TWI476189B

TWI476189B - 用作抗癌劑之吲哚衍生物

Info

Publication number: TWI476189B
Application number: TW099103103A
Authority: TW
Inventors: Bruno Schoentjes; Sophie Descamps; Nathalie Claudie Isabelle Amblard
Original assignee: Janssen Pharmaceutica Nv
Priority date: 2009-02-04
Filing date: 2010-02-03
Publication date: 2015-03-11
Also published as: BRPI1008855B1; MX2011008195A; BRPI1008855B8; IL214427A; CA2749209A1; BRPI1008855A2; US20110294846A1; NZ594186A; UA107455C2; ZA201105695B; MY152018A; CA2749209C; AR075235A1; CN102307868B; TW201038552A; ES2639752T3; NO20111199A1; AU2010210178A1; AU2010210178B2; KR101730407B1

Description

用作抗癌劑之吲哚衍生物

本發明係關於吲哚化合物及含該作為抗癌劑之化合物的組成物。此外，本發明提供所揭示化合物之製備方法、含其之組成物及使用其之方法，例如作為一種藥劑，特別是用於治療癌症。

本申請案主張歐洲專利申請案No. 09152089.0之優先權，其併於本文參考。不受任何理論所拘束，現今認為，雖然在腫瘤細胞生物學中，MDM2及p53代表關鍵要素，且在對於細胞損傷或緊迫的細胞反應上具有關鍵角色，儘管本化合物增加p53之表現，藉由本化合物引出其之已證實有效的臨床前抗腫瘤活性，似乎其不能代表主要分子標靶。最初的觀察資料指出在DNA合成及/或複製-緊迫反應上直接或間接的效果作為支持所觀察到的化合物臨床前抗腫瘤活性。本化合物在缺乏p53、缺乏機能性p53、或具有突變之p53之腫瘤細胞亦呈現抗增殖效果，此外，其可使腫瘤形成細胞對於化學療法及放射療法敏感。

p53為一種腫瘤抑制因子蛋白質，其在調節細胞增殖與細胞生長抑止/細胞凋零之間的平衡上扮演一種樞紐的角色。在正常狀況下，p53之半生期非常短暫，因此p53在細胞中之濃度很低。然而，對於細胞DNA損害或細胞緊迫(例如致癌基因活化、端粒(telomere)蝕化、組織缺氧)的反應，p53之濃度增加。此增加p53濃度導致活化驅動細胞進入生長抑止或進入細胞凋零程序之一些基因的轉錄。因此，p53重要的功能是避免受損細胞不受控制之增殖，從而保護生物避免癌症生長。本文所使用之“MDM2”(鼠雙微粒體2；Murine Double Minute 2)一詞意指由於mdm2基因表現而獲得之蛋白質。在此術語之意義內，MDM2包含所有經mdm2編碼之蛋白質、期之突變體，或者是其薄片蛋白質(slice protein)、及其磷酸化蛋白質。此外，如本文中所使用，“MDM2”一詞包括MDM2類似物，例如MDMX，亦已知為MDM4，及MDM2同系物及其他動物之類似物，例如人類同系物HDM2或人類類似物HDMX。MDM2為一種p53功能之關鍵負調節劑，其經由結合至p53之胺基端反式激活域(transactivation domain)形成負的自動調節環，因此MDM2抑制p53活化轉錄之能力及將p53蛋白質水解降解。在正常狀況下，此調節環是維持p53低濃度的原因。

JP11130750尤其敘述經取代苯基胺基羰基吲哚基衍生物，作為5-HT受體拮抗劑。

EP1129074敘述鄰胺苯甲酸醯胺，作為血管內皮生長因子受體(VEGFR)之抑制劑，並用於治療血管生成疾病。WO01/42224提供羧基醯胺衍生物，用於治療阿滋海默症。EP1317443揭示三環三級胺衍生物，使用作為趨化素(chemokine)受體CXCR4或CCR5調控劑，用於治療人類免疫不全病毒及貓免疫不全病毒。

EP1379239揭示N-(2-芳基乙基)苯甲基胺，作為5-HT6受體之拮抗劑。WO00/15357提供哌-4-苯基衍生物，作為MDM2與p53間相互作用之抑制劑。EP1137418提供三環化合物，用於恢復p53家族蛋白質之構形安定性。WO03/040402提供抑制蛋白質間相互作用之化合物，例如MDM2與p53間之相互作用。EP1443937敘述經取代1,4-苯并二氮呯(benzodiazepines)及其作為MDM2-p53相互作用抑制劑之用途。EP1458380提供順-2,4,5-三苯基-咪唑酮，其抑制MDM2蛋白質與類p53胜肽之相互作用，並具有抗增殖活性。

EP1519932揭示雙芳基磺醯胺化合物，其結合至MDM2，並可用於癌症治療。

WO2006/032631、WO2007/107543、WO2007/107545、WO2009/019274、WO2009/037308、及WO2009/037343揭示MDM2與p53相互作用之抑制劑。

對於腫瘤細胞生長具有有效抑制效果、具有寬廣的安全輪廓，及較少非所欲之副作用的小分子有所需求。

本發明化合物顯示優異活體外活性及優異的活體內抗腫瘤效果，其對於P450酵素具有低親合性，降低不利的藥劑-藥劑相互作用的風險，容許較寬廣的安全限度。此外，本發明化合物具有低的藥劑誘導神經效果，且具有改良的心血管輪廓，其可適宜地影響化合物之劑量限制毒性(dose limiting toxicity)。。

本發明提供化合物、組成物、及治療癌症之方法。此外，本發明化合物及組成物用於增強化學療法及放射療法之效力。

本發明涉及式(I)化合物

包括其任何立體化學異構型式，其中R¹ 為羥基C_1-6 烷基或C_2-6 烯基；前提為R¹ 取代基位於吲哚部分的位置6或7；R² 為氫或C_1-4 烷基；Z為選自下列之基或R³ 為氫或羥基C_1-4 烷基；R⁴ 為羥基或C_1-4 烷氧基；R⁵ 為氫或C_1-4 烷基；或R⁴ 及R⁵ 結合在一起形成酮基；其醫藥可接受性鹽或其溶劑化物。

式(I)化合物亦可存在為其之互變異構型式，雖然於上式中並未明確指出，這些型式意圖包括於本發明之範圍內。

本發明亦關於式(I)化合物於製造用於治療癌症之藥劑上之用途，及關於一種用於治療癌症之式(I)化合物。

用於前述定義及下文中的一些術語如下說明，這些術語有時依其使用或以組合術語使用。

做為基團或基團之一部分的C_1-4 烷基定義為具有1至4個碳原子之直鏈或支鏈飽和碳氫殘基，例如甲基、乙基、丙基、1-甲基乙基、丁基；做為基團或基團之一部分的C_1-6 烷基定義為具有1至6個碳原子之直鏈或支鏈飽和碳氫殘基，例如C_1-4 烷基所定義之基及戊基、己基、2-甲基丁基等。C_2-6 烯基定義為含一雙鍵及具有2至6個碳原子之直鏈及支鏈碳氫殘基，例如乙烯基、2-丙烯基、3-丁烯基、2-戊烯基、3-戊烯基、3-甲基-2-丁烯基等。

由取代基劃至環系統中的線表示鍵可連接至任何適當的環原子。

關於治療用途，式(I)化合物之鹽類為相對離子是醫藥上可接受者。然而，非醫藥上可接受之酸及鹼的鹽類亦可供給使用，例如在製備或純化醫藥上可接受化合物。所有鹽類，無論醫藥上可接受或不能接受者皆包含於本發明之範圍內。

前文或下文中所述之醫藥上可接受鹽類意指包含式(I)化合物能夠形成之治療上活性無毒性酸加成鹽型式，後者可便利地經由以此適當之酸處理鹼形式而獲得，該酸如無機酸，例如氫鹵酸，例如氫氯酸、氫溴酸等；硫酸；硝酸；磷酸等；或有機酸，例如乙酸、丙酸、羥基乙酸、2-羥基丙酸、2-酮基丙酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、馬來酸、富馬酸、蘋果酸、酒石酸、2-羥基-1,2,3-丙烷三羧酸、甲烷磺酸、乙烷磺酸、苯磺酸、4-甲基苯磺酸、環己烷磺酸、2-羥基苯甲酸、4-胺基-2-羥基苯甲酸等酸。相反地，鹽型式可經由鹼處理轉變成游離鹼的型式。

含酸性質子之(I)化合物經由以適當有機及無機鹼處理，可轉變成其治療上活性無毒性金屬或胺加成鹽型式。如前文或下文中所述之醫藥上可接受鹽類意指亦包含式(I)化合物能夠形成之治療上活性無毒性金屬或胺加成鹽型式(鹼加成鹽型式)。適當的鹼加成鹽型式包含，例如銨鹽、鹼金屬及鹼土金屬鹽類，例如鋰、鈉、鉀、鎂、鈣鹽等、有機鹼之鹽類，例如一級、二級及三級脂族及芳族胺，例如甲胺、乙胺、丙胺、異丙胺、四丁基胺異構物、二甲胺、二乙胺、二乙醇胺、二丙胺、二異丙胺、二-正丁胺、吡咯啶、哌啶、嗎啉、三甲胺、三乙胺、三丙胺、啶、吡啶、喹啉及異喹啉、苄星(benzathine)、N -甲基-D-還原葡糖胺、2-胺基-2-(羥基甲基)-1,3-丙二醇、海巴明(hydrabamine)鹽類、及具有胺基酸之鹽類，例如精胺酸、離胺酸等。相反地，鹽型式可經由酸處理轉變成游離酸的型式。

鹽類一詞亦包含四級銨鹽(四級胺)，經由式(I)化合物之鹼性氮與適當之四級化試劑間之反應可形成式(I)化合物，該四級化試劑例如為任意地經取代之C_1-6 烷基鹵化物、芳基鹵化物、C_1-6 烷基羰基鹵化物、芳基羰基鹵化物、或芳基C_1-6 烷基鹵化物，例如甲基碘或苯甲基碘、其中芳基代表未經取代或經取代之苯基。其它具有優異離去基之反應物亦可使用，例如C_1-6 烷基　三氟甲烷磺酸酯、C_1-6 烷基　甲烷磺酸酯、及C_1-6 烷基　對甲苯磺酸酯。四級胺具有正電氮。醫藥上可接受相對離子包括氯、溴、碘、三氟乙酸根、乙酸根、三氟甲烷磺酸根、硫酸根、磺酸酯。可使用離子交換樹脂導入相對離子之選擇。

較佳地，鹽類一詞意指醫藥上可接受酸加成鹽型式及醫藥上可接受金屬或胺加成鹽型式。

溶劑化物一詞包含式(I)化合物可形成之水合物及溶劑加成型式，及其鹽類。此型式之實例例如為水合物、醇化物等。

將可察知一些式(I)化合物及其鹽類、及溶劑化物可包含一或多個對掌中心，並存在立體化學異構型式。

如前文中所使用，“式(I)化合物之立體化學異構型式”一詞定義經由相同鍵之順序鍵結相同原子，但具有不可交換之不同立體結構所組成之所有可能的化合物，其可具有式(I)化合物及其醫藥上可接受性鹽類或生理機能性衍生物。

除另有提及或指出外，化合物之化學命名代表所有可能之立體化學異構型式的混合物，且各個別的式(I)異構型式及其鹽類或溶劑化物實質上不含相關其他異構物，即少於50%，較佳地少於20%，更佳地少於10%，更佳地少於5%，更佳地少於2%，且最佳地少於1%。因此，當式(I)化合物為例如特定為R，此意指化合物實質上不含S異構物。或若式(I)化合物為例如特定為E，此意指化合物實質上不含Z異構物。

尤其是，立體中心可具有R-或S-組態；在二價環(部分)飽和殘基上之取代基可具有順式-或反式-組態。包含雙鍵之化合物在該雙鍵上可具有E(對側)或Z(同側)-立體化學。術語順式、反式、R、S、E及Z為熟悉技術者所熟知。

式(I)化合物之立體化學異構型式顯然地意圖包含於本發明之範圍內。

特別受關注的是立體化學上純的這些式(I)化合物。

依據CAS-命名規定，當已知絕對組態之二個立體中心存在於分子中時，R 或S 描述符號被指定(基於Cahn-Ingold-Prelog順序規則)為最小編號對掌中心，參考中心。使用相關描述符號[R *,R *]或[R *,S *]表示第二立體中心之組態，其中R *經常被特定為參考中心，且[R *,R *]表示具有相同對掌之中心，且[R *,S *]表示不同對掌之中心。例如，若分子中最小編號對掌中心具有S 組態，而第二中心為R ，立體描述符號將被特定為S -[R *,S *]。若使用“α”及“β”：在具有最低環數之環系統的不對稱碳原子上，最優先取代基之位置任意地經常位於環系統所決定之平均平面的“α”位置。在環系統中，相對於在參考原子上最優先取代基之位置，在其他不對稱碳原子上最優先取代基之位置，若其位於環系統所決定之平均平面的同側，則被命名為“α”，若其位於環系統所決定之平均平面的另一側，則被命名為“β”。

當於本文使用時，述語順式及反式符合Chemical Abstracts nomenclature(J. Org. Chem. 1970,35(9),2849-2867)，且涉及環部分上取代基之位置。

式(I)化合物可被合成為對映異構物之外消旋混合物形式，其可依技術中已知之解析程序相互分離。外消旋式(I)化合物可經由與適當對掌性酸反應，被轉換成對應之非鏡像異構鹽形式。隨後分離該非鏡像異構鹽形式，例如經由選擇性或部分結晶，並將對映異構物經由鹼解離。式(I)化合物之分離對映異構物形式的另一方式包含使用對掌性靜止相之液體層析。倘若反應立體特異性地發生，該純的立體化學異構型式亦可衍生自對應的適當起始物質之純立體化學異構型式，較佳地，若特定立體異構物為所欲，該化合物將經由製備之立體特異性方法合成，這些方法將有利地使用對映異構性純的起始物質。

本發明亦意圖包括任何存在於本發明化合物中之原子的同位素，例如氫之同位素，包括氚及氘，及碳之同位素，包括C-13及C-14。

每當於下文使用時，"式(I)化合物"或“本發明化合物”表示亦包括醫藥上可接受鹽類，特別是酸或鹼(金屬或胺)加成鹽、所有立體異構型式、溶劑化物、及所有多型結晶型式或非晶型式。

每當於前文或下文使用時，取代基各自可被獨立地自許多定義之列表中選出，所有可能之組合被預期為化學上可能的。

本發明令人關注的具體實施例為R¹ 取代基位於吲哚部分之位置7的這些式(I)化合物，因此，化合物具有下式

本發明令人關注的具體實施例為R¹ 取代基位於吲哚部分之位置6的這些式(I)化合物，因此，化合物具有下式

本發明令人關注的具體實施例為這些式(I)化合物、(I-a)或(I-b)，其中R¹ 為羥基C_1-6 烷基，特別是-CH₂ -OH、-C(CH₃ )₂ -OH、-CH(CH₃ )-OH、-CH₂ -CH₂ -OH、-CH(CH(CH₃ )₂ )-OH、-CH₂ -CH₂ -CHOH-CH₃ ，尤其是-C(CH₃ )₂ -OH。

本發明令人關注的具體實施例為這些式(I)化合物、(I-a)或(I-b)，其中R¹ 為C_2-6 烯基，特別是-CH=CH₂ 、-C(CH₃ )=CH₂ 。

本發明令人關注的具體實施例為這些式(I)化合物、(I-a)或(I-b)或上述其之令人關注的具體實施例，其中R² 為氫。

本發明令人關注的具體實施例為這些式(I)化合物、(I-a)或(I-b)、或只要可能，上述其之令人關注的具體實施例，其中R² 為C_1-4 烷基，特別是甲基。

本發明令人關注的具體實施例為這些式(I)化合物、(I-a)或(I-b)、或只要可能，上述其之令人關注的具體實施例，其中R³ 代表氫。

本發明令人關注的具體實施例為這些式(I)化合物、(I-a)或(I-b)、或只要可能，上述其之令人關注的具體實施例，其中R³ 代表羥基C_1-4 烷基，特別是-CH₂ -OH。較佳地，此R³ 取代基位於吡啶部分之位置2。

本發明令人關注的具體實施例為這些式(I)化合物、(I-a)或(I-b)、或只要可能，上述其之令人關注的具體實施例，其中R⁴ 代表羥基。

本發明令人關注的具體實施例為這些式(I)化合物、(I-a)或(I-b)、或只要可能，上述其之令人關注的具體實施例，其中R⁴ 代表C_1-4 烷氧基，特別是甲氧基。

本發明令人關注的具體實施例為這些式(I)化合物、(I-a)或(I-b)、或只要可能，上述其之令人關注的具體實施例，其中R⁵ 代表氫。

本發明令人關注的具體實施例為這些式(I)化合物、(I-a)或(I-b)、或只要可能，上述其之令人關注的具體實施例，其中R⁵ 代表C_1-4 烷基，特別是甲基。

本發明令人關注的具體實施例為這些式(I)化合物、(I-a)或(I-b)、或只要可能，上述其之令人關注的具體實施例，其中R⁴ 及R⁵ 一起形成酮基。

本發明令人關注的具體實施例為這些式(I)化合物、(I-a)或(I-b)、或只要可能，上述其之令人關注的具體實施例，其中R⁴ 為羥基且R⁵ 為氫。

本發明令人關注的具體實施例為這些式(I)化合物、(I-a)或(I-b)、或只要可能，上述其之令人關注的具體實施例，其中R⁴ 為羥基且R⁵ 為C_1-4 烷基，特別是甲基。

本發明令人關注的具體實施例為這些式(I)化合物、(I-a)或(I-b)、或只要可能，上述其之令人關注的具體實施例，其中R⁴ 為C_1-4 烷氧基且R⁵ 為氫。

本發明令人關注的具體實施例為這些式(I)化合物、(I-a)或(I-b)、或只要可能，上述其之令人關注的具體實施例，其中Z為式(z-1)之基。

本發明令人關注的具體實施例為這些式(I)化合物、(I-a)或(I-b)、或只要可能，上述其之令人關注的具體實施例，其中Z為式(z-2)之基。

上述令人關注的具體實施例的所有可能組合被認為包含於本發明之範圍內。

本發明令人關注的具體實施例為這些式(I)化合物、(I-a)或(I-b)，其中R¹ 為-CH₂ -OH、-C(CH₃ )₂ -OH、-CH(CH₃ )-OH、-CH₂ -CH₂ -OH、-CH(CH(CH₃ )₂ )-OH、-CH₂ -CH₂ -CHOH-CH₃ 、-CH=CH₂ 或C(CH₃ )=CH₂ ；R² 為氫或甲基；R³ 為氫或-CH₂ -OH；R⁴ 為羥基或甲基氧基；R⁵ 為氫或甲基、或R⁴ 與R⁵ 結合在一起形成酮基。

較佳地，上述令人關注的具體實施例之化合物為立體化學性純的。

本發明較佳的化合物選自下列所組成之群組

包括任何其立體化學異構型式；其醫藥可接受性鹽或其溶劑化物。

(^* 表示相關立體化學)

本發明較佳的化合物選自下列所組成之群組

包括其任何立體化學異構型式；其醫藥可接受性鹽或其溶劑化物。

本發明較佳的化合物為具有下式之化合物

其醫藥可接受性鹽或其溶劑化物。

本發明較佳的化合物為具有下式之化合物

本發明較佳的化合物為具有下式之對映異構物

且具有左旋旋光性，其以鈉(589奈米)之D-線波長的光，於溫度20℃，及晶格路徑長度1公寸，在濃度8.59毫克/毫升之氯仿中量測；或其醫藥可接受性鹽或其溶劑化物。

本發明較佳的化合物為具有下式之對映異構物

且具有右旋旋光性，其以鈉(589奈米)之D-線波長的光，於溫度20℃，及晶格路徑長度1公寸，在濃度10.33毫克/毫升之甲醇中量測；或其醫藥可接受性鹽或其溶劑化物。

本發明較佳的化合物為具有下式之對映異構物

且具有左旋旋光性，其以鈉(589奈米)之D-線波長的光，於溫度20℃，及晶格路徑長度1公寸，在濃度10.74毫克/毫升之甲醇中量測；或其醫藥可接受性鹽或其溶劑化物。

式(I)化合物、其醫藥上可接受鹽類及其立體化學異構型式可於習知方法中製備。起始物質及一些中間產物為已知的化合物，且為商業上可獲得，或可根據技術中通常已知之習知反應程序製備。敘述於WO2006/032631之合成方法亦作為關於此方面之參考資料。

一些此類製備方法將於下文中更詳細的敘述，獲得最終式(I)化合物之其他方法敘述於實施例中。

一般而言，式(I)化合物可經由式(II)中間產物與式(III)中間產物反應而製備，其中W₁ 為適當之離去基，例如鹵素，例如氟、氯、溴或碘、或磺醯氧基，例如甲基磺醯氧基、4-甲基苯基磺醯氧基等。反應可於反應-惰性溶劑中完成，例如醇，例如甲醇、乙醇、2-甲氧基-乙醇、丙醇、丁醇等；醚，例如1,4-二烷，較佳地有適當的酸存在，例如HCl、1,1’-氧基雙丙烷等；酮，例如4-甲基-2-戊酮；或N,N-二甲基甲醯胺、硝基苯、乙腈等。添加適當的鹼，例如鹼金屬或鹼土金屬碳酸鹽或碳酸氫鹽，或有機鹼，例如N,N-二異丙基乙基胺、三乙基胺、碳酸鈉或碳酸鉀，可被用於收取在反應過程中被解離之酸。可添加少量適當的金屬碘化物，例如碘化鈉或碘化鉀，以促進反應。攪拌可增強反應速率。反應可便利地於室溫與反應混合物之回流溫度間的溫度範圍進行，如果需要，反應可於增壓下進行。

在上述反應中，式(II)中間產物，其中R¹ 為-C(OH)(CH₃ )₂ 可產生對應之最終式(I)化合物，其中R¹ 為-C(CH₃ )=CH₂ 。

上述式(III)中間產物與式(II)中間產物之反應亦可在適當的催化劑，例如Pd(dba)₂ (雙[(1,2,4,5-η)-1,5-二苯基-1,4-戊二烯-3-酮]-鈀)、適當的配位基，例如BINAP(2,2'-雙(二苯基膦)-1,1'-雙萘基)、適當的鹼，例如三級丁醇鈉、及適當的溶劑，例如甲苯，存在下完成。

式(I)化合物，其中R¹ 代表羥基C_1-4 烷基，該化合物以式(I-1)代表，其亦可在適當的還原劑，例如NaBH₄ ，及適當的溶劑，例如醇，例如甲醇等存在下，經由還原對應之式(IV)羰基衍生物而製備。

式(I-1)化合物亦可在適當的還原劑，例如LiAlH₄ ，及適當的溶劑，例如四氫呋喃存在下，經由還原對應之式(V)醚衍生物而製備，其中R^x 代表-C_1-3 烷基C(=O)OC_1-4 烷基。

式(I-1)化合物，其中R¹ 代表羥基C_1-4 烷基，且該羥基C_1-4 烷基位於吲哚部分之位置7，該化合物以式(I-1-a)表示，其亦可經由以適當的鹼，例如氫氧化鈉，及適當的溶劑，例如四氫呋喃，或醇，例如乙醇等，水解式(VI)中間產物而製備。

經由技術中已知的反應或官能基轉變，式(I)化合物亦可被相互轉換。

經由在適當的溶劑中，例如醇，例如2-丙醇、二乙醚、二異丙醚，與適當的酸反應，例如氫氯酸，式(I)化合物亦可被轉換成醫藥上可接受性酸加成鹽。

一些中間產物及起始物質為已知化合物，且為商業上可獲得或可根據技術中已知之製程製備。

一般而言，在適當的金屬催化劑存在下，例如雷氏鎳(Raney Nickel)，於適當的溶劑存在下，例如醇，例如甲醇或乙醇等；或含鉑之炭，在適當的催化劑毒(catalyst poison)存在下，例如噻吩溶液及五氧化釩，在適當的溶劑存在下，例如四氫呋喃，式(II)中間產物可經由氫化式(VII)中間產物而製備。

在適當的溶劑存在下，例如N,N-二甲亞碸，式(VII)中間產物可經由反應式(VIII)中間產物與式(IX)中間產物而製備，其中W₂ 代表適當的離去基，例如鹵原子，例如氯、溴、氟等。添加適當的鹼例如，例如鹼金屬或鹼土金屬碳酸鹽或碳酸氫鹽或有機鹼，例如N,N-二異丙基乙胺、三乙胺、碳酸鈉、碳酸氫鈉、或碳酸鉀，可用於收取反應過程期間所解離之酸。

在雷氏鎳及NH₃ 存在下，在適當的溶劑存在下，例如醇，例如甲醇等，式(VIII)中間產物可由相對應之式(X)中間產物製備。

式(X)中間產物，其中R¹ 代表羥基C_1-4 烷基，例如-CH(OH)(CH₃ )，該中間產物以式(X-a)表示，其可經由在適當的溶劑存在下，例如四氫呋喃，與CH₃ MgCl反應，由式(XI)中間產物製備。

相同的反應可用於製備其他另一羥基C_1-4 烷基。例如，其R¹ 代表-C(OH)(CH₃ )₂ 之中間產物可由對應之具有-C(=O)-CH₃ 的中間產物製備。

式(XI)中間產物可在適當的溶劑存在下，例如N，N-二甲基甲醯胺，經由反應式(XII)中間產物與氰化鈉而製備。

或者是，式(XI)中間產物亦可在戴斯-馬丁過碘烷(Dess-Martin periodinane)及例如二氯甲烷之適當溶劑存在下，經由氧化對應羥基類似物而製備。

式(XII)中間產物可在適當的溶劑存在下，例如醇，例如乙醇，經由反應式(XIII)中間產物與CH₃ I而製備。

式(XIII)中間產物可在乙酸存在下，經由反應式(XIV)中間產物與埃申莫瑟氏鹽類酸(Eschenmosser，s salt acid)而製備。

式(XIV)中間產物可在適當的氧化劑存在下，例如MnO₂ ，在適當的溶劑存在下，例如二氯甲烷，經由氧化對應之羥基類似物而製備。

式(III)中間產物，其中Z為式(z-2)基，且R⁴ 為羥基，該中間產物以式(III-a)表示，其可在適當的溶劑存在下，例如醇，例如甲醇，經由以適當的還原劑，例如NaBH₄ ，還原式(III-b)中間產物而製備。

式(III-a)中間產物可在適當的鹼，例如氫化鈉，及適當的溶劑，例如四氫呋喃存在下，經由與C_1-4 烷基碘化物反應，轉換成式(III-c)中間產物。可在適當的溶劑存在下，例如二氯甲烷，經由與適當的氧化劑反應，例如MnO₂ ，氧化式(III-a)中間產物而製備式(III-b)中間產物。在適當的溶劑存在下，例如四氫呋喃，式(III-b)中間產物可經由與C_1-4 烷基MgCl反應，轉換成式(III-d)中間產物。

式(III-a)中間產物亦可經由在甲醇/NH₃ 之混合物中攪拌式(XV)中間產物而製備。如果需要，式(III-a)中間產物可經由在乙酸酐與吡啶之混合物中攪拌，轉換成式(XV)中間產物。

中間產物(III-a)之S-對映異構物(本文稱為式(III-a-1)中間產物)，及式(XV)中間產物之R-對映異構物(本文稱為式(XV-b)中間產物)，可經由在適當的溶劑中，例如乙酸乙烯酯，添加南極假絲酵母脂肪酶B(Lipase Candida Antartica B)至式(III-a)中間產物之外消旋混合物中而製備(詳見流程圖1)。當需要時，式(XV-b)中間產物可經由在MeOH/NH₃ 中反應，轉換成中間產物(III-a)之R對映異構物，本文稱為式(III-a-2)中間產物。

由外消旋混合物起始，此方法提供以ee>99%及58%產率轉換一種對映異構物成為其之乙酸鹽，且第二種對映異構物以ee>99%及42%產率被分離。

對映異構物過量(ee)一詞為熟悉立體化學之人所熟知。關於(+)及(-)對映異構物之混合物，以F(+)及F(-)之莫耳或重量分率給予之組成物(其中F(+)+F(-)=1)，對於F(*)之對映異構物過量定義為F(+)-F(-)，且百分比對映異構物過量定義為100*[F(+)-F(-)]。

流程圖1

或者是，中間產物(III-a)之R-對映異構物(本文稱為式(III-a-2)中間產物)及式(XV)中間產物之S-對映異構物(本文稱為式(XV-a)中間產物)可經由在水中，添加南極假絲酵母脂肪酶B至式(XV)中間產物之外消旋混合物而製備(詳見流程圖2)。當需要時，式(XV-a)中間產物可經由在MeOH/NH3中反應，轉換成中間產物(III-a-1)。

流程圖2

或者是，式(III-a)中間產物亦可經由對掌性管柱層析分離成其之對映異構物。

式(XV)中間產物可經由在乙酸酐酐攪拌式(XVI)中間產物而製備。

式(XVI)中間產物，其中W₁ 為氯，本文稱為式(XVI-a)中間產物，其之製備可經由添加氯化苯甲基三乙基銨及氯化鈉至含式(XVII)中間產物之乙腈溶液中，之後添加濃氫氯酸。

式(XVII)中間產物可經由添加發煙硝酸至硫酸中，之後逐份添加6,7-二氫-5H-環戊[b]吡啶，1-氧化物而製備。

式(IV)中間產物可根據上述關於式(II)中間產物之反應規則而製備。

式(V)中間產物可在適當的酸，例如氫氯酸，及適當的溶劑，例如乙腈存在下，經由去保護式(XVIII)中間產物而製備，其中P代表適當的保護基，例如-C(=O)-O-C(CH₃ )₃ 。

在反應-惰性溶劑，例如醇，例如甲醇、乙醇、2-甲氧基-乙醇、丙醇、異丙醇丁醇等；醚，例如1,4-二烷存在下，較佳地在適當的酸，例如HCl、1,1’-氧基雙丙烷等；酮，例如4-甲基-2-戊酮；或N,N-二甲基甲醯胺、硝基苯、乙腈等存在下，式(XVIII)中間產物可經由反應式(XIX)中間產物與式(III)中間產物而製備。添加適當的鹼，例如鹼金屬或鹼土金屬碳酸鹽或碳酸氫鹽或有機鹼，例如N,N-二異丙基乙基胺、三乙胺、碳酸鈉或碳酸鉀，可用於收取反應過程間所解離之酸。添加少量適當的金屬碘化物，例如碘化鈉或碘化鉀，以促進反應。攪拌可增強反應速率。反應可便利地於室溫與反應混合物之回流溫度間的溫度範圍進行，如果需要，反應可於增壓下進行。

式(XIX)中間產物可根據上述關於式(II)中間產物之反應規則而製備。

式(VI)中間產物可在適當的酸，例如三氟乙酸及適當的溶劑，例如二氯甲烷存在下，經由反應式(XX)中間產物而製備，其中P代表上述定義之適當保護基，且R^y 代表-C_1-4 烷基-O-Si(CH₃ )₂ C(CH₃ )₃ 。

在反應-惰性溶劑，例如醇，例如甲醇、乙醇、2-甲氧基-乙醇、丙醇、異丙醇丁醇等；醚，例如1,4-二烷存在下，較佳地在適當的酸，例如HCl、1,1’-氧基雙丙烷等；酮，例如4-甲基-2-戊酮；或N,N-二甲基甲醯胺、硝基苯、乙腈等存在下，式(XX)中間產物可經由反應式(XXI)中間產物與式(III)中間產物而製備。添加適當的鹼，例如鹼金屬或鹼土金屬碳酸鹽或碳酸氫鹽或有機鹼，例如N,N-二異丙基乙基胺、三乙胺、碳酸鈉或碳酸鉀，可用於收取反應過程間所解離之酸。添加少量適當的金屬碘化物，例如碘化鈉或碘化鉀，以促進反應。攪拌可增強反應速率。反應可便利地於室溫與反應混合物之回流溫度間的溫度範圍進行，如果需要，反應可於增壓下進行。

在適當的催化劑，例如雷氏鎳，及適當的溶劑，例如醇，例如甲醇等存在下，式(XXI)中間產物可經由氫化，由對應之式(XXII)硝基中間產物製備。

式(XXII)中間產物，其中P代表-C(=O)-O-C_1-4 烷基，該中間產物以式(XXII-a)表示，其可在適當的鹼，例如三乙胺，及適當的溶劑，例如4-(二甲基)胺基吡啶存在下，經由反應式(XXIII)中間產物與二-第三丁基二碳酸酯而製備。

式(XXIII)中間產物可在適當的鹼，例如碳酸氫鈉，及適當的溶劑，例如N,N-二甲亞碸存在下，經由反應式(XXIV)中間產物與式(IX)中間產物而製備。

式(XXIV)中間產物可在適當的催化劑存在下，例如雷氏鎳，在適當的溶劑存在下，例如醇，例如甲醇等，經由反應式(XXV)中間產物與NH₃ 而製備。

式(XXV)中間產物可在適當的鹼，例如咪唑，及適當的溶劑，例如四氫呋喃存在下，經由反應式(XXVI)中間產物與第三丁基二甲基矽烷基氯而製備。

式(XXVI)中間產物可如上述關於式(XI)中間產物所述製備。

本發明中式(I)化合物及一些中間產物可包含不對稱碳原子。該化合物及該中間產物之純的立體化學異構型式可經由應用技術中已知之製程獲得，例如非鏡像異構物可經由物理方法分離，例如選擇性結晶或層析技術，例如逆流分佈(counter current distribution)、液體層析等方法。對映異構物可由外消旋混合物獲得，其首先經由以適當的解析劑，例如對掌性酸，轉換該外消旋混合物成為非鏡像異構鹽類或化合物之混合物；然後物理性分離該非鏡像異構鹽類或化合物之混合物，例如選擇性結晶、超臨界液體層析或層析技術，例如液體層析等方法；且最後轉換該經分離的非鏡像異構鹽類或化合物成為相對應之對映異構物。純的立體化學異構型式亦可獲自適當的中間產物及起始物質之純的立體化學異構型式，倘若中間反應立體特異性地發生。

式(I)化合物，包括任何其立體化學異構型式、其醫藥上可接受性鹽類或其溶劑化物，因其增加p53之表現而具有有用的藥理學特性，顯示有效的抗增殖活性，顯示有效的抗腫瘤活性。

如前所示，本發明化合物在C.1所述之分析中增加p53之表現，此增加可歸因於，但不限於一或多種下列作用機制：

-　與上游或下游標靶之相互作用，例如包含於泛素化作用(ubiquitination)或SUMO修飾之激酶、或酵素活性，

-　p53蛋白質之直接或間接安定化作用，例如經由保持其在其之機能性結構形式，或經由防止錯誤摺疊，

-　增強p53表現或p53家族成員之表現，例如p63及p73，

-　增加p53活性，例如經由(但不限於)增強其之轉錄活性，及/或

-　增加p53-發信路徑之基因及蛋白質的表現，例如(但不限於)p21waf1、cip1、MIC-1(GDF-15)、PIG-3、Bax、Puma、Noxa、及ATF-3。

因此，本發明揭示式(I)化合物使用作為藥劑，特別是用於治療癌症或相關疾病，用於抑制腫瘤生長，用於增加p53之表現。

此外，本發明亦涉及化合物於製造藥劑上之用途，該藥劑用於治療經由p53之降低表現所調控之疾病，特別是用於治療癌症，其中該化合物為式(I)化合物。

本文中所使用之“治療”一詞涵蓋動物中，特別是人類的疾病及/或症狀之任何治療，且包括：(i)預防病患所發生之疾病及/或症狀，該病患可能感染疾病及/或症狀但尚未被診斷出來；(ii)抑制疾病及/或症狀，即阻止其發展；(iii)緩解疾病及/或症狀，即引起疾病及/或症狀之逆行。

關於“經由p53之降低表現所調控之疾病”一詞意指可經由細胞凋零、誘導細胞死亡、或調節細胞循環而被阻止發展、被緩解或被引起逆行的任何非所欲或有害之症狀。

本發明亦提供治療經由p53之降低表現所調控之疾病的方法，特別是治療癌症，其經由投與有效量之本發明化合物於所需此治療之病患，例如哺乳動物(且更具體為人類)。

本發明化合物對於腫瘤細胞可具有抗增殖作用，即使此細胞缺乏機能性p53。更特別是，本發明化合物對於具有廣泛型式或突變p53之腫瘤及/或對於過度表現MDM2之腫瘤，可具有抗增殖作用。化合物可影響血管生成作用、腫瘤細胞遷移、侵入或轉移。

因此，本發明亦提供一種抑制腫瘤生長之方法，其經由投與有效量之本發明化合物於所需此治療之病患，例如哺乳動物(且更具體而言為人類)。

腫瘤之實例包括可被本發明化合物抑制之成人及小兒惡性腫瘤，包括但不限於肺癌，包括小細胞肺癌及非小細胞肺癌(例如腺癌)、胰臟癌、結腸癌(例如結腸直腸癌，例如結腸腺癌及結腸腺瘤)、食道癌、口腔鱗狀細胞癌、舌癌、胃癌、肝癌、鼻咽癌，淋巴系統之造血性腫瘤(例如急性淋巴細胞白血病、B細胞淋巴瘤、伯奇(Burkitt)氏淋巴瘤)、非霍奇金(non-Hodgkin)氏淋巴瘤(例如外套細胞淋巴瘤)、霍奇金氏症、顆粒性白血病(例如急性骨髓性白血病(AML)或慢性粒細胞白血病(CML))、急性淋巴細胞白血病、慢性淋巴細胞白血病(CLL)、甲狀腺濾泡癌、骨髓增生異常徵候群(MDS)，間質起緣性腫瘤、軟組織肉瘤、脂肪肉瘤、胃腸道基質肉瘤、惡性週邊神經鞘腫瘤(MPNST)、尤英(Ewing)肉瘤、平滑肌肉瘤、間質軟骨肉瘤、淋巴肉瘤、纖維肉瘤、橫紋肌肉瘤、黑色素瘤、畸胎瘤、神經母細胞瘤、腦腫瘤、骨髓母細胞瘤、神經膠質瘤、良性皮膚腫瘤(例如角化)、乳房癌(例如後期乳腺癌)、腎臟癌、腎母細胞瘤、卵巢癌、子宮頸癌、子宮內膜癌、膀胱癌、前列腺癌，包括後期疾病和激素耐性前列腺癌、睾丸癌、骨肉瘤、頭頸部癌症、表皮細胞癌、多發性骨髓瘤(例如耐性多發性骨髓瘤)、間皮瘤。特別是可以本發明化合物治療之癌症為乳癌、結腸癌、非小細胞肺癌、急性骨髓細胞白血病(AML)。

本發明化合物亦可用於治療及預防炎症性症狀。

因此，本發明亦提供一種治療及預防炎症性症狀之方法，其經由投與有效量之本發明化合物於所需此治療之病患，例如哺乳動物(且更具體而言為人類)。

本發明化合物亦可用於治療自體免疫疾病及症狀。關於“自體免疫疾病”一詞意指動物的免疫系統對於自己之抗原產生不利反應的任何疾病。關於“自己之抗原”一詞意指通常發現於動物體之任何抗原。代表性之自體免疫疾病包括，但不限於：橋本(Hashimoto)甲狀腺炎、葛瑞夫(Grave)氏症、多發性硬化症、惡性貧血，艾迪生(Addison)氏症、胰島素依賴型糖尿病、類風濕關節炎、全身性紅斑狼瘡(SLE或狼瘡)、皮肌炎、克隆(Crohn)氏症、韋格納(Wegener)氏肉芽腫，抗腎小球基膜症、抗磷脂徵候群、25皰疹性皮炎、過敏性腦脊髓炎、腎小球腎炎、膜性腎小球腎炎、古德帕斯丘(Goodpasture)氏徵候群、藍伯特-伊頓(Lambert-Eaton)徵候群、肌無力徵候群、重症肌無力症、水大皰性天孢瘡樣病、多內分泌腺疾病(Polyendocrinopathies)、賴特(Reiter)氏症，和僵人(Stiff-Man)徵候群。

因此，本發明亦提供一種治療自體免疫疾病及症狀之方法，其經由投與有效量之本發明化合物於所需此治療之病患，例如哺乳動物(且更具體而言為人類)。

本發明化合物亦可用於治療與構造不安定或錯誤摺疊之蛋白質相關疾病。

與構造不安定或錯誤摺疊之蛋白質相關疾病的實例包括，但不限於：囊性纖維變性(CFTR)、馬凡(Marfan)氏徵候群(微纖維蛋白)、肌萎縮性脊髓側索硬化症(超氧化物歧化酶(dismutase))、壞血病(膠原蛋白)、楓糖漿尿疾病(α-酮酸去氫酶複合物)、成骨不全症(第1型原膠原pro-α)、庫傑(Creutzfeldt-Jakob)二氏症(病原性蛋白顆粒)、阿茲海默(Alzheimer)氏症(β-澱粉樣蛋白)、家族性澱粉樣變性(溶菌酶)、白內障(晶狀體)、家族性高膽固醇血症(LDL受體)、αI-抗胰蛋白酶缺乏症、泰-薩(Tay-Sachs)二氏症(β-己糖胺酶)、色素性視網膜炎(視紫紅質)和矮妖症(leprechaunism)(胰島素受體)。

因此，本發明亦提供一種治療與構造不安定或錯誤摺疊之蛋白質相關疾病之方法，其經由投與有效量之本發明化合物於所需此治療之病患，例如哺乳動物(且更具體而言為人類)。

有鑒於其有用之醫藥特性，目標化合物可被調配成各種用於投與目的之醫藥型式。

為了製備本發明醫藥組成物，作為活性成分之有效量的本發明化合物與醫藥上可接受載劑充分混合而組合，該載劑可根據所欲投與之製備型式廣泛變化取用。這些醫藥組成物合於適當的單一劑型，較佳地用於經口、直腸、經皮膚投與、或經由非經腸胃道注射。例如在製備口服劑型組成物，在口服液體製劑情況下，例如懸浮液、糖漿、酏劑及溶液，可使用任何通常之醫藥媒劑，例如水、二醇類、油類、醇類等；或在粉末、丸劑、膠囊、及錠劑情況下，固體載劑，例如澱粉、糖類、高嶺土、潤滑劑、黏結劑、崩解劑等。

因為易於投與，固錠劑及膠囊代表最有利之口服單位劑型，在此情況，固體醫藥載劑顯著地被使用。關於非經腸胃道組成物，載劑通常將包含無菌水(至少大部分)，然而可包括其他成分(例如幫助溶解)。例如可製備注射溶液，其中載劑包含食鹽水溶液、葡萄糖溶液、或食鹽水與葡萄糖之混合物溶液。可製備注射懸浮液，在此情況，可使用適當的液體載劑、懸浮劑等。在適於經皮膚投與之組成物，載劑任意地包含滲透增強劑及/或適當的濕潤劑，任意地以較少比例合併適當的任何種類添加劑，該添加劑對於皮膚並不引起明顯的有害作用。該添加劑可易於投與皮膚及/或可有助於製備所欲組成物，這些組成物可以不同方式投與，例如皮膚滲透貼布、滴劑、軟膏。其特別有利於調配上述醫藥組成物於易於投與之單位劑型及劑量之均勻度。用於本文說明書及申請專利範圍中之單位劑型係指物理性分離之單位，適於作為單一劑量，各單位包含預定量之預計產生所欲治療效果的活性成分與所需之醫藥載劑。各單位劑型之實例為錠劑(包括加截痕或膜衣錠)、膠囊、丸劑、粉末包裝、粉片、注射溶液或懸浮液、茶匙、湯匙等，及其分離之倍數。

特別有利於調配上述醫藥組成物於易於投與之單位劑型及劑量之均勻度。用於本文說明書及申請專利範圍中之單位劑型係指物理性分離之單位，適於作為單一劑量，各單位包含預定量之預計產生所欲治療效果的活性成分與所需之醫藥載劑。各單位劑型之實例為錠劑(包括加截痕或膜衣錠)、膠囊、丸劑、粉末包裝、粉片、注射溶液或懸浮液、茶匙、湯匙等，及其分離之倍數。

本發明化合物被投與之量足以引起細胞凋零、引起細胞死亡、或調節細胞周期。

因此，本發明化合物被投與之量足以增加p53之表現、或發揮其抗腫瘤活性。

熟悉技術者可由下文之測試結果而易於決定有效量。一般而言，需考量的是治療上有效量為0.005毫克/公斤體重至100毫克/公斤體重，且特別是0.005毫克/公斤體重至10毫克/公斤體重。其可適當的於一整天適當間隔投與所需劑量，如單一、二、三、四或多個次劑量。該次劑量可調配成單位劑型，例如每單位劑型包含0.5至500毫克，特別是1毫克至500毫克，更特別是10毫克至500毫克之活性成分。

根據投與方法，醫藥組成物較佳地將包含0.05至99重量%之本發明化合物，更佳地由0.1至70重量%，甚佳地由0.1至50重量%，及1至99.95重量%之醫藥上可接受載劑、更佳地由30至99.9重量%，甚佳地由50至99.9重量%，所有百分比基於組成物之總重。

關於本發明其他方面，有設想到本發明化合物與其他抗癌劑之組合物，尤其是使用作為藥劑，更明確而言，於治療癌症或相關疾病。

關於治療上述症狀，本發明化合物可有利的被使用於組合一或多種其他藥劑，更明確而言，在癌症治療上組合其他抗癌劑或佐劑，抗癌劑或佐劑之實例(治療中之支持劑)包括，但不限於：

-鉑配位化合物，例如順鉑(cisplatin)任意地結合氨磷汀(amifostine)，卡鉑(carboplatin)或奧沙利鉑(oxaliplatin)；

-紫杉烷類(taxane)化合物，例如太平洋紫杉醇(paclitaxel)，太平洋紫杉醇蛋白質結合粒子(Abraxane^TM )或多西紫杉醇(docetaxel)；

-拓撲異構酶I(topoisomerase I)抑製劑，例如喜樹鹼(camptothecin)化合物，例如依立替康(irinotecan)、SN-38、拓撲替康(topotecan)、鹽酸拓撲替康；

-拓撲異構酶II抑製劑，例如抗腫瘤表鬼臼毒素類(epipodophyllotoxins)或鬼臼毒素(podophyllotoxin)衍生物，例如依托泊苷(etoposide)、依托泊苷磷酸鹽或替尼泊(teniposide)；

-抗腫瘤長春花生物鹼類(vinca alkaloids)，例如長春鹼(vinblastine)、長春新鹼(vincristin)、或長春瑞賓(vinorelbine)。

-抗腫瘤核苷衍生物，例如5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil)、亞葉酸(leucovorin)、吉西他濱(gemcitabine)、鹽酸吉西他濱、卡培他濱(capecitabine)、克拉屈濱(cladribine)、氟達拉濱(fludarabine)、奈拉濱(nelarabine)；

-烷化劑，例如氮芥(nitrogen mustard)或亞硝基脲(nitrosourea)，例如環磷醯胺(cyclophosphamide)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、卡莫司汀(carmustine)、噻替哌(thiotepa)，馬法蘭mephalan(mephalan；melphalan)、洛莫司汀(lomustine)、六甲蜜胺(altretamine)、白消安(busulfan)、達卡巴嗪(dacarbazine)、雌莫司汀(estramustine)、異環磷醯胺(ifosfamide)任意地結合美斯納(mesna)、哌泊溴烷(pipobroman)、卡巴肼(procarbazine)、鏈脲菌素(streptozocin)、替莫唑胺(telozolomide)、尿嘧啶(uracil)；

-抗腫瘤蒽環類(anthracycline)衍生物，例如柔紅黴素(daunorubicin)、多柔比星(doxorubicin)任意地結合右雷佐生(dexrazoxane)、doxil、依達比星(idarubicin)、米托蒽醌(mitoxantrone)、表阿黴素(epirubicin)、鹽酸表阿黴素、戊柔比星(valrubicin)；

-以IGF-1受體為標靶之分子，例如足葉苦素(picropodophilin)；

-替曲卡星(tetracarcin)衍生物，例如替曲卡星A；

-糖皮質素，例如強體松(prednisone)；

-抗體，例如曲妥珠單抗(HER2抗體)、美羅華(rituximab)(CD20抗體)、吉妥單抗(gemtuzumab)、吉姆單抗奧唑米星(gemtuzumab ozogamicin)、西妥昔單抗(cetuximab)、怕妥珠(pertuzumab)、貝伐珠單抗(bevacizumab)、阿來珠單抗(alemtuzumab)，衣庫珠單抗(eculizumab)、替伊莫單抗(ibritumomab tiuxetan)，巰諾莫单抗(nofetumomab)、帕尼單抗(Panitumumab)、托西莫單抗(tositumomab)、CNTO 328；

-雌激素受體拮抗劑或選擇性雌激素受體調控劑或雌激素合成抑制劑，例如它莫西芬(tamoxifen)、氟維司群(fuivestrant)、托瑞米芬(toremifene)、屈洛昔芬(droloxifene)、faslodex、雷洛昔芬(raloxifene)、或來曲唑(letrozole)；

-芳香酶(aromatase)抑制劑，例如依西美坦(exemestane)、阿那曲唑(anastrozole)、來曲唑、睪內酯(testolactone)、和伏氯唑(vorozole)；

-分化劑(differentiating agent)，例如類視色素(retinoid)、維生素D、或視黃酸和視黃酸代謝阻斷劑(RAMBA)，例如accutane；

-DNA甲基轉移酶抑制劑，例如氮雜胞苷(azacytidine)或地西他濱(decitabine)；

-抗葉酸劑，例如培美曲塞二鈉(premetrexed disodium)；

-抗生素，例如放線菌素D(antinomycin D)、博萊黴素(bleomycin)、絲裂黴素C(mitomycin C)、放線菌素、洋紅黴素(carminomycin)、柔紅黴素(daunomycin)、左旋咪唑(levamisole)、普卡黴素(plicamycin)、光神黴素(mithramycin)；

-抗代謝劑，例如克羅拉濱(clofarabine)、胺基蝶呤(aminopterin)、阿糖胞苷(cytosine arabinoside)或甲氨蝶呤(methotrexate)、阿扎胞苷(azacitidine)、阿糖胞苷(cytarabine)、氟脲苷(floxuridine)、噴司他丁(pentostatin)、硫鳥嘌呤(thioguanine)；

-細胞凋零誘導劑和抗血管生成劑，例如Bcl-2抑製劑，例如YC 137、BH 312、ABT 737、棉子酚(gossypol)，HA 14-1、TW 37或癸酸；

-微管蛋白-結合劑，例如卡貝塔汀(combrestatin)、秋水仙素或諾考達唑(nocodazole)；

-激酶抑制劑(例如EGFR(上皮生長因子受體)抑制劑、MTKI(多標靶激酶抑制劑)、mTOR抑製劑)，例如夫拉平度(flavoperidol)、甲磺酸伊馬替尼(imatinib mesylate)、埃羅替尼(erlotinib)、吉非替尼(gefitinib)、達沙替尼(dasatinib)、拉帕替尼(lapatinib)、二甲苯磺酸拉帕替尼(lapatinib ditosylate)、索拉非尼(sorafenib)、舒尼替尼(sunitinib)、馬來酸舒尼替尼(sunitinib maleate)、西羅莫斯(temsirolimus)；

-法尼基轉移酶抑制劑，例如替吡法尼(tipifarnib)；

-組蛋白去乙醯化酶(HDAC)抑制劑，例如丁酸鈉、辛二醯苯胺異羥肟酸(SAHA)、縮酚酸肽(depsipeptide)(FR 901228)、NVP-LAQ824、R306465、JNJ-26481585、曲古菌素A(trichostatin A)，伏立諾他(vorinostat)；

-泛素-蛋白酶體路徑抑制劑，例如PS-341、MLN 0.41或硼替佐米(bortezomib)；

-Yondelis；

-端粒末端轉移酶(Telomerase)抑制劑，例如端粒塔汀(telomestatin)；

-基質金屬蛋白酶抑制劑，例如巴馬司他(batimastat)、立馬司他(marimastat)、匹諾司他(prinostat)或美他司他(metastat)；

-重組介白素，例如阿地介白素(aldesleukin)、地尼介白素(denileukin diftitox)、干擾素α2a、干擾素α2b、聚乙二醇干擾素α2b。

-MAPK抑制劑

-類視色素，例如9順維甲酸(Alitretinoin)、蓓薩羅丁(bexarotene)、維生素A酸(tretinoin)。

-三氧化二砷

-天門冬醯胺酶

-類固醇，例如屈他雄酮丙酸酯(dromostanolone propionate)、乙酸甲地孕酮(megestrol acetate)、諾龍(nandrolone)(癸酸，苯丙酸)，地塞米松(dexamethasone)。

-促性腺激素釋放荷爾蒙激動劑或拮抗劑，例如阿巴瑞克(abarelix)、乙酸戈舍瑞林(goserelinacetate)、乙酸組胺瑞林(histrelin acetate)、乙酸亮丙瑞林(leuprolide acetate)。

-　沙利竇邁(Thalidomide)、來那度胺(lenalidomide)。

-　巯基嘌呤(Mercaptopurine)、米托坦(mitotane)、帕米德諾內(pamidronate)、培加酶(pegademase)、培門冬酶(pegaspargase)、拉布立酶(rasburicase)。

- BH3結構類似物，例如ABT-737。

- MEK抑制劑，例如PD98059、AZD6244、CI-1040。

-　集落刺激因子類似物，例如非格司亭(filgrastim)、培非司亭(pegfilgrastim)、沙格司亭(sargramostim)；其之促紅細胞生成素或類似物(例如達貝泊汀α(darbepoetin alfa))；介白素11；奧普瑞白介素(oprelvekin)、唑來磷酸(Zoledronate)、唑來磷酸(zoledronic acid)；芬太尼(fentanyl)；雙膦酸鹽；帕里伏明(palifermin)。

-　類固醇細胞色素P450 17α-羥基酶-17,20-解離酶抑製劑(CYP17)，例如阿比特龍(abiraterone)。

如上所述，本發明化合物在對於放射療法及化學療法感光之腫瘤細胞上亦具有治療之應用。

因此，本發明化合物可使用作為“輻射敏化劑”及/或“化學敏化劑”或可與“輻射敏化劑”及/或“化學敏化劑”合併給予。

本文所使用之“輻射敏化劑”一詞定義為一種分子，較佳地為一種低分子量分子，投與動物治療上有效量，以增加細胞對於離子化輻射的敏感度，及/或促進可以離子化輻射治療之疾病的治療。

本文所使用之“化學敏化劑”一詞定義為一種分子，較佳地為一種低分子量分子，投與動物治療上有效量，以增加細胞對於化學療法的敏感度，及/或促進可以化學療法之疾病的治療。

對於輻射敏化劑作用模式之數種機制在文獻中已被建議，包括：細胞低氧射線輻射敏化劑(例如2-硝基咪唑化合物、及苯并三二氧化物化合物)仿效氧氣或或者是在低氧下表現類似生物還原劑；非細胞低氧輻射敏化劑(例如鹵化嘧啶)可為DNA鹼基之類似物，且優先地併入癌症細胞之DNA，因此促進輻射誘導破壞DNA分子，及/或避免正常DNA修復機制；且在治療疾病中，對於輻射敏化劑的各種其他作用之潛在機制已被假設。

現在許多癌症治療規則使用輻射敏化劑結合x射線輻射，x射線活性化輻射敏化劑之實例包括，但不限於下列：甲硝唑(metronidazole)、米索硝唑(misonidazole)、去甲基米索硝唑(desmethylmisonidazole)、哌莫硝唑(pimonidazole)、依他硝唑(etanidazole)、尼莫拉唑(nimorazole)、絲裂黴素C(mitomycin C)、RSU 1069、SR 4233、EO9、RB 6145、菸鹼醯胺(nicotinamide)、5-溴去氧尿苷(5-bromodeoxyuridine；BUdR)、5-碘去氧尿苷(5-iododeoxyuridine；IUdR)、溴去氧胞苷(bromodeoxycytidine)、氟去氧尿苷(fluorodeoxyuridine；FudR)、羥基脲、順鉑和其治療上有效的類似物和衍生物。

癌症之光動力療法(Photodynamic therapy；PDT)使用可見光作為敏化劑之輻射活化劑。光動力輻射敏化劑之實例包括，但不限於下列：血卟啉(hematoporphyrin)衍生物、Photofrin(福得靈)，苯并卟啉(benzoporphyrin)衍生物、錫初冬卟啉(tinetioporphyrin)、脫鎂葉綠酸-a(pheoborbide-a)、細菌葉綠素-a(bacteriochlorophyll-a)、萘酞菁(naphthalocyanines)、酞菁(phthalocyanines)、酞菁鋅、和其治療上有效的類似物和衍生物。

輻射敏化劑可結合治療上有效量之一或多種其他化合物投與，包括，但不限於：促進輻射敏化劑併入標靶細胞之化合物；控制療法流程、營養物、及/或氧至標靶細胞程之化合物；具有或不具附加輻射之作用在腫瘤的化學治療藥劑；或其他對於治療癌症或其他疾病治療上有效之化合物。

化學敏化劑可結合治療上有效量之一或多種其他化合物投與，包括，但不限於：促進化學敏化劑併入標靶細胞之化合物；控制療法流程、營養物、及/或氧至標靶細胞程之化合物；作用在腫瘤的化學治療藥劑或其他對於治療癌症或其他疾病治療上有效之化合物。鈣拮抗劑，例如維拉帕米(verapamil)，被發現有用於組合抗腫瘤劑，以建立對於所受化學治療藥劑有抗性之腫瘤細胞的化學敏感性，並實現此化合物在藥劑-敏感性惡疾的效力。

鑑於其有用之藥理性質，本發明組合物之成份，即一或多種其他藥劑及本發明化合物可被調配成各種用於投與目的之醫藥型式。成份可分別被調配成個別醫藥組成物或包含所有成分之單一醫藥組成物。

因此本發明亦關於一種醫藥組成物，其包含一或多種其他藥劑及本發明化合物與醫藥載劑。

本發明進一步關於本發明組合物在製造用於抑制腫瘤細胞生長之醫藥組成物上之用途。

本發明進一步關於一種包含作為第一活性成分之本發明化合物及作為其他活性成分之一或多種抗癌劑的產品，作為在治療罹患癌症之病患時，同時、分離或連續使用之一種組合製劑。

一或多種其他藥劑及本發明化合物可同時投與(例如於分離或單一組成物)，或以任何順序連續投與。在後者之情況，二種或多種化合物將在一期間內並以足以確保達成有益或協同效果之數量及方法投與。將可察知，較佳的方法及投與順序及個別劑量及對於組合物各成份之攝生法將依據欲投與之特定的其他藥劑及本發明化合物、其之投與路徑、欲治療之特定腫瘤及欲治療之特定宿主。最理想的投與方法及順序及劑量及攝生法可經由熟悉技術者使用習知方法而易於決定，並可見於本文開始之資料。

當以組合物給予時，本發明化合物與一或多種其他抗癌劑之重量比可經由熟悉技術者決定。該比例及確切的劑量及投與頻率依據所使用之特定本發明化合物及其他抗癌劑、欲治療之特定症狀、欲治療之特定病患的症狀嚴重性、年齡、體重、性別、飲食、投與時間及一般生理狀況、投與方式及個體可攝取之其他藥劑，如熟悉技術者所熟知。此外，顯然地，有效之每日藥量可依據授治療之病患的反應及/或依據指定本發明化合物之醫師評估而減少或增加。本式(I)化合物及其他抗癌劑之特定之重量比可在1/10至10/1之範圍，更特別是1/5至5/1，更特別是1/3至3/1。

鉑配位化合物有利地以體表面積每平方米1至500毫克(毫克/米² )之劑量投與，例如50至400毫克/米² ，特別是，每一療程順鉑的劑量約75毫克/米² ，而卡鉑約300毫克/米² 。

紫杉烷類化合物有利地以體表面積每平方米50至400毫克(毫克/米² )之劑量投與，例如75至250毫克/米² ，特別是，每一療程太平洋紫杉醇的劑量約175至250毫克/米² ，而多西紫杉醇約75至150毫克/米² 。

喜樹鹼化合物有利地以體表面積每平方米1至400毫克(毫克/米² )之劑量投與，例如1至300毫克/米² ，特別是，每一療程依立替康的劑量約100至350毫克/米² ，而拓撲替康約1至2毫克/米² 。

抗腫瘤鬼臼毒素衍生物有利地以體表面積每平方米30至300毫克(毫克/米² )之劑量投與，例如50至250毫克/米² ，特別是，每一療程依托泊苷的劑量約35至100毫克/米² ，而替尼泊約50至250毫克/米² 。

抗腫瘤長春花生物鹼類有利地以體表面積每平方米2至30毫克(毫克/米² )之劑量投與，例如50至250毫克/米² ，特別是，每一療程長春鹼的劑量約3至12毫克/米² ，長春新鹼的劑量約1至2毫克/米² ，而長春瑞賓的劑量約10至30毫克/米² 。

抗腫瘤核苷衍生物有利地以體表面積每平方米200至2500毫克(毫克/米² )之劑量投與，例如700至1500毫克/米² ，特別是，每一療程5-FU的劑量約200至500毫克/米² ，吉西他濱約800至1200毫克/米² ，而卡培他濱約1000至2500毫克/米² 。

烷化劑，例如氮芥或亞硝基脲，有利地以體表面積每平方米100至500毫克(毫克/米² )之劑量投與，例如120至200毫克/米² ，特別是，每一療程環磷醯胺的劑量約100至500毫克/米² ，苯丁酸氮芥的劑量約0.1至0.2毫克/公斤，卡莫司汀的劑量約150至200毫克/米² ，而洛莫司汀的劑量約100至150毫克/米² 。

抗腫瘤蒽環類衍生物有利地以體表面積每平方米10至75毫克(毫克/米² )之劑量投與，例如15至60毫克/米² ，特別是，每一療程多柔比星的劑量約40至75毫克/米² ，柔紅黴素的劑量約25至45毫克/公斤，而依達比星的劑量約10至15毫克/米² 。

抗雌激素劑依據特定藥劑及欲治療之症狀，有利地每日以1至100毫克之劑量投與。它莫西芬有利地以5至50毫克之劑量口服投與，較佳地為每日二次10至20毫克，持續治療足夠時間以達到並維持治療效果。托瑞米芬有利地以每日一次約60毫克口服投與，持續治療足夠時間以達到並維持治療效果。阿那曲唑有利地以每日一次約1毫克口服投與。屈洛昔芬有利地以每日一次約20-100毫克口服投與。雷洛昔芬有利地以每日一次60毫克口服投與。依西美坦有利地以每日一次約25毫克口服投與。

抗體有利地以體表面積每平方米約1至5毫克(毫克/米² )之劑量投與，或如果不同，則如技術中所知者。群司珠單抗(trastuzumab)有利地以每一療程體表面積每平方米約1至5毫克(毫克/米² )之劑量投與，特別是，約2至4毫克/米² 。

這些劑量可例如以每一療程一次、二次或多次投與，其可被分離，例如每7、14、21或28日。

式(I)化合物、醫藥上可接受加成鹽，特別是醫藥上可接受酸加成鹽、及其立體異構型式可具有有用的診斷性質，因為其可用於偵測或確認標示化合物與其他分子、胜肽、蛋白質、酵素或受體之間複合物之形成。

偵測或確認方法可使用以例如放射線同位素、酵素、螢光物質、發光物質等標示劑標示之化合物。放射線同位素之實例包括¹²⁵ I、¹³¹ I、³ H及¹⁴ C。酵素一般製作係經由連接適當的基質，之後催化可偵測反應而可被偵測。其之實例包括例如β-半乳糖苷酶、β-葡萄糖苷酶、鹼金屬磷酸酶、過氧化酶和蘋果酸去氫酶，較佳為辣根過氧化酶(horseradish peroxidase)。發光物質包括例如發光胺(luminol)、發光胺衍生物、螢光素、水母素(aequorin)和螢光素酶。

生物樣本可被定義為體組織或體液。體液之實例為腦脊髓液、血液、血漿、血清、尿液、痰、唾液等。

下列實施例說明本發明。

實驗部分

下文中，“DMF”定義為N,N -二甲基甲醯胺，“DCM”定義為二氯甲烷，“DIPE”定義為二異丙基醚，‘DMSO’定義為二甲亞碸，“EtOAc”定義為乙酸乙酯，“EtOH”定義為乙醇，“MeOH”定義為甲醇，及“THF”定義為四氫呋喃。

A.中間產物化合物之製備實施例A1 a)中間產物1之製備

將氧化錳(33.31克，13當量，0.3832莫耳)逐份添加至含4-氯-6,7-二氫-5H -環戊[b]吡啶-7-醇(中間產物3)[CAS 126053-15-4](5克，1當量，0.029莫耳)之DCM(50毫升)溶液中，將混合物於室溫攪拌24小時，然後在塞里塑料(celite)上過濾，將溶劑蒸發，產生3.25克(66%)之中間產物1。

b)中間產物2之製備

於-5至0℃，在N₂ 流下，將氯化甲基鎂(1.47毫升，3.2當量，0.0.004莫耳)逐滴添加至含中間產物1(0.220克，1當量，0.0013莫耳)之THF(4毫升)溶液，反應於室溫攪拌1.5小時。

於0-10℃，添加氯化銨(10%於水中)及EtOAc，混合物以EtOAc萃取三次，然後分離有機層，在MgSO₄ 上乾燥，過濾並將溶劑蒸發。殘餘物(0.215克)以管柱層析在矽凝膠上純化(洗提液：環己烷/EtOAc 50/50)。收集純的濾份並將溶劑蒸發，產生0.120克(50%)之中間產物2。

實施例A2 a)中間產物3之製備

將四氫硼酸鈉(1.92克，50.67毫莫耳)於5℃逐份添加至含中間產物1(7.72克，46.06毫莫耳)之MeOH(80毫升)溶液中，反應混合物於室溫攪拌1晚，然後倒入水中。混合物以EtOAc萃取三次，有機層以水及NaCl溶液洗滌，分離，在MgSO₄ 上乾燥，過濾並將溶劑蒸發，產生6.38克(81.7%)之中間產物3(50/50混合物RS)。此產物不再純化而於下一步驟中使用。

b)中間產物4之製備

在0℃及N₂ 氣壓下，將氫化鈉(1.06克，44.22毫莫耳)逐份添加至含中間產物3(3.00克，17.70毫莫耳)之THF(無水，30毫升)溶液中，反應於0℃攪拌15分鐘，然後於0℃，將碘甲烷(1.65毫升，26.53毫莫耳)逐滴添加至混合物中。反應於室溫攪拌1晚，冷卻混合物至室溫，並逐滴添加冷水。攪拌混合物1小時，然後以EtOAc萃取三次。分離有機層，在MgSO₄ 上乾燥，過濾並將溶劑蒸發，產生3.10克(95.4%)之中間產物4。此產物不再純化而於下一步驟中使用。

實施例A3 a)中間產物5之製備

將含1H -呷哚-7-羧酸甲酯(0.091莫耳)、埃申莫澤爾鹽(Eschenmoser's salt)(0.1莫耳)之乙酸(300毫升)於65℃加熱2小時，過濾出沉澱物，溶於DCM及碳酸鉀10%，添加碳酸鉀(固體)，並將混合物於室溫攪拌1小時，然後萃取。分離有機層，在MgSO₄ 上乾燥，過濾並將溶劑蒸發，產生10克中間產物5。

b)中間產物6之製備

將含中間產物5(0.043莫耳)、碘甲烷(0.047莫耳)之EtOH(300毫升)於室溫攪拌隔夜，過濾出沉澱物，並乾燥，產生8.3克之中間產物6。

c)中間產物7之製備

將含中間產物6(0.023莫耳)、氰化鈉(0.03莫耳)之DMF(100毫升)於110℃加熱2小時。將反應混合物倒入冰水中，攪拌1小時。過濾出沉澱物，並於DCM中收取。萃取溶液，分離有機層，在MgSO₄ 上乾燥，過濾並蒸發，產生5.1克之中間產物7。

d)中間產物8之製備

於5℃，N₂ 流下，將氯化甲基鎂(0.058莫耳)逐滴添加至含中間產物7(0.018莫耳)之THF(50毫升)溶液中，反應混合物於5℃攪拌1小時。於5℃逐滴添加氯化銨10%，反應混合物以EtOAc萃取。分離有機層，在MgSO₄ 上乾燥，過濾並蒸發，產生4克之中間產物8。

e)中間產物9之製備

將含中間產物8(0.019莫耳)、雷氏鎳(4克)之MeOH/NH₃ (50毫升)於室溫在3巴壓力下氫化2小時，將反應混合物在塞里塑料上過濾，以DCM洗滌，並將濾液蒸發，產生3.5克之中間產物9。

f)中間產物10之製備

將含中間產物9(0.016莫耳)、2-氟-5-硝基甲苯(0.018莫耳)、碳酸一鈉陰離子(0.019莫耳)之DMSO(100毫升)混合物於60℃加熱隔夜，混合物冷卻至室溫。添加冰水，添加DCM。萃取反應混合物，分離有機層，在MgSO₄ 上乾燥，過濾並濃縮。殘餘物以管柱層析在矽凝膠上純化(洗提液：環己烷/EtOAc 60/40)，收集純的濾份，並將溶劑蒸發，產生2.8克之中間產物10。

g)中間產物11之製備

將含中間產物10(0.0079莫耳)、氧化釩(0.05克)、噻吩(4%)之DIPE(1毫升)溶液、Pt/C 5%(1.3克)之THF(50毫升)於大氣壓力下於室溫氫化1晚。過濾反應，並將溶劑蒸發，產生中間產物11，此產物不再純化而於下一步驟中使用。

下列中間產物根據方法A3製作。

實施例A4 中間產物7亦可另以下列製備。 a)製備中間產物12

將1-(三苯基膦烯)-2-丙酮(34.4毫莫耳)於室溫逐份添加至含1H-吲哚-7-甲醛(34.44毫莫耳)之甲基-苯(60毫升)溶液中。將反應混合物於100℃加熱3小時，然後冷卻至室溫並蒸發至乾燥。殘餘物(17.4克)經HPLC於二氧化矽上純化：20-45微米(450克)，(洗提液99.5/0.5 DCM/MeOH)。收集純的濾份並將溶劑蒸發，產生4.3克中間產物12。

b)製備中間產物13

將含中間產物12(3.4毫莫耳)及埃申莫澤爾鹽(3.8毫莫耳)之乙酸(10毫升)於65℃加熱2小時。濾出沉澱物，溶於DCM及碳酸鉀10%。添加碳酸鉀(固體)，並將混合物於室溫攪拌1小時。萃取反應混合物，分離有機層，在MgSO₄ 上乾燥，過濾並將溶劑蒸發，產生0.7克之中間產物13。

c)製備中間產物14

將含中間產物13(0.13莫耳)、碘甲烷(0.14莫耳)之EtOH(300毫升)於室溫攪拌2日，濾出沉澱物並乾燥，產生47克之中間產物14。

d)製備中間產物15

將含中間產物14(136.5毫莫耳)、氰化鈉(177.5毫莫耳)之DMF(400毫升)於室溫攪拌2小時，添加水並以EtOAc萃取反應混合物。分離有機層，在MgSO₄ 上乾燥，過濾及蒸發。殘餘物以高效能液體層析(Irregular SiOH 20-45毫米1000g MATREX)純化。移動相：環己烷70%/EtOAc 30%)。收集純的濾份，並將溶劑蒸發，產生11.8克之中間產物15。

e)製備中間產物16

將氯化甲基鎂(0.07莫耳)逐滴添加至含中間產物15(0.022莫耳)之THF(50毫升)溶液，添加NH₄ Cl 10%及EOAc。萃取反應混合物，分離有機層，在MgSO₄ 上乾燥，過濾並將溶劑蒸發。殘餘物(2.9克)以高效能液體層析(Irregular SiOH 20-45微米450g MATREX)純化，移動相：環己烷60%/EtOAc 40%)。收集純的濾份，並將溶劑蒸發，產生2克之中間產物16。

f)製備中間產物7

將戴斯-馬丁過碘烷(Dess-Martin periodinane)(24.9毫升)於室溫逐滴添加至含中間產物16(10毫莫耳)之DCM(20毫升)溶液。反應混合物於室溫攪拌1小時，然後倒入冰水中，於塞里塑料上過濾，並將濾液以DCM萃取。分離有機層，在MgSO₄ 上乾燥，過濾並濃縮溶劑。殘餘物(2.8克)以管柱層析在矽凝膠上純化(洗提液為環己烷/EtOAc 60/40)。收集純的濾份並將溶劑蒸發，產生0.8克之中間產物7。

實施例A5 中間產物15亦可另依下列製備。 a)製備中間產物17

將四氫鋁酸鋰(0.018莫耳，0.69克)於5℃在N₂ 氣流下，逐份添加至含3-(氰基甲基)-1H-吲哚-7-羧酸甲酯(0.012莫耳，2.6克)之THF(50毫升)溶液中，反應混合物於室溫攪拌30分鐘，於5℃逐滴添加水，並將反應混合物於塞里塑料上過濾，以EtOAc洗滌並萃取。分離有機層，於MgSO₄ 上乾燥，過濾及濃縮，產生2.4克之中間產物17。

b)製備中間產物15

將戴斯-馬丁過碘烷(0.016莫耳)於5℃逐滴添加至含中間產物17(0.0081莫耳)之DCM(15毫升)溶液中，反應混合物於室溫攪拌2小時。將反應混合物於塞里塑料上過濾，蒸發濾液，殘餘物在矽凝膠上以管柱層析純化(洗提液為環己烷/EtOAc 70/30)。收集純的濾份並將溶劑蒸發，產生0.5克之中間產物15。

實施例A6 製備中間產物18、19及20

將4-氯-6,7-二氫-5H-環戊[b]吡啶-7-醇(5克，0.029莫耳)及南極假絲酵母脂肪酶B(Lipase Candida Antartica B)(2.5克)之乙酸乙烯酯(50毫升)混合物於室溫攪拌4小時，將反應混合物於塞里塑料上過濾，塞里塑料以DCM洗滌，將濾液之溶劑蒸發，殘餘物(6.3克)在矽凝膠上以管柱層析純化(洗提液：DCM/MeOH由100/0至98/2；15-40微米)，收集二種不同產物濾份，並將各產物濾份之溶劑蒸發，產生2.1克之中間產物18(42%；S-對映異構物)，及3.6克之中間產物19(58%；R-對映異構物)。當所欲中間產物19可經由在MeOH/NH₃ 反應被轉換成中間產物18之R對映異構物時，產生中間產物20。

中間產物18及20亦另可如下製備。

將四氫硼酸鈉(1.37克，36.10毫莫耳)於5℃逐份添加至含中間產物1(5.50克，32.82毫莫耳)之MeOH(50毫升)溶液中，反應混合物於室溫攪拌1晚，然後倒入水中，並將混合物以EtOAc萃取三次。有機層以水及NaCl水溶液洗滌，分離，在MgSO₄ 上乾燥，過濾並將溶劑蒸發。殘餘物(4.42克)在對掌性PAK AD-H5微米250x20毫米上，經對掌性超臨界液體層析純化，移動相：85% CO2，15%MeOH。收集純的濾份並將溶劑蒸發，產生1.625克(29.2%)化合物18(S-對映異構物)(DMF，20℃，濃度0.33w/v%，589奈米：-77.58°)，及1.620克(29.1%)化合物20(R-對映異構物)(DMF，20℃，濃度0.33w/v%，589奈米：+76.74°)。

實施例A7 製備中間產物21

將草醯氯(0.0079莫耳)於5℃逐滴添加至含7-[2-[[(1,1-二甲基乙基)二甲基矽烷基]氧基]乙基]-1H-吲哚(0.0047莫耳)之二乙醚(20毫升)。反應混合物於5℃攪拌2小時。於5℃逐滴添加NH₄ OH(濃，20毫升)至溶液。反應混合物於室溫攪拌隔夜。添加水及EtOAc，分離有機層，在MgSO₄ 上乾燥，過濾並濃縮，產生1.8克之中間產物21。

製備中間產物22

將四氫鋁酸鋰(0.021莫耳)於5℃逐份添加至含中間產物21(0.0052莫耳)之THF(50毫升)溶液。混合物於回流攪拌隔夜，然後冰浴冷卻至5℃。逐滴添加水將過量四氫鋁酸鋰小心地水解，在塞里塑料上濾出混合物，以DCM洗滌並萃取。分離有機層，在MgSO₄ 上乾燥，過濾並濃縮，產生0.6克之中間產物22。

實施例A8 a)製備中間產物23

將草醯氯(2.9毫莫耳)於5℃逐滴添加至含4-(1H-吲哚-7-基)-3-丁烯-2-酮(2.7毫莫耳)之二乙醚(10毫升)溶液。移除冷浴，並使反應溫熱至室溫(1.5小時)。濾出沉澱物並乾燥，產生0.49克之中間產物23。

b)製備中間產物24

將氫氧化銨(10毫升)於5℃逐滴添加至含中間產物23(0.725毫莫耳)之二乙醚(10毫升)溶液，反應混合物於室溫攪拌隔夜。濾出沉澱物並乾燥，產生0.11克之中間產物24。

c)製備中間產物25

將四氫鋁酸鋰(39.5毫莫耳)於5℃逐份添加至含中間產物24(7.9毫莫耳)之THF(20毫升)溶液，混合物於80℃攪拌2小時，然後在冰浴上於5℃冷卻。經由逐滴添加水，小心水解過量之四氫鋁酸鋰。在塞里塑料上濾出混合物，以DCM洗滌並萃取。分離有機層，在MgSO₄ 上乾燥，過濾並濃縮，產生1克之中間產物25。

d)製備中間產物26

將中間產物25(4.3毫莫耳)、2-氟-5-硝基甲苯(4.7毫莫耳)、碳酸一鈉陰離子(5.1毫莫耳)之DMSO(10毫升)混合物於60℃加熱隔夜，將混合物冷卻至室溫，添加冰水，添加DCM。萃取反應混合物，分離有機層，在MgSO₄ 上乾燥，過濾並蒸發。殘餘物經由管柱層析純化(洗提液：DCM/MeOH 97/3)。收集純的濾份並將溶劑蒸發，殘餘物經高效能液體層析(Irregular SiOH 15-40微米300g MERCK)純化，移動相(NH4OH 0.1%-二氯甲烷99%-MeOH 1%)。收集純的濾份並將溶劑蒸發，產生200毫克之中間產物26。

e)製備中間產物27

將含中間產物26(0.35毫莫耳)、雷氏鎳(200毫克)之MeOH(5毫升)混合物在大氣壓下於室溫氫化，殘餘物於塞里塑料上過濾，以DCM洗滌並將殘餘物蒸發，產生0.14克之中間產物27。

實施例A9 a)製備中間產物28

將第三丁基二甲基矽烷基氯(195毫克，0.91毫莫耳)於室溫添加至含中間產物16(162毫克，0.81毫莫耳)、咪唑(143毫克，2.1毫莫耳)之THF(5毫升)溶液，反應混合物於室溫攪拌隔夜，濾出沉澱物並以DCM洗滌。蒸發濾液，殘餘物(365毫克)在矽凝膠上以驟層析純化(15-40微米，30g，DCM/MeOH：100/0至99/1)。收集純的濾份並蒸發至乾燥，產生190毫克之中間產物28。

b)製備中間產物29

將含中間產物28(190毫克，0.6毫莫耳)、雷氏鎳(0.7g)之NH₃ 之MeOH 7N(10毫升)在3巴之H2下於室溫攪拌4小時。將反應於塞里塑料上過濾並將塞里塑料以DCM/MeOH(90/10)洗滌三次。將溶劑蒸發而獲得147毫克之中間產物29。

c)製備中間產物30

將含中間產物29(147毫克，0.46毫莫耳)、1-氟-2-甲基-4-硝基-苯(78毫克，0.51毫莫耳)、碳酸鈉鹽(1：1)(85毫克，1毫莫耳)之DMSO(2毫升)混合物於65℃加熱1晚，將混合物倒入冰中，並攪拌10分鐘，添加DCM並將混合物以DCM萃取二次。有機層以水洗滌，然後在MgSO₄ 上乾燥，過濾並將溶劑蒸發，殘餘物在上矽凝膠以驟層析純化(15-40微米，30g，環己烷/EtOAc 85/15)。收集純的濾份，並蒸發至乾燥，產生200毫克之中間產物30。

d)製備中間產物31

將含中間產物30(2.8克，6.17毫莫耳)、二第三丁基二碳酸酯(8克，37毫莫耳)、4-二甲基胺基吡啶(0.15克，1.2毫莫耳)及三乙胺(1.89毫升，13.6毫莫耳)之THF(50毫升)於60℃攪拌24小時，蒸發混合物至乾燥，殘餘物(7.4克)在矽凝膠(Cartridge 15-40微米，90g)上以高效能液體層析純化，移動相(環己烷50%；二氯甲烷50%)。收集純的濾份，並將溶劑蒸發，產生3.3克之中間產物31。

e)製備中間產物32

將含中間產物31(3.3克，5毫莫耳)、雷氏鎳(3克)之MeOH(100毫升)混合物於2.5巴氫化2小時。將殘餘物於塞里塑料上過濾，以DCM洗滌，並將殘餘物蒸發，產生2.7克之中間產物32。

f)製備中間產物33

將含中間產物32(2.6克，4.2毫莫耳)、4-氯-6,7-二氫-5H-環戊[b]吡啶-7-醇(0.78克，4.6毫莫耳)、HCl 4M之二烷(0.21毫升，0.8毫莫耳)於乙腈(28毫升)及EtOH(7毫升)中於65℃加熱72小時。冷卻至室溫後，添加水及碳酸鉀粉末，並將混合物以EtOAc萃取二次。有機層以水洗滌，在MgSO₄ 上乾燥，過濾並蒸發。殘餘物以高效能液體層析(Irregular SiOH 20-45微米450g MATREX)純化，移動相(NH₄ OH 0.5%；二氯甲烷95%；MeOH 5%)。收集純的濾份，並將溶劑蒸發，產生2.35克之中間產物33。

g)製備中間產物34

將氧化錳(IV)(4.3克)於室溫逐份添加至含中間產物33(2.2克，2.9毫莫耳)及三(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)胺(47毫克，0.145毫莫耳)之DCM(50毫升)溶液，混合物於室溫攪拌18小時。將混合物於塞里塑料上過濾，塞里塑料以DCM洗滌，並將溶劑蒸發，產生1.84克之中間產物34。

h)製備中間產物35

將含中間產物34(1.2克，1.6毫莫耳)之三氟乙酸(1.2毫升，15.9毫莫耳)及DCM(10毫升)於室溫攪拌2日，添加碳酸鉀10%，並將混合物以DCM萃取二次，有機層在MgSO₄ 上乾燥，過濾並蒸發，獲得0.8克之中間產物35。其不再純化而於下一步驟使用。

實施例A10 a)製備中間產物36

將碘甲烷(0.024莫耳)添加至含3-[(二甲基胺基)甲基]-1H-吲哚-7-羧酸甲酯(0.022莫耳)之EtOH(50毫升)溶液。混合物於室溫攪拌隔夜，然後於真空中濃縮至乾燥，產生5.6克(68%)之中間產物36。

b)製備中間產物37

將含中間產物36(0.015莫耳)及氰化鈉(0.019莫耳)之DMF(60毫升)混合物於100℃攪拌2小時，添加水，過濾沉澱物，蒸發濾液，產生3.5克(100%)之中間產物37。

c)製備中間產物38

將含中間產物37(0.016莫耳)及雷氏鎳(3克)之MeOH/NH₃ (50毫升)混合物於室溫在3巴壓力下氫化，然後於塞里塑料上過濾，蒸發濾液，產生3.2克(89%)之中間產物38。

d)製備中間產物39

將含中間產物38(0.0092莫耳)、1-氟-4-硝基-苯(0.01莫耳)及二異丙基乙基胺(0.023莫耳)混合物於180℃攪拌2小時，添加水，混合物以DCM萃取，分離有機層，乾燥(MgSO₄ )，過濾並將溶劑蒸發。殘餘物(2.6克)在kromasil上以管柱層析純化(洗提液：環己烷/EtOAc 60/40)。收集純的濾份並將溶劑蒸發，產生1.4克(45%)之中間產物39。

e)製備中間產物40

將第三丁氧基羰基酐(0.015莫耳)於室溫添加至含中間產物39(0.05莫耳)及4-(二甲基胺基)吡啶(少量)之THF(50毫升)混合物中，將混合物於室溫攪拌隔夜，混合物以EtOAc萃取，有機層以水洗滌，乾燥(MgSO₄ )，過濾並將溶劑蒸發。殘餘物(4克)在矽凝膠上以管柱層析純化(洗提液：環己烷/EtOAc 60/40)。收集純的濾份，並將溶劑蒸發，產生3.3克(82%)之中間產物40。

f)製備中間產物41

將含中間產物40(0.0061莫耳)及雷氏鎳(3.3克)之MeOH(50毫升)混合物於室溫在3巴壓力下氫化，然後在塞里塑料上過濾，將塞里塑料以DCM/MeOH(98/2)洗滌，蒸發濾液，殘餘物(2.8克)在矽凝膠上以管柱層析純化(洗提液：環己烷/EtOAc 70/30)，收集純的濾份，並將溶劑蒸發，產生1.3克之(42%)之中間產物41。

g)製備中間產物42

將含中間產物41(0.0018莫耳)、4-氯-6,7-二氫-5H-環戊[b]吡啶-7-醇(0.33克)及HCl/異丙醇(5彽)之乙腈(20毫升)混合物於65℃攪拌24小時，添加碳酸鉀10%，混合物以EtOAc萃取，分離有機層，乾燥(MgSO₄ )，過濾並將溶劑蒸發。殘餘物(1.1克)在矽凝膠上以管柱層析純化(洗提液：DCM/MeOH/NH4OH 95/5/0.1)。收集純的濾份並將溶劑蒸發，產生0.054克之中間產物42。

h)製備中間產物43

將含中間產物42(0.0009莫耳)及HCl3N(0.0039莫耳)之乙腈(10毫升)混合物於65℃攪拌3小時，添加碳酸鉀10%，混合物以EtOAc萃取，分離有機層、乾燥(MgSO₄ )、過濾並將溶劑蒸發。殘餘物(0.4克，100%)由二乙醚/乙腈結晶，濾出沉澱物並乾燥，產生0.3克之中間產物43，熔點164℃。

B.製備最終化合物實施例B1 製備化合物1

將中間產物11(1.00克，3.092毫莫耳)、中間產物2(0.437克，2.381毫莫耳)、HCl(0.155毫升，0.618毫莫耳)之乙腈(10毫升)於65℃攪拌5小時，將反應冷卻至室溫，然後以碳酸鉀(10%於水中)鹼化，並以DCM萃取三次，有機層以水洗滌，在MgSO₄ 上乾燥，過濾並將溶劑蒸發，殘餘物(1.37克)在二氧化矽上以正相層析純化(5微米150x30.0毫米)。移動相(梯度由0% NH₄ OH、100% DCM、0% MeOH至0.8% NH₄ OH、92% DCM、8% MeOH)。收集純的濾份並將溶劑蒸發，收取殘餘物(0.350克)至乙腈中於室溫1週，結晶此產物並過濾及在真空中乾燥，產生300毫克(20.8%)之化合物1，熔點209℃。

實施例B2 製備化合物2及3

及

將含中間產物11(0.0031莫耳)、N,N-二異丙基乙基胺(0.0028莫耳)、4-溴吡啶鹽酸鹽(0.0034莫耳)之乙腈(20毫升)溶液於65℃加熱6小時，添加碳酸鉀10%及EtOAc。萃取反應混合物，分離有機層，在MgSO₄ 上乾燥，過濾並濃縮。殘餘物(1.3克)在矽凝膠上以管柱層析純化(洗提液95/5/0.5 DCM/MeOH/NH₄ OH)。收集二種濾份，並將溶劑蒸發，獲得60毫克化合物3及80毫克F2。殘餘物F2(80毫克)以超臨界液體層析純化(AMINO管柱150x21.2mmm)洗提液：MeOH/CO₂ 30/70)。收集純的濾份並將溶劑蒸發，產生43毫克之化合物2。

實施例B3 製備化合物4

將含中間產物35(0.8克，1.7毫莫耳)及氫氧化鈉3N(2.57毫升，2.57毫莫耳)之EtOH(22毫升)及THF(10毫升)於室溫攪拌30分鐘，添加NH₄ Cl 10%及DCM，並將混合物在塞里塑料上過濾，傾析有機層，在上MgSO₄ 乾燥，過濾並蒸發。殘餘物以在Spherical SiOH 10微米60g(PharmPrep MERCK)上以正相純化，移動相(NH₄ OH 0.1%，95% DCM，5% MeOH)。收集純的濾份並將溶劑蒸發，產生250毫克之化合物4。

實施例B4 製備化合物5

將四氫硼酸鈉(0.69毫莫耳)於5℃添加至含中間產物49(0.46毫莫耳)之MeOH(5毫升)溶液。反應混合物於室溫攪拌隔夜，添加水，以EtOAc萃取反應混合物，分離有機層，在MgSO₄ 上乾燥，過濾並蒸發。殘餘物(0.14克)於乙腈中結晶，濾出沉澱物並乾燥，產生0.1克之化合物5。

實施例B5 製備化合物6

將四氫鋁酸鋰(0.0003莫耳)於5℃逐份在N₂ 氣流下添加至含中間產物43(0.0002莫耳)之THF(4毫升)溶液。混合物於室溫攪拌2小時，添加水。混合物以EtOAc萃取，分離有機層，乾燥(MgSO₄ )，過濾並將溶劑蒸發。殘餘物(0.18克)在上以管柱層析純化(洗提液：DCM/MeOH/NH₄ OH98/2/0.2至85/15/1；3.5微米)。收集純的濾份並將溶劑蒸發，產生0.066克(70%)之化合物6。

實施例B6 製備化合物7及8

及

將含中間產物47(1.00克，3.23毫莫耳)、中間產物4(0.653克，3.55毫莫耳)、HCl/二烷(0.242毫升，0.97毫莫耳)之乙腈(15毫升)於70℃攪拌1晚。將反應混合物冷卻至室溫，然後添加水、碳酸鉀(10%於水中)，混合物以DCM萃取三次，分離有機層，在MgSO₄ 上乾燥，過濾並將溶劑蒸發。殘餘物在矽凝膠(Cartridge 15-40微米30g)上以正相純化，移動相(96% DCM，4% MeOH)。收集純的濾份並將溶劑蒸發，產生0.092克(6.5%)之化合物7及0.030克(2.0%)之化合物8。

實施例B7 製備化合物9

將中間產物27(0.41毫莫耳)及4-氯-6,7-二氫-5H-環戊[b]吡啶-7-醇(0.46毫莫耳)於125℃加熱2小時，殘餘物在矽凝膠上以管柱層析純化(洗提液90/10/0.1 DCM/MeOH/NH₄ OH)。收集純的濾份並將溶劑蒸發，產生58克之化合物9。

實施例B8 製備化合物24及25

Co.No.24：*S

Co.No.25：*R

*意指相對立體化學(絕對之立體化學並未知)。因此，若化合物24為S對映異構物，則化合物25為R對映異構物，或若化合物24為R對映異構物，則化合物25為S對映異構物。

反應在N₂ 氣壓下進行，將含中間產物47(11.31毫莫耳)、中間產物4(12.44毫莫耳)、Pd(dba)₂ (1.13毫莫耳)、BINAP(1.13毫莫耳)及tBuONa(22.62毫莫耳)之甲苯(100毫升)混合物於回流攪拌隔夜。過濾混合物，以MeOH洗滌，並以高效能液體層析(管柱Synergi 50*250毫米，10微米；洗提液：CH₃ CN/H₂ O(0.1%三氟乙酸)，15% CH₃ CN梯度於時間0分鐘至40% CH₃ CN於時間25分鐘)純化。收集所欲濾份，並將溶劑於真空中蒸發，殘餘物以DCM萃取，以NaHCO₃ 水溶液洗滌，在Na₂ SO₄ 上乾燥，過濾並蒸發，獲得化合物8(3.8克，98%純度，65%產率)，其分離係經由超臨界液體層析Chiralcel OJ,20微米，250毫米*20毫米；超臨界CO₂ ：異丙醇(0.05%二乙基胺)，40：60 v/v,70毫升/分鐘)，穫得二種濾份；1000.79毫克(19%)之化合物24，熔點110.5-111.6℃，(ee%=99%，[α]_D ²⁰ =+5.034°，(波長=589，20℃於甲醇中，濃度10.33毫克/毫升)及939.19毫克(18%)之化合物25，熔點111.4-113.3℃。(ee%=99%，[α]_D ²⁰ =-3.443°，(波長=589，20℃於MeOH，濃度10.74毫克/毫升)

實施例B9 製備化合物

Co.No. 26：*S

Co.No. 27：*R

*意指相對立體化學(絕對之立體化學並未知)。因此，若化合物26為S對映異構物，則化合物27為R對映異構物，或若化合物26為R對映異構物，則化合物27為S對映異構物。

反應在N₂ 氣壓下進行，將含中間產物11(9.25毫莫耳)、中間產物2(9.25毫莫耳)、tBuONa(18.5毫莫耳)、Pd(dba)₂ (0.93毫莫耳)及BINAP(0.93毫莫耳)之甲苯(40毫升)混合物於回流加熱並攪拌3小時。將所產生之混合物冷卻至室溫並過濾，於真空中蒸發濾液，並將殘餘物以高效能液體層析(管柱Synergi 50*250毫米，10微米；洗提液：CH₃ CN/H₂ O(0.1%三氟乙酸)，梯度10% CH₃ CN於時間0分鐘至40% CH₃ CN於時間25分鐘)純化。收集所欲濾份，並調整至pH>7。濃縮溶劑，並以乙酸乙酯萃取(3次100毫升)，所欲之有機層以鹽水洗滌，在Na₂ SO₄ 上乾燥，過濾並將溶劑於真空中蒸發，獲得2.5克(57%)之化合物1，其以超臨界液體層析分離(AD 250毫米*20毫米，20微米；超臨界CO₂ ：異丙醇(0.05%二乙基胺)40：60，v/v，70毫升/分鐘)，獲得2種濾份。

濾份1(1克)進一步以高效能液體層析純化(管柱Synergi 50*250，10微米；洗提液：CH₃ CN/H₂ O(0.1%三氟乙酸)，梯度10% CH₃ CN於時間0分鐘至40% CH₃ CN於時間25分鐘)，獲得0.88克(20%)化合物26，熔點122.3-124℃，(ee=100%)。

濾份2(1克)進一步以高效能液體層析純化(管柱Synergi 50*250，10微米；洗提液：CH₃ CN/H₂ O(0.1%三氟乙酸)，梯度10% CH₃ CN於時間0分鐘至40% CH₃ CN於時間25分鐘)，獲得0.96克(22%)之化合物27，熔點121.4-122.6℃，(ee=99%)。

表1列出根據上述實施例之一者製備之化合物。

化合物特性熔點：

數值為峰值或熔化範圍，且其之獲得具有實驗不確定度，通常與其分析方法有關。

Kofler

對於化合物4，以凱氏加熱座(Kofler hot bench)獲得熔點，由具有線性溫度梯度之加熱板、游標及攝氏溫標組成。

WRS-2A

對於化合物11、24、25、26、27、28、29、30、31，熔點以WRS-2A熔點儀決定，其購自Shanghai Precision and Scientific Instrument Co. Ltd.。熔點以0.2-5.0℃/分鐘之線性加熱速率測定，報告值為熔化範圍，最大溫度為300℃。

DSC

對於化合物1，熔點以DSC(微差掃描熱量測定法；differential scanning calorimetry)決定，熔點以10℃/分鐘之溫度梯度測定，最大溫度為350℃，數值為峰值。

LCMS

對於本發明化合物之LCMS-定性，使用下列程序。

一般程序A

使用包含具脫氣機之四級泵浦、自動取樣機、二及陣列探測器(DAD)及管柱之Alliance HT 2795(Waters)系統進行HPLC測量，具體說明於下列各別之方法，管柱保持於溫度30℃。來自管柱之流被分流至MS光譜儀，MS探測器配有電噴灑離子化源。毛細管針頭之電壓為3 kV，且在LCT上之來源溫度維持在100℃(Time of Flight Zspray^TM 質譜儀，Waters)。使用氮氣作為噴霧器氣體，以Waters-Micromass MassLynx-Openlynx數據系統進行數據之取得。

一般程序B

使用包含具脫氣機之二元泵浦、自動取樣機、二及陣列探測器(DAD)及管柱之UPLC(超效能液體層析)Acquity(Waters)系統進行LC測量，具體說明於下列各別之方法，管柱保持於溫度40℃。來自管柱之流被分流至MS光譜儀，MS探測器配有電噴灑離子化源。毛細管針頭之電壓為3 kV，且在Quattro上之來源溫度維持在130℃(三連式四極質譜儀，Waters)。使用氮氣作為噴霧器氣體，以Waters-Micromass MassLynx-Openlynx數據系統進行數據取得。

一般程序C

使用包含泵浦、自動取樣機、二及陣列探測器(DAD)(波長使用220奈米)及管柱加熱器及管柱之Agilent 1100模式進行HPLC測量，具體說明於下列各別之方法。來自管柱之流被分流至Agilent MSD Series G1946C及G1956A，MS探測器配有API-ES(大氣壓電噴灑離子化)。經由100至1000之掃描獲得質譜。毛細管針頭之電壓用於正離子化模式為2500 V，而用於負離子化模式為3000 V。碎裂電壓(fragmentation voltage)為50 V，乾燥氣體溫度維持在350℃，流速10公升/分鐘。

方法1

除了一般程序A之外：逆相HPLC進行於Xterra-MS C18管柱(5微米，4.6 x 150毫米)，流速1.0毫升/分鐘。二種移動相(移動相A：100% 7 mM乙酸銨；移動相B：100%乙腈)，用於進行梯度條件由85% A，15% B(保持3分鐘)，在5分鐘內至20% A、80% B，保持在20% A及80% B6分鐘，以起始條件再平衡3分鐘。使用注射體積為20微升。錐口電壓(cone voltage)用於正離子化模式為20 V，而用於負離子化模式為20 V。使用0.08秒之內掃描延遲(interscan delay)，經由在0.8秒之100至900之掃描獲得質譜。

方法2

除了一般程序B之外：逆相HPLC進行於Waters Acquity BEH(橋接乙基矽氧烷/二氧化矽混合源)C18管柱(1.7微米，2.1 x 100毫米)，流速0.35毫升/分鐘。二種移動相(移動相A：95% 7 mM乙酸銨/5%乙腈；移動相B：100%乙腈)，用於進行梯度條件由90% A及10% B(保持0.5分鐘)，在3.5分鐘內至8% A、92% B，保持2分鐘，並在0.5分鐘內回到起始條件，保持1.5分鐘。使用注射體積為2微升。錐口電壓用於正及負離子化模式為20 V。使用0.1秒之內掃描延遲，經由在0.2秒之100至1000之掃描獲得質譜。

方法3

除了一般程序C之外：逆相HPLC進行於YMC-Pack ODS-AQ,50x2.0毫米5微米管柱，流速0.8毫升/分鐘。使用二種移動相(移動相A：具有0.1%TFA之水；移動相B：具有0.05%TFA之乙腈)。首先，90% A及10% B保持0.8分鐘，然後施用梯度在3.7分鐘內至20% A及80% B並保持3分鐘。使用一般注射體積為2微升。烘箱溫度為50℃。(MS極性：正)。

旋光度

使用偏極計量測旋光度，[α]_D ²⁰ 指出以鈉之D-線波長(589奈米)之光，於溫度20℃量測旋光度，晶格光徑為1分米(dm)。實際值之後，述及濃度及用於量測旋光度溶液之溶劑。

C.　藥理實施例：

本化合物保存p53於A2780細胞之能力以p53酵素連結免疫吸附分析量測。p53分析為一種應用二種多株抗體之“三明治式”酵素免疫分析。多株抗體，對於p53蛋白質特異性，已被免疫固定於塑膠小孔之表面，存在於欲分析之樣本的任何p53將結合至捕捉抗體。生物素標記偵測劑多株抗體亦認識p53蛋白質，並將結合至任何已被捕捉抗體保留之p53。之後，偵測抗體經由經辣根過氧化酶結合之鏈黴抗生物素蛋白(streptavidin)結合。辣根過氧化酶催化顯色基質o-二胺苯之轉變，其之強度與結合至板上之p53蛋白質的量成比例。呈色反應產物使用分光光度計定量。使用已知濃度的純化重組HIS標示p53蛋白質，經由標準曲線之濃度達成定量(詳見實施例C.1.)。

C.1. p53 ELISA

A2780細胞(ATCC)以補充10%胎牛血清(FCS)、2 mM L-麩醯胺及健他黴素(gentamycin)之RPMI 1640，培養於37℃、濕潤、備有5% CO₂ 之培養箱中。

A2780細胞以每孔20.000個細胞接種於96孔盤中，培養24小時，並以化合物在37℃、於濕潤培養箱中處理16小時。培養後，細胞以磷酸鹽緩衝食鹽水洗滌一次，並於每孔添加30微升之低鹽RIPA緩衝液(20 mM tris，pH 7.0，0.5 mM EDTA，1% Nonidet P40，0.5% DOC，0.05% SDS，1mM PMSF，1微克/毫升抑肽酶(aprotinin)及0.5μ/微升亮肽素(leupeptin)。將培養盤置於冰上30分鐘，以完全分解。使用下述之三明治ELISA檢測溶解產物中之p53蛋白質。

高結合聚苯乙烯EIA/RIA 96孔盤(Costar 9018)以濃度為含1微克/毫升之塗覆緩衝液(0.1M NaHCO₃ pH8.2)的捕捉抗體pAb1801(Abcam ab28-100)塗覆每孔50微升。使抗體於4℃黏附隔夜。經塗覆之盤以磷酸鹽緩衝食鹽水(PBS)/0.05%Tween 20清洗，並添加300微升之阻斷緩衝液(PBS，1%牛血清白蛋白(BSA))，於室溫培養2小時。在阻斷緩衝液中稀釋純化重組HIS標示p53蛋白質，範圍為3-200奈克/毫升，並作為標準液。

盤以PBS/0.05% Tween 20清洗二次，並以80微升/每孔添加阻斷緩衝液或標準液。在標準液中，添加20微升溶解緩衝液。以20微升溶解產物/每孔，添加樣本至其他孔中。於4℃隔夜培養後，將盤以PBS/0.05% Tween 20清洗二次。整倍數之100微升第二多株抗體p53(FL-393)(Tebubio，sc-6243)，以含1微克/微升之阻斷緩衝液的濃度添加至各孔中，並使其於室溫粘附2小時。將盤以PBS/0.05% Tween 20清洗三次。偵測抗體抗兔HRP(sc-2004，Tebubio)，其以含0.04微克/毫升之PBS/1% BSA濃度添加，並於室溫培養1小時。盤以PBS/0.05% Tween 20清洗三次，並添加100微升之基質緩衝液(基質緩衝液子使用前立即製備，其經由添加1錠10毫克o-二胺苯(OPD，Sigma)及125微升3% H₂ O₂ 至25毫升OPD緩衝液：35 mM檸檬酸、66 mM Na₂ HPO₄ ，pH5.6)。5至10分鐘之後，經由每孔添加50微升終止緩衝液(1M H₂ SO₄ )停止呈色反應。使用Biorad微盤讀取機量測在雙波長490/655奈米之吸光度，然後分析結果。

對於每一實驗，對照組(不包含藥劑)及空白培養組(不包含細胞或藥劑)平行進行。所有對照組及樣本之值減去空白值。對於各樣本，p53之值(以吸光度單位)表示為存在於對照組之p53之值的百分比。百分比維持高於140%被定義為顯著。本文中測試化合物之效果表示為最低劑量給予存在於對照組之p53之值的至少140%(LAD)(詳見表4)。

在一些實驗中，分析適於並用於384-孔培養盤。

C.2增殖分析

人類A2780卵巢癌細胞係來自Dr. T.C. Hamilton(Fox Chase Cancer Centre,Pennsylvania,U.S.A.)之令人感激的禮物。細胞培養於補充2 mM L-麩醯胺、50微升/毫升健他黴素及10%胎牛血清之RPMI 1640培養基。

使用於阿爾瑪藍分析(Alamar Blue assay)之試劑

刃天青(resazurin)購自Aldrich(Prod. No. 199303)。氰亞鐵酸鉀、鐵氰化鉀、KH₂ PO₄ 及K₂ HPO₄ 購自Sigma(各為Prod. Nos. P9387、P8131、P5655及P8281)。

磷酸鉀緩衝液0.1M(PPB)如下製備：將2.72克KH₂ PO₄ 及13.86克K₂ HPO₄ 溶於500毫升milli-Q H₂ O，pH調整至pH 7.4，且體積以milli-Q H₂ O帶至1公升；緩衝液過濾消毒，並儲存於室溫。刃天青儲備液(PPB-A)經由溶解45毫克刃天青於15毫升PBS中新鮮製備。30 mM鐵氰化鉀(PPB-B)經由溶解0.987克鐵氰化鉀於100毫升PPB中而製備。30 mM氰亞鐵酸鉀(PPB-C)經由溶解1.266克氰亞鐵酸鉀於100毫升PPB而製備。

PPB-A、PPB-B及PPB-C之混合物經由混合等量之各溶液而製備。刃天青工作溶液(本文稱為“阿爾瑪藍(Alamar Blue)”溶液)經由稀釋該混合物20×(vol/vol)於PPB中並過濾消毒而製備；阿爾瑪藍溶液可保持於4℃最長2週。

阿爾瑪藍分析之程序

關於實驗於384孔盤，細胞以5x10³ 細胞/毫升之密度接種於具45微升培養基之Falcon 384孔培養盤(Life Technologies,Merelbeke,Belgium)，黑色具透明底部。使細胞黏附於塑膠24小時，預先稀釋測試化合物(1/50於培養基)，並添加5微升預先稀釋之化合物至小孔中。之後培養4日，添加10微升阿爾瑪藍溶液至各小孔，且細胞於37℃進一步培養5小時(A2780)。以螢光盤讀取機(Fluorskan,Labsystems，540奈米激發及590奈米放射)量測每一小孔之螢光強度。

抗增殖活性計算為在治療相對對照(未治療細胞)條件中，仍發育細胞之百分比。在實驗中，每一實驗條件之結果為3個平行實驗小孔之平均。當適當時，重複實驗以建立完全的濃度-反應曲線。當適當時，使用用於等級資料之機率單位分析(probit analysis)(Finney,D.J.,Probit Analyses,2^nd Ed. Chapter 10,Graded Responses,Cambridge University Press,Cambridge 1962)，估算IC₅₀ -值(降低細胞生長至對照組之50%所需的藥劑之濃度)。本文中，測試化合物之效果表示為pIC₅₀ (IC₅₀ -值(M)之負數對數值)(詳見表5A)。

化合物亦根據上述規則測試，但使用其他細胞株：結腸直腸癌細胞株HCT116、非小細胞肺癌細胞株H1299、人類前列腺癌細胞株DU145。結果報導於表5B。

C.3.P450分析

CYP P450(E.coli表現)蛋白質(3A4、2D6、2C9、1A2 ＆ 2C19)轉變其特異性基質成為螢光分子¹² 。使用螢光盤讀取機量測螢光分子，化合物抑制酵素反應將造成螢光信號之降低。

經個別的cDNA表現細胞色素P450同功酶調控之轉變

縮寫：

CEC：7-乙氧基-3-氰基香豆素(coumarin)；CHC：3-氰基-7-羥基香豆素，

MFC：7-甲氧基-4-三氟甲基香豆素；7-HFC：7-羥基-三氟甲基香豆素，

CEC：7-乙氧基-3-氰基香豆素；CHC：3-氰基-7-羥基香豆素，

AMMC：3-[2-(N,N-二乙基-N-甲基胺基)乙基]-7-甲氧基-4-甲基香豆素；

AHMC：3-[2-(N,N-二乙基胺基)乙基]-7-羥基-4-甲基香豆素鹽酸鹽，

BFC：7-苯甲基氧基-三氟甲基香豆素；

DBF：二苯甲基螢光素,7-BQ：苯甲基氧基喹啉。

輔因子混合物：(對於所有CYP酵素，除了CYP 2D6之外)

縮寫：G-6-P：葡萄糖-6-磷酸鹽；G-6-P-DH：葡萄糖-6-磷酸鹽-去氫酶。

輔因子混合物：(對於CYP2D6)

CYP P450酵素溶液：

將所有這些CYP酵素溶於0.01 M Na-K-磷酸鹽緩衝液+1.15% KCl，並保持在冰上直到使用。CYP P450酵素儲存於-80℃。

化合物及參考抑制劑稀釋：

化合物及參考抑制劑被運送至部門，作為含5 mM之DMSO溶液。經由使用乙連續稀釋製作5.10^-4 M之工作溶液，最終化合物濃度為10^-5 M用於初級篩選，且最終溶劑濃度為2%。在濃度10^-5 M初級篩選後，被選擇之有效抑制劑之IC₅₀ 值於3.10^-9 -10^-5 M之濃度範圍測試。在初級篩選中，所有化合物測試三次。

參考抑制劑於10^-9 -10^-4 M之濃度範圍測試。

參考抑制劑

受質溶液：

將受質儲備液溶於乙腈，並儲存於-20℃，將最終工作溶液溶於0.1 M Na-K-磷酸緩衝液pH 7.4，且此溶液總是在開始分析前新鮮製備。

資料分析

盤之製備、資料連結、資料分析、結果確認及認可與資料上載以Lexis-Laplace軟體(Laplace-DLM-RVAM)半自動執行。

計算所使用之方程式為：

%活性=(100/(陽性對照平均-陰性對照平均))x(樣本平均-陰性對照平均)

%抑制=100-%活性

當計算時，經由在RVAM之圖解外推法(graphical extrapolation)，基於與50%對照軸相交，自動產生IC₅₀ 值。

方法

分析進行於黑色96孔Costar盤，每孔分析包含：40微升CYP P450酵素溶液(於陰性對照樣本40微升之0.1M Na-K-磷酸緩衝液pH 7.4，無酵素添加)；40微升輔因子混合；2微升化合物或參考抑制劑用於陰性對照樣本或溶劑用於陽性對照樣本。於37℃在震盪培養箱中預培養5分鐘後，添加20微升受質溶液。將盤於37℃培養10分鐘(CYP3A4/DBF)、15分鐘(CYP1A2)、30分鐘(CYP2C9、CYP3A4/BFC及CYP3A4/7-BQ ＆ CYP2C19)及45分鐘(CYP2D6)。反應經由添加200微升乙腈而終止。對於CYP3A4/DBF，反應經由添加200微升2M NaOH而終止。對於CYP3A4/7-BQ，反應經由添加40微升Tris/乙腈(1：5)(V：V，之後於2000 rpm離心10分鐘)。經由螢光Victor2(Wallac)或Fluoroskan(Labsystems)讀取機偵測螢光信號。不同酵素及其特異性基質之激發及放射波長敘述於表6。

參考資料

[1]　Microtiter Plate Assays for Inhibition of human,Drug-Metabolizing Cytochromes P450 Charles L. Crespi,Vaughn P. Miller,Bruce W. Penman(Gentest) Analytical Biochemistry 248,188-190(1997) Article n° AB972145

[2]Novel High Throughput fluorescent P450 assays V.P. Miller,J. Ackermann,D.M. Stresser,C.L. Crespi Gentest Internet site.

表7提供當與先前技術之化合物比較時，測試於7個試驗之本發明化合物(化合物編號18、20、9、14及4)的數據。如上所述，測試五種P450酵素，其中之一在三種不同基質上(因此總計7個試驗)。在表7中指出在多少P450試驗中，化合物顯示具有IC₅₀ <1.00E-06之抑制活性。

C.4. Ro-4-1284在小鼠之拮抗作用^3,4,5

試驗係修改Colpaert et al.(1975)³ 所述之程序，雄性NMRI小鼠(22±3克)圈養於macrolon觀察籠(L x W x H：11x12x17公分；n=每籠3隻)。在開始實驗時，緊接投與測試化合物之前，以經由插入電子溫度計(Comark)之熱感應探針(直徑1.0毫米)至食道3公分之固定深度，直到獲得穩定之讀數，量測小鼠之起始體溫至精確度0.1℃。以刻度顯微鏡量測右眼瞳孔直徑，並以1/24毫米單位表示。投與測試化合物15分鐘後，以Ro-4-1284(10毫克/公斤，s.c.)考驗小鼠，Ro-4-1284為一種類蛇根鹼(reserpine-like)囊泡膜上轉運(vesicular monoamine transport；VMAT-2)抑制劑，其快速地耗盡分泌囊泡。^3,4 在考驗15、30及60分鐘後，將小鼠之眼瞼張開(0、1、2、3、4、5)及移動活動力(-1、0、1、2、3)記分。於60分鐘之間隔，緊接在記分明顯的行為後，再次量測右眼瞳孔直徑及食道溫度。紀錄反常現象，例如密集吸氣、咀嚼、豎直、充血、豎毛、流涎、顫抖、抽搐及死亡(當發生在Ro-4-1284投與之前時，亦紀錄後面現象)。對於藥物引發效果之判定標準：反覆眼瞼下垂：眼瞼張開積分>1在15、30或60分鐘(各為2.7、0.5及0%偽陽性對照；n>350)；誘發虛脫：積分-1於運動15、30或60分鐘(未見於對照組)；反覆運動減弱：積分>0於運動15、30及60分鐘(各為2.2、0.8及0%偽陽性對照)；反覆瞳孔縮小：瞳孔直徑>5單位，於60分鐘(0.8%偽陽性)；加強低體溫效力：溫度降低(超過小時時間間隔)>9.0℃(1.4%偽陽性)；反覆體溫降低：溫度降低<3.0℃(1.8%偽陽性)。

根據標準程序，R0-4-1284依皮下注射或口服投與15分鐘，並開始觀察15分鐘。劑量開始給予3隻動物，當3隻動物中至少2隻對於至少一種觀察顯示活性，則化合物被認為是有效的。在其他情況，化合物在特定時間-路徑-劑量攝生法被認為是無效的，並歸類為完成。

化合物編號20、18、1、27、24、25、31、30、7、29、28、26及17依口服投與濃度80毫克/公斤各測試於3隻動物，且其並未顯示在反覆瞳孔縮小、反覆眼瞼下垂、反覆體溫降低上之活性。化合物4僅測試40毫克/公斤，且並未顯示在反覆瞳孔縮小、反覆眼瞼下垂、反覆體溫降低上之活性。

EP 1809622之化合物亦於相同試驗中測試，且結果顯示於下表8。

參考資料

[3]　Colpaert,F.C.,Lenaerts,F.M.,Niemegeers,C.J.E.,Janssen,P.A.J.："A critical study on Ro-4-1284 antagonism in mice.",Arch. Int. Pharmacodyn.215 40-90(1975).

[4]　Colzi,A.,D'Agostini,R.,Cesura,A.M.,Borroni,E.,Da Prada,M.："Monoamine oxidase-A inhibitors and dopamine metabolism in rat caudatus：evidence that an increased cytosolic level of dopamine displaces reversible monoamine oxidase-A inhibitors in vivo.",J. Pharmacol. Exp. Ther. 265 103-111(1993).

[5]Filinger,E.J.："Effect of a reserpine-like agent on the release and metabolism of [³ H]NA in cell bodies and terminals.",Gen. Pharmacol. 25 1039-1043(1994).

C.5膜片鉗制試驗(patch-clamp test)-在HEK293細胞之經HERG調控K+電流之抑制

使用穩定表現HERG鉀通道之HEK293細胞進行實施例，細胞於37℃及5% CO₂ 之培養瓶中，生長於補充10%熱去活化胎牛血清、1% L-麩醯胺酸-青黴素-鏈黴素-溶液、1%非必要胺基酸(100x)、1%丙酮酸鈉(100 mM)及0.8%遺傳黴素(Geneticin)(50毫克/毫升)之MEM培養基。使用前，將細胞再次培養於不含5毫升L-麩醯胺酸-青黴素-鏈黴素之MEM培養基。用於自動化膜片鉗制系統PatchXpress 7000A(Axon Instruments)，將細胞收取以獲得單一細胞之細胞懸浮液。

細胞外溶液包含(mM)：150 NaCl、4 KCl、1 MgCl₂ 、1.8 CaCl₂ 、10 HEPES、5葡萄糖(pH 7.4以NaOH調整)。吸量管溶液包含(mM)：120 KCl、10 HEPES、5 EGTA、4 ATP-Mg₂ 、2 MgCl₂ 、0.5 CaCl₂ (pH 7.2以KOH調整)。

膜片鉗制實驗在電壓-鉗模式進行，且全細胞電流以利用PatchXpress 7000A系統(Axon Instruments)之自動化膜片鉗制分析記錄。經由Multiclamp放大器放大及數位化電流信號，經由PatchXpress、DataXpress軟體及Igor 5.0(Wavemetrics)儲存及分析。

鉗制電位(holding potential)為-80 mV，在2秒去極化至+60 mV後，確定HERG電流(K+-選擇性流出電流)為最大尾電流於-40 mV。脈動循環率為15秒。在各試驗脈動前，獲得由鉗制電位至-60 mV之短暫脈動(0.5秒)，以確定(線性)漏流(leak current)。在建立全細胞組態及穩定期後，施用媒劑5分鐘，之後經由10-7 M、3x10-7 M及3x10-6 M之漸增濃度施用測試物質。各測試物質之濃度施用二次，各濃度之效果以5分鐘後3個連續電壓脈動之平均電流確定。為了確定阻斷的程度，將殘餘電流與預測試之媒劑相比較。數據(表9)以相較於對照組(對照組為100%)之百分比抑制的平均值(如果可得，±平均值之標準差(SEM))呈現。

表9：於HEK293細胞之經HERG調控K+電流之抑制

令人驚訝地，本化合物顯示優異之活體外活性，其兼備對於P450酵素低親合性及無活體內藥劑誘導神經學效果及低心血管效果。

C.6.　活體內抗腫瘤效果

活體內抗腫瘤活性可如下試驗：

NCI標準參考資料：

Bissery,M-C.,and Chabot,G.G. History and new development of screening and evaluation methods of anticancer drugs used in vivo and in vitro. Bull. Cancer. 1991,78：587-602.

動物模式：

免疫缺陷(無胸腺)小鼠NMRI(Nu/Nu )裸鼠(20-25克，獲自Janvier,France)用於這些研究，初始體重接近23至34克。所有動物維持在SPF“完全隔離”與自由取用食物及飲水條件之下。將小鼠分組圈養於12小時白日：黑夜循環(光照於06：00小時)、溫度於19至22℃及濕度35至40%之Techniplast第3型IVC籠中。小鼠飼養標準實驗室飼料。所有實驗依據European Communities Council Directives(86/609/EEC)進行，且必須經由地方倫理委員會核准。為了建立腫瘤異體移植模式(腫瘤體積~200毫米³ )，根據腫瘤體積，以每一測試組10至14隻小鼠隨機化小鼠。

測試系統：

人類U87神經膠質瘤腫瘤細胞株由44歲女性白種人病患取得，細胞於37℃、濕潤氣壓(5% CO₂ ，95%空氣)，培養於補充2 mM L-麩醯胺酸、2.0 mM丙酮酸鈉、25單位/毫升青黴素/25微克/毫升鏈黴素及10%胎牛血清之DMEM培養基中。使用下列程序，以每T175瓶3×10⁶ 個細胞，每週繼代二次，將細胞維持在單層細胞培養。簡而言之，在添加胰蛋白酶-EDTA至培養瓶之前，細胞以PBS(不含Mg²⁺ 、Ca²⁺ )洗滌。細胞分離後，以添加完整培養基將胰蛋白酶-EDTA去活化。然後將細胞懸浮液轉移至50毫升Falcon試管，並以1200 rpm離心3分鐘。吸出培養基，且細胞再懸浮於適當體積之完整培養基中。於血球計數器中計數細胞，且以0.25%剛果藍(trypan blue)排除法估計其發育能力。然後將適當體積之細胞懸浮液添加至含新鮮培養基之新的T175培養瓶或滾瓶中。為了U87腫瘤細胞大規模生長，在接種於小鼠前，以0.5至1×10⁷ 個細胞接種於適15%起始體重時被認為為臨床毒性，且將動物自研究中移除並予以犧牲。腫瘤生長之時間進程以中位數值表示，或標準化成為開始治療之日之起始腫瘤體積，並表示為平均值±平均值之標準差(SEM)(每組7至10隻動物)。關於預先建立之腫瘤，計算各小鼠之相對腫瘤體積(被治療腫瘤體積/第0日之腫瘤體積)，且對於每一治療組別表示為平均值±SEM。最後處理之24小時後，將動物犧牲，切除腫瘤並秤重。經由Wilcoxon-Mann-Whitney分析之單邊p -值(魏克森等級和檢定；Wilcoxon rank sum test)表示統計之顯著性，且p <0.05被認為為具有統計上之意義。使用NCI標準，根據最終相對腫瘤體積計算測試/對照(T/C)比例，T/C比例之有效標準為42%。

D.　組成物樣本：膜衣錠錠劑核心之製備

將100克式(I)化合物、570克乳糖及200克澱粉之混合物充份混合，之後以含5克十二基硫酸鈉及10克聚乙烯吡咯酮於約200毫生之水的溶液潤濕。將濕性粉末混合物過篩、乾燥並再次過篩，然後添加100克微晶纖維素及15克氫化蔬菜油。將整體充份混合，並壓製成錠劑，獲得10.000顆錠劑，各含10毫克之式(I)化合物。

塗覆

在含10克甲基纖維素之75毫升變性乙醇溶液中，添加含5克乙基纖維素之150毫升二氯甲烷溶當數量之滾瓶1週。在此期間充填培養基二次，且最後充填日係在細胞注射之前。除了離心後之外，如上所述收集細胞，細胞再懸浮於冷的(4℃)無血清培養基中。小鼠於鼠蹊部位以總計1×10⁷ 個細胞之200微升體積注射。

研究設計：

於第0日(D0)，將人類U87神經膠質瘤細胞直接注射於雄性NMRI裸鼠之鼠蹊部位(1×10⁷ 個細胞/200微升/動物)。於第8日(D8)，當腫瘤體積已達約平均200毫米³ ，根據腫瘤體積，以每一測試組10至14隻小鼠隨機化小鼠。然後以媒劑(10% HP-β-CD)或含測試化合物之媒劑強迫投與(p.o.)體積10毫升/公斤體重，將小鼠每日測試一次(QD)，計21日。腫瘤大小及體重每週量測二次，並在治療期間，每日監視小鼠毒性之臨床症狀。毒性之臨床症狀包括(但不限於)持續食慾不振或脫水、臥姿、垂死、昏睡、體溫下降及/或用力呼吸(根據用於實驗腫瘤形成之動物福利之UKCCCR指南(The UKCCCR(UK Coordinating Committee on Cancer Research)(July 1997)；及Workman,P.et al . UKCCCR guideline.Br .J .Cancer . 1998,77：1-10)。

資料分析：

對於每一個別動物，體重及腫瘤大小[使用通常認可的方程式：腫瘤體積(毫米3)=(a×b² /2)；其中‘a’代表長度，而‘b’代表經測徑器量測所決定之腫瘤寬度]在研究期間每週監測2次。持續體重減少大於液。然後添加75毫升二氯甲烷及2.5毫升1,2,3-丙三醇，將10克聚乙二醇熔化並溶解於75毫升二氯甲烷，將後述溶液添加至前者中，然後添加2.5克十八酸鎂、5克聚乙烯吡咯酮及30毫升濃縮著色懸浮液，並將整體均質化。在塗覆裝置中錠劑核心以此所得之混合物塗覆。

Claims

一種式(I)化合物，包括其任何立體化學異構型式，其中R¹ 為羥基C_1-6 烷基或C_2-6 烯基；前提為R¹ 取代基位於吲哚部分的位置6或7；R² 為氫或C_1-4 烷基；Z為選自下列之基 R³ 為氫或羥基C_1-4 烷基；R⁴ 為羥基或C_1-4 烷氧基；R⁵ 為氫或C_1-4 烷基；或R⁴ 及R⁵ 一起形成酮基；其醫藥可接受性鹽。
如申請專利範圍第1項之化合物，其中該化合物具有下式
如申請專利範圍第1或2項之化合物，其中R¹ 為羥基C_1-6 烷基。
如申請專利範圍第1或2項之化合物，其中R² 為C_1-4 烷基。
如申請專利範圍第1或2項之化合物，其中Z為式(z-1)之基。
如申請專利範圍第1或2項之化合物，其中Z為式(z-2)之基。
如申請專利範圍第6項之化合物，其中R⁴ 為羥基且R⁵ 為氫。
如申請專利範圍第6項之化合物，其中R⁴ 為羥基且R⁵ 為C_1-4 烷基。
如申請專利範圍第1項之化合物，其中該化合物為具有下式之對映異構物，且具有左旋旋光性，其以鈉(589奈米)之D-線波長的光，於溫度20℃，及晶格路徑長度1公寸，在濃度8.59毫克/毫升之氯仿中量測；或其醫藥可接受性鹽。
如申請專利範圍第1項之化合物，其中該化合物為具有下式之對映異構物，且具有右旋旋光性，其以鈉(589奈米)之D-線波長的光，於溫度20℃，及晶格路徑長度1公寸，在濃度10.33毫克/毫升之甲醇中量測；或其醫藥可接受性鹽。
一種使用作為藥劑之申請專利範圍第1至10項中任一項之化合物。
一種醫藥組成物，其包含醫藥上可接受載劑及治療上有效量之作為活性成分的申請專利範圍第1至10項中任一項之化合物。
一種申請專利範圍第1至10項中任一項之化合物於製造治療癌症藥劑上之用途。
一種一或多種抗癌劑與申請專利範圍第1至10項中任一項之化合物之組合物。
一種製備申請專利範圍第1項之化合物之方法，其特徵在於a)於任意地有鹼存在之反應-惰性溶劑中，將式(II)中間產物與式(III)中間產物反應，其中W₁ 為適當之離去基，或在適當之催化劑、適當之配位基、適當之鹼及適當的溶劑存在下，將式(II)中間產物與式(III)中間產物反應，其中W₁ 為適當之離去基，且R¹ 、R² 及Z如申請專利範圍第1項之定義；b)在適當之還原劑及適當之溶劑存在下，反應對應之式(IV)羰基衍生物，且R² 及Z如申請專利範圍第1項之定義；c)在適當之還原劑及適當之溶劑存在下，反應相對應之式(V)酯衍生物，其中R^x 代表-C_1-3 烷基C(=O)OC_1-4 烷基，且R² 及Z如申請專利範圍第1項之定義；或d)在適當之溶劑存在下，以適當之鹼水解式(VI)中間產物，且R² 及Z如申請專利範圍第1項之定義；或如果需要，經由以酸處理將式(I)化合物轉換成治療上活性無毒性酸加成鹽，或經由以鹼處理將式(I)化合物轉換成治療上活性無毒性鹼加成鹽，或相反地，經由以鹼處理將酸加成鹽形式轉換成游離鹼，或經由以酸處理將鹼加成鹽轉換成游離酸。