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TWI551595B - 2,4-disubstituted benzene-1,5-diamine derivatives and their use, Its preparation of pharmaceutical compositions and pharmaceutical compositions - Google Patents

2,4-disubstituted benzene-1,5-diamine derivatives and their use, Its preparation of pharmaceutical compositions and pharmaceutical compositions Download PDF

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TWI551595B
TWI551595B TW104105605A TW104105605A TWI551595B TW I551595 B TWI551595 B TW I551595B TW 104105605 A TW104105605 A TW 104105605A TW 104105605 A TW104105605 A TW 104105605A TW I551595 B TWI551595 B TW I551595B
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mmol
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methyl
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TW104105605A
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Inventor
Yun-Zhou Jin
fu-sheng Zhou
Jing Xie
Si-Da Shen
Yi Hu
Wei Liu
Original Assignee
Shanghai Haiyan Pharmaceutical Technology Co Ltd
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Publication date
Application filed by Shanghai Haiyan Pharmaceutical Technology Co Ltd filed Critical Shanghai Haiyan Pharmaceutical Technology Co Ltd
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Description

2,4-二取代苯-1,5-二胺衍生物及其應用以及由 其製備的藥物組合物和藥用組合物
本發明涉及醫藥技術領域，特別涉及一種2,4-二取代苯-1,5-二胺衍生物及其作為EGFR酪胺酸激酶抑制劑的應用，以及由其製備的藥物組合物和藥用組合物。
肺癌是全球發病率最高的癌症，在中國肺癌發病率位居所有癌症中第一位，也是中國發病率和死亡率最高的癌症，在中國肺癌病人中，30%病人具有EGFR突變，其中L858R和外顯子19缺失突變占90%以上，這類病人對EGFR抑制劑更為敏感。現有已上市第一代EGFR抑制劑例如厄洛替尼，吉非替尼對這類病人效果良好，能夠使其中60%以上病人腫瘤縮小，明顯延長病人無進展生存期。但絕大多數病人在6-12個月獲得耐藥，第一代EGFR抑制劑將不再起效，而這類病人目前處於無藥可用狀態。臨床發現對第一代EGFR抑制劑產生耐藥的病人中有50%檢測到EGFR T790M突變。在T790M突變細胞系H1975中第一代EGFR抑制劑，吉非替尼和厄洛替尼，均大於3μM，基本沒有活性。
目前開發上市的第二代不可逆pan-EGFR抑制劑(Afatinib(BIBW2992))對EGFR突變肺癌病人療效顯著好於第一代EGFR抑制劑。但第二代抑制劑同時也具有很強的野生型EGFR抑制活性，對野生型EGFR的抑制活性顯著高於耐藥T790M突變，病人皮疹等毒副作用嚴重且對耐藥病人療效較差，僅有小部分第一代EGFR抑制劑耐藥病人對這類藥物產生應答。
為了提高對耐藥EGFR T790M突變抑制活性的同時降低對野生型EGFR的抑制活性，開發活性更高、選擇性更好、毒性更低的第三代EGFR突變體選擇性抑制劑具有重要的意義。
本發明的目的是提供一種2,4-二取代苯-1,5-二胺衍生物，或其藥學上可接受的鹽、立體異構體、溶劑化物或其前藥；以及包含上述衍生物的藥物組合物。
本發明的第二個目的是提供上述衍生物或組合物在製備調節EGFR酪胺酸激酶活性或治療EGFR相關疾病的藥物中的應用。
本發明第一方面提供了一種結構如式(I)所示的化合物，或其藥學上可接受的鹽、立體異構體、溶劑化物或其前藥：
在式(I)中，A為選自下組中的任意一種： 其中，Z2為CR5或N；R5為氫、鹵素、三氟甲基或C1-10烷氧基；Z21為N或CH；R4、R42、R43各自獨立地為氫或C1-10烷基、C3-10環烷基、C3-10雜環烷基(如哌啶基)、或鹵代的C1-10烷基；R41為氫、鹵素、三氟甲基、C1-10烷基或C1-10烷氧基；(優選地，R4、R42、R43各自獨立地為氫、甲基或乙基；R41為氫、氯、氟、三氟甲基、甲基或甲氧基；)R1'、R2'和R5'各自獨立地為氫、C1-10烷基；(優選地，R1'、R2'和R5'各自獨立地為氫、甲基或乙基；)R3'、R4'各自獨立地為氫、C1-10烷基，或R3'與R4'相連形成橋環結構；(優選地，R3'、R4'各自獨立地為氫、甲基或乙基；或者R3'與R4'相連為-CH2-；)Y為O、CH2、NRa'；其中Ra'為氫、甲基、第三丁氧羰基、乙醯基、甲磺醯基；n為0或1；R0為氫、鹵素、C1-10烷基、-NRaRb或-CO-NRaRb，其中，Ra、Rb各自獨立地為C1-10烷基；Z1為CR6或N；其中，R6為氫、鹵素、三氟甲 基、甲氧基或-CO2-C1-10烷基；R1為氫，或選自下組中的任意一種： R2和R3各自獨立地為氫或-CH2NR7R8；其中，R7、R8各自獨立地為氫或甲基；或R7、R8和相連的氮原子共同形成5-6員含氮飽和雜環；及R12為氫、鹵素、C1-10烷基或C1-10烷氧基(優選地為甲氧基)。
在另一優選例中，式(I)中，A為選自下組中的任意一種：、、、、 、及；其中，n、R4、R41、R42、R43、R1'、R2'、R3'、R4'、R5'、Ra'如上述所定義。
在另一優選例中，式(I)中，R4為氫、甲基、乙 基、異丙基、環丙基、二氟甲基或哌啶基；R41為氫、氯、氟、三氟甲基、甲基或甲氧基；R42為氫、甲基或乙基；R43為氫、甲基或乙基。
在另一優選例中，式(I)中，R2和R3各自獨立地為氫；且R12為甲氧基。
在另一優選例中，式(I)中，Z1為CR6或N；其中，R6為氫、氟、氯、三氟甲基、甲氧基或-CO2C1-10烷基；在另一優選例中，式(I)中，Z1為CR6，其中，R6為氫、氟、氯、三氟甲基、甲氧基或-CO2CH3。
在另一優選例中，式(I)中，R0為氫。
在另一優選例中，式(I)中，A為選自下組中的任意一種：、、、、 、、和；這裡，和可以 分別是和。
在另一優選例中，式(I)中，R2和R3各自獨立地為氫。
在另一優選例中，式(I)中，R2和R3各自獨立地為氫或-CH2NR7R8，且R7、R8各自獨立地為氫或甲基。
在另一優選例中，式(I)中，R2和R3各自獨立地為氫或-CH2NR7R8，且R7、R8和相連的氮原子共同形成5-6員含氮飽和雜環。
在另一優選例中，式(I)中，R2和R3各自獨立地為氫或-CH2NR7R8，且R7、R8和相鄰的氮原子共同形成5-6員含氮飽和雜環，所述5-6員含氮飽和雜環的結構如式(Ⅲ)所示：
式中，X為O、S、NR9或CR10R11；其中，R9、R10、R11各自獨立地為氫、C1-10烷氧基或-CO-C1-10烷基。
在另一優選例中，式(I)所示的化合物為結構如式(IV-1)所示化合物：
式中，A、R0、R1、R2、R3和R6如上述所定義。
在另一優選例中，式(I)所示的化合物為結構如式(IV-2)所示的化合物：
式中，A、R0、R1、R2和R3如上述所定義。
在另一優選例中，式(I)所示的化合物為結構如式(V-1)所示的化合物：
式中，R1、R2、R3、R4、R41和R6如上述所定 義。
在另一優選例中，式(I)所示的化合物為結構如式(V-2)所示的化合物：
式中，R1、R2、R3、R4和R41如上述所定義。
在另一優選例中，式(I)所示的化合物為結構如式(VI-1)所示：
式中，R1、R2、R3、R4、R41和R6如上述所定義。
在另一優選例中，式(I)所示的化合物為結構如式(VI-2)所示：
式中，R1、R2、R3、R4和R41如上述所定義。
在另一優選例中，式(I)所示的化合物為結構如式(VII-1)所示：
式中，R1、R2、R3和R6如上述所定義。
在另一優選例中，式(I)所示的化合物為結構如式(VII-2)所示：
式中，R1、R2和R3如上述所定義。
在另一優選例中，式(I)所示的化合物為結構如式(VIII-1)所示的化合物：
式中，R1'、R2'、R3'、R4'、R5'、R1、R2、R3、R6和Y如上述所定義。
在另一優選例中，式(I)所示的化合物為結構如式(VIII-2)所示的化合物：
式中，R1'、R2'、R3'、R4'、R5'、R1、R2、R3和Y如上述所定義。
在另一優選例中，式(I)所示的化合物為結構如式(IX-1)所示：
式中，R1'、R2'、R4'、R5'、R1、R2、R3和R6如上述所定義。
在另一優選例中，式(I)所示的化合物為結構如式(IX-2)所示：
式中，R1'、R2'、R4'、R5'、R1、R2和R3如上述所定義。
在另一優選例中，式(I)所示的化合物為結構如式(X-1)所示的化合物：
式中，R1'、R5'、R1、R2、R3和R6如上述所定義。
在另一優選例中，式(I)所示的化合物為結構如式(X-2)所示的化合物：
式中，R1'、R5'、R1、R2和R3如上述所定義。
在另一優選例中，式(I)所示的化合物為結構如式(XI-1)所示的化合物：
式中，R1、R2、R3、R4、R42、R43和R6如上述所定義。
在另一優選例中，式(I)所示的化合物為結構如式(XI-2)所示的化合物：
式中，R1、R2、R3、R4、R42和R43如上述所定義。
在另一優選例中，式(I)所示的化合物為結構如式(XII-1)所示的化合物：
式中，R1、R2、R3、R4、R41和R6如上述所定義。
在另一優選例中，式(I)所示的化合物為結構如式(XII-2)所示的化合物：
式中，R1、R2、R3、R4和R41如上述所定義。
在另一優選例中，式(XI-1)化合物中，R6為氫、氟、氯、三氟甲基。
在另一優選例中，式(XI-1)或式(XI-2)化合物中，R2和R3各自獨立地為氫。
在另一優選例中，式(XI-1)或式(XI-2)化合物中，R1選自：
在另一優選例中，式(XI-1)或式(XI-2)化合物中，R4、R42、R43各自獨立地為氫、C1-10烷基、鹵代的C1-10烷基或哌啶基；在另一優選例中，式(XI-1)或式(XI-2)化合物中，R4、R42、R43各自獨立地為氫、甲基、乙基、二氟甲基或哌啶基。
在另一優選例中，式(XI-1)或式(XI-2)化合物中 ，R4為氫、甲基、二氟甲基或哌啶基；R42、R43各自獨立地為氫或甲基。
在另一優選例中，式(V-1)、式(V-2)、式(VI-1)、式(VI-2)、式(XII-1)或式(XII-2)化合物中，R4為氫、C1-10烷基、C3-10環烷基或鹵代的C1-10烷基。
在另一優選例中，式(V-1)、式(V-2)、式(VI-1)、式(VI-2)、式(XII-1)或式(XII-2)化合物中，R4為氫、甲基、乙基、異丙基、環丙基或二氟甲基。
在另一優選例中，式(V-1)、式(V-2)、式(VI-1)、式(VI-2)、式(XII-1)或式(XII-2)化合物中，R41為氫、氯、氟、三氟甲基、甲基或甲氧基。
在另一優選例中，式(V-1)、式(V-2)、式(VI-1)、式(VI-2)、式(XII-1)或式(XII-2)化合物中，R2和R3各自獨立地為氫。
在另一優選例中，式(V-1)、式(VI-1)或式(XII-1)化合物中，R6為氫、氟、氯、三氟甲基、甲氧基或-CO2CH3。
在另一優選例中，式(V-1)、式(V-2)、式(VI-1)、式(VI-2)、式(XII-1)或式(XII-2)化合物中，R1選自：
在另一優選例中，所述的化合物選自下組：
本發明第二方面提供了一種藥物組合物，它包括本發明第一方面所述的化合物，或其藥學可接受的鹽、立體異構體、溶劑化物或其前藥，並且還包括藥學上可接受的載體。
在另一優選例中，所述藥物組合物包括治療有效量的本發明第一方面所述的化合物，如上述式(I)化合物、式(IV-1)化合物、式(IV-2)化合物、式(V-1)化合物、式(V-2)化合物、式(VI-1)化合物、式(VI-2)化合物、式(VII-1)化合物、式(VII-2)化合物、式(VIII-1)化合物、式(VIII-2)化合物、式(IX-1)化合物、式(IX-2)化合物、式(X-1)化合物、式(X-2)化合物、式(XI-1)化合物、或式(XI-2)化合物、或上述示例化合物，或其藥學上可接受的鹽、立體異構體、溶劑化物或其前藥；以及藥學上可接受的載體。
通常，本發明化合物或其藥學可接受的鹽可以與一種或多種藥用載體形成適合的劑型施用。這些劑型適用於口服、直腸給藥、局部給藥、口內給藥以及其他非胃腸道施用(例如，皮下、肌肉、靜脈等)。例如，適合口服給藥的劑型包括膠囊、片劑、顆粒劑以及糖漿等。這些製劑中包含的本發明的化合物可以是固體粉末或顆粒；水性或非水性液體中的溶液或是混懸液；油包水或水包油的乳劑 等。上述劑型可由活性化合物與一種或多種載體或輔料經由通用的藥劑學方法製成。上述的載體需要與活性化合物或其他輔料相容。對於固體製劑，常用的無毒載體包括但不限於甘露醇、乳糖、澱粉、硬脂酸鎂、纖維素、葡萄糖、蔗糖等。用於液體製劑的載體包括水、生理鹽水、葡萄糖水溶液、乙二醇和聚乙二醇等。活性化合物可與上述載體形成溶液或是混懸液。
本發明的組合物以符合醫學實踐規範的方式配製，定量和給藥。給予化合物的“有效量”由要治療的具體病症、治療的個體、病症的起因、藥物的靶點以及給藥方式等因素決定。
本發明第三方面提供了本發明第一方面所述的化合物，或其藥學上可接受的鹽、立體異構體、溶劑化物或其前藥可用於製備調控EGFR酪胺酸激酶活性或治療EGFR相關疾病的藥物中的應用。
作為優選，所述EGFR相關疾病為癌症，糖尿病，免疫系統疾病，神經退化性疾病或心血管疾病。
作為優選，所述癌症為非小細胞肺癌、頭頸癌、乳腺癌、腎癌、胰腺癌、子宮頸癌、食道癌、胰腺癌、前列腺癌、膀胱癌、結腸直腸癌、卵巢癌、胃癌、腦惡性腫瘤包括成膠質細胞瘤等，或它們的任何組合。
作為優選，所述非小細胞肺癌是由EGFR突變引起的，包括敏感型突變(如L858R突變或外顯子19缺失)和耐藥性突變(如EGFR T790M突變)。
作為優選，所述的化合物，或其藥學上可接受的鹽、立體異構體、溶劑化物或其前藥還可用於製備治療EGFR異常表達的疾病或在使用EGFR調節劑治療期間具有獲得性耐藥性的疾病的藥物中的應用。
作為優選，所述獲得性耐藥性是由EGFR外顯子20編碼的T790突變引起的或者是包含EGFR外顯子20編碼的T790突變所引起的耐藥性，如T790M。
在本發明中，EGFR調節劑是指靶向EGFR的小分子酪胺酸激酶抑制劑，如吉非替尼、厄洛替尼、埃克替尼、拉帕替尼或阿法替尼。
本發明第四方面提供了一種藥用組合物，其包括治療有效量的本發明第一方面所述的化合物，或其藥學上可接受的鹽、立體異構體、溶劑化物或其前藥，以及選自下組藥物中的一種或多種其它藥物：吉非替尼、厄洛替尼、埃克替尼、拉帕替尼、XL647、NVP-AEE-788、ARRY-334543、EKB-569、BIBW2992、HKI272、BMS-690514、CI-1033、凡德他尼、PF00299804、WZ4002、西妥昔單抗、曲妥珠單抗、帕尼突單抗、馬妥珠單抗、尼妥珠單抗、紮魯木單抗、帕妥珠單抗、MDX-214、CDX-110、IMC-11F8、Zemab、Her2疫苗PX 1041、HSP90抑制劑、CNF2024、坦螺旋黴素、阿螺旋黴素、IPI-504、SNX-5422、NVP-AUY922、或其組合。除本發明的化合物，或其藥學上可接受的鹽、立體異構體、溶劑化物或其前藥以外，上述藥用組合物中的其它藥物均為本領域技術人員熟知的抗腫 瘤藥物。
如本文所用，“治療有效量”是指可對人和/或動物產生功能或活性的且可被人和/或動物所接受的量。
本發明的藥物組合物或所述藥用組合物中含有的本發明化合物，或其藥學上可接受的鹽、立體異構體、溶劑化物或其前藥的治療有效量優選為0.1mg-5g/kg(體重)。
本發明的藥用組合物可用於治療EGFR相關疾病，如癌症、糖尿病、免疫系統疾病、神經退化性疾病或心血管疾病，或使用EGFR調節劑治療期間具有獲得性耐藥性的疾病。
所述獲得性耐藥性的疾病是由EGFR外顯子20編碼的T790突變所引起的，或者是包含EGFR外顯子20編碼的T790突變所引起的。
在另一優選例中，所述的EGFR外顯子20編碼的T790為T790M。
本發明所述的化合物在某些疾病中可以與其它藥物聯合應用，以達到預期的治療效果。一個聯合應用的例子是用來治療晚期NSCLC。例如，將治療有效量的本發明式I所示化合物與mTOR抑制劑聯用(例如雷帕黴素)；或與Met抑制劑(包括Met抗體MetMAb和Met小分子抑制劑PF02341066)聯用；或與IGFIR抑制劑聯用(例如OSI-906)；或與熱休克蛋白抑制劑聯用等。
應理解，在本發明範圍內中，本發明的上述各 技術特徵和在下文(如實施例)中具體描述的各技術特徵之間都可以互相組合，從而構成新的或優選的技術方案。
發明人經過長期而深入的研究，意外地發現了一類EGFR突變選擇性抑制劑，體外實驗表明其在納摩爾濃度下即可抑制EGFR T790M/L858R雙突變酶和細胞株H1975的增殖，同時對EGFR敏感性突變細胞株HCC827(外顯子19缺失)也有很高的抑制強度，而對野生型EGFR酶和細胞株A431的抑制則相對較弱。因此，此類結構不但可用於EGFR敏感型突變癌症的治療，還適用於目前EGFR-TKI治療中產生繼發性耐藥的病例；同時其突變選擇性大大減小了因抑制野生型EGFR而產生的毒副作用，此外，該類化合物在正常細胞系(如3T3細胞)中具有較低的細胞毒性，從而大大降低了非特異性毒副作用，是第二代EGFR-TKI的理想替代物。
術語定義
如本文所用，“C1-10烷基”是指具有1至10個碳原子的直鏈或支鏈的飽和脂族烴基。例如甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、第二丁基、第三丁基、戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基等。
如本文所用，“C1-10烷氧基”指C1-10烷基-O-。 例如甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、丁氧基、異丁氧基、第二丁氧基、第三丁氧基等。
如本文所用，“鹵素”指氟、氯、溴或碘。
如本文所用，“C3-10環烷基”指包括3至10個碳原子飽和或部分不飽和單環或多環環狀烴取代基，優選環烷基包含3至8個碳原子(C3-8環烷基)，最優選環烷基包含3至6個碳原子(C3-6環烷基)。單環環烷基的非限制性實施例包含環丙基、環丁基、環戊基、環戊烯基、環己基、環己烯基、環己二烯基、環庚基、環庚三烯基、環辛基等，優選環丙基、環戊基、環己烯基。多環環烷基包括螺環、稠環和橋環的環烷基。
如本文所用，“C3-10雜環烷基”指飽和或部分不飽和單環或多環環狀烴取代基，其包括3至10個環原子，其中一個或多個環原子選自氮、氧或S(O)t(其中t是整數0至2)的雜原子，但不包括-O-O-、-O-S-或-S-S-的環部分，其餘環原子為碳。優選包括3至8個環原子，其中1-3個是雜原子，更優選雜環烷基包含3至6個環原子，更優選雜環烷基包含5至6個環原子。單環雜環基的非限制性實施例包含吡咯烷基、哌啶基、哌基、嗎啉基、硫代嗎啉基、高哌基、吡喃基、四氫呋喃基等。多環雜環基包括螺環、稠環和橋環的雜環基。
如本文所用，“鹵代的C1-10烷基”指烷基被1、2、3、4或5個鹵素取代，其中烷基的定義如上所述。優選鹵代C1-10烷基，更優選鹵代C1-6烷基，最優選鹵代C1-3烷 基。包括(但不限於)一氯乙基、二氯甲基、1,2-二氯乙基、一溴乙基、一氟乙基、一氟甲基、二氟甲基、三氟甲基等。
活性成分
術語“本發明的活性物質”或“本發明的活性化合物”是指本發明式(I)化合物、或其藥學上可接受的鹽、或其溶劑化物、或其立體異構體、或其前藥，其具有顯著耐藥EGFR T790M突變(特別是EGFR T790M/L858R雙突變)抑制活性。
如本文所用，所述“藥學上可接受的鹽”包括藥學上可接受的酸加成鹽和藥學可接受的鹼加成鹽。“藥學上可接受的酸加成鹽”是指能夠保留游離鹼的生物有效性而無其他副作用的，與無機酸或有機酸所形成的鹽。無機酸鹽包括但不限於鹽酸鹽、氫溴酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽等；有機酸鹽包括但不限於甲酸鹽、乙酸鹽、丙酸鹽、乙醇酸鹽、葡萄糖酸鹽、乳酸鹽、草酸鹽、馬來酸鹽、琥珀酸鹽、富馬酸鹽、酒石酸鹽、檸檬酸鹽、麩胺酸鹽、天門冬胺酸鹽、苯甲酸鹽、甲磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽和水楊酸鹽等。這些鹽可通過本專業已知的方法製備。“藥學可接受的鹼加成鹽”，包括但不限於無機鹼的鹽如鈉鹽，鉀鹽，鈣鹽和鎂鹽等。包括但不限於有機鹼的鹽，比如銨鹽，三乙胺鹽，離胺酸鹽，精胺酸鹽等。這些鹽可通過本專業已知的方法製備。
如本文所用，式(I)化合物可以存在於一種或多 種晶型，本發明的活性化合物包括各種晶型及其混合物。
本發明中提及的“溶劑化物”是指本發明的化合物與溶劑形成的配合物。它們或者在溶劑中反應或者從溶劑中沉澱析出或者結晶出來。例如，一個與水形成的配合物稱為“水合物”。式(I)化合物的溶劑化物屬於本發明範圍之內。
本發明式(I)所示的化合物可以含有一個或多個手性中心，並以不同的光學活性形式存在。當化合物含有一個手性中心時，化合物包含對映異構體。本發明包括這兩種異構體和異構體的混合物，如外消旋混合物。對映異構體可以通過本專業已知的方法拆分，例如結晶以及手性層析等方法。當式(I)化合物含有多於一個手性中心時，可以存在非對映異構體。本發明包括拆分過的光學純的特定異構體以及非對映異構體的混合物。非對映異構體可由本專業已知方法拆分，比如結晶以及製備層析。
本發明包括上述化合物的前藥。前藥包括已知的胺基保護基和羧基保護基，在生理條件下被水解或經由酶反應釋放得到母體化合物。具體的前藥製備方法可參照Saulnier，M.G.；Frennesson，D.B.；Deshpande，M.S.；Hansel，S.B.and Vysa，D.M.Bioorg.Med.Chem.Lett.1994，4，1985-1990；和Greenwald，R.B.；Choe，Y.H.；Conover，C.D.；Shum，K.；Wu，D.；Royzen，M.J.Med.Chem.2000，43，475.。
製備方法
本發明提供了式(I)化合物的製備方法，本發明中的化合物可以通過多種合成操作容易地製備，這些操作是所屬領域技術人員熟練掌握的。這些化合物的示例性製備方法可以包括(但不限於)下文所述的流程。
較佳地，本發明式(I)化合物可以通過以下方案及實施例中所述的示例性方法以及本領域技術人員所用的相關公開文獻操作完成。
在具體操作過程中，可以根據需要對方法中的步驟進行擴展或合併。
步驟1：嘧啶4位的氯與硼酸酯或者硼酸，或者合適的胺反應，需在一定溫度下，使用合適的催化劑及適當的溶劑可以進行。使用Suzuki方法，所用的鈀催化劑可以是但不限於PdCl2(dppf)，所用的鹼可以是但不限於碳酸鈉。
步驟2：嘧啶2位的氯以胺取代，需在一定溫度下，使用合適的催化劑及適當的溶劑才能進行。使用酸催化，催化劑可以是但不限於TFA或對甲苯磺酸。使用Buchwald-Hartwig胺化法，所用的鈀催化劑可以是但不限於Pd2(dba)3，所用的配體可以是但不限於Xantphos(4,5-雙(二苯基膦)-9,9-二甲基氧雜蒽)，所用的鹼可以是但不限於碳酸銫。
步驟3：苯基4位的氟以胺取代，需在一定溫度下，使用合適的鹼及適當的溶劑才能進行。所用的鹼可以是但不限於碳酸鉀。
步驟4：該硝基化合物轉化為相應的胺基化合物可在酸性條件下，用金屬(可以是但不限於鐵粉，鋅粉)或者氯化亞錫進行還原；或者在鈀碳催化下，加氫還原。
步驟5：該胺基化合物可在鹼性條件下與相應的醯氯縮合成醯胺，或者在縮合劑存在下與相應的羧酸縮合成醯胺。
以上各步驟中的反應均是本領域技術人員已知的常規反應。
本發明公開的式(I)化合物以及化合物的製備方法、藥物組成和治療方案，本領域技術人員可以借鑒本文內容，適當改進製程參數實現。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動對本領域技術人員來說是顯而易見的，它們都被視為包括在本發明。本發明的產品、方法及應用已經通過較佳實施例進行了描述，相關人員明顯能在不脫 離本發明內容、精神和範圍內對本文所述的方法和應用進行改動或適當變更與組合，來實現和應用本發明技術。
與現有技術相比，本發明的主要優點在於：
(1)本發明化合物對EGFR T790M突變型(特別是EGFR T790M/L858R雙突變型)酶和細胞具有高抑制活性，且對EGFR野生型(EGFR WT)酶和細胞具有低抑制活性，因此具有高選擇抑制性。
(2)本發明化合物對EGFR雙突變型酶和細胞表現高選擇抑制性的同時還具有低非特異性細胞毒性。
(3)與其他已知的EGFR突變抑制劑相比，本發明化合物還顯示出有利的物理性質(例如，較高的水溶性)，有利的毒性特徵(例如較低的hERG阻斷傾向)，有利的代謝特徵(例如，較好的藥代動力學特徵，如生物利用度)。
為了使本領域技術人員更好地理解本發明的技術方案，下面結合具體實施例對本發明作進一步的詳細說明。
試劑與儀器
本發明中，化合物的結構和純度通過核磁共振(1H NMR)和/或液質聯用質譜(LC-MS)來確定。1H NMR：Bruker AVANCE-400核磁儀，內標為四甲基矽烷(TMS)。LC-MS：Agilent 1200 HPLC System/6140 MS液質聯用質譜儀(購自安捷倫)，管柱Waters X-Bridge,150×4.6mm,3.5μm。製備高效液相層析(pre-HPLC)：用Waters PHW007，管柱XBridge C18,4.6×150mm,3.5μm。
採用ISCO Combiflash-Rf75或Rf200型自動過柱儀，Agela 4g、12g、20g、40g、80g、120g一次性矽膠柱。
薄層層析矽膠板使用煙臺黃海HSGF254或青島GF254矽膠板，薄層層析法(TLC)，檢測反應使用的矽膠板採用的規格是0.15-0.2mm，薄層層析法分離純化產品使用的矽膠板採用的規格是0.4-0.5mm。矽膠一般使用煙臺黃海矽膠200-300目矽膠為載體。鹼性氧化鋁柱一般使用國藥層析用FCP 200-300目鹼性氧化鋁為載體。
本發明的已知的起始原料可以採用或按照本領域已知的方法來合成，或可以於ABCR GmbH & Co.KG，Acros Organics，Aldrich Chemical Company，韶遠化學科技(Accela ChemBio Inc)和達瑞化學品等公司處購買。
實施例中無特殊說明，反應均在氮氣或氬氣氛下進行。實施例中無特殊說明，溶液是指水溶液。
如本文所用，DMF表示二甲基甲醯胺，DMSO表示二甲基亞碸，THF表示四氫呋喃，DIEA表示N,N-二異丙基乙胺，EA表示乙酸乙酯，PE表示石油醚。BINAP表示(2R,3S)-2,2'-雙二苯膦基-1,1'-聯萘，NBS表示N-溴代丁二醯亞胺，NCS表示N-氯代丁二醯亞胺，Pd2(dba)3表示三(二亞苄基丙酮)二鈀，Pd(dppf)Cl2表示[1,1'-雙(二苯基磷)二茂鐵]二氯化鈀。
如本文所用，室溫指的是約25℃。
化合物1a的製備：
步驟a：將化合物1a1(10.6g,58mmol)置於500mL反應瓶中，加入THF/水(100mL/60mL)混合溶液溶解。在室溫下，邊攪拌邊依次加入氯化銨(15.5g,292mmol)和還原鐵粉(26g,467mmol)，隨後將反應體系加熱至65℃並持續攪拌3h。TLC檢測反應進度，待反應完成後，過濾除去多餘鐵粉，濾餅用EA淋洗三次。濾液用EA/水體系萃取三次，分離出有機層，經水洗，飽和食鹽水洗滌，無水Na2SO4乾燥後，減壓濃縮得到化合物1a2(8.0g)，直接用於下一步反應。產率：93%；純度：90%；MS m/z(ESI)：142.0[M+H]+。
步驟b：將化合物1a2(8.0g,43mmol)置於500mL反應瓶中，勻速攪拌下加入濃硫酸(100mL)使底物溶解。在零下20℃下，邊攪拌邊緩慢滴加濃硝酸(6.15mL,48mmol)，並保溫攪拌5min。TLC檢測反應進度，待反應完成後，倒入冰水中。保持零下20℃冰浴，向反應體系中緩慢加入氫氧化鈉/水溶液(150mL/300mL)，調節pH值至8-9。然後反應液用EA/水體系萃取三次，分離出有機層，經水洗，飽和食鹽水洗滌，無水Na2SO4乾燥後，減壓濃縮得到化合物1a(8.7g)，直接用於下一步反應。產率：80%；純度：100%；MS m/z(ESI)：187.0[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)：δ 7.34(d,J=7.8Hz,1H),7.04(d,J=13.4 Hz,1H),5.25(brs,2H),3.90(s,3H)。
中間體2a的製備
步驟1：將化合物1a(11.16g，60mmol)溶於150mL二氯甲烷，加入二碳酸二第三丁酯(15.60g，72mmol)、三乙胺(12.24g，120mmol)和4-二甲胺基吡啶(0.74g，6mmol)室溫下攪拌反應18h。TLC檢測反應進度，待反應完成後，減壓濃縮反應液，柱層析[PE：EA=80：20]分離純化得到目標產物化合物2a2(12.56g，73%)。MS m/z(ESI)：285[M-H]+。
步驟2：將化合物2a2(11.46g，40mmol)溶於60mL N,N-二甲基乙醯胺，加入N,N,N'-三甲基乙二胺(4.90g，48mmol)，N,N-二異丙基乙基胺(7.74g，60mmol)，加熱至90℃攪拌反應6h。TLC檢測反應進度，待反應完成後，將反應液冷卻至室溫，倒入冰水中，用乙酸乙酯萃取，飽和食鹽水洗滌，無水Na2SO4乾燥，減壓濃縮得目標產物化合物2a3(12.51g，85%)。直接用於下一步反應。MS m/z(ESI)：369[M+H]+。
步驟3：將化合物2a3(12g，32.6mmol)溶於200mL甲醇，加入1.0g 10% Pd/C。以氫氣置換空氣後，於室溫下以氫氣球加氫，攪拌反應1h。TLC檢測反應進度，待反應完成後，經砂芯漏斗抽濾，以少量甲醇洗滌濾餅，將濾液濃縮得到目標產物化合物2a4(10.70g，97%)。直接用於下一步反應。MS m/z(ESI)：339[M+H]+。
步驟4：將化合物2a4(10.1g，30mmol)和三乙胺(6.12g，60mmol)溶於200mL二氯甲烷，冷卻至0℃，加入丙烯醯氯(3.24g，36mmol)，在氮氣保護下，室溫攪拌3h。TLC檢測反應進度，待反應完成後，以飽和碳酸氫鈉水溶液、飽和食鹽水順次洗滌，無水Na2SO4乾燥，抽濾，經減壓濃縮得到目標產物化合物2a5(9.64g，82%)。直接用於下一步反應。MS m/z(ESI)：393[M+H]+。
步驟5：將化合物2a5(9.41g，24mmol)溶解在100mL二氯甲烷中，冷卻到0℃，加入20mL三氟乙酸，在氮氣保護下室溫攪拌18h。TLC檢測反應進度，待反應完成後，減壓濃縮反應液。將殘留物以300mL二氯甲烷溶解，用飽和碳酸氫鈉水溶液、飽和食鹽水順次洗滌，無水Na2SO4乾燥，抽濾，減壓濃縮得到粗產品。經柱層析[DCM：MeOH=10：1]純化得到目標產物化合物2a(3.26g，46.5%)。MS m/z(ESI)：293[M+H]+。
中間體3a的製備
製備方法同化合物2a，不同的是將化合物2a製法中步驟2中的N,N,N'-三甲基乙二胺換成4-二甲胺基哌啶。MS m/z(ESI)：319.2[M+H]+。
中間體4a的製備
製備方法同化合物2a，不同的是將化合物2a製法中步驟2中的N,N,N'-三甲基乙二胺換成甲基哌。MS m/z(ESI)：291[M+H]+。
實施例1：N-(5-(5-氯-4-(1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)嘧啶-2-胺基)-2-((2-(二甲胺)乙基)甲基胺基)-4-甲氧基苯基)丙醯胺(化合物Z-1)
步驟1：5-溴-1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(化合物1-2)
在0℃下，將化合物5-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(5g，25.4mmol，市購)的DMF溶液加入到氫化鈉(4.32g，30.5mmol)的40mL DMF中，0℃下劇烈攪拌0.5h後，加入碘甲烷(1.22g，30.5mmol)，室溫下劇烈攪拌3h。TLC檢測反應進度，待反應完成後，將反應體系倒入冰水中。待固體完全析出後，過濾，固體用二氯甲烷和甲醇(10：1)溶解，水洗3次，乾燥，分離出有機層，減壓濃縮得到化合物1-2(5.4g，99%)，產物直接用於下一步。MS m/z(ESI)：211.0[M+H]+。
步驟2：1-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼烷-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(化合物1-3)
將雙聯頻哪硼酸酯(11.26g，43.6mmol)，PdCl2(dppf)(814mg，1.11mmol)和乙酸鉀(6.53g，32.7mmol)加入到化合物1-2(4.6g,21.8mmol)的50mL 1,4-二氧六環溶液中。90℃下，在N2氛圍中劇烈攪拌8h。反應結束後，過濾，濾液濃縮，得粗產品化合物1-3(13.9g)，產物直接用於下一步。MS m/z(ESI)：259.1[M+H]+。
步驟3：5-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(化合物1-4)
將2,4,5-三氯嘧啶(4.93g，26.2mmol)，PdCl2(dppf)(1.66g，2.26mmol，市購)和23mL的2.0mol/L的碳酸鈉溶液加入到化合物1-3(13.9g,21.8mmol)的50mL乙腈溶液中。85℃下，在N2氛圍中劇烈攪拌4h。反應結束後，加水稀釋，用EA/水體系萃取，水洗3次，乾燥，有機層減壓濃縮得粗產品。經Combi-flash柱層析[PE：EA=100：0-20：80]純化後得化合物1-4(2.16g，36%)。MS m/z(ESI)：279.0[M+H]+。
步驟4：5-氯-N-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基)-4-(1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)嘧啶-2-胺(化合物1-5)
將化合物4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯胺(1.13g，6.09mmol)，Pd2(dba)3(558mg，0.61mmol)，Xantphos(705mg，1.22mmol)和碳酸銫(3.97g，12.2mmol)加入到化合物1-4(1.70g,6.09mmol)的20mL 1,4-二氧六環溶液中。120℃下，在N2氛圍中劇烈攪拌5h。反應結束後，過濾， 濾液減壓濃縮後得粗產品，經Combi-flash柱層析[PE：EA=100：0-0：100]純化後得化合物1-5(420mg，16%)。MS m/z(ESI)：429.0[M+H]+。
步驟5：N1-(5-氯-4-(1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)嘧啶-2-基)-N4-(2-(二甲胺基)乙基)-2-甲氧基-N4-甲基-5-硝基苯基-1,4-二胺(化合物1-6)
將N,N,N'-三甲基乙二胺(72mg，0.70mmol)和碳酸鉀(193mg，1.40mmol)加入到化合物1-5(200mg,0.47mmol)的4mL的DMF中，100℃下劇烈攪拌2h。TLC檢測反應進度，待反應完成後，加入10mL水，用EA/水體系萃取三次，分離出有機層，減壓濃縮得到化合物1-6(240mg，90%)。MS m/z(ESI)：511.3[M+H]+。
步驟6：N4-(5-氯-4-(1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)嘧啶-2-基)-N1-(2-(二甲胺基)乙基)-5-甲氧基-N1-甲基苯基-1,2,4-三胺(化合物1-7)
將Pd/C(20mg)加入到化合物1-6(100mg,0.20mmol)的20mL甲醇溶液中。室溫下，在H2氛圍中劇烈攪拌4h。反應結束後，過濾，濾液濃縮，得化合物1-7(80mg，83%)，產物直接用於下一步。MS m/z(ESI)：481.2[M+H]+。
步驟7：N-(5-(5-氯-4-(1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)嘧啶-2-胺基)-2-((2-(二甲胺)乙基)甲基胺基)-4-甲氧基苯基)丙醯胺(化合物Z-1)
在0℃下，將丙烯醯氯(17mg,0.17mmol)與三 乙胺(28mg,0.25mmol)加入到化合物1-7(80mg,0.17mmol)的2mL二氯甲烷溶液中，0℃下劇烈攪拌2h。反應結束後，加水稀釋，用二氯甲烷/水體系萃取三次，有機層減壓濃縮得到粗產物。經製備液相分離純化得化合物Z-1(2.39mg，6%)。MS m/z(ESI)：534.9[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)：δ 10.11(s,1H),8.87-8.75(m,2H),8.57(d,J=17.2Hz,3H),7.62(d,J=3.5Hz,1H),7.00(s,1H),6.57(d,J=3.4Hz,1H),6.44-6.35(m,1H),6.29(d,J=16.7Hz,1H),5.77(d,J=12.0Hz,1H),3.87(s,3H),3.82(s,3H),2.85(s,2H),2.70(s,3H),2.29(d,J=5.7Hz,2H),2,19(s,6H)。
實施例2：N-(5-(5-氯-4-(1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)嘧啶-2-胺基)-2-(4-(二甲胺基)哌啶-1-基)-4-甲氧基苯基)丙烯醯胺(化合物Z-2)
步驟1：5-氯-N-(4-(4-(二甲胺基)哌啶-1-基)-2-甲氧基-5-硝基苯基)-4-(1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)嘧啶-2-胺(化合物2-6)
將化合物1-5(260mg,0.607mmol)和碳酸鉀(251mg,1.822mmol)置於25mL反應瓶中，加入DMF(10mL)使底物部分溶解。之後加入N,N-二甲胺基哌啶(85.4 mg,0.667mmol)並保持反應體系在70℃條件下加熱3h。TLC檢測反應進度，待反應完成後，反應液用EA/水體系萃取三次，分離出有機層，經水洗，飽和食鹽水洗滌，無水Na2SO4乾燥後，減壓濃縮得到粗產物2-6，220mg，產率68%。MS M/Z(ESI)：537.2[M+H]+。
步驟2：N1-(5-氯-4-(1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)嘧啶-2-基)-4-(4-(二甲胺基)哌啶-1-基)-6-甲氧基苯基-1,3-二胺(化合物2-7)
將反應底物2-6(110mg,0.205mmol)置於25mL反應瓶中，加入乙醇(6mL)。在室溫條件下，向攪拌的反應瓶中加入氯化亞錫(138mg,0.615mmol)，並保持反應體系在60℃條件下加熱2h。TLC檢測反應進度，待反應完成後，反應液濃縮旋乾，用EA/水體系萃取三次，分離出有機層，經水洗，飽和食鹽水洗滌，無水Na2SO4乾燥後。濾液減壓濃縮得到粗產物2-7(80mg，76.9%)，直接用於下一步反應。
步驟3：N-(5-(5-氯-4-(1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)嘧啶-2-胺基)-2-(4-(二甲胺基)哌啶-1-基)-4-甲氧基苯基)丙烯醯胺(化合物Z-2)
在0℃下，將丙烯醯氯(17.0mg,0.188mmol)與DIEA(60.8mg,0.471mmol)加入到化合物2-7(80mg,0.157mmol)的3mL THF溶液中，0℃下劇烈攪拌2h。反應結束後，加水稀釋，用二氯甲烷/水體系萃取三次，有機層減壓濃縮得到粗產物。經製備液相分離純化得化合物Z-2(9.0 mg，10%)。MS m/z(ESI)：560.8[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)：δ 8.98(s,1H),8.75-8.74(d,J=4.0Hz,1H)，8.48-8.53(m,4H),7.62-7.61(d,J=4.0Hz,1H),6.84(s,1H),6.71-6.57(m,2H),6.29-6.25(d,J=16.0Hz,1H),5.77-5.74(d,J=12.0Hz,1H),3.87(s,3H),3.82(s,3H),3.05-3.02(d,J=12.0Hz,2H),2.69-2.63(m,2H),2.30-2.19(m,7H),1.91-1.83(m,2H),1.70-1.68(m,2H)。
實施例3：N-(5-(5-氯-4-(1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)嘧啶-2-胺基)-4-甲氧基-2-(4-甲基哌 -1-基)苯基)丙烯醯胺(化合物Z-3)
步驟1：5-氯-N-(2-甲氧基-4-(4-甲基哌-1-基)-5-硝基苯基)-4-(1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)嘧啶-2-胺(化合物3-6)
將N-甲基哌(126mg，1.26mmol)和碳酸鉀(261mg，1.89mmol)加入到化合物1-5(200mg,0.47mmol)的4mL的DMF中，100℃下劇烈攪拌2h。TLC檢測反應進度，待反應完成後，加入10mL水，用EA/水體系萃取三次，分離出有機層，減壓濃縮得到化合物3-6(200mg，84%)。MS m/z(ESI)：509.2[M+H]+。
步驟2：N1-(5-氯-4-(1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)嘧啶-2-基)-6-甲氧基-4-(4-甲基哌-1-基)苯基-1,3-二胺(化合物3-7)
以化合物3-6(200mg,0.39mmol)為原料，參照實施例1中步驟6進行合成，得化合物3-7(140mg，75%)，產物直接用於下一步。MS m/z(ESI)：479.1[M+H]+。
步驟3：N-(5-(5-氯-4-(1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)嘧啶-2-胺基)-4-甲氧基-2-(4-甲基哌-1-基)苯基)丙烯醯胺(化合物Z-3)
以化合物3-7(140mg,0.29mmol)為原料，參照實施例1中步驟7進行合成，得化合物Z-3(1.60mg，1%)。MS m/z(ESI)：533.2[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)：δ 8.98(s,1H),8.76(s,1H),8.51(d,J=32.1Hz,3H),7.63(s,1H),6.86(s,1H),6.63(d,J=28.9Hz,2H),6.27(d,J=16.2Hz,1H),5.76(d,J=9.1Hz,1H),5.33(s,1H),3.88(s,3H),3.84(s,3H),2.86(s,4H),2.55(s,2H),2.26(s,3H),1.99(s,2H)。
實施例4：N-(2-(4-(二甲胺基)哌啶-1-基)-4-甲氧基-5-(4-(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)嘧啶-2-基胺基)苯基)丙烯醯胺(化合物Z-4)
步驟1：5-溴-1-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(化合物4-2)
將氫化鈉(720mg,30mmol)置於100mL反應瓶中，向反應瓶中加入無水THF(40mL)。0℃條件下攪拌5min，將反應底物5-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(4.0g,20mmol，市購)溶於THF(20mL)中，通過恒壓滴液漏斗緩慢滴加到反應瓶中，攪拌30min，向反應體系中滴加碘甲烷(1.6mL,26mmol)。滴加完畢，緩慢升溫至室溫反應，攪拌過夜。TLC檢測反應進度，待反應完成後，向反應體系中加入冰水10mL淬滅反應，減壓濃縮蒸除THF，殘留物經二氯甲烷(60mL)和水(20mL×3)萃取，有機層經無水Na2SO4乾燥、減壓濃縮得4.1g褐色固體，經Combi-flash柱層析[PE：EA=10：90-40：60]分離純化得目標化合物4-2(3.1g，73%)。MS m/z(ESI)：211.9[M+H]+。
步驟2：1-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜環戊硼烷-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(化合物4-3)
將化合物4-2(3.1g,14.6mmol)和雙聯頻哪醇硼酸酯(11.1g,43.8mmol)置於250mL反應瓶中，加入DMF(150mL)和乙酸鉀(4.3g,43.8mmol)。反應體系用氬氣置換空氣三次後，加入Pd(dppf)Cl2(0.55g,0.73mmol)，之後再用氮氣置換空氣三次。將反應體系加熱至90℃，並且持續攪拌8h。LC-MS檢測反應進度，待反應完成後，抽濾，濾餅經EA(30mL×3)洗滌，濾液減壓濃縮蒸除DMF得到化合物4-3(13.5g)，褐色固體，直接用於下一步反應。MS m/z(ESI)：260.2[M+H]+。
步驟3：5-(2-氯嘧啶-4-基)-1-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(化合物4-4)
將反應底物4-3(3.8g,14.6mmol)和2,4-二氯嘧啶(2.6g,17.5mmol)置於250mL反應瓶中，加入乙腈(130mL)和碳酸鈉溶液(22mL,2M)。反應體系用氬氣置換空氣三次後，加入Pd(dppf)Cl2(0.55g,0.73mmol)，之後再用氮氣置換空氣三次。將反應體系加熱至85℃，並且持續攪拌3h。LC-MS檢測反應進度，待反應完成後，冷卻至室溫，析出大量固體，抽濾，濾餅經EA(10mL×3)洗滌，烘乾至恒重得2.2g黃色固體，濾液經EA和水萃取，乾燥濃縮後，再經Combi-flash柱層析[PE：EA=10：90-70：30]分離純化得0.6g黃色固體，將固體合併得目標化合物4-4(2.8g，78%)。MS m/z(ESI)：246.1[M+H]+。
步驟4：N-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基)-4-(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)嘧啶-2-胺(化合物4-5)
將反應底物4-4(420mg,1.7mmol)和4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯胺(316mg,1.7mmol)置於100mL的封管反應瓶中，加入異丁醇(40mL)使底物部分溶解。之後加入對甲苯磺酸(807mg,4.25mmol)，並保持反應體系在130℃條件下封管加熱16h。待反應結束後，冷卻至室溫，溶液中析出大量固體。布氏漏斗過濾得到濾餅，經過乙醇回流打漿後，得到目標化合物4-5(524mg，78%)，直接用於下一步反應。純度：47%。MS m/z(ESI)：396.2[M+H]+。
步驟5：N-(4-(4-(二甲基胺基)哌啶-1-基)-2-甲氧基-5-硝基苯基)-4-(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)嘧啶-2-胺(化合物4-6)
將反應底物4-5(146mg,0.25mmol)和碳酸鉀(104mg,0.75mmol)置於25mL反應瓶中，加入DMF(10mL)使底物完全溶解。之後加入4-二甲胺基哌啶(42mg,0.325mmol)並保持反應體系在100℃條件下加熱反應2h。TLC檢測反應進度，待反應完成後，反應液用EA/水體系萃取三次，分離出有機層，經水洗，飽和食鹽水洗滌，無水Na2SO4乾燥後，減壓濃縮得到目標化合物4-6(120mg，98%)。MS m/z(ESI)：504.2[M+H]+。
步驟6：4-(4-(二甲基胺基)哌啶-1-基)-6-甲氧基-N1-(4-(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)嘧啶-2-基)苯-1,3-二胺(化合物4-7)
以化合物4-6(120mg,0.24mmol)為原料，參照實施例1中的步驟6進行合成，得到化合物4-7(113mg)，直接用於下一步反應。MS m/z(ESI)：474.3[M+H]+。
步驟7：N-(2-(4-(二甲胺基)哌啶-1-基)-4-甲氧基-5-(4-(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)嘧啶-2-基胺基)苯基)丙烯醯胺(化合物Z-4)
以化合物4-7(113mg,0.24mmol)為原料，參照實施例1中步驟7進行合成，得到的粗產物經Prep-TLC柱層析[DCM：MeOH：NH4OH=9：1：0.1]純化後，得到目標化合物Z-4(6mg，5%)。MS m/z(ESI)：528.3[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)：δ 9.33(s,1H),9.22(s,1H),9.04(s,1H),8.80(s,1H),8.51-8.50(d,J=5.6Hz,2H),8.13(s,1H),7.53-7.51(d,J=5.6Hz,1H),6.86(s,1H),6.74-6.67(m,1H),6.32-6.28(d,J=17.0Hz,2H),5.79-5.67(d,J=13.4Hz,1H),4.24(s,3H),3.86(s,3H),3.33(s,1H),3.05-3.03(d,J=10.7Hz,2H),2.70-2.64(t,J=11.7Hz,3H),2.22(s,6H),1.85-1.82(d,J=11.3Hz,2H),1.70-1.67(d,J=12.1Hz,2H)。
實施例5：N-(4-甲氧基-5-(4-(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)嘧啶-2-基胺基)-2-(4-甲基哌 -1-基)苯基)丙烯醯胺(化合物Z-5)
步驟1：N-(2-甲氧基-4-(4-甲基哌-1-基)-5-硝 基苯基)-4-(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)嘧啶-2-胺(化合物5-6)
將化合物4-5(146mg,0.25mmol)和碳酸鉀(104mg,0.75mmol)置於25mL反應瓶中，加入DMF(10mL)使底物完全溶解。之後加入N-甲基哌(32mg,0.325mmol)並保持反應體系在100℃條件下加熱反應2h。TLC檢測反應進度，待反應完成後，反應液用EA/水體系萃取三次，分離出有機層，經水洗，飽和食鹽水洗滌，無水Na2SO4乾燥後，減壓濃縮得到目標化合物5-6，直接用於下一步反應。純度：88%。MS m/z(ESI)：476.2[M+H]+。
步驟2：6-甲氧基-N1-(4-(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)嘧啶-2-基)-4-(4-甲基哌-1-基)苯基-1,3-二胺(化合物5-7)
以化合物5-6(119mg,0.25mmol)為原料，參照實施例1中步驟6進行合成，得到化合物5-7，直接用於下一步反應。純度：59%。MS m/z(ESI)：446.2[M+H]+。
步驟3：N-(4-甲氧基-5-(4-(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)嘧啶-2-基胺基)-2-(4-甲基哌-1-基基)苯基)丙烯醯胺(化合物Z-5)
以化合物5-7(111mg,0.25mmol)為原料，參照實施例1中步驟7進行合成，得到的粗產物經Prep-TLC柱層析[DCM：MeOH：NH4OH=9：1：0.1]純化後得到目標化合物Z-5(8mg，6%)。純度：96.5%。MS m/z(ESI)：500.2[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)：δ 9.33(s,1H),9.21(s,1H), 9.03(s,1H),8.79(s,1H),8.51-8.50(d,J=5.2Hz,2H),8.12(s,1H),7.52-7.51(d,J=5.2Hz,1H),6.88(s,1H),6.68-6.61(m,1H),6.31-6.27(d,J=16.9Hz,2H),5.78-5.76(d,J=9.9Hz,1H),4.24(s,3H),3.87(s,3H),2.86(s,4H),2.53-2.49(d,J=13.6Hz,4H),2.25(s,3H)。
實施例6：N-(2-((2-(二甲基胺基)乙基)(甲基)胺基)-4-甲氧基-5-(4-(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)嘧啶-2-基胺基)苯基)丙烯醯胺(化合物Z-6)
步驟1：N1-(2-(二甲基胺基)乙基)-5-甲氧基-N1-甲基-N4-(4-(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)嘧啶-2-基)-2-硝基苯基-1,4-二胺(化合物6-6)
將化合物4-5(146mg,0.25mmol)和碳酸鉀(104mg,0.75mmol)置於25mL反應瓶中，加入DMF(10mL)使底物完全溶解。之後加入N,N,N'-三甲基乙二胺(34mg,0.325mmol)並保持反應體系在100℃條件下加熱反應2h。TLC檢測反應進度，待反應完成後，反應液用EA/水體系萃取三次，分離出有機層，經水洗，飽和食鹽水洗滌，無水Na2SO4乾燥後，減壓濃縮得到目標產物化合物6-6，直接用於下一步反應。純度：94%。MS m/z(ESI)：478.2[M+H]+。
步驟2：N1-(2-(二甲基胺基)乙基)-5-甲氧基-N1-甲基-N4-(4-(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)嘧啶-2-基 基)苯-1,2,4-三胺(化合物6-7)
以化合物6-6(119mg,0.25mmol)為原料，參照實施例1中步驟6進行合成，得到化合物6-7，直接用於下一步反應。純度：83%。MS m/z(ESI)：448.2[M+H]+。
步驟3：N-(2-((2-(二甲基胺基)乙基)(甲基)胺基)-4-甲氧基-5-(4-(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)嘧啶-2-基胺基)苯基)丙烯醯胺(化合物Z-6)
以化合物6-7(111mg,0.25mmol)為原料，參照實施例1中步驟7進行合成，得到的粗產物經Prep-HPLC分離純化後得到目標產品化合物Z-6(1mg,1%)。純度：96.5%。MS m/z(ESI)：502.2[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)：δ 10.13(s,1H),9.35(s,1H),9.27(s,1H),9.12(s,1H),8.52-8.51(d,J=5.3Hz,1H),8.50(s,2H),8.20(s,1H),8.14(s,1H),7.54-7.53(d,J=5.2Hz,1H),7.03(s,1H),6.50-6.44(d,J=10.0Hz,1H),6.34-6.29(d,J=17.3Hz,1H),5.80-5.78(d,J=10.6Hz,1H),4.24(s,3H),3.87(s,3H),2.92-2.90(d,J=5.4Hz,2H),2.69(s,3H),2.39-2.36(t,J=5.4Hz,2H),2.25(s,6H)。
實施例7：N-(5-((5-氯-4-嗎啉嘧啶-2-基)胺基)-2-(4-(二甲胺基)哌啶-1-基)-4-甲氧苯基)丙烯醯胺(化合物Z-7)甲酸鹽
步驟1：4-(2,5-二氯嘧啶-4-基)嗎啉(化合物7-2)
在25℃下，將化合物2,4,5-三氯嘧啶(5g，27.0mmol)加入到25mL THF中，加入三乙胺(5.5g，54.0mmol)，將嗎啉(2.37g，27.0mmol)滴加至反應液中，室溫下攪拌1h。TLC檢測反應進度，待反應完成後，加入水和EA，分離出有機層，有機層經飽和食鹽水系，乾燥，減壓濃縮得到化合物7-2(5.2g)，產物直接用於下一步。MS m/z(ESI)：234.0[M+H]+。
步驟2：5-氯-N-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基)-4-嗎啉嘧啶-2-胺(化合物7-3)
將化合物7-2(1.0g，4.2mmol)，4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯胺(0.83g，4.4mmol)和對甲苯磺酸(2.57g，15.0mmol)加入到10mL 1,4-二氧六環溶液中。110℃下，在N2氛圍中攪拌8h。反應結束後，過濾，用EA洗濾餅，將濾 餅於50℃下烘乾，得粗產品化合物7-3(1.16g)，產物直接用於下一步。MS m/z(ESI)：284.1[M+H]+。
步驟3：5-氯-N-(4-(4-(二甲胺基)哌啶-1-基)-2-甲氧基-5-硝基苯基)-4-嗎啉嘧啶-2-胺(化合物7-4)
將化合物7-3(0.1g，0.26mmol)，4-二甲胺基哌啶(0.033g，0.26mmol)和碳酸鉀(0.072g，0.52mmol)加入到DMF溶液中。100℃下，在N2氛圍中攪拌2h。反應結束後，加水稀釋，用EA/水體系萃取，水洗3次，乾燥，有機層減壓濃縮得粗產品化合物7-4(0.21g)，產物直接用於下一步。MS m/z(ESI)：492.2[M+H]+。
步驟4：N-(5-氯-4-嗎啉嘧啶-2-基)-4-(4-(二甲胺基)哌啶-1-基)-6-甲氧基苯-1,3-二胺(化合物7-5)
將化合物7-4(0.2g，0.41mmol)，鐵粉(0.51g，8.1mmol)和氯化銨(0.11g，2.0mmol)加入到16mL THF和水的混合溶液中。65℃下，在N2氛圍中劇烈攪拌3h。反應結束後，過濾，濾液經EA萃取，水洗，乾燥，減壓濃縮得化合物7-5(0.19g)，產物直接用於下一步。MS m/z(ESI)：462.2[M+H]+。
步驟5：N-(5-((5-氯-4-嗎啉嘧啶-2-基)胺基)-2-(4-(二甲胺基)哌啶-1-基)-4-甲氧苯基)丙烯醯胺(化合物Z-7)甲酸鹽
在0℃下，將丙烯醯氯(40mg,0.43mmol)與三乙胺(50mg,0.49mmol)加入到化合物7-5(190mg,0.41mmol)的5mL二氯甲烷溶液中，0℃下劇烈攪拌2h。反應 結束後，加水稀釋，用二氯甲烷/水體系萃取三次，有機層減壓濃縮得到粗產物。經製備液相分離純化得化合物Z-7的甲酸鹽(4.27mg，五步產率3.1%)。MS m/z(ESI)：562.2[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)：δ 8.98(s,1H),8.57(s,1H),8.28(s,1H),8.06(s,1H),7.83(s,1H),6.80(s,1H),6.65(dd,J=17.0,10.1Hz,1H),6.21(d,J=17.0Hz,1H),5.72(d,J=10.3Hz,1H),3.84(s,3H),3.65(d,J=7.6Hz,8H),3.02(d,J=11.0Hz,2H),2.64(t,J=11.0Hz,2H),2.27(overlap,7H),1.84(d,J=10.7Hz,2H),1.68(d,J=9.6Hz,2H)。
實施例8：N-(5-((5-氯-4-嗎啉嘧啶-2-基)胺基)-4-甲氧基-2-(4-甲基哌 -1-基)苯基)丙烯醯胺(化合物Z-8)
步驟1：5-氯-N-(2-甲氧基-4-(4-甲基哌-1-基)-5-硝基苯基)-4-嗎啉嘧啶-2-胺(化合物8-4)
將化合物7-3(0.5g，1.3mmol)，N-甲基哌(0.13g，1.3mmol)和碳酸鉀(0.36g，2.6mmol)加入到DMF溶液中。100℃下，在N2氛圍中攪拌2h。反應結束後，加水稀釋，用EA/水體系萃取，水洗3次，乾燥，有機層減壓濃縮得粗產品化合物8-4(0.6g)，產物直接用於下一步 。MS m/z(ESI)：464.1[M+H]+。
步驟2：N-(5-氯-4-嗎啉嘧啶-2-基)-6-甲氧基-4-(4-甲基哌-1-基)苯-1,3-二胺(化合物8-5)
以化合物8-4(0.6g，1.3mmol)為原料，參照實施例7中步驟4進行合成，得化合物8-5(0.56g)，產物直接用於下一步。MS m/z(ESI)：434.2[M+H]+。
步驟3：N-(5-((5-氯-4-嗎啉嘧啶-2-基)胺基)-4-甲氧基-2-(4-甲基哌-1-基)苯基)丙烯醯胺(化合物Z-8)
以化合物8-5(0.56g,1.3mmol)為原料，參照實施例1中步驟7進行合成，得到的粗產物經製備液相分離純化後得化合物Z-8(44.51mg，三步產率7.0%)。MS m/z(ESI)：488.2[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ 9.26(s,1H),8.46(s,1H),7.94(s,1H),7.43(s,1H),6.69(s,1H),6.29(d,J=16.8Hz,1H),6.18(dd,J=16.8,10.0Hz,1H),5.66(dd,J=10.0,1.3Hz,1H),3.78(s,3H),3.76(s,8H),2.82(d,J=4.2Hz,4H),2.55(d,J=13.4Hz,4H),2.32(s,3H)。
實施例9：N-(5-((5-氯-4-嗎啉嘧啶-2-基)胺基)-2-((2-(二甲胺基)乙基)甲胺基)-4-甲氧基苯基)丙烯醯胺(化合物Z-9)
步驟1：N-(5-氯-4-嗎啉嘧啶-2-基)-N-(2-(二甲胺基)乙基)-2-甲氧基-N-甲基-5-硝基苯-1,4-二胺(化合物9-4)
將化合物7-3(0.5g，1.3mmol)，N,N,N'-三甲基乙二胺(0.26g，2.6mmol)和碳酸鉀(0.36g，2.6mmol)加入到DMF溶液中。100℃下，在N2氛圍中攪拌2h。反應結束後，加水稀釋，用EA/水體系萃取，水洗3次，乾燥，有機層減壓濃縮得粗產品化合物9-4(0.6g)，產物直接用於下一步。MS m/z(ESI)：466.1[M+H]+。
步驟2：N-(5-氯-4-嗎啉嘧啶-2-基)-N-(2-(二甲胺基)乙基)-5-甲氧基-N-甲基苯-1,2,4-三胺(化合物9-5)
以化合物9-4(0.6g，1.3mmol)為原料，參照實施例7中步驟4進行合成，得化合物9-5(0.56g)，產物直接用於下一步。MS m/z(ESI)：436.2[M+H]+。
步驟3：N-(5-((5-氯-4-嗎啉嘧啶-2-基)胺基)-2-((2-(二甲胺基)乙基)甲胺基)-4-甲氧基苯基)丙烯醯胺(化合物Z-9)
以化合物9-5(0.50g,1.2mmol)為原料，參照實施例1中步驟7進行合成，得到的粗產物經製備液相分離純化後得化合物Z-9(77.19mg，三步產率12.1%)。MS m/z(ESI)：490.2[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ 10.00(s,1H),9.29(s,1H),7.94(s,1H),7.44(s,1H),6.69(s,1H),6.31(dd,J=16.9,1.8Hz,1H),6.21(d,J=9.6Hz,1H),5.59(dd,J=10.0,1.8Hz,1H),3.78(d,J=7.3Hz, 9H),2.79(s,2H),2.62(s,3H),2.18(s,6H),1.53(s,4H)。
實施例10：N-(2-(3-(二甲基胺基)氮雜環丁烷-1-基)-4-甲氧基-5-((4-(喹啉-3-基)嘧啶-2-基)胺基)苯基)丙烯醯胺(化合物Z-10)
步驟1：3-(2-氯嘧啶-4-基)喹啉(化合物10-2)
將化合物2,4-二氯嘧啶(5.0g,34mmol，市購)和喹啉-3-硼酸(5.8g,34mmol，市購)加入到乙腈(120mL)和碳酸鈉溶液(50mL,2M)中。反應體系用氮氣置換空氣三次後，加入Pd(dppf)Cl2(494mg,0.68mmol)，之後再用氮氣置換空氣三次。將反應體系加熱至80℃，並且持續攪拌6h。TLC檢測反應進度，待反應完成後，加水稀釋，析出灰色固體，布氏漏斗過濾，濾餅經水洗後，烘乾至恒重，得到化合物10-2(4.6g,57%)，直接用於下一步反應。MS m/z(ESI)：242.7[M+H]+。
步驟2：N-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基)-4-(喹啉-3-基)嘧啶-2-胺(化合物10-3)
將4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯胺(2.2g,12mmol)和化合物10-2(2.9g,12mmol)加入對甲苯磺酸(p-TSA)(2.1g,12mmol)40mL正丁醇溶液中，130℃條件下封管加熱6h。待反應結束後，冷卻至室溫，溶液中析出大量固體。布氏漏斗過濾得到濾餅，經過乙醇回流打漿後，得到化合物10-3(4.3g，64%)，直接用於下一步反應。MS m/z(ESI)：392.0[M+H]+
步驟3：第三丁基3-(二甲基胺基)氮雜環丁烷-1-甲酸第三丁酯(化合物10-5)
將化合物3-氧氮雜環丁烷-1-羧酸第三丁酯(2.0g,11.7mmol，市購)和二甲胺鹽酸鹽(1.3g,17mmol)加入100mL乙酸(1mL)的甲醇溶液中，加入鈀/碳(1.4g)，氫氣換氣三次後在氫氣環境下攪拌5h，反應結束後過濾掉剩餘鈀/碳，將濾液減壓濃縮後得到化合物10-5(2.2g,80%)，直接用於下一步反應。MS m/z(ESI)：200.1[M+H]+。
步驟4：3-(二甲基胺基)氮雜環丁烷(化合物10-6)鹽酸鹽
將鹽酸的1,4-二氧六環溶液(10mL)加入到15mL化合物10-5(2.2g，11mmol)中，常溫攪拌3h。反應結束減壓濃縮得到化合物10-6(1.3g,90%)，直接用於下一步反應。MS m/z(ESI)：100.1[M+H]+。
步驟5：N-(4-(3-(二甲基胺基)氮雜環丁烷-1-基)-2-甲氧基-5-硝基苯基)-4-(喹啉-3-基)嘧啶-2-胺(化合物10-7)
將化合物10-6(160mg.1.16mmol)和碳酸鉀(350mg,2.3mmol)加入到化合物10-3(300mg,0.58mmol)的4mL DMF溶液中，100度下攪拌2h，TLC檢測反應進度，待反應完成後，加入10mL水，用EA/水體系萃取三次，分離出有機層，減壓濃縮得到化合物10-7(130mg,50%)，直接用於下一步反應。MS m/z(ESI)：472.2[M+H]+。
步驟6：4-(3-(二甲基胺基)氮雜環丁烷-1-基)-6-甲氧基-N 1-(4-(喹啉-3-基)嘧啶-2-基)苯-1,3-二胺(化合物10-8)
以化合物10-7(130mg,0.27mmol)為原料，參照實施例7中步驟4進行合成，得化合物10-8(80mg,70%)，產物直接用於下一步。MS m/z(ESI)：441.2[M+H]+。
步驟7：N-(2-(3-(二甲基胺基)氮雜環丁烷-1-基)-4-甲氧基-5-((4-(喹啉-3-基)嘧啶-2-基)胺基)苯基)丙烯醯胺(化合物Z-10)
以化合物10-8(80mg,0.17mmol)為原料，參照實施例1中步驟7進行合成，得到的粗產物經製備液相分離純化後得化合物Z-10(30.69mg,30%)。MS m/z(ESI)：496.2[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ 9.40(d,J=2.0Hz,1H),9.32(s,1H),9.16(s,1H),8.45(d,J=5.1Hz,1H),8.25(s,1H),8.06(d,J=8.5Hz,1H),7.68(dd,J=18.2, 10.0Hz,2H),7.54-7.43(m,2H),7.22(d,J=5.2Hz,1H),6.49-6.37(m,2H),6.33(d,J=10.1Hz,1H),5.73(d,J=10.2Hz,1H),3.92-3.78(m,5H),3.58(t,J=6.5Hz,2H),3.07(d,J=6.3Hz,1H),2.13(d,J=17.8Hz,6H)。
實施例11：(R)-N-(2-(3-(二甲基胺基)吡咯烷-1-基)-4-甲氧基-5-((4-(喹啉-3-基)嘧啶-2-基)胺基)苯基)丙烯醯胺(化合物Z-11)
步驟1：(R)-N-(4-(3-(二甲基胺基)吡咯烷-1-基)-2-甲氧基-5-硝基苯基)-4-(喹啉-3-基)嘧啶-2-胺(化合物11-7)
將(R)-N，N-二甲基吡咯烷-3-胺(80mg，0.70mmol，市購)和碳酸鉀(193mg，1.40mmol)加入到化合物10-3(200mg,0.47mmol)的4mL的DMF中，100℃下劇烈攪拌2h。TLC檢測反應進度，待反應完成後，加入10mL水，用EA/水體系萃取三次，分離出有機層，減壓濃縮得到化合物11-7(180mg，79%)。MS m/z(ESI)：486.2[M+H]+。
步驟2：(R)-4-(3-(二甲基胺基)吡咯烷-1-基)-6-甲氧基-N1-(4-(喹啉-3-基)嘧啶-2-基)苯-1,3-二胺(化合物11-8)
以化合物11-7(180mg,0.37mmol)為原料，參 照實施例1中步驟6進行合成，得化合物11-8(150mg，89%)，產物直接用於下一步。MS m/z(ESI)：456.2[M+H]+。
步驟3：(R)-N-(2-(3-(二甲基胺基)吡咯烷-1-基)-4-甲氧基-5-((4-(喹啉-3-基)嘧啶-2-基)胺基)苯基)丙烯醯胺(化合物Z-11)
以化合物11-8(150mg,0.3mmol)為原料，參照實施例1中步驟7進行合成，得到的粗產物經製備液相分離純化後得化合物Z-11(23.58mg，9.87%)。MS m/z(ESI)：509.9[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)：δ 9.67(1s,1H)，9.40(1s,1H),8.59(d,J=4Hz,1H),8.39(s,1H),8.31(s,1H),8.07(d,J=8Hz,1H),7.70(m,2H),7.50(m,1H),7.27(m,1H),6.74(s,1H),6.35(m,2H),5.73(d,J=8Hz,1H),3.83(s,3H),3.05(m,4H),1.16(m,1H),2.24(s,6H),2.05(m,2H)。
實施例12：N-(4-甲氧基-2-(1-甲基-1,2,3,6-四氫吡啶-4-基)-5-((4-(喹啉-3-基)嘧啶-2-基)胺基)苯基)丙醯胺(化合物Z-12)
步驟1：3-(2-氯嘧啶-4-基)喹啉(化合物10-2，按照實施例10的步驟1)
步驟2：4-溴-2-甲氧基-1-硝基苯(化合物12-4)
在室溫條件下，將化合物12-3(10.0g,46mmol，市購)溶解於150mL無水甲醇中，加入甲醇鈉(4.37g，81mmol)，加熱至回流並劇烈攪拌8h。TLC檢測反應進度，待反應完成後，加水稀釋，用EA/水體系萃取，水洗3次，乾燥，有機層減壓濃縮得粗產品化合物12-4(9.5g)，產物直接用於下一步。MS m/z(ESI)：231.0[M+H]+。
步驟3：4-溴-2-甲氧基苯胺(化合物12-5)
在室溫條件下，將還原鐵粉(4.48g,80mmol) 和氯化銨(2.65g,50mmol)加入到化合物12-4(2.3g,10.0mmol)的60mL THF/水(THF與水的體積比為2：1)混合溶液中。65℃下，劇烈攪拌4h。反應結束後，過濾，濾液加水稀釋，用EA/水體系萃取，水洗3次，乾燥，有機層減壓濃縮得粗產品化合物12-5(2.0g)，產物直接用於下一步。MS m/z(ESI)：201.9[M+H]+。
步驟4：4-溴-2-甲氧基-5-硝基苯胺(化合物12-6)
在-20℃條件下，將硝酸鉀(217mg，2.25mmol)加入到化合物12-5(400mg,2.0mmol)的3.5mL濃硫酸溶液中。-20℃下，劇烈攪拌5min。反應結束後，加水稀釋，用EA/水體系萃取，水洗3次，乾燥，有機層減壓濃縮得粗產品化合物12-6(300mg)，產物直接用於下一步。MS m/z(ESI)：246.9[M+H]+。
步驟5：4-(4-胺基-5-甲氧基-2-硝基苯基)-5,6-二氫吡啶-1(2H)-羧酸第三丁酯(化合物12-7)
將化合物12-6(100mg,0.40mmol)，Pd(PPh3)4(24mg，0.02mmol)和0.5mL的2.0mol/L的碳酸鈉溶液加入到化合物4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊環-2-基)-5,6-二氫吡啶-1(2H)-甲酸第三丁酯(125mg,0.40mmol)，的5mL 1,4-二氧六環溶液中。100℃下，在N2氛圍中劇烈攪拌4h。反應結束後，過濾，濾液減壓濃縮後得粗產品，經Combi-flash柱層析[PE：EA=100：0-0：100]純化後得化合物12-7(50mg，35%)。MS m/z(ESI)：350.1[M+H]+。
步驟6：4-(5-甲氧基-2-硝基-4-((4-(喹啉-3-基) 嘧啶-2-基)胺基)苯基)-5,6-二氫吡啶-1(2H)-甲酸第三丁酯(化合物12-8)
將化合物12-7(500mg，1.43mmol)，Pd2(dba)3(131mg，0.143mmol)，Xantphos(165mg，0.286mmol)和碳酸銫(925mg，2.86mmol)加入到化合物10-2(345mg,1.43mmol)的30mL 1,4-二氧六環溶液中。100℃下，在N2氛圍中劇烈攪拌5h。反應結束後，過濾，濾液減壓濃縮後得粗產品，經Combi-flash柱層析[DCM：MeOH=100：0-0：100]純化後得化合物12-8(600mg，76%)。MS m/z(ESI)：545.0[M+H]+。
步驟7：N-(2-甲氧基-5-硝基-4-(1,2,3,6-四氫吡啶-4-基)苯基)-4-(喹啉-3-基)嘧啶-2-胺(化合物12-9)
在室溫下，向化合物12-8(150mg,0.27mmol)的二氯甲烷(10mL)溶液滴加1mL三氟乙酸，滴加完畢後室溫下攪拌3h。反應液用飽和碳酸氫鈉水溶液中和，分離有機相，水相用二氯甲烷萃取(2×10mL)，合併有機相，用飽和食鹽水(10mL)洗滌，無水Na2SO4乾燥，過濾，減壓濃縮得化合物12-9(115mg,93%)，產物直接用於下一步反應。MS m/z(ESI)：455.2[M+H]+。
步驟8：N-(2-甲氧基-4-(1-甲基-1,2,3,6-四氫吡啶-4-基)-5-硝基苯)-4-(喹啉-3-基)嘧啶-2-胺(化合物12-10)
在室溫下，向化合物12-9(115mg,0.25mmol)的甲醇(5mL)溶液中加入多聚甲醛(45mg,0.5mmol)和醋酸硼氫化鈉(106mg,0.5mmol)，室溫下繼續攪拌3h後， 加入20mL二氯甲烷，有機相依次用水洗(10mL)，飽和食鹽水洗(10mL)，無水Na2SO4乾燥，過濾，減壓濃縮得化合物12-10(95mg,81%)，產物直接用於下一步反應。MS m/z(ESI)：469.2[M+H]+。
步驟9：6-甲氧基-4-(1-甲基-1,2,3,6-四氫吡啶-4-基)-N1-(4-(喹啉-3-基)嘧啶-2-基)苯-1,3-二胺(化合物12-11)
以化合物12-10(95mg,0.2mmol)為原料，參照實施例7中步驟4進行合成，得化合物12-11(74mg,84%)，產物直接用於下一步反應。MS m/z(ESI)：439.2[M+H]+。
步驟10：N-(4-甲氧基-2-(1-甲基-1,2,3,6-四氫吡啶-4-基)-5-((4-(喹啉-3-基)嘧啶-2-基)胺基)苯基)丙醯胺(化合物Z-12)
以化合物12-11(74mg,0.17mmol)為原料，參照實施例1中步驟7合成，得到的粗產物經製備液相分離後得化合物Z-12(14mg,17%)。MS m/z(ESI)：493.2[M+H]+。
實施例13：N-(2-((2-(二甲基胺基)乙基)(甲基)胺基)-4-甲氧基-5-(5-甲氧基-4-(喹啉-3-基)嘧啶-2-基胺基)苯基)丙烯醯胺(Z-13)
步驟1：3-(2-氯-5-甲氧基嘧啶-4-基)喹啉(化合物13-2)
將喹啉-3-硼酸(2.93g，16.9mmol)，PdCl2(dppf)(250mg，0.34mmol)和50mL的2.0mol/L的碳酸鈉溶液加入到化合物13-1(3g,16.9mmol，市購)的80mL乙腈溶液中。95℃下，在N2氛圍中劇烈攪拌8h。反應結束後，倒入大量的冷水中，至固體完全析出。過濾，用水充分洗滌，乾燥後得化合物13-2(4g，100%)。MS m/z(ESI)：272.7[M+H]+。
步驟2：N-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基)-5-甲氧基-4-(喹啉-3-基)嘧啶-2-胺(化合物13-3)將化合物4-硝基-2-甲氧基-5-硝基苯胺(343mg
，1.85mmol)，Pd2(dba)3(169mg，0.18mmol)，Xantphos(214mg，0.37mmol)和碳酸銫(1.2g，3.69mmol)加入到化合物13-2(500mg，1.85mmol)的9mL 1,4-二氧六環溶液中。120℃下，在N2氛圍中劇烈攪拌5h。反應結束後，過濾，濾液減壓濃縮後得粗產品，經Combi-flash柱層析 [PE：EA=100：0-0：100]純化後得化合物13-3(180mg，65%)。MS m/z(ESI)：422.1[M+H]+。
步驟3：N1-(2-(二甲基胺基)乙基)-5-甲氧基-N4-(5-甲氧基-4-(喹啉-3-基)嘧啶-2-基)-N-甲基-2-硝基苯-1,4-二胺(化合物13-4)
將N,N,N'-三甲基乙二胺(65mg，0.64mmol)和碳酸鉀(193mg，1.29mmol)加入到化合物13-3(180mg,0.43mmol)的3mL的DMF中，100℃下劇烈攪拌2h。TLC檢測反應進度，待反應完成後，加入10mL水，用EA/水體系萃取三次，分離出有機層，減壓濃縮得到化合物13-4(200mg，91%)。MS m/z(ESI)：504.3[M+H]+。
步驟4：N1-(2-(二甲基胺基)乙基)-5-甲氧基-N4-(5-甲氧基-4-(喹啉-3-基)嘧啶-2-基)-N1-甲基苯-1,2,4-三胺(化合物13-5)
以化合物13-4(200mg,0.40mmol)為原料，參照實施例1中步驟6合成，得化合物13-5(100mg，92%)，產物直接用於下一步。MS m/z(ESI)：474.1[M+H]+。
步驟5：N-(2-((2-(二甲基胺基)乙基)(甲基)胺基)-4-甲氧基-5-(5-甲氧基-4-(喹啉-3-基)嘧啶-2-基胺基)苯基)丙烯醯胺(化合物Z-13)
以化合物13-5(100mg,0.21mmol)為原料，參照實施例1中步驟7合成，得到的粗產物經製備液相分離純化後得化合物Z-13(4.55mg，4%)。MS m/z(ESI)：527.8[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)：δ 9.57(s,1H),9.21 (d,J=16.7Hz,2H),8.57(s,1H),8.28-8.19(m,2H),8.07(d,J=8.2Hz,1H),7.96(s,1H),7.85(t,J=7.4Hz,1H),7.65(t,J=7.3Hz,1H),7.02(s,1H),6.61-6.47(m,1H),6.32(d,J=17.1Hz,1H),5.80(d,J=10.8Hz,1H),3.97(s,3H),3.88(s,3H),2.94(s,2H),2.68(s,3H),2.45(s,2H),2.30(s,6H)。
實施例14：N-(2-((2-(二甲基胺基)乙基)(甲基)胺基)-4-甲氧基-5-(4-(喹啉-3-基)-1,3,5-三 -2-基胺基)苯基)丙烯醯胺(Z-14)
步驟1：4-氯-N-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基 )-1,3,5-三-2-胺(化合物14-2)
將化合物1a(200mg,1.1mmol，市購)置於250mL反應瓶中，加入THF(10mL)使底物溶解。在80℃下，向攪拌的反應瓶中加入4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯胺(200mg,1.1mmol)的THF(30mL)溶液，保持溫度滴加50min。滴加完畢後繼續反應10min。TLC檢測反應進度，待反應完成後，減壓濃縮得到粗產品。經Combi-Flash柱層析純化得到目標產品化合物14-2(110mg,34%)。MS m/z(ESI)：300.0[M+H]+。
步驟2：N-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基)-4-(喹啉-3-基)-1,3,5-三-2-胺(化合物14-3)
將反應底物化合物14-2(1.2g,4mmol)，3-喹啉硼酸(5.8g,34mmol)，碳酸鉀(1.11g,8mmol)置於250mL反應瓶中，加入乙二醇二甲醚(20mL)和水(5mL)。反應體系用氮氣置換空氣三次後，加入Pd(dppf)Cl2(300mg,0.4mmol)，之後再用氮氣置換空氣三次。將反應體系加熱至100℃，並且持續攪拌4h。TLC檢測反應進度，待反應完成後，減壓濃縮得到粗產品。經Combi-Flash柱層析純化得到目標產品化合物14-3(700mg,45%)。MS m/z(ESI)：393.1[M+H]+。
步驟3：N1-(2-(二甲基胺基)乙基)-5-甲氧基-N1-甲基-2-硝基-N4-(4-(喹啉-3-基)-1,3,5-三-2-基)苯-1,4-二胺(化合物14-4)
將反應底物化合物14-3(400mg,1mmol)， N,N,N'-三甲基乙二胺(156mg,1.5mmol)和碳酸銫(670mg,2mmol)置於50mL反應瓶中，加入二甲胺基甲醯胺(6mL)。反應體系用氮氣置換空氣三次後，將反應體系加熱至80℃，並且持續攪拌4h。TLC檢測反應進度，待反應完成後，加水稀釋反應液，過濾得粗產品，經Combi-Flash柱層析純化得到目標產品化合物14-4(200mg,42%)。MS m/z(ESI)：475.2[M+H]+。
步驟4：N1-(2-(二甲基胺基)乙基)-5-甲氧基-N-甲基-N4-(4-(喹啉-3-基)-1,3,5-三-2-基)苯-1,2,4-三胺(化合物14-5)
以化合物14-4(190mg,0.4mmol)為原料，參照實施例1中步驟6合成，得到化合物14-5(180mg)，直接用於下一步反應。MS m/z(ESI)：445.2[M+H]+。
步驟5：N-(2-((2-(二甲基胺基)乙基)(甲基)胺基)-4-甲氧基-5-(4-(喹啉-3-基)-1,3,5-三-2-基胺基)苯基)丙烯醯胺(化合物Z-14)
以化合物14-5(180mg,0.41mmol)為原料，參照實施例1中步驟7合成，得到的粗產物經Prep-TLC純化後得到目標產品化合物Z-14(2.01mg,1%)。純度：94.99%。MS m/z(ESI)：499.3[M+H]+。
實施例15：N-(2-(4-(二甲基胺基)哌啶-1-基)-4-甲氧基-5-(4-(喹啉-3-基)-1,3,5-三 -2-基胺基)苯基)丙烯醯胺(Z-15)
步驟1：N-(4-(4-(二甲基胺基)哌啶-1-基)-2-甲氧基-5-硝基苯基)-4-(喹啉-3-基)-1,3,5-三-2-胺(化合物15-4)
將化合物14-3(100mg,0.25mmol)，4-二甲胺基哌啶(66mg,0.51mmol)和碳酸鉀(140mg,1.02mmol)置於20mL反應瓶中，加入二甲胺基甲醯胺(4mL)。反應體系用氮氣置換空氣三次後，將反應體系加熱至100℃，並且持續攪拌4h。TLC檢測反應進度，待反應完成後，反應液用EA/水體系萃取三次，分離出有機層，經水洗，飽和食鹽水洗滌，無水Na2SO4乾燥後，減壓濃縮得到粗產物。經Combi-Flash柱層析純化得到目標產品化合物15-4(110mg,43%)。MS m/z(ESI)：501.2[M+H]+。
步驟2：4-(4-(二甲基胺基)哌啶-1-基)-6-甲氧基-N1-(4-(喹啉-3-基)-1,3,5-三-2-基)苯-1,3-二胺(化合物15-5)
以化合物15-4(100mg,0.2mmol)為原料，參照實施例1中步驟6合成，得到化合物15-5(90mg)，直接用於下一步反應。MS m/z(ESI)：471.3[M+H]+。
步驟3：N-(2-(4-(二甲基胺基)哌啶-1-基)-4-甲氧基-5-(4-(喹啉-3-基)-1,3,5-三-2-基胺基)苯基)丙烯醯胺(化合物Z-15)
以化合物15-5(90mg,0.2mmol)為原料，參照實施例1中步驟7合成，得到的粗產物經Prep-HPLC柱層析純化後得到目標產品化合物Z-15(2.09mg,2%,FA salt)。純度：100.0%。MS m/z(ESI)：525.3[M+H]+。
實施例16：N-(2-((2-(二甲基胺基)乙基)(甲基)胺基)-4-甲氧基-5-((4-(1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)嘧啶-2-基)胺基)苯基)丙烯醯胺(化合物Z-16)
步驟1：5-(2-氯嘧啶-4-基)-1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(化合物16-2)
將化合物16-1(2.0g，13.5mmol)，PdCl2(dppf)(1.04g，1.35mmol)和13.5mL的2.0mol/L的碳酸鈉溶液加入到化合物1-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼烷 -2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(8.6g,13.5mmol)的50mL乙腈溶液中。80℃下，在N2氛圍中劇烈攪拌4h。反應結束後，加水稀釋，用EA/水體系萃取，水洗3次，乾燥，有機層減壓濃縮得粗產品。經Combi-flash柱層析[PE：EA=100：0-20：80]純化後得化合物16-2(2.1g，36%)。MS m/z(ESI)：245.0[M+H]+。
步驟2：N-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基)-4-(1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)嘧啶-2-胺(化合物16-3)
將4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯胺(1.6g,8.6mmol)和化合物16-2(2.1g,8.6mmol)加入對甲苯磺酸(3.7g,21.5mmol)20mL異丁醇溶液中，130℃條件下封管加熱6h。待反應結束後，冷卻至室溫，溶液中析出大量固體。布氏漏斗過濾得到濾餅，經過乙醇回流打漿後，得到化合物16-3(1.2g，44%)，直接用於下一步反應。MS m/z(ESI)：429.0[M+H]+。
步驟3：N1-(2-(二甲基胺基)乙基)-5-甲氧基-N-甲基-N4-(4-(1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)嘧啶-2-基)-2-硝基苯-1,4-二胺(化合物16-4)
以化合物16-3(370mg,0.62mmol)為原料，參照實施例1中步驟5合成，得到化合物16-4(300mg，90%)。MS m/z(ESI)：477.2[M+H]+。
步驟4：N1-(2-(二甲基胺基)乙基)-5-甲氧基-N-甲基-N4-(4-(1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)嘧啶-2-基基)苯-1,2,4-三胺(化合物16-5)
以化合物16-4(300mg，0.6mmol)為原料，參照實施例7中步驟4合成，得化合物16-5(200mg)，產物直接用於下一步。MS m/z(ESI)：447.2[M+H]+。
步驟5：N-(2-((2-(二甲基胺基)乙基)(甲基)胺基)-4-甲氧基-5-((4-(1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基基)嘧啶-2-基)胺基)苯基)丙烯醯胺(化合物Z-16)
以化合物16-5(200mg,0.44mmol)為原料，參照實施例1中步驟7合成，得到的粗產物經製備液相分離純化後得化合物Z-16(23mg，10%)。MS m/z(ESI)：501.3[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ 10.04(s,1H),9.78(s,1H),9.20(s,1H),8.90(d,J=2.0Hz,1H),8.41(d,J=5.2Hz,1H),7.70(s,1H),7.15(dd,J=6.9,4.4Hz,2H),6.73(s,1H),6.59(d,J=3.4Hz,1H),6.49-6.42(m,1H),6.30(d,J=10.1Hz,1H),5.65(d,J=10.1Hz,1H),3.84(d,J=13.7Hz,6H),2.86-2.77(m,2H),2.64(s,3H),2.22(d,J=5.8Hz,2H),2.19(s,6H)。
實施例17：N-(2-(4-(二甲基胺基)哌啶-1-基)-4-甲氧基-5-((4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基)胺基)苯基)丙烯醯胺(Z-17)
步驟1：2-氯-4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶(化合物17-2)
將化合物16-1(745mg,5mmol)和甲基-4-吡唑頻哪醇硼酸酯(1.092g,5.25mmol，市購)置於100mL反應瓶中，加入乙腈(30mL)和碳酸鈉溶液(5mL,2M)。反應體系用氮氣置換空氣三次後，加入Pd(dppf)Cl2(109.7mg,0.15mmol)，之後再用氮氣置換空氣三次。將反應體系加熱至110℃，並且持續攪拌6h。TLC檢測反應進度，待反應完成後，加水稀釋，反應液用EA/水體系萃取三次，分離出有機層，經水洗，飽和食鹽水洗滌，無水Na2SO4乾燥後，減壓濃縮得到粗產物1.1g。經Combi-Flash柱層析[EA：PE=1：5-1：2]純化得到目標產品化合物17-2(600mg，93%)。MS m/z(ESI)：195.1[M+H]+。
步驟2：N-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基)-4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺(化合物17-3)
將化合物17-2(500mg,2.577mmol)和4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯胺(479g,2.577mmol)置於50mL的封管 反應瓶中，加入正丁醇(12mL)使底物部分溶解。之後加入對甲苯磺酸(1.108g,6.44mmol)，並保持反應體系在130℃條件下封管加熱5h。待反應結束後，冷卻至室溫，溶液中析出大量固體。布氏漏斗過濾得到濾餅，經過乙醇回流打漿後，得到目標產物化合物17-3(600mg，67.8%)，直接用於下一步反應。
步驟3：N-(4-(4-(二甲基胺基)哌啶-1-基)-2-甲氧基-5-硝基苯基)-4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺(化合物17-4)
將化合物17-3(70mg,0.203mmol)和碳酸鉀(84mg,0.609mmol)置於25mL反應瓶中，加入DMF(5mL)使底物部分溶解。之後加入N,N-二甲胺基哌啶(31.2mg,0.244mmol)並保持反應體系在70℃條件下加熱2h。TLC檢測反應進度，待反應完成後，反應液用EA/水體系萃取三次，分離出有機層，經水洗，飽和食鹽水洗滌，無水Na2SO4乾燥後，減壓濃縮得到化合物17-4(70mg，76%)。MS m/z(ESI)：453.2[M+H]+。
步驟4：4-(4-(二甲基胺基)哌啶-1-基)-6-甲氧基-N 1-(4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基)苯-1,3-二胺(化合物17-5)
以化合物17-4(70mg,0.155mmol)為原料，參照實施例1中步驟6合成，得到粗產物化合物17-5(60mg，92%)，直接用於下一步反應。
步驟5：N-(2-(4-(二甲基胺基)哌啶-1-基)-4-甲 氧基-5-((4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基)胺基)苯基)丙烯醯胺(化合物Z-17)
以化合物17-5(50mg,0.118mmol)為原料，參照實施例1中步驟7合成，得到的粗產物經製備板層析[DCM：MeOH=10：1]純化後得到目標產品化合物Z-17(30mg，44%)。MS m/z(ESI)：477.2[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)：δ 9.14(s,1H),9.05(s,1H),8.81(s,1H),8.36-8.35(d,J=4.0Hz,1H),8.21(s,1H),7.76(s,1H),7.10-7.09(d,J=4.0Hz,1H),6.86(s,1H),6.76-6.69(m,1H),6.33-6.29(d,J=16.0Hz,1H),5.80-5.77(d,J=12.0Hz,1H),3.92(s,3H),3.88(s,3H),3.03-3.00(m,2H),2.69-2.64(m,2H),2.27-2.15(m,7H),1.85-1.82(m,2H),1.73-1.68(m,2H)。
實施例18：N-(2-((2-(二甲基胺基)乙基)(甲基)胺基)-4-甲氧基-5-((4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基)胺基)苯基)丙烯醯胺(Z-18)
步驟1：N1-(2-(二甲基胺基)乙基)-5-甲氧基-N-甲基-N4-(4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基)-2-硝基苯-1,4-二胺(化合物18-4)
將化合物17-3(130mg,0.378mmol，製備方法參照實施例17步驟2)和碳酸鉀(156mg,1.133mmol)置於 50mL反應瓶中，加入DMF(5mL)使底物部分溶解。之後加入N,N,N'-三甲基乙二胺(57.8mg,0.567mmol)並保持反應體系在70℃條件下加熱3h。TLC檢測反應進度，待反應完成後，反應液用EA/水體系萃取三次，分離出有機層，經水洗，飽和食鹽水洗滌，無水Na2SO4乾燥後，減壓濃縮得到粗產物化合物18-4(110mg，68%)。MS m/z(ESI)：427.2[M+H]+。
步驟2：N1-(2-(二甲基胺基)乙基)-5-甲氧基-N-甲基-N4-(4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基)苯-1,2,4-三胺(化合物18-5)
以化合物18-4(110mg,0.258mmol)為原料，參照實施例1中步驟6合成，得到粗產物化合物18-5(110mg，100%)，直接用於下一步反應。
步驟3：N-(2-((2-(二甲基胺基)乙基)(甲基)胺基)-4-甲氧基-5-((4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基)胺基)苯基)丙烯醯胺(化合物Z-18)
以化合物18-5(110mg,0.278mmol)為原料，參照實施例1中步驟7合成，得到的粗產物經製備板層析純化，DCM：MeOH體積比為10：1，純化後得到目標產品化合物Z-18(10.0mg，8.2%)。MS m/z(ESI)：451.1[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)：δ 10.18(s,1H),9.42(s,1H),8.90(s,1H),8.38-8.37(d,J=4.0Hz,1H),8.23(s,1H),7.79(s,1H),7.12-7.11(d,J=4.0Hz,1H),7.03(s,1H),6.46-6.32(m,2H),5.82-5.76(m,1H),3.93(s,3H),3.86(s, 3H),2.97-2.93(m,2H),2.68(s,3H),2.08-2.47(m,8H)。
實施例19：N-(5-((5-氯-4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基)胺基)-2-((2-(二甲基胺基)乙基)(甲基)胺基)-4-甲氧苯基)丙烯醯胺(Z-19)
步驟1：2,5-二氯-4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶(化合物19-2)
以2,4,5-三氯嘧啶(1.32g,7.21mmol)和甲基-4-吡唑頻哪醇硼酸酯(1.5g,7.21mmol)為原料，參照實施例17中步驟1合成，得到的粗產物經Combi-Flash柱層析(EA：PE=1：5)純化後得到化合物19-2(1.4g，84.8%)。MS m/z(ESI)：229.3[M+H]+。
步驟2：5-氯-N-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基)-4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺(化合物19-3)
將化合物19-2(1.1g，4.8mmol)，Pd2(dba)3(439mg，0.48mmol)，Xantphos(277mg，0.48mmol)和碳酸銫(4.68g，14.4mmol)加入到4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯胺(892mg,4.8mmol)的30mL 1,4-二氧六環溶液中。100℃下，在 N2氛圍中劇烈攪拌5h。反應結束後，過濾，濾液減壓濃縮後得粗產品，經Combi-flash柱層析[PE：EA=100：0-0：100]純化後得到化合物19-3(600mg，33.1%)。MS m/z(ESI)：379.3[M+H]+。
步驟3：N1-(5-氯-4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基)-N4-(2-(二甲基胺基)乙基)-2-甲氧基-N4-甲基-5-硝基苯-1,4-二胺(化合物19-4)
以化合物19-3(600mg,1.587mmol)為原料，參照實施例1中步驟5合成，得到粗產物化合物19-4(400mg,57.7%)，直接用於下一步反應。MS m/z(ESI)：461.1[M+H]+。
步驟4：N4-(5-氯-4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基)-N1-(2-(二甲基胺基)乙基)-5-甲氧基-N-甲基苯-1,2,4-三胺(化合物19-5)
以化合物19-4(200mg,0.435mmol)為原料，參照實施例2中步驟2合成，得到粗產物化合物19-5(200mg)，直接用於下一步反應。MS m/z(ESI)：431.3[M+H]+。
步驟5：N-(5-((5-氯-4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基)胺基)-2-((2-(二甲基胺基)乙基)(甲基)胺基)-4-甲氧苯基)丙烯醯胺(化合物Z-19)
以化合物19-5(200mg,0.465mmol)為原料，參照實施例1中步驟7合成，得到的粗產物經Prep-HPLC柱層析純化後得到目標產品化合物Z-19(23mg,10%)。MS m/z(ESI)：485.2；1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)：δ 10.21(s, 1H),9.11(s,1H),8.99(s,1H),8.46(s,1H),8.37(s,1H),8.07(s,1H),7.04(s,1H),6.29-6.47(m,2H),5.79-5.81(m,1H),3.97(s,3H),3.87(s,3H),2.89(m,2H),2.70(s,3H),2.15-2.39(m,8H)。
實施例20：N-(2-((2-(二甲基胺基)乙基)(甲基)胺基)-5-((5-氟-4-(1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)嘧啶-2-基)胺基)-4-甲氧苯基)丙烯醯胺(Z-20)
步驟1：5-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(化合物20-2)
將2,4-二氯-5-氟嘧啶(2.0g,7.8mmol)，PdCl2(dppf)2(0.57g,0.78mmol)和碳酸鈉(1.64g,15.6 mmol)加入到化合物1-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼烷-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(2.0g,7.8mmol，市購)的20mL乙腈和4mL水的混合溶液中。80℃下，在氮氣氛圍中劇烈攪拌2h。反應結束後，過濾，濾液減壓濃縮後得粗產品，經Combi-flash柱層析[PE：EA=100：0-60：40]純化後得化合物20-2(1.12g，55%)。MS m/z(ESI)：263.1[M+H]+。
步驟2：5-氟-N-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基)-4-(1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)嘧啶-2-胺(化合物20-3)
以化合物20-2(1.5g,5.46mmol)為原料，參照實施例19中步驟2合成，不同的是，120℃下，在N2氛圍中劇烈攪拌21h，得到的粗產品經Combi-flash柱層析(PE：EA=50：50)純化後得化合物20-3(0.8g，45%)。MS m/z(ESI)：413.1[M+H]+。
步驟3：N1-(2-(二甲基胺基)乙基)-N4-(5-氟-4-(1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)嘧啶-2-基)-5-甲氧基-N-甲基-2-硝基苯-1,4-二胺(化合物20-4)
以化合物20-3(300mg,1.18mmol)為原料，參照實施例1中步驟5合成，得到化合物20-4(330mg，92%)，產物直接用於下一步反應。MS m/z(ESI)：495.2[M+H]+。
步驟4：N1-(2-(二甲基胺基)乙基)-N4-(5-氟-4-(1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)嘧啶-2-基)-5-甲氧 基-N1-甲基苯-1,2,4-三胺(化合物20-5)
以化合物20-4(330mg,0.67mmol)為原料，參照實施例1中步驟6合成，得化合物20-5(317mg，100%)，產物直接用於下一步。MS m/z(ESI)：465.2[M+H]+。
步驟5：N-(2-((2-(二甲基胺基)乙基)(甲基)胺基)-5-((5-氟-4-(1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)嘧啶-2-基)胺基)-4-甲氧苯基)丙烯醯胺(化合物Z-20)
以化合物20-5(317mg,0.68mmol)為原料，參照實施例1中步驟7合成，得到的粗產物經製備板層析[DCM：MeOH：NH4OH=90：10：1]分離純化後得化合物Z-20(11.9mg，3.4%)。MS m/z(ESI)：519.2[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ 9.92(br.s.,1H),9.64(s,1H),9.07(d,J=9.2Hz,2H),8.31(d,J=2.8Hz,1H),7.66(s,1H),7.14(d,J=1.6Hz,1H),6.70(s,1H),6.59(d,J=1.6Hz,1H),6.42(br.s.,2H),5.66-5.63(m,1H),3.86(s,3H),3.81(s,3H),2.87(br.s.,2H),2.63(s,3H),2.25(br.s.,8H)。
實施例21：N-(2-((2-(二甲基胺基)乙基)(甲基)胺基)-4-甲氧基-5-((5-甲氧基-4-(1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)嘧啶-2-基)胺基)苯基)丙烯醯胺(Z-21)
步驟1：5-(2-氯-5-甲氧基嘧啶-4-基)-1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(化合物21-2)
將2,4-二氯-5-甲氧基嘧啶(1.25g,7.0mmol)，PdCl2(dppf)2(0.5g,0.7mmol)和碳酸鈉(1.5g,14.0mmol)加入到化合物1-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼烷-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(1.8g,7.0mmol，市購)的20mL乙腈和4mL水的混合溶液中。80℃下，在N2氛圍中劇烈攪拌2h。反應結束後，過濾，濾液減壓濃縮後得粗產品，經Combi-flash柱層析[PE：EA=100：0-60：40]純化後得化合物21-2(1.54g，80%)。MS m/z(ESI)：275.1[M+H]+。
步驟2：N-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基)-5-甲氧 基-4-(1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)嘧啶-2-胺(化合物21-3)
以化合物21-2(1.5g,5.46mmol)為原料，參照實施例19中步驟2合成，不同的是，120℃下，在N2氛圍中劇烈攪拌21h，得粗產品經Combi-flash柱層析[PE：EA=50：50]純化後得化合物21-3(1.2g，52%)。MS m/z(ESI)：425.2[M+H]+。
步驟3：N1-(2-(二甲基胺基)乙基)-5-甲氧基-N4-(5-甲氧基-4-(1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)嘧啶-2-基)-N1-甲基-2-硝基苯-1,4-二胺(化合物21-4)
以化合物21-3(500mg,1.18mmol)為原料，參照實施例1中步驟5合成，得到化合物21-4(620mg，100%)，產物直接用於下一步反應。MS m/z(ESI)：507.3[M+H]+。
步驟4：N1-(2-(二甲基胺基)乙基)-5-甲氧基-N4-(5-甲氧基-4-(1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)嘧啶-2-基)-N1-甲基苯-1,2,4-三胺(化合物21-5)
以化合物21-4(500mg,0.99mmol)為原料，參照實施例1中步驟6合成，得化合物21-5(332mg，70.3%)，產物直接用於下一步。MS m/z(ESI)：477.2[M+H]+。
步驟5：N-(2-((2-(二甲基胺基)乙基)(甲基)胺基)-4-甲氧基-5-((5-甲氧基-4-(1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)嘧啶-2-基)胺基)苯基)丙烯醯胺(化合物Z-21)
以化合物21-5(332mg,0.7mmol)為原料，參照 實施例1中步驟7合成，得到的粗產物經製備板層析[DCM：MeOH：NH4OH=90：10：1]分離純化後得化合物Z-21(59mg，15.6%)。MS m/z(ESI)：531.2[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ 9.83(br.s.,1H),9.63(s,1H),9.13(d,J=1.6Hz,1H),8.93(s,1H),8.23(s,1H),7.52(s,1H),7.11(d,J=3.6Hz,1H),6.67(s,1H),6.53(d,J=3.2Hz,1H),6.48-6.34(m,2H),5.63(d,J=11.6Hz,1H),3.84(s,3H),3.81(s,3H),3.80(s,3H),2.87(br.s.,2H),2.61(s,3H),2.37(br.s.,2H),2.28(br.s.,6H)。
實施例22：N-(2-((2-(二甲基胺基)乙基)(甲基)胺基)-4-甲氧基-5-((4-(1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)胺基)苯基)丙烯醯胺(Z-22)
步驟1：5-(2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(化合物22-2)
將2,4-二氯-5-(三氟甲基)嘧啶(1.0g，6.5mmol)，PdCl2(dppf),(0.5g，0.65mmol)和6.5mL的2.0mol/L的碳酸鈉溶液加入到化合物1-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基 -1,3,2-二氧雜硼烷-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(4.3g,6.5mmol)的25mL乙腈溶液中。80℃下，在N2氛圍中劇烈攪拌4h。反應結束後，加水稀釋，用EA/水體系萃取，水洗3次，乾燥，有機層減壓濃縮得粗產品。經Combi-flash柱層析[PE：EA=100：0-20：80]純化後得化合物22-2(0.6g，36%)。MS m/z(ESI)：313.0[M+H]+。
步驟2：N-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基)-4-(1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-胺(化合物22-3)
將4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯胺(760mg,4.1mmol)和化合物22-2(1.0g,4.1mmol)加入對甲苯磺酸(p-TSA)(1.7g,10.5mmol)20ml異丁醇溶液中，130℃條件下封管加熱6h。待反應結束後，冷卻至室溫，溶液中析出大量固體。布氏漏斗過濾得到濾餅，經過乙醇回流打漿後，得到化合物22-3。(740mg，44%)，直接用於下一步反應。MS m/z(ESI)：463.1[M+H]+。
步驟3：N1-(2-(二甲基胺基)乙基)-5-甲氧基-N-甲基-N4-(4-(1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)-5-(三氟基)嘧啶-2-基)-2-硝基苯-1,4-二胺(化合物22-4)
以化合物22-3(370mg,0.62mmol)為原料，參照實施例1中步驟5合成，得到化合物22-4(300mg，90%)。MS m/z(ESI)：544.2[M+H]+。
步驟4：N1-(2-(二甲基胺基)乙基)-5-甲氧基-N-甲基-N4-(4-(1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)-5-(三氟 基)嘧啶-2-基)苯-1,2,4-三胺(化合物22-5)
以化合物22-4(300mg，0.6mmol)為原料，參照實施例7中步驟4合成，得化合物化合物22-5(200mg)，產物直接用於下一步。MS m/z(ESI)：514.2[M+H]+。
步驟5：N-(2-((2-(二甲基胺基)乙基)(甲基)胺基)-4-甲氧基-5-((4-(1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)胺基)苯基)丙烯醯胺(化合物Z-22)
以化合物22-5(200mg,0.44mmol)為原料，參照實施例1中步驟7合成，得到的粗產物經製備液相分離純化後得化合物Z-22(44.9mg，20%)。MS m/z(ESI)：568.8[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ 10.03(s,1H),9.60(s,1H),8.76(s,1H),8.56(s,1H),7.85(s,1H),7.16(s,2H),6.72(s,1H),6.52(s,1H),6.42(d,J=16.8Hz,1H),6.24(dd,J=17.0,10.1Hz,1H),5.64(d,J=10.2Hz,1H),3.83(d,J=24.8Hz,6H),2.79(s,2H),2.63(s,3H),2.20(d,J=12.4Hz,8H)。
實施例23：N-(5-((5-氯-4-(1,4-氧氮雜環庚-4-基)嘧啶-2-基)胺基)-2-((2-(二甲基胺基)乙基)(甲基)胺基)-4-甲氧基苯基)丙烯醯胺(Z-23)
步驟1：4-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-1,4-氧氮雜庚環(化合物23-2)
在0℃下，將化合物2,4,5-三氯嘧啶(0.3g，1.65mmol)加入到10mL THF中，加入三乙胺(0.49g，4.9mmol)，將高嗎啉(0.22g，1.65mmol，市購)加至反應液中，室溫下攪拌1h。TLC檢測反應進度，待反應完成後，加入水和EA，分離出有機層，有機層經飽和食鹽水系，乾燥，減壓濃縮得到化合物23-2(0.5g)，產物直接用於下一步。MS m/z(ESI)：248.0[M+H]+。
步驟2：5-氯-N-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基)-4-(1,4-氧氮雜環庚-4-基)嘧啶-2-胺(化合物23-3)
將化合物23-2(0.5g，2.0mmol)，4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯胺(0.37g，2.0mmol)和對甲苯磺酸(0.87g，5.0mmol)加入到10mL 1,4-二氧六環溶液中。110℃下，在N2保護下攪拌8h。反應結束後，過濾，用EA洗濾餅，將濾 餅於50℃下烘乾，得粗產品化合物23-3(0.45g)，產物直接用於下一步。MS m/z(ESI)：398.1[M+H]+。
步驟3：N1-(5-氯-4-(1,4-氧氮雜環庚-4-基)嘧啶-2-基)-N4-(2-(二甲基胺基)乙基)-2-甲氧基-N4-甲基-5-硝基苯1,4-二胺(化合物23-4)
以化合物23-3(0.45g，1.1mmol)為原料，參照實施例1中步驟5合成，得粗產品化合物23-4(0.4g)，產物直接用於下一步。MS m/z(ESI)：480.2[M+H]+。
步驟4：N4-(5-氯-4-(1,4-氧氮雜環庚-4-基)嘧啶-2-基)-N1-(2-(二甲基胺基)乙基)-5-甲氧基-N-甲基苯-1,2,4-三胺(化合物23-5)
以化合物23-4(0.4g，0.83mmol)為原料，參照實施例7中步驟4合成，得化合物23-5(0.25g)，產物直接用於下一步。MS m/z(ESI)：450.2[M+H]+。
步驟5：N-(5-((5-氯-4-(1,4-氧氮雜環庚-4-基)嘧啶-2-基)胺基)-2-((2-(二甲基胺基)乙基)(甲基)胺基)-4-甲氧基苯基)丙烯醯胺(化合物Z-23)
以化合物23-5(0.25g,0.55mmol)為原料，參照實施例1中步驟7合成，得到的粗產物經製備液相分離純化後得化合物Z-23(69.8mg，8.4%)。MS m/z(ESI)：504.2[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ 9.99(s,1H),9.18(s,1H),7.89(s,1H),7.32(s,1H),6.68(s,1H),6.30(dd,J=17.0,1.9Hz,1H),6.20(d,J=9.9Hz,1H),5.58(dd,J=10.0,1.9Hz,1H),4.03-3.98(m,2H),3.96(t,J=6.2Hz, 2H),3.83-3.79(m,2H),3.78(s,3H),3.72-3.66(m,2H),2.84-2.75(m,2H),2.61(s,3H),2.19(s,2H),2.17(s,6H),1.98(dd,J=11.9,5.9Hz,2H)。
實施例24：N-(5-((4-((1S,4S)-2-氧雜-5α-氮雜雙環[2.2.1]庚烷-5-基)-5-氯吡啶-2-基)胺基)-2-((2-(二甲基胺基)乙基)(甲基)胺基)-4-甲氧苯基)丙烯醯胺(Z-24)
步驟1：(1S,4S)-5-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-2-氧雜-5-氮雜雙環[2.2.1]庚烷(化合物24-2)
在0℃下，將化合物2,4,5-三氯嘧啶(0.3g，1.65mmol)加入到10mL THF中，加入三乙胺(0.5g，4.9mmol)，將橋環嗎啉(0.22g，1.65mmol，市購)滴加至反應液中，室溫下攪拌1h。TLC檢測反應進度，待反應完成後，加入水和EA，分離出有機層，有機層經飽和食鹽水系，乾燥，減壓濃縮得到化合物24-2(0.36g)，產物直接用於下一步。MS m/z(ESI)：246.0[M+H]+。
步驟2：4-((1S,4S)-2-氧雜-5-氮雜雙環[2.2.1]庚烷-5-基)-5-氯-N-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基)嘧啶-2-胺(化合物24-3)
以化合物24-2(0.36g，1.4mmol)為原料，參照實施例23中步驟2合成，得粗產品化合物24-3(0.32g)，產物直接用於下一步。MS m/z(ESI)：396.1[M+H]+。
步驟3：N1-(4-((1S,4S)-2-氧雜-5-氮雜雙環[2.2.1]庚烷-5-基)-5-氯嘧啶-2-基)-N4-2-(二甲基胺基)乙基)基-2-甲氧基-N4-甲基-5-硝基苯-1,4-二胺(化合物24-4)
以化合物24-3(0.32g，0.81mmol)為原料，參照實施例1中步驟5合成，得粗產品化合物24-4(0.31g)，產物直接用於下一步。MS m/z(ESI)：478.1[M+H]+。
步驟4：N4-(4-((1S,4S)-2-氧雜-5-氮雜雙環[2.2.1]庚烷-5-基)-5-氯嘧啶-2-基)-N1-(2-(二甲基胺基)乙基)基-5-甲氧基-N1-甲基苯-1,2,4-三胺(化合物24-5)
以化合物24-4(0.31g，0.65mmol)為原料，參照實施例7中步驟4合成，得化合物24-5(0.22g)，產物直接用於下一步。MS m/z(ESI)：448.2[M+H]+。
步驟5：N-(5-(4-((1S,4S)-2-氧雜-5α-氮雜雙環[2.2.1]庚烷-5-基)-5-氯吡啶-2-基)胺基)-2-((2-(二甲基胺基)乙基)(甲基)胺基)-4-甲氧苯基)丙烯醯胺(化合物Z-24)
以化合物24-5(0.2g,0.44mmol)為原料，參照實施例1中步驟7合成，得到的粗產物經製備液相分離純化後得化合物Z-24(60.1mg，7.3%)。MS m/z(ESI)：502.2 [M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)：δ 10.09(s,1H),8.85(s,1H),7.96(s,1H),7.67(s,1H),6.96(s,1H),6.37(dd,J=16.9,10.0Hz,1H),6.22(dd,J=16.9,2.1Hz,1H),5.73(dd,J=10.0,2.1Hz,1H),5.32(s,1H),4.61(s,1H),3.88(d,J=10.5Hz,1H),3.85(s,3H),3.81(d,J=7.6Hz,1H),3.73(d,J=7.5Hz,1H),3.59(d,J=10.5Hz,1H),2.85(t,J=5.2Hz,2H),2.68(s,3H),2.25(t,J=5.9Hz,2H),2.18(s,6H),1.90(d,J=9.9Hz,1H),178(d,J=9.7Hz,1H)。
實施例25-78、87、88：
實施例25-78、87和88中的目標化合物如式(IV-1)所示，其中，取代基R0、R2和R3都為氫，其餘的取代基A、R1、R6如下表所示。
通用步驟：化合物Z-25至Z-56、Z-87、Z-88以不同取代的硼酸酯或者硼酸、5位取代的2,4-二氯嘧啶為原料，參照實施例1的類似的方法進行製備。
化合物Z-57至Z-78以不同胺、5位取代的2,4-二氯嘧啶為原料，參照實施例7的類似的方法進行製備。
實施例79-86
實施例79-86中的目標化合物如式(IV-2)所示，其中，取代基R0、R2和R3都為氫，其餘的取代基A、R1如下表所示。
通用步驟：化合物Z-79至Z-82以不同的胺、 2,4-二氯-1,3,5-三為原料，參照實施例23的類似的方法進行製備。
化合物Z-83至Z-86以不同取代的硼酸酯或者硼酸、以及2,4-二氯-1,3,5-三為原料，參照實施例14的類似的方法進行製備。
實施例89：N-(5-(5-氯-4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基胺基)-2-(4-(二甲基胺基)哌啶-1-基)-4-甲氧基苯基)丙烯醯胺(Z-89)的製備
步驟1：在氮氣氣氛下，將1-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊環-2-基)-1H-吡唑(1.1g，5.25mmol)、化合物19-1(745mg，4mmol)、Pd(dppf)Cl2(109.7mg，0.15mmol)和碳酸鈉溶液(5mL，2M)的混合物的乙腈(30mL)溶液在85℃下攪拌6h。待反應完成後，加水淬滅，向反應混合物中加入EA(150mL)分層後，水相用EA(50mL×2)萃取兩次，合併的有機相用Na2SO4乾燥後濃縮，得到的粗產品經Combi-flash柱層析[PE：EA=5：1-2：1]分離純化得0.6g目標產物89-2。MS m/z(ESI)：229[M+H]+。
步驟2：向化合物3a(159mg，0.5mmol)、化合物89-2(114mg，0.5mmol)、Pd2(dba)3(45.75mg，0.05mmol)和Xantphos(28.4mg，0.05mmol)的1,4-二氧六環(4mL)溶液中加入碳酸銫(487.5mg，0.5mmol)，反應化合物在100℃下攪拌3h後，向反應混合物中加入EA(50ml×2)和水(10mL)，有機相用水(10mL×3)洗滌後經Na2SO4乾燥，濃縮得到粗產品，將所得粗產品經製備液相分離純化得目標化合物Z-89(19mg，4%)，MS m/z(ESI)：511.2[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ 9.50(s,1H),9.19(s,1H),8.63(s,1H),8.40(s,1H),8.24(s,1H),7.66(s,1H),669(s, 1H),6.28(ddd,J=26.8,16.9,5.7Hz,2H),5.69(dd,J=9.9,1.6Hz,1H),4.00(s,3H),3.81(s,3H),2.96(d,J=12.1Hz,2H),2.66(t,J=10.9Hz,2H),2.15(dd,J=9.3,5.5Hz,1H),2.04-1.91(m,2H),1.62(s,2H)。
實施例90：N-(2-(4-(二甲基胺基)哌啶-1-基)-5-(5-氟-4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基胺基)-4-甲氧基苯基)丙烯醯胺(Z-90)的製備
製備方法同實施例89，不同的是將實施例89步驟1中的化合物19-1換成化合物90-1，目標化合物Z-90(42mg，產率9%)。MS m/z(ESI)：495.0[M+H]+；1H NMR(400MHz，DMSO-d 6)：δ 9.05(s,1H),9.01(s,1H),8.80(s,1H),8.48(d,J=4Hz,1H),8.18(s,1H),7.89(s,1H),6.87(s,1H),6.73(m,1H),6.32(m,1H),5.78(t,1H),3.97(s,3H),3.88(s,3H),3.01(d,J=12Hz,2H),2.66(t,2H),2.19(s,6H),2.16(m,1H),1.84(m,2H),1.71(m,2H)。
實施例91：N-(5-(5-氯-4-(1,3,5-三甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基胺基)-2-((2-(二甲基胺基)乙基)(甲基)胺基)-4-甲氧基苯基)丙烯醯胺(Z-91)的製備
製備方法同實施例89，不同的是將實施例89步驟1中的化合物89-1換成化合物91-1，步驟2中的化合物3a換成化合物2a，得目標化合物Z-91(22mg，產率11%)。為黃色固體。MS m/z(ESI)：513.2[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ 9.32(br.s.,1H),8.43(s,1H),7.54(s,1H),6.66(s,1H),6.35(d,J=160Hz,1H),5.62(d,J=12.0Hz,1H),3.78(s,3H),3.70(s,3H),2.92(br.s.,2H),2.63(s,3H),2.34(br.s.,6H),221(s,3H),2.19(s,3H),1.60(br.s.,2H)。
實施例92：N-(5-(5-氯-4-(1,3,5-三甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基胺基)-2-(4-(二甲基胺基)哌啶-1-基)基-4-甲氧基苯基)丙烯醯胺(Z-92)的製備
製備方法同實施例91，不同的是將實施例91步驟2中化合物2a換成化合物3a，得目標化合物Z-92(4.9 mg，產率2.3%)，為白色固體，MS m/z(ESI)：539.2[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ 12.78(br.s.,1H),9.28(br.s.,1H),8.42(s,1H),7.59(br.s.,1H),6.62(br.s.,1H),6.20-6.40(m,2H),5.70(d,J=9.6Hz,1H),3.80(s,3H),3.71(s,3H),3.08-3.17(m,2H),2.77(s,3H),2.76(s,3H),2.71(br.s.,2H),2.28(br.s,2H),2.13-2.25(m,7H),1.95-2.11(m,2H)。
實施例93：N-(2-((2-(二甲基胺基)乙基)(甲基)胺基)-5-(5-氟-4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基胺基)-4-甲氧基苯基)丙烯醯胺(Z-93)的製備
製備方法同實施例90，不同的是將實施例90步驟2中化合物3a換成化合物2a，得目標化合物Z-93(86mg，產率20%)，為黃色固體，MS m/z(ESI)：469.0[M+H]+；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ 10.25(s,1H),9.33(s,1H),8.90(s,1H),8.50(s,1H),8.22(d,J=4Hz,1H),7.91(s,1H),7.04(s,1H),6.35(m,2H),5.80(m,1H),3.98(s,3H),3.89(s,3H),2.87(t,2H),2.70(s,3H),2.27(m,2H),2.21(s,6H)。
實施例94：N-(5-(5-氯-4-(1,3-二甲基-1H-吡唑 -4-基)嘧啶-2-基胺基)-2-((2-(二甲基胺基)乙基)(甲基)胺基)基-4-甲氧基苯基)丙烯醯胺(Z-94)的製備
製備方法同實施例91，不同的是將實施例91步驟1中化合物91-1換成化合物94-1，得目標化合物Z-94(13mg，2.6%)，MS m/z(ESI)：499.2[M+H]+；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ 10.13(s,1H),8.46(d,J=3.1Hz,3H),8.40(s,1H),7.00(s,1H),6.41(dd,J=16.7,10.0Hz,1H),6.22(dd,J=16.9,2.0Hz,1H),5.75(dd,J=10.1,1.9Hz,1H),3.81(d,J=17.7Hz,6H),2.90(s,2H),2.72(s,3H),2.33(s,2H),2.21(d,J=24.6Hz,9H)。
實施例95：N-(5-(5-氯-4-(1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基胺基)-2-(4-(二甲基胺基)哌啶-1-基)-4-甲氧基苯基)丙烯醯胺(Z-96)的製備
製備方法同實施例94，不同的是將實施例94 步驟2中化合物2a換成化合物3a，得目標化合物Z-95(75mg，產率17.4%)，為黃色固體，MS m/z(ESI)：525.2[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ 9.30(br.s.,1H),8.26-8.37(m,2H),8.20(s,1H),7.43(s,1H),6.64(s,1H),6.29-6.38(m,1H),6.11-6.29(m,1H),5.68(d,J=10.3Hz,1H),3.84(s,3H),3.81(s,3H),3.03(d,J=12.0Hz,2H),2.67(t,J=11.2Hz,3H),2.44-2.58(m,7H),2.39(s,3H),2.11(d,J=11.5Hz,2H),1.80(d,J=9.8Hz,2H)。
實施例96：N-(5-(5-氯-4-(1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基胺基)-2-(4-(二甲基胺基)哌啶-1-基)-4-甲氧基苯基)丙烯醯胺(Z-96)的製備
步驟1：0℃下，向4-羥基哌啶-1-甲酸第三丁酯(2.0g，10mmol)的二氯甲烷(20mL)溶液中加入三乙胺(2.0g，20mmol)，再滴加甲基磺醯氯(1.73g，15mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液。反應混合物攪拌1h後，將反應混合物倒 入冰水中，用二氯甲烷萃取，有機相用鹽水洗滌後經無水Na2SO4乾燥，濃縮，得到2.5g粗產品96-2，未經純化直接下一步；MS m/z(ESI)：223[M-56]+。
步驟2：向4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊環-2-基)-1H-吡唑(97mg，0.5mmol)的DMF溶液中加入化合物96-2(134mg，0.5mmol)和碳酸銫(245mg，0.75mmol)，反應混合物在90℃下攪拌12-16h，反應液冷卻至室溫，加水稀釋。用EA萃取，合併的有機相用鹽水洗滌，無水Na2SO4乾燥，濃縮得到粗產品，粗產品經Combi-flash柱層析[PE：EA=100：0-50：50]分離純化得目標產物96-3(2g，產率44%)，MS m/z(ESI)：378.2[M+1]+。
步驟3：以化合物19-1(549mg，3.0mmol)和化合物96-3(754mg，2.0mmol)為原料，參照實施例89中步驟1進行製備，得到目標物96-4(580mg，產率73%)，MS m/z(ESI)：398[M+H]+。
步驟4：向化合物96-4(298mg，0.75mmol)、化合物2a(159mg，0.5mmol)、碳酸銫(326mg，1.0mmol)和Xantphos(58mg，0.1mmol)的1,4-二氧六環(2mL)溶液中加入Pd2(dba)3(46mg，0.05mmol)，反應液經氮氣置換三次，在160℃下微波反應0.5h後，將反應液過濾並濃縮，得粗產品。粗產品經Combi-flash柱層析[PE：EA=100：0-0：100]分離純化得目標化合物96-5(250mg)，為黃色固體。MS m/z(ESI)：680.3[M+H]+。
步驟5：室溫下，向化合物96-5(240mg，0.35 mmol)的二氯甲烷(10mL)溶液中加入鹽酸/1,4-二氧六環的混合液，反應混合物室溫攪拌2h，加入Na2CO3調pH值為9，加入二氯甲烷。有機相用鹽酸洗滌，濃縮得到粗產品。將所得粗產品經製備液相分離純化得20mg目標化合物Z-96，為黃色固體。MS m/z(ESI)：580[M+H]+。
實施例97：N-(5-(5-氯-4-(1,5-二甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基胺基)-2-(4-(二甲基胺基)哌啶-1-基)-4-甲氧基苯基)丙烯醯胺(Z-97)的製備
製備方法同實施例89，不同的是將實施例89步驟1中化合物89-1換成化合物97-1，得目標化合物Z-97(56.5mg，產率26%)，為黃色固體。MS m/z(ESI)：525.2[M+H]+；1H NMR(400MHz，DMSO-d 6)：δ 8.99(s,1H),8.44(s,1H),8.39(s,1H),8.20(s,1.5H),7.99(s,1H),6.81(s,1H),6.66(dd,J=16.8,10.0Hz,1H),6.22(dd,J=16.8Hz,2.0Hz,1H),5.73(d,J=10.4Hz,1H),3.79(s,3H),3.76(s,3H),3.07(d,J=11.0Hz,2H),2.68(t,J=11.0Hz,2H),2.46(br.s.,1H),2.37(s,6H),2.34(s,3H),1.89(d,J=10.5Hz,2H),1.75(t,J=11.0Hz,2H)。
實施例98：N-(5-(5-氯-4-(1-甲基-1H-吡咯-3- 基)嘧啶-2-基胺基)-2-(4-(二甲基胺基)哌啶-1-基)-4-甲氧基苯基)丙烯醯胺(Z-98)的製備
步驟1：以化合物19-1(400mg，2.2mmol)和1-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊環-2-基)-1H-吡咯(250mg，2.0mmol)為原料，參照實施例89中步驟1進行製備，得到的粗產品經Combi-flash柱層析[PE：EA=3：1]分離純化得目標產物98-2(80mg，產率17.6%)。MS m/z(ESI)：228[M+H]+。
步驟2：向化合物98-2(100mg，0.44mmol)的1,4-二氧六環(6mL)溶液中加入化合物3a(140mg，0.4mmol)、Pd2(dba)3(41mg，0.044mmol)、BINAP(55mg，0.088mmol)和碳酸銫(286mg，0.88mmol)。將反應液在130℃下微波反應30分鐘。將反應液過濾後減壓濃縮得到粗產品，將所得粗產品經製備液相分離純化得94.47mg目標化合物Z-98，為黃色粉末。MS m/z(ESI)：510.3[M+H]+；1H NMR(400MHz，DMSO-d 6)：δ 9.06(s,1H),8.80(s,1H),8.34(s,1H),8.28(s,1H),8.06(s,1H),7.92(s,1H),6.98(s,1H),6.84(dd,J=5.6,3.2Hz,2H),6.71(dd,J=16.9,10.2Hz,1H),6.29(dd,J=17.0,1.6Hz,1H),5.77(d,J=11.5 Hz,1H),3.87(s,3H),3.74(s,3H),3.05(d,J=11.4Hz,2H),2.68(t,J=11.0Hz,2H),2.42(t,J=11.1Hz,1H),2.34(s,6H),1.89(d,J=10.6Hz,2H),1.79-1.67(m,2H)。
實施例99：N-(5-(5-氯-4-(1-甲基-1H-吡咯-3-基)嘧啶-2-基胺基)-2-((2-(二甲基胺基)乙基)(甲基)胺基)-4-甲氧基苯基)丙烯醯胺(Z-99)的製備
製備方法同實施例98，不同的是將實施例98步驟2中化合物3a換成化合物2a，得103mg目標化合物Z-99，為黃色粉末。MS m/z(ESI)：484.2[M+H]+；1H NMR(400MHz，DMSO-d 6)：δ 10.16(s,1H),9.06(s,1H),8.35(s,1H),8.26(s,1H),8.14(s,1H),7.93(s,1H),7.05-6.98(m,2H),6.84(t,J=2.4Hz,1H),6.48(dd,J=16.9,10.1Hz,1H),6.29(dd,J=16.9,1.9Hz,1H),5.78(dd,J=10.1,1.8Hz,1H),3.87(s,3H),3.74(s,3H),2.92(t,J=5.7Hz,2H),2.69(s,3H),2.38(t,J=5.7Hz,2H),2.26(s,6H)。
實施例100：N-(5-(5-氯-4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基胺基)-4-甲氧基-2-(4-甲基哌 -1-基)苯基)丙烯醯胺(Z-100)的製備
以化合物4a(100mg，0.34mmol)和化合物89-2(80mg，0.34mmol)為原料，參照實施例89步驟2的方法進行合成，得目標化合物Z-100(200mg，產率70%)；MS m/z(ESI)：483[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ 9.51(s,1H),9.10(s,1H),8.41(s,2H),8.26(s,1H),8.20(s,1H),7.70(s,1H),6.73(s,1H),6.43-6.32(m,1H),6.26(d,J=10.0Hz,1H),5.82-5.65(m,1H),3.99(s,3H),3.83(s,3H),3.03(s,8H),2.62(s,4H)。
實施例101：N-(5-(5-氯-4-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基胺基)-2-(4-(二甲基胺基)哌啶-1-基)-4-甲氧基苯基)丙烯醯胺(Z-101)的製備
步驟1：向乙腈(100ml)加入化合物4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊環-2-基)-1H-吡唑101-1(4.0g，0.21mol)，二氟氯乙酸鈉(3.77g 0.25mol)，15-冠-5(103.8g，0.65mol)，氮氣保護下加熱到回流，攪拌24h，冷卻至室溫，反應液倒入水(50mL)中淬滅，用EA(100mL×3)萃取，飽和食鹽水(20mL)洗滌，Na2SO4乾燥，過濾，濾液旋乾得到化合物101-2(4.1g，產率80%)白色固體。MS m/z(ESI)：245.1[M+H]+。
步驟2：向裝有四三苯基膦鈀(0.264g，2.58×10-4mol)的反應瓶中加入溶有化合物101-2(2.1g，8.9×10-3mol)的二甲氧基乙烷(20mL)溶液，溶有化合物19-1(1.4g，8.0×10-3mol)的二甲氧基乙烷(20mL)溶液和溶有碳酸鈉(1.8g，1.72×10-2mol)的水溶液(11mL)，氮氣保護下，加熱至100℃，攪拌過夜，降至室溫，水(50mL)淬滅反應液，EA(3×100mL)萃取，飽和食鹽水(30mL)洗滌，Na2SO4乾燥，過 濾濃縮得到油狀物，柱層析(矽膠；300-400目)，石油醚：EA=30：1洗脫得到化合物101-3(870mg，產率30%)，白色固體。MS m/z(ESI)：265.0[M+H]+，純度=96.08%(UV214)；1H NMR(400MHz，DMSO)：δ 9.21(s,1H),8.95(s,1H),8.56(s,1H),7.94(t,J=58Hz,1H)。
步驟3：以化合物101-3和化合物3a為原料，參照實施例89中步驟2進行合成，所得粗產品經製備液相分離純化得目標化合物Z-101，為黃色固體。MS m/z(ESI)：547[M+H]+；1H NMR(400MHz，DMSO-d 6)：δ 9.28(s,1H),9.06(s,1H),8.76(s,1H),8.65(s,1H),8.55(s,1H),8.28(d,J=3.6Hz,2H),7.92(t,J=58.6Hz,1H),6.87(s,1H),6.70(dd,J=17.0,10.2Hz,1H),6.29(dd,J=16.9,1.7Hz,1H),5.87-5.65(m,1H),3.86(s,3H),3.04(d,J=11.6Hz,2H),2.68(t,J=10.9Hz,2H),2.26(s,7H),1.85(d,J=10.5Hz,2H),1.71(d,J=8.9Hz,2H)。
實施例102：N-(5-(5-氯-4-(1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基胺基)-2-(4-(二甲基胺基)哌啶-1-基)-4-甲氧基苯基)丙烯醯胺(Z-102)的製備
步驟1：攪拌下，向化合物101-1(5.0g，25.8mmol)和2,3-二氫吡喃(4.33g，51.5mmol)的二氯甲烷(100mL)溶液中加入DTSA(463mg，2.6mmol)，反應混合物在40℃下攪拌2h。反應結束後，反應液用水洗滌，EA萃取後，減壓濃縮得到粗產品102-2(7.0g，60%)；不經純化直接下一步，MS m/z(ESI)：279[M+H]+。
步驟2：以化合物19-1(4.5g，25mmol)和化合物102-2(7.0g，25mmol)為原料，參照實施例89中步驟1進行製備，得到的粗產品經Combi-flash柱層析分離純化得目標產物102-3(850mg，產率10%)。MS m/z(ESI)：299[M+H]+。
步驟3：以化合物102-3(300mg，1mmol)和化合物3a(320mg，1mmol)為原料，參照實施例89中步驟2進行製備，得粗產品102-4(60mg，產率70%)；不經純化直接下一步，MS m/z(ESI)：581[M+H]+。
步驟4：攪拌下，向化合物102-4(700mg，1 mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液中加入鹽酸/1,4-二氧六環溶液(2mL)，反應液室溫下攪拌4h，得粗產品，將所得粗產品經製備液相分離純化得目標化合物Z-102(80mg，產率60%)，為黃色固體。MS m/z(ESI)：497[M+H]+：1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ 9.55(s,1H),8.92(s,2H),8.70(s,1H),8.35(s,1H),7.72(s,1H),6.76(s,1H),6.32(dt,J=17.0,12.9Hz,2H),5.76(d,J=9.9Hz,1H),3.89(s,3H),3.04(d,J=11.9Hz,2H),2.73(t,J=11.0Hz,2H),2.36(s,6H),2.24(d,J=7.4Hz,1H),2.05(d,J=11.5Hz,2H),1.70(s,2H)。
實施例103-127
實施例103至127中的目標化合物如式(IV-1)所示，其中，取代基R0、R2和R3都為氫，其餘的取代基A、R1、R6如下表所示。通用步驟：化合物Z-103至Z-127以不同取代的硼酸酯或者硼酸、5位取代的2,4-二氯嘧啶為原料，參照實施例1的類似方法進行製備。
對比例
對比化合物2和3分別以相應的硼酯和5位取代或未取代的2,4-二氯嘧啶為原料，參照實施例1的類似方法製備。
測試例1：對野生型EGFR和突變型EGFR激酶的活性抑制測試
以下z-lyte測試方法中所用試劑均可購自Invitrogen。
利用z-lyte方法測定待測物對雙突變型EGFR激酶(EGFR T790M/L858R激酶)(Invitrogen，PV4879)、野生型EGFR激酶(EGFR WT)(Invitrogen，PV3872)活性的抑制作用。
10μL T790M/L858R激酶反應體系中各組分的工作濃度為：25μM ATP,0.08(或0.1)ng/μL EGFR T790M/L858R激酶，2μM Tyr04底物(Invitrogen，PV3193 ，下同)。加入本發明上述實施例製備的化合物(即待測物)後DMSO的濃度為2%。
10μL EGFR WT激酶反應體系中各組分的工作濃度為：10μM ATP,0.8ng/μL EGFR WT激酶，2μM Tyr04底物。加入待測物後DMSO的濃度為2%。
測試方法：
室溫溶解10mM的待測化合物儲存液經4% DMSO的水梯度稀釋至終濃度10-0.005μM。每孔中加入2.5μL的待測物溶液以及5μL經反應緩衝液稀釋的EGFR T790M/L858R激酶(或EGFR WT激酶)與Tyr04底物的混合物，再加入2.5μL的ATP啟動反應。C1孔用反應緩衝液代替ATP，C2孔不加入任何藥物，C3孔按說明書描述加入磷酸化的底物。
在室溫搖床反應60min後。加入5μL Development Reagent B(Invitrogen)，於室溫搖床反應60min。在Victor X5螢光酶標儀(PerkinElmer)上讀板，測定激發波長為405nm，發射波長為450nm和520nm的光吸收。(例如，C3520nm表示C3孔在520nm的讀值)。
抑制率計算方法如下：
1、ER=Coumarin Emission(450nm)/Fluorescein Emission(520nm)
2、磷酸化率=
3、抑制率(IR)=(1-(測試化合物的磷酸化率)/(C2的磷酸化率))×100%
用XLFIT 5.0軟體(英國IDBS公司)擬合計算半數抑制濃度IC50。對酶的抑制活性和選擇抑制活性結果參見表1至表3。
從表1、表2和表3可以看出，本發明的示例化合物對EGFR突變型酶(T790M/L858R和L858R)表現出較強的抑制活性，而對EGFR野生型酶(T790M WT)抑制活性較弱，與陽性對照物BIBW2992(Afatinib)相比，本發明的化合物對EGFR突變型酶具有明顯的選擇抑制活性。並且本發明示例化合物對EGFR突變型酶的選擇抑制活性超過了對比化合物1(具體結構如下所示，並可參見WO2013014448A1)，選擇性最高比對比化合物1提高了18倍。
測試例2：MTT(3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴鹽)方法檢測細胞抑制活性
MTT測試方法步驟採用本領域技術人員熟知的方法進行，方法中所用試劑均可市購得到。
2.1 測試方法：
首先，移除培養基並加入0.25%的胰酶/EDTA(Gibco,25200-056)。洗一次後，再加入1.5mL胰酶/EDTA消化貼壁細胞，至細胞分離，然後加入3.5mL培養基終止消化。將消化完的細胞懸浮液移至15mL離心管，1300rpm離心3min後棄上清，並用新鮮的培養基懸浮細胞。然後細胞計數，並稀釋細胞至以下濃度：A431和H1975細胞每mL 2.78萬，NIH3T3每mL 3.33萬。將細胞種入96孔板(BD 3072)，每孔90μL，培養過夜。
A431細胞培養基為：10% FBS(Gibco，10099-141)DMEM(Hyclone SH30243.01B)；NIH3T3細胞培養基：10% FBS(Gibco，10099-141)DMEM(Hyclone SH30243.01B)；H1975細胞培養基：10% FBS(Gibco，10099-141)RPMI-1640(Hyclone SH30809.01B)；取20μL 10mM待測化合物，按照如下濃度梯 度(2000，666.67，222.22，74.07，24.69，8.23，2.74，0.91μM)稀釋10X藥品，再加入無血清培養基(終濃度為：10，3.333，1.111，0.370，0.123，0.041，0.014，0.005μM)，並加入每孔10μL藥品到細胞培養板內，其中DMSO終濃度為0.5%。
加藥後將細胞放入培養箱，培養72h後，每孔加入10μL的5mg/mL的MTT(Sigma,M5655)溶液，然後將96孔板放入37℃ 5% CO2培養箱孵育4h。
再在2000rpm，5min的條件下離心平板，移除上清後，每孔加入150μL DMSO，並在搖床中震盪平板至所有結晶紫溶解(約10-20min)。最後使用酶標儀測定492nm光吸收，使用XLFIT 5.0軟體(英國IDBS公司)計算IC50。示例化合物對細胞的抑制活性或選擇抑制活性見表4至表7。
從表4和表6可以看出，本發明的示例化合物對EGFR突變型細胞(H1975細胞)表現出較強的抑制活性，而對EGFR野生型細胞(A431細胞)表現出較弱抑制活性，與陽性對照物BIBW2992相比，本發明的化合物對EGFR突變型細胞生長具有明顯的選擇抑制活性。並且大部分示例化合物對EGFR突變型細胞生長的選擇抑制活性均超過了對比化合物1、2和3。選擇性最高比對比化合物1提高至近4倍。而研究發現將A換成吡啶環或喹啉環後，對H1975細胞活性和對細胞生長的選擇抑制活性明顯降低。
從表5和表7可以看出，本發明的示例化合物對NIH3T3細胞具有較高的IC50值，因此顯示出較小的毒性。
測試例3：EGFR T790M抑制劑細胞活性ELISA法測定
以下方法中的試劑、溶液的配置方法以及細胞處理和裂解液製備步驟、ELISA檢測步驟均按照R&D DYC3570，R&D DYC1095E以及R&D DYC1095BE的說明書進行操作。
一、試劑和溶液
細胞裂解緩衝液：1% NP-40，20mM Tris(pH 8.0)，137mM NaCl，10% glycerol，1mM NaVO3，2mM EDTA。
細胞裂解液：細胞裂解緩衝液+10μg/mL抑肽酶(Aprotinin)(Sigma)，10μg/mL亮抑蛋白肽酶(Leupeptin)(Sigma)，現配現用。
1x PBS緩衝液：NaCl：0.137M，KCl：0.0027M，Na2PO4-12H2O：0.01M，KH2PO4：0.0015M，pH 7.4。
洗滌緩衝液：含有0.05% Tween-20的PBS緩衝液。
檢測抗體稀釋液：20mM Tris，137mM NaCl，0.05% Tween-20，0.1% BSA，pH 7.2-7.4。
封閉液：含有1% BSA的PBS緩衝液。
ELISA試劑盒：R&D DYC3570，R&D DYC1095E和R&D DYC1095BE。
二、H1975細胞
2.1 H1975細胞處理和裂解液製備
(1)將H1975細胞以1×104/孔的密度種到96孔板中，每孔90微升含有10% FBS的1640培養基，37℃、5% CO2培養過夜。
(2)將待測化合物按照MTT實驗中藥物稀釋方法稀釋，將10μL稀釋後的化合物或稀釋後的DMSO加入到細胞培板的對應孔中，DMSO終濃度為0.5%，37℃、5% CO2培養1小時。以純DMSO處理的細胞培養體系作為細胞對照。
(3)吸掉培養基後加入100μL細胞裂解液，封板模封置於-80℃冰箱中過夜。以細胞裂解緩衝液作為空白對照。
2.2 ELISA檢測步驟
按照R&D DYC1095E或R&D DYC1095BE給定說明書進行操作。
(1)R&D捕獲抗體((DYC1095BE或DYC1095E))用PBS 1：180稀釋，稀釋好的抗體100μL/孔加入ELISA反應板(Corning costar 42592)，25℃搖床包被過夜；(2)360μL洗滌緩衝液洗3次；(3)加入300μL封閉液，25℃搖床孵育2小時；(4)360μL洗滌緩衝液洗3次；(5)加入40μL細胞裂解緩衝液和60μL細胞裂解液，25℃搖床孵育2小時；(6)360μL洗滌緩衝液洗3次；(7)檢測抗體用檢測抗體稀釋液以試劑盒說明規定比例稀釋，每孔加入100μL，25℃搖床避光孵育1小時；(8)360μL洗滌緩衝液洗3次；(9)將TMB底物(R&D DY999)中的A試劑和B試劑以1：1進行混合，每孔100μL，25℃搖床避光孵育20 分鐘；(10)2N H2SO4每孔加入50μL；(11)用酶標儀讀板(Thermo Multiskan K3)分別測定細胞對照、空白對照以及藥物處理情況下的OD450值和OD570值，並用相同孔的OD450值減去相應OD570值分別得到OD細胞、OD空白和OD藥物處理。
2.3 資料分析
抑制率(%)=100%×(OD細胞-OD藥物處理)/(OD細胞-OD空白)
2.4 將計算得到的抑制率用XLFIT 5.0軟體計算出IC50值，參見表8。
三、A431細胞
3.1 A431細胞的處理和測試步驟
(1)將A431細胞以1×104/孔的密度種到96孔板中，每孔90微升含有10% FBS的DMEM培養基37℃、5% CO2培養過夜。
(2)將A431細胞培養基更換為90微升無血清DMEM培養基，繼續培養過夜。
(3)將待測化合物按照MTT實驗中藥物稀釋方法稀釋，將10μL稀釋後的化合物或稀釋後的DMSO加入到細胞培板的對應孔中，DMSO終濃度為0.5%，37℃、5% CO2培養1小時。然後在除細胞對照孔外的每孔中加入10微升2μg/L的EGF，在細胞孔加入10微升無血清DMEM培養45分鐘；以不加入EGF與藥物處理的細胞作為細胞對 照，以不加入藥物的只加入EGF處理的細胞作為EGF對照。
(4)吸掉培養基後加入100μL細胞裂解液，封板模封置於-80℃冰箱中過夜。
3.2 ELISA檢測步驟
參照R&D DYC3570E說明書進行操作。
(1)R&D捕獲抗體(DYC3570E)用PBS 1：180稀釋，稀釋好的抗體100μL/孔加入ELISA反應板(Corning costar 42592)，25℃搖床包被過夜；(2)360μL洗滌緩衝液洗3次；(3)加入200μL封閉液，25℃搖床孵育2小時；(4)360μL洗滌緩衝液洗3次；(5)加入40μL細胞裂解緩衝液和60μL細胞裂解液，25℃搖床孵育2小時；(6)360μL洗滌緩衝液洗3次；(7)檢測抗體用檢測抗體稀釋液以試劑盒說明規定比例稀釋，每孔加入100μL，25℃搖床避光孵育1小時；(8)360μL洗滌緩衝液洗3次；(9)將TMB底物(R&D DY999)中的A試劑和B試劑以1：1進行混合，每孔100μL，25℃搖床避光孵育20分鐘；(10)2N H2SO4每孔加入50μL； (11)用酶標儀讀板(Thermo Multiskan K3)分別測定細胞對照、空白對照以及藥物處理情況下的OD450值和OD570值，並用相同孔的OD450值減去相應OD570值分別得到ODEGF、OD藥物、OD細胞。
3.3 資料分析
抑制率(%)=100%×(ODEGF-OD藥物)/(ODEGF-OD細胞)
3.4 將計算得到的抑制率用XLFIT 5.0軟體計算出IC50值，參見表8。
從表8可以看出，與陽性對照物BIBW2992相比，本發明的示例化合物在細胞層級上對標靶細胞具有明顯的選擇抑制活性。並且與對比化合物1、2和3相比，在細胞層級上對標靶細胞的選擇抑制活性最高提高至90倍。而研究發現將式(I)中的A換成吡啶環或喹啉環後，對H1975細胞活性和在細胞層級上對標靶細胞的選擇抑制活性明顯降低，甚至沒有選擇抑制活性。
從體外酶、細胞生長抑制實驗顯示，本發明化合物對EGFR突變型酶、細胞表現出較強的抑制活性，而對EGFR野生型酶、細胞表現出較弱抑制活性，因此對EGFR突變株細胞具有較好的選擇性；細胞毒性實驗中對NIH-3T3細胞有極弱的抑制作用，故表現出較低的細胞毒性；因此 此類化合物對T790M突變的EGFR有較好的選擇抑制活性和較低的細胞毒性。
測試例4：大鼠或小鼠體內試驗
應用LC/MS/MS法測定了大鼠或小鼠分別灌胃和靜注給予實施例化合物後不同時刻血漿中的藥物濃度，研究本發明化合物在大鼠或小鼠體內的藥代動力學行為，評價其藥動學特徵。
實驗方案：
試驗動物：健康成年雄性SD大鼠(體重200-300g，6隻，禁食)或雄性CD1小鼠(體重20-30g，18隻，自由飲水和飲食)，由斯萊克公司提供；給藥方式與劑量：給予SD大鼠足背靜脈給藥(1mg/kg，5mL/kg，5% DMAC(二甲基乙醯胺)，5% Solutol HS 15(聚乙二醇硬脂酸脂15)和90%鹽水和灌胃給藥(20mg/kg，10mL/kg，0.5% CMC-Na水溶液)；給予CD1小鼠尾靜脈給藥(1mg/kg，5mL/kg，5% DMAC，5% Solutol HS 15和90% Saline)和灌胃給藥(5mg/kg，10mL/kg，0.5% CMC-Na水溶液)
血樣採集：首先對給藥前挑選符合實驗要求的動物，稱重標記。採集血樣前，綁定大鼠或小鼠，每一隻給藥的大鼠在預定的採血時間點(靜脈給藥：分別於給藥前，給藥後的0.083,0.25,0.5,1,2,4,8,24h採血，共9個時間點；灌胃給藥：分別於給藥前，給藥後的0.083,0.25,0.5,1,2,4,8,24h採血，共9個時間點)，通過尾靜脈採 血，或經心臟採血(終末採血)約150μL。每一隻給藥的小鼠在預定的採血時間點(尾靜脈給藥於0.083,0.25,0.5,1,2,4,8,24採血，共8個時間點；灌胃給藥：於0.25,0.5,1,2,4,8,24h採血，共7個時間點)，通過眼眶採血，或經心臟採血(終末採血)約150μL。血液轉移至預先加入K2EDTA的1.5mL試管中。採完的血樣放在濕冰上，離心5min(2000g，4℃)，取出血漿，整個過程在採血後15min內完成。所有的樣品都需要存放於-70℃冰箱直到樣品分析。
應用LC/MS/MS法測定藥物濃度，本發明部分實施例化合物在相同劑量和給藥方式下，大鼠和小鼠體內的藥代動力學性質參數如表9所示：
從表9可以看出，本發明示例化合物的藥代吸收好，具有明顯的藥代吸收效果，同時表現出良好的生物利用度。
惟以上所述者，僅為本發明之實施例而已，當 不能以此限定本發明實施之範圍，即大凡依本發明申請專利範圍及專利說明書內容所作之簡單的等效變化與修飾，皆仍屬本發明專利涵蓋之範圍內。

Claims (10)

  1. 一種結構如式(I)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽或立體異構體： 在式(I)中， A為選自下組中的任意一種：及；其中 ，Z2為CR5或N；R5為氫、鹵素、三氟甲基或C1-10烷氧基；Z21為N或CH；R4、R42、R43各自獨立地為氫或C1-10烷基、C3-10環烷基、哌啶基、或鹵代的C1-10烷基；R41為氫、鹵素、三氟甲基、C1-10烷基或C1-10烷氧基；R0為氫、鹵素、C1-10烷基、-NRaRb或-CO-NRaRb，其中，Ra、Rb各自獨立地為C1-10烷基；Z1為CR6或N；其中，R6為氫、鹵素、三氟甲基、甲氧基或-CO2-C1-10烷基；R1為氫，或選自下組中的任意一種： R2和R3各自為氫；及R12為甲氧基。
  2. 如請求項1所述的化合物或其藥學上可接受的鹽或立體異構體，其中，A為選自下組中的任意一種： 其中，R4、R41、R42、R43如請求項1中所定義。
  3. 如請求項1所述的化合物或其藥學上可接受的鹽或立體異構體，其中，所述式(I)化合物為式(IV-1)或式(IV-2)所示化合物： 其中，A、R0、R1、R2、R3和R6如請求項1中所定義。
  4. 如請求項1所述的化合物或其藥學上可接受的鹽或立體異構體，其中，所述式(I)化合物為式(V-1)、式(V-2)、式(VI-1)、式(VI-2)、式(XI-1)、式(XI-2)、式(XII-1)或式(XII-2)所示化合物： 其中，R1、R2、R3、R4、R41、R42、R43和R6如請求項1中所定義。
  5. 如請求項1所述的化合物或其藥學上可接受的鹽或立體異構體，其中，所述式(I)化合物為選自下組的化合物：
  6. 一種藥物組合物，包括請求項1-5中任一項所述的化合物或其藥學上可接受的鹽或立體異構體；以及藥學上可接受的載體。
  7. 一種如請求項1-5中任一項所述的化合物或其藥學上可接受的鹽或立體異構體在製備調控EGFR酪胺酸激酶或者治療EGFR相關疾病的藥物中的應用。
  8. 如請求項7所述的應用，其中，所述的EGFR相關疾病選自下組：癌症、糖尿病、免疫系統疾病、神經退化性疾病、心血管疾病、使用EGFR調節劑治療期間具有獲得性耐藥性的疾病。
  9. 如請求項8所述的應用，其中，所述獲得性耐藥性的疾病是由EGFR外顯子20編碼的T790突變所引起的或者是包含EGFR外顯子20編碼的T790突變所引起的。
  10. 一種藥用組合物，包括如請求項1-5中任一項所述的化合物或其藥學上可接受的鹽或立體異構體；以及其它藥物，所述其它藥物為選自下組：吉非替尼、厄洛替尼、埃克替尼、拉帕替尼、XL647、NVP-AEE-788、 ARRY-334543、EKB-569、BIBW2992、HKI272、BMS-690514、CI-1033、凡德他尼、PF00299804、WZ4002、西妥昔單抗、曲妥珠單抗、帕尼突單抗、馬妥珠單抗、尼妥珠單抗、紮魯木單抗、帕妥珠單抗、MDX-214、CDX-110、IMC-11F8、Zemab、Her2疫苗PX 1041、HSP90抑制劑、CNF2024、坦螺旋黴素、阿螺旋黴素、IPI-504、SNX-5422、NVP-AUY922、或其組合。
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Families Citing this family (53)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104860941B (zh) 2014-02-25 2017-03-22 上海海雁医药科技有限公司 2,4‑二取代苯‑1,5‑二胺衍生物及其应用以及由其制备的药物组合物和药用组合物
AP2017009690A0 (en) 2014-06-19 2017-01-31 Ariad Pharma Inc Heteroaryl compounds for kinase inhibition
CN105315285B (zh) * 2014-07-25 2017-12-08 上海海雁医药科技有限公司 2,4‑二取代7H‑吡咯并[2,3‑d]嘧啶衍生物、其制法与医药上的用途
WO2016029839A1 (zh) * 2014-08-25 2016-03-03 四川海思科制药有限公司 一种（取代的苯基）（取代的嘧啶）胺基衍生物及其制备方法和药物用途
WO2016054987A1 (zh) 2014-10-11 2016-04-14 上海翰森生物医药科技有限公司 Egfr抑制剂及其制备和应用
PL3604294T3 (pl) 2014-10-13 2021-11-02 Yuhan Corporation Związki i kompozycje do modulowania aktywności zmutowanych kinaz EGFR
CN105085489B (zh) * 2014-11-05 2019-03-01 益方生物科技（上海）有限公司 嘧啶或吡啶类化合物、其制备方法和医药用途
CN112457298B (zh) 2014-12-11 2024-05-07 贝达医药公司 取代的2-苯胺基嘧啶衍生物及其作为表皮生长因子受体调节剂
HK1245260A1 (zh) 2014-12-23 2018-08-24 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. 细胞周期蛋白依赖性激酶7(cdk7)的抑制剂
US10266517B2 (en) * 2014-12-23 2019-04-23 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Pyrimidines as EGFR inhibitors and methods of treating disorders
CN104788427B (zh) * 2015-02-05 2017-05-31 上海泓博智源医药股份有限公司 3‑(2‑嘧啶氨基)苯基丙烯酰胺类化合物及其应用
JP6861166B2 (ja) 2015-03-27 2021-04-21 ダナ−ファーバー キャンサー インスティテュート， インコーポレイテッド サイクリン依存性キナーゼの阻害剤
TR201909160T4 (tr) 2015-07-15 2019-07-22 Hoffmann La Roche Metabotropik glutamat reseptörü modülatörleri olarak etinil türevleri.
US10561646B2 (en) 2015-07-24 2020-02-18 Shanghai Haiyan Pharmaceutical Technology Co. Ltd. EGFR inhibitor and pharmaceutically acceptable salt and polymorph thereof, and use thereof
US10377747B2 (en) 2015-08-31 2019-08-13 Wuxi Shuangliang Biotechnology Co., Ltd. 2-arylamino pyridine, pyrimidine or triazine derivatives, preparation method and use thereof
CN106749193B (zh) * 2015-11-23 2020-11-20 南京圣和药业股份有限公司 吲唑取代的表皮生长因子受体抑制剂及其应用
CN106928200A (zh) * 2015-12-30 2017-07-07 湖南福沃药业有限公司 用于治疗癌症的三嗪衍生物
JP2019501222A (ja) * 2016-01-07 2019-01-17 シーエス ファーマテック リミテッド Ｅｇｆｒチロシンキナーゼの臨床的に重要な変異体の選択的阻害薬
WO2017119732A1 (en) 2016-01-08 2017-07-13 Samsung Electronics Co., Ltd. Electronic device and operating method thereof
JP7112957B2 (ja) 2016-03-09 2022-08-04 ベイジン パーカンズ オンコロジー カンパニー リミテッド 腫瘍細胞懸濁培養及び関連方法
CN112645932B (zh) 2016-03-22 2022-01-14 江苏豪森药业集团有限公司 Egfr抑制剂游离碱或其酸式盐的多晶型、其制备方法和应用
WO2017202311A1 (zh) * 2016-05-23 2017-11-30 中国科学院上海药物研究所 一种2-氨基嘧啶类化合物的多晶型形式
CN109311858B (zh) * 2016-05-26 2021-12-03 里科瑞尔姆Ip控股有限责任公司 Egfr抑制剂化合物
GB201611580D0 (en) * 2016-07-01 2016-08-17 Aslan Pharmaceuticals Pte Ltd Method
JP6936305B2 (ja) 2016-07-18 2021-09-15 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ エチニル誘導体
CN108602802B (zh) * 2016-07-26 2020-01-21 深圳市塔吉瑞生物医药有限公司 用于抑制蛋白酪氨酸激酶活性的氨基嘧啶类化合物
CN107793413B (zh) * 2016-09-05 2021-09-28 上海科州药物研发有限公司 嘧啶杂环化合物及其制备方法和应用
CN108864079B (zh) * 2017-05-15 2021-04-09 深圳福沃药业有限公司 一种三嗪化合物及其药学上可接受的盐
MY199042A (en) * 2017-06-13 2023-10-11 Beijing Adamadle Biotechnology Llc Aminopyrimidine compound, preparation method therefor and use thereof
JP7045726B2 (ja) 2017-06-16 2022-04-01 ベータ ファーマ，インコーポレイテッド Ｎ－（２－（２－（ジメチルアミノ）エトキシ）－４－メトキシ－５－（（４－（１－メチル－１ｈ－インドール－３－イル）ピリミジン－２－イル）アミノ）フェニル）アクリルアミドおよびその塩の医薬品製剤
CA3068854A1 (en) * 2017-07-05 2019-01-10 Cs Pharmatech Limited Selective inhibitors of clinically important mutants of the egfr tyrosine kinase
JP7213193B2 (ja) * 2017-07-06 2023-01-26 ヤンセン ファーマシューティカ エヌ．ベー． Ｎｉｋ阻害剤としての新規の置換アザインドリン誘導体
CN107827875B (zh) * 2017-09-25 2021-07-09 文韬创新药物研究（北京）有限责任公司 一种苯并咪唑类衍生物作为周期蛋白依赖性激酶4/6抑制剂的应用
CN108299284A (zh) * 2018-01-18 2018-07-20 河南省科学院化学研究所有限公司 一种2-溴-6,9-二苯基咔唑工业化生产工艺
WO2019177375A1 (ko) * 2018-03-13 2019-09-19 포로노이바이오 주식회사 2, 4, 5-치환된 피리미딘 유도체, 이의 제조방법 및 이를 유효성분으로 포함하는 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
WO2019222093A1 (en) 2018-05-14 2019-11-21 Ariad Pharmaceuticals, Inc. Pharmaceutical salts of pyrimidine derivatives and method of treating disorders
EP3810132A4 (en) 2018-06-25 2022-06-22 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. TAIRE FAMILY KINASE INHIBITORS AND RELATED USES
EP3613738A1 (en) * 2018-08-23 2020-02-26 Lead Discovery Center GmbH 4-substituted pyrrolo[2,3-b]pyridine as erbb modulators useful for treating cancer
JP7240032B2 (ja) * 2018-12-21 2023-03-15 深▲チェン▼市塔吉瑞生物医薬有限公司 プロテインキナーゼ活性を阻害するためのアミノピリミジン系化合物
CA3124422A1 (en) 2018-12-28 2020-07-02 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Inhibitors of cyclin-dependent kinase 7 and uses thereof
CN111410651B (zh) * 2019-01-05 2021-06-04 山东轩竹医药科技有限公司 酪氨酸激酶抑制剂的盐及其晶型
CN113227073B (zh) * 2019-01-05 2022-09-16 山东轩竹医药科技有限公司 Egfr酪氨酸激酶的选择性抑制剂的盐及其晶型
CN110041302B (zh) * 2019-03-01 2021-11-30 南方医科大学 2-氨基-4-取代吡啶衍生物及其合成方法和应用
CN111747931A (zh) * 2019-03-29 2020-10-09 深圳福沃药业有限公司 用于治疗癌症的氮杂芳环酰胺衍生物
WO2022033455A1 (zh) * 2020-08-13 2022-02-17 上海和誉生物医药科技有限公司 具有egfr抑制活性的三嗪衍生物及其制备方法和应用
CN116157391B (zh) * 2020-11-11 2025-06-24 上海海雁医药科技有限公司 包含egfr抑制剂的药物组合物及其制备方法
WO2022166916A1 (zh) * 2021-02-05 2022-08-11 深圳市塔吉瑞生物医药有限公司 取代的杂芳基衍生物及其组合物及用途
KR102666918B1 (ko) * 2021-04-08 2024-05-20 주식회사 스탠다임 신규한 lrrk2 억제제
CN113387935B (zh) * 2021-07-23 2022-06-10 苏州雅深智慧科技有限公司 抑制三突变表皮生长因子受体酪氨酸激酶的化合物及用途
CN113861216B (zh) * 2021-11-03 2022-12-09 潍坊医学院 含有嘧啶杂环结构的化合物及其制备方法和应用
CN114767689B (zh) * 2022-04-29 2024-10-11 暨南大学 Luminespib在制备预防和/或治疗腺病毒感染的药物中的应用
KR102651320B1 (ko) * 2022-08-11 2024-03-28 환인제약 주식회사 신규한 헤테로아릴 치환 유도체 및 이를 포함하는 신경퇴행성 질환, 암, 및 염증성 질환의 예방 또는 치료용 조성물
WO2024035194A1 (ko) * 2022-08-11 2024-02-15 환인제약 주식회사 신규한 헤테로아릴 치환 유도체 및 이를 포함하는 신경퇴행성 질환, 암, 및 염증성 질환의 예방 또는 치료용 조성물

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101910152A (zh) * 2007-11-16 2010-12-08 因塞特公司 作为janus激酶抑制剂的4-吡唑基-n-芳基嘧啶-2-胺和4-吡唑基-n-杂芳基嘧啶-2-胺

Family Cites Families (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6881737B2 (en) * 2001-04-11 2005-04-19 Amgen Inc. Substituted triazinyl acrylamide derivatives and methods of use
JP2008510766A (ja) * 2004-08-27 2008-04-10 ゲーペーツェー ビオテック アーゲー ピリミジン誘導体
US20080300267A1 (en) * 2005-05-16 2008-12-04 Barun Okram Compounds and Compositions as Protein Kinase Inhibitors
BRPI0711385A2 (pt) * 2006-05-09 2011-11-08 Novartis Ag combinação compreendendo um quelante de ferro e um agente anti-neoplástico e seu uso
WO2009017838A2 (en) * 2007-08-01 2009-02-05 Exelixis, Inc. Combinations of jak-2 inhibitors and other agents
AU2009214440B2 (en) * 2008-02-15 2014-09-25 Rigel Pharmaceuticals, Inc. Pyrimidine-2-amine compounds and their use as inhibitors of JAK kinases
US8338439B2 (en) 2008-06-27 2012-12-25 Celgene Avilomics Research, Inc. 2,4-disubstituted pyrimidines useful as kinase inhibitors
US8450335B2 (en) * 2008-06-27 2013-05-28 Celgene Avilomics Research, Inc. 2,4-disubstituted pyrimidines useful as kinase inhibitors
CN103501612B (zh) * 2011-05-04 2017-03-29 阿里亚德医药股份有限公司 抑制表皮生长因子受体导致的癌症中细胞增殖的化合物
WO2012167322A1 (en) * 2011-06-10 2012-12-13 Huntsman Corporation Australia Pty Limited Structuring agents and emulsifiers for agricultural oil-based formulations
ME02887B (me) * 2011-07-27 2018-04-20 Astrazeneca Ab 2-(2,4,5-supstituisani-anilino) pirimidinski derivati kao egfr modulatori korisni za tretman raka
CN104860941B (zh) 2014-02-25 2017-03-22 上海海雁医药科技有限公司 2,4‑二取代苯‑1,5‑二胺衍生物及其应用以及由其制备的药物组合物和药用组合物
CN104788427B (zh) * 2015-02-05 2017-05-31 上海泓博智源医药股份有限公司 3‑(2‑嘧啶氨基)苯基丙烯酰胺类化合物及其应用

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101910152A (zh) * 2007-11-16 2010-12-08 因塞特公司 作为janus激酶抑制剂的4-吡唑基-n-芳基嘧啶-2-胺和4-吡唑基-n-杂芳基嘧啶-2-胺

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