TWI417045B - Pharmacodynamic Test Method for Water - borne Smoke - Google Patents
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Description
本發明有關一種殺蟲劑的藥效測試方法，特別是指一種針對具有固型物滅菌藥劑的水蒸式煙燻殺蟲劑測試方法。
歐美國家至今只生產傳統「點火引燃式的煙霧劑」(Smoke Generator)或研發「全釋型高壓噴霧煙霧劑」(Aerosol Total release Smoke Generator)。此種煙物劑或噴霧煙物劑的滅菌劑一般皆以液劑為主。
傳統滅菌液劑的殺菌測試方法是依據處方標示配製的Tryptone Soy Agar和Potato Dextrose Agar，於121℃，15磅高壓下滅菌15分鐘，冷卻至約50℃，倒入無菌培養皿中，每一皿倒入約15mL的培養基，待其冷卻凝固，在30℃下放置24小時，檢查有無雜菌生長。再配製無菌稀釋液：1.磷酸二氫鉀溶液：取3.4g磷酸二氫鉀(KH2
PO4
)溶於50mL之蒸餾水中，待完全溶解後，以1.0N氫氧化鈉溶液調整其PH值為7.2±0.5。然後加蒸餾水至全量為100mL，儲存於冰箱中做為母液備用；2.氯化鎂溶液：取8.1g氯化鎂(MgCl2
‧6H2
O)，先溶於少量蒸餾水中，待完全溶解後，再加蒸餾水至全量為100ml，儲存於冰箱中做為母液備用；分別取10ml氯化鎂溶液和2.5ml磷酸二氫鉀溶液，再加入蒸餾水至全量為2000ml，混合均勻後分散於稀釋瓶中，經121℃滅菌15分鐘，做為無菌稀釋液備用。另取隔夜平板培養的測試菌，以無菌稀釋液做成懸浮菌液備用，取0.1ml懸浮菌液加到10ml的藥液中混合均勻，靜置作用10分鐘，取0.2ml塗抹於Tryptone soy agar或是Potato Detrose Agar於35±2℃下培養48±1小時後計算菌數，真菌則置於30±2℃培養箱中，經5天後計算菌落數；最後做測試菌株之總活菌數。
傳統噴霧殺蟲劑之殺菌試驗方法是處方標示配製Potato Dextrose Agar及三分之一強度的Tryptone Soy Agar，於121℃，15磅高壓下滅菌15分鐘，冷卻至約50℃，倒入無菌培養皿中，每一皿倒入約15mL的培養基，待其冷卻凝固，在30℃下放置24小時，檢查有無雜菌生長；再取0.1ml菌液加到10ml的藥液中混合均勻，靜置作用10分鐘，取0.2ml塗抹於Potato Dextrose Agar或三分之一強度的Tryptone Soy Agar，每處理各做5次重覆，細菌置於35±2℃培養箱中，48±1小時計算菌數，真菌則置於30±2℃培養箱中，經5天後計算菌數；最後做測試菌株之總活菌數。
然而，一般亞洲國家常使用的水蒸式煙燻劑主要是以固型物進行氣化揮發，其殺蟲配方中大多以擊倒劑配合殺死劑使用，讓整體殺蟲功效提升，直到如台灣發明專利公開200913884號所揭示，水蒸式殺蟲煙燻劑已有達到擊倒、殺死及滅菌三效合一的複方製劑之前，先前尚無任何水蒸式煙燻劑有添加滅菌劑。
也由於三效合一煙燻劑需要採用固型化的藥粒，因此，煙燻劑本身的滅菌劑需要經由蒸發後形成微小粒子漂浮在空中後，降到表面進行滅菌，故無法採用傳統滅菌劑液劑或滅菌劑噴霧劑之接觸法去測試三合一水蒸式煙燻劑。
有鑒於目前測試滅菌劑的方法大多都以液劑方式量測，無法適用於三合一水蒸式殺蟲煙燻劑，且目前尚無任何分析滅菌劑為固型物的方法，更無藥效試驗的方法與標準可遵循，因此，為能夠符合滅菌劑為固型物的實際使用狀態，去設計一種藥效測試方法實乃創新開發的重點。
爰是，本發明之主要目的，旨在提供一種水蒸式煙燻劑的藥效測試方法，用以測試滅菌劑為固型物之水蒸式煙燻殺蟲劑，解決傳統測試方式僅能應用於液劑之困擾。
為達上揭目的，本發明藥效測試方法，主要是針對具有固型物滅菌劑的水蒸式煙燻劑開發創新，其包含以下步驟：
(A) 依處方標示配製胰蛋白大豆瓊脂培養基(Tryptone Soy Agar，TSA)及水洋菜培養基(Water Agar)，於高溫高壓下滅菌後冷卻凝固，於室溫下放置一段培養時間後檢視有無雜菌生長；其中，上述胰蛋白大豆瓊脂(TSA)培養基採用原始材料的三分之一強度，且高溫高壓下滅菌冷卻凝固狀態為121℃及15磅高壓下滅菌15分鐘並冷卻至約50℃凝固，而上述培養時間為24小時。
(B) 取磷酸二氫鉀溶完全溶解於蒸餾水中形成磷酸二氫鉀溶液，另取氯化鎂完全溶解於蒸餾水中形成氯化鎂溶液，將氯化鎂溶液和磷酸二氫鉀溶液配合蒸餾水均勻混合製成無菌稀釋液。
(C)將培養的測試菌以無菌稀釋液做連續稀釋，使菌數分別形成三種不同稀釋度菌液，取兩種稀釋度的菌液對無煙燻劑對照組進行抽氣過濾，另取兩種相同於無煙燻劑對照組稀釋度的菌液對煙燻劑試驗組進行抽氣過濾步驟；於一較佳實施利中，上述三種不同稀釋度菌液分別可為101
、102
及103
CFU/mL。
(D)吸取適當稀釋度的菌液以抽氣過濾方式，使菌均勻散布於濾膜上，將濾膜平貼於水洋菜培養基上，保持濾膜濕潤並維持測試菌株之活性；
(E)將煙燻室先以酒精表面消毒，把燻蒸試驗組貼有濾膜的水洋菜培養基打開且濾膜朝上，放入煙燻劑後將門關閉，當燻蒸劑的煙不再散出時，開始計時燻蒸時間，另把無燻蒸劑對照組貼有濾膜的水洋菜培養基打開且濾膜朝上，直接將門關閉，與燻蒸試驗組同步計時；其中，上述燻蒸時間為24小時。
(F)燻蒸時間一到就開動抽氣馬達，將煙燻室內的煙抽出後開門取出無燻蒸劑對照組與燻蒸試驗組的水洋菜培養基，並把濾膜轉換至胰蛋白大豆瓊脂(TSA)培養基上，經由培育程序後，計算無燻蒸劑對照組的菌數，並計算燻蒸試驗組的菌數相互比較；於一較佳實施利中，上述培育程序是採用35±2℃的狀態
下持續放置48小時。
茲為便於更進一步對本發明之構造、使用及其特徵有更深一層明確、詳實的認識與瞭解，爰舉出較佳實施例，配合圖式詳細說明如下：本發明水蒸式煙燻劑的藥效測試方法如下：
1.藥劑成份及含量：
賽滅寧(Cypermethrin) 8.0%w/w
鄰-苯甲基對氯酚(O-Benzyl-p-chlorophenol) 5.0%w/w
2.包裝規格：20公克/罐
3.測試濃度：依不同內容量使用於不同之空間(規格3、10、15、20公克/罐、使用空間分別為1~2坪、2~3坪、3~5坪、5~6坪)，此次實驗之燻蒸式空間為1.8×1.8×1.8公尺，故取3公克藥劑進行測試。
4.作用時間：緊閉門窗4小時。
5.測試微生物：
a. bacillus cereus BCRC 10603(仙人掌桿菌)
b. Escherichia coli BCRC 10675(大腸桿菌)
c. Pseudomonas aeruginosa BCRC 10994(綠膿桿菌)
d. Salmonella choleraesuis subsp.Choleraesuis BCEC 10744(沙門桿菌)
e. Staphylococcus aereus subsp.Aureus BCRC 12657(金黃葡萄球菌)
6. 材料：
Tryptone Soy Agar(Difco)
Water Agar
濾膜0.45um cellulose ester membranes(Adventec MFC,Inc. USA)
抽氣過濾設備
無菌稀釋液(依環保署公告之配方配製)
天秤、秤量紙、藥匙、試管、量筒、微量吸管
7. 方法：
(1) 依處方標示配製三分之一強度的胰蛋白大豆瓊脂培養基(Tryptone Soy Agar，TSA)和水洋菜培養基(Water Agar)，於121℃，15磅高壓下滅菌15分鐘，冷卻至約50℃，倒入無菌培養皿中，每一皿倒入約15mL的培養基，待其冷卻凝固，在30℃下放置24小時，檢查有無雜菌生長。
(2) 無菌稀釋液之配製：
1. 磷酸二氫鉀溶液：取3.4g磷酸二氫鉀(KH2
PO4
)溶於50mL之蒸餾水中，待完全溶解後，以1.0N氫氧化鈉溶液調整其PH值為7.2±0.5；然後加蒸餾水至全量為100mL，儲存於冰箱中做為原液備用。
2. 氯化鎂溶液：取8.1g氯化鎂(MgCl2
‧6H2
O)，先溶於少量蒸餾水中，待完全溶解後，再加蒸餾水至全量為100mL，儲存於冰箱中做為原液備用。
分別取10mL氯化鎂溶液和2.5mL磷酸二氫鉀溶液，再加入蒸餾水至全量為2000mL，混合均勻後分裝於稀釋瓶中，經121℃滅菌15分鐘，做為無菌稀釋液備用。
(3) 將隔夜平板培養的測試菌，以無菌稀釋液做連續稀釋，使菌數約分別為101
、102
及103
CFU/mL不同稀釋度菌液。吸取1毫升適當稀釋度的菌液以抽氣過濾方式，使菌均勻散布於濾膜上，將濾膜平貼於水洋菜培養基上，水洋菜培養基在長時間測試實驗的過程中，可保持濾膜濕潤以維持測試菌株之活性，預備進行燻蒸試驗以及無燻蒸劑之對照組實驗。
(4) 燻蒸試驗組：煙燻室先以75%酒精表面消毒，將貼有濾膜的水洋菜培養基打開，濾膜朝上，在煙燻室內排開，放入煙燻劑後將門關閉。當燻蒸劑的煙不再散出時(約需6分鐘)，開始計時4小時。燻蒸時間一到就開動抽氣馬達，將室內的煙抽出，約經15分鐘後開門取出水洋菜培養基，將濾膜轉換至三分之一強度的胰蛋白大豆瓊脂(TSA)培養基上，於35±2℃下經2天培養後，計算菌數。每測試菌為五重複。
(5) 無燻蒸劑對照組；煙燻室先以75%酒精表面消毒，將貼有濾膜的水洋菜培養基打開，濾膜朝上，在煙燻室內排開，直接將門關閉。與燻蒸試驗組同步計時。燻蒸時間一到就開動抽氣馬達，將室內的煙抽出，約經15分鐘後開門取出水洋菜培養基，將濾膜轉換至三分之一強度的胰蛋白大豆瓊脂(TSA)培養基上，於35±2℃下經2天培養後，計算無燻蒸劑對照組的菌數，並比較煙燻試驗組的菌數。每測試菌為五重複。
前述方法僅為方便舉例說明之用，並非加以限制，亦即，上述試驗方法亦依據實際狀況對培養時間、等待時間、燻蒸時間等各種不同的試驗條件進行微幅調整。
以下為單獨滅菌劑原體與各種不同三合一複合配方藥劑，應用前述方法進行之藥效試驗結果：
由前述列表可知，單獨滅菌劑原體沒有發煙劑應用本發明測試方法的滅菌效果為很差；另滅菌劑母粉與擊倒劑母粉、殺死劑母粉，先用粉對粉稀釋，再加入發煙劑，稀釋後之黏劑、溶劑及少量水，再一起攪拌混合並以冷風乾燥造粒成型再次乾燥之滅菌效果為最佳；而將滅菌劑、擊倒劑與殺死劑三劑原體一起混合攪拌，再次烘乾造粒再烘乾之滅菌效果為不穩定，時好時壞。
綜上所述，本發明水蒸式煙燻劑的藥效測試方法以無菌稀釋液做連續稀釋，並以抽氣過濾步驟使菌均勻散布於濾膜上，進行燻蒸試驗以及無燻蒸劑之對照組實驗，可測得氣化揮發後滅菌劑固態粒子的滅菌效果，如此即可測試像是水蒸式煙燻殺蟲劑的滅菌劑固型物，解決傳統測試方式僅能應用於液劑之困擾
以上所舉實施例，僅用為方便說明本發明並非加以限制，在不離本發明精神範疇，熟悉此一行業技藝人士依本發明申請專利範圍及發明說明所作之各種簡易變形與修飾，均仍應含括於以下申請專利範圍中。
第1圖係本發明水蒸式煙燻劑的藥效測試方法之流程圖。
Claims (7)
- 一種水蒸式煙燻劑的藥效測試方法，包含以下步驟：依處方標示配製胰蛋白大豆瓊脂培養基及水洋菜培養基，於高溫高壓下滅菌後冷卻凝固，於室溫下放置一段培養時間後檢視有無雜菌生長；取磷酸二氫鉀溶完全溶解於蒸餾水中形成磷酸二氫鉀溶液，另取氯化鎂完全溶解於蒸餾水中形成氯化鎂溶液，將氯化鎂溶液和磷酸二氫鉀溶液配合蒸餾水均勻混合製成無菌稀釋液；將培養的測試菌以無菌稀釋液做連續稀釋，使菌數分別形成三種不同稀釋度菌液，取兩種稀釋度的菌液對無煙燻劑對照組進行抽氣過濾，另取兩種相同於無煙燻劑對照組稀釋度的菌液對煙燻劑試驗組進行抽氣過濾步驟；吸取適當稀釋度的菌液以抽氣過濾方式，使菌均勻散布於濾膜上，將濾膜平貼於水洋菜培養基上，保持濾膜濕潤並維持測試菌株之活性；將煙燻室先以酒精表面消毒，把燻蒸試驗組貼有濾膜的水洋菜培養基打開且濾膜朝上，放入煙燻劑後將門關閉，當燻蒸劑的煙不再散出時，開始計時燻蒸時間，另把無燻蒸劑對照組貼有濾膜的水洋菜培養基打開且濾膜朝上，直接將門關閉，與燻蒸試驗組同步計時；以及燻蒸時間一到就開動抽氣馬達，將煙燻室內的煙抽 出後開門取出無燻蒸劑對照組與燻蒸試驗組的水洋菜培養基，並把濾膜轉換至胰蛋白大豆瓊脂培養基上，經由培育程序後，計算無燻蒸劑對照組的菌數，並計算燻蒸試驗組的菌數相互比較。
- 如申請專利範圍第1項所述水蒸式煙燻劑的藥效測試方法，其中，上述胰蛋白大豆瓊脂培養基採用原始材料的三分之一強度。
- 如申請專利範圍第1項所述水蒸式煙燻劑的藥效測試方法，其中，上述高溫高壓下滅菌冷卻凝固狀態為121℃及15磅高壓下滅菌15分鐘並冷卻至50℃凝固。
- 如申請專利範圍第1項所述水蒸式煙燻劑的藥效測試方法，其中，上述培養時間為24小時。
- 如申請專利範圍第1項所述水蒸式煙燻劑的藥效測試方法，其中，上述三種不同稀釋度菌液分別為101 、102 及103 CFU/mL。
- 如申請專利範圍第1項所述水蒸式煙燻劑的藥效測試方法，其中，上述燻蒸時間為4小時。
- 如申請專利範圍第1項所述水蒸式煙燻劑的藥效測試方法，其中，上述培育程序是採用35±2℃的狀態下持續放置48小時。
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| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| TW100127870A TWI417045B (zh) | 2011-08-05 | 2011-08-05 | Pharmacodynamic Test Method for Water - borne Smoke |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
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| TW100127870A TWI417045B (zh) | 2011-08-05 | 2011-08-05 | Pharmacodynamic Test Method for Water - borne Smoke |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| TW201306738A TW201306738A (zh) | 2013-02-16 |
| TWI417045B true TWI417045B (zh) | 2013-12-01 |
Family
ID=48169414
Family Applications (1)
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| TW100127870A TWI417045B (zh) | 2011-08-05 | 2011-08-05 | Pharmacodynamic Test Method for Water - borne Smoke |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| TW (1) | TWI417045B (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US10967010B2 (en) | 2016-07-13 | 2021-04-06 | 4D Pharma Plc | Compositions comprising bacterial strains |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4163038A (en) * | 1977-03-03 | 1979-07-31 | Earth Chemical Company, Limited | Fumigating method and apparatus |
| US4171340A (en) * | 1977-03-03 | 1979-10-16 | Earth Chemical Company, Ltd. | Fumigating apparatus and method |
| TW200913884A (en) * | 2007-09-21 | 2009-04-01 | Aerolead Internat Ltd | Disposable multi-function fumigant |
-
2011
- 2011-08-05 TW TW100127870A patent/TWI417045B/zh active
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4163038A (en) * | 1977-03-03 | 1979-07-31 | Earth Chemical Company, Limited | Fumigating method and apparatus |
| US4171340A (en) * | 1977-03-03 | 1979-10-16 | Earth Chemical Company, Ltd. | Fumigating apparatus and method |
| US4171340B1 (zh) * | 1977-03-03 | 1986-04-08 | ||
| TW200913884A (en) * | 2007-09-21 | 2009-04-01 | Aerolead Internat Ltd | Disposable multi-function fumigant |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US10967010B2 (en) | 2016-07-13 | 2021-04-06 | 4D Pharma Plc | Compositions comprising bacterial strains |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| TW201306738A (zh) | 2013-02-16 |
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