘿蔔素之天然含油樹脂混合。

ii. 抗氧化劑

在一些實施例中，另外將抗氧化劑作為添加成份或作為與另一試劑(例如含油樹脂)之預混料引入連續流動裝置中。適宜抗氧化劑可包括(但不限於)彼等上文章節I(e)中所列示者。

抗氧化劑可以以重量計介於約0.25%與約5%之間之量提供至含有類胡蘿蔔素之天然含油樹脂。在一些實施例中，抗氧化劑可以以重量計0.25%、約0.5%、約0.75%、約1%、約2%、約3%、約4%或約5%之量提供至含有類胡蘿蔔素之天然含油樹脂。在一個較佳實施例中，抗氧化劑係以重量計3%之量提供至含有類胡蘿蔔素之天然含油樹脂。抗氧化劑可以與含有類胡蘿蔔素之天然含油樹脂之預混料提供，或可分開提供。

iii. 質子受體

皂化在質子受體或可為鹼試劑之強鹼存在下進行。在一些實施例中，皂化係在金屬氫氧化物存在下達成。適宜金屬氫氧化物包括(但不限於)氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化鈣及氫氧化鎂。在一個較佳實施例中，質子受體係氫氧化鉀。

金屬氫氧化物一般存於較佳係水性溶液之溶液中。在一些實施例中，金屬氫氧化物溶液介於約10%至約70%範圍內，或在其他實施例中，該溶液介於約20%至約60%範圍內。在其他實施例中，金屬氫氧化物係以約10%溶液、約20%溶液、約30%溶液、約40%溶液、約50%溶液、約60%溶液或約70%溶液存在。在一個較佳實施例中，金屬氫氧化物係氫氧化鉀之50%水性溶液。

含有類胡蘿蔔素之天然含油樹脂對金屬氫氧化物之比率在替代性實施例中可能且將變化，且可受金屬氫氧化物之濃度及連續流動裝 置中之引入速率的影響。在一些實施例中，金屬氫氧化物溶液對含有類胡蘿蔔素之天然含油樹脂之比率係以重量計約10%至約50%，或更佳約28%至約30%。在一些實施例中，金屬氫氧化物溶液對含有類胡蘿蔔素之天然含油樹脂之比率係以重量計約10%、約15%、約20%、約25%、約30%、約35%、約40%、約45%或約50%。

iv. 溫度

向皂化步驟提供熱量以促進反應。一般而言，溫度可介於約110℃至約180℃範圍內。可藉由與連續流動裝置相連之加熱器件來提供熱量。可將該等器件設定為溫度介於約110℃至約120℃、約115℃至約125℃、約120℃至約130℃、約125℃至約135℃、約130℃至約140℃、約135℃至約145℃、約140℃至約150℃、約145℃至約155℃、約150℃至約160℃、約165℃至約175℃、約170℃至約180℃範圍內。在一個較佳實施例中，藉由包圍連續流動裝置之設定至約140℃之夾套器件提供加熱。

v. 預加熱

在一個實施例中，在接觸之前預加熱含有質子受體、含有類胡蘿蔔素之天然含油樹脂或二者之溶液。試劑可在進入連續流動裝置之前在試劑容器中預加熱，或可在連續流動裝置中在兩種試劑接觸之前加熱。可藉由多種來源(包括經由傳導或對流)提供加熱。實例性加熱源包括加熱夾套、熱交換器及諸如此類。

較佳地，將含有類胡蘿蔔素之天然含油樹脂在進入連續流動裝置中之前預加熱並維持在試劑容器中。在該等實施例中，經加熱之含有類胡蘿蔔素之天然含油樹脂在連續流動裝置中展現增強之流動性及泵送性。可將含有類胡蘿蔔素之天然含油樹脂維持在介於約50℃至約70℃範圍內之溫度下。在某些實施例中，將含有類胡蘿蔔素之天然含油樹脂加熱至約50℃、約55℃、約60℃、約65℃或約70℃之溫度。在 一個較佳實施例中，將含有類胡蘿蔔素之天然含油樹脂在引入連續流動裝置中之前加熱至約60℃溫度。

可將質子受體在與含有類胡蘿蔔素之天然含油樹脂接觸之前預加熱。可將金屬氫氧化物加熱至介於約60℃至約150℃範圍內之溫度。更佳地，將金屬氫氧化物加熱至大約介於約80℃至約90℃範圍內之溫度。在替代性實施例中，將金屬氫氧化物加熱至約75℃、約80℃、約85℃或約90℃之溫度。在一個較佳實施例中，在連續流動裝置內藉由板式熱交換器將金屬氫氧化物加熱至90℃溫度。

vi. 充分混合

皂化步驟包含充分混合。如本文所用充分混合係指高剪切混合、勻漿(例如經由勻漿器(包括轉子-定子型勻漿器、高壓勻漿器))、音波處理或經由超音波處理。在一個較佳實施例中，混合係藉由連續流動裝置內之高剪切混合器來提供。在一些實施例中，充分混合係與其他種類之混合(例如靜態混合)組合提供。

(b)霧化

製程進一步包含使步驟(a)中產生之非酯化類胡蘿蔔素肥皂霧化之步驟。霧化方法為業內已知。舉例而言，霧化步驟可經由將步驟(a)中產生之包含非酯化類胡蘿蔔素之產物經由噴嘴或旋轉盤噴霧至噴霧室中來達成。亦可將氣流以相對於噴霧流動方向之逆流或並流引入霧化室中。隨著來自(a)之液體產物釋放，含有非酯化類胡蘿蔔素之肥皂組合物以小液滴形式分佈至氣流中。藉由該氣體乾燥或冷卻所噴霧液滴。氣體可為大氣或選自氬、氮及其組合之惰性氣體。在一些實施例中，使用氣流來遞送另一自由流動助劑，該自由流動助劑在霧化肥皂液滴通過霧化器時分佈於該等液滴之間。

i. 溫度

進行霧化之溫度可介於約15℃至約100℃範圍內。更佳地，霧化 器內之溫度介於約30℃至約80℃範圍內。在替代性實施例中，霧化器內之溫度係約45℃、約55℃、約65℃或約75℃。在一個較佳實施例中，霧化器中之溫度係約50℃。

ii. 自由流動助劑

可使用自由流動助劑來增強最終肥皂產物之流動性。可在霧化期間經由霧化器中之氣流引入自由流動助劑。自由流動助劑可選業內已知之自自由流動助劑。適宜實例可包括(但不限於)磷酸三鈣、纖維素粉末、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、碳酸氫鈉、亞鐵氰化鈉、亞鐵氰化鈣、亞鐵氰化鉀、骨質磷酸鹽、矽酸鈉、二氧化矽、矽酸鈣、三矽酸鎂、滑石粉、矽酸鋁鈉、矽酸鋁鉀、鋁矽酸鈣、膨土、矽酸鋁、硬脂酸、聚二甲基矽氧烷、葡萄糖、麥芽糊精、疏水改性澱粉及諸如此類。在一個較佳實施例中，自由流動助劑係二氧化矽。在另一較佳實施例中，自由流動助劑係滑石粉。

所添加自由流動助劑之量可介於最終肥皂產物之重量之約3%至約15%範圍內，或更佳為約5%至約10%。在一些實施例中，自由流動助劑係最終肥皂產物之重量之約0.5%、約1%、約1.5%、約2%、約2.5%、約3%、約4%、約5%、約6%、約7%、約8%、約9%、約10%、約11%、約12%、約13%或約14%或約15%。

iii. 水分含量

霧化器可降低離開霧化器之產物之水分含量。在某些實施例中，霧化後產物之水分含量介於約5%與約15%之間，更佳介於約10%與約13%之間。在某些實施例中，離開霧化器之產物之水分含量係約5%、約6%、約7%、約8%、約9%、約10%、約11%、約12%、約13%、約14%或約15%。

(c)異構化

連續流動製程進一步包含非酯化類胡蘿蔔素之異構化，其中加 熱該霧化肥皂以使得大於80%之所存在非酯化類胡蘿蔔素呈全反式異構物構型，且終產物之非酯化類胡蘿蔔素濃度大於10%。

異構化將順式-葉黃素轉換為全反式異構物且一般係用熱學加熱來達成。可以多種方式向產物提供熱學加熱，包括經由流化床乾燥器、加熱振動運送器、烘箱或熱處理器來提供。

實施異構化之溫度可能且將在不同實施例中及在異構化步驟過程中變化。溫度可介於約40℃至約120℃範圍內。在一些實施例中，異構化步驟可在介於約75℃至約80℃、約80℃至約85℃、約85℃至約90℃、約90℃至約95℃、約95℃至約100℃或約100℃至約105℃範圍內之溫度下實施。

異構化可經約1小時至約48小時之時間段實施。在一些實施例中，異構化係經約1小時、約2小時、約3小時、約4小時、約5小時、約6小時、約7小時、約8小時、約9小時、約10小時、約11小時、約12小時、約13小時、約14小時、約15小時、約16小時、約17小時、約18小時、約19小時、約20小時、約21小時、約22小時、約23小時或約24小時之時間段實施。在一個實施例中，異構化在介於約75℃與約95℃之間之溫度下經介於約1小時至約3小時範圍內之時段進行。

在一些實施例中，異構化可在一個以上溫度階段中進行。異構化可在約40℃至約60℃之第一溫度範圍下實施。不受限於任何理論，認為第一溫度範圍下之熱接觸可將水分含量降低約2%至約5%。可將第一溫度維持約15分鐘至約2小時之時段。使用第二溫度範圍來提高全反式異構物含量。第二溫度範圍可介於約70℃至約90℃範圍內且可將第二溫度維持介於約30分鐘至約3小時範圍內之時段。在一個較佳實施例中，異構化係在約50℃之第一溫度下實施約30分鐘且在80℃之第二溫度下實施約1.5小時。在替代性實施例中，溫度在反應過程期間自介於約40℃至約60℃範圍內之較低溫度升高至介於約70℃至約90 ℃範圍內之較高溫度。

在一些實施例中，異構化在惰性氣氛下進行。作為非限制性實例，惰性氣氛可選自氬、氮或其組合。在一個較佳實施例中，異構化係在氮氣存在下實施。

在一些實施例中，在霧化後大於70%所存在之非酯化類胡蘿蔔素係全反式異構物。在其他實施例中，大於75%或80%或85%或90%之類胡蘿蔔素被轉換為全反式異構物。異構化步驟可增加最終肥皂產物之全反式類胡蘿蔔素總含量。異構化可將全反式類胡蘿蔔素含量增加最終肥皂產物之大於5%或大於10%或大於15%。在一個實施例中，最終肥皂產物之全反式類胡蘿蔔素總含量大於10%。

在異構化後，可將最終肥皂產物轉移至產物容器。最終肥皂產物具有章節I中闡述之性質。在一些實施例中，除了在霧化步驟期間添加之試劑以外，可在異構化後將諸如自由流動助劑等其他試劑添加至產物。

(d)連續流動裝置

製程係以連續流動方式在連續流動裝置中實施。「連續流動」意指，反應在反應器內在運動中進行，或隨著產生連續添加並取出起始材料及條件。連續流動裝置及相關設備之示意圖顯示於圖1中。儘管較佳方法係連續方法，但亦可能以不連續方式實施該方法。亦即，可中止該方法並在不同時間或在不同物理位置再開始。

參照圖1，可將第一試劑容器102內之金屬氫氧化物之第一溶液經由第一導管106傳導至第一靜態混合器112。可將第二試劑容器104內之包含含有類胡蘿蔔素之天然含油樹脂之第二溶液經由第二導管108轉移至第一靜態混合器112中。在一個實施例中，藉由熱轉移器件105加熱試劑容器104。熱轉移器件可選自(但不限於)電加熱器、感應加熱器、瓦斯加熱器、油加熱器、陶瓷加熱器及諸如此類，或更具體 而言選自板式熱交換器及管式熱交換器。在一個實施例中，在金屬氫氧化物通過連續流動裝置時使用熱轉移器件110來加熱該金屬氫氧化物。

導管106及108可為可控轉移幫浦，其將試劑自試劑容器穿過導管泵送至第一靜態混合器112。導管可為可控壓力幫浦，其將儲存於試劑容器內之試劑加壓至所選預定壓力以使該等試劑以期望轉移速率移出容器，及其任一組合。適合用作轉移幫浦之幫浦之非限制性實例包括齒輪幫浦、隔膜幫浦、離心幫浦、活塞幫浦及蠕動幫浦。在某些實施例中，導管係蠕動幫浦且除了連續流動裝置個部分之大小以外亦負責流速。

連續製程之流速在不同實施例中可變。具體而言，流速可端視生產需求及熟習此項技術者已知之其他因素而或高或低。在一些實施例中，流速可介於100kg/hr與300kg/hr範圍內，或為50kg/hr至250kg/hr或50kg/hr至300kg/hr。在一些實施例中，流速可介於約50kg/hr至約100kg/hr、約75kg/hr至約125kg/hr、約100kg/hr至約150kg/hr、約125kg/hr至約175kg/hr、約150kg/hr至約200kg/hr、約175kg/hr至約225kg/hr、約200kg/hr至約250kg/hr、約225kg/hr至約275kg/hr、約250kg/hr至約300kg/hr範圍內。在其他實施例中，流速可介於約100kg/hr至約200kg/hr、約150kg/hr至約250kg/hr、約200kg/hr至約300kg/hr範圍內。在較佳實施例中，流速介於約150kg/hr至約250kg/hr範圍內。

第一靜態混合器112連續接收試劑。第一靜態混合器一般為管形且可為直管、彎管或直管與彎管之組合。靜態混合器在管內含有多種元件，從而產生流動模式且使試劑在通過管時混合。該等元件可藉由(例如)產生層流或(例如)產生徑向混合來提供混合。第一靜態混合器之直徑及長度結合流速達成試劑之具體滯留時間。

在一些實施例中，第一靜態混合器之直徑為約20mm至約150mm。在一些實施例中，第一靜態混合器之直徑為約20mm至約30mm、約25mm至約35mm、約30mm至約40mm、約35mm至約45mm、約40mm至約50mm、約45mm至約55mm、約50mm至約60mm、約55mm至約65mm、約60mm至約70mm、約65mm至約75mm、約70mm至約80mm、約75mm至約85mm、約80mm至約90mm、約95mm至約105mm、約100mm至約110mm、約105mm至約115mm、約110mm至約120mm、約115mm至約125mm、約120mm至約130mm、約125mm至約135mm、約130mm至約140mm、約135mm至約145mm、約140mm至約150mm。在一個較佳實施例中，第一靜態混合器之直徑為50mm。

在一個實施例中，第一靜態混合器112連接至高剪切混合器116，其提供除了靜態混合器以外之充分混合。在一個實施例中，利用四葉片開槽圓柱定子。定子之大小可能且將端視其他參數而變化。葉片之每分鐘轉數(rpm)在不同實施例中可變。在一些實施例中，速度介於2000rpm至約3500rpm範圍內。在某些實施例中，速度為2000rpm、2100rpm、2200rpm、2300rpm、2400rpm、2500rpm、2600rpm、2700rpm、2800rpm、2900rpm、3000rpm、3100rpm、3200rpm、3300rpm、3400rpm或3500rpm。

高剪切混合器116可直接或藉助另一管道連接至第二靜態混合器118。倘若使用第二靜態混合器，則該第二靜態混合器118可為管形且可為直管、彎管或直管與彎管之組合。在一些實施例中，第二靜態混合器之直徑為約20mm至約200mm。在一些實施例中，第二靜態混合器之直徑為約20mm至約30mm、約25mm至約35mm、約30mm至約40mm、約35mm至約45mm、約40mm至約50mm、約45mm至約55mm、約50mm至約60mm、約55mm至約65mm、約60mm至約70 mm、約65mm至約75mm、約70mm至約80mm、約75mm至約85mm、約80mm至約90mm、約95mm至約105mm、約100mm至約110mm、約105mm至約115mm、約110mm至約120mm、約115mm至約125mm、約120mm至約130mm、約125mm至約135mm、約130mm至約140mm、約135mm至約145mm、約140mm至約150mm。在一個較佳實施例中，第二靜態混合器之直徑為125mm。

在靜態混合期間亦可藉由熱轉移器件控制溫度。在一些實施例中，第一及第二靜態混合器夾套有熱轉移器件以將通過液體維持在給定溫度下。

自引入試劑至第二靜態混合器末端之滯留時間可介於約30秒至約5分鐘範圍內，且部分取決於溫度。一般而言，對於較高溫度，需要較短滯留時間。類似地，對於較低溫度，需要較長滯留時間。在一些實施例中，滯留時間係約30秒、45秒、約1分鐘、約1.5分鐘、約2分鐘、約2.5分鐘、約3分鐘、約3.5分鐘、約4分鐘、約4.5分鐘或約5分鐘。在一個實施例中，滯留時間係約95秒。

第二靜態混合器直接或藉助另一管道連接至活塞流反應器120。活塞流反應器係可分為單獨隔室之管式反應器，每一隔室包含較小管式反應器。在一些實施例中，管式反應器包含四個管式反應器。在活塞流反應器內溫度受控。在一個實施例中，活塞流反應器經夾套至100℃以上溫度。在一個實施例中，活塞流反應器經夾套至介於約130℃至約150℃範圍內之溫度。在一個較佳實施例中，夾套溫度係約140℃。活塞流反應器較佳向上取向以使得管式裝置引導之垂直於地面之試劑流動長於平行於地面取向之試劑。在活塞流反應器中之滯留時間可能且將變化，較佳為約5分鐘至約10分鐘。在具體實施例中，在活塞流反應器中之滯留時間為5分鐘、6分鐘、7分鐘、8分鐘、9分鐘或10分鐘。在一個較佳實施例中，滯留時間為8分鐘。

連續流動裝置內之壓力可經由氣壓感測器件及沿連續流動裝置發現之一或多個閥124來調節。該等閥可釋放地對連續流動裝置周圍之環境密封。在壓力達到臨限值時，該等閥可開啟以將氣體釋放至連續流動裝置周圍之環境中。在較佳實施例中，閥124定位於霧化器122之前。

霧化器122可包含旋轉圓盤用於自活塞流反應器引入產物。該盤之旋轉可產生液體噴霧。在旋轉盤附近，可存在一或多個鼓風機以使得氣體與噴霧液體在移動經過霧化室時接觸。此時，含有非酯化類胡蘿蔔素之液體產物可發生乾燥及/或固化。在一些實施例中，一或多個鼓風機可含有來自自由流動助劑容器128之自由流動助劑流。可將自由流動助劑另外吹至室中以使得在其移動經過連續流動裝置時其與噴霧產物接觸而形成含有自由流動助劑之乾燥產物。

可將液體產物以介於約100kg/hr至約300kg/小時、或約50kg/hr至約250kg/hr、或約150kg/hr至250kg/小時範圍內之進給速率引入霧化器。在一些實施例中，進給速率可介於約50kg/hr至約100kg/hr、約75kg/hr至約125kg/hr、約100kg/hr至約150kg/hr、約125kg/hr至約175kg/hr、約150kg/hr至約200kg/hr、約175kg/hr至約225kg/hr、約200kg/hr至約250kg/hr、約225kg/hr至約275kg/hr、約250kg/hr至約300kg/hr範圍內。在其他實施例中，流速可介於約100kg/hr至約200kg/hr、約150kg/hr至約250kg/hr、約200kg/hr至約300kg/hr範圍內。在較佳實施例中，進給速率係約150kg/hr。

在一些實施例中，進給至霧化器之旋轉盤之速度為約10,000rpm至約30,000rpm，或更佳約20,000rpm至約25,000rpm。在具體實施例中，旋轉盤進給係約20,000rpm、約21,000rpm、約22,000rpm、約23,000rpm、約24,000rpm或約25,000rpm。

在霧化器中之滯留時間可能且將在各個實施例之間變化。在一 個實施例中，平均滯留時間將介於約10秒與約14秒範圍內。在其他實施例中，平均滯留時間係約10秒、約11秒、約12秒、約13秒及約14秒。

霧化器之室尺寸可介於約2000mm至約2500mm之直徑範圍內。在替代性實施例中，霧化器之室尺寸可介於約2200mm至約2400mm範圍內。在一個較佳實施例中，霧化器之室尺寸係約2300mm。

引入霧化器中之氣體係以具體流速引入。此流速可介於約2500m³/小時至約3500m³/小時範圍內。在一些實施例中，引入霧化器中之氣體之流速介於約2900m³/小時與3100m³/小時範圍內。在較佳實施例中，流速係約3000m³/小時。

霧化器直接或藉助一系列管連接至異構化裝置126。將試劑自霧化器122進給至異構化裝置126。異構化裝置可為密閉槽，且槽內具有一系列旋轉圓形托盤。將試劑進給至頂部旋轉托盤，其中其他旋轉托盤位於頂部旋轉托盤正下方。在每次旋轉後，產物滴落至下一托盤上且在托盤旋轉時藉由靜止擋板整平。可將密閉槽加熱至某一溫度且其可另外具有流動氣體。

可將試劑自異構化裝置進給至產物容器130。產物容器之大小及組態可接收來自連續流動裝置之產物。在一些實施例中，產物容器連接至自由流動助劑容器128，其可視情況含有與霧化器122相同之自由流動助劑。可將自由流動助劑經由空氣流吹至產物容器130中以提高自由流動助劑之百分比。

連續流動裝置之各個組件可由多種適宜材料製成。材料之適宜實例可包括(但不限於)金屬(包括不銹鋼、黃銅)、玻璃(包括(但不限於)硼矽玻璃)及聚合物(包括(但不限於)氟化聚(乙烯)(FPE)、氟化乙烯聚(丙烯)(FEP)、高密度聚(乙烯)(HDPE)、聚(氯三氟乙烯)(PCT)、聚(醚醚酮)(PEEK)、聚(四氟乙烯)(PTFE)、聚(氟乙烯)(PVF)、過氟 烷氧基(PFA)聚合物及其組合或共聚物)。

(e)液體調配之可選製程

在一個替代性實施例中，該製程產生液體調配物。在該等實施例中，不實施霧化步驟(b)，而係如(c)中所述將步驟(a)中產生之產物異構化且隨後在水槽中驟冷。如章節(d)中所述且如圖1中所示之連續流動反應器可經修改以使得不存在霧化器且將異構化產物引導至水槽中，其中異構化產物於水中稀釋。

異構化產物對水之比率可能且將變化。在一些實施例中，介於約0.25%水溶液至約10%水溶液範圍內。在其他實施例中，溶液介於約0.5%水溶液至約5%水溶液範圍內。在一個較佳實施例中，溶液係約1%水溶液至約2%水溶液。

在一個實施例中，非酯化類胡蘿蔔素之異構化(其中加熱稀釋肥皂以使得大於80%之所存在非酯化類胡蘿蔔素呈全反式異構物構型)產生大於10%之最終肥皂產物之非酯化類胡蘿蔔素濃度。

在另一替代性實施例中，製程產生液體調配物。在該等實施例中，不實施霧化步驟(b)，而係將步驟(a)中產生之產物在水槽中驟冷且隨後如章節(c)中所述將其異構化。

Ⅳ. 使用本發明組合物之方法

可使用本發明組合物來提高各種物件(包括動物產物)之類胡蘿蔔素含量。該等方法包括提高色素沉著效率之方法。亦可使用本發明組合物來改良動物健康或表現。另外，可使用本發明組合物來幫助保存飼料組合物。下文更詳細地論述該等方法中之每一方法。

(a)提高物件類胡蘿蔔素含量之方法

可使用本發明組合物來提高物件之類胡蘿蔔素含量。舉例而言，可使用本發明組合物來提高動物飼料或動物補充料之類胡蘿蔔素含量。在該等實施例中，該方法包含將本發明組合物與動物飼料或動 物補充料組合。舉例而言，動物飼料或補充料可包含約100%、95%、90%、85%、80%、75%、70%、65%、60%、55%、50%、45%、40%、35%、30%、25%、20%、15%、10%或5%之動物飼料或動物補充料。

在一些實施例中，可將本發明組合物飼餵至動物以提高某些動物產物之類胡蘿蔔素含量。在該等實施例中，可將本發明組合物獨自或作為動物飼料或動物補充料之一部分飼餵至動物。舉例而言，可向家禽(或其他產蛋禽)飼餵單獨的或作為家禽飼料或補充料之一部分之本發明組合物，以提高蛋黃之類胡蘿蔔素含量或肉雞雞皮、雞爪或其他器官之類胡蘿蔔素含量。

欲投與動物以提高動物產物之類胡蘿蔔素含量之類胡蘿蔔素組合物之量可使用業內熟知之方法來確定。一般而言，該量可在介於約1mg葉黃素/kg完全飼料至約100mg葉黃素/kg完全飼料之間之範圍內。在一些實施例中，欲投與之類胡蘿蔔素組合物之量可為約1、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100或大於100mg葉黃素/kg飼料。在其他實施例中，該量可為約1、2、3、4、5、6、7、8、9或10mg葉黃素/kg完全飼料。

可使用本發明組合物來增加產物、尤其人類消耗之食品之色素沉著。舉例而言，可使用本發明組合物為蛋黃(多種禽)、人類消耗之某些動物肉(例如肉雞皮，或某些水產(包括魚)之肉(flesh)或肉(meat))或人類消耗之其他動物器官提供色素沉著。有利地，等量的本發明組合物之色素沉著效率高於其他類胡蘿蔔素肥皂組合物。舉例而言，與其他類胡蘿蔔素肥皂組合物相比，本發明組合物之色素沉著效率可增加大於90%、100%、110%、120%、130%、140%、150%、160%、170%、180%、190%或200%。在一些實施例中，與其他類胡蘿蔔素肥皂組合物相比，組合物之色素沉著效率可增加大於100%、105%、 110%、115%、120%、125%或130%。

在一個實施例中，將本發明組合物添加至家禽飲食。如熟習此項技術者可瞭解，每天飼餵量取決於大小及期望著色。在一些實施例中，產蛋雞飲食包括約2ppm本發明組合物、約3ppm、約4ppm、約5ppm、約6ppm、約7ppm或約8ppm。在另一實施例中，肉雞飲食含有約20ppm、約25ppm、約30ppm、約35ppm、約40ppm、約45ppm或約50ppm本發明組合物。

(b)改良動物健康及表現之方法

本發明另一態樣提供藉由向所關注動物提供本發明組合物來改良動物健康及表現之方法。熟習此項技術者應瞭解，向具體動物提供之組合物之量可能且將端視該動物之物種、性別及年齡而變化。此外，投與本發明組合物可影響多種健康及表現參數。

在一些實施例中，可將本發明組合物提供至家禽，例如產蛋雞、肉雞、火雞及鴨子。適宜健康參數之實例可包括(但不限於)體重、體態評分、體溫、攝食量、抗氧化狀態、氧化應力標記、血清蛋白質含量、血清礦物含量、免疫系統功能(免疫刺激)、腸微生物從之健康及多樣性、糞細菌、骨骼關節健康等。適宜表現參數之非限制性實例可包括增重、飼料：增重比、營養素消化率、飼料轉化比、產蛋量、蛋品質、蛋殼品質、蛋黃顏色、膚色、屠體品質、屠體產量、肉等級、肉產量、肉蛋白質脂肪比及諸如此類。

在一些實施例中，可將本發明組合物提供至乳用反芻動物，例如乳牛、乳綿羊及乳山羊。在較佳實施例中，乳用反芻動物係乳牛。欲評價之適宜健康參數之非限制性實例可包括體重、體態評分、體溫、攝食量、抗氧化狀態、氧化應力標記、血清蛋白質含量、血清礦物含量、免疫系統功能、瘤胃微生物從之健康及多樣性、糞細菌等。適宜表現參數可包括(但不限於)產乳量、產乳效率、乳脂、乳蛋白、 體細胞計數、FCM、ECM增重、飼料：增重比、營養素消化率、飼料轉化比、懷孕率、後代數、後代體重等。

在其他實施例中，可將本發明組合物飼餵至非乳用反芻動物，例如肉牛、小牛及羔羊。適宜健康參數之實例可包括(但不限於)體重、體態評分、體溫、攝食量、抗氧化狀態、氧化應力標記、血清蛋白質含量、血清礦物含量、免疫系統功能、瘤胃微生物從之健康及多樣性、糞細菌、骨骼關節健康等。適宜表現參數之非限制性實例可包括增重、飼料：增重比、營養素消化率、飼料轉化比、屠體品質、屠體產量、肉等級、肉產量、肉蛋白質脂肪比及諸如此類。

在其他實施例中，可將本發明組合物提供至豬；亦即母豬、仔豬、生長豬、肥育豬及公豬。健康參數之非限制性實例可包括體重、體態評分、體溫、攝食量、抗氧化狀態、氧化應力標記、血清蛋白質含量、血清礦物含量、免疫系統功能、腸微生物從之健康及多樣性、糞細菌、骨骼關節健康及諸如此類。適宜表現參數之實例可包括(但不限於)增重、飼料：增重比、營養素消化率、飼料轉化比、離乳發情間隔、生育率、後代數、後代體重、分娩率、離乳日齡、屠體品質、屠體產量、肉等級、肉產量、肉蛋白質脂肪比及諸如此類。

在其他實施例中，可將本發明組合物提供至馬。健康參數之非限制性實例可包括體重、體態評分、體溫、攝食量、抗氧化狀態、氧化應力標記、血清蛋白質含量、血清礦物含量、免疫系統功能、腸微生物從之健康及多樣性、糞細菌、骨骼關節健康及諸如此類。適宜表現參數之非限制性實例可包括增重、飼料：增重比、營養素消化率、飼料轉化比、步幅、跳躍距離、速度及諸如此類。

在其他實施例中，可將本發明組合物提供至水產養殖動物，例如魚、蝦、牡蠣、貽貝及諸如此類。適宜健康參數之實例可包括(但不限於)體重、體態評分、攝食量、抗氧化狀態、氧化應力標記、血 清蛋白質含量、血清礦物含量、免疫系統功能、腸微生物從之健康及多樣性、糞細菌等。適宜表現參數之非限制性實例可包括增重、飼料：增重比、營養素消化率、飼料轉化比、殼品質、屠體品質、屠體產量、肉等級、肉產量、肉蛋白質脂肪比及諸如此類。

在其他實施例中，可將本發明組合物飼餵至伴侶動物，例如貓、狗及諸如此類。適宜健康參數之實例可包括(但不限於)體重、體態評分、攝食量、抗氧化狀態、氧化應力標記、血清蛋白質含量、血清礦物含量、免疫系統功能、體溫、腸微生物從之健康及多樣性、糞細菌、骨骼關節健康等。適宜表現參數之非限制性實例可包括增重、飼料：增重比、營養素消化率、飼料轉化比、移動性、敏捷性、生活品質及諸如此類。

(c)保存方法

在其他實施例中，本發明涵蓋保存產物之方法。具體而言，該方法包含將本發明組合物添加至欲保存產物。此可藉由將本發明組合物直接添加至產物或藉助將本發明組合物飼餵至產物之來源動物來實施。舉例而言，在一個實施例中，本發明方法涵蓋保存動物飼料或補充料。該方法包含將動物飼料或補充料與本發明組合物組合。在另一實施例中，該方法包含使本發明組合物與欲保存產物接觸。

適宜量包括彼等詳述於上文章節IV(a)中者。

實例：

以下實例闡釋本發明之各種反覆。

實例1： 對產蛋雞之蛋黃顏色之效應

用籠中之產蛋母雞實施試驗以比較Xamacol 40(「X-40」)與本發明組合物(Xamacol ColorTek(「XCT」))相比對產蛋雞之蛋黃顏色之色素沉著效率。

試驗持續7週，包括飼餵「白色」基礎飲食之3週葉黃素耗盡， 及之後飼餵實驗飲食之4週。動物(168隻伊莎褐(Isa Brown)產蛋母雞，在試驗開始時係48週齡)自18週齡起已與相同籠中同伴位於試驗室中。在禽之3週葉黃素耗盡後，在飼餵「白色」基礎飲食的同時提供具有色素之實驗飼料。提供可隨意消耗之飼料及水。基礎飲食經調配以滿足或超過產蛋母雞之營養需求。單一基礎飲食係根據預期飼料消耗來調配。每一飼餵處理係自在多步混合方案中將相應量之產物添加至100kg飼料來製備。

總計7次飼餵處理(包括「白色」對照)。飼餵處理源自以相應劑量向基礎飲食添加實驗產物(添加產物X-40或XCT以提供4、6或9mg葉黃素/kg完全飼料)，設計中亦包括不添加色素之陰性對照。

在飼餵實驗飼料時每隔一週在每次重複時檢查並記錄表現變量(體重、飼料消耗、產蛋率、蛋重量、破蛋率、每日之軟殼蛋或髒蛋)。除了有兩天保留蛋用於葉黃素分析(22d及23d)以外，在葉黃素耗盡期結束時(-1d及0d)、在三週中每週(7d、14d、21d)及在第4週期間每日(24d至28d)評價蛋黃顏色。取每一天所產之所有蛋用於蛋黃顏色評價或葉黃素分析。

根據伊莎褐標準(2010)，本試驗之結果良好，其中產蛋率改良4.7%(90.6%對86.6%)，平均蛋重量減少1.6%(63.6g對64.6g)，飼料轉化比(FCR)改良6.0%(1.884對2.005)，且生產率改良3%(57.6g對55.9g)。色素效應之對比(X-40對XCT)對於蛋重量顯著(2.3%差異：62.92g對64.37g)。

對第4週之蛋的分析顯示顯著色素及劑量效應，且對於變量CIE(國際照明委員會(Commission Internationale de L'Eclairage))a*、比率CIE a*/b*及Roche蛋黃色扇(RYCF)具有顯著相互作用色素×劑量(指示線性回歸之斜率顯著不同)。對於每一劑量值，色素XCT具有優於色素X-40之變量CIE b*、比率CIE a*/b*及RYCF之值。明度對色素或劑 量之間之差異較不敏感。色素XCT具有高1.6點之平均黃度值(39.84對38.28)及高2點之截距值。對於CIE a*/b*及RYCF變量，色素XCT100之效率係色素X-40之117%。包括0ppm值之非線性回歸之結果提供類似結論：對於黃度值，色素XCT之效率係色素X-40之122%，且對於紅度/黃度比率及RYCF，色素XCT之效率係色素X-40之118%-119%。

蛋黃重量不受色素或劑量顯著影響，而蛋黃之葉黃素含量受兩個因素顯著影響，且具有分別表示為ppm或總含量之顯著或幾乎顯著之相互作用。該相互作用意指，對於色素XCT，蛋黃之葉黃素含量隨劑量增加較多：色素XCT之效率係色素X-40之137%-133%。針對產蛋率校正之沈積率受色素而非劑量顯著影響(相互作用不顯著)：色素XCT具有較色素X-40高0.63點之平均沈積率(3.28%對2.65%)，代表色素XCT之效率係色素X-40之124%。對於蛋黃著色，色素XCT之效率係色素X-40之約119%，對於蛋之葉黃素含量，色素XCT之效率係色素X-40之135%，且對於葉黃素沈積率，色素XCT之效率係色素X-40之124%。

實例2： 對產蛋雞之蛋黃顏色之效應

用籠中之產蛋母雞實施試驗以比較來自(X-40、XCT及競爭劑產物3(「C3」))之不同黃色色素對產蛋雞之蛋黃顏色之色素沉著效率。

試驗持續9週，包括飼餵「白色」基礎飲食之5週葉黃素耗盡，及之後飼餵實驗飲食之4週。動物(305隻海藍褐(HyLine Brown)產蛋母雞，在試驗開始時係23週齡)自18週齡起已與相同籠中同伴位於試驗室中。在禽之5週葉黃素耗盡後，在飼餵「白色」基礎飲食的同時提供具有色素之實驗飼料。提供可隨意消耗之飼料及水。基礎飲食經調配以滿足或超過產蛋母雞之營養需求(海藍(Hy-Line)，2009)。單一基礎飲食係根據預期飼料消耗來調配。每一飼餵處理係自在多步混合方案中將相應量之產物添加至64或74kg飼料來製備。

總計16次飼餵處理。飼餵處理源自以相應劑量向基礎飲食添加實驗產物(添加X-40或XCT以提供2.5、5、10、20、40及80mg葉黃素/kg完全飼料，或添加C3以提供2.5、5、10及20mg葉黃素/kg完全飼料)。

在飼餵實驗飼料時每隔一週在每次重複時檢查並記錄表現變量(體重、飼料消耗、產蛋率、蛋重量、破蛋率、每日之軟殼蛋或髒蛋)。除了有一天保留蛋用於葉黃素分析(25d)以外，在葉黃素耗盡期結束時(0d)、在三週中每週(7d、14d、21d)及在第4週期間每日(22d至28d)評價蛋黃顏色；在耗盡期後(-1d)亦實施葉黃素分析。取每一天所產之所有蛋用於蛋黃顏色評價或葉黃素分析。

對於在試驗開始或結束時之體重(BW)，或對於BW變化，在處理、色素或劑量之間未檢測到顯著差異。對於任一表現變量，未檢測到處理或相互作用處理×時段之顯著效應，不過對於處理之間之無銷路蛋之出現率除外，但該等差異與色素或劑量無關。

在飼餵實驗飲食一週後，蛋黃顏色幾乎達到其在試驗四週後獲得之最終值。在最高20ppm之X-40、XCT及C3之間及在最高80ppm之X-40與XCT之間，對於幾乎所有所研究變量，在所有週皆檢測到顯著差異；色素及劑量之間之相互作用亦顯著，表示在遞增劑量下色素之間之反應不同。

最高10或20ppm之所有三種色素之非線性回歸之比較得到類似結果，即對於黃度(121%至128%，在XCT與C3之間無差異：95%置信極限重疊)、紅度/黃度比率(XCT之效率係X-40之158%；C3之效率係X-40之117%至120%；即XCT較C3更有效，此乃因95%置信極限不重疊)及RYCF值(XCT之效率係X-40之159%至161%；C3之效率係X-40之117%至120%；即XCT較C3更有效，此乃因95%置信極限不重疊)，XCT及C3較X-40顯著更有效。在使用全劑量範圍(最高80ppm)來比較 X-40與XCT時，結果亦類似於使用較低包括值獲得者：對於黃度(122%)、紅度/黃度比率(165%)及RYCF值(157%)，XCT較X-40顯著更有效；以及紅度呈現具有生物學意義之回歸值，即XCT為159%，較X-40更有效。

XCT之蛋黃葉黃素濃度及含量及葉黃素沈積率顯著較高(即最高20ppm之X-40、XCT及C3之平均校正沈積率%分別為3.02、3.64及3.18；且最高80ppm之X-40及XCT分別為2.82及3.46)，但對於蛋黃中葉黃素之濃度、總含量及沈積(未校正或針對產蛋率校正)，在色素及劑量之間檢測到顯著相互作用。2.5ppm之Xamacol 40具有最高沈積率%，此乃因在此飲食中檢測到之總葉黃素與其他色素相比含量較低且因此攝入葉黃素較少，而並非係由於蛋黃中TX濃度較高。除了在2.5ppm下，在所有劑量下，Xamacol 40之沈積率皆低於其他色素。若所有色素之平均校正沈積率%之計算皆排除2.5ppm及最高20ppm之值，則X-40、XCT及C3之結果分別為2.52、3.54及3.17(比率100%、141%及126%)，且最高80ppm之X-40及XCT分別為2.48及3.36(比率100%及135%)。

蛋黃中之總葉黃素濃度及含量隨飲食中色素之劑量增加而增加，且該等反應可用線性回歸來調節。根據最高10ppm之所有色素之線性回歸之斜率比率，XCT與X-40相比之效率改良係約190%，而C3之改良未達到統計顯著性。在考慮最高20ppm之劑量時，XCT之改良為約170%且C3之改良為約147%。

僅考慮全劑量範圍(最高80ppm)之X-40及XCT時，斜率比率指示XCT之125%之對蛋葉黃素含量及葉黃素沈積率之效率改良。

Xamacol CT較X-40更有效。顏色變量之改良端視所研究變量而非比較中所包括之劑量範圍(最高10、20或80ppm)而變化；近似改良如下：黃度為125%，且紅度/黃度比率及RYCF為160%。蛋黃中總葉 黃素濃度及含量之改良為：最高劑量10ppm之190%，最高20ppm之170%，及最高80ppm之125%。對於不包括2.5ppm之值的平均校正沈積率%，改良為約137%。

競爭劑產物3較X-40更有效。顏色變量之改良端視所研究變量而非比較中所包括之劑量範圍(最高10或20ppm)而變；近似改良如下：黃度為125%，且紅度/黃度比率及RYCF為120%。蛋黃中總葉黃素濃度及含量之改良為最高劑量10ppm之139%(但不顯著)，及最高20ppm之147%。對於不包括2.5ppm之值的平均校正沈積率%，改良為約126%。

Xamacol CT較C3更有效。顏色變量之改良端視所研究變量而非比較中包括之劑量範圍(最高10或20ppm)而變；近似改良如下：紅度/黃度比率及RYCF為134%。蛋黃中總葉黃素濃度及含量之改良為最高劑量10ppm之137%(但不顯著)，及最高20ppm之117%(但不顯著)。

實例3： 對肉雞色素沉著之效應

實施飼餵試驗以比較來自萬壽菊之兩種不同黃色色素(X-40及XCT)在直至47日齡之肉雞色素沉著及表現中之色素沉著效能。使用總計1,078隻1至47日齡之羅斯(Ross)308 1日齡雌性雞，且將其隨機分配以供實驗處理。實驗設計完全隨機化有7次飲食處理：T1：基礎飲食(陰性對照)；T2：基礎飲食+產物X-40 30ppm；T3：基礎飲食+產物X-40 40ppm；T4：基礎飲食+產物X-40 50ppm；T5：基礎飲食+產物XCT 30ppm；T6：基礎飲食+產物XCT 40ppm；T7：基礎飲食+產物XCT 50ppm。將處理重複7次且係在生長期(22至35日齡)及肥育期(36至47日齡)期間提供。將動物飼養在畜欄中，每個畜欄22隻肉雞，放養密度類似於EU之商業實踐(30kg/m²)。

隨意飼餵粉料(雛雞)及粒狀(生長雞及肥育雞)飼料，且該等飼料係基於小麥及大豆粉，且不添加生長促進劑或獸用抗生素。自0至21 日飼餵雛雞飼料，自22至35日飼餵生長雞飼料，且自35至47日齡飼餵肥育雞飼料。在4日藉由飲用水投與Paracox疫苗且將球蟲預防劑添加至生長雞飲食。

觀察包括生長、體重、飼料攝入、飼料效率、EPEF(歐洲生產效率因子)、一般健康以及死亡率及淘汰百分比。同樣，在冷卻後在屠體上量測皮膚色素沉著。此外，評估股二頭肌之氧化(TBARs Technique)及腸組織學。

藉由統計分析軟體(SAS)之一般線性方法(GLM)根據完全隨機設計分析數據。在機率P0.05時表明顯著性，且在0.05<P0.10時表明接近顯著之趨勢。根據7次獨立處理且根據不包括陰性處理之複因子設計分析表現及膚色參數。亦藉由線性回歸對所攝取色素使用SAS 9.0版(SAS,2002)之GLM程序分析膚色參數，且藉由非線性回歸使用SAS 9.0版(SAS,2002)之NLIN程序將數據擬合至兩個不同模型來分析該等膚色參數。

在整個研究期間將動物之健康視為正常，且未記錄不良事件。動物之表現符合試驗條件(將肉雞在平欄(floor pen)中飼養且飼餵粉料/粒狀飲食)。在處理之間，在色素類型之間或在所研究任一年齡使用之不同劑量之間未觀察到動物體重有顯著差異。如所預期，自0至21日未觀察到表現有顯著差異，此乃因所有動物皆接受普通飲食。之後在色素類型(X-40對XCT)之間或在所測試不同劑量之間未觀察到顯著差異。

在0與21日之間有20隻死亡/淘汰者(1.86%)，在21與35日之間有8隻死亡/淘汰者(0.74%)，且在35與47日之間有34隻死亡/淘汰者(3.15%)(表10)。在肥育期(35至47日)期間檢測到由於色素類型導致之死亡率之意外顯著效應。在劑量之間未觀察到死亡率有顯著差異。

在47日齡肉雞冷卻屠體之足、胸部(在兩個不同區域；1：腋部， 2：中央胸部)及大腿上量測皮膚色素沉著。慮及缺少供應基礎飲食中之天然色素之原材料，在陰性對照與其餘實驗處理之間存在明確差異，且對照動物始終展現更灰白之顏色。亦檢測到劑量之間之差異，且不論評估哪個區域，顏色始終隨著色素劑量之增加而變暗。

在所評估之所有區域中皆藉由RCF及分光光度計明確檢測到色素之間之差異。在足中(7.0^a對6.4^b；P<0.0001)、在胸部(對於第1點及第2點，分別為7.1^a對6.5^b及7.9^a對6.9^b；P<0.0001)及大腿中(6.8^a對6.2^b；P<0.0001)，接受色素XCT之肉雞展現較飼餵色素X-40之禽增加之Roche含量。同樣，色素XCT禽屠體之胸部及大腿之a*及b*值始終顯著高於色素X-40之值(胸部第1點中之a*及b*分別為1.48對1.14及28.09對26.05；P<0.05；胸部第2點中之a*及b*分別為2.11對1.68及33.41對30.27；P<0.05；對於大腿中之a*及b*，分別為0.90對0.75，P=0.10以及25.89對24.60，P=0.0002)。飲食中包括之色素之含量效應亦明確且顯著。在所評估之所有區域中，隨著色素劑量增加，Roche色扇以及a*及b*值增大且L*值減小。

一般而言，線性方程在色素之間不同，且對於胸部2中之a*值(+25.7%；P<0.001)，對於胸部(+13.8%；P=0.0655)、胸部2(+27.8%；P<0.0001)及大腿(+8.5%；P=0.0491)中之b*值及對於足中(+7.6%；P=0.0384)、胸部區域2(+9.8%；P=0.0044)及大腿(+7.1%；P=0.0565)中之RCF值，色素XCT方程之斜率高於色素X-40之斜率。亦評估非線性顏色飽和函數，且色素X-40之K值(達成最大色素沉著之一半所需之色素濃度)高於色素XCT之K值。

亦評估在冷凍儲存0及10日後，處理對47日齡肉雞之股二頭肌中之TBARS含量之效應。在處理之間，在色素類型(X-40對XCT)之間或在所測試不同劑量之間，未檢測到在4℃下儲存0或10日之肉樣品之脂質氧化有顯著差異。

亦評估處理對在5個GIT切片上量測之絨毛高度、隱窩深度及肌肉層厚度之效應。在陰性對照與其他處理之間，在所評估任一組織學參數中未檢測到顯著差異。一般而言，在所評估區域中未檢測到色素之間之顯著差異。在陰性對照與其餘實驗處理之間在皮膚色素沉著中存在明確差異，且對照動物始終在所評估所有區域中展現更灰白之顏色。在所評估所有區域中皆藉由RCF及分光光度計明確檢測到色素之間之差異。接受色素XCT之肉雞展現較飼餵色素X-40之禽增加之Roche含量、a*及b*值。一般而言，線性方程在色素之間不同，且對於胸部2之a*值(+25.7%)，對於胸部(+13.8%)、胸部2(+27.8%)及大腿(+8.5%)中之b*值且對於足(+7.6%)、胸部區域2(+9.8%)及大腿(+7.1%)中之RCF值，色素XCT方程之斜率高於色素X-40之斜率。一般而言，非線性顏色飽和函數在色素之間不同，且色素X-40之K值高於色素XCT之K值。

實例4： 對肉雞色素沉著之效應

用平欄中之肉雞實施試驗以比較不同黃色色素(X-40、XCT及C3)對肉雞著色之色素沉著效率。

試驗持續6週，包括飼餵「白色」基礎飲食之3週，及之後飼餵實驗飲食之3週。將動物(1223隻一日齡羅斯308雌性肉雞)在到達後隨機分配在56個畜欄中。在飼餵「白色」基礎飲食之3週後提供含有色素之實驗飼料。提供可隨意消耗之飼料及水。基礎飲食經調配以滿足或超過雞之營養需求(羅斯，2006)。根據禽之年齡(3週之雛雞及之後之生長雞)調配兩種基礎飲食。每一飼餵處理係在多步混合方案中自添加相應量之產物來製備。

總計10次飼餵處理。飼餵處理源自以相應劑量向基礎飲食添加實驗產物(X-40或XCT提供20、40、60及80mg葉黃素/kg完全飼料，或C3提供40mg葉黃素/kg完全飼料)。

每隔兩周在每次重複時檢查並記錄表現變量；在試驗結束時主觀評估窩品質(litter quality)。在屠宰場在冷卻一天之屠體上評價肉雞著色。

色素及劑量二者皆不影響表現或窩品質。

對於胸部翼點(pectoral pterilium)之明度(60.65對61.09)、腋部裸區(axilar apterium)之黃度(28.78對28.03)及足墊之明度、紅度及紅度/黃度比率(明度、紅度及紅度/黃度比率分別為65.60對66.16、5.27對4.36及0.11對0.09)，Xamacol CT達到優於X-40之著色。其他變量之差異以及相互作用色素×劑量不顯著。

對足墊之紅度及紅度/黃度比率之線性回歸之截距呈現顯著差異，即XCT之紅度較X-40高0.9點且紅度對黃度之比率較X-40高0.02點。作為斜率比率(對於線性回歸)或參數k(對於非線性回歸)量測之效率改良介於胸部翼點黃度及跗趾扇色之103%至皮膚扇色之109%及足墊紅度及紅度/黃度比率之120%範圍內。然而，該等改良皆未達到顯著。

除了對於足墊之明度(C3之值低於X-40或XCT；分別為64.3^d、66.4^b及65.8^bcd)及足墊之黃度(C3之值低於X-40，但XCT之值不低於X-40；分別為43.6^de、47.7^c及47.2^cd)，對於所研究任一變量，使用40ppm之競爭劑(C3)獲得之著色與使用40ppm之X-40或XCT獲得者無顯著不同。

對於胸部翼點及足墊之紅度(分別為90.3^a對78.1^b；62.5^a對52.2^b)，X-40之差異係數高於XCT；然而，對於足墊之紅度/黃度比率(0.09^b對0.11^a)，X-40之CV低於XCT，但對於其他變量並非如此。最低CV係由皮膚扇色獲得，其次係任一位置之明度及黃度，以及足墊之扇色。紅度及紅度/黃度比率之CV遠遠較高。在胸部翼點、腋部裸區或足墊中獲得之CV具有類似範圍。

實例5： 穩定性研究

實施測試以比較含有自由流動助劑之本發明組合物對X-40之穩定性。一個研究量測在室溫下在開口袋中具有自由流動助劑之XCT之總葉黃素(「TX」)的降低。因此，結果代表在開口袋條件(暴露於氧、水分等)中之降解。結果顯示於表A中。在升高溫度(50℃)下實施類似研究。結果顯示於表B中。表C顯示在室溫下XCT及X-40二者在透氧性暗袋中之TX降解。表D顯示XCT對X-40之結果，其中二者皆在室溫下在透氧性暗袋中與飼料混合。在任一實例中，XCT皆不使用製造後封裝。

實例6： 與Xamacol 40之顯微術比較

藉由偏光光學顯微術分析如本文所述製備之Xamacol ColorTek(XCT)。圖2A顯示在偏光顯微鏡下放大100倍之Xamacol 40(X-40)肥皂。圖2B顯示在偏光顯微鏡下放大100倍之XCT。POM將在X-40肥皂中觀察到之黃體素奈米粒子顯示為各向同性材料。圖2B顯示，XCT之粒徑過小而無法分析。圖3A顯示在光學顯微鏡下放大400倍之Xamacol 40。圖3B顯示在光學顯微鏡下放大400倍之XCT。

實例7： 差式掃描量熱法

藉由差式掃描量熱法以10℃/min比較組合物與Xamacol 40以測定相變。吸熱過程顯示為負峰或谷且放熱過程顯示為正峰。圖4顯示X-40之紅色曲線及XCT之黑色曲線。在Xamacol 40情形中，肥皂在158℃顯現可對應於黃體素晶體熔點之細吸熱峰。

為確定在每次轉變中發生了什麼，在配備有加熱器件之偏光顯 微鏡下觀察兩個樣品，以使肥皂樣品在不同溫度下之相變可視化。兩個樣品之第一吸熱谷係在58-60℃之小熔化谷，其不引起肥皂變化。之後，開始新吸熱寬峰(對於XCT，其在62-64℃開始，且對於X-40，其在78-80℃開始)。在此過程中，大部分肥皂熔化。此轉變與對應於Xamacol 40及XCT二者中之黃體素奈米粒子熔化之另一吸熱峰(其大約始於110℃)重疊。在兩種情形中，此過程在145℃結束。對於XCT，未觀察到更多轉變。對於Xamacol 40，一部分黃體素微晶在150℃之前熔化。最後，加熱X-40樣品直至200℃以研究最終吸熱峰。藉由顯微鏡觀察黃體素微晶大約在180-190℃之熔化。最終吸熱細縫對應於一些屬於X-40肥皂之黃體素微晶之熔點。一部分黃體素微晶在150℃之前熔化。黃體素奈米粒子在110℃-150℃之間熔化，或其可被熔化肥皂溶解。在X-40肥皂DSC溫度記錄圖與XCT之間存在重要差異，此對應於160-170℃之微晶熔化。寬吸熱峰可係由於非晶質粒子熔化產生，且窄吸熱峰係由於純晶體熔化產生。

DSC顯示，最重要差異介於70-120℃之間，其中XCT具有大吸熱峰且X-40具有極小峰。

在研究DSC曲線後可得出結論，萬壽菊含油樹脂皂化獲得XCT並非在黃體素熔點以上實施。在70-80℃獲得晶體之主要原因係低肥皂移動，此與容許黃體素分子組織化之足夠黏度相關。但在130-140℃下，肥皂分子之高移動不容許結晶。對X-40熔化之攝影顯示，在80℃下僅觀察到黃體素晶體(奈米粒子及微米粒子二者)。在150℃下僅觀察到黃體素微晶。在200℃下，黃體素微晶之熔化可視化。在100℃下之移動使得難以獲得照片。照片顯示於圖5A-D中。

實例8： X-射線繞射

藉由X-射線繞射(XRD)分析本發明組合物(XCT)、Xamacol 40肥皂及純黃體素之三個樣品，以測定Xamacol 40及XCT中黃體素之結晶 度。

X-40之結晶部分在4.44、6.57、6.85及8.89(4.44×2)呈現4個峰。在峰之間有兩個組。第一組可一起分組為寬峰(4.44、6.85及8.89 °2θ)，其對應於具有<30nm之極小大小之晶相。在6.57 °2θ之較尖峰係由大於150nm之晶體粒子產生。

XCT之結晶部分係由2個峰4.69及6.96 °2θ代表。在Xamacol 40中，4.69之峰與4.44之峰相同。此峰係由低於30nm之晶體大小產生。

實例9： XCT之製程

將50% KOH水溶液添加至連續流動裝置中之試劑容器中。將萬壽菊含油樹脂添加至連續流動反應器中之第二試劑容器中。將萬壽菊含油樹脂加熱至60℃溫度。以約46kg/小時之進給速率將KOH溶液泵送至連續流動裝置中。將萬壽菊含油樹脂以約154kg/小時之進給速率泵送至連續流動反應器中。在進入靜態混合器之前經由板式熱交換器加熱KOH。KOH之溫度升高至約90℃。將KOH及萬壽菊含油樹脂在經140℃夾套溫度夾套之靜態混合器中混合。經過靜態混合器之滯留時間為約21秒。在進入另一靜態混合器之前，將溶液輸送經過轉子-定子型勻漿器。在轉子-定子勻漿器之後，使溶液通過經140℃夾套溫度夾套之第二靜態混合器。在第二靜態混合器中之滯留時間為約72秒。然後使溶液通過具有140℃夾套溫度之活塞流反應器。在活塞流反應器中之滯留時間為約8分鐘。在活塞流反應器之後，使溶液通過霧化器，之後通過乾燥器。將SiO₂吹至霧化產物上。產物不進行封裝。

實例10： X-40之比較性製造

將萬壽菊含油樹脂E-484(聚乙二醇蓖麻油酸甘油酯)及丙二醇在皂化反應器內混合在一起。皂化反應器中之溫度介於58℃至約63℃範圍內。此步驟之時移為約10’。然後將氫氧化鈉水溶液傾入皂化反應 器中。使萬壽菊含油樹脂與氫氧化鉀之間之反應進行2至3小時。在此期間之溫度為75-80℃。然後將磷酸添加至皂化反應器以淬滅過量氫氧化鉀。溫度由於此反應之放熱性自5℃升高至10℃。將肥皂傾入加載有碳酸鈣及二氧化矽之漿式混合器中。藉由自由流動助劑吸收肥皂。此過程之總時間係約20’，包括加載及混合。排放混合器並使混合物通過研磨器以使團塊解聚。經由振動篩篩濾產物。示意圖顯示於圖6中。表E顯示藉由此製程及藉由本發明製程製備之終產物之物理性質。在本申請案通篇中將此製程之產物稱作X-40。

實例11： 使用乙氧喹之穩定性研究

使用不同量之乙氧喹(ETQ)研究本發明組合物(XCT)。如實例9中所述製備樣品。藉由使用驗證分析方法測定總葉黃素來量測樣品。在 研究開始時分析每一樣品之總葉黃素。所有樣品皆儲存在25℃下之透氧性暗塑膠袋中。將所有樣品保持在相同條件(黑暗、氧、溫度、光及時間)中。

如表F中可見，具有不同量之乙氧喹之產物之間無差異。相反，根據本發明製造之組合物較藉由添加乙氧喹產生者更穩定且具有更強效應。

實例12： 比較性穩定性研究

在不同溫度條件下使用純組合物或與維生素礦物預混料混合之組合物實施若干次比較性研究。如實例11中所述實施穩定性研究。針對如實例10中所述製備之組合物(X-40)、競爭劑1及競爭劑2測試組合物。競爭劑2降解而使得量測在30日後中斷。在不同條件下及與維生素預混料混合之結果顯示於表G-I中。

實例13： 閉口袋穩定性研究

在閉口袋條件中研究總葉黃素以模擬包裝。所有樣品皆係如實例9中所述來製造。將樣品(具有或不具有自由流動助劑)儲存在25℃下之不透性鋁密封塑膠袋中。所有樣品皆係在低氧含量、溫度及黑暗之相同條件下運行。所有調配物皆在24個月顯示良好穩定性，如表J中所示。樣品具有約18%二氧化矽作為自由流動助劑(FFA)。

實例14： 粉末調配物

下表展示表示為重量百分比之XCT製程之實例性粉末調配物。

實例15： 無乙氧喹調配物

下表展示XCT製程之不含乙氧喹之實例性粉末調配物。

實例16： 液體調配物

液體調配物係以與粉末調配物類似之方式製備。然而，並非將萬壽菊肥皂噴霧至霧化器中，而係將其噴霧至水中。將水維持在15-30℃。隨著肥皂之添加，溫度上升至40-50℃。使用ultraturrax經1小時過程混合混合物。將液體產物在70-80℃下加熱6-9小時以異構化至反式黃體素及反式-玉米黃素之期望程度。在冷卻後，液體產物完 成。

實例17： 使用液體調配物之穩定性研究

液體調配物係萬壽菊肥皂於水中之穩定乳液。液體調配物之穩定性主要係由於與氧之接觸少所致。結果顯示於表N中。

實例18： 對產物之比較性研究

如實例5及11中所述實施穩定性研究且與阿蔔酯產物進行比較。下表提供針對競爭劑4(C4)及競爭劑5(C5)之該等研究之結果。對於阿蔔酯欄，若存在兩個值，則第一個值係C4且第二個值係C5。圖7A 顯示針對C4及C5之結果。圖7B顯示針對C3及C6之結果。

實例19： 產蛋雞之蛋黃顏色之黃色色素

用籠中之產蛋母雞實施試驗以比較不同黃色色素(A、B及C)對產蛋雞之蛋黃顏色之色素沉著效率。試驗持續9週，包括飼餵「白色」基礎飲食之5週葉黃素耗盡，及之後飼餵實驗飲食之4週。

動物：305隻海藍褐產蛋母雞，在試驗開始時係23週齡。

提供可隨意消耗之飼料及水。基礎飲食經調配以滿足或超過產蛋母雞之營養需求(海藍，2009)。對於此引證需要更多資訊嗎？單一基礎飲食係根據預期飼料消耗來調配。每一飼餵處理係自添加相應量 之產物來製備。

總計16次飼餵處理(6次重複，每次處理3隻母雞/籠)。飼餵處理源自以相應劑量向基礎飲食添加實驗產物(產物A或B提供2.5、5、10、20、40及80mg葉黃素/kg完全飼料，或產物C提供2.5、5、10及20mg葉黃素/kg完全飼料)。

在飼餵實驗飼料時每隔一週在每次重複時檢查並記錄表現變量(體重、飼料消耗、產蛋率、蛋重量、破蛋率、每日之軟殼蛋或髒蛋)。除了有一天保留蛋用於葉黃素分析(25d)以外，在葉黃素耗盡期結束時(0d)、在三週中每週(7d、14d、21d)及在第4週期間每日(22d至28d)評價蛋黃顏色；在耗盡期後(-1d)亦實施葉黃素分析。取每一天所產之所有蛋用於蛋黃顏色評價或葉黃素分析。

使用美能達色度計實施顏色評價。色度計描繪CIE L*a*b*中之顏色。L*指示以(0-100)量表代表暗至亮之明度。a*(紅度)值給出紅-綠色程度，且較高正a*值指示更多紅色。b*(黃度)值指示黃-藍色程度，且較高正b*值指示更多黃色。結果顯示於圖8A-8D中。對於最高20ppm之所有色素劑量，及在實驗飲食第四週期間，對變量之線性回歸顯示，對於黃度，XCT之效率係X-40之121%。對於RYCF，XCT之效率係X-40之159%。

蛋黃(在何時獲得)之總葉黃素含量顯示於圖9A及9B中。線性回歸分析顯示，在第25天，對於蛋葉黃素濃度，XCT之效率係X-40之172%。

實例20： 不添加紅色色素之產蛋雞試驗

用籠中之產蛋母雞實施試驗以測定Xamacol ColorTek對阿蔔酯(C4)在給予蛋黃黃色中之比較效能。

試驗持續9週，包括飼餵「白色」基礎飲食之5週葉黃素耗盡，及之後飼餵實驗飲食之4週。

動物：216隻海藍W-36產蛋母雞，在試驗開始時係57週齡。

此研究係在MRP電池設備廠實施。房屋環境受控制。提供可隨意消耗之飼料及水。所有飼量皆經設計以滿足或超過用於W-36之所有飲食推薦(給予海藍導則2009-11)。

總計9次處理，每次處理使用24個畜欄(籠)重複。每籠具有一隻母雞。

在飼餵實驗飼料時每隔一週在每次重複時檢查並記錄表現變量(體重、飼料消耗、產蛋率、蛋重量、破蛋率、每日之軟殼蛋或髒蛋)。在葉黃素耗盡期結束時(0d)、在三週中每週(7d、14d、21d)及在第4週(25d至28d)更頻繁地評價蛋黃顏色。取每一天所產之所有蛋用於蛋黃顏色評價。表P顯示處理。

結果顯示於圖10A-10D中。對於最高80ppm之所有色素劑量，及在實驗飲食之第四週期間，對變量之線性回歸顯示，對於紅度值，XCT之效率係X-40之159%；對於黃度值，XCT係X-40之122%；對於紅度/黃度比率，XCT之效率係X-40之165%；對於RYCF，XCT之效率係X-40之157%。

總葉黃素含量顯示於圖11A-11B中。蛋葉黃素含量及葉黃素沈積率之線性回歸顯示，對於蛋葉黃素濃度，XCT之效率係X-40之126%，且對於蛋葉黃素含量，XCT之效率係X-40之124%。對於紅度/黃度比率，XCT為131%較競爭劑產物3更有效，且對於RYCF，XCT為133%較競爭劑產物3更有效，且對於蛋黃中之總葉黃素，XCT為117%較競爭劑產物3更有效。

使用酯產物進行類似比較。結果顯示於圖12A-12D中。

實例21： 添加合成紅色色素之產蛋雞試驗

用籠中之產蛋母雞實施試驗來比較2種黃色色素(A及B)在添加合成源紅色色素(C)時對產蛋雞之蛋黃顏色之色素沉著效率。

試驗持續7週，包括飼餵「白色」基礎飲食之3週葉黃素耗盡，及之後飼餵實驗飲食之4週。

動物：360隻海藍(伊莎褐+)，在試驗開始時係32週齡。

提供可隨意消耗之飼料及水。基礎飲食經調配以滿足或超過產蛋母雞之營養素海藍2009需求(伊莎褐，2009-10)。單一基礎飲食係根據預期飼料消耗來調配。每一飼餵處理係自添加相應量之產物來製備。

總計10次飼餵處理(6次重複，每次處理6隻母雞/籠)。

在飼餵實驗飼料時每隔一週在每次重複時檢查並記錄表現變量(體重、飼料消耗、產蛋率、蛋重量、破蛋率、每日之軟殼蛋或髒蛋)。在葉黃素耗盡期結束時(0d)、在三週中每週(7d、14d、21d)及在第4週(25d至28d)更頻繁地評價蛋黃顏色。取每一天所產之所有蛋用於蛋黃顏色評價。

用DSM蛋黃色扇(亦稱作Roche色扇)實施色扇分析。該分析具有15個用於區分蛋黃顏色密度之顏色指數量表。該方法係由以目測比較及估計類胡蘿蔔素之形式評價蛋黃組成。蛋黃色扇之結果顯示，在添 加紅色色素時，CXT與多種競爭劑相當。圖13顯示具有紅色色素及不具有紅色色素之色扇分析之結果。消費者無法發覺該等差異。

實例22： 添加天然紅色色素之產蛋雞試驗

用籠中之產蛋母雞實施試驗來比較2種黃色色素(A及B)在添加天然源紅色色素(C)時對產蛋雞之蛋黃顏色之色素沉著效率。

試驗持續7週，包括飼餵「白色」基礎飲食之3週葉黃素耗盡，及之後飼餵實驗飲食之4週。

動物：使用240隻市售褐色產蛋母雞(海藍褐)，在試驗開始時係38週齡。

提供可隨意消耗之飼料及水。基礎飲食係根據海藍褐推薦來調配(海藍國際紅手冊，2009)。單一基礎飲食係根據預期飼料消耗來調配。每一飼餵處理係自添加相應量之產物來製備。

總計10次飼餵處理(24次重複，每次處理1隻母雞/籠)。

在飼餵實驗飼料時每隔一週在每次重複時檢查並記錄表現變量(體重、飼料消耗、產蛋率、蛋重量、破蛋率、每日之軟殼蛋或髒蛋)。在葉黃素耗盡期結束時(0d)、在三週中每週(7d、14d、21d)及在第4週(25d至28d)更頻繁地評價蛋黃顏色。取每一天所產之所有蛋用於蛋黃顏色評價。

在飼餵實驗飼料時每隔一週在每次重複時檢查並記錄表現變量(體重、飼料消耗、產蛋率、蛋重量、破蛋率、每日之軟殼蛋或髒蛋)。在葉黃素耗盡期結束時(0d)、在三週中每週(7d、14d、21d)及在第4週(25d至28d)更頻繁地評價蛋黃顏色。取每一天所產之所有蛋用於蛋黃顏色評價。

使用DSM/Roche蛋黃色扇(亦稱作Roche色扇)實施色扇分析。該分析具有15個用於區分蛋黃顏色密度之顏色指數量表。該方法係由以目測比較及估計類胡蘿蔔素之形式評價蛋黃組成。蛋黃色扇之結果顯 示，在添加紅色色素時，CXT與多種競爭劑相當。圖14顯示具有紅色色素及不具有紅色色素之色扇分析之結果。消費者無法發覺該等差異。

實例23： 光譜研究

使用X-40及XCT實施光譜研究。圖15A顯示並排的FTIR光譜。X-40及XCT具有類似特徵且譜帶對應於芳香族及脂肪族官能基之振動模式。=C-H伸縮(3033cm^-1及3010cm^-1)、離開環平面之C-H(710cm^-1)及芳香族環中之C-C伸縮(1560cm^-1、1473cm^-1)指示結構中存在不飽和部分。另外，兩個樣品中存在對應於烷基之-C-H伸縮(2915/2849cm^-1)之譜帶，指示存在脂肪族基團。在T40 FTIR光譜情形中，在1400cm^-1、1063cm^-1及1024cm^-1對應於磷酸基之強譜帶與分子指紋區中之一些譜帶重疊。圖15B顯示1800cm^-1至600cm^-1區域之放大區域。底部及頂部線條與圖15A相同。

圖15C顯示X-40(黑色)對XCT(紅色)之Raman光譜。

實例24. 薄層層析

將XCT及X-40之樣品溶解於氯仿中且將其離心以棄去白色沈澱。在己烷：乙酸乙酯(1：1 v/v)流動相中實施薄層層析(TLC)。藉由UV輻照使TLC板顯色且使用I₂暴露來使其可視化。顯示於圖16A中之初始TLC顯示三種主要化合物。使用矽膠層析管柱自混合物樣品分離化合物。使用2：1己烷：乙酸乙酯作為溶劑溶析初始流份(流份1-5)。然後將溶劑混合物之極性升高至乙酸乙酯(流份6至14)，且最後為乙酸乙酯中之20%甲醇(流份15至19)。圖16B顯示X-40之結果。

根據TLC可得出結論，X-40及XCT中主要化合物之比例不同。兩個樣品之主要化合物皆係3號，此亦針對藉由X-40及XCT之管柱層析分離之純形式之量來確證。在XCT情形中，如圖16C中所示，化合物2未自管柱順利純化，而其他化合物存於流份2中。XCT中之化合物2 之量顯著低於X-40。另外，XCT之自管柱純化之化合物3之量高於X-40。

102‧‧‧第一試劑容器

104‧‧‧第二試劑容器

105‧‧‧熱轉移器件

106‧‧‧第一導管

108‧‧‧第二導管

110‧‧‧熱轉移器件

112‧‧‧第一靜態混合器

116‧‧‧高剪切混合器

118‧‧‧第二靜態混合器

120‧‧‧活塞流反應器

122‧‧‧霧化器

124‧‧‧閥

126‧‧‧異構化裝置

128‧‧‧自由流動助劑容器

130‧‧‧產物容器

Claims (59)

1. 一種組合物，該組合物包含源自含有類胡蘿蔔素之天然含油樹脂之皂化之肥皂，其中該肥皂含有非酯化葉黃素粒子及來自初始含有類胡蘿蔔素之天然含油樹脂之含油樹脂組份，且當在室溫下在透氧性暗袋中儲存3個月時，保持大於80%之總葉黃素濃度。
2. 如請求項1之組合物，其中90%之該等非酯化葉黃素粒子之最大直徑小於0.5微米。
3. 如請求項2之組合物，其中至少95%之該等非酯化葉黃素粒子之該最大直徑小於0.5微米。
4. 如請求項3之組合物，其中至少99%之該等非酯化葉黃素粒子之該最大直徑小於0.5微米。
5. 如請求項1之組合物，其中至少60%之該非酯化葉黃素係全反式異構物。
6. 如請求項5之組合物，其中至少80%之該非酯化葉黃素係該全反式異構物。
7. 如請求項1之組合物，其中該組合物包含至少75mg非酯化葉黃素/克肥皂。
8. 如請求項7之組合物，其中該組合物包含至少100mg非酯化葉黃素/克肥皂。
9. 如請求項1之組合物，該組合物係由源自含有類胡蘿蔔素之天然含油樹脂之皂化之肥皂組成，其中該肥皂含有非酯化葉黃素粒子，且當在室溫下在透氧性暗袋中儲存一個月時，保持大於80%之總葉黃素濃度。
10. 如請求項1之組合物，其中該含有類胡蘿蔔素之天然含油樹脂選 自萬壽菊含油樹脂或辣椒含油樹脂。
11. 如請求項1之組合物，其中該等非酯化葉黃素粒子包含黃體素。
12. 如請求項1之組合物，其中該等非酯化葉黃素粒子包含玉米黃素。
13. 如請求項1之組合物，其中該等非酯化葉黃素粒子至少包含黃體素及玉米黃素。
14. 一種組合物，該組合物包含源自含有類胡蘿蔔素之天然含油樹脂之皂化之肥皂及來自初始含有類胡蘿蔔素之天然含油樹脂之含油樹脂組份，其中該肥皂含有非酯化葉黃素粒子，且90%之該等非酯化葉黃素粒子之最大直徑小於0.5微米。
15. 如請求項14之組合物，其中至少95%之該等非酯化葉黃素粒子之最大直徑小於0.5微米。
16. 如請求項15之組合物，其中至少99%之該等非酯化葉黃素粒子之最大直徑小於0.5微米。
17. 如請求項14之組合物，其中至少60%之該非酯化葉黃素係全反式異構物。
18. 如請求項17之組合物，其中至少80%之該非酯化葉黃素係該全反式異構物。
19. 如請求項14之組合物，其中該組合物包含至少75mg非酯化葉黃素/克肥皂。
20. 如請求項19之組合物，其中該組合物包含至少100mg/g葉黃素。
21. 如請求項14之組合物，其中該組合物進一步包含小於約15%之自由流動助劑。
22. 如請求項14之組合物，其中該含有類胡蘿蔔素之天然含油樹脂係萬壽菊含油樹脂。
23. 如請求項14之組合物，其中該等非酯化葉黃素粒子包含黃體 素。
24. 如請求項14之組合物，其中該等非酯化葉黃素粒子包含玉米黃素。
25. 如請求項14之組合物，其中該等非酯化葉黃素粒子至少包含黃體素及玉米黃素。
26. 如請求項14之組合物，其中當在室溫下在透氧性暗袋中儲存一個月時，該組合物保持大於98%之初始非酯化總葉黃素濃度。
27. 如請求項14之組合物，其中當在室溫下在透氧性暗袋中與動物飼料混合儲存一個月時，該組合物保持大於90%之初始非酯化總葉黃素濃度。
28. 一種動物飼料，該動物飼料包含如請求項1之組合物。
29. 一種提高動物飼料之色素沉著效能之方法，該方法包含組合該動物飼料與如請求項1之組合物。
30. 如請求項29之方法，其中該動物飼料係產蛋禽飼料或水產養殖飼料。
31. 一種增加蛋黃之類胡蘿蔔素含量之方法，該方法包含向產蛋禽投與如請求項1之組合物。
32. 如請求項31之方法，其中該產蛋禽係雞。
33. 一種增加個體皮膚之類胡蘿蔔素含量之方法，該方法包含向該個體投與如請求項1之組合物。
34. 一種增加動物飼料之類胡蘿蔔素含量之方法，該方法包含組合如請求項1之組合物與該動物飼料。
35. 如請求項34之方法，其中該類胡蘿蔔素係葉黃素。
36. 如請求項34之方法，其中該葉黃素係黃體素。
37. 一種產生非酯化類胡蘿蔔素濃度大於10%之終產物之方法，該方法包含： a)含有類胡蘿蔔素之天然含油樹脂之鹼皂化，其中該皂化係在金屬氫氧化物存在下在充分混合下進行，且在介於約110℃至約180℃之間之溫度下進行，產生包含非酯化類胡蘿蔔素及來自初始含有類胡蘿蔔素之天然含油樹脂之含油樹脂組份之組合物，b)所得包含非酯化類胡蘿蔔素及來自初始含有類胡蘿蔔素之天然含油樹脂之含油樹脂組份之肥皂之霧化以產生霧化肥皂，及c)該等非酯化類胡蘿蔔素之異構化，其中加熱該霧化肥皂以使得大於80%之所存在之該等非酯化類胡蘿蔔素呈全反式異構物構型，且最終肥皂產物之非酯化類胡蘿蔔素濃度大於10%，且其中該最終肥皂產物含有來自初始含有類胡蘿蔔素之天然含油樹脂之含油樹脂組份。
38. 如請求項37之方法，其中該含有類胡蘿蔔素之天然含油樹脂係萬壽菊含油樹脂。
39. 如請求項37之方法，其中該金屬氫氧化物選自由以下組成之群：KOH、NaOH及Ca(OH)₂。
40. 如請求項37之方法，其中在與該金屬氫氧化物混合之前加熱該含有類胡蘿蔔素之天然含油樹脂。
41. 如請求項40之方法，其中在與該金屬氫氧化物混合之前將該含有類胡蘿蔔素之天然含油樹脂加熱至介於約50℃至約70℃範圍內之溫度。
42. 如請求項37之方法，其中步驟(a)係在連續流動裝置中進行且連續流動之速率係約100kg/小時至約300kg/小時。
43. 如請求項42之方法，其中連續流動之速率係約150kg/小時至約250kg/小時。
44. 如請求項37之方法，其中步驟(b)係在介於約3%與15%之間之自由流動助劑存在下進行。
45. 如請求項44之方法，其中步驟(b)係在介於約5%與10%之間之二氧化矽存在下進行。
46. 如請求項37之方法，其中霧化後之水分含量介於約10%與13%之間。
47. 如請求項37之方法，其中該異構化在惰性氣氛下進行。
48. 如請求項37之方法，其中該異構化在介於約75℃與約95℃之間之溫度下經介於約1小時至約3小時範圍內之時段進行。
49. 如請求項37之方法，其中該最終肥皂產物之粒子各自小於約0.9mm。
50. 一種類胡蘿蔔素調配物，該調配物係自如請求項37之方法獲得。
51. 一種自水及非酯化類胡蘿蔔素濃度大於10%之終產物產生水性產物之方法，該方法包含：a)含有類胡蘿蔔素之天然含油樹脂之鹼皂化，其中該皂化係在金屬氫氧化物存在下在充分混合下進行，且在介於約110℃至約180℃之間之溫度下進行，產生包含非酯化類胡蘿蔔素及來自初始含有類胡蘿蔔素之天然含油樹脂之含油樹脂組份之肥皂，b)來自步驟(a)所產生之肥皂中之該等非酯化類胡蘿蔔素之異構化，其中加熱該肥皂以使得大於80%之所存在之該等非酯化類胡蘿蔔素呈全反式異構物構型，以產生大於10%之最終肥皂產物之非酯化類胡蘿蔔素濃度，且其中該最終肥皂產物含有來自初始含有類胡蘿蔔素之天然含油樹脂之含油樹脂組份，及c)使該最終肥皂產物與足量水接觸以產生具有0.5%至約10%之該最終肥皂產物之水性產物。
52. 如請求項51之方法，其中該含有類胡蘿蔔素之天然含油樹脂係萬壽菊含油樹脂。
53. 如請求項51之方法，其中該金屬氫氧化物選自由以下組成之群：KOH、NaOH及Ca(OH)₂。
54. 如請求項51之方法，其中在與該金屬氫氧化物混合之前加熱該含有類胡蘿蔔素之天然含油樹脂。
55. 如請求項51之方法，其中在與該金屬氫氧化物混合之前將該含有類胡蘿蔔素之天然含油樹脂加熱至介於約50℃至約70℃範圍內之溫度。
56. 如請求項51之方法，其中步驟(a)係在連續流動裝置中進行且連續流動之速率係約50kg/小時至約300kg/小時。
57. 如請求項56之方法，其中連續流動之速率係約150kg/小時至約250kg/小時。
58. 如請求項51之方法，其中該最終肥皂產物之粒子各自小於約0.9mm。
59. 一種類胡蘿蔔素調配物，該調配物係自如請求項51之方法獲得。